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JP2021176915A - 二重可変ドメインイムノコンジュゲートおよびその用途 - Google Patents

二重可変ドメインイムノコンジュゲートおよびその用途 Download PDF

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JP2021176915A
JP2021176915A JP2021128507A JP2021128507A JP2021176915A JP 2021176915 A JP2021176915 A JP 2021176915A JP 2021128507 A JP2021128507 A JP 2021128507A JP 2021128507 A JP2021128507 A JP 2021128507A JP 2021176915 A JP2021176915 A JP 2021176915A
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immunoconjugate according
immunoconjugate
immunoglobulin
linker
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レーダー，クリストフ
Rader Christoph
ナンナ，アレックス・アール
R Nanna Alex
ロウシュ，ウィリアム・アール
R Roush William
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Scripps Research Institute
Original Assignee
Scripps Research Institute
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Abstract

【課題】二重可変ドメイン（ＤＶＤ）イムノコンジュゲートおよびその用途を提供する。
【解決手段】イムノコンジュゲートの態様は、第１および第２可変ドメインを有するＤＶＤ免疫グロブリン分子と、第２可変ドメインにリンカーを介して共有結合しているカーゴ部分（例えば、薬物部分）とを含む。該イムノコンジュゲートの製造方法、ならびに癌および他の疾患の予防および／または治療における使用方法も提供する。
【選択図】図１

Description

関連出願に対する相互参照 本出願は２０１５年９月１７日付け出願の米国仮特許出願第
６２／２２０，１４８号（その出願の開示の全体を参照により本明細書に組み入れること
とする）の出願日の優先権の利益を主張するものである。また、本出願は２０１６年４月
２６日付け出願の米国仮特許出願第６２／３２７，８４９号（その出願の開示の全体を参
照により本明細書に組み入れることとする）の出願日の優先権の利益を主張するものであ
る。
政府の権利 本発明は、ＮＩＨにより授与された助成金番号ＣＡ１７４８４４に基づく米
国政府の援助によりなされた。米国政府は本発明における一定の権利を有する。
発明の分野 本発明は二重可変ドメインイムノコンジュゲート、その製造方法ならびに癌
および他の疾患の予防および治療におけるその使用方法に関する。
配列表の援用 ８５，６４７バイト（ＭＳ−Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）で測定）であり
、２０１６年９月１６日付けで作成された「Ｐ３４３４４ＷＯ００．ｔｘｔ」と称される
ファイルに含まれる配列表は２４個の配列を含み、該配列表を本明細書と共に電子的に提
出し、その全体を参照により本明細書に組み入れることとする。
悪性腫瘍（癌）は米国において心臓病に次いで第２位の死亡原因である（Ｂｏｒｉｎｇら
，ＣＡ Ｃａｎｃｅｌ Ｊ．Ｃｌｉｎ．４３：７（１９９３））。癌は、増殖して腫瘍塊
を形成する異常な又は腫瘍性の正常組織由来細胞の数の増加、これらの腫瘍性腫瘍細胞に
よる隣接組織への浸潤、ならびに最終的には血液またはリンパ系を介して局所リンパ節へ
と及び転移と称される過程により遠隔部位へと広がる悪性細胞の発生により特徴づけられ
る。癌状態においては、正常細胞が増殖しない条件下で細胞が増殖する。癌は、種々の度
合の浸潤性および攻撃性により特徴づけられる多種多様な形態で生じる。
癌治療のための有効な細胞標的を発見する試みにおいて、研究者らは、１以上の正常非癌
細胞上と比較して１以上の特定のタイプの癌細胞の表面上で特異的に発現される膜貫通ま
たは膜結合ポリペプチドを特定しようと努めている。しばしば、そのような膜結合ポリペ
プチドは、非癌細胞の表面上と比較して、癌細胞の表面上で、より豊富に発現される。そ
のような腫瘍関連細胞表面抗原ポリペプチドの特定は、抗体に基づく治療により癌細胞を
特異的に標的化して破壊することを可能にしている。
細胞毒性剤または細胞増殖抑制剤（すなわち、癌の治療において腫瘍細胞を殺し又は抑制
する薬物）の局所運搬のための抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、すなわち、イムノ
コンジュゲート（免疫複合体）の使用は腫瘍細胞への薬物部分の標的化運搬および腫瘍細
胞内の細胞内蓄積を可能にし、この場合、これらの非コンジュゲート化薬剤の全身投与は
、排除することが求められている腫瘍細胞に対してだけでなく正常細胞に対しても許容し
えないレベルの毒性をもたらしうる。ＡＤＣの治療指数（すなわち、最大有効性および最
小毒性）を改善するための努力はポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体（ｍＡｂ
）の選択性ならびに薬物結合特性および薬物放出特性に焦点を合わせている（Ｌａｍｂｅ
ｒｔ，Ｊ．（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ
５：５４３−５４９）。抗体薬物コンジュゲートにおいて使用される薬物部分には、細菌
タンパク質毒素、例えばジフテリア毒素、植物タンパク質毒素、例えばリシン、小分子、
例えばゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒら（２０００）Ｊ．ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔ．Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３−１５８１；Ｍａｎｄｌｅｒら（２００
０）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １０：１０２５−
１０２８；Ｍａｎｄｌｅｒら（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１３：
７８６−７９１）、メイタンシノイド（ＥＰ １３９１２１３；Ｌｉｕら（１９９６）Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：８６１８−８６２３）、カリケア
マイシン（Ｌｏｄｅら（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２８；Ｈｉｎｍａ
ｎら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２）、ダウノマイシン
、ドキソルビシン、メトトレキセートおよびビンデシン（Ｒｏｗｌａｎｄら（１９８６）
前掲）が含まれる。薬物部分は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合またはトポイソメラーゼ
抑制を含む細胞毒性メカニズムおよび細胞増殖抑制メカニズムに影響を及ぼしうる。幾つ
かの細胞毒性薬は、大きな抗体またはタンパク質受容体リガンドにコンジュゲート化（結
合）している場合、不活性または低活性である傾向にある。
抗体に或る部分（例えば、薬物部分）を結合させる（すなわち、共有結合により連結させ
る）通常の手段は、一般に、抗体上の多数の部位に該部分が結合している、分子の不均一
混合物を与える。例えば、細胞毒性薬は、典型的には、抗体のしばしば多数のリジン残基
を介して抗体にコンジュゲート化されて、不均一な抗体−薬物コンジュゲート混合物を与
える。反応条件に応じて、不均一混合物は、典型的には、０個〜約８個以上の結合薬物部
分を有する抗体の分布を含む。また、薬物部分対抗体の個々の整数比を有するコンジュゲ
ートの各亜群内には、抗体上の種々の部位に薬物部分が結合している潜在的に不均一な混
合物が存在する。コンジュゲート化反応から生じた不均一混合物中の抗体−薬物コンジュ
ゲート種分子を分離し特徴づけるためには、分析および分取方法は不適当でありうる。抗
体は大きく複雑で構造的に多様な生体分子であり、しばしば、多数の反応性官能基を含有
する。リンカー試薬および薬物−リンカー中間体とのそれらの反応性はｐＨ、濃度、塩濃
度および共溶媒のような要因に左右される。更に、多工程コンジュゲート化法は、反応条
件の制御ならびに反応物および中間体の特徴づけが困難であるため、再現性を示さない可
能性がある。
発明の概括 二重可変ドメイン（ＤＶＤ）イムノコンジュゲートおよびその用途を提供す
る。該イムノコンジュゲートの態様は、第１および第２可変ドメインを有するＤＶＤ免疫
グロブリン分子と、第２可変ドメインにリンカーを介して共有結合しているカーゴ（積荷
）部分（例えば、薬物部分）とを含む。該イムノコンジュゲートの製造方法、ならびに癌
および他の疾患の予防および／または治療における使用方法も提供する。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは二重可変ドメイン免疫グロブリン分子またはその免疫グロブリンフラグメント（抗
原結合性フラグメント）であり、ここで、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子は、結合
標的に結合する第１可変ドメインと、反応性残基を含む第２可変ドメインとを含み、Ｌは
、Ｉｇの第２可変ドメインの反応性残基に共有結合しているリンカーであり、Ｄは薬物部
分であり、ｎは１〜１２の整数、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１
１または１２から選択される。１つの態様においては、反応性残基はＬの化学量論的結合
を可能にし、限定的なものではないがＳＨ、ＮＨ２、ＯＨ、ＳｅＨ、Ｎ３、アルキン、ア
ルケン、歪アルキン、歪アルケン、Ｃ＝Ｏおよび活性化ＣＨを反応性官能基として含有す
る天然および非天然アミノ酸を含む。
本発明の他の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここ
で、Ｉｇは二重可変ドメイン免疫グロブリン分子またはその抗原結合性フラグメントであ
り、ここで、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子は、結合標的に結合する第１可変ドメ
インと、反応性リジン残基を含む第２可変ドメインとを含み、Ｌは、Ｉｇの第２可変ドメ
インの反応性リジン残基に共有結合しているリンカーであり、Ｄは薬物部分であり、ｎは
１または２である。
配列の簡単な説明 配列番号１および２はペプチドリンカーのアミノ酸配列である。
配列番号３はヒト化３８Ｃ２（ｈ３８Ｃ２）抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号４はヒト化３８Ｃ２（ｈ３８Ｃ２）抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号５はＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸
配列である。
配列番号６はＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸
配列である。
配列番号７はＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸
配列である。
配列番号８はＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸
配列である。
配列番号９はＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリンの軽
鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号１０はＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリンの
重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号１１はＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリンの
軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号１２はＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリンの
重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号１３はファルレツズマブ（ｆａｒｌｅｔｕｚｕｍａｂ）ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２
−ＤＶＤ１免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号１４はファルレツズマブＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリンの重
鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号１５はファルレツズマブＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリンの軽
鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号１６はファルレツズマブＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリンの重
鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号１７はＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミ
ノ酸配列である。
配列番号１８はＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミ
ノ酸配列である。
配列番号１９はＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミ
ノ酸配列である。
配列番号２０はＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミ
ノ酸配列である。
配列番号２１はＣＤ７９ｂ−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミ
ノ酸配列である。
配列番号２２はＣＤ７９ｂ−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミ
ノ酸配列である。
配列番号２３はＣＤ７９ｂ−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミ
ノ酸配列である。
配列番号２４はＣＤ７９ｂ−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミ
ノ酸配列である。
詳細な説明 二重可変ドメイン（ＤＶＤ）イムノコンジュゲートおよびその用途を提供す
る。該イムノコンジュゲートの態様は、第１および第２可変ドメインを有するＤＶＤ免疫
グロブリン
分子と、第２可変ドメインにリンカーを介して共有結合している薬物部分とを含む。該イ
ムノコンジュゲートの製造方法、ならびに癌および他の疾患の予防および／または治療に
おける使用方法も提供する。
本発明をより詳細に説明する前に、本発明は、記載されている特定の態様に限定されるも
のではなく、したがって、勿論、変動しうると理解されるべきである。また、本明細書中
で用いられる用語は、特定の態様を説明することを目的としたものであるに過ぎず、本発
明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、該用語は限定的なもので
はないと理解されるべきである。
値の範囲が示されている場合、その範囲の上限と下限との間の、文脈に明らかに矛盾しな
い限り下限の単位の１０分の１までの各介在値、およびその示されている範囲内の任意の
他の示されている又は介在する値が本発明に含まれると理解される。これらの、より小さ
い範囲の、上限および下限は、独立して、より小さい範囲内に含まれることが可能であり
、示されている範囲内のいずれかの特に除外される限界がありうることを前提として、同
様に本発明に含まれる。示されている範囲がそれらの限界の一方または両方を含む場合、
それらの含まれる限界の一方または両方を除外する範囲も本発明に含まれる。
本明細書においては、ある範囲は、「約」なる語に続く数値で示されている。「約」なる
語は、本明細書においては、それに続く厳密な数、およびその語に続く数に近い又は近似
した数に対する文字上の対応を示すために用いられる。ある数が、特に列挙された数に近
い又は近似しているかどうかを判定する際、近い又は近似した列挙されていない数は、そ
れが示されている文脈において、特に列挙されている数の実質的な等価体を示す数であり
うる。
特に示されていない限り、本明細書中で用いる全ての科学技術用語は、本発明が属する技
術分野の当業者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書に記載されてい
るものに類似した又は等価な任意の方法および材料も本発明の実施または試験において使
用されうるが、以下においては代表的な例示的な方法および材料を記載する。
本明細書に挙げられている全ての刊行物および特許を、各個の刊行物または特許が参照に
より本明細書に組み入れられると具体的かつ個別に示されている場合と同様に、参照によ
り本明細書に組み入れることとし、また、該刊行物が引用されている対象である方法およ
び／または材料を開示し記載するために、それらの刊行物および特許を参照により本明細
書に組み入れることとする。いずれの刊行物の引用も出願日前のその開示のためであり、
本発明が先行発明としてそのような刊行物に先行する権利を有さないと認めるものと解釈
されるべきではない。更に、示されている公開日は、独立して証明されることを要しうる
実際の公開日とは異なりうる。
本明細書および添付の特許請求の範囲で用いる単数形は、文脈に明らかに矛盾しない限り
、複数対象物を含むことに注意すべきである。更に、特許請求の範囲は、任意の随意的（
すなわち、所望により含まれていてもよい）要素を除くように書かれうることに注意すべ
きである。したがって、この陳述は、特許請求の範囲の要素の列挙に関する「専ら」、「
だけ」などのような排他的用語の使用または「消極的」な限定の使用のための先行的基礎
として働くと意図される。
この開示を読めば当業者には明らかなとおり、本明細書に記載され例示されている個々の
態様のそれぞれは、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、その他の幾つかの態
様のいずれかの特徴から容易に分離さうる又は該特徴と組合されうる分離した成分および
特徴を有する。任意の記載されている方法は、記載されている事象の順序で、または論理
的に可能な任意の他の順序で実施されうる。
本発明の実施は、特に示されていない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学
、細胞生物学、生化学および免疫学の通常の技術を用いることが可能であり、それらは当
技術分野の技量の範囲内である。そのような技術は、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉ
ｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓ
ａｍｂｒｏｏｋら，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ”（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ”
（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
ｏｇｙ”（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏ
ｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編
，１９８７および定期的更新）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ
Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓら編，１９９４）；“Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ
Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ”（Ｐｅｒｂａｌ Ｂｅｒｎａ
ｒｄ Ｖ．，１９８８）；“Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ”（Ｂａｒｂａｓら，２００１）のような文献に十分に説明されている。
定義 本明細書において互換的に用いられる「免疫グロブリン」または「抗体」なる語は
、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される基本的な４鎖ヘ
テロ四量体糖タンパク質を意味する。各Ｌ鎖は１つの共有ジスルフィド結合によりＨ鎖に
連結されており、一方、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１以上のジスルフィド
結合により互いに連結されている。各ＨおよびＬ鎖はＮ末端およびＣ末端を有し、また、
規則的に間隔をあけて存在する鎖内ジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖はＮ末端に可変ド
メイン（ＶＨ）を有し、それに続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３
）を有する。各Ｌ鎖はＮ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、それに続いて１つの定常ド
メイン（ＣＬ）を有する。ＶＬはＶＨと整列しており、ＣＬは重鎖の第１定常ドメイン（
ＣＨ１）と整列している。特定のアミノ酸残基は、Ｌ鎖可変ドメインとＨ鎖可変ドメイン
との間の境界を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬとがペアになって単一の抗原結合
部位を形成する。
任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパお
よびラムダと称される２つの明らかに異なる型の１つに割り当てられうる。免疫グロブリ
ンは、その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、異なるクラスまたはア
イソタイプに割り当てられうる。免疫グロブリンの５つのクラス、すなわち、ＩｇＡ、Ｉ
ｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、それらは、それぞれα、δ、ε、γおよび
μと称される重鎖を有する。γおよびαクラスは、ＣＨの配列および機能における比較的
小さな相違に基づいて、更にサブクラスに分類され、例えば、ヒトは以下のサブクラスを
発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２。
免疫グロブリンの「可変領域」または「可変ドメイン」は免疫グロブリンのＨまたはＬ鎖
のＮ末端ドメインを意味する。Ｈ鎖の可変ドメインは「ＶＨ」と称されうる。軽鎖の可変
ドメインは「ＶＬ」と称されうる。これらのドメインは、一般に、免疫グロブリンの最も
可変性の部分であり、抗原結合部位を含有する。
「可変」なる語は、可変ドメインの或る部分が免疫グロブリン間で配列において甚だしく
異なることを意味する。Ｖドメインは抗原結合をもたらし、特定の免疫グロブリンの、そ
の特定の抗原に対する特異性を定める。しかし、可変性はほとんどの可変ドメインの１１
０アミノ酸の範囲にわたって均一には分布していない。実際には、Ｖ領域は、１５〜３０
アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と称される比較的に不変の伸長からなり、これら
は、それぞれ９〜１２アミノ酸長である「超可変領域」と称される、極めて可変性である
、より短い領域により分離されている。天然ＨおよびＬ鎖の可変ドメインはそれぞれ、４
つのＦＲ領域を含み、これらは主として、ベータシート構造を連結する（幾つかの場合に
は、ベータシート構造の一部を形成する）ループを形成する３つの超可変領域により連結
されたベータシート立体配置をとる。各鎖内の超可変領域は、ＦＲ領域により、互いに接
近してひとかたまりになっており、その他の鎖からの超可変領域と共に、免疫グロブリン
の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕ
ｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ
ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照されたい）。定常ド
メインは抗原への免疫グロブリンの結合に直接は関与しないが、種々のエフェクター機能
、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）および
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）における免疫グロブリンの関与を示す。
「無傷」免疫グロブリンは、抗原結合部位、ならびにＣＬ、および少なくともＨ鎖定常ド
メイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む免疫グロブリンである。定常ドメ
インは天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸
配列変異体でありうる。無傷免疫グロブリンは１以上のエフェクター機能を有しうる。
本明細書の目的における「裸免疫グロブリン」は、薬物部分にコンジュゲート化（結合）
していない免疫グロブリンである。
「免疫グロブリンフラグメント」は、無傷免疫グロブリンの一部、好ましくは、無傷免疫
グロブリンの抗原結合または可変領域を含む。免疫グロブリンフラグメントの例には、限
定的なものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ジ
アボディ；直鎖状免疫グロブリン（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐ
ａｔａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２［１９９５］を参
照されたい）；一本鎖免疫グロブリン分子；ならびに免疫グロブリンフラグメントから形
成される多重特異性抗体が含まれる。幾つかの態様においては、免疫グロブリンフラグメ
ントは全ての可能な代替的フラグメント形態を含む。幾つかの態様においては、免疫グロ
ブリンフラグメントは二重特異性でありうる。幾つかの態様においては、免疫グロブリン
フラグメントは二重パラトープ性（ｂｉ−ｐａｒａｔｏｐｉｃ）でありうる。幾つかの態
様においては、免疫グロブリンフラグメントは三重特異性でありうる。幾つかの態様にお
いては、免疫グロブリンフラグメントは多量体でありうる。幾つかの態様においては、免
疫グロブリンフラグメントは無傷免疫グロブリンの抗原結合部位を含み、したがって、抗
原に結合する能力を保有する。幾つかの態様においては、免疫グロブリンフラグメントは
、抗原に結合する能力を有する単一の可変ドメインを含む。幾つかの態様においては、免
疫グロブリンフラグメントは、活性、特性、薬物動態学的挙動およびインビボ効力を調節
するために更に修飾される（ペプチド添加、ペグ化、ヘシル化、グリコシル化に限定され
ない）。
免疫グロブリンのパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと称される２つの同一の抗原
結合性フラグメント、および残りの「Ｆｃ」フラグメント（この記号は、容易に結晶化し
うることを表している）を生成する。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（
ＶＨ）および１つの重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）と共に、Ｌ鎖全体からなる。各Ｆ
ａｂフラグメントは抗原結合に関して一価であり、すなわち、それは単一の抗原結合部位
を有
する。免疫グロブリンのペプシン処理は単一の大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成
し、これは、２価抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合Ｆａｂフラグメントにほ
ぼ対応し、尚も抗原を架橋しうる。Ｆａｂ’フラグメントは、免疫グロブリンヒンジ領域
由来の１以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における追加的な少数
の残基を有する点で、Ｆａｂフラグメントと異なっている。
Ｆｃフラグメントは、ジスルフィドにより互いに結合した両方のＨ鎖のカルボキシ末端部
分を含む。免疫グロブリンのエフェクター機能はＦｃ領域内の配列により決定され、該領
域は、あるタイプの細胞上で見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）により認識される部分でも
ある。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含有する最小免疫グロブリンフラグメント
である。このフラグメントは、強固な非共有結合で結合した１つの重鎖可変ドメインと１
つの軽鎖可変ドメインとの二量体からなる。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種においては、１つ
の重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインが、柔軟なペプチドリンカーにより共
有結合されることが可能であり、その結果、軽鎖および重鎖は、２本鎖Ｆｖ種の場合に類
似した「二量体」構造で会合しうる。これらの２つのドメインのフォールディングから、
抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し免疫グロブリンに抗原結合特異性を付与する６つ
の超可変ループ（ＨおよびＬ鎖にそれぞれが由来する３つのループ）が発出する。しかし
、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさ
えも、典型的には完全結合部位より低いアフィニティーではあるものの、抗原を認識しそ
れに結合する能力を有する。ＤＶＤ免疫グロブリン分子に関して本明細書中で用いる場合
の「Ｆｖ」なる語は、重鎖および軽鎖の第１および第２可変ドメインの両方を含む結合フ
ラグメントを意味する。
「一本鎖Ｆｖ」は「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略され、単一のポリペプチド鎖へと
連結されたＶＨおよびＶＬ免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブリンフラグメントで
ある。好ましくは、該ｓＦｖポリペプチドは更に、該ｓＦｖが抗原結合のための所望の構
造を形成するのを可能にする、ＶＨおよびＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーを含む
。ｓＦｖの総説としては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇ
ｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎ
ｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐ
ｐ．２６９−３１５（１９９４）；Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ １９９５（後記）を参照され
たい。ＤＶＤ免疫グロブリン分子に関して本明細書中で用いる場合の「ｓｃＦｖ」なる語
は、重鎖および軽鎖の第１および第２可変ドメインの両方を含む結合フラグメントを意味
する。
本明細書中で用いる「二重可変ドメイン免疫グロブリン」または「ＤＶＤ−Ｉｇ」なる語
は、Ｈ鎖およびＬ鎖の両方が、第１可変ドメインに隣接して位置する第２可変ドメインを
含む、前記の免疫グロブリン分子を意味する。したがって、ＤＶＤ−ＩｇのＬ鎖は、Ｎ末
端からＣ末端へと、ＶＬ１−ＶＬ２−ＣＬのドメインを含む。したがって、ＤＶＤ−Ｉｇ
のＨ鎖は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＶＨ１−ＶＨ２−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３のドメイン
を含む。ＶＬ１とＶＨ１とは一緒にペアになって第１抗原結合部位を形成する。ＶＬ２と
ＶＨ２とは一緒にペアになって第２抗原結合部位を形成する。
特に示されていない限り、「免疫グロブリン」または「抗体」なる語は、天然に存在する
変異体を含む、天然ヒトおよび非ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ
、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＭ抗体を特に含む。
ポリペプチド（例えば、抗体または免疫グロブリン）に関する「天然」なる語は、本明細
書においては、その製造方法には無関係に、天然に存在する配列を有するポリペプチドを
示すために用いられる。ポリペプチド（例えば、抗体または免疫グロブリン）に関する「
非天然」なる語は、本明細書においては、天然には存在しない配列を有するポリペプチド
を示すために用いられる。
「ポリペプチド」なる語は本明細書においては最も広い意味で用いられ、ペプチド配列を
含む。「ペプチド」なる語は、一般に、ペプチド結合により共有結合し約３０個まで、好
ましくは約６０個までのアミノ酸を含有する、アミノ酸の直鎖状分子鎖を表す。
本明細書中で用いる「モノクローナル抗体」なる語は、実質的に均一な免疫グロブリンの
集団から得られる抗体または免疫グロブリン分子（例えば、ＤＶＤ Ｉｇ分子）を意味す
る。すなわち、該集団を構成する個々の免疫グロブリンは、僅かな量で存在しうる天然で
生じる、考えられうる突然変異以外は同一である。モノクローナル免疫グロブリンは単一
の抗原部位に対して高特異的である。更に、種々の決定基（エピトープ）に対する種々の
抗体を典型的に含む通常の（ポリクローナル）抗体調製物とは異なり、各モノクローナル
免疫グロブリンは抗原上の単一の決定基に対するものである。修飾語「モノクローナル」
は、実質的に均一な抗体集団から得られるという該免疫グロブリンの特性を示しており、
いずれかの特定の方法による該抗体の製造を要するとは解釈されない。例えば、本発明に
従い使用されるモノクローナル免疫グロブリンは、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ
（１９７５），Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法
により製造可能であり、あるいは組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６
７号を参照されたい）により製造可能である。
本明細書におけるモノクローナル免疫グロブリンは特に、重鎖および／または軽鎖の一部
分が、特定の種に由来する抗体における対応配列と同一または相同であり、該鎖の残部が
、別の種に由来する抗体における対応配列と同一または相同である、「キメラ」免疫グロ
ブリン、およびそのような抗体のフラグメントを含むが、それらは所望の生物活性を示す
ものでなければならない（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））
。
