JP5608792B2

JP5608792B2 - ニクズク加工処理物及びその製造方法

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Publication number: JP5608792B2
Application number: JP2013140593A
Authority: JP
Inventors: 智大白井; 堅太郎組橋; 比呂志楠奥; 充好逆井; 宙橋本
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2012-07-12
Filing date: 2013-07-04
Publication date: 2014-10-15
Anticipated expiration: 2033-07-04
Also published as: JP2014031366A

Description

本発明は、ニクズク加工処理物、その製造方法、並びに前記ニクズク加工処理物を用いた冷感剤及びＴＲＰＭ８活性化剤に関する。

ニクズクやその加工処理物（例えばナツメグオイル等）は、古来より胃腸薬や頭痛薬、香辛料などに用いられている有用な化合物である。

一方、使用中や使用後における清涼感を付与することを目的として、化粧品、ヘアケア製品、トイレタリー製品、入浴剤、医薬品等の各種製品に、冷感物質がしばしば配合されており、斯様な冷感物質として、メントールが広く用いられている。
メントールによる冷感付与は、皮膚や粘膜組織中に存在する知覚神経終末にメントールが直接作用することにより生じると考えられており、この冷感付与に関するメカニズムの検討が進められてきた。

まず、ラットの感覚神経のうち、弱い冷却刺激に応答して内向きのイオン電流を生じるニューロンが、メントールに対しても同様の応答性を示すことが発見された（非特許文献１）。この発見により、メントールの刺激による冷感が内向きのイオン電流により引き起こされるものであることが明らかとなった。

そして、メントール及び冷刺激に応答性を示す受容体として、三叉神経ニューロンからＣＭＲ−１（ｃｏｌｄａｎｄｍｅｎｔｈｏｌｓｅｎｓｉｔｉｖｅｒｅｃｅｐｔｏｒ）が同定された（非特許文献２）。この受容体はＴＲＰＭ８と呼ばれており（非特許文献３）、ＴＲＰイオンチャネルファミリーに属する興奮性のイオンチャネルであるこの受容体が、前述のイオン電流を引き起こすと考えられる。

これらの報告によって、感覚神経に存在するＴＲＰＭ８にメントールが結合して内向き電流が発生することにより、メントールによる冷感が生じることが明らかとなっている。

ＲＥＩＤ，Ｇ．＆ＦＬＯＮＴＡ，Ｍ．Ｌ．（２００２），Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，３２４，ｐ１６４−１６８ＭＣＫＥＭＹ，Ｄ．Ｄ．，ＮＥＵＨＡＵＳＳＥＲ，Ｗ．Ｍ．＆ＪＵＬＩＵＳ，Ｄ．（２００２），Ｎａｔｕｒｅ，４１６，ｐ５２−５６ＰＥＩＥＲ，Ａ．Ｍ．，ＭＯＱＲＩＣＨ，Ａ．，ＨＥＲＧＡＲＤＥＮ，Ａ．Ｃ．，ＲＥＥＶＥ，Ａ．Ｊ．，ＡＮＤＥＲＳＳＯＮ，Ｄ．Ａ．，ＳＴＯＲＹ，Ｇ．Ｍ．，ＥＡＲＬＥＹ，Ｔ．Ｊ．，ＤＲＡＧＯＮＩ，Ｉ．，ＭＣＩＮＴＹＲＥ，Ｐ．，ＢＥＶＡＮ，Ｓ．＆ＰＡＴＡＰＯＵＴＩＡＮ，Ａ．（２００２），Ｃｅｌｌ，１０８，ｐ７０５−７１５ＢＥＨＲＥＮＤＴ，Ｈ．−Ｊ．，ＧＥＲＭＡＮＮ，Ｔ．，ＧＩＬＬＥＮ，Ｃ．，ＨＡＴＴ，Ｈ．＆ＪＯＳＴＯＣＫ，Ｒ．（２００４），Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１４１，ｐ７３７−７４５

しかしながら、メントールは、多量に使用した場合に、皮膚や粘膜への刺激や特有の不快な刺激臭等が問題となるため、使用量が制限されることがある。
また、メントールの他に、リナロール、ゲラニオール、ヒドロキシシトロネラール等もＴＲＰＭ８を活性化することが知られているが（非特許文献４）、該非特許文献４に記載の化合物が示す清涼感は必ずしも充分なものではなかった。

本発明は、優れたＴＲＰＭ８活性化作用を有する植物加工処理物、その製造方法、並びに前記植物加工処理物を用いた冷感剤及びＴＲＰＭ８活性化剤に関する。

本発明者らは、ニクズク又はその抽出物を、アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液とプロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上とで同時に処理することにより、優れたＴＲＰＭ８活性化作用を有するニクズク加工処理物が得られることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、ニクズク加工処理物の製造方法であって、ニクズク又はその抽出物を、アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液とプロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上とで同時に処理する工程を含むことを特徴とする製造方法を提供するものである。
また、本発明は、上記製造方法で得られるニクズク加工処理物を提供するものである。
更に、本発明は、上記ニクズク加工処理物を有効成分とする冷感剤を提供するものである。
更に、本発明は、上記ニクズク加工処理物を有効成分とするＴＲＰＭ８活性化剤を提供するものである。
更に、本発明は、上記ニクズク加工処理物を含有する化粧料を提供するものである。
更に、本発明は、上記ニクズク加工処理物を含有する口腔用組成物を提供するものである。

