JP5177338B2 - Ｌ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液 - Google Patents

Description

本発明は、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを含有するリポソーム液に関し、さらに詳しくは、リポソーム中にＬ−アスコルビン酸グルコシドを内包する化粧料に関する。

リポソームは、脂質二分子膜から成り、その内部に水層を有する閉鎖小胞体であり、リポソームは広くバイオサイエンスの基礎、応用の分野で利用、検討されている。リポソームは生体膜と類似の成分であるリン脂質から構成されているため、細胞膜に結合しやすく、皮膚に塗布した場合、水分や種々の薬効成分を角質層に運搬できる。また、リポソーム中に内包されることによって、本来、不安定で失活しやすい薬効成分を長期間安定に保つことができる。

アスコルビン酸及びその誘導体は、化粧料に美白剤として配合されている。Ｌ−アスコルビン酸（以下、「アスコルビン酸」と記載する）は、メラニン生成過程の代謝中間体であるドーパキノンからドーパクロムへの変換反応を抑制することで、メラニンの生成を抑制し、生成した有色の酸化型メラニンを無色の還元型メラニンに変換する作用を有しており、皮膚への美白効果、しみ、そばかす、黒皮症、肝班等の治療や改善に有効である。しかし、アスコルビン酸は化学的に不安定な化合物であるため、各種のアスコルビン酸誘導体が開発されている。特に各種アスコルビン酸誘導体の中でも、安定性、持続性、また化粧料への配合特性にも優れており、美白効果を有するＬ−アスコルビン酸グルコシドが注目されている。しかしながらアスコルビン酸誘導体によっては皮膚に対する即効的な浸透性がやや悪い場合もあり、化粧料に用いた場合、誘導体の種類によっては刺激性がある、水相と油相の相溶性に劣るものもあり、また配合成分やｐＨの影響により、経時的に着色を生じることもあり、さらに使いやすい化粧料が求められていた。例えばアスコルビン酸グルコシド、レシチンおよびキレート剤を用いた化粧料が開示されている（例えば特許文献１）。この化粧料はＬ−アスコルビン酸グルコシドのもつ持続性を保持したまま、経時的な着色の問題は改善されているものの、即時浸透性については満足な結果は得られなかった。特に、日焼けした後に衣服や水着等で覆われて日焼けしない部分と覆われていない部分で日焼けした部分との境目は色目が大きく異なり目立つため、後処理剤の開発が望まれていたのだが、従来の美白剤は日焼け部分も日焼けしていない部分も同様に美白してしまうため、境目がいつまでも残るものであった。
特開２００２−２６５３４４号公報

これらの問題点を解決するため、アスコルビン酸類を脂肪酸モノグリセリドからなるラメラ構造体に内包した皮膚外用剤が開示されている（例えば特許文献２）。更に、アスコルビン酸やその誘導体を含有するリポソームについて、これまで検討がなされてきた。例えばアスコルビン酸類をリン脂質リポソームに内包した美白化粧料が開示されている（例えば特許文献３）。また、臨界あるいは亜臨界状態の炭酸ガス、更に低級アルコール等の溶解剤を併用してアスコルビン酸類をリポソームに内包し、安定化する方法が開示されている（例えば特許文献４）。
特開２００２−１４５７５１号公報 特開昭５６−１２０６１２号公報 特開２００３−１１９１２０号公報

しかし、特許文献３記載のものでは、日焼けの境目など局所的に美白効果を期待する場合、局所特異的な効果が得られにくく、処方自体の安定性が悪く、着色や臭気等に問題があるため、化粧品の配合処方が制限される等の問題があった。また、特許文献４記載のものでは、着色や臭気等が強く、化粧品の配合処方が制限されるなどの欠点があった。

また、通常リポソームを製造する上で、グリセリン等の多価アルコールやエタノール等の有機溶剤を使用することがあるが、グリセリン等の多価アルコールが残存すると、べたつきの原因となり、使用上好ましくない場合があった。また、エタノール等の揮発性溶剤を使用した場合でも残存すると、配合上制限されるなどの問題があった。

本発明は、より即時浸透性に優れ、美白効果が高く、また各種配合剤への配合特性に優れ、配合剤の影響による経時的に着色や臭いが生じにくく、種々の配合形態で使用できるＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液およびリポソーム含有化粧料を提供することを目的とする。

