JP2873894B2

JP2873894B2 - 環状デプシペプチドおよびその製造法

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Publication number: JP2873894B2
Application number: JP27909492A
Authority: JP
Inventors: 真大山; 裕美子岡田; 幸二中川; 誠之高木; 忠昭岡田; 安村井; 利夫米田; 勝春飯沼
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1992-10-19
Filing date: 1992-10-19
Publication date: 1999-03-24
Anticipated expiration: 2014-03-24
Also published as: JPH06184126A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規な環状デプシペプ
チド並びにその製造法に関する。本発明の環状デプシペ
プチドPF1022E は駆虫作用を有しており医薬、動物薬等
の分野への応用が期待される。

【０００２】

【従来の技術】駆虫活性を有する化合物は多数知られて
いるが、微生物の生産物で駆虫活性を有する物質として
はデストマイシンＡ、ハイグロマイシンＢ、アベルメク
チン等が挙げられるが、その数は少ない。本発明者らは
先にニワトリ回虫を用いる探索研究の結果、駆虫活性を
有する環状デプシペプチド物質（PF1022）を発見した
〔特開平3-35796〕。また、その類縁物質としては特願
平3-163085が知られている。その後、本物質生産菌の培
養物を精査したところ、新たに新規な環状デプシペプチ
ドを単離することができた。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】寄生虫病と呼ばれる病
気は、人間および動物の健康ならびに農業に多大の被害
を及ぼす。そのような背景から新規にして有用な駆虫活
性物質の出現とその有利な製造法は常に求められる課題
である。本発明者らは以上のような点に着目し、その可
能性のある新規な物質を提供するとともに、その製造法
を確立することを目的とした。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の課題
を解決すべく新規な駆虫剤としての用途が期待される化
合物の探索を行って来たところ、上述の駆虫活性を有す
る環状デプシペプチド（PF1022物質）生産菌の培養物中
に、PF1022物質と類似の物理化学的性質を有する環状デ
プシペプチドPF1022E物質が存在することを見出し、こ
れを単離し、その物理化学的性質を明らかにすることに
より本発明を完成させた。本発明の目的は、新規環状デ
プシペプチドPF1022E物質ならびにその製造法を提供す
ることにある。第１の本発明の要旨とするところは、下
記の式（Ｉ）

【０００５】

【化２】（Ｉ）（Ｐｈはフェニル基を示し、Ｍｅはメチル基を示す。）

【０００６】で表される環状デプシペプチドPF1022E 物
質を提供することである。さらに第２の発明は、糸状菌
に属するPF1022E物質生産菌を培養し、その培養物からP
F1022E物質を採取することを特徴とするPF1022E物質の
製造法にある。本発明に使用されるPF1022E物質生産菌
の一例としては、1988年、沖縄県与那国島のサトウキビ
葉から分離されたPF1022株がある。本菌株は工業技術院
微生物工業技術研究所に微工研菌寄第P-10504号として
寄託されていたが、現在は微工研条寄第2671号（FERM B
P-2671）として寄託されている。本菌株の性状は本発明
者らによる発明；「環状デプシペプチド物質およびその
製造法ならびにそれを含有する駆虫剤」（特開平3-3579
6) に述べられているものと同一である。

【０００７】１．PF1022E物質生産菌の培養法無胞子不完全菌目に属するPF1022E物質生産菌を通常の
微生物が利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。
栄養源としては、従来カビの培養に利用されている公知
のものが使用できる。例えば、炭素源としては、グルコ
−ス、シュクロ−ス、水飴、デキストリン、澱粉、グリ
セロ−ル、糖密、動・植物油等を使用しうる。また、窒
素源としては、大豆粉、小麦胚芽、コ−ン・スティ−ブ
・リカ−、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、
硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、カリウム、カルシ
ウム、マグネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸およ
びその他のイオンを生成することができる無機塩類を添
加することは有効である。また、菌の発育を助け、PF10
22E物質の生産を促進するような有機および無機物を適
当に添加することができる。

