SE519827C2 - Näringsmedium innehållande metionin samt användning av detta - Google Patents
Näringsmedium innehållande metionin samt användning av dettaInfo
- Publication number
- SE519827C2 SE519827C2 SE9801090A SE9801090A SE519827C2 SE 519827 C2 SE519827 C2 SE 519827C2 SE 9801090 A SE9801090 A SE 9801090A SE 9801090 A SE9801090 A SE 9801090A SE 519827 C2 SE519827 C2 SE 519827C2
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- medium
- methionine
- interferon
- liter
- nutrient medium
- Prior art date
Links
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 title claims abstract description 55
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 title claims abstract description 15
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 title 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 claims abstract description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 15
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 15
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 claims description 3
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 210000004544 dc2 Anatomy 0.000 claims 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 45
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 31
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 25
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 21
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 20
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 20
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical class O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 3
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000006303 immediate early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 3
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 3',5'-di-O-methyltricetin Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100040019 Interferon alpha-1/13 Human genes 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N Piscigenin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2)=O)=C1 IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940053050 neomycin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011020 pilot scale process Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N tricin Natural products COc1cc(OC)c(O)c(c1)C2=CC(=O)c3c(O)cc(O)cc3O2 BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- HHGZUQPEIHGQST-RGVONZFCSA-N (2r)-2-amino-3-[[(2r)-2-amino-2-carboxyethyl]disulfanyl]propanoic acid;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.OC(=O)[C@@H](N)CSSC[C@H](N)C(O)=O HHGZUQPEIHGQST-RGVONZFCSA-N 0.000 description 1
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 description 1
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 1
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 description 1
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000012092 media component Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical group CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000011172 small scale experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
25 30 519 827 2 hos startmaterialet. Genom att använda, ett renare mindre komplext startmaterial, i det här fallet detta medium, kommer dä den renande slutprodukten att bli renare jäm- fört med användning av ett mer komplext medium.
Teknikens ståndpunkt Ett sätt att förbättra renheten hos slutprodukten är att använda ett mer förenklat medium. Detta tillvägagångssätt är beskrivet i bl a i det amerikanska patentet 4,696,899.
Detta patent beskriver användandet av ett förenklat me- dium vid tillverkningen av interferon-alpha och inter- feron-gamma fràn leukocyter.
Användningen av methionin som en komponent i serum- fritt medium för odling av animalceller är visat i EP O 501 435, vilken utgör tillägg av methionin i en mängd fràn 8.0 till 14.0 mg/1. Bàde högre och lägre koncentrationer avvisas pga avsaknad av den önskade effekten.
Användning av methionin i formuleringar av poly- peptidprodukter för läkemedels eller terapeutisk an- vändning är känd. Methionin tillförs för att förhindra oxidationen av methioninrester på sàdana polypeptider.
Enligt US 5 272 135 tillförs methionin till en rekom- binant human epidermal tillväxt factor (rhEGF) for- mulering i mängder inom området fràn 0.01 till 0.3 % (w/v) eller i ett förhållande av methionin-resten till proteinet pà lO:1 - 100:l.
Dessutom beskriver US 5 358 708 tillsats av methionin för stabilisering av interferon formuleringar i en mängd av 2mg/ml eller i ett förhållande av methionin . f lO:l piuuêiu _ 19921. . . | . « v 10 15 20 25 30 519 827 3 Sammanfattning av uppfinningen Det har nu överraskande visat sig att ett närings- medium med en mycket förenklad komposition men inne- hållande en hög mängd av methionin kan användas med stor framgång för humana leukocyter vid produktion av natur- ligt interferon alpha. Ett oförändrat, högt utbyte av interferon alpha àstadkoms tillsammans med en mer homogen slutprodukt. Användningen av mediet enligt uppfinningen ger också märkbara ekonomiska fördelar.
