JP2004043466A - 免疫調節オリゴヌクレオチド - Google Patents
免疫調節オリゴヌクレオチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP2004043466A JP2004043466A JP2003178741A JP2003178741A JP2004043466A JP 2004043466 A JP2004043466 A JP 2004043466A JP 2003178741 A JP2003178741 A JP 2003178741A JP 2003178741 A JP2003178741 A JP 2003178741A JP 2004043466 A JP2004043466 A JP 2004043466A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oligonucleotide
- cells
- cpg
- odn
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Transplantation (AREA)
Abstract
【課題】新規な免疫刺激オリゴヌクレオチド組成物、このオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性に基づく有用な方法、中性オリゴヌクレオチド、中性オリゴヌクレオチドを用いる有用な方法、および免疫阻害オリゴヌクレオチド、免疫阻害オリゴヌクレオチドの種々の使用を提供すること。
【解決手段】式Ｉ：５’ Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４ ３’に従う少なくとも１つの核酸配列を含む、免疫刺激オリゴヌクレオチド：ここで、ＣＧは、該オリゴヌクレオチドに免疫刺激能力を付与する非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドであり；Ｘ１およびＸ２の少なくとも１つはプリンであり；そして、Ｘ３およびＸ４の少なくとも１つはピリミジンである。
【選択図】 なし
【解決手段】式Ｉ：５’ Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４ ３’に従う少なくとも１つの核酸配列を含む、免疫刺激オリゴヌクレオチド：ここで、ＣＧは、該オリゴヌクレオチドに免疫刺激能力を付与する非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドであり；Ｘ１およびＸ２の少なくとも１つはプリンであり；そして、Ｘ３およびＸ４の少なくとも１つはピリミジンである。
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド、およびこのオリゴヌクレオチドの被験体における免疫応答を刺激する能力に基づく治療的有用性に関する。本発明はまた、被験体における非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドにより開始される免疫系の活性化に関連する疾病を処置するための治療法に関する。この治療法は、非メチル化ＣｐＧ配列（すなわち、メチル化ＣｐＧ配列またはＣｐＧ配列なし）を含まないオリゴヌクレオチドを被験体に投与し、非メチル化ＣｐＧ核酸を結合について競合して優る工程を包含する。さらに、本発明は、アンチセンス療法において使用するための、またはインビボでのハイブリダイゼーションプローブとして使用するためのメチル化ＣｐＧ含有ジヌクレオチド、ならびに抗ウィルス治療剤として使用するための免疫阻害オリゴヌクレオチドに関する。
（政府の援助）
本発明において得られる研究は、一部、米国衛生研究所認可番号 Ｒ２９−ＡＲ４２５５６−０１号により援助された。従って、本発明のある種の権利が米国政府に与えられ得る。
【０００２】
【従来の技術】
（ＤＮＡは細胞膜に結合しインターナライズされる）
１９７０年代には、幾人かの研究者が、高分子量ＤＮＡの細胞膜への結合を報告した（Ｌｅｒｎｅｒ，Ｒ．Ａ．，Ｗ．Ｍｅｉｎｋｅ，およびＤ．Ａ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，１９７１，「二倍体ヒトリンパ球の細胞質における膜結合ＤＮＡ」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ６８：１２１２；Ａｇｒａｗａｌ，Ｓ．Ｋ．，Ｒ．Ｗ．Ｗａｇｎｅｒ，Ｐ．Ｋ．ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ，およびＢ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，１９７５，「白金−ピリミジン錯体を用いて電子顕微鏡により視覚化された腫瘍発生細胞における細胞表面結合核酸」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７２：９２８）。１９８５年には、Ｂｅｎｎｅｔｔらが、ＤＮＡのリンパ球への結合がリガンド−レセプター相互作用に類似することを初めて示した：すなわち、結合は飽和可能であり、競合的であり、そしてＤＮＡのエンドサイトーシスおよび分解を引き起こす（Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｒ．Ｍ．，Ｇ．Ｔ．Ｇａｂｏｒ，およびＭ．Ｍ．Ｍｅｒｒｉｔｔ．１９８５，「ＤＮＡのヒト白血球への結合。ＤＮＡのレセプター媒介結合、インターナリゼーションおよび分解の証拠」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７６：２１８２）。ＤＮＡと同様に、オリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）は、飽和可能であり、配列独立性であり、そして温度およびエネルギー依存性の様式で細胞に入り得る（Ｊａｒｏｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．Ｗ．，およびＪ．Ｓ．Ｃｏｈｅｎ，１９９１，「アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドの細胞取り込み」，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６：２３５；Ａｋｈｔａｒ，Ｓ．，Ｙ．Ｓｈｏｊｉ，およびＲ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ，１９９２，「アンチセンスオリゴヌクレオチドの生物学的安定性および膜輸送特性の薬学的局面」；Ｇｅｎｅ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ： Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｎｄ ＤＮＡ，Ｒ．Ｐ．Ｅｒｉｃｋｓｏｎ，およびＪ．Ｇ．Ｉｚａｎｔ編，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｔｄ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１３３；ならびに、Ｚｈａｏ，Ｑ．，Ｔ．Ｗａｌｄｓｃｈｍｉｄｔ，Ｅ．Ｆｉｓｈｅｒ，Ｃ．Ｊ．Ｈｅｒｒｅｒａ，およびＡ．Ｍ．Ｋｒｉｅｇ，１９９４，「マウス骨髄Ｂ細胞前駆体における時期特異的オリゴヌクレオチド取り込み」，Ｂｌｏｏｄ ８４：３６６０）。ＤＮＡまたはＯＤＮ取り込みのレセプターはクローン化されておらず、そしてＯＤＮ結合および細胞取り込みが高分子量ＤＮＡと同一のメカニズムを介して起こるのか異なるメカニズムを介して起こるのかはいまだ明らかではない。
【０００３】
リンパ球のＯＤＮ取り込みは細胞の活性化により調節されることが示されている。Ｂ細胞マイトジェンＬＰＳにより刺激された脾臓細胞は、Ｂ細胞集団におけるＯＤＮ取り込みを飛躍的に増大させたが、一方、Ｔ細胞マイトジェンＣｏｎ Ａで処理された脾臓細胞は、Ｂ細胞ではなくＴ細胞によるＯＤＮ取り込みの増大を示した（Ｋｒｉｅｇ，Ａ．Ｍ．，Ｆ．Ｇｍｅｌｉｇ−Ｍｅｙｌｉｎｇ，Ｍ．Ｆ．Ｇｏｕｒｌｅｙ，Ｗ．Ｊ．Ｋｉｓｃｈ，Ｌ．Ａ．Ｃｈｒｉｓｅｙ，およびＡ．Ｄ．Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ，１９９１，「リンパ様細胞によるオリゴデオキシヌクレオチドの取り込みは不均質かつ誘導性である」，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １：１６１）。
（核酸の免疫効果）
いくつかのポリヌクレオチドが、生体応答調節因子として広範に評価されている。その最良の例は、おそらくポリ（Ｉ，Ｃ）であろう。これは、ＩＦＮ産生の強力なインデューサーであり、そしてマクロファージのアクチベーターおよびＮＫ活性のインデューサーである（Ｔａｌｍａｄｇｅ，Ｊ．Ｅ．，Ｊ．Ａｄａｍｓ，Ｈ．Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｍ．Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｂ．Ｌｅｎｚ，Ｍ．Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｅ．Ｓｃｈｌｉｃｋ，Ｒ．Ｒｕｆｆｍａｎｎ，Ｒ．Ｈ．Ｗｉｌｔｒｏｕｔ，およびＭ．Ａ．Ｃｈｉｒｉｇｏｓ，１９８５，「ポリ−Ｌ−リジンおよびカルボキシメチルセルロースと複合体化されたポリイノシン−ポリシチジル酸のマウスにおける免疫調節効果」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４５：１０５８；Ｗｉｌｔｒｏｕｔ，Ｒ．Ｈ．，Ｒ．Ｒ．Ｓａｌｕｐ，Ｔ．Ａ．Ｔｗｉｌｌｅｙ，およびＪ．Ｅ．Ｔａｌｍａｄｇｅ，１９８５，「ポリリボヌクレオチドによるナチュラルキラー活性の免疫調節」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓｐ．Ｍｏｄ．４：５１２；Ｋｒｏｗｎ，Ｓ．Ｅ．１９８６，「ガン処置におけるインターフェロンおよびインターフェロンインデューサー」，Ｓｅｍ．Ｏｎｃｏｌ．１３：２０７；ならびに、Ｅｗｅｌ，Ｃ．Ｈ．，Ｓ．Ｊ．Ｕｒｂａ，Ｗ．Ｃ．Ｋｏｐｐ，Ｊ．Ｗ．Ｓｍｉｔｈ ＩＩ，Ｒ．Ｇ．Ｓｔｅｉｓ，Ｊ．Ｌ．Ｒｏｓｓｉｏ，Ｄ．Ｌ．Ｌｏｎｇｏ，Ｍ．Ｊ．Ｊｏｎｅｓ，Ｗ．Ｇ．Ａｌｖｏｒｄ，Ｃ．Ｍ．Ｐｉｎｓｋｙ，Ｊ．Ｍ．Ｂｅｖｅｒｉｄｇｅ，Ｋ．Ｌ．ＭｃＮｉｔｔ，および Ｓ．Ｐ．Ｃｒｅｅｋｍｏｒｅ，１９９２，「ガン患者におけるポリ−Ｌ−リジンおよびカルボキシメチルセルロースで複合体化されたポリイノシン−ポリシチジル酸とインターロイキン２の組み合わせ：臨床的および免疫学的効果」，Ｃａｎｓ．Ｒｅｓ．５２：３００５）。このマウスＮＫの活性化は、ＩＦＮ β分泌の誘導のみに起因し得るようである（Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｒ．，および Ｃ．Ａ．Ｂｉｒｏｎ，１９９３，「ＩＦＮ誘導およびそれに関連する脾臓白血球分布における変化」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：３７１３）。デオキシリボースは有効ではなかったので、この活性化はリボース糖に特異的であった。インビトロにおけるその強力な抗腫瘍活性により、（ＲＮＡｓｅによる分解を減少させるために）ポリ−Ｌ−リジンおよびカルボキシメチルセルロースで複合体化されたポリ（Ｉ，Ｃ）を用いるいくつかの臨床的試験がなされている（Ｔａｌｍａｄｇｅ，Ｊ．Ｅ．ら，１９８５，前述；Ｗｉｌｔｒｏｕｔ，Ｒ．Ｈ．ら，１９８５，前述；Ｋｒｏｗｎ，Ｓ．Ｅ．ら，１９８６，前述；および、Ｅｗｅｌ，Ｃ．Ｈ．ら，１９９２，前述）。不運なことに、毒性の副作用により、ポリ（Ｉ，Ｃ）は有用な治療薬剤になるにはほど遠かった。
【０００４】
Ｃ８位が臭素またはチオール基で置換されたグアニンリボヌクレオチドはＢ細胞マイトジェンであり、「Ｂ細胞分化因子」を置換し得る（Ｆｅｌｄｂｕｓｈ，Ｔ．Ｌ．，およびＺ．Ｋ．Ｂａｌｌａｓ，１９８５，「８−メルカプトグアノシンのリンホカイン様活性：ＴおよびＢ細胞分化の誘導」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：３２０４；ならびに、Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｍ．Ｇ．，１９８６，「体液性免疫におけるＴ細胞シグナルとＣ８置換グアニンヌクレオシドとの間の共働作用のメカニズム：Ｂリンパ球性（Ｂ ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ）サイトカインは、８−メルカプトグアノシンに対する応答性を誘導する」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：３３３５）。８−メルカプトグアノシンおよび８−ブロモグアノシンはまた、ＭＨＣ拘束性ＣＴＬの生成に必要とされるサイトカインの代替物となり得（Ｆｅｌｄｂｕｓｈ，Ｔ．Ｌ．，１９８５，前述）、マウスＮＫ活性を増大させ得（Ｋｏｏ，Ｇ．Ｃ．，Ｍ．Ｅ．Ｊｅｗｅｌｌ，Ｃ．Ｌ．Ｍａｎｙａｋ，Ｎ．Ｈ．Ｓｉｇａｌ，およびＬ．Ｓ．Ｗｉｃｋｅｒ，１９８８，「８−ブロモグアノシンによるマウスナチュラルキラー細胞およびマクロファージの活性化」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３２４９）、そして、マウスＬＡＫ生成の誘導においてＩＬ−２と共働作用し得る（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ａ．，およびＺ．Ｋ．Ｂａｌｌａｓ，１９９０，リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞。Ｖ。ＬＡＫ生成におけるＩＬ−２節約剤としての８−メルカプトグアノシン」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：３５２４）。これらのＣ８置換グアノシンのＮＫおよびＬＡＫ増大活性は、それらのＩＦＮの誘導に起因するようである（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ａ．ら，１９９０，前述）。最近、マイコバクテリウムにより産生された５’三リン酸化チミジンが、ヒトγδＴ細胞のサブセットに対してマイトジェン性であることが見いだされた（Ｃｏｎｓｔａｎｔ，Ｐ．，Ｆ．Ｄａｖｏｄｅａｕ，Ｍ．−Ａ．Ｐｅｙｒａｔ，Ｙ．Ｐｏｑｕｅｔ，Ｇ．Ｐｕｚｏ，Ｍ．Ｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ，およびＪ．−Ｊ．Ｆｏｕｒｎｉｅ，１９９４，「非ペプチド性マイコバクテリウムリガンドによるヒトγδＴ細胞の刺激」，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：２６７）。この報告は、免疫系が微生物の核酸に優先的に応答する経路を展開し得ることを示した。
【０００５】
いくつかの観察により、ある種のＤＮＡ構造もまたリンパ球を活性化する潜在性を有し得ることが示唆されている。例えば、Ｂｅｌｌらは、脾臓細胞上清中のヌクレオソームタンパク質−ＤＮＡ複合体（裸のＤＮＡではない）がＢ細胞増殖および免疫グロブリン分泌を引き起こしたことを報告した（Ｂｅｌｌ，Ｄ．Ａ．，Ｂ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，およびＰ．ＶａｎｄｅｎＢｙｇａａｒｔ，１９９０，「免疫原性ＤＮＡ関連因子」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８５：１４８７）。他の場合においては、裸のＤＮＡが免疫効果を有することが報告されている。例えば、最近、Ｍｅｓｓｉｎａらは、ポリ（ｄＧ）・（ｄＣ）およびポリ（ｄＧ・ｄＣ）の２６０〜８００ｂｐのフラグメントが、Ｂ細胞に対してマイトジェン性であることを報告した（Ｍｅｓｓｉｎａ，Ｊ．Ｐ．，Ｇ．Ｓ．Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，およびＤ．Ｓ．Ｐｉｓｅｔｓｋｙ，１９９３，「天然および合成ポリヌクレオチド抗原によるマウスリンパ球のインビトロでの刺激に対するＤＮＡ構造の影響」，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１４８）。Ｔｏｋｕｎａｇａらは、ｄＧ・ｄＣがγ−ＩＦＮおよびＮＫ活性を誘導することを報告した（Ｔｏｋｕｎａｇａ，Ｓ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，およびＫ．Ｎａｍｂａ，１９８８，「合成一本鎖ＤＮＡ、ポリ（ｄＧ・ｄＣ）はインターフェロン−α／βおよび−γを誘導し、ナチュラルキラー活性を増大させ、そして腫瘍成長を抑制する」，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７９：６８２）。このような人工的なホモポリマー配列に加えて、Ｐｉｓｅｔｓｋｙらは、純粋な哺乳動物ＤＮＡは検出可能な免疫効果を有さないが、ある種の細菌由来のＤＮＡがＢ細胞活性化および免疫グロブリン分泌を誘導することを報告した（Ｍｅｓｓｉｎａ，Ｊ．Ｐ．，Ｇ．Ｓ．Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，およびＤ．Ｓ．Ｐｉｓｅｔｓｋｙ，１９９１，「細菌ＤＮＡによるマウスリンパ球のインビトロでの増殖の刺激」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１７５９）。これらのデータがある種の通常でない混入物によるものでないとすれば、これらの研究は、細菌ＤＮＡの特定の構造または他の特性が、細菌ＤＮＡを、Ｂ細胞活性化をトリガーし得るようにしていることを示唆している。マイコバクテリウムＤＮＡ配列の研究により、ある種のパリンドローム配列を含むＯＤＮがＮＫ細胞を活性化し得ることが示された（Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｓ．，Ｔ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｔ．Ｋａｔａｏｋａ，Ｅ．Ｋｕｒａｍｏｔｏ，Ｏ．Ｙａｎｏ，およびＴ．Ｔｏｋｕｎａｇａ，１９９２，「合成オリゴヌクレオチドにおける独特のパリンドローム配列が、ＩＮＦを誘導するために、およびＩＮＦ媒介ナチュラルキラー活性を増大させるために必要とされる」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：４０７２；Ｋｕｒａｍｏｔｏ，Ｅ．，Ｏ．Ｙａｎｏ，Ｙ．Ｋｉｍｕｒａ，Ｍ．Ｂａｂａ，Ｔ．Ｍａｋｉｎｏ，Ｓ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｔ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｔ．Ｋａｔａｏｋａ，およびＴ．Ｔｏｋｕｎａｇａ，１９９２，「ナチュラルキラー細胞の活性化に必要とされるオリゴヌクレオチド配列」，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．８３：１１２８、および欧州特許出願、公開番号０ ４６８ ５２０号）。
【０００６】
いくつかのホスホロチオエート修飾ＯＤＮが、インビトロまたはインビボでのＢ細胞刺激を誘導することが報告されている（Ｔａｎａｋａ，Ｔ．，Ｃ．Ｃ．Ｃｈｕ，およびＷ．Ｅ．Ｐａｕｌ，１９９２，「Ｉγ２ｂ中の配列に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドが、γ２ｂ生殖系列転写物を増加させ、Ｂ細胞ＤＮＡ合成を刺激し、そして免疫グロブリン分泌を阻害する」， Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：５９７；Ｂｒａｎｄａ，Ｒ．Ｆ．，Ａ．Ｌ．Ｍｏｏｒｅ，Ｌ．Ｍａｔｈｅｗｓ，Ｊ．Ｊ．ＭｃＣｏｒｍａｃｋ，およびＧ．Ｚｏｎ，１９９３，「ＨＩＶ−１のｒｅｖ遺伝子に相補的なアンチセンスオリゴマーによる免疫刺激」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４５：２０３７；ＭｃＩｎｔｙｒｅ，Ｋ．Ｗ．，Ｋ．Ｌｏｍｂａｒｄ−Ｇｉｌｌｏｏｌｙ，Ｊ．Ｒ．Ｐｅｒｅｚ，Ｃ．Ｋｕｎｓｃｈ，Ｕ．Ｍ．Ｓａｒｍｉｅｎｔｏ，Ｊ．Ｄ．Ｌａｒｉｇａｎ，Ｋ．Ｔ．Ｌａｎｄｒｅｔｈ，およびＲ．Ｎａｒａｙａｎａｎ，１９９３，「転写因子ＮＦ−κβＴ６５の開始コドンに対するセンスホスホロチオエートオリゴヌクレオチドが、配列特異的な免疫刺激を引き起こす」，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３：３０９；ならびに、Ｐｉｓｅｔｓｋｙ，Ｄ．Ｓ．，およびＣ．Ｆ．Ｒｅｉｃｈ，１９９３，「単純ヘルペスウィルスに対するアンチセンス活性を有するホスホロチオエートオリゴヌクレオチドによるマウスリンパ球増殖の刺激」，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ５４：１０１）。これらの報告は、これらのＯＤＮの効果を説明し得るこれらのＯＤＮにおける共通の構造的モチーフも共通の配列エレメントも示唆しない。
（転写因子のＣＲＥＢ／ＡＴＦファミリーおよび複製におけるそれらの役割）
ｃＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）および活性化転写因子（ＡＴＦ）、すなわち転写因子のＣＲＥＢ／ＡＴＦファミリーは、偏在して発現する転写因子のクラスであり、そのうちの１１のメンバーが今までのところクローン化されている（ｄｅ Ｇｒｏｏｔ，Ｒ．Ｐ．，およびＰ．Ｓａｓｓｏｎｅ−Ｃｏｒｓｉ，「遺伝子発現のホルモンによる制御：環状アデノシン３’，５’−モノホスフェート−応答性核レギュレーターの多様性および多変性」，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．７：１４５，１９９３；Ｌｅｅ．Ｋ．Ａ．Ｗ．，およびＮ．Ｍａｓｓｏｎ，「ＣＲＥＢおよびその関連物質による転写調節」，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１７４：２２１，１９９３）。これらはすべて、塩基性領域／ロイシンジッパー（ｂＺｉｐ）クラスのタンパク質に属する。すべての細胞は１つ以上のＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質を発現するようであるが、発現されるメンバーおよびｍＲＮＡスプライシングの調節は組織特異的であるようである。活性化ドメインのディファレンシャルなスプライシングが、特定のＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質が転写インヒビターであるかアクチベーターであるかを決定し得る。多くのＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質がウィルス性転写を活性化し得るが、活性ドメインを有さないいくつかのスプライシング変異体は阻害性である。ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質は、ｃＡＭＰ応答エレメント（ＣＲＥ）を介してホモダイマーまたはヘテロダイマーとしてＤＮＡを結合し得る。ＣＲＥのコンセンサス形態は、非メチル化配列ＴＧＡＣＧＴＣである（ＣｐＧがメチル化されている場合には、結合がなくされる）（Ｉｇｕｃｈｉ−Ａｒｉｇａ，Ｓ．Ｍ．Ｍ．，およびＷ．Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ，「ｃＡＭＰ応答性エンハンサー／プロモーター配列ＴＧＡＣＧＴＣＡのＣｐＧのメチル化が、特定の因子の結合および転写活性化をなくさせる」，Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐ．３：６１２，１９８９）。
【０００７】
ＣＲＥの転写活性は、Ｂ細胞活性化の間に増加する（Ｘｉｅ，Ｈ．Ｔ．Ｃ．Ｃｈｉｌｅｓ，およびＴ．Ｌ．Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ，「Ｂ細胞の表面Ｉｇレセプターを介したＣＲＥＢ活性の誘導」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：８８０，１９９３）。ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質は、ＣＲＥを介して複数の遺伝子（免疫学的に重要な遺伝子を含む）の発現を調節するようである。このような遺伝子としては、例えば、以下が挙げられる：ｆｏｓ、ｊｕｎ Ｂ、Ｒｂ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１（Ｔｓｕｋａｄａ，Ｊ．，Ｋ．Ｓａｉｔｏ，Ｗ．Ｒ．Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａ．Ｃ．Ｗｅｂｂ，およびＰ．Ｅ．Ａｕｒｏｎ，「転写因子ＮＦ−ＩＬ６およびＣＲＥＢは、ヒトプロインターロイキン１β遺伝子における共通の必須部位を認識する」，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：７２８５，１９９４；Ｇｒａｙ，Ｇ．Ｄ．，Ｏ．Ｍ．Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｄ．Ｈｅｂｅｌ，Ｍ．Ｒｏｏｔ，Ｊ．Ｍ．Ｐｏｗ−Ｓａｎｇ，およびＥ．Ｗｉｃｋｓｔｒｏｍ，「ヌードマウスにおいてｃ−Ｈａ−ｒａｓオンコジーンにより誘導される腫瘍成長のアンチセンスＤＮＡ阻害」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：５７７，１９９３）、ＩＦＮ−β（Ｄｕ，Ｗ．，およびＴ．Ｍａｎｉａｔｉｓ「ＡＴＦ／ＣＲＥＢ結合部位タンパク質が、ヒトインターフェロンＢ遺伝子のウィルス誘導に必要とされる」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：２１５０，１９９２）、ＴＧＦ−β１（Ａｓｉｅｄｕ，Ｃ．Ｋ．，Ｌ．Ｓｃｏｔｔ，Ｒ．Ｋ．Ａｓｓｏｉａｎ，およびＭ．Ｅｈｒｌｉｃｈ，「ヒトＴＧＦ−Ｂ１遺伝子下流の連続性部位へのＡＰ−１／ＣＲＥＢタンパク質およびＭＤＢＰの結合」，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １２１９：５５，１９９４）、ＴＧＦ−β２、クラスＩＩ ＭＨＣ（Ｃｏｘ，Ｐ．Ｍ．，およびＣ．Ｒ．Ｇｏｄｉｎｇ，「ＡＴＦ／ＣＲＥＢ結合モチーフが、ＭＨＣクラスＩＩ ＤＲａプロモーターの異常構成性発現およびＳＶ−４０ Ｔ−抗原による活性化に必要とされる」，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：４８８１，１９９２），Ｅ−セレクチン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＤ−８α、生殖系列Ｉｇα定常領域遺伝子、ＴＣＲ Ｖβ遺伝子、および増殖細胞核抗原（Ｈｕａｎｇ，Ｄ．，Ｐ．Ｍ．Ｓｈｉｐｍａｎ−Ａｐｐａｓａｍｙ，Ｄ．Ｊ．Ｏｒｔｅｎ，Ｓ．Ｈ．Ｈｉｎｒｉｃｈｓ，およびＭ．Ｂ．Ｐｒｙｓｔｏｗｓｋｙ，「増殖細胞核抗原遺伝子のプロモーター活性は、インターロイキン２−刺激Ｔリンパ球の誘導性ＣＲＥ−結合タンパク質に関連する」，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：４２３３，１９９４）。ｃＡＭＰ経路を介した活性化に加えて、ＣＲＥＢはまた、細胞内Ｃａ＋＋濃度の変化に対する転写応答を媒介し得る（Ｓｈｅｎｇ，Ｍ．，Ｇ．ＭｃＦａｄｄｅｎ，およびＭ．Ｅ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，「膜の非極性化およびカルシウムが転写因子ＣＲＥＢのリン酸化を介するｃ−ｆｏｓ転写を誘導する」，Ｎｅｕｒｏｎ ４：５７１，１９９０）。
【０００８】
ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質による転写活性化におけるタンパク質−タンパク質相互作用の役割は、きわめて重要なようである。サイクリックＡＭＰ経路を介したＣＲＥＢの活性化は、プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）（これは、ＣＲＥＢ３４１をｓｅｒ１３３でリン酸化し、これを最近クローン化されたタンパク質ＣＢＰに結合させる）を必要とする（Ｋｗｏｋ，Ｒ．Ｐ．Ｓ．，Ｊ．Ｒ．Ｌｕｎｄｂｌａｄ，Ｊ．Ｃ．Ｃｈｒｉｖｉａ，Ｊ．Ｐ．Ｒｉｃｈａｒｄｓ，Ｈ．Ｐ．Ｂａｃｈｉｎｇｅｒ，Ｒ．Ｇ．Ｂｒｅｎｎａｎ，Ｓ．Ｇ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｍ．Ｒ．Ｇｒｅｅｎ，およびＲ．Ｈ．Ｇｏｏｄｍａｎ，「核タンパク質ＣＢＰは、転写因子ＣＲＥＢのコアクチベーターである」，Ｎａｔｕｒｅ，３７０：２２３，１９９４；Ａｒｉａｓ，Ｊ．，Ａ．Ｓ．Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｐ．Ｂｒｉｎｄｌｅ，Ｆ．Ｘ．Ｃｌａｒｅｔ，Ｔ．Ｓｍｅａ，Ｍ．Ｋａｒｉｎ，Ｊ．Ｆｅｒａｍｉｓｃｏ，およびＭ．Ｍｏｎｔｍｉｎｙ，「ｃＡＭＰおよびマイトジェン応答性遺伝子の活性化は、共通の核因子に依存する」，Ｎａｔｕｒｅ，３７０：２２６，１９９４）。ＣＢＰは、次いで、基礎的な転写因子であるＴＦＩＩＢと相互作用して転写を増大させる。ＣＲＥＢはまた、ｄＴＡＦＩＩ １１０、ＴＡＴＡ結合タンパク質会合因子（この結合が転写を調節し得る）と相互作用することが報告されている（Ｆｅｒｒｅｒｉ，Ｋ．，Ｇ．Ｇｉｌｌ，およびＭ．Ｍｏｎｔｍｉｎｙ，「ｃＡＭＰ調節転写因子ＣＲＥＢは、ＴＦＩＩＤ複合体の要素と相互作用する」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１２１０，１９９４）。これらの相互作用に加えて、ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質は、他の複数の核因子と特異的に結合し得る（Ｈｏｅｆｆｌｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｊ．Ｗ．Ｌｕｓｔｂａｄｅｒ，およびＣ．−Ｙ．Ｃｈｅｎ，「タンパク質−タンパク質相互作用により、環状アデノシン３’，５’−モノホスフェート応答エレメント結合タンパク質および活性化転写因子−２と相互作用する複数の核因子の同定」，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．５：２５６，１９９１）。しかし、これらの相互作用の大部分についての生物学的意義は知られていない。ＣＲＥＢは、通常、ホモダイマーまたはいくつかの他のタンパク質とのヘテロダイマーのいずれかとしてＤＮＡと結合すると考えられている。驚くべきことに、ＣＲＥＢモノマーは、構成的に転写を活性化する（Ｋｒａｊｅｗｓｋｉ，Ｗ．，およびＫ．Ａ．Ｗ．Ｌｅｅ，「細胞性転写因子ＣＲＥＢのモノマー誘導体は、構成性アクチベーターとして機能する」，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：７２０４，１９９４）。
【０００９】
細胞性転写の調節における重要な役割のほかに、ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質がいくつかの感染性ウィルスおよびレトロウィルス（これらはウィルス性複製にＣＲＥＢ／ＡＴＰタンパク質を必要とする）によりくつがえされることが最近示されている。例えば、サイトメガロウィルス即時プロモーター（哺乳動物の最も強力な既知のプロモーターの１つ）は、プロモーター機能に必須である１１コピーのＣＲＥを含む（Ｃｈａｎｇ，Ｙ．−Ｎ．，Ｓ．Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｊ．Ｓｔａｌｌ，Ｄ．Ｒ．Ｒａｗｌｉｎｓ，Ｋ．−Ｔ．Ｊｅａｎｇ，およびＧ．Ｓ．Ｈａｙｗａｒｄ，「シミアンサイトメガロウィルス主要即時プロモーターにおけるパリンドロームシリーズＩ反復は、強力な基礎的エンハンサーおよびサイクリックＡＭＰ応答エレメントの両方として機能する」，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：２６４，１９９０）。アデノウィルスＥ１Ａタンパク質（これは多くのプロモーターを誘導する）の転写活性化効果のうちの少なくともいくつかは、ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質、ＡＴＦ−２（これは、Ｅ１Ａ誘導性転写活性化を媒介する）のＤＮＡ結合ドメインへの結合に起因する（Ｌｉｕ，Ｆ．，およびＭ．Ｒ．Ｇｒｅｅｎ，「異なる細胞性ＤＮＡ結合ドメインとの相互作用を介したアデノウィルスＥ１ａによるプロモーター標的化」，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：５２０，１９９４）。Ｅ１ＡがＣＲＥＢ結合タンパク質ＣＢＰに結合することも示唆されている（Ａｒａｎｙ，Ｚ．，Ｗ．Ｒ．Ｓｅｌｌｅｒｓ，Ｄ．Ｍ．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，およびＲ．Ｅｃｋｎｅｒ，「Ｅ１Ａ会合ｐ３００およびＣＲＥＢ会合ＣＢＰは、コアクチベーターの保存ファミリーに属する」，Ｃｅｌｌ ７７：７９９，１９９４）。ヒトＴ細胞白血病および熱帯痙性麻痺を引き起こすレトロウィルスであるヒトＴリンパ球性ウィルス−Ｉ（ＨＴＬＶ−Ｉ）もまた、複製にＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質を必要とする。この場合には、レトロウィルスはタンパク質Ｔａｘを産生する。Ｔａｘは、ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質に結合し、これらをその通常の細胞性結合部位からＨＴＬＶ転写エンハンサー内に存在する異なるＤＮＡ配列（Ｇ−およびＣ− リッチ配列に隣接する）へと再方向付けする（Ｐａｃａ−Ｕｃｃａｒａｌｅｒｔｋｕｎ，Ｓ．，Ｌ．−Ｊ．Ｚｈａｏ，Ｎ．Ａｄｙａ，Ｊ．Ｖ．Ｃｒｏｓｓ，Ｂ．Ｒ．Ｃｕｌｌｅｎ，Ｉ．Ｍ．Ｂｏｒｏｓ，およびＣ．−Ｚ．Ｇｉａｍ，「ヒトＴ細胞リンパ球性ウィルスＩ型転写アクチベーターＴａｘに対して高度に応答性のＤＮＡエレメントのインビトロでの選択」，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：４５６，１９９４；Ａｄｙａ，Ｎ．，Ｌ．−Ｊ．Ｚｈａｏ，Ｗ．Ｈｕａｎｇ，Ｉ．Ｂｏｒｏｓ，およびＣ．−Ｚ．Ｇｌａｍ，「ＴａｘによるＣＲＥＢのＤＮＡ認識特異性の拡大は、ＣＲＥＢの保存ＤＮＡ結合ドメイン近傍の２８２〜２８４位のＡｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇとの相互作用から生じる」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：５６４２，１９９４）。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明が解決しようとする課題は、新規な免疫刺激オリゴヌクレオチド組成物、このオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性に基づく有用な方法、中性オリゴヌクレオチド、中性オリゴヌクレオチドを用いる有用な方法、および免疫阻害オリゴヌクレオチド、免疫阻害オリゴヌクレオチドの種々の使用を提供することである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明は、式Ｉ：５’ Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４ ３’に従う少なくとも１つの核酸配列を含む、免疫刺激オリゴヌクレオチドであり：
ここで、ＣＧは、オリゴヌクレオチドに免疫刺激能力を付与する非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドであり；Ｘ１およびＸ２の少なくとも１つはプリンであり；そして、Ｘ３およびＸ４の少なくとも１つはピリミジンである。
【００１２】
好適な実施形態では、上記式Ｉがパリンドロームではない。
【００１３】
さらに好適な実施形態では、Ｘ１がプリンヌクレオチドである。
【００１４】
さらに好適な実施形態では、Ｘ４がピリミジンヌクレオチドである。
【００１５】
さらに好適な実施形態では、Ｘ１の５’側にさらにチミジンヌクレオチドを含む。
【００１６】
さらに好適な実施形態では、上記式Ｉのヌクレオチド配列が、５’ ＧＡＣＧＴＴ ３’、５’ ＡＧＣＧＴＴ ３’、５’ ＡＡＣＧＣＴ ３’、５’ ＣＴＣＧＡＣ ３’、５’ ＧＴＣＧＧＴ ３’、５’ ＧＡＣＧＴＴ ３’、５’ ＴＴＣＧＡＴ ３’、５’ ＡＡＣＧＡＴ ３’および５’ ＡＴＣＧＡＣ３’からなる群から選択される。
【００１７】
さらに好適な実施形態では、上記式Ｉの配列を含む上記オリゴヌクレオチドの５’末端および３’末端のヌクレオチド配列がポリＧヌクレオチドである。
【００１８】
さらに好適な実施形態では、１つ以上のホスフェート骨格修飾を有する。
【００１９】
さらに好適な実施形態では、上記１つ以上のホスフェート骨格修飾が、ホスホロチオエート修飾である。
【００２０】
さらに好適な実施形態では、約６〜約１００のヌクレオチドを含む。
【００２１】
さらに好適な実施形態では、約６〜約４０のヌクレオチドを含む。
【００２２】
さらに好適な実施形態では、上記オリゴヌクレオチドと標的化手段とを有する。
【００２３】
さらに好適な実施形態では、上記標的化手段が、コレステロール、ビロソーム、リポソーム、脂質および標的細胞特異的結合因子からなる群から選択される。
【００２４】
本発明はまた、免疫系不全にかかっているかまたはかかりやすいヒトを含む動物の予防または処置のための薬品を製造するための、上記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体の使用である。
【００２５】
好適な実施形態では、上記免疫系不全が、ウィルス、細菌、真菌または寄生体の感染によって引き起こされる。
【００２６】
本発明はまた、ガンにかかっているヒトを含む動物の処置のための薬品を製造するための、上記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体の使用である。
【００２７】
本発明はまた、ワクチンに対する動物の免疫応答を増大させるためにワクチン投与前またはワクチン投与と同時にヒトを含む動物に投与するためのアジュバントを調製するための、上記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体の使用である。
【００２８】
本発明はまた、免疫系の活性化に関連する疾病にかかりやすいヒトを含む動物の予防のための薬品を製造するための、上記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体の使用である。
【００２９】
好適な実施形態では、上記免疫系の活性化に関連する疾病が、自己免疫疾患である。
【００３０】
さらに好適な実施形態では、上記免疫系の活性化が、細菌、真菌または寄生体の感染によって引き起こされる。
【００３１】
本発明はまた、上記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的処方物である。
【００３２】
好適な実施形態では、別の治療剤をさらに含む。
【００３３】
本発明はまた、少なくとも１つのメチル化ＣＧジヌクレオチドを含む免疫中性オリゴヌクレオチドと、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的処方物である。
【００３４】
本発明はまた、ヒトを含む動物の免疫系の活性化に関連する疾病の予防または処置のための薬品を調製するための、上記免疫中性オリゴヌクレオチドの使用である。
【００３５】
好適な実施形態では、上記疾病が全身性紅斑性狼瘡である。
【００３６】
好適な実施形態では、上記疾病が敗血症である。
【００３７】
好適な実施形態では、上記メチル化ＣＧジヌクレオチドが、５−メチルシトシンである。
【００３８】
【発明の実施の形態】
本発明は、非メチル化シトシン−グアニン（ＣｐＧ）ジヌクレオチドを含むある種のオリゴヌクレオチドがインビトロおよびインビボデータにより示されるようにリンパ球を活性化するという知見に基づいている。この知見に基づいて、本発明は、１つの局面においては、新規な免疫刺激オリゴヌクレオチド組成物を特徴とする。
【００３９】
好ましい実施態様においては、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、合成物であり、２〜１００塩基対のサイズであり、そして以下の式で表されるコンセンサスマイトジェン性ＣｐＧモチーフを含む：
５’ Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４ ３’
ここで、ＣおよびＧは、非メチル化であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４はヌクレオチドであり；そしてＧＣＧトリヌクレオチド配列は、５’および３’末端にもその近傍にも存在しない。
【００４０】
細胞への取り込みを促進するためには、ＣｐＧ含有免疫刺激オリゴヌクレオチドは、好ましくは８〜４０塩基対のサイズの範囲である。安定化されたオリゴヌクレオチド（特に、ホスホチオエート安定化オリゴヌクレオチド）を用いて、長期の免疫刺激が得られ得る。Ｘ１Ｘ２がジヌクレオチドＧｐＡおよび／またはＸ３Ｘ４がジヌクレオチド（最も好ましくはＴｐＣまたはＴｐＴ）である場合に、免疫刺激活性の増大が確認された。コンセンサスモチーフＸ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４が５’末端でＴにより先行される場合に、免疫刺激活性のさらなる増大が確認される。
【００４１】
第２の局面においては、本発明は、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性に基づく有用な方法を特徴とする。例えば、リンパ球が被験体から得られ得、そして適切なオリゴヌクレオチドとの接触に際してエクスビボで刺激され得るか；または、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドが被験体に投与され得、被験体のリンパ球のインビボでの活性化を促進し得る。本明細書に記載の方法で（例えば、エクスビボまたはインビボのいずれかで）刺激された、活性化されたリンパ球は、被験体の免疫応答を増強し得る。従って、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、免疫系不全（例えば、被験体の腫瘍またはガン、あるいは、ウィルス、真菌、細菌または寄生体による感染症）を処置し、防止し、または改善するために使用され得る。さらに、免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、ワクチンアジュバントとしても投与され得、被験体のワクチンに対する応答を刺激し得る。さらに、免疫刺激細胞が白血病性細胞を細胞周期に入るように誘導する能力を有するので、慢性白血病細胞の感受性を増大させた後、通常の除去化学療法（ａｂｌａｔｉｖｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）を施すことにより白血病を処置するための有用性が示唆される。
【００４２】
第３の局面においては、本発明は、中性オリゴヌクレオチド（すなわち、非メチル化ＣｐＧを含まないか、メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド）を特徴とする。好ましい実施態様においては、中和オリゴヌクレオチドは免疫刺激配列に相補的であるが、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド配列の代わりにメチル化ＣｐＧジヌクレオチド配列を含み、従って、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドとの結合を完成し得る。好ましい実施態様においては、メチル化は、シトシンの６員環を含む４つの炭素および２つの窒素のうちの１つ以上で起こり、あるいは、グアニンの９員二重環を含む５つの炭素および４つの窒素のうちの１つ以上で起こる。好ましいメチル化ＣｐＧは、５’−メチルシトシンである。
【００４３】
第４の局面においては、本発明は、中性オリゴヌクレオチドを用いる有用な方法を特徴とする。例えば、中性オリゴヌクレオチドのインビボでの投与が、被験体における非メチル化ＣｐＧ２量体の存在により引き起こされるかまたは悪化させる疾病（例えば、全身性紅斑性狼瘡、敗血症および自己免疫疾患）の処置に有用であると判明するはずである。さらに、メチル化ＣｐＧ含有アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドプローブは、インビボでの被験体への投与時に免疫反応を開始させない。従って、これらは、対応する非メチル化オリゴヌクレオチドよりも安全である。
【００４４】
第５の局面においては、本発明は、免疫阻害オリゴヌクレオチド（これは、ウィルス性または細胞性転写因子の活性を妨害し得る）を特徴とする。好ましい実施態様においては、免疫阻害オリゴヌクレオチドは、２〜１００塩基対のサイズの間であり、そして以下の式で表されるコンセンサス免疫阻害ＣｐＧモチーフを含む：
５’ ＧＣＧＸｎＧＣＧ ３’
ここで、Ｘはヌクレオチドであり；ｎは０〜５０の範囲である。好ましい実施態様においては、Ｘはピリミジンである。
【００４５】
細胞への取り込みを促進するためには、免疫阻害オリゴヌクレオチドは、好ましくは８〜４０塩基対のサイズの範囲である。安定化されたオリゴヌクレオチド（特に、ホスホチオエート安定化オリゴヌクレオチド）を用いて、長期の生物学的効果が得られ得る。
【００４６】
第６かつ最後の局面においては、本発明は、免疫阻害オリゴヌクレオチドの種々の使用を特徴とする。免疫阻害オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドと標的とされるウィルス性配列との間の相補性に起因するいかなるアンチセンス効果とも無関係に、抗ウィルス活性を有する。
【００４７】
本発明の他の利点および特徴は、以下の詳細な説明および添付の特許請求の範囲からより明らかになるであろう。
（発明の詳細な説明）
（定義）
本明細書において用いられるように、以下の用語および表現は下記の意味を有する：
「オリゴヌクレオチド」または「オリゴ」は、複数のヌクレオチド（すなわち、ホスフェート基および置換可能な有機塩基（置換ピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ））あるいは置換プリン（例えば、アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ））のいずれかである）に結合した糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）を含む分子）を意味する。本明細書において用いられるように、用語「オリゴヌクレオチド」は、オリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）およびオリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）の両方を意味する。用語「オリゴヌクレオチド」はまた、オリゴヌクレオシド（すなわち、ホスフェートを含まないオリゴヌクレオチド）および任意の他の有機塩基含有ポリマーを包含する。オリゴヌクレオチドは、既存の核酸源（例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡ）から得られ得るが、好ましくは合成である（例えば、オリゴヌクレオチド合成により産生される）。
【００４８】
「安定化されたオリゴヌクレオチド」は、インビボでの分解（例えば、エクソまたはエンドヌクレアーゼによる分解）に比較的耐性であるオリゴヌクレオチドを意味する。本発明の好ましい安定化されたオリゴヌクレオチドは、修飾ホスフェート骨格を有する。特に好ましいオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート修飾ホスフェート骨格（すなわち、ホスフェート酸素の少なくとも１つがイオウで置換された構造）を有する。他の安定化されたオリゴヌクレオチドは、非イオン性ＤＮＡアナログ（例えば、アルキル−およびアリール−ホスホネート（荷電ホスホネート酸素が、アルキルまたはアリール基で置換される）、ホスホジエステルおよびアルキルホスホトリエステル（荷電酸素部分がアルキル化される））を包含する。いずれか一方または両方の末端にジオール（例えば、テトラエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコール）を含むオリゴヌクレオチドもまた、ヌクレアーゼ分解に対して実質的に耐性であることが示されている。
【００４９】
「免疫刺激オリゴヌクレオチド」、「免疫刺激ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド」または「ＣｐＧ ＯＤＮ」は、シトシン、グアニンジヌクレオチド配列を含み、そして脊椎動物リンパ球を刺激する（例えば、マイトジェン効果を有する）オリゴヌクレオチドを意味する。好ましい免疫刺激オリゴヌクレオチドは、２〜１００塩基対のサイズであり、そして以下の式で表されるコンセンサスマイトジェン性ＣｐＧモチーフを含む：
５’ Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４ ３’
ここで、ＣおよびＧは、非メチル化であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４はヌクレオチドであり；そしてＧＣＧトリヌクレオチド配列は、５’および３’末端にもその近傍にも存在しない。
好ましくは免疫刺激オリゴヌクレオチドは８〜４０塩基対のサイズの範囲である。さらに、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、好ましくは安定化されたオリゴヌクレオチドであり、特に好ましくはホスホロチオエートで安定化されたオリゴヌクレオチドである。好ましい１つの実施態様においては、Ｘ１Ｘ２はジヌクレオチドＧｐＡである。好ましい別の実施態様においては、Ｘ３Ｘ４は、好ましくはジヌクレオチドＴｐＣまたはＴｐＴである。特に好ましい実施態様においては、コンセンサスモチーフＸ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４は５’末端においてＴにより先行される。特に好ましいコンセンサス配列は、ＴＧＡＣＧＴＴまたはＴＧＡＣＧＴＣである。
【００５０】
「中性オリゴヌクレオチド」は、非メチル化ＣｐＧを含まないオリゴヌクレオチド、またはメチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを意味する。好ましい実施態様においては、中和オリゴヌクレオチドは免疫刺激配列に相補的であるが、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド配列の代わりにメチル化ＣｐＧジヌクレオチド配列を含み、従って、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドとの結合を完成し得る。好ましい実施態様においては、メチル化は、シトシンの６員環を含む４つの炭素および２つの窒素のうちの１つ以上で起こり、あるいは、グアニンの９員二重環を含む５つの炭素および４つの窒素のうちの１つ以上で起こる。好ましいメチル化ＣｐＧは、５’−メチルシトシンである。
【００５１】
「免疫阻害オリゴヌクレオチド」または「免疫阻害ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド」は、ウィルス性または細胞性転写因子の活性を妨害し得るオリゴヌクレオチドである（明細書１０頁（英文明細書８頁）の発明の要旨に支持されている）。好ましい免疫阻害オリゴヌクレオチドは、２〜１００塩基対のサイズの間であり、そして以下の式で表され得る：
５’ ＧＣＧＸｎＧＣＧ ３’
ここで、Ｘはヌクレオチドであり；ｎは０〜５０の範囲である。好ましい実施態様においては、Ｘはピリミジンである。
【００５２】
細胞への取り込みを促進するためには、免疫阻害オリゴヌクレオチドは、好ましくは８〜４０塩基対のサイズの範囲である。安定化されたオリゴヌクレオチド（特に、ホスホロチオエート安定化オリゴヌクレオチド）を用いて、長期の免疫刺激が得られ得る。
【００５３】
「パリンドローム配列」は、逆方向反復（すなわち、ＡＢＣＤＥＥ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’のような配列、ここでＡおよびＡ’は、通常のＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成し得る塩基である）を意味する。インビボにおいては、このような配列は、二本鎖構造を形成し得る。
【００５４】
「オリゴヌクレオチド送達複合体」は、標的手段に結合した（例えば、標的手段にイオン的にまたは共有結合的に結合した；あるいは標的手段内にカプセル化された）オリゴヌクレオチドを意味する。標的手段は、例えば、標的細胞（例えば、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）表面との高親和性結合を生じる、および／または標的細胞による細胞性取り込みを増加させる分子である。オリゴヌクレオチド送達複合体の例としては、以下のものに結合したオリゴヌクレオチドが挙げられる：ステロール（例えば、コレステロール）、脂質（例えば、カチオン性脂質、ビロソームまたはリポソーム）、または標的細胞特異的結合因子（例えば、標的細胞特異性レセプターにより認識されるリガンド）。好ましい複合体は、標的細胞によるインターナリゼーション前の有意な非結合を防止するようにインビボで十分に安定でなければならない。しかし、複合体は、オリゴヌクレオチドが機能的形態で放出されるよう、適切な条件下では細胞内で開裂可能でなければならない。
【００５５】
「免疫系不全」は、被験体の免疫系が通常の能力で機能しない疾病または障害を意味する。あるいは、被験体の免疫応答を増強し、例えば、被験体における腫瘍またはガン（例えば、脳、肺（例えば、小細胞および非小細胞）、卵巣、乳房、前立腺、結腸の腫瘍、ならびに他のガン腫および肉腫）、あるいは、ウィルス（例えば、ＨＩＶ、ヘルペス）、真菌（例えば、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．）、細菌または寄生体（例えば、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）による感染症を取り除くことが有用である疾病または障害を意味する。
【００５６】
「免疫系の活性化に関連する疾病」は、被験体の免疫系の活性化により引き起こされるかまたは悪化される疾病または症状を意味する。例としては、全身性紅斑性狼瘡、敗血症および自己免疫疾患（例えば、リューマチ性関節炎、多発性硬化症）が挙げられる。
【００５７】
「被験体」は、ヒトまたは脊椎動物（イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、サル、ラット、マウスなどを包含する）を意味する。
（ある種の非メチル化ＣｐＧ含有オリゴは、インビトロおよびインビボで示されるようにＢ細胞刺激活性を有する）
後述の実施例１および２に記載のプロトコールを用いて内在性レトロウィルス配列に特異的な２つのアンチセンスオリゴヌクレオチドのリンパ球刺激効果を調べると、驚くべきことに、２４の「コントロール」（「アンチセンス」ＯＤＮのパネルについての種々のスクランブル、センスおよびミスマッチコントロールを含む）のうちの２つもまたＢ細胞活性化およびＩｇＭ分泌を媒介するが、他の「コントロール」は効果を有さないことが見いだされた。
【００５８】
２つの観察から、この「コントロール」ＯＤＮによるＢ細胞の活性化は、アンチセンス効果を有し得ないことが示唆された：（１）ＧｅｎＢａｎｋにリストされる脊椎動物ＤＮＡ配列で比較すると、非刺激ＯＤＮで見られるものより大きな相同性を示さなかったこと、および、（２）２つのコントロールは、１０μｇの脾臓ポリＡ＋ＲＮＡを用いるノーザンブロットへのハイブリダイゼーションを示さなかったこと。異なる合成機によるこれらのＯＤＮの再合成またはポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーによる十分な精製により、同一の刺激が得られた。このことは不純物の可能性を排除した。同様の刺激が、Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウス由来のＢ細胞を用いて得られた。このことはリポ多糖（ＬＰＳ）による汚染が原因となり得る可能性を排除した。
【００５９】
２つの「コントロール」ＯＤＮが２つの「アンチセンス」ＯＤＮと同様のＢ細胞活性化を引き起こしたという事実は、他のすべての非刺激コントロールＯＤＮには存在しない配列モチーフを含むある種の非アンチセンスメカニズムによってこれら４つのＯＤＮのすべてがＢ細胞を刺激するという可能性を提起した。これらの配列を比較すると、４つの刺激ＯＤＮはすべて、非刺激コントロールとは配列の異なるＯＤＮジヌクレオチドを含んでいた。
【００６０】
刺激ＯＤＮに存在するＣｐＧ要素が観察された刺激の原因となるかどうかを調べるために、５〜４２塩基の長さの範囲の３００を超えるＯＤＮ（これらは、種々の配列のメチル化、非メチル化、または非ＣｐＧジヌクレオチドを含む）を合成した。２つのもとの「コントロール」（ＯＤＮ１および２）および「アンチセンス」として独自に合成した２つ（ＯＤＮ ３Ｄおよび３Ｍ；Ｋｒｉｅｇ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３：２４４８（１９８９））を含むこれらのＯＤＮを、脾臓細胞に対するインビトロでの効果を調べた（表１に代表的な配列を列挙する）。ＣｐＧジヌクレオチドを含むいくつかのＯＤＮが、Ｂ細胞活性化およびＩｇＭ分泌を誘導した；代表的には、刺激の程度は、ＣｐＧジヌクレオチドをより多く添加することにより増大し得た（表１；ＯＤＮ２を２ａに、または３Ｄを３Ｄａおよび３Ｄｂに比較のこと）。刺激は、アンチセンスメカニズムによるものでも不純物によるものでもないようである。ＯＤＮは、γδまたはその他のＴ細胞集団について検出可能な活性化を引き起こさなかった。
【００６１】
ＣｐＧジヌクレオチドが変異された場合（表１；ＯＤＮ１を１ａに；３Ｄを３Ｄｃに；３Ｍを３Ｍａに；および４を４ａに比較のこと）、または、ＣｐＧジヌクレオチドのシトシンが５−メチルシトシンで置換された場合（表１；ＯＤＮ １ｂ、２ｂ、２ｃ、３Ｄｄ、および３Ｍｂ）には、マイトジェン性ＯＤＮ配列は一様に非刺激性となった。これに対して、他のシトシンがメチル化された場合には、ＯＤＮ活性は減少しなかった（ＯＤＮ １ｃ、２ｄ、３Ｄｅ、および３Ｍｃ）。これらのデータにより、ＣｐＧモチーフが、 Ｂ細胞を活性化する、ＯＤＮに存在する必須エレメントであることが確認された。
【００６２】
これらの研究において、ＣｐＧジヌクレオチドに隣接する塩基が、ＯＤＮに誘導されるＢ細胞活性化を決定する際に重要な役割を果たすことが明らかになった。最適刺激モチーフは、２つの５’プリン（好ましくは、ＧｐＡジヌクレオチド）および２つの３’ピリミジン（好ましくは、ＴｐＴまたはＴｐＣジヌクレオチド）に隣接するＣｐＧからなると決定された。この理想により近いＣｐＧモチーフをもたらすＯＤＮの変異により、刺激が改善された（例えば、ＯＤＮ ２を２ｅに；３Ｍを３Ｍｄに比較のこと）が、このモチーフを妨げる変異により刺激が減少した（例えば、ＯＤＮ ３Ｄを３Ｄｆに；４を４ｂ、４ｃおよび４ｄに比較のこと）。一方、ＣｐＧモチーフ外の変異によっては、刺激は減少しなかった（例えば、ＯＤＮ １を１ｄに；３Ｄを３Ｄｇに；３Ｍを３Ｍｅに比較のこと）。
【００６３】
