JP2014166998A - ６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリンの多形および水和物の形態、塩、ならびに製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】蛋白質チロシンキナーゼモジュレーター、とりわけ、ｃ−Ｍｅｔの阻害剤である、６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリンの副生成物の少ない製造方法の提供。
【解決手段】６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリン（下記式（Ｉ））の新規多形及び水和物の形態並びに塩、それらの製造方法。前記多形若しくは水和物の形態又は塩の最低１種を含んでなる製薬学的組成物。並びに前記組成物の癌への治療的及び／又は予防的使用。

【選択図】なし

Description

本発明は、６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリン（化合物（Ｉ））の新規多形および水和物の形態ならびに塩、それらの製造方法、前記多形若しくは水和物の形態または塩の最低１種を含んでなる製薬学的組成物、ならびにこうした組成物の治療的および／若しくは予防的使用に関する。本発明は化合物（Ｉ）の新たな製造様式もまた提供する。

化合物６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリン（本明細書で化合物（Ｉ））は、特許文献１として公開された同時係属出願特許文献２に開示される。化合物（Ｉ）はタンパク質チロシンキナーゼモジュレーター、とりわけｃ−Ｍｅｔの阻害剤である。

肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）（分散因子としてもまた知られる）受容体ｃ−Ｍｅｔは、細胞の増殖、形態形成および運動性を調節する受容体チロシンキナーゼである。ｃ−Ｍｅｔ遺伝子は１７０ｋＤのタンパク質に翻訳され、これは１４０ｋＤのβ膜貫通サブユニットおよび５０ｋＤのグリコシル化細胞外αサブユニットから構成される細胞表面受容体にプロセシングされる。

ｃ−Ｍｅｔ中の突然変異、ｃ−Ｍｅｔおよび／若しくはＨＧＦ／ＳＦの過剰発現、その細胞によるｃ−ＭｅｔおよびＨＧＦ／ＳＦの発現、ならびに過剰発現および／若しくは異常なｃ−Ｍｅｔシグナル伝達が多様なヒト充実性腫瘍に存在し、そして血管新生、腫瘍発生、浸潤および転移に参加すると考えられている。例えば制御されないｃ−Ｍｅｔ活性化を伴う細胞株は高度に浸潤性および転移性の双方である。ｃ−Ｍｅｔ受容体を発現する正常および形質転換細胞の間の顕著な差違は、腫瘍細胞中のチロシンキナーゼドメインのリン酸化がしばしばリガンドの存在に依存しないことである。

ｃ−Ｍｅｔの突然変異／変化は、腫瘍および癌腫、例えば遺伝性および散発性ヒト乳頭状腎細胞癌、乳癌、肝転移を場合によっては伴う結腸直腸癌、胃癌、神経膠腫、卵巣癌、肝細胞癌、頭頚部扁平上皮細胞癌、精巣癌、基底細胞癌、肝癌、肉腫、悪性胸膜中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、滑膜肉腫、甲状腺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）および小細胞肺癌、膀胱の移行上皮癌、精巣癌、基底細胞癌、肝癌、ならびに白血病、リンパ腫および骨髄腫、例えば急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、急性未分化白血病（ＡＵＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、成人Ｔ細胞ＡＬＬ、三血球系骨髄異形成を伴うＡＭＬ（ＡＭＬ ｗｉｔｈ ｔｒｉｌｉｎｅａｇｅ ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ）（ＡＭＬ／ＴＭＤＳ）、混合系統白血病（ＭＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性障害（ＭＰＤ）、多発性骨髄腫、（ＭＭ）、骨髄肉腫、非ホジキンリンパ腫およびホジキン病（ホジキンリンパ腫ともまた呼ばれる）を包含する多数のヒト疾患で同定されている。

ｃ−Ｍｅｔの過剰発現は、例えば、乳癌、非小細胞肺癌、膵内分泌腫瘍、前立腺癌、食道腺腫、結腸直腸癌、唾液腺癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および子宮内膜癌のようなある種の疾患の予後の潜在的に有用な予測因子であるともまた考えられている。

多様なヒト癌の病因における異常なＨＧＦ／ＳＦ−Ｍｅｔシグナル伝達の役割のため、化合物（Ｉ）を包含するｃ−Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼの阻害剤は、ｃ−Ｍｅｔが過剰発現されない若しくは別の方法で変えられていないものを包含する浸潤性／転移性の表現型にＭｅｔ活性が寄与する癌の処置に広範な応用を有する。ｃ−Ｍｅｔの阻害剤は血管新生もまた阻害し、そして従って関節リウマチおよび網膜症のような新たな脈管構造の形成を伴う疾患の処置に有用性を有すると考えられる（非特許文献１）。

特許文献２（特許文献１）は化合物（Ｉ）の製造方法を開示し、ここで、最後の段階で、２，２−ジフルオロ−２−キノリン−６−イルアセトヒドラジドおよび３−クロロ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジンを１−ブタノール中で長時間還流して化合物（Ｉ）を提供する（非特許文献２）。しかしながら、これらの比較的過酷な反応条件は、副生成物、とりわけジフルオロ（キノリン−６−イル）酢酸ブチルおよび３−ブトキシ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジンの形成につながり得る。これゆえに、反応後に化合物（Ｉ）は反復されるクロマトグラフィーにより精製される必要があり、これは上の製造方法の収量を低下させ得かつスケールアップ可能性（ｕｐｓｃａｌａｂｉｌｉｔｙ）を妨げ得る。

従って、化合物（Ｉ）の改良された製造方法、とりわけ、改良された収量、より高い純度、製造工程のより少ない操作および／若しくはより良好なスケールアップ可能性を見込みうる方法を提供する必要性が存在する。

結晶多形および水和物はその化合物の多様な固体状態の分子形態を表す。異なる結晶多形および水和物は格子中の分子の異なる充填により異なる結晶構造を表す。これは異なる結晶対称性および／若しくは単位格子パラメータをもたらし、それらは物理特性に直接影響する。

結晶多形形態および水和物は、製薬業界、およびとりわけ適する剤形の開発に関与する者に興味深い。多形形態若しくは水和物が臨床若しくは安定性試験の間に一定に保持されない場合、使用若しくは試験される正確な剤形はロットごとに比較可能でないことがある。化合物を臨床試験若しくは商業的製品で使用する場合に、高純度の選択された多形形態若しくは水和物を伴う化合物の製造方法を有することもまた望ましい。存在する不純物が望ましくない毒物学的効果を生じうるためである。ある種の多形形態若しくは水和物は、高められた熱力学的安定性、高められた化学的安定性を表しうるか、若しくはより容易に大量に高純度で製造されることができ、そして従って製薬学的製剤への包含により適する。ある種の多形若しくは水和物は、吸湿傾向の欠如、改良された溶解性、異なる格子エネルギーによる高められた溶解速度、および改良された（経口）生物学的利用性などのような他の有利な物理特性を表しうる。

従って、とりわけこうした形態が改良された特性を引き起こしうる化合物（Ｉ）の別個のかつ特徴付けられた多形形態および水和物を得る必要性が存在する。

塩もまたある化合物の異なる分子形態を表す。ある種の塩の形態は、高められた熱力学的安定性を表しうるか、若しくはより容易に大量に高純度で製造することができ、そして従って製薬学的製剤への包含により適する。ある種の塩は、吸湿傾向の欠如、改良された溶解性、異なる格子エネルギーによる高められた溶解速度、および改良された（経口）生物学的利用性などのような他の有利な物理特性を表しうる。

これゆえに、こうした形態が改良された特性を引き起こしうる化合物（Ｉ）のさらなる塩の形態を得る必要性が存在する。

第ＷＯ ２００７／０７５５６７号明細書 第ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４８２４１号明細書

Ｍｉｃｈｉｅｌｉら Ｐ．２００４．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ６（１）：６１−７３ Ａｌｂｒｉｇｈｔ，Ｊ．Ｄ．ら １９８１ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：５９２−６００

［発明の要約］
本発明は、当該技術分野における上で論考された必要性を扱う。

より具体的には、化合物（Ｉ）が１種以上の多形若しくは水和物の結晶形で存在し得ることが驚くべきことに見出された。これらの形態は、例えば癌を包含する増殖性の適応症のようなｃ−Ｍｅｔ関連障害の処置のための処方された生成物で使用しうる。各形態は例えば生物学的利用性、安定性若しくは製造可能性において他者を上回る利点を有しうる。大量の製造および取扱いに他の多形形態より適することがありそうである化合物（Ｉ）の結晶多形形態が発見された。高純度のこれらの多形若しくは水和物の形態の製造方法を本明細書に記述する。

本発明のさらなる一目的は、化合物（Ｉ）の他の多形若しくは水和物の形態を実質的に含まない化合物（Ｉ）の各多形若しくは水和物の形態の製造方法を提供することである。

加えて、上で論考されたところの多様な多形若しくは水和物の形態の化合物（Ｉ）を含んでなる製薬学的製剤、およびこうした製薬学的製剤を投与することによるｃ−Ｍｅｔ関連の過剰増殖状態の処置方法を提供することが、本発明の一目的である。

従って、局面において、本発明は、式（Ｉ）の化合物すなわち６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリン：

の結晶形態および水和物を提供する。

従って、一局面において、本発明は、結晶形態が形態Ｉの実質的に純粋な多形である式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。形態Ｉは、その非吸湿性の特徴ならびに良好な結晶学的および化学的安定性によりとりわけ有利でありうる。

別の局面において、本発明は、従って、結晶形態が６．１±０．２、１６．５±０．２および１９．０±０．２の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有する、式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。強度の変動が、強度に影響する過程、最も重要にはサンプルの処理履歴により発生しうる。

さらなる一局面において、本発明は、結晶形態が図１に示されると本質的に同一の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターンを有する、式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。

さらなる一局面において、本発明は、従って、結晶形態が、１０２７±２、８３５±２および８２２±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる；より具体的には１５７８±２、１０２７±２、９８２±２、９７１±２、８９２±２、８５２±２、８３５±２および８２２±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる；なおより具体的には１５７８±２、１０２７±２、１０７７±２、１０５０±２、９８２±２、９７１±２、９６１±２、９３２±２、８９２±２、８５２±２、８３５±２、８２２±２、７７２±２、６７５±２、５７６±２、５５４±２および５２８±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトルを有する、式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。

また具体的には、本発明は、結晶形態が表２若しくは図２に示されると本質的に同一の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトルを有する、式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。

一局面において、化合物（Ｉ）の多形形態Ｉは、１０２７±２、９８２±２および８９２±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる；より具体的には１５４２±２、１３２３±２、１１７５±２、１１２１±２、１０２７±２、９８２±２、９７１±２、９６１±２、８９２±２、７１６±２、６７５±２および５５４±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる、それに特異的なＩＲスペクトルのピークを特徴とする。

さらなる一局面において、本発明は、従って、結晶形態が、１分あたり１０℃の走査速度で走査する場合に示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定されるところの１９９．０℃と２０３．５℃の間の融解吸熱を有する、式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。

一局面において、本発明は、結晶形態が形態ＩＩの実質的に純粋な多形である式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。

なおさらなる一局面において、本発明は、従って、結晶形態が、１分あたり１０℃の走査速度で走査する場合にＤＳＣにより測定されるところの１８９．０℃と１９７．０℃の間の融解吸熱を有する、式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。

一局面において、本発明は、結晶形態が形態ＩＩＩの実質的に純粋な多形である式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。

別の局面において、本発明は、従って、結晶形態が、６．７±０．２、１１．３±０．２および１５．３±０．２の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有する、式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。強度の変動は、強度に影響する過程、最も重要にはサンプルの処理履歴により発生し得る。

さらなる一局面において、本発明は、結晶形態が図３に示されると本質的に同一の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターンを有する、式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。

さらなる一局面において、本発明は、従って、結晶形態が、１５７６±２、１２２５±２、８３６±２および８３０±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる；より具体的には１５７６±２、１２２５±２、１１７９±２、１１４６±２、１１０５±２、１０４２±２、９８７±２、９６９±２、８３６±２、８３０±２および８１１±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる；なおより具体的には１５７６±２、１３３２±２、１２４８±２、１２２５±２、１１７９±２、１１５８±２、１１４６±２、１１０５±２、１０４２±２、９８７±２、９６９±２、９３２±２、８５０±２、８３６±２、８３０±２、８１１±２および７７２±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトルを有する、式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。

また具体的には、本発明は、結晶形態が、表４若しくは図４に示されると本質的に同一の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトルを有する、式（Ｉ）の化合物の結晶形態を提供する。

一局面において、化合物（Ｉ）の多形形態ＩＩＩは、１０４２±２、９８７±２および９６９±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる；より具体的には２９５３±２、１５３７±２、１３３２±２、１１７９±２、１１０５±２、１０４２±２、９８７±２、９６９±２、７１４±２および６７２±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる、それに特異的なＩＲスペクトルのピークを特徴とする。

一局面において、本発明は式（Ｉ）の化合物の水和物の形態を提供する。水和物の形態はとりわけ安定であることができ、そして従って例えば水性懸濁液のような水性媒体中で有利でありうる。

別の局面において、本発明は、従って、水和物の形態が、８．４±０．３、１９．５±０．３および２９．０±０．３の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有する式（Ｉ）の化合物の水和物の形態を提供し；強度の変動が、強度に影響する過程、最も重要にはサンプルの処理履歴により発生し得る。

さらなる一局面において、本発明は、水和物の形態が図５に示されると本質的に同一の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターンを有する、式（Ｉ）の化合物の水和物の形態を提供する。

さらなる一局面において、本発明は、従って、水和物の形態が、８３６±２、８２５±２および６６８±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる；より具体的には３２９９±２、１５７７±２、９８５±２、８３６±２、８２５±２、７７４±２、６８５±２および６６８±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる；なおより具体的には３２９９±２、１５７７±２、１２２４±２、１１８３±２、１１５８±２、１１１４±２、１０５１±２、９８５±２、８３６±２、８２５±２、７７４±２、７３４±２、７１６±２、６８５±２、６６８±２および４８１±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトルを有する、式（Ｉ）の化合物の水和物の形態を提供する。

また具体的には、本発明は、水和物の形態が表６若しくは図６に示されると本質的に同一の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトルを有する、式（Ｉ）の化合物の水和物の形態を提供する。

一局面において、化合物（Ｉ）の水和物の形態は、３２９９±２、９８５±２および６６８±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる；より具体的には３２９９±２、１５３９±２、１４８１±２、１３４１±２、１１８３±２、１１２６±２、１１１４±２、９９１±２、９８５±２、９７７±２、９１４±２および６６８±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる、それに特異的なＩＲスペクトルのピークを特徴とする。

関連する一局面において、本発明は、最低５０重量％、例えば最低６０％、好ましくは最低７０％、例えば最低８０％、より好ましくは最低９０％、例えば最低９５％若しくは最低９８％の多形形態Ｉを含んでなる固体の形態の式（Ｉ）の化合物を提供する。

一局面において、本発明は、最低５０重量％、例えば最低６０％、好ましくは最低７０％、例えば最低８０％、より好ましくは最低９０％、例えば最低９５％若しくは最低９８％の多形形態ＩＩＩを含んでなる固体の形態の式（Ｉ）の化合物を提供する。

一局面において、本発明は、最低５０重量％、例えば最低６０％、好ましくは最低７０％、例えば最低８０％、より好ましくは最低９０％、例えば最低９５％若しくは最低９８％の上の水和物の形態を含んでなる固体の形態の式（Ｉ）の化合物を提供する。

一局面において、本発明は、多形形態Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩならびに水和物の形態から選択される最低２形態の混合物を含んでなる固体の形態の式（Ｉ）の化合物を提供する。好ましくは、前記混合物は、固体の形態の式（Ｉ）の化合物の最低５０重量％、例えば最低６０％、好ましくは最低７０％、例えば最低８０％、より好ましくは最低９０％、例えば最低９５％若しくは１００％さえを構成しうる。

好ましい一態様において、固体の形態の式（Ｉ）の化合物は多形形態Ｉおよび多形形態ＩＩＩの混合物を含み得る。多形形態のＩおよびＩＩＩの前記混合物は、好ましくは（ｗ／ｗ）：約９０％の多形形態Ｉおよび約１０％の多形形態ＩＩＩ；若しくは約８０％の多形形態Ｉおよび約２０％の多形形態ＩＩＩ；若しくは約７０％の多形形態Ｉおよび約３０％の多形形態ＩＩＩ；若しくは約６０％の多形形態Ｉおよび約４０％の多形形態ＩＩＩを含有しうる。

さらなる一局面において、本発明は、化合物（Ｉ）の上の多形形態および水和物、とりわけ多形形態ＩおよびＩＩＩならびに水和物の形態の製造方法を提供する。

別の局面において、本発明は、
（ａ）式（ＩＩ）

ここでＷ¹は脱離基である、
の中間体を、式（ＩＩＩ）

の中間体と酸の存在下で反応させて、それにより式（Ｉ）の化合物の塩を得ること；および
（ｂ）前記塩を塩基と接触させてそれにより式（Ｉ）の化合物を得ること
を含んでなる、式（Ｉ）の化合物の製造方法を提供する。

好ましくは、上の段階（ａ）で使用される酸は、約３未満、より好ましくは１に等しいか若しくはそれ未満のｐＫａを有する。とりわけ好ましい態様において、段階（ａ）で使用される酸はハロ水素酸、より好ましくはＨＣｌ若しくはＨＢｒ、硫酸（Ｈ₂ＳＯ₄）、トリフルオロ酢酸、またはスルホン酸、より好ましくはｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、カンファースルホン酸、メタンスルホン酸若しくはエタンスルホン酸でありうる。

発明者は、驚くべきことに、中間体（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の反応での酸の包含が前記反応を大きく促進することを理解した。結果、該反応は、以前よりかなり低い温度（例えば１２０℃未満で、例えば８０℃と１１０℃の間）起こることができ、これは副生成物の形成を低下させる。従って純粋な化合物（Ｉ）を得るためのカラムクロマトグラフィーを回避し得る。加えて、酸の包含は、反応時間もまた、好ましくは２０時間未満に、より好ましくは１５時間未満に、なおより好ましくは例えば約４時間と約１０時間の間のような１０時間若しくはそれ未満に短縮しうる。これは副生成物の形成の機会もまた減少させ得、ならびに該過程を促進する。さらに、該反応の収率を、従って、反応混合物の約８５％若しくはそれ以上と同じくらいの転化、および約７５％若しくはそれ以上、または約８０％若しくはそれ以上の単離される収率と同じくらいまで改良し得る。また、形成される塩を反応混合物から沈殿させる可能性により、反応混合物からの純粋な化合物としての塩の単離は大きく単純化され、それにより大規模な処理（ｗｏｒｋ−ｕｐ）および抽出処置を回避する。

従って、本発明は、式（Ｉ）の化合物の塩、より好ましくは１に等しいか若しくはそれ未満のｐＫａを有する酸との塩、およびなおより好ましくはＨＣｌ、ＨＢｒ、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸との塩もまた提供する。上で説明されたとおり、こうした塩は式（Ｉ）の化合物の製造でとりわけ有用な中間体である。加えて、認識され得るとおり、こうした塩はまた、例えば改良された安定性、溶解性、生物学的利用性などのような際立った薬理学的利点を表しうる化合物（Ｉ）の付加的な形態も表す。とりわけ、本発明は、酸（但し該酸はＨＣｌでない）との式（Ｉ）の化合物の塩、より好ましくは１に等しいか若しくはそれ未満のｐＫａを有する酸との塩、およびなおより好ましくはＨＢｒ、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸との塩を提供する。

これを鑑み、本発明は、酸の存在下で中間体（ＩＩ）を中間体（ＩＩＩ）と反応させることを含んでなる式（Ｉ）の化合物の塩の製造方法もまた提供する。

関連する局面において、本発明は以下のいずれかを提供する。すなわち
−結晶形態が形態Ｉの実質的に純粋な多形である式（Ｉ）の化合物の結晶形態を含んでなる製薬学的組成物；
−結晶形態が形態ＩＩＩの実質的に純粋な多形である式（Ｉ）の化合物の結晶形態を含んでなる製薬学的組成物；
−結晶形態が本明細書に教示されるところの実質的に純粋な水和物である式（Ｉ）の化合物の結晶形態を含んでなる製薬学的組成物；
−固体の形態の式（Ｉ）の化合物を含んでなる製薬学的組成物であって、前記固体の形態が、多形形態Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩならびに水和物の形態から選択される最低２形態の混合物を含んでなり；好ましくは、前記混合物は前記固体の形態の最低５０重量％、例えば最低６０％、好ましくは最低７０％、例えば最低８０％、より好ましくは最低９０％、例えば最低９５％若しくは１００％さえを構成することができ；
−固体の形態の式（Ｉ）の化合物を含んでなる製薬学的組成物であって、前記固体の形態が多形形態Ｉおよび形態ＩＩＩの混合物を含んでなり；好ましくは、前記混合物が（ｗ／ｗ）：約９０％の多形形態Ｉおよび約１０％の多形形態ＩＩＩ；若しくは約８０％の多形形態Ｉおよび約２０％の多形形態ＩＩＩ；若しくは約７０％の多形形態Ｉおよび約３０％の多形形態ＩＩＩ；若しくは約６０％の多形形態Ｉおよび約４０％の多形形態ＩＩＩを含有しうるか；または
−式（Ｉ）の化合物の塩を含んでなる製薬学的組成物であって；好ましくは前記塩は１に等しいか若しくはそれ未満のｐＫａを有する酸とであることができ；より好ましくは、前記塩は、ＨＣｌ、ＨＢｒ、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸から選ばれる酸、より好ましくはＨＢｒ、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸のいずれかとでありうる。

さらなる一局面において、本発明は、タンパク質チロシンキナーゼモジュレーター、とりわけｃ−Ｍｅｔの阻害剤としての、ならびに、とりわけ細胞若しくは被験体のｃ−Ｍｅｔのキナーゼ活性を低下若しくは阻害するための、および／または細胞若しくは被験体でのｃ−Ｍｅｔ発現を調節するための、ならびに／または被験体における細胞増殖性疾患および／若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害を予防若しくは処置、好ましくは処置するための；式（Ｉ）の化合物の多形形態Ｉ、ＩＩ若しくはＩＩＩのいずれかまたはそれらのいずれかの混合物；および／あるいは式（Ｉ）の化合物の水和物の形態；および／あるいは式（Ｉ）の化合物の塩を提供する。

別の局面において、本発明は、被験体のｃ−Ｍｅｔのキナーゼ活性を低下若しくは阻害するための、および／または被験体でのｃ−Ｍｅｔ発現を調節するための、ならびに／または被験体における細胞増殖性疾患および／若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害を予防若しくは処置、好ましくは処置するための医薬品の製造のための；式（Ｉ）の化合物の多形形態Ｉ、ＩＩ若しくはＩＩＩのいずれかまたはそれらのいずれかの混合物；および／あるいは式（Ｉ）の化合物の水和物の形態；および／あるいは式（Ｉ）の化合物の塩の使用を提供する。

関連する一局面において、本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの細胞のｃ−Ｍｅｔのキナーゼ活性を低下若しくは阻害、かつ／またはｉｎ ｖｉｔｒｏの細胞でのｃ−Ｍｅｔ発現を調節するための；式（Ｉ）の化合物の多形形態Ｉ、ＩＩ若しくはＩＩＩのいずれかまたはそれらのいずれかの混合物；および／あるいは式（Ｉ）の化合物の水和物の形態；および／あるいは式（Ｉ）の化合物の塩の使用を提供する。

