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JP2007016035A - プレニルトランスフェラーゼの阻害剤 - Google Patents

プレニルトランスフェラーゼの阻害剤 Download PDF

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Abstract

【課題】
プレニルトランスフェラーゼ、特にファルネシルトランスフェラーゼ及びゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩの阻害剤および抗癌薬として有用な化合物、これらの化合物の製造方法、これらの化合物を含有する薬剤組成物、及び使用方法を提供する。
【解決手段】
システイニル部分、アミノ安息香酸またはアミノナフトエ酸部分およびメチオニンなどアミノ酸の３部分より構成される新規なペプチド模倣体化合物、この化合物を含有する組成物および使用方法。
【選択図】なし

Description

本発明は、タンパク質イソプレニルトランスフェラーゼ（特に、タンパク質ファルネシルトランスフェラーゼ及びゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ）の阻害剤として及び抗癌薬として有用である、新規なペプチド模倣体及びその他の化合物、このような化合物を含有する組成物、並びに使用方法に関する。
Ｒａｓタンパク質は、細胞外シグナルからの生物学的情報を核へ形質導入するリレースイッチ(relay switch)として機能する形質膜結合ＧＴＰアーゼである（２９−３１）。正常な細胞では、Ｒａｓタンパク質がＧＤＰ−（不活性）結合形とＧＴＰ−（活性）結合形との間を循環して増殖と分化とを調節する。例えば上皮増殖因子及び血小板由来増殖因子（ＥＧＦ及びＰＤＧＦ）のような細胞外シグナルがそれらの生物学的情報をＲａｓタンパク質を介して核に形質導入する機構が、最近解明されている。チロシンキナーゼ受容体への増殖因子の結合は種々なチロシンの自動リン酸化を生じ、これらのチロシンは次に幾つかのシグナリングタンパク質(signaling protein）のｓｒｃ−ホモロジー２（ＳＨ２）ドメインに結合する。これらの１つである、ＧＲＢ−２とｒａｓ交換体との細胞質ゾル複合体（ｍ−ＳＯＳ−１）はチロシンリン酸化受容体によって補充されて(recruited）、ｍＳＯＳ−１はＲａｓ上でＧＤＰとＧＴＰとの交換を触媒して、これを活性化する。ＧＴＰ結合ＲａｓはＲａｆ、セリン／トレオニンキナーゼを形質膜にリクルートして、形質膜においてこれは活性化される。Ｒａｆはマイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）をリン酸化することによってキナーゼカスケード(kinase cascade)、キナーゼ／細胞外調節タンパク質キナーゼ（ＥＲＫ）キナーゼ（ＭＥＫ）を誘発し、次にはこれがトレオニン及びチロシン残基上のＭＡＰキナーゼをリン酸化する。活性化ＭＡＰキナーゼは核に転位し、核で転写因子をリン酸化する（３１）。この増殖シグナルの停止はＲａｓ−ＧＴＰからＲａｓ−ＧＤＰへの加水分解によって達成される。
Ｒａｓ癌遺伝子はヒト腫瘍において最も頻繁に同定される活性化癌遺伝子である（１−３）。多数のヒト癌においては、アミノ酸１２、１３又は６１における突然変異のためにＲａｓがＧＴＰ固定され、上記Ｒａｓ経路はもはや上流の増殖シグナルを必要とせず、中断されないことになる。その結果、この経路における酵素、例えばＲａｆ、ＭＥＫ及びＭＡＰキナーゼは本質的に(constitutively)活性化される。
癌遺伝子のＲａｓは、ＧＴＰを加水分解することができないことの他に、悪性トランスフォーメーションを惹起するためには形質膜結合しなければならない（１３）。Ｒａｓは形質膜とのその結合を仲介する脂質基、ファルネシルによって翻訳後修飾される（１０−１４）。
ｐ２１ｒａｓの膜結合をもたらす翻訳後イベントは既に開示されている（１０−１４）。ｐ２１ｒａｓタンパク質は細胞質ゾル中で最初にｐｒｏ−ｐ２１ｒａｓとして形成され、細胞質ゾル中でそれらのカルボキシル末端配列
ＣＡ１Ａ２Ｘ
（Ｃ＝システイン、Ａ１及びＡ２＝イソロイシン、ロイシン又はバリン、Ｘ＝メチオニン又はセリン）
のシステイン１８６上でコレステロール生合成の中間体ファルネシルピロホスフェート（ＦＰＰ）によって修飾される。このファルネシル化反応に続いて、Ａ１Ａ２Ｘトリペプチドのペプチダーゼ除去と残留システインのカルボキシルメチル化とが生ずる。処理されたｐ２１ｒａｓタンパク質は形質膜の内面に結合する（１０−１４）。
ｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼ、即ち、ＦＰＰからｐ２１ｒａｓのＣＡ１Ａ２Ｘカルボキシル末端のシステインへのファルネシル、１５−炭素イソプレノイドの転移を触媒する責任のある酵素はラット脳から均質になるまで精製されている（１５、１６）。この酵素はそれぞれ分子量４９と４６のαサブユニットとβサブユニットとから構成されるヘテロダイマーである（１７）。βサブユニットはｐ２１ｒａｓに結合することが判明している（１７）。ｐ２１ｒａｓファルネシル化とその後の膜結合とがｐ２１ｒａｓトランスフォーミング活性のために必要であるので、ｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼが有用な抗癌療法標的であることが提案されている。したがって、この酵素の阻害剤に関する熱心な研究が行われている（１８−２４、３３−４４）。可能な阻害剤候補はＣＡ１Ａ２Ｘテトラペプチダーゼであり、これはｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼによってファルネシル化されることが判明しており、インビトロにおいてこの酵素の強力な阻害剤であるように思われる（１５、１８、２１−２４）。最大の阻害活性を有するＣＡ１Ａ２ＸペプチドはＡ１とＡ２とが疎水性ペプチドであるようなＣＡ１Ａ２Ｘペプチドであり、中央位置における荷電した残基又は親水性残基は殆ど阻害活性を示さないことを、競合試験が実証している（１８、２１、２３）。治療剤としてのペプチドの使用に関連した主要な欠点は、それらの低い細胞への取り込みとプロテアーゼによるそれらの迅速な失活である。
ファルネシルトランスフェラーゼとその活性の阻害とに関する研究成果は下記特許又は公開された特許出願によってさらに説明される：
Ｕ．Ｓ． ５，１４１，８５１
ＷＯ ９１／１６３４０
ＷＯ ９２／１８４６５
ＥＰＡ ０４５６１８０ Ａ１
ＥＰＡ ０４６１８６９ Ａ２
ＥＰＡ ０５１２８６５ Ａ２
ＥＰＡ ０５２０８２３ Ａ２
ＥＰＡ ０５２３８７３ Ａ１。
上記開示のうち、ＥＰＡ０５２０８２３Ａ２はファルネシルタンパク質トランスフェラーゼと癌遺伝子タンパク質ｒａｓのファルネシル化との阻害に有用である化合物を開示する。ＥＰＡ０５２０８２３Ａ２の化合物は式：
Ｃｙｓ−Ｘａａ１−ｄＸａａ２−Ｘａａ３
によって示される化合物又はその製薬的に受容される塩であり、上記式においてＣｙｓはシステインアミノ酸であり；Ｘａａ１は天然Ｌ−異性体形のアミノ酸であり；ｄＸａａ２は非天然Ｄ−異性体形のアミノ酸であり；Ｘａａ３は天然Ｌ−異性体形のアミノ酸である。
好ましい化合物はＣＶ（Ｄｌ）Ｓ及びＣＶ（Ｄｆ）Ｍであると言われ、アミノ酸は下記のように慣用的な３文字略号と単一文字略号とによって同定される：
システイン Ｃｙｓ Ｃ
グリシン Ｇｌｙ Ｇ
イソロイシン Ｉｌｅ Ｉ
ロイシン Ｌｅｕ Ｌ
リシン Ｌｙｓ Ｋ
メチオニン Ｍｅｔ Ｍ
フェニルアラニン Ｐｈｅ Ｆ
セリン Ｓｅｒ Ｓ
トレオニン Ｔｈｒ Ｔ
バリン Ｖａｌ Ｖ
ＥＰＡ０５２３８７３Ａ１は、Ｘａａ３がフェニルアラニン又はｐ−フルオロフェニルアラニンであるＥＰＡ０５２０８２３Ａ２の化合物の修飾を開示する。
ＥＰＡ０４６１８６９は式：
Ｃｙｓ−Ａａａ１−Ａａａ２−Ｘａａ
［式中、Ａａａ１とＡａａ２は脂肪族アミノ酸であり、Ｘａａはアミノ酸である］で示される、Ｒａｓタンパク質のファルネシル化を阻害する化合物を述べている。開示される脂肪族アミノ酸はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅである。好ましい化合物はＡａａ１がＶａｌであり、Ａａａ２がＬｅｕ、Ｉｌｅ又はＶａｌであり、ＸａａがＳｅｒ又はＭｅｔであるような化合物である。好ましい特定の化合物を次に挙げる：
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｍｅｔ
米国特許第５，１４１，８５１号とＷＯ９１／１６３４０とは精製されたファルネシルタンパク質トランスフェラーゼとそれに対するある種のペプチド阻害剤、例えば、ＣＶＩＭ、ＴＫＣＶＩＭ及びＫＫＳＫＴＫＣＶＩＭとを開示している。
ＷＯ９２／１８４６５は、ｒａｓタンパク質を包含するタンパク質の酵素メチル化を阻害するある種のファルネシル化合物を開示する。
ＥＰＡ０４５６１８０Ａ１は、ｒａｓ癌遺伝子産物のファルネシル化を阻止する物質を同定するために用いることができるファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ分析に関し、ＥＰＡ０５１２８６５Ａ２は、コレステロールを低下させ、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼを阻害するために有用であるある種の環状化合物を開示する。
上記から明らかであるように、ファルネシルトランスフェラーゼの阻害剤の開発に関する非常に多くの研究成果が存在する。しかし、この極めて重要な分野における改良の必要性がまだ依然として存在する。
ファルネシルトランスフェラーゼに密接に関連した酵素、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ（ＧＧＴアーゼＩ）は、脂質ゲラニルゲラニルをＸがロイシンであるタンパク質のＣＡＡＸボックスのシステインに結合させる（４９、６９）。ＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩとはαサブユニットを共有するα／βヘテロダイマーである（６１、６２）。架橋実験は、両方の基質（ＦＰＰとＲａｓ ＣＡＡＸ）がＦＴアーゼのβサブユニットと相互作用することを示唆した（１７、６３）。ＧＧＴアーゼはＸ位置におけるロイシンを好むが、その基質特異性はＦＴアーゼの基質特異性とオーバーラップすることがインビトロにおいて示された（６４）。さらに、ＧＧＴアーゼＩはファルネシルをロイシン末端ペプチドに転移させることもできる（６５）。
ＣＡＡＸペプチドはＦＴアーゼの強力な競合阻害剤であるが、迅速な分解と低い細胞取り込みとがそれらの治療剤としての用途を限定している。ＦＴアーゼとＧＧＴアーゼとを阻害するための優れた化合物を開発する本発明の方策は、ＣＡＡＸモチーフにおける幾つかのアミノ酸をペプチド模倣体によって置換することであった。この方策の基本原理は、Ｒａｓ分子のカルボキシル末端ＣＡＡＸの疎水性“ＡＡ”ジペプチドと相互作用する酵素活性部位における疎水性ポケットの存在に基づく。これに関して、我々はＦＴアーゼの２種類の非常に強力な阻害剤（即ち、Ｃｙｓ−３ＡＭＢＡ−ＭｅｔとＣｙｓ−４ＡＢＡ−Ｍｅｔ）を先行米国特許出願に開示している。ペプチド模倣体Ｃｙｓ−４ＡＢＡ−Ｍｅｔは疎水性／芳香族スペーサー（即ち、４−アミノ安息香酸）をＣｙｓとＭｅｔとの間に挿入する。本出願は４−アミノ安息香酸の位置２と３が幾つかのアルキル基及び／又は芳香族基によって修飾された、Ｃｙｓ−４ＡＢＡ−Ｍｅｔの幾つかの誘導体、即ち、Ｒａｓ依存性シグナリングに選択的に拮抗し、異常なＲａｓ機能を有するヒト腫瘍の増殖を選択的に阻害することができる非常に有望な可能性を示す化合物を開示する。
哺乳動物細胞によって発現される４種類のＲａｓタンパク質（Ｈ−、Ｎ−、Ｋ４Ａ−及びＫ４Ｂ−Ｒａｓ）のうちで、Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ（Ｋ−Ｒａｓ４Ｂとも呼ばれる）はヒト癌におけるＲａｓの最も頻繁に見られる突然変異形である（１、３）。幾つかの研究室が癌遺伝子Ｈ−Ｒａｓプロセシングとシグナリングとの強力な阻害を実証しているが（４３、４４）、この分断(disruption)はＫ−Ｒａｓ４Ｂによっては示されていない。以前の研究は阻害剤の開発のための標的としてＨ−Ｒａｓを目標としており、Ｋ−Ｒａｓ４Ｂを目標としていない。最近の１つの報告は、Ｋ−Ｒａｓ４Ｂがインビトロにおいてゲラニルゲラニル化されることができるが、比較的低い効率によってであり；ＧＧＴアーゼＩへのそのＫｍはＦＴアーゼに対するそのＫｍの７倍であることを示している（６７）。ゲラニルゲラニル化プロセシングを阻止することができるＧＧＴアーゼＩＣＡＡＸに基づく阻害剤は報告されていない。
最近、ＦＴアーゼの強力な阻害剤がＫ−Ｒａｓ４Ｂプロセシングを分断するが、これはゲラニルゲラニル化タンパク質のプロセシングをも阻害するような非常に高い濃度においてのみであることを、我々は実証している（６６）。このことは、Ｋ−Ｒａｓ４Ｂがゲラニルゲラニル化されることができ、それ故、ＧＧＴアーゼＩを標的とする阻害剤は癌遺伝子Ｋ−Ｒａｓ４Ｂのプロセシング及びシグナリングの分断と、この形態のＲａｓに関連した癌の治療とに有効であることを示唆している。
Ｕ．Ｓ． ５，１４１，８５１ ＷＯ ９１／１６３４０ ＷＯ ９２／１８４６５ ＥＰＡ ０４５６１８０ Ａ１ ＥＰＡ ０４６１８６９ Ａ２ ＥＰＡ ０５１２８６５ Ａ２ ＥＰＡ ０５２０８２３ Ａ２ ＥＰＡ ０５２３８７３ Ａ１
発明の概要
本発明によると、式（Ａ−Ｌ）：
Figure 2007016035
｛式中、Ｒ１'は下記を表す：
（ｉ）水素；
（ii）低級アルキル；
（iii)アルケニル；
（iv）アルコキシ；
（ｖ）チオアルコキシ；
（vi）ハロ；
（vii)ハロアルキル；
（viii）アリール−Ｌ２−［式中、Ｌ２は存在しないか又は−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｑ（式中、ｑは０、１若しくは２である）、−Ｎ（Ｒ’）−（式中、Ｒ’は水素若しくは低級アルキルである）、又は−Ｃ（Ｏ）−であり、アリールはフェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル及びインデニルからなる群から選択され、アリールは非置換であるか又は置換されている］；又は
（ix）複素環−Ｌ３−［式中、Ｌ３は存在しないか又は−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｑ（式中、ｑは０、１若しくは２である）、−Ｎ（Ｒ’）−（式中、Ｒ’は水素若しくは低級アルキルである）、又は−Ｃ（Ｏ）−であり、複素環は単環状複素環（式中、複素環は非置換であるか若しくは低級アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ハロ、ニトロ、オキソ（＝Ｏ）、アミノ、Ｎ−保護アミノ、アルコキシ、チオアルコキシ及びハロアルキルから成る群から独立的に選択される１、２若しくは３個の置換基によって置換されている）である］；
Ｒ１ａは水素又は低級アルキルであり；
Ｒ２'は下記を表す：
（ｉ）
Figure 2007016035
［式中、Ｒ１２ａは水素、低級アルキル又は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒ１３（式中、Ｒ１３は水素若しくはカルボキシ保護基である）であり、Ｒ１２ｂは水素又は低級アルキルである、但し、Ｒ１２ａとＲ１２ｂが両方とも水素であることはない］；
（ii）−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１４）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５［式中、Ｒ１４は、
（ａ）低級アルキル、
（ｂ）シクロアルキル、
（ｃ）シクロアルキルアルキル、
（ｄ）アルコキシアルキル、
（ｅ）チオアルコキシアルキル、
（ｆ）ヒドロキシアルキル、
（ｇ）アミノアルキル、
（ｈ）カルボキシアルキル、
（ｉ）アルコキシカルボニルアルキル、
（ｊ）アリールアルキル、又は
（ｋ）アルキルスルホニルアルキルであり、
Ｒ１５は水素、又はカルボキシ保護基である］；又は
（iii)
Figure 2007016035
Ｒ３'は
Figure 2007016035
［式中、ＡはＯ又は２Ｈを表し、
Ｒ０はＳＨ、ＮＨ２又はＣｘＨｙ−ＳＯ２−ＮＨ−（式中、ＣｘＨｙは直鎖の飽和若しくは不飽和炭化水素であり、ｘは１〜２０であり、ｙは３〜４１（４１を包含する）である］であり；
Ｌ１は−ＮＨ−である｝
で示される化合物又はその製薬的に受容される塩若しくはプロドラッグが提供される。
本発明の重要な実施態様は、式（Ｉ）：
ＣβＸ （Ｉ）
［式中、Ｃはシステインラジカル又はシステインラジカルの還元形（Ｒ−２−アミノ−３−メルカプトプロピルアミン）であり；βは非ペプチドアミノアルキル−若しくはアミノ−置換フェニルカルボン酸であり；Ｘはアミノ酸のラジカル、好ましくはＭｅｔである］で示される新規なペプチド模倣体群がヒト腫瘍ｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼに対して高い阻害効力を有し、ヒト癌腫の腫瘍増殖を阻害するという研究結果に基づく。任意の他の天然又は合成アミノ酸もこの位置に用いることができる。本発明はまた、式（Ｉ）の製薬的に受容される塩及びプロドラッグをも包含する。
これに関して特に好ましい化合物は、
Figure 2007016035
である。この化合物において、システインラジカルは還元形であり、スペーサー基は２−フェニル−４−アミノ安息香酸である。
本発明の他の好ましい化合物は、
Figure 2007016035
である。
式（Ｉ）化合物は、それらが式ＣＡ１Ａ２Ｘによって示される先行技術の阻害剤におけるような別々のペプチドアミノ酸Ａ１、Ａ２を包含しない点で、先行技術のファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤とは異なる。従って、本発明の化合物はペプチド性アミド結合を含まない。
本発明の化合物は酵素によってファルネシル化されないことも認識すべきである。それ故、本発明の化合物は実際の阻害剤であり、単なる代替え基質ではない。このことは本発明の化合物が、ファルネシル化されるそれらの親化合物に比べて高い阻害作用を有することを説明することができる。
本発明のさらに重要な特徴は、プロドラッグ形状の式（Ｉ）化合物の調製である。大ざっぱに言うと、これは、本発明の化合物の形質膜透過性と細胞取り込みとを高め、その結果、腫瘍細胞増殖（growth）の阻害における化合物の効率を増強するために役立つ疎水性の酵素感受性部分によって、本発明の化合物の末端基（アミノ、システイン硫黄及びカルボキシ基）を官能性化することによって達成される。さらに、アミノ及びシステイン硫黄基に関するプロドラッグは低級アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリールアルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、シクロアルキルカルボニル、シクロアルコキシカルボニル、及び当業者に周知の他の基を包含することができる。
これに関して、本発明の特に好ましい化合物は、図１Ａによって説明されるＦＴＩ−２７６のメチルエステル形である。本発明の上記プロドラッグ態様は、本発明の化合物にのみではなく、先行技術のペプチド阻害剤ＣＡ１Ａ２Ｘ並びに以下に記載するような化合物の総合的効果を改良するために生物学的に使用される可能性を有する他のペプチドにも適用可能である。
他の変更態様は、以下に述べるように、アルキルホスホネート置換基によってシステインＣのスルフヒドリル基を官能性化することによって修飾されたＣＡ１Ａ２Ｘテトラペプチド又はＣβＸペプチド模倣体の調製を含む。
本発明の他の重要な実施態様は、ＣＡ１Ａ２Ｘテトラペプチド阻害剤のＡ１Ａ２Ｘ部分を非アミノ酸成分によって置換し、望ましいファルネシルトランスフェラーゼ阻害活性を保留させることを意図する。これらの化合物は式(II)：
Ｃ△ （II）
［式中、Ｃはシステイン又は還元されたシステインであり、△は、ペプチドアミノ酸を包含しないが、以下に述べるように、サイズにおいてＡ１Ａ２Ｘと本質的に一致する、例えば３−アミノメチル−ビフェニル−３’−カルボン酸のような、アリール又は複素環式置換基を表す］によって説明されることができる。本発明はまた、式（II）の製薬的に受容される塩及びプロドラッグをも包含する。
本発明はまた、システイン位置においてさらなる置換がなされている化合物をも包含する。これらの化合物は１端部において遊離システインチオール及び／又は末端アミノ基を含み、他の端部においてカルボン酸又はカルボキシレート基を包含し、カルボン酸又はカルボキシレート基はシステインチオール及び／又は末端アミノ基から、先行技術のＣＡＡＸ模倣体におけるような連結アミド(linking amido)基を含まない疎水性スペーサー基によって分離されている。本発明の他の化合物に関すると同様に、これらの化合物は細胞内でのタンパク質分解(proteolytic degradation）を受けず、ＦＴアーゼ阻害に必要な構造的特徴を保有する。これらの化合物はインビトロとインビボの両方においてＦＴアーゼを選択的に阻害し、先行技術のＣＡＡＸペプチド模倣体を凌駕する幾つかの他の利点を提供する。
この実施態様の化合物は式：
Ｃ０Ｂ （III)
［式中、Ｃ０は
Figure 2007016035
であり、
ＡはＯ又は２Ｈであり、
Ｒ０はＳＨ、ＮＨ２又はＣｘＨｙ−ＳＯ２−ＮＨ−（式中、ＣｘＨｙは直鎖の飽和若しくは不飽和炭化水素であり、ｘは１〜２０であり、ｙは３〜４１（４１を包含する）であり；Ｂは−ＮＨＲ（式中、Ｒはアリール基である）を表す］
によって説明されることができる。本発明は式（III)の製薬的に受容される塩とプロドラッグをも包含する。本発明の好ましい１実施態様では、Ｒは、式：
Figure 2007016035
［式中、Ｒ１とＲ３はＨ又はＣＯＯＨを表し；Ｒ２はＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ３又はＣＯＯＣＨ３を表し；Ｒ４はＨ又はＯＣＨ３を表し；Ａは２Ｈ又はＯを表す］で示されるような、１個以上の−ＣＯＯＨ基及び／又は低級アルキル基（例えば、メチル基）によって置換されたビフェニルである。この式は、Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔトリペプチドを模倣するが、制限された形態的フレキシビリティを有する一連の４−アミノ−３’−カルボキシビフェニル誘導体を表す。システインアミド結合の還元（式中、ＡはＨ、Ｈである）は完全な非ペプチドＲａｓＣＡＡＸ模倣体を提供する。
ＲはＮＨ−アリール基に関して好ましくは３’位置又は４’位置、最も好ましくは３’位置に−ＣＯＯＨ置換基を有するビフェニル基である。−ＣＯＯＨ置換基はそのもの自体として現れる又は、製薬的に受容される塩若しくはエステル形では、例えばアルカリ金属塩又はメチルエステルとして現れることができる。
本発明の特徴をＣＶＩＭ（ＥＰ０４６１８６９及び米国特許第５，１４１，８５１号参照のこと）及びＣ−４ＡＢＡ−Ｍとして知られたＣＡＡＸテトラペプチドを参照することによって本明細書で説明する。これらの化合物はそれぞれＣｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ及びＣｙｓ−４アミノ安息香酸−Ｍｅｔであり、式中Ｃｙｓはシステインラジカルであり、Ｍｅｔはメチオニンラジカルである。
本発明の好ましい非ペプチドＣＡＡＸ模倣体は図１２に４として同定される還元Ｃｙｓ−４−アミノ−３’−ビフェニルカルボキシレートであり、これはＦＴＩ−２６５とも呼ばれる。この誘導体はアミド結合を含有せず、したがって、ＣＡＡＸテトラペプチドの実際の非ペプチド模倣体である。
本発明の化合物はカルボン酸形又はその製薬的に受容される塩又はエステルとして用いることができる。低級アルキルエステルが好ましいが、他のエステル（例えば、フェニルエステル）形も使用可能である。
ＧＧＴアーゼＩを阻害するＣＡＡＸペプチド模倣体を提供することも、本発明の目的である。
したがって、ゲラニルゲラニル化及び／又はファルネシル化プロセシングに影響を与える癌遺伝子Ｋ−Ｒａｓ４Ｂプロセシング及びシグナリングを分断する物質及び手段を提供することが、本発明の目的である。
例えば、非限定的に、膵臓癌や結腸癌のような、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤に反応を示す癌を治療するための薬剤組成物を提供することも、本発明の他の目的である。
後者の目的は、ＣＡＡＸテトラペプチドの中心の“ＡＡ”を疎水性スペーサーによって置換し、ＧＧＴアーゼＩによる認識を最適にするためにＣ末端位置にロイシン又はイソロイシン残基を組み入れることによって達成される。さらに、以下に述べるように、システイン部分を還元システイン又は他の官能基によって置換することができる。
本発明の重要な実施態様は、式（IV）：
ＣβＬ （IV）
［式中、Ｃはシステインラジカル、又はシステインラジカルの還元形（Ｒ−２−アミノ−３−メルカプトプロピルアミン）を意味し；βは非ペプチドアミノアルキル−又はアミノ−置換フェニルカルボン酸のラジカルであり；Ｌはロイシン又はイソロイシンのラジカルである］で示される新規なペプチド模倣体群がゲラニルゲラニルトランスフェラーゼに対して高い阻害効力を有し、癌遺伝子Ｋ−Ｒａｓ４Ｂのプロセシングとシグナリングとを分断すると言う研究結果に基づく。本発明はまた式（IV）の製薬的に受容される塩とプロドラッグをも包含する。
この実施態様の好ましい化合物は、４−アミノ安息香酸（４ＡＢＡ）のフェニル環の２位置及び／又は３位置において置換されるＣｙｓ−４ＡＢＡ−Ｌｅｕの誘導体である。これらの位置における置換は、非限定的に、アルキル、アルコキシ及びアリール（特に、前記基の炭素数１〜１０の直鎖基又は分枝鎖基）、並びにナフチル、複素環及びヘテロ芳香環を包含する。
本発明のこの態様の特に好ましい化合物、ＧＧＴＩ−２８７は図１７に説明される。この化合物では、システインラジカルは還元形であり、スペーサー基は２−フェニル−４−アミノ安息香酸である。図１７に示される他の好ましい化合物はＧＧＴＩ−２９７であり、これはスペーサー基、２−ナフチル−４−アミノ安息香酸を含有する。有用であると容易に明らかである他のスペーサー基は、本明細書においてファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤に関連して説明する。
本発明の他の重要な特徴は、プロドラッグの形状の本発明の化合物の調製である。“プロドラッグ”とは、インビボ修飾(in vivo modification)が生じて、活性化合物を生成するような化合物を意味する。このような化合物は例えばプロドラッグとしてそれらの作用部位により容易に供給されやすい。大ざっぱに言えば、本発明のプロドラッグは化合物の末端基（アミノ、システイン硫黄及びカルボキシ基）を、化合物の形質膜透過性及び細胞取り込みを高め、その結果、腫瘍細胞増殖の阻害における化合物の効率を高めるために役立つ疎水性の酵素感受性部分によって官能性化することによって製造される。
これに関して、本発明の特に好ましい化合物は、図１７に説明される、ＧＧＴＩ−２８７，ＧＧＴＩ−２８６のメチルエステル形である。
本発明の化合物は先行技術ＣＡＡＸテトラペプチド阻害剤と同様な方法で、これらの酵素を含有する任意の宿主におけるｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼ又はゲラニルゲラニルトランスフェラーゼを阻害するために使用可能である。これはインビトロ使用とインビボ使用の両方を包含する。ファルネシルトランスフェラーゼ、特にヒト腫瘍ｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼを阻害し、その結果癌遺伝子タンパク質Ｒａｓのファルネシル化を阻害する化合物は癌の治療又は癌細胞の処置に使用可能である。多くのヒト癌が活性化ｒａｓを有し、このような癌の典型的なものとしては、結腸直腸癌、骨髄球性白血病、外分泌性膵臓癌等を挙げることができる。同様に、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼを阻害する化合物はＫ−Ｒａｓ４Ｂに関連する癌の治療に使用可能である。
本発明の化合物は哺乳動物又は宿主に経口、皮下、静脈内、腹腔内又は筋肉内投与するために適した慣用的形の薬剤組成物に用いることができる。これは例えば本発明の１種以上の化合物を製薬的に受容されるキャリヤーと共に含み、他の添加剤は含む又は含まない、例えば、錠剤、カプセル剤、無菌溶液又は懸濁液を包含する。錠剤又はカプセル剤のための典型的なキャリヤーは、例えば、ラクトース又はコーンスターチである。経口組成物のためには、慣用的な懸濁剤、フレーバー剤等と共に水性懸濁液を用いることができる。
望ましい阻害効果を得るための阻害剤の投与量は変化するが、容易に決定されることができる。本発明の化合物がヒト又は他の哺乳動物に薬剤又は化学治療剤として０．１〜１０００mg／kg体重、好ましくは１〜５００mg／kg体重、最も好ましくは１０〜５０mg／kg体重の投与量で投与されることが考えられる。特定の個人又は疾患に対する必要量は変化するが、通常の熟練した実施者によってルーチン方法を用いて決定されることができる。化合物は非限定的に経口、非経口、局所、呼吸（吸入）ルートを包含する、製薬分野及び医学分野において周知の方法によって投与されることができる。薬剤製剤(pharmaceutical preparation)は適当なキャリヤー又は希釈剤を含有することができる。適当なキャリヤー又は希釈剤を決定する手段は、製薬分野で周知である。
本明細書で用いられる“カルボキシ保護基”なる用語は、化合物の他の官能性部位を含む反応を実施するときにカルボン酸を官能的にブロック又は保護するために用いられるカルボン酸保護エステル基を意味する。カルボキシ保護基はGreene、“Protective Groups in Organic Synthesis”１５２〜１８６頁（１９８１）（本明細書に援用される）に開示されている。さらに、カルボキシ保護基は、カルボキシ保護基がインビボにおいて例えば酵素加水分解によって容易に切断されて、生物学的に活性な親化合物(parent)を放出するように、プロドラッグとして用いられることができる。プロドラッグ概念に関する包括的な考察は、Ｔ．Higuchi とＶ．Stellaによって、“Prodrugs as Novel Delivery Systems”，ＡＣＳ Symposium Series（American Chemical Society)（１９７５）の１４巻に記載されており、この文献は本明細書に援用される。このようなカルボキシ保護基は当業者に周知であり、米国特許第３，８４０，５５６号及び第３，７１９，６６７号（これらの開示は本明細書に援用される）に記載されているように、ペニシリン及びセファロスポリン分野においてカルボキシ基の保護に広範囲に用いられている。カルボキシル基含有化合物に関する“プロドラッグ”として有用なエステルの例はＥ．Ｂ．Roche 編集の“Bioreversible Carriers in Drug Design：Theory and Application”，Permagon Press，ニューヨーク（１９８７）（本明細書に援用される）の１４〜２１頁に見い出されることができる。典型的なカルボキシ保護基の例はＣ１−Ｃ８低級アルキル（例えば、メチル、エチル、tert−ブチル等）；アリールアルキル（例えば、フェネチル又はベンジル、これらの置換誘導体、例えば５−インダニル等）；ジアルキルアミノアルキル（例えば、ジメチルアミノエチル等）；アルカノイルオキシアルキル基、例えば、アセトキシメタノール、ブチリルオキシメチル、バレリルオキシメチル、イソブチリルオキシメチル、イソバレリルオキシメチル、１−（プロピオニルオキシ）−１−エチル、１−（ピバロイルオキシル）−１−エチル、１−メチル−１−（プロピオニルオキシ）−１−エチル、ピバロイルオキシメチル、プロピオニルオキシメチル等；シクロアルカノイルオキシアルキル基、例えば、シクロプロピルカルボニルオキシメチル、シクロブチルカルボニルオキシメチル、シクロペンチルカルボニルオキシメチル、シクロヘキシルカルボニルオキシメチル等；アロイルオキシアルキル、例えば、ベンゾイルオキシメチル、ベンゾイルオキシエチル等；アリールアルキルカルボニルオキシアルキル、例えば、ベンジルカルボニルオキシメチル、２−ベンジルカルボニルオキシエチル等；アルコキシカルボニルアルキル又はシクロアルキルオキシカルボニルアルキル、例えばメトキシカルボニルメチル、シクロヘキシルオキシカルボニルメチル、１−メトキシカルボニル−１−エチル等；アルコキシカルボニルオキシアルキル又はシクロアルコキシカルボニルアルキル、例えば、メトキシカルボニルオキシメチル、ｔ−ブチルオキシカルボニルオキシメチル、１−エトキシカルボニルオキシ−１−エチル、１−シクロヘキシルオキシカルボニルオキシ−１−エチル等；アリールオキシカルボニルオキシアルキル、例えば、２−（フェノキシカルボニルオキシ）エチル、２−（５−インダニルオキシカルボニルオキシ）エチル等；アルコキシアルキルカルボニルオキシアルキル、例えば、２−（１−メトキシ−２−メチルプロパン−２−オイルオキシ）エチル等；アリールアルキルオキシカルボニルオキシアルキル、例えば、２−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）エチル等；アリールアルケニルオキシカルボニルオキシアルキル、例えば、２−（３−フェニルプロペン−２−イルオキシカルボニルオキシ）エチル等；アルコキシカルボニルアミノアルキル、例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノメチル等；アルキルアミノカルボニルアミノアルキル、例えば、メチルアミノカルボニルアミノメチル等；アルカノイルアミノアルキル、例えば、アセチルアミノメチル等；複素環式カルボニルオキシアルキル、例えば、４−メチルピペラジニルカルボニルオキシメチル等；ジアルキルアミノカルボニルアルキル、例えば、ジメチルアミノカルボニルメチル、ジエチルアミノカルボニルメチル等；（５−（低級アルキル）−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）アルキル、例えば、（５−ｔ−ブチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル等；及び（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）アルキル、例えば、（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル等である。
本発明の好ましいカルボキシ保護化合物は、保護されたカルボキシ基が低級アルキル、シクロアルキル又はアリールアルキルエステル、例えば、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、sec-ブチルエステル、イソブチルエステル、アミルエステル、イソアミルエステル、オクチルエステル、シクロヘキシルエステル、フェニルエチルエステル等、又はアルカノイルオキシアルキル、シクロアルカノイルオキシアルキル、アロイルオキシアルキル若しくはアリールアルキルカルボニルオキシアルキルエステルである化合物である。
本明細書で用いられる“Ｎ−保護基”又は“Ｎ−保護された”なる用語は、合成操作中の好ましくない反応から、アミノ酸若しくはペプチドのＮ−末端を保護する又はアミノ基を保護するように意図された基を意味する。一般的に用いられるＮ−保護基はGreene,“Protective Groups in Organic Synthesis”, (John Wiley ＆ Sons,ニューヨーク（１９８１））（本明細書に援用される）に開示されている。
本明細書で用いられる“アルカノイル”なる用語は、Ｒ２９Ｃ（Ｏ）−Ｏ−［式中、Ｒ２９は低級アルキル基である］を意味する。
本明細書で用いられる“アルカノイルアミノアルキル”なる用語は、Ｒ７１−ＮＨ−［式中、Ｒ７１はアルカノイル基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アルカノイルオキシ”なる用語は、Ｒ２９Ｃ（Ｏ）−Ｏ−［式中、Ｒ２９は低級アルキル基である］を意味する。
本明細書で用いられる“アルカノイルオキシアルキル”なる用語は、アルカノイルオキシ基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アルケニル”なる用語は、炭素原子２〜１０個を含有し、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含有する直鎖又は分枝鎖炭化水素を意味する。アルケニルの例は−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３等を包含する。
本明細書で用いられる“アルケニレン”なる用語は、炭素原子２〜１０個を含有し、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合をも含有する直鎖又は分枝鎖炭化水素から誘導される二価基を意味する。アルケニレンの例は−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−等を包含する。
本明細書で用いられる“アルコキシ”なる用語は、Ｒ３０Ｏ−［式中、Ｒ３０は上記で定義したような低級アルキルである］を意味する。アルコキシ基の典型的な例は、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ等を包含する。
本明細書で用いられる“アルコキシアルコキシ”なる用語は、Ｒ３１Ｏ−Ｒ３２Ｏ−［式中、Ｒ３１は上記で定義したような低級アルキルであり、Ｒ３２はアルキレンラジカルである］を意味する。
アルコキシアルコキシ基の典型的な例は、メトキシメトキシ、エトキシメトキシ、ｔ−ブトキシメトキシ等を包含する。
本明細書で用いられる“アルコキシアルキル”なる用語は、前記で定義したようなアルキル基に付加した、前記で定義したようなアルコキシ基を意味する。アルコキシアルキルの例は、非限定的に、メトキシメチル、メトキシエチル、イソプロポキシメチル等を包含する。
本明細書で用いられる“アルコキシアルキルカルボニルオキシアルキル”なる用語は、Ｒ６６−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−［式中、Ｒ６６はアルコキシアルキル基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アルコキシカルボニル”なる用語は、カルボニル基を介して親分子部分に付加した前記で定義したようなアルコキシ基を意味する。アルコキシカルボニルの例は、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル等を包含する。
本明細書で用いられる“アルコキシカルボニルアルキル”なる用語は、低級アルキルラジカルに付加した前記で定義したようなアルコキシカルボニル基を意味する。アルコキシカルボニルアルキルの例は、メトキシカルボニルメチル、２−エトキシカルボニルエチル等を包含する。
本明細書で用いられる“アルコキシカルボニルアミノアルキル”なる用語は、Ｒ６９−ＮＨ−［式中、Ｒ６９はアルコキシカルボニル基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アルコキシカルボニルオキシアルキル”なる用語は、Ｒ６３−Ｏ−［式中、Ｒ６３はアルコキシカルボニル基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アルキルアミノ”なる用語は、Ｒ３５ＮＨ−［式中、Ｒ３５は低級アルキル基である］、例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、ブチルアミノ等を意味する。
本明細書で用いられる“アルキルアミノアルキル”なる用語は、アルキルアミノ基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アルキルアミノカルボニルアミノアルキル”なる用語は、Ｒ７０−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−［式中、Ｒ７０はアルキルアミノ基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アルキレン”なる用語は、炭素原子１〜１０個を有する直鎖又は分枝鎖飽和炭化水素から２個の水素原子を除去することによって誘導される二価基、例えばメチレン、１，２−エチレン、１，１−エチレン、１，３−プロピレン、２，２−ジメチルプロピレン等を意味する。
本明細書で用いられる“アルキルスルフィニル”なる用語は、Ｒ３３Ｓ（Ｏ）−［式中、Ｒ３３は低級アルキル基である］を意味する。
本明細書で用いられる“アルキルスルホニル”なる用語は、Ｒ３４Ｓ（Ｏ）２−［式中、Ｒ３４は低級アルキル基である］を意味する。
本明細書で用いられる“アルキルスルホニルアルキル”なる用語は、アルキルスルホニル基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アルキニル”なる用語は、炭素原子２〜１０個を含有し、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を含有する直鎖又は分枝鎖炭化水素を意味する。アルキニルの例は−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ３等を包含する。
本明細書で用いられる“アルキニレン”なる用語は、炭素原子２〜１０個を含有し、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合をも含有する直鎖又は分枝鎖炭化水素から誘導される二価基を意味する。アルキニレンの例は−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ２−等を包含する。
本明細書で用いられる“アミノ”なる用語は、−ＮＨ２を意味する。
本明細書で用いられる“アミノアルキル”なる用語は、アミノ基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アロイルオキシアルキル”なる用語は、アロイルオキシ基［即ち、Ｒ６１−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（式中、Ｒ６１はアリール基である）］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アリール”なる用語は、１個又は２個の芳香環を有する単環状又は二環状炭素環系を意味し、非限定的に、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニル等を包含する。アリール基（二環状アリール基を包含する）は非置換であることも、低級アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、チオアルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヒドロキシ、ハロ、メルカプト、ニトロ、シアノ、カルボキシアルデヒド(carbox aldehyde）、カルボキシ、アルコキシカルボニル、ハロアルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、ハロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−及びカルボキサミド(carboxamide）から独立的に選択される１、２又は３個の置換基によって置換されることもできる。さらに、置換アリール基はテトラフルオロフェニル及びペンタフルオロフェニルを包含する。
本明細書で用いられる“アリールアルケニル”なる用語は、アリール基が付加したアルケニルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アリールアルケニルオキシカルボニルオキシアルキル”なる用語は、Ｒ６８−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−［式中、Ｒ６８はアリールアルケニル基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アリールアルキル”なる用語は、アリール基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。代表的なアリールアルキル基は、ベンジル、フェニルエチル、ヒドロキシベンジル、フルオロベンジル、フルオロフェニルエチル等を包含する。
