JP2022528030A - 多機能性融合タンパク質及びその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、融合タンパク質、及び治療を必要とする患者に治療有効量の上記融合タンパク質を投与することを含む治療方法に関する。【選択図】なし。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１月７日に出願された米国仮特許出願第６２／７８９２１２号の米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく優先権を主張するものであり、その仮特許出願の全体は参照により本明細書に援用される。

複数の経路によって、感染細胞及びがん細胞の生存、並びにＴ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの免疫系細胞の活性化又は抑制が制御される。Ｔ細胞に対して共刺激性及び抑制性第２シグナルを伝える１つの経路はプログラムド・デス１（ＰＤ－１、ＣＤ２７９としても知られる）受容体並びにそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１；ＣＤ２７４）及びＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ；ＣＤ２７３）によって代表される。ＰＤ－１は、休止Ｔ細胞ではなく、活性化を受けたＴ細胞の上で発現されるＣＤ２８／ＣＴＬ４ファミリーメンバーである（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら著、（１９９６年）、Ｉｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第８巻：７７３頁）。リガンドのＰＤ－１への結合は、サイトカイン生産の低下及びＴ細胞の生存率低下を引き起こす抑制シグナルを成立させる（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら著、（１９９９年）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ誌、第１１巻：１４１頁、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら著、（２００１年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２９１巻：３１９頁、Ｃｈｅｍｉｔｚら著、（２００４年）、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第１７３巻：９４５頁）。

ウイルスマクロファージ炎症タンパク質－ＩＩ（ｖＭＩＰ－ＩＩ）は、ＣＣＲ５ケモカイン受容体及びＣＸＣＲ４ケモカイン受容体を含むＣＣケモカイン受容体及びＣＸＣケモカイン受容体と相互作用するヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ－８）によってコードされるケモカインである。ＨＩＶ－１侵入のｖＭＩＰ－ＩＩによる阻害は、標的細胞内へＨＩＶ－１が侵入するためのＨＩＶ－１受容体であるＣＣＲ３、ＣＣＲ５、及びＣＸＣＲ４を介して行われる。

Ｔ細胞の活性化及びＴ細胞のエフェクター機能の維持は、正と負のシグナルの複雑な相互作用によって制御されている。ＴＮＦリガンド／ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーがこのシグナル集団において重要な位置を占めており、シグナルの免疫系細胞間での橋渡し並びに免疫系細胞と他の器官系の細胞との間での橋渡しを行っている。このようにして、ＴＮＦスーパーファミリーメンバーは、細胞生存と細胞死、細胞分化、及び炎症に対する作用を介して恒常性及び発病の両方に寄与している。

がんなどの疾患の治療用の治療薬には改善の必要性がある。本発明はこの必要性に取り組む。

本明細書に記載されるように、本発明は、多点分子付着能（ｍｕｌｔｉｐｏｉｎｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ）を有する融合タンパク質、及びその融合タンパク質の使用に関する。

本発明の１つの態様は、構成要素Ａ及び／又は構成要素Ｂを含む融合タンパク質を含む。構成要素Ａは、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含む。構成要素Ｂは、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む。

本発明の別の態様は、構成要素Ａ、構成要素Ｂ、及び構成要素Ｃを含む融合タンパク質を含む。構成要素Ａは、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含む。構成要素Ｂは、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む。構成要素Ｃは、構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ’_Ｌを含む。構成要素ＹはＰＤ－１の少なくとも一部を含み、構成要素Ｚ２及び構成要素Ｚ２’はヒトＦｃのＣＨ２ドメインを含み、構成要素Ｚ３及び構成要素Ｚ３’はヒトＦｃのＣＨ３ドメインを含む。構成要素Ｘ’及び構成要素ＸはｖＭＩＰ－ＩＩの少なくとも一部を含み、構成要素ＣＬ’はヒトＩｇＧ１κの少なくとも１つのＣＨ１ドメインを含む。

本発明のさらに別の態様は、融合タンパク質を生成する方法を含む。上記方法は、ヒトＰＤ－１－ｈＦｃＡをコードする第１核酸、ｖＭＩＰＩＩ－ＣＨ’－ｈＦｃＢをコードする第２核酸、及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’をコードする第３核酸を細胞に投与することを含む。

本発明のさらに別の態様は、配列番号１４、配列番号４９、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む融合タンパク質を含む。

本発明の別の態様は、薬学的に許容可能な担体と、本明細書に開示される融合タンパク質のいずれかと、を含む医薬組成物を含む。

本発明の別の態様は、患者の増殖性障害を治療する方法を含む。上記方法は、そのような治療が必要な患者に、治療有効量の本明細書に開示される融合タンパク質のいずれかを投与することを含む。

上記態様の様々な実施形態又は本明細書において詳述される本発明の他のいずれかの態様では、構成要素Ｂは構成要素Ｚ_１’をさらに含む。ある特定の実施形態では、構成要素Ａは構成要素Ｚ_１をさらに含む。

ある特定の実施形態では、上記融合タンパク質は構成要素Ｃをさらに含み、構成要素Ｃは構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ_Ｌ’を含む。

ある特定の実施形態では、上記融合タンパク質は構成要素Ｄをさらに含み、構成要素Ｄは構成要素Ｑ及び構成要素Ｃ_Ｌを含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｙはリガンドドメイン、受容体ドメイン、ｓｃＦｖドメイン、又はリポカリンドメインを含む。ある特定の実施形態では、構成要素ＹはＰＤ－１、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、又はＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）の少なくとも一部を含む。

ある特定の実施形態では、上記融合タンパク質はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に結合する。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’はウイルス由来ペプチド、リガンド由来ペプチド、受容体由来ペプチド、又はＨＴＳ選択ペプチドを含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’はｖＭＩＰ－ＩＩの少なくとも一部を含む。ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’はＶ１又はＶ１Δを含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘはウイルス由来ペプチド、リガンド由来ペプチド、受容体由来ペプチド、又はＨＴＳ選択ペプチドを含む。ある特定の実施形態では、構成要素ＸはＶ１又はＶ１Δを含む。

ある特定の実施形態では、上記融合タンパク質はＣＸＣＲ４に結合する。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｙ及び構成要素Ｚ_２はヒンジを介して接続されている。ある特定の実施形態では、構成要素Ｚ_１’及び構成要素Ｚ_２’はヒンジを介して接続されている。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’及び構成要素Ｚ_１’はリンカーを介して接続されている。ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ_Ｌはリンカーを介して接続されている。ある特定の実施形態では、構成要素Ｑ及び構成要素Ｃ_Ｌはリンカーを介して接続されている。

ある特定の実施形態では、融合タンパク質は免疫細胞上の受容体又はリガンドに結合する。ある特定の実施形態では、上記受容体はＦｃ受容体である。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’はＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素ＹはＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素ＸはＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素ＱはＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ａは配列番号１４～配列番号２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｂは配列番号３２～配列番号３５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、構成要素Ｂは配列番号４９～配列番号５５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ａは配列番号１４～配列番号２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、構成要素Ｂは配列番号３２～配列番号３５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｃは配列番号５７～配列番号６３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｂは配列番号４９～配列番号５５のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、構成要素Ｃは配列番号５７～配列番号６３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、上記融合タンパク質は、（ｉ）ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２、（ｉｉ）ＣＸＣＲ４、及び（ｉｉｉ）免疫細胞上のＦｃ受容体又はリガンドに結合可能である。

ある特定の実施形態では、構成要素Ａは配列番号２９のアミノ酸配列を含み、構成要素Ｂは配列番号３０のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｙは配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｚ_２は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、且つ／又は構成要素Ｚ_３は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ａは配列番号１４又は配列番号１５のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｂは配列番号４９のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’は配列番号３７のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、構成要素Ｘは配列番号３７のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｚ_２’は配列番号１２を含み、且つ／又は構成要素Ｚ_３’は配列番号４８を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｃ_Ｌ’は配列番号６４のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｂは配列番号５３のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ｃは配列番号６１のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、構成要素Ａは配列番号１４のアミノ酸配列を含み、構成要素Ｂは配列番号５３のアミノ酸配列を含み、構成要素Ｃは配列番号６１のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、上記方法は、上記第１核酸が配列番号１４のアミノ酸配列をコードし、且つ／又は上記第２核酸が配列番号４９のアミノ酸配列をコードし、且つ／又は上記第３核酸が配列番号５７のアミノ酸配列をコードすることを含む。

ある特定の実施形態では、上記増殖性障害はがんである。ある特定の実施形態では、上記がんは固形腫瘍である。ある特定の実施形態では、上記がんは、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、膀胱がん、黒色腫、神経膠芽腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、又は結腸がんである。

添付図面と併せて読むと以下の本発明の好ましい実施形態の詳細な説明がより良く理解されることになる。目下の好ましい実施形態が本発明を例示する目的で添付図面に示されている。しかしながら、本発明はこれら図面に示されている実施形態の正確な構成及び手段に限定されないことを理解されたい。

図１Ａは、融合タンパク質プラットフォームの幾つかの実施形態の概略図である。 図１Ｂは、融合タンパク質プラットフォームの幾つかの実施形態の概略図である。 図２は、融合タンパク質プラットフォームの幾つかの実施形態の概略図である。この図では、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と腫瘍細胞との間の接触面を標的とする融合タンパク質が例示されている。 図３は、ＣＸＣＲ４、ＰＤ－Ｌ１、及びＦｃγＲＩＩＩａに結合する融合タンパク質の概略図である。 図４は、ＣＸＣＲ４、ＰＤ－Ｌ１、及びＦｃγＲＩＩＩａに結合する融合タンパク質のがん細胞との及びＮＫ細胞との相互作用の概略図である。 図５は、ＣＸＣＲ４、ＰＤ－Ｌ１、及びＦｃγＲＩＩＩａに結合する融合タンパク質と様々な種類の細胞とに生じ得る相互作用の概略図である。 図６は、様々な融合タンパク質と様々な種類の細胞とに生じ得る相互作用の概略図である。 図７は、様々な融合タンパク質と様々な種類の細胞とに生じ得る相互作用の概略図である。 図８は、様々な融合タンパク質と腫瘍随伴マクロファージ（Ｍ１）とに生じ得る相互作用の概略図である。 図９は、ｈＰＤ－１－ＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３６）のクマシーブルー染色（還元）ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。 図１０は、ｈＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３６）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。 図１１は、ｈＭＩＣＡ－ＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２２及び配列番号３６）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。 図１２は、ｈＦｃＡ／ｈＴＩＧＩＴ－ＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３６）、ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１５５－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３２）、ｈＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３６）、及びｈＭＩＣＡ－ＦｃＡ／ｈＴＩＧＩＴ－ＦｃＢ（配列番号２２及び配列番号３３）のクマシーブルー染色（還元）ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。 図１３は、ｈＣＤ１１２Ｒ－ＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号１６及び配列番号３６）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。 図１４は、ＨＡ－ＰＤ－１－ＦｃＡ／ｈＣＤ１１３－ＦｃＢ（配列番号１５及び配列番号３５）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。 図１５は、ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１１３－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３３）及びＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１１３－ＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３５）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。 図１６は、ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１５５－ＦｃＢ（配列番号２３及びと配列番号３２）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。 図１７は、ｈＦｃＡ／ＴＩＭ－３－ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３４）及びＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＴＩＭ－３－ｈＦｃＢ（配列番号１４と配列番号３４）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。 図１８は、ｈＦｃＡ／ｈＴＩＧＩＴ－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３３）がヒトＣＤ１５５発現細胞に結合することを示す図である。 図１９は、ｈＦｃＡ／ｈＴＩＧＩＴ－ＦｃＢ（配列番号２３及びと配列番号３３）がヒトＣＤ１１２発現細胞に結合することを示す図である。 図２０は、ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１５５－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３２）がヒトＴＩＧＩＴ発現細胞に結合することを示す図である。 図２１は、ｈＦｃＡ／ｈＴＩＧＩＴ－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３３）及びｈＦｃＡ／ｈＣＤ１５５－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３２）がＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩａ）発現細胞に結合することを示す図である。 図２２は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ時に分離及び還元（Ｒ）され、クマシーゲル染色された融合タンパク質を示す図である。示されているように、「Ａ」はｈＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３６）を指し、「Ｂ」はＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３６）を指し、「Ｃ」はｈＦｃＡ／ＶｐＩ－ＣＨ’－ＦｃＢ／ＶｐＩ－ＣＬ（配列番号２３に加えて配列番号５３及び配列番号６１）を指し、「Ｄ」はＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＶｐＩ－ＣＨ’－ＦｃＢ／ＶｐＩ－ＣＬ（配列番号１４に加えて配列番号５３及び配列番号６１）を指す。 図２３Ａ～図２３Ｄは、一連のウエスタンブロットを示す図である。図２２に示されている発現コンストラクトを形質移入されたＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞の調整培地から精製されたプロテインＡ精製融合タンパク質に対してウエスタンブロット分析を実施した。観察されたバンドはＰＤ－１－ｈＦｃＡ（配列番号１４）及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’（配列番号５７）の予測サイズと一致した。非還元（ＮＲ）試料については１２５ｋＤａであり、還元（Ｒ）試料についてはそれぞれ６０ｋＤａと２０ｋＤａである。抗ＰＤ１抗体（図２３Ａ）、抗ＩｇＧκ軽鎖抗体（図２３Ｂ）、抗ＩｇＧ重鎖抗体（図２３Ｃ）、及び抗ｖＭＩＰ－ＩＩ抗体（図２３Ｄ）をウエスタンブロットのプローブとして使用した。 図２３Ａ～図２３Ｄは、一連のウエスタンブロットを示す図である。図２２に示されている発現コンストラクトを形質移入されたＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞の調整培地から精製されたプロテインＡ精製融合タンパク質に対してウエスタンブロット分析を実施した。観察されたバンドはＰＤ－１－ｈＦｃＡ（配列番号１４）及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’（配列番号５７）の予測サイズと一致した。非還元（ＮＲ）試料については１２５ｋＤａであり、還元（Ｒ）試料についてはそれぞれ６０ｋＤａと２０ｋＤａである。抗ＰＤ１抗体（図２３Ａ）、抗ＩｇＧκ軽鎖抗体（図２３Ｂ）、抗ＩｇＧ重鎖抗体（図２３Ｃ）、及び抗ｖＭＩＰ－ＩＩ抗体（図２３Ｄ）をウエスタンブロットのプローブとして使用した。 図２３Ａ～図２３Ｄは、一連のウエスタンブロットを示す図である。図２２に示されている発現コンストラクトを形質移入されたＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞の調整培地から精製されたプロテインＡ精製融合タンパク質に対してウエスタンブロット分析を実施した。観察されたバンドはＰＤ－１－ｈＦｃＡ（配列番号１４）及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’（配列番号５７）の予測サイズと一致した。非還元（ＮＲ）試料については１２５ｋＤａであり、還元（Ｒ）試料についてはそれぞれ６０ｋＤａと２０ｋＤａである。抗ＰＤ１抗体（図２３Ａ）、抗ＩｇＧκ軽鎖抗体（図２３Ｂ）、抗ＩｇＧ重鎖抗体（図２３Ｃ）、及び抗ｖＭＩＰ－ＩＩ抗体（図２３Ｄ）をウエスタンブロットのプローブとして使用した。 図２３Ａ～図２３Ｄは、一連のウエスタンブロットを示す図である。図２２に示されている発現コンストラクトを形質移入されたＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞の調整培地から精製されたプロテインＡ精製融合タンパク質に対してウエスタンブロット分析を実施した。観察されたバンドはＰＤ－１－ｈＦｃＡ（配列番号１４）及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’（配列番号５７）の予測サイズと一致した。非還元（ＮＲ）試料については１２５ｋＤａであり、還元（Ｒ）試料についてはそれぞれ６０ｋＤａと２０ｋＤａである。抗ＰＤ１抗体（図２３Ａ）、抗ＩｇＧκ軽鎖抗体（図２３Ｂ）、抗ＩｇＧ重鎖抗体（図２３Ｃ）、及び抗ｖＭＩＰ－ＩＩ抗体（図２３Ｄ）をウエスタンブロットのプローブとして使用した。 図２４は、融合タンパク質が細胞表面上にＰＤ－Ｌ１及びＣＸＣＲ４又はＣＸＣＲ７を発現するＢ１６黒色腫細胞株に結合することを示す図である。試験した融合タンパク質は（上から下へ順に）ｈＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３６）、ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３６）、ｈＦｃＡ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＬ’（配列番号２３に加えて配列番号５２及び配列番号６０）、ｈＦｃＡ／Ｖ１Δ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δ－ＣＬ’（配列番号２３に加えて配列番号５１及び配列番号５９）、ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＬ’（配列番号１４と配列番号５２及び配列番号６０）、及びＰＤ－１－ｈＦｃＡ／Ｖ１Δ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δ－ＣＬ’（配列番号１４に加えて配列番号５１及び配列番号５９）である。 図２５は、黒色腫細胞の細胞移動に対する融合タンパク質の阻害効果を評価するトランスウェルアッセイを示す図である。移動したＢ１６－Ｆ１０細胞を１００ｎｇ／ｍＬのＣＸＣＬ１２及び融合タンパク質で処理する一回のトランスウェル移動アッセイの代表的画像が示されている。試験した融合タンパク質は（上から下へ順に）ｈＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３６）、ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３６）、ｈＦｃＡ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＬ’（配列番号２３に加えて配列番号５２及び配列番号６０）、ｈＦｃＡ／Ｖ１Δ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δ－ＣＬ’（配列番号２３に加えて配列番号５１及び配列番号５９）、ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＬ’（配列番号１４に加えて配列番号５２及び配列番号６０）、及びＰＤ－１－ｈＦｃＡ／Ｖ１Δ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δ－ＣＬ’（配列番号１４と配列番号５１及び配列番号５９）である。２％クリスタルバイオレットを使用して上記アッセイを染色した。 図２６Ａは、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫皮下モデルにおける融合タンパク質（ＦＰ）ＰＤ１－ｈＦｃＡ／ｖ１Δ－ＣＨ’－ｈＦｃＢ／ｖ１Δ－ＣＬ’（配列番号１４に加えて配列番号５１及び配列番号５９）が媒介する腫瘍増殖の阻害を示す図である。１×１０^５個のＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞の皮下接種後１３日目、１４日目、１５日目、１６日目、及び２１日目にＣ５７ＢＬ／６マウスを１００μｌのＰＢＳ中の（１０μｇ／ｍＬ）ＦＰ（マウスＲ、マウス２Ｌ、及びマウス２Ｒ）又はＰＢＳのみ（マウスＸ又はマウスＬ）で処理した。経時的腫瘍サイズを測定し、各マウスについて図２６Ａにプロットした。 図２６Ｂは、ＰＢＳのみの処理群の１匹のマウス（上）及びＰＤ１－ｈＦｃＡ／ｖ１Δ－ＣＨ’－ｈＦｃＢ／ｖ１Δ－ＣＬ’（ＦＰ）処理群の１匹のマウス（下）の代表像を示す図である。 図２７は、ＮＫ細胞介在性ＡＤＣＣが多機能性融合タンパク質の添加により増大することを示す図である。ＳＫＯＶ－３卵巣細胞株［標的細胞（Ｔ）］を９６ウェルプレート中に３０００細胞／ウェルの割合で播種して接着させ、そしてセルトラッカー・レッドＣＭＴＰＸ試薬を使用して標識した。その後、緑色蛍光カスパーゼ－３試薬を使用してＳＫＯＶ－３細胞を標識した。ＣＤ１６．ＮＫ－９２細胞株［Ｖ１５８変異体；エフェクター細胞（Ｅ）である］を５：１のエフェクター：標的比率で上記ウェルに２５ｍｇ／ｍｌの濃度の様々な融合タンパク質と共に添加するか、又はタンパク質無しで添加し、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ生細胞分析システムを使用して蛍光二重陽性（赤色＋緑色）細胞の数を測定して分析した。示されている結果は２０時間の時点での結果を示している。試験した融合タンパク質は高親和性（ＨＡ）－ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＦｃＢ（配列番号１５及び配列番号３６）、ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１１３－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３５）及び高親和性（ＨＡ）－ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１１３－ＦｃＢ（配列番号１５及び配列番号３５）である。

定義
別途定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語と科学用語は本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載される方法及び材料と類似又は同等のどの方法及び材料も本発明の試験の実施に使用可能であるが、本明細書に記載される材料及び方法は好ましい材料及び方法である。本発明の説明と請求では以下の用語が使用される。

本明細書において使用される用語は特定の実施形態を説明することだけを目的としており、限定することを目的としてはいないことも理解されたい。

冠詞「ａ」及び「ａｎ」はその冠詞の文法上の目的語の１つ又は１つより多く（すなわち少なくとも１つ）を指すために本明細書において使用される。例として、「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は１つの要素又は１つより多くの要素を意味する。

量、時間等のような測定可能な値に言及するときに本明細書において使用される「約」は、明示されている値からの±２０％又は±１０％の変動、より好ましくは±５％の変動、さらにより好ましくは±１％の変動、及びさらにより好ましくは±０．１％の変動のような本開示の方法の実施にとって適切である変動を包含することを意味する。

本明細書において使用される場合、「活性化」とは、充分に刺激を受けることにより、サイトカイン生産、検出可能なエフェクター機能、及び細胞増殖のうちの１以上が誘導されているＴ細胞の状態を指す。「活性化Ｔ細胞」という用語は、特に、これらの活性化の特徴のうちの１以上を示しているＴ細胞を指す。

