JP2023525034A

JP2023525034A - Ｖｅｇｆトラップおよびミニトラップならびに眼障害およびがんの治療方法

Info

Publication number: JP2023525034A
Application number: JP2022567484A
Authority: JP
Inventors: ウィリアム・オルソン; ジョエル・マーティン; ニール・スタール; ジー・キム
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2020-05-08
Filing date: 2021-05-07
Publication date: 2023-06-14
Also published as: KR20230008830A; MX2022013812A; US20240124554A1; CA3182893A1; AU2021268026A1; WO2021226444A2; EP4146686A2; US20210347852A1; WO2021226444A3; US12103960B2; CN115803009A

Abstract

本発明は、ＶＥＧＦに結合し、ＶＥＧＦ受容体とのその相互作用をブロックする、多量体化成分に融合されたＶＥＧＦ受容体Ｉｇ様ドメインを含むＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップに関する。そのような分子は、血管新生性眼障害（例えば、加齢性黄斑変性症）、がん、および他の望ましくない血管新生を治療するために有用である。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年５月８日に出願された米国特許仮出願第６３／０２２，１７８号の優先権を主張するものであり、その各々の開示は、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる。

配列表
本出願の配列表は、ファイル名が「２５０２９８＿０００２１５＿ＳＬ．ｔｘｔ」であり、２０２１年５月６日に作成され、サイズが１７１，９８２バイトであるＡＳＣＩＩ形式の配列表として電子的に提出されている。この提出された本配列表は、本明細書の一部であり、参照によってその全体が本明細書に組み入れられる。

本発明の分野は、がんおよび血管新生性眼障害の治療に有用なＶＥＧＦトラップおよびミニトラップ分子、ならびにそのような治療方法自体に関する。

幾つかの眼障害は、病理学的血管新生に関連する。例えば、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）の発症は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）と呼ばれるプロセスに関連する。ＣＮＶからの漏出は、黄斑浮腫および黄斑下液の集積を引き起こし、視力喪失をもたらす。糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）は、血管新生成分による別の眼疾患である。ＤＭＥは、糖尿病患者における中等度の視力喪失の最も多く見られる原因であり、網膜血管に影響を及ぼす疾患である糖尿病性網膜症の一般的な合併症である。臨床的に重要なＤＭＥは、網膜の光感受性部分でありはっきりとした直接視力に寄与する黄斑の中心へと液体が漏出した際に生じる。黄斑内の液体は、重度の視力喪失または失明を引き起こす可能性がある。異常な血管新生に関連するさらに別の眼障害は、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）である。ＣＲＶＯは、網膜中心静脈の閉塞により引き起こされ、閉塞は、網膜内の血液および液体の停滞に結び付く。また、網膜は、虚血状態になり、不適切な血管の成長が新たにもたらされる可能性があり、それによりさらなる視力喪失およびより深刻な合併症が引き起こされる可能性がある。血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の放出は、眼の血管透過性の増加および不適切な新しい血管成長に寄与する。したがって、ＶＥＧＦの血管新生促進特性を阻害することは、血管新生性眼障害を治療するための効果的な戦略である。

このような眼障害の治療には、ＶＥＧＦトラップであるアイリーア（アフリベルセプト）などの種々のＶＥＧＦ阻害剤が承認されている。ＶＥＧＦトラップの断片であるミニトラップも、そのような血管新生性眼障害を治療するための有用な手段である。しかしながら、ＶＥＧＦミニトラップは、患者の体内で抗ヒンジ抗体（ＡＨＡ）と反応するという欠点を被る可能性がある。そのようなＡＨＡは、短縮された免疫グロブリンＦｃのＣ末端残基が露出する場合に作出されるネオエピトープを認識する。ＡＨＡは、関節リウマチなどの自己免疫性疾患を有する個体で同定されているが、そのような抗体の機能はよくわかっていない。非特許文献１。

Ｆａｌｋｅｎｂｕｒｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８巻：８２～９３頁（２０１７年）。

本発明は、ドメイン構造：
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）、
または
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ４）］ａ－多量体化成分（ＭＣ）
により特徴付けられるＶＥＧＦミニトラップであって、
式中、ａ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ＭＣは、
－ステルス突然変異（例えば、残基ＥＬＬＧ（配列番号９０）がＰＶＡに突然変異されている）を含むＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＩｇＧ１ヒンジ領域－ＩｇＧ２ヒンジ領域キメラ（例えば、ＩｇＧ１残基ＥＬＬＧ（配列番号９０）がＰＶＡに変異されている）；
－ｕｂｅｒ突然変異（例えば、残基ＥＬＬＧ（配列番号９０）がＧＧＧに突然変異されている）を含むＩｇＧ１ヒンジ領域
－残基ＡＰＥＬ（配列番号９１）が突然変異されている（例えば、ＧＧＧＦ（配列番号９２）に、ＧＧＧＧ（配列番号９３）に、またはＧＧＧＬ（配列番号９４）に突然変異されている）ＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＡＰＥ残基欠失を有するＩｇＧ１ヒンジ；
－ＩｇＧ２ヒンジ領域（例えば、ジスルフィド架橋を形成することができる２つまたは４つのシステインを有する）；
－ＩｇＧ３ヒンジ領域；
－ＩｇＧ４ヒンジ領域；
－ステルス突然変異（例えば、ＩｇＧ４ヒンジ残基ＥＦＬＧ（配列番号９５）がＰＶＡに突然変異されている）を含むＩｇＧ４ヒンジ領域；または
－ｕｂｅｒ突然変異（例えば、残基ＥＦＬＧ（配列番号９５）がＧＧＧに突然変異されている）を含むＩｇＧ４ヒンジ領域
であるヒンジ領域であり、
例えば、ヒンジ領域は、アミノ酸配列：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号２）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ステルスＦｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ（配列番号３）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ｕｂｅｒＦｃを参照）；
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号４）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ２Ｆｃｗ／４Ｃｙｓを参照）；
ＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号５）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ２Ｆｃｗ／２Ｃｙｓを参照）；
ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号６またはそのアミノ酸６～２１）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ３Ｆｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧ（配列番号７またはそのアミノ酸４～１８）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ４Ｆｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号８またはそのアミノ酸４～１７）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ４ステルスＦｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ（配列番号９またはそのアミノ酸４～１７）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ４ｕｂｅｒＦｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号１０）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１－２キメラＦｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧ（配列番号１１）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＦ（配列番号９２）Ｆｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧ（配列番号１２）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＧ（配列番号９３）Ｆｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧ（配列番号１３）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＬ（配列番号９４）Ｆｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧ（配列番号１４）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１Ｄｅｌ（ＡＰＥ）Ｆｃを参照）；または
ＤＫＴＨＴＣＰＬＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号６８）；または
配列番号１５～２２もしくは７４～７７のいずれかまでであるが、図２に示されているＧＰＳＶ（配列番号９６）ＩｄｅＳ切断部位を含まないもの
を含むか、からなるか、またはから本質的になる、ＶＥＧＦミニトラップを提供する。

また、本発明は、ドメイン構造：
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）、
または
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ４）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）
により特徴付けられるＶＥＧＦトラップであって、
式中、ａ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ＭＣは、
－ステルス突然変異を含むＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＩｇＧ１ヒンジ領域－ＩｇＧ２ヒンジ領域キメラ；
－残基ＡＰＥＬ（配列番号９１）が突然変異されている（例えば、ＧＧＧＦ（配列番号９２）に、ＧＧＧＧ（配列番号９３）に、またはＧＧＧＬ（配列番号９４）に）ＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＡＰＥ残基が欠失されているＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＩｇＧ２ヒンジ領域（例えば、ジスルフィド架橋を形成することができる２つまたは４つのシステイン残基を含む）；
－ＩｇＧ３ヒンジ領域；
－ＩｇＧ４ヒンジ領域；または
－ステルス突然変異を含むＩｇＧ４ヒンジ領域
であるヒンジ領域およびプロテアーゼ切断部位を含み、
例えば、ＭＣは、アミノ酸配列：
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１６、またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸６～２４（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ステルスＦｃを参照）；
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１７、またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸６～２４（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ｕｂｅｒＦｃを参照）；
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１８、またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２１もしくは６～２１（ＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶ（配列番号９７））（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ２Ｆｃｗ／２Ｃｙｓまたはｗ／４Ｃｙｓを参照）；
ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１９、またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸６～２５（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ３Ｆｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号２０、またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２２（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ４Ｆｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号２１、またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２１（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ４ステルスＦｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号２２、またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２１（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ４ｕｂｅｒＦｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶ（配列番号７０）（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ステルスＦｃまたはｈＩｇＧ１－２キメラＦｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧＧＰＳＶ（配列番号７４のアミノ酸６～２５）（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ｍｕｔＧＧＧＦ（配列番号９２）Ｆｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧＧＰＳＶ（配列番号７５のアミノ酸６～２５）（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ｍｕｔＧＧＧＧ（配列番号９３）Ｆｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧＧＰＳＶ（配列番号７６のアミノ酸６～２５）（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ｍｕｔＧＧＧＬ（配列番号９４）Ｆｃを参照）；または
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧＧＰＳＶ（配列番号７７のアミノ酸６～２２）（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１Ｄｅｌ（ＡＰＥ）Ｆｃを参照）
を含む、ＶＥＧＦトラップを提供する。

本発明の実施形態では、本明細書に示されているＶＥＧＦトラップまたはミニトラップのいずれかは、以下のいずれか１つまたはそれ以上により特徴付けられる：
・２５℃にて約１～２ｐＭのＫ_Ｄまたはそれよりも高い親和性でヒトＶＥＧＦ_１６５に結合し、親和性は表面プラズモン共鳴により測定されたものである；
・９７ｋＤａ未満（例えば、約５０ｋＤａ、４９ｋＤａ、４８ｋＤａ、４７ｋＤａ、または４６ｋＤａ；または前述の重量のいずれよりも小さい）のホモ二量体分子量を有すること；
・ＩＬ１８ＲアルファまたはＩＬ１８Ｒベータの細胞内ドメインに融合されたＶＥＧＦ受容体細胞外ドメインを発現し、ＮＦカッパＢ－ルシフェラーゼ－ＩＲＥＳ－ｅＧＦＰレポーター遺伝子を有するＨＥＫ２９３細胞において測定して、約１～２×１０^－１１Ｍの、ＶＥＧＦＲ１および／またはＶＥＧＦＲ２のＶＥＧＦ_１２１および／またはＶＥＧＦ_１６５活性化をブロックするためのＩＣ_５０を有すること；
・サルナイーブ血清試料および／またはヒトＡＭＤ／ＤＭＥベースライン血清試料において、抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイにより測定して、ＲＥＧＮ７４８３（ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号６７））の免疫原性よりも低い免疫原性を呈すること；
・ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体と１：１複合体を形成すること；
・ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体および抗ＶＥＧＦＦａｂ断片（ＶＥＧＦミニトラップ：ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体：Ｆａｂ断片）と１：１：２複合体を形成すること；
・酸素誘発性網膜症（ＯＩＲ）マウスモデルに硝子体内投薬すると、網膜血管新生を低減させること；
・硝子体内注射した場合、ウサギ眼球においてアフリベルセプトよりも短い硝子体内半減期を示すこと；
・非ヒト霊長類に５．５ｍｇ／眼球で硝子体内注射すると、４ｍｇ／眼球で硝子体内注射したアフリベルセプトよりも低い血漿レベルの遊離分子を呈すること；
・約５．５ｍｇ／眼球の硝子体内注射の約３３６時間後に、非ヒト霊長類の血漿において約０．１もしくは０．２もしくは０．１～０．２マイクログラム／ｍｌ（またはそれよりも低い）の濃度の遊離分子を呈すること；
・約２８日ごとに約５．５ｍｇ／眼球を４回硝子体内注射した後、非ヒト霊長類の眼球に著しくは蓄積しないこと；
・ＶＥＧＦトラップおよび／またはＶＥＧＦミニトラップを含む組成物において、そのような分子は、１つまたはそれ以上のフコース残基（例えば、約４３～４５％）、ガラクトース残基（例えば、約６４～７２％）、シアル酸残基（例えば、約２０～２７％）、高マンノース残基（例えば、Ｍａｎ５）（例えば、約１９～２５％）、および／または二分岐グリカン（例えば、約１．６～１．９％；つまり、２つの規則的な分枝間にＮ－アセチルグルコサミンを有するＮ－グリカン、例えば、図２６（Ａ）を参照）でグリコシル化されていること。
・１つまたはそれ以上のヒスチジンが２－オキソ－ヒスチジンに酸化されていること。
・１つまたはそれ以上のトリプトファンは脱酸素されていること。
・その１つまたはそれ以上のアスパラギンはグリコシル化されていること。
・１つまたはそれ以上のセリンまたはスレオニンは、Ｏ－グリコシル化されていること；
・１つまたはそれ以上のアスパラギンは脱アミド化されていること。
・１つまたはそれ以上のアスパルテート－グリシンモチーフは、イソアスパルテート－グリシンおよび／またはＡｓｎ－Ｇｌｙに変換されていること。
・１つまたはそれ以上のメチオニンは酸化されていること。
・１つまたはそれ以上のトリプトファンは、Ｎ－ホルミルキヌレニンに変換されていること。
・１つまたはそれ以上のアルギニンは、Ａｒｇ３－デオキシグルコソンに変換されていること。
・Ｃ末端グリシンは存在しないこと。
・１つまたはそれ以上の非グリコシル化糖化部位が存在すること。
・キシロシル化されていること。
・リジンで糖化されていること。
・遊離チオール基を有するシスチンを含むこと。
・鎖内ジスルフィド架橋を含むこと。
・平行または交差配向のジスルフィド架橋を含むこと；および／または
・カルボキシメチル化されたリジンまたはアルギニンを含むこと。

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップのいずれかのＭＣは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２３）；ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２４）；ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２５）；ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２６）；ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２７）；ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２８）；ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２９）；ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３０）；ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３１）；
ＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７８）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７９）；
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８０）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号８１）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８２）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８３）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８４）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８５）；または
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８６）。

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦミニトラップは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号３２）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号３３）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号３４）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号３５）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号３６）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧ（配列番号３７）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧ（配列番号３８）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧ（配列番号３９）；
または
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧ
（配列番号４０）。

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４１）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４２）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４３）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４４）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４５）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４６）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４７）；ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４８）；またはＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４９）。

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップはグリコシル化されており、例えば、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップは、Ｎ結合型グリカンを含み；ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップは、Ｏ結合型グリカンを含み；ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップは、１つもしくはそれ以上の残基がシアリル化、ガラクトシル化、および／もしくはフコシル化（ｆｕｓｏｓｙｌａｔｅｄ）されており；ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップは、１つもしくはそれ以上の残基にＮ結合型マンノース－５グリカン（Ｍａｎ５）を含み；ならびに／またはＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップは、ＣＨＯ細胞グリコシル化を含む。本発明の範囲には、本明細書に示されているＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップのグリコシル化バリアントの異種混合物を含む組成物が含まれる。例えば、本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップの約４７％は、シアリル化されており、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップの約７０％はガラクトシル化されており、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップの約３６％はフコシル化されており、および／またはＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップの約１１％は、Ｍａｎ－５グリコシル化されている。

また、本発明は、ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップホモ二量体（例えば：ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；および／またはｍＲＥＧＮ１０５１５）およびＶＥＧＦを含む複合体であって、例えば、ＶＥＧＦは、ヒトＶＥＧＦ_１６５またはＶＥＧＦ_１２１などのヒトＶＥＧＦであり；および／または複合体は、例えば、ヒトＶＥＧＦおよび抗ＶＥＧＦＦａｂ断片を含む抗ＶＥＧＦ抗体またはそのＦａｂ断片を含み、その場合、化学量論比は１：１：２（ＶＥＧＦミニトラップ：ヒトＶＥＧＦ：Ｆａｂ）であり；および／または複合体は、ＶＥＧＦミニトラップとＶＥＧＦとの間のものであり、ＶＥＧＦミニトラップ対ＶＥＧＦの化学量論比は１：１である、複合体を含む。

本発明は、本発明のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；および／またはｍＲＥＧＮ１０５１５）および薬学的に有効な担体を含む医薬製剤（例えば、水性医薬製剤）を提供する。

また、本発明は、本発明のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；および／またはｍＲＥＧＮ１０５１５）をコードする単離されたポリヌクレオチド、例えば、配列番号７１、７２、または７３；およびポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

また、本発明は、本発明のポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞）を提供する。

本発明は、配列番号３２～４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、からなるか、またはから本質的になる単離されたポリペプチドをさらに提供する。

また、本発明は、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；および／またはｍＲＥＧＮ１０５１５）または本発明のその医薬製剤を含む、例えば無菌である容器または注射デバイス（例えば、シリンジ、使い捨てシリンジ、または事前充填シリンジ）を提供する。

また、本発明は、ＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；および／またはｍＲＥＧＮ１０５１５）またはその医薬製剤を製作するための方法であって、本発明のＶＥＧＦトラップを、ＶＥＧＦトラップのＭＣを切断するプロテアーゼ（例えば、配列番号５０～６５のいずれかのアミノ酸配列を含む、例えばＩｄｅＳ）と接触させること、ならびにＶＥＧＦトラップおよびプロテアーゼを、切断を促進する条件下でインキュベートすること、ならびに場合によりＶＥＧＦミニトラップ切断産物を、薬学的に有効な担体と合わせることを含む方法を提供する。

また、本発明は、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップ（例えば：ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；および／またはｍＲＥＧＮ１０５１５）またはその医薬製剤を製作するための方法であって、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップをコードするポリヌクレオチドまたはそのベクターを含む宿主細胞を、トラップまたはミニトラップの発現を促進する条件下で培養培地中にてインキュベートすること、ならびに場合によりトラップまたはミニトラップを、宿主細胞および／または培地から単離すること、ならびに場合によりＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ切断産物を、薬学的に有効な担体と合わせることを含む方法を提供する。場合により、この方法は、ＶＥＧＦトラップを、ＶＥＧＦトラップのＭＣを切断するプロテアーゼと接触させる工程、ならびにＶＥＧＦトラップおよびプロテアーゼを、切断を促進する条件下でインキュベートする工程を含む。そのような方法の産物であるＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップも、本発明の一部を形成する。

また、本発明は、対象（例えば、ヒト）の血管新生性眼障害（例えば、加齢性黄斑変性症、湿性加齢黄斑変性症、乾性加齢黄斑変性症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、虹彩血管新生、血管新生緑内障、緑内障の術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、視神経乳頭血管新生、角膜血管新生、網膜血管新生、硝子体血管新生、パンヌス、翼状片、血管網膜症、糖尿病性黄斑浮腫を有する患者の糖尿病性網膜症；糖尿病性網膜症、非増殖性糖尿病性網膜症、および／または増殖性糖尿病性網膜症）を治療または予防するための方法であって、治療有効量の本発明のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；および／またはｍＲＥＧＮ１０５１５）を対象に（例えば、眼内または硝子体内）投与することを含む方法を提供する。本発明の実施形態では、対象の眼の網膜の血管新生が低減され、および／または対象の眼の網膜の血管透過性が低減される。

また、本発明は、対象（例えば、ヒト）のがん（例えば、肺がん、乳がん、結腸直腸がん、転移性結腸直腸がん、前立腺がん、皮膚がん、または胃がん）を治療または予防するための方法であって、治療有効量のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；および／またはｍＲＥＧＮ１０５１５）を対象に投与（例えば、静脈内）することを含む方法を提供する。

また、本発明は、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；および／またはｍＲＥＧＮ１０５１５）または本発明のその医薬製剤を、対象（例えば、ヒト）に投与するための方法であって、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたは医薬製剤を対象の体内に導入すること（例えば、注射、例えば硝子体内注射により）を含む方法を提供する。

また、本発明は、対象の網膜の血管新生および／または網膜の血管透過性を低減するための方法であって、治療有効量のＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；および／またはｍＲＥＧＮ１０５１５）または本明細書に示されているその医薬製剤を対象に投与することを含む方法を含む。

本発明は、例えば、Ｎ末端またはＣ末端に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個（例えば、最大で１０個）の追加のアミノ酸をさらに含むことを除いて、本明細書に示されているアミノ酸配列からなるＶＥＧＦトラップまたはミニトラップのいずれか；ならびにそれらの関連使用方法のいずれかを包含する。