本明細書で用いられる“アリールアルキルカルボニルオキシアルキル”なる用語は、アリールアルキルカルボニルオキシ基［即ち、Ｒ６２Ｃ（Ｏ）Ｏ−（式中、Ｒ６２はアリールアルキル基である）］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アリールアルキルオキシカルボニルオキシアルキル”なる用語は、Ｒ６７−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−［式中、Ｒ６７はアリールアルキル基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アリールオキシアルキル”なる用語は、Ｒ６５−Ｏ−［式中、Ｒ６５はアリール基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アリールオキシチオアルコキシアルキル”なる用語は、Ｒ７５−Ｓ−［式中、Ｒ７５はアリールオキシアルキル基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アリールオキシカルボニルアルキル”なる用語は、Ｒ６５−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−［式中、Ｒ６５はアリール基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“アリールスルホニル”なる用語は、Ｒ３６Ｓ（Ｏ）２−［式中、Ｒ３６はアリール基である］を意味する。
本明細書で用いられる“アリールスルホニルオキシ”なる用語は、Ｒ３７Ｓ（Ｏ）２Ｏ−［式中、Ｒ３７はアリール基である］を意味する。
本明細書で用いられる“カルボキシアルキル”なる用語は、カルボキシ（−ＣＯＯＨ）基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“カルボキシアルデヒド”なる用語は、−Ｃ（Ｏ）Ｈを意味する。
本明細書で用いられる“カルボキサミド”なる用語は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２を意味する。
本明細書で用いられる“シアノアルキル”なる用語は、シアノ（−ＣＮ）基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“シクロアルカノイルアルキル”なる用語は、シクロアルカノイル基［即ち、Ｒ６０−Ｃ（Ｏ）−（式中、Ｒ６０はシクロアルキル基である）］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“シクロアルカノイルオキシアルキル”なる用語は、シクロアルカノイルオキシ基［即ち、Ｒ６０−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（式中、Ｒ６０はシクロアルキル基である）］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“シクロアルケニル”なる用語は、炭素原子３〜１０個を有し、炭素−炭素二重結合を含有する脂環式基を意味し、非限定的に、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等を包含する。
本明細書で用いられる“シクロアルキル”なる用語は、炭素原子３〜１０個を含む脂環式基を意味し、非限定的に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボルニル、アダマンチル等を包含する。
本明細書で用いられる“シクロアルキルアルキル”なる用語は、シクロアルキル基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。シクロアルキルアルキルの代表的な例は、シクロプロピルメチル、シクロヘキシルメチル、２−（シクロプロピル）エチル、アダマンチルメチル等を包含する。
本明細書で用いられる“シクロアルキルオキシカルボニルオキシアルキル”なる用語は、Ｒ６４−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−［式中、Ｒ６４はシクロアルキル基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“ジアルコキシアルキル”なる用語は、２個のアルコキシ基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“ジアルキルアミノ”なる用語は、Ｒ３８Ｒ３９Ｎ−［式中、Ｒ３８とＲ３９は低級アルキル、例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルプロピルアミノ等から独立的に選択される］を意味する。
本明細書で用いられる“ジアルキルアミノアルキル”なる用語は、ジアルキルアミノ基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“ジアルキルアミノカルボニルアルキル”なる用語は、Ｒ７３−Ｃ（Ｏ）−［式中、Ｒ７３はジアルキルアミノ基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“ジオキソアルキル”なる用語は、２個のオキソ(＝Ｏ)基によって置換された低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“ジチオアルコキシアルキル”なる用語は、２個のチオアルコキシ基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“ハロゲン”又は“ハロ”なる用語は、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ又はＦを意味する。
本明細書で用いられる“ハロアルケニル”なる用語は、少なくとも１個のハロゲン置換基を有する、上記で定義したアルケニルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“ハロアルキル”なる用語は、少なくとも１個のハロゲン置換基を有する、上記で定義した低級アルキルラジカル、例えば、クロロメチル、フルオロエチル又はトリフルオロメチル等を意味する。
本明細書で用いられる“複素環(heterocyclic ring）”又は“複素環式”又は“複素環(heterocycle）”なる用語は、窒素、酸素及び硫黄から成る群から独立的に選択される１、２若しくは３個のヘテロ原子を含有する五員、六員若しくは七員環、又は４個の窒素原子を含有する五員環を意味し、１、２若しくは３個の窒素原子;１個の酸素原子;１個の硫黄原子；１個の窒素原子と１個の硫黄原子；１個の窒素原子と１個の酸素原子；非隣接位置における２個の酸素原子；非隣接位置における１個の酸素原子と１個の硫黄原子；非隣接位置における２個の硫黄原子；隣接位置における２個の硫黄原子と１個の窒素原子；２個の隣接窒素原子と１個の硫黄原子；２個の非隣接窒素原子と１個の硫黄原子；２個の非隣接窒素原子と１個の酸素原子を含有する五員、六員若しくは七員環を包含する。五員環は０〜２個の二重結合を有し、六員環又は七員環は０〜３個の二重結合を有する。
“複素環式”なる用語は、任意の上記複素環がアリール環、シクロヘキサン環、シクロペンネン（cyclopenene)環及び他の単環状複素環（例えば、インドリル、キノリル、イソキノリル、テトラヒドロキノリル、ベンゾフリル又はベンゾチエニル等）から成る群から独立的に選択される１環又は２環と縮合した二環状、三環状及び四環状基をも包含する。複素環はピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ピラジニル、ピペラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソキサゾリル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾキサゾリル、フリル、チエニル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、ピリミジル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロインドリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ピラニル、ジヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル及びベンゾチエニルを包含する。複素環は、単環状複素環基がアルキレン基によって架橋された架橋二環状基、例えば、
Figure 2007016035
等も包含する。
複素環は式：
Figure 2007016035
［式中、Ｘ＊は−ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−又は−Ｏ−であり、Ｙ＊は−Ｃ（Ｏ）−又は−（Ｃ（Ｒ”）２）ｖ−［式中、Ｒ”は水素又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、ｖは１、２又は３である］で示される化合物、例えば、１，３−ベンゾジオキソリル、１，４−ベンゾジオキサニル等をも包含する。
複素環は非置換であることも、
（ａ） ヒドロキシ、
（ｂ） −ＳＨ、
（ｃ） ハロ、
（ｄ） オキソ（＝Ｏ）、
（ｅ） チオキソ（＝Ｓ）、
（ｆ） アミノ、
（ｇ） −ＮＨＯＨ、
（ｈ） アルキルアミノ、
（ｉ） ジアルキルアミノ、
（ｊ） アルコキシ、
（ｋ） アルコキシアルコキシ、
（ｌ） ハロアルキル、
（ｍ） ヒドロキシアルキル、
（ｎ） アルコキシアルキル、
（ｏ） シクロアルキル、
（ｐ） シクロアルケニル、
（ｑ） アルケニル、
（ｒ） アルキニル、
（ｓ） アリール、
（ｔ） アリールアルキル、
（ｕ） −ＣＯＯＨ、
（ｖ） −ＳＯ３Ｈ、
（ｗ） 低級アルキル、
（ｘ） アルコキシカルボニル、
（ｙ） −Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、
（ｚ） −Ｃ（Ｓ）ＮＨ２、
（ａａ）−Ｃ（＝Ｎ−ＯＨ）ＮＨ２、
（ｂｂ）低級アルキル−Ｃ（Ｏ）−、
（ｃｃ）低級アルキル−Ｃ（Ｓ）−、
（ｄｄ）ホルミル、
（ｅｅ）シアノ、及び
（ｆｆ）ニトロ
から成る群から独立的に選択される１、２又は３個の置換基によって置換されることもできる。
本明細書で用いられる“（複素環）アルキル”なる用語は、上記で定義した低級アルキルラジカルに付加した、上記で定義した複素環基を意味する。複素環アルキルの例は、２−ピリジルメチル、４−ピリジルメチル、４−キノリニルメチル等を包含する。
本明細書で用いられる“複素環カルボニルオキシアルキル”なる用語は、Ｒ７２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−［式中、Ｒ７２は複素環基である］が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“ヒドロキシアルキル”なる用語は、ヒドロキシ基が付加した低級アルキルラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“ヒドロキシチオアルコキシ”なる用語は、Ｒ５１Ｓ−［式中、Ｒ５１はヒドロキシアルキル基である］を意味する。
本明細書で用いられる“低級アルキル”なる用語は、炭素原子１〜１０個を含む分枝鎖又は直鎖アルキル基を意味し、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ネオペンチル等を包含する。
本明細書で用いられる“Ｎ−保護アルキルアミノアルキル”なる用語は、窒素がＮ−保護されているアルキルアミノアルキル基を意味する。
本明細書で用いられる“オキソアルキルオキシ”なる用語は、低級アルキル部分がオキソ（＝Ｏ）基によって置換されているアルコキシラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“スピロアルキル”なる用語は、両端部が親基(parent group)の同じ炭素原子に結合して、スピロ環状基を形成しているアルキレンジラジカルを意味する。
本明細書で用いられる“チオアルコキシ”なる用語は、Ｒ５２Ｓ−［式中、Ｒ５２は低級アルキル基である］を意味する。チオアルコキシの例は、非限定的に、メチルチオ、エチルチオ等を包含する。
本明細書で用いられる“チオアルコキシアルキル”なる用語は、前記で定義した低級アルキル基に付加した前記で定義したチオアルコキシ基を意味する。チオアルコキシアルキルの例は、チオメトキシメチル、２−チオメトキシエチル等を包含する。
本発明はまた、式（Ｉ）〜（ＸＩＩ）の化合物の製造方法と、このような方法において有用な合成中間体とに関する。
本発明の他の態様では、製薬的に受容されるキャリヤーと組合せて本発明の化合物を含む薬剤組成物を開示する。
本発明のさらに他の態様では、他の化学治療剤及び製薬的に受容されるキャリヤーと組合せて本発明の化合物を含む薬剤組成物を開示する。
本発明のさらに他の態様では、患者に本発明の化合物の治療有効量を投与することを含む、ヒト又はヒトより下等な哺乳動物におけるタンパク質イソプレニルトランスフェラーゼ（即ち、タンパク質ファルネシルトランスフェラーゼ及び／又はゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ）を阻害する方法を開示する。
本発明のさらに他の態様では、タンパク質ファルネシルトランスフェラーゼ、タンパク質ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ又は両方による癌遺伝子Ｒａｓタンパク質の翻訳後修飾を阻害する方法を開示する。
本発明のさらに他の態様では、ファルネシル化又はゲラニルゲラニル化タンパク質によって仲介される症状の治療方法、例えば、ヒト及び他の哺乳動物におけるＲａｓ関連腫瘍の治療方法を開示する。
本発明のさらに他の態様では、本発明の化合物の治療有効量を単独で又は他の化学治療剤と組合せて患者に投与することを含む、ヒト又はヒトより下等な哺乳動物における癌を抑制又は治療する方法を開示する。
本発明のさらに他の態様では、本発明の化合物の治療有効量を患者に投与することを含む、ヒト又はヒトより下等な哺乳動物における再狭窄を治療又は予防する方法を開示する。
本発明の化合物は無機酸又は有機酸から誘導される製薬的に受容される塩の形で用いられることもできる。これらの塩は、非限定的に、下記を包含する：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、蓚酸塩、パモエート(pamoate）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びウンデカン酸塩。また、塩基性窒素含有基は例えば低級アルキルハライド（例えば、メチル、エチル、プロピル及びブチルの塩化物、臭化物及びヨウ化物）、ジアルキルスルフェート（例えば、ジメチルスルフェート、ジエチルスルフェート、ジブチルスルフェート及びジアミルスルフェート）、長鎖ハライド（例えば、デシル、ラウリル、ミリスチル及びステアリルの塩化物、臭化物及びヨウ化物）、臭化ベンジル及び臭化フェネチルのようなアラルキルハライド等のような作用剤によって第４級化されることができる。これによって、水又は油に溶解性又は分散性の生成物が得られる。
製薬的に受容される酸付加塩を形成するために使用可能である酸の例は、例えば塩酸、硫酸及びリン酸のような無機酸と、例えば蓚酸、マレイン酸、コハク酸及びクエン酸のような有機酸とを包含する。
塩基性付加塩は式Ａ−Ｌの化合物の最終的単離及び精製中に現場で製造されることができる、又はカルボン酸官能基(carboxylic acid function)を例えば製薬的に受容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩若しくは炭酸水素塩のような適当な塩基と、又はアンモニア、有機第１級、第２級若しくは第３級アミンと反応させることによって別に製造されることができる。このような製薬的に受容される塩は、非限定的に、例えばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム塩等のような、アルカリ金属及びアルカリ土類金属に基づくカチオン、並びに非限定的にアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、テトラメチルアミン、テトラエチルアミン、エチルアミン等を包含した、無毒性なアンモニウム、第４級アンモニウム及びアミンカチオンを包含する。塩基付加塩の形成に有用な、他の代表的な有機アミンはジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン等を包含する。
本発明の他の特徴も以下で明らかになるであろう。
好ましい実施態様の説明
言及を容易にするために、本明細書において下記略号を用いることができる：
ＦＴアーゼ：ファルネシルトランスフェラーゼ
ＧＧＴアーゼ：ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：ドデシル硫酸ナトリウム
ポリアクリルアミドゲル電気泳動
ＰＢＳ：リン酸塩緩衝化生理的食塩水
ＣＡＡＸ：Ｃがシステインであり、Ａが脂肪族アミノ酸であり、Ｘがアミノ酸であるテト
ラペプチド
ＤＴＴ：ジチオトレイトール
ＤＯＣ：デオキシコーレート(deoxycholate)
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
ＧＧＴアーゼＩ：ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ
ＰＡＧＥ：ポリアクリルアミドゲル電気泳動
ＭＡＰＫ：マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ
ＦＴＩ：ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤
ＧＧＴＩ：ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤
ＰＭＳＦ：フェニルメチルスルホニルフルオリド
Ｉ．ＣβＸ型のファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤
本発明の好ましい実施態様の１つである式（Ｉ）のペプチド模倣体は、当該技術分野において慣用的である方法を用いて製造されることができる。好ましくは、βは２−フェニル−４−アミノ安息香酸であるが、例えばテトラヒドロイソキノリン−７−カルボン酸、２−アミノメチルピリジン−６−カルボン酸又はその他の複素環式誘導体のような束縛された誘導体(constrained derivative)も使用可能である。βがアミノメチル安息香酸（特に、３−アミノメチル安息香酸）である化合物は米国特許出願第０８／０６２，２８７号（本明細書に援用される）に開示されている。βの酸成分はシステインと便利に反応するので、βのアミノ基とシステインのカルボキシル基とが反応して、アミド基を形成し、反応物の他の反応性置換基は好ましくない反応から適当に保護される。還元システイン系列の化合物の場合には、βのアミノ基が適当に保護されたシステイナル(cysteinal）と反応する。次に、Ｘによって表されるアミノ酸（好ましくは、Ｍｅｔ）がそのアミノ基を介してスペーサー化合物βの脱保護され、活性化されたカルボキシル基と反応する。他の保護基の除去による脱保護後に、式（Ｉ）化合物が得られる。
代替え手段として、βを最初にＸアミノ酸と反応させ、その後に慣用的な反応条件を用いてシステイン又はシステイナル成分と反応させることができる。
本発明はまた、式（Ｉ）化合物の製薬的に受容される塩をも包含する。これらは遊離塩基又は遊離酸を適当量の無機又は有機の酸又は塩基、例えばアルカリ金属の水酸化物又は炭酸塩（例えば、水酸化ナトリウム）、有機アミン（例えば、トリメチルアミン等）と反応させることによって得ることができる。酸塩は例えば、当該技術分野において慣用的に用いられるような、トルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸等によって得られる反応生成物を包含する。
本発明の化合物はｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼを含有する宿主においてｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼを阻害するために用いることができる。これはインビトロ使用とインビボ使用の両方を包含する。これらの化合物はファルネシルトランスフェラーゼ、特にヒト腫瘍ｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼを阻害し、その結果、癌遺伝子タンパク質ｒａｓのファルネシル化を阻害するので、これらの化合物は癌又は癌細胞の治療に用いることができる。多くのヒト癌が活性化ｒａｓを有することが認められており、このような癌の典型的なものとして、結腸直腸癌、骨髄性白血病、外分泌性膵臓癌等を挙げることができる。
本発明の化合物は、哺乳動物又は宿主への経口投与、皮下投与、静脈内投与、腹腔内投与又は筋肉内投与に適した慣用的な形の薬剤組成物に用いることができる。これは例えば１種以上の本発明の化合物を製薬的に受容されるキャリヤーと共に含み、他の添加剤をも含む又は含まない錠剤、カプセル剤、無菌溶液又は懸濁液を包含する。錠剤又はカプセル剤に用いるための典型的なキャリヤーは例えばラクトース又はコーンスターチを包含する。経口組成物のためには、水性懸濁液を慣用的な懸濁化剤、フレーバー剤等と共に用いることができる。
所望の阻害効果を得るための阻害剤投与量は変化するが、容易に決定することができる。ヒトへの使用に関して、１日量は状況（例えば、年齢や体重）に依存する。しかし、０．１〜２０mg／kg体重の１日量を例示のために挙げることができる。
本発明の種々な態様を下記実施例を参照することによってさらに説明する。これらの実施例は、特に、本発明のペプチド模倣体とこれと比較する化合物との調製を説明する。
本発明において、β成分は一般に任意の非ペプチドアミノ酸組合せ又はその他の疎水性スペーサー要素であり、これはＣＶＩＭ又は類似のテトラペプチドＣＡ１Ａ２Ｘの構造とコンフォーメーションとを模倣する化合物を形成する。本発明のこの態様によってβ成分として種々な疎水性スペーサーが用いられている。これは、式（Ｉ）化合物のβ成分に置換するものとして前述したように、例えば３−アミノ安息香酸、４−アミノ安息香酸及び５−アミノペンタン酸と、例えばテトラヒドロイソキノリン−７−カルボン酸、２−アミノメチルピリジン−６−カルボン酸等のような複素環カルボン酸を包含する。したがって、広範囲な意味で、本発明のペプチド模倣体は式（Ｉ）の変形［式中、βは非ペプチドアミノアルキル若しくはアミノ置換脂肪族若しくは芳香族カルボン酸又は複素環モノカルボン酸、例えば３−アミノ安息香酸（３−ＡＢＡ）、４−アミノ安息香酸（４−ＡＢＡ）又は５−アミノペンタン酸（５−ＡＰＡ）のラジカルを意味する］を包含する。
挙げることができる他の適当なβ置換基は、例えばフラン、キノリン、ピロール、オキサゾール、イミダゾール、ピリジン及びチアゾールのような、他の環状疎水性化合物のアミノメチル−又はアミノカルボン酸誘導体を用いることによって得られる置換基を包含する。それ故、一般的に言えば、任意の疎水性の非ペプチドアミノアルキル−又はアミノ−置換した脂肪族、芳香族又は複素環式モノカルボン酸から、β置換基を誘導することができる。
本発明のさらに他の特徴によると、式（Ｉ）化合物に負に荷電した残基を導入することによって、ファルネシルトランスフェラーゼの他の有効な阻害剤を提供することができる。本発明のこの特徴は、ファルネシル化反応の遷移状態の考察と、官能性酵素複合体がペプチド結合領域に近接したファルネシルピロホスフェート結合部位を含まねばならないという認識とに基づく。この実施態様の典型的な化合物は、システイン硫黄に種々な距離で結合したホスホネート残基を有して製造されるペプチドを包含する。これらの誘導体はＮ−Ｃｂｚ−システインとエチル ２−クロロエチルホスホネートとの反応と、この後の４−アミノ安息香酸のＣ−末端メチオニンアダクツ（又はＮ−脱保護ＶＩＭメチルエステル）との縮合によって製造されている。ホスホネート、カルボキシレート及びアミノ保護基の脱保護はそれぞれ類似体（５）及び（６）を生成し、これらの類似体はテトラペプチドとファルネシルピロホスフェート残基の要素(element）を含有するため、ｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼの両認識部位における結合基と相互作用することができる：
Figure 2007016035
本明細書で考察する上記ホスホネートは構造的に下記のように表されることができる：
△１−Ｃ−β−Ｘ
式中、Ｃ、Ｘ、β及び△は既述した通りであり、△１はシステイン硫黄原子を介してシステインに結合したホスホネート基である。
前述したように、本発明の重要なさらなる特徴は、本発明の化合物と式：ＣＡ１Ａ２Ｘのテトラペプチドｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤との、プロドラッグを生じるような修飾である。これは化合物から末端基を適当に官能性化することによる親油性酵素感受性誘導体の形成を含む。例えば、末端アミノ基とシステイン硫黄とはベンジルクロロホルメートと反応して、カルボベンジルオキシエステル末端基を形成することができ、化合物の他方の端部の末端カルボキシ基はアルキル又はアリールエステル、例えばメチルエステルに転化される。他の例は長さ炭素数１〜１０のアルキルエステルと、例えばシアノメチル若しくはトリフルオロメチルのような活性化エステル、コレステロール、コーレート(cholate）又は炭水化物誘導体を包含する。これに関連して用いる場合に、“親油性”なる用語は、特に、メトキシカルボニル及び他の長鎖基又はカルバメート基を包含する意味である。このような基の例は、通常に熟練した実施者に周知である。
先行技術のペプチドＣＡ１Ａ２Ｘと本明細書に述べるペプチド模倣体との、親油性又は疎水性の酵素感受性部分による誘導体化は、化合物の形質膜透過性と細胞への取り込みを高め、その結果、腫瘍細胞増殖の阻害におけるそれらの効力を高める。
カルボベンジルオキシ誘導体は効果を改良するためのペプチド及びペプチド模倣体の官能性化の１方法として述べられているが、種々な他の基も上記目的のために使用可能であることは理解されるであろう。典型的な代替え基は、コレステロリル、アリール若しくはアラルキル、例えばベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル若しくはナフチル、又はアルキル、典型的にはメチル若しくは例えば炭素数８まで若しくはそれ以上の他のアルキルを包含する。このような官能基がシステイン硫黄と、末端アミノ基及びカルボキシ基とに付加することが考えられる。
本発明の化合物を代表するものとしてＣ−ＡＢＡ−Ｍを用いると、本発明の官能性化プロドラッグは構造的に下記のように説明されることができる：
Figure 2007016035
上記ＢＢＭ化合物において、式中に用いられる“ＢＢＭ”はＣβＭ及びＣＶＩＭのビス−（カルボキシベンジルオキシ）メチルエステルを表示する略記を表す。
本明細書で前述したホスホネートの官能性化誘導体も有用な細胞増殖阻害剤である。これに相応して、化合物と共に用いられる“ＢＭＭＭ”なる名称はメチル化されたリン酸末端基及びカルボン酸末端基におけるカルボキシベンジルオキシ置換基と３個のメチル基とを意味する。
上述したように、親化合物に添加された官能基の目的は、腫瘍細胞中への化合物の侵入を改良することである。ひと度細胞中に入るならば、官能基は除去されて、活性化合物を遊離し、活性化合物はその阻害能力を発揮する。
当業者によって理解されるように、本発明の官能性化プロドラッグは、アミノ、ＳＨ及びカルボン酸基をエステル化するための慣用的な周知の方法を用いて製造されることができる。このため、このような方法の詳細は本発明のプロドラッグの製造に関して本質的ではない。
ＦＴＩ−２３２の合成
Ａ．Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ安息香酸
４−アミノ安息香酸（１０ｇ，７２．９mmol）をジオキサン（１４５．８ml）と０．５Ｍ ＮａＯＨ（１４５．８ml）との混合物中に入れた。この溶液を０℃に冷却し、ジ−ｔ−ブチルジカルボネート（２３．８７ｇ，１０９．５mmol）を加えた。反応混合物を室温まで温度上昇させ、一晩撹拌した。翌日、ジオキサンを除去し、残渣を酸性にして、酢酸エチル中に抽出した。酢酸エチル画分を一緒にし、１Ｎ ＨＣｌで洗浄して、未反応出発物質を除去した。溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去した。粗生成物を酢酸エチル／ヘキサンから再結晶して、１２．２ｇ（７０．６％）の純粋な生成物を得た。
ｍｐ１８９−１９０℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１．５２（９Ｈ，ｓ），７．４９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．９１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），９．２８（１Ｈ，ｓ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２８．５９，８１．２９，１１８．５４，１２５．３０，１３１．８１，１４５．７０，１５５．００，１６９．８０；分析：計算値，Ｃ１２Ｈ１５ＮＯ４としてＣ：６０．７６，Ｈ：６．３７，Ｎ：５．９０；実測値，Ｃ：６０．５２，Ｈ：６．４３，Ｎ：５．８３；ＨＲＭＳ 計算値，Ｃ１２Ｈ１５ＮＯ４として、２３７．０９６１，実測値，２３７．１００１．
Ｂ．Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル
乾燥した窒素充填フラスコに、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１４８ml）中のＮ−ＢＯＣ−４−アミノ安息香酸（８．７７ｇ，３６．９７mmol）をメチオニンメチルエステル塩酸塩（８．１２ｇ，４０．６６mmol）と共に入れた。この溶液を氷浴中で冷却し、トリエチルアミン（６．７ml）と、ＥＤＣＩ（７．８０ｇ，４０．６６mmol）と、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ，５．５０ｇ，４０．６６mmol）とを加えた。この混合物を一晩撹拌し、さらにＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、１Ｍ ＨＣｌ、１Ｍ ＮａＨＣＯ３及び水によってそれぞれ３回抽出した。このＣＨ２Ｃｌ２をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去した。固体を酢酸エチル／ヘキサンから再結晶して、９．７２ｇ（７１．３％）の純粋な生成物を得た。
ｍｐ１８４−１８５℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．５３（９Ｈ，ｓ），２．０６−２．１８（４Ｈ，ｍ），２．２３−２．３３（１Ｈ，ｍ），２．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），３．８０（３Ｈ，ｓ），４．９２（１Ｈ，ｍ），７．４５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．５９，２８．３４，３０．１５，３１．６４，５２．１０，５２．７３，８１．２０，１１７．７３，１２７．８，１２８．３３，１４１．８８，１５２．３３，１６６．５０，１７２．７５；分析：計算値，Ｃ１８Ｈ２６Ｎ２Ｏ５ＳとしてＣ：５６．５３，Ｈ：６．８５，Ｎ：７．２９；実測値，Ｃ：５６．４７，Ｈ：６．８６，Ｎ：７．２９；ｍ／ｚ（ＥＩ）３８２（Ｍ）．
Ｃ．ＨＣｌ−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル
Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル（３．５３ｇ，９．５９mmol）をＣＨ２Ｃｌ２（３０〜３５ml）中に入れ、これに３Ｍ ＨＣｌ／Ｅｔ２Ｏ（３８．４ml）を加えた。放置した後に、白色沈殿が形成された。２時間後に、溶液をデカントし、結晶を遠心分離によって回収した。次に、結晶を新しいエーテルによって数回洗浄し、真空ポンプ上で一晩乾燥させた。この間に、濾液は一晩放置して、さらに生成物を沈殿させた。この第２画分をエーテルで洗浄して、真空ポンプ上で一晩乾燥させた。純粋な完全脱保護物質の総収量は２．８７ｇ（９３．９％）収率であった。
ｍｐ１５８−１６４℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）２．１０（３Ｈ，ｓ），２．１２−２．２９（１Ｈ，ｍ），２．５２−２．７１（１Ｈ，ｍ），２．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），３．７５（３Ｈ，ｓ），４．７９（１Ｈ，ｍ），７．０２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．５５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．２３，３１．４３，３１．５３，５２．９１，５２．４３，１２４．３５，１３０．５６，１３５．３１，１３５．７６，１６８．９５，１７３．８７；ＨＲＭＳ 計算値，Ｃ１３Ｈ１８Ｎ２Ｏ３Ｓとして，２８２．１０３８；実測値，２８２．１００９．
Ｄ．Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル
乾燥ＴＨＦ（１０４ml）を含有する乾燥したＮ２充填フラスコに、Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−Ｃｙｓ（２．８６ｇ，６．５４mmol）とトリエチルアミン（１．２ml）とを入れた。これを氷／塩浴を用いて、−１０℃に冷却し、イソブチルクロロホルメート（０．９ml）、ＩＢＣＦ、を加えた。この溶液を−１０℃において４０分間撹拌し、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３４．１ml）中のＨＣｌ−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル（２．０８ｇ，６．５４mmol）をトリエチルアミン（１．２ml，１．３当量）と共に加えた。この溶液を室温に温度上昇させ、Ｎ２下で一晩撹拌した。次に、溶媒を真空中で除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２中に入れ、１Ｍ ＨＣｌと、Ｈ２Ｏと、ブライン（飽和ＮａＣｌ）とによってそれぞれ数回抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去した。次に、淡黄色泡状物をシリカゲル上で２：１ヘキサン、酢酸エチル溶離用混合物を用いてクロマトグラフィーして、２．６２ｇ（５４．９％）の純粋な生成物を得た。
ｍｐ１１０−１１１℃；〔α〕２５ Ｄ＝−８．０°（ｃ＝１，ＣＨ３ＯＨ）；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．４４（９Ｈ，ｓ），２．１１−２．１８（４Ｈ，ｍ），２．２２−２．３４（１Ｈ，ｍ），２．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），２．６６−２．８３（２Ｈ，ｍ），３．８０（３Ｈ，ｓ），３．９８（１Ｈ，ｍ），４．８４（１Ｈ，ｍ），４．９２（１Ｈ，ｍ），６．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．２３−７．３３（９Ｈ，ｍ），７．４３−７．４６（６Ｈ，ｍ），７．５１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．７４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．５１（１Ｈ，ｓ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．５３，２８．３４，３０．７２，３０．８９，３３．６０，５２．２３，５２．８８，５４．９５，６０．５０，６７．１３，８０．６４，１１８．８１，１１９．３１，１２６．９４，１２８．０７，１２８．３０，１２９．５３，１４１．０６，１４４．３８，１５６．３１，１６７．０２，１７０．１３，１７４．４９；分析：計算値，Ｃ４０Ｈ４４Ｎ３Ｏ６Ｓ２・Ｈ２ＯとしてＣ：６４．５０，Ｈ：６．２２，Ｎ：５．６４；実測値，Ｃ：６４．１４，Ｈ：６．１９，Ｎ：５．５６．
Ｅ．ＨＣｌ−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル
Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル（１ｇ，１．３７mmol）をフラスコに入れ、ＣＨ３ＯＨ（１３．７ml）中に加えた。この溶液に、ＣＨ３ＯＨ（１３．７ml）中の塩化第２水銀（０．７５ｇ，２．７４mmol）の溶液を加えた。塩化第２水銀を添加すると、白色沈殿が形成され始めた。混合物をスチーム浴上で６５℃に３５分間加熱し、次に、冷却し、沈殿を濾過し、少量の(sparingly）冷ＣＨ３ＯＨで洗浄した。フィルター上で数分間乾燥させた後に、ガス供給口と排出口とを備えた５０mlの三つ口フラスコ中に固体を入れた。約２０〜３０mlのＣＨ３ＯＨを加え、この不均質な溶液に通してＨ２Ｓガスを３０分間バブルさせた。ガスが添加されると、白色溶液は橙色に変わり、次に黒色に変わった。溶液を遠心分離し、透明な無色液体を乾燥させて、白色の泡状物を得た。この固体を真空ポンプ上に短時間乗せた後に、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ml）中に入れ、３〜４Ｍ ＨＣｌ／Ｅｔ２Ｏ溶液によって生成物を沈殿させた。沈殿を遠心分離によって回収し、pHが中性になるまで、エーテルによって洗浄した。真空下で一晩乾燥させた後に、０．３８g(６６．５％）の生成物が得られた、これはＨＰＬＣによって＞９５％純度であった。
ｍｐ発泡１４１−１４３℃；分解１９５℃；〔α〕２５ Ｄ＝＋３°（ｃ＝１，Ｈ２Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２．０９（３Ｈ，ｓ），２．１４−２．２６（１Ｈ，ｍ），２．５１−２．６７（３Ｈ，ｍ），３．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，７．３Ｈｚ），３．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，４．８Ｈｚ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．１７（１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，４．８Ｈｚ），４．７５−４．８１（１Ｈ，ｍ），７．７４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．８７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），８．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１５．２３，２６．３８，３１．４３，３１．５６，５２．８８，５３．３０，５６．９２，１２０．４６，１２９．５８，１３０．７５，１４２．３３,１６６．９１，１６９．６６，１７４．０６;分析：計算値，Ｃ１６Ｈ２４ＣｌＮ３Ｏ４Ｓ２として、Ｃ：４５．５５，Ｈ：５．７３，Ｎ：９．９６；実測値，Ｃ：４５．３１，Ｈ：５．８４，Ｎ：９．７９．
Ｆ．ＨＣｌ−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニン ＦＴＩ−２３２
ＨＣｌ−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．５１ｇ，０．７mmol）をＴＨＦ（４．１ml）中に入れ、この溶液に０．５Ｍ ＬｉＯＨ（２．９ml）を０℃において加えた。この不均質な溶液を０℃において３５〜４０分間撹拌し、次にＴＨＦを真空中で除去した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２中に入れ、１Ｍ ＨＣｌによって３回洗浄した後に、ブラインによって洗浄した。この有機溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去した。淡黄色固体を３mlのＣＨ２Ｃｌ２中に入れ、生成物を３〜４Ｍ ＨＣｌ／Ｅｔ２Ｏによって沈殿させた。固体を遠心分離によって回収し、エーテルによって、エーテル洗液が中性になるまで、数回洗浄し、ＨＰＬＣが純粋に思われるようになるまで、このプロセスを数回繰り返した。総収量７８．６mg（２７．５％）の純粋生成物が得られた。
ｍｐ昇華１５７℃以下、分解２１１℃；〔α〕２５ Ｄ＝＋１０°（ｃ＝０．８，Ｈ２Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２．０９（３Ｈ，ｓ），２．１７−２．３２（１Ｈ，ｍ），２．５３−２．６６（３Ｈ，ｍ），３．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，７．２Ｈｚ），３．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，４．６Ｈｚ），４．２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．２３Ｈｚ，４．６３Ｈｚ），４．７３−４．７８（１Ｈ，ｍ），７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．８７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１５．２３，２６．３３，３１．５８，３１．８６，５３．２４，５６．９８，１２０．４８，１２９．５９，１３１．１０，１４２．２６，１６６．８９，１６９．６６，１７５．２９；分析：計算値，Ｃ１５Ｈ２２ＣｌＮ３Ｏ４Ｓ２として、Ｃ：４４．１６，Ｈ：５．４４，Ｎ：１０．３０；実測値，Ｃ：４５．４５，Ｈ：５．６２，Ｎ：１０．０３；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）遊離アミン３７１（Ｍ＋１）．
ＦＴＩ−２６０の合成
Ａ．Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−３−メチル安息香酸
４−アミノ−３−メチル安息香酸（５ｇ，３３．１mmol）をＮ−ＢＯＣ−アミノ安息香酸と同じ方法によって反応させた。橙褐色固体を酢酸エチルとヘキサンから再結晶させて、４．９９ｇ（６０％）の黄褐色プリズム結晶を得た。
ｍｐ１８０−１８２℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１．５１（９Ｈ，ｓ），２．２７（３Ｈ，ｓ），７．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．７９−７．８２（２Ｈ，ｍ），８．３２（１Ｈ，ｓ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１７．９８，２８．６２，８１．４７，１２３．１２，１２７．０５，１２９．１４，１３０．６５，１３２．９９，１４２．４５，１５５．３３，１６８．７０;分析:計算値，Ｃ１３Ｈ１７ＮＯ４としてＣ：６２．１５，Ｈ：６．８２，Ｎ：５．５８；実測値，Ｃ：６２．０７，Ｈ：６．８６，Ｎ：５．４６;ｍ／ｚ（ＥＩ）２５１;ＨＲＭＳ 計算値，Ｃ１３Ｈ１７ＮＯ４として２５１．１１５８；実測値，２５１．１１５３．
Ｂ．Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−３−メチルベンゾイルメチオニンメチルエステル
実施例１においてＮ−ＢＯＣ−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルに関して述べた方法に従って、Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−３−メチル安息香酸（２．００ｇ，７．９６mmol）を、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３１．８ml）中のメチオニンメチルエステル塩酸塩（１．７５ｇ，８．７６mmol）、ＥＤＣＩ（１．６８ｇ，８．７６mmol）、ＨＯＢＴ（１．１８ｇ，８．７６mmol）及びＥｔ３Ｎ（１．４ml）と反応させた。粗生成物を酢酸エチルとヘキサンから再結晶して、２．６１ｇ（８５．７％）の純粋生成物を得た。
