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JP2012525375A - 皮膚の攻撃的な作用因子の免疫抑制作用に対抗するための医薬用、皮膚用、栄養用又は化粧品用組成物 - Google Patents

皮膚の攻撃的な作用因子の免疫抑制作用に対抗するための医薬用、皮膚用、栄養用又は化粧品用組成物 Download PDF

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JP2012525375A
JP2012525375A JP2012507873A JP2012507873A JP2012525375A JP 2012525375 A JP2012525375 A JP 2012525375A JP 2012507873 A JP2012507873 A JP 2012507873A JP 2012507873 A JP2012507873 A JP 2012507873A JP 2012525375 A JP2012525375 A JP 2012525375A
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catechin
skin
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JP2012507873A
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ギウリアニ・ジャムマリア
ベネデュシ・アンナ
Original Assignee
ギウリアニ ソシエタ ペル アチオニ
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Abstract

本発明の目的は、空中汚染物質、脱水剤、紫外線並びに熱衝撃及び浸透圧衝撃等の攻撃的な作用因子によって皮膚において誘発される免疫抑制を治療するための、それぞれがおよそ３：１〜６：１に及ぶモル比にあるカテキン及びケルセチンの混合物と、前記混合物を活性成分として含有する医薬用、皮膚用、栄養用又は化粧品用組成物である。

Description

皮膚は、環境の弊害に対して効果的な障壁を提供し、身体の内部器官を保護する。皮膚の主要層には、表皮、真皮及び下皮が含まれる。ヒトの上皮は、かなり厚く、最大で１５枚までの層を含む。それは、紫外線、例えば熱衝撃及び浸透圧衝撃、並びに最近では環境中にますます広まっている空中汚染物質を含んだ、物理的、化学的及び環境への有害作用因子に対する身体の最初の防御障壁を示す。
皮膚の免疫システムの抑制は、かかる有害作用因子が、例えば、主として表皮層及び対応する細胞に作用する、皮膚腫瘍の発症を誘発できる機序の一つであると知られている。
一例を挙げれば、紫外線は、照射期間中及びその後に、皮膚の急激な変化及び遅れた変化の両方を誘発する。日射病によって誘発された細胞（「日焼け細胞」としても知られている）の形成、メラノサイトによるメラニンの生成、及び特定のサイトケラチンの作用によって角膜層が厚くなること等の目に見える変化に加えて、分子レベルで起こる幾つかの変化は、可能性のある長期間に亘った損傷の原因である：内因性抗酸化物質の枯渇［これは、放射線への暴露直後の数時間で起こり、遅れた退行性反応（酸化的ストレスとして知られている）のカスケードを引き起こし、皮膚の構造全体、表皮及び真皮に影響を与える］；免疫反応［ここで、主役はランゲルハンス細胞であり、その反応は、サイトカイン及び他の可溶性因子によって媒介される］；ＤＮＡに対する分子損傷（特には８−オキシＤグアノシンの形成を介したもの）等である。
このテーマに関する文献の参考として、紫外線の免疫抑制効果に関し、非特許文献１〜５には触れておく価値がある。
Katiyar S, Elmets CA, Katiyar SK. Green tea and skin cancer: photoimmunology, angiogenesis and DNA repair. J Nutr Biochem. 2007 May;18(5):287-96. Skiba B, Neill B, Piva TJ. Gene expression profiles of TNF-alpha, TACE, furin, IL-1beta and matrilysin in UVA- and UVB-irradiated HaCat cells. Photodermatol Photoimmunol Photomed. 2005 Aug;21(4):173-82. Yawalkar N, Limat A, Brand CU, Braathen LR. Constitutive expression of both subunits of interleukin-12 in human keratinocytes. J Invest Dermatol. 106(1):80-3, 1996. Curiel-Lewandrowski C, Venna SS, Eller MS, Cruikshank W, Dougherty I, Cruz PD Jr, Gilchrest BA. Inhibition of the elicitation phase of contact hypersensitivity by thymidine dinucleotides is in part mediated by increased expression of interleukin-10 in human keratinocytes. Exp Dermatol. 2003 Apr;12(2):145-52. Schwarz T. Mechanisms of UV-induced immunosuppression. Keio J Med. 2005 Dec; 54(4):165-71.