非ヒト（例えば、げっ歯類、例えば、マウスまたはウサギ）免疫グロブリンの「ヒト化」
形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する免疫グロブリンである。ほ
とんどの場合、ヒト化免疫グロブリンは、所望の特異性、アフィニティーおよび能力を有
するマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ニワトリ、ウシまたは非ヒト霊長類のような
非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域からの残基によりレシピエントの超可変領域からの
残基が置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。幾つかの場合には、
ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基も対応非ヒト残基により置換
される。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を
含みうる。これらの修飾は、抗体の性能を更に改善するために行われる。一般に、該ヒト
化免疫グロブリンは、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを
含み、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全ては非ヒト免疫グロブリンのものに対
応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のものである。該ヒト
化免疫グロブリンはまた、所望により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的には、
ヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部を含むであろう。更なる詳細は、Ｊｏｎｅ
ｓら（１９８６），Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら（１
９８８），Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ（１９９２），
Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６を参照されたい。
本明細書中で用いる「ヒト免疫グロブリン」なる語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列
に由来する可変領域および定常領域を有する免疫グロブリンを含むと意図される。本発明
のヒト免疫グロブリンは、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってはコードされないア
ミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発またはイ
ンビボでの体細胞突然変異により導入された変異）を、例えばＣＤＲ内、特にＣＤＲ３内
に含みうる。しかし、本明細書中で用いる「ヒト免疫グロブリン」なる語は、マウスのよ
うな別の哺乳類種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上にグラフ
ト化された免疫グロブリンを含むことを意図するものではない。
本明細書における「単離（された）」免疫グロブリンは、特定され、組換え宿主細胞にお
けるその天然環境の成分から分離および／または回収された免疫グロブリンである。その
天然環境の混入成分は、該免疫グロブリンの診断または治療用途を妨げる物質であり、酵
素、ホルモンおよび他のタンパク質性または非タンパク質性溶質、ならびに望ましくない
副産物を包含しうる。幾つかの態様においては、本明細書における単離された免疫グロブ
リンは、（１）ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたはＳＥＣ−ＨＰＬＣ法による測定で９５重量％以上
、９８重量％以上、または９９重量％以上まで、（２）アミノ酸シーケンサーの使用によ
りＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、ある
いは（３）クーマシーブルーまたは好ましくは銀染色を用いて還元または非還元条件下で
ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均一になるまで精製される。通常、単離された免疫グロブリンは
少なくとも１つの精製工程により調製されるであろう。
「特異的結合」または「特異的に結合する」または「特異的である」なる語は、結合標的
への結合性部分の結合、例えば、標的抗原（例えば、特定のポリペプチド、ペプチドまた
は他の標的（例えば、糖タンパク質標的）上のエピトープ）への免疫グロブリンの結合に
関するものであり、非特異的相互作用（例えば、非特異的相互作用はウシ血清アルブミン
またはカゼインへの結合でありうる）とは測定可能な様態で異なる結合を意味する。特異
的結合は、例えば、対照分子への結合と比較して、標的分子への結合性部分または免疫グ
ロブリンの結合を決定することにより測定されうる。例えば、特異的結合は、標的に類似
した対照分子、例えば過剰な非標識標的との競合により決定されうる。この場合、プロー
ブへの標識標的の結合が過剰の非標識標的により競合的に阻害される場合、特異的結合が
示される。本明細書中で用いる、特定のポリペプチドに又は特定のポリペプチド上のエピ
トープに「特異的結合」または「特異的に結合する」または「特異的である」なる語は、
例えば、少なくとも約２００ｎＭ、あるいは少なくとも約１５０ｎＭ、あるいは少なくと
も約１００ｎＭ、あるいは少なくとも約６０ｎＭ、あるいは少なくとも約５０ｎＭ、ある
いは少なくとも約４０ｎＭ、あるいは少なくとも約３０ｎＭ、あるいは少なくとも約２０
ｎＭ、あるいは少なくとも約１０ｎＭ、あるいは少なくとも約８ｎＭ、あるいは少なくと
も約６ｎＭ、あるいは少なくとも約４ｎＭ、あるいは少なくとも約２ｎＭ、あるいは少な
くとも約１ｎＭまたはそれ以上の、標的に対するＫｄを有する分子により示されうる。あ
る例においては、「特異的結合」なる語は、ある分子が特定のポリペプチドには又は特定
のポリペプチド上のエピトープには結合するが、他のいずれのポリペプチドまたはポリペ
プチドエピトープにも実質的に結合しない、結合を意味する。
「結合アフィニティ」は分子（例えば、免疫グロブリン）の単一結合部位とその結合相手
（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を意味する。特に示されてい
ない限り、本明細書中で用いる
「結合アフィニティ」は、結合ペア（例えば、免疫グロブリンおよび抗原）のメンバー間
の１：１の相互作用を表す固有結合アフィニティを意味する。分子Ｘの、その相手Ｙに対
するアフィニティは、一般に、解離定数（Ｋｄ）により表されうる。例えば、Ｋｄは約２
００ｎＭ、１５０ｎＭ、１００ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎ
Ｍ、１０ｎＭ、８ｎＭ、６ｎＭ、４ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭまたはそれより強力でありうる
。アフィニティは、本明細書に記載されている方法を含む当技術分野で公知の一般的方法
により測定されうる。低アフィニティ抗体は、一般に、抗原に遅く結合し、速く解離する
傾向にあり、一方、高アフィニティ抗体は、一般に、抗原に速く結合し、より長く結合し
たままとなる傾向にある。結合アフィニティを結合する種々の方法が当技術分野で公知で
ある。
本明細書中で用いる「Ｋｄ」または「Ｋｄ値」は、免疫グロブリンおよび標的ペアに適し
た技術により、例えば表面プラズモン共鳴アッセイを用いて、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ
Ｘ１００またはＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔ
ａｗａｙ，ＮＪ）を固定化抗原ＣＭ５チップと共に２５℃で使用して測定される解離定数
を意味する。
「コンジュゲート」、「コンジュゲート化」および「結合」なる語はあらゆる形態の共有
結合または非共有結合を意味し、限定的なものではないが直接的な遺伝的または化学的融
合、リンカーまたは架橋剤を介したカップリング、および非共有結合性会合を含む。
「融合」なる語は、本明細書においては、１つのポリペプチド鎖における異なる起源のア
ミノ酸配列の、それらのコードヌクレオチド配列のインフレーム組合せによる組合せを示
すために用いられる。「融合」なる語は、内部融合、すなわち、ポリペプチド鎖内の異な
る起源の配列の挿入を、その末端の１つへの融合に加えて明示的に含む。「融合」なる語
は、本明細書においては、異なる起源のアミノ酸配列の組合せを示すために用いられる。
「エピトープ」なる語は、免疫グロブリンに特異的に結合しうる任意の分子決定基を含む
。ある態様においては、エピトープ決定基は分子の化学的に活性な表面基、例えばアミノ
酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルを含み、ある態様においては、特異的な三次元
構造特性および／または特異的な電荷特性を有しうる。エピトープは、免疫グロブリンが
結合する、抗原の領域である。「結合領域」は、結合性分子が結合する、結合標的上の領
域である。
「標的」または「結合標的」は最も広い意味で用いられ、限定的なものではないが特に、
天然に存在する場合の生物学的機能を有する又は有さないポリペプチド、核酸、炭水化物
、脂質、細胞および他の分子を含む。
「抗原」なる語は、免疫グロブリンに結合しうる又は細胞性免疫応答を誘発しうる実体ま
たはその断片を意味する。免疫原は、生物、特に動物、より詳細にはヒトを含む哺乳動物
において免疫応答を誘導しうる抗原を意味する。抗原なる語は、前記の抗原決定基または
エピトープとして公知の領域を含む。
本発明の免疫グロブリンの「抗原結合部位」または「抗原結合領域」は、典型的には、各
可変ドメイン内に６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有し、抗原に対する結合部位のア
フィニティに種々の度合で寄与する。各可変ドメインには、３つの重鎖可変ドメインＣＤ
Ｒ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）および３つの軽鎖可変ドメインＣＤＲ（
ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３）が存在する。ＣＤＲおよびフレームワーク領
域（ＦＲ）の範囲は、配列間の可変性および／または抗体／抗原複合体からの構造情報に
従いそれらの領域が定められているアミノ酸配列のコンパイル済データベースとの比較に
より決定される。また、より少数のＣＤＲを含む機能的抗原結合部位（すなわち、この場
合、結合特異性は３、４または５個のＣＤＲにより決定される）も本発明の範囲内に含ま
れる。６個のＣＤＲの完全セットに満たないものも幾つかの結合標的への結合に十分であ
りうる。したがって、幾つかの場合には、ＶＨまたはＶＬドメインのみのＣＤＲで十分で
ある。更に、ある抗体は抗原に対する非ＣＤＲ関連結合部位を有しうるであろう。そのよ
うな結合部位は本定義に特に含まれる。
本出願において用いる「宿主細胞」なる語は、本発明の免疫グロブリンを生成するように
操作されうる任意の種類の細胞系を意味する。１つの態様においては、チャイニーズハム
スター卵巣（ＣＨＯ）細胞が宿主細胞として使用される。幾つかの態様においては、大腸
菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）が宿主細胞として使用される。
本明細書中で用いる「細胞」、「細胞系」および「細胞培養」なる表現は互換的に用いら
れ、全てのそのような表示は後代を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換
細胞」なる語は初代対象細胞およびそれから誘導される培養を含む（導入の回数には無関
係）。また、全ての後代は、意図的または非意図的な突然変異のため、ＤＮＡ含量におい
て厳密には同一でない可能性があると理解される。元の形質転換細胞において選別された
ものと同じ機能または生物活性を有する変異体後代が含まれる。
核酸が「機能的に連結」されていると言えるのは、それが別の核酸配列に対して機能的な
関係で配置されている場合である。例えば、プレ配列または分泌リーダーに関するＤＮＡ
がポリペプチドに関するＤＮＡに機能的に連結されていると言えるのは、それが、該ポリ
ペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合であり、プロモーターま
たはエンハンサーがコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、それが該配列の
転写に影響を及ぼす場合であり、あるいはリボソーム結合部位がコード配列に機能的に連
結されていると言えるのは、それが、翻訳を促進するように配置されている場合である。
一般に、「機能的に連結（されている）」は、連結されているＤＮＡ配列が連続的であり
、分泌リーダーの場合には、連続的でありリーディングフレームにおけるものであること
を意味する。しかし、エンハンサーは連続的である必要はない。連結は、簡便な制限部位
における連結により達成される。そのような部位が存在しない場合には、合成オリゴヌク
レオチドアダプターまたはリンカーが通常の慣例に従い使用される。
本明細書中で特定されているペプチドまたはポリペプチド配列、すなわち、ｈ３８Ｃ２抗
体ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性（％）」は、配列同一性の一部として
いずれの保存的置換をも考慮することなく、配列をアライメントし、最大の配列同一性（
％）が得られるように必要に応じてギャップを導入した後、特定のペプチドまたはポリペ
プチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列内のアミノ酸残基の割合（％）
として定義される。アミノ酸配列同一性（％）を決定する目的でのアライメントは、当技
術分野における通常の技術の範囲内である種々の方法で、例えば、公に利用可能なコンピ
ュータソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌ
ｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成されうる。当業者は、比較されて
いる配列の全長にわたって最大アライメントを得るために必要ないずれかのアルゴリズム
を含むアライメントを測定するための適当なパラメータを決定することが可能である。
「治療する」または「治療」は治療的処置および予防的手段の両方を意味し、ここで、そ
の目的は対象病態または障害を予防または抑制（緩和）することである。治療を要する者
には、該障害を既に有する者、および該障害を有する傾向にある者、または該障害が予防
されるべき者が含まれる。例えば、対象または哺乳動物が癌に関して成功裏に「治療」さ
れたと言えるのは、本発明の方法に従い該イムノコンジュゲートの治療量が投与された後
、該対象が以下の１以上の観察可能および／または測定可能な軽減（減少）または非存在
を示す場合である：癌細胞の数の減少または癌細胞の非存在、腫瘍サイズの減少；周辺器
官への癌細胞浸潤（軟組織および骨への癌の広がりを含む）の抑制（すなわち、ある程度
の減速、好ましくは阻止）；腫瘍転移の抑制（すなわち、ある程度の減速、好ましくは阻
止）；腫瘍成長の或る程度の抑制；および／または特定の癌に関連した症状の１以上の或
る程度の緩和；死亡率および／または罹患率の減少；ならびに生活の質の問題の改善。
二重可変ドメイン免疫グロブリン 本発明の態様は、標的抗原に結合する第１可変ドメイ
ンと、リンカー分子の共有結合のための部位を与える特有の反応性の残基を含む第２可変
ドメインとを含有する二重可変ドメイン（ＤＶＤ）免疫グロブリン分子を含む。該ＤＶＤ
免疫グロブリン分子は２つの同一軽鎖および２つの同一重鎖を含む。各軽鎖および各重鎖
はＮ末端およびＣ末端を含む。各軽鎖は、ＶＬ１およびＶＬ２と称される第１および第２
可変ドメインならびにＣＬと称される定常ドメインを含む。幾つかの態様においては、軽
鎖はカッパ軽鎖を含む。幾つかの態様においては、軽鎖はラムダ軽鎖を含む。
本発明の態様は、標的抗原に結合する第１可変ドメインと、リンカー分子の共有結合のた
めの部位を与える特有の反応性の単一リジン残基を含む第２可変ドメインとを含有する二
重可変ドメイン（ＤＶＤ）免疫グロブリン分子を含む。該ＤＶＤ免疫グロブリン分子は２
つの同一軽鎖および２つの同一重鎖を含む。各軽鎖および各重鎖はＮ末端およびＣ末端を
含む。各軽鎖は、ＶＬ１およびＶＬ２と称される第１および第２可変ドメインならびにＣ
Ｌと称される定常ドメインを含む。幾つかの態様においては、軽鎖はカッパ軽鎖を含む。
幾つかの態様においては、軽鎖はラムダ軽鎖を含む。
幾つかの態様においては、各重鎖は、ＶＨ１およびＶＨ２と称される第１および第２可変
ドメイン、ならびにＣＨ１と称される定常ドメイン、およびそれに続く重鎖Ｆｃ領域ドメ
インを含む。幾つかの態様においては、重鎖上のＦｃ領域ドメインは、個々の免疫グロブ
リン型または亜型に特異的であるＦｃ領域ドメイン、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１
、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、
ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ抗体からのＦｃ領域（これらに限定されるものではない）を
含みうる。例えば、幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＧクラスに属し、重
鎖はγ重鎖を含む。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＧ１クラスに属し、
重鎖はγ１重鎖を含む。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＧ２クラスに属
し、重鎖はγ２重鎖を含む。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＧ３クラス
に属し、重鎖はγ３重鎖を含む。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＧ４ク
ラスに属し、重鎖はγ４重鎖を含む。
幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＡクラスに属し、重鎖はα重鎖を含む。
幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＡ１クラスに属し、重鎖はα１重鎖を含
む。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＡ２クラスに属し、重鎖はα２重鎖
を含む。
幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＤクラスに属し、重鎖はδ重鎖を含む。
幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＥクラスに属し、重鎖はε重鎖を含む。
幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＩｇＭクラスに属し、重鎖はμ重鎖を含む。
幾つかの態様においては、免疫グロブリン分子は、天然に存在する天然ポリペプチド配列
を含有しうる。
軽鎖に沿った可変ドメインおよび定常ドメインの構成は、一般に、Ｎ末端からＣ末端へと
ＶＬ１−ＶＬ２−ＣＬとして進む。しかし、ある態様においては、軽鎖上の可変ドメ
インの構成は逆転可能であり、この場合、Ｎ末端からＣ末端への構成はＶＬ２−ＶＬ１−
ＣＬとなる。この同じ構成は該ＤＶＤ免疫グロブリンの結合性フラグメントに適用され、
この場合、Ｎ末端からＣ末端への構成はＶＬ１−ＶＬ２またはＶＬ２−ＶＬ１でありうる
。同様に、重鎖に沿った可変ドメインおよび定常ドメインの構成は、一般に、Ｎ末端から
Ｃ末端へとＶＨ１−ＶＨ２−ＣＨ１−Ｆｃとして進むが、軽鎖上のドメインの構成を反映
するように修飾可能であり、この場合、免疫グロブリン分子またはその結合性フラグメン
トが構築された際に、軽鎖上の適切なドメインは重鎖上の適切なドメインとペアになる。
ある態様においては、軽鎖および重鎖に沿った可変ドメインおよび定常ドメインの構成は
、軽鎖に沿ったドメインの配列がＮ末端からＣ末端へとＶＬ１−ＶＬ２−ＣＨ１として進
み、重鎖に沿ったドメインの構成がＮ末端からＣ末端へとＶＨ１−ＶＨ２−ＣＬ−Ｆｃと
して進むように構成されうる。この特定の構成はＣｒｏｓｓＭＡｂ構成と称され、Ｋｌｅ
ｉｎら、ｍＡｂｓ ４，６５３−６６３（２０１２）（その開示の全体を参照により本明
細書に組み入れることとする）に詳細に記載されている。ある態様においては、Ｃｒｏｓ
ｓＭＡｂ構成を使用して二重特異性ＤＶＤ免疫グロブリンを製造することが可能であり、
これについては後記において更に詳細に説明する。
幾つかの態様においては、第１可変ドメインおよび第２可変ドメインは、それらの軽鎖ま
たは重鎖に沿って、ペプチドリンカー配列により連結される。ペプチドリンカー配列は単
一アミノ酸またはポリペプチド配列でありうる。幾つかの態様においては、ペプチドリン
カー配列はＡＳＴＫＧＰ（配列番号１）またはＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２）
である。該ＤＶＤ免疫グロブリンの第１可変ドメインと第２可変ドメインとを連結するた
めに使用されうる追加的プチドリンカー配列は米国特許第７，６１２，１８１号（その開
示の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。
図１に示されているとおり、２つの軽鎖および２つの重鎖の集合は、軽鎖および重鎖の相
互作用を安定化させる種々の鎖間および鎖内ジスルフィド結合を有するＤＶＤ免疫グロブ
リン分子の形成をもたらす。
該ＤＶＤ免疫グロブリン分子の態様は、抗原結合機能を有する第１可変ドメインを含む。
該ＤＶＤ免疫グロブリン分子のＶＬ１およびＶＨ１配列は、例えば腫瘍細胞上の抗原のよ
うな標的に特異的に結合するように選択される。免疫グロブリンは、アポトーシス、再指
向性（ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ）細胞傷害性、リガンド−受容体相互作用の阻害、または腫
瘍性表現型に決定的に重要なタンパク質の発現の予防を誘導することにより、抗腫瘍効果
を発揮しうる。更に、免疫グロブリンは腫瘍微小環境の成分を標的とすることが可能であ
り、重要な構造、例えば腫瘍関連脈管構造の形成を妨げうる。免疫グロブリンはまた、リ
ガンドが増殖因子である受容体（例えば、表皮増殖因子受容体）を標的とすることが可能
であり、それにより、細胞を刺激する天然リガンドの、標的化腫瘍細胞への結合を抑制す
る。あるいは、免疫グロブリンはＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣを誘導しうる。
腫瘍関連抗原は実質的にあらゆるタイプの癌に関して公知であると当業者は認識するであ
ろう。該ＤＶＤ免疫グロブリン分子の第１可変ドメインにより標的化されうる特定の腫瘍
関連結合標的には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：ＨＥＲ２
（ＥＲＢＢ２）、ＦＯＬＲ１、ＦＯＬＲ２、ＣＤ１３８、ＣＤ１９、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７
９Ｂ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＦＣＲＭ、ＣＳ１、ＧＰＡ３３、ＭＳＬＮ、ＣＤ５２、ＣＤ
２０、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、
ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＢＣＭＡ、ＢＭＰ６、ＩＬ１２Ａ
、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＢＭＰ
６、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４
、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２
１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、Ｆ
ＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＲＰ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、Ｉ
Ｌ２、ＩＮＨＡ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＶＥＧＦ、ＣＤＫ２
、ＥＧＦ、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＩＧＦ１、ＩＧＦ
１Ｒ、ＩＬ２、ＶＥＧＦ、ＢＣＬ２、ＣＤ１６４、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫ
Ｎ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ
ＢＰ６、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＯＤＺ１、ＰＡＷＲ、ＰＬＧ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＲ、Ｂ
ＲＣＡ１、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、Ｅ２Ｆ１、
ＥＧＦＲ（ＥＲＢＢ１）、ＨＥＲ３（ＥＲＢＢ３）、ＨＥＲ４（ＥＲＢＢ４）、ＥＮＯ１
、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ２、ＩＮＳＬ４、ＭＹＣ、Ｎ
ＯＸ５、ＮＲ６Ａ１、ＰＡＰ、ＰＣＮＡ、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＴＰ５３、
ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ９、ＩＧＦＢＰ３、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＫＬＫ６、ＴＰ
５３、ＣＨＧＢ、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４
、ＰＲＬ、ＫＬＫ６、ＳＨＢＧ、ＮＲ１Ｄ１、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｆ６、Ｎ
Ｒ４Ａ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＮＲ０Ｂ１、ＮＲ０Ｂ２、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、Ｎ
Ｒ１Ｈ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１
、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５
Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＰＧＲ、ＲＡＲＢ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ６、ＫＬＫ３、ＫＲ
Ｔ１、ＡＰＯＣ１、ＢＲＣＡ１、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、ＣＬＵ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ６
Ａ１、ＥＧＦ、ＥＲＫ８、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４
、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２
２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧ
Ｆ９、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１２Ａ、Ｉ
Ｌ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＫＬＫ１０
、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、
ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳＭＢ、ＮＴＮ４、ＯＤＺ１、ＰＡＰ、Ｐ
ＬＡＵ、ＰＲＬ、ＰＳＡＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＨＢＧ、ＴＧＦＡ、ＴＩＭＰ３、ＣＤ
４４、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ９、ＣＤＨ１
、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８
、ＣＤＨ９、ＲＯＢＯ２、ＣＤ４４、ＩＬＫ、ＩＴＧＡ１、ＡＰＣ、ＣＤ１６４、ＣＯＬ
６Ａ１、ＭＴＳＳ１、ＰＡＰ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＧＲ２、ＡＩＧ１、ＡＫＡＰ１、ＡＫ
ＡＰ２、ＣＡＮＴ１、ＣＡＶ１、ＣＤＨ１２、ＣＬＤＮ３、ＣＬＮ３、ＣＹＢ５、ＣＹＣ
１、ＤＡＢ２１Ｐ、ＤＥＳ、ＤＮＣＬ１、ＥＬＡＣ２、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＦＡＳＮ、
ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＧＴ１、ＧＳＴ
Ｐ１、ＨＩＰ１、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＬ２９、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩ１、ＫＲＴ２Ａ、ＭＩ
Ｂ１、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＣＡ３、ＰＩＡＳ２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＰＩＤ、ＰＲ１
、ＰＳＣＡ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ
２、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＰＣ６、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＰＥＰ、ＥＣ
ＧＦ１、ＥＲＥＧ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＩＧＦ、ＦＬＴ１、ＪＡＧ１、ＫＤＲ、ＬＡ
ＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＰＧＦ、ＰＬＸＤＣ１、ＳＴＡＢ１、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ
Ｃ、ＡＮＧＰＴＬ３、ＢＡＩ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＩＬ８、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ
２、ＳＴＡＢ１、ＡＮＧＰＴＬ４、ＰＥＣＡＭ１、ＰＦ４、ＰＲＯＫ２、ＳＥＲＰＩＮＦ
１、ＴＮＦＡＩＰ２、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ３、
ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ９、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＬ１Ｂ、
ＩＬ６、ＭＤＫ、ＥＤＧ１、ＥＦＮＡ１、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＰＨＢ４
、ＦＧＦＲ３、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＴＧＢ３、ＰＤＧＦＡ、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦ
Ｂ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ１、ＣＣＬ２、ＣＤＨ５、ＣＯＬ１８Ａ１、ＥＤＧ１、Ｅ
ＮＧ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＢＡＤ、ＢＡＧ１、ＢＣＬ２
、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＤＨ１（Ｅ−カド
ヘリン）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＯ
Ｌ６Ａ１、ＣＴＮＮＢ１（ｂ−カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＥＳＲ１、ＥＳ
Ｒ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ−１）、ＧＡＴＡ３、ＧＳＮ（ゲルソリン）、
ＩＧＦＢＰ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、Ｉ
ＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＪＵＮ、ＫＬＫ５、ＫＲＴ１９、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊ
ｕｎ）、ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＭＥ１（ＮＭ２
３Ａ）、ＰＧＲ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＴＥＮ、ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）、ＳＥ
ＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ−１）、ＴＧＦＡ、ＴＨＢＳ１（トロンポスポンジン−１）、ＴＩ
Ｅ（Ｔｉｅ−１）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＯＰ２Ａ
（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰ５３、ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−糖タンパク質）、ＢＰ
ＡＧ１（プレクチン）、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＬＤＮ７（クロ
ーディン−７）、ＣＬＵ（クラスタリン）、ＦＧＦ１、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）
、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＮＡＳ１、ＩＤ２、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、
ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）、ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）、ＫＲＴ１９（ケラ
チン１９）、ＫＲＴＨＢ６（毛特異的ＩＩ型ケラチン）、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＴ３（
メタロチオネクチン−ＩＩＩ）、ＭＵＣ１（ムチン）、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）、ＲＡ
Ｃ２（ｐ２１Ｒａｃ２）、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ
２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓ
ｐｒ１）、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４およびＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）。
抗原結合機能を付与する第１可変ドメイン領域のアミノ酸配列はキメラ、ヒト化またはヒ
トアミノ酸配列を含みうる。そのような配列の任意の適切な組合せが該ＤＶＤ免疫グロブ
リン分子の第１可変ドメイン内に組込まれうる。
抗原結合性可変領域配列は、特定の標的に結合しうる当技術分野でよく知られた種々のモ
ノクローナル抗体から選択されうる。これらには以下のものが含まれるが、それらに限定
されるものではない：抗ＴＮＦ抗体（米国特許第６，２５８，５６２号）、抗ＩＬ１２抗
体および／または抗ＩＬ１２ｐ４０抗体（米国特許第６，９１４，１２８号）；抗ＩＬ１
８抗体（ＵＳ ２００５／０１４７６１０ Ａ１）、抗Ｃ５、抗ＣＢＬ、抗ＣＤ１４７、
抗ｇｐ１２０、抗ＶＬＡ４、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＤ４０Ｌ、抗
Ｉｄ、抗ＩＣＡＭ１、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＤ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＴＧＦベータ２、抗Ｅ
セレクチン、抗ＶＩＩ因子、抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、抗Ｆｇｐ、抗ＣＤ１１／１８、抗ＣＤ
１４、抗ＩＣＡＭ３、抗ＣＤ８０、抗ＣＤ４、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２３、抗ベータ２インテ
グリン、抗アルファ４ベータ７、抗ＣＤ５２、抗ＨＬＡ ＤＲ、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ
２０、抗ＭＩＦ、抗ＣＤ６４（ＦｃＲ）、抗ＴＣＲアルファベータ、抗ＣＤ２、抗Ｈｅｐ
Ｂ、抗ＣＡ１２５、抗ＥｐＣＡＭ、抗ｇｐ１２０、抗ＣＭＶ、抗ｇｐＩＩｂＩＩＩａ、抗
ＩｇＥ、抗ＣＤ２５、抗ＣＤ３３、抗ＨＬＡ、抗ＶＮＲインテグリン、抗ＩＬ１アルファ
、抗ＩＬ１ベータ、抗ＩＬ１受容体、抗ＩＬ２受容体、抗ＩＬ４、抗ＩＬ４受容体、抗Ｉ
Ｌ５、抗ＩＬ５受容体、抗ＩＬ６、抗ＩＬ８、抗ＩＬ９、抗ＩＬ１３、抗ＩＬ１３受容体
、抗ＩＬ１７および抗ＩＬ２３（Ｐｒｅｓｔａ ＬＧ．２００５ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，
ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１−
６およびＣｌａｒｋ，Ｍ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｃ
ａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＵＫ，１５ Ｏｃｔ．２０００（Ｄｅｐａｒ
ｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙの
ウェブサイトにおけるＭ．Ｃｌａｒｋのホームページでオンライン公開）を参照されたい
）。
抗原結合性可変領域配列は、使用に関して承認された又は臨床試験中の又は臨床使用のた
めに開発中の種々の治療用抗体からも選択されうる。そのような治療用抗体には以下のも
のが含まれるが、それらに限定されるものではない：ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、ＩＤ
ＥＣ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）（例えば、米国特許第５，７３６，１３７号を
参照されたい）、非ホジキンリンパ腫を治療するために承認されたキメラ抗ＣＤ２０抗体
；ＨＵＭＡＸ−ＣＤ２０（登録商標），Ｇｅｎｍａｂにより現在開発中の抗ＣＤ２０、米
国特許第５，５００，３６２号に記載されている抗ＣＤ２０抗体、ＡＭＥ−１３３（Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）、ｈＡ２０（Ｉｍｍｕｎｏｍｅ
ｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ＨｕｍａＬＹＭ（Ｉｎｔｒａｃｅｌ）およびＰＲＯ７０７６９（
ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４０４２６，発明の名称“Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖ
ａｒｉａｎｔｓ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ”）、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔ
ｕｚｕｍａｂ）（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（例えば、米
国特許第５，６７７，１７１号を参照されたい）、乳癌を治療するために承認されたヒト
化抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより現在開発中のペルツズマブ（ｐｅ
ｒｔｕｚｕｍａｂ）（ｒｈｕＭａｂ−２Ｃ４，ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標））；米国特
許第４，７５３，８９４号に記載されている抗Ｈｅｒ２抗体；セツキシマブ（ｃｅｔｕｘ
ｉｍａｂ）（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標），Ｉｍｃｌｏｎｅ）（米国特許第４，９４３，
５３３号；ＰＣＴ ＷＯ ９６／４０２１０）、種々の癌に関して臨床試験中のキメラ抗
ＥＧＦＲ抗体；Ａｂｇｅｎｉｘ−Ｉｍｍｕｎｅｘ−Ａｍｇｅｎにより現在開発中のＡＢＸ
−ＥＧＦ（米国特許第６，２３５，８８３号）；Ｇｅｎｍａｂにより現在開発中のＨＵＭ
ＡＸ−ＥＧＦＲ（商標）（Ｕ．Ｓ．Ｓｅｒ．Ｎｏ．１０／１７２，３１７）；４２５、Ｅ
ＭＤ５５９００、ＥＭＤ６２０００およびＥＭＤ７２０００（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）（
米国特許第５，５５８，８６４号；Ｍｕｒｔｈｙら，１９８７，Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５２（２）：５４９−６０；Ｒｏｄｅｃｋら，１９８７，Ｊ Ｃ
ｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５（４）：３１５−２０；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら，
１９９１，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．４（７）：７７３−８３）；ＩＣＲ６２（Ｉｎｓｔ
ｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（ＰＣＴ ＷＯ ９５／２００４
５；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，１９９３，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９９３，２
２（１−３）：１２９−４６；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，１９９３，Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃ
ｅｒ．１９９３，６７（２）：２４７−５３；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，１９９６，Ｂｒ
Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，７３（２）：２２８−３５；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら，２００３，
Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，１０５（２）：２７３−８０）；ＴｈｅｒａＣＩＭ ｈＲ３
（ＹＭ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｎａｄａ ａｎｄ Ｃｅｎｔｒｏ ｄｅ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｉａ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｃｕｂａ（米国特許第５，８９１，９９６号；
米国特許第６，５０６，８８３号；Ｍａｔｅｏら，１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ，３（１）：７１−８１）；ｍＡｂ−８０６（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ
ｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔ
ｔｅｒｉｎｇ）（Ｊｕｎｇｂｌｕｔｈら，２００３，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓ
ｃｉ ＵＳＡ．１００（２）：６３９−４４）；ＫＳＢ−１０２（ＫＳ Ｂｉｏｍｅｄｉ
ｘ）；ＭＲ１−１（ＩＶＡＸ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）
（ＰＣＴ ＷＯ ０１６２９３１Ａ２）；およびＳＣ１００（Ｓｃａｎｃｅｌｌ）（ＰＣ
Ｔ ＷＯ ０１／８８１３８）；アレムツズマブ（ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）（ＣＡＭＰ
ＡＴＨ（登録商標），Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病の治療のた
めに現在承認されているヒト化モノクローナル抗体；ムロモナブ（ｍｕｒｏｍｏｎａｂ）
−ＣＤ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３（登録商標））、Ｏｒｔｈｏ Ｂｉｏｔｅｃ
ｈ／Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎにより開発された抗ＣＤ３抗体、イブリツモマ
ブ チウキセタン（ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ ｔｉｕｘｅｔａｎ）（ＺＥＶＡＬＩＮ（登
録商標））、ＩＤＥＣ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧにより開発された抗ＣＤ２０抗体、ゲム
ツズマブ オゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）（ＭＹＬＯ
ＴＡＲＧ（登録商標））、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｗｙｅｔｈにより開発された抗ＣＤ３３（
ｐ６７タンパク質）抗体、アレファセプト（ａｌｅｆａｃｅｐｔ）（ＡＭＥＶＩＶＥ（登
録商標））、Ｂｉｏｇｅｎにより開発された抗ＬＦＡ−３ Ｆｃ融合体、Ｃｅｎｔｏｃｏ
ｒ／Ｌｉｌｌｙにより開発されたアブシキシマブ（ａｂｃｉｘｉｍａｂ）（ＲＥＯＰＲＯ
（登録商標））、Ｎｏｖａｒｔｉｓにより開発されたバシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉ
ｍａｂ）（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標））、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅにより開発されたパリ
ビズマブ（ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））、インフリキシマ
ブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、Ｃｅｎｔｏｃｏｒによ
り開発された抗ＴＮＦアルファ抗体、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）（ＨＵＭＩ
ＲＡ（登録商標））、Ａｂｂｏｔｔにより開発された抗ＴＮＦアルファ抗体、ＨＵＭＩＣ
ＡＤＥ（登録商標）、Ｃｅｌｌｔｅｃｈにより開発された抗ＴＮＦアルファ抗体、エタネ
ルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、Ｉｍｍｕｎｅｘ／Ａ
ｍｇｅｎにより開発された抗ＴＮＦアルファＦｃ融合体、ＡＢＸ−ＣＢＬ、Ａｂｇｅｎｉ
ｘにより開発中の抗ＣＤ１４７抗体、ＡＢＸ−ＩＬ８、Ａｂｇｅｎｉｘにより開発中の抗
ＩＬ８抗体、ＡＢＸ−ＭＡ１、Ａｂｇｅｎｉｘにより開発中の抗ＭＵＣ１８抗体、ペンツ
モマブ（Ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）（Ｒ１５４９，９０Ｙ−ｍｕＨＭＦＧ１）、Ａｎｔｉｓ
ｏｍａにより開発中の抗ＭＵＣ１、Ｔｈｅｒｅｘ（Ｒ１５５０）、Ａｎｔｉｓｏｍａによ
り開発中の抗ＭＵＣ１抗体、Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発中のＡｎｇｉｏＭａｂ（ＡＳ１
４０５）、Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発中のＨｕＢＣ−１、Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発
中のチオプラチン（Ｔｈｉｏｐｌａｔｉｎ）（ＡＳ１４０７）、ＡＮＴＥＧＲＥＮ（登録
商標）（ナタリズマブ（ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ））、Ｂｉｏｇｅｎにより開発中の抗ア
ルファ−４−ベータ−１（ＶＬＡ４）およびアルファ−４−ベータ−７抗体、ＶＬＡ−１
ｍＡｂ、Ｂｉｏｇｅｎにより開発中の抗ＶＬＡ−１インテグリン抗体、ＬＴＢＲ ｍＡ
ｂ、Ｂｉｏｇｅｎにより開発中の抗リンホトキシンベータ受容体（ＬＴＢＲ）抗体、ＣＡ
Ｔ−１５２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより開発
中の抗ＴＧＦ−β２抗体、Ｊ６９５、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙおよびＡｂｂｏｔｔにより開発中の抗ＩＬ−１２抗体、ＣＡＴ−１９２、Ｃ
ａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＧｅｎｚｙｍｅによ
り開発中の抗ＴＧＦβ１抗体、ＣＡＴ−２１３、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより開発中の抗エオタキシン（Ｅｏｔａｘｉｎ）１抗体、ＬＹ
ＭＰＨＯＳＴＡＴ−Ｂ（登録商標）、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙおよびＨｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．により開発
中の抗Ｂｌｙｓ抗体、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１ｍＡｂ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ
ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＨｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．
により開発中の抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１抗体、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標） ベバシズマブ（
ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ｒｈｕＭＡｂ−ＶＥＧＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発
中の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発中の抗ＨＥＲ受容体ファミリー抗体
、抗組織因子（ＡＴＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発中の抗組織因子抗体、ＸＯＬＡ
ＩＲ（登録商標）（オマリズマブ（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ））、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによ
り開発中の抗ＩｇＥ抗体、ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）（エファリズマブ（Ｅｆａｌｉｚ
ｕｍａｂ））、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＸｏｍａにより開発中の抗ＣＤ１１ａ抗体、Ｇ
ｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより
開発中のＭＬＮ−０２抗体（旧称ＬＤＰ−０２）、ＨＵＭＡＸ ＣＤ４（登録商標）、Ｇ
ｅｎｍａｂにより開発中の抗ＣＤ４抗体、ＨＵＭＡＸ（商標）−ＩＬ１５、Ｇｅｎｍａｂ
およびＡｍｇｅｎにより開発中の抗ＩＬ１５抗体、ＧｅｎｍａｂおよびＭｅｄａｒｅｘに
より開発中のＨＵＭＡＸ（商標）−Ｉｎｆｌａｍ、ＨＵＭＡＸ（商標）−Ｃａｎｃｅｒ、
ＧｅｎｍａｂおよびＭｅｄａｒｅｘおよびＯｘｆｏｒｄ ＧｌｙｃｏＳｃｉｅｎｃｅｓに
より開発中の抗ヘパラナーゼ（Ｈｅｐａｒａｎａｓｅ）Ｉ抗体，ＧｅｎｍａｂおよびＡｍ
ｇｅｎにより開発中のＨＵＭＡＸ（商標）−Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｇｅｎｍａｂにより開発
中のＨＵＭＡＸ（商標）−ＴＡＣ、ＩＤＥＣ−１３１、およびＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌｓにより開発中の抗ＣＤ４０Ｌ抗体、ＩＤＥＣ−１５１（クレノリキシマ
ブ（Ｃｌｅｎｏｌｉｘｉｍａｂ））、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより
開発中の抗ＣＤ４抗体、ＩＤＥＣ−１１４、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
により開発中の抗ＣＤ８０抗体、ＩＤＥＣ−１５２、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉ
ｃａｌｓにより開発中の抗ＣＤ２３、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより
開発中の抗マクロファージ遊走因子（ＭＩＦ）抗体、ＢＥＣ２、Ｉｍｃｌｏｎｅにより開
発中の抗イディオタイプ抗体、ＩＭＣ−１Ｃ１１、Ｉｍｃｌｏｎｅにより開発中の抗ＫＤ
Ｒ抗体、ＤＣ１０１、Ｉｍｃｌｏｎｅにより開発中の抗ｆｌｋ−１抗体、Ｉｍｃｌｏｎｅ
により開発中の抗ＶＥカドヘリン抗体、ＣＥＡ−ＣＩＤＥ（登録商標）（ラベツズマブ（
ｌａｂｅｔｕｚｕｍａｂ））、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発中の抗癌胎児抗原（
ＣＥＡ）抗体、ＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ（登録商標）（エプラツズマブ（Ｅｐｒａｔｕｚｕ
ｍａｂ））、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発中の抗ＣＤ２２抗体、Ｉｍｍｕｎｏｍ
ｅｄｉｃｓにより開発中のＡＦＰ−Ｃｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発中の
ＭｙｅｌｏｍａＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発中のＬｋｏＣｉｄｅ、Ｉ
ｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発中のＰｒｏｓｔａＣｉｄｅ、ＭＤＸ−０１０、Ｍｅｄ
ａｒｅｘにより開発中の抗ＣＴＬＡ４抗体、ＭＤＸ−０６０、Ｍｅｄ
ａｒｅｘにより開発中の抗ＣＤ３０抗体、Ｍｅｄａｒｅｘにより開発中のＭＤＸ−０７０
、Ｍｅｄａｒｅｘにより開発中のＭＤＸ−０１８、ＯＳＩＤＥＭ（登録商標）（ＩＤＭ−
１）、およびＭｅｄａｒｅｘおよびＩｍｍｕｎｏ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ
ｓにより開発中の抗Ｈｅｒ２抗体、ＨＵＭＡＸ（登録商標）−ＣＤ４、Ｍｅｄａｒｅｘお
よびＧｅｎｍａｂにより開発中の抗ＣＤ４抗体、ＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、Ｍｅｄａｒｅｘ
およびＧｅｎｍａｂにより開発中の抗ＩＬ１５抗体、ＣＮＴＯ １４８、Ｍｅｄａｒｅｘ
およびＣｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊ＆Ｊにより開発中の抗ＴＮＦａ抗体、ＣＮＴＯ １２７５、
Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊ＆Ｊにより開発中の抗サイトカン抗体、ＭＯＲ１０１およびＭＯＲ
１０２、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓにより開発中の抗細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１）（ＣＤ
５４）抗体、ＭＯＲ２０１、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓにより開発中の抗線維芽細胞増殖因子受
容体３（ＦＧＦＲ−３）抗体、ＮＵＶＩＯＮ（登録商標）（ビシリズマブ（ｖｉｓｉｌｉ
ｚｕｍａｂ））、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓにより開発中の抗ＣＤ３抗体
、ＨＵＺＡＦ（登録商標）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓにより開発中の抗
ガンマインターフェロン抗体、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓにより開発中の
抗ａ５β１インテグリン、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓにより開発中の抗Ｉ
Ｌ１２、ＩＮＧ−１、Ｘｏｍａにより開発中の抗Ｅｐ−ＣＡＭ抗体、ＸＯＬＡＩＲ（登録
商標）（オマリズマブ（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ））、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＮｏｖａ
ｒｔｉｓにより開発されたヒト化抗ＩｇＥ抗体、およびＭＬＮ０１、Ｘｏｍａにより開発
中の抗ベータ２インテグリン抗体。この段落において前記で引用されている参考文献の全
てを明示的に参照により本明細書に組み入れることとする。
該ＤＶＤ免疫グロブリン分子の態様は、反応性リジン残基を含む３８Ｃ２抗体からの第２
可変ドメインを含む。３８Ｃ２抗体は、例えば米国特許第８，２５２，９０２号（その開
示の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。簡潔に説明
すると、３８Ｃ２抗体の重鎖可変領域は特有の反応性の単一リジン残基を含み、これはリ
ンカーと反応可能であり、それにより、薬物部分とのコンジュゲート化のための結合点を
提供しうる。したがって、３８Ｃ２抗体の可変ドメインを含む免疫グロブリン分子は、薬
物部分とのコンジュゲート化に用いられうる２つのそのような結合点（各重鎖上に１つ）
を含有する。反応性リジン残基がリンカーにコンジュゲート化されたら、３８Ｃ２可変ド
メインの結合機能が失われ、このことは、該可変ドメインがもはや標的に結合しないこと
を意味する。したがって、いずれの特定の理論にも限定されるものではないが、該ＤＶＤ
免疫グロブリン分子において使用される３８Ｃ２抗体の可変ドメインはコンジュゲート化
のための結合点を提供するが、抗原結合機能をもたらさない。
ヒト化３８Ｃ２抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のアミノ酸配列を配列番号３に示す。ヒ
ト化３８Ｃ２抗体の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のアミノ酸配列を配列番号４に示す。
幾つかの態様においては、該ＤＶＤ免疫グロブリン分子はヒト化３８Ｃ２抗体の軽鎖可変
ドメイン配列（配列番号３）をＶＬ２ドメイン配列として含む。幾つかの態様においては
、該ＤＶＤ免疫グロブリン分子は、配列番号３に実質的に類似している、例えば、配列番
号３に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、
８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、
９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列
同一性を有するＶＬ２ドメイン配列を含む。
幾つかの態様においては、該ＤＶＤ免疫グロブリン分子はヒト化３８Ｃ２抗体の重鎖可変
ドメイン配列（配列番号４）をＶＨ２ドメイン配列として含む。幾つかの態様においては
、該ＤＶＤ免疫グロブリン分子は、配列番号４に実質的に類似している、例えば、配列番
号４に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、
８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、
９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列
同一性を有する、反応性リジン残基を含むＶＨ２ドメイン配列を含む。
該ＤＶＤ免疫グロブリン分子はキメラ、ヒト化およびヒト免疫グロブリン配列を含むこと
が可能であり、幾つかの態様においては、それらの任意の混合物を含有することが可能で
ある。例えば、幾つかの態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリン分子はキメラ第１可変ド
メインを含むことが可能であり、ヒト第２可変ドメインを含むことが可能である。幾つか
の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリン分子はヒト化第１可変ドメインを含むことが可
能であり、ヒト第２可変ドメインを含むことが可能である。該ＤＶＤ免疫グロブリン分子
においてはキメラ、ヒト化およびヒト免疫グロブリン配列の任意の適切な組合せが使用さ
れうる。
幾つかの態様においては、本発明のＤＶＤ免疫グロブリンは、例えば、免疫グロブリンの
ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣを増強するためにエフェクター機能に関して修飾されう
る。これは、免疫グロブリンのＦｃ領域に１以上のアミノ酸置換を導入することにより達
成されうる。代替的または追加的に、システイン残基をＦｃ領域に導入することが可能で
あり、それにより、この領域内の鎖間ジスルフィド結合形成が可能となる。このようにし
て得られた免疫グロブリンは、改善されたインターナリゼーション能力および／または増
強したＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣを有しうる。Ｃａｒｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｅｄ
．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照されたい。免疫グロブリンの血清半
減期を増加させるために、例えば米国特許第５，７３９，２７７号に記載されているとお
り、免疫グロブリン（特に免疫グロブリンフラグメント）内にサルベージ受容体結合性エ
ピトープが組込まれうる。本明細書中で用いる「サルベージ受容体結合性エピトープ」な
る語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の増加をもたらすＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ
１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを意味する。
図２に示されているとおり、本発明の態様によるＤＶＤ免疫グロブリン分子は、抗原結合
機能を付与する第１可変ドメインと、リンカーにコンジュゲート化されうる特有の反応性
の単一リジン残基を含む３８Ｃ２抗体からの第２可変ドメインとを含む。
１つの特定の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリンは、ＨＥＲ２に結合する第１可変ド
メインを含み、第２可変ドメインとしてヒト化３８Ｃ２抗体可変ドメインを含む。可変ド
メインは各軽鎖および重鎖上でペプチドリンカー配列ＡＳＴＫＧＰ（配列番号１）に連結
される。この特定の態様は「ＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１」と称され、図３に示され
ている。この態様の軽鎖アミノ酸配列は配列番号５に示されている。この態様の重鎖アミ
ノ酸配列は配列番号６に示されている。幾つかの態様においては、該ＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ
２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子は、配列番号５に実質的に類似している、例えば、配列
番号５に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％
、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％
、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配
列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。幾つかの態様においては、該ＨＥＲ２−ｈ３
８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子は、配列番号６に実質的に類似している、例えば、
配列番号６に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８
１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９
１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ
酸配列同一性を有する、反応性リジン残基を含む重鎖アミノ酸配列を含む。
もう１つの特定の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリンは、ＨＥＲ２に結合する第１可
変ドメインを含み、第２可変ドメインとしてヒト化３８Ｃ２抗体可変ドメインを含む。可
変ドメインは各軽鎖および重鎖上でペプチドリンカー配列ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配
列番号２）に連結される。この特定の態様は「ＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２」と称さ
れ、図３に示されている。この態様の軽鎖アミノ酸配列は配列番号７に示されている。こ
の態様の重鎖アミノ酸配列は配列番号８に示されている。幾つかの態様においては、該Ｈ
ＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子は、配列番号７に実質的に類似してい
る、例えば、配列番号７に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少
なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９
９％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。幾つかの態様においては、
該ＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子は、配列番号８に実質的に類似し
ている、例えば、配列番号８に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるい
は少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８
９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％のアミノ酸配列同一性を有する、反応性リジン残基を含む重鎖アミノ酸配列を含
む。
１つの特定の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリンは、ＦＯＬＲ１に結合する、ＩＭＧ
Ｎ−８５３抗ＦＯＬＲ１抗体（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ，Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）からの第１
可変ドメインを含み、第２可変ドメインとしてヒト化３８Ｃ２抗体可変ドメインを含む。
可変ドメインは各軽鎖および重鎖上でペプチドリンカー配列ＡＳＴＫＧＰ（配列番号１）
に連結される。この特定の態様は「ＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ
１」と称され、図４に示されている。この態様の軽鎖アミノ酸配列は配列番号９に示され
ている。この態様の重鎖アミノ酸配列は配列番号１０に示されている。幾つかの態様にお
いては、該ＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子は
、配列番号９に実質的に類似している、例えば、配列番号９に対して少なくとも約８０％
のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％
、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列
を含む。幾つかの態様においては、該ＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶ
Ｄ１免疫グロブリン分子は、配列番号１０に実質的に類似している、例えば、配列番号１
０に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８
２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９
２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同
一性を有する、反応性リジン残基を含む重鎖アミノ酸配列を含む。
もう１つの特定の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリンは、ＦＯＬＲ１に結合する、Ｉ
ＭＧＮ−８５３抗ＦＯＬＲ１抗体（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ，Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）からの
第１可変ドメインを含み、第２可変ドメインとしてヒト化３８Ｃ２抗体可変ドメインを含
む。可変ドメインは各軽鎖および重鎖上でペプチドリンカー配列ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ
Ｐ（配列番号２）に連結される。この特定の態様は「ＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬＲ１−ｈ
３８Ｃ２−ＤＶＤ２」と称され、図４に示されている。この態様の軽鎖アミノ酸配列は配
列番号１１に示されている。この態様の重鎖アミノ酸配列は配列番号１２に示されている
