JP7138626B2 - アルキルアンモニウムｅｄｔａ塩を含む混合物及び製剤 - Google Patents

Description

本発明は、脂質と抗酸化剤とを含む混合物に関する。本発明はまた、水、または体液などの水性媒体に晒されると自発的に相転移を起こし、その結果、制御放出性マトリックスを形成する製剤前駆体（予備製剤）に関する。特に、本発明は、耐酸化性が改善された混合物、予備製剤、及び組成物に関する。

医薬品、栄養素、ビタミンなどを含め、多くの生物活性薬剤は「有効域」を有する。すなわち、その範囲にわたって、これらの薬剤が何らかの生物学的効果をもたらすことが観察できる濃度範囲が存在する。身体の該当する部分の濃度（例えば、局所濃度、または血清濃度によって示されるようなもの）が一定レベルを下回る場合、その薬剤に起因し得る有益な効果はないと考えられ得る。同様に、通常は上限の濃度レベルが存在し、それを超えると濃度を上げても、それ以上の効果が得られない。場合によっては、特定のレベルを超えて濃度を増加させると、望ましくない影響、または危険でさえある影響が生じる。

生物活性薬剤によっては、長い生物学的半減期及び／または広い有効域を有し、そのため、時々投与して、相当な期間（例えば、６時間～数日間）にわたって機能的な生物学的濃度を維持できるものもある。それ以外の場合は、クリアランス速度が速く、及び／または有効域が狭く、そのため、この域内の生物学的濃度を維持するには、少量の定期的（またはさらに連続的な）投与が必要とされる。特にこれは、非経口の投与経路（例えば、非経口投与）が望ましいか、または必要な場合に問題となる可能性がある。その理由は、非経口投与は自己投与が困難であることから、不都合及び／または服薬遵守の欠如を招く可能性があるためである。そのような場合には、単回投与で、活性が必要とされる全期間にわたって治療レベルの活性薬剤が供給されれば有利であると考えられる。

治療を受けている患者によっては、通常、相当な期間にわたる治療用量の持続、及び／または数か月もしくは数年にもわたる継続的な治療を必要とすることになる。したがって、長期間にわたり高用量の負荷及び制御放出を可能にするデポシステムは、従来の送達システムを上回る大幅な利点をもたらすであろう。

本発明のある特定の製剤は、投与後に非ラメラ液晶相を形成する。生物活性薬剤の送達における非ラメラ相構造（例えば液晶相）の使用は今では比較的十分に確立されている。最も効果的な脂質デポシステムはＷＯ２００５／１１７８３０に記載されており、非常に好ましい脂質デポ剤がその文献に記載されている。しかしながら、デポ製剤には複数の点で性能を改善する余地が残っている。

ＧＬＰ－１（ＷＯ２００６／１３１７３０）、ソマトスタチン類似体（ＷＯ２００６／０７５１２４）、ＬＨＲＨ類似体（ＷＯ２００６／０７５１２５）、ならびにブプレノルフィンなどの非ペプチド（ＷＯ２０１４／０１６４２８）といった活性薬剤を用いた脂質制御放出送達システムが開発されている。脂質系単独でも治療価値があり、活性薬剤を含む必要はない。例えば、ＦＤＡ承認済み経口液ｅｐｉｓｉｌ（登録商標）は、活性薬剤は一切必要としないが、口腔内に脂質バリアを形成することによって、口腔粘膜炎及び他の口腔の炎症状態によって引き起こされる疼痛を軽減する。

特に多用途な脂質の組み合わせが、ジオレイン酸グリセロール（ＧＤＯ）とホスファチジルコリン（ＰＣ）である。しかし、持続放出性製剤は、トコフェロール（ＷＯ２００６／０７５１２３）、ソルビトールの誘導体（ＷＯ２０１６／１０２６８３）、トリグリセリド（ＷＯ２０１６／０６６６５５）、及びホスファチジルエタノールアミンを含む様々なリン脂質成分（ＷＯ２０１３／０８３４５９及びＷＯ２０１３／０８３４６０）を含め、その他の多種多様な脂質成分で製造することができる。

脂質成分、特に不飽和脂質と、予備製剤または持続放出性組成物に含有される活性薬剤はいずれも、保存中またはｉｎ ｖｉｖｏのいずれにおいても酸化されやすい。酸化過程は、活性薬剤の含有量を減少させる、及び／または望ましくない分解生成物を形成する原因となる場合があるため、酸化の程度を減少させることが望ましい。酸化は、ひいては製品の有効期間を短縮する。

とりわけ脂質組成物が酸化する原因となる要因のひとつに、微量の金属イオン、特に鉄（Ｆｅ）などの遷移金属の存在がある。脂質成分が高純度等級のものであっても、そのような微量のイオンを完全に除去することは困難である場合が多い。脂質製剤の製造に使用される装置にはステンレス鋼が含まれていることが多く、これが少量の金属イオン（特にＦｅ）を混合物に浸出させている可能性があると考えられている。したがって、脂質製剤に抗酸化剤を加えるのが一般的である。抗酸化剤は一般に任意の金属イオンをキレート化し、それによって酸化過程への金属イオンの関与を妨げる役割をする。

前提条件として、どの抗酸化剤も脂質混合物、例えば予備製剤に可溶性でなければならない。ＷＯ２０１２／１６０２１３には、液晶相への相変化を引き起こすことなく、綿密に量が制御された水を脂質予備製剤に加えることができることが記載されている。相当量の水を含む予備製剤の場合、アスコルビン酸のような水溶性抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート剤の無機塩（例えば、ナトリウム塩またはカルシウム塩）、及びクエン酸を有効量で加えることが可能な場合がある。しかし、ある種の活性薬剤では、（例えば活性薬剤が感湿性であるため）保存中に持続的に水に曝露されないようにする必要がある場合や、または予備製剤に水を含まない方が望ましい放出プロファイルを得られる場合がある。金属イオンは一般に有機溶媒中または脂質環境内よりも水中の方が溶解しやすいため、水を避けることによって、存在し得る微量金属の量も減少させることができる。含水量の低い脂質製剤の場合、実質的に無水の脂質環境では、必要とされる可溶性を有し得ないため、従来の水溶性抗酸化剤を使用することは不可能である。したがって、実質的に無水の脂質環境に可溶性であり、混合物（例えば予備製剤）の脂質成分、及びその中に含まれる任意の活性薬剤の酸化分解を制限または防止する抗酸化剤を提供することは有利であろう。標準的な無機塩（ナトリウムまたはカルシウム）が、非水性環境（例えば脂質マトリックス）で不溶性であるか、または無視できるほどの溶解性を有する、ＥＤＴＡなどの金属キレート剤は、特にこれに該当する。

国際公開第２００５／１１７８３０号パンフレット 国際公開第２０１２／１６０２１３号パンフレット

ＷＯ２０１０／０２０７９４は、脂質系において特別な利点を提供するものとしてチオール化抗酸化剤を記載しており、この抗酸化剤はまた、非水性脂質系にも適している。しかし、特定の最終用途では、チオール化抗酸化剤の存在が許容されない場合がある。これは特に、例えばチオール基またはジスルフィド架橋を有するペプチドまたはタンパク質に当てはまる。ＷＯ２０１０／０２０７９４はまた、ＥＤＴＡまたはＥＤＴＡのナトリウム塩、二ナトリウム塩及びカルシウム二ナトリウム塩をキレート剤として加えることの可能性について述べているが、これは例示される選択肢には入っていない。本発明者らは、ＥＤＴＡまたはその一般的な塩が、ＷＯ２０１０／０２０７９４に記載されている種類の脂質製剤、すなわちＧＤＯ、ＳＰＣ、及び有機溶媒（エタノールなど）をベースとする製剤に、測定可能なほどには可溶性をもたないことを確認した。

現在では驚くべきことに、有効量のＥＤＴＡのアルキルアンモニウム塩を非水性脂質環境に溶解することができ、その結果得られる混合物、例えば予備製剤が、保存中の酸化分解に対して高い耐性をもつことを確認している。さらに、アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩は、金属イオンを封鎖するという予測メカニズムによって分解を減少させる効果を有すると考えられているが、本発明は、いくつかの実施形態で、このメカニズムのみを根拠とし得るレベルを超えて耐酸化性を改善することができる。

本発明者らは、アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩の含有により、多種多様な脂質成分及び／またはその中に含まれる活性薬剤の酸化を防止できること、または酸化速度を実質的に低下できることを立証した。本発明者らは、アルキルアンモニウムＥＤＴＡの含有により、安定性試験で試験される薬物試料中の活性薬剤の分析物の損失を実質的に減少させることができ、それにより、医薬品の有効期間を延長できることを見出した。ＥＤＴＡ塩は安価であり、多種多様な対カチオンを用いて容易に製造され、一般に安全とみなされている（また、医薬用途などに広く使用される）という有利性がある。

本発明者らが見出したアルキルアンモニウムＥＤＴＡの安定化効果及び有効期間の延長効果は、酸化反応の防止または低減に関連するだけでなく、他の化学分解反応、例えば加水分解、アシル化、アミド分解の防止または低減にも関連し得る。

第１の態様では、本発明は
ｉ）少なくとも１種の脂質及び／または少なくとも１種の油と；
ｉｉ）アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩（例えば、エチレンジアミン四酢酸またはその類似体のアニオンを含む）と、を含む混合物であって、
含水量が０～１．０重量％の範囲内である混合物を提供する。

どの態様においても、エチレンジアミン四酢酸類似体及びその対応するアニオンは一般的に、本明細書の以下に記載される通りである。

本発明はまた、適切な組み合わせの脂質賦形剤、有機溶媒、及びアルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩を含む医薬製剤を提供する。これを前駆デポ製剤（本明細書では略して予備製剤と呼ぶ）として使用し、上記の１種以上のニーズに対処することができる。

したがって第２の態様では、本発明は
ｉ）以下を含む脂質混合物：
ａ）モノアシル、ジアシルもしくはトリアシル脂質及び／またはトコフェロールのうち少なくとも１種；
ｂ）場合により少なくとも１種のリン脂質；
ｃ）少なくとも１種の生体適合性有機溶媒；ならびに
ｉｉ）アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩（例えば、エチレンジアミン四酢酸またはその類似体のアニオンを含む）を含む予備製剤であって、
含水量が０～１．０重量％の範囲内である予備製剤を提供する。

好ましい実施形態では、予備製剤は、過剰の水性流体と接触すると少なくとも１つの液晶相構造を形成するかまたは形成することが可能である。

本明細書で使用される場合、「脂質混合物」は「脂質制御放出マトリックス」であり得る。

いくつかの実施形態では、特に好ましい成分の組み合わせは、ジオレイン酸グリセロール（ＧＤＯ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、エタノール、及びテトラキス（エタノールアンモニウム）ＥＤＴＡである。すべての実施形態の予備製剤は、本明細書に記載されるような活性薬剤をさらに含んでもよい。

この予備製剤は、活性薬剤の制御放出及び持続放出、特に投与時に非常に平坦な放出プロファイル及び／または最小限の「バースト」が要求される、またはそれにより利益が得られる場合に非常に有用である。したがって、対応する実施形態では、本発明は、
ｉ）以下を含む脂質混合物：
ａ）モノアシル、ジアシルもしくはトリアシル脂質及び／またはトコフェロールのうち少なくとも１種；
ｂ）場合により少なくとも１種のリン脂質；
ｃ）少なくとも１種の生体適合性有機溶媒；
ｄ）活性薬剤；ならびに
ｉｉ）アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩（例えば、エチレンジアミン四酢酸またはその類似体のアニオンを含む）の混合物であって、
含水量が０～１．０重量％の範囲内である混合物を、当該活性薬剤の持続投与に使用される予備製剤の製造において提供する。好ましい実施形態では、予備製剤は、過剰の水性流体と接触すると少なくとも１つの液晶相構造を形成するかまたは形成することが可能である。

本明細書で参照される「生物活性薬剤」または「活性薬剤」は、ペプチド、タンパク質、薬物、抗原、栄養素、化粧品、芳香剤、着香剤、診断薬、医薬品、ビタミン、または食餌療法剤のような、所望の生物学的または生理学的効果を有する任意の化合物であってよく、有効レベルのｉｎ ｖｉｖｏ濃度（局所用組成物の局所濃度を含む）を付与するのに十分な濃度で製剤化される。一実施形態では、「活性薬剤」とは、治療的、緩和的及び／または予防的効果を、適切な対象（通常はそのような効果を必要とするもの）に投与したときに付与される天然もしくは合成のペプチドまたは非ペプチド薬物の医薬品有効成分（ＡＰＩ）である。

したがって、さらなる実施形態では、本発明は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物対象の治療方法であって、本明細書に記載の予備製剤を上記対象に投与することを含む、方法を提供する。そのような方法は、先端巨大症、がん、癌腫、黒色腫、少なくとも１つのソマトスタチン受容体を発現する腫瘍、ｓｓｔ（２）陽性腫瘍、ｓｓｔ（５）陽性腫瘍、前立腺癌、胃腸膵内分泌腫瘍、胃腸膵神経内分泌（ＧＥＰ ＮＥ）腫瘍（ＧＥＰ－ＮＥＴ）、肺神経内分泌腫瘍（肺ＮＥＴ）、カルチノイド腫瘍、インスリノーマ、ＴＳＨ分泌下垂体腺腫、ガストリノーマ、血管活性腸管ペプチド（ＶＩＰ）腫瘍及びグルカゴノーマ、成長ホルモン（ＧＨ）上昇、インスリン様成長因子Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）上昇、静脈瘤出血（特に食道）、化学療法誘引性の胃腸障害（下痢など）、リンパ漏、糖尿病性網膜症、甲状腺眼症、肥満、膵炎、及び関連する病態から選択される少なくとも１つの病態を抑制（例えば、その症状の治癒、改善、予防または寛解）するために、治療を必要とするヒトまたは非ヒト哺乳動物対象を治療する方法であり得る。そのような方法は、本明細書に記載されるような、成分ｄ）が少なくとも１種のソマトスタチン類似体である場合に特に該当する。そのような方法に使用される本明細書に記載の予備製剤は、本発明のさらなる態様を構成する。

それに対応するさらなる態様では、本発明は、
ｉ）以下を含む脂質混合物：
ａ）モノアシル、ジアシルもしくはトリアシル脂質及び／またはトコフェロールのうち少なくとも１種；
ｂ）少なくとも１種のリン脂質；
ｃ）少なくとも１種の生体適合性有機溶媒；ならびに
ｉｉ）アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩（例えば、エチレンジアミン四酢酸またはその類似体のアニオンを含む）の低粘度混合物であって、
含水量が０～１．０重量％の範囲内である当該混合物の、
先端巨大症、がん、癌腫、黒色腫、少なくとも１つのソマトスタチン受容体を発現する腫瘍、ｓｓｔ（２）陽性腫瘍、ｓｓｔ（５）陽性腫瘍、前立腺癌、胃腸膵内分泌腫瘍、胃腸膵神経内分泌（ＧＥＰ ＮＥ）腫瘍、肺ＮＥ腫瘍（肺ＮＥＴ）、カルチノイド腫瘍、インスリノーマ、ガストリノーマ、血管活性腸管ペプチド（ＶＩＰ）腫瘍及びグルカゴノーマ、ＴＳＨ分泌下垂体腺腫、成長ホルモン（ＧＨ）上昇、インスリン様成長因子Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）上昇、静脈瘤出血（特に食道）、化学療法誘引性の胃腸障害（下痢など）、リンパ漏、糖尿病性網膜症、甲状腺眼症、肥満、膵炎、及び関連する病態から選択される少なくとも１つの病態を治療するためのデポ剤のｉｎ ｖｉｖｏ形成に使用される低粘度予備製剤医薬品の製造における使用を提供する。そのような使用は、本明細書に記載されるような、成分ｄ）が少なくとも１種のソマトスタチン類似体である場合に特に該当する。

ある種の活性薬剤（例えばある種のペプチド）は、本質的に治療上というよりはむしろ（またはそれに加えて）美容上の利点を有する。そのような効果には、体重減少及び／または空腹感抑制、ならびに皮膚または毛髪の色素沈着、発毛などに対する制御が含まれる。したがって、本発明はさらに、ヒトまたは非ヒト哺乳動物対象の美容治療の方法であって、本明細書に記載の予備製剤を上記対象に投与することを含む、方法を提供する。そのような美容方法は一般に、療法の手段にはならない（すなわち、治療的または医学的効果を有さない）。

他の多くの制御放出組成物に優る本発明の製剤の利点のひとつは、最終形態で保存する際に安定であり、その結果、投与時に調製がほとんど必要ないか、または不要なことである。そのため、予備製剤をすぐに投与することができ、またすぐに投与できる利便な形態で供給することもできる。したがって、さらなる態様では、本発明は、本明細書に記載の予備製剤を含むプレフィルド投与器具を提供する。そのような器具は一般に、例えば１μｇ～１５ｍｇ／日の範囲、例えば０．１ｍｇ～１５ｍｇ／日または１μｇ～５ｍｇ／日の投与量の活性薬剤が送達される、組成物の単回投与または複数回投与のいずれかを提供する。

さらなる態様では、本発明は、本発明による当該投与器具を含むキットを提供する。

キットは必要に応じて、当該予備製剤の皮下投与または筋肉内投与についての説明書を含み得る。本明細書に記載のすべての予備製剤はそのようなキットでの使用に適しており、そのため、キットの中に含まれていてもよい。

本発明のキットは、必要に応じて、針、綿棒などのような追加の投与用構成部品を含むことができ、必要に応じて投与についての説明書が含まれる。

さらなる態様では、本発明は、アルキルアンモニウムカチオンがトリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、またはテトラエチルアンモニウムではないという条件で、本明細書で定義される式ＮＲ¹Ｒ²Ｒ³Ｒ⁴ⁿ⁺である少なくとも１つのアルキルアンモニウムカチオンを含むアルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩を提供する。

保存条件２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としての試料５３～５４のオクトレオチドアッセイを示す。 ４０℃／７５％ＲＨで保存後の３つの時点（０か月、１か月、及び２か月）でのＥＤＴＡ濃度（０～７５０ｐｐｍまたは０～０．０７５重量％）の関数としての試料５５～６０のオクトレオチドアッセイ。 １００ｐｐｍのＥＤＴＡの非存在下（試料６１）及び存在下（試料６２）のＳＰＣ／ＧＤＯ／ＥｔＯＨ／ＰＧベースの製剤における、２５℃／６０％ＲＨでの時間の関数としてのＯＣＴアッセイ。製剤はプレフィルドガラスシリンジに保存した。 ４０℃／７５％ＲＨで１か月保存して記録された、０、２５、１００、及び２５０ｐｐｍのＥＤＴＡ存在下（試料６３～７８）のＳＰＣ／ＧＤＯ／ＥｔＯＨ／ＰＧベースの製剤における、Ｆｅ³⁺濃度の関数としてのＯＣＴアッセイ。製剤は、ヘッドスペースに周囲空気が存在するバイアルに保存した。 ４０℃／７５％ＲＨで１か月保存後のＳＰＣ／ＧＤＯ／ＥｔＯＨ／ＰＧ製剤における、ＥＤＴＡ：Ｆｅ³⁺モル比の関数としてのＯＣＴアッセイデータ。製剤は、ヘッドスペースに周囲空気が存在するバイアルに保存した。 ＳＰＣ／ＧＤＯ／ＥｔＯＨ／ＰＧ製剤における、４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としての、ＯＣＴのアッセイ値（ａ）及び安定性指数値（ｂ）：添加剤なし（試料７９、参照）、ＥＤＴＡ（Ｎａ）あり（試料８０）、ＥＤＴＡ（Ｎａ）／ＥＴＡあり（試料８１）、ＥＤＴＡあり（試料８２）、及びＥＤＴＡ／ＥＴＡあり（試料８３）。製剤は、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。参照試料７９を除く製剤にはすべて、５ｐｐｍのＦｅ³⁺も含有した。 ＥＴＡ（試料８４）、ＤｉＥＴＡ（試料８５）、またはエチレンジアミン（試料８６）の使用により脂質製剤に溶解された１００ｐｐｍのＥＤＴＡの非存在下（試料７９）及び存在下のＳＰＣ／ＧＤＯ／ＥｔＯＨ／ＰＧベースの製剤における、４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としてのＯＣＴアッセイ。製剤は、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 ＳＰＣ／ＧＤＯ／ＥｔＯＨ／ＰＧ（試料７９はＥＤＴＡを含まない参照、及び試料８４は１００ｐｐｍのＥＤＴＡを含む）ベースの製剤における、４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としてのＯＣＴアッセイ。製剤は、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 ＳＰＣ／ＧＤＯ／ＥｔＯＨ／ＰＧ（試料８９はＥＤＴＡを含まない参照、及び試料９０は１００ｐｐｍのＥＤＴＡを含む）ベースの製剤における、４０℃／７５％ＲＨ（ａ）及び２５℃／６０％ＲＨ（ｂ）での時間の関数としてのＳＯＭアッセイ。製剤は、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 １００ｐｐｍのＥＤＴＡを含まない（試料９３）及び含む（試料９４）ＳＰＣ／ＧＤＯ／ＥｔＯＨ／ＤＭＳＯ製剤における、４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としてのＧＯＳのアッセイ値（ａ）及び安定性指数値（ｂ）。両製剤は５ｐｐｍのＦｅ³⁺を含有し、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 １００ｐｐｍのＥＤＴＡを含まない（試料９５）及び含む（試料９６）ＳＰＣ／ＧＤＯ／ＥｔＯＨ／ＤＭＳＯ製剤における、４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としてのＯＸＹのアッセイ値（ａ）及び安定性指数値（ｂ）。両製剤は５ｐｐｍのＦｅ³⁺を含有し、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 １００ｐｐｍのＥＤＴＡを含まない（試料９７）及び含む（試料９８）ＳＰＣ／ＧＤＯ／ＥｔＯＨ／ＤＭＳＯ製剤における、４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としてのＧＲＮのアッセイ値（ａ）及び安定性指数値（ｂ）。両製剤は５ｐｐｍのＦｅ³⁺を含有し、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 １００ｐｐｍのＥＤＴＡを含まない（試料９９）及び含む（試料１００）ＳＰＣ／ＧＭＯ／ＥｔＯＨ／ＤＭＳＯ製剤における、４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としてのＧＯＳのアッセイ値（ａ）及び安定性指数値（ｂ）。両製剤は５ｐｐｍのＦｅ³⁺を含有し、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 １００ｐｐｍのＥＤＴＡを含まない（試料１０１）及び含む（試料１０２）ＳＰＣ／Ｓｂ油／ＥｔＯＨ／ＤＭＳＯ製剤における、４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としてのＧＯＳのアッセイ値（ａ）及び安定性指数値（ｂ）。両製剤は５ｐｐｍのＦｅ³⁺を含有し、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 ５ｐｐｍのＦｅ³⁺の非存在下（ａ）及び存在下（ｂ）での、１００ｐｐｍのＥＤＴＡを含まない（試料１０３及び１０４）及び含む（試料１０５及び１０６）ＳＰＣ／ＧＤＯ（５０／５０ｗ／ｗ）ベースの製剤における、６０℃／周囲ＲＨでの時間の関数としてのバイアルヘッドスペース酸素濃度。製剤は、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 ５ｐｐｍのＦｅ³⁺の非存在下（ａ）及び存在下（ｂ）での、１００ｐｐｍのＥＤＴＡを含まない（試料１０７及び１０８）及び含む（試料１０９及び１１０）ＳＰＣ／ＧＤＯ（３５／６５ｗ／ｗ）ベースの製剤における、６０℃／周囲ＲＨでの時間の関数としてのバイアルヘッドスペース酸素濃度。製剤は、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 ５ｐｐｍのＦｅ³⁺の非存在下（ａ）及び存在下（ｂ）での、１００ｐｐｍのＥＤＴＡを含まない（試料１０３及び１０４）及び含む（試料１０５及び１０６）ＳＰＣ／ＧＤＯ（５０／５０ｗ／ｗ）ベースの製剤における、４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としてのバイアルヘッドスペース酸素濃度。製剤は、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。 ５ｐｐｍのＦｅ³⁺の非存在下（ａ）及び存在下（ｂ）での、１００ｐｐｍのＥＤＴＡを含まない（試料１０７及び１０８）及び含む（試料１０９及び１１０）ＳＰＣ／ＧＤＯ（３５／６５ｗ／ｗ）ベースの製剤における、４０℃／７５％ＲＨでの時間の関数としてのバイアルヘッドスペース酸素濃度。製剤は、ヘッドスペースに通常の空気が存在するバイアルに保存した。