本発明の目的は、攻撃的な作用因子、例えば空中汚染物質、脱水剤、紫外線、熱衝撃及び浸透圧衝撃並びにその他のものの皮膚に対する免疫抑制作用に効果的に対抗する手段を提供することにある。
同一出願人が所有するＥＰ１３２８２６８は、フラボノイド類のカテキン及びケルセチンの組み合わせの抗酸化活性を記載しており、該抗酸化活性は、特に、顕著な血小板凝集抑制活性が実証された臨床研究に基づいている。また、前述の特許は、紫外線の皮膚老化効果を対照させる抗酸化活性を示唆した。
しかしながら、一般的に言えば、既定の化合物又は化合物の組み合わせの抗酸化活性が、免疫抑制効果に対する作用、延いては上述の種類の免疫保護活性と同時に発生できるかどうかについて言及することは不可能である。
発明の要旨
本発明によれば、実験的な研究の結果から、カテキン及びケルセチンを選択した量比で一緒に組み合わせたものは、上述の攻撃的な作用因子の皮膚に対する免疫抑制作用に対抗するための有効な活性成分を構成するということが、驚くべきことに見出された。
発明の詳細な説明
カテキン及びケルセチンの構造式及び分子量は、以下の通りである：
それ故に、本発明の目的は、空中汚染物質、脱水剤、紫外線、熱衝撃及び浸透圧衝撃等の攻撃的な作用因子の皮膚に対する免疫抑制作用に対抗するための医薬用、皮膚用、栄養用又は化粧品用組成物の調製における活性成分としての前述の組み合わせの使用と、対応した組成物であって、活性成分としてカテキン及びケルセチンの組み合わせをそれぞれがおよそ６：１と３：１の範囲のモル比で含むことを特徴とするものである。
本発明に従う組成物は、皮膚上への局所用に又は全身用に配合でき、例えば経口投与に適した形態として配合できる。
以下のものは、本発明に従う組成物の幾つかの記載であり、限定するものとして意図されない。
例１〜５においては、成分の量が、以下のように所定の範囲内の重量対重量パーセントとして表される。一方、ケルセチンについては、前述の範囲内で選択されたカテキンの量との関連で、１：５のケルセチン対カテキンのモル比を示す。
例１
サンミルク
成分（ＩＮＣＩ名）・・・量％ｗ／ｗ
ジポリヒドロキシステアリン酸ＰＥＧ−３０・・・２．００〜５．００
ジイソステアリン酸／ポリヒドロキシステアリン酸／セバシン酸ポリグリセリル−４・・・２．００〜６．００
バチルアルコール・・・０．０３〜０．０８０
メトキシケイ皮酸エチルへキシル・・・５．００〜１１．００
ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート・・・５．００〜１１．００
ブチルメトキシジベンゾイルメタン・・・１．００〜４．００
サリチル酸エチルへキシル・・・１．００〜５．０００
カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド・・・１．００〜１０．００
安息香酸Ｃ１２〜１５アルキル・・・３．００〜１０．００
ジカプリル酸／ジカプリン酸ブチレングリコール・・・４．００〜１０．００
セバシン酸ジイソプロピル・・・１．００〜５．００
シアバター・・・０．４０〜３．００
トウモロコシオイル・・・０．５０〜１．００
アボカドオイル不けん化物・・・０．４０〜２．００
トウキンセンカ・・・１．００〜５．００
クエン酸トリエチル・・・０．２０〜０．８０
Ｖｐ／エイコセンコポリマー・・・０．３０〜２．００
ベヘン酸／エイコサン二酸グリセリル・・・１．００〜３．００
テトラ−ジ−ｔ−ブチルヒドロキシヒドロケイ皮酸ペンタエリスリチル・・・０．０１〜０．０５０
エチルへキシルトリアゾン・・・１．００〜４．００