本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、天然起源又は組換え起源の完全免疫グロブリンであり得、完全免疫グロブリンの免疫反応性部分であり得る。抗体は四量体免疫グロブリン分子であることが典型的であり、このような四量体から成るさらに高次の多量体として存在してもよい。本発明の抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、及びＦ（ａｂ）_２、並びに単鎖抗体（ｓｃＦｖ）及びヒト化抗体を含む様々な形態で存在する場合がある（Ｈａｒｌｏｗら著、１９９９年、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ内、コールドスプリングハーバーラボラトリー・プレス、ニューヨーク州、Ｈａｒｌｏｗら著、１９８９年、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ内、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州、Ｈｏｕｓｔｏｎら著、１９８８年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ誌、第８５巻：５８７９～５８８３頁、Ｂｉｒｄら著、１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２４２巻：４２３～４２６頁）。

「抗体断片」という用語は、完全抗体の一部を指し、完全抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片、直鎖抗体、ｓｃＦｖ抗体、及び抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられるがこれらに限定されない。

本明細書において使用される場合、「抗体重鎖」は、自然と生じる立体構造の状態において全ての抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖のうちの大きい方のポリペプチド鎖を指す。ガンマ（γ）重鎖、ミュー（μ）重鎖、デルタ（δ）重鎖、アルファ（α）重鎖、及びイプシロン（ε）重鎖が５種類の主要抗体重鎖アイソタイプである。

本明細書において使用される場合、「抗体軽鎖」は、自然と生じる立体構造の状態において全ての抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖のうちの小さい方のポリペプチド鎖を指す。カッパ（κ）軽鎖及びラムダ（λ）軽鎖が２種類の主要抗体軽鎖アイソタイプである。

本明細書において使用される「合成抗体」という用語は、組換えＤＮＡ技術を使用して生成される抗体、例えば、本明細書に記載されているバクテリオファージによって発現される抗体等を意味する。この用語は、抗体をコードし、且つ、抗体タンパク質をコードするＲＮＡを発現するＤＮＡ分子の合成、又は上記抗体を規定するアミノ酸配列の合成によって生成される抗体を意味するとも解釈されるべきであり、上記ＤＮＡ、ＲＮＡ又はアミノ酸配列は当技術分野において利用可能且つよく知られている核酸配列合成技術又はアミノ酸配列合成技術を使用して得られたものである。

本明細書において使用される「抗原」又は「Ａｇ」という用語は、免疫応答を引き起こす分子又はＴ細胞受容体などの免疫認識部分に結合する分子として定義される。この免疫応答は、抗体の生産又は特定の免疫適格細胞の活性化のどちらか又は両方を伴う場合がある。当業者は、実質的に全てのタンパク質又はペプチドを含むいずれの巨大分子も抗原として働き得ることを理解するであろう。さらに、抗原は組換えＤＮＡ又はゲノムＤＮＡから導出され得る。当業者は、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分ヌクレオチド配列を含むいずれのＤＮＡもそれ故に本明細書において使用される用語としての「抗原」をコードすることを理解するであろう。さらに、当業者は、抗原が必ずしも遺伝子の全長ヌクレオチド配列だけによってコードされるわけではないことを理解するであろう。本発明が、限定されるものではないが、１つより多くの遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用を含むこと、及び所望の免疫応答を誘発するためにこれらのヌクレオチド配列が様々な組合せで編成されることは容易に理解できる。また、当業者は、抗原が必ずしも全て「遺伝子」によってコードされるわけではないことを理解するであろう。抗原は、生成可能であること、合成可能であること、又は生物試料から導出可能であることが容易に理解できる。このような生物試料には、組織試料、腫瘍試料、細胞試料、又は生体液が含まれ得るが、これらに限定されない。

本明細書において使用される「抗腫瘍作用」という用語は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移巣数の減少、余命の増加、又はがん症状に付随する様々な生理的症状の改善によって明白になり得る生物作用を指す。「抗腫瘍作用」は、まず何よりも腫瘍発生の防止における本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞、及び抗体の能力によっても明白になる場合がある。

本発明によると、「自己抗原」という用語は、免疫系によって外来性であると認識されるあらゆる自己抗原を意味する。自己抗原には、細胞表面受容体をはじめとして細胞タンパク質、リンタンパク質、細胞表面タンパク質、細胞脂質、核酸、糖タンパク質が含まれるがこれらに限定されない。

本明細書において使用される「自己免疫疾患」という用語は、自己免疫応答の結果生じる障害として定義される。自己免疫疾患は自己抗原に対する不適切且つ過剰な応答の結果である。自己免疫疾患の例には、特に、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、自己免疫肝炎、自己免疫耳下腺炎、クローン病、糖尿病（Ｉ型）、栄養障害型表皮水疱症、精巣上体炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、乾癬、リューマチ熱、リウマチ性関節炎、サルコイドーシス、強皮病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、甲状腺炎、脈管炎、尋常性白斑、粘液水腫、悪性貧血、潰瘍性大腸炎が挙げられるがこれらに限定されない。

本明細書において使用される場合、「自己（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ）」という用語は、ある個体から導出され、後に同じ個体に再導入されることになるあらゆる物質を意味する。

「同種異系間（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ）」とは、同じ種の異なる動物に由来する移植片を指す。

「異種間（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ）」とは、異なる種の動物に由来する移植片を指す。

本明細書において使用される「がん（ｃａｎｃｅｒ）」という用語は、異常な細胞の急速且つ制御されていない増殖及び／又は蓄積を特徴とする疾患として定義される。がん細胞は局所的に広がるか、又は血流及びリンパ系を介して体の他の部分に広がり得る。様々ながんの例には、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸部がん、皮膚がん、膵臓がん、大腸がん、腎臓がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病、肺がん等が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、がんは甲状腺髄様がんである。

「切断（ｃｌｅａｖａｇｅ）」という用語は、共有結合の切断、例えば核酸分子の骨格の切断を指す。切断は様々な方法によって開始可能であり、それらの方法にはホスホジエステル結合の酵素加水分解又は化学加水分解が含まれるが、これらに限定されない。一本鎖切断と二本鎖切断の両方が可能である。二本鎖切断は２回の別々の一本鎖切断イベントの結果として生じる場合がある。ＤＮＡ切断は平滑末端又は突出末端のどちらかを生じさせ得る。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは切断された二本鎖ＤＮＡを標的とするために使用される場合がある。

本明細書において使用される場合、「保存的配列改変（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」という用語は、そのアミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に大きくは影響しない、又はその結合特性を大きくは変えないアミノ酸改変を指すものとされる。そのような保存的改変には、アミノ酸の置換、付加、及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的変異形成及びＰＣＲ介在性変異形成などの当技術分野において知られている標準的技法によって本発明の抗体に導入され得る。保存的アミノ酸置換は、同様の側鎖を有するアミノ酸残基でアミノ酸残基を置き換える改変である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当技術分野において明らかになっている。これらのファミリーには塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族性側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、抗体のＣＤＲ領域内の１以上のアミノ酸残基は同じ側鎖ファミリーの他のアミノ酸残基で置換可能であり、その改変抗体は本明細書に記載される機能アッセイを用いて抗原への結合能について検査され得る。

「疾患（ｄｉｓｅａｓｅ）」とは、恒常性を維持できていない動物の健康状態であって、その疾患が改善されないと当該動物の健康が悪化し続ける健康状態である。一方、動物の「障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」とは、恒常性を維持できているが、その障害が存在しない場合よりも健康状態が好ましくない動物の健康状態である。障害は治療されずにいても必ずしもその動物の健康状態をさらに悪化させるわけではない。

「有効量」又は「治療有効量」とは、本明細書において互換的に使用され、特定の生物学的成果を達成するため、又は治療若しくは予防利益を実現するために有効な本明細書に記載されるような化合物、製剤、物質、又は組成物の量を指す。そのような成果には、当技術分野において適切ないずれかの手段によって判定されるような抗腫瘍活性が挙げられる場合があるが、これに限定されない。

「コードする（ｅｎｃｏｄｉｎｇ）」とは、規定のヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）又は規定のアミノ酸配列のいずれかを有し、且つ、その配列から生じる生物学的特性を有する他の重合体及び巨大分子の生物学的過程における合成用の鋳型として働くための、ポリヌクレオチド中の特定のヌクレオチド配列（遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなど）の固有の特性を指す。したがって、遺伝子に対応するｍＲＮＡへの転写とｍＲＮＡの翻訳によって細胞内又は他の生物学的系内でタンパク質が生じる場合に、上記遺伝子は上記タンパク質をコードしている。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、且つ、配列表内に提示されることが通常であるコード鎖と遺伝子の転写又はｃＤＮＡの鋳型として使用される非コード鎖の両方が、上記遺伝子又はｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードしていると言及され得る。

本明細書において使用される場合、「内在性（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ）」とは、生物、細胞、組織、又は系の内側に由来する、又は内側で生産されるあらゆる物質を指す。

本明細書において使用される場合、「外来性（ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ）」という用語は、生物、細胞、組織、又は系の外側から導入される、又は外側で生産されるあらゆる物質を指す。

本明細書において使用される「拡大（ｅｘｐａｎｄ）」という用語は、Ｔ細胞数の増加のように、数の増加を指す。１つの実施形態では、生体外で拡大したＴ細胞は、培養時に元々存在した数と比較して数が増えている。別の実施形態では、生体外で拡大したＴ細胞は、培養時に他の種類の細胞と比較して数が増えている。本明細書において使用される場合、「生体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）」という用語は、生体（例えばヒト）から取り出され、上記生体の外部で（例えば、培養皿、試験管、又はバイオリアクターの中で）繁殖された細胞を指す。

本明細書において使用される「発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」という用語は、プロモーターなどの、制御エレメントによって誘導される特定のヌクレオチド配列の転写及び／又は翻訳として定義される。

「発現ベクター」とは、発現されるヌクレオチド配列に機能的に結合されている発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現にとって充分なｃｉｓ作用性エレメントを含み、発現用の他のエレメントは宿主細胞又はインビトロ発現系に供給される場合がある。発現ベクターには、上記組換えポリヌクレオチドが組み込まれている当技術分野において知られている全てのベクター、例えばコスミド、プラスミド（例えば、裸又はリポソームに含有されている）及びウイルス（例えば、センダイウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）が挙げられる。

本明細書において使用される「相同な（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）」とは、２つの高分子間の小単位配列同一性、例えば２つのＤＮＡ分子又は２つのＲＮＡ分子などの２つの核酸分子間又は２つのポリペプチド分子間の小単位配列同一性を指す。上記２分子の両方の小単位位置が同じ単量体小単位によって占められている場合、例えば２つのＤＮＡ分子のそれぞれのある位置がアデニンによって占められている場合に、上記分子は上記位置において相同である。２つの配列間の相同性はマッチする位置又は相同な位置の数の一次関数である。例えば、２つの配列内の位置の半分（例えば、長さが１０小単位の高分子内の５か所の位置）が相同である場合に上記２つの配列は５０％相同であり、上記位置の９０％（例えば、１０のうちの９か所）がマッチする、又は相同である場合に上記２つの配列は９０％相同である。

「ヒト化（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）」型の非ヒト（例えばマウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの断片（例えば抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は他の抗原結合小配列）である。大部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲに由来する残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体はレシピエント抗体にも移入されたＣＤＲ配列又はフレームワーク配列にも見られない残基を含む場合がある。抗体の性能をさらに洗練されたものにし、且つ、最適化するためにこれらの改変が行われる。一般に、ヒト化抗体は少なくとも１つ、典型的に２つの可変ドメインのうちの実質的に全てを含み、上記可変ドメインではＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である。上記ヒト化抗体は免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むことが最適である。さらに詳細についてはＪｏｎｅｓら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３２１巻： ５２２～５２５頁、１９８６年、Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３３２巻： ３２３～３２９頁、１９８８年、Ｐｒｅｓｔａ著、Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ．誌、第２巻： ５９３～５９６頁、１９９２年を参照されたい。

「完全にヒト（ｆｕｌｌｙ ｈｕｍａｎ）」とは、分子全体がヒト起源である抗体又は分子全体がヒト型の上記抗体と同じアミノ酸配列から成る抗体などの免疫グロブリンを指す。

本明細書において使用される「同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」とは、２つの高分子間、特に２つのアミノ酸分子間、例えば２つのポリペプチド分子間の小単位配列同一性を指す。２つのアミノ酸配列が同じ位置において同じ残基を有する場合、例えば２つのポリペプチド分子のそれぞれのある位置がアルギニンによって占められている場合に、上記分子は上記位置において同一である。同一性、又は２つのアミノ酸配列が整列した中で同じ位置に同じ残基を有する程度はパーセンテージで表されることが多い。２つのアミノ酸配列間の同一性はマッチする位置又は同一の位置の数の一次関数である。例えば、２つの配列内の位置の半分（例えば、長さが１０アミノ酸の高分子内の５か所の位置）が同一である場合に、上記２つの配列は５０％同一であり、上記位置の９０％（例えば、１０のうちの９か所）がマッチする、又は同一である場合に上記２つのアミノ酸配列は９０％同一である。

本明細書において使用される場合、「免疫グロブリン」又は「Ｉｇ」という用語は、抗体として機能するタンパク質のクラスとして定義される。Ｂ細胞が発現する抗体は、時にＢＣＲ（Ｂ細胞受容体）又は抗原受容体と呼ばれることがある。このクラスのタンパク質に含まれる５つのメンバーはＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥである。ＩｇＧは最も一般的な循環抗体である。ＩｇＭは大半の対象の初期免疫応答において生産される主要な免疫グロブリンである。この免疫グロブリンは凝集、補体結合、及び他の抗体応答において最も効率的な免疫グロブリンであり、細菌とウイルスに対する防御において重要である。ＩｇＤは抗体機能が知られていないが、抗原受容体として働く可能性がある免疫グロブリンである。ＩｇＡは、唾液、涙液、母乳、胃腸分泌液、並びに呼吸器及び生殖器の粘性分泌液の中に存在する主要な抗体である。ＩｇＥは、アレルゲンに曝露されると肥満細胞及び好塩基球からメディエーターの放出を引き起こすことにより即時過敏症を成立させる免疫グロブリンである。

本明細書において使用される「免疫応答」という用語は、リンパ球が抗原分子を外来性と認識し、上記抗原を除去するために抗体の形成を誘導し、且つ／又はリンパ球を活性化するときに生じる抗原に対する細胞応答として定義される。

本明細書において使用される「リポカリン」という用語は、天然の設定ではステロイド、ビリン、レチノイド、及び脂質などの疎水性小分子を輸送するように機能するタンパク質のクラスとして定義される。上記タンパク質は、限定的な配列相動性領域を共有し、且つ、内部リガンド結合部位を取り囲む反復＋１トポロジーを有する８重鎖アンチパラレルβバレルを含む共通の三次構造を共有する。リポカリンはグラム陰性細菌、脊椎動物細胞、無脊椎動物細胞、及び植物に見られ、多数の生物学的過程、何よりも免疫応答、フェロモン輸送、プロスタグランジン生合成、レチノイド結合、及びがん細胞相互作用と関連付けられている。リポカリンは、結合特性を変更又は強化するために、例えば細胞表面分子に結合し、こうして機能特性を妨害、強化、又はそれ以外には改変するために抗体の改変について記載された同じ方法のうちの多くの方法で改変可能である。

本明細書において使用される場合、「説明資料」には、本発明の組成物及び方法の有用性を伝えるために使用可能な刊行物、記録物、図表、又は他のあらゆる表現手段が含まれる。本発明のキットの説明資料は、例えば、本発明の核酸、ペプチド、及び／又は組成物を含んでいる容器に貼り付けられても、上記核酸、ペプチド、及び／又は組成物を含んでいる容器と共に出荷されてもよい。あるいは、この説明資料は、受領者がこの説明資料とこの化合物を協同的に使用するものとして容器とは別に出荷されてもよい。

「単離（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」とは、天然の状態からの変更又は移動を意味する。例えば、生きている動物に天然状態で存在する核酸又はペプチドは「単離」されていないが、その天然の状態で共に存在する物質から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは「単離」されている。単離された核酸又はタンパク質は実質的に精製された形で存在する場合もあれば、例えば宿主細胞などの天然とは異なる環境の中に存在する場合もある。

本明細書において使用される「レンチウイルス」とは、レトロウイルス科の属を指す。レンチウイルスは非分裂細胞に感染可能である点でレトロウイルスの中でも独特であり、レンチウイルスは耐量の遺伝情報を宿主細胞のＤＮＡ中に送達することができるのでレンチウイルスは最も効率的な遺伝子送達ベクター方法のうちの１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、及びＦＩＶは全てがレンチウイルスの例である。レンチウイルスに由来するベクターはインビボで高レベルの遺伝子移入を達成するための手段になる。

本明細書において使用される場合、「改変（ｍｏｄｉｆｉｅｄ）」という用語は、本発明の分子又は細胞の状態又は構造の変化を意味する。分子は化学、構造、及び機能をはじめとする多くの面で改変される場合がある。細胞は核酸の導入を介して改変される場合がある。

本明細書において使用される場合、「調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）」という用語は、対象の応答レベルが、治療又は化合物が存在しない状態での上記対象の応答レベル及び／又は治療されていないが他の面では同一の対象の応答レベルと比較して検出可能なレベルに上昇又は低下させることを意味する。この用語は元来のシグナル又は応答を混乱させ、且つ／又は作用することにより対象、好ましくはヒトにおいて有益な治療反応を成立させることを包含する。

本発明の中では以下の一般に生じる核酸塩基の略語が使用される。「Ａ」はアデノシンを指し、「Ｃ」はシトシンを指し、「Ｇ」はグアノシンを指し、「Ｔ」はチミジンを指し、「Ｕ」はウリジンを指す。

別途指定されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」には、お互いに縮重型であり、且つ、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列が含まれる。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という言葉は、上記タンパク質をコードする上記ヌクレオチド配列がイントロンを含む種類の配列である場合に限りイントロンを含んでもよい。

「機能可能であるように結合されている」という用語は、異種核酸配列の発現を引き起こす調節性配列と上記異種核酸配列との間の機能的結合を指す。例えば、第１核酸配列が第２核酸配列と機能的に関係する状態で配置されている場合、上記第１核酸配列は上記第２核酸配列と機能可能であるように結合している。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響する場合、上記プロモーターは上記コード配列に機能可能であるように結合している。機能可能であるように結合されたＤＮＡ配列は連続しており、２つのタンパク質コード領域を連結することが必要である場合には同じリーディングフレームにあることが一般的である。

「過剰発現した」腫瘍抗原、又は腫瘍抗原の「過剰発現」という用語は、患者の特定の組織又は器官内の固形腫瘍のような疾患領域に由来する細胞における腫瘍抗原の発現レベルがその組織又は器官に由来する正常細胞における発現レベルと比較して異常であることを示すものとされる。腫瘍抗原の過剰発現を特徴とする固形腫瘍又は血液悪性腫瘍を有する患者は当技術分野において知られている標準的アッセイによって判定され得る。

免疫原性組成物の「非経口」投与の例には、皮下（ｓ．ｃ．）注射、静脈内（ｉ．ｖ．）注射、筋肉内（ｉ．ｍ．）注射、又は胸骨内注射、又は輸液技術が含まれる。

本明細書において使用される「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチド鎖として定義される。さらに、核酸はヌクレオチドの重合体である。したがって、本明細書において使用される核酸及びポリヌクレオチドは置き換え可能である。当業者は核酸がポリヌクレオチドであり、単量体の「ヌクレオチド」に加水分解可能であるという一般的知識を有している。上記単量体ヌクレオチドはヌクレオシドに加水分解可能である。本明細書において使用される場合、ポリヌクレオチドには、限定されないが、組換え技術、すなわち通常のクローニング技術及びＰＣＲ（商標）等を用いる組換えライブラリー又は細胞ゲノムからの核酸配列のクローニング、及び合成技術をはじめとする当技術分野において利用可能なあらゆる手段によって得られる全ての核酸配列が含まれるがこれらに限定されない。

本明細書において使用される場合、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合しているアミノ酸残基から構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは少なくとも２つのアミノ酸を含有していなくてはならず、タンパク質又はペプチドの配列を構成し得るアミノ酸の最大数には制限がない。ポリペプチドにはペプチド結合によって連結している２つ以上のアミノ酸を含むあらゆるペプチド又はタンパク質が含まれる。本明細書において使用される場合、この用語は短鎖と長鎖の両方を指し、短鎖は当技術分野では一般的にペプチド、オリゴペプチド、及びオリゴマー等とも呼ばれ、長鎖は多くの種類が存在するタンパク質と当技術分野では一般的に呼ばれる。「ポリペプチド」には何よりも、例えば、生物学的活性断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチド変異体、改変ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が含まれる。上記ポリペプチドには天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、又はそれらの組合せが含まれる。

本明細書において使用される場合、「融合タンパク質」及び「キメラタンパク質」という用語は互換的に使用され、２つ以上のポリペプチドから構成される化合物を指す。幾つかの実施形態では、２つ以上のポリペプチドは共有結合している。その他の実施形態では、２つ以上のポリペプチドはペプチド結合、リンカー、又はジスルフィド結合によって共有結合している。融合タンパク質は当業者によく知られた多数の方法によって作製可能であり、最も一般的には融合タンパク質アミノ酸配列をコード又は指定する核酸配列を含むベクターを細胞に導入することにより作製可能である。その他の機能的特性、例えば安定性、半減期、多量体化、精製しやすさを引き出すために追加のアミノ酸又はポリペプチドを融合タンパク質に組み込むことが可能である。そのような要素の一例はポリペプチドリンカーである。

