JP2009506038A

JP2009506038A - ナノ粒子処方物の貯蔵方法

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Publication number: JP2009506038A
Application number: JP2008528056A
Authority: JP
Inventors: ウェイピンユー，; ジョンモーン，
Original assignee: セルシオンコーポレイション
Priority date: 2005-08-23
Filing date: 2006-08-23
Publication date: 2009-02-12
Anticipated expiration: 2026-08-23
Also published as: TW200803918A; HK1120731A1; CN101282715B; WO2007024826A3; ES2587583T3; CA2620829A1; WO2007024826A2; AU2006283465B2; TWI388344B; KR20120104438A; JP5227173B2; KR20080046672A; AU2006283465A1; EP1937214B1; CA2620829C; KR101209496B1; CN101282715A; EP1937214A2

Abstract

本発明は、少なくとも１種のリン脂質、少なくとも１種の界面活性剤、および少なくとも１種の親水性ポリマーの組み合わせによって形成されるリポソームまたはナノ粒子処方物を貯蔵するための方法である。この方法は、このような処方物を凍結する工程、およびそれを少なくとも３日間の期間にわたって貯蔵する工程を含む。この方法は、凍結したリポソーム処方物を輸送する工程および該処方物を別の場所で解凍する工程をさらに含み得る。

Description

（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、一般に、ナノ粒子の貯蔵方法に関する。より詳細には、本発明は、高められた安定性および貯蔵特性を有するリポソームの貯蔵方法に関する。

（背景情報）
リポソームおよびナノ粒子の貯蔵のために、冷蔵、凍結／乾燥（または凍結乾燥）、および脱水などのいくつかの標準的な技術が使用されている。凍結乾燥法では、糖類および糖誘導体などの保護充填剤（凍結防止剤）を使用して貯蔵性を高めることができる。これらの保護充填剤は、役に立つが、凍結プロセスおよび解凍プロセス中のリポソームの安定性または損壊の問題を必ずしも十分に克服するものではない。また、このような保護充填剤を組み込むことは、冷蔵条件または凍結条件下での貯蔵寿命を制限することにつながる場合があるので、現行のプロセスには、経済的効率および商業的効率に関して限界がある。さらに、凍結乾燥に関連する凍結プロセス、解凍プロセスおよび／または乾燥プロセスもしくは脱水プロセス中に、カプセル化された活性のある薬剤の生物学的特性、化学的特性、および／または物理的特性に対する有害な変化が発生しうる。また、現行の凍結乾燥プロセス（凍結および乾燥サイクル）は、極めて緩慢でかつ時間がかかりうる。１つの重要な懸念は、凍結乾燥を、あまりにも急速に行うと、または温度を制御しないで行うと、そのことが、リポソーム膜の生物学的特性、化学的特性、および／または物理的特性に対して変化をもたらし、貯蔵の際に不安定性をもたらす可能性があることである。結局、このことはまた、カプセル化された活性のある薬剤の特性に有害な影響を及ぼす可能性がある。

単独でまたはその他の方法と組み合わせて使用される従来からの凍結プロセス中に、損壊は、例えば、リポソーム小胞膜が氷晶形成に曝されることの結果としての高い圧力による機械的応力によって、または凍結、解凍、および／もしくは脱水中のリポソーム内での溶質の膨張および収縮によって引き起こされる可能性がある。凍結サイクル中のリポソーム膜の膨張は、リポソーム膜中に脆弱性、ならびに穴および裂け目の形成を引き起こし、このことが、その後に漏洩の問題につながる完全性および安定性の喪失をもたらす場合がある。さらに、個々のリポソームは、互いに近接して束ねられているのが通常であり、その結果、従来からの凍結中に、１つのリポソームの膨張が、隣接リポソームの完全性に有害な結果をもたらす圧力の原因となる場合がある。

一般に、既存の諸技術には、リポソームの貯蔵寿命、貯蔵、取扱い、および封じ込め特性、ならびに（ｉ）リポソームまたはナノ粒子組成物、および（ｉｉ）活性のある薬剤の完全性を維持する能力に関しておのずから制約がある。さらに、諸技術の多くは、プロセスを実施するのに必要な時間、およびその結果としてのプロセス生産バッチの大きさ（これらは、費用全体に加算される）によりさらに制約される。

（発明の要旨）
本発明は、少なくとも１種のリン脂質、少なくとも１種の界面活性剤、および少なくとも１種の親水性ポリマーの組み合わせによって形成されるリポソームまたはナノ粒子処方物を貯蔵するための方法である。この方法は、このような処方物を凍結する工程、およびそれを少なくとも３日間の期間にわたって貯蔵する工程を含む。