ステアリン酸マグネシウム・・・０．１０〜０．８０
ベータ−シトステロール・・・０．０５〜０．５０
安息香酸・・・０．２０〜０．５０
トリクロサン・・・０．０２〜０．７０
グリシルレチン酸・・・０．０２〜０．７０
窒化ホウ素・・・０．２０〜０．５０
二酸化チタン・・・０．５０〜５．００
水酸化アルミニウム・・・０．５０〜５．００
ステアリン酸・・・０．５０〜３．００
グリセリン・・・１．００〜５．００
ソルビチルフルフラール・・・０．１０〜０．９０
カテキン・・・０．００５〜０．０５
硫酸マグネシウム・・・０．７０
シクロペンタシロキサン・・・１．００〜５．００
カプリリルグリコール・・・０．１０〜０．８０
ケルセチン・・・１：５（ケルセチン対カテキンのモル比）
ジカルボキシメチルグルタミン酸四ナトリウム・・・０．１０〜０．０５
パルファム・・・０．２０
ビス−エチルへキシルヒドロキシジメトキシベンジルマロナート・・・０．０１〜０．５０
水添レシチン・・・０．０５〜１．００
水・・・ｑ．ｓ．１００ｇ
例２
サンミルク
成分（ＩＮＣＩ名）・・・量％ｗ／ｗ
Ｃ１０〜１８トリグリセリズ・・・１．００〜１０．００
安息香残Ｃ１２〜１５アルキル・・・３．００〜１０．００
ジカプリル酸／ジカプリン酸ブチレングリコール・・・４．００〜１０．００
セバシン酸ジイソプロピル・・・１．００〜５．００
ベヘニルアルコール・・・０．４０〜３．００
スクアラン・・・０．４０〜２．００
ジポリヒドロキシステアリン酸ＰＥＧ−３０・・・２．００〜５．００
ジイソステアリン酸／ポリヒドロキシステアリン酸／セバシン酸ポリグリセリル−４・・・２．００〜６．００
バチルアルコール・・・０．０３〜０．０８
メトキシケイ皮酸エチルへキシル・・・５．００〜１１．００
ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート・・・５．００〜１１．００
ブチルメトキシジベンゾイルメタン・・・１．００〜４．００
サリチル酸エチルへキシル・・・１．００〜５．００
トウモロコシオイル・・・０．５０〜１．００
トウキンセンカ・・・１．００〜５．００
クエン酸トリエチル・・・０．２０〜０．８０
Ｖｐ／エイコセンコポリマー・・・０．３０〜２．００
ベヘン酸／エイコサン二酸グリセリル・・・１．００〜３．００
テトラ−ジ−ｔ−ブチルヒドロキシヒドロケイ皮酸ペンタエリスリチル・・・０．０１〜０．０５０
エチルへキシルトリアゾン・・・１．００〜４．０００
ステアリン酸マグネシウム・・・０．１０〜０．８０
ベータ−シトステロール・・・０．０５〜０．５０
安息香酸・・・０．２０〜０．５０
トリクロサン・・・０．０２〜０．７０
グリシルレチン酸・・・０．０２〜０．７０
窒化ホウ素・・・０．２０〜０．５０
二酸化チタン・・・０．５０〜５．００
水酸化アルミニウム・・・０．５０〜５．００
ステアリン酸・・・０．５０〜３．００
グリセリン・・・１．００〜５．００
カテキン・・・０．００５〜０．０５
硫酸マグネシウム・・・０．１０〜０．８０
シクロペンタシロキサン・・・１．００〜５．００
カプリリルグリコール・・・０．５０〜０．８００
ソルビチルフルフラール・・・０．１０〜０．９０
ケルセチン・・・１：５（ケルセチン対カテキンのモル比）
ジカルボキシメチルグルタミン酸四ナトリウム・・・０．１０〜０．０５
パルファム・・・０．２００
コウレスホルスコリ根エキス・・・０．０１〜０．１０
ビス−エチルへキシルヒドロキシジメトキシベンジルマロナート・・・０．０１〜０．５０
水添レシチン・・・０．０５〜１．００
水・・・ｑ．ｓ．１００ｇ
例３
サンクリーム