【０００８】培養法としては、好気的条件での培養法、
特に深部培養法が最も適している。培養に適当な温度は
15〜30℃であるが、多くの場合26℃付近で培養する。PF
1022E物質の生産は培地や培養条件により異なるが、振
盪培養、タンク培養のいずれにおいても通常2〜10日間
でその蓄積が最高に達する。培養中のPF1022E物質の蓄
積量が最高になった時に培養を停止し、培養液から目的
物質を単離精製する。

【０００９】２．PF1022E物質の精製法本発明によって得られるPF1022E物質の培養液からの採
取に当たっては、その性状を利用した通常の分離手段、
例えば、溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、吸着又は分配
カラムクロマト法、ゲルろ過法、透析法、沈澱法等を単
独でまたは適宜組合せて抽出精製することができる。例
えば、培養菌体中からはアセトン−水、メタノ−ル−水
または酢酸エチル等で抽出される。また培養液中に蓄積
されたPF1022E物質は、水と混ざらない有機溶剤、例え
ば、ブタノ−ル、酢酸エチル等で抽出すれば有機溶剤層
に抽出される。PF1022E物質を更に精製するには、シリ
カゲル（ワコ−ゲルC-200、和光純薬工業社製等) 、ア
ルミナ等の吸着剤やセファデックスLH-20（ファルマシ
ア社製）、トヨパ−ルHW-40（株式会社東ソ−社製）等
を用いるクロマグラフィ−を行うとよい。以上のような
方法により、あるいはこれらを適宜組合せることによ
り、高純度のPF1022E物質が得られる。得られたPF1022E
物質の物理化学的性状は次の通りである。

【００１０】１．PF1022E物質の物理化学的性状（１）色および形状：無色粉末（２）融点：142〜144℃ （３）分子式：Ｃ₅₂Ｈ₇₆Ｎ₄Ｏ₁₃
（４）マススペクトル (EI-MS) ：m/z 964 （Ｍ⁺）（５）比旋光度：〔α〕D²⁵＝−100
^。(c 1.0, MeOH) （６）紫外部吸収スペクトル： λ_maxnm (MeOH,E^1% _1cm)：278(6.5) （７）赤外部吸収スペクトル：図１ 3434,2959,2872,1744,1663,1518,1470,1416,1370,1331,
1271,1194,1128,1078,1028,835,750,702,511 （KBr cm
^ー1）（８）¹ＨＮＭＲスペクトル：図２（９）溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノ−ル、ジメチルスルホキシドに可溶で、水に
不溶である。（10）薄層クロマトグラフィ−（シリカゲルプレ−ト60
F₂₅₄、0.25mm、西独メルク社製）：クロロホルム：酢酸
エチル＝１：１ Rf値 0.24 （11）塩基性、酸性、中性の区分：中性物質さらに構造研究の結果、PF1022E物質の化学構造を、前
記の式（Ｉ）のごとく決定した。

【００１１】以下に本発明の実施例を示すが、PF1022E
物質の性状が本発明によって明らかにされたので、それ
らの性状にもとづきPF1022E物質の製造法を種々考案す
ることができる。従って本発明は実施例に限定されるも
のではなく、実施例の修飾手段は勿論、本発明によって
明らかにされたPF1022E物質の性状にもとづいて公知の
手段を施してPF1022E物質を生産、濃縮、抽出、精製す
る方法をすべて包括する。

【００１２】

【実施例】種培地として、可溶性澱粉2.0%、グルコ−ス
1.0%、ポリペプトン0.5%、小麦胚芽0.6%、酵母エキス0.
3%、大豆粕0.2%、炭酸カルシウム0.2%の組成からなる培
地を用いた。また生産培地として、グルコ−ス2.0%、澱
粉1.0%、小麦胚芽0.8%、大豆粕1.3%、肉エキス0.38% 、
塩化ナトリウム0.13%、炭酸カルシウム0.15%の組成から
なる培地を用いた。なお、殺菌前pHはすべてpH7.0に調
整して使用した。