すなわち本発明は、下記（１）〜（４）に掲げるＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液、（５）に掲げる美白用化粧料、および（６）に掲げるアフターサンローションである。
（１） リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン含量が７０重量％以上であり、リン脂質１重量部に対してＬ−アスコルビン酸グルコシドが０．１〜１重量部配合されているリポソーム液であって、前記リポソーム液に対してリン脂質の占める割合が０．１〜２０重量％であり、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドの内包率が５０重量％以上であり、かつ前記リポソームの平均粒径が１００〜８００ｎｍである、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液。
（２） リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン中のアシル基の不飽和脂肪酸の割合が７０％以上である、請求項１記載のＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液。
（３） リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン中のアシル基のリノール酸の割合が５０％以上である、請求項１または２記載のＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液。
（４） リポソームの平均粒径が１００〜３００ｎｍである請求項３記載のＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液。
（５） 請求項１〜４のいずれか１項に記載のＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液を５０重量％以下含有する美白用化粧料。
（６） 請求項１〜４のいずれか１項に記載のＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液５０重量％以下含有するアフターサンローション。

本発明によれば、リポソーム中にアスコルビン酸誘導体を内包するリポソーム複合体を化粧料に含有することにより、アスコルビン酸誘導体の美白効果をより高めた、また経時的に着色や臭いが生じにくい化粧料を提供する。本発明は、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドをリン脂質のホスファチジルコリン純度が高く、さらにリン脂質のアシル基の不飽和脂肪酸含有量の高い特定のリポソームに配合し、粒径を制御することにより、特に日焼け後の荒れた肌への浸透性が良好であるため、日焼け後の水着等のあとを残さないアフターサンローションへの適用がより効果的である。本発明は、日焼け後の皮膚への色素沈着やしみ、そばかす、肝班等の淡色改善効果に優れ、美白効果にも優れた化粧料を提供する。

本発明のリポソームに内包されるＬ−アスコルビン酸グルコシドは、アスコルビン酸とグルコースを糖転移酵素により酵素反応にて生成された化合物である。具体例としては、α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸である２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸が安定性の点から優れており、特に好ましくは２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸である。

本発明のＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液は、リン脂質とリポソームに内包させる水溶性物質を公知の技術により混合させることにより得られる。例えば、超音波処理法、フレンチプレス法、逆相蒸発法、界面活性剤法、エクストルージョン法、マントンゴーリン法、カルシウム−ＥＤＴＡキレート法、凍結融解法、分散液を１５０ＭＰａ以上の圧力下でジェット流として噴射し、噴射口に対して配置された壁面に該ジェット流を衝突させて、上記ジェット流の方向と実質的に対向する方向に反転させる方法、増圧ポンプにより圧力波形がフラットで定圧に加圧された試料を超高圧でチャンバー内に入れ細管部を高速通過させ、強力な剪断力を受け、さらに合流部で加速された流体どうしが正面衝突することにより強い衝撃を受け、拡大部で圧力降下により強力なキャビテーションを受けることによって、リポソームを得る方法（マイクロフルイダイザー法）、真空乳化機を用いてリポソームを得る方法、高圧ホモミキサーを用いてリポソームを得る方法、等から目的に応じて選択することができる。

本発明のリポソームを構成するリン脂質は、分子内にリン酸基とアシル基及び／又はアルキル基からなる疎水基を２個以上有する化合物であり、例えば、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、スフィンゴミエリン（ＳＰＭ）、カルジオリピン、及びこれらの混合物である大豆レシチン、コーンレシチン、綿実油レシチン、卵黄レシチンなどの天然レシチンおよび水素添加大豆レシチン、水素添加卵黄レシチン、これらのリン脂質にポリエチレングリコールやアミノグリカン類を導入したリン脂質誘導体などが挙げられ、これらのうち、１種又は２種以上が混合して用いられる。

ここで、リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン含量を７０％以上とすることによって、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソームが安定的に調製でき、即時浸透性を付与することで、アスコルビン酸グルコシドの持つ美白効果をより一層高めることが可能となる。また、経時による着色や臭いが抑えられ、化粧品材料として汎用可能となるという点で産業上きわめて有用となる。リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン含量が７０％より少ないと、着色や臭いなどの問題があり、リポソームの安定性が悪くなるため、好ましくない。