成分（ＩＮＣＩ名）・・・量％ｗ／ｗ
ジポリヒドロキシステアリン酸ＰＥＧ−３０・・・１．００〜５．００
ジイソステアリン酸／ポリヒドロキシステアリン酸／セバシン酸ポリグリセリル−４・・・１．００〜５．００
バチルアルコール・・・０．０３〜０．０８
メトキシケイ皮酸エチルへキシル・・・５．００〜１１．００
ブチルメトキシジベンゾイルメタン・・・０．５０〜１．００
ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート・・・５．００〜１１．００
サリチル酸エチルへキシル・・・２．００〜７．００
カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド・・・３．００〜８．００
安息香残Ｃ１２〜１５アルキル・・・３．００〜８．００
ジカプリル酸／ジカプリン酸ブチレングリコール・・・３．００〜８．００
セバシン酸ジイソプロピル・・・１．００〜６．００
シアバター・・・０．４０〜３．００
アボカドオイル不けん化物・・・０．４０〜３．００
オリーブ・・・０．４０〜３．００
トウキンセンカエキス・・・０．４０〜３．００
Ｖｐ／エイコセンコポリマー・・・０．５０〜１．２０
ベヘン酸／エイコサン二酸グリセリル・・・２．００〜３．５０
クエン酸トリエチル・・・０．１０〜０．６０
テトラ−ジ−ｔ−ブチルヒドロキシヒドロケイ皮酸ペンタエリスリチル・・・０．０２５〜０．０５０
エチルへキシルトリアゾン・・・１．００〜２．５００
ベータ−シトステロール・・・０．０５〜０．３００
安息香酸・・・０．２０〜０．３０
トリクロサン・・・０．０２〜０．５００
グリシルレチン酸・・・０．０２０〜０．５００
窒化ホウ素・・・０．０２０〜０．５００
ソルビチルフルフラール・・・０．１０〜０．９０
グリセリン・・・１．００〜５．００
硫酸マグネシウム・・・０．０２〜０．９０
キサンタンゴム・・・０．２０〜０．４０
シクロペンタシロキサン・・・１．００〜３．５０
カテキン・・・０．００５〜０．０５
ケルセチン・・・１：５（ケルセチン対カテキンのモル比）
カプリリルグリコール・・・０．５０〜０．８００
ジメチルシリル化シリカ・・・１．００〜３．００
オクテニルコハク酸デンプンアルミニウム・・・１．００〜３．００
ジカルボキシメチルグルタミン酸四ナトリウム・・・０．１０〜０．５０
コウレスホルスコリ根エキス・・・０．００５〜０．０５
ビス−エチルへキシルヒドロキシジメトキシベンジルマロナート・・・０．１０〜０．５０
水添レシチン・・・０．０５〜０．１５０
パルファム・・・０．２０
水・・・ｑ．ｓ．１００ｇ
例４
アフターサンボディミルク
成分（ＩＮＣＩ名）・・・量％ｗ／ｗ
グリセリン・・・１．００〜６．００
セチルヒドロキシエチルセルロース・・・０．１０〜０．４０
キサンタンゴム・・・０．１０〜０．４０
アラントイン・・・０．１０〜０．３５
タピオカデンプン・・・１．００〜４．００
ヒアルロン酸ナトリウム・・・０．０２５〜０．３５
ＥＤＴＡ二ナトリウム・・・０．０２５〜０．２０
カテキン・・・０．００５〜０．０５
ケルセチン・・・１：５（ケルセチン対カテキンのモル比）
ステアリン酸ソルビタン・・・２．００〜５．００
ヤシ脂肪酸スクロース・・・０．１０〜１．００
グリシルレチン酸・・・０．３０〜０．７０
スクアラン・・・２．００〜５．００
ベータ−シトステロール・・・０．１０〜０．５０
カプリル酸／カプリン酸トリグリセリズ・・・１．００〜５．００
シアバター・・・１．００〜５．００
トウキンセンカ・・・１．００〜３．００
ジメチコーン・・・１．００〜３．００