また、本発明は、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物の多形形態Ｉ、ＩＩ若しくはＩＩIのいずれかまたはそれらのいずれかの混合物；および／あるいは式（Ｉ）の化合物の水
和物の形態；および／あるいは式（Ｉ）の化合物の塩を被験体に投与することを含んでなる、被験体のｃ−Ｍｅｔのキナーゼ活性の低下若しくは阻害、ならびに／または細胞若しくは被験体でのｃ−Ｍｅｔ発現の調節、ならびに／または被験体における細胞増殖性疾患および／若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害の予防若しくは処置、好ましくは処置方法を提供する。好ましくは、これらは本明細書に教示されるところの製薬学的組成物の形態で投与し得る。好ましくは、被験体は動物、より好ましくは温血動物、なおより好ましくは哺乳動物、例えばヒト若しくはヒト以外の哺乳動物でありうる。

本発明のこれらおよびさらなる局面ならびに好ましい態様は、以下の節および付随する請求の範囲に記述する。

［発明の詳細な記述］
本明細書で使用されるところの単数形「ある（ａ、ａｎ）」および「該（ｔｈｅ）」は、文脈が別の方法で明瞭に示さない限り単数および複数双方の指示物を包含する。

本明細書で使用されるところの「含んでなること」、「含んでなる」および「より構成される」という用語は、「包含すること」、「包含する」若しくは「含有すること」、「含有する」と同義であり、および包括的であるか若しくは制限がなく、ならびに付加的な列挙されないメンバー、要素若しくは方法段階を除外しない。

終点による数値範囲の列挙は、それぞれの範囲内に含まれる全部の数字および画分ならびに列挙される終点を包含する。

パラメータ、量、一時的期間などのような測定可能な値を指す場合に本明細書で使用されるところの「約」という用語は、開示される発明で実施するためにこうした変動が適切である限り、指定される値のおよびそれから±１０％若しくは未満、好ましくは±５％若しくは未満、より好ましくは±１％若しくは未満、およびなおより好ましくは±０．１％若しくは未満の変動を包含することを意味している。限定語「約」が指す値は具体的におよび好ましくはそれ自身もまた開示されることが理解されるべきである。

本明細書の本発明に対する背景の論考は本発明の情況を説明するために包含する。これは、指される物質のいずれかが、請求の範囲のいずれかの優先日の時点でいずれかの国で公表されたか、既知であったか若しくは普遍的な一般知識の一部であったことの承認と解釈されるべきでない。

略語
本明細書で使用されるところの以下の略語は以下の意味を有することを意図している（本明細を通じ、必要な場合は追加の略語を提供する）。
ＢＴＥＡＣ 塩化ベンジルトリエチルアンモニウム
ＤＡＳＴ ジアルキルアミノサルファートリフルオリド
Ｄｅｏｘｏ−Ｆｌｕｏｒ^TM ビス（２−メトキシエチル）アミノサルファートリフル
オリド
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＳＣ 示差走査熱量測定
ＩＣＨ 調和国際会議
ｉＰｒ イソプロピル
ＩＲ 赤外
ＯＡｃ アセテート
ＯＭｓ メタンスルホニルオキシ（−ＯＳＯ₂ＣＨ₃）
ＯＴｆ トリフラート基（−ＯＳＯ₂ＣＦ₃）
ＯＴｓ ｐ−トルエンスルホニルオキシ（−ＯＳＯ₂Ｃ₆Ｈ₅Ｃ
Ｈ₃）
Ｐｄ／Ｃ パラジウム／カーボンブラック
ＰｄＣｌ₂（ＰＰｈ₃）₂ ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（
ＩＩ）
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ₂ ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フ
ェロセン］パラジウム（ＩＩ）
Ｐｄ（ＯＡｃ）₂ 酢酸パラジウム
Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄ テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０
）
Ｐｅｐｐｓｉ−ｉＰｒ ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｅｎｈａｎｃｅｄ ｐｒｅ−ｃａｔ
ａｌｙｓｔ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｓｔａｂｉｌｉ
ｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ（Ｓｉｇ
ｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈの商標）
ＲＴ 室温
ＴＧＡ 熱重量分析
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＸＲＰＤ Ｘ線粉末回折

式（Ｉ）の化合物の多形形態
「多形」という用語は、同一化合物の他の結晶形態に比較して別個の空間格子配置をもつ化合物の結晶形態を指す。

「水和物」という用語は、結晶構造中に結合水を含んでなる化合物の固体状態の分子形態を指す。

「スラリー」という用語は、液体媒体、典型的には水若しくは有機溶媒に懸濁された固体物質を指す。

本発明は式（Ｉ）の化合物の数種の多形および水和物の結晶形態ならびに塩を提供する。前記化合物の各結晶形態は、以下、すなわちＸＲＰＤパターン（すなわち多様な回折角（２θ）のＸ線粉末回折ピーク）；ＤＳＣサーモグラムの吸熱により具体的に説明されるところの融点開始（および水和した形態については水和の開始）；ＤＳＣサーモグラムにより具体的に説明される再結晶開始；ＩＲ分光法；ＴＧＡ挙動；水の吸着；水溶解性；ＩＣＨの高強度光条件下での光安定性、ならびに物理的および化学的貯蔵安定性の１種若しくはそれ以上を特徴とし得る。

「Ｘ線粉末回折パターン」という用語は、実験的に観察される回折図若しくはそれ由来のパラメータを指す。Ｘ線粉末回折パターンは、ピーク位置（横軸）および表示ピーク強度（縦軸）を特徴とする。

「ピーク強度」という用語は、所定のＸ線回折パターン内の測定（カウント）若しくは相対シグナル強度を指す。相対ピーク強度に影響し得る因子は、サンプル厚および好ましい方向（すなわち結晶粒子が無作為に分布されていない）である。本明細書で使用されるところの「ピーク位置」という用語は、Ｘ線粉末回折実験で測定かつ観察されるところのＸ線反射位置を指す。ピーク位置は単位格子の寸法に直接関する。それらのそれぞれのピーク位置により同定されるピークは、式（Ｉ）の化合物の多様な多形形態Ｉ若しくはＩＩＩまたは水和物の回折パターンから抜き出された。

「相対強度」という用語は、サンプルのＸ線回折パターン若しくはＩＲスペクトル由来の強度値を指す。回折パターンの完全な縦軸範囲スケールは１００の値を割り当てられる。

「２シータ値」若しくは「２θ」という用語は、ＸＲＤ実験の実験の設定に基づくピーク位置を指し、そして回折パターンで普遍的な横軸単位である。該実験の設定は、入射ビームがある格子面と角シータ（θ）を形成する場合に反射が回折される場合、該反射ビームが角２シータ（２θ）に記録されることを必要とする。

化合物（Ｉ）の各多形形態、水和物若しくは塩のＸＲＰＤパターンは、発電機ＰＷ３０４０を伴うＰｈｉｌｉｐｓ Ｘ’ＰｅｒｔＰＲＯ ＭＰＤ回折計ＰＷ３０５０／６０で測定した。該装置はＣｕ ＬＦＦ Ｘ線管ＰＷ３３７３／００を装備している。化合物をゼロバックグラウンドサンプルホルダ上で広げた。装置パラメータは、すなわち測定条件は後に続くとおりであった。すなわち、発電機電圧４５ｋＶ；発電機電流量４０ｍＡ；構造
Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ；ステージ：スピナーステージ（ｓｐｉｎｎｅｒ ｓｔａｇｅ）。測定条件は後に続くとおりであった。すなわち、走査モード：連続；走査範囲：３ないし５０° ２θ；ステップサイズ：０．０１６７°／ステップ；計数時間：２９．８４５秒／ステップ；スピナー旋回時間：１秒；放射線型：ＣｕＫα；放射波長：１．５４０５６Å；入射ビーム路（プログラム。発散スリット：１５ｍｍ；Ｓｏｌｌｅｒスリット：０．０４ｒａｄ；ビームマスク：１５ｍｍ；抗散乱スリット：１°；ビームナイフ：＋）；回折ビーム路（長抗散乱シールド（ｌｏｎｇ ａｎｔｉ ｓｃａｔｔｅｒ ｓｈｉｅｌｄ）：＋；Ｓｏｌｌｅｒスリット：０．０４ｒａｄ；Ｎｉフィルター：＋；検出器：Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ。

当業者は、ピーク位置（２θ）が若干の装置間変動性、典型的には約＋０．１°若しくは−０．１°を示しうることを認識するであろう。従って、ピーク位置（２θ）が報告される場合、当業者は、こうした数字がこうした装置間変動性を包含することを意図していることを認識するであろう。さらに、本発明の固体の形態が、所定の図で示されるものと本質的に同一のＸＲＰＤパターンを有すると記述される場合、「本質的に同一」という用語は、回折ピーク位置のこうした装置間変動性を包含することを意図している。さらに、当業者は、相対ピーク強度が装置間変動性、ならびに結晶化度、好ましい方向、調製されたサンプル表面、および当業者に既知の他の因子による変動性を示すことができ、そして質的尺度としてのみ採用されるべきであることを認識するであろう。

化合物（Ｉ）の各多形形態若しくは水和物のＩＲスペクトルは、ＫＢｒ窓およびＧｅ／ＫＢｒビームスプリッタをもつＤＴＧＳ検出器を伴うＴｈｅｒｍｏ Ｎｅｘｕｓ ６７０
ＦＴＩＲ分光光度計を使用して測定した。該装置は、Ｓｉ結晶を伴うＨａｒｒｉｃｋ Ｓｐｌｉｔ Ｐｅａ ｍｉｃｒｏ ＡＴＲアクセサリを装備していた。スペクトルは、以下のパラメータ、すなわち走査数：３２；分解能：１ｃｍ^-1；波長範囲：４０００ないし４００ｃｍ^-1を使用して収集した。全スペクトルを正規化しかつベースライン補正した。

化合物（Ｉ）の多様な多形若しくは水和物の形態または塩はまた示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用しても識別された。ＤＳＣは、温度の上昇を用いて固体サンプルと適切な参照の間の熱エネルギーの差違を測定する。ＤＳＣサーモグラムは、典型的にはサンプルが加熱される際の吸熱（エネルギー取り込みを示す）およびまた発熱（エネルギー放出を示す）を特徴とする。ＤＳＣサーモグラフは、ＲＣＳ冷却装置を装備されたＴＡ−Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ１０００ ＭＴＤＳＣを使用して得た。サンプルは、適切な蓋で閉じられる標準的アルミニウムＴＡ−Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔサンプル皿に秤量した（約３ｍｇ）。以下のパラメータを使用した。すなわち、初期温度：２５℃；加熱速度：１０℃／分；最終温度：３００℃；窒素流速：５０ｍｌ／分。ＤＳＣ分析を実施する加熱の速度（すなわち走査速度）、ＤＳＣ開始温度を定義かつ決定する方法、使用される較正標準、装置較正、ならびに相対湿度およびサンプルの化学的純度に依存して、本発明の化合物により表される吸熱は変動しうる（融解する結晶多形について約０．０１〜５℃、および吸熱の上若しくは下の水和物脱水について約０．０１〜２０℃。いずれの所定のサンプルについても、観察される吸熱は装置間でもまた変動しうるが；しかしながら、それは一般に本明細書に定義される範囲内にあることができるが、但し装置が同様に較正される。

化合物（Ｉ）の多様な多形若しくは水和物の形態または塩は熱重量分析（ＴＧＡ）を使用してもまた識別された。ＴＧＡは、空気若しくは窒素のような制御される雰囲気中で試料を加熱する際に試料の重量の変化を記録する試験処置である。熱重量曲線（サーモグラム）は物質の溶媒および水含量ならびに熱安定性に関する情報を提供する。ＴＧＡは、以下のパラメータ、すなわち初期温度：室温；加熱速度：２０℃／分；分離係数：４；最終条件；３００℃若しくは＜８０［（ｗ／ｗ）％］を使用して、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ５００熱重量分析計で実施した。

化合物（Ｉ）の多様な多形若しくは水和物の形態または塩は、異なる安定性および異なる溶解性によってもまた識別されうる。

本発明の多形若しくは水和物の形態は、好ましくは実質的に純粋であることができ、式（Ｉ）の化合物の所定の多形が、１０重量％未満、例えば９％未満若しくは８％未満、好ましくは７％未満、例えば６％未満、より好ましくは５％未満、例えば４％未満、なおより好ましくは３％未満、例えば２％未満、およびなおより好ましくは１％未満の、式（Ｉ）の化合物の他の多形若しくは無定形形態を包含する不純物を包含することを意味している。こうした純度は例えばＸＲＰＤにより測定しうる。

本発明の塩は、好ましくは実質的に純粋であることができ、式（Ｉ）の化合物の所定の塩が、１０重量％未満、例えば９％未満若しくは８％未満、好ましくは７％未満、例えば６％未満、より好ましくは５％未満、例えば４％未満、なおより好ましくは３％未満、例えば２％未満、およびなおより好ましくは１％未満の、式（Ｉ）の化合物の遊離塩基を包含する不純物を包含することを意味している。

本固体の形態は混合物中で一緒にもまた存在しうる。本発明の多形若しくは水和物の形態または塩の混合物は、該混合物中に存在する形態のそれぞれに特徴的なＸ線回折ピークを有することができる。例えば、２種の多形の混合物は、実質的に純粋な多形に対応するＸＲＰＤパターンの畳み込み（ｃｏｎｖｏｌｕｔｉｏｎ）であるＸＲＰＤパターンを有することができる。

多形形態Ｉ
多形形態Ｉは式（Ｉ）の化合物の無水結晶である。形態Ｉは非吸湿性であり、ならびにとりわけ結晶学的および化学的に安定である。形態Ｉは化合物（Ｉ）の現在同定されている多形の熱力学的に最も安定な形態であると考えられている。加えて、遊離塩基の形態Ｉは、化合物（Ｉ）の塩に比較してラットモデルで類似の生物学的利用性を示した。

１０℃／分の走査速度でのＤＳＣは、典型的には１９９．０℃と２０３．５℃の間の形態Ｉの融解吸熱を生じる（図７）。

形態Ｉは表１に示されるところの回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターンを特徴とする。表１に示される２θ角は約０．２ ２θ変動しうる。

図１は形態Ｉの例示的ＸＲＰＤパターンを提供する。

形態Ｉは表２に示されるところの吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる赤外（ＩＲ）スペクトルを特徴とする。表２に示される吸収帯は約２ｃｍ^-1変動しうる。

ＶＷ（非常に弱い）：０％ないし１０％；Ｗ（弱い）：＞１０％ないし３０％；Ｍ（中程度）：＞３０％ないし６０％；Ｓ（強い）：＞６０％ないし９０％；ＶＳ（非常に強い）：＞９０％ないし１００％

図２は形態Ｉの例示的ＩＲスペクトルを提供する。

多様なｐＨでの形態のＩの水溶解性を表７に要約する（実施例４を参照されたい）。

多形形態Ｉは、式（Ｉ）の化合物をアルコール溶媒から結晶化すること、およびそのように形成された結晶を収集することにより製造し得る。とりわけ適するアルコール溶媒は、エタノール、イソプロパノール、または例えばブタノール若しくはペンタノールのような高級アルコール、あるいはそれらの混合物を包含する。該製造は、ＲＴと溶媒の還流温度の間の温度で、好ましくは約５０℃以上、例えば約６０℃以上、より好ましくは約７０℃以上、例えば約８０℃以上の温度で実施しうる。該製造は最低２時間、好ましくは最低４時間進行しうる。

多形形態Ｉは、式（Ｉ）の化合物を非プロトン性溶媒から結晶化すること、およびそのように形成された結晶を収集することによってもまた製造し得る。とりわけ適する非プロトン性溶媒は、酢酸エチル若しくはジクロロメタン、または好ましくはそれらの混合物を包含する。該製造はＲＴと溶媒の還流温度の間の温度で実施することができ、そして最低２時間、好ましくは最低４時間進行しうる。

加えて、多形形態Ｉは、式（Ｉ）の化合物を高温でアルコールおよび水の混合物から結晶化すること、ならびにそのように形成された結晶を収集することによってもまた得ることができる。とりわけ適するアルコールはエタノール若しくはメタノールである。該混合物は、好ましくは約４０：６０と約９０：１０の間のアルコール：水（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、より好ましくは約５０：５０と約８０：２０の間のアルコール：水（ｖｏｌ／ｖｏｌ）を含有しうる。結晶化は最低６０℃の温度で遂げることができる。

多形形態ＩＩ
多形形態ＩＩはＤＳＣにより観察され、そして形態ＩＩＩの熱処理および再結晶により得ることができる。１０℃／分の走査速度でのＤＳＣは、典型的には１８９．０℃と１９７．０℃の間の形態ＩＩの融解吸熱を生じうる（図８）。

多形形態ＩＩＩ
多形形態ＩＩＩは式（Ｉ）の化合物の無水結晶である。

１０℃／分の走査速度でのＤＳＣは形態ＩＩＩの融解吸熱を生じうる（図９；この特定の曲線中で、１９３℃のシグナル それは形態ＩＩにより；該曲線は形態ＩＩＩの転化を示す）。

形態ＩＩＩは表３に示されるところの回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターンを特徴とする。表３に示される２θ角は約０．２ ２θ変動しうる。

図３は形態ＩＩＩの例示的ＸＲＰＤパターンを提供する。

形態ＩＩＩは、表４に示されるところの吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる赤外（ＩＲ）スペクトルを特徴とする。表４に示される吸収帯は約２ｃｍ^-1変動しうる。

ＶＷ（非常に弱い）：０％ないし１０％；Ｗ（弱い）：＞１０％ないし３０％；Ｍ（中程度）：＞３０％ないし６０％；Ｓ（強い）：＞６０％ないし９０％；ＶＳ（非常に強い）：＞９０％ないし１００％

図４は形態ＩＩＩの例示的ＩＲスペクトルを提供する。

多様なｐＨでの形態ＩＩＩの水溶解性を表７に要約する（実施例４を参照されたい）。

多形形態ＩＩＩは、水性溶媒に溶解した式（Ｉ）の化合物の塩を塩基で中和すること、およびそのように形成された沈殿を収集することにより製造し得る。例示的塩は式（Ｉ）の化合物のメタンスルホン酸（メシル酸）塩であることができ；適する水性溶媒は例えば酢酸エチル／水混合物であることができ；適切な塩基は例えばアンモニアである。

多形形態ＩＩＩは、式（Ｉ）の化合物をＲＴと約６０℃の間の温度でアルコール／水系から結晶化すること、およびそのように形成された結晶を収集することによってもまた製造し得る。とりわけ適するアルコール／水混合物は、約３０：７０と約７０：３０の間のアルコール：水（ｖｏｌ／ｖｏｌ）のメタノール／水およびエタノール／水系を包含する。

多形形態ＩＩＩは、式（Ｉ）の化合物を約０．０１Ｎの濃度の水性ＨＣｌから沈殿させること、およびそのように形成された結晶を収集することによりさらに製造し得る。

加えて、多形形態ＩＩＩは、式（Ｉ）の化合物の水和物の約１１５℃での熱処理によってもまた得ることができる。

多形形態ＩＩＩは、約６０℃の温度の非プロトン性極性溶媒／水系中で形態Ｉをスラリーにすること、およびそのように形成された結晶を収集することにより同様に製造し得る。とりわけ適する溶媒系は、約３０：７０と約５０：５０の間のアセトン：水（ｖｏｌ／ｖｏｌ）のアセトン／水混合物である。

水和物の形態
本発明は式（Ｉ）の化合物の水和物の形態をさらに企図している。水和物の形態は例えば水性懸濁液中のような水性媒体中でとりわけ適する。

水和物の形態は、表５に示されるところの回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターンを特徴とする。表５に示される２θ角は約０．３ ２θ変動しうる。

図５は水和物の形態の例示的ＸＲＰＤパターンを提供する。

水和物の形態は、表６に示されるところの吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなる赤外（ＩＲ）スペクトルを特徴とする。表６に示される吸収帯は約２ｃｍ^-1変動しうる。

ＶＷ（非常に弱い）：０％ないし１０％；Ｗ（弱い）：＞１０％ないし３０％；Ｍ（中程度）：＞３０％ないし６０％；Ｓ（強い）：＞６０％ないし９０％；ＶＳ（非常に強い）：＞９０％ないし１００％

図６は水和物の形態の例示的ＩＲスペクトルを提供する。

多様なｐＨでの水和物の形態の水溶解性を表７に要約する（実施例４を参照されたい）。

水和物の形態は、式（Ｉ）の化合物を約０．１Ｎの濃度の水性ＨＣｌから沈殿させること、およびそのように形成された結晶を収集することにより製造し得る。

化合物（Ｉ）の塩
本発明は、化合物（Ｉ）の塩、より具体的には、塩酸、臭化水素酸、メタンスルホン酸（メシル酸塩）、エタンスルホン酸（エシル酸塩）若しくはｐ−トルエンスルホン酸（トシル酸塩）、より好ましくは、臭化水素酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸とのその塩をさらに企図している。

本明細の別の場所に説明されるとおり、上のような塩は化合物（Ｉ）の合成の過程で得ることができ、そしてそれらのとりわけ有利な中間体を表しうる。

加えて、本塩は、化合物（Ｉ）の遊離塩基の形態を未希釈の（ｎｅａｔ）若しくは好ましくは溶媒中のいずれかの対応する酸で処理することによってもまた得ることができる。好ましい一態様において、化合物（Ｉ）の遊離塩基の形態をアルコール、好ましくは高温のアルコールに溶解し得、そしてそれへの酸の添加により中和し得、そしてそのように形成された沈殿を収集する。

上の塩の抜粋された特性を実施例９ないし１１に示す。

合成過程
さらなる一局面において、本発明は式（Ｉ）の化合物若しくはその塩の新たな製造方法に関する。とりわけ、第一の過程は、下のスキーム１に記述されるところの反応、ならびに、場合によってはかつ好ましくはスキーム２および３ならびに「好ましい合成経路」の節に開示されるところの中間体を製造するための反応を必要とする。第一の過程の利益は扱われており、そしてそれぞれのスキームでさらに説明する。

第二の過程は下のスキーム５に記述され、ならびに、場合によってはかつ好ましくは下のスキーム６および７で開示されるところの中間体を製造するための反応もまた必要としうる。第二の過程の利益は、とりわけ、発癌性かつ危険なヒドラジンならびに遺伝毒性中間体３−クロロ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジンおよび２，２−ジフルオロ−２−キノリン−６−イルアセトヒドラジドの反応過程からの回避を包含する。

本発明の化合物（Ｉ）の製造過程のいずれかの間に、関係する分子のいずれかの感受性すなわち反応性の基を保護することが必要かつ／若しくは望ましいことがある。これは、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ、Ｐ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ、Ｔｈｉｅｍｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、２０００；およびＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ＆ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版 Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、１９９９に記述されるもののような慣習的保護基によって達成しうる。保護基は、当該技術分野で既知の方法を使用して、便宜的な後の段階で除去しうる。

本明細書で特許請求される合成方法の反応は、有機合成の当業者により容易に選択されうる適する溶媒中で実施され、前記適する溶媒は、一般に、該反応を実施する温度、すなわち溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度までの範囲にわたりうる温度で出発原料（反応体）、中間体若しくは生成物と実質的に非反応性であるいずれかの溶媒である。所定の反応を１種の溶媒若しくは１種以上の溶媒の混合物中で実施しうる。特定の反応段階に依存して、特定の反応段階に適する溶媒を選択しうる。

反応のいずれかを実施した後、または保護基（１個若しくは複数）を除去した後、中間体および／若しくは最終化合物を、以下の段階におよび／若しくは反応をモニターするために必要な場合は、濾過、溶媒抽出、熱による若しくは真空下の溶媒蒸発、再結晶、摩砕、クロマトグラフィーまたはイオン交換樹脂を使用する方法のような、有機合成化学の分野で既知の方法により処理かつ／若しくは精製しうる。

ここで：
Ｗ¹は脱離基であり
Ｑはキノリン−６−イルすなわち

である。

スキーム１は式（Ｉ）の化合物に至る合成経路（ａ）を具体的に説明する。該経路は、６位で１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イルおよび３位で適切な脱離基Ｗ¹で置換されているピリダジン（ＩＩ）ならびに２，２−ジフルオロ−２−キノリン−６−イルアセトヒドラジド（ＩＩＩ）を反応させて、化合物６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリン（Ｉ）を得ることを必要とする。

