JP5795167B2 - 疾患治療剤 - Google Patents

Description

本発明は、自己免疫疾患の治療に関する。本発明は、既に報告されている剤よりも高投与量で患者に投与され得るヒト化モノクローナル抗体などの剤に関する。前記剤は、有効な治療のために高投与量を必要とする疾患及び特性のいずれかを有する患者に特に有効である。本発明は、抗体などの前記剤を有効濃度で含む医薬組成物と、該剤を含む組成物及び薬剤の使用と、該剤を含む組成物及び薬剤を用いる治療方法とに関する。

自己免疫は、生物が自身の構成部（サブ分子レベルまで）を「自己」として認識できないことであり、その結果自身の細胞及び組織に対する免疫反応が生じる。かかる異常な免疫反応から生じる任意の疾患は、自己免疫疾患と命名されている。自己免疫疾患としては、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、重症筋無力症（ＭＧ）、多腺性自己免疫症候群ＩＩ型（ＡＰＳ−ＩＩ）、橋本甲状腺炎（ＨＴ）、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、及び自己免疫リンパ増殖症候群（ＡＬＳ）が挙げられる。

自己免疫疾患は、Ｔ細胞が「自己」の分子、即ちホストの細胞により産生される分子を認識し該分子に反応するときに生じる。抗原提示細胞（ＡＰＣ）によるプロセシングを受けた自己抗原の提示による「自己反応性」Ｔ細胞の活性化は、Ｔ細胞のクローン性増殖及び特定の組織への遊走を導き、前記組織においてＴ細胞は、炎症及び組織破壊を誘導する。

通常、Ｔ細胞は、自己組織に対して免疫寛容性であり、異種構造が提示されたときにのみ反応する。中枢性免疫寛容及び末梢性免疫寛容は、自己反応性Ｔ細胞がその有害な機能を誘発することを免疫系が妨げる２種の機序である。中枢性免疫寛容には負の選択が介在する。このプロセスは、個体発生中の胸腺における自己反応性Ｔ細胞のクローン除去を通じた排除を伴う。

末梢性免疫寛容は、中枢性免疫寛容が失敗し、自己反応性細胞が胸腺から逃れた場合に利用されるバックアップである。免疫寛容のこの機序は、生涯に亘って持続的に存在し、免疫学的無視（アネルギー）、末梢消失、及び活性抑制の少なくともいずれかを通して自己反応性細胞を抑制する。

活性抑制の一部として制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ、かつては「サプレッサ細胞」とも称されていた）は、末梢性免疫寛容を維持し、自己免疫を制御する（非特許文献１〜７）。一般に制御性Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞１型（ＴＨ１）及びＴＨ２エフェクタ細胞の活性化及び機能の少なくともいずれかを阻害する。Ｔｒｅｇ細胞の頻度及び機能のいずれかにおける制御不全が、自己免疫疾患の弱体化を導く場合もある（非特許文献６、及び８〜１０）。

制御性Ｔ細胞の幾つかのサブセットが特徴付けられている。Ｔｒｅｇファミリーは２種の重要なサブセット、自然発生サブセット、例えばＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇと、末梢性誘導サブセット、Ｔｒ１及びＴｈ３Ｔｒｅｇとからなる。更にＮＫＴｒｅｇ及びＣＤ８^＋Ｔｒｅｇが、ヒト及び齧歯類で報告されている（非特許文献１１）。

胸腺由来のＴｒｅｇ細胞（自然発生型ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇ）は、自己免疫或いは病原体免疫反応の制御に関与する主な制御性細胞であり、前記細胞は、
ｉ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞であり、末梢性ＣＤ４^＋Ｔ細胞の５％〜１０％を構成している、
ｉｉ）胸腺で成熟する、
ｉｉｉ）ＩＬ−２受容体（ＣＤ２５）、ＣＤ４５分子の低分子アイソフォームで、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）、及び転写因子ＦｏｘＰ３と合わせて発現することを一般に特徴とする。

Ｔｒｅｇの役割は、ＣＤ２５^＋細胞の枯渇したＣＤ４^＋細胞を有する免疫不全ヌードマウスを再構成することを含む実験により最も良く示されている。ＣＤ４^＋ＣＤ２５⁻再構成ヌードマウスは、胃炎、卵巣炎、精巣炎、及び甲状腺炎などの様々な器官特異的自己免疫疾患を発現する（非特許文献１２）。

再構成実験においてＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋サブセットをヌードマウスに組み込むとこれら疾患の発症が妨げられる（非特許文献１３）。器官特異的自己免疫に対するＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋細胞の保護的価値は、出産３日後に実施される新生児胸腺摘出（ｄ３Ｔｘ）により惹起される自己免疫（例えば自己免疫胃炎、前立腺炎、卵巣炎、糸球体腎炎、精巣上体炎、及び甲状腺炎）、或いはＳＣＩＤマウスを高ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４^＋ＣＤ２５⁻Ｔ細胞で再構成することにより惹起される炎症性腸疾患の幾つかの他のモデルにおいても示されている。抗ＣＤ２５抗体をインビボでマウスに投与することによっても器官限局性自己免疫疾患が誘導される。

マウスのＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞の機能における転写因子ＦｏｘＰ３の重要性の発見、及びＩＰＥＸ（免疫不全、多発性内分泌腺症、腸症、及びＸ連鎖遺伝）症候群、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性細胞欠損マウス（ｓｃｕｒｆｙ症候群）で見られる疾患に類似している重篤な炎症性疾患、の患者がＦｏｘＰ３に変異を有しているという以前の知見により、自己免疫動物モデル、マウス制御性Ｔ細胞とヒトの自己免疫疾患との間に直接的相関が得られた（非特許文献１３）。

制御性Ｔ細胞の薬学的機序は完全には明らかになっていない。ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇは、ポリクローナル及び抗原特異的にＴ細胞活性化を阻害する。ＴＣＲを介したＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇの活性化を必要とする細胞接触依存性機序により抑制が媒介されるが、Ｔｒｅｇは、ＴＣＲ活性化時或いはマイトジェニック抗体による刺激時に増殖反応を示さない（アネルギー性）（非特許文献１４）。一旦刺激されると、それらはＣＤ４^＋Ｔ細胞及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の反応を抗原非依存的方法で抑制し、Ｂ細胞活性化及びそれらのクローン除去を阻害する能力を有する。

ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇのサプレッサ活性がＴＧＦ−βなどの抗炎症性サイトカインにも部分的に依存することを示す更なるデータが存在する（非特許文献１５及び１６）。ＴＧＦ−β分泌の機能的重要性は、ＴＧＦ−β欠損マウスが自己免疫疾患を発現し、幾つかのモデルにおいて自己免疫の阻止或いはＣＤ４^＋Ｔ細胞の寛容誘導性活性がＴＧＦ−βに対する中和抗体の投与によりインビボで取り消されるという知見により更に支持されている。

ＣＤ４^＋Ｔ細胞サブセットには、抑制機能を有する少なくとも２超の異なる種類の細胞、１型制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１）及びＴｈ３細胞が存在する可能性があり、前記細胞は特異的外因性抗原に曝露された後誘導される（「適応性或いは誘導性制御性Ｔ細胞」と呼ばれる）。これら細胞の種類は、そのサイトカイン産生プロファイルに基づいてＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇと区別できると思われる。しかしこれら異なる種類間の関係は不明であり、作用機序は重複している。

Ｔｒ１細胞は、ＩＬ−１０の存在下におけるＴＣＲの反復刺激により誘導され、中程度の量のＴＧＦ−βと共に高レベルのＩＬ−１０の産生を介して免疫反応を主にダウンレギュレートすることが示された（非特許文献１７）。

Ｔｈ３細胞（抗原の経口送達後ＥＡＥモデルで同定された）は、多量のＴＧＦ−βと、可変量のＩＬ−４及びＩＬ−１０とを産生する。ＩＬ−４はそれ自体Ｔｈ３細胞の分化にとって重要な因子であることが示されており、ＩＬ−１０を用いて分化するＴｒ１細胞とは対照的である（非特許文献１８）。

免疫抑制薬剤の使用によるＴ細胞の機能抑制は、成功裏に自己免疫疾患を治療するために用いられている主な治療ストラテジである。しかし前記薬剤は選択性が乏しいため全身で免疫抑制を誘導し、その結果免疫系の有害な機能だけでなく有用な機能も阻害する。結果として、感染、癌、及び薬剤毒性などの幾つかのリスクが生じる恐れがある。

Ｔ細胞の機能に干渉する剤は、各種自己免疫疾患治療の中枢を担っている。

自己免疫疾患を治療するために制御性Ｔ細胞の活性化を目的とする剤を使用するアプローチは、著しく困難であることがこれまでに判明している。アゴニスト性抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ−３を用いるＴＣＲを介したＴｒｅｇの活性化（非特許文献１９）、或いはスーパーアゴニスト性抗ＣＤ２８抗体ＴＧＮ１４１２を用いる共刺激分子ＣＤ２８を介したＴｒｅｇの活性化により、制御性Ｔ細胞集団及び他の従来のＴ細胞の完全な枯渇と、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、及びＩＬ−２を含む炎症促進性サイトカインの全身性誘導及び過剰量の放出とが導かれ、その結果ヒトでは臨床的に明らかなサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）が生じる（非特許文献２０）。

５ｍｇのモノクローナル抗体ＯＫＴ３を最初の２回〜３回注入した後、患者の大部分がサイトカイン放出症候群を発現し、腎移植レシピエントの血液循環において１時間〜２時間以内に高濃度の腫瘍壊死因子α、インターロイキン−２、及びγ−インターフェロンが現れる（非特許文献２１）。これにより治療域が狭くなり、自己免疫疾患の治療におけるこの抗体の有用性が限定される。

総用量５ｍｇ〜１０ｍｇのＴＧＮ１４１２（０．１ｍｇ抗ＣＤ２８／ｋｇ体重）で処理すると、ＴＧＮ１４１２の単回静脈内投与を受けた後９０分以内に多臓器不全を伴う全身性炎症反応が導かれる（非特許文献２０）。

ＣＤ４Ｔ細胞が自己免疫の開始及び維持において重要な役割を果たしていることは一般に認められている。したがって、ＣＤ４Ｔ細胞表面分子に対するｍＡｂ、特に抗ＣＤ４ｍＡｂを免疫抑制剤として使用することが提案されている。多くの臨床研究によりこのアプローチの潜在的重要性が確認されているが、前記研究はルーチンな診療における使用に対して抗ＣＤ４ｍＡｂをより好適にするために対処すべき幾つかの問題も提起している。

ＣＤ４ｍＡｂの幾つかの異なる作用機序が提案されており、例えば（１）ＣＤ４−ＭＨＣ ＩＩ相互作用の拮抗によるＴ細胞活性化阻害、（２）ＣＤ４の細胞表面発現低下により判定されるＣＤ４受容体調節、（３）後にＴ細胞活性化を抑制しＣＤ４Ｔ細胞のアポトーシス細胞死を誘発し得るＴ細胞受容体架橋の非存在下におけるＣＤ４受容体を通じた部分的シグナル伝達、（４）ＣＤ４Ｔ細胞枯渇を導くＦｃ媒介性補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）或いは抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、及び（５）制御性Ｔ細胞の刺激が挙げられる。

ＣＤ４Ｔ細胞枯渇を導くＦｃ媒介性補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）或いは抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）が主に観察される機序であり、ＩｇＧ１サブクラスの抗体について特に証明されている。ＴＲＸ−１、ＴＮＸ−３５５、ＩＤＥＣ−１５１、ＯＫＴｃｄｒ４Ａなど他の機序に寄与しているのはほんの僅かなＣＤ４抗体であり、この中でＩｇＧ１はＴＲＸ−１のみである（非特許文献２２〜２９）。

「高」用量（１００ｍｇ超を複数サイクル投与）におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の用量依存性枯渇、及び「低」用量（１０ｍｇ超を複数サイクル投与）における一過性隔離（短期間枯渇）が、幾つかのＣＤ４受容体（非特許文献２３及び２６）及びＨｕＭａｘ−ＣＤ４（非特許文献２８及び３０）で観察されている。その枯渇活性にもかかわらず、ＣＤ４に対するｍＡｂは、研究された自己免疫疾患、例えば関節リウマチにおいて臨床的有用性及び一貫した有効性をもたらすことはできなかった（非特許文献３１）。更にＣＤ４^＋Ｔ細胞の枯渇は一般にシナリオ（ｓｃｅｎａｒｉｏ）と見なされ、これは重篤な免疫抑制を惹起することがある。

