KR101088071B1

KR101088071B1 - 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물의 신규한 용도

Info

Publication number: KR101088071B1
Application number: KR1020080102061A
Authority: KR
Inventors: 황재관; 조유미; 김규회; 김정환; 이해지; 오현인
Original assignee: (주)뉴트리; (주)바이오케어
Priority date: 2007-10-17
Filing date: 2008-10-17
Publication date: 2011-11-29
Anticipated expiration: 2028-10-17
Also published as: KR20090039650A; EP2200576B1; CN101827579B; US8969408B2; EP2200576A2; WO2009051437A2; EP2200576A4; US20110118346A1; WO2009051437A3; CN101827579A; JP2011500670A

Abstract

본 발명은 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물의 신규한 용도에 관한 것이다. 구체적으로 본 발명은 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 조성물에 관한 것이다. 상기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물은 멜라닌 생성 및 티로시나제 활성을 억제함으로써 탁월한 미백 효과가 있으므로 미백용 화장료 조성물, 식품 조성물 또는 약학적 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있다.

리그난계, 육두구, 가종피, 추출물, 미백, 멜라닌, 티로시나제

Description

리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물의 신규한 용도{Novel use of lignan-type compounds or extract of nutmeg or aril of nutmeg comprising the same}

본 출원은 2007년 10월 17일자로 출원된 대한민국 특허출원 제2007-0104783호를 우선권으로 주장하고, 상기 명세서 전체는 본 발명의 참고문헌이다.

본 발명은 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물의 신규한 용도에 관한 것이다. 구체적으로 본 발명은 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부색은 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melanocyte)의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두께 및 카로티노이드, 빌리루빈 등 인체 내외의 색소 함유 유무와 같은 여러 요인들에 의해 결정되는데, 그 중에서 멜라노사이트에서 티로시나제 등의 여러 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌이라는 흑색 색소가 가장 중요하다.

상기 멜라닌 색소의 형성에는 유전적 요인, 호르몬 분비, 스트레스 등과 관 련된 생리적 요인 및 자외선 조사 등과 같은 환경적 요인이 영향을 미친다. 멜라닌은 피부의 외각인 표피층에 존재하여 자외선 등으로부터 진피 이하의 피부기관을 보호해주는 동시에 피부 생체 내에 생겨난 자유라디칼 등을 잡아주는 역할을 하여 피부 내 단백질과 유전자들을 보호해주는 중요한 기능을 가지고 있지만, 멜라닌이 과잉생산 됨으로써 기미, 주근깨 등을 형성할 뿐 아니라 피부노화를 촉진하며 피부암 유발에도 중요한 작용을 하는 것으로 알려져 있다.

상기 기미, 주근깨, 색소침착 등과 같은 피부색소 이상침착 증상과 자외선 노출 등에 의해 발생된 과도한 멜라닌 색소 침착을 치료 또는 경감시켜주기 위해서 이전부터 아스코르빈산, 코지산, 알부틴, 하이드로퀴논, 글루타치온 또는 이들의 유도체, 티로시나제 저해활성을 가진 화합물을 화장료나 의약품에 배합 사용하여 왔는데, 이들은 불충분한 미백효과, 피부에 대한 안전성 문제, 화장료에 배합하는 경우 발생하는 제형 및 안정성 문제 등으로 인해 그 사용이 제한되고 있다. 이에 안전성이 뛰어나고 미백 활성이 우수한 천연물 유래의 물질에 대한 연구가 진행되고 있다.

한편, 육두구(nutmeg)는 열대지방에서 재배되는 다년생 식물인 미리스티카 프라그란스(Myristica fragrans)의 열매로서 오래전부터 향신료로 이용되어 왔다. 아울러, 육두구 가종피는 상기 미리스티카 프라그란스(Myristica fragrans)의 열매의 껍질 부분을 나타내는 것으로 헬리코박터 파일로리 균의 성장 억제 활성(In Vivo., 17;541-4, 2003), 간의 해독 작용 기작의 활성화(Food Chem. Toxicol., 31;517-21, 1993), 피부 사마귀의 화학적 예방작용(Cancer Lett., 56;59-63, 1991), 항염활성(Jpn. J. Pharmacol., 49;155-63, 1999)이 있는 것으로 알려져 있다. 그러나 상기 육두구 또는 육두구 가종피가 미백 활성이 있는지 여부에 대해서는 알려진 바가 전혀 없다.

특히 상기 육두구 또는 육두구 가종피로부터 추출될 수 있는 메이스리그난은 대표적인 리그난계 화합물로(Phytochemistry, 59: 169-173, 2002), 아폽토시스(apoptosis)를 유도하는 카스파제(caspase)-3 활성 증진작용(Biol. Pharm. Bull., 27: 1305-1307, 2004), 구강미생물에 대한 항균활성(대한민국특허 공개특허공보 10-691792호), 항염증작용(대한민국특허 공개특허공보 10-0579752), 항여드름 기능(대한민국특허 공개특허공보 10-0567431), 뇌세포 지질 과산화 및 활성산소 생성 억제 효과(Biochem. Biophys. Res. Commu., 331: 1264-1269) 등이 보고되고 있다. 그러나 상기 메이스리그난을 포함하여 상기 육두구 또는 육두구 가종피로부터 추출될 수 있는 아우스토바이리그난 7또는 리카린 E이 미백 활성이 있는지 여부에 대해서는 알려진 바가 전혀 없다.

