JP2023516441A - Ａｘｌ／ｍｅｒ阻害剤及びｐｄ－１／ｐｄ－ｌ１阻害剤を含む併用療法 - Google Patents
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Abstract
本開示は、化合物、すなわちＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼ阻害剤を、ＰＤ－１に結合する抗体またはその抗体フラグメントと組み合わせて投与することによって、がんを治療する方法に関する。
Description
本開示は、化合物、すなわちＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼ阻害剤を、ＰＤ－１に結合する抗体またはその抗体フラグメントと組み合わせて投与することによって、がんを治療する方法に関する。
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、細胞外環境から細胞の細胞質及び核にシグナルを伝達して、生存、成長、増殖、分化、接着、及び遊走などの細胞事象を調節する、細胞表面タンパク質である。
ＴＡＭサブファミリーは、Ｔｙｒｏ３、ＡＸＬ、及びＭｅｒを含む、３つのＲＴＫからなる（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １４，７６９－７８５、Ｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １００，３５－８３）。ＴＡＭキナーゼは、２つの免疫グロブリン様ドメイン及び２つのフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインからなる細胞外リガンド結合ドメインを特徴とする。ＴＡＭキナーゼでは、成長停止特異的６（ＧＡＳ６）及びプロテインＳ（ＰＲＯＳ１）の２つのリガンドが特定されている。ＧＡＳ６は、３つ全てのＴＡＭのキナーゼに結合し、それらを活性化することができるが、ＰＲＯＳ１は、Ｍｅｒ及びＴｙｒｏ３のリガンドである（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １４，７６９－７８５）。
ＡＸＬ（ＵＦＯ、ＡＲＫ、ＪＴＫ１１、及びＴＹＲＯ７としても既知）は、もともと、慢性骨髄性白血病を有する患者のＤＮＡからの形質転換遺伝子として特定された（Ｏ’Ｂｒｙａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １１，５０１６－５０３１、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １４，７６９－７８５、Ｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １００，３５－８３）。ＧＡＳ６は、ＡＸＬに結合し、その後のＡＸＬチロシンキナーゼの自己リン酸化及び活性化を誘導する。ＡＸＬは、ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ、Ｒａｆ－ＭＡＰＫ、ＰＬＣ－ＰＫＣを含むいくつかの下流シグナル伝達経路を活性化する（Ｆｅｎｅｙｒｏｌｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １３，２１４１－２１４８、Ｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １００，３５－８３）。
ＭＥＲ（ＭＥＲＴＫ、ＥＹＫ、ＲＹＫ、ＲＰ３８、ＮＹＫ、及びＴＹＲＯ１２としても既知）は、もともと、リンパ芽球発現ライブラリからのリン酸化タンパク質として特定された（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １０，２３４９－２３５９、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １４，７６９－７８５、Ｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １００，３５－８３）。ＧＡＳ６及びＰＲＯＳ１の両方は、Ｍｅｒに結合し、Ｍｅｒキナーゼのリン酸化及び活性化を誘導することができる（Ｌｅｗ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。ＡＸＬのように、ＭＥＲ活性化もまた、ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ及びＲａｆ－ＭＡＰＫを含む下流シグナル伝達経路を伝達する（Ｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １００，３５－８３）。
ＴＹＲＯ３（ＤＴＫ、ＳＫＹ、ＲＳＥ、ＢＲＴ、ＴＩＦ、ＥＴＫ２としても既知）は、もともと、ＰＣＲに基づくクローニング研究により特定された（Ｌａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ ６，６９１－７０，１９９１、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １４，７６９－７８５、Ｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １００，３５－８３）。ＧＡＳ６及びＰＲＯＳ１の両方のリガンドは、ＴＹＲＯ３に結合し、それを活性化することができる。ＴＹＲＯ３活性化の下流のシグナル伝達経路は、ＴＡＭ ＲＴＫの間で最も研究されていないが、ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ及びＲａｆ－ＭＡＰＫ経路の両方が関与していると思われる（Ｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １００，３５－８３）。ＡＸＬ、ＭＥＲ、及びＴＹＲＯ３は、がん細胞において過剰発現することがわかっている。
ＡＸＬ／ＭＥＲキナーゼのモジュレーターを、ＰＤ－１に結合する抗体またはその抗体フラグメントと組み合わせて使用した、新規のがん治療レジメンが依然として必要とされている。本開示は、この必要性及び他の必要性を対象とする。
本出願は、とりわけ、患者のがんを治療する方法であって、前記患者に、
（ｉ）以下の構造を有する化合物１：
またはその薬学的に許容される塩と、
（ｉｉ）ヒトＰＤ－１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、当該抗体が、（ｉｉ－１）ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、及び（ｉｉ－２）ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、
（ａ）ＶＨ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号６）を含み、
（ｂ）ＶＨ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）を含み、
（ｃ）ＶＨ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）を含み、
（ｄ）ＶＬ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）を含み、
（ｅ）ＶＬ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）を含み、
（ｆ）ＶＬ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントと、を投与することを含む、方法を提供する。
（ｉ）以下の構造を有する化合物１：
（ｉｉ）ヒトＰＤ－１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、当該抗体が、（ｉｉ－１）ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、及び（ｉｉ－２）ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、
（ａ）ＶＨ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号６）を含み、
（ｂ）ＶＨ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）を含み、
（ｃ）ＶＨ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）を含み、
（ｄ）ＶＬ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）を含み、
（ｅ）ＶＬ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）を含み、
（ｆ）ＶＬ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントと、を投与することを含む、方法を提供する。
本出願は、患者のがんを治療する方法であって、化合物１またはその薬学的に許容される塩と、レチファンリマブとを、患者に投与することを含む方法をさらに提供する。
本出願はまた、がん治療用の薬剤調製のための、本明細書に記載の化合物１またはその薬学的に許容される塩と、抗体または抗原結合フラグメントとの使用をさらに提供する。
本出願は、本明細書に記載のいずれかの方法にて使用するための、本明細書に記載の化合物１またはその薬学的に許容される塩と、抗体または抗原結合フラグメントとをさらに提供する。
本出願は、とりわけ、患者のがんを治療する方法であって、前記患者に、
（ｉ）以下の構造を有する化合物１：
またはその薬学的に許容される塩と、
（ｉｉ）ヒトＰＤ－１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、レチファンリマブ）とを投与することを含む、方法を提供する。
（ｉ）以下の構造を有する化合物１：
（ｉｉ）ヒトＰＤ－１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、レチファンリマブ）とを投与することを含む、方法を提供する。
インビトロ研究によって、単一の薬剤としての化合物１の治療、及び単一の薬剤としてのレチファンリマブの治療で、炎症誘発性サイトカインが誘導されることが示されているが、化合物１とＰＤ－１抗体レチファンリマブとを組み合わせて使用することで、極めて多くのサイトカインが誘導されるという結果が得られた（実施例Ｇ参照）。
ヒトＰＤ－１タンパク質（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９）のアミノ酸配列は、ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号１）である。
レチファンリマブは、ヒトＰＤ－１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１９／０１２７４６７参照）。成熟レチファンリマブの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を以下に記載する。
重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３を、成熟ＶＬ及びＶＨ配列のＮ末端からＣ末端の順序で、下線及び太字で示す。以下に記載する成熟した重鎖（配列番号２）及び成熟した軽鎖（配列番号３）からなる抗体を、レチファンリマブと称す。
成熟したレチファンリマブの重鎖（ＨＣ）
成熟したレチファンリマブの軽鎖（ＬＣ）
レチファンリマブの重鎖可変（ＶＨ）ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：
レチファンリマブの軽鎖可変（ＬＨ）ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：
レチファンリマブのＶＨ ＣＤＲのアミノ酸配列を以下に列挙する：
ＶＨ ＣＤＲ１：ＳＹＷＭＮ（配列番号６）、
ＶＨ ＣＤＲ２：ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）、
ＶＨ ＣＤＲ３：ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）。
ＶＨ ＣＤＲ１：ＳＹＷＭＮ（配列番号６）、
ＶＨ ＣＤＲ２：ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）、
ＶＨ ＣＤＲ３：ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）。
レチファンリマブのＶＬ ＣＤＲのアミノ酸配列を以下に列挙する：
ＶＬ ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）、
ＶＬ ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）、及び
ＶＬ ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）。
ＶＬ ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）、
ＶＬ ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）、及び
ＶＬ ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）。
従って、本開示は、患者のがんを治療する方法であって、前記患者に、
（ｉ）以下の構造を有する化合物１：
またはその薬学的に許容される塩と、
（ｉｉ）ヒトＰＤ－１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、当該抗体が、（ｉｉ－１）ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、及び（ｉｉ－２）ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、
（ａ）ＶＨ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号６）を含み、
（ｂ）ＶＨ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）を含み、
（ｃ）ＶＨ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）を含み、
（ｄ）ＶＬ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）を含み、
（ｅ）ＶＬ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）を含み、
（ｆ）ＶＬ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントと、を投与することを含む、方法を提供する。
（ｉ）以下の構造を有する化合物１：
（ｉｉ）ヒトＰＤ－１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、当該抗体が、（ｉｉ－１）ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、及び（ｉｉ－２）ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、
（ａ）ＶＨ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号６）を含み、
（ｂ）ＶＨ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）を含み、
（ｃ）ＶＨ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）を含み、
（ｄ）ＶＬ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）を含み、
（ｅ）ＶＬ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）を含み、
（ｆ）ＶＬ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントと、を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、変異Ｆｃ領域であって、
（ａ）ＦｃγＲへの変異Ｆｃ領域の親和性を低減させる１種以上のアミノ酸修飾であって、Ｌ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ；またはＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）を含む、ＦｃγＲへの変異Ｆｃ領域の親和性を低減させる１種以上の修飾と、及び／または
（ｂ）変異Ｆｃ領域の血清半減期を増強する１種以上のアミノ酸修飾であって、Ｍ２５２Ｙ；Ｍ２５２Ｙ及びＳ２５４Ｔ；Ｍ２５２Ｙ及びＴ２５６Ｅ；Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ；またはＫ２８８Ｄ及びＨ４３５Ｋの置換（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）を含む、変異体Ｆｃ領域の血清半減期を増強する１種以上の修飾と、を含む、変異Ｆｃ領域を含む。
（ａ）ＦｃγＲへの変異Ｆｃ領域の親和性を低減させる１種以上のアミノ酸修飾であって、Ｌ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ；またはＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）を含む、ＦｃγＲへの変異Ｆｃ領域の親和性を低減させる１種以上の修飾と、及び／または
（ｂ）変異Ｆｃ領域の血清半減期を増強する１種以上のアミノ酸修飾であって、Ｍ２５２Ｙ；Ｍ２５２Ｙ及びＳ２５４Ｔ；Ｍ２５２Ｙ及びＴ２５６Ｅ；Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ；またはＫ２８８Ｄ及びＨ４３５Ｋの置換（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）を含む、変異体Ｆｃ領域の血清半減期を増強する１種以上の修飾と、を含む、変異Ｆｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域がＩｇＧ４アイソタイプであるＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプのＦｃ領域、及び安定化をもたらす変異を含むＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプのＦｃ領域、及び鎖交換の発生を低下させるためのＳ２２８Ｐ置換を含むＩｇＧ４ヒンジドメイン（例えば、配列番号１２：ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（Ｌｕ ｅｔ ａｌ，（２００８）“Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔ Ｏｆ Ａ Ｐｏｉｎｔ Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｏｎ Ｔｈｅ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｏｆ ＩｇＧ４ Ａｓ Ｍｏｎｉｔｏｒｅｄ Ｂｙ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ９７：９６０－９６９）参照）を含む。従って、いくつかの実施形態では、（ａ）抗体は、Ｆｃ領域及びヒンジドメインを含み、（ｂ）Ｆｃ領域及びヒンジドメインは、ＩｇＧ４タイプであり、（ｃ）ヒンジドメインは、安定化をもたらす変異を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は重鎖を含み、重鎖は配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は軽鎖を含み、軽鎖は配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１タイプであるＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、変異ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＡＡ）置換を含む）を含むが、Ｃ末端リシン残基を欠いている、ＩｇＧ１タイプであるＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１タイプであるＦｃ領域を含み、成熟した重鎖及び軽鎖の配列は、配列番号１３及び配列番号３のものである。
成熟した重鎖（ＨＣ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴ ＳＹＷＭＮＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶ ＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬ ＤＱＫＦＫＤＲＶＴＩ ＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹ ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＨ ＹＧＴＳＰＦＡＹＷＧ ＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ ＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬ ＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧ ＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤ ＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷ ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨ ＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧ ＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶ ＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹ ＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮ ＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫ ＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰ ＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰ ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫ ＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥ ＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨ ＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹ ＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫ ＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳ ＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶ ＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥ ＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬ ＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫ ＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶ ＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭ ＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬ ＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡ ＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥ ＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬ ＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳ ＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱ ＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭ ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ ＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴ ＳＹＷＭＮＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶ ＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬ ＤＱＫＦＫＤＲＶＴＩ ＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹ ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＨ ＹＧＴＳＰＦＡＹＷＧ ＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ ＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬ ＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧ ＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤ ＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷ ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨ ＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧ ＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶ ＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹ ＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮ ＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫ ＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰ ＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰ ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫ ＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥ ＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨ ＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹ ＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫ ＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳ ＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶ ＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥ ＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬ ＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫ ＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶ ＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭ ＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬ ＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡ ＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥ ＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬ ＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳ ＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱ ＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭ ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ ＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１３）
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、ヒト化抗体である。
いくつかの実施形態では、化合物１またはその薬学的に許容される塩、及びレチファンリマブは、同時にまたは逐次的に患者に投与される。いくつかの実施形態では、化合物１またはその薬学的に許容される塩、及びレチファンリマブは、同時に患者に投与される。いくつかの実施形態では、化合物１またはその薬学的に許容される塩、及びレチファンリマブは、逐次的に患者に投与される。
化合物１及びその薬学的に許容される塩は、対象に、例えばそれを必要とする対象に、例えばヒト対象に、様々な方法によって投与され得る。多くの適用では、投与経路は経口投与である。いくつかの実施形態では、化合物１及びその薬学的に許容される塩は、医薬組成物として投与される。
化合物１の製剤（例えば、固形の経口投与剤形）は、米国特許出願公開第２０２０／００００８１２ Ａ１号に記載され、同明細書は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、化合物１は、
（ａ）化合物１、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物１のマレイン酸塩）、溶媒和物もしくは水和物、
（ｂ）有機酸、及び
（ｃ）界面活性剤を含む、固形の経口投与剤形で製剤化される。
（ａ）化合物１、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物１のマレイン酸塩）、溶媒和物もしくは水和物、
（ｂ）有機酸、及び
（ｃ）界面活性剤を含む、固形の経口投与剤形で製剤化される。
用語「有機酸」とは、酸性特性を有する有機化合物を意味する。いくつかの実施形態では、有機酸は、各々が１つ以上の酸性基（例えば、１、２、もしくは３つのカルボン酸、アルコール、またはスルホン酸基）で置換されたＣ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、または５～６員のヘテロシクロアルキルであり、５～６員のヘテロシクロアルキルは、任意に１つ以上の酸性基（例えば、１、２、３、もしくは４つのカルボン酸、アルコール、またはスルホン酸基）で置換されたＣ１～６アルキル基で任意に置換されている。有機酸は、１つ以上の酸性基（例えば、１、２、３、もしくは４つのカルボン酸、アルコール、またはスルホン酸基）で置換されたＣ１～６アルキルまたはＣ２～６アルケニルであり得る。いくつかの実施形態では、有機酸は、１、２、もしくは３つのカルボン酸基で置換され、かつ０、１、もしくは２つのアルコール基で置換されたＣ１～６アルキルまたはＣ２～６アルケニルである。いくつかの実施形態では、有機酸は、１つ以上の酸性基（例えば、１、２、もしくは３つのカルボン酸、アルコール、またはスルホン酸基）で置換され、かつ任意にＣ１～６アルキルで置換された５～６員のヘテロシクロアルキルであり、Ｃ１～６アルキルは、任意に１つ以上の酸性基（例えば、１、２、もしくは３つのカルボン酸、アルコール、またはスルホン酸基）で置換されている。例示的な有機酸としては、これらに限定されないが、クエン酸、アスコルビン酸、フマル酸、リンゴ酸、ソルビン酸、酒石酸、及びそれらの水和物または溶媒和物が挙げられる。製剤中の有機酸は、約１重量％～約５０重量％であり得る。製剤中の有機酸は、約５重量％～約４０重量％であり得る。製剤中の有機酸は、約５重量％～約３０重量％であり得る。製剤中の有機酸は、約５重量％～約２０重量％であり得る。製剤中の有機酸は、約１０重量％～約２０重量％であり得る。例えば、製剤中の有機酸は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０重量％であり得る。いくつかの実施形態では、形成物中の有機酸は、約１０重量％である。いくつかの実施形態では、形成物中の有機酸は、約２０重量％である。
