JPWO2006118246A1 - 経皮吸収促進剤 - Google Patents

Abstract

本発明の課題は、様々な活性成分を経皮吸収させるための経皮吸収促進剤を提供することである。これまで外用医薬品や化粧品の基材として利用されてきたリオトロピック液晶を有効成分とする本発明の経皮吸収促進剤によれば、高分子物質や水溶性物質の経皮吸収性を向上することができる。

Description

本発明は、様々な活性成分を経皮吸収させるための経皮吸収促進剤に関する。

経皮投与は、経口投与や注射による投与に比較して簡便であり、効力の持続性や副作用発現の軽減などの利点も考えられることから優れた投与方法である。しかしながら、経皮投与によって活性成分を体内に浸透させるためには、活性成分を生体の一次バリアを構成する皮膚を透過させなければならないことから、その生物学的利用能（薬物が血流に吸収される量）は本来的に低いものである。従って、活性成分の生物学的利用能の改善を図るために、ジプロピレングリコール、ヘキシレングリコール、イソパラフィン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアルコールのエチレンオキサイド付加物、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、炭酸プロピル、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、尿素、乳酸、乳酸ナトリウム、レシチン、ジメチルスルホキシド、ピロリドンカルボン酸エステル、ニコチン酸エステル、Ｎ−メチルプロリンエステル、オレイン酸コレステリルエステル、アミンオキサイドなどを経皮吸収促進剤として外用製剤に配合することが行われる。

本発明者らは、これまでに活性成分を経皮吸収させるための研究開発を精力的に行ってきており、その成果として、角化細胞（ケラチノサイト）の分化・増殖を促進させることで皮膚の再生を促進させる作用を有するレチノイン酸を、ナノメートルオーダーのカプセル（ナノ粒子）に封入して皮膚表面に塗付することにより、上記のような経皮吸収促進剤を配合することなくレチノイン酸を効率的かつ徐放的に経皮吸収させることができることを見出している（非特許文献１および非特許文献２）。
経皮デリバリーのための新規ナノテクノロジー、山口葉子、Ｂｉｏベンチャー、第４巻、第６号、６２頁−６４頁、２００４年 Y.Yamaguchi, T.Nagasawa, N.Nakamura, M.Takenaga, M.Mizoguchi, S.Kawai, Y.Mizushima, R.Igarashi, Successful treatment of photo-damaged skin of nano-scale atRA particles using a novel transdermal delivery, 104, 29-40, 2005

上記のレチノイン酸封入ナノ粒子は、レチノイン酸が有する皮膚に対する刺激が少なく、レチノイン酸を経皮吸収させる方法として臨床応用が期待されるところであるが、様々な活性成分を経皮吸収させるための方法の探求は意義のあることである。
そこで本発明は、様々な活性成分を経皮吸収させるための経皮吸収促進剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記の点に鑑みて鋭意検討を重ねた結果、外用医薬品や化粧品の基材として公知であるリオトロピック液晶（例えば特許第２５４７１５１号や特許第３４５９２５３号など）が様々な活性成分に対して経皮吸収促進作用を有することを見出した。

上記の知見に基づいてなされた本発明の経皮吸収促進剤は、請求項１記載の通り、リオトロピック液晶を有効成分とすることを特徴とする。
また、請求項２記載の経皮吸収促進剤は、請求項１記載の経皮吸収促進剤において、リオトロピック液晶が界面活性剤５重量％〜８０重量％と水５重量％〜８０重量％を含むものであることを特徴とする。
また、請求項３記載の経皮吸収促進剤は、請求項２記載の経皮吸収促進剤において、界面活性剤が非イオン性界面活性剤および／またはレシチンであることを特徴とする。
また、請求項４記載の経皮吸収促進剤は、請求項３記載の経皮吸収促進剤において、非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油から選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする。
また、請求項５記載の経皮吸収促進剤は、請求項２記載の経皮吸収促進剤において、リオトロピック液晶がさらに油分１重量％〜８０重量％を含むものであることを特徴とする。
また、請求項６記載の経皮吸収促進剤は、請求項５記載の経皮吸収促進剤において、油分がスクアランであるであることを特徴とする。
また、請求項７記載の経皮吸収促進剤は、請求項２記載の経皮吸収促進剤において、リオトロピック液晶がさらに多価アルコール１重量％〜５５重量％を含むものであることを特徴とする。
また、請求項８記載の経皮吸収促進剤は、請求項７記載の経皮吸収促進剤において、多価アルコールがグリセリンであることを特徴とする。
また、請求項９記載の経皮吸収促進剤は、請求項２記載の経皮吸収促進剤において、リオトロピック液晶がさらに補助界面活性剤０．０１重量％〜１０重量％を含むものであることを特徴とする。
また、請求項１０記載の経皮吸収促進剤は、請求項９記載の経皮吸収促進剤において、補助界面活性剤がコレステロールであることを特徴とする。
また、本発明の経皮吸収組成物は、請求項１１記載の通り、リオトロピック液晶に活性成分が配合されてなることを特徴とする。
また、請求項１２記載の経皮吸収組成物は、請求項１１記載の経皮吸収組成物において、活性成分が有機化合物、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡから選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする。
また、請求項１３記載の経皮吸収組成物は、請求項１１記載の経皮吸収組成物において、活性成分が分子量が１０００以上の高分子物質または水溶性物質であることを特徴とする。
また、請求項１４記載の経皮吸収組成物は、請求項１１記載の経皮吸収組成物において、活性成分が２価金属無機酸塩微粒子の内部に封入された形態で配合されてなることを特徴とする。
また、請求項１５記載の経皮吸収組成物は、請求項１１記載の経皮吸収組成物において、活性成分がリオトロピック液晶に対して重量比で０．０１％〜５０％配合されてなることを特徴とする。

