JP3436741B2

JP3436741B2 - ポリヌクレオチドアレイの作製方法

Info

Publication number: JP3436741B2
Application number: JP2000374754A
Authority: JP
Inventors: 学原田
Original assignee: 日本レーザ電子株式会社
Priority date: 2000-12-08
Filing date: 2000-12-08
Publication date: 2003-08-18
Anticipated expiration: 2020-12-08
Also published as: JP2002181817A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明が属する技術分野】本発明は、支持体上に多種類
で多数のポリヌクレオチドをスポット状に固定したポリ
ヌクレオチドアレイの作製方法に関する。

【０００２】

【発明が解決しようとする課題】遺伝子発現や遺伝子多
系解析の研究においては、スライドガラス等の支持体表
面に、適当な塩類（０．４５mol／lの塩化ナトリウム、
０．０４５mol／lのクエン酸ナトリウム等）を含む夫々
の溶液に異なる種類のポリヌクレオチドを夫々溶解した
多種類のポリヌクレオチド溶液を、高密度で多数、スポ
ッティングして乾燥固定したポリヌクレオチドアレイ
（ＤＮＡチップ）を使用し、１回の測定作業で多種類の
ポリヌクレオチド試料を多項目にわたって同時に解析で
きるようにしている。

【０００３】しかし、上記のポリヌクレオチドアレイに
あっては、乾燥固定したポリヌクレオチドを乾燥固定し
た後にポリヌクレオチドの相互間の支持体表面に被検用
ヌクレオチドが付着するのを防止するブロッキング処理
を施したり、支持体表面に被検用ヌクレオチド溶液を滴
下してハイブリダイゼーションする際に、支持体表面か
らポリヌクレオチドが剥離し易く、被検用ヌクレオチド
を有効、かつ高感度に測定できなかった。

【０００４】この欠点は、支持体表面を、例えばアミノ
基と結合し易い状態に表面処理すると共に固定されるポ
リヌクレオチドの末端をアミノ化して固定強度を高くす
ることにより解決し得るが、多種類のポリヌクレオチド
の末端をアミノ化修飾するのに多大の費用と時間がかか
り、解析コストが増大する問題を生じさせていた。

【０００５】また、支持体表面とポリヌクレオチドの反
応時間を長くして固定化反応を高くするため、ポリヌク
レオチドが溶解される溶媒としてジメチルスルホキシド
やエチレングリコール等の吸水性が高い溶媒を使用する
処理方法が提案されている。

【０００６】この方法にあっては、支持体上にポリヌク
レオチドがスポッティングされた際にスポット形状が不
均一になり易く、ポリヌクレオチドの濃度が不均一にな
って被検用ヌクレオチドを高感度で、効率的に解析する
ことが困難であった。

【０００７】また、支持体表面に所定量で多数のポリヌ
クレオチド溶液をスポッティングする装置としては、先
端部に軸線方向に延びる縦割り溝を設けた分注針を使用
し、該縦割り溝内にポリヌクレオチド溶液をサンプリン
グした後に支持体表面に接触させることにより所定量の
ポリヌクレオチドを所定のスポット形状でスポッティン
グしている。

【０００８】しかし、上記した分注針を使用したスポッ
ティング方法にあっては、スポッティング初期には先端
部に付着した余剰のポリヌクレオチド溶液が流出して支
持体に付着してスポット径が大きくなることによりポリ
ヌクレオチドのスポット相互が汚染し合うおそれがある
と共にスポット形状が不均一化により濃度が均一化せ
ず、被検用ヌクレオチドを高感度に検出できない問題を
有している。

【０００９】更に、上記した分注針を使用したスポッテ
ィング方法にあっては、１個の分注針で多種類のポリヌ
クレオチド溶液をスポッティングしているが、分注針の
洗浄が不充分な場合にはスポッティングされるポリヌク
レオチドが汚染されて被検用ヌクレオチドを正確に解析
できなかった。

【００１０】本発明は、上記した従来の欠点を解決する
ために発明されたものであり、その課題とする処は、支
持体上にスポッティングされるポリヌクレオチドの相互
汚染を防止しながら多種類のポリヌクレオチドを濃度が
ほぼ均一な状態で強固に固定して被検用ヌクレオチドの
解析作業を有効、かつ効率的に行うことができるポリヌ
クレオチドアレイの作製方法を提供することにある。