いくつかの実施形態では、有機酸は、クエン酸である。いくつかの実施形態では、クエン酸は、クエン酸一水和物である。製剤中のクエン酸は、約１重量％～約５０重量％であり得る。製剤中のクエン酸は、約５重量％～約４０重量％であり得る。製剤中のクエン酸は、約５重量％～約３０重量％であり得る。製剤中のクエン酸は、約５重量％～約２０重量％であり得る。製剤中のクエン酸は、約１０重量％～約２０重量％であり得る。例えば、製剤中のクエン酸は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０重量％であり得る。いくつかの実施形態では、形成物中のクエン酸は、約１０重量％である。いくつかの実施形態では、形成物中のクエン酸は、約２０重量％である。
界面活性剤は、化合物１、またはその薬学的に許容される塩（例えば、化合物１のマレイン酸塩）、溶媒和物もしくは水和物のバイオアベイラビリティを高めるのに役立ち得る。用語「界面活性剤」は、２種の液体間の界面張力、または液体と固体との間の界面張力を低下させる化合物を指す。いくつかの実施形態では、界面活性剤はまた、洗剤、湿潤剤、乳化剤、発泡剤、及び分散剤などの他の機能を有することができる。例示的な界面活性剤としては、ポロキサマーが挙げられるが、これに限定されない。ポロキサマーの例は、ポロキサマー４０７、ポロキサマー３３８、ポロキサマー２３７、及びポロキサマー１８８である。一実施形態では、ポロキサマーは、ポロキサマー１８８である。一実施形態では、ポロキサマーは、ポロキサマー４０７である。ポロキサマーは、薬物放出を助けることができる熱可逆性特性及びゾル－ゲル転移特性を有する、ポリエチレン－プロピレングリコール共重合体（既知の商品名はＳｕｐｒｏｎｉｃ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ、またはＴｅｔｒｏｎｉｃ）である。例えば、ポロキサマーは、室温未満でゾル状態を呈し、体温（３７．２℃）でゲル状態に変換し、これにより薬物放出特性を改変することができる（Ｄ．Ｒａｍｙａ Ｄｅｖｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．＆Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．５（８），２０１３，１５９－１６５、Ｙ．Ｍａｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ３５（２００４）１１２７－１１４２）。
抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントは、様々な方法によって、対象、例えば、それを必要とする対象、例えば、ヒト対象に投与され得る。多くの用途では、投与経路は、静脈内注射または注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、または筋肉内注射のうちの１つである。関節内送達を使用することも可能である。非経口投与の他の方法も使用することができる。そのような様式の例としては、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、ならびに硬膜外及び胸骨内注射が挙げられる。いくつかの場合では、投与は経口投与であり得る。
抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントは、様々な方法によって、対象、例えば、それを必要とする対象、例えば、ヒト対象に投与され得る。多くの用途では、投与経路は、静脈内注射または注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、または筋肉内注射のうちの１つである。関節内送達を使用することも可能である。非経口投与の他の方法も使用することができる。そのような様式の例としては、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、ならびに硬膜外及び胸骨内注射が挙げられる。いくつかの場合では、投与は経口投与であり得る。
抗体またはその抗原結合フラグメントの投与経路及び／または投与様式はまた、例えば、対象をモニタリングすることによって、例えば、腫瘍を視覚化するために、例えば断層撮像を使用して、個々の症例に合わせて調整され得る。
抗体またはその抗原結合フラグメントは、固定用量として、またはｍｇ／ｋｇ用量で投与され得る。用量はまた、抗ＰＤ－１抗体に対する抗体の産生を低減または回避するように選択され得る。投薬レジメンは、所望の応答、例えば、治療応答または組み合わせ治療効果を提供するために調整される。一般に、抗ＰＤ－１抗体（及び任意選択で第２の薬剤）の用量は、対象に薬剤を生物が利用可能な量で提供するために使用され得る。例えば、０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～２０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１０ｍｇ／ｋｇ、または１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量を投与することができる。他の用量も使用することができる。特定の実施形態では、治療を必要とする対象に、抗ＰＤ－１抗体を、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、または４０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。
組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、または約１０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、または約５０～２５０ｍｇ／ｍＬ、または約１００～１５０ｍｇ／ｍＬ、または約１００～２５０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでよい。
本明細書で使用される投薬単位形態または「固定用量」または「均一用量」は、治療される対象に対する単位投薬量として適した、物理的に別々の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体に関連して、及び任意選択で他の薬剤に関連して、所望の治療効果をもたらすように算出された、既定量の活性化合物を含有する。単回または複数回の投薬が行われてよい。代替的に、または加えて、抗体は、連続注入を介して投与されてもよい。例示的な固定用量は、３７５ｍｇ、５００ｍｇ、及び７５０ｍｇを含む。
抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントの用量は、例えば、少なくとも２回の用量、３回の用量、５回の用量、１０回の用量、またはそれ以上、例えば、１日１回もしくは２回、または１週間に約１～４回、または好ましくは週に１回、隔週（２週間ごと）、３週間ごと、月１回、例えば、約１～１２週間、好ましくは２～８週間、より好ましくは約３～７週間、さらにより好ましくは約４、５、または６週間を包含するのに十分な期間（治療の経過）にわたって周期的な間隔で投与することができる。対象を効果的に治療するために必要とされる投与量及び時期に影響を及ぼし得る因子としては、例えば、疾患または障害の重症度、製剤、送達経路、以前の治療、対象の一般的な健康及び／または年齢、ならびに存在する他の疾患が挙げられる。さらに、治療有効量の化合物を用いた対象の治療は、単一の治療を含むことができ、または好ましくは、一連の治療を含むことができる。
例示的な投薬レジメンは、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントを３７５ｍｇの固定用量で、３週間に１回投与することを含む。別の例示的な投薬レジメンは、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントを５００ｍｇの固定用量で、４週間に１回投与することを含む。さらに別の例示的な投薬レジメンは、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントを７５０ｍｇの固定用量で、４週間に１回投与することを含む。
いくつかの実施形態では、「約」という用語は、値の±１０％を指す。当業者は、本明細書に提示される値が、データ収集または計器のばらつきなどの実験の条件に起因して変化し得ることを理解しているであろう。
化合物１
化合物１（Ｎ－（４－（４－アミノ－７－（１－イソブチリルピペリジン－４－イル）ピロロ［１，２－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）フェニル）－１－イソプロピル－２，４－ジオキソ－３－（ピリジン－２－イル）－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－５－カルボキサミド）は、以下の構造を有する：
化合物１（Ｎ－（４－（４－アミノ－７－（１－イソブチリルピペリジン－４－イル）ピロロ［１，２－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）フェニル）－１－イソプロピル－２，４－ジオキソ－３－（ピリジン－２－イル）－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－５－カルボキサミド）は、以下の構造を有する：
化合物１は、米国特許第９，９８１，９７５号及び米国特許出願公開第２０１９／１１２３１３号に記載されているように合成でき、これらの明細書は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示はまた、本明細書に記載される化合物１の薬学的に許容される塩も含む。
化合物１の結晶性塩の形態は、米国特許出願公開第２０１９／１１２３１３号に記載され、同明細書は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、化合物１及びその塩は、実質的に単離されている。「実質的に単離されている」とは、化合物が形成または検出された環境から、少なくとも部分的に、または実質的に分離されていることを意味する。部分的な分離とは、例えば化合物１が濃縮された組成物を含み得る。実質的な分離とは、化合物１またはその塩を少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、または少なくとも約９９重量％含有する組成物を含むことができる。化合物及びそれらの塩を単離する方法は、当該技術分野において日常的なものである。
化合物１は、様々な固体形態で存在することができる。本明細書で使用される場合、「固体形態」は、例えば、融点、溶解度、安定性、結晶性、吸湿性、水含有量、ＴＧＡ特徴、ＤＳＣ特徴、ＤＶＳ特徴、ＸＲＰＤ特徴などの１つ以上の特性を特徴とする固体を指すことを意味する。固体形態は、例えばアモルファス、結晶性またはそれらの混合物であることができる。
異なる結晶性固体形態は、典型的には、異なる結晶格子（例えば、単位胞）を有し、その結果、通常、異なる物理特性を有する。場合によっては、異なる結晶性固体形態は、異なる水含有量または溶媒含有量を有する。異なる結晶格子は、固体状態特性評価方法によって、例えば、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）によって特定することができる。他の特性評価方法、例えば示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、動的蒸気収着（ＤＶＳ）などは、固体形態の特定をさらに助け、同様に安定性及び溶媒／水含有量の決定を助ける。
ＸＲＰＤの反射（ピーク）パターンは、典型的には特定の結晶形態の指紋とみなされる。ＸＲＰＤピークの相対強度は、特にサンプルの調製技法、結晶サイズの分布、使用される様々なフィルター、サンプルの取り付け手順、及び用いられる特定の計器に応じて広く変化し得ることがよく知られている。いくつかの事例では、計器の種類または設定に応じて、新たなピークが観測され得るか、または既存のピークが消失し得る。本明細書で使用される場合、「ピーク」という用語は、最大ピーク高さ／強度の少なくとも約４％の相対高さ／強度を有する反射を指す。さらに、計器の変動及び他の要因は、２θ値に影響を及ぼし得る。従って、本明細書で報告されるものなどのピーク帰属は、プラスまたはマイナス約０．２°（２θ）で変化し得、「実質的に」という用語は、本明細書でＸＲＰＤの文脈において使用される場合、上述の変化を包含することを意味する。
同様に、ＤＳＣ、ＴＧＡ、または他の熱実験に関する温度読み取りは、計器、特定の設定、サンプル調製などに応じて約±３℃変化し得る。
従って、いくつかの実施形態では、本出願は、Ｎ－（４－（４－アミノ－７－（１－イソブチリルピペリジン－４－イル）ピロロ［１，２－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）フェニル）－１－イソプロピル－２，４－ジオキソ－３－（ピリジン－２－イル）－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－５－カルボキサミドマレイン酸塩（本明細書では、化合物１のマレイン酸塩、化合物１マレイン酸塩、またはそれらの任意のバリエーションとも称される）を提供する。
いくつかの実施形態では、塩は、マレイン酸に対して、Ｎ－（４－（４－アミノ－７－（１－イソブチリルピペリジン－４－イル）ピロロ［１，２－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）フェニル）－１－イソプロピル－２，４－ジオキソ－３－（ピリジン－２－イル）－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－５－カルボキサミドが、１：１の化学量論比である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される化合物１のマレイン酸塩は結晶性である。本明細書で使用される場合、「結晶性」または「結晶形態」という用語は、結晶性物質のある特定の格子構成を指すことを意味する。同じ物質の異なる結晶形態は、一般に異なる結晶格子（例えば、単位格子）を有し、これは、各結晶形態に特有の異なる物理的特性に起因する。場合によっては、異なる格子構成は、異なる水含有量または溶媒含有量を有する。
化合物１の化合物のマレイン酸塩は、米国特許出願公開第２０１９／１１２３１３号に記載されているような、例えば、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型またはＶ型を含む、様々な結晶形態で調製でき、同明細書は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
化合物１マレイン酸塩、Ｉ型
本明細書で提供されるのは、後述の実施例５に記載される、Ｉ型と呼ばれる、化合物１の結晶性形態である。
本明細書で提供されるのは、後述の実施例５に記載される、Ｉ型と呼ばれる、化合物１の結晶性形態である。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩は、２シータで、約４．３°、約８．４°、約１２．６°、約１３．２°、及び約１８．５°から選択される少なくとも１つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩は、２シータで、約４．３°、約８．４°、約１２．６°、約１３．２°、及び約１８．５°から選択される少なくとも２つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩は、２シータで、約４．３°、約８．４°、約１２．６°、約１３．２°、及び約１８．５°から選択される少なくとも３つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩は、２シータで、約４．３°、約８．４°、約１２．６°、約１３．２°、及び約１８．５°から選択される少なくとも４つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩は、２シータで、以下のＸＲＰＤピーク：約４．３°、約８．４°、約１２．６°、約１３．２°、及び約１８．５°を含む。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩は、２シータで、以下のＸＲＰＤピーク：約４．３°、約８．４°、及び約１３．２°を含む。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩は、約２１１℃での吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを有する。
化合物１マレイン酸塩、ＩＩ型
本明細書で提供されるのは、後述の実施例６及び実施例７に記載される、ＩＩ型と呼ばれる、化合物１の結晶性形態である。
本明細書で提供されるのは、後述の実施例６及び実施例７に記載される、ＩＩ型と呼ばれる、化合物１の結晶性形態である。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩ型は、２シータで、約３．８°、約７．８°、約２３．５°、及び約２６．０°から選択される少なくとも１つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩ型は、２シータで、約３．８°、約７．８°、約２３．５°、及び約２６．０°から選択される少なくとも２つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩ型は、２シータで、約３．８°、約７．８°、約２３．５°、及び約２６．０°から選択される少なくとも３つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩ型は、２シータで、以下のＸＲＰＤピーク：約３．８°、約７．８°、約２３．５°、及び約２６．０°を含む。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩ型は、２シータで、以下のＸＲＰＤピーク：約３．８°、約７．８°、及び約２３．５°を含む。
化合物１マレイン酸塩、ＩＩＩ型
本明細書で提供されるのは、後述の実施例６及び実施例８に記載される、ＩＩＩ型と呼ばれる、化合物１の結晶性形態である。
本明細書で提供されるのは、後述の実施例６及び実施例８に記載される、ＩＩＩ型と呼ばれる、化合物１の結晶性形態である。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩＩ型は、２シータで、約３．８°、約７．７°、約１２．１°、約１８．９°、及び約２０．６°から選択される少なくとも１つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩＩ型は、２シータで、約３．８°、約７．７°、約１２．１°、約１８．９°、及び約２０．６°から選択される少なくとも２つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩＩ型は、２シータで、約３．８°、約７．７°、約１２．１°、約１８．９°、及び約２０．６°から選択される少なくとも３つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩＩ型は、２シータで、約３．８°、約７．７°、約１２．１°、約１８．９°、及び約２０．６°から選択される少なくとも４つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩＩ型は、２シータで、以下のＸＲＰＤピーク：３．８°、約７．７°、約１２．１°、約１８．９°、及び約２０．６°を含む。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩＩ型は、２シータで、以下のＸＲＰＤピーク：約３．８°、約７．７°、約１２．１°、及び約１８．９°を含む。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩＩ型は、約１６５．４℃及び約１９５．４℃での吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを有する。いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩＩ型は、約１６５．４℃での吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを有する。いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＩＩ型は、約１９５．４℃での吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを有する。
化合物１マレイン酸塩、ＩＶ型
本明細書で提供されるのは、後述の実施例６及び実施例９に記載される、ＩＶ型と呼ばれる、化合物１の結晶性形態である。
本明細書で提供されるのは、後述の実施例６及び実施例９に記載される、ＩＶ型と呼ばれる、化合物１の結晶性形態である。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＶ型は、２シータで、約３．９°、約４．６°、約７．８°、約９．１°、及び約２２．８°から選択される少なくとも１つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＶ型は、２シータで、約３．９°、約４．６°、約７．８°、約９．１°、及び約２２．８°から選択される少なくとも２つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＶ型は、２シータで、約３．９°、約４．６°、約７．８°、約９．１°、及び約２２．８°から選択される少なくとも３つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＶ型は、２シータで、約３．９°、約４．６°、約７．８°、約９．１°、及び約２２．８°から選択される少なくとも４つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＶ型は、２シータで、以下のＸＲＰＤピーク：約３．９°、約４．６°、約７．８°、約９．１°、及び約２２．８°を含む。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＶ型は、２シータで、以下のＸＲＰＤピーク：約３．９°、約４．６°、約７．８°、及び約９．１°を含む。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＶ型は、約１５２．１℃及び約２０２．６℃での吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを有する。いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＶ型は、約１５２．１℃での吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを有する。いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＩＶ型は、約２０２．６℃での吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを有する。
化合物１マレイン酸塩、Ｖ型
本明細書で提供されるのは、後述の実施例６及び実施例１０に記載される、Ｖ型と呼ばれる、化合物１の結晶性形態である。
本明細書で提供されるのは、後述の実施例６及び実施例１０に記載される、Ｖ型と呼ばれる、化合物１の結晶性形態である。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＶ型は、２シータで、約４．１°、約８．３°、約８．８°、約１８．０°、及び約２７．３°から選択される少なくとも１つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＶ型は、２シータで、約４．１°、約８．３°、約８．８°、約１８．０°、及び約２７．３°から選択される少なくとも２つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＶ型は、２シータで、約４．１°、約８．３°、約８．８°、約１８．０°、及び約２７．３°から選択される少なくとも３つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＶ型は、２シータで、約４．１°、約８．３°、約８．８°、約１８．０°、及び約２７．３°から選択される少なくとも４つのＸＲＰＤピークを有する。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＶ型は、２シータで、以下のＸＲＰＤピーク：約４．１°、約８．３°、約８．８°、約１８．０°、及び約２７．３°を含む。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＶ型は、２シータで、以下のＸＲＰＤピーク：約４．１°、約８．３°、約８．８°、及び約２７．３°を含む。
いくつかの実施形態では、化合物１のマレイン酸塩のＶ型は、約２００．１℃での吸熱ピークを有するＤＳＣサーモグラムを有する。
抗体及び抗体の薬学的組成物の調製
特定の実施形態では、ヒトＰＤ－１に結合する抗体は、ヒト重鎖及び軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、ＣＨ１ドメイン及びヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、ＣＨ３ドメインを含む。重鎖定常領域が置換を含む場合、そのような置換は抗体の特性を改変する（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうち１つ以上の増大または低減）。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択される。
特定の実施形態では、ヒトＰＤ－１に結合する抗体は、ヒト重鎖及び軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、ＣＨ１ドメイン及びヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、ＣＨ３ドメインを含む。重鎖定常領域が置換を含む場合、そのような置換は抗体の特性を改変する（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうち１つ以上の増大または低減）。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択される。
レチファンリマブなどの抗体は、例えば、列挙されたアミノ酸配列をコードする合成遺伝子を調製及び発現することによって、またはヒト生殖細胞系列遺伝子を変異させて、列挙されたアミノ酸配列をコードする遺伝子を提供することによって作製され得る。さらに、ヒトＰＤ－１に結合するこの抗体及び他の抗体は、例えば、以下の方法のうちの１つ以上を使用して得ることができる。
ヒト化抗体は、抗原結合に直接関与していないＦｖ可変領域の配列を、ヒトＦｖ可変領域由来の同等の配列で置き換えることによって生成され得る。ヒト化抗体を生成するための一般的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：１２０２－１２０７（１９８５）、Ｏｉ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，４：２１４（１９８６）、ならびにＵＳ５，５８５，０８９、ＵＳ５，６９３，７６１、ＵＳ５，６９３，７６２、ＵＳ５，８５９，２０５、及びＵＳ６，４０７，２１３によって提供される。これらの方法は、重鎖または軽鎖のうちの少なくとも１つから免疫グロブリンＦｖ可変領域の全てまたは一部をコードする核酸配列を単離、操作、及び発現することを含む。かかる核酸の供給源は、当業者に周知であり、例えば、上述のように、所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子から、または合成構築物から得ることができる。次いで、ヒト化抗体をコードする組換えＤＮＡを、適切な発現ベクターにクローニングすることができる。
例えば、ヒト生殖系列配列は、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：７７６－７９８（１９９２）；Ｃｏｏｋ，Ｇ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１６：２３７－２４２（１９９５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２２７：７９９－８１７（１９９２）；及びＴｏｍｌｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１４：４６２８－４６３８（１９９５）に開示されている。Ｖ ＢＡＳＥディレクトリは、ヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的なディレクトリを提供する（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ ａｌ．、ＭＲＣ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫにより編集）。これらの配列は、例えば、フレームワーク領域及びＣＤＲのためのヒト配列のソースとして使用され得る。コンセンサスヒトフレームワーク領域もまた、例えば、米国特許第６，３００，０６４号に記載されているように、使用され得る。
抗体をヒト化するための他の方法もまた、使用され得る。例えば、他の方法は、抗体の三次元構造、結合決定基に三次元的に近接するフレームワーク位置、及び免疫原性ペプチド配列を説明することができる。例えば、ＷＯ９０／０７８６１、米国特許第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第６，４０７，２１３号、Ｔｅｍｐｅｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６－２７１を参照されたい。さらに別の方法は、「ヒューマニアリング（ｈｕｍａｎｅｅｒｉｎｇ）」と称され、例えば、ＵＳ２００５－００８６２５に記載されている。
抗体は、ヒトＦｃ領域、例えば、野生型Ｆｃ領域または１つ以上の改変を含むＦｃ領域を含むことができる。一実施形態では、定常領域は、抗体の特性を変更するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうち１つ以上の増大または低減）、改変、例えば変異される。例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域は、１つ以上の残基、例えば、残基２３４及び２３７のうちの１つ以上で変異され得る（Ｋａｂａｔ番号付けに基づく）。抗体は、エフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体結合及び補体活性化を低減または改変させる、重鎖のＣＨ２領域における変異を有し得る。例えば、抗体は、米国特許第５，６２４，８２１号及び同第５，６４８，２６０号に記載されるような変異を有し得る。抗体はまた、当該技術分野に開示されるように、ＩｇＧ４のヒンジ領域における変異（例えば、Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５－０８）などのように、免疫グロブリンの２つの重鎖間のジスルフィド結合を安定化する変異を有してもよい。例えば、Ｕ．Ｓ．２００５－００３７０００も参照されたい。
ヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、完全長抗体の形態であり得るか、またはヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体の低分子量形態（例えば、生物学的に活性な抗体フラグメントまたはミニボディ）の形態、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、ｓｃＦｖ、及びｓｃ（Ｆｖ）２であり得る。本開示に包含される他の抗体としては、ＶＨもしくはＶＬなどの単一の可変鎖、またはその生物学的に活性なフラグメントを含有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）が挙げられる。例えば、Ｍｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８５（４９）：３８３４８－３８３６１（２０１０）；Ｈａｒｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，７７（１）：１３－２２（２００７）；Ｕ．Ｓ．２００５／００７９５７４及びＤａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，９（６）：５３１－７を参照されたい。全抗体と同様に、ｓｄＡｂは、特定の抗原に選択的に結合することができる。わずか１２～１５ｋＤａの分子量を有するｓｄＡｂは、一般的な抗体よりもはるかに小さく、Ｆａｂフラグメント及び一本鎖可変フラグメントよりもさらに小さい。
本明細書では、ヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメント、及び１つ以上のその酸性変異体の混合物を含む組成物が提供され、例えば、酸性変異体（複数可）の量は、約８０％、７０％、６０％、６０％、５０％、４０％、３０％、３０％、２０％、１０％、５％、または１％未満である。少なくとも１つの脱アミド化部位を含む、ヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む組成物も提供され、組成物のｐＨは、例えば、少なくとも約９０％の抗体が脱アミド化されない（すなわち、約１０％未満の抗体が脱アミド化される）ように、約５．０～約６．５である。特定の実施形態では、抗体の約５％、３％、２％または１％未満が脱アミド化される。ｐＨは、５．０～６．０、例えば５．５または６．０であってよい。特定の実施形態では、組成物のｐＨは、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５である。
「酸性変異体」は、目的のポリペプチドよりも酸性である（例えば、カチオン交換クロマトグラフィーによって決定される）、目的のポリペプチドの変異体である。酸性変異体の例は、脱アミド化変異体である。