。幾つかの態様においては、該ＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免
疫グロブリン分子は、配列番号１１に実質的に類似している、例えば、配列番号１１に対
して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８２％、
８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、
９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を
有する軽鎖アミノ酸配列を含む。幾つかの態様においては、該ＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬ
Ｒ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子は、配列番号１２に実質的に類似してい
る、例えば、配列番号１２に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは
少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または
９９％のアミノ酸配列同一性を有する、反応性リジン残基を含む重鎖アミノ酸配列を含む
。
１つの特定の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリンは、ＦＯＬＲ１に結合する、ファー
レツズマブ（ｆａｒｌｅｔｕｚｕｍａｂ）抗体（Ｍｏｒｐｈｏｔｅｋ，Ｉｎｃ．，Ｅｘｔ
ｏｎ ＰＡ）からの第１可変ドメインを含み、第２可変ドメインとしてヒト化３８Ｃ２抗
体可変ドメインを含む。可変ドメインは各軽鎖および重鎖上でペプチドリンカー配列ＡＳ
ＴＫＧＰ（配列番号１）に連結される。この特定の態様は「ファーレツズマブＦＯＬＲ１
−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１」と称され、図４に図示されている。この態様の軽鎖アミノ酸配
列は配列番号１３に示されている。この態様の重鎖アミノ酸配列は配列番号１４に示され
ている。幾つかの態様においては、該ファーレツズマブＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ
１免疫グロブリン分子は、配列番号１３に実質的に類似している、例えば、配列番号１３
に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８２
％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一
性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。幾つかの態様においては、該ファーレツズマブＦＯ
ＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子は、配列番号１４に実質的に類似して
いる、例えば、配列番号１４に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるい
は少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８
９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％のアミノ酸配列同一性を有する、反応性リジン残基を含む重鎖アミノ酸配列を含
む。
もう１つの特定の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリンはファーレツズマブ（ｆａｒｌ
ｅｔｕｚｕｍａｂ）抗体（Ｍｏｒｐｈｏｔｅｋ，Ｉｎｃ．，Ｅｘｔｏｎ ＰＡ）からの第
１可変ドメインを含み、第２可変ドメインとしてヒト化３８Ｃ２抗体可変ドメインを含む
。可変ドメインは各軽鎖および重鎖上でペプチドリンカー配列ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ
（配列番号２）に連結される。この特定の態様は「ファーレツズマブＦＯＬＲ１−ｈ３８
Ｃ２−ＤＶＤ２」と称され、図４に図示されている。この態様の軽鎖アミノ酸配列は配列
番号１５に示されている。この態様の重鎖アミノ酸配列は配列番号１６に示されている。
幾つかの態様においては、該ファーレツズマブＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グ
ロブリン分子は、配列番号１５に実質的に類似している、例えば、配列番号１５に対して
少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８２％、８３
％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３
％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を有す
る軽鎖アミノ酸配列を含む。幾つかの態様においては、該ファーレツズマブＦＯＬＲ１−
ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子は、配列番号１６に実質的に類似している、例
えば、配列番号１６に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なく
とも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９
０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％
のアミノ酸配列同一性を有する、反応性リジン残基を含む重鎖アミノ酸配列を含む。
１つの特定の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリンは、ＣＤ１３８に結合する第１可変
ドメインを含み、第２可変ドメインとしてヒト化３８Ｃ２抗体可変ドメインを含む。可変
ドメインは各軽鎖および重鎖上でペプチドリンカー配列ＡＳＴＫＧＰ（配列番号１）に連
結される。この特定の態様は「ＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１」と称され、図５に図
示されている。この態様の軽鎖アミノ酸配列は配列番号１７に示されている。この態様の
重鎖アミノ酸配列は配列番号１８に示されている。幾つかの態様においては、該ＣＤ１３
８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子は、配列番号１７に実質的に類似している
、例えば、配列番号１７に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少
なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９
９％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。幾つかの態様においては、
該ＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子は、配列番号１８に実質的に類
似している、例えば、配列番号１８に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、
あるいは少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８
％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８
％または９９％のアミノ酸配列同一性を有する、反応性リジン残基を含む重鎖アミノ酸配
列を含む。
もう１つの特定の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリンは、ＣＤ１３８に結合する第１
可変ドメインを含み、第２可変ドメインとしてヒト化３８Ｃ２抗体可変ドメインを含む。
可変ドメインは各軽鎖および重鎖上でペプチドリンカー配列ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（
配列番号２）に連結される。この特定の態様は「ＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２」と
称され、図５に示されている。この態様の軽鎖アミノ酸配列は配列番号１９に示されてい
る。この態様の重鎖アミノ酸配列は配列番号２０に示されている。幾つかの態様において
は、該ＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子は、配列番号１９に実質的
に類似している、例えば、配列番号１９に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一
性、あるいは少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、
８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。幾つかの態
様においては、該ＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子は、配列番号２
０に実質的に類似している、例えば、配列番号２０に対して少なくとも約８０％のアミノ
酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％
、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％
、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を有する、反応性リジン残基を含む
重鎖アミノ酸配列を含む。
１つの特定の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリンは、ＣＤ７９ｂに結合する第１可変
ドメインを含み、第２可変ドメインとしてヒト化３８Ｃ２抗体可変ドメインを含む。可変
ドメインは各軽鎖および重鎖上でペプチドリンカー配列ＡＳＴＫＧＰ（配列番号１）に連
結される。この特定の態様は「ＣＤ７９ｂ−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１」と称さる。この態様
の軽鎖アミノ酸配列は配列番号２１に示されている。この態様の重鎖アミノ酸配列は配列
番号２２に示されている。幾つかの態様においては、該ＣＤ７９ｂ−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ
１免疫グロブリン分子は、配列番号２１に実質的に類似している、例えば、配列番号２１
に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８２
％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一
性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。幾つかの態様においては、該ＣＤ７９ｂ−ｈ３８Ｃ
２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子は、配列番号２２に実質的に類似している、例えば、配
列番号２２に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８
１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９
１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ
酸配列同一性を有する、反応性リジン残基を含む重鎖アミノ酸配列を含む。
もう１つの特定の態様においては、ＤＶＤ免疫グロブリンは、ＣＤ７９ｂに結合する第１
可変ドメインを含み、第２可変ドメインとしてヒト化３８Ｃ２抗体可変ドメインを含む。
可変ドメインは各軽鎖および重鎖上でペプチドリンカー配列ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（
配列番号２）に連結される。この特定の態様は「ＣＤ７９ｂ−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２」と
称される。この態様の軽鎖アミノ酸配列は配列番号２３に示されている。この態様の重鎖
アミノ酸配列は配列番号２４に示されている。幾つかの態様においては、該ＣＤ７９ｂ−
ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子は、配列番号２３に実質的に類似している、例
えば、配列番号２３に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なく
とも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９
０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％
のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。幾つかの態様においては、該Ｃ
Ｄ７９ｂ−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子は、配列番号２４に実質的に類似し
ている、例えば、配列番号２４に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、ある
いは少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、
８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％ま
たは９９％のアミノ酸配列同一性を有する、反応性リジン残基を含む重鎖アミノ酸配列を
含む。
ある態様においては、該ＤＶＤ免疫グロブリン分子は二重特異性であり、ここで、免疫グ
ロブリンの一方のアームは、第１結合標的に対する結合特異性を有する第１可変ドメイン
を含み、第２のアームは、第２結合標的に対する結合特異性を有する第１可変ドメインを
含む。そのような態様は、２つの異なる標的に結合する能力を付与し、それにより、追加
的な機能を付与する。例示的な二重特異性ＤＶＤ免疫グロブリン分子を図６に示す。
ある態様においては、該ＤＶＤ免疫グロブリン分子は二重パラトープ性（ｂｉ−ｐａｒａ
ｔｏｐｉｃ）であり、ここで、免疫グロブリンの一方のアームは、第１結合標的に対する
結合特異性を有する第１可変ドメインを含み、第２のアームは、同じ結合標的に対する且
つ異なる結合性エピトープに対する結合特異性を有する第１可変ドメインを含む。そのよ
うな態様は、２つの異なるが潜在的に幾らか重複している結合性エピトープを含む同じ標
的に結合する能力を付与し、それにより、標的架橋機能を付与して、インターナリゼーシ
ョン後のリソソーム輸送を誘発する。
ある態様においては、免疫グロブリン分子
は、前記の第１および第２可変領域を含む、そして軽鎖上のＣＬドメインならびに重鎖定
常ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３をも含む無傷免疫グロブリン分子である。定常ド
メインは天然もしくは非天然配列またはそのアミノ酸配列変異体を含みうる。ある態様に
おいては、免疫グロブリン分子は免疫グロブリンフラグメントでありうる。免疫グロブリ
ンフラグメントの例には、限定的なものではないが（Ｆａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂお
よびＦｖフラグメントが含まれ、それらの非限定的な例は図６に示されている。
ＤＶＤ免疫グロブリンの製造 本発明のＤＶＤ免疫グロブリンは当技術分野で公知の多数
の技術のいずれか（例えば、ＤＶＤ重鎖および／またはＤＶＤ軽鎖をコードする発現ベク
ターを標準的な技術により宿主細胞内にトランスフェクトする、宿主細胞からの発現）に
より製造されうる。「トランスフェクション」なる語の種々の形態は、原核または真核宿
主細胞内への外因性ＤＮＡの導入に一般的に用いられる多種多様な技術、例えばエレクト
ロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクション
などを含むと意図される。原核または真核宿主細胞のいずれかにおいて本発明のＤＶＤ免
疫グロブリンを発現させることが可能であるが、真核細胞におけるＤＶＤ免疫グロブリン
の発現が好ましく、哺乳類宿主細胞における該発現が最も好ましい。なぜなら、そのよう
な真核細胞（特に哺乳類細胞）は、適切にフォールディングされた免疫学的に活性なＤＶ
Ｄ免疫グロブリンを構築し分泌する可能性が、原核細胞より高いからである。
本発明の組換え免疫グロブリンを発現させるための好ましい哺乳類宿主細胞には、チャイ
ニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｒ．Ｊ．ＫａｕｆｍａｎおよびＰ．Ａ．
Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されているＤ
ＨＦＲ選択マーカーと共に使用される、ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ，（１９８０）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６−４２２０に記載され
ているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ヒト胎児腎（ＨＥＫ）細胞、ＮＳ０骨髄腫細胞、
ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が含まれる。ＤＶＤ免疫グロブリンをコードする組換え発現
ベクターを哺乳類宿主細胞内に導入する場合、該宿主細胞におけるＤＶＤ免疫グロブリン
の発現、またはより好ましくは、宿主細胞が培養される培地内へのＤＶＤ免疫グロブリン
の分泌を可能にするのに十分な期間にわたって、該宿主細胞を培養することにより、ＤＶ
Ｄ免疫グロブリンが産生される。ＤＶＤ免疫グロブリンは、標準的なタンパク質精製法を
用いて培地から回収されうる。
本発明のＤＶＤ免疫グロブリンの組換え発現のための好ましい系においては、ＤＶＤ重鎖
およびＤＶＤ軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターをリン酸カルシウム媒介トラン
スフェクションによりｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。該組換え発現ベクターにおいて
は、ＤＶＤ重鎖および軽鎖遺伝子はそれぞれ、遺伝子の高レベルの転写を駆動するために
ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素に機能的に連結されている。該組
換え発現ベクターはＤＨＦＲ遺伝子をも含有し、これは、メトトレキセート選択／増幅を
用いることにより、該ベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能にする
。選択された形質転換宿主細胞を培養してＤＶＤ重鎖および軽鎖の発現を可能にし、無傷
ＤＶＤ免疫グロブリンを培地から回収する。組換え発現ベクターを製造し、宿主細胞をト
ランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培地からＤＶＤ免疫グロブ
リンを回収するためには、標準的な分子生物学および組織培養技術を用いる。また、本発
明の態様は、本発明のＤＶＤ免疫グロブリンが合成されるまで適切な培地内で本発明の宿
主細胞を培養することにより、本発明のＤＶＤ免疫グロブリンを合成する方法を含む。該
方法は更に、ＤＶＤ免疫グロブリンを培地から単離して、単離された免疫グロブリンを得
ることを含みうる。
該ＤＶＤ免疫グロブリンの特徴は、通常の抗体と同様の方法で製造され精製されうること
である。ＤＶＤ免疫グロブリンの製造は、定常領域のいかなる配列修飾もいかなる種類の
化学修飾も伴うことなく、所望の活性を有する均一な単一主要産物を与えうる。
リンカー 該イムノコンジュゲートの態様はリンカーを含み、これは１以上のリンカー成
分を含みうる。本発明の態様によるリンカーは、カーゴ部分（例えば、薬物部分）をＤＶ
Ｄ−Ｉｇに結合させる働きをし、任意の適切な化学を用いることが可能である。切断性（
切断可能）リンカーおよび非切断性リンカーならびに可逆的リンカーおよび不可逆的リン
カー（これらに限定されるものではない）を含む種々のタイプのリンカー機能が該イムノ
コンジュゲートに含まれうる。
切断性リンカーは、細胞質内の還元、リソソームもしくはエンドソーム内の酸性条件への
曝露、または細胞内の特定の酵素（例えば、プロテアーゼ）による切断のような、標的細
胞内のプロセスに基づいて、薬物部分を遊離させるリンカーである。したがって、切断性
リンカーは、イムノコンジュゲートが標的細胞においてインターナリセーションされプロ
セシングされた後で結合薬物部分がその元の形態で遊離することを可能にする。切断性リ
ンカーには、酵素により結合が切断されうるもの（例えば、ペプチドリンカー）、還元条
件により結合が切断されうるもの（例えば、ジスルフィドリンカー）または酸性条件によ
り結合が切断されうるもの（例えば、ヒドラゾンおよびカルボナート）が含まれるが、こ
れらに限定されるものではない。切断性リンカーの非限定的な例を図７に示す。
非切断性リンカーはイムノコンジュゲートの異化分解を利用して薬物部分を遊離させる。
遊離薬物部分は、一般に、リンカー、およびリンカーが結合していた免疫グロブリンのア
ミノ酸残基を保有する。非切断性リンカーには、ＰＥＧリンカー、炭化水素リンカー、お
よびチオエーテルリンカーが含まれるが、これらに限定されるものではない。非切断性リ
ンカーの非限定的な例を図８に示す。
該イムノコンジュゲートの態様は可逆的および不可逆的リンカーをも含みうる。可逆的リ
ンカーは、適切な試薬を使用して容易に破壊または逆転されうる化学結合を用いる。した
がって、可逆的リンカーの形成後、リンカーは試薬での処理により所望の位置において破
壊可能であり、それにより、リンカーから免疫グロブリン分子を遊離しうる。可逆的リン
カーの非限定的な例を図９に示し、例えば、ジケトン部分を含む。不可逆的リンカーは、
それらの形成後に容易には破壊または逆転され得ない化学結合を用いる。したがって、不
可逆的リンカーの形成後、免疫グロブリン分子は容易には遊離し得ない。不可逆的リンカ
ーの非限定的な例を図１０に示し、例えば、β−ラクタム部分を含む。免疫グロブリンが
可逆的または不可逆的リンカーにコンジュゲート化されるリンカー反応の例を図１３に示
す。
β−ラクタムおよびジケトン部分に加えて、幾つかの態様においては、例えばビニルジケ
トンおよびプロ−ビニルジケトンのような他の部分がコンジュゲート化に用いられうる。
幾つかの態様においては、求電子部分（ハンドル）が単独で又はそのような部分と組合せ
て使用されうる。求電子部分はｈ３８Ｃ２可変ドメインの特有の反応性の単一リジンとの
部位特異的コンジュゲート化に使用可能であり、ｈ３８Ｃ２リジンが薬物部分にコンジュ
ゲート化された後の非特異的コンジュゲート化にも使用可能である。他の部分の非限定的
な例には以下のものが含まれる：６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプ
ロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、
アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボ
ニル（「ＰＡＢ」）、および以下のようなリンカー試薬とのコンジュゲート化から得られ
るもの：リンカー部分４−メルカプトペンタン酸を形成するＮ−スクシンイミジル ４−
（２−ピリジルチオ）ペンタノアート（「ＳＰＰ」）、リンカー部分４−（（２，５−ジ
オキソピロリジン−１−イル）メチル）シクロヘキサンカルボン酸を形成するＮ−スクシ
ンイミジル ４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１ カルボキシラート（「
ＳＭＣＣ」；本明細書においては「ＭＣＣ」とも称される）、リンカー部分４−メルカプ
トブタン酸を形成する２，５−ジオキソピロリジン−１−イル ４−（ピリジン−２−イ
ルジスルファニル）ブタノアート（「ＳＰＤＢ」）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨード
−アセチル）アミノベンゾアート（「ＳＩＡＢ」）、１以上の反復単位としてのエチレン
オキシ−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（「ＥＯ」または「ＰＥＯ」）。更なる情報はＳｉｎｈａら，
Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２，４４９−４５６（２００７）（その開示の全体を参照により
本明細書に組み入れることとする）に記載されている。
幾つかの態様においては、リンカー成分はアミノ酸単位を含みうる。１つのそのような態
様においては、アミノ酸単位はプロテアーゼによるリンカーの切断を可能にし、それによ
り、リソソーム酵素のような細胞内プロテアーゼへの曝露の際にイムノコンジュゲートか
らの薬物の遊離を促進する。例えば、Ｄｏｒｏｎｉｎａら（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８−７８４を参照されたい。アミノ酸単位の非限定的な例には
、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドおよびペンタペプチドが挙げられるが、こ
れらに限定されるものではない。ジペプチドの非限定的な例には、バリン−シトルリン（
ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ
）；フェニルアラニン−リジン（ｆｋまたはｐｈｅ−ｌｙｓ）；またはＮ−メチル−バリ
ン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が含まれる。トリペプチドの非限定的な例には
、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）およびグリシン−グリシン
−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれる。アミノ酸単位は、天然に存在するア
ミノ酸残基、ならびに主要でないアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸類似体、例え
ばシトルリンを含みうる。アミノ酸単位は特定の酵素（例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、
カテプシンＢ、ＣおよびＤ、またはプラスミンプロテアーゼ）による酵素的切断の選択性
に関して設計および最適化されうる。
幾つかの態様においては、リンカーＬは、１つを超える薬物部分を分岐多官能性リンカー
部分を介して免疫グロブリンに共有結合させるための分岐または樹状型リンカーでありう
る（Ｓｕｎら（２００２）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：２２１３−２２１５；Ｓｕｎら（２００３）Ｂｉｏｏ
ｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １１：１７６１−１７６
８）。分岐樹状リンカーの非限定的な例には、２，６−ビス（ヒドロキシメチル）−ｐ−
クレゾールおよび２，４，６−トリス（ヒドロキシメチル）−フェノールデンドリマー単
位が含まれる（ＷＯ ２００４／０１９９３；Ｓｚａｌａｉら（２００３）Ｊ．Ａｍｅｒ
．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５：１５６８８−１５６８９；Ｓｈａｍｉｓら（２００４）Ｊ
．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２６：１７２６−１７３１；Ａｍｉｒら（２００３）
Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４２：４４９４−４４９９）。分岐リンカーは免
疫グロブリンに対する薬物のモル比、すなわち、ローディング（これは、ＡＤＣの効力に
関連している）を増加させうる。したがって、例えば、免疫グロブリンがコンジュゲート
化のための反応性アミノ酸残基を１つだけ含有する場合、分岐リンカーを介して多数の薬
物部分を結合させることが可能である。
ストレッチャー、スペーサーおよびアミノ酸単位を含むリンカー成分は当技術分野で公知
の方法、例えば
、米国特許公開第２００５／０２３８６４９ Ａ１号（その全体を参照により本明細書に
組み入れることとする）に記載されている方法により合成されうる。
カーゴ部分 本発明の態様は、前記のとおりリンカーを介して１以上のカーゴ部分にコン
ジュゲート化された免疫グロブリン分子を含む。カーゴ部分には、生物学的に活性な部分
、例えば薬物部分および発現修飾部分、ならびに非生物学的に活性な部分、例えば検出可
能部分（例えば、検出可能な標識）が広く含まれるが、これらに限定されるものではない
。これらの部分のそれぞれは本明細書に更に詳細に記載されている。
薬物部分の非限定的な例には、標的細胞を死滅させうる又は標的細胞の増殖を阻止しうる
細胞毒性剤および細胞増殖抑制剤が含まれる。幾つかの態様においては、薬物部分には、
毒素、化学療法剤、抗生物質、放射性同位体、キレート化放射性同位体および核酸分解酵
素が含まれる。
幾つかの態様においては、薬物部分は、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、ドロ
スタチン（ｄｏｌｏｓｔａｔｉｎ）、セマドチン（ｃｅｍａｄｏｔｉｎ）、ＭＭＡＦ、Ｍ
ＭＡＥ、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）（限定的なものではないがＤＭ
１、ＤＭ３およびＤＭ４を含む）、ピロロベンゾジアゼピン（限定的なものではないが単
量体および二量体ＰＢＤを含むＰＢＤ）、エンジイン（限定的なものではないがカリケア
マイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）およびチアンシマイシン（ｔｉａｎｃｉｍｙｃ
ｉｎ）を含む）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）（限定的なものではない
がＳＮ−３８を含む）、およびドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（限定的なも
のではないがＭＭＤＸまたはその生物活性化産物、例えばＰＮＵ−１５９６８２を含む）
からなる群から選択される。
ある態様においては、本発明のイムノコンジュゲートの薬物部分は、Ｖ−ＡＴＰアーゼイ
ンヒビター、アポトーシス促進物質、Ｂｃｌ２インヒビター、ＭＣＬ１インヒビター、Ｈ
ＳＰ９０インヒビター、ＩＡＰインヒビター、ｍＴｏｒインヒビター、微小管安定化物質
、微小管不安定化物質、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、ドラスタチン（ｄｏ
ｌａｓｔａｔｉｎ）、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、ＭｅｔＡＰ（メ
チオニンアミノペプチダーゼ）、タンパク質ＣＲＭ１の核外輸送のインヒビター、ＤＰＰ
ＩＶインヒビター、プロテアソームインヒビター、ミトコンドリア内のホスホリル転移反
応のインヒビター、タンパク質合成インヒビター、キナーゼインヒビター、ＣＤＫ２イン
ヒビター、ＣＤＫ９インヒビター、キネシンインヒビター、ＨＤＡＣインヒビター、ＤＮ
Ａ損傷物質、ＤＮＡアルキル化物質、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ副溝結合物質お
よびＤＨＦＲインヒビターからなる群から選択される。
更に、該免疫グロブリン（またはその結合性フラグメント）は、与えられた生物学的応答
を修飾する薬物部分にコンジュゲート化されうる。薬物部分は、古典的な化学療法剤に限
定されるものと解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有
するタンパク質、ペプチドまたはポリペプチドでありうる。そのようなタンパク質には、
例えば毒素、例えばアブリン（ａｂｒｉｎ）、リシンＡ、シュードモナス外毒素、コレラ
毒素またはジフテリア毒素、タンパク質、例えば腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、
β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲンアク
チベーター、サイトカイン、アポトーシス物質、抗血管新生剤、または生物学的応答調節
物質、例えばリンホカインが含まれうる。
幾つかの態様においては、薬物部分は細胞毒、薬物（例えば、免疫抑制剤）または放射性
毒素でありうる。細胞毒の例には、タキサン（ｔａｘａｎｅ）、ＤＮＡアルキル化物質（
例えば、ＣＣ−１０６５類似体）、アントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ）
、チューブリシン（ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ）類似体、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍ
ｙｃｉｎ）類似体、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）Ｅ、オーリスタチンＦ、メ
イタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、および反応性ポリエチレングリコール部
分を含む細胞毒物質、タキソン（ｔａｘｏｎ）、サイトカラシン（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓ
ｉｎ）Ｂ、グラミシジン（ｇｒａｍｉｃｉｄｉｎ）Ｄ、臭化エチジウム、エメチン（ｅｍ
ｅｔｉｎｅ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄ
ｅ）、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ
）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎ）、
ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉ
ｎ）、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ
）、ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙ
ｃｉｎ）Ｄ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン（ｐｒｏｃ
ａｉｎｅ）、テトラカイン（ｔｅｔｒａｃａｉｎｅ）、リドカイン（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ
）、プロプラノロール（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）およびピューロマイシン（ｐｕｒｏｍ
ｙｃｉｎ）ならびにそれらの類似体またはホモログが含まれるが、これらに限定されるも
のではない。薬物部分にはまた、例えば、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキセート（ｍ
ｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、６−メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、
６−チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、
５−フルオロウラシルデカルバジン（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ｄｅｃａｒｂａｚｉｎ
ｅ））、アブレーション（ａｂｌａｔｉｎｇ）物質、例えばメクロレタミン（ｍｅｃｈｌ
ｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ） クロラムブシル（ｃｈｌｏｒ
ａｍｂｕｃｉｌ）、メイファラン（ｍｅｉｐｈａｌａｎ）、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓ
ｔｉｎｅ）（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）（ＣＣＮＵ）、シクロ
ホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ
）、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ）、マ
イトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）Ｃ、およびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（
ＤＤＰ）シスプラチン、アントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ）（例えば、
ダウノルビシン（旧称ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダ
クチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）（旧称アクチノマイシン）、ブレオマイシ
ン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）およびアントラ
マイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（ＡＭＣ））、および抗有糸分裂物質（例えば、ビ
ンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）およびビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎ
ｅ））が含まれうる。例えば、米国特許公開第２００９０３０４７２１号（その全体を参
照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。
本発明の抗体、抗体フラグメント（抗原結合性フラグメント）または機能的等価体にコン
ジュゲート化されうる細胞毒の他の非限定的な例には、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａ
ｒｍｙｃｉｎ）、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、メイタンシン（ｍ
ａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびオーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）ならびにそれらの
誘導体が含まれる。
本発明の免疫グロブリンまたはその結合性フラグメントを放射性同位体またはキレート化
放射性同位体にコンジュゲート化させて、放射性イムノコンジュゲートと称される細胞毒
性放射性医薬品を得ることが可能である。診断用または治療用の抗体にコンジュゲート化
されうる放射性同位体の例には、ヨウ素１３１、インジウム１１１、イットリウム９０、
ルテチウム１７７、ビスマス２１３およびアスタチン２１１が含まれるが、これらに限定
されるものではない。放射性イムノコンジュゲートの製造方法は当技術分野において確立
されている。放射性イムノコンジュゲートの具体例、例えばＺｅｖａｌｉｎ（商標）（Ｄ
ＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびＢｅｘｘａｒ（商標）（Ｃｏｒｉｘａ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が商業的に入手可能であり、本発明の抗体を使用して
放射性イムノコンジュゲートを製造するために類似方法が用いられうる。ある態様におい
ては、大環状キレーターは１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ
’’，Ｎ’’’−四酢酸（ＤＯＴＡ）であり、これはリンカー分子を介して免疫グロブリ
ンに結合されうる。
幾つかの態様においては、薬物部分は、前記のとおり、単一薬物単位を含む。他の態様に
おいては、薬物部分は複数の同一薬物単位、例えば２、３、４、５、６、７、８、９また
は１０個の薬物単位を同一薬物部分上に含む。ある態様においては、薬物部分は２つの異
なる薬物単位を同一薬物部分上に含む。例えば、幾つかの態様においては、単一薬物部分
はＭＭＡＦ薬物単位およびＰＢＤ単量体薬物単位の両方を含みうる。更に、ある態様にお
いては、該イムノコンジュゲートは、該イムノコンジュゲートの第１アームにコンジュゲ
ート化された第１薬物部分と、該イムノコンジュゲートの第２アームにコンジュゲート化
された第２薬物部分とを含みうる。したがって、任意の種々の組合せの薬物部分がリンカ
ーを介して該ＤＶＤ−Ｉｇにコンジュゲート化されうる。薬物部分の非限定的な例を図１
４に示す。
発現修飾部分には、非タンパク質コード化ＲＮＡ（「ｎｐｃＲＮＡ」）が含まれるが、こ
れに限定されるものではない。１つの態様においては、ｎｐｃＲＮＡには以下のものが含
まれるが、それらに限定されるものではない：マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮ
Ａ前駆体、小型干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、小型ＲＮＡおよびそれをコードする前駆体、
ヘテロクロマチンｓｉＲＮＡ（ｈｃ−ｓｉＲＮＡ）、Ｐｉｗｉ干渉ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）
、ヘアピン二本鎖ＲＮＡ（ヘアピンｄｓＲＮＡ）、トランス作用性ｓｉＲＮＡ（ｔａ−ｓ
ｉＲＮＡ）、天然に存在するアンチセンスｓｉＲＮＡ（ｎａｔ−ｓｉＲＮＡ）、トレーサ
ーＲＮＡ（ｔｃＲＮＡ）、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、および単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲ
ＮＡ）。１つの態様においては、ｓｉＲＮＡは、約２０〜約２５塩基対、例えば約２０〜
約２４塩基対、例えば約２１〜約２５塩基対、または約２２〜約２４塩基対の範囲の長さ
を含む。１つの態様においては、小型ＲＮＡは約２２〜約２６塩基対、例えば約２２〜約
２５塩基対、例えば約２３〜約２６塩基対、または約２４〜約２５塩基対の範囲の長さを
含む。
ｓｉＲＮＡ技術の一般的な説明および総説は、Ｒｅｓｎｉｅｒら，“Ａ ｒｅｖｉｅｗ
ｏｆ ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｓｉＲＮＡ ｎａｎｏｍｅｄｉｃ
ｉｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ”，Ｂｉｏｍａｔｅ
ｒｉａｌｓ ３４（２０１３）６４２９−４３（その全体を参照により本明細書に組み入
れることとする）において見出されうる。
ｓｉＲＮＡ技術の一般的な説明および総説は、Ｓｏｎｇら，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｅｄ
ｉａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒ
ｉｎｇ ＲＮＡｓ ｖｉａ ｃｅｌｌ−ｓｕｒｆａｃｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”，Ｎａｔ
ｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３，７０９−７１７（２００５）（その全体を
参照により本明細書に組み入れることとする）においても見出されうる。
検出可能な部分には、直接的に検出される標識または部分（例えば、蛍光、発色、電子密
度、化学発光および放射性標識）、ならびに例えば酵素反応または分子相互作用を介して
間接的に検出される酵素またはリガンドのような部分が含まれるが、これらに限定される
ものではない。
典型的な標識には以下
のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、
１２５Ｉ、３Ｈおよび１３３Ｉ、発蛍光団、例えば希土類キレートまたはフルオレセイン
およびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフ
ェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３
７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ホースラディッシ
ュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グル
コアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクト
ースオキシダーゼおよびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、複素環オキシダーゼ
、例えばウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼ（ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼま
たはミクロペルオキシダーゼのような色素前駆体を酸化するために過酸化水素を使用する
酵素と共役したもの）、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安
定フリーラジカルなど。
イムノコンジュゲート 本発明の態様は、ＤＶＤ−Ｉｇがリンカーを介して１以上の薬物
部分にコンジュゲート化されているイムノコンジュゲートを含む。幾つかの態様において
は、該イムノコンジュゲートは一般に式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎにより示され、ここで、Ｉｇ
は二重可変ドメイン免疫グロブリン分子であり、Ｌはリンカーであり、Ｄは薬物部分であ
り、ｎは１〜１２の整数、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１か
ら選択される。１つの態様においては、ｎは１または２である。
ある態様においては、Ｉｇの第２可変ドメインは反応性リジン残基を含み、イムノコンジ
ュゲートは、制御されたコンジュゲート化反応を用いて製造され、該反応においては、リ
ンカー／薬物部分組成物が裸Ｉｇの各重鎖上の反応性リジンにコンジュゲート化される。
この反応の条件は例えば米国特許第８，２５２，９０２号（その全体を参照により本明細
書に組み入れることとする）に記載されている。簡潔に説明すると、該反応は、１×ＰＢ
Ｓ、２％ ＤＭＳＯの溶液中、室温で行われ、Ｉｇをリンカー／薬物部分組成物と反応さ
せ、それにより、１つのリンカー／薬物部分をＩｇ上の反応性リジン残基のそれぞれに結
合させることにより行われる。その産物は、Ｉｇの各重鎖上の反応性リジン残基にリンカ
ーを介して結合している２つの薬物部分を有するイムノコンジュゲートである。例示的な
反応の概要図を図１５に示す。
ある態様においては、無制御コンジュゲート化技術を用いて、Ｉｇに追加的薬物部分がコ
ンジュゲート化されうる。例えば、ある態様においては、３８Ｃ２可変ドメインの特有の
反応性の単一リジン残基以外のアミノ酸残基が、リンカーを介した薬物部分のコンジュゲ
ート化のための結合点として使用されうる。そのような無制御コンジュゲート化の産物は
、免疫グロブリン分子上の前記の他のアミノ酸残基に結合した１以上の薬物部分を有する
イムノコンジュゲートである。そのような追加的コンジュゲート化は、例えば、第２可変
ドメインにおける特有の反応性の単一リジン以外の免疫グロブリン分子上のリジン残基、
または免疫グロブリン分子上の標準的な若しくは操作されたシステイン残基、または免疫
グロブリン分子上の１以上の操作されたセレノシステイン残基とリンカー／薬物部分組成
物を反応させることにより達成されうる。そのような無制御コンジュゲート化の産物は、
リンカー／薬物部分組成物と反応させるのに利用可能なアミノ酸残基の数に応じて、抗体
当たり薬物部分約１〜約２０個の範囲の平均薬物部分数を有するイムノコンジュゲートで
ある。ある態様においては、無制御コンジュゲート化アプローチを用いて得られる免疫グ
ロブリン分子当たりの薬物部分の平均数は免疫グロブリン当たり薬物部分約１〜約８、例
えば、２、３、４、５、６または７個である。
１つの態様においては、イムノコンジュゲートは、不可逆的リンカーを介して反応性リジ
ン残基のそれぞれにコンジュゲート化されたＭＭＡＦ薬物部分を有するＨＥＲ２−ｈ３８
Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子を含む。１つの態様においては、イムノコンジュゲー
トは、不可逆的リンカーを介して反応性リジン残基のそれぞれにコンジュゲート化された
ＭＭＡＦ薬物部分を有するＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子を含む。
１つの態様においては、イムノコンジュゲートは、不可逆的リンカーを介して反応性リジ
ン残基のそれぞれにコンジュゲート化されたＭＭＡＦ薬物部分を有するＩＭＧＮ−８５３
ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子を含む。１つの態様においては
、イムノコンジュゲートは、不可逆的リンカーを介して反応性リジン残基のそれぞれにコ
ンジュゲート化されたＭＭＡＦ薬物部分を有するＩＭＧＮ−８５３ ＦＯＬＲ１−ｈ３８
Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子を含む。
１つの態様においては、イムノコンジュゲートは、不可逆的リンカーを介して反応性リジ
ン残基のそれぞれにコンジュゲート化されたＭＭＡＦ薬物部分を有するファーレツズマブ
（ｆａｒｌｅｔｕｚｕｍａｂ）ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子を
含む。１つの態様においては、イムノコンジュゲートは、不可逆的リンカーを介して反応
性リジン残基のそれぞれにコンジュゲート化されたＭＭＡＦ薬物部分を有するファーレツ
ズマブＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子を含む。
１つの態様においては、イムノコンジュゲートは、不可逆的リンカーを介して反応性リジ
ン残基のそれぞれにコンジュゲート化されたＭＭＡＦ薬物部分を有するＣＤ１３８−ｈ３
８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン分子を含む。１つの態様においては、イムノコンジュゲ
ートは、不可逆的リンカーを介して反応性リジン残基のそれぞれにコンジュゲート化され
たＭＭＡＦ薬物部分を有するＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン分子を含
む。
イムノコンジュゲートの用途 イムノコンジュゲートは広範な予防、治療および診断の用
途および使用方法を有しうる。それらには、特定の腫瘍抗原を発現する細胞を標的化し死
滅させることによる、種々の癌および他の疾患の治療が含まれるが、これらに限定される
ものではない。イムノコンジュゲートは任意の種々の癌の治療に広範に使用されうる。任
意の型の腫瘍および任意の型の腫瘍関連抗原が該イムノコンジュゲートにより標的化され
うると予想される。癌の型の例には、血液癌、癌腫、肉腫、黒色腫および中枢神経系癌が
含まれるが、これらに限定されるものではない。
該イムノコンジュゲートで治療されうる血液癌の非限定的な例には、白血病、急性骨髄性
白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、リンパ腫
、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫および骨髄異形成症候群が含まれる。
該イムノコンジュゲートで治療されうる癌腫の非限定的な例には、皮膚癌、頭頸部、甲状
腺、肺、鼻咽頭、結腸直腸、肝臓、膀胱、卵巣、子宮頚部、子宮内膜、前立腺、胃、食道
、膵臓、腎臓および乳癌が含まれる。
該イムノコンジュゲートで治療されうる肉腫の非限定的な例には、血管肉腫、軟骨肉腫、
ユーイング肉腫、線維肉腫、胃腸間質腫瘍、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍
、骨肉腫、多形性肉腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫および滑膜肉腫が含まれる。
該イムノコンジュゲートで治療されうる中枢神経系癌の非限定的な例には、神経膠腫、髄
膜腫および神経腫が含まれる。
該イムノコンジュゲートで治療されうる他の癌の非限定的な例には、黒色腫が含まれる。
幾つかの場合には、該イムノコンジュゲートの使用方法は、個々の癌を治療するために１
以上の追加的療法と組合せて、前記のとおりにイムノコンジュゲートを対象に投与するこ
とを含む。したがって、該イムノコンジュゲートは、個々の癌を治療するために単独で使
用されることが可能であり、あるいは、他の薬物、例えば抗腫瘍剤での通常の治療と組合
せて又はそれを補助するものとして使用されうる。イムノコンジュゲートは、一般に、任
意の抗腫瘍剤、例えば通常の及び／又は実験的な化学療法剤、放射線治療などと組合せて
使用されうる。
例えば、幾つかの態様においては、追加的療法には、抗体、抗腫瘍剤、細胞毒性剤、抗血
管新生剤または免疫抑制剤が含まれうる。追加的治療剤の非限定的な例には、シスプラチ
ン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、オキサリプラ
チン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）
、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、クロラムブシル（ｃｈｌ
ｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ドキソルビシン（ｄ
ｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、バルルビシン
（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、エピルビシン（ｅ
ｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ブレオマイシン
（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（
ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、イマチニブ（ｉｍａ
ｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉ
ｂ）、イブルチニブ（ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ）、イデラリシブ（ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ）、
レナリドミド（ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ
）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎ
ｅ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）お
よびドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）が含まれる。
イムノコンジュゲートの医薬組成物 治療における使用のために、イムノコンジュゲート
は医薬組成物へと製剤化されうる。本発明の医薬組成物は当技術分野で公知の種々の方法
により投与されうる。当業者により理解されるとおり、投与の経路および／または方法は
標的疾患または状態、および所望の結果に応じて変動するであろう。ある投与経路により
本発明の化合物を投与するためには、該化合物を、その不活性化を防ぐための物質で被覆
し、または該物質と共に投与することが必要でありうる。例えば、化合物は適切な担体、
例えばリポソームまたは希釈剤中で、対象に投与されうる。医薬上許容される希釈剤には
、生理食塩水および水性緩衝溶液が含まれる。医薬担体には、無菌水溶液または分散液が
含まれ、また、無菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が含まれる。医薬
上活性な物質のためのそのような媒体および物質の使用は当技術分野において公知である
。
組成物は補助剤、例えば保存剤、湿潤剤、乳化剤および／または分散剤をも含有しうる。
微生物の存在の予防は、滅菌操作により、ならびに種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例え
ばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの配合により保証されうる
。等張化剤、例えば糖、塩化ナトリウムなどを組成物中に含有させることも望ましいこと
がある。更に、吸収を遅らせる物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチ
ンの配合により、注射可能な医薬形態の持続的吸収がもたらされうる。
本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、患者に対する毒性を伴うこと
なく個々の患者、組成物および投与方法に関する所望の治療応答を達成するのに有効な有
効成分の量が得られるように変動しうる。選択される投与量レベルは、種々の薬物動態学
的要因、例えば、使用される本発明の個々の組成物の活性、投与経路、使用される個々の
化合物の排泄速度、治療の持続期間、使用される個々の組成物と組合せて使用される他の
薬物、化合物および／または物質、治療される患
者の年齢、性別、体重、状態、全身健康状態および病歴、ならびに医学分野でよく知られ
た同様の要因に左右されるであろう。
組成物は無菌でなければならず、また、組成物がシリンジにより運搬可能となる程度に流
動性でなければならない。水に加えて、担体は、好ましくは、等張性緩衝食塩水である。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは二重可変ドメイン免疫グロブリン分子またはその抗原結合性フラグメントであり、
ここで、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子は、結合標的に結合する第１可変ドメイン
と、反応性残基を含む第２可変ドメインとを含み、Ｌは、Ｉｇの第２可変ドメインの反応
性残基に共有結合しているリンカーであり、Ｄは薬物部分であり、ｎは１〜１２の整数、
例えば１〜１１、２〜１２、３〜１０、４〜９、５〜８、６〜７、１〜３、４〜６、７〜
９、または１０〜１２から選択される。幾つかの態様においては、ｎは１、２、３、４、
５、６、７、８、９、１０、１１または１２である。本発明の更なる態様は、式Ｉｇ−（
Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、Ｉｇは二重可変ドメイン免疫
グロブリン分子またはその抗原結合性フラグメントであり、ここで、二重可変ドメイン免
疫グロブリン分子は、結合標的に結合する第１可変ドメインと、反応性リジン残基を含む
第２可変ドメインとを含み、Ｌは、Ｉｇの第２可変ドメインの反応性リジン残基に共有結
合しているリンカーであり、Ｄは薬物部分であり、ｎは１または２である。幾つかの態様
においては、Ｉｇの第１可変ドメインは第２可変ドメインよりもＮ末端に近くに配置され
る。幾つかの態様においては、Ｉｇは二重特異性免疫グロブリン分子でありうる。幾つか
の態様においては、Ｄは２以上の異なる薬物部分を含む。幾つかの態様においては、抗原
結合性フラグメントはＩｇの第１および第２可変ドメインを含み、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ
（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖから選択される。幾つかの態様においては、Ｉｇはキ
メラ免疫グロブリン配列を含む。幾つかの態様においては、Ｉｇはヒト化免疫グロブリン
配列を含む。幾つかの態様においては、Ｉｇはヒト免疫グロブリン配列を含む。幾つかの
態様においては、Ｉｇの第２可変ドメインは配列番号３のアミノ酸配列を含む。幾つかの
態様においては、Ｉｇの第２可変ドメインは配列番号４のアミノ酸配列を含む。
幾つかの態様においては、結合標的は腫瘍細胞表面抗原である。幾つかの態様においては
、腫瘍細胞表面抗原は、ＨＥＲ２、ＦＯＬＲ１およびＣＤ１３８から選択される。幾つか
の態様においては、Ｉｇの第１可変ドメインはＨＥＲ２に結合する。幾つかの態様におい
ては、Ｉｇの第１可変ドメインはＦＯＬＲ１に結合する。幾つかの態様においては、Ｉｇ
の第１可変ドメインはＣＤ１３８に結合する。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは二重可変ドメイン免疫グロブリン分子またはその抗原結合性フラグメントであり、
ここで、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子は、結合標的に結合する第１可変ドメイン
と、反応性リジン残基を含む第２可変ドメインとを含み、Ｌは、Ｉｇの第２可変ドメイン
の反応性リジン残基に共有結合しているリンカーであり、Ｄは薬物部分であり、ｎは、１
〜１２から選択される整数である。本発明の更なる態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有す
るイムノコンジュゲートを含み、ここで、Ｉｇは二重可変ドメイン免疫グロブリン分子ま
たはその抗原結合性フラグメントであり、ここで、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子
は、結合標的に結合する第１可変ドメインと、反応性リジン残基を含む第２可変ドメイン
とを含み、Ｌは、Ｉｇの第２可変ドメインの反応性リジン残基に共有結合しているリンカ
ーであり、Ｄは薬物部分であり、ｎは、１または２である。幾つかの態様においては、Ｄ
は細胞毒性剤である。幾つかの態様においては、細胞毒性剤は、毒素、化学療法剤、抗生
物質、放射性同位体、キレート化放射性同位体および核酸分解酵素から選択される。幾つ
かの態様においては、Ｄはオーリスタチン、ドロスタチンまたはセマドチンである。幾つ
かの態様においては、ＤはＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである。幾つかの態様においては、Ｄ
はカンプトテシンである。幾つかの態様においては、カンプトテシンはＳＮ−３８である
。幾つかの態様においては、Ｄはメイタンシノイドである。幾つかの態様においては、メ
イタンシノイドはＤＭ１、ＤＭ３またはＤＭ４である。幾つかの態様においては、Ｄはピ
ロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）である。いくつかの態様においては、Ｄはエンジインで
ある。幾つかの態様においては、Ｄはカリケアマイシンである。幾つかの態様においては
、Ｄはチアンシマイシン（ｔｉａｎｃｉｍｙｃｉｎ）である。幾つかの態様においては、
Ｄはドキソルビシンである。いくつかの態様においては、ＤはＭＭＤＸである。幾つかの
態様においては、ＤはＰＮＵ−１５９６８２である。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは二重可変ドメイン免疫グロブリン分子またはその抗原結合性フラグメントであり、
ここで、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子は、結合標的に結合する第１可変ドメイン
と、反応性残基を含む第２可変ドメインとを含み、Ｌは、Ｉｇの第２可変ドメインの反応
性残基に共有結合しているリンカーであり、Ｄは薬物部分であり、ｎは、１〜１２から選
択される整数である。本発明の更なる態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコン
ジュゲートを含み、ここで、Ｉｇは二重可変ドメイン免疫グロブリン分子またはその抗原
結合性フラグメントであり、ここで、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子は、結合標的
に結合する第１可変ドメインと、反応性リジン残基を含む第２可変ドメインとを含み、Ｌ
は、Ｉｇの第２可変ドメインの反応性リジン残基に共有結合しているリンカーであり、Ｄ
は薬物部分であり、ｎは、１または２である。幾つかの態様においては、Ｌは可逆的リン
カーである。幾つかの態様においては、Ｌは不可逆的リンカーである。幾つかの態様にお
いては、Ｌは切断性リンカーである。幾つかの態様においては、Ｌは非切断性リンカーで
ある。幾つかの態様においては、Ｌは分岐リンカーである。幾つかの態様においては、Ｌ
は直鎖状リンカーである。
本発明の態様は、イムノコンジュゲートの有効量と医薬上許容される担体とを含む、癌の
治療のための医薬組成物を含む。
本発明の態様は、癌を治療するための医薬の製造におけるイムノコンジュゲートの使用を
含む。幾つかの態様においては、癌は、血液癌、癌腫、肉腫、黒色腫または中枢神経系癌
である。幾つかの態様においては、血液癌は白血病、リンパ腫、骨髄腫または骨髄異形成
症候群である。幾つかの態様においては、白血病は急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性
白血病、慢性骨髄性白血病または慢性リンパ球性白血病である。幾つかの態様においては
、リンパ腫はホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫である。幾つかの態様において
は、癌腫は皮膚癌、頭頸部、甲状腺、肺、鼻咽頭、結腸直腸、肝臓、膀胱、卵巣、子宮頚
部、子宮内膜、前立腺、胃、食道、膵臓、腎臓または乳癌である。幾つかの態様において
は、肉腫は血管肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、胃腸間質腫瘍、平滑筋肉腫
、脂肪肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、骨肉腫、多形性肉腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫および
滑膜肉腫である。幾つかの態様においては、中枢神経系の癌は神経膠腫、髄膜腫または神
経腫である。
幾つかの態様においては、医薬は第２治療剤の有効量を更に含む。幾つかの態様において
は、第２治療剤は、抗体、抗腫瘍剤、細胞毒性剤、抗血管新生剤または免疫抑制剤である
。幾つかの態様においては、第２治療剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプ
ラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド、ドキ
ソルビシン、ダウノルビシン、バルルビシン、イダルビシン、エピルビシン、アクチノマ
イシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、ベバシズマブ、イマチニブ
、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イデラリシブ、レナリドミド、ビンクリ
スチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、パクリタキセルおよびドセタキセ
ルからなる群から選択される。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは配列番号５および６のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的はＨＥＲ
２であり、Ｌは、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーで
あり、ＤはＭＭＡＦであり、ｎは２である。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは配列番号７および８のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的はＨＥＲ
２であり、Ｌは、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーで
あり、ＤはＭＭＡＦであり、ｎは２である。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは配列番号９および１０のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的はＦＯ
ＬＲ１であり、Ｌは、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカ
ーであり、ＤはＭＭＡＦであり、ｎは２である。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは配列番号１１および１２のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的はＦ
ＯＬＲ１であり、Ｌは、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リン
カーであり、ＤはＭＭＡＦであり、ｎは２である。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは配列番号１３および１４のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的はＦ
ＯＬＲ１であり、Ｌは、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リン
カーであり、ＤはＭＭＡＦであり、ｎは２である。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは配列番号１５および１６のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的はＦ
ＯＬＲ１であり、Ｌは、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リン
カーであり、ＤはＭＭＡＦであり、ｎは２である。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは配列番号１７および１８のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的はＣ
Ｄ１３８であり、Ｌは、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リン
カーであり、ＤはＭＭＡＦであり、ｎは２である。
本発明の態様は、式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートを含み、ここで、
Ｉｇは配列番号１９および２０のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的はＣ
Ｄ１３８であり、Ｌは、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リン
カーであり、ＤはＭＭＡＦであり、ｎは２である。
幾つかの態様においては、免疫グロブリンは２つの同一軽鎖および２つの同一重鎖から構
成される。１つの態様においては、免疫グロブリン軽鎖はカッパ軽鎖を含む。１つの態様
においては、免疫グロブリン軽鎖はラムダ軽鎖を含む。１つの態様においては、免疫グロ
ブリンは、α重鎖を有するＩｇＡ免疫グロブリンである。１つの態様においては、免疫グ
ロブリンはＩｇＡ１免疫グロブリンである。１つの態様においては、免疫グロブリンはＩ
ｇＡ２免疫グロブリンである。１つの態様においては、免疫グロブリンは、δ重鎖を有す
るＩｇＤ免疫グロブリンである。１つの態様
においては、免疫グロブリンは、ε重鎖を有するＩｇＥ免疫グロブリンである。１つの態
様においては、免疫グロブリンは、γ重鎖を有するＩｇＧ免疫グロブリンである。１つの
態様においては、免疫グロブリンはＩｇＧ１免疫グロブリンである。１つの態様において
は、免疫グロブリンはＩｇＧ２免疫グロブリンである。１つの態様においては、免疫グロ
ブリンはＩｇＧ３免疫グロブリンである。１つの態様においては、免疫グロブリンはＩｇ
Ｇ４免疫グロブリンである。１つの態様においては、免疫グロブリンは、μ重鎖を有する
ＩｇＭ免疫グロブリンである。
１つの態様においては、免疫グロブリンは少なくとも１つの可変領域を含む。１つの態様
においては、免疫グロブリンは無傷免疫グロブリンである。１つの態様においては、免疫