【００１１】また、本発明の他の課題は、支持体上にス
ポッティングされるポリヌクレオチド試料のスポット濃
度をほぼ均一化して充分な測定感度を得ることができる
ポリヌクレオチドアレイの作製方法を提供することにあ
る。

【００１２】

【課題を解決するための手段】請求項１の発明は、支持
体表面に分注針を当接してポリヌクレオチド溶液をスポ
ッティングした後に固定してポリヌクレオチドアレイを
作製する方法において、１．ポリヌクレオチドを少なく
とも水に約１０体積％ホルムアミドを添加した溶媒に溶
解してポリヌクレオチド溶液に調整する、２．上記のよ
うに調整されたポリヌクレオチドを以下の工程に従って
支持体表面にポリヌクレオチドを固定することを特徴と
する。

【００１３】(1)．洗浄液により分注針の先端部を洗浄
する。 (2)．先端部が洗浄された分注針にポリヌクレオチド溶
液をサンプリングする。 (3)．ポリヌクレオチド溶液がサンプリングされた分注
針を捨て打ち板に当接して先端部に付着した余剰のポリ
ヌクレオチド溶液を除去する。 (4)．支持体表面に対して分注針を当接して多数のポリ
ヌクレオチド溶液をスポッティングする。 (5)．支持体表面にスポッティングされた多数のポリヌ
クレオチド溶液を乾燥してポリヌクレオチドを固定す
る。 (6)．ポリヌクレオチドが固定された支持体をブロック
液に浸漬してポリヌクレオチドスポット相互間の支持体
表面をブロッキング処理する。

【００１４】また、請求項２の発明は、支持体表面に分
注針を当接してポリヌクレオチド溶液をスポッティング
した後に固定してポリヌクレオチドアレイを作製する方
法において、１．ポリヌクレオチドを少なくとも水に約
１０体積％グリセロールを添加した溶媒に溶解してポリ
ヌクレオチド溶液に調整する、上記のように調整された
ポリヌクレオチドを以下の工程に従って支持体表面にポ
リヌクレオチドを固定することを特徴とする。

【００１５】(1)．洗浄液により分注針の先端部を洗浄
する。 (2)．先端部が洗浄された分注針にポリヌクレオチド溶
液をサンプリングする。 (3)．ポリヌクレオチド溶液がサンプリングされた分注
針を捨て打ち板に当接して先端部に付着した余剰のポリ
ヌクレオチド溶液を除去する。 (4)．支持体表面に対して分注針を当接して多数のポリ
ヌクレオチド溶液をスポッティングする。 (5)．支持体表面にスポッティングされた多数のポリヌ
クレオチド溶液を乾燥してポリヌクレオチドを固定す
る。 (6)．ポリヌクレオチドが固定された支持体をブロック
液に浸漬してポリヌクレオチドスポット相互間の支持体
表面をブロッキング処理する。

【００１６】

【発明の実施形態】以下、本発明の実施形態を図に従っ
て説明する。図１〜図２において、ポリヌクレオチドア
レイ１の支持体３は、例えばガラス、膜、プラスチック
（ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン等）等
が使用可能で、好適例としては、例えば松浪硝子工業株
式会社製のスライドガラス（型式Ｓ９１１５）が挙げら
れる。

【００１７】支持体の表面処理支持体３の表面は陽電荷処理またはアミノ化処理され
る。陽電荷処理としては支持体３の表面をポリ−Ｌ−リ
シンまたはアミノプロピルトリエトキシシラン等で表面
処理して陽電荷化させる。また、アミノ化処理としては
上記方法により陽電荷化された支持体３の表面を、アル
デヒド処理またはスクシニド処理してアミノ基が結合し
易い状態にする。このアミノ化処理は固定されるポリヌ
クレオチド末端のアミノ基の結合を促進させるのに有効
である。