本発明によれば、これまで外用医薬品や化粧品の基材として利用されてきたリオトロピック液晶の新規な医薬用途としての経皮吸収促進剤が提供され、本発明の経皮吸収促進剤は、様々な活性成分を経皮吸収させることができる。

実施例１における血中レチノイン酸濃度の変化を示すグラフである。 実施例２における４種類のサンプルをそれぞれ塗付した際のＨＢ−ＥＧＦ産生量の変化を示すグラフである。 実施例３における４種類のサンプルをそれぞれ塗付した際のＨＢ−ＥＧＦ産生量の変化と何も塗布していない皮膚のＨＢ−ＥＧＦ産生量を示すグラフである。 実施例４における５種類のサンプルをそれぞれ塗付した際の皮膚の断面写真と何も塗布していない皮膚の断面写真である。 実施例５における血中インスリン濃度の変化を示すグラフである。 実施例６における投与量に対する全血中のナイアシンアミドの割合の経時変化を示すグラフである。 実施例７における５種類のサンプルのレチノイン酸の残存率の経時変化を示すグラフである。 実施例８における４種類のサンプルのレチノールパルミテートの残存率の経時変化を示すグラフである。 実施例９におけるＳＯＤを配合したリオトロピック液晶を塗付した皮膚の断面写真である。 同、ＳＯＤを水に分散させた分散液を塗付した皮膚の断面写真である。 同、水だけを塗付した皮膚の断面写真である。 実施例１０における６種類のサンプルをそれぞれ塗布した際の皮膚の断面写真である。 実施例１１におけるＦＩＴＣで蛍光ラベルしたオリゴＤＮＡを配合したリオトロピック液晶を塗付した皮膚の蛍光断面写真である。 同、ＦＩＴＣで蛍光ラベルしたオリゴＤＮＡを水に分散させた分散液を塗付した皮膚の蛍光断面写真である。 実施例１２におけるＦＩＴＣで蛍光ラベルしたデキストラン（分子量４０００）を配合したリオトロピック液晶を塗付した皮膚の蛍光断面写真である。 実施例１３におけるＦＩＴＣで蛍光ラベルしたデキストラン（分子量７００００）を配合したリオトロピック液晶を塗付した皮膚の蛍光断面写真とＦＩＴＣで蛍光ラベルしたデキストラン（同）を水に分散させた分散液を塗付した皮膚の蛍光断面写真である。

本発明の経皮吸収促進剤は、リオトロピック液晶を有効成分とすることを特徴とするものである。本発明におけるリオトロピック液晶（ｌｙｏｔｒｏｐｉｃ ｌｉｑｕｉｄ ｃｒｙｓｔａｌ）とは、界面活性剤（分子内に親水性部分と疎水性（親油性）部分を有する両親媒性分子）と水との共存系において、両者の混合比率と温度によって液晶状態（結晶のようにその分子配列に一定の規則性を保ちながら液体のような流動性を兼ね備えた状態）を形成するものを意味する。リオトロピック液晶は、原理的には、疎水性部分（アルキル基などの疎水性基）同士を向け合った結晶構造をとる固体状態の界面活性剤に所定の温度範囲で水を加えていくと、当該部分が熱運動により規則性を失って液体状態となるが、今度は親水性部分が水素結合により作用しあって長周期を維持して会合構造（ヘキサゴナル構造やラメラ構造など）をとるものと理解することができる（必要であれば「鈴木敏幸、液晶、第２巻、１９４頁−２０１頁、１９９８年」を参照のこと）。

リオトロピック液晶の構成成分となる界面活性剤は、水との共存系において、水との混合比率と温度によって液晶状態（とりわけ面間隔が１０ｎｍ〜８００ｎｍの周期構造が望ましい）を形成することができるものであれば特段制限されるものではなく、非イオン性タイプ、アニオン性タイプ、カチオン性タイプ、両性タイプのいずれのタイプの界面活性剤であってもよく、また、レシチン（卵黄レシチンや大豆レシチンなど）やサポニンなどの天然由来の界面活性剤であってもよい。界面活性剤は単一のものを単独で用いてもよいし、複数種類を混合して用いてもよい。