脂質及び油、特に不飽和基を有するものは酸化しやすい。したがって、脂質または油を含む混合物は、例えば保存中または使用中に、時間の経過とともに徐々に純度が低下する場合がある。これは望ましくないものであり、混合物の物理的特性及び／または化学的特性に意図しない変化をもたらす場合がある。分解生成物は患者にとって有害であり、場合を問わず厳密に管理された限度内に保たなければならない場合が多いため、医薬用途を有する混合物中の分解生成物の量を最小限にすることは特に重要である。

脂質及び油は水との混和性が低いため、脂質及び油の含水量は一般的に低い。したがって、脂質または油を水溶性抗酸化剤と製剤化することは困難である。したがって、混合物の酸化を防止するために脂質または油と混合できる抗酸化剤を見出すことが望ましいであろう。本発明はこの問題に対処する。

本発明の混合物は実質的に非水性であり、少なくとも１種の脂質及び／または油（成分ｉ）ならびに少なくとも１種のアルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩（成分ｉｉ）を含む。好ましい態様では、混合物は予備製剤である。本発明の予備製剤は脂質ベースで、実質的に非水性であり、水性流体と接触するとデポ組成物を形成する。本明細書で使用される場合、用語「製剤」または「予備製剤」は、通常は低粘度である、成分（ｉ）及び（ｉｉ）（成分（ｉ）は、成分（ａ）、（ｃ）、ならびに必要に応じて（ｂ）及び（ｄ）を含む）の混合物に関する。用語「デポ剤」は、予備製剤が、例えば多数の非経口投与経路内で起こるような、過剰の水性流体に曝露されたときに形成される組成物に関する。理論に束縛されるものではないが、この変化は少なくとも部分的には、溶媒（ｃ）が水性流体と交換されることによってもたらされると考えられる。デポ剤は通常、対応する予備製剤よりもはるかに粘度が高く、デポ剤中に含まれる任意の活性薬剤の徐放を可能にする。

好ましい態様では、本発明の製剤は投与後に非ラメラ相（例えば、非ラメラ液晶相）を形成する。生物活性薬剤の送達における非ラメラ相構造（例えば液晶相）の使用は今では比較的十分に確立されている。最も効果的な脂質デポシステムはＷＯ２００５／１１７８３０に記載されており、本発明での使用に適した脂質マトリックスがその文献に記載されている。この文献の全開示内容は参照により本明細書に組み込まれる。そのような製剤の最も好ましい相構造の説明として、ＷＯ２００５／１１７８３０の考察、特にその２９ページが注目される。好ましくは、本発明による予備製剤は、Ｌ₂相（液相）構造を有するか、あるいは液体溶液または分子性溶液である。

特に記載のない限り、本明細書全体を通して％はすべて重量により指定する。重量パーセント（％）は、例えば重量％と略記することがある。さらに、記載される重量％は、特に記載のない限り、本明細書に示された全成分を含む予備製剤全体に占める％である。成分（ｄ）に関して重量パーセンテージが示されている場合、特に記載のない限り、その重量は（例えば、塩が使用されている場合）遊離塩基の量を意味する。ある特定の実施例では、特定の塩の重量％が記載されているが、これは該当する場合に示されるものであり、遊離塩基の相当する重量に容易に変換することができる。

予備製剤は場合により、本質的に本明細書に示される成分のみからなる（必要に応じて、以下の本明細書及び添付の特許請求の範囲に記載される追加の任意成分を含む）場合もあれば、ある態様では完全にそのような成分からなる場合もある。

本明細書に記載の脂質ベースの予備製剤は、脂質成分（ａ）有機溶媒（ｃ）、及び場合により（ｂ）及び（ｄ）を含む脂質混合物（ｉ）と、アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩（ｉｉ）とを含む。

驚くべきことに今では、本発明者らは、抗酸化剤を適切に選択することによって、脂質及び／または油の耐酸化性、ならびに予備製剤の場合には予備製剤に含まれる任意の活性薬剤の耐酸化性を著しく改善できることを立証した。

様々なアルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩が、例えばＳｃｏｔｔ ａｎｄ Ｋｙｆｆｉｎ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（１９７８）１６９，６９７－７０１）により既知であるが、脂質系での抗酸化剤としての使用及びそのような製剤との適合性についてはこれまで知られていない。Ｓｃｏｔｔ ａｎｄ Ｋｙｆｆｉｎは、骨試料の脱灰における可溶性ＥＤＴＡ塩の使用について記載しており、その場合、ＥＤＴＡは金属イオン封鎖剤として作用する。特に好適な溶液は、０．２ＭトリメチルアンモニウムＥＤＴＡを含有する８０％エタノール水溶液であるとされている。脂質製剤での使用についても脂質中の溶解性についてもまったく示唆されていない。本発明におけるＥＤＴＡ塩の目的は、脂質製剤での防腐剤または安定性強化剤としてのものであり、以前に記載されたものとはまったく異なっている。

成分ｉ）－脂質及び／または油
本発明の実施形態すべてにおいて、混合物は少なくとも１種の脂質及び／または油（成分ｉ）を含み、含水量が０～１．０重量％である。脂質の混合物、油の混合物、または脂質と油両方の混合物を成分ｉ）として使用することができる。

本明細書で使用される場合、用語「油」とは、常温常圧で液体である、飽和または不飽和のＣ５～Ｃ７０炭化水素を指す。本発明での使用に好ましい油は、飽和または不飽和のＣ１０～Ｃ６０炭化水素、好ましくは飽和または不飽和のＣ１０～Ｃ４０炭化水素である。

一実施態様では、成分ｉ）は滑沢剤を使用する際に適した油である。そのような油は通常、飽和Ｃ１０～Ｃ４０炭化水素である。酸化は滑沢剤の粘度を増加させる傾向があるため、滑沢剤は耐酸化性であることが望ましい。

一実施形態では、成分ｉ）は、少なくとも１種の脂肪酸または脂肪酸エステル（脂質）を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。脂肪酸／脂質は、カルボン酸またはエステルの極性「頭部基」と、非極性の「尾部」基を形成する炭化水素鎖とで構成されるという点で「油」とは異なる。脂肪酸エステルはエステル化脂肪酸である。本発明で使用される脂肪酸またはエステルは、常温常圧で固体であっても液体であってもよいが、好ましくは液体である。

非極性「尾部」基の例として、Ｃ₆～Ｃ₃₂アルキル基及びアルケニル基があり、これは通常、長鎖カルボン酸またはそのエステルとして存在する。これらは、炭素鎖中の炭素原子数及び不飽和数を基準にして記載される場合が多い。したがって、ＣＸ：Ｚとは、Ｘ個の炭素原子とＺ個の不飽和を有する炭化水素鎖を示す。特に例として、ラウロイル（Ｃ１２：０）基、ミリストイル（Ｃ１４：０）基、パルミトイル（Ｃ１６：０）基、フィタノイル（Ｃ１６：０）基、パルミトレオイル（Ｃ１６：１）基、ステアロイル（Ｃ１８：０）基、オレオイル（Ｃ１８：１）基、エライドイル（Ｃ１８：１）基、リノレオイル（Ｃ１８：２）基、リノレノイル（Ｃ１８：３）基、アラキドノイル（Ｃ２０：４）基、ベヘノイル（Ｃ２２：０）基、及びリグノセロイル（Ｃ２４：９）基が挙げられる。誤解を避けるために記すと、本明細書で「鎖」または「尾部」中の炭素原子数に言及する場合、当技術分野で慣例とされるように、この数には－Ｃ（Ｏ）Ｏ－部分の炭素原子を含む。

したがって、一般的な非極性鎖は、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、フィタン酸、パルミトール酸、ステアリン酸、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、ベヘン酸、もしくはリグノセリン酸を含む天然エステル脂質の脂肪酸、または対応するアルコールをベースとする。好ましい非極性鎖は、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びリノール酸、特にオレイン酸である。

脂質（複数可）は飽和であっても不飽和であってもよいが、好ましくは少なくとも１重量％（総脂質含有量基準）、例えば、少なくとも５重量％（５～１００％）、少なくとも１５重量％（１５～１００％）、少なくとも３０重量％（３０～１００％）、少なくとも５０重量％（５０～１００％）、または少なくとも８０重量％（８０～１００％）の不飽和脂質を含む。

一実施形態では、成分ｉ）は単一の脂肪酸／脂肪酸エステル、または脂肪酸／脂肪酸エステルの混合物である。通常、成分ｉ）には、飽和脂肪酸と不飽和脂肪酸の混合物が含まれる。好ましい実施形態では、脂質（複数可）及び／または油（複数可）は天然源から抽出される。

一実施形態では、成分ｉ）は、アーモンド油、アボカド油、バター、キャノーラ油、ヒマシ油、ココナッツ油、コーン油、綿実油、フラックスシード油、ギー、ラード、亜麻仁油、マカダミア油、マーガリン、マスタード油、オリーブ油、パーム油、ピーナツ油、カボチャ種子油、米ぬか油、ベニバナ油、ゴマ油、大豆油、ヒマワリ油、茶種子油、植物油、またはクルミ油などの食用脂質である。誤解を避けるために記すと、上記の食用脂質は、炭化水素ではなく、特に脂肪酸エステルの形態で脂肪酸を含有するため、成分（ｉ）の意図では「油」ではなく「脂質」である。

一実施形態では、成分ｉ）は、以降のセクションで説明される成分ａ）またはｂ）で規定される通りである。

特に好ましい実施形態では、混合物は、成分ｉ）及びｉｉ）から本質的になるか、またはそれからなる。

予備製剤
予備製剤は、成分ｉ）が脂質混合物であり、少なくとも１種の中性脂質「成分ａ）」及び場合により少なくとも１種のリン脂質「成分ｂ）」が含まれる上記「混合物」の下位区分である。予備製剤は、下記のような成分ｃ）及び場合により成分ｄ）をさらに含む。

成分ａ）－中性脂質
成分ａ）の好ましい範囲は、予備製剤の２０～９０重量％、好ましくは３０～７０重量％、より好ましくは３３～６０％（例えば４３～６０％）、特に３８～４３％である。

本明細書に示される成分「ａ」は、極性「頭部」基及び少なくとも１つの非極性「尾部」基を含む少なくとも１つのモノアシル、ジアシルまたはトリアシル脂質である。あるいは、成分ａ）はトコフェロール（複数可）を含み得るか、またはそれからなり得る。好ましい態様では、成分ａ）は少なくとも１種の中性ジアシル脂質（生理学的ｐＨで実効電荷を有しない）を含む。

本明細書で使用される場合、用語「アシル脂質」は、ポリオール「頭部」基及び１つ以上の無極性「尾部基」で構成される脂質成分に関する。ある特定の実施形態では、ポリオールは、グリセロール、糖、またはソルビタンなどのヘキシタンであり得る。用語「ヘキシタン」は、式ＨＯＣＨ₂（ＣＨＯＨ）₄ＣＨ₂ＯＨであるヘキシトールを意味し、これは、形式上、１当量の水を失うことにより環化して５員環または６員環、好ましくは５員フラノース環を形成する。ソルビタンは、ある特定の実施形態では、特にモノアシル脂質成分の一成分として、特に好適な「頭部基」である。

ジアシル脂質及びトリアシル脂質の場合、脂質成分が、２つまたは３つの無極性尾部基を有するグリセロール頭部基を含むことが最も好ましい。２つまたは３つの非極性基は、炭素原子数が同じであっても異なっていてもよく、それぞれ独立して飽和であっても不飽和であってもよい。非極性基の例として、Ｃ₆～Ｃ₃₂アルキル基及びアルケニル基があり、これは通常、長鎖カルボン酸のエステルとして存在する。これらは、炭素鎖中の炭素原子数及び不飽和数を基準にして記載される場合が多い。したがって、ＣＸ：Ｚとは、Ｘ個の炭素原子とＺ個の不飽和を有する炭化水素鎖を示す。特に例として、ラウロイル（Ｃ１２：０）基、ミリストイル（Ｃ１４：０）基、パルミトイル（Ｃ１６：０）基、フィタノイル（Ｃ１６：０）基、パルミトレオイル（Ｃ１６：１）基、ステアロイル（Ｃ１８：０）基、オレオイル（Ｃ１８：１）基、エライドイル（Ｃ１８：１）基、リノレオイル（Ｃ１８：２）基、リノレノイル（Ｃ１８：３）基、アラキドノイル（Ｃ２０：４）基、ベヘノイル（Ｃ２２：０）基、及びリグノセロイル（Ｃ２４：９）基が挙げられる。したがって、一般的な非極性鎖は、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、フィタン酸、パルミトール酸、ステアリン酸、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、ベヘン酸、もしくはリグノセリン酸を含む天然エステル脂質の脂肪酸、または対応するアルコールをベースとする。好ましい非極性鎖は、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びリノール酸、特にオレイン酸である。

任意の数のモノアシル、ジアシル及び／またはトリアシル脂質の混合物を成分ａ）として使用することができる。好ましくは、この成分には、Ｃ１８脂質の少なくとも一部（例えば、１つ以上のＣ１８：０、Ｃ１８：１、Ｃ１８：２、またはＣ１８：３の非極性基を有するジアシルグリセロール（ＤＡＧ））、例えばジオレイン酸グリセロール（ＧＤＯ）及び／またはジリノール酸グリセロール（ＧＤＬ）などが挙げられるであろう。非常に好ましい例は、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも８０％、さらには実質的に１００％のＧＤＯを含むＤＡＧである。

ＧＤＯ及び他のジアシルグリセロールは天然源に由来してもよいため、一般に、一定の割合で他の鎖長などを有する「汚染」脂質が存在する。これに関連して、「純粋な」ＧＤＯとはグリセロールと２つのＣ１８：１脂肪酸とのジエステルである。他のいずれのジアシルグリセロールも不純物とみなす。したがって、一態様では、本明細書で使用されるＧＤＯは、付随する不純物を含む任意の工業用等級のＧＤＯ（すなわち工業用純度のＧＤＯ）を示すのに使用される。これらの不純物は精製により分離除去することができるが、等級が一定であればこれはほとんど必要ない。しかしながら、必要に応じて、「ＧＤＯ」は、本質的に化学的に純粋なＧＤＯ、例えば少なくとも純度７０％、好ましくは少なくとも純度７５％、及びより好ましくは少なくとも純度８０％のＧＤＯであり得る。同様に、本明細書で参照されるＧＤＯのＣ１８：１含有量は、約８０％、好ましくは少なくとも８５％、及びより好ましくは少なくとも９０％であり得る。

成分ａ）を含め、使用されるどの材料にも、場合により重金属を含む不可避の微量金属不純物が潜在的に含まれる可能性があることが理解されるであろう。市販のＧＤＯ（例えば、Ｃｒｏｄａ製）の分析証明書によると、ＧＤＯ中の重金属（または元素不純物）の通常最大濃度は５ｐｐｍである。理論に束縛されるものではないが、本発明の様々な態様に共通して存在するこれらの金属成分と、その封鎖は、観察される付加的な安定性に少なくとも部分的に関与する可能性がある。しかしながら、材料の取り扱い／保存に使用される鉄系合金材料から吸収される可能性がある鉄イオンの存在の方が、一般的な問題であり得る。

成分ｂ）－リン脂質
本発明の好ましい脂質マトリックス中の任意成分「ｂ」は少なくとも１種のリン脂質である。トリアシル脂質をベースとする脂質遅延放出マトリックスは、リン脂質成分の存在を必要とせずに（ただし、リン脂質が存在していてもよい）、水性流体に曝露されるとデポ組成物を形成できることがＷＯ２０１６／０６６６５５により知られている。したがって、一実施形態では、成分ａ）はトリアシル脂質（複数可）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、成分ｂ）は任意である。しかしながら、成分ａ）が、５０％超のモノアシル脂質もしくはジアシル脂質、もしくはトコフェロール、またはこれらの成分のいずれかの混合物である場合、リン脂質成分ｂ）が存在することが好ましいであろう。一実施形態では、成分ａ）は、（成分ａ）の総量を基準として）トリアシル脂質が５０％未満（例えば、０～４５％）であり、成分ｂ）が（例えば、予備製剤の２０～８０重量％で）存在している。

存在する場合、成分ｂ）の好ましい範囲は、予備製剤の２０～８０重量％、好ましくは３０～７０重量％、より好ましくは３３～５５％（例えば、３５～５５％）、特に３８～４３％である。成分ｂ）が存在する場合、ａ：ｂの比は通常、４０：６０～７０：３０、好ましくは４５：５５～５５：４５、及びより好ましくは４０：６０～５４：４６、例えば４５：５５～５４：４６または４７：５３～５３：４７である。ある特定の実施形態では、約５０：５０の比（例えば、４９：５１～５１：４９）が非常に有効である。

好ましいリン脂質の極性「頭部」基としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、及びホスファチジルイノシトールが挙げられる。最も好ましいのはホスファチジルコリン（ＰＣ）及びホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、特にＰＣである。成分ａ）と同様に、この成分は極性頭部基と少なくとも１つの非極性尾部基とを含む。成分ａ）とｂ）との違いは主に極性基によるものである。したがって、非極性部分は、成分ａ）について上で考察した脂肪酸または対応するアルコールから適宜誘導することができる。リン脂質は２つの非極性基を含むと考えられる。この場合も、Ｃ１８基が好ましく、これを他の好適な任意の非極性基、特にＣ１６基と組み合わせてもよい。

リン脂質部分は天然源に由来してもよい。ＰＣの場合、リン脂質の好適な供給源として、卵、心臓（例えば、ウシ）、脳、肝臓（例えばウシ）、及び大豆を含む植物源が挙げられる。そのような供給源は、成分ｂの１つ以上の成分を提供するものであってもよく、リン脂質の任意の混合物を含んでもよい。これらの供給源または他の供給源に由来する、単一のＰＣまたはＰＣの混合物のいずれを使用してもよいが、大豆ＰＣまたは卵ＰＣを含む混合物が非常に適している。ＰＣ成分は、好ましくは少なくとも５０％の大豆ＰＣまたは卵ＰＣ、より好ましくは少なくとも７５％の大豆ＰＣまたは卵ＰＣ、及び最も好ましくは本質的に純粋な大豆ＰＣまたは卵ＰＣを含有する。

本発明の全態様に適用可能な一実施形態では、成分ｂ）はＰＣを含む。好ましくは、ＰＣは大豆由来である。好ましくは、ＰＣは、一次脂肪酸成分として１８：２脂肪酸を含み、二次脂肪酸成分として１６：０及び／または１８：１を含む。それぞれの脂肪酸成分は、ＰＣ中に１．５：１～６：１の比で存在するのが好ましい。１８：２が約６０～６５％、１６：０が１０～２０％、１８：１が５～１５％であり、残りは主に他の１６炭素及び１８炭素の脂肪酸であるＰＣが好ましく、一般的には大豆ＰＣである。

代替的ではあるが同様に好ましい実施形態では、ＰＣ成分に合成ジオレオイルＰＣ（ＤＯＰＣ）を含んでもよい。ＤＯＰＣを使用すると安定性の向上をもたらすことができるため、長期保存に対する安定性を必要とする組成物、及び／またはｉｎ ｖｉｖｏでの放出期間が長い組成物にとって特に好ましいと考えられる。本実施形態では、ＰＣ成分は、好ましくは少なくとも５０％の合成ジオレオイルＰＣ、より好ましくは少なくとも７５％の合成ジオレオイルＰＣ、及び最も好ましくは本質的に純粋な合成ジオレオイルＰＣを含有する。残りのＰＣがあれば、それは上記のような大豆ＰＣまたは卵ＰＣであることが好ましい。