本発明の製造方法によれば、優れたＴＲＰＭ８活性化作用を有するニクズク加工処理物を製造できる。
また、本発明のニクズク加工処理物は、優れたＴＲＰＭ８活性化作用を有し、これを用いることによって良好な冷感を付与することができる。

実施例１３の洗口液の冷涼感を示す図である。

本発明のニクズク加工処理物の製造方法は、ニクズク又はその抽出物を、アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液とプロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上とで同時に処理する工程を含むことを特徴とするものである（以下、本発明の製造方法で得られるニクズク加工処理物を、単にニクズク加工処理物ともいう）。

上記ニクズクは、ニクズク科に属する植物であるＭｙｒｉｓｔｉｃａｆｒａｇｒａｎｓＨｏｕｔｔ．を意味する。また、ニクズクとしては、その種子、メース、葉、果実などが使用され、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、種子、メースが好ましい。なお、これら部位は１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
また、ニクズクは、そのまま又は乾燥させた後に適当な大きさに切断・粉砕したものを用いることができる。

本発明において、ニクズクの抽出は、上記ニクズクを室温又は加温下にて溶剤に含浸させる方法、ソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて行われる溶剤抽出法、炭酸ガス等を超臨界状態にして行う超臨界抽出法、圧搾して抽出物を得る圧搾法等を利用して行うことができる。また、水蒸気蒸留やマイクロ波水蒸気蒸留などを行った残渣から、再度溶媒等を用いて抽出を行ってもよい。

また、上記のような方法で抽出した後で蒸留してもよいが、この場合、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、蒸留残渣を用いるのが好ましい。なお、蒸留法は、分子蒸留、水蒸気蒸留、マイクロ波蒸留等の公知の方法であればよい。また、斯かる蒸留操作は、常圧又は減圧下で行うことができ、蒸留温度は、通常３０〜１５０℃であり、好ましくは６０〜１３０℃である。

また、上記抽出に抽出溶剤を用いる場合、その抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれを使用してもよい。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、シクロヘキサノール等のアルコール類（例えば、後述する処理に用いるアルコール）；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等の鎖状又は環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類等の他、超臨界二酸化炭素、油脂、ワックス、オイル等が挙げられる。これらは１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
これらの中でも、水と極性溶剤との混合液、極性溶剤が好ましく、水・アルコール類混合液、アルコール類がより好ましい。なお、後述するように、抽出溶剤にプロトン酸等が含まれていてもよい。
また、上記水と極性溶剤との混合液を用いる場合、その極性溶剤の濃度は、好ましくは２５％（ｖ／ｖ）以上、より好ましくは３５％（ｖ／ｖ）以上、更に好ましくは５０％（ｖ／ｖ）以上、更に好ましくは７０％（ｖ／ｖ）以上、更に好ましくは８０％（ｖ／ｖ）以上、更に好ましくは９０％（ｖ／ｖ）以上であり、また、好ましくは９９．９％（ｖ／ｖ）以下である。具体的には、混合液中の極性溶剤の濃度は、好ましくは２５〜９９．９％（ｖ／ｖ）であり、より好ましくは３５〜９９．９％（ｖ／ｖ）であり、更に好ましくは５０〜９９．９％（ｖ／ｖ）であり、更に好ましくは７０〜９９．９％（ｖ／ｖ）であり、更に好ましくは８０〜９９．９％（ｖ／ｖ）であり、更に好ましくは９０〜９９．９％（ｖ／ｖ）である。

また、上記抽出溶剤の使用量は特に限定されないが、ニクズク１質量部に対して、通常１質量部以上、好ましくは３質量部以上、より好ましくは５質量部以上であり、また、通常５０質量部以下、好ましくは３０質量部以下、より好ましくは２５質量部以下、更に好ましくは１５質量部以下である。具体的には、抽出溶剤の使用量は、ニクズク１質量部に対して、好ましくは１〜５０質量部であり、より好ましくは３〜３０質量部であり、更に好ましくは５〜２５質量部である。

また、抽出温度は、通常３℃以上、好ましくは１０℃以上、より好ましくは２０℃以上であり、また、通常１００℃以下、好ましくは６０℃以下、より好ましくは４５℃以下である。具体的には、抽出温度は、好ましくは３〜１００℃であり、より好ましくは１０〜６０℃であり、更に好ましくは２０〜４５℃である。

また、抽出時間は、通常１時間以上であり、また、通常１４日間以下、好ましくは７日間以下、より好ましくは５日間以下である。具体的には、抽出時間は、好ましくは１時間〜１４日間であり、より好ましくは１時間〜７日間であり、更に好ましくは１時間〜５日間である。
また、抽出するときの圧力は、通常、常圧で行うが、高圧下で行うこともできる。