Kort beskrivning av ritningarna Föreliggande uppfinning beskrivs i närmare detalj i den följande beskrivningen och i exemplen med referens till de bifogade ritningarna, i vilka: Figur l visar ett HPLC kromatogram med renade interferon alpha proteiner erhållna från medium kompletterat med 500 mg/l av L-methionine (nedre bilden) i jämförelse med interferon proteiner renade med medium utan L-methionine (övre bilden).
Figur 2 visar också ett HPLC kromatogram av renade interferon alpha proteiner med användning av en HPLC metod men denna gäng jämförs tillsatsen av 500 mg/l- methionine tillsatt till mediet före tillsatsen av leukocyter med tillsats av 500 mg/l av L-methionine tillsatt direkt efter inkubering.
Beskrivning av uppfinningen Uppfinnarna har överraskande visat att ett näringsmedium med väldigt få ingredienser men med tillsats av methionin i mängder som ligger utanför det som rapporterats tidigare ger ett oförändrat eller t.o.m lätt ökat utbyte av interferon tillsammans med en märkbar förbättring i slutproduktens homogenitet, stabilitet och . , ~ . - » 10 15 20 25 30 519 827 4 en hantering som medger en avsevärd förenkling av beredning av media.
Det uppfunna mediet kännetecknas av att det inne- fattar följande: en balanserad saltlösning (BSS) eller varianter därav, en energikälla som t ex en monosackarid eller en disackarid, en pH buffer, methionin i mängder som ligger inom intervallet 0.015-2.0 g/liter, och eventuellt antibiotika.
I jämförelse med konventionella och välkända Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM) så saknar mediet i upp- finningen totalt aminosyror, vitaminlösningar och fol- syralösning vilket ingàr i EMEM.
Men jämfört med det s k Cantell mediet, som först visades av Cantell et al. 1981 (Methods in Enzymology, vol. 78, 1981) som vanligtvis används för inkubering av humana leukocyter, innehåller mediet i uppfinningen MgCl2, NaH2PO4 men saknar L-glutamin. I det ursprungliga arbetet, beskriver Cantell et al. experiment vars syfte var att identifiera de ingredienser i EMEM som var nöd- vändiga för optimalt utbyte av interferon men dessa ex- periment gav resultat som stred mot resultaten som visas i denna ansökan (se exempel 2).
Med detta som bakgrund är det än mer överraskande att det uppfunna mediet medför att det gàr att producera interferon med oförändrat utbyte i jämförelse med EMEM. I jämförelse med andra förenklade medier sä ger det en märkbar förbättring i utbyte. Dessutom medför det för- enklade mediet en enklare rening av den önskvärda pro- dukten och det ger även märkbara processekonomiska för- delar genom att mediet är enklare att bereda och det in- __1_ neiàl er färre mediakomponenter som ej behöver beställas, FJ registreras och analyseras osv. Därutöver, ger mediet i . . « . v » . . - » f ~ 10 l5 20 25 30 519 827 5 uppfinningen, BNLM, en mer homogen och stabil produkt med oförändrat utbyte.
Uppfinningen är också tillämpbar pà andra typer av celler eftersom uppfinningen är av en generell natur. För växande celler, är det troligen inte det ideala mediet men i stationär fas eller i proteinproducerande fas ger detta medium många fördelar som nämnts ovan. Således, kan uppfinningen användas pà andra proteinproducerande celler/cell-linjer.
Uppfinningen illustreras av de följande exemplen.
Olika modifieringar kan göras utan att fràngà det prin- cipiella innehàllet i uppfinningen. Sàledes är det inte tänkt att uppfinningen skall vara begränsad förutom av kraven.
Exempel I exemplen kommer de följande förkortningarna att användas: BNLM - det uppfunna mediet, BNL - det uppfunna mediet utan L-methionine, GIBCO-EMEM tillverkat av GIBCO, EMEM-EMEM tillverkat enligt Cantell (K. Cantell, S.