ＩｇＧヒンジアミノ酸を有するＶＥＧＦトラップおよびミニトラップの概要を示す図である［／／＝ＩｄｅＳ切断部位］。ＩｄｅＳ切断によるＶＥＧＦミニトラップは、表記のＶＥＧＦトラップのＩｄｅＳ切断により生成されるミニトラップを指す。ＩｇＧは、トラップまたはミニトラップの多量体化成分におけるＩｇＧの形態に関する情報を含む。ＩｄｅＳ切断部位が示されているＶＥＧＦトラップヒンジ領域配列を示す図である。患者の血清中の既存抗ヒンジ抗体と反応性である可能性がある、ＩｇＧ１のＦｃヒンジ領域の残基（ＰＥＬおよびＴ）の位置は矢印で示されている。下部ヒンジ領域、コアヒンジ領域、および上部ヒンジ領域の残基は四角で示されている。（それぞれ配列番号１５～２２、１６、７４～７７）ＶＥＧＦトラップおよびミニトラップの概要であり、一般名称および記述的名称ならびに分子量が示されている図である。図３－１の続き。図３－２の続き。ＶＥＧＦトラップのＩｄｅＳ切断から生じる典型的なＶＥＧＦミニトラップ形成の模式図である。アフリベルセプト（ＲＥＧＮ３）、ＲＥＧＮ３由来のＶＥＧＦミニトラップ（ＲＥＧＮ７４８３^Ｆ）、ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ステルスＦｃ、４つのｃｙｓを有するＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ２Ｆｃ、４つのｃｙｓを有するＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ２、２つのｃｙｓを有するＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ２Ｆｃ、および２つのｃｙｓを有するＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ２間の配列比較を示す図である。図５－１の続き。アフリベルセプト（ＲＥＧＮ３）、ＲＥＧＮ３由来のＶＥＧＦミニトラップ（ＲＥＧＮ７４８３^Ｆ）、ＲＥＧＮ１０５１３、ＲＥＧＮ１０５１４、ＲＥＧＮ１０５１２、ＲＥＧＮ１０５１５、ＲＥＧＮ１０１０４、ＲＥＧＮ１０５１１、ＲＥＧＮ１０１０２、ＲＥＧＮ１０１１７、およびＲＥＧＮ１０１８７間の配列比較を示す図である。図には、「ＧＧＧＦ」、「ＧＧＧＧ」、および「ＧＧＧＬ」が、それぞれ配列番号９２～９４として開示されている。図６－１の続き。図７（Ａ～Ｊ）は、ＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップのアミノ酸配列を示す図である。（Ａ）ＲＥＧＮ３、ＲＥＧＮ７４８３、（Ｂ）ＲＥＧＮ１０１０４、ｍＲＥＧＮ１０１０４、（Ｃ）ＲＥＧＮ１０１０２、ＲＥＧＮ１０１０５、（Ｄ）ＲＥＧＮ１０１７、ＲＥＧＮ１０１０３、（Ｅ）ＲＥＧＮ１０１８７、ｍＲＥＧＮ１０１８７、（Ｆ）ＲＥＧＮ１０５１１、ｍＲＥＧＮ１０５１１、（Ｇ）ＲＥＧＮ１０５１２、ｍＲＥＧＮ１０５１２、（Ｈ）ＲＥＧＮ１０５１３、ｍＲＥＧＮ１０５１３、（Ｉ）ＲＥＧＮ１０５１４、ＲＥＧＮ１１０９５、および（Ｊ）ＲＥＧＮ１０５１５、ｍＲＥＧＮ１０５１５。ＶＥＧＦトラップのＩｄｅＳプロテアーゼ切断部位は、矢印で示されている。Ｎ末端ＶＥＧＦＲ１ドメイン２は、濃く網掛けされており、ＶＥＧＦＲ２ドメイン３は、薄く網掛けされ四角で囲まれている。ＶＥＧＦトラップのＣ末端Ｆｃドメインは、濃く網掛けされている。ＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップのヒンジ領域は網掛けされていない。図には、「ＧＧＧＦ」、「ＧＧＧＧ」、および「ＧＧＧＬ」が、それぞれ配列番号９２～９４として開示されている。図７－１の続き。図７－２の続き。図７－３の続き。図７－４の続き。図７－５の続き。図７－６の続き。図７－７の続き。図７－８の続き。図７－９の続き。図８（Ａ～Ｅ）は、ＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップ（ＲＥＧＮ１０１１７（Ａ）、ＲＥＧＮ１０１０４およびｍＲＥＧＮ１０１０４（Ｂ）、ＲＥＧＮ１０１０２（Ｃ）、ＲＥＧＮ１０１８７およびｍＲＥＧＮ１０１８７（Ｄ）；ならびにＲＥＧＮ１０１０３およびＲＥＧＮ１０１０５（Ｅ）；各々には、対照ＲＥＧＮ７４８３、ＲＥＧＮ３（ＶＥＧＦＴ）、およびＶＥＧＦ_１２１が含まれる）が、ＶＥＧＦＲ１発現細胞（２９３／Ｄ９／ＶＥＧＦＲ１）のＶＥＧＦ_１２１活性化（４０ｐＭのＶＥＧＦ_１２１）をブロックするバイオアッセイ活性を示す図である。図８－１の続き。図８－２の続き。図８－３の続き。図８－４の続き。図９（Ａ～Ｅ）は、ＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップ（ＲＥＧＮ１０１０２（Ａ）、ＲＥＧＮ１０１０４およびｍＲＥＧＮ１０１０４（Ｂ）ＲＥＧＮ１０１１７（Ｃ）、ＲＥＧＮ１０１８７（Ｄ）ＲＥＧＮ１０１８７およびｍＲＥＧＮ１０１８７（Ｄ）；ならびにＲＥＧＮ１０１０３およびＲＥＧＮ１０１００５（Ｅ）；各々には、対照ＲＥＧＮ７４８３、ＲＥＧＮ３（ＶＥＧＦＴ）、およびＶＥＧＦ_１２１が含まれる）が、ＶＥＧＦＲ２発現細胞（２９３／Ｄ９／ＶＥＧＦＲ２）のＶＥＧＦ_１２１活性化（６０ｐＭのＶＥＧＦ_１２１）をブロックするバイオアッセイ活性を示す図である。図９－１の続き。図９－２の続き。図９－３の続き。図９－４の続き。図１０（Ａ～Ｆ）は、種々のＶＥＧＦトラップ（ＲＥＧＮ３（Ａ）、ＲＥＧＮ１０１０２（Ｂ）、ＲＥＧＮ１０５１１（Ｃ）、ＲＥＧＮ１０５１２（Ｄ）、ＲＥＧＮ１０５１４（Ｅ）、およびＲＥＧＮ１０５１５（Ｆ））の経時的なＩｄｅｓプロテアーゼ媒介性切断の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す図である（０、１、２、もしくは４時間の、またはオーバーナイト（Ｏ／Ｎ）のインキュベーション後）。図には、「ＧＧＧＦ」および「ＧＧＧＬ」が、それぞれ配列番号９２および９４として開示されている。図１０－１の続き。図１０－２の続き。図１０－３の続き。図１０－４の続き。図１０－５の続き。図１１（Ａ～Ｂ）は、抗薬物抗体電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬ）－架橋方式を示す図である。（Ａ）アッセイ方式のダイヤグラム。（Ｂ）ナイーブサル血清試料における既存抗ヒンジ抗体（ＡＨＡ）応答に関する、ＲＥＧＮ７４８３^Ｆ、ＲＥＧＮ１０１０５（２つのＣｙｓを有するＩｇＧ２Ｆｃを有するＩｄｅＳ切断ＶＥＧＦトラップに由来するもの）、ｍＲＥＧＮ１０１０４（ＲＥＧＮ１０１０４からＩｄｅＳ切断されたもの）、ＲＥＧＮ１０１０５（ＣＨＯ細胞で組換え発現されたもの）、ＲＥＧＮ１０１０３（４つのＣｙｓを有するＩｇＧ２Ｆｃを有するＶＥＧＦトラップからＩｄｅＳ切断されたもの）、およびｍＲＥＧＮ１０１８７のアッセイ。図１１－１の続き。抗薬物抗体電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬ）－架橋方式を示す図である。ヒトＡＭＤ／ＤＭＥ血清試料における既存抗ヒンジ抗体（ＡＨＡ）応答に関する、ＲＥＧＮ７４８３^Ｆ、ＲＥＧＮ１０１０５（２つのＣｙｓを有するＩｇＧ２Ｆｃを有するＩｄｅＳ切断ＶＥＧＦトラップに由来するもの）、ｍＲＥＧＮ１０１０４（ＲＥＧＮ１０１０４からＩｄｅＳ切断されたもの）、ＲＥＧＮ１０１０５（ＣＨＯ細胞で組換え発現されたもの）、ＲＥＧＮ１０１０３（４つＣｙｓを有するＩｇＧ２Ｆｃを有するＶＥＧＦトラップからＩｄｅＳ切断されたもの）、およびｍＲＥＧＮ１０１８７のアッセイ。エフェクター機能を低減するためのヒトＩｇＧ４ステルスおよびヒトＩｇＧ１ステルスの模式図である。図には、「ＣＰＰＣ」および「ＥＦＬＧ」が、それぞれ配列番号１００および９５として開示されている。ステルス突然変異を有するＩｇＧ４抗体の模式図である（出現順にそれぞれ配列番号１１１および１０９）。ＩｇＧ２下部ヒンジ領域配列を有するＩｇＧ４の配列を示す図である。コンストラクトの配列は四角で囲まれている。図に示されているように、ＩｇＧ２の四角で囲まれたヒンジ配列を有するＭＣを有する（またはＩｇＧ４ＥＳＫＹ（配列番号９８）モチーフから始まる）ＩｇＧ４／２ハイブリッドＶＥＧＦトラップおよびそのミニトラップ（ＧＰＳＶ（配列番号９６）の前で切断されたもの）は本発明の一部である。図には、配列番号１１２～１１４がそれぞれ出現順に開示されている。ステルス突然変異を有するＩｇＧ１抗体の模式図である（出現順にそれぞれ配列番号１０２および１０９）。無エフェクターＣＨ２配列を有するＩｇＧ１の配列を示す図である。図に示されているように、ＩｇＧ２の四角で囲まれたヒンジ配列を有するＭＣを有する（またはＩｇＧ１ＤＫＴＨＴ（配列番号９９）モチーフから始まる）ＩｇＧ１／２ハイブリッドＶＥＧＦトラップおよびそのミニトラップ（ＧＰＳＶ（配列番号９６）の前で切断されたもの）は本発明の一部である。図には、配列番号１１２～１１４がそれぞれ出現順に開示されている。図１８（Ａ～Ｂ）は、（Ａ）ＲＥＧＮ１０１０５：ｈＶＥＧＦ１６５複合体（実線）および（Ｂ）ＲＥＧＮ１１０９５：ｈＶＥＧＦ_１６５複合体（実線）の、多角度レーザー光散乱（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）と連結した粒径排除クロマトグラフィーによる分析を示す図である。ＲＥＧＮ１０１０５またはＲＥＧＮ１１０９５（灰色破線）およびｈＶＥＧＦ_１６５（黒色破線）の個々の試料のクロマトグラムも重ねて表示されている。保持容積の関数としての相対屈折率が各試料について示されており、分離されたピークのモル質量測定値が示されている。図１８－１の続き。図１９（Ａ～Ｄ）は、ＶＥＧＦおよびＲＥＧＮ１８Ｆａｂと複合体化したＶＥＧＦミニトラップＲＥＧＮ１０１０５の構造のＣｒｙｏ－ＥＭ分析を示す図である。ｈＶＥＧＦ単独、ＲＥＧＮ１０１０５単独、ｈＶＥＧＦを有するＲＥＧＮ１０１０５またはＲＥＧＮ１０１０５、ｈＶＥＧＦ、およびＲＥＧＮ１８Ｆａｂの試料を分析した。（Ａ）ＲＥＧＮ１０１０５／ＶＥＧＦ／ＲＥＧＮ１８Ｆａｂ混合物のＳＥＣ－ＭＡＬＳクロマトグラム。（Ｂ）生Ｃｒｙｏ－ＥＭ画像、複合体／粒子は丸で囲まれている。（Ｃ）２Ｄクラス平均の選択；矢印はＶＥＧＦＲ２ドメイン３を示す。（Ｄ）個々の２Ｄクラス；矢印はＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲ２ドメイン３を示す。図１９－１の続き。図１９－２の続き。図１９－３の続き。図２０（Ａ～Ｂ）は、ヒトＦｃ、アフリベルセプト、ＲＥＧＮ１１０９５、またはＲＥＧＮ１０１０５で硝子体内処置した酸素誘発性網膜症マウスモデルの網膜で観察された（Ａ）無血管面積および（Ｂ）異常面積の要約を示す図である。ＧＳレクチンＩ（無血管面積試験のため）またはＮＧ２（異常面積試験のため）で染色された網膜フラットマウント（ｆｌａｔｍｏｕｎｔ）を分析した。図２０－１の続き。未注射の、またはヒトＦｃ、アフリベルセプト（０．０５、０．５、または５マイクログラム）、もしくはＲＥＧＮ１０１０５（０．０２５、０．２５、または２．５マイクログラム）で硝子体内処置した酸素誘発性網膜症マウスモデルの網膜で観察された、標準化（ｈＦｃ治療に対して）異常面積の要約を示す図である。ＮＧ２で染色された網膜フラットマウントを分析した。データを、Ｆｃ処置群に対して標準化した。図２２（Ａ～Ｂ）は、ヒトＦｃ、アフリベルセプト、ＲＥＧＮ１１０９５、またはＲＥＧＮ１０１０５を全身投与した酸素誘発性網膜症マウスモデルの網膜で観察された（Ａ）無血管面積および（Ｂ）異常面積（ｈＦｃ処置に対して標準化）の要約を示す図である。ＧＳレクチンＩ（無血管面積試験のため）またはＮＧ２（異常面積試験のため）で染色された網膜フラットマウントを分析した。図２２－１の続き。図２３（Ａ～Ｆ）は、ニュージーランドホワイトラビットの硝子体におけるＶＥＧＦトラップの崩壊分析を示す図である。（Ａ）ＲＥＧＮ３（動物４２８、４２９、および４３０）、（Ｂ）ＲＥＧＮ７４８３（動物４３４、４３５、および４３６）、（Ｃ）ＲＥＧＮ３（動物５７０、５７１、および５７２）、（Ｄ）ＲＥＧＮ１０１０５（動物５７３、５７４、および５７５）、および（Ｅ）ＲＥＧＮ１１０９５（動物５７６、５７７、および５７８）。ＯＳ＝左眼、ＯＤ＝右眼。（Ｆ）ＲＥＧＮ３、ＲＥＧＮ１０１０５、またはＲＥＧＮ１１０９５のＩＶＴ注射前後の眼圧（ＩＯＰ）（ｍｍＨｇ）。図２３－１の続き。図２３－２の続き。図２３－３の続き。図２３－４の続き。図２３－５の続き。図２４（Ａ～Ｄ）は、ＲＥＧＮ１０１０５またはＲＥＧＮ１１０９５を複数回（１、２９、５７、および８５日目に）投薬した、経時的な、オスおよびメス非ヒト霊長類の眼球における遊離および結合ＶＥＧＦミニトラップの分析を示す図である。（Ａ）遊離ＲＥＧＮ１０１０５、（Ｂ）遊離ＲＥＧＮ１１０９５、（Ｃ）結合ＲＥＧＮ１０１０５、（Ｄ）結合ＲＥＧＮ１１０９５。図２４－１の続き。ＲＥＧＮ７４８３（５．５ｍｇ／眼球）、ＲＥＧＮ１０１０５（５．５ｍｇ／眼球）、またはアフリベルセプト（４ｍｇ／眼球）を硝子体内投薬した非ヒト霊長類における、経時的な全身性（血漿中）ＶＥＧＦトラップおよびミニトラップ濃度を示す図である。図２６（Ａ～Ｂ）は、ＲＥＧＮ１０１０３およびＲＥＧＮ１０１０５のＮ－結合型グリカンのＨＩＬＩＣ－ＦＬＲクロマトグラムを示す図である。（Ａ）重ね合わせたものおよび（Ｂ）別々のもの。表記のＮ－グリカンのいずれか１つもしくはそれ以上を有するＲＥＧＮ１０１０３もしくはＲＥＧＮ１０１０５または図に示されているグリカンプロファイルを有する組成物は、本発明の一部である。図２６－１の続き。

本発明は、他のミニトラップと比較して、特に高濃度において優れた安定性および低粘度を呈するＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップを提供する。そのような特徴により、ＶＥＧＦトラップおよびミニトラップは、高濃度の製剤に十分に適したものになり、それは、低容積で高用量の投薬を、したがってより少ない頻度の投薬を容易にする。眼の解剖学的構造および生理学的特徴のため、大容積を硝子体内に注射することは望ましくなく；したがって、硝子体内注射は、約１００マイクロリットル以下の容積で行う必要がある。こうした要因が組み合わさることにより、好適な容積で十分な量を硝子体内注射するために有用なタンパク質ベース薬物の開発は技術的に困難である。所与の期間にわたって必要な投薬回数を最小限に抑えるために、送達される薬物の量を最大化することは、さらに大きな課題である。本明細書で提供されるトラップおよびミニトラップは、こうした技術的困難を克服した。

ＲＥＧＮ１０１０５などの本明細書に示されているＶＥＧＦミニトラップを含む水性組成物の粘度は、他のＶＥＧＦミニトラップと比べても低い。粘度が低いため、患者の不快感を最小限に抑え、患者コンプライアンスを増加させる、より高いゲージ針を用いた硝子体内投与が可能になる。

さらに、本明細書に示されているＶＥＧＦミニトラップ、例えば、ＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５は、加速条件下においてアフリベルセプトよりも高い安定性を呈する（高分子量種の形成がより少ない）。また、ＲＥＧＮ１０１０５は、ＲＥＧＮ７４８３などの他のＶＥＧＦミニトラップと比較して、特に光安定性である。

また、本明細書に示されているＶＥＧＦミニトラップ、例えばＲＥＧＮ１０１０５の硝子体内投与後の潜在的全身曝露のレベルは、アフリベルセプトのレベルよりも低い。具体的には、ウサギ硝子体内におけるＲＥＧＮ１０１０５の半減期はより短く、眼から身体の残りの部分へのクリアランスのより低い可能性に結び付く。

既存抗ヒンジ抗体との反応性がより低いことがｉｎｖｉｔｒｏで特徴付けられた本明細書に示されているＶＥＧＦミニトラップは、投与した場合に免疫原性反応を起こす可能性がより低い。例えば、ＩｇＧ２ベースのＦｃヒンジ領域を有するＶＥＧＦミニトラップは、既存抗ヒンジ抗体と反応性であり得るＩｇＧ１ベースのＦｃヒンジ領域のＰＥＬ残基およびＴ残基を欠如する（ＲＥＧＮ７４８３など）。

ＶＥＧＦトラップは、好ましくは、ＶＥＧＦトラップの各ポリペプチド鎖に［（ＶＥＧＦＲ１ｄ２）－（ＶＥＧＦＲ２ｄ３）］_ｎ（例えば、式中、ｎ＝１）として配置された、ＶＥＧＦＲ１（Ｆｌｔ１とも呼ばれる）（例えば、ＶＥＧＦＲ１のＩｇ２ドメイン（ＶＥＧＦＲ１ｄ２））および／またはＶＥＧＦＲ２（Ｆｌｋ１またはＫＤＲとも呼ばれる）（例えば、ＶＥＧＦＲ２のＩｇ３ドメイン（ＶＥＧＦＲ２ｄ３））など、ＶＥＧＦ受容体の２つまたはそれ以上の免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメインを含み、２つまたはそれ以上のキメラポリペプチドの多量体化（例えば、二量体化）を促進するＦｃドメインも含むＶＥＧＦ受容体ベースのキメラ分子である。

ＶＥＧＦミニトラップは、Ｆｃドメインの断片、好ましくはＦｃドメインのヒンジ領域（例えば、上部ヒンジ領域（一部の場合では、Ｅ－（Ｐ、Ｓ、またはＲ）－Ｋモチーフで始まる）、コアヒンジ領域、および下部ヒンジ領域を含む）に連結されており、ＩｄｅＳプロテアーゼのＧＰＳＶ（配列番号９６）切断部位まで伸張するが、切断部位を含まないＶＥＧＦ結合ドメイン（例えば、アフリベルセプトなどのＶＥＧＦトラップのものと同様の様式で配置されたＶＥＧＦＲ１Ｉｇドメイン２およびＶＥＧＦＲ２Ｉｇドメイン３）を含む（例えば、図２を参照）。ヒンジ領域は、好ましくは、別のＶＥＧＦミニトラップポリペプチド鎖とシステイン架橋を形成することができる１つまたはそれ以上（例えば、２つまたは４つ）のシステインを含む。好ましくは、ＶＥＧＦトラップおよびミニトラップは、そのようなポリペプチドのホモ二量体複合体である。また、ＶＥＧＦトラップおよびミニトラップは、そのような単量体ポリペプチドおよびホモ二量体の異種集団を含む組成であってもよい。そのような単量体、多量体、および組成物は、本発明の一部を形成する。ポリペプチドホモ二量体は、例えば、ジスルフィド架橋を介して互いに結合されている場合がある。ＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップの概略図は図４に示されている。

ＶＥＧＦＲの「Ｉｇ」ドメインは、表記のＶＥＧＦ受容体の表記の免疫グロブリン様ドメインを指す。

分子生物学の標準的な方法については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８２年および１９８９年第２版、２００１年第３版）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ、ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ社、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１年）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ、第３版、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ社、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州；Ｗｕ（１９９３年）ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＤＮＡ、２１７巻、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ社、サンディエゴ、カリフォルニア州）に記載されている。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌら（２００１年）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、１～４巻、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．社ニューヨーク市、ニューヨーク州にも掲載されており、この文献には、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異導入（１巻）、哺乳動物細胞および酵母におけるクローニング（２巻）、複合糖質およびタンパク質発現（３巻）、およびバイオインフォマティクス（４巻）が記載されている。

免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、および結晶化を含む、タンパク質精製の一般的な方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００年）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉｅｎｃｅ、１巻、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．社，ニューヨーク市）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の産生、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００年）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉｅｎｃｅ、２巻、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．社、ニューヨーク市；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１年）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、３巻、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．社、ニューヨーク市、ニューヨーク州、１６．０．５～１６．２２．１７頁；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．社（２００１年）ＰｒｏｄｕｃｔｓｆｏｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＲｅｓｅａｒｃｈ、セントルイス、ミューズリー州；４５～８９頁；ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ社（２００１年）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ、ピスカタウエイ、ニュージャージー州、３８４～３９１頁を参照）。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の産生、精製、および断片化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１年）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１巻、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．社、ニューヨーク市；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９年）ＵｓｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ社、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク市；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前掲）。リガンド／受容体相互作用を特徴付けるための標準的な技法が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１年）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、４巻，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．社、ニューヨーク市を参照）。

蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリー法が利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４年）ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｆｏｒＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒａｃｔｉｃｅ、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ社、ホーボーケン、ニュージャージー州；Ｇｉｖａｎ（２００１年）ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ、第２版；Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ社、ホーボーケン、ニュージャージー州；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３年）ＰｒａｃｔｉｃａｌＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ社、ホーボーケン、ニュージャージー州を参照）。例えば診断試薬として使用するための、核酸プライマーおよびプローブ、ポリペプチド、ならびに抗体を含む、核酸の修飾に好適な蛍光試薬が利用可能である（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ社（２００３年）カタログ、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．社、ユージーン，オレゴン州；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社（２００３年）カタログ、セントルイス、ミューズリー州）。

免疫系の組織学的検査の標準的な方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ－Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６年）ＨｕｍａｎＴｈｙｍｕｓ：ＨｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙａｎｄＰａｔｈｏｌｏｇｙ、ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ社、ニューヨーク市、ニューヨーク州；Ｈｉａｔｔら（２０００年）ＣｏｌｏｒＡｔｌａｓｏｆＨｉｓｔｏｌｏｇｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ社、フィラデルフィア市、ペンシルベニア州；Ｌｏｕｉｓら（２００２年）ＢａｓｉｃＨｉｓｔｏｌｏｇｙ：ＴｅｘｔａｎｄＡｔｌａｓ、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ社、ニューヨーク市、ニューヨーク州を参照）。

ＶＥＧＦミニトラップおよびＶＥＧＦトラップ
本発明のＶＥＧＦミニトラップは、低い免疫原性および粘度ならびに高い安定性と共に、優れたＶＥＧＦ中和活性を呈する。さらに、本発明のＶＥＧＦトラップは、ＩｄｅＳプロテアーゼ（例えば、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＩｄｅＳ）などのプロテアーゼで切断可能である限り、そのようなＶＥＧＦミニトラップの生成に十分に好適である。

本発明は、以下のドメイン構造：
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）、
または
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ４）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）
を含むＶＥＧＦミニトラップであって、
式中、ａ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ＭＣは、
－ステルス突然変異（例えば、残基ＥＬＬＧ（配列番号９０）がＰＶＡに突然変異されている）を含むＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ｕｂｅｒ突然変異（例えば、残基ＥＬＬＧ（配列番号９０）がＧＧＧに変異されている）を含むＩｇＧ１ヒンジ領域
－ＩｇＧ１ヒンジ領域－ＩｇＧ２ヒンジ領域キメラ（例えば、ＩｇＧ１残基ＥＬＬＧ（配列番号９０）がＰＶＡに変異されている）；
－残基ＡＰＥＬ（配列番号９１）が突然変異されている（例えば、ＧＧＧＦ（配列番号９２）に、ＧＧＧＧ（配列番号９３）に、またはＧＧＧＬ（配列番号９４）に突然変異されている）ＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＡＰＥ残基欠失を有するＩｇＧ１ヒンジ；
－ＩｇＧ２ヒンジ領域（例えば、ジスルフィド架橋を形成することができる２つまたは４つのシステインを有する）；
－ＩｇＧ３ヒンジ領域；
－ＩｇＧ４ヒンジ領域；
－ステルス変異（例えば、ＩｇＧ４ヒンジ残基ＥＦＬＧ（配列番号９５）がＰＶＡに突然変異されている）を含むＩｇＧ４ヒンジ領域；
－ｕｂｅｒ突然変異（例えば、残基ＥＦＬＧ（配列番号９５）がＧＧＧに突然変異されている）を含むＩｇＧ４ヒンジ領域
または
－ヒトＦｃのＩｄｅＳタンパク質分解切断の産物を含むヒンジ領域；
およびそれらの多量体（例えば、ホモ二量体）
であるヒンジ領域である、ＶＥＧＦミニトラップを提供する。

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦミニトラップヒンジ領域は、アミノ酸配列：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号２）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ステルスＦｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ（配列番号３）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ｕｂｅｒＦｃを参照）；
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号４）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ２Ｆｃｗ／４Ｃｙｓを参照）；
ＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号５）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ２Ｆｃｗ／２Ｃｙｓを参照）；
ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号６またはそのアミノ酸６～２１（下線部））（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ３Ｆｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧ（配列番号７またはそのアミノ酸４～１８（下線部））（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ４Ｆｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号８またはそのアミノ酸４～１７（下線部））（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ４ステルスＦｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ（配列番号９またはそのアミノ酸４～１７（下線部））（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ４ｕｂｅｒＦｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号１０）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１－２キメラＦｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧ（配列番号１１）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＦ（配列番号９２）Ｆｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧ（配列番号１２）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＧ（配列番号９３）Ｆｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧ（配列番号１３）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＬ（配列番号９４）Ｆｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧ（配列番号１４）（ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１Ｄｅｌ（ＡＰＥ）Ｆｃを参照）；または
ＤＫＴＨＴＣＰＬＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号６８）、
または
本明細書に示されているＭＣのいずれか（例えば、配列番号７８～８６のいずれか）、もしくは図１、２、３、５、６、７、もしくは１３～１７のいずれかに示されているＭＣのいずれかのヒンジ領域
を含むか、から本質的になるか、またはからなる。