非イオン性界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェノールエーテル、アルキルグルコシド、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸アルカノールアミド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などが挙げられる。アニオン性界面活性剤としては、セッケン（脂肪酸のナトリウム塩やカリウム塩など）、アルキルベンゼンスルホン酸塩（ナトリウム塩など）、高級アルコール硫酸エステル塩（ナトリウム塩など）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩（ナトリウム塩など）、α−スルホ脂肪酸エステル、α−オレフィンスルホン酸塩（ナトリウム塩など）、モノアルキルリン酸エステル塩（ナトリウム塩など）、アルカンスルホン酸塩（ナトリウム塩など）などが挙げられる。カチオン性界面活性剤としては、アルキルトリメチルアンモニウム塩（クロリドなど）、ジアルキルジメチルアンモニウム塩（クロリドなど）、アルキルジメチルベンジルアンモニウム塩（クロリドなど）、アミン塩（酢酸塩や塩酸塩など）などが挙げられる。両性界面活性剤としては、アルキルアミノ脂肪酸塩（ナトリウム塩など）、アルキルベタイン、アルキルアミンオキシドなどが挙げられる。リオトロピック液晶に占める界面活性剤の割合は５重量％〜８０重量％が望ましく、７重量％〜７０重量％がより望ましく、１０重量％〜６５重量％がさらに望ましい。界面活性剤のＨＬＢ値は８以上が望ましく、１０以上がより望ましく、１２以上がさらに望ましい。

リオトロピック液晶の構成成分となる水としては、蒸留水などを用いることができる。水には水と相溶性のあるエタノールやイソプロパノールなどの有機溶媒が含まれていてもよい。リオトロピック液晶に占める水の割合は５重量％〜８０重量％が望ましく、１０重量％〜６０重量％がより望ましく、１３重量％〜５０重量％がさらに望ましい。

リオトロピック液晶は、界面活性剤と水の他に油分を含んでもよい。油分を含むことで液晶構造は角質層の細胞間脂質が形成するラメラ構造に近似したものとなり、皮膚表面に塗付した際に細胞間脂質構造の相転移を起こさせやすくし、この結果として優れた活性成分に対する経皮吸収促進作用を発揮する。油分としては、小麦胚芽油やトウモロコシ油やヒマワリ油やヒマシ油や大豆油などの植物油、シリコーン油、イソプロピルミリステートやグリセリルトリオクタノエートやジエチレングリコールモノプロピレンペンタエリスリトールエーテルやペンタエリスリチルテトラオクタノエートなどのエステル油、スクアラン、スクアレン、流動パラフィン、ポリブテンなどが挙げられる。油分は単一のものを単独で用いてもよいし、複数種類を混合して用いてもよい。リオトロピック液晶に占める油分の割合は１重量％〜８０重量％が望ましく、５重量％〜７０重量％がより望ましく、１０重量％〜６５重量％がさらに望ましい。

また、リオトロピック液晶は、多価アルコールを含んでもよい。多価アルコールを含むことで液晶構造の形成容易化（相領域の拡大）や安定化を図ることができる。多価アルコールとしては、ポリエチレングリコールやポリアルキレングリコールなどのポリアルキレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、２−ブテン−１，４−ジオール、ペンタン−１，５−ジオール、２，２−ジメチルプロパン−１，３−ジオール、３−メチルペンタン−１，５−ジオール、ペンタン−１，２−ジオール、２，２，４−トリメチルペンタン−１，３−ジオール、２−メチルプロパン−１，３−ジオール、ヘキシレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコールなどが挙げられる。多価アルコールは単一のものを単独で用いてもよいし、複数種類を混合して用いてもよい。リオトロピック液晶に占める多価アルコールの割合は１重量％〜５５重量％が望ましく、３重量％〜５２重量％がより望ましく、５重量％〜５０重量％がさらに望ましい。

また、リオトロピック液晶は、コレステロールなどを補助界面活性剤として含んでもよい。補助界面活性剤を含むことで多種多様の界面活性剤を用いた場合でも界面膜曲率の低減化を図ることができ、よって、液晶構造の形成容易化や安定化を図ることができる。リオトロピック液晶に占める補助界面活性剤の割合は０．０１重量％〜１０重量％が望ましい。

リオトロピック液晶は、その構成成分となる界面活性剤や水を、所定の温度において所定の比率で混合することにより調製することができる。必要に応じて構成成分を混合前や混合後に一時的に加温するといった操作を行ってもよい。

本発明の経皮吸収促進剤は、活性成分の物理化学的特性に依存せず、様々な活性成分を経皮吸収させることができる。ここで「活性成分」とは、ヒトを含む哺乳動物に対して各種の疾患の予防や治療、健康・美容の維持や改善を図るための薬剤となりえるものを意味し、具体的には、ビタミン類、プロスタグランディン類、抗癌剤、成長ホルモン類、各種成長因子、ワクチン抗原、有用タンパク質をコードする遺伝子をはじめとする、有機化合物、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡなどが挙げられる。本発明の経皮吸収促進剤について特筆すべき事項は、分子量が１０００以上の高分子物質（分子量の上限は制限されるものではないが例えば５０万〜１００万である）や、ナイアシンアミド（ニコチン酸アミド）などの水溶性物質（水溶性物質は例えば「水に分散させた際に波長４５０ｎｍにおいて透過度（１／吸光度）が７０％〜１００％の範囲内にあって外観観察において巨視的な分離が認められないもの」と定義することができる）などの、これまで皮膚を透過させて体内に浸透させることができない、または、困難であるとされてきた成分の経皮吸収を可能にすることである。