이에 본 발명자들은 천연물 유래의 미백 활성이 있는 물질에 관하여 연구하던 중, 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물이 우수한 미백 활성이 있음을 알아내어 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 하기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 하기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 상기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명은 상기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 약학적 조성물을 제공한다.

이하 본 발명의 내용을 보다 상세히 설명하기로 한다.

본 발명에서 ‘육두구(nutmeg)’는 열대지방에서 재배되는 다년생 식물인 미리스티카 프라그란스(Myristica fragrans)의 열매를 말하며, ‘육두구 가종 피(aril of nutmeg)’는 상기 미리스티카 프라그란스(Myristica fragrans) 열매의 껍질 부분을 말한다.

본 발명에서 ‘육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물’은 육두구 또는 육두구 가종피에서 유래된 하기 리그난계 화합물을 함유하는 추출물을 말한다. 상기 리그난계 화합물을 함유할 수 있다면 상기 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물의 제조방법에는 제한이 없지만, 바람직하게는 육두구(nutmeg) 또는 육두구 가종피(aril of nutmeg)로부터 물, C1-C6의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출함으로써 제조될 수 있다. 또한 필요한 경우 당업자에게 공지된 방법에 따라 여과 및 농축 단계를 추가적으로 포함하여 제조할 수 있다.

상기 C1-C6의 유기용매는 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 C1-C6의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane), 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택된 것을 말한다.

또한 상기에서 '초임계 유체'란 일반적인 조건에서는 기체 상태이지만 임계 온도와 임계 압력 이상에서는 유체인 것을 말하며, 상기에서 아임계 유체는 아임계 액체와 기체를 포함하며 특히 아임계 액체는 온도가 초임계온도와 포화온도보다 낮은 상태의 유체이며, 아임계 기체는 온도가 포화온도보다 높고 압력은 초임계압력 보다 낮은 상태의 유체를 말한다. 상기 초임계 유체 및 아임계 유체는 의약품 공업, 식품공업, 화장품·향료 공업, 화학 공업, 에너지 공업 및 기타 다양한 분야에 응용되고 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 초임계 유체 및 아임계 유체는 특별히 제한되는 것은 아니며 예를 들어, 이산화탄소, 질소, 아산화질소, 메탄, 에틸렌, 프로판, 프로필렌, 석유에테르, 에틸에테르 및 시클로헥산 등을 이용할 수 있다. 특히, 이산화탄소는 대량구입이 가능하고, 비교적 저렴하며, 비폭발성이고, 가공용으로 충분히 안전하다는 장점 때문에 특히 바람직하다. 상기 이산화탄소는 임계온도가 31.1℃이고 임계압력은 73.8기압이다.

본 발명의 일실시예에서는 건조한 육두구 또는 육두구 가종피를 분쇄하고 이에 에탄올, 헥산 또는 클로로포름 용매를 이용하여 추출한 다음 여과 및 농축 단계를 거쳐 육두구 또는 육두구 가종피 에탄올, 헥산 또는 클로로포름 추출물을 제조하였다. 또한 초임계 유체로서 이산화탄소(CO₂)를 이용한 초임계 유체추출기에 육두구를 투여하여 육두구 초임계 추출물을 제조하였다(<실시예 1> 참조).

본 발명에서 ‘리그난계 화합물’은 하기 화학식 1 내지 3으로 이루어진 군에서 선택된 화합물을 말한다. 구체적으로 화학식 1로 표시되는 화합물은 메이스리그난(macelignan, 4-((2S, 3R)-4-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-2,3-dimethyl-butyl)-2-methoxyphenol)을 말하고, 화학식 2로 표시되는 화합물은 아우스토바이리그난 7(austobailignan 7, 4-(1-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-2-methyl-butoxymethyl)-2- methoxy-phenol)을 말하며, 화학식 3으로 표시되는 화합물은 리카린 E(licarin E, 5-(7-Methoxy-3-methyl-5-propenyl-2,3-dihydro-benzofuran-2-yl)-benzo[1,3]dioxole)를 말한다.

상기 리그난계 화합물은 공지의 합성 방법을 이용하여 제조될 수 있으며 상기 육두구 또는 육두구 가종피부터 추출하여 분리 정제함으로써 수득할 수 있다. 상기 육두구 또는 육두구 가종피 추출물로부터 리그난계 화합물의 분리 및 정제는 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 실리카겔(silica gel)이나 활성 알루미나(alumina)등의 각종 합성수지를 충진한 컬럼 크로마토그라피(column chromatography) 및 고성능액체 크로마토그라피(HPLC) 등을 단독으로 혹은 병행하여 사용할 수 있다. 그러나 리그난계 화합물의 추출, 분리 및 정제 방법은 반드시 상기한 방법에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일실시예에서는 건조한 육두구 또는 육두구 가종피 추출물로부터 공지된 실리카겔(silica gel) 컬럼 크로마토그라피를 이용하여 상기 메이스리그난(macelignan), 아우스토바이리그난 7(austobailignan 7) 또는 리카린 E(licarin E)를 분리하였다(<실시예 2> 참조).