本発明の予備製剤は、多くの場合、活性薬剤を加えて対象に投与されるため、成分が生体適合性であることが重要である。これに関して、トコフェロール、ＰＣ及びアシルグリセロール、特にＤＡＧは忍容性が高く、哺乳動物の体内に自然に存在する成分にｉｎ ｖｉｖｏ分解されるため、本発明の予備製剤に使用される好ましい脂質マトリックスは非常に有利である。

成分ｂ）には、重金属の不可避の微量不純物が含まれる可能性があるものと理解されよう。市販の大豆ＰＣ（例えば、Ｌｉｐｏｉｄ製）の分析証明書によると、大豆ＰＣ中の重金属（または元素不純物）の通常最大濃度は１０ｐｐｍである。

ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）のような合成または高精製ＰＣは、成分ｂ）の全部または一部として非常に適している。合成ジオレオイルＰＣは、最も好ましくは１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンであり、また他の合成ＰＣ成分として、ＤＤＰＣ（１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＤＥＰＣ（１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＤＬＯＰＣ（１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＤＬＰＣ（１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＤＭＰＣ（１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）：ＤＯＰＣ（１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＤＰＰＣ（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＤＳＰＣ（１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＭＰＰＣ（１－ミリストイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＭＳＰＣ（１－ミリストイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＰＭＰＣ（１－パルミトイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＰＯＰＣ（１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＰＳＰＣ（１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＳＭＰＣ（１－ステアロイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；ＳＯＰＣ（１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）；及びＳＰＰＣ（１－ステアロイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

成分ａ）及びｂ）の特に好ましい組み合わせは、ＧＤＯとＰＣ、特にＧＤＯと大豆ＰＣ及び／またはＤＯＰＣである。組み合わせに適した各成分の適量は、任意の組み合わせの個々の成分について本明細書に示した量である。文脈上、許容される限り、本明細書に示す成分の任意の組み合わせにもこれが当てはまる。

成分ｃ）－生体適合性有機溶媒
本発明の予備製剤の成分ｃ）は少なくとも１種の生体適合性有機溶媒である。予備製剤は、（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ）投与後に通常は過剰の水性流体と接触してデポ組成物を生成することを目的とするため、この溶媒は対象にとって忍容性があり、かつ、水性流体との混合及び／または予備製剤から水性流体への拡散または溶解が可能であることが望ましい。したがって、少なくとも中程度の水溶性を有する溶媒が好ましい。後述するように、成分ｃ）には極性共溶媒を含み得る。

成分ｃ）は、アルコール、アミン、アミド、またはエステルからなる群から選択される少なくとも１種の溶媒を含むかまたはそれからなる。好ましくは、成分ｃ）は少なくともモノアルコール溶媒を含む。最も好ましくは、成分ｃ）はエタノール、プロパノール、イソプロパノール、またはそれらの混合物を含む。成分ｃ）はエタノールを含むかまたはそれからなることが特に好ましい。成分ｃ）は、モノアルコール溶媒、好ましくはエタノール、及び極性共溶媒を含むかまたはそれらからなるものであり得る。エタノールとプロピレングリコールを含むかまたはそれらからなる混合物もまた非常に好ましい。

予備製剤中の成分ｃ）の量はいくつかの特徴に大幅な影響を与えると考えられる。特に、粘度及び放出速度（及び持続時間）は、溶媒濃度によって著しく変化する可能性がある。したがって、溶媒の量は、低粘度混合物を得るのに少なくとも十分であるが、さらに所望の放出速度を得るように決定される。通常は１～３０％、特に２～２０％の溶媒濃度で、好適な放出特性及び粘度特性が得られるであろう。いくつかの実施形態では、２～１８％、例えば２～１６％、特に２～１５％の濃度が好ましい。

上に示すように、本発明の予備製剤中の成分ｃ）の量は、成分ａ）、ｃ）、及びｉｉ）（本明細書に記載されるように、成分ｂ）及びｄ）は任意である）の低粘度混合物（例えば分子性溶液）を得るのに少なくとも十分であり、成分の任意の特定の組み合わせに応じて、標準方法によって容易に決定される。

偏光顕微鏡法、Ｘ線散乱及び回折技術、核磁気共鳴法、及び低温透過型電子顕微鏡（クライオＴＥＭ）と組み合わせた目視観察などの技術によって、溶液、Ｌ₂相もしくはＬ₃相、または液晶相を観察すること、あるいはクライオＴＥＭの場合はそのような相に分散した断片を観察することにより、相挙動を分析することができる。粘度は標準手段によって、すぐに測定することができる。上記のように、適切な実効粘度は、効果的に注射できる粘度であり、特に滅菌濾過できる粘度である。これは本明細書に示すように容易に評価されるであろう。

成分ａ）、ｂ）、及びｃ）の非常に好ましい組み合わせは、ＧＤＯ、大豆ＰＣ、及びエタノール、特にＧＤＯ、大豆ＰＣ、及びエタノールとプロピレングリコールの混合物である。上に示すように、組み合わせに適した各成分の適量は、任意の組み合わせの個々の成分について本明細書に示した量である。

ハロゲン置換炭化水素は生体適合性が低い傾向があるため、成分ｃ）にほとんど含まれないか、または全く含まれないことが好ましい。

本明細書で使用される成分ｃ）は単一溶媒であっても、好適な溶媒の混合物であってもよいが、一般的に低粘度のものである。「低粘度」溶媒、成分ｃ）（単一溶媒または混合物）の粘度は通常、２０℃で１８ｍＰａｓ以下にすべきである。これは、好ましくは２０℃で１５ｍＰａｓ以下、より好ましくは１０ｍＰａｓ以下、及び最も好ましくは７ｍＰａｓ以下である。

ＷＯ２０１２／１６０２１３には、モノアルコール溶媒に加えて極性溶媒を添加すると、粘度の低下及び活性薬剤のバーストプロファイルの低下を含む多数の利点が得られることが記載されている。成分ｃ）について前述した好ましい態様に加えて、特に好ましい一実施形態では、成分ｃ）はモノアルコール溶媒及び極性共溶媒を含む。本明細書で使用される場合、用語「極性共溶媒」は、２５℃で少なくとも２８、より好ましくは２５℃で少なくとも３０の誘電率（ｄｉｅｌ）を有するが、水または何らかの水性流体ではない溶媒であると定義される。非常に好適な例として、プロピレングリコール（ｄｉｅｌ約３２）及びＮ－メチル－２－ピロリドン（ＮＭＰ、ｄｉｅｌ約３２）が挙げられる。本明細書に列挙する成分ｃ）の好ましい濃度は、特に文脈上の定めがない限り、モノアルコール溶媒と極性共溶媒との混合物にも同様に適用される。

特に好ましい実施形態では、成分ｃ）は、モノアルコール溶媒と極性共溶媒との混合物を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。極性共溶媒は、一実施形態では、ジアルコールＣ３～Ｃ６有機溶媒、すなわち２つのヒドロキシ基を含むＣ３～Ｃ６有機溶媒であり得る。ジアルコール溶媒は、好ましくはプロピレングリコールである。存在する場合、極性共溶媒は、予備製剤の２～１２重量％、例えば３～１０重量％、特に４～９重量％の濃度で含まれる。この濃度は、成分ｃ）について上に列挙した範囲の一部とみなされる。一実施形態では、成分ｃ）は、エタノールとプロピレングリコール（ＰＧ）との混合物を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

有機モノアルコール溶媒と極性共溶媒の両方、例えばエタノールとＰＧの両方が存在する場合、モノアルコール溶媒と極性共溶媒との溶媒比は、好ましくは２０：８０～７０：３０の範囲、好ましくは３０：７０～７０：３０（ｗ／ｗ）、より好ましくは４０：６０～６０：４０である。モノアルコール成分とジアルコール成分がほぼ等量であるものが非常に適している。

特に好ましい実施形態では、成分ｃ）は１～３０％の濃度で存在し、エタノールとＰＧとの混合物を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、その場合、ＰＧに対するエタノールの比（ｗ／ｗ）は３０：７０～７０：３０、好ましくは４０：６０～６０：４０である。より好ましくは、成分ｃ）は５～１５重量％または８～１８重量％、最も好ましくは８～１８重量％の範囲で存在し、エタノールとＰＧの比が４０：６０～６０：４０（ｗ／ｗ）の混合物である。

誤解を避けるために記すと、本発明の予備製剤に極性共溶媒が存在する場合であっても、総水分濃度は、本明細書の様々な実施形態に記載される通りに維持されることになる（例えば、０．１～１．０重量％）。

成分ｉｉ）－アルキルアンモニウム塩
成分ｉｉ）は、ＥＤＴＡ（「エチレンジアミン四酢酸」または「エデト酸」）のアニオンまたは後述するようなＥＤＴＡ類似体のアニオンと、式（Ｉ）：
ＮＲ¹Ｒ²Ｒ³Ｒ⁴ⁿ⁺（Ｉ）
である少なくとも１つのアルキルアンモニウムカチオンと、を含むアルキルアンモニウム塩であり、式中、各Ｒ¹～Ｒ⁴は独立して、Ｈ、または直鎖もしくは分枝鎖のＣ１～１０基（本明細書に記載されるもの）であり、ただしＲ¹～Ｒ⁴のうち少なくとも１つはＨではない。

通常及び好ましくは、ｎ＝１である。しかしながら、エチレンジアミン（ＮＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₂）のように、複数の窒素原子を含むアンモニウム塩に関しては、＋１カチオンと＋２カチオン（すなわち、ＮＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₃ ⁺とＮＨ₃ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₃ ²⁺）の混在が可能な場合がある。後述するように過剰の前駆体アミンを与えることによって、ある程度までポリカチオン種の形成を防止することができる。しかしながら、混合カチオンの形成が起こり得る場合を当業者は認識している。

Ｒ¹～Ｒ⁴のうち少なくとも１つがＨでなければ、Ｒ¹～Ｒ⁴のそれぞれは同一であっても異なっていてもよい。ＨではないＲ¹～Ｒ⁴の置換基はすべて同じであることが好ましい。したがって、好ましいカチオンはＮＲＨ₃ ⁺、ＮＲ₂Ｈ₂ ⁺、及びＮＲ₃Ｈ⁺またはＮＲ₄ ⁺である（式中の「Ｒ」基は同一である）。第１級、第２級及び第３級アンモニウムカチオンは、後述するように適切なアミンとＥＤＴＡとを組み合わせることによって容易に調製できるため、第４級カチオンよりも好ましい。

Ｒ¹～Ｒ⁴のそれぞれは独立して、Ｈ、または直鎖もしくは分枝鎖のＣ１～１０アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、好ましくはＣ１～Ｃ５である。最も好ましくは、Ｒ¹～Ｒ⁴のそれぞれは、直鎖または分岐鎖のＣ１～５アルキル基であり、特に直鎖のＣ１～Ｃ５またはＣ１～Ｃ３アルキル基である。

Ｒ¹～Ｒ⁴のそれぞれは独立して、１つ以上のＯＨまたはＮＨ₂（またはＮＨ₃ ⁺）でさらに置換されていてもよい。一実施形態では、置換基Ｒがｍ個の炭素原子を含む場合、その置換基は、置換基あたり最大でｍ－１個のＯＨ基及び／またはＮＨ２基を含み得る。例えば、Ｒ１がＣ８である場合、Ｒ１は最大７個のＯＨ基を含んでよく、特にアンモニウムＮ原子に直接結合している炭素原子以外の各炭素原子に１個のＯＨ単位が結合している。本実施形態は、アルキルアンモニウムカチオンがアミノポリオール（例えばメグルミン（ＭｅＮＨＣＨ₂（ＣＨＯＨ）₄ＣＨ₂ＯＨ））から誘導される場合に特に関連するものである。別の例として、Ｒ１がＣ３である場合、Ｒ１は、セリノール（ＮＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）₂）のように最大２個のＯＨ基を含み得る。一実施形態では、Ｒ¹～Ｒ⁴のうち少なくとも１つは、少なくとも１つのＯＨ基またはＮＨ₂基で置換された直鎖Ｃ１～Ｃ６基である。

ある実施形態では、Ｒ１～Ｒ４基のうちのいずれか２つが結合してＣ４～Ｃ８、好ましくはＣ４～Ｃ６環を形成する。これは場合により１つ以上の環外ＯＨ基またはＮＨ２基を含み得る。Ｒ¹～Ｒ⁴基のうちのいずれか２つが一緒に環を形成する場合、単環内にＯまたはＮＨの単位も存在し得る。特に、モルホリン塩を使用してもよいことが想定される（すなわち、Ｒ¹～Ｒ⁴のうちのいずれか２つが、１個の環内にＯ原子を含む６員Ｃ４環を一緒に形成する場合）。本実施形態では、Ｒ¹～Ｒ⁴基のうちの２つとＮが、残りのＲ¹～Ｒ⁴基は上記の定義を有したまま、モルホリン環を一緒に形成する。

特に好ましいアルキルアンモニウムカチオンには、アミンのＮ－プロトン化から誘導されるもの、またはあまり好ましくない実施形態ではＮ－アルキル化から誘導されるものが含まれ、その場合のアミンは以下から選択される：
エタノールアミン「ＥＴＡ」（ＮＨ₂（ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ））；
ジエタノールアミン「ＤｉＥＴＡ」（ＮＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ）₂）；
メグルミン（ＮＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂（ＣＨＯＨ）₄ＣＨ２ＯＨ））；
トリス－ヒドロキシメチルアミン「ＴＲＩＳ」（Ｎ（ＣＨ₂ＯＨ）₃）；
エチレンジアミン（ＮＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₂）；または
セリノール（ＮＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）₂）。

式（Ｉ）のアルキルアンモニウムカチオンの質量は、５００ａｍｕ未満、好ましくは３５０ａｍｕ未満、特に２５０ａｍｕ未満であることが好ましい。本発明ではエタノールアンモニウムイオン（ＨＯＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₃ ⁺）を含むＥＤＴＡの塩が特に好ましい。ＥＤＴＡ塩はＥＤＴＡとエタノールアミン（ＥＴＡ）との塩であり、好ましくはＥＤＴＡとＥＴＡのみであることが最も好ましい。

一実施形態では、本発明は、アルキルアンモニウムカチオンがトリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、またはテトラエチルアンモニウムではないという条件で、前述する式（Ｉ）の少なくとも１つのアルキルアンモニウムカチオンとＥＤＴＡのアニオンとを含むＥＤＴＡ塩に関する。

アルキルアンモニウムカチオンは、ＥＤＴＡ二ナトリウムなどの従来の金属（無機）ＥＤＴＡ塩と比較して、ＥＤＴＡ塩の脂溶性を増加させるのに役立つと考えられる。ＥＤＴＡには４つのカルボン酸単位が含まれるため、アルキルアンモニウム塩は最大４つのアンモニウムカチオン及びテトラアニオン性ＥＤＴＡアニオンを含み得る。

本明細書で使用される場合、用語「ＥＤＴＡ」が、エチレンジアミン四酢酸それ自体を表す場合がある。あるいは、本明細書に示すＥＤＴＡは、エチレンジアミン四酢酸それ自体とＥＤＴＡ類似体の両方を包含する場合がある。したがって、本明細書における「ＥＤＴＡ」には、文脈上許容される限り、「ＥＤＴＡ及びその類似体」を包含する。好適なＥＤＴＡ類似体は、分子内に少なくとも１つのグリシネート単位（すなわち、単位－ＮＣＨ₂ＣＯＯ－）、好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのグリシネート単位を含むものである。好適なＥＤＴＡ類似体には以下が挙げられる：
イミノ二酢酸（ＩＤＡ）－（ＮＨ（ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）₂；
ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）－Ｎ（ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）₃；
ペンテン酸＊－Ｎ（ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）₂；
エグタズ酸－Ｎ（ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）₂
ＮＯＴＡ－［Ｎ（ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）ＣＨ₂ＣＨ₂］₃
ＤＯＴＡ－［Ｎ（ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）ＣＨ₂ＣＨ₂］₄
＊「ＤＴＰＡ」とも称する
一実施形態では、ＥＤＴＡ類似体は、以下の式（ＩＩ）：

に示される構造を有し、
式中、ｎは１～１０、好ましくは１～５、特に１、２または３であり；
ＸはＣＨ₂、ＯまたはＮＲ₄であり、
Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、及びＲ₄はそれぞれ独立して、ＨもしくはＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ、好ましくはＣＨ₂ＣＯ₂Ｈであるか、または
Ｒ₁及びＲ₃は一緒に共有結合となり（すなわち、ＥＤＴＡ類似体は環状である）、かつ、Ｒ₂及びＲ₄はそれぞれ独立してＨもしくはＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ、好ましくはＣＨ₂ＣＯ₂Ｈである。

本明細書で定義されるＥＤＴＡの量及び（ｄ）に対するＥＤＴＡの比は、ＥＤＴＡ及びＥＤＴＡ類似体に等しく適用される。実施形態すべてにおいて、成分（ｉｉ）中でＥＤＴＡが対イオンとして使用されることが好ましい。

ＥＤＴＡ塩の生成
ＥＤＴＡ塩は、混合物、例えば予備製剤を生成する前に、予め生成して、１種以上の成分に溶解または分散させても、あるいは原位置で生成してもよい。原位置での生成は一般に、操作が簡潔であるため好ましい。アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩の好適な調製方法には、ＥＤＴＡ（酸形態）及び必須アルキルアミン（塩基）を溶媒成分（ｃ）、または溶媒成分（ｃ）の前駆体（または副成分）である溶媒に溶解して、固体が完全に溶解するまで混合することを伴う。本明細書で規定される予備製剤以外の混合物では、ＥＤＴＡ塩を予め生成し、成分ｉ）に溶解または分散させてもよい。

本発明者らは、塩を溶媒成分（ｃ）に可溶化するには、原則として、モノアミンの場合で、ＥＤＴＡの量に対して、少なくとも３．０、好ましくは少なくとも３．５（例えば、３．５～１０）モル当量のアミン（これはアンモニウム塩の前駆体である）が必要であることを立証した。実施例に記載されているように、塩を可溶化するのに必要なアミンとＥＤＴＡとの最小比は、具体的に選択されるアルキルアンモニウム塩に応じて異なる。しかしながら、固体ＥＤＴＡが溶媒に完全に溶解するアルキルアミンのモル過剰量を単に測定することにより、実験によって適切なモル比を得ることができる。一実施形態では、テトラアンモニウムＥＤＴＡ塩を生成するために、形式上必要とされるよりも多い、化学量論比を超えるアミンを添加する。例えば、以下の実施例に記載されるように、ＴＲＩＳを用いたＥＤＴＡの効率的な可溶化には、５．０当量以上のアミンを必要とする場合がある。

ある種のジアミンまたはトリアミンについては、適切なＥＤＴＡ塩の溶解度が得られるモル比が、モノアミンの場合ほど高くない可能性がある。ＮＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₂などのポリアミン（ジアミン、トリアミンなど）については、必要とするモル比がモノアミンの場合より低くてもよい。ポリアミンの好適な濃度は、２．０以上（例えば、２．０～４．０）、または２．５以上であり得る。この場合も、最適化によって適切な濃度を見出すことができる。指針として、上述したアミンのモル当量は、ＥＤＴＡに対するモノアミンのモル比を表すこともあれば、アミン（またはアミンの混合物）が分子中に（個別にまたは混合物に平均して）複数のアミン部分を有する場合にはＥＤＴＡに対するアミン部分の比を表すこともある。

存在し得るアミンの当量数に上限はないが、通常は効率的な可溶化を確実にするのに必要とされる量を超えるアミンを添加すべきでないことが理解されるであろう。通常の実用限界は、２０当量、好ましくは１０当量であり得る。

本発明者らは、アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩を生成するには、一般的に用いられるＥＤＴＡ二ナトリウム（ＥＤＴＡ（Ｎａ））ではなく、酸形態のＥＤＴＡを出発物質とする必要があることを立証した。ＥＤＴＡ（エデト酸）もＥＤＴＡ（Ｎａ）も、アルキルアミン（例えばＥＴＡ）を含まないと、数か月混合した後も、好適な／好ましい溶媒（例えばＥｔＯＨ／ＰＧ）に溶解しない。驚くべきことに、ＥＤＴＡ（Ｎａ）はＥＴＡの存在下でもＥｔＯＨ／ＰＧに不溶である。

したがって、塩を製造するための一般的な手順には、遊離四酸ＥＤＴＡ（水和物であり得る）を溶媒（ｃ）、または溶媒成分（ｃ）の前駆体である溶媒に溶解することを伴う。この溶媒には、少なくともエタノールなどのモノアルコール溶媒を含み、さらに前述のような極性共溶媒を含んでもよく、好ましくはエタノールとＰＧの混合物である。次に、必要当量数のアルキルアミンを添加し、例えば転倒回転または磁気撹拌によって、目視観察で確認できる程度にＥＤＴＡが溶解するまで混合物を撹拌する。例えば、ＥＴＡ／ＥＤＴＡ塩を生成する場合、通常は２４時間の混合で十分に有効な溶解性が確保される。

溶媒成分（ｃ）の前駆体である溶媒中での塩の生成も本発明の範囲内である。「前駆体」とは、ＥＤＴＡ塩を生成する溶媒が溶媒成分（ｃ）の最終組成と同一ではないが、予備製剤中で溶媒（ｃ）の最終組成に達するように、前駆体中の溶媒（複数可）の含有量を調整できることを意味する。一例として、ＥｔＯＨ：ＰＧ（１：２）の混合物中で塩を生成し、成分（ｃ）の最終組成がＥｔＯＨ：ＰＧ（１：１）に達するように、塩生成中または塩生成後に追加のエタノールを添加することができる。

アルキルアミンとＥＤＴＡとの比
本発明者らは、驚くべきことに、アルキルアミン：ＥＤＴＡが一定の比を超えると、予備製剤中の活性薬剤の化学的安定性が低下し始めることを立証した。これは、過剰のアルキルアミンと活性薬剤との直接的な反応、または分解生成物による反応の結果である可能性がある。したがって、選択するアルキルアミンの量が、溶媒成分（ｃ）中のＥＤＴＡをすべて完全に溶解するのに十分であるが、このレベルを著しく超えないことが好ましい。含まれるアルキルアミンの量は、完全な溶解を達成するのに必要とされるレベルの２倍以下であることが好ましく、好ましくは１．５倍以下、好ましくは１．２倍以下である。溶媒成分（ｃ）中にＥＴＤＡを完全に溶解するのに必要なアルキルアミンの量は、前述の方法によって確定することができる。