本発明において、中間体（ＩＩ）および（ＩＩＩ）を酸の存在下で反応させる。従って、経路（ａ）は本明細書で（ａ’）および（ａ”）と称される反応を含んでなると企図することができる。第一の反応（ａ’）は該反応で使用される酸との化合物（Ｉ）の塩を生じる。反応（ａ”）において、前記塩を適する塩基で処理して化合物（Ｉ）の遊離塩基の形態を達成し得る。

上の合成に適する脱離基Ｗ¹は当業者に公知のとおり慣習的でありうる。好ましい一態様において、脱離基Ｗ¹はハロゲン、より好ましくはＣｌ、Ｂｒ若しくはＩ、および適するスルホネート基、より好ましくはＯＭｓ、ＯＴｓ、ＯＴｆ若しくはベンゼンスルホニルオキシ（−ＯＳＯ₂Ｃ₆Ｈ₅）から選択しうる。他の潜在的に有用な脱離基Ｗ¹は、アセトキシ（−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ₃）、トリフルオロアセトキシ（−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＦ₃）およびニトロオキシ（−ＯＮＯ₂）を包含しうる。好ましくは、脱離基Ｗ¹はハロゲン、より好ましくはＣｌ、Ｂｒ若しくはＩである。一態様において、脱離基陰イオンは反応（ａ’）で使用される酸の陰イオンと同一でありうる。

反応（ａ’）で使用される酸は、好ましくは約３未満、例えば約２．５未満、より好ましくは約２未満、例えば約１．７５未満、約１．５未満若しくは約１．２５未満のｐＫａを有しうる。なおより好ましくは、前記酸のｐＫａは、１に等しいか若しくはそれ未満（すなわちｐＫａ≦１）、例えば≦０．８若しくは≦０．６、なおより好ましくは≦０．４、例えば≦０．２若しくは≦０、なおより好ましくは≦−０．２、例えば≦−０．４若しくは≦−０．６、および非常に好ましくは≦−０．８、例えば≦−１．０、≦−１．２若しくは≦−１．５でありうる。とりわけ好ましくは、前記酸は強酸でありうる（すなわち約−１．７９未満のｐＫａを有する）。酸に関する「ｐＫａ」という用語は当該技術分野で確立されており、そして２５℃の水中で測定される酸の解離定数の逆数の対数を指す。前記酸が多塩基性酸である場合、そのｐＫａの最低１種が上の好ましい値を有し得る。ｐＫａ値は例えばＬａｎｇｅ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（第１６版、Ｓｐｅｉｇｈｔ Ｊ．Ｇ．による、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、２００５）に列挙されている。

とりわけ好ましい態様において、反応（ａ’）で使用される酸はハロ水素酸、より好ましくはＨＣｌ若しくはＨＢｒ、硫酸（Ｈ₂ＳＯ₄）、トリフルオロ酢酸若しくはスルホン酸、より好ましくはｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、カンファースルホン酸、メタンスルホン酸若しくはエタンスルホン酸でありうる。非常に好ましくは、前記酸は反応（ａ’）を大きく促進するメタンスルホン酸でありうる。

酸は、前記中間体（１種若しくは複数）を上回るモル過剰により、中間体（ＩＩ）および／若しくは（ＩＩＩ）に関して例えば約０．１倍若しくは約０．２５倍若しくは約０．５倍若しくは約０．７５倍モル等量からの範囲にわたるような多様な量で反応（ａ’）に存在しうる。好ましくは、該反応は、中間体（ＩＩ）および／若しくは（ＩＩＩ）に関して前記酸の制限なしに約１．１倍と１０倍の間、より好ましくは約１．１倍と５倍の間、なおより好ましくは約１．１倍と３倍の間、なおより好ましくは例えば約１．２倍、約１．４倍、約１．６倍若しくは約１．８倍のような約１．１倍と２倍の間若しくは約１．１倍と１．５倍の間のモル過剰のような、中間体（ＩＩ）および／若しくは（ＩＩＩ）を上回る前記酸のモル過剰を使用しうる。

先に示したとおり、反応（ａ’）への酸の包含は、有利には反応温度を１２０℃未満に低下させることを可能にし得、それは、従来技術で観察されるところの中間体（ＩＩ）および／若しくは（ＩＩＩ）のアルコール溶媒との不要な副反応を回避しうる。これゆえに、好ましい態様において、反応（ａ’）は、１２０℃より低い温度、例えば≦１１８℃、≦１１６℃、≦１１４℃、≦１１２℃若しくは≦１１０℃で実施しうる。好ましくは、反応（ａ’）は、例えば５０℃と１１５℃の間若しくは８０℃と１１０℃の間のような、約５０℃と＜１２０℃の間、より好ましくは約８０℃と＜１２０℃の間、なおより好ましくは約１００℃と＜１２０℃の間で実施しうる。

反応（ａ’）は、適切な溶媒、好ましくは適するアルコール溶媒中で実施しうる。「アルコール」という用語は、飽和炭素原子（１個若しくは複数）に結合された１個若しくはそれ以上のヒドロキシ基−ＯＨを含んでなる有機化合物を指す。アルコールは、場合によっては例えばアルコキシ基のような他の官能基を含みうる。反応（ａ’）での使用に適切なアルコール溶媒は反応温度および好ましくは周囲温度でもまた液体であり、そして中間体（ＩＩ）および（ＩＩＩ）を溶解しかつ／若しくは前記中間体を該反応温度で反応させることが可能である。より好ましくは、反応（ａ’）はより高沸点のアルコール溶媒（例えば約８０℃に等しいか若しくはそれ以上の沸点を有する）を必要としうる。好ましい例は、とりわけ、プロパノール、ブタノール、ペンタノールおよび１−メトキシ−２−プロパノールを包含し、後者がとりわけ適する。発明者は、二級若しくは三級アルコール溶媒（例えばイソプロパノール、ｓｅｃ−ブタノール、１−メトキシ−２−プロパノールなど）を使用することが、中間体（ＩＩ）および／若しくは（ＩＩＩ）とのアルコール溶媒の不要な副反応を一級アルコールに関して有利に低減しうることもまた理解した。

既に示されたとおり、とりわけ溶媒がそれからの前記塩の沈殿を見込む上のような適するアルコールである（例えばとりわけ好ましくは１−メトキシ−２−プロパノール）反応（ａ’）での化合物（Ｉ）の塩の形成は、前記沈殿された塩の例えば濾過、遠心分離若しくはデカンテーションによる反応混合物からの高収量かつ単純な回収を提供しうる。これは、有利には、甚だしい処理および抽出処置を回避しつつ満足すべき程度の純度で化合物（Ｉ）塩を提供し得る。

これゆえに、反応（ａ’）のとりわけ好ましい一態様は反応スキーム（ａ’１）に具体的に説明される。

ここでＷ¹は上で定義されたところの脱離基である。

反応（ａ”）において、反応（ａ’）で得られた化合物（Ｉ）の塩を、十分量の適する塩基での処理を介して遊離塩基の形態にさらに転化し得る。この目的上適する塩基は、一般に、化合物（Ｉ）に関して比較的より強い塩基性をもつものである。好ましくは、前記塩基は、約７以上、例えば約７．５以上、好ましくは約８以上、例えば約８．５以上、およびなおより好ましくは約９以上の（それらの共役酸の）ｐＫａを有しうる。例示的塩基は、限定されるものでないが、アルカリ金属水酸化物、好ましくはＮａＯＨ若しくはＫＯＨ、炭酸塩、好ましくはＮａ₂ＣＯ₃若しくはＫ₂ＣＯ₃、アンモニアおよび有機塩基、好ましくは、例えばベンジルアミン、メチルアミン、ジおよびトリメチルアミン、エチルアミン、ジおよびトリエチルアミン、エチレンジアミンならびにジイソプロピルアミンのような一級、二級若しくは三級アミンを引用することにより挙げることができる。アンモニアがとりわけ好ましい。

反応（ａ”）における塩基での化合物（Ｉ）の塩のアルカリ化は、当業者に一般に利用可能である適する条件下で実施しうる。具体的説明として、そして制限としてでなく、前記酸は未希釈の塩基と反応させうる。より好ましくは、中和は、化合物（Ｉ）の塩および塩基を溶解しかつ／若しくは前記塩および塩基を反応させることが可能な適する溶媒中で実施しうる。なおより好ましくは、溶媒は遊離塩基の形態の化合物（Ｉ）のそれからの沈殿もまた見込むことができ、それにより例えば濾過、遠心分離若しくはデカンテーションにより前記沈殿された化合物（Ｉ）の高収量かつ単純な回収を提供する。好ましい溶媒は、例えば水、または他の水と混合可能なプロトン性溶媒、好ましくはアルコール、例えばメタノール、エタノール若しくはイソプロパノールとの水の混合物のような水性溶媒を包含しうる。

反応（ａ’）で得られる化合物（Ｉ）の塩若しくは反応（ａ”）で得られるそれらの遊離塩基の形態を、例えば溶媒抽出、再結晶、クロマトグラフィー、若しくはイオン交換樹脂を使用する方法のような有機合成化学の分野で既知の１種若しくはそれ以上の方法によりさらに精製し得ることが、当業者により認識されるはずである。

上の中間体（ＩＩ）および（ＩＩＩ）は当業者に既知の方法により得ることができる。以下の反応スキーム２および３は、前記中間体の製造の潜在的に好ましいが制限しない例を具体的に説明することを意味している。

ここで
Ｗ¹、Ｗ²は脱離基であり
Ｙはボロン酸種、亜鉛酸塩若しくはスタンナンである。

スキーム２は、例えばＳｕｚｕｋｉ（Ｍｉｙａｕｒａ Ｎ．，Ｓｕｚｕｋｉ Ａ．１９９５．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９５：２４５７）、Ｎｅｇｉｓｈｉ（Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｅ．ら
１９７７．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４２：１８２１）若しくはＳｔｉｌｌｅ（Ｓｔｉｌｌｅ Ｊ．Ｋ．１９８６．Ａｇｎｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．２５：５０８、およびその中の参考文献）の条件下の脱離基Ｗ¹およびＷ²で３，６−二置換されたピリダジン（Ｖ）と１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル置換ボロン酸種（好ましくは限定されるものでないがボロン酸、ボロン酸エステル、トリフルオロボロン酸カリウムを包含するハロボロン酸塩、若しくはボランを挙げることができる）、亜鉛酸塩またはスタンナン（ＩＶ）の間の遷移金属に触媒されるクロスカップリング反応（ｂ）を必要とする、式（ＩＩ）の中間体を得るために採用される例示的一経路を具体的に説明する。

クロスカップリング反応（ｂ）は、例えばＰｄ（ＰＰｈ₃）₄、ＰｄＣｌ₂（ＰＰｈ₃）₂、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ₂、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｄ（ＯＡｃ）₂若しくはＰｅｐｐｓｉ−ｉＰｒ触媒（Ｏｒｇａｎ Ｍ．Ｇ．ら ２００６．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ａ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ １２（１８）：４７４３−４７４８およびその中の参考文献）のような触媒により媒介される不活性環境中で一般に実施しうる。適用できる場合、式（ＩＶ）の化合物、とりわけボロン酸種を、例えば、例えばＮａ₂ＣＯ₃、Ｋ₂ＣＯ₃、ＮａＯＣＨ₂ＣＨ₃、ＣｓＦ、Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₃）₃、ＮａＯＡｃ、ＫＯＡｃ、ＤＩＰＥＡ若しくはＫ₃ＰＯ₄のような適する塩基により活性化しうる。これらの反応は、一般に、極性の非プロトン性溶媒（例えばＴＨＦ、２−メチルＴＨＦ、ＤＭＦ、ＤＭＡ）若しくは二相溶液中で約６０℃から約１５０℃までの範囲にわたる温度で起こりうる。

脱離基Ｗ¹は上のスキーム１で詳述されたとおりである。クロスカップリング反応（ｂ）に適する脱離基Ｗ²は当業者に公知である。好ましくは、脱離基Ｗ²はハロゲンおよび全フッ素置換スルホネート、より好ましくはＩ、Ｂｒ、ＣｌおよびＯＴｆ、ならびになおより好ましくはＩ、ＢｒおよびＯＴｆから選択しうる。脱離基Ｗ¹およびＷ²は同一若しくは異なりうる。

式（ＩＶ）のボロン酸種、亜鉛酸塩若しくはスタンナンが商業的に入手可能でない場合、それは、対応するハロゲン化物から、若しくは直接メタル化／トランスメタル化手順により合成し得る。本方法で有用な式（ＩＶ）の例示的な制限しない商業的に入手可能なボロン酸種は、１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−ボロン酸ピナコールエステル（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号５９５３１４；Ｘｕ Ｇ．とＧｉｌｂｅｒｔｓｏｎ ＳＲ．２００５．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．７：４６０５−４６０８）である。

ここで：
Ｘ¹はＣｌ、Ｂｒ若しくはＩであり
Ｒ¹はＣ_1-6アルキルであり
Ｑはキノリン−６−イルすなわち

である。

スキーム３は式（ＩＩＩ）の中間体を得るために採用される例示的経路を具体的に説明する。

該経路は、Ｃ_1-6アルキルジフルオロ（キノリン−６−イル）アセテート（ＩＸ）（ここでＲ¹はＣ_1-6アルキル、好ましくはＣ_1-4アルキル、より好ましくはＣ_1-3アルキル、およびなおより好ましくはメチル若しくはエチルである）を、２，２−ジフルオロ−２−キノリン−６−イルアセトヒドラジド（ＩＩＩ）を製造するのに十分な条件下でヒドラジン若しくはヒドラジン同等物と接触させることを必要とする反応（ｇ）を含んでなる。

単独の若しくは別の基の一部としての「Ｃ_1-6アルキル」という用語は、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、２−メチル−プロピル、ペンチル、ヘキシルなどのような１と６の間、例えば１、２、３、４、５若しくは６個の炭素原子の一価の分枝状若しくは非分枝状炭化水素基を意味している。Ｃ_1-6アルキル基は、具体的には、Ｃ_1-4アルキル基、より具体的にはＣ_1-3アルキル基、ならびになおより具体的にはメチルおよびエチル部分もまた包含する。単独の若しくは別の基の一部としての「Ｃ_1-4アルキル」という用語は、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、２−メチル−プロピルなどのような１と４の間、例えば１、２、３若しくは４個の炭素原子の一価の分枝状若しくは非分枝状炭化水素基を意味している。単独の若しくは別の基の一部としての「Ｃ_1-3アルキル」という用語は、例えばメチル、エチル、プロピルのような１と３の間、例えば１、２若しくは３個の炭素原子の一価の分枝状若しくは非分枝状炭化水素基を意味している。

反応（ｇ）のヒドラジン同等物は、無水ヒドラジン、ヒドラジン水和物、ならびに、例えば酢酸ヒドラジン、臭化水素酸ヒドラジン、塩酸ヒドラジンおよびヒドラジンセミスルファートのようなヒドラジンの塩を包含する。好ましくはヒドラジン水和物を使用しうる。ヒドラジン塩を使用する場合、水酸化ナトリウム若しくは炭酸ナトリウムのような塩基の付加的な量がヒドラジン塩の酸を中和するのに必要とされうることが理解される。典型的には、該反応は、化合物（ＩＸ）に関して制限なしに１．２倍と２０倍の間、より好ましくは１．５倍と１０倍の間、なおより好ましくは例えば約２．５倍、約３．０倍、約３．５倍、約４．０倍若しくは約４．５倍のような２．０倍と５倍の間のモル過剰のヒドラジン若しくはヒドラジン同等物のような、モル過剰のヒドラジン若しくはヒドラジン同等物を使用しうる。

反応（ｇ）は、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、メトキシプロパノール、ブタノール若しくはアミレン水和物（２−メチル−２−ブタノール）のようなアルコール溶媒中、ＲＴと溶媒の還流温度の間の温度、例えばおよそ周囲温度で一般に起こることができる。発明者は、アミレン水和物が反応混合物からの沈殿した生成物（ＩＩＩ）の例えば濾過、遠心分離若しくはデカンテーションによる高収量および単純な回収を可能にするため、それがとりわけ有利でありうることを理解した。

これゆえに、反応（ｇ）のとりわけ好ましい一態様が反応スキーム（ｇ１）に具体的に説明される。

ここで：
Ｒ¹は上で定義されるところのＣ_1-6アルキルである。

反応（ｅ）および（ｆ）は式（ＩＸ）の中間体に到着するための代替経路を描く。反応（ｅ）は、６−ハロキノリン（ＶＩ）（ここでＸ¹はＣｌ、Ｂｒ若しくはＩ、好ましくはＢｒ若しくはＩ、より好ましくはＩである）の式Ｒ¹ＯＣ（＝Ｏ）ＣＦ₂Ｘ²（ここでＲ¹は上のとおりでありかつＸ²はＣｌ、Ｂｒ若しくはＩ、好ましくはＢｒ若しくはＩ、より好ましくはＢｒである）のＣ_1-6アルキルハロ（ジフルオロ）アセテートとの銅に媒介されるクロスカップリングを必要とする。反応（ｅ）は、典型的には、ＤＭＳＯのような極性の非プロトン性溶媒中、銅触媒、例えばＣｕ（０）（ナノ）粉末により媒介される不活性環境で実施しうる。活性の銅種が硫酸銅（ＩＩ）およびアスコルビン酸のナトリウム塩からその場で生成される様式もまたとりわけ企図している。

反応（ｆ）において、Ｃ_1-6アルキルオキソ（キノリン−６−イル）アセテ―ト（ＶＩＩＩ）（ここでＲ¹は上のとおりである）をデオキソフッ素化（ｄｅｏｘｏｆｌｕｏｒｉｎａｔｅｄ）して中間体（ＩＸ）を生じる。該反応は、一般に、化合物（ＶＩＩＩ）を、例えばジクロロメタン、クロロホルム、トリクロロフルオロメタン、グリム若しくはジグリムのような適する非水性溶媒中、とりわけＤＡＳＴ（好ましくはジエチル−ＤＡＳＴ）、Ｄｅｏｘｏ−Ｆｌｕｏｒ^TM（Ｌａｌ Ｓら １９９９．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．：７０４８−７０５４）若しくは四フッ化イオウ（ＳＦ₄）を包含する技術既知のデオキソフッ素化剤と接触させることを必要とする。カルボニルないしジェミナル二フッ化物の転換（ｆ）は、典型的には室温若しくはそれ以上で実施しうる。

好ましい一態様において、デオキソフッ素化反応（ｆ）は、ルイス酸触媒、好ましくはＨＦの存在下にＳＦ₄を使用して実施しうる。好ましくは、該反応は、化合物（ＶＩＩＩ）に関して、制限なしに１．５倍と２０倍の間、好ましくは２．０倍と１０倍の間、より好ましくは例えば約３．０倍、約３．５倍、約４．０倍若しくは約４．５倍のような２．５倍と５倍の間のモル過剰のＳＦ₄のようなモル過剰のＳＦ₄を使用しうる。該反応は、好ましくは、化合物（ＶＩＩＩ）に関して制限なしに１．１倍と５倍の間、好ましくは１．１倍と３倍の間、より好ましくは例えば約１．７倍、約２．０倍若しくは約２．３倍のような１．５倍と２．５倍の間のモル過剰のＨＦのようなモル過剰のＨＦもまた使用しうる。ＳＦ₄／ＨＦ媒介性のデオキソフッ素化反応は、例えば上に列挙されたところの適切な非水性溶媒、好ましくはジクロロメタン中、好ましくは周囲温度と約６０℃の間、より好ましくは約３０℃と約６０℃の間、若しくは約３５℃と約５０℃の間、例えば約４０℃若しくは約４５℃で遂げることができる。

従って、反応（ｆ）のとりわけ好ましい一態様が反応スキーム（ｆ１）に具体的に説明される。

ここで：
Ｒ¹は上で定義されたところのＣ_1-6アルキルである。

反応（ｃ）および（ｄ）は式（ＶＩＩＩ）の中間体に到着するための代替経路を描く。反応（ｄ）は、Ｃ_1-6アルキルキノリン−６−イルアセテート（ＶＩＩ）（ここでＲ¹は上のとおりである）の式（ＶＩＩＩ）のＣ_1-6アルキルオキソ（キノリン−６−イル）アセテートへの酸化を必要とする。該反応は、適する溶媒、例えばジオキサン中、例えば二酸化セレン（ＳｅＯ₂）のようなカルボニル化合物中での活性メチレン基の酸化に適切な剤を使用しうる。

反応（ｃ）は、有利には、６−ハロキノリン（ＶＩ）（ここでＸ¹はＣｌ、Ｂｒ若しくはＩ、好ましくはＢｒ若しくはＩ、より好ましくはＩである）のグリニヤール錯体を製造すること、および前記錯体をモル過剰の式Ｒ¹ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（Ｗ³）＝Ｏ（ここでＲ¹は上のとおりでありかつＷ³は脱離基である）のシュウ酸塩誘導体と反応させることを必要としうる。

ヘテロアリールハロゲン化物のグリニヤール試薬の製造は当該技術分野で公知であり、そして、典型的には、本明細書で６−ハロキノリン（ＶＩ）のようなヘテロアリールハロゲン化物を、例えばＴＨＦ、２−メチルＴＨＦ、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエチルエーテル若しくはジメトキシエタンのような適切なエーテル溶媒中；および有利には０℃より下、例えば０℃と−８０℃の間の温度で、ハロゲン化合物に関して典型的には約１．０５から約２モル等量までの過剰で添加されたＭｇ（０）（例えばＭｇ削り屑（ｔｕｒｎｉｎｇ）若しくは粉末）、ｉＰｒＭｇＢｒ、ｉＰｒＭｇＣｌ若しくはｉＰｒＭｇＣｌ．ＬｉＣｌのような試薬と反応させることを必要としうる。グリニヤール試薬の生じる溶液若しくは懸濁液は、場合によっては過剰のＭｇの除去後に、さらなる処理なしで次の段階で使用し得る。

６−ハロキノリン（ＶＩ）のグリニヤール試薬を、これゆえに、モル過剰のシュウ酸エステル誘導体Ｒ¹ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（Ｗ³）＝Ｏと反応させて化合物（ＶＩＩＩ）を得る。モル過剰の前記シュウ酸エステル誘導体は、化合物（ＶＩＩＩ）に関して、制限なしに１．５倍と２０倍の間、好ましくは２．０倍と１０倍の間、より好ましくは例えば約３．０倍、約３．５倍、約４．０倍若しくは約４．５倍のような２．５倍と５倍の間のモル過剰でありうる。本反応は、有利には、上のようなエーテル溶媒、一般にはグリニヤール試薬を製造するのに使用されると同一の溶媒中で実施しうる。また有利には、該反応は０℃より下、例えば０℃と−８０℃の間の温度で実施しうる。十分な反応時間後に、該反応を、例えばＮＨ₄ＯＡｃ若しくは好ましくはＮＨ₄Ｃｌのようなそれ自体既知の適切なクエンチング剤を使用して有利にクエンチしうる。

適切な脱離基Ｗ³は当業者により理解されることができ、そして、好ましくはＣｌ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ²、−ＯＲ²若しくは−ＮＲ²Ｒ³（ここでＲ²およびＲ³はそれぞれ独立にＣ_1-6アルキル、好ましくはＣ_1-4アルキル、より好ましくはＣ_1-3アルキル、およびなおより好ましくはメチル若しくはエチルである）を包含しうる。好ましくはＷ³は−ＯＲ²であり、すなわち、シュウ酸エステル誘導体はシュウ酸ジアルキルＲ¹ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（ＯＲ²）＝Ｏであり、ここでＲ¹およびＲ²はそれぞれ独立にＣ_1-6アルキル、好ましくはＣ_1-4アルキル、より好ましくはＣ_1-3アルキル、およびなおより好ましくはメチル若しくはエチルである。好ましくは、前記シュウ酸ジアルキル中のＲ¹およびＲ²は例えばシュウ酸ジブチル、シュウ酸ジメチル若しくはシュウ酸ジエチルのようなものでありうる。