また、本発明のニクズク加工処理物の製造方法は、ニクズク又はその抽出物（以下、ニクズク又はその抽出物をニクズク等ともいう）を、アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液（以下、アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液をアルコール等ともいう）とプロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上（以下、プロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上をプロトン酸等ともいう）とで同時に処理するものであるが、これは、ニクズク等とアルコール等とプロトン酸等とを共存させることをいい、各成分の添加の順番は問わない。また、斯かる処理は上記のニクズクの抽出として行ってもよく、ニクズクの抽出の後に行ってもよい。
上記処理の具体例としては、（１）アルコール等とプロトン酸等とを含有する抽出溶剤を用いて、上記の抽出を行う方法、（２）アルコール等を含むがプロトン酸等を含まない抽出溶剤を用いて上記の抽出を行い、次いで、その抽出液をプロトン酸等で処理する方法、（３）適当な抽出溶剤を用いた上記の抽出で得たニクズク抽出物を、アルコール等とプロトン酸等と共存させる等して同時に処理する方法が挙げられる。
なお、上記（１）の方法においては、得られたニクズク抽出物を蒸留し、その蒸留残渣をニクズク加工処理物としてもよい。また、上記（３）の方法においては、適当な抽出溶剤を用いた上記の抽出で得たニクズク抽出物を更に蒸留し、その蒸留残渣をアルコール等とプロトン酸等で同時に処理してもよい。

本発明の製造方法に含まれる上記処理にはアルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液を用いる。斯かる処理に用いるアルコールとしては、１価のアルコールが好ましい。また、その炭素数は、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、好ましくは１〜１０であり、より好ましくは１〜６であり、更に好ましくは２〜６である。例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、シクロヘキサノール等が挙げられ、これら１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
また、上記アルコール水溶液の濃度は、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、好ましくは３５％（ｖ／ｖ）以上、より好ましくは５０％（ｖ／ｖ）以上、更に好ましくは７０％（ｖ／ｖ）以上、更に好ましくは８０％（ｖ／ｖ）以上、更に好ましくは９０％（ｖ／ｖ）以上であり、また、好ましくは９９．９％（ｖ／ｖ）以下である。具体的には、アルコール水溶液の濃度は、好ましくは３５〜９９．９％（ｖ／ｖ）であり、より好ましくは５０〜９９．９％（ｖ／ｖ）であり、更に好ましくは７０〜９９．９％（ｖ／ｖ）であり、更に好ましくは８０〜９９．９％（ｖ／ｖ）であり、更に好ましくは９０〜９９．９％（ｖ／ｖ）である。なお、アルコール水溶液を使用する場合、その濃度が２５％（ｖ／ｖ）未満であると、ニクズク加工処理物のＴＲＰＭ８活性化作用が不十分になる。

上記アルコール等の使用量は特に限定されないが、ニクズク等１質量部に対して、通常０．１質量部以上、好ましくは１質量部以上、より好ましくは２質量部以上であり、また、通常１０００質量部以下、好ましくは５００質量部以下、より好ましくは２００質量部以下である。具体的には、アルコール等の使用量は、ニクズク等１質量部に対して、好ましくは０．１〜１０００質量部であり、より好ましくは１〜５００質量部であり、更に好ましくは２〜２００質量部である。

また、上記処理にはプロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上を用いる。斯かる処理に用いるプロトン酸としては、有機酸、無機酸が挙げられる。これらは１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。

上記有機酸としては、例えば、クエン酸、酢酸、パラトルエンスルホン酸等が挙げられる。
また、上記無機酸としては、例えば、硫酸、塩酸、硝酸、リン酸等が挙げられる。

また、上記Ｈ型陽イオン交換樹脂としては、例えば、アンバーリスト（ダウ・ケミカル社）、ＤＯＷＥＸ（ダウ・ケミカル社製）、ＤＩＡＩＯＮ（三菱化学製）等が挙げられる。なお、Ｈ型陽イオン交換樹脂による処理は、Ｈ型陽イオン交換樹脂の添加でもよく、Ｈ型陽イオン交換樹脂を充填したカラムへの通液でもよい。

上述したプロトン酸、Ｈ型陽イオン交換樹脂の中でも、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、強酸性プロトン酸、強酸性Ｈ型陽イオン交換樹脂が好ましい。

また、プロトン酸等の使用量は特に限定されないが、ニクズク等１質量部に対して、通常０．００１質量部以上、好ましくは０．０１質量部以上であり、また、通常５０質量部以下、好ましくは２５質量部以下、より好ましくは１０質量部以下、更に好ましくは５質量部以下である。具体的には、プロトン酸等の使用量は、ニクズク等１質量部に対して、好ましくは０．０１〜５０質量部であり、より好ましくは０．０１〜１０質量部であり、更に好ましくは０．０１〜５質量部である。

また、処理温度は、通常３℃以上、好ましくは１５℃以上、より好ましくは２５℃以上であり、また、通常１００℃以下、好ましくは７０℃以下、より好ましくは６０℃以下である。具体的には、処理温度は、好ましくは３〜１００℃であり、より好ましくは１５〜７０℃であり、更に好ましくは２５〜６０℃である。