ｍｐ１６３−１６５℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．５４（９Ｈ，ｓ），２．０６−２．１８（４Ｈ，ｍ），２．２３−２．３４（４Ｈ，ｍ），２．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．８０（３Ｈ，ｓ），４．９２（１Ｈ，ｍ），６．４５（１Ｈ，ｓ），６．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．６６（１Ｈ，ｓ），８．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．４７，１７．６１，２８．２２，３０．０３，３１．５５，５１．９３，５２．５７，８１．０４，１１８．７３，１２５．６２，１２７．６６，１２９．５４，１３９．８９，１５２．３４，１６６．５８，１７２．６６．
Ｃ．ＨＣｌ−４−アミノ−３−メチルベンゾイルメチオニンメチルエステル
Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−３−メチルベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．９９ｇ，２．５９mmol）をＣＨ２Ｃｌ２（１５〜２０ml）中に溶解し、３Ｍ ＨＣｌ／Ｅｔ２Ｏ（２０．７ml）によって沈殿させた。真空ポンプ上で一晩乾燥させた後に、０．８３ｇ（９６．６％）の淡橙色沈殿が得られた。
ｍｐ１５７−１５９℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２．０４（３Ｈ，ｓ），２．１１−２．２５（１Ｈ，ｍ），２．４７（３Ｈ，ｓ），２．５２−２．６８（３Ｈ，ｍ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．７５−４．８０（１Ｈ，ｍ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．８１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．８７（１Ｈ，ｓ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１５．２３，１７．２８，３１．４３，３１．５１，５２．９１，５３．３７，１２４．４１，１２７．８５，１３１．９９，１３３．６３，１３４．１４，１３５．６５，１６９．０５，１７３．８４；分析：計算値，Ｃ１４Ｈ２１Ｎ２Ｏ３ＳとしてＣ：５０．５２，Ｈ：６．３６，Ｎ：８．４２；実測値，Ｃ：５０．７１，Ｈ：６．４０，Ｎ：８．３４．
Ｄ．Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−３−メチルベンゾイルメチオニンメチルエステル
上述したように、乾燥ＴＨＦ（２５ml）中のＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン（０．５５ｇ，１．２５mmol）をＥｔ３Ｎ（０．１９ml）、ＩＢＣＦ（０．１６ml，１．２５mmol）と−１０℃において反応させた。乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（６．５ml）中のＨＣｌ−４−アミノ−３−メチルベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．４２ｇ，１．２５mmol）をＥｔ３Ｎ（０．２６ml）と共に−１０℃において加え、この反応混合物を窒素下で一晩撹拌した。次に、上述したように、仕上げ処理(workup)を実施し、粗生成物をシリカゲル上で溶離用混合物としてヘキサンと酢酸エチルとの２：１混合物を用いてクロマトグラフィーして、０．１２ｇ（１３．９％）の純粋な生成物を得た。
ｍｐ８３−８５℃；〔α〕２５ Ｄ＝−１４．０°（ｃ＝１，ＣＨ３ＯＨ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．４４（９Ｈ，ｓ），２．１０−２．１７（４Ｈ，ｍ），２．２２−２．３２（４Ｈ，ｍ），２．６１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５７Ｈｚ），２．６８−２．７０（１Ｈ，ｍ），２．８５−２．９０（１Ｈ，ｍ），３．７９（３Ｈ，ｓ），３．９３−４．０８（１Ｈ，ｓ），４．８４−４．８８（１Ｈ，ｍ），４．９０−４．９５（１Ｈ，ｍ），６．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．００Ｈｚ），７．２０−７．３３（９Ｈ，ｍ），７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ），７．４４−７．４７（６Ｈ，ｍ），７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４６Ｈｚ），７．６５（１Ｈ，ｓ），８．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２２Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｓ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．３９，１７．５５，２７．７０，２８．１７，３０．００，３１．４３，３１．４１，５１．９０，５２．５１，５９．９５，６７．３０，８０．７４，８４．５４，１２０．７４，１２５．３３，１２６．７０，１２６．８３，１２７．８９，１２８．００，１２９．４０，１３８．９２，１４４．２２，１６６．５０，１６６．８９，１６８．８７，１７２．５６．
Ｅ．ＴＦＡ・システイン−４−アミノ−３−メチルベンゾイルメチオニン ＦＴＩ−２６０
ＴＨＦ（２．１ml）中のＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−３−メチルベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．２７ｇ,０．３７mmol)を０．５Ｍ ＬｉＯＨ（２．９ml）によって室温において１．５時間にわたって脱保護した。溶媒を真空中で除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２中に入れ、１Ｎ ＨＣｌによって３回抽出した後にブラインによって抽出した。有機溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去し、０．１９ｇ（７３．５％）の遊離酸を得た。この遊離酸をＣＨ２Ｃｌ２（１．４ml）中に入れ、Ｅｔ３ＳｉＨ（０．０４ml）を加え、その後にトリフルオロ酢酸、ＴＦＡ（１．４ml）を加えた。この反応混合物を室温において１時間撹拌した。ＴＦＡを除去し、残渣をＨ２Ｏ中に溶解し、トリチル誘導体の全てが除去されるまで、Ｅｔ２Ｏによって抽出した。水相(water）を凍結乾燥させ、粗生成物のＨＰＬＣ（crude ＨＰＬＣ）はこの物質が純粋ではなく、ジアステレオマーを含有することを示した。生成物を水とアセトニトリル中の０．１％ＴＦＡ溶離用混合物を用いる、分取(preparative）ＨＰＬＣで精製して、２種類のジアステレオマーを得て、主要成分（ＨＰＬＣトレース中の主要化合物によって決定）のみを特徴づけた。
ｍｐ昇華１１２℃；発泡１５８−１６３℃，分解１９６−１９７℃；〔α〕２５ Ｄ＝＋１２．７°（ｃ＝０．６ Ｈ２Ｏ），〔α〕２５ Ｄ＝＋２１．０°（ｃ＝１ Ｈ２Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２．０９−２．１７（４Ｈ，ｍ），２．１９−２．３０（１Ｈ，ｍ），２．３６（３Ｈ，ｓ），２．５７−２．６５（２Ｈ，ｍ），３．０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，６．９Ｈｚ），３．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，５．２Ｈｚ），４．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．９，５．２Ｈｚ），４．７０−４．７５（１Ｈ，ｍ），７．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．６９−７．７３（１Ｈ，ｍ），７．７７（１Ｈ，ｓ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１５．２３，１８．２８，２６．５４，３１．５８３２．０６，５３．５３，５６．６６，１２５．５４，１２５．７７，１２６．７４，１３１．０４，１３３．２４，１３９．２６，１６７．５３，１６９．７０，１７５．５９．
ＦＴＩ−２６１の合成
Ａ．Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−３−メトキシ安息香酸
４−アミノ−３−メトキシ安息香酸（１ｇ，５．９８mmol）をＮ−ＢＯＣ−４−アミノ安息香酸と同じ方法によってジオキサン（１２ml）と０．５Ｍ ＮａＯＨ（１２ml）中のジ−ｔ−ブチルジカーボネート（１．９６ｇ，６．５８mmol）と反応させた。１．５０ｇ（９３．７％）の黄褐色結晶が酢酸エチルとヘキサンからの再結晶後に得られた。
ｍｐ１７６−１７８℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１．５２（９Ｈ，ｓ），３．９２（３Ｈ，ｓ），７．５６（１Ｈ，ｓ），７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．９６（１Ｈ，ｓ），８．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２８．５３，５６．３５，８１．７８，１１２．０１，１１８．５８，１２４．２０，１２５．７６，１３３．８４，１４９．０４，１５４．２０，１６９．６０；ＨＲＭＳ 計算値，Ｃ１３Ｈ１７ＮＯ５として、２６７．１１０７；実測値，２６７．１１０３．
Ｂ．Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−３−メトキシベンゾイルメチオニンメチルエステル
Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルにおけると同様にＥＤＣＩを用いて、Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−３−メトキシ安息香酸（０．３５ｇ，１．３１mmol）を、メチオニンメチルエステル塩酸塩（０．９ｇ，１．４３mmol）と反応させた。酢酸エチルとヘキサンからの再結晶後に、０．３６ｇ（５７．２％）の純粋生成物を得た。
ｍｐ１６３−１６５℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．５３（９Ｈ，ｓ），２．０９−２．１８（４Ｈ，ｍ），２．２３−２．３５（１Ｈ，ｍ），２．６０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．８０（３Ｈ，ｓ），３．９３（３Ｈ，ｓ），４．９２（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．２５（１Ｈ，ｍ），７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ），７．４４（１Ｈ，ｓ），８．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．４７，２８．２３，３０．０９，３１．４８，５２．０６，５２．５４，５５．８１，８０．８２，９８．０６，１０９．３８，１１６．６６，１１９．３１，１３１．５２，１４７．２３，１５２．３１,１６６．５７，１７２．５８;ｍ／ｚ（ＦＡＢ）４１３（Ｍ＋１）．
Ｃ．ＨＣｌ−４−アミノ−３−メトキシベンゾイルメチオニンメチルエステル
Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−３−メトキシベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．７１ｇ，１．７９mmol）をＣＨ２Ｃｌ２（４ml）中に入れ、３〜４Ｍ ＨＣｌ／Ｅｔ２Ｏ（１２ml）によって沈殿させ、真空下で一晩乾燥させて、０．５５ｇ（８８．３％）の赤色物質を得た。
ｍｐ１７６−１７７℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２．０８（３Ｈ，ｓ），２．２１（２Ｈ，ｍ），２．６１（２Ｈ，ｍ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．０２（３Ｈ，ｓ），４．７９（１Ｈ，ｍ），７．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ），７．６７（１Ｈ，ｓ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１５．２６，３１．３４，３１．４２，５２．９５，５３．３８，５７．１２，１１２．２９，１２１．４３，１２４．５７，１２４．７７，１３６．１５，１５３．６７，１６８．７９，１７３．８１．
Ｄ．Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−３−メトキシベンゾイルメチオニンメチルエステル
上述したように、乾燥ＴＨＦ（２７．５ml）中のＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン（０．７６ｇ，１．７４mmol）をＥｔ３Ｎ（０．２４ml）、ＩＢＣＦ（０．２３ml，１．７４mmol）と−１０℃において反応させた。乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（８．７ml）中のＨＣｌ−４−アミノ−３−メトキシベンゾイルメチオニンメチルエステル(０．５５ｇ，１．５８mmol）をＥｔ３Ｎ（０．３０ml）と共にこの混合物に加え、窒素下で一晩撹拌した。次に、実施例１においてＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルに関して述べたように、これを仕上げ処理し、粗生成物をシリカゲル上でヘキサンと酢酸エチルとの２：１混合物を用いてクロマトグラフィーして、０．１８ｇ（１５．２％）の純粋な生成物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．４５（９Ｈ，ｓ），２．０５−２．３３（５Ｈ，ｍ），２．５７−２．６５（２Ｈ，ｍ），２．６８−２．７２（１Ｈ，ｍ），２．７５−２．９６（１Ｈ，ｍ），３．７８（３Ｈ，ｓ），３．８４（３Ｈ，ｓ），４．９０−５．００（１Ｈ，ｍ），５．０３−５．１８（１Ｈ，ｍ），７．１７−７．４８（１７Ｈ，ｍ），８．３０−８．３８（１Ｈ，ｍ），８．６５（１Ｈ，ｂｒ ｓ）．
Ｅ．ＴＦＡ・システイン−４−アミノ−３−メトキシベンゾイルメチオニン，ＦＴＩ−２６１
Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−３−メトキシベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．１８ｇ，０．２４mmol）をＬｉＯＨによって室温において上述のように脱保護して、遊離酸を得た。この遊離酸を次にＣＨ２Ｃｌ２（１．２ml）中でＥｔ３ＳｉＨ（０．０４ml，０．２４mmol）とＴＦＡ（１．２ml）とによってさらに脱保護した。生成物を実施例１においてＨＣｌ−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンに関して述べたように仕上げ処理した、ＨＰＬＣはこの生成物が不純であることを明らかにした。次に、この粗生成物を溶離用溶剤として水とアセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを用いてＨＰＬＣ上で精製して、ジアステレオマーであると思われる２種類の純粋なサンプルを得た。主要成分（ＨＰＬＣトレース中の主要化合物によって決定）を下記のように特徴づけた。
ｍｐ昇華１０９℃，分解１９１−１９３℃；〔α〕２５ Ｄ＝＋３０．０°（ｃ＝１，Ｈ２Ｏ），〔α〕２５ Ｄ＝＋１９．０°（ｃ＝１，Ｈ２Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２．１０（３Ｈ，ｓ），２．１２−２．１８（１Ｈ，ｍ），２．２０−２．３２（１Ｈ，ｍ），２．５３−２．７１（２Ｈ，ｍ），３．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．６，７．５），３．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．５８，４．８），４．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，４．８），７．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５６（１Ｈ，ｓ），８．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１５．２０，２６．６５，３１．６０，３１．７６，５３．２７，５６．５８，５６．７６，１１１．０４，１２１．０８，１２２．１４，１３０．８５，１３１．８５，１５０．８８，１６７．２１，１６９．６１，１７５．３６；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）遊離アミン，４０２（Ｍ＋１）．
ＦＴＩ−２７２の合成
Ａ．４−ニトロ−フェニルトルエン
２−ブロモ−４−ニトロトルエン（２．１６ｇ，１０．００mmol）とフェニルホウ酸（phenyl boric acid)（１．４６ｇ，１２．００mmol）とを窒素下で無水ＤＭＦ（２５ml）中に溶解させた。この混合物に、Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（０．５８ｇ，５％）を加えた。混合物を１００℃において一晩加熱した。この溶液を１Ｎ ＨＣｌ中に注入し、Ｅｔ２Ｏによって抽出した。粗生成物を溶離剤としてヘキサンを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーした。エタノールからの再結晶後に、１．２３ｇ（５７．６％）の淡橙色針状結晶が得られた。
ｍｐ６９−７１℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）２．３６（３Ｈ，ｓ），７．２９−７．４０（２Ｈ，ｍ），７．４１−７．４９（５Ｈ，ｍ），８．０７−８．１０（２Ｈ，ｍ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）２０．６８，１２１．９６，１２４．５１，１２７．７８，１２８．４１，１２８．８３，１３１．０６，１３９．４４，１４２．９７，１４３．４８，１４６．０５；分析：計算値Ｃ１３Ｈ１１ＮＯ２として、Ｃ：７３．２６，Ｈ：５．２０，Ｎ：６．５７；実測値，Ｃ：７３．１０，Ｈ：５．１２，Ｎ：６．５０；ｍ／ｚ（ＥＩ）２１３；ＨＲＭＳ 計算値，Ｃ１３Ｈ１１ＮＯ２として、２１３．０７９０；実測値，２１３．０７９３．
Ｂ．４−ニトロ−２−フェニル安息香酸
４−ニトロ−２−フェニルトルエン（０．５０ｇ，２．３４mmol）を水（４．６ml）とピリジン（２．３ml）中に溶解させた。この混合物を還流加熱し、ＫＭｎＯ４（１．８５ｇ，１１．７０mmol）を加えた。反応混合物を一晩加熱し、溶液を濾過し、沸騰水によって数回洗浄した。水溶液を酸性にして、生成物を酢酸エチル中に抽出した。酢酸エチルをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去して、０．３７ｇ（６７．９％）の純粋な淡黄色生成物を得た。
ｍｐ１７４−１７６℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）７．３８−７．４８（５Ｈ，ｍ），７．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），８．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４８，２．３７）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１２２．９５，１２６．０９，１２９．２７，１２９．４２，１２９．４９，１３１．５６，１３９．２６，１４０．４２，１４４．４１，１５０．１７，１７０．５２；ｍ／ｚ（ＥＩ）２４３（Ｍ）．
Ｃ．４−ニトロ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（４．９ml）中の４−ニトロ−２−フェニル安息香酸（０．３０ｇ，１．２３mmol）、メチオニンメチルエステル塩酸塩（０．２７ｇ，１．３５mmol）、ＥＤＣＩ（０．２６ｇ，１．３５mmol）、ＨＯＢＴ（０．１８ｇ，１．３５mmol）及びＥｔ３Ｎ（０．１９ml）を上記方法に従って反応させ、実施例１においてＮ−ＢＯＣ−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルに関して述べたように仕上げ処理した。酢酸エチルとヘキサンからの再結晶後に、０．４１ｇ（８５．５％）の純粋生成物が単離された。
ｍｐ９８−１０１℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．６２−１．７３（１Ｈ，ｍ），１．７９−１．８８（１Ｈ，ｍ），１．９１（３Ｈ，ｓ），１．９９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３．５９（３Ｈ，ｓ），４．５３（１Ｈ，ｍ），６．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．３３−７．４０（５Ｈ，ｍ），７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），８．０７−８．１２（２Ｈ，ｍ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１４．９２，２９．１１，３０．６７，５１．５１，５２．２９，１２１．８６，１２４．７４，１２８．２７，１２８．６０，１２８．６９，１２９．５２，１３７．５０，１４０．５６，１４１．０２，１４８．０９，１６７．２３，１７１．２３；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）３８９（Ｍ＋１）．
Ｄ．４−アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル
４−ニトロ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．３５ｇ，０．９０mmol）を酢酸エチル（９．０ml）中に入れた。この混合物に、ＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（１．０２ｇ，４．５０mmol）を加え、反応を窒素下で１時間還流加熱した。混合物を氷上に注入し、溶液をＮａＨＣＯ３を用いて塩基性にして、生成物を酢酸エチルによって数回（７〜８回）抽出した。酢酸エチル画分を一緒にし、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去して、０．２４ｇ（７３．４％）の黄色固体を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．５８−１．７０（１Ｈ，ｍ），１．８０−１．９２（１Ｈ，ｍ），１．９８（３Ｈ，ｓ），２．０６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），３．６２（３Ｈ，ｓ），４．００（２Ｈ，ｂｒ ｓ），４．５６−４．６３（１Ｈ，ｍ），５．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），６．５０（１Ｈ，ｓ），６．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．２９−７．４２（５Ｈ，ｍ），７．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．０２，２９．２５，３１．２５，５１．５７，５２．１５，１１３．２７，１１５．８８，１２３．５２，１２７．５６，１２８．３７，１２８．４４，１３０．９２，１４０．６６，１４１．４４，１４８．５３，１６８．５８，１７１．９１．
Ｅ．Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル
乾燥ＴＨＦ（１１ml）中のＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン（０．３１ｇ，０．６６mmol）を実施例１においてＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルに関して述べたように−１０℃においてＥｔ３Ｎ（０．１０ml）、ＩＢＣＦ（０．０９ml，０．７３mmol）と反応させた。乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３．５ml）中の４−アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．２４ｇ，０．６６mmol）を加え、混合物を窒素下で一晩撹拌した。これを実施例１においてＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルに関して述べたように仕上げ処理し、乾燥後に、粗生成物をヘキサンと酢酸エチルとの２：１混合物を用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーして、８４．７０mg(１６．０％)の純粋生成物を得た。
ｍｐ１００−１０３℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．４１（９Ｈ，ｓ），１．６１−１．７８（１Ｈ，ｍ），１．８４−１．９５（１Ｈ，ｍ），２．００（３Ｈ，ｓ），２．０５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），２．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，６．９Ｈｚ），２．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，５．５１Ｈｚ），３．６４（３Ｈ，ｓ），４．０２（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．５８−４．６３（１Ｈ，ｍ），４．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），６．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．１８−７．３０（１０Ｈ，ｍ），７．３７−７．４４（１１Ｈ，ｍ），７．５０（１Ｈ，ｓ），７．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），８．６９（１Ｈ，ｓ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．２１，２８．２０，２９．３８，３１．２４，３３．００，５１．７７，５２．３５，５４．１５，６７．３０，８０．８５，１１８．１８１２０．８６，１２６．８８，１２７．９０，１２８．０３，１２８．５６，１２８．６６，１２９．４４，１２９．７９，１３０．１４，１５６．００，１６８．５２，１６９．１１，１７１．８５．
Ｆ．ＴＦＡ・システイン−４−アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニン ＦＴＩ−２７２
Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル（８４．７０mg，０．１１mmol）をＴＨＦ（０．６２ml）中に入れ、これに、０．５Ｍ ＬｉＯＨ（０．３２ml）を０℃において加えた。この混合物を０℃において３５分間撹拌した。溶媒をロトバップ（rotovap)上での冷水浴を用いて真空中で除去した。残渣を実施例１においてＨＣｌ−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンに関して述べたように仕上げ処理し、６０mgの遊離酸を得た。次に、これをＣＨ２Ｃｌ２（０．８ml）中に溶解させ、Ｅｔ３ＳｉＨ（０．０１ml）を加え、ＴＦＡ（０．８ml）を加えた。この反応混合物を室温において１時間撹拌し、実施例２においてＴＥＡ・システイン−４−アミノ−３−メチルベンゾイルメチオニンに関して述べたように仕上げ処理した。凍結乾燥後に、０．０３８７ｇ（８４．０％）が得られた。ＨＰＬＣは、エピマー化が生じなかったことを明らかにしたが、この物質をＨＰＬＣ上で精製して、基準不純物(baseline impurities）を除去した。
ｍｐ１５０−１５４℃；〔α〕２５ Ｄ＝＋２１．５°（ｃ＝０．７，Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＯＨ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１．６２−１．７９（１Ｈ，ｍ），２．００−２．１０（５Ｈ，ｍ），２．１６−２．１８（１Ｈ，ｍ），３．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．７Ｈｚ，７．３Ｈｚ），３．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．７Ｈｚ，４．８Ｈｚ），４．４６（１Ｈ，ｂｒ ｓ），７．３７−７．４１（５Ｈ，ｍ），７．５２−７．５５（１Ｈ，ｍ），７．６５−７．６７（２Ｈ，ｍ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１５．０３，２６．３５，３１．７８，３２．７９，５７．０１，１１９．４０，１２２．３５，１２８．９５，１２９．６２，１２９．７１，１３０．１５，１３３．４９，１４０．５０，１４１．３６，１４２．５３，１６７．０５，１６７．７６，１７２．５１；分析：計算値，Ｃ２３Ｈ２６Ｆ３Ｎ３Ｏ６Ｓ２としてＣ：４９．２０，Ｈ：４．６７，Ｎ：７．４８；実測値，Ｃ：４９．１４，Ｈ：４．７１，Ｎ：７．４２．
ＨＣｌ−システイン−４−アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル ＦＴＩ２７４
Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．０６ｇ，０．０７５mmol）をメタノール（２ml）中に溶解させ、これにメタノール（１ml）中のＨｇＣｌ２（０．０４ｇ）を加えた。この反応を上述のようにおこなって、ＨＰＬＣによって１５．７mgのやや不純な化合物を得た。
ｍｐ１３０−１３２℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１．７２−１．８４（１Ｈ，ｍ），１．９０−２．２４（６Ｈ，ｍ），３．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，８．５Ｈｚ），３．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，３．６Ｈｚ），３．６９（３Ｈ，ｓ），４．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝．５Ｈｚ，３．６Ｈｚ），４．４８−４．５３（１Ｈ，ｍ），７．３３−７．４３（５Ｈ，ｍ），７．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．７０−７．７２（２Ｈ，ｍ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１５．０４，２６．３６，３０．８８，３１．３６，５２．８５，５３．０５，５６．９３，１１９．４２，１２２．３８，１２８．８８，１２９．５５，１２９．７３，１３０．０５，１３３．１７，１４０．５５，１４１．３２，１４２．５２，１６６．９２，１７２．６１，１７３．５８；分析：計算値，Ｃ２４Ｈ２９ＣｌＮ３Ｏ６Ｓ２・２Ｈ２Ｏとして、Ｃ：５１．２０，Ｈ：５．８６，Ｎ：８．１４；実測値，Ｃ：５１．２３，Ｈ，５．６０，Ｎ：８．２２．
ＦＴＩ−２７５の合成
Ａ．２−ブロモ−４−ニトロ安息香酸
２−ブロモ−４−ニトロトルエン（５．００ｇ，２３．１４mmol）をピリジン（２３ml）と水（４６ml）中の溶解させた。この均質な混合物を６０℃に加熱し、ＫＭｎＯ４（１８．２９ｇ，１１５．７mmol）を細心に加えた。次に、混合物を一晩還流加熱した。この反応混合物を濾過し、沸騰水で洗浄した。溶液を次に酸性にして、酢酸エチル中に抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去した。粗生成物のＮＭＲ（crude NMR)は残留出発物質を明らかにしたので、固体をＮａＯＨ中に入れ、ヘキサンによって洗浄した。水相を酸性にして、生成物を酢酸エチル中に抽出した。酢酸エチル画分を一緒にして、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去して、３．７２ｇ（６５．４％）を得た。
ｍｐ１５８−１６０℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｓ);１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１２１．９６，１２２．７５，１２９．３６，１３２．２４，１３９．５２，１４９．５４，１６７．７５；分析：計算値，Ｃ７Ｈ４ＢｒＮＯ４＋０．１酢酸エチルとして、Ｃ：３４．８８，Ｈ：１．９０，Ｎ：５．５０；実測値，Ｃ：３４．６８，Ｈ，１．８６，Ｎ：５．８２．
Ｂ．３，５−ジメチルフェニルボロン酸（３，５−dimethylphenyl boronic acid）
滴下ロートと還流冷却管とを装備した、乾燥したＮ２充填フラスコ中でＭｇ削り屑（１．４４ｇ，５９．４３mmol）を乾燥ＴＨＦ（１８．８ml）によって覆った。これに、Grignard反応の開始後に、ＴＨＦ（１５ml）中の５−ブロモ−ｍ−キシレン（１０ｇ，５４．０３mmol）を加えた。この添加は数分間にわたっておこない、反応混合物を、Ｍｇの大部分が反応するまで、１〜２時間還流加熱した。次に、反応混合物を冷却し、トリイソプロピルボレート（２４．９ml）を含有するＮ２充填フラスコに取り付けた滴下ロートに−７０℃において移した。滴加を数分間にわたって実施し、混合物を室温に温度上昇させ、一晩撹拌した。灰色溶液を２Ｍ ＨＣｌ上に注入すると、この溶液は直ちに黄色に変わった。溶液をＥｔ２Ｏ中に抽出し、Ｅｔ２Ｏ画分を一緒にして、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去して、２．４１ｇ（２９．７％）を得た。
ｍｐ２４９−２５１℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）２．４４（６Ｈ，ｓ），７．２３（１Ｈ，ｓ），７．８４（２Ｈ，ｓ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２１．３６，１３３．２８，１３４．３９，１３７．４８．
Ｃ．４−ニトロ−２−（３，５−ジメチルフェニル）安息香酸
２−ブロモ−４−ニトロ安息香酸（０．５０ｇ，２．０３mmol）と３，５−ジメチルフェニルボロン酸（０．３４ｇ，２．２３mmol）とを無水ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）（２５ml）中に窒素下で溶解させた。この混合物に、ＣＳ２ＣＯ３（１．６６ｇ，５．０８mmol）を加え、次にＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（０．１２ｇ，５％）を加えた。この混合物を１００℃において一晩加熱した。この溶液を１Ｎ ＨＣｌ上に注入し、Ｅｔ２Ｏ中に抽出した。これをＭｇＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去した。粗生成物をヘキサンと酢酸エチルとの９：１混合物を用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーして、０．３４ｇ（６１．７％）の純粋な生成物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) ２．３６（６Ｈ，ｓ），６．９９（２Ｈ，ｓ），７．０７（１Ｈ，ｓ），８．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．２３−８．２５（２Ｈ，ｍ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）２１．２８，１２１．６８，１２３．６８，１２５．７４，１２６．０７，１３０．２２，１３１．１９，１３１．３１，１３５．０４，１３８．２１，１４４．７４，１７０．７５．
Ｄ．４−ニトロ−２−（３，５−ジメチルフェニル）ベンゾイルメチオニンメチルエステル
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２．２ml）中の４−ニトロ−２−（３，５−ジメチルフェニル）安息香酸（０．１５ｇ，０．５５mmol）、メチオニンメチルエステル塩酸塩（０．１１ｇ，０．５５mmol）、ＥＤＣＩ（０．１１ｇ，０．５５mmol）、ＨＯＢＴ（０．１１ｇ，０．５５mmol）及びＥｔ３Ｎ（０．０８ml）を反応させ、実施例１においてＮ−ＢＯＣ−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルに関する方法に従って仕上げ処理した。酢酸エチルとヘキサンからの再結晶後に、０．１３ｇ（５８．４％）の純粋な生成物が単離された。
ｍｐ１２２−１２４℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) １．２−１．８４（１Ｈ，ｍ），１．８５−１．９７（１Ｈ，ｍ），２．０１（３Ｈ，ｓ），２．０５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），２．３８（６Ｈ，ｓ），３．７０（３Ｈ，ｓ），４．６７−４．７４（１Ｈ，ｍ），６．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．０５（２Ｈ，ｓ），７．０９（１Ｈ，ｓ），７．８４−７．８７（１Ｈ，ｍ），７．８４−７．８７（１Ｈ，ｍ），８．２３−８．２６（２Ｈ，ｍ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３），１５．２０，２１．２６，２９．２２，３１．１５，５１．７９，５２．５７，１２２．０７，１２５．１１，１２６．２７，１３０．０３，１３０．５３，１３７．７７，１３８．８２，１４０．２９，１４１．５６，１４８．４１，１６７．１４，１７１．５３．
Ｅ．４−アミノ−２−（３，５−ジメチルフェニル）ベンゾイルメチオニンメチルエステル
４−ニトロ−２−（３，５−ジメチルフェニル）ベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．１１ｇ，０．２６mmol）を酢酸エチル（３．０ml）中に入れた。この混合物に、ＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（０．３０ｇ，１．３０mmol）を加え、反応を窒素下で６時間還流加熱した。混合物を実施例２において４−アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステルに関して述べたように仕上げ処理して、０．１５ｇの黄色フィルムを得た、これは溶媒によって濡れていた。この物質は他の点ではＮＭＲによって純粋であり、これをさらに精製せずに用いた。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．６０−１．７０（１Ｈ，ｍ），１．８０−１．９０（１Ｈ，ｍ），１．９９（３Ｈ，ｓ），２．０５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），２．３３（６Ｈ，ｓ），３．６４（３Ｈ，ｓ），３．９３（２Ｈ，ｂｒｓ），４．６１−４．６４（１Ｈ，ｍ），５．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），６．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），６．６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２．４Ｈｚ），６．９８（２Ｈ，ｓ），７．００（１Ｈ，ｓ），７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３），１５．０８，２１．１７，２９．２８，３１．４９，５１．７０，５２．１８，１１３．３０，１１５．９４，１２３．５５，１２６．３６，１２９．３２，１３１．２３，１３８．１５，１４０．７２，１４１．９２，１４８．４０，１６８．４５，１７２．０１．
Ｆ．Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−２−（３，５−ジメチルフェニル）ベンゾイルメチオニンメチルエステル
４−アミノ−２−（３，５−ジメチルフェニル）ベンゾイルメチオニンメチルエステル（０．１０ｇ，０．２６mmol）を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１．４ml）中に溶解させ、これを放置した。別のフラスコにおいて、Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−Ｃｙｓ（０．１２ｇ，０．２６mmol）をＴＨＦ（４．４ml）中に溶解させ、上述したように、ＩＢＣＦ（０．０３ml）及びＥｔ３Ｎ（０．０４ml）と反応させた。生成物を実施例１においてＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルに関して述べたように仕上げ処理し、１：１ヘキサンと酢酸エチルとの溶離用混合物を用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーして、０．１２ｇ（５６．０％）の純粋物質を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．３３（９Ｈ，ｓ），１．６１−１．６８（１Ｈ，ｍ），１．７３−１．９１（４Ｈ，ｍ），１．９６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．５７−２．６４（２Ｈ，ｍ），３．５７（３Ｈ，ｓ），４．００（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．５４−４．５８（１Ｈ，ｍ），５．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），５．９７（１Ｈ，ｂｒ ｄ），６．９０（１Ｈ，ｓ），６．９２（２Ｈ，ｓ），７．１８−７．２２（９Ｈ，ｍ），７．２７−７．４０（７Ｈ，ｍ），７．５５（１Ｈ，ｍ），７．６１（１Ｈ，ｍ），８．５８（１Ｈ，ｂｒ ｓ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．１１，２１．２０，２７．７９，２９．２５，３１．２８，５１．７０，５２．２８，５４．０８，６０．３２，７１．４５，８０．７５，１１８．０１，１２０．８０，１２６．３８，１２６．８２，１２７．９８，１２９．４１，１２９．８７，１３０．２２，１３８．１１，１３９．１８，１３９．７９，１４１．０６，１４４．１７，１６８．３８，１６９．０４，１７１．８２．
Ｇ．ＴＦＡ・システイン−４−アミノ−２−（３，５−ジメチルフェニル）ベンゾイルメチオニンメチルエステル ＦＴＩ２７５
Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−２−（３，５−ジメチルフェニル)ベンゾイルメチオニンメチルエステル(０．１２ｇ，０．１５mmol）をＴＨＦ（０．９ml）中に入れ、上述したように、０℃において０．５Ｍ ＬｉＯＨ（０．６ml）と反応させた後に、ＴＦＡ（１．５ml）とＥｔ３ＳｉＨ（０．２４ml）とによって脱保護した。過剰なスキャベンジャー(scavenger）の添加が結果に影響するとは思われない。生成物を分取ＨＰＬＣによって精製して、２３．８mg（２７．３％）を得た。
ｍｐ １３５−１３８℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．７６−１．８４（１Ｈ，ｍ），２．００−２．１７（６Ｈ，ｍ），２．３３（６Ｈ，ｓ），３．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，７．３Ｈｚ），３．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），４．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．３，４．９Ｈｚ），４．４５−４．４８（１Ｈ，ｍ），７．０２（３Ｈ，ｓ），７．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６６（２Ｈ，ｍ）；１３Ｃ （ＣＤ３ＯＤ）１４．９６，２１．５１，２６．２８，３０．９１，３１．７０，５３．０３，５６．９８，１１９．２７，１２２．３０，１２７．５２，１３０．０７，１３０．５７，１３３．３７，１３９．２８，１４０．３９，１４１．２９，１４２．８６，１６６．８９，１７２．６０，１７４．８１．
ＦＴＩ−２６６の合成
Ａ．４−アミノ−１−ナフトエ酸
４−アミノ−１−ナフタレンカルボニトリル（１．５０ｇ，８．９１mmol）を５０％ＫＯＨ溶液（１８ml）中の溶解させた。この不均質な溶液を２〜３日間還流加熱した。溶液がひと度均質になり、ＴＬＣがもはや出発物質を示さないならば、深赤色の溶液を冷却し、２００mlの水の上に注入した。次に、溶液を濾過し、濃ＨＣｌによってこの酸を沈殿させた。赤色結晶を濾別し、濾液を再濾過して、ピンク色結晶を得た。第１画分を活性炭によって処理して、赤色の一部を除去した。１．５１ｇ（９０．６％）の生成物が得られた。
ｍｐ １６９−１７１℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）６．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．３８−７．４３（１Ｈ，ｍ），７．４８−７．５４（１Ｈ，ｍ），８．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），９．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１０７．３９，１１４．６１，１２２．９９，１２３．９２，１２５．２１，１２７．４０，１２８．４８，１３５．０４，１５１．３５，１７１．４４；ＨＲＭＳ計算値，Ｃ１１Ｈ７ＮＯ２として，１８７．０６３３；実測値，１８７．０６４２．
Ｂ．Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−１−ナフトエ酸
４−アミノ−１−ナフトエ酸（０．８６ｇ，４．６１mmol）をジオキサン（９．２ml）と０．５Ｍ ＮａＯＨ（９．２ml）に溶解させた。ジ−ｔ−ブチルジカーボネート（１．１１ｇ，５．０７mmol）を加え、混合物を一晩撹拌した。反応混合物を実施例１においてＮ−ＢＯＣ−４−アミノ安息香酸に関して述べたように仕上げ処理して、０．７６ｇ（５６．７％）の赤味がかったピンク色固体を得た。ｍｐ １９４−１９５℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１．５６（９Ｈ，ｓ），７．５３−７．６２（２Ｈ，ｍ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），８．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１８Ｈｚ），９．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２６．６８，８１．６２，１１９．０６，１２３．４０，１２４．５７，１２７．０３，１２７．３７，１２８．４９，１２８．７７，１３１．８９，１３３．７６，１３９．８６，１５５．９５，１７０．７３；分析：計算値，Ｃ１７Ｈ１７ＮＯ４として，Ｃ：６６．９０，Ｈ：５．９６，Ｎ：４．８８；実測値，Ｃ：６６．４９，Ｈ：６．０８，Ｎ：４．７９；ｍ／ｚ（ＥＩ），２８９；ＨＲＭＳ計算値，Ｃ１６Ｈ１７ＮＯ４として，２８７．１１５８；実測値，２８７．１１５１．
Ｃ．Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−１−ナフトイルメチオニンメチルエステル
ＣＨ２Ｃｌ２（６．４ml）中のＮ−ＢＯＣ−４−アミノ−１−ナフトエ酸（０．４６ｇ，１．６０mmol）、メチオニンメチルエステル塩酸塩（０．３５ｇ，１．７６mmol）、ＥＤＣＩ（０．４３ｇ，１．７６mmol）、ＨＯＢＴ（０．２４ｇ，１．７６mmol）及びＥｔ３Ｎ（０．２７ml）を実施例１においてＮ−ＢＯＣ−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルに関して述べたように反応させた。仕上げ処理し、酢酸エチルとヘキサンから再結晶させた後に、０．４４ｇ（６３．６％）の淡ピンク色結晶が得られた。
ｍｐ １３１−１３２℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．５７（９Ｈ，ｓ），２．１１−２．２１（４Ｈ，ｍ），２．２９−２．４１（１Ｈ，ｍ），２．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．８３（３Ｈ，ｓ），４．９９−５．０６（１Ｈ，ｍ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．０２（１Ｈ，ｓ），７．５６−７．５９（２Ｈ，ｍ），７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．８７−７．９０（１Ｈ，ｍ），８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），８．４４−８．４８（１Ｈ，ｍ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．５６，２８．３１，３０．１９，３１．６５，５２．０６，５２．６４，８１．１７，１１５．８２，１２０．１８，１２５．７９，１２６．３７，１２６．５３，１２７．１８，１３１．０２，１３５．６５，１５２．９３,１６９．０４，１７２．４０;ＨＲＭＳ計算値，Ｃ２２Ｈ２８Ｎ２Ｏ５Ｓとして，４３２．１７１９；実測値，４３２．１７０２；ｍ／ｚ（ＦＡＢ）４３３（Ｍ＋１）．
Ｄ．ＨＣｌ・４−アミノ−１−ナフトイルメチオニンメチルエステル
Ｎ−ＢＯＣ−４−アミノ−１−ナフトイルメチオニンメチルエステル（０．５７ｇ，１．３１mmol）をＨＣｌ／エーテルによって脱保護して、０．３１ｇ（６４．１％）の白色固体を得た。
ｍｐ １７８−１８１℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２．０８−２．１６（４Ｈ，ｍ），２．２０−２．３０（１Ｈ，ｍ），２．５７−２．７５（２Ｈ，ｍ），３．８２（３Ｈ，ｓ），４．８７−４．９１（１Ｈ，ｍ），７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７１−７．８０（２Ｈ，ｍ），８．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２．０Ｈｚ），８．３５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１．８Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１５．２３，３１．４０，５３．０１，５３．３３，１１９．９０，１２２．２０，１２６．１５，１２７．４１，１２７．７７，１２９．０９，１２９．３１，１３１．５０，１３２．３３，１３５．６４，１７１．７７，１７３．８３；ｍ／ｚ（ＦＡＢ），３６９（Ｍ＋１）．
Ｅ．Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−１−ナフトイルメチオニンメチルエステル
乾燥ＴＨＦ（１１．２ml）中のＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−Ｃｙｓ（０．３１ｇ，０．６７mmol）を、上述したように、Ｅｔ３Ｎ（０．１０ml）及びＩＢＣＦ（０．１０ml，０．７４mmol）と−１０℃において反応させた。乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３．５ml）中のＨＣｌ・４−アミノ−１−ナフトイルメチオニンメチルエステル（０．２５ｇ，０．６７mmol）を加え、混合物を窒素下で一晩撹拌した。この混合物を実施例１においてＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルに関して述べたように仕上げ処理し、粗生成物をヘキサンと酢酸エチルとの２：１混合物を用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーして、０．２０ｇ（３７．５％）の純粋な物質を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．４８（９Ｈ，ｓ），２．１０−２．２０（４Ｈ，ｍ），２．３０−２．３７（１Ｈ，ｍ），２．６３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４），２．７４（１Ｈ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，Ｊ＝５．３Ｈｚ），２．９０（１Ｈ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，６．２Ｈｚ），３．８１（３Ｈ，ｓ），４．９６−５．０３（２Ｈ，ｍ），６．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．１８−７．３３（１１Ｈ，ｍ），７．４４−７．５６（７Ｈ，ｍ），７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），８．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），８．９４（１Ｈ，ｂｒｓ)；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１５．２３，２６．５２，３１．４１，３１．５０，５２．９８，５３．３１，５６．７９，６８．１５，１２２．５２，１２３．５４，１２６．１６，１２６．９９，１２８．０３，１２８．３９，１２９．５２，１３２．３０，１３４．０４，１３５．２４，１６８．０８，１７２．３８，１７３．９４．
Ｆ．ＴＦＡ・システイン−４−アミノ−１−ナフトイルメチオニン，ＦＴＩ−２７０
Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル−システイン−４−アミノ−１−ナフトイルメチオニンメチルエステル（８３．３mg，０．１１mmol）をＴＨＦ（０．７ml）中に入れ、この混合物に０．５Ｍ ＬｉＯＨ（０．４３ml）を０℃において加えた。この混合物を０℃において３５分間撹拌した。冷水浴を用いて、溶媒を真空中で除去した。残渣を実施例２においてＴＦＡ・システイン−４−アミノ−３−メチルベンゾイルメチオニンに関して述べたように仕上げ処理して、７４．１mgの遊離酸を得た。次に、これをＣＨ２Ｃｌ２（１ml）中に溶解させ、Ｅｔ３ＳｉＨ（０．０１５ml）を加えた後に、ＴＦＡ（１ml）を加えた。この反応混合物を室温において１時間撹拌し、実施例２においてＴＦＡ・システイン−４−アミノ−３−メチルベンゾイルメチオニンに関してさらに述べたように仕上げ処理した。凍結乾燥させた後に、４２．４mgの粗生成物を得て、これをＨＰＬＣ上で水とアセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを用いて精製した。
ｍｐ １２１−１２５℃；〔α〕２５ Ｄ＝＋２．４°（ｃ＝０．８，Ｈ２Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２．０３−２．１３（４Ｈ，ｍ），２．２２−２．３６（１Ｈ，ｍ），２．５９−２．７４（２Ｈ，ｍ），３．１６−３．３３（２Ｈ，ｍ），４．４２（１Ｈ，ｍ），４．８４−４．８９（１Ｈ，ｍ），７．５７−７．６１（２Ｈ，ｍ），７．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），８．０８−８．１１（１Ｈ，ｍ），８．２９−８．３２（１Ｈ，ｍ），８．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）１５．１９，２６．４５，３１．５０，３１．６３，５３．２０，５６．７２，１２２．５２，１２３．４３，１２６．４３，１２６．１２，１２７．０２，１２７．９６，１２８．３２，１２９．４９，１３２．２７，１３４．１５，１３５．１２，１６８．１１，１７２．４１，１７５．１７；分析：計算値，Ｃ２１Ｈ２３Ｆ３Ｎ３Ｏ６Ｓ２として，Ｃ：４７．１９，Ｈ：４．３４，Ｎ：７．８６；実測値，Ｃ：４６．５３，Ｈ：４．５６，Ｎ：７．５９；注釈：Ｃの差異は０．６５である。
Ｇ．ＨＣｌ・システイン−４−アミノ−１−ナフトイルメチオニンメチルエステル ＦＴＩ−２７０・ＨＣｌ
ＴＦＡ・システイン−４−アミノ−１−ナフトイルメチオニン（０．１２ｇ，０．１５mmol）をＣＨ３ＯＨ（４．３ml）中に溶解させた。この溶液に、ＣＨ３ＯＨ（４．３ml）中のＨｇＣｌ２（０．２３ｇ，０．８６mmol）の溶液を加えた。上述したように操作を続け、ＨＣｌ／Ｅｔ２Ｏ沈殿及び数回の再沈殿後に、３１．０mg（１８．３％）の純粋な白色物質を得た。
ｍｐ昇華１３７℃，分解２１４−２１５℃；〔α〕２５ Ｄ＝−３２．０℃（ｃ＝１ ＣＨ３ＯＨ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）２．１２（３Ｈ，ｓ），２．２１−２．２８（１Ｈ，ｍ），２．５７−２．７３（３Ｈ，ｍ），３．２０−３．３４（２Ｈ，ｍ），３．８２（３Ｈ，ｓ），４．３９−４．４３（１Ｈ，ｍ），７．６１−７．６８（３Ｈ，ｍ），７．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），８．１３−８．１６（１Ｈ，ｍ），８．２８−８．３２（１Ｈ，ｍ）；１３Ｃ（ＣＤ３ＯＤ）１５．２３，２６．５２，３１．４１，３１．５０，５２．９８，５３．３１，５６．７９，１２２．５２，１２３．５４，１２６．１６，１２６．９９，１２８．０３，１２８．３９，１２９．５２，１３２．３０，１３４．０４，１３５．２４，１６８．０８，１７２．３８，１７３．９４．
ＦＴＩ−２５４の合成
Ａ．Ｎ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチルシステイナル
トリエチルアミン（２．２２ml，１６mmol）とＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１．５７ｇ，１６．１mmol）とを８５mlの塩化メチレン中のＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチルシステイン（７．４４ｇ，１６mmol）の溶液に加えた。この混合物を氷浴中で冷却し、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ，３．０８ｇ，１６．０mmol）とＨＯＢＴ（２．１７ｇ，１６mmol）とを加えた。この混合物を０℃において１時間撹拌し、室温においてさらに１０時間撹拌した。この混合物を塩化メチレンと０．５Ｎ ＨＣｌとによって抽出した。有機層を０．５Ｎ ＨＣｌと、濃ＮａＨＣＯ３と、ブラインとによって連続的に洗浄した。有機層を乾燥させ、蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１．５：１＝ヘキサン：酢酸エチル）によって精製して、白色泡状物（７．４０ｇ，９１％）を得た。
ｍ．ｐ．５９−６０℃（分解）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．４１（ｍ，６Ｈ），７．２０−７．３１（ｍ，９Ｈ），５．１３（ｄ，８．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ），２．５６（ｄｄ，４．７及び１２．１Ｈｚ，１Ｈ），２．３９（ｄｄ，７．８及び１２．１Ｈｚ，１Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７０．７，１５４．９，１４４．２，１２９．３，１２７．６，１２６．４，７９．３，６６．４，６１．２，４９．５，３３．８，３１．８，２８．１．
このカルボキシアミド（２．０２ｇ，４．０mmol）を３０mlのエーテル中に溶解させ、−１０℃に冷却した。水素化アルミニウムリチウム（１６７mg，４．４０mmol）を加え、混合物を窒素下で１５分間撹拌した。次に、４０mlの０．５ＮＨＣｌを加え、溶液をエーテルによって抽出した。エーテル層を０．５ＮＨＣｌによって洗浄し、乾燥させた。溶媒を蒸発させて、白色泡状物（１．８０ｇ）を得て、これを精製せずにさらなる反応に用いた。この化合物の１ＨＮＭＲスペクトルは複雑であった。アルデヒドの割合は約６５〜７０％であり、これはシャープな一重線（δ９．１７）とトリチルピーク（δ７．４０，ｍ，６Ｈ；７．２８，ｍ，９Ｈ）との集積(integration）によって算出した。温度を−４５℃に下げることはアルデヒドの割合を改良しなかった。
Ｂ．４−Ｎ− [２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルチオプロピル] アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル
１０mlのメタノール中の１当量のＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチルシステイナルを６０mlのメタノールと４mlの氷酢酸中の４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル塩酸塩（１．７８３６ｇ，５．６mmol）の溶液に加えた。シアノホウ水素化ナトリウム(sodium cyanoboronhydride)（０．５２８ｇ，８．４０mmol）をこの濃い色の溶液に０℃において加えた。混合物を室温において１５時間撹拌した。溶媒を蒸発させた後に、残渣を酢酸エチルと濃炭酸水素ナトリウムとによって抽出した。有機層を乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１：１）によって精製して、所望の純粋な生成物（２．５２ｇ，６５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．６３（ｄ，８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４３（ｍ，６Ｈ），７．２１−７．３２（ｍ，９Ｈ），６．７３（ｄ，７．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ アミド），６．５０（ｄ，８．６Ｈｚ，２Ｈ），４．９１（ｄｄｄ，５．１Ｈｚ，５．３Ｈｚ及び７．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ α Ｈ），４．５９（ｄ，８．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｂｏｃ アミド），４．２５−４．４０（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨＰｈ），３．８０（ｍ，１Ｈ，Ｃｙｓ α Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．０９（ｄ，６．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２ＮＨ），２．５５−２．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＳＣＰｈ３），２．４６（ｄ，５．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２ＳＣＨ３），２．２３−２．２８（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），２．０７−２．１２（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），２．０９（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ３），１．４３（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）．
Ｃ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル
完全に保護された４−Ｎ−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル（１．３１ｇ，１．８３mmol）を２０mlのメタノール中に溶解させた。この溶液に、５mlのメタノール中の塩化第２水銀（１．０９ｇ，４．０４mmol）を加えた。混合物を２０分間還流させてから、冷却した。透明な溶液を除去し、固体沈殿を５mlのメタノールで洗浄した。固体を乾燥させ、次に、１５mlのメタノール中に懸濁させた。懸濁液を撹拌し、硫化水素ガスと１時間反応させた。黒色沈殿を遠心分離によって取り出した。透明な溶液を蒸発乾固させた。残渣を６mlの塩化メチレン中に溶解させ、その後にエーテル中３Ｎ ＨＣｌ（２０ml）を添加した。白色沈殿を濾過し、乾燥させて、所望の生成物の塩酸塩（０．６０ｇ，７３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．７３（ｄ，８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．７５（ｄ，８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．７４（ｄｄ，４．９Ｈｚ及び４．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ α Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．４３−３．５９（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２ＮＨ 及び Ｃｙｓ α Ｈ），２．９３（ｄｄ，３．９Ｈｚ及び１４．４Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＨ），２．８１（ｄｄ，５．２Ｈｚ及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＨ），２．４９−２．６６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＳＣＨ３），２．０７−２．２０（ｍ，２Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），２．１０（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ３）．
Ｄ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノベンゾイルメチオニン
完全に保護されたペプチド４−Ｎ−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノベンゾイルメチオニンメチルエステル（５６７mg，０．７９mmol）を３．０mlの０．５Ｎ 水酸化リチウムと３．０mlのテトラヒドロフラン中に溶解させた。この混合物を０℃において１時間撹拌した。溶媒を蒸発させた後に、残渣を水中に溶解させ、塩化メチレンと１Ｎ塩酸とによって抽出した。有機相を乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残渣を１mlの塩化メチレンと２mlのトリフルオロ酢酸との混合物中に溶解させた。濃褐色が消失するまで、トリエチルシランを滴加した。混合物を室温に１時間維持した。溶媒を蒸発させ、残渣を乾燥させた。この残渣を酢酸中１．７Ｎ ＨＣｌ(１ml)中に溶解させた後に、エーテル中３Ｎ ＨＣｌ（２０ml）を添加した。白色沈殿を濾過し、乾燥させて、所望の生成物の塩酸塩（１５９mg，４６％）を得た。分析ＨＰＬＣは９８％を越える純度を示した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．７４（ｄ，８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．７５（ｄ，８．７Ｈｚ，２Ｈ），４．７３（ｄｄ，４．５Ｈｚ及び４．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ α Ｈ），３．４５−３．５８（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２ＮＨ 及び Ｃｙｓ α Ｈ），２．９３（ｄｄ，４．５Ｈｚ及び１４．６Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＨ），２．８０（ｄｄ，５．３Ｈｚ及び１４．６Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＨ），２．５３−２．６４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＳＣＨ３），２．１５−２．２３（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），２．０７−２．１３（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），２．１０（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ３）．
ＦＴＩ−２８４の合成
Ａ．４−ニトロ−２−フェニルベンゾイル−［１’（Ｓ）−メトキシカルボニル−３’−メチルスルホニル］プロピルアミド
４−ニトロ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル（５２５mg，１．２８mmol）と、Ｎ−メチルモルホリンオキシド（４５３mg，３．８７mmol）と、０．５mlの四酸化オスミウム（tert−ブタノール中の２．５重量％溶液）とを４０mlのアセトンと１０mlの水との混合物に加えた。この混合物を室温において一晩撹拌した。過剰な亜硫酸ナトリウムの添加後に、反応混合物を酢酸エチルによって抽出し、濃炭酸水素ナトリウムによって洗浄した。有機相を乾燥させ、溶媒を蒸発させ、固体（５７０mg，１００％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２９（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４３−７．５５（ｍ，５Ｈ），６．１５（ｄ，７．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ アミド），４．６８（ｄｄｄ，５．０Ｈｚ，５．１Ｈｚ及び７．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ α Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），２．８５（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ３），２．６９−２．８１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＯ２），２．５８−２．６６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＯ２），２．２１−２．３３（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），１．９６−２．０８（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２）．
Ｂ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−［１’（Ｓ）−メトキシカルボニル−３’−メチルスルホニル］プロピルアミド
４−ニトロ−２−フェニルベンゾイル−［１’（Ｓ）−メトキシカルボニル−３’−メチルスルホニル］プロピルアミド（４３０mg，１．０２mmol）を２０mlのメタノール中に溶解させた。炭素担体付き５％パラジウムの触媒量を加え、混合物を４０ＰＳＩにおいて１．５時間水素化した。混合物を濾過し、濾液を蒸発乾固させ、４−アミノ生成物（４００mg，１００％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．７０（ｄ，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３８−７．４７（ｍ，７Ｈ），４．５３（ｄｄ，４．６Ｈｚ及び４．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ α Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），２．８９（ｓ，３Ｈ，ＳＯ２ＣＨ３），２．７９−２．８５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＯ２），２．５８−２．６８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＯ２），２．１９−２．２９（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），１．９３−２．０４（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２）．
このアミンを１５mlのメタノールと０．８mlの酢酸中に溶解させた。１当量のＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチル−システイナルを加えた後に、シアノホウ水素化ナトリウム（９７mg，１．５当量）を添加した。この混合物を室温において一晩撹拌した。溶媒の蒸発後に、残渣を酢酸エチルと濃炭酸水素ナトリウムとによって抽出した。有機相を乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール＝１５：１５：２）によって精製して、純粋な生成物（５００mg，６０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．６４（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３７−７．４６（ｍ，１１Ｈ），７．１８−７．３３（ｍ，９Ｈ），６．５３（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３４（ｓ，１Ｈ），５．７４（ｄ，７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ アミド），４．６４（ｄｄｄ，４．９Ｈｚ，５．１Ｈｚ及び７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ α Ｈ），４．５５（ｄ，７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｂｏｃ アミド），４．２６（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨＰｈ），３．７９（ｍ，１Ｈ，Ｃｙｓ α Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．１０（ｔ，５．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２ＮＨＰｈ），２．８４（ｓ，３Ｈ，ＳＯ２ＣＨ３），２．６２−２．８２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＳＯ２），２．４５（ｄ，２Ｈ，ＣＨ２ＳＣＰｈ３），２．１９−２．２７（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），１．８４−１．９５（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），１．４１（ｓ，９Ｈ）．
Ｃ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−[１’（Ｓ）−メトキシカルボニル−３’−メチルスルホニル]プロピルアミド，ＦＴＩ−２８４
完全に保護されたペプチド ４−Ｎ−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−［１’（Ｓ）−メトキシカルボニル−３’−メチルスルホニル］プロピルアミド（２７７mg，０．３３mmol）を５mlのメタノール中に溶解させた。この溶液に、２mlのメタノール中の塩化第２水銀（２２９mg，２．５０当量）を加えた。この混合物を２０分間還流させた。沈殿を乾燥させてから、１０mlのメタノール中に懸濁させた。この混合物を硫化水素ガスと反応させた。反応混合物を遠心分離し、透明な溶液を蒸発させた。残渣を２mlの塩化メチレン中に溶解させた後に、エーテル中の２０mlの３Ｎ ＨＣｌを添加した。白色沈殿を回収し、乾燥させて、所望の生成物の塩酸塩（１６５mg，８９％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．４４（ｄ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．４０（ｍ，５Ｈ），６．７７（ｄ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），４．４５（ｄｄ，４．５Ｈｚ及び４．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ α Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．４０−３．５７（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２ＮＨＰｈ 及び Ｃｙｓ α Ｈ），２．７８−２．９６（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２ＳＨ 及び ＣＨ２ＳＯ２），２．８９（ｓ，３Ｈ，ＳＯ２ＣＨ３），２．６０−２．６９（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＯ２），２．１５−２．２４（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），１．９１−２．０２（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２）．
ＦＴＩ−２７７の合成
Ａ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニル−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル
１．５当量のシアノホウ水素化ナトリウムの存在下での４−アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル（３．８８ｇ，１０mmol）と１当量のＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチルシステイナルとのカップリングによって粗混合物を得て、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１：１）によって精製して、純粋な所望の生成物（５．８３ｇ，７４％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．６５（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．４５（ｍ，１１Ｈ），７．１８−７．３０（ｍ，９Ｈ），６．５０（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｓ，１Ｈ），５．６５（ｄ，７．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ アミド），４．６２（ｄｄｄ，５．０Ｈｚ，５．２Ｈｚ及び７．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ α Ｈ），４．５４（ｄ，８．１Ｈｚ，Ｂｏｃ アミド），４．１８（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨＰｈ），３．７８（ｍ，１Ｈ，Ｃｙｓ α Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．１０（ｔ，６．１Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２ＮＨＰｈ），２．４５（ｄ，５．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２ＳＣＰｈ３），２．０４−２．１０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＳＣＨ３），２．００（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ３），１．８１−１．９２（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），１．６１−１．７０（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），１．４０（ｓ，９Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７２．０，１６８．３，１５５．７，１４９．４，１４４．３，１４１．６，１４１．１，１３１．３，１２９．５，１２８．７，１２８．５，１２７．９，１２７．７，１２６．８，１２２．６，１１３．６，１１１．３，７９．８，６７．１，５２．２，５１．７，４９．５，４７．２，３４．３，３１．６，２９．４，２８．３，１５．２．
Ｂ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル，ＦＴＩ−２７７
完全に保護されたペプチド ４−Ｎ−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニル−３−トリフェニルメチル−チオプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル（１．５７ｇ，２．０mmol）を最初に塩化第２水銀（１．３６ｇ，５．０mmol）と反応させ、次に、メタノール中で硫化水素ガスと反応させて、所望の生成物の塩酸塩（０．８０８ｇ，８４％）を得た。分析ＨＰＬＣは９８％を越える純度を示した。
〔α〕２５ Ｄ＝−１２．１°（ｃ＝０．００８，ＣＨ３ＯＨ）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．４２（ｄ，８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．３８（ｍ，５Ｈ），６．７８（ｄ，８．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｓ，１Ｈ），４．４７（ｄｄ，４．２Ｈｚ及び５．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ α Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．４４−３．５４（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２ＮＨＰｈ及びＣｙｓ α Ｈ），２．９４（ｄｄ，４．１Ｈｚ及び１４．６Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＨ），２．８１（ｄｄ，５．０Ｈｚ及び１４．６Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＨ），２．１２−２．２２（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＣＨ３），２．０３−２．１０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＣＨ３），２．００（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ３），１．９０−１．９７（ｍ，１Ｈ，ＭｅｔＣＨ２），１．７３−１．８２（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１７３．７，１７３．４，１５０．７，１４３．５，１４２．３，１３１．２，１２９．８，１２９．５，１２８．６，１２５．６，１１５．６，１１２．２，５３．７，５３．２，５２．８，４５．０，３１．３，３０．８，２５．３，１５．０．
ＦＴＩ−２７６の合成
４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニン
完全に保護されたペプチド ４−Ｎ−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニル−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイルメチオニンメチルエステル（２．３６ｇ，３mmol）を最初に水酸化リチウムと反応させ、次にトリフルオロ酢酸と反応させて、粗生成物（１．３０ｇ，７７％収率，ＨＰＬＣによって８５％純度を示す）を得て、これを分取ＨＰＬＣによってさらに精製して、純粋な生成物（０．９８ｇ，７５％）を得た。
〔α〕２５ Ｄ＝−１３．６°（ｃ＝０．００５，ＣＨ３ＯＨ）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．４４（ｄ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．４１（ｍ，５Ｈ），６．７５（ｄ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），４．４３（ｄｄ，４．２Ｈｚ及び５．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｍｅｔ α Ｈ），３．４４−３．５８（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２ＮＨＰｈ 及び Ｃｙｓ α Ｈ），２．９５（ｄｄ，４．４Ｈｚ及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＨ），２．８３（ｄｄ，５．０Ｈｚ及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＨ），２．１４−２．２３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＣＨ３），２．０５−２．１１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＳＣＨ３），２．００（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ３），１．９１−１．９９（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２），１．７２−１．８１（ｍ，１Ｈ，Ｍｅｔ ＣＨ２）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１７６．４，１７３．５，１５０．４，１４３．０，１４１．５，１３１．０，１２９．７，１２９．４，１２８．９，１２４．６，１１５．０，１１２．２，５３．３，４４．４，３０．８，３０．１，２４．９，１４．８．