本発明はまた、中間体（ＶＩＩＩ）の高収量を確保するために反応（ｃ）で使用されるべきとりわけ有利な条件も決定した。とりわけ、グリニヤール試薬は、好ましくはＴＨＦ中ｉＰｒＭｇＣｌ．ＬｉＣｌを使用して６−ヨードキノリンから製造しうる。好ましい温度は０℃と−６０℃の間、より好ましくは例えば約−２０℃若しくは約−３０℃のような−１０℃と−４０℃の間の範囲にわたる。生じるグリニヤール錯体をＴＨＦ中のモル過剰（上のような）のシュウ酸ジエチルに添加する。この反応の温度は、好ましくは０℃と−６０℃の間、より好ましくは例えば約−３０℃若しくは約−４０℃のような−２０℃と−５０℃の間である。該反応は、好ましくはＮＨ₄Ｃｌを使用して適切にクエンチし得る。

従って、反応（ｃ）のとりわけ好ましい一態様が反応スキーム（ｃ１）に具体的に説明される。

好ましい合成経路
挙げられたとおり、本発明は、酸の存在下で中間体（ＩＩ）および（ＩＩＩ）を反応させることにより塩若しくは遊離塩基の形態の化合物（Ｉ）を得、それは例えば所望の生成物の改良された収量および単純化された精製のような大きな利点を見込む。

中間体（ＩＩ）および（ＩＩＩ）は、原則として、当業者に利用可能ないずれの方法（言及が第ＷＯ２００７／０７５５６７号明細書になされる）によっても得ることができる一方、先行するスキーム２ないし３は、合成過程全体、例えば生成物の収量および／若しくは純度、ならびに／または該過程の容易さおよび／若しくはスケールアップ可能性をさらに改良し得る利点を提供する好ましい選択肢を詳述する。

従って、好ましい態様において、本発明の化合物（Ｉ）の塩若しくは遊離塩基の形態の製造方法は、
−化合物（ＩＶ）および（Ｖ）から中間体（ＩＩ）を製造するための上のような反応（ｂ）；ならびに／若しくは
−中間体（ＩＸ）から中間体（ＩＩＩ）を製造するための上の反応（ｇ１）について定義されたところの条件を好ましくは使用する上のような反応（ｇ）；ならびに／若しくは
−中間体（ＶＩＩＩ）から中間体（ＩＸ）を製造するための上の反応（ｆ１）について定義されたところの条件を好ましくは使用する上のような反応（ｆ）；ならびに／若しくは−６−ハロキノリン（ＶＩ）から中間体（ＶＩＩＩ）を製造するための上の反応（ｃ１）について定義されたところの条件を好ましくは使用する上のような反応（ｃ）
をさらに含みうる。

これゆえに、とりわけ好ましい態様において、化合物（Ｉ）の塩若しくは遊離塩基の形態の製造方法は、以下のスキーム４に沿って進行しうる。

ここで、全部の数値および文字はそれぞれ上で教示されたところの化合物および反応を描き；角カッコ中の反応（ａ”）の包含はこの段階が場合によっては包含されうることを示す。

なおより好ましい一態様において、スキーム４の６−ハロキノリン（ＶＩ）から中間体（ＩＩＩ）への経路は、上で詳述されたところの反応（ｃ１）、（ｆ１）および（ｇ１）の連続を必要としうる。

ここで
ＰＧは保護基であり
Ｅは−ＯＨ、−Ｏ^(-)Ｍ⁽⁺⁾若しくは−ＯＲ¹であり、ここでＭはアルカリ金属でありかつＲ¹はＣ^1-6アルキルでありＱはキノリン−６−イルすなわち

である。

スキーム５は、式（Ｉ）の化合物に至る代替合成経路を具体的に説明する。

該経路は、６位で１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イルで、および３位で保護された（ＰＧ、スキーム６を参照されたい）ヒドラジノ部分で置換されたピリダジン（Ｘ）、ならびに、カルボキシル化合物（ＸＩ）、または、場合によっては、例えばカルボニルイミダゾール誘導体（イミダゾリド）、アシルハロゲン化物（例えば塩化若しくは臭化アシルのような）、混合無水物、２−クロロピリジニウム若しくは３−クロロイソキサゾリウム誘導体、チオエステルなどのような前記カルボキシル化合物（ＸＩ）の反応性官能性誘導体を反応させることを必要とする反応（ｈ）を含んでなる。

カルボキシル化合物（ＸＩ）は、好ましくは、カルボン酸（すなわちＥが−ＯＨである）、アルカリ金属カルボン酸塩（すなわちＥが−Ｏ^(-)Ｍ⁽⁺⁾であり、ここでＭはアルカリ金属、好ましくはＮａ⁺若しくはＫ⁺である。スキーム７を参照されたい）、またはエステル（すなわちＥが−ＯＲ¹であり、ここでＲ¹はＣ_1-6アルキル、好ましくはＣ_1-4アルキル、より好ましくはＣ_1-3アルキル、なおより好ましくはメチル若しくはエチルである。化合物（ＩＸ）を参照されたい）でありうる。好ましい一態様において、前記化合物（ＸＩ）はアルカリ金属塩でありうる。

アシル化（ｈ）を実施するための反応条件は当該技術分野で公知のとおりでありうる。例えば、カルボキシル化合物（ＸＩ）の反応性アシル化種は、塩化チオニル、三塩化リン、五塩化リン、オキシ塩化リン若しくは塩化オキザリル、好ましくは塩化チオニル；カルボニルジイミダゾール；２−クロロ−１−メチルピリジニウム；クロロチオカルボン酸Ｓ−ピリジン−２−イルなどのような適するハロゲン化剤を、場合によっては４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）のような触媒の存在下；適する極性非プロトン性溶媒例えばアセトニトリルのような適切な溶媒中で使用して形成しうる。当業者は、反応体の残存する部分、とりわけＮ−ＰＧ結合の完全性を確保するために反応（ｈ）の適切な試薬および条件を選ぶことができる。

ＰＧ保護された中間体（ＸＩＩ）はその後反応（ｉ）で脱保護されてヒドラジノ化合物（ＸＩＩＩ）を得る。Ｎ−脱保護の正確な条件は保護基ＰＧの性質に依存し、そしてＧｒｅｅｎｅとＷｕｔｓ（上記）のような文献に十分に記述されている。例として、および制限としてでなく、ｔＢｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）基は酸加水分解により、Ｃｂｚ（カルボベンジルオキシ）基は水素化により、トリフルオロアセチル基は穏やかな条件下での加水分解により、およびベンゼンスルホニル基は光活性化脱スルホニル化により除去しうる。

好ましい一態様において、保護基ＰＧはｔＢｏｃでありうる。酸加水分解（ｉ）によるこの基の除去はヒドラジノ化合物（ＸＩＩＩ）の塩を提供し、これは有利には反応混合物から沈殿し得、それにより増大された収量および例えば濾過、遠心分離若しくはデカンテーションによる単純な回収を見込む。ｔＢｏｃ加水分解に使用される酸は、有利にはスキーム１で定義されるところの酸、好ましくはハロ水素酸、より好ましくはＨＣｌ若しくはＨＢｒ、硫酸、トリフルオロ酢酸またはスルホン酸、より好ましくはｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、カンファースルホン酸、メタンスルホン酸若しくはエタンスルホン酸から選ぶことができる。好ましくは、前記酸はメタンスルホン酸でありうる。

分子内環化反応（ｊ）はヒドラゾノ中間体（ＸＩＩＩ）を化合物（Ｉ）に転化する。該反応は、例えば６０℃と１１０℃の間のような、高温、例えば５０℃と溶媒の還流温度の間で遂げることができる。適する溶媒はより高沸点のアルコール、例えばプロパノール、ブタノール、ペンタノール、好ましくは１−メトキシ−２−プロパノールを包含しうる。場合によっては、形成された水を、水抽出剤（ｗａｔｅｒ−ａｂｓｔｒａｃｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）を使用して共沸蒸留分離若しくは除去しうる。

化合物（Ｉ）が塩として形成される場合（例えばＰＧ除去が酸加水分解を必要とする場合）、遊離塩基の形態の（Ｉ）は、上のスキーム１で反応（ａ”）に記述されるとおり適する塩基を用いて遊離し得る。

上の中間体（Ｘ）および（ＸＩ）は当業者に既知の方法により得ることができる。以下の反応スキーム６および７は、前記中間体の製造の潜在的に好ましいが制限しない例を具体的に説明することを意味している。

ここで：
Ｗ¹は脱離基であり
ＰＧは保護基である。

スキーム６は式（Ｘ）の中間体に至る合成経路（ｋ）を具体的に説明する。該経路は、上のスキーム１で教示されたところのピリダジン誘導体（ＩＩ）を式ＮＨ₂ＮＨＰＧ（ここでＰＧは適切な窒素保護基である）のヒドラジン誘導体と反応させることを必要とする。

「窒素保護基」という用語は、試薬と窒素原子の望ましくない反応から中間体を保護する目的上前記原子上に置かれる基を指す。本明細書で使用のための適する窒素保護基は慣習的アミン保護基であることができ、それらは一般に、当該技術分野（例えばＴ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅとＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、”第３版、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、１９９９）で既知のようなヒドラジン窒素を保護するのにもまた適切である。例示的窒素保護基ＰＧは、引用によりしかし制限を伴わず、ｔＢｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）、Ｃｂｚ（カルボベンジルオキシ）、アリール置換Ｃｂｚ、トリフルオロアセチルおよびベンゼンスルホニルのような部分を包含する。窒素保護基の導入は当該技術分野で公知である。加えて、保護されたヒドラジン誘導体が商業的に入手可能である（例えば、Ｂｏｃ−ヒドラジド：Ｆｌｕｋａ カタログ番号１９７４０；Ｃｂｚ−ヒドラジン：Ｆｌｕｋａ カタログ番号１７３０７）。

典型的には、反応（ｋ）は、化合物（ＩＩ）に関して、制限なしに１．２倍と２０倍の間、より好ましくは１．５倍と１０倍の間、なおより好ましくは例えば約２．５倍、約３．０倍、約３．５倍、約４．０倍若しくは約４．５倍のような２．０倍と５倍の間のモル過剰のヒドラジン誘導体のようなモル過剰のヒドラジン誘導体を使用しうる。反応（ｋ）は、一般に、例えばプロパノール、２−プロパノール、好ましくは１−ブタノールのようなアルコール溶媒中、ＲＴと溶媒の還流温度の間の温度で起こりうる。

ここで：
Ｒ¹はＣ_1-6アルキルであり
Ｍはアルカリ金属であり
Ｑはキノリン−６−イルすなわち

である。

スキーム７は、エステル誘導体（ＩＸ）の塩基性条件下での加水分解（ケン化）（ｍ）を必要とする、式（ＸＩ）（ここでＥは−Ｏ^(-)Ｍ⁽⁺⁾であり、そしてＭはアルカリ金属、好ましくはＮａ⁺若しくはＫ⁺である）のカルボン酸塩誘導体を得るために採用される例示的一経路を具体的に説明する。エステル誘導体（ＩＸ）は、一般に、スキーム３で教示されるとおりであることができ、Ｒ¹はＣ_1-6アルキル、好ましくはＣ_1-4アルキル、より好ましくはＣ_1-3アルキル、およびなおより好ましくはメチル若しくはエチルである。

塩基で触媒されるエステル加水分解の条件は当業者に公知であり、そして典型的にはエステル、本明細書で中間体（ＩＸ）を水性塩基、好ましくはアルカリ金属水酸化物、より好ましくはＮａＯＨ若しくはＫＯＨと反応させることを必要とする。適する水性溶媒は、例えば、水および他の水と混合可能なプロトン性溶媒、好ましくはアルコール、例えばメタノール、エタノール若しくはイソプロパノールと水の混合物を包含する。該反応は一般に高温、例えば溶媒の還流温度までで実施しうる。

式（Ｉ）の化合物の多形若しくは水和物の形態および塩の製薬学的製剤および用途
本発明の有効成分（すなわち、以下の記述で使用されるところの、式（Ｉ）の化合物の多形形態、水和物の形態若しくは塩、または本明細書に開示されるところのそれらのいずれかの混合物）は、細胞若しくは被験体でのｃ−Ｍｅｔ活性を包含するチロシンキナーゼ活性若しくは発現を阻害する、ｃ−Ｍｅｔ活性を包含するキナーゼ活性若しくは発現を低下させる、およびｃ−Ｍｅｔの発現を調節する、または被験体でのｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性若しくは発現に関係する障害を処置するために使用し得る。ｃ−Ｍｅｔ活性の阻害はｃ−Ｍｅｔ発現を間接的に調節すると考えられる。

本局面の一態様において、本発明は、本発明の有効成分と細胞を接触させる段階を含んでなる、細胞中のｃ−Ｍｅｔのキナーゼ活性の低下若しくは阻害方法およびｃ−Ｍｅｔの発現の調節方法を提供する。本発明は、被験体に本発明の有効成分を投与する段階を含んでなる、被験体でのｃ−Ｍｅｔのキナーゼ活性の低下若しくは阻害方法およびｃ−Ｍｅｔの発現の調節方法もまた提供する。本発明は、本発明の有効成分と細胞を接触させる段階を含んでなる、細胞での細胞増殖の阻害方法をさらに提供する。

細胞若しくは被験体でのｃ−Ｍｅｔのキナーゼ活性若しくは発現は、本明細書に記述されるｃ−Ｍｅｔキナーゼアッセイのような当該技術分野で公知の手順により測定し得る。細胞中のｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性の阻害は、ＥＬＩＳＡアッセイ形式を使用して若しくはウエスタンブロッティングによりｃ−Ｍｅｔリン酸化のレベルを測定することによってもまた測定し得る。

本明細書で使用されるところの「被験体」という用語は、処置、観察若しくは実験の対象であった動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。本明細書で使用されるところの「接触させること」という用語は、有効成分が細胞により取り込まれるような細胞への有効成分の添加を指す。本局面に対する他の態様において、本発明は、細胞増殖性障害若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害を発症する危険にさらされている（若しくは発症しやすい）被験体の予防的および治療的双方の処置方法を提供する。こうした障害は、ｃ−Ｍｅｔ発現（若しくは過剰発現）および／またはｃ−Ｍｅｔ突然変異に関係する既存の状態を包含する。

一例において、本発明は、本発明の有効成分および製薬学的に許容できる担体を含んでなる製薬学的組成物の予防的有効量を被験体に投与することを含んでなる、被験体での細胞増殖性障害若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害の予防方法を提供する。

前記予防剤の投与は、疾患若しくは障害が予防されるか若しくはそうでなければその進行を遅らされるような、細胞増殖性障害若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害に特徴的な症状の発現の前に起こり得る。

別の例において、本発明は、本発明の有効成分および製薬学的に許容できる担体を含んでなる製薬学的組成物の治療的有効量を被験体に投与することを含んでなる、被験体での細胞増殖性障害若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害の処置方法に関する。前記治療薬の投与は、前記治療薬が細胞増殖性障害若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害について補償するための治療としてはたらくような、障害に特徴的な症状の発現と同時に起こり得る。

別の例において、本発明は、本発明の有効成分および製薬学的に許容できる担体を含んでなる製薬学的組成物の治療的有効量を被験体に投与することを含んでなる、ｃ−Ｍｅｔ発現のレベル若しくはｃ−Ｍｅｔ活性の調節が細胞増殖性障害若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害を改善するようはたらきうるような、被験体における細胞増殖性障害若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害の調節方法に関する。

「予防的有効量」という用語は、研究者、獣医師、医師若しくは他の臨床家により探求されているところの障害の発症を被験体において阻害する若しくは遅延させる有効成分若しくは製薬学的剤の量を指す。本明細書で使用されるところの「治療的有効量」という用語は、処置されている疾患若しくは障害の症状の改善を包含する、研究者、獣医師、医師若しくは他の臨床家により探求されている被験体で生物学的若しくは医学的応答を導き出す有効成分若しくは製薬学的剤の量を指す。本製薬学的組成物の治療的および予防的有効用量の決定方法は当該技術分野で既知である。

本明細書で使用されるところの「組成物」という用語は、指定される量の指定される成分を含んでなる生成物、ならびに指定される量の指定される成分の組合せから直接若しくは間接的に生じるいかなる生成物も包含することを意図している。

本明細書で使用されるところの「ｃ−Ｍｅｔに関係する障害」若しくは「ｃ−Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼに関係する障害」という用語は、ｃ−Ｍｅｔ活性、例えばｃ−Ｍｅｔの過剰活性と関連する若しくはそれが関わる疾患およびこれらの疾患に付随する状態を包含する。「ｃ−Ｍｅｔの過剰活性」という用語は、１）通常はｃ−Ｍｅｔを発現しない細胞でのｃ−Ｍｅｔ発現；２）通常は活性ｃ−Ｍｅｔを有しない細胞によるｃ−Ｍｅｔ活性；３）不要な細胞増殖につながる増大されたｃ−Ｍｅｔ発現；若しくは４）ｃ−Ｍｅｔの構成的活性化につながる突然変異のいずれかを指す。「ｃ−Ｍｅｔに関係する障害」の例は、異常に大量のｃ−Ｍｅｔ若しくはｃ−Ｍｅｔの突然変異によるｃ−Ｍｅｔの過剰刺激から生じる障害、または異常に大量のｃ−Ｍｅｔ若しくはｃ−Ｍｅｔの突然変異による異常に大量のｃ−Ｍｅｔ活性から生じる障害を包含する。ｃ−Ｍｅｔの過剰活性が、細胞増殖性障害、腫瘍性障害および癌のような多数の疾患の病因に関与していることが既知である。

「細胞増殖性障害」という用語は、多細胞生物体に対する害（すなわち不快感若しくは減少された平均余命）をもたらす、多細胞生物体中の細胞の１若しくはそれ以上のサブセットの不要な細胞増殖を指す。細胞増殖性障害は多様な型の動物およびヒトで発生し得る。細胞増殖性障害は、腫瘍性障害（本明細書で使用されるところの「腫瘍性障害」は、異常な若しくは制御されない細胞増殖から生じる腫瘍を指す）および他の細胞増殖性障害を包含する。

ｃ−Ｍｅｔに関係する細胞増殖性障害の例は、白血病、リンパ腫および骨髄腫、例えば急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、急性未分化白血病（ＡＵＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、成人Ｔ細胞ＡＬＬ、三血球系骨髄異形成を伴うＡＭＬ（ＡＭＬ／ＴＭＤＳ）、混合系統白血病（ＭＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性障害（ＭＰＤ）、多発性骨髄腫、（ＭＭ）、骨髄肉腫、非ホジキンリンパ腫およびホジキン病（ホジキンリンパ腫ともまた呼ばれる）を包含する、腫瘍および癌腫、例えば遺伝性および散発性ヒト乳頭状腎癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、神経膠腫、卵巣癌、肝細胞癌、頭頚部扁平上皮細胞癌、精巣癌、基底細胞癌、肝癌、肉腫、悪性胸膜中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、滑膜肉腫、甲状腺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）および小細胞肺癌、膀胱の移行上皮癌、精巣癌、基底細胞癌、肝癌、ならびに関節リウマチおよび網膜症のような新たな脈管構造の形成を伴う疾患を包含する。

ｃ−Ｍｅｔの過剰活性がそれらの病因に関与している他の細胞増殖性障害は、ｃ−Ｍｅｔが過剰発現されない若しくは別の方法で変えられていない癌を包含する、ｃ−Ｍｅｔ活性が浸潤性／転移性の表現型に寄与している癌を包含する。本局面に対するさらなる一態様において、本発明は、被験体における細胞増殖性障害若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害の発症を処置若しくは阻害するための併用療法を包含する。該併用療法は、本発明の有効成分の治療的若しくは予防的有効量、ならびに化学療法、放射線治療、遺伝子治療および免疫療法を包含する１種若しくはそれ以上の他の抗細胞増殖療法を被験体に投与することを含んでなる。本発明の一態様において、本発明の有効成分は化学療法とともに投与しうる。本明細書で使用されるところの化学療法は化学療法剤を必要とする治療を指す。多様な化学療法剤を本明細書に開示される併用処置法で使用しうる。例示として企図している化学療法剤は、限定されるものでないが、白金化合物（例えばシスプラチン、カルボプラチン、オキザリプラチン）；タキサン化合物（例えばパクリタキセル、ドセタキソール（ｄｏｃｅｔａｘｏｌ））；カンプトテシン化合物（イリノテカン、トポテカン）；ビンカアルカロイド（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン）；抗腫瘍ヌクレオシド誘導体（例えば５−フルオロウラシル、５−フルオロ−デオキシウリジン一リン酸（５ＦｄＵＭＰ）、ロイコボリン、ゲムシタビン、カペシタビン）；アルキル化剤（例えばシクロホスファミド、カルムスチン、ロムスチン、チオテパ）；エピポドフィロトキシン／ポドフィロトキシン（例えばエトポシド、テニポシド）；アロマターゼ阻害剤（例えばアナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタン）；抗エストロゲン化合物（例えばタモキシフェン、フルベストラント）、葉酸代謝拮抗薬（例えばプレメトレキセド（ｐｒｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）二ナトリウム）；低メチル化薬（ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）（例えばアザシチジン）；生物製剤（例えばゲムツザマブ（ｇｅｍｔｕｚａｍａｂ）、セツキシマブ、リツキシマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、エルロチニブ）；抗生物質／アントラサイリン（ａｎｔｈｒａｃｙｌｉｎｅ）（例えばイダルビシン、アクチノマイシンＤ、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシン、カルミノマイシン、ダウノマイシン）；代謝拮抗薬（例えばクロファラビン、アミノプテリン、シトシンアラビノシド、メトトレキサート、デシタビン）：微小管阻害剤（例えばコンブレタスタチン、コルヒチン、ノコダゾール）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えばカンプトテシン）；分化剤（例えばレチノイド、ビタミンＤおよびレチノイン酸）；レチノイン酸代謝阻害剤（ＲＡＭＢＡ）（例えばアキュテイン）；キナーゼ阻害剤（例えばフラボペリドール、イマチニブメシル酸塩、ゲフィニチブ、ラパチニブ、スニチニブ、バンデタニブ、ＢＩＢＷ２９９２、１７−ブロモ−８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１９−オクタヒドロ−２０−メトキシ−１３−メチル−４，６−エタンジイリデンピリミド［４，５−ｂ］［６，１，１２］ベンズオキサジアザシクロペンタデシン）：ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（例えばティピファルニブ（ｔｉｐｉｆａｒｎｉｂ））；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えばＮ−ヒドロキシ−2−［４−［［（１Ｈ−インドル−３−イルメチル）アミノ］メチル］−１
−ピペリジニル］−５−ピリミジンカルボキサミドおよびその２，２，２−トリフルオロ酢酸塩（ＪＮＪ−２６４８１５８５））；ユビキチンプロテアソーム経路の阻害剤（例えばボルテゾミブ、ヨンデリス（Ｙｏｎｄｅｌｉｓ）、Ｎ１−［２−（１Ｈ−インドル−３−イル）エチル］−Ｎ４−４−ピリジニル−１，４−ベンゼンジアミン（ＪＮＪ２６８５４１６５））を挙げることができる。

さらなる有用な剤は、ベラパミル（許容される化学療法剤に抵抗性の腫瘍細胞で化学受容性を確立しおよび薬物感受性悪性病変におけるこうした化合物の有効性を増強するために抗腫瘍薬と組合せで有用であることが見出されたカルシウム拮抗薬）を包含する。Ｓｉｍｐｓｏｎ ＷＧ，Ｔｈｅ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒ ｖｅｒａｐａｍｉｌ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｅｌｌ Ｃａｌｃｉｕｍ．１９８５ Ｄｅｃ；６（６）：４４９−６７を参照されたい。加えて、未だ出現されない化学療法剤を、本発明の有効成分とともに有用であるとして企図している。