また、処理時間は、通常０．１時間以上、好ましくは１時間以上、より好ましくは２時間以上であり、また、通常５日間以下、好ましくは３日間以下、より好ましくは２日間以下である。具体的には、処理時間は、好ましくは０．１時間〜５日間であり、より好ましくは１時間〜３日間であり、更に好ましくは２時間〜２日間である。

また、得られたニクズク加工処理物を希釈、濃縮、凍結乾燥等をした後、必要に応じて粉末やペースト状に調製して用いることもできる。
なお、上記ニクズク加工処理物の希釈に用いる溶媒としては、上記処理に用いられるアルコール、水、これらの混液が挙げられる。また、上記ニクズク加工処理物の濃縮・精製手段としては、例えば当該加工処理物の濾過、活性炭処理、液−液分配等が挙げられる。

そして、本発明のニクズク加工処理物は、後記実施例に示すように、天然物由来でありながら、優れたＴＲＰＭ８活性化作用を有する。
したがって、本発明のニクズク加工処理物は、冷感剤及びＴＲＰＭ８活性化剤（以下、冷感剤等とも称する）として、そのまま、或いは各種製剤担体や保存剤等とともに用いることができる。

次に、本発明の冷感剤及びＴＲＰＭ８活性化剤の態様について説明する。
冷感剤等は、それ自体がヒト又は動物用の医薬品、化粧料、飲食品、口腔用組成物、ペットフード、他の嗜好品（タバコ等）等であってもよく、また、これら医薬品等に添加する冷感を付与する素材であってもよい。

上記医薬品は任意の投与形態で投与され得る。投与形態は、経粘膜、経皮等の非経口投与と経口投与とに大別される。
また、前記医薬品の剤型は特に限定されない。非経口投与用の医薬品の剤型としては、例えば、液剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、パップ剤、エアゾール剤、ローション剤、ファンデーション等の皮膚外用剤の他、点眼剤、点鼻剤等が挙げられる。
一方、経口投与用の医薬品の剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、丸剤、糖衣錠、内服液、懸濁液、シロップ剤等が挙げられる。
また、前記医薬品は、消炎鎮痛剤、殺菌消毒剤、収斂剤、抗生物質等の他の薬効成分を含んでいてもよい。なお、これらは１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。

また、前記化粧料、飲食品、口腔用組成物の形態は特に限定されない。
化粧料は、例えば、皮膚外用剤（虫除けスプレー等）、洗浄剤、化粧水、乳液、スキンクリーム、ファンデーション、口紅、頭皮用化粧料、毛髪化粧料（シャンプー、ヘアトニック等）、入浴剤、シート状製品等とすることができる。また、化粧料は、ニクズク加工処理物の他に、油剤、セラミド類、擬似セラミド類、ステロール類、保湿剤、抗酸化剤、紫外線吸収剤、美白剤、アルコール類、キレート剤、ｐＨ調整剤、防腐剤等を含んでいてもよい。なお、これらは１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
また、飲食品としては、例えば、キャンディ、ガム、タブレット、カプセル、飲料水等が挙げられる。
また、口腔用組成物としては、例えば、歯磨剤、洗口液、歯肉マッサージクリーム等が挙げられる。

また、ニクズク加工処理物の含有量は特に限定されないが、経口投与のための医薬品、飲食品、口腔用組成物又はペットフードである場合は、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、好ましくは０．１ｐｐｍ以上、より好ましくは１ｐｐｍ以上、更に好ましくは１０ｐｐｍ以上、更に好ましくは５０ｐｐｍ以上であり、また、好ましくは１００００ｐｐｍ以下、より好ましくは５０００ｐｐｍ以下、更に好ましくは２５００ｐｐｍ以下、更に好ましくは１０００ｐｐｍ以下である。具体的には、上記のような場合のニクズク加工処理物の含有量は、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、好ましくは０．１〜１００００ｐｐｍであり、より好ましくは１〜１００００ｐｐｍであり、更に好ましくは１０〜５０００ｐｐｍであり、更に好ましくは５０〜２５００ｐｐｍである。

また、非経口投与のための医薬品、化粧料又は他の嗜好品である場合、ニクズク加工処理物の含有量は、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、好ましくは１０質量％以下である。具体的には、上記のような場合のニクズク加工処理物の含有量は、ＴＲＰＭ８活性化作用の観点から、好ましくは０．００１〜１０質量％であり、より好ましくは０．０１〜１０質量％である。

上述した実施形態に関し、本発明は更に以下の製造方法等を開示する。

＜１＞ニクズク加工処理物の製造方法であって、ニクズク又はその抽出物を、アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液とプロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上とで同時に処理する工程を含むことを特徴とする製造方法。