（発明の説明）
本発明の実施形態を以下で考察する。実施形態を説明する際には、明瞭性のために特定の用語を使用する。しかし、本発明は、そうして選択された特定の用語に限定されることを意図しない。特定の典型的な実施形態について考察するが、これは、例示目的のためにのみ行われることを理解されたい。当業者は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなしに、その他の要素および配置を使用できることを認識するであろう。本明細書で引用されるすべての参考文献は、あたかもそれぞれが個別に援用されたかのように、参照により援用される。

本明細書中で使用される場合、ナノ粒子は、内部コアを取り囲む、両親媒性物質、すなわち、親水性部分および疎水性部分を有する成分から形成される外層または膜を有するほぼ球状の小胞と定義できる。一般に、ナノ粒子の大きさは、約１０００ｎｍ未満である。本発明に関して特に重要なのは、薬物送達システムの中で、または薬物送達システムとして使用できるナノ粒子である。例えば、本発明で有用なナノ粒子は、（ｉ）薬物などの生物学的に活性のある化合物、または（ｉｉ）イメージング剤などの生物学的に活性のない化合物が挙げられるがこれらに限定されない、生物学的系に送達するための化合物をカプセル化するのに使用できる。リポソームは、本発明で使用できるナノ粒子の典型的なタイプである。リポソームは、水性コアを取り囲む脂質二重層を含み、生物学的に活性のある化合物および生物学的に活性のない化合物をカプセル化することもできる小胞である。本発明は、ナノ粒子またはリポソームの膜の完全性を高め、かつ、凍結、解凍および攪拌などの各種の応力によって引き起こされる損壊から膜を保護する。したがって、本発明は、リポソームなどのナノ粒子の安定性、貯蔵性、および／または貯蔵寿命特性を高める。本明細書中で使用される場合、凍結は、固体状態を提供する、一般には０℃未満の任意の温度、例えば、約−２０℃以下、約−７８℃以下（すなわち、ドライアイスの温度）、または約−１９６℃以下（すなわち、液体窒素の温度）でよい。本発明は、一般には、代表的なナノ粒子としてリポソームを有する実施形態に関して説明されるが、このことは、限定ではなく、本発明は、その他のナノ粒子にも適用できる。

各種リポソームおよびその他のナノ粒子処方物の組成は、当技術分野で周知であり、医療目的、化粧品目的およびその他の目的に対して商業的に使用される。リポソーム処方物は、様々なモル比の各種脂質と、標的化部分および生物学的に活性のある物質を含むがこれらに限定されない、その他の構成成分との組合せである。リポソームの製造プロセスは、一般に公知である。リポソームは、例えば、直径が２０ｎｍ未満から５００ｎｍを超える様々な大きさで調製することができ、単層小胞または多層小胞でよい。それらは、医療目的および非医療目的に使用される各種物質をカプセル化するのに使用できる。リポソームは、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、生物学的に活性のない薬剤（イメージング剤など）およびこれらの混合物などの活性のある薬剤を封じ込めるために、およびこれらの薬剤を特定の部位に送達するために使用できる。しかし、リポソーム処方物に関する主な問題は、脂質の分解および／または活性のある薬剤の放出なしにそれらを研究目的または商業目的のためにそれを貯蔵する能力（例えば、貯蔵寿命）であった。したがって、時間の経過に伴うリポソームの漏洩および分解に対する小胞の安定性が、主な問題である。

本発明の実施形態は、ナノ粒子処方物、例えば、リポソーム処方物の貯蔵に関するが、脂質などの両親媒性物質から構成されるその他のタイプのナノ粒子に対して適用できる。本発明で使用するのに適した処方物は、膜中に、少なくとも１種の両親媒性物質、少なくとも１種の界面活性剤、および少なくとも１種の親水性ポリマーを含む成分を有するナノ粒子を含む。親水性ポリマーは、未修飾でもよく、ナノ粒子膜と会合する官能基を付加することによって修飾されていてもよく、またはナノ粒子膜の中の両親媒性物質、界面活性剤もしくはその他の成分に化学的に結合していてもよい。親水性ポリマーをナノ粒子膜と会合させるための修飾の例としては、膜を形成する両親媒性物質または界面活性剤の極性基とのより強力な会合を作り出すための極性または電荷を形成する官能基の付加を挙げることができる。親水性ポリマーは、代わりに、それがその完全性を保護および維持するためにナノ粒子またはリポソームの表面に存在するように、膜を形成する両親媒性物質または界面活性剤に共有結合で結合されていてもよいし、あるいは、リポソームまたはナノ粒子処方物の内側脂質層中に組み込まれていてもよい。親水性ポリマーは、例えば、アミド結合またはエステル結合などの生分解性または加水分解性の結合を介して、あるいはアミン結合またはエーテル結合などのより安定な結合を介して両親媒性物質または界面活性剤に結合できる。