一実施形態では、成分（ｉｉ）は、アミノ基またはアルキルアミノ基を１つだけ有するアルキルアンモニウム対イオンを含み、予備製剤中の、ＥＤＴＡと、上記アルキルアンモニウム対イオン及びその任意のアミン遊離塩基の合計との比は１：≧３．０であり、好ましくは１：≧３．５、最も好ましくは１：３．０～１：１０の範囲内である。

一実施形態では、成分（ｉｉ）は、アミノ基及び／またはアルキルアミノ基を２つ以上有するアルキルアンモニウム対イオンを含み、予備製剤中の、ＥＤＴＡと、上記アルキルアンモニウム対イオン及びその任意のアミン遊離塩基の合計との比は１：≧２．０であり、好ましくは１：２．０～１：４．０の範囲内である。

特に好ましい態様では、ＥＤＴＡ塩はＥＤＴＡのＥＴＡ塩である。本発明者らは、本実施形態において、溶媒成分（ｃ）（例えば、ＥｔＯＨ／ＰＧの５０：５０混合物）中でＥＤＴＡを完全に溶解するには、ＥＤＴＡの量に対して少なくとも約３．５モル当量のＥＴＡを加える必要があることを立証した。したがって、ＥＤＴＡに対するＥＴＡの量は７：１以下であることが好ましい。ＥＤＴＡに対するＥＴＡの当量は、好ましくは３．５～７（ｍｏｌ／ｍｏｌ）、好ましくは３．５～５、最も好ましくは３．５～４．５の範囲内である。最も好ましくは、ＥＤＴＡの量に対して４当量（ｍｏｌ／ｍｏｌ）のＥＴＡが使用される。

ＥＤＴＡ塩の量
アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩の量は、必要な保存期間にわたって、及び選択された保存条件下で、脂質ビヒクル及び活性薬剤（存在する場合）の成分の適切な安定性を確保するように選択される。適量のアルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩を決定する際に考慮すべき要素として、脂質成分と活性薬剤（存在する場合）の反応性、活性薬剤の使用量（存在する場合）、活性薬剤の分子量、保存条件（酸素含有量、湿度、温度）、必要とされる酸化保護の持続時間、及び予備製剤中に存在する金属イオンの濃度（分解過程を触媒する可能性がある）が挙げられる。

金属、例えばＦｅの触媒活性を抑制するには、予備製剤は通常、ＥＤＴＡ塩と金属（例えばＦｅ、特にＦｅ（ＩＩ）及びＦｅ（ＩＩＩ）イオンの形態）との比が少なくとも約２：１（ｍｏｌ／ｍｏｌ）である、すなわちＥＤＴＡ塩が少なくとも２倍モル過剰で存在するような量でＥＤＴＡ塩を含む。通常の手順では、モル比は、最大推定金属イオン（特にＦｅイオン）濃度と、この最大推定値に対して約２：１の比で提供されるＥＤＴＡに基づくことになる。したがって、実際の結果は、ＥＤＴＡと金属（例えばＦｅイオン）とのモル比が２：３以上になるであろう。

本発明者らは、好ましいＥＤＴＡ量が存在し、それを超えると混合物、例えば予備製剤の耐酸化性に関して有利性が見られず、実際には安定性が幾分低下する可能性があることを立証した。これは、「実施例」のセクションで詳細に考察するように、製剤中に存在する金属イオン（例えばＦｅイオン）の量に影響される。しかしながら、一般に、予備製剤中のＥＤＴＡ塩の好適な量（ＥＤＴＡ遊離酸に換算して算出）は、０．００１～０．０２重量％（１０～２００ｐｐｍ）であり、好ましくは０．００１～０．０１５重量％（１０～１５０ｐｐｍ）、特に０．００２～０．０１５重量％（２０～１５０ｐｐｍ）である。特に好ましい量は、０．００５～０．０１５重量％（５０～１５０ｐｐｍ）、最も好ましくは０．００８～０．０１２重量％（８０～１２０ｐｐｍ）である。１００ｐｐｍという量は、最大１０ｐｐｍの金属（鉄等価物）に対する保護に適しており、これは適切な医薬品の頑強性を確保するには十分である。

ある特定の実施形態では、ＥＤＴＡの量（アミン対カチオンを含まない、ＥＤＴＡ単独の重量を基準とする）は、予備製剤の０．００１～０．８重量％（１０～８０００ｐｐｍ）、０．００２～０．５重量％（２０～５０００ｐｐｍ）、０．００５～０．２重量％（５０～２０００ｐｐｍ）、または０．０１～０．１重量％（１００～１０００ｐｐｍ）の範囲であり得る。ある特定の実施形態では、ＥＤＴＡの量は、混合物、例えば予備製剤の０．００１～０．０５０重量％（１０～５００ｐｐｍ）、好ましくは混合物の０．００２～０．０３０重量％（２０～３００ｐｐｍ）の範囲であり得る。

先のセクションで説明したように、アルキルアミンとＥＤＴＡとの至適比が判明すれば、添加すべきアルキルアミンの量は確定することができる。一実施形態では、（ｉｉ）と（ｄ）との比は、１：１～１：５０００（ｗ／ｗ）の範囲内であり、好ましくは１：１～１：５００（ｗ／ｗ）、好ましくは１：５０～１：３００の範囲内である。

含水量
式（Ｉ）のアルキルアンモニウムイオンを含むＥＤＴＡ塩を加えることにより、水分量の少ない混合物、例えば予備製剤に抗酸化剤を加えることが可能になる。しかしながら、微量の水分を（特に原材料から）完全に除去することは極めて困難である。本質的に無水の製剤を実現できたとしても、予備製剤は通常、すぐに使用できる形態、例えば注射器中で、おそらく冷蔵状態で保存されることになる。注射器は完全に気密性でない場合が多く、これは、たとえ当初の水分量が微々たるものであっても、予備製剤中の水分量が、例えば数か月にわたり時間の経過とともに相当なレベルまで増加する可能性があることを意味する。

混合物、例えば予備製剤中の初期絶対水分量は０～１．０重量％である。好ましくは、含水量は１．０重量％未満、好ましくは０．８重量％未満、好ましくは０．５重量％未満である。最も好ましくは、水分量は０．１～０．９重量％、特に０．２～０．８重量％の範囲内である。各量は絶対水分量を表し、追加水分量を表すものではない。成分ａ）、ｂ）、またはｃ）内に存在する、何らかの不可避な微量の水分はここで示す水分量に含まれる。３か月の保存後の絶対水分量は好ましくは１．５重量％以下である。絶対水分量は、カールフィッシャー滴定などの当技術分野で周知の方法によって測定することができる。特に、含水量は、米国薬局方（ＵＳＰ ４０－ＮＦ ３５、ＵＳＰ＜９２１＞Ｗａｔｅｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄ Ｉａ）の手順に従って測定されることが好ましい。

成分ｄ）－活性薬剤
本発明の予備製剤は、１種以上のペプチドまたは非ペプチド活性薬剤を含み得る。本明細書に記載の特定のＥＤＴＡ塩を加えることによって、水分量が少ない（１．０％以下）脂質予備製剤、及び場合によりその中に含まれる任意の活性薬剤の酸化を低減できるという驚くべき発見は、一般的な応用性に優れているため、本発明の実施にとって生物活性薬剤の性質は特に重要ではないことを強調する。事実、本発明の方法によって脂質成分の酸化が低減されるため、いかなる活性薬剤の性質または存在さえも無関係に本発明の利点を得ることができる。

本発明は、対象となるどの生物活性薬剤を含有する脂質予備製剤にも適用可能であると想定される。生物活性薬剤は、ペプチド、タンパク質、薬物、抗原、栄養素、化粧品、芳香剤、着香剤、診断薬、医薬品、ビタミン、または食餌療法剤のような、所望の生物学的または生理学的効果を有する任意の化合物であってよく、有効レベルのｉｎ ｖｉｖｏ濃度（局所用組成物の局所濃度を含む）を付与するのに十分な濃度で製剤化される。最も好ましい活性薬剤は、薬物、ワクチン、及び診断薬を含む医薬品である。特に好ましいクラスの活性薬剤は、ソマトスタチン及びソマトスタチン類似体である。

本発明の組成物によって送達できる薬物の例としては、抗菌剤、免疫調節剤（免疫賦活薬及び免疫抑制剤を含む）、抗がん薬及び／または抗ウイルス薬（ヌクレオシド類似体、パクリタキセル及びそれらの誘導体など）、抗炎症薬／抗炎症剤（非ステロイド性抗炎症薬及びコルチコステロイドなど）、心血管薬（コレステロール降下剤及び血圧降下剤を含む）、鎮痛薬、制吐薬（ヒスタミンＨ１、ＮＫ１及び５－ＨＴ₃受容体アンタゴニスト、コルチコステロイド及びカンナビノイドを含む）、抗精神病薬及び抗鬱剤（セロトニン取り込み阻害剤、プロスタグランジン及び誘導体を含む）、ワクチン、ならびに骨調節剤が挙げられるが、これらに限定されない。診断薬には、放射性核種標識化合物、ならびにＸ線、超音波及びＭＲＩの造影剤を含む造影剤が挙げられる。栄養素には、ビタミン、補酵素、栄養補助食品などが挙げられる。

特に好適な活性薬剤には、急速な分解または排泄によって通常は体内での滞留時間が短くなるであろうもの、及び経口バイオアベイラビリティが低いであろうものが含まれる。このような活性薬剤には、ペプチド、タンパク質及び核酸を用いた活性薬剤、ホルモン、ならびに天然型または修飾型である他の天然に存在する作用物質が含まれる。そのような薬剤を本発明の予備製剤から形成されたデポ組成物の形態で投与することによって、クリアランス速度が急速であるにもかかわらず、数日間、数週間、または数か月に及ぶことがある期間にわたって持続的なレベルで薬剤が提供される。これは、同じ期間にわたって毎日複数回投与する場合と比較して、安定性及び患者の服薬遵守の点で明らかな利点をもたらす。したがって、好ましい一実施形態では、活性薬剤は、（血流に入ってからの）生物学的半減期が１日未満、好ましくは１２時間未満、より好ましくは６時間未満である。場合によって、この半減期は１～３時間以下程度であってもよい。好適な薬剤はまた、注射によって達成されるものと比べて経口バイオアベイラビリティが低いものであり、その場合、活性薬剤は同様にまたは代わりに、経口製剤において２０％未満、または好ましくは２％未満、特に０．２％未満、及び最も好ましくは０．１％未満のバイオアベイラビリティを有する。

本発明の予備製剤と製剤化される生物活性薬剤の量は、有効用量、及び投与時に形成されるデポ組成物が持続放出される予定の期間に応じて異なることになる。一般に、特定の薬剤の処方用量は、通常の１日用量に、予備製剤が放出される予定の日数を乗じたものとほぼ等しくなるであろう。明らかに、治療の開始時に高用量での何らかの有害作用を考慮に入れて、この量を調整する必要があり、そのため一般にこれが使用される最大用量となる。好適な実験によって、どんな場合にも適する正確な量を容易に決定できるであろう。

一実施形態では、本発明の予備製剤は、１種以上のペプチド活性薬剤を含み得る。ペプチド活性薬剤は、５～６０個の天然アミノ酸及び／または合成アミノ酸、特に５～５０個または５～４０個のアミノ酸を含み得る。

ペプチド及びタンパク質を用いた活性薬剤には、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）及びその断片、アンジオテンシン及びその関連ペプチド、抗体及びその断片、抗原及びその断片、心房性ナトリウム利尿ペプチド、生体接着性ペプチド、ブラジキニン及びその関連ペプチド、カルシトニン及びアミリンを含むカルシトニンペプチド及びその関連ペプチド、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、グルカゴン、及びセクレチンを含む血管活性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、プロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）ペプチドを含むオピオイドペプチド、エンケファリンペンタペプチド、プロダイノルフィンペプチド及び関連ペプチド、膵臓ポリペプチド関連ペプチド様神経ペプチド（ＮＰＹ）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、膵臓ポリペプチド（ＰＰＹ）、細胞表面受容体タンパク質断片、走化性ペプチド、シクロスポリン、サイトカイン、ダイノルフィン及びその関連ペプチド、エンドルフィン及びＰ－リドトロピン断片、エンケファリン及びその関連タンパク質、酵素阻害剤、免疫賦活性のペプチド及びポリアミノ酸、フィブロネクチン断片及びその関連ペプチド、胃腸ペプチド、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）のアゴニスト及びアンタゴニスト、グルカゴン様ペプチド１及び２、成長ホルモン放出ペプチド、免疫賦活性ペプチド、インスリン及びインスリン様成長因子、インターロイキン、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）及びその関連ペプチド（後述するようなＧｎＲＨアゴニストに相当する）、メラノコルチン受容体のアゴニスト及びアンタゴニスト、メラニン細胞刺激ホルモン及びその関連ペプチド、核移行シグナル関連ペプチド、ニューロテンシン及びその関連ペプチド、神経伝達物質ペプチド、オピオイドペプチド、オキシトシン、バソプレシン及びその関連ペプチド、副甲状腺ホルモン及びその断片、プロテインキナーゼ及びその関連ペプチド、ソマトスタチン及びその関連ペプチド、サブスタンスＰ及びその関連ペプチド、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）及びその関連ペプチド、腫瘍壊死因子の断片、トキシン及びトキソイド及び機能性ペプチド（アンジオスタチンを含む抗がんペプチドなど）、降圧ペプチド、抗血液凝固ペプチド、ならびに抗菌ペプチドからなる群から選択されるヒト用及び動物用の薬物；免疫グロブリン、アンジオゲニン、骨形成タンパク質、ケモカイン、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、サイトカイン、成長因子、インターフェロン（Ｉ型及びＩＩ型）、インターロイキン、レプチン、白血病抑制因子、幹細胞因子、トランスフォーミング増殖因子及び腫瘍壊死因子などのタンパク質からなる群から選択されるヒト用及び動物用の薬物が含まれる。本発明に適した生物活性薬剤のクラスで興味深いのがペプチドホルモンであり、これには、糖タンパク質ホルモンファミリー（ゴナドトロピン（ＬＨ、ＦＳＨ、ｈＣＧ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ））；プロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）ファミリー、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）；下垂体後葉ホルモン（バソプレシン及びオキシトシンを含む）、成長ホルモンファミリー（成長ホルモン（ＧＨ）を含む）、ヒトの絨毛性乳腺刺激ホルモン（ｈＣＳ）、プロラクチン（ＰＲＬ）、膵臓ポリペプチドファミリー（ＰＰ、ＰＹＹ及びＮＰＹを含む）；メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）；オレキシン；胃腸のホルモン及びペプチド（ＧＬＰ－１及びＧＩＰを含む）；グレリン及びオベスタチン；脂肪組織のホルモン及びサイトカイン（レプチン、アディポネクチン、及びレジスチンを含む）；ナトリウム利尿ホルモン；副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）；カルシトニン及びアミリンを有するカルシトニンファミリー；膵臓ホルモン（インスリン、グルカゴン及びソマトスタチンを含む）が挙げられる。上述のペプチドと同様の受容体親和性スペクトルを有するように設計された合成ペプチドもすべて本発明に非常に適している。

本発明のデポ組成物のさらなる大きな利点は、反復投与を必要とせずに活性薬剤が長期間にわたって徐々に放出されるということである。したがって、この組成物は、患者の服薬遵守が困難で不確実である状況、または投与量の均等性が非常に重要である状況、例えば、精神状態に影響を与える活性薬剤、治療域が狭い活性薬剤、及び子供または確実な投与計画にライフスタイルが適合しない人に投与される活性薬剤など、及び活性薬剤の効果よりも反復投与の不便さが上回る可能性がある「生活改善」活性薬剤に非常に適している。この態様により特に利点が得られる活性薬剤の特定のクラスとして、避妊薬、ホルモン（避妊ホルモン及び特に成長ホルモンなどの子供に使用されるホルモンを含む）、抗依存薬、ならびに統合失調症、アルツハイマー病、またはパーキンソン病を患っている患者など、服薬遵守度の低い集団の治療に使用される薬物、すなわち抗うつ薬及び抗けいれん薬が挙げられる。

カチオン性ペプチド及びタンパク質は、予備製剤の一部に、脂肪酸、またはホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリンを含むアニオン性脂質などの、アニオン性の両親媒性物質が含まれる場合の使用に特に適している。本実施形態では、好ましいペプチドまたはタンパク質に、オクトレオチド、ランレオチド、カルシトニン、オキシトシン、インターフェロン－ベータ及びガンマ、インターロイキン４、５、７及び８、ならびにｐＨ７超、特にｐＨ８超の等電点を有する他のペプチドまたはタンパク質が含まれる。

本発明の好ましい一態様では、本発明の組成物は、水性流体に曝露されると逆ミセルキュービック（Ｉ₂）相、またはＩ₂相を含む混合相を形成するような組成物であり、組成物中に極性活性薬剤が含まれるような組成物である。特に好適な極性活性薬剤として、上で列挙したものを含め、ペプチド及びタンパク質の活性薬剤、オリゴヌクレオチド、ならびに小分子の水溶性活性薬剤が挙げられる。この態様で特に注目すべきは、ペプチドオクトレオチド及び他のソマトスタチン関連ペプチド、インターフェロンアルファ及びベータ、グルカゴン様ペプチド１及びグルカゴン様ペプチド２の受容体のアゴニスト、リュープロレリン及び他のＧｎＲＨアゴニスト、アバレリクス及び他のＧｎＲＨアンタゴニスト、グラニセトロン及びオンダンセトロン及び他の５－ＨＴ₃受容体アンタゴニストである。

ＧｎＲＨ類似体
ＧｎＲＨ類似体は、本発明の製剤に含まれ得る活性薬剤の特定の１クラスを構成する。

ゴナドトロピン放出ホルモンアゴニスト（ＧｎＲＨアゴニスト）は、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体と相互作用してその生物学的応答である下垂体ホルモン（卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ））の放出を誘発する視床下部神経ホルモンＧｎＲＨをモデルにした合成ペプチドである。ＧｎＲＨアゴニストは、ホルモン感受性のがんであって、性腺機能低下状態により再発の可能性が低下するがんの治療に有用である。したがって、ＧｎＲＨアゴニストは、前立腺癌の内科的管理によく利用され、乳癌の患者に使用されている。その他の適応症の範囲には、思春期早発症を有する個体において思春期を遅延させる処置、エストロゲンの産生に依存する女性の障害の管理が含まれる。さらに、月経過多、子宮内膜症、腺筋症または子宮筋腫を有する女性に、卵巣の活動を抑制して低エストロゲン状態を誘発するためにＧｎＲＨアゴニストが投与される場合がある。

ロイプロリド（またはリュープロレリン）、ゴセレリン、ヒストレリン、トリプトレリン、ブセレリン、デスロレリン、ナファレリン及び関連ペプチドなどのゴナドトロピン放出ホルモン受容体アゴニスト（ＧｎＲＨ－ＲＡ）は、通常はこれらが長期間にわたって投与される種々の病態の治療に使用されるかまたは適応する。ＧｎＲＨ－ＲＡは、本発明での使用に好ましい活性薬剤の群を構成する。

ＧｎＲＨ自体は、ｐｙｒｏ－Ｇｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－ＮＨ₂（ＧｎＲＨ－Ｉ）という構造の翻訳後修飾デカペプチドである。５－Ｈｉｓ、７－Ｔｒｐ、８－Ｔｙｒの置換を有するＧＮＲＨ－ＩＩ、及び７－Ｔｒｐ、８－Ｌｅｕを有するＧｎＲＨ＿ＩＩＩという２種類の天然変異体も知られている。アゴニスト特性を有するペプチド類似体がいくつか知られており、その大半は１０－Ｇｌｙ－ＮＨ₂がＮ－Ｅｔ－ＮＨ₂で置換されている。フェルチレリンは、１０－ＧｌｙからＮ－Ｅｔ－ＮＨ₂への置換のみを有するが、ＧｎＲＨ－Ｉに対するさらなる置換を有する類似体として、リュープロレリン（ロイプロリド）（６－Ｄ－Ｌｅｕ）、ブセレリン（６－Ｓｅｒ（Ｂｕ^t））、ヒストレリン（６－ｄ－Ｈｉｓ（Ｉｍｂｚｌ））、デスロレリン（６－ｄ－Ｔｒｐ）がある。別の一般的なノナペプチドアゴニストは、６－Ｓｅｒ（Ｂｕ^t）で置換され、１０－Ｇｌｙ－ＮＨ₂がＡｚａＧｌｙ－ＮＨ₂で置換されているゴセレリンである。ナファレリン（６－ｄ－Ｎａｌ）及びトリプトレリン（６－ｄ－Ｔｒｐ）はいずれも、１０－Ｇｌｙ－ＮＨ₂基を保持する。最も一般的な２つのＧｎＲＨアゴニスト（ロイプロリド及びゴセレリン）の構造を以下に酢酸塩として示す。
ロイプロリド：ｐｙｒｏ－Ｇｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｎ－Ｅｔ－ＮＨ₂（酢酸塩）
ゴセレリン：ｐｙｒｏ－Ｇｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｓｅｒ（Ｂｕ^t）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ａｚｇｌｙ－ＮＨ₂（酢酸塩）
同様に、ＧｎＲＨ－Ｉの構造に基づいたＧｎＲＨアンタゴニストが少数知られている。これには、アバレリックス（Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ（ⁱＰｒ）－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ）、アンタレリクス（Ｄ－Ｎａｌ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｈｃｉｔ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ（ⁱＰｒ）－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ）；セトロレリクス（Ｄ－Ｎａｌ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｃｉｔ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ）、ガニレリクス（Ｄ－Ｎａｌ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－ｈＡｒｇ－Ｌｅｕ－ＨＡｒｇ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ）、イトレリクス（Ｄ－Ｎａｌ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ－Ｓｅｒ－ＮｉｃＬｙｓ－Ｄ－ＮｉｃＬｙｓ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ（ⁱＰｒ）－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ）、及びＮａｌ－Ｇｌｕ（Ｄ－Ｎａｌ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｐａｌ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ａｌａ）が含まれる。