＜２＞アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液とプロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上とを含有する抽出溶剤を用いてニクズクを抽出する工程を含むことを特徴とするニクズク加工処理物の製造方法。
＜３＞アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液を含むがプロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上を含まない抽出溶剤を用いてニクズクを抽出し、得られた抽出液を、プロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上で処理する工程を含むことを特徴とするニクズク加工処理物の製造方法。
＜４＞抽出溶剤を用いてニクズクを抽出し、得られた抽出物を、アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液と、プロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上とで処理する工程を含むことを特徴とするニクズク加工処理物の製造方法。
＜５＞アルコールとして、好ましくは炭素数１〜１０のアルコール、より好ましくは炭素数１〜６のアルコール、更に好ましくは炭素数２〜６のアルコールを用いる上記＜１＞〜＜４＞のいずれかの製造方法。
＜６＞アルコール水溶液の濃度が、好ましくは３５％（ｖ／ｖ）以上、より好ましくは５０％（ｖ／ｖ）以上、更に好ましくは７０％（ｖ／ｖ）以上、更に好ましくは８０％（ｖ／ｖ）以上、更に好ましくは９０％（ｖ／ｖ）以上であり、また、好ましくは９９．９％（ｖ／ｖ）以下である上記＜１＞〜＜５＞のいずれかの製造方法。
＜７＞アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液の使用量が、ニクズク又はその抽出物１質量部に対して、好ましくは０．１質量部以上、より好ましくは１質量部以上、更に好ましくは２質量部以上であり、また、好ましくは１０００質量部以下、より好ましくは５００質量部以下、更に好ましくは２００質量部以下である上記＜１＞〜＜６＞のいずれかの製造方法。
＜８＞プロトン酸として、有機酸及び無機酸から選ばれる１種以上を用いる上記＜１＞〜＜７＞のいずれかの製造方法。
＜９＞強酸性プロトン酸及び強酸性Ｈ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上を用いる上記＜１＞〜＜８＞のいずれかの製造方法。
＜１０＞プロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上の使用量が、ニクズク又はその抽出物１質量部に対して、好ましくは０．００１質量部以上、より好ましくは０．０１質量部以上であり、また、好ましくは５０質量部以下、より好ましくは２５質量部以下、更に好ましくは１０質量部以下である上記＜１＞〜＜９＞のいずれかの製造方法。
＜１１＞処理温度が、好ましくは３℃以上、より好ましくは１５℃以上、更に好ましくは２５℃以上であり、また、好ましくは１００℃以下、より好ましくは７０℃以下、更に好ましくは６０℃以下である上記＜１＞〜＜１０＞のいずれかの製造方法。
＜１２＞処理時間が、好ましくは０．１時間以上、より好ましくは１時間以上、更に好ましくは２時間以上であり、また、好ましくは５日間以下、より好ましくは３日間以下、更に好ましくは２日間以下である上記＜１＞〜＜１１＞のいずれかの製造方法。
＜１３＞上記＜１＞〜＜１２＞のいずれかの製造方法で得られるニクズク加工処理物。
＜１４＞上記＜１３＞のニクズク加工処理物を有効成分とする冷感剤。
＜１５＞上記＜１３＞のニクズク加工処理物を有効成分とするＴＲＰＭ８活性化剤。
＜１６＞上記＜１３＞のニクズク加工処理物を含有する化粧料。
＜１７＞上記＜１３＞のニクズク加工処理物を含有する口腔用組成物。

以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

調製例１エタノール処理エキス
ニクズク科ニクズク（ＭｙｒｉｓｔｉｃａｆｒａｇｒａｎｓＨｏｕｔｔ．）の種子５ｇに、９９．５ｖｏｌ％エタノールを５０ｍＬ添加し、室温で２日間浸漬して抽出した後、濾過し粗抽出液（酸未処理物）を得た。得られた粗抽出液の蒸発残分は１．０５ｗ／ｖ％であった。

実施例１エタノール・塩酸処理エキス
調製例１で得られた粗抽出液５ｍＬ（固形分５２．５ｍｇ）に、塩酸（１．１Ｍ水溶液、０．０５ｍＬ）を添加し、全体が均一になるよう混ぜた後、６０℃で２日間静置することで、エタノールと塩酸で処理したエキス（蒸発残分１．０５ｗ／ｖ％）を得た。

実施例２エタノール・強酸性陽イオン交換樹脂処理エキス
調製例１で得られた粗抽出液５ｍＬ（固形分５２．５ｍｇ）に、強酸性陽イオン交換樹脂（アンバーリスト１５ＪＷ、ダウ・ケミカル社製）を５２．５ｍｇ添加し、撹拌した後、６０℃で２日間静置した。このエキス中の樹脂を濾別することで、濾液として、エタノールと強酸性陽イオン交換樹脂で処理したエキス（蒸発残分１．０５ｗ／ｖ％）を得た。

実施例３エタノール・クエン酸処理エキス
調製例１で得られた粗抽出液５ｍＬ（固形分５２．５ｍｇ）に、クエン酸（９６０ｍｇ）を添加し、撹拌した後、６０℃で２日間静置した。その後、窒素フローによりエタノールを除去し、ヘキサン（２．５ｍＬ）及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２．５ｍＬ）を加えた。水相を廃棄した後、ヘキサン相を濃縮し、再度エタノール（５ｍＬ）に溶解することで、エタノールとクエン酸で処理したエキス（蒸発残分０．６０ｗ／ｖ％）を得た。