상기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물은 우수한 미백 활성을 가지고 있다.

구체적으로 상기 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 멜라닌세포(melanocyte)인 Melan-a 세포에 투여한 결과 멜라닌 생성이 현저히 억제되고(<실험예 1> 참조), 멜라닌 생성에 관여하는 효소인 티로시나제(tyrosinase) 활성을 억제하며(<실험예 2> 참조), 상기 티로시나제 및 티로시나제 관련 단백질(TRP-1, TRP-2) 발현이 억제됨을 알 수 있었다(<실험예 3> 참조).

따라서 상기 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물은 미백 활성이 우수하므로 화장료 조성물, 식품 조성물 또는 약학적 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있다.

상기 본 발명의 화장료 조성물은 상기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태 로 제조될 수 있다.

상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 상기 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 상기 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물 또는 이의 염을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 상기 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물의 함량은 이에 한정되지 않지만 전체 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%인 것이 바람직하고, 0.01 내지 5 중량%인 것이 더욱 바람직하다. 상기 함량이 0.001중량% 미만에서는 목적하는 미백 효과를 기대할 수 없고, 10중량% 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다.

한편 상기 본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 형태를 포함한다.

상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 이에 한정되지 않지만 예를 들면, 건강식품으로는 상기 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용할 수 있도록 액상화, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 상기 리그난계 화합물 또는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물과 미백 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다. 또한, 기능성 식품으로는 이에 한정되지 않지만 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 상기 리그난계 화합물 또는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 리그난계 화합물 또는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물 중 상기 리그난계 화합물 또는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물의 바람직한 함유량으로는 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 최종적으로 제조된 식품 중 0.01 내지 50 중량%이다. 더 바람직하게는, 본 발명의 식품 조성물은 특히, 미백 효과가 있는 것으로 알려진 활성 성분과 함께 혼합하여 건강식품의 형태로 제조될 수 있다.

한편 상기 본 발명의 약학적 조성물은 상기 리그난계 화합물 또는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 단독으로 함유하거나 또는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다.

약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).

본 발명의 약학 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여 할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다. 경구 투여용 제제의 경우에 본 발명의 조성물은 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 등으로 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 비경구 투여시는 상기 리그난계 화합물 또는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 50 mg, 더 바람직하게는 0.1 내지 30 mg의 양으로 투여되도록, 그리고 경구 투여시는 상기 리그난계 화합물 또는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 100 mg, 더 바람직하게는 0.1 내지 50 mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 그러나 상기 리그난계 화합물 또는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물의 용량은 약학적 조성물의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 리그난계 화합물 또는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 미백을 위한 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.

이상 살펴본 바와 같이, 상기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물은 멜라닌 생성 및 티로시나제 활성을 억제함으로써 탁월한 미백 효과가 있으므로 미백용 화장료 조성물, 식품 조성물 또는 약학적 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있다.

이하, 실시예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.

<실시예 1>

미백활성이 있는 육두구 또는 육두구 가종피 추출물의 제조

<1-1> 육두구 추출물의 제조

먼저 육두구(nutmeg) 에탄올 추출물을 제조하기 위하여, 건조한 육두구를 믹서로 분쇄한 다음 분쇄한 육두구 시료 100g를 에탄올 1L에 넣고 48시간 상온에서 냉침하여 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거하여 육두구 에탄올 추출물을 수득하였다.

또한 추출용매로 상기 에탄올 대신 메탄올, 헥산 또는 클로로포름을 사용하여 상기와 동일한 방법을 이용함으로써 육두구 메탄올, 헥산 또는 클로로포름 추출물을 수득하였다.

한편 초임계 유체추출기를 사용하여 육두구 초임계 추출물을 제조하였다. 구체적으로 초임계 유체로 이산화탄소(CO₂)를 이용하고 추출온도는 50℃, 추출압력은 200 bar로 하고 추출물로부터 용매를 제거함으로써 제조하였다.

<1-2> 육두구 가종피 추출물의 제조

건조한 육두구 가종피(aril of nutmeg)를 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 육두구 가종피 시료 100g를 에탄올 1L에 넣고 48시간 상온에서 냉침하고 상기 <실시예 1-2>와 동일한 방법을 이용하여 추출함으로써 육두구 가종피 에탄올 추출물을 제조하였다.

<실시예 2>

육두구 또는 육두구 가종피 추출물에서 미백활성이 있는 화합물의 분리

<2-1> 메이스리그난(macelignan) 분리

상기 <실시예 1-1>에서 얻은 농축된 육두구 에탄올 추출물과 에틸아세테이트를 혼합하여 에틸아세테이트 용해성 성분을 추출하고, 에틸아세테이트를 제거하여 에틸아세테이트 용해성 성분을 농축하였다. 실리카겔을 6x15cm로 충진한 칼럼에서 헥산, 에틸아세테이트를 10:1(v/v)의 비율로 혼합한 용매시스템을 이용하여 비활성물질들을 제거하고, 이를 다시 헥산(hexane), 에틸아세테이트를 각각 20:1(v/v)의 비율로 혼합한 용매의 분획물을 얻은 후 Rp-18 컬럼 크로마토그래피(column chromatography)를 이용하여 80% 메탄올로 용출시켜 농축 건조하여, 최종적으로 순수한 단일 미백활성 물질인 하기 화학식 1의 메이스리그난(macelignan, 4-((2S,3R)-4-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-2,3-dimethyl-butyl)-2-methoxyphenol)을 분리하였다.