単回用量のロイプロリドなどのＧｎＲＨアゴニストを投与すると、下垂体のゴナドトロピン（すなわち、ＬＨ及びＦＳＨ）の放出が刺激され、その結果、血清ＬＨ濃度及び血清ＦＳＨ濃度が増加し、ならびに卵巣及び精巣のステロイド産生が刺激される。この薬物を毎日１回投与する初期治療中に、男性では血清テストステロン及び血清ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の一過性の上昇、ならびに閉経前女性では血清エストロン濃度及び血清エストラジオール濃度の一過性の上昇が観察される。

短期治療時及び／または間欠治療時の強力なＧｎＲＨアゴニストの効果は、ステロイド産生の刺激であるが、長期投与時の動物及びヒトにおけるこの薬物の主な効果は、ゴナドトロピン分泌の阻害ならびに卵巣及び精巣のステロイド産生の抑制である。正確な作用機序（複数可）は完全には解明されていないが、ＧｎＲＨアゴニストによる継続療法は、下垂体のＧｎＲＨ受容体及び／または精巣のＬＨ受容体の数の減少を引き起こし、その結果、それぞれ下垂体及び／または精巣の脱感作が生じることは明らかである。この薬物は、ゴナドトロピンに対する受容体の親和性には影響しないと思われる。ロイプロリドの作用機序は、ステロイド産生を制御する酵素の阻害及び／または誘導も伴う可能性がある。他の作用機序には、生物学的活性の変化によるＬＨ分子の分泌、またはＬＨ及びＦＳＨの分泌の正常なパルス状パターンの障害を含み得る。

いくつかの重篤な医学的適応症は、性腺ステロイドホルモンの濃度に関連する、及び／またはこれに影響される。これには、がん、特に乳癌及び前立腺癌、及び良性前立腺肥大を含む、ある種の腫瘍性疾患；青少年における早発性または遅発性の思春期；多毛症；アルツハイマー病；ならびに性腺機能低下症、無排卵症、無月経症、精子減少症、子宮内膜症、平滑筋腫（子宮筋腫）、月経前症候群、及び多嚢胞性卵巣疾患などの生殖器系に関連する、ある種の病態が含まれる。この系の制御はまた、体外受精の方法においても重要である。

ＧｎＲＨアゴニストによる治療は、性腺ステロイドホルモン濃度が影響する病態の悪化を招くと予想される場合があるが、治療を約２週間以上継続した場合、上述した下方制御効果により、これらのホルモンが去勢レベルまで低下される。その結果、ある特定の前立腺癌及び乳癌などのホルモン感受性腫瘍、ならびに思春期早発症及び上記の他の病態の多くを、長期のＧｎＲＨアゴニスト療法によって改善または緩和することができる。

一実施形態では、本発明の予備製剤は、１種以上のＧｎＲＨ類似体を含有する。ＧｎＲＨはペプチドホルモンであるため、一般的なＧｎＲＨ類似体はペプチド、特に１２アミノ酸以下のものであろう。そのようなペプチドは、本明細書で列挙されるものを含め、ＧｎＲＨ Ｉ、ＩＩ及び／またはＩＩＩ、及び／または１種以上の公知の類似体と構造的に関連することが好ましいであろう。ペプチドは、遺伝コードで示される２０種のαアミノ酸から選択されるアミノ酸のみを含んでもよく、またはより好ましくは、それらの異性体、ならびに他の天然アミノ酸及び非天然アミノ酸（一般に、αアミノ酸、βアミノ酸またはγアミノ酸）、ならびにそれらの類似体及び誘導体を含んでもよい。好ましいアミノ酸には、公知のＧｎＲＨ類似体の構成要素として上記で列挙されたものを含む。

アミノ酸誘導体は、ペプチドの末端で特に有用であり、末端アミノ基または末端カルボキシレート基が、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、エステル、アミド、チオ、アミド、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノもしくはトリアルキルアミノ、アルキル（これは、本明細書全体にわたってＣ₁～Ｃ₁₂アルキル、好ましくはＣ₁～Ｃ₆アルキル、例えばメチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチルまたはｔ－ブチルなどを意味する）、アリール（例えばフェニル、ベンジル、ナフチルなど）、または他の官能基、好ましくは少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは合計で１０個以下、より好ましくは６個以下の原子を有するものなどの任意の他の官能基で置換されていてもよい。

特に好ましいＧｎＲＨ類似体は、６～１２個のアルファ－アミノ酸の拘束性ペプチドであり、その特定の例としては、上記のもの、及び特に上記の配列のロイプロリド及びゴセレリンが挙げられる。

本明細書で使用される場合、「ＧｎＲＨ類似体」とは、任意のＧｎＲＨのアゴニストまたはアンタゴニスト、好ましくはペプチド、ペプチド誘導体またはペプチド類似体を意味する。ペプチド由来のＧｎＲＨアゴニスト、例えば上記のもの、及び特にロイプロリドまたはゴセレリンのようなものが最も好ましい。

存在する場合、ＧｎＲＨ類似体は一般に、予備製剤全体の０．０２～１２重量％として製剤化される（遊離塩基の量を基準とする）。通常値は０．１～１０％、好ましくは０．２～８％、及びより好ましくは０．５～６％であると考えられる。約１～５％のＧｎＲＨ類似体含有量が最も好ましい。

予備製剤に含有するのに適したＧｎＲＨ類似体の用量、それにより使用される製剤の容量は、放出速度（例えば、使用される溶媒の種類及び量によって制御される）及び放出持続時間、ならびに所望の治療レベル、具体的な薬剤の活性、及び選択された特定の活性薬剤のクリアランス速度に依存することになる。通常は、７～１８０日間にわたって治療レベルをもたらすのに、１用量あたり０．１～５００ｍｇの量が適するであろう。好ましくは、これは１～２００ｍｇであろう。ロイプロリドまたはゴセレリンの場合、この量は、通常は約１～１２０ｍｇ（例えば、持続期間が３０～１８０日）であると考えられる。好ましくは、３０日から１年、好ましくは３～６か月にわたり放出するように設計されたデポ剤の場合、ロイプロリドの量は、注射ごとに１日あたり約０．０２～１ｍｇであろう。活性薬剤の安定性及び放出速度の直線性は、充填量対持続時間が線形関係ではない可能性があることを意味することは明らかであろう。例えば、３０日ごとに投与されるデポ剤は、本明細書に示すＧｎＲＨ類似体のうちの１つなどの活性薬剤を２～３０ｍｇ有する可能性があり、または９０日用のデポ剤は６～９０ｍｇを有する可能性がある。

ソマトスタチン類似体
ソマトスタチン類似体は、本発明の製剤に含まれ得る活性薬剤の特定の１クラスを構成する。ソマトスタチン（成長ホルモン放出抑制因子、ＳＳＴ）は、動物の体内に広く分布する天然のペプチドホルモンであり、中枢神経系において神経伝達物質として作用し、複数の組織に対して多様なパラクリン／オートクリン調節作用を有する。高等な種において、ＳＳＴ－１４及びＳＳＴ－２８（後者は、Ｎ末端側が伸長したＳＳＴ－１４の同族体である）という２つの生物学的に活性な産物が知られている。

ＳＳＴ－１４は、Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓという配列を有する１４残基の環状ペプチドホルモンであり、２つのシステイン残基がジスルフィド架橋で結合して、Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒという重要な結合配列にＩＩ型βターンが形成されている。天然のＳＳＴ－１４の生物学的半減期は非常に短く（１～３分）、そのため、天然のＳＳＴ－１４自体は、現在の製剤において治療的実用性はないが、ｉｎ ｖｉｖｏでの活性が高く、及び／またはクリアランス時間が長い、入手可能なソマトスタチン受容体アゴニストの数は増加しつつある。

ＳＳＴ－１４、ＳＳＴ－２８、オクトレオチド、ランレオチド、バプレオチド、パシレオチド（ＳＯＭ２３０）及び関連ペプチドなどのソマトスタチン受容体アゴニスト（ＳＲＡ）は、通常はこれらが長期間にわたって投与される種々の病態の治療に使用されるかまたは適応する。ＳＲＡは、本発明での使用に好ましい活性薬剤の群を構成する。

例えば、オクトレオチドは、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｃｙｓ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ－ｏｌ（２－７ジスルフィド架橋）という配列を有する合成オクタペプチドであり、通常は酢酸塩として投与される。このＳＳＴ－１４誘導体は、ｉｎ ｖｉｖｏのＳＳＴ様活性に必要である重要なＰｈｅ－（Ｄ）Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒのβターンを保持するが、天然ホルモンとは対照的に、約１．７時間という終末相半減期を有する。オクトレオチドは、カルチノイド腫瘍及び先端巨大症を含む病態の治療に使用され、通常は数週、またはより一般的には数か月もしくは数年という持続した期間にわたって投与される。多種多様な腫瘍がソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）を発現することが見出されているため、ソマトスタチン受容体アゴニストは、種類の異なる多くのがんの治療において特に注目されている。公知のＳＳＴＲは５種類（ＳＳＴＲ１～ＳＳＴＲ５）存在し、これらはＳＳＴ－１４に対して同等に高い親和性を示す。オクトレオチドを含め、最も研究されているソマトスタチン受容体アゴニストは、ＳＳＴＲ２及びＳＳＴＲ５に対して高い選択性を示していることから、オクトレオチドは、この種の受容体を発現する腫瘍の治療において特に注目されている。

最も一般的で「単純な」オクトレオチド製剤は、Ｎｏｖａｒｔｉｓの「Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ」（登録商標）である。これは、皮下（ｓ．ｃ）注射用の水溶液であり、１００μｇの用量で、注射から０．４時間後にピーク濃度である５．２ｎｇ／ｍｌに達する。最大１２時間、作用を持続することができるが、一般に８時間ごとに皮下投与を実施する。数か月または数年という期間にわたって１日３回皮下注射を行うことは明らかに理想的な投与計画ではない。

１回のパシレオチドの皮下投与の後、ヒト血漿中の濃度は通常、急速に（投与から約１５分～１時間後に）ピークに達し、初期半減期はそのピークから２～３時間である。クリアランス半減期は、後半の減退期では長くなるものの、そのような送達ではＣｍａｘ／Ｃａｖｅがかなり高くなるであろうことは明らかである。

パシレオチドＬＡＲは、上記の問題の一部を解消する、長時間作用型のパシレオチド製剤である。しかしこれはポリマー微粒子を用いた系であり、当技術分野で知られているように、及び本明細書で上述するように、そのような系に固有の制限を伴う。

カルチノイド腫瘍は、パラクリン機能を有する特殊化した細胞（ＡＰＵＤ細胞）から生じる腸腫瘍である。原発腫瘍は一般に虫垂にあり、臨床上は良性である。二次性で転移性の腸カルチノイド腫瘍は、セロトニン、ブラジキニン、ヒスタミン、プロスタグランジン、及びポリペプチドホルモンを含む、過剰量の血管作動性物質を分泌する。この臨床的結果が、カルチノイド症候群（弁膜症を有する患者、及びあまり一般的ではないが喘息及び関節症を有する患者における、突発性の皮膚紅潮、チアノーゼ、痙攣性腹痛及び下痢といった症候群）である。これらの腫瘍は、胃腸管（及び肺）内のいずれの場所においても増殖する可能性があるが、約９０％は虫垂内である。残りは、回腸、胃、結腸または直腸で生じる。現在、カルチノイド症候群の処置は、最初に静脈内ボーラス注射し、その後静脈内注入を行う。症状に対して十分な効果が確認されたら、ポリ乳酸－コ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）マイクロスフェア中に製剤化されたオクトレオチドのデポ製剤による処置を開始する。しかし、デポ剤の注射後の最初の２週間またはそれ以上の間は、ＰＬＧＡ球からの徐放を補うために、オクトレオチドを毎日皮下注射することが推奨される。

本発明の予備製剤のうち特定のものは、１つ以上のソマトスタチン受容体アゴニストの塩を含む（これはペプチド活性薬剤の好ましい例である。したがって、本明細書での「活性薬剤」に対するいずれの言及もペプチド活性薬剤を意図する）。ＳＳＴ－１４はペプチドホルモンであるため、一般的なソマトスタチン受容体アゴニストはペプチド、特に１４アミノ酸以下のものであろう。好ましくは、そのようなペプチドは、環状化及び／または少なくとも１つの分子内架橋を有することなどによって、構造的に拘束されている。アミド架橋、エステル架橋、または特にジスルフィド架橋が非常に好適である。拘束ペプチドは２型βターンを示すことが好ましいであろう。そのようなターンは、ソマトスタチンの重要な領域に存在する。ペプチドは、遺伝コードで示される２０種のαアミノ酸から選択されるアミノ酸のみを含んでもよく、またはより好ましくは、それらの異性体、ならびに他の天然アミノ酸及び非天然アミノ酸（一般に、αアミノ酸、βアミノ酸またはγアミノ酸、Ｌ－アミノ酸またはＤ－アミノ酸）、ならびにそれらの類似体及び誘導体を含んでもよい。本明細書で使用される場合、用語「ソマトスタチン受容体アゴニスト」には、本明細書に記載される非常に高性能の遅延放出型製剤中に塩として製剤化された場合に有効なペプチド活性薬剤であるという理由から、場合に応じてＳＳＴ－１４及び／またはＳＳＴ－２８を含む場合がある。

アミノ酸誘導体及びタンパク質合成に通常は使用されないアミノ酸は、ペプチドの末端で特に有用であり、末端アミノ基または末端カルボキシレート基は、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、アミド、チオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノもしくはトリアルキルアミノ、アルキル（これは、本明細書全体にわたってＣ₁～Ｃ₁₈アルキル、好ましくはＣ₁～Ｃ₈アルキル、例えばメチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチルまたはｔ－ブチルなどを意味する）、アリール（例えばフェニル、ベンジル、ナフチルなど）、または他の官能基、好ましくは少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは合計で１０個以下、より好ましくは６個以下の原子を有するものなどの任意の他の官能基で置換されていてもよい。

特に好ましいソマトスタチン受容体アゴニストは、６～１０個のα－アミノ酸の拘束ペプチドであり、その特定の例としては、オクトレオチド、ランレオチド（配列ＮＨ₂－（Ｄ）Ｎａｐｈ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－（Ｄ）Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ－ＣＯＮＨ₂、及び配列ＮＨ₂－（Ｄ）Ｎａｐｈ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－（Ｄ）Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ－ＣＯＮＨ₂であるその環状誘導体、いずれもＣｙｓ－Ｃｙｓ分子内ジスルフィド架橋を有する）、パシレオチド（別称ＳＯＭ２３０）、及びバプレオチドが挙げられる。存在する場合、ソマトスタチン受容体アゴニストは一般に、製剤全体の０．１～１２重量％として製剤化される（遊離塩基の量を基準とする）。通常値は０．１～１０％、０．５～９％、好ましくは１～８％、及びより好ましくは１～７％であると考えられる。２～６％のソマトスタチン受容体アゴニスト含有量が最も好ましい。

製剤に含有するのに適したソマトスタチン受容体アゴニストの用量、それにより使用される製剤の容量は、放出速度（例えば、使用される溶媒の種類及び量によって制御される）及び放出持続時間、ならびに所望の治療レベル、選択された特定の活性薬剤の活性及びクリアランス速度に依存することになる。通常は、７～９０日間にわたって治療レベルをもたらすのに、１用量あたり１～５００ｍｇの量が適するであろう。好ましくは、これは５～３００ｍｇであろう。オクトレオチドの場合、この量は、通常は約１０～１８０ｍｇ（例えば、持続期間が３０～９０日）であると考えられる。好ましくは、オクトレオチドの量は、注射ごとに１日あたり約０．２～３ｍｇであろう。したがって、３０日ごとに投与されるデポ剤は、オクトレオチドを６～９０ｍｇ有する可能性があり、または９０日用のデポ剤は１８～２７０ｍｇを有する可能性がある。

パシレオチドの場合、投与量は通常、持続期間１～２４週、好ましくは２～１６（例えば３、４、８、１０または１２）週にわたり、デポ持続期間の１週あたりの量が約０．０５～４０ｍｇであり、好ましくは持続期間の１週あたりの量が約０．１～２０ｍｇ（例えば１週あたり１～５ｍｇ）であろう。代替的実施形態では、予備製剤は、毎週（例えば７±１日ごとに）投与するように製剤化されてよい。７～１６８日間にわたって治療レベルをもたらすのに、１用量あたり合計０．０５～２５０ｍｇのパシレオチドの量が適するであろう。これは、好ましくは０．１～２００ｍｇ、例えば０．２～１５０ｍｇ、０．１～１００ｍｇ、２０～１６０ｍｇなどである。活性薬剤の安定性及び放出速度に対する効果は、充填量対持続時間が線形関係ではない可能性があることを意味することは明らかであろう。例えば、３０日ごとに投与されるデポ剤は、パシレオチドを０．２～２０ｍｇ有する可能性があり、または９０日用のデポ剤はパシレオチドを３０～６０ｍｇ有する可能性がある。

ＳＲＡなどのペプチド活性薬剤の塩が本発明の製剤に使用される場合、これは生物学的に許容される塩である。好適な塩として、酢酸塩、パモ酸塩、塩化物塩、または臭化物塩が挙げられる。最も好ましいのは塩化物塩である。

他の活性薬剤
別の実施形態では、予備製剤は、ソマトスタチンまたはソマトスタチン類似体ではない活性薬剤を含む。例えば、ペプチド活性薬剤は、ＳＳＴ（１）～ＳＳＴ（５）受容体（特に対応するヒト受容体）のいずれにおいてもアゴニストまたはアンタゴニストとして相互作用しないペプチドであってよい。

通常、そのような予備製剤にはソマトスタチンまたはソマトスタチン類似体の活性薬剤は一切含有されない。すなわち、先行するセクションに記載のソマトスタチン類似体の範囲に入らない活性薬剤が存在する。特に、本実施形態では、予備製剤は、内因性ソマトスタチン、ＳＳＴ－１４、ＳＳＴ－２８、オクトレオチド、ランレオチド、バプレオチド、もしくはパシレオチドまたはそれらの塩から選択されない活性薬剤を含み得る。これらのペプチドは、好ましくは本実施形態の予備製剤から除外される。この予備製剤は、ソマトスタチン、ソマトスタチン受容体アゴニスト、及びソマトスタチン類似体を含まないことが好ましい。

本発明の予備製剤に含有してもよい他の活性薬剤には以下が挙げられる：
ＧｎＲＨアンタゴニスト、例えば、セトロレリクス、ガニレリクス、アバレリクス、デガレリクス；
ＧＬＰ－１及びその類似体、例えばＧＬＰ－１（７－３７）、ＧＬＰ－１（７－３６）アミド、リラグルチド、セマグルチド、エクセナチド、及びリキシセナチド（ＡＶＥ００１０）；
グルカゴン様ペプチド２アゴニスト（ＧＬＰ－２）及びその類似体、例えばＧＬＰ－２及びエルシグルチド（ＺＰ１８４６）；
ＤＰＰＩＶ阻害剤；ナトリウム／グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤。

本発明に適した他のペプチドとして、アンジオペプチン、アンジオテンシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、アンチロイキナート、抗炎症性ペプチド２、アプロチニン、ブラジキニン、ボンベシン、カルシトニン、カルシトリオール、コレシストキニン（ＣＣＫ）、コロニー刺激因子、副腎皮質刺激ホルモン放出因子、Ｃ－ペプチド、ＤＤＡＶＰ、デルモルフィン由来テトラペプチド（ＴＡＰＳ）、ダイノルフィン、エンドルフィン、エンドスタチン、エンドセリン、エンドセリン－１、エンケファリン、上皮成長因子、エリスロポエチン、線維芽細胞増殖因子、卵胞刺激ホルモン、フォリスタチン、フォリトロピン、ガラニン、ガラニン様ペプチド、ガレクチン－１、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、Ｇ－ＣＳＦ、グレリン、グリア由来神経栄養因子、ＧＭ－ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子、成長ホルモン、成長ホルモン放出因子、肝細胞増殖因子、インスリン、インスリン様増殖因子－Ｉ及びＩ、インターフェロン、インターロイキン、レプチン、白血病抑制因子、メラノコルチン１、２、３、４、メラニン細胞刺激ホルモンメタスチン、単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）、モルフィセプチン、ＮＥＰ１－４０、ニューロペプチドＹ、ニューロペプチドＷ、オレキシン－Ａ及びオレキシン－Ｂ、オキシトシンｐ２１－Ｃｉｐ１／ＷＡＦ－１、ＴＡＴ融合タンパク質、副甲状腺ホルモン、色素上皮由来増殖因子（ＰＥＤＦ）、ペプチド、ペプチド、プロレニンハンドル領域、ペプチドＹＹ（３－３６）、血小板活性化因子、血小板由来増殖因子、プロレニンデカペプチド、プロテグリン－１、ＰＲ３９、プロラクチン、リラキシン、セクレチン、サブスタンスＰ、腫瘍壊死因子、ウロコルチン、血管内皮増殖因子、血管作動性腸管ポリペプチド、バソプレシンが挙げられる。

モルヒネ、ヒドロモルフォン及びオキシコドンなどの排出半減期が短いオピオイドは、２４時間鎮痛を達成するにはこれらの薬剤を頻繁に投与する必要があり、長時間作用型放出製剤に最適な候補となる。フェンタニル及びブプレノルフィンは著しい初回通過代謝を受け、経口投与後のバイオアベイラビリティが十分でない。フェンタニル及びブプレノルフィンは、それらの高い効力と相まって、本発明の長時間作用型注射デポ製剤に最適な候補である。スフェンタニル、レミフェンタニル、オキシモルフォン、ジモルフォン、ジヒドロエトルフィン、ジアセチルモルヒネは、本発明での使用に適した他の強力なオピオイド受容体アゴニストである。