ポリペプチド分子の「脱アミド化」変異体は、元のポリペプチドの１つ以上のアスパラギン残基（複数可）がアスパラギン酸に変換された、すなわち、中性アミド側鎖が、全体的な酸性特性を有する残基に変換されたポリペプチドである。
本明細書で使用される「混合物」という用語は、ヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物に関し、ヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する所望の抗体、またはその抗原結合フラグメント、及びその１つ以上の酸性変異体の両方の存在を意味する。酸性変異体は、少量の他の酸性変異体（複数可）と共に、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１と結合する脱アミド抗体を主として含み得る。
特定の実施形態では、脱アミド化を排除するために変異させた抗体の結合親和性（ＫＤ）、オンレート（ＫＤオン）及び／またはオフレート（ＫＤオフ）は、野生型抗体のものと類似し、例えば、約５倍、２倍、１倍（１００％）、５０％、３０％、２０％、１０％、５％、３％、２％または１％未満の差を有する。
抗体フラグメント
抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、及びＦｖ）は、インタクトな抗体のタンパク質分解によって調製され得る。例えば、抗体フラグメントは、全抗体を、パパイン、ペプシン、またはプラスミンなどの酵素で処理することによって得ることができる。全抗体のパパイン消化は、Ｆ（ａｂ）２またはＦａｂフラグメントを産生し、全抗体のペプシン消化は、Ｆ（ａｂ’）２またはＦａｂ’を産生し、全抗体のプラスミン消化は、Ｆａｃｂフラグメントを産生する。
抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、及びＦｖ）は、インタクトな抗体のタンパク質分解によって調製され得る。例えば、抗体フラグメントは、全抗体を、パパイン、ペプシン、またはプラスミンなどの酵素で処理することによって得ることができる。全抗体のパパイン消化は、Ｆ（ａｂ）２またはＦａｂフラグメントを産生し、全抗体のペプシン消化は、Ｆ（ａｂ’）２またはＦａｂ’を産生し、全抗体のプラスミン消化は、Ｆａｃｂフラグメントを産生する。
代替的に、抗体フラグメントは、組換えで産生され得る。例えば、目的の抗体フラグメントをコードする核酸を構築し、発現ベクターに導入し、好適な宿主細胞で発現させることができる。例えば、Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：２９６８－２９７６（１９９４）、Ｂｅｔｔｅｒ，Ｍ．ａｎｄ Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ａ．Ｈ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１７８：４７６－４９６（１９８９）、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ａ．ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，Ａ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１７８：４７６－４９６（１９８９）、Ｌａｍｏｙｉ，Ｅ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：６５２－６６３（１９８９）、Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，（１９８９）１２１：６６３－６６９（１９８９）、及びＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，ＴＩＢＴＥＣＨ，９：１３２－１３７（１９９１）を参照されたい）。抗体フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現されて、それから分泌され得るため、これらのフラグメントを容易に大量に産生することができる。抗体フラグメントは、抗体ファージライブラリから単離することができる。代替的に、Ｆａｂ’－ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収されてもよく、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ）２フラグメントを形成してもよい（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２））。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントについては、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。
ミニボディ
ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体のミニボディには、ダイアボディ、一本鎖（ｓｃＦｖ）、及び一本鎖（Ｆｖ）２（ｓｃ（Ｆｖ）２）が含まれる。
ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体のミニボディには、ダイアボディ、一本鎖（ｓｃＦｖ）、及び一本鎖（Ｆｖ）２（ｓｃ（Ｆｖ）２）が含まれる。
「ダイアボディ」は、遺伝子融合によって構築される二価のミニボディである（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９０：６４４４－６４４８（１９９３）、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１を参照されたい）。ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖からなる二量体である。ダイアボディの各ポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインは、リンカーによって結合される。リンカーを構成するアミノ酸残基の数は、２～１２つの残基（例えば、３～１０つの残基、または５つもしくは約５つの残基）であり得る。ダイアボディ中のポリペプチドのリンカーは、典型的には、ＶＬとＶＨとが互いに結合することを可能にするには短すぎる。従って、同じポリペプチド鎖にコードされるＶＬ及びＶＨは、一本鎖可変領域フラグメントを形成することはできないが、代わりに、異なる一本鎖可変領域フラグメントを有する二量体を形成する。その結果、ダイアボディは２つの抗原結合部位を有する。
ｓｃＦｖは、ＶＨ及びＶＬをリンカーで連結することによって得られる一本鎖ポリペプチド抗体である（例えば、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５：５８７９－５８８３（１９８８）、及びＰｌｉｃｋｔｈｕｎ，“Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”Ｖｏｌ．１１３，Ｅｄ Ｒｅｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５，（１９９４）を参照されたい）。連結されるＶＨ及びＶＬの順序は特に限定されず、任意の順序で配置され得る。配置の例としては、［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］、または［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］が挙げられる。ＳｃＦｖにおけるＨ鎖Ｖ領域及びＬ鎖Ｖ領域は、本明細書に記載のヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１と結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントに由来し得る。
ｓｃ（Ｆｖ）２は、２つのＶＨ及び２つのＶＬがリンカーによって連結されて、一本鎖を形成するミニボディである（Ｈｕｄｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，（１９９９）２３１：１７７－１８９（１９９９））。ｓｃ（Ｆｖ）２は、例えば、ｓｃＦｖをリンカーで接続することによって調製することができる。本開示のｓｃ（Ｆｖ）２は、好ましくは、２つのＶＨ及び２つのＶＬが、一本鎖ポリペプチドのＮ末端から始めて、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ、及びＶＬ（［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］）の順に配置されているが、ただし、２つのＶＨ及び２つのＶＬの順序は、上記の配置に限定されず、それらは任意の順序で配置され得る。
二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、ＰＤ－１タンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のそのような抗体は、ＰＤ－１結合部位を、別のタンパク質の結合部位と組み合わせ得る。二重特異性抗体は、全長抗体またはその低分子量形態（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体、ｓｃ（Ｆｖ）２二重特異性抗体、ダイアボディ二重特異性抗体）として調製することができる。
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、ＰＤ－１タンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のそのような抗体は、ＰＤ－１結合部位を、別のタンパク質の結合部位と組み合わせ得る。二重特異性抗体は、全長抗体またはその低分子量形態（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体、ｓｃ（Ｆｖ）２二重特異性抗体、ダイアボディ二重特異性抗体）として調製することができる。
全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の共発現に基づき、これらの２つの鎖は、異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７－５３９（１９８３））。異なるアプローチによると、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。免疫グロブリン重鎖融合体、また所望の場合は免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが、別個の発現ベクターに挿入され、好適な宿主細胞に共トランスフェクトされる。これは、３つのポリペプチドフラグメントの比率を調整する際のより大きな柔軟性を提供する。しかしながら、均等な比率での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現により高収率がもたらされる場合、２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
米国特許第５，７３１，１６８号に記載される別のアプローチに従って、一対の抗体分子間の界面を操作して、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の割合を最大化することができる。好ましい界面は、ＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面由来の１つ以上の小さいアミノ酸側鎖が、より大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えられる。大きいアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはトレオニン）で置き換えることによって、大きい側鎖（複数可）と同一または同様のサイズの補償「空洞」が第２の抗体分子の界面上に作製される。これにより、ホモ二量体などの他の望ましくない最終産物よりもヘテロ二量体の収率を増加させるための機序が提供される。
二重特異性抗体としては、架橋または「ヘテロコンジュゲート」抗体が挙げられる。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体のうちの一方がアビジンにカップリングし得、他方がビオチンにカップリングし得る。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋方法を使用して作製され得る。
「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体フラグメントの作製のための代替機序を提供している。これらのフラグメントは、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによってＶＬに接続されたＶＨを含む。従って、１つのフラグメントのＶＨ及びＶＬドメインが別のフラグメントの相補的ＶＬ及びＶＨドメインと対合させられ、それにより２つの抗原結合部位が形成される。
多価抗体
多価抗体は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速く内部移行（及び／または異化）され得る。本明細書に提供される抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（例えば、四価抗体）であってもよく、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生され得る。多価抗体は、二量体化ドメイン、及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。例示的な二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。多価抗体は、３～約８つ（例えば、４つ）の抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）ことができる。多価抗体は、任意選択で少なくとも１つのポリペプチド鎖（例えば、少なくとも２つのポリペプチド鎖）を含み、このポリペプチド鎖（複数可）は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）ｎ－Ｆｃを含み得、ここで、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域のポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸またはペプチドスペーサーを表し、ｎは０または１である。
多価抗体は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速く内部移行（及び／または異化）され得る。本明細書に提供される抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（例えば、四価抗体）であってもよく、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生され得る。多価抗体は、二量体化ドメイン、及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。例示的な二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。多価抗体は、３～約８つ（例えば、４つ）の抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）ことができる。多価抗体は、任意選択で少なくとも１つのポリペプチド鎖（例えば、少なくとも２つのポリペプチド鎖）を含み、このポリペプチド鎖（複数可）は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）ｎ－Ｆｃを含み得、ここで、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域のポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸またはペプチドスペーサーを表し、ｎは０または１である。
コンジュゲート抗体
本明細書に開示される抗体は、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧで修飾されたポリエチレンイミン（ＰＥＩ）（ＰＥＩ－ＰＥＧ）、ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）（Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）コポリマー）、ヒアルロン酸、放射性物質（例えば、９０Ｙ、１３１Ｉ）蛍光物質、発光物質、ハプテン、酵素、金属キレート、薬物、及び毒素（例えば、カルケアマイシン、シュードモナス外毒素Ａ、リシン（例えば、デグリコシル化リシンＡ鎖）））などの巨大分子物質を含む様々な分子に結合されるコンジュゲート抗体であってもよい。
本明細書に開示される抗体は、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧで修飾されたポリエチレンイミン（ＰＥＩ）（ＰＥＩ－ＰＥＧ）、ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）（Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）コポリマー）、ヒアルロン酸、放射性物質（例えば、９０Ｙ、１３１Ｉ）蛍光物質、発光物質、ハプテン、酵素、金属キレート、薬物、及び毒素（例えば、カルケアマイシン、シュードモナス外毒素Ａ、リシン（例えば、デグリコシル化リシンＡ鎖）））などの巨大分子物質を含む様々な分子に結合されるコンジュゲート抗体であってもよい。
一実施形態では、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体の細胞傷害作用を改善し、その結果、それらの治療効果を改善するために、抗体は、放射性同位体及び細胞傷害剤を含む強毒性物質とコンジュゲートされる。これらのコンジュゲートは、標的部位（すなわち、抗体によって認識される抗原を発現する細胞）に選択的に毒性負荷を送達することができ、一方で、抗体によって認識されない細胞は、免除される。毒性を最小限に抑えるために、コンジュゲートは、一般に、血清半減期が短い分子（従って、マウス配列、及びＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの使用）に基づいて操作される。
特定の実施形態では、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、例えば、血液、血清、もしくは他の組織中で、例えば、少なくとも１．５、２、５、１０、または５０倍、循環におけるその安定化及び／または保持を改善する部分構造で修飾される。例えば、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ポリマー、例えば、ポリアルキレンオキシドまたはポリエチレンオキシドなどの実質的に非抗原性ポリマーと会合する（例えば、コンジュゲートする）ことができる。好適なポリマーは、重量によって実質的に変化する。約２００～約３５，０００ダルトン（または約１，０００～約１５，０００、及び２，０００～約１２，５００）の範囲の分子数平均重量を有するポリマーを使用することができる。例えば、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、水溶性ポリマー、例えば、親水性ポリビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンにコンジュゲートされ得る。かかるポリマーの例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールなどのポリアルキレンオキシドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、これらのコポリマー及びこれらのブロックコポリマーが挙げられるが、ブロックコポリマーの水溶性が維持されることを条件とする。さらなる有用なポリマーとしては、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレンなどのポリオキシアルキレン、ならびにポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレンのブロックコポリマー、ポリメタクリレート、カルボマー、ならびに分枝または非分枝の多糖類が挙げられる。
上述のコンジュゲート抗体は、本明細書に記載の抗体またはその低分子量形態に対して化学修飾を行うことによって調製することができる。抗体を修飾するための方法は、当該技術分野で周知である（例えば、ＵＳ５０５７３１３及びＵＳ５１５６８４０）。
抗体の産生方法
抗体は、細菌または真核細胞において産生され得る。いくつかの抗体、例えば、Ｆａｂ’は、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞において産生され得る。抗体はまた、形質転換細胞株（例えば、ＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ）などの真核細胞において産生され得る。加えて、抗体（例えば、ｓｃＦｖ’）は、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３－３５（２００１））、Ｈａｎｓｅｕｌａ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓなどの酵母細胞内で発現され得る。目的の抗体を産生するために、抗体をコードするポリヌクレオチドを構築し、発現ベクターに導入し、次いで、好適な宿主細胞に発現させる。標準的な分子生物学的技術を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を回収する。
抗体は、細菌または真核細胞において産生され得る。いくつかの抗体、例えば、Ｆａｂ’は、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞において産生され得る。抗体はまた、形質転換細胞株（例えば、ＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ）などの真核細胞において産生され得る。加えて、抗体（例えば、ｓｃＦｖ’）は、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３－３５（２００１））、Ｈａｎｓｅｕｌａ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓなどの酵母細胞内で発現され得る。目的の抗体を産生するために、抗体をコードするポリヌクレオチドを構築し、発現ベクターに導入し、次いで、好適な宿主細胞に発現させる。標準的な分子生物学的技術を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を回収する。
抗体が細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現される場合、発現ベクターは、細菌細胞内のベクターの増幅を可能にする特徴を有するべきである。さらに、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、またはＸＬ１－ＢｌｕｅなどのＥ．ｃｏｌｉを宿主として使用する場合、ベクターは、プロモーター、例えば、ｌａｃＺプロモーター（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，３４１：５４４－５４６（１９８９）、ａｒａＢプロモーター（Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１－１０４３（１９８８））、またはＴ７プロモーターなどのＥ．ｃｏｌｉにおいて効率的な発現を可能にすることができるプロモーターを有さなければならない。そのようなベクターの例としては、例えば、Ｍ１３シリーズベクター、ｐＵＣシリーズベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ－Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ－５Ｘ－１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ ｓｙｓｔｅｍ」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、及びｐＥＴ（この発現ベクターが使用される場合、宿主は好ましくはＴ７ ＲＮＡポリメラーゼを発現するＢＬ２１である）が挙げられる。発現ベクターは、抗体分泌のためのシグナル配列を含有し得る。Ｅ．ｃｏｌｉの周辺質への産生のために、ｐｅｌＢシグナル配列（Ｌｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６９：４３７９（１９８７））を、抗体分泌のシグナル配列として使用してもよい。細菌の発現については、塩化カルシウム法またはエレクトロポレーション法を使用して、発現ベクターを細菌細胞に導入してもよい。
抗体が、ＣＨＯ、ＣＯＳ、及びＮＩＨ３Ｔ３細胞などの動物細胞において発現される場合、発現ベクターは、これらの細胞において発現するのに必要なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７７：１０８（１９７９））、ＭＭＬＶ－ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１８：５３２２（１９９０））、またはＣＭＶプロモーターを含む。免疫グロブリンまたはそのドメインをコードする核酸配列に加えて、追加の配列、例えば、宿主細胞内でのベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び選択マーカー遺伝子を、組換え発現ベクターに保有させることができる。選択マーカー遺伝子は、ベクターを導入した宿主細胞の選択を促進することができる（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、及び同第５，１７９，０１７号を参照されたい）。例えば、通常、選択マーカー遺伝子は、ベクターを導入した宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、メトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。選択マーカーを有するベクターの例としては、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ－ＲＳＶ、ｐＢＫ－ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶ、及びｐＯＰ１３が挙げられる。
一実施形態では、抗体は、哺乳動物細胞で産生される。抗体を発現するための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０に記載されるｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含み、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１－６２１に記載されるように、ＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用される）、ヒト胚性腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、ならびにトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物に由来する細胞が挙げられる。
抗体発現のための例示的な系では、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１抗体と結合する抗体の抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクションによって、ｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞内に導入する。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子はそれぞれ、エンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントまたはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントなどのＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来する）に作用可能に連結され、遺伝子の高レベルの転写を駆動する。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を使用してベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を保有する。選択された形質転換宿主細胞は、抗体重鎖及び軽鎖の発現を可能にするように培養され、抗体は、培養培地から回収される。
抗体は、遺伝子改変動物によっても産生される。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号は、トランスジェニック哺乳動物の乳腺において抗体を発現させる方法を記載している。乳汁特異的プロモーターと、目的の抗体及び分泌のためのシグナル配列をコードする核酸とを含む導入遺伝子が構築される。そのようなトランスジェニック哺乳動物の雌によって産生される乳は、その中に分泌される、目的の抗体を含む。抗体は、乳から精製することができるか、またはいくつかの用途のために直接使用されることができる。本明細書に記載される核酸のうちの１つ以上を含む動物も提供される。
本開示の抗体は、宿主細胞の内部または外部（培地など）から単離され、実質的に純粋で均質な抗体として精製され得る。抗体精製のために一般的に使用される単離及び精製方法は、抗体の単離及び精製のために使用されてもよく、任意の特定の方法に限定されない。抗体は、例えば、カラムクロマトグラフィー、濾過、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈殿、ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電気集束、透析、及び再結晶化を適切に選択及び組み合わせることによって単離及び精製され得る。クロマトグラフィーとしては、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、及び吸着クロマトグラフィーが挙げられる（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ．Ｅｄ Ｄａｎｉｅｌ Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９６）。クロマトグラフィーは、ＨＰＬＣ及びＦＰＬＣなどの液相クロマトグラフィーを使用して実施され得る。アフィニティークロマトグラフィーに使用されるカラムとしては、プロテインＡカラム及びプロテインＧカラムが挙げられる。プロテインＡカラムを使用するカラムの例としては、Ｈｙｐｅｒ Ｄ、ＰＯＲＯＳ、及びＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられる。本開示はまた、これらの精製方法を使用して高度に精製される抗体も含む。
グリコシル化を改変した抗体
異なる糖形態は、薬物動態、薬力学、受容体相互作用、及び組織特異的標的化を含む、治療薬の特性に深く影響を及ぼし得る（Ｇｒａｄｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：２８５－２９７）。特に、抗体について、オリゴ糖構造は、抗体のエフェクター機能（例えば、ＣＤＣを誘導する補体複合体Ｃ１への結合、及びＡＤＣＣ経路の調節を担うＦｃγＲ受容体への結合）に加えて、プロテアーゼ耐性、ＦｃＲｎ受容体によって媒介される抗体の血清半減期、食作用、及び抗体フィードバックに関連する特性に影響を及ぼし得る（Ｎｏｓｅ ａｎｄ Ｗｉｇｚｅｌｌ，１９８３、Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗ ａｎｄ Ｄｗｅｋ，１９８３、Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８５、Ｗａｌｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＰＮＡＳ，８９：４２８５－４２８９）。
異なる糖形態は、薬物動態、薬力学、受容体相互作用、及び組織特異的標的化を含む、治療薬の特性に深く影響を及ぼし得る（Ｇｒａｄｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：２８５－２９７）。特に、抗体について、オリゴ糖構造は、抗体のエフェクター機能（例えば、ＣＤＣを誘導する補体複合体Ｃ１への結合、及びＡＤＣＣ経路の調節を担うＦｃγＲ受容体への結合）に加えて、プロテアーゼ耐性、ＦｃＲｎ受容体によって媒介される抗体の血清半減期、食作用、及び抗体フィードバックに関連する特性に影響を及ぼし得る（Ｎｏｓｅ ａｎｄ Ｗｉｇｚｅｌｌ，１９８３、Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗ ａｎｄ Ｄｗｅｋ，１９８３、Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８５、Ｗａｌｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＰＮＡＳ，８９：４２８５－４２８９）。