試験されたもののうち、８塩基よりも短いＯＤＮは非刺激性であった（例えば、ＯＤＮ ４ｅ）。試験された４８の８塩基ＯＤＮのうち、同定された最も刺激性の配列はＴＣＡＡＣＧＴＴ（ＯＤＮ ４）であった。この配列は、自己相補性の「パリンドローム」ＡＡＣＧＴＴを含む。このモチーフをさらに最適化すると、（特に、末端のヌクレオチド間結合のホスホロチオエート修飾により、ＯＤＮがヌクレアーゼ耐性とされる場合には、）両端部にＧを含むＯＤＮが増大した刺激を示すことが見いだされた。最初の２つおよび最後の５つのヌクレオチド間結合がホスホロチオエート修飾されているＯＤＮ １５８５（５’ ＧＧＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＣＡＧＧＧＧＧＧ ３’（配列番号：１））は、両端の１０のＧが１０のＡで置換されていること以外はＯＤＮ １５８５と同じ配列を有するＯＤＮ １６３８により誘導されたマウス脾臓細胞増殖における平均３．２倍の増加に比較して、マウス脾臓細胞増殖における平均２５．４倍の増加を引き起こした。Ｇリッチ末端の効果はシスである；ポリＧ末端を有するがＣｐＧモチーフを有さないＯＤＮを１６３８と共に添加しても、増殖の増加は得られなかった。
【００６４】
最適モチーフに近似する場合には（例えば、ＯＤＮ ４ｂ、４ｃ）、５’末端にＴｐＣジヌクレオチドを有する６塩基のパリンドロームを含む他の８量体ＯＤＮもまた活性であった。５’末端の他のジヌクレオチドは、刺激を減少させた（例えば、ＯＤＮ ４ｆ；１６の可能なジヌクレオチドすべてについて試験した）。３’ジヌクレオチドの存在は、５’ジヌクレオチドの欠乏を補填するには不十分であった（例えば、ＯＤＮ ４ｇ）。パリンドロームの破壊により８量体ＯＤＮにおける刺激が取り除かれた（例えば、ＯＤＮ ４ｈ）が、より長いＯＤＮにはパリンドロームは必要とされなかった。
【００６５】
【表１】
＊刺激指数は、少なくとも３つの異なる実験から得られた平均および標準偏差であり、そしてＯＤＮを加えずに培養されたウェルと比較される。ＮＤは、試験せずを意味する。ＣｐＧジヌクレオチドは下線で示される。点は同一であることを示し；ダッシュは欠失を示す。Ｚは、５−メチルシトシンを示す。
【００６６】
マウス脾臓細胞を用いて白血球活性化の反応速度を調べた。ＯＤＮ添加と同時に細胞をパルスし、４時間後に細胞を集めると、３Ｈウリジン取り込みはすでに２倍に増加していた。刺激は１２〜４８時間後にピークとなり、その後減少した。２４時間後には、インタクトなＯＤＮは検出されず、おそらくこのことはその後の刺激の低下の原因となっている。（マイトジェン性以下の投与量での）抗ＩｇＭの存在下または非存在下で精製Ｂ細胞をＣｐＧ ＯＤＮとともに培養した場合に、２つのマイトジェンの組み合わせにより４８時間後には増殖が約１０倍と顕著に増加することが見いだされた。刺激の程度は濃度依存性であり、両方について最適条件の下では一致してＬＰＳの刺激の程度を上回っていた。ヌクレアーゼ耐性ホスホロチオエート骨格を含むオリゴヌクレオチドは、非修飾オリゴヌクレオチドの約２００倍強力であった。
【００６７】
細胞周期分析を用いて、ＣｐＧ−ＯＤＮにより活性化されたＢ細胞の割合を決定した。ＣｐＧ−ＯＤＮは、９５％を超えるＢ細胞の細胞周期進行を誘導した（表２）。フローサイトメトリーによりＣＤ２３−（周辺領域）およびＣＤ２３＋（小胞）下位集団にソートされた脾臓Ｂリンパ球は、ＯＤＮ誘導刺激に対して同等に応答性であった。なぜならこれらは共に休止状態であり、Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配での分画により単離されたＢ細胞の活性化集団であったからである。これらの研究により、ＣｐＧ−ＯＤＮが本質的にすべてのＢ細胞を細胞周期に入るようにすることが示された。
【００６８】
【表２】
実施例１に記載のように、ヒト細胞に対するＣｐＧ ＯＤＮのマイトジェン性効果を、２人の慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）患者から得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）について調べた。ＣｐＧジヌクレオチド配列を含まないコントロールＯＤＮは、ヒト細胞の基礎増殖に対して４４２ｃｐｍおよび８７４ｃｐｍと効果を示さなかった（増殖は３Ｈチミジン取り込みにより測定した）。しかし、ホスホロチオエート修飾ＣｐＧ ＯＤＮ ３Ｍｄ（配列番号２５）は、わずか１μＭの濃度で、２人の患者においてそれぞれ７２１０および８６７９５ｃｐｍと増殖の増加を誘導した。これらの細胞は凍結されていたので、これらは、インビボの新鮮な細胞よりもオリゴに対して応答性が低かったかもしれない。さらに、ＣＬＬ患者由来の細胞は代表的には非増殖性であり、このことが従来の化学療法が有効でない原因である。
【００６９】
ある種のＢ細胞株（例えば、ＷＥＨＩ−２３１）が誘導され、抗ＩｇＭによるそれらの抗原レセプターの架橋に応答して増殖阻止および／またはアポトーシスを受ける（Ｊａｋｗａｙ，Ｊ．Ｐ．ら、「抗免疫グロブリン、リポ多糖および他の細菌性産物によるＢリンパ腫細胞株ＷＥＨＩ−２３１の増殖の調節」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：２２２５（１９８６）；Ｔｓｕｂａｔａ，Ｔ．，Ｊ．Ｗｕ，およびＴ．Ｈｏｎｊｏ，「抗原レセプター架橋により誘導されたＢ細胞アポトーシスが、ＣＤ４０を介したＴ細胞シグナルによりブロックされる」，Ｎａｔｕｒｅ ３６４：６４５（１９９３））。ＷＥＨＩ−２３１細胞は、ある種の刺激（例えば、ＬＰＳ）により、およびＣＤ４０リガンドにより、この増殖阻止からレスキューされる。ＣｐＧモチーフ含有ＯＤＮはまた、抗ＩｇＭ誘導増殖阻止からＷＥＨＩ−２３１を保護しすることが見いだされた。このことは、この効果にはアクセサリー細胞集団は必要とされないことを示している。
【００７０】
非メチル化ＣｐＧ ＯＤＮの免疫効果をより十分に理解するために、インビトロおよびインビボでのサイトカインおよびプロスタグランジンのレベルを調べた。ＬＰＳとは異なり、ＣｐＧ ＯＤＮは、精製マクロファージにプロスタグランジンＰＧＥ２の産生を誘導しないことが見いだされた。実際、マクロファージにおいてもＴ細胞においても、ＣｐＧ ＯＤＮの明らかな直接的効果は認められなかった。インビボまたは全脾臓細胞において、以下のインターロイキン（ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４またはＩＬ−１０）の有意な増加は、最初の６時間以内には認められなかった。しかし、ＩＬ−６のレベルは、ＣｐＧ ＯＤＮを注射したマウスの血清において、２時間以内に顕著に増加した。脾臓細胞によるＩＬ−１２およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）の発現の増大もまた、最初の２時間以内に認められた。
【００７１】
ＣｐＧ ＯＤＮがインビボでの免疫刺激を引き起こし得るかどうかを決定するために、ＰＢＳまたはホスホロチオエートＣｐＧまたは非ＣｐＧ ＯＤＮを、３３ｍｇ／ｋｇ（約５００μｇ／マウス）の用量でＤＢＡ／２マウスに１回腹腔内注射した。マウスにおける薬物動態学的研究により、この用量でのホスホロチオエートが２４時間より長期間にわたり脾臓組織において約１０μｇ／ｇのレベル（本明細書に記載のインビトロでの研究から決定される有効濃度範囲内）を与えることが示される（Ａｇｒａｗａｌ，Ｓ．ら、（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：７５９５）。３色フローサイトメトリーを用いてＢ細胞表面活性化マーカーＬｙ−６Ａ／Ｅ、Ｂｌａ−１およびクラスＩＩＭＨＣの発現について、ならびに３Ｈチミジンを用いてそれらの自然増殖について、ＯＤＮ注射の２４時間後にマウス由来の脾臓細胞を調べた。３種の活性化マーカーすべての発現が、ＣｐＧ ＯＤＮ注射マウス由来のＢ細胞において有意に増加したが、ＰＢＳまたは非ＣｐＧ ＯＤＮ注射マウス由来のＢ細胞においては増加しなかった。刺激性ＯＤＮを注射したマウス由来の脾臓細胞は、ＰＢＳまたは非ＣｐＧ ＯＤＮ注射マウスと比較して、自然３Ｈチミジン取り込みが２〜６倍増加した。４日後、インビボでのＣｐＧ ＯＤＮ注射マウスの血清ＩｇＭレベルは、コントロールと比較して約３倍増加した。これらの薬剤がＴ細胞を活性化する能力がないことと一致して、ＩＬ−２ＲまたはＣＤ−４４のＴ細胞発現における変化は最小限であった。
【００７２】
血清におけるホスホジエステルＯＤＮの分解は、３’−エクソヌクレアーゼにより優先的に媒介される。一方、細胞内ＯＤＮ分解はより複雑であり、５’および３’エクソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼを含む。５’および３’末端で変化する数のホスホロチオエート修飾結合を有する３Ｄ配列を有するＯＤＮパネルを用いて、２つの５’修飾結合および５つの３’修飾結合がこのＣｐＧ ＯＤＮによる最適刺激を提供するために必要であることが実験的に決定された。（非メチル化ＣｐＧ含有オリゴはＮＫ細胞刺激活性を有する）
実施例４でさらに詳細に記載するように、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドがＢ細胞に加えてナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性を刺激するかどうかを決定するために実験を行った。表３に示すように、ＣｐＧ ＯＤＮ １および３Ｄｄと共に培養された脾臓細胞においてＮＫ活性の顕著な誘導が観察された。これに対して、非ＣｐＧコントロールＯＤＮで処理されたエフェクターにおいては、誘導はほとんど存在しなかった。
【００７３】
【表３】
（メチル化ＣｐＧ含有オリゴの中和活性）
ＯＤＮ（ＣｐＧモチーフまたは他の部分でのシトシンが５−メチルシトシンで置換されたもの）のＢ細胞マイトジェン性を、実施例１に記載のようにして調べた。上記表１に示すように、メチル化ＣｐＧを含むＯＤＮは、非マイトジェン性であった（表１；ＯＤＮ １ｃ、２ｆ、３Ｄｅ、および３Ｍｃ）。しかし、ＣｐＧジヌクレオチド以外のシトシンのメチル化では、刺激特性は維持された（表１；ＯＤＮ １ｄ、２ｄ、３Ｄｆ、および３Ｍｄ）。
（両末端およびその近傍にＧＣＧトリヌクレオチド配列を含むオリゴの免疫阻害活性）
いくつかの場合においては、上記の刺激モチーフ内部ではないＣｐＧジヌクレオチドを含むＯＤＮは、他のマイトジェン性ＣｐＧ ＯＤＮの刺激効果をブロックすることが見いだされた。具体的には、ＣｐＧ ＯＤＮの５’および／または３’末端およびその近傍にＧＣＧからなる非定型のＣｐＧモチーフを加えることにより、他のＣｐＧモチーフによる増殖の刺激が実際に阻害された。ＧＣＧモチーフにおけるシトシンのメチル化または置換は、この効果を逆転する。好ましいＣｐＧモチーフに見られるよりもずっと低いが、ＯＤＮ中のＧＣＧモチーフはそれ自体が低いマイトジェン性効果を有する。
（免疫刺激、中和および免疫阻害オリゴヌクレオチドの作用の提唱されるメカニズム）
その表面Ｉｇレセプターを介してＢ細胞をトリガーする抗原とは異なり、ＣｐＧ−ＯＤＮは、検出可能なＣａ２＋流出、タンパク質チロシンリン酸化における変化またはＩＰ ３生成のいずれも誘導しなかった。ＣｐＧモチーフ存在下または非存在下でのＦＩＴＣ−結合ＯＤＮを用いるフローサイトメトリーを、Ｚｈａｏ，Ｑら（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ３：５３−６６（１９９３））に記載のようにして行った。これにより、等価な膜結合、細胞取り込み、流出および細胞内局在化が示された。このことは、ＣｐＧ ＯＤＮに対して特異的な細胞膜タンパク質は存在しないかもしれないことを示唆している。細胞膜を介して作用するよりもむしろ、これらのデータは、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドが活性のために細胞取り込みを必要とすることを示唆している：固体Ｔｅｆｌｏｎ支持体に共有結合したＯＤＮは非刺激性であり、アビジンビーズまたはアビジンコートされたペトリ皿上に固定化されたビオチン化ＯＤＮも同様であった。ＦＩＴＣまたはビオチンのいずれかと結合されたＣｐＧ ＯＤＮは、完全なマイトジェン性特性を維持し、このことは立体障害を有さないことを示した。
【００７４】
最適なＣｐＧモチーフ（ＴＧＡＣＧＴＴ／Ｃ）は、ＣＲＥ（サイクリックＡＭＰ応答エレメント）と同一である。ＣｐＧ ＯＤＮのマイトジェン性効果と同様に、中央のＣｐＧがメチル化された場合には、ＣＲＥＢのＣＲＥへの結合はなくされる。電気泳動移動度シフトアッセイを用いて、ＣｐＧ ＯＤＮ（１本鎖）がＢ細胞ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質のそれらの通常の結合部位（２本鎖ＣＲＥ）への結合と競合し得るかどうかを決定した。競合アッセイにより、ＣｐＧモチーフを含む１本鎖ＯＤＮはＣＲＥＢのその結合部位への結合と競合し得るが、ＣｐＧモチーフを含まないＯＤＮは競合し得ないことが示された。これらのデータは、ＣｐＧ ＯＤＮがある種の様式で１つ以上のＢ細胞ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質と相互作用することによりそれらのマイトジェン性効果を発揮するという結論を支持する。逆に、ＯＤＮの３’および／または５’端部近傍のＧＣＧ配列または他の非定型ＣｐＧモチーフの存在により、活性化を引き起こさず、阻止さえし得る様式でＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質と相互作用するようである。
刺激ＣｐＧモチーフは、微生物ゲノムＤＮＡに共通であるが、脊椎動物ＤＮＡにおいてはきわめてまれである。さらに、細菌ＤＮＡは、Ｂ細胞増殖および免疫グロブリン（Ｉｇ）産生を誘導することが報告されているが、哺乳動物ＤＮＡは誘導しない（Ｍｅｓｓｉｎａ，Ｊ．Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１７５９（１９９１））。さらに実施例３に記載の実験（この実験で、ＣｐＧメチラーゼを用いる細菌ＤＮＡのメチル化により、マイトジェン性がなくされることが見いだされた）により、ＣｐＧの状態の違いが細菌ＤＮＡによるＢ細胞刺激の原因であることが示された。このデータは以下の結論を支持する：細菌ＤＮＡ内に存在する非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドが、細菌ＤＮＡの刺激効果の原因となる。
目的論的には、ＣｐＧモチーフによる白血球活性化によって免疫防御メカニズムが代表され、これにより、宿主ＤＮＡと細菌ＤＮＡとが区別され得るようである。宿主ＤＮＡは、そのＣｐＧ抑制およびメチル化に起因してリンパ球活性化をほとんど誘導しないか全く誘導しない。細菌ＤＮＡは、感染組織において選択的なリンパ球活性化を引き起こす。ＣｐＧ経路は抗原レセプターを介するＢ細胞活性化と共働するので、細菌抗原に特異的な抗原レセプターを有するＢ細胞は、細胞膜Ｉｇを介する１つの活性化シグナルと細菌ＤＮＡからの第２のシグナルとを受信し、従って、優先的に活性化される傾向を有する。Ｂ細胞活性化におけるこの経路と他の経路との相互関係が、ポリクローナル抗原を用いて抗原特異性応答を誘導する生理学的メカニズムを提供する。
（免疫刺激オリゴの作製方法）
本発明において使用するために、オリゴヌクレオチドが、当該分野で周知の多くの方法のうちの任意の方法を用いて新たに合成され得る。例えば、β−シアノエチルホスホルアミダイト法（Ｓ．Ｌ．ＢｅａｕｃａｇｅおよびＭ．Ｈ．Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ，（１９８１）Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２２：１８５９）；ヌクレオシドＨ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇら，（１９８６）Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５１−４０５４；Ｆｒｏｅｈｌｅｒら，（１９８６）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１４：５３９９−５４０７；Ｇａｒｅｇｇら，（１９８６）Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５５−４０５８；Ｇａｆｆｎｅｙら，（１９８８）Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２９：２６１９−２６２２）。これらの化学反応は、種々の市販の自動化オリゴヌクレオチド合成機により行われ得る。あるいは、オリゴヌクレオチドは、公知の技術（例えば、制限酵素、エクソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼを使用する技術）を用いて、既存の核酸配列（例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡ）から調製され得る。
【００７５】
インビボでの使用のためには、オリゴヌクレオチドは、好ましくは、（例えば、エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼによる）分解に対して比較的耐性である。オリゴヌクレオチドの安定化は、ホスフェート骨格での修飾により達成され得る。好ましい安定化されたオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート修飾骨格を有する。ホスホロチオエートＯＤＮの薬物動態学は、それらが齧歯動物において４８時間の全身半減期を有することを示し、そしてそれらがインビボでの適用に有用であり得ることを示唆する（Ａｇｒａｗａｌ，Ｓ．ら，（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７５９５）。ホスホロチオエートは、ホスホルアミデートまたはＨ ホスホネート化学のいずれかを使用する自動化技術を用いて合成され得る。アリールおよびアルキルホスホネートが（例えば、米国特許第４，４６９，８６３号に記載のようにして）作製され得る；そして、アルキルホスホトリエステル（荷電酸素部分は、米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許第０９２，５７４号に記載のようにしてアルキル化される）が、市販の試薬を用いる自動化固相合成により調製され得る。他のＤＮＡ骨格修飾および置換の作製方法が記載されている（Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．およびＰｅｙｍａｎ，Ａ．（１９９０）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４４；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ．（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１：１６５）。
【００７６】
インビボで投与するために、オリゴヌクレオチドは、標的細胞（例えば、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）表面への高親和性結合が得られる分子、および／または標的細胞による細胞の取り込みを増大させる分子に結合されて、「オリゴヌクレオチド送達複合体」を形成し得る。オリゴヌクレオチドは、当該分野で周知の技術を用いて適切な分子にイオン的にまたは共有結合的に結合し得る。種々のカップリング剤または架橋剤（例えば、プロテインＡ、カルボジイミド、およびＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ））が使用され得る。あるいは、オリゴヌクレオチドは、周知技術を用いてリポソームまたはビロソーム中にカプセル化され得る。
【００７７】
本発明は、以下の実施例（これはさらなる限定として解釈されるべきではない）によりさらに説明される。本出願全体に引用されるすべての参考文献（学術文献、発行された特許、刊行された特許出願および同時係属特許出願を含む）の全体の内容は、本明細書に参考として援用される。
（免疫刺激オリゴの治療的使用）
その免疫刺激特性に基づいて、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、インビボで被験体に投与され、「免疫系不全」を処置し得る。あるいは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、免疫系不全を有する被験体から得られるリンパ球（例えば、Ｂ細胞またはＮＫ細胞）とエクスビボで接触され得、次いで、活性化リンパ球が被験体に再度移植され得る。
【００７８】
免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、アジュバントとしてワクチンと共に被験体に投与され得、被験体の免疫系を増強して、ワクチンからより優れた応答をもたらし得る。好ましくは、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドは、ワクチン投与の少し前またはワクチン投与と同時に投与される。
【００７９】
免疫刺激オリゴヌクレオチドを用いる先行する化学療法は、引き続く化学療法に対する悪性腫瘍細胞の応答性を増加させるに有用であることが判明するはずである。ＣｐＧ ＯＤＮはまた、ヒトおよびマウス細胞の両方においてナチュラルキラー細胞活性を増加させた。ＮＫ活性の誘導は、ガンの免疫療法において同様に有益であり得る。
（中性オリゴヌクレオチドの治療的使用）
特定の標的配列に相補的なオリゴヌクレオチドが合成され得、そしてインビボで非検体に投与され得る。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは相補的なｍＲＮＡにハイブリダイズし、これにより特異的な標的遺伝子の発現を防止する。アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列特異的な効果により、それらはタンパク質機能の研究に有用な調査手段となった。全身アンチセンス療法の第Ｉ／ＩＩ相のヒトへの試験が、急性骨髄性白血病およびＨＩＶについて現在行われている。
【００８０】
さらに、オリゴヌクレオチドプローブ（すなわち、検出可能な標識を有するオリゴヌクレオチド）が被験体に投与され得、結合標識の検出に基づいて相補的配列の存在を検出し得る。オリゴヌクレオチドプローブのインビボでの投与および検出は、特定のＤＮＡ配列により引き起こされるかまたは悪化される特定の疾病（例えば、全身性紅斑性狼瘡、敗血症および自己免疫疾患）の診断に有用であり得る。
【００８１】
任意のまたはすべてのＣｐＧジヌクレオチドがメチル化されているアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドプローブは、被験体へのインビボでの投与時に免疫反応を生じさせず、従って、対応する非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドよりも安全である。
【００８２】
治療における使用のために、有効量の適切なオリゴヌクレオチドが、単独で、またはオリゴヌクレオチド送達複合体として処方されて、オリゴヌクレオチドが適切な標的細胞（例えば、Ｂ細胞およびＮＫ細胞）に取り込まれることを可能にする任意の方法で被験体に投与され得る。好ましい投与経路は、経口および経皮（例えば、パッチによる）を包含する。他の投与経路の例としては、注射（皮下、静脈内、腸管外、腹腔内、包膜内など）が挙げられる。注射は、ボーラスでの注射または連続的な注入であり得る。
【００８３】
オリゴヌクレオチドは、単独で、またはオリゴヌクレオチド送達複合体として、薬学的に受容可能なキャリアと共に投与され得る。本明細書において使用されるように、「薬学的に受容可能なキャリア」という表現は、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体と同時投与され得、かつ、オリゴヌクレオチドがその意図された機能を実施することを可能にする物質を包含することが意図される。このようなキャリアの例としては、溶液、溶媒、分散媒体、遅延剤、エマルジョンなどが挙げられる。薬学的に活性な物質についてのこのような媒体の使用は、当該分野で周知である。オリゴヌクレオチドとの使用に適切なあらゆる他の従来のキャリアは、本発明の範囲内にある。
【００８４】
用語「有効量の」オリゴヌクレオチドとは、所望の生物学的効果を実現するに必要または十分な量を意味する。例えば、免疫系不全を処置するための少なくとも１つのメチル化ＣｐＧを含むオリゴヌクレオチドの有効量は、腫瘍、ガン、あるいは細菌性、ウィルス性または真菌性感染症を除去するに必要な量であり得る。ワクチンアジュバントとしての使用のための有効量は、ワクチンに対する被験体の免疫応答を増強するに有用な量であり得る。免疫系活性化に関連する疾病の処置に使用するための非メチル化ＣｐＧを含まないオリゴヌクレオチドの「有効量」は、非メチル化ＣｐＧ含有ヌクレオチド配列に競合して優るに必要な量であり得る。任意の特定用途についての有効量は、処置されるべき疾病または症状、投与される特定のオリゴヌクレオチド、被験体の大きさ、あるいは疾病または症状の重さなどの要因に応じて変化し得る。当業者は、過度の実験を必要とすることなく、特定のオリゴヌクレオチドの有効量を経験的に決定し得る。
上記で報告された研究によれば、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、リンパ球（例えば、Ｂ細胞およびＮＫ細胞）について直接的にマイトジェン性であることが示される。細菌ＤＮＡにおけるこれらの配列の存在とあわせて、これらの結果は、動物ゲノム中のＣｐＧジヌクレオチドが脱表現されないこと（ｕｎｄｅｒｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）、および、このようなジヌクレオチド中に存在するシトシンの広範囲のメチル化が、宿主ＤＮＡと細菌ＤＮＡとを区別し得る免疫防御メカニズムの存在により説明され得ることを示唆する。宿主ＤＮＡは、通常、多くの解剖学的領域およびアポトーシス（細胞死）による炎症領域に存在するが、一般に、リンパ球活性化をほとんど誘導しないか全く誘導しない。しかし、非メチル化ＣｐＧモチーフを含む細菌ＤＮＡの存在は、それが有益である感染した解剖学的領域において、正確にリンパ球活性化を引き起こし得る。この新規な活性化経路は、Ｔ細胞依存抗原特異的Ｂ細胞活性化の迅速な代替物を提供する。しかし、Ｂ細胞活性化は、全体的には非特異的ではないようである。細菌産物に特異的な抗原レセプターを有するＢ細胞は、細胞膜Ｉｇを介する１つの活性化シグナルおよび細菌ＤＮＡからの第２のシグナルとを受信し得、これにより、抗原特異的免疫応答をさらに激しくトリガーし得る。
【００８５】
他の免疫防御メカニズムについては、細菌ＤＮＡに対する応答は、ある種の場合においては望ましくない結果を有し得る。例えば、自己抗原に対する自己免疫応答もまた、細菌感染により優先的にトリガーされる傾向にある。なぜなら自己抗原が、細菌ＤＮＡによりトリガーされる自己反応性Ｂ細胞に第２の活性化シグナルを提供し得るからである。実際、細菌感染による自己免疫の誘導は、一般的な臨床的観察である。例えば、自己免疫疾患である全身性紅斑性狼瘡は、（ｉ）抗ＤＮＡ抗体の産生により特徴づけられ；（ｉｉ）ＤＮＡメチルトランスフェラーゼを阻害する薬物により誘導され（Ｃｏｒｎａｃｃｈｉａ，Ｅ．Ｊ．ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：３８（１９９３））；そして、（ｉｉｉ）ＤＮＡメチル化の減少をともなう（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｂ．Ｌ．ら，Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ ３５：６４７（１９９２））。この疾病は、少なくとも部分的には、ＣｐＧモチーフにより提供される刺激シグナルによるＤＮＡ特異的Ｂ細胞の活性化によって、ならびに抗原レセプターの細菌ＤＮＡの結合によってトリガーされるようである。
【００８６】
さらに、敗血症（免疫系の多量でかつ非特異的な活性化に起因する高い罹患率および死亡率により特徴づけられる）は、多くのリンパ球を直接活性化するに十分な濃度に到達する死滅細菌から放出される細菌ＤＮＡおよび他の産物により発症され得る。
【００８７】
非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含まないオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧモチーフを含まないオリゴヌクレオチド、またはＣｐＧモチーフがメチル化されているオリゴヌクレオチド）を被験体に投与し、非メチル化ＣｐＧ含有核酸配列の結合をブロックすることにより、狼瘡、敗血症および他の「免疫系活性化に関連する疾病」が処置され得、防止され得または改善され得る。非メチル化ＣｐＧモチーフを含まないオリゴヌクレオチドは、単独で、または他のマイトジェン性細菌産物（例えば、ＬＰＳ）に対する免疫細胞応答をブロックする組成物と共に投与され得る。
【００８８】
以下、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドがどのようにして疾病狼瘡を処置し、防止しまたは改善し得るかについて、機構的に説明する。狼瘡は、一般に、細菌性またはウィルス性感染によりトリガーされると考えられている。このような感染は、１本鎖ＤＮＡに対する非病原性抗体の産生を刺激すると報告されている。これらの抗体は、主に非メチル化ＣｐＧを含む細菌配列を認識するようである。狼瘡において疾病が発達するにつれて、抗ＤＮＡ抗体は、２本鎖ＤＮＡに特異的な病原性抗体にシフトする。これらの抗体はメチル化ＣｐＧ配列への結合を増大させ、そしてこれらの産生は狼瘡における寛容の衰弱（ｂｒｅａｋｄｏｗｎ）から生じる。あるいは、患者のＤＮＡが過少メチル化（ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ）し、従って、非メチル化ＣｐＧに特異的な抗ＤＮＡ抗体が自己ＤＮＡに結合させ、そして、「エピトープスプレッディング（ｅｐｉｔｏｐｅ ｓｐｒｅａｄｉｎｇ）」と称されるプロセスを介してより広範な自己免疫をトリガーさせた場合に、狼瘡が生じ得る。
【００８９】
いずれの場合にも、抗原性オリゴヌクレオチドをタンパク質キャリア（例えば、γ−グロブリン（ＩｇＧ））にカップリングさせることにより、狼瘡患者の寛容を回復させることが可能であり得る。γ−グロブリンと複合体化した仔ウシ胸腺ＤＮＡは、抗ＤＮＡ抗体形成を減少させることが報告されている。
（両端またはその近傍にＧＣＧトリヌクレオチド配列を含むオリゴの治療的使用）
オリゴヌクレオチドと標的化されるウィルス配列との間の相補性に起因する任意のアンチセンス効果に関係なく、ＣＲＥＢ／ＡＴＦとのその相互作用に基づいて、両端またはその近傍にＧＣＧトリヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドは、抗ウィルス活性を有する。この活性に基づいて、阻害オリゴヌクレオチドの有効量が、被験体に投与されてウィルス感染を処置または防止し得る。
【００９０】
【実施例】
（実施例１：Ｂ細胞全ＲＮＡ合成および細胞周期に対するＯＤＮの効果）
抗−Ｔｈｙ−１．２および補体を用いてＴ細胞を放血し、ｌｙｍｐｈｏｌｙｔｅ Ｍ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｒｎｂｙ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）で遠心分離した、６〜１２週齢で特定の病原体を有さないＤＢＡ／２またはＢＸＳＢマウス（アイオワ大学動物管理施設で飼育された；実質的な系統の違いは示されなかった）から得られた脾臓からＢ細胞を精製した（「Ｂ細胞」）。Ｂ細胞は、１％未満のＣＤ４＋またはＣＤ８＋細胞を含んでいた。１０％ＦＢＳ（６５℃で３０分間熱失活させた）、５０μＭの２−メルカプトエタノール、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および２ｍＭのＬ−グルタメートを含む１００μｌ ＲＰＭＩ中の８×１０４のＢ細胞を、９６ウェルのマイクロタイタープレートに３連で分配した。２０μＭのＯＤＮを、３７℃で２０時間の培養開始時に加え、１μＣｉの３Ｈウリジンで細胞をパルスし、そして４時間後に細胞を回収し、そしてカウントした。２０μＭのＯＤＮとともに脾臓細胞全体を４８時間培養した後、ＥＬＩＳＡスポットアッセイを用いてＩｇ分泌Ｂ細胞を数えた。データ（表１に報告する）は、ＯＤＮなしで培養した細胞と比較した刺激指数を表す。本実験においては、ＯＤＮなしで培養した細胞は６８７ｃｐｍを与えたが、一方、２０μｇ／ｍｌのＬＰＳ（最適濃度であることを滴定により決定した）と共に培養した細胞は９９，６９９ｃｐｍを与えた。３Ｈチミジン取り込みアッセイは、同様の結果を示したが、分解したＯＤＮから放出されたチミジンによる非特異的阻害をいくらか示した（Ｍａｔｓｏｎ，ＳおよびＡ．Ｍ．Ｋｒｉｅｇ（１９９２），「コントロールオリゴヌクレオチドによる３Ｈ−チミジン取り込みの非特異的抑制」，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２：３２５）。
【００９１】
細胞周期分析のために、２×１０６のＢ細胞を、２ｍｌの組織培養培地単独で、または３０μｇ／ｍｌのＬＰＳと共に、または１μＭの示されたホスホロチオエート修飾ＯＤＮと共に、４８時間培養した。Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ，Ｚ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２８８１（１９８１）に記載のようにして、細胞周期分析を行った。
【００９２】
ヒト細胞に対するＣｐＧ ＯＤＮのマイトジェン性効果を調べるために、２人の慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）（循環細胞が悪性腫瘍Ｂ細胞である疾病）患者から末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得た。上記のようにして、細胞を４８時間培養し、トリチウム化チミジンで４時間パルスした。
（実施例２：Ｂ細胞由来のＩｇＭ産生に対するＯＤＮの効果）
新たに殺したマウスの脾臓由来の単一細胞懸濁液を、Ｌｅｉｂｓｏｎらの方法（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５４：１６８１（１９８１））により抗−Ｔｈｙｌ、抗−ＣＤ４、および抗−ＣＤ８ならびに補体で処理した。休止Ｂ細胞（＜，０２％のＴ細胞混入）を、ＤｅＦｒａｎｃｏらの手順（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５５：１５２３（１９８２））により非連続Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配の６３〜７０％バンドから単離した。上記のようにして、これらを３０μＭ ＯＤＮまたは２０μｇ／ｍｌ ＬＰＳ中で４８時間培養した。ＥＬＩスポットアッセイ（Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．Ｍ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：５０６（１９９０））により決定したところ、活発にＩｇＭを分泌するＢ細胞の数はこの時点で最大であった。このアッセイにおいては、Ｂ細胞を抗Ｉｇでコートされたマイクロタイタープレート上で６時間インキュベートした。それらが産生したＩｇ（＞９９％ ＩｇＭ）を、ホスファターゼ標識抗Ｉｇ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を用いて検出した。個々のＢ細胞により産生された抗体を、ホスファターゼの存在下で不溶性青色沈殿を形成するＢＣＩＰ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を加えることにより視覚化した。２０〜４０のスポット／ウェルを生じる細胞の希釈を用いて、抗体分泌Ｂ細胞／試料の総数を決定した。すべてのアッセイを３連で行った。いくつかの実験において、培地の上清をＥＬＩＳＡによりＩｇＭについてアッセイしたところ、ＣｐＧ−ＯＤＮに対する応答の同様な増加を示した。
（実施例３：細菌ＤＮＡによるＢ細胞刺激）
ＤＢＡ／２ Ｂ細胞を、ＤＮＡなしで、あるいは、５０μｇ／ｍｌの（ａ）Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｙｓｏｄｅｉｋｔｉｃｕｓ；（ｂ）ＮＺＢ／Ｎマウス脾臓；およびＮＦＳ／Ｎマウス脾臓ゲノムＤＮＡと共に４８時間培養し、次いで、３Ｈチミジンで４時間パルスし、そして、その後細胞を回収した。２連のＤＮＡ試料を、３７℃で３０分間ＤＮＡｓｅＩで消化し、次いで、細胞培養物に加えた。ＥＬＩＳＡスポットアッセイを用いると、Ｅ ｃｏｌｉ ＤＮＡもまた、４８時間までＩｇＭ分泌Ｂ細胞の数の８．８倍の増加を誘導した。
【００９３】
ＤＢＡ／２ Ｂ細胞を、添加物なしに、あるいは、５０μｇ／ｍｌのＬＰＳまたは２０μＭのＯＤＮ １；１ａ；４；または４ａとともに培養した。細胞を培養し、そして４、８、２４および４８時間後に回収した。実施例１と同様にして、ＢＸＳＢ細胞を、５、１０、２０、４０または８０μＭのＯＤＮ １；１ａ；４；または４ａあるいはＬＰＳと共に培養した。この実験において、ＯＤＮを含まないウェルは３８３３ｃｐｍを有していた。各実験を少なくとも３回行い、同様の結果を得た。３連のウェルの標準偏差は＜５％であった。
（実施例４：ナチュラルキラー（ＮＫ）活性に対するＯＤＮの効果）
１０×１０６のＣ５７ＢＬ／６脾臓細胞を、２ｍｌのＲＰＭＩ（実施例１に記載のように補充した）中で、４０μＭのＣｐＧまたは非ＣｐＧ ＯＤＮの存在下または非存在下で４８時間培養した。細胞を洗浄し、次いで、２つのＮＫ感受性標的細胞株（ＹＡＣ−１および２Ｃ１１）を用いる短期５１Ｃｒ放出アッセイにおけるエフェクター細胞として用いた（Ｂａｌｌａｓ，Ｚ．Ｋ．ら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：１７）。０．２ｍｌ中Ｖ底マイクロタイタープレート中の１０４の５１Ｃｒ標識標的細胞に、種々の濃度でエフェクター細胞を加え、そして５％ＣＯ２中、３７℃で４時間インキュベートした。次いで、プレートを遠心分離し、上清のアリコートを放射能についてカウントした。エフェクター細胞の存在下で放出された５１Ｃｒから標的細胞単独で培養された場合に放出された５１Ｃｒ放出を引いた値の、２％酢酸中での細胞溶解後に放出された総カウントから細胞単独で培養された場合に放出された５１Ｃｒ ｃｐｍを引いた値に対する比率を計算することにより、特異的溶解パーセントを決定した。
（実施例５：ＣｐＧホスホロチオエートＯＤＮについてのインビボでの研究）
マウスを計量し、０．２５ｍｌの滅菌ＰＢＳまたはＰＢＳに溶解した示されたホスホロチオエートＯＤＮをＩＰで注射した。２４時間後、脾臓細胞を回収し、洗浄し、そして、Ｂ細胞のゲートのためのファイコエリトリン結合６Ｂ２を、ビオチン結合抗Ｌｙ−６Ａ／Ｅまたは抗Ｉａｄ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）または抗Ｂｌａ−１（Ｈａｒｄｙ，Ｒ．Ｒ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５９：１１６９（１９８４））と組み合わせて用いて、フローサイトメトリーのために染色した。それぞれの条件について２匹のマウスを調べ、個々に分析した。
（実施例６：Ｂ細胞刺激についてのホスホロチオエートＯＤＮの滴定）
コントロールＯＤＮ １ａ、またはＣｐＧ ＯＤＮ １ｄおよび３Ｄｄの配列を有するホスホロチオエートＯＤＮと共にＢ細胞を培養し、次いで、２０時間後に３Ｈウリジン、または４４時間後に３Ｈチミジンのいずれかでパルスし、次いで、細胞を回収し、そしてｃｐｍを決定した。
（実施例７：アポトーシスからのＢ細胞のレスキュー）
ＷＥＨＩ−２３１細胞（５×１０４／ウェル）を、ＬＰＳあるいはコントロールＯＤＮ １ａまたはＣｐＧ ＯＤＮ １ｄおよび３Ｄｄの存在下または非存在下、３７℃で１時間培養し、次いで、抗ＩｇＭ（１μ／ｍｌ）を加えた。細胞をさらに２０時間培養し、次いで２μＣｉ／ウェルの３Ｈチミジンで４時間パルスした。この実験において、ＯＤＮも抗ＩｇＭも加えない細胞は、抗ＩｇＭの添加により９０．４×１０３を与えた。表１に示すホスホジエステルＯＤＮは、ＯＤＮ分解に起因する非特異的抑制をいくらか示すものの、同様の保護を与えた。各実験を少なくとも３回繰り返し、同様の結果を得た。
（実施例８： ＩＬ−６のインビボでの誘導）
ＤＢＡ／２雌性マウス（２ヶ月齢）に、５００μｇのＣｐＧまたはコントロールホスホロチオエートＯＤＮをＩＰで注射した。注射後、種々の時点で、マウスを採血した。２匹のマウスを各時点について調べた。ＩＬ−６をＥｌｉｓａにより測定し、そしてＩＬ−６濃度を組換えＩＬ−６を用いて得られる標準曲線と比較することにより計算した。アッセイの感度は、１０ｐｇ／ｍｌであった。レベルは８時間後に検出不能であった。
（実施例９：Ｂ細胞ＣＲＥＢ／ＡＴＦの放射性標識２本鎖ＣＲＥプローブ（ＣＲＥＢ）への結合）
ＣＲＥプローブ（遊離プローブは、像の底部から離れている）を用いるＥＭＳＡにより分析すると、ＣＨ１２．ＬＸ Ｂ細胞由来の全細胞抽出物は、２つの遅延バンドを示した。ＣＲＥへのＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質の結合は、示された量のコールドＣＲＥおよび１本鎖ＣｐＧ ＯＤＮにより競合されたが、非ＣｐＧＯＤＮによっては競合されなかった。
（等価物）
当業者は、日常的な実験程度を用いて、本明細書に記載の本発明の特定の実施態様の多くの等価物を認識し、または確認し得る。このような等価物は、添付の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【００９４】
非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド、およびこのオリゴヌクレオチドの被験体における免疫応答を刺激する能力に基づく治療的有用性が開示される。また、被験体における非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドにより開始される免疫系の活性化に関連する疾病を処置するための治療法が開示される。この治療法は、非メチル化ＣｐＧ配列（すなわち、メチル化ＣｐＧ配列またはＣｐＧ配列なし）を含まないオリゴヌクレオチドを被験体に投与し、非メチル化ＣｐＧ核酸を結合について競合して優る工程を包含する。さらに、アンチセンス療法において使用するための、またはインビボでのハイブリダイゼーションプローブとして使用するためのメチル化ＣｐＧ含有ジヌクレオチド、ならびに抗ウィルス治療剤として使用するための免疫阻害オリゴヌクレオチドが開示される。
【００９５】
【発明の効果】
本発明によって、新規な免疫刺激オリゴヌクレオチド組成物、このオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性に基づく有用な方法、中性オリゴヌクレオチド、中性オリゴヌクレオチドを用いる有用な方法、および免疫阻害オリゴヌクレオチド、免疫阻害オリゴヌクレオチドの種々の使用が提供される。
【００９６】
【配列表】
【発明の属する技術分野】
本発明は、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド、およびこのオリゴヌクレオチドの被験体における免疫応答を刺激する能力に基づく治療的有用性に関する。本発明はまた、被験体における非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドにより開始される免疫系の活性化に関連する疾病を処置するための治療法に関する。この治療法は、非メチル化ＣｐＧ配列（すなわち、メチル化ＣｐＧ配列またはＣｐＧ配列なし）を含まないオリゴヌクレオチドを被験体に投与し、非メチル化ＣｐＧ核酸を結合について競合して優る工程を包含する。さらに、本発明は、アンチセンス療法において使用するための、またはインビボでのハイブリダイゼーションプローブとして使用するためのメチル化ＣｐＧ含有ジヌクレオチド、ならびに抗ウィルス治療剤として使用するための免疫阻害オリゴヌクレオチドに関する。
（政府の援助）
本発明において得られる研究は、一部、米国衛生研究所認可番号 Ｒ２９−ＡＲ４２５５６−０１号により援助された。従って、本発明のある種の権利が米国政府に与えられ得る。
【０００２】
【従来の技術】
（ＤＮＡは細胞膜に結合しインターナライズされる）
１９７０年代には、幾人かの研究者が、高分子量ＤＮＡの細胞膜への結合を報告した（Ｌｅｒｎｅｒ，Ｒ．Ａ．，Ｗ．Ｍｅｉｎｋｅ，およびＤ．Ａ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，１９７１，「二倍体ヒトリンパ球の細胞質における膜結合ＤＮＡ」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ６８：１２１２；Ａｇｒａｗａｌ，Ｓ．Ｋ．，Ｒ．Ｗ．Ｗａｇｎｅｒ，Ｐ．Ｋ．ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ，およびＢ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，１９７５，「白金−ピリミジン錯体を用いて電子顕微鏡により視覚化された腫瘍発生細胞における細胞表面結合核酸」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７２：９２８）。１９８５年には、Ｂｅｎｎｅｔｔらが、ＤＮＡのリンパ球への結合がリガンド−レセプター相互作用に類似することを初めて示した：すなわち、結合は飽和可能であり、競合的であり、そしてＤＮＡのエンドサイトーシスおよび分解を引き起こす（Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｒ．Ｍ．，Ｇ．Ｔ．Ｇａｂｏｒ，およびＭ．Ｍ．Ｍｅｒｒｉｔｔ．１９８５，「ＤＮＡのヒト白血球への結合。ＤＮＡのレセプター媒介結合、インターナリゼーションおよび分解の証拠」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７６：２１８２）。ＤＮＡと同様に、オリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）は、飽和可能であり、配列独立性であり、そして温度およびエネルギー依存性の様式で細胞に入り得る（Ｊａｒｏｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．Ｗ．，およびＪ．Ｓ．Ｃｏｈｅｎ，１９９１，「アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドの細胞取り込み」，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６：２３５；Ａｋｈｔａｒ，Ｓ．，Ｙ．Ｓｈｏｊｉ，およびＲ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ，１９９２，「アンチセンスオリゴヌクレオチドの生物学的安定性および膜輸送特性の薬学的局面」；Ｇｅｎｅ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ： Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｎｄ ＤＮＡ，Ｒ．Ｐ．Ｅｒｉｃｋｓｏｎ，およびＪ．Ｇ．Ｉｚａｎｔ編，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｔｄ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１３３；ならびに、Ｚｈａｏ，Ｑ．，Ｔ．Ｗａｌｄｓｃｈｍｉｄｔ，Ｅ．Ｆｉｓｈｅｒ，Ｃ．Ｊ．Ｈｅｒｒｅｒａ，およびＡ．Ｍ．Ｋｒｉｅｇ，１９９４，「マウス骨髄Ｂ細胞前駆体における時期特異的オリゴヌクレオチド取り込み」，Ｂｌｏｏｄ ８４：３６６０）。ＤＮＡまたはＯＤＮ取り込みのレセプターはクローン化されておらず、そしてＯＤＮ結合および細胞取り込みが高分子量ＤＮＡと同一のメカニズムを介して起こるのか異なるメカニズムを介して起こるのかはいまだ明らかではない。
【０００３】
リンパ球のＯＤＮ取り込みは細胞の活性化により調節されることが示されている。Ｂ細胞マイトジェンＬＰＳにより刺激された脾臓細胞は、Ｂ細胞集団におけるＯＤＮ取り込みを飛躍的に増大させたが、一方、Ｔ細胞マイトジェンＣｏｎ Ａで処理された脾臓細胞は、Ｂ細胞ではなくＴ細胞によるＯＤＮ取り込みの増大を示した（Ｋｒｉｅｇ，Ａ．Ｍ．，Ｆ．Ｇｍｅｌｉｇ−Ｍｅｙｌｉｎｇ，Ｍ．Ｆ．Ｇｏｕｒｌｅｙ，Ｗ．Ｊ．Ｋｉｓｃｈ，Ｌ．Ａ．Ｃｈｒｉｓｅｙ，およびＡ．Ｄ．Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ，１９９１，「リンパ様細胞によるオリゴデオキシヌクレオチドの取り込みは不均質かつ誘導性である」，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １：１６１）。
（核酸の免疫効果）
いくつかのポリヌクレオチドが、生体応答調節因子として広範に評価されている。その最良の例は、おそらくポリ（Ｉ，Ｃ）であろう。これは、ＩＦＮ産生の強力なインデューサーであり、そしてマクロファージのアクチベーターおよびＮＫ活性のインデューサーである（Ｔａｌｍａｄｇｅ，Ｊ．Ｅ．，Ｊ．Ａｄａｍｓ，Ｈ．Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｍ．Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｂ．Ｌｅｎｚ，Ｍ．Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｅ．Ｓｃｈｌｉｃｋ，Ｒ．Ｒｕｆｆｍａｎｎ，Ｒ．Ｈ．Ｗｉｌｔｒｏｕｔ，およびＭ．Ａ．Ｃｈｉｒｉｇｏｓ，１９８５，「ポリ−Ｌ−リジンおよびカルボキシメチルセルロースと複合体化されたポリイノシン−ポリシチジル酸のマウスにおける免疫調節効果」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４５：１０５８；Ｗｉｌｔｒｏｕｔ，Ｒ．Ｈ．，Ｒ．Ｒ．Ｓａｌｕｐ，Ｔ．Ａ．Ｔｗｉｌｌｅｙ，およびＪ．Ｅ．Ｔａｌｍａｄｇｅ，１９８５，「ポリリボヌクレオチドによるナチュラルキラー活性の免疫調節」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓｐ．Ｍｏｄ．４：５１２；Ｋｒｏｗｎ，Ｓ．Ｅ．１９８６，「ガン処置におけるインターフェロンおよびインターフェロンインデューサー」，Ｓｅｍ．Ｏｎｃｏｌ．１３：２０７；ならびに、Ｅｗｅｌ，Ｃ．Ｈ．，Ｓ．Ｊ．Ｕｒｂａ，Ｗ．Ｃ．Ｋｏｐｐ，Ｊ．Ｗ．Ｓｍｉｔｈ ＩＩ，Ｒ．Ｇ．Ｓｔｅｉｓ，Ｊ．Ｌ．Ｒｏｓｓｉｏ，Ｄ．Ｌ．Ｌｏｎｇｏ，Ｍ．Ｊ．Ｊｏｎｅｓ，Ｗ．Ｇ．Ａｌｖｏｒｄ，Ｃ．Ｍ．Ｐｉｎｓｋｙ，Ｊ．Ｍ．Ｂｅｖｅｒｉｄｇｅ，Ｋ．Ｌ．ＭｃＮｉｔｔ，および Ｓ．Ｐ．Ｃｒｅｅｋｍｏｒｅ，１９９２，「ガン患者におけるポリ−Ｌ−リジンおよびカルボキシメチルセルロースで複合体化されたポリイノシン−ポリシチジル酸とインターロイキン２の組み合わせ：臨床的および免疫学的効果」，Ｃａｎｓ．Ｒｅｓ．５２：３００５）。このマウスＮＫの活性化は、ＩＦＮ β分泌の誘導のみに起因し得るようである（Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｒ．，および Ｃ．Ａ．Ｂｉｒｏｎ，１９９３，「ＩＦＮ誘導およびそれに関連する脾臓白血球分布における変化」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：３７１３）。デオキシリボースは有効ではなかったので、この活性化はリボース糖に特異的であった。インビトロにおけるその強力な抗腫瘍活性により、（ＲＮＡｓｅによる分解を減少させるために）ポリ−Ｌ−リジンおよびカルボキシメチルセルロースで複合体化されたポリ（Ｉ，Ｃ）を用いるいくつかの臨床的試験がなされている（Ｔａｌｍａｄｇｅ，Ｊ．Ｅ．ら，１９８５，前述；Ｗｉｌｔｒｏｕｔ，Ｒ．Ｈ．ら，１９８５，前述；Ｋｒｏｗｎ，Ｓ．Ｅ．ら，１９８６，前述；および、Ｅｗｅｌ，Ｃ．Ｈ．ら，１９９２，前述）。不運なことに、毒性の副作用により、ポリ（Ｉ，Ｃ）は有用な治療薬剤になるにはほど遠かった。
【０００４】
Ｃ８位が臭素またはチオール基で置換されたグアニンリボヌクレオチドはＢ細胞マイトジェンであり、「Ｂ細胞分化因子」を置換し得る（Ｆｅｌｄｂｕｓｈ，Ｔ．Ｌ．，およびＺ．Ｋ．Ｂａｌｌａｓ，１９８５，「８−メルカプトグアノシンのリンホカイン様活性：ＴおよびＢ細胞分化の誘導」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：３２０４；ならびに、Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｍ．Ｇ．，１９８６，「体液性免疫におけるＴ細胞シグナルとＣ８置換グアニンヌクレオシドとの間の共働作用のメカニズム：Ｂリンパ球性（Ｂ ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ）サイトカインは、８−メルカプトグアノシンに対する応答性を誘導する」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：３３３５）。８−メルカプトグアノシンおよび８−ブロモグアノシンはまた、ＭＨＣ拘束性ＣＴＬの生成に必要とされるサイトカインの代替物となり得（Ｆｅｌｄｂｕｓｈ，Ｔ．Ｌ．，１９８５，前述）、マウスＮＫ活性を増大させ得（Ｋｏｏ，Ｇ．Ｃ．，Ｍ．Ｅ．Ｊｅｗｅｌｌ，Ｃ．Ｌ．Ｍａｎｙａｋ，Ｎ．Ｈ．Ｓｉｇａｌ，およびＬ．Ｓ．Ｗｉｃｋｅｒ，１９８８，「８−ブロモグアノシンによるマウスナチュラルキラー細胞およびマクロファージの活性化」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３２４９）、そして、マウスＬＡＫ生成の誘導においてＩＬ−２と共働作用し得る（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ａ．，およびＺ．Ｋ．Ｂａｌｌａｓ，１９９０，リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞。Ｖ。ＬＡＫ生成におけるＩＬ−２節約剤としての８−メルカプトグアノシン」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：３５２４）。これらのＣ８置換グアノシンのＮＫおよびＬＡＫ増大活性は、それらのＩＦＮの誘導に起因するようである（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ａ．ら，１９９０，前述）。最近、マイコバクテリウムにより産生された５’三リン酸化チミジンが、ヒトγδＴ細胞のサブセットに対してマイトジェン性であることが見いだされた（Ｃｏｎｓｔａｎｔ，Ｐ．，Ｆ．Ｄａｖｏｄｅａｕ，Ｍ．−Ａ．Ｐｅｙｒａｔ，Ｙ．Ｐｏｑｕｅｔ，Ｇ．Ｐｕｚｏ，Ｍ．Ｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ，およびＪ．−Ｊ．Ｆｏｕｒｎｉｅ，１９９４，「非ペプチド性マイコバクテリウムリガンドによるヒトγδＴ細胞の刺激」，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：２６７）。この報告は、免疫系が微生物の核酸に優先的に応答する経路を展開し得ることを示した。
【０００５】
いくつかの観察により、ある種のＤＮＡ構造もまたリンパ球を活性化する潜在性を有し得ることが示唆されている。例えば、Ｂｅｌｌらは、脾臓細胞上清中のヌクレオソームタンパク質−ＤＮＡ複合体（裸のＤＮＡではない）がＢ細胞増殖および免疫グロブリン分泌を引き起こしたことを報告した（Ｂｅｌｌ，Ｄ．Ａ．，Ｂ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，およびＰ．ＶａｎｄｅｎＢｙｇａａｒｔ，１９９０，「免疫原性ＤＮＡ関連因子」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８５：１４８７）。他の場合においては、裸のＤＮＡが免疫効果を有することが報告されている。例えば、最近、Ｍｅｓｓｉｎａらは、ポリ（ｄＧ）・（ｄＣ）およびポリ（ｄＧ・ｄＣ）の２６０〜８００ｂｐのフラグメントが、Ｂ細胞に対してマイトジェン性であることを報告した（Ｍｅｓｓｉｎａ，Ｊ．Ｐ．，Ｇ．Ｓ．Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，およびＤ．Ｓ．Ｐｉｓｅｔｓｋｙ，１９９３，「天然および合成ポリヌクレオチド抗原によるマウスリンパ球のインビトロでの刺激に対するＤＮＡ構造の影響」，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１４８）。Ｔｏｋｕｎａｇａらは、ｄＧ・ｄＣがγ−ＩＦＮおよびＮＫ活性を誘導することを報告した（Ｔｏｋｕｎａｇａ，Ｓ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，およびＫ．Ｎａｍｂａ，１９８８，「合成一本鎖ＤＮＡ、ポリ（ｄＧ・ｄＣ）はインターフェロン−α／βおよび−γを誘導し、ナチュラルキラー活性を増大させ、そして腫瘍成長を抑制する」，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７９：６８２）。このような人工的なホモポリマー配列に加えて、Ｐｉｓｅｔｓｋｙらは、純粋な哺乳動物ＤＮＡは検出可能な免疫効果を有さないが、ある種の細菌由来のＤＮＡがＢ細胞活性化および免疫グロブリン分泌を誘導することを報告した（Ｍｅｓｓｉｎａ，Ｊ．Ｐ．，Ｇ．Ｓ．Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，およびＤ．Ｓ．Ｐｉｓｅｔｓｋｙ，１９９１，「細菌ＤＮＡによるマウスリンパ球のインビトロでの増殖の刺激」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１７５９）。これらのデータがある種の通常でない混入物によるものでないとすれば、これらの研究は、細菌ＤＮＡの特定の構造または他の特性が、細菌ＤＮＡを、Ｂ細胞活性化をトリガーし得るようにしていることを示唆している。マイコバクテリウムＤＮＡ配列の研究により、ある種のパリンドローム配列を含むＯＤＮがＮＫ細胞を活性化し得ることが示された（Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｓ．，Ｔ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｔ．Ｋａｔａｏｋａ，Ｅ．Ｋｕｒａｍｏｔｏ，Ｏ．Ｙａｎｏ，およびＴ．Ｔｏｋｕｎａｇａ，１９９２，「合成オリゴヌクレオチドにおける独特のパリンドローム配列が、ＩＮＦを誘導するために、およびＩＮＦ媒介ナチュラルキラー活性を増大させるために必要とされる」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：４０７２；Ｋｕｒａｍｏｔｏ，Ｅ．，Ｏ．Ｙａｎｏ，Ｙ．Ｋｉｍｕｒａ，Ｍ．Ｂａｂａ，Ｔ．Ｍａｋｉｎｏ，Ｓ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｔ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｔ．Ｋａｔａｏｋａ，およびＴ．Ｔｏｋｕｎａｇａ，１９９２，「ナチュラルキラー細胞の活性化に必要とされるオリゴヌクレオチド配列」，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．８３：１１２８、および欧州特許出願、公開番号０ ４６８ ５２０号）。
【０００６】
