JP5144362B2 - 皮膚外用剤 - Google Patents

Description

本発明は、アテモヤの抽出物を含有することを特徴とする、シワの予防や改善、抗炎症作用等に優れた皮膚外用剤に関する。

近年、生体成分を酸化させる要因として、フリーラジカルや活性酸素がとりあげられ、その悪影響が問題となっている。フリーラジカルや活性酸素は体内で生じ、コラーゲンなどの生体組織を分解あるいは架橋し、また、油脂類を酸化して、細胞に障害を与える過酸化脂質をつくると言われている。このような障害は、肌のシワや張りの低下等の原因になると考えられており、これらを防ぐ方法の一つに過酸化脂質の生成を抑制する方法が知られている。従来、抗酸化剤にはアスコルビン酸、トコフェロール、ＢＨＴ（３，５−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエン）やスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）等が用いられてきた。

また、シワの原因としては、コラーゲン、エラスチン等の真皮マトリックスの線維減少、変性が起こることが知られている。近年研究が進み、この変化を誘導する因子として、特にＭＭＰの関与が指摘されている。また、ＭＭＰの中でも、コラゲナーゼとゼラチナーゼは皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるコラーゲンを分解する酵素として知られ、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少変性の原因の一つとなり、シワの形成等の大きな要因の一つであると考えられている。よって、これらの酵素を阻害することは、コラーゲンを保護し、線維を形成するマトリックスを保護することとなり、シワを防ぐうえで重要である。このようなシワを防ぐ方法の一つにＭＭＰ活性阻害剤が知られている。従来、シワを予防する成分としてレチノイン酸、α−ヒドロキシ酸、レチノール等が用いられてきた。

肌荒れの一因として紫外線等による皮膚炎症があり、その炎症を沈め、肌荒れを改善する皮膚外用剤が望まれている。その治療法の一つとして、炎症時に生じる起炎物質であるヒスタミンの遊離を抑制する方法がある。従来、肌荒れの治療には、ステロイド剤やインドメタシン等を外用する処置が行われてきた。しかし、以上に述べたシワの予防や改善及び抗炎症作用の指標である、過酸化脂質生成抑制作用、ＭＭＰ活性阻害作用及びヒスタミン遊離抑制作用について、植物原料のアテモヤは検討されていなかった。

皮膚のシワの予防や改善又は抗酸化を目的として用いられるＳＯＤは不安定であり、製剤化が難しく、トコフェロールも効果が充分であるとは言えない。また、合成化合物であるＢＨＴ等は安全性に問題があり、配合量に制限があることから、化学合成品ではなく、安定でかつ副作用の少ない天然原料が望まれている。同様に、安全で安定なＭＭＰ活性阻害作用を有することがシワの予防や改善に好ましい。また、従来のヒスタミンの遊離を抑制する作用を持つ皮膚外用材は、ステロイド剤等の化学合成で得られた物質を含有するものがほとんどであり、副作用の危険性もあるため、同様に安定性が高く、効果の優れた天然物由来の皮膚外用剤が望まれている。

以上のことから、安全で安定性に優れ、シワの予防や改善及び抗炎症作用に優れた皮膚外用剤が望まれている。

このような事情により、本発明者らは鋭意検討した結果、アテモヤの抽出物が優れた過酸化脂質生成抑制作用、ＭＭＰ活性阻害作用及びヒスタミン遊離抑制作用をもち、安定性においても優れていることを見出した。さらに、その抽出物を含有する皮膚外用剤が、安全で安定であり、シワの予防や改善及び抗炎症作用に優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。

本発明に用いるアテモヤ（学名：Ａｎｎｏｎａ ａｔｅｍｏｙａ）は、バンレイシ科バンレイシ属に属する植物であり、バンレイシ（バンレイシ科、学名：Ａｎｎｏｎａ ｓｑｕａｍｏｓａ）とチェリモヤ（バンレイシ科：Ａｎｎｏｎａ ｃｈｅｒｉｍｏｌａ）を人工的に掛け合わせ品種改良した果樹である。その実は食用として広く流通しているが、化粧料としての利用は報告されていない。