本発明の別の態様において、本発明の有効成分は放射線治療とともに投与しうる。本明細書で使用されるところの「放射線治療」は、それの必要な被験体を放射線に曝露することを含んでなる治療を指す。こうした治療は当業者に既知である。放射線治療の適切なスキームは、放射線治療を単独で若しくは他の化学療法剤とともに使用する、臨床治療で既に使用されているものに類似であることができる。

本発明の別の態様において、本発明の有効成分は遺伝子治療とともに投与しうる。本明細書で使用されるところの「遺伝子治療」は、腫瘍発生に関与する特定の遺伝子に標的を定める治療を指す。可能な遺伝子治療戦略は、欠陥のある癌阻害遺伝子の修復、増殖因子およびそれらの受容体をコードする遺伝子に対応するアンチセンスＤＮＡでの細胞形質導入若しくはトランスフェクション、リボザイム、ＲＮＡデコイ、アンチセンスメッセンジャーＲＮＡおよび小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子のようなＲＮＡに基づく戦略、ならびにいわゆる「自殺遺伝子」を包含する。本発明の他の態様において、本発明の有効成分は免疫療法とともに投与しうる。本明細書で使用されるところの「免疫療法」は、腫瘍発生に関与する特定のタンパク質にこうしたタンパク質に特異的な抗体を介して標的を定める治療、例えばトラスツズマブを指す。例えば、血管内皮細胞増殖因子に対するモノクローナル抗体が癌の治療において使用されている。

本発明の有効成分に加えて第二の医薬品を使用する場合、該２種の医薬品は、同時に（例えば別個の若しくは１つの組成物中で）、いずれかの順序で連続して、ほぼ同時に、または別個の投薬スケジュールで投与しうる。後者の場合、該２化合物は、有利な若しくは相乗効果が達成されることを確実にするのに十分である期間内にならびに量および様式で投与することができる。組合せの各成分の好ましい投与方法および順序ならびにそれぞれの投薬量および投与計画は、本発明の有効成分ともに投与される特定の化学療法剤、それらの投与経路、処置されている特定の腫瘍および処置されている特定の宿主に依存することができることが認識されるであろう。

当業者により理解されるであろうとおり、化学療法剤の適切な用量は、一般に、化学療法剤を単独で若しくは他の化学療法剤とともに投与する臨床治療で既に使用されているものと同様若しくはそれ未満であることができる。

最適な投与方法および順序ならびに投薬量および投与計画は、慣習的方法を使用して、および本明細書に示される情報を鑑み、当業者により容易に決定し得る。

例のみとして、白金化合物は、有利には、体表面積１平方メートルあたり１ないし５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば５０ないし４００ｍｇ／ｍ２の投薬量、とりわけシスプラチンについて処置クールあたり約７５ｍｇ／ｍ２の投薬量、およびカルボプラチンについて約３００ｍｇ／ｍ２で投与する。シスプラチンは経口で吸収されず、そして従って注入を介して静脈内、皮下、筋肉内若しくは腹腔内で送達しなければならない。

例のみとして、タキサン化合物は、有利には、体表面積１平方メートルあたり５０ないし４００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば７５ないし２５０ｍｇ／ｍ２の投薬量、とりわけパクリタキセルについて処置クールあたり約１７５ないし２５０ｍｇ／ｍ２の投薬量、およびドセタキセルについて約７５ないし１５０ｍｇ／ｍ２で投与する。

例のみとして、カンプトテシン化合物は、有利には、体表面積１平方メートルあたり０．１ないし４００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１ないし３００ｍｇ／ｍ２の投薬量、とりわけイリノテカンについて処置クールあたり約１００ないし３５０ｍｇ／ｍ２の投薬量、およびトポテカンについて約１ないし２ｍｇ／ｍ２で投与する。

例のみとして、ビンカアルカロイドは、有利には、体表面積１平方メートルあたり２ないし３０ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、とりわけビンブラスチンについて処置クールあたり約３ないし１２ｍｇ／ｍ２の投薬量、ビンクリスチンについて約１ないし２ｍｇ／ｍ２の投薬量、およびビノレルビンについて約１０ないし３０ｍｇ／ｍ２の投薬量で投与しうる。

例のみとして、抗腫瘍ヌクレオシド誘導体は、有利には、体表面積１平方メートルあたり２００ないし２５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば７００ないし１５００ｍｇ／ｍ２の投薬量で投与しうる。５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、一般に２００から５００ｍｇ／ｍ２まで（好ましくは３から１５ｍｇ／ｋｇ／日まで）の範囲にわたる用量を含む静脈内投与を介して使用する。ゲムシタビンは、有利には処置クールあたり約８００ないし１２００ｍｇ／ｍ２の投薬量で投与し、およびカペシタビンは、有利には約１０００ないし２５００ｍｇ／ｍ２で投与する。

例のみとして、アルキル化剤は、有利には、体表面積１平方メートルあたり１００ないし５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１２０ないし２００ｍｇ／ｍ２の投薬量、とりわけシクロホスファミドについて処置クールあたり約１００ないし５００ｍｇ／ｍ２の投薬量、クロラムブシルについて約０．１ないし０．２ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量、カルムスチンについて約１５０ないし２００ｍｇ／ｍ２の投薬量、およびロムスチンについて約１００ないし１５０ｍｇ／ｍ２の投薬量で投与しうる。

例のみとして、ポドフィロトキシン誘導体は、有利には、体表面積１平方メートルあたり３０ないし３００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば５０ないし２５０ｍｇ／ｍ２の投薬量、とりわけエトポシドについて処置クールあたり約３５ないし１００ｍｇ／ｍ２の投薬量、およびテニポシドについて約５０ないし２５０ｍｇ／ｍ２で投与しうる。

例のみとして、アントラサイクリン誘導体は、有利には、体表面積１平方メートルあたり１０ないし７５ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１５ないし６０ｍｇ／ｍ２の投薬量、とりわけドキソルビシンについて処置クールあたり約４０ないし７５ｍｇ／ｍ２の投薬量、ダウノルビシンについて約２５ないし４５ｍｇ／ｍ２の投薬量、およびイダルビシンについて約１０ないし１５ｍｇ／ｍ２の投薬量で投与しうる。

例のみとして、抗エストロゲン化合物は、有利には、特定の剤および処置されている状態に依存して１日約１ないし１００ｍｇの投薬量で投与しうる。タモキシフェンは、有利には１日２回５ないし５０ｍｇ、好ましくは１０ないし２０ｍｇの投薬量で経口投与し、治療効果を達成しかつ維持するのに十分な期間治療を継続する。トレミフェンは、有利には１日１回約６０ｍｇの投薬量で経口投与し、治療効果を達成しかつ維持するのに十分な期間治療を継続する。アナストロゾールは、有利には１日１回約１ｍｇの投薬量で経口投与する。ドロロキシフェンは、有利には１日１回約２０〜１００ｍｇの投薬量で経口投与する。ラロキシフェンは、有利には１日１回約６０ｍｇの投薬量で経口投与する。エキセメスタンは、有利には１日１回約２５ｍｇの投薬量で経口投与する。

例のみとして、生物製剤は、有利には、体表面積１平方メートルあたり約１ないし５ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）の投薬量で、若しくは異なる場合は当該技術分野で既知のとおり投与しうる。例えば、トラスツズマブは、有利には処置クールあたり１ないし５ｍｇ／ｍ２の投薬量、とりわけ２ないし４ｍｇ／ｍ２で投与する。

投薬量は、例えば７、１４、２１若しくは２８日ごとに反復されうる処置クールあたり例えば１回、２回若しくはそれ以上投与しうる。本発明の有効成分は、全身で、例えば静脈内、経口、皮下、筋肉内、皮内若しくは非経口で被験体に投与し得る。本発明の有効成分はまた被験体に局所投与もし得る。局所送達系の制限しない例は、血管内薬物送達カテーテル、ワイヤ、薬理学的ステントおよび腔内敷石（ｅｎｄｏｌｕｍｉｎａｌ ｐａｖｉｎｇ）を包含する腔内医療用具の使用を包含する。本発明の有効成分は、さらに、標的部位での該化合物の高い局所濃度を達成するための標的化剤とともに被験体に投与し得る。本発明の有効成分は、数時間から数週間までの範囲にわたる期間、薬物若しくは剤を標的組織と接触して維持するという目的を伴い、迅速放出若しくは徐放のため処方しうる。

本発明はまた、製薬学的に許容できる担体とともに本発明の有効成分を含んでなる製薬学的組成物も提供する。該製薬学的組成物は、約０．１ｍｇと１０００ｍｇの間、好ましくは約１００ないし５００ｍｇの本発明の有効成分を含有することができ、そして選択される投与様式に適するいかなる形態にも構成しうる。「製薬学的に許容できる」という句は、動物若しくはヒトに適切なように投与される場合に有害な、アレルギー性の若しくは他の不利な反応を生じない分子実体および組成物を指す。家畜の用途は本発明内に等しく包含され、そして「製薬学的に許容できる」製剤は臨床および／若しくは家畜双方の使用のための製剤を包含する。本発明はまた、投与様式に依存して、０．０５から９９重量％まで、より好ましくは０．１から７０重量％まで、なおより好ましくは０．１から５０重量％までの有効成分、および１から９９．９５重量％まで、より好ましくは３０から９９．９重量％まで、なおより好ましくは５０から９９．９重量％までの製薬学的に許容できる担体（全部のパーセンテージは組成物の総重量に基づく）を含んでなる製薬学的組成物も提供する。

担体は、限定されるものでないが結合剤、懸濁化剤、滑沢剤、香料（ｆｌａｖｏｒａｎｔ）、甘味料、保存剤、色素およびコーティングを挙げることができる必要かつ不活性な製薬学的賦形剤を包含する。経口投与に適する組成物は、丸剤、錠剤、カプレット剤、カプセル剤（それぞれ即時放出、調時放出および徐放製剤を包含する）、顆粒剤ならびに散剤のような固体の形態、ならびに溶液、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および懸濁剤のような液体の形態を包含する。非経口投与に有用な形態は無菌溶液、乳剤および懸濁剤を包含する。

本発明の製薬学的組成物は本発明の有効成分の徐放のための製薬学的組成物もまた包含する。該組成物は徐放担体（典型的にはポリマー性担体）および本発明の有効成分を包含する。徐放の生物分解可能な担体は当該技術分野で公知である。これらは、その中に有効成分（１種若しくは複数）を捕捉しかつ適する環境（例えば水性、酸性、塩基性など）下でゆっくりと分解／溶解し、そしてそれにより体液中で分解／溶解しかつその中の有効成分（１種若しくは複数）を放出する粒子を形成しうる物質である。該粒子は好ましくはナノ粒子（すなわち直径約１ないし５００ｎｍ、好ましくは直径約５０〜２００ｎｍ、および最も好ましくは直径約１００ｎｍの範囲の）である。

本発明は本発明の製薬学的組成物の製造方法もまた提供する。本発明の有効成分は慣習的製薬学的調合技術に従って製薬学的担体と緊密に混合され、その担体は投与、例えば経口若しくは筋肉内のような非経口に望ましい製剤の形態に依存して広範な形態を取りうる。経口剤形の組成物の製造において、通常の製薬学的媒体のいずれも使用しうる。従って、例えば懸濁剤、エリキシル剤および溶液のような液体の経口製剤について、適する担体および添加物は、水、グリコール、油、アルコール、着香料、甘味料、保存剤、着色剤などを包含し；例えば散剤、カプセル剤、カプレット剤、ゲルカプセル剤および錠剤のような固体の経口製剤について、適する担体および添加物はデンプン、糖、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などを包含する。投与におけるそれらの容易さのため、錠剤およびカプセル剤が最も有利な経口投与単位形態であり、その場合固体の製薬学的担体が明らかに使用される。所望の場合は、錠剤を標準技術により糖コーティング若しくは腸溶コーティングしうる。非経口製剤について、担体は通常滅菌水を含むことができるとはいえ、例えば溶解性を補助するような目的上若しくは保存のための他成分を包含しうる。注入可能な懸濁剤もまた製造することができ、その場合は適切な液体の担体、懸濁化剤などを使用しうる。徐放のための製剤中では、徐放担体、典型的にはポリマー性担体および本発明の有効成分を最初に有機溶媒に溶解若しくは分散する。得られる有機溶液をその後水性溶液に添加して水中油型乳剤を得る。好ましくは、該水性溶液は界面活性剤（１種若しくは複数）を包含する。その後、該有機溶媒を水中油型乳剤から蒸発させて、徐放担体および本発明の有効成分を含有する粒子のコロイド懸濁液を得る。

本明細書の製薬学的組成物は、投薬単位、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、注射剤、茶さじ１杯などあたり、上述されたところの有効用量を送達するのに必要な有効成分の量を含有することができる。本明細書の製薬学的組成物は、単位投薬単位、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、注射剤、坐剤、茶さじ１杯などあたり、１日あたり約０．０１ｍｇから２００ｍｇ／ｋｇ体重までを含有することができる。好ましくは、該範囲は１日あたり約０．０３から約１００ｍｇ／ｋｇ体重まで、最も好ましくは約１日あたり０．０５から約５
１０ｍｇ／ｋｇ体重までである。化合物は１日あたり１ないし５回の投与計画で投与しうる。投薬量は、しかしながら、患者の要件、処置されている状態の重症度および使用されている化合物に依存して変動しうる。連日投与若しくは定期的後（ｐｏｓｔ−ｐｅｒｉｏｄｉｃ）投与いずれかの使用を使用しうる。

好ましくは、これらの組成物は、経口、非経口、鼻内、舌下若しくは直腸投与のため、または吸入若しくはガス注入による投与のため；錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、無菌の非経口溶液若しくは懸濁剤、計量式エアゾル若しくは液体スプレー剤、滴剤、アンプル、自動注入器装置または坐剤のような単位剤形にある。あるいは、該組成物は、週１回若しくは月１回投与に適する形態で提示されることができ；例えば、デカン酸塩のような有効成分の不溶性塩を、筋肉内注入のためのデポー製剤を提供するように適合させうる。錠剤のような固体組成物を製造するため、主有効成分を製薬学的担体、例えばトウモロコシデンプン、乳糖、ショ糖、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムもしくはガムのような慣習的打錠成分、および他の製薬学的希釈剤、例えば水と混合して、本発明の有効成分若しくはその製薬学的に許容できる塩の均質な混合物を含有する固体の処方前（ｐｒｅＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）組成物を形成する。これらの処方前組成物を均質と呼ぶ場合、該組成物が錠剤、丸剤およびカプセル剤のような等しく有効な剤形に容易に細分されうるように有効成分が組成物全体に均一に分散されていることを意味している。この固体の処方前組成物をその後、０．１から約１０００ｍｇまで、とりわけ０．１から約５００ｍｇまでの本発明の有効成分を含有する上述された型の単位剤形に細分する。該新規組成物の錠剤若しくは丸剤をコーティング若しくは別の方法で調合して、延長された作用の利点を提供する剤形を提供し得る。例えば、錠剤若しくは丸剤は内部投薬および外部投薬成分を含み得、後者は前者の上の外被の形態にある。該２成分を、胃中での崩壊に抵抗するようにはたらきかつ内部成分を無傷で十二指腸に送らせる若しくは放出を遅らせる腸溶層により分離し得る。こうした腸溶層若しくはコーティングに多様な物質を使用し得、こうした物質はセラック、アセチルアルコールおよびセルロースアセテートのような物質を伴う多数のポリマー酸を包含する。

本発明の有効成分を経口で若しくは注入による投与のため組み込み得る液体の形態は、水性溶液、適して香味を付けられたシロップ、水性若しくは油性懸濁液、ならびに綿実油、ゴマ油、ココナッツ油若しくはラッカセイ油のような可食油を含む香味を付けられた乳剤、ならびにエリキシルおよび類似の製薬学的ベヒクルを包含する。水性懸濁液のための適する分散助剤若しくは懸濁化剤は、トラガカント、アラビアゴムのような合成および天然のガム、アルギン酸塩、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン若しくはゼラチンを包含する。適して香味を付けられた懸濁化剤若しくは分散助剤中の液体の形態は、合成および天然のガム、例えばトラガカント、アラビアゴム、メチルセルロースなどもまた包含しうる。非経口投与には無菌の懸濁液および溶液が望ましい。適する保存剤を一般に含有する等張製剤を、静脈内投与が望ましい場合に使用する。

有利には、本発明の有効成分は単一１日用量で投与することができるか、または総１日投薬量を１日２、３若しくは４回の分割用量で投与しうる。さらに、本発明の有効成分は、適する鼻内ベヒクルの局所使用を介する鼻内の形態で、若しくは当業者に公知の経皮皮膚貼付剤を介して投与し得る。経皮送達系の形態で投与されるために、投薬量の投与はもちろん投薬計画を通じて間欠的よりむしろ連続的であることができる。

例えば、錠剤若しくはカプセル剤の形態の経口投与のため、有効成分を当業者に既知の経口の非毒性の製薬学的に許容できる不活性担体と組合せることができる。エタノール、グリセロール、水などのような液体を造粒目的上使用し得る。さらに、所望の若しくは必要な場合は、適する結合剤；滑沢剤、崩壊剤および着色料もまた混合物に組み込み得る。適する結合剤は、デンプン、ゼラチン、グルコース若しくはβ−乳糖のような天然の糖、トウモロコシ甘味料、アラビアゴム、トラガカントのような天然および合成のガム、またはオレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどを制限なしに包含する。崩壊剤は、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどを制限なしに包含する。

本発明の生成物の１日投薬量は、１日あたり成体のヒトあたり１から５０００ｍｇまでの広範囲にわたり変動しうる。経口投与のため、該組成物は、好ましくは、処置されるべき患者への投薬量の症候性の調節のため、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、１５０、２００、２５０および５００ミリグラムの有効成分を含有する錠剤の形態で提供される。該薬物の有効量は、通常は１日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇ体重までの投薬量レベルで供給する。とりわけ、該範囲は、１日あたり約０．０３から約１５ｍｇ／ｋｇ体重まで、およびより具体的には１日あたり約０．０５から約１０ｍｇ／ｋｇ体重までである。本発明の有効成分は１日あたり４若しくは５回までまたはそれ以上、好ましくは１日あたり１ないし２回の投与計画で投与しうる。

投与されるべき最適投薬量は当業者により容易に決定されることができ、そして、使用される特定の化合物、投与様式、製剤の濃度、投与様式および疾患状態の進行とともに変動することができる。加えて、患者の齢、重量、食事および投与時刻を包含する、処置されている特定の患者と関連する因子が、投薬量を調節する必要性をもたらすことができる。

本発明の有効成分は、小型単層小胞、大型単層小胞および多層小胞のようなリポソーム送達系の形態でもまた投与し得る。リポソームは、限定されるものでないが、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、カルジオリピン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトール、ジアシルトリメチルアンモニウムプロパン、ジアシルジメチルアンモニウムプロパンおよびステアリルアミンのような両親媒性脂質、トリグリセリドのような中性脂質、ならびにそれらの組み合わせを挙げることができる。それらはコレステロールを含みうるか、若しくはコレステロールを含まないことができるかのいずれかである。

本発明の有効成分は局所にもまた投与し得る。血管内薬物送達カテーテル、ワイヤ、薬理学的ステントおよび腔内敷石のようないかなる送達装置も利用しうる。こうした装置のための送達系は、投与者により制御される速度で化合物を送達する局所注入カテーテルを含みうる。

本発明は、腔内医療用具、好ましくはステント、および治療的投薬量の本発明の有効成分を含んでなる薬物送達装置を提供する。「ステント」という用語はカテーテルにより送達されることが可能ないかなる装置も指す。ステントは、外科的外傷による血管組織の不要な内向きの増殖のような物理的異常による血管閉鎖を予防するのに慣例に使用する。それはしばしば、管の腔の内側に残されて閉塞を解消するのに適切な管状の拡張する格子型構造を有する。ステントは腔壁に接触する表面および腔に露出される表面を有する。腔壁に接触する表面は管の外側表面であり、そして腔に露出される表面は管の内表面である。ステントはポリマー性、金属性若しくはポリマーおよび金属性であり得、そしてそれは場合によっては生物分解性であり得る。

一般に、ステントは拡張されない形態で腔に挿入され、そしてその後自動的に若しくはｉｎ ｓｉｔｕで第二の装置の助けを借りて拡張される。典型的な一拡張方法は、血管の壁成分と会合された閉塞を剪断かつ破壊しおよび拡張された腔を得るために、狭窄した血管若しくは身体通路内で膨張される、カテーテルに取り付けられた血管形成バルーンの使用により起こる。米国特許第６，７７６，７９６号明細書（Ｆａｌｏｔｉｃｏら）に記述されるところの自己拡張型ステントもまた利用しうる。炎症および増殖を予防する薬物、剤若しくは化合物とのステントの組合せは、血管形成術後再狭窄の最も有効な処置を提供しうる。

本発明の有効成分は多数の方法でおよびいずれかの数の生物適合性素材の利用においてステントに組み込まれ若しくは付着され得る。例示的一態様において、剤をポリマーポリピロールのようなポリマーマトリックスに直接組み込み、そしてその後ステントの外表面にコーティングする。剤は拡散によりポリマーを通ってマトリックスから溶離する。ステントおよびステントへの薬物のコーティング方法は当該技術分野で詳細に論考されている。別の例示的態様において、ステントを最初に化合物、エチレンコビニルアセテートおよびポリブチルメタクリレートの溶液を含んでなる基層としてでコーティングする。その後、ステントをポリブチルメタクリレートのみを含んでなる外層でさらにコーティングする。外層は、該化合物があまりにも迅速に溶離されかつ周囲の組織に進入することを予防するための拡散障壁として作用する。外層すなわち上塗りの厚さが、マトリックスから剤が溶離する速度を決定する。ステントおよびコーティング方法は、ＷＩＰＯ公開第ＷＯ９６３２９０７号明細書、米国特許公開第２００２／００１６６２５号明細書およびそれらの中に開示される参考文献で詳細に論考されている。

本発明の有効成分および生物適合性素材／ポリマーの溶液は、多数の方法でステント中若しくは上に組み込みうる。例えば、溶液をステント上に噴霧しうるか、若しくはステントを溶液中に浸漬しうる。好ましい一態様において、溶液をステント上に噴霧しそしてその後乾燥させる。別の例示的態様において、溶液を一極性に電気的に荷電させることができ、そしてステントを反対の極性に電気的に荷電させる。この様式で、溶液およびステントは相互に誘引されることができる。この型の噴霧方法の使用において浪費を低減させることができ、そして塗膜の厚さに関するより多くの制御を達成しうる。剤は、好ましくは、一組織と接触させるステントの外表面にのみ付着される。しかしながら、数種の化合物についてはステント全体をコーティングしうる。ステントに塗布される化合物の用量および該薬物の放出を制御するポリマーコーティングの組合せが、薬物の有効性で重要である。該化合物は、好ましくはおよそ６か月およびそれ以上まで最低３日間、好ましくは７と３０日の間、ステント上に留まる。

いずれかの数の非可食性生物適合性ポリマーを本発明の有効成分とともに利用しうる。多様なポリマーを多様なステントに利用しうることに注意することが重要である。例えば、上述されたエチレンコビニルアセテートおよびポリブチルメタクリレートマトリックスはステンレス鋼ステントとともに良好に機能する。他のポリマーは、ニッケルおよびチタンの合金のような超弾性特性を表す素材を包含する他の素材から形成されるステントとともにより効果的に利用しうる。