従って、抗体のエフェクター機能を調節する別の手段は、抗体定常領域のグリコシル化を改変することを含む。改変したグリコシル化には、例えば、グリコシル化残基の数の減少または増加、グリコシル化残基のパターンまたは位置の変化、及び糖構造（複数可）の変化が含まれる。ヒトＩｇＧに見出されるオリゴ糖は、それらのエフェクター機能の程度に影響を及ぼし（Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｐｒｉｌ ２００３．４４－５３）、ヒトＩｇＧオリゴ糖の微小不均一性は、ＣＤＣ及びＡＤＣＣなどの生物学的機能、様々なＦｃ受容体への結合、ならびにＣｌｑタンパク質への結合に影響を及ぼし得る（Ｗｒｉｇｈｔ Ａ． ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ． ＴＩＢＴＥＣＨ １９９７，１５ ２６－３２、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１ ２７６（９）：６５９１－６０４、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００２，２７７（３０）：２６７３３－４０、Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００３ ２７８（５）：３４６６－７３、Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９ Ｆｅｂ，１７（２）：１７６－８０）。例えば、Ｃ１ｑに結合し、補体カスケードを活性化するＩｇＧの能力は、（通常Ａｓｎ２９７に固定されている）２つのＣＨ２ドメインの間に位置付けられた炭水化物部分の存在、非存在、または修飾に依存し得る（Ｗａｒｄ ａｎｄ Ｇｈｅｔｉｅ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２：７７－９４（１９９５）。
Ｆｃ含有ポリペプチド内、例えば、ＩｇＧ抗体などの抗体内のグリコシル化部位は、標準的な技術によって特定され得る。グリコシル化部位の特定は、実験的または配列解析またはモデリングデータに基づいていてもよい。コンセンサスモチーフ、すなわち、種々のグリコシルトランスフェラーゼによって認識されるアミノ酸配列が説明されている。例えば、Ｎ結合グリコシル化モチーフのコンセンサスモチーフは、高頻度でＮＸＴまたはＮＸＳであり、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸であり得る。潜在的なグリコシル化モチーフを見つけるためのいくつかのアルゴリズムも説明されている。従って、抗体またはＦｃ含有フラグメント内の潜在的なグリコシル化部位を特定するために、例えば、Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓによって提供されるウェブサイトなどの公開されているデータベースを使用して、抗体の配列を調べる（Ｎ結合グリコシル化部位を予測するためのＮｅｔＮＧｌｙｃサービス及びＯ結合グリコシル化部位を予測するためのＮｅｔＯＧｌｙｃサービスを参照されたい）。
インビボ研究で、アグリコシル抗体のエフェクター機能の低減が確認されている。例えば、アグリコシル抗ＣＤ８抗体は、マウスにおけるＣＤ８保有細胞を枯渇させることができず（Ｉｓａａｃｓ，１９９２ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：３０６２）、アグリコシル抗ＣＤ３抗体は、マウスまたはヒトにおいてサイトカイン放出症候群を誘導しない（Ｂｏｙｄ，１９９５（上記）、Ｆｒｉｅｎｄ，１９９９ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８：１６３２）。ＰＤ－１抗体のアグリコシル化形態も、低減されたエフェクター機能を有する。
重要なことに、ＣＨ２ドメイン内のグリカンの除去は、エフェクター機能に大きな影響を及ぼすように見えるが、抗体の他の機能的特性及び物理的特性は、変化しないままである。具体的には、グリカンの除去は、血清半減期及び抗原への結合にほとんどまたは全く影響を及ぼさなかったことが示されている（Ｎｏｓｅ，１９８３（上記）、Ｔａｏ，１９８９（上記）、Ｄｏｒａｉ，１９９１（上記）、Ｈａｎｄ，１９９２（上記）、Ｈｏｂｂｓ，１９９２、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：９４９）。
本開示のヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、（第２のＰＤ－１特異的抗体と比較して）エフェクター機能（複数可）の増加または低下を誘発するように修飾または改変され得る。抗体のグリコシル化部位を改変するための方法は、例えば、ＵＳ６，３５０，８６１及びＵＳ５，７１４，３５０、ＷＯ０５／１８５７２及びＷＯ０５／０３１７５に記載されており、これらの方法を使用して、グリコシル化が改変された、低減された、またはグリコシル化を含まない、本開示の抗体を産生することができる。
使用方法
本明細書に記載の方法は、がんの治療を伴う。がんの例としては、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、小腸の癌、結腸癌、直腸癌、肛門の癌、子宮内膜癌、胃癌、頭頸部癌（例えば、喉頭、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭、唇、及び口の癌）、腎臓癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌、胆管細胞癌）、肺癌（例えば、腺癌、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌、小細胞性及び非小細胞性癌、気管支癌、気管支腺腫、胸膜肺芽細胞腫）、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、子宮癌、食道癌、胆嚢癌、膵臓癌（例えば、外分泌性膵臓癌）、胃癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌、カポジ肉腫、メルケル細胞皮膚癌）、ならびに脳腫瘍（例えば、星状細胞腫、髄芽細胞腫、上衣腫、神経外分泌腫瘍、松果体腫瘍）が挙げられる。
本明細書に記載の方法は、がんの治療を伴う。がんの例としては、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、小腸の癌、結腸癌、直腸癌、肛門の癌、子宮内膜癌、胃癌、頭頸部癌（例えば、喉頭、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭、唇、及び口の癌）、腎臓癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌、胆管細胞癌）、肺癌（例えば、腺癌、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌、小細胞性及び非小細胞性癌、気管支癌、気管支腺腫、胸膜肺芽細胞腫）、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、子宮癌、食道癌、胆嚢癌、膵臓癌（例えば、外分泌性膵臓癌）、胃癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌、カポジ肉腫、メルケル細胞皮膚癌）、ならびに脳腫瘍（例えば、星状細胞腫、髄芽細胞腫、上衣腫、神経外分泌腫瘍、松果体腫瘍）が挙げられる。
本開示の治療方法で治療可能な他のがんとしては、骨癌、眼内癌、婦人科系癌、内分泌系の癌、副腎の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、下垂体癌、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、及びアスベストによって誘発されるものを含む環境誘発癌が挙げられる。
さらなるがんの例としては、造血器悪性腫瘍、例えば、白血病またはリンパ腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫、骨髄増殖性腫瘍（例えば、真性多血症、本態性血小板血症、及び原発性骨髄線維症）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、有毛細胞リンパ腫、慢性骨髄性リンパ腫、急性リンパ芽球性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びバーキットリンパ腫が挙げられる。
本開示の治療方法で治療可能な他のがんとしては、眼の腫瘍、膠芽腫、黒色腫、横紋肉腫、リンパ肉腫、及び骨肉腫が挙げられる。
本開示の方法は、転移がん、特にＰＤ－Ｌ１を発現する転移がんの治療にも有用である。
いくつかの実施形態では、本開示の方法を使用して治療可能な疾患及び適応症としては、血液癌、頭頸部癌、肉腫、肺癌、胃腸癌、尿生殖路癌、肝臓癌、骨癌、神経系癌、婦人科癌、及び皮膚癌が挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な血液癌としては、リンパ腫及び白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、非ホジキンリンパ腫（再発性または難治性ＮＨＬを含む）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性疾患（例えば、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、真性多血症（ＰＶ）、本態性血小板増加症（ＥＴ））、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、多発性骨髄腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、有毛細胞リンパ腫、慢性骨髄性リンパ腫、及びバーキットリンパ腫が挙げられる。
例示的な肉腫としては、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、血管肉腫、線維肉腫、脂肪肉腫、粘液腫、横紋筋腫、横紋肉腫、線維腫、脂肪腫、過誤腫、及び奇形腫が挙げられる。
例示的な肺癌としては、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、気管支原性癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（気管支）癌、気管支腺腫、軟骨性過誤腫、及び中皮腫が挙げられる。
例示的な胃腸癌としては、食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（管腺癌、膵島細胞腫、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、カルチノイド腫瘍、ＶＩＰ産生腫瘍）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）の癌、直腸結腸癌、及び胆管癌が挙げられる。
例示的な泌尿生殖路癌としては、腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、腎細胞癌）、膀胱癌及び尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌、尿路上皮癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、ならびに精巣（精上皮腫、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）の癌が挙げられる。
例示的な肝臓癌としては、肝腫（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、及び血管腫が挙げられる。
例示的な骨癌としては、例えば、骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨腫）、良性軟骨腫瘍、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫、及び巨細胞腫瘍が挙げられる。
例示的な神経系癌としては、頭蓋骨（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫（松果体腫）、膠芽腫、多形性膠芽腫、乏突起膠腫、神経鞘腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、及び脊髄（神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）の癌、ならびに神経芽細胞腫、レルミット・デュクロ病、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、ＣＮＳ原発リンパ腫、及び脊椎軸腫瘍が挙げられる。
例示的な婦人科系癌としては、子宮（子宮内膜癌）、頸部（子宮頸癌、前腫瘍子宮頸部異形成）、卵巣（卵巣癌（漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、分類不能癌）、顆粒膜－莢膜細胞腫瘍、セルトリ・ライディッヒ細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫））、及び卵管（癌腫）の癌が挙げられる。
例示的な皮膚癌としては、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、メルケル細胞皮膚癌、ほくろ異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、及びケロイドが挙げられる。
例示的な頭頸部癌としては、膠芽腫、黒色腫、横紋筋肉腫、リンパ肉腫、骨肉腫、扁平上皮細胞癌、腺癌、口腔癌、喉頭癌、鼻咽頭癌、鼻腔及び副鼻腔癌、甲状腺及び副甲状腺癌が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本開示は、肝細胞癌の治療を必要とする患者においてそれを治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、横紋筋肉腫、食道癌、乳癌、または頭頸部癌の治療を必要とする患者においてそれらを治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、がんを治療する方法を提供し、がんは、肝細胞癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、肛門癌、メルケル細胞癌、胃癌、頭頸部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、食道癌、胆嚢癌、膵臓癌、甲状腺癌、皮膚癌、白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、有毛細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、膠芽腫、黒色腫、及び横紋肉腫から選択される。
いくつかの実施形態では、本開示は、がんを治療する方法を提供し、がんは、肝細胞癌、乳癌、膀胱癌、結腸直腸癌、黒色腫、中皮腫、肺癌、前立腺癌、膵臓癌、精巣癌、甲状腺癌、扁平上皮癌、膠芽腫、神経芽細胞腫、子宮癌、及び横紋肉腫から選択される。
いくつかの実施形態では、本開示は、がんを治療する方法を提供し、がんは、肉腫、頭頸部癌、黒色腫、及び非小細胞肺癌から選択される。いくつかの実施形態では、がんは肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは頭頸部癌である。いくつかの実施形態では、がんは黒色腫である。いくつかの実施形態では、がんは非小細胞肺癌である。
本明細書に記載の方法は、がん、例えば、固形腫瘍の治療を伴う。
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、皮膚癌、肺癌、リンパ腫、肉腫、膀胱癌、尿管癌、尿道癌、及び尿膜管癌、胃癌、子宮頸癌、肝臓癌、乳癌、腎癌、扁平上皮細胞癌、大腸癌、子宮内膜癌、肛門癌、ならびにマイクロサテライト不安定性高（ＭＳＩ－Ｈ）、ミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）、及び／またはＤＮＡポリメラーゼεエキソヌクレアーゼドメイン変異陽性疾患を有する腫瘍から選択される。
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、胆管細胞癌、黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、胃癌、肝細胞癌、メルケル細胞癌、トリプルネガティブ乳癌、腎細胞癌、頭頸部の扁平上皮細胞癌、及び大腸癌から選択される。
いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、肉腫、頭頸部癌、黒色腫、及び非小細胞肺癌から選択される。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は肉腫である。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は頭頸部癌である。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は黒色腫である。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は非小細胞肺癌である。
本明細書で使用される場合、「細胞」という用語は、インビトロ、エクスビボまたはインビボである細胞を意味する。いくつかの実施形態では、エクスビボ細胞は、哺乳動物などの生物から切除された組織サンプルの一部であり得る。いくつかの実施形態では、インビトロ細胞は、細胞培養物中の細胞であり得る。いくつかの実施形態では、インビボ細胞は、哺乳動物などの生物に生息する細胞である。
本明細書で使用される場合、「接触させること」という用語は、インビトロ系またはインビボ系にて、示された部分を一緒にすることを指す。例えば、ＴＡＭキナーゼを化合物１に「接触させること」は、個体または患者、例えばヒトに化合物１を投与すること、及び、例えば、化合物１を、ＴＡＭキナーゼを含有する細胞または精製調製物を含有する試料に導入することを含む。
本明細書で使用される場合、「対象」、「個体」、または「患者」という用語は、互換可能に使用され、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、及び最も好ましくはヒトを含む任意の動物を指す。
本明細書で使用される場合、「治療すること」または「治療」という用語は、１）疾患を阻害すること、例えば、疾患、状態または障害の病状または総体的症状を経験または示している個人の疾患、状態または障害を阻害する（すなわち、病状及び／または総体的症状のさらなる進行を阻止する）こと、または２）疾患を改善すること、例えば、疾患、状態または障害の病状または症候学を経験または示している個人の疾患、状態または障害を改善する（すなわち、病状及び／または総体的症状を逆転させる）こと、を指す。
本明細書で使用される場合、「予防すること」または「予防」という用語は、疾患、状態または障害の素因がある可能性があるが、疾患の病状または総体的症状をまだ経験または示していない個人の疾患、状態または障害を予防することを指す。
併用療法
Ｉ．がん療法
がん細胞増殖及び生存は、複数のシグナル伝達経路の機能不全に影響を受け得る。従って、それらが活性を調節する標的において異なる選択性を示す、異なる酵素／タンパク質／受容体阻害剤を組み合わせて、そのような状態を治療することは有用である。２つ以上のシグナル伝達経路（または所定のシグナル伝達経路に関与する２つ以上の生物学的分子）を標的とすることは、細胞集団において生じる薬物抵抗の可能性を低減し、及び／または治療の毒性を低減することができる。
Ｉ．がん療法
がん細胞増殖及び生存は、複数のシグナル伝達経路の機能不全に影響を受け得る。従って、それらが活性を調節する標的において異なる選択性を示す、異なる酵素／タンパク質／受容体阻害剤を組み合わせて、そのような状態を治療することは有用である。２つ以上のシグナル伝達経路（または所定のシグナル伝達経路に関与する２つ以上の生物学的分子）を標的とすることは、細胞集団において生じる薬物抵抗の可能性を低減し、及び／または治療の毒性を低減することができる。
１つ以上の追加の医薬剤、例えば、化学療法薬、抗炎症剤、ステロイド、免疫抑制剤、がん免疫療法剤、代謝酵素阻害剤、ケモカイン受容体阻害剤、及びホスファターゼ阻害剤などに加えて、標的療法、例えば、Ｂｃｒ－Ａｂｌ、Ｆｌｔ－３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＪＡＫ、ｃ－ＭＥＴ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ｃ－Ｋｉｔ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＲＡＦ、ＦＡＫ、ＣＤＫ２、及びＣＤＫ４／６キナーゼ阻害剤など、例えば、ＷＯ２００６／０５６３９９に記載されるものなどが、がん及び固形腫瘍を治療するために本開示の治療方法及びレジメンと組み合わせて使用され得る。治療抗体などの他の薬剤が、がん及び固形腫瘍の治療のための本開示の治療方法及びレジメンと組み合わせて使用され得る。１つ以上の追加の医薬剤は、患者に同時または逐次的に投与することができる。
本明細書で開示されるような治療方法は、がんなどの疾患及び本明細書に記載される他の疾患または障害を治療するために、１つ以上の他の酵素／タンパク質／受容体阻害剤療法と組み合わせて使用され得る。例えば、本開示の治療方法及びレジメンは、がん治療のために、以下のキナーゼのうちの１つ以上の阻害剤と組み合わせることができる：Ａｋｔ１、Ａｋｔ２、Ａｋｔ３、ＢＣＬ２、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４／６、ＴＧＦ－βＲ、ＰＫＡ、ＰＫＧ、ＰＫＣ、ＣａＭ－キナーゼ、ホスホリラーゼキナーゼ、ＭＥＫＫ、ＥＲＫ、ＭＡＰＫ、ｍＴＯＲ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＩＮＳ－Ｒ、ＩＤＨ２、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＲ－Ｒ、ＰＤＧＦαＲ、ＰＤＧＦβＲ、ＰＩ３Ｋ（アルファ、ベータ、ガンマ、デルタ、及び複数または選択的）、ＣＳＦ１Ｒ、ＫＩＴ、ＦＬＫ－ＩＩ、ＫＤＲ／ＦＬＫ－１、ＦＬＫ－４、ｆｌｔ－１、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ｃ－Ｍｅｔ、ＰＡＲＰ、Ｒｏｎ、Ｓｅａ、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＴＡＭキナーゼ（Ａｘｌ、Ｍｅｒ、Ｔｙｒｏ３）、ＦＬＴ３、ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ２、Ｆｌｔ４、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ４、Ｔｉｅ２、Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、Ｆｇｒ、Ｂｔｋ、Ｆａｋ、ＳＹＫ、ＦＲＫ、ＪＡＫ、ＡＢＬ、ＡＬＫ、及びＢ－Ｒａｆ。がんの治療のために本開示の治療方法及びレジメンと組み合わされ得る阻害剤の非限定的な例には、ＦＧＦＲ阻害剤（ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、またはＦＧＦＲ４、例えば、ペミガチニブ（ＩＮＣＹ５４８２８）、ＩＮＣＢ６２０７９）、ＥＧＦＲ阻害剤（ＥｒＢ－１またはＨＥＲ－１としても知られている：例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、バンデタニブ、オシメルチニブ、セツキシマブ、ネシツムマブ、またはパニツムマブ）、ＶＥＧＦＲ阻害剤もしくは経路遮断薬（例えば、ベバシズマブ、パゾパニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、レゴラフェニブ、ポナチニブ、カボザンチニブ、バンデタニブ、ラムシルマブ、レンバチニブ、ｚｉｖ－アフリベルセプト）、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ベリパリブ、またはニラパリブ）、ＪＡＫ阻害剤（ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２、例えば、ルキソリチニブ、バリシチニブ、イタシチニブ（ＩＮＣＢ３９１１０））、ＬＳＤ１阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ５９８７２及びＩＮＣＢ６０００３）、ＴＤＯ阻害剤、ＰＩ３Ｋ－デルタ阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ５０４６５及びＩＮＣＢ５０７９７）、ＰＩ３Ｋ－ガンマ選択的阻害剤などのＰＩ３Ｋ－ガンマ阻害剤、Ｐｉｍ阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ５３９１４）、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＴＡＭ受容体チロシンキナーゼ（Ｔｙｒｏ－３、Ａｘｌ、及びＭｅｒ）、アデノシン受容体アンタゴニスト（例えば、Ａ２ａ／Ａ２ｂ受容体アンタゴニスト）、ＨＰＫ１阻害剤、ケモカイン受容体阻害剤（例えば、ＣＣＲ２またはＣＣＲ５阻害剤）、ＳＨＰ１／２ホスファターゼ阻害剤、ＨＤＡＣ８阻害剤などのヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）、血管新生阻害剤、インターロイキン受容体阻害剤、ブロモ及び余剰末端ファミリーメンバー阻害剤（例えば、ブロモドメイン阻害剤またはＢＥＴ阻害剤、例えば、ＩＮＣＢ５４３２９及びＩＮＣＢ５７６４３）、ｃ－ＭＥＴの阻害剤（例えば、カプマチニブ）、抗ＣＤ１９抗体（例えば、タファシタマブ）、ＡＬＫ２阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ００９２８）またはそれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される治療方法は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤の投与と組み合わされる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される治療方法は、ＪＡＫ阻害剤の投与と組み合わされる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される治療方法は、ＪＡＫ１またはＪＡＫ２阻害剤（例えば、バリシチニブまたはルキソリチニブ）の投与と組み合わされる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される治療方法は、ＪＡＫ１阻害剤の投与と組み合わせられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される治療方法は、ＪＡＫ２よりも選択的であるＪＡＫ１阻害剤の投与と組み合わせられる。
併用療法において投与され得る例示的な抗体としては、トラスツズマブ（例えば、抗ＨＥＲ２）、ラニビズマブ（例えば、抗ＶＥＧＦ－Ａ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標）、例えば、抗ＶＥＧＦ）、パニツムマブ（例えば、抗ＥＧＦＲ）、セツキシマブ（例えば、抗ＥＧＦＲ）、リツキサン（例えば、抗ＣＤ２０）、及びｃ－ＭＥＴに対する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
以下の薬剤のうちの１つ以上が、本開示の治療方法と組み合わせて患者に投与されてもよく、非限定的なリストとして提示される：細胞増殖抑制剤、シスプラチン、ドキソルビシン、タキソテール、タキソール、エトポシド、イリノテカン、カンプトスター、トポテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロン、タモキシフェン、５－フルオロウラシル、メトトレキサート、テモゾロミド、シクロホスファミド、ＳＣＨ６６３３６、Ｒ１１５７７７、Ｌ７７８，１２３、ＢＭＳ２１４６６２、ＩＲＥＳＳＡ（商標）（ゲフィチニブ）、ＴＡＲＣＥＶＡ（商標）（エルロチニブ）、ＥＧＦＲに対する抗体、イントロン、ａｒａ－Ｃ、アドリアマイシン、サイトキサン、ゲムシタビン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、フロクスウリジン、シタラビン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、リン酸フルダラビン、オキサリプラチン、ロイコビリン、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標）（オキサリプラチン）、ペントスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン－Ｃ、Ｌ－アスパラギナーゼ、テニポシド１７．アルファ－エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メグストロールアセテート、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロンアセテート、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゴセレリン、カルボプラチン、ヒドロキシ尿素、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミソール、ナベルベン、アナストラゾール、レトラゾール、カペシタビン、レロキサフィン、ドロロキサフィン、ヘキサメチルメラミン、アバスチン、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（トラスツズマブ）、ＢＥＸＸＡＲ（商標）（トシツモマブ）、ＶＥＬＣＡＤＥ（商標）（ボルテゾミブ）、ＺＥＶＡＬＩＮ（商標）（イブリツモマブチウキセタン）、ＴＲＩＳＥＮＯＸ（商標）（三酸化ヒ素）、ＸＥＬＯＤＡ（商標）（カペシタビン）、ビノレルビン、ポルフィマー、ＥＲＢＩＴＵＸ（商標）（セツキシマブ）、チオテパ、アルトレタミン、メルファラン、トラスツズマブ、レロゾール、フルベストラント、エキセメスタン、イホスフォミド、リツキシマブ、Ｃ２２５（セツキシマブ）、カンパス（アレムツズマブ）、クロファラビン、クラドリビン、アフィジコロン、リツキサン、スニチニブ、ダサチニブ、テザシタビン、Ｓｍｌ１、フルダラビン、ペントスタチン、トリアピン、ジドックス、トリミドックス、アミドックス、３－ＡＰ、及びＭＤＬ－１０１，７３１。
本開示の治療方法及びレジメンは、例えば、化学療法、放射線療法、腫瘍標的療法、アジュバント療法、免疫療法、または手術によって、がんを治療する他の方法と組み合わせてさらに使用することができる。免疫療法の例としては、サイトカイン処置（例えば、インターフェロン、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－２）、ＣＲＳ－２０７免疫療法、がんワクチン、モノクローナル抗体、二重特異性または多重特異性抗体、抗体薬物複合体、養子Ｔ細胞移入、Ｔｏｌｌ受容体アゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、腫瘍溶解性ウイルス療法及び免疫調節小分子、例えば、サリドマイドまたはＪＡＫ１／２阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤などを含むものが挙げられる。化合物は、１つ以上の抗がん剤、例えば、化学療法剤などと組み合わせて投与され得る。化学療法薬の例としては、アバレリクス、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アザシチジン、ベバシズマブ、ベキサロテン、バリシチニブ、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、静注用ブスルファン、経口用ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダルテパリンナトリウム、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デニロイキン、デニロイキンジフチトクス、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドキソルビシン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エクリズマブ、エパカドスタット、エピルビシン、エルロチニブ、エストラムスチン、リン酸エトポシド、エトポシド、エキセメスタン、クエン酸フェンタニル、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、酢酸ゴセレリン、酢酸ヒストレリン、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、メシル酸イマチニブ、インターフェロンアルファ２ａ、イリノテカン、ラパチニブジトシレート、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、酢酸ロイプロリド、レバミソール、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、パニツムマブ、ペグアスパラガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スニチニブ、マレイン酸スニチニブ、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、及びゾレドロネートのいずれかが挙げられる。
化学療法薬の追加の例としては、プロテオソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、サリドマイド、レブリミド、及びＤＮＡ損傷剤、例えば、メルファラン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、エトポシド、カルムスチンなどが挙げられる。
例示的なステロイドには、デキサメタゾンまたはプレドニゾンなどのコルチコステロイドが含まれる。
例示的なＢｃｒ－Ａｂｌ阻害剤としては、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＡＣ（商標））、ニロチニブ、ダサチニブ、ボスチニブ、及びポナチニブ、ならびに薬学的に許容される塩が挙げられる。他の例示的で好適なＢｃｒ－Ａｂｌ阻害剤としては、米国特許第５，５２１，１８４号、ＷＯ０４／００５２８１、及び米国出願第６０／５７８，４９１号に開示される属及び種の化合物、及びその薬学的に許容される塩が挙げられる。