【００１８】ポリヌクレオチド溶液の調整支持体３の表面に固定されるポリヌクレオチド溶液を以
下のように調整する。

【００１９】本発明で使用するポリヌクレオチド（核
酸）の種類は特に限定されず、ＤＮＡ（デオキシリボ核
酸）、ＲＮＡ（リボ核酸）等が挙げられる。そしてＤＮ
Ａ及びＲＮＡについても特に限定されず、染色体ＤＮＡ
由来のＤＮＡ断片、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、化学合成ＤＮ
Ａまたは化学合成ＲＮＡの何れでもよく、具体的にはＰ
ＣＲ増幅産物、制限酵素切断処理ＤＮＡ等の何れであっ
てもよい。

【００２０】本発明で使用するポリヌクレオチドは、任
意生物に由来するものを使用できる。また、本発明で使
用するポリヌクレオチドは疾患と関連することが知られ
ている染色体位置由来のＤＮＡ断片、ｃＤＮＡ断片、化
学合成ＤＮＡが挙げられる。更に、本発明のポリヌクレ
オチドは特定の遺伝子の一部を含むＤＮＡ断片、転写レ
ベルの異常が見られるｍＲＮＡまたは該ｍＲＮＡに由来
するｃＤＮＡでもよい。

【００２１】上記した本発明のポリヌクレオチドは、純
水または３×ＳＳＣ溶液（０．４５Ｍ塩化ナトリウム、
０．０４５Ｍクエン酸ナトリウムでｐＨ：７．０に調
整）に１０体積％のホルムアミドまたはグリセロールを
添加してポリヌクレオチド濃度を０．５〜５０pmol/μl
に調整したものを使用する。

【００２２】支持体３の表面に対する前記ポリヌクレオ
チド溶液をスポッティングするには、多数の分注針５
が、例えば１００〜２００μｍの間隔でマトリクス状に
配列された分注ヘッド７を使用。支持体３の表面に対し
てＸ−Ｙ−Ｚ軸方向へ移動制御して多数のポリヌクレオ
チド溶液をスポッティングする。このスポッティングに
使用する各分注針５は先端直径が、例えば１００〜２０
０μｍで、先端から軸線方向へ縦割り溝５ａが形成さ
れ、縦割り溝５ａ内にスポッティングされるポリヌクレ
オチド溶液を毛細管現象により吸水させて溜める。

【００２３】分注針５としては先端部に貫通孔が形成さ
れると共に先端部外周に加熱部材を取り付け、後端部に
設けられたタンク内に溜められて貫通孔内に滞留するポ
リヌクレオチド溶液を加熱部材に瞬間加熱して気泡化し
て支持体３の表面に飛び出させることによりスポッティ
ングするものであってもよい。

【００２４】また、上記した気泡飛び出し形式の分注針
のほかにピエゾ素子の変形や超音波振動を利用してポリ
ヌクレオチド溶液を直接飛び出させて支持体３の表面に
スポッティングする形式であってもよい。

【００２５】洗浄分注ヘッド７を移動制御して支持体３の表面にポリヌク
レオチド溶液をスポッティングする際に、先ず、分注ヘ
ッド７における各分注針５の先端部を洗浄し、スポッテ
ィングされる多種類のポリヌクレオチド相互が汚染（キ
ャリーオーバー）されるのを防止する。

【００２６】洗浄方法としては、先ず、分注ヘッド７に
おける各分注針５の先端を多孔質セラミック板、吸水紙
板等の洗浄吸水板に押し当てて各縦割り溝５ａ内に残溜
したポリヌクレオチド溶液を排出させた後、０．１％ド
デシル硫酸ナトリウム水溶液槽、超純水槽、エタノール
槽の順に約１〜５sec.間、浸漬して洗浄した後、各分注
針５の先端部を気相吸引して付着したエタノールを乾燥
させて行う。

【００２７】ポリヌクレオチドのサンプリング上記のように洗浄された分注ヘッド７における各分注針
５の先端部を、支持体３表面に固定しようとする多種類
のポリヌクレオチド溶液が溜められた、例えば３８４穴
マルチプレートの各溶液槽内に約７sec.間、浸漬して各
縦割り溝５ａ内に、ポリヌクレオチド溶液を毛細管現象
により吸水させてサンプリングする。