グロブリンは裸免疫グロブリンである。１つの態様においては、免疫グロブリンは免疫グ
ロブリンフラグメントである。１つの態様においては、免疫グロブリンフラグメントは、
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖおよびｓｃＦｖからなる群から選択される。
幾つかの態様においては、免疫グロブリンは二重可変ドメイン免疫グロブリンである。幾
つかの態様においては、免疫グロブリンは天然ポリペプチド配列を含む。幾つかの態様に
おいては、免疫グロブリンは非天然ポリペプチド配列を含む。幾つかの態様においては、
免疫グロブリンはポリペプチドを含む。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはモノ
クローナル免疫グロブリンである。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはキメラ免
疫グロブリンを含む。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはヒト化免疫グロブリン
を含む。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはヒト免疫グロブリンを含む。幾つか
の態様においては、免疫グロブリンは、単離された免疫グロブリンである。幾つかの態様
においては、免疫グロブリンは、２以上のポリペプチド配列の融合体であるポリペプチド
配列を含む。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはコンジュゲート化免疫グロブリ
ンである。
幾つかの態様においては、免疫グロブリンは結合標的に特異的に結合し、または結合標的
に特異的である。幾つかの態様においては、免疫グロブリンは結合アフィニティを有する
。幾つかの態様においては、免疫グロブリンはＫｄ値を有する。幾つかの態様においては
、免疫グロブリンはエピトープに結合する。幾つかの態様においては、免疫グロブリンは
標的または結合標的に結合する。幾つかの態様においては、結合標的は、免疫グロブリン
が結合する結合領域を含む。幾つかの態様においては、免疫グロブリンは抗原に結合する
。幾つかの態様においては、免疫グロブリンは抗原結合部位または抗原結合領域を含む。
幾つかの態様においては、免疫グロブリンは宿主細胞内で製造される。幾つかの態様にお
いては、免疫グロブリンは細胞系または細胞培養により製造される。幾つかの態様におい
ては、免疫グロブリンは、別の核酸配列に機能的に連結された核酸配列から製造される。
幾つかの態様においては、免疫グロブリンアミノ酸配列は、別のアミノ酸配列に対して或
る比率のアミノ酸配列同一性を有する。
幾つかの態様においては、イムノコンジュゲートは対象または哺乳動物の治療に使用され
る。
図１は、２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む二重可変ドメイン免疫グロブリン分子の概要図である。 図２は、各重鎖上の反応性リジン残基に結合した薬物部分を有する二重可変ドメインイムノコンジュゲートの概要図である。 図３はＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１およびＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２イムノコンジュゲートの概略図である。 図４はＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１およびＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２イムノコンジュゲートの概要図である。 図５はＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１およびＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２イムノコンジュゲートの概要図である。 図６は二重可変ドメインイムノコンジュゲート、その種々の結合フラグメントおよび二重特異性二重可変ドメインイムノコンジュゲートの概要図である。 図７は切断性リンカーの種々の非限定的な例を示す。 図８は非切断性リンカーの種々の非限定的な例を示す。 図９は可逆的リンカーの種々の非限定的な例を示す。 図１０は不可逆的リンカーの種々の非限定的な例を示す。 図１１はβ−ラクタム−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−ＭＭＡＦの化学合成のための反応プロセスを示す。 図１２はβ−ラクタム−ＰＥＧリンカー−ＭＭＡＦの化学合成のための反応プロセスを示す。 図１３は、可逆的リンカーおよび不可逆的リンカーを使用する免疫グロブリンとのリンカー反応の種々の非限定的な例を示す。 図１４は薬物部分の種々の非限定的な例を示す。 図１５は、第２可変ドメイン（ｈ３８Ｃ２可変ドメイン）内の反応性リジン残基においてコンジュゲート化が生じる免疫グロブリンコンジュゲート化反応の概要図である。 図１６は、免疫グロブリン分子へのコンジュゲート化（結合）に使用されるβ−ラクタム−炭化水素リンカー−ＭＭＡＦ組成物を製造するために用いられうる固相合成反応の非限定的な例を示す。 図１７は、ＨＥＲ２＋細胞への抗ＨＥＲ２二重可変ドメインイムノコンジュゲートの特異的結合を示す結合データを示す。 図１８は、抗ＨＥＲ２二重可変ドメインイムノコンジュゲートによる殺細胞を示す、第１の細胞毒性アッセイからのデータを示す２つのグラフを示す。 図１９は、抗ＨＥＲ２二重可変ドメインイムノコンジュゲートによる殺細胞を示す、第２の細胞毒性アッセイからのデータを示す２つのグラフを示す。 図２０は、抗ＨＥＲ２二重可変ドメインイムノコンジュゲートによる殺細胞を示す、第３の細胞毒性アッセイからのデータを示す２つのグラフを示す。 図２１はＤＶＤ１およびＤＶＤ２の非限定的な構造の例、ならびに予想サイズおよび純度を確認するためのクーマシー染色を示す。 図２２はＨＥＲ２発現性ＳＫＢＲ３細胞への選択的結合およびＨＥＲ２陰性ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞への非結合を示すフローサイトメトリーデータおよび概要図を示す。 図２３は、検出用のストレプトアビジンＰＥを使用した場合の、ＤＶＤ１およびＤＶＤ２のβ−ラクタムビオチン標識ならびにＳＫＢＲ３細胞（ＨＥＲ２＋）への結合を示すフローサイトメトリーデータならびに概要図を示す。ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞（ＨＥＲ２−）に関しては、検出は観察されなかった。 図２４は、ＳＫＢＲ３（ＨＥＲ２＋）に対する抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１ ＡＤＣの細胞毒性およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８（ＨＥＲ２−）細胞に対する非細胞毒性を示すグラフデータを示す。 図２５は、ＩＭＧＮ抗ＦＯＬＲ１、ＦＡＲ抗ＦＯＬＲ１および抗ＣＤ１３８ ＤＶＤ ＡＤＣの構造の概要図、ならびに非コンジュゲート化ＤＶＤからのクマシーゲルデータを示す。 図２６は、ＩＧＲＯＶ１（ＦＯＬＲ１＋）細胞に対する抗ＦＯＬＲ１ ＡＤＣの細胞毒性を示すグラフデータを示す。 図２７は、Ｈ９２９（ＣＤ１３８＋）細胞に対する抗ＣＤ１３８ ＡＤＣの細胞毒性を示すグラフデータを示す。 図２８は、ＤＶＤ１、ｈ３８Ｃ２、トラスツズマブおよびＤＶＤ１−ＡＤＣを含む種々の組成物の触媒活性を示すグラフデータを示す。 図２９は、ＳＫＢＲ３、ＢＴ４７４、ＫＰＬ４、ＤＹＴ２およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞に対するＤＶＤ１−ＡＤＣの細胞毒性を示すグラフデータを示す。 図３０は、ＫＰＬ４移植ＮＳＧマウス（１群当たりｎ＝２）のインビボ異種移植モデルにおける用量の関数としての腫瘍体積およびＤＶＤ１−ＡＤＣに関する用量応答を示すグラフデータを示す。 図３１は、ＫＰＬ４移植ＮＳＧマウス（１群あたりｎ＝７または８）のインビボ異種移植片における用量の関数としての腫瘍体積を示すグラフデータを示す。 図３２はＤＶＤ１−Ｆａｂ組成物の非限定的な例の概要図ならびにクーマシーゲルデータ、触媒活性データおよびＫＰＬ４（ＨＥＲ２＋）細胞に対する細胞毒性データを示す。 図３３はＤＶＤ１およびＤＶＤ１−ＡＤＣ重鎖からのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析データを示す。 ＤＶＤ組成物の種々の非限定的な例の概要図を示す。 図３５は、ｈ３８Ｃ２に基づく追加的な二重特異性組成物の触媒活性を示すグラフデータを示す。 図３６は、ｈ３８Ｃ２、ＤＶＤ１、ＤＶＤ２およびトラスツズマブを含む種々の組成物の触媒活性を示すグラフデータを示す。 図３７ＡはＡＤＣの製造のためのβ−ラクタムＭＭＡＦの構造の概要図を示す。図３７Ｂはｈ３８Ｃ２（丸印）のリジンにおける薬物結合部位（星印）の概要図を示す。図３７Ｃは、抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦの触媒活性の完全喪失を示すグラフデータを示し、完全なコンジュゲート化を証明しており、非コンジュゲート化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１は陽性対照として働き、アラニンが突然変異した抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１（オレンジ色）およびトラスツズマブＩｇＧ１（紫色）は陰性対照として働く。 図３８は、ＨＥＲ２＋細胞に対する抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦのインビトロ活性を示すグラフデータを示す。 図３９は、抗ＣＤ１３８ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦおよび抗ＣＤ７９ｂ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦのインビトロ活性を示すグラフデータを示す。 図４０Ａは、還元型非コンジュゲート抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１のエレクトロスプレーイオン化飛行時間（ＥＳＩ−ＴＯＦ）を示すグラフデータを示す。図４０Ｂは、還元型コンジュゲート化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦのエレクトロスプレーイオン化飛行時間（ＥＳＩ−ＴＯＦ）を示すグラフデータを示す。 図４１Ａは、還元型抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１ Ａｌａ突然変異体のアラニン変異体のエレクトロスプレーイオン化飛行時間（ＥＳＩ−ＴＯＦ）を示すグラフデータを示す。図４１Ｂは、還元型抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦ Ａｌａ突然変異体のアラニン突然変異体のエレクトロスプレーイオン化飛行時間（ＥＳＩ−ＴＯＦ）を示すグラフデータを示す。 図４２Ａは、腫瘍体積の関数としての抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦコンジュゲートのインビボ活性を示すグラフデータを示す。図４２Ｂは、抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦコンジュゲートのインビボ活性を示すカプラン−マイヤー生存曲線を示す。 図４３Ａは抗ＣＤ１３８ ＤＶＤ１および抗ＣＤ７９ｂ ＤＶＤ１の両方のクマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。図４３Ｂは、抗ＣＤ１３８ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦおよび抗ＣＤ７９ｂ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦの触媒活性を示すグラフデータを示す。 図４４はβ−ラクタムＭＭＡＦの固相合成スキームを示す。 図４５は、全てのＤＶＤが親ｈ３８Ｃ２ ＩｇＧ１と実質的に同じ触媒活性を有することを示すグラフデータを示す。 図４６は、標的発現細胞に対する全てのＤＶＤの結合を示すフローサイトメトリーデータを示す。
以下の実施例、配列および図面は、本発明の理解を助けるために記載されており、その真
の範囲は添付の特許請求の範囲に記載されている。本発明の精神から逸脱することなく、
記載されている手法に修飾が施されうると理解される。
実施例 実施例１：β−ラクタム−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−ＭＭＡＦの化学合成 図１１におい
て１〜６と表示されている化合物について説明する。３３２ｍｇの化合物１（Ｇｅｒｖａ
ｙ−Ｈａｇｕｅ，Ｊ．ら，ＪＡＣＳ．２０１１，１３３（１０），３２３０−３２３３）
に１０７ｍｇのＮＨＳ（１当量）および３ｍｌの乾燥ＴＨＦを加
える。反応物を０℃に冷却し、ついで０．１４３ｍｌ（１当量）のＤＩＣを加える。反応
物を２４時間にわたって室温に加温し、セライトで濾過し、溶媒を真空中で除去する。３
５０ｍｇ（１当量）のＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ（Ｔｒａｉｌ，Ｐ．Ａ．ら，Ｂｉｏｃｏｎ
ｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２００２，１３，８５５−８６９）を加え、ついで５．６ｍｌ
の乾燥ＤＭＦを加え、反応物を１６時間撹拌する。生成物の形成を１６時間後にＬＣ／Ｍ
Ｓにより確認する。溶媒を真空中で除去し、粗物質をＣＨ２Ｃｌ２でトリチュレートし、
ついで濾過し、ヘキサンで洗浄する。粗褐色固体をカラムクロマトグラフィー（９：１
ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．２）（収率６１％）により精製する。
３１２ｍｇの化合物２、５０５ｍｇのビス−ニトロカルボナート（３当量）、０．１９３
ｍｌのＤＩＰＥＡ（２当量）および７ｍｌの乾燥ＤＭＦを合わせ、１６時間撹拌する。溶
媒を真空中で除去し、粗物質を逆相ＨＰＬＣにより精製する（収率３５％）。
３８ｍｇの化合物３、２２ｍｇの化合物４（Ｂａｒｂａｓ，Ｃ．Ｆ．ら，ＡＣＳ Ｍｅｄ
．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２０１４，５（２），１３３−１３７）、６ｍｇのＣｕＳＯ４
・５Ｈ２Ｏ、０．５ｍｌのＤＭＦおよび０．２５ｍｌのＨ２Ｏを合わせ、３０分間脱気す
る。１２μＬの１Ｍ アスコルビン酸ナトリウムを加え、ついで反応物を１．５時間撹拌
し、ついで逆相ＨＰＬＣにより精製する（収率６０％）。
２．０ｍｇのＭＭＡＦ、４．８ｍｇの化合物５（１．５当量）、０．２ｍｇのＯｘｙｍａ
（０．５当量）、０．７７μｌのＤＩＰＥＡ（１．６当量）および７０μｌの乾燥ＤＭＦ
を火炎乾燥マイクロ波バイアル内で合わせる。７２時間後、追加的な０．２ｍｇのＯｘｙ
ｍａ（０．５当量）および０．４８μｌのＤＩＰＥＡ（１当量）を加える。２４時間後、
反応物を逆相ＨＰＬＣにより精製して１．９ｍｇの化合物６（収率４０％）を得る。
実施例２：β−ラクタム−ＰＥＧリンカー−ＭＭＡＦの化学合成 図１２において１〜５
と表示されている化合物について説明する。３３２ｍｇの化合物１（Ｏｋｏｔｈ，Ｒ．ら
，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１３，９，６０８−６１２）を１．６ｍｌのＭｅＣＮに
溶解する。１７３ｍｇの無水グルタル酸（１当量）を１ｍｌのＭｅＣＮに溶解し、化合物
１に３０分かけて加える。１８時間後、溶媒を真空中で除去する。粗生成物をＣＨ２Ｃｌ
２に溶解し、カラムクロマトグラフィー（９５：５、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ）により精
製する（収率８８％）。
１８ｍｇの化合物２、２２ｍｇの化合物３（Ｂａｒｂａｓ，Ｃ．Ｆ．ら，ＡＣＳ Ｍｅｄ
．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２０１４，５（２），１３３−１３７）、６ｍｇのＣｕＳＯ４
・５Ｈ２Ｏ（０．５当量）、０．２５ｍｌのＤＭＦおよび０．２５ｍｌのＨ２Ｏを合わせ
、３０分間脱気する。ついで１２μＬの１Ｍ アスコルビン酸ナトリウムを加え、反応物
を１．５時間撹拌し、ついで逆相ＨＰＬＣにより精製する（収率４３％）。
３ｍｇの化合物４，７ｍｇの４オングストロームのモレキュラーシーブ、１．５ｍｇのＨ
ＡＴＵ（１当量）、１．５μｌのＤＩＰＥＡ（２当量）および３３μｌの乾燥ＤＭＦを火
炎乾燥バイアル内で合わせる。１時間後、１．４ｍｇのＭＭＡＦを４０μｌの乾燥ＤＭＦ
と共に添加する。１．５時間後、逆相ＨＰＬＣを用いて精製して化合物５（収率８２％）
を得る。
実施例３：β−ラクタム−炭化水素リンカー−ＭＭＡＦの固相化学合成 図４４において
１〜７と表示されている化合物について説明する。４ｍｌの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２および０．
５ｍｌのＤＩＰＥＡに溶解されたＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（１５当量）を、予め膨潤した
クロロトリチル樹脂に加える。該混合物を４時間撹拌し、ついで溶媒を除去し、ＭｅＯＨ
で２０分間撹拌して樹脂１を得る。次に該混合物をＤＭＦ中の２０％ ピペリジンで脱保
護し（２ｍＬ×２０分×２回）、ＤＭＦで洗浄し、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のＦｍｏｃ−
Ｄａｐ−ＯＨ（３当量）、ＨＡＴＵ（３当量）およびＤＩＰＥＡ（１０当量）の新たに調
製された溶液と共に室温で撹拌し（一晩）、ついで排液に付し、ＤＭＦで洗浄して樹脂２
を得る。ついで該混合物をＤＭＦ中の２０％ ピペリジンでＦｍｏｃ脱保護し（２ｍＬ×
２０分×２回）、ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｄｉｌ−ＯＨ（２．５当量）、Ｈ
ＡＴＵ（２．５当量）およびＤＩＰＥＡ（５当量）の新たに調製された溶液と共に室温で
攪拌し（一晩）、ＤＭＦで洗浄して樹脂３を得る。未官能基化樹脂を無水酢酸の溶液（１
０：１０：８０ ｖ／ｖ Ａｃ２Ｏ：ＤＩＥＡ：ＤＭＦ）で室温でキャップ化する（３０
分間）。樹脂３をＤＭＦ中の２０％ ピペリジン（２ｍＬ×２０分×２回）でＦｍｏｃ脱
保護し、ＤＭＦ（４．２ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（６．０当量）、ＨＡＴＵ（
６．０当量）およびＤＩＥＡ（１２当量）の新たに調製された溶液と共に室温で撹拌し（
一晩）、ついでＤＭＦで洗浄する。ついで未官能基化樹脂を無水酢酸の溶液（１０：１０
：８０ ｖ／ｖ Ａｃ２Ｏ：ＤＩＰＥＡ：ＤＭＦ）で室温でキャップ化し（３０分間）、
ＤＭＦで洗浄して樹脂４を得る。樹脂４をＤＭＦ中の２０％ ピペリジンでＦｍｏｃ−脱
保護し（２ｍＬ×２０分×２回）、ＤＭＦ（４．２ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｎ−メチル−Ｖ
ａｌ−ＯＨ（５当量）、ＨＡＴＵ（５当量）、ＤＩＰＥＡ（１０当量）の新たに調製され
た溶液と共に室温で撹拌し（３時間）、ついでＤＭＦで洗浄する。ついで未官能基化樹脂
を無水酢酸の溶液（１０：１０：８０ ｖ／ｖ Ａｃ２Ｏ：ＤＩＰＥＡ：ＤＭＦ）で室温
でキャップ化し（３０分間）、ＤＭＦで洗浄して樹脂５を得る。樹脂５をＤＭＦ中の２０
％ ピペリジンでＦｍｏｃ−脱保護し（２ｍＬ×２０分×２回）、ＤＭＦ（２．５ｍＬ）
中のＦｍｏｃ−カプロン酸（６当量）、ＨＡＴＵ（６当量）およびＤＩＥＡ（１２当量）
の新たに調製された溶液と共に室温で撹拌し（一晩）、ついでＤＭＦで洗浄する。ついで
未官能基化樹脂を無水酢酸の溶液（１０：１０：８０ ｖ／ｖ Ａｃ２Ｏ：ＤＩＰＥＡ：
ＤＭＦ）で室温でキャップ化し（３０分間）、ＤＭＦで洗浄して樹脂６を得る。樹脂６を
ＤＭＦ中の２０％ ピペリジンでＦｍｏｃ−脱保護し（２ｍＬ×２０分×２回）、ＤＭＦ
で洗浄し、ついでＤＭＦ（１．５ｍｌ）中のβ−ラクタムｐｆｐエステル（Ｍａｇａｎｏ
，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，２０１４，１８（１），１４２−１
５１）（３当量）およびＤＩＰＥＡ（３当量）の新たに調製された溶液と共に室温で撹拌
する（１時間）。ついで樹脂をＤＭＦおよびＤＣＭで順次洗浄する。ついで樹脂を希Ａｃ
ＯＨ溶液（１：１：８ ｖ／ｖ ＡｃＯＨ：ＴＦＥ：ＤＣＭ；２．５ｍＬ×３０分×２回
）で処理してペプチド生成物を切断し、真空中で濃縮し、逆相ＨＰＬＣを用いて精製して
化合物７を得る。
実施例４：ＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１およびＤＶＤ２のクローニング、発現および
精製 抗ＨＥＲ２の可変ドメイン配列をｈ３８Ｃ２の可変ドメイン配列に融合させたＤＮ
ＡはｇＢｌｏｃｋｓ Ｇｅｎｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）としてカスタム合成され、またはＰＣＲにより調製される。
異なるペプチドリンカー配列（ＤＶＤ１の場合はＡＳＴＫＧＰ（配列番号１）、またはＤ
ＶＤ２の場合はＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２））を有する２つの形態がそれら
の可変ドメイン配列を分離する。全ての抗体はヒトＩｇＧ１由来の定常ドメインを用いる
。ＤＮＡをＰＣＲにより増幅し、ＮｈｅＩ／ＸｈｏＩ連結によりｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ）内にクローニングする。ＤＮＡ配列決定によりＤＮＡを確認し、トランスフ
ェクションのために全てのプラスミドをＱＩＡＧＥＮ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍａｘｉ Ｋｉ
ｔで精製する。
ヒト胎児腎（ＨＥＫ）２９３細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％（ｖ／ｖ）胎仔ウシ血清（ＦＢ
Ｓ；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と１％（ｖ／ｖ）ペニシリン・ストレプトマ
イシン（Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐ；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とを含有するＤＭ
ＥＭ（ＧｌｕｔａＭＡＸを有するダルベッコ変法イーグル培地；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ）中、加湿５％ ＣＯ２雰囲気下、３７℃で維持する。前記の哺乳類細胞発
現ベクターを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＨ
ＥＫ２９３細胞内に一過性にトランスフェクトする。１２〜１６時間のトランスフェクシ
ョンの後、培地を、ＦＢＳを含有しない新鮮ＤＭＥＭと交換する。トランスフェクション
後の第３日、第６日および第９日に培養上清を集め、０．４５μｍ Ｓｔｅｒｉｃｕｐフ
ィルターユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して濾過する。上清を、ＡＫＴＡｐｕｒ
ｉｆｉｅｒ系（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に接続された１ｍＬの組換えプロテインＡ
カラム（ＨｉＴｒａｐ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にローディングする。カラム平
衡化および洗浄にＰＢＳを使用し、溶出に０．５Ｍ 酢酸（ｐＨ３．０）を使用し、即時
中和に１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）を使用する。中和された溶出液をＰＢＳ中
へとバッファー交換し、３０ｋＤａカットオフ遠心フィルター装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ
）を使用して同時に濃縮する。全ての免疫グロブリンはＳＤＳ−ＰＡＧＥにより９５％を
超える純度であると判定される。
実施例５：ＦＯＬＲ１−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１およびＤＶＤ２のクローニング、発現およ
び精製 抗ＦＯＬＲ１の可変ドメイン配列をｈ３８Ｃ２の可変ドメイン配列に融合させた
ＤＮＡはｇＢｌｏｃｋｓ Ｇｅｎｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮ
Ａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）としてカスタム合成され、またはＰＣＲにより調製され
る。異なるペプチドリンカー配列（ＤＶＤ１の場合はＡＳＴＫＧＰ（配列番号１）、また
はＤＶＤ２の場合はＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２））を有する２つの形態がそ
れらの可変ドメイン配列を分離する。全ての抗体はヒトＩｇＧ１由来の定常ドメインを用
いる。ＤＮＡをＰＣＲにより増幅し、ＮｈｅＩ／ＸｈｏＩ連結によりｐＣＥＰ４（Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎ）内にクローニングする。ＤＮＡ配列決定によりＤＮＡを確認し、トラン
スフェクションのために全てのプラスミドをＱＩＡＧＥＮ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍａｘｉ
Ｋｉｔで精製する。
ヒト胎児腎（ＨＥＫ）２９３細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％（ｖ／ｖ）胎仔ウシ血清（ＦＢ
Ｓ；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と１％（ｖ／ｖ）ペニシリン・ストレプトマ
イシン（Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐ；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とを含有するＤＭ
ＥＭ（ＧｌｕｔａＭＡＸを有するダルベッコ変法イーグル培地；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ）中、加湿５％ ＣＯ２雰囲気下、３７℃で維持する。前記の哺乳類細胞発
現ベクターを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＨ
ＥＫ２９３細胞内に一過性にトランスフェクトする。１２〜１６時間のトランスフェクシ
ョンの後、培地を、ＦＢＳを含有しない新鮮ＤＭＥＭと交換する。トランスフェクション
後の第３日、第６日および第９日に培養上清を集め、０．４５μｍ Ｓｔｅｒｉｃｕｐフ
ィルターユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して濾過する。上清を、ＡＫＴＡｐｕｒ
ｉｆｉｅｒ系（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に接続された１ｍＬの組換えプロテインＡ
カラム（ＨｉＴｒａｐ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にローディングする。カラム平
衡化および洗浄にＰＢＳを使用し、溶出に０．５Ｍ 酢酸（ｐＨ３．０）を使用し、即時
中和に１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）を使用する。中和された溶出液をＰＢＳ中
へとバッファー交換し、
３０ｋＤａカットオフ遠心フィルター装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して同時に濃縮
する。全ての免疫グロブリンはＳＤＳ−ＰＡＧＥにより９５％を超える純度であると判定
される。
実施例６：ＣＤ１３８−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１およびＤＶＤ２のクローニング、発現およ
び精製 抗ＣＤ１３８の可変ドメイン配列をｈ３８Ｃ２の可変ドメイン配列に融合させた
ＤＮＡはｇＢｌｏｃｋｓ Ｇｅｎｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮ
Ａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）としてカスタム合成され、またはＰＣＲにより調製され
る。異なるペプチドリンカー配列（ＤＶＤ１の場合はＡＳＴＫＧＰ（配列番号１）、また
はＤＶＤ２の場合はＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２））を有する２つの形態がそ
れらの可変ドメイン配列を分離する。全ての抗体はヒトＩｇＧ１由来の定常ドメインを用
いる。ＤＮＡをＰＣＲにより増幅し、ＮｈｅＩ／ＸｈｏＩ連結によりｐＣＥＰ４（Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎ）内にクローニングする。ＤＮＡ配列決定によりＤＮＡを確認し、トラン
スフェクションのために全てのプラスミドをＱＩＡＧＥＮ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍａｘｉ
Ｋｉｔで精製する。
ヒト胎児腎（ＨＥＫ）２９３細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％（ｖ／ｖ）胎仔ウシ血清（ＦＢ
Ｓ；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と１％（ｖ／ｖ）ペニシリン・ストレプトマ
イシン（Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐ；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とを含有するＤＭ
ＥＭ（ＧｌｕｔａＭＡＸを有するダルベッコ変法イーグル培地；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ）中、加湿５％ ＣＯ２雰囲気下、３７℃で維持する。前記の哺乳類細胞発
現ベクターを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＨ
ＥＫ２９３細胞内に一過性にトランスフェクトする。１２〜１６時間のトランスフェクシ
ョンの後、培地を、ＦＢＳを含有しない新鮮ＤＭＥＭと交換する。トランスフェクション
後の第３日、第６日および第９日に培養上清を集め、０．４５μｍ Ｓｔｅｒｉｃｕｐフ
ィルターユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して濾過する。上清を、ＡＫＴＡｐｕｒ
ｉｆｉｅｒ系（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に接続された１ｍＬの組換えプロテインＡ
カラム（ＨｉＴｒａｐ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にローディングする。カラム平
衡化および洗浄にＰＢＳを使用し、溶出に０．５Ｍ 酢酸（ｐＨ３．０）を使用し、即時
中和に１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）を使用する。中和された溶出液をＰＢＳ中
へとバッファー交換し、３０ｋＤａカットオフ遠心フィルター装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ
）を使用して同時に濃縮する。全ての免疫グロブリンはＳＤＳ−ＰＡＧＥにより９５％を
超える純度であると判定される。
実施例７：ＤＶＤ免疫グロブリンへのβ−ラクタム−ＭＭＡＦへのコンジュゲート化 ２
７０μｌのＰＢＳ中のｈ３８Ｃ２可変ドメインを含む３００μｇの二重可変ドメイン免疫
グロブリン（それぞれは特有の反応性の単一リジンを有する）に１．２μｌのＤＭＳＯを
加え、１．５μｌ（ＤＭＳＯ中の１０ｍＭストック，１０当量）のβ−ラクタム−ＭＭＡ
Ｆを加え、ボルテックスし、ついで室温で２時間インキュベートする。ＰＢＳで平衡化さ
れたＧ−２５プレパックセファデックスカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に抗体
−薬物コンジュゲート溶液をローディングする。ＰＢＳを使用して抗体−薬物コンジュゲ
ートを溶出する。
実施例８：ＨＥＲ＋およびＨＥＲ−細胞への抗ＨＥＲ２イムノコンジュゲートの結合分析
図１７に示されているとおり、ヒト乳癌細胞系ＳＫ−ＢＲ−３およびＭＤＡ−ＭＢ−４
６８をＡＴＣＣから購入する。両方の細胞系を、１０％ ＦＢＳおよび１％ Ｐｅｎ Ｓ
ｔｒｅｐで補足されたＤＭＥＭ中、加湿５％ ＣＯ２雰囲気中、３７℃で維持する。細胞
を、ＴｒｙｐＬＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して集め、Ｖ字型９６
ウェルマイクロタイタープレートに移し、２００μｌのＦＡＣＳバッファー（ＰＢＳ中の
１％ ＦＢＳ）で洗浄する。１００μｌのＰＢＳ中の１μｇのＤＶＤを各ウェルに加え、
氷上で３０分間インキュベートする。細胞を２００μｌのＦＡＣＳバッファーで洗浄し、
ついで６４７結合ヤギ抗ヒトＦｃｇ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）
（１０μｌ，ＦＡＣバッファー中で１：１００希釈）で氷上で２０分間染色する。該細胞
を２００μｌのＦＡＣＳバッファー（×２）で洗浄し、２００μｌのＦＡＣＳバッファー
に再懸濁させ、蛍光をフローサイトメトリー（ＢＤ Ｆａｃｓ Ｃａｎｔｏ ＩＩ）によ
り測定する。ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ，Ｉｎｃ．）を使用してデ
ータを分析する。
実施例９：抗ＨＥＲ２イムノコンジュゲートによる細胞毒性アッセイ ヒト乳癌細胞系Ｓ
Ｋ−ＢＲ−３およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８を、１０％ ＦＢＳおよび１％ Ｐｅｎ Ｓｔ
ｒｅｐで補足されたＤＭＥＭ中、加湿５％ ＣＯ２雰囲気中、３７℃で維持する。細胞を
、ＴｒｙｐＬＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して集め、処理の２４時
間前に平底９６ウェル組織培養プレート（５０００細胞／ウェル）に移す。１０％ ＦＢ
Ｓおよび１％ Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐで補足されたＤＭＥＭ中で系列希釈液を調製する。元
の細胞培地を除去し、１００μｌの処理溶液を加え（３回重複して実施する）、培養プレ
ートを加湿５％ ＣＯ２雰囲気中、３７℃で７２時間維持する。２０μｌのＣｅｌｌＴｉ
ｔｅｒ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）
を各ウェルに加え、加湿５％ ＣＯ２雰囲気中、３７℃でプレートを現像する。ついで細
胞をイムノコンジュゲートまたは幾つかの対照組成物の１つと接触させる。
図１８に示されているグラフに関しては、ＤＶＤ１は裸ＨＥＲ２−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１
免疫グロブリン（すなわち、リンカー／薬物部分組成物がコンジュゲート化していないも
の）を意味し、ＤＶＤ１ ＡＤＣは、β−ラクタム−炭化水素リンカー−ＭＭＡＦが結合
しているＤＶＤ１免疫グロブリンを意味し、ｔｒａｓｔは裸抗ＨＥＲ２抗体（トラスツズ
マブ）を意味し、ｔｒａｓｔ ｐｒｏは、β−ラクタム−炭化水素リンカー−ＭＭＡＦ組
成物と混合された裸抗ＨＥＲ２抗体を意味し、ｈ３８Ｃ２ ｐｒｏは、β−ラクタム−炭
化水素リンカー−ＭＭＡＦ組成物にコンジュゲート化されているが、ＨＥＲ２可変領域結
合ドメインを含まないｈ３８Ｃ２抗体を意味し、遊離薬物はβ−ラクタム−炭化水素リン
カー−ＭＭＡＦ組成物を意味する。
図１９に示されているグラフに関しては、ｈ３８Ｃ２ ｐｒｏは、β−ラクタム−炭化水
素リンカー−ＭＭＡＦ組成物にコンジュゲート化されているが、ＨＥＲ２可変領域結合ド