本発明の前記観点からは、リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン含量を７５％以上とすることが更に好ましい。

リン脂質中のホスファチジルコリンを構成するアシル基は、炭素数８〜２２の不飽和脂肪酸の残基からなるアシル基であることが好ましく、例えば2-ラウロレイン酸、リンデル酸、トウハク酸、5-ラウロレイン酸、11-ラウロレイン酸、ツズ酸、5-ミリストレイン酸、ミリストレイン酸、2-パルミトレイン酸、7-パルミトレイン酸、cis-9-パルミトレイン酸、trans-9-パルミトレイン酸、ペトロセリン酸、ペトロセエライジン酸、cis-7-オクタデセン酸、trans-7-オクタデセン酸、cis-8-オクタデセン酸、trans-8-オクタデセン酸、オレイン酸、エライジン酸、バセニン酸、ゴンドイン酸、trans-ゴンドイン酸、エルシン酸、ブラシン酸、リノール酸、リノエライジン酸、α-エレオステアリン酸、β-エレオステアリン酸、リノレン酸、リノレンエライジン酸、プソイドエレオステアリン酸、α-パリナリン酸、β-パリナリン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸等の直鎖不飽和カルボン酸由来のアシル基が挙げられ、好ましくはリノール酸、オレイン酸、リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸由来のアシル基である。

特に、アシル基の中の不飽和脂肪酸含有率が７０重量％以上であると、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドの美白効果をより高めることができる。また、リノール酸含有率が５０重量％以上であると、不飽和脂肪酸含有率が７０重量％未満であっても、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドの美白効果をより一層高めることができる。特に好ましくは、アシル基の中の不飽和脂肪酸含有率が７０重量％以上であり、リノール酸含有率が５０重量％以上である。

本発明のＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液の中に占めるリン脂質の割合は、０．１〜２０重量％が好ましく、また、リン脂質とＬ−アスコルビン酸グルコシドとの配合比は、美白効果や保存時の安定性等の面から、リン脂質１重量部に対し、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド０．１〜１重量部が好ましい。リン脂質１重量部に対し、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドが０．１重量部より少ないと美白効果が充分ではなく、１重量部より多くなるとリポソームの調製が困難となる。

本発明のリポソームの平均粒径は１００〜８００ｎｍであることが望ましく、より好ましくは１００〜３００ｎｍが望ましい。平均粒径が１００ｎｍより小さくなると、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを充分にリポソーム中に含有できず、リポソームの美白効果を充分に得られなくなり、８００ｎｍより大きくなると、皮膚からの吸収率が悪くなり、リポソームの美白効果を充分に得られなくなる。また、リポソームが相分離や凝集を起こし易く、保存中又は皮膚滞留中に不安定となる。

本発明のリポソームにおけるＬ−アスコルビン酸グルコシドの配合比はリン脂質1重量部に対して０.１〜1重量部が好ましいが、さらにこの時配合したＬ−アスコルビン酸グルコシドがリポソーム内に内包される内包率は５０重量％以上であることが望ましい。ここでいう内包率とは、リポソーム液に含有されるＬ−アスコルビン酸グルコシドの総量に対して、リポソームの中に内包されたＬ−アスコルビン酸グルコシドの割合を意味する。例えば、リン脂質1重量部に対し、０．６重量部のＬ−アスコルビン酸グルコシドを配合した時、０．６重量部のＬ−アスコルビン酸グルコシドのうち０．３重量部以上のＬ−アスコルビン酸グルコシドがリポソームに内包されていることが望ましい。この内包率は、ゲルろ過カラムを用いてリポソームに内包されなかったＬ−アスコルビン酸グルコシドを分離除去した後、メタノールとクロロホルムおよび水とを加えて、リン脂質をクロロホルムにＬ−アスコルビン酸グルコシドをメタノール、水混液に抽出して定量を行うことにより求めることができる。また、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドは逆相カラムを用いたＨＰＬＣ法（ＵＶ検出波長２４０ｎｍ）により定量することができる。リポソームへのＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率が５０重量％以上より少なくなると、日焼けした皮膚に対する美白効果が薄くなり、日焼けした部分と日焼けしていない部分の境目が消えにくくなるので、好ましくない。