本発明の他の化合物（特に、請求項［１４〜１８］の化合物）は、請求項３の２−フェニル−４−アミノ安息香酸誘導体に関して述べた方法の変更法(modification)によって合成可能である。特に、Suzukiカップリング方法の変更法はアルコキシ−、クロロ、ブロモ又はメチル置換されたフェニル基を４−アミノ安息香酸スペーサーに導入することを可能にする。非置換誘導体に対すると同様に、４−ニトロ−２−ブロモトルエンを対応置換フェニルボロン酸誘導体（アルコキシフェニル又はクロロー、ブロモー又はメチルフェニルボロン酸）と、パラジウム触媒作用条件下でカップリングさせることができる。２−フェニルの場合に述べたように、適当に置換された２−（置換）フェニル−４−ニトロトルエン誘導体はペプチド模倣体合成に組込まれることができる。
同様な方法で、２−ナフチル−，２−チオフェン−，２−ピロール−及び２−ピリジル−４−アミノ安息香酸スペーサーの先駆体は４−ニトロ−２−ブロモトルエンと、ナフタレン−２−ボロン酸、チオフェン−２−ボロン酸、ピロール−２−ボロン酸、ピリジン−２，３−又は４−ボロン酸との反応によって製造することができる。
ＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩとの活性分析
ヒトＢｕｒｋｉｔｔリンパ腫（Ｄａｕｄｉ）細胞（ＡＴＣＣ，米国，メリーランド州，ロックヴィル）の６０，０００ｘｇ上清からのＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩ活性をＦＴアーゼに関して既述したように分析した（４１）。簡単には、１００μg の上清を５０mM Ｔｒｉｓ、 pH ７．５、５０μM ＺｎＣｌ２、２０mMＫＣｌ及び１mMジチオトレイトール（ＤＴＴ）中でインキュベートした。この反応をＦＴアーゼに対しては組換え体Ｈａ−Ｒａｓ−ＣＶＬＳ（１１μM ）及び[３Ｈ］ＦＰＰ（６２５nM；１６．３Ci／mmol）と共に、ＧＧＴアーゼＩに対しては組換え体Ｈａ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ（５μM ）及び[３Ｈ］ゲラニルゲラニルピロホスフェート（５２５nM；１９．０Ci／mmol）と共に３０℃において３０分間インキュベートした。ペプチド模倣体をＦＴアーゼ及びＧＧＴアーゼと混合してから、反応混合物に加えた。
Ｒａｓ及びＲａｐ１Ａプロセシング分析
１００mm Ｄｉｓｋ（costar) におけるＤｕｌｂｅｃｃｏの修飾イーグル培地（ＧＩＢＣＯ）中にＨ−ＲａｓＦ細胞（４５）を０日目に接種して(seeded)、４０〜６０％集密度(confluency)にまで増殖させた。１日目と２日目に、培地４ml／プレートを種々な濃度のＦＴＩ−２７７又はビヒクルと共に細胞に供給した。３日目に、細胞を氷冷ＰＢＳによって１回洗浄し、回収し、氷上の溶解緩衝剤中で３０〜６０分間インキュベートすることによって溶解させた（４１）。溶解産物を清澄化させ(cleared）（１４，０００rpm ，４℃，１５分間）、上清を回収した。等量の溶解産物を１２．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上に分離して、ニトロセルロースに移し、抗Ｒａｓ抗体（Ｙ１３−２３８，ＡＴＣＣ）又は抗Ｒａｐ１Ａ抗体（Santa Cruz Biotechnology, カリフォルニア州，サンタクルズ）を用いてウェスタンブロット法をおこなった。Ｙ１３−２３８に対してはペルオキシダーゼ抱合(peroxidase-conjugated）ヤギ抗ラットＩｇＧ、Ｒａｐ１Ａに対してはペルオキシダーゼ抱合ヤギ抗ウサギＩｇＧを、強化化学発光検出系（ＥＣＬ；Amersham Corp.）と共に用いて、抗体反応を可視化した。
ＲａｆとＲａｓとの同時免疫沈殿
１００mmの皿における１０％ウシ血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）と１％ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ（ＧＩＢＣＯ）とを補充したＤｕｌｂｅｃｃｏの修飾イーグル培地（ＧＩＢＣＯ）（１０ml）中に細胞を０日目に接種した。１日目と２日目に、細胞をＦＴＩ−２７７（５μM ）又はビヒクルによって処理した（細胞４０〜６０％の集密度）。３日目に、細胞を氷冷ＰＢＳ中での遠心分離によって回収した。次に、細胞ペレットを氷冷低張性緩衝剤（１０mM Ｔｒｉｓ、pH７．５、５mMＭｇＣｌ２、１mM ＤＴＴ、１mM ＰＭＳＦ）中に再懸濁させ、細胞を音波処理して、細胞ペレットを破壊して、細胞質ゾルと膜との分離を促進させた。次に、細胞懸濁液を２，０００rpm で１０分間遠心分離して、デブリ（debri)を清澄化させ、その後に上清を超遠心分離管に入れ、ＳＷ Ｔｉ５５ローターに対する１００，０００ｘｇにおいて３０分間回転させて、膜画分と細胞質ゾル画分とを分離した。膜画分と細胞質ゾル画分とを氷上で、３０mM ＨＥＰＥＳ、pH７．５、１％ＴＸ−１００、１０％グリセロール、１０mM ＮａＣｌ、５mM ＭｇＣｌ２、２mM Ｎａ３ＶＯ４、２５mM ＮａＦ、１mM ＥＧＴＡ、１０μM 大豆トリプシン、２５μg ／mlロイペプチン、１０μg ／ml アプロチニン、２mM ＰＭＳＦを含有する緩衝剤中で６０分間溶解させた。溶解産物を遠心分離によって清澄化させた。等量の細胞質ゾル画分と膜画分とを、５０μl の２５％プロティンＡセファロースＣｌ−４Ｂ懸濁液（Sigma)を１μf ／mlの抗ｃ−Ｒａｆ−１（ＳＣ１３３，Santa Cruz Biotechnology, カリフォルニア州，サンタクルズ）と共に用いて免疫沈殿させた。サンプルを４℃において６０分間タンブリングさせ(tumbled) 、次に、５０mM ＨＥＰＥＳ、pH７．５、１００mM ＮａＣｌ、５mM ＭｇＣｌ２、０．１％ＴＸ−１００、１０％グリセロール、２０mM ＮａＦ中で５回洗浄した。最終ペレットを１２．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上でランして、ニトロセルロースに移し、Ｒａｓの存在に関しては抗Ｒａｓ抗体(Ｙ１３−２３８)を用いて免疫ブロットし、Ｒａｆの存在に関しては（ｃ−Ｒａｆ−１、ＳＣ１３３、Santa CruzBiotechnology,カリフォルニア州，サンタクルズ）を用いて免疫ブロットした。検出は、Ｒａｓ及びＲａｐ１Ａプロセシングに関して上述した検出と同じであった。
Ｒａｓに結合したＧＴＰ及びＧＤＰの検出（ＦＴＩ−２７７）
Ｈ−ＲａｓＦ細胞をＲａｓ／Ｒａｆ相互作用及びＲａｓとＲａｐ１Ａとのプロセシングに関して上述したように、接種し、処理した。しかし、２日目に、１０％ウシ血清と、１mg／mlのＢＳＡと、２０mM ＨＥＰＥＳ（pH７．５）とを補充した１０mlのＤＭＥＭ−ホスフェート中で１００μ Ci ／moの［３２Ｐ］オルトホスフェート（Amersham ＰＢＳ１３）によって一晩、細胞を標識した。３日目に、培地を除去し、細胞を氷冷ＰＢＳによって１回洗浄し、細胞スクラパー(cell scraper)によってプレートから削りとり、回収し、遠心分離した。細胞ペレットを上記氷冷低張性緩衝剤中に再懸濁させ、Ｒａ／Ｒａｆ会合に関して上述したように、細胞質ゾル画分と膜画分とを分離させた。次に、細胞質ゾル画分と膜画分とを氷上で、５０mM Ｔｒｉｓ、pH７．５、５mM ＭｇＣｌ２、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（ＴＸ−１００）、０．５％ＤＯＣ、０．０５％ＳＤＳ、５００mM ＮａＣｌ、１mM ＥＧＴＡ、１０μg ／ml アプロチニン、１０μg ／mlの大豆トリプシン阻害剤、２５μg ／ml ロイペプチン、１mM ＤＴＴ、１mg／ml ＢＳＡ中において６０分間溶解させた。溶解産物を清澄化させ、抗Ｒａｓ抗体（Ｙ１３−２５９）を３０μl のプロティンＡアガロースヤギ抗ラットＩｇＧ複合体（Oncogene Science) と共に用いて、等量のタンパク質を４℃において６０分間免疫沈殿させた。免疫沈殿物を、５０mM ＨＥＰＥＳ、pH７．５、０．５Ｍ ＮａＣｌ、０．１％ＴＸ−１００、０．０００５ＳＤＳ、５mM ＭｇＣｌ２中で６回洗浄し、注射器を用いて排液させ(drained) 、１２μl の５mM ＤＴＴ、５mMＥＤＴＡ、０．２％ＳＤＳ、０．５mM ＧＤＰ及び０．５mM ＧＴＰ中で６８℃において２０分間、結合ヌクレオチドを溶離させた。免疫複合体を迅速に回転させ、６μl の上清をＰＥＩセルロース薄層クロマトグラフィープレート（２０cmｘ２０cm）上に供給した。ヌクレオチドを７８ｇ／リンターのギ酸アンモニウム、９．６％（ｖ／ｖ）濃ＨＣｌ中でのクロマトグラフィーによって分離させた。プレートをオートラジオグラムによって分析した。
Ｒａｆ−Ｉキナーゼ活性の分析
［γ−３２Ｐ］ＡＴＰからホスフェートを、自動リン酸化(autophosphorylation）部位を含有する１９マーペプチドに移すＲａｆの能力を評価することによって、Ｒａｆ−Ｉキナーゼを分析した。膜画分と細胞質ゾル画分の単離物とＲａｆ免疫沈殿物とを冷ＨＥＰＥＳ緩衝剤によって３回、キナーゼ緩衝剤（５０mM Ｔｒｉｓ、pH７．５、１５０mM ＮａＣｌ、１２mMＭｎＣｌ２、１mM ＤＴＴ、０．２％ Tween ２０）によって２回洗浄した。２０μCiの［γ−３２Ｐ］ＡＴＰ（１０ mCi／ml，Amersham）と２μl のＲａｆ−１基質ペプチド（１mg／ml，Promega)とを含む９６μl のキナーゼ緩衝剤中で、膜画分と細胞質ゾル画分とからの免疫沈殿物を２５℃において３０分間インキュベートすることによって、免疫複合体キナーゼ分析をおこなった。Ｒａｆ−１基質ペプチドの配列はＩＶＱＱＦＧＦＱＲＲＡＳＤＤＧＫＬＴＤである。分析混合物の５０μl アリコートを０．５％オルトリン酸中で４０分間にわたってWhatman Ｐ８１上にスポットすること(spotting)によって、リン酸化反応を停止させ、風乾させた。３２Ｐの組込まれた量を液体シンチレーション計数によって測定した。
ＦＴＩ−２７６及びその他の化合物によるＦＴアーゼの阻害
図１Ｂは、ＦＴＩ−２７６は[３Ｈ］ＦＰＰから組換え体Ｈ−Ｒａｓ−ＣＶＬＳへのファルネシルの転移を５００pMのＩＣ５０で阻害したことを実証する。ＦＴＩ−２４９（ＦＴＩ−２７６の親化合物）はＦＴアーゼを２００，０００pMのＩＣ５０で阻害した。したがって、安息香酸スペーサーの２位置におけるフェニル環はＦＴアーゼの阻害効力を４００倍に高め、このことはＦＴアーゼのＣＡＡＸ結合部位内に顕著な疎水性ポケットが存在すると言う我々の予想を確証した。この非常に強力な阻害剤はまた、密接に関連したＧＧＴアーゼＩに比べてＦＴアーゼに対して高度に選択的（１００倍）である（図１Ｂ）。ＦＴＩ−２７６は[３Ｈ］ＧＧ−ＰＰから組換え体Ｈ−Ｒａｓ−ＣＶｌｌへのゲラニルゲラニルの転移を５０nMのＩＣ５０で阻害した（図１Ｂ）。この１００倍の選択性は親化合物、ＦＴＩ−２４９の１５倍の選択性よりも優れている。他の重要な化合物の幾つかに関するデータを表１に示す。
Figure 2007016035
ＲａｓプロセシングのＦＴＩ−２７７による阻害
細胞取り込みを促進するために、Ｒａｓプロセシングの阻害を測定する実験にＦＴＩ−２７７（ＦＴＩ−２７６のメチルエステル）を用いた。Ｈ−ＲａｓＦ細胞（癌遺伝子（６１ロイシン）Ｈ−Ｒａｓ−ＣＶＬＳによって形質転換されたＮＩＨ３Ｔ３細胞）（４５）をＦＴＩ−２７７（０〜５０μM ）によって処理し、溶解産物を抗Ｒａｓ又は抗Ｒａｐ１Ａ抗体によってブロットした。図２Ａに示すように、１０nM程度の低い濃度がＲａｓプロセシングを阻害したが、１０μM 程度の高い濃度はゲラニルゲラニル化Ｒａｐ１Ａのプロセシングを阻害しなかった。ＦＴＩ−２７７はＲａｓプロセシングを１００nMのＩＣ５０で阻害した。これに反して、ＦＴＩ−２４９のＩＣ５０は１００μM であり、今までに報告された最も強力なＣＡＡＸペプチド模倣体はＲａｓプロセシングを１０μM 以上の濃度で阻害した（４４）。
ゲラニルゲラニル化プロセシングではなくファルネシル化プロセシングに対するＦＴＩ−２７７の選択性は図２Ｂにおいてさらに実証する。Ｈ−ＲａｓＧＧ細胞（癌遺伝子（６１ロイシン）Ｈ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬによって形質転換されたＮＩＨ３Ｔ３細胞）（４５）をＦＴＩ−２７７によって処理した。ＲａｓＧＧのプロセシングは影響されなかったが、ＲａｓＦのプロセシングは完全に阻害された。内因性ＲａｓのプロセシングもｐＺＩＰｎｅｏ細胞（癌遺伝子Ｒａｓ配列を含有しないベクターを除いてＨ−ＲａｓＦ及びＨ−Ｒａｓ−ＦＦと同じプラスミドによってトランスフェクトされた(transfected) ＮＩＨ３Ｔ３細胞）とＲａｆ細胞（活性化ウイルスＲａｆによって形質転換されたＮＩＨ３Ｔ３細胞（４８））とにおいて阻害される。
Ｒａｓ癌遺伝子シグナリングのＦＴＩ−２７７による分断機構
Ｒａｓはチロシンキナーゼ受容体からの生物学的情報を核へ、一連のＭＡＰＫの活性化によって供給する（２９〜３１において考察）。成長因子が刺激されると、ＲａｓはＧＴＰ結合形になり、ｓｅｒ／ｔｈｒキナーゼ（ｃ−Ｒａｆ−１）を形質膜に補充することができ(recruit)、これは形質膜で活性化される。次に、ｃ−Ｒａｆ−１は、ＭＡＰＫを活性化するＭＥＫ(二重ｔｈｒ／ｔｙｒキナーゼ)をリン酸化し、活性化する。最近、上皮増殖因子がＲａｆとＲａｓとの会合を誘発することが判明している（４６）。
ＦＴＩ−２７７がＲａｓ癌遺伝子シグナリングを分断する機構を知るために、ＮＩＨ３Ｔ３細胞を活性化（ＧＴＰロックト(locked)）Ｒａｓによってトランスフェクトし、Ｒａｓとその直接のエフェクターＲａｆとの相互作用に対するＦＴＩ−２７７の効果を研究した。種々なＮＩＨ３Ｔ３細胞トランスフェクタント(transfectant)（ｐＺＩＰｎｅｏ、Ｈ−ＲａｓＦ及びＨ−ＲａｓＧＧ）をビヒクル又はＦＴＩ−２７７によって処理し、膜画分と細胞質ゾル画分とを単離し、上述したように抗Ｒａｆ抗体によって免疫沈殿させた。図３に示すように、ＧＴＰロックトＲａｓを含有しないｐＺＩＰｎｅｏ細胞では、ＲａｆはＲａｓと会合しなかった。これに反して、Ｈ−ＲａｓＦとＨ−ＲａｓＧＧ細胞とは、図３に示すように、膜ではＲａｓ／Ｒａｆ複合体を含有するが、細胞質画分では含有しない。これらの細胞のＦＴＩ−２７７による処理はＨ−ＲａｓＦ細胞の細胞質ゾル画分ではＲａｓ／Ｒａｆ複合体の蓄積を生じたが、膜画分では生ぜず、Ｈ−ＲａｓＧＧ細胞においてはＲａｓ／Ｒａｆ複合体の蓄積を生じなかった（図３）。したがって、細胞膜におけるＲａｓ／Ｒａｆ相互作用の分断と細胞質におけるこれらの複合体の蓄積とはＲａｓ−Ｆにおいてのみ生じ、Ｒａｓ−ＧＧ細胞では生じず、このことは図２のＲａｓプロセシング選択性の結果と一致する。したがって、これらの結果は、ＦＴＩ−２７７による阻害がＲａｆに結合することができる非ファルネシル化細胞質ゾルＲａｓの蓄積を生じることを実証する。非プロセシング(non-processed) Ｒａｓが非膜細胞質環境においてＲａｆと会合することができるという事実は、ファルネシル化部位を有さず、それ故、細胞質中に残留するＧＴＰロックトＲａｓ（６１ロイシン癌遺伝子突然変異と１８６セリン突然変異とによるＲａｓ突然変異体）によってＮＩＨ３Ｔ３細胞をトランスフェクトし、これらの細胞がＲａｆによって免疫沈殿させ、抗Ｒａｓ抗体によってブロットしたときに細胞質Ｒａｓ／Ｒａｆ複合体のみを含有することを示すことによって（図３）、確証された。要約すると、ＲａｓがＲａｆに結合するためにファルネシル化は必要ではない。
Ｒａｓのヌクレオチド状態の決定
ＲａｆがＲａｓ−ＧＤＰよりも非常に大きいアフィニティでＲａｓ−ＧＴＰを結合するという事実を利用して、細胞質Ｒａｓ／Ｒａｆ複合体中のＲａｓのヌクレオチド状態を上述のように決定した。Ｒａｓ−Ｆ細胞では、図４Ａに示すように、膜画分のみがＧＴＰロックトＲａｓを含有した。しかし、ＦＴＩ−２７７によって処理すると、非ファルネシル化細胞質ゾルＲａｓはＧＴＰ結合することが判明した。したがって、６１ロイシンＲａｓへのＧＴＰの結合はＲａｓプロセシングとその後の形質膜会合とを必要としない。Ｒａｓ／Ｒａｆ複合体中のＲａｆのｓｅｒ／ｔｈｒキナーゼ活性は、Ｒａｆを免疫沈殿させ、１９マー自動リン酸化ペプチドをリン酸化するその能力に関して分析することによって測定した。図４Ｂは、癌遺伝子Ｒａｓ−Ｆが形質膜におけるＲａｆの活性化を誘発したこと及びＦＴＩ−２７７による処理がこの活性化を抑制したことを示す。さらに重要なことには、ＦＴＩ−２７７によって誘発された細胞質Ｒａｓ／Ｒａｆ複合体（図３）が親ＮＩＨ３Ｔ３細胞ラインｐＺＩＰｎｅｏの活性に匹敵する基底レベルのＲａｆキナーゼ活性を有した（図４Ｂ）。図３と図４は、一緒に考察すると、ＧＴＰロックトＲａｓによる癌遺伝子形質転換が形質膜への構造的補充(constitutive recruitment)と、Ｒａｆのその後の活性化とを生じることを実証する。さらに、ＦＴＩ−２７７によるＦＴアーゼ阻害が、ＲａｓがＧＴＰ結合しているがＲａｆキナーゼは活性化されない細胞質におけるＲａｓ／Ｒａｆ複合体の蓄積を誘発することによってこの活性化を抑制する。Ｒａｆキナーゼが非膜環境においてＲａｓに結合しているときには活性化されないという事実は、Ｒａｆ活性化が形質膜における活性化因子を今後決定することを必要とすることを示す最近の報告と一致する（４７）。
次に、ＭＡＰＫの癌遺伝子Ｒａｓ活性化、Ｒａｆ下流シグナリングイベントに対するＦＴＩ−２７７の効果を研究するために実験をおこなった（２９−３１）。活性化ＭＡＰＫはＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて緩慢に移動するので、ＭＡＰＫの癌遺伝子活性化は容易に決定されることができる。図５Ａは、ｐＺＩＰｎｅｏによってトランスフェクトされたＮＩＨ３Ｔ３細胞が不活性なＭＡＰＫのみを含有するが、癌遺伝子Ｈ−Ｒａｓによって形質転換されると、ＭＡＰＫが活性化されることを示す（図５Ａ）。ＦＴＩ−２７７による前処理はＭＡＰＫの癌遺伝子Ｒａｓ活性化の濃度依存性阻害を生じる。３００nM程度の低い濃度が有効であり、１μM においてブロックが完成した。図３と図５は、一緒に考察すると、ＭＡＰＫ活性化の完全な抑制のためにはＲａｓプロセシングの少なくとも５０％の阻害が必要であるが、ＲａｓによるＭＡＰＫ活性化の完全な抑制のためにはＲａｓプロセシングの１００％未満の阻害が必要であることを実証する。種々な癌遺伝子によって形質転換されたＮＩＨ３Ｔ３細胞ライン系列を用いて、ＭＡＰＫ活性化の阻害がＲａｓ機能の選択的な拮抗によるものであるか否かを決定した。図５Ｂは、ＦＴＩ−２７７がＭＡＰＫのＨ−ＲａｓＦ活性化を阻害することができるがＨ−ＲａｓＧＧ活性化を阻害することができないことを示す。このことは、ＦＴＩ−２７７がＨ−ＲａｓＦプロセシングを阻害するがＨ−ＲａｓＧＧプロセシングを阻害しないその能力と一致する（図２）。ＭＡＰＫのＲａｓ依存性活性化に拮抗するＦＴＩ−２７７の選択性が、Ｒａｆ癌遺伝子による形質転換によって構造的に活性化されるＮＩＨ３Ｔ３細胞を用いることによって実証された。図５Ｂは、内因性Ｒａｓのプロセシングがこれらの細胞において阻害されたとしても、ＭＡＰＫの癌遺伝子Ｒａｆ活性化がＦＴＩ−２７７によって阻害されないことを示す。同様な結果がＦＴＩ−２７６によっても得られた（図６）。これらの結果は、一緒に考察すると、ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７とがＭＡＰＫの構造的Ｒａｓ特異性活性化の分断において非常に効果的かつ選択的であることを明らかに実証する。
したがって、ＦＴＩ−２７７は非常に強力でかつ高度に選択的なＦＴアーゼ阻害剤である。この化合物は１０nM程度の低い濃度でＲａｓプロセシングを阻害し、プロセシングは１μM において阻止された。今までに報告された最も強力な阻害剤のＢＺＡ−５Ｂは１５０μM において初めてＲａｓプロセシングを阻止した
（４４）。
ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７との抗腫瘍効力と選択性
抗癌剤としてのこれらの阻害剤の効力を実証し、これらの化合物が多重の複雑な遺伝的変化を有するヒト腫瘍の腫瘍増殖を阻害することができることを示すために、ヒト腫瘍細胞ラインを用いて抗腫瘍効力実験をおこなった。本発明の化合物の可能な用途に関連した重要な問題は、Ｋ−Ｒａｓ突然変異を有するヒト腫瘍の増殖が阻止されうるか否かである。このことは、Ｋ−Ｒａｓ突然変異はヒト癌において最も一般的に存在し、Ｋ−Ｒａｓプロセシングはこれより一般的でないＨ−Ｒａｓのプロセシングよりも阻害されることが困難であるので、抗癌剤としてのＦＴアーゼ阻害剤をさらに開発するために重要である（１−３，１５）。さらに、ヒト腫瘍の大部分は多重の遺伝的変化を有し；特に、腫瘍サプレッサー遺伝子ｐ５３のデレーション(delation)が最も一般的である。それ故、Ｋ−Ｒａｓ突然変異並びにｐ５３の欠失(deletion)を有するヒト腫瘍の増殖を停止させるためにＲａｓ機能の阻害が充分であるか否かを知ることが非常に重要である。
ＦＴＩ−２７６の抗腫瘍効力を評価するために、ヌードマウス異種移植モデルを用いた。このモデルでは、２種類のヒト肺癌細胞ラインからの腫瘍を皮下に移植する。これらの１種（Ｃａｌｕ−Ｉ）はＫ−Ｒａｓ癌遺伝子突然変異を含み、腫瘍サプレッサー遺伝子ｐ５３の欠失を有する。他方のヒト肺癌（ＮＣＩ−Ｈ１８０）はＲａｓ突然変異を有さない。ｓ．ｃ．移植後３２日目に腫瘍が６０〜８０mm３のサイズに達したときに、マウスを対照群と処置群（４動物／群；各動物は右わき腹と左わき腹の両方に腫瘍を有する）とにランダムに分離した。図７Ａは、３６日目から出発して毎日生理的食塩水のみで処置した対照動物からの腫瘍が腫瘍移植から６４日間の期間にわたって５６６mm３の平均サイズまで成長したことを示す。これに反して、ＦＴＩ−２７６（５０mg／kg）によって１日１回処置した腫瘍は殆ど成長せず、平均腫瘍サイズは１１３mm３であった（図７Ａ）。別の実験では、ＦＴＩ−２７７（ＦＴＩ−２７６のメチルエステル）はＣａｌｕ−Ｉ細胞の成長を同じ程度に阻害した（図８）。動物を１日１回５０mg／kgによって３６日間（１．８ｇ／kgの総累積投与量）処置したが、体重損失は観察されず、動物は全体的毒性(gross toxicity)の徴候を示さず正常に見えた。この毒性欠如は、投与量を１日１回１８０mg／kgまで増加させた別の実験においても観察された。したがって、ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７とはＣａｌｕ−Ｉ癌の腫瘍成長を阻害し、全体的毒性の徴候を示さなかった。
癌遺伝子Ｒａｓ突然変異を含まない、他のヒト肺癌（ＮＣＩ−Ｈ８１０）の腫瘍成長に対するＦＴＩ−２７６の効果も評価した。図７Ｂは、生理的食塩水又はＦＴＩ−２７６によって処置した動物からの腫瘍が同様な速度で成長したことを示す。１４日間の処置期間にわたって、対照群とＦＴＩ−２７６処置群との平均腫瘍サイズは、それぞれ、９１９mm３と８１５mm３であった。これらの結果は、Ｃａｌｕ−Ｉとは対照的に、ＮＣＩ−Ｈ８１０がＦＴＩ−２７６処置に非感受性であることを明確に実証し、ヒト肺癌の腫瘍成長のＦＴＩ−２７６阻害がＲａｓ依存性であることを示唆する。さらに、ＦＴＩ−２７６は、Ｃａｌｕ−１がｐ５３を発現しないとしても腫瘍成長を阻害した。
Ｒａｓ依存性腫瘍を選択的に阻害するＦＴＩ−２７６の選択性をさらに確認するために、同じヌードマウス異種移植モデルにおけるＨ−ＲａｓＦ形質転換したＮＩＨ３Ｔ３及びＲａｆ形質転換したＮＩＨ３Ｔ３に対するＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７との抗腫瘍効力を試験した。図９は、ＦＴＩ−２７６又はＦＴＩ−２７７（５０mg／kg）の１日１回の注入がＨ−ＲａｓＦ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞の腫瘍成長を阻害したことを示す。これに反して、ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７とによる同じ処置計画はＲａｆ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞の増殖に対して効果を有さず（図１０）、ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７とがＲａｓ依存性腫瘍に対して選択的であるという図７と８の結果からの結論をさらに立証した。
さらに、腫瘍成長のＦＴＩ−２７６阻害がインビボでのＲａｓプロセシングの阻害と相関するかどうかという疑問を取り上げた。これに対処するために、皮下Ｈ−ＲａｓＦ細胞を有するマウスを種々な投与量のＦＴＩ−２７６（０，１０，５０及び１００mg／kg）によって処置し、インビボＨＲａｓＦ腫瘍の腫瘍サイズとＲａｓプロセシングとを試験した。図１１Ａは、１１日間の処置期間を通して、ＦＴＩ−２７６が投与量依存的に腫瘍成長を阻害したことを示す。１７日間の終了時に腫瘍サイズは生理的食塩水に関しては２４９０mm３、１０mg／kg処置動物では１７９３mm３、５０mg／kg処置動物では１２２６mm３、１００mg／kg処置動物では６２４mm３であった。Ｒａｓプロセシングの阻害レベルを測定するために、最後の注入後５時間に動物を殺し、腫瘍を摘出し、図１１の説明文に記載するように抗Ｒａｓ抗体によって免疫ブロットするために処理した。対照動物からの腫瘍は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル中でより迅速に移動する完全プロセシング済み(fully processed) Ｒａｓのみを含有した（図１１Ｂ）。ＦＴＩ−２７６の投与量が１０mg／kgから１００mg／kgまで増加すると、完全プロセシング済みＲａｓの相対的比の低下と平行した非プロセシング済みＲａｓの漸進的蓄積が生じた。したがって、腫瘍成長の阻害度はＲａｓプロセシングの阻害度と相関した。さらに、インビボのＲａｓプロセシングの阻害は、ＦＴＩ−２７６が１００mg／kgにおいてもＲａｐ１Ａプロセシングを阻害しなかったという点で選択的であった。
ＩＩ．Ｃ△型のファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤
本発明の他の主要な実施態様の化合物は式IIによって表される。幾つかの実施例を図１２に示す。この実施態様の上記及びその他の化合物は当該技術分野において慣用的である方法を用いて製造することができる。例えば、図１２の化合物４と５はそれぞれ４−アミノ−３’−tert−ブトキシ−カルボニルビフェニル又は４−アミノ−４’−tert−ブトキシ−カルボニルビフェニルのＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチルシステイナルによる還元性アミノ化と、その後の例えばトリフルオロ酢酸による脱保護と精製とによって製造することができる。
本発明のこの実施態様を下記実施例によって非限定的に説明する：
式（２）の化合物Ｃ−４ＡＢＡ−Ｍｅｔ（図１２参照）を参考文献（２７）に述べられたように製造した。ペプチド模倣体の保護された形（２ａ）を、ＮａＢＨ３ＣＮと５％酢酸とを含有するメタノール溶液中での４−アミノベンゾイルメチオニンメチルエステルとＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチルシステイナルとの還元性アミノ化によって製造した。この反応は（２ａ）のＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル、メチルエステルを６５％の収率で生じた。保護されたペプチド模倣体をＴＨＦ中のＬｉＯＨによって脱エステル化し、次に、２当量のトリエチルシランを含む塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸によって脱保護し、粗生成物（２ａ）を得て、これを逆相ＨＰＬＣによって精製した。Ｎ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチルシステイナルによる４−アミノ−３’−メチルビフェニルの還元性アミノ化によって（８）のＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチル誘導体を得て、これを次にトリフルオロ酢酸によって脱保護し、逆相ＨＰＬＣによって精製することによって、ビフェニルに基づくペプチド模倣体（８）を製造した。ペプチド模倣体（４）と（５）は、それぞれ４−アミノ−３’−tert−ブトキシカルボニルビフェニルと４−アミノ−４’−tert−ブトキシカルボニルビフェニルのＮ−ＢＯＣ−Ｓ−トリチルシステイナルによる還元性アミノ化から（４）と（５）のＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチル、tert−ブチルエステルを得ることによって製造した。トリフルオロ酢酸による脱保護と、逆相ＨＰＬＣによる精製とが純粋な（４）と（５）を生成した。
合成
本発明の化合物の製造に用いた基本的アプローチをスキーム１に化合物４の合成に関して説明する。［以下の考察における化合物番号はスキーム１と２に関連する。］
スキーム１．ＦＴアーゼ阻害剤ａの代表的な合成
Figure 2007016035
ａ試薬：（ａ）Ｐｄ（ＯＡｃ）２；（ｂ）ＫＭｎＯ４、ピリジン／Ｈ２Ｏ；
（ｃ）（１）（ＣＯＣｌ）２、（２）tert−ブチルアルコール、ｎ−ＢｕＬｉ；（ｄ）（１）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、（２）Ｎ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチルシステイナル１７、（３）ＮａＢ（ＣＮ）Ｈ３；（ｅ）ＴＦＡ、Ｅｔ３ＳｉＨ。
スキーム２．化合物１１と１２ａの合成
Figure 2007016035
１−ブロモー４−ニトロベンゼンを３−メチルフェニルボロン酸（３４）に、変更Suzukiカップリング（３０）によってカップリングさせて、化合物１４(３５)を得た。化合物１４をカルボン酸１５に酸化して、これを酸塩化物に転化させ、リチウムｔ−ブトキシド（３６）と反応させて、tert−ブチルエステル１６を得た。水素化による１６の還元と、得られたアミンのＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチルシステイナル１７（３８）によるその後の還元性アミノ化（３７）とによって、完全保護誘導体１８を得て、これをトリエチルシランの存在下でトリフルオロ酢酸によって脱保護した（３９）。化合物４を逆相ＨＰＬＣによって精製して、そのトリフルオロ酢酸塩として凍結乾燥によって単離した。
１１と１２の合成はスキーム２において説明する。化合物１９は３−メチル−３’−カルボキシビフェニル（これ自体は、メチル ３−ブロモベンゾエートと３−メチルフェニルボロン酸とのアリール−アリールカップリングと、その後のケン化とから製造）から化合物１６と同じ方法によって製造した。１９の臭素化と、その後のアジ化ナトリウムとの反応とによって、２０を得て、これを触媒水素化して、対応アミンを得た。Ｂｏｃ−トリチル保護システインとこのアミンとの混合無水物方法（mixed anhydride method) による反応によって２１を得、化合物２２はＢｏｃ−トリチル保護システイナルによる還元性アミノ化によって製造した。
実験
３Ｈ ＮＭＲスペクトルと１３Ｃ ＮＭＲスペクトルとをＢｒｕｋｅｒ ＡＭ−３００スペクトロメーターに記録した。化学シフトはテトラメチルシランを基準としてδ（ppm)で報告した。全ての結合定数(coupling constant) はＨｚで記載した。元素分析は Atlantic Microlab 社（ジョージア州）によっておこなわれた。旋光度はPerkin−Elmer ２４１旋光計によって測定した。濃度はｇ／mlで表す。フラッシュカラムクロマトグラフィーは約４psi の圧力下においてシリカゲル（４０〜６３μm ）上で実施した。溶媒は商業的供給者から入手して、次のように精製した：テトラヒドロフランとエーテルとは、ナトリウムベンゾフェノンケチル(sodium benzophenone ketyl) から蒸留し、塩化メチレンは水素化アルミニウムリチウムから蒸留した。分取ＨＰＬＣは Waters ６００Ｅコントローラーと、 Waters ４９０Ｅ多重波長ＵＶ検出器とを、 Waters ２５ｘ１０cmラジアル コンプレッション モジュール(radial compression module) 内のＤｅｌｔａ−Ｐａｋ Ｃ−１８ ３００Åカートリッジカラムと共に用いておこなった。分析ＨＰＬＣは Rainin ＨＰコントローラーとRainin ＵＶ−Ｃ検出器とをRainin ２５０ｘ４．６mm ５μm Microsorb Ｃ−１８カラムと共に用いておこなった。高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）と低分解能質量スペクトル（ＬＲＭＳ）とはVarian ＭＡＴ ＣＨ−５とＶＧ７０７０質量分析計上でおこなった。合成した全ての阻害剤の純度は分析ＨＰＬＣによって実証されるように９８％より大きかった。
Ａ．４−ニトロー３’−メチルビフェニル（１４）
３５mlのアセトンと４０mlの水中の４−ニトロベンゼン（３．０ｇ，１４．８mmol）と３−メチルフェニルボロン酸（２．０６ｇ，１５．１mmol）との混合物に、Ｋ２ＣＯ３・１．５Ｈ２Ｏ（５．９３ｇ，３7.５mmol）とＰｄ（ＯＡｃ）２（１０１mg，０．５０mmol）とを加えた。濃黒色混合物を６時間還流させてから、冷却した。混合物をエーテルで抽出し、有機層をセライトの層に通した。淡黄色溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣を熱メタノールから再結晶させて、淡黄色結晶（２．６８ｇ，８５％）を得た。
ｍ．ｐ．５９−６０℃．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２６（ｄ，８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．７０（ｄ，８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．４１（ｍ，３Ｈ），７．２６（ｄ，７．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｓ，１Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ３）δ１４７．６，１４６．８，１３８．８，１３８．６，１２９．６，１２８．９，１２８．０，１２７．６，１２４．４，１２３．９，２１．４，ＬＲＭＳ（ＥＩ） Ｃ１３Ｈ１１ＮＯ２として，２１３（Ｍ＋，強度１００）；ＨＲＭＳ（ＥＩ）計算値２１３．０７８９，実測値２１３．０７７８．
Ｂ．４−ニトロ−３’−カルボキシビフェニル（１５）
化合物１４（２．３１ｇ，１０mmol）を１０mlのピリジンと２０mlの水との混合物中に懸濁させた。この混合物を還流加熱してから、ＫＭｎＯ４（７．９ｇ，５０mmol）を数回に分けて加えた。この混合物を１時間還流させ、室温において４時間撹拌した。熱混合物を濾過して、黒色固体を熱水で洗浄した。濾液を６Ｎ ＨＣｌによって酸性化した。沈殿を回収し、乾燥させた（２．１６ｇ，８９％）。
ｍ．ｐ．２６５℃（分解）．１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１−１１．４（ｂｒ ｓ，ＣＯＯＨ），８．３２（ｄ，８．７Ｈｚ，２Ｈ），８．２７（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｍ，４Ｈ），７．６６（ｔ，７．８Ｈｚ，１Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６７．１，１４８．９，１４５．６，１３８．２，１３１．８，１３１．５，１２９．６（ｂｒ），１２７．９，１２４．２（ｂｒ）．ＬＲＭＳ（ＥＩ） Ｃ１３Ｈ９Ｏ４Ｎとして，２４３（Ｍ＋，１００），１５２（６０）；ＨＲＭＳ（ＥＩ）計算値２４３．０５３１，実測値２４３．０５４４．分析：（Ｃ１３Ｈ９ＮＯ４）Ｃ，Ｈ，Ｎ．
Ｃ．４−ニトロー３’−tert−ブトキシカルボニルビフェニル（１６）
３０mlの塩化メチレン中の１５（１．２１５ｇ，５mmol）の溶液に、塩化オキサリル（０．６５ml，７．４５mmol）と１滴のＤＭＦとを加えた。この混合物をバブリング(bubbling)がもはや観察されなくなるまで撹拌した。透明な溶液を蒸発乾固させ、粗酸塩化物を得た。７．０mlのtert−ブタノールを含有する別のフラスコに、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．８Ｍ，２．８ml，５．０４mmol）を水浴下で加えた。濁った溶液を室温において５分間撹拌し、次に２０mlのＴＨＦ中の上記酸塩化物を滴下ロートから加えた。混合物を一晩撹拌してから、溶媒を除去した。残渣を塩化メチレン中に溶解させ、０．５Ｎ ＮａＯＨによって洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。残渣をメタノールから再結晶させて、淡黄色結晶（８５１mg，５７％）を得た。
ｍ．ｐ．１１０．５−１１１．０℃．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３２（ｄ，７．８Ｈｚ，２Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｍ，３Ｈ），７．５６（ｔ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），１．６３（ｓ，９Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６５．１，１４７．１，１４６．５，１３８．７，１３２．８，１３１．０，１２９．６，１２９．０，１２８．２，１２７．８，１２４．０，８１．４，２８．０，ＬＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ１７Ｈ１７Ｏ４Ｎとして，２９９（Ｍ＋，２０），２４３（７０），２６６（３０），１５２（２５）；ＨＲＭＳ（ＥＩ）計算値２９９．１１５７，実測値２９９．１１９２．分析：（Ｃ１７Ｈ１７ＮＯ４）Ｃ，Ｈ，Ｎ．
Ｄ．Ｎ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチルシステイナル（１７）
８５mlの塩化メチレン中のＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチルシステイン（７．４４ｇ，１６mmol）の溶液に、トリエチルアミン（２．２２ml，１６mmol）とＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸（１．５７ｇ，１６．１mmol）とを加えた。この混合物を氷浴中で冷却し、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸（ＥＤＣＩ，３．０８ｇ，１６．０mmol）とＨＯＢＴ（２．１７ｇ，１６mmol）とを加えた。混合物を０℃において１時間、室温においてさらに１０時間撹拌した。混合物を塩化メチレンと０．５ＮＨＣｌとによって抽出した。有機層を０．５Ｎ ＨＣｌと、濃ＮａＨＣＯ３と、ブラインとによって連続的に洗浄した。有機層を乾燥させ、蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１．５：１＝ヘキサン：酢酸エチル）によって精製して、白色泡状物（７．４０ｇ，９１％）を得た。
ｍ．ｐ．５９−６０°（分解）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．４１（ｍ，６Ｈ），７．２０−７．３１（ｍ，９Ｈ），５．１３（ｄ，８．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ），２．５６（ｄｄ，４．７及び１２．１Ｈｚ，１Ｈ），２．３９（ｄｄ，７．８及び１２．１Ｈｚ，１Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７０．７，１５４．９，１４４．２，１２９．３，１２７．６，１２６．４，７９．３，６６．４，６１．２，４９．５，３３．８，３１．８，２８．１．
このカルボキシアミド（２．０２ｇ，４．０mmol）を３０mlのエーテル中に溶解させ、−１０℃に冷却した。水素化アルミニウムリチウム（１６７mg，４．４０mmol）を加えて、混合物を窒素下で１５分間撹拌した。次に、４０mlの０．５Ｎ ＨＣｌを加え、溶液をエーテルによって抽出した。エーテル層を０．５Ｎ ＨＣｌによって洗浄し、乾燥させた。溶媒を蒸発させて、白色泡状物(１．８０ｇ)を得て、これをさらなる反応に精製せずに用いた。この化合物の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは複雑であった。アルデヒドの割合は約６５〜７０％であり、この割合はシャープな一重線（δ９．１７）とトリチルピーク（δ７．４０，ｍ，６Ｈ；７．２８，ｍ，９Ｈ）との集積によって算出された。温度を−４５℃に低下させることはアルデヒドの割合を改良しなかった。
Ｅ．４−Ｎ−［２−（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−３’−tert−ブトキシカルボニルビフェニル（１８）
化合物１６（７６８mg，２．５６mmol）をＴＨＦ中に溶解させた。触媒量の活性炭上１０％Ｐｄ（７８mg）を加えた。混合物を３０分間水素化した（４０psi)。黒色混合物をセライトの薄層に通し、淡黄色溶液を蒸発させた。残渣を１０mlのメタノール中に溶解させた。この溶液に０．５mlの酢酸と、６mlのメタノール中の等量のアルデヒド１７（１Ｈ ＮＭＲ測定による）の溶液とを加えた。シアノホウ水素化ナトリウム（２４１mg，３．８４mmol，１．５当量）を加え、混合物を一晩撹拌した。溶媒を蒸発させた後に、残渣を酢酸エチルと濃炭酸水素ナトリウムとによって抽出した。有機層を乾燥させ、蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（３．５：１＝ヘキサン：ＴＨＦ）して、白色泡状物（１．０９ｇ，６１％）を得た。
ｍ．ｐ．７５．０−７６．０℃（分解）．〔α〕２５ Ｄ＝−２．１３（ｃ＝０．０１，ＣＨ３ＣＯＯＣ２Ｈ５）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１４（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｍ，９Ｈ），７．２２−７．３０（ｍ，９Ｈ），６．６１（ｄ，８．５Ｈｚ，２Ｈ），４．５８（ｄ，７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｂｒ ｍ，２Ｈ，Ｃｙｓ α プロトン及びアミン），３．１２（ｂｒ ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），２．４８（ｂｒ，ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｓ），１．６０（ｓ，９Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６５．９，１５５．６，１４７．５，１４４．４，１４１．２，１３２．３，１３０．１，１２９．５，１２９．２，１２８．５，１２８．０，１２７．９，１２７．１，１２６．８，１１２．９，８０．９，７９．７，６７．０，４９．４，４７．１，３４．３，２８．３，２８．２（予想１４ 芳香族Ｃ，実測値１３）．分析：（Ｃ４４Ｈ４８Ｎ２Ｏ４Ｓ・１．２Ｈ２Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ．
Ｆ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−３’−カルボキシビフェニル（４）
化合物１８（６００mg，０．８５mmol）を２mlのＴＦＡと２mlの塩化メチレン中に溶解させた。トリエチルシランを濃褐色の混合物に、褐色が消失するまで、滴加した。次に、この混合物を室温に１時間維持した。次に、溶媒を蒸発させて、残渣を真空下で乾燥させた。固体に３０mlのエーテルと３mlのエーテル中３Ｎ ＨＣｌを加えて磨砕した。白色沈殿を濾過し、エーテルで洗浄して、粗生成物（２７０mg，８４％）を得た。この粗生成物を３０mlの希ＨＣｌ溶液（０．０１Ｎ）中に溶解させ、凍結乾燥させた。分析ＨＰＬＣは純度が９５％であることを実証した。