本発明の経皮吸収促進剤は、これまで外用医薬品や化粧品の基材として利用されてきたリオトロピック液晶を有効成分とするので、リオトロピック液晶に活性成分を配合することで経皮吸収組成物とすることができる。活性成分の配合量は、リオトロピック液晶に対して重量比で例えば０．０１％〜５０％である。例えば、リオトロピック液晶にケラチノサイトの分化・増殖促進作用を有する物質、メラニン色素産生抑制作用を有する物質、角質層の細胞間脂質の合成促進作用を有する物質などを配合することで、皮膚の老化やシミの発生などを効果的に抑制することができる皮膚再生促進組成物とすることができる。ここで、ケラチノサイトの分化・増殖促進作用を有する物質としては、レチナール、３−デヒドロレチナール、レチノイン酸、３−デヒドロレチノイン酸、レチノイン酸類似物、レチノール、レチノール脂肪酸エステル、３−デヒドロレチノール脂肪酸エステルなどが挙げられる。メラニン色素産生抑制作用を有する物質としては、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、スーパーオキサイド・ディスムターゼ（ＳＯＤ）などが挙げられる。角質層の細胞間脂質の合成促進作用を有する物質としては、ナイアシンアミドなどが挙げられる。これらの物質は、それ自体をリオトロピック液晶に均一分散させて液晶構造の相間に取り込ませることで配合してもよいし、２価金属無機酸塩微粒子、例えば、直径が１００ｎｍ〜１０００ｎｍの炭酸カルシウム微粒子、炭酸マグネシウム微粒子、炭酸亜鉛微粒子、リン酸カルシウム微粒子、リン酸マグネシウム微粒子、リン酸亜鉛微粒子などの内部に封入し（その方法は必要であれば国際公開第０２／０９６３９６号パンフレットを参照のこと）、これらの物質が封入された微粒子（ナノ粒子）をリオトロピック液晶に均一分散させて液晶構造の相間に取り込ませることで配合してもよい。また、リオトロピック液晶の面上（界面膜）に２価金属イオンとその対イオンを吸着させて膜の粘弾性を上昇させることで、相間に取り込まれた物質の物理化学的安定性を向上させることができる。なお、本発明の経皮吸収促進剤は、予め皮膚表面に塗付しておき、そこに活性成分を後から添加することで経皮吸収させるといったように利用することもできる。

本発明の経皮吸収促進剤は、そのまま外用製剤として皮膚表面に塗付してもよいし、軟膏基剤やクリーム基剤やローション基剤に分散させて皮膚表面に塗付してもよい。なお、製剤化の際には、防腐剤や保湿剤や抗酸化剤などの公知の成分を適宜添加してもよいことは言うまでもない。

実施例１：
（工程１）
表１に記載の３種類の処方からなる活性成分としてレチノイン酸（全トランス体，以下同じ）が封入されたナノ粒子を以下のようにして調製した。
ビーカーにレチノイン酸、エタノール、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を入れ、レチノイン酸を均一に溶解させた。続いて、グリセリンと花王株式会社の非イオン性界面活性剤である商品名：エマルゲン２０２０Ｇ−ＨＡ（ポリオキシエチレンオクチルドデシルエーテル）を添加し、約１０分間攪拌した。次いで、蒸留水を添加して約１０分間攪拌を続けることでレチノイン酸と非イオン界面活性剤の混合ミセルを得た。その後、５Ｍ塩化マグネシウム水溶液または５Ｍ塩化カルシウム水溶液を添加して約１時間攪拌を続けた。最後に、１Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を添加して約１時間攪拌し、直径が１００ｎｍ〜１０００ｎｍの炭酸マグネシウム薄膜または炭酸カルシウム薄膜にレチノイン酸が封入されたナノ粒子を得た。

（工程２）
１７ｍＬの蒸留水が入ったビーカーに３１ｍＬのグリセリンを添加してこれを均一に溶解させた。次いで、２８ｍＬのエマルゲン２０２０Ｇ−ＨＡを添加してこれを均一に分散させた。この際、液の粘性が上昇するので、その現象を各原料の均一分散の目安とした。続いて、２０ｍＬのスクアランを添加してこれを均一に混合した後、さらに１０ｍＬのスクアレンを添加して約５分間攪拌し続けた。さらに５ｍＬのスクアランを添加して攪拌を続けると、液の粘性が徐々に上昇し、瞬間的にゲル化した。この現象を液晶形成の目安とした。その後も数分間攪拌を続け、リオトロピック液晶（界面活性剤２８．０重量％，水１６．０重量％，油分２５．０重量％，多価アルコール３１．０重量％）を得た。このリオトロピック液晶に対し、工程１で得たナノ粒子を、レチノイン酸の配合量がリオトロピック液晶に対して重量比で０．１％（組成１），０．２％（組成２），０．４％（組成３）になるように配合し、レチノイン酸が封入されたナノ粒子が分解することなく均一分散したリオトロピック液晶を得た。なお、以上の操作は、全て遮光下で行い、非イオン性界面活性剤は約６０℃で融解させてから用いた（以下同じ）。