いくつかのホスホロチオエート修飾ＯＤＮが、インビトロまたはインビボでのＢ細胞刺激を誘導することが報告されている（Ｔａｎａｋａ，Ｔ．，Ｃ．Ｃ．Ｃｈｕ，およびＷ．Ｅ．Ｐａｕｌ，１９９２，「Ｉγ２ｂ中の配列に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドが、γ２ｂ生殖系列転写物を増加させ、Ｂ細胞ＤＮＡ合成を刺激し、そして免疫グロブリン分泌を阻害する」， Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：５９７；Ｂｒａｎｄａ，Ｒ．Ｆ．，Ａ．Ｌ．Ｍｏｏｒｅ，Ｌ．Ｍａｔｈｅｗｓ，Ｊ．Ｊ．ＭｃＣｏｒｍａｃｋ，およびＧ．Ｚｏｎ，１９９３，「ＨＩＶ−１のｒｅｖ遺伝子に相補的なアンチセンスオリゴマーによる免疫刺激」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４５：２０３７；ＭｃＩｎｔｙｒｅ，Ｋ．Ｗ．，Ｋ．Ｌｏｍｂａｒｄ−Ｇｉｌｌｏｏｌｙ，Ｊ．Ｒ．Ｐｅｒｅｚ，Ｃ．Ｋｕｎｓｃｈ，Ｕ．Ｍ．Ｓａｒｍｉｅｎｔｏ，Ｊ．Ｄ．Ｌａｒｉｇａｎ，Ｋ．Ｔ．Ｌａｎｄｒｅｔｈ，およびＲ．Ｎａｒａｙａｎａｎ，１９９３，「転写因子ＮＦ−κβＴ６５の開始コドンに対するセンスホスホロチオエートオリゴヌクレオチドが、配列特異的な免疫刺激を引き起こす」，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３：３０９；ならびに、Ｐｉｓｅｔｓｋｙ，Ｄ．Ｓ．，およびＣ．Ｆ．Ｒｅｉｃｈ，１９９３，「単純ヘルペスウィルスに対するアンチセンス活性を有するホスホロチオエートオリゴヌクレオチドによるマウスリンパ球増殖の刺激」，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ５４：１０１）。これらの報告は、これらのＯＤＮの効果を説明し得るこれらのＯＤＮにおける共通の構造的モチーフも共通の配列エレメントも示唆しない。
（転写因子のＣＲＥＢ／ＡＴＦファミリーおよび複製におけるそれらの役割）
ｃＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）および活性化転写因子（ＡＴＦ）、すなわち転写因子のＣＲＥＢ／ＡＴＦファミリーは、偏在して発現する転写因子のクラスであり、そのうちの１１のメンバーが今までのところクローン化されている（ｄｅ Ｇｒｏｏｔ，Ｒ．Ｐ．，およびＰ．Ｓａｓｓｏｎｅ−Ｃｏｒｓｉ，「遺伝子発現のホルモンによる制御：環状アデノシン３’，５’−モノホスフェート−応答性核レギュレーターの多様性および多変性」，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．７：１４５，１９９３；Ｌｅｅ．Ｋ．Ａ．Ｗ．，およびＮ．Ｍａｓｓｏｎ，「ＣＲＥＢおよびその関連物質による転写調節」，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１７４：２２１，１９９３）。これらはすべて、塩基性領域／ロイシンジッパー（ｂＺｉｐ）クラスのタンパク質に属する。すべての細胞は１つ以上のＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質を発現するようであるが、発現されるメンバーおよびｍＲＮＡスプライシングの調節は組織特異的であるようである。活性化ドメインのディファレンシャルなスプライシングが、特定のＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質が転写インヒビターであるかアクチベーターであるかを決定し得る。多くのＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質がウィルス性転写を活性化し得るが、活性ドメインを有さないいくつかのスプライシング変異体は阻害性である。ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質は、ｃＡＭＰ応答エレメント（ＣＲＥ）を介してホモダイマーまたはヘテロダイマーとしてＤＮＡを結合し得る。ＣＲＥのコンセンサス形態は、非メチル化配列ＴＧＡＣＧＴＣである（ＣｐＧがメチル化されている場合には、結合がなくされる）（Ｉｇｕｃｈｉ−Ａｒｉｇａ，Ｓ．Ｍ．Ｍ．，およびＷ．Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ，「ｃＡＭＰ応答性エンハンサー／プロモーター配列ＴＧＡＣＧＴＣＡのＣｐＧのメチル化が、特定の因子の結合および転写活性化をなくさせる」，Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐ．３：６１２，１９８９）。
【０００７】
ＣＲＥの転写活性は、Ｂ細胞活性化の間に増加する（Ｘｉｅ，Ｈ．Ｔ．Ｃ．Ｃｈｉｌｅｓ，およびＴ．Ｌ．Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ，「Ｂ細胞の表面Ｉｇレセプターを介したＣＲＥＢ活性の誘導」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：８８０，１９９３）。ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質は、ＣＲＥを介して複数の遺伝子（免疫学的に重要な遺伝子を含む）の発現を調節するようである。このような遺伝子としては、例えば、以下が挙げられる：ｆｏｓ、ｊｕｎ Ｂ、Ｒｂ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１（Ｔｓｕｋａｄａ，Ｊ．，Ｋ．Ｓａｉｔｏ，Ｗ．Ｒ．Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａ．Ｃ．Ｗｅｂｂ，およびＰ．Ｅ．Ａｕｒｏｎ，「転写因子ＮＦ−ＩＬ６およびＣＲＥＢは、ヒトプロインターロイキン１β遺伝子における共通の必須部位を認識する」，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：７２８５，１９９４；Ｇｒａｙ，Ｇ．Ｄ．，Ｏ．Ｍ．Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｄ．Ｈｅｂｅｌ，Ｍ．Ｒｏｏｔ，Ｊ．Ｍ．Ｐｏｗ−Ｓａｎｇ，およびＥ．Ｗｉｃｋｓｔｒｏｍ，「ヌードマウスにおいてｃ−Ｈａ−ｒａｓオンコジーンにより誘導される腫瘍成長のアンチセンスＤＮＡ阻害」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：５７７，１９９３）、ＩＦＮ−β（Ｄｕ，Ｗ．，およびＴ．Ｍａｎｉａｔｉｓ「ＡＴＦ／ＣＲＥＢ結合部位タンパク質が、ヒトインターフェロンＢ遺伝子のウィルス誘導に必要とされる」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：２１５０，１９９２）、ＴＧＦ−β１（Ａｓｉｅｄｕ，Ｃ．Ｋ．，Ｌ．Ｓｃｏｔｔ，Ｒ．Ｋ．Ａｓｓｏｉａｎ，およびＭ．Ｅｈｒｌｉｃｈ，「ヒトＴＧＦ−Ｂ１遺伝子下流の連続性部位へのＡＰ−１／ＣＲＥＢタンパク質およびＭＤＢＰの結合」，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １２１９：５５，１９９４）、ＴＧＦ−β２、クラスＩＩ ＭＨＣ（Ｃｏｘ，Ｐ．Ｍ．，およびＣ．Ｒ．Ｇｏｄｉｎｇ，「ＡＴＦ／ＣＲＥＢ結合モチーフが、ＭＨＣクラスＩＩ ＤＲａプロモーターの異常構成性発現およびＳＶ−４０ Ｔ−抗原による活性化に必要とされる」，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：４８８１，１９９２），Ｅ−セレクチン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＤ−８α、生殖系列Ｉｇα定常領域遺伝子、ＴＣＲ Ｖβ遺伝子、および増殖細胞核抗原（Ｈｕａｎｇ，Ｄ．，Ｐ．Ｍ．Ｓｈｉｐｍａｎ−Ａｐｐａｓａｍｙ，Ｄ．Ｊ．Ｏｒｔｅｎ，Ｓ．Ｈ．Ｈｉｎｒｉｃｈｓ，およびＭ．Ｂ．Ｐｒｙｓｔｏｗｓｋｙ，「増殖細胞核抗原遺伝子のプロモーター活性は、インターロイキン２−刺激Ｔリンパ球の誘導性ＣＲＥ−結合タンパク質に関連する」，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：４２３３，１９９４）。ｃＡＭＰ経路を介した活性化に加えて、ＣＲＥＢはまた、細胞内Ｃａ＋＋濃度の変化に対する転写応答を媒介し得る（Ｓｈｅｎｇ，Ｍ．，Ｇ．ＭｃＦａｄｄｅｎ，およびＭ．Ｅ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，「膜の非極性化およびカルシウムが転写因子ＣＲＥＢのリン酸化を介するｃ−ｆｏｓ転写を誘導する」，Ｎｅｕｒｏｎ ４：５７１，１９９０）。
【０００８】
ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質による転写活性化におけるタンパク質−タンパク質相互作用の役割は、きわめて重要なようである。サイクリックＡＭＰ経路を介したＣＲＥＢの活性化は、プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）（これは、ＣＲＥＢ３４１をｓｅｒ１３３でリン酸化し、これを最近クローン化されたタンパク質ＣＢＰに結合させる）を必要とする（Ｋｗｏｋ，Ｒ．Ｐ．Ｓ．，Ｊ．Ｒ．Ｌｕｎｄｂｌａｄ，Ｊ．Ｃ．Ｃｈｒｉｖｉａ，Ｊ．Ｐ．Ｒｉｃｈａｒｄｓ，Ｈ．Ｐ．Ｂａｃｈｉｎｇｅｒ，Ｒ．Ｇ．Ｂｒｅｎｎａｎ，Ｓ．Ｇ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｍ．Ｒ．Ｇｒｅｅｎ，およびＲ．Ｈ．Ｇｏｏｄｍａｎ，「核タンパク質ＣＢＰは、転写因子ＣＲＥＢのコアクチベーターである」，Ｎａｔｕｒｅ，３７０：２２３，１９９４；Ａｒｉａｓ，Ｊ．，Ａ．Ｓ．Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｐ．Ｂｒｉｎｄｌｅ，Ｆ．Ｘ．Ｃｌａｒｅｔ，Ｔ．Ｓｍｅａ，Ｍ．Ｋａｒｉｎ，Ｊ．Ｆｅｒａｍｉｓｃｏ，およびＭ．Ｍｏｎｔｍｉｎｙ，「ｃＡＭＰおよびマイトジェン応答性遺伝子の活性化は、共通の核因子に依存する」，Ｎａｔｕｒｅ，３７０：２２６，１９９４）。ＣＢＰは、次いで、基礎的な転写因子であるＴＦＩＩＢと相互作用して転写を増大させる。ＣＲＥＢはまた、ｄＴＡＦＩＩ １１０、ＴＡＴＡ結合タンパク質会合因子（この結合が転写を調節し得る）と相互作用することが報告されている（Ｆｅｒｒｅｒｉ，Ｋ．，Ｇ．Ｇｉｌｌ，およびＭ．Ｍｏｎｔｍｉｎｙ，「ｃＡＭＰ調節転写因子ＣＲＥＢは、ＴＦＩＩＤ複合体の要素と相互作用する」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１２１０，１９９４）。これらの相互作用に加えて、ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質は、他の複数の核因子と特異的に結合し得る（Ｈｏｅｆｆｌｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｊ．Ｗ．Ｌｕｓｔｂａｄｅｒ，およびＣ．−Ｙ．Ｃｈｅｎ，「タンパク質−タンパク質相互作用により、環状アデノシン３’，５’−モノホスフェート応答エレメント結合タンパク質および活性化転写因子−２と相互作用する複数の核因子の同定」，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．５：２５６，１９９１）。しかし、これらの相互作用の大部分についての生物学的意義は知られていない。ＣＲＥＢは、通常、ホモダイマーまたはいくつかの他のタンパク質とのヘテロダイマーのいずれかとしてＤＮＡと結合すると考えられている。驚くべきことに、ＣＲＥＢモノマーは、構成的に転写を活性化する（Ｋｒａｊｅｗｓｋｉ，Ｗ．，およびＫ．Ａ．Ｗ．Ｌｅｅ，「細胞性転写因子ＣＲＥＢのモノマー誘導体は、構成性アクチベーターとして機能する」，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：７２０４，１９９４）。
【０００９】
細胞性転写の調節における重要な役割のほかに、ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質がいくつかの感染性ウィルスおよびレトロウィルス（これらはウィルス性複製にＣＲＥＢ／ＡＴＰタンパク質を必要とする）によりくつがえされることが最近示されている。例えば、サイトメガロウィルス即時プロモーター（哺乳動物の最も強力な既知のプロモーターの１つ）は、プロモーター機能に必須である１１コピーのＣＲＥを含む（Ｃｈａｎｇ，Ｙ．−Ｎ．，Ｓ．Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｊ．Ｓｔａｌｌ，Ｄ．Ｒ．Ｒａｗｌｉｎｓ，Ｋ．−Ｔ．Ｊｅａｎｇ，およびＧ．Ｓ．Ｈａｙｗａｒｄ，「シミアンサイトメガロウィルス主要即時プロモーターにおけるパリンドロームシリーズＩ反復は、強力な基礎的エンハンサーおよびサイクリックＡＭＰ応答エレメントの両方として機能する」，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：２６４，１９９０）。アデノウィルスＥ１Ａタンパク質（これは多くのプロモーターを誘導する）の転写活性化効果のうちの少なくともいくつかは、ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質、ＡＴＦ−２（これは、Ｅ１Ａ誘導性転写活性化を媒介する）のＤＮＡ結合ドメインへの結合に起因する（Ｌｉｕ，Ｆ．，およびＭ．Ｒ．Ｇｒｅｅｎ，「異なる細胞性ＤＮＡ結合ドメインとの相互作用を介したアデノウィルスＥ１ａによるプロモーター標的化」，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：５２０，１９９４）。Ｅ１ＡがＣＲＥＢ結合タンパク質ＣＢＰに結合することも示唆されている（Ａｒａｎｙ，Ｚ．，Ｗ．Ｒ．Ｓｅｌｌｅｒｓ，Ｄ．Ｍ．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，およびＲ．Ｅｃｋｎｅｒ，「Ｅ１Ａ会合ｐ３００およびＣＲＥＢ会合ＣＢＰは、コアクチベーターの保存ファミリーに属する」，Ｃｅｌｌ ７７：７９９，１９９４）。ヒトＴ細胞白血病および熱帯痙性麻痺を引き起こすレトロウィルスであるヒトＴリンパ球性ウィルス−Ｉ（ＨＴＬＶ−Ｉ）もまた、複製にＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質を必要とする。この場合には、レトロウィルスはタンパク質Ｔａｘを産生する。Ｔａｘは、ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質に結合し、これらをその通常の細胞性結合部位からＨＴＬＶ転写エンハンサー内に存在する異なるＤＮＡ配列（Ｇ−およびＣ− リッチ配列に隣接する）へと再方向付けする（Ｐａｃａ−Ｕｃｃａｒａｌｅｒｔｋｕｎ，Ｓ．，Ｌ．−Ｊ．Ｚｈａｏ，Ｎ．Ａｄｙａ，Ｊ．Ｖ．Ｃｒｏｓｓ，Ｂ．Ｒ．Ｃｕｌｌｅｎ，Ｉ．Ｍ．Ｂｏｒｏｓ，およびＣ．−Ｚ．Ｇｉａｍ，「ヒトＴ細胞リンパ球性ウィルスＩ型転写アクチベーターＴａｘに対して高度に応答性のＤＮＡエレメントのインビトロでの選択」，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：４５６，１９９４；Ａｄｙａ，Ｎ．，Ｌ．−Ｊ．Ｚｈａｏ，Ｗ．Ｈｕａｎｇ，Ｉ．Ｂｏｒｏｓ，およびＣ．−Ｚ．Ｇｌａｍ，「ＴａｘによるＣＲＥＢのＤＮＡ認識特異性の拡大は、ＣＲＥＢの保存ＤＮＡ結合ドメイン近傍の２８２〜２８４位のＡｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇとの相互作用から生じる」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：５６４２，１９９４）。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明が解決しようとする課題は、新規な免疫刺激オリゴヌクレオチド組成物、このオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性に基づく有用な方法、中性オリゴヌクレオチド、中性オリゴヌクレオチドを用いる有用な方法、および免疫阻害オリゴヌクレオチド、免疫阻害オリゴヌクレオチドの種々の使用を提供することである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明は、式Ｉ：５’ Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４ ３’に従う少なくとも１つの核酸配列を含む、免疫刺激オリゴヌクレオチドであり：
ここで、ＣＧは、オリゴヌクレオチドに免疫刺激能力を付与する非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドであり；Ｘ１およびＸ２の少なくとも１つはプリンであり；そして、Ｘ３およびＸ４の少なくとも１つはピリミジンである。
【００１２】
好適な実施形態では、上記式Ｉがパリンドロームではない。
【００１３】
さらに好適な実施形態では、Ｘ１がプリンヌクレオチドである。
【００１４】
さらに好適な実施形態では、Ｘ４がピリミジンヌクレオチドである。
【００１５】
さらに好適な実施形態では、Ｘ１の５’側にさらにチミジンヌクレオチドを含む。
【００１６】
さらに好適な実施形態では、上記式Ｉのヌクレオチド配列が、５’ ＧＡＣＧＴＴ ３’、５’ ＡＧＣＧＴＴ ３’、５’ ＡＡＣＧＣＴ ３’、５’ ＣＴＣＧＡＣ ３’、５’ ＧＴＣＧＧＴ ３’、５’ ＧＡＣＧＴＴ ３’、５’ ＴＴＣＧＡＴ ３’、５’ ＡＡＣＧＡＴ ３’および５’ ＡＴＣＧＡＣ３’からなる群から選択される。
【００１７】
さらに好適な実施形態では、上記式Ｉの配列を含む上記オリゴヌクレオチドの５’末端および３’末端のヌクレオチド配列がポリＧヌクレオチドである。
【００１８】
さらに好適な実施形態では、１つ以上のホスフェート骨格修飾を有する。
【００１９】
さらに好適な実施形態では、上記１つ以上のホスフェート骨格修飾が、ホスホロチオエート修飾である。
【００２０】
さらに好適な実施形態では、約６〜約１００のヌクレオチドを含む。
【００２１】
さらに好適な実施形態では、約６〜約４０のヌクレオチドを含む。
【００２２】
さらに好適な実施形態では、上記オリゴヌクレオチドと標的化手段とを有する。
【００２３】
さらに好適な実施形態では、上記標的化手段が、コレステロール、ビロソーム、リポソーム、脂質および標的細胞特異的結合因子からなる群から選択される。
【００２４】
本発明はまた、免疫系不全にかかっているかまたはかかりやすいヒトを含む動物の予防または処置のための薬品を製造するための、上記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体の使用である。
【００２５】
好適な実施形態では、上記免疫系不全が、ウィルス、細菌、真菌または寄生体の感染によって引き起こされる。
【００２６】
本発明はまた、ガンにかかっているヒトを含む動物の処置のための薬品を製造するための、上記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体の使用である。
【００２７】
本発明はまた、ワクチンに対する動物の免疫応答を増大させるためにワクチン投与前またはワクチン投与と同時にヒトを含む動物に投与するためのアジュバントを調製するための、上記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体の使用である。
【００２８】
本発明はまた、免疫系の活性化に関連する疾病にかかりやすいヒトを含む動物の予防のための薬品を製造するための、上記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体の使用である。
【００２９】
好適な実施形態では、上記免疫系の活性化に関連する疾病が、自己免疫疾患である。
【００３０】
さらに好適な実施形態では、上記免疫系の活性化が、細菌、真菌または寄生体の感染によって引き起こされる。
【００３１】
本発明はまた、上記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的処方物である。
【００３２】
好適な実施形態では、別の治療剤をさらに含む。
【００３３】
本発明はまた、少なくとも１つのメチル化ＣＧジヌクレオチドを含む免疫中性オリゴヌクレオチドと、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的処方物である。
【００３４】
本発明はまた、ヒトを含む動物の免疫系の活性化に関連する疾病の予防または処置のための薬品を調製するための、上記免疫中性オリゴヌクレオチドの使用である。
【００３５】
好適な実施形態では、上記疾病が全身性紅斑性狼瘡である。
【００３６】
好適な実施形態では、上記疾病が敗血症である。
【００３７】
好適な実施形態では、上記メチル化ＣＧジヌクレオチドが、５−メチルシトシンである。
【００３８】
【発明の実施の形態】
本発明は、非メチル化シトシン−グアニン（ＣｐＧ）ジヌクレオチドを含むある種のオリゴヌクレオチドがインビトロおよびインビボデータにより示されるようにリンパ球を活性化するという知見に基づいている。この知見に基づいて、本発明は、１つの局面においては、新規な免疫刺激オリゴヌクレオチド組成物を特徴とする。
【００３９】
好ましい実施態様においては、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、合成物であり、２〜１００塩基対のサイズであり、そして以下の式で表されるコンセンサスマイトジェン性ＣｐＧモチーフを含む：
５’ Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４ ３’
ここで、ＣおよびＧは、非メチル化であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４はヌクレオチドであり；そしてＧＣＧトリヌクレオチド配列は、５’および３’末端にもその近傍にも存在しない。
【００４０】
細胞への取り込みを促進するためには、ＣｐＧ含有免疫刺激オリゴヌクレオチドは、好ましくは８〜４０塩基対のサイズの範囲である。安定化されたオリゴヌクレオチド（特に、ホスホチオエート安定化オリゴヌクレオチド）を用いて、長期の免疫刺激が得られ得る。Ｘ１Ｘ２がジヌクレオチドＧｐＡおよび／またはＸ３Ｘ４がジヌクレオチド（最も好ましくはＴｐＣまたはＴｐＴ）である場合に、免疫刺激活性の増大が確認された。コンセンサスモチーフＸ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４が５’末端でＴにより先行される場合に、免疫刺激活性のさらなる増大が確認される。
【００４１】
第２の局面においては、本発明は、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性に基づく有用な方法を特徴とする。例えば、リンパ球が被験体から得られ得、そして適切なオリゴヌクレオチドとの接触に際してエクスビボで刺激され得るか；または、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドが被験体に投与され得、被験体のリンパ球のインビボでの活性化を促進し得る。本明細書に記載の方法で（例えば、エクスビボまたはインビボのいずれかで）刺激された、活性化されたリンパ球は、被験体の免疫応答を増強し得る。従って、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、免疫系不全（例えば、被験体の腫瘍またはガン、あるいは、ウィルス、真菌、細菌または寄生体による感染症）を処置し、防止し、または改善するために使用され得る。さらに、免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、ワクチンアジュバントとしても投与され得、被験体のワクチンに対する応答を刺激し得る。さらに、免疫刺激細胞が白血病性細胞を細胞周期に入るように誘導する能力を有するので、慢性白血病細胞の感受性を増大させた後、通常の除去化学療法（ａｂｌａｔｉｖｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）を施すことにより白血病を処置するための有用性が示唆される。
【００４２】
第３の局面においては、本発明は、中性オリゴヌクレオチド（すなわち、非メチル化ＣｐＧを含まないか、メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド）を特徴とする。好ましい実施態様においては、中和オリゴヌクレオチドは免疫刺激配列に相補的であるが、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド配列の代わりにメチル化ＣｐＧジヌクレオチド配列を含み、従って、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドとの結合を完成し得る。好ましい実施態様においては、メチル化は、シトシンの６員環を含む４つの炭素および２つの窒素のうちの１つ以上で起こり、あるいは、グアニンの９員二重環を含む５つの炭素および４つの窒素のうちの１つ以上で起こる。好ましいメチル化ＣｐＧは、５’−メチルシトシンである。
【００４３】
第４の局面においては、本発明は、中性オリゴヌクレオチドを用いる有用な方法を特徴とする。例えば、中性オリゴヌクレオチドのインビボでの投与が、被験体における非メチル化ＣｐＧ２量体の存在により引き起こされるかまたは悪化させる疾病（例えば、全身性紅斑性狼瘡、敗血症および自己免疫疾患）の処置に有用であると判明するはずである。さらに、メチル化ＣｐＧ含有アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドプローブは、インビボでの被験体への投与時に免疫反応を開始させない。従って、これらは、対応する非メチル化オリゴヌクレオチドよりも安全である。
【００４４】
第５の局面においては、本発明は、免疫阻害オリゴヌクレオチド（これは、ウィルス性または細胞性転写因子の活性を妨害し得る）を特徴とする。好ましい実施態様においては、免疫阻害オリゴヌクレオチドは、２〜１００塩基対のサイズの間であり、そして以下の式で表されるコンセンサス免疫阻害ＣｐＧモチーフを含む：
５’ ＧＣＧＸｎＧＣＧ ３’
ここで、Ｘはヌクレオチドであり；ｎは０〜５０の範囲である。好ましい実施態様においては、Ｘはピリミジンである。
【００４５】
細胞への取り込みを促進するためには、免疫阻害オリゴヌクレオチドは、好ましくは８〜４０塩基対のサイズの範囲である。安定化されたオリゴヌクレオチド（特に、ホスホチオエート安定化オリゴヌクレオチド）を用いて、長期の生物学的効果が得られ得る。
【００４６】
第６かつ最後の局面においては、本発明は、免疫阻害オリゴヌクレオチドの種々の使用を特徴とする。免疫阻害オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドと標的とされるウィルス性配列との間の相補性に起因するいかなるアンチセンス効果とも無関係に、抗ウィルス活性を有する。
【００４７】
本発明の他の利点および特徴は、以下の詳細な説明および添付の特許請求の範囲からより明らかになるであろう。
（発明の詳細な説明）
（定義）
本明細書において用いられるように、以下の用語および表現は下記の意味を有する：
「オリゴヌクレオチド」または「オリゴ」は、複数のヌクレオチド（すなわち、ホスフェート基および置換可能な有機塩基（置換ピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ））あるいは置換プリン（例えば、アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ））のいずれかである）に結合した糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）を含む分子）を意味する。本明細書において用いられるように、用語「オリゴヌクレオチド」は、オリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）およびオリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）の両方を意味する。用語「オリゴヌクレオチド」はまた、オリゴヌクレオシド（すなわち、ホスフェートを含まないオリゴヌクレオチド）および任意の他の有機塩基含有ポリマーを包含する。オリゴヌクレオチドは、既存の核酸源（例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡ）から得られ得るが、好ましくは合成である（例えば、オリゴヌクレオチド合成により産生される）。
【００４８】
「安定化されたオリゴヌクレオチド」は、インビボでの分解（例えば、エクソまたはエンドヌクレアーゼによる分解）に比較的耐性であるオリゴヌクレオチドを意味する。本発明の好ましい安定化されたオリゴヌクレオチドは、修飾ホスフェート骨格を有する。特に好ましいオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート修飾ホスフェート骨格（すなわち、ホスフェート酸素の少なくとも１つがイオウで置換された構造）を有する。他の安定化されたオリゴヌクレオチドは、非イオン性ＤＮＡアナログ（例えば、アルキル−およびアリール−ホスホネート（荷電ホスホネート酸素が、アルキルまたはアリール基で置換される）、ホスホジエステルおよびアルキルホスホトリエステル（荷電酸素部分がアルキル化される））を包含する。いずれか一方または両方の末端にジオール（例えば、テトラエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコール）を含むオリゴヌクレオチドもまた、ヌクレアーゼ分解に対して実質的に耐性であることが示されている。
【００４９】
「免疫刺激オリゴヌクレオチド」、「免疫刺激ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド」または「ＣｐＧ ＯＤＮ」は、シトシン、グアニンジヌクレオチド配列を含み、そして脊椎動物リンパ球を刺激する（例えば、マイトジェン効果を有する）オリゴヌクレオチドを意味する。好ましい免疫刺激オリゴヌクレオチドは、２〜１００塩基対のサイズであり、そして以下の式で表されるコンセンサスマイトジェン性ＣｐＧモチーフを含む：
５’ Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４ ３’
ここで、ＣおよびＧは、非メチル化であり；Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４はヌクレオチドであり；そしてＧＣＧトリヌクレオチド配列は、５’および３’末端にもその近傍にも存在しない。
好ましくは免疫刺激オリゴヌクレオチドは８〜４０塩基対のサイズの範囲である。さらに、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、好ましくは安定化されたオリゴヌクレオチドであり、特に好ましくはホスホロチオエートで安定化されたオリゴヌクレオチドである。好ましい１つの実施態様においては、Ｘ１Ｘ２はジヌクレオチドＧｐＡである。好ましい別の実施態様においては、Ｘ３Ｘ４は、好ましくはジヌクレオチドＴｐＣまたはＴｐＴである。特に好ましい実施態様においては、コンセンサスモチーフＸ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４は５’末端においてＴにより先行される。特に好ましいコンセンサス配列は、ＴＧＡＣＧＴＴまたはＴＧＡＣＧＴＣである。
【００５０】
「中性オリゴヌクレオチド」は、非メチル化ＣｐＧを含まないオリゴヌクレオチド、またはメチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを意味する。好ましい実施態様においては、中和オリゴヌクレオチドは免疫刺激配列に相補的であるが、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド配列の代わりにメチル化ＣｐＧジヌクレオチド配列を含み、従って、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドとの結合を完成し得る。好ましい実施態様においては、メチル化は、シトシンの６員環を含む４つの炭素および２つの窒素のうちの１つ以上で起こり、あるいは、グアニンの９員二重環を含む５つの炭素および４つの窒素のうちの１つ以上で起こる。好ましいメチル化ＣｐＧは、５’−メチルシトシンである。
【００５１】
「免疫阻害オリゴヌクレオチド」または「免疫阻害ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド」は、ウィルス性または細胞性転写因子の活性を妨害し得るオリゴヌクレオチドである（明細書１０頁（英文明細書８頁）の発明の要旨に支持されている）。好ましい免疫阻害オリゴヌクレオチドは、２〜１００塩基対のサイズの間であり、そして以下の式で表され得る：
５’ ＧＣＧＸｎＧＣＧ ３’
ここで、Ｘはヌクレオチドであり；ｎは０〜５０の範囲である。好ましい実施態様においては、Ｘはピリミジンである。
【００５２】
細胞への取り込みを促進するためには、免疫阻害オリゴヌクレオチドは、好ましくは８〜４０塩基対のサイズの範囲である。安定化されたオリゴヌクレオチド（特に、ホスホロチオエート安定化オリゴヌクレオチド）を用いて、長期の免疫刺激が得られ得る。
【００５３】
「パリンドローム配列」は、逆方向反復（すなわち、ＡＢＣＤＥＥ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’のような配列、ここでＡおよびＡ’は、通常のＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成し得る塩基である）を意味する。インビボにおいては、このような配列は、二本鎖構造を形成し得る。
【００５４】
「オリゴヌクレオチド送達複合体」は、標的手段に結合した（例えば、標的手段にイオン的にまたは共有結合的に結合した；あるいは標的手段内にカプセル化された）オリゴヌクレオチドを意味する。標的手段は、例えば、標的細胞（例えば、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）表面との高親和性結合を生じる、および／または標的細胞による細胞性取り込みを増加させる分子である。オリゴヌクレオチド送達複合体の例としては、以下のものに結合したオリゴヌクレオチドが挙げられる：ステロール（例えば、コレステロール）、脂質（例えば、カチオン性脂質、ビロソームまたはリポソーム）、または標的細胞特異的結合因子（例えば、標的細胞特異性レセプターにより認識されるリガンド）。好ましい複合体は、標的細胞によるインターナリゼーション前の有意な非結合を防止するようにインビボで十分に安定でなければならない。しかし、複合体は、オリゴヌクレオチドが機能的形態で放出されるよう、適切な条件下では細胞内で開裂可能でなければならない。
【００５５】
「免疫系不全」は、被験体の免疫系が通常の能力で機能しない疾病または障害を意味する。あるいは、被験体の免疫応答を増強し、例えば、被験体における腫瘍またはガン（例えば、脳、肺（例えば、小細胞および非小細胞）、卵巣、乳房、前立腺、結腸の腫瘍、ならびに他のガン腫および肉腫）、あるいは、ウィルス（例えば、ＨＩＶ、ヘルペス）、真菌（例えば、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．）、細菌または寄生体（例えば、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）による感染症を取り除くことが有用である疾病または障害を意味する。
【００５６】
「免疫系の活性化に関連する疾病」は、被験体の免疫系の活性化により引き起こされるかまたは悪化される疾病または症状を意味する。例としては、全身性紅斑性狼瘡、敗血症および自己免疫疾患（例えば、リューマチ性関節炎、多発性硬化症）が挙げられる。
【００５７】
「被験体」は、ヒトまたは脊椎動物（イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、サル、ラット、マウスなどを包含する）を意味する。
（ある種の非メチル化ＣｐＧ含有オリゴは、インビトロおよびインビボで示されるようにＢ細胞刺激活性を有する）
後述の実施例１および２に記載のプロトコールを用いて内在性レトロウィルス配列に特異的な２つのアンチセンスオリゴヌクレオチドのリンパ球刺激効果を調べると、驚くべきことに、２４の「コントロール」（「アンチセンス」ＯＤＮのパネルについての種々のスクランブル、センスおよびミスマッチコントロールを含む）のうちの２つもまたＢ細胞活性化およびＩｇＭ分泌を媒介するが、他の「コントロール」は効果を有さないことが見いだされた。
【００５８】
２つの観察から、この「コントロール」ＯＤＮによるＢ細胞の活性化は、アンチセンス効果を有し得ないことが示唆された：（１）ＧｅｎＢａｎｋにリストされる脊椎動物ＤＮＡ配列で比較すると、非刺激ＯＤＮで見られるものより大きな相同性を示さなかったこと、および、（２）２つのコントロールは、１０μｇの脾臓ポリＡ＋ＲＮＡを用いるノーザンブロットへのハイブリダイゼーションを示さなかったこと。異なる合成機によるこれらのＯＤＮの再合成またはポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーによる十分な精製により、同一の刺激が得られた。このことは不純物の可能性を排除した。同様の刺激が、Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウス由来のＢ細胞を用いて得られた。このことはリポ多糖（ＬＰＳ）による汚染が原因となり得る可能性を排除した。
【００５９】
２つの「コントロール」ＯＤＮが２つの「アンチセンス」ＯＤＮと同様のＢ細胞活性化を引き起こしたという事実は、他のすべての非刺激コントロールＯＤＮには存在しない配列モチーフを含むある種の非アンチセンスメカニズムによってこれら４つのＯＤＮのすべてがＢ細胞を刺激するという可能性を提起した。これらの配列を比較すると、４つの刺激ＯＤＮはすべて、非刺激コントロールとは配列の異なるＯＤＮジヌクレオチドを含んでいた。
【００６０】
刺激ＯＤＮに存在するＣｐＧ要素が観察された刺激の原因となるかどうかを調べるために、５〜４２塩基の長さの範囲の３００を超えるＯＤＮ（これらは、種々の配列のメチル化、非メチル化、または非ＣｐＧジヌクレオチドを含む）を合成した。２つのもとの「コントロール」（ＯＤＮ１および２）および「アンチセンス」として独自に合成した２つ（ＯＤＮ ３Ｄおよび３Ｍ；Ｋｒｉｅｇ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３：２４４８（１９８９））を含むこれらのＯＤＮを、脾臓細胞に対するインビトロでの効果を調べた（表１に代表的な配列を列挙する）。ＣｐＧジヌクレオチドを含むいくつかのＯＤＮが、Ｂ細胞活性化およびＩｇＭ分泌を誘導した；代表的には、刺激の程度は、ＣｐＧジヌクレオチドをより多く添加することにより増大し得た（表１；ＯＤＮ２を２ａに、または３Ｄを３Ｄａおよび３Ｄｂに比較のこと）。刺激は、アンチセンスメカニズムによるものでも不純物によるものでもないようである。ＯＤＮは、γδまたはその他のＴ細胞集団について検出可能な活性化を引き起こさなかった。
【００６１】
ＣｐＧジヌクレオチドが変異された場合（表１；ＯＤＮ１を１ａに；３Ｄを３Ｄｃに；３Ｍを３Ｍａに；および４を４ａに比較のこと）、または、ＣｐＧジヌクレオチドのシトシンが５−メチルシトシンで置換された場合（表１；ＯＤＮ １ｂ、２ｂ、２ｃ、３Ｄｄ、および３Ｍｂ）には、マイトジェン性ＯＤＮ配列は一様に非刺激性となった。これに対して、他のシトシンがメチル化された場合には、ＯＤＮ活性は減少しなかった（ＯＤＮ １ｃ、２ｄ、３Ｄｅ、および３Ｍｃ）。これらのデータにより、ＣｐＧモチーフが、 Ｂ細胞を活性化する、ＯＤＮに存在する必須エレメントであることが確認された。
【００６２】
これらの研究において、ＣｐＧジヌクレオチドに隣接する塩基が、ＯＤＮに誘導されるＢ細胞活性化を決定する際に重要な役割を果たすことが明らかになった。最適刺激モチーフは、２つの５’プリン（好ましくは、ＧｐＡジヌクレオチド）および２つの３’ピリミジン（好ましくは、ＴｐＴまたはＴｐＣジヌクレオチド）に隣接するＣｐＧからなると決定された。この理想により近いＣｐＧモチーフをもたらすＯＤＮの変異により、刺激が改善された（例えば、ＯＤＮ ２を２ｅに；３Ｍを３Ｍｄに比較のこと）が、このモチーフを妨げる変異により刺激が減少した（例えば、ＯＤＮ ３Ｄを３Ｄｆに；４を４ｂ、４ｃおよび４ｄに比較のこと）。一方、ＣｐＧモチーフ外の変異によっては、刺激は減少しなかった（例えば、ＯＤＮ １を１ｄに；３Ｄを３Ｄｇに；３Ｍを３Ｍｅに比較のこと）。
【００６３】
試験されたもののうち、８塩基よりも短いＯＤＮは非刺激性であった（例えば、ＯＤＮ ４ｅ）。試験された４８の８塩基ＯＤＮのうち、同定された最も刺激性の配列はＴＣＡＡＣＧＴＴ（ＯＤＮ ４）であった。この配列は、自己相補性の「パリンドローム」ＡＡＣＧＴＴを含む。このモチーフをさらに最適化すると、（特に、末端のヌクレオチド間結合のホスホロチオエート修飾により、ＯＤＮがヌクレアーゼ耐性とされる場合には、）両端部にＧを含むＯＤＮが増大した刺激を示すことが見いだされた。最初の２つおよび最後の５つのヌクレオチド間結合がホスホロチオエート修飾されているＯＤＮ １５８５（５’ ＧＧＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＣＡＧＧＧＧＧＧ ３’（配列番号：１））は、両端の１０のＧが１０のＡで置換されていること以外はＯＤＮ １５８５と同じ配列を有するＯＤＮ １６３８により誘導されたマウス脾臓細胞増殖における平均３．２倍の増加に比較して、マウス脾臓細胞増殖における平均２５．４倍の増加を引き起こした。Ｇリッチ末端の効果はシスである；ポリＧ末端を有するがＣｐＧモチーフを有さないＯＤＮを１６３８と共に添加しても、増殖の増加は得られなかった。
【００６４】
最適モチーフに近似する場合には（例えば、ＯＤＮ ４ｂ、４ｃ）、５’末端にＴｐＣジヌクレオチドを有する６塩基のパリンドロームを含む他の８量体ＯＤＮもまた活性であった。５’末端の他のジヌクレオチドは、刺激を減少させた（例えば、ＯＤＮ ４ｆ；１６の可能なジヌクレオチドすべてについて試験した）。３’ジヌクレオチドの存在は、５’ジヌクレオチドの欠乏を補填するには不十分であった（例えば、ＯＤＮ ４ｇ）。パリンドロームの破壊により８量体ＯＤＮにおける刺激が取り除かれた（例えば、ＯＤＮ ４ｈ）が、より長いＯＤＮにはパリンドロームは必要とされなかった。
【００６５】
【表１】
【００６６】
マウス脾臓細胞を用いて白血球活性化の反応速度を調べた。ＯＤＮ添加と同時に細胞をパルスし、４時間後に細胞を集めると、３Ｈウリジン取り込みはすでに２倍に増加していた。刺激は１２〜４８時間後にピークとなり、その後減少した。２４時間後には、インタクトなＯＤＮは検出されず、おそらくこのことはその後の刺激の低下の原因となっている。（マイトジェン性以下の投与量での）抗ＩｇＭの存在下または非存在下で精製Ｂ細胞をＣｐＧ ＯＤＮとともに培養した場合に、２つのマイトジェンの組み合わせにより４８時間後には増殖が約１０倍と顕著に増加することが見いだされた。刺激の程度は濃度依存性であり、両方について最適条件の下では一致してＬＰＳの刺激の程度を上回っていた。ヌクレアーゼ耐性ホスホロチオエート骨格を含むオリゴヌクレオチドは、非修飾オリゴヌクレオチドの約２００倍強力であった。
【００６７】
細胞周期分析を用いて、ＣｐＧ−ＯＤＮにより活性化されたＢ細胞の割合を決定した。ＣｐＧ−ＯＤＮは、９５％を超えるＢ細胞の細胞周期進行を誘導した（表２）。フローサイトメトリーによりＣＤ２３−（周辺領域）およびＣＤ２３＋（小胞）下位集団にソートされた脾臓Ｂリンパ球は、ＯＤＮ誘導刺激に対して同等に応答性であった。なぜならこれらは共に休止状態であり、Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配での分画により単離されたＢ細胞の活性化集団であったからである。これらの研究により、ＣｐＧ−ＯＤＮが本質的にすべてのＢ細胞を細胞周期に入るようにすることが示された。
【００６８】
【表２】
【００６９】
ある種のＢ細胞株（例えば、ＷＥＨＩ−２３１）が誘導され、抗ＩｇＭによるそれらの抗原レセプターの架橋に応答して増殖阻止および／またはアポトーシスを受ける（Ｊａｋｗａｙ，Ｊ．Ｐ．ら、「抗免疫グロブリン、リポ多糖および他の細菌性産物によるＢリンパ腫細胞株ＷＥＨＩ−２３１の増殖の調節」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：２２２５（１９８６）；Ｔｓｕｂａｔａ，Ｔ．，Ｊ．Ｗｕ，およびＴ．Ｈｏｎｊｏ，「抗原レセプター架橋により誘導されたＢ細胞アポトーシスが、ＣＤ４０を介したＴ細胞シグナルによりブロックされる」，Ｎａｔｕｒｅ ３６４：６４５（１９９３））。ＷＥＨＩ−２３１細胞は、ある種の刺激（例えば、ＬＰＳ）により、およびＣＤ４０リガンドにより、この増殖阻止からレスキューされる。ＣｐＧモチーフ含有ＯＤＮはまた、抗ＩｇＭ誘導増殖阻止からＷＥＨＩ−２３１を保護しすることが見いだされた。このことは、この効果にはアクセサリー細胞集団は必要とされないことを示している。
【００７０】
非メチル化ＣｐＧ ＯＤＮの免疫効果をより十分に理解するために、インビトロおよびインビボでのサイトカインおよびプロスタグランジンのレベルを調べた。ＬＰＳとは異なり、ＣｐＧ ＯＤＮは、精製マクロファージにプロスタグランジンＰＧＥ２の産生を誘導しないことが見いだされた。実際、マクロファージにおいてもＴ細胞においても、ＣｐＧ ＯＤＮの明らかな直接的効果は認められなかった。インビボまたは全脾臓細胞において、以下のインターロイキン（ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４またはＩＬ−１０）の有意な増加は、最初の６時間以内には認められなかった。しかし、ＩＬ−６のレベルは、ＣｐＧ ＯＤＮを注射したマウスの血清において、２時間以内に顕著に増加した。脾臓細胞によるＩＬ−１２およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）の発現の増大もまた、最初の２時間以内に認められた。
【００７１】
ＣｐＧ ＯＤＮがインビボでの免疫刺激を引き起こし得るかどうかを決定するために、ＰＢＳまたはホスホロチオエートＣｐＧまたは非ＣｐＧ ＯＤＮを、３３ｍｇ／ｋｇ（約５００μｇ／マウス）の用量でＤＢＡ／２マウスに１回腹腔内注射した。マウスにおける薬物動態学的研究により、この用量でのホスホロチオエートが２４時間より長期間にわたり脾臓組織において約１０μｇ／ｇのレベル（本明細書に記載のインビトロでの研究から決定される有効濃度範囲内）を与えることが示される（Ａｇｒａｗａｌ，Ｓ．ら、（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：７５９５）。３色フローサイトメトリーを用いてＢ細胞表面活性化マーカーＬｙ−６Ａ／Ｅ、Ｂｌａ−１およびクラスＩＩＭＨＣの発現について、ならびに３Ｈチミジンを用いてそれらの自然増殖について、ＯＤＮ注射の２４時間後にマウス由来の脾臓細胞を調べた。３種の活性化マーカーすべての発現が、ＣｐＧ ＯＤＮ注射マウス由来のＢ細胞において有意に増加したが、ＰＢＳまたは非ＣｐＧ ＯＤＮ注射マウス由来のＢ細胞においては増加しなかった。刺激性ＯＤＮを注射したマウス由来の脾臓細胞は、ＰＢＳまたは非ＣｐＧ ＯＤＮ注射マウスと比較して、自然３Ｈチミジン取り込みが２〜６倍増加した。４日後、インビボでのＣｐＧ ＯＤＮ注射マウスの血清ＩｇＭレベルは、コントロールと比較して約３倍増加した。これらの薬剤がＴ細胞を活性化する能力がないことと一致して、ＩＬ−２ＲまたはＣＤ−４４のＴ細胞発現における変化は最小限であった。
【００７２】
血清におけるホスホジエステルＯＤＮの分解は、３’−エクソヌクレアーゼにより優先的に媒介される。一方、細胞内ＯＤＮ分解はより複雑であり、５’および３’エクソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼを含む。５’および３’末端で変化する数のホスホロチオエート修飾結合を有する３Ｄ配列を有するＯＤＮパネルを用いて、２つの５’修飾結合および５つの３’修飾結合がこのＣｐＧ ＯＤＮによる最適刺激を提供するために必要であることが実験的に決定された。（非メチル化ＣｐＧ含有オリゴはＮＫ細胞刺激活性を有する）
実施例４でさらに詳細に記載するように、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドがＢ細胞に加えてナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性を刺激するかどうかを決定するために実験を行った。表３に示すように、ＣｐＧ ＯＤＮ １および３Ｄｄと共に培養された脾臓細胞においてＮＫ活性の顕著な誘導が観察された。これに対して、非ＣｐＧコントロールＯＤＮで処理されたエフェクターにおいては、誘導はほとんど存在しなかった。
【００７３】
【表３】
ＯＤＮ（ＣｐＧモチーフまたは他の部分でのシトシンが５−メチルシトシンで置換されたもの）のＢ細胞マイトジェン性を、実施例１に記載のようにして調べた。上記表１に示すように、メチル化ＣｐＧを含むＯＤＮは、非マイトジェン性であった（表１；ＯＤＮ １ｃ、２ｆ、３Ｄｅ、および３Ｍｃ）。しかし、ＣｐＧジヌクレオチド以外のシトシンのメチル化では、刺激特性は維持された（表１；ＯＤＮ １ｄ、２ｄ、３Ｄｆ、および３Ｍｄ）。
（両末端およびその近傍にＧＣＧトリヌクレオチド配列を含むオリゴの免疫阻害活性）
いくつかの場合においては、上記の刺激モチーフ内部ではないＣｐＧジヌクレオチドを含むＯＤＮは、他のマイトジェン性ＣｐＧ ＯＤＮの刺激効果をブロックすることが見いだされた。具体的には、ＣｐＧ ＯＤＮの５’および／または３’末端およびその近傍にＧＣＧからなる非定型のＣｐＧモチーフを加えることにより、他のＣｐＧモチーフによる増殖の刺激が実際に阻害された。ＧＣＧモチーフにおけるシトシンのメチル化または置換は、この効果を逆転する。好ましいＣｐＧモチーフに見られるよりもずっと低いが、ＯＤＮ中のＧＣＧモチーフはそれ自体が低いマイトジェン性効果を有する。
（免疫刺激、中和および免疫阻害オリゴヌクレオチドの作用の提唱されるメカニズム）
その表面Ｉｇレセプターを介してＢ細胞をトリガーする抗原とは異なり、ＣｐＧ−ＯＤＮは、検出可能なＣａ２＋流出、タンパク質チロシンリン酸化における変化またはＩＰ ３生成のいずれも誘導しなかった。ＣｐＧモチーフ存在下または非存在下でのＦＩＴＣ−結合ＯＤＮを用いるフローサイトメトリーを、Ｚｈａｏ，Ｑら（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ３：５３−６６（１９９３））に記載のようにして行った。これにより、等価な膜結合、細胞取り込み、流出および細胞内局在化が示された。このことは、ＣｐＧ ＯＤＮに対して特異的な細胞膜タンパク質は存在しないかもしれないことを示唆している。細胞膜を介して作用するよりもむしろ、これらのデータは、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドが活性のために細胞取り込みを必要とすることを示唆している：固体Ｔｅｆｌｏｎ支持体に共有結合したＯＤＮは非刺激性であり、アビジンビーズまたはアビジンコートされたペトリ皿上に固定化されたビオチン化ＯＤＮも同様であった。ＦＩＴＣまたはビオチンのいずれかと結合されたＣｐＧ ＯＤＮは、完全なマイトジェン性特性を維持し、このことは立体障害を有さないことを示した。
【００７４】
最適なＣｐＧモチーフ（ＴＧＡＣＧＴＴ／Ｃ）は、ＣＲＥ（サイクリックＡＭＰ応答エレメント）と同一である。ＣｐＧ ＯＤＮのマイトジェン性効果と同様に、中央のＣｐＧがメチル化された場合には、ＣＲＥＢのＣＲＥへの結合はなくされる。電気泳動移動度シフトアッセイを用いて、ＣｐＧ ＯＤＮ（１本鎖）がＢ細胞ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質のそれらの通常の結合部位（２本鎖ＣＲＥ）への結合と競合し得るかどうかを決定した。競合アッセイにより、ＣｐＧモチーフを含む１本鎖ＯＤＮはＣＲＥＢのその結合部位への結合と競合し得るが、ＣｐＧモチーフを含まないＯＤＮは競合し得ないことが示された。これらのデータは、ＣｐＧ ＯＤＮがある種の様式で１つ以上のＢ細胞ＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質と相互作用することによりそれらのマイトジェン性効果を発揮するという結論を支持する。逆に、ＯＤＮの３’および／または５’端部近傍のＧＣＧ配列または他の非定型ＣｐＧモチーフの存在により、活性化を引き起こさず、阻止さえし得る様式でＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質と相互作用するようである。
刺激ＣｐＧモチーフは、微生物ゲノムＤＮＡに共通であるが、脊椎動物ＤＮＡにおいてはきわめてまれである。さらに、細菌ＤＮＡは、Ｂ細胞増殖および免疫グロブリン（Ｉｇ）産生を誘導することが報告されているが、哺乳動物ＤＮＡは誘導しない（Ｍｅｓｓｉｎａ，Ｊ．Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１７５９（１９９１））。さらに実施例３に記載の実験（この実験で、ＣｐＧメチラーゼを用いる細菌ＤＮＡのメチル化により、マイトジェン性がなくされることが見いだされた）により、ＣｐＧの状態の違いが細菌ＤＮＡによるＢ細胞刺激の原因であることが示された。このデータは以下の結論を支持する：細菌ＤＮＡ内に存在する非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドが、細菌ＤＮＡの刺激効果の原因となる。
目的論的には、ＣｐＧモチーフによる白血球活性化によって免疫防御メカニズムが代表され、これにより、宿主ＤＮＡと細菌ＤＮＡとが区別され得るようである。宿主ＤＮＡは、そのＣｐＧ抑制およびメチル化に起因してリンパ球活性化をほとんど誘導しないか全く誘導しない。細菌ＤＮＡは、感染組織において選択的なリンパ球活性化を引き起こす。ＣｐＧ経路は抗原レセプターを介するＢ細胞活性化と共働するので、細菌抗原に特異的な抗原レセプターを有するＢ細胞は、細胞膜Ｉｇを介する１つの活性化シグナルと細菌ＤＮＡからの第２のシグナルとを受信し、従って、優先的に活性化される傾向を有する。Ｂ細胞活性化におけるこの経路と他の経路との相互関係が、ポリクローナル抗原を用いて抗原特異性応答を誘導する生理学的メカニズムを提供する。
（免疫刺激オリゴの作製方法）
本発明において使用するために、オリゴヌクレオチドが、当該分野で周知の多くの方法のうちの任意の方法を用いて新たに合成され得る。例えば、β−シアノエチルホスホルアミダイト法（Ｓ．Ｌ．ＢｅａｕｃａｇｅおよびＭ．Ｈ．Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ，（１９８１）Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２２：１８５９）；ヌクレオシドＨ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇら，（１９８６）Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５１−４０５４；Ｆｒｏｅｈｌｅｒら，（１９８６）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１４：５３９９−５４０７；Ｇａｒｅｇｇら，（１９８６）Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５５−４０５８；Ｇａｆｆｎｅｙら，（１９８８）Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２９：２６１９−２６２２）。これらの化学反応は、種々の市販の自動化オリゴヌクレオチド合成機により行われ得る。あるいは、オリゴヌクレオチドは、公知の技術（例えば、制限酵素、エクソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼを使用する技術）を用いて、既存の核酸配列（例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡ）から調製され得る。
【００７５】
インビボでの使用のためには、オリゴヌクレオチドは、好ましくは、（例えば、エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼによる）分解に対して比較的耐性である。オリゴヌクレオチドの安定化は、ホスフェート骨格での修飾により達成され得る。好ましい安定化されたオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート修飾骨格を有する。ホスホロチオエートＯＤＮの薬物動態学は、それらが齧歯動物において４８時間の全身半減期を有することを示し、そしてそれらがインビボでの適用に有用であり得ることを示唆する（Ａｇｒａｗａｌ，Ｓ．ら，（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７５９５）。ホスホロチオエートは、ホスホルアミデートまたはＨ ホスホネート化学のいずれかを使用する自動化技術を用いて合成され得る。アリールおよびアルキルホスホネートが（例えば、米国特許第４，４６９，８６３号に記載のようにして）作製され得る；そして、アルキルホスホトリエステル（荷電酸素部分は、米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許第０９２，５７４号に記載のようにしてアルキル化される）が、市販の試薬を用いる自動化固相合成により調製され得る。他のＤＮＡ骨格修飾および置換の作製方法が記載されている（Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．およびＰｅｙｍａｎ，Ａ．（１９９０）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４４；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ．（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１：１６５）。
【００７６】
インビボで投与するために、オリゴヌクレオチドは、標的細胞（例えば、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）表面への高親和性結合が得られる分子、および／または標的細胞による細胞の取り込みを増大させる分子に結合されて、「オリゴヌクレオチド送達複合体」を形成し得る。オリゴヌクレオチドは、当該分野で周知の技術を用いて適切な分子にイオン的にまたは共有結合的に結合し得る。種々のカップリング剤または架橋剤（例えば、プロテインＡ、カルボジイミド、およびＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ））が使用され得る。あるいは、オリゴヌクレオチドは、周知技術を用いてリポソームまたはビロソーム中にカプセル化され得る。
【００７７】
本発明は、以下の実施例（これはさらなる限定として解釈されるべきではない）によりさらに説明される。本出願全体に引用されるすべての参考文献（学術文献、発行された特許、刊行された特許出願および同時係属特許出願を含む）の全体の内容は、本明細書に参考として援用される。
（免疫刺激オリゴの治療的使用）
その免疫刺激特性に基づいて、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、インビボで被験体に投与され、「免疫系不全」を処置し得る。あるいは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、免疫系不全を有する被験体から得られるリンパ球（例えば、Ｂ細胞またはＮＫ細胞）とエクスビボで接触され得、次いで、活性化リンパ球が被験体に再度移植され得る。