理論によって拘束されるものではないが、親水性ポリマーは、凍結、冷蔵、凍結乾燥、脱水および／または再水和のプロセス中のリポソームまたはナノ粒子膜の完全性を保護すると考えられる。ナノ粒子およびリポソーム膜の完全性を保護すると、ナノ粒子およびリポソーム処方物の物理的特性、化学的特性および生物学的特性が保存され、そしてまた、ナノ粒子またはリポソーム内に封じ込められたまたはカプセル化された任意の化合物の特性が維持される。したがって、リポソームまたはナノ粒子処方物は、医療用途、獣医学用途および非医療的用途（バイオテクノロジー、エレクトロニクス、防衛および農業技術などであるがこれらに限定されない）のための封じ込められた封入物を保存し、かつ、凍結状態でのリポソーム処方物の貯蔵および輸送を可能にする。

界面活性剤に対する両親媒性物質の比率は、変えることができ、ナノ粒子またはリポソームの意図した使用に適している任意の比率でよい。両親媒性物質および界面活性剤は、双方とも、両親媒性および界面活性の特性を有することができるが、双方の成分が類似の特性を有する場合、本明細書の目的のためには、両親媒性物質は、主要な膜成分として考えることができ、一方、界面活性剤は、副次的な成分であることが認識される。したがって、両親媒性物質：界面活性剤の比率は、少なくとも約５１：４９であり、９９：１のように大きくてもよい。典型的な実施形態において、両親媒性物質：界面活性剤の比率は、少なくとも約７０：３０であり、約８０：２０または９０：１０でよい。当技術分野で公知のように、界面活性剤の添加は、ナノ粒子またはリポソームの物理的特性または化学的特性における、膜の相転移温度または透過性の低下などの、若干の望ましい特性を達成するような変化を引き起こすことができる。ナノ粒子組成物のこのような変化は、本発明の範囲内にある。

親水性ポリマーは、両親媒性物質と界面活性剤との総量を基準にして約０．１〜約２５モル％の範囲の種々の量でナノ粒子またはリポソームの膜中に存在できる。親水性ポリマーが、約７５〜９０重量％の親水性ポリマーおよび２５〜１０重量％の脂質を含むリポソーム形成性リン脂質に結合されている実施形態において、これは、約０．１１〜約３３モル％の親水性ポリマーで修飾されたリン脂質に相当する。当業者なら理解するように、モル％の親水性ポリマーのモル％の修飾両親媒性物質への変換は、非修飾両親媒性物質の分子量および親水性ポリマーの分子量に依存する。比率の計算は、充分に当業者の理解の範囲に含まれる。本発明の実施形態は、約３〜２０モル％の親水性ポリマー（例えば、約３〜約２７モル％の修飾両親媒性物質）または３〜１０モル％の親水性ポリマー（例えば、約３〜約１３モル％の修飾両親媒性物質）を含むことができる。本発明の特定の実施形態は、約４〜約５モル％の修飾両親媒性物質から調製され、したがって、約２．５〜約４．５モル％の親水性ポリマーを提供する。最適量の親水性ポリマーは、当業者によって慣用実験により容易に決定できる。

本発明の組成物および方法は、ポリエチレングリコール、ポリアクリロイルモルホリン、ポリ−２−エチル−２−オキサゾリン、ポリビニルピロリドン、メトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）誘導体、およびこれらの混合物などの少なくとも１種の親水性ポリマーと組み合わせた、リン脂質、大豆脂質、ホスホエタノールアミン、コレステロール、リゾ脂質、界面活性剤、およびこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない広範な種類の組成物から調製されるナノ粒子およびリポソームについて効果的であり得る。本発明のリン脂質の例としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、およびスフィンゴミエリンが挙げられるがこれらに限定されない。本発明で有用な代表的界面活性剤としては、二鎖リン脂質（ｄｉｃｈａｉｎｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ）、リゾ脂質、胆汁酸、ミリストイル界面活性剤、パルミトイル界面活性剤、ステアロイル界面活性剤、モノオレイン酸グリセリル、セラミド、ＰＥＧ−セラミド、Ｃ１８−エーテル結合リゾホスファチジルコリン、ポリエチレングリコール−ポリエチレンコポリマー、ブロックコポリマー、脂肪酸、およびこれらの混合物が挙げられ得るがこれらに限定されない。本発明で有用なリゾ脂質の例としては、モノパルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、モノラウリルホスファチジルコリン（ＭＬＰＣ）、モノミリストイルホスファチジルコリン（ＭＭＰＣ）、モノステアロイルホスファチジルコリン（ＭＳＰＣ）、およびこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。本発明で有用な代表的な親水性ポリマーとしては、ポリエチレングリコール、ポリアクリロイルモルホリン、ポリ−２−エチル−２−オキサゾリン、ポリビニルピロリドン、およびメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、およびこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。本発明で有用な活性のある薬剤の例としては、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤（ｆｌａｖｏｒａｇｅｎｔ）、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、生物学的に活性のない産物（イメージング剤など）、およびこれらの混合物などが挙げられるがこれらに限定されない。活性のある薬剤の典型的なタイプとしては、例えば、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物が挙げられる。典型的な抗新生物薬としては、ドキソルビシンおよびエピルビシンなどのアントラサイクリン類；タキソールおよびタキソテレなどのタキサン類；およびシスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンなどのプラチン類が挙げられるがこれらに限定されない。