【００１３】前記の種培地(40 ml)を分注した200 ml容
三角フラスコを120℃で15分間殺菌し、PF1022株の斜面
寒天培養の2〜3白金耳を接種し、26℃で48時間振盪培養
して種培養とした。次いで、前記の種培地50 Lを130 L
容醗酵槽に仕込み120 ℃で15分間殺菌し、これに前記フ
ラスコ種培養25本を接種して、26℃で48時間振盪培養
し、これをタンク種培養とした。次いで、前記の生産培
地１KLを２KL容醗酵槽に仕込み、120 ℃で25分間殺菌
し、これに前記タンク種培養より40L接種し、26℃で７
日間通気攪拌培養した。培養終了後、濾過助剤として珪
藻土を加えて濾過し、菌体約90gを得た。

【００１４】２バッチ分の菌体180Kgにメタノ−ル(710
L)を加え、２時間攪拌後菌体を濾別して菌体抽出液を得
た。菌体抽出液は、減圧下でメタノ−ルを留去して50 L
の濃縮液とした。この濃縮液を酢酸エチル(60 L)を加
え、活性成分を抽出し、酢酸エチル層を濃縮乾固し油状
物質を得た。この油状物質にヘキサン- アセトニトリル
の混合溶媒5 Lを加え攪拌後分配したアセトニトリル濃
縮乾固し、粉末(1.64 Kg)を得た。この粉末をメタノ−
ル−脱イオン水1.64 L（50:1）に溶解し氷冷して5時間
攪拌し、一夜冷却し結晶化した。結晶をNo.3のグラスフ
ィルタ−で濾過し、冷メタノ−ル(2.3 L)で洗う。結晶
母液を濃縮乾固し粉末260gを得た。この粉末260gのう
ち、40 gをシリカゲルのカラムクロマト（クロロホル
ム：酢酸エチル＝１：１、ワコ−ゲルＣ-200 400 g）で
精製を２回、（クロロホルム：酢酸エチル＝２：１、ワ
コ−ゲルＣ-200 400 g）で精製を１回行いPF1022E物質
1.77 gを得た。本物質は前記の物理化学的性状を有す
る。

【００１５】

【発明の効果】本発明のPF1022E物質は、新規な環状デ
プシペプチドでありPF1022物質と同様に駆虫剤としての
用途が期待される。

【００１６】

【図面の簡単な説明】

【図１】PF1022E物質のKBr中での赤外部吸収スペクトル

【図２】PF1022E物質の重メタノ−ル溶液中での500 MHz
¹H NMRスペクトル

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者高木誠之神奈川県横浜市港北区師岡町760番地明治製菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者岡田忠昭神奈川県横浜市港北区師岡町760番地明治製菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者村井安神奈川県小田原市栢山788 明治製菓株式会社薬品技術研究所内 (72)発明者米田利夫神奈川県小田原市栢山788 明治製菓株式会社薬品技術研究所内 (72)発明者飯沼勝春神奈川県小田原市栢山788 明治製菓株式会社薬品技術研究所内 (56)参考文献特開平３−35796（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C07D 273/00 C12P 17/00 - 17/18 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の式（Ｉ）【化１】（Ｉ）（Ｐｈはフェニル基を示し、Ｍｅはメチル基を示す。）
で表される環状デプシペプチドPF1022E 物質。
【請求項２】ＰＦ１０２２Ｅ物質生産菌ＰＦ１０２２株
（ＦＥＲＭＢＰ−２６７１）を培養し、その培養物か
ら請求項１記載の構造式で示されるＰＦ１０２２Ｅ物質
を採取することを特徴とするＰＦ１０２２Ｅ物質の製造
法。