アフリベルセプト（ＲＥＧＮ３）およびＲＥＧＮ７４８３のＩｇＧヒンジ領域は、アミノ酸配列：ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号１）を含む。本発明の実施形態では、本明細書で規定されるＶＥＧＦミニトラップおよびＶＥＧＦトラップは、アフリベルセプトのＭＣのヒンジ領域および／またはＲＥＧＮ７４８３のヒンジ領域が除外されているという条件付きである。

また、本発明は、以下のドメイン構造：
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）、
または
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ４）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）
を含むＶＥＧＦトラップであって
式中、ａ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ＭＣは、ヒンジ領域およびＩｄｅＳなどのプロテアーゼの切断部位を含む免疫グロブリンＦｃポリペプチドである（しかしながら、本発明の実施形態では、Ｆｃは、野生型ヒトＩｇＧ１ではない）、ＶＥＧＦトラップを含む。本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップＭＣは、
－ステルス突然変異もしくはｕｂｅｒ突然変異を含むＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＩｇＧ１ヒンジ領域－ＩｇＧ２ヒンジ領域キメラ；
－残基ＡＰＥＬ（配列番号９１）が変異されている（例えば、ＧＧＧＦ（配列番号９２）に、ＧＧＧＧ（配列番号９３）に、またはＧＧＧＬ（配列番号９４）に変異されている）ＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＩｇＧ１ＡＰＥ残基欠失；
－ＩｇＧ２ヒンジ領域（例えば、ジスルフィド架橋を形成することができる２つまたは４つのシステインを有する）；
－ＩｇＧ３ヒンジ領域；
－ＩｇＧ４ヒンジ領域；
－ステルス突然変異もしくはｕｂｅｒ突然変異を含むＩｇＧ４ヒンジ領域；
または
－本明細書に示されているＭＣのいずれか
を含むヒトＦｃである。

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップＭＣは、アミノ酸配列（配列中、^ＶはＩｄｅＳプロテアーゼ切断部位である）：
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ ^ＶＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１６またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸６～２４（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ステルスＦｃを参照）；
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ ^ＶＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１７またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸６～２４（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ｕｂｅｒＦｃを参照）；
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ ^ＶＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１８またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２１もしくは６～２１（ＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ^ＶＧＰＳＶ（配列番号９７））（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ２Ｆｃｗ／２Ｃｙｓまたはｗ／４Ｃｙｓを参照）；
ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ ^ＶＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１９またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸６～２５（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ３Ｆｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧ ^ＶＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号２０またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２２（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ４Ｆｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ ^ＶＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号２１またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２１（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ４ステルスＦｃを参照）；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ ^ＶＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号２２またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２１（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ４ｕｂｅｒＦｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ^ＶＧＰＳＶ（配列番号７０）（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ステルスＦｃまたはｈＩｇＧ１－２キメラＦｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧ^ＶＧＰＳＶ（配列番号７４のアミノ酸６～２５）（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ｍｕｔＧＧＧＦ（配列番号９２）Ｆｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧ^ＶＧＰＳＶ（配列番号７５のアミノ酸６～２５）（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ｍｕｔＧＧＧＧ（配列番号９３）Ｆｃを参照）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧ^ＶＧＰＳＶ（配列番号７６のアミノ酸６～２５）（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ｍｕｔＧＧＧＬ（配列番号９４）Ｆｃを参照）；または
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧ^ＶＧＰＳＶ（配列番号７７のアミノ酸６～２２）（ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１Ｄｅｌ（ＡＰＥ）Ｆｃを参照）
を含む。

例えば、図２を参照されたい。

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップＭＣは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２３）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２４）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２５）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
（配列番号２６）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２７）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２８）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２９）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号３０）；または
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号３１）。

本発明の実施形態では、本明細書に示されているＶＥＧＦミニトラップのいずれかは、そのようなＭＣを含まない。

本発明の実施形態では、Ｆｃドメインヒンジ領域またはそのバリアントもしくは断片（例えば、ＩｇＧ４由来するもの）を含む多量体化成分は、例えば、二量体安定化を促進するために、Ｓ１０８Ｐ突然変異を含む。

本発明の実施形態では、本発明のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップは、エフェクター機能が低減された修飾Ｆｃドメインまたはその断片（例えば、断片はヒンジ領域を含む）を含む。本明細書で使用される場合、「エフェクター機能が低減された修飾Ｆｃドメイン」は、修飾Ｆｃを含む分子が、野生型の天然に存在する型のＦｃ部分を含む比較分子と比べて、細胞殺滅（例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ）、補体活性化、食作用、およびオプソニン作用からなる群から選択される少なくとも１つの効果の激しさまたは程度の低減を呈するように、野生型の天然に存在するＦｃドメインと比べて、修飾、突然変異、短縮などがされている、免疫グロブリンの任意のＦｃ部分を意味する。ある特定の実施形態では、「エフェクター機能が低減された修飾Ｆｃドメイン」は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）との結合が低減または減弱されたＦｃドメインである。

本発明のある特定の実施形態では、修飾Ｆｃドメインは、ヒンジ領域に置換を含むバリアントＩｇＧ１ＦｃまたはバリアントＩｇＧ４Ｆｃである。例えば、本発明の状況で使用するための修飾Ｆｃは、ＩｇＧ１Ｆｃヒンジ領域の少なくとも１つのアミノ酸が、ＩｇＧ２Ｆｃヒンジ領域の対応するアミノ酸で置き換えられているバリアントＩｇＧ１Ｆｃを含んでいてもよい。その代わりに、本発明の状況で使用するための修飾Ｆｃは、ＩｇＧ４Ｆｃヒンジ領域の少なくとも１つのアミノ酸が、ＩｇＧ２Ｆｃヒンジ領域の対応するアミノ酸で置き換えられているバリアントＩｇＧ４Ｆｃを含んでいてもよい。本発明の状況で使用することができる非限定的で例示的な修飾Ｆｃ領域は、米国特許出願公開第２０１４／０２４３５０４号明細書に示されており、その開示ならびにそこに示されている修飾Ｆｃ領域のあらゆる機能的に同等なバリアントは、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。

本発明の状況で使用することができる他の修飾ＦｃドメインおよびＦｃ修飾としては、米国特許出願公開第２０１４／０１７１６２３号明細書；米国特許第８，６９７，３９６号明細書；米国特許出願公開第２０１４／０１３４１６２号明細書；国際公開第２０１４／０４３３６１号パンフレットに示されている修飾のいずれかが挙げられ、これら文献の開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。

ステルス突然変異を有する遺伝子操作ＩｇＧ１は、ＩｇＧ１フレームワークに基づくが、ヒンジＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号１のアミノ酸６～１６）のＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号２のアミノ酸６～１５）への置き換え、およびＩｇＧ１ＣＨ２ドメインのＩｇＧ４のＣＨ２ドメインへの置き換えを両方とも有する。例えば、図１３、図１４、図１５、図１６、および図１７を参照されたい。

ステルス突然変異を有する遺伝子操作ＩｇＧ４は、ＦｃγＲ１に結合する能力を欠如するＩｇＧ２のヒンジ領域のものと類似させるために、Ｃ１ｑに結合する能力を欠如するヒンジ安定化（ＣＰＰＣ（配列番号１００）またはＣＰＳＣ（配列番号１０１））ＩｇＧ４のフレームワークに３つのアミノ酸置換（ＥＦＬＧ（配列番号９５）からＰＶＡへの）を有する。例えば、図１３、図１４、図１５、図１６、および図１７を参照されたい。

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップもしくはミニトラップは、ＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号１０２）をＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ（配列番号１０３）にする、ヒンジ領域のＩｇＧ１ｕｂｅｒもしくはｕｂｅｒステルス突然変異を有するか；またはＶＥＧＦトラップもしくはミニトラップは、ＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧ（配列番号１０４）をＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ（配列番号１０３）にする、ヒンジ領域のＩｇＧ４のｕｂｅｒもしくはｕｂｅｒステルス突然変異を有する。

ヒトＩｇＧ１ステルスＦｃまたはヒトＩｇＧ４ステルスＦｃを有するＶＥＧＦトラップまたはミニトラップでは、既存抗ヒンジ抗体応答を起こし易いＶＥＧＦトラップＩｇＧ１のヒンジのアミノ酸残基（ＰＥＬ）が置き換えられている。こうしたキメラＦｃ領域のＩｇＧヒンジとヒトＩｇＧ２のＩｇＧヒンジとの間では配列が保存されているため、それらは、既存抗ヒンジ抗体（ＡＨＡ）に対する応答の低下を示す。

キメラＩｇＧ２／ＩｇＧ４ＦｃＶＥＧＦトラップおよびミニトラップは、本発明の一部である。こうした分子は、ＩｇＧ２アイソタイプおよびＩｇＧ４アイソタイプの両方の好ましい特性を兼ね備えており、エフェクター機能の能力は最小限である。異なるＩｇＧアイソフォームが、異なるタイプおよびレベルのエフェクター機能を発揮することが知られている。こうした違いは、大部分が、種々のＦｃγＲならびに補体成分Ｃ１ｑと相互作用する各アイソフォームの能力のためである。ＩｇＧ２アイソタイプおよびＩｇＧ４アイソタイプは両方とも、ＩｇＧ１アイソタイプと比較して、Ｆｃ依存性エフェクター機能を生じさせる能力の減少を示す。

また、本発明は、本発明のＶＥＧＦトラップのタンパク質分解切断のＶＥＧＦ結合性産物であるＶＥＧＦミニトラップを含み、この場合、切断はＭＣの部分を除去する。例えば、本発明の実施形態では、タンパク質分解切断は、ＩｄｅＳプロテアーゼ（またはそのバリアント）またはＧＰＳＶ（配列番号４１のアミノ酸２１８～２２１）の前で切断を行う別のプロテアーゼによる。

本発明の実施形態では、本発明のＶＥＧＦミニトラップは、以下に示されているアミノ酸配列を含む：

ＲＥＧＮ１０１０３－ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ２Ｆｃｗ／４ＣｙｓＣＰＰＡＰＰＡＰＰＶＡ（配列番号１０５）
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ
（配列番号３２）；

ＲＥＧＮ１０１０５－ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ２Ｆｃｗ／２ＣｙｓＣＰＰＡＰＡＰＰＶＡ（配列番号１０６）
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ
（配列番号３３）

ミニ－ＲＥＧＮ１０１０４（ｍＲＥＧＮ１０１０４）－ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ステルスＦｃ

ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ

（配列番号３４）；Ｆｃドメイン（またはその断片）が除去されているＲＥＧＮ１０１０４。

ミニ－ＲＥＧＮ１０１８７（ｍＲＥＧＮ１０１８７）－ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ４ステルスＦｃ

ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ

（配列番号３５）；Ｆｃドメイン（またはその断片）が除去されているＲＥＧＮ１０１８７。

ミニ－ＲＥＧＮ１０５１１（ｍＲＥＧＮ１０５１１）－ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１－２キメラＦｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ

（配列番号３６）；Ｆｃドメイン（またはその断片）が除去されているＲＥＧＮ１０５１１。

ミニ－ＲＥＧＮ１０５１２（ｍＲＥＧＮ１０５１２）－ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＦ（配列番号９２）Ｆｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧ

（配列番号３７）；Ｆｃドメイン（またはその断片）が除去されているＲＥＧＮ１０５１２。

ミニ－ＲＥＧＮ１０５１３（ｍＲＥＧＮ１０５１３）－ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＧ（配列番号９３）Ｆｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧ

（配列番号３８）；Ｆｃドメイン（またはその断片）が除去されているＲＥＧＮ１０５１３。

ミニ－ＲＥＧＮ１０５１４（ｍＲＥＧＮ１０５１４またはＲＥＧＮ１１０９５）－ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＬ（配列番号９４）Ｆｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧ

（配列番号３９）；Ｆｃドメイン（またはその断片）が除去されているＲＥＧＮ１０５１４。

ミニ－ＲＥＧＮ１０５１５（ｍＲＥＧＮ１０５１５）－ＶＥＧＦミニトラップｈＩｇＧ１Ｄｅｌ（ＡＰＥ）Ｆｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧ

（配列番号４０）；Ｆｃドメイン（またはその断片）が除去されているＲＥＧＮ１０５１５。

図７を参照されたい。

本発明の実施形態では、本発明のＶＥＧＦトラップは、以下に示されているアミノ酸配列を含む：

ＲＥＧＮ１０１０２－ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ２Ｆｃｗ／２Ｃｙｓ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

（配列番号４１）

ＲＥＧＮ１０１０４－ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ステルスＦｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

（配列番号４２）

ＲＥＧＮ１０１１７－ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ２Ｆｃｗ／４Ｃｙｓ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

（配列番号４３）

ＲＥＧＮ１０１８７－ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ４ステルスＦｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ

（配列番号４４）

ＲＥＧＮ１０５１１－ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１－２キメラＦｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

（配列番号４５）

ＲＥＧＮ１０５１２－ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＦ（配列番号９２）Ｆｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

（配列番号４６）

ＲＥＧＮ１０５１３－ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＧ（配列番号９３）Ｆｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

（配列番号４７）

ＲＥＧＮ１０５１４－ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１ＭｕｔＧＧＧＬ（配列番号９４）Ｆｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

（配列番号４８）

ＲＥＧＮ１０５１５－ＶＥＧＦトラップｈＩｇＧ１Ｄｅｌ（ＡＰＥ）Ｆｃ
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号４９）

このようなＶＥＧＦトラップは、ＩｄｅＳプロテアーゼにより切断可能である。そのような切断の産物であるＶＥＧＦミニトラップは、本発明の一部である。図７を参照されたい。

種々のＶＥＧＦトラップとＶＥＧＦミニトラップとの間の配列比較は、図５および６に示されている。

ポリペプチドの「バリアント」（例えば、配列番号３２～４９のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドのバリアント）は、アルゴリズムのパラメーターが、それぞれの参照配列の長さ全体にわたってそれぞれの配列間で最大マッチをもたらすように選択される（例えば、期待閾値：１０；ワードサイズ：３；クエリ範囲における最大マッチ数：０；ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス；ギャップコスト：存在１１、伸長１；条件付き組成スコアマトリックス調整（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｓｃｏｒｅｍａｔｒｉｘａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ））ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより比較を実施した場合、本明細書に示されている参照アミノ酸配列と少なくとも約７０～９９．９％（例えば、７０、７２、７４、７５、７６、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、９９．９％）同一であるかまたは類似しているポリペプチドを指す。本発明の実施形態では、ポリペプチドのバリアントは、本明細書に示されている参照アミノ酸配列のものと比較して、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の点突然変異（例えば、アミノ酸の置換、欠失、および／または挿入）を含むポリペプチドを指す。本明細書に示されているもののいずれかのバリアントであるアミノ酸配列を有するＶＥＧＦトラップおよびミニトラップは、本発明の一部である。

以下の参考文献は、配列分析によく使用されるＢＬＡＳＴアルゴリズムに関する：ＢＬＡＳＴＡＬＧＯＲＩＴＨＭＳ：Ａｌｔｓｃｈｕｌら（２００５年）ＦＥＢＳＪ．２７２巻（２０号）：５１０１～５１０９頁；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５巻：４０３～４１０頁；Ｇｉｓｈ，Ｗ．ら（１９９３年）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔ．３巻：２６６～２７２頁；Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら（１９９６年）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６巻：１３１～１４１頁；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら（１９９７年）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５巻：３３８９～３４０２頁；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．ら（１９９７年）ＧｅｎｏｍｅＲｅｓ．７巻：６４９～６５６頁；Ｗｏｏｔｔｏｎ，Ｊ．Ｃ．ら（１９９３年）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１７巻：１４９～１６３頁；Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｍ．ら（１９９４年）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０巻：６７～７０頁；ＡＬＩＧＮＭＥＮＴＳＣＯＲＩＮＧＳＹＳＴＥＭＳ：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．ら「Ａｍｏｄｅｌｏｆｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｃｈａｎｇｅｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓ．」ｉｎＡｔｌａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ，（１９７８年）５巻，相補３．Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編）３４５～３５２頁、Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｍ．ら「Ｍａｔｒｉｃｅｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｄｉｓｔａｎｔｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．」ｉｎＡｔｌａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ（１９７８年）５巻、相補３．Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編）３５３～３５８頁、Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．（１９９１年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９巻：５５５～５６５頁；Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．ら（１９９１年）Ｍｅｔｈｏｄｓ３巻：６６～７０頁；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ．ら（１９９２年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９巻：１０９１５～１０９１９頁；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら（１９９３年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３６巻：２９０～３００頁；ＡＬＩＧＮＭＥＮＴＳＴＡＴＩＳＴＩＣＳ：Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら（１９９０年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７巻：２２６４～２２６８頁；Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０巻：５８７３～５８７７頁；Ｄｅｍｂｏ，Ａ．ら（１９９４年）Ａｎｎ．Ｐｒｏｂ．２２巻：２０２２～２０３９頁；およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．「Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇｔｈｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｄｉｓｔｉｎｃｔｌｏｃａｌａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ．」ｉｎＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌＭｅｔｈｏｄｓｉｎＧｅｎｏｍｅＲｅｓｅａｒｃｈ（Ｓ．Ｓｕｈａｉ編）（１９９７年）１～１４頁、Ｐｌｅｎｕｍ，ＮｅｗＹｏｒｋ。

本明細書に示されているように、用語「ＲＥＧＮ１０１０４」；「ｍＲＥＧＮ１０１０４」；「ＲＥＧＮ１０１０２」；「ＲＥＧＮ１０１０５」；「ＲＥＧＮ１０１１７」；「ＲＥＧＮ１０１０３」；「ＲＥＧＮ１０１８７」；「ｍＲＥＧＮ１０１８７」；「ＲＥＧＮ１０５１１」；「ｍＲＥＧＮ１０５１１」；「ＲＥＧＮ１０５１２」；「ｍＲＥＧＮ１０５１２」；「ＲＥＧＮ１０５１３」；「ｍＲＥＧＮ１０５１３」；「ＲＥＧＮ１０５１４」；「ＲＥＧＮ１１０９５」；「ＲＥＧＮ１０５１５」；「ｍＲＥＧＮ１０５１５」は、こうした名称で本明細書に記載されているアミノ酸配列を含むポリペプチドおよびそれらのバリアント；ならびに／またはそのようなポリペプチドの２つもしくはそれ以上を含む多量体（例えば、ホモ二量体）を含む、それぞれのＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップを指す。