本発明のリポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン含量は７０％以上であり、リン脂質の相転移温度以上の温度で製造を行うことにより、２種以上のリン脂質を混合する場合においても製造工程には有機溶剤を使用せずに均一で安定なリポソームを得ることができる。そのため、有機溶剤除去工程が不必要であり、工業的には極めて有利である。また製造されたリポソームが有機溶剤等の余分な配合物を含まないため、配合の自由度が大きいものである。本発明のリポソームは（Ａ）リン脂質０．１〜２０重量％に対して、水８０〜９９．９重量％を加え、リン脂質の相転移温度以上の温度で乳化させる工程、（Ｂ）Ｌ−アスコルビン酸グルコシド水溶液と（Ａ）で得られた乳化液とを混合する工程から製造することができる。

本発明のリポソームを、既存の製剤に混合することで、化粧料を調製することが出来る。含有させる方法としては、製剤の最終段階で混合しても良く、製剤の途中、例えば、水相を添加する際に、混合しても良い。混合条件は、通常の化粧料を製造する条件がそのまま適用できる。本発明によるリポソーム中にＬ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソームは、既存の製剤に混合してもリポソームが安定に保たれ、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドの安定性が損なわれることがない。

なお、本発明のリポソーム液を含有する化粧料には、化粧料に常用されている添加剤として、アルコール、水性基剤、油性基剤、界面活性剤、顔料、色素、ｐＨ調製剤、防腐剤、殺菌剤、キレート剤、抗酸化剤、紫外線吸収剤、動植物由来の天然エキス、香料、無機塩等を本発明の性能を損なわない範囲で配合することも可能である。

本発明で本リポソーム液が配合できる化粧料の剤形は、医薬品、医薬部外品及び化粧品に通常用いられる剤形、すなわち剤形としては、液状、ゲル状、ペースト状、クリーム状などの形態に適用可能である。

さらに本リポソーム液を凍結乾燥、噴霧乾燥などの公知の手段により水分を除去した後に配合することによって、粉末状あるいは固状などの形態に適用可能であり、これらの形態に特に限定されるものではない。本発明は、このように請求項１〜４のいずれか一つの請求項に記載のリポソーム液を乾燥して得られた粉体をも提供する。この粉体においては、リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン含量が７０重量％以上であり、リン脂質１重量部に対してＬ−アスコルビン酸グルコシドが０．１〜１重量部配合されており、リポソームの平均粒径が１００〜８００ｎｍである。好ましくは、リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン中のアシル基の不飽和脂肪酸の割合が７０％以上であり、および／または、リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン中のアシル基のリノール酸の割合が５０％以上であり、および／または、リポソームの平均粒径が１００〜３００ｎｍである。

本発明は、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドをリン脂質のホスファチジルコリン純度が高く、リン脂質のアシル基の不飽和脂肪酸含有量の高い特定のリポソーム処方に配合し、さらに粒径を制御することにより、特に日焼け後の荒れた肌への浸透性が良好であり、日焼けしていない、荒れていない肌へは浸透しにくいリポソーム処方としているため、日焼け後の水着等のあとを残さないアフターサンローションへの適用がより効果的である。本発明により、日焼け後の皮膚への色素沈着やしみ、そばかす、肝班等の淡色改善効果に優れ、美白効果にも優れた化粧料を提供することができる。

以下、実施例に基づき本発明を更に詳しく説明する。
（実施例１）
［Ｌ−アスコルビン酸グルコシド内包リポソームの調製］
精製水８４．９ｇに未水素添加大豆レシチン（日本油脂（株）製、ＣＯＡＴＳＯＭＥ ＮＣ−２０）１０ｇ（ホスファチジルコリン純度９２．６％、不飽和アシル基含有量８０．５％、このうちリノール酸アシル基６５．２％、脂肪酸組成の詳細は表１を参照）、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド（２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸）５ｇ、ｄｌ−α−トコフェロール０．１ｇを添加し、ポリトロン（キネマティカ製、ロータ・ステータ式ホモジナイザー）を用い回転数２０，０００ｒｐｍ、室温で１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液をＤｅＢＥＥ２０００（ビーイーイーインターナショナル製、超高圧乳化分散破砕機）にて、圧力１０，０００ｐｓｉで５回微粒子化処理を施し、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド内包リポソーム（粒径１８３ｎｍ）を得た。このとき、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率はゲルろ過法により測定した結果、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率は８０％であった。