Hirvonen, H.-L. Kauppinen, G. Myllylä, Methods och vol. 78, p. 29-38, Academic Press, 1981) med Enzymology, fosfat och en ökad mängd av glukos (5 g/liter), CM-enkelt medium enligt Cantell (H.-L. Kauppinen, G. Myllylä, and K. Cantell in "Human Interferon" (W.R. Stinebring and P.J. Chapple, eds.), p. 1 Plenum, New York, 1978), CMV - enkelt medium enligt Cantell (1978) men utan L-glutamin, minskad mängd av Tricin och NaHCO3 och ökad mängd av (PBS) Produkt no. D 8662 PBS-Fosfat buffrad salin enligt Dulbecco glukos, (SIGMA Cell Culture Catalogue 1996, eller D5780) med NaHCO3, 1- 519 827 Exempel 1 Jämförande smàskale-experiment utfördes i smà flaskor (volym 100 ml) med följande media (40 ml): EMEM (Eagle's minimal essential medium) tillhandahállen av BioNative AB, Umeå, Sverige, EMEM tillhandahàllen av GIBCO och det uppfunna mediet utan L-methionine (BNL).
Kompositionerna som användes visas tabell 1.
”NJ 519 827 7 Tabell 1. Komnoaitlon av olika media (EMEM/BNL/Glßcø. testerna utfördes i smà f1askorL Komponent EMEM BNL GIBCO (mg/ (mg/ (mg/ liter) liter) liter) Kalciumklorid anhydrat 200.00 Kalciumklorid 2 hydrat 200.00 200.00 Kaliumklorid 400.00 400.00 400.00 Magnesiumklorid, anhydrat 97.67 Magnesiumklorid, 6 hydrat 200.00 200.00 Natriumklorid 6800.00 6800.00 6800.00 Natriumdivätefosfat, 2 105.00 105.00 140.00 hydrat NaHCO3 750.00 750.00 750.00 Tricin 3000.00 l500.00 3000.00 D-Glukos 5000.00 5000.00 5000.00 L-Arginin 126.00 L-Arginin . Hcl 126.00 L-Cystin 25.00 L-cystin . 2 Hcl 31.29 L-Glutamin 292.00 292.00 L-Histidin 42.00 L-Histidin - HCl - H20 42.00 L-Isoleucin 52.00 52.00 L-Leucin 52.00 52.00 L-Lyain, Hcl 73.00 72.50 L-Methionin 15.00 15.00 L-Phenylalanin 32.00 32.00 L-Threonin 48.00 48.00 L-Tryptophan 10.00 10.00 .UU- 10 15 519 827 8 Tabell 1 forts Komponent EMEM BNL GIBCO (ms/ (mg/ (mg/ liter) liter) liter) L-Valin 46.00 46.00 L-Tyrosin 52.00 L-Tyrosin (Naz-salt) 51.90 D-Kalciumpantotenat 1.00 1.00 Cholinklorid 1.00 1.00 i-Inositol 2.00 2.00 Nikotinamid 1.00 1.00 Pyridoxin HCl 1.00 1.00 Riboflavin 0.10 0.10 Thiamin HCl l.OO l.OO Folsyra 1.00 1.00 Tabell 1 visar kompositioner av det uppfunna mediet utan L-methionine (BNL) i jämförelse med tvà vanliga mer kom- plexa kommersiellt tillgängliga media. När mediet används för produktion av naturligt interferon-alpha är det också kompletterat med agamma-plasma (Cantell, 1978) (slut kon- centration ca 4%), neomycin sulfat lösning 10% (0.25 ml/liter) och priming (interferon-alpha tillsatt till en slutkoncentration av 100 IU/ml). Utbytet av in- terferon-alpha erhàllet med dessa medier visas i Tabell 2.