<2-2> 아우스토바이리그난 7의 분리

상기 <실시예 1-2>에서 얻은 농축된 육두구 가종피 에탄올 추출물을 에틸아세테이트, 부탄올, 물로 분획하였다. 에틸아세테이트 분획물(10.29 g)을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 클로로포름과 에틸아세테이트를 9:1(v/v)의 비율로 혼합한 용매로 용출시켜 분획물 Ⅴ(0.52)과 분획물 Ⅵ(0.19 g)을 얻었다. 분획물 Ⅵ를 클로로포름과 에틸아세테이트와 아세톤 30:1:2(v/v/v)의 비율로 혼합한 용 매로 컬럼 크로마토그래피하여 분획물 Ⅵ-B(0.52 g)를 얻었다. 이후, 분획물 Ⅵ-B를 리싸이클링 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 100% 메탄올로 용출함으로써 최종적으로 순수한 단일 미백활성 물질인 하기 화학식 2의 아우스토바이리그난 7(4-(1-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-2-methyl-butoxymethyl)-2-methoxy-phenol) 0.011 g을 분리하였다.

<2-3> 리카린 E의 분리

상기 <실시예 1-2>에서 얻은 농축된 육두구 가종피 에탄올 추출물을 에틸아세테이트, 부탄올, 물로 분획하였다. 에틸아세테이트 분획물(18.44 g)을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 클로로포름과 에틸아세테이트를 9:1(v/v)의 비율로 혼합한 용매로 용출시켜 분획물 II(3.04 g)을 얻었다. 분획물 II를 클로로포름과 핵산과 에틸아세테이트와 아세톤 15:10:0.1:0.1 (v/v/v/v)의 비율로 혼합한 용매로 컬럼 크로마토그래피하여 분획물 II-B(0.4 g)를 얻었다. 이후, 분획물 II-B를 리싸이클링 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 100% 메탄올로 용출함으로써 최종적으로 순수한 단일 미백활성 물질인 하기 화학식 3의 리카린 E(5-(7-Methoxy- 3-methyl-5-propenyl-2,3-dihydro-benzofuran-2-yl)-benzo[1,3]dioxole) 0.016 g를 분리하였다.

<실험예 1>

멜라닌 생성 억제 활성

<1-1> 육두구 또는 육두구 가종피 추출물의 멜라닌 생성 억제

먼저 상기 <실시예 1-1>에서 제조된 육두구 에탄올 추출물이 멜라닌 생성 억제 활성이 있는지 여부를 확인하였다.

구체적으로 10 % FBS와 2μM TPA(phorbol 12-myristate 13-acetate)가 함유된 RPMI 1640으로 6-웰 플레이트(멜라닌 정량)에 2X10⁵cell/ml(최종 부피 3ml)의 Melan-a 세포를 넣고 10% CO₂ 배양기(MCO-20AIC, Sanyo)로 37℃에서 24시간 배양하였다. 상기 배양 후 배지를 제거하고 RPMI 1640 배지에 상기 <실시예 1-1>에서 제조된 육두구 에탄올 추출물을 첨가하여 3일간 매일 처리하였다. 5일 후 6-well 플 레이트에서 배양된 배지를 제거하고 0.25% trypsin-EDTA(Sigma Chemical Co.)용액을 처리하여 세포 펠렛(pellet)을 회수하고 1.5ml 튜브(tube)로 옮겨 10,000rpm으로 10분간 원심 분리하여 상등액을 제거하였다. 수득한 펠렛을 60℃에서 건조시킨 후 1N NaOH 100 ㎕를 넣어 세포내 멜라닌을 녹였다. 이 용액을 PBS로 희석시킨 다음 ELISA reader 475nm에서 흡광도를 측정하고 하기 수학식 1에 따라 멜라닌 함량을 구하고 그 결과를 도 1에 기재하였다 이때 육두구 에탄올 추출물을 첨가하지 않은 군을 대조군으로 하였다.

상기 도 1에 기재된 바와 같이, 육두구 에탄올 추출물은 멜라닌 생성을 억제하는 활성이 우수하므로 미백효과가 탁월함을 알 수 있다(**: P<0.01).

또한, 상기 <실시예 1-1>에서 제조된 육두구 헥산 추출물, 클로로포름 추출물, 초임계 추출물 및 상기 <실시예 1-2>에서 제조된 육두구 가종피 에탄올 추출물 40μg/ml를 각각 Melan-a 세포에 처리하여 상기와 동일한 방법으로 멜라닌 생성 정도를 측정한 결과, 육두구 헥산 추출물의 경우 약 53.74%, 육두구 클로로포름 추출물의 경우 약 66.93%, 육두구 초임계 추출물의 경우 약 73.80%, 육두구 가종피 에탄올 추출물의 경우 약 70.50% 정도 멜라닌 생성이 억제됨을 알 수 있었다(결과 미도시).