本発明の一実施形態は、リン脂質ＤＰＰＣ、リゾ脂質ＭＳＰＣ、および親水性ポリマーを含めるために官能化された１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）などのリン脂質（例えば、親水性ポリマーがアミド結合を介して脂質に結合している、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００および／またはＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−５０００）を含むリポソーム処方物を利用する。９０：１０：１のように低いモル比のリン脂質：リゾ脂質：親水性ポリマーで官能化されたリン脂質を含むリポソーム組成物は、凍結および貯蔵の方法で効果的であることが示された。結果として、本発明は、商業的リポソーム製品について、効率を高め、処理コストを低下させるのに使用できる広域的な応用を有する。本発明を任意のナノ粒子またはリポソーム処方物に適用して、凍結、冷蔵、脱水および凍結乾燥中のリポソームの完全性を保護できる。

一実施形態において、本発明は、安定性特性、貯蔵特性、封じ込め特性または放出特性などの高められた特性をもつナノ粒子処方物、例えば、リポソーム処方物の貯蔵方法に関する。リポソームなどのナノ粒子の膜中に親水性ポリマーを組み込むことにより、このような小胞の安定性特性、貯蔵特性、封じ込め特性、および放出特性が高められることが見出された。ナノ粒子およびリポソーム処方物中に親水性ポリマーを含めると、この処方物の貯蔵、安定性、および取扱いを助けるのに使用される凍結、冷蔵、解凍、凍結乾燥、脱水またはその他の方法によって引き起こされる、ナノ粒子またはリポソームの膜の生物学的特性、化学的特性、および物理的特性に対する有害な変化が制限される。したがって、ナノ粒子またはリポソーム処方物と会合した親水性ポリマーの存在は、もともとの膜の完全性を保護、維持および／または強化する。

過去において、リポソームを貯蔵する目的のために凍結だけを効果的に使用することは可能でなかった。大部分のリポソーム製品は、「禁凍結」を示す警告ラベルを貼付している。この例は、Ｄｏｘｉｌ、ＡｍＢｉｓｏｍｅ、ＤｅｐｏＣｙｔ、およびいくつかの化粧品用リポソームなどの市販製品のラベルで見ることができる。本発明で有用な処方物は、リポソームおよびナノ粒子を、膜の完全性またはカプセル化された内容物を損壊することなしに凍結できる組成物を提供できる。したがって、本発明の処方物を採用すると、単一のバイアルおよび複数バイアル製品の組合せを配送目的のために凍結し、貯蔵することが可能になる。すなわち、本発明の特別な利点は、リポソーム処方物を、使用直前に再処方を必要とする別個の容器の状態で輸送するのではなく、単位剤形でもよい単一容器の状態で凍結および輸送することができることである。

本発明は、また、ナノ粒子またはリポソーム調製物の処方および貯蔵のための方法を包含し、この方法は、ナノ粒子またはリポソーム組成物を形成するのに適した両親媒性物質または脂質を親水性ポリマーと組み合わせる工程、凍結する工程および貯蔵する工程を含む。このようなナノ粒子およびリポソームは、当技術分野で一般に公知の方法を使用して、例えば両親媒性成分を適切な条件下で水性溶液と混合することによって形成され得る。適切な方法は当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に援用される、Ｎｅｅｄｈａｍの米国特許第６，２００，５９８号および６，７２６，９２５号、Ｏｇａｗａの米国特許第５，０９４，８５４号を参照されたい。ナノ粒子およびリポソーム組成物は、短期間、例えば数分または数時間、およびより長期間、例えば、数日、数週間、数カ月、または数年間貯蔵できる。

さらに、記載されている方法は、ナノ粒子およびリポソーム処方物を、凍結および貯蔵に先立ってまたは続いて、複数または単一のバイアル中に単位用量で分配することを可能にする。本発明のナノ粒子およびリポソーム処方物は、細胞傷害性薬物および非細胞傷害性薬物、遺伝子産物、または生物学的薬剤、ならびに非生物学的薬剤（例えば、イメージング剤）のうちの少なくとも１つをカプセル化することができ、それらは、直ちに使用してもよく、またはキットとして凍結して包装してもよい。