【００２８】余剰ポリヌクレオチドの除去分注ヘッド７によるスポッティング作業に先立って捨て
打ち操作を行う。即ち、分注針５にポリヌクレオチド溶
液をサンプリングした際に各分注針５の先端部外面には
余剰のポリヌクレオチド溶液が付着したままの状態にな
っている。このため、各分注針５の先端面を多孔質セラ
ミック板、吸水紙板またはガラス板等の捨て打ち板に対
し、１回当り約０．５〜１sec.間で数回、押し当てるこ
とにより各分注針５の先端部外面に付着した余剰溶液を
吸収させる。

【００２９】これにより支持体３表面に対するスポッテ
ィング初期に分注針５の先端部に付着した余剰のポリヌ
クレオチド溶液がスポッティングされるのを防止し、ス
ポッティングされるポリヌクレオチド溶液による各スポ
ットの大きさをほぼ均一にしてポリヌクレオチド溶液の
濃度を均一化させると共にスポット相互間の汚染を防止
する。

【００３０】スポッティング次に、支持体３表面に対し、分注ヘッド７をＸ−Ｙ−Ｚ
軸方向へ移動制御して分注ヘッド７における各分注針５
の先端面を約０．５〜１sec.間、当接させて多種類のポ
リヌクレオチド溶液をマトリクス状にスポッティングす
る。このスポッティング作業において分注ヘッド７はＸ
−Ｙ軸方向に対し、各スポットの相互間隔が約１００〜
２００μｍになるように移動制御される。その際のスポ
ッティング環境としては、常温環境下であってもよい
が、好ましくは外部環境温度を約２〜１０℃、好適例と
しては約２〜６℃で、湿度を５０〜７０％に保って行う
ことによりスポッティングされたポリヌクレオチド溶液
が短時間に乾燥するのを回避して固定化時間を長くする
ことができる。

【００３１】具体的には、支持体３及び分注ヘッド７を
含む領域全体を外気と仕切ると共に仕切られた内部領域
に温度センサー、湿度センサーを設けて上記設定温度及
び湿度となるように加熱及び加湿する装置が設けて行な
う。

【００３２】次に、多種類のポリヌクレオチド溶液を多
数、スポッティングした支持体３表面に水蒸気を約１〜
３sec.間、吹き付けた後に支持体３を約８０〜９５℃に
加熱されたホットプレート上に載置して乾燥固定させ
る。支持体３の表面に分注針５の先端面を当接してポリ
ヌクレオチド溶液をスポッティングした際には各スポッ
トにおけるポリヌクレオチド溶液の付着状態が不均一に
なってスポット内の濃度が一定しない。これを回避する
ため、支持体３に対するポリヌクレオチド溶液のスポッ
ティング後、水蒸気を吹き付けることによりスポッティ
ングされたポリヌクレオチド溶液の濃度を低くして各ス
ポットにおける付着状態を均一化させる。

【００３３】このとき、ホルムアミドが添加されたポリ
ヌクレオチド溶液にあっては、ホルムアミドによりヌク
レオチドの変性が阻害されることにより一定形態を保つ
ことができる。このため、陽電荷化処理された支持体３
の表面にスポッティングした際には、ポリヌクレオチド
において陰電荷化したリン酸が支持体３表面に静電結合
し合う確率を高めている。

【００３４】また、アミノ化処理された支持体３の表面
にスポッティングした際にはポリヌクレオチド末端のア
ミノ基との結合確率を高めている。即ち、ポリヌクレオ
チドが絶えず変性する場合には静電結合或いはアミノ基
結合がし難くなるが、ポリヌクレオチドの変性を阻害し
て一定形態にすることにより結合確率を高めることがで
きる。

【００３５】更に、グリセロースが添加されたポリヌク
レオチド溶液にあっては、ホルムアミド添加のようにヌ
クレオチドの変性は阻害されず、絶えず変性するが、乾
燥時間を長くして静電結合またはアミン基結合の時間を
長くして結合確率を高めることができる。

【００３６】これにより支持体３表面に対するポリヌク
レオチドの固定強度を高くする。

【００３７】乾燥次に、ポリヌクレオチドが固定された支持体３表面に対
し、ＵＶクロスリンカー（Ｈｏｅｆｅｒ社製ＵＶＣ５
００）を使用して約５０〜１２０ｍＪの紫外光を照射し
てポリヌクレオチドを固定化する。