ブプレノルフィンは、オピオイド依存症、ならびに場合によりコカイン及びアンフェタミン及びメトアンフェタミンの依存症の維持治療にも使用されるが、現在の舌下ブプレノルフィン製剤には、バイオアベイラビリティが低い、変動性が大きい、及び効果の持続時間が制限されるという傾向があり、その結果、特に朝、予測不能な用量反応及び離脱症状が生じるという問題がある。本発明の注射デポ製剤を使用することによって、これらの問題に効果的に対処できると同時に、舌下で必要とされる高用量を、同一用量で効果が著しく高い注射で用いた結果、薬物の誤用を促すという誤用及び誤った指示による問題にも対処できる。同様に、本発明によって提供されるような利便な注射デポシステムを使用した依存症の治療にオピオイドアンタゴニストを使用することができる。本発明での使用に適したオピエートアンタゴニストは、ナロキソン、ナルメフェン、及びナルトレキソンである。

リスペリドン、イロペリドン、パリペリドン、オランザピン、アセナピン、ジプラジドン及びアリピプラゾールを含む抗精神病薬もまた、患者による治療コンプライアンスが改善される可能性という観点から、ならびに経時的に安定した血漿中濃度が得られることにより、本発明に非常に適している。同様に、本発明は認知に悪影響を及ぼす認知症、アルツハイマー病及びパーキンソン病の治療に有用である。好適な活性成分として、ドネペジル、リバスチグミン、ガランタミン、及びエマンチン、ラサギリン及びプラミペキソールが挙げられる。

本発明の予備製剤に含有してもよい他の活性薬剤群は、５ＨＴ₃アンタゴニストである。活性薬剤が５ＨＴ₃アンタゴニストまたは第２世代５ＨＴ₃アンタゴニストを含む場合、好ましくは、これはオンダンセトロン、トロピセトロン、グラニセトロン、ドラセトロン、パロノセトロン、アロセトロン、シランセトロン及び／またはラモセトロンまたはそれらの混合物から選択される。製剤に含有するのに適した５ＨＴ₃アンタゴニストの用量、それにより使用される製剤の容量は、放出速度（例えば、使用される溶媒の種類及び量によって制御される）及び放出持続時間、ならびに所望の治療レベル、具体的な薬剤の活性、及び選択された特定の活性薬剤のクリアランス速度に依存することになる。通常は、５～９０日間にわたって治療レベルをもたらすのに、１用量あたり１～５００ｍｇの量が適するであろう。好ましくは、これは１～３００ｍｇであろう。グラニセトロンの場合、この量は、通常は約１０～１８０ｍｇ（例えば、持続期間が３～６０日）であると考えられる。好ましくは、３０日から１年、好ましくは３～６か月にわたり放出するように設計されたデポ剤の場合、グラニセトロンの量は、注射ごとに１日あたり約０．２～３ｍｇであろう。活性薬剤の安定性及び放出速度の直線性は、充填量対持続時間が線形関係ではない可能性があることを意味することは明らかであろう。例えば、３０日ごとに投与されるデポ剤は、活性薬剤を２～３０ｍｇ有する可能性があり、または９０日用のデポ剤は６～９０ｍｇを有する可能性がある。

好ましい実施形態では、予備製剤は、ソマトスタチン受容体アゴニストではない少なくとも１つの活性薬剤を含む。好ましくは、この予備製剤はソマトスタチン受容体アゴニストを含まない。したがって、予備製剤は、（特にヒトの）ＳＳＴ（１）～ＳＳＴ（５）受容体のいずれにおいてもアゴニストまたはアンタゴニストとして相互作用する活性薬剤を含まなくてもよい。

本明細書で用語「予備製剤」とは、医薬組成物、好ましくは非経口医薬組成物、より好ましくは注射用非経口医薬組成物、さらにより好ましくは皮下または筋肉内適用のための注射用非経口医薬組成物、さらにより好ましくは皮下適用のための注射用非経口医薬組成物である。

任意の追加成分
本発明の特に好ましい一実施形態では、組成物（予備製剤及び得られるデポ剤）は、ポリエチレンオキシドまたはポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）崩壊剤、例えばＰＥＧグラフト化脂質及び／または界面活性剤などの崩壊剤を含まない。

例えば、組成物は、好ましくは、ポリソルベート８０（Ｐ８０）または他のポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）、ＰＥＧ化リン脂質（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（２０００）、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ（５０００）、ＤＯＰＥ－ＰＥＧ（２０００）、及びＤＯＰＥ－ＰＥＧ（５０００）などのＰＥＧ脂質）、Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ１５、ＰＥＧ化脂肪酸（例えば、ＰＥＧ－オレエート）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１２７及びＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８などのブロック共重合体、エトキシル化ヒマシ油誘導体（例えば、クレモフォア）、ＰＥＧ化グリセリル脂肪酸エステル（例えば、Ｎｉｋｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ製のＴＭＧＯ－１５）、及びＰＥＧ化トコフェロール（例えば、Ｅａｓｔｍａｎ製のＶｉｔａｍｉｎ Ｅ ＴＰＧＳとして知られる、ｄ－アルファトコフェリルポリ（エチレングリコール）１０００コハク酸）などの崩壊剤を含まない。

しかし、粉末としての活性薬剤（例えば、本発明のキットに含まれる）、ならびに脂質製剤に溶解した活性薬剤は、ある種の安定化添加剤によって安定性（保存安定性及びｉｎ ｖｉｖｏ安定性の両方）を得ることができる。そのような添加剤として、糖（例えば、スクロース、トレハロース、ラクトースなど）、ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロースなどのポリオール）、アミノ酸（メチオニン、グルタミン酸、リジンなど）、ＨＣｌなどの脂溶性酸成分、アニオン脂質及び／または界面活性剤（ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、及びオレイン酸（ＯＡ）など）が挙げられる。

単回投与形態は、使用前の保存中に安定性及び効力が維持されなければならないが、１回使用した後は使い捨てにできる。注目すべき知見として、アルキルアンモニウムＥＤＴＡ塩を含む非水性予備製剤は、２５℃またはさらには４０℃などの高温での保存安定性が向上している。これは、輸送及び保存が容易（冷蔵が不要）という点で利点をもたらす。単回投与形態は、２５℃（ヘッドスペースに空気あり）で２か月間保存した後に、分析した活性薬剤濃度が最初に分析した活性薬剤濃度の少なくとも９５％であり、３か月後に、分析した活性薬剤濃度が最初に分析した活性薬剤濃度の少なくとも９０％であるような安定性を有することが好ましい。

好ましい一実施形態では、本発明の予備製剤、器具及び／またはキットは、周囲温度のように、１０℃超（例えば、１５～４０℃で）、好ましくは２０℃超で保存される。対応する実施形態では、本発明の予備製剤、器具及び／またはキットは、１～６℃などの冷蔵温度（例えば、１０℃未満または５℃未満）で保存されるものではない。

単回投与形態は、４０℃（ヘッドスペースに空気あり）で２か月間保存した後に、分析した活性薬剤濃度が最初に分析した活性薬剤濃度の少なくとも８５％であり、３か月後に、分析した活性薬剤濃度が最初に分析した活性薬剤濃度の少なくとも８０％であるような安定性を有することが好ましい。

複数回投与形態は、使用前の保存中に安定性及び効力が維持されなければならないだけでなく、最初の使用後に密封性が損なわれた後も、複数回投与を用いたレジメンの投与期間にわたって、安定性、効力、及び相対的／実質的な無細菌状態を維持しなければならない。このような理由から、複数回投与形態は、抗菌剤または静微生物剤、例えば静菌剤、防腐剤が必要とされる場合が多い。

しかし、防腐剤を使用すると安定性に問題が生じるため、タンパク質またはペプチドの活性薬剤を含有する保存医薬品の製造は困難な場合が多いことが実証されている。多くの場合、タンパク質が不活性化し、凝集物が形成されることで、時には活性薬剤に対する注射部位の不耐性または免疫原性が報告されるに至る場合もある。追加される賦形剤または製剤成分によって、これがさらに悪化する可能性がある。

一態様では、本明細書の実施形態のそれぞれは、静菌剤及び防腐剤を含む、抗菌剤または静微生物剤を場合により含有し得る。そのような薬剤には、塩化ベンザルコニウム、ｍ－クレゾール、ベンジルアルコール、または他のフェノール系防腐剤が含まれる。当技術分野において公知の通常濃度を使用することができる。

成分ｉ）（成分ａ）及びｃ）を含み、成分ｂ）及びｄ）が任意である）及び成分ｉｉ）として上記に挙げた追加成分が、多少でも存在する場合には、好ましくは０～５重量％（例えば、０．０１重量％～５重量％）、好ましくは２重量％以下、及びより好ましくは１重量％以下の量で存在する。

一実施形態では、成分ａ）及びｂ）（これらの成分の性質に固有の何らかの不純物を許容する）は、予備製剤の脂質成分の少なくとも９５％を構成する。好ましくは、予備製剤の総脂質含有量の少なくとも９９％が成分ａ）及びｂ）からなる。好ましくは、予備製剤の脂質成分は本質的に成分ａ）及びｂ）からなる。

投与
本発明の予備製剤は一般に非経口投与されるように製剤化される。この投与は一般に血管内方法ではないが、好ましくは皮下（ｓ．ｃ．）、腔内または筋肉内（ｉ．ｍ．）であろう。通常、投与は注射によるものであり、注射という用語は本明細書で、有針、カテーテルまたは無針（針なし）注射器などによって、皮膚経由で製剤を送る任意の方法を示す際に使用される。ただし、本製剤の高充填量及び他の有益な特徴を、皮膚、粘膜、鼻腔、頬側及び／または口腔への局所投与または全身投与を含む非経口投与に活かすことが可能である。好ましくは、そのような非経口投与は局所用途のものである。

好ましい非経口投与は、筋肉内または皮下注射、最も好ましくは深部皮下注射によるものである。本発明の組成物の重要な特徴は、毒性または著しい局所的影響なしに筋肉内と皮下両方の経路、及び他の経路によって投与できることである。この組成物は腔内投与にも適している。深部皮下注射は、現在の一部のデポ剤で使用されている（深部）筋肉内注射よりも深部に達せず、対象にとって痛みが少ないという利点があり、また、注射の容易さと局所的な副作用リスクの低さを併せ持つことから、実用上、本発明の事例に最も適している。驚くべきことに本発明者らの観察によれば、本製剤は、皮下注射及び筋肉内注射のいずれによっても予測可能な期間にわたって活性薬剤の持続放出をもたらす。したがって、これにより注射部位の広範囲な変更が可能になり、注射部位の組織深度を綿密に考慮しなくても用量を投与することが可能になる。

一実施形態では、本発明の脂質予備製剤は、特にｉｎ ｖｉｖｏで水性流体に曝露されると非ラメラ液晶デポ組成物となる。本明細書で使用される場合、用語「非ラメラ」は、通常の液晶相もしくは逆液晶相（キュービック相またはヘキサゴナル相など）またはＬ３相あるいはそれらの任意の組み合わせを示す際に使用される。液晶という用語は、あらゆるヘキサゴナル液晶相、あらゆるキュービック液晶相、及び／またはそれらのあらゆる混合物を指す。本明細書で使用される場合、特に記載のない限り、ヘキサゴナルは「通常の」または「逆」ヘキサゴナル（好ましくは逆）を示し、「キュービック」は任意のキュービック液晶相を示す。当業者は、本明細書に示す説明及び実施例、ならびにＷＯ２００５／１１７８３０を参照することによって適切な相挙動を有するこれらの組成物を難なく特定できるが、相挙動にとって最も好ましい組成領域は、成分ａ：ｂが４０：６０～７０：３０、好ましくは４５：５５～５５：４５、及びより好ましくは４０：６０～５４：４６の領域に入る場合である。約５０：５０の比（例えば、４９：５１～５１：４９）が非常に好ましく、最も好ましくは約５０：５０である。

理解すべき重要な点として、本発明の予備製剤は低粘度のものである。したがって、液晶相はどれも、注射器または同様の注入ディスペンサーによって投与できる粘度よりも著しく高い粘度を有するため、この予備製剤はバルクで液晶相であってはならない。そのため、本発明の予備製剤は、溶液、Ｌ₂相またはＬ₃相、特に溶液またはＬ₂のような非液晶状態であると考えられる。本明細書全体を通じて使用されるＬ₂相は、好ましくは、粘度低下効果を有する有機モノアルコール溶媒（成分ｃ）を５重量％超、好ましくは７％超、及び最も好ましくは９％超含有する「膨潤」Ｌ₂相である。

本明細書に記載の予備製剤は、好ましくは「低粘度」のものである。これは、例えば、１ｍｌの使い捨て注射器から小ゲージ針を通して分配することが可能であるかどうかを目安とすることができる。好ましくは、低粘度の混合物は、手動圧により、１９ａｗｇの針、好ましくは１９ゲージ未満、より好ましくは２３ａｗｇ（またはさらに最も好ましくは２７ゲージ）の針を通して分配することができる。特に好ましい実施形態では、低粘度の混合物は、０．２２μｍ注射器フィルターなどの標準的な滅菌濾過膜を通過することができる混合物であるべきである。本発明の予備製剤に適した粘度の一般的な範囲は、例えば、２０℃で１～１０００ｍＰａｓ、好ましくは１０～８００ｍＰａｓ、より好ましくは５０～７５０ｍＰａｓ、及び最も好ましくは５０～６００ｍＰａｓであろう。

本発明の好ましい脂質系の予備製剤の多くは、投与されると、低粘度混合物から高粘度（一般に組織接着性）デポ組成物への相構造転移を起こす。一般にこれは、分子混合物、すなわち膨潤したＬ₂相及び／またはＬ₃相から、１つ以上の（高粘度）液晶相、例えば、通常のヘキサゴナル液晶相もしくは逆ヘキサゴナル液晶相、またはキュービック液晶相あるいはそれらの混合物などへの転移であると考えられる。また、投与後にさらなる相転移が起こる可能性もある。本発明が機能するには完全な相転移は必要ないが、投与された混合物の少なくとも表面層が液晶構造を形成するであろうことは明らかである。一般に、投与された製剤の少なくとも表面領域（その部分は空気、体表面及び／または体液と直接接触する）では、この転移が急速になる。これは、最も好ましくは数秒間または数分間（例えば１秒～最大３０分、好ましくは最大１０分、より好ましくは５分以内）であろう。組成物の残りの部分は、拡散によって及び／または表面領域が分散するにつれて、より緩徐に液晶相へと相変化する可能性がある。

本発明は、投与時に液晶構造への相変化を受ける製剤に限定されない。デポ組成物は、投与時に、液晶相の形成を必要としない他のメカニズムによって形成され得る。例えば、ＷＯ２０１６／０６６６５５に記載されている系では、デポ組成物の形成は液晶相への転換を伴わない。

理論に束縛されるものではないが、本発明の予備製剤は過剰の水性流体に曝露されると、その中に含有された有機溶媒の一部またはすべてを（例えば拡散により）消失し、身体環境（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ環境）から水性流体を取り込むと考えられる。本明細書に記載の特定の脂質予備製剤では、製剤の少なくとも一部が、非ラメラ、特に液晶相構造を生成することが好ましい。ほとんどの場合、これらの非ラメラ構造は粘性が高く、ｉｎ ｖｉｖｏ環境で容易に溶解または分散しない。その結果、体液への曝露が限定された領域でしかｉｎ ｖｉｖｏ生成されないモノリシックな「デポ剤」となる。さらに、非ラメラ構造は極性の大きな領域、無極性領域、及び境界領域を有するため、この脂質デポ剤は、ペプチドなどの活性薬剤を可溶化及び安定化し、かつそれを分解機序から保護するのに非常に有効である。予備製剤から形成されたデポ組成物が数日、数週、または数か月の期間にわたって徐々に分解するにつれ、活性薬剤が徐々に組成物から放出される、及び／または拡散する。デポ組成物内の環境は比較的保護されているため、本発明の予備製剤は、生物学的半減期が比較的短い活性薬剤（上記参照）に非常に適している。

ＷＯ２０１２／１６０２１３に初めて記載されているように、予備製剤に共溶媒を組み込むことによって、実質的に水が存在しない状態で有機溶媒を含有する組成物と比較して、注射された予備製剤表面での非ラメラ（例えば液晶）相への相転移の速度を向上させることができると考えられる。このように、得られるデポ剤の性能が改善され、活性薬剤の放出に対するさらなる制御が実現される。

本発明の製剤により形成されるデポ剤システムは活性薬剤を分解から保護するのに非常に有効であり、それによって放出期間の延長が可能である。したがって、本発明の製剤は、５～９０日、好ましくは５～６０日、より好ましくは６～３２日に１回の投与しか必要としない、ペプチド活性薬剤のｉｎ ｖｉｖｏデポ剤を提供することができる。明らかに、長期間の安定的な放出は、患者の快適性及び服薬遵守にとって望ましく、ならびに組成物の自己投与を意図しない場合には医療従事者に要求される時間が減少する点で望ましい。組成物の自己投与を意図する場合、投与が必要であることを忘れないように、毎週（例えば７日ごと、場合により±１日）、隔週（例えば１４日ごと、場合により±２日）、または毎月（例えば２８日または３０日ごと、場合により±７日）の投与により、患者の服薬遵守を容易にすることができる。

本発明のデポ前駆体の大きな利点は、それらが安定した均質相であるということである。すなわち、室温または冷蔵庫温度で相分離することなく、かなりの期間（好ましくは少なくとも６か月）保存することができる。保存に有利で投与が容易であることに加え、個々の対象の種、年齢、性別、体重、及び／または体調に照らして、選択量を注入することによって、活性薬剤（例えばソマトスタチン類似体、例えばオクトレオチド）の用量を選択することが可能である。

したがって、本発明は、個体に特異的な投与量を、特に対象の体重によって選択することを含む方法を提供する。この用量選択のための手段は投与量の選択である。

好ましい一態様では、本発明は、成分ａ）、ｂ）、ｃ）、及び場合によりｄ）を含む脂質混合物ｉ）、成分ｉｉ）、ならびに０～１．０％の水を含む予備製剤を提供する。これらの成分の量は通常、ａ）が２０～６０％、ｂ）が２０～６０％、ｃ）が１～３０％、及びｉｉ）が０．００１～０．８％の範囲内であろう。

本発明の予備製剤は、その最終の「投与準備完了」形態での長期保存に対して安定であるという点で非常に有利である。結果として、その予備製剤は、医療従事者または患者もしくはその介護人いずれによる投与の場合にも速やかに供給することができる。投与者は十分に熟練した医療従事者である必要はなく、複雑な調剤を行うための経験または技術をもっていなくてもよい。これは、糖尿病のような長期的で遅効な疾患において特に重要である。

器具
さらに別の態様では、本発明は、測定用量の本発明の予備製剤が予め装填された使い捨て投与器具（器具の構成部品も含む）を提供する。そのような器具には通常、すぐに投与できる単回投与量が入っており、一般に組成物が投与されるまで器具内に保存されるように無菌包装される。好適な器具には、カートリッジ、アンプル、ならびに特に注射器及び注射筒が含まれ、これらは一体型針か、または好適な使い捨て針を取り付けるように適合された標準の（例えばルアー）フィッティングを備える。

キット
本発明の充填済み器具は投与キットに適切に含まれてもいてもよく、そのキットもまた本発明のさらなる態様を構成する。したがって、さらに別の態様では、本発明は、少なくとも１種の活性薬剤を投与するためのキットを提供し、上記キットには、測定用量の本発明の製剤及び場合により投与器具またはその構成部品が含まれる。好ましくは、その用量が、筋肉内投与、または好ましくは皮下投与に適している器具または構成部品内に保持される。このキットは、針、綿棒などのような追加の投与構成部品を備えていてもよく、必要に応じて及び好ましくは投与についての説明書が含まれる。そのような説明書は通常、本明細書に記載の経路による投与、及び／または本明細書で上に示す疾患を処置するための投与と関連する。

本発明は、本明細書に示す充填済み投与器具、及び本明細書に記載の予備製剤を含む本明細書に示すキットを提供する。

本発明の代替的態様では、「キット」は少なくとも２つの容器を含んでよく、第１の容器には、本明細書に記載される、成分ａ）、ｃ）、及び場合によりｂ）を含む脂質混合物ｉ）と、ｉｉ）との低粘度の混合物が入っており、第２の容器には、測定用量の、本明細書に記載される少なくとも１種の活性薬剤ｄ）が入っている。

そのような「２成分キット」は、１つのバイアルまたはプレフィルドシリンジ中に粉末製剤として活性薬剤ｄ）を含み、第２のバイアルまたはプレフィルドシリンジ中に成分ｉ）及びｉｉ）を含んでもよい。注射器が２つの場合、注射前に、プレフィルドシリンジを接続し、注射筒を前後に動かすことによって活性薬剤を含む粉末をマトリックス製剤と混合して、溶液または懸濁液を形成し、これを注射する。あるいは、液体脂質製剤を１つのバイアルから吸い上げるか、または注射器に予め充填して、粉末活性薬剤（例えばペプチド）が入っているバイアルに注入する。続いてこの製剤を、手で振盪するかまたは他の適切な再構成方法（例えばボルテックス混合など）によって混合することができる。溶媒成分は一方または両方の容器（例えばバイアルまたは注射器）に存在し得る。溶媒が少なくとも部分的に活性薬剤で構成されている場合、これは一般に溶液または懸濁液の形態であろう。

したがって、本態様では、本発明は以下を含む２成分キットを提供する
１）本明細書に記載の成分ａ）～ｃ）の低粘度混合物が入っている第１の容器；
２）少なくとも１種のペプチド活性薬剤が入っている任意の第２の容器；
３）場合により第３の容器中、好ましくは第２の容器中、または最も好ましくは第１の容器中の抗酸化成分ｉｉ）；
４）場合により及び好ましくは、以下の少なくとも１つ：
５）少なくとも１つの注射器（これは上記第１及び第２の容器の一方または両方であり得る）；
６）本明細書に記載されるもののような投与用針；
７）第１及び第２の容器の内容物から本発明の組成物を生成するための説明書；
８）投与に関する説明書（それにより本明細書に記載のデポ剤を形成する）。