Humana leukocyter erhölls fràn buffy coats från olika blodcentraler. Leukocyterna renades i flera steg före de inkuberades i olika media. enligt Cantell (1981) Först klipps blodpàsarna upp och töms. Blodet Centri- lO 15 20 25 30 519 827 9 fugeras och plasmafraktionen och den röda blodcells (RBC) fraktionen separerades. Den återstående leukocytinne- hàllande fraktionen utsetts för lysering (10 minuter) genom att tillsätta tvà delar 0.8% NH4Cl till en del leukocytfraktion. Efter centrifugering av lysatet kastas supernatanten som huvudsakligen innehåller lyserade RBC leukocytcellerna tas tillvara. Detta lyserings och centrifugerings steg upprepas en gäng och den resulterande leukocytsuspensionen tillsattes till de olika medierna i lika mängder. Medierna kompletterades också med agamma plasma (slutkoncentration ca 4% v/v), neomycinsulfatlösning 10% (0.25 ml/liter) och priming (100 IU interferon alpha/ml medium).
Agamma plasma tillverkades genom centrifugering av separerade plasma fraktioner som tagits tillvara fràn flera batcher och sedan med fällning av supernatanten genom tillsats av en del 30% (w/w) Polyetylenglykol 6000 (Macrogol 6000) till fyra delar plasma. Blandningen cen- trifugerades och supernatanten (agamma-plasma) togs till- vara. Fällningen, som innehåller IgG kastades. 40 ml leukocytsuspension primades med interferon och inkuberades vid 37.0 °C och rördes om med en magnet- omrörare. Efter 1.5 timme tillsattes Sendai virus. Inku- bationen varade i ca 16 timmar. Celler och debris renades bort genom centrifugering och supernatanten togs tillvara och interferon koncentrationen bestämdes med en ELISA metod. Analysmetoden, The Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) användes för den kvantitativa analysen av interferon alpha (IFN-d). ELISA-standarden är kalibrerad mot en internationell referenspreparation 69/19. En parallell inkubering med EMEM användes som referens.
Resultaten är presenterade i Tabell 2. 519 827 10 Tabell 2. Resultat fràn tester med olika media (%L (EMEM/BNL/GIBCO, testerna utfördes i smà flaskor) EMEM BNL GIBCO Test 1 100 97 -"- 2 100 109 -"- 3 1oo s9 -"- 4 lOO 87 -"- 5 1oo 108 99 -"- 6 100 82 97 -H- 7 1oo 94 98 -"- 8 100 102 86 -"- 9 100 77 -"- 10 100 104 -"- 11 1oo se -"- 12 100 104 -"- 13 1oo 95 -"- 14 100 77 87 -"- 15 100 104 -"- 16 100 79 87 ____ H -"- 17 100 86 87 % av ref (EMEM) 100 91 93 SD 11,1 7,5 Antal tester 13 11 519 827 ll Exempel 2 Jämförande experiment utfördes också i smà flaskor med andra media, vilka liknar BNL medium. Kompositionerna som användes och utbytena som erhölls är presenterade i Tabell 3. Leukocyterna som användes i Exempel 2 prepa- rerades pà samma sätt som i Exempel 1.