【００３８】ブロッキング処理次に、支持体３表面におけるポリヌクレオチドの非スポ
ッティング領域をブロッキング処理する。ブロッキング
処理方法としては、１〜１．５ｗｔ％無水こはく酸、９
０体積％Ｎ−メチルピロシノン、１０体積％０．２Ｍほ
う酸ナトリウム溶液（pH：８．０）でpH５〜６に調整さ
れたブロック液中にポリヌクレオチドが固定された支持
体３全体を約１５min.間、浸漬して行なう。

【００３９】そしてブロック溶液から取り出した支持体
３を９５〜９９℃の熱水に浸漬して約６０秒間、放置し
た後、支持体３をエタノールに浸漬した後に、支持体３
表面を風乾させる。

【００４０】他のブロッキング処理方法としては、ブロ
ック液にエタノールアミン溶液でpH８〜９に調整したも
のを使用し、同様に浸漬して行なう。即ち、ポリヌクレ
オチドがスポッティングされた支持体３を４５〜６５℃
の飽和水蒸気下で４〜１４時間、インキベーションした
後、各終濃度５０ｍｍｏｌ／ｌエタノールアミン、
０．１Ｍトリス緩衝液ｐＨ：９．０、０．１％ドデシル
硫酸ナトリウムで全体がｐＨ：８〜９に調整したブロッ
ク液に１０〜３０min.浸漬し、次に水洗した後に５０
℃、０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを含むＳＳＣ溶液
に１５〜６０min.浸漬する。更に、水洗後、支持体３に
付着した液体成分を除去した後に乾燥して行なう。

【００４１】比較例１本比較例においては、酵母内の機能ヌクレオチドをコピ
ーした合成オリゴヌクレオチド（８０塩基、終濃度２５
pmol/μl）を、３×ＳＳＣ溶液、リン酸緩衝液（ｐＨ：
７．５）、超純水、１０体積％ホルムアルデヒド水溶液
の４種類の溶媒に溶解した合成オリゴヌクレオチド溶液
を使用し、各溶媒毎の固定化率を検証した。

【００４２】ハイブリダイゼーションに使用したヌクレ
オチドは、支持体３表面に固定された合成オリゴヌクレ
オチドと相補的塩基配列を持ち、蛍光色素（Cy３）によ
り標識されたオリゴヌクレオチド（８０塩基、終濃度１
pmol/μl、０．１g/ml鮭精子ＤＮＡを含む）を使用し
た。

【００４３】また、支持体３としては、松浪硝子工業株
式会社製のＤＮＡチップ用スライドガラス（商品名：Ｍ
ＡＳコートスライド）を使用した。

【００４４】図３及び図４で示すように、溶媒としての
ホルムアルデヒドで合成オリゴヌクレオチドを溶解した
場合が、他の溶媒に比べて蛍光強度が一番高いことを示
している。この事実は合成オリゴヌクレオチドの溶媒と
してホルムアルデヒドを使用した場合に、支持体３表面
に対する合成オリゴヌクレオチドの固定量が一番多いこ
とを示している。

【００４５】図５は、溶媒としてホルムアミドを使用し
て合成オリゴヌクレオチドを溶解した合成オリゴヌクレ
オチド溶液をスポッティングして固定したポリヌクレオ
チドアレイ１に対し、ブロッキング過程及びハイブリダ
イゼーション過程を施した場合における支持体３表面に
おける合成オリゴヌクレオチドスポットの固定化率につ
いて１６回試行した結果であり、溶媒としてホルムアミ
ドを使用した場合においては平均固定化率は９７．６％
であり、充分の固定量を残すことができた。

【００４６】比較例２図６及び図７はスポッティングに先だって捨て打ちを行
なった場合と行なわない場合との比較を示し、本実験に
おいては吸水板９として多孔質セラミック板を使用する
と共に支持体３の表面にスポッティングするポリヌクレ
オチドとしてλファージＤＮＡを蛍光色素（Ｃｙ３）で
標識したものを使用した。