ここで、内包率の測定方法について説明する。ゲルろ過カラム（担体：ファルマシア、セファデックスＧ５０；カラム直径１６ｍｍ；カラム高さ３００ｍｍ）を通してリポソーム複合体をゲルろ過し、溶出液を分画した（２．５ｍＬ／分画）。各分画より０．８ｍＬを採取し、メタノール２ｍＬを加えて攪拌した後、クロロホルム１ｍＬを加えて攪拌し、いったん全体を透明に溶解させた。これにクロロホルム１ｍＬを加えて攪拌し、更に蒸留水１．２ｍＬを加えて攪拌後、冷却遠心分離機（久保田商事（株）製ＫＲ−７０２型）にて遠心分離（３，５００ｒｐｍ、１０分間、室温）し、分離した二層の上層（水及びメタノール相）に回収されるＬ−アスコルビン酸グルコシド量を高速液体クロマトグラフィーにより測定した（カラム：和光純薬工業、Wakosik-II 5C18 HG 4.6mm×250nm、カラム温度：35℃、移動相：0.02M リン酸二水素カリウム（2.722g／L）-水（pH2.0）、流速：1.0mL／min）。

（実施例２）
［Ｌ−アスコルビン酸グルコシド内包リポソームの調製］
水素添加大豆レシチン（日本油脂（株）製、ＣＯＡＴＳＯＭＥ ＮＣ−６１）１０ｇ（ホスファチジルコリン純度７５．３％、不飽和アシル基なし、このうちリノール酸アシル基なし、脂肪酸組成の詳細は表２参照）を用いて、実施例１と同様の方法でリポソームを調製した（粒径２２０ｎｍ）。このとき、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率はゲルろ過法により測定した結果、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率は７５％であった。

（実施例３）
［Ｌ−アスコルビン酸グルコシド内包リポソームの調製］
水素添加大豆レシチン（日本油脂（株）製、ＣＯＡＴＳＯＭＥ ＮＣ−２１）１０ｇ（ホスファチジルコリン純度９５．１％、不飽和アシル基なし、リノール酸アシル基なし）にジエチルエーテル／エタノール混合溶液（９／１、ｖ／ｖ）１０００ｍｌを加え溶解した後、水を２００ｍｌ添加し、マグネチックスターラーで攪拌後、ソニケーターで超音波処理を３０分間行った。その後、ロータリーエバポレーターでジエチルエーテルおよびエタノールを留去し、濃度調整後エクストルーダーを用いてポリカーボネート製のフィルター（孔径０．６μｍ）で濾過してリポソームを調製した（粒径５０４ｎｍ）。このとき、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率はゲルろ過法により測定した結果、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率は７８％であった。

（比較例１）
精製水９５ｇにＬ−アスコルビン酸グルコシド（２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸）５ｇ加え、マグネティックスターラーにて攪拌し、溶解させた。

（比較例２）
［Ｌ−アスコルビン酸グルコシド内包リポソーム複合体の調製］
精製水７９．９ｇに水素添加大豆レシチン（日本油脂（株）製、ＣＯＡＴＳＯＭＥ ＮＣ−２１）１０ｇ（ホスファチジルコリン純度９５．１％、不飽和アシル基なし、リノール酸アシル基なし）、ｄｌ−α−トコフェロール０．１ｇを添加し、ポリトロン（キネマティカ製、ロータ・ステータ式ホモジナイザー）を用い回転数２０，０００ｒｐｍ、室温で１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液をＤｅＢＥＥ２０００（ビーイーイーインターナショナル製、超高圧乳化分散破砕機）にて、圧力１０，０００ｐｓｉで５回微粒子化処理を施し、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを含まない空のリポソームを得た。そこへ、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド（２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸）５ｇを添加し、マグネチックスターラーで３０分間攪拌した。このときのリポソームの粒径は２４７ｎｍであった。また、リポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率はゲルろ過法により測定した結果、１％であった。