本発明の実施形態では、本明細書に示されているＶＥＧＦミニトラップは、以下のいずれか１つまたはそれ以上により特徴付けられる：
・ヒトＶＥＧＦ_１６５またはＶＥＧＦ_１２１に、例えば、ＶＥＧＦ_１６５に、例えば２５℃において、約１もしくは２もしくは１～２ｐＭ（例えば、約０．７４ｐＭ、０．８、０．８６、０．８６５ｐＭ、１ｐＭ、１．１ｐＭ、１．０８ｐＭ、１．７８ｐＭ、２．６ｐＭ、１．８９ｐＭ、１．３７ｐＭ、１．０８ｐＭ、１．８２ｐＭ、または１．３７ｐＭ）のＫ_Ｄで、またはより大きな親和性で結合し、例えば、親和性は、例えば、約２．５ｎＭ～約０．０７８ｐＭヒトＶＥＧＦ_１６５の存在下で、表面プラズモン共鳴により測定されたものである。
・ＶＥＧＦＲ１および／またはＶＥＧＦＲ２のＶＥＧＦ_１２１および／またはＶＥＧＦ_１６５活性化をブロックするためのＩＣ_５０が、例えば、ＶＥＧＦ受容体（例えば、細胞外ドメインが、ＩＬ１８ＲアルファまたはＩＬ１８Ｒベータの細胞質ドメインに融合されている）を発現し、例えば、ＮＦカッパＢ－ルシフェラーゼ－ＩＲＥＳ－ｅＧＦＰレポーター遺伝子も有するＨＥＫ２９３細胞にて測定して、１～２×１０^－１１Ｍである。例えば、（ｉ）ＶＥＧＦＲ１のＶＥＧＦ_１６５（４０ｐＭ）活性化（例えば、約１．０６×１０^－１１Ｍまたは約２．１９×１０^－１１Ｍ）；（ｉｉ）ＶＥＧＦＲ２のＶＥＧＦ_１６５（２０ｐＭ）活性化（例えば、約２．４６×１０^－１１Ｍまたは約２．３９×１０^－１１Ｍ）；（ｉｉｉ）ＶＥＧＦＲ１のＶＥＧＦ_１２１（４０ｐＭ）活性化（例えば、約１．７４×１０^－１１Ｍまたは約２．１６×１０^－１１Ｍ）；（ｉｖ）ＶＥＧＦＲ２のＶＥＧＦ_１２１（６０ｐＭ）活性化（例えば、約１．８０×１０^－１１Ｍまたは約２．３０×１０^－１１Ｍ）をブロックするためのＩＣ_５０が約１～２．５×１０^－１１Ｍである。
・例えば、抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイ、例えば、電気化学発光イムノアッセイ架橋アッセイであって、例えば、ＶＥＧＦミニトラップは、ビオチンおよびルテニウムで標識されており、例えば、ＡＤＡは、ビオチン標識およびルテニウム標識ＶＥＧＦミニトラップに結合して、架橋を形成し、ビオチン標識ＶＥＧＦミニトラップは、ストレプトアビジンコーティングプレート表面に結合し、例えば、電流がルテニウム標識薬物を活性化して、複合体の存在を示す電気化学発光シグナルを生成する電気化学発光イムノアッセイ架橋アッセイにより測定して、サルナイーブ血清試料および／またはヒトＡＭＤ／ＤＭＥベースライン血清試料において、ＲＥＧＮ７４８３の免疫原性よりも低い免疫原性を呈する。図１１（Ａ）のアッセイ方式要約を参照されたい。
・ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体と１：１複合体を形成する（ＲＥＧＮ１０１０５：ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体またはＲＥＧＮ１１０９５：ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体）（例えば、６μＭ：２μＭ；２μＭ：２μＭ；または２μＭ：６μＭ比のＶＥＧＦミニトラップ：ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体）。
・ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体およびＲＥＧＮ１８抗ＶＥＧＦＦａｂと１：１：２複合体を形成する（ＲＥＧＮ１０１０５：ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体：ＲＥＧＮ１８）。
・ＯＩＲマウスモデルに硝子体内投薬した場合（例えば、眼球１つ当たり約０．１２５、０．０２５、０．２５、または２．５マイクログラムで）、例えば、網膜フラットマウント下で測定して、（例えば、ヒトＦｃを投薬したマウスの網膜血管新生と比べて）網膜血管新生を低減させる。
・硝子体内に注射した場合（例えば、眼球１つ当たり約．１１５、．１４６、または．１４７マイクログラム）、ウサギ（例えば、ニュージーランドホワイトラビット）眼球においてアフリベルセプトよりも急速な硝子体内半減期（例えば、約３．４または３．９日の）を呈し、例えば、この場合、ＶＥＧＦミニトラップは１０ｍＭヒスチジンで製剤化されており、例えば、ＶＥＧＦミニトラップはＡＦ４８８色素にコンジュゲートされている。
・例えば５．５ｍｇ／眼球で硝子体内に注射した場合、アフリベルセプト（例えば、４ｍｇ／眼球の）よりも少ない全身暴露（例えば、遊離分子の血漿レベル）を呈する（例えば、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）において）。例えば、約５．５ｍｇ／眼球を注射（例えば、単回注射）した約３３６時間後に、例えばＮＨＰの血漿中の遊離分子の濃度が、約０．１または０．２または０．１～０．２マイクログラム／ｍｌである（またはそれよりも低い）。
・例えば、約５．５ｍｇ／眼球を硝子体内に複数回注射した後（例えば約２８日ごとに、例えば４回）、例えば非ヒト霊長類の血漿中に蓄積しない（例えば、遊離分子またはＶＥＧＦに結合した分子として）。
・およそ等モルの条件下で、例えば３７℃の高温で、例えば４週間などのストレス条件下で、アフリベルセプトよりも大きな安定性を呈する。例えば、９０ｍｇ／ｍｌでは、１週間当たり約３～４％（例えば、３．５、３．６、３．７、３．７４、４．０、または４．１）の高分子量種（ＨＭＷ）が発生し（例えば、３７℃にて４週間で）；および／または１２０ｍｇ／ｍｌでは、１週間当たり約５～６％（例えば、５．０、５．１、５．２、５．３、５．５、５．７、または５．９）の高分子量種（ＨＭＷ）が発生し（例えば、３７℃にて４週間で）；例えば一方で、１４０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプトは、１週間当たり約５．６％の高分子量種（ＨＭＷ）を発生させ（例えば、３７℃にて４週間で）；または例えば一方で、９０ｍｇ／ｍｌのＲＥＧＮ７４８３^Ｆは、約５～６％（例えば、５．４、５．４５、５．５、５．６）のＨＭＷ種／週（例えば、３７℃にて４週間で）を発生させる。ＲＥＧＮ７４８３^Ｆミニトラップは、アフリベルセプトのＦａｂＲＩＣＡＴＯＲ切断により生成される。
・約１０００ｒｐｍで約１５分間の撹拌および／または２回の凍結解凍サイクル（ｆｒｅｅ－ｔｈａｗｃｙｃｌｅ）後、凝集レベルに著しい変化を呈さない（例えば、約９０ｍｇ／ｍｌまたは１２０ｍｇ／ｍｌで）。
・ＲＥＧＮ７４８３よりも低い粘度、例えば、９０ｍｇ／ｍｌで約５．８、または１２０ｍｇ／ｍｌで１２．１ｃＰ（例えば、２０℃にて）を呈し；例えば、一方で、ＲＥＧＮ７４８３は、９０ｍｇ／ｍｌで約６．９ｃＰ；もしくは１２０ｍｇ／ｍｌで１２．１ｃＰの粘度を有するか、または例えば一方で、ＲＥＧＮ７４８３は、１２０ｍｇ／ｍｌで約１４．５ｃＰの粘度を有し（例えば、２０℃にてヒスチジンの存在下で）、例えばこの場合、ＶＥＧＦミニトラップは、ＲＥＧＮ１０１０５である。
・ＲＥＧＮ７４８３よりも大きな光安定性を呈し、例えば、約８．７％ＨＭＷ増加（暗所対照試料と比べて）／Ｍルクス^＊時を生じさせ（例えば、この場合、ＶＥＧＦミニトラップは、ＲＥＧＮ１０１０５である）；一方で例えば、ＲＥＧＮ７４８３は、例えば、光が冷白色光および／または紫外光である場合、例えば、約１０ｍｇ／ｍｌの濃度では、約９．５％ＨＭＷ増加（暗所対照試料と比べて）／Ｍルクス^＊時を呈する。
・ＶＥＧＦトラップおよび／またはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＩｇＧ２ヒンジ領域を有する）を含む組成物では、そのような分子は、総Ｎ－グリカンの約４３～４５％がコアフコース残基を有し、総Ｎ－グリカンの約６４～７２％が少なくとも１つのガラクトース残基を有し、総Ｎ－グリカンの約２０～２７％が少なくとも１つのシアル酸残基を有し、約１９～２５％が、高マンノース（例えば、Ｍａｎ５）を有すると同定され、および／もしくは総Ｎ－グリカンの約１．６～１．９％が二分岐グリカンとなるように、Ｎ－グリカンでグリコシル化されており（例えば、フコシル化されているか、シアリル化されているか、ガラクトシル化されているか、マンノシル化されているか、または二分岐Ｎ－グリカンで修飾されている）；例えば、そのような分子は、総Ｎ－グリカンの約４３．３％がコアフコース残基を有し、総Ｎ－グリカンの約６４．４％が少なくとも１つのガラクトース残基を有し、総Ｎ－グリカンの約２０％が少なくとも１つのシアル酸残基を有し、約２５．２％が高マンノース（例えば、Ｍａｎ５）を有すると同定され、および／もしくは総Ｎ－グリカンの約１．６％が二分岐グリカンとなるように、Ｎ－グリカンでグリコシル化されているか（この場合、例えば、ＶＥＧＦミニトラップは、ＲＥＧＮ１０１０３である）；または、そのような分子は、総Ｎ－グリカンの約４４．８％がコアフコース残基を有し、総Ｎ－グリカンの約７１．６％が少なくとも１つのガラクトース残基を有し、総Ｎ－グリカンの約２６．５％が少なくとも１つのシアル酸残基を有し、約１８．６％が高マンノース（例えば、Ｍａｎ５）を有すると同定され、および／もしくは総Ｎ－グリカンの約１．９％が二分岐グリカンとなるように、Ｎ－グリカンでグリコシル化されている（この場合、例えば、ＶＥＧＦミニトラップは、ＲＥＧＮ１０１０５である）。
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップの１つまたはそれ以上のセリンまたはスレオニンはＯ－グリコシル化されている；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップの１つまたはそれ以上のアスパラギンは、脱アミド化されている；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップの１つまたはそれ以上のアスパルテート－グリシンモチーフは、イソアスパルテート－グリシンおよび／またはＡｓｎ－Ｇｌｙに変換されている；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップの１つまたはそれ以上のメチオニンは、酸化されている；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップの１つまたはそれ以上のトリプトファンは、Ｎ－ホルミルキヌレニンに変換されている；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップの１つまたはそれ以上のアルギニンは、Ａｒｇ３－デオキシグルコソンに変換されている；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップのＣ末端残基（例えば、グリシンまたはアラニン）は存在しない；
・１つまたはそれ以上の非グリコシル化糖化部位が、ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップに存在する；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップは、キシロシル化されている；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップは、リジンが糖化されている；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップは、遊離チオール基を有するシスチンを含む；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップは、鎖内ジスルフィド架橋を含む；
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップは、平行もしくは交差配向のジスルフィド架橋を含む；および／または
・ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップは、カルボキシメチル化されたリジンもしくはアルギニンを含む。

例えば、ＧｕｉｄａｎｃｅｆｏｒＩｎｄｕｓｔｒｙＱ１ＢＰｈｏｔｏｓｔａｂｉｌｉｔｙＴｅｓｔｉｎｇｏｆＮｅｗＤｒｕｇＳｕｂｓｔａｎｃｅｓａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓ、米国保健社会福祉省、食品医薬品局、医薬品評価研究センター（ＣＤＥＲ）、生物製剤評価研究センター（ＣＢＥＲ）、１９９６年１１月を参照されたい。

また、本明細書に示されているＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；またはｍＲＥＧＮ１０５１５）は、グリコシル化されている場合がある（例えば、Ｎ結合型および／またはＯ結合型グリカンにより）。例えば、本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップは、１つまたはそれ以上の部位がシアリル化、ガラクトシル化、および／またはフコシル化されている。本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップまたはミニトラップは、１つまたはそれ以上のＮ結合型マンノース－５グリカン（Ｍａｎ５）を有する。本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップは、典型的には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞で発現される分子に付加されるグリコシル化を含む（ＣＨＯ細胞グリコシル化）。例えば、Ｃａｒｉｌｌｏら、ＧｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＧｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓＰｒｏｄｕｃｅｄｉｎＣＨＯＣｅｌｌｓ、ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ．２０１７年；１６０３巻：２２７～２４１頁；またはＨｏｓｓｌｅｒら、Ｏｐｔｉｍａｌａｎｄｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｉｎｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ１９巻（９号）：９３６～９４９頁（２００９年）を参照されたい。本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップは、トラップまたはミニトラップのグリコシル化バリアントの異種混合物を含む組成物である。ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップの個々の分子は、それらの特定のグリコシル化パターンに関して組成が他と異なっていてもよい。例えば、分子の約４７％がシアリル化されている場合があり、分子の約７０％がガラクトシル化されている場合があり、分子の約３６％がフコシル化されている場合があり、および／または分子の約１１％がＭａｎ－５グリコシル化されている場合がある。本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップおよび／またはＶＥＧＦミニトラップを含む組成物は、約４３．３％フコシル化、約６４．４％ガラクトシル化、約２０％シアリル化、約２５．２％高マンノースグリカン、および約１．６％二分岐Ｎ－グリカンというグリカンプロファイルを有するか（例えば、この場合、ＶＥＧＦミニトラップは、ＲＥＧＮ１０１０３である）；または約４４．８％フコシル化、約７１．６％ガラクトシル化、約２６．５％シアリル化、約１８．６％高マンノースグリカン、および約１．９％二分岐Ｎ－グリカンというグリカンプロファイルを有する（例えば、この場合、ＶＥＧＦミニトラップは、ＲＥＧＮ１０１０５である）。

例えば、Ｙｕら、Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｗｉｔｈＮ－ｌｉｎｋｅｄｍａｎｎｏｓｅ－５ｇｌｙｃａｎｓ、ＭＡｂｓ．２０１２年７月～８月；４巻（４号）：４７５～８７頁を参照されたい。

本発明の実施形態では、ＲＥＧＮ１０１０５は、以下に示す下線付きＮ残基の１つまたはそれ以上がＮ－グリコシル化されている（例えば、本明細書に記載のように）：ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号３３）。本明細書に示されている他のＶＥＧＦトラップおよびミニトラップの対応するＮ残基は、同様にＮ－グリコシル化されている場合がある。

本発明の実施形態では、本明細書に示されているＶＥＧＦトラップまたはミニトラップの１つまたはそれ以上のヒスチジンは、２－オキソ－ヒスチジンである。

２つの化学型の２－オキソ－ヒスチジン（２－ｏｘｏ－ｈｉｓ）

、ヒスチジンと比べて分子量が１３．９８Ｄａ増加しているもの（１３．９８Ｄａ型）；または

ヒスチジンと比べて分子量が１５．９９Ｄａ増加しているもの（１５．９９Ｄａ型）が産生される可能性があり；２－オキソ－ヒスチジンの１３．９８Ｄａ型は、ＣＤＭ中で発現されるミニトラップで観察される主要な部分である。ペプチドにおける１３．９８Ｄａ型の２－オキソ－ヒスチジンの含有量は、この部分が、波長３５０ｎＭの光の吸光度の増強を示すのに対し、１５．９９Ｄａ型はそのような吸光度の増強を示さないため、分光光度法で評価することができる。ミニトラップにおける１３．９８Ｄａ型の２－オキソ－ヒスチジンの形成は、光により触媒される可能性があるが、１５．９９Ｄａ型の形成は、銅（Ｃｕ^２＋）などの金属により触媒される可能性がある。

トリプトファンの酸化は、産物の複雑な混合物をもたらす場合がある。主要な産物は、モノ酸化産物、二酸化産物、および／またはトリ酸化産物と共に、Ｎ－ホルミルキヌレニンおよびキヌレニンであってもよい。酸化Ｔｒｐ修飾を有するペプチドは、一般に、キヌレニン（ＫＹＮ）、ヒドロキシトリプトファン（Ｗ_ｏｘ１）、およびＮ－ホルミルキヌレニン／ジヒドロキシトリプトファン（ＮＦＫ／Ｗ_ｏｘ２、「二重酸化Ｔｒｐ」とも呼ばれる）、トリヒドロキシトリプトファン（Ｗ_ｏｘ３、「三重酸化Ｔｒｐ」とも呼ばれる）、およびヒドロキシキヌレニン（ＫＹＮ_ｏｘ１、＋２０Ｄａ）などのそれらの組合せの形成に応じて、４、１６、３２、および４８Ｄａの質量増加を呈する。ヒドロキシトリプトファン（Ｗ_ｏｘ１）への酸化（Ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｏｘｉｄａｔｉｖｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｒｅｓｉｄｕｅｓｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓ：ｃｈｅｍｉｃａｌａｒｔｉｆａｃｔｏｒｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ？ＪＡｍＳｏｃＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍ．２０１０年７月；２１巻（７号）：１１１４～１１１７頁）。トリプトファンと同様に、チロシンの酸化は、主に、３，４－ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）およびジチロシンを産出する（Ｌｉ，Ｓ，ＣＳｃｈｏｎｅｉｃｈおよびＲＴ．Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ．１９９５年、ＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆＰｒｏｔｅｉｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＯｘｉｄａｔｉｏｎａｎｄＳｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒＳｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．４８巻：４９０～５００頁）。

本発明の範囲には、組成物中のＶＥＧＦミニトラップまたはトラップのヒスチジンの約０．１～２％（またはそれ未満、例えば、０．１％もしくはそれ未満、または０．０５％、または０．０１％）が２－オキソ－ヒスチジンである、組成物が含まれる。

ＩｄｅＳおよびそのバリアント
本発明は、ストレプトコッカス・ピオゲネスＩｄｅＳ（ＦａｂＲＩＣＡＴＯＲ）およびそのバリアントによるアフリベルセプトのタンパク質分解消化により産生されたＶＥＧＦミニトラップおよびそれらの組成物を含む。ＦａｂＲＩＣＡＴＯＲは、Ｇｅｎｏｖｉｓ，Ｉｎｃ．；ケンブリッジ、マサチューセッツ州；ルンド、スウェーデンから市販されている。

一実施形態では、ＩｄｅＳポリペプチドは、配列番号５０～６５からなる群に示されている通りの単離されたアミノ酸配列の全長に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一態様では、単離されたアミノ酸配列は、単離されたアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有する。別の態様では、単離されたアミノ酸配列は、単離されたアミノ酸配列の全長に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有する。別の態様では、単離されたアミノ酸配列は、単離されたアミノ酸配列の全長に対して約１００％の配列同一性を有する。一態様では、ポリペプチドは、標的タンパク質を切断して断片にすることが可能であってもよい。特定の態様では、標的タンパク質はＩｇＧである。別の特定の態様では、標的タンパク質は融合タンパク質である。さらに別の特定の態様では、断片は、Ｆａｂ断片および／またはＦｃ断片を含んでいてもよい。

一実施形態では、ＩｄｅＳアミノ酸配列は、
ＭＲＫＲＣＹＳＴＳＡＡＶＬＡＡＶＴＬＦＶＬＳＶＤＲＧＶＩＡＤＳＦＳＡＮＱＥＩＲＹＳＥＶＴＰＹＨＶＴＳＶＷＴＫＧＶＴＰＰ
ＡＮＦＴＱＧＥＤＶＦＨＡＰＹＶＡＮＱＧＷＹＤＩＴＫＴＦＮＧＫＤＤＬＬＣＧＡＡＴＡＧＮＭＬＨＷＷＦＤＱＮＫＤＱＩＫ
ＲＹＬＥＥＨＰＥＫＱＫＩＮＦＮＧＥＱＭＦＤＶＫＥＡＩＤＴＫＮＨＱＬＤＳＫＬＦＥＹＦＫＥＫＡＦＰＹＬＳＴＫＨＬＧＶＦＰＤ
ＨＶＩＤＭＦＩＮＧＹＲＬＳＬＴＮＨＧＰＴＰＶＫＥＧＳＫＤＰＲＧＧＩＦＤＡＶＦＴＲＧＤＱＳＫＬＬＴＳＲＨＤＦＫＥＫＮＬＫ
ＥＩＳＤＬＩＫＫＥＬＴＥＧＫＡＬＧＬＳＨＴＹＡＮＶＲＩＮＨＶＩＮＬＷＧＡＤＦＤＳＮＧＮＬＫＡＩＹＶＴＤＳＤＳＮＡＳＩＧＭ
ＫＫＹＦＶＧＶＮＳＡＧＫＶＡＩＳＡＫＥＩＫＥＤＮＩＧＡＱＶＬＧＬＦＴＬＳＴＧＱＤＳＷＮＱＴＮ
（配列番号６６）により規定される親アミノ酸配列を含むが、８７位、１３０位、１８２位、および／または２７４位のアスパラギン残基がアスパラギン以外のアミノ酸に突然変異されている。一態様では、突然変異は、親アミノ酸配列と比較して、アルカリ性ｐＨ値にて化学的安定性の増加を付与することができる。別の態様では、突然変異は、親アミノ酸配列と比較して、アルカリ性ｐＨ値にて５０％の化学的安定性の増加を付与することができる。一態様では、アミノ酸は、アスパラギン酸、ロイシン、およびアルギニンから選択することができる。特定の態様では、８７位のアスパラギン残基は、アスパラギン酸残基に突然変異している。別の特定の態様では、１３０位のアスパラギン残基は、アルギニン残基に突然変異している。さらに別の特定の態様では、１８２位のアスパラギン残基は、ロイシン残基に突然変異している。さらに別の特定の態様では、２７４位のアスパラギン残基は、アスパラギン酸残基に突然変異している。さらに別の特定の態様では、８７位および１３０位のアスパラギン残基は突然変異している。さらに別の特定の態様では、８７位および１８２位のアスパラギン残基は突然変異している。さらに別の特定の態様では、８７位および２７４位のアスパラギン残基は突然変異している。さらに別の特定の態様では、１３０位および１８２位のアスパラギン残基は突然変異している。さらに別の特定の態様では、１３０位および２７４位のアスパラギン残基は突然変異している。さらに別の特定の態様では、１８２位および２７４位のアスパラギン残基は突然変異している。さらに別の特定の態様では、８７位、１３０位、および１８２位のアスパラギン残基は突然変異している。さらに別の特定の態様では、８７位、１８２位、および２７４位のアスパラギン残基は突然変異している。さらに別の特定の態様では、１３０位、１８２位、および２７４位のアスパラギン残基は突然変異している。さらに別の特定の態様では、８７位、１３０位、１８２位、および２７４位のアスパラギン残基は突然変異している。

アフリベルセプトまたは別のＶＥＧＦトラップは、固体支持体、例えばクロマトグラフィービーズに固定化されているＩｄｅＳで切断してもよい。例えば、緩衝水性溶液中に（切断緩衝液中に）ＶＥＧＦトラップを含む試料を、例えばクロマトグラフィーカラムの固定化されたＩｄｅＳにアプライしてもよい。カラムを、例えば約１８℃で、例えば３０分間インキュベートしてもよい。次いで、カラムを切断緩衝液で洗浄してもよい。切断後、消化溶液および洗浄溶液をプロテインＡカラムにアプライして、切断されたＦｃ副産物を捕捉してもよく、この場合ミニトラップ産物は、通過画分に保持される。本発明の実施形態では、切断緩衝液ならびに／またはプロテインＡカラム平衡化および洗浄溶液は、ｐＨ７であり、例えば４０ｍＭＴｒｉｓ、５４ｍＭ酢酸塩、ｐＨ７．０±０．１である。ＶＥＧＦミニトラップを製作するためのそのような方法は、本発明の一部である。

本発明の実施形態では、ＩｄｅＳバリアントは、以下に示されているアミノ酸配列を含む：
ＭＲＫＲＣＹＳＴＳＡＡＶＬＡＡＶＴＬＦＶＬＳＶＤＲＧＶＩＡＤＳＦＳＡＮＱＥＩＲＹＳＥＶＴＰＹＨＶＴＳＶＷＴＫＧＶＴＰＰＡＮＦＴＱＧＥＤＶＦＨＡＰＹＶＡＮＱＧＷＹＤＩＴＫＴＦＮＧＫＤＤＬＬＣＧＡＡＴＡＧＮＭＬＨＷＷＦＤＱＮＫＤＱＩＫＲＹＬＥＥＨＰＥＫＱＫＩＮＦＮＧＥＱＭＦＤＶＫＥＡＩＤＴＫＮＨＱＬＤＳＫＬＦＥＹＦＫＥＫＡＦＰＹＬＳＴＫＨＬＧＶＦＰＤＨＶＩＤＭＦＩＮＧＹＲＬＳＬＴＮＨＧＰＴＰＶＫＥＧＳＫＤＰＲＧＧＩＦＤＡＶＦＴＲＧＤＱＳＫＬＬＴＳＲＨＤＦＫＥＫＮＬＫＥＩＳＤＬＩＫＫＥＬＴＥＧＫＡＬＧＬＳＨＴＹＡＮＶＲＩＮＨＶＩＮＬＷＧＡＤＦＤＳＮＧＮＬＫＡＩＹＶＴＤＳＤＳＮＡＳＩＧＭＫＫＹＦＶＧＶＮＳＡＧＫＶＡＩＳＡＫＥＩＫＥＤＮＩＧＡＱＶＬＧＬＦＴＬＳＴＧＱＤＳＷＮＱＴＮ
（配列番号５０）；

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（配列番号５１）；

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（配列番号５２）；

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（配列番号５３）；

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（配列番号５４）；

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（配列番号５５）；

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（配列番号５６）；

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（配列番号５７）；

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（配列番号５８）；

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（配列番号５９）；

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（配列番号６０）；

ＭＲＫＲＣＹＳＴＳＡＡＶＬＡＡＶＴＬＦＶＬＳＶＤＲＧＶＩＡＤＳＦＳＡＮＱＥＩＲＹＳＥＶＴＰＹＨＶＴＳＶＷＴＫＧＶＴＰＰＡＮＦＴＱＧＥＤＶＦＨＡＰＹＶＡＮＱＧＷＹＤＩＴＫＴＦＤＧＫＤＤＬＬＣＧＡＡＴＡＧＮＭＬＨＷＷＦＤＱＮＫＤＱＩＫＲＹＬＥＥＨＰＥＫＱＫＩＮＦＲＧＥＱＭＦＤＶＫＥＡＩＤＴＫＮＨＱＬＤＳＫＬＦＥＹＦＫＥＫＡＦＰＹＬＳＴＫＨＬＧＶＦＰＤＨＶＩＤＭＦＩＬＧＹＲＬＳＬＴＮＨＧＰＴＰＶＫＥＧＳＫＤＰＲＧＧＩＦＤＡＶＦＴＲＧＤＱＳＫＬＬＴＳＲＨＤＦＫＥＫＮＬＫＥＩＳＤＬＩＫＫＥＬＴＥＧＫＡＬＧＬＳＨＴＹＡＮＶＲＩＮＨＶＩＮＬＷＧＡＤＦＤＳＮＧＮＬＫＡＩＹＶＴＤＳＤＳＮＡＳＩＧＭＫＫＹＦＶＧＶＮＳＡＧＫＶＡＩＳＡＫＥＩＫＥＤＮＩＧＡＱＶＬＧＬＦＴＬＳＴＧＱＤＳＷＮＱＴＮ
（配列番号６１）；

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（配列番号６２）；

ＭＲＫＲＣＹＳＴＳＡＡＶＬＡＡＶＴＬＦＶＬＳＶＤＲＧＶＩＡＤＳＦＳＡＮＱＥＩＲＹＳＥＶＴＰＹＨＶＴＳＶＷＴＫＧＶＴＰＰＡＮＦＴＱＧＥＤＶＦＨＡＰＹＶＡＮＱＧＷＹＤＩＴＫＴＦＤＧＫＤＤＬＬＣＧＡＡＴＡＧＮＭＬＨＷＷＦＤＱＮＫＤＱＩＫＲＹＬＥＥＨＰＥＫＱＫＩＮＦＮＧＥＱＭＦＤＶＫＥＡＩＤＴＫＮＨＱＬＤＳＫＬＦＥＹＦＫＥＫＡＦＰＹＬＳＴＫＨＬＧＶＦＰＤＨＶＩＤＭＦＩＬＧＹＲＬＳＬＴＮＨＧＰＴＰＶＫＥＧＳＫＤＰＲＧＧＩＦＤＡＶＦＴＲＧＤＱＳＫＬＬＴＳＲＨＤＦＫＥＫＮＬＫＥＩＳＤＬＩＫＫＥＬＴＥＧＫＡＬＧＬＳＨＴＹＡＮＶＲＩＮＨＶＩＮＬＷＧＡＤＦＤＳＤＧＮＬＫＡＩＹＶＴＤＳＤＳＮＡＳＩＧＭＫＫＹＦＶＧＶＮＳＡＧＫＶＡＩＳＡＫＥＩＫＥＤＮＩＧＡＱＶＬＧＬＦＴＬＳＴＧＱＤＳＷＮＱＴＮ
（配列番号６３）；