例示的で好適なＦｌｔ－３阻害剤としては、ミドスタウリン、レスタウルチニブ、リニファニブ、スニチニブ、スニチニブ、マレエート、ソラフェニブ、キザルチニブ、クレノラニブ、パクリチニブ、タンズチニブ、ＰＬＸ３３９７及びＡＳＰ２２１５、ならびにそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。他の例示的で好適なＦｌｔ－３阻害剤としては、ＷＯ０３／０３７３４７、ＷＯ０３／０９９７７１、及びＷＯ０４／０４６１２０に開示されるような化合物、及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。
例示的で好適なＲＡＦ阻害剤としては、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、及びベムラフェニブ、ならびにそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。他の例示的で好適なＲＡＦ阻害剤としては、ＷＯ００／０９４９５及びＷＯ０５／０２８４４４に開示されるような化合物、及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。
例示的で好適なＦＡＫ阻害剤としては、ＶＳ－４７１８、ＶＳ－５０９５、ＶＳ－６０６２、ＶＳ－６０６３、ＢＩ８５３５２０、及びＧＳＫ２２５６０９８、ならびにそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。他の例示的で好適なＦＡＫ阻害剤としては、ＷＯ０４／０８０９８０、ＷＯ０４／０５６７８６、ＷＯ０３／０２４９６７、ＷＯ０１／０６４６５５、ＷＯ００／０５３５９５、及びＷＯ０１／０１４４０２に開示されるような化合物、及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。
例示的で好適なＣＤＫ４／６阻害剤としては、パルボシクリブ、リボシクリブ、トリラシクリブ、レロシクリブ、及びアベマシクリブ、ならびにそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。他の例示的で好適なＣＤＫ４／６阻害剤としては、ＷＯ０９／０８５１８５、ＷＯ１２／１２９３４４、ＷＯ１１／１０１４０９、ＷＯ０３／０６２２３６、ＷＯ１０／０７５０７４、及びＷＯ１２／０６１１５６に開示されるような化合物、及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、特にイマチニブまたは他のキナーゼ阻害剤に耐性がある患者を治療するために、イマチニブを含む１つ以上の他のキナーゼ阻害剤と組み合わせて使用され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の治療方法は、がんの治療において化学療法剤と組み合わせて使用され得、化学療法剤単独での応答と比較して、その毒性作用の悪化を伴わずに、治療応答を改善し得る。いくつかの実施形態では、本開示の治療方法は、本明細書で提供される化学療法剤と組み合わせて使用され得る。例えば、多発性骨髄腫の治療に使用される追加の医薬剤としては、メルファラン、メルファランとプレドニゾン［ＭＰ］、ドキソルビシン、デキサメタゾン、及びベルケイド（ボルテゾミブ）が挙げられ得るが、これらに限定されない。多発性骨髄腫の治療に使用されるさらに追加の薬剤としては、Ｂｃｒ－Ａｂｌ、Ｆｌｔ－３、ＲＡＦ及びＦＡＫキナーゼ阻害剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、その薬剤は、アルキル化剤、プロテアソーム阻害剤、コルチコステロイド、または免疫調節剤である。アルキル化剤の例としては、シクロホスファミド（ＣＹ）、メルファラン（ＭＥＬ）、及びベンダムスチンが挙げられる。いくつかの実施形態では、プロテアソーム阻害剤はカルフィルゾミブである。いくつかの実施形態では、コルチコステロイドは、デキサメタゾン（ＤＥＸ）である。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、レナリドミド（ＬＥＮ）またはポマリドミド（ＰＯＭ）である。相加効果または相乗効果は、本開示の治療方法を追加の薬剤と組み合わせることの望ましい結果である。
薬剤は、単回または連続剤形で、本治療方法の化合物１及び／またはヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせられ得るか、または薬剤は、別々の剤形として同時にまたは逐次的に投与され得る。
いくつかの実施形態では、デキサメタゾンなどのコルチコステロイドは、本開示の治療方法と組み合わせて患者に投与され、その場合、デキサメタゾンは、連続的ではなく断続的に投与される。
本明細書に記載の治療方法は、がん細胞、精製腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチド、及び炭水化物分子を含む）、細胞、及び免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞などの別の免疫原性薬剤と組み合わせることができる。使用され得る腫瘍ワクチンの非限定的な例としては、黒色腫抗原のペプチド、例えば、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ－２、ＭＡＲＴＩ及び／またはチロシナーゼのペプチドなど、あるいはサイトカインＧＭ－ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞が挙げられる。
本明細書に記載の治療方法は、がんの治療のためのワクチン接種プロトコルと組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は、ＧＭ－ＣＳＦを発現するように形質導入される。いくつかの実施形態では、腫瘍ワクチンとしては、ヒトのがんに関与するウイルス、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶ及びＨＣＶ）ならびにカポジヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）などに由来するタンパク質が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示の治療方法及びレジメンは、腫瘍特異的抗原、例えば、腫瘍組織自体から単離された熱ショックタンパク質などと組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、強力な抗腫瘍応答を活性化するために、樹状細胞免疫化と組み合わせることができる。
本開示の治療方法及びレジメンは、ＦｅアルファまたはＦｅガンマ受容体発現エフェクター細胞を腫瘍細胞に標的化する二重特異性大環状ペプチドと組み合わせて使用することができる。本開示の治療方法及びレジメンはまた、宿主の免疫応答性を活性化する大環状ペプチドと組み合わせることもできる。
いくつかのさらなる実施形態では、本開示の治療方法は他の治療剤と組み合わせて、骨髄移植または幹細胞移植の前、間、及び／または後に患者に投与することができる。本開示の治療方法及びレジメンは、造血起源の様々な腫瘍の治療のために骨髄移植と組み合わせて使用することができる。
２つ以上の医薬剤が、患者に投与される場合、上記の任意の実施形態において議論したように、同時に、別々に、逐次的に、または組み合わせて投与することができる（例えば、３つ以上の薬剤の場合）。
これらの化学療法剤の多くを安全かつ効果的に投与する方法が、当業者に既知である。加えて、それらの投与は標準的な文献に記載されている。例えば、化学療法剤の多くの投与は、「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」（ＰＤＲ、例えば、１９９６年版、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ）に記載されており、その開示はその全体が記載されている場合と同様に参照によって本明細書に組み込まれる。
ＩＩ．免疫チェックポイント療法
本開示の化合物（化合物１またはその薬学的に許容される塩）は、疾患、例えば、がんまたは感染症などを治療するために１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用され得る。例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、免疫チェックポイント分子、例えば、ＣＢＬ－Ｂ、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ１２２、ＣＤ９６、ＣＤ７３、ＣＤ４７、ＣＤＫ２、ＧＩＴＲ、ＣＳＦ１Ｒ、ＪＡＫ、ＰＩ３Ｋデルタ、ＰＩ３Ｋガンマ、ＴＡＭ、アルギナーゼ、ＨＰＫ１、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＬＲ（ＴＬＲ７／８）、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２Ｒ、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２などに対する阻害剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ及びＣＤ１３７から選択される刺激性チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、及びＶＩＳＴＡから選択される阻害チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される化合物は、ＫＩＲ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＬＡＩＲ１阻害剤、ＣＤ１６０阻害剤、２Ｂ４阻害剤及びＴＧＦＲベータ阻害剤から選択される１つ以上の薬剤と組み合わせて使用され得る。
本開示の化合物（化合物１またはその薬学的に許容される塩）は、疾患、例えば、がんまたは感染症などを治療するために１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用され得る。例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、免疫チェックポイント分子、例えば、ＣＢＬ－Ｂ、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ１２２、ＣＤ９６、ＣＤ７３、ＣＤ４７、ＣＤＫ２、ＧＩＴＲ、ＣＳＦ１Ｒ、ＪＡＫ、ＰＩ３Ｋデルタ、ＰＩ３Ｋガンマ、ＴＡＭ、アルギナーゼ、ＨＰＫ１、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＬＲ（ＴＬＲ７／８）、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２Ｒ、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２などに対する阻害剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ及びＣＤ１３７から選択される刺激性チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、及びＶＩＳＴＡから選択される阻害チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される化合物は、ＫＩＲ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＬＡＩＲ１阻害剤、ＣＤ１６０阻害剤、２Ｂ４阻害剤及びＴＧＦＲベータ阻害剤から選択される１つ以上の薬剤と組み合わせて使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される化合物は、免疫チェックポイント分子、例えば、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）の１つ以上のアゴニストと組み合わせて使用され得る。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、または抗ＣＴＬＡ－４抗体である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、セミプリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、チスレリズマブ、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）、セトレリマブ（ＪＮＪ－６３７２３２８３）、トリパリマブ（ＪＳ００１）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、シンチリマブ（ＩＢＩ３０８）、ＡＢ１２２（ＧＬＳ－０１０）、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４／ＭＥＤＩ－０６８０、ＢＭＳ９３６５５９、ＪＴＸ－４０１４、ＢＧＢ－１０８、ＳＨＲ－１２１０、ＭＥＤＩ４７３６、ＦＡＺ０５３、ＢＣＤ－１００、ＫＮ０３５、ＣＳ１００１、ＢＡＴ１３０６、ＬＺＭ００９、ＡＫ１０５、ＨＬＸ１０、ＳＨＲ－１３１６、ＣＢＴ－５０２（ＴＱＢ２４５０）、Ａ１６７（ＫＬ－Ａ１６７）、ＳＴＩ－Ａ１０１（ＺＫＡＢ００１）、ＣＫ－３０１、ＢＧＢ－Ａ３３３、ＭＳＢ－２３１１、ＨＬＸ２０、ＴＳＲ－０４２、またはＬＹ３３０００５４である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、米国特許第７，４８８，８０２号、同第７，９４３，７４３号、同第８，００８，４４９号、同第８，１６８，７５７号、同第８，２１７，１４９号、もしくは同第１０，３０８，６４４号、米国特許出願公開第２０１７／０１４５０２５号、同第２０１７／０１７４６７１号、同第２０１７／０１７４６７９号、同第２０１７／０３２０８７５号、同第２０１７／０３４２０６０号、同第２０１７／０３６２２５３号、同第２０１８／００１６２６０号、同第２０１８／００５７４８６号、同第２０１８／０１７７７８４号、同第２０１８／０１７７８７０号、同第２０１８／０１７９１７９号、同第２０１８／０１７９２０１号、同第２０１８／０１７９２０２号、同第２０１８／０２７３５１９号、同第２０１９／００４００８２号、同第２０１９／００６２３４５号、同第２０１９／００７１４３９号、同第２０１９／０１２７４６７号、同第２０１９／０１４４４３９号、同第２０１９／０２０２８２４号、同第２０１９／０２２５６０１号、同第２０１９／０３００５２４号、もしくは同第２０１９／０３４５１７０号、またはＰＣＴ公開第ＷＯ０３０４２４０２号、同第ＷＯ２００８１５６７１２号、同第ＷＯ２０１００８９４１１号、同第ＷＯ２０１００３６９５９号、同第ＷＯ２０１１０６６３４２号、同第ＷＯ２０１１１５９８７７号、同第ＷＯ２０１１０８２４００号もしくは同第ＷＯ２０１１１６１６９９号に開示されるものであり、その各々の全体が参照によって本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１の阻害剤はＩＮＣＢ０８６５５０である。
いくつかの実施形態では、抗体は抗ＰＤ－１抗体、例えば、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、セミプリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、セトレリマブ、トリパリマブ、シンチリマブ、ＡＢ１２２、ＡＭＰ－２２４、ＪＴＸ－４０１４、ＢＧＢ－１０８、ＢＣＤ－１００、ＢＡＴ１３０６、ＬＺＭ００９、ＡＫ１０５、ＨＬＸ１０、またはＴＳＲ－０４２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、セミプリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、セトレリマブ、トリパリマブ、またはシンチリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はペンブロリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はニボルマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はセミプリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はスパルタリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はカムレリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はセトレリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はトリパリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はシンチリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＡＢ１２２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＡＭＰ－２２４である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＪＴＸ－４０１４である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＢＧＢ－１０８である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＢＣＤ－１００である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＢＡＴ１３０６である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＬＺＭ００９である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＡＫ１０５である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＨＬＸ１０である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＴＳＲ－０４２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体は、ニボルマブまたはペンブロリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１抗体はＳＨＲ－１２１０である。他の抗がん剤（複数可）としては、抗体治療薬、例えば、４－１ＢＢ（例えば、ウレルマブ、ウトミルマブ）などが挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、チスレリズマブ、ＢＭＳ－９３５５５９、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６としても知られる）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、ＣＳ１００１、ＳＨＲ－１３１６、ＣＢＴ－５０２、Ａ１６７、ＳＴＩ－Ａ１０１、ＣＫ－３０１、ＢＧＢ－Ａ３３３、ＭＳＢ－２３１１、ＨＬＸ２０、またはＬＹ３３０００５４である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、またはチスレリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はアテゾリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はアベルマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はデュルバルマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はチスレリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＢＭＳ－９３５５５９である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＥＤＩ４７３６である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＦＡＺ０５３である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＫＮ０３５である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＣＳ１００１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＳＨＲ－１３１６である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＣＢＴ－５０２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＡ１６７である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＳＴＩ－Ａ１０１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＣＫ－３０１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＢＧＢ－Ａ３３３である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＳＢ－２３１１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＨＬＸ２０である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＬＹ３３０００５４である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に結合する小分子、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に結合して内在化させる小分子、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＵＳ２０１８／０１７９２０１、ＵＳ２０１８／０１７９１９７、ＵＳ２０１８／０１７９１７９、ＵＳ２０１８／０１７９２０２、ＵＳ２０１８／０１７７７８４、ＵＳ２０１８／０１７７８７０、米国出願第１６／３６９，６５４号（２０１９年３月２９日出願）、及び米国出願第６２／６８８，１６４号におけるものから選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、その各々の全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＫＩＲ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦＲベータの阻害剤である。
いくつかの実施形態では、阻害剤はＭＣＬＡ－１４５である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＣＴＬＡ－４の阻害剤、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＡＧＥＮ１８８４、またはＣＰ－６７５，２０６である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＬＡＧ３の阻害剤、例えば、抗ＬＡＧ３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、ＢＭＳ－９８６０１６、ＬＡＧ５２５、ＩＮＣＡＧＮ２３８５、またはエフチラギモドアルファ（ＩＭＰ３２１）である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＣＤ７３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＤ７３の阻害剤はオレクルマブである。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＴＩＧＩＴの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴの阻害剤はＯＭＰ－３１Ｍ３２である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＶＩＳＴＡの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＶＩＳＴＡの阻害剤は、ＪＮＪ－６１６１０５８８またはＣＡ－１７０である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、Ｂ７－Ｈ３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、Ｂ７－Ｈ３の阻害剤は、エノブリツズマブ、ＭＧＤ００９、または８Ｈ９である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＫＩＲの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＫＩＲの阻害剤は、リリルマブまたはＩＰＨ４１０２である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、Ａ２ａＲの阻害剤である。いくつかの実施形態では、Ａ２ａＲの阻害剤は、ＣＰＩ－４４４である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＴＧＦ－ベータの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ－ベータの阻害剤は、トラベデルセン、ガルセルチニブ、またはＭ７８２４である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＩ３Ｋ－ガンマの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ－ガンマの阻害剤はＩＰＩ－５４９である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＣＤ４７の阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７の阻害剤は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４またはＴＴＩ－６２１である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＣＤ７３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＤ７３の阻害剤はＭＥＤＩ９４４７である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＣＤ７０の阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＤ７０の阻害剤は、クサツズマブまたはＢＭＳ－９３６５６１である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＴＩＭ３の阻害剤、例えば、抗ＴＩＭ３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ３抗体は、ＩＮＣＡＧＮ２３９０、ＭＢＧ４５３、またはＴＳＲ－０２２である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＣＤ２０の阻害剤、例えば、抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブまたはリツキシマブである。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＴＬＲ７／８、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）のアゴニストである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７のアゴニストはウレルマブである。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７のアゴニストはウトミルマブである。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＧＩＴＲの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲのアゴニストは、ＴＲＸ５１８、ＭＫ－４１６６、ＩＮＣＡＧＮ１８７６、ＭＫ－１２４８、ＡＭＧ２２８、ＢＭＳ－９８６１５６、ＧＷＮ３２３、ＭＥＤＩ１８７３またはＭＥＤＩ６４６９である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＯＸ４０のアゴニスト、例えば、ＯＸ４０アゴニスト抗体またはＯＸ４０Ｌ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、ＩＮＣＡＧＮ０１９４９、ＭＥＤＩ０５６２（タボリマブ）、ＭＯＸＲ－０９１６、ＰＦ－０４５１８６００、ＧＳＫ３１７４９９８、ＢＭＳ－９８６１７８、または９Ｂ１２である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質はＭＥＤＩ６３８３である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＣＤ４０のアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０のアゴニストは、ＣＰ－８７０８９３、ＡＤＣ－１０１３、ＣＤＸ－１１４０、ＳＥＡ－ＣＤ４０、ＲＯ７００９７８９、ＪＮＪ－６４４５７１０７、ＡＰＸ－００５Ｍ、またはＣｈｉ Ｌｏｂ ７／４である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＩＣＯＳのアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳのアゴニストは、ＧＳＫ－３３５９６０９、ＪＴＸ－２０１１、またはＭＥＤＩ－５７０である。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＣＤ２８のアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８のアゴニストはセラリズマブである。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＣＤ２７のアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＣＤ２７のアゴニストはバルリルマブである。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＴＬＲ７／８のアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＴＬＲ７／８のアゴニストはＭＥＤＩ９１９７である。
本開示の化合物は、二重特異性抗体と組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体のドメインのうち１つは、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ３またはＴＧＦβ受容体を標的とする。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１に結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１に結合する二重特異性抗体は、ＭＣＬＡ－１３６である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１及びＣＴＬＡ－４に結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１及びＣＴＬＡ－４に結合する二重特異性抗体は、ＡＫ１０４である。
いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、１つ以上の代謝酵素阻害剤と組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、代謝酵素阻害剤は、ＩＤＯ１、ＴＤＯ、またはアルギナーゼの阻害剤である。ＩＤＯ１阻害剤の例としては、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９、ＢＭＳ－９８６２０５、ＰＦ－０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ－７００９９及びＬＹ３３８１９６が挙げられる。アルギナーゼ阻害剤の阻害剤としては、ＩＮＣＢ１１５８が挙げられる。
全体を通して提供されるように、追加の化合物、阻害剤、薬剤などは、単一のもしくは連続した剤形で本化合物と組み合わされ得るか、またはそれらは、別個の剤形として同時にもしくは逐次的に投与され得る。
薬学的組成物