（比較例３）
［Ｌ−アスコルビン酸グルコシド内包リポソーム複合体の調製］
精製水７９．９ｇに水素添加大豆レシチン（日光ケミカルズ製、レシノールＳ−１０）１０ｇ（ホスファチジルコリン純度３１．８％、不飽和アシル基なし、リノール酸アシル基なし）、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド（２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸）５ｇ、ｄｌ−α−トコフェロール０．１ｇを添加し、ポリトロン（キネマティカ製、ロータ・ステータ式ホモジナイザー）を用い回転数２０，０００ｒｐｍ、室温で１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液をＤｅＢＥＥ２０００（ビーイーイーインターナショナル製、超高圧乳化分散破砕機）にて、圧力１０，０００ｐｓｉで５回微粒子化処理を施し、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド内包リポソーム（粒径１６１ｎｍ）を得た。このとき、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率はゲルろ過法により測定した結果、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率は６８％であった。

（比較例４）
［Ｌ−アスコルビン酸グルコシド内包リポソーム複合体の調製］
精製水７９．９ｇに未水素添加大豆レシチン（日本油脂（株）製、ＣＯＡＴＳＯＭＥ ＮＣ−２０）１０ｇ（ホスファチジルコリン純度９２．６％、不飽和アシル基含有量８０．５％、このうちリノール酸アシル基６５．２％）、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド（２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸）５ｇ、ｄｌ−α−トコフェロール０．１ｇを添加し、ポリトロン（キネマティカ製、ロータ・ステータ式ホモジナイザー）を用い回転数２０，０００ｒｐｍ、室温で１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した（粒径６０４ｎｍ）。このとき、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率はゲルろ過法により測定した結果、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドを内包するリポソーム中のＬ−アスコルビン酸グルコシドの内包率は1６％であった。

（実施例１〜３および比較例１〜４）
（化粧料の評価）
上記実施例および比較例で得たＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム分散液を使用して表３に示す化粧水である化粧料を調製した。調製方法はプロペラミキサーを用いた。但し、添加成分として表３に示す４成分を共通添加成分として使用した。
（１）モルモットを用いたメラニン生成抑制効果
褐色モルモットを用いてｉｎ
ｖｉｖｏにおけるメラニン生成抑制効果の評価を行った。すなわち、褐色モルモットの背部を剃毛し、５×１０ｃｍの長方形の穴を開けた紫外線遮蔽版で覆い、紫外線を照射した（０．５Ｊ／ｃｍ²）。色素沈着が形成された後、表１の化粧料５０μＬを１日２回塗布した。そして、塗布前と塗布後２０日後及び４０日後の黒化の度合いを色差計（ミノルタ製、分光測色計ＣＭ−２６００ｄ）にて測定した。結果を表３に示す。

（２）美白効果
２０名の女性（２５才〜４０才）をパネラーとし、１日朝晩２回ずつ２ヶ月間、表３の化粧料を使用し、その後の皮膚の「シミ」、「ソバカス」の改善度を肉眼で下記のように判定し、２０名の平均値を求めて、平均値７点以上を美白効果の高い皮膚外用剤であると評価した。結果を表３に示す。
１０点：明らかに有効であると判断された場合。
５点：やや効果が有ると判断された場合。
０点：全く効果が無いと判断された場合。

２０名の女性（２５才〜４０才）をパネラーとし、右腕上腕部に絆創膏を貼付し、夏の海岸で４時間日光浴を行った後、絆創膏をはがし、１日朝晩２回ずつ５日間、表３の化粧料を絆創膏のはがした部分に塗布した。絆創膏のはがした部分のきわ部分について、日焼けあとの改善度を肉眼で下記のように判定した。
○：日焼けあとが目立たない
×：日焼けあとが残っている

（３）経時安定性（着色度合い）
化粧料を透明ガラス容器に密封して０℃、２５℃および４０℃で３ヶ月間保存し、その外観を観察して、下に示す３段階で評価した。結果を表４に示す。
○：安定性良好（いずれの温度でも外観の変化がない。）
△：安定性やや不良（いずれかの温度において、やや着色を生じる。）
×：安定性不良（いずれかの温度においてより、着色を生じる。）

（４）経時安定性（におい）
化粧料を透明ガラス容器に密封して０℃、２５℃および４０℃で３ヶ月間保存し、そのにおいを２０名の女性（２５才〜４０才）をパネラーとし、下に示す２段階で評価した。結果を表３に示す。
○：２０名中４名以下のパネラーがにおいが強くなっていると感じた。
×：２０名中５名以上のパネラーがにおいが強くなっていると感じた。