따라서 육두구 또는 육두구 가종피 추출물은 멜라닌 생성을 억제하는 활성이 우수하여 미백용 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있을 것으로 사료되었다.

<1-2> 메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E의 멜라닌 생성 억제

상기 <실시예 2-1>에서 분리된 메이스리그난을 Melan-a 세포에 처리하여 상기 <실험예 1-1>과 동일한 방법으로 멜라닌 생성 정도를 측정하여 그 결과를 도 2에 나타내었다.

상기 도 2에 기재한 바와 같이, 메이스리그난은 멜라닌 생성을 억제하는 활성이 우수하므로 미백효과가 탁월함을 알 수 있다(**: P<0.01).

또한 상기 <실시예 2>에서 분리한 아우스토바이리그난 7(750μM) 및 리카린 E(50μM)을 각각 Melan-a 세포에 처리하여 상기 <실험예 1-1>과 동일한 방법으로 멜라닌 생성 정도를 측정한 결과, 아우스토바이리그난 7의 경우 약 53.89%, 리카린 E의 경우 58.44%정도 멜라닌 생성이 억제됨을 알 수 있었다(결과 미도시).

따라서 메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E는 멜라닌 생성을 억제하는 활성이 우수하여 미백용 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있을 것으로 사료되었다.

<실험예 2>

티로시나제(tyrosinae) 활성 억제

<2-1> 육두구 또는 육두구 가종피 추출물의 티로시나제 활성 억제

먼저 상기 <실시예 1-1>에서 제조된 육두구 에탄올 추출물이 멜라닌 생성에 관여하는 효소인 티로시나제 활성을 억제하는지 여부를 확인하였다.

상기 <실험예 1-1>과 같이 배양된 Melan-a 세포에 상기 <실시예 1-1>에서 제조된 육두구 에탄올 추출물을 3일간 처리하고 5일 후 6-웰 플레이트에서 배양된 배지를 제거하고 0.25% trypsin-EDTA(Sigma Chemical Co.)용액을 처리하여 세포 펠렛을 회수하였다. 회수된 펠렛을 1.5ml 튜브로 옮겨 인산염 완충액(pH 6.8) 200㎕를 첨가한 후 10,000rpm으로 10분간 원심 분리후 상등액을 모아 그 중 150 ㎕을 96-웰마이크로플레이트(96-well microplate)에 넣은 후 카테콜(catechol) 50㎕을 첨가하였다. 상기 첨가 후 37℃에서 30분간 배양한 후 마이크로플레이트 리더(micro plate reader)를 이용하여 생성된 도파 크롬(dopa chrome)의 양을 490㎚에서 흡광도를 측정하여 그 결과를 도 3에 기재하였다.

상기 도 3에 기재한 바와 같이, 상기 <실시예 1-1>에서 제조된 육두구 에탄올 추출물을 처리한 경우 생성된 도파 크롬(dopa chrome)의 양이 현저히 줄었음을 알 수 있었다. 따라서 티로시나제가 도파 크롬(dopa chrome) 생성에 관여하는 효소인 점을 고려하면, 상기 <실시예 1-1>에서 제조된 육두구 에탄올 추출물은 티로시나제 활성을 저해함으로써 멜라닌 생성을 억제할 수 있음을 알 수 있었다(**: P<0.01).

또한, 상기 <실시예 1-1>에서 제조된 육두구 헥산 추출물, 클로로포름 추출물, 초임계 추출물 및 상기 <실시예 1-2>에서 제조된 육두구 가종피 에탄올 추출물 40μg/ml를 각각 Melan-a 세포에 처리하여 상기와 동일한 방법으로 도파 크롬(dopa chrome) 생성 정도를 측정한 결과, 육두구 헥산 추출물의 경우 약 54.92%, 육두구 클로로포름 추출물의 경우 약 62.89%, 육두구 초임계 추출물의 경우 약 68.34%, 육두구 가종피 에탄올 추출물의 경우 약 772.75% 정도 도파 크롬(dopa chrome) 생성이 억제됨을 알 수 있었다(결과 미도시).

<2-2> 메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린E의 티로시나제 활성 억제

상기 <실시예 2-1>에서 분리된 메이스리그난을 Melan-a 세포에 처리하여 상기 <실험예 2-1>과 동일한 방법으로 도파 크롬 생성 정도를 측정하여 그 결과를 도 4에 기재하였다.

상기 도 4에 기재한 바와 같이, 메이스리그난은 도파 크롬 생성을 억제하는 활성이 우수하므로 티로시나제 활성을 억제할 수 있음을 알 수 있었다(**: P<0.01).

또한 상기 <실시예 2>에서 분리한 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E를 각각 Melan-a 세포에 처리하여 상기 <실험예 1-1>과 동일한 방법으로 도파 크롬 생성 정도를 측정한 결과, 아우스토바이리그난 7의 경우 약 54.87%%, 리카린 E의 경우 60.04% 정도 도파 크롬 생성이 억제됨을 알 수 있었다(결과 미도시).