本明細書において使用される「プロモーター」という用語は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するために必要とされ、細胞の合成装置によって認識される、又は合成装置に導入されるＤＮＡ配列として定義される。

本明細書において使用される場合、「プロモーター／調節性配列」という用語は、プロモーター／調節性配列に機能可能であるように結合している遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を意味する。幾つかの例では、この配列はコアプロモーター配列である場合があり、他の例ではこの配列はエンハンサー配列及び上記遺伝子産物の発現に必要な他の調節性エレメントを含む場合もある。このプロモーター／調節性配列は、例えば、組織特異的に上記遺伝子産物を発現させるものであってよい。

「構成的（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ）」プロモーターとは、遺伝子産物をコード又は指定するポリヌクレオチドと機能可能であるように結合している場合に、細胞のほとんど又は全ての生理的条件下において、当該細胞中で上記遺伝子産物を生産させるヌクレオチド配列である。

「誘導性（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ）」プロモーターとは、遺伝子産物をコード又は指定するポリヌクレオチドと機能可能であるように結合している場合に、実質的にはプロモーターに対応する誘導物質が細胞中に存在する場合にのみ、上記細胞中で上記遺伝子産物を生産させるヌクレオチド配列である。

「組織特異的（ｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」プロモーターとは、遺伝子産物をコード又は指定するポリヌクレオチドと機能可能であるように結合している場合、実質的には細胞がプロモーターに対応する種類の組織の細胞である場合にのみ、上記細胞中で上記遺伝子産物を生産させるヌクレオチド配列である。

「シグナル伝達経路」とは、細胞の１つの部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達に役割を果たす様々なシグナル伝達分子の間の生化学的関係を指す。「細胞表面受容体」という言葉には、細胞の原形質膜を越えてシグナルを受信及び伝達することが可能である分子及び分子の複合体が含まれる。

抗体に関して本明細書において使用される場合、「特異的に結合する」という用語は、試料中の特定の抗原を認識するが、他の分子を実質的に認識又は結合しない抗体を意味する。例えば、１つの種の抗原に特異的に結合する抗体は１又は複数の種のその抗原にも結合する場合がある。しかしながら、そのような異種間交差反応性自体は特異的であるとの抗体の分類を変更しない。別の例では抗原に特異的に結合する抗体は、抗原の異なるアレル型にも結合する場合がある。しかしながら、そのような交差反応性自体は特異的であるとの抗体の分類を変更しない。幾つかの例では「特異的結合」又は「特異的に結合する」という用語は、抗体、タンパク質、又はペプチドの第２の化学種との相互作用を参照する場合、上記相互作用が上記化学種上の特定の構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存していることを意味するために使用され得る。例えば、抗体はタンパク質全体よりもむしろ特定のタンパク質構造を認識し、結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、エピトープＡを含む分子（又は遊離した無標識のＡ）の存在は標識された「Ａ」と上記抗体を含む反応において上記抗体に結合する標識されたＡの量を減少させる。

「対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）」という用語は、免疫応答を誘発させることが可能な生物（例えば哺乳類動物）を含むものとされる。本明細書において使用される場合、「対象」又は「患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」とは、ヒト又は非ヒト哺乳類動物であってよい。非ヒト哺乳類動物の例には、家畜及びペット、例えばヒツジ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、及びマウス哺乳類動物が含まれる。この対象はヒトであることが好ましい。

本明細書において使用される場合、「実質的に精製された」細胞とは、基本的に他の種類の細胞を含まない細胞である。実質的に精製された細胞は、通常ではその天然の状態で結合している他の種類の細胞から分離された細胞も指す。幾つかの例では、実質的に精製された細胞の集団は同種の細胞集団を指す。他の例では、この言葉は単に、通常ではその天然の状態で結合している細胞から分離された細胞を指す。幾つかの実施形態では、上記細胞はインビトロ培養されている。他の実施形態では、上記細胞はインビトロ培養されていない。

「標的部位（ｔａｒｇｅｔ ｓｉｔｅ）」又は「標的配列（ｔａｒｇｅｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」とは、結合が起こるために充分な条件下で結合分子が特異的に結合し得る核酸の一部を規定するゲノム核酸配列を指す。

本明細書において使用される「治療（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」という用語は、治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）及び／又は予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）を意味する。治療効果は、疾患状態の抑制、寛解、又は根絶によって得られる。

本明細書において使用される「形質移入される（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ）」又は「形質転換される（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ）」又は「形質導入される（ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ）」という用語は、外来性核酸を宿主細胞に移入又は導入するための処理を指す。「形質移入された」又は「形質転換された」又は「形質導入された」細胞は外来性核酸で形質移入、形質転換、又は形質導入された細胞である。上記細胞には初期対象細胞及びその子孫細胞が含まれる。

「導入遺伝子（ｔｒａｎｓｇｅｎｅ）」という用語は、動物、具体的には哺乳類動物、より具体的には生きている哺乳類動物細胞のゲノムに人工的に挿入された、又は挿入されようとしている遺伝物質を指す。

本明細書において使用される場合、疾患を「治療する（ｔｒｅａｔ）」ことは、対象が経験している疾患又は障害の少なくとも１つの徴候又は症状の頻度又は重症度を低下させることを意味する。

本明細書において使用される「転写制御下」又は「機能的に結合している」という言葉は、ＲＮＡポリメラーゼによる転写の開始及びポリヌクレオチドの発現を制御するためのポリヌクレオチドに関してプロモーターが正しい場所及び方向にあることを意味する。

「ベクター」は、単離核酸を含み、且つ、この単離核酸を細胞内部に送達するために使用可能な組成物である。直鎖状ポリヌクレオチド、イオン化合物又は両親媒性化合物と結合したポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスを含むがこれらに限定されない多数のベクターが当技術分野において知られている。したがって、「ベクター」という用語には、自律複製性プラスミド又はウイルスが含まれる。また、この用語は、例えばポリリシン化合物、リポソーム等のような細胞中への核酸の移入を促進する非プラスミド化合物及び非ウイルス化合物を含むと解釈されるべきである。プラスミドベクターの一例は、ウイルス、例えばエプスタイン・バールウイルス及びＢＫウイルスに由来する調節性エレメントによって自己複製が引き起こされる、又は引き立てられるエピソーム性ベクターである。ウイルスベクターの例には、センダイウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター等が挙げられるが、これらに限定されない。

範囲
本開示を通じて、範囲形式で本発明の様々な態様が提示され得る。範囲形式での記述は、単に簡便性及び簡潔性を理由としていることが理解されるべきであり、その記述は本発明の範囲を確固として限定することと解釈されるべきではない。よって、範囲の記述は、その範囲内の個々の数値と同様に全ての可能な小範囲を具体的に開示していると考えられるべきである。例えば、１～６などの範囲の記述は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６等のような小範囲、並びにその範囲内の個々の数（例えば１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６）を具体的に開示していると考えられるべきである。このことは、範囲の大きさと無関係に適用される。

任意のアミノ酸配列がＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号によって具体的に参照されている場合、この配列は、一部及び／又は全体が参照により本明細書に援用される。受入番号に付随するシグナルペプチド、細胞外ドメイン、経膜ドメイン、プロモーター配列、及び翻訳開始部位の特定などの情報も一部及び／又は全体が参照により本明細書に援用される。

本開示の組成物及び方法に関して本発明において想定されているように、１つの態様では、本発明の実施形態は本明細書において開示される構成要素及び／又は工程を含む。別の態様では、本発明の実施形態は本明細書において開示される構成要素及び／又は工程から基本的に成る。さらに別の態様では、本発明の実施形態は本明細書において開示される構成要素及び／又は工程から成る。

説明
融合タンパク質が提供される。幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質の上記第１構成要素は（融合タンパク質内のｖＭＩＰＩＩペプチド又はＶ１ペプチド又はそれらの誘導体の結合を介して）ケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ４及び／又はＣＸＣＲ７）を妨害し、この妨害が腫瘍細胞を動けないようにし、その移動性、浸潤性、転移性、及び他の腫瘍原性特性に支障をきたすように働く。上記融合タンパク質の上記第２構成要素は（融合タンパク質内のＰＤ１又はその誘導体の結合を介して）上記腫瘍細胞上のチェックポイント阻害因子（例えば、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２）を妨害し、この妨害が腫瘍指向性免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞の阻害に支障をきたすように働く。上記融合タンパク質の上記第３構成要素は、（融合タンパク質内のＦｃ_γ又はその誘導体の結合を介して）同じ免疫エフェクター細胞上の活性化受容体、例えばＦｃ_γＲＩＩＩａ受容体を刺激し、それによりＮＫ細胞の活性化を引き起こし、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰを促進する。

幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質の１つの構成要素が腫瘍細胞又は他の細胞上のチェックポイント阻害因子を妨害し、他の２つの構成要素がそれぞれ免疫エフェクター細胞上の別個の活性化受容体を刺激する。幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、チェックポイント阻害因子が腫瘍細胞上に存在する場合に、免疫エフェクター細胞と標的腫瘍細胞に分子架橋を形成する。さらに、チェックポイント阻害経路の妨害と活性化受容体の刺激の連携である融合タンパク質の３つの相互作用が互いを機能的に補強するように働き、それらの３つの相互作用の全てが協同して上記免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞の活性化を引き起こす。好ましい実施形態では、融合タンパク質により妨害されるチェックポイント阻害因子は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５、又はＣＤ１１１から成り、融合タンパク質が共刺激する２つの活性化受容体は、ＮＫ細胞上の４－１ＢＢ及びＦｃ_γＲＩＩＩａ受容体である。

融合タンパク質
構成要素Ａ及び／又は構成要素Ｂを含む融合タンパク質であって、
構成要素Ａが、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含み、
構成要素Ｂが、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む上記融合タンパク質が提供される。幾つかの実施形態では、構成要素Ｂは構成要素Ｚ_１’をさらに含む。したがって、幾つかの実施形態では、構成要素Ｂは、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_１’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む。

幾つかの実施形態では、構成要素Ａは構成要素Ｚ_１をさらに含む。したがって、幾つかの実施形態では、構成要素Ａは、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_１、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含む。

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ｃをさらに含み、構成要素Ｃは構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ_Ｌ’を含む。その他の実施形態では、構成要素Ｃ_Ｌ’は免疫グロブリン軽鎖の少なくとも一部を含む。幾つかの実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ｄをさらに含み、構成要素Ｄは構成要素Ｑ及び構成要素Ｃ_Ｌを含む。その他の実施形態では、構成要素Ｃ_Ｌは免疫グロブリン軽鎖の少なくとも一部を含む。

幾つかの実施形態では、構成要素Ａはリーダー配列をさらに含む。その他の実施形態では、上記リーダー配列はヒトアルブミンリーダー配列である。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｂはリーダー配列をさらに含む。その他の実施形態では、上記リーダー配列はヒトアルブミンリーダー配列である。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｙは、リガンドドメイン、受容体ドメイン、ｓｃＦｖドメイン、又はリポカリンドメインを含む。その他の実施形態では、構成要素Ｙは、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。さらにその他の実施形態では、融合タンパク質はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に結合する。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_１は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ１ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_２は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ２ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_３は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ３ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_１’は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ１ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_２’は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ２ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_３’は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ３ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’は、ウイルス由来ペプチド、リガンド由来、受容体由来ペプチド、又はハイスループットスクリーン（ＨＴＳ）選択ペプチドを含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’は、ケモカイン受容体、サイトカイン受容体、機能リガンドのカウンター受容体、インテグリン、リガンド、又は膜シグナル伝達複合体の一部に結合するペプチド配列を含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’はＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。その他の実施形態では、構成要素Ｘ’はｖＭＩＰ－ＩＩの少なくとも一部を含む。その他の実施形態では、構成要素Ｘ’はＶ１ポリペプチド又はＶ１Δポリペプチドを含む。さらにその他の実施形態では、融合タンパク質はＣＸＣＲ４に結合する。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｑは、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｘは、ウイルス由来ペプチド、リガンド由来ペプチド、受容体由来ペプチド、又はＨＴＳ選択ペプチドを含む。その他の実施形態では、構成要素ＸはＶ１ポリペプチド又はＶ１Δポリペプチドを含む。その他の実施形態では、融合タンパク質はＣＸＣＲ４に結合する。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｙと構成要素Ｚ_２とはヒンジ（例えばＩｇＧヒンジ）を介して接続されている。幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_１’と構成要素Ｚ_２’とはヒンジ（例えばＩｇＧヒンジ）を介して接続されている。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’と構成要素Ｚ_１’とはリンカーを介して接続されている。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘと構成要素Ｃ_Ｌとはリンカーを介して接続されている。

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ａ及びＦｃを含む。その他の実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ａ及びヒトＦｃＢ（ｈＦｃＢ）を含む。

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ｂ及びＦｃを含む。その他の実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ｂ及びヒトＦｃＡ（ｈＦｃＡ）を含む。

幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｂとは共有結合している。幾つかの実施形態では、共有結合はジスルフィド結合又はリンカーを介している。

幾つかの実施形態では、構成要素Ａは構成要素Ｂと共有結合していない。幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｂとは、ノブ・イントゥ・ホール相互作用を介してつなぎ合わせられている。幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｂとは、ノブ・イントゥ・ホール変異及びジスルフィド結合を介した共有結合を含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ａは変異Ｙ３４９Ｃ及び変異Ｔ３６６Ｗを含み、構成要素Ｂは変異Ｄ３５６Ｃ、変異Ｔ３６６Ｓ、変異Ｌ３６８Ａ、及び変異Ｙ４０７Ｖ（「ノブ・イントゥ・ホール」変異）を含む。これらの構成要素鎖内の変異及び変化の位置はＫａｂａｔ番号付与法（Ｊｏｈｎｓｏｎ， Ｇ及びＷｕ， ＴＴ著、（２００１年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．誌、第２８巻（第１号）、２１４～１８頁）によって規定される。

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、構成要素Ａ及び免疫グロブリンのドメインを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンドメインはＦｃドメインである。

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、構成要素Ｂ及び免疫グロブリンのドメインを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンドメインはＦｃドメインである。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｂと構成要素Ｃとは共有結合している。幾つかの実施形態では、共有結合はジスルフィド結合を介している。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｂは構成要素Ｃと共有結合していない。

幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｄとは共有結合している。幾つかの実施形態では、共有結合はジスルフィド結合を介している。

幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｄとは共有結合していない。

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は免疫細胞上の受容体又はリガンドに結合する。

幾つかの実施形態では、受容体はＦｃ受容体である。

薬学的に許容可能な担体と、上述の実施形態のうちのいずれか１つの融合タンパク質と、を含む医薬組成物も提供される。

増殖性障害の治療が必要な患者に、上述の実施形態のうちのいずれか１つの融合タンパク質の治療有効量を投与することを含む、患者の増殖性障害を治療する方法も提供される。幾つかの実施形態では、増殖性障害はがんである。その他の実施形態では、がんは固形腫瘍である。さらにその他の実施形態では、がんは、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、膀胱がん、黒色腫、神経膠芽腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、結腸がん、肺がん、肝臓がん、又はいずれかの固形若しくは液性腫瘍種である。

本発明は、がんなどの増殖性障害の治療に有用な新規融合タンパク質を提供する。構成要素Ｙの受容体又はリガンド及び構成要素Ｘ’の受容体又はリガンドを発現する細胞上で、本発明の融合タンパク質は一方又は両方の受容体又はリガンドを妨害することが可能である。したがって、構成要素Ｙの受容体又はリガンド及び構成要素Ｘ’の受容体又はリガンドを共発現する細胞上で、本発明の融合タンパク質は腫瘍細胞の細胞死、不動化、及びクリアランスを引き起こすことが可能である。さらに、構成要素Ｚ_３又は構成要素Ｚ_３’の受容体又はリガンドを発現する細胞上、例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で、本発明の融合タンパク質は上記受容体又はリガンドを刺激する場合があり、上記細胞の活性化を引き起こす場合がある。したがって、本発明の融合タンパク質は、２つの隣接する細胞に及ぶことによりその活性を成立させる場合がある。さらに、本発明の融合タンパク質は、細胞上の３つ以上の異なる分子に結合する場合がある。幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、ある特定の細胞の阻害又は減少の原因となることにより、又はある特定の細胞の活性化若しくは増加の原因となることにより、がんなどの疾患を治療するように作用する場合がある。

構成要素Ａ
構成要素Ａは、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含む。

構成要素Ｙ
幾つかの実施形態では、構成要素Ｙは、リガンドドメイン、受容体ドメイン、ｓｃＦｖドメイン、又はリポカリンドメインを含む。その他の実施形態では、構成要素Ｙは、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱ
（配列番号１）ヒトＰＤ－１細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿００５０１８．３

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＨＶＶＷＨＲＥＳＰＳＧＱＴＤＴＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＶＣＧＶＩＳＬＡＰＫＩＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱ
（配列番号２）高親和性ヒトＰＤ－１細胞外ドメイン

構成要素Ｙの例示的な配列は以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＭＭＴＧＴＩＥＴＴＧＮＩＳＡＥＫＧＧＳＩＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＳＬＴＶＮＤＴＧＥＹＦＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩＦＬＥＶＬＥＳＳＶＡＥＨＧＡＲＦＱＩＰ
（配列番号３）ヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿１７３７９９．４

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＶＷＥＫＴＶＮＴＥＥＮＶＹＡＴＬＧＳＤＶＮＬＴＣＱＴＱＴＶＧＦＦＶＱＭＱＷＳＫＶＴＮＫＩＤＬＩＡＶＹＨＰＱＹＧＦＹＣＡＹＧＲＰＣＥＳＬＶＴＦＴＥＴＰＥＮＧＳＫＷＴＬＨＬＲＮＭＳＣＳＶＳＧＲＹＥＣＭＬＶＬＹＰＥＧＩＱＴＫＩＹＮＬＬＩＱＴＨＶＴＡＤＥＷＮＳＮＨＴＩＥＩＥＩＮＱＴＬＥＩＰＣＦＱＮＳＳＳＫＩＳＳＥＦＴＹＡＷＳＶＥＮＳＳＴＤＳＷＶＬＬＳＫＧＩＫＥＤＮＧＴＱＥＴＬＩＳＱＮＨＬＩＳＮＳＴＬＬＫＤＲＶＫＬＧＴＤＹＲＬＨＬＳＰＶＱＩＦＤＤＧＲＫＦＳＣＨＩＲＶＧＰＮＫＩＬＲＳＳＴＴＶＫＶＦＡＫＰＥＩＰＶＩＶＥＮＮＳＴＤＶＬＶＥＲＲＦＴＣＬＬＫＮＶＦＰＫＡＮＩＴＷＦＩＤＧＳＦＬＨＤＥＫＥＧＩＹＩＴＮＥＥＲＫＧＫＤＧＦＬＥＬＫＳＶＬＴＲＶＨＳＮＫＰＡＱＳＤＮＬＴＩＷＣＭＡＬＳＰＶＰＧＮＫＶＷＮＩＳＳＥＫＩＴＦＬＬＧＳＥＩＳＳＴＤＰＰＬＳＶＴＥＳＴＬＤＴＱＰＳＰＡＳＳＶＳＰＡＲＹＰＡＴＳＳＶＴＬＶＤＶＳＡＬＲＰＮＴＴＰＱＰＳＮＳＳＭＴＴＲＧＦＮＹＰＷＴＳＳＧＴＤＴＫＫＳＶＳＲＩＰＳＥＴＹＳＳＳＰＳＧＡＧＳＴＬＨＤＮＶＦＴＳＴＡＲＡＦＳＥＶＰＴＴＡＮＧＳＴＫＴＮＨＶＨＩＴＧＩＶＶＮＫＰＫＤＧＭ
（配列番号４）ヒトＣＤ９６細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿１９８１９６．２

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＭＧＨＲＴＬＶＬＰＷＶＬＬＴＬＣＶＴＡＧＴＰＥＶＷＶＱＶＲＭＥＡＴＥＬＳＳＦＴＩＲＣＧＦＬＧＳＧＳＩＳＬＶＴＶＳＷＧＧＰＮＧＡＧＧＴＴＬＡＶＬＨＰＥＲＧＩＲＱＷＡＰＡＲＱＡＲＷＥＴＱＳＳＩＳＬＩＬＥＧＳＧＡＳＳＰＣＡＮＴＴＦＣＣＫＦＡＳＦＰＥＧＳＷＥＡＣＧＳＬＰＰＳＳＤＰＧＬＳＡＰＰＴＰＡＰＩＬＲＡＤ
（配列番号５）ヒトＣＤ１１２Ｒ細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿０２４０７０．３