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（配列番号６４）；または

ＭＲＫＲＣＹＳＴＳＡＡＶＬＡＡＶＴＬＦＶＬＳＶＤＲＧＶＩＡＤＳＦＳＡＮＱＥＩＲＹＳＥＶＴＰＹＨＶＴＳＶＷＴＫＧＶＴＰＰＡＮＦＴＱＧＥＤＶＦＨＡＰＹＶＡＮＱＧＷＹＤＩＴＫＴＦＤＧＫＤＤＬＬＣＧＡＡＴＡＧＮＭＬＨＷＷＦＤＱＮＫＤＱＩＫＲＹＬＥＥＨＰＥＫＱＫＩＮＦＲＧＥＱＭＦＤＶＫＥＡＩＤＴＫＮＨＱＬＤＳＫＬＦＥＹＦＫＥＫＡＦＰＹＬＳＴＫＨＬＧＶＦＰＤＨＶＩＤＭＦＩＬＧＹＲＬＳＬＴＮＨＧＰＴＰＶＫＥＧＳＫＤＰＲＧＧＩＦＤＡＶＦＴＲＧＤＱＳＫＬＬＴＳＲＨＤＦＫＥＫＮＬＫＥＩＳＤＬＩＫＫＥＬＴＥＧＫＡＬＧＬＳＨＴＹＡＮＶＲＩＮＨＶＩＮＬＷＧＡＤＦＤＳＤＧＮＬＫＡＩＹＶＴＤＳＤＳＮＡＳＩＧＭＫＫＹＦＶＧＶＮＳＡＧＫＶＡＩＳＡＫＥＩＫＥＤＮＩＧＡＱＶＬＧＬＦＴＬＳＴＧＱＤＳＷＮＱＴＮ
（配列番号６５）。

このようなＩｄｅＳバリアントは、親アミノ酸配列（配列番号６６）と比較して、アルカリ性ｐＨ値で化学的安定性が増加している。

本発明は、本明細書に示されているＶＥＧＦミニトラップ、およびＩｄｅＳ切断によりＶＥＧＦミニトラップ産物を生成するために使用された対応するＶＥＧＦトラップを含む組成物を含む。混合物中のＶＥＧＦトラップは、ＩｄｅＳによるタンパク質分解の未消化またはまだ消化されていない反応物である。例えば、組成物は、以下のものを含んでいてもよい：
・ＶＥＧＦトラップＲＥＧＮ１０１０２およびＶＥＧＦミニトラップＲＥＧＮ１０１０５；
・ＶＥＧＦトラップＲＥＧＮ１０１０４およびＶＥＧＦミニトラップｍＲＥＧＮ１０１０４；
・ＶＥＧＦトラップＲＥＧＮ１０１１７およびＶＥＧＦミニトラップＲＥＧＮ１０１０３；
・ＶＥＧＦトラップＲＥＧＮ１０１８７およびＶＥＧＦミニトラップｍＲＥＧＮ１０１８７；
・ＶＥＧＦトラップＲＥＧＮ１０５１１およびＶＥＧＦミニトラップｍＲＥＧＮ１０５１１；
・ＶＥＧＦトラップＲＥＧＮ１０５１２およびＶＥＧＦミニトラップｍＲＥＧＮ１０５１２；
・ＶＥＧＦトラップＲＥＧＮ１０５１３およびＶＥＧＦミニトラップｍＲＥＧＮ１０５１３；
・ＶＥＧＦトラップＲＥＧＮ１０５１４およびＶＥＧＦミニトラップＲＥＧＮ１１０９５；ならびに／または
・ＶＥＧＦトラップＲＥＧＮ１０５１５およびＶＥＧＦミニトラップｍＲＥＧＮ１０５１５。
本発明の実施形態では、ＶＥＧＦトラップよりも多くの（例えば、モルまたはグラムで）、例えば、２、５、１０、または１５倍多くのＶＥＧＦミニトラップが存在する。そのような組成物は、例えば、本明細書に示されているようなＩｄｅＳまたはそのバリアントをさらに含んでいてもよい。ＩｄｅＳは、存在しないか、微量で、例えば０．０４ｐｐｍ（もしくはそれ未満）または０．３ｐｐｍ未満で存在するに過ぎないかのいずれであってもよい。また、組成物は、プロテアーゼ切断の助けとなる緩衝液および／または他の成分を含んでもよい。

ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、および製作方法
本明細書に示されている任意のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドは、本発明の一部を形成し、ポリヌクレオチドを含むベクター、ならびに／または本明細書に示されているポリヌクレオチド、ベクター、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップ、および／もしくはポリペプチドを含む宿主細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）も同様である。そのような宿主細胞も、本発明の一部を形成する。

ポリヌクレオチドとしては、ＤＮＡおよびＲＮＡが挙げられる。本発明は、例えば、本明細書に示されているＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップポリペプチド（例えば、配列番号３２～４９のいずれか）をコードする本発明の任意のポリヌクレオチドを含む。場合により、ポリヌクレオチドは、プロモーターまたは他の発現制御配列に作動可能に連結している。本発明の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、分泌シグナル配列に融合されている。そのようなポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドも、本発明の範囲内にある。

本発明の実施形態では、ＲＥＧＮ１０１０３をコードするポリヌクレオチドは、以下のヌクレオチド配列を含む：
ＡＧＴＧＡＴＡＣＣＧＧＴＡＧＡＣＣＴＴＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＧＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＣＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＧＧＴＴＣＴＧＡＧＴＣＣＧＴＣＴＣＡＴＧＧＡＡＴＴＧＡＡＣＴＡＴＣＴＧＴＴＧＧＡＧＡＡＡＡＧＣＴＴＧＴＣＴＴＡＡＡＴＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＴＧＡＡＣＴＡＡＡＴＧＴＧＧＧＧＡＴＴＧＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＡＴＡＣＣＣＴＴＣＴＴＣＧＡＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＡＡＧＡＡＡＣＴＴＧＴＡＡＡＣＣＧＡＧＡＣＣＴＡＡＡＡＡＣＣＣＡＧＴＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＡＴＴＴＴＴＧＡＧＣＡＣＣＴＴＡＡＣＴＡＴＡＧＡＴＧＧＴＧＴＡＡＣＣＣＧＧＡＧＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＴＴＧＴＡＣＡＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＣＡＣＡＴＴＴＧＴＣＡＧＧＧＴＣＣＡＴＧＡＡＡＡＧＧＡＧＣＧＣＡＡＡＴＧＴＴＧＴＧＴＣＧＡＧＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＡＣＣＴＧＴＧＧＣＡＴＧＡ
（配列番号７１）

本発明の実施形態では、ＲＥＧＮ１０１０５をコードするポリヌクレオチドは、以下のヌクレオチド配列を含む：
ＡＧＴＧＡＴＡＣＣＧＧＴＡＧＡＣＣＴＴＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＧＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＣＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＧＧＴＴＣＴＧＡＧＴＣＣＧＴＣＴＣＡＴＧＧＡＡＴＴＧＡＡＣＴＡＴＣＴＧＴＴＧＧＡＧＡＡＡＡＧＣＴＴＧＴＣＴＴＡＡＡＴＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＴＧＡＡＣＴＡＡＡＴＧＴＧＧＧＧＡＴＴＧＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＡＴＡＣＣＣＴＴＣＴＴＣＧＡＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＡＡＧＡＡＡＣＴＴＧＴＡＡＡＣＣＧＡＧＡＣＣＴＡＡＡＡＡＣＣＣＡＧＴＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＡＴＴＴＴＴＧＡＧＣＡＣＣＴＴＡＡＣＴＡＴＡＧＡＴＧＧＴＧＴＡＡＣＣＣＧＧＡＧＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＴＴＧＴＡＣＡＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＣＡＣＡＴＴＴＧＴＣＡＧＧＧＴＣＣＡＴＧＡＡＡＡＧＧＴＣＧＡＧＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＡＣＣＴＧＴＧＧＣＡＴＧＡ
（配列番号７２）

本発明の実施形態では、ＲＥＧＮ１１０９５をコードするポリヌクレオチドは、以下のヌクレオチド配列を含む：
ＡＧＴＧＡＴＡＣＣＧＧＴＡＧＡＣＣＴＴＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＧＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＣＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＧＧＴＴＣＴＧＡＧＴＣＣＧＴＣＴＣＡＴＧＧＡＡＴＴＧＡＡＣＴＡＴＣＴＧＴＴＧＧＡＧＡＡＡＡＧＣＴＴＧＴＣＴＴＡＡＡＴＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＴＧＡＡＣＴＡＡＡＴＧＴＧＧＧＧＡＴＴＧＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＡＴＡＣＣＣＴＴＣＴＴＣＧＡＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＡＡＧＡＡＡＣＴＴＧＴＡＡＡＣＣＧＡＧＡＣＣＴＡＡＡＡＡＣＣＣＡＧＴＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＡＴＴＴＴＴＧＡＧＣＡＣＣＴＴＡＡＣＴＡＴＡＧＡＴＧＧＴＧＴＡＡＣＣＣＧＧＡＧＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＴＴＧＴＡＣＡＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＣＡＣＡＴＴＴＧＴＣＡＧＧＧＴＣＣＡＴＧＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＧＣＧＧＴＧＧＡＣＴＴＣＴＡＧＧＧＴＧＡ
（配列番号７３）

一般に、「プロモーター」または「プロモーター配列」は、細胞のＲＮＡポリメラーゼに結合し（例えば、直接的に、または他のプロモーター結合タンパク質もしくは物質を介して）、コード配列の転写を開始することが可能なＤＮＡ調節領域である。プロモーターは、エンハンサー配列およびリプレッサー配列を含む他の発現制御配列に、ならびに／または本発明のポリヌクレオチドに作動可能に連結していてもよい。遺伝子発現を制御するために使用することができるプロモーターとしては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（米国特許第５，３８５，８３９号明細書および第５，１６８，０６２号明細書）、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｎｏｉｓｔら、（１９８１年）Ｎａｔｕｒｅ２９０巻：３０４～３１０頁）、ラウス肉腫ウイルスの３’末端の長い末端反復（３’ｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ）に含まれているプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら、（１９８０年）Ｃｅｌｌ２２巻：７８７～７９７頁）、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら（１９８１年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７８巻：１４４１～１４４５頁）、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、（１９８２年）Ｎａｔｕｒｅ２９６巻：３９～４２頁）；ベータラクタマーゼプロモーター（ＶＩＩＩａ－Ｋｏｍａｒｏｆｆら、（１９７８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７５巻：３７２７～３７３１頁）またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら、（１９８３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８０巻：２１～２５頁）などの原核生物発現ベクター；ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＡｍｅｒｉｃａｎ（１９８０年）２４２巻：７４～９４頁の「Ｕｓｅｆｕｌｐｒｏｔｅｉｎｓｆｒｏｍｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｔｅｒｉａ」も参照されたい；および酵母、またはＧａｌ４プロモーター、ＡＤＣ（アルコールデヒドロゲナーゼ）プロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーター、もしくはアルカリホスファターゼプロモーターなどの他の真菌に由来するプロモーターエレメント。

ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、細胞または他の発現系において、この配列が、コード配列のＲＮＡポリメラーゼ媒介性転写を指図してＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを産生させ、次いでＲＮＡがスプライスされ（イントロンが含まれている場合）、場合によりコード配列によりコードされているタンパク質に翻訳される場合、プロモーターまたは他の発現制御配列に「作動可能に連結」している。

本発明は、そのアミノ酸配列が本明細書に具体的に示されているもの（例えば、配列番号３２～４９のいずれか）のバリアントであるＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップポリペプチド鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。

哺乳動物細胞を含む真核生物宿主細胞、および原核生物宿主細胞を、ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップポリペプチド（例えば、配列番号３２～４９のいずれか）を発現させるための宿主として使用することができる。そのような宿主細胞は当技術分野で周知であり、多くはアメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から入手可能である。こうした宿主細胞としては、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＨＯＫ１、ＥＥＳＹＲ、ＮＩＣＥ、ＮＳ０、Ｓｐ２／０、胚性腎臓細胞、およびＢＨＫ細胞が挙げられる。宿主細胞としては、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）、例えばピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）または細菌細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などの真菌細胞が挙げられる。本発明は、１つもしくはそれ以上のＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップポリペプチド（もしくはそれらのバリアント）および／またはそのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、本明細書で考察されている通りの）を含む単離された宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞もしくは上記に示されている任意のタイプの宿主細胞）を含む。ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップをコードするポリヌクレオチドまたはそのベクターは、異所性であってもよく、または染色体ＤＮＡもしくは宿主細胞に染色体的に組み込まれていてもよい。

形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞へと導入するための任意の公知の方法によるものであってもよい。異種性ポリヌクレオチドを哺乳動物細胞へと導入するための方法は、当技術分野で周知であり、デキストラン媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介性トランスフェクション、原形質融合、エレクトロポレーション、リポソームへのポリヌクレオチドの封入、核に対するＤＮＡの遺伝子銃インジェクションおよび直接マイクロインジェクションが挙げられる。加えて、ウイルスベクターにより核酸分子を哺乳動物細胞へと導入することができる。細胞を形質転換するための方法は、当技術分野で周知である。例えば、米国特許第４３９９２１６号明細書；第４９１２０４０号明細書；第４７４０４６１号明細書；第４９５９４５５号明細書を参照されたい。したがって、本発明は、ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップを製作するための組換え方法であって、
（ｉ）宿主細胞（例えば、ＣＨＯまたはピキアまたはピキア・パストリス）を、ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップをコードするポリヌクレオチドの発現に好ましい条件下で（例えば、バイオリアクター中で、例えば、既知組成培地（ＣＤＭ）中で、または非ＣＤＭ中で）培養する工程、ならびに
（ｉｉ）場合により、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたはその鎖を、宿主細胞および／または宿主を増殖させた培地から単離する工程
を含む方法を含む。
本発明の実施形態では、本方法は、ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップポリペプチドをコードする１つまたはそれ以上のポリヌクレオチド（例えば、配列番号３２～４９のいずれか１つに示されているアミノ酸配列を含む）を宿主細胞に導入する工程であって、例えば、ポリヌクレオチドは、ベクターに存在し；および／または宿主細胞染色体に組み込まれ、および／またはプロモーターに作動可能に連結している工程を含む。２つもしくはそれ以上のポリペプチド鎖を含むＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップを製作する場合、単一の宿主細胞において鎖を共発現させることにより、例えば、細胞内でまたは細胞表面上でまたはそのような鎖が分泌される場合は細胞外部において、ホモ二量体のＶＥＧＦミニトラップが形成されるような鎖の付随に結び付く。また、本発明は、本明細書に示されている産生方法および場合により本明細書に示されている精製方法の産物であるＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップを含む。

例えば、そのような方法の産物である組換えＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップ（例えば、配列番号３２～４９のいずれか）は、本発明の一部である。

例えば、Ｌｉｎｇら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｍａｎｕｆａｃｔｕｒａｂｉｌｉｔｙａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ－ｄｅｆｉｎｅｄｍｅｄｉｕｍｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｉｎＣＨＯｃｅｌｌｓ、ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＰｒｏｇ２０１５年９月～１０月；３１巻（５号）：１１６３～７１頁を参照されたい。

また、本発明は、本明細書に示されているＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦトラップに由来するＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ホモ二量体ＶＥＧＦミニトラップ）を、製作するための方法であって、下部ヒンジまたはその一部が、ＶＥＧＦミニトラップ産物の一部になるように、Ｆｃヒンジドメインの下方（Ｃ末端側）にある免疫グロブリンＦｃ多量体化成分においてＶＥＧＦトラップを切断するプロテアーゼを用いて、ＶＥＧＦトラップをタンパク質分解することを含むか、またはからなるか、またはから本質的になる方法を提供する。例えば、タンパク質分解は、Ｓ．ピオゲネスＩｄｅＳ（例えば、ＦａｂＲＩＣＡＴＯＲプロテアーゼ；Ｇｅｎｏｖｉｓ社；ケンブリッジ、マサチューセッツ州；ルンド、スウェーデン）またはストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミクスＩｄｅＺ（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ社；イプスウィッチ、マサチューセッツ州）で行うことができる。本発明の実施形態では、そのような方法は、そのようなＶＥＧＦミニトラップポリペプチドのアミノ酸残基の著しい修飾（例えば、ＰＥＧ化またはヨードアセトアミド化などの部位指定化学修飾）および／またはジスルフィド架橋還元を含むあらゆる工程を欠如する。そのような製作方法のＶＥＧＦミニトラップ産物も、本発明の一部である。

ＶＥＧＦミニトラップを製作するためのそのような方法の後に、例えば、Ｆｃ断片、タンパク質分解酵素、または他の物質などの夾雑物からＶＥＧＦミニトラップを精製するための方法を行ってもよい。本発明の実施形態では、精製方法は、ホモ二量体ＶＥＧＦミニトラップの形成を促進する条件下で（例えば、非還元条件下で、例えば、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはベータ－メルカプトエタノールなどの還元剤の非存在下で）行われる。そのような製作方法および／または精製方法のＶＥＧＦミニトラップ産物も、本発明の一部である。本発明の実施形態では、精製は、クロマトグラフィー精製を含む方法により実施される。

また、本発明により、配列番号３２～４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、からなるか、またはから本質的になる単離されたポリペプチドが提供される。そのようなポリペプチドを含む組成物、例えば、そのようなポリペプチドのすべてまたは部分が、例えばＶＥＧＦに結合することができるホモ二量体ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ複合体に付随している組成物は、本発明の一部である。そのような組成物は、例えば、宿主細胞、プロテアーゼ（例えば、ＩｄｅＳ）、および培養培地の１つまたはそれ以上を含んでいてもよい。

槽式バイオリアクターまたはシングルユースバイオリアクターなどのバイオリアクターを使用して、ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップを発現させるために宿主細胞を培養することができる。そのようなバイオリアクターは、培養物混合のためのインペラー（例えば、タービン設計、マリーン設計、またはスパイラル設計）、ならびに培養培地の温度、ｐＨ、酸素、および／または窒素含有量を制御するための手段を含んでいてもよい。バイオリアクター容積は、研究規模（例えば、２５０ｍＬまたは２リットル）または製造規模（例えば、２０００リットルまたは１００００リットル）であってもよい。本発明は、本発明のＶＥＧＦトラップおよび／またはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；またはｍＲＥＧＮ１０５１５）ならびに場合により宿主細胞（例えば、本明細書で考察されているもの）ならびに／または培養培地（例えば、ＣＤＭ）を含む槽式バイオリアクターを含む。例えば、ＩｎｎｏｖａｔｉｏｎｓｉｎＣｅｌｌＣｕｌｔｕｒｅ、ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ１２巻（相補５）（２０１４年９月）を参照されたい。

組合せおよび医薬製剤
本発明は、１つもしくはそれ以上の成分と合わせたＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；またはｍＲＥＧＮ１０５１５）を含む組成物、ならびにそれらの使用方法およびそのような組成物の製作方法を提供する。ＶＥＧＦミニトラップおよび薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬製剤は、本発明の一部である。本発明の実施形態では、本発明の医薬製剤は、約５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、または６．２のｐＨを有する。

ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；またはｍＲＥＧＮ１０５１５）の医薬製剤を調製するため、ミニトラップを、薬学的に許容される担体または賦形剤と混合する。例えば、以下の文献を参照されたい：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：ＮａｔｉｏｎａｌＦｏｒｍｕｌａｒｙ、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、イーストン、ペンシルベニア州（１９８４年）；Ｈａｒｄｍａｎら（２００１年）ＧｏｏｄｍａｎａｎｄＧｉｌｍａｎ’ｓＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｉｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ、ニューヨーク、ニューヨーク州；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００年）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ、ニューヨーク、ニューヨーク州；Ａｖｉｓら（編）（１９９３年）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：ＰａｒｅｎｔｅｒａｌＭｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ、ニューヨーク州；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０年）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ、ニューヨーク州；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０年）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：ＤｉｓｐｅｒｓｅＳｙｓｔｅｍｓ、ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ、ニューヨーク州；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００年）ＥｘｃｉｐｉｅｎｔＴｏｘｉｃｉｔｙａｎｄＳａｆｅｔｙ、ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク、ニューヨーク州。本発明の実施形態では、医薬製剤は無菌である。そのような組成物は、本発明の一部である。

本発明の医薬製剤は、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；またはｍＲＥＧＮ１０５１５）、ならびに例えば、水、緩衝剤、保存剤、および／または界面活性剤を含む薬学的に許容される担体を含む。

本発明の範囲は、ＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；またはｍＲＥＧＮ１０５１５）を含む乾燥された、例えば凍結乾燥された組成物、または薬学的に許容される担体を含むが実質的に水を欠如するその医薬製剤を含む。

本発明のさらなる実施形態では、本明細書で開示されたＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ｒＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ｒＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５またはｍＲＥＧＮ１０５１５）と合わせて対象に投与されるさらなる療法剤は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ＤｅｓｋＲｅｆｅｒｅｎｃｅ２００３（ＴｈｏｍｓｏｎＨｅａｌｔｈｃａｒｅ；第５７版（２００２年１１月１日））に準拠して対象に投与される。

本発明は、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４、ｍＲＥＧＮ１０１０４、ＲＥＧＮ１０１０２、ＲＥＧＮ１０１０５、ＲＥＧＮ１０１１７、ＲＥＧＮ１０１０３、ＲＥＧＮ１０１８７、ｍＲＥＧＮ１０１８７、ＲＥＧＮ１０５１１、ｍＲＥＧＮ１０５１１、ＲＥＧＮ１０５１２、ｍＲＥＧＮ１０５１２、ＲＥＧＮ１０５１３、ｍＲＥＧＮ１０５１３、ＲＥＧＮ１０５１４、ＲＥＧＮ１１０９５、ＲＥＧＮ１０５１５またはｍＲＥＧＮ１０５１５）のいずれかまたはその薬学的に許容される担体を含む医薬製剤を含む容器（例えば、プラスチックまたはガラスバイアル、例えば蓋付きのもの、またはクロマトグラフィーカラム、中空針、またはシリンジ筒）を提供する。また、本発明は、本明細書に示されているＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたは製剤を含む注射デバイス、例えば、シリンジ、事前充填シリンジ、または自動注射器を提供する。本発明の実施形態では、容器は、光を遮断するために着色されている（例えば、茶色または緑色）。

本発明は、１つまたはもしくはそれ以上のさらなる療法剤と合わせてＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５またはｍＲＥＧＮ１０５１５）を含む組合せを含む。ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップおよびさらなる療法剤は、単一の組成物であってもよくまたは別々の組成物であってもよい。例えば、本発明の実施形態では、さらなる療法剤は、オリゴヌクレオチド（例えば、ＶＥＧＦの発現を低減させるオリゴヌクレオチド、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）、Ａｎｇ－２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、Ｔｉｅ－２受容体活性化因子、抗ＰＤＧＦ抗体もしくはその抗原結合性断片、抗ＰＤＧＦ受容体もしくはＰＤＧＦ受容体ベータ抗体もしくはそれらの抗原結合性断片、および／またはアフリベルセプト、コンバーセプト、ベバシズマブ、ラニビズマブなどの追加のＶＥＧＦアンタゴニスト、ペガプタニブ（例えば、ペガプタニブナトリウム）などの抗ＶＥＧＦアプタマー、ブロルシズマブなどの単鎖（例えば、ＶＬ－ＶＨ）抗ＶＥＧＦ抗体、アビシパルペゴルＤＡＲＰｉｎなどの抗ＶＥＧＦＤＡＲＰｉｎ、ＲＧ７７１６などの例えばＡＮＧ２にも結合する二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体、またはＦｃ融合タンパク質として発現される、細胞外ドメイン１～３を含む可溶型ヒト血管内皮増殖因子受容体－３（ＶＥＧＦＲ－３）である。

投与および治療
本発明は、対象のがん（例えば、その増殖および／または転移が、少なくとも部分的にはＶＥＧＦにより媒介されるもの、例えばＶＥＧＦ媒介性血管新生）または血管新生性眼障害を治療または予防するための方法であって、治療有効量のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５またはｍＲＥＧＮ１０５１５）を対象に投与することを含む方法を提供する。