따라서 티로시나제가 도파 크롬(dopa chrome) 생성에 관여하는 효소인 점을 고려하면, 메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E는 티로시나제 활성을 저해함으로써 멜라닌 생성을 억제할 수 있음을 알 수 있었다.

<실험예 3>

티로시나제 및 티로시나제 관련 단백질(TRP-1, TRP-2) 발현 억제

<3-1> 육두구 추출물의 티로시나제, TRP-1 및 TRP-2 발현 억제

상기 <실시예 1-1>에서 제조된 육두구 에탄올 추출물이 티로시나제(tyrosinase), 티로시나제 관련 단백질 1(tyrosinase related protein-1, TRP-1) 및 티로시나제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein-2, TRP-2) 발현을 억제하는지 여부를 확인하기 위하여 웨스턴 블럿(Western blot)을 이용하여 분석하고 브래드포드(Bradford)법을 이용하여 단백질을 정량하였다.

구체적으로 상기 <실험예 1-1>에서 육두구 에탄올 추출물이 처리된 세포로부터 추출된 단백질을 10% SDS-폴리아크릴아미드 겔에 전기영동 시킨 후 니트로셀룰로오스 막(nitrocellulose membrane)으로 겔의 단백질을 전이시켰다. 5% 탈지분유(skim milk)를 1시간 동안 상온에서 처리하고 티로시나제, TRP-1 및 TRP-2의 1차 항체를 5% 탈지분유에 1:1000의 비율로 희석하여 2시간 동안 상온에서 반응시켰다. 1차 항체 반응 후 10분씩 2회에 걸쳐 TBST(Tris-buffer Saline Tween 20)로 흔들어주며 세척하였다. 각각의 1차 항체를 인지하는 2차 항체를 5% 탈지분유에 1:1000이 되도록 희석하여 1시간 동안 상온에서 반응시키고 1차 항체 때와 마찬가지로 10분씩 3회에 걸쳐 TBST(Tris-buffer Saline Tween20)로 흔들어 주며 세척한 후 다음 화학발광법(chemiluminescence)으로 현상하여 그 결과를 도 5에 기재하였다.

상기 도 5에 기재한 바와 같이, 상기 육두구 에탄올 추출물은 티로시나제, TRP-1 및 TRP-2의 발현을 저해함으로써 멜라닌 생성을 억제할 수 있음을 알 수 있었다(**: P<0.01).

<3-2> 메이스리그난의 티로시나제, TRP-1 및 TRP-2 발현 억제

상기 <실시예 2-1>에서 분리된 메이스리그난을 Melan-a 세포에 처리하여 상기 <실험예 3-1>과 동일한 방법으로 티로시나제, TRP-1 및 TRP-2의 발현을 억제하는지 여부를 확인하여 그 결과를 도 6에 기재하였다.

상기 도 6에 기재한 바와 같이, 상기 메이스리그난은 티로시나제, TRP-1 및 TRP-2의 발현을 저해함으로써 멜라닌 생성을 억제할 수 있음을 알 수 있었다(**: P<0.01).

<제형예 1 - 화장품>

<1-1 내지 1-3> 영양화장수(밀크로션)

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E)을 하기 표 1의 영양화장수 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 영양화장수를 제조하였다.

영양화장수

배합성분	제형예 1 (중량%)	제형예 2 (중량%)	제형예 3 (중량%)
<실시예 2>에서 분리된 화합물	2.0	-	-
육두구 에탄올 추출물	-	2.0	-
육두구 가종피 에탄올 추출물	-	-	2.0
스쿠알란	5.0	5.0	5.0
밀납	4.0	4.0	4.0
폴리솔베이트 60	1.5	1.5	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5	1.5	1.5
유동파라핀	0.5	0.5	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0	5.0	5.0
글리세린	3.0	3.0	3.0
부틸렌글리콜	3.0	3.0	3.0
프로필렌글리콜	3.0	3.0	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1	0.1	0.1
트리에탄올아민	0.2	0.2	0.2
방부제, 색소, 향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<1-4 내지 1-6> 유연화장수(스킨로션)

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E)을 하기 표 2의 유연화장수 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 유연화장수를 제조하였다.

유연화장수

배합성분	제형예 4 (중량%)	제형예 5 (중량%)	제형예 6 (중량%)
<실시예 2>에서 분리된 화합물	2.0	-	-
육두구 에탄올 추출물	-	2.0	-
육두구 가종피 에탄올 추출물	-	-	2.0
글리세린	3.0	3.0	3.0
부틸렌글리콜	2.0	2.0	2.0
프로필렌글리콜	2.0	2.0	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1	0.1	0.1
PEG 12 노닐페닐에테르	0.2	0.2	0.2
폴리솔베이트 80	0.4	0.4	0.4
에탄올	10.0	10.0	10.0
트리에탄올아민	0.1	0.1	0.1
방부제, 색소, 향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<1-7 내지 1-9> 영양크림

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E)을 하기 표 3의 영양크림 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 영양크림을 제조하였다.