実施例４ｎ−ブタノール・塩酸処理エキス
調製例１で得られた粗抽出液５ｍＬ（固形分５２．５ｍｇ）を濃縮後、ｎ−ブタノール（５ｍＬ）に溶解し、塩酸（１．１Ｍ水溶液、０．０５ｍＬ）を添加した。撹拌後、６０℃で２日間静置することで、ｎ−ブタノールと塩酸で処理したエキス（蒸発残分０．８５ｗ／ｖ％）を得た。

実施例５ｎ−ブタノール・強酸性陽イオン交換樹脂処理エキス
調製例１で得られた粗抽出液５ｍＬ（固形分５２．５ｍｇ）を濃縮後、ｎ−ブタノール（５ｍＬ）に溶解し、強酸性陽イオン交換樹脂（アンバーリスト１５ＪＷ、ダウ・ケミカル社製）を５２．５ｍｇ添加し撹拌後、６０℃で２日間静置した。このエキス中の樹脂を濾別することで、濾液として、ｎ−ブタノールと強酸性陽イオン交換樹脂で処理したエキス（蒸発残分０．７８ｗ／ｖ％）を得た。

実施例６エタノール・強酸性陽イオン交換樹脂処理エキス
ニクズク科ニクズク（ＭｙｒｉｓｔｉｃａｆｒａｇｒａｎｓＨｏｕｔｔ．）のメース８ｇに、９９．５ｖｏｌ％エタノールを８０ｍＬ添加し、室温で１日間浸漬して抽出した後、濾過し粗抽出液（蒸発残分１．１７ｗ／ｖ％）を得た。これに強酸性陽イオン交換樹脂（アンバーリスト１５ＪＷ、ダウ・ケミカル社製）を９３６ｍｇ添加し撹拌後、６０℃で２日間静置した。このエキス中の樹脂を濾別することで、濾液として、エタノールと強酸性陽イオン交換樹脂で処理したエキス（蒸発残分１．１７ｗ／ｖ％）を得た。

実施例７エタノール・強酸性陽イオン交換樹脂処理エキス
ニクズク科ニクズク（ＭｙｒｉｓｔｉｃａｆｒａｇｒａｎｓＨｏｕｔｔ．）の葉２０ｇに、９９．５ｖｏｌ％エタノールを４００ｍＬ添加し、室温で４日間浸漬して抽出した後、濾過し粗抽出液（蒸発残分０．３２ｗ／ｖ％）を得た。これに強酸性陽イオン交換樹脂（アンバーリスト１５ＪＷ、ダウ・ケミカル社製）を６４０ｍｇ添加し撹拌後、６０℃で２日間静置した。このエキス中の樹脂を濾別することで、濾液として、エタノールと強酸性陽イオン交換樹脂で処理したエキス（蒸発残分０．３２ｗ／ｖ％）を得た。

実施例８エタノール・強酸性陽イオン交換樹脂処理物
調製例１と同様に、ニクズク科ニクズク（ＭｙｒｉｓｔｉｃａｆｒａｇｒａｎｓＨｏｕｔｔ．）の種子１０ｇに、９９．５ｖｏｌ％エタノールを１００ｍＬ添加し、室温で２日間浸漬して抽出した後、濾過し粗抽出液（蒸発残分１．０５ｗ／ｖ％）を得た。この溶液を、強酸性陽イオン交換樹脂（アンバーリスト１５ＪＷ、ダウ・ケミカル社製）を５ｇ充填したカラムに５０℃で２日間通液し、エタノールと強酸性陽イオン交換樹脂で処理したエキスを得た。
次いで、上記エキスを加水濃縮した後、再度エタノール１００ｍＬに溶解し、これに活性炭を加え、室温で２日間静置した後、活性炭を濾別した。次いで濾液を減圧濃縮することで、エタノールと強酸性陽イオン交換樹脂で処理したニクズク抽出物（１４１ｍｇ）を得た。

比較例１ＤＭＳＯ・塩酸処理エキス
調製例１で得られた粗抽出液５ｍＬ（固形分５２．５ｍｇ）を濃縮してエタノールを除去した後、ＤＭＳＯ（５ｍＬ）に溶解し、塩酸（１．１Ｍ水溶液、０．０５ｍＬ）を添加した。撹拌後、６０℃で２日間静置して、ＤＭＳＯと塩酸で処理したエキス（蒸発残分１．０５ｗ／ｖ％）を得た。

調製例２エタノール処理物
調製例１と同様に、ニクズク科ニクズク（ＭｙｒｉｓｔｉｃａｆｒａｇｒａｎｓＨｏｕｔｔ．）の種子１０ｇに、９９．５ｖｏｌ％エタノールを１００ｍＬ添加し、室温で２日間浸漬して抽出した後、濾過し粗抽出液（蒸発残分１．０５ｗ／ｖ％）を得た。このエキスを加水濃縮し、エタノールで処理したニクズク抽出物（８３５ｍｇ）を得た。