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＥＥＶＬＷＨＴＳＶＰＦＡＥＮＭＳＬＥＣＶＹＰＳＭＧＩＬＴＱＶＥＷＦＫＩＧＴＱＱＤＳＩＡＩＦＳＰＴＨＧＭＶＩＲＫＰＹＡＥＲＶＹＦＬＮＳＴＭＡＳＮＮＭＴＬＦＦＲＮＡＳＥＤＤＶＧＹＹＳＣＳＬＹＴＹＰＱＧＴＷＱＫＶＩＱＶＶＱＳＤＳＦＥＡＡＶＰＳＮＳＨＩＶＳＥＰＧＫＮＶＴＬＴＣＱＰＱＭＴＷＰＶＱＡＶＲＷＥＫＩＱＰＲＱＩＤＬＬＴＹＣＮＬＶＨＧＲＮＦＴＳＫＦＰＲＱＩＶＳＮＣＳＨＧＲＷＳＶＩＶＩＰＤＶＴＶＳＤＳＧＬＹＲＣＹＬＱＡＳＡＧＥＮＥＴＦＶＭＲＬＴＶＡＥＧＫＴＤＮＱＹＴＬＦＶＡ
（配列番号６）ヒトＣＤ２２６細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿００６５６６．３

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＱＮＬＦＴＫＤＶＴＶＩＥＧＥＶＡＴＩＳＣＱＶＮＫＳＤＤＳＶＩＱＬＬＮＰＮＲＱＴＩＹＦＲＤＦＲＰＬＫＤＳＲＦＱＬＬＮＦＳＳＳＥＬＫＶＳＬＴＮＶＳＩＳＤＥＧＲＹＦＣＱＬＹＴＤＰＰＱＥＳＹＴＴＩＴＶＬＶＰＰＲＮＬＭＩＤＩＱＫＤＴＡＶＥＧＥＥＩＥＶＮＣＴＡＭＡＳＫＰＡＴＴＩＲＷＦＫＧＮＴＥＬＫＧＫＳＥＶＥＥＷＳＤＭＹＴＶＴＳＱＬＭＬＫＶＨＫＥＤＤＧＶＰＶＩＣＱＶＥＨＰＡＶＴＧＮＬＱＴＱＲＹＬＥＶＱＹＫＰＱＶＨＩＱＭＴＹＰＬＱＧＬＴＲＥＧＤＡＬＥＬＴＣＥＡＩＧＫＰＱＰＶＭＶＴＷＶＲＶＤＤＥＭＰＱＨＡＶＬＳＧＰＮＬＦＩＮＮＬＮＫＴＤＮＧＴＹＲＣＥＡＳＮＩＶＧＫＡＨＳＤＹＭＬＹＶＹＤＰＰＴＴＩＰＰＰＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＩＬＴＩＩＴＤＳＲＡＧＥＥＧＳＩＲＡＶＤＨ
（配列番号７）ヒトＮＥＣＬ２細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿０１４３３３．３

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＰＩＩＶＥＰＨＶＴＡＶＷＧＫＮＶＳＬＫＣＬＩＥＶＮＥＴＩＴＱＩＳＷＥＫＩＨＧＫＳＳＱＴＶＡＶＨＨＰＱＹＧＦＳＶＱＧＥＹＱＧＲＶＬＦＫＮＹＳＬＮＤＡＴＩＴＬＨＮＩＧＦＳＤＳＧＫＹＩＣＫＡＶＴＦＰＬＧＮＡＱＳＳＴＴＶＴＶＬＶＥＰＴＶＳＬＩＫＧＰＤＳＬＩＤＧＧＮＥＴＶＡＡＩＣＩＡＡＴＧＫＰＶＡＨＩＤＷＥＧＤＬＧＥＭＥＳＴＴＴＳＦＰＮＥＴＡＴＩＩＳＱＹＫＬＦＰＴＲＦＡＲＧＲＲＩＴＣＶＶＫＨＰＡＬＥＫＤＩＲＹＳＦＩＬＤＩＱＹＡＰＥＶＳＶＴＧＹＤＧＮＷＦＶＧＲＫＧＶＮＬＫＣＮＡＤＡＮＰＰＰＦＫＳＶＷＳＲＬＤＧＱＷＰＤＧＬＬＡＳＤＮＴＬＨＦＶＨＰＬＴＦＮＹＳＧＶＹＩＣＫＶＴＮＳＬＧＱＲＳＤＱＫＶＩＹＩＳＤＰＰＴＴＴＴＬＱＰＴＩＱＷＨＰＳＴＡＤＩＥＤＬＡＴＥＰＫＫＬＰＦＰＬＳＴＬＡＴＩＫＤＤ
（配列番号８）ヒトＣＤ１１３細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿０１５４８０．３

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＡＥＰＨＳＬＲＹＮＬＴＶＬＳＷＤＧＳＶＱＳＧＦＬＴＥＶＨＬＤＧＱＰＦＬＲＣＤＲＱＫＣＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＮＫＴＷＤＲＥＴＲＤＬＴＧＮＧＫＤＬＲＭＴＬＡＨＩＫＤＱＫＥＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＮＳＴＲＳＳＱＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＫＥＷＴＭＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＲＮＦＬＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＨＡＭＨＡＤＣＬＱＥＬＲＲＹＬＫＳＧＶＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷ
（配列番号９）ヒトＭＩＣＡ（ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ）細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿０００２４７．３

リーダー配列
リーダー配列の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（配列番号１０）ヒトアルブミンリーダー配列

ヒンジ
ヒンジの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
（配列番号１１）ヒトＩｇＧヒンジ

構成要素Ｚ_２
構成要素Ｚ_２の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ
（配列番号１２）ＩｇＧ１

構成要素Ｚ_３
構成要素Ｚ_３の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＳＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号１３）ＩｇＧ１

構成要素Ａの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ヒトＰＤ－１細胞外ドメイン；Ｙドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

構成要素Ａの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：高親和性ヒトＰＤ－１細胞外ドメイン；Ｙドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

構成要素Ａの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ヒトＣＤ１１２Ｒ細胞外ドメイン；Ｙドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

構成要素Ａの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：高親和性ヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン；Ｙドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

構成要素Ａの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ヒトＣＤ９６細胞外ドメイン；Ｙドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

構成要素Ａの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ヒトＣＤ２２６細胞外ドメイン；Ｙドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

構成要素Ａの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ヒトＮＥＣＬ２細胞外ドメイン；Ｙドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

構成要素Ａの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ヒトＣＤ１１３細胞外ドメイン；Ｙドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

構成要素Ａの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ヒトＭＩＣＡ細胞外ドメイン；Ｙドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

構成要素Ｂ
構成要素Ｂは、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’は、ウイルス由来ペプチド、リガンド由来ペプチド、受容体由来ペプチド、又はＨＴＳ選択ペプチドを含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’は、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

構成要素Ｘ’
構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＷＰＰＰＧＴＧＤＶＶＶＱＡＰＴＱＶＰＧＦＬＧＤＳＶＴＬＰＣＹＬＱＶＰＮＭＥＶＴＨＶＳＱＬＴＷＡＲＨＧＥＳＧＳＭＡＶＦＨＱＴＱＧＰＳＹＳＥＳＫＲＬＥＦＶＡＡＲＬＧＡＥＬＲＮＡＳＬＲＭＦＧＬＲＶＥＤＥＧＮＹＴＣＬＦＶＴＦＰＱＧＳＲＳＶＤＩＷＬＲＶＬＡＫＰＱＮＴＡＥＶＱＫＶＱＬＴＧＥＰＶＰＭＡＲＣＶＳＴＧＧＲＰＰＡＱＩＴＷＨＳＤＬＧＧＭＰＮＴＳＱＶＰＧＦＬＳＧＴＶＴＶＴＳＬＷＩＬＶＰＳＳＱＶＤＧＫＮＶＴＣＫＶＥＨＥＳＦＥＫＰＱＬＬＴＶＮＬＴＶＹＹＰＰＥＶＳＩＳＧＹＤＮＮＷＹＬＧＱＮＥＡＴＬＴＣＤＡＲＳＮＰＥＰＴＧＹＮＷＳＴＴＭＧＰＬＰＰＦＡＶＡＱＧＡＱＬＬＩＲＰＶＤＫＰＩＮＴＴＬＩＣＮＶＴＮＡＬＧＡＲＱＡＥＬＴＶＱＶＫＥＧＰＰＳＥＨＳＧＭＳＲＮ
（配列番号２４）ヒトＣＤ１５５（ポリオウイルス受容体、ＰＶＲ）細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿００６５０５．５

構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＭＭＴＧＴＩＥＴＴＧＮＩＳＡＥＫＧＧＳＩＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＳＬＴＶＮＤＴＧＥＹＦＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩＦＬＥＶＬＥＳＳＶＡＥＨＧＡＲＦＱＩＰ
（配列番号２５）ヒトＴＩＧＩＴ（Ｉｇドメイン・ＩＴＩＭドメイン含有Ｔ細胞免疫受容体）細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿１７３７９９．４

構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＥＤＧＹＫＶＥＶＧＫＮＡＹＬＰＣＳＹＴＬＰＴＳＧＴＬＶＰＭＣＷＧＫＧＦＣＰＷＳＱＣＴＮＥＬＬＲＴＤＥＲＮＶＴＹＱＫＳＳＲＹＱＬＫＧＤＬＮＫＧＤＶＳＬＩＩＫＮＶＴＬＤＤＨＧＴＹＣＣＲＩＱＦＰＧＬＭＮＤＫＫＬＥＬＫＬＤＩＫＡＡＫＶＴＰＡＱＴＡＨＧＤＳＴＴＡＳＰＲＴＬＴＴＥＲＮＧＳＥＴＱＴＬＶＴＬＨＮＮＮＧＴＫＩＳＴＷＡＤＥＩＫＤＳＧＥＴＩＲ
（配列番号２６）マウスＴｉｍ－３細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿１３４２５０．２
マウスＴＩＭ－３はヒトガラクチン－９に対して良好な結合性を有する。

構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＰＩＩＶＥＰＨＶＴＡＶＷＧＫＮＶＳＬＫＣＬＩＥＶＮＥＴＩＴＱＩＳＷＥＫＩＨＧＫＳＳＱＴＶＡＶＨＨＰＱＹＧＦＳＶＱＧＥＹＱＧＲＶＬＦＫＮＹＳＬＮＤＡＴＩＴＬＨＮＩＧＦＳＤＳＧＫＹＩＣＫＡＶＴＦＰＬＧＮＡＱＳＳＴＴＶＴＶＬＶＥＰＴＶＳＬＩＫＧＰＤＳＬＩＤＧＧＮＥＴＶＡＡＩＣＩＡＡＴＧＫＰＶＡＨＩＤＷＥＧＤＬＧＥＭＥＳＴＴＴＳＦＰＮＥＴＡＴＩＩＳＱＹＫＬＦＰＴＲＦＡＲＧＲＲＩＴＣＶＶＫＨＰＡＬＥＫＤＩＲＹＳＦＩＬＤＩＱＹＡＰＥＶＳＶＴＧＹＤＧＮＷＦＶＧＲＫＧＶＮＬＫＣＮＡＤＡＮＰＰＰＦＫＳＶＷＳＲＬＤＧＱＷＰＤＧＬＬＡＳＤＮＴＬＨＦＶＨＰＬＴＦＮＹＳＧＶＹＩＣＫＶＴＮＳＬＧＱＲＳＤＱＫＶＩＹＩＳＤＰＰＴＴＴＴＬＱＰＴＩＱＷＨＰＳＴＡＤＩＥＤＬＡＴＥＰＫＫＬＰＦＰＬＳＴＬＡＴＩＫＤＤ
（配列番号２７）ヒトＣＤ１１３細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿０１５４８０．３

リーダー配列
リーダー配列の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（配列番号１０）ヒトアルブミンリーダー配列

ヒンジ
ヒンジの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
（配列番号１１）ヒトＩｇＧヒンジ

構成要素Ｚ_２’
構成要素Ｚ_２’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ
（配列番号１２）ＩｇＧ１

構成要素Ｚ_３’
構成要素Ｚ_３’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＳＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号１３）ＩｇＧ１

構成要素Ｂの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ヒトＣＤ１５５（ポリオウイルス受容体、ＰＶＲ）細胞外ドメイン；Ｘ’ドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

構成要素Ｂの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ヒトＴＩＧＩＴ（Ｉｇドメイン・ＩＴＩＭドメイン含有Ｔ細胞免疫受容体）細胞外ドメイン；Ｘ’ドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

構成要素Ｂの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：マウスＴＩＭ－３細胞外ドメイン；Ｘ’ドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

構成要素Ｂの別の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ヒトＣＤ１１３細胞外ドメイン；Ｘ’ドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

構成要素Ｚ_１’を含む構成要素Ｂ
幾つかの実施形態では、構成要素Ｂは構成要素Ｚ_１’をさらに含む。したがって、幾つかの実施形態では、構成要素Ｂは、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_１’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む。

幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’は、ウイルス由来ペプチド、リガンド由来ペプチド、受容体由来ペプチド、又はＨＴＳ選択ペプチドを含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’は、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。その他の実施形態では、構成要素Ｘ’は、ＣＤ１５５、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、又はＣＤ１１３の少なくとも一部を含む。

構成要素Ｘ’
構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＣＣＬＧＹＱＫＲＰＬＰＱＶＬＬＳＳＷＹＰＴＳＱＬＣＳＫＰＧＶＩＦＬＴＫＲＧＲＱＶＣＡＤＫＳＫＤＷＶＫＫＬＭＱＱＬＰＶＴＡＲ
（配列番号３７）ｖＭＩＰＩＩ、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＹＰ＿００１１２９３６２

構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＣＣＬＧＹＱＫＲＰＬＰ
（配列番号３８）Ｖ１

構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＣＡＬＧＹＱＫＲＰＬＰ
（配列番号３９）Ｖ１Δ

構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＡＣＡＬＧＹＱＫＲＰＬＰ
（配列番号４０）Ｖ１Δｍｕｔ

構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＣＣＬＧＹＱＫＲＰＬＰＱＶＬＬＳＳＷＹＰＴＳＱＬ
（配列番号４１）Ｖｐ１

構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＣＡＬＧＹＱＫＲＰＬＰＱＶＬＬＳＳＷＹＰＴＳＱＬ
（配列番号４２）Ｖｐ１Δ

構成要素Ｘ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＡＣＡＬＧＹＱＫＲＰＬＰＱＶＬＬＳＳＷＹＰＴＳＱＬ
（配列番号４３）Ｖｐ１Δｍｕｔ

リーダー配列
リーダー配列の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（配列番号１０）ヒトアルブミンリーダー配列

構成要素Ｚ_１’
構成要素Ｚ_１’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＸ
（配列番号４５）

ヒンジ
ヒンジの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
（配列番号１１）

構成要素Ｚ_２’
構成要素Ｚ_２’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ
（配列番号１２）

構成要素Ｚ_３’
構成要素Ｚ_３’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＣＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＳＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号４８）

構成要素Ｂの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ｖＭＩＰＩＩ
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＨ’
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

構成要素Ｂの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖ１（Ｖ１はＶＭＩＰＩＩの最初の２１アミノ酸である）
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＨ’
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

構成要素Ｂの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖ１Δ（Ｖ１Δは、２つのＶ１ペプチドの二量体化を増強するアミノ酸１１におけるＣからＡへの変異を有するＶ１である）
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＨ’
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

構成要素Ｂの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖ１Δｍｕｔ（Ｖ１ΔｍｕｔはＶ１と同じアミノ酸１１におけるＣからＡへの変異を有するが、受容体結合を防止するアミノ酸９におけるＫからＡへの変異が加えられている）
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＨ’
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

構成要素Ｂの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖｐ１（Ｖｐ１はｖＭＩＰＩＩの最初の３４アミノ酸である）
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＨ’
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

構成要素Ｂの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖｐ１Δ
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＨ’
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖｐ１Δｍｕｔ
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＨ’
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ’_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ’_３ドメイン

構成要素Ｃ
幾つかの実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ｃをさらに含み、構成要素Ｃは構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ_Ｌ’を含む。

構成要素Ｘ
構成要素Ｘの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＣＣＬＧＹＱＫＲＰＬＰＱＶＬＬＳＳＷＹＰＴＳＱＬＣＳＫＰＧＶＩＦＬＴＫＲＧＲＱＶＣＡＤＫＳＫＤＷＶＫＫＬＭＱＱＬＰＶＴＡＲ
（配列番号３７）ｖＭＩＰＩＩ、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＹＰ＿００１１２９３６２

構成要素Ｘの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＣＣＬＧＹＱＫＲＰＬＰ
（配列番号３８）Ｖ１

構成要素Ｘの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＣＡＬＧＹＱＫＲＰＬＰ
（配列番号３９）Ｖ１Δ

構成要素Ｘの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＡＣＡＬＧＹＱＫＲＰＬＰ
（配列番号４０）Ｖ１Δｍｕｔ

構成要素Ｘの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＣＣＬＧＹＱＫＲＰＬＰＱＶＬＬＳＳＷＹＰＴＳＱＬ
（配列番号４１）Ｖｐ１

構成要素Ｘの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＣＡＬＧＹＱＫＲＰＬＰＱＶＬＬＳＳＷＹＰＴＳＱＬ
（配列番号４２）Ｖｐ１Δ

構成要素Ｘの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＡＣＡＬＧＹＱＫＲＰＬＰＱＶＬＬＳＳＷＹＰＴＳＱＬ
（配列番号４３）Ｖｐ１Δｍｕｔ

幾つかの実施形態では、構成要素Ｘと構成要素Ｘ’とは同じである。その他の実施形態では、構成要素Ｘは構成要素Ｘ’とは異なっている。

リーダー配列
リーダー配列の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（配列番号１０）ヒトアルブミンリーダー配列

構成要素Ｃ_Ｌ’
構成要素Ｃ_Ｌ’の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
（配列番号６４）

構成要素Ｃの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：ｖＭＩＰＩＩ
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＬ’

構成要素Ｃの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖ１
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＬ’

構成要素Ｃの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖ１Δ
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＬ’

構成要素Ｃの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖ１Δｍｕｔ
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＬ’

構成要素Ｃの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は例示的なの配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖｐ１
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＬ’

構成要素Ｃの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖｐ１Δ
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＬ’

構成要素Ｃの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

斜体：ヒトアルブミンリーダー配列
波線：Ｖｐ１Δｍｕｔ
太波線：Ｖ１、Ｖ１Δ、及びＶ１Δｍｕｔ間のアミノ酸の違い
太線：ＣＬ’

構成要素Ｄ
幾つかの実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ｄをさらに含み、構成要素Ｄは構成要素Ｑ及び構成要素Ｃ_Ｌを含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ｑは、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

構成要素Ｑの例示的な配列は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、若しくは９を含むか、又は配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、若しくは９から成る。幾つかの実施形態では、構成要素Ｑと構成要素Ｙとは同じである。その他の実施形態では、構成要素Ｑは構成要素Ｙとは異なっている。

構成要素Ｃ_Ｌ
構成要素Ｃ_Ｌの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
（配列番号６４）

融合タンパク質の構成
本発明の融合タンパク質の幾つかの実施形態では、本明細書の別の箇所に記載される組換え技法により調製される場合、構成要素Ａの構成要素のコード配列は直接的に、又はリンカーを介してインフレームで共に融合される。本明細書において使用される場合、「直接的に」という用語は、間にペプチドリンカーを含まずに２つの構成要素を融合することを指す（すなわち、発現コンストラクト内で構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３をコードするコドンが連続する）。本明細書において使用される場合、「インフレームで融合される」とは、融合コード配列の発現の結果として、ポリペプチド構成要素の全てを含む融合タンパク質が生じることを意味し、例えば、幾つかの実施形態では、構成要素Ａは構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３のポリペプチド構成要素の全てをインフレームで含む。

本発明の融合タンパク質の幾つかの実施形態では、本明細書の別の箇所に記載される組換え技法により調製される場合、構成要素Ｂの構成要素のコード配列は直接的に、又はリンカーを介してインフレームで共に融合される。幾つかの実施形態では、構成要素Ｂの発現コンストラクトにおいて、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２及び構成要素Ｚ_３’をコードするコドンが連続する。その他の実施形態では、構成要素Ｂの発現コンストラクトにおいて、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_１’、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３’をコードするコドンが連続する。幾つかの実施形態では、構成要素Ｂは、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３’のポリペプチド構成要素の全てをインフレームで含む。その他の実施形態では、構成要素Ｂは、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_１’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’のポリペプチド構成要素の全てをインフレームで含む。

本発明の融合タンパク質の幾つかの実施形態では、本明細書の別の箇所に記載される組換え技法により調製される場合、構成要素Ｃの構成要素のコード配列は直接的に、又はリンカーを介してインフレームで共に融合される。幾つかの実施形態では、構成要素Ｃの発現コンストラクトにおいて、構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ_Ｌ’をコードするコドンが連続する。幾つかの実施形態では、構成要素Ｃは、構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ_Ｌ’のポリペプチド構成要素の全てをインフレームで含む。

幾つかの実施形態では、任意の構成要素Ａと任意の構成要素Ｂとを互いに組み合わせて混合することが可能である。本発明の融合タンパク質の幾つかの例示的な実施形態では、構成要素Ａ及び構成要素Ｂは表１に示される通りである。幾つかの実施形態では、表１の構成要素Ａ及び構成要素Ｂを互いに組み合わせて混合しても、追加の構成要素Ａ及び構成要素Ｂのオプションと共に組み合わせることが可能である。上記追加オプションも互いに組み合わせて混合することが可能である。構成要素Ａ又は構成要素Ｂの追加オプションは、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含み得る。