【００７８】
免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、アジュバントとしてワクチンと共に被験体に投与され得、被験体の免疫系を増強して、ワクチンからより優れた応答をもたらし得る。好ましくは、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドは、ワクチン投与の少し前またはワクチン投与と同時に投与される。
【００７９】
免疫刺激オリゴヌクレオチドを用いる先行する化学療法は、引き続く化学療法に対する悪性腫瘍細胞の応答性を増加させるに有用であることが判明するはずである。ＣｐＧ ＯＤＮはまた、ヒトおよびマウス細胞の両方においてナチュラルキラー細胞活性を増加させた。ＮＫ活性の誘導は、ガンの免疫療法において同様に有益であり得る。
（中性オリゴヌクレオチドの治療的使用）
特定の標的配列に相補的なオリゴヌクレオチドが合成され得、そしてインビボで非検体に投与され得る。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは相補的なｍＲＮＡにハイブリダイズし、これにより特異的な標的遺伝子の発現を防止する。アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列特異的な効果により、それらはタンパク質機能の研究に有用な調査手段となった。全身アンチセンス療法の第Ｉ／ＩＩ相のヒトへの試験が、急性骨髄性白血病およびＨＩＶについて現在行われている。
【００８０】
さらに、オリゴヌクレオチドプローブ（すなわち、検出可能な標識を有するオリゴヌクレオチド）が被験体に投与され得、結合標識の検出に基づいて相補的配列の存在を検出し得る。オリゴヌクレオチドプローブのインビボでの投与および検出は、特定のＤＮＡ配列により引き起こされるかまたは悪化される特定の疾病（例えば、全身性紅斑性狼瘡、敗血症および自己免疫疾患）の診断に有用であり得る。
【００８１】
任意のまたはすべてのＣｐＧジヌクレオチドがメチル化されているアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドプローブは、被験体へのインビボでの投与時に免疫反応を生じさせず、従って、対応する非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドよりも安全である。
【００８２】
治療における使用のために、有効量の適切なオリゴヌクレオチドが、単独で、またはオリゴヌクレオチド送達複合体として処方されて、オリゴヌクレオチドが適切な標的細胞（例えば、Ｂ細胞およびＮＫ細胞）に取り込まれることを可能にする任意の方法で被験体に投与され得る。好ましい投与経路は、経口および経皮（例えば、パッチによる）を包含する。他の投与経路の例としては、注射（皮下、静脈内、腸管外、腹腔内、包膜内など）が挙げられる。注射は、ボーラスでの注射または連続的な注入であり得る。
【００８３】
オリゴヌクレオチドは、単独で、またはオリゴヌクレオチド送達複合体として、薬学的に受容可能なキャリアと共に投与され得る。本明細書において使用されるように、「薬学的に受容可能なキャリア」という表現は、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド送達複合体と同時投与され得、かつ、オリゴヌクレオチドがその意図された機能を実施することを可能にする物質を包含することが意図される。このようなキャリアの例としては、溶液、溶媒、分散媒体、遅延剤、エマルジョンなどが挙げられる。薬学的に活性な物質についてのこのような媒体の使用は、当該分野で周知である。オリゴヌクレオチドとの使用に適切なあらゆる他の従来のキャリアは、本発明の範囲内にある。
【００８４】
用語「有効量の」オリゴヌクレオチドとは、所望の生物学的効果を実現するに必要または十分な量を意味する。例えば、免疫系不全を処置するための少なくとも１つのメチル化ＣｐＧを含むオリゴヌクレオチドの有効量は、腫瘍、ガン、あるいは細菌性、ウィルス性または真菌性感染症を除去するに必要な量であり得る。ワクチンアジュバントとしての使用のための有効量は、ワクチンに対する被験体の免疫応答を増強するに有用な量であり得る。免疫系活性化に関連する疾病の処置に使用するための非メチル化ＣｐＧを含まないオリゴヌクレオチドの「有効量」は、非メチル化ＣｐＧ含有ヌクレオチド配列に競合して優るに必要な量であり得る。任意の特定用途についての有効量は、処置されるべき疾病または症状、投与される特定のオリゴヌクレオチド、被験体の大きさ、あるいは疾病または症状の重さなどの要因に応じて変化し得る。当業者は、過度の実験を必要とすることなく、特定のオリゴヌクレオチドの有効量を経験的に決定し得る。
上記で報告された研究によれば、非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、リンパ球（例えば、Ｂ細胞およびＮＫ細胞）について直接的にマイトジェン性であることが示される。細菌ＤＮＡにおけるこれらの配列の存在とあわせて、これらの結果は、動物ゲノム中のＣｐＧジヌクレオチドが脱表現されないこと（ｕｎｄｅｒｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）、および、このようなジヌクレオチド中に存在するシトシンの広範囲のメチル化が、宿主ＤＮＡと細菌ＤＮＡとを区別し得る免疫防御メカニズムの存在により説明され得ることを示唆する。宿主ＤＮＡは、通常、多くの解剖学的領域およびアポトーシス（細胞死）による炎症領域に存在するが、一般に、リンパ球活性化をほとんど誘導しないか全く誘導しない。しかし、非メチル化ＣｐＧモチーフを含む細菌ＤＮＡの存在は、それが有益である感染した解剖学的領域において、正確にリンパ球活性化を引き起こし得る。この新規な活性化経路は、Ｔ細胞依存抗原特異的Ｂ細胞活性化の迅速な代替物を提供する。しかし、Ｂ細胞活性化は、全体的には非特異的ではないようである。細菌産物に特異的な抗原レセプターを有するＢ細胞は、細胞膜Ｉｇを介する１つの活性化シグナルおよび細菌ＤＮＡからの第２のシグナルとを受信し得、これにより、抗原特異的免疫応答をさらに激しくトリガーし得る。
【００８５】
他の免疫防御メカニズムについては、細菌ＤＮＡに対する応答は、ある種の場合においては望ましくない結果を有し得る。例えば、自己抗原に対する自己免疫応答もまた、細菌感染により優先的にトリガーされる傾向にある。なぜなら自己抗原が、細菌ＤＮＡによりトリガーされる自己反応性Ｂ細胞に第２の活性化シグナルを提供し得るからである。実際、細菌感染による自己免疫の誘導は、一般的な臨床的観察である。例えば、自己免疫疾患である全身性紅斑性狼瘡は、（ｉ）抗ＤＮＡ抗体の産生により特徴づけられ；（ｉｉ）ＤＮＡメチルトランスフェラーゼを阻害する薬物により誘導され（Ｃｏｒｎａｃｃｈｉａ，Ｅ．Ｊ．ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：３８（１９９３））；そして、（ｉｉｉ）ＤＮＡメチル化の減少をともなう（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｂ．Ｌ．ら，Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ ３５：６４７（１９９２））。この疾病は、少なくとも部分的には、ＣｐＧモチーフにより提供される刺激シグナルによるＤＮＡ特異的Ｂ細胞の活性化によって、ならびに抗原レセプターの細菌ＤＮＡの結合によってトリガーされるようである。
【００８６】
さらに、敗血症（免疫系の多量でかつ非特異的な活性化に起因する高い罹患率および死亡率により特徴づけられる）は、多くのリンパ球を直接活性化するに十分な濃度に到達する死滅細菌から放出される細菌ＤＮＡおよび他の産物により発症され得る。
【００８７】
非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含まないオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧモチーフを含まないオリゴヌクレオチド、またはＣｐＧモチーフがメチル化されているオリゴヌクレオチド）を被験体に投与し、非メチル化ＣｐＧ含有核酸配列の結合をブロックすることにより、狼瘡、敗血症および他の「免疫系活性化に関連する疾病」が処置され得、防止され得または改善され得る。非メチル化ＣｐＧモチーフを含まないオリゴヌクレオチドは、単独で、または他のマイトジェン性細菌産物（例えば、ＬＰＳ）に対する免疫細胞応答をブロックする組成物と共に投与され得る。
【００８８】
以下、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドがどのようにして疾病狼瘡を処置し、防止しまたは改善し得るかについて、機構的に説明する。狼瘡は、一般に、細菌性またはウィルス性感染によりトリガーされると考えられている。このような感染は、１本鎖ＤＮＡに対する非病原性抗体の産生を刺激すると報告されている。これらの抗体は、主に非メチル化ＣｐＧを含む細菌配列を認識するようである。狼瘡において疾病が発達するにつれて、抗ＤＮＡ抗体は、２本鎖ＤＮＡに特異的な病原性抗体にシフトする。これらの抗体はメチル化ＣｐＧ配列への結合を増大させ、そしてこれらの産生は狼瘡における寛容の衰弱（ｂｒｅａｋｄｏｗｎ）から生じる。あるいは、患者のＤＮＡが過少メチル化（ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ）し、従って、非メチル化ＣｐＧに特異的な抗ＤＮＡ抗体が自己ＤＮＡに結合させ、そして、「エピトープスプレッディング（ｅｐｉｔｏｐｅ ｓｐｒｅａｄｉｎｇ）」と称されるプロセスを介してより広範な自己免疫をトリガーさせた場合に、狼瘡が生じ得る。
【００８９】
いずれの場合にも、抗原性オリゴヌクレオチドをタンパク質キャリア（例えば、γ−グロブリン（ＩｇＧ））にカップリングさせることにより、狼瘡患者の寛容を回復させることが可能であり得る。γ−グロブリンと複合体化した仔ウシ胸腺ＤＮＡは、抗ＤＮＡ抗体形成を減少させることが報告されている。
（両端またはその近傍にＧＣＧトリヌクレオチド配列を含むオリゴの治療的使用）
オリゴヌクレオチドと標的化されるウィルス配列との間の相補性に起因する任意のアンチセンス効果に関係なく、ＣＲＥＢ／ＡＴＦとのその相互作用に基づいて、両端またはその近傍にＧＣＧトリヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドは、抗ウィルス活性を有する。この活性に基づいて、阻害オリゴヌクレオチドの有効量が、被験体に投与されてウィルス感染を処置または防止し得る。
【００９０】
【実施例】
（実施例１：Ｂ細胞全ＲＮＡ合成および細胞周期に対するＯＤＮの効果）
抗−Ｔｈｙ−１．２および補体を用いてＴ細胞を放血し、ｌｙｍｐｈｏｌｙｔｅ Ｍ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｒｎｂｙ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）で遠心分離した、６〜１２週齢で特定の病原体を有さないＤＢＡ／２またはＢＸＳＢマウス（アイオワ大学動物管理施設で飼育された；実質的な系統の違いは示されなかった）から得られた脾臓からＢ細胞を精製した（「Ｂ細胞」）。Ｂ細胞は、１％未満のＣＤ４＋またはＣＤ８＋細胞を含んでいた。１０％ＦＢＳ（６５℃で３０分間熱失活させた）、５０μＭの２−メルカプトエタノール、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および２ｍＭのＬ−グルタメートを含む１００μｌ ＲＰＭＩ中の８×１０４のＢ細胞を、９６ウェルのマイクロタイタープレートに３連で分配した。２０μＭのＯＤＮを、３７℃で２０時間の培養開始時に加え、１μＣｉの３Ｈウリジンで細胞をパルスし、そして４時間後に細胞を回収し、そしてカウントした。２０μＭのＯＤＮとともに脾臓細胞全体を４８時間培養した後、ＥＬＩＳＡスポットアッセイを用いてＩｇ分泌Ｂ細胞を数えた。データ（表１に報告する）は、ＯＤＮなしで培養した細胞と比較した刺激指数を表す。本実験においては、ＯＤＮなしで培養した細胞は６８７ｃｐｍを与えたが、一方、２０μｇ／ｍｌのＬＰＳ（最適濃度であることを滴定により決定した）と共に培養した細胞は９９，６９９ｃｐｍを与えた。３Ｈチミジン取り込みアッセイは、同様の結果を示したが、分解したＯＤＮから放出されたチミジンによる非特異的阻害をいくらか示した（Ｍａｔｓｏｎ，ＳおよびＡ．Ｍ．Ｋｒｉｅｇ（１９９２），「コントロールオリゴヌクレオチドによる３Ｈ−チミジン取り込みの非特異的抑制」，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２：３２５）。
【００９１】
細胞周期分析のために、２×１０６のＢ細胞を、２ｍｌの組織培養培地単独で、または３０μｇ／ｍｌのＬＰＳと共に、または１μＭの示されたホスホロチオエート修飾ＯＤＮと共に、４８時間培養した。Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ，Ｚ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２８８１（１９８１）に記載のようにして、細胞周期分析を行った。
【００９２】
ヒト細胞に対するＣｐＧ ＯＤＮのマイトジェン性効果を調べるために、２人の慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）（循環細胞が悪性腫瘍Ｂ細胞である疾病）患者から末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得た。上記のようにして、細胞を４８時間培養し、トリチウム化チミジンで４時間パルスした。
（実施例２：Ｂ細胞由来のＩｇＭ産生に対するＯＤＮの効果）
新たに殺したマウスの脾臓由来の単一細胞懸濁液を、Ｌｅｉｂｓｏｎらの方法（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５４：１６８１（１９８１））により抗−Ｔｈｙｌ、抗−ＣＤ４、および抗−ＣＤ８ならびに補体で処理した。休止Ｂ細胞（＜，０２％のＴ細胞混入）を、ＤｅＦｒａｎｃｏらの手順（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５５：１５２３（１９８２））により非連続Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配の６３〜７０％バンドから単離した。上記のようにして、これらを３０μＭ ＯＤＮまたは２０μｇ／ｍｌ ＬＰＳ中で４８時間培養した。ＥＬＩスポットアッセイ（Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．Ｍ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：５０６（１９９０））により決定したところ、活発にＩｇＭを分泌するＢ細胞の数はこの時点で最大であった。このアッセイにおいては、Ｂ細胞を抗Ｉｇでコートされたマイクロタイタープレート上で６時間インキュベートした。それらが産生したＩｇ（＞９９％ ＩｇＭ）を、ホスファターゼ標識抗Ｉｇ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を用いて検出した。個々のＢ細胞により産生された抗体を、ホスファターゼの存在下で不溶性青色沈殿を形成するＢＣＩＰ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を加えることにより視覚化した。２０〜４０のスポット／ウェルを生じる細胞の希釈を用いて、抗体分泌Ｂ細胞／試料の総数を決定した。すべてのアッセイを３連で行った。いくつかの実験において、培地の上清をＥＬＩＳＡによりＩｇＭについてアッセイしたところ、ＣｐＧ−ＯＤＮに対する応答の同様な増加を示した。
（実施例３：細菌ＤＮＡによるＢ細胞刺激）
ＤＢＡ／２ Ｂ細胞を、ＤＮＡなしで、あるいは、５０μｇ／ｍｌの（ａ）Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｙｓｏｄｅｉｋｔｉｃｕｓ；（ｂ）ＮＺＢ／Ｎマウス脾臓；およびＮＦＳ／Ｎマウス脾臓ゲノムＤＮＡと共に４８時間培養し、次いで、３Ｈチミジンで４時間パルスし、そして、その後細胞を回収した。２連のＤＮＡ試料を、３７℃で３０分間ＤＮＡｓｅＩで消化し、次いで、細胞培養物に加えた。ＥＬＩＳＡスポットアッセイを用いると、Ｅ ｃｏｌｉ ＤＮＡもまた、４８時間までＩｇＭ分泌Ｂ細胞の数の８．８倍の増加を誘導した。
【００９３】
ＤＢＡ／２ Ｂ細胞を、添加物なしに、あるいは、５０μｇ／ｍｌのＬＰＳまたは２０μＭのＯＤＮ １；１ａ；４；または４ａとともに培養した。細胞を培養し、そして４、８、２４および４８時間後に回収した。実施例１と同様にして、ＢＸＳＢ細胞を、５、１０、２０、４０または８０μＭのＯＤＮ １；１ａ；４；または４ａあるいはＬＰＳと共に培養した。この実験において、ＯＤＮを含まないウェルは３８３３ｃｐｍを有していた。各実験を少なくとも３回行い、同様の結果を得た。３連のウェルの標準偏差は＜５％であった。
（実施例４：ナチュラルキラー（ＮＫ）活性に対するＯＤＮの効果）
１０×１０６のＣ５７ＢＬ／６脾臓細胞を、２ｍｌのＲＰＭＩ（実施例１に記載のように補充した）中で、４０μＭのＣｐＧまたは非ＣｐＧ ＯＤＮの存在下または非存在下で４８時間培養した。細胞を洗浄し、次いで、２つのＮＫ感受性標的細胞株（ＹＡＣ−１および２Ｃ１１）を用いる短期５１Ｃｒ放出アッセイにおけるエフェクター細胞として用いた（Ｂａｌｌａｓ，Ｚ．Ｋ．ら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：１７）。０．２ｍｌ中Ｖ底マイクロタイタープレート中の１０４の５１Ｃｒ標識標的細胞に、種々の濃度でエフェクター細胞を加え、そして５％ＣＯ２中、３７℃で４時間インキュベートした。次いで、プレートを遠心分離し、上清のアリコートを放射能についてカウントした。エフェクター細胞の存在下で放出された５１Ｃｒから標的細胞単独で培養された場合に放出された５１Ｃｒ放出を引いた値の、２％酢酸中での細胞溶解後に放出された総カウントから細胞単独で培養された場合に放出された５１Ｃｒ ｃｐｍを引いた値に対する比率を計算することにより、特異的溶解パーセントを決定した。
（実施例５：ＣｐＧホスホロチオエートＯＤＮについてのインビボでの研究）
マウスを計量し、０．２５ｍｌの滅菌ＰＢＳまたはＰＢＳに溶解した示されたホスホロチオエートＯＤＮをＩＰで注射した。２４時間後、脾臓細胞を回収し、洗浄し、そして、Ｂ細胞のゲートのためのファイコエリトリン結合６Ｂ２を、ビオチン結合抗Ｌｙ−６Ａ／Ｅまたは抗Ｉａｄ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）または抗Ｂｌａ−１（Ｈａｒｄｙ，Ｒ．Ｒ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５９：１１６９（１９８４））と組み合わせて用いて、フローサイトメトリーのために染色した。それぞれの条件について２匹のマウスを調べ、個々に分析した。
（実施例６：Ｂ細胞刺激についてのホスホロチオエートＯＤＮの滴定）
コントロールＯＤＮ １ａ、またはＣｐＧ ＯＤＮ １ｄおよび３Ｄｄの配列を有するホスホロチオエートＯＤＮと共にＢ細胞を培養し、次いで、２０時間後に３Ｈウリジン、または４４時間後に３Ｈチミジンのいずれかでパルスし、次いで、細胞を回収し、そしてｃｐｍを決定した。
（実施例７：アポトーシスからのＢ細胞のレスキュー）
ＷＥＨＩ−２３１細胞（５×１０４／ウェル）を、ＬＰＳあるいはコントロールＯＤＮ １ａまたはＣｐＧ ＯＤＮ １ｄおよび３Ｄｄの存在下または非存在下、３７℃で１時間培養し、次いで、抗ＩｇＭ（１μ／ｍｌ）を加えた。細胞をさらに２０時間培養し、次いで２μＣｉ／ウェルの３Ｈチミジンで４時間パルスした。この実験において、ＯＤＮも抗ＩｇＭも加えない細胞は、抗ＩｇＭの添加により９０．４×１０３を与えた。表１に示すホスホジエステルＯＤＮは、ＯＤＮ分解に起因する非特異的抑制をいくらか示すものの、同様の保護を与えた。各実験を少なくとも３回繰り返し、同様の結果を得た。
（実施例８： ＩＬ−６のインビボでの誘導）
ＤＢＡ／２雌性マウス（２ヶ月齢）に、５００μｇのＣｐＧまたはコントロールホスホロチオエートＯＤＮをＩＰで注射した。注射後、種々の時点で、マウスを採血した。２匹のマウスを各時点について調べた。ＩＬ−６をＥｌｉｓａにより測定し、そしてＩＬ−６濃度を組換えＩＬ−６を用いて得られる標準曲線と比較することにより計算した。アッセイの感度は、１０ｐｇ／ｍｌであった。レベルは８時間後に検出不能であった。
（実施例９：Ｂ細胞ＣＲＥＢ／ＡＴＦの放射性標識２本鎖ＣＲＥプローブ（ＣＲＥＢ）への結合）
ＣＲＥプローブ（遊離プローブは、像の底部から離れている）を用いるＥＭＳＡにより分析すると、ＣＨ１２．ＬＸ Ｂ細胞由来の全細胞抽出物は、２つの遅延バンドを示した。ＣＲＥへのＣＲＥＢ／ＡＴＦタンパク質の結合は、示された量のコールドＣＲＥおよび１本鎖ＣｐＧ ＯＤＮにより競合されたが、非ＣｐＧＯＤＮによっては競合されなかった。
（等価物）
当業者は、日常的な実験程度を用いて、本明細書に記載の本発明の特定の実施態様の多くの等価物を認識し、または確認し得る。このような等価物は、添付の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【００９４】
非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド、およびこのオリゴヌクレオチドの被験体における免疫応答を刺激する能力に基づく治療的有用性が開示される。また、被験体における非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドにより開始される免疫系の活性化に関連する疾病を処置するための治療法が開示される。この治療法は、非メチル化ＣｐＧ配列（すなわち、メチル化ＣｐＧ配列またはＣｐＧ配列なし）を含まないオリゴヌクレオチドを被験体に投与し、非メチル化ＣｐＧ核酸を結合について競合して優る工程を包含する。さらに、アンチセンス療法において使用するための、またはインビボでのハイブリダイゼーションプローブとして使用するためのメチル化ＣｐＧ含有ジヌクレオチド、ならびに抗ウィルス治療剤として使用するための免疫阻害オリゴヌクレオチドが開示される。
【００９５】
【発明の効果】
本発明によって、新規な免疫刺激オリゴヌクレオチド組成物、このオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性に基づく有用な方法、中性オリゴヌクレオチド、中性オリゴヌクレオチドを用いる有用な方法、および免疫阻害オリゴヌクレオチド、免疫阻害オリゴヌクレオチドの種々の使用が提供される。
【００９６】
【配列表】
Claims (4)
- 少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含む、ワクチンアジュバントとしての使用のための組成物。
- 請求項１に記載の組成物およびワクチンを含む、医薬としての使用のための組成物。
- 前記オリゴヌクレオチドが合成である、請求項１または２に記載の組成物。
- 以下：
（ｃ）ヒト被験体；または
（ｄ）非ヒト脊椎動物、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、サル、ラットまたはマウス、
を処置するための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US27635894A | 1994-07-15 | 1994-07-15 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP50499196A Division JP3468773B2 (ja) | 1994-07-15 | 1995-02-07 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2008015654A Division JP2008169216A (ja) | 1994-07-15 | 2008-01-25 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2004043466A true JP2004043466A (ja) | 2004-02-12 |
| JP4126252B2 JP4126252B2 (ja) | 2008-07-30 |
Family
ID=23056334
Family Applications (7)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP50499196A Expired - Lifetime JP3468773B2 (ja) | 1994-07-15 | 1995-02-07 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
| JP2002302338A Withdrawn JP2003144184A (ja) | 1994-07-15 | 2002-10-16 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
| JP2003178740A Withdrawn JP2004024261A (ja) | 1994-07-15 | 2003-06-23 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
| JP2003178741A Expired - Lifetime JP4126252B2 (ja) | 1994-07-15 | 2003-06-23 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
| JP2004069838A Withdrawn JP2004215670A (ja) | 1994-07-15 | 2004-03-11 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
| JP2008015654A Withdrawn JP2008169216A (ja) | 1994-07-15 | 2008-01-25 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
| JP2009057160A Withdrawn JP2009148296A (ja) | 1994-07-15 | 2009-03-10 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
Family Applications Before (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP50499196A Expired - Lifetime JP3468773B2 (ja) | 1994-07-15 | 1995-02-07 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
| JP2002302338A Withdrawn JP2003144184A (ja) | 1994-07-15 | 2002-10-16 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
| JP2003178740A Withdrawn JP2004024261A (ja) | 1994-07-15 | 2003-06-23 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
Family Applications After (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2004069838A Withdrawn JP2004215670A (ja) | 1994-07-15 | 2004-03-11 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
| JP2008015654A Withdrawn JP2008169216A (ja) | 1994-07-15 | 2008-01-25 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
| JP2009057160A Withdrawn JP2009148296A (ja) | 1994-07-15 | 2009-03-10 | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6194388B1 (ja) |
| EP (4) | EP1167377B2 (ja) |
| JP (7) | JP3468773B2 (ja) |
| AT (3) | ATE328890T1 (ja) |
| AU (1) | AU713040B2 (ja) |
| CA (2) | CA2560114A1 (ja) |
| DE (2) | DE69535905D1 (ja) |
| DK (1) | DK0772619T4 (ja) |
| ES (3) | ES2267100T5 (ja) |
| HK (3) | HK1043598A1 (ja) |
| PT (1) | PT772619E (ja) |
| WO (1) | WO1996002555A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008169216A (ja) * | 1994-07-15 | 2008-07-24 | Univ Of Iowa Research Foundation | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
Families Citing this family (867)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5849719A (en) | 1993-08-26 | 1998-12-15 | The Regents Of The University Of California | Method for treating allergic lung disease |
| US6727230B1 (en) | 1994-03-25 | 2004-04-27 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs |
| US6207646B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
| US20030026782A1 (en) * | 1995-02-07 | 2003-02-06 | Arthur M. Krieg | Immunomodulatory oligonucleotides |
| US6429199B1 (en) | 1994-07-15 | 2002-08-06 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells |
| US6239116B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-05-29 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
| US7935675B1 (en) * | 1994-07-15 | 2011-05-03 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
| US7422902B1 (en) * | 1995-06-07 | 2008-09-09 | The University Of British Columbia | Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer |
| US5981501A (en) * | 1995-06-07 | 1999-11-09 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers |
| AU1463097A (en) | 1996-01-04 | 1997-08-01 | Rican Limited | Helicobacter pylori bacterioferritin |
| CA2244946C (en) * | 1996-01-30 | 2010-04-13 | The Regents Of The University Of California | Gene expression vectors which generate an antigen specific immune response and methods of using the same |
| FR2750704B1 (fr) * | 1996-07-04 | 1998-09-25 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Procede de production d'adn therapeutique |
| US5856462A (en) * | 1996-09-10 | 1999-01-05 | Hybridon Incorporated | Oligonucleotides having modified CpG dinucleosides |
| JP4111403B2 (ja) | 1996-10-11 | 2008-07-02 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ カリフォルニア | 免疫刺激ポリヌクレオチド／免疫調節分子複合体 |
| AU768178B2 (en) * | 1996-10-11 | 2003-12-04 | Regents Of The University Of California, The | Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates |
| EP0855184A1 (en) | 1997-01-23 | 1998-07-29 | Grayson B. Dr. Lipford | Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination |
| WO1998037919A1 (en) | 1997-02-28 | 1998-09-03 | University Of Iowa Research Foundation | USE OF NUCLEIC ACIDS CONTAINING UNMETHYLATED CpG DINUCLEOTIDE IN THE TREATMENT OF LPS-ASSOCIATED DISORDERS |
| PT1005368E (pt) * | 1997-03-10 | 2009-11-19 | Coley Pharm Gmbh | Utilização de ácidos nucleicos contendo dinucleótidos cpg não metilados em combinação com alúmen como adjuvante |
| US6406705B1 (en) | 1997-03-10 | 2002-06-18 | University Of Iowa Research Foundation | Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant |
| US6426334B1 (en) | 1997-04-30 | 2002-07-30 | Hybridon, Inc. | Oligonucleotide mediated specific cytokine induction and reduction of tumor growth in a mammal |
| AU733310C (en) | 1997-05-14 | 2001-11-29 | University Of British Columbia, The | High efficiency encapsulation of charged therapeutic agents in lipid vesicles |
| US20030104044A1 (en) * | 1997-05-14 | 2003-06-05 | Semple Sean C. | Compositions for stimulating cytokine secretion and inducing an immune response |
| AU7589398A (en) * | 1997-05-19 | 1998-12-11 | Merck & Co., Inc. | Oligonucleotide adjuvant |
| CA2301575C (en) | 1997-05-20 | 2003-12-23 | Ottawa Civic Hospital Loeb Research Institute | Vectors and methods for immunization or therapeutic protocols |
| US20040006034A1 (en) * | 1998-06-05 | 2004-01-08 | Eyal Raz | Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof |
| US6589940B1 (en) | 1997-06-06 | 2003-07-08 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof |
| EP1374894A3 (en) * | 1997-06-06 | 2004-09-22 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof |
| ES2326848T3 (es) | 1997-06-06 | 2009-10-20 | The Regents Of The University Of California | Inhibidores de la actividad de secuencias inmunoestimulatorias de adn. |
| EP1872786A1 (en) | 1997-09-05 | 2008-01-02 | The Regents of the University of California | Use of immunostimulatory oligonucleotides for preventing or reducing antigen-stimulated, granulocyte-mediated inflammation |
| GB9724531D0 (en) | 1997-11-19 | 1998-01-21 | Smithkline Biolog | Novel compounds |
| EP1584685B1 (en) | 1998-02-05 | 2011-04-13 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Tumor-associated antigen derivatives from the mage family, used for the preparation of fusion proteins with T-helper epitopes and of compositions for vaccination |
| US20020147143A1 (en) | 1998-03-18 | 2002-10-10 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer |
| US6218371B1 (en) | 1998-04-03 | 2001-04-17 | University Of Iowa Research Foundation | Methods and products for stimulating the immune system using immunotherapeutic oligonucleotides and cytokines |
| EP1069910A1 (en) * | 1998-04-09 | 2001-01-24 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Adjuvant compositions |
| GB9808866D0 (en) | 1998-04-24 | 1998-06-24 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
| CA2328602A1 (en) * | 1998-05-06 | 1999-11-11 | University Of Iowa Research Foundation | Methods for the prevention and treatment of parasitic infections and related diseases using cpg oligonucleotides |
| DE69927495T2 (de) * | 1998-05-14 | 2006-07-06 | Coley Pharmaceutical Group, Inc., Wellesley | Verfahren zur regulieren der hämatopoese mit hilfe von cpg-oligonukleotiden |
| CN1307473A (zh) | 1998-05-19 | 2001-08-08 | 研究发展基金会 | 三萜组合物和它们的使用方法 |
| ES2628744T3 (es) * | 1998-05-22 | 2017-08-03 | Ottawa Hospital Research Institute | Métodos y productos para inducir inmunidad en mucosas |
| US6881561B1 (en) | 1998-05-27 | 2005-04-19 | Cheil Jedang Corporation | Endonuclease of immune cell, process for producing the same and immune adjuvant using the same |
| KR19990086271A (ko) * | 1998-05-27 | 1999-12-15 | 손경식 | 면역세포의 신규한 엔도뉴클레아제 및 이를 사용한 면역보조제 |
| US6562798B1 (en) * | 1998-06-05 | 2003-05-13 | Dynavax Technologies Corp. | Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof |
| US20030022854A1 (en) * | 1998-06-25 | 2003-01-30 | Dow Steven W. | Vaccines using nucleic acid-lipid complexes |
| US6693086B1 (en) * | 1998-06-25 | 2004-02-17 | National Jewish Medical And Research Center | Systemic immune activation method using nucleic acid-lipid complexes |
| US20040247662A1 (en) * | 1998-06-25 | 2004-12-09 | Dow Steven W. | Systemic immune activation method using nucleic acid-lipid complexes |
| WO2000006588A1 (en) * | 1998-07-27 | 2000-02-10 | University Of Iowa Research Foundation | STEREOISOMERS OF CpG OLIGONUCLEOTIDES AND RELATED METHODS |
| EP1103564B1 (en) | 1998-07-31 | 2009-01-07 | International Institute of Cancer Immunology, Inc. | Cancer antigens based on tumor suppressor gene wt1 product |
| IL141044A0 (en) | 1998-08-07 | 2002-02-10 | Univ Washington | Innunological herpes simplex virus antigens and methods for use thereof |
| WO2000009159A1 (en) * | 1998-08-10 | 2000-02-24 | Aquila Biopharmaceuticals, Inc. | Compositions of cpg and saponin adjuvants and methods thereof |
| WO2000014262A2 (en) * | 1998-09-09 | 2000-03-16 | Genzyme Corporation | Methylation of plasmid vectors |
| FR2783170B1 (fr) * | 1998-09-11 | 2004-07-16 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Emulsion immunostimulante |
| US6692752B1 (en) | 1999-09-08 | 2004-02-17 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Methods of treating human females susceptible to HSV infection |
| ATE326239T1 (de) * | 1998-09-18 | 2006-06-15 | Dynavax Tech Corp | Verfahren zur behandlung von ig-e assozierten krankheiten und zusammensetzungen zur verwendung in diesen verfahren |
| US20030235557A1 (en) | 1998-09-30 | 2003-12-25 | Corixa Corporation | Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy |
| EP1119375A4 (en) * | 1998-10-05 | 2005-02-02 | Regetns Of The University Of C | METHODS AND ADJUVANTS FOR STIMULATING MUCOUS IMMUNITY |
| DE122007000087I1 (de) | 1998-10-16 | 2008-03-27 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Adjuvanzsysteme und impfstoffe |
| HUP0400719A3 (en) | 1998-12-08 | 2010-08-30 | Corixa Corp | Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection |
| EP1137777B1 (en) | 1998-12-08 | 2011-10-05 | GlaxoSmithKline Biologicals s.a. | Novel compounds derived from neisseria meningitidis |
| US20020119158A1 (en) | 1998-12-17 | 2002-08-29 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer |
| US6579973B1 (en) | 1998-12-28 | 2003-06-17 | Corixa Corporation | Compositions for the treatment and diagnosis of breast cancer and methods for their use |
| US7198920B1 (en) | 1999-01-29 | 2007-04-03 | Corika Corporation | HER-2/neu fusion proteins |
| WO2000045849A2 (en) * | 1999-02-05 | 2000-08-10 | Genzyme Corporation | Use of cationic lipids to generate anti-tumor immunity |
| WO2000048630A1 (en) | 1999-02-17 | 2000-08-24 | Csl Limited | Immunogenic complexes and methods relating thereto |
| EP2286792A1 (en) | 1999-02-26 | 2011-02-23 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Microemulsions with an adsorbent surface, comprising a microdroplet emulsion |
| WO2000050075A2 (en) | 1999-02-26 | 2000-08-31 | Chiron S.P.A. | Enhancement of bactericidal activity of neisseria antigens with oligonucleotides containing cg motifs |
| ES2337650T3 (es) | 1999-03-12 | 2010-04-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Polipeptidos antigenicos de neisseria meningitidis polinucleotidos y anticuerpos protectores correspondientes. |
| FR2790955B1 (fr) | 1999-03-19 | 2003-01-17 | Assist Publ Hopitaux De Paris | Utilisation d'oligonucleotides stabilises comme principe actif antitumoral |
| JP2000262247A (ja) * | 1999-03-19 | 2000-09-26 | Asama Kasei Kk | 免疫調節剤、免疫調節食品および免疫調節飼料 |
| GB9909077D0 (en) | 1999-04-20 | 1999-06-16 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compositions |
| DE60038166T2 (de) | 1999-03-19 | 2009-03-12 | Glaxosmithkline Biologicals S.A., Rixensart | Impfstoff gegen bakterielle antigene |
| PL354348A1 (en) | 1999-04-02 | 2004-01-12 | Corixa Corporation | Compounds and methods for therapy and diagnosis of lung cancer |
| WO2000061151A2 (en) * | 1999-04-12 | 2000-10-19 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response |
| US6977245B2 (en) | 1999-04-12 | 2005-12-20 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response |
| US6558670B1 (en) | 1999-04-19 | 2003-05-06 | Smithkline Beechman Biologicals S.A. | Vaccine adjuvants |
| CZ303515B6 (cs) | 1999-04-19 | 2012-11-07 | Smithkline Beecham Biologicals S. A. | Adjuvantní prostredek |
| AU4978100A (en) * | 1999-04-29 | 2000-11-17 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Screening for immunostimulatory dna functional modifyers |
| WO2001000232A2 (en) * | 1999-06-29 | 2001-01-04 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Use of cpg as an adjuvant for hiv vaccine |
| GB9915204D0 (en) * | 1999-06-29 | 1999-09-01 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| US6514948B1 (en) | 1999-07-02 | 2003-02-04 | The Regents Of The University Of California | Method for enhancing an immune response |
| FR2795963A1 (fr) * | 1999-07-08 | 2001-01-12 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Polynucleotide immunostimulant |
| SK782002A3 (en) * | 1999-07-21 | 2003-08-05 | Lexigen Pharm Corp | FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| GB9918319D0 (en) | 1999-08-03 | 1999-10-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
| US20050244434A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-11-03 | Cohen David I | Tat-based tolerogen compositions and methods of making and using same |
| US20050226890A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-10-13 | Cohen David I | Tat-based vaccine compositions and methods of making and using same |
| EP1204425B1 (en) | 1999-08-19 | 2009-01-07 | Dynavax Technologies Corporation | Methods of modulating an immune response using immunostimulatory sequences and compositions for use therein |
| CA2382611A1 (en) * | 1999-08-27 | 2001-03-08 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Compositions for stimulating cytokine secretion and inducing an immune response |
| TR200200797T2 (tr) * | 1999-09-25 | 2002-10-21 | University Of Iowa Research Foundation | İmmünostimülatör nükleik asitler |
| US6949520B1 (en) * | 1999-09-27 | 2005-09-27 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon |
| CA2388337C (en) | 1999-10-22 | 2013-01-08 | Aventis Pasteur Limited | Method of inducing and/or enhancing an immune response to tumor antigens |
| US7223398B1 (en) | 1999-11-15 | 2007-05-29 | Dynavax Technologies Corporation | Immunomodulatory compositions containing an immunostimulatory sequence linked to antigen and methods of use thereof |
| WO2001045750A1 (en) * | 1999-12-21 | 2001-06-28 | The Regents Of The University Of California | Method for preventing an anaphylactic reaction |
| DE60131430T2 (de) * | 2000-01-14 | 2008-10-16 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Oligodeoxynukleotide und ihre verwendung zur induktion einer immunreaktion |
| AT409085B (de) * | 2000-01-28 | 2002-05-27 | Cistem Biotechnologies Gmbh | Pharmazeutische zusammensetzung zur immunmodulation und herstellung von vakzinen |
| EP1253947A4 (en) * | 2000-01-31 | 2005-01-05 | Univ California | IMMUNOMODULATORY POLYNUCLEOTIDES FOR THE TREATMENT OF INFECTION BY AN INTRACELLULAR PATHOGEN |
| US7585847B2 (en) * | 2000-02-03 | 2009-09-08 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Immunostimulatory nucleic acids for the treatment of asthma and allergy |
| FR2805264B1 (fr) * | 2000-02-18 | 2002-04-12 | Aventis Pasteur | Oligonucleotides immunostimulants |
| FR2805265B1 (fr) * | 2000-02-18 | 2002-04-12 | Aventis Pasteur | Oligonucleotides immunostimulants |