Ｗｉｓｔａｒラット（７週齢，雄）の背部を毛剃りし、毛剃りした部分をぬるま湯で洗浄後、２ｃｍ×５ｃｍの面積に、上記の組成１のレチノイン酸封入ナノ粒子を配合したリオトロピック液晶（レチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子配合液晶とレチノイン酸封入炭酸カルシウム微粒子配合液晶）をそれぞれ３０ｍｇ塗布し、血中レチノイン酸濃度を測定した。また、比較例として、同じ投与量のレチノイン酸を皮下注射し、血中レチノイン酸濃度を測定した。さらに、レチノイン酸封入ナノ粒子を配合したリオトロピック液晶のかわりに、レチノイン酸封入ナノ粒子（レチノイン酸封入炭酸カルシウム微粒子）を組成１の液晶とレチノイン酸の配合量が同じになるように配合したワセリンと、レチノイン酸自体を組成１の液晶とレチノイン酸の配合量が同じになるように配合したワセリンをそれぞれ塗布し、血中レチノイン酸濃度を測定した。結果を図１に示す。なお、図１の（Ａ）〜（Ｅ）は以下の通りである。
（Ａ）レチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を配合したリオトロピック液晶を塗布した結果
（Ｂ）レチノイン酸封入炭酸カルシウム微粒子を配合したリオトロピック液晶を塗布した結果
（Ｃ）レチノイン酸を皮下注射した結果
（Ｄ）レチノイン酸封入炭酸カルシウム微粒子を配合したワセリンを塗付した結果
（Ｅ）レチノイン酸自体を配合したワセリンを塗付した結果
図１から明らかなように、レチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を配合したリオトロピック液晶およびレチノイン酸封入炭酸カルシウム微粒子を配合したリオトロピック液晶を塗付した場合の血中レチノイン酸濃度は、レチノイン酸を皮下注射した場合の血中レチノイン酸濃度に匹敵したことから、リオトロピック液晶には経皮吸収促進作用があることがわかった。

実施例２：
ｄｄＹマウス（７週齢，雄）の背部を毛剃りし、毛剃りした部分をぬるま湯で洗浄後、１．５ｃｍ×１．５ｃｍの面積に、以下の４種類のサンプルをそれぞれ３０ｍｇ塗布した。塗付日から１日後、２日後、３日後の皮膚再生機能を担うＨＢ−ＥＧＦ（ｈｅｐａｒｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ＥＧＦ−ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）の産生量の変化を測定することで（測定手法の詳細は必要であれば非特許文献２を参照のこと）、それぞれのレチノイン酸の経皮吸収性に対する効果を評価した。結果を図２に示す。図２から明らかなように、レチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子およびレチノイン酸封入炭酸カルシウム微粒子をリオトロピック液晶に配合した場合、ワセリンに配合した場合に比較して、塗付日から２日後と３日後のＨＢ−ＥＧＦ産生量が多いことから、リオトロピック液晶の経皮吸収促進作用によってレチノイン酸の経皮吸収性が向上したことがわかった。
（ア）実施例１の組成１のレチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を配合したリオトロピック液晶（Ｍｇ−ａｔＲＡ／液晶）
（イ）実施例１の組成１のレチノイン酸封入炭酸カルシウム微粒子を配合したリオトロピック液晶（Ｃａ−ａｔＲＡ／液晶）
（ウ）レチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を実施例１の組成１の液晶とレチノイン酸の配合量が同じになるように配合したワセリン（Ｍｇ−ａｔＲＡ／ワセリン）
（エ）レチノイン酸封入炭酸カルシウム微粒子を実施例１の組成１の液晶とレチノイン酸の配合量が同じになるように配合したワセリン（Ｃａ−ａｔＲＡ／ワセリン）