Ｂ−Ｆ５抗体（マウスＩｇＧ１抗ヒトＣＤ４）を様々な自己免疫疾患で試験した。

重篤な乾癬に罹患している少数の患者をマウスＢ−Ｆ５抗体で処理した結果、幾つかの正の効果が報告された（非特許文献３２及び３３）。

関節リウマチ患者では、Ｂ−Ｆ５を毎日投与するプラセボ対照試験で観察された結果は有意な改善を示さなかった（非特許文献３４）。

多発性硬化症（ＭＳ）患者では、再発寛解型患者を１０日間処理した後幾つかの正の効果が観察され、患者の一部は治療の６ヶ月後も再発しなかった（非特許文献３５）。同様の効果が非特許文献３６でも観察された。

重篤なクローン病では、連続して７日間Ｂ−Ｆ５を投与した患者で有意な改善は見られなかった（非特許文献３７）。

同種移植片拒絶の予防では、同種移植片拒絶の予防に用いるにはＢ−Ｆ５の生物学的利用能が十分ではないことが報告された（非特許文献３８）。

臨床的改善を得るために高用量のｍＡｂの使用が必須であるという問題を最初に解決すべきであることが上記から明らかである。該問題は、標的組織におけるｍＡｂへのリンパ球の接近可能性が低いことに特に起因する可能性がある。高用量の使用により、血中リンパ球に対する過剰作用が生じ、不所望の副作用が誘導される恐れがある。

ヒトにおいてモノクローナル抗体を用いる治療の別の問題点は、これらの抗体が一般にマウス細胞から得られたものであり、ヒトレシピエントにおいて抗マウス反応を誘発することである。これは前記治療の有効性及び将来開発されるであろうマウスモノクローナル抗体を用いる任意の治療法の有効性さえも低下させるだけでなく、アナフィラキシーのリスクも高める。

この問題点は、マウスモノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）をグラフトすることにより得られるヒト化抗体を使用することにより原則として避けることができ、前記相補性決定領域とはヒト免疫グロブリン分子のフレームワーク領域（ＦＲ）上に存在する抗原結合特異性を決定する領域である。ヒト化の目的は、ＣＤＲ配列が由来するマウスモノクローナル抗体と同様の抗原結合性を有し、ヒトにおける免疫原性が非常に低い組み換え抗体を得ることである。

場合によっては、抗原結合性（特異性だけでなく、抗原に対する親和性も）を移行させるにはマウス抗体のＣＤＲをヒトフレームワークにおけるヒトＣＤＲに置換するだけで十分である。しかし多くの抗体では幾つかのＦＲ残基が抗原結合にとって重要であり、その理由は前記ＦＲ残基が抗体−抗原複合体中の抗原に直接接触するか、或いは前記ＦＲ残基がＣＤＲの立体構造延いてはその抗原結合性能に影響を与えるためである。

したがってほとんどの場合、マウス抗体の１或いは数個のフレームワーク残基をヒトの対応するＦＲ残基に置換することも必要である。抗マウス反応を防ぐために置換される残基数はできる限り少なくしなければならないため、抗原結合性を保持するためにどのアミノ酸残基（１或いは複数のいずれか）が重要なのかを決定することが問題である。置換するのにより適切な部位を予測するための種々の方法が提案されている。前記方法はヒト化の最初の段階で助けになる可能性のある一般原理を提供するが、最終的な結果は抗体によって異なる。したがって、所定の抗体についてどの置換が所望の結果をもたらすかを予想することは非常に困難である。

マウスＢ−Ｆ５抗体のヒト化は既に試みられており、親マウスＢ−Ｆ５に類似するＣＤ４結合性を有するヒト化Ｂ−Ｆ５（以後ｈＢ−Ｆ５と称する）を産生することに成功している。

したがって、特許文献１ではヒト化抗体ＢＴ０６１（ヒト化Ｂ−Ｆ５、或いは単にｈＢ−Ｆ５）が乾癬及び関節リウマチなどの自己免疫疾患の治療において有用であることが見出されている。前記特許出願は、０．１ｍｇ〜１０ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜５ｍｇの用量を投与できるよう配合された非経口投与用組成物について開示している。予想される投与レジメは１０日間に亘って１日当たり１ｍｇの用量及び２日に１回５ｍｇの用量を関節リウマチ患者に静脈内投与するレジメである。したがって開示されている最高用量は１回に５ｍｇであり、１０日に亘る過程では２５ｍｇである。

前記研究は非特許文献３９においても報告された。関節リウマチに罹患している１１人の患者の治療について開示された。患者は１５０ｍｇのジクロフェナック（Ｄｉｃｌｏｐｈｅｎａｃ）との併用治療により、隔日５ｍｇのＢＴ０６１を５回静脈内注入することにより治療された。

この研究に記載されている抗体は、高用量で用いるのに好適であることが開示されておらず、より多くの患者を治療するために高用量による治療法を見出すことが依然として望まれている。

国際特許公開第２００４／０８３２４７号

Ｓｕｒｉ−Ｐａｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：１７９９−１８０５（１９９６） Ａｓａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：３８７−３９６（１９９６） Ｂｏｎｏｍｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：６６０２−６６１１（１９９５） Ｗｉｌｌｅｒｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３：５２１−５３０（１９９５） Ｔａｋａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：１９６９−１９８０（１９９８） Ｓａｌｏｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １２：４３１−４４０（２０００） Ｒｅａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：２９５−３０２（２０００） Ｂａｅｃｈｅｒ−Ａｌｌａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗ ２１２：２０３−２１６（２００６） Ｓｈｅｖａｃｈ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：４２３−４４９（２０００） Ｓａｋａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１８２：１８−３２（２００１） Ｆｅｈｅｒｖａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ １１４：１２０９−１２１７（２００４） Ｓｕｒｉ−Ｐａｙｅｒｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１２１２−１２１８（１９９８） Ｓａｋａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１１５１−１１６４（１９９５） Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：３８９（２００２） Ｋｉｎｇｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：１０８０（２００２） Ｎａｋａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９４：６２９−６４４（２００１） Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：７３３−７４４（２００３） Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６５：１２３７−１２４０（１９９４） Ａｂｒａｍｏｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ，Ｎ Ｅｎｇｌ．Ｊ Ｍｅｄ．１９９２ Ｓｅｐ ３；３２７（１０）：７３６ Ｓｕｎｔｈａｒａｌｉｎｇａｍ ｅｔ ａｌ，Ｎ Ｅｎｇｌ．Ｊ Ｍｅｄ．２００６ Ｓｅｐ ７；３５５（１０）：１０１８−２８ Ａｂｒａｍｏｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．１９８９ Ａｐｒ；４７（４）：６０６−８ Ｓｃｈｕｌｚｅ−Ｋｏｏｐｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２５（１１）：２０６５−７６（１９９８） Ｍａｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２９（２）：２２０−９（２００２） Ｃｈｏｙ ｅｔ ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ３９（１０）：１１３９−４６（２０００） Ｈｅｒｚｙｋ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．６９（２）：１０３２−４３（２００１） Ｋｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ．１８（１）：４５−５２（２００１） Ｍｏｕｒａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６５（５）：６３２−４１（１９９８） Ｓｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３９（１１）：１４３３−９（２００３） Ｊａｂａｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（１）：９４−１０３（１９９７） Ｃｈｏｙ ｅｔ ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ４１（１０）：１１４２−８（２００２） Ｓｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ６： ７５−９２， （２００７） Ｒｏｂｉｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １９９６：６：１４１−６ Ｒｏｂｉｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ａｃａｄ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １９９７；３６：５８２−８ Ｗｅｎｄｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏ１；２５（８）：１４５７−６１，１９９８ Ｒａｃａｄｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ，６（６）：７７１−８６，１９９３ Ｒｕｍｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．（Ｍｕｔｔ Ｓｃｌｅｒ；１（４）：２０７−１２，１９９６） Ｃａｎｖａ−Ｄｅｌｃａｍｂｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｌｉｍｅｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ １０（５）：７２１−７，１９９６ Ｄａｎｔａｌ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２７；６２（１０）：１５０２−６，１９９６ Ｗｉｊｄｅｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＵＬＡＲｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ、２００５年６月、講演要旨及びポスター発表

上記先行技術を考慮して本発明の目的は、既存の治療法に対して未だ十分反応していない自己免疫疾患患者を治療することにある。具体的には本発明の目的は、現在反応していない患者の治療反応を改善するために、高用量で患者に適用できる自己免疫疾患の治療法を見出すことにある。

驚くべきことに本発明者が実施した実験により、他のＣＤ４ｍＡｂと比べてＩｇＧ１抗体ＢＴ０６１は、一旦標的細胞のＣＤ４に結合すると、ＡＤＣＣもＣＤＣ或いはアポトーシスも誘導しないことが明らかになった。

したがって本発明は、薬学的に許容される担体と、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤とを含む自己免疫疾患を治療するための医薬組成物であって、剤の用量が１０ｍｇ〜２００ｍｇで対象に投与される組成物を提供する。

本発明は更に、薬学的に許容される担体と、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤とを含む自己免疫疾患を治療するための医薬組成物であって、剤の用量が５ｍｇ／ｍ^２〜６０ｍｇ／ｍ^２で対象に投与される組成物を提供する。

本発明は更に、薬学的に許容される担体と、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤とを含む自己免疫疾患を治療するための医薬組成物であって、剤の用量が１μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇで対象に投与される組成物を提供する。

更に本発明は、薬学的に許容される担体と、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤とを含む医薬組成物であって、剤が１０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する医薬組成物を提供する。

本発明の好ましい態様では剤は、ヒト化抗ＣＤ４抗体、その断片及びその誘導体のいずれかである。

また本発明は、自己免疫疾患を治療するための薬剤の製造における本明細書に定義される剤の使用であって、前記剤が本明細書に定義される用量で対象に投与される使用を提供する。本発明は更に、自己免疫疾患の治療において使用するための本明細書に定義される剤であって、本明細書に定義される用量で対象に投与される剤を提供する。

驚くべきことに本発明者らは、ヒト化抗体ＢＴ０６１（ヒト化Ｂ−Ｆ５、或いは単にｈＢ−Ｆ５）が、例えば抗ＣＤ３抗体などの他のＴ細胞相互作用抗体と比べて炎症促進性サイトカインの放出を実質的に調節せず、誘導もしないことを見出したことは、上記投与量から理解される。更に該抗体は、ＣＤ４^＋リンパ球の実質的に長期間に亘る枯渇を引き起こさない。

本発明の剤の濃度は、該剤が既知の濃度と比べて高い濃度で存在する限り、特に制限されない。しかし該剤の濃度は、１０ｍｇ／ｍＬ（或いは１０ｍｇ／ｍＬ超）〜１５０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ（或いは１５ｍｇ／ｍＬ超）〜７５ｍｇ／ｍＬ、或いは２０ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬが好ましい。該剤の濃度は、（約）１０ｍｇ／ｍＬ、（約）１２．５ｍｇ／ｍＬ、（約）２０ｍｇ／ｍＬ、（約）２５ｍｇ／ｍＬ、（約）５０ｍｇ／ｍＬ、（約）６０ｍｇ／ｍＬ、（約）７０ｍｇ／ｍＬ、（約）８０ｍｇ／ｍＬ、（約）９０ｍｇ／ｍＬ、或いは（約）１００ｍｇ／ｍＬのいずれか１種が最も好ましい。

組成物として対象に適用される場合の投与体積は、特に制限されないが、但し既に知られている投与量と比べて全体的に高投与量を送達し、したがって高用量により利益を得ることができる個体を治療するのに好適であり、該個体は、罹患期間が長く現在の治療法に対する反応が不十分である重篤な場合の個体などであるがこれらに限定されない。具体的には前記投与体積の範囲内である剤の濃度は、本願に記載されている必要な用量を提供するために変動してもよい。

投与体積は投与方法に応じて変動する。非経口投与が好ましい。非経口投与の例は、筋肉内投与、静脈内投与、或いは皮下投与である。組成物を静脈内注入により投与する場合、投与体積は０．１ｍＬ〜５００ｍＬ、或いは０．５ｍＬ〜５００ｍＬであってもよく、好ましくは１５ｍＬ〜２５ｍＬ、典型的には約２０ｍＬである。組成物を皮下注入或いは筋肉内注入により投与する場合、投与体積は０．１ｍＬ〜３ｍＬであってもよく、好ましくは０．５ｍＬ〜１．５ｍＬであり、典型的には約１ｍＬである。

しかし幾つかの実施形態では、組成物は濃縮形態で提供され、対象個体に必要な強度に希釈されてもよい。これらの状況において組成物は、約１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、或いは５ｍＬという比較的少ない体積で提供されることが好ましい。代替実施形態では、組成物は必要な強度且つ上記投与体積で提供される（即ちすぐに投与できる）。１つの特定の実施形態では皮下投与用医薬組成物は、医療従事者でなくとも容易に投与できるように、すぐに投与できる形態で提供される。