= V . . , . 10 519 827 12 Tabell 3. Jämförelse mellan EMEM/BNL/CM/CMV/PBS (enligt Dulbecco) EMEM BNL CM CMV PBS <9/ (9/ <9/ (9/ <9/ liter) liter) liter) liter) liter) CaCL2 x 2H2O 0.2 0.2 - - 0.133 KCl 0.4 0.4 0.2 0.2 0.2 MgCl2X6I-I2O 0.2 0.2 - - 0.1 NaCl 6.8 6.8 8 0 8.0 8.0 NaH2PO4 X 2H2O 0.105 0.105 - - - Glukos 5.0 5.0 1 0 5.0 5.0 KH2PO4 - ' ' - 0.2 Na2HPO4 X 21-120 - - - - 1.42 Tricin 3.0 1.5 3.0 1.5 1.5 NaHCOg, 0.75 0.75 1.0 0.75 0.75 Neomycin 10% 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 Aminosyror + - - - - Vitaminlösning + - - - - Folsyralösning. + - - - - L-Glutamin 0.3 - 0.3 - - Test 1 (%) 100 104 9 Test 2 (%) 100 27 17 64 Tabell 3 visar interferon-alpha utbytet erhållet med det uppfunna mediet utan L-methionine (BNL) i jämförelse med mer komplexa kommersiellt tillgängliga media (EMEM) och tre andra förenklade media liknande BNL-medium. Ett (1978) en annan är är berett enligt Cantell (benämnd CM), en variant av densamma (benämnd CMV) och en tredje är PBS enligt Dulbecco. 519 827 13 Exempel 3 Tester med olika mängder av L-methionine i liten skala. Tabell 4 visar resultatet av tester av olika mängder av L-methionine i BNLM medium. De använda leukocyterna i Exempel 3 var preparerade pá samma sätt som i Exempel 1. 10 15 Tabell 4. 519 827 14 Resultat från tester med olika mängder av L- methionine i BNL i smà flaskor.
IFN-koncentrationer analyserade med en ELISA-metod (IU/mlh BNL BNLM BNLM BNLM BNLM BNLM 15 mg 150 mg 500 mg 1000 mg 2000 mg av av av av av L-met L-met L-met L-met L-met Test 1 67000 80000 68000 67000 - 64000 Test 2 89000 93000 85000 75000 73000 66000 Test 3 72000 74000 66000 61000 60000 - Utbyten: BNL BNLM BNLM BNLM BNLM BNLM 15 mg 150 mg 500 mg 1000 mg 2000 mg av av av av av L-met L-met L-met L-met L-met Test 1 100 118 101 - 94 Test 2 100 105 96 84 82 74 Test 3 100 102 92 85 83 - Tabell 4 visar interferon-alpha utbyten erhållna med det uppfunna mediet med L-methionine (BNLM) i olika mäng- der i jämförelse med det uppfunna mediet utan L-methio- nine. Experimenten utfördes i lite skala, 40 ml medium. 10 15 20 25 30 519 827 15 Exempel 4 Jämförande inkubationer utfördes i pilotskale- fermentorer (Belach Bioteknik AB, volym 3 1) med olika mängder av L-methionine i BNLM medium. Leukocyterna som användes i Exempel 4 preparerades pà samma sätt som i Exempel 1. Resultaten visas i Tabell 5. Interferon alpha som utsöndras fràn leukocyterna ut i mediet renades med immunoaffinitets kromatografi och de renade interferon proteinerna analyserades med reversed-phase high per- formance liquid chromatography (RP-HPLC). HPLC kroma- togrammen fràn de renade proven av interferon producerade med leukocyter inkuberade i BNL medium kompletterad med 500 mg/liter av L-methionine visas i Figur 1 (nedre bilden) och fràn interferon producerat med medium utan L- methionine (övre bilden). Den stationära fasen i den separerande kolonnen bestàr av små likformiga partiklar av ytmodifierade silica. Proteiner eller andra molekyler interagerar med den stationära fasen genom hydrofobisk interaktion. De kan selektivt elueras från kolonnen med ökande mängd av organiskt lösningsmedel (acetonitrile) i den mobila fasen. Ett silica media med kopplade C4 grup- per (butyl) har funnits vara användbara vid separation av alpha interferon subtyper.
Interferon alpha produkten som erhållits efter rening analyserades med RP-HPLC. HPLC kromatogrammet fràn renade interferon alpha- proteiner erhållna från medium kompletterat med 500 mg/l av L-methionine (övre bilden) visas i jämförelse med interferonproteiner renade från (nedre bilden). Separationen av medium utan L-methionine toppar, vilket mest troligt beror pà oxidation av methioninresterna i proteinerna, minskas eller är odetekterbara när L-methionine tillsatts till mediet. l0 15 20 25 519 827 16 Effekten är mest märk-bar för interferon subtyperna alpha 1 och alpha 14.