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、構成要素Ａ及びｈＦｃＢを含む。幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、構成要素Ｂ及びｈＦｃＡを含む。

幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質の構成要素の１つが抑制性受容体を妨害し、融合タンパク質の他の２つの構成要素がそれぞれ別個の活性化受容体を刺激する。好ましい実施形態では、これらの３種類の受容体は同じ免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞の表面上に共局在し、阻害経路の妨害及び活性化受容体の刺激の連携である融合タンパク質の３つの相互作用が互いを補強するように働き、それらの３つの相互作用の全てが協同してＮＫ細胞の活性化を引き起こす。

他の例示的な実施形態では、融合タンパク質の構成要素の２つがそれぞれ別個の抑制性受容体を妨害し、融合タンパク質の他の１つの構成要素が活性化受容体を刺激する。好ましい実施形態では、これらの３種類の受容体は同じ免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞の表面上に共局在し、阻害経路の妨害及び活性化受容体の刺激の連携である融合タンパク質の３つの相互作用が互いを機能的に補強するように働き、それらの３つの相互作用の全てが協同してＮＫ細胞の活性化を引き起こす。

さらに他の例示的な実施形態では、融合タンパク質の３つの構成要素がそれぞれ活性化受容体を刺激する。好ましい実施形態では、これらの３種類の受容体は同じ免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞の表面上に共局在し、全て活性化受容体の刺激である融合タンパク質の３つの相互作用が互いを機能的に補強するように働き、それらの３つの相互作用の全てが協同してＮＫ細胞の活性化を引き起こす。

ＮＫ細胞について、前述の実施形態における活性化受容体は、ＮＫ細胞の活性化を引き起こし、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を促進するＦｃ_γＲＩＩＩａ受容体であり得る。

幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質は、構成要素Ｂ及び構成要素Ｃを含む。幾つかの実施形態では、任意の構成要素Ｂと任意の構成要素Ｃとを互いに組み合わせて混合することが可能である。幾つかの実施形態では、構成要素Ｂ及び構成要素Ｃは表２に示される通りである。幾つかの実施形態では、表２の各行は融合タンパク質内の構成要素Ｂと構成要素Ｃの組合せを示している。

幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｂとは、ジスルフィド結合で安定化されているノブ・イントゥ・ホール相互作用（ＫｉＨ_Ｓ－Ｓ）を介してつなぎ合わされている。幾つかの実施形態では、構成要素Ａは変異Ｙ３４９Ｃ及び変異Ｔ３６６Ｗ（例えば配列番号２９）を含み、構成要素Ｂは変異Ｄ３５６Ｃ、変異Ｔ３６６Ｓ、変異Ｌ３６８Ａ、及び変異Ｙ４０７Ｖ（例えば配列番号３０）（「ノブ・イントゥ・ホール」変異）を含み、それにより構成要素Ａと構成要素Ｂとの強制二量体化が可能になる。構成要素Ｚ_１、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３はそれぞれヒトＩｇＧ１のＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインのポリペプチドアミノ酸骨格に基づいている。これらの構成要素鎖内の変異及び変化の位置はＫａｂａｔ番号付与法（Ｊｏｈｎｓｏｎ， Ｇ及びＷｕ， ＴＴ著、（２０１１年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．誌、第２８巻（第１号）、２１４～１８頁）によって規定され、野生型ヒトＩｇＧ１配列に基づいている。

波線：ＩｇＧ１ Ｚ_１ドメイン
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン

幾つかの実施形態では、構成要素Ａは、以下の配列（Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ）を含むか、又は以下の配列から成る。

波線：ＩｇＧ１ Ｚ_１ドメイン（配列番号６７）（例えば図１ａ参照）
太字：ＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号６８）
Ｓ^＊：野生型と比較して異なる別のシステインとの結合を行う可能性がある非対システイン（Ｃ）を除去するためにこの変異をヒンジ領域に付加した。
二重下線：ＩｇＧ１ Ｚ_２ドメイン（配列番号６９）
Ａ^＊＊：Ｃ１ｑ結合を減少させるために付加された変異（例えば図１ａ参照）
太線：ＩｇＧ１ Ｚ_３ドメイン（配列番号４４）
Ｌ^＊＊＊及びＳ^＊＊＊：ＦｃＲｎ結合を増加させるために付加された変異（例えば図１ａ参照）

幾つかの実施形態では、構成要素Ｂは以下の配列（Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ）を含むか、又は以下の配列から成る。

波線：ＩｇＧ１ Ｚ_１’ドメイン

表１及び表２に示される構成要素は例であり、限定する意図はない。

幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質の１つの構成要素が腫瘍細胞の腫瘍形成性及び／又は転移能に寄与する、腫瘍細胞上の受容体を妨害し、融合タンパク質の第２の構成要素が腫瘍細胞上のチェックポイント阻害因子を妨害し、融合タンパク質の第３の構成要素が免疫エフェクター細胞上の活性化受容体を刺激する。理論に捉われることを望むものではないが、融合タンパク質は免疫エフェクター細胞と標的腫瘍細胞に分子架橋を形成するように働き、融合タンパク質の第２の構成要素及び第３の構成要素は、チェックポイント阻害因子の妨害及び免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞上の活性化受容体の刺激の連携によって互いを補強するように働くと共に協同して、免疫エフェクター細胞の活性化を引き起こす。

好ましい実施形態では、融合タンパク質の第１構成要素は（融合タンパク質内のｖＭＩＰＩＩペプチド又はＶ１ペプチド又はそれらの誘導体の結合を介して）ケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ４及び／又はＣＸＣＲ７）を妨害し、この妨害が腫瘍細胞を動けないようにし、その移動性、浸潤性、転移性、及び他の腫瘍原性特性に支障をきたすように働く。融合タンパク質の第２構成要素は（融合タンパク質内のＰＤ１又はその誘導体の結合を介して）腫瘍細胞上のチェックポイント阻害因子、例えばＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２を妨害し、この妨害が腫瘍指向性免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞の阻害に支障をきたすように働く。融合タンパク質の第３構成要素は、（融合タンパク質内のＦｃ_γ又はその誘導体の結合を介して）同じ免疫エフェクター細胞上の活性化受容体、例えばＦｃ_γＲＩＩＩａ受容体を刺激し、それによりＮＫ細胞の活性化を引き起こし、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰを促進する。上記実施形態の有益な特徴は、同じ融合タンパク質が正味の抗腫瘍作用を有するＮＫ細胞以外の他の免疫細胞も協調的に調整することである（図５参照）。

幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質の１つの構成要素が腫瘍細胞又は他の細胞上のチェックポイント阻害因子を妨害し、その他の２つの構成要素がそれぞれ免疫エフェクター細胞上の別個の活性化受容体を刺激する。チェックポイント阻害因子が腫瘍細胞上に存在する場合、融合タンパク質が事実上免疫エフェクター細胞と標的腫瘍細胞に分子架橋を形成するように働く。さらに、チェックポイント阻害経路の妨害及び活性化受容体の刺激の連携である融合タンパク質の３つの相互作用が互いを機能的に補強するように働き、それらの３つの相互作用の全てが協同して免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞の活性化を引き起こす。好ましい実施形態では、融合タンパク質により妨害されるチェックポイント阻害因子は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５、又はＣＤ１１１から成り、融合タンパク質が共刺激する２つの活性化受容体はＮＫ細胞上のＦｃ_γＲＩＩＩａ受容体と４－１ＢＢである（図６参照）。

幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質の１つの構成要素が腫瘍細胞又は他の細胞上のチェックポイント阻害因子を妨害し、融合タンパク質の第２の構成要素が免疫エフェクター細胞上の同じ又は異なるチェックポイント阻害因子の共抑制性受容体を妨害し、融合タンパク質の第３の構成要素が免疫エフェクター細胞上の活性化受容体を刺激する。チェックポイント阻害因子が腫瘍細胞上に存在する場合、融合タンパク質が事実上免疫エフェクター細胞と標的腫瘍細胞に分子架橋を形成するように働き、チェックポイント阻害経路の妨害及び活性化受容体の刺激の連携である融合タンパク質の３つの相互作用が互いを機能的に補強するように働き、それらの３つの相互作用の全てが協同して免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞の活性化を引き起こす。好ましい実施形態では、融合タンパク質の第１構成要素が妨害するチェックポイント阻害因子は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５、又はＣＤ１１１から成り、融合タンパク質が妨害するＮＫ細胞上の共抑制性受容体はＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、又はＣＤ１１２Ｒから成り、融合タンパク質が刺激する活性化受容体は同じＮＫ細胞上のＦｃ_γＲＩＩＩａ受容体である（図７参照）。

幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質の１つの構成要素がＭ１型腫瘍随伴マクロファージ上の抑制性「ドント・イート・ミー」シグナル受容体を妨害することにより、上記受容体の抗腫瘍貪食活性及び他の活性を解除し、融合タンパク質の他の２つの構成要素がそれぞれ腫瘍随伴マクロファージ上の別個の活性化受容体を刺激する。マクロファージ阻害経路の妨害及びマクロファージ上の別個の活性化受容体の刺激の連携である融合タンパク質の３つの相互作用が互いを機能的に補強するように働き、それらの３つの相互作用の全てが協同して腫瘍随伴マクロファージの活性化を引き起こし、その抗腫瘍機能を促進する。好ましい実施形態では、融合タンパク質の第１構成要素が妨害する「ドント・イート・ミー」シグナル受容体はＳＩＲＰαであり、融合タンパク質が刺激する活性化受容体は同じマクロファージ上のＣＤ４０とＦｃ_γＲＩＩＩａ受容体である（図８左パネル参照）。

幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質の１つの構成要素がＭ１型腫瘍随伴マクロファージ上の抑制性「ドント・イート・ミー」シグナル受容体を妨害することにより、上記受容体の抗腫瘍貪食活性及び他の活性を解除し、融合タンパク質の第２の構成要素がマクロファージ上の別個の抑制性受容体を妨害し、融合タンパク質の第３の構成要素が腫瘍随伴マクロファージ上の活性化受容体を刺激する。２つのマクロファージ阻害経路の妨害及びマクロファージ上の活性化受容体の刺激の連携である融合タンパク質の３つの相互作用が互いを機能的に補強するように働き、それらの３つの相互作用の全てが協同して腫瘍随伴マクロファージの活性化及び／又は抗腫瘍エフェクター機能を引き起こす。好ましい実施形態では、融合タンパク質の第１構成要素が妨害する「ドント・イート・ミー」シグナル受容体はＳＩＲＰαであり、融合タンパク質の第２構成要素が妨害する抑制性受容体はＰＤ－１であり、融合タンパク質が刺激する活性化受容体はＦｃ_γＲＩＩＩａ受容体である（図８右パネル参照）。

本発明の融合タンパク質の好ましい実施形態は、サイトカイン又はその一部若しくは誘導体を含み、それは構成要素Ａ、構成要素Ｂ、構成要素Ｃ、及び／又は構成要素Ｄに組み込まれ得る。このサイトカインには当業者によく知られている広範囲のサイトカインが含まれ、それらのサイトカインは多種多様なクラス、例えば、インターロイキン、腫瘍壊死因子、インターフェロン、コロニー刺激因子、及びその他に分類され、一連の活性化特性又は阻害特性を有する様々な機能、例えば適応免疫、炎症促進性シグナル伝達、炎症抑制性シグナル伝達、幹細胞の改変と分化、化学遊走、食作用、細胞傷害、及び抗ウイルス作用に関連するとされており、一連の免疫細胞標的及び非免疫細胞標的、例えばＢ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ／単球、樹状細胞、骨髄間質細胞、幹細胞、線維芽細胞、内皮細胞、及び上皮細胞と関連付けられている。好ましい実施形態は、適応免疫に関連するサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＧＭ－ＣＳＦ）、炎症促進性シグナル伝達に関連するサイトカイン［例えば、ＩＬ－１ファミリー（ＩＬ－１、ＩＬ－１８、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６）、ＩＬ－６ファミリー（ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－３１、ＣＮＴＦ、ＣＴ－１、ＬＩＦ、ＯＰＮ、ＯＳＭ）、ＴＮＦαファミリー（ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＢＡＦＦ、ＡＰＲＩＬ）、ＩＬ－１７ファミリー（ＩＬ－１７Ａ－Ｆ、ＩＬ－２５）、Ｉ型ＩＦＮファミリー（ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮκ、リミチン）、ＩＩ型ＩＦＮファミリー（ＩＦＮγ）、及びＩＩＩ型ＩＦＮファミリー（ＩＦＮλ１／ＩＬ－２９、ＩＦＮλ２／ＩＬ－２８Ａ、ＩＦＮλ３／ＩＬ－２８Ｂ）］、及び炎症抑制性シグナル伝達に関連するサイトカイン［ＩＬ－１２ファミリー（ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＬ－３５）及びＩＬ－１０ファミリー（ＩＬ－１０、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２２、ＩＬ－２４、ＩＬ－２６、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９）］を含む。Ｔｕｒｎｅｒ， Ｍａｒｋ Ｄ．著、「Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ： Ａｔ ｔｈｅ Ｃｒｏｓｓｒｏａｄｓ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ誌、第１８４３巻（２０１４年）、２５６３～２５８２頁を参照されたい。

ｖＭＩＰ－ＩＩ
幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はｖＭＩＰ－ＩＩ又はその変異体を含み得る。ウイルスマクロファージ炎症タンパク質－ＩＩ（ｖＭＩＰ－ＩＩ）は、ＣＣＲ５ケモカイン受容体及びＣＸＣＲ４ケモカイン受容体を含むＣＣケモカイン受容体及びＣＸＣケモカイン受容体と相互作用するケモカインである。ＣＣＲ５及びＣＸＣＲ４は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ－１）の細胞侵入に必要とされる主要な共受容体である。ＣＸＣＲ４はがん細胞上、例えば腫瘍細胞上に見られる場合もある。ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ－８）がコードするケモカインであるｖＭＩＰ－ＩＩ（Ｍｏｏｒｅ， Ｐ．Ｓ．ら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２７４巻：１７３９～１７４４頁、１９９６年）は、ＣＣケモカイン受容体及びＣＸＣケモカイン受容体の両方との多様な相互作用を示し、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５、及びＣＸＣＲ４を介したＨＩＶ－１侵入を妨害する。参照により全体が本明細書に援用される米国特許出願公開第２００３／０２２０４８２号明細書を参照されたい。ｖＭＩＰ－ＩＩはＣＸＣＲ７にも結合し、これはＣＸＣＲ４のように腫瘍形成に関係するとされている。Ｖ１（ｖＭＩＰ－ＩＩのアミノ酸１～アミノ酸２１）及びその関連のＤＶ１（Ｄアミノ酸異性体）はＣＸＣＲ４及びＣＸＣＲ７に対してアンタゴニスト活性を示すが、ＣＣＲ５に対してはアンタゴニスト活性を示さない。

ｖＭＩＰは天然のリガンドであるＣＸＣＬ１２の結合を阻害する。幾つかの実施形態では、Δは、構成要素Ｂと構成要素Ｃの２つのペプチド間での二量体化を引き起こす、１２番アミノ酸における変異を意味している。幾つかの実施形態では、Δｍｕｔは、ペプチドの結合を妨害する、１０番アミノ酸における変異を意味しており、陰性対照として作用する。

ＰＤ－１
幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＰＤ－１又はその変異体を含み得る。ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）はＣＤ２７９としても知られており、細胞に対する免疫系の応答を制御する役割を有する当該細胞の表面上のタンパク質である。ＰＤ－１は免疫系を下方制御し、Ｔ細胞炎症活性を抑制することにより自己免疫寛容を助長する。理論に捉われることを望むものではないが、ＰＤ－１は少なくとも２つの機序を通して免疫チェックポイントとして作用する。ＰＤ－１はリンパ節において抗原特異的Ｔ細胞のアポトーシスを促進する。ＰＤ－１はまた調節性Ｔ細胞のアポトーシスを減少させる。ＰＤ－１はＢ７ファミリーメンバーであるリガンドＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に結合する。ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２は幾つかの腫瘍細胞の表面上に発現する。腫瘍細胞上に発現したＰＤ－Ｌ１はエフェクターＴ細胞上及びＮＫ細胞上のＰＤ－１と結合し、これらの細胞の機能を阻害する。したがって、腫瘍細胞上に発現したＰＤ－Ｌ１はエフェクターＴ細胞の抗腫瘍活性を阻害する。

幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質のＰＤ－１変異体は高親和性ＰＤ－１である。天然のＰＤ－１がそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に対して有する親和性は比較的に低い。ＰＤ－１エクトドメインの高親和性変異体であればＰＤ－１リガンドに対するより競合的なアンタゴニストとして機能するだろう。ヒトＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間のＰＤ－１接触残基に変異を形成した後にその残基を結合について評価した。本明細書に記載される高親和性ＰＤ－１は、１０カ所のアミノ酸が変異していることにより１０，０００倍を超えるＰＤ－Ｌ１に対する親和性の向上が達成されている。その他の詳細についてはＭａｕｔｅら著、ＰＮＡＳ誌、第１１２巻（第４７号）：６５０６～６５１４頁、２０１５年を参照されたい。

ＣＤ１１２Ｒ
幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１１２Ｒ又はその変異体を含み得る。ＣＤ１１２ＲはＴ細胞上及びＮＫ細胞上に発現し、活性化応答を抑制する。抗原提示細胞上及び腫瘍細胞上に広く発現するＣＤ１１２はＣＤ１１２Ｒのリガンドである。ＣＤ１１２Ｒは共抑制性受容体であるＣＤ２２６とＣＤ１１２への結合について競合する。理論に捉われることを望むものではないが、ＣＤ１１２Ｒ－ＣＤ１１２間の相互作用の破壊がＴ細胞応答を増加させる可能性がある。ヒトＣＤ１１２Ｒは単一の細胞外ＩｇＶドメインを含む。本明細書に記載されるＣＤ１１２Ｒ融合タンパク質変異体は、ヒトＩｇＧ１のヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインに結合しているヒトＣＤ１１２Ｒのエクトドメイン全体から構成される。ＣＤ１１２Ｒ及び変異体はそのリガンドであるＣＤ１１２に結合し、ＮＫ細胞上及びＴ細胞上の天然ＣＤ１１２Ｒに対する競合的アンタゴニストとして作用して抑制性シグナル伝達を阻害する可能性がある。

ＣＤ１１３
幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１１３又はその変異体を含み得る。ＣＤ１１３はポリオウイルス受容体関連タンパク質３（ＰＶＲＬ３）又はネクチン－３としても知られており、接着結合部を形成する免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＤ１１３は、限定されないが、ＭＬＬＴ４、ＰＡＲＤ３、及びＰＴＰＲＭと相互作用することが示されている。また、ＣＤ１１３はＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５、及び自分自身と結合する。本明細書に記載されるＣＤ１１３融合タンパク質変異体は、ヒトＩｇＧ１のヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインに結合している天然ヒトＣＤ１１３の細胞外ドメイン全体から構成される。ＣＤ１１３含有融合タンパク質はＮＫ細胞上及びＴ細胞上の天然ＴＩＧＩＴに対する競合的アンタゴニストとして作用して抑制性シグナル伝達を阻害する可能性がある。あるいは、ＣＤ１１３融合タンパク質はＣＤ１１２、ＣＤ１５５、及び／又はＣＤ１１１に結合し、抑制性受容体ＣＤ１１２Ｒ、ＴＩＧＩＴ、及びＣＤ９６とそれらの結合をそれぞれ妨害してＮＫ細胞及びＴ細胞の細胞傷害性及びサイトカイン生産を回復させる可能性がある。

ＭＩＣＡ
幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）又はその変異体を含み得る。ＭＩＣＡはＭＨＣ座位内に位置するＭＩＣＡ遺伝子がコードする細胞表面糖タンパク質である。ＭＩＣＡはβ２マイクログロブリンにも従来のＭＨＣクラスＩ分子が結合するようなペプチドにも結合しない。理論に捉われることを望むものではないが、ＭＩＣＡはＮＫＧ２Ｄ受容体のストレス誘導性リガンドとして作用する可能性がある。ＭＩＣＡは細胞表面上にＮＫＧ２Ｄを発現するＮＫ細胞、γδＴ細胞、及びＣＤ８＋αβＴ細胞によって大まかに認識される。ＭＩＣＡを発現する腫瘍細胞に対するＴ細胞及びＮＫ細胞のエフェクター細胞溶解反応はＮＫＧ２Ｄ－ＭＩＣＡ間の結合の結果として開始される。幾つかの実施形態では、ＭＩＣＡ変異体は、ヒトＩｇＧ１のヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインに結合しているＭＩＣＡエクトドメイン全体から構成される。ＮＫ細胞上及び細胞傷害性Ｔ細胞上でのＮＫＧ２Ｄシグナル伝達のＭＩＣＡ刺激は抗腫瘍活性の重要な介在因子である。