| CA2399550A1 (en) | 2000-02-23 | 2001-08-30 | The Regents Of The University Of California | Method for treating inflammatory bowel disease and other forms of gastrointestinal inflammation |
| US20030130217A1 (en) * | 2000-02-23 | 2003-07-10 | Eyal Raz | Method for treating inflammatory bowel disease and other forms of gastrointestinal inflammation |
| HUP0300054A3 (en) | 2000-02-23 | 2012-09-28 | Smithkline Beecham Biolog | Tumour-specific animal proteins |
| US20040002068A1 (en) | 2000-03-01 | 2004-01-01 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies |
| US20040131628A1 (en) * | 2000-03-08 | 2004-07-08 | Bratzler Robert L. | Nucleic acids for the treatment of disorders associated with microorganisms |
| US7129222B2 (en) * | 2000-03-10 | 2006-10-31 | Dynavax Technologies Corporation | Immunomodulatory formulations and methods for use thereof |
| US20030129251A1 (en) | 2000-03-10 | 2003-07-10 | Gary Van Nest | Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof |
| US7157437B2 (en) | 2000-03-10 | 2007-01-02 | Dynavax Technologies Corporation | Methods of ameliorating symptoms of herpes infection using immunomodulatory polynucleotide sequences |
| US20010046967A1 (en) | 2000-03-10 | 2001-11-29 | Gary Van Nest | Methods of preventing and treating respiratory viral infection using immunomodulatory polynucleotide |
| US20020098199A1 (en) | 2000-03-10 | 2002-07-25 | Gary Van Nest | Methods of suppressing hepatitis virus infection using immunomodulatory polynucleotide sequences |
| US20020142978A1 (en) * | 2000-04-07 | 2002-10-03 | Eyal Raz | Synergistic improvements to polynucleotide vaccines |
| WO2001081379A2 (en) | 2000-04-21 | 2001-11-01 | Corixa Corporation | Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection |
| ATE513913T1 (de) | 2000-05-10 | 2011-07-15 | Sanofi Pasteur Ltd | Durch mage minigene kodierte immunogene polypeptide und ihre verwendungen |
| DE60134134D1 (de) | 2000-05-19 | 2008-07-03 | Corixa Corp | Prophylaktische und therapeutische behandlung von ten mit verbindungen, die auf monosacchariden basieren |
| EP1542732B1 (en) | 2000-06-20 | 2009-09-16 | Corixa Corporation | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis |
| CA2410371C (en) | 2000-06-22 | 2015-11-17 | University Of Iowa Research Foundation | Methods for enhancing antibody-induced cell lysis and treating cancer |
| EP1319069B1 (en) | 2000-06-28 | 2008-05-21 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer |
| GB0108364D0 (en) | 2001-04-03 | 2001-05-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine composition |
| MY133981A (en) | 2000-06-29 | 2007-11-30 | Smithkline Beecham Biologicals S A | Vaccine composition |
| US7229623B1 (en) | 2000-08-03 | 2007-06-12 | Corixa Corporation | Her-2/neu fusion proteins |
| KR100917101B1 (ko) * | 2000-08-04 | 2009-09-15 | 도요 보세키 가부시키가이샤 | 플렉시블 금속적층체 및 그 제조방법 |
| UA79735C2 (uk) | 2000-08-10 | 2007-07-25 | Глаксосмітклайн Байолоджікалз С.А. | Очищення антигенів вірусу гепатиту b (hbv) для використання у вакцинах |
| AU2001285421A1 (en) * | 2000-08-10 | 2002-02-18 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Vaccine against rsv |
| EP1335741A4 (en) * | 2000-08-25 | 2005-10-26 | Yeda Res & Dev | METHOD FOR THE PREVENTION OF AUTOIMMUNE DISEASES WITH CpG-CONTAINING POLYNUCLEOTIDES (04.03.02) |
| CA2419894A1 (en) * | 2000-09-15 | 2002-03-21 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Process for high throughput screening of cpg-based immuno-agonist/antagonist |
| GB0022742D0 (en) | 2000-09-15 | 2000-11-01 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| PT1889630E (pt) | 2000-10-18 | 2012-02-29 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacinas compreendendo o antigénio mage ligado a um fragmento da proteína d |
| MX357775B (es) | 2000-10-27 | 2018-07-20 | J Craig Venter Inst Inc | Acidos nucleicos y proteinas de los grupos a y b de estreptococos. |
| EP1350262B8 (en) | 2000-12-08 | 2008-08-13 | Coley Pharmaceuticals GmbH | Cpg-like nucleic acids and methods of use thereof |
| CA2598144A1 (en) * | 2000-12-08 | 2006-08-31 | 3M Innovative Properties Company | Compositions and methods for targeted delivery of immune response modifiers |
| US6677347B2 (en) * | 2000-12-08 | 2004-01-13 | 3M Innovative Properties Company | Sulfonamido ether substituted imidazoquinolines |
| ATE471374T1 (de) | 2000-12-27 | 2010-07-15 | Dynavax Tech Corp | Immunomodulatorische polynukleotide und verfahren zur deren verwendung |
| US20040110834A1 (en) * | 2001-01-12 | 2004-06-10 | Masahiro Murakami | Preventives for microbial infections |
| CN1496266A (zh) * | 2001-01-12 | 2004-05-12 | ������ҩ��ʽ���� | 抗变态反应剂 |
| US7128911B2 (en) | 2001-01-19 | 2006-10-31 | Cytos Biotechnology Ag | Antigen arrays for treatment of bone disease |
| KR20030070137A (ko) * | 2001-01-24 | 2003-08-27 | 아마토 세이야쿠 가부시키가이샤 | 항스트레스제 |
| DE10105234A1 (de) | 2001-02-02 | 2002-08-29 | Schoeller Textil Ag Sevelen | Textile Fläche |
| GB0103171D0 (en) | 2001-02-08 | 2001-03-28 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
| GB0105360D0 (en) * | 2001-03-03 | 2001-04-18 | Glaxo Group Ltd | Chimaeric immunogens |
| DE60224508T2 (de) | 2001-03-22 | 2008-12-24 | International Institute of Cancer Immunology, Inc., Suita-shi | Wti-modifiziertes peptid |
| US20030050268A1 (en) * | 2001-03-29 | 2003-03-13 | Krieg Arthur M. | Immunostimulatory nucleic acid for treatment of non-allergic inflammatory diseases |
| EP1515982A4 (en) | 2001-05-09 | 2005-10-26 | Corixa Corp | COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE THERAPY AND DIAGNOSIS OF PROSTATE CANCER |
| WO2002094845A2 (en) | 2001-05-21 | 2002-11-28 | Intercell Ag | Method for stabilising of nucleic acids |
| US6818787B2 (en) * | 2001-06-11 | 2004-11-16 | Xenoport, Inc. | Prodrugs of GABA analogs, compositions and uses thereof |
| GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| KR100985457B1 (ko) | 2001-06-21 | 2010-10-06 | 다이나박스 테크놀로지 코퍼레이션 | 키메라 면역조절 화합물 및 그것들의 사용 방법 |
| US7785610B2 (en) * | 2001-06-21 | 2010-08-31 | Dynavax Technologies Corporation | Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same—III |
| CZ20033515A3 (cs) * | 2001-06-29 | 2005-01-12 | Chiron Corporation | Kompozice vakcíny HCV E1E2 |
| EP1417236A4 (en) | 2001-07-10 | 2010-03-17 | Corixa Corp | COMPOSITIONS AND METHODS FOR ADMINISTRATION OF ENCAPSULATED PROTEINS AND ADJUVANTS IN MICROSPHERES |
| GB0118249D0 (en) | 2001-07-26 | 2001-09-19 | Chiron Spa | Histidine vaccines |
| US7666674B2 (en) | 2001-07-27 | 2010-02-23 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Use of sterically stabilized cationic liposomes to efficiently deliver CPG oligonucleotides in vivo |
| GB0121591D0 (en) | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
| US20030148316A1 (en) * | 2001-08-01 | 2003-08-07 | Lipford Grayson B. | Methods and compositions relating to plasmacytoid dendritic cells |
| CA2456193A1 (en) * | 2001-08-03 | 2003-03-27 | Medarex, Inc. | Compositions comprising immunostimulatory oligonucleotides and uses thereof to enhance fc receptor-mediated immunotherapies |
| JP4607452B2 (ja) | 2001-08-07 | 2011-01-05 | ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション | 免疫調節性組成物、製剤およびその使用方法 |
| AU2002361468A1 (en) * | 2001-08-14 | 2003-03-18 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human S | Method for rapid generation of mature dendritic cells |
| US7361352B2 (en) | 2001-08-15 | 2008-04-22 | Acambis, Inc. | Influenza immunogen and vaccine |
| IL160157A0 (en) * | 2001-08-17 | 2004-07-25 | Coley Pharm Group Inc | Combination motif immune stimulation oligonucleotides with improved activity |
| DK1567641T3 (da) | 2001-08-24 | 2012-08-27 | Uvic Industry Partnerships Inc | Proaerolysin indeholdende proteaseaktiveringssekvenser og fremgangsmåder til anvendelse til behandling af prostatacancer. |
| CA2458876A1 (en) * | 2001-08-30 | 2003-03-13 | 3M Innovative Properties Company | Methods of maturing plasmacytoid dendritic cells using immune response modifier molecules |
| JP2005501917A (ja) * | 2001-09-07 | 2005-01-20 | ザ トラスティーズ オブ ボストン ユニバーシティ | 免疫複合体関連疾患を処置するための方法および組成物 |
| CN1599623B (zh) * | 2001-09-14 | 2011-05-11 | 赛托斯生物技术公司 | 免疫刺激物向病毒样颗粒内的包装:制备方法与用途 |
| WO2003024480A2 (en) * | 2001-09-14 | 2003-03-27 | Cytos Biotechnology Ag | In vivo activation of antigen presenting cells for enhancement of immune responses induced by virus like particles |
| CN100392085C (zh) | 2001-09-20 | 2008-06-04 | 葛兰素集团有限公司 | 疫苗 |
| AU2002353783A1 (en) | 2001-09-24 | 2003-04-07 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of | SUPPRESSORS OF CpG OLIGONUCLEOTIDES AND METHODS OF USE |
| WO2004012669A2 (en) | 2002-08-01 | 2004-02-12 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Method of treating inflammatory arthropathies with suppressors of cpg oligonucleotides |
| US20030119774A1 (en) * | 2001-09-25 | 2003-06-26 | Marianna Foldvari | Compositions and methods for stimulating an immune response |
| EP1447092A4 (en) * | 2001-09-28 | 2007-07-11 | Haruo Sugiyama | METHODS OF INDUCING ANTIGEN-SPECIFIC T CELLS |
| WO2003028757A1 (fr) * | 2001-09-28 | 2003-04-10 | Haruo Sugiyama | Nouvelle methode pour induire des lymphocytes t specifiques d'antigenes |
| AR045702A1 (es) | 2001-10-03 | 2005-11-09 | Chiron Corp | Composiciones de adyuvantes. |
| CN1633598A (zh) * | 2001-10-05 | 2005-06-29 | 科勒制药股份公司 | Toll样受体3信号传导的激动剂和拮抗剂 |
| EP1478371A4 (en) * | 2001-10-12 | 2007-11-07 | Univ Iowa Res Found | METHOD AND PRODUCTS FOR IMPROVING IMMUNE RESPONSES WITH IMIDAZOCHINOLINE COMPOUNDS |
| TW200303759A (en) * | 2001-11-27 | 2003-09-16 | Schering Corp | Methods for treating cancer |
| JP2005519035A (ja) * | 2001-12-07 | 2005-06-30 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | 免疫促進性オリゴデオキシヌクレオチド |
| AU2002356962C1 (en) | 2001-12-12 | 2008-05-01 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods for using extracellular adenosine inhibitors and adenosine receptor inhibitors to enhance immune response and inflammation |
| CA2476755C (en) | 2001-12-17 | 2014-08-26 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of inflammatory bowel disease |
| US8466116B2 (en) | 2001-12-20 | 2013-06-18 | The Unites States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Use of CpG oligodeoxynucleotides to induce epithelial cell growth |
| AU2002366710A1 (en) | 2001-12-20 | 2003-07-09 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of | USE OF CpG OLIGODEOXYNUCLEOTIDES TO INDUCE ANGIOGENESIS |
| WO2003055514A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-10 | Antigenics Inc. | Compositions comprising immunoreactive reagents and saponins, and methods of use thereof |
| US20040034223A1 (en) * | 2002-02-07 | 2004-02-19 | Covalent Partners, Llc. | Amphiphilic molecular modules and constructs based thereon |
| US7432371B2 (en) * | 2002-02-07 | 2008-10-07 | Covalent Partners, Llc | Nanofilm and membrane compositions |
| US8088388B2 (en) * | 2002-02-14 | 2012-01-03 | United Biomedical, Inc. | Stabilized synthetic immunogen delivery system |
| ES2607431T3 (es) | 2002-02-20 | 2017-03-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Micropartículas con moléculas que contienen polipéptidos adsorbidos |
| US7351413B2 (en) | 2002-02-21 | 2008-04-01 | Lorantis, Limited | Stabilized HBc chimer particles as immunogens for chronic hepatitis |
| US20070037769A1 (en) * | 2003-03-14 | 2007-02-15 | Multicell Immunotherapeutics, Inc. | Compositions and methods to treat and control tumors by loading antigen presenting cells |
| JP2005526778A (ja) * | 2002-03-15 | 2005-09-08 | アストラル，インコーポレイテッド | 免疫調節性非コードｒｎａモチーフを用いて抗体及び主要組織適合性クラスｉ拘束性又はクラスｉｉ拘束性ｔ細胞の応答を開始或いは増強させるための組成物及び方法 |
| EP2258712A3 (en) | 2002-03-15 | 2011-05-04 | Multicell Immunotherapeutics, Inc. | Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs |
| WO2003086280A2 (en) * | 2002-04-04 | 2003-10-23 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Immunostimulatory g,u-containing oligoribonucleotides |
| US20030224013A1 (en) * | 2002-04-19 | 2003-12-04 | Cole Garry T. | Methods for protection against Coccidioides spp. infection using Coccidioides spp. urea amidohydrolase (Ure) protein |
| CA2484266A1 (en) * | 2002-05-10 | 2003-11-20 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Cancer vaccines and methods of using the same |
| US20040013649A1 (en) * | 2002-05-10 | 2004-01-22 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Cancer vaccines and methods of using the same |
| US20040009943A1 (en) * | 2002-05-10 | 2004-01-15 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Pathogen vaccines and methods for using the same |
| US20040009944A1 (en) * | 2002-05-10 | 2004-01-15 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Methylated immunostimulatory oligonucleotides and methods of using the same |
| KR100456681B1 (ko) * | 2002-05-22 | 2004-11-10 | 주식회사 대웅 | 박테리아의 염색체 ｄｎａ 파쇄물과 비독성리포폴리사카라이드를 포함하는 면역강화 및 조절 조성물 |
| CA2388049A1 (en) | 2002-05-30 | 2003-11-30 | Immunotech S.A. | Immunostimulatory oligonucleotides and uses thereof |
| SE0201701D0 (sv) * | 2002-06-05 | 2002-06-05 | Gotovax Ab | Treatment of epithelial tumors and infections |
| AU2003243409A1 (en) * | 2002-06-05 | 2003-12-22 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Method for treating autoimmune or inflammatory diseases with combinations of inhibitory oligonucleotides and small molecule antagonists of immunostimulatory cpg nucleic acids |
| DE60335186D1 (de) * | 2002-06-20 | 2011-01-13 | Cytos Biotechnology Ag | Verpackte virusartige partikel in kombination mit cpg zur verwendung als adjuvantien mit allergenen. herstellungsverfahren und verwendung |
| WO2004002500A1 (en) | 2002-06-28 | 2004-01-08 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Method of treating autoimmune diseases with interferon-beta and il-2r antagonist |
| US20040053880A1 (en) * | 2002-07-03 | 2004-03-18 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Nucleic acid compositions for stimulating immune responses |
| US7605138B2 (en) * | 2002-07-03 | 2009-10-20 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Nucleic acid compositions for stimulating immune responses |
| DE10229872A1 (de) | 2002-07-03 | 2004-01-29 | Curevac Gmbh | Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA |
| US7576066B2 (en) * | 2002-07-03 | 2009-08-18 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Nucleic acid compositions for stimulating immune responses |
| US7807803B2 (en) | 2002-07-03 | 2010-10-05 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Nucleic acid compositions for stimulating immune responses |
| US7569553B2 (en) * | 2002-07-03 | 2009-08-04 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Nucleic acid compositions for stimulating immune responses |
| AU2003255969A1 (en) * | 2002-07-17 | 2004-02-02 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Use of cpg nucleic acids in prion-disease |
| EP2316479B8 (en) | 2002-07-18 | 2015-03-18 | University of Washington | Pharmaceutical compositions comprising immunologically active herpes simplex virus (HSV) protein fragments |
| AU2003254585A1 (en) | 2002-07-24 | 2004-02-16 | Intercell Ag | Antigens encoded by alternative reading frame from pathogenic viruses |
| AU2003269864A1 (en) | 2002-08-02 | 2004-02-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccine composition comprising lipooligosaccharide with reduced phase variability |
| ES2355819T3 (es) | 2002-08-15 | 2011-03-31 | 3M Innovative Properties Company | Composiciones inmunoestimuladoras y métodos para estimular una respuesta inmune. |
| AR040996A1 (es) | 2002-08-19 | 2005-04-27 | Coley Pharm Group Inc | Acidos nucleicos inmunoestimuladores |
| GB0220194D0 (en) | 2002-08-30 | 2002-10-09 | Chiron Spa | Improved vesicles |
| EP1537418A2 (en) | 2002-09-13 | 2005-06-08 | Intercell AG | Method for isolating hepatitis c virus peptides |
| US20040106741A1 (en) * | 2002-09-17 | 2004-06-03 | Kriesel Joshua W. | Nanofilm compositions with polymeric components |
| US8263091B2 (en) * | 2002-09-18 | 2012-09-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Method of treating and preventing infections in immunocompromised subjects with immunostimulatory CpG oligonucleotides |
| WO2004031382A1 (ja) * | 2002-10-02 | 2004-04-15 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | 新規なモノクローナル抗体の作製方法 |
| US8043622B2 (en) | 2002-10-08 | 2011-10-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Method of treating inflammatory lung disease with suppressors of CpG oligonucleotides |
| WO2004035618A2 (en) | 2002-10-15 | 2004-04-29 | Intercell Ag | Nucleic acids coding for adhesion factor of group b streptococcus, adhesion factors of group b streptococcus and further uses thereof |
| CA2502268A1 (en) | 2002-10-23 | 2004-05-06 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Methods for vaccinating against malaria |
| AU2003301526A1 (en) * | 2002-10-25 | 2004-05-13 | University Of Connecticut Health Center | Immunotherapy of cancer through controlled cell lysis |
| BR0315810A (pt) * | 2002-10-29 | 2005-09-13 | Coley Pharmaceutical Group Ltd | Uso de oligonucleotìdeos cpg no tratamento de infecção por vìrus da hepatite c |
| EP1572122A4 (en) * | 2002-11-01 | 2008-04-09 | Us Gov Health & Human Serv | METHOD FOR PREVENTING INFECTIONS OF BIOTERRORISM AGENTS WITH IMMUNOSTIMULATING CPG OLIGONUCLEOTIDES |
| CA2506318C (en) | 2002-11-15 | 2011-07-12 | Chiron Srl | Unexpected surface proteins in neisseria meningitidis |
| US7811813B2 (en) * | 2002-11-21 | 2010-10-12 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and immune modulatory nucleic acid compositions for preventing and treating disease |
| GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
| AU2003300831A1 (en) * | 2002-12-11 | 2004-06-30 | Hawaii Biotech, Inc. | Recombinant vaccine against flavivirus infection |
| US20050287170A1 (en) * | 2002-12-11 | 2005-12-29 | Hawaii Biotech, Inc. | Subunit vaccine against West Nile viral infection |
| CA2502015A1 (en) * | 2002-12-11 | 2004-06-24 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | 5' cpg nucleic acids and methods of use |
| KR100525321B1 (ko) * | 2002-12-13 | 2005-11-02 | 안웅식 | 파필로마바이러스 항원 단백질 및ＣｐＧ-올리고데옥시뉴클레오타이드를 포함하는파필로마바이러스 유발 질환의 예방 또는 치료용 약제학적조성물 |
| US8158768B2 (en) | 2002-12-23 | 2012-04-17 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
| EP1575977B1 (en) | 2002-12-23 | 2009-09-09 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
| JP2006516099A (ja) * | 2002-12-23 | 2006-06-22 | ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション | 分枝状の免疫調節化合物及び該化合物の使用方法 |
| JP2006520746A (ja) | 2002-12-27 | 2006-09-14 | カイロン コーポレイション | リン脂質を含む免疫原性組成物 |
| WO2004060319A2 (en) | 2002-12-30 | 2004-07-22 | 3M Innovative Properties Company | Immunostimulatory combinations |
| US7960522B2 (en) | 2003-01-06 | 2011-06-14 | Corixa Corporation | Certain aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use |
| PL220536B1 (pl) | 2003-01-06 | 2015-11-30 | Corixa Corp | Związek aminoalkiloglukozaminidofosforanowy |
| AU2004209660A1 (en) | 2003-02-03 | 2004-08-19 | Fraunhofer Usa, Inc. | System for expression of genes in plants |
| EP1592302A4 (en) * | 2003-02-13 | 2007-04-25 | 3M Innovative Properties Co | METHODS AND COMPOSITIONS ASSOCIATED WITH IMMUNE RESPONSE MODIFIER COMPOUNDS AND TOLL-LIKE RECEPTOR 8 |
| WO2004074454A2 (en) | 2003-02-20 | 2004-09-02 | University Of Connecticut Health Center | Methods and compositions for the treatment of cancer and infectious disease using alpha (2) macroglobulin-antigenic molecule complexes |
| GB2398783A (en) | 2003-02-26 | 2004-09-01 | Antonio Lanzavecchia | A method for producing immortalised human B memory lymphocytes |
| US7485432B2 (en) * | 2003-02-27 | 2009-02-03 | 3M Innovative Properties Company | Selective modulation of TLR-mediated biological activity |
| WO2004078138A2 (en) | 2003-03-04 | 2004-09-16 | 3M Innovative Properties Company | Prophylactic treatment of uv-induced epidermal neoplasia |
| DE602004022923D1 (de) | 2003-03-04 | 2009-10-15 | Intercell Ag | Streptococcus pyogenes antigene |
| NZ567227A (en) * | 2003-03-13 | 2010-01-29 | 3M Innovative Properties Co | Methods of improving skin quality through topical application of an immune response modifier such as imiquimod |
| WO2004080292A2 (en) | 2003-03-13 | 2004-09-23 | 3M Innovative Properties Company | Method of tattoo removal |
| AU2004224746B2 (en) | 2003-03-24 | 2009-04-23 | Valneva Austria Gmbh | Improved vaccines |
| US20040192585A1 (en) | 2003-03-25 | 2004-09-30 | 3M Innovative Properties Company | Treatment for basal cell carcinoma |
| US7537767B2 (en) | 2003-03-26 | 2009-05-26 | Cytis Biotechnology Ag | Melan-A- carrier conjugates |
| US7517520B2 (en) * | 2003-03-26 | 2009-04-14 | Cytos Biotechnology Ag | Packaging of immunostimulatory oligonucleotides into virus-like particles: method of preparation and use |
| JP2006522806A (ja) * | 2003-03-26 | 2006-10-05 | マルチセル・イミュノセラピューティクス，インコーポレイテッド | 細胞死及び／又はアポトーシスを誘導するための、選択されたｒｎａモチーフ |
| DE602004024179D1 (de) | 2003-03-31 | 2009-12-31 | Intercell Ag | Staphylococcus epidermidis antigene |
| AU2004226605A1 (en) * | 2003-04-02 | 2004-10-14 | Coley Pharmaceutical Group, Ltd. | Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations for topical application |
| US20040265351A1 (en) * | 2003-04-10 | 2004-12-30 | Miller Richard L. | Methods and compositions for enhancing immune response |
| US20040202720A1 (en) * | 2003-04-10 | 2004-10-14 | 3M Innovative Properties Company | Delivery of immune response modifier compounds using metal-containing particulate support materials |
| SE0301109D0 (sv) * | 2003-04-14 | 2003-04-14 | Mallen Huang | Nucleotide vaccine composition |
| EP2336357A1 (en) | 2003-04-15 | 2011-06-22 | Intercell AG | S. pneumoniae antigens |
| WO2004096144A2 (en) * | 2003-04-28 | 2004-11-11 | 3M Innovative Properties Company | Compositions and methods for induction of opioid receptors |
| CN101914552A (zh) | 2003-05-07 | 2010-12-15 | 英特塞尔股份公司 | 无乳链球菌抗原ⅰ和ⅱ |
| US7790189B2 (en) | 2003-05-15 | 2010-09-07 | Mitsui Sugar Co., Ltd. | Immunostimulating agents |
| CN1833030B (zh) | 2003-05-22 | 2014-07-23 | 美国弗劳恩霍夫股份有限公司 | 用于表达、传递及纯化目标多肽的重组载体分子 |
| CA2525540A1 (en) | 2003-05-30 | 2004-12-09 | Intercell Ag | Enterococcus antigens |
| CN1798548B (zh) | 2003-06-02 | 2010-05-05 | 诺华疫苗和诊断公司 | 基于含吸附类毒素和含多糖抗原微粒体的免疫原性组合物 |
| WO2005000884A1 (en) | 2003-06-05 | 2005-01-06 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Poly-gamma-glutamic conjugates for eliciting immune responses directed against bacilli |
| CA2528774A1 (en) * | 2003-06-20 | 2005-01-27 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Small molecule toll-like receptor (tlr) antagonists |
| WO2005004907A1 (en) * | 2003-07-10 | 2005-01-20 | Cytos Biotechnology Ag | Packaged virus-like particles |
| US20050013812A1 (en) * | 2003-07-14 | 2005-01-20 | Dow Steven W. | Vaccines using pattern recognition receptor-ligand:lipid complexes |
| JP2007501252A (ja) * | 2003-08-05 | 2007-01-25 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 免疫応答調整剤を含有する製剤 |
| US7648997B2 (en) * | 2003-08-12 | 2010-01-19 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Hydroxylamine substituted imidazoquinolines |
| US20060035242A1 (en) | 2004-08-13 | 2006-02-16 | Michelitsch Melissa D | Prion-specific peptide reagents |
| AU2004266162A1 (en) * | 2003-08-25 | 2005-03-03 | 3M Innovative Properties Company | Immunostimulatory combinations and treatments |
| JP5128815B2 (ja) * | 2003-08-27 | 2013-01-23 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | アリールオキシ置換およびアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリン |
| AU2004268665A1 (en) * | 2003-09-02 | 2005-03-10 | 3M Innovative Properties Company | Methods related to the treatment of mucosal associated conditions |
| CA2537763A1 (en) * | 2003-09-05 | 2005-03-17 | 3M Innovative Properties Company | Treatment for cd5+ b cell lymphoma |
| EP2289547B1 (en) | 2003-09-12 | 2015-12-16 | Agenus Inc. | Vaccine for treatment and prevention of herpes simplex virus infection |
| JP4989225B2 (ja) * | 2003-09-25 | 2012-08-01 | コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド | 核酸親油性接合体 |
| ATE474595T1 (de) | 2003-10-02 | 2010-08-15 | Glaxosmithkline Biolog Sa | B. pertussis antigene und ihre verwendung bei der vakzinierung |
| CA2540541C (en) * | 2003-10-03 | 2012-03-27 | 3M Innovative Properties Company | Alkoxy substituted imidazoquinolines |
| US7544697B2 (en) * | 2003-10-03 | 2009-06-09 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Pyrazolopyridines and analogs thereof |
| US20090075980A1 (en) * | 2003-10-03 | 2009-03-19 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Pyrazolopyridines and Analogs Thereof |
| CA2542099A1 (en) * | 2003-10-11 | 2005-04-21 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Methods and compositions for enhancing innate immunity and antibody dependent cellular cytotoxicity |
| NZ546275A (en) * | 2003-10-30 | 2009-05-31 | Coley Pharm Gmbh | C-class oligonucleotides analogs with enhanced immunostimulatory potency |
| EP1680080A4 (en) * | 2003-10-31 | 2007-10-31 | 3M Innovative Properties Co | NEUTROPHILIC ACTIVATION THROUGH COMPOUNDS TO MODIFY THE IMMUNE RESPONSE |
| US20050239733A1 (en) * | 2003-10-31 | 2005-10-27 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Sequence requirements for inhibitory oligonucleotides |
| US20050100983A1 (en) * | 2003-11-06 | 2005-05-12 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Cell-free methods for identifying compounds that affect toll-like receptor 9 (TLR9) signaling |
| WO2005048933A2 (en) | 2003-11-14 | 2005-06-02 | 3M Innovative Properties Company | Oxime substituted imidazo ring compounds |
| CN1906192A (zh) * | 2003-11-14 | 2007-01-31 | 3M创新有限公司 | 羟胺取代的咪唑环化合物 |
| US8691837B2 (en) * | 2003-11-25 | 2014-04-08 | 3M Innovative Properties Company | Substituted imidazo ring systems and methods |
| US20050287118A1 (en) * | 2003-11-26 | 2005-12-29 | Epitomics, Inc. | Bacterial plasmid with immunological adjuvant function and uses thereof |
| US20050277127A1 (en) * | 2003-11-26 | 2005-12-15 | Epitomics, Inc. | High-throughput method of DNA immunogen preparation and immunization |
| US20050226878A1 (en) * | 2003-12-02 | 2005-10-13 | 3M Innovative Properties Company | Therapeutic combinations and methods including IRM compounds |
| US8940755B2 (en) * | 2003-12-02 | 2015-01-27 | 3M Innovative Properties Company | Therapeutic combinations and methods including IRM compounds |
| ATE554106T1 (de) | 2003-12-23 | 2012-05-15 | Arbor Vita Corp | Antikörper für onkogene stämme von hpv und verfahren zu deren verwendung |
| JP4817599B2 (ja) * | 2003-12-25 | 2011-11-16 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 免疫活性増強剤とこれを用いた免疫活性の増強方法 |
| JP2007517035A (ja) * | 2003-12-29 | 2007-06-28 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | アリールアルケニルおよびアリールアルキニル置換されたイミダゾキノリン |
| JP2007517055A (ja) * | 2003-12-30 | 2007-06-28 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 免疫応答の増強 |
| AU2004312508A1 (en) * | 2003-12-30 | 2005-07-21 | 3M Innovative Properties Company | Imidazoquinolinyl, imidazopyridinyl, and imidazonaphthyridinyl sulfonamides |