ヒドロキシメチルグリシンナトリウム・・・０．２５〜０．５０
パルファム・・・０．３０
デルタトコフェロール・・・０．０２〜０．２５
ソルビチルフルフラール・・・０．１０〜０．９０
水・・・ｑ．ｓ．１００ｇ
乳酸（ｐＨ調整剤）・・・ｑ．ｓ．
例５
アフターサンフェイスクリーム
成分（ＩＮＣＩ名）・・・量％ｗ／ｗ
グリセリン・・・２．０〜５．０
タピオカデンプン・・・１．００〜２．００
セチルヒドロキシエチルセルロース・・・０．１０〜０．５０
ヒアルロン酸ナトリウム・・・０．０５〜０．５
ＥＤＴＡ四ナトリウム・・・０．１０〜０．５０
カテキン・・・０．００５〜０．０５
ケルセチン・・・１：５（ケルセチン対カテキンのモル比）
グリシルレチン酸・・・０．１０〜０．７０
オリーブ脂肪酸セテアリル・・・１．００〜４．００
オリーブ脂肪酸ソルビタン・・・０．５０〜３．００
シアバター・・・１．０〜８．００
セトステアリルアルコール・・・０．５０〜２．００
ベータシトステロール・・・０．１０〜０．５０
デルタトコフェロール・・・０．０５〜０．２０
ジメチコーン・・・０．５０〜１．５０
ジメチコーンクロスポリマー・・・０．２０〜１．５０
ソルビチルフルフラール・・・０．５〜１．００
トウキンセンカ・・・０．５０〜５．００
ヒドロキシメチルグリシンナトリウム・・・０．２５〜０．５０
パルファム・・・ｑ．ｓ．
水・・・ｑ．ｓ．１００．００
例６
誘発された皮膚免疫抑制による損傷を防ぐための食用製品
各軟質ゼラチンカプセル（パール）は、以下のものを含有する：
カテキン・・・８０ｍｇ
ケルセチン・・・２０ｍｇ
ビタミンＥ（ｄｌ−アルファトコフェロール）・・・５ｍｇ
大豆油・・・２９０ｍｇ
大豆レシチン・・・５ｍｇ
脂肪酸のモノ−及びジグリセリズ・・・３０ｍｇ
カプセル成分：
ゼラチン・・・１４５ｍｇ
グリセロール・・・６７ｍｇ
例７
誘発された皮膚免疫抑制による損傷を防ぐための錠剤形態としての食用製品
各錠剤は、以下のものを含有する：
Ｌ−アルギニン塩酸塩・・・２００〜２５０ｍｇ
微結晶性セルロース・・・１００〜２５０ｍｇ
二塩基性リン酸カルシウム二水和物・・・１００〜２００ｍｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース・・・３０〜１００ｍｇ
亜鉛（アミノ酸キレートとして）・・・７．５ｍｇ
銅（アミノ酸キレートとして）・・・１．２ｍｇ
カテキン・・・４．０３ｍｇ
ケルセチン・・・０．８４ｍｇ
脂肪酸のモノ−及びジグリセリズ（Ｅ４７１）・・・５〜１０ｍｇ
二酸化ケイ素（コロイドシリカ）・・・５〜１０ｍｇ
赤色酸化鉄（着色剤Ｅ１７２）・・・０．４４ｍｇ
ビオチン・・・０．１７ｍｇ
例８
誘発された皮膚免疫抑制による損傷を防ぐための硬質ゼラチンカプセルとしての食用製品
各硬質ゼラチンカプセルは、以下のものを含有する：
ケルセチン・・・１０．４ｍｇ
カテキン・・・４０ｍｇ
リシン一塩酸塩・・・１１０ｍｇ
二塩基性リン酸カルシウム二水和物・・・５０〜１００ｍｇ
微結晶性セルロース・・・５０〜１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム・・・５〜１０ｍｇ
二酸化ケイ素・・・３〜６ｍｇ
天然ゼラチン・・・カプセル
例９
誘発された皮膚免疫抑制による損傷を防ぐための食用製品−軟質ゼラチンカプセル（パール）
各軟質ゼラチンカプセル（パール）は、以下のものを含有する：
ケルセチン・・・１７ｍｇ
カテキン・・・８３ｍｇ
ビタミンＥ（ｄｌ−アルファトコフェロール）・・・５ｍｇ
ボラージオイル・・・５０ｍｇ