実施例３：
実施例２と同様にして、以下の４種類のサンプルの塗付によるＨＢ−ＥＧＦの産生量の変化を測定することで、それぞれのレチノイン酸の経皮吸収性に対する効果を評価した。結果を何も塗布していない皮膚のＨＢ−ＥＧＦ産生量とともに図３に示す。図３から明らかなように、リオトロピック液晶にレチノイン酸を配合することで、その配合形態によらずレチノイン酸の経皮吸収性が向上し、ＨＢ−ＥＧＦ産生量が増加した。また、リオトロピック液晶自体にもＨＢ−ＥＧＦ産生増加作用が認められ、リオトロピック液晶が皮膚再生促進剤の有効成分となりえることがわかった。
（ア）実施例１の組成１のレチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を配合したリオトロピック液晶（Ｍｇ−ａｔＲＡ／液晶）
（イ）実施例１の工程１でレチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を調製する際に得られたレチノイン酸と非イオン界面活性剤の混合ミセルを実施例１の組成１の液晶とレチノイン酸の配合量が同じになるように配合したリオトロピック液晶（ａｔＲＡミセル／液晶）
（ウ）レチノイン酸自体を実施例１の組成１の液晶とレチノイン酸の配合量が同じになるように配合したリオトロピック液晶（ａｔＲＡ／液晶）
（エ）実施例１の工程２で得られたリオトロピック液晶（液晶のみ）

実施例４：
メラニン色素産生細胞を持つ有色モルモット（Ｗｅｉｓｅｒ Ｍａｐｌｅｓ，５週齢，雄）の背部を毛剃りし、毛剃りした部分をぬるま湯で洗浄後、２ｃｍ×５ｃｍの面積に、以下の５種類のサンプルをそれぞれ３０ｍｇ塗布した。ＵＶＡ，ＵＶＢ，ＵＶＡとＵＶＢの両方のいずれかの照射下で塗付日から３日後、サンプルを塗布した部分の皮膚を採取し、切片をホルマリンで固定した後、パラフィン包埋し、メラニン色素を黒く染め出すフォンタナマッソン法で染色し、皮膚再生促進作用を評価した。それぞれのサンプルを塗布した皮膚の断面写真を何も塗布していない皮膚の断面写真とともに図４に示す。図４から明らかなように、各種の形態でレチノイン酸を配合したリオトロピック液晶を塗布した場合およびリオトロピック液晶自体を塗布した場合において、表皮の肥厚が認められた。
（ア）実施例１の組成１のレチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を配合したリオトロピック液晶（Ｍｇ−ａｔＲＡ／液晶）
（イ）実施例１の工程１でレチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を調製する際に得られたレチノイン酸と非イオン界面活性剤の混合ミセルを実施例１の組成１の液晶とレチノイン酸の配合量が同じになるように配合したリオトロピック液晶（ａｔＲＡミセル／液晶）
（ウ）レチノイン酸自体を実施例１の組成１の液晶とレチノイン酸の配合量が同じになるように配合したリオトロピック液晶（ａｔＲＡ／液晶）
（エ）実施例１の工程２で得られたリオトロピック液晶（液晶のみ）
（オ）レチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を実施例１の組成１の液晶とレチノイン酸の配合量が同じになるように配合したワセリン（Ｍｇ−ａｔＲＡ／ワセリン）

実施例５：
インスリンを０．５％，１％，３％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶（リオトロピック液晶自体は実施例１の工程２で得られたもの）を調製し、実施例１と同様にして、血中インスリン濃度を測定した。また、比較例として、インスリンを０．２ｍｇ／２００μＬ皮下注射し、血中インスリン濃度を測定した。結果を図５に示す。なお、図５の（Ａ）〜（Ｄ）は以下の通りである。
（Ａ）インスリンを０．５％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶を塗布した結果
（Ｂ）インスリンを１％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶を塗付した結果
（Ｃ）インスリンを３％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶を塗付した結果
（Ｄ）インスリンを０．２ｍｇ／２００μＬ皮下注射した結果
図５から明らかなように、インスリンを配合したリオトロピック液晶を塗布した場合の初期の血中インスリン濃度は、インスリンを皮下注射した場合の初期の血中インスリン濃度に及ばないものの、その後、インスリンを皮下注射した場合には血中インスリン濃度は急激に減少するのに対し、インスリンを配合したリオトロピック液晶を塗布した場合には血中インスリン濃度は比較的高く維持された。この結果から、インスリンをリオトロピック液晶に配合することで、インスリンを徐放的に経皮吸収させることができることがわかった。

実施例６：
Ｗｉｓｔａｒラット（７週齢，雄）の背部を毛剃りし、毛剃りした部分をぬるま湯で洗浄後、２ｃｍ×２ｃｍの面積に、（Ａ）¹⁴Ｃナイアシンアミドを２％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶（リオトロピック液晶自体は実施例１の工程２で得られたもの）、（Ｂ）¹⁴Ｃナイアシンアミドを２％の割合（重量比）で配合した水性ゲル（カルボキシビニルポリマー，日光ケミカルズ株式会社の商品名「カーボポール」）の２種類のサンプルをそれぞれ３０ｍｇ塗布した。塗付してから１５分後〜６時間後に採血し、血液２００μＬに含まれる¹⁴Ｃの放射活性を測定することで、投与量に対する全血中のナイアシンアミドの割合（％）を算出した。結果を図６に示す。図６から明らかなように、ナイアシンアミドをリオトロピック液晶に配合することで、ナイアシンアミドが血中に取り込まれやすくなること、その血中濃度は長時間にわたって比較的高く維持されることがわかった。以上の結果は、ナイアシンアミドは水溶性物質であるので、通常、経皮吸収させることが非常に困難な物質であるが、リオトロピック液晶の経皮吸収促進作用によって皮膚表面から浸透し、真皮内の毛細血管を通じて血中に取り込まれたことによるものと考えられた。