ヒトおよび／または動物におけるナノ粒子およびリポソーム組成物の使用中のもう１つの懸念は、この組成物が、細網内皮系（ＲＥＳ）などの自然な身体防御によって認識されて除去される可能性があり、このことがそれらの効果的な循環時間および治療上の有用性を制限することである。ナノ粒子およびリポソーム組成物の大きさを最適にすること、または、自然な生物学的除去プロセスからそれらを保護もしくは「隠蔽」するために組成物膜に特定の成分を添加して「ステルス」組成物を作製することによるなど、いくつかの方法が調べられている。貯蔵中に、ナノ粒子およびリポソームは、大きさが増大する傾向を有し、このことは、膜の完全性および安定性の喪失をもたらす。ナノ粒子およびリポソームの所望する大きさおよび均一性を維持するための方法を開発することは、このような「ステルス」特性を作り出すために別個の構成要素を特別に添加することに対する代替として、対象における効果的な循環時間を増加させかつ維持するのを助けることができる。この理由のため、凍結、冷蔵、脱水または凍結乾燥中のナノ粒子またはリポソームの大きさを保護することは、それらの完全性および性能にとって極めて重要であり得る。したがって、ナノ粒子またはリポソームの安定性を高める処方物は、貯蔵中の粒子の大きさを一定に保ち、その治療有効性を維持することができる。

典型的な実施形態では、両親媒性物質、界面活性剤、および有効量の親水性ポリマー（または親水性ポリマーを含むように修飾された両親媒性物質）を合わせ、既知の方法を使用してナノ粒子を形成する。例えば、両親媒性物質、界面活性剤および親水性ポリマー（または、親水性ポリマーを含むように修飾された両親媒性物質）を有機溶媒中で合わせ、溶媒を除去し、続いて、水性溶液を添加できる。次いで、例えば、ｐＨ勾配の使用などの公知技術を使用して、活性のある薬剤をナノ粒子の内部空間内に充填できる。ナノ粒子は、例えば、適切なポリカーボネート製フィルターを通した押出しなどの公知技術を使用して大きさにより分別することができる。大きさによる分別は、活性のある薬剤をナノ粒子に封入する前または後に実施できる。ナノ粒子の最終的な大きさは、約１０００ｎｍ未満、または約１０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約２５ｎｍ〜約５００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約２００ｎｍ、または約８０ｎｍ〜約１２５ｎｍであり得る。親水性ポリマーの有効量は、ナノ粒子を調製すること、所望の温度で凍結すること、適切な時間貯蔵すること、処方物を解凍すること、および安定性を示すナノ粒子特性を測定することによって決定され得る。測定される特性は、例えば、粒子径であってもよく、または活性のある薬剤の漏洩であってもよい。次いで、最初の調製物中での親水性ポリマーの量を変えて、所望の安定度を達成できる。

ナノ粒子を調製した後、処方物を、固体状態で、例えば約−２０℃以下、約−７８℃以下、または約−１９６℃以下で凍結および貯蔵できる。典型的な実施形態では、ナノ粒子を、解凍による物理的特性の有意な変化なしに、凍結状態で約３日間以上貯蔵できる。その他の実施形態では、ナノ粒子処方物を、約７日間以上、約１カ月以上、約３カ月以上もしくは約２４カ月、またはさらにより長期間貯蔵できる。処方物は、バルク溶液として貯蔵することができ、あるいは、凍結に先立って、配送のための単位用量に分割できる。貯蔵に加え、凍結したナノ粒子処方物を、それが使用される場所に輸送することができる。例えば、処方物を、生産施設で調製し、単位用量に分割し、凍結し、それが使用される場所に輸送することができる。このことは、既存の処方物および配送方法に優る利点を提供する。伝統的方法を使用すると、安定性の喪失を防ぐため、ナノ粒子処方物はしばしば、輸送のために成分要素部分に分けられる。例えば、リポソーム処方物は、しばしば、リポソームを１つの容器で、活性のある薬剤の溶液を別の容器でという複数のバイアルで輸送される。使用に先立って、２つの別々の容器を、投与の前に活性のある薬剤の充填量を確実にするような手法で合わせなければならない。この最終溶液を調製する際の誤りは、有効性の不足をもたらし得る。本発明を使用すると、この合わせる工程が排除される。したがって、使用現場で、処方物を解凍し、直接に使用または投与できる。このことは、組成物の使用を容易にし、有効な投与のために組成物を正確に調製することを確実にする。

したがって、本発明は、ナノ粒子またはリポソーム処方物を貯蔵、輸送、および投与するための方法を提供する。本発明により貯蔵および／または輸送される処方物は、個々の処方物にとって有用である任意の方法で投与され得る。投与方法としては、経口投与、直腸投与、腹膜投与、静脈内投与、および口内投与が挙げられるが、活性のある薬剤およびその活性部位に応じて任意の望ましい投与経路を利用できる。処方物は、単独で、すなわち製造されたままで、または使用に先立ってその他の治療薬剤またはビヒクルと合わせて投与できる。ビヒクルは、水溶液、懸濁液、エマルジョン、固体ビヒクル、分散剤など、その他の固体または液体の賦形剤を含むことができる。最終的適用は、それが調製後、すなわち貯蔵および輸送の前に直接利用されたであろうナノ粒子処方物を使用することと一貫している。