De eluerade subtyperna visar ett karaktàristiskt toppmönster i kromatogrammen. En huvudtopp eluerar vid omkring 50 minuter och bestàr av interferon alpha 1. En serie av mindre toppar eluerar med retentionstider mellan 0.6 till 0.9 i förhållande till IFN-alpha 1 toppen och innehåller de andra interferon alpha subtyperna i pro- dukten.
Tabell 5. Resultat fràn tester av olika mänqder av L- methionine i BNL i laboratorie- fermentorer IFN-koncentrationer analyserade med en ELISA-metod (IU/ml): BNL BNLM BNLM BNLM BNLM 15 mg av 75 mg av 150 mg av 500 mg av L-met L-met L-met L-met Test 1 94000 98000 - 92000 88000 Test 2 116000 108000 - 99000 97000 Test 3 83000 - - 84000 76000 Test 4 100000 - 93000 - - 17 Utbyten: BNL BNLM BNLM BNLM BNLM 15 mg av 75 mg av 150 mg av 500 mg av L-met L-met L-met L-met Test 1 1oo 105 - 99 94 Test 2 1oo 93 - 85 84 Test 3 1oo - - 101 92 Test 4 100 _ 93 _ _ Tabell 5 visar interferon-alpha utbytena erhållna med det uppfunna mediet med L-methionine i olika mängder i jäm- förelse med det uppfunna mediet utan L-methionine. Ex- perimenten utfördes i pilotskala, 2 liter medium. .~,.,
Claims (6)
1. Näringsmedium för proteinproducerande celler, k ä n n e t e c k n a t a v att nämnda medium består av följande komponenter: en balanserad saltlösning innehållande Ca”j K+, Mg” och Na*, en monosackarid eller disackarid som energikälla, en pH-buffert, agammaplasma, metionin i en mängd mellan 0,015-2,0 g/liter och eventuellt antibiotika.
2. Näringsmedium enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t a v att nämnda medium har följande komposition (g/liter): CaClz X 2H2O 0,2 KCl 0,4 MgCl2 X 6H2O 0,2 NaCl 6,8 NaH2PO4 X 2H2O 0,105 Glukos 5,0 Tricin 1,5 NaHCO3 0,75 Neomycin 10 % 0,25 Metionin 0,015 - 2,0 Agammaplasma 4 % (v/v)
3. Näringsmedium enligt något av kraven 1-2 för användning vid odling av animalceller.
4. Näringsmedium enligt något av kraven 1-2 för användning vid odling av humana leukocyter.
5. Näringsmedium för odling av humana leukocyter vid tillverkningen av interferon k ä n n e t e c k n a t a v att det har den följande kompositionen (g/liter): CaCl2 X 2H2O 0,2 KCl 0,4 Mgclz x 6H2o Z. n Ü _| mo mm .snnvà NaH2PO4 X 2H2O 0,105 Glukos 5 0 ~. BL? 827;3g¿¿¿f. Tricin NaHCO3 Neomycin 10% Metionin Agammaplasma 3,0 0,75 0,25 0,015-2,0 4 % (V/v).