本発明に用いるアテモヤの抽出物とは、アテモヤの葉、茎、樹皮、花、果実、根等の植物体の一部又は全草から抽出したものである。好ましくは、果実、果肉、果皮、種子等から抽出したものが良い。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。また、生のアテモヤを用いても良いし、乾燥したものを用いても良い。

抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。

上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。

本発明の皮膚外用剤には、上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することができる。

本発明の皮膚外用剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品のいずれにも用いることができ、その剤形としては、例えば、化粧水、クリ−ム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデ−ション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤等の皮膚に適用されるものが挙げられる。

本発明に用いる上記抽出物の配合量は、本発明の皮膚外用剤全量に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上、好ましくは０．００１〜１０重量％の配合が良い。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を越えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。

本発明のアテモヤの抽出物は、優れた過酸化脂質生成抑制作用、ＭＭＰ活性阻害作用及びヒスタミン遊離抑制作用を有し、安定性にも優れていた。さらに、これらの抽出物を含有する皮膚外用剤は、安全で優れたシワの予防や改善及び抗炎症作用を示した。

次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、本発明の処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。処方例に示す配合量の部とは重量部を、％とは重量％を示す。

製造例１ アテモヤ果皮の熱水抽出物
アテモヤ果皮の乾燥物２０ｇに精製水４００ｇを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してアテモヤ果皮の熱水抽出物を６．１ｇ得た。

製造例２ アテモヤ果実の熱水抽出物
アテモヤ果実の乾燥物２０ｇに精製水４００ｇを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してアテモヤ果実の熱水抽出物を１０．４ｇ得た。

製造例３ アテモヤ種子の熱水抽出物
アテモヤ種子の乾燥物２０ｇに精製水４００ｇを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してアテモヤ種子の熱水抽出物を１．７ｇ得た。

製造例４ アテモヤ果皮の５０％エタノール抽出物
アテモヤ果皮の乾燥物２０ｇに５０（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液４００ｇを加え、常温で５日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してアテモヤ未熟果皮の５０％エタノール抽出物を７．１ｇ得た。

製造例５ アテモヤ果皮のエタノール抽出物
アテモヤ果皮の乾燥物２０ｇにエタノール４００ｇを加え、常温で５日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してアテモヤ果皮のエタノール抽出物を０．２ｇ得た。

処方例１ 化粧水
処方 配合量
１．アテモヤ果皮の熱水抽出物（製造例１） ０．１部
２．１，３−ブチレングリコール ８．０
３．グリセリン ２．０
４．キサンタンガム ０．０２
５．クエン酸 ０．０１
６．クエン酸ナトリウム ０．１
７．エタノール ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。

比較例１ 従来の化粧水
処方例１において、アテモヤ果皮の熱水抽出物（製造例１）を精製水に置き換えたものを従来の化粧水とした。

処方例２ クリーム
処方 配合量
１．アテモヤ果皮の５０％エタノール抽出物（製造例４） ０．０５部
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．香料 ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１２．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
１３．１，３−ブチレングリコール ８．５
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

比較例２ 従来のクリーム
処方例２において、アテモヤ果皮の５０％エタノール抽出物（製造例４）を精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。

処方例３ 乳液
処方 配合量
１．アテモヤ果実の熱水抽出物（製造例２） ０．００１部
２．スクワラン ５．０
３．オリーブ油 ５．０
４．ホホバ油 ５．０
５．セタノール １．５
６．モノステアリン酸グリセリン ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート
（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
９．香料 ０．１
１０．プロピレングリコール １．０
１１．グリセリン ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

処方例４ ゲル剤
処方 配合量
１．アテモヤ果皮の５０％エタノール抽出物（製造例４） １．０部
２．エタノール ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．１
５．香料 適量
６．１，３−ブチレングリコール ５．０
７．グリセリン ５．０
８．キサンタンガム ０．１
９．カルボキシビニルポリマー ０．２
１０．水酸化カリウム ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。