再狭窄は冠動脈血管形成術後の重大な罹病率および死亡率の原因である。再狭窄は、弾性反跳、血栓形成、内膜過形成および細胞外マトリックスリモデリングを包含する４過程の組合せにより起こる。数種の増殖因子が、再狭窄につながるこれらの過程で役割を演じていることが最近同定された。Ｓｃｈｉｅｌｅ ＴＭら、２００４、”Ｖａｓｃｕｌａｒ
ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ−ｓｔｒｉｖｉｎｇ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ．”Ｅｘｐｅｒｔ
Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．５（１１）：２２２１−３２を参照されたい。血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）はｃ−Ｍｅｔ受容体を発現する。ｃ−Ｍｅｔのリガンド、肝細胞増殖因子への曝露は、遊走性の表現型を表すようにこれらの細胞を刺激する。Ｔａｈｅｒら、Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｔｒｉｇｇｅｒｓ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃａｓｃａｄｅｓ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ
Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．（２００２）２９８（１）：８０−６；Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ａｏｋｉ Ｍ，Ｙｏ Ｙ，Ｏｇｉｈａｒａ Ｔ．Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｓ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｈｏｒｍｏｎｅ：ｒｏｌｅ ｏｆ ＨＧＦ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｎｄｏｃｒ Ｊ．（２００２）Ｊｕｎ；４９（３）：２７３−８４を参照されたい。動脈の中膜から内膜へのＶＳＭＣ遊走がアテローム硬化症および再狭窄の発症である役割を演じているため、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性のアンタゴニストはこれらの疾患の処置で実現可能な治療戦略を提示すると考えられる。

従って、本発明は、ステントのような腔内医療用具からの放出による治療上有効な量の本発明の有効成分の制御送達を含んでなる、血管壁の再狭窄、内膜過形成若しくは炎症を包含するｃ−Ｍｅｔに関係する障害の処置方法を提供する。

体腔へのステントの導入方法は公知であり、そして本発明の化合物で被覆されたステントは好ましくはカテーテルを使用して導入する。当業者により認識されるであろうとおり、方法はステント埋め込みの場所に基づいてわずかに変動することができる。冠動脈ステント埋め込みのために、ステントを持つバルーンカテーテルを冠動脈に挿入し、そしてステントを所望の部位に配置する。バルーンを膨張させステントを拡張する。ステントが拡張する際にステントが腔壁と接触する。ステントを一旦配置すれば、バルーンを縮小させかつ除去する。ステントは、化合物を持つ管腔と接触する表面が腔壁表面に直接接触する正しい位置に留まる。ステント埋め込みは、必要とされるとおり、抗凝固治療により付随されうる。

本発明のステントでの使用のための剤の送達のための最適条件は、使用される多様な局所送達系、ならびに使用される化合物の特性および濃度とともに変動しうる。最適化されうる条件は、例えば、化合物の濃度、送達容量、送達速度、血管壁の浸透の深さ、近位膨張圧、穿孔の量および大きさ、ならびに薬物送達カテーテルバルーンの密着度合いを包含する。条件は、例えば平滑筋細胞の増殖能力または血管抵抗性若しくは腔径の変化により測定されるところの再狭窄による大きな動脈閉塞が起こらないような傷害の部位での平滑筋細胞増殖の阻害のため最適化しうる。最適条件は、慣例のコンピュータによる方法を使用して動物モデル研究からのデータに基づき決定し得る。

本発明の有効成分の別の代替投与方法は、その意図している作用部位、すなわち血管内皮細胞若しくは腫瘍細胞に複合体を向ける標的化剤に化合物を複合することによることができる。抗体および抗体以外の双方の標的化剤を使用しうる。標的化剤とその対応する結合パートナーの間の特異的相互作用のため、本発明の有効成分は標的部若しくはその近くに高い局所濃度で投与し得、そして従って標的部位の障害をより効果的に処置する。抗体標的化剤は、腫瘍細胞、腫瘍脈管構造若しくは腫瘍間質の標的化可能な若しくは接近可能な成分に結合する抗体若しくはそれらの抗原結合フラグメントを包含する。腫瘍細胞、腫瘍脈管構造若しくは腫瘍間質の「標的化可能な若しくは接近可能な成分」は、好ましくは、表面で発現される、表面が接近可能な若しくは表面に局在化される成分である。抗体標的化剤は、壊死性腫瘍細胞から放出される細胞内成分に結合する抗体若しくはそれらの抗原結合フラグメントもまた包含する。好ましくは、こうした抗体は、浸透可能となるように誘導されうる細胞、若しくは実質的に全部の腫瘍および正常細胞の細胞ゴーストに存在するがしかし哺乳動物の正常生存細胞の外側に存在しないか若しくは接近可能でない不溶性細胞内抗原（１種若しくは複数）に結合するモノクローナル抗体若しくはそれらの抗原結合フラグメントである。本発明において、標的化可能な若しくは接近可能な成分はｃ−Ｍｅｔ受容体でありうる。それは標的組織上若しくはその近くで接近可能かつ発現されるからである。

本明細書で使用されるところの「抗体」という用語は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｄａｂのような一価フラグメント、ならびに組換え抗体、ヒト化抗体、二特異性抗体などのような工作された抗体のような、いかなる免疫学的結合剤も広範に指すことを意図している。抗体はポリクローナル若しくはモノクローナルいずれでもあり得るとは言え、モノクローナルが好ましい。事実上いかなる充実性腫瘍型の細胞表面に対する免疫学的特異性も有する当該技術分野で既知の非常に広範な抗体が存在する（Ｔｈｏｒｐｅらへの米国特許第５，８５５，８６６号明細書中の充実性腫瘍に対するモノクローナル抗体に関する要約表を参照されたい）。腫瘍に対する抗体の製造および単離方法は当業者に既知である（Ｔｈｏｒｐｅらへの米国特許第５，８５５，８６６号明細書、およびＴｈｏｒｐｅらへの米国特許第６，３４，２２１９号明細書）。

抗体に治療的部分を複合するための技術は公知である。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）中、Ａｍｏｎら、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”、ｐｐ．２４３−５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（第２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）中、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”、ｐｐ．６２３−５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）中、Ｔｈｏｒｐｅ、“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”、ｐｐ．４７５−５０６（１９８５）を参照されたい。類似の技術を、本発明の有効成分を抗体以外の標的化剤に結合するのにもまた応用し得る。

当業者は、小分子、オリゴペプチド、多糖若しくは他のポリアニオン性化合物のような抗体以外の標的化剤との複合体の形成方法を知っているであろうか、若しくは決定することが可能であろう。

血液中で合理的に安定であるいかなる結合部分も本発明の有効成分を標的化剤に連結するのに使用し得るとは言え、生物学的に遊離可能な結合および／または選択的に切断可能なスペーサー若しくはリンカーが好ましい。「生物学的に遊離可能な結合」および「選択的に切断可能なスペーサー若しくはリンカー」は、循環中で合理的な安定性をなお有するが、しかしある条件下すなわちある環境内で若しくは特定の剤と接触してのみ若しくは優先的に遊離可能、切断可能若しくは加水分解可能である。こうした結合は、米国特許第５，４７４，７６５号および同第５，７６２，９１８号明細書に記述されるところの例えばジスルフィドおよびトリスルフィド結合ならびに酸不安定性結合、ならびに米国特許第５，４７４，７６５号および同第５，７６２，９１８号明細書に記述されるところのペプチド結合、エステル、アミド、ホスホジエステルおよびグリコシドを包含する酵素感受性結合を包含する。こうした選択的遊離設計の特徴は、意図している標的部位での複合体からの化合物の徐放を容易にする。

本発明は、標的化剤に複合された本発明の有効成分の有効量および製薬学的に許容できる担体を含んでなる製薬学的組成物を提供する。

本発明はさらに、標的化剤に複合された本発明の有効成分の治療的有効量を被験体に投与することを含んでなる、ｃ−Ｍｅｔと関係する障害、とりわけ腫瘍の処置方法を提供する。

抗体若しくは増殖因子のようなタンパク質または多糖を標的化剤として使用する場合、それらは好ましくは注入可能な組成物の形態で投与される。注入可能な抗体溶液は、２分から約４５分まで、好ましくは１０から２０分までの経過にわたり静脈、動脈若しくは脊髄液に投与することができる。ある場合には、皮内および腔内投与が、皮膚の特定の領域および／若しくは特定の体腔に近密な領域に制限される腫瘍に有利である。加えて、クモ膜下腔内投与を脳中に位置する腫瘍に使用しうる。

標的化剤に複合された本発明の有効成分の治療的有効量は、個体、疾患の型、疾患状態、投与方法および他の臨床的変数に依存する。有効投薬量は動物モデルからのデータを使用して容易に決定可能である。充実性腫瘍を持つ実験動物が、臨床環境に移す前に適切な治療用量を最適化するのに頻繁に使用される。こうしたモデルは効果的な抗癌戦略の予測において非常に信頼できることが既知である。例えば、充実性腫瘍を持つマウスは、最小毒性を伴い有益な抗腫瘍効果を与える治療薬の作用範囲を決定するための前臨床試験で広範に使用される。

前述の明細は本発明の原理を教示し、実施例は具体的説明の目的上提供される一方、本発明の実務は、以下の請求の範囲およびそれらの同等物の範囲内にあるところの通常の変形、翻案および／若しくは改変の全部を包含することが理解されるであろう。

式（Ｉ）の化合物の多形形態ＩのＸＲＰＤパターンを具体的に説明する。 式（Ｉ）の化合物の多形形態ＩのＩＲスペクトルを具体的に説明する。 式（Ｉ）の化合物の多形形態ＩＩＩのＸＲＰＤパターンを具体的に説明する。 式（Ｉ）の化合物の多形形態ＩＩＩのＩＲスペクトルを具体的に説明する。 式（Ｉ）の化合物の水和物のＸＲＰＤパターンを具体的に説明する。 式（Ｉ）の化合物の水和物のＩＲスペクトルを具体的に説明する。 式（Ｉ）の化合物の多形形態ＩのＤＳＣ走査を具体的に説明する。 式（Ｉ）の化合物の多形形態ＩＩの融解吸熱を示すＤＳＣ走査を具体的に説明する。 式（Ｉ）の化合物の多形形態ＩＩＩのＤＳＣ走査を具体的に説明する。 Ｕ８７ＭＧ腫瘍増殖阻害に対する化合物（Ｉ）の効果を具体的に説明する。 Ｕ８７ＭＧの最終腫瘍体積に対する化合物（Ｉ）の効果を具体的に説明する。 Ｓ１４４腫瘍退縮に対する化合物（Ｉ）の効果を具体的に説明する。

実施例

化合物（Ｉ）の多形形態Ｉ
ａ．製造方法１
式（Ｉ）の化合物（３ｇ、クロマトグラフィーにより純粋かつ乾燥）を２−プロパノール（３０ｍＬ）中で最低４時間還流する。室温に冷却した後、固形物を濾過しかつ５０℃で乾燥して、２．１ｇの形態Ｉを提供する。

ｂ．製造方法２
式（Ｉ）の化合物を、３３％ジクロロメタン／６７％メタノール溶液（約７．５ｍｇ／ｍＬ）として、０．５ｍＬガラスインサートバイアルを含有する９６ウェルプレートの１ウェルに運んだ（２００μｌ／ウェル）。プレートをその後窒素下乾固まで蒸発させてウェル中に残存するおよそ１．５ｍｇの無定形固形物を残した。次に酢酸エチル／ジクロロメタン混合物（５０／５０ｖ／ｖ％）をウェルに分注した。プレートをその後Ｔｅｆｌｏｎコーティングしたゴム製マットを使用して封止し、５０℃で１５分間超音波処理し、そしてその後５０℃で１時間加熱した。加熱した後にプレートを室温と平衡化させ、そして封止されて一夜室温で放置した。プレートの封止をその後除去し、そして溶媒をゆっくりと蒸発させて形態Ｉを提供した。

ｃ．製造方法３
式（Ｉ）の化合物のメタンスルホン酸（メシル酸）塩（１．３１ｇを還流でメタノール／水（５０／５０、ｖｏｌ／ｖｏｌ；３００ｍＬ）に溶解する。炭酸ナトリウムをｐＨ＞７まで添加する。混合物を室温に冷却し、固形物を濾過し、洗浄しかつ５０℃で乾燥して９．７５ｇの形態Ｉを提供する。

形態Ｉの例示的ＸＲＰＤパターンを図１および表１に；ＩＲスペクトルを図２および表２に；ＤＳＣ走査を図７に示す。

化合物（Ｉ）の多形形態ＩＩＩ
ａ．製造方法１
式（Ｉ）の化合物のメタンスルホン酸（メシル酸）塩（８．７ｇ）を酢酸エチル／水混合物（５０／５０ ｖｏｌ／ｖｏｌ；４００ｍＬ）に溶解する。炭酸ナトリウム（２．５ｇ）の添加が式（Ｉ）の化合物の遊離塩基の形態を遊離し、それは溶媒混合物から結晶化する。固形物を濾過し、洗浄しかつ５０℃で乾燥して６．５３ｇの形態ＩＩＩを提供する。

ｂ．製造方法２
式（Ｉ）の化合物（０．５ｇ、クロマトグラフィーにより純粋若しくは粗）を、６０℃でメタノール／水混合物（５０／５０、ｖｏｌ／ｖｏｌ；１０ｍＬ）若しくはエタノール／水混合物（５０／５０、ｖｏｌ／ｖｏｌ；１０ｍＬ）から結晶化する。固形物を濾過しかつ５０℃で乾燥して０．４４ｇの形態ＩＩＩを提供する。

ｃ．製造方法３
式（Ｉ）の化合物（１００ｍｇ、クロマトグラフィーにより純粋）を２５℃で０．０１Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ）から沈殿させる。固形物を濾過しかつ５０℃で乾燥して形態ＩＩＩのサンプルを提供する。

ｄ．製造方法４
式（Ｉ）の化合物の水和物（１０ｍｇ、実施例３で製造されるところの）を１１５℃で１時間加熱して、形態ＩＩＩを生じる（単離されない）。

ｅ．製造方法５
式（Ｉ）の化合物の形態Ｉ（０．５ｇ、実施例１で製造されるところの）をアセトン／水混合物（５０／５０、ｖｏｌ／ｖｏｌ；１２ｍＬ）中６０℃で１時間加熱する。固形物を濾過しかつ５０℃で乾燥して０．４８ｇの形態ＩＩＩを提供する。

形態ＩＩＩの例示的ＸＲＰＤパターンを図３および表３に；ＩＲスペクトルを図４および表４に；ＤＳＣ走査を図９に示す。

水和物の形態
製造方法
式（Ｉ）の化合物（１００ｍｇ、クロマトグラフィーにより純粋）を２５℃で０．１Ｎ
ＨＣｌ（２５ｍｌ）に溶解する。この溶液の５ｍＬのサンプルに、沈殿物が形成するまで式Ｉの化合物を添加し（濃度：１５ｍｇ／ｍＬ）、次いで該溶液の残存部分を添加しかつ一夜攪拌する。固形物を濾過しかつ５０℃で乾燥（制限された時間）して水和物の形態を提供する。

水和物の形態の例示的ＸＲＰＤパターンを図５および表５に；ＩＲスペクトルを図６および表６に示す。

溶解性
式（Ｉ）の化合物の多形形態ＩおよびＩＩＩならびに水和物の形態の溶解性を多様なｐＨ値の水性条件で試験した。表７は、これらの形態の良好な溶解性および形態Ｉの優れた溶解性を示す（値はｍｇ／ｍｌでである）。

水性環境での水和物の形態の安定性
式（Ｉ）の化合物の水性懸濁液１６ｍｇ／ｍｌを９日まで約４℃で貯蔵した。サンプルを貯蔵１、２および９日後に採取した。懸濁液を濾紙上に広げそして室温で２時間乾燥した。得られた物質をＸＲＰＤにより分析した。

出発原料は多形形態ＩおよびＩＩＩの混合物を含有した一方、４℃で１日、２日および９日間貯蔵した懸濁液のＸＲＤパターンは、水和物の形態のものと矛盾がなかった。さらに、水和物は水性媒体中で最低９日間安定のままであった（ＸＲＤは実質的に変化しない）。

加えて、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）による粒子径の測定は、４℃で９日間の貯蔵が水和物の粒子径に影響を有しなかったことを示した。

化合物（Ｉ）の多形形態Ｉの特性
形態Ｉは吸湿性でない
多様な相対湿度条件で２５℃での水の吸着および脱着を、相対湿度の関数として重量変化を記録することにより、約１０ｍｇの式（Ｉ）の化合物の形態Ｉで検討した。

初期乾燥段階の間に０．０５％の重量減少が記録された。得られた乾燥生成物は周囲湿度に依存して０．５％までの水を吸着し、そして試験の間吸湿挙動を示さずかつ結晶性のままであった。

形態Ｉの結晶学的安定性
化合物（Ｉ）の多形形態Ｉの結晶構造の安定性を、室温（ＲＴ）で＜５％、５０℃で、５６％および７５％相対湿度（ＲＨ）、ならびに４０℃かつ７５％ＲＨで６週の期間の開放条件での化合物の貯蔵後に研究した。

サンプルをＴＧＡ、ＤＳＣ、ＸＲＰＤおよびＩＲ分光法により分析した。結果は表８にある。

多形形態Ｉは結晶学的に安定である。多様な条件下での貯蔵後に変化が観察されない。ＸＲＤパターンおよびＤＳＣ曲線は貯蔵の前および後で同一のままである。５６％および７５％相対湿度（ＲＨ）下室温（ＲＴ）で６週間貯蔵したサンプルのＩＲスペクトルは、いくつかの小さな余分のシグナル（±Ｒｅｆ）を含有する。

形態のＩの化学的安定性
形態Ｉの化学的安定性を、１、４および８週の期間、多様な開放貯蔵条件、すなわち４０℃／７５％ＲＨ；５０℃；ＲＴ／＜５％ＲＨ；ＲＴ／５６％ＲＨ；ＲＴ／７５％ＲＨおよび０．３ｄａ ＩＣＨ高強度光で試験した。化合物を貯蔵後にＨＰＬＣおよび目視検査により分析した。結果は表９にある。

多形形態Ｉは全部の検討した条件下で化学的に安定であった。

化合物（Ｉ）の多様な形態のスラリー転化
形態ＩＩＩおよび混合物形態ＩＩＩ／水和物でのスラリー転化
０．２５ｍｌの溶媒（２−プロパノール；若しくは２−プロパノン／水（８／２、ｖ／ｖ）；若しくはメタノール／水（８／２、ｖ／ｖ））を伴う２０ｍｇの形態ＩＩＩをバイアルに分注した。各溶媒について３バイアルを調製し、そして異なる温度（４℃、ＲＴ、４０℃）で２日間それぞれ貯蔵した。貯蔵後にスラリーを濾紙上に広げ、固体画分を収集しかつＲＴで２時間乾燥した。さらなる実験において、溶媒としてメタノール／水（８／２、ｖ／ｖ）を使用して形態ＩＩＩを水和物で種入れした（ｓｅｅｄ）。多形組成物をＸＲＰＤを使用して測定した。結果は表１０にある。

２−プロパノールおよびメタノール／水（８／２、ｖ／ｖ）については、水和物の形態で種入れした後でさえ転化は見出されなかった。２−プロパノン／水（８／２、ｖ／ｖ）中では、水和物の形態への転化が全部の試験した温度で起こった。

形態ＩＩＩおよび形態Ｉの混合物でのスラリー転化
形態ＩＩＩおよび形態Ｉの混合物３０ｍｇならびに０．２５ｍｌの溶媒（２−プロパノール；若しくはエタノール／水（８／２、ｖ／ｖ））をバイアルに入れた。各溶媒について２バイアルを調製し、そしてそれぞれを異なる温度（ＲＴ、７０℃）で一夜貯蔵した。貯蔵後にスラリーを濾紙上に広げ、固形物画分を収集しかつＲＴで２時間乾燥した。多形組成物をＸＲＰＤを使用して測定した。結果は表１１にある。

形態Ｉがサンプル中に存在した場合は、形態ＩＩＩの形態Ｉへの多形転化がＲＴおよび高温で起こった。この転化は水含有媒体中でもまた起こった。

一緒にすれば、上のデータは、形態ＩがＲＴから７０℃までで最も安定な多形であることを示す。形態Ｉ種入れ物質の存在は形態Ｉへの転化率を増大させる。２−プロパノン−水混合物を４℃から４０℃までの温度で使用する場合、水和物の形態への転化が見出される。

多様な形態の化合物（Ｉ）の熱転化
形態ＩＩＩ若しくは水和物の形態を、開放サンプル皿を使用して選択した温度まで（等温１分間）ＤＳＣオーブン（加熱速度１０℃／分）で熱的に処理した。選択した温度は、形態ＩＩＩについて１１０℃および１７０℃、ならびに水和物の形態について７０℃、１１０℃および１７０℃である。得られた画分の多形組成をＸＲＰＤにより測定した。表１２はＤＳＣ処理した形態ＩＩＩのＸＲＰＤパターンを要約する。表１３はＤＳＣ処理した水和物のＸＲＰＤパターンを要約する。

化合物（Ｉ）の塩の製造および特性
化合物（Ｉ）の遊離塩基（３ｇ；７．９５ｍｍｏｌ）を無水エタノール（４０ｍＬ）に溶解しかつ７８℃に加熱した。酸（２−プロパノール中６Ｍ ＨＣｌ、２．０ｍｌ（１２ｍｍｏｌ）；水中４８％ＨＢｒ、０．９８ｍＬ（８．７５ｍｍｏｌ）；メタンスルホン酸、９１７ｍｇ（９．５４ｍｍｏｌ）；エタンスルホン酸、１．０５ｇ（９．５４ｍｍｏｌ）若しくはｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．６６ｇ（８．７５ｍｍｏｌ））を熱反応混合物に添加した。反応混合物を室温に冷まさせた。生じる沈殿物を濾過分離し、エタノールで洗浄しかつ真空下６０℃で乾燥した。

得られた固形物を酸滴定、カール・フィッシャー滴定およびＨＰＬＣにより分析した。物理的特徴付けを実施した（ＤＳＣ、ＴＧＡ、ＸＲＤおよびＩＲ、ＤＶＳ）。

ＨＣｌ塩はＸＲＤ結果に基づけば結晶性生成物である。ＩＲスペクトルはハロゲン化水素酸塩の特徴的なバンドの存在を示し、該生成物は溶媒和している。ＤＳＣ曲線は２３６．４℃での該生成物の分解を伴う融解を示す。余分の吸熱シグナルが溶媒蒸発により７２．８℃に観察される。ＨＣｌ塩は吸湿性生成物であり、乾燥される（乾燥窒素流下２５℃で１時間）場合に周囲湿度に依存して１１．４％までの水を吸着する。

メシル酸塩はＸＲＤ結果に基づけば結晶性生成物である。ＩＲスペクトルはスルホン酸塩の特徴的なバンドの存在を示す。ＤＳＣ曲線は２３９．０℃での該生成物の分解を伴う融解を示す。メシル酸塩は吸湿性生成物であり、乾燥される（乾燥窒素流下２５℃で１時間）場合に高相対湿度で４．５％までの水を吸着する。

ＨＢｒ塩はＸＲＤ結果に基づけば結晶性生成物である。該ＩＲスペクトルはハロゲン化水素酸塩の特徴的なバンドの存在を示し、該生成物は溶媒和している。ＤＳＣ曲線は２４６．６℃での該生成物の分解を伴う融解を示す。余分の吸熱シグナルが溶媒蒸発により９７．８℃に観察される。ＨＢｒ塩は吸湿性生成物であり、乾燥される（乾燥窒素流下２５℃で１時間）場合に周囲湿度に依存して１１．４％までの水を吸着する。

トシル酸塩はＸＲＤ結果に基づけば結晶性生成物である。ＩＲスペクトルはスルホン酸塩の特徴的なバンドの存在を示す。ＤＳＣ曲線は２２５．４℃での該生成物の融解を示す。トシル酸塩は非吸湿性生成物であり、乾燥される（乾燥窒素流下２５℃で１時間）場合に周囲湿度に依存してわずか０．２％までの水を吸着する。