実施例７：
以下の５種類のサンプルを４０℃で保存した場合の、レチノイン酸の残存率の経時変化を調べた。結果を図７に示す。図７から明らかなように、レチノイン酸封入２価金属無機酸塩微粒子をリオトロピック液晶に配合することで、調製後６０日経過した時点でもレチノイン酸は安定に残存することがわかった。
（Ａ）レチノイン酸封入炭酸亜鉛微粒子をレチノイン酸の配合量がリオトロピック液晶に対して重量比で０．１％になるように配合したリオトロピック液晶
（Ｂ）レチノイン酸封入炭酸カルシウム微粒子を同様に配合したリオトロピック液晶
（Ｃ）レチノイン酸封入リン酸カルシウム微粒子を同様に配合したリオトロピック液晶
（Ｄ）レチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を同様に配合したリオトロピック液晶
（Ｅ）レチノイン酸自体をレチノイン酸の配合量がリオトロピック液晶に対して重量比で０．１％になるように配合したワセリン
注：（Ｂ）のサンプルは実施例１の組成１のレチノイン酸封入炭酸カルシウム微粒子を配合したリオトロピック液晶に相当し、（Ｄ）のサンプルは実施例１の組成１のレチノイン酸封入炭酸マグネシウム微粒子を配合したリオトロピック液晶に相当する。（Ａ）と（Ｃ）のサンプルは（Ｂ）と（Ｄ）のサンプルの調製方法に準じて調製した。

実施例８：
以下の４種類のサンプルを４０℃で保存した場合の、レチノールパルミテートの残存率の経時変化を調べた。結果を図８に示す。図８から明らかなように、レチノールパルミテートをリオトロピック液晶に配合することで、調製後３０日経過した時点でもレチノールパルミテートは安定に残存することがわかった。
（Ａ）レチノールパルミテートを０．１％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶（リオトロピック液晶自体は実施例１の工程２で得られたもの）
（Ｂ）レチノールパルミテートの０．１％（ｗ／ｗ）エタノール溶液
（Ｃ）（Ｂ）のエタノール溶液に酸化防止剤（ＢＨＴ）を添加したエタノール溶液
（Ｄ）実施例１の工程１のレチノイン酸が封入されたナノ粒子の調製方法に準じて調製したレチノールパルミテートが封入されたナノ粒子（レチノールパルミテート含量０．１重量％）

実施例９：
メラニン色素産生細胞を持つ有色モルモット（Ｗｅｉｓｅｒ Ｍａｐｌｅｓ，５週齢，雄）の背部を毛剃りし、毛剃りした部分をぬるま湯で洗浄後、１．５ｃｍ×１．５ｃｍの面積に、メラニン色素産生抑制作用を有するＳＯＤ（分子量３２０００）を０．１％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶を３０ｍｇ塗布し、実施例４に記載の方法で表皮に対する影響を調べた。皮膚の断面写真（フォンタナマッソン染色）を図９に示す。また、ＳＯＤを０．１％の割合（重量比）で水に分散させた分散液を３０μＬ塗付した場合の皮膚の断面写真（フォンタナマッソン染色）を図１０に、水だけを３０μＬ塗付した場合の皮膚の断面写真（フォンタナマッソン染色）を図１１に示す。図９〜図１１から明らかなように、ＳＯＤを配合したリオトロピック液晶を塗布した場合、ＳＯＤを水に分散させた分散液や水だけを塗布した場合に比較して、表皮内のメラニン色素量が顕著に減少した（黒色のスポットやエリアが少ないことで判定）。これはＳＯＤが角質層を透過して表皮内に到達したからであると考えられた。なお、ＳＯＤを配合したリオトロピック液晶を塗布した場合に認められる表皮の肥厚は、リオトロピック液晶自体の皮膚再生促進作用によるものと考えられた。

実施例１０：
実施例９と同様にして、以下の６種類のサンプルの表皮に対する影響を調べた。皮膚の断面写真（フォンタナマッソン染色）を図１２に示す。図１２から明らかなように、メラニン色素産生抑制作用を有するアルブチンをリオトロピック液晶に配合して塗布することで、表皮内のメラニン色素量が顕著に減少した。また、リオトロピック液晶だけを塗布した場合にも表皮の肥厚が認められたことから、リオトロピック液晶自体に皮膚再生促進作用があることが確かめられた。
（ア）α−アルブチン（分子量２７２，江崎グリコ株式会社）を２％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶
（イ）β−アルブチン（分子量２７２，株式会社林原）を２％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶
（ウ）リオトロピック液晶のみ
（エ）α−アルブチンを２％の割合（重量比）で水に分散させた分散液
（オ）β−アルブチンを２％の割合（重量比）で水に分散させた分散液
（カ）水のみ