6. Användningen av mediet enligt något av kraven 1-5 vid tillverkningen av interferon, varvid mediet utnyttjas som nàringsmedium för interferonproducerande celler.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9801090A SE519827C2 (sv) | 1998-03-30 | 1998-03-30 | Näringsmedium innehållande metionin samt användning av detta |
| AU36331/99A AU3633199A (en) | 1998-03-30 | 1999-03-23 | Methionin containing animal cell culture medium and its use |
| DK99918400.5T DK1073715T3 (da) | 1998-03-30 | 1999-03-23 | Dyrecellekulturmedium, der indeholder methionin, og anvendelse deraf |
| US09/647,402 US6309862B1 (en) | 1998-03-30 | 1999-03-23 | Methionine containing animal cell culture medium and its use |
| EP99918400.5A EP1073715B1 (en) | 1998-03-30 | 1999-03-23 | Methionin containing animal cell culture medium and its use |
| HU0102319A HU225802B1 (en) | 1998-03-30 | 1999-03-23 | Methionin containing animal cell culture medium and its use |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9801090A SE519827C2 (sv) | 1998-03-30 | 1998-03-30 | Näringsmedium innehållande metionin samt användning av detta |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE9801090D0 SE9801090D0 (sv) | 1998-03-30 |
| SE9801090L SE9801090L (sv) | 1999-11-30 |
| SE519827C2 true SE519827C2 (sv) | 2003-04-15 |
Family
ID=20410773
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE9801090A SE519827C2 (sv) | 1998-03-30 | 1998-03-30 | Näringsmedium innehållande metionin samt användning av detta |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6309862B1 (sv) |
| EP (1) | EP1073715B1 (sv) |
| AU (1) | AU3633199A (sv) |
| DK (1) | DK1073715T3 (sv) |
| HU (1) | HU225802B1 (sv) |
| SE (1) | SE519827C2 (sv) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003054146A2 (en) * | 2001-11-14 | 2003-07-03 | Northwestern University | Self-assembly and mineralization of peptide-amphiphile nanofibers |
| US7371719B2 (en) * | 2002-02-15 | 2008-05-13 | Northwestern University | Self-assembly of peptide-amphiphile nanofibers under physiological conditions |
| WO2004106359A2 (en) * | 2002-09-23 | 2004-12-09 | Northwestern University | Self-assembled peptide-amphiphiles & self-assembled peptide nanofiber networks presenting multiple signals |
| US7554021B2 (en) * | 2002-11-12 | 2009-06-30 | Northwestern University | Composition and method for self-assembly and mineralization of peptide amphiphiles |
| US7683025B2 (en) * | 2002-11-14 | 2010-03-23 | Northwestern University | Synthesis and self-assembly of ABC triblock bola peptide amphiphiles |
| ATE541580T1 (de) | 2003-12-05 | 2012-02-15 | Univ Northwestern | Selbst anordnende peptid-amphiphile und relevante verfahren für die abgabe von wachstumsfaktor |
| AU2006206194A1 (en) * | 2005-01-21 | 2006-07-27 | Northwestern University | Methods and compositions for encapsulation of cells |
| US7510732B2 (en) * | 2005-02-16 | 2009-03-31 | Cambridge Scientific Pty Ltd | Analgesic and anti-inflammatory composition |
| WO2006096614A2 (en) * | 2005-03-04 | 2006-09-14 | Northwestern University | Angiogenic heparin binding peptide amphiphiles |
| US8076295B2 (en) * | 2007-04-17 | 2011-12-13 | Nanotope, Inc. | Peptide amphiphiles having improved solubility and methods of using same |
| EP2419116A1 (en) * | 2009-04-13 | 2012-02-22 | North Western University | Novel peptide-based scaffolds for cartilage regeneration and methods for their use |
| US20220204920A1 (en) * | 2019-05-16 | 2022-06-30 | Formycon Ag | Method for reducing methionine oxidation in recombinant proteins |
| TW202128745A (zh) | 2019-12-06 | 2021-08-01 | 美商再生元醫藥公司 | 抗ｖｅｇｆ蛋白組合物及其製備方法 |
| MX2022013812A (es) | 2020-05-08 | 2022-12-15 | Regeneron Pharma | Trampas y mini-trampas de vegf y metodos para el tratamiento de trastornos oculares y cancer. |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4767704A (en) | 1983-10-07 | 1988-08-30 | Columbia University In The City Of New York | Protein-free culture medium |