処方例５ パック
処方 配合量
１．アテモヤ果皮の熱水抽出物（製造例１） ０．１部
２．アテモヤ果皮の５０％エタノール抽出物（製造例４） ０．１
３．ポリビニルアルコール １２．０
４．エタノール ５．０
５．１，３−ブチレングリコール ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．） ０．５
８．クエン酸 ０．１
９．クエン酸ナトリウム ０．３
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。

処方例６ ファンデーション
処方 配合量
１．アテモヤ果皮のエタノール抽出物（製造例５） １．０部
２．ステアリン酸 ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート
（２０Ｅ．Ｏ．） １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．セタノール １．０
６．液状ラノリン ２．０
７．流動パラフィン ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
１０．ベントナイト ０．５
１１．プロピレングリコール ４．０
１２．トリエタノールアミン １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．二酸化チタン ８．０
１５．タルク ４．０
１６．ベンガラ １．０
１７．黄酸化鉄 ２．０
１８．香料 適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例７ 浴用剤
処方 配合量
１．アテモヤ種子の熱水抽出物（製造例３） ５．０部
２．炭酸水素ナトリウム ５０．０
３．黄色２０２号（１） 適量
４．香料 適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。

処方例８ 軟膏
処方 配合量
１．アテモヤ果皮の熱水抽出物（製造例１） ０．０１部
２．アテモヤ果皮の５０％エタノール抽出物（製造例４） ０．５
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン １０．０
５．流動パラフィン ５．０
６．セタノール ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
８．プロピレングリコール １０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。

実験例１ ヒト皮膚繊維芽細胞ＮＢ１ＲＧＢを用いた過酸化脂質生成抑制作用
紫外線による繊維芽細胞の過酸化脂質生成抑制効果をＴＢＡ法にて測定した。

試料は製造例１、４及び５を用いた。

対数増殖期にある繊維芽細胞をφ６０ｍｍｄｉｓｈに３×１０４細胞播種し、Ｅａｇｌｅｓ’ＭＥＭ（１０％ＦＢＳを含む）を加え、３７℃、５％ＣＯ２条件下にて培養した。培養６日後に最終濃度１．０ｍｇ／ｍＬになるように試料を加えたＰＢＳを添加し、３７℃、５％ＣＯ２条件下にて３０分培養後、ＵＶＡ（６．５Ｊ／ｃｍ２）を照射した。照射後、細胞をｄｉｓｈから剥離し、細胞を超音波破砕した後、細胞破砕液０．２ｍＬに、８．１％ＳＤＳ０．２ｍＬ、２０％酢酸（ｐＨ３．５）１．５ｍＬ、０．８％チオバルビツール酸ナトリウム１．５ｍＬ、蒸留水０．６ｍＬを加え、よく攪拌した。さらに４００ｍＭ ＢＨＴ０．０１ｍＬを加え、１００℃で１時間反応させた。冷却後、反応液２ｍＬに６．２５％ピリジン含有ｎ−ブチルアルコール溶液２ｍＬを加え、よく攪拌した後、遠心分離し、ｎ−ブチルアルコール層の蛍光強度（励起波長５１５ｎｍ、蛍光波長５５３ｎｍ）を測定し、過酸化脂質量とした。さらに、紫外線を照射しないものを作成し、紫外線照射したものとの差を過酸化脂質生成量とした。過酸化脂質生成抑制率は、試料の代わりに溶媒のみを添加した場合の過酸化脂質生成量を１００とし、試料添加時の過酸化脂質生成量との割合から算出した。