大豆油・・・３５０ｍｇ
大豆レシチン・・・５ｍｇ
脂肪酸のモノ−及びジ−グリセリズ・・・３０ｍｇ
カプセル成分：
ゼラチン・・・１４５ｍｇ
グリセロール・・・６７ｍｇ
例１０
誘発された皮膚免疫抑制による損傷を防ぐための錠剤形態としての食用製品
各錠剤は、以下のものを含有する：
ｄ−ビオチン・・・０．２３ｍｇ
ユビデカレノン・・・１０ｍｇ
ビタミンＣ・・・６０ｍｇ
ビタミンＥ（ｄｌ−アルファトコフェロール）・・・１５ｍｇ
ヴィティス・ヴィニフェラの種子及び葉の乾燥エキス（カテキン及びケルセチンを５：１のモル比で含有する）・・・６０ｍｇ
ピリドキシン塩酸塩・・・３．６ｍｇ
ルテイン・・・２ｍｇ
亜鉛（アミノ酸キレートとして）・・・７．５ｍｇ
銅（アミノ酸キレートとして）・・・１．２ｍｇ
マンガン（アミノ酸キレートとして）・・・１．７５ｍｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース・・・３０〜５０ｍｇ
二塩基性リン酸カルシウム二水和物・・・５０〜１００ｍｇ
微結晶性セルロース・・・５０〜１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム・・・５〜１０ｍｇ
二酸化ケイ素・・・３〜６ｍｇ
例１１
誘発された皮膚免疫抑制による損傷を防ぐための食用製品−単一用量小袋
各小袋は、以下のものを含有する：
ヴィティス・ヴィニフェラの種子及び葉の乾燥エキス（カテキン及びケルセチンを５：１のモル比で含有する）・・・６０ｍｇ
凍結乾燥したラクトバチルス・プランタルム・・・１，０００，０００ＵＦＣ／用量
ロイシン・・・１０〜２０ｍｇ
マルトデキストリン・・・５００〜１０００ｍｇ
本発明に従う活性成分の有効性を、インビトロでの実験によってテストした。
実験的な研究は、図面中のグラフを参照して、以下に説明される。
サイトカインＩＬ−１０の発現について言及するグラフを示す。 サイトカインＩＬ−１２の発現について言及するグラフを示す。 以下に与えられた詳細な説明に従ったＴＮＦ−αの発現について言及するグラフを示す。 照射の４時間後にカテキン及びケルセチンの組み合わせを用いて処置した場合及び処置しなかった場合での、照射されたサンプル（１ＭＥＤ）におけるチミン二量体の免疫組織化学を示す。
インビトロでの研究
序論及び目的
この研究は、最小紅斑量（１ＭＥＤ）でのＵＶＡ及びＵＶＢ照射によって誘発されたＤＮＡ損傷に対するカテキン及びケルセチンの組み合わせの免疫保護及び予防作用を評価するため、インビトロで再構築されたヒト表皮について行われた。
ＵＶ誘発ＤＮＡ損傷は、光免疫抑制の主な分子メディエーターの一つであると知られている（Ｓｃｈｗａｒｚ ｅｔ ａｌ．，２００５）。
Ｋｒｉｐｋｅのグループによって行われた研究（１９９２）は、ＤＮＡが全身性免疫抑制を引き起こす過程における紫外線の優先的な標的であること、及びこのタイプのＵＶ誘発免疫抑制を媒介する主要な分子現象がピリミジン二量体の形成であることを明確にした。具体的に、このタイプのＤＮＡ損傷に対して特定的に活性な方法は、免疫学的機能を回復するのに効果的な手段である。
ＵＶ誘発ＤＮＡ損傷に関する研究と並行して、炎症促進性サイトカインＴＮＦ−アルファ及びＩＬ−１２並びに抗炎症性サイトカインＩＬ−１０についても解析した。
上記研究全体で採用した実験的アプローチは、我々が、既に早い段階（延いては、光誘発損傷を防ぐ際における皮膚科学的作用に非常に重要である）で、ＵＶ誘発ストレスに置かれたバイタル表皮の生理的条件下において紫外線によって誘発された免疫抑制過程に対抗する際に考慮される分子の活性度を確認できるようにした；これは、メディエーターの発現及び分子レベルでのＤＮＡへの損傷等、関連性があり動的で感受性の高いパラメータを用いて行われた。