| HU192254B (en) | 1983-12-13 | 1987-05-28 | Egyt Gyogyszervegyeszeti Gyar | Process for producing human leucocite and human gamma interferons in consecutive steps |
| US5272135A (en) | 1991-03-01 | 1993-12-21 | Chiron Ophthalmics, Inc. | Method for the stabilization of methionine-containing polypeptides |
| US5676942A (en) | 1992-02-10 | 1997-10-14 | Interferon Sciences, Inc. | Composition containing human alpha interferon species proteins and method for use thereof |
| US5358708A (en) | 1993-01-29 | 1994-10-25 | Schering Corporation | Stabilization of protein formulations |
-
1998
- 1998-03-30 SE SE9801090A patent/SE519827C2/sv not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-03-23 EP EP99918400.5A patent/EP1073715B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-23 US US09/647,402 patent/US6309862B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-23 HU HU0102319A patent/HU225802B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1999-03-23 AU AU36331/99A patent/AU3633199A/en not_active Abandoned
- 1999-03-23 DK DK99918400.5T patent/DK1073715T3/da active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1073715B1 (en) | 2013-06-26 |
| HUP0102319A2 (hu) | 2001-10-28 |
| DK1073715T3 (da) | 2013-07-15 |
| SE9801090D0 (sv) | 1998-03-30 |
| US6309862B1 (en) | 2001-10-30 |
| EP1073715A1 (en) | 2001-02-07 |
| HU225802B1 (en) | 2007-09-28 |
| SE9801090L (sv) | 1999-11-30 |
| HUP0102319A3 (en) | 2003-03-28 |
| AU3633199A (en) | 1999-10-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SE519827C2 (sv) | Näringsmedium innehållande metionin samt användning av detta | |
| US4503035A (en) | Protein purification process and product | |
| US4289690A (en) | Protein purification process and product | |
| US8993724B2 (en) | Process for the preparation of glycosylated interferon beta | |
| EP0102989B1 (en) | Process for recovering human ifn-beta from a transformed microorganism | |
| EP0778893B1 (en) | Bacterial production of Interferon-beta polypeptide | |
| Hershey et al. | Purification and properties of initiation factor f-1 | |
| CA2129533A1 (en) | Improved alpha interferon composition and method for its production from human peripheral blood leukocytes | |
| US20210070822A1 (en) | Method for the Purification of G-CSF | |
| US5196323A (en) | Process for preparing and purifying alpha-interferon | |
| Fryklund et al. | Isolation and characterization of polypeptides from human plasma enhancing the growth of human normal cells in culture | |
| Gu et al. | Influence of Primatone RL supplementation on sialylation of recombinant human interferon‐γ produced by Chinese hamster ovary cell culture using serum‐free media | |
| Cantell et al. | [7] Production and partial purification of human immune interferon | |
| JPS6079000A (ja) | ヒトγ型インタ−フエロン単量体の製造法 | |
| Stampfer et al. | Identification of the vesicular stomatitis virus large protein as a unique viral protein | |
| US4855409A (en) | Novel polypeptides and method of producing same | |
| WO2011063195A2 (en) | Purification of modified cytokines | |
| CN111492050A (zh) | 用于制备液体培养基的精简型方法 | |
| De Luca et al. | The stimulation of growth of mammalian cells in vitro by a peptide fraction from enzymatic digests of serum | |
| WO1999050390A1 (en) | Methionin containing animal cell culture medium and its use | |
| WO1992015670A1 (en) | Blended bovine sera cellular growth media and their methods of production and use | |
| Miyazaki et al. | Characterization of a growth-inhibiting protein present in rat serum that exerts a differential effect on in vitro growth of nonmalignant rat liver cells when compared with Rous sarcoma virus-transformed rat liver cells | |
| HU184972B (en) | Process for preparing human gamma interferone | |
| CA2354025C (en) | Modification of interferon alpha production | |
| US4591557A (en) | Process and materials for producing soluble biological mediators from white blood cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NUG | Patent has lapsed |