| WO2005072290A2 (en) * | 2004-01-23 | 2005-08-11 | Joslin Diabetes Center | Methods of treating, reducing, or preventing autoimmune conditions |
| CA2555274A1 (en) | 2004-02-05 | 2005-08-25 | The Ohio State University Research Foundation | Chimeric vegf peptides |
| US20050181035A1 (en) * | 2004-02-17 | 2005-08-18 | Dow Steven W. | Systemic immune activation method using non CpG nucleic acids |
| US20050256073A1 (en) * | 2004-02-19 | 2005-11-17 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Immunostimulatory viral RNA oligonucleotides |
| US7927580B2 (en) * | 2004-03-16 | 2011-04-19 | Nanirx, Inc. | Tat-based immunomodulatory compositions and methods of their discovery and use |
| WO2005092360A1 (en) | 2004-03-19 | 2005-10-06 | Xiu-Min Li | Herbal therapy for the treatment of food allergy |
| AU2005228150A1 (en) * | 2004-03-24 | 2005-10-13 | 3M Innovative Properties Company | Amide substituted imidazopyridines, imidazoquinolines, and imidazonaphthyridines |
| TWI235440B (en) * | 2004-03-31 | 2005-07-01 | Advanced Semiconductor Eng | Method for making leadless semiconductor package |
| CA2562283A1 (en) * | 2004-04-09 | 2005-11-24 | 3M Innovative Properties Company | Methods, compositions, and preparations for delivery of immune response modifiers |
| CN101426524A (zh) * | 2004-04-28 | 2009-05-06 | 3M创新有限公司 | 用于粘膜接种疫苗的组合物和方法 |
| CA2565714C (en) | 2004-05-06 | 2014-12-23 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Methods and compositions for the treatment of uveitis |
| WO2006031264A2 (en) | 2004-05-25 | 2006-03-23 | Oregon Health And Science University | Siv and hiv vaccination using rhcmv- and hcmv-based vaccine vectors |
| US20050267145A1 (en) * | 2004-05-28 | 2005-12-01 | Merrill Bryon A | Treatment for lung cancer |
| AU2005294805B2 (en) | 2004-05-28 | 2012-02-16 | Oryxe | A mixture for transdermal delivery of low and high molecular weight compounds |
| US8017779B2 (en) * | 2004-06-15 | 2011-09-13 | 3M Innovative Properties Company | Nitrogen containing heterocyclyl substituted imidazoquinolines and imidazonaphthyridines |
| US7915281B2 (en) * | 2004-06-18 | 2011-03-29 | 3M Innovative Properties Company | Isoxazole, dihydroisoxazole, and oxadiazole substituted imidazo ring compounds and method |
| WO2006009832A1 (en) * | 2004-06-18 | 2006-01-26 | 3M Innovative Properties Company | Substituted imidazo ring systems and methods |
| WO2006038923A2 (en) * | 2004-06-18 | 2006-04-13 | 3M Innovative Properties Company | Aryl substituted imidazonaphthyridines |
| US8026366B2 (en) * | 2004-06-18 | 2011-09-27 | 3M Innovative Properties Company | Aryloxy and arylalkyleneoxy substituted thiazoloquinolines and thiazolonaphthyridines |
| WO2007026190A2 (en) | 2004-07-18 | 2007-03-08 | Csl Limited | Immuno stimulating complex and oligonucleotide formulations for inducing enhanced interferon-gamma responses |
| ES2534288T3 (es) | 2004-08-03 | 2015-04-21 | Innate Pharma | Composiciones terapéuticas contra el cáncer que seleccionan como objetivo 4Ig-B7-H3 |
| GB0417494D0 (en) | 2004-08-05 | 2004-09-08 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| EP1786450A4 (en) * | 2004-08-27 | 2009-11-11 | 3M Innovative Properties Co | HIV IMMUNOSTIMATORY COMPOSITIONS |
| US20090270443A1 (en) * | 2004-09-02 | 2009-10-29 | Doris Stoermer | 1-amino imidazo-containing compounds and methods |
| WO2006032500A2 (en) | 2004-09-22 | 2006-03-30 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
| US9573979B2 (en) | 2004-09-24 | 2017-02-21 | Susanne Modrow | Modified VP1-capsid protein of parvovirus B19 |
| JP2008000001A (ja) * | 2004-09-30 | 2008-01-10 | Osaka Univ | 免疫刺激オリゴヌクレオチドおよびその医薬用途 |
| EP1804583A4 (en) * | 2004-10-08 | 2009-05-20 | 3M Innovative Properties Co | ADJUVANT FOR DNA VACCINE |
| CA2587084C (en) | 2004-10-08 | 2019-07-16 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention | Modulation of replicative fitness by using less frequently used synonym ous codons |
| MY159370A (en) * | 2004-10-20 | 2016-12-30 | Coley Pharm Group Inc | Semi-soft-class immunostimulatory oligonucleotides |
| US7332324B2 (en) | 2004-12-03 | 2008-02-19 | University Of Toledo | Attenuated vaccine useful for immunizations against Coccidioides spp. infections |
| JP2008523076A (ja) * | 2004-12-08 | 2008-07-03 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 免疫調節性の組成物、合剤、および方法 |
| US9809824B2 (en) | 2004-12-13 | 2017-11-07 | The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | CpG oligonucleotide prodrugs, compositions thereof and associated therapeutic methods |
| WO2006083440A2 (en) | 2004-12-30 | 2006-08-10 | 3M Innovative Properties Company | Substituted chiral fused [1,2]imidazo[4,5-c] ring compounds |
| JP2008526765A (ja) | 2004-12-30 | 2008-07-24 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 皮膚転移の処置 |
| WO2006074003A2 (en) | 2004-12-30 | 2006-07-13 | 3M Innovative Properties Company | CHIRAL FUSED [1,2]IMIDAZO[4,5-c] RING COMPOUNDS |
| PL2682126T3 (pl) | 2005-01-27 | 2017-07-31 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Szczepionki pęcherzykowe oparte na GNA1870 dla szerokiego spektrum ochrony przeciwko chorobom spowodowanym przez Neisseria meningitidis |
| CA2597092A1 (en) * | 2005-02-04 | 2006-08-10 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Aqueous gel formulations containing immune reponse modifiers |
| AU2006213746A1 (en) | 2005-02-11 | 2006-08-17 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Oxime and hydroxylamine substituted imidazo(4,5-c) ring compounds and methods |
| CA2598992A1 (en) * | 2005-02-24 | 2006-08-31 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Immunostimulatory oligonucleotides |
| GB0504436D0 (en) | 2005-03-03 | 2005-04-06 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| US8101345B1 (en) | 2005-03-25 | 2012-01-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Proinflammatory nucleic acids |
| CA2602637A1 (en) | 2005-03-31 | 2006-10-05 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccines against chlamydial infection |
| WO2006107851A1 (en) | 2005-04-01 | 2006-10-12 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | 1-substituted pyrazolo (3,4-c) ring compounds as modulators of cytokine biosynthesis for the treatment of viral infections and neoplastic diseases |
| EP1869043A2 (en) | 2005-04-01 | 2007-12-26 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Pyrazolopyridine-1,4-diamines and analogs thereof |
| US8642577B2 (en) | 2005-04-08 | 2014-02-04 | Chimerix, Inc. | Compounds, compositions and methods for the treatment of poxvirus infections |
| ZA200708863B (en) * | 2005-04-08 | 2009-03-25 | Coley Pharm Group Inc | Methods for treating infectious disease exacerbated asthma |
| EP2842559A3 (en) * | 2005-04-08 | 2015-03-18 | Chimerix, Inc. | Compounds, compositions and methods for the treatment of viral infections and other medical disorders |
| AU2006241166A1 (en) | 2005-04-25 | 2006-11-02 | 3M Innovative Properties Company | Immunostimulatory compositions |
| CA2609788A1 (en) * | 2005-04-26 | 2006-11-02 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Modified oligoribonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory activity |
| DK2426141T3 (da) | 2005-04-29 | 2014-11-10 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Fremgangsmåde til forebyggelse eller behandling af M tuberkuloseinfektioner |
| AU2006257664B2 (en) | 2005-06-14 | 2013-01-10 | Protox Therapeutics Incorporated | Method of treating or preventing benign prostatic hyperplasia using modified pore-forming proteins |
| EP1912680B1 (en) | 2005-06-15 | 2014-11-26 | The Ohio State University Research Foundation | Her-2 peptides |
| GB0513421D0 (en) | 2005-06-30 | 2005-08-03 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccines |
| PT2179737E (pt) | 2005-07-01 | 2013-12-05 | Index Pharmaceuticals Ab | Método para modular a capacidade de resposta aos esteróides |
| AU2006266503B2 (en) | 2005-07-01 | 2011-12-08 | Index Pharmaceuticals Ab | Immunostimulatory method |
| US20090117132A1 (en) * | 2005-07-07 | 2009-05-07 | Pfizer, Inc. | Anti-Ctla-4 Antibody and Cpg-Motif-Containing Synthetic Oligodeoxynucleotide Combination Therapy for Cancer Treatment |
| WO2007008904A2 (en) | 2005-07-08 | 2007-01-18 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Targeting poly-gamma-glutamic acid to treat staphylococcus epidermidis and related infections |
| JP2009500454A (ja) | 2005-07-11 | 2009-01-08 | グローブイミューン， インコーポレイテッド | 標的化治療の変異型を回避する免疫応答を惹起するための組成物および方法 |
| JP2009502207A (ja) | 2005-08-03 | 2009-01-29 | フラウンホーファー ユーエスエー， インコーポレイテッド | イムノグロブリンの産生のための組成物および方法 |
| US20100130425A1 (en) | 2005-09-09 | 2010-05-27 | Oregon Health & Science University | Use of toll-like receptor ligands in treating excitotoxic injury, ischemia and/or hypoxia |
| WO2007031877A2 (en) * | 2005-09-16 | 2007-03-22 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Modulation of immunostimulatory properties of short interfering ribonucleic acid (sirna) by nucleotide modification |
| JP2010503608A (ja) * | 2005-09-16 | 2010-02-04 | コーリー ファーマシューティカル ゲーエムベーハー | ホスホジエステルバックボーンを有する免疫刺激性一本鎖リボ核酸 |
| WO2007041190A2 (en) * | 2005-09-30 | 2007-04-12 | The University Of Iowa Research Foundation | Polymer-based delivery system for immunotherapy of cancer |
| EP1940472A1 (en) | 2005-10-28 | 2008-07-09 | Index Pharmaceuticals AB | Composition and method for the prevention, treatment and/or alleviation of an inflammatory disease |
| BRPI0622298A8 (pt) | 2005-11-25 | 2016-04-05 | Coley Pharm Gmbh | Oligorribonucleotídeo para estimular a produção de uma citocina pró-inflamatória, uso do mesmo e composição contendo tal oligorribonucleotídeo |
| CA2632630C (en) | 2005-12-13 | 2016-12-06 | President And Fellows Of Harvard College | Scaffolds for cell transplantation |
| WO2007068747A1 (en) | 2005-12-14 | 2007-06-21 | Cytos Biotechnology Ag | Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity |
| SI1962899T1 (sl) | 2005-12-22 | 2011-11-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Pnevmokokna polisaharidna konjugatna vakcina |
| GB0607088D0 (en) | 2006-04-07 | 2006-05-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| US9259463B2 (en) | 2006-01-16 | 2016-02-16 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Chlamydia vaccine |
| EA015561B1 (ru) | 2006-01-17 | 2011-08-30 | Арне Форсгрен | НОВЫЙ ПОВЕРХНОСТНЫЙ БЕЛОК HAEMOPHILUS INFLUENZAE (БЕЛОК E; pE) |
| KR20080106433A (ko) | 2006-02-13 | 2008-12-05 | 프라운호퍼 유에스에이, 인코포레이티드 | 인플루엔자 항원, 백신 조성물 및 관련 방법 |
| US20080045473A1 (en) | 2006-02-15 | 2008-02-21 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Compositions and methods for oligonucleotide formulations |
| EP3085373A1 (en) | 2006-02-22 | 2016-10-26 | 3M Innovative Properties Company | Immune response modifier conjugates |
| BRPI0708865A8 (pt) | 2006-03-14 | 2019-01-22 | Univ Oregon Health & Science | métodos para produzir uma resposta imune à tuberculose |
| BRPI0710210A2 (pt) | 2006-03-30 | 2011-05-24 | Glaxomithkline Biolog S A | composição imunogênica, vacina, métodos para preparar a vacina, e para prevenir ou tratar infecção estafilocócica, uso da composição imunogênica, e, processo para conjugar oligassacarìdeo ou polissacarìdeo capsular |
| WO2007119815A1 (ja) | 2006-04-14 | 2007-10-25 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Ｔｏｌｌ様受容体９作動薬 |
| EP2034015B1 (en) | 2006-05-31 | 2012-07-11 | Toray Industries, Inc. | Immunostimulatory oligonucleotide and pharmaceutical application thereof |
| EP2390358A1 (en) | 2006-06-02 | 2011-11-30 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Method for identifying whether a patient will be responder or not to immunotherapy based on the differential expression of the GZMK gene |
| KR100906970B1 (ko) | 2006-06-03 | 2009-07-10 | 주식회사 바이오씨에스 | 피부 면역질환에 대한 ＣｐＧ 올리고데옥시뉴클레오티드의치료학적 용도 |
| WO2007143582A2 (en) * | 2006-06-05 | 2007-12-13 | Baylor College Of Medicine | Reversal of the suppressive function of specific t cells via toll-like receptor 8 signaling |
| PT2032592E (pt) | 2006-06-12 | 2013-08-28 | Cytos Biotechnology Ag | Processos para o empacotamento de oligonucleótidos em partículas semelhantes a vírus de bacteriófagos de arn |
| CA2654709A1 (en) | 2006-06-12 | 2007-12-21 | Nathalie Devos | Neisseria meningitidis lipooligosaccharide vaccine |
| EP2287188A1 (en) | 2006-07-07 | 2011-02-23 | Intercell AG | Small Streptococcus pyogenes antigens and their use |
| US8128921B2 (en) * | 2006-07-11 | 2012-03-06 | University Of Connecticut | Use of conditional plasmodium strains lacking nutrient transporters in malaria vaccination |
| US8153116B2 (en) | 2006-07-11 | 2012-04-10 | University Of Connecticut | Use of conditional plasmodium strains lacking an essential gene in malaria vaccination |
| WO2008008432A2 (en) * | 2006-07-12 | 2008-01-17 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Substituted chiral fused( 1,2) imidazo (4,5-c) ring compounds and methods |
| JP2010507361A (ja) | 2006-07-31 | 2010-03-11 | キュアバック ゲーエムベーハー | 具体的には免疫刺激剤／アジュバントとしての、一般式（Ｉ）：ＧｌＸｍＧｎ、または一般式（ＩＩ）：ＣｌＸｍＣｎで表される核酸 |
| DE102006035618A1 (de) * | 2006-07-31 | 2008-02-07 | Curevac Gmbh | Nukleinsäure der Formel (I): GlXmGn, insbesondere als immunstimulierendes Adjuvanz |
| EA015964B1 (ru) | 2006-09-07 | 2012-01-30 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Вакцина |
| CN101516905A (zh) | 2006-09-15 | 2009-08-26 | 英特塞尔股份公司 | 疏螺旋体属抗原 |
| FI2068918T4 (fi) | 2006-09-26 | 2024-08-16 | Access To Advanced Health Inst | Synteettistä adjuvanttia sisältävä rokotekoostumus |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| CN101517082B (zh) | 2006-09-27 | 2014-01-22 | 科勒制药有限责任公司 | 具有增强的免疫刺激活性的含疏水性T类似物的CpG寡聚核苷酸类似物 |
| BRPI0718182A2 (pt) * | 2006-10-26 | 2014-02-25 | Coley Pharm Gmbh | Oligorribonucleotídeos e seus usos. |
| DK2442107T3 (da) | 2006-11-01 | 2014-05-19 | Ventana Med Syst Inc | Haptener, haptenkonjugater, sammensætninger deraf og fremgangsmåde til deres fremstilling og anvendelse |
| WO2008057529A2 (en) * | 2006-11-06 | 2008-05-15 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Peptide-based vaccine compositions to endogenous cholesteryl ester transfer protein (cetp) |
| JP5714818B2 (ja) * | 2006-11-09 | 2015-05-07 | ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション | 免疫刺激性オリゴヌクレオチドを使用する長期疾患修飾 |
| EP1923069A1 (en) | 2006-11-20 | 2008-05-21 | Intercell AG | Peptides protective against S. pneumoniae and compositions, methods and uses relating thereto |
| US20080149123A1 (en) | 2006-12-22 | 2008-06-26 | Mckay William D | Particulate material dispensing hairbrush with combination bristles |
| EP2269625A3 (en) | 2007-01-12 | 2012-08-08 | Intercell AG | Protective proteins of S. agalactiae, combinations thereof and methods of using the same |
| EP2444410A3 (en) | 2007-02-28 | 2012-08-08 | The Govt. Of U.S.A. As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Brachyury polypeptides and methods for use |
| EA021391B1 (ru) | 2007-03-02 | 2015-06-30 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Способ индукции иммунного ответа, вакцинная композиция, ее применение и набор |
| WO2008106803A1 (en) * | 2007-03-07 | 2008-09-12 | Nventa Biopharmaceuticals Corporation | Double-stranded locked nucleic acid compositions |
| KR20100015661A (ko) | 2007-03-19 | 2010-02-12 | 글로브이뮨 | 암의 표적 치료법의 돌연변이성 이탈의 표적 절제를 위한 조성물 및 방법 |
| JP5378350B2 (ja) | 2007-04-04 | 2013-12-25 | インフェクティアス ディジーズ リサーチ インスティチュート | 結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）ポリペプチドおよびその融合物を含む免疫原性組成物 |
| PE20090146A1 (es) | 2007-04-20 | 2009-03-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Composicion inmunogenica contra el virus influenza |
| WO2008134643A2 (en) | 2007-04-28 | 2008-11-06 | Fraunhofer Usa, Inc. | Trypanosoma antigens, vaccine compositions, and related methods |
| EP2682127A1 (en) | 2007-05-02 | 2014-01-08 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine |
| EP2360177A1 (en) | 2007-05-02 | 2011-08-24 | Intercell AG | Klebsiella antigens |
| EP2160465B1 (en) * | 2007-05-04 | 2013-01-02 | Index Pharmaceuticals AB | Tumour growth inhibitory compounds and methods of their use |
| BRPI0811621A2 (pt) * | 2007-05-17 | 2014-10-21 | Coley Pharm Group Inc | Oligonucleotídeos de classe a com potência imunoestimuladora, composição contendo os mesmos e uso da referida composição |
| HUE025645T2 (hu) * | 2007-05-18 | 2016-04-28 | Adiutide Pharmaceuticals Gmbh | Immunstimuláló hatású foszfát-módosított oligonukleotid analógok |
| ES2731432T3 (es) * | 2007-05-23 | 2019-11-15 | Ventana Med Syst Inc | Transportadores poliméricos para inmunohistoquímica e hibridación in situ |
| CN101678091A (zh) | 2007-05-24 | 2010-03-24 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 冷冻干燥的抗原组合物 |
| DK2158211T3 (en) | 2007-05-31 | 2016-12-05 | Medigene Ag | Mutated structural protein of a parvovirus |
| EP2012122A1 (en) | 2007-07-06 | 2009-01-07 | Medigene AG | Mutated parvovirus structural proteins as vaccines |
| US20100203075A1 (en) | 2007-06-18 | 2010-08-12 | Intercell Ag | Chlamydia antigens |
| ES2626662T3 (es) | 2007-06-26 | 2017-07-25 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vacuna que comprende conjugados de polisacárido capsular de Streptococcus pneumoniae |
| EP3061462B1 (en) | 2007-07-02 | 2019-02-27 | Etubics Corporation | Methods and compositions for producing an adenovirus vector for use with multiple vaccinations |
| WO2009009759A2 (en) | 2007-07-11 | 2009-01-15 | Fraunhofer Usa, Inc. | Yersinia pestis antigens, vaccine compositions, and related methods |
| ES2539818T3 (es) | 2007-08-02 | 2015-07-06 | Biondvax Pharmaceuticals Ltd. | Vacunas contra la gripe multiepitópicas multiméricas |
| EP2185577A4 (en) | 2007-08-03 | 2010-09-22 | Harvard College | CHLAMYDIAN ANTIGENS |
| US7879812B2 (en) | 2007-08-06 | 2011-02-01 | University Of Iowa Research Foundation | Immunomodulatory oligonucleotides and methods of use therefor |
| BRPI0815199A2 (pt) | 2007-08-13 | 2015-03-31 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Uso de um antígeno derivado da proteína circunsporozóite de plasmodium falciparum |
| KR20100075843A (ko) * | 2007-08-21 | 2010-07-05 | 다이나박스 테크놀로지 코퍼레이션 | 인플루엔자 단백질 조성물 및 그 제조 및 사용 방법 |
| JP2010536907A (ja) | 2007-08-31 | 2010-12-02 | ニューリミューン セラピューティクス エイジー | 患者にアミロイドーシスおよびタンパク質凝集性障害における特異的免疫応答をもたらす方法 |
| WO2009030254A1 (en) | 2007-09-04 | 2009-03-12 | Curevac Gmbh | Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation |
| WO2009037441A1 (en) | 2007-09-17 | 2009-03-26 | Oncomethylome Sciences Sa | Improved methylation detection |
| KR20100068422A (ko) * | 2007-10-09 | 2010-06-23 | 콜리 파마슈티칼 게엠베하 | 변경된 당 잔기를 함유하는 면역자극성 올리고뉴클레오티드 유사체 |
| SG187482A1 (en) | 2007-11-07 | 2013-02-28 | Celldex Therapeutics Inc | Antibodies that bind human dendritic and epithelial cell 205 (dec-205) |
| WO2010008411A1 (en) | 2007-11-09 | 2010-01-21 | The Salk Institute For Biological Studies | Use of tam receptor inhibitors as immunoenhancers and tam activators as immunosuppressors |
| AU2008331800A1 (en) | 2007-12-03 | 2009-06-11 | President And Fellows Of Harvard College | Chlamydia antigens |
| AU2008335457B2 (en) | 2007-12-07 | 2015-04-16 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Compositions for inducing immune responses |
| EP3109258B1 (en) | 2007-12-24 | 2019-01-23 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Recombinant rsv antigens |
| US8993542B2 (en) * | 2008-01-25 | 2015-03-31 | Chimerix Inc. | Methods of treating viral infections |
| KR101483715B1 (ko) | 2008-01-31 | 2015-01-19 | 큐어백 게엠바하 | 면역증강제／애주번트인 화학식（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａ를 포함하는 핵산 및 이의 유도체 |
| JP5690143B2 (ja) | 2008-02-13 | 2015-03-25 | プレジデント・アンド・フェロウズ・オブ・ハーバード・カレッジ | 持続的細胞プログラミング装置 |
| WO2009105641A2 (en) | 2008-02-20 | 2009-08-27 | New York University | Preventing and treating amyloid-beta deposition by stimulation of innate immunity |
| EP2631245A1 (en) | 2008-03-10 | 2013-08-28 | Children's Hospital & Research Center at Oakland | Chimeric factor H binding proteins (fHBP) containing a heterologous B domain and methods of use |
| BRPI0909664A2 (pt) | 2008-03-17 | 2019-09-24 | Intercell Ag | peptídios protetores contra s. pneumoniae e composições, métodos e usos relacionados com os mesmos |
| JP2011518186A (ja) | 2008-04-18 | 2011-06-23 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | 自己集合性ワクチンを使用する免疫療法 |
| WO2009140626A2 (en) * | 2008-05-15 | 2009-11-19 | Dynavax Technologies Corporation | Long term disease modification using immunostimulatory oligonucleotides |
| US8222225B2 (en) | 2008-05-21 | 2012-07-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Method of treating pneumoconiosis with oligodeoxynucleotides |
| AU2009248810B2 (en) | 2008-05-23 | 2013-12-05 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoemulsion vaccines |
| EP2300799B1 (en) | 2008-06-05 | 2015-11-25 | Ventana Medical Systems, Inc. | Method for histochemical processessing and use of a composition for histochemical processing |
| TWI351288B (en) * | 2008-07-04 | 2011-11-01 | Univ Nat Pingtung Sci & Tech | Cpg dna adjuvant in avian vaccines |
| KR101707569B1 (ko) | 2008-08-01 | 2017-02-16 | 감마 백신즈 피티와이 리미티드 | 인플루엔자 백신 |
| CN102187224A (zh) | 2008-09-22 | 2011-09-14 | 俄勒冈健康科学大学 | 用于检测结核分枝杆菌感染的方法 |
| CA2738245A1 (en) | 2008-09-26 | 2010-04-01 | Nanobio Corporation | Nanoemulsion therapeutic compositions and methods of using the same |
| WO2010037046A1 (en) | 2008-09-28 | 2010-04-01 | Fraunhofer Usa, Inc. | Humanized neuraminidase antibody and methods of use thereof |
| WO2010037408A1 (en) | 2008-09-30 | 2010-04-08 | Curevac Gmbh | Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof |
| AU2009304552B2 (en) | 2008-10-16 | 2015-02-19 | Dalhousie University | Combination adjuvant formulation |
| WO2010048572A1 (en) | 2008-10-23 | 2010-04-29 | Cornell University | A novel anti-viral method |
| WO2010048731A1 (en) * | 2008-10-31 | 2010-05-06 | Christopher John Ong | Aminoacyl trna-synthetase inhibitors as broad-spectrum immunosuppressive agents |
| US9974844B2 (en) | 2008-11-17 | 2018-05-22 | The Regents Of The University Of Michigan | Cancer vaccine compositions and methods of using the same |
| ES2866623T3 (es) | 2008-11-24 | 2021-10-19 | Massachusetts Inst Technology | Métodos y composiciones para el suministro localizado de nanopartículas a un tumor |
| CN102282155B (zh) | 2008-12-02 | 2017-06-09 | 日本波涛生命科学公司 | 磷原子修饰的核酸的合成方法 |
| KR20110091560A (ko) | 2008-12-03 | 2011-08-11 | 프로테아 벡신 테크놀로지스 엘티디. | 글루타밀 ｔＲＮＡ 합성효소(ＧｔＳ) 단편들 |
| US20110268757A1 (en) | 2008-12-03 | 2011-11-03 | Institut Pasteur | Use of phenol-soluble modulins for vaccine development |
| BRPI0923341B8 (pt) | 2008-12-09 | 2021-05-25 | Coley Pharm Group Inc | oligonucleotideo imunoestimulador, vacina compreendendo o mesmo e seu uso |
| US8552165B2 (en) * | 2008-12-09 | 2013-10-08 | Heather Davis | Immunostimulatory oligonucleotides |
| KR101634058B1 (ko) | 2008-12-09 | 2016-06-27 | 화이자 백신스 엘엘씨 | ＩｇＥ ＣＨ３ 펩티드 백신 |
| EP2384120B1 (en) | 2009-01-05 | 2019-12-11 | Epitogenesis Inc. | Adjuvant compositions and methods of use |
| JP5379243B2 (ja) | 2009-01-20 | 2013-12-25 | トランジェーヌ、ソシエテ、アノニム | 患者を選択するためのバイオマーカーおよびそれに関連する方法 |
| US20100234283A1 (en) | 2009-02-04 | 2010-09-16 | The Ohio State University Research Foundation | Immunogenic epitopes, peptidomimetics, and anti-peptide antibodies, and methods of their use |
| WO2010089340A2 (en) | 2009-02-05 | 2010-08-12 | Intercell Ag | Peptides protective against e. faecalis, methods and uses relating thereto |
| US8617574B2 (en) | 2009-02-13 | 2013-12-31 | Valneva Austria Gmbh | Nontypable Haemophilus influenzae antigens |
| US8664183B2 (en) | 2009-02-27 | 2014-03-04 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | SPANX-B polypeptides and their use |
| BRPI1009873A2 (pt) | 2009-03-17 | 2016-03-08 | Glaxosmithkline Biolog Sa | detecção aperfeiçoada de expressão gênica |
| CN102405057B (zh) | 2009-03-23 | 2016-05-25 | 那尼尔科斯治疗公司 | 用免疫刺激性Hiv Tat衍生物多肽治疗癌症 |
| JP5774578B2 (ja) | 2009-03-24 | 2015-09-09 | トランジェーヌ、ソシエテ、アノニムＴｒａｎｓｇｅｎｅ Ｓ．Ａ． | 患者をモニターするためのバイオマーカー |
| RU2015117604A (ru) | 2009-04-03 | 2015-10-27 | Эйдженус Инк. | Способы получения и применения мультишаперон-антигенных комплексов |
| HRP20140262T1 (hr) | 2009-04-17 | 2014-04-25 | Transgene Sa | Biomarker za praä†enje pacijenata |
| AU2010239689A1 (en) * | 2009-04-21 | 2011-11-03 | Selecta Biosciences, Inc. | Immunonanotherapeutics providing a Th1-biased response |
| BRPI1014494A2 (pt) | 2009-04-30 | 2016-08-02 | Coley Pharm Group Inc | vacina pneumocócica e usos da mesma |
| EP2435469A1 (en) | 2009-05-27 | 2012-04-04 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Casb7439 constructs |
| AU2010254549B2 (en) | 2009-05-27 | 2016-10-20 | Selecta Biosciences, Inc. | Nanocarriers possessing components with different rates of release |
| PT2437753T (pt) | 2009-06-05 | 2016-11-23 | Infectious Disease Res Inst | Adjuvantes lipídicos de glucopiranosilo sintéticos e composições de vacina contendo os mesmos |
| EP2442827B1 (en) | 2009-06-16 | 2016-01-06 | The Regents of the University of Michigan | Nanoemulsion vaccines |
| SI2445526T1 (sl) | 2009-06-24 | 2016-08-31 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Rekombinantni RSV antigeni |
| EP2445527A2 (en) | 2009-06-24 | 2012-05-02 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Vaccine |
| CA2767253A1 (en) | 2009-07-06 | 2011-01-13 | Ontorii, Inc. | Novel nucleic acid prodrugs and methods of use thereof |
| JP5650212B2 (ja) | 2009-07-10 | 2015-01-07 | トランジェーヌ、ソシエテ、アノニムＴｒａｎｓｇｅｎｅ Ｓ．Ａ． | 患者を選択するためのバイオマーカーおよび関連方法 |
| US20110305727A1 (en) | 2009-07-15 | 2011-12-15 | Novartis Ag | Rsv f protein compositions and methods for making same |
| WO2011011519A1 (en) | 2009-07-21 | 2011-01-27 | Chimerix, Inc. | Compounds, compositions and methods for treating ocular conditions |
| CA2768346A1 (en) * | 2009-07-30 | 2011-02-03 | Pfizer Vaccines Llc | Antigenic tau peptides and uses thereof |
| US20110033515A1 (en) * | 2009-08-04 | 2011-02-10 | Rst Implanted Cell Technology | Tissue contacting material |
| GB0913680D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| GB0913681D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| EP2471801A4 (en) | 2009-08-26 | 2013-12-04 | Rna Inc | GLYCOLIPIDES DERIVED FROM LIPOTHEICHOIC ACID AND COMPOSITIONS CONTAINING THESE GLYCOLIPIDS |
| WO2011026111A1 (en) | 2009-08-31 | 2011-03-03 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Oral delivery of a vaccine to the large intestine to induce mucosal immunity |
| KR101660578B1 (ko) | 2009-09-03 | 2016-09-27 | 화이자 백신스 엘엘씨 | Ｐｃｓｋ９ 백신 |
| US20110053829A1 (en) | 2009-09-03 | 2011-03-03 | Curevac Gmbh | Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids |
| CN102573886A (zh) * | 2009-09-17 | 2012-07-11 | 相互制药公司 | 用抗病毒剂治疗哮喘的方法 |
| GB0917457D0 (en) | 2009-10-06 | 2009-11-18 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method |
| CA2776144C (en) | 2009-09-29 | 2020-10-27 | Fraunhofer Usa, Inc. | Influenza hemagglutinin antibodies, compositions, and related methods |