ｍ．ｐ．１０５−１０６℃（分解）．〔α〕２５ Ｄ＝＋１３．１６（ｃ＝０．０１メタノール中 １Ｊ Ｍ＜Ｒ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．１８（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄ，７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｍ，３Ｈ），６．８２（ｄ，８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．５６（ｍ，２Ｈ，ＣＨＮ 及び ＣＨ２Ｎ），３．４２（ｄｄ，８．９及び１５．２Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ）．１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ 及び ＣＤ３ＯＤ）δ１７１．１，１４７．１，１４１．４，１３１．９，１３０．９，１３０．１，１２８．８，１２８．５，１２７．０，１１５．２，５３．２，４５．４，２５．０ ＬＲＭＳ（ＦＡＢ，グリセロール） Ｃ１６Ｈ１８Ｎ２Ｏ２Ｓとして（Ｍ＋１）３０３．分析：（Ｃ１６Ｈ１８Ｎ２Ｏ２Ｓ・２ＨＣｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ．
さらに分取ＨＰＬＣ（Waters Ｃ−１８，４０％アセトニトリル、６０％水、０．１％ＴＦＡ、４０分間勾配）によって、生成物４（１２０mg）を９９．９％を越える純度で得た。
Ｇ．３−メチル−３’−tert−ブトキシカルボニルビフェニル（１９）
３−メチルフェニルボロン酸と３−ブロモ安息香酸メチルエステルとのカップリングによって、３−メチル−３’−メトキシカルボニルビフェニル（７９％収率）を得、次に、これを加水分解して、３−メチル−３’−カルボキシビフェニル（９７％収率）を得た。この酸から化合物１６の製造と同じ方法を用いて化合物１９（油状物）を製造した（６５％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２１（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｄ，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄ，６．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｍ，３Ｈ），７．３５（ｔ，７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，７．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），１．６２（ｓ，９Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６５．６，１４１．３，１４０．２，１３８．３，１３２．４，１４０．０，１２８．７，１２８．５，１２８．３，１２８．０，１２７．９，１２４．２，８１．０，２８．１，２１．４．ＬＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ１８Ｈ２０Ｏ２として，２６８（Ｍ＋，３５），２１２（１００），１９５（２０）；ＨＲＭＳ（ＥＩ）計算値２６８．１４６３，実測値２６８．１４５８．
Ｈ．３−アジド−３’−tert−ブトキシカルボニルビフェニル（２０）
化合物１９（２．１８ｇ，８．１３mmol）とＮ−ブロモスクシンイミド（１．７０ｇ，９．５０mmol）とを６０mlのＣＣｌ４中に懸濁させた。過酸化ジベンゾイル（２０mg）を加え、混合物を１．５時間還流させた。固体を取り出した後に、濾液を濃炭酸水素ナトリウムによって洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。
１Ｈ ＮＭＲは、粗生成物が７０％の一臭素化生成物と、３０％の二臭素化生成物とを含有することを示した。この物質を２０mlのＤＭＳＯ中に溶解させ、アジ化ナトリウム（３．７０ｇ，５７mmol）を加えた。混合物を８０℃に４時間かけて加熱してから、塩化メチレンと水との混合物中に注入した。有機層を乾燥させ、蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル５％）によって精製して、２０（２．１４ｇ，７８％，２段階）を無色油状物として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２２（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｍ，２Ｈ），７．５０（ｍ，２Ｈ），７．３３（ｄ，７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｓ，２Ｈ），１．６２（ｓ，９Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６５．２，１４０．５，１４０．３，１３５．８，１３２．３，１３０．７，１２９．１，１２８．５，１２８．２，１２７．８，１２７．１，１２６．７，１２６．６，８０．９，５４．３，２７．８．
Ｉ．Ｎ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチル−システイニル−３−アミノメチル−３’−tert−ブトキシカルボニルビフェニル（２１）
化合物２０（０．７５ｇ，２．４３mmol）を３０mlのメタノール中に溶解させた。触媒量の硫酸バリウム上５％Ｐｄ（０．３０ｇ）を加えた。混合物を１気圧において５時間水素化した。触媒を濾別し、メタノールを蒸発させた。この残渣を４０mlの塩化メチレン中に溶解させた。Ｎ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチルシステイン（１．１２ｇ，２．４３mmol）を０℃において加え、ＥＤＣＩ（１当量）とＨＯＢＴ（１当量）とを加えた。混合物を２４時間撹拌した。仕上げ処理し、溶媒を蒸発させた後に、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３．２：１）によって精製して、２１（５７０mg，４４％）を得た。
ｍ．ｐ．８４−８６℃．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１７（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５０−７．３０（ｍ，９Ｈ），７．３０−７．１０（ｍ，１１Ｈ），６．４４（ｂｒ，１Ｈ），４．８６（ｂｒ，１Ｈ），４．４５（ｄ，４．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．８７（ｂｒ，１Ｈ，Ｃｙｓ α Ｈ），２．７５（ｄｄ，７．２及び１２．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ），２．５５（ｄｄ，５．３及び１２．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ），１．６２（ｓ，９Ｈ），１．３６（ｓ，９Ｈ）．分析:（Ｃ４５Ｈ４８Ｎ２Ｏ５Ｓ） Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ．
Ｊ．システイニル−３−アミノメチル−３’−カルボキシビフェニル（１１）
化合物４の製造と同じ方法を用いて、化合物２１（１５０mg）を脱保護した。分取ＨＰＬＣによる最終精製によって、１１を白色固体（４２mg，４６％）として得た。
ｍ．ｐ．８８−８９℃（分解）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．２６（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｍ，２Ｈ），７．４６（ｔ，７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｓ，２Ｈ），４．００（ｔ，５．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｃｙｓ α Ｈ），３．０６（ｄｄ，１４．６及び５．２Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ），２．９７（ｄｄ，１４．６及び６．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ）．ＬＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ１７Ｈ１８Ｎ２Ｏ３Ｓとして，３３１（Ｍ＋１，８），２８１（１００），２２６（７５），分析：（Ｃ１７Ｈ１８Ｎ２Ｏ３Ｓ・ＨＣｌ・０．６Ｈ２Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ．
Ｋ．３−Ｎ−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノメチル−３’−tert−ブトキシ−カルボニルビフェニル（２２）
アジド２０（９００mg，２．９１mmol）を２０mlのメタノール中に溶解させた。触媒量の硫酸バリウム上５％Ｐｄ（９０mg）を加えた。この混合物を１気圧において一晩水素化した。触媒を除去し、メタノールを蒸発させた。残留する残渣を０．５Ｎ ＨＣｌ（２０ml）とエーテル（２０ml）との混合物中に溶解させた。水相を１Ｎ ＮａＯＨによって中和し、塩化メチレン中に抽出した。溶媒を蒸発させた後に、粘稠な油状物を得た（６００mg，７３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２２（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄ，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｍ，２Ｈ），７．４３（ｔ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｓ，２Ｈ），１．６２（ｓ，９Ｈ），１．４６（ｂｒ ｓ，２Ｈ，ＮＨ２）．
このアミン（５８１mg，２．０５mmol）を１０mlのメタノールと０．５mlの酢酸中に溶解させ、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチルシステイナル（アルデヒドの割合の１Ｈ ＮＭＲ測定によると、１当量）を加えた。シアノホウ水素化ナトリウム（１９３mg，１．５０当量）を上記溶液に加え、混合物を室温において一晩撹拌した。仕上げ処理後に、粗残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１：１＝酢酸エチル：ヘキサン）して、白色泡状物（６０２mg，４１％）を得た。
ｍ．ｐ．６６−６８℃（分解）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２１（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄ，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７−７．５１（ｍ，１０Ｈ），７．１５−７．３１（ｍ，１０Ｈ），４．６９（ｂｒ ｄ，１Ｈ），３．７５（ｂｒ ｓ，３Ｈ，ＰｈＣＨ２Ｎ 及びＣｙｓ α Ｈ），２．６８（ｄｄ，６．０及び１２．３Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ），２．５６（ｄｄ，５．５及び１２．３Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ），２．４７（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２Ｎ），２．３５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２Ｎ），１．６２（ｓ，９Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ），１．１２（ｂｒ ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．
Ｌ．３−Ｎ−［２(Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノメチル−３'−カルボキシビフェニル（１２）
化合物２２（４８０mg，０．６７２mmol）を２mlの塩化メチレンと２mlのトリフルオロ酢酸との混合物中に溶解させた。数滴のトリエチルシランを濃褐色が消失するまで、加えた。この混合物を室温に１．５時間維持し、次に、溶媒を蒸発させて、残渣を真空下で乾燥させた。固体残渣を１mlの酢酸と２mlの酢酸中ＨＣｌ（１．７Ｍ）中に溶解させた。最後に、５mlのエーテル中ＨＣｌ（３Ｍ）と１０mlのエーテルとを加えた。白色沈殿を乾燥エーテルで洗浄し、乾燥させて、塩酸塩（２１５mg，８１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ８．１６（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｓ，２Ｈ），７．５５（ｔ，７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４６（ｄ，７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３６（ｓ，２Ｈ，ＰｈＣＨ２），３．８１（ｍ，１Ｈ，Ｃｙｓ α Ｈ），３．５７（ｄｄ，５．７及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．４４（ｄｄ，６．５及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｎ），２．９７（ｄｄ，５．３及び１５．１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ），２．８６（ｄｄ，５．９及び１５．１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ）．
Ｍ．２−メトキシ−４−ニトロ−３’−tert−ブトキシカルボニルビフェニル（２３）
１−ブロモ−２−メトキシ−４−ニトロベンゼンと３−メチルフェニルボロン酸とのカップリングによって、２−メトキシ−４−ニトロ−３’−カルボキシビフェニルを得た。酸塩化物とリチウム ｔ−ブトキシドとの反応によって２３（３段階、３５％）を得た。
ｍ．ｐ．８８．０−８８．５℃．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１３（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｍ，２Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），１．６０（ｓ，９Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６５．２，１５６．７，１４８．０，１３６．３，１３６．２，１３３．２，１３２．０，１３０．８，１３０．１，１２９．０，１２７．９，１１５．８，１０６．０，８１．１，５５．９，２７．９．ＬＲＭＳ(ＥＩ)Ｃ１８Ｈ１９ＮＯ５として，３２９（Ｍ＋，３０），２７３（１００）．
Ｎ．２−メトキシ−４−Ｎ−［２（Ｒ）−Ｎ−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−３’−tert−ブトキシカルボニルビフェニル（２４）
化合物１８の製造と同じ方法を用いて、化合物２４を製造した（収率６３％）。ｍ．ｐ．７６．０−７７．０℃（分解）．〔α〕２５ Ｄ＝−１１．２５（ｃ＝０．０１，ＣＨ３ＣＯＯＣ２Ｈ５）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．０９（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｍ，６Ｈ），７．２１−７．３２（ｍ，９Ｈ），７．１１（ｄ，８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），６．１８（ｄ，８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｄ，６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．７６（ｓ及びｍ，４Ｈ），３．１４（ｂｒ ｄ，４．９Ｈｚ，２Ｈ），２．４９（ｂｒ ｄ，５．１Ｈｚ，２Ｈ），１．５９（ｓ，９Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６５．９，１５７．３，１５５．５，１４８．８，１４４．３，１３８．９，１３３．３，１３１．５，１３１．２，１３０．０，１２９．４，１２７．８，１２７．５，１２６．７，１１８．７，１０４．７，９６．２，８０．５，７９．４，６６．８，５５．２，４９．３，４７．０，３４．１，２８．２，２８．１.分析:（Ｃ４５Ｈ５０Ｎ２Ｏ５Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ．
Ｏ．２−メトキシ−４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−３’−カルボキシビフェニル（１０）
化合物１０を化合物２４の脱保護から得た。
ｍ．ｐ．１２０−１２１℃（分解）．〔α〕２５ Ｄ＝＋１２．６２（ｃ＝０．０１，メタノール中）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．０９（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｄ，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｔ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．５６（ｓ，１Ｈ），６．５３（ｄ，８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．６０（ｍ，２Ｈ，Ｃｙｓ α Ｈ 及び ＣＨ２Ｎ），３．４８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２Ｎ），２．９６（ｄｄ，４．９及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ），２．８６（ｄｄ，５．４及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｓ）．１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ及びＣＤ３ＯＤ）δ１７１．１，１５８．２，１４９．３，１３９．７，１３５．１，１３２．２，１３１．１，１３０．４，１２９．４，１２８．４，１２０．５，１０６．２（広幅，ジウテリウム置換による），９８．８，５６．３，５３．４，４５．１，２４．９．ＬＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ１７Ｈ２０Ｎ２Ｏ３Ｓとして，３３２（Ｍ＋）．分析：（Ｃ１７Ｈ２０Ｎ２Ｏ３Ｓ・１．２ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ．
Ｐ．システイニル−４−アミノ−３’−カルボキシビフェニル（６）
化合物６を分取ＨＰＬＣによって精製した。純度は９９％を越えることが判明した。
ｍ．ｐ．１２０．０−１２１．０℃．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．２５（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｔ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，８．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１６（ｑ，５．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１９（ｄｄ，５．２０及び１４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．０７（ｄｄ，７．７及び１４．７Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１６９．８，１６６．７，１４１．９，１３８．７，１３７．８，１３２．６，１３２．２，１３０．２，１２９．５，１２８．８，１２８．５，１２１．６，５６．９，２６．４．ＬＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ１６Ｈ１６Ｏ３Ｎ２Ｓとして，３１６（Ｍ＋，２５），２１３（１００）；ＨＲＭＳ（ＥＩ）計算値，３１６．０８８２，実測値，３１６．０８６７．分析：（Ｃ１６Ｈ１６Ｎ２Ｏ３Ｓ・ＣＦ３ＣＯＯＨ・Ｈ２Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ．
Ｑ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２’−カルボキシビフェニル（３）
ｍ．ｐ．１２９−１３０℃（分解）．〔α〕２５ Ｄ＝＋１２．５８（ｃ＝０．０１，ＣＨ３ＯＨ）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．７３（ｄ，７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｍ，２Ｈ），７．２１（ｄ，８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．８６（ｄ，８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．５８（ｍ，２Ｈ），３．４６（ｍ，１Ｈ），２．９７（ｄｄ，４．８及び１４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．８６（ｄｄ，５．４及び１４．６Ｈｚ，１Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ 及び ＣＤ３ＯＤ）δ１７４．３，１４６．３，１４１．９，１３２．８，１３２．７，１３１．４，１３０．６，１３０．２，１２７．９，１１５．３，５２．９，４５．８，２５．０．ＬＲＭＳ（ＦＡＢ，グリセロール）
Ｃ１６Ｈ１８Ｎ２Ｏ２Ｓとして，（Ｍ＋１）３０３．分析：（Ｃ１６Ｈ１８Ｎ２Ｏ２Ｓ・１．６ＨＣｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ．
Ｒ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−４’−カルボキシビフェニル（３）
ｍ．ｐ．２６０℃（分解）．〔α〕２５ Ｄ＝＋１２．２０（ｃ＝０．０１，ＣＨ３ＯＨ）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．０３（ｄ，８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．６６（ｄ，８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄ，８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｄ，８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．５７（ｍ，２Ｈ），３．４５（ｍ，１Ｈ），２．９８（ｄｄ，４．８及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．８５（ｄｄ，５．７及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ 及び ＣＤ３ＯＤ）δ１６９．８，１４６．４，１４６．１，１３３．６，１３１．４，１２９．８，１２９．４，１２７．１，１１７．０，５３．３，４７．２，２５．５．ＬＲＭＳ（ＥＩ） Ｃ１６Ｈ１８Ｏ２Ｎ２Ｓとして，３０２（Ｍ＋，１５），２８５（１５），２２６（１００），２１３（５０）．ＨＲＭＳ（ＥＩ）計算値３０２．１０８８，実測値３０２．１０８９．分析：（Ｃ１６Ｈ１８Ｎ２Ｏ２Ｓ・２ＨＣｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ．
Ｓ．４−Ｎ−［２（Ｒ）アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノビフェニル（７）
ｍ．ｐ．２１６℃（分解）．〔α〕２５ Ｄ＝＋１３．２７（ｃ＝０．０１，ＣＨ３ＯＨ）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．５４（ｍ，４Ｈ），７．３９（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｍ，１Ｈ），６．８２（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．５６（ｂｒ ｍ，２Ｈ），３．４５（ｍ，１Ｈ），２．９８（ｍ，１Ｈ），２．８７（ｍ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１４４．８，１４１．８，１３５．７，１２９．９，１２９．１，１２７．８，１２７．４，１１７．４，５３．２，４７．６，２５．５．ＬＲＭＳ（ＥＩ） Ｃ１５Ｈ１８Ｎ２Ｓとして，２５８（Ｍ＋，１５），１８２（１００）；ＨＲＭＳ（ＥＩ）計算値２５８．１１９０，実測値２５８．１１８３．分析：（Ｃ１５Ｈ１８Ｎ２Ｓ・１．６ＨＣｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ．
Ｔ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−３’−メチルビフェニル（８）
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．５０（ｄ，８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．３５（ｍ，２Ｈ），７．２７（ｔ，７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，７．３Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄ，８．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６０（ｍ，２Ｈ），３．４６（ｍ，１Ｈ），２．９９（ｄｄ，４．９及び１４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．８８（ｄｄ，５．５及び１４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ）．ＬＲＭＳ（ＥＩ） Ｃ１６Ｈ２０Ｎ２Ｓとして，２７２（Ｍ＋，１５），１９６（１００）．ＨＲＭＳ（ＥＩ）計算値２７２．１３４１，実測値２７２．１３４７．
Ｕ．４−Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−３’−メトキシカルボニルビフェニル（９）
ｍ．ｐ．８６−８９℃（分解）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．１８（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，６．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｔ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，８．６Ｈｚ，２Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．５４３．６５（ｍ，２Ｈ），３．４４−３．５２（ｍ，１Ｈ），２．９７（ｄｄ，４．７及び１４．７Ｈｚ，１Ｈ），２．８８（ｄｄ，５．５及び１４．７Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＲＭＳ（ＥＩ） Ｃ１７Ｈ２０Ｏ２Ｎ２Ｓとして，３１６（Ｍ＋，１５），２９９（２０），２４０（１００）．ＨＲＭＳ（ＥＩ）計算値３１６．１２４０，実測値３１６．１２３９．分析：（Ｃ１７Ｈ２０Ｎ２Ｏ２Ｓ・２ＨＣｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ．
Figure 2007016035
Figure 2007016035
以下に開示する本発明の化合物に対して用いられる幾つかの名称を表３に示す。
ＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩとの活性分析
ヒトＢｕｒｋｉｔｔリンパ腫（Ｄａｕｄｉ）細胞（ＡＴＣＣ，米国，メリーランド州，ロックヴィル）を、加湿１０％ＣＯ２インキュベーター中、３７℃において、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）と１％Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐとを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で増殖させた。細胞を回収し、５０mM Ｔｒｉｓ、pH７．５、１mM ＥＤＴＡ、１mM ＥＧＴＡ、２５μg ／mlのロイペプチン、１mMフェニルメチルスルホニルフルオリド中で音波処理した。次に、ホモジネートを１２，０００ｘｇにおいて回転させ、得られた上清を６０，０００ｘｇにおいてさらに回転させた。上清をＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩとの両方に関して分析した。簡単には、１００μg の上清を５０mM Ｔｒｉｓ、pH７．５、５０μM ＺｎＣｌ２、２０mM ＫＣｌ、３mM ＭｇＣｌ２及び１mM ＤＴＴ中でインキュベートした。ＦＴアーゼ分析に関しては、この反応を組換え体Ｈ−Ｒａｓ−ＣＶＬＳ（１１μM)及び［３Ｈ］ＦＰＰ（６２５nM；１６．３Ci／mmol）と共に３７℃において３０分間インキュベートした。ＧＧＴアーゼ分析に関しては、この反応を組換え体Ｈ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ（５μM ）及び［３Ｈ］ＧＧＰＰ（５２５nM；１９．０Ci／mmol）と共に３７℃において３０分間インキュベートした。反応を停止させ、ガラス繊維フィルターに通して、遊離と取り込まれた標識とに分離した。阻害試験に関して、ペプチド模倣体をＦＴアーゼ及びＧＧＴアーゼＩとプレミックスしてから、反応混合物の残部に加えた。組換え体Ｈ−Ｒａｓ−ＣＶＬＳを細菌（３１）から既述したように（２６）製造した。組換え体Ｈ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬを細菌（３２）から製造した。
ペプチド模倣体ファルネシル化分析
ヒトＢｕｒｋｉｔｔリンパ腫（Ｄａｕｄｉ）ＦＴアーゼがペプチド及びペプチド模倣体をファルネシル化する能力を既述されたように（３４、３５）判定した。簡単には、５０mM Ｔｒｉｓ、pH７．５、５０μM ＺｎＣｌ２、２０mM ＫＣｌ、３mM ＭｇＣｌ２、１mM ＤＴＴ及び０．２％オクチルβ−Ｄ−グルコシド中に５０μg の６０，０００ｘｇ上清と２０μM ペプチド模倣体とを含有する反応混合物（２５μl ）を３７℃において３０分間インキュベートし、シリカゲルＧＴＬＣシート（２０ｘ２０cm，Brinkmann Instruments)上にスポットし、ｎ−プロパノール／５Ｎ 水酸化アンモニウム／水（６：１：１）で展開させた。乾燥したシートにＥｎ３Ｈａｎｃｅ（ＤｕＰｏｎｔ ＮＥＮ）をスプレイして、［３Ｈ］ファルネシル化生成物の検出のためにＸ線フィルムに暴露させた。
Ｒａｓ及びＲａｐ１Ａプロセシング分析
ＥＪ３細胞をペプチド模倣体又はビヒクルによって２０〜２４時間処置した。細胞を溶解緩衝剤（１０mM Ｎａ２ＨＰＯ４、pH７．２５、１５０mM ＮａＣｌ、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１２mMデオキシコール酸ナトリウム、１mM ＮａＦ、０．２％ＮａＮ３、２mM ＰＭＳＦ、２５μg ／mlロイペプチン）中で溶解させ、溶解産物を１３，０００rpm において１５分間回転させることによって清澄化させた。Ｒａｓタンパク質を５０μgの抗Ｒａｓ抗体（Ｙ１３−２５９；ＡＴＣＣからのハイブリドーマ，メリーランド州，ロックビル）を３０μl のプロティンＡ−アガロースヤギ抗ラットＩｇＧ複合体（Oncogene Science, ニューヨーク州，ユニオンダール）と共に用いて、４℃において一晩免疫沈殿させた。免疫沈殿物を溶解緩衝剤によって４回洗浄し、結合タンパク質を４０μl のＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプル緩衝剤中で５分間加熱することによって放出させ、次いで１２．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で電気泳動させた。タンパク質をニトロセルロース上に転移させ、次に、ＰＢＳ（１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有、ＰＢＳ−Ｔ）中の５％脱脂ドライミルクによってブロックし、Ｙ１３−２５９（ＰＢＳ−Ｔ中３％脱脂ドライミルク中の５０μg ／ml）で検査した。ポジティブ抗体反応をペルオキシダーゼ抱合ヤギ抗ラットＩｇＧ（Oncogene Science, ニューヨーク州，ユニオンダール）と、強化化学発光検出系(ＥＣＬ；Amersham）とを用いて可視化した。
Ｒａｐ１Ａプロセシング分析に関しては、５０μg の細胞熔解産物をＲａｓプロセシングに関して上述したように電気泳動させ、ニトロセルロースに移した。こえらの膜を次にトリス緩衝化生理的食塩水（pH８．０、０．５％Ｔｗｅｅｎ２０含有）中の５％ミルクによってブロックし、抗Ｒａｐ１Ａ（１μg ／ml ５％ミルク／ＴＢＳ−Ｔ中，Santa Cruz Biotechnology, カリフォルニア州，サンタクルズ）によって検査した。抗体反応をペルオキシダーゼ抱合ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Oncogene）とＥＣＬ化学発光とを上述のように用いて、可視化した。
構造モデル化（図１３）
エネルギー最小化コンフォーメーションの算出を MacroModel program,第３．５ａ版内のＡＭＢＥＲフォースフィールド（force field)を用いて実施した。
図１２と表３のペプチド模倣体が不完全（partially)精製ＦＴアーゼを阻害する効力を、これらのペプチド模倣体が上述のように組換え体Ｈ−Ｒａｓへのファルネシルの転移を阻害する能力を測定することによって評価した。結果は表４に要約し、表４はＦＴアーゼ活性とＧＧＴアーゼ−Ｉ活性とに関して得られたＩＣ５０と、本発明の幾つかのペプチド模倣体の選択性とを示す。表４に記載されたＩＣ５０値は記載された化合物によるインビトロでのＦＴアーゼとＧＧＴアーゼ−Ｉとの阻害を示す。
Figure 2007016035
ａ括弧内の数字は測定回数を示す。数字が記載されない場合には、少なくとも２回の測定をおこなった。
ｂｎｄは測定されなかったを意味する。
得られた結果は、化合物２（即ち、Ｃｙｓ−４ＡＢＡ−Ｍｅｔ）（１〜１０μM ）が濃度依存的にＦＴアーゼを１５０nMのＩＣ５０で阻害したことを示す（ＦＴＩ−２３２、表４）。この値はＣＶＩＭとＣｙｓ−４ＡＢＡ−Ｍｅｔに関して今までに報告されたＩＣ５０値に類似する（３５）。システインとアミノ安息香酸との間のアミド結合の還元は、３００nMのＩＣ５０を有する還元Ｃｙｓ−４ＡＢＡ−Ｍｅｔ（２ａ、ＦＴＩ−２４９）を生じた。しかし、（２ａ）におけるメチオニンとＣ末端アミド結合とを他の芳香環と置換して、ビフェニルに基づくペプチド模倣体（４）を得ることは、効力を２倍に改良した（ＦＴＩ−２６５、表４）。ペプチド模倣体４はヒトＢｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞からの不完全精製ＦＴアーゼに対しては１１４nM、均質になるまで精製されたラット脳ＦＴアーゼに対しては５０nMのＩＣ５０を有した。したがって、化合物ＣＶＩＭ（１）と４との間の大きい構造的相違にも拘わらず、後者の化合物４はテトラペプチドＣＶＩＭ（１）とペプチド模倣体２と２ａとの強力なＦＴアーゼ阻害活性を保有した。
上述したように、図１４Ａと１４Ｂは、ＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩ阻害試験の結果をグラフによって説明する。これらの試験では、不完全精製ＦＴアーゼとＧＴＴアーゼＩとを供試ペプチド模倣体と共にインキュベートし、［３Ｈ］ファルネシルをＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＳ（ＦＴアーゼ）へ転移させ、［３Ｈ］ゲラニゲラニルをＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ（ＣＣＴアーゼＩ）へ転移させるそれらの能力を前述したように測定した。図１４ＡはＦＴアーゼ阻害を□、（４）と■、（５）によって示し、図１４Ｂは（４）によるＦＴアーゼ阻害（□）とＧＧＴアーゼＩ阻害（■）をプロットする。各曲線は少なくとも４種類の独立した実験を表す。
ゲラニルゲラニル化はファルネシル化よりも一般的なタンパク質プレニル化である（４９）。それ故、ＧＧＴアーゼよりもＦＴアーゼを阻害する高い選択性を有することは、ファルネシル化を目標とするＣＡＡＸペプチド模倣体にとって有利である。ＣＡＡＸテトラペプチドでは、Ｘ位置はシステインチオールがＦＴアーゼによってファルネシル化されるか、ＧＧＴアーゼＩによってゲラニルゲラニル化されるかいずれであるかを決定する。Ｘ位置にＬｅｕ又はＩｌｅを有するタンパク質又はペプチドはゲラニルゲラニル化される。表４に示すように、本発明の化合物はＧＧＴアーゼＩを有意に阻害せず、ＦＴアーゼへの非常に高い選択性を示す。
図１４Ｂは、強力なＦＴアーゼ阻害剤である化合物４は非常に弱いＧＧＴアーゼＩ阻害剤であることを示す。Ｒａｓ−ＣＶＬＬへのゲラニルゲラニルの転移を阻害する化合物４の能力（ＩＣ５０＝１００，０００nM）は、Ｒａｓ−ＣＶＬＳへのファルネシルの転移を阻害する化合物４の能力（ＩＣ５０＝１１４nM）よりも８７７倍低いことが判明した（表４）。この選択性は、ＧＧＴアーゼＩに比べてＦＴアーゼに対してそれぞれ僅か１０倍及び１５倍大きく選択的であるペプチド模倣体２と２ａにおけるよりも非常に顕著である。化合物４の遊離カルボキシレートはこの選択性の原因でないことも、化合物８におけるメチルによるこの基の置換がＧＧＴアーゼＩに対するアフィニティを高めなかったので（表４）、認められる。これらの結果は、ＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩとの結合部位が全く異なることと、Ｌｅｕ、ＩｌｅとＭｅｔ側鎖との間の差異が選択性の単なるプレディクター(predictor）ではありえないことを示す。この解釈にも拘わらず、本発明の化合物がＦＴアーゼの阻害に非常に高度に選択的であることは明らかである。
不良な細胞取り込みと迅速に分解されることの他に、天然ＣＡＡＸペプチドの他の欠点は、それらがＦＴアーゼによってファルネシル化されることである。ファルネシル化されたＣＡＡＸ誘導体はもはやＦＴアーゼの阻害剤ではないので、これは代謝不活性化を生じる（３４）。図１５は、天然のペプチドＣＶＬＳ（Ｈ−Ｒａｓのカルボキシル末端ＣＡＡＸ）がＢｕｒｋｉｔｔ腫細胞からのＦＴアーゼによってファルネシル化されることを示す。トリペプチドＶＬＳを４におけるように４−アミノ−３’−ヒドロキシカルボニルビフェニルによって置換することは、ＦＴアーゼ阻害の効力に影響を与えなかったが（表４）、システインチオールのファルネシル化を阻止した（図１５）。本発明のペプチド模倣体のいずれもＦＴアーゼによって代謝的に不活性化されない（図１５）。したがって、ＡＡＸトリペプチドは強力なＦＴアーゼ阻害のためには必要ではなく、ファルネシル化のために必要であると思われる。
図１５に関して、ペプチド及びペプチド模倣体へのＦＴアーゼによる［３Ｈ］ファルネシルの転移が、以下に述べるように、シリカＧ ＴＬＣによって確認されたことに注目すべきである。ＦＰＰ、Ｆ−ペプチド及びＯＲＩＧＩＮは、それぞれ、ファルネシル、ファルネシル化ペプチド及び起源(origin)を表示する。図１５は下記を示す：レーン１、ＦＰＰのみ；レーン２、ＦＰＰとＣＶＬＳによる、ＦＴアーゼは含まず；レーン３、ＦＰＰとＦＴアーゼによる、ペプチドは含まず。レーン４〜９は全てＦＴアーゼとＦＰＰとを含み、これらと共に、レーン４はＣＶＩＭを含み；レーン５はＣＶＬＳを含み；レーン６は化合物２ａを含み；レーン７は化合物４を含み；レーン８は化合物５を含み；レーン９は化合物８を含む。図示した結果は、本発明の化合物がＣＡＡＸ化合物とは対照的にファルネシル化されないことを実証する。記載したデータは２種類の独立した実験を表わす。
上記結果は、本明細書に述べる新規なペプチド模倣体が２つの非常に重要な特徴、即ち、強力なＦＴアーゼ阻害剤であることと、ＦＴアーゼによる代謝不活性化に耐性であることを有することを示す。他の重要な特徴は、本発明の化合物が全細胞におけるＲａｓプロセシングを阻害することである。このことは、以下でＲａｓとＲａｐ１Ａプロセシングを説明する図１６に関連して示される。この目的のために、Ｒａｓ形質転換３Ｔ３細胞を阻害剤で処置して、溶解させ、溶解産物を（Ａ）抗Ｒａｓ抗体によって免疫沈殿されるか又は（Ｂ）ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離させた。（Ａ）からの免疫沈殿物をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離させ、抗Ｒａｓ抗体によってブロットし、（Ｂ）からのサンプルは以下に述べるように抗Ｒａｐ１Ａ抗体によってブロットした。図１６は下記を示す：レーン１、対照;レーン２、ロバスタチン;レーン３、還元された化合物２ａ(２００μM) ；レーン４、化合物４（１００μM ）；レーン５、化合物４（５０μM ）；レーン６、化合物４（２５μM ）；レーン７、化合物５；レーン８、化合物８。データは３種類の独立した実験を示す。ファルネシル化ＲａｓはＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で非プロセシング済みＲａｓよりも迅速にランする（２３−２５、２８、２９）。
図１６Ａ（レーン１）は、ビヒクルで処置された細胞がプロセシング済みＲａｓのみを示すのに反して、ロバスタチンで処置された細胞（レーン２）はプロセシング済みＲａｓと非プロセシングＲａｓの両方を含有し、このことはロバスタチンがＲａｓプロセシングを阻害したことを示唆する。ロバスタチンはファルネシルピロホスフェートとゲラニルゲラニルピロホスフェートとの生合成を阻害するＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤であり、ゲラニルゲラニル化タンパク質とファルネシル化タンパク質の両方のプロセシングの阻害に関するポジティブ対照としてルーチンに用いられている（３６、３７、３９、４０、５１）。その遊離カルボキシレート形の還元Ｃｙｓ−４ＡＢＡ−Ｍｅｔ３によって処置された細胞はＲａｓプロセシングを阻害しなかった。しかし、これに反して、２ａの対応メチルエステル（２００μM ）はＦＴアーゼを阻害した（図１６Ａ、レーン３）。
このことは、ＣＡＡＸペプチドのカルボキシレートの中和はこれらのペプチドのＲａｓプロセシングを阻害する能力を強化することを示した今までの研究と一致する（３７、４０、５１）。化合物４は遊離カルボキシレート負電荷を有するが、細胞に侵入して、Ｒａｓプロセシングを強力に阻害することができる（レーン４、１００μM 化合物４）。化合物４が５０μM 程度の低濃度でＲａｓプロセシングを阻害するが（レーン５）、その対応親化合物２ａは２００μM 程度の高濃度でＲａｓプロセシングを阻害しないことが発見された。化合物４はその親化合物のメチルエステル（２ａ）と同じ程度に強力であった（図１６Ａ、レーン３）。さらに、化合物４は全細胞において直接、活性化のために細胞酵素に依存せずに全細胞中でのＲａｓプロセシングを効果的に阻害した最初のＣＡＡＸペプチド模倣体であると思われる。ビフェニル基の疎水性特徴は遊離カルボキシレート負電荷を明らかに相殺して、ペプチド模倣体を膜に透過させ、その細胞取り込みを促進する。