영양크림

배합성분	제형예 7 (중량%)	제형예 8 (중량%)	제형예 9 (중량%)
<실시예 2>에서 분리된 화합물	2.0	-	-
육두구 에탄올 추출물	-	2.0	-
육두구 가종피 에탄올 추출물	-	-	2.0
폴리솔베이트 60	1.5	1.5	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.5	0.5	0.5
PEG60 경화피마자유	2.0	2.0	2.0
유동파라핀	10	10	10
스쿠알란	5.0	5.0	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0	5.0	5.0
글리세린	5.0	5.0	5.0
부틸렌글리콜	3.0	3.0	3.0
프로필렌글리콜	3.0	3.0	3.0
트리에탄올아민	0.2	0.2	0.2
방부제	적량	적량	적량
색소	적량	적량	적량
향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<1-10 내지 1-12> 마사지크림

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E)을 하기 표 4의 마사지크림 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 마사지크림을 제조하였다.

마사지크림

배합성분	제형예 10 (중량%)	제형예 11 (중량%)	제형예12 (중량%)
<실시예 2>에서 분리된 화합물	1.0	-	-
육두구 에탄올 추출물	-	1.0	-
육두구 가종피 에탄올 추출물	-	-	1.0
밀납	10.0	10.0	10.0
폴리솔베이트 60	1.5	1.5	1.5
PEG 60 경화피마자유	2.0	2.0	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.8	0.8	0.8
유동파라핀	40.0	40.0	40.0
스쿠알란	5.0	5.0	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0	4.0	4.0
글리세린	5.0	5.0	5.0
부틸렌글리콜	3.0	3.0	3.0
프로필렌글리콜	3.0	3.0	3.0
트리에탄올아민	0.2	0.2	0.2
방부제, 색소, 향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<1-13 내지 1-15> 팩

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E)을 하기 표 5의 팩 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 팩을 제조하였다.

팩

배합성분	제형예 13 (중량%)	제형예 14 (중량%)	제형예 15 (중량%)
<실시예 2>에서 분리된 화합물	1.0	-	-
육두구 에탄올 추출물	-	1.0	-
육두구 가종피 에탄올 추출물	-	-	1.0
폴리비닐알콜	13.0	13.0	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2	0.2	0.2
글리세린	5.0	5.0	5.0
알란토인	0.1	0.1	0.1
에탄올	6.0	6.0	6.0
PEG 12 노닐페닐에테르	0.3	0.3	0.3
폴리솔베이트 60	0.3	0.3	0.3
방부제, 색소, 향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<1-16 내지 1-18> 젤

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E)을 하기 표 6의 젤 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 젤을 제조하였다.

젤

배합성분	제형예 16 (중량%)	제형예 17 (중량%)	제형예 18 (중량%)
<실시예 2>에서 분리된 화합물	0.5	-	-
육두구 에탄올 추출물	-	0.5	-
육두구 가종피 에탄올 추출물	-	-	0.5
에틸렌디아민초산나트륨	0.05	0.05	0.05
글리세린	5.0	5.0	5.0
카르복시비닐폴리머	0.3	0.3	0.3
에탄올	5.0	5.0	5.0
PEG 60 경화피마자유	0.5	0.5	0.5
트리에탄올아민	0.3	0.3	0.3
방부제, 색소, 향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<제형예 2 - 식품>

<2-1> 건강식품의 제조

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E) 1000㎎, 비타민 A 아세테이트 70㎍, 비타민 E 1.0㎎, 비타민 B1 0.13㎎, 비타민 B2 0.15㎎, 비타민 B6 0.5㎎, 비타민 B12 0.2㎍, 비타민 C 10㎎, 비오틴 10㎍, 니코틴산아미드 1.7㎎, 엽산 50㎍, 판토텐산 칼슘 0.5㎎, 황산제1철 1.75㎎, 산화아연 0.82㎎, 탄산마그네슘 25.3㎎, 제1인산칼륨 15㎎, 제2인산칼슘 55㎎, 구연산칼륨 90㎎, 탄산칼슘 100㎎, 염화마그네슘 24.8 ㎎를 혼합하여 제조할 수 있으며, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<2-2> 건강음료의 제조

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E) 1000㎎, 구연산 1000㎎, 올리고당 100 g, 매실농축액 2g, 타우린 1g에 정제수를 가하여 전체 900 ㎖ 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강음료 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<2-3> 츄잉껌

껌 베이스 20 중량%, 설탕 76.9 중량%, 향료 1 중량% 및 물 2 중량%와 상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E) 0.1 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 츄잉껌을 제조하였다.

<2-4> 캔디

설탕 60 중량%, 물엿 39.8 중량% 및 향료 0.1 중량%와 상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E) 0.1 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 캔디를 제조하였다.

<2-5> 비스켓

박력 1급 25.59 중량%, 중력 1급 22.22 중량%, 정백당 4.80 중량%, 식염 0.73 중량%, 포도당 0.78 중량%, 팜쇼트닝 11.78 중량%, 암모늄 1.54 중량%, 중조 0.17 중량%, 중아황산나트륨 0.16 중량%, 쌀가루 1.45 중량%, 비타민 B₁0.0001 중량%, 비타민 B₂0.0001 중량%, 밀크향 0.04 중량%, 물 20.6998 중량%, 전지분유 1.16 중량%, 대용분유 0.29 중량%, 제1인산칼슘 0.03 중량%, 살포염 0.29 중량% 및 분무유 7.27 중량%와 상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E) 1 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 비스켓을 제조하였다.