既に述べたように、本発明により想定される高投与量で自己免疫疾患を治療可能な剤を投与できることは知られていなかった。自己免疫疾患を治療可能な剤の投与が一部の個体或いは疾患の種類で有効であることは知られていたが、それが高用量で耐容され得るという認識により、一部の自己免疫疾患及び患者のクラスのより有効な治療法の可能性が開かれた。

本発明は、以下の図面を参照してほんの１例として示される。

図１は、３人の健常ドナー由来の全血培養物のサイトカイン合成に対するＢＴ０６１の効果を示す。培養物は、個々の実験において４種の異なる活性化因子を用いて刺激した：ＣＤ３＝抗ＣＤ３抗体、ＬＰＳ＝リポ多糖類、ＰＨＡ＝植物性血球凝集素＋抗ＣＤ２８抗体；ＳＥＢ＝ブドウ球菌エンテロトキシンＢ＋抗ＣＤ２８抗体。様々なサイトカインを測定して、各種白血球亜集団に対する効果を測定した：Ｔｒｅｇ細胞（ＣＤ３：ＴＧＦ−β、ＩＬ−１０）；単球／マクロファージ（ＬＰＳ：ＩＬ−１０、ＴＮＦα、ＩＬ−１β）；Ｔｈ２細胞（ＰＨＡ：ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３）；Ｔｈ１細胞（ＳＥＢ：ＩＬ−２、ＩＦＮγ）。 図２は、様々な刺激物により誘発されるサイトカイン合成に対するヒト全血培養物（関節リウマチのドナー）中のＢＴ０６１の効果を示す。 図３は、マウスＢ−Ｆ５ Ｖ_Ｈ領域をコードするヌクレオチド配列（配列番号５）を示す。 図４は、マウスＢ−Ｆ５ Ｖ_Ｋ領域をコードするヌクレオチド配列（配列番号６）を示す。 図５は、ヒト化Ｂ−Ｆ５のＶ_Ｈ領域をコードするプラスミド断片のヌクレオチド配列（配列番号３）を示す。Ｖ領域をコードする配列に下線を引き、対応するポリペプチド配列（配列番号１７）をヌクレオチド配列の下に示す。 図６は、ヒト化Ｂ−Ｆ５のＶ_Ｋ領域をコードするプラスミド断片のヌクレオチド配列（配列番号４）を示す。Ｖ領域をコードする配列に下線を引き、対応するポリペプチド配列（配列番号２）をヌクレオチド配列の下に示す。 図７は、抗ＣＤ３モノクローナル抗体で報告されているレベルと比較した、健常ボランティアにおけるＢＴ０６１（単回静脈内注入或いは皮下注入）を用いた臨床試験で観察されたＴＦＮα及びＩＬ−６放出を示す。投与量及び回復時間は図に記載されている。図中に「２）」として示したＴＲＸ４の結果は、Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｔｙｐｅ １ Ｄｉａｂｅｔｅｓ ｐａｔｉｅｎｔｓに報告されている。図中に「３）」として示したＴｅｐｌｉｚｕｍａｂの結果は、Ｈｅｒｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｔｙｐｅ Ｉ Ｄｉａｂｅｔｅｓ ｐａｔｉｅｎｔｓに報告されている。図中に「４）」として示した正常値は、Ｓｔｒａｕｂ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ａｔｈｒ．＆Ｒｈｅｕｍａｔに報告されている。「^＊）」は単一用量を表し、「^＊＊）」はピーク濃度に達するまで注入された累積投与量を表す。 図８は、健常ボランティアにおける単一用量のＢＴ０６１を静脈内投与或いは皮下投与した後のＩＬ−２及びＩＦＮ−γの血漿濃度を示す。ＵＬＮ＝正常上限；ＬＬＮ＝正常下限。 図９は、単一用量のＢＴ０６１を静脈内投与することにより処理したボランティアにおけるＣＤ４細胞数（血漿１ｍＬ当たりの細胞数）の動態を示す。１用量群当たり３人の患者の平均値を示す。点線は、正常上限（ＵＬＮ）及び正常下限（ＬＬＮ）を示す。 図１０は、単一用量のＢＴ０６１を皮下投与することにより処理したボランティアにおけるＣＤ４細胞数（血漿１ｍＬ当たりの細胞数）の動態を示す。１用量群当たり３人の患者の平均値を示す。点線は、正常上限（ＵＬＮ）及び正常下限（ＬＬＮ）を示す。 図１１Ａは、実施例７に記載される用量群Ｉの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を０．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１１Ａは、用量群Ｉの１番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１１Ｂは、実施例７に記載される用量群Ｉの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を０．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１１Ｂは、用量群Ｉの２番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１１Ｃは、実施例７に記載される用量群Ｉの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を０．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１１Ｃは、用量群Ｉの３番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１１Ｄは、実施例７に記載される用量群Ｉの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を０．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１１Ｄは、用量群Ｉの４番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１１Ｅは、実施例７に記載される用量群Ｉの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を０．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１１Ｅは、用量群Ｉの５番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１１Ｆは、実施例７に記載される用量群Ｉの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を０．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１１Ｆは、用量群Ｉの６番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１１Ｇは、実施例７に記載される用量群Ｉの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を０．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１１Ｇは、用量群Ｉの７番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１１Ｈは、実施例７に記載される用量群Ｉの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を０．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１１Ｈは、用量群Ｉの８番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１２Ａは、実施例７に記載される用量群ＩＩの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を２．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１２Ａは、用量群ＩＩの１番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１２Ｂは、実施例７に記載される用量群ＩＩの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を２．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１２Ｂは、用量群ＩＩの２番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１２Ｃは、実施例７に記載される用量群ＩＩの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を２．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１２Ｃは、用量群ＩＩの３番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１２Ｄは、実施例７に記載される用量群ＩＩの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を２．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１２Ｄは、用量群ＩＩの４番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１２Ｅは、実施例７に記載される用量群ＩＩの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を２．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１２Ｅは、用量群ＩＩの５番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１２Ｆは、実施例７に記載される用量群ＩＩの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を２．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１２Ｆは、用量群ＩＩの６番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１２Ｇは、実施例７に記載される用量群ＩＩの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を２．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１２Ｇは、用量群ＩＩの７番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１２Ｈは、実施例７に記載される用量群ＩＩの乾癬患者の臨床試験から得られたデータを示し、この試験では患者を２．５ｍｇのＢＴ０６１或いはプラセボを静脈内注入することにより処理した。図１２Ｈは、用量群ＩＩの８番の患者のＰＡＳＩスコアのグラフを提供する。 図１３は、実施例７に記載される乾癬患者の臨床試験から得られた写真を提供する。写真は、用量群ＩＩのメンバーであった同一患者のものである。パートＡに示す写真は治療前に撮影された。パートＢに示す写真は治療の２８日後に撮影された。 図１４は、実施例８に記載される関節リウマチ患者の臨床試験結果を示す。図は、１．２５ｍｇ、６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、及び２５ｍｇのＢＴ０６１を皮下投与した用量群の患者のうち少なくともＡＣＲ２０応答が得られた患者の割合の棒グラフを示す。各群６人の患者に抗体が投与され、一方２人の患者にプラセボが投与された。 図１５は、実施例８に記載される関節リウマチ患者の臨床試験結果を示す。図１５Ａは、２５ｍｇのＢＴ０６１を投与した用量群の患者における圧痛関節数の棒グラフを示す。図１５Ｂは、同用量群の患者における関節腫脹数の棒グラフを示す。各群６人の患者に抗体が投与され、一方２人の患者にプラセボが投与された。 図１６は、実施例８に記載される関節リウマチ患者の臨床試験結果を提供する。図１６Ａは、２５ｍｇ皮下投与群における１人のレスポンダにおける個々のパラメータの変化（％）を示す。図１６Ｂは、２５ｍｇ皮下投与群における１人の非レスポンダにおける個々のパラメータの変化（％）を示す。図中「ＰａｔのＧＡ」及び「ＰｈｙのＧＡ」はそれぞれ患者の全般的評価及び医師の全般的評価を指す。用語「ＰＡの疼痛」は患者の疼痛評価を指す。 図１７は、実施例８に記載される関節リウマチ患者の臨床試験結果を提供する。図１７Ａは、１．２５ｍｇ皮下投与群の患者における圧痛関節数を示す。図１７Ｂは、６．２５ｍｇ皮下投与群の患者における圧痛関節数を示す。 図１８は、実施例８に記載される関節リウマチ患者の臨床試験結果を提供する。図１８Ａは、５０ｍｇ皮下投与群の患者における圧痛関節数を示す。図１８Ｂは、６．２５ｍｇ皮下投与群の患者における圧痛関節数を示す。 図１９は、Ｂ−Ｆ５（即ちＢＴ０６１）のヒト化形態の設計におけるマウスＢ−Ｆ５Ｖ_Ｋ（配列番号８）、ＦＫ−００１（配列番号９、１０、１１、及び１２）、Ｌ４Ｌ（配列番号１８）、及びＬ４Ｍ（配列番号２）のポリペプチド配列のアラインメントを示す。 図２０は、Ｂ−Ｆ５のヒト化形態の設計におけるマウスＢ−Ｆ５Ｖ_Ｈ（配列番号７）、Ｍ２６（配列番号１３、１４、１５、及び１６）、Ｈ３７Ｌ（配列番号１）、及びＨ３７Ｖ（配列番号１７）のポリペプチド配列のアラインメントを示す。

次に、本発明を更に詳細に説明する。

本発明で使用するのに好適である剤は、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤である。前記剤は、ポリペプチド、タンパク質、或いは抗体であってもよい。前記剤が抗体である場合、前記剤はモノクローナル抗体であってもよい。前記抗体は、モノクローナル抗ＣＤ４抗体であることが好ましい。抗体は、また好ましくはＩｇＧ１抗体であってもよく、非修飾ＩｇＧ１抗体であってもよい。

本発明の好ましい態様では、抗ＣＤ３抗体と比較して、前記剤は、投与後の対象の血漿中の炎症促進性サイトカイン濃度を実質的に増加させない。具体的には健常対象で測定された血漿濃度と比較して、前記剤の投与後のＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−２の少なくともいずれかの濃度は、実質的に上昇しない（表Ａ１参照）。特に表Ａ１に示されている特定のサイトカインのＵＬＮをＸとすると、本発明の剤の投与後９６時間以内のＸ増加は２０倍未満であってもよい。Ｘ増加は１０倍未満であることが好ましい。投与開始後１０分〜投与完了後９６時間の間これらの濃度であることがより好ましい。

自己免疫患者では、前記剤の投与前のサイトカイン濃度が健常対象で観察されるサイトカイン濃度（表Ａ１で示されているＵＬＮ）よりも既に高い可能性がある。これは例えば健常対象の細胞の活性化状態に比べて免疫細胞の活性化状態が変化しているためである。この場合前記剤の投与直前の特定のサイトカイン濃度をＸとすると、本発明の剤の投与後９６時間以内のＸ増加は２０倍未満であってもよい。Ｘ増加は１０倍未満であることが好ましい。投与開始後１０分〜投与完了後９６時間の間これらの濃度であることがより好ましい。

本発明の更に好ましい態様では、前記剤は、実質的に長期に亘って対象の血漿におけるＣＤ４^＋リンパ球の細胞数を減少させない。具体的には投与後７２時間〜９６時間の期間内、対象の血漿におけるＣＤ４^＋リンパ球の細胞数は２５０細胞／μＬを超えていてもよい（或いは少なくとも２５０細胞／μＬである）。

処理された患者の少なくとも８０％で上記サイトカイン及びＣＤ４^＋リンパ球に対する効果が見られることが好ましい。

免疫系の負の影響、例えばリンパ球細胞数の減少或いはサイトカイン放出の誘導を防ぐため、サブクラスＩｇＧ２、ＩｇＧ３、或いはＩｇＧ４の抗体（特にＴ細胞相互作用抗体）を利用することが当該技術分野において既知であり、その理由はＩｇＧ１サブクラスの抗体がより高いＦｃ受容体相互作用を示すためである。Ｆｃ突然変異、脱グリコシル化、糖修飾（ｇｌｙｃｏｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、或いは糖鎖工学により抗体（特にＴ細胞相互作用抗体）を改質してＦｃ受容体相互作用を低減することも当該技術分野において既知である。

本明細書に記載される実験において本発明者らは、ＩｇＧ１サブクラスの抗体の回避及び改質が本発明の剤にとって必須ではないことを見出した。具体的には本願に示すデータは、本発明の剤は実質的に且つ長期に亘ってＣＤ４^＋細胞を枯渇させないか、或いは抗ＣＤ３抗体と比べて実質的なサイトカイン放出を誘導しない。