メインを含まないｈ３８Ｃ２抗体を意味し、ｔｒａｓｔ ｐｒｏは、β−ラクタム−炭化
水素リンカー−ＭＭＡＦ組成物と混合された裸抗ＨＥＲ２抗体を意味し、ｔｒａｓｔは裸
抗ＨＥＲ２抗体（トラスツズマブ）を意味し、ＤＶＤ１は裸ＨＥＲ２−短ペプチドリンカ
ー−ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン（すなわち、リンカー／薬物部分組成物がコン
ジュゲート化していないもの）を意味し、ＤＶＤ２は裸ＨＥＲ２−長ペプチドリンカー−
ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン（すなわち、リンカー／薬物部分組成物がコンジュ
ゲート化していないもの）を意味し、ＤＶＤ１ ＡＤＣは、β−ラクタム−炭化水素リン
カー−ＭＭＡＦが結合しているＤＶＤ１免疫グロブリンを意味し、ＤＶＤ２ ＡＤＣは、
β−ラクタム−炭化水素リンカー−ＭＭＡＦが結合しているＤＶＤ２免疫グロブリンを意
味する。
図２０に示されているグラフに関しては、ＤＶＤ１は裸ＨＥＲ２−短ペプチドリンカー−
ｈ３８Ｃ２−ＤＶＤ１免疫グロブリン（すなわち、リンカー／薬物部分組成物がコンジュ
ゲート化していないもの）を意味し、ＤＶＤ２は裸ＨＥＲ２−長ペプチドリンカー−ｈ３
８Ｃ２−ＤＶＤ２免疫グロブリン（すなわち、リンカー／薬物部分組成物がコンジュゲー
ト化していないもの）を意味し、ＤＶＤ１ ＡＤＣは、β−ラクタム−炭化水素リンカー
−ＭＭＡＦが結合しているＤＶＤ１免疫グロブリンを意味し、ＤＶＤ２ ＡＤＣは、β−
ラクタム−炭化水素リンカー−ＭＭＡＦが結合しているＤＶＤ２免疫グロブリンを意味し
、ｔｒａｓｔは裸抗ＨＥＲ２抗体（トラスツズマブ）を意味し、ｔｒａｓｔ ＡＤＣは、
β−ラクタム−炭化水素リンカー−ＭＭＡＦ組成物と混合された裸抗ＨＥＲ２抗体を意味
し、ｈ３８Ｃ２ ＡＤＣは、β−ラクタム−炭化水素リンカー−ＭＭＡＦ組成物にコンジ
ュゲート化されているが、ＨＥＲ２可変領域結合ドメインを含まないｈ３８Ｃ２抗体を意
味する。
細胞毒性は、４９０ｎＭでプレートリーダー（Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍ５）を使用して
蛍光に基づいて評価される。結果を図１８、図１９および図２０のグラフに示す。
実施例１０：ＤＶＤ組成物の分子量分析 ＤＶＤ組成物の純度を、ＤＶＤ１およびＤＶＤ
２の両方について、還元（サイズ＝２００ｋＤａ）および非還元条件下（重鎖＝７０ｋＤ
ａ、軽鎖＝４０ｋＤａ）のクマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて確認した。結果を図２
１および図２５に示す。
実施例１１：フローサイトメトリーにより示されたＤＶＤ組成物の選択的結合 ＤＶＤ１
およびＤＶＤ２をＳＫＢＲ３（ＨＥＲ２＋）またはＭＤＡ−ＭＢ−４６８（ＨＥＲ２−）
と共に氷上で３０分間インキュベートし、ついでＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７結合Ｆ（
ａｂ’）２ヤギ抗ヒト（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）で染色した。
結果を図２２に示す。この結果は、ＤＶＤ１およびＤＶＤ２組成物がＳＫＢＲ３（ＨＥＲ
＋）細胞に選択的に結合したことを示している。
ビオチンβ−ラクタムの非特異的結合を調べるために、ＤＶＤ１およびＤＶＤ２を３当量
のビオチンβ−ラクタム（図面においては「化合物」と称される）と共に室温で２時間イ
ンキュベートし、ついでＳＫＢＲ３（ＨＥＲ２＋）またはＭＤＡ−ＭＢ−４６８（ＨＥＲ
２−）と共に氷上で３０分間インキュベートし、ＰＥ結合ストレプトアビジン（ＢｉｏＬ
ｅｇｅｎｄ）で染色した。結果を図２３に示す。結果は、ＤＶＤ１およびＤＶＤ２組成物
はＳＫＢＲ３（ＨＥＲ＋）細胞に選択的に結合し、一方、ビオチンβ−ラクタム化合物は
ＨＥＲ２＋細胞に非特異的に結合しなかったことを示している。
実施例１２：ＳＫＢＲ３（ＨＥＲ２＋）、ＢＴ４７４（ＨＥＲ２＋）、ＫＰＬ４（ＨＥＲ
２＋）、ＤＹＴ２（ＨＥＲ２＋）およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８（ＨＥＲ２−）細胞に対す
るＡＤＣの細胞毒性 示されている細胞型を９６ウェルプレート内に５×１０３／ウェル
でプレーティングした。細胞を一晩接着させた。ＡＤＣの系列希釈物を０〜１０ｎＭの範
囲の濃度で細胞に加えた。７２時間のインキュベーションの後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９
６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を
製造者の指示に従い使用して、細胞生存率を測定した。細胞生存率を未処理細胞に対する
百分率（≡１００％）として計算した。結果を図２４および図２９に示す。結果は、ＡＤ
ＣがＨＥＲ２＋細胞に対する細胞毒性活性を有していたことを示している。
実施例１３：ＩＧＲＯＶ１（ＦＯＬＲ１＋）およびＨ９２９（ＣＤ１３８＋）細胞に対す
るＡＤＣの細胞毒性 ヒト癌細胞系ＩＧＲＯＶ１（ＦＯＬＲ１＋）およびＨ９２９（ＣＤ
１３８＋）を、１０％ ＦＢＳおよび１％ Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐで補足されたＤＭＥＭま
たはＲＰＭＩ内で、加湿５％ ＣＯ２雰囲気中、３７℃で維持した。ＩＧＲＯＶ細胞を、
ＴｒｙｐＬＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して集め、処理の２４時間
前に平底９６ウェル組織培養プレート（５０００細胞／ウェル）に移した。Ｈ９２９細胞
を直ちに処理した。１０％ ＦＢＳおよび１％ Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐで補足されたＤＭ
ＥＭまたはＲＰＭＩ内で系列希釈物を調製した。ＩＧＲＯＶ１細胞については、元の細胞
培地を除去し、１００μｌの処理溶液を加え（３回重複して実施）、培養プレートを加湿
５％ ＣＯ２雰囲気中、３７℃で７２時間維持した。Ｈ９２９については、１００μｌの
処理溶液を加えた。ついで該細胞をイムノコンジュゲートまたは幾つかの対照組成物の１
つと接触させた。２０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎ
ｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに加え、加湿５％ ＣＯ２雰囲気中
、３７℃でプレートを現像した。結果を図２６および図２７に示す。結果は、該イムノコ
ンジュゲートが標的細胞型に対する細胞毒性活性を有していたことを示している。
実施例１４：ＤＶＤ組成物の触媒活性 ９８μｌの抗体（ＰＢＳ中の１μＭ）を９６ウェ
ルプレートに分注した。ついで２μｌのメトドール（Ｍｅｔｈｏｄｏｌ）（ＥｔＯＨ中の
１０ｍＭ）を加え、励起（λｅｘｔ＝３３０ｎＭ）および発光（λｅｍ＝４５２ｎＭ）を
、分光蛍光光度計を使用して５分毎に記録した。５４８μｌのＤＶＤ１（１０．３３ｍｇ
／ｍｌ、５１．７μＭ）に１１．３μｌ（ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ）のβ−ラクタムＭＭＡ
Ｆ（抗体に対して４当量）を加えた。該溶液をボルテックスし、室温で４時間インキュベ
ートし、ＰＤ−１０脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製した。Ｐ
ＢＳ中の該コンジュゲートを短期間の使用には４℃で、長期間の使用にはアリコート中で
−８０℃で保存した。２８０ｎＭでの吸光度に基づいて抗体濃度を決定した。ｈ３８Ｃ２
ＩｇＧ１を、同じコンジュゲート化条件を用いて陽性対照として使用した。Ｓｉｎｈａ
，ＳＣ．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ２，４４９−４５６（２００７）（その開
示の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されているとおり、公知
アッセイを用いて触媒活性を評価した。非コンジュゲート化ＤＶＤ１およびｈ３８Ｃ２
ＩｇＧ１を陽性対照として使用した。トラスツズマブＩｇＧ１を陰性対照として使用した
。種々のＤＶＤ組成物の概要図を図３４に示す。触媒活性アッセイの結果を図２８、図３
２および図３５に示す。結果は、各組成物の触媒活性が、利用可能な反応性リジン残基の
数と相関することを示している。例えば、図３５に示されているとおり、ｈ３８Ｃ２−Ｉ
ｇＧ１（これは、１つの反応性リジン残基をそれぞれが含有する２つの可変ドメインを有
する）はＤＶＤ１−Ｆａｂ（これは、１つの反応性リジン残基を含有する１つの可変ドメ
インを有する）の触媒活性の約２倍の触媒活性を示した。ある組成物（例えば、図３４に
示されているｓｃＦｖおよびＤＡＲＴ形態の組成物）の触媒活性は、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ
、ＩｇＧおよびそれらの対応ＤＶＤ形態組成物と比較して低下した触媒活性を示した。反
応性リジン残基を有さない組成物（例えば、トラスツズマブ）は触媒活性を示さなかった
。
実施例１５：ＤＶＤ組成物の質量分析 非コンジュゲート化ＤＶＤ１および抗体−薬物コ
ンジュゲート（ＡＤＣ）を、ＰＮＧａｓｅ Ｆ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂ
ｓ）を製造業者の指示に従い使用して脱グリコシル化し、ＤＴＴ（最終濃度は５０ｍＭ
ＤＴＴであった）を使用して還元し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析を用いて分析した。Ａ
ＤＣ重鎖の質量は重鎖あたり１つの薬物に対応し、これはＤＶＤ当たり一定数の薬物分子
の正確なコンジュゲート化を示している。結果を図３３に示す。
実施例１６：ＤＶＤ組成物のｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害性 ７週齢の雌ＮＳＧマウス（Ｊａ
ｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の乳房脂肪体内にＰＢＳとＢＤ Ｍａｔｒｉｇｅｌ
（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）との１：１混合物中のＫＰＬ−４（ＨＥＲ２＋）細胞（
マウスあたり５×１０６個）を皮下接種した。腫瘍が〜２００ｍｍ３に達したら、マウス
をそれぞれ２匹のマウスの７つの群に無作為に割り付け、２．５、５．０、１０もしくは
２０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１ ＡＤＣ、または１０ｍｇ／ｋｇの非コンジュゲ
ート化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１、またはビヒクル（ＰＢＳ）のみ、または１０ｍｇ／ｋｇの
アド−トラスツズマブ・エムタンシン（ａｄｏ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｅｍｔａｎｓ
ｉｎｅ）バイオシミラー（Ｌｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）で、静脈内（尾静脈）注
射により、４日ごとに合計４サイクルにわたって処理した（＊注：２０ｍｇ／ｋｇ ＡＤ
Ｃ群は１サイクルのみであった）。マウスに、２／４注射の１日前に２５０μｌの無菌ラ
ット血清を予め投与した。腫瘍サイズを４日ごとにキャリパー測定によりモニターした。
全ての操作はスクリプス研究所の動物の管理および使用に関する委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕ
ｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ
Ｔｈｅ Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）により承認されてお
り、実験動物の管理および使用に関するＮＩＨ指針（ＮＩＨ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈ
ｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）に従い
実施された。結果を図３０に示す。結果は、ＡＤＣが、ビヒクル対照（例えば、ＰＢＳ）
と比較して腫瘍体積を減少させることが可能であったことを示している。
７週齢の雌ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の乳房脂肪体内にＰ
ＢＳとＢＤ Ｍａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）との１：１混合物中のＫ
ＰＬ−４（ＨＥＲ２＋）細胞（マウスあたり６×１０６個）を皮下接種した。腫瘍が〜２
００ｍｍ３に達したら、マウスをそれぞれ７または８匹のマウスの５つの群に無作為に割
り付け、５もしくは１０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１ ＡＤＣ、または１０ｍｇ／
ｋｇの非コンジュゲート化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１、またはビヒクル（ＰＢＳ）のみ、また
は５ｍｇ／ｋｇのアド−トラスツズマブ・エムタンシン（ａｄｏ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａ
ｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）バイオシミラー（Ｌｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）で、静
脈内（尾静脈）注射により、７日ごとに合計４サイクルにわたって処理した。マウスに、
各注射の１日前に２５０μｌの無菌ヒト血清（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を予め投与
した。腫瘍サイズを４日ごとにキャリパー測定によりモニターした。全ての操作はスクリ
プス研究所の動物の管理および使用に関する委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎ
ｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｔｈｅ Ｓｃｒｉｐ
ｐｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）により承認されており、実験動物の管理
および使用に関するＮＩＨ指針（ＮＩＨ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎ
ｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）に従い実施された。結果を
図３１に示す。結果は、ＡＤＣが、ビヒクル対照（例えば、ＰＢＳ）と比較して腫瘍体積
を減少させることが可能であったことを示している。
実施例１７：ＤＶＤ１−Ｆａｂのクローニング、発現、精製、触媒活性および細胞毒性
ＰＣＲ断片をＮｈｅ１−ＨＦ／Ｘｈｏ１連結により哺乳類発現ベクターｐＣＥＰ４（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ）内にクローニングした。重鎖はヒトＩｇＧ１の第１定常ドメイン（Ｃ
Ｈ１）をＣ末端に含んでいた。軽鎖はヒトＣカッパ（Ｃｋ）の第１定常ドメインをＣ末端
に含んでいた。該哺乳類細胞発現ベクターを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して
ヒト胎児腎（ＨＥＫ）２９３細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）内に一過性に
コトランスフェクト（軽鎖および重鎖）した。ＤＶＤ１−Ｆａｂ組成物を、ＨｉＴｒａｐ
プロテインＡ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製した。典型的
な収量は１０ｍｇ／Ｌであった。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて純度を確認し、実施例１４に
記載されているとおりに触媒活性を評価した。ｈ３８Ｃ２ ＩｇＧ１を陽性対照として使
用し、トラスツズマブＩｇＧ１を陰性対照として使用した。実施例１２に記載されている
とおりに細胞毒性を評価した。結果を図３２に示す。予想通り、ＤＶＤ１−Ｆａｂ組成物
はｈ３８Ｃ２−ＩｇＧ１組成物の触媒活性の約１／２の触媒活性を有していた。細胞毒性
データは、ＤＶＤ１−ＡＤＣおよびＤＶＤ１−Ｆａｂ−ＡＤＣの両方がＨＥＲ２＋細胞に
対する細胞毒性活性を有していたことを示している。予想通り、ＤＶＤ１−ＡＤＣ組成物
と比較してＤＶＤ１−Ｆａｂ−ＡＤＣ上の薬物量が少ないため、ＤＶＤ１−Ｆａｂ−ＡＤ
Ｃの細胞毒性活性はＤＶＤ１−ＡＤＣ組成物の場合より低かった。
実施例１８：ＤＶＤ２−Ｆａｂのクローニング、発現、精製および触媒活性 ＤＶＤ１お
よびＤＶＤ２のためのそれぞれ短いリンカー（ＡＳＴＫＧＰ）または長いリンカー（ＴＶ
ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ）を介してトラスツズマブのＶＨおよびＶＬをｈ３８Ｃ２のＶＨお
よびＶＬに連結することにより、抗ＨＥＲ２ ＤＶＤを製造する。抗ＣＤ１３８および抗
ＣＤ７９ｂ ＤＶＤを、短い（ＡＳＴＫＧＰ）リンカーを使用して発現させる。所望の配
列はｇＢｌｏｃｋｓ（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とし
て合成され、ヒトＩｇＧ１重鎖またはｋ軽鎖定常ドメインと共に発現される。ＤＶＤ発現
カセットを哺乳類発現ベクターｐＣＥＰ４内にＮｈｅＩ／ＸｈｏＩクローニングし、ＨＥ
Ｋ２９３細胞内に一過性にトランスフェクトして産生を行う。上清を９日間にわたって３
回集め、ついで１ｍＬ ＨｉＴｒａｐプロテインＡ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃ
ａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）をＡＫＴＡ ＦＰＬＣ装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ
ｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）と共に使用して濾過および精製を行う。収量は
典型的には１０ｍｇ／Ｌである。ＤＶＤの純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびそれに続くクマ
シー染色により確認し、濃度を、２８０ｎｍでの吸光度を測定することにより決定した。
ＤＶＤ形態においてｈ３８Ｃ２のＬｙｓ反応性が保有されていることを確認するために、
レトロアルドール反応によりメタノールを親アルデヒドに変換する触媒アルドラーゼ活性
に基づくアッセイを用いて、その活性を直接評価する。蛍光アルデヒドの形成を、蛍光光
度計を使用して定量する。
詳細には、ＤＶＤまたはＩｇＧ１をＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で１μＭに希釈し、９６ウェ
ルプレート内に９８μｌのアリコートで三重に分注する。ついでエタノール中の１０ｍＭ
メトドール２μｌを加え、３３０ｎｍに設定された励起波長（λｅｘｔ）、４５２ｎｍ
に設定された発光波長（λｅｍ）、ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏソフトウェアと共にＳｐｅｃ
ｔｒａＭａｘ Ｍ５装置（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用し、０分から開
始する５分間隔の時点を用いて、蛍光を直ちに評価する。加えられた２μＬのメトドール
調製物で９８μＬのＰＢＳに対して正規化することにより、シグナルを決定する。
図３６は、蛍光アルデヒドに変換され検出されるメトドールを基質として使用して直接測
定されたｈ３８Ｃ２リジンの活性を示す。ＤＶＤ１は親ｈ３８Ｃ２ ＩｇＧ１と同等の活
性を有し、ＤＶＤ２は、低下した活性を有していた。トラスツズマブＩｇＧ１を陰性対照
として使用する。
実施例１９：ＤＶＤに基づく薬物コンジュゲートの製造およびインビトロでのＨＥＲ２＋
乳癌細胞系に対するその活性の評価 所望のＡＤＣを製造するために、非切断性リンカー
を有するβ−ラクタム官能基化モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）化合物を合成す
る（図３７Ａ）。コンジュゲート化のためにβ−ラクタムハンドルを使用する。なぜなら
、それは、安定なアミド結合を形成することによりｈ３８Ｃ２のＬｙｓと不可逆的に反応
して、早すぎる薬物放出の可能性を防ぐからである。非切断性リンカーを有するＭＭＡＦ
が選択されるのは、このペイロードが、種々の標的に
対する強力なＡＤＣを製造するために使用されており、非切断性リンカーがより高い最大
耐量を有すると報告されているからである。ＰＢＳ中で４当量のβ−ラクタムＭＭＡＦ（
各Ｌｙｓ残基に対して２当量）と共にＤＶＤ１を４時間インキュベートすることにより、
ＡＤＣを製造する（図３７Ｂ）。図４４はβ−ラクタムＭＭＡＦの固相合成スキームを示
す。Ｌｙｓはβ−ラクタム部分と反応してアミド結合を形成するため、Ｌｙｓはもはや触
媒的に活性ではなく、したがって、触媒活性の消失によって完全なコンジュゲート化が確
認される（図３７Ｃ）。
３０ｋＤａカットオフ遠心フィルター装置を使用して抗体を５０μＭ（１０．０ｍｇ／ｍ
Ｌ）まで濃縮した後、全てのコンジュゲート化をＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で行う。６．０
μｌのβ−ラクタム−ＭＭＡＦ（ＰＢＳ中の１０％ ＤＭＳＯ溶液の１ｍＭ、４当量）を
３００μｇの抗体に加えて最終反応体積を３６μｌとする。該溶液を室温で４時間インキ
ュベートする。ＰＢＳを使用して１μＭに希釈された粗反応物の一部を使用するメトドー
ルアッセイを用いた場合の触媒活性の喪失により、全てのコンジュゲート化は完了したと
みなされる。完了したら、ＰＤ−１０脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用
して未反応化合物を除去する。より大規模でＡＤＣを製造するために、１１．３μｌのβ
−ラクタム−ＭＭＡＦ（１００％ ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ）を５．７ｍｇの抗体に加えて
、最終反応体積を５６０μｌとした。該溶液を室温で４時間インキュベートし、既に記載
されているとおりに精製した。ＰＢＳ中の該コンジュゲートを短期間の使用には４℃で、
長期間の使用にはアリコート中で−８０℃で保存する。既知濃度の非コンジュゲート化抗
体を標準体として使用して、Ｂｉｏ−Ｒａｄタンパク質アッセイで抗体濃度を測定する。
ＫＰＬ−４（ウェルあたり３×１０３細胞）以外の全てのＢＣ細胞に関してはウェル当た
り５×１０３細胞で、ＭＭまたはＲａｍｏｓ細胞に関してはウェル当たり２．０×１０４
細胞で、９６ウェルプレート内で細胞をプレーティングする。ＢＣ細胞を一晩接着させ、
懸濁細胞を直ちに処理する。非コンジュゲート化抗体およびＡＤＣの系列希釈物を０〜１
０ｎＭの範囲の濃度で細胞に加える。７２時間のインキュベーションの後、ＣｅｌｌＴｉ
ｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖アッセイ（Ｐｒｏｍ
ｅｇａ）を製造業者の指示に従い使用して、細胞生存率を測定する。細胞生存率は未処理
細胞（≡１００％）に対する百分率として計算される。
該コンジュゲートのインビトロ細胞毒性をＨＥＲ２＋（ＳＫ−ＢＲ−３）およびＨＥＲ２
−（ＭＤＡ−ＭＢ−４６８）ＢＣ細胞に対して評価する。ＡＤＣは標的発現細胞に対して
非常に強力であり（ＩＣ５０＝２桁のピコモル）、ＨＥＲ２−細胞系では細胞毒性は認め
られない（図２９：ＳＫＢＲ３（ＨＥＲ２＋）パネル）。陰性対照として、ｈ３８Ｃ２
ＩｇＧ１をβ−ラクタムＭＭＡＦと共に並行してインキュベートし、これらの細胞系に対
して試験する。ｈ３８Ｃ２は該追加的抗ＨＥＲ２標的化ドメインを欠いているため、予想
通り、細胞毒性は観察されない。ＡＤＣは幾つかの他のＨＥＲ２＋細胞系に対して非常に
強力であることが判明している（図３８）。図３８に関しては、ＨＥＲ２＋ ＢＣ細胞系
であるＭＤＡ−ＭＢ−３６１、ＢＴ−４７４およびＫＰＬ−４と共に３７℃で７２時間イ
ンキュベートした後の抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦのインビトロ細胞毒性が示されて
いる（３回の重複試験の平均±ＳＤ）。この方法の有用性を実証するために、ＨＥＲ２標
的化可変ドメインをＣＤ１３８およびＣＤ７９ｂ標的化ドメインで置換することにより、
２つの追加的なＡＤＣをも製造する。これらの抗原は共に、多発性骨髄腫（ＭＭ）および
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療のための臨床的に確立されたＡＤＣ標的である。両
方のＡＤＣは標的発現細胞に対して非常に強力である（ＩＣ５０＝２桁のピコモル）（図
３９）。図３９Ａに関しては、ＣＤ１３８＋ ＭＭ細胞系Ｕ−２６６およびＮＣＩ−Ｈ９
２９と共に３７℃で７２時間インキュベートした後の抗ＣＤ１３８ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦ
コンジュゲートの細胞毒性が示されている（３回の重複試験の平均±ＳＤ）。図３９Ｂに
関しては、ＣＤ７９ｂ＋ バーキットリンパ腫細胞系（Ｒａｍｏｓ）と共に３７℃で７２
時間インキュベートした後の抗ＣＤ７９ｂ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦコンジュゲートの細胞毒
性が示されている（３回の重複試験の平均±ＳＤ）。抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦお
よびｈ３８Ｃ２ ＩｇＧ１／ＭＭＡＦを陰性対照として使用する。
実施例２０：抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦ薬物コンジュゲートの分析的特徴づけ こ
のＡＤＣプラットフォームの薬物ローディングを確認するために、重鎖および軽鎖の質量
を決定するために質量分析法を用いる。全てのサンプルを、還元条件下（ＰＢＳ中の５０
ｍＭ ＤＴＴ）、ＰＮＧアーゼＦ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用し
て３７℃で一晩脱グリコシル化する。プロテインＧ ＨＰ ＳｐｉｎＴｒａｐ（ＧＥ Ｈ
ｅａｌｔｈｃａｒｅ）を製造業者の指示に従い使用して、ＰＮＧアーゼＦを除去する。サ
ンプル分析前にサンプルを再び還元する（ＰＢＳ中の１０ｍＭ ＤＴＴ）。Ａｇｉｌｅｎ
ｔエレクトロスプレーイオン化飛行時間（ＥＳＩ−ＴＯＦ）質量分析計を使用してデータ
を得る。Ａｇｉｌｅｎｔ ＢｉｏＣｏｎｆｉｒｍソフトウェアを使用して、デコンボリュ
ーションされた質量を得る。β−ラクタムＭＭＡＦ薬物化合物と反応すると予想される唯
一のリジンは重鎖上に位置するため、重鎖の質量は１つの薬物化合物の追加分だけ増加す
るはずであり、軽鎖上には修飾は観察されないはずである。非コンジュゲート化抗ＨＥＲ
２ ＤＶＤ１の質量を抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦと比較すると、質量は単一薬物分
子の付加に応じて増加し、軽鎖に関する質量の変化は認められない（図４０）。図４０に
関しては、非コンジュゲート化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１（図４０Ａ）およびコンジュゲート
化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦ（図４０Ｂ）を、まず、ＰＮＧアーゼＦで脱グリコシ
ル化し、分析前に１０ｍＭ ＤＴＴで還元する。重鎖上のコンジュゲート化は検出されず
、重鎖の質量の増加（〜１１６０Ｄａ）はβ−ラクタムＭＭＡＦの付加に対応する。非コ
ンジュゲート化種も、より高い薬物負荷の種も検出されない。したがって、薬物対抗体比
（ＤＡＲ）は無傷抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦに関しては２である。より高い薬物負
荷の種は検出されない。更に、Ｌｙｓがアラニン（Ａｌａ）へと突然変異し、並行してβ
−ラクタムＭＭＡＦにコンジュゲート化した場合、修飾は検出されない（図４１）。図４
１に関しては、抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１を、ｈ３８Ｃ２のリジンをアラニンで置換するため
に突然変異させ、実施例１９における条件を用いてβ−ラクタムＭＭＡＦと共にインキュ
ベートする。図４１においては、非コンジュゲート化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１ Ａｌａ突然
変異体（図４１Ａ）およびコンジュゲート化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦ Ａｌａ突
然変異体（図４１Ｂ）を、まず、ＰＮＧアーゼＦで脱グリコシル化し、分析前に１０ｍＭ
ＤＴＴで還元する。β−ラクタムＭＭＡＦの存在下のインキュベーションの後、軽鎖ま
たは重鎖上でコンジュゲート化は検出されず、このことは薬物結合部位としてのｈ３８Ｃ
２のリジンを示している。このデータは、ＡＤＣがもはや触媒的に活性ではないことと組
合されて、Ｌｙｓ残基が唯一のコンジュゲート化点（結合点）であることを強く示唆して
いる。ＤＶＤに基づくＡＤＣは２つの重鎖および軽鎖から構成されているため、ＤＡＲは
２である。
実施例２１：ヒト乳癌異種移植マウスモデルにおける抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦの
評価 図４３Ａに関しては、クマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥは非還元条件下（予想値＝〜
２００ｋＤａ）および還元条件下（予想重鎖＝〜６３ｋＤａ、軽鎖＝〜３６ｋＤａ）での
抗ＣＤ１３８ ＤＶＤ１および抗ＣＤ７９ｂ ＤＶＤ１の両方の純度を証明している。予
め染色されたタンパク質ラダーからの分子量が左側に示されている。図４３Ｂに関しては
、抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦの製造に関して記載されているとおり、抗ＣＤ１３８
ＤＶＤ１および抗ＣＤ７９ｂ ＤＶＤ１を４当量のβ−ラクタムＭＭＡＦと共にインキ
ュベートする。陽性対照としての非コンジュゲート化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１および陰性対
照としてのトラスツズマブＩｇＧ１を使用して、得られた抗ＣＤ１３８ ＤＶＤ１／ＭＭ
ＡＦおよび抗ＣＤ７９ｂ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦの触媒活性を評価することにより、完全な
コンジュゲート化を確認する。触媒活性の完全な消失は完全なコンジュゲート化を証明し
ている。
抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦをインビボで評価する。雌ＮＳＧマウスと共にＫＰＬ−
４細胞を使用して、ＢＣ異種移植研究を行う。７週齢の雌ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の乳房脂肪体内にＰＢＳとＢＤ Ｍａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ Ｂ
ｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）との１：１混合物中のＫＰＬ−４細胞（マウスあたり６×１０６個
）を皮下接種する。腫瘍が〜１５０ｍｍ３に達したら、マウスをそれぞれ７〜８匹のマウ
スの５つの群に無作為に割り付け、５ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ２
ＤＶＤ１／ＭＭＡＦ、または１０ｍｇ／ｋｇの非コンジュゲート化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１
、または５ｍｇ／ｋｇのアド−トラスツズマブ・エムタンシン（ａｄｏ−ｔｒａｓｔｕｚ
ｕｍａｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）バイオシミラー（Ｌｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）
、またはビヒクル（ＰＢＳ）のみで、静脈内（尾静脈）注射により、４日ごとに合計４サ
イクルにわたって処理した。各サイクルの２４時間前に２５０μｌの滅菌濾過ヒト血清（
Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を腹腔内注射によりマウスに予め投与する。キャリパー測
定を用いて腫瘍サイズを４日ごとにモニターする。全ての操作はスクリプス研究所の動物
の管理および使用に関する委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒ
ｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｔｈｅ Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）により承認されており、実験動物の管理および使用に関す
るＮＩＨ指針（ＮＩＨ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）に従い実施される。
確立された腫瘍（〜１５０ｍｍ３）を有するマウスを、５ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／
ｋｇの抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦ、１０ｍｇ／ｋｇの非コンジュゲート化抗ＨＥＲ
２ ＤＶＤ１、基準ＡＤＣであるアド−トラスツズマブ・エムタンシン（ａｄｏ−ｔｒａ
ｓｔｕｚｕｍａｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）５ｍｇ／ｋｇ、またはビヒクルで、合計４回の
処理により４日ごとに静脈内（ｉ．ｖ．）注射により処理する。ＮＳＧマウスは血清Ｉｇ
Ｇを欠いているため、定常ドメインに結合するマクロファージを介した注入抗体のクリア
ランスを防止するために、２５０μｌのヒト血清を各動物に予め投与する。両方の抗ＨＥ
Ｒ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦ用量に関して有意な腫瘍退縮および増殖抑制が認められる（図
４２Ａ）。図４２Ａに関しては、ヒトＢＣ細胞系ＫＰＬ−４を雌ＮＳＧマウスの乳房脂肪
体内に異種移植し、〜１５０ｍｍ３まで増殖させ、それぞれ７または８匹のマウスを含む
５群に無作為に分け、示されている用量の示されているＡＤＣおよび対照の静脈内（尾静
脈）注射により４日ごとに４回処理する。各注射の２４時間前に２５０μｌのヒト血清を
ｉ．ｐ．（腹腔内）に注射する。平均±ＳＤ値がプロットされている。また、両方の抗Ｈ
ＥＲ２ ＤＶＤ１／ＭＭＡＦ用量および非コンジュゲート化抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ群に関し
ては、ビヒクルと比較して、生存期間は有意に長い（図４２Ｂ）。更に、１０ｍｇ／ｋｇ
抗ＨＥＲ２ ＤＶＤ ＡＤＣ群は第１００日の実験終了時に８匹中５匹の動物の治癒を
示し
ており、７／８匹の動物が生存している。この用量においては、腫瘍退縮および生存率の
両方が５ｍｇ／ｋｇのアド−トラスツズマブ・エムタンシンより優れている。ＡＤＣプラ
ットフォームをアド−トラスツズマブ・エムタンシンと比較する際の２つの重要な考慮事
項は抗体サイズおよび薬物負荷（薬物ローディング）である。ＡＤＣプラットフォームは
アド−トラスツズマブ・エムタンシン（１５０ｋＤａ）より２５％大きく（２００ｋＤａ
）、アド−トラスツズマブ・エムタンシンの場合（抗体当たり薬物は平均３．５個）より
少数の、抗体当たりの薬物（抗体当たり薬物は２個）を有する。これらの要因を考慮し、
用量当たりの細胞毒性剤のナノモルに正規化すると、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ２ ＤＶ