好ましい特徴と組み合わせ
本明細書に示す特徴及び好ましい特徴と組み合わせた、本発明の混合物、例えば予備製剤は、以下の好ましい特徴のうちの１つ以上を独立してまたは組み合わせて有し得る。

本明細書に示す比率はすべて場合により、指定された量の最大１０％、場合により及び好ましくは最大５％変動し得る。

成分ａ）がＧＤＯを含むか、本質的にそれからなるか、または好ましくはそれからなる。

成分ｂ）が大豆ＰＣを含むか、本質的にそれからなるか、または好ましくはそれからなる。

成分ｃ）が、１、２、３または４個の炭素アルコール、好ましくはイソプロパノールまたはより好ましくはエタノールを含むか、本質的にそれからなるか、または好ましくはそれからなる。

成分ｃ）が、プロピレングリコールなどの極性共溶媒を含む。

予備製剤は、（本明細書に記載の）いかなるソマトスタチン類似体も含有しない。

予備製剤は、本明細書に示す低粘度を有する。

予備製剤は、ｉｎ ｖｉｖｏ投与時に本明細書に示す非ラメラ液晶相を形成する。

予備製剤は、ｉｎ ｖｉｖｏ投与後にデポ剤を生成し、このデポ剤は、少なくとも７日間、好ましくは少なくとも２１日間、より好ましくは少なくとも２８日間にわたり治療レベルで少なくとも１種の活性薬剤を放出する。

本明細書に示す特徴及び好ましい特徴と組み合わせた、本発明の治療方法（複数可）は、以下の好ましい特徴のうちの１つ以上を独立してまたは組み合わせて有し得る。

方法は、上記のような１つ以上の好ましい特徴を有する少なくとも１つの製剤の投与を含む。

方法は、本明細書に示す少なくとも１つの製剤を筋肉内注射、皮下注射（例えば、深部皮下注射）によって投与することを含む。

方法は、本明細書に示す充填済み投与器具による投与を含む。

方法は、２０ゲージ以下、好ましくは２０ゲージ未満、及び最も好ましくは２２ゲージ、２３ゲージ以下の針による投与を含む。

方法は、５～９０日ごと、好ましくは６～３２日（例えば７日または２８～３１日）ごとの単回投与を含む。

本明細書に示す特徴及び好ましい特徴と組み合わせた、医薬品の製造における本明細書に示す予備製剤の使用（複数可）は、以下の好ましい特徴のうちの１つ以上を独立してまたは組み合わせて有し得る。

使用には、上記のような１つ以上の好ましい特徴を有する少なくとも１つの製剤の使用を含む。

使用は、本明細書に示す少なくとも１つの製剤を筋肉内注射または皮下注射によって投与するための医薬品の製造を含む。

使用は、本明細書に示す充填済み投与器具によって投与するための医薬品の製造を含む。

使用は、２０ゲージ以下、好ましくは２０ゲージ未満、及び最も好ましくは２２ゲージ、２３ゲージ以下の針により投与するための医薬品の製造を含む。

使用は、５～９０日、好ましくは５～６０日、より好ましくは６～３２日ごとに１回投与するための医薬品の製造を含む。

本明細書に示す特徴及び好ましい特徴と組み合わせた、本発明の充填済み器具は、以下の好ましい特徴のうちの１つ以上を独立してまたは組み合わせて有し得る。

充填済み器具には、本明細書に示すような好ましい製剤が入っている。

充填済み器具は、２０ゲージ未満、好ましくは２２ゲージ以下または２３ゲージ以下の針を備える。

充填済み器具には、本発明の組成物の均一混合物がそのまま注射できる形態で入っている。

充填済み器具には、活性薬剤と組み合わせるための成分ｉ）（好ましくは、ａ）、ｂ）及びｃ）を含む）及びｉｉ）の製剤が入っている。

充填済み器具には、５ｍｌ以下、好ましくは３ｍｌ以下、より好ましくは１．５ｍｌ以下の総投与量が入っている。

本明細書に示す特徴及び好ましい特徴と組み合わせた、本発明のキットは、以下の好ましい特徴のうちの１つ以上を独立してまたは組み合わせて有し得る。

キットには、本明細書に示すような好ましい製剤が含まれている。

キットには、本明細書に示す充填済み器具が含まれている。

キットには、２０ゲージ未満、好ましくは２２ゲージ以下、または２３ゲージ以下の針が含まれている。

キットには、ペプチド活性薬剤が含まれている。

キットには、５ｍｌ以下、好ましくは３ｍｌ以下、より好ましくは１．５ｍｌ以下の総投与量が含まれている。

キットには、本明細書に示す経路による、及び／または頻度での投与に関する説明書が含まれている。

キットには、本明細書に記載の治療方法に使用する投与に関する説明書が含まれている。

以下の非限定的な実施例及び添付の図面を参照することによって、本発明を以降でさらに説明する。

［実施例］
材料
実施例で使用した材料はすべて、民間の供給元から入手したものであり、適切な場合には薬局方等級のもの、または入手可能な最高純度等級のものであった。実施例を通して以下の略語を使用する：
ＡＰＩ 活性医薬成分
ＤｉＥＴＡ ジエタノールアミン
ＤＴＰＡ ジエチレントリアミン五酢酸（ペンテト酸）
ＥｔＯＨ エタノール（９９．７％、欧州薬局方）
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸（エデト酸）（ＵＳＰ／ＮＦ）
ＥＤＴＡ（Ｎａ） エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム二水和物
ＥＴＡ エタノールアミン（ＵＳＰ／ＮＦ）
ＦｅＣｌ₃×６Ｈ₂Ｏ 塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物
ＧＤＯ ジオレイン酸グリセロール（Ｃｒｏｄａ製のＣｉｔｈｒｏｌ ＧＤＯ ＨＰ－ＳＯ－（ＬＫ））
ＧＭＯ モノオレイン酸グリセロール
ＧＯＳ（Ａｃ） ゴセレリン酢酸塩
ＧＯＳ（Ｃｌ） ゴセレリン塩化物
ＧＲＮ（０） グラニセトロン遊離塩基
ＯＣＴ（Ｃｌ） オクトレオチド塩酸塩
ＯＸＹ（Ａｃ） オキシトシン酢酸塩
ＯＸＹ（Ｃｌ） オキシトシン塩化物
ＰＧ プロピレングリコール（欧州薬局方）
Ｓｂ油 大豆油
ＳＯＭ（Ａｃ） ソマトスタチン－１４酢酸塩
ＳＯＭ（Ｃｌ） ソマトスタチン－１４塩化物
ＳＰＣ 大豆ホスファチジルコリン（Ｌｉｐｏｉｄ製のＬｉｐｏｉｄ Ｓ１００）
ＴＲＩＳ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
一般的手順
ＥＤＴＡ及びＥＤＴＡ（Ｎａ）のＥｔＯＨ／ＰＧ溶液の調製
適量のＥＤＴＡまたはＥＤＴＡ（Ｎａ）及びアルキルアミンを秤量してガラスバイアル、例えば１５Ｒバイアルに入れ、続いて有機溶媒または溶媒混合物（例えば、ＥｔＯＨ／ＰＧ（５０／５０ｗ／ｗ））を添加して試料を調製した。バイアルを密封し、ローラーミキサー（周囲室温での転倒回転による）、またはマグネチックスターラーのいずれかに置いた。溶解時に、周囲光及び交差偏光を使用して、溶解していないＥＤＴＡ粒子についてバイアルを目視検査した。

ＦｅＣｌ₃×６Ｈ₂Ｏ溶液の調製
適量のＦｅＣｌ₃×６Ｈ₂Ｏを秤量して滅菌ガラスバイアルに入れ、続いて有機溶媒または溶媒混合物を添加して試料を調製した。バイアルを密封してローラーミキサーに置き、ＦｅＣｌ₃×６Ｈ₂Ｏが完全に溶解するまで周囲室温で転倒回転させた。

ＳＯＭ（Ｃｌ）の調製
イオン交換処理のため、約１２０ｇのＤｏｗｅｘ １×２塩素イオン形（５０～１００メッシュ）樹脂を等量のミリポア水と混合し、２００ｍＬのガラスイオン交換カラムに添加し、一晩放置して平衡化した。翌日、イオン交換の前に、Ｄｏｗｅｘマトリックスを９００ｍｌのミリポア水でゆっくり洗浄し、イオン交換処理を開始した。３．７４３ｇのＳＯＭ（Ａｃ）を１１２．４ｇのミリポア水に溶解した。（約３０分以内に）新たに調製したＳＯＭ（Ａｃ）溶液をイオン交換カラムの頂部へ装填した。（約１５秒／ｍＬで）流入を開始し、ミリポア水でカラムを連続的にすすぐことにより、それぞれ５０～２５０ｍＬの溶出画分を回収した。５０μＳ／ｃｍ超の導電率を有する溶出画分をプールし、３つの１０００ｍＬ丸底フラスコに移し、Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－２００を使用してＥｔＯＨ／ドライアイス中でシェル凍結し、－８０℃で約１時間冷却下に置き、約３６時間、一晩凍結乾燥した。得られたＳＯＭ（Ｃｌ）の量及び収率は、それぞれ３．０９６ｇ及び８２．７％であった。二次的ＨＰＬＣ－ＵＶによって２つのアニオンを測定して、酢酸塩から塩化物への完全な交換を確認した。

ＧＯＳ（Ｃｌ）の調製
イオン交換処理のため、３４．７９９５ｇのＤｏｗｅｘ １×２塩素イオン形（５０～１００メッシュ）樹脂を３６．６３２７ｇのミリポア水と混合し、１００ｍＬのガラスイオン交換カラムに添加し、一晩放置して平衡化した。翌日、イオン交換の前に、Ｄｏｗｅｘマトリックスを７００ｍｌのミリポア水でゆっくり洗浄し、イオン交換処理を開始した。０．８３５３ｇのＧＯＳ（Ａｃ）を１３．９５３４ｇのミリポア水に溶解した。（約３０分以内に）新たに調製したＧＯＳ（Ａｃ）溶液をイオン交換カラムの頂部へ装填した。（約１５秒／ｍＬで）流入を開始し、ミリポア水でカラムを連続的にすすぐことにより、それぞれ１５～５０ｍＬの溶出画分を回収した。３５μＳ／ｃｍ超の導電率を有する溶出画分をプールし、５００ｍＬ丸底フラスコに移し、Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－２００を使用してＥｔＯＨ／ドライアイス中でシェル凍結し、－８０℃で約１時間冷却下に置き、約２３時間凍結乾燥した。得られたＧＯＳ（Ｃｌ）の量及び収率は、それぞれ０．７３９ｇ及び８８．５％であった。二次的ＨＰＬＣ－ＵＶによって２つのアニオンを測定して、酢酸塩から塩化物への完全な交換を確認した。

ＯＸＹ（Ｃｌ）の調製
イオン交換処理のため、３１．５４９３ｇのＤｏｗｅｘ １×２塩素イオン形（５０～１００メッシュ）樹脂を４２．１８６０ｇのミリポア水と混合し、１００ｍＬのガラスイオン交換カラムに添加し、一晩放置して平衡化した。翌日、イオン交換の前に、Ｄｏｗｅｘマトリックスを６００ｍｌのミリポア水でゆっくり洗浄し、イオン交換処理を開始した。０．７９３３ｇのＯＸＹ（Ａｃ）を１２．５１６６ｇのミリポア水に溶解した。（約３０分以内に）新たに調製したＯＸＹ（Ａｃ）溶液をイオン交換カラムの頂部へ装填した。（約１５秒／ｍＬで）流入を開始し、ミリポア水でカラムを連続的にすすぐことにより、それぞれ１５～５０ｍＬの溶出画分を回収した。２５μＳ／ｃｍ超の導電率を有する溶出画分をプールし、５００ｍＬ丸底フラスコに移し、Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ－２００を使用してＥｔＯＨ／ドライアイス中でシェル凍結し、－８０℃で約１時間冷却下に置き、約２５時間、一晩凍結乾燥した。得られたＯＸＹ（Ｃｌ）の量及び収率は、それぞれ０．６８６ｇ及び８６．５％であった。二次的ＨＰＬＣ－ＵＶによって２つのアニオンを測定して、酢酸塩から塩化物への完全な交換を確認した。

脂質製剤の調製
脂質プラセボ製剤は、適量のＳＰＣ、ＧＤＯ、ＥＤＴＡ／アルキルアミン溶液、及び（必要に応じて）ＦｅＣｌ₃×６Ｈ₂Ｏ溶液を秤量して、滅菌ガラスバイアルに入れることによって調製した。次に、密封したバイアルを、完全に混合されて透明な均一溶液になるまで（２４時間未満）、室温でローラーミキサーに定置した。

滅菌ガラスバイアル中の脂質プラセボ製剤に適量のＡＰＩ粉末を添加することによって、ＡＰＩ含有製剤を調製した。バイアルを密封して、完全に混合されて透明な均一溶液になるまで（約２４時間）、室温でローラーミキサーに定置した。

一例として、ＥＤＴＡ及びＥＴＡ（ＥＤＴＡ：ＥＴＡのモル比が１：４）をＥｔＯＨ／ＰＧ（５０／５０ｗ／ｗ）混合物に溶解した。次に、適量のＳＰＣ、ＧＤＯ（ＳＰＣ／ＧＤＯの重量比が５０／５０）及びＥｔＯＨ／ＰＧ／ＥＤＴＡ／ＥＴＡ混合物を秤量して、滅菌した２０Ｒガラスバイアルに入れた。次に、密封したバイアルを、完全に混合されて透明な均一溶液になるまで（２４時間未満）、室温でローラーミキサーに定置した。次に、ＯＣＴ（Ｃｌ）粉末を、滅菌した１５Ｒガラスバイアル中の脂質製剤に２．３４重量％の濃度で加えた。バイアルを密封して、完全に混合されて透明な均一溶液になるまで（２４時間）、室温でローラーミキサーに定置した。

脂質製剤中のオクトレオチド安定性の評価（一般的な方法）
上記のように調製した脂質ペプチド（例えばオクトレオチド）製剤を、滅菌した２Ｒガラスバイアルに取り分けた（１バイアルあたり製剤０．５ｇ）。バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわちヘッドスペースに窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。バイアルを密封し、２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。所定のサンプリング点（最長３か月保存）で、各製剤及び保管キャビネットの２つのバイアルを取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

なお、ヘッドスペースは窒素などの不活性雰囲気ではなく空気で構成されるため、充填手順及び保存条件は確実に強制分解条件に保たれる。

脂質製剤中のペプチドのＨＰＬＣ－ＵＶによる測定
脂質製剤中のペプチド（例えばオクトレオチド塩化物などのオクトレオチド）の測定は、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣによって実施した。使用したＨＩＬＩＣ分析カラムはＨＡＬＯ Ｐｅｎｔａ－ＨＩＬＩＣ ２．７μｍ，１５０×３．０ｍｍであった。脂質製剤試料（必要とする標的ペプチド濃度で試料溶媒に脂質製剤を溶解することによって調製）で得られたペプチド（例えばオクトレオチド）ピーク面積を、既知濃度の対応するペプチドを含有する標準溶液から作成された検量線に内挿することによって定量化を実施した。

（例えばオクトレオチドと）使用した通常の移動相は、３８４：１６：４００：１（ｖ／ｖ）の水：２Ｍ塩化ナトリウム：アセトニトリル：トリフルオロ酢酸（移動相Ａ）及び２０：３０：９５０：１（ｖ／ｖ）の水：メタノール：アセトニトリル：トリフルオロ酢酸（移動相Ｂ）で構成した。２２０ｎｍで検出を行った。使用した試料溶媒はアセトニトリル：メタノール（１：１、ｖ／ｖ）であった。オクトレオチドは約２５．２分後に溶出した。

データ表示
実施例のセクションでは、ＡＰＩアッセイの絶対値に加えて、場合によりＡＰＩアッセイの安定性指数でも結果を表す。安定性指数は、特定の製剤中のＡＰＩアッセイ値を参照製剤中のＡＰＩアッセイ値で除算して算出される。この方法で表される安定性指数値が１を超えると、参照製剤と比較したとき、ＡＰＩ安定性の改善を意味する。

バイアルのヘッドスペース酸素濃度の測定
バイアルのヘッドスペース中の酸素濃度を、ニードル型光学式酸素マイクロセンサー（ＮＴＨ、１４０μｍのフラット凹凸チップ）搭載のＰＣ制御式ＰｒｅＳｅｎｓ Ｍｉｃｒｏｘ ＴＸ３マイクロ光ファイバー酸素トランスミッターを使用して測定した。酸素マイクロセンサーを、バイアルのゴム栓を貫通させてバイアルのヘッドスペースまで挿入し、安定した読み取り値が得られるまで（約１分）酸素濃度を計測することによって測定を行った。

実施例１．アルキルアミンの存在下及び非存在下でのＥＤＴＡの溶解性
ＥＴＡの存在下及び非存在下で、０．０８重量％のＥＤＴＡ及びＥＤＴＡ（Ｎａ）のＥｔＯＨ／ＰＧ（５０／５０ｗ／ｗ）溶液を調製した（表１）。周囲室温での転倒回転中に、ＥＤＴＡ及びＥＤＴＡ（Ｎａ）の溶解を２７日間にわたって目視検査（周囲光及び交差偏光）により評価した。結果は、ＥＴＡを使用しない場合、二ナトリウム塩のＥＤＴＡ（ＥＤＴＡ（Ｎａ））も酸形態のＥＤＴＡも、２７日間の混合後にもＥｔＯＨ／ＰＧに溶解しないことを示している。得られた結果はまた、ＥＴＡの存在下でもＥＤＴＡ（Ｎａ）はＥｔＯＨ／ＰＧに溶解しないのに対し、酸形態のＥＤＴＡは、ＥＤＴＡ１ｍｏｌあたり４ｍｏｌのＥＴＡの存在下で、２４時間の混合後にはすでにＥｔＯＨ／ＰＧに溶解されていることも示している。

実施例２．ＥＴＡ／ＥＤＴＡモル比の関数としてのＥＤＴＡ溶解性
ＥＴＡ／ＥＤＴＡモル比の関数としての、ＥＤＴＡの濃度０．３８重量％でのＥｔＯＨ／ＰＧ溶媒混合液（１／１ｗｔ／ｗｔ）への溶解性に関する結果を表２にまとめる。ＥＤＴＡが完全に溶解しなかった試料は、ＥＴＡ／ＥＤＴＡモル比が最低のものだけであった。他の試料ではすべて、周囲室温での２４時間の転倒回転による混合後、ＥＤＴＡが溶解された。得られた結果は、使用した非水性溶媒にＥＤＴＡを溶解するのに必要とされる必要最小量が、ＥＤＴＡ１ｍｏｌあたり、ＥＴＡ約３．５ｍｏｌに近いことを示している。

実施例３．ＤｉＥＴＡ／ＥＤＴＡモル比の関数としてのＥＤＴＡ溶解性
周囲室温での２４時間の転倒回転による混合後の、ＤｉＥＴＡ／ＥＤＴＡモル比の関数としての、０．３８重量％ＥＤＴＡのＥｔＯＨ／ＰＧ（１／１ｗｔ／ｗｔ）溶媒混合液へのＥＤＴＡ溶解性結果を表３にまとめる。得られた結果は、使用した非水性溶媒にＥＤＴＡを溶解するのに必要とされる必要最小量が、ＥＤＴＡ１ｍｏｌあたり、ＤｉＥＴＡ約４．５ｍｏｌに近いことを示している。

実施例４．エチレンジアミン／ＥＤＴＡモル比の関数としてのＥＤＴＡ溶解性
周囲室温での２４時間の転倒回転による混合後の、エチレンジアミン／ＥＤＴＡモル比の関数としての、０．３８重量％ＥＤＴＡのＥｔＯＨ／ＰＧ（１／１ｗｔ／ｗｔ）溶媒混合液へのＥＤＴＡ溶解性結果を表４にまとめる。得られた結果は、使用した非水性溶媒にＥＤＴＡを溶解するのに必要とされる必要最小量が、ＥＤＴＡ１ｍｏｌあたり、エチレンジアミン約２．５ｍｏｌに近いことを示した。

実施例５．セリノール／ＥＤＴＡモル比の関数としてのＥＤＴＡ溶解性
周囲室温での２４時間の転倒回転による混合後の、セリノール／ＥＤＴＡモル比の関数としての、０．３８重量％ＥＤＴＡのＥｔＯＨ／ＰＧ（１／１ｗｔ／ｗｔ）溶媒混合液へのＥＤＴＡ溶解性結果を表５にまとめる。得られた結果は、使用した非水性溶媒にＥＤＴＡを溶解するのに必要とされる必要最小量が、ＥＤＴＡ１ｍｏｌあたり、セリノール約４ｍｏｌに近いことを示した。

実施例６．ＴＲＩＳ／ＥＤＴＡモル比の関数としてのＥＤＴＡ溶解性
周囲室温での７日間の転倒回転による混合後の、ＴＲＩＳ／ＥＤＴＡモル比の関数としての、０．３８重量％ＥＤＴＡのＥｔＯＨ／ＰＧ（１／１ｗｔ／ｗｔ）溶媒混合液へのＥＤＴＡ溶解性結果を表６にまとめる。得られた結果は、使用した非水性溶媒にＥＤＴＡを溶解するのに必要とされる必要最小量が、ＥＤＴＡ１ｍｏｌあたり、ＴＲＩＳ約５ｍｏｌに近いことを示した。

実施例７．ＥＤＴＡの存在下における脂質製剤中のＯＣＴ（Ｃｌ）の安定性
１００ｐｐｍのＥＤＴＡの存在下及び非存在下で、２．３４重量％のＯＣＴ（Ｃｌ）を含有する脂質製剤を表７に示す組成に従って調製した。滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤０．５ｇ）を取り分けて密封し、４０℃／７５％ＲＨまたは２５℃／６０％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制分解条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。所定のサンプリング点（最長３か月保存）で、各製剤及び保存条件の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