実施例９エタノール・強酸性陽イオン交換樹脂処理エキス
ニクズク科ニクズク（ＭｙｒｉｓｔｉｃａｆｒａｇｒａｎｓＨｏｕｔｔ．）の種子の超臨界二酸化炭素抽出物（ＰＴＭＩＴＲＡＡＹＵＡＤＩＰＲＡＴＡＭＡ社より購入）５０．０ｍｇをエタノール（５ｍＬ）に溶解した。これに強酸性陽イオン交換樹脂（アンバーリスト１５ＪＷ、ダウ・ケミカル社製）を５０ｍｇ添加し撹拌後、６０℃で１日間静置した。このエキス中の樹脂を濾別することで、濾液として、エタノールと強酸性陽イオン交換樹脂で処理したエキス（蒸発残分１．００ｗ／ｖ％）を得た。

実施例１０５０％エタノール水溶液・強酸性陽イオン交換樹脂処理エキス
実施例９と同様の超臨界二酸化炭素抽出物５０．０ｍｇを５０％エタノール水溶液（５ｍＬ）に溶解した。これに強酸性陽イオン交換樹脂（アンバーリスト１５ＪＷ、ダウ・ケミカル社製）を５０ｍｇ添加し撹拌後、６０℃で１日間静置した。このエキス中の樹脂を濾別することで、濾液として、５０％エタノール水溶液と強酸性陽イオン交換樹脂で処理したエキス（蒸発残分１．００ｗ／ｖ％）を得た。

比較例２超臨界二酸化炭素抽出物のエタノール溶液
実施例９と同様の超臨界二酸化炭素抽出物５０．０ｍｇをエタノール（５ｍＬ）に溶解して、超臨界二酸化炭素抽出物のエタノール溶液を得た。

比較例３２０％エタノール水溶液・強酸性陽イオン交換樹脂処理エキス
実施例９と同様の超臨界二酸化炭素抽出物５０．０ｍｇを２０％エタノール水溶液（５ｍＬ）に溶解した。これに強酸性陽イオン交換樹脂（アンバーリスト１５ＪＷ、ダウ・ケミカル社製）を５０ｍｇ添加し撹拌後、６０℃で１日間静置した。このエキス中の樹脂を濾別することで、濾液として、２０％エタノール水溶液と強酸性陽イオン交換樹脂で処理したエキス（蒸発残分１．００ｗ／ｖ％）を得た。

実施例１１エタノール・強酸性陽イオン交換樹脂処理エキス
ニクズク科ニクズク（ＭｙｒｉｓｔｉｃａｆｒａｇｒａｎｓＨｏｕｔｔ．）の種子の超臨界二酸化炭素抽出物を分子蒸留した残渣（ＰＴＭＩＴＲＡＡＹＵＡＤＩＰＲＡＴＡＭＡ社より購入）５０．０ｍｇをエタノール（５ｍＬ）に溶解した。これに強酸性陽イオン交換樹脂（アンバーリスト１５ＪＷ、ダウ・ケミカル社製）を５０ｍｇ添加し撹拌後、６０℃で１日間静置した。このエキス中の樹脂を濾別することで、濾液として、エタノールと強酸性陽イオン交換樹脂で処理したエキス（蒸発残分１．００ｗ／ｖ％）を得た。

実施例１２シクロヘキサノール・強酸性陽イオン交換樹脂処理エキス
実施例１１と同様の超臨界二酸化炭素抽出物の蒸留残渣５０．０ｍｇをシクロヘキサノール（５ｍＬ）に溶解した。これに強酸性陽イオン交換樹脂（アンバーリスト１５ＪＷ、ダウ・ケミカル社製）を５０ｍｇ添加し撹拌後、６０℃で１日間静置した。このエキス中の樹脂を濾別することで、濾液として、シクロヘキサノールと強酸性陽イオン交換樹脂で処理したエキス（蒸発残分１．００ｗ／ｖ％）を得た。

試験例１ＴＲＰＭ８活性化作用の評価
以下の手順に従い、試験サンプルのＴＲＰＭ８活性化作用におけるＥＣ₅₀値を測定した。
（１）ヒトＴＲＰＭ８安定発現株の作製
ヒトＴＲＰＭ８安定発現ＨＥＫ２９３細胞株を作製するため、ヒトＴＲＰＭ８遺伝子のクローニングを行った。全長ヒトＴＲＰＭ８遺伝子は、ヒト前立腺組織全ＲＮＡ（ＣＯＳＭＯＢＩＯ社製）より、ＲＴ−ＰＣＲ法を用いて増幅した。
得られたＰＣＲ産物をエントリーベクターｐＥＮＴＲ−Ｄ／ＴＯＰＯ（インビトロジェン社製）へクローニングした後、ｐＣＤＮＡ３．２−Ｖ５／ＤＥＳＴ（インビトロジェン社製）へサブクローニングし、リポフェクトアミン２０００（インビトロジェン社製）によりＨＥＫ２９３細胞へ形質導入した。形質導入された細胞を、４５０μｇ／ｍＬのＧ−４１８（プロメガ社）を含有するＤＭＥＭ培地中で増殖させて選抜した。ＨＥＫ２９３細胞は内在性のＴＲＰＭ８を発現しないため、ＴＲＰＭ８形質導入株に対するコントロールとして使用できる。