ＣＤ１５５
幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１５５又はその変異体を含み得る。ＣＤ１５５は免疫グロブリンスーパーファミリーのＩ型経膜糖タンパク質である。ヒトではＣＤ１５５はポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）遺伝子によってコードされる。ＣＤ１５５は上皮細胞間の細胞間接着結合の構築に関与する。ＣＤ１５５の外部ドメインは細胞外マトリックス分子であるビトロネクチンへの細胞接着に関係する一方、その細胞内ドメインはダイニン軽鎖Ｔｃｔｅｘ－１／ＤＹＮＬＴ１と相互作用する。また、ＣＤ１５５はＮＫ細胞抑制性受容体であるＴＩＧＩＴ及びＣＤ９６と結合し、ＮＫ細胞の細胞傷害性及び活性化受容体ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ－１）を制限する。ＣＤ１５５細胞外ドメイン含有融合タンパク質はＮＫ細胞上及びＴ細胞上のＴＩＧＩＴ又はＣＤ９６に結合し、腫瘍細胞又は抗原提示細胞（ＡＰＣ）が発現した内在性ＣＤ１５５に対する競合的アンタゴニストとして作用する可能性がある。ＣＤ１５５含有融合タンパク質は共刺激受容体であるＣＤ２２６に結合し、腫瘍標的のＮＫ細胞介在性溶解を誘導する可能性もある。

ＴＩＧＩＴ
幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＴＩＧＩＴ又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、ＴＩＧＩＴはマウスＴＩＧＩＴである。その他の実施形態では、ＴＩＧＩＴはヒトＴＩＧＩＴである。幾つかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ変異体は、ヒトＩｇＧ１のヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインに結合しているＴＩＧＩＴ細胞外ＩｇＶ様ドメイン全体を含む。

ＴＩＧＩＴは、Ｉｇドメイン・ＩＴＩＭドメイン含有Ｔ細胞免疫受容体としても知られており、幾つかのＴ細胞上及びＮＫ細胞上に存在する免疫受容体である。ＴＩＧＩＴはＷＵＣＡＭ又はＶｓｔｍ３としても知られている。ＴＩＧＩＴは樹状細胞（ＤＣ）及びマクロファージなどの細胞上のＣＤ１５５（ＰＶＲ）に高い親和性で結合し、ＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２）にも低い親和性で結合する。ＴＩＧＩＴはチェックポイント阻害因子であり、がん、例えば黒色腫の個体に由来する腫瘍抗原特異的（ＴＡ特異的）ＣＤ８＋Ｔ細胞上及びＣＤ８＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）上に過剰発現する。理論に捉われることを望むものではないが、ＴＩＧＩＴの妨害は細胞増殖、サイトカイン生産、並びに腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＴＩＬ ＣＤ８＋Ｔ細胞の脱顆粒の増加を引き起こす可能性がある。ＴＩＧＩＴ含有融合タンパク質はその受容体であるＣＤ１５５（ＰＶＲ）及びＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２）に結合し、ＮＫ細胞上のＴＩＧＩＴとのそれらの相互作用を妨害する可能性がある。ＴＩＧＩＴのがん細胞上のリガンドとの相互作用の破壊はＮＫ細胞の細胞傷害活性及びサイトカイン生産を回復させることになる。

ＴＩＭ－３
幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＴＩＭ－３又はその変異体を含み得る。Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有タンパク質－３（ＴＩＭ－３）はＡ型肝炎ウイルス細胞性受容体２（ＨＡＶＣＲ２）としても知られており、ヒトではＨＡＶＣＲ２遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＨＡＶＣＲ２はＩＦＮγ産生ＣＤ４＋Ｔｈ１細胞上及びＣＤ８＋Ｔｃ１細胞上に発現する細胞表面分子である。ＴＩＭ－３の発現はＴｈ１７細胞、調節性Ｔ細胞、及び先天的免疫細胞（樹状細胞、ＮＫ細胞、単球）でも検出されている。ＴＩＭ－３は免疫チェックポイントであり、Ｔ細胞疲弊に関係する。理論に捉われることを望むものではないが、ＴＩＭ－３は、肺がん、胃がん、頭頚部がん、シュワン細胞腫、黒色腫、及び濾胞Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫を含むがこれらに限定されない数種類のがんの中の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）において発現上昇している。幾つかの実施形態では、ＴＩＭ－３変異体は、Ｎ末端ＩｇＶ様ドメインを含み、ヒトＩｇＧ１のヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインに結合しているＴＩＭ－３エクトドメイン全体を含む。ＴＩＭ－３含有融合タンパク質はその天然のリガンドであるガレクチン－９、セアカム－１、及びホスファチジルセリンに結合し、ＮＫ細胞上、Ｔ細胞上、及びＡＰＣ上に発現した内在性ＴＩＭ－３とのそれらの相互作用を妨害してＴ細胞疲弊を元に戻し、ＮＫ細胞の細胞傷害性及びサイトカイン生産を回復させる可能性がある。

腫瘍細胞受容体標的
幾つかの実施形態では、融合タンパク質又はその１以上の構成要素は、腫瘍細胞受容体標的に結合する。幾つかの実施形態では、融合タンパク質又はその１以上の構成要素はリガンドの腫瘍細胞受容体標的への結合を妨害する。幾つかの実施形態では、腫瘍細胞受容体標的は、限定されないが、ケモカイン受容体、ノッチ受容体、免疫チェックポイント阻害因子、並びに腫瘍血管系リガンド及び受容体を含む。幾つかの実施形態では、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ１０、又はＣＣＲ７を含む。幾つかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害因子はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２を含む。幾つかの実施形態では、腫瘍血管系標的はανβ３、ανβ５、ＣＤ１３（アミノペプチダーゼＮ）、ＮＧＦモチーフペプチドの標的、又はＴｉｅ２（アンジオポエチン－２の受容体）を含む。

免疫細胞受容体標的
幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＣＤ４０である。幾つかの実施形態では、融合タンパク質又はその１以上の構成要素はアゴニストＣＤ４０ ｓｃＦｖを含む。その他の実施形態では、免疫細胞受容体標的はＳＩＲＰαである。幾つかの実施形態では、融合タンパク質又はその１以上の構成要素はアンタゴニストＳＩＲＰαペプチドを含む。幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的は４－１ＢＢである。幾つかの実施形態では、融合タンパク質又はその１以上の構成要素はアゴニスト４－１ＢＢ ｓｃＦｖ又はアゴニスト４－１ＢＢペプチドを含む。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＣＤ９６である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ９６又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ９６のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ２２６又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ２２６のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＴＩＭ－３又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＴＩＭ－３のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＣＤ１１１である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１１１又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１１１のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＣＤ１１２である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１１２又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１１２のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＣＤ１１３である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１１３又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１１３のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＣＤ１１５である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１１５又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ１１５のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＴＩＧＩＴである。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＴＩＧＩＴ又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＴＩＧＩＴのアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２若しくはＫＩＲ２ＤＬ３、又はその変異体である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２若しくはＫＩＲ２ＤＬ３、又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、又はＫＩＲ２ＤＬ３のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＨＬＡ－Ｃである。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＨＬＡ－Ｃのアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＨＬＡ－Ｃのアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）又はその変異体である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）又はその変異体のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＨＬＡ－Ｅである。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＨＬＡ－Ｅのアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＨＬＡ－Ｅのアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的は２Ｂ４又はその変異体である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素は２Ｂ４又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素は２Ｂ４又はその変異体のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＣＤ４８又はその変異体である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ４８のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＣＤ４８又はその変異体のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＮＫＧ２Ｄ又はその変異体である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＮＫＧ２Ｄ又はその変異体を含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＮＫＧ２Ｄ又はその変異体のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体標的はＭＩＣＡ／Ｂ若しくはＵＬＢＰ１又はその変異体である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＭＩＣＡ／Ｂ又はＵＬＢＰ１のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素はＭＩＣＡ／Ｂ若しくはＵＬＢＰ１又はその変異体のアンタゴニスト又はアゴニストを含み得る。

上述の実施形態のうちのいずれの１つにおいても、免疫細胞は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、マクロファージ、又は腫瘍随伴マクロファージ（Ｍ１）である。

免疫細胞受容体又はリガンド
幾つかの実施形態では、融合タンパク質又はその１以上の構成要素は免疫細胞受容体又はリガンドに結合する。幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体又はリガンドへの結合によって、ＮＫ細胞の活性化（サイトカイン（ＩＦＮγ及びＴＮＦ）生産、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ））が起こる。幾つかの実施形態では、受容体はＦｃ受容体である。幾つかの実施形態では、Ｆｃ受容体への結合によってＮＫ細胞の活性化（ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰ）が起こる。幾つかの実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃ_γ受容体、Ｆｃ_ε受容体、Ｆｃ_α受容体、Ｆｃ_μ受容体、又はＦｃ_δ受容体である。幾つかの実施形態では、免疫細胞受容体又はリガンドはＴＮＦスーパーファミリーメンバー若しくはその受容体、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー若しくはその受容体、トランスフェリン若しくはその受容体、ヒト血清アルブミン若しくはその受容体、又はリポカリン構造ファミリーメンバー若しくはその受容体である。

リンカー
幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成要素は、任意選択的にペプチドリンカーを介して接続されていてよい。リンカーの残基は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、及び修飾型アミノ酸から選択され得る。リンカーによって、第１構成要素のカルボキシ末端が第２構成要素のアミノ末端に接続されることが典型的である。リンカーによって、融合タンパク質の２つの構造的構成要素間の距離が変えられ、また、この領域の柔軟性（ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙ）が変化し得る。リンカーは任意の数のアミノ酸を含んでよい。したがって、リンカーは、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、又はそれより多くのアミノ酸を含んでよい。幾つかの実施形態では、リンカーは、３～６０個のアミノ酸残基、３～４０個のアミノ酸残基、３～３０個のアミノ酸残基、３～２４個のアミノ酸残基、３～１８個のアミノ酸残基、又は３～１５個のアミノ酸残基から構成されてよい。リンカーは、例えば、２個、３個、４個、５個、又はそれより多くのアミノ酸残基から成る反復小配列を含んでよく、２単位、３単位、４単位、５単位、６単位、７単位、８単位、９単位、１０単位、１１単位、１２単位、又はそれより多くの単位のこの反復小配列を含んでよい。

リンカーは天然の配列でも設計された配列でもよい。本発明の融合タンパク質における有用なペプチドリンカーには、グリシンリンカー、高グリシンリンカー、セリングリシンリンカー等が挙げられるが、これらに限定されない。高グリシンリンカーは、少なくとも約５０％のグリシン、好ましくは少なくとも約６０％のグリシンを含む。一実施形態では、リンカーはＧｌｙ－Ｓｅｒというアミノ酸配列又はその反復を含む。例えば、Ｈｕｓｔｏｎら著、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第２０３巻：４６～８８頁、（１９９１年）を参照されたい。別の実施形態では、リンカーはＧｌｙ－Ｌｙｓというアミノ酸配列又はその反復を含む。例えば、Ｗｈｉｔｌｏｗら著、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．誌、第６巻：９８９頁、（１９９３年）を参照されたい。別の実施形態では、リンカーはＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒというアミノ酸配列又はその反復を含む。別の実施形態では、リンカーはアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号２９）というアミノ酸配列又はその反復を含む。ある特定の実施形態では、リンカーはＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３０）というアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、リンカーはＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ又はＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ、又はＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号２９）の２～１２単位の反復を含む。ペプチドリンカーの例については米国特許第６５４１２１９号明細書を参照されたい。一実施形態では、リンカーはＧＤＰＬＶＴＡＡＳＶＬＥＦＧＧＳＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＤＩ（配列番号３１）という配列を含んでもよい。

リンカーは、融合タンパク質の２つの構成要素の分離に有用であり、この分離が構成要素の正しい折り畳みを可能にし、立体障害の可能性を低下させ、且つ／又は最適な受容体結合に貢献する。当業者はペプチドリンカーの設計と選択を熟知している。例えば、Ｒｏｂｉｓｏｎら著、１９９８年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ誌、第９５巻：５９２９～５９３４頁を参照されたい。自動プログラムもペプチドリンカーの設計に利用可能である（例えば、Ｃｒａｓｔｏら著、２０００年、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ誌、第１３巻：３０９～３１２頁）。

任意選択的な他の要素
融合タンパク質は、任意選択的に、構成要素Ａ、構成要素Ｂ、構成要素Ｃ、及び／又は構成要素Ｄとは異なる要素をさらに含んでもよい。そのような追加要素は、開始メチオニン、シグナルペプチド、抗原ポリペプチド、三量体化ドメイン、高次多量体化ドメイン、及びＨｉｓ－６などの精製タグを含む場合があるが、これらに限定されない。例示的な精製タグはＡＳＨＨＨＨＨＨＭ（配列番号４６）である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、任意選択的に三量体化ドメインを含む。

本発明の融合タンパク質は、任意選択的にシグナルペプチドを含む。シグナルペプチドは、当業者が理解するように、使用者のニーズ、発現系、及び他の因子に応じて変化し得る。シグナルペプチドは当技術分野においてよく知られており、当業者に知られている公開シグナルペプチド認識ソフトウェアによって認識／予測されるシグナルペプチドを含む任意の所望のシグナルペプチドが使用可能である。

幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質は構成要素間に柔軟性を与えるヒンジ領域を含む。Ｌｏｂｎｅｒら著、（２０１６年）、Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｖｉｅｗｓ誌、第２７０巻：１１３～１３１頁を参照されたい。幾つかの実施形態では、構成要素Ｙと構成要素Ｚ_２とはヒンジ（例えばＩｇＧヒンジ）を介して接続されている。幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_１’と構成要素Ｚ_２’とはヒンジ（例えばＩｇＧヒンジ）を介して接続されている。

幾つかの実施形態では、Ｎ結合型グリカンが構成要素Ａ上及び／又は構成要素Ｂ上のＡｓｎに結合している。幾つかの実施形態では、Ｎ結合型グリカンが構成要素Ａ上及び／又は構成要素Ｂ上のＡｓｎ２９７に結合している。理論に捉われることを望むものではないが、これによりＦｃＲ結合が促進され、融合タンパク質の構造的完全性及び熱安定性が増進する可能性がある。Ａｒｎｏｌｄら著、（２００７年）、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ、第２５巻：２１～５０頁を参照されたい。

幾つかの実施形態では、構成要素Ａ及び／又は構成要素ＢはＫからＡへの変異を含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ａ及び／又は構成要素ＢはＫ３２２Ａ変異を含む。理論に捉われることを望むものではないが、これによりＣ１ｑ結合と補体介在性溶解及び補体介在性溶解が減少する可能性がある。Ｉｄｕｓｏｇｉｅら著、（２０００年）、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ誌、第１６４巻：４１７８～４１８４頁を参照されたい。

幾つかの実施形態では、構成要素Ａ及び構成要素Ｂはノブ・イントゥ・ホール変異を含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ａは変異Ｙ３４９Ｃ及び変異Ｔ３６６Ｗを含み、構成要素Ｂは変異Ｄ３５６Ｃ、変異Ｔ３６６Ｓ、変異Ｌ３６８Ａ、及び変異Ｙ４０７Ｖ（「ノブ・イントゥ・ホール」変異）を含む。理論に捉われることを望むものではないが、これによりホモ二量体化よりもヘテロ二量体化が促進される可能性がある。Ｍｅｒｃｈａｎｔら著、（１９９８年）、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．誌、第１６巻：６７７～６８１頁を参照されたい。

幾つかの実施形態では、構成要素Ａ及び／又は構成要素Ｂは新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を増加させる変異を含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ａ及び／又は構成要素Ｂは変異Ｍ４２８Ｌ及び変異Ｎ４３４Ｓを含む。理論に捉われることを望むものではないが、これにより様々な細胞上の新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が増加し、血清半減期が延長される可能性がある。Ｋｕｏ及びＡｖｅｓｏｎ著、（２０１１年）、ｍＡｂｓ誌、第３巻：４２２～４３０頁を参照されたい。

三量体化ドメイン
三量体化ドメインは当技術分野においてよく知られている。本発明の融合タンパク質中の異種三量体化ドメインとして適切な三量体化ドメインの非限定的な例には、ＧＣＮ４ロイシンジッパー（Ｈａｒｂｕｒｙら著、１９９３年、「Ａ ｓｗｉｔｃｈ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ－， ｔｈｒｅｅ－， ａｎｄ ｆｏｕｒ－ｓｔｒａｎｄｅｄ ｃｏｉｌｅｄ ｃｏｉｌｓ ｉｎ ＧＣＮ４ ｌｅｕｃｉｎｅ ｚｉｐｐｅｒ ｍｕｔａｎｔｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２６２巻（第５１３８号）：１４０１～７頁）、肺サーファクタントタンパク質由来３５アミノ酸配列（Ｈｏｐｐｅら著、１９９４年、「Ａ ｐａｒａｌｌｅｌ ｔｈｒｅｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ ａｌｐｈａ ｈｅｌｉｃａｌ ｂｕｎｄｌｅ ａｔ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ ｓｉｔｅ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｔｒｉｐｌｅ－ｈｅｌｉｘ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ」、ＦＥＢＳ ｌｅｔｔｅｒｓ誌、第３４４巻（第２～３号）：１９１～５頁）、コラーゲン由来短反復ヘプタッド配列（ＭｃＡｌｉｎｄｅｎら著、２００３年、「Ａｌｐｈａ－ｈｅｌｉｃａｌ ｃｏｉｌｅｄ－ｃｏｉｌ ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎｓ ａｒｅ ａｌｍｏｓｔ ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ」、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．誌、第２７８巻（第４３号）：４２２００－７頁、２００３年８月１４日電子出版）、及びバクテリオファージＴ４フィブリチン「フォールドン」（例えば、Ｍｉｒｏｓｈｎｉｋｏｖら著、１９９８年、「Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｒｉｍｅｒｉｃ ｆｉｂｒｏｕｓ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ Ｔ４ ａｄｈｅｓｉｎｓ」、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．誌、第１１巻（第４号）：３２９～３２頁参照）が挙げられる。例示的な三量体化ドメインは、米国特許第６９１１２０５号明細書及び同第８１４７８４３号明細書及び米国特許出願公開第２０１０／０１３６０３２号明細書にも開示されている。例示的な三量体化配列は、ＧＹＩＰＥＡＰＲＤＧＱＡＹＶＲＫＲＧＥＷＶＬＬＳＴＦＬ（配列番号４７）という配列を有するＴ４「フォールドン」である。別の例示的な三量体化ドメインはトロンボスポンジン－１に由来し、ＶＴＴＬＱＤＳＩＲＫＶＴＥＥＮＫＥＬＡＮＥＬＲＲ（配列番号５６）という配列を有する。

修飾
本発明は、本明細書に記載される融合タンパク質の変異体を包含する。変異体は概して所与の分子への結合能の強化を示すことが望ましいが、幾つかの実施形態では、例えば活性の減弱化が意図的に望まれている場合では、本発明の他の融合タンパク質と比較してわずかに低下した活性を有する変異体が設計されてもよい。さらに、多量体化特性が改変された変異体又は誘導体を生成することも可能である。

本発明の融合タンパク質の変異体又は誘導体は、アミノ酸配列の疎水性／親水性を維持していることが望ましい。

追加の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、配列番号１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、３２、３３、３４、３５、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６５、６６、６７、６８、６９、７０、又は７１に示されているアミノ酸配列の変異体及び／又は誘導体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質の変異体は、配列番号１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、３２、３３、３４、３５、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６５、６６、６７、６８、６９、７０、又は７１に対して少なくとも８０％以上の当技術分野で理解されているような配列同一性又は相同性を有し、より好ましくは配列番号１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、３２、３３、３４、３５、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６５、６６、６７、６８、６９、７０、又は７１に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％もの配列同一性を有する。

本発明は、本発明の融合タンパク質の化学修飾も提供する。このような修飾の非限定的な例には、カルボキシル末端又はカルボキシル側鎖含有残基の脂肪族エステル又はアミド、ヒドロキシル基含有残基のＯ－アシル誘導体、及びアミノ末端アミノ酸又はアミノ基含有残基、例えばリシン又はアルギニンのＮ－アシル誘導体が挙げられる場合があるが、これらに限定されない。

本発明の融合タンパク質の他の誘導体は、組み込まれた非天然アミノ酸残基、又はホスホチロシン残基、ホスホセリン残基、若しくはホスホトレオニン残基などのリン酸化アミノ酸残基を含む。他の潜在的な修飾には、スルホン化、ビオチン化、又は他の部分の付加、特にリン酸基に類似の分子形状を有する部分の付加が挙げられる。

誘導体はグリコシル化により修飾されたポリペプチドも含む。これらの誘導体は様々な代替的真核生物宿主発現系での合成及びプロセッシング時、又はその他のプロセッシング工程時のグリコシル化パターンを改変することにより作製され得る。グリコシル化修飾を行うための方法は、通常時にこのようなプロセッシングを行う細胞に由来するグリコシル化酵素、例えば哺乳類グリコシル化酵素に対して上記融合タンパク質を曝露することを含む。あるいは、脱グリコシル化酵素を使用して真核生物発現系内での生産時に取り付けられた炭水化物を除去することができる。また、コード配列を改変してグリコシル化部位を付加したり、又はグリコシル化部位を欠失したり働かなくすることもできる。さらに、グリコシル化が望ましくない場合では原核生物宿主発現系内で上記タンパク質を生産することができる。