これらの結果を表１に示した。アテモヤ果皮の抽出物は極めて高い過酸化脂質生成抑制作用を有していることが認められた。

実験例２ ＭＭＰ活性阻害試験

試料は製造例１、３、４及び５を用いた。

０．６ｍｇ／ｍＬのゼラチンを含む１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（１ｍｍ厚）を作製し、線維芽細胞の培養上清０．０１５ｍＬを非還元条件下で電気泳動した。その後、ゲルを２．５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（ＳＩＧＭＡ社製）の溶液にて室温で３０分間２回洗浄してＳＤＳを除去し、２００ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭ塩化カルシウム、０．０１％ｂｒｉｊ−３５（ＳＩＧＭＡ社製）を含む３０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．６）中にて３７℃で２４時間インキュベートした。この際、ゲルを浸した緩衝液中に試料を添加した。反応終了後ゲルを０．２％クマシーブリリアントブルーＲ（ＳＩＧＭＡ社製）の溶液にて染色し、５％メタノール−７．５％酢酸溶液にて脱色した。青色のゲル上で染色されないバンドとして検出される７２ｋＤａ付近のバンドにおけるコラゲナーゼ活性をデンシトメーター（アトー社製、アトーデンシトグラフ、ＡＥ−６９０５）にて定量化し、活性阻害率を算出した。阻害率の計算は、試料を添加していない場合のデンシトメーターの数値を１００とし、試料添加時の数値との割合から算出した。

これらの結果を表２に示した。アテモヤの抽出物は極めて高いＭＭＰ活性阻害作用を有していることが認められた。

実験例３ ヒスタミン遊離抑制試験

試料は製造例１、４及び５を用いた。

Ｗｉｓｔｅｒ系雄性ラット（８週齢）腹腔から採取した肥満細胞浮遊液を２×１０５個／ｍＬとなるように調整し、その６５０μＬにＩｇＥ抗体を含むラット血清の８倍希釈液３２０μＬを加え、３７℃で３０分インキュベートした。次に、試料を１．０あるいは０．３ｍｇ／ｍＬとなるように加え、３７℃で１０分間インキュベートした。さらに、卵白アルブミン２０μｇ及びフォスファチジルセリン３０μｇを加え、３７℃で２０分間インキュベートして抗原刺激を行った後、肥満細胞浮遊液を４℃に冷却し、反応を停止させた。十分に冷却した後、３，０００回転で５分間遠心分離し、遊離したヒスタミンを含む上清を回収した。上清のヒスタミンは、ｎ−ヘプタン中で塩酸を加えてヒスタミン塩酸塩とした後、ｏ−フタルアルデヒド法により、蛍光強度を測定することにより定量した。

これらの結果を表３に示した。アテモヤ果皮の抽出物は極めて高いヒスタミン遊離抑制作用を有していることが認められた。

実験例４ 使用試験１
処方例１の化粧水、処方例２のクリーム、比較例１の従来の化粧水及び比較例２の従来のクリームを用いて、女性２０人（２１〜４６才）を対象に１ヶ月間の使用試験を行った。使用後、肌のシワの改善効果をアンケートにより判定した。

これらの試験結果を表４に示した。アテモヤの抽出物を含有する皮膚外用剤は優れたシワの改善作用を示した。なお、試験期間中、皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。また、処方成分の劣化についても問題なかった。

実験例５ 使用試験２
処方例１の化粧水、処方例２のクリーム、比較例１の従来の化粧水及び比較例２の従来のクリームを用いて、肌荒れに悩む女性２０人（２１〜４６才）を対象に１ヶ月間の使用試験を行った。使用後、肌荒れの改善効果をアンケートにより判定した。

これらの試験結果を表５に示した。アテモヤの抽出物を含有する皮膚外用剤は、優れた肌荒れの改善作用を示した。なお、試験期間中、皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。また、処方成分の劣化についても問題なかった。

実施例３〜８についても同様に使用試験を行ったところ、優れたシワ、肌荒れ等の改善作用を示した。

以上のことから、本発明のアテモヤの抽出物は、優れた過酸化脂質生成抑制作用、ＭＭＰ活性阻害及びヒスタミン遊離抑制作用を有し、安全性が高く、化粧品、食品、医薬品などに利用可能である。

Claims (4)

1. アテモヤの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするシワ予防又は改善剤。
2. アテモヤの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。
3. アテモヤの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする肌荒れ改善剤。
4. アテモヤの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする過酸化脂質生成抑制剤。