特定のサイトカイン、特にインターロイキンＩＬ−１２は、免疫担当細胞、即ちランゲルハンス細胞に関して免疫修飾活性を有することがよく知られている。それ故に、我々は、ここで検討される化合物の活性を評価するため、ＵＶ照射後のケラチノサイトによって媒介される表皮の免疫応答についてのこの初期の機序を使用することに決めた。
ＩＬ−１０は、病原体耐性と有害な全身性炎症間の微妙なバランスを保つために極めて重要な因子であり、それは、ＩＬ−１２産生の強力な阻害剤である（Ｈａｓｔｅ−Ａｍｅｚａｇａ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｄ’Ａｎｄｒｅａ ｅｔ ａｌ．，１９９３）。
ＵＶ照射後の表皮ケラチン細胞中におけるＩＬ−１２の発現は、ＲＴ−ＰＣＲ法を用いて評価された。
ＤＮＡ損傷に対する保護効果は、基底及び基底層上の表皮レベルでのピリミジン塩基（チミン）による二量体の形成から判断されており、これは、照射の４時間後に既に明らかになる：これら二量体は、ＮＭＳＣ（非黒色腫皮膚癌）のマーカーとして認識されており、それらの形成は、免疫組織化学によって評価される。カテキン及びケルセチンによって処置した組織の免疫組織化学的検査は、より限られた免疫染色を示し、チミン二量体の減少を示していた。図４は、チミン二量体の免疫組織化学スライドの画像を示しており、左側が未処置の照射サンプル（１ＭＥＤ）で、右側が本発明に従うカテキン及びケルセチン混合物によって処置したサンプルであり、照射の４時間後のものであって、後者ではより限定された細胞染色を示している。
ＵＶＡ誘発ＤＮＡ損傷の特異的なマーカーである８−オキシＤ−グアノシンの形成を評価するため、同一の方法を用いた。
この実験に対し、我々は、不活性な対照物質として０．９％生理溶液を用い、本発明に従う組成物として生理溶液中に溶解した重量／重量比が５：１のカテキン及びケルセチンを含有する混合物を用いた。
図面中の図１〜３は、未照射コントロール、未処置の照射コントロール、及び本発明に従う組成物（カテキン＋ケルセチン）を用いて処置した照射サンプルについて得られたＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−アルファの発現に関するグラフを示す。
グラフ中における一対の隣接したカラムのそれぞれは、１ＭＥＤの場合のように照射された、４時間のＵＶ処理（左側の薄い色のカラム，４ｈ）と２４時間の処理（右側の濃い色のカラム，２４ｈ）の場合についてそれぞれ言及している。
結果
免疫蛍光法を用いた組織学的評価の結果は、以下のことを実証した：
ａ）８−オキシＤ−グアノシン（ＵＶＡ誘発酸化的ストレスのバイオマーカー）：照射の４時間後、８−オキシの形成が照射コントロールと比べて抑制されたため、カテキン及びケルセチン混合物は、保護効果を示した；
ｂ）チミン二量体：カテキン及びケルセチンを用いて処置された混合物において、照射の４時間後にピリミジン二量体の形成を阻害する証拠があった。
未照射コントロールと、ＵＶ照射後にカテキン＋ケルセチン処置を行った場合及び該処置を行わなかった場合とを比較して、増加したＩＬ−１０レベルは、免疫抑制に向かう変化が皮膚環境下において起きた証拠である（図１）。