したがって本発明の好ましい態様では、前記剤は非修飾ＩｇＧ１抗体、即ちＦｃ突然変異を含まず、またＦｃ受容体、その断片、及びその誘導体のいずれかの相互作用を低減するために脱グリコシル化、糖修飾（ｇｌｙｃｏｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、或いは糖鎖工学に供されていない抗体である。

本発明で使用するのに最も好適である抗体は、ヒト化抗ＣＤ４抗体、その断片、或いはその誘導体のいずれかであり、これらはＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能である。ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な抗体の例はＢｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００７），Ｖｏｌ．３７：ｐｐ．１２１７−１２２３）で論じられている。

一般に本発明で用いられる抗体は、ヒト定常領域（Ｆｃ）を更に含む。この定常領域は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、並びにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプに由来する定常ドメインから選択することができる。好ましい定常領域は、ＩｇＧ、特にＩｇＧ１の定常ドメインから選択される。

本発明はまたＶ領域を含む抗体の任意の断片を含む。これは具体的にはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’_２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片を含む。

本発明の特に好ましい態様では抗体は、マウスモノクローナル抗ＣＤ４抗体Ｂ−Ｆ５に由来するヒト化抗ＣＤ４抗体、その断片、及びその誘導体のいずれかである。かかる抗体の例はＢＴ０６１抗体である。

ＢＴ０６１抗体、その断片、及びその誘導体
ヒト化抗体ＢＴ０６１（ｈＢ−Ｆ５）は、マウスＢ−Ｆ５ｍＡｂに由来し、以下のポリペプチド配列により定義されるＶドメインを有する：
−Ｈ鎖Ｖドメイン：ＥＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳＤＣＲＭＹＷＬＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＳＡＳ ＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）
−Ｌ鎖Ｖドメイン：ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＩＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＷＴＦＧ ＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）。

この抗体の誘導体もまた本発明で使用するのに好適である。誘導体としては、配列番号１或いは配列番号２で表されるポリペプチド配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列により定義されるＶドメインを有する誘導体が挙げられる。

特に好ましい抗体は、マウスＢ−Ｆ５ｍＡｂの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化するｈＢ−Ｆ５の能力を保持している抗体である。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｋドメイン内のＣＤＲの位置を図１９及び図２０に示す。かかる抗体は、結合特異性及び結合親和性の少なくともいずれかに対して実質的に影響を与えない変異をＣＤＲの配列中に任意的に有していてもよい。

一般に本発明で用いられるｈＢ−Ｆ５抗体は、ヒト定常領域（Ｆｃ）を更に含む。上記のようにこの定常領域は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、並びにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプに由来する定常ドメインから選択することができる。好ましい定常領域は、ＩｇＧ、特にＩｇＧ１の定常ドメインから選択される。

本発明はまたＢＴ０６１抗体のＶ領域を含むＢＴ０６１抗体の任意の断片を含む。これは具体的にはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’_２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片を含む。

ＢＴ０６１抗体のＨ鎖或いはＬ鎖のＶドメインをコードするポリヌクレオチドは、以下の方法で得られる完全Ｈ鎖及び完全Ｌ鎖を発現させる目的のために、ヒトＨ鎖或いはヒトＬ鎖の定常領域をコードするポリヌクレオチドと融合させてもよく、またタンパク質を分泌させるシグナルペプチドをコードする配列を付加してもよい。

本発明はまた、選択されたホスト細胞における上記ポリヌクレオチドの転写及び翻訳を制御することを可能にする適切な調節配列に上記ポリヌクレオチドが結合している発現カセットと、本発明のポリヌクレオチド或いは発現カセットを含む組み換えベクターを使用する。

組換えＤＮＡ及び遺伝子工学の周知の技術によりこれら組換えＤＮＡコンストラクトを得、ホスト細胞に導入することができる。

本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドにより形質転換されているホスト細胞を使用する。本発明の範囲内の有用なホスト細胞は、原核細胞であっても真核細胞であってもよい。好適な真核細胞の中でも例として植物細胞、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓなどの酵母細胞、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ或いはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａなどの昆虫細胞、及びＨｅＬａ、ＣＨＯ、３Ｔ３、Ｃ１２７、ＢＨＫ、ＣＯＳなどの哺乳類細胞が挙げられる。

本発明で用いられる発現ベクターの構築及びホスト細胞の形質転換は、分子生物学の標準的な技術により行うことができる。

本発明で用いられるＢＴ０６１（ｈＢ−Ｆ５）抗体は、前記抗体の発現に好適な条件下で前記抗体をコードする核酸配列を含む発現ベクターを有するホスト細胞を培養し、前記抗体をホスト細胞培養物から回収することにより得ることができる。

ヒト化Ｂ−Ｆ５の構築
ヒト化Ｂ−Ｆ５Ｖ_Ｈ領域及びＶ_Ｋ領域の設計
マウスＢ−Ｆ５Ｖ_Ｈ領域及びＶ_Ｋ領域をコードするＤＮＡ配列をそれぞれ図３及び図４に示し、配列識別子を配列番号５及び配列番号６とする。マウスＣＤＲがグラフトされているヒトＶ_Ｈ及びＶ_Ｋは、オリジナルのマウスＢ−Ｆ５Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｋに最も類似しているヒトＶ_Ｈをデータベースで検索することにより選択した。ヒト抗体（Ｍ２６；アクセッション番号Ａ３６００６）のＶ_Ｈ領域が、Ｂ−Ｆ５Ｖ_Ｈに対して最も高い相同性を有していた。別のヒト抗体（ＦＫ−００１；ＮＡＫＡＴＡＮＩ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７（１９８９），８０５−８１０））のＶ_Ｋ領域が、Ｂ−Ｆ５Ｖ_Ｋに対して最も高い相同性を有していた。

４番目の残基がロイシンであるかメチオニンであるかという点が異なる２種のＶ_Ｋを構築し、Ｌ４Ｌ及びＬ４Ｍと命名した。３７番目のアミノ酸残基がロイシンであるかバリンであるかという点が異なる２種のＶ_Ｈを構築し、Ｈ３７Ｌ及びＨ３７Ｖと命名した。Ｂ−Ｆ５、ＦＫ−００１、Ｌ４Ｌ、及びＬ４Ｍのポリペプチド配列のアラインメントを図１９に示す。Ｂ−Ｆ５、Ｍ２６、Ｈ３７Ｌ、及びＨ３７Ｖのポリペプチド配列のアラインメントを図２０に示す。ＣＤＲのパッキング（ｐａｃｋｉｎｇ）に重要であることが既に報告されているＦＲ残基（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２（１９８９），８７７；Ｆｏｏｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２４（１９９２），４８７）を四角で囲む。

Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｋを組み合わせることにより、４種のＶ領域を設計した。

ヒト化Ｂ−Ｆ５の発現
この後のヒト化Ｂ−Ｆ５の産生工程は、ヒト化Ｂ−Ｂ１０について米国特許第５，８８６，１５２号明細書に開示されているものと同一であった。

簡潔に述べると、ヒト化Ｂ−Ｆ５のＨ鎖用発現プラスミド（ヒトｙ−１鎖の定常領域に融合しているＶ_Ｈヒト化領域（ＴＡＫＡＨＡＳＨＩ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２９（１９８２），６７１−６７９））及びＬ鎖用発現プラスミド（ＦＫ−００１のＫ鎖の定常領域に融合しているＶ_Ｋヒト化領域）を別々に構築した。これらのプラスミドでは、ヒト化Ｂ−Ｆ５の発現はヒトモノクローナルＩｇＭ、ＦＫ−００１遺伝子のプロモータ／エンハンサによりドライブされる。図５及び図６はそれぞれヒト化Ｂ−Ｆ５のＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｋ領域をコードするプラスミドの断片を示す。Ｖ領域をコードする配列に下線を引き、対応するポリペプチド配列をヌクレオチド配列の下に示す。Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ^ｎｉを用いてマウス骨髄腫Ｓｐ２／０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８１）に両方のプラスミド及びｐＳＶ２ｎｅｏを同時に導入した。抗ヒトＩｇＧ（γ鎖）抗体及び抗ヒトＩｇＫ鎖抗体を用いてＥＬＩＳＡによりヒトＩｇＧを産生するトランスフェクトーマを選択した。

ヒト化Ｂ−Ｆ５の異なるバージョンの特徴付け
ＣＤ４結合活性の評価
４種のｈＢ−Ｆ５を産生するトランスフェクトーマの培養上清を回収し濃縮した。プロテインＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅを用いてアフィニティクロマトグラフィーにより培養上清から様々な抗体を精製し、競合ＥＬＩＳＡを用いてビオチン化ｍＢ−Ｆ５とマイクロタイタープレート上にコーティングされている可溶性ＣＤ４との結合に対する前記抗体の阻害活性を測定することにより前記抗体のＣＤ４結合活性を評価した。インキュベート時間は、３７℃の場合は２時間及び４℃の場合は一晩である。

ｈＢ−Ｆ５の相対結合活性（ｍＢ−Ｆ５の結合活性を１００％として）を以下の表Ａに示す。

表Ａに示した結果から、ｈＢ−Ｆ５のＣＤ４結合活性を維持するために３７番目の残基がロイシンであることが重要であると思われる。その理由は、ＣＤ４結合活性が^３７Ｌｅｕを^３７Ｖａｌに変換することにより数倍低下しているためである。対照的にＶ_Ｋの４番目の残基はＣＤ４結合活性にとってそれ程重要ではないことが見出された。Ｖ_Ｈの^３７Ｌｅｕと^３７Ｖａｌとの間の構造的差異は分子モデリングによって明らかに示されてはいないため、ＣＤ４結合活性においてＨ３７ＬがＨ３７Ｖに対して優位であることは予想外であった。

評価のためにＨ３７Ｌ／Ｌ４Ｌ及びＨ３７Ｌ／Ｌ４Ｍを選択した。

ヒト化Ｂ−Ｆ５のインビトロにおける生物学的活性の研究
マウスＢ−Ｆ５及びヒト化Ｂ−Ｆ５（Ｈ３７Ｌ／Ｌ４Ｍ ＩｇＧ１及びＨ３７Ｌ／Ｌ４Ｌ ＩｇＧ１）のインビトロにおける生物学的活性を評価した。ＩｇＧ２型のヒト化Ｂ−Ｆ５（Ｈ３７Ｌ／Ｌ４Ｍ ＩｇＧ２及びＨ３７Ｌ／Ｌ４Ｌ ＩｇＧ２）についても試験した。

健常ドナー由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いてｍＢ−Ｆ５及び４種のｈＢ−Ｆ５のインビトロにおける生物学的活性を評価した。ＰＢＭＣは、マウスＢ−Ｆ５或いはｈＢ−Ｆ５の存在下でＣｏｎＡ（２．５ｐｇ／ｍＬ、３日）或いはＰＰＤ（１０ｐｇ／ｍＬ、４日）により活性化され、３Ｈ−チミジンの取り込みによるＰＢＭＣの増殖反応をモニタした。

マウスＢ−Ｆ５及びｈＢ−Ｆ５は、穏やかにＣｏｎ−Ａ誘導性増殖を阻害することができたが、活性は、抗体によって、ドナーによって、或いは抗体及びドナーによって異なっていた。またマウスＢ−Ｆ５及びｈＢ−Ｆ５は、ＰＰＤにより誘導されるＡｇ特異的ＰＢＭＣ増殖を阻害することができた。

ＩｇＧ１型のｈＢ−Ｆ５は、ｍＢ−Ｆ５より有効にＰＰＤ誘導性増殖を阻害した（最大７０％阻害）。阻害活性がｍＢ−Ｆ５と略等しかったＩｇＧ２型よりもＩｇＧ１型の方が有効であると思われる。ＩｇＧ１型では、Ｈ３７Ｌ／Ｌ４ＭがＨ３７Ｌ／Ｌ４Ｌよりも有効であった。ＩｇＧ２型のＨ３７Ｌ／Ｌ４ＭとＨ３７Ｌ／Ｌ４Ｌは略等しい阻害活性を有していた。簡潔に述べるとＰＰＤ誘導性ＰＢＭＣ増殖に対するＢ−Ｆ５の阻害活性は以下の通りであった：Ｈ３７Ｌ／Ｌ４Ｍ ＩｇＧ１＞Ｈ３７Ｌ／Ｌ４Ｌ ＩｇＧ１＞Ｈ３７Ｌ／Ｌ４Ｍ ＩｇＧ２＝Ｈ３７Ｌ／Ｌ４Ｌ ＩｇＧ２＝ｍＢ−Ｆ５。