（５）経時安定性（沈殿度合い）
化粧料を透明ガラス容器に密封して０℃、２５℃および４０℃で３ヶ月間保存し、その外観を観察して、下に示す２段階で評価した。結果を表４に示す。
○：安定性良好（いずれの温度でも外観の変化がない。）
×：安定性不良（いずれかの温度においており、沈殿を生じるまたは分離する。）

注１；２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸（（株）林原生物化学研究所製）
注２；ΔＬ*：色差計のＬ*値（明度）で、照射前を０としてＵＶ照射後のＬ^*値との差を黒化度とした。すなわち、値の低い方が黒化度は高い。

表３、表４より、本発明の化粧水である化粧料（実施例１〜３）は比較例１〜４と比較して褐色モルモットのメラニン生成を顕著に抑制することが判り、いずれも美白効果に優れるとともに、経時安定性にも優れていた。一方、比較例１〜４では、これらの効果すべてにおいて十分な性能が得られていない。つまり、比較例１〜４ではＬ−アスコルビン酸グルコシドをリン脂質のホスファチジルコリン純度が高く、リン脂質のアシル基の不飽和脂肪酸含有量が高い特定のリポソーム処方に配合し、さらに粒径を制御していないため、美白効果および経時安定性の双方を満足する十分な性能が得られていない。

（実施例４）
（エモリエントクリーム）
（処方）
油相 重量％
モノステアリン酸ポリオキシエチレン４０ ２．０
自己乳化型モノステアリン酸グリセリル ５．０
ステアリン酸 ２．０
セタノール ２．０
スクワラン １２．０
マカデミアナッツ油 ４．０
メチルポリシロキサン ０．２
防腐剤 適量
水相
１，３−ブタンジオール ７．０
精製水 残部
リポソーム
実施例３のリポソーム ５０．０

（調製法）
油相、水相ともに８０℃で加温溶解し、水相を油相に攪拌しながら徐々に加えて乳化する。更に攪拌を続けて冷却し、４０℃以下でリポソームを添加、更に攪拌して均一混合した。

（実施例５）
乳液
（処方）
油相 重量％
モノステアリン酸ポリオキシエチレン２０ソルビタン １．０
テトラオレイン酸ポリオキシエチレン４０ソルビトール ０．５
モノステアリン酸ソルビタン １．０
ステアリン酸 ０．５
ベヘニルアルコール ０．５
ミツロウ ０．５
スクワラン １０．０
トリイソオクタン酸グリセリル １０．０
デカオレイン酸デカグリセリル ３．０
１，３−ブタンジオール ７．０
防腐剤 適量
水相
キサンタンガム ０．０４
トリエタノールアミン ０．０５
精製水 残部
リポソーム
実施例３のリポソーム ５０．０
（調製法）
実施例４の方法に従って調製した。

これら実施例４〜５について、実施例１〜３と同様に（１）モルモットを用いたメラニン生成抑制効果、および（２）美白効果の試験を行った。試験結果を表５に示す。

表５の結果からわかるように、実施例４および実施例５では、褐色モルモットのメラニン生成を顕著に抑制し、いずれも美白効果に優れる効果が認められた。

Claims (4)

1. リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン含量が７０重量％以上であり、リン脂質１重量部に対してＬ−アスコルビン酸グルコシドが０．１〜１重量部配合されているＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液であって、前記リポソーム液に対してリン脂質の占める割合が０．１〜２０重量％であり、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドの内包率が５０重量％以上であり、かつ前記リポソームの平均粒径が１００〜８００ｎｍである、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液であって、前記リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン中のアシル基に占める不飽和脂肪酸の割合が７０％以上であるとともに、前記リポソームを構成するリン脂質中のホスファチジルコリン中のアシル基に占めるリノール酸の割合が５０％以上であり、かつ、多価アルコール及びエタノールを含まない、Ｌ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液。
2. 前記リポソームの平均粒径が１００〜３００ｎｍである、請求項１に記載のＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液。
3. 請求項１又は２に記載のＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液を５０重量％以下含有する、美白用化粧料。
4. 請求項１又は２に記載のＬ−アスコルビン酸グルコシド含有リポソーム液を５０重量％以下含有する、アフターサンローション。