本発明の融合タンパク質の変異体及び／又は誘導体は、化学合成によって、又は完全型受容体をコードする核酸を改変するために部位特異的変異形成（Ｇｉｌｌｍａｎら著、Ｇｅｎｅ誌、第８巻：８１頁（１９７９年）、 Ｒｏｂｅｒｔｓら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３２８巻：７３１頁（１９８７年）、又はＩｎｎｉｓ編、１９９０年、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ： Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、ニューヨーク州）若しくはＤａｕｇｈｅｒｔｙら著、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．誌、第１９巻：２４７１頁、（１９９１年）によって例示されているように、ポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ；Ｓａｉｋｉら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２３９巻：４８７頁、（１９８８年））を使用することによって調製され得る。

追加の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、タンパク質精製を容易にするため、組換えタンパク質の発現を増加させるため、又は組換えタンパク質の溶解性を増加させるために付加された１以上の追加ポリペプチドドメインをさらに含んでもよい。このような精製／発現／溶解性増進ドメインには、固定化金属上での精製を可能にするヒスチジン－トリプトファンモジュールなどの金属キレートペプチド（Ｐｏｒａｔｈ著、１９９２年、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ誌、第３巻、２６３～２８１頁）、固定化免疫グロブリン上での精製を可能にするプロテインＡドメイン、及びＦＬＡＧＳエクステンション／アフィニティー精製システムで利用されるドメイン（Ｉｍｍｕｎｅｘ社、シアトル、ワシントン州）が挙げられるが、これらに限定されない。上記精製ドメインと構成要素Ａ及びＢの融合体との間に、ファクターＸａ又はエンテロキナーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、サンディエゴ、カリフォルニア州）などの切断可能リンカー配列を含めることは精製を容易にするうえで有用である。

融合発現ベクターにはそれぞれグルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＢ結合タンパク質、又はプロテインＡを標的組換えタンパク質に融合するｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社、ピスカタウェイ、ニュージャージー州）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ社、ビバリー、マサチューセッツ州）、及びｐＲＩＴＳ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社、ピスカタウェイ、ニュージャージー州）が含まれる。ＥＢＶ、ＢＫＶ、及び他のエピソーム性発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）も使用可能である。また、レトロウイルス発現ベクター及びレンチウイルス発現ベクターも使用可能である。さらに、生物内での組換えタンパク質の高レベル発現のために設計されている多数のインビボ発現系のうちのいずれか１つの系も本明細書において明示されている融合タンパク質の生産のために援用可能である。

上で考察したように、本発明の融合タンパク質はそのＮ末端に異種シグナル配列を含む場合がある。ある特定の宿主細胞（例えば、哺乳類宿主細胞）では、融合タンパク質の発現及び／又は分泌は異種シグナル配列の使用によって増加し得る。シグナル配列は疎水性アミノ酸から成るコアを特徴とすることが典型的であり、これらの疎水性アミノ酸は概して１以上の切断イベントで分泌の間に成熟タンパク質から切除される。このようなシグナルペプチドは、成熟タンパク質が分泌経路を通過すると共にシグナル配列を成熟タンパク質から切断させるプロセッシング部位を含む。したがって、本発明は、シグナル配列を有するポリペプチド並びにシグナル配列がタンパク質分解により切断されたポリペプチド（すなわち切断産物）に関する。

安定性及び／又は反応性を増進するために、本発明の融合タンパク質は、天然のアレル変異から生じるアミノ酸配列の中に１以上の多型を組み込むように改変されてもよい。また、Ｄ－アミノ酸、非天然アミノ酸、又は非アミノ酸類似体で置換又は付加することで、本発明の範囲内の改変融合タンパク質を作製することも可能である。

本発明のアミノ酸配列は、同アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の適切な発現系における発現によって作製されてもよい。

加えて、又は代わりに、所望のアミノ酸配列を合成するための化学的方法を使用して、融合タンパク質自体を全体的又は部分的に作製することも可能である。例えば、ポリペプチドを固相法によって合成し、樹脂から切り離し、分取高速液体クロマトグラフィーによって精製することも可能である（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ著、（１９８３年）、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ： Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ、ＷＨ Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ、ニューヨーク、ニューヨーク州）。合成ポリペプチドの組成は、アミノ酸分析又はシーケンシング（例えば、エドマン分解法）によって確認され得る。また、変異体ポリペプチドを作製するために、本発明の融合タンパク質のアミノ酸配列又はそのいずれかの部分を直接的に合成時に変更してもよく、且つ／又は化学的方法を用いて他の小単位の配列若しくはそのいずれかの部分と組み合わせてもよい。

本発明の任意の融合タンパク質のあらゆる相同体、誘導体、又は変異体の生物活性を測定するためのアッセイは当技術分野においてよく知られている。

活性及び有用性
一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、事実上腫瘍細胞を不動化して、この細胞が移動すること、近隣の組織に浸潤すること、及び／又は離れた部位まで転移することを抑制又は防止する。別の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、腫瘍細胞がマクロファージなどの食細胞による食作用から逃れることを抑制又は防止する一方、腫瘍細胞のアポトーシス及び／又は免疫破壊を促進する。他の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、腫瘍細胞が食細胞による食作用から逃れることを抑制又は防止する一方、近隣の腫瘍細胞のアポトーシスを促進する。こうして本発明の融合タンパク質は、多数の機序のうちのいずれか１つによる腫瘍細胞破壊を促進する。

ＰＤ－１のリガンド又は受容体は、固形腫瘍細胞などの広範囲の腫瘍細胞上で発現する。したがって、一実施形態では、本発明は増殖性障害と診断された対象に本発明の融合タンパク質の治療有効量を投与することにより、増殖性障害を治療する方法を提供する。

本発明の融合タンパク質は、がんなどの細胞増殖性障害並びに悪性腫瘍及び良性腫瘍にかかっている個体（例えば、動物及びヒトを含む哺乳類動物）に投与され得る。本発明の特定の実施形態では、治療を受ける個体はヒトである。

融合タンパク質は広範囲の腫瘍種に対して有効であると考えられており、腫瘍種には、卵巣がん、子宮頸部がん、乳がん、前立腺がん、精巣がん、肺がん、腎臓がん、大腸がん、皮膚がん、脳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、及び慢性リンパ性白血病を含む白血病が含まれるが、これらに限定されない。

より具体的には、本発明の化合物、組成物、及び方法によって治療され得るがんには、限定されるものではないが、以下のがんが含まれる：
血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、及び脂肪肉腫などの肉腫、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫、並びに奇形腫等を含む噴門がん、
扁平上皮がん、未分化小細胞がん、未分化大細胞がん、及び腺がんなどの気管支原性がん、細気管支肺胞上皮がん、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫、並びに中皮腫等を含む肺がん、
扁平上皮がん、腺がん、平滑筋肉腫、及びリンパ腫などの食道がん、がん腫、リンパ腫、及び平滑筋肉腫などの胃がん、膵管腺がん、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、及びビポーマなどの膵臓がん、腺がん、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、及び線維腫などの小腸がん、並びに腺がん、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、及び平滑筋腫などの大腸がん等を含む胃腸がん、
腺がん、ウィルムス腫瘍（腎芽腫）、リンパ腫、及び白血病などの腎臓がん、扁平上皮がん、移行上皮がん、及び腺がんなどの膀胱尿路がん、腺がん及び肉腫などの前立腺がん、並びに精上皮腫、奇形腫、胎生期がん、奇形がん腫、絨毛がん、肉腫、間質細胞がん、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、及び脂肪腫などの精巣がん等を含む泌尿生殖路がん、
原発性肝細胞がんなどの肝細胞がん、胆管がん、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、及び血管腫等を含む肝臓がん、
骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫軟骨腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨症）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫、及び巨細胞腫瘍等を含む骨がん、
骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、及び変形性骨炎などの頭骨がん、髄膜腫、髄膜肉腫、及び神経膠腫症などの髄膜がん、星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫（松果体腫）、多形膠芽腫、希突起神経膠腫、シュワン細胞腫、網膜芽細胞腫、及び先天性腫瘍などの脳がん、並びに神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、及び肉腫などの脊髄がん等を含む神経系がん、
子宮内膜がんなどの子宮がん、子宮頸部がん腫及び前がん子宮頸部異形成症などの子宮頸部がん、漿液性嚢胞腺がん、粘液性嚢胞腺がん、非分類がん、顆粒膜卵胞膜細胞腫、セルトリ・ライディッヒ細胞腫、未分化胚細胞腫、及び悪性奇形腫を含む卵巣がん腫などの卵巣がん、扁平上皮がん、上皮内がん、腺がん、線維肉腫、及び黒色腫などの陰門がん、明細胞がん、扁平上皮がん、ブドウ状肉腫、及び胎児型横紋筋肉腫などの膣がん、並びにがん腫などの卵管がん等を含む婦人科がん、
急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、及び骨髄異型性症候群、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（悪性リンパ腫）及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄球性白血病、骨髄性顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ白血病、形質細胞白血病、形質細胞性白血病、前骨髄球性白血病、リーダー細胞白血病、シリング白血病、幹細胞白血病、亜白血性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、無白血性白血病、無白血球症性白血病、好塩基球性白血病、芽細胞白血病、ウシ白血病、慢性骨髄球性白血病、皮膚白血病、胎児細胞白血病、未分化細胞白血病、好酸球性白血病、グロス白血病、ヘアリー細胞白血病、血芽球性白血病、血球芽細胞性白血病、組織球白血病、幹細胞白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、リンパ性白血病、リンパ性白血病、リンパ肉腫細胞性白血病、肥満細胞白血病、巨核球性白血病、並びに小骨髄芽球性白血病などの血液のがんを含む血液がん、
悪性黒色腫、基底細胞がん、扁平上皮がん、カポジ肉腫、異形性母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、及び乾癬等を含む皮膚がん、並びに
神経芽細胞腫等を含む副腎がん。

このようながんのより具体的な例には、腎臓がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、大腸がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺がん、及び肺扁平上皮がんを含む肺がん；扁平上皮がん（例えば扁平上皮細胞がん）、子宮頸部がん、卵巣がん、前立腺がん、肝臓がん、膀胱がん、腹膜がん、肝細胞がん、胃腸がんを含む胃がん、胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、膵臓がん、頭頚部がん、神経膠芽腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、莢膜細胞腫、男性化細胞腫、肝がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫、及び急性血液悪性腫瘍を含む血液悪性腫瘍；子宮内膜がん又は子宮がん、子宮内膜症、線維肉腫、絨毛がん、唾腺がん腫、陰門がん、甲状腺がん、食道がん、肝臓がん、肛門がん、陰茎がん、鼻咽頭がん、喉頭がん、カポジ肉腫、黒色腫、皮膚がん、シュワン細胞腫、希突起神経膠腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、骨原性肉腫、平滑筋肉腫、尿路がん、甲状腺がん、ウィルムス腫瘍、並びにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小非分割細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変性ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症付随異常血管増殖、浮腫（脳腫瘍に付随する浮腫など）、及びメイグス症候群が挙げられる。本明細書において使用される場合、「腫瘍（ｔｕｍｏｒ）」は、悪性でも良性でも全ての新生細胞成長及び増殖、並びに全ての前がん状態及びがん状態の細胞及び組織を指す。

がんは、転移性でも転移性でなくてもよい固形腫瘍であり得る。がんは白血病の場合のようにまとまりのない組織に生じる場合もある。したがって、本明細書において提示される場合、「腫瘍細胞（ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ）」という用語は、上述された障害のうちのいずれか１つにかかっている細胞を含む。

好ましい実施形態では、がんは固形腫瘍である。好ましい実施形態では、がんは、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、膀胱がん、黒色腫、及び神経膠芽腫のうちの１つである。

別の実施形態では、がんは血液がんである。好ましい実施形態では、血液がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のうちの１つである。

医薬組成物及び投与法
典型的には、本発明の組成物の投与は非経口投与であり、皮下注射、静脈内注射、筋肉内投与、又は腹腔内注射による投与であり、又は輸液若しくは他のあらゆる許容可能な全身投与方法による投与である。好ましい実施形態では、投与は皮下注射による投与である。別の好ましい実施形態では、投与は静脈内輸液による投与であり、通常ではこの投与は約１～５時間にわたって行われ得る。また、治療用タンパク質の投与には様々な経口送達方法が存在し、これらの方法は本発明の治療用融合タンパク質に適用可能である。

安全性及び有効性を最適化するために、治療のための投与量は低レベルから高レベルへと用量設定されることが多い。一日投与量は体重１キログラム当たり約０．０１～２０ｍｇのタンパク質の範囲内になることが一般的である。投与量の範囲は、体重１キログラムに対してタンパク質量が約０．１～５ｍｇになることが典型的である。融合タンパク質の薬物動態学的特性及び／又は薬力学的特性に影響を与えるために、ポリエチレングリコール鎖の付加（ＰＥＧ化）などの融合タンパク質の様々な修飾体又は誘導体が作製される場合がある。

非経口投与以外の方法により融合タンパク質を投与するためには、タンパク質の不活化を防ぐ物質でタンパク質を被覆するか、その物質と共にタンパク質を共投与することが必要な場合がある。例えば、タンパク質を不完全アジュバントの中に入れて投与するか、酵素阻害剤と共投与するか、リポソーム中に入れて投与してもよい。酵素阻害剤には、膵臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＥＰ）、及びトラジロールが挙げられる。リポソームには水中油中水型ＣＧＦ乳剤並びに従来型リポソームが挙げられる（Ｓｔｒｅｊａｎら著、１９８４年、Ｊ． Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第７巻：２７頁）。

本発明の組成物は単純な溶液状で投与することが可能であるが、担体、好ましくは薬学的に許容可能な担体などの他の物質と併用されることがより典型的である。有用な薬学的に許容可能な担体は、本発明の組成物を患者に送達するために適切な適合性のある任意の無毒の物質であり得る。担体としては、無菌水、アルコール、脂肪、ワックス、及び不活性固形物が挙げられる。薬学的に許容可能なアジュバント（緩衝剤、分散剤）を医薬組成物の中に組み入れてもよい。一般的にこのような薬品の非経口投与に有用な組成物は周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１７版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ社、イーストン、ペンシルバニア州、１９９０年）。あるいは、本発明の組成物は、移植可能薬物送達系によって患者の体内に導入されてもよい（Ｕｒｑｕｈａｒｔら著、１９８４年、Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌ．、第２４巻：１９９頁）。

治療用製剤は、多くの従来の剤形で投与される場合がある。製剤は少なくとも１種類の有効成分を１以上の薬学的に許容可能な担体と共に含むことが典型的である。製剤には、経口投与、直腸投与、経鼻投与、又は非経口投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、及び皮内投与を含む）に適切な製剤が含まれ得る。

上記製剤は、単位投与剤形で提供されることが便利である場合があり、薬学分野においてよく知られているあらゆる方法によって調製され得る。例えば、Ｇｉｌｍａｎら編、（１９９０年）、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、上掲、イーストン、ペンシルバニア州、Ａｖｉｓら編、（１９９３年）、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ： Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、ニューヨーク、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら編、（１９９０年）、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ： Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、ニューヨーク、及びＬｉｅｂｅｒｍａｎら編、（１９９０年）、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ： Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、ニューヨークを参照されたい。

追加の実施形態では、本発明は、遺伝子治療法により融合タンパク質を投与すること、例えば、目的の融合タンパク質をコードする単離核酸を投与することを企図している。本発明の融合タンパク質のタンパク質基本要素（例えば、構成要素Ａ及び構成要素Ｂ）は、タンパク質をコードする核酸配列の点でもそれらにより生じるタンパク質のアミノ酸配列の点でも特徴が分析されている。このような単離核酸の組換えＤＮＡ法による操作は当業者の能力の範囲内である。特定の細胞背景において組換えタンパク質収量を最大化すること目的としたコドン最適化も優に当業者の能力の範囲内である。融合タンパク質をコードする単離核酸の投与は「本発明の融合タンパク質の治療有効量の投与」という表現に包含される。遺伝子治療法は当技術分野においてよく知られている。例えば、細胞内抗体を生成するための遺伝子治療法の使用法を開示している国際公開第９６／０７３２１号パンフレットを参照されたい。遺伝子治療法はヒト患者での実証にも成功している。例えば、Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒら著、１９９８年、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ誌、第９７巻：第１２号、１１１４～１１２３頁、最近のものでは両方とも参照により本明細書に援用されるＦａｔｈａｍ著、２００７年、「Ａ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ」、Ｉｍｍｕｎ． Ｒｅｓ．誌、第１８巻：１５～２６頁、及び米国特許第７３７８０８９号明細書を参照されたい。Ｂａｉｎｂｒｉｄｇｅら著、２００８年、「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｖｉｓｕａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｌｅｂｅｒ’ｓ ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ Ａｍａｕｒｏｓｉｓ」、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｍｅｄ誌、第３５８巻：２２３１～２２３９頁、及びＭａｇｕｉｒｅら著、２００８年、「Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｆｏｒ Ｌｅｂｅｒ’ｓ ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ Ａｍａｕｒｏｓｉｓ」、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ誌、第３５８巻：２２４０～８頁も参照されたい。生体内及び生体外の患者細胞内に融合タンパク質をコードする核酸（所望によりベクター内に含まれる核酸）を導入するためには、２種類の主要な方法が存在する。生体内送達については、核酸は直接的に患者内に、通常では融合タンパク質が必要とされる部位に注入される。生体外処理については、患者細胞を取り出し、これらの単離細胞に核酸を導入し、そして改変細胞を直接的に患者に投与するか、又は例えば患者に移植される多孔性膜内に封入して患者に投与する（例えば、米国特許第４８９２５３８号明細書及び同５２８３１８７号明細書を参照されたい）。生細胞内へ核酸を導入するために利用可能な様々な技法が存在する。上記技法は、核酸がインビトロで培養細胞内に導入されるのか、又は目的の宿主の細胞内にインビボで導入されるのかに応じて変化する。核酸を哺乳類細胞にインビトロで導入するために適切な技法にはリポソームの使用、電気穿孔法、マイクロインジェクション法、細胞融合法、ＤＥＡＥデキストラン法、リン酸カルシウム沈殿法などが挙げられる。遺伝子の生体外送達に一般的に使用されるベクターはレトロウイルスベクター及びレンチウイルスベクターである。

好ましいインビボ核酸導入法には、アデノウイルス、Ｉ型単純ヘルペスウイルス、アデノ随伴ウイルスなどのウイルスベクターを使用する形質移入、脂質ベースの系（上記遺伝子の脂質介在性導入に有用な脂質はＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、及びＤＣ－Ｃｈｏｌ等である）を使用する形質移入、裸ＤＮＡを使用する形質移入、及びトランスポゾンベースの発現系を使用する形質移入が挙げられる。現在公知の遺伝子マーキングプロトコルと遺伝子治療プロトコルの概論についてはＡｎｄｅｒｓｏｎら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２５６巻：８０８～８１３頁、（１９９２年）を参照されたい。国際公開第９３／２５６７３号パンフレット及びその中に引用されている参照文献も参照されたい。

「遺伝子治療」には、一回の治療で長期作用が達成される従来の遺伝子治療と治療上有効なＤＮＡ又はｍＲＮＡの１回の投与又は反復投与を伴う遺伝子治療薬の投与の両方が挙げられる。オリゴヌクレオチドの取込みを向上させるために、例えば、オリゴヌクレオチドの負に帯電したホスホジエステル基を非荷電基で置換することによってオリゴヌクレオチドを改変する場合がある。本発明の融合タンパク質は遺伝子治療法を用いて（例えば、特定の組織種を選択的に標的とするベクター、例えば組織特異的アデノ随伴ウイルスベクターによって）例えば腫瘍床に局所的に、髄腔内に、又は全身に送達可能である。幾つかの実施形態では、本発明の融合タンパク質のいずれかをコードする遺伝子を、個体に由来する初期細胞（リンパ球又は幹細胞など）に生体外で形質移入した後、形質移入細胞を個体の体に戻す場合がある。

「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」又は「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、標的とする病的状態又は障害を防止すること又は遅らせること（やわらげること）が目的である治療を指す。本発明の方法に従って本発明の融合タンパク質の治療的量を受けた後に、対象がその特定の疾患の１以上の徴候及び症状の観察可能及び／又は測定可能な減少又は喪失を示す場合、その対象は順調に「治療」されている。例えば、がんについては、がん細胞数が減少又はがん細胞が喪失し、腫瘍サイズが減少し、腫瘍転移が抑制され（すなわち、ある程度遅延し、好ましくは停止し）、腫瘍増殖がある程度抑制され、寛解時間が延長し、且つ／又は特定のがんに関連する症状のうちの１以上がある程度軽減し、罹患率及び死亡率が減少し、且つ、クオリティ・オブ・ライフ問題が改善される場合、その対象は順調に「治療」されている。患者が疾患の徴候又は症状の減少を感じる場合もある。がんの全ての徴候の消失として定義される完全奏功、又は腫瘍サイズが減少し、好ましくは５０％を超えて減少し、より好ましくは７５％まで減少する部分的奏功が治療によって達成可能である。患者が疾患の安定を体験する場合にも、その患者は治療されていると考えられる。治療の成功及び疾患の改善を評価するためのこれらのパラメータは、当技術分野の医師によく知られている日常的方法によって容易に測定され得る。