インビトロにおける生物学的活性及びマウスと同一のアミノ酸数が少ないことを考慮して更なる評価のためにＨ３７Ｌ／Ｌ４Ｍ ＩｇＧ１を選択した。ＢＴ０６１と命名され、本願の実施例において本発明を説明するために用いられているのはこの抗体である。

組成物及び使用
上述の通り本発明で用いられる医薬組成物及び薬剤は、高用量により利益を得ることができる患者の自己免疫疾患を治療可能であることが好ましい。かかる患者としては罹患期間の長い重篤な患者が挙げられるがこれに限定されない。

また本発明の１つの態様では、自己免疫疾患に対して有効な薬剤の製造におけるヒト化抗ＣＤ４抗体、その断片及びその誘導体のいずれかの使用であって、前記ヒト化抗体がＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能であり、前記薬剤が１０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１５ｍｇ／ｍＬ〜７５ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは２０ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体を含む使用を提供する。

本発明は更に、自己免疫疾患に対して有効な薬剤の製造におけるヒト化抗ＣＤ４抗体、その断片及びその誘導体のいずれかの使用であって、前記ヒト化抗体がＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能であり、前記薬剤が投与１回当たりの抗体の量１０ｍｇ〜２００ｍｇでの単回用量或いは複数回用量で対象に投与される使用を提供する。

また本発明は、薬学的に許容される担体と、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤とを含む自己免疫疾患を治療するための医薬組成物であって、剤の用量が１０ｍｇ〜１００ｍｇ、１０ｍｇ〜８０ｍｇ、１５ｍｇ〜８０ｍｇ、２０ｍｇ〜７５ｍｇ、好ましくは２０ｍｇ〜６０ｍｇ、最も好ましくは２５ｍｇ〜６０ｍｇで対象に投与される医薬組成物を提供する。

本発明の１つの態様では対象は複数回投与を受ける。これら状況では１０日間に亘る投与量は、２５ｍｇ超であるが２００ｍｇ以下が好ましく、２８ｍｇ〜１００ｍｇがより好ましく、３０ｍｇ〜１００ｍｇが最も好ましい。更に５日間に亘る投与量は、１５ｍｇ超であるが１００ｍｇ以下が好ましく、１８ｍｇ〜１００ｍｇがより好ましく、２０ｍｇ〜１００ｍｇが最も好ましい。本発明のこの態様では投与量が皮下投与されることが特に好ましい。

用量はまた対象の体重或いは対象の体表面積（ＢＳＡ）に基づいて算出することもできる。体表面積（ＢＳＡ）は、既知の方法のいずれかに従って算出することができる。ＢＳＡ算出法の例は以下の通りである：
Ｍｏｓｔｅｌｌｅｒ式：（ＢＳＡ（ｍ^２））＝（［高さ（ｃｍ）×重量（ｋｇ）］／３６００）^１／２
（Ｍｏｓｔｅｌｌｅｒ ＲＤ：Ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｄｙ Ｓｕｒｆａｃｅ Ａｒｅａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ １９８７ Ｏｃｔ ２２；３１７（１７）：１０９８）
ＤｕＢｏｉｓ及びＤｕＢｏｉｓ式：ＢＳＡ（ｍ^２）＝０．２０２４７×高さ（ｍ）^{０．７２５}×重量（ｋｇ）^{０．４２５}
（ＤｕＢｏｉｓ Ｄ；ＤｕＢｏｉｓ ＥＦ：Ａ ｆｏｒｍｕｌａ ｔｏ ｅｓｔｉｍａｔｅ ｔｈｅ ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅ ｓｕｒｆａｃｅ ａｒｅａ ｉｆ ｈｅｉｇｈｔ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｂｅ ｋｎｏｗｎ．Ａｒｃｈ Ｉｎｔ Ｍｅｄ １９１６ １７：８６３−７１．）
Ｈａｙｃｏｃｋ式：ＢＳＡ（ｍ^２）＝０．０２４２６５×高さ（ｃｍ）^{０．３９６４}×重量（ｋｇ）^{０．５３７８}
（Ｈａｙｃｏｃｋ Ｇ．Ｂ．，Ｓｃｈｗａｒｔｚ Ｇ．Ｊ．，Ｗｉｓｏｔｓｋｙ Ｄ．Ｈ．Ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｂｏｄｙ ｓｕｒｆａｃｅ ａｒｅａ：Ａ ｈｅｉｇｈｔ ｗｅｉｇｈｔ ｆｏｒｍｕｌａ ｖａｌｉｄａｔｅｄ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ，ｃｈｉｌｄｒｅｎ ａｎｄ ａｄｕｌｔｓ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １９７８ ９３：１：６２−６６）
Ｇｅｈａｎ及びＧｅｏｒｇｅ式：ＢＳＡ（ｍ^２）＝０．０２３５×高さ（ｃｍ）^{０．４２２４６}×重量（ｋｇ）^{０．５１４５６}
（Ｇｅｈａｎ ＥＡ，Ｇｅｏｒｇｅ ＳＬ，Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｏｄｙ ｓｕｒｆａｃｅ ａｒｅａ ｆｒｏｍ ｈｅｉｇｈｔ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｒｅｐ １９７０ ５４：２２５−３５）
Ｂｏｙｄ式：ＢＳＡ（ｍ^２）＝０．０００３２０７×高さ（ｃｍ）^０．３×重量（グラム）^{（０．７２８５−（０．０１８８×ＬＯＧ（グラム））}

本発明によれば剤の用量は、患者の体表面積に対し５ｍｇ／ｍ^２〜６０ｍｇ／ｍ^２、好ましくは６ｍｇ／ｍ^２〜５０ｍｇ／ｍ^２、最も好ましくは８ｍｇ／ｍ^２〜４０ｍｇ／ｍ^２である。

更に用量は、対象の体重に基づいて計算することもできる。本発明によれば対象に投与される剤の用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１５ｍｇ／ｋｇ〜１．５ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは０．２ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇである。

本発明のこれら態様では、用量が対象の体表面積或いは体重に基づく場合、１０日間に亘る投与量は、好ましくは１０ｍｇ／ｍ^２〜１２０ｍｇ／ｍ^２、より好ましくは１６ｍｇ／ｍ^２〜１２０ｍｇ／ｍ^２、或いは０．２ｍｇ／ｋｇ〜４ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．４ｍｇ／ｋｇ〜４ｍｇ／ｋｇである。投与量は皮下投与されることが特に好ましい。

治療効果に干渉しない限り、投与頻度は特に限定されない。本発明では以下の基準のうちの少なくとも１種で複数回用量を投与することが好ましい：１日間に１回、２日間に１回、１週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、１２週間に１回、２４週間に１回、１ヶ月間に１回、３ヶ月間に１回、６ヶ月間に１回、或いは１年間に１回。したがって投与は、少なくとも１日間、少なくとも１週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、或いは少なくとも１年の間隔で隔てられてもよい（用量が少なくとも１日に１回、１週間に１回、１ヶ月間に１回、６ヶ月間に１回、或いは１年間に１回服用されることを意味する）。更なる他の方法では、１日間〜３１日間に１回、或いは１ヶ月間〜１２ヶ月間に１回複数回用量が服用される。

治療期間は特に限定されず、自己免疫疾患の治療では典型的に、治療は無期限に継続される、或いは患者が管理可能なレベルに症状が低減するまで継続される。一般に用量は、少なくとも１ヶ月間に亘って対象に投与される。

本発明はまた上記で定義したように使用するためのキットであって、対象に同時に、連続して、或いは別個に投与するための上記で定義した通りの複数の薬剤用量を備えるキットを提供する。

本発明はまた自己免疫疾患の治療方法であって、上記で定義した医薬組成物を対象に投与する工程を含む方法を提供する。

自己免疫疾患の治療方法であって、対象に薬剤を投与する工程を含み、前記薬剤がＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を含み、前記薬剤が上記量で対象に投与される治療方法も提供される。

剤は、マウスモノクローナル抗ＣＤ４抗体Ｂ−Ｆ５に由来するヒト化抗ＣＤ４抗体、その断片及びその誘導体のいずれかであることが好ましい。

上述の通り本発明で用いられる医薬組成物及び薬剤は、高用量から利益を得られる患者の自己免疫疾患を治療できることが好ましい。かかる患者としては罹患期間が長い重篤な患者が挙げられるがこれに限定されない。

自己免疫疾患は、乾癬、関節リウマチ、多発性硬化症、１型糖尿病、炎症性腸疾患、クローン病、橋本甲状腺炎、自己免疫甲状腺炎、自己免疫重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、心筋炎、及びグラフト対ホスト反応或いはホスト対グラフト反応などの移植関連疾患、或いは一般的な器官寛容性の問題から選択されることが好ましい。

本発明の特に好ましい態様では、医薬組成物は自己免疫疾患である乾癬を治療するためのものである。具体的にはかかる医薬組成物は、本明細書で特定される投与量を静脈内投与或いは皮下投与する。

乾癬は、罹患者の皮膚上に乾癬病変或いは斑を生じさせる疾患である。罹患者の呈している乾癬レベルを評価及び記録するために乾癬面積及び重症度指数（ＰＡＳＩ）のスコアが一般的に用いられている。ＰＡＳＩのスコア付けは、紅斑（Ｅ）、浸潤（Ｉ）、落屑（Ｄ）、並びに４箇所の身体領域（頭部（ｈ）、体幹（ｔ）、上肢（ｕ）、及び下肢（ｌ））の病変の体表面積（Ａ）の評価を含む。以下の表Ｂはスコア付けシステムがどのように機能するかを示す。

頭部、上肢、体幹、及び下肢は、それぞれ体表面積の約１０％、２０％、３０％、及び４０％に相当するため、ＰＡＳＩスコアは以下の式により算出される。
ＰＡＳＩ＝０．１（Ｅ_ｈ＋Ｉ_ｈ＋Ｄ_ｈ）Ａ_ｈ＋０．２（Ｅ_ｕ＋Ｉ_ｕ＋Ｄ_ｕ）Ａ_ｕ＋０．３（Ｅ_ｔ＋Ｉ_ｔ＋Ｄ_ｔ）Ａ_ｔ＋０．４（Ｅ_ｌ＋Ｉ_ｌ＋Ｄ_ｌ）Ａ_ｌ

ＰＡＳＩスコアは、０〜７２の範囲である。スコア０は、乾癬ではないことを意味し、一方スコア７２は、最も重篤な乾癬であることを表す。

この態様の好ましい実施形態では本発明の医薬組成物は、患者のＰＡＳＩスコアを少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％改善することにより乾癬を治療し得る。対象は治療前に少なくとも１０のＰＡＳＩスコアを有することが好ましい。投与後少なくとも５６日間、より好ましくは投与後少なくとも７５日間これらの効果が見られ得る。具体的には治療された患者の少なくとも８０％でこれらの効果が見られ得る。

本発明の更なる態様では、医薬組成物は関節リウマチを治療するためのものである。

関節リウマチは、関節及び周辺組織の慢性炎症を惹起する自己免疫疾患であり、他の組織及び体器官にも影響を及ぼす場合がある。

治療を受けた患者が示す関節リウマチの改善は、米国リウマチ学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ）（ＡＣＲ）コアセットのパラメータ（Ｆｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，１９９５，３８（６），７２７−７３５）を用いて一般的に評価されている。このシステムは、圧痛関節数及び腫脹関節数の２０％改善、且つ残り５種のＡＣＲコアセット測定値：患者及び医師による全般的評価、疼痛、身体障害、及びＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）などの急性期反応物質のうち３種の２０％改善としてＡＣＲ２０値を定義する。

具体的には関節リウマチを治療するための医薬組成物は、本明細書で特定される投与量を筋肉内投与或いは皮下投与することが好ましい。

関節炎の現在の治療法としては、例えばアスピリン、イブプロフェン、ナプロキセンなどの非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）に分類されている疼痛及び炎症を制御するための第１選択薬が挙げられる。関節炎の二次治療としては、コルチコステロイド（例えばプレドニゾン及びデキサメタゾン）、遅効性抗リウマチ薬（ＳＡＡＲＤ）、或いは疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、例えばメトトレキサート、ペニシリンアミン、シクロホスファミド、金塩、アザチオプリン、レフルノミドなどが挙げられる。

体内のコルチゾンホルモンの合成バージョンであるコルチコステロイド（例えばプレドニゾン及びデキサメタゾン）を用いて関節リウマチの進行を阻害する。

生物学的応答調節物質（ＢＲＭ）と呼ばれる別の群の薬剤もまた関節リウマチ治療用に開発されており、ＴＮＦ−αタンパク質の受容体への結合を通して機能する、或いはＴＮＦ−αタンパク質への直接結合を通して機能するＴＮＦ−αに対する拮抗剤（アダリムマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト）が挙げられる。