いくつかの実施形態では、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、薬学的組成物の一部として製剤化できる。いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１と結合する抗体は、薬学的組成物の一部として製剤化できる。本明細書に記載される化合物、及びヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む薬学的組成物は、例えば、本明細書に記載される障害を治療するために、対象に投与するための薬学的組成物として製剤化できる。典型的には、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬剤的に許容される担体」には、生理的に適合性である、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌薬剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含むことができる（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１－１９を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、薬学的組成物の一部として製剤化できる。いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１と結合する抗体は、薬学的組成物の一部として製剤化できる。本明細書に記載される化合物、及びヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む薬学的組成物は、例えば、本明細書に記載される障害を治療するために、対象に投与するための薬学的組成物として製剤化できる。典型的には、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬剤的に許容される担体」には、生理的に適合性である、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌薬剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含むことができる（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１－１９を参照されたい）。
薬学的製剤は、確立された技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）、Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）、及びＫｉｂｂｅ（ｅｄ．），Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，３ｒｄ ｅｄ．（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）にさらに記載されている。
薬学的組成物は、様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体溶液（例えば、注射用及び注入用溶液）、分散剤または懸濁剤、錠剤、丸剤、粉末、リポソーム及び坐剤などの液体、半固体及び固体剤形が含まれる。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療的用途に依存し得る。典型的には、本明細書に記載の薬剤のための組成物は、注射可能または注入可能な溶液の形態である。
組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、または高い濃度での安定な保存に好適な他の秩序ある構造として、製剤化することができる。滅菌注射液は、必要な量の本明細書に記載の薬剤を適切な溶媒に、上に列挙された成分のうちの１つまたはその組み合わせを組み込み、続いて必要に応じて、濾過滅菌することによって、調製することができる。一般に、分散液は、本明細書に記載の薬剤を、基本的な分散媒及び上で列挙されたものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって、調製される。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、本明細書に記載の薬剤と任意の追加的な所望の成分の粉末を事前に滅菌濾過されたその溶液から得る、真空乾燥及び凍結乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合、必要とされる粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持され得る。注射用組成物の持続的吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを含むことによって、もたらすことができる。
特定の実施形態では、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、インプラントを含む徐放性製剤及びマイクロカプセル化送達システムなど、急速な放出から化合物を保護する担体を用いて調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤の調製のための多くの方法は、特許取得されているか、または一般的に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７８）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本化合物は、薬学的組成物の一部として製剤化され、少なくとも１種の賦形剤をさらに含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物を作製する際に、化合物は賦形剤と混合され、賦形剤によって希釈されるか、または、例えば、カプセル、サシェ、紙もしくは他の容器の形態の担体に封入される。賦形剤が希釈剤として機能する場合、それは、活性成分のためのビヒクル、担体、または媒体として作用する固体、半固体、または液体の材料であり得る。従って、組成物は、錠剤、丸剤、粉末、ロゼンジ、サシェ、カシェ、エリキシル、懸濁剤、エマルション、溶液、シロップ、エアロゾル（固体としてまたは液体媒体中で）、例えば、１０重量％までの活性化合物を含む軟膏、軟質及び硬質ゼラチンカプセル、坐剤、無菌注射用溶液、及び無菌包装粉末の形態であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される薬学的組成物は、錠剤の形態である。
製剤を調製する際は、他の成分と組み合わせる前に、化合物を粉砕して適切な粒径を提供することができる。いくつかの実施形態では、化合物は、２００メッシュ未満の粒径に粉砕することができる。いくつかの実施形態では、粒径は、粉砕することによって、例えば、約４０メッシュに調整されて、製剤中に実質的に均一な分布をもたらすことができる。
適切な賦形剤のいくつかの例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、及びメチルセルロースが含まれる。製剤には、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱物油などの潤滑剤；湿潤剤；乳化剤及び懸濁剤；メチルベンゾエート及びプロピルヒドロキシベンゾエートなどの保存剤；甘味料；ならびに香味料をさらに含み得る。本明細書に記載の組成物は、当該技術分野において既知の手順を用いることによって患者に投与した後に、活性成分の迅速な放出、持続的放出、または遅延放出を提供するように製剤化され得る。
組成物は、単位剤形で製剤化され得る。「単位剤形」という用語は、ヒト対象及び他の哺乳動物のための単位投薬量として適切な、物理的に別個の単位を指し、各単位は、適切な薬学的賦形剤と関連して、所望の治療効果（例えば所望のＰＫプロファイル）を生じるように計算された、予め決定された量の化合物を含む。
特定の実施形態では、錠剤などの固体組成物を調製するために、化合物を薬学的賦形剤と混合して、化合物の均一な混合物を含む固体予備配合組成物を形成する。これらの予備配合組成物が均質物として言及される場合、化合物は、典型的には組成物全体に均一に分散され、それによりこの組成物は、錠剤、丸剤及びカプセルなどの等しく有効な単位剤形に容易に分割され得る。次いで、この固体予備製剤は、単位剤形に分割される。
本開示の錠剤または丸剤は、長期作用の利点をもたらす剤形を提供するためにコーティングまたは別様に配合され得る。例えば、錠剤または丸剤は、内部用量及び外部用量の成分を含み得、後者は前者上のエンベロープの形態である。２つの成分は、胃における崩壊に抵抗し、かつその内部成分を無傷で十二指腸内まで通過させる、または放出を遅延させることができる、腸溶性の層によって分離することができる。多数のポリマー酸、ならびにシェラック、セチルアルコール、及び酢酸セルロースなどの物質とのポリマー酸の混合物を含む様々な物質は、そのような腸溶性層またはコーティングとして利用することができる。
本明細書に記載される組成物が経口による投与のために組み込まれ得る液体形態としては、水溶液、好適に風味付けされたシロップ、水性または油性懸濁液、及び綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、またはピーナッツ油などの食用油で風味付けされたエマルション、ならびにエリキシル剤及び類似の薬学的ビヒクルが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、従来の殺菌技法によって殺菌され得るか、または無菌濾過されてもよい。水溶液は、そのままで使用するために包装するか、または凍結乾燥することができ、凍結乾燥調製物は、投与前に無菌水性担体と合わされる。化合物調製物のｐＨは、典型的には、３～１１、より好ましくは５～９、最も好ましくは７～８であろう。ある特定の前述の賦形剤、担体、または安定剤の使用によって、薬学的塩の製剤が得られることは理解されよう。
いくつかの実施形態では、化合物１は、経口投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、経口カプセル剤として投与される。
いくつかの実施形態では、化合物１は、１日１回投与される。
いくつかの実施形態では、化合物１は、約５ｍｇ～約１５０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約５ｍｇ～約１２０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約５ｍｇ～約１００ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約５ｍｇ～約８０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約５ｍｇ～約６０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約５ｍｇ～約４０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約５ｍｇ～約２０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約５ｍｇ～約１０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約１０ｍｇ～約１５０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約１０ｍｇ～約１２０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約１０ｍｇ～約１００ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約１０ｍｇ～約８０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約１０ｍｇ～約６０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約１０ｍｇ～約４０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約１０ｍｇ～約２０ｍｇの１日量で投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４５ｍｇ、約６０ｍｇ、約９０ｍｇまたは約１２０ｍｇの１日量で投与される。
いくつかの実施形態では、化合物１は、連続投与レジメンで１日１回投与される。いくつかの実施形態では、化合物１は、２８日間の投与レジメンで投与される。
いくつかの実施形態では、レチファンリマブは、静脈内投与される。
いくつかの実施形態では、レチファンリマブは月１回投与される。いくつかの実施形態では、レチファンリマブは、４週間に１回投与される。
いくつかの実施形態では、レチファンリマブは、約２５０ｍｇ～約１０００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、レチファンリマブは、約４００ｍｇ～約６００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、レチファンリマブは、約５００ｍｇの用量で投与される。
標識化合物
本開示の別の態様は、画像化技法だけでなく、インビトロ及びインビボの両方でのアッセイにおいても有用である本開示の標識化合物１（放射標識、蛍光標識、同位体標識など）に関する。
本開示の別の態様は、画像化技法だけでなく、インビトロ及びインビボの両方でのアッセイにおいても有用である本開示の標識化合物１（放射標識、蛍光標識、同位体標識など）に関する。
本開示は、同位体標識した化合物１をさらに含む。「同位体標識された」または「放射性標識された」化合物は、１つ以上の原子が、自然界で通常見られる（すなわち、天然に存在する）原子量または質量数とは異なる原子量または質量数を有する原子に置き換えられた、または置換された化合物１である。本開示の化合物に組み込まれ得る適切な放射性核種には、２Ｈ（重水素としてＤとも記される）、３Ｈ（トリチウムとしてＴとも記される）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、１８Ｆ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉが含まれるがこれらに限定されない。例えば、本開示の化合物の１つ以上の水素原子を、重水素で置き換えることができ、または任意で重水素で置換することができる。
化合物１の１つ以上の構成原子は、天然または非天然の存在量で、原子の同位体に置き換える、または置換することができる。いくつかの実施形態では、化合物１は、少なくとも１つの重水素原子を含む。例えば、本開示の化合物における１つ以上の水素原子は、重水素に置き換える、または置換することができる。いくつかの実施形態では、化合物は、２つ以上の重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、化合物は、１～２つ、１～３つ、１～４つ、１～５つ、または１～６つの重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、化合物中の全ての水素原子を、重水素原子に置き換える、または置換することができる。
有機化合物中に同位体を含めるための合成法は、当該技術分野では周知のものである（Ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｂｙ Ａｌａｎ Ｆ．Ｔｈｏｍａｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ａｐｐｌｅｔｏｎ－Ｃｅｎｔｕｒｙ－Ｃｒｏｆｔｓ，１９７１、Ｔｈｅ Ｒｅｎａｉｓｓａｎｃｅ ｏｆ Ｈ／Ｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ ｂｙ Ｊｅｎｓ Ａｔｚｒｏｄｔ，Ｖｏｌｋｅｒ Ｄｅｒｄａｕ，Ｔｈｏｒｓｔｅｎ Ｆｅｙ ａｎｄ Ｊｏｃｈｅｎ Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００７，７７４４－７７６５、Ｔｈｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｂｙ Ｊａｍｅｓ Ｒ．Ｈａｎｓｏｎ，Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１）。同位体標識化合物は、ＮＭＲ分光法、代謝実験、及び／またはアッセイなどの様々な研究で使用することができる。
重水素などのより重い同位体での置換は、例えば、インビボ半減期の増加または必要投与量の低減などの高い代謝安定性から得られる、ある特定の治療上の利点をもたらし得ることから、状況によっては好ましい場合がある（例えば、Ａ．Ｋｅｒｅｋｅｓ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１，５４，２０１－２１０、Ｒ．Ｘｕ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｌａｂｅｌ Ｃｏｍｐｄ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２０１５，５８、３０８－３１２参照）。特に、１つ以上の代謝部位での置換は、１つ以上の治療上の利点をもたらす可能性がある。
「放射性標識」または「標識化合物」は、少なくとも１つの放射性核種を組み込んだ化合物であることが理解される。いくつかの実施形態では、放射性核種は、３Ｈ及び１４Ｃからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、放射性核種は、１１Ｃ、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ及び７７Ｂｒからなる群から選択される。
キット
本開示はまた、例えば、本明細書で言及されるがんの治療に有用な薬学的キットを含み、これは、本明細書に記載される薬学的組成物を含有する１つ以上の容器を含む。当業者には明らかなように、そのようなキットは、必要に応じて、例えば、１つ以上の薬学的に許容される担体を有する容器、追加の容器などの様々な従来の医薬キット構成要素のうちの１つ以上をさらに含むことができる。挿入物またはラベルのいずれかとして、投与される成分の量、投与のガイドライン、及び／または成分を混合するためのガイドラインを示す指示書も、キットに含めることができる。
本開示はまた、例えば、本明細書で言及されるがんの治療に有用な薬学的キットを含み、これは、本明細書に記載される薬学的組成物を含有する１つ以上の容器を含む。当業者には明らかなように、そのようなキットは、必要に応じて、例えば、１つ以上の薬学的に許容される担体を有する容器、追加の容器などの様々な従来の医薬キット構成要素のうちの１つ以上をさらに含むことができる。挿入物またはラベルのいずれかとして、投与される成分の量、投与のガイドライン、及び／または成分を混合するためのガイドラインを示す指示書も、キットに含めることができる。
本発明を、具体的な実施例によってより詳細に記載する。以下の実施例は例示の目的のために提供され、いかなる様式でも本発明を限定するようには意図されない。当業者は、本質的に同じ結果をもたらすように変更または改変することができる、様々な重要でないパラメータを容易に認識するであろう。
一般的な方法
Ｈ１２９９細胞（ＲＲＩＤ：ＣＶＣＬ＿００６０）を１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；＃ＳＨ３００７１．０３）を含むＲＰＭＩ－１６４０（ＲＰＭＩ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ；＃１１８７５－０９３）培養液中に維持した。この細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；＃ＣＲＬ－５８０３）から入手したものであった。ＢＡＦ３細胞は、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＤＳＭＺ；Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ；＃ＡＣＣ ３００）から入手したものであり、１０％のＦＢＳ及び４ｎｇ／ｍＬのインターロイキン（ＩＬ）－３を添加したＲＰＭＩ中で生育した。Ｇ３６１細胞（ＲＲＩＤ：ＣＶＣＬ＿１２２０）はＡＴＣＣ（＃ＣＲＬ－１４２４）から入手したものであり、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培養液中に維持した。全てのヒト細胞株は、過去３年以内に、ショートタンデムリピートプロファイリングを用いて認証されている。全ての実験は、マイコプラズマフリーな細胞を用いて実施した。レチファンリマブは、Ｉｎｃｙｔｅから提供されたものであり、抗ヒトプログラム細胞死（ＰＤ）－１抗体である。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、２人の健康なドナー（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ，Ｃｏｌｍａｒ，ＰＡ）の標準的な白血球除去輸血から入手した。
Ｈ１２９９細胞（ＲＲＩＤ：ＣＶＣＬ＿００６０）を１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；＃ＳＨ３００７１．０３）を含むＲＰＭＩ－１６４０（ＲＰＭＩ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ；＃１１８７５－０９３）培養液中に維持した。この細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；＃ＣＲＬ－５８０３）から入手したものであった。ＢＡＦ３細胞は、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＤＳＭＺ；Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ；＃ＡＣＣ ３００）から入手したものであり、１０％のＦＢＳ及び４ｎｇ／ｍＬのインターロイキン（ＩＬ）－３を添加したＲＰＭＩ中で生育した。Ｇ３６１細胞（ＲＲＩＤ：ＣＶＣＬ＿１２２０）はＡＴＣＣ（＃ＣＲＬ－１４２４）から入手したものであり、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培養液中に維持した。全てのヒト細胞株は、過去３年以内に、ショートタンデムリピートプロファイリングを用いて認証されている。全ての実験は、マイコプラズマフリーな細胞を用いて実施した。レチファンリマブは、Ｉｎｃｙｔｅから提供されたものであり、抗ヒトプログラム細胞死（ＰＤ）－１抗体である。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、２人の健康なドナー（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ，Ｃｏｌｍａｒ，ＰＡ）の標準的な白血球除去輸血から入手した。
実施例Ａ：生化学的アッセイ
ＴＡＭファミリーメンバーの酵素活性を阻害する化合物１の生化学的効力を、ＡＸＬ、ＭＥＲ及びＴＹＲＯ３キナーゼドメインの組換えリン酸化形態を使用したＴＲ－ＦＲＥＴアッセイによって調査した。
ＴＡＭファミリーメンバーの酵素活性を阻害する化合物１の生化学的効力を、ＡＸＬ、ＭＥＲ及びＴＹＲＯ３キナーゼドメインの組換えリン酸化形態を使用したＴＲ－ＦＲＥＴアッセイによって調査した。
リン酸化したＡＸＬ（ｐＡＸＬ）、ｃＭＥＲ及びＴｙｒｏ３キナーゼ活性を、時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ－ＦＲＥＴ）アッセイによって測定した。組換えＡＸＬタンパク質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃ＰＶ４２７５）を、ｐＨ７．５、５０ｍＭのトリス、０．２ｍｇ／ｍＬのＡＸＬ、５ｍＭのＡＴＰ、２０ｍＭのＭｇＣｌ２、及び２ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）を含有するバッファー中で、室温で１時間インキュベートすることによってＡＸＬの自己リン酸化を実施し、その後キナーゼアッセイを行った。キナーゼアッセイバッファーは、ｐＨ７．５、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０１％のＮＰ－４０、及び２ｍＭのＤＴＴを含有した。０．６９ｎＭのリン酸化ＡＸＬ、または０．０８８ｎＭのｃＭＥＲ（Ｃａｒｎａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｏｂｅ，Ｊａｐａｎ；＃０８－１０８）、または０．１３７ｎＭのＴＹＲＯ３（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＰＲ７４８０Ａ）の酵素溶液をアッセイバッファー中で調製した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解させた、ペプチド基質ビオチン－ＥＱＥＤＥＰＥＧＤＹＦＥＷＬＥ－アミド（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ，ＭＡ）１ｍＭ原液を、２０００μＭのＡＴＰを含有するアッセイバッファーで１μＭに希釈した。化合物１（１５ｎＬ）をＤＭＳＯ中に溶解させ、化合物プレートから低容量の白色３８４ウェルアッセイプレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）に移動させた。各プレートの適切なウェルに酵素溶液（６μＬ、または酵素ブランクの場合はアッセイバッファー）を添加し、３０分間インキュベートした。次に、６μＬ／ウェルで基質溶液を添加して、反応を開始した。プレートを光から保護し、室温（２１℃）で６０分間（ｃＭＥＲ及びＴＹＲＯ３）または９０分間（ＡＸＬ）、インキュベートした。ｐＨ７．８、５０ｍＭのトリス－ＨＣｌ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、４５ｍＭのＥＤＴＡ、１８０ｎＭのＳＡ－ＡＰＣ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；ＣＲ１３０－１００）、及び３ｎＭのＥｕ－Ｗ１０２４抗ホスホチロシンＰＹ２０（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；ＡＤ００６７）を含有する、６μＬの検出溶液を添加することによって、反応を停止した。プレートを室温で３０分間インキュベートし、ＰｈｅｒａＳｔａｒ ＦＳプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ，Ｏｒｔｅｎｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で、均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）シグナルを測定した。各濃度について阻害率を計算し、半数阻害濃度（ＩＣ５０）値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いたカーブフィッティングから生成した。
ｃＭＥＲ－阻害剤複合体の迅速かつ大幅な希釈の後、ｃＭＥＲ酵素活性の回復率を測定することによって、化合物の可逆性を決定した。ｐＨ７．５、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０１％のＮＰ－４０、及び２ｍＭのＤＴＴを含有するキナーゼアッセイバッファーで、ｃＭＥＲ、ＡＴＰ及びビオチン標識ペプチド基質を希釈した。検出試薬（２４０ｎＭのＳＡ－ＡＰＣ［Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；ＣＲ１３０－１００］及び４ｎＭのＥｕ－Ｗ１０２４抗ホスホチロシンＰＹ２０［Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；ＡＤ００６７］）を、ｐＨ７．８、５０ｍＭのトリス－ＨＣｌ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＢＳＡ、及び４５ｍＭのＥＤＴＡを含有する検出バッファー中で調製した。化合物の阻害様式を特定するために、異なるＡＴＰ濃度（反応での最終濃度が２５、１００、３００及び１０００μＭ）でＩＣ５０値を測定した。化合物１を、ＡＴＰ及び酵素（６６ｐＭのｃＭＥＲ）とともに、８μＬのアッセイバッファー中で、長時間（２時間）インキュベートした。これらの条件下で、化合物、ＡＴＰ及び酵素が平衡に達し、その後、１．５μＭビオチン標識ペプチド４μＬを添加することによって反応を開始した。１時間のインキュベーション後、６０ｍＭのＥＤＴＡ、２４０ｎＭのＳＡ－ＡＰＣ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；ＣＲ１３０－１００）、及び４ｎＭのＥｕ－Ｗ１０２４抗ホスホチロシンＰＹ２０（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；＃ＡＤ００６７）を含有する４μＬの検出試薬によって反応を停止した。３０分のインキュベーション後、アッセイプレートを、ＰｈｅｒａＳｔａｒプレートリーダーによってＨＴＲＦモードで読み取った。用量反応曲線をフィッティングし、ＩＣ５０値をＡＴＰ濃度の関数としてプロットした。競合阻害の式（ＩＣ５０＝Ｋｉ（１＋［ＡＴＰ］／Ｋｍ））にデータを当てはめて、化合物１の阻害定数（Ｋｉ）を計算した。
化合物１の複数ロットからの、ＡＸＬ、ＭＥＲ及びＴＹＲＯ３に対する平均ＩＣ５０値は、それぞれ０．６１±０．３１ｎＭ（ｎ＝１８）、３．１７±１．９７ｎＭ（ｎ＝２５）、及び１０１±２７ｎＭ（ｎ＝２５）であり、ＴＹＲＯ３では約３０倍の選択性が示された。また、化合物１を２００ｎＭで、１７９種のキナーゼを包含する包括的なキナーゼ試験で評価した。化合物１は、ｃ－Ｍｅｔと比較して、ＡＸＬ及びＭＥＲには約６０倍選択的であり、またその他のいかなるキナーゼも阻害しなかった。これらの結果は、化合物１が、ＡＸＬ及びＭＥＲキナーゼの強力かつ高度に選択的な阻害剤であることを示している。ＡＴＰ濃度に関する阻害様式を、ＭＥＲキナーゼアッセイを使用して評価した。図１に示すとおり、ＭＥＲキナーゼに対する化合物１のＩＣ５０値は、ＡＴＰ濃度の高まりとともに直線的に高まり、ＡＴＰと競合する阻害様式を示唆している。
実施例Ｂ：細胞増殖アッセイ
ＴＡＭ受容体ファミリー内の細胞での効力及び選択性を評価するために、ＡＸＬ、ＭＥＲまたはＴＹＲＯ３を安定して発現するマウスＢＡＦ３細胞株を生成した。
ＴＡＭ受容体ファミリー内の細胞での効力及び選択性を評価するために、ＡＸＬ、ＭＥＲまたはＴＹＲＯ３を安定して発現するマウスＢＡＦ３細胞株を生成した。
二量体化配列及びＨＡタグと融合したＡＸＬ、ＭＥＲ、またはＴＹＲＯ３の細胞質ドメインを、ピューロマイシン耐性マーカーを含むｐＭＳＣＶ（マウス幹細胞ウイルス）ベクターにクローニングして、エレクトロポレーションによって個別にＢＡＦ３細胞中へ導入して、３つの構築物を生成した。ＩＬ３－非依存性で、ピューロマイシン耐性のある単一クローンを選択し、特性評価した。ＢＡＦ３細胞増殖への作用を評価するために、ＢＡＦ３細胞、ＢＡＦ３－ＡＸＬ細胞、ＢＡＦ３－ＭＥＲ細胞またはＢＡＦ３－ＴＹＲＯ３細胞（１０００細胞／ウェル）を、２％のＦＢＳを有するＲＰＭＩ－１６４０で希釈した、様々な濃度での化合物１の存在下（最も高い１０μｍの濃度から、３倍の希釈倍率を用いた１０つの濃度ポイント）、または不存在下にて、４８時間、３８４ウェルプレートにおいて処理した。細胞生存率を、ＡＴＰアッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によって、製造業者の手順に従って測定した。データをＤＭＳＯ対照と比較した阻害率に変換し、ＩＣ５０曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してフィッティングした。
安定なＢＡＦ３トランスフェクタントを化合物１によって処理することで、ＡＸＬまたはＭＥＲキナーゼのいずれかを発現するＢＡＦ３細胞の増殖は強力に阻害され、それぞれ１６±１１ｎＭ、１４±４．９ｎＭの５０％増殖阻害濃度（ＧＩ５０）値の濃度が必要であった。しかしＴＹＲＯ３を発現するＢＡＦ３細胞の増殖阻害は弱く（ＩＣ５０＝４９８±１６１ｎＭ）、また親ＢＡＦ３細胞に対しては不活性であった（ＩＣ５０＞４０００ｎＭ）。これらの細胞データは生化学的データと一致しており、化合物１は、ＡＸＬ及びＭＥＲの強力な阻害剤であり、ＴＹＲＯ３に対して３０倍を超える選択性があることを確認できる。
実施例Ｃ：Ｈ１２９９細胞におけるｐＡＸＬ阻害アッセイ
高レベルの内因性ＡＸＬを発現する腫瘍細胞株において、化合物１のＡＸＬ活性を調節する能力を評価した。非小細胞肺癌細胞株Ｈ１２９９は、著しく高いＡＸＬタンパク質発現を呈することが示されている。
高レベルの内因性ＡＸＬを発現する腫瘍細胞株において、化合物１のＡＸＬ活性を調節する能力を評価した。非小細胞肺癌細胞株Ｈ１２９９は、著しく高いＡＸＬタンパク質発現を呈することが示されている。
Ｈ１２９９細胞（３０，０００細胞／ウェル）を９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）に添加し、３７℃、５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。適切な濃度で化合物１を添加し、３７℃、５％のＣＯ２で１時間インキュベートした。ｒｈＧＡＳ６（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ；＃８８５－ＧＳＢ）を各ウェルに１μｇ／ｍｌで添加し、３７℃、５％のＣＯ２で１５分間、プレートをインキュベートした。細胞をハーベストし、１１０μＬの氷冷した溶解バッファー（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ；＃９８０３）中で、プロテアーゼ阻害剤及びホスファターゼ阻害剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃７８４４６）とともに、氷上で１時間溶解し、ＥＬＩＳＡ用として－８０℃で保管した。Ｇｒｅｉｎｅｒ ｌｕｍｉｔｒａｃ高結合プレートを、８μｇ／ｍｌの抗ＡＸＬ抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；ＭＡＢ１５４）とともに、室温で一晩インキュベートすることによって、ＥＬＩＳＡプレートを調製した。プレートを洗浄し、０．１％のＢＳＡを含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を用いてブロッキングした。細胞溶解物をＥＬＩＳＡプレート上に入れ、室温で２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、Ｌａｎｃｅ Ｅｕ－Ｗ１０２４抗ホスホチロシン抗体（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；＃ＡＤ００６７）とともに、ＤＥＬＦＩＡアッセイバッファー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；＃４００２－００１０）中で、室温で２時間インキュベートし、洗浄し、ＤＥＬＦＩＡ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；＃４００１－００１０）を添加した。プレートを、室温で１５分間、緩やかに振盪させ、ＰｈｅｒａＳｔａｒ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で読み取った。データをＤＭＳＯ対照と比較した阻害率に変換した。化合物１のＩＣ５０の決定を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、阻害剤濃度の対数に対して阻害率の曲線をフィッティングすることにより実施した。