エシル酸塩はＸＲＤ結果に基づけば結晶性生成物である。ＩＲスペクトルはスルホン酸塩の特徴的なバンドの存在を示す。ＤＳＣ曲線は２１７．３℃での該生成物の融解を示す。エシル酸塩は吸湿性生成物であり、乾燥される（乾燥窒素流下２５℃で１時間）場合に高相対湿度で３４％までの水を吸着する。

化合物（Ｉ）の塩の水溶解度
過剰の化合物（Ｉ）の多様な塩を水とともに２０℃で２４時間攪拌した。濾過後、溶液中の化合物（Ｉ）の濃度をＵＶ分光法により測定した。結果を表１４に要約する。

化合物（Ｉ）の塩のラットへの投与後の吸収および血漿キネティクス
５匹の雄性ＳＤラット（２２５±１１ｇ）を塩形態あたりに使用した。各ラットから完全な血漿濃度時間プロファイルを得た。水道水および食餌は任意に利用可能であった。該試験は、ＨＢｒ、ＨＣｌ、メタンスルホン酸（メシル酸塩）、エタンスルホン酸（エシル酸塩）若しくはｐ−トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩）との化合物（Ｉ）の塩を必要とした。個々の塩は、０．５％メトセル（ｍｅｔｈｏｃｅｌ）懸濁液に１ｍｇ塩基等量／ｍｌの最終濃度まで分散した。該製剤を室温で貯蔵した。

投与は胃挿管による経口であった。すなわち、１０ｍｇ塩基等量／ｋｇの用量を得るために１０ｍｌ／ｋｇ。

血液サンプルを用量投与後３０分、１、２、４、７および２４時間に収集した
血液は尾静脈からＭｕｌｔｉｖｅｔｔｅ^(R)６００ Ｋ３Ｅチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）への複数サンプリングにより収集した。サンプルを直ちに融解氷上に置き、そして４℃でおよそ１９００×ｇで１０分間の遠心分離後に血漿を得た。全サンプルを分析前に日光から遮蔽しかつ−１８℃以下で保存した。

血漿サンプルを適格な研究ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法（定量下限（ＬＬＯＱ）は１．００若しくは５．００ｎｇ／ｍｌであった）を使用して化合物（Ｉ）について分析した。制限される薬物動態分析を、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ^TM Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．１）を使用して実施した。ｌｉｎ／ｌｏｇ補間を伴うｌｉｎ／ｌｏｇ台形則を使用する非コンパートメント解析を全データに使用した。個々のおよび平均の血漿濃度の概要ならびに若干の基礎的薬物動態パラメータを表１５に見出し得る。

化合物（Ｉ）の一製造経路
６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリン

段階１：６−ヨードキノリン

６−ブロモキノリン（８０．１ｇ、０．３８５ｍｍｏｌ）をｎ−ブタノール（０．８Ｌ）に溶解する。銅触媒ＣｕＩ（３．７ｇ、０．０１９ｍｏｌ）、銅リガンドＮ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（３．４ｇ、０．０３８５ｍｏｌ）およびヨウ化物源ＮａＩ（１１５．５ｇ、０．７７０ｍｏｌ）を添加し、そして混合物を不活性雰囲気下加熱ジャケット中で１２０℃に加熱する。処理（０．８Ｌの水を反応混合物に添加し、有機層を分離しかつ蒸発させる）および精製（粗蒸発残渣を１５０ｍＬジイソプロピルエーテルから結晶化した）後に６−ヨードキノリンを８０％収率で得た。

１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ ７．３９（ｄｄ、Ｊ＝８．３１、４．１５Ｈｚ、１Ｈ）７．８３（ｄ、Ｊ＝９．０６Ｈｚ、１Ｈ）７．８６−７．９６（ｍ、１Ｈ）８．０２（ｄ、Ｊ＝８．３１Ｈｚ、１Ｈ）８．１９（ｓ、１Ｈ）８．９１（ｓ、１Ｈ）

段階２：オキソ（キノリン−６−イル）酢酸エチル

不活性雰囲気下で２５５ｇの６−ヨードキノリン（１ｍｏｌ）をＴＨＦに溶解しかつ−２０℃に冷却し、そして８０８ｇのＩｐＭｇＣｌ．ＬｉＣｌ（１．１モル）を添加する。この冷溶液を、低温（−７８℃）の１８００ｍＬのＴＨＦ中の４３８ｇのシュウ酸ジエチル（３モル）の溶液に添加する。反応混合物を０℃に加熱しかつ飽和酢酸アンモニウム溶液（０．８Ｌ／モル）でクエンチする。オキソ（キノリン−６−イル）酢酸エチルをこの混合物から酢酸エチル（１Ｌ）で抽出する。クロマトグラフィー（シリカ、ヘプタン／酢酸エチル）後に、オキソ（キノリン−６−イル）酢酸エチルを７０％収率で得た。

１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ １．４７（ｔ、Ｊ＝７．１８Ｈｚ、３Ｈ）４．５２（ｑ、Ｊ＝７．１８Ｈｚ、２Ｈ）７．５２（ｄｄ、Ｊ＝８．３１、４．１５Ｈｚ、１Ｈ）８．２０（ｄ、Ｊ＝８．６９Ｈｚ、１Ｈ）８．２９（ｄｄ、Ｊ＝８．６９、１．８９Ｈｚ、１Ｈ）８．３０（ｄｄ、Ｊ＝８．１２、１．３２Ｈｚ、１Ｈ）８．５９（ｄ、Ｊ＝１．８９Ｈｚ、１Ｈ）９．０５（ｄｄ、Ｊ＝４．３４、１．７０Ｈｚ、１Ｈ）

段階３：２，２−ジフルオロ（キノリン−６−イル）酢酸エチル

適するオートクレーブ反応槽に１７０ｇ（０．７４ｍｏｌ）のオキソ（キノリン−６−イル）酢酸エチルおよび１．３Ｌのジクロロメタンを負荷した。その後、２６ｇのＨＦ（１．３ｍｏｌ）および４００ｇのＳＦ４（３．７ｍｏｌ）を気体瓶から反応槽に液化した。混合物を６０℃で２４時間加熱した。周囲温度に冷却した後に混合物を水でクエンチしかつＮａＨＣＯ₃の添加により中和した。有機層の分離および蒸発後に残渣をクロマトグラフィー分離して、１３８ｇのジフルオロ（キノリン−６−イル）酢酸エチルを提供した（収率は７４％である）。

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ １．３０（ｔ、Ｊ＝７．０５Ｈｚ、３Ｈ）４．３３（ｑ、Ｊ＝７．３０Ｈｚ、２Ｈ）７．４５（ｄｄ、Ｊ＝８．３１、４．２８Ｈｚ、１Ｈ）７．９１（ｄｄ、Ｊ＝８．８１、２．０１Ｈｚ、１Ｈ）８．１１−８．１４（ｍ、１Ｈ）８．１９（ｄ、Ｊ＝８．８１Ｈｚ、１Ｈ）８．２１（ｄｄ、Ｊ＝７．５５、１．２６Ｈｚ、１Ｈ）８．９８（ｄｄ、Ｊ＝４．０３、１．５１Ｈｚ、１Ｈ）

段階４：２，２−ジフルオロ−２−キノリン−６−イルアセトヒドラジド

不活性雰囲気下の反応槽に３１．０５ｍＬの２−メチル−２−ブタノールおよび１２．５８ｍＬ（０．２５９ｍｏｌ）のヒドラジン水和物を添加した。その後、１２５ｍＬの２−メチル−２−ブタノール中の２６ｇ（０．１０３ｍｏｌ）のジフルオロ（キノリン−６−イル）酢酸エチルの溶液を室温でヒドラジン溶液に添加した。沈殿物を反応混合物から濾過分離し、そして水で洗浄しかつ５０℃で乾燥した。２２．５１ｇの２，２−ジフルオロ−２−キノリン−６−イルアセトヒドラジドを９０％収率で得た。

１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ ４．７７（ｂｒ．ｓ．、２Ｈ）７．６５（ｄｄ、Ｊ＝８．３１、４．２８Ｈｚ、１Ｈ）７．９２（ｄｄ、Ｊ＝８．８１、２．０１Ｈｚ、１Ｈ）８．１８（ｄ、Ｊ＝８．８１Ｈｚ、１Ｈ）８．２８−８．３３（ｍ、１Ｈ）８．５６（ｄ、Ｊ＝８．３１Ｈｚ、１Ｈ）９．００−９．０６（ｍ、１Ｈ）１０．１８（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）

段階５：３−クロロ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジン

水（２５３ｍＬ）およびＴＨＦ（８４２ｍＬ）を反応バルーンに入れた。攪拌される反応混合物に、試薬、すなわちリン酸カリウム一水和物８６．２ｇ（３７４ｍｍｏｌ）およびＢＴＥＡＣ２．２５ｇ（９．８８ｍｍｏｌ）を１種類ずつ添加した。その後、３−クロロ−６−ヨードピリダジン４５ｇ（１８７．２ｍｍｏｌ）および１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール４６．７３ｇ（２２４．６ｍｍｏｌ）を添加し、そして最後にトリフェニルホスフィン１．９６ｇ（７．４９ｍｍｏｌ）および二酢酸パラジウム４２０ｍｇ（１．８７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を６５℃で１６時間加熱した。反応混合物を６０℃に冷まさせた。その後、９３５ｍＬの水および３０１．５ｇの塩化ナトリウムを添加した。混合物を１５分間攪拌しかつ４５℃に冷まさせた。層を分離し、そして有機層を３７４ｍＬの水中４５ｇの塩化ナトリウムの溶液で洗浄した。有機層を分離しかつ硫酸マグネシウム（２２５ｇ）および炭（ｃｈａｒｃｏａｌ）（４．５ｇ）とともに攪拌した。混合物を濾過しかつ蒸発させた。蒸発残渣をトルエンと２回共蒸発させ、そして２００ｍｌの最終容量までさらに蒸発させた。この残渣を室温で１６時間攪拌した。生じる固形物を濾過により収集した。固形物を減圧で乾燥して２９．７ｇの表題化合物（１５２．６ｍｍｏｌ、収率８２％）を提供した。

１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ ４．００（ｓ、３Ｈ）７．４６（ｄ、Ｊ＝８．６９Ｈｚ、１Ｈ）７．５６（ｄ、Ｊ＝９．０６Ｈｚ、１Ｈ）７．９８（ｓ、１Ｈ）８．１１（ｓ、１Ｈ）

段階６：６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリン

不活性雰囲気下の反応槽に、７３．８４ｇ（０．３８ｍｏｌ）の３−クロロ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジン、９０ｇ（０．３８ｍｏｌ）の２，２−ジフルオロ−２−キノリン−６−イルアセトヒドラジドおよび１２００ｍＬの１−メトキシ−２−プロパノールを添加した。その後、２９．８５ｍＬ（０．４５５ｍｏｌ）のメタンスルホン酸を添加し、そして反応混合物を８０℃で８時間加熱した。周囲温度に冷却した後、表題化合物のメシル酸塩を反応混合物から濾過分離した。この塩を４００ｍＬのエタノールおよび３００ｍＬの水の混合物に溶解し、２００ｍＬの水中５０ｍＬのアンモニア（０．６５ｍｏｌ）での８０℃でのアルカリ化後に、表題化合物の遊離塩基が沈殿し、そして濾過分離された。この沈殿物を５０℃で乾燥し、そしてその後２−プロパノール（１．８Ｌ／ｍｏｌ）から再結晶して表題化合物を７５％収率で得た。

１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ ４．０１（ｓ、３Ｈ）７．４０（ｄ、Ｊ＝９．４４Ｈｚ、１Ｈ）７．５０（ｄｄ、Ｊ＝８．３１、４．１５Ｈｚ、１Ｈ）７．９５（ｓ、１Ｈ）７．９８（ｓ、１Ｈ）８．０８（ｄｄ、Ｊ＝８．６９、１．８９Ｈｚ、１Ｈ）８．１４（ｄ、Ｊ＝９．８２Ｈｚ、１Ｈ）８．２５（ｄ、Ｊ＝９．０６Ｈｚ、１Ｈ）８．２７（ｄｄ、Ｊ＝８．３１、１．５１Ｈｚ、１Ｈ）８．２９（ｄ、Ｊ＝１．１３Ｈｚ、１Ｈ）９．０２（ｄｄ、Ｊ＝４．１５、１．８９Ｈｚ、１Ｈ）

化合物（Ｉ）の一製造経路
６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリン

段階１：２−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジン−３−イル］ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル

カルバジン酸ｔｅｒｔ−ブチル８．９８ｇ（６．７３ｍｍｏｌ）および３−クロロ−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジン（１１．９ｇ、６１．１ｍｍｏｌ）を１−ブタノール（２４５ｍＬ）中で混合した。この混合物を９０℃まで加熱しかつその温度で１６時間攪拌した。反応混合物を冷却し、そして水（２５０ｍＬ）および酢酸エチル（２５０ｍＬ）を添加した。該二層混合物をｐＨが７になるまで炭酸水素ナトリウムで中和した。その後有機層を分離し、そして水層を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（２５０ｍＬ）で１回洗浄しかつ蒸発させた。残渣をイソプロピルエーテル中で攪拌し、濾過分離しそして真空下で乾燥した。収量：５．９ｇ（２０．３ｍｍｏｌ；３３％）の表題化合物。

段階２：２，２−ジフルオロ（キノリン−６−イル）酢酸ナトリウム

８．１ｇ（３２．２ｍｍｏｌ）のジフルオロ（キノリン−６−イル）酢酸エチルを反応バルーンに添加した。メタノール（４０．５ｍＬ）および水（２．９ｍＬ）を添加した。この溶液に、１．２９ｇの水酸化ナトリウム（３２．２ｍｍｏｌ）を室温で１６時間添加した。生じる固形物を濾過分離しかつ真空下で乾燥した。収量４．５ｇ（１８．４ｍｍｏｌ；５７％）。

段階３：６−｛１，１−ジフルオロ−２−［（６Ｅ）−６−ヒドラゾノ−３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジン−１（６Ｈ）−イル］−２−オキソエチル｝キノリン

９００ｍｇ（３．６７ｍｍｏｌ）のジフルオロ（キノリン−６−イル）酢酸ナトリウムをアセトニトリル（２７ｍＬ）に溶解した。１．１７ｇ（４．０４ｍｍｏｌ）の２−［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジン−３−イル］ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを添加し、そして３００ｍｇ（４．４１ｍｍｏｌ）の１Ｈ−イミダゾールを一度に添加した。０．５６１ｍＬ（７．７１ｍｍｏｌ）の塩化チオニルを室温で５分にわたり添加した。該混合物を室温で２時間攪拌し、（２Ｅ）−２−｛２−［ジフルオロ（キノリン−６−イル）アセチル］−６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジン−３（２Ｈ）−イリデン｝ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを生じた。その後、０．７２２ｍＬ（１１．０ｍｍｏｌ）のメタンスルホン酸を室温で添加しかつ１６時間攪拌した。生じる固形物をアルゴン雰囲気下に濾過分離し、６−｛１，１−ジフルオロ−２−［（６Ｅ）−６−ヒドラゾノ−３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジン−１（６Ｈ）−イル］−２−オキソエチル｝キノリンを生じ、そしてそれ自体を次の段階で使用した。

段階４：６−｛ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル｝キノリン（化合物（Ｉ））
上の段階３からの粗６−｛１，１−ジフルオロ−２−［（６Ｅ）−６−ヒドラゾノ−３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾル−４−イル）ピリダジン−１（６Ｈ）−イル］−２−オキソエチル｝キノリン（３．６７ｍｍｏｌ）をアルゴン下反応バルーン中に移した。３６ｍＬの１−メトキシ−２−プロパノールを添加し、そして該混合物を１０５℃で１時間攪拌した。その後、反応混合物を追加の１時間穏やかな還流（１０８℃）に移した。反応混合物を室温に冷まさせ、そして１００ｍＬの水中１０ｇの炭酸ナトリウムの溶液に注いだ。１００ｍＬのトルエンを添加しかつ層を分離した。水層をトルエン（１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄しかつ蒸発させ、７００ｍｇの化合物（Ｉ）（１．８６ｍｍｏｌ；５１％）を生じた。

式（Ｉ）の化合物のｃ−Ｍｅｔ阻害活性
組換えｃ−Ｍｅｔタンパク質のクローニング、発現および精製
本実施例は、ｃ−Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼ活性を有するｃ−Ｍｅｔの細胞質ドメインのクローニング、発現および精製を記述する。該細胞質ドメインは４３５アミノ酸を有し、そしてチロシンキナーゼのＳＲＣファミリーとの高い相同性を示す（Ｐａｒｋら、１９８７、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．８４（１８）：６３７９−８３）。本明細書で製造されるところのｃ−Ｍｅｔ細胞質ドメインは、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性およびそれに対する本発明の剤の効果のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイに使用しうる。

チロシンキナーゼドメインを含有するＭｅｔ受容体の細胞質ドメインのｃＤＮＡをＰＣＲにより増幅した。オリゴヌクレオチドはＧｉｂｃｏ−ＢＲＬ（カリフォルニア州カールズバッド）により特注合成した。フォワードオリゴヌクレオチドｍｅｔｋｉｎＦ２は、３０７３と３０７８の間のヌクレオチドがクローニング目的上のＢａｍＨＩ部位を創製するよう変えられたことを除き、ＮＭ＿０００２４５に列挙されるヌクレオチド配列のヌクレオチド３０６８−３０９７に同一である。リバースオリゴヌクレオチドｍｅｔｋｉｎＲ２ａは、４３７２−４３６７の間のヌクレオチドがクローニング目的上のＸｈｏＩ部位（下線を付けられる）を創製するよう変えられたことを除き、ＮＭ＿０００２４５に列挙されているものの相補配列のヌクレオチド４３７８−４３４８に同一である。該オリゴヌクレオチドをＰＣＲプライマーとして使用して、Ｑｕｉｃｋ Ｃｌｏｎｅ胎盤ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ；２５ Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）からＭｅｔ受容体細胞質ドメインｃＤＮＡを増幅した。増幅は、５０μｌ容量中でＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ；カリフォルニア州カールズバッド）、１．２５ｍＭの各ｄＮＴＰ、２００ｎＭの各オリゴを使用して実施した。熱サイクルプロファイルは、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ９６００サーモサイクラーで、それぞれ９４℃３０秒間、６０℃３０秒間および７２℃１分間を含有する３０サイクルであった。

Ｍｅｔ受容体の細胞質ドメインの増幅されたｃＤＮＡを発現ベクターにクローン化した。ＰＣＲ産物をＢａｍＨＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ；マサチューセッツ州ビバリー）およびＸｈｏＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）で消化した。消化された１．３ｋｂの生成物を、Ｇｅｎｅ Ｃｌｅａｎ（Ｑｂｉｏｇｅｎｅ；カリフォルニア州アーヴィン）を使用して１％アガロースゲルから単離かつ精製した。ベクターｐＦａｓＢａｃＨＴａ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）をＢａｍＨＩおよびＸｈｏＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）で消化し、そして、４．７ｋｂの直鎖状フラグメントを、Ｇｅｎｅ Ｃｌｅａｎ（Ｂｉｏ １０１）を使用して１％アガロースゲルから精製した。１．３ｋｂのＭｅｔ ｃＤＮＡフラグメントは、１０μｌの最終容量中でＴ４ ＤＮＡリガーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を用いてｐＦａｓｔＢａｃＨＴａベクターに４℃で１６時間連結した。ｐＦａｓｔＢａｃＨＴａのＢａｍＨＩ部位にＭｅｔ細胞質ドメインのｃＤＮＡをクローン化することは、Ｎ末端のＨｉｓ標識タンパク質の発現を見込むように該ｃＤＮＡを該ベクターのＨｉｓ−６標識とインフレームに置いた。ライゲーション混合物の半分（５μＬ）を使用して、５０μｌのＤＨ５αコンピテント大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を形質転換した。形質転換混合物を、１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有するＬＢアガロースプレートにプレーティングし、そして３７℃で１６時間インキュベートした。コロニーをこれらのプレートから拾い、そして１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有するＬＢブロス中で１６時間増殖させた。プラスミドＤＮＡはＱｉａｇｅｎプラスミドＤＮＡ精製試薬（Ｑｉａｇｅｎ；カリフォルニア州バレンシア）を使用して単離し、そしてクローンをＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩでの消化によりスクリーニングした。消化物から遊離される適切な大きさのフラグメントを有した３クローンをＡＣＧＴ，ＩｎｃにＤＮＡ配列分析のため提出した。

１クローン、ｐＦａｓｔＢａｃＨＴｍｅｔｋｉｎ−１５は、クローン化したｃ−Ｍｅｔ細胞質ドメイン中に突然変異を含有せず、そして発現のための組換えバキュロウイルスを生成するのに使用した。組換えバキュロウイルスは、製造元により指定されるプロトコルに従い、Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ Ｂａｃ−Ｔｏ−Ｂａｃ系を使用して生成した。簡潔には、ＤＨ１０Ｂａｃ細胞をｐＦａｓｔＢａｃＨＴｍｅｔｋｉｎ−１５で形質転換し、クローンを選択し、ウイルスＤＮＡを単離し、そしてＭｅｔ ｃＤＮＡ挿入物についてＰＣＲによりスクリーニングした。Ｓｆ９昆虫細胞を該組換えバキュロウイルスＤＮＡでトランスフェクトした。Ｐ０ウイルスストック２５を含有する培地を収集しかつその後の２回のウイルス増幅に使用した。

複数濃度の増幅したウイルスストックを使用してＳｆ９細胞を感染させた。細胞をトランスフェクション２４、４８および７２時間後に収集した。感染させたＳｆ９細胞を５０ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５０ｍＭイミダゾール、１．０ｍＭ ＰＭＳＦ、０．５％ＮＰ４０、３．５μｇ／ｍｌロイペプチン、３．５μｇ／ｍｌアプロチニン中で溶解し、そして総タンパク質濃度をＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ；イリノイ州ロックフォード）で測定した。細胞ライセートを４〜１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、その後イムノブロット分析のためニトロセルロースメンブレンに転写した。ニトロセルロースブロットを抗Ｈｉｓ６抗体でプロービングして、Ｈｉｓ標識ｍｅｔキナーゼタンパク質の発現を確認した。最適のウイルス濃度対Ｓｆ９細胞の比を、多様な感染条件から収集したライセートの検査により決定した。最大タンパク質回収は感染４８時間後に起こった。

Ｍｅｔ受容体のＨｉｓ標識細胞質ドメインの小スケール発現／精製を実施した。Ｍｅｔ受容体のＨｉｓ標識細胞質ドメインを発現する組換えバキュロウイルスでトランスフェクトしたＳｆ９昆虫細胞を、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５０ｍＭイミダゾール、１．０ｍＭ ＰＭＳＦ、０．５％ＮＰ４０、３．５μｇ／ｍｌロイペプチン、３．５μｇ／ｍｌアプロチニンを含有する緩衝液中で溶解した。ライセートを、ＰＢＳ中Ｎｉ−アガロースビーズ（Ｑｉａｇｅｎ）の５０％溶液５ｍｌと４℃で回転して２時間インキュベートして、Ｈｉｓ標識タンパク質を捕捉した。Ｎｉ−アガロースビーズに結合したＨｉｓ標識タンパク質を含有するライセートを１０ｍｌカラムに負荷した。Ｎｉ−アガロースビーズを充填させ、そして上清を流れさせた。充填されたカラムをその後６０ｍｌの洗浄緩衝液（溶解緩衝液と同一）で洗浄した。５ｍｌの溶離緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ ｐＨ８、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５０ｍＭイミダゾール、１．０ｍＭ ＰＭＳＦ）をカラムに添加し、そして１０画分（各０．５ｍｌ容量）を収集した。各画分の小アリコートを４〜１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、そしてイムノブロット分析のためニトロセルロースに転写したか、若しくはクマシー染色（Ｂｉｏ−Ｓａｆｅ Ｓａｆｅ Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ）のため処理したかのいずれかであった。クマシー染色ゲル上の主要なタンパク質バンドは、イムノブロットにより検出されたＨｉｓ標識タンパク質に対応するＨｉｓ６−ＭｅｔＫｉｎの適切な大きさ（５２ｋＤ）を有する。クマシー染色ゲルから推定されるところのタンパク質濃度はおよそ２ｍｇ／ｍｌであった。