がんを治療する文脈において、本発明の融合タンパク質は、任意選択的に患者に他の化学療法剤と併用投与され得る。適切な化学療法剤には、例えば、チオテパ及びシクロホスファミド（シトキサン（商標））などのアルキル化剤、ブスルファン、インプロシイルファン（ｉｍｐｒｏｓｉｉｌｆａｎ）、及びピポスルファンなどのアルキルスルホン類、ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン類、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチロロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、及びウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード類、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなどのニトロソウレア類、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、及びゾルビシンなどの抗生物質、メトトレキサート及び５‐フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、及びトリメトレキサートなどの葉酸類似体、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、及びチオグアニンなどのプリン類似体、アンシタビン、アザシチジン、６‐アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、及び５－ＦＵなどのピリミジン類似体、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、及びテストラクトンなどのアンドロゲン類、アミノグルテチミド、ミトタン、及びトリロスタンなどの抗副腎剤、フォリン酸などの葉酸補充剤、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）、デメコルシン、ジアジコン、エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）、酢酸エリプチニウム、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、レンチナン、ロニダミン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ（登録商標）、ラゾキサン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、ブリストル・マイヤーズ・スクイブ・オンコロジー社、プリンストン、ニュージャージー州）及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、ローヌ・プーラン・ローラー社、アントニー、フランス）などのタキサン類、クロラムブシル、ゲムシタビン、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、シスプラチン及びカルボプラチンなどのプラチナ類似体、ビンブラスチン、プラチナ、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ナベルビン、ノバントロン、テニポシド、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、ＣＰＴ－１１、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイン酸、エスペラマイシン、カペシタビン、並びに上記の化学療法剤のうちのいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸、又は誘導体が挙げられる。

他の化学療法剤には、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）－イミダゾール、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（フェアストン）等をはじめとする抗エストロゲン剤並びにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン剤等、腫瘍に対するホルモンの作用を制御又は阻害するように作用する抗ホルモン剤及び上記の抗ホルモン剤のうちのいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸、又は誘導体がさらに挙げられる。

本発明の融合タンパク質と併用可能な他の腫瘍細胞傷害剤は、それら自体が融合タンパク質である。腫瘍細胞傷害性融合タンパク質の例は、ＣＴＬＡ－４－ＦａｓＬ及びＦｎ１４－ＴＲＡＩＬであり、それらはｃｉｓループ・バックタンパク質として自己アポトーシスシグナル伝達ループを腫瘍細胞の表面に形成することにより作用し得る。それぞれ全体が参照により援用される米国特許第７５６９６６３号明細書、同第８３２９６５７号明細書、及び同第８０３９４３７号明細書を参照されたい。次に、ＴＲＡＩＬ構成要素を組み入れているこれらのｃｉｓループ・バックタンパク質は、プロテアソーム阻害剤及びヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、シクロへキシミド、メシル酸イマチニブ及び他のタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、１７－アリルアミノ－１７－デメトキシゲルダナマイシン、三酸化ヒ素、及びＸ連鎖アポトーシス阻害因子タンパク質小分子アンタゴニスト等、腫瘍細胞をＴＲＡＩＬに対して高感度にし、且つ、ＴＲＡＩＬ耐性に打ち勝つことができる化学療法剤及びこれらの化学療法剤のうちのいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸、又は誘導体と併用投与され得る。

参照により全体が援用される米国特許第７２８５５２２号明細書に、がん治療の方法に関する追加情報が提示されている。

以下の非限定的な例によって本発明の実施が例示される。本発明は、本明細書に記載される組成物及び方法のみに限定されると解釈されるべきではなく、他の組成物及び方法も同様に含むと解釈されるべきである。当業者は本明細書に記載される手順を実施するために他の組成物及び方法が利用可能であることを理解するであろう。

本発明の実施は、別段の指示が無い限り、分生生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技法を使用し、上記技法は優に当業者の範囲内にある。このような技法は、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第４版、（Ｓａｍｂｒｏｏｋ編、２０１２年）、「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、（Ｇａｉｔ著、１９８４年）、「Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ」、（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ著、２０１０年）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、（Ｗｅｉｒ著、１９９７年）、「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ」、（Ｍｉｌｌｅｒ及びＣａｌｏｓ著、１９８７年）、「Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、（Ａｕｓｕｂｅｌ著、２００２年）、「Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ， Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｔｒｏｕｂｌｅｓｈｏｏｔｉｎｇ」、（Ｂａｂａｒ著、２０１１年）、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、（Ｃｏｌｉｇａｎ著、２００２年）などの文献において十分に説明されている。これらの技法は本発明のポリヌクレオチド及びポリペプチドの生産に適用可能であり、したがって本発明の実行実施において考慮される可能性がある。特定の実施形態にとって特に有用な技法を以下の節において考察する。

以下の実施例を参照して、本発明をさらに詳細に説明する。これらの実施例は例示のみを目的に提示されており、別段の指定が無い限り限定を意図したものではない。したがって、本発明は決して以下の実施例に限定されると解釈されるべきではなく、むしろ本明細書において提示される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変化を包含すると解釈されるべきである。

当業者は、さらに説明されなくても、これまでの説明と以下の例となる実施例を用いて本発明の化合物を作製及び利用し、本請求の方法を実施することができると考えられる。したがって、以下の実施例は本発明の好ましい実施形態を具体的に指摘するものであり、それ以外の開示を多少なりとも限定すると解釈されるべきではない。

＜実施例１：融合タンパク質の結合＞
融合タンパク質コンストラクトと発現
Ａ鎖又はＢ鎖のどちらかのヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメイン（すなわち、Ｚ_２ドメイン、Ｚ_３ドメイン、Ｚ_２’ドメイン、又はＺ_３’ドメイン）の合成遺伝子断片に連結された、所望のリガンド／受容体構成要素の各々の新規に合成された遺伝子断片（サーモフィッシャー・サイエンティフィック社）を使用して、これらの融合タンパク質の発現プラスミドコンストラクトを生成した。高コピー数で染色体外複製するＥＢＶエピソーム性発現ベクター（元はチクチンスキー研究室において開発された）であるｐＣＥＰ４発現プラスミドにクローニングするための制限部位を末端に含むプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によっ、て個々の構成要素を接ぎ合わせた。遺伝子合成の際に、チャイニーズハムスター卵巣懸濁液（ＣＨＯ－Ｓ）細胞での発現用にコドン最適化をＤＮＡ断片に対して実施する。ＴｒａｎｓＩＴ－Ｐｒｏ試薬（ＭＩＲＵＳ社）を３７℃で使用して２４時間にわたってＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ振盪フラスコ培養物中にＡ鎖コンストラクト及びＢ鎖コンストラクトを一時的に共形質移入した後で、これらの培養物を全体で８～１０日間にわたって３２℃で培養することで、融合タンパク質を作製した。調整済み培養上清を６℃で一晩にわたってプロテインＡアガロース樹脂と混合した後に回収し、非変性中性ｐＨ溶出緩衝液（ＰＩＥＲＣＥ社）を使用して溶出することにより、この調整済み培養上清からタンパク質を精製した。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）により各融合タンパク質を大きさ及び品質について検証した。

融合タンパク質結合試験
ヒトＣＤ１５５、免疫グロブリンドメイン・ＩＴＩＭドメイン含有Ｔ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、ＣＤ１１２、及びＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩａ）の全長ｃＤＮＡを発現するリガンドコンストラクトをＰＣＲによって生成し、ｐｃＤＮＡ３．１＋（サーモフィッシャー・サイエンティフィック社）発現プラスミドにクローン化した。リポフェクタミン３０００（サーモフィッシャー社）を使用して各発現コンストラクトをＣＨＯ－Ｓ細胞に形質移入し、Ｇ４１８を添加することで安定形質移入体を選択した。適切なフルオロクローム結合抗リガンド抗体（黒色線）又は適切なフルオロクローム結合アイソタイプ対照抗体（灰色の線と塗りつぶし）を使用する免疫染色後のフローサイトメトリーによってリガンドの発現を判定した。ＦＣＳａｌｙｚｅｒソフトウェアを使用してデータを分析した。融合タンパク質結合試験のために対照としての形質移入されていないＣＨＯ－Ｓ細胞（灰色の線と塗りつぶし）又は対応するリガンドを発現するＣＨＯ－Ｓ形質移入体のどちらかに融合タンパク質を添加し、６℃で１時間にわたってインキュベートし、その後で洗浄し、Ｃｙ５結合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃγ特異的抗体（黒色の線）で免疫染色し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。図１８～図２０を参照されたい。ＣＤ１６結合試験については融合タンパク質を含有するＴＩＧＩＴ又はＣＤ１５５を対照としての形質移入されていないＣＨＯ－Ｓ細胞（灰色の線と塗りつぶし）又はＣＤ１６発現性ＣＨＯ－Ｓ形質移入体のどちらかと共にインキュベートし、それぞれＴＩＧＩＴ又はＣＤ１５５を認識するＡＰＣ結合抗体又はＰＥ結合抗体を使用する免疫染色によって検出を行った（黒色の線）。図２１を参照されたい。

＜実施例２：融合タンパク質の結合アッセイ及び移動度アッセイ＞
タンパク質ゲル分析
融合タンパク質を、１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上で還元するか（Ｒ）、又は還元せずに（ＮＲ）分離し、そしてＰａｇｅＢｌｕｅタンパク質染色液（サーモ・サイエンティフィック社）中で１２時間にわたって染色した。図２２を参照されたい。

イムノブロット分析
その後、融合タンパク質をピアースＢＣＡタンパク質アッセイキット（サーモフィッシャー社）によって定量し、１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルに負荷した。タンパク質をＩｍｍｏｂｉｌｏｎ－Ｐメンブレン（ＥＭＤミリポア社、ビレリカ、マサチューセッツ州）に電気泳動転写し、オデッセイ・ブロッキング緩衝液（Ｌｉｃｏｒ社、リンカーン、ネブラスカ州）中で（Ａ）抗ＰＤ１一次抗体及び（Ｂ）抗ＩｇＧ軽鎖一次抗体と共に１２時間にわたってインキュベートした。対応する二次抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ社）を１：１０，０００の希釈率で使用した。オデッセイ・インフレア・イメージングシステム（ＬＩ－ＣＯＲバイオサイエンス社、モデル番号９１２０）を使用してイムノブロットをスキャニングした。図２３を参照されたい。

融合タンパク質結合試験
図２４に示されているように、ＣＸＣＲ４／７及びＰＤ１＋黒色腫細胞株である（Ａ）ＹＵＭＭＥＲ１．７細胞又は（Ｂ）Ｂ１６細胞は表示融合タンパク質と共に６℃で１時間にわたってインキュベートされ、その後で洗浄され、Ｃｙ５結合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃγ特異的抗体を使用して免疫染色され、そしてフローサイトメトリーにより分析され（黒色の実線）、対照試料は融合タンパク質を抜いてインキュベートされた（塗りつぶされた灰色の線）。

トランスウェルアッセイ
トランスウェル挿入物を２４ウェルコンパニオンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社、カタログ番号３５３５０４）中に差し込んだ。細胞懸濁液を上部細胞浸潤チャンバーに２５，０００細胞／チャンバーの割合で播種した。下部の各ウェルに１００ｎｇ／ｍＬのＣＸＣＬ１２を含むＤＭＥＭを化学誘引物質として添加した。試料を３７℃で２４時間にわたってインキュベートして細胞移動させた。コットンスワブを使用して上記挿入物の先端面上の非浸潤細胞を取り除き、２％クリスタルバイオレットを使用して上記支持体の下面まで移動した細胞を染色した。図２５を参照されたい。

＜実施例３：ＴｒｉＴｏｕｃｈ－１０１は黒色腫退縮を誘導する＞
腫瘍増殖の抑制が、インビボでＴｒｉＴｏｕｃｈ－１０１ ＰＤ１ｈＦｃＡ＊ｖＭＩＰＩＩＣＨ－ｈＦｃＢ＊ＣＬ（ＦＰ）によって誘導された。Ｂ１６Ｆ１０黒色腫皮下モデルを使用して、ＰＤ１ｈＦｃＡ＊ｖＭＩＰＩＩＣＨ－ｈＦｃＢ＊ＣＬ（ＦＰ）による黒色腫退縮の誘導を実証した。簡単に説明すると、１×１０^５個のＢ１６Ｆ１０細胞の皮下接種後１３日目、１４日目、１５日目、１６日目、及び２１日目の５回にわたってＢＬ１６マウスを１００μｌの（１０ｕｇ／ｍＬの）ＦＰ（マウスＲ、マウス２Ｌ、及びマウス２Ｒ）又はＰＢＳ（マウスＸ又はマウスＬ）で処理した。腫瘍サイズを測定した（図２６Ａ）。図２６Ｂに各処理群の１匹のマウスの代表的画像（上パネルにはＸ、下パネルには２Ｒ）が示されている。ＴｒｉＴｏｕｃｈ－１０１が黒色腫退縮を誘導することを示しているこれらのインビボデータは移動アッセイにおいてこの融合タンパク質が黒色腫細胞を抑制することを示している以前のデータ（図２５）と合う。

＜実施例４：ＮＫはＴｒｉＴｏｕｃｈタンパク質種を調節する＞
ＡＤＣＣは多機能性融合タンパク質の添加により増大した（図２７）。ＳＫＯＶ－３卵巣細胞株を９６ウェルプレート中に３０００細胞／ウェルの割合で播種して接着させ、そしてセルトラッカー・レッドＣＭＴＰＸ試薬を使用して標識した。その後、緑色蛍光カスパーゼ－３試薬を使用して上記ＳＫＯＶ－３細胞を標識した。ＣＤ１６．ＮＫ－９２細胞株（Ｖ１５８変異体）を５：１のエフェクター：標的比率で上記ウェルに２５ｍｇ／ｍｌの濃度の様々な融合タンパク質と共に添加するか、又はタンパク質無しで添加し、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ生細胞分析システムを使用して蛍光二重陽性（赤色＋緑色）細胞の数を測定して分析した。示されている結果は２０時間の時点での結果を示している（図２７）。

他の実施形態
本明細書における変数の定義において複数の要素の記載を取り上げることは、記載される要素のうちのいずれか単数の要素としての、又は記載される要素の組合せ（又は部分的組合せ）としてのその変数の定義を含む。本明細書において一実施形態として取り上げることは、いずれか１つの実施形態としての、又は他のあらゆる実施形態又はその部分との組合せとしてその実施形態を含む。

本明細書において引用される一つ一つの特許、特許出願、及び刊行物の開示内容の全体が参照により本明細書に援用される。特定の実施形態を参照して本発明が開示されてきたが、当業者が本発明の主旨と範囲から逸脱せずに本発明の他の実施形態及び変種を考案する可能性があることは明らかである。添付される特許請求の範囲には全てのこのような実施形態及び等価の変種が含まれると解釈されたい。

Claims (53)

1. 構成要素Ａ及び／又は構成要素Ｂを含む融合タンパク質であって、
   構成要素Ａが、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含み、且つ
   構成要素Ｂが、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む、
   前記融合タンパク質。
2. 構成要素Ｂが構成要素Ｚ_１’をさらに含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
3. 構成要素Ａが構成要素Ｚ_１をさらに含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
4. 構成要素Ｃをさらに含み、
   構成要素Ｃが、構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ_Ｌ’を含む、請求項１～請求項３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
5. 構成要素Ｄをさらに含み、
   構成要素Ｄが、構成要素Ｑ及び構成要素Ｃ_Ｌを含む、請求項１～請求項４のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
6. 構成要素Ｙが、リガンドドメイン、受容体ドメイン、ｓｃＦｖドメイン、又はリポカリンドメインを含む、請求項１～請求項５のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
7. 構成要素Ｙが、ＰＤ－１、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、又はＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）の少なくとも一部を含む、請求項６に記載の融合タンパク質。
8. 前記融合タンパク質がＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に結合する、請求項７に記載の融合タンパク質。
9. 構成要素Ｘ’が、ウイルス由来ペプチド、リガンド由来ペプチド、受容体由来ペプチド、又はＨＴＳ選択ペプチドを含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
10. 構成要素Ｘ’が、ｖＭＩＰ－ＩＩの少なくとも一部を含む、請求項９に記載の融合タンパク質。
11. 構成要素Ｘ’が、Ｖ１又はＶ１Δを含む、請求項１０に記載の融合タンパク質。
12. 構成要素Ｘが、ウイルス由来ペプチド、リガンド由来ペプチド、受容体由来ペプチド、又はＨＴＳ選択ペプチドを含む、請求項４に記載の融合タンパク質。
13. 構成要素Ｘが、Ｖ１又はＶ１Δを含む、請求項１２に記載の融合タンパク質。
14. 前記融合タンパク質がＣＸＣＲ４に結合する、請求項９～請求項１３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
15. 構成要素Ｙと構成要素Ｚ_２とがヒンジを介して接続されている、請求項１に記載の融合タンパク質。
16. 構成要素Ｚ_１’と構成要素Ｚ_２’とがヒンジを介して接続されている、請求項１に記載の融合タンパク質。
17. 構成要素Ｘ’と構成要素Ｚ_１’とがリンカーを介して接続されている、請求項１に記載の融合タンパク質。
18. 構成要素Ｘと構成要素Ｃ_Ｌとがリンカーを介して接続されている、請求項４に記載の融合タンパク質。
19. 構成要素Ｑと構成要素Ｃ_Ｌとがリンカーを介して接続されている、請求項５に記載の融合タンパク質。
20. 前記融合タンパク質が、免疫細胞上の受容体又はリガンドに結合する、請求項１～請求項１９のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
21. 前記受容体がＦｃ受容体である、請求項２０に記載の融合タンパク質。
22. 構成要素Ｘ’が、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む、請求項１～請求項２１のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
23. 構成要素Ｙが、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む、請求項１～請求項２２のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
24. 構成要素Ｘが、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む、請求項４に記載の融合タンパク質。
25. 構成要素Ｑが、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む、請求項５に記載の融合タンパク質。
26. 構成要素Ａが、配列番号１４～配列番号２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
27. 構成要素Ｂが、配列番号３２～配列番号３５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
28. 構成要素Ａが、配列番号１４～配列番号２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、構成要素Ｂが配列番号３２～配列番号３５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
29. 構成要素Ｂが、配列番号４９～配列番号５５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
30. 構成要素Ｃが、配列番号５７～配列番号６３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
31. 構成要素Ｂが、配列番号４９～配列番号５５のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、構成要素Ｃが、配列番号５７～配列番号６３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
32. 構成要素Ａ、構成要素Ｂ、及び構成要素Ｃを含む融合タンパク質であって、
    構成要素Ａが、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含み、
    構成要素Ｂが、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含み、
    構成要素Ｃが、構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ’_Ｌを含み、
    構成要素ＹがＰＤ－１の少なくとも一部を含み、
    構成要素Ｚ_２及び構成要素Ｚ_２’がヒトＦｃのＣＨ２ドメインを含み、
    構成要素Ｚ_３及び構成要素Ｚ_３’がヒトＦｃのＣＨ３ドメインを含み、
    構成要素Ｘ’及び構成要素ＸがｖＭＩＰ－ＩＩの少なくとも一部を含み、且つ
    構成要素Ｃ_Ｌ’がヒトＩｇＧ１κの少なくとも１つのＣＨ１ドメインを含む、
    前記融合タンパク質。
33. 前記融合タンパク質が、（ｉ）ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２、（ｉｉ）ＣＸＣＲ４、及び（ｉｉｉ）免疫細胞上のＦｃ受容体又はリガンドに結合可能である、請求項３２に記載の融合タンパク質。
34. 構成要素Ａが配列番号２９のアミノ酸配列を含み、構成要素Ｂが配列番号３０のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
35. 構成要素Ｙが配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
36. 構成要素Ｚ_２が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、且つ／又は構成要素Ｚ_３が配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
37. 構成要素Ａが配列番号１４又は配列番号１５のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
38. 構成要素Ｂが配列番号４９のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
39. 構成要素Ｘ’が配列番号３７のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
40. 構成要素Ｚ_２’が配列番号１２を含み、且つ／又は構成要素Ｚ_３’が配列番号４８を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
41. 構成要素Ｘが配列番号３７のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
42. 構成要素Ｃ_Ｌ’が配列番号６４のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
43. 構成要素Ｂが配列番号５３のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
44. 構成要素Ｃが配列番号６１のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
45. 構成要素Ａが配列番号１４のアミノ酸配列を含み、構成要素Ｂが配列番号５３のアミノ酸配列を含み、構成要素Ｃが配列番号６１のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。
46. ヒトＰＤ－１－ｈＦｃＡをコードする第１核酸、ｖＭＩＰＩＩ－ＣＨ’－ｈＦｃＢをコードする第２核酸、及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’をコードする第３核酸を細胞に投与することを含む、融合タンパク質を生成する方法。
47. 前記第１核酸が配列番号１４のアミノ酸配列をコードし、且つ／又は前記第２核酸が配列番号４９のアミノ酸配列をコードし、且つ／又は前記第３核酸が配列番号５７のアミノ酸配列をコードする、請求項４６に記載の方法。
48. 薬学的に許容可能な担体と、請求項１～請求項４５のいずれか一項に記載の融合タンパク質と、を含む、医薬組成物。
49. 治療が必要な患者に請求項１～請求項４５のいずれか一項に記載の融合タンパク質の治療有効量を投与することを含む、患者の増殖性障害を治療する方法。
50. 前記増殖性障害ががんである、請求項４９に記載の方法。
51. 前記がんが固形腫瘍である、請求項５０に記載の方法。
52. 前記がんが、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、膀胱がん、黒色腫、神経膠芽腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、又は結腸がんである、請求項５０に記載の方法。
53. 配列番号１４、配列番号４９、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む、融合タンパク質。
    

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