一方、ＩＬ−１０のＩＬ−１２に対する優勢（図２）は、ＵＶ照射後の炎症反応の退行を支持するために必須である。具体的に、皮膚中における高いＩＬ−１０レベル及び低いＩＬ−１２レベルの像は、ＵＶ照射の免疫抑制効果と炎症反応を制限するための皮膚の要求と一致する（Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９７）。
また、ＩＬ−１２は、炎症反応及びＩＦＮ−ガンマ産生を調整する際にＩＬ−１２と密接に関連する他のサイトカインであるＴＮＦ−アルファによっても抑制される（Ｍａ ａｎｄ Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，２００１）。ＴＮＦ−アルファは、ＵＶ誘発皮膚損傷のメディエーターとしての重要な役割がある（Ｂａｒｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９）。
ＵＶ照射は、ＴＮＦ−アルファレベルの増加を引き起こす一方、カテキン及びケルセチンを用いた処置は、ＴＮＦ−アルファレベルの減少をもたらす。
この知見は、図３中に示されるように、ＩＬ−１０がＴＮＦ−アルファの強力な阻害剤であるため（Ｂｏｇｄａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１）、カテキン＋ケルセチン処置がＩＬ−１０レベルで引き起こす増加と密接に関係している。
結論
上述の研究の結果は、本発明に従うカテキン及びケルセチン混合物の驚くべき保護作用を全体的に実証しており、ＵＶＡ及び／又はＵＶＢによって誘発されたＤＮＡ損傷に対する保護効果の証拠、並びにＩＬ−１０及びＴＮＦ−アルファ発現レベルの証拠から現れる抗炎症活性と関係がある。
従って、本発明の目的の効果的な達成が実証された。

Claims (9)

  1. 空中汚染物質、脱水剤、紫外線並びに熱衝撃及び浸透圧衝撃等の攻撃的な作用因子によって皮膚において誘発される免疫抑制を治療するための、それぞれがおよそ６：１〜３：１の範囲のモル比にあるカテキン及びケルセチンの混合物。
  2. 空中汚染物質、脱水剤、紫外線並びに熱衝撃及び浸透圧衝撃等の攻撃的な作用因子によって皮膚において誘発される免疫抑制を治療するための活性成分としての、それぞれがおよそ６：１〜３：１の範囲のモル比にあるカテキン及びケルセチンの混合物の使用。
  3. 空中汚染物質、脱水剤、紫外線並びに熱衝撃及び浸透圧衝撃等の攻撃的な作用因子によって皮膚において誘発される免疫抑制を治療するための組成物の調製への、それぞれがおよそ６：１〜３：１の範囲のモル比にあるカテキン及びケルセチンの混合物の使用。
  4. 前記カテキン及びケルセチンの混合物が、およそ５：１のモル比にあることを特徴とする請求項２又は３に記載の使用。
  5. 空中汚染物質、脱水剤、紫外線並びに熱衝撃及び浸透圧衝撃等の攻撃的な作用因子によって皮膚において誘発される免疫抑制作用に対抗する医薬用、皮膚用、栄養用又は化粧品用組成物であって、活性成分として、それぞれがおよそ６：１〜３：１の範囲のモル比にあるカテキン及びケルセチンの混合物を含むことを特徴とする組成物。
  6. 前記活性成分が、およそ５：１のモル比にあるカテキン及びケルセチンの混合物からなることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
  7. 局所用に配合されたことを特徴とする請求項５又は６に記載の組成物。
  8. 経口用に配合されたことを特徴とする請求項５〜７のいずれかに記載の組成物。
  9. 全身用に配合されたことを特徴とする請求項５〜８のいずれかに記載の組成物。
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