| WO2011041886A1 (en) | 2009-10-07 | 2011-04-14 | University Of Victoria Innovation And Development Corporation | Vaccines comprising heat-sensitive transgenes |
| EP2308896A1 (en) | 2009-10-09 | 2011-04-13 | Sanofi-aventis | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
| JP2013507115A (ja) | 2009-10-09 | 2013-03-04 | サノフイ | 「終末糖化産物受容体」への結合のためのポリペプチド、さらにはそれを含む組成物及び方法 |
| EP2319871A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-05-11 | Sanofi-aventis | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
| US9181306B2 (en) | 2009-10-16 | 2015-11-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Insertion of foreign genes in rubella virus and their stable expression in a live, attenuated viral vaccine |
| GB0919117D0 (en) | 2009-10-30 | 2009-12-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process |
| US8961989B2 (en) | 2009-11-20 | 2015-02-24 | Oregon Health & Science University | Methods for producing an immune response to tuberculosis |
| WO2011067758A2 (en) | 2009-12-02 | 2011-06-09 | Protea Vaccine Technologies Ltd. | Immunogenic fragments and multimers from streptococcus pneumoniae proteins |
| AU2010334428B2 (en) | 2009-12-22 | 2015-05-21 | Celldex Therapeutics, Inc. | Vaccine compositions |
| FR2954703B1 (fr) | 2009-12-28 | 2013-12-13 | Chu Nantes | Agonistes des recepteurs tlr 4 et 9 pour prevenir les complications septiques de l'immunodepression post-traumatique chez les patients hospitalises pour traumatismes severes |
| CA2789443C (en) | 2010-02-12 | 2016-09-13 | Chimerix, Inc. | Nucleoside phosphonate salts |
| WO2011101332A1 (en) | 2010-02-16 | 2011-08-25 | Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. | Compositions based on the fibronectin extracellular domain a for the treatment of melanoma |
| WO2011109422A2 (en) | 2010-03-02 | 2011-09-09 | The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Compositions and methods for the treatment of cancer |
| EP2542670A2 (en) | 2010-03-05 | 2013-01-09 | President and Fellows of Harvard College | Induced dendritic cell compositions and uses thereof |
| GB201003920D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method of treatment |
| GB201003924D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| CN103002910A (zh) | 2010-03-10 | 2013-03-27 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 疫苗组合物 |
| WO2011112599A2 (en) | 2010-03-12 | 2011-09-15 | The United States Of America, As Represented By The Secretary. Department Of Health & Human Services | Immunogenic pote peptides and methods of use |
| US20110229556A1 (en) * | 2010-03-19 | 2011-09-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Lipid-coated polymer particles for immune stimulation |
| US8747869B2 (en) | 2010-03-19 | 2014-06-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Lipid vesicle compositions and methods of use |
| US9149432B2 (en) | 2010-03-19 | 2015-10-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Lipid vesicle compositions and methods of use |
| GB201005005D0 (en) * | 2010-03-25 | 2010-05-12 | Angeletti P Ist Richerche Bio | New vaccine |
| BR122021020829B8 (pt) | 2010-03-30 | 2022-12-27 | Children´S Hospital & Res Center At Oakland | Proteína de ligação ao fator h de ocorrência não natural (fhbp), composição, e célula hospedeira de neisseria meningitidis geneticamente modificada |
| NZ602892A (en) | 2010-04-13 | 2014-08-29 | Celldex Therapeutics Inc | Antibodies that bind human cd27 and uses thereof |
| EP2563367A4 (en) | 2010-04-26 | 2013-12-04 | Chimerix Inc | Methods of treating retroviral infections and related dosage regimes |
| HUE049725T2 (hu) | 2010-05-14 | 2020-10-28 | Univ Oregon Health & Science | Hepatitisz B vírusból izolált heterológ antigént kódoló rekombináns HCMV és RhCMV vektorok és alkalmazásuk |
| PT2575876T (pt) | 2010-05-26 | 2018-03-26 | Selecta Biosciences Inc | Vacinas de nanotransportadores sintéticos multivalentes |
| JP6034285B2 (ja) | 2010-05-28 | 2016-11-30 | ゾエティス・ベルジャム・エス・アー | 抗原および免疫調節ワクチンおよびコレステロール、ならびにその使用 |
| CA2800774A1 (en) | 2010-06-07 | 2011-12-15 | Pfizer Vaccines Llc | Ige ch3 peptide vaccine |
| US8658603B2 (en) | 2010-06-16 | 2014-02-25 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for inducing an immune response |
| EP2955230A1 (en) | 2010-07-30 | 2015-12-16 | CureVac AG | Complexation of nucleic acids with disulfide-crosslinked cationic components for transfection and immunostimulation |
| WO2012028741A1 (en) | 2010-09-03 | 2012-03-08 | Intercell Ag | Isolated polypeptide of the toxin a and toxin b proteins of c. difficile and uses thereof |
| WO2012031760A1 (en) | 2010-09-08 | 2012-03-15 | Medigene Ag | Parvovirus mutated structural proteins comprising cross - protective b - cell epitopes of a hpv l2 protein as well as products and methods relating thereto |
| GB201015132D0 (en) | 2010-09-10 | 2010-10-27 | Univ Bristol | Vaccine composition |
| US8883171B2 (en) | 2010-09-14 | 2014-11-11 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Computationally optimized broadly reactive antigens for influenza |
| DK2620428T3 (da) | 2010-09-24 | 2019-07-01 | Wave Life Sciences Ltd | Asymmetrisk hjælpegruppe |
| CA2809463C (en) | 2010-09-27 | 2021-05-25 | Crucell Holland B.V. | Heterologous prime boost vaccination regimen against malaria |
| WO2012048165A2 (en) | 2010-10-06 | 2012-04-12 | President And Fellows Of Harvard College | Injectable, pore-forming hydrogels for materials-based cell therapies |
| WO2012057904A1 (en) | 2010-10-27 | 2012-05-03 | Infectious Disease Research Institute | Mycobacterium tuberculosis antigens and combinations thereof having high seroreactivity |
| WO2012061717A1 (en) | 2010-11-05 | 2012-05-10 | Selecta Biosciences, Inc. | Modified nicotinic compounds and related methods |
| BR112013011420A2 (pt) | 2010-11-08 | 2016-08-02 | Infectious Disease Res Inst | vacinas compreendendo poliptídeos de nucleosídeo hidrolase não específica e esterol 24-c-metil-transferase (smt) para o tratamento e o diagnóstico de leishmaníase |
| UA110118C2 (uk) | 2010-12-14 | 2015-11-25 | Ґлаксосмітклайн Байолоджікалз С.А. | Мікобактеріальна антигенна композиція |
| EP2667891B1 (en) | 2011-01-27 | 2021-10-06 | Gamma Vaccines Pty Limited | Combination vaccines |
| WO2012114323A1 (en) | 2011-02-22 | 2012-08-30 | Biondvax Pharmaceuticals Ltd. | Multimeric multiepitope polypeptides in improved seasonal and pandemic influenza vaccines |
| WO2012131504A1 (en) | 2011-03-02 | 2012-10-04 | Pfizer Inc. | Pcsk9 vaccine |
| EP2505640A1 (en) | 2011-03-29 | 2012-10-03 | Neo Virnatech, S.L. | Vaccine compositions for birnavirus-borne diseases |
| GB201106357D0 (en) | 2011-04-14 | 2011-06-01 | Pessi Antonello | Composition and uses thereof |
| NZ616304A (en) | 2011-04-08 | 2016-01-29 | Immune Design Corp | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
| TW201302779A (zh) | 2011-04-13 | 2013-01-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 融合蛋白質及組合疫苗 |
| US20120288515A1 (en) | 2011-04-27 | 2012-11-15 | Immune Design Corp. | Synthetic long peptide (slp)-based vaccines |
| ES2782119T3 (es) | 2011-05-13 | 2020-09-10 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Antígenos de F de prefusión del VRS |
| FR2975600B1 (fr) | 2011-05-24 | 2013-07-05 | Assist Publ Hopitaux De Paris | Agents pour le traitement de tumeurs |
| CA2837227C (en) | 2011-06-01 | 2022-05-10 | Janus Biotherapeutics, Inc. | Novel immune system modulators |
| CA2837207A1 (en) | 2011-06-01 | 2012-12-06 | Janus Biotherapeutics, Inc. | Novel immune system modulators |
| CN103582496B (zh) | 2011-06-03 | 2016-05-11 | 3M创新有限公司 | 具有聚乙二醇链段的异双官能连接基以及由其制成的免疫应答调节剂缀合物 |
| CA2838023C (en) | 2011-06-03 | 2019-08-13 | 3M Innovative Properties Company | Hydrazino 1h-imidazoquinolin-4-amines and conjugates made therefrom |
| CA2838188C (en) | 2011-06-04 | 2017-04-18 | Rochester General Hospital Research Institute | Compositions and methods related to p6 of haemophilus influenzae |
| WO2012170678A1 (en) | 2011-06-07 | 2012-12-13 | Fraunhofer Usa, Inc. | In vivo de-glycosylation of recombinant proteins by co-expression with pngase f |
| CN107312075B (zh) | 2011-06-17 | 2021-01-12 | 田纳西大学研究基金会 | A群链球菌多价疫苗 |
| CA2839995A1 (en) | 2011-06-20 | 2012-12-27 | University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Computationally optimized broadly reactive antigens for h1n1 influenza |
| US20150030586A1 (en) | 2011-06-21 | 2015-01-29 | Sarah Ellen Warren | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of cancer |
| WO2013007703A1 (en) * | 2011-07-08 | 2013-01-17 | Universität Zürich | CLASS A CpG OLIGONUCLEOTIDES FOR PREVENTION OF VIRAL INFECTION IN CATS |
| JP6128529B2 (ja) | 2011-07-19 | 2017-05-17 | ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッドＷａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｔｄ． | 官能化核酸の合成のための方法 |
| US20130023736A1 (en) | 2011-07-21 | 2013-01-24 | Stanley Dale Harpstead | Systems for drug delivery and monitoring |
| EP2736537A4 (en) | 2011-07-29 | 2015-04-15 | Selecta Biosciences Inc | SYNTHETIC NANOTRANSPORTERS FOR THE PRODUCTION OF HUMOROUS AND CYTOTOXIC T-LYMPHOCY (CTL) IMMUNE REACTIONS |
| GB201114919D0 (en) | 2011-08-30 | 2011-10-12 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method |
| US20140348865A1 (en) | 2011-09-12 | 2014-11-27 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Ser. | Immunogens based on an hiv-1 v1v2 site-of-vulnerability |
| CA2848611A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Ucb Pharma S.A. | Neutralising antibodies to the major exotoxins tcda and tcdb of clostridium difficile |
| DK2572725T3 (en) | 2011-09-21 | 2015-09-21 | Ruprecht Karls Universität Heidelberg | MSI-specific frameshift peptides (FSP) for the prevention and treatment of cancer |
| WO2013049535A2 (en) | 2011-09-30 | 2013-04-04 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Influenza vaccine |
| AU2012318694B2 (en) | 2011-10-04 | 2016-12-22 | Janus Biotherapeutics, Inc. | Novel imidazole quinoline-based immune system modulators |
| EP3819306A3 (en) | 2011-10-20 | 2021-07-28 | The Government of The United States of America as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Dengue virus e-glycoprotein polypeptides containing mutations that eliminate immunodominant cross-reactive epitopes |
| EP2780034A1 (en) | 2011-11-14 | 2014-09-24 | Crucell Holland B.V. | Heterologous prime-boost immunization using measles virus-based vaccines |
| EP2596806A1 (en) | 2011-11-25 | 2013-05-29 | Index Pharmaceuticals AB | Method for prevention of colectomy |
| US12268718B2 (en) | 2012-01-16 | 2025-04-08 | Labyrinth Holdings Llc | Control of cellular redox levels |
| US9713630B2 (en) | 2012-01-16 | 2017-07-25 | Labyrinth Holdings, Llc | Compositions and methods for the treatment of hepatic diseases and disorders |
| WO2013113326A1 (en) | 2012-01-31 | 2013-08-08 | Curevac Gmbh | Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen |
| WO2013119856A1 (en) | 2012-02-07 | 2013-08-15 | Infectious Disease Research Institute | Improved adjuvant formulations comprising tlr4 agonists and methods of using the same |
| WO2013119683A1 (en) | 2012-02-07 | 2013-08-15 | University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Computationally optimized broadly reactive antigens for h3n2, h2n2, and b influenza viruses |
| MY180109A (en) | 2012-02-13 | 2020-11-23 | Univ Pittsburgh Commonwealth Sys Higher Education | Computationally optimized broadly reactive antigens for human and avian h5n1 influenza |
| CA2866185C (en) | 2012-03-23 | 2021-04-06 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Pathogenic phlebovirus isolates and compositions and methods of use |
| WO2013150518A1 (en) | 2012-04-01 | 2013-10-10 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | Extracellular matrix metalloproteinase inducer (emmprin) peptides and binding antibodies |
| SI2838515T1 (sl) | 2012-04-16 | 2020-07-31 | President And Fellows Of Harvard College | Mezoporozni sestavki iz silicijevega dioksida za moduliranje imunskih odgovorov |
| WO2013163176A1 (en) | 2012-04-23 | 2013-10-31 | Allertein Therapeutics, Llc | Nanoparticles for treatment of allergy |
| EP2844282B1 (en) | 2012-05-04 | 2019-06-12 | Pfizer Inc | Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens |
| BR112014028476A2 (pt) | 2012-05-16 | 2017-08-01 | Immune Design Corp | fragmento imunogênico de um polipeptídeo, polinucleotídeo isolado, composição farmacêutica imunogênica, métodos para tratar uma infecção, para gerar uma resposta imune em um sujeito, e para imunizar um sujeito |
| EP2666785A1 (en) | 2012-05-23 | 2013-11-27 | Affiris AG | Complement component C5a-based vaccine |
| US9409956B2 (en) | 2012-05-23 | 2016-08-09 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Salmonella typhi Ty21a expressing Yersinia pestis F1-V fusion protein and uses thereof |
| WO2013177397A1 (en) | 2012-05-24 | 2013-11-28 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Multivalent meningococcal conjugates and methods for preparing cojugates |
| WO2013192144A2 (en) | 2012-06-19 | 2013-12-27 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Rift valley fever virus replicon particles and use thereof |
| KR101850319B1 (ko) | 2012-07-13 | 2018-04-20 | 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 | 비대칭 보조 그룹 |
| CN112007045A (zh) | 2012-07-13 | 2020-12-01 | 波涛生命科学有限公司 | 手性控制 |
| SG11201500243WA (en) | 2012-07-13 | 2015-04-29 | Shin Nippon Biomedical Lab Ltd | Chiral nucleic acid adjuvant |
| BR112015002483A2 (pt) | 2012-08-03 | 2017-11-07 | Infectious Disease Res Inst | composições e métodos para o tratamento de uma infecção ativa por mycobacterium tuberculosis |
| CA2879939A1 (en) | 2012-08-06 | 2014-02-13 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel method |
| US20140037680A1 (en) | 2012-08-06 | 2014-02-06 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Novel method |
| WO2014031178A1 (en) | 2012-08-24 | 2014-02-27 | Etubics Corporation | Replication defective adenovirus vector in vaccination |
| EP2703483A1 (en) | 2012-08-29 | 2014-03-05 | Affiris AG | PCSK9 peptide vaccine |
| EP3639851A1 (en) | 2012-09-04 | 2020-04-22 | Bavarian Nordic A/S | Methods and compositions for enhancing vaccine immune responses |
| WO2014043535A1 (en) | 2012-09-14 | 2014-03-20 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Compositions for the treatment of cancer |
| US20150224181A1 (en) | 2012-09-14 | 2015-08-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Se | Brachyury protein, non-poxvirus non-yeast vectors encoding brachyury protein, and their use |
| WO2014043189A1 (en) | 2012-09-14 | 2014-03-20 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Conditionally replication deficient herpes viruses and use thereof in vaccines |
| BR112015006264A2 (pt) | 2012-09-21 | 2017-07-04 | Mckenna Elizabeth | composições de oligonucleotídeos cpg ocorrendo naturalmente e suas aplicações terapêuticas |
| PL2912186T3 (pl) | 2012-10-24 | 2021-06-14 | Platelet Targeted Therapeutics Llc | Leczenie ukierunkowane na płytki krwi |
| CN104853764B (zh) | 2012-12-13 | 2018-06-22 | 海德堡吕布莱希特-卡尔斯大学 | 用于预防和治疗癌症的msi-特异性移码肽(fsp) |
| RS61101B1 (sr) | 2013-01-07 | 2020-12-31 | Univ Pennsylvania | Preparati i postupci za lečenje kožnog limfoma t-ćelija |
| CA2936092A1 (en) | 2013-01-23 | 2014-07-31 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Stabilized hepatitis b core polypeptide |
| HRP20240996T1 (hr) | 2013-03-13 | 2024-10-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Prefuzija rsv f proteina i njihova uporaba |
| EP3608332B1 (en) | 2013-03-15 | 2022-06-01 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Vaccine against human rhinovirus |
| WO2014160987A2 (en) | 2013-03-28 | 2014-10-02 | Infectious Disease Research Institute | Vaccines comprising leishmania polypeptides for the treatment and diagnosis of leishmaniasis |
| SG11201508113SA (en) | 2013-04-03 | 2015-10-29 | Allertein Therapeutics Llc | Novel nanoparticle compositions |
| WO2014172637A1 (en) | 2013-04-18 | 2014-10-23 | Immune Design Corp. | Gla monotherapy for use in cancer treatment |
| JP2016518126A (ja) | 2013-04-19 | 2016-06-23 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | ローンスターウイルス |
| CN105263517B (zh) | 2013-05-15 | 2021-03-26 | 阿尔伯达大学董事会 | E1e2hcv疫苗及使用方法 |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| GB201310008D0 (en) | 2013-06-05 | 2013-07-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition for use in therapy |
| WO2014201245A1 (en) | 2013-06-12 | 2014-12-18 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Tlr-9 agonist with tlr-7 and/or tlr-8 agonist for treating tumors |
| JP6697384B2 (ja) | 2013-07-25 | 2020-05-20 | イグジキュア, インコーポレーテッドExicure, Inc. | 予防的および治療的使用のための免疫刺激剤としての球状の核酸ベース構築物 |
| EP3632458B1 (en) | 2013-07-26 | 2025-03-19 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of bacterial infections |
| CA2919773A1 (en) | 2013-08-05 | 2015-02-12 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Combination immunogenic compositions |
| JP6896421B2 (ja) | 2013-08-21 | 2021-06-30 | キュアバック アーゲー | 呼吸器合胞体ウイルス（ｒｓｖ）ワクチン |
| US9603944B2 (en) | 2013-09-27 | 2017-03-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Carrier-free biologically-active protein nanostructures |
| WO2015048785A2 (en) | 2013-09-30 | 2015-04-02 | Los Alamos National Security, Llc | Mosaic conserved region hiv immunogenic polypeptides |
| CN105705164A (zh) | 2013-10-04 | 2016-06-22 | 品诺制药公司 | 用于癌症治疗的免疫刺激性hiv tat衍生多肽 |
| DK3062815T3 (en) | 2013-11-01 | 2019-03-11 | Pfizer | Vectors for expression of prostate-associated antigens |
| US10208102B2 (en) | 2013-11-01 | 2019-02-19 | University Of Oslo | Albumin variants and uses thereof |
| US10357554B2 (en) | 2013-11-11 | 2019-07-23 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Army | AMA-1 epitopes, antibodies, compositions, and methods of making and using the same |
| CA2929126C (en) | 2013-11-13 | 2020-01-07 | University Of Oslo | Outer membrane vesicles and uses thereof |
| DK3069138T3 (en) | 2013-11-15 | 2019-04-08 | Univ Oslo Hf | CTL PEPTID EPITOPES AND ANTIGEN-SPECIFIC T-CELLS, METHODS OF RECOGNITION THEREOF, AND APPLICATIONS THEREOF |
| WO2015077442A2 (en) | 2013-11-20 | 2015-05-28 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Grass pollen immunogens and methods and uses for immune response modulation |
| US20160287696A1 (en) | 2013-11-20 | 2016-10-06 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Pan pollen immunogens and methods and uses for immune response modulation |
| WO2015078856A1 (en) | 2013-11-28 | 2015-06-04 | Bavarian Nordic A/S | Compositions and methods vectors for inducing an enhanced immune response using poxvirus vectors |
| EP3079716B1 (en) | 2013-12-13 | 2019-05-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Multi-epitope tarp peptide vaccine and uses thereof |
| WO2015092710A1 (en) | 2013-12-19 | 2015-06-25 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Contralateral co-administration of vaccines |
| BR112016015422A2 (pt) | 2013-12-31 | 2017-10-24 | Infectious Disease Res Inst | formulações de vacina de frasco único |
| WO2015108048A1 (ja) * | 2014-01-15 | 2015-07-23 | 株式会社新日本科学 | 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤 |
| EP3095461A4 (en) * | 2014-01-15 | 2017-08-23 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant having immunity induction activity, and immunity induction activator |
| JPWO2015108046A1 (ja) * | 2014-01-15 | 2017-03-23 | 株式会社新日本科学 | 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤 |
| EP4137572A1 (en) | 2014-01-16 | 2023-02-22 | Wave Life Sciences Ltd. | Chiral design |
| EP3957321A3 (en) | 2014-01-21 | 2022-07-13 | Pfizer Inc. | Streptococcus pneumoniae capsular polysaccharides and conjugates thereof |
| KR102049825B1 (ko) | 2014-01-21 | 2019-12-03 | 화이자 인코포레이티드 | 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 피막 폴리사카라이드 및 그의 접합체 |
| AU2015209575A1 (en) | 2014-01-21 | 2016-07-21 | Immune Design Corp. | Compositions for use in the treatment of allergic conditions |
| US11160855B2 (en) | 2014-01-21 | 2021-11-02 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| NZ760783A (en) | 2014-01-21 | 2023-07-28 | Pfizer | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| WO2015123291A1 (en) | 2014-02-11 | 2015-08-20 | The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Pcsk9 vaccine and methods of using the same |
| TW201620927A (zh) | 2014-02-24 | 2016-06-16 | 葛蘭素史密斯克藍生物品公司 | Ｕｓｐａ２蛋白質構築體及其用途 |
| WO2015131053A1 (en) | 2014-02-28 | 2015-09-03 | Alk-Abelló A/S | Polypeptides derived from phl p and methods and uses thereof for immune response modulation |
| WO2015149944A2 (en) | 2014-04-01 | 2015-10-08 | Curevac Gmbh | Polymeric carrier cargo complex for use as an immunostimulating agent or as an adjuvant |
| EP3134104B1 (en) | 2014-04-25 | 2018-12-26 | Tria Bioscience Corp. | Synthetic hapten carrier compositions and methods |
| CN107073090A (zh) | 2014-04-30 | 2017-08-18 | 哈佛学院董事会 | 结合的疫苗装置和杀死癌细胞的方法 |
| WO2015184272A2 (en) | 2014-05-30 | 2015-12-03 | Sanofi Pasteur Biologics Llc | Expression and conformational analysis of engineered influenza hemagglutinin |
| PL3164113T3 (pl) | 2014-06-04 | 2019-09-30 | Exicure, Inc. | Wielowartościowe dostarczanie modulatorów immunologicznych w liposomowych kolistych kwasach nukleinowych do zastosowań profilaktycznych lub terapeutycznych |
| EP2952893A1 (en) | 2014-06-04 | 2015-12-09 | Institut d'Investigació Biomèdica de Bellvitge (IDIBELL) | Method for detecting antibody-secreting B cells specific for HLA |
| CN106659777A (zh) | 2014-06-13 | 2017-05-10 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 免疫原性组合产品 |
| CA2955015A1 (en) | 2014-07-15 | 2016-01-21 | Immune Design Corp. | Prime-boost regimens with a tlr4 agonist adjuvant and a lentiviral vector |
| US10759836B2 (en) | 2014-07-18 | 2020-09-01 | University Of Washington | Cancer vaccine compositions and methods of use thereof |
| AR101256A1 (es) | 2014-07-21 | 2016-12-07 | Sanofi Pasteur | Composición vacunal que comprende ipv y ciclodextrinas |
| EP3398948A3 (en) | 2014-08-22 | 2018-12-05 | Janus Biotherapeutics, Inc. | 2,4,6,7-tetrasubstituted pteridine compounds and methods of synthesis and use thereof |
| CN107002081A (zh) | 2014-10-06 | 2017-08-01 | 埃克西奎雷股份有限公司 | 抗tnf化合物 |
| US11083788B2 (en) | 2014-10-10 | 2021-08-10 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoemulsion compositions for preventing, suppressing or eliminating allergic and inflammatory disease |
| AR102547A1 (es) | 2014-11-07 | 2017-03-08 | Takeda Vaccines Inc | Vacunas contra la enfermedad de manos, pies y boca y métodos de fabricación y su uso |
| AU2015252119A1 (en) | 2014-11-07 | 2016-05-26 | Takeda Vaccines, Inc. | Hand, foot, and mouth vaccines and methods of manufacture and use thereof |
| JP2017537619A (ja) | 2014-11-21 | 2017-12-21 | ノースウェスタン ユニバーシティ | 球状核酸ナノ粒子複合体の配列特異的細胞内取込 |
| MX387007B (es) | 2014-12-10 | 2025-03-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Una composición inmunogénica para usarse en el tratamiento o prevención de la infección por staphylococcus aureus. |
| WO2016097865A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Regenesance B.V. | Antibodies that bind human c6 and uses thereof |
| AU2015374385B2 (en) | 2014-12-31 | 2020-08-06 | Checkmate Pharmaceuticals, Inc. | Combination tumor immunotherapy |
| AU2016205215B2 (en) | 2015-01-09 | 2021-03-11 | Etubics Corporation | Methods and compositions for combination immunotherapy |
| HRP20230416T1 (hr) | 2015-01-15 | 2023-07-07 | Pfizer Inc. | Imunogeni pripravci, namijenjeni upotrebi u cjepivima protiv pneumokoka |
| HK1247861A1 (zh) | 2015-01-30 | 2018-10-05 | President And Fellows Of Harvard College | 用於癌症治疗的肿瘤周围和肿瘤内部材料 |
| WO2016131048A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Rna containing compositions and methods of their use |
| US10813993B2 (en) | 2015-03-03 | 2020-10-27 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Display platform from bacterial spore coat proteins |
| EP4226937A3 (en) | 2015-03-05 | 2023-09-27 | Northwestern University | Non-neuroinvasive viruses and uses thereof |
| EP3268037B1 (en) | 2015-03-09 | 2022-08-31 | Celldex Therapeutics, Inc. | Cd27 agonists |
| US20180071380A1 (en) | 2015-03-20 | 2018-03-15 | The Regents Of The University Of Michigan | Immunogenic compositions for use in vaccination against bordetella |
| SG11201707926WA (en) | 2015-03-26 | 2017-10-30 | Gpn Vaccines Pty Ltd | Streptococcal vaccine |
| CN114099793A (zh) | 2015-04-10 | 2022-03-01 | 哈佛学院院长等 | 免疫细胞捕获装置及其制备和使用方法 |
| WO2016172249A1 (en) | 2015-04-20 | 2016-10-27 | Etubics Corporation | Methods and compositions for combination immunotherapy |
| WO2016180852A1 (en) | 2015-05-12 | 2016-11-17 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for preparing antigen-specific t cells from an umbilical cord blood sample |
| IL293135A (en) | 2015-05-13 | 2022-07-01 | Agenus Inc | Composition comprising at least two different complexes of a purified stress protein bound to an antigenic peptide |
| BR112017025316A2 (pt) | 2015-05-26 | 2018-07-31 | Ohio State Innovation Foundation | estratégia de vacina baseada em nanopartículas contra o vírus da gripe suína |
| WO2016196846A2 (en) | 2015-06-02 | 2016-12-08 | Sanofi Pasteur Inc. | Engineered influenza antigenic polypeptides and immunogenic compositions thereof |
| ES2895148T3 (es) | 2015-06-10 | 2022-02-17 | Us Health | Procesos para la producción y purificación de composiciones que contienen ácidos nucleicos |
| WO2016207314A2 (en) * | 2015-06-26 | 2016-12-29 | Bayer Animal Health Gmbh | Methods of modulating cytosolic dna surveillance molecules |
| JP6994453B2 (ja) | 2015-07-21 | 2022-01-14 | ファイザー・インク | コンジュゲート化莢膜糖類抗原を含む免疫原性組成物、それを含むキットおよびこれらの使用 |
| CA2993076A1 (en) | 2015-07-22 | 2017-01-26 | University Of Saskatchewan | Mycoplasma vaccines and uses thereof |
| CN108990413A (zh) | 2015-08-12 | 2018-12-11 | 麻省理工学院 | 纳米颗粒的细胞表面偶联 |
| JP7223989B2 (ja) | 2015-08-25 | 2023-02-17 | アグラワル，バビタ | 免疫調節組成物およびその使用方法 |
| CN108024914A (zh) | 2015-09-17 | 2018-05-11 | Jrx生物技术有限公司 | 改善皮肤的水合作用或润湿作用的方法 |
| WO2017059280A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Novel pan-tam inhibitors and mer/axl dual inhibitors |
| US10548970B2 (en) | 2015-10-05 | 2020-02-04 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Human rotavirus G9P[6] strain and use as a vaccine |
| US11186615B2 (en) | 2015-10-08 | 2021-11-30 | The Governors Of The University Of Alberta | Hepatitis C virus E1/E2 heterodimers and methods of producing same |
| GB201518668D0 (en) | 2015-10-21 | 2015-12-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic Comosition |
| AU2016343845B2 (en) | 2015-10-30 | 2023-04-13 | Baylor College Of Medicine | Compositions and methods for the treatment of HER2-expressing solid tumors |
| US10786561B2 (en) | 2015-11-20 | 2020-09-29 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines |
| WO2017120504A1 (en) | 2016-01-08 | 2017-07-13 | Durfee Paul N | Osteotropic nanoparticles for prevention or treatment of bone metastases |