また、本発明は、それを必要とする対象のがん（例えば、その増殖および／または転移が、少なくとも部分的にはＶＥＧＦにより媒介されるもの、例えばＶＥＧＦ媒介性血管新生）または血管新生性眼障害を治療するための方法であって、本明細書に示されている治療有効量のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ、および場合によりさらなる療法剤を、対象の身体に、例えば対象の眼内に投与することを含む方法を提供する。「血管新生性眼障害」という表現は、本明細書で使用される場合、血管の成長もしくは増殖により引き起こされるかもしくは関連するか、または血管漏出により引き起こされる任意の眼疾患を意味する。本発明の実施形態では、投与は、硝子体内注射により行われる。本明細書の方法を使用して治療可能または予防可能である血管新生性眼障害の非限定的な例としては、以下のものが挙げられる：
・加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）（例えば、湿性または乾性、好ましくは湿性）、
・黄斑浮腫、
・網膜静脈閉塞後の黄斑浮腫、
・網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、
・網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、
・網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、
・糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、
・脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、
・虹彩血管新生、
・血管新生緑内障、
・緑内障の術後線維症、
・増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、
・視神経乳頭血管新生、
・角膜血管新生、
・網膜血管新生、
・硝子体血管新生、
・パンヌス、
・翼状片、
・血管網膜症、
・糖尿病性黄斑浮腫を有する対象の糖尿病性網膜症；および
・糖尿病性網膜症（例えば、ＤＭＥまたは中心窩を含むＤＭＥ（ｃｅｎｔｅｒ－ｉｎｖｏｌｖｅｄＤＭＥ）に罹患していない対象の、非増殖性糖尿病性網膜症（例えば、約４７または５３の糖尿病性網膜症重症度スケール（ＤＲＳＳ）レベルにより特徴付けられる）または増殖性糖尿病性網膜症）。

「治療する」または「治療」という用語は、例えば、任意の臨床的に測定可能な程度だけそのような疾患または障害の１つまたはそれ以上の症状または徴候の退行、安定化、または排除を引き起こすことにより、例えば、血管新生性眼障害に関しては、糖尿病性網膜症重症度スコア（ＤＲＳＳ）の低減もしくは維持を引き起こすことにより、視力（例えば、ＥＴＤＲＳ文字の増加により測定されるような、例えば、最良の矯正視力での）を改善もしくは維持することにより、視野を増加もしくは維持することにより、および／または網膜中心部の厚さを低減もしくは維持することにより、ならびにがんに関しては、対象のがん細胞の増殖、生存、および／または転移を停止または後退させることにより、望ましくない疾患または障害（例えば、血管新生性眼障害またはがん）を、後退、安定化、または排除する療法手段を指す。典型的には、療法手段は、治療有効量のＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップの１またはそれ以上の用量を、疾患または障害を有する対象に投与することである。

がん（例えば、少なくとも部分的には血管新生により媒介される）または血管新生性眼障害を治療または予防するためのＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；またはｍＲＥＧＮ１０５１５）の有効量または治療有効量は、例えば、任意の臨床的に測定可能な程度だけ、がんまたは血管新生性眼障害の１つまたはそれ以上の症状または徴候を退行、安定化、または排除することにより、例えば、血管新生性眼障害に関しては、糖尿病性網膜症重症度スコア（ＤＲＳＳ）の低減もしくは維持を引き起こすことにより、視力（例えば、ＥＴＤＲＳ文字の増加により測定されるような、例えば、最良の矯正視力での）を改善もしくは維持することにより、視野を増加もしくは維持することにより、および／または網膜中心部の厚さを低減もしくは維持することにより、ならびにがんに関しては、対象のがん細胞の増殖、生存、および／または転移を停止または後退させることにより、がんまたは血管新生性眼障害の退行、安定化、または排除を引き起こすのに十分なＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップの量を指す。本発明の実施形態では、血管新生性眼障害を治療または予防するためのＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップの有効量または治療有効量は、例えば、約１００μｌ以下で約０．５～２５ｍｇである。量は、投与される対象の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、ならびに投与経路などに応じて様々であってもよい。ある特定の実施形態では、初回用量の後に、初回用量の量とほぼ同じか、またはより少ないか、またはより多い量であってもよい、ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップの２回目または複数の後続用量を投与することができ、その場合、後続用量は、約１週間～約８週間の間隔がおかれる。

ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５またはｍＲＥＧＮ１０５１５）またはその組成物の投与モードは様々であってもよい。投与経路としては、非経口、非－非経口（ｎｏｎ－ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）、経口、直腸、経粘膜、腸、筋肉内、皮下、皮内、髄内、髄腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、吹送、局所、皮膚、眼内、硝子体内、経皮、または動脈内が挙げられる。

本発明は、ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；またはｍＲＥＧＮ１０５１５）を対象に投与するための方法であって、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたはその医薬製剤を対象の身体内に導入することを含む方法を提供する。例えば、本発明の実施形態では、この方法は、例えばシリンジの針で対象の身体を穿刺し、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたはその医薬製剤を対象の身体内に、例えば対象の眼内、静脈内、動脈内、筋肉組織内、または皮下組織内に注射することを含む。

本発明の実施形態では、本発明の医薬製剤（本発明のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；またはｍＲＥＧＮ１０５１５）を含む）の硝子体内注射は、製剤を含むシリンジおよび針（例えば、３０ゲージ注射針）で眼を穿刺する工程、ならびに製剤（例えば、約１００マイクロリットルと等しいかまたはそれ未満）を（例えば、本明細書に示されている治療有効量を送達するのに十分な量、例えば、約０．５～２０ｍｇのＶＥＧＦミニトラップを）眼の硝子体内に注射する工程を含む。場合により、この方法は、局所麻酔薬（例えば、プロパラカイン、リドカイン、またはテトラカイン）、抗生物質（例えば、フルオロキノロン）、消毒剤（例えば、ポビドンヨード）、および／または瞳孔拡張剤を、注射されている眼に投与する工程を含む。本発明の実施形態では、注射前に、注射しようとする眼の周囲に無菌領域が確立される。本発明の実施形態では、硝子体内注射後、対象を、眼圧、炎症、および／または血圧の上昇についてモニターする。

「と合わせて」という用語は、成分、本発明のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ（例えば、ＲＥＧＮ１０１０４；ｍＲＥＧＮ１０１０４；ＲＥＧＮ１０１０２；ＲＥＧＮ１０１０５；ＲＥＧＮ１０１１７；ＲＥＧＮ１０１０３；ＲＥＧＮ１０１８７；ｍＲＥＧＮ１０１８７；ＲＥＧＮ１０５１１；ｍＲＥＧＮ１０５１１；ＲＥＧＮ１０５１２；ｍＲＥＧＮ１０５１２；ＲＥＧＮ１０５１３；ｍＲＥＧＮ１０５１３；ＲＥＧＮ１０５１４；ＲＥＧＮ１１０９５；ＲＥＧＮ１０５１５；またはｍＲＥＧＮ１０５１５）が、例えば同時送達の場合、抗ＡＮＧ２などの別の作用剤と共に単一の組成物に製剤化されていてもよく、または２つもしくはそれ以上の組成物に別々に製剤化されていてもよい（例えば、各成分を含むキット）ことを示す。互いと合わせて投与される成分は、他の成分が投与される時点とは異なる時点で対象に投与してもよく；例えば、各投与は、同時ではなく所与の期間にわたって間隔を置いて（例えば、別々にまたは順次）与えてもよい。また、互いと合わせて投与される別々の成分は、同じ投与セッション中に本質的に同時に（例えば、正確に同時に、または臨床的に有意ではない期間だけ離間させて）投与してもよい。さらに、互いと合わせて投与される別々の成分は、同じ経路または異なる経路により対象に投与することができる。

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、例えば、がんまたは血管新生性眼障害の予防および／または治療を必要とする哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ヤギ、ウサギ）、好ましくはヒトを指す。対象は、がんもしくは血管新生性眼障害を有していてもよく、またはがんもしくは血管新生性眼障害を発症し易い素因があってもよい。

本発明の実施形態では、例えば、血管新生性眼障害を治療または予防するために、本発明のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップを硝子体内に注射する工程を含むいずれの方法も、眼圧／または血圧の著しい上昇に結び付かない。

こうした実施例は、本発明を例示することが意図されており、本発明を限定するものではない。実施例に示されている組成物および方法は、本発明の一部を形成する。

受容体捕捉表面上でのＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップならびにＶＥＧＦの結合速度分析。
種々のＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップの結合特徴を評価した。

ＲＥＧＮ３＝ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣ２４０ＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫ４０３ＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６９）

実験手順（関連する細胞系、タンパク質、試薬、ならびに装置のタイプおよびモデルの説明を含む）。

様々な精製済みＶＥＧＦミニトラップコンストラクトと結合するヒトＶＥＧＦ_１６５の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ値）を、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００装置を使用するリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーを使用して決定した。すべての結合試験を、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤ツイーン２０、ｐＨ７．４（ＨＢＳ－ＥＴ）ランニング緩衝液内、２５℃において実施した。ＶＥＧＦミニトラップコンストラクトを捕捉するために、Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面を、アミンカップリングによりモノクロナールマウス抗ＶＥＧＦＲ１抗体（ＲＥＧＮ１８）でまず誘導体化した。以下のヒトＶＥＧＦ試薬：ヒトＶＥＧＦ_１６５に対して結合試験を実施した。異なる濃度のＶＥＧＦ_１６５試薬を、ＨＢＳ－ＥＴランニング緩衝液（２．５ｎＭ～０．０７８ｐＭ；ヒトＶＥＧＦ_１６５の２倍連続希釈）で調製し、次に抗ＶＥＧＦＲ１捕捉ＶＥＧＦミニトラップコンストラクト表面に、９０μＬ／分の流速で１０８秒間注入した。ＶＥＧＦミニトラップコンストラクトからの結合ＶＥＧＦ_１６５試薬の解離を、ＨＢＳ－ＥＴランニング緩衝液中で６０分間モニターした。動的会合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０ｃ曲線近似ソフトウェアを使用して、リアルタイムセンサーグラムを１：１結合モデルに近似させることにより決定した。結合解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）および解離半減期（ｔ_１／２）を、動的速度定数から：

として計算した。

２５℃において異なるＶＥＧＦミニトラップコンストラクトと結合するヒトＶＥＧＦ１６５に関する結合動態パラメーターを、表１－２および表１－３に示す。すべてのＶＥＧＦミニトラップは、アフリベルセプトＲＥＧＮ３と同等の結合動態を示した。

ルシフェラーゼバイオアッセイにおける、ＶＥＧＦ_１６５およびＶＥＧＦ_１２１によるＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２の活性化をブロックするＶＥＧＦミニトラップの能力の評価。
種々のＶＥＧＦトラップおよびＶＥＧＦミニトラップがＶＥＧＦＲ活性化をブロックする能力を評価した。

細胞系

ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２を介するリガンドシグナル伝達経路をそれぞれ測定するために、２つの細胞系を生成した。ＶＥＧＦＲ１の場合、２つのキメラ受容体を、ＩＬ１８ＲαまたはＩＬ１８Ｒβのいずれかの細胞質ドメインに融合されたＶＥＧＦＲ１細胞外ドメインＦｌｔ１（１～７）に組み込むことにより、ＨＥＫ２９３／Ｄ９／Ｆｌｔ（１～７）－ＩＬ１８Ｒα／Ｆｌｔ－ＩＬ１８ＲβクローンＶ３Ｈ９を構築した。キメラ受容体を、一体化されたＮＦκＢ－ルシフェラーゼ－ＩＲＥＳ－ｅＧＦＰレポーター遺伝子を有する細胞系内にトランスフェクトした。細胞外ＶＥＧＦＲ１はＶＥＧＦに結合すると二量体化し、ＩＬ１８Ｒα細胞内ドメインとＩＬ１８Ｒβ細胞内ドメインとの相互作用、ＮＦκＢシグナル伝達、および後続するルシフェラーゼ生成を引き起こす。同様に、ＶＥＧＦＲ２の場合、２つのキメラ受容体を、ＩＬ１８ＲαまたはＩＬ１８Ｒβのいずれかの細胞質ドメインに融合されたＶＥＧＦＲ２細胞外ドメインＦｌｋ１（１～７）に組み込むことにより、ＨＥＫ２９３／Ｄ９／Ｆｌｋ（１～７）－ＩＬ１８Ｒα／Ｆｌｔ－ＩＬ１８Ｒβを構築した。

アッセイ手順

ＨＥＫ２９３／Ｄ９／Ｆｌｔ－ＩＬ１８Ｒα／Ｆｌｔ－ＩＬ１８Ｒβ（ＶＥＧＦＲ１）またはＨＥＫ２９３／Ｄ９／Ｆｌｋ（１～７）－ＩＬ１８Ｒα／Ｆｌｔ－ＩＬ１８Ｒβ（ＶＥＧＦＲ２）細胞を、０．５の％ＦＢＳ（Ｓｅｒａｄｉｇｍ社、カタログ番号１５００－５００）を含むＯｐｔｉＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号３１９８５）内、細胞１０，０００個／ウェルで、９６ウェル白色不透過性プレート（Ｎｕｎｃ社、カタログ番号１３６１０１）に播種し、そして３７℃、５％のＣＯ_２、オーバーナイトでインキュベートした。翌日、細胞を、濃度範囲５０００ｐＭ～０．０８５ｐＭのＶＥＧＦトラップまたはミニトラップタンパク質の１：３連続希釈を用いて個別に処理し、その後に固定濃度のＶＥＧＦ_１２１（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号４６４４－ＶＳ）または４０ｐＭのＶＥＧＦ_１６５（ＲＥＧＮ１１０）リガンドタンパク質を添加し、そして３７℃、５％ＣＯ_２で６時間インキュベートした。次に、Ｏｎｅ－Ｇｌｏルシフェラーゼ基質（ＰＲＯＭＥＧＡ社、カタログ番号Ｅ６１３０）を細胞に添加し、そして発光をＶＩＣＴＯＲ（商標）×５マルチラベルプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、モデル２０３０－００５０）を使用して測定した。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェアにより、１１ポイント応答曲線について、４パラメーターロジスティック方程式を使用してデータを分析し、ＥＣ_５０およびＩＣ_５０値を決定した。

結果の要約および結論

ＶＥＧＦ_１２１は、ＨＥＫ２９３／Ｄ９／Ｆｌｔ－ＩＬ１８Ｒα／Ｆｌｔ－ＩＬ１８Ｒβ（ＶＥＧＦＲ１）またはＨＥＫ２９３／Ｄ９／Ｆｌｋ（１～７）－ＩＬ１８Ｒα／Ｆｌｔ－ＩＬ１８Ｒβ（ＶＥＧＦＲ２）細胞を、約３０ｐＭのＥＣ_５０値で活性化する（図８および図９および表２－２）。

すべてのＶＥＧＦミニトラップは、２０ｐＭのＶＥＧＦ_１２１により媒介されるＶＥＧＦＲ１またはＶＥＧＦＲ２の活性化を阻害し、ＩＣ_５０値は完全長ＶＥＧＦトラップＲＥＧＮ３で観察されたＩＣ_５０値と類似していた（図８および図９および表２－２および表２－３）。

Ｉｄｅｓプロテアーゼにより媒介されるＶＥＧＦ－トラップバリアントの相対切断効率を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を使用して決定した。
ＩｄｅＳプロテアーゼにより切断される種々のＶＥＧＦトラップの能力を決定した。

実験手順（関連する細胞系、タンパク質、試薬、ならびに装置のタイプおよびモデルの説明を含む）

Ｉｄｅｓプロテアーゼにより媒介される種々のＶＥＧＦトラップコンストラクトの相対切断効率を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を使用して決定した。切断試験はすべて、１０ｍＭリン酸ナトリウム、４０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０３％ポリソルベート２０、および５％スクロース、ｐＨ６．２緩衝液中で室温にて実施した。種々のＶＥＧＦトラップコンストラクトを、まず０．１ｍｇのスケールで０．１ｍｇ／ｍＬに標準化した。各ＶＥＧＦトラップコンストラクトについて、試料アリコート１００ｕＬを、標準化ストックから調製し、５つの複製物を用意した。次にストックＩｄｅｓプロテアーゼ（０．１ｍｇ／ｍＬ）を、５ｎｇプロテアーゼ／ｕｇＶＥＧＦトラップの比ですべての試料に添加した。試料は、０、１、２、４、および２４時間の期間にわたってインキュベートを可能にした。ストックアミンベースのｐＨ２．８緩衝液０．１ｍＬを添加することにより、各時点で切断を停止させた。試料収集時点を、ＶＥＧＦトラップバリアントタイプ別にグループ分けし、次に各消化試料２ｕｇを、非還元条件下で４～２０％Ｔｒｉｓ－グリシンゲルを使用したＳＤＳ－ＰＡＧＥで分析した。各ゲルで、定電流３００ｍＡで１時間の期間にわたって泳動を行った。その後の各ゲルの染色には、Ｓｉｍｐｌｙ－ＢｌｕｅＳａｆｅ－Ｓｔａｉｎを使用した。脱染色したゲルを視覚的に分析して、Ｉｄｅｓプロテアーゼにより媒介される各ＶＥＧＦトラップバリアントの相対切断効率を、インキュベーション時間にわたって確かめた。切断効率の程度は、未切断のＶＥＧＦトラップ二量体、部分的に切断されたＶＥＧＦトラップ二量体、完全に切断されたＶＥＧＦトラップ二量体（ＶＥＧＦミニトラップ）、およびＦｃ単量体断片の相対レベルを比較することにより決定した。次に、観察されたＩｄｅｓ媒介性切断の程度に基づき、ＶＥＧＦトラップバリアント間の相対切断効率の順位を決定した。

テストした各ＶＥＧＦトラップバリアントのＩｄｅＳプロテアーゼ媒介性切断のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を図１０（Ａ～Ｆ）に示す。

既存抗ヒンジ抗体（ＡＨＡ）との反応性に関するＶＥＧＦミニトラップのアッセイ。
既存ヒトおよびサル抗ヒンジ抗体に対する種々のＶＥＧＦミニトラップの反応性を決定した。

既存抗ヒンジ抗体（ＡＨＡ）に対するＶＥＧＦミニトラップの潜在的な免疫原性を、抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイで評価した。図１１（Ａ）のアッセイ方式の説明図を参照されたい。このＡＤＡアッセイは、ビオチン標識およびルテニウム標識薬物（ミニトラップ）を使用して架橋を形成する、電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬ）架橋アッセイである。抗薬物抗体は、ビオチン標識およびルテニウム標識薬物（ＶＥＧＦミニトラップ）に結合して架橋複合体を形成し、次いで架橋複合体は、ストレプトアビジンコーティングプレート表面に捕捉される。電流がルテニウム標識薬物を活性化して、電気化学発光シグナルを生成する。

このアッセイでは、４８個のヒトＡＭＤ／ＤＭＥベースライン血清試料および２４個のサルナイーブ血清試料を使用して、６つのＶＥＧＦミニトラップをテストした。抗ＶＥＧＦＲ１モノクローナル抗体（ＲＥＧＮ１８）を、陽性対照として使用した。結果を図１１（Ｂ）および図１２に要約する。

結果の要約および結論

データは、ナイーブサル血清試料またはヒトＡＭＤ／ＤＭＥベースライン血清試料中の既存抗ヒンジ抗体（ＡＨＡ）が、ばらつきが大きい計数範囲を示したＲＥＧＮ７４８３（ｈＩｇＧ１）を除いて、ＶＥＧＦミニトラップコンストラクトを認識しなかったことを示した。陽性対照抗ＶＥＧＦＲ１ｍＡｂは、６８５８～１５０５５の範囲の平均計数を示した。

多角度レーザー光散乱装置と連結した粒径排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）による、ＶＥＧＦミニトラップ（ＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５）と組換えヒトＶＥＧＦ_１６５（ＲＥＧＮ１１０）との間で形成されるＩｎＶｉｔｒｏ複合体のサイズ分析。
ヒトＶＥＧＦ_１６５（ｈＶＥＧＦ_１６５；ＲＥＧＮ１１０）に結合するための、２つのＶＥＧＦミニトラップ（ＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５）の化学量論を決定した。

物質および機材

方法

ＳＥＣ－ＭＡＬＳ移動相緩衝液。移動相緩衝液（１０ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．０±０．１）を、リン酸ナトリウム一塩基性一水和物１．４ｇ、リン酸ナトリウム二塩基性七水和物１０．７ｇ、および５Ｍ塩化ナトリウム５００ｍＬを合わせることにより調製した。次に溶液を、ＨＰＬＣグレード水で５．０Ｌの容積にした。緩衝液の最終測定ｐＨは７．０であった。移動相緩衝液を使用前に濾過（０．２μｍ）した。

ＳＥＣ－ＭＡＬＳ。ＳＥＣ－ＭＡＬＳシステムは、紫外線（ＵＶ）、光散乱（ＬＳ）、および屈折率（ＲＩ）検出器に接続されたＵＰＬＣで構成されていた。検出器は、以下の順序：ＵＶ－ＬＳ－ＲＩで直列に接続されていた。ＬＳおよびＲＩ検出器を、ＷｙａｔｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社により提供された説明書に従って較正した。ＢＥＨ（登録商標）２００ＳＥＣカラム粒径排除カラムを、ＳＥＣ－ＭＡＬＳシステムに接続し、試料注入前に、１０ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．０（ＳＥＣ移動相緩衝液）を０．３ｍＬ／分の流速で用いて事前に平衡化した。規定量のミニトラップを各々ｈＶＥＧＦ_１６５（ＲＥＧＮ１１０）と合わせて、１×ＤＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈して、様々な比を得た。試料をすべて周囲温度で２時間インキュベートし、注入まで濾過せず４℃で維持した。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；２ｍｇ／ｍＬ；試料ロード１０μｇ）を別々に注入し、システム適合性対照として含めた。

ＭＡＬＳデータ分析。ＡＳＴＲＡＶソフトウェア（バージョン７．３．１．９、ＷｙａｔｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を使用してデータを分析した。過剰散乱光を溶質濃度および重量平均モル質量Ｍｗに関連付ける式に対してデータをフィッティングした（Ｋｅｎｄｒｉｃｋら、「ＯｎｌｉｎｅＳｉｚｅ－ＥｘｃｌｕｓｉｏｎＨｉｇｈ－ＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＬｉｇｈｔＳｃａｔｔｅｒｉｎｇａｎｄＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌＲｅｆｒａｃｔｏｍｅｔｒｙＭｅｔｈｏｄｓｔｏＤｅｔｅｒｍｉｎｅＤｅｇｒｅｅｏｆＰｏｌｙｍｅｒＣｏｎｊｕｇａｔｉｏｎｔｏＰｒｏｔｅｉｎｓａｎｄＰｒｏｔｅｉｎ－ＰｒｏｔｅｉｎｏｒＰｒｏｔｅｉｎ－ＬｉｇａｎｄＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎＳｔａｔｅｓ」。（２００１年）。ＡｎａｌＢｉｏｃｈｅｍ。２９９巻（２号）、１３６～４６頁；Ｗｙａｔｔ（１９９３年）Ａｎａｌ．Ｃｈｉｍ。Ａｃｔａ２７２巻（１号）、１～４０頁、ＬｉｇｈｔＳｃａｔｔｅｒｉｎｇａｎｄｔｈｅＡｂｓｏｌｕｔｅＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）：

式中、ｃは溶質濃度であり、Ｒ（θ，ｃ）は、散乱角および濃度の関数としての、溶質からの過剰なＲａｌｅｉｇｈ比であり、Ｍｗはモル質量であり、Ｐ（θ）は、散乱光の角度依存性を記述し（回転半径が＜５０ｎｍの粒子の場合は約１である）、Ａ_２は、浸透圧の展開における第２のビリアル係数である（これは、測定が希釈溶液で実施されるため無視することができる）および

式中、ｎ_ｏは溶媒屈折率を表し、Ｎ_Ａはアボガドロ数であり、λ_０は、真空中の入射光の波長であり、ｄｎ／ｄｃは、溶質の比屈折率増分を表す。

ＢＳＡ単量体のモル質量は、データ収集中に光散乱および示差屈折率検出器の較正定数を評価する役目を果たした（システム適合性チェック）。ＵＶおよびＲＩ検出器で決定されたＢＳＡの平均モル質量の相対標準偏差（ＲＳＤ％）は≦５．０％だった。