Ｄ ＡＤＣは、５ｍｇ／ｋｇのアド−トラスツズマブ・エムタンシン（〜１１４ｎｍｏｌ
のメルタンシン）と比較して、有効に、より低い用量（〜９８ｎｍｏｌのＭＭＡＦ）であ
る。活性薬物のこのようなより高い用量にもかかわらず、研究の経過中に５ｍｇ／ｋｇの
アド−トラスツズマブ・エムタンシンを使用した場合には治癒した動物は無く、全体的な
生存率は低く、研究終了時に僅か２／８匹の動物が生存したに過ぎなかった。
実施例２２：種々のＤＶＤにおける触媒活性の比較 ＣＤ１３８ ＤＶＤ、ＣＤ７９ｂ
ＤＶＤ、ｈ３８Ｃ２ ＩｇＧ１およびＨＥＲ２ ＤＶＤ２における触媒活性を、前記実施
例１８に記載されている触媒活性を用いて比較する。図４５に関しては、試験したＤＶＤ
の全ては親ｈ３８Ｃ２ ＩｇＧ１と実質的に同じ触媒活性を有する。このことは、ｈ３８
Ｃ２ Ｆｖ部分が、上流標的化Ｆｖ部分には無関係に、部位特異的薬物コンジュゲート化
のための汎用アダプターであることを示唆している。
また、これらのＤＶＤの結合活性を標的発現細胞に対して試験する。ＳＫ−ＢＲ−３、Ｍ
ＤＡ−ＭＢ−４６８、Ｈ９２９、Ｕ２６６およびＲａｍｏｓ細胞を、ＴｒｙｐＬＥ（Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して集め、Ｖ底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎ
ｉｎｇ）内に分注する。該細胞を２００μＬのフローサイトメトリーバッファー（ＰＢＳ
，２％（ｗ／ｖ）ＦＢＳ，ｐＨ７．４）で洗浄し、ＤＶＤ１またはＤＶＤ２と共に氷上で
３０分間インキュベートし、２００μＬのフローサイトメトリーバッファーで洗浄し、６
４７結合ポリクローナル（Ｆａｂ’）２ロバ抗ヒトＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で氷上で２０分間染色する。２００μＬ
の氷冷フローサイトメトリーバッファーで２回洗浄した後、Ｃａｎｔｏ ＩＩフローサイ
トメーター（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して細胞を分析する。Ｆｌｏｗ
Ｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用してデータを分析した。図４６に関して
は、フローサイトメトリーデータは標的発現細胞に対する全てのＤＶＤの結合を示してい
る。
前記の発明は、理解を明瞭にする目的で、例示および実施例によって或る程度詳細に記載
されているが、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく、ある変更
および修飾がそれに施されうることが、本発明の教示を考慮して当業者に容易に理解され
る。
したがって、前記の説明は本発明の原理を例示しているに過ぎない。本明細書に明示的に
は記載されていない又は示されていないが本発明の原理を具体化しておりその精神および
範囲に含まれる種々の改変を当業者が案出することが可能であると理解されるであろう。
更に、本明細書に挙げられている全ての実施例および条件付きの言い回しは、技術の発展
のために本発明者により提供される概念および本発明の原理を読者が理解するのを補助す
ることを主に意図したものであり、具体的に挙げられているそのような実施例および条件
には限定されないと解釈されるべきである。更に、本発明の原理および態様ならびにそれ
らの具体例を挙げている本明細書における全ての説明はそれらの構造的等価体および機能
的等価体の両方を含むと意図される。また、そのような等価体（均等物）は現在公知の等
価体および将来開発される等価体の両方（すなわち、構造には無関係に同じ機能を発揮す
る開発されるあらゆる要素）を含むと意図される。したがって、本発明の範囲は、本明細
書に示され記載されている例示的態様には限定されないと意図される。むしろ、本発明の
範囲および精神は添付の特許請求の範囲により具体化される。
したがって、前記の説明は本発明の原理を例示しているに過ぎない。本明細書に明示的には記載されていない又は示されていないが本発明の原理を具体化しておりその精神および範囲に含まれる種々の改変を当業者が案出することが可能であると理解されるであろう。更に、本明細書に挙げられている全ての実施例および条件付きの言い回しは、技術の発展のために本発明者により提供される概念および本発明の原理を読者が理解するのを補助することを主に意図したものであり、具体的に挙げられているそのような実施例および条件には限定されないと解釈されるべきである。更に、本発明の原理および態様ならびにそれらの具体例を挙げている本明細書における全ての説明はそれらの構造的等価体および機能的等価体の両方を含むと意図される。また、そのような等価体（均等物）は現在公知の等価体および将来開発される等価体の両方（すなわち、構造には無関係に同じ機能を発揮する開発されるあらゆる要素）を含むと意図される。したがって、本発明の範囲は、本明細書に示され記載されている例示的態様には限定されないと意図される。むしろ、本発明の範囲および精神は添付の特許請求の範囲により具体化される。
本発明は一態様において、以下を提供する。
[項目１]
式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ） ｎ を有するイムノコンジュゲートであって、ここで、
（ａ）Ｉｇは二重可変ドメイン免疫グロブリン分子またはその抗原結合性フラグメントであり、ここで、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子は、
（ｉ）結合標的に結合する第１可変ドメインと、
（ｉｉ）反応性残基を含む第２可変ドメインとを含み、
（ｂ）Ｌは、Ｉｇの第２可変ドメインの反応性残基に共有結合しているリンカーであり、
（ｃ）Ｄは薬物部分であり、
（ｄ）ｎは１〜１２の整数から選択される、イムノコンジュゲート。
[項目２]
反応性残基がリジンである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目３]
ｎが１または２である、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目４]
Ｉｇの第１可変ドメインが第２可変ドメインよりもＮ末端に近くに配置される、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目５]
Ｉｇが二重特異性免疫グロブリン分子である、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目６]
Ｄが２以上の同じ又は異なる薬物部分を含む、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目７]
抗原結合性フラグメントがＩｇの第１および第２可変ドメインを含み、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） ２ 、ＦｖまたはｓｃＦｖから選択される、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目８]
抗原結合性フラグメントがＦａｂを含む、項目７記載のイムノコンジュゲート。
[項目９]
Ｉｇがキメラ免疫グロブリン配列を含む、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目１０]
Ｉｇがヒト化免疫グロブリン配列を含む、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目１１]
Ｉｇがヒト免疫グロブリン配列を含む、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目１２]
Ｉｇの第２可変ドメインが配列番号３のアミノ酸配列を含む、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目１３]
Ｉｇの第２可変ドメインが配列番号４のアミノ酸配列を含む、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目１４]
結合標的が腫瘍細胞表面抗原である、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目１５]
腫瘍細胞表面抗原が、ＨＥＲ２、ＦＯＬＲ１、ＣＤ１３８およびＣＤ７９ｂから選択される、項目１４記載のイムノコンジュゲート。
[項目１６]
Ｉｇの第１可変ドメインがＨＥＲ２に結合する、項目１５記載のイムノコンジュゲート。
[項目１７]
Ｉｇの第１可変ドメインがＦＯＬＲ１に結合する、項目１５記載のイムノコンジュゲート。
[項目１８]
Ｉｇの第１可変ドメインがＣＤ１３８に結合する、項目１５記載のイムノコンジュゲート。
[項目１９]
Ｉｇの第１可変ドメインがＣＤ７９ｂに結合する、項目１５記載のイムノコンジュゲート。
[項目２０]
薬物部分が細胞毒性剤である、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目２１]
細胞毒性剤が、毒素、化学療法剤、抗生物質、放射性同位体、キレート化放射性同位体および核酸分解酵素から選択される、項目２０記載のイムノコンジュゲート。
[項目２２]
Ｄがオーリスタチン、ドロスタチンまたはセマドチンである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目２３]
ＤがＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである、項目２２記載のイムノコンジュゲート。
[項目２４]
Ｄがカンプトテシンである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目２５]
カンプトテシンがＳＮ−３８である、項目２４記載のイムノコンジュゲート。
[項目２６]
Ｄがメイタンシノイドである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目２７]
メイタンシノイドがＤＭ１、ＤＭ３またはＤＭ４である、項目２６記載のイムノコンジュゲート。
[項目２８]
Ｄがピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）である、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目２９]
Ｄがエンジインである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目３０]
Ｄがカリケアマイシンである、項目２９記載のイムノコンジュゲート。
[項目３１]
Ｄがチアンシマイシンある、項目２９記載のイムノコンジュゲート。
[項目３２]
Ｄがドキソルビシンである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目３３]
ＤがＭＭＤＸである、項目３２記載のイムノコンジュゲート。
[項目３４]
ＤがＰＮＵ−１５９６８２である、項目３３記載のイムノコンジュゲート。
[項目３５]
ＤがｓｉＲＮＡである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目３６]
Ｌが可逆的リンカーである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目３７]
Ｌが不可逆的リンカーである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目３８]
Ｌが切断性リンカーである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目３９]
Ｌが非切断性リンカーである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目４０]
Ｌが分岐リンカーである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目４１]
Ｌが直鎖状リンカーである、項目１記載のイムノコンジュゲート。
[項目４２]
項目１〜４１のいずれか１項記載のイムノコンジュゲートの有効量と医薬上許容される担体とを含む、癌の治療のための医薬組成物。
[項目４３]
癌を治療するための医薬の製造における、項目１〜４１のいずれか１項記載のイムノコンジュゲートの使用。
[項目４４]
癌が血液癌、癌腫、肉腫、黒色腫または中枢神経系癌である、項目４３記載の使用。
[項目４５]
血液癌が白血病、リンパ腫、骨髄腫または骨髄異形成症候群である、項目４４記載の使用。
[項目４６]
白血病が急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病または慢性リンパ球性白血病である、項目４５記載の使用。
[項目４７]
リンパ腫がホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫である、項目４５記載の使用。
[項目４８]
癌腫が皮膚癌、頭頸部、甲状腺、肺、鼻咽頭、結腸直腸、肝臓、膀胱、卵巣、子宮頚部、子宮内膜、前立腺、胃、食道、膵臓、腎臓または乳癌である、項目４４記載の使用。
[項目４９]
肉腫が血管肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、胃腸間質腫瘍、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、骨肉腫、多形性肉腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫および滑膜肉腫である、項目４４記載の使用。
[項目５０]
中枢神経系癌が神経膠腫、髄膜腫または神経腫である、項目４４記載の使用。
[項目５１]
医薬が第２治療剤の有効量を更に含む、項目４３記載の使用。
[項目５２]
第２治療剤が抗体、抗腫瘍剤、細胞毒性剤、抗血管新生剤または免疫抑制剤である、項目５１記載の使用。
[項目５３]
第２治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、バルルビシン、イダルビシン、エピルビシン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、ベバシズマブ、イマチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イデラリシブ、レナリドミド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、パクリタキセルおよびドセタキセルからなる群から選択される、項目５２記載の使用。
[項目５４]
（ａ）Ｉｇが配列番号５および６のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＨＥＲ２であり、
（ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
（ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、
（ｄ）ｎが１〜１２である、項目２記載のイムノコンジュゲート。
[項目５５]
（ａ）Ｉｇが配列番号７および８のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＨＥＲ２であり、
（ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
（ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、
（ｄ）ｎが１〜１２である、項目２記載のイムノコンジュゲート。
[項目５６]
（ａ）Ｉｇが配列番号９および１０のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＦＯＬＲ１であり、
（ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
（ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、
（ｄ）ｎが１〜１２である、項目２記載のイムノコンジュゲート。
[項目５７]
（ａ）Ｉｇが配列番号１１および１２のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＦＯＬＲ１であり、
（ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
（ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、
（ｄ）ｎが１〜１２である、項目２記載のイムノコンジュゲート。
[項目５８]
（ａ）Ｉｇが配列番号１３および１４のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＦＯＬＲ１であり、
（ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
（ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、
（ｄ）ｎが１〜１２である、項目２記載のイムノコンジュゲート。
[項目５９]
（ａ）Ｉｇが配列番号１５および１６のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＦＯＬＲ１であり、
（ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
（ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、
（ｄ）ｎが１〜１２である、項目２記載のイムノコンジュゲート。
[項目６０]
（ａ）Ｉｇが配列番号１７および１８のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＣＤ１３８であり、
（ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
（ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、
（ｄ）ｎが１〜１２である、項目２記載のイムノコンジュゲート。
[項目６１]
（ａ）Ｉｇが配列番号１９および２０のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＣＤ１３８であり、
（ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
（ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、
（ｄ）ｎが１〜１２である、項目２記載のイムノコンジュゲート。
[項目６２]
（ａ）Ｉｇが配列番号２１および２２のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＣＤ７９ｂであり、
（ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
（ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、
（ｄ）ｎが１〜１２である、項目２記載のイムノコンジュゲート。
[項目６３]
（ａ）Ｉｇが配列番号２３および２４のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＣＤ７９ｂであり、
（ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
（ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、
（ｄ）ｎが１〜１２である、項目２記載のイムノコンジュゲート。
[項目６４]
ｎが１または２である、項目５４〜６３のいずれか１項記載のイムノコンジュゲート。
[項目６５]
式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ） ｎ を有するイムノコンジュゲートであって、ここで、
（ａ）Ｉｇは二重可変ドメイン免疫グロブリン分子またはその抗原結合性フラグメントであり、ここで、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子は、
（ｉ）結合標的に結合する第１可変ドメインと、
（ｉｉ）反応性リジン残基を含む第２可変ドメインとを含み、
（ｂ）Ｌは、Ｉｇの第２可変ドメインの反応性リジン残基に共有結合しているリンカーであり、
（ｃ）Ｄは薬物部分であり、
（ｄ）ｎは１〜１２である、イムノコンジュゲート。
[項目６６]
ｎが１または２である、項目６５記載のイムノコンジュゲート。

Claims (66)

  1. 式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートであって、ここで、 （ａ）Ｉｇは
    二重可変ドメイン免疫グロブリン分子またはその抗原結合性フラグメントであり、ここで
    、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子は、 （ｉ）結合標的に結合する第１可変ド
    メインと、 （ｉｉ）反応性残基を含む第２可変ドメインとを含み、 （ｂ）Ｌは、
    Ｉｇの第２可変ドメインの反応性残基に共有結合しているリンカーであり、 （ｃ）Ｄは
    薬物部分であり、 （ｄ）ｎは１〜１２の整数から選択される、イムノコンジュゲート。
  2. 反応性残基がリジンである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  3. ｎが１または２である、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  4. Ｉｇの第１可変ドメインが第２可変ドメインよりもＮ末端に近くに配置される、請求項１
    記載のイムノコンジュゲート。
  5. Ｉｇが二重特異性免疫グロブリン分子である、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  6. Ｄが２以上の同じ又は異なる薬物部分を含む、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  7. 抗原結合性フラグメントがＩｇの第１および第２可変ドメインを含み、Ｆａｂ、Ｆａｂ’
    、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖから選択される、請求項１記載のイムノコンジュ
    ゲート。
  8. 抗原結合性フラグメントがＦａｂを含む、請求項７記載のイムノコンジュゲート。
  9. Ｉｇがキメラ免疫グロブリン配列を含む、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  10. Ｉｇがヒト化免疫グロブリン配列を含む、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  11. Ｉｇがヒト免疫グロブリン配列を含む、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  12. Ｉｇの第２可変ドメインが配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１記載のイムノコン
    ジュゲート。
  13. Ｉｇの第２可変ドメインが配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１記載のイムノコン
    ジュゲート。
  14. 結合標的が腫瘍細胞表面抗原である、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  15. 腫瘍細胞表面抗原が、ＨＥＲ２、ＦＯＬＲ１、ＣＤ１３８およびＣＤ７９ｂから選択され
    る、請求項１４記載のイムノコンジュゲート。
  16. Ｉｇの第１可変ドメインがＨＥＲ２に結合する、請求項１５記載のイムノコンジュゲート
    。
  17. Ｉｇの第１可変ドメインがＦＯＬＲ１に結合する、請求項１５記載のイムノコンジュゲー
    ト。
  18. Ｉｇの第１可変ドメインがＣＤ１３８に結合する、請求項１５記載のイムノコンジュゲー
    ト。
  19. Ｉｇの第１可変ドメインがＣＤ７９ｂに結合する、請求項１５記載のイムノコンジュゲー
    ト。
  20. 薬物部分が細胞毒性剤である、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  21. 細胞毒性剤が、毒素、化学療法剤、抗生物質、放射性同位体、キレート化放射性同位体お
    よび核酸分解酵素から選択される、請求項２０記載のイムノコンジュゲート。
  22. Ｄがオーリスタチン、ドロスタチンまたはセマドチンである、請求項１記載のイムノコン
    ジュゲート。
  23. ＤがＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである、請求項２２記載のイムノコンジュゲート。
  24. Ｄがカンプトテシンである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  25. カンプトテシンがＳＮ−３８である、請求項２４記載のイムノコンジュゲート。
  26. Ｄがメイタンシノイドである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  27. メイタンシノイドがＤＭ１、ＤＭ３またはＤＭ４である、請求項２６記載のイムノコンジ
    ュゲート。
  28. Ｄがピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）である、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  29. Ｄがエンジインである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  30. Ｄがカリケアマイシンである、請求項２９記載のイムノコンジュゲート。
  31. Ｄがチアンシマイシンある、請求項２９記載のイムノコンジュゲート。
  32. Ｄがドキソルビシンである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  33. ＤがＭＭＤＸである、請求項３２記載のイムノコンジュゲート。
  34. ＤがＰＮＵ−１５９６８２である、請求項３３記載のイムノコンジュゲート。
  35. ＤがｓｉＲＮＡである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  36. Ｌが可逆的リンカーである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  37. Ｌが不可逆的リンカーである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  38. Ｌが切断性リンカーである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  39. Ｌが非切断性リンカーである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  40. Ｌが分岐リンカーである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  41. Ｌが直鎖状リンカーである、請求項１記載のイムノコンジュゲート。
  42. 請求項１〜４１のいずれか１項記載のイムノコンジュゲートの有効量と医薬上許容される
    担体とを含む、癌の治療のための医薬組成物。
  43. 癌を治療するための医薬の製造における、請求項１〜４１のいずれか１項記載のイムノコ
    ンジュゲートの使用。
  44. 癌が血液癌、癌腫、肉腫、黒色腫または中枢神経系癌である、請求項４３記載の使用。
  45. 血液癌が白血病、リンパ腫、骨髄腫または骨髄異形成症候群である、請求項４４記載の使
    用。
  46. 白血病が急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病または慢性リン
    パ球性白血病である、請求項４５記載の使用。
  47. リンパ腫がホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫である、請求項４５記載の使用。
  48. 癌腫が皮膚癌、頭頸部、甲状腺、肺、鼻咽頭、結腸直腸、肝臓、膀胱、卵巣、子宮頚部、
    子宮内膜、前立腺、胃、食道、膵臓、腎臓または乳癌である、請求項４４記載の使用。
  49. 肉腫が血管肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、胃腸間質腫瘍、平滑筋肉腫、脂
    肪肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、骨肉腫、多形性肉腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫および滑膜
    肉腫である、請求項４４記載の使用。
  50. 中枢神経系癌が神経膠腫、髄膜腫または神経腫である、請求項４４記載の使用。
  51. 医薬が第２治療剤の有効量を更に含む、請求項４３記載の使用。
  52. 第２治療剤が抗体、抗腫瘍剤、細胞毒性剤、抗血管新生剤または免疫抑制剤である、請求
    項５１記載の使用。
  53. 第２治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シ
    クロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド、ドキソルビシン、ダウノルビシン
    、バルルビシン、イダルビシン、エピルビシン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、プ
    リカマイシン、マイトマイシン、ベバシズマブ、イマチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニ
    ブ、イブルチニブ、イデラリシブ、レナリドミド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビ
    ノレルビン、ビンデシン、パクリタキセルおよびドセタキセルからなる群から選択される
    、請求項５２記載の使用。
  54. （ａ）Ｉｇが配列番号５および６のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的が
    ＨＥＲ２であり、 （ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可
    逆的リンカーであり、 （ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、 （ｄ）ｎが１〜１２である、請求
    項２記載のイムノコンジュゲート。
  55. （ａ）Ｉｇが配列番号７
    および８のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的がＨＥＲ２であり、 （ｂ
    ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状不可逆的リンカーであり、
    （ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、 （ｄ）ｎが１〜１２である、請求項２記載のイムノコンジ
    ュゲート。
  56. （ａ）Ｉｇが配列番号９および１０のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標的
    がＦＯＬＲ１であり、 （ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖状
    不可逆的リンカーであり、 （ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、 （ｄ）ｎが１〜１２である、
    請求項２記載のイムノコンジュゲート。
  57. （ａ）Ｉｇが配列番号１１および１２のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標
    的がＦＯＬＲ１であり、 （ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖
    状不可逆的リンカーであり、 （ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、 （ｄ）ｎが１〜１２である
    、請求項２記載のイムノコンジュゲート。
  58. （ａ）Ｉｇが配列番号１３および１４のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標
    的がＦＯＬＲ１であり、 （ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖
    状不可逆的リンカーであり、 （ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、 （ｄ）ｎが１〜１２である
    、請求項２記載のイムノコンジュゲート。
  59. （ａ）Ｉｇが配列番号１５および１６のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標
    的がＦＯＬＲ１であり、 （ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖
    状不可逆的リンカーであり、 （ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、 （ｄ）ｎが１〜１２である
    、請求項２記載のイムノコンジュゲート。
  60. （ａ）Ｉｇが配列番号１７および１８のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標
    的がＣＤ１３８であり、 （ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖
    状不可逆的リンカーであり、 （ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、 （ｄ）ｎが１〜１２である
    、請求項２記載のイムノコンジュゲート。
  61. （ａ）Ｉｇが配列番号１９および２０のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標
    的がＣＤ１３８であり、 （ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖
    状不可逆的リンカーであり、 （ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、 （ｄ）ｎが１〜１２である
    、請求項２記載のイムノコンジュゲート。
  62. （ａ）Ｉｇが配列番号２１および２２のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標
    的がＣＤ７９ｂであり、 （ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖
    状不可逆的リンカーであり、 （ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、 （ｄ）ｎが１〜１２である
    、請求項２記載のイムノコンジュゲート。
  63. （ａ）Ｉｇが配列番号２３および２４のアミノ酸配列を含み、第１可変ドメインの結合標
    的がＣＤ７９ｂであり、 （ｂ）Ｌが、Ｉｇの反応性リジン残基に共有結合している直鎖
    状不可逆的リンカーであり、 （ｃ）ＤがＭＭＡＦであり、 （ｄ）ｎが１〜１２である
    、請求項２記載のイムノコンジュゲート。
  64. ｎが１または２である、請求項５４〜６３のいずれか１項記載のイムノコンジュゲート。
  65. 式Ｉｇ−（Ｌ−Ｄ）ｎを有するイムノコンジュゲートであって、ここで、 （ａ）Ｉｇは
    二重可変ドメイン免疫グロブリン分子またはその抗原結合性フラグメントであり、ここで
    、二重可変ドメイン免疫グロブリン分子は、 （ｉ）結合標的に結合する第１可変ド
    メインと、 （ｉｉ）反応性リジン残基を含む第２可変ドメインとを含み、 （ｂ）
    Ｌは、Ｉｇの第２可変ドメインの反応性リジン残基に共有結合しているリンカーであり、
    （ｃ）Ｄは薬物部分であり、 （ｄ）ｎは１〜１２である、イムノコンジュゲート。
  66. ｎが１または２である、請求項６５記載のイムノコンジュゲート。
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