実施例１１：
ｄｄＹマウス（７週齢，雄）の背部を毛剃りし、毛剃りした部分をぬるま湯で洗浄後、１．５ｃｍ×１．５ｃｍの面積に、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で蛍光ラベルしたオリゴＤＮＡ（分子量８８９９）を２％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶を３０ｍｇ塗布した。塗付してから２時間後、サンプルを塗布した部分の皮膚を採取し、凍結切片を調製して蛍光観察を行った。皮膚の蛍光断面写真を図１３に示す。また、ＦＩＴＣで蛍光ラベルしたオリゴＤＮＡを２％の割合（重量比）で水に分散させた分散液を３０μＬ塗付した場合の皮膚の蛍光断面写真を図１４に示す。図１３と図１４から明らかなように、オリゴＤＮＡはリオトロピック液晶に配合して塗布されることで、塗付してから２時間後に表皮内に浸透した。

実施例１２：
実施例１１と同様にして、ＦＩＴＣで蛍光ラベルしたデキストラン（分子量４０００）を５％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶を塗付した場合の皮膚透過性を調べた。皮膚の蛍光断面写真を図１５に示す。図１５から明らかなように、デキストランはリオトロピック液晶に配合して塗布されることで、１５分後には表皮内に浸透し、時間が経つにつれてより内部に浸透した。

実施例１３：
実施例１１と同様にして、ＦＩＴＣで蛍光ラベルしたデキストラン（分子量７００００）を５％の割合（重量比）で配合したリオトロピック液晶を塗付した場合の皮膚透過性を調べた。また、ＦＩＴＣで蛍光ラベルしたデキストラン（同）を５％の割合（重量比）で水に分散させた分散液を３０μＬ塗付した場合の皮膚透過性も調べた。それぞれの皮膚の蛍光断面写真を図１６に示す。図１６から明らかなように、デキストランはリオトロピック液晶に配合して塗布されることで、１５分後には表皮内に浸透し、時間が経つにつれてより内部に浸透した。

実施例１４：
スクアラン１６．８１９重量％、大豆レシチン８．９３１重量％、コレステロール４．４６６重量％、ＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油１５．０２６重量％、グリセリン３８．８９７重量％、蒸留水１５．８６０重量％からなるリオトロピック液晶を調製した。このリオトロピック液晶を予め皮膚表面に塗付しておき、そこにレチノイン酸を後から添加することで、レチノイン酸の経皮吸収性を向上させることができた。

製剤例１：
実施例１４のリオトロピック液晶に市販の防腐剤を添加して製剤化した。

製剤例２：
実施例１４のリオトロピック液晶を自家調製したローション基剤（乳液）に配合し、市販の防腐剤を添加してローション剤に製剤化した。ローション基剤は、大豆レシチン、コレステロール、ＰＥＧ４０００、環状シリコーン、カーボポール（高分子ゲル化剤）、ケルトロール（高分子ゲル化剤）、蒸留水を混合して乳化することで調製した。

本発明は、これまで外用医薬品や化粧品の基材として利用されてきたリオトロピック液晶の新規な医薬用途としての経皮吸収促進剤を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。

Claims (15)

1. リオトロピック液晶を有効成分とすることを特徴とする経皮吸収促進剤。
2. リオトロピック液晶が界面活性剤５重量％〜８０重量％と水５重量％〜８０重量％を含むものであることを特徴とする請求項１記載の経皮吸収促進剤。
3. 界面活性剤が非イオン性界面活性剤および／またはレシチンであることを特徴とする請求項２記載の経皮吸収促進剤。
4. 非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油から選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする請求項３記載の経皮吸収促進剤。
5. リオトロピック液晶がさらに油分１重量％〜８０重量％を含むものであることを特徴とする請求項２記載の経皮吸収促進剤。
6. 油分がスクアランであるであることを特徴とする請求項５記載の経皮吸収促進剤。
7. リオトロピック液晶がさらに多価アルコール１重量％〜５５重量％を含むものであることを特徴とする請求項２記載の経皮吸収促進剤。
8. 多価アルコールがグリセリンであることを特徴とする請求項７記載の経皮吸収促進剤。
9. リオトロピック液晶がさらに補助界面活性剤０．０１重量％〜１０重量％を含むものであることを特徴とする請求項２記載の経皮吸収促進剤。
10. 補助界面活性剤がコレステロールであることを特徴とする請求項９記載の経皮吸収促進剤。
11. リオトロピック液晶に活性成分が配合されてなることを特徴とする経皮吸収組成物。
12. 活性成分が有機化合物、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡから選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする請求項１１記載の経皮吸収組成物。
13. 活性成分が分子量が１０００以上の高分子物質または水溶性物質であることを特徴とする請求項１１記載の経皮吸収組成物。
14. 活性成分が２価金属無機酸塩微粒子の内部に封入された形態で配合されてなることを特徴とする請求項１１記載の経皮吸収組成物。
15. 活性成分がリオトロピック液晶に対して重量比で０．０１％〜５０％配合されてなることを特徴とする請求項１１記載の経皮吸収組成物。