ゲラニルゲラニル化される小Ｇ−プロティンであるＲａｐ１Ａのプロセシングを阻害する、本発明のＲａｓファルネシル化阻害剤の能力を測定することによって、それらの選択性が研究されている（４９、５０）。細胞をロバスタチン又はペプチド模倣体によって、Ｒａｓプロセシング実験に関して述べたと正確に同じに処置した。次に、溶解産物をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、以下に述べるように、抗Ｒａｐ１Ａ抗体によって免疫ブロットした。対照細胞はゲラニルゲラニル化Ｒａｐ１Ａのみを含有したが（図１６Ｂ，レーン１）、ロバスタチン処置細胞はＲａｐ１Ａのプロセシング済み形と非プロセシング形の両方を含有し、このことは予想されるようにロバスタチンがＲａｐ１Ａのプロセシングを阻害したことを実証した（図１６Ｂ、レーン２）。Ｒａｓプロセシングを阻害した化合物４はＲａｐ１Ａのゲラニルゲラニル化を阻害することができなかった（図１６Ｂ、レーン４〜６）。化合物５と８もＲａｐ１Ａプロセシングを阻害しなかった（図１６Ｂ、レーン７と８）。
幾つかの本発明の化合物の構造を表３に要約し、ＦＴＴアーゼとＧＧＴアーゼとを阻害するそれらの相対的効果を表４に示す。阻害剤の活性は表４にＩＣ５０値として報告する、ＩＣ５０はＦＴアーゼ又はＧＧＴアーゼＩの活性が５０％阻害される濃度である。阻害剤の幾つかは、表４に示すように、薄層クロマトグラフィーによってファルネシル化のための基質として役立つそれらの能力に関してさらに特徴づけた（４１）。
ＦＴアーゼに対する発表された配列依存性試験はＣＡＡＸの末端位置におけるメチオニンの強い選択性(preference)を示している。本発明の化合物には、メチオニン残基が存在せず、トリペプチドＡＡＸは単一の疎水性部分によって完全に置換される。ＣＡＡＸ系列の最も強力な阻害剤は３０nMのＩＣ５０値を有するＣｙｓ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ（１８、２２）である。ペプチド模倣体阻害剤１０とＣＩＦＭとの構造の大きな相違にも拘わらず、ペプチド模倣体阻害剤１０はＣＩＦＭと同程度に強力である。これらの結果は本発明によるＡＡＸ置換のための疎水性方法を確立する。
既に報告されたように、ＣＡ１Ａ２Ｘ（例えばＣＩＦＭ）のＡ２部分への芳香族アミノ酸の取り込みはテトラペプチドがファルネシル化のための基質として役立つことを阻止する（２２）。表４は、設計された非ペプチドＣＡＡＸ模倣体（例えば化合物４）がファルネシル化のための基質ではないことを示す。ＦＴアーゼによるファルネシル化のこの欠損は、チオール基へのファルネシル転移を許さないコンフォーメーションの酵素への阻害剤結合によると考えられる。
III. ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤
Ｒａｓのカルボキシル末端ＣＡＡＸテトラペプチドはＦＴアーゼの基質であり、可能な抗癌活性を有する、この酵素の阻害剤を設計するための標的として役立つ（３３）。我々の以前の出願はＦＴアーゼの非常に強力な（ＩＣ５０＝５００pM）阻害剤、ＦＴＩ−２７６（図１７）を開示する（６６）。その細胞透過性メチルエステルＦＴＩ−２７７は全細胞におけるＨ−Ｒａｓプロセシングを１００nMのＩＣ５０で阻害する（６６）。さらに、ＦＴＩ−２７６はＧＧＴアーゼＩよりもＦＴアーゼに対して非常に選択的である（１００倍）（表５）。
Figure 2007016035
ＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩの阻害剤の合成
ペプチド模倣体ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７とを上述したように製造した。ＧＧＴアーゼ阻害剤のＧＧＴＩ−２８７とＧＧＴＩ−２８６とを２−フェニル−４−ニトロ安息香酸（６６）からＬ−ロイシンメチルエステルとの反応と、その後の塩化第１スズによる還元とによって製造した。得られた４−アミノ−２−フェニルベンゾイルロイシンメチルエステルをＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチル−システイナルと反応させ、ＦＴアーゼ阻害剤に関して述べられた方法（６６）と同様な方法によって脱保護して、それらの塩酸塩としてＧＧＴＩ−２８６とＧＧＴＩ−２８７を得た。
Ａ．４−アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−メチオニンメチルエステル塩酸塩
７０mlのアセトンと８５mlの水との混合物に、２−ブロモ−４−ニトロトルエン６．８４ｇ（３０mmol）と、フェニルボロン酸３．８４ｇ（３１．５mmol）と、炭酸カリウム１０．３５ｇ（７５mmol）と、酢酸パラジウム３３６mg（１．５mmol）とを加えた。この混合物を１０時間還流させてから、エーテルと希塩酸とによって抽出した。溶媒を蒸発させた後に、固体残渣をメタノールから再結晶させて、５．６４ｇの４−ニトロ−２−フェニルトルエン（８８％収率）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ８．０９−８．１１（ｍ，２Ｈ），７．４０−７．４９（ｍ，４Ｈ），７．３０−７．３３（ｍ，２Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ）．
上記４−ニトロ−２−フェニルトルエン（４．４６ｇ，２１mmol）を２１mlのピリジンと４２mlの水中に懸濁させた。混合物を沸騰するまで加熱した後に、過マンガン酸カリウム（１９．８，１２６mmol）を添加した。この混合物を２時間還流させてから、濾過して、固体を除去した。濾液を６Ｎ ＨＣｌによって酸性化して、４．４８ｇの４−ニトロ−２−フェニル安息香酸（８９％収率）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ８．２５−８．３３（ｍ，２Ｈ），８．０８（ｄ，８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４１−７．５１（ｍ，３Ｈ），７．３１−７．３９（ｍ，２Ｈ）．
上記４−ニトロ−２−フェニル安息香酸（２．４３ｇ，１０mmol）を５０mlの塩化メチレン中に懸濁させた。この溶液に、（Ｌ）−メチオニンメチルエステル塩酸塩（２．０ｇ，１０mmol）と、トリエチルアミン（１．３８ml，１０mmol）と、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ，２．０１ｇ，１０．５mmol）と、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ，１．３５ｇ，１０mmol）とを加えた。混合物を１２時間撹拌し、塩化メチレンと１Ｎ塩酸とによって抽出した。溶媒を蒸発させた後に、残渣を酢酸エチルとヘキサンとから再結晶させて３．２２ｇの４−ニトロ−２−フェニルベンゾリル−（Ｌ）−メチオニンメチルエステル（収率８３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ８．２４−８．２８（ｍ，２Ｈ），７．８５（ｄ，８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４３−７．５２（ｍ，５Ｈ），６．０１（ｄ，７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｄｄｄ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），２．０５（ｍ，２Ｈ），１．９８（ｓ，３Ｈ），１．８８−１．９６（ｍ，１Ｈ），１．７２−１．８１（ｍ，１Ｈ）．
４−ニトロ−２−フェニルベンゾリル−（Ｌ）−メチオニンメチルエステル（３．０４ｇ，７．８３mmol）を１００mlの酢酸エチル中に溶解させた後に、塩化第１スズ水和物（８．８４ｇ，３９mmol）を添加した。混合物を２時間還流させ、次に酢酸エチルと濃炭酸水素ナトリウムとの混合物によって抽出した。溶媒を蒸発させた後に、残渣を塩化メチレン中に溶解させて、エーテル中３Ｎ塩化水素を添加した。固体を濾過し、乾燥させて、２．９６ｇの４−アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｌ）−メチオニンメチルエステル塩酸塩（収率９６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．６５（ｄ，８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３９−７．４６（ｍ，７Ｈ），４．５３（ｄｄ，４．３及び９．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），２．１５−２．２３（ｍ，１Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．９３−２．１１（ｍ，２Ｈ），１．７４−１．８３（ｍ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１７３．４，１７１．７，１４３．４，１４０．１，１３７．４，１３４．０，１３０．９，１２９．７，１２９．４，１２５．５，１２２．７，５３．０，５２．９，３１．３，３０．９，１５．１．
Ｂ．４−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−メチオニンメチルエステル
２０mlのメタノール中の４−アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−メチオニンメチルエステル塩酸塩（１．２７ｇ，３．２２mmol）の混合物に、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチル−（Ｌ）−システイナル（アルデヒド割合の１Ｈ ＮＭＲ測定によって、１．０当量）と、シアノホウ水素化ナトリウム（４００mg，２．０当量）とを加えた。この混合物を１２時間撹拌した。溶媒を蒸発した後に、残渣を酢酸エチルと濃炭酸水素ナトリウムとによって抽出した。溶媒を除去した後に、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１：１＝ヘキサン：酢酸エチル，シリカ）によって精製して、生成物１．６７ｇ（収率６７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ７．６５（ｄ，８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３４−７．４２（ｍ，１１Ｈ），７．１８−７．２９（ｍ，９Ｈ），６．５２（ｄｄ，２．３及び８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．３４（ｄ，２．３Ｈｚ，１Ｈ），５．６５（ｄ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄｄｄ，１Ｈ），４．５５（ｄ，８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１９（ｂｒ ｔ，１Ｈ），３．７８（ｂｒ ｍ，１Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），３．０９（ｔ，６．１Ｈｚ，２Ｈ），２．４４（ｍ，２Ｈ），２．０４−２．１０（ｍ，２Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．８１−１．９０（ｍ，１Ｈ），１．６０−１．７０（ｍ，１Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ１７２．０，１６８．３，１５５．７，１４９．４，１４４．３，１４１．６，１４１．１，１３１．３，１２９．５，１２８．７，１２８．５，１２７．９，１２７．７，１２６．８，１２２．６，１１３．６，１１１．３，７９．８，６７．１，５２．２，５１．７，４９．５，４７．２，３４．３，３１．６，２９．４，２８．２，１５．２．
Ｃ．４−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−メチオニンメチルエステル塩酸塩
上記Ｎ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチル保護ペプチドメチルエステル（９００mg）を５mlのメタノール中に溶解させた。この混合物に５mlのメタノール中の塩化第２水銀（７７４mg，２．５０当量）の溶液を加えた。この混合物を２０分間還流させた。沈殿を回収し、乾燥させた。この固体を１０mlのメタノール中に懸濁させ、気体状の硫化水素と反応させた。黒色固体を除去した後に、透明な溶液を蒸発乾固させた。次に、残渣を塩化メチレンに溶解させた後に、エーテル中３Ｎ塩化水素を添加した。白色固体を回収し、乾燥させて、純粋な生成物４７６mg（収率８１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．４２（ｄ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．３８（ｍ，５Ｈ），７．７７（ｄ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｓ，１Ｈ），４．４８（ｄｄ，４．２及び５．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．４４−３．５８（ｍ，３Ｈ），２．９０−２．９５（ｄｄ，４．１及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７９−２．８５（ｄｄ，４．７及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．１８−２．２２（ｍ，１Ｈ），２．０３−２．１６（ｍ，１Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．９１−１．９７（ｍ，１Ｈ），１．７３−１．８２〜（ｍ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１７３．７，１７３．４，１５０．７，１４３．５，１４２．３，１３１．２，１２９．８，１２９．５，１２８．６，１２５．６，１１５．６，１１２．２，５３．７，５３．２，５２．８，４５．０，３１．４，３０．９，２５．３，１５．０．
Ｄ．４−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−メチオニン
上記Ｎ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチル保護ペプチドメチルエステル（５００mg）を２．０当量の水酸化リチウムによって０℃において１時間加水分解した。生成物を塩化メチレン（１ml）中のトリフルオロ酢酸（２ml）によって脱保護した。濃黄色が消失するまで、トリエチルシランを滴加した。混合物を室温に１．５時間維持した。溶媒を蒸発させた後に、残渣を乾燥させ、乾燥エーテルによって洗浄した。固体を分取ＨＰＬＣによって精製し、純粋な生成物２７０mg（収率７８％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．４４（ｄ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．３９（ｍ，５Ｈ），６．７５（ｄ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），４．４５（ｄｄ，４．２及び５．１Ｈｚ，１Ｈ），３．４２−３．５８（ｍ，３Ｈ），２．９０（ｄｄ，４．３及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．８１（ｄｄ，５．５及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．１７−２．２３（ｍ，１Ｈ），２．０９−２．１５（ｍ，１Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．９０−１．９９（ｍ，１Ｈ），１．７１−１．８１（ｍ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１７６．４，１７３．５，１５０．４，１４３．０，１４１．５，１３１．０，１２９．７，１２９．４，１２８．９，１２４．６，１１５．０，１１２．３，５３．３，４９．６，４４．４，３０．８，３０．１，２４．９，１４．８．
Ｅ．４−ニトロ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−ロイシンメチルエステル
この化合物は、メチオニン誘導体の製造と同様に（実施例２６，セクションＡ参照）、４−ニトロ−２−フェニル安息香酸と（Ｌ）−ロイシンメチルエステル塩酸塩とのカップリングによって製造した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ８．２４−８．２６（ｍ，２Ｈ），７．８６（ｄ，８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４１−７．４６（ｍ，５Ｈ），５．７１（ｄ，７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｄｄｄ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），１．３７−１．４６（ｍ，１Ｈ），１．０８−１．２５（ｍ，２Ｈ），０．７８（ｄｄ，６Ｈ）．
Ｆ．４−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニル−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−ロイシンメチルエステル
この化合物は、メチオニン誘導体の製造と同じ方法を用いて（実施例２６，セクションＢ参照）、出発物質として４−アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−ロイシンメチルエステルとＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチル−（Ｌ）−システイナルとを用いて製造した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ７．６８（ｄ，８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３３−７．４１（ｍ，１１Ｈ），７．１７−７．２９（ｍ，９Ｈ），６．５０（ｄ，８．６Ｈｚ，１Ｈ），６．３１（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｄ，７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｄ，６．１Ｈｚ，１Ｈ），４．４７（ｄｄｄ，１Ｈ），４．１９（ｂｒ ｔ，１Ｈ），３．７７（ｂｒ ｍ，１Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．０９（ｔ，５．９Ｈｚ，２Ｈ），２．４５（ｂｒ ｍ，２Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ），１．２７−１．３３（ｍ，１Ｈ），１．０３−１．１８（ｍ，２Ｈ），０．７５（ｄｄ，６Ｈ）；１３Ｃ（ＣＤＣｌ３) δ１７３．２，１６８．２，１５５．６，１４９．４，１４４．４，１４１．７，１４１．２，１３１．４，１２９．５，１２８．８，１２８．５，１２７．９，１２７．６，１２６．８，１２２．７，１１３．６，１１１．３，７９．６，６７．１，５１．９，５０．９，４９．５，４７．１，４１．２，３４．３，２８．３，２４．４，２２．７，２１．８．
Ｇ．４−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−ロイシンメチルエステル塩酸塩
この化合物は、メチオニン誘導体の製造と同じ方法によって（実施例２６，セクションＣ参照）、４−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニル−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−ロイシンメチルエステルと塩化第２水銀とを用いて製造した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．４２（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３１−７．３８（ｍ，５Ｈ），６．７６（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），４．３３（ｔ，７．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．４６−３．５５（ｍ，３Ｈ），２．９５（ｄｄ，４．４及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．８１（ｄｄ，５．１及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），１．４４（ｔ，７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．１８−１．２５（ｍ，１Ｈ），０．７６−０．８３（ｄｄ，４．１及び６．６Ｈｚ，６Ｈ）．
Ｈ．４−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−ロイシン
この化合物は、メチオニン誘導体の製造と同じ方法によって（実施例２６，セクションＤ参照）、４−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−フェニルベンゾイル−（Ｓ）−ロイシンメチルエステル塩酸塩と水酸化リチウムとを用いて製造した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．４２（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２９−７．３８（ｍ，５Ｈ），６．７３（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），４．３２（ｄｄ，３．３及び５．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４１−３．５７（ｍ，３Ｈ），２．９４（ｄｄ，４．３及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７８（５．２及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），１．４５（ｔ，６．７Ｈｚ，２Ｈ），１．１７−１．２６（ｍ，１Ｈ），０．７８−０．８３（ｔ，８．５Ｈｚ，６Ｈ）．
Ｉ．４−ニトロ−２−ナフチル安息香酸
５０mlのＤＭＦ中の無水リン酸ナトリウム（３．６４ｇ，２２．２mmol）とパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（４２６mg，０．３６８mmol）との存在下での１００℃における４−ニトロ−２−ブロモ安息香酸メチルエステル（１．９２ｇ，７．４mmol）と１−ナフチルボロン酸（２．５３ｇ，１４．７mmol）とのカップリングは、４−ニトロ−２−ナフチル安息香酸メチルエステル（１．６６ｇ，７５％収率）を生成した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ８．３４（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄ，８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４７−７．５６（ｍ，２Ｈ），７．４１（ｄ，３．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｄ，６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４０（ｓ，３Ｈ）．
メチルエステルの加水分解後に、１．４４ｇの生成物を回収した（収率９１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ８．３３（ｄ，８．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４６−７．５２（ｍ，２Ｈ），７．３８−７．４２（ｍ，２Ｈ），７．３３（ｄ，７．０Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＯＣＤ３) δ１６７．２，１５０．１，１４３．１，１３９．０，１３８．２，１３４．４，１３２．５，１３２．１，１２９．２，１２７．３，１２６．７，１２５．８，１２５．９，１２３．３．
Ｊ．４−ニトロ−２−ナフチルベンゾイル−（Ｓ）−メチオニンメチルエステル
ＥＤＣＩとＨＯＢＴとの存在下での４−ニトロ−２−ナフチル安息香酸と（Ｌ）−メチオニンメチルエステルとのカップリングによって、所望の生成物を得た（収率９５％）。生成物のＴＬＣは単一スポットを示したが、１Ｈ ＮＭＲはナフチル環とフェニル環との間での回転の制限によって生じたジアステレオマーの存在を示した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ８．３３−８．３８（ｍ，１Ｈ），８．２６（ｓｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，８．５Ｈｚ，０．５Ｈ），８．００（ｄ，８．５Ｈｚ，０．５Ｈ），７．９４−７．９８（ｍ，２Ｈ），７．４２−７．６５（ｍ，５Ｈ），５．９８（ｔ，１Ｈ），４．４２（ｍ，１Ｈ），３．５６（ｓ，１．５Ｈ），３．５１（ｓ，１．５Ｈ），１．８３（ｓ，１．５Ｈ），１．７４（ｓ，１．５Ｈ），１．５６−１．６４（ｍ，１Ｈ），１．３３−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．０９−１．１４（ｍ，１Ｈ）．
Ｋ．４−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニル−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−２−ナフチル−（Ｓ）−メチオニンメチルエステル
４−ニトロ−２−ナフチルベンゾイル−（Ｌ）−メチオニンメチルエステルの還元によって定量的収量のアミノ誘導体を得て、これをシアノホウ水素化ナトリウムの存在下でＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチル−システイナルと反応させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（１：１＝酢酸エチル：ヘキサン）による精製後に、所望の生成物が得られた（収率４０％）。ＴＬＣは単一スポットを示したが、１Ｈ ＮＭＲはナフチル環とフェニル環との間での回転の制限によって生じたジアステレオマーを示した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ７．８４−７．９６（ｍ，３Ｈ），７．４９−７．６６（ｍ，４Ｈ），７．３７−７．４３（ｍ，７Ｈ），７．１４−７．２７（ｍ，９Ｈ），６．６０−６．６３（ｄ，８．６Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｍ，１Ｈ），５．６７（ｄ，７．８Ｈｚ，０．６Ｈ），５．６０（ｄ，７．８Ｈｚ，０．４Ｈ），４．５６（ｂｒ ｄ，６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３５−４．４４（ｍ，１Ｈ），４．３０（ｂｒ，１Ｈ），３．７８（ｂｒ ｍ，１Ｈ），３．５５（ｓ，１．９Ｈ），３．３８（ｓ，１．１Ｈ），３．０６（ｔ，５．８Ｈｚ，２Ｈ），２．４４（ｍ，２Ｈ），１．９０（ｓ，１Ｈ），１．７９（ｓ，２Ｈ），１．５７−１．６８（ｍ，０．５Ｈ），１．３６−１．４５（ｍ，１０Ｈ），１．２３−１．３２（ｍ，２Ｈ），０．９４−０．９８（ｍ，０．７Ｈ）．
Ｌ．４−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−ナフチルベンゾイル−（Ｓ）−メチオニン
この化合物はＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチル保護形（セクションＫ）からケン化と、その後のトリフルオロ酢酸による酸性開裂とによって製造した。分取ＨＰＬＣによって純粋な化合物が得られた。１Ｈ ＮＭＲはアリール−アリール結合の回転の制限によって生じる複雑なジアステレオマーを示した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．８６−７．９４（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｄ，８．６Ｈｚ，０．６Ｈ），７．３５−７．６７（ｍ，５．４Ｈ），６．８３−６．８８（ｍ，１Ｈ），６．６３−６．６７（ｍ，１Ｈ），４．１７−４．２３（ｍ，１Ｈ），３．４１−３．５８（ｍ，３Ｈ），２．９１（ｄｄ，４．２及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．８０（ｄｄ，５．３及び１４．５Ｈｚ，１Ｈ），１．８２（ｓ，１．４Ｈ），１．８０（ｓ，１．６Ｈ），１．６５−１．７７（ｍ，１Ｈ），１．４１−１．５２（ｍ，２Ｈ），１．０９−１．３２（ｍ，１Ｈ）．
Ｍ．４−ニトロ−２−ナフチルベンゾイル−（Ｓ）−ロイシンメチルエステル
この化合物はメチオニン誘導体の製造（セクションＪ）と同じ方法によって、４−ニトロ−２−ナフチル安息香酸と、（Ｓ）−ロイシンメチルエステルと、ＥＤＣＩと、ＨＯＢＴとを用いて製造した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ８．３４−８．３９（ｍ，１Ｈ），８．２５（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，８．６Ｈｚ，０．６Ｈ），８．０２（ｄ，８．６Ｈｚ，０．４Ｈ），７．９１−８．００（ｍ，２Ｈ），７．６２（ｔ，７．０Ｈｚ，０．６Ｈ），７．４８−７．５８（ｍ，３Ｈ），７．４１（ｔ，７．０Ｈｚ，１．４Ｈ），５．７１（ｄ，７．９Ｈｚ，０．６Ｈ），５．６０（ｄ，７．９Ｈｚ，０．４Ｈ），４．２９（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｓ，１．７Ｈ），３．５２（ｓ，１．３Ｈ），１．０５−１．１１（ｍ，０．５Ｈ），０．８８−０．９７（ｍ，０．７Ｈ），０．６９−０．７８（ｍ，０．５Ｈ），０．４１−０．５９（ｍ，７．０Ｈ），０．１９−０．２６（ｍ，０．６Ｈ）．
Ｎ．４−［２（Ｒ）−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルチオプロピル］アミノ−２−ナフチルベンゾイル−（Ｓ）−ロイシンメチルエステル
この化合物はメチオニン誘導体の製造（セクションＫ）と同じ方法によって製造した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ７．８５−８．００（ｍ，３Ｈ），７．４７−７．６７（ｍ，４Ｈ），７．３９−７．４３（ｍ，７Ｈ），７．１４−７．３７（ｍ，９Ｈ），６．６１（ｄ，８．６Ｈｚ，１Ｈ），６．３２（ｓ，１Ｈ），５．４６（ｄ，７．６Ｈｚ，０．６Ｈ），５．３６（ｄ，７．６Ｈｚ，０．４Ｈ），４．５５（ｄ，７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２０−４．２７（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｂｒ，１Ｈ），３．５６（ｓ，２Ｈ），３．３８（ｓ，１Ｈ），３．０６（ｔ，５．９Ｈｚ，２Ｈ），２．４３（ｍ，２Ｈ），１．３６−１．４３（ｍ，９Ｈ），０．８１−１．０３（ｍ，１Ｈ），０．５５−０．６７（ｍ，２．８Ｈ），０．３６−０．４５（ｍ，４．７Ｈ），０．００−０．０９（ｍ，０．６Ｈ）．
Ｏ．４−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−ナフチルベンゾイル−（Ｓ）−ロイシンメチルエステル
この化合物は対応化合物のＮ−Ｂｏｃ−Ｓ−トリチルメチルエステルから、セクションＬの方法を用いて製造した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３) δ７．９８（ｄ，８．５Ｈｚ，０．６Ｈ），７．８４−７．９０（ｍ，２．４Ｈ），７．６５（ｄ，８．５Ｈｚ，０．４Ｈ），７．４３−７．５８（ｍ，３．６Ｈ），７．３４−７．３９（ｍ，１Ｈ），６．７２（ｍ，１Ｈ），６．４５（ｓｓ，１Ｈ），５．４６（ｄ，７．８Ｈｚ，０．６Ｈ），５．４０（ｄ，７．７Ｈｚ，０．４Ｈ），４．６４（ｍ，１Ｈ），４．２３（ｍ，１Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），３．３０（ｓ，１Ｈ），３．２５（ｍ，１Ｈ），２．９７−３．０６（ｍ，２Ｈ），２．６７（ｄｄ，３．７及び１３．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４７（ｄｄ，６．５及び１３．２Ｈｚ，１Ｈ），１．４５−１．６５（ｂｒ ｓ，２Ｈ），０．８１−１．０３（ｍ，１．２Ｈ），０．５４−０．６７（ｍ，３Ｈ），０．３６−０．３９（ｍ，４．３Ｈ），０．００−０．１０（ｍ，０．７Ｈ）．
ＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩとの活性分析
ヒトＢｕｒｋｉｔｔリンパ腫（Ｄａｕｄｉ）細胞（ＡＴＣＣ，メリーランド州，ロックヴィル）の６０，０００ｘｇ上清からのＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩ活性を、正確にＦＴアーゼに関して既述したように（４１）、分析した。阻害試験は、［３Ｈ］ＦＰＰと［３Ｈ］ＧＧＰＰとから、それぞれ、Ｈ−ｒａｓ−ＣＶＬＳとＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬとへの［３Ｈ］ファルネシルと［３Ｈ］ゲラニルゲラニルとの転移を阻害するＲａｓ ＣＡＡＸペプチド模倣体の能力を測定することによって、実施した（４１）。
Ｒａｓ及びＲａｐ１Ａプロセシング分析
Ｈ−Ｒａｓ細胞（４５）とＫ−Ｒａｓ４Ｂ細胞（３２）とはDr. Channing Derと Dr. Adrienne Cox （ノースカロライナ大学、チャペルヒル）からの好意的な贈り物であった。これらの細胞ラインを得る手段は、熟練した実施者によって容易に理解されるであろう。１００mm皿における、１０％ウシ胎児血清と１％ペニシリン−ストレプトマイシンとを補充したＤｕｌｂｅｃｃｏの修飾イーグル培地中に、細胞を０日目に接種した。１日目と２日目に、細胞を種々な濃度のＦＴＩ−２７７又はＧＧＴＩ−２８６又はビヒクル（ＤＭＳＯ中１０mMＤＴＴ）を含有する培地で再度供給した。３日目に、細胞を洗浄し、５０mM ＨＥＰＥＳ、pH７．５、１０mM ＮａＣｌと、１％ＴＸ−１００と、１０％グリセロールと、５mM ＭｇＣｌ２と、１mM ＥＧＴＡと、２５μg ／mlのロイペプチンと、２mM ＰＭＳＦと、２mM Ｎａ３ＶＯ４と、１mg／mlの大豆トリプシン阻害剤と、１０μg／mlのアプロチニンと、６．４mg／mlの Sigma−１０４（登録商標）ホスファターゼ基質とを含有する溶解緩衝剤中で溶解させた。溶解産物を清澄化させ（１４，０００rpm ，４℃，１５分間）、等量のタンパク質を１２．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上に分離して、ニトロセルロースに移し、抗Ｒａｓ抗体（Ｙ１３−２５９，ＡＴＣＣ）又は抗Ｒａｐ１Ａ抗体（ＳＣ−６５，Santa Cruz Biotechnology, カリフォルニア州，サンタクルズ）を用いて免疫ブロットした。ペルオキシダーゼ抱合ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｙ１３−２５９に対して）、又はペルオキシダーゼ抱合ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｒａｐ１Ａに対して）を、強化化学発光検出系（ＥＣＬ，Amersham corp.）と共に用いて、既述したように（４１）、抗体反応を可視化した。
ＭＡＰキナーゼ免疫ブロッティング
細胞をＦＴＩ−２７７、ＧＧＴＩ−２８６又はビヒクルによって処置して、Ｒａｓ及びＲａｐ１Ａプロセシングに関して既述したように、溶解させた。等量のタンパク質を１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で分離して、ニトロセルロースに移し、抗ＭＡＰキナーゼ抗体（ｅｒｋ２，モノクローナル，ＵＢ１，ニューヨーク州，レイクプラシド）を用いて免疫ブロットした。ペルオキシダーゼ抱合ロバ抗マウスＩｇＧ（Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc．，ペンシルバニア州，ウェストグローブ）と強化化学発光系（ＥＣＬ，Amersham Corp.）とを用いて、抗体反応を可視化した。
ＧＧＴＩ−２８６によるＧＧＴアーゼＩの阻害
ＧＧＴＩ−２８７はインビトロにおいてＧＧＴアーゼＩを強力に阻害し（ＩＣ５０＝５nM）、ＦＴアーゼ（ＩＣ５０＝２５nM）よりもＧＧＴアーゼＩ阻害に対して選択的であった（表５）。したがって、ＦＴＩ−２７６におけるメチオニンをＧＧＴＩ−２８７におけるロイシンと置換すると（図１７）、ＧＧＴアーゼＩに対する効力が約１０倍上昇した（表５）。さらに重要なことには、このことはＦＴアーゼ特異的阻害剤からＧＧＴアーゼ特異的阻害剤へ選択性を５００倍に逆転させた（表５）。この選択性が全細胞に関するものであるかどうかを知るために、ＧＧＴＩ−２８７の細胞透過性メチルエステル誘導体（ＧＧＴＩ−２８６）（図１７）を合成して、癌遺伝子Ｈ−Ｒａｓ−ＣＶＬＳを過度発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞（３１）を処置するために用いた。細胞溶解産物をＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で電気泳動させ、実施例２８で述べたように、抗Ｒａｓ抗体によって免疫ブロットした。図１８は３０μM 未満の低濃度のＧＧＴＩ−２８６において非プロセシングＨ−Ｒａｓの蓄積が生じなかったことを示す。それ故、ＧＧＴＩ−２８６は全細胞におけるＨ−Ｒａｓプロセシングの良好な阻害剤ではない。しかし、ＧＧＴＩ−２８６はゲラニルゲラニル化Ｒａｐ１Ａタンパク質のプロセシングの非常に強力な阻害剤であった（ＩＣ５０＝２μM) （図１８）。したがって、ＧＧＴＩ−２８６はファルネシル化プロセシングよりもゲラニルゲラニル化プロセシングの阻害に対して１５倍より大きく選択的である（表５）。このデータは、それぞれ、１００nMと５０μM のＩＣ５０でＨ−ＲａｓプロセシングとＲａｐ１Ａプロセシングを阻害したＦＴアーゼ特異的阻害剤ＦＴＩ−２７７とは全く対照的である（図１８）。したがって、ＧＧＴＩ−２８６は全細胞中でのゲラニルゲラニル化の阻害に関してＦＴＩ−２７７よりも２５倍強力である（表５）。
ＧＧＴＩ−２９７及びＧＧＴＩ−２９８によるＧＧＴアーゼＩの阻害
フェニル置換基をナフチルと置換することのＧＧＴアーゼＩ阻害に対する効果を知るために、４−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ−２−ナフチルベンゾイル−（Ｌ）−ロイシン（ＧＧＴＩ−２９７）とそのメチルエステル（ＧＧＴＩ−２９８）とを試験した。ＧＧＴＩ−２９７はインビトロにおいてＧＧＴアーゼＩを４０nMのＩＣ５０で阻害し、ＦＴアーゼ（ＩＣ５０＝２７０nM)よりもＧＧＴアーゼＩの阻害に対して選択的であった（図２１，表５）。したがって、ＧＧＴＩ−２８７におけるフェニルをＧＧＴＩ−２９７におけるナフチルによって置換すると、ＧＧＴアーゼＩに対する効力は８分の１に低下し、ＦＴアーゼに対する効力は１０分の１より大きく低下した。しかし、さらに重要なことには、ＦＴアーゼよりもＧＧＴアーゼＩに対する選択性は、表５に示すように、５倍（ＧＧＴＩ−２８７）〜７倍（ＧＧＴＩ−２９７）に上昇した。２０μM 程度の高濃度がＨ−Ｒａｓプロセシングを阻害しないにも拘わらず、Ｒａｐ１ＡとＲａｓ４Ｂとは１０μM ＧＧＴＩ−２９８で完全にブロックされたので、この選択性はインビボにも関したものであった（表５）。
ＧＧＴＩ−２８６によるＫ−Ｒａｓ機能の阻害
この場合には、癌遺伝子Ｋ−Ｒａｓ４Ｂのプロセシングとシグナリングとを阻害するＧＧＴＩ−２８６の能力を評価した。癌遺伝子Ｋ−Ｒａｓ４Ｂを過度発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞（３２）をＧＧＴＩ−２８６（０〜３０μM ）又はＦＴＩ−２７７（０〜３０μM ）のいずれかで処置し、溶解産物を抗Ｒａｓ抗体によって、実施例２８に述べたように、免疫ブロットした。図１９は、ＧＧＴＩ−２８６がＫ−Ｒａｓ４Ｂのプロセシングを２μM のＩＣ５０で強力に阻害したことを示す。Ｋ−Ｒａｓ４Ｂのプロセシングを阻害するＧＧＴＩ−２８６の能力はファルネシル化Ｈ−Ｒａｓのプロセシング（ＩＣ５０＞３０μM ）よりもゲラニルゲラニル化Ｒａｐ１Ａのプロセシング（ＩＣ５０＝２μM ）を阻害するその能力に非常に近似した（図１８）（表５）。このことは、Ｋ−Ｒａｓ４Ｂがゲラニルゲラニル化されうることを示唆した。Ｋ−Ｒａｓ４ＢのプロセシングがＦＴアーゼ特異性阻害剤ＦＴ−２７７に非常に耐性である（ＩＣ５０＝１０μM ）という事実は、これと一致する（図１９）。さらに、ＧＧＴＩ−２８６はＫ−Ｒａｓ４Ｂプロセシングを、ファルネシル化Ｈ−Ｒａｓプロセシングに影響を与えない（図１８）濃度（１〜３μM ）で阻害した（図１９）。
ＭＡＰキナーゼの癌遺伝子Ｋ−Ｒａｓ４Ｂ構成活性化に対するＧＧＴＩ−２８６の効果
ＧＧＴＩ−２８６によるＫ−Ｒａｓ４Ｂプロセシングの阻害が癌遺伝子シグナリングの分断を生じるかどうかを知るために、ＭＡＰキナーゼの癌遺伝子Ｋ−Ｒａｓ４Ｂ構成活性化（constitutive activation)に拮抗するＧＧＴＩ−２８６の能力を試験した。活性化ＭＡＰキナーゼは高リン酸化されており、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で低リン酸化（不活性）ＭＡＰキナーゼよりも緩慢に移動する（４３、６６）。図２０は、Ｋ−Ｒａｓ４Ｂ形質転換細胞が主として活性化ＭＡＰキナーゼを含有することを示す。これらの細胞をＦＴアーゼ特異性阻害剤ＦＴＩ−２７７（０〜３０μM ）で処置すると、３０μM までＭＡＰキナーゼ活性化を阻害しなかった（図２０）。これに反して、ＧＧＴＩ−２８６はＭＡＰキナーゼ活性化を１μM のＩＣ５０で阻害し、ブロックは１０μM で完成した。したがって、ＧＧＴＩ−２８６は癌遺伝子Ｋ−Ｒａｓ４ＢＭＡＰキナーゼ活性化を、ＦＴＩ−２７７が効果を示さない濃度（１０μM ）においてブロックした。これに反して、ＭＡＰキナーゼの癌遺伝子Ｈ−Ｒａｓ活性化はＧＧＴＩ−２８６によってはごく軽度に阻害されるに過ぎなかったが、ＦＴＩ−２７７はこの活性化を３μM において完全にブロックした（図２０）。さらに、ＧＧＴＩ−２８６はＭＡＰキナーゼのＫ−Ｒａｓ４Ｂ活性化を、ＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ活性化に殆ど影響を与えない濃度（１０μM ）においてブロックした（図２０）。
抗腫瘍効力
上記実施例は、ＧＧＴＩ−２８６がＫ−Ｒａｓ４Ｂプロセシングと、癌遺伝子シグナリングの活性化との強力で高度に選択的な阻害剤であることを実証する。これらの阻害剤の抗癌剤としての効力を実証するために、Ｋ−Ｒａｓ４Ｂ形質転換ＮＩＨ−３Ｔ３細胞をヌードマウスに皮下移植した。腫瘍が５０〜１００mm３のサイズに達したときに、マウスを対照群と処置群（５動物／群，各動物は右わき腹と左わき腹の両方に腫瘍を有した）とにランダムに分類した。図２２は、１日１回生理的食塩水で処置された対照動物からの腫瘍が２週間にわたって２９００mm３の平均サイズに成長したことを示す。これに反して、１日１回ＧＧＴＩ−２８６（２５mg／kg又は５０mg／kg）で処置された動物からの腫瘍はそれぞれ１６００mm３又は９００mm３のサイズに成長した（図２２）。したがって、ＧＧＴＩ−２８６は腫瘍成長をそれぞれ５０％と７０％阻害したことになる。
要約すると、これらのデータはＧＧＴＩ−２８６を、培養細胞におけるＫ−Ｒａｓ４Ｂ癌遺伝子シグナリングの強力なアンタゴニストとしてのみでなく、全動物における腫瘍成長の阻害剤としても明白に同定する。
本明細書に引用する参考文献を以下に便宜的に記載する、これらは本明細書に援用される。
Figure 2007016035