本発明のこれらおよびその他の特徴および利点は、以下の代表的実施例によりさらに理解されるであろうが、実施例は、本発明の範囲を限定することを意味しない。

（代表実施例１）
ジパルミトイル−ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、１−ステアロイル−２−リゾ−ホスファチジルコリン（ＭＳＰＣ）およびＮ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００）を９０：１０：４のモル比でジクロロメタンに溶解した。次いで、有機溶媒をロータリーエバポレーションで除去した。次いで、混合物をｐＨ４の３００ｍＭクエン酸緩衝液を使用して水和し、約１００ｍｇ／ｍＬの最終脂質濃度を得た。次いで、形成された懸濁液を２つのポリカーボネート製メンブランフィルターを通して押し出した（Ｈｏｐｅ，Ｍ．Ｊ．ら、「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｌａｒｇｅｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒｖｅｓｉｃｌｅｓｂｙａｒａｐｉｄｅｘｔｒｕｓｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅ．ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｉｚｅ，ｔｒａｐｐｅｄｖｏｌｕｍｅａｎｄａｂｉｌｉｔｙｔｏｍａｉｎｔａｉｎａｍｅｍｂｒａｎｅｐｏｔｅｎｔｉａｌ」、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．、８１２巻、５５〜６５頁、１９８５年）。この実施例における最終リポソーム処方物の初期平均粒子径は、９８〜１２２ｎｍであった（一般に、本発明のリポソームの粒子径は、押出し方法に応じて５０〜５００ｎｍである）。リポソームを炭酸ナトリウム溶液および薬物ドキソルビシンと混合することによってこの薬物をリポソーム内に充填した。簡潔には、１．６ｍＬのドキソルビシン溶液（５．８ｍｇ／ｍＬ）および１．２ｍＬの０．０５ｍＭ炭酸ナトリウムを１．９ｍＬのリポソーム混合物に添加し、３５℃で６０分間平衡化させた。次いで、薬物を充填したリポソーム、および空のリポソームを−２０℃で貯蔵した。粒子径の変化を監視した。ｍＰＥＧを添加せずに、同一のプロセスでリポソーム組成物を作製した。表１は、ｍＰＥＧを添加すると、リポソームの粒子径は、凍結および解凍の後に同一のままであること、ならびにリポソームの完全性および安定性の標準的なアッセイによって測定したところ、このリポソームは２４カ月まで安定であることを示している。対照的に、親水性ポリマーｍＰＥＧを欠くリポソームは、凍結および解凍後に安定でない。このような不安定性の証拠は、凍結後に粒子径が増大することである。図１は、凍結／解凍後のリポソーム調製物を示す。凍結／解凍の前後で外観および粒子径に有意差はない。

（代表実施例２）
もう１つのドキソルビシン含有リポソーム調製物を実施例１と同様にして調製した。

サンプルを−２０℃で１週間、１カ月および３カ月凍結した。各時点で、ドキソルビシン含有量、１．２μｍでの回収％、カプセル化％、脂質濃度、ｐＨおよび小胞の大きさを決定した。開始時点（ｔ＝０）で、３つのサンプルを凍結有りおよび無しで試験し、リポソーム処方物に対する凍結の影響を判定した。さらに、１つのサンプルを３回の凍結解凍サイクルに曝し、複数回の凍結解凍サイクルが有害であるかどうかを判定した。

以下の表からわかるように、ｔ＝０で、リポソーム処方物は、周囲の条件または凍結条件において類似の特性を有した。３回の凍結解凍サイクルでさえも、膜の完全性に影響を与えなかった。処方物は、−２０℃で３カ月を超える貯蔵期間にわたって安定であった。小胞径、ドキソルビシン含有量、カプセル化または脂質含有量の有意の変化は、この時間枠にわたって観察されなかった。サンプルの測定された外部ｐＨは、異なる時点でわずかに変化したが、炭酸塩緩衝液中で調製されたリポソームのｐＨ測定値は、バイアルからＣＯ_２ガスが逃げるにつれて時間と共に変化することが観察された。しかし、表２に示すように、ｐＨの変化は、３カ月目のｐＨデータが１週目のｐＨデータと類似しているので、膜の安定性に影響を及ぼさない。

本明細書中で例示および考察した実施形態は、本発明者らが知っている本発明を考案、使用するための最良の方法を当業者に単に教示することを意味する。本明細書中の何物も、本発明の範囲を限定するものと考えるべきではない。提供したすべての例は、代表的なものであり、限定するものではない。本発明の前記実施形態は、上記教示に照らして当業者が認識するように、本発明から逸脱しないで、修正または変更され得る。したがって、特許請求の範囲およびそれらの均等物の範囲内で、具体的に説明されたものとは別な方法で本発明を実施できることを理解されたい。