組換えウイルスストックを、ハイスループットスクリーニングに十分な量のＨｉｓ６−ＭｅｔＫｉｎの大スケール発現および精製のため、契約実験室Ｐａｎ Ｖｅｒａ（ウィスコンシン州マディソン）に移送した。６０Ｌスケールアップおよび４段階精製スキームが、９５％以上純粋である９８．４ｍｇのタンパク質を生じた。

ｃ−Ｍｅｔキナーゼの自己リン酸化に対する化合物（Ｉ）の影響
本自己リン酸化アッセイは、放射活性ＡＴＰを使用してｃ−Ｍｅｔ自己リン酸化に際してのリン酸の取り込みを測定する。スクリーニングのための該アッセイ手順は後に続くとおりである。

材料
ｃ−Ｍｅｔ酵素（Ｐａｎｖｅｒａから購入された、ロット４００４７Ｘ、２，４ｍｇ／ｍｌ）；「アッセイ緩衝液」（１３，３ｍＭ ＭＯＰＳ ｐＨ７；０，３３ｍＭ ＥＤＴＡ）；「酵素緩衝液」（２０ｍＭ ＭＯＰＳ ｐＨ７；１ｍＭ ＥＤＴＡ；０．０１％ Ｂｒｉｊ ３５；５％グリセロール；０．１％βメルカプト−ＥｔＯＨ）；１００ｍＭ ＭｇＡｃ；３％リン酸；７５ｍＭリン酸；１ｍＭ ＡＴＰストック；［³³Ｐ］−γ−ＡＴＰ（ＮＥＮ、ＮＥＧ６０２Ｈ）；丸底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３７９９）；Ｆｉｌｔｅｒｍａｔ Ｐ３０−フィルター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）；「酵素混合物」（６９８，８０μｌの上のような酵素緩衝液＋１．１７μｌの上のようなｃ−Ｍｅｔ酵素）；「基質混合物」（９４６，００μｌの１００ｍＭ ＭｇＡｃ＋５０，００μｌのＡＴＰ（０．１ｍＭ）＋４，００μｌの上のような［³³Ｐ］−γ−ＡＴＰ）。

プロトコル段階
１．ウェルあたり１５μｌのアッセイ緩衝液を分配する。
２．試験されるｃ−Ｍｅｔ阻害剤（例えば化合物（Ｉ）またはその形態若しくは塩）のＤＭＳＯ中希釈０．５μｌを添加する。
３．ウェルあたり５μｌの酵素混合物を添加する（対照：ブランクの酵素緩衝液）。
４．ウェルあたり５μｌの基質混合物を添加する。
５．室温で６０分間インキュベートする。
６．３％リン酸（ウェルあたり５μｌ）で反応を停止する。
７．プレートを振とうする。
８．ウェルから５μｌをフィルターマット（ｆｉｌｔｅｒｍａｔ）Ｐ３０にスポットする。
９．フィルターを７５ｍＭリン酸で５分間３回洗浄する。
１０．フィルターをメタノールで２分間１回洗浄する。
１１．フィルターを６０℃で１時間乾燥する。
１２．フィルターを低エネルギー蛍光体貯蔵プレート（ｐｈｏｓｐｈｏｒ ｓｔｏｒａｇｅ ｐｌａｔｅ）上で蛍光体貯蔵カセットに一夜曝露し、そして適するホスホイメージャー（本明細書ではＴｙｐｈｏｏｎ）を使用してシグナルを検出しかつ定量する。

結果
上で詳述されたアッセイを使用して、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ阻害のＩＣ₅₀値は、化合物（Ｉ）の遊離塩基の形態およびＨＣｌとの化合物（Ｉ）の塩についてそれぞれおよそ７．０１×１０^-9Ｍおよび１．３２×１０^-8Ｍと決定された。

式（Ｉ）の化合物の生物学的活性
Ｕ８７ＭＧ神経膠芽腫腫瘍異種移植モデル
緒言
Ｕ８７ＭＧ神経膠芽腫細胞株（Ｐｉｅｄｍｏｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ＬＬＣ）はｃ−Ｍｅｔ受容体を発現しかつヒト成長因子（ＨＧＦ）に応答する。本研究は、ｃ−Ｍｅｔの阻害剤での処置がＵ８７ＭＧ神経膠芽腫腫瘍異種移植モデルに対し有効であるかどうかを検討した。本研究は、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）アッセイを利用して１５ヌードマウスの群で経口（ｐ．ｏ．）化合物単剤療法を試験した。対照群はベヒクルすなわち２０％ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）で処置した。全処置は、樹立された皮下（ｓ．ｃ．）Ｕ８７ＭＧ腫瘍を持つマウスで第１日（Ｄ１）に開始した。

方法および材料
マウス
雌性無胸腺ヌードマウス（Ｈａｒｌａｎ）は、試験のＤ１に１８．１〜２５．０ｇのＢＷ範囲を伴う１０〜１１週齢であった。動物は、水（逆浸透、１ｐｐｍ Ｃｌ）、ならびに１８．０％粗タンパク質、５．０％粗脂肪および５．０％粗繊維からなるＮＩＨ ３１
Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ａｎｄ Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ Ｌａｂ Ｄｉｅｔ^(R)を随意に給餌された。マウスは、２１〜２２℃（７０〜７２°Ｆ）および４０〜６０％湿度で１２時間の明周期の固定マイクロアイソレーター中で照射済ＡＬＰＨＡ−ｄｒｉ^(R)ｂｅｄ−ｏ−ｃｏｂｓ^(R)実験動物床材上に収容した。全動物は、米国実験動物管理公認協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）（ＡＡＡＬＡＣ）により完全に認定されている実験動物医学施設に収容した。動物が関わる全部の処置は、ＮＩＨの実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）に従って実施し、また、全部のプロトコルは内部動物管理および使用委員会（Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ａｎｉｍａｌ
Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＩＡＣＵＣ）により承認された。

腫瘍移植
異種移植は、無胸腺ヌードマウスでの一連の移植により維持したＵ８７ＭＧヒト神経膠芽腫腫瘍断片から開始した。各試験マウスは、右脇腹に移植した皮下Ｕ８７ＭＧ腫瘍断片（１ｍｍ³）を受領し、そして平均サイズが２００ｍｍ³に近づく際に腫瘍の増殖をモニターした。１２日後すなわち試験の第１日に、動物を、１７２〜３５２ｍｍ³からの範囲にわたる個々の腫瘍体積および２１６ｍｍ³の群平均腫瘍体積をもつ４群（ｎ＝１２〜１５マウス／群）に分類した。腫瘍体積は、式

ここで、ｗ＝腫瘍の幅およびｌ＝長さ（ｍｍ）
を使用して計算した。腫瘍重量は、１ｍｇが１ｍｍ³の腫瘍体積に同等であるという仮定を用いて推定しうる。

薬物処置
本発明の化合物の投薬溶液は、水中２０％ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）よりなるベヒクル中で毎週新たに調製した。全群で、０．２ｍＬ／２０ｇマウスの投薬容量を、各動物の体重に合わせて増減（ｓｃａｌｅ）した。用量は化合物のＨＣｌ塩の形態を見込むよう与えた。

腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）分析
ＴＧＩは、以下の関係

によりベヒクル処置対照群の腫瘍体積中央値のパーセンテージとして表される、ベヒクル処置および薬物処置マウスの腫瘍体積中央値の間の差違から計算した。

ＭＴＶ（ｎ）は、動物の数ｎ（その日の試験で残存している）の腫瘍体積中央値（ＭＴＶ）と定義する。

毒性
動物を試験の最初の５日間毎日およびその後週２回体重測定した。マウスはいかなる有害な薬物関連の副作用の明白な徴候についても頻回に検査し、そして毒性の臨床徴候を観察された場合に記録した。許容できる毒性は、試験の間の２０％未満の群平均体重（ＢＷ）減少、および１０動物で１件以下の処置関連（ＴＲ）死亡と定義する。死亡は、それが臨床徴候および／若しくは剖検により明示されるところの処置の副作用に帰される、または投与期間中若しくは最後の投与の１０日以内の未知の原因による場合にＴＲと分類する。死亡は、該死亡が薬物の副作用に関係したという証拠が存在しない場合に治療無関係（ＮＴＲ）と分類する。死亡は、死亡の原因が未知である場合に処置無関係の未知（ＮＴＲｕ）と分類する。

統計学的およびグラフ解析
中央値の解析のためのＭａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定を使用して、ＭＴＶ間の差違の統計学的有意性を決定した。Ｐｒｉｓｍ ３．０３（ＧｒａｐｈＰａｄ）ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓを統計学的解析およびグラフ表示に使用した。腫瘍増殖は試験の各群について時間に対する腫瘍体積中央値としてプロットした。加えて、最終腫瘍体積および最終腫瘍増殖阻害パーセント（％ＴＧＩ）もまた該グラフ若しくは別個の棒グラフに表示した（*
＝ｐ≦０．０５、**＝ｐ≦０．０１、***＝ｐ≦０．００１）。Ｕ８７ＭＧ腫瘍増殖研究
の結果を図１０および図１１に示す。

図１０：化合物（Ｉ）を２５、５０および７５ｍｇ／ｋｇの用量でｐ．ｏ．投与した。全用量が、無胸腺ヌードマウスで皮下で増殖させたＵ８７ＭＧ腫瘍の統計学的に有意の腫瘍増殖阻害を生じた（ｐ＜０．０１）。腫瘍退縮もまた全３用量で観察された。２５ｍｇ／ｋｇ用量は第１日に１日１回（ｑ．ｄ．）および第１２日まで１日２回投与した。５０ｍｇ／ｋｇ用量は７日間１日２回、２４時間休薬、その後第１２日までｑ．ｄ．投与した。５０ｍｇ／ｋｇ用量と同様、７５ｍｇ／ｋｇ用量は７日間１日２回、２４時間休薬、その後第１２日までｑ．ｄ．投与した。

図１１：化合物（Ｉ）を２５、５０および７５ｍｇ／ｋｇの用量でｐ．ｏ．投与した。処置の最終日（第１２日）、平均腫瘍体積が、２５、５０および７５ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ９４％（ｐ＜０．０１）、９６％（ｐ＜０．０１）および９７％（ｐ＜０．０１）減少した。２５ｍｇ／ｋｇ用量は第１日に１日に１回（ｑ．ｄ．）および第１２日まで１日２回投与した。５０ｍｇ／ｋｇ用量は７日間１日２回、２４時間休薬、その後第１２日までｑ．ｄ．投与した。５０ｍｇ／ｋｇ用量と同様、７５ｍｇ／ｋｇ用量は７日間１日２回、２４時間休薬、その後第１２日までｑ．ｄ．投与した。

Ｓ１１４腫瘍モデル
方法
マウス
雌性無胸腺ヌードマウス（ＣＤ−１、ｎｕ／ｎｕ、９〜１０週齢）をＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（マサチューセッツ州ウィルミントン）から得、そしてＮＩＨの基準に従って管理した。全マウスは、２１〜２２℃および４０〜５０％湿度で維持した室中で１２時間の明／暗周期で無菌のマイクロアイソレーターケージ中クリーンルーム条件下に群で収容した（５マウス／ケージ）。マウスは照射済の標準げっ歯類食餌および水を随意に給餌された。全動物は、米国実験動物管理公認協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）（ＡＡＡＬＡＣ）により完全に認定されている実験動物医学施設に収容した。動物が関わる全部の処置は、ＮＩＨの実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ
ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）に従って実施し、また、全部のプロトコルは内部動物管理および使用委員会（Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＩＡＣＵＣ）により承認された。

Ｓ１１４腫瘍
ヒト成長因子（ＨＧＦ）およびヒトｃ−Ｍｅｔ受容体双方を過剰発現するよう工作されたマウスＮＩＨ ３Ｔ３由来細胞株Ｓ１１４をＤＭＥＭ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、メリーランド州ベセスダ）で増殖させた。注入直前に細胞を洗浄し、計数し、そしてＰＢＳに再懸濁した。体重が２０〜２１グラム以上の雌性無胸腺ヌードマウスに、０．１ｍＬの送達容量中の５×１０⁶細胞を大腿の左鼠径部領域に皮下接種した。腫瘍を５日間増殖させた。

薬物処置
マウスに２０％ＨＰＢＣＤ中１００ｍｇ／ｋｇの化合物若しくはベヒクル（２０％ＨＰＢＣＤ、対照群）を経口投与した。投与は連続４日継続した。本発明の化合物は２０％ＨＰβＣＤの澄明な溶液として連日新たに調製し、そして上述されたとおり投与した。体重を試験の終了時に測定し、そして１０％超の体重減少を化合物の認容性の欠如の指標として使用した。許容できない毒性は試験の間の２０％を超える体重減少と定義した。マウスは、有害な薬物関連の副作用の明白な臨床徴候について各用量で毎日緊密に検査した。体重若しくは行動の重大な変化は試験中に示されなかった。

解析
試験終了日に、最終腫瘍体積および最終体重を各動物で得た。１００％ＣＯ₂を使用してマウスを安楽死させ、そして腫瘍を直ちに無傷で摘出しかつ重量測定し、最終腫瘍湿重量（グラム）が一次有効性エンドポイントとしてはたらいた。Ｐｒｉｓｍ ３．０３（ＧｒａｐｈＰａｄ）ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓを統計学的解析およびグラフ表示に使用した。Ｓ１１４腫瘍研究の結果を図１２に示す。

図１２および表１６：化合物（Ｉ）を１００ｍｇ／ｋｇ、ｑ．ｄ．の用量で連続４日間ｐ．ｏ．投与した。Ｓ１１４腫瘍は化合物（Ｉ）で処置した全５マウスで退縮した。さらに、５マウスの３匹の腫瘍は試験の終了までに触知不可能で検出不可能な腫瘍に退縮した。

以下に本発明の主な特徴と態様を列挙する。

１． 式（ＩＩ）

ここでＷ¹は脱離基である
の中間体を式（ＩＩＩ）

の中間体と反応させることを含んでなり、
前記反応させることが酸の存在下であることを特徴とする、
式（Ｉ）

の化合物の塩の製造方法。

２． （ａ）式（ＩＩ）

ここでＷ¹は脱離基である
の中間体を式（ＩＩＩ）

の中間体と酸の存在下で反応させ、それにより式（Ｉ）の化合物の塩を得ること；および（ｂ）前記酸を塩基と接触させて、それにより式（Ｉ）の化合物を得ること
を含んでなる、式（Ｉ）の化合物の製造方法。

３． 式（ＩＩＩ）の中間体が、
（ａ）式（ＶＩ）

ここでＷ¹はクロロ、ブロモ若しくはヨードである
の６−ハロキノリンのグリニヤール試薬を式（ＶＩＩＩ）

ここでＲ¹はＣ_1-6アルキルである
の中間体に転化すること；
（ｂ）式（ＶＩＩＩ）の中間体をデオキソフッ素化して、それにより式（ＩＸ）

の中間体を得ること、
および（ｃ）式（ＩＸ）の中間体をヒドラジン若しくはヒドラジン同等物で処理し、それにより式（ＩＩＩ）の中間体を得ること
を含んでなる方法により製造される、１若しくは２のいずれかに記載の方法。

４． 前記酸が約３未満、好ましくは約２未満、より好ましくは１に等しいか若しくはそれ未満のｐＫａを有する、１ないし３のいずれか１つに記載の方法。

５． 前記酸が、ハロ水素酸、好ましくはＨＣｌ若しくはＨＢｒ、硫酸（Ｈ₂ＳＯ₄）、トリフルオロ酢酸、またはスルホン酸、好ましくはｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、カンファースルホン酸、メタンスルホン酸若しくはエタンスルホン酸から選ばれる、１ないし４のいずれか１つに記載の方法。

６． 前記酸がメタンスルホン酸である、５に記載の方法。

７． （ａ）式（Ｘ）

ここでＰＧは保護基である
の中間体を式（ＸＩ）

ここでＥは−ＯＨ、−Ｏ^(-)Ｍ⁽⁺⁾若しくは−ＯＲ¹であり、ならびにＭはアルカリ金属であり、およびＲ¹はＣ_1-6アルキルである
の中間体と反応させ、それにより式（ＸＩＩ）

の中間体を得ること
（ｂ）式（ＸＩＩ）の中間体から保護基ＰＧを除去し、それにより式（ＸＩＩＩ）

の中間体を得ること、
および（ｃ）式（ＸＩＩＩ）の中間体を式（Ｉ）の化合物に転化すること
を含んでなる、式（Ｉ）

の化合物の製造方法。

８． 結晶形が、以下すなわち
−６．１±０．２、１６．５±０．２および１９．０±０．２の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターン；
−図１に示されると本質的に同一の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターン；
−１０２７±２、８３５±２および８２２±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
−表２若しくは図２に示されると本質的に同一の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
−１０２７±２、９８２±２および８９２±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
−１分あたり１０℃の走査速度で走査する場合に示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定されるところの１９９．０℃と２０３．５℃の間の融解吸熱
のいずれか１種若しくはそれ以上を有する、式（Ｉ）

の化合物の結晶形。

９． 結晶形が実質的に純粋である、８に記載の結晶形。

１０． 結晶形が、以下すなわち
−６．７±０．２、１１．３±０．２および１５．３±０．２の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターン；
−図３に示されると本質的に同一の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターン；
−１５７６±２、１２２５±２、８３６±２および８３０±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
−１０４２±２、９８７±２および９６９±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
−表４若しくは図４に示されると本質的に同一の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
のいずれか１種若しくはそれ以上を有する、式（Ｉ）

の化合物の結晶形。

１１． 結晶形が実質的に純粋である、１０に記載の結晶形。

１２． 式（Ｉ）

の化合物の水和物の形態。

１３． 前記水和物の形態が、以下すなわち
−８．４±０．３、１９．５±０．３および２９．０±０．３の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターン；
−図５に示されると本質的に同一の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターン；
−８３６±２、８２５±２および６６８±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
−３２９９±２、９８５±２および６６８±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
−表６若しくは図６に示されると本質的に同一の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル
のいずれか１種若しくはそれ以上を有する、１２に記載の水和物の形態。

１４． ８、１０若しくは１２に記載されるところの結晶形から選択される最低２形態の混合物を含んでなる、固体の形態の式（Ｉ）の化合物。

１５． 酸との式（Ｉ）

の化合物の塩であって、但し酸がＨＣｌでない塩。

１６． 前記酸が、ＨＢｒ、硫酸（Ｈ₂ＳＯ₄）、トリフルオロ酢酸、またはスルホン酸、好ましくはｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、カンファースルホン酸若しくはメタンスルホン酸から選ばれる、１５に記載の塩。

１７． 製薬学的に許容できる担体とともに８ないし１６のいずれか１つに記載されるところの式（Ｉ）の化合物の形態のいずれか１種若しくは混合物を含んでなる製薬学的組成物。

１８． 被験体でｃ−Ｍｅｔのキナーゼ活性を低下若しくは阻害し、かつ／または被験体でのｃ−Ｍｅｔ発現を調節し、かつ／または被験体における細胞増殖性障害および／若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害を予防若しくは処置するための医薬品の製造のための、８ないし１６のいずれか１つに記載されるところの式（Ｉ）の化合物の形態のいずれか１種若しくは混合物の使用。

１９． ８ないし１６のいずれか１つに記載の化合物および１種若しくはそれ以上の他の化学療法剤の組合せ。

２０． ８ないし１６のいずれか１つに記載の化合物および放射線治療若しくは遺伝子治療の組合せ。

Claims (14)

1. （ａ）式（Ｘ）
   

   

   ここでＰＧは保護基である
   の中間体を式（ＸＩ）
   

   

   ここでＥは−ＯＨ、−Ｏ^(-)Ｍ⁽⁺⁾若しくは−ＯＲ¹であり、ならびにＭはアルカリ金属であり、およびＲ¹はＣ_1-6アルキルである
   の中間体と反応させ、それにより式（ＸＩＩ）
   

   

   の中間体を得ること
   （ｂ）式（ＸＩＩ）の中間体から保護基ＰＧを除去し、それにより式（ＸＩＩＩ）
   

   

   の中間体を得ること、
   および（ｃ）式（ＸＩＩＩ）の中間体を式（Ｉ）の化合物に転化すること
   を含んでなる、式（Ｉ）
   

   

   の化合物の製造方法。
2. 結晶形が、以下すなわち
   −６．１±０．２、１６．５±０．２および１９．０±０．２の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターン；
   −図１に示されると本質的に同一の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターン；
   −１０２７±２、８３５±２および８２２±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
   −表２若しくは図２に示されると本質的に同一の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
   −１０２７±２、９８２±２および８９２±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
   −１分あたり１０℃の走査速度で走査する場合に示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定されるところの１９９．０℃と２０３．５℃の間の融解吸熱
   のいずれか１種若しくはそれ以上を有する、式（Ｉ）
   

   

   の化合物の結晶形。
3. 結晶形が実質的に純粋である、請求項２に記載の結晶形。
4. 結晶形が、以下すなわち
   −６．７±０．２、１１．３±０．２および１５．３±０．２の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターン；
   −図３に示されると本質的に同一の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターン；
   −１５７６±２、１２２５±２、８３６±２および８３０±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
   −１０４２±２、９８７±２および９６９±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
   −表４若しくは図４に示されると本質的に同一の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
   のいずれか１種若しくはそれ以上を有する、式（Ｉ）
   

   

   の化合物の結晶形。
5. 結晶形が実質的に純粋である、請求項４に記載の結晶形。
6. 式（Ｉ）
   

   

   の化合物の水和物の形態。
7. 前記水和物の形態が、以下すなわち
   −８．４±０．３、１９．５±０．３および２９．０±０．３の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターン；
   −図５に示されると本質的に同一の回折角（２θ）にピークを含んでなるＸＲＰＤパターン；
   −８３６±２、８２５±２および６６８±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
   −３２９９±２、９８５±２および６６８±２の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル；
   −表６若しくは図６に示されると本質的に同一の吸収帯（ｃｍ^-1）にピークを含んでなるＩＲスペクトル
   のいずれか１種若しくはそれ以上を有する、請求項６に記載の水和物の形態。
8. 請求項２、４若しくは６に記載されるところの結晶形から選択される最低２形態の混合物を含んでなる、固体の形態の式（Ｉ）の化合物。
9. 酸との式（Ｉ）
   

   

   の化合物の塩であって、但し酸がＨＣｌでない塩。
10. 前記酸が、ＨＢｒ、硫酸（Ｈ₂ＳＯ₄）、トリフルオロ酢酸、またはスルホン酸、好ましくはｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、カンファースルホン酸若しくはメタンスルホン酸から選ばれる、請求項９に記載の塩。
11. 製薬学的に許容できる担体とともに請求項２ないし１０のいずれか１つに記載されるところの式（Ｉ）の化合物の形態のいずれか１種若しくは混合物を含んでなる製薬学的組成物。
12. 被験体でｃ−Ｍｅｔのキナーゼ活性を低下若しくは阻害し、かつ／または被験体でのｃ−Ｍｅｔ発現を調節し、かつ／または被験体における細胞増殖性障害および／若しくはｃ−Ｍｅｔに関係する障害を予防若しくは処置するための医薬品の製造のための、請求項２ないし１０のいずれか１つに記載されるところの式（Ｉ）の化合物の形態のいずれか１種若しくは混合物の使用。
13. 請求項２ないし１０のいずれか１つに記載の化合物および１種若しくはそれ以上の他の化学療法剤の組合せ。
14. 請求項２ないし１０のいずれか１つに記載の化合物および放射線治療若しくは遺伝子治療の組合せ。

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