本発明のこの態様の１つの実施形態では、組成物は、関節リウマチを治療するために現在用いられている薬剤と組み合わせて投与される。具体的には組成物は、上述の薬剤のうち１種、好ましくはメトトレキサートと共に投与される。

メトトレキサートなどの既知の薬剤及び本発明の医薬組成物は、同時に、連続して、或いは別個に投与することができる。

本発明は、以下の特定の実施形態に関して更に記載される。

実施例１−Ｔ細胞の増殖に関するＢＴ０６１の免疫調節能の研究
方法
新鮮末梢血を用いて全血培養を実施した。簡潔に述べると１９Ｇの針を用いて３人の健常ボランティアからヘパリン処理したシリンジに血液を採取した。血液提供後６０分以内に前記血液を９６ウェル培養プレートに播種した。

本発明で用いられる抗体（ＢＴ０６１、ロット番号４０５８８、或いはロット番号７０Ａ００１３Ｂ）を培養物に添加し、次いで５種の異なる濃度の白血球（以下の「試験物質」参照）を刺激した。３７℃、５％ ＣＯ_２、加湿雰囲気にて９０分間細胞を抗体と相互作用させ、次いで下記ａ〜ｄの４種の異なる刺激物質を別々の培養物に添加した。
（ａ）抗ＣＤ３抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；５０ｎｇ／ｍＬ）；
（ｂ）植物性血球凝集素（ＰＨＡ、Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＫＧ；３ｐａ／ｍＬ）及び抗ＣＤ２８抗体（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；１μｇ／ｍＬ）；
（ｃ）リポ多糖類（ＬＰＳ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ製サブタイプ０５５：Ｂ１５；１μｇ／ｍＬ）；
（ｄ）ＳＥ−Ｂ（Ｂｅｒｎｈａｒｄ−Ｎｏｃｈｔ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ；２５ｎｇ／ｍＬ）及び抗ＣＤ２８抗体（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；１μｇ／ｍＬ）

３７℃、５％ ＣＯ_２（加湿雰囲気）にて２４時間全ての全血培養物をインキュベートした。次いでサイトカインのエンドポイントを決定するためにＰＨＡ／抗ＣＤ２８抗体刺激培養物を除く培養上清を回収した。ＰＨＡ／抗ＣＤ２８抗体刺激培養物は、Ｔｈ２細胞を十分に刺激するために４８時間インキュベートした。

結果を図１に記載する。

結果
ＢＴ０６１は、健常ボランティア由来の全血培養物において単球／マクロファージの主な活性、Ｔｈ１活性、及びＴｈ２活性に対して有意な効果を示さなかった。Ｔｒｅｇ細胞に対する濃度依存性効果が見られた（ＴＧＦ−β放出の増加として示された）。

特に、前記結果から以下のことが確認される：
・患者における最高１５０ｍｇの高用量適用に相当する最高５０μｇ／ｍＬの濃度において炎症性サイトカインＩＬ−２は調節されない、
・患者における最高１５０ｍｇの高用量適用に相当する最高５０μｇ／ｍＬの濃度において炎症性サイトカインＩＦＮ−γは誘導されない、
・患者における高用量適用に相当する最高５０μｇ／ｍＬの濃度においてＴｈ１／Ｔｈ２サイトカインは調節されない、
・辺縁増殖（ｍａｒｇｉｎａｌ ｉｎｃｒｅｍｅｎｔ）によりＩＬ−６の非常に散発性であるアップレギュレーションのみが生じ、この意味については議論の余地がある、
・ＴＧＦ−β放出が増加する（Ｔｒｅｇ細胞）、
・単球／マクロファージの主な調節活性、Ｔｈ１活性、及びＴｈ２活性に対して有意な効果は見られない。

実施例２−抗破傷風類毒素応答及びサイトカインアッセイのために予備刺激された培養ヒトＰＢＭＣに対するＢＴ０６１の影響試験
方法
増殖アッセイ
９６ウェル平底マイクロタイタープレート内にて２００μＬ／ウェル（４×１０^５細胞／ウェル）の体積の新たに単離したＰＢＭＣを培養した。試験品（抗ＣＤ４ ＡＫ ＢＴ０６１）は、２０μｇ／ｍＬ、４μｇ／ｍＬ、及び０．８μｇ／ｍＬ（予備試験では更に４０μｇ／ｍＬも）の濃度で用いた。破傷風類毒素は、２５μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、及び１μｇ／ｍＬの濃度で用いた。陰性対照として細胞培養培地を用いた。全ての培養物を３連で用意した。

Ｃｏｎ−Ａ刺激には、２．５μｇ／ｍＬの濃度及び２００μＬ／ウェルの体積を用いた。ＰＢＭＣの密度を１×１０^６／ｍＬに調整し、１ウェル当たり１００μＬの体積に分布させた。

培養期間の終わりに、０．４μＣｉの^３Ｈ−チミジン／ウェルを添加することにより１６時間の細胞増殖を検出した。培養期間の終わりに、ＥＤＴＡ溶液を用いて表面から細胞を剥離させ、ｓｃａｔｒｏｎ細胞回収器を用いてグラスファイバーフィルタで細胞を回収した。各ウェル内のＤＮＡに取り込まれた放射能の量をシンチレーションカウンタで測定したところ、それは増殖細胞の数と比例しており、また該増殖細胞数は刺激を受けて細胞周期のＳ期に入った白血球の数の関数であった。読み出し（ｒｅａｄｏｕｔ）パラメータはカウント毎分（ｃｐｍ）、及びｃｐｍ_化合物／ｃｐｍ_ブランクと定義される各濃度についての刺激指数（ＳＩ）であった。

サイトカインアッセイ
市販のＥＬＩＳＡキットを用い、各メーカの取扱説明書に従って培養上清中の全サイトカインを定量した。用いた試薬を以下の表１に記載する。

ヒトＩＬ−１ ＥＬＩＳＡセットＡ（Ｂｅｎｄｅｒ）試験キットを用いてメーカの取扱説明書に従って培養上清中のインターロイキン（ＩＬ）−１濃度を測定した。キットと共に供給される標準物質により予め定められる試験の範囲は、未希釈サンプルでは１．３ｐｇ／ｍＬ〜１３０ｐｇ／ｍＬと指定された。

ＯｐｔＥＩＡ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）試験キットを用いてメーカの取扱説明書に従って培養上清中のＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０濃度、並びにトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）β１、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αを測定した。キットと共に供給される標準物質により予め定められる試験の範囲は、未希釈サンプルを測定したとき３．８ｐｇ／ｍＬ〜３３０ｐｇ／ｍＬ（ＩＦＮ−γ）、６．３ｐｇ／ｍＬ〜６１６ｐｇ／ｍＬ（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、及びＴＮＦ）と指定され、２倍希釈したサンプルを用いたとき７．６ｐｇ／ｍＬ〜６６０ｐｇ／ｍＬ（ＩＬ−６）と指定された。

各独立した微小培養物に由来するＥＬＩＳＡにより決定された２種（単球培養物）或いは８種（ＰＢＭＣ培養物）のサイトカインの測定値は平均及び標準偏差の計算に含まれていた。試験の上限（例えばＴＮＦの場合６１６ｐｇ／ｍＬ）を超える力価をこの計算用の値に設定した。計算前に各平均値から試験の下限を減じた。

結果
ＢＴ０６１（ヒト化Ｂ−Ｆ５或いは単にｈＢ−Ｆ５とも呼ばれる）は、破傷風類毒素特異的Ｔ細胞増殖を用量依存的に抑制することができ、Ｔ細胞の総数に対する影響は見られなかった。サイトカイン放出の全身性抑制が見られた。

以下の表２は、破傷風類毒素特異的Ｔ細胞増殖アッセイにおける抗ＣＤ４ｍＡｂ ＢＴ０６１の影響を示し、３連で測定した。

３連で測定した^３Ｈ−Ｔｄｒの取り込みの平均及びＳＤ、各濃度における刺激指数（ＳＩ、ｃｐｍ_化合物／ｃｐｍ_ｎｉｌと定義される）、培地対照に対する独立両側ｔ検定における有意性のレベル（ｎ．ｓ．：有意差無し、^＊：ｐ＜０．０５、^＊＊：ｐ＜０．０１、^＊＊＊：ｐ＜０．００１）を示す。

表２〜４のデータは以下のことを示す：
・破傷風類毒素誘導性Ｔ細胞増殖の用量依存的抑制（再現反応）が高用量ＢＴ０６１でさえも見られ、これは、ＢＴ０６１が全ての免疫反応を抑制する訳ではないことを示す。用いられた用量は、患者において最高６０ｍｇの高用量適用に相当する、
・Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスに影響を及ぼすことなしに、サイトカイン放出が全身で抑制される（ＩＦＮ−γ、ＩＬ−５、及びＴＮＦ−αの用量依存的減少、ＩＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０には変化無し）、
・ＴＧＦ−β放出が増加する。

実施例３−ＢＴ０６１（抗ＣＤ４ｍＡｂ）誘導性ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害性）についてのフローサイトメトリー試験
ＨｕＴ７８標的細胞をＢＴ０６１（ｈＢ−Ｆ５）で標識し、エフェクタとしてのＰＢＭＣ細胞と共にインキュベートした。３０分間インキュベーションした後のＤＮＡ色素ヨウ化プロピジウムの取り込みにより死細胞を検出することができた。結果を表５に示す。
表中のデータは、高濃度においてさえもＢＴ０６１（ｈＢ−Ｆ５）によりＡＤＣＣが誘導されないことを示す。

実施例４−アポトーシス
ＢＴ０６１（抗ＣＤ４ｍＡｂ）誘導性アポトーシスについてのフローサイトメトリー試験において、全血由来のＰＢＭＣをＢＴ０６１或いは陽性対照と共にインキュベートした。

７日間インキュベートした後、アポトーシス細胞をＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ−Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｅで染色することによりアポトーシス細胞の検出を実施した。結果を表６に示す。
データは、高濃度のＢＴ０６１でさえもアポトーシスを誘導しないことを示す。

実施例５−補体結合
補体因子Ｃ１ｑの結合についてのフローサイトメトリー試験において、ＰＢＭＣを単離しＢＴ０６１（抗ＣＤ４ｍＡｂ）と共にインキュベートし、続いて精製組み換えＣ１ｑと共にインキュベートした。

ＡＴＧ（Ｔｅｃｅｌａｃ）を陽性対照として用いた。

Ｃ１ｑに対するＦＩＴＣ標識検出抗体を用いて検出を実施した。結果を以下の表７に示す。
データは、高濃度でさえも補体結合が見られないことを示す。

実施例６−漸増用量のＢＴ０６１の安全性及び耐容性
１８歳以上７５歳以下の健常男性及び女性ボランティアにおいて漸増用量の抗体を用いてＢＴ０６１の安全性及び耐容性をモニタするための研究を行った。

各群３人ずつの１０投与量群に分けた３０人のボランティアにＢＴ０６１を静脈内投与した。更に各群３人ずつ５投与量群に分けた１５人のボランティアにＢＴ０６１を皮下投与した。ＢＴ０６１の静脈内投与について以下の表８に示す。
０．９％の塩化ナトリウム注入液で最高総体積２０ｍＬまで各用量を希釈する。用量を単回持続静脈内注入として２時間に亘って投与する。

ＢＴ０６１の皮下用量
ＢＴ０６１の皮下投与について以下の表９に示す。
各用量は単回ボーラス注入として注入する。

注入後３ヶ月間に亘ってボランティアを評価した。

皮下適用では、投与前、投与３時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、５６時間後、７２時間後、８８時間後、９６時間後、１２０時間後、１４４時間後、１６８時間後、及び７５日目に血漿サンプルを採取した。

静脈内適用では、投与前、投与３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、１２０時間後、１４４時間後、及び１６８時間後に血漿サンプルを採取した。

標準的なＥＬＩＳＡ法を用いて血漿サンプルを分析し、サイトカインレベルを決定した。分析した関連サイトカインにはＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−２が含まれていた。

標準的なフローサイトメトリー法を用いて血漿サンプルも分析し、ＣＤ４^＋リンパ球数を測定した。

結果
最高６０ｍｇの静脈内用量及び皮下用量は一般に耐容性に優れていることが見出された。

サイトカインレベル
サイトカイン放出誘導は、ＡＴＧ、ＯＫＴ３、ＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ、及びヒト化抗ＣＤ３ｍＡｂ（ＴＲＸ４、Ｖｉｓｉｌｉｚｕｍａｂ、及びＴｅｐｌｉｚｕｍａｂ）などのＴ細胞相互作用治療抗体の使用に伴って生じる一般的な即時併発症である。主な症状としては、中等度の発熱、頭痛、及び自己限定性胃腸炎が挙げられる。抗体投与後のサイトカイン誘導と相関する副作用には、抗ヒスタミン剤塩酸ジフェンヒドラミン及び抗炎症剤イブプロフェンの少なくともいずれかなどの更なる薬剤の適用を必要とする。

ＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３）、マウスＣＤ３特異的治療モノクローナル抗体を使用した場合、死者が出たという報告さえあり、重篤な副作用により主に免疫低下患者に対するこの抗体の臨床的使用は制限されている。

自己免疫疾患の治療のために医療機関で現在用いられているヒト化ＦｃＲ非結合ＣＤ３特異的モノクローナル抗体（Ｔｅｐｌｉｚｕｍａｂ及びＴＲＸ４）は、ＯＫＴ３などのＦｃＲ結合ＣＤ３特異的抗体と比較して、最初の投与後のＴ細胞の活性化及びＦｃ受容体発現細胞の活性化の少なくともいずれかにより誘導される副作用は減少しているが、Ｔ細胞の活性化及びＦｃ受容体発現細胞の活性化が依然としてある程度見られ、これによりサイトカイン依存性副作用に一般に関連しているサイトカイン放出が導かれる。

現在の研究ではＢＴ０６１の静脈内適用或いは皮下適用後に健常ボランティアで見られるサイトカイン誘導は、抗ＣＤ３抗体に比べて少なく且つ一過性であることが驚くべきことに見出された。サイトカイン誘導は、投与量増加につれて一般に増加する。しかし４０ｍｇ〜６０ｍｇの最高用量でさえも、他のＴ細胞相互作用モノクローナル抗体で見られるよりもサイトカイン誘導は著しく少ない（図７Ａ及び図７Ｂ）。

最高用量（４０ｍｇ〜６０ｍｇのＢＴ０６１）を用いて投与した後９６時間以内のいずれかの時点で観察されたサイトカインの中央ピーク濃度を図７及び図８に示す。

各サイトカインの中央ピーク濃度は以下のように算出される。最高サイトカイン濃度の中央値は抗体の投与後に観察された。

図７Ａ及び図７Ｂは、抗ＣＤ３モノクローナル抗体、Ｔｅｐｌｉｚｕｍａｂ及びＴＲＸ４の投与後の放出と比較した、ＢＴ０６１の静脈内投与或いは皮下投与後に健常ボランティアで観察されたＴＮＦ−α及びＩＬ−６放出を示す。これらのサイトカインの正常値はＳｔｒａｕｂ ｅｔ ａｌ．，（２００７，Ａｒｔｈｒ．＆Ｒｈｅｕｍａｔ．）から得た。図８は、ＢＴ０６１の静脈内投与或いは皮下投与後のＩＬ−２及びＩＦＮ−γ血漿濃度を示す。抗体注入４日以内に測定した４０ｍｇ及び６０ｍｇ用量群から中央ピーク濃度を算出した。正常上限（ＵＬＮ）は、３９人の健常対象で測定されたサイトカイン濃度に基づいて算出され、ＵＬＮ＝平均値＋２×標準偏差である。

Ｔｅｐｌｉｚｕｍａｂ及びＴＲＸ４（それぞれＨｅｒｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ及びＫｅｙｍｅｕｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄから得られた結果）に比べて、ＢＴ０６１はサイトカイン放出を僅かに且つ一過的にしか誘導しなかった。ＴＮＦ−α及びＩＬ−６濃度は僅かに増加した。図７は、ＢＴ０６１（４０ｍｇ及び６０ｍｇ）の適用後血漿中で検出されたＩＬ−６及びＴＮＦ−αサイトカイン濃度の中央ピーク値が、ＣＤ３特異的治療抗体Ｔｅｐｌｉｚｕｍａｂ及びＴＲＸ４で処理した後に見られる値より低いことを示す。

更に抗ＣＤ３ｍＡｂとは対照的に、ＢＴ０６１はＴＲＸ４の適用について報告されているように（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ ｅｔ ａｌ．２００５）ＩＦＮ−γ及びＩＬ−２レベルを実質的に増加させなかった（図８）。

ＣＤ４^＋リンパ球
更に該試験は、採取した血漿サンプル中のＣＤ４陽性リンパ球数の研究も含んでいた。

静脈内投与の結果を以下の表９、表１０、及び表１１に示す。表１２は、皮下投与による試験の結果を示す。この結果を図９及び図１０にグラフで示す。

具体的には図９は、ＢＴ０６１の単回静脈内投与で処理されたボランティアのＣＤ４細胞数（細胞／ｍＬ血漿）を示す。データ点は、各用量群における３人の患者の平均値を示す。点線は、正常上限（ＵＬＮ）及び正常下限（ＬＬＮ）を示す。健常ボランティアの細胞数に基づいてＵＬＮ及びＬＬＮ（平均値＋（或いは−）標準偏差）を算出したところ、正常下限（ＬＬＮ）は４４３ＣＤ４細胞／μＬであり、正常上限（ＵＬＮ）は１３２４ＣＤ４細胞／μＬであった。

図１０は、ＢＴ０６１の単回皮下投与で処理されたボランティアのＣＤ４細胞数（細胞／ｍＬ血漿）を示す。図９と同様に、データ点は各用量群における３人の患者の平均値を示す。点線は、正常上限（ＵＬＮ）及び正常下限（ＬＬＮ）を示す。

当該技術分野において既知である多くのＣＤ４特異的モノクローナル抗体（Ｓｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．，２００７で概説されている抗体など）でＣＤ４陽性リンパ球枯渇を介した免疫抑制が達成される。これらの抗体の問題点は、処理された個体が免疫低下（ｉｍｍｕｎｏ−ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ）状態になり、他の感染症に罹患しやすくなることである。

対照的に、この研究はＢＴ０６１がＣＤ４陽性細胞の広範囲に亘る持続性枯渇を誘導しないことを示した。ＣＤ４陽性リンパ球の一過性減少が観察されたが、抗体の投与後７２時間以内に末梢血における正常値に回復した。

ＢＴ０６１の適用後７２時間の時点では、静脈内投与群の４人のボランティアにおけるＣＤ４細胞数は、以下のように正常値を下回るＣＤ４数を示した：１００μｇ静脈内投与群のボランティア１名：４００ＣＤ４細胞／μＬ；５ｍｇ投与群のボランティア１名：４１９ＣＤ４細胞／μＬ；１０ｍｇ投与群のボランティア１名：４４０ＣＤ４細胞／μＬ；及び２０ｍｇ投与群のボランティア１名：３９２ＣＤ４細胞／μＬ。

しかしこれらの値は正常値をほんの僅か下回っていた。静脈内投与群の残りの２６人のボランティアにおけるＣＤ４細胞数は、ＢＴ０６１投与７２時間後正常値の範囲内であった。

皮下投与群では、７２時間後、１５人のボランティアのうち１人のみが正常値を下回るＣＤ４細胞数を示した。

結論として、ＣＤ４特異的ｍＡｂの枯渇とは対照的に、高用量ＢＴ０６１でさえもＣＤ４陽性細胞の一過性減少を誘導するのみであり、後にその低下は全身で回復する。一過性減少及び急速な正常値への全身性回復から、ＣＤ４陽性細胞の枯渇ではなくＣＤ４陽性細胞の一過的再分布が生じていると結論付けられる。

実施例７−中等度〜重篤な慢性乾癬に罹患している患者におけるＢＴ０６１の臨床試験
中等度〜重篤な慢性乾癬に罹患している患者５６人についてｈＢ−Ｆ５ ＢＴ０６１の自己免疫疾患を治療する能力を試験した。試験は、ｈＢ−Ｆ５の安全性及び有効性を評価するための単一用量漸増試験を含む。

試験条件は以下の通りである：
５６人の患者を各群８人ずつの７種の用量群に分けた。５種の用量群（用量群Ｉ〜Ｖ）に抗体或いはプラセボを静脈内投与し、２種の用量群（用量群ＶＩ〜ＶＩＩ）に抗体或いはプラセボを皮下投与した。各用量群の２人の患者にプラセボを投与し、各用量群の残り６人にはある用量のＢＴ０６１を投与した。用量群Ｉでは６人の患者に０．５ｍｇＢＴ０６１を静脈内投与した。用量群ＩＩ〜Ｖでは６人の患者にそれぞれ２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、或いは２０ｍｇのＢＴ０６１を投与した。皮下投与の用量群ＶＩ及びＶＩＩでは６人の患者にそれぞれ１２．５ｍｇ或いは２５ｍｇのＢＴ０６１を投与した。

静脈内投与では、医学的に認められている手順に従って前腕静脈に抗体／プラセボを注入する。この場合ｐｅｒｆｕｓｏｒ（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｐｉｌｏｔ Ｃ，Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を通して２時間に亘って単回持続静脈内注入として全体積を投与する。各容量の抗体を０．９％の塩化ナトリウム注入液（Ｂ．Ｂｒａｕｎ Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で最高総体積２０ｍＬまで各抗体用量を希釈する。

皮下投与では、単回皮下注入として抗体を投与する。同手順をプラセボにも適用する。

乾癬面積及び重症度指数（ＰＡＳＩ）スコアを用いて各患者が示す乾癬レベルを記録する。上述のようにＰＡＳＩスコアが高くなるにつれて乾癬レベルも高くなる。試験の登録患者は、中等度〜重篤な慢性乾癬、即ち１０以上のＰＡＳＩスコアを有する。

試験前に患者のＰＡＳＩスコアを評価して０日目の「基準」値を得、試験中５日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目、４２日目、５６日目、及び７５日目にＰＡＳＩスコア評価を繰り返した。

用量群Ｉ
用量群Ｉの６人の患者に０．５ｍｇのＢＴ０６１を単回静脈内適用し、用量群Ｉの２人の患者にプラセボを投与した。各患者の体重当たりの用量及び体表面積（ＢＳＡ）当たりの用量を表１３に示す。体表面積は本明細書に記載されたＭｏｓｔｅｌｌｅｒ式に従って算出した。

ＰＡＳＩスコアの基準からの改善率と共に用量群Ｉの患者のＰＡＳＩスコアを表１３に示す。

用量群ＩＩ
用量群ＩＩの６人の患者に２．５ｍｇのＢＴ０６１を単回静脈内適用し、用量群ＩＩの２人の患者にプラセボを投与した。各患者の体重当たりの用量及び体表面積（ＢＳＡ）当たりの用量を表１４Ａに示す。

ＰＡＳＩスコアの基準からの改善率と共に用量群ＩＩの患者のＰＡＳＩスコアを表１４Ａに示す。

用量群ＩＩＩ
用量群ＩＩＩの６人の患者に５．０ｍｇのＢＴ０６１を単回静脈内適用し、用量群ＩＩＩの２人の患者にプラセボを投与した。各患者の体重当たりの用量及び体表面積（ＢＳＡ）当たりの用量を表１４Ｂに示す。

ＰＡＳＩスコアの基準からの改善率と共に用量群ＩＩＩの患者のＰＡＳＩスコアを表１４Ｂに示す。

用量群ＩＶ
用量群ＩＶの６人の患者に１０．０ｍｇのＢＴ０６１を単回静脈内適用し、用量群ＩＶの２人の患者にプラセボを投与した。各患者の体重当たりの用量及び体表面積（ＢＳＡ）当たりの用量を表１４Ｃに示す。

ＰＡＳＩスコアの基準からの改善率と共に用量群ＩＶの患者のＰＡＳＩスコアを表１４Ｃに示す。

更に個々の患者について時間に対するＰＡＳＩスコアをグラフ形式で図１１Ａ〜図１１Ｈ、及び図１２Ａ〜図１２Ｈに示す。図１１Ａ〜図１１Ｈに示すグラフは用量群Ｉの患者のＰＡＳＩスコアを表し、図１２Ａ〜図１２Ｈに示すグラフは用量群ＩＩの患者のＰＡＳＩスコアを表す。

表１３及び表１４Ａ〜表１４Ｃに示した結果から分かるように、用量群Ｉ及び用量群ＩＩの全患者の７５％のＰＡＳＩスコアが明らかに改善されている、即ち単回投与後基準値に対して少なくとも４０％改善されている。用量群Ｉ及び用量群ＩＩの患者の２５％にはプラセボが投与されたことに留意すべきである。

実際に両用量群で５０％の患者のＰＡＳＩスコアが少なくとも５０％改善され、用量群ＩＩの患者の１人（即ち表１４Ａの患者３）は５６日目でＰＡＳＩスコアが８８％改善された。更に低用量でさえも治療効果が持続し、多くの患者で試験の終わりである投与後７５日目でも依然として改善が見られた。