（２）カルシウムイメージング
ＨＥＫ２９３細胞へ形質導入したＴＲＰＭ８活性の測定は、蛍光カルシウムイメージング法により行った。
まず、培養したＴＲＰＭ８発現細胞をポリ−Ｄ−リジンコートされた９６ウェルプレート（ＢＤファルコン社製）へ播種（３０，０００細胞／ウェル）し、３７℃で一晩インキュベートした後、培養液を除去し、Ｆｌｕｏ４−ＡＭ液（同仁化学社製；カルシウムキットＩＩ）を添加し、３７℃で３０〜６０分間インキュベートした。その後、９６ウェル穴プレートを蛍光プレートリーダー（ＦＤＳＳ３０００；浜松ホトニクス社製）にセットし、装置庫内温度を３２℃とした状態で、励起波長４８０ｎｍで励起したときのＦｌｕｏ４による蛍光イメージを、ＣＣＤカメラを用いて検出波長５２０ｎｍにより捕捉した。
測定は１秒毎に計４分間行い、測定開始１５秒後に、ＦＤＳＳ３０００内蔵の分注器からリンガー液に溶解させた表１に示す試験サンプルを添加し、蛍光強度の変化によりＴＲＰＭ８の活性を評価した。

（３）ＴＲＰＭ８活性化作用の評価
ＴＲＰＭ８活性は、試験サンプルによる自家蛍光の影響を排除するため、下記の式で自家蛍光分を差し引いた。
自家蛍光を差し引いた蛍光強度（Ｆ_sub）
＝（各時点のＴＲＰＭ８発現細胞の蛍光強度）−｛（各時点ＨＥＫ２９３細胞の蛍光強度）−（測定開始時のＨＥＫ２９３細胞の蛍光強度）｝
また、各サンプルによるＴＲＰＭ８活性化作用は、試験サンプル添加後の蛍光強度比のピークを用いて評価した。下記の式を用いて蛍光強度比を算出した。
蛍光強度比＝各時点のＦ_sub／測定開始時のＴＲＰＭ８発現細胞の蛍光強度
各処理群あたり２ウェルで評価を行い、その平均値を用いた。

（４）ＴＲＰＭ８活性化作用の評価結果
表１に示す試験サンプルのＴＲＰＭ８活性化作用を、上記方法を用いて、乾燥固形分換算の終濃度０．０１〜１０ｐｐｍの範囲で測定した。測定結果より、最小二乗法を用いてヒルの式に近似した容量依存曲線を求め、これよりＥＣ₅₀値を算出した。調整例１の粗抽出液、比較例１〜３及び実施例１〜７、９〜１２のニクズク加工処理物のＴＲＰＭ８活性化作用におけるＥＣ₅₀値は表１に示すとおりであった。

前記表１に示すとおり、実施例１〜７および９〜１２のニクズク加工処理物は優れたＴＲＰＭ８活性化作用を示す。

試験例２試験サンプル配合洗口液の冷感評価
表２に示す洗口液（試験品Ａ、Ｂ及びＣ）を調製し、以下の手順及び基準に従って冷涼感誘発効果を評価した。評価結果を図１に示す。

（１）評価手順
男性パネル５名及び女性パネル１名の計６名に対し、洗口液による冷涼感の評価を行った。
試験品Ａ（比較例４）、試験品Ｂ（比較例５）又は試験品Ｃ（実施例１３）を１０ｍＬ３０秒間口に含み、吐き出した。その後、３０分間の口腔内に感じた冷涼感を０〜５．０点（０．５刻みの１１段階評価）で評価した。各試験品の適用は３０分以上の間隔をあけて行った。

（２）評価基準（冷感スコア）
０点：なにも感じない
０．５点
１．０点：わずかに冷涼感を感じる
１．５点
２．０点：よわい冷涼感を感じる
２．５点
３．０点：はっきりと冷涼感を感じる
３．５点
４．０点：強い冷涼感を感じる
４．５点
５．０点：非常に強い冷涼感を感じる

（３）冷涼感誘発効果の評価結果
図１に示すように、実施例１３の洗口液は比較例４の洗口液及び比較例５の洗口液（実施例８のサンプルに換えて同濃度の調製例２のサンプルを含むもの）と比較して、強度・持続性の高い冷涼感を示す。

Claims

ニクズク加工処理物の製造方法であって、ニクズクの種子、メース若しくは葉又はそれらの抽出物を、アルコール又は２５％（ｖ／ｖ）以上のアルコール水溶液とプロトン酸及びＨ型陽イオン交換樹脂から選ばれる１種以上とで同時に処理する工程を含むことを特徴とする製造方法。
アルコールとして炭素数１〜１０のアルコールを用いる請求項１に記載の製造方法。
請求項１又は２に記載の製造方法で得られるニクズク加工処理物。
請求項３に記載のニクズク加工処理物のみを有効成分とする冷感剤。
請求項３に記載のニクズク加工処理物のみを有効成分とするＴＲＰＭ８活性化剤。
請求項４に記載の冷感剤を含有する化粧料。
請求項４に記載の冷感剤を含有する口腔用組成物。
請求項５に記載のＴＲＰＭ８活性化剤を含有する化粧料。
請求項５に記載のＴＲＰＭ８活性化剤を含有する口腔用組成物。