Ｈ１２９９細胞を化合物１によって処理することでｐＡＸＬは強力に阻害され、図２に示すように、ＩＣ５０値は１．８±０．６３ｎＭ（Ｎ＝１９）であった。
実施例Ｄ：Ｇ３６１細胞におけるリン酸化ＭＥＲ阻害アッセイ
化合物１のＭＥＲ自己リン酸化をブロックする効力を、Ｇ３６１細胞、すなわち高レベルのＭＥＲキナーゼを発現するメラノーマ細胞株で評価した。
化合物１のＭＥＲ自己リン酸化をブロックする効力を、Ｇ３６１細胞、すなわち高レベルのＭＥＲキナーゼを発現するメラノーマ細胞株で評価した。
新しく解凍したＧ３６１細胞を、使用前に３継代の間回復させ、解凍後、２０継代以内の細胞のみをアッセイで使用した。細胞は、コンフルエントでない条件で保持し、対数増殖期で使用した。１×１０６細胞／ｍＬ（２×１０６細胞／ウェル）のＧ３６１細胞２ｍＬを、６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ；＃３９６１）に２日間添加した。アッセイ時に、培養液１ｍＬを各ウェルに添加した。化合物１の活性を決定するために、ＤＭＳＯ中５ｍＭの化合物１の原液を使用して、ＤＭＳＯワーキングストックの３倍の連続希釈液を作り、それを培養液でさらに希釈した。希釈した化合物１００μＬを各ウェルに、０．２ｎＭ～１μＭまでの範囲の最終濃度で添加した。化合物１が存在しない対照ウェルでは、０．０２％の最終的なＤＭＳＯ濃度を維持するために、全ての試料に０．２２％のＤＭＳＯ、１００μＬを添加した。細胞と化合物との混合物を、３７℃で１時間、５％のＣＯ２を補充した加湿インキュベータ中でインキュベートした。続いて、ＰＢＳ中５５．５μｇ／ｍＬのＭＥＲ活性型抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；＃ＭＡＢ８９１２；５００ｎｇ／ｍＬに相当する最終濃度）１０μＬを、非刺激試料以外の各ウェルに添加し、３７℃で３０分間、５％のＣＯ２を補充した加湿インキュベータ中でインキュベートした。インキュベーション後、各ウェルを２ｍＬの冷却ＰＢＳで２回洗浄した。１ｍＭのＰＭＳＦ、Ｈａｌｔホスファターゼ阻害剤（１：１００の希釈；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃７８４２６）、及びプロテアーゼ阻害剤（１：５０の希釈；Ｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）＃５３５１４０；ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）を含有する溶解バッファー（１２０μＬ；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；＃９８０３）を各試料に添加し、氷上で３０分間インキュベートした。細胞抽出物を９６ウェルＶ底プレートに移し、３０００ｒｐｍにて、４℃で１０分間遠心分離にかけた。リン酸化ＭＥＲ（ｐＭｅｒ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；＃ＤＹＣ２５７９）のＥＬＩＳＡによる分析まで、抽出物を８０℃で保管した。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐｌｕｓマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて、４５０ｎｍで、波長補正を５４０ｎｍとして、プレートの光学密度を測定した。４－パラメータアルゴリズムカーブフィッティングソフトウェア（ＳＯＦＴｍａｘ ＰＲＯ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、標準物質の吸光度を濃度に対してプロットして、標準曲線を生成した。標準曲線からの外挿法によって、未知試料のｐＭＥＲ濃度を決定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０によって、可変勾配を有する非線形回帰シグモイド型用量反応曲線を使用してＩＣ５０値を計算した。
図３に示されるように、化合物１は、Ｇ３６１メラノーマ細胞において、ＭＡＢ８９１２によって誘発されるＭＥＲリン酸化を効果的に防ぎ、ＩＣ５０値は８．３±３．１ｎＭ（Ｎ＝２）であった。
実施例Ｅ：初代マクロファージにおけるＭＥＲキナーゼ活性の阻害
化合物１の、マクロファージにおけるＭＥＲキナーゼ活性を調整する能力を評価した。
化合物１の、マクロファージにおけるＭＥＲキナーゼ活性を調整する能力を評価した。
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ密度勾配遠心沈殿法を使用して分離し、残っている赤血球（ＲＢＣ）を全て、１×ＲＢＣ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて、室温で５分間溶解した。ＰＢＭＣをＰＢＳで洗浄し、その後、製造業者（ＡｕｔｏＭａｃｓ Ｐｒｏ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の指定されたプロトコルに従って、ＣＤ１４マイクロビーズによるポジティブセレクション分離を使用して、単核細胞を濃縮した。最初に、ＣＤ１４＋細胞を、６ウェルプレート中、１００ｎｇ／ｍＬのマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；＃２１６－ＭＣ）を添加した、ＲＰＭＩ－１６４０＋１０％の加熱不活性化したＦＢＳ及び１０％のＡＢヒト血清（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン＋１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において、ウェル当たり１．５×１０６で播種し、５％のＣＯ２、３７℃で１０日間培養した。マクロファージが付着するまで、新鮮なＭ－ＣＳＦを３日ごとに培養液に添加した。アッセイに備えて培養液を取り除き、ヒト血清を含まない新鮮な培養液で、細胞を再度フィードした。化合物１原液を、１００％ＤＭＳＯ中、１０００×で調製し、最初に培養液中に６７倍に希釈し、次にマクロファージに添加するときにさらに１５倍に希釈した。マクロファージを化合物１で、５％のＣＯ２、３７℃において２時間処理した。追加の３０分間のうちに、マクロファージに５μｇ／ｍＬの抗ＭＥＲ抗体ＭＡＢ８９１２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加し、このとき細胞を冷却ＰＢＳで洗浄した。全てのＰＢＳをウェルから慎重に吸引し、乾燥させたプレートを－２０℃で凍結した。
マクロファージを氷上で自然解凍し、その後、２５０μＬ／ウェルの１×Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；＃９８０３）及びＨａｌｔプロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって、４℃で１時間溶解した。溶解した細胞をこすり取り、氷上のＥｐｐｅｎｄｏｒｆバイアル瓶へ移した。溶解物を、１２，７００ｒｐｍ、４℃で１５分間遠心分離した。ＰＤＸ腫瘍を計量し、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ；＃１１８３６１７０００１）を添加した溶解バッファーによって均質化した。腫瘍を氷上で３０分間溶解し、続いて１３，０００ｒｐｍにて１０分間、遠心分離にかけた。ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃２３２２５）を使用して、タンパク質溶解物を定量化した。溶解物を、６×Ｌａｅｍｍｌｉ ＳＤＳ試料バッファー（Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ，Ｈａｖｅｒｈｉｌｌ，ＭＡ）とともに新しい試験管に移し、試料を９５℃で６分間加熱した。Ｎｏｖｅｘ（商標）８－１６％Ｔｒｉｓ－Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｍｉｎｉ Ｇｅｌｓまたは４－１２％Ｔｒｉｓ－Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｎｏｖｅｘ ＷｅｄｇｅＧｅｌｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して、ウェル当たり約５０μｇのタンパク質試料を入れた。ｉＢｌｏｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）ドライ式ブロッティングシステムを用いて、タンパク質をニトロセルロースメンブレンに転写した。洗浄バッファー（１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０、１０ｍＭのトリス－ＨＣｌ、０．１％のＴｗｅｅｎ２０）中の０．５％の脱脂粉乳を用いて、メンブレンを室温で１時間ブロックした。ｐＭＥＲに使用した一次抗体は、ＰｈｏｓｐｈｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ａｕｒｏｒａ，ＣＯ；＃ｐ１８６－７４９）から入手した。残りの抗体は、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手した：ＭＥＲ（＃４３１９）、ｐＡＸＬ（＃５７２４）、ＡＸＬ（＃４５６６）、ＧＡＳ６（＃６７２０２）、ｐＡＫＴ（＃４０６０）、ＡＫＴ（＃９２７２）及びβ－アクチン（＃４９７０）であった。一次抗体を、０．５％の乳／洗浄バッファーに、それぞれ１：５００及び１：１０００で添加し、４℃で一晩振盪した。メンブレンを洗浄バッファー中で３回洗浄し、その後、０．５％の乳／洗浄バッファー中、１：２５００での二次抗体（抗ウサギＩｇＧ１－ＨＲＰ；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）とともに、室温で２時間インキュベーションした。メンブレンを再び洗浄し、その後、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｄｕｒａ Ｅｘｔｅｎｄｅｄ Ｄｕｒａｔｉｏｎ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてバンドを検出し、Ｆｌｕｏｒｏｃｈｅｍ Ｍ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｉｍａｇｅｒ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して視覚化した。
図４に示すように、化合物１は、初代マクロファージにおいて、濃度依存的にｐＭＥＲを阻害することができ、ＩＣ５０は１．６±０．４ｎＭ（Ｎ＝２）であった。これらのデータは、化合物１が、腫瘍細胞及び初代ヒト免疫細胞の両方においてＭＥＲキナーゼ活性を阻害できることを示唆している。
実施例Ｆ：マクロファージによるＴ細胞増殖抑制のアッセイ
化合物１の機能的活性を調べるために、マクロファージによって媒介されるＴ細胞増殖抑制への作用を評価した。
化合物１の機能的活性を調べるために、マクロファージによって媒介されるＴ細胞増殖抑制への作用を評価した。
ヒトＰＢＭＣを、健康なドナーの末梢血からＦｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ；＃１７－１４４０－０２）での密度勾配遠心沈殿法によって単離し、続いて抗ＣＤ１４マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ；＃１３０－０５０－２０１）を用いて精製した。単離したＣＤ１４＋単核細胞／マクロファージを、１００ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；＃２１６－ＭＣ）及び５０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；＃２４０－Ｂ）とともに、３７℃で６日間インキュベートした。１００μＬ／ウェルのＣＤ１４＋マクロファージを、９６ウェル丸底培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ；＃３７９９）中に、０．５×１０６細胞／ｍＬで播種し、化合物１で、３７℃において一晩処理した。ＣＤ４＋ＣＤ２５－エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞を、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ制御性ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；＃１１３６３Ｄ）を用いて単離し、Ｔｅｆｆ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃Ｃ３４５５４）を用いて、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識した。ＣＦＳＥで標識したてのＴｅｆｆ細胞を、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＤ３／ＣＤ２８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃１１１３２Ｄ）と、５：１の比で混合し、続いて１００μＬ／ウェルのＴ細胞／ビーズ混合物を、１×１０６細胞／ｍＬで、化合物１処理済みＣＤ１４＋マクロファージに添加し、３７℃で５日間培養を続けた。Ｔｅｆｆ細胞を、フローサイトメーター（ＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）によって分析し、無細胞上清を、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；＃ＨＣＹＴＯＭＡＧ－６０Ｋ＿３８ｐｌｅｘ）で試験し、異なるサイトカイン及びケモカインの濃度を測定した。
図５Ａは、化合物１が、マクロファージによって媒介されるＴ細胞増殖抑制を部分的に逆転させたことを示している。これは、図５Ｂに示すように、ＩＦＮ－γ産生の高まりと関連があった。
実施例Ｇ：ＰＢＭＣ細胞共培養アッセイ
抗腫瘍応答をさらに高めるための、化合物１のチェックポイント遮断と協働する能力を評価した。Ｈ１２９９肺癌細胞を、化合物１処理済みの刺激したヒトＰＢＭＣ、抗ヒトプログラム細胞死（ＰＤ）－１抗体レチファンリマブ、またはこれらの組み合わせと共培養し、２つの異なる実験で炎症誘発性サイトカインの産生を評価した（図６）。第３の実験を行い、前の２つの実験の結果を確認する結果となった（図示せず）。
抗腫瘍応答をさらに高めるための、化合物１のチェックポイント遮断と協働する能力を評価した。Ｈ１２９９肺癌細胞を、化合物１処理済みの刺激したヒトＰＢＭＣ、抗ヒトプログラム細胞死（ＰＤ）－１抗体レチファンリマブ、またはこれらの組み合わせと共培養し、２つの異なる実験で炎症誘発性サイトカインの産生を評価した（図６）。第３の実験を行い、前の２つの実験の結果を確認する結果となった（図示せず）。
Ｈ１２９９細胞を、ヒトＰＢＭＣとともに、それぞれ４×１０４細胞／ｍＬまたは１６×１０４細胞／ｍＬで、１０％のＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃１５１４０－１２２）、及び１×β－メルカプトエタノール（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃２１９８５－０２３）を含有するＲＰＭＩにおいて共培養した。化合物１またはレチファンリマブを、単剤として、または組み合わせて細胞に添加した。抗ＣＤ３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；＃５５５３３６）、抗ＣＤ２８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；＃５５５７２５）、またはＳＥＡ（Ｔｏｘｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓａｒａｓｏｔａ，ＦＬ；＃ＡＴ１０１ｒｅｄ）を、それぞれ１μｇ／ｍＬ、０．５μｇ／ｍＬまたは１００ｎｇ／ｍＬの最終濃度で添加し、細胞増殖を刺激した。培養物を３７℃で、５％のＣＯ２インキュベータにおいて４日間、インキュベートした。サイトカイン分析用の上清を、マルチプレックスアッセイシステム（カスタムヒトＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘ Ｌｕｍｉｎｅｘキット，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃ＰＰＸ－１５－ＭＸＲＷＥ６Ｐ）を用いて収集した。
化合物１単独では、ＩＦＮ－γ、腫瘍壊死因子－α、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を誘導し、ＩＬ－１２ ｐ７０を穏やかに誘導した（図６Ｂ～図６Ｄ）。また、レチファンリマブも一部のドナーにおいて、これらのサイトカインを誘導した。一方で、化合物１とレチファンリマブとの組み合わせは、ＩＬ－２（図６Ａ）を含めて、個々の剤と比較してサイトカイン産生の著しい増大を示した（図６）。これらのデータは、化合物１とチェックポイント遮断との組み合わせが、インビトロで炎症誘発性サイトカイン産生を誘導できることを示している。
実施例Ｈ：インビボでの有効性試験
化合物１の、インビボでの潜在的な免疫調節活性を試験するために、同系の腫瘍モデルにおいて、抗腫瘍有効性試験を行った。
化合物１の、インビボでの潜在的な免疫調節活性を試験するために、同系の腫瘍モデルにおいて、抗腫瘍有効性試験を行った。
患者腫瘍組織移植（ＰＤＸ）モデルは、一般に使用される動物腫瘍モデルであり、抗がん剤の抗腫瘍有効性を評価するものである（Ｊｉｎ Ｋ，Ｔｅｎｇ Ｌ，Ｓｈｅｎ Ｙ，Ｈｅ Ｋ，Ｘｕ Ｚ，Ｌｉ Ｇ．Ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｕｒ ｔｉｓｓｕｅ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ，Ｃｌｉｎ Ｔｒａｎｓｌ Ｏｎｃｏｌ（２０１０）１２：４７３－８０．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１２０９４－０１０－０５４０－６）。ＰＤＸモデルは、患者からの新鮮ながん組織を、免疫不全マウスに直接的に移植することによって生成される。ＰＤＸモデルは一度もインビトロで継代されなかったという点で、細胞ベースの異種移植片モデルと異なり、一方で細胞ベースの異種移植片は、組織培養で生育された移植細胞から生成される。ＰＤＸモデルは、原発性患者腫瘍の遺伝子構成及び組織形態を保持しているため、前臨床の薬剤発見において有益な手段であることが示されている（Ｉｚｕｍｃｈｅｎｋｏ Ｅ，Ｐａｚ Ｋ，Ｃｉｚｎａｄｉｊａ Ｄ，Ｓｌｏｍａ Ｉ，Ｋａｔｚ Ａ，Ｖａｓｑｕｅｚ－Ｄｕｎｄｄｅｌ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｃａｐｔｕｒｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ａ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ ｃｏｈｏｒｔ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ（２０１７）２８：２５９５－６０５．ｄｏｉ：１０．１０９３／ａｎｎｏｎｃ／ｍｄｘ４１６）。ＰＤＸモデルは、がん適応症全体の腫瘍モデルにおいて、抗がん剤の応答を評価するのに利用されている（Ｇａｏ Ｈ，Ｋｏｒｎ ＪＭ，Ｆｅｒｒｅｔｔｉ Ｓ，Ｍｏｎａｈａｎ ＪＥ，Ｗａｎｇ Ｙ，Ｓｉｎｇｈ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｕｓｉｎｇ ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｔｕｍｏｒ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ ｔｏ ｐｒｅｄｉｃｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｄｒｕｇ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｎａｔ Ｍｅｄ（２０１５）２１：１３１８－２５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．３９５４）。これらの試験は、同じがん適応症の腫瘍間で生じ得る、処置に応答するモデル、同様に処置に応答しないモデルを識別するのに有効であると判明している。
ＭＢＴ－２細胞は、Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｃｅｌｌ Ｂａｎｋから入手し、１０％のＦＢＳを添加したＤＭＥＭ中で維持した。ＭＣ３８細胞はＮＣＩから入手した。４Ｔ１細胞はＡＴＣＣから入手し、１０％のＦＢＳを添加したＲＰＭＩ培養液中で維持した。ＭＢＴ－２の実験では、６～８週齢のＣ３Ｈマウスまたは胸腺欠損ヌードマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）の右後脇腹に、５×１０５のＭＢＴ－２細胞を皮下移植した。ＭＣ３８試験では、１２週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右後脇腹に、ＭＣ３８腫瘍のブライ（インビボで６継代）を移植した。４Ｔ１試験では、６～８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスまたは胸腺欠損ヌードマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右後脇腹に、７．５×１０５の４Ｔ１細胞を皮下移植した。マウスを、腫瘍体積ごとに、各群ｎ＝１０～１２で無作為化した。試験の開始から終了まで、化合物１を１日２回（ＢＩＤ）継続的に経口投与した。ＭＣ３８試験では、抗プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）（ＢＥ０１０１，Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ，Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）を、１週間に２回、１５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。また、ビヒクル群及び化合物１群に、ラットＩｇＧ２ｂ対照抗体（ＢＥ００９０，Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ）を、処置開始時から始め、１週間に２回投与した。４Ｔ１試験では、試験開始時に、抗ＰＤ－Ｌ１の単回用量を、１５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。併用試験では、ビヒクル対照群及び抗ＰＤ－Ｌ１を与えられたマウスに、試験終了まで１日２回、継続的にビヒクルを投与した。ビヒクル及び化合物１は、１日２回、経口投与した。実験の全体を通じて、腫瘍成長及び明白な忍容性についてマウスを観察した。ＰＤＸ腫瘍モデルは、Ｃｈａｍｐｉｏｎｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｈａｃｋｅｎｓａｃｋ，ＮＪ）で実施した。６～８週齢の雌の胸腺欠損ヌードマウスに、ＰＤＸ腫瘍を移植した。腫瘍体積が約１５０～２５０ｍｍ３になったときに、マウスを腫瘍体積ごとに無作為化し、化合物１を１０、３０または１００ｍｇ／ｋｇで１日２回、経口強制投与によって投与した。腫瘍体積は、式（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して計算し、式中、Ｌ及びＷはそれぞれ長さ及び幅の寸法を示す。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）は、式（１－（ＶＴ／ＶＣ））×１００を使用して計算し、式中、ＶＴは処置最終日の処置群の腫瘍体積であり、ＶＣは処置最終日の対照群の腫瘍体積である。Ｄｕｎｎｅｔｔ多重比較検定を用いる二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して、処置群間の統計的有意差を決定した（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）。動物は、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌによって認可された、壁のある設備内に収容した。手順は全て、ＵＳ Ｐｕｂｌｉｃ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｐｏｌｉｃｙ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ及びＩｎｃｙｔｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓに準拠して実施した。
試験の最後に、最後の化合物１投与の４時間後に腫瘍を回収し、氷上に置いた。腫瘍試料を２ｍｍ試験片へと切断し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｃ Ｔｕｂｅｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ；＃１３０－０９６－３３４）へ移した。製造業者のプロトコル（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ；＃１３０－０９６－７３０）に従って、腫瘍分散を実施した。フィルターを冷却ＰＢＳですすぎ、試料をペレット化した。赤血球を、Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；＃５５５８９９）中に溶解した。細胞をＰＢＳで洗浄し、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ染色剤（ＬｉｆｅＴｅｃｈ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ，Ｃｈｉｎａ；＃Ｌ３４９６６）とともに、室温で１５分間、ＰＢＳ中に再懸濁した。続いて、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、染色用バッファー（ＢＤ；＃５５４６５７）に再懸濁し、４℃で３０分間、試料に以下の抗体を添加した：ＣＤ３（ＢＤ；＃５５３０６２）、ＣＤ４５（ＢＤ；＃５６４２７９）、ＣＤ８（ＢＤ；＃５６０１８２）、ＣＤ４（ＢＤ；＃５５２７７５）、ＣＤ１１ｂ（ＢＤ；＃５５７６５７）、Ｆ４／８０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；＃１２－４８０１－８２）、ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ ＩＩ（ＢＤ；＃５６２５６４）及びＣＤ２０６（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；＃１４１７０８）。細胞を洗浄し、固定／透過処理用バッファー（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ００－５５２３－００）によって、固定及び透過処理した。細胞を、透過処理用バッファー（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；００－８３３３）中で再懸濁した。Ｋｉ－６７抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；＃６５２４１３）を、室温で１時間、試料に添加した。続いて、細胞を洗浄し、収集のために染色用バッファー（ＢＤ；＃５５４６５７）中で再懸濁した。Ｍ１マクロファージを、ＣＤ４５＋集団、ＣＤ１１ｂ＋集団、Ｆ４／８０＋集団の中で、ＭＨＣクラスＩＩＨｉ／ＣＤ２０６Ｌｏとして同定し、Ｍ２マクロファージを、ＭＨＣクラスＩＩＬｏ／ＣＤ２０６Ｈｉとして同定した。データをＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ上で取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアによって分析した。腫瘍中のインターフェロン（ＩＦＮ）－γのレベルを、マルチプレックスタンパク質検出キットによって、製造業者のプロトコル（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）に従って数量化した。Ｄｕｎｎｅｔｔ多重比較検定を用いる一元配置ＡＮＯＶＡ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）によって、統計的有意性を決定した。
化合物１は、ＭＢＴ－２腫瘍モデル及び４Ｔ１腫瘍モデルで用量依存的効力を誘導した（図７Ａ及び図７Ｂ）。同じ腫瘍を有する免疫不全マウスでは化合物１の活性はなく、少なくともこれらのモデルにおいては、抗腫瘍活性は機能的免疫系に依存していたことを示している（図７Ｃ）。４Ｔ１モデルでは、化合物１の処置によって、Ｍ２様マクロファージに対するＭ１様マクロファージの比率が用量依存的に高まった（図７Ｄ）。初代ヒトＰＢＭＣを用いて観察されたインビトロ活性の高まりに基づき、化合物１を、インビボでチェックポイント遮断と組み合わせて試験した。ＭＣ３８モデルでは、化合物１及び抗ＰＤ－Ｌ１は、いずれも単剤での抗腫瘍活性を有したが、組み合わせることで著しく高い活性を示した（図８Ａ）。両方の単剤処置によってＣＤ４＋及びＣＤ８＋腫瘍浸潤リンパ球の増殖が誘導され、組み合わせることでその程度が高まった（図８Ｂ及び図８Ｃ）。また、併用処置は、単剤処置と比較して、腫瘍におけるＩＦＮ－γレベルの上昇という結果をもたらした（図８Ｄ）。これらのデータは、化合物１がマクロファージの極性化を誘導し、機能的なＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞活性を高め、チェックポイント遮断と組み合わせられることでインビボでの抗腫瘍活性を増強したことを示している。
実施例Ｉ：肉腫ＰＤＸモデル
肉腫ＰＤＸモデルにおける化合物１の活性を、実施例ＨのＰＤＸモデルにおいて記載されるように評価した。（ａ）ＣＴＧ－２０４１腫瘍、（ｂ）ＣＴＧ－１３０２腫瘍、または（ｃ）ＣＴＧ－１３３９腫瘍を有する胸腺欠損ヌードマウスに、化合物１を１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇで、１日２回、経口投与した。化合物１またはビヒクルで処置したマウスからのＣＴＧ－２０４１腫瘍またはＣＴＧ－１３３９腫瘍を溶解し、ｐＡＸＬ、ＡＸＬ、ｐＭＥＲ、ＭＥＲ、ＧＡＳ６、ｐＡＫＴ、ＡＫＴ、及びβ－アクチンを検出するためのウエスタンブロットによって処理した。１群当たり３匹のマウスを分析した。ウエスタンブロットデータは、異なるゲルから得たものであった。ＣＴＧ－２０４１腫瘍を用いた実験は、血管肉腫のモデルを示す。ＣＴＧ－１３０２腫瘍を用いた実験は、平滑筋肉腫のモデルを示す。ＣＴＧ－１３３９腫瘍を用いた実験は、骨肉腫モデルを示す。
肉腫ＰＤＸモデルにおける化合物１の活性を、実施例ＨのＰＤＸモデルにおいて記載されるように評価した。（ａ）ＣＴＧ－２０４１腫瘍、（ｂ）ＣＴＧ－１３０２腫瘍、または（ｃ）ＣＴＧ－１３３９腫瘍を有する胸腺欠損ヌードマウスに、化合物１を１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇで、１日２回、経口投与した。化合物１またはビヒクルで処置したマウスからのＣＴＧ－２０４１腫瘍またはＣＴＧ－１３３９腫瘍を溶解し、ｐＡＸＬ、ＡＸＬ、ｐＭＥＲ、ＭＥＲ、ＧＡＳ６、ｐＡＫＴ、ＡＫＴ、及びβ－アクチンを検出するためのウエスタンブロットによって処理した。１群当たり３匹のマウスを分析した。ウエスタンブロットデータは、異なるゲルから得たものであった。ＣＴＧ－２０４１腫瘍を用いた実験は、血管肉腫のモデルを示す。ＣＴＧ－１３０２腫瘍を用いた実験は、平滑筋肉腫のモデルを示す。ＣＴＧ－１３３９腫瘍を用いた実験は、骨肉腫モデルを示す。
ＣＴＧ－２０４１では、１日２回、１０、３０及び１００ｍｇ／ｋｇでの化合物１の投薬で同等の活性を有する、強力な抗腫瘍応答が観察され、９５％のＴＧＩが示された（図９Ａ）。またＣＴＧ－１３０２においても、強い抗腫瘍応答が観察された（図９Ｂ）。対照的に、ＣＴＧ－１３３９は、化合物１処置に耐性があった（図９Ｃ）。非応答モデルと比較して、応答モデルで観察される違いの原因である潜在的なメカニズムを理解するために、化合物１の、ＡＸＬ及びＭＥＲ活性化への影響、ならびにＣＴＧ－２４０１腫瘍及びＣＴＧ－１３３９腫瘍における下流のシグナル伝達への影響を評価した（図９Ｄ）。化合物１は両方のモデルにおいてｐＡＸＬ及びｐＭＥＲを阻害した一方で、ＣＴＧ－２０４１は、著しく高いレベルの総ＡＸＬ及びＭＥＲ、特にｐＡＸＬ及びｐＭＥＲを発現した（図９Ｄ）。ｐＡＫＴはＣＴＧ－２０４１のみで阻害されたが、これは化合物１の抗腫瘍効力と関連している。また、化合物１処置は、両方の腫瘍モデルにおける総ＭＥＲレベルを高め、同様にＣＴＧ－２０４１におけるＧＡＳ６レベルを高めた。
（ａ）ＣＴＧ－２４２６（粘液線維肉腫）及び（ｂ）ＣＴＧ－１８６１（消化管間質腫瘍）を有する胸腺欠損ヌードマウスにおいて、さらなる実験を行った。これらの実験の結果を下表に示す。
実施例Ｊ：ヒト化マウスモデル