図１は、本発明による凍結および解凍後のリポソーム調製物を示す。

Claims

少なくとも１種の両親媒性物質、少なくとも１種の界面活性剤、および少なくとも１種の親水性ポリマーを有するナノ粒子処方物の貯蔵方法であって、該方法は、該処方物を凍結する工程および少なくとも３日間の期間にわたって貯蔵する工程を含む、方法。
凍結したリポソーム処方物を輸送する工程および該処方物を別の場所で解凍する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
前記ナノ粒子がリポソームである、請求項１に記載の方法。
前記両親媒性物質が、少なくとも１種のリン脂質を含む、請求項３に記載の方法。
ａ．前記少なくとも１種のリン脂質が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリン、およびこれらの混合物から選択され、
ｂ．前記少なくとも１種の界面活性剤が、二鎖リン脂質、リゾ脂質、胆汁酸、ミリストイル界面活性剤、パルミトイル界面活性剤、ステアロイル界面活性剤、モノオレイン酸グリセリル、セラミド、ＰＥＧ−セラミド、Ｃ１８−エーテル結合リゾホスファチジルコリン、ポリエチレングリコール−ポリエチレンコポリマー、ブロックコポリマー、脂肪酸、およびこれらの混合物から選択され、
ｃ．前記少なくとも１種の親水性ポリマーが、ポリエチレングリコール、ポリアクリロイルモルホリン、ポリ−２−エチル−２−オキサゾリン、ポリビニルピロリドン、メトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、およびこれらの混合物から選択される、請求項４に記載の方法。
前記親水性ポリマーが、加水分解性結合を介して前記リン脂質に結合されている、請求項５に記載の方法。
少なくとも１種のリン脂質、少なくとも１種の界面活性剤、および少なくとも１種の親水性ポリマーを有するリポソーム処方物の貯蔵方法であって、該リン脂質が、少なくとも１種のホスファチジルコリンであり、該界面活性剤が、少なくとも１種のリゾ脂質であり、かつ該親水性ポリマーが、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−５０００、およびこれらの混合物から選択され、該方法は、前記処方物を凍結する工程、および少なくとも３日間貯蔵する工程を含む、方法。
前記凍結されたリポソーム処方物を輸送する工程および該処方物を別の場所で解凍する工程をさらに含む、請求項７に記載の方法。
前記リン脂質が、少なくとも１種のホスファチジルコリンであり、前記界面活性剤が、モノパルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、モノラウリルホスファチジルコリン（ＭＬＰＣ）、モノミリストイルホスファチジルコリン（ＭＭＰＣ）、モノステアロイルホスファチジルコリン（ＭＳＰＣ）、およびこれらの混合物から選択される少なくとも１種であり、かつ前記親水性ポリマーが、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００またはＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−５０００、およびこれらの混合物から選択される、請求項７に記載の方法。
前記リン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）であり、前記界面活性剤が、モノパルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）であり、かつ前記親水性ポリマーが、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−５０００、およびこれらの混合物から選択される、請求項９に記載の方法。
前記リン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）であり、前記界面活性剤が、モノステアロイルホスファチジルコリン（ＭＳＰＣ）であり、かつ前記親水性ポリマーが、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−５０００、およびこれらの混合物から選択される、請求項９に記載の方法。
ＤＰＰＣ：ＭＰＰＣ：ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧのモル比が、約９０：１０：４である、請求項１０に記載の方法。
ＤＰＰＣ：ＭＳＰＣ：ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧのモル比が、約９０：１０：４である、請求項１１に記載の方法。
前記ナノ粒子処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項１に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項１４に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項１５に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項１６に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項３に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項１８に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項１９に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項２０に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項４に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項２２に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項２３に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項２４に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項５に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項２６に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項２７に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項２８に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項６に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項３０に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項３１に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項３２に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項７に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項３４に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項３５に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項３６に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項９に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項３８に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項３９に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項４０に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項４２に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項４３に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項４４に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項４６に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項４７に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項４８に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項５０に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項５１に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項５２に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、麻酔薬、抗ヒスタミン薬、抗新生物薬、抗潰瘍薬、抗発作薬、筋弛緩薬、免疫抑制薬、抗感染薬、非ステロイド性抗炎症薬、イメージング剤、栄養剤、およびこれらの混合物から選択される、請求項５４に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、少なくとも１種の抗新生物薬である、請求項５５に記載の方法。