【００４７】そして支持体３表面に対し、１回のスポッ
ティング作業で１１６スポットを連続スポッティングし
た後に、スキャナーで蛍光強度を読み取ってグラフ化し
た。

【００４８】この結果、支持体３表面にスポッティング
するのに先立って数回、捨て打ち（タッピング）した場
合には、タッピングしない場合に比べて１スポット当り
の蛍光強度が均一化している。反対にタッピングしない
場合には、スポッティング初期の蛍光強度が高く、従っ
てポリヌクレオチドのスポット量が多いことを示してい
る。

【００４９】比較例３一本の分注針５を使用し、純水に４００fmol/μlの蛍光
色素（Ｃｙ３、Ｃｙ５）を溶解した蛍光溶液と純水とを
交互にサンプリングして支持体３表面にスポッティング
し、スキャナーにより蛍光標識を検出する。スポッティ
ングサイクルは、蛍光サンプリング→スポッティング→
洗浄→純水サンプリング→スポッティング・・・の順に
行い、分注針５の洗浄効果を検証する。

【００５０】図８に示すように蛍光が検出されるスポッ
トと非検出のスポットとが交互に表われることから、上
記した分注針５の洗浄により縦割り溝５ａ内がほぼ完全
に洗浄され、純水中に蛍光色素が検出されていないこと
を示している。

【００５１】

【発明の効果】本発明は、支持体上にスポッティングさ
れるポリヌクレオチドの相互汚染を防止しながら多種類
のポリヌクレオチドを濃度がほぼは均一な状態で強固に
固定して被検用ヌクレオチドの解析作業を有効、かつ効
率的に行うことができる。また、支持体上にスポッティ
ングされるポリヌクレオチド試料のスポット濃度をほぼ
均一化して充分な測定感度を得ることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ポリヌクレオチドアレイの作製工程を示す説明
図である。

【図２】ポリヌクレオチドアレイのスポッティング状態
を示す部分斜視図である。

【図３】各溶媒に溶解したポリヌクレオチドを使用して
ハイブリダイゼーションした際の各溶媒毎の蛍光状態を
スキャナーにより観察した写真である。

【図４】図３の各スポットの蛍光強度を定量化したグラ
フである。

【図５】ブロッキング過程及びハイブリダイゼーション
過程の回数に応じたポリヌクレオチドの固定化率を示す
表である。

【図６】支持体にポリヌクレオチドをスポッティングす
るに先立って分注針をタッピングした際の蛍光強度を示
すグラフである。

【図７】タッピングせずにスポッティングした際の蛍光
強度を示すグラフである。

【図８】分注針の洗浄効果を示す写真である。

【符号の説明】

１−ポリヌクレオチドアレイ、３−支持体、５−分注
針、５ａ−縦割り溝

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩＧ０１Ｎ 37/00 １０２Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｆ

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】支持体表面に分注針を当接してポリヌクレ
オチド溶液をスポッティングした後に固定してポリヌク
レオチドアレイを作製する方法において、以下の事項か
らなるポリヌクレオチドアレイの作製方法。１．ポリヌクレオチドを少なくとも水に約１０体積％ホ
ルムアミドを添加した溶媒に溶解してポリヌクレオチド
溶液に調整する。２．以下の工程に従って支持体表面にポリヌクレオチド
を固定する。 (1)．洗浄液により分注針の先端部を洗浄する。 (2)．先端部が洗浄された分注針にポリヌクレオチド溶
液をサンプリングする。 (3)．ポリヌクレオチド溶液がサンプリングされた分注
針を捨て打ち板に当接して先端部に付着した余剰のポリ
ヌクレオチド溶液を除去する。 (4)．支持体表面に対して分注針を当接して多数のポリ
ヌクレオチド溶液をスポッティングする。 (5)．支持体表面にスポッティングされた多数のポリヌ
クレオチド溶液を乾燥してポリヌクレオチドを固定す
る。 (6)．ポリヌクレオチドが固定された支持体をブロック
液に浸漬してポリヌクレオチドスポット相互間の支持体
表面をブロッキング処理する。
【請求項２】支持体表面に分注針を当接してポリヌクレ
オチド溶液をスポッティングした後に固定してポリヌク
レオチドアレイを作製する方法において、以下の事項か
らなるポリヌクレオチドアレイの作製方法。１．ポリヌクレオチドを少なくとも水に約１０体積％グ
リセロールを添加した溶媒に溶解してポリヌクレオチド
溶液に調整する。２．以下の工程に従って支持体表面にポリヌクレオチド
を固定する。 (1)．洗浄液により分注針の先端部を洗浄する。 (2)．先端部が洗浄された分注針にポリヌクレオチド溶
液をサンプリングする。 (3)．ポリヌクレオチド溶液がサンプリングされた分注
針を捨て打ち板に当接して先端部に付着した余剰のポリ
ヌクレオチド溶液を除去する。 (4)．支持体表面に対して分注針を当接して多数のポリ
ヌクレオチド溶液をスポッティングする。 (5)．支持体表面にスポッティングされた多数のポリヌ
クレオチド溶液を乾燥してポリヌクレオチドを固定す
る。 (6)．ポリヌクレオチドが固定された支持体をブロック
液に浸漬してポリヌクレオチドスポット相互間の支持体
表面をブロッキング処理する。
【請求項３】請求項１または２において、溶媒に溶解し
たポリヌクレオチド濃度を０．５〜５０pmol/μlとした
ポリヌクレオチドアレイの作製方法。
【請求項４】請求項１または２において、ポリヌクレオ
チドを生体遺伝子由来のＰＣＲ増幅産物としたポリヌク
レオチドアレイの作製方法。
【請求項５】請求項１または２において、ポリヌクレオ
チドを人工合成したオリゴヌクレオチドとしたポリヌク
レオチドアレイの作製方法。
【請求項６】請求項１または２において、捨て打ち板は
多孔質セラミックス板、吸水紙板及びガラス板の何れか
としたポリヌクレオチドアレイの作製方法。
【請求項７】請求項１または２において、分注針の洗浄
を、吸水材に接触させて縦割り溝内に残留するポリヌク
レオチド溶液を排出する、０．１％ドデシル硫酸ナトリ
ウム溶液に浸漬する、純水に浸漬する、エタノールに浸
漬する、気相吸引乾燥する工程により行なうポリヌクレ
オチドアレイの作製方法。
【請求項８】請求項１または２において、支持体表面に
対するポリヌクレオチドのスポッティング環境を常温環
境としたポリヌクレオチドアレイの作製方法。
【請求項９】請求項１または２において、支持体表面に
対するポリヌクレオチドのスポッティング環境を、温度
２〜１０℃、湿度５０〜７０％としたポリヌクレオチド
アレイの作製方法。
【請求項１０】請求項１または２において、支持体表面
はポリ−Ｌ−リシン及びアミノプロピルトリエトキシシ
ランの何れかによる表面処理により陽電荷化したポリヌ
クレオチドアレイの作製方法。
【請求項１１】請求項１または２において、支持体表面
はアルデヒド処理及びスクシニド処理の何れかによりア
ミノ化したポリヌクレオチドアレイの作製方法。
【請求項１２】請求項１または２において、ブロック液
は少なくともpH５〜６に調整されたこはく酸溶液とした
ポリヌクレオチドアレイの作製方法。
【請求項１３】請求項１または２において、ブロック液
は少なくともpH８〜９に調整されたエタノールアミン溶
液としたポリヌクレオチドアレイの作製方法。
【請求項１４】請求項１または２において、ポリヌクレ
オチド溶液がスポッティングされた支持体の表面に水蒸
気を吹き付けて各スポットにおけるポリヌクレオチド溶
液の付着状態を均一化するポリヌクレオチドアレイの作
製方法。
【請求項１５】請求項１または２において、分注針は先
端部に軸線方向へ延びる縦割り溝を形成し、該縦割り溝
内にポリヌクレオチド溶液をサンプリング可能にしたポ
リヌクレオチドアレイの作製方法。
【請求項１６】請求項１または２において、分注針は貫
通孔を有した先端部に加熱部材を設け、該貫通孔内のポ
リヌクレオチド溶液を加熱部材により瞬間加熱して気泡
化して支持体表面にポリヌクレオチド溶液をスポッティ
ングするポリヌクレオチドアレイの作製方法。