| PL3407910T3 (pl) | 2016-01-29 | 2022-08-16 | Bavarian Nordic A/S | Rekombinowana zmodyfikowana szczepionka przeciwko wirusowi krowianki ankara (mva) przeciwko wirusowi zapalenia mózgu koni |
| WO2017136837A1 (en) | 2016-02-06 | 2017-08-10 | President And Fellows Of Harvard College | Recapitulating the hematopoietic niche to reconstitute immunity |
| CN109562154A (zh) | 2016-03-10 | 2019-04-02 | 爱普瑞希斯有限公司 | 带有修饰hsp70域的抗原结合融合蛋白 |
| WO2017158421A1 (en) | 2016-03-14 | 2017-09-21 | University Of Oslo | Anti-viral engineered immunoglobulins |
| SG11201807949WA (en) | 2016-03-14 | 2018-10-30 | Univ Oslo | Engineered immunoglobulins with altered fcrn binding |
| WO2017173334A1 (en) | 2016-04-01 | 2017-10-05 | Checkmate Pharmaceuticals, Inc. | Fc receptor-mediated drug delivery |
| AU2017252527A1 (en) | 2016-04-18 | 2018-11-08 | Celldex Therapeutics, Inc. | Agonistic antibodies that bind human CD40 and uses thereof |
| WO2017189448A1 (en) | 2016-04-25 | 2017-11-02 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Bivalent immunogenic conjugate for malaria and typhoid |
| CA3023968A1 (en) | 2016-05-16 | 2017-11-23 | Infectious Disease Research Institute | Formulation containing tlr agonist and methods of use |
| WO2017201390A1 (en) | 2016-05-19 | 2017-11-23 | The Regents Of The University Of Michigan | Novel adjuvant compositions |
| KR20190009308A (ko) | 2016-05-21 | 2019-01-28 | 인펙셔스 디지즈 리서치 인스티튜트 (아이디알아이) | 2차 결핵 및 비결핵성 마이코박테리아 감염을 치료하기 위한 조성물 및 방법 |
| EP3735984A1 (en) | 2016-05-27 | 2020-11-11 | Etubics Corporation | Neoepitope vaccine compositions and methods of use thereof |
| IL315825A (en) | 2016-06-01 | 2024-11-01 | Access To Advanced Health Inst | Nanoalum particles containing a fixing factor |
| CA3026096A1 (en) | 2016-06-02 | 2017-12-07 | Sanofi Pasteur Inc. | Engineered influenza antigenic polypeptides and immunogenic compositions thereof |
| CN115746107A (zh) | 2016-06-03 | 2023-03-07 | 圣诺菲·帕斯图尔公司 | 经改造的流感血凝素多肽的修饰 |
| EP3468590B1 (en) | 2016-06-13 | 2025-01-01 | The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Nucleic acids encoding zika virus-like particles and their use in zika virus vaccines and diagnostic assays |
| CN109715196A (zh) | 2016-06-13 | 2019-05-03 | 转矩医疗股份有限公司 | 用于促进免疫细胞功能的组合物和方法 |
| GB201610599D0 (en) | 2016-06-17 | 2016-08-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic Composition |
| US11780924B2 (en) | 2016-06-21 | 2023-10-10 | University Of Oslo | HLA binding vaccine moieties and uses thereof |
| CA3030154A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Chimeric dengue/zika viruses live-attenuated zika virus vaccines |
| WO2018009603A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | The United State of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Service | Chimeric west nile/zika viruses and methods of use |
| CN115404196A (zh) | 2016-07-13 | 2022-11-29 | 哈佛学院院长等 | 抗原呈递细胞模拟支架及其制备和使用方法 |
| AU2017305345B2 (en) | 2016-08-02 | 2024-09-05 | President And Fellows Of Harvard College | Biomaterials for modulating immune responses |
| CA3031799A1 (en) | 2016-08-05 | 2018-02-08 | Sanofi Pasteur, Inc. | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| PH12019500238B1 (en) | 2016-08-05 | 2023-05-10 | Sanofi Pasteur Inc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| BR112019003462A2 (pt) | 2016-08-23 | 2019-06-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | proteína de fusão, polinucleotídeo, vetor viral, composição farmacêutica, uso de uma proteína de fusão, polinucleotídeo, vetor viral ou composição farmacêutica, e, método para tratar ou prevenir infecção de hepatite b viral ou infecção de hepatite c viral |
| WO2018039629A2 (en) | 2016-08-25 | 2018-03-01 | Northwestern University | Micellar spherical nucleic acids from thermoresponsive, traceless templates |
| BR112019004913B1 (pt) | 2016-09-16 | 2022-07-12 | Infectious Disease Research Institute | Vacinas que compreendem polipeptídeos de mycobacterium leprae para a prevenção, tratamento e diagnóstico de lepra |
| EP3518966A1 (en) | 2016-09-29 | 2019-08-07 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Compositions and methods of treatment of persistent hpv infection |
| AU2017339576A1 (en) * | 2016-10-07 | 2019-05-02 | Secarna Pharmaceuticals Gmbh & Co. Kg | Immunosuppression-reverting oligonucleotides inhibiting the expression of CD39 |
| US10172933B2 (en) | 2016-10-31 | 2019-01-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Mosaic vaccines for serotype a foot-and-mouth disease virus |
| WO2018096396A1 (en) | 2016-11-22 | 2018-05-31 | University Of Oslo | Albumin variants and uses thereof |
| GB201620968D0 (en) | 2016-12-09 | 2017-01-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Adenovirus polynucleotides and polypeptides |
| MX2019006349A (es) | 2016-12-16 | 2019-08-22 | Inst Res Biomedicine | Proteinas recombinantes rsv f de prefusion nuevas y usos de las mismas. |
| PL3570879T3 (pl) | 2017-01-20 | 2022-06-20 | Pfizer Inc. | Kompozycje immunogenne do zastosowania w szczepionkach przeciw pneumokokom |
| WO2018160865A1 (en) | 2017-03-01 | 2018-09-07 | Charles Jeffrey Brinker | Active targeting of cells by monosized protocells |
| WO2018162450A1 (en) | 2017-03-06 | 2018-09-13 | Fundación Para La Investigación Médica Aplicada | New inmunostimulatory compositions comprising an entity of cold inducible rna-binding protein with an antigen for the activation of dendritic cells |
| BR112019020209A2 (pt) | 2017-03-31 | 2020-06-02 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Composição imunogênica, uso de uma composição imunogênica, método de tratamento ou prevenção de uma recorrência de uma exacerbação aguda de doença pulmonar obstrutiva crônica, e, terapia de combinação. |
| WO2018178265A1 (en) | 2017-03-31 | 2018-10-04 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Immunogenic composition, use and method of treatment |
| US20200093909A1 (en) | 2017-04-19 | 2020-03-26 | Institute For Research In Biomedicine | Plasmodium sporozoite npdp peptides as vaccine and target novel malaria vaccines and antibodies binding to |
| WO2018201090A1 (en) | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Exicure, Inc. | Synthesis of spherical nucleic acids using lipophilic moieties |
| MY204084A (en) | 2017-06-11 | 2024-08-06 | Molecular Express Inc | Methods and compositions for substance use disorder vaccine formulations and uses thereof |
| IL271384B2 (en) | 2017-06-15 | 2025-02-01 | Access To Advanced Health Inst | Nanostructured lipid carriers and stable emulsions and their uses |
| WO2019018744A1 (en) | 2017-07-21 | 2019-01-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS OF NEISSERIA MENINGITIDIS |
| BR112020001768A2 (pt) | 2017-08-14 | 2020-09-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | método de reforçar uma resposta imune pré-existente contra haemophilus influenzae e moraxella catarrhalis não tipáveis em um indivíduo, e, protocolo de vacinação. |
| US11123415B2 (en) | 2017-08-16 | 2021-09-21 | Ohio State Innovation Foundation | Nanoparticle compositions for Salmonella vaccines |
| AU2018328209A1 (en) | 2017-09-05 | 2020-04-23 | Torque Therapeutics, Inc. | Therapeutic protein compositions and methods of making and using the same |
| WO2019048928A1 (en) | 2017-09-07 | 2019-03-14 | University Of Oslo | VACCINE MOLECULES |
| WO2019048936A1 (en) | 2017-09-07 | 2019-03-14 | University Of Oslo | VACCINE MOLECULES |
| JP7339942B2 (ja) | 2017-09-08 | 2023-09-06 | アクセス ツー アドバンスト ヘルス インスティチュート | サポニンを含むリポソーム製剤および使用方法 |
| TW201920669A (zh) | 2017-09-08 | 2019-06-01 | 英商美納治療公司 | ＨＮＦ４ａ ｓａＲＮＡ組成物和使用方法 |
| JP7551496B2 (ja) | 2017-10-31 | 2024-09-17 | カリヴィル イムノセラピューティクス， インコーポレイテッド | 全身送達のためのプラットフォーム腫瘍溶解性ベクター |
| CA3081586A1 (en) | 2017-11-03 | 2019-05-09 | Takeda Vaccines, Inc. | Zika vaccines and immunogenic compositions, and methods of using the same |
| WO2019090138A2 (en) | 2017-11-04 | 2019-05-09 | Board Of Regents Of The Nevada System Of Higher Education, On Behalf Of The University Of Nevada, Reno | Immunogenic conjugates and methods of use thereof |
| KR20250048594A (ko) | 2017-12-15 | 2025-04-09 | 엘랑코 애니멀 헬스 게엄베하 | 면역자극성 올리고뉴클레오티드 |
| US11116830B2 (en) | 2017-12-18 | 2021-09-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Bacterial polysaccharide-conjugated carrier proteins and use thereof |
| KR20200101954A (ko) | 2017-12-19 | 2020-08-28 | 메사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 | 항원-아주반트 커플링 시약 및 사용 방법 |
| GB201721576D0 (en) | 2017-12-21 | 2018-02-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hla antigens and glycoconjugates thereof |
| GB201721582D0 (en) | 2017-12-21 | 2018-02-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | S aureus antigens and immunogenic compositions |
| US11369675B2 (en) | 2018-01-22 | 2022-06-28 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Broadly protective inactivated influenza virus vaccine |
| WO2019147925A1 (en) | 2018-01-26 | 2019-08-01 | Nantcell, Inc. | Compositions and methods for combination cancer vaccine and immunologic adjuvant therapy |
| EP3752194A4 (en) | 2018-02-13 | 2022-03-16 | Checkmate Pharmaceuticals, Inc. | ANTI-TUMOR IMMUNOTHERAPY COMPOSITIONS AND METHODS |
| WO2019158636A1 (en) | 2018-02-16 | 2019-08-22 | 2A Pharma Ab | Parvovirus structural protein for the treatment of autoimmune diseases |
| EP3527223A1 (en) | 2018-02-16 | 2019-08-21 | 2A Pharma AB | Mutated parvovirus structural protein |
| BR112020016859A2 (pt) | 2018-02-28 | 2020-12-29 | Pfizer Inc. | Variantes de il-15 e usos da mesma |
| US11633471B2 (en) | 2018-03-06 | 2023-04-25 | Unm Rainforest Innovations | Compositions and methods for reducing serum triglycerides |
| US11576964B2 (en) | 2018-03-28 | 2023-02-14 | Sanofi Pasteur Inc. | Methods of generating broadly protective vaccine compositions comprising hemagglutinin |
| WO2019195276A1 (en) | 2018-04-03 | 2019-10-10 | Sanofi | Antigenic ospa polypeptides |
| WO2019195284A1 (en) | 2018-04-03 | 2019-10-10 | Sanofi | Antigenic influenza-ferritin polypeptides |
| EP3773698A1 (en) | 2018-04-03 | 2021-02-17 | Sanofi | Ferritin proteins |
| CN112512566A (zh) | 2018-04-03 | 2021-03-16 | 赛诺菲 | 抗原性爱泼斯坦-巴尔病毒多肽 |
| KR20210018206A (ko) | 2018-04-03 | 2021-02-17 | 사노피 | 항원성 호흡기 세포융합 바이러스 폴리펩타이드 |
| IL319506A (en) | 2018-04-09 | 2025-05-01 | Checkmate Pharmaceuticals Inc | Packaging of oligonucleotides in virus-like particles |
| CA3097369A1 (en) | 2018-04-17 | 2019-10-24 | Celldex Therapeutics, Inc. | Anti-cd27 and anti-pd-l1 antibodies and bispecific constructs |
| US11434292B2 (en) | 2018-05-23 | 2022-09-06 | Pfizer Inc. | Antibodies specific for CD3 and uses thereof |
| JP7057843B2 (ja) | 2018-05-23 | 2022-04-20 | ファイザー・インク | ＧＵＣＹ２ｃに特異的な抗体及びその使用 |
| US11702674B2 (en) | 2018-06-12 | 2023-07-18 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Simian adenovirus vectors comprising the ChAd-157 fiber protein |
| CA3106400A1 (en) | 2018-07-13 | 2020-01-16 | University Of Georgia Research Foundation | Broadly reactive immunogens of influenza h3 virus, compositions and methods of use thereof |
| CN112673054A (zh) | 2018-07-19 | 2021-04-16 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 用于制备干燥多糖的方法 |
| CN112601545A (zh) | 2018-08-07 | 2021-04-02 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 工艺和疫苗 |
| US11260119B2 (en) | 2018-08-24 | 2022-03-01 | Pfizer Inc. | Escherichia coli compositions and methods thereof |
| US12239699B2 (en) | 2018-09-11 | 2025-03-04 | Shanghai Public Health Clinical Center | Immunogen for broad-spectrum influenza vaccine and application thereof |
| WO2020061129A1 (en) | 2018-09-19 | 2020-03-26 | President And Fellows Of Harvard College | Compositions and methods for labeling and modulation of cells in vitro and in vivo |
| WO2020068798A1 (en) | 2018-09-24 | 2020-04-02 | Guo Jimin | Living mammalian cells modified with functional modular nanoparticles |
| WO2020117590A1 (en) | 2018-12-04 | 2020-06-11 | The Rockefeller University | Hiv vaccine immunogens |
| US20220000779A1 (en) | 2018-12-06 | 2022-01-06 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic compositions |
| JP7585203B2 (ja) | 2018-12-12 | 2024-11-18 | ファイザー・インク | 免疫原性多重ヘテロ抗原多糖－タンパク質コンジュゲートおよびその使用 |
| JP7551618B2 (ja) | 2018-12-12 | 2024-09-17 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | Ｏ－結合型グリコシル化のための修飾キャリアタンパク質 |
| EP3894547A1 (en) | 2018-12-12 | 2021-10-20 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Recombinant mumps virus vaccine expressing genotype g fusion and hemagglutinin-neuraminidase proteins |
| US20220023410A1 (en) | 2018-12-14 | 2022-01-27 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Crimean-congo hemorrhagic fever virus replicon particles and use thereof |
| US20220184158A1 (en) | 2018-12-21 | 2022-06-16 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Methods of inducing an immune response |
| WO2020128893A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Pfizer Inc. | Combination treatments of cancer comprising a tlr agonist |
| GB201901608D0 (en) | 2019-02-06 | 2019-03-27 | Vib Vzw | Vaccine adjuvant conjugates |
| US12208164B2 (en) | 2019-02-28 | 2025-01-28 | Unm Rainforest Innovations | Modular metal-organic polyhedra superassembly compositions |
| EP3946446A1 (en) | 2019-04-02 | 2022-02-09 | Sanofi | Antigenic multimeric respiratory syncytial virus polypeptides |
| WO2020208502A1 (en) | 2019-04-10 | 2020-10-15 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof |
| WO2020212461A1 (en) | 2019-04-18 | 2020-10-22 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Antigen binding proteins and assays |
| MX2021013111A (es) | 2019-05-20 | 2021-11-17 | Valneva Se | Una vacuna de subunidad para el tratamiento o la prevencion de una infeccion del tracto respiratorio. |
| WO2020243115A1 (en) | 2019-05-25 | 2020-12-03 | Infectious Disease Research Institute | Composition and method for spray drying an adjuvant vaccine emulsion |
| WO2020240268A1 (en) | 2019-05-31 | 2020-12-03 | Universidad De Chile | An immunogenic formulation that induces protection against shiga toxin-producing escherichia coli (stec) |
| EP3770269A1 (en) | 2019-07-23 | 2021-01-27 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Quantification of bioconjugate glycosylation |
| WO2021023691A1 (en) | 2019-08-05 | 2021-02-11 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic composition |
| WO2021042022A1 (en) | 2019-08-30 | 2021-03-04 | University Of Rochester | Septin inhibitors for treatment of cancers |
| WO2021055580A2 (en) | 2019-09-18 | 2021-03-25 | Children's Medical Center Corporation | An anaplastic lymphoma kinase (alk) cancer vaccine and methods of use |
| EP3799884A1 (en) | 2019-10-01 | 2021-04-07 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Immunogenic compositions |
| CN114667343A (zh) | 2019-11-01 | 2022-06-24 | 辉瑞大药厂 | 大肠杆菌组合物及其方法 |
| US20220396797A1 (en) | 2019-11-15 | 2022-12-15 | Infectious Disease Research Institute | Rig-i agonist and adjuvant formulation for tumor treatment |
| CN114728051A (zh) | 2019-11-22 | 2022-07-08 | 葛兰素史克生物有限公司 | 细菌糖糖缀合物疫苗的剂量和施用 |
| WO2021127271A1 (en) | 2019-12-17 | 2021-06-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Live attenuated leishmania parasite vaccines with enhanced safety characteristics |
| PH12022551298A1 (en) | 2019-12-17 | 2023-11-20 | Pfizer | Antibodies specific for cd47, pd-l1, and uses thereof |
| WO2021165928A2 (en) | 2020-02-23 | 2021-08-26 | Pfizer Inc. | Escherichia coli compositions and methods thereof |
| WO2021173907A1 (en) | 2020-02-28 | 2021-09-02 | Sanofi Pasteur, Inc. | High dose influenza vaccine for pediatric subjects |
| US11213482B1 (en) | 2020-03-05 | 2022-01-04 | University of Pittsburgh—Of the Commonwealth System of Higher Educat | SARS-CoV-2 subunit vaccine and microneedle array delivery system |
| CA3176303A1 (en) | 2020-04-20 | 2021-10-28 | Antonio FACCIUOLO | Compositions and methods for preventing, controlling and diagnosing mycobacterial infections |
| KR20230022246A (ko) | 2020-07-17 | 2023-02-14 | 화이자 인코포레이티드 | 치료 항체 및 그의 용도 |
| CA3174411A1 (en) | 2020-09-04 | 2022-03-10 | Ryan M. Kramer | Co-lyophilized rna and nanostructured lipid carrier |
| WO2022066973A1 (en) | 2020-09-24 | 2022-03-31 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Immunotherapy targeting pbk or oip5 antigens |
| CN116724053A (zh) | 2020-09-24 | 2023-09-08 | 弗雷德哈钦森癌症中心 | 靶向sox2抗原的免疫治疗 |
| WO2022074061A1 (en) | 2020-10-07 | 2022-04-14 | Valneva Sweden Ab | Cholera vaccine formulation |
| US20230416309A1 (en) | 2020-10-23 | 2023-12-28 | Jiangsu Provincial Center For Disease Control And Prevention (Public Health Research Institute Of Ji | Fusion protein and application thereof |
| US12138302B2 (en) | 2020-10-27 | 2024-11-12 | Pfizer Inc. | Escherichia coli compositions and methods thereof |
| EP4237428A2 (en) | 2020-10-27 | 2023-09-06 | Pfizer Inc. | Escherichia coli compositions and methods thereof |
| AU2021373358A1 (en) | 2020-11-04 | 2023-06-01 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines |
| US20230405137A1 (en) | 2020-11-10 | 2023-12-21 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| AU2021406131A1 (en) | 2020-12-23 | 2023-08-03 | Access To Advanced Health Institute | Solanesol vaccine adjuvants and methods of preparing same |
| US12357681B2 (en) | 2020-12-23 | 2025-07-15 | Pfizer Inc. | E. coli FimH mutants and uses thereof |
| US20240299510A1 (en) | 2020-12-31 | 2024-09-12 | The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services | Antibody-guided pcsk9-mimicking immunogens lacking 9-residue sequence overlap with human proteins |
| JP2024510717A (ja) | 2021-02-22 | 2024-03-11 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 免疫原性組成物、使用及び方法 |
| EP4313132A1 (en) | 2021-03-31 | 2024-02-07 | Vib Vzw | Vaccine compositions for trypanosomatids |
| CN117545773A (zh) | 2021-04-09 | 2024-02-09 | 塞德斯医疗公司 | 抗ilt4的抗体、双特异性抗ilt4/pd-l1抗体及其用途 |
| CA3210412A1 (en) | 2021-04-09 | 2022-10-13 | Urban Lundberg | Human metapneumo virus vaccine |
| WO2022232375A1 (en) | 2021-04-30 | 2022-11-03 | Kalivir Immunotherapeutics, Inc. | Oncolytic viruses for modified mhc expression |
| WO2022249107A2 (en) | 2021-05-28 | 2022-12-01 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| JP2024522395A (ja) | 2021-05-28 | 2024-06-19 | ファイザー・インク | コンジュゲートさせた莢膜糖抗原を含む免疫原性組成物およびその使用 |
| CA3226187A1 (en) | 2021-07-16 | 2023-01-19 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Universal vaccine for influenza virus based on tetrameric m2 protein incorporated into nanodiscs |
| JP2024532763A (ja) | 2021-08-11 | 2024-09-10 | サノフィ パスツール インコーポレイテッド | 切断型インフルエンザノイラミニダーゼおよびこれを使用する方法 |
| AU2022361432A1 (en) | 2021-10-08 | 2024-05-23 | Sanofi Pasteur Inc. | Multivalent influenza vaccines |
| US20230302112A1 (en) | 2021-11-05 | 2023-09-28 | Sanofi | Respiratory synctial virus rna vaccine |
| KR20240105413A (ko) | 2021-11-05 | 2024-07-05 | 사노피 | 헤마글루티닌과 뉴라미니다제를 포함하는 하이브리드 다가 인플루엔자 백신 및 이의 사용 방법 |
| EP4426346A1 (en) | 2021-11-05 | 2024-09-11 | Sanofi Pasteur, Inc. | Multivalent influenza vaccines comprising recombinant hemagglutinin and neuraminidase and methods of using the same |
| WO2023077521A1 (en) | 2021-11-08 | 2023-05-11 | Celldex Therapeutics, Inc | Anti-ilt4 and anti-pd-1 bispecific constructs |
| WO2023083964A1 (en) | 2021-11-11 | 2023-05-19 | 2A Pharma Ab | Parvovirus structural protein against beta- and gamma-hpv |
| MX2024006506A (es) | 2021-11-30 | 2024-08-14 | Sanofi Pasteur Inc | Vacunas basadas en vectores virales de metapneumovirus humano. |
| US20230310571A1 (en) | 2021-11-30 | 2023-10-05 | Sanofi Pasteur Inc. | Human metapneumovirus vaccines |
| US20250082745A1 (en) | 2021-12-13 | 2025-03-13 | The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Bacteriophage lambda-vaccine system |
| WO2023111262A1 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | Sanofi | Lyme disease rna vaccine |
| AU2023207315A1 (en) | 2022-01-13 | 2024-06-27 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| US20250115881A1 (en) | 2022-01-27 | 2025-04-10 | Sanofi Pasteur | Modified vero cells and methods of using the same for virus production |
| US20250163484A1 (en) | 2022-02-25 | 2025-05-22 | Pfizer Inc. | Methods for Incorporating Azido Groups in Bacterial Capsular Polysaccharides |
| JP2025512745A (ja) | 2022-03-14 | 2025-04-22 | サノフィ パスツール インコーポレイテッド | ワクチン生成のためのタンパク質設計における機械学習技術 |
| AU2023265481A1 (en) | 2022-05-06 | 2024-12-19 | Sanofi | Signal sequences for nucleic acid vaccines |
| CN119317445A (zh) | 2022-05-11 | 2025-01-14 | 辉瑞公司 | 用于生产含有防腐剂的疫苗制剂的方法 |
| US20250213667A1 (en) | 2022-06-01 | 2025-07-03 | Valneva Austria Gmbh | Clostridium difficile vaccine |
| AU2023298083A1 (en) | 2022-06-29 | 2025-01-09 | Bavarian Nordic A/S | RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) AND VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) PRIME-BOOST REGIMEN |
| AU2023336224A1 (en) | 2022-09-09 | 2025-03-27 | Access To Advanced Health Institute | Immunogenic vaccine composition incorporating a saponin |
| TW202434283A (zh) | 2022-11-04 | 2024-09-01 | 法商賽諾菲公司 | 呼吸道融合病毒rna疫苗接種 |
| WO2024110827A1 (en) | 2022-11-21 | 2024-05-30 | Pfizer Inc. | Methods for preparing conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| CN120265317A (zh) | 2022-11-22 | 2025-07-04 | 辉瑞公司 | 包含经缀合的荚膜糖抗原的免疫原性组合物及其用途 |
| IL321069A (en) | 2022-12-01 | 2025-07-01 | Pfizer | Pneumococcal conjugate vaccine preparations |
| WO2024121380A1 (en) | 2022-12-08 | 2024-06-13 | Pierre Fabre Medicament | Vaccinal composition and adjuvant |
| WO2024127215A2 (en) | 2022-12-13 | 2024-06-20 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions and methods for eliciting an immune response against clostridioides (clostridium) difficile |
| TW202438514A (zh) | 2022-12-20 | 2024-10-01 | 法商賽諾菲公司 | 鼻病毒mrna疫苗 |
| WO2024149832A1 (en) | 2023-01-12 | 2024-07-18 | Bavarian Nordic A/S | RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) FOR CANCER VACCINE |
| WO2024163327A1 (en) | 2023-01-30 | 2024-08-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Epstein-barr virus glycoprotein 42 immunogens for vaccination and antibody discovery |
| WO2024166008A1 (en) | 2023-02-10 | 2024-08-15 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| AR132053A1 (es) | 2023-03-02 | 2025-05-21 | Sanofi Pasteur | Composiciones para su uso en el tratamiento de clamidia |
| WO2024186635A2 (en) | 2023-03-03 | 2024-09-12 | Celldex Therapeutics, Inc. | Anti-stem cell factor (scf) and anti-thymic stromal lymphopoietin (tslp) antibodies and bispecific constructs |
| WO2024201324A2 (en) | 2023-03-30 | 2024-10-03 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| WO2024214016A1 (en) | 2023-04-14 | 2024-10-17 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| WO2024224266A1 (en) | 2023-04-24 | 2024-10-31 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| TW202500750A (zh) | 2023-05-05 | 2025-01-01 | 法商賽諾菲公司 | 用於治療痤瘡的組成物 |
| WO2024231565A1 (en) | 2023-05-10 | 2024-11-14 | Sanofi | Combination respiratory mrna vaccines |
| TW202508621A (zh) | 2023-05-11 | 2025-03-01 | 美商賽諾菲巴斯德公司 | 呼吸道融合病毒疫苗及其使用方法 |
| WO2024241172A2 (en) | 2023-05-19 | 2024-11-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Methods for eliciting an immune response to respiratory syncycial virus and streptococcus pneumoniae infection |
| WO2024246358A1 (en) | 2023-06-01 | 2024-12-05 | Sanofi | Thermostable compositions comprising mrna lipid nanoparticles |
| WO2025006737A1 (en) | 2023-06-30 | 2025-01-02 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Genetically detoxified mutant of neisseria and outer membrane vesicle (omv) vaccine |
| WO2025017202A2 (en) | 2023-07-19 | 2025-01-23 | Sanofi | Porphyromonas gingivalis antigenic constructs |
| US20250090650A1 (en) | 2023-09-06 | 2025-03-20 | Sanofi | Modified influenza b hemagglutinin polypeptides and nucleic acids and uses thereof |
| WO2025057078A1 (en) | 2023-09-14 | 2025-03-20 | Pfizer Inc. | Adjuvanted immunogenic compositions comprising conjugated pneumococcal capsular saccharide antigens and uses thereof |
| WO2025106787A1 (en) | 2023-11-17 | 2025-05-22 | Sanofi Pasteur Inc. | Trehalose vaccine formulation |
| WO2025133971A1 (en) | 2023-12-23 | 2025-06-26 | Pfizer Inc. | Improved methods for producing bacterial capsular saccharide glycoconjugates |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2034118A1 (en) † | 1970-07-09 | 1972-01-13 | Seinfeld, Hugo, Brendel, Walter, Prof Dr . 8000 München | Xenogenic nucleic acids for enhancing antigenicity - of peptides and proteins |
| US4956296A (en) * | 1987-06-19 | 1990-09-11 | Genex Corporation | Cloned streptococcal genes encoding protein G and their use to construct recombinant microorganisms to produce protein G |
| US5059519A (en) | 1986-07-01 | 1991-10-22 | University Of Massachusetts Medical School | Oligonucleotide probes for the determination of the proclivity for development of autoimmune diseases |
| CA1339596C (en) | 1987-08-07 | 1997-12-23 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | Viral expression inhibitors |
| US5786189A (en) * | 1989-11-29 | 1998-07-28 | Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) | Vaccine |
| US5248670A (en) | 1990-02-26 | 1993-09-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotides for inhibiting herpesviruses |
| JPH04352724A (ja) * | 1990-07-27 | 1992-12-07 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 免疫調節型治療剤 |
| EP0468520A3 (en) * | 1990-07-27 | 1992-07-01 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences |
| US5591720A (en) | 1990-08-16 | 1997-01-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides for modulating the effects of cytomegalovirus infections |
| US5234811A (en) * | 1991-09-27 | 1993-08-10 | The Scripps Research Institute | Assay for a new gaucher disease mutation |
| AU3143993A (en) | 1991-11-18 | 1993-06-15 | Tanox Biosystems, Inc. | Anti-sense oligonucleotides for isotype-specific suppression of immunoglobulin production |
| EP0609459B1 (en) | 1992-07-24 | 1996-10-09 | Kumiai Chemical Industry Co., Ltd. | Triazole derivative, process for producing the same, pest control agent, and pest control method |
| US5585479A (en) * | 1992-07-24 | 1996-12-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Antisense oligonucleotides directed against human ELAM-I RNA |
| WO1994002499A1 (en) † | 1992-07-27 | 1994-02-03 | Hybridon, Inc. | Oligonucleotide alkylphosphonothioates |
| DE69433978T2 (de) | 1993-06-11 | 2005-08-25 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Methode der spezifischen abschaltung von genen durch dna-methylierung |
| WO1995026204A1 (en) * | 1994-03-25 | 1995-10-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs |
| CA2560114A1 (en) * | 1994-07-15 | 1996-02-01 | The University Of Iowa Research Foundation | Immunomodulatory oligonucleotides |
| US5629052A (en) | 1995-02-15 | 1997-05-13 | The Procter & Gamble Company | Method of applying a curable resin to a substrate for use in papermaking |
-
1995
- 1995-02-07 CA CA002560114A patent/CA2560114A1/en not_active Abandoned
- 1995-02-07 DE DE69535905T patent/DE69535905D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-07 DK DK95911630.2