前記活性のある薬剤が、ドキソルビシンである、請求項５６に記載の方法。
前記親水性ポリマーが、非加水分解性結合を介して前記リン脂質に結合されている、請求項３に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬学上活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項５８に記載の方法。
前記凍結する工程が、凍結乾燥プロセスの一部である、請求項１に記載の方法。
前記ナノ粒子処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項６０に記載の方法。
前記凍結する工程が、凍結乾燥プロセスの一部である、請求項３に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項６２に記載の方法。
前記凍結する工程が、凍結乾燥プロセスの一部である、請求項４に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項６４に記載の方法。
前記凍結する工程が、凍結乾燥プロセスの一部である、請求項５に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項６６に記載の方法。
前記凍結する工程が、凍結乾燥プロセスの一部である、請求項７に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項６８に記載の方法。
前記凍結する工程が、凍結乾燥プロセスの一部である、請求項９に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項７０に記載の方法。
前記凍結する工程が、凍結乾燥プロセスの一部である、請求項１０に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項７２に記載の方法。
前記凍結する工程が、凍結乾燥プロセスの一部である、請求項１１に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項７４に記載の方法。
前記凍結する工程が、凍結乾燥プロセスの一部である、請求項１２に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項７６に記載の方法。
前記凍結する工程が、凍結乾燥プロセスの一部である、請求項１３に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項７８に記載の方法。
前記少なくとも１種の両親媒性物質、少なくとも１種の界面活性剤、および少なくとも１種の親水性ポリマーを有するナノ粒子処方物の貯蔵方法であって、該方法は、前記処方物を脱水する工程、および少なくとも３日間の期間にわたって貯蔵する工程を含む、貯蔵方法。
前記脱水されたリポソーム処方物を輸送する工程、および該処方物を別の場所で再水和する工程をさらに含む、請求項８０に記載の方法。
前記ナノ粒子がリポソームである、請求項８０に記載の方法。
前記両親媒性物質が、少なくとも１種のリン脂質を含む、請求項８２に記載の方法。
ａ．前記少なくとも１種のリン脂質が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリン、およびこれらの混合物から選択され、
ｂ．前記少なくとも１種の界面活性剤が、二鎖リン脂質、リゾ脂質、胆汁酸、ミリストイル界面活性剤、パルミトイル界面活性剤、ステアロイル界面活性剤、モノオレイン酸グリセリル、セラミド、ＰＥＧ−セラミド、Ｃ１８−エーテル結合リゾホスファチジルコリン、ポリエチレングリコール−ポリエチレンコポリマー、ブロックコポリマー、脂肪酸、およびこれらの混合物から選択され、
ｃ．前記少なくとも１種の親水性ポリマーが、ポリエチレングリコール、ポリアクリロイルモルホリン、ポリ−２−エチル−２−オキサゾリン、ポリビニルピロリドン、メトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、およびこれらの混合物から選択される、請求項８３に記載の方法。
前記親水性ポリマーが、加水分解性結合を介して前記リン脂質に結合されている、請求項８４に記載の方法。
少なくとも１種のリン脂質、少なくとも１種の界面活性剤、および少なくとも１種の親水性ポリマーを有するリポソーム処方物の貯蔵方法であって、該リン脂質が、少なくとも１種のホスファチジルコリンであり、該界面活性剤が、少なくとも１種のリゾ脂質であり、かつ該親水性ポリマーが、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−５０００、およびこれらの混合物から選択され、該方法は、前記処方物を脱水する工程、および少なくとも３日間貯蔵する工程を含む、方法。
前記リポソーム処方物を輸送する工程、および該処方物を別の場所で水和する工程をさらに含む、請求項８６に記載の方法。
前記リン脂質が、少なくとも１種のホスファチジルコリンであり、前記界面活性剤が、モノパルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、モノラウリルホスファチジルコリン（ＭＬＰＣ）、モノミリストイルホスファチジルコリン（ＭＭＰＣ）、モノステアロイルホスファチジルコリン（ＭＳＰＣ）、およびこれらの混合物から選択される少なくとも１種であり、かつ前記親水性ポリマーが、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００またはＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−５０００、およびこれらの混合物から選択される、請求項８７に記載の方法。
前記リン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）であり、前記界面活性剤が、モノパルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）であり、かつ前記親水性ポリマーが、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−５０００、およびこれらの混合物から選択される、請求項８８に記載の方法。
前記リン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）であり、前記界面活性剤が、モノステアロイルホスファチジルコリン（ＭＳＰＣ）であり、かつ前記親水性ポリマーが、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００、ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−５０００、およびこれらの混合物から選択される、請求項８８に記載の方法。
ＤＰＰＣ：ＭＰＰＣ：ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧのモル比が、約９０：１０：４である、請求項８９に記載の方法。
ＤＰＰＣ：ＭＳＰＣ：ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧのモル比が、約９０：１０：４である、請求項９０に記載の方法。
前記ナノ粒子処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項８０に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項８２に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項８３に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項８４に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項８６に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項８８に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項８９に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項９０に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項９１に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項９２に記載の方法。
前記親水性ポリマーが、非加水分解性結合を介して前記リン脂質に結合されている、請求項６２に記載の方法。
前記リポソーム処方物が、薬理学的に活性のある薬剤、フレーバー剤、診断薬、栄養剤、遺伝子産物、およびこれらの混合物から選択される活性のある薬剤をさらに含む、請求項１０３に記載の方法。