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Figure 2007016035

Figure 2007016035

上述した本発明において、下記請求の範囲において定義される本発明の範囲及び要旨から逸脱せずに、種々な変更がなされうることは理解されるであろう。
図１：Ｒａｓ ＣＡＡＸペプチド模倣体及びＦＴアーゼ／ＧＧＴアーゼＩの活性 Ａ．ＣＶＩＭ、ＦＴＩ−２４９、ＦＴＩ−２７６及びＦＴＩ−２７７の構造。ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７とは、実施例１０と１１で説明するように合成された。Ｂ．ＦＴアーゼ及びＧＧＴアーゼＩの阻害分析は実施例１２に述べるように、ファルネシルとゲラニルゲラニルとの、それぞれ、組換えＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＳとＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬとへの転移を阻害するＦＴ−２７６の能力を測定することによって実施した。データは少なくとも３種類の実験を表す。 図２：Ｒａｓ及びＲａｐｌＡプロセシングの阻害 Ａ．実施例１３に述べるように、Ｈ−ＲａｓＦ細胞を種々な濃度のＦＴＩ−２７７によって処理し、溶解させ、溶解産物を抗Ｒａｓ又は抗ＲａｐｌＡ抗体によって免疫ブロットした。Ｂ．ｐＺＩＰｎｅｏ、Ｈ−ＲａｓＦ、Ｈ−ＲａｓＧＧ、Ｒａｆ及びＳ１８６細胞をビヒクル又はＦＴＩ−２７７（５μM)によって処理し、溶解させ、溶解産物を抗Ｒａｓ抗体によって免疫ブロットした。データは５種類の実験を表す。細胞はノースカロライナ大学（ノースカロライナ州，チャペルヒル）のDr. Channing Derから入手した。 図３：Ｒａｓ／Ｒａｆ会合に対するＦＴＩ−２７７の効果 ｐＺＩＰｎｅｏ、Ｈ−ＲａｓＦ、Ｈ−ＲａｓＧＧ及びＳ１８６細胞をビヒクル又はＦＴＩ−２７７（５μM)によって処理し、均質化し、膜（Ａ）画分と細胞質ゾル（Ｂ）画分とを分離させ、抗Ｒａｆ抗体によって免疫沈殿させた。実施例１４に述べるように、免疫沈殿物を次にＳＤＳ−ＲＡＧＥによって分離させ、抗ＲＡＳ抗体によって免疫ブロットした。データは３種類の実験を表す。 図４：Ｒａｓヌクレオチド結合とＲａｆキナーゼ活性とに対するＦＴＩ−２７７の効果Ａ：Ｈ−ＲａｓＦ細胞をビヒクル又はＦＴＩ−２７７によって処理し、溶解させ、溶解産物を抗Ｒａｓ抗体によって免疫沈殿させた。次に、実施例１５に述べるように、ＧＴＰとＧＤＰとをＲａｓから放出させ、ＴＬＣによって分離させた。Ｂ：ｐＺＩＰｎｅｏ細胞及びＨ−ＲａｓＦ細胞をビヒクル又はＦＴＩ−２７７によって処理し、溶解させ、細胞溶解産物を抗Ｒａｆ抗体によって免疫沈殿させた。実施例１６に述べるように、１９マー自動リン酸化ペプチドを基質として用いることによって、Ｒａｆキナーゼを分析した。データは３種類の実験を表す。 図５：ＭＡＰＫの癌遺伝子活性化に対するＦＴＩ−２７７の効果Ａ：Ｈ−ＲａｓＦ細胞を種々な濃度のＦＴＩ−２７７によって処理し、細胞を溶解させ、溶解産物をＳＤＳ−ＰＡＧＥ上でランし、抗ＭＡＰＫ抗体によって免疫ブロットした。Ｂ：ｐＺＩＰｎｅｏ、Ｈ−ＲａｓＦ、Ｈ−ＲａｓＧＧ、Ｒａｆ及びＳ１８６細胞をビヒクル又はＦＴＩ−２７７（５μM)によって処理し、溶解させ、細胞溶解産物をＡと同様に処理した。データは２種類の実験を表す。 図６：ＦＴＩ−２７６はＲａｓプロセシングとＭＡＰキナーゼの癌遺伝子Ｒａｓ活性化とを選択的に阻害する。 エンプティベクター(empty vector)（ｐＺＩＰｎｅｏ）、癌遺伝子（ＧＴＰ−ロックト(locked)）ファルネシル化Ｒａｓ（ＲａｓＦ）、ゲラニルゲラニル化Ｒａｓ（ＲａｓＧＧ）、又はヒトＲａｆ−１の形質転換突然変異体によってトランスフェクトされた（transfected)ＮＩＨ３Ｔ３細胞は、Channing DerとAdrienne Cox（ノースカロライナ大学，米国，ノースカロライナ州，チャペルヒル）から入手した（２６、２７）。これらの細胞を１日目にＤＭＥＭ／１０％ＣＳ（Dubelco の修飾イーグル培地，１０％ウシ血清）にプレートし(plated)、２日目と３日目にビヒクル又はＦＴＩ−２７０（２０μM)よって処理した。次に、細胞を４日目に回収し、溶解緩衝剤（３０mM ＨＥＰＥＳ、pH７．５、１％ＴＸ−１００、１０％グリセロール、１０mM ＮａＣｌ、５mM ＭｇＣｌ２、２５mM ＮａＦ、１mM ＥＧＴＡ、２mM Ｎａ３ＶＯ４、１０μg ／ml トリプシン阻害剤、２５μg ／ml ロイペプチン、１０μg ／ml アプロチニン、２mM ＰＭＳＦ）中で溶解させた。溶解産物（３５μg)を１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で電気泳動させ、ニトロセルロース膜に移し、抗Ｒａｓ抗体Ｙ１３−２３８（ＡＴＣＣ，メリーランド州，ロックビルから購入したハイブリドーマから単離）と抗ＭＡＰキナーゼ（ｅｒｋ２）抗体（ＵＢＩ，ニューヨーク州，レイクプラシド）とによって、既述したように、同時に免疫ブロットした（１７，２２）。 図７．ヒト肺癌に対するＦＴＩ−２７６の抗腫瘍効力 Ｃａｌｕ−１（Ｐａｎｅｌ Ａ）とＮＣＩ−Ｈ８１０細胞（Ｐａｎｅｌ Ｂ）とをＡＴＣＣから購入し、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）中のＭｃＣｏｙの５Ａ培地と１０％ＦＢＳ中のＲＰＭＩ１６４０とにおいてそれぞれ増殖させた。細胞を回収し、ＰＢＳ中に再懸濁させ、生後８週間の雌ヌードマウスの右わき腹と左わき腹とにｓ．ｃ．注入した（１０７細胞／わき腹）。ヌードマウス（Harlan Sprague Dawley ，インディアナ州，インディアナポリス）はInstitutional Animal Care and Use Committee （ＩＡＣＵＣ）の方法とガイドラインとに従って維持した。腫瘍のｓ．ｃ．移植後３２日目に、動物に１日１回０．２mlを３６日間ｉ．ｐ．投与した。対照動物（中実円）には生理的食塩水ビヒクルを与えたが、処理動物（無地三角形）にはＦＴＩ−２７６（５０mg／kg）を注入した。腫瘍体積を長さ（ｌ）と幅（ｗ）とを測定し、体積（Ｖ＝（ｌ）Ｘ（ｗ）２／２）を算出することによって決定した。データは各細胞ラインに関して各群における８個の腫瘍の平均体積として記載する。対照群と処理群との統計的有意性はスチューデントｔ検定を用いて評価した（* Ｐ＜０．０５）。 図８．ヒト肺癌（Ｃａｌｕ−１）細胞におけるＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７との抗腫瘍効力 実験方法は図７に述べた方法と同じであった。 図９．ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７とによるＲａｓ形質転換細胞における腫瘍増殖の阻害 Ｒａｓ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞をヌードマウスに皮下移植し、腫瘍が５０mm３に達したときに、ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７（５０mg／kg)との毎日腹腔内注入を開始した。 図１０．ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７とによるＲａｆ形質転換細胞における腫瘍増殖の阻害 Ｒａｆ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞をヌードマウスに皮下移植し、腫瘍が５０mm３に達したときに、ＦＴＩ−２７６とＦＴＩ−２７７（５０mg／kg）との毎日腹腔内注入を開始した。 図１１．投与量反応：抗腫瘍効力及びＲａｓプロセシング相互関係 Ａ．図３に述べられているように、抗腫瘍効力を試験したが、この場合には、動物をそれぞれ４マウス（２腫瘍／マウス）から成る４群にランダムに割り当てた。生理的食塩水処理群（円）；ＦＴＩ−２７６処理群：１０mg／kg（方形）、５０mg／kg（上向き三角形）、１００mg／kg（下向き三角形）。Ｂ．１７日目の最後の処理後５時間後に、Ｒａｓプロセシングを実施した。腫瘍を動物から摘出し、ティッシュマイズし(tissumized)、図１に記載するように、溶解緩衝剤中で溶解させた。溶解産物（２５μg ）を１２．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で電気泳動させ、既述したように、抗Ｒａｓ抗体Ｙ１３−２３８によって免疫ブロットした。これらのブロットを次に抗Ｒａｐ１Ａ抗体（Santa Cruze Biotechnologies,カリフォルニア州，サンタクルズ）によって再検査した。 図１２．ＣＶＩＭ、Ｃ−４ＡＢＡ−Ｍ、還元Ｃ−４ＡＢＡ−Ｍ、ＦＴＩ−２６５（４）、ＦＴＩ−２７１（５）及びＦＴＩ−２６１（８）の構造 図１３．ＣＶＩＭとファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤ＦＴＩ−２６５のエネルギー最小化構造的コンフォーメーション 図１４ＡとＢ．ＦＴＩ−２６５とＦＴＩ−２７１とによるＦＴアーゼとＧＧＴアーゼとの阻害の比較 図１５．Ｒａｓ ＣＡＡＸペプチドとペプチド模倣体のファルネシル化に関連したシリカゲルＴＬＣ 図１６．本発明による化合物を用いた、細胞におけるＲａｓとＲａｐ１Ａプロセシング 図１７．ＣＡＡＸペプチド模倣体の構造 ＦＴＩ−２７６／２７７、ＧＧＴＩ−２８７／２８６及びＧＧＴＩ−２９７の構造。 図１８．Ｈ−ＲａｓとＲａｐ１Ａプロセシングの分断 癌遺伝子Ｈ−Ｒａｓを過度発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞を種々な濃度のＦＴＩ−２７７（０〜５０μM)又はＧＧＴＩ−２８６（０〜３０μM)によって処理した。実施例３に述べるように、細胞を溶解させ、溶解産物をＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で電気泳動させ、抗Ｒａｓ抗体又は抗Ｒａｐ１Ａ抗体によって免疫ブロットした。ＵとＰはタンパク質の非処理形と処理形を表す。データは３種類の独立した実験を表す。 図１９．Ｋ−Ｒａｓ４Ｂプロセシングの分断 癌遺伝子Ｋ−Ｒａｓ４Ｂを過度発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞をＦＴＩ−２７７又はＧＧＴＩ−２８６（０〜３０μＭ）によって処理した。実施例３に述べるように、細胞を溶解させ、溶解産物をＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で電気泳動させ、抗Ｒａｓ抗体によって免疫ブロットした。ＵとＰはＲａｓの非処理形と処理形を表す。データは３種類の独立した実験を表す。 図２０．ＭＡＰキナーゼの癌遺伝子活性化の阻害 癌遺伝子Ｈ−Ｒａｓ又はＫ−Ｒａｓ４Ｂを過度発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞をＦＴＩ−２７７又はＧＧＴＩ−２８６（０〜３０μM)によって処理した。細胞を溶解させ、溶解産物をＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で電気泳動させ、抗ＭＡＰ−キナーゼ抗体によって免疫ブロットした。Ｐ−ＭＡＲＫは高リン酸化(hyperphosphorylated）ＭＡＰキナーゼを表す。データは３種類の独立した実験を表す。 図２１．ＧＧＴＩ−２９７によるＦＴアーゼとＧＧＴアーゼＩとの活性の阻害 図２２．Ｋ−Ｒａｓ４ＢにおけるＧＧＴＩ−２８６の抗腫瘍効力

Claims (76)

  1. 式：
    ＣβＸ
    ［式中、
    Ｃは還元状態又は非還元状態のシステイニル部分であり；
    Ｘはアミノ酸であり；
    βはアミノ安息香酸又はアミノナフトエ酸の残基である］
    で示されるペプチド模倣体。
  2. システイニル部分が還元状態である、請求項１記載のペプチド模倣体。
  3. βが２−フェニル−４−アミノ安息香酸である、請求項２記載のペプチド模倣体。
  4. 式：
    Figure 2007016035

    で示される、請求項１記載のペプチド模倣体。
  5. βが置換４−アミノ安息香酸である、請求項１記載のペプチド模倣体。
  6. Ｘがメチオニン又はフェニルアラニンである、請求項１記載のペプチド模倣体。
  7. 請求項１記載のペプチド模倣体と、製薬的に受容されるキャリヤーとを含む、薬剤組成物。
  8. ファルネシルトランスフェラーゼが存在する宿主におけるファルネシルトランスフェラーゼの阻害方法であって、宿主に請求項１記載のペプチド模倣体の有効量を投与することを含む方法。
  9. プロドラッグの形態である、請求項１記載のペプチド模倣体。
  10. 親油性のエステラーゼ感受性部分によって官能性化された１個以上の末端アミノ、スルフヒドリル及び酸基によって定義される化合物を含む、請求項９記載のプロドラッグ。
  11. システインＣの末端アミノ及びスルフヒドリル基がベンゾイルオキシカルボニル基又は他の切断可能な親油性基によって官能性化され、末端カルボン酸基がエステル化される、請求項９記載のプロドラッグ。
  12. カルボン酸基がメチルエステルとしてエステル化される、請求項１１記載のプロドラッグ。
  13. 式：
    Figure 2007016035

    ［式中、ＲはＨ，ＣＨ３又は任意の親油性エステラーゼ感受性部分を表し、Ｒ１はＨ又は置換若しくは非置換フェニル基を表す］
    で示される化合物。
  14. Ｒ１が非置換フェニル基、又はアルコキシ−、クロロー、ブロモ−若しくはメチル−置換フェニル基である、請求項１３記載の化合物。
  15. Ｒ１が３，５−ジメチルフェニルラジカル、チオフェンラジカル、ナフチルラジカル、ピロールラジカル、ピリジルラジカル、アルキルラジカル及びアルコキシラジカルから成る群から選択される、請求項１３記載の化合物。
  16. 式：
    Figure 2007016035

    ［式中、ＲはＨ、ＣＨ３又は任意の親油性エステラーゼ感受性部分を表し、
    Ｒ１はＨ又は置換若しくは非置換フェニル基である］
    で示される化合物。
  17. Ｒ１が非置換フェニル基、又はアルコキシ−、クロロー、ブロモ−若しくはメチル−置換フェニル基である、請求項１５記載の化合物。
  18. Ｒ１が３，５−ジメチルフェニルラジカルである、請求項１６記載の化合物。
  19. 式：
    Figure 2007016035

    ［式中、ＲはＨ、ＣＨ３又は任意の親油性エステラーゼ感受性部分である］
    で示される化合物。
  20. 式：
    Figure 2007016035

    ［式中、ＲはＨ、ＣＨ３又は任意の親油性エステラーゼ感受性部分を表し、
    Ｒ１はＨ、ＣＨ３又はＯＣＨ３を表す］
    で示される化合物。
  21. ファルネシルトランスフェラーゼが存在する宿主におけるファルネシルトランスフェラーゼの阻害方法であって、宿主に請求項１３記載のペプチド模倣体の有効量を投与することを含む方法。
  22. 癌の治療方法であって、このような治療を必要とする患者に請求項１又は１３に記載のペプチド模倣体の有効量を投与することを含む方法。
  23. βがアミノ安息香酸の残基である、請求項１記載のペプチド模倣体。
  24. Ｘがロイシン又はイソロイシンである、請求項２３記載のペプチド模倣体。
  25. βが置換４−アミノ安息香酸である、請求項２４記載のペプチド模倣体。
  26. システイニル部分が還元状態である、請求項２５記載のペプチド模倣体。
  27. ４−アミノ安息香酸がフェニル環の２−及び／又は３−位置においてアルキル、アルコキシ、アリール若しくはナフチル基、又は複素環若しくはヘテロ芳香環によって置換される、請求項２６記載のペプチド模倣体。
  28. βが２−フェニル−４−アミノ安息香酸又は２−ナフチル−４−アミノ安息香酸である、請求項２６記載のペプチド模倣体。
  29. Ｌがロイシンである、請求項２８記載のペプチド模倣体。
  30. 請求項２４記載のペプチド模倣体と製薬的に受容されるキャリヤーとを含む薬剤組成物。
  31. ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼが存在する宿主におけるゲラニルゲラニルトランスフェラーゼの阻害方法であって、宿主に請求項２４記載のペプチド模倣体の有効量を投与することを含む方法。
  32. プロドラッグの形態である、請求項２４記載のペプチド模倣体。
  33. 親油性のエステラーゼ感受性部分によって官能性化された１個以上の末端アミノ、スルフヒドリル及び酸基によって定義される化合物を含む、請求項３２記載のプロドラッグ。
  34. 末端カルボン酸基がエステル化される、請求項３３記載のプロドラッグ。
  35. カルボン酸基がメチルエステルとしてエステル化される、請求項３４記載のプロドラッグ。
  36. ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼが存在する宿主におけるゲラニルゲラニルトランスフェラーゼの阻害方法であって、宿主に請求項３５記載の化合物の有効量を投与することを含む方法。
  37. 癌の治療方法であって、このような治療を必要とする患者に請求項２４記載のペプチド模倣体の有効量を投与することを含む方法。
  38. 癌の治療方法であって、このような治療を必要とする患者に請求項３５記載のペプチド模倣体の有効量を投与することを含む方法。
  39. 式：
    Ｃ０Ｂ
    ［式中、Ｃ０は
    Figure 2007016035

    を表し、
    ＡはＯ又は２Ｈを表し、
    Ｒ０はＳＨ、ＮＨ２又はＣｘＨｙ−ＳＯ２−ＮＨ−（式中、ＣｘＨｙは直鎖の飽和若しくは不飽和炭化水素であり、ｘは１〜２０であり、ｙは３〜４１（４１を包含する）である）であり；Ｂは−ＮＨＲ（式中、Ｒはアリール基である）を表す］で示される化合物。
  40. Ｒがビフェニル基である、請求項３９記載の化合物。
  41. Ｃ０が３−メルカプト−２−アミノ−プロピルアミノである、請求項３９記載の化合物。
  42. Ｒがビフェニル基である、請求項４１記載の化合物。
  43. Ｒが−ＣＯＯＨによって置換されたビフェニル基である、請求項４２記載の化合物。
  44. Ｒが低級アルキル又はオキシアルキルによって置換されたビフェニル基である、請求項４２記載の化合物。
  45. 低級アルキルがメチルである、請求項４４記載の化合物。
  46. 式：
    Figure 2007016035

    ［式中、ＡはＯ又は２Ｈであり；Ｒ１は水素又はＣＯＯＨであり；Ｒ２は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＣＨ３、ＣＨ３又はテトラゾリルであり；Ｒ３は水素又はＣＯＯＨであり；Ｒ４は水素、ＯＣＨ３、ＯＣ３Ｈ７又はフェニル基である］
    で示される請求項３９記載の化合物。
  47. Ｒ１が水素であり；Ｒ２が水素、ＣＯＯＨ又はＣＨ３であり；Ｒ３が水素又はＣＯＯＨであり；Ｒ３が水素であるときにＲ２はＣＯＯＨ又はＣＨ３であり；Ｒ４は水素である］
    で示される請求項４６記載の化合物。
  48. Ｒ２がＣＯＯＨであり、Ｒ３が水素である、請求項４７記載の化合物。
  49. Ｒ１とＲ３がＨであり；Ｒ２がＣＯＯＨ又はＣＨ３であり；Ｒ４がフェニル又はｎ−オキシプロピル基である、請求項４６記載の化合物。
  50. Ｒ１、Ｒ３及びＲ４がＨであり；Ｒ２がテトラゾリルである、請求項４６記載の化合物。
  51. Ｒ０がＣｘＨｙ−ＳＯ２−ＮＨ−であり；ｘが２〜１６であり；ｙが３〜３３である、請求項４０記載の化合物。
  52. Ｒ０がＣ２Ｈ５−ＳＯ２−ＮＨ−、ＣＨ２＝ＣＨ−ＳＯ２−ＮＨ−及びＣＨ３（ＣＨ２）１５−ＳＯ２−ＮＨ−から成る群から選択される、請求項５１記載の化合物。
  53. Ｒ０がＮＨ２−である、請求項４０記載の化合物。
  54. Ｒが２’−カルボキシ−ビフェニル基又は１−メトキシ−２’−カルボキシ−ビフェニル基である、請求項５３記載の化合物。
  55. Ｒ０がＳＨであり、Ｂが３−アミノメチル−３’−カルボキシビフェニルである、請求項３９記載の化合物。
  56. ｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼの阻害を必要とする宿主におけるｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼの阻害方法であって、請求項３９記載の化合物の有効量を前記宿主に投与することを含む方法。
  57. 請求項３９記載の化合物とそのための製薬的に受容されるキャリヤーとを含む薬剤組成物。
  58. ｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼの阻害を必要とする宿主におけるｐ２１ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼの阻害方法であって、請求項４１記載の化合物の有効量を前記宿主に投与することを含む方法。
  59. 請求項４１記載の化合物とそのための製薬的に受容されるキャリヤーとを含む薬剤組成物。
  60. 式：
    ＣβＸ
    ［式中、
    Ｃはシステインを表し；
    Ｘはアミノ酸であり；
    βは非ペプチドアミノアルキル−若しくはアミノ−置換脂肪族若しくは芳香族カルボン酸又は複素環モノカルボン酸である］
    で示されるペプチド模倣体。
  61. βがアミノ安息香酸又はアミノアルカン酸である、請求項６０記載のペプチド模倣体。
  62. 式：
    Ｃ△
    ［式中、Ｃはシステインであり、△は、ペプチドアミノ酸を包含しないが、サイズにおいて式：ＣＡ１Ａ２Ｘ（式中、Ｃはシステインであり、Ａ１、Ａ２及びＸはペプチドアミノ酸である）のテトラペプチドと一致するアリール又は複素環式置換基である］
    で示されるペプチド模倣体。
  63. アミノメチル二環状アリールカルボン酸に直接結合したシステインを含む、請求項６５記載のペプチド模倣体。
  64. △がビフェニル基を含む、請求項６３記載の化合物。
  65. △が３−アミノメチル−ビフェニル−３−カルボン酸のラジカルである、請求項６４記載の化合物。
  66. 式：
    △１Ｃ△
    △１ＣＡ１Ａ２Ｘ
    又は
    △１Ｃ−β−Ｘ
    ［式中、
    Ｃはシステインであり；
    Ａ１、Ａ２及びＸはペプチドアミノ酸であり；
    △はペプチドアミノ酸を包含しない、アリール又は複素環式置換基であり；
    βは非ペプチドアミノアルキル−若しくはアミノ−置換脂肪族若しくは芳香族カルボン酸又はヘテロカルボン酸であり；
    △１はシステインＳ原子を介してＣに結合したホスホネート基である］
    で示される化合物。
  67. 式：
    △１Ｃ−ＡＭＢＡ−Ｘ
    ［式中、△１、Ｃ及びＸは請求項５６において定義した意味を有し、ＡＭＢＡはアミノメチル安息香酸である］
    で示される請求項６６記載の化合物。
  68. ＡＭＢＡが３−アミノメチル安息香酸である、請求項６７記載の化合物。
  69. 式：
    β１Ｃ△
    β１ＣＡ１Ａ２Ｘ
    又は
    β１Ｃ−β−Ｘ
    ［式中、
    Ｃはシステインであり；Ａ１、Ａ２及びＸはペプチドアミノ酸であり；
    △はペプチドアミノ酸を包含しない、アリール又は複素環式置換基であり；
    βは非ペプチドアミノアルキル−若しくはアミノ−置換脂肪族若しくは芳香族カルボン酸又はヘテロカルボン酸であり；
    β１はシステインＳ原子を介してＣに結合したアリール又はアラルキル基である］
    で示される化合物。
  70. 式：
    β１Ｃ−ＡＭＢＡ−Ｘ
    ［式中、Ｃ、Ｘ及びβ１は請求項７０において定義した意味を有し、ＡＭＢＡはアミノメチル安息香酸である］
    で示される請求項６９記載の化合物。
  71. ＡＭＢＡが３−アミノメチル安息香酸である、請求項７０記載の化合物。
  72. 式：
    Figure 2007016035

    で示される化合物。
  73. ペプチド又はペプチド模倣体の細胞への取り込みを改良する方法であって、末端アミノ、スルフヒドリル及び酸基が親油性又は疎水性のエステラーゼ感受性部分によって官能性化されるような、官能性化形のペプチドを用いることを含む方法。
  74. 宿主における腫瘍細胞増殖を阻害するための請求項７３記載の方法であって、１個以上の末端アミノ、スルフヒドリル及びカルボン酸基が親油性又は疎水性のエステラーゼ感受性部分によって官能性化されている、ペプチド又はペプチド模倣体の有効量を宿主に投与することを含む方法。
  75. 末端アミノ基及びスルフヒドリル基がベンジルオキシカルボニル基によって官能性化され、カルボン酸基がエステル化される、請求項７４記載の方法。
  76. 式（Ａ−Ｌ）：
    Figure 2007016035

    ｛式中、Ｒ１'は：
    （ｉ）水素；
    （ii）低級アルキル；
    （iii)アルケニル；
    （iv）アルコキシ；
    （ｖ）チオアルコキシ；
    （vi）ハロ；
    （vii)ハロアルキル；
    （viii）アリール−Ｌ２−［式中、Ｌ２は存在しないか又は−ＣＨ２−、
    −ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｑ（式中、ｑは０、１若しくは２である）、−Ｎ（Ｒ’）−（式中、Ｒ’は水素若しくは低級アルキルである）、又は−Ｃ（Ｏ）−であり、アリールはフェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル及びインデニルから成る群から選択され、アリール基は非置換であるか又は置換されている］；又は
    （ix）複素環−Ｌ３−［式中、Ｌ３は存在しないか又は−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｑ（式中、ｑは０、１若しくは２である）、−Ｎ（Ｒ’）−（式中、Ｒ’は水素若しくは低級アルキルである）、又は−Ｃ（Ｏ）−であり、複素環は単環状複素環（式中、複素環は非置換であるか若しくは低級アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ハロ、ニトロ、オキソ（＝Ｏ）、アミノ、Ｎ−保護アミノ、アルコキシ、チオアルコキシ及びハロアルキルから成る群から独立的に選択される１、２若しくは３個の置換基によって置換されている）である］であり；
    Ｒ１ａは水素又は低級アルキルであり；
    Ｒ２'は：
    （ｉ）
    Figure 2007016035

    ［式中、Ｒ１２ａは水素、低級アルキル又は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒ１３（式中、Ｒ１３は水素若しくはカルボキシ保護基である）であり、Ｒ１２ｂは水素又は低級アルキルである、但し、Ｒ１２ａとＲ１２ｂが両方とも水素であることはない］；
    （ii）−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１４）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５［式中、Ｒ１４は、
    （ａ）低級アルキル、
    （ｂ）シクロアルキル、
    （ｃ）シクロアルキルアルキル、
    （ｄ）アルコキシアルキル、
    （ｅ）チオアルコキシアルキル、
    （ｆ）ヒドロキシアルキル、
    （ｇ）アミノアルキル、
    （ｈ）カルボキシアルキル、
    （ｉ）アルコキシカルボニルアルキル、
    （ｊ）アリールアルキル、又は
    （ｋ）アルキルスルホニルアルキルであり、
    Ｒ１５は水素、又はカルボキシ保護基である］；又は
    （iii)
    Figure 2007016035

    であり；
    Ｒ３'は
    Figure 2007016035

    ［式中、ＡはＯ又は２Ｈを表し、
    Ｒ０はＳＨ、ＮＨ２又はＣｘＨｙ−ＳＯ２−ＮＨ−（式中、ＣｘＨｙは直鎖の飽和若しくは不飽和炭化水素であり、ｘは１〜２０であり、ｙは３〜４１（４１を包含する）である］であり；
    Ｂは−ＮＨＲ（式中、Ｒはアリール基である）を表し；
    Ｌ１は−ＮＨ−である｝
    で示される化合物又はその製薬的に受容される塩若しくはプロドラッグ。
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