用量群ＩＩＩの患者もまたＰＡＳＩスコアの改善が見られ、処理後８人中６人の患者でＰＡＳＩスコアが２０％超改善し、これら６人中２人は３０％超改善した。しかしより低用量の抗体を投与した用量群Ｉ及び用量群ＩＩの患者で見られた程著しい改善ではなかった。用量群ＩＶの患者でも多少の効果が見られた。具体的には用量群ＩＶの患者１、患者４、患者５、及び患者８（表１４Ｃに示された）のＰＡＳＩスコアは明らかに改善されたが、この効果は用量群Ｉ〜用量群ＩＩＩの患者に比べて限定されていた。

ＰＡＳＩスコアが少なくとも４０％、５０％、６０％、及び７５％改善した患者数を表１５に示す。

図１３Ａ及び図１３Ｂは、処理前及び処理後の写真によって乾癬レベルが改善されたことを証明する。図１３Ａは、投与前の用量群ＩＩの患者の皮膚の乾癬領域を示す。図１３Ｂは、投与２８日後の同乾癬領域を示す。図１３Ｂの黒線で囲んだ領域における改善が著しい。

これらの結果からＢＴ０６１が中等度〜重篤な慢性乾癬を有効に治療することが明らかに分かる。

この研究の結果は、高用量の本発明の抗体のヒトにおける耐容性が一般に優れていることを示す上記実施例６に記載された結果と併せて、本明細書に記載される用量で自己免疫疾患を有効に治療する本発明の医薬組成物の能力を示す。

実施例８−関節リウマチ患者におけるＢＴ０６１の臨床試験
ＢＴ０６１の関節リウマチを治療する能力について、関節リウマチ患者で試験した。試験は１２群に分けられた９６人の患者についての複数回投与試験を含む。各群２人の患者にプラセボを投与し、６人の患者にＢＴ０６１を投与した。患者は６週間に亘って週１回投与を受けた。

患者を抗体皮下投与群と抗体静脈内投与群に分けた。皮下投与群には１．２５ｍｇ、６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、及び１００ｍｇを投与する。静脈内投与群には０．５ｍｇ、２ｍｇ、６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、及び２５ｍｇを投与する。

１．２５ｍｇ皮下投与群では、患者に１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、及び１０８という番号を付けた。６．２５ｍｇ皮下投与群では患者に２０１〜２０８の番号を付けた。１２．５ｍｇ皮下投与群では患者に３０１〜３０８の番号を付けた。２５ｍｇ皮下投与群では患者に４０１〜４０８の番号を付けた。５０ｍｇ皮下投与群では患者に５０１〜５０８の番号を付けた。６．２５ｍｇ皮下投与群では患者に６０１〜６０８の番号を付けた。

静脈内投与手順及び皮下投与手順は、乾癬試験について実施例７で記載した手順と同様であった。

ＡＣＲパラメータ、具体的には圧痛関節数、腫脹関節数、後のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）及び赤血球沈降速度（ＥＳＲ）のレベルを調べることにより関節リウマチのレベルを毎週記録した。試験前にこれらパラメータについて評価して０日目の「基準」値を得、試験期間中及び投与期間終了後８日目、２２日目、及び４３日目（即ち追跡（ＦＵ）８日目、ＦＵ２２日目、及びＦＵ４３日目）にも繰り返し評価した。

以下の表に試験から得られたデータを示す。具体的には表１６〜表２１は、試験期間中の圧痛関節数及び腫脹関節数を示す。

図１４は１．２５ｍｇ、６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、及び２５ｍｇのＢＴ０６１皮下投与群患者のうち試験期間中関連ＡＣＲパラメータが少なくとも２０％改善された患者の割合、及び７週間目で少なくともＡＣＲ２０の応答があった患者の割合を示す。

具体的には２５ｍｇ皮下投与群患者の５０％（即ちプラセボ投与を受けた患者２人を含む８人のうち４人）で、６週間目に関連ＡＣＲパラメータが少なくとも２０％改善された。この割合は７週間目で８人中５人の患者に増加した、即ち８人中５人の患者でＡＣＲ２０が達成された。この用量群の患者の１人は、５週間目及び６週間目で関連ＡＣＲパラメータが５０％超改善された（完全なデータは示さない）。

他の用量群の患者でも正の結果が得られた。６．２５ｍｇ皮下投与患者の１人は４週間目で関連ＡＣＲパラメータが少なくとも５０％改善され、一方別の患者は３週間目で関連ＡＣＲパラメータが少なくとも７０％改善された（完全なデータは示さない）。

図１５Ａ及び図１５Ｂは、６週間に亘る２５ｍｇＢＴ０６１皮下投与群患者が呈した圧痛関節数及び腫脹関節数を示す。数人の患者において処理期間中圧痛関節数及び腫脹関節数が減少する。この用量群の１人のレスポンダ患者及び１人の非レスポンダ患者の結果をそれぞれ図１６Ａ及び図１６Ｂに示す。レスポンダは、圧痛関節数、腫脹関節数、及び疼痛レベルの有意な改善を示す。

圧痛関節数及び腫脹関節数の減少はまた他の用量群患者でも見られる。図１７Ａ、図１７Ｂ、図１８Ａ、及び図１８Ｂは、試験期間中及びその後数週間に亘る１．２５ｍｇ皮下投与群、６．２５ｍｇ皮下投与群、５０ｍｇ皮下投与群、及び６．２５ｍｇ静脈内投与群における圧痛関節数を示す。

これらの結果は、関節リウマチ治療における本明細書に記載される用量範囲内の本発明の剤の有効性を示す。

Claims (35)

1. 薬学的に許容される担体と、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞を活性化可能なヒト化抗ＣＤ４抗体とを含む自己免疫疾患を治療するための医薬組成物であって、投与１回当たりの前記ヒト化抗ＣＤ４抗体の量が２５ｍｇ〜２００ｍｇで対象に皮下投与され、
   前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が、Ｈ鎖Ｖドメイン、Ｌ鎖Ｖドメイン及びＩｇＧ１の定常ドメインを含み、
   前記Ｈ鎖Ｖドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）が、ポリペプチド配列ＤＣＲＭＹ、ＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧ、及びＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹを含み、かつ前記Ｌ鎖Ｖドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）が、ポリペプチド配列ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹ、ＬＡＳＩＬＥＳ、及びＱＨＳＲＥＬＰＷＴを含むことを特徴とする医薬組成物。
2. 投与１回当たりのヒト化抗ＣＤ４抗体の量が２５ｍｇ〜８０ｍｇで対象に投与される請求項１に記載の医薬組成物。
3. 投与１回当たりのヒト化抗ＣＤ４抗体の量が２５ｍｇ〜６０ｍｇで対象に投与される請求項２に記載の医薬組成物。
4. 自己免疫疾患が、乾癬、関節リウマチ、多発性硬化症、１型糖尿病、炎症性腸疾患、クローン病、自己免疫甲状腺炎、自己免疫重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、及びグラフト対ホスト反応、又は一般的な器官寛容性の問題などの移植関連疾患から選択される請求項１から３のいずれかに記載の医薬組成物。
5. 自己免疫疾患が乾癬である請求項４に記載の医薬組成物。
6. 医薬組成物が患者の乾癬面積及び重症度指数（ＰＡＳＩ）スコアを少なくとも４０％改善することにより乾癬を治療することができる請求項５に記載の医薬組成物。
7. 医薬組成物が患者の乾癬面積及び重症度指数（ＰＡＳＩ）スコアを少なくとも５０％改善することにより乾癬を治療することができる請求項６に記載の医薬組成物。
8. 自己免疫疾患が関節リウマチである請求項４に記載の医薬組成物。
9. 医薬組成物が、０．１ｍＬ〜３ｍＬの投与体積で提供される請求項１から８のいずれかに記載の医薬組成物。
10. 投与体積が０．５ｍＬ〜１．５ｍＬである請求項９に記載の医薬組成物。
11. ヒト化抗ＣＤ４抗体が１０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する請求項１から８のいずれかに記載の医薬組成物。
12. ヒト化抗ＣＤ４抗体が１５ｍｇ／ｍＬ〜７５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する請求項１１に記載の医薬組成物。
13. ヒト化抗ＣＤ４抗体が２０ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する請求項１２に記載の医薬組成物。
14. 単回用量として又は複数回用量の一部として用いるための請求項１から１３のいずれかに記載の医薬組成物。
15. 医薬組成物が複数回用量の一部であり、各用量が１日間に１回、２日間に１回、１週間に１回、２週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、１２週間に１回、２４週間に１回、４８週間に１回、６ヶ月間に１回、又は１年間に１回投与される請求項１４に記載の医薬組成物。
16. 自己免疫疾患が乾癬であり、用量が２週間に１回投与される請求項１５に記載の医薬組成物。
17. 自己免疫疾患が乾癬であり、用量が４週間に１回投与される請求項１５に記載の医薬組成物。
18. 自己免疫疾患が関節リウマチであり、用量が２週間に１回投与される請求項１５に記載の医薬組成物。
19. 自己免疫疾患が関節リウマチであり、用量が４週間に１回投与される請求項１５に記載の医薬組成物。
20. 投与開始後１０分〜投与終了後９６時間の期間内に、対象の血漿サイトカイン濃度が投与直前の濃度の１倍超かつ２０倍未満増加し、前記サイトカインがＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−２から選択される請求項１から１９のいずれかに記載の医薬組成物。
21. 投与開始後１０分〜投与終了後９６時間の期間内に、対象の血漿サイトカイン濃度が正常上限（ＵＬＮ）値の１倍超かつ２０倍未満増加し、前記サイトカインがＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＬ−２から選択され、前記ＵＬＮ値がそれぞれ３．８ｐｇ／ｍＬ、２．８ｐｇ／ｍＬ、４．４ｐｇ／ｍＬ、及び１９．４ｐｇ／ｍＬである請求項１から２０いずれかに記載の医薬組成物。
22. 投与後７２時間〜９６時間の期間内、対象の血漿ＣＤ４^＋リンパ球細胞数が少なくとも２００細胞／μＬである請求項１から２１のいずれかに記載の医薬組成物。
23. 血漿ＣＤ４^＋リンパ球細胞数が少なくとも２５０細胞／μＬである請求項２２に記載の医薬組成物。
24. ヒト化抗ＣＤ４抗体が皮下投与され、前記ヒト化抗ＣＤ４抗体の用量が最高３９．５ｍｇである請求項２２及び２３のいずれかに記載の医薬組成物。
25. ヒト化抗ＣＤ４抗体が皮下投与され、前記ヒト化抗ＣＤ４抗体の用量が最高３９．５ｍｇであり、投与後０時間〜７２時間の期間内、対象の血漿ＣＤ４^＋リンパ球細胞数が少なくとも３００細胞／μＬである請求項１から２１のいずれかに記載の医薬組成物。
26. 投与後７２時間〜３０日の期間内、対象の血漿ＣＤ４^＋リンパ球細胞数が少なくとも３００細胞／μＬである請求項１から２１のいずれかに記載の医薬組成物。
27. ヒト化抗ＣＤ４抗体がヒト化モノクローナル抗体である請求項１から２６のいずれかに記載の医薬組成物。
28. ヒト化抗ＣＤ４抗体が以下のポリペプチド配列により定義されるＶドメイン：
    −Ｈ鎖Ｖドメイン：
    ＥＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳＤＣＲＭＹＷＬＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＳＡＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）
    −Ｌ鎖Ｖドメイン：
    ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＩＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）
    を有する請求項１から２７のいずれかに記載の医薬組成物。
29. ヒト化抗ＣＤ４抗体がマウスモノクローナル抗ＣＤ４抗体Ｂ−Ｆ５由来のヒト化抗ＣＤ４抗体である請求項１から２８のいずれかに記載の医薬組成物。
30. 自己免疫疾患が乾癬であり、用量が１週間に１回投与される請求項１５に記載の医薬組成物。
31. 自己免疫疾患が関節リウマチであり、用量が１週間に１回投与される請求項１５に記載の医薬組成物。
32. 投与後３時間〜６時間の期間内、対象の血漿ＣＤ４^＋リンパ球細胞数が２５０細胞／μＬ未満である請求項１から３１のいずれかに記載の医薬組成物。
33. 投与後７２時間〜９６時間の期間内、対象の血漿ＣＤ４^＋リンパ球細胞数が投与直前の前記対象の血漿ＣＤ４^＋リンパ球細胞数の５０％以上である請求項１から３２のいずれかに記載の医薬組成物。
34. 改善が医薬組成物の単回用量投与後５６日間見られる請求項６及び７のいずれかに記載の医薬組成物。
35. 改善が医薬組成物の単回用量投与後７５日間見られる請求項６及び７のいずれかに記載の医薬組成物。