光散乱検出器の標準化係数、検出器間遅延容積、およびバンドブロードニング項を、使用したＳＥＣ－ＭＡＬＳ条件で収集したＢＳＡクロマトグラムから算出した。こうした値を、すべての他の試料の収集データファイルに適用して、こうした項目について補正した。

ｄｎ／ｄｃ値および２８０ｎｍの吸光係数（グリコシル化に関して補正される）を、Ａｓｔｒａソフトウェアに提供されているタンパク質コンジュゲート分析を使用して実験的に決定した。補正した吸光係数およびｄｎ／ｄｃ値を使用して、すべてのタンパク質－タンパク質複合体試料を分析した。

結果

ヒトＶＥＧＦ１６５（ｈＶＥＧＦ_１６５；ＲＥＧＮ１１０）に結合する２つの個々のミニトラップ（ＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５）の化学量論を、様々な濃度のリガンドの存在下および非存在下におけるミニトラップのＳＥＣ－ＭＡＬＳ分析から決定した。同等の結合条件下では、ｈＶＥＧＦ_１６５との結合の化学量論は、テストした各ミニトラップで同等だった。分析したすべての試料から得られた複合体の化学量論を、図１８（Ａ）および図１８（Ｂ）に示し、表５－３および表５－４に要約する。

各ミニトラップ対ｈＶＥＧＦ_１６５のモル比３：１、１：１、および１：３に対応する代表的な重ね合わせクロマトグラムを図１８（Ａ）および１８（Ｂ）に示す。比較のために、遊離ｈＶＥＧＦ_１６５および遊離ミニトラップのクロマトグラムも重ね合わせてある。注釈付きピーク番号は、遊離ｈＶＥＧＦ_１６５（ピーク１）、遊離ミニトラップ（ピーク２）、およびミニトラップ－ｈＶＥＧＦ_１６５複合体（ピーク３）に対応する。観察された各ピークのモル質量は、各クロマトグラムの個々のピークと重なっている。

ピーク１およびピーク２のモル質量測定値は、それぞれ遊離ｈＶＥＧＦ_１６５および遊離ミニトラップに対応するおよそ４６ｋＤａおよび６３ｋＤａだった。遊離ｈＶＥＧＦ_１６５および遊離ミニトラップのモル質量計算値に基づき、ミニトラップ：ｈＶＥＧＦ_１６５の１：１複合体のモル質量理論値は１０９ｋＤａであると予測される。したがって、クロマトグラムのピーク３は、およそ１０６ｋＤａの平均モル質量計算値に基づき、１：１ミニトラップ：ｈＶＥＧＦ_１６５複合体に対応する可能性が最も高い（表５－３および５－４）。加えて、いずれのテスト条件下のいずれの試料でも、より高分子量の複合体はほとんどまたはまったく信頼性をもって検出されず、各ミニトラップは、より高次の多量体化なしにｈＶＥＧＦ_１６５と結合することが示された。まとめると、こうした結果は、各ミニトラップが、ｈＶＥＧＦ_１６５に対して当量の結合化学量論を呈し、各ミニトラップ分子は、１分子のｈＶＥＧＦ_１６５リガンドに結合可能であることを示す。

ＶＥＧＦおよび抗ＶＥＧＦＦａｂ（ＲＥＧＮ１８）との複合体におけるＶＥＧＦミニトラップＲＥＧＮ１０１０５の極低温電子顕微鏡（Ｃｒｙｏ－ＥＭ）構造解析。
極低温電子顕微鏡法を使用して、ＲＥＧＮ１０１０５と、Ｆａｂ分子と共に、ＶＥＧＦとの結合を分析した。ＲＥＧＮ１８は、複合体のサイズを増加させて、試料をＣｒｙｏ－ＥＭ試験により好適なものにするために追加された、ＶＥＧＦ結合の非遮断剤である抗ヒトＶＥＧＦＲ１－ｄ２ｍＡｂである。

Ｆａｂ断片の調製。抗ｈＶＥＧＦＲ１ドメイン２抗体ＲＥＧＮ１８を、製造業者の標準的プロトコールに従ってＦａｂｒｉｃａｔｏｒ酵素（Ｇｅｎｏｖｉｓ社）を使用して、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｃ断片に切断した。２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）を使用してＦ（ａｂ’）_２をＦａｂに還元し、続いてＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔＩｇＧ－Ｆｃ（ｍｓ）親和性樹脂（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）を使用してＦｃ断片を除去した。ＡＫＴＡＡｖａｎｔ２５クロマトグラフィーシステム（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）に接続された粒径排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）カラム（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００Ｉｎｃｒｅｓｅ１５／３００ＧＬ、ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）に注入することにより、Ｆａｂ断片をさらに精製した。ランニング緩衝液は、５０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌｐＨ７．５、１５０ｍＭＮａＣｌを含んでいた。ピーク画分をプールし、１０ｋＤａカットオフ遠心分離フィルター（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ社）で濃縮し、その後の複合体調製に使用した。

複合体調製。精製ミニトラップ（ＲＥＧＮ１０１０５－Ｌ３）１００μｇを、ＲＥＧＮ１８Ｆａｂ２００μｇおよびｈＶＥＧＦ（ＲＥＧＮ１１０－Ｌ９）１６０μｇと混合し、４℃にてオーバーナイトでインキュベートした。混合物を、ＡＫＴＡクロマトグラフィーシステム（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）および多角度光散乱（ＭＡＬＳ）検出器（ＷｙａｔｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）に接続されたＳＥＣカラム（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００Ｉｎｃｒｅａｓｅ１５／３００ＧＬ、ＧＥ社）に注入した。ＳＥＣランニング緩衝液は、５０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌｐＨ７．５、１５０ｍＭＮａＣｌを含んでいた。推定分子量２１０ｋＤａを有する、ＲＥＧＮ１０１０５－ＲＥＧＮ１１０－ＲＥＧＮ１８Ｆａｂ複合体に対応するピークの画分をプールし、３０ｋＤａカットオフ遠心分離フィルター（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ社）で濃縮し、濃度を３．２ｍｇ／ｍＬにした。濃度は、Ｎａｎｏｄｒｏｐ装置を使用して測定した（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）。図１９（Ａ）を参照されたい。ＲＥＧＮ１８は、ＶＥＧＦ結合の非遮断剤であり、ＲＥＧＮ１０１０５－ＲＥＧＮ１１０複合体のサイズを増加させて、試料をその後のＣｒｙｏ－ＥＭ試験により好適なものにするために追加された。

Ｃｒｙｏ－ＥＭ試料調製およびデータ収集。新たに精製したＲＥＧＮ１０１０５－ＲＥＧＮ１１０－ＲＥＧＮ１８Ｆａｂ複合体を、０．１５％ＰＭＡＬ－Ｃ８Ａｍｐｈｉｐｏｌ界面活性剤と混合してから、混合物３．５μＬをＵｌｔｒＡｕｆｏｉｌＲ１．２／１．３、３００メッシュグリッド（Ｑｕａｎｔｉｆｏｉｌ社）にピペットした。濾紙を使用して余分な液体を吸い取り、４℃および湿度１００％で作動させたＶｉｔｒｏｂｏｔＭａｒｋＩＶ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）を使用して、液体窒素で冷却された液体エタン中にグリッドを押し込んで凍結させた。次に、グリッドを、Ｋ３カメラ（Ｇａｔａｎ社）を装備したＴｉｔａｎＫｒｉｏｓＧ３ｉ顕微鏡（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）にロードした。公称倍率１０５，０００×（０．８５Åピクセルサイズ）の計数モードで１３，２４８個の動画を収集した。各動画は、２秒間露光させた４６個の線量画分を含み、１Å^２当たりの総取得線量は約４０個電子だった。

Ｃｒｙｏ－ＥＭデータ処理およびマップ作成。Ｃｒｙｏｓｐａｒｃｖ２．１４．２を使用して、Ｃｒｙｏ－ＥＭデータを処理した。動画を、パッチモーション補正でモーション補正し、パッチＣＴＦ推定でＣＴＦパラメーターを推定した。まず、ブロブピッカー（Ｂｌｏｂｐｉｃｋｅｒ）を使用して粒子をピッキングし、テンプレートピッキング用の２Ｄクラス平均を生成した。２Ｄ分類を数ラウンド実行してジャンク粒子を除去した後、６３３，３３５個の粒子が残った。ａｂｉｎｉｔｉｏ再構成および不均一精密化（Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｏｕｓｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ）の後、ＲＥＧＮ１０１０５－ＲＥＧＮ１１０－ＲＥＧＮ１８Ｆａｂ複合体に対応する１２５，４４７個の粒子が同定され、非均一精密化（Ｎｏｎ－ｕｎｉｆｏｒｍｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ）を使用して、３．４Å分解能再構成へとさらに精密化した。

結果。ＲＥＧＮ１０１０５と、ｈＶＥＧＦと、ＲＥＧＮ１８との間の複合体形成を決定した。ＲＥＧＮ１０１０５は、ｈＶＥＧＦ二量体（５８ｋＤａ＋４６ｋＤａ＝１０４ｋＤａ）と１：１複合体を形成した。ＲＥＧＮ１０１０５、ＶＥＧＦ二量体、およびＲＥＧＮ１８Ｆａｂは、１：１：２複合体を形成する（１０４ｋＤａ＋４８ｋＤａ^＊２＝２１０ｋＤａ）。試料には、ある程度のＲＥＧＮ１８Ｆ（ａｂ’）_２が混入していた。図１９（Ａ）を参照されたい。

ＲＥＧＮ１０１０５／ＶＥＧＦ／ＲＥＧＮ１８複合体の二次元構造を、極低温電子顕微鏡下での可視化により特徴付けた。２Ｄクラスは、二次構造特徴を示し、それらの一部は、明確な２回対称性を示した。ＶＥＧＦＲ２ドメイン３密度は、多くの画像で視認できるが、複合体の残り部分と比較して非常にぼやけており（矢印で示す）、このドメインは可撓性であることが示唆される。ＶＥＧＦＲ２ドメイン３密度は、遠位端がさらにぼやけている。

ＲＥＧＮ１０１０５－ＶＥＧＦ－ＲＥＧＮ１８複合体の３．４Å Ｃｒｙｏ－ＥＭマップは、ＶＥＧＦＲ２ドメイン３Ｃ末端の密度が不良であることを示した。ＶＥＧＦＲ１ドメイン２、ＶＥＧＦ、およびＲＥＧＮ１８Ｆａｂ可変ドメインについては非常に明確な密度が存在し；ＲＥＧＮ１８Ｆａｂ定常ドメインは、この領域が可撓性であるため密度は不良だった。ＶＥＧＦＲ２ドメイン３は解像され、主鎖および一部の側鎖を追跡することができたが、この領域はおそらくは可撓性が高いため、Ｒ２－ｄ３のＣ末端ではＣｒｙｏ－ＥＭ密度が非常に弱い。図１９（Ｂ～Ｄ）を参照されたい。

Ｃｒｙｏ－ＥＭにより可視化して、ヒトＶＥＧＦ_１６５および抗ＶＥＧＦＦａｂと複合体化すると、本質的に図１９（Ｃ～Ｄ）に図示されている複合体を形成するＲＥＧＮ１０１０５は、本発明の一部である。

酸素誘発性網膜症（ＯＩＲ）マウスモデルにおけるミニトラップＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５の効果。
ＯＩＲマウスモデルにおける網膜血管系に対する全身性および硝子体内ＲＥＧＮ１１０９５およびＲＥＧＮ１００１５の効果を決定した。

マウスの酸素誘発性網膜症（ＯＩＲ）モデルでは、ＴａｃｏｎｉｃＣ５７Ｂｌ／６マウス仔を、生後（Ｐ）６日目に高酸素環境（７５％Ｏ_２）に置き、Ｐ１１に室内空気に戻した。試験１（硝子体内（ＩＶＴ）注射等モルスクリーニング試験）：ＯＩＲ仔に、それぞれヒト（ｈ）Ｆｃ（ｈＦｃ）０．１２５μｇ、アフリベルセプト０．２５μｇ、ＲＥＧＮ１０１０５０．１２５μｇ、ＲＥＧＮ１１０９５０．１２５μｇをＰ１３においてＩＶＴで注射し、Ｐ１６において収集した。試験２（ＩＶＴ用量応答試験）：ＯＩＲマウスに、Ｐ１３において、ｈＦｃを０．２５μｇで、ＲＥＧＮ１０１０５を０．０２５μｇ、０．２５μｇ、および２．５μｇで、またはアフリベルセプトを０．０５μｇ、０．５μｇ、および５μｇでＩＶＴ注射し、Ｐ１６において回収した。試験３（等モル全身性（ＩＰ）試験）：ＯＩＲマウスに、Ｐ１２において、それぞれ５ｍｇ／ｋｇのｈＦｃ、１０ｍｇ／ｋｇのアフリベルセプト、５ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ１０１０５、または５ｍｇ／ｍｌのＲＥＧＮ１１０９５をＩＰ注射し、Ｐ１６において収集した。網膜を固定し、切開し、ＦＩＴＣ標識されたグリフホニア・シンプリシホリア（Ｇｒｉｆｆｏｒｎｉａｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａ）レクチンＩ（ＧＳレクチンＩ）で染色して網膜血管系を標識し（ＶｅｃｔｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）、ＮＧ２（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を二次ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５９４（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）で染色して新生血管叢を標識した。

仔マウスを、生後（Ｐ）６～Ｐ１１に７５％Ｏ_２チャンバーに入れた。酸素チャンバーで５日後、室内空気（２１％Ｏ_２）に戻した。硝子体内（ＩＶＴ）試験では、マウスに、Ｐ１３において試薬を注射し、Ｐ１６において眼球を収集した。全身性（ＩＰ）試験では、マウスに、Ｐ１２において試薬を注射し、Ｐ１６において眼球を収集した。

試験１：硝子体内（ＩＶＴ）アフリベルセプトおよびＶＥＧＦミニトラップ等モル用量試験
・アフリベルセプト（ＲＥＧＮ３）：０．２５μｇ／眼球
・ＲＥＧＮ１１０９５：０．１２５μｇ／眼球
・ＲＥＧＮ１０１０５：０．１２５μｇ／眼球
・ビヒクル（ｈＦｃ）：０．１２５μｇ／眼球
１群当たり３匹のマウス；左眼球および右眼球に注射

マウスの酸素誘発性網膜症（ＯＩＲ）モデルでは、ＴａｃｏｎｉｃＣ５７Ｂｌ／６マウス仔を、生後（Ｐ）６日目に高酸素環境（７５％Ｏ_２）に置き、Ｐ１１に室内空気に戻した。

試験１（ＩＶＴ等モルスクリーニング試験）：ＯＩＲ仔に、Ｐ１３において、それぞれヒト（ｈ）Ｆｃ（ｈＦｃ）０．１２５μｇ、アフリベルセプト０．２５μｇ、ＲＥＧＮ１０１０５０．１２５μｇ、ＲＥＧＮ１１０９５０．１２５μｇをＩＶＴ注射し、Ｐ１６において収集した。

網膜を固定し、切開し、ＦＩＴＣ標識されたグリフホニア・シンプリシホリアレクチンＩ（ＧＳレクチンＩ）で染色して網膜血管系を標識し（ＶｅｃｔｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）、ＮＧ２（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を二次ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５９４（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）で染色して新生血管叢を標識した。マウス網膜の無血管面積を図２０（Ａ）に要約する。マウス網膜の異常面積を図２０（Ｂ）に要約する。

試験２：硝子体内（ＩＶＴ）等モルアフリベルセプトおよびＶＥＧＦミニトラップ用量応答試験
・アフリベルセプト（ＲＥＧＮ３）：０．０５μｇ／眼球、０．５μｇ／眼球、および５μｇ／眼球
・ＲＥＧＮ１０１０５：０．０２５μｇ／眼球、０．２５μｇ／眼球、および２．５μｇ／眼球
・ビヒクル（ｈＦｃ）：０．２５μｇ／眼球
１群当たり３～４匹のマウス；左眼球のみに注射

試験２（ＩＶＴ用量応答試験）：ＯＩＲマウスに、Ｐ１３において、ｈＦｃを０．２５μｇで、ＲＥＧＮ１０１０５を０．０２５μｇ、０．２５μｇ、および２．５μｇで、またはアフリベルセプトを０．０５μｇ、０．５μｇ、および５μｇでＩＶＴ注射し、Ｐ１６において回収した。

網膜を固定し、切開し、ＦＩＴＣ標識されたグリフホニア・シンプリシホリアレクチンＩ（ＧＳレクチンＩ）で染色して網膜血管系を標識し（ＶｅｃｔｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）、ＮＧ２（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を二次ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５９４（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）で染色して新生血管叢を標識した。

ｈＦｃのみを投薬したマウスの異常網膜領域の面積に対して標準化した、異常網膜領域の面積を図２１に示す。

試験３：全身性アフリベルセプトおよびＶＥＧＦミニトラップ等モル試験
・アフリベルセプト（ＲＥＧＮ３）：１０ｍｇ／ｋｇ
・ＲＥＧＮ１０１０５５ｍｇ／ｋｇ
・ＲＥＧＮ１１０９５５ｍｇ／ｋｇ
・ビヒクル（ｈＦｃ）：５ｍｇ／ｋｇ
^※実験は２回行った
１群当たり３匹のマウス；左眼球および右眼球を分析

試験３（等モル全身性（ＩＰ）試験）：ＯＩＲマウスに、Ｐ１２において、それぞれ５ｍｇ／ｋｇのｈＦｃ、１０ｍｇ／ｋｇのアフリベルセプト、５ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ１０１０５、または５ｍｇ／ｍｌのＲＥＧＮ１１０９５をＩＰ注射し、Ｐ１６において収集した。

網膜を固定し、切開し、ＦＩＴＣ標識されたグリフホニア・シンプリシホリアレクチンＩ（ＧＳレクチンＩ）で染色して網膜血管系を標識し（ＶｅｃｔｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）、ＮＧ２（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を二次ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５９４（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）で標識して新生血管叢を標識した。

ｈＦｃのみを投薬したマウスの無血管面積に対して標準化した、マウス網膜の無血管面積を図２２（Ａ）に要約する。ｈＦｃのみを投薬したマウスの異常面積に対して標準化した、マウス網膜の異常面積を図２２（Ｂ）に要約する。

ウサギにおけるＶＥＧＦトラップおよびミニトラップ（ＲＥＧＮ１０１０５、ＲＥＧＮ１１０９５、およびＲＥＧＮ３）ＩｎＶｉｖｏ薬物動態（ＰＫ）。
ウサギにおけるＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５の薬物動態を調査した。

このＰＫ試験は、ＶＥＧＦミニトラップ（ＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５）の半減期が、ＮＺＷラビット硝子体ではＶＥＧＦトラップ（ＲＥＧＮ３）の半減期よりも短く、ＶＥＧＦミニトラップ持続性は、それぞれ約２２％および３２％短かったことを示した（５．０日対３．９および３．４日）。

実験手順。ＶＥＧＦトラップ（ＲＥＧＮ３）、および２つの新しいＶＥＧＦミニトラップ（ＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５）は、アミンコンジュゲーションを通じてＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）でタグ化された分子であった。タンパク質濃度、エンドトキシンレベル、および標識度（ＤＯＬ）を表８－２に提示する。両側硝子体内（ＩＶＴ）注射を、６匹のオスのニュージーランドホワイト（ＮＺＷ）ラビットに対して行った（６眼球／３匹ウサギ／分子）。すべての眼球を、硝子体ベースライン蛍光について、注射前にＯｃｕＭｅｔｒｉｃｓＦｌｕｏｒｏｔｒｏｎ蛍光光度計（ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ、ＣＡ）を用いて検査し、そして３、７、１４、および２１日目に、注射後の硝子体蛍光強度についてフォローアップした。一般的な眼球検査には、ＩＶＴ注射の前および３０分後、ならびに各フォローアップ時点における眼内圧（ＩＯＰ）、炎症兆候、角膜および結膜浮腫、出血、前眼房内浮遊物、瞳孔サイズおよび形状、白内障、ならびに網膜剥離が含まれた。蛍光強度および位置情報を抽出し、そしてグラフ表示および分析用としてＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍにインポートした。データを、一次、単一コンパートメントモデルに当て嵌めた。

結果。ＮＺＷラビット硝子体内におけるＶＥＧＦトラップ（ＲＥＧＮ３）およびＶＥＧＦミニトラップ（ＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５）のＰＫ試験より、半減期はそれぞれ５．０（±０．４）日、３．９（±０．３）日、および３．４（±０．５）日であることが明らかとなった。図２３（Ａ～Ｃ）を参照されたい。いずれの分子でもＩＶＴ注射前後で有意なＩＯＰ変化は認められなかった。図２３（Ｄ）を参照されたい。臨床的に特筆すべき兆候は、一般的な眼球検査において観察されなかった。

カニクイザルにおけるＶＥＧＦミニトラップの薬物動態試験。
サルにおけるＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５の薬物動態を調査した。

硝子体内投与後のカニクイザル（６匹／性別／群）の血漿中の遊離および結合ＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５の濃度を測定した。この試験では、麻酔した動物は、ＲＥＧＮ１０１０５またはＲＥＧＮ１１０９５の両側硝子体内注射を４週間ごとに５．５ｍｇ／目／用量の合計４用量で受けた。１ｃｃシリンジおよび３０ゲージ針を使用して、５０マイクロＬ／眼球の各用量を投与した。全身薬物曝露評価のために、４用量の各々の後に血液試料を収集した。遊離および結合ＲＥＧＮ１０１０５およびＲＥＧＮ１１０９５の血漿濃度を測定するために使用したアッセイは、各化合物の遊離種および結合種の定量化下限が０．０７８μｇ／ｍＬである酵素結合免疫吸着測定法ベースの方法だった。図２４（Ａ～Ｄ）を参照されたい。

遊離ＲＥＧＮ１０１０５のピーク血漿濃度は、最初の試料採取時間（６時間）までに達成されたが、結合ＲＥＧＮ１０１０５の血漿濃度は遅延し、概して投薬後５～７日の間であった。オスのサルおよびメスのサルにおける遊離ＲＥＧＮ１０１０５または結合ＲＥＧＮ１０１０５の血漿濃度は、最初の用量後ならびにその後（合計で４用量）のＲＥＧＮ１０１０５用量の各々後で類似していた。これは、性別差はなく、複数回投薬後も全身性薬物蓄積はなかったことを示す。ＲＥＧＮ１１０９５を投薬した動物は、ＲＥＧＮ１０１０５と同様の血漿薬物動態特徴（例えば、ピーク濃度までの時間、性別差の欠如、および複数回投薬後の蓄積なし）を共有していたが、ＲＥＧＮ１０１０５を投薬した動物よりも低い血漿濃度および曝露を示した。

単一用量（複数用量試験の最初の用量）後の遊離ＲＥＧＮ１０１０５血漿濃度を、ＲＥＧＮ７４８３およびＲＥＧＮ３の血漿濃度プロファイルと比較すると、ＲＥＧＮ７４８３は、同様の投薬量（ＲＥＧＮ１０１０５もしくはＲＥＧＮ７４８３はいずれも５．５ｍｇ／眼球、またはＲＥＧＮ３は４ｍｇ／眼球）での硝子体内注射として投与した場合のＲＥＧＮ３のものよりも、血漿濃度（全身性曝露）がより低く、ＲＥＧＮ１０１０５がそれに続くことが示される。これにより、ＲＥＧＮ７４８３およびＲＥＧＮ１０１０５は両方とも、各眼球への硝子体内注射後の全身性曝露がＲＥＧＮ３よりも低いことが示される。図２５を参照されたい。

ＶＥＧＦミニトラップのＮ－結合型グリカン分析。
ＲＥＧＮ１０１０３およびＲＥＧＮ１０１０５のグリカンプロファイル、特にフコシル化、ガラクトシル化、シアリル化、高マンノース、および二分岐グリカンのレベルを、この実施例で決定した。