動物は、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌによって認可された、壁のある設備内に収容した。手順は全て、ＵＳ Ｐｕｂｌｉｃ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｐｏｌｉｃｙ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ及びＩｎｃｙｔｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓに準拠して実施した。５００万個のＨ１２９９細胞（ＡＴＣＣ）を、２０～２４週齢の雌のヒトＣＤ３４＋再構築ＮＳＧマウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）の右後脇腹に皮下移植した。細胞移植には、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中、１：１の体積比率で、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（＃３５４２４８；Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）が含まれた。腫瘍体積が平均で約１５０ｍｍ３に達したときに、マウスを、腫瘍体積及びドナー（群当たり２～５のドナー）ごとに１０群に無作為化し、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を加えたビヒクル、化合物１、レチファンリマブ、または組み合わせのいずれかで処置した。化合物１は、０．５％のメチルセルロース中５０ｍＭのクエン酸バッファーに溶解し、１日２回、３０ｍｇ／ｋｇで経口投与した。レチファンリマブはＰＢＳで希釈し、５日ごとに５ｍｇ／ｋｇで、腹膜内に投与した。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）は、式（１－（ＶＴ／ＶＣ））×１００を使用して計算し、式中、ＶＴは処置最終日の処置群の腫瘍体積であり、ＶＣは処置最終日の対照群の腫瘍体積である。二元配置分散分析を用いて統計分析を行った。
動物は、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌによって認可された、壁のある設備内に収容した。手順は全て、ＵＳ Ｐｕｂｌｉｃ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｐｏｌｉｃｙ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ及びＩｎｃｙｔｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓに準拠して実施した。５００万個のＨ１２９９細胞（ＡＴＣＣ）を、２０～２４週齢の雌のヒトＣＤ３４＋再構築ＮＳＧマウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）の右後脇腹に皮下移植した。細胞移植には、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中、１：１の体積比率で、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（＃３５４２４８；Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）が含まれた。腫瘍体積が平均で約１５０ｍｍ３に達したときに、マウスを、腫瘍体積及びドナー（群当たり２～５のドナー）ごとに１０群に無作為化し、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を加えたビヒクル、化合物１、レチファンリマブ、または組み合わせのいずれかで処置した。化合物１は、０．５％のメチルセルロース中５０ｍＭのクエン酸バッファーに溶解し、１日２回、３０ｍｇ／ｋｇで経口投与した。レチファンリマブはＰＢＳで希釈し、５日ごとに５ｍｇ／ｋｇで、腹膜内に投与した。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）は、式（１－（ＶＴ／ＶＣ））×１００を使用して計算し、式中、ＶＴは処置最終日の処置群の腫瘍体積であり、ＶＣは処置最終日の対照群の腫瘍体積である。二元配置分散分析を用いて統計分析を行った。
実施例Ｋ：第Ｉ相試験
本実施例は、化合物１単剤（パート１）及びレチファンリマブと組み合わせた化合物１（パート２）の安全性及び忍容性、薬動学、薬力学、ならびに予備的な効力を評価することを意図した、第Ｉ相の非盲検試験について記載する。
本実施例は、化合物１単剤（パート１）及びレチファンリマブと組み合わせた化合物１（パート２）の安全性及び忍容性、薬動学、薬力学、ならびに予備的な効力を評価することを意図した、第Ｉ相の非盲検試験について記載する。
パート１及びパート２の両方に、用量決定及び用量拡大が含まれる。パート１Ａ及びパート１Ｂでは、選択された固形腫瘍を有する参加者を登録する。パート１Ｃでは、ＡＭＬを有する参加者を登録する。パート２Ａ及びパート２Ｂでは、選択された固形腫瘍を有する参加者のみ登録する。試験の治療は、疾患の進行、容認できない毒性、死亡、同意の取下げ、または他のいかなる治療中止基準が満たされるまで続けられる。
パート１：化合物１単剤
試験はパート１Ａから開始する。最初に、開始用量レベルコホートの３人の参加者に化合物１の単回用量を与え、続いて時間を計ったＰＫ評価を行って曝露を約１週間確認し、その後、継続的投与を開始する。各参加者の継続的投与の用量レベルは、以下に記載の曝露に基づく投薬ガイドラインに従って、本ＰＫ評価での曝露に基づいて決定する。
・単回用量のＰＫ分析からのＡＵＣ０－２４ｈが＞１０００ｎＭ・ｈであるが＜２０００ｎＭ・ｈ、及びＣ２４ｈが≧１５ｎＭである場合、１日１回（ＱＤ）、１０ｍｇの化合物１単剤の用量で継続的投与を開始する。
・単回用量のＰＫ分析からのＡＵＣ０－２４ｈが＞２０００ｎＭ・ｈ、及びＣ２４ｈが＞１５ｎＭである場合、継続的投与は５ｍｇＱＤで開始する。
・単回用量のＰＫ分析からのＡＵＣ０－２４ｈが＜１０００ｎＭ・ｈ、またはＣ２４ｈが＜１５ｎＭである場合、継続的投与は１５ｍｇＱＤで開始する。
・単回用量のＰＫ分析からのＡＵＣ０－２４ｈが＞１５，０００ｎＭ・ｈ、またはＣ２４ｈ＞５０ｎＭである場合、参加者の曝露レベルはメディカルモニターによって評価され、参加者が安全に治療され得るかどうか、または参加者が試験の治療を中止することになるかを決定する。
試験はパート１Ａから開始する。最初に、開始用量レベルコホートの３人の参加者に化合物１の単回用量を与え、続いて時間を計ったＰＫ評価を行って曝露を約１週間確認し、その後、継続的投与を開始する。各参加者の継続的投与の用量レベルは、以下に記載の曝露に基づく投薬ガイドラインに従って、本ＰＫ評価での曝露に基づいて決定する。
・単回用量のＰＫ分析からのＡＵＣ０－２４ｈが＞１０００ｎＭ・ｈであるが＜２０００ｎＭ・ｈ、及びＣ２４ｈが≧１５ｎＭである場合、１日１回（ＱＤ）、１０ｍｇの化合物１単剤の用量で継続的投与を開始する。
・単回用量のＰＫ分析からのＡＵＣ０－２４ｈが＞２０００ｎＭ・ｈ、及びＣ２４ｈが＞１５ｎＭである場合、継続的投与は５ｍｇＱＤで開始する。
・単回用量のＰＫ分析からのＡＵＣ０－２４ｈが＜１０００ｎＭ・ｈ、またはＣ２４ｈが＜１５ｎＭである場合、継続的投与は１５ｍｇＱＤで開始する。
・単回用量のＰＫ分析からのＡＵＣ０－２４ｈが＞１５，０００ｎＭ・ｈ、またはＣ２４ｈ＞５０ｎＭである場合、参加者の曝露レベルはメディカルモニターによって評価され、参加者が安全に治療され得るかどうか、または参加者が試験の治療を中止することになるかを決定する。
用量漸増は、最初に３人の参加者に投与される最も低い用量から開始する。例えば、最初の３人の参加者のうちの１人に５ｍｇＱＤを与える場合、指定の開始用量レベルコホートは５ｍｇＱＤとなり、３＋３＋３の試験デザインを用いて安全性及び忍容性について評価する。このシナリオに基づいて、５ｍｇの用量を許容できると宣言する十分な参加者及びデータが確保できるまで、参加者は５ｍｇコホートに登録される。同様に、最初の参加者３人の最低用量が１０ｍｇＱＤまたは１５ｍｇＱＤである場合、それぞれ１０ｍｇＱＤまたは１５ｍｇＱＤが指定の開始用量レベルとなり、その用量レベルのコホートが許容できると宣言されるまで、参加者は最低用量レベルのコホートに登録されるものとする。単回用量のＰＫ分析のうち、最初の３人の参加者のいずれかが、指定の開始用量より高い化合物１の用量で開始する場合、その参加者はその曝露ベースの用量にとどまり、相当する用量レベルのコホート分析に包含される。
サイクル１、１日目の最初の参加者３人からのレベルが目標となる曝露を下回る（ＡＵＣ０－２４ｈ１０００ｎＭ・ｈ、またはＣ２４ｈ≦１５ｎＭである）場合、次の用量レベル増加は、５０％超１００％以下としてもよい。単回用量のＰＫ分析は、用量が５０％超増化する任意の用量レベルコホートの、最初の３人の参加者で実施し、さらに治験依頼者の裁量により追加の参加者で、または他の用量レベルコホートで実施してもよい。化合物１の用量決定スキームを以下に示す。
パート１Ａでの用量拡大のための推奨用量（「ＲＤＥ」）の選別に応じて、パート１Ｂを開始する。
パート１Ｂには、化合物１のＲＤＥの安全性、忍容性、効力及び薬力学的効果をさらに特性決定するための、それぞれ約１２人の参加者が登録される、独立した４種の腫瘍別（黒色腫、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＣＨＮ及び軟部組織肉腫）の用量拡大コホートが含まれる。パート１Ｂの全ての参加者からの対になる腫瘍生検（治療前、及びサイクル２、１日目とサイクル３、１日目の間）が必要となる。パート２Ａの化合物１及びレチファンリマブの組み合わせ漸増からの安全性データが入手でき、組み合わせ用量が安全かつ許容できると決定されれば、進行中のパート１Ｂ用量拡大コホートの参加者は、初期の治療上の生検及び腫瘍撮像の完了後に、治験依頼者の承認付きで、レチファンリマブを投与されてもよい。併用療法を開始するパート１Ｂの参加者は、サイクル１と、サイクル２安全性及びＰＫ評価とを繰り返す必要があり、併用療法の開始後４～８週間に発生する繰り返しの生検に同意しなければならない。化合物１の用量は、パート２Ａでレチファンリマブと組み合わせて試験し、安全かつ許容できると決定された用量を超えない。
パート１Ｃの試験もまた、パート１ＡでのＲＤＥの特定に応じて開始してもよく、パート１Ｂと平行して実行する。この拡大コホートへの登録の開始は、治験依頼者の裁量に従う。試験のこのパートでは、再発した及び／または難治性のＡＭＬを有する参加者が、１つの独立した拡大コホートに登録され、この集団での、化合物１のＲＤＥの安全性、忍容性及び予備効力を評価する。パート１Ｃでは、ステージ１終了後に反応が観察されない場合、早期の終了を可能とする中止規則を有する、Ｓｉｍｏｎの２段階デザインを使用する。ステージ１の間、１０人の参加者が登録される。目的の応答が観察されない場合、臨床的な活性の根拠なく治療される参加者数を最小限にするために、追加の登録は行わないものとする。少なくとも１つの目的の応答が観察される場合、パート１Ｃに最大２９人登録されるように、そのコホートに最大１９人の追加参加者が登録されてもよい。
パート２：レチファンリマブと組み合わせた化合物１
パート２には、パート２Ａ及びパート２Ｂが含まれる。パート２Ａは用量決定段階であり、選択された進行性の固形腫瘍を有する参加者における、レチファンリマブと組み合わせた化合物１の安全性及び忍容性を評価するために、３＋３＋３デザインを使用して実施する。
パート２には、パート２Ａ及びパート２Ｂが含まれる。パート２Ａは用量決定段階であり、選択された進行性の固形腫瘍を有する参加者における、レチファンリマブと組み合わせた化合物１の安全性及び忍容性を評価するために、３＋３＋３デザインを使用して実施する。
パート２Ａは、パート１Ａで用量レベルが安全かつ許容できると確認され次第開始し、パート１Ａと平行して登録してもよいが、現在確立されている許容できる用量を１レベル下回る用量レベルとする。
レチファンリマブと組み合わせた化合物１の用量決定スキームを以下に記載する。
パート２Ｂは、パート２Ａで決定した、レチファンリマブと組み合わせたＲＤＥでの化合物１の安全性、忍容性、効力及び薬力学的効果をさらに評価するための用量拡大である。それぞれ約１２人の参加者の、独立した４種の腫瘍別（黒色腫、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＣＨＮ及び軟部組織肉腫）の拡大コホートが登録される。パート２Ｂの全ての参加者からの、対になる腫瘍生検（治療前、及びサイクル２、１日目とサイクル３、１日目の間）が必要である。
試験での治療
各２８日サイクルにおいて、１日１回、経口カプセルとして化合物１を投与する。各２８日サイクルの１日目に、ＩＶを介してレチファンリマブを投与する。試験薬剤（複数可）は、単剤または併用レジメンによって、疾患の進行、薬剤の中断を必要とする有害事象、または参加者もしくは医師の決定があるまで継続する。参加者は、利益を得られる場合、最長１年間治療を継続する。その時点で、治験責任医師及び治験依頼者は、治療の継続が臨床的に適切であるかどうかを検討する。
各２８日サイクルにおいて、１日１回、経口カプセルとして化合物１を投与する。各２８日サイクルの１日目に、ＩＶを介してレチファンリマブを投与する。試験薬剤（複数可）は、単剤または併用レジメンによって、疾患の進行、薬剤の中断を必要とする有害事象、または参加者もしくは医師の決定があるまで継続する。参加者は、利益を得られる場合、最長１年間治療を継続する。その時点で、治験責任医師及び治験依頼者は、治療の継続が臨床的に適切であるかどうかを検討する。
参加者は、毎朝、ほぼ同じ時間に化合物１を服用しなければならない。投与のスケジュールは、新たなＰＫ観察を基準として調整してもよい。
参加基準
以下の全ての基準が適用される場合にのみ、参加者は本試験に参加する資格がある。
以下の全ての基準が適用される場合にのみ、参加者は本試験に参加する資格がある。
まず、全ての参加者は１８歳以上である必要がある。
パート１Ａ、１Ｂ、２Ａ及び２Ｂ：固形腫瘍の組織学的または細胞学的エビデンスがあり、そのために標準療法を利用できない、または化学療法、標的治療、生物学的療法及び免疫療法を含み得る標準療法にもかかわらず進行した、もしくは標準療法に耐えられない、のいずれかであり、以下で概説するコホート別の要件を含む：
・外科手術またはその他の根治的治療もしくは手順に適さないとみなされる、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に従って測定可能な病変であり、評価に利用できる少なくとも１つの標的病変がある。過去の放射線療法の照射野内、または他の局所療法に供された領域に位置している腫瘍病変は、病変での進行が示された場合、測定可能であるとみなされる。
・外科手術またはその他の根治的治療もしくは手順に適さないとみなされる、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に従って測定可能な病変であり、評価に利用できる少なくとも１つの標的病変がある。過去の放射線療法の照射野内、または他の局所療法に供された領域に位置している腫瘍病変は、病変での進行が示された場合、測定可能であるとみなされる。
パート１Ａ及びパート２Ａのみ：進行性もしくは転移性の胃腺癌もしくはＧＥＪ腺癌、ＨＣＣ、黒色腫、ＮＳＣＬＣ、ＲＣＣ、軟部組織肉腫、ＳＣＣＨＮ（再発性もしくは転移性）、ＴＮＢＣまたは尿路上皮癌。ＭＳＩ－Ｈ腫瘍を含む追加の腫瘍組織も、メディカルモニターの承認付きで許可されてもよい。
パート１Ｂ及びパート２Ｂのみ：
コホート１：進行性または転移性黒色腫
－１回の過去のＰＤ－１／Ｌ１含有レジメン（単剤として、または併用で）を含むがこれらに限定されない、利用できる標準治療を受け、少なくとも２回分の用量の抗ＰＤ－１／Ｌ１剤を与えられ、治療中または治療後にＰＤを経験していなければならない。
－ＢＲＡＦのステータスが既知である（Ｖ６００ｅ及びＶ６００ｋ）。
－眼内黒色腫は除外する。
コホート１：進行性または転移性黒色腫
－１回の過去のＰＤ－１／Ｌ１含有レジメン（単剤として、または併用で）を含むがこれらに限定されない、利用できる標準治療を受け、少なくとも２回分の用量の抗ＰＤ－１／Ｌ１剤を与えられ、治療中または治療後にＰＤを経験していなければならない。
－ＢＲＡＦのステータスが既知である（Ｖ６００ｅ及びＶ６００ｋ）。
－眼内黒色腫は除外する。
コホート２：進行性または転移性ＮＳＣＬＣ
－１回の過去のＰＤ－１／Ｌ１含有レジメン（単剤として、または併用で）を含むがこれらに限定されない、利用できる標準治療を受け、少なくとも２回分の用量の抗ＰＤ－１／Ｌ１剤を与えられ、治療中または治療後にＰＤを経験していなければならない。
－既知のドライバー変異（ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＢＲＡＦ）を有する腫瘍をもつ参加者で、過去に適切な標的指向型薬剤で治療したことがある参加者は、登録を許可される。
－ＰＤ－Ｌ１発現のステータス及び／またはＴＰＳが既知である。
－１回の過去のＰＤ－１／Ｌ１含有レジメン（単剤として、または併用で）を含むがこれらに限定されない、利用できる標準治療を受け、少なくとも２回分の用量の抗ＰＤ－１／Ｌ１剤を与えられ、治療中または治療後にＰＤを経験していなければならない。
－既知のドライバー変異（ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＢＲＡＦ）を有する腫瘍をもつ参加者で、過去に適切な標的指向型薬剤で治療したことがある参加者は、登録を許可される。
－ＰＤ－Ｌ１発現のステータス及び／またはＴＰＳが既知である。
コホート３：再発性または転移性ＳＣＣＨＮ
－１回の過去のＰＤ－１／Ｌ１含有レジメン（単剤として、または併用で）を含むがこれらに限定されない、利用できる標準治療を受け、少なくとも２回分の用量の抗ＰＤ－１／Ｌ１剤を与えられ、治療中または治療後にＰＤを経験していなければならない。
－ＰＤ－Ｌ１発現のステータス及び／またはＴＰＳが既知である。
－上咽頭、甲状腺、唾液腺または非扁平上皮組織の癌腫は除外する。
－１回の過去のＰＤ－１／Ｌ１含有レジメン（単剤として、または併用で）を含むがこれらに限定されない、利用できる標準治療を受け、少なくとも２回分の用量の抗ＰＤ－１／Ｌ１剤を与えられ、治療中または治療後にＰＤを経験していなければならない。
－ＰＤ－Ｌ１発現のステータス及び／またはＴＰＳが既知である。
－上咽頭、甲状腺、唾液腺または非扁平上皮組織の癌腫は除外する。
コホート４：進行性または転移性の軟部組織肉腫
－利用可能な標準治療を受けていなければならない。
－適格なサブタイプとしては、平滑筋肉腫、未分化型／脱分化型の脂肪肉腫、骨未分化高悪性度多形肉腫／ＭＦＨ、粘液線維肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、類上皮肉腫、明細胞肉腫、滑膜肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫及び血管肉腫が挙げられる。追加の組織も、メディカルモニターの承認付きで許可されてもよい。
－過去に抗ＰＤ－１／Ｌ１標的指向治療を受けたことがあってはならない。
－利用可能な標準治療を受けていなければならない。
－適格なサブタイプとしては、平滑筋肉腫、未分化型／脱分化型の脂肪肉腫、骨未分化高悪性度多形肉腫／ＭＦＨ、粘液線維肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、類上皮肉腫、明細胞肉腫、滑膜肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫及び血管肉腫が挙げられる。追加の組織も、メディカルモニターの承認付きで許可されてもよい。
－過去に抗ＰＤ－１／Ｌ１標的指向治療を受けたことがあってはならない。
パート１Ｃ：ＷＨＯの基準で定義される再発した、及び／または原発性で難治性のＡＭＬ。急性前骨髄球性白血病（Ｍ３）、治療関連ＡＭＬ及び移行型（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ）のＭＤＳは除外する。
除外基準
以下の基準のいずれかに該当する場合、参加者は試験から除外される。
以下の基準のいずれかに該当する場合、参加者は試験から除外される。
１．ＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害剤または誘導物質を投与されている参加者。
ａ．過去に強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤を伴う治療を行った参加者が試験に登録するためには、化合物１の初回投与の前に、５半減期以上のウォッシュアウト期間が必要である。
ｂ．ＣＹＰ３Ａ４誘導物質の治療を行った参加者が試験に登録するためには、化合物１の初回投与の前に、１４日以上のウォッシュアウト期間が必要である。
ａ．過去に強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤を伴う治療を行った参加者が試験に登録するためには、化合物１の初回投与の前に、５半減期以上のウォッシュアウト期間が必要である。
ｂ．ＣＹＰ３Ａ４誘導物質の治療を行った参加者が試験に登録するためには、化合物１の初回投与の前に、１４日以上のウォッシュアウト期間が必要である。
２．黄斑変性症、増殖性糖尿病網膜症または黄斑浮腫を伴う糖尿病性網膜症、レチナール静脈閉塞、ブドウ膜炎、中心性漿液性網膜症、白血病性網膜症、遺伝性の網膜変性を有する参加者、遺伝性の網膜変性の家族歴がある参加者、及び瞳孔散大からの閉塞隅角緑内障の危険がある参加者は不適格である。眼科領域スクリーニング検査の間に、その他の臨床的に重大な異常をもつことが特定された参加者は、眼のモニタリングを混乱させる可能性があるため不適格である。眼科領域スクリーニング検査の間に異常が確認された場合、治験責任医師は、メディカルモニターに連絡して、適格性について検討しなければならない。
３．サイクル１、１日目から６ヵ月以内に、ＬＶＥＦ＜４０％、不安定狭心症、急性心筋梗塞を含む臨床的に重大な心臓病があった、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｃｌａｓｓ ＩＩＩまたはＩＶのうっ血性心不全、及び治療を要する不整脈がある。
４．治験責任医師の判断で、臨床的に有意性のあるＥＣＧの履歴または存在。スクリーニングのＱＴｃＦ間隔＞４８０ミリ秒は除外する。単一のＱＴｃが４８０ミリ秒を超える場合は、３回のＥＣＧの平均ＱＴｃが４８０ミリ秒未満であれば、参加者は登録してもよい。心室内伝導遅延を有する参加者（ＱＲＳ間隔＞１２０ミリ秒）の場合は、治験依頼者の承認付きで、ＱＴｃの代わりにＪＴｃ間隔を使用してもよい。ＱＴｃの代わりにＪＴｃを使用する場合、ＪＴｃは３４０ミリ秒以下でなければならない。左脚ブロックを有する参加者は除外する。
５．未治療の脳転移もしくはＣＮＳ転移、または進行中の脳転移もしくはＣＮＳ転移（例えば、新しい脳転移もしくは脳転移拡大のエビデンス、または脳転移もしくはＣＮＳ転移に起因する新たな神経症状）がある。過去に治療を受け、脳転移またはＣＮＳ転移が臨床的に安定している参加者で、２週間以上、全てのコルチコステロイドをやめている参加者は適格である。
６．過去の治療とは関係なく、もしくは過去の免疫チェックポイント阻害剤治療から誘発された、過去２年間で全身性治療を必要とした、活動性もしくは非活動性の自己免疫疾患もしくは症候群（例えば、関節リウマチ、中程度もしくは重篤な乾癬、多発性硬化症、炎症性腸疾患）を有する参加者、または自己免疫疾患もしくは炎症性疾患のために全身性治療を受けている参加者（すなわち、疾患修飾剤、コルチコステロイドもしくは免疫抑制剤の使用）。
７．過去にグレード３以上の免疫関連副作用（ＡＥ）、または過去の免疫療法に関するあらゆる眼毒性を有する参加者。次のグレード３以上のＡＥは許可される：
ａ．局所療法で解消したグレード３の発疹。
ｂ．治療の中断を必要としない無症候性リパーゼ上昇。
ｃ．上述の除外基準６に従って許可される自己免疫状態。
ａ．局所療法で解消したグレード３の発疹。
ｂ．治療の中断を必要としない無症候性リパーゼ上昇。
ｃ．上述の除外基準６に従って許可される自己免疫状態。
８．検査値がプロトコルで定義された範囲内ではない。以下のスクリーニングの化学的検査及び血液検査が、治療開始の７日より前に実施される場合、サイクル１、１日目の試験薬剤の投与前に検査を繰り返し、適格性を確認する必要がある。以下のようなスクリーニングの検査値を有する参加者は、不適格である。
９．アセノクマロール、フルインジオン、フェンプロクモン及びワルファリンが挙げられるが、これらに限定されない、任意のビタミンＫ拮抗剤を投与されている参加者は除外する。
１０．試験薬剤を初回投与する前に、下記間隔の範囲内で抗がん剤または治験薬による治療を受けている：
ａ．化学療法、標的指向低分子治療または放射線療法については少なくとも１４日間。参加者は、治療の結果として放射線肺炎を患っていてはならない。非ＣＮＳ疾患に対する緩和照射では、治験依頼者の承認付きで１週間のウォッシュアウト期間で許可される。
ｂ．抗がん剤療法に使用される過去のモノクローナル抗体については少なくとも２８日。長い半減期（例えば、＞５日）を有するその他の剤では、５日の半減期の前に登録するには、メディカルモニターの承認が必要である。
ａ．化学療法、標的指向低分子治療または放射線療法については少なくとも１４日間。参加者は、治療の結果として放射線肺炎を患っていてはならない。非ＣＮＳ疾患に対する緩和照射では、治験依頼者の承認付きで１週間のウォッシュアウト期間で許可される。
ｂ．抗がん剤療法に使用される過去のモノクローナル抗体については少なくとも２８日。長い半減期（例えば、＞５日）を有するその他の剤では、５日の半減期の前に登録するには、メディカルモニターの承認が必要である。
１１．試験治療の開始前に、過去の治療（過去の免疫療法など）の毒性作用から、及び／または過去の外科的処置からの合併症から、グレード１以下、またはベースラインに回復していない。末梢神経毒性、脱毛症及び疲労感などの、解消が期待されない安定な慢性毒性は許可される。
１２．試験治療の初回投与前の７日以内に全身性コルチコステロイドを使用していない。
１３．試験治療の初回投与前の３ヵ月以内に生ワクチンを接種している。
１４．全身性治療を必要とする活動性感染症がある。抗生物質の全身投与には２８日のウォッシュアウト期間が必要となる。試験中及びスクリーニング中のプロバイオティクスの使用は禁止される。
１５．ＨＢＶ感染もしくはＨＣＶ感染のエビデンス、または再活性化のリスクがある。Ｂ型肝炎ウイルスＤＮＡ及びＨＣＶ ＲＮＡは、検出不可能でなければならない。参加者は、ＨＢＶ ＤＮＡ、ＨＣＶ ＲＮＡ、Ｂ型肝炎表面抗原または抗Ｂ型肝炎コア抗体について陽性であることはできない。
１６．ＨＩＶの既往歴（ＨＩＶ１／２抗体）がある。
１７．試験薬剤または製剤成分の任意の成分に対して、過敏症または重篤な反応を示す。
１８．スクリーニングのための訪問から開始し、試験治療の最終投与から１８０日後までの、試験の計画継続期間中に、妊娠中である、または授乳中である、または子供の妊娠や子供の父親となる予定がある。
１９．治験責任医師の判断で、治験治療薬の投与及び必要な治験来院への参加を含む、治験への完全な参加を妨げる、参加者に重大なリスクをもたらす、または治験データの解釈を妨げる条件がある。
２０．参加者（もしくは親、保護者もしくは代諾者）がＩＣＦを理解できない、またはＩＣＦに署名しない。
２１．嚥下障害、短腸症候群、胃不全麻痺、または経口投与される薬剤の服用または消化管吸収を制限するその他の状態が確認される参加者。
２２．パート１Ｃのみ：化合物１の初回投与から６０日以内にＨＳＣＴを受けた参加者、またはスクリーニング時に、ＨＳＣＴ後の免疫抑制療法を受けている参加者もしくは臨床的に重大なＧＶＨＤを有する参加者。（進行中の皮膚ＧＶＨＤのための外用ステロイドの使用は許容される。）
２３．パート１Ｃのみ：活動性ＣＮＳ白血病を示唆する臨床的な症状を有する参加者、またはＣＮＳ白血病が認められる参加者。脳脊髄液の評価は、スクリーニング中に白血病によるＣＮＳ関与が臨床的に疑われる場合にのみ必要とされる。
２３．パート１Ｃのみ：活動性ＣＮＳ白血病を示唆する臨床的な症状を有する参加者、またはＣＮＳ白血病が認められる参加者。脳脊髄液の評価は、スクリーニング中に白血病によるＣＮＳ関与が臨床的に疑われる場合にのみ必要とされる。
２４．間質性肺疾患のエビデンス、間質性肺疾患または活動性の非感染性肺炎の既往歴がある。
２５．同種異系幹細胞移植を含む、臓器移植の既往歴（コホート１Ｃは除外）。
２６．過去のチェックポイント阻害剤治療の間に、免疫関連毒性があり、そのために治療の永久的な中止が推奨される（製品ラベルもしくはコンセンサスガイドラインに従う）、または管理に集中的もしくは長期にわたる免疫抑制を必要とする、あらゆる免疫関連毒性がある（ホルモン補充療法で十分に制御される内分泌病を除く）。
２７．眼・皮膚白皮症の診断がなされている。
本明細書で説明されるものに加えて、本発明の様々な修正は、前述の説明から当業者には明らかとなろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。本出願で引用された全ての特許、特許出願、及び刊行物を含む各参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
Claims (21)
- 患者のがんを治療する方法であって、前記患者に、
（ｉ）以下の構造を有する化合物１：
（ｉｉ）ヒトＰＤ－１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体が、（ｉｉ－１）ＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、及び（ｉｉ－２）ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、
（ａ）前記ＶＨ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号６）を含み、
（ｂ）前記ＶＨ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）を含み、
（ｃ）前記ＶＨ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）を含み、
（ｄ）前記ＶＬ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）を含み、
（ｅ）前記ＶＬ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）を含み、
（ｆ）前記ＶＬ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメントと、
を投与することを含む、前記方法。 - 化合物１及び前記抗体が同時に投与される、請求項１に記載の方法。
- 化合物１及び前記抗体が逐次的に投与される、請求項１に記載の方法。
- 化合物１が経口投与される、請求項１に記載の方法。
- 前記抗体または抗原結合フラグメントが、静脈内投与を介して投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
- 前記抗体または抗原結合フラグメントが、３７５ｍｇの用量で、３週間ごとに１回投与される、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記抗体または抗原結合フラグメントが、５００ｍｇの用量で、４週間ごとに１回投与される、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記抗体または抗原結合フラグメントが、７５０ｍｇの用量で、４週間ごとに１回投与される、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ＶＨドメインが、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ＶＬドメインが、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ＶＨドメインが配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
- （ａ）前記抗体がＦｃ領域及びヒンジドメインを含み、
（ｂ）前記Ｆｃ領域及び前記ヒンジドメインはＩｇＧ４タイプであり、
（ｃ）前記ヒンジドメインが安定化をもたらす変異を含む、
請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。 - 前記抗体が重鎖を含み、前記重鎖が配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記抗体が軽鎖を含み、前記軽鎖が配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
- 前記抗体が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記抗体が、ＩｇＧ１タイプであるＦｃ領域を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記抗体が重鎖を含み、前記重鎖が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２及び請求項１６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記抗体が軽鎖及び重鎖を含み、前記重鎖が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２及び請求項１６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記抗体がヒト化抗体である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記がんが、肝細胞癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、肛門癌、メルケル細胞癌、胃癌、頭頸部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、食道癌、胆嚢癌、膵臓癌、甲状腺癌、皮膚癌、白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、有毛細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、膠芽腫、黒色腫、及び横紋肉腫から選択される、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記がんが、肉腫、頭頸部癌、黒色腫、及び非小細胞肺癌から選択される、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
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