<제형예 3 - 의약품>

<3-1> 산제

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E) 50 mg, 결정셀룰로오즈 2 g을 혼합한 후 통상의 산제 제조방법에 따라서 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<3-2> 정제

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E) 50 ㎎, 결정셀룰로오즈 400 ㎎, 스테아린산 마그네슘 5 ㎎을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<3-3> 캡슐제

상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E) 30 ㎎, 유청단백질 100 ㎎, 결정셀룰로오즈 400 ㎎, 스테아린산 마그네슘 6 ㎎을 혼합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<3-4> 주사제

통상의 주사제 제조방법에 따라 활성성분을 주사용 증류수에 용해하고 pH를 약 7.5로 조절한 다음 상기 <실시예 1>에서 제조된 육두구 추출물, 육두구 가종피 추출물 또는 상기 <실시예 2>에서 분리된 화합물(메이스리그난, 아우스토바이리그난 7 및 리카린 E) 100 ㎎, 주사용 증류수, pH 조절제 를 혼합하여 2 ㎖ 용량의 앰플에 충진하고 멸균시켜서 주사제를 제조하였다.

<적용예>

상기 <제형예 1-1> 내지 <제형예 1-18>에 따라 제조된 영양화장수, 유연화장수, 영양크림, 마사지크림, 팩 및 젤에 의한 색소침착 억제효과를 하기와 같이 검증하였다.

먼저, 건강한 남녀 20명씩을 선정하여 양팔의 하박부에 직경 7mm 크기의 구멍이 6개씩 2줄로 파인 알루미늄 호일을 붙이고, 팔에서 10㎝ 떨어진 거리에서 ORIEL solar simulator 1000W를 사용하여 60J/㎠의 광량을 조사하였다. 조사 전에 70% 에탄올 수용액으로 조사부위를 잘 세척하였다. 조사 후 조사부위에 1일 3회씩 미백성분을 함유하는 <제형예 1-1> 내지 <제형예 1-18>을 도포하였다. 3주간 도포한 후에 색소 침착도를 육안으로 판정하여, 상기 제형예가 대조군에 비해 색소침착을 억제한 정도를 현저한 효과, 유효, 무효의 3단계로 평가하였으며, 아울러 피부 부작용 발생여부를 관찰한 후 그 결과를 표 7에 나타내었다.

본 발명의 조성물의 적용 결과

실험물질	현저한 효과(명)	유효(명)	무효(명)	부작용
제형예 1	6	10	4	0
제형예 2	4	11	5	0
제형예 3	4	10	6	0
제형예 4	6	9	5	0
제형예 5	4	10	6	0
제형예 6	3	9	8	0
제형예 7	7	10	3	0
제형예 8	5	9	6	0
제형예 9	3	10	7	0
제형예 10	6	10	4	0
제형예 11	3	10	7	0
제형예 12	3	9	8	0
제형예 13	5	10	5	0
제형예 14	4	10	6	0
제형예 15	4	9	7	0
제형예 16	4	12	4	0
제형예 17	3	11	6	0
제형예 18	3	11	6	0

상기 표 7에 기재한 바와 같이, 본 발명에 따른 미백성분을 함유하는 피부미백용 조성물을 피시험자 20명 중에서 최소 12명 이상에 대하여 미백효과를 나타내었다.

상기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물은 멜라닌 생성 및 티로시나제 활성을 억제함으로써 탁월한 미백 효과가 있으므로 미백용 화장료 조성물, 식품 조성물 또는 약학적 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있다.

도 1은 육두구 에탄올 추출물이 멜라닌 생성을 억제하는 활성이 있는지 여부를 확인한 결과이다.

도 2는 메이스리그난 화합물이 멜라닌 생성을 억제하는 활성이 있는지 여부를 확인한 결과이다.

도 3은 육두구 에탄올 추출물이 멜라닌 생성에 관여하는 효소인 티로시나제 활성을 억제하는지 여부를 확인한 결과이다.

도 4는 메이스리그난 화합물이 멜라닌 생성에 관여하는 효소인 티로시나제 활성을 억제하는지 여부를 확인한 결과이다.

도 5는 육두구 에탄올 추출물이 티로시나제 및 티로시나제 관련 단백질(TRP-1, TRP-2) 발현을 억제하는 활성이 있는지를 확인한 결과이다.

도 6은 메이스리그난 화합물이 티로시나제 및 티로시나제 관련 단백질(TRP-1, TRP-2) 발현을 억제하는 활성이 있는지를 확인한 결과이다.

Claims

하기 화학식 1 내지 화학식 3으로 이루어진 군에서 선택된 리그난계 화합물 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
하기 화학식 1의 메이스리그난 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 식품 조성물.

<화학식 1>
하기 화학식 1의 메이스리그난 또는 이를 함유하는 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 미백용 약학적 조성물.

<화학식 1>
제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 육두구 추출물 또는 육두구 가종피 추출물은 물, C1-C6의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매에 의한 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제4항에 있어서, 상기 C1-C6의 유기용매는 C1-C6의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane), 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택된 것임을 특징으로 하는 조성물.