４５℃で２５分間、０．１％ＷａｔｅｒｓＲａｐｉＧｅｓｔおよび４．２ｍＭＴＣＥＰを含む５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．９）中のＰＮＧａｓｅ－Ｆにより、Ｎ－結合型グリカンをタンパク質から放出させた。放出されたグリカンを、４５℃で３０分間、ＲａｐｉＦｌｕｏｒ－ＭＳ蛍光色素で標識した。２５％ＤＭＦおよび５３％［ｖ／ｖ］アセトニトリルを添加することによりタンパク質を析出させ、そして１６，０００×ｇで５分間の遠心分離を通じてチューブの底にペレット化させた。標識されたグリカンを含有する上清を収集し、そしてポストカラム蛍光検出を行いながら、親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＷａｔｅｒｓＢＥＨアミドカラム）を使用するＵＰＬＣ上で分析した。カラムに結合させた後、標識されたグリカンを、移動相Ａとしての水性５０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ４．４）および移動相Ｂとしてのアセトニトリルで構成される二成分系移動相グラジエントを使用して分離した。分離されたグリカンを、２６５ｎｍの励起波長および４２５ｎｍの発光波長を用いた蛍光検出器を使用して検出した。得られたクロマトグラムのＮ－グリカンピークの相対面積パーセンテージを使用して、Ｎ－グリカンの分布を、（１）コアフコース残基を含むＮ－グリカン、（２）少なくとも１つのシアル酸残基を含むＮ－グリカン、（３）マンノース－５として同定されるＮ－グリカン、（４）少なくとも１つのガラクトース残基を含むＮ－グリカン、および（５）二分岐Ｎ－グリカンの合計パーセンテージとして報告した。

ＲＥＧＮ１０１０３およびＲＥＧＮ１０１０５のＮ－結合型グリカンのＨＩＬＩＣ－ＦＬＲ（親水性相互作用クロマトグラフィー－蛍光）クロマトグラムを重ね合わせたものを図２６（Ａ）に示し、個別のクロマトグラムを図２６（Ｂ）に示し、本明細書の表１０－１に要約する。

ＲＥＧＮ１０１０５と比べてＲＥＧＮ１０１０３で高マンノース種（例えば、Ｍａｎ５）のレベルが上昇していた。ガラクトシル化およびシアリル化の相対存在量は、おそらくはＲＥＧＮ１０１０３で高マンノースが上昇していたため、ＲＥＧＮ１０１０５よりもＲＥＧＮ１０１０３の方がより低かった。

ＲＥＧＮ１０１０５粘度および安定性試験
この実施例では、ＲＥＧＮ１０１０５の安定性（ストレス安定性および光安定性）および粘度試験を実施した。

ＲＥＧＮ１０１０５（ＩｇＧ２、２つのＣｙｓ、ＦａｂＲＩＣＡＴＯＲ切断ＶＥＧＦミニトラップ）を開発し、ＲＥＧＮ１０１０５は、抗ヒンジ抗体がＦｃ切断ＩｇＧ１分子、ＲＥＧＮ７４８３に付随するリスクを排除することを見出した。ＲＥＧＮ１０１０５の粘度、熱安定性、および光安定性を、ヒスチジンを含む組成物中で評価した。

３８～１３２ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で、ＲＥＧＮ１０１０５の粘度評価を実施した。濃度対粘度のグラフをプロットし、結果をＲＥＧＮ７４８３と比較した。ＲＥＧＮ１０１０５は、等モル濃度のＲＥＧＮ７４８３と比較してより、より低い粘度プロファイルを示した（ＲＥＧＮ１０１０５（９０ｍｇ／ｍｌ）では粘度＝５．８ｃＰであるのに対してＲＥＧＮ７４８３（９０ｍｇ／ｍｌ）では６．９ｃＰ）。約１２ｃＰの粘度が、１２０ｍｇ／ｍＬの濃度のＲＥＧＮ１０１０５で観察された。粘度は、濃度が１２０ｍｇ／ｍＬを上まわると指数関数的に増加した。

９０ｍｇ／ｍＬおよび１２０ｍｇ／ｍＬのＲＥＧＮ１０１０５の熱安定性を、充填容積０．４ｍＬのＩ型ホウケイ酸ガラスバイアル中で評価した。熱ストレス安定性を３７℃で４週間テストし、保管安定性を５℃で最大３か月間評価した。生成されたデータを、９０ｍｇ／ｍＬＲＥＧＮ７４８３^Ｆの安定性テストの結果と比較した。ＲＥＧＮ１０１０５は、９０ｍｇ／ｍＬでは、ＲＥＧＮ７４８３（５．４５％ＨＭＷ／週）と比較して、熱ストレス下でより低い凝集速度（３．７４％ＨＭＷ／週）を示した。ＲＥＧＮ１０１０５の保管安定性は、類似濃度のＲＥＧＮ７４８３と同等だった。加えて、ＲＥＧＮ１０１０５製剤は、撹拌（１０００ｒｐｍで最大１５分）および凍結解凍（２×）しても凝集レベルにいかなる明らかな変化も示さなかった。

１０ｍｇ／ｍＬＲＥＧＮ１０１０５の光安定性を、周囲環境（１０Ｗ／ｍ^２で０．６時間および８Ｋルクスの冷白色光（ＣＷＬ）で１８時間（６Ｗ^＊ｈ／ｍ^２および１４４ｋルクス^＊時））および０．５×ＩＣＨ（１０Ｗ／ｍ^２で１０時間、および８Ｋルクスで７５時間（１００Ｗ^＊ｈ／ｍ^２および６００Ｋルクス^＊時））に曝露させた後、光チャンバー（ＢａｈｎｓｏｎＥＳ２０００ＣＬ－ＬＴＰｈｏｔｏ－ＳｔａｂｉｌｉｔｙＣｈａｍｂｅｒ）内で評価した。ＲＥＧＮ１０１０５は、ＲＥＧＮ７４８３よりもわずかにより良好な光安定性を示した。全体として、ＲＥＧＮ１０１０５は、ＲＥＧＮ７４８３と比較して、より高い熱安定性およびより低い粘度を示した。
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本明細書で引用されたすべての参考資料は、個々の公開資料、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許それぞれが、参照によって組み入れられることを特別かつ個別に示されたかのように、それと同じ程度において参照によって組み入れられている。こうした参照による組み入れの宣言は、ありとあらゆる個々の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許に関することが出願人により意図されており、それらの各々は、そのような引用が、参照による組み入れのそれ専用の宣言が直近に存在しない場合でも、明確に特定される。参照による組み入れのそれ専用の宣言が存在する場合、それらが明細書内に含まれていても、参照による組み入れのこの基本宣言はいかなる点でも弱められることはない。本明細書における参考文献の引用は、参考文献が関連する先行技術であることの承認を意図したものでもなく、そうした刊行物または文書の内容または日付についての一切の承認を構成するものでもない。

Claims

ドメイン構造：
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）、
または
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ４）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）
により特徴付けられるポリペプチドを含むＶＥＧＦミニトラップであって、
式中、ａ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ＭＣは、ヒンジ領域を含むか、からなるか、またはから本質的になり、ヒンジ領域は、
－上部ヒンジ領域、コアヒンジ領域、およびＩｄｅＳプロテアーゼのＧＰＳＶ（配列番号９６）切断部位まで伸張するが、切断部位を含まない下部ヒンジ領域を含むＩｇＧＦｃドメインまたはそのバリアントであって、ヒンジ領域が、アミノ酸配列ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号１５のアミノ酸６～２１）、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＰＣ（配列番号８７）；ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＰＣＰＰＣ（配列番号８８）、もしくはＤＫＴＨＴＣＰＬＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号８９）からならないことを条件とする、ＩｇＧＦｃドメインまたはそのバリアント；
－残基ＥＬＬＧ（配列番号９０）がＰＶＡに突然変異されているＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＩｇＧ１残基ＥＬＬＧ（配列番号９０）がＰＶＡに突然変異されているＩｇＧ１ヒンジ領域－ＩｇＧ２ヒンジ領域キメラ；
－残基ＥＬＬＧ（配列番号９０）がＧＧＧに突然変異されているＩｇＧ１ヒンジ領域；
－残基ＡＰＥＬ（配列番号９１）が、ＧＧＧＦ（配列番号９２）に、ＧＧＧＧ（配列番号９３）に、もしくはＧＧＧＬ（配列番号９４）に突然変異されているＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＡＰＥ残基が欠失されているＩｇＧ１ヒンジ；
－ＩｇＧ２ヒンジ領域；
－ＩｇＧ３ヒンジ領域；
－ＩｇＧ４ヒンジ領域；
－ＩｇＧ４ヒンジ残基ＥＦＬＧ（配列番号９５）がＰＶＡに突然変異されているＩｇＧ４ヒンジ領域；または
－残基ＥＦＬＧ（配列番号９５）がＧＧＧに突然変異されているＩｇＧ４ヒンジ領域
である、ＶＥＧＦミニトラップ。
ヒンジ領域は、アミノ酸配列：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号２またはそのバリアント）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ（配列番号３またはそのバリアント）；
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号４またはそのバリアント）；
ＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号５またはそのバリアント）；
ＤＴＰＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号６のアミノ酸６～２１またはそのバリアント）；
ＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧ（配列番号７のアミノ酸４～１８またはそのバリアント）；
ＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号８のアミノ酸４～１７またはそのバリアント）；
ＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ（配列番号９のアミノ酸４～１７またはそのバリアント）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号１０またはそのバリアント）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧ（配列番号１１またはそのバリアント）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧ（配列番号１２またはそのバリアント）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧ（配列番号１３またはそのバリアント）；または
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧ（配列番号１４またはそのバリアント）
を含むか、からなるか、またはから本質的になる、請求項１に記載のＶＥＧＦミニトラップ。
ドメイン構造：
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）、
または
［（ＶＥＧＦＲ１Ｉｇ２）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ３）－（ＶＥＧＦＲ２Ｉｇ４）］_ａ－多量体化成分（ＭＣ）
により特徴付けられるポリペプチドを含むＶＥＧＦトラップであって、
式中、ａ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ＭＣは、ヒトＦｃヒンジ領域を含み、ヒトＦｃヒンジ領域は、
－ステルス突然変異を含むＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＩｇＧ１ヒンジ領域－ＩｇＧ２ヒンジ領域キメラ；
－残基ＡＰＥＬＬＧ（配列番号１０８）もしくはＰＥＬの１つもしくはそれ以上が突然変異されたＩｇＧ１ヒンジ領域；
－ＡＰＥ残基欠失を有するＩｇＧ１；
－ＩｇＧ２ヒンジ領域；
－ＩｇＧ３ヒンジ領域；
－ＩｇＧ４ヒンジ領域；または
－ステルス突然変異を含むＩｇＧ４ヒンジ領域
であり、
ＭＣは、プロテアーゼ切断部位を含む、ＶＥＧＦトラップ。
ＭＣは、アミノ酸配列
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１５またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸６～２５；
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１６またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸６～２４；
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１７またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸６～２４；
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１８またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２１もしくは６～２１；
ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号１９またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸６～２５；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号２０またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２２；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号２１またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２１；
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ（配列番号２２またはそのバリアント）もしくはそのアミノ酸１～２１；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶ（配列番号７０）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧＧＰＳＶ（配列番号７４のアミノ酸６～２５）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧＧＰＳＶ（配列番号７５のアミノ酸６～２５）；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧＧＰＳＶ（配列番号７６のアミノ酸６～２５）；または
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧＧＰＳＶ（配列番号７７のアミノ酸６～２２）
を含むか、からなるか、またはから本質的になる、請求項３に記載のＶＥＧＦトラップ。
ＭＣは、アミノ酸配列
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２３またはそのバリアント）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２４またはそのバリアント）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２５またはそのバリアント）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
（配列番号２６またはそのバリアント）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２７またはそのバリアント）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２８またはそのバリアント）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号２９またはそのバリアント）；
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号３０またはそのバリアント）；
または
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号３１またはそのバリアント）
を含むか、からなるか、またはから本質的になる、請求項３または４に記載のＶＥＧＦトラップ。
ＶＥＧＦミニトラップであって、アミノ酸配列：
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ
（配列番号３２またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ
（配列番号３３またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ
（配列番号３４またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ
（配列番号３５またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ
（配列番号３６またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＦＬＧ
（配列番号３７またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＧＬＧ
（配列番号３８またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧ
（配列番号３９またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧ
（配列番号４０またはそのバリアント）
を含むか、からなるか、またはから本質的になるＶＥＧＦミニトラップ。
ＶＥＧＦトラップであって、アミノ酸配列：
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号４１またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号４２またはそのバリアント）；
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（配列番号４３またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
（配列番号４４またはそのバリアント）；
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（配列番号４５またはそのバリアント）；
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（配列番号４６またはそのバリアント）；
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（配列番号４７またはそのバリアント）；
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＧＧＧＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号４８またはそのバリアント）；
または
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号４９またはそのバリアント）
を含むか、からなるか、またはから本質的になるＶＥＧＦトラップ。
グリコシル化されている、請求項１～７のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ。
・前記ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップは、Ｎ結合型グリカンを含み；
・前記ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップは、Ｏ結合型グリカンを含み；
前記ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップは、１つもしくはそれ以上の残基がシアリル化、ガラクトシル化、および／もしくはフコシル化されており；
・前記ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップは、Ｎ結合型マンノース－５グリカン（Ｍａｎ５）および／もしくは二分岐Ｎ－グリカンを１つまたはそれ以上の残基に含み；ならびに／または
前記ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップは、ＣＨＯ細胞グリコシル化を含む、
請求項１～８のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップまたはミニトラップ。
・２５℃にて約１～２ｐＭのＫ_Ｄもしくはそれよりも高い親和性でヒトＶＥＧＦ_１６５に結合し、前記親和性は、表面プラズモン共鳴により測定されたものであること；
・９７ｋＤａ未満の分子量を有すること；
・ＩＬ１８ＲアルファもしくはＩＬ１８Ｒベータの細胞内ドメインに融合されたＶＥＧＦ受容体細胞外ドメインを発現し、ＮＦカッパＢ－ルシフェラーゼ－ＩＲＥＳ－ｅＧＦＰレポーター遺伝子を有するＨＥＫ２９３細胞にて測定して、約１～２×１０^－１１Ｍの、ＶＥＧＦＲ１および／もしくはＶＥＧＦＲ２のＶＥＧＦ_１２１および／もしくはＶＥＧＦ_１６５活性化をブロックするためのＩＣ_５０を有すること；
・サルナイーブ血清試料および／もしくはヒトＡＭＤ／ＤＭＥベースライン血清試料において、抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイで測定して、ＲＥＧＮ７４８３の免疫原性よりも低い免疫原性を呈すること；
・ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体と１：１複合体を形成すること；
・ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体および抗ＶＥＧＦＦａｂ断片（ＶＥＧＦミニトラップ：ＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体：抗ＶＥＧＦＦａｂ断片）と１：１：２複合体を形成すること；
・酸素誘発性網膜症マウスモデルに硝子体内投薬すると、網膜血管新生を低減させること；
・硝子体内注射すると、ウサギ眼においてアフリベルセプトよりも短い硝子体内半減期を呈すること；
・ＶＥＧＦミニトラップ約０．１４６ｍｇを注射する場合、ウサギの硝子体内において約３．４日もしくは３．９日の半減期を有すること；
・非ヒト霊長類に約５．５ｍｇ／眼球で硝子体内注射すると、４ｍｇ／眼球で硝子体内注射したアフリベルセプトよりも低い血漿レベルの遊離分子を呈すること；
・約５．５ｍｇ／眼球の硝子体内注射の約３３６時間後に、非ヒト霊長類の血漿において約０．１もしくは０．２もしくは０．１～０．２マイクログラム／ｍｌ（またはそれよりも低い）の濃度の遊離分子を呈すること；
・約２８日ごとに約５．５ｍｇ／眼球を４回硝子体内注射した後、非ヒト霊長類の眼球に著しくは蓄積しないこと；
・３７℃で４週間保管した場合、アフリベルセプトおよび／もしくはＲＥＧＮ７４８３よりも高分子量種の形成が少ないこと；
・２０℃において、９０ｍｇ／ｍｌ濃度では約５．８ｃＰおよび／もしくは１２０ｍｇ／ｍｌ濃度では約１２．１ｃＰの粘度を有すること；
・光に曝されると、ＨＭＷ／Ｍルクス^＊時にて約８．８％増加の速度でＨＭＷ種を形成すること（暗所対照と比べて）；
・１つもしくはそれ以上のヒスチジンは、２－オキソ－ヒスチジンに酸化されていること、
・１つもしくはそれ以上のトリプトファンは脱酸素されていること；
・その１つもしくはそれ以上のアスパラギンはグリコシル化されていること；
・１つもしくはそれ以上のセリンもしくはスレオニンは、Ｏ－グリコシル化されていること；
・１つもしくはそれ以上のアスパラギンは脱アミド化されていること；
・１つもしくはそれ以上のアスパルテート－グリシンモチーフは、イソアスパルテート－グリシンおよび／もしくはＡｓｎ－Ｇｌｙに変換されていること；
・１つもしくはそれ以上のメチオニンは酸化されていること；
・１つもしくはそれ以上のトリプトファンは、Ｎ－ホルミルキヌレニンに変換されていること；
・１つもしくはそれ以上のアルギニンは、Ａｒｇ３－デオキシグルコソンに変換されていること；
・Ｃ末端残基は存在しないこと；
・１つもしくはそれ以上の非グリコシル化糖化部位が存在すること；
・キシロシル化されていること；
・リジンが糖化されていること；
・遊離チオール基を有するシスチンを含むこと；
・鎖内ジスルフィド架橋を含むこと；
・平行もしくは交差配向のジスルフィド架橋を含むこと；ならびに／または
・カルボキシメチル化されているリジンもしくはアルギニンを含むこと、
のいずれか１つまたはそれ以上により特徴付けられる、請求項１～９のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップまたはミニトラップ。
ホモ二量体である、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ。
組成物であって、請求項１～１１のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップのグリコシル化バリアントの異種性混合物を含む組成物。
ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップの約２０～２７％は、シアリル化されており、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップの約６４～７２％は、ガラクトシル化されており、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップの約４３～４５％は、フコシル化されており、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップの約１９～２５％は、Ｍａｎ－５グリコシル化されており、および／または二分岐Ｎ－グリカンで約１～２％修飾されている、請求項１２に記載の組成物。
組成物であって、請求項１～１１のいずれか１項に記載のＶＥＧＦミニトラップおよびＶＥＧＦトラップを含み；場合によりＩｄｅＳプロテアーゼまたはそのバリアントをさらに含む組成物。
複合体であって、ＶＥＧＦまたはそのホモ二量体に結合した請求項１～１１のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップホモ二量体を含む複合体。
・ＶＥＧＦはヒトＶＥＧＦであり；
・ＶＥＧＦはヒトＶＥＧＦ_１６５であり；
・ＶＥＧＦはヒトＶＥＧＦ_１２１であり；
・抗ＶＥＧＦ抗体もしくはそのＦａｂ断片を含み；
・ヒトＶＥＧＦホモ二量体および抗ＶＥＧＦＦａｂ断片を含み、ＶＥＧＦミニトラップホモ二量体：ヒトＶＥＧＦ：Ｆａｂの化学量論比は１：１：２であり；
ならびに／または
ＶＥＧＦミニトラップホモ二量体：ＶＥＧＦホモ二量体の化学量論比は１：１である、
請求項１５に記載の複合体。
医薬製剤であって、請求項１～１１のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップおよび薬学的に有効な担体を含む医薬製剤。
請求項１～９のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、場合により、配列番号７１、７２、または７３に示されているヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
ベクターであって、請求項１８に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
宿主細胞であって、請求項１８または１９に記載のポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞。
チャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項２０に記載の宿主細胞。
単離されたポリペプチドであって、配列番号３２～４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、からなるか、またはから本質的になる、単離されたポリペプチド。
ＶＥＧＦトラップまたはその医薬製剤を製作するための方法であって、請求項３、４、５、７、８、９、１０、または１１のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップを、前記ＶＥＧＦトラップのＭＣを切断するプロテアーゼと接触させること、および切断を促進する条件下でＶＥＧＦトラップおよびプロテアーゼをインキュベートすること、および場合により切断のＶＥＧＦミニトラップ産物を単離することを含む方法。
プロテアーゼはＩｄｅＳである、請求項２３に記載の方法。
ＩｄｅＳプロテアーゼは、配列番号５０～６５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の方法。
ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップを製作するための方法であって、トラップまたはミニトラップの発現を促進する条件下で、請求項２０または２１に記載の宿主細胞を培養培地中でインキュベートすること、ならびに場合によりトラップまたはミニトラップを宿主細胞および／または培地から単離することを含む方法。
ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップは、ＶＥＧＦトラップであり、方法は、ＶＥＧＦトラップを前記ＶＥＧＦトラップのＭＣを切断するプロテアーゼと接触させること、ならびにＶＥＧＦトラップおよびプロテアーゼを、プロテアーゼによる切断を促進する条件下でインキュベートすることをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップであって、請求項２３～２７のいずれか１項に記載の方法の産物であるＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ。
ホモ二量体である、請求項２８に記載のＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップ。
請求項２３～２５または２７のいずれか１項に記載の方法の産物である組成物であって、ＶＥＧＦトラップ、ＩｄｅＳプロテアーゼ、および前記プロテアーゼによる前記ＶＥＧＦトラップの切断の産物であるＶＥＧＦミニトラップを含む組成物。
容器、バイオリアクター、または注射デバイスであって、請求項１～１１または１７または２８または２９のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたはその医薬製剤を含む容器、バイオリアクター、または注射デバイス。
シリンジ、使い捨てシリンジ、および事前充填シリンジから選択される注射デバイスである、請求項３１に記載の容器、バイオリアクター、または注射デバイス。
無菌および／またはガラスおよび／またはプラスチックである、請求項３１または３２に記載の注射デバイス。
それを必要とする対象の血管新生性眼障害を治療または予防するための方法であって、請求項１～１１または１７または２８または２９のいずれか１項に記載の治療有効量のＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたはその医薬製剤を、対象に投与することを含む方法。
血管新生性眼疾患は、加齢性黄斑変性症、湿性加齢黄斑変性症、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、虹彩血管新生、血管新生緑内障、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、緑内障の術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、視神経乳頭血管新生、角膜血管新生、網膜血管新生、硝子体血管新生、パンヌス、翼状片、血管網膜症、糖尿病性黄斑浮腫を有する患者の糖尿病性網膜症；糖尿病性網膜症、非増殖性糖尿病性網膜症、および／または増殖性糖尿病性網膜症である、請求項３４に記載の方法。
ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップは、対象に眼内投与される、請求項３４または３５に記載の方法。
ＶＥＧＦトラップまたはＶＥＧＦミニトラップは、対象に硝子体内投与される、請求項３４または３５に記載の方法。
それを必要とする対象の網膜の血管新生を低減させるための、および／または網膜の血管透過性を低減させるための、および／または網膜の無血管面積を増加させるための、および／または網膜の血管化面積を低減させるための方法であって、請求項１～１１または１７または２８または２９のいずれか１項に記載の治療有効量のＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたはその医薬製剤を対象に投与することを含む方法。
それを必要とする対象におけるがんを治療または予防するための方法であって、請求項１～１１または１７または２８または２９のいずれか１項に記載の治療有効量のＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたはその医薬製剤を、対象に投与することを含む方法。
がんは、肺がん、乳がん、結腸直腸がん、転移性結腸直腸がん、前立腺がん、皮膚がん、または胃がんである、請求項３９に記載の方法。
請求項１～１１または１７または２８または２９のいずれか１項に記載のＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたはその医薬製剤を対象に投与するための方法であって、ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたはその医薬製剤を対象の体内に導入することを含む方法。
ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたは医薬製剤は、注射により対象の体内に導入される、請求項４１に記載の方法。
ＶＥＧＦトラップもしくはＶＥＧＦミニトラップまたは医薬製剤は、硝子体内注射により対象の眼球内に導入される、請求項４１または４２に記載の方法。
対象は、前記投与後に眼圧および／または血圧の上昇を経験しない、請求項３４～３８または４１～４３のいずれか１項に記載の方法。