２つの製剤の試料を一般的手順に記載の通りに安定状態に置いた。なお、ヘッドスペースは窒素などの不活性雰囲気ではなく空気で構成されるため、充填手順及び保存条件は確実に強制分解条件に保たれる。図１は、異なる保存時点及び保存条件でのオクトレオチドアッセイを示す。図１に示すように、０．０１重量％（１００ｐｐｍ）ＥＴＡの使用により、脂質製剤に溶解された０．０１重量％（１００ｐｐｍ）のＥＤＴＡが存在することで、両方の保存条件でペプチド安定性が大幅に増強された。

実施例８．ペプチド安定性に対するＥＤＴＡ濃度の効果
２．２７重量％のＯＣＴ（Ｃｌ）及び濃度の異なるＥＤＴＡを含有する脂質製剤を表８に示す組成に従って調製した。滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤０．５ｇ）を取り分けて密封し、４０℃／７５％ＲＨまたは２５℃／６０％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制分解条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。所定のサンプリング点（最長６か月保存）で、各製剤及び保存条件の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

６つの製剤の試料を一般的手順に記載の通りに安定状態に置いた。なお、ヘッドスペースは窒素などの不活性雰囲気ではなく空気で構成されるため、充填手順及び保存条件は確実に強制分解条件に保たれる。結果を図２に示す。示されているように、ＥＴＡの効果により、脂質製剤に溶解されたＥＤＴＡが存在することで、ＥＤＴＡ／ＥＴＡを含まない参照製剤と比較して、ペプチド安定性が大幅に増強された。ＥＤＴＡ濃度５０～２５０ｐｐｍ（０．００５～０．０２５重量％）の区間内で、最大の安定化効果が得られた。

実施例９．ＥＤＴＡの存在における脂質製剤中のＯＣＴ（Ｃｌ）の長期安定性
１００ｐｐｍのＥＤＴＡの非存在下及び存在下で、ＯＣＴ（Ｃｌ）を含有する脂質製剤を表９に示す組成に従って調製した。滅菌した１ｍＬの２２Ｇ×１／２”ガラス注射器（Ｓｃｈｏｔｔ ＡＧ）に製剤（注射器１本あたり製剤０．５ｇ）を取り分けて、プランジャーで密封し、２５℃／６０％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。所定のサンプリング点（最長１２か月保存）で、各製剤の２つの注射器を環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

図３は、異なる保存時点でのオクトレオチドアッセイを示す。示されているように、ＥＴＡの効果により脂質製剤に溶解された０．０１重量％（１００ｐｐｍ）のＥＤＴＡが存在することで、２５℃／６０％ＲＨの長期保存条件で、プレフィルドシリンジ内での長期ペプチド安定性が大幅に増強された。

実施例１０．鉄及びＥＤＴＡの存在下における脂質製剤中のＯＣＴ（Ｃｌ）の安定性
ＯＣＴ（Ｃｌ）及び量の異なるＦｅ³⁺及びＥＤＴＡを含有する脂質製剤を表１０に示す組成に従って調製した。滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤０．５ｇ）を取り分けて密封し、４０℃／７５％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制分解条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。１か月のサンプリング点で、各製剤及び保存条件の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

図４は、量の異なるＥＤＴＡの存在下における、Ｆｅ³⁺濃度の関数としての１か月時点でのオクトレオチドアッセイを示す。明らかにわかるように、Ｆｅ³⁺濃度が増加するにつれて、ＯＣＴを分解から保護するのに要するＥＤＴＡが増加する。Ｆｅ³⁺存在下におけるＯＣＴ分解からの保護は、１００ｐｐｍまではＥＤＴＡ濃度が増加するにつれて増強されるが、それ以降は１００～２５０ｐｐｍの間で幾分減少する。Ｆｅ³⁺濃度と、鉄の触媒活性の抑制に必要なＥＤＴＡの量との間にも明確な相関関係がある。図５に示すように、ＥＤＴＡ：Ｆｅ³⁺のモル比が約２：１以降は最大の安定化効果が得られる。これは、Ｆｅ³⁺含有量１０ｐｐｍでＥＤＴＡ約１００ｐｐｍに相当する。

実施例１１．ＥＴＡの非存在下及び存在下における、ＥＤＴＡ及び鉄を含む脂質製剤中のＯＣＴ（Ｃｌ）の安定性
ＥＴＡの非存在下及び存在下で、ＥＤＴＡまたはＥＤＴＡ（Ｎａ）を含有する脂質製剤を表１１に示す組成に従って調製した。実施例１に示すように、ＥＴＡを使用しないとＥＤＴＡ（Ｎａ）もＥＤＴＡもＥｔＯＨ／ＰＧに溶解しない。目視検査により評価したところ、ＥＤＴＡ（Ｎａ）はＥＴＡの存在下でもＥｔＯＨ／ＰＧに溶解しなかった。そのため、ＥｔＯＨ／ＰＧ中のＥＤＴＡ（Ｎａ）、ＥＤＴＡ及びＥＤＴＡ（Ｎａ）／ＥＴＡ含有混合物を、Ｍｉｌｌｅｘ－ＬＧ親水性ＰＴＦＥ ０．２μｍ注射器フィルターを使用してさらに濾過し、溶解していないＥＤＴＡ粒子を除去した。調製後、滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤０．５ｇ）を取り分けて密封し、４０℃／７５％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制分解条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。所定のサンプリング点（最長２か月保存）で、各製剤及び保存条件の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

図６はそれぞれ、時間の関数としての、オクトレオチドのアッセイ値及び安定性指数値を示す。示されているように、ＥＴＡの効果により脂質製剤に溶解されたＥＤＴＡがある場合のみ、５ｐｐｍのＦｅ³⁺の存在下で、参照製剤と比較してペプチド安定性が大幅に増強された。同一条件下で、ＥＤＴＡ（Ｎａ）、ＥＤＴＡ、またはＥＤＴＡ（Ｎａ）／ＥＴＡを含有する製剤は、（参照製剤と比較して）ＯＣＴ（Ｃｌ）安定性に悪影響を示した。

実施例１２．ＥＤＴＡを含む脂質製剤中のＯＣＴ（Ｃｌ）の安定性に対する種々のアルキルアミン及び溶媒の効果
脂質製剤を表１２に示す組成に従って調製した。滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤０．５ｇ）を取り分けて密封し、４０℃／７５％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制分解条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。所定のサンプリング点（最長２か月保存）で、各製剤及び保存条件の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

図７は、異なる保存時点でのオクトレオチドアッセイを示す。示されているように、０．０１重量％（１００ｐｐｍ）のＥＤＴＡを脂質製剤に溶解するために使用された種々のアルキルアミン（ＥＴＡ、ＤｉＥＴＡ、またはエチレンジアミン）は、参照製剤と比較したとき、同様に高程度までペプチド安定性を増強した。得られた結果はまた、ＯＣＴ（Ｃｌ）の安定性に対するＥＤＴＡの正の効果が、図９と比較したとき、図８のＥｔＯＨ／ＰＧ含有製剤についてのデータによって示されるように、脂質製剤の調製に使用された混合物とは無関係であることを示す。

実施例１３．ＥＤＴＡの存在下における脂質製剤中のＳＯＭ（Ｃｌ）の安定性
ＥｔＯＨ／ＰＧを使用して、１００ｐｐｍのＥＤＴＡの非存在下及び存在下で、ＳＯＭ（Ｃｌ）を含有する脂質製剤を表１３に示す組成に従って調製した。滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤０．５ｇ）を取り分けて密封し、４０℃／７５％ＲＨまたは２５℃／６０％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制分解条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。所定のサンプリング点（最長３か月保存）で、各製剤及び保存条件の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

図９は、異なる保存時点及び保存条件でのＳＯＭアッセイを示す。示されているように、ＥＴＡの使用により脂質製剤に溶解された１００ｐｐｍのＥＤＴＡが存在することで、４０℃／７５％ＲＨ及び２５℃／６０％ＲＨという両方の保存条件でペプチド安定性が大幅に増強された。

実施例１４．ＥＤＴＡ及び鉄の存在下における脂質製剤中のＧＯＳ（Ｃｌ）の安定性
１００ｐｐｍのＥＤＴＡの非存在下及び存在下で、ＧＯＳ（Ｃｌ）を含有する脂質製剤を表１４に示す組成に従って調製した。滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤０．９ｇ）を取り分けて密封し、４０℃／７５％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制分解条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。さらに酸化ストレス条件を確実に保つため、両方の製剤には５ｐｐｍのＦｅ³⁺も含有した。所定のサンプリング点（最長２か月保存）で、各製剤の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

図１０はそれぞれ、時間の関数としての、ＧＯＳのアッセイ値及び安定性指数値を示す。明らかにわかるように、ＥＴＡの効果により脂質製剤に溶解された１００ｐｐｍのＥＤＴＡを使用することで、５ｐｐｍのＦｅ³⁺の存在下でのペプチド安定性が大幅に増強された。データは、ＥＤＴＡにより、賦形剤、ＡＰＩ、または処理装置に起因し得る低濃度から中濃度の金属からペプチドを保護できることを示している。

実施例１５．ＥＤＴＡ及び鉄の存在下における脂質製剤中のＯＸＹ（Ｃｌ）の安定性
１００ｐｐｍのＥＤＴＡの非存在下及び存在下で、ＯＸＹ（Ｃｌ）を含有する脂質製剤を表１５に示す組成に従って調製した。滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤０．９ｇ）を取り分けて密封し、４０℃／７５％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制分解条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。酸化ストレス条件を増強するため、両方の製剤には５ｐｐｍのＦｅ³⁺も含有した。所定のサンプリング点（最長２か月保存）で、各製剤の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

図１１はそれぞれ、時間の関数としての、ＯＸＹのアッセイ値及び安定性指数値を示す。明らかにわかるように、ＥＴＡの効果により脂質製剤に溶解された１００ｐｐｍのＥＤＴＡを使用することで、５ｐｐｍのＦｅ³⁺の存在下でのペプチド安定性が大幅に増強された。データは、ＥＤＴＡにより、賦形剤、ＡＰＩ、または処理装置に起因し得る低濃度から中濃度の金属からペプチドを保護できることを示している。

実施例１６．ＥＤＴＡ及び鉄の存在下における脂質製剤中のＧＲＮ（０）の安定性
１００ｐｐｍのＥＤＴＡの非存在下及び存在下で、ＧＲＮ（０）を含有する脂質製剤を表１６に示す組成に従って調製した。滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤１ｇ）を取り分けて密封し、４０℃／７５％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制分解条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。さらに酸化ストレス条件を確実に保つため、両方の製剤には５ｐｐｍのＦｅ³⁺も含有した。所定のサンプリング点（最長２か月保存）で、各製剤の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

図１２はそれぞれ、時間の関数としての、ＧＲＮのアッセイ値及び安定性指数値を示す。明らかにわかるように、ＥＴＡの効果により脂質製剤に溶解された１００ｐｐｍのＥＤＴＡは、５ｐｐｍのＦｅ³⁺の存在下でのＧＲＮの安定性を大幅に増強させた。データは、ＥＤＴＡにより、賦形剤、ＡＰＩ、または処理装置に起因し得る低濃度から中濃度の金属から活性物質を保護できることを示している。

実施例１７．ＥＤＴＡ及び鉄の存在下における、リン脂質／モノグリセリド（ＳＰＣ／ＧＭＯ）及びリン脂質／トリグリセリド（ＳＰＣ／Ｓｂ油）ベースの製剤中のＧＯＳ（Ｃｌ）の安定性
１００ｐｐｍのＥＤＴＡの非存在下及び存在下で、ＧＯＳ（Ｃｌ）を含有する脂質製剤を表１７に示す組成に従って調製した。滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤１ｇ）を取り分けて密封し、４０℃／７５％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制分解条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。酸化ストレス条件を増強するため、全製剤には５ｐｐｍのＦｅ³⁺も含有した。所定のサンプリング点（最長９週保存）で、各製剤の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ＵＶ検出による勾配ＨＰＬＣを用いてペプチド含有量を分析した（アッセイ）。

図１３及び図１４はそれぞれ、ＳＰＣ／ＧＭＯまたはＳＰＣ／Ｓｂ油ベースの製剤のいずれかに溶解されたＧＯＳの、時間の関数としてのアッセイ値及び安定性指数値を示す。示されているように、ＥＴＡの効果により両方の製剤構成（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｐｔｓ）に溶解された１００ｐｐｍのＥＤＴＡは、５ｐｐｍのＦｅ³⁺の存在下でのペプチド安定性を大幅に増強させた。データは、ＥＤＴＡにより、賦形剤、ＡＰＩ、または処理装置に起因し得る低濃度から中濃度の金属からペプチドを保護できることを示している。

実施例１８．ＥＤＴＡの存在下におけるプラセボ脂質製剤中の脂質酸化
１００ｐｐｍのＥＤＴＡの非存在下及び存在下で、脂質プラセボ製剤を表１８に示す組成に従って調製した。滅菌した２Ｒガラスバイアルに製剤（１バイアルあたり製剤１ｇ）を取り分けて密封し、６０℃／周囲ＲＨまたは４０℃／７５％ＲＨの環境制御された保管キャビネットに入れた。確実に強制脂質酸化条件に保たれるように、バイアルのヘッドスペースは周囲空気であった（すなわち窒素などの不活性雰囲気を導入しなかった）。酸化ストレス条件を増強するため、一部の製剤には５ｐｐｍのＦｅ³⁺も含有した（表１８）。所定のサンプリング点（６０℃／周囲ＲＨで最長９日保存、及び４０℃／７５％ＲＨで最大３０日保存）で、各製剤の２つのバイアルを環境制御されたキャビネットから取り出し、１時間室温に平衡化し、ニードル型酸素マイクロセンサーを使用して、バイアルヘッドスペース内の酸素濃度を分析した（ここでは、脂質製剤中の脂質酸化の間接的な尺度として酸素消費量を使用する）。

得られた結果を図１５、図１６、図１７、及び図１８にまとめる。図中のデータは明らかに、全製剤において、保存条件、製剤の調製に使用される脂質比、またはＦｅ³⁺の存在とは無関係に、１００ｐｐｍのＥＤＴＡの添加により、酸素消費（及びそれによる脂質の酸化分解）が大幅に減少することを示している。データは、ＥＤＴＡにより、賦形剤または処理装置に起因し得る低濃度から中濃度の金属から脂質を保護できることを示している。

実施例１９．ＥＴＡ／ＤＴＰＡモル比の関数としてのＤＴＰＡ溶解性
異なるＥＴＡ／ＤＴＰＡモル比で添加される様々な量のＥＴＡの非存在下及び存在下で、０．０８重量％ＤＴＰＡのＥｔＯＨ／ＰＧ（５０／５０ｗ／ｗ）溶液を調製した（表１９）。結果は、ＥＴＡを使用しないと、ＤＴＰＡがＥｔＯＨ／ＰＧに溶解されないことを示している。得られた結果はまた、使用した非水性溶媒にＤＴＰＡを溶解するのに必要とされる必要最小量が、ＤＴＰＡ１ｍｏｌあたり、ＥＴＡ約４．３ｍｏｌに近いことを示している。

Claims (35)

1. ｉ）以下を含む脂質混合物：
   ａ）ジオレイン酸グリセロールを３３～６０重量％；
   ｂ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）を３３～５５重量％；
   ｃ）エタノール、エタノールとプロピレングリコールの混合物、およびエタノールとＤＭＳＯの混合物からなる群から選択される少なくとも１種の生体適合性有機溶媒を１～３０重量％；ならびに
   ｉｉ）１０～５００ｐｐｍ（遊離酸に換算して算出）のエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む予備製剤であって、
   前記予備製剤は含水量が０～１．０重量％の範囲内であり、
   前記予備製剤は、エタノールアミン、ジエタノールアミン、およびエチレンジアミンからなる群から選択される少なくとも１つのアルキルアミンを含む、予備製剤。
2. 成分ｉｉ）がエチレンジアミン四酢酸であり、前記アルキルアミンがエタノールアミン（ＥＴＡ）である、請求項１に記載の予備製剤。
3. ＥＤＴＡの量に対するＥＴＡの当量が、３．５～７（ｍｏｌ／ｍｏｌ）の範囲内である、請求項２に記載の予備製剤。
4. 前記アルキルアミンが、エタノールアミンまたはジエタノールアミンである請求項１～３のいずれかに記載の予備製剤。
5. 前記ＥＤＴＡが、ＥＤＴＡ遊離酸の量に基づいて、前記予備製剤の２０～３００ｐｐｍの量で存在する、請求項１～４のいずれかに記載の予備製剤。
6. 前記予備製剤は、アミノ基またはアルキルアミノ基を１つだけ有するアルキルアミンを含み、
   前記予備製剤中の、ＥＤＴＡと前記アルキルアミン及びその任意のアミン遊離塩基の合計とのモル比が１：≧３．０である、請求項１～５のいずれかに記載の予備製剤。
7. 前記アルキルアミンは、モノアミンであり、
   ＥＤＴＡの量に対する前記アルキルアミンのモル当量は、３．０～１０当量である請求項１～５のいずれかに記載の予備製剤。
8. 前記予備製剤は、エチレンジアミンを含み、
   前記予備製剤中の、ＥＤＴＡとエチレンジアミン及びその任意のアミン遊離塩基の合計とのモル比が１：≧２．０である、請求項１～７のいずれかに記載の予備製剤。
9. 前記アルキルアミンは、エチレンジアミンであり、
   ＥＤＴＡの量に対するエチレンジアミンのモル当量が、２．０～１０当量である請求項１～８のいずれかに記載の予備製剤。
10. 含水量が１．０重量％未満である、請求項１～９のいずれかに記載の予備製剤。
11. 含水量が０．１～０．９重量％である、請求項１～１０のいずれかに記載の予備製剤。
12. 活性薬剤（ｄ）をさらに含む、請求項１～１１のいずれかに記載の予備製剤。
13. 前記活性薬剤（ｄ）がペプチドを含むかまたはそれからなる、請求項１２に記載の予備製剤。
14. 前記活性薬剤（ｄ）が、５～６０個のアミノ酸を含むペプチドを含むかまたはそれからなる、請求項１２または１３に記載の予備製剤。
15. 前記活性薬剤（ｄ）が、内因性ＧＬＰ－１またはＧＬＰ－１受容体アゴニストを含むかまたはそれからなる、請求項１２～１４のいずれかに記載の予備製剤。
16. 前記活性薬剤（ｄ）が、内因性ＧＬＰ－１、ＧＬＰ－１（７－３７）、ＧＬＰ－１（７－３６）アミド、リラグルチド、ＡＶＥ－０１０（ＺＰ１０）、ＴＨ０３１８、エクセナチドからなる群から選択される、請求項１５に記載の予備製剤。
17. 成分ｃ）が、エタノールまたはエタノールとプロピレングリコールとの混合物を含むかまたはそれからなる、請求項１～１６のいずれかに記載の予備製剤。
18. 成分ｃ）が、２～２０重量％のレベルで存在する、請求項１～１７のいずれかに記載の予備製剤。
19. 成分ｃ）が、２～１２重量％のプロピレングリコールを含む、請求項１８に記載の予備製剤。
20. 成分ｃ）の残りがエタノールである、請求項１９に記載の予備製剤。
21. 成分ａ：ｂの重量比が、３０：７０～８０：２０の範囲内である、請求項１～２０のいずれかに記載の予備製剤。
22. 成分ａ：ｂの重量比が、４０：６０～６０：４０の範囲内である、請求項１～２０のいずれかに記載の予備製剤。
23. 活性薬剤（ｄ）が存在し、及び（ｉｉ）と（ｄ）との比が１：１～１：５０００（ｗ／ｗ）の範囲内である、請求項１～２２のいずれかに記載の予備製剤。
24. 前記予備製剤が、Ｌ₂相または分子性溶液などの液体状態である、請求項１～２３のいずれかに記載の予備製剤。
25. 前記予備製剤が、過剰の水性流体と接触すると少なくとも１つの液晶相構造を形成するかまたは形成することが可能である、請求項１～２４のいずれかに記載の予備製剤。
26. ｉ）以下を含む脂質混合物：
    ａ）ジオレイン酸グリセロールを３３～６０重量％；
    ｂ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）を３３～５５重量％；
    ｃ）エタノール、エタノールとプロピレングリコールの混合物、およびエタノールとＤＭＳＯの混合物からなる群から選択される少なくとも１種の生体適合性有機溶媒を１～３０重量％；ならびに
    ｉｉ）エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のアニオン
    およびエタノールアミン、ジエタノールアミン、またはエチレンジアミンのカチオン
    を含む予備製剤であって、
    前記予備製剤は含水量が０～１．０重量％の範囲内である、予備製剤。
27. 前記カチオンが、エタノールアミン（ＥＴＡ）のカチオンである請求項２６に記載の予備製剤。
28. ＥＤＴＡの量に対するＥＴＡの当量が、３．５～７（ｍｏｌ／ｍｏｌ）の範囲内である、請求項２７に記載の予備製剤。
29. ＥＤＴＡのアニオンが、ＥＤＴＡ遊離酸の量に基づいて、
    前記予備製剤の０．００１～０．０５０重量％（１０～５００ｐｐｍ）の量で存在する、請求項２６～２８のいずれかに記載の予備製剤。
30. ＥＤＴＡのアニオンが、ＥＤＴＡ遊離酸の量に基づいて、前記予備製剤の０．００１～０．０２重量％（１０～２００ｐｐｍ）の量で存在する、請求項２６～２９のいずれかに記載の予備製剤。
31. 活性薬剤（ｄ）をさらに含み、
    前記活性薬剤（ｄ）がペプチド、または５～６０個のアミノ酸を含むペプチドを含むかまたはそれからなる、請求項２６～３０のいずれかに記載の予備製剤。
32. 成分ｃ）が、２～２０重量％のレベルで存在する、請求項２６～３１のいずれかに記載の予備製剤。
33. 成分ｃ）が、２～１２重量％のプロピレングリコールを含み、
    成分ｃ）の残りがエタノールである、請求項３２に記載の予備製剤。
34. 医薬品として使用される、請求項１～３３のいずれかに記載の予備製剤。
35. 請求項１～３４のいずれかに記載の予備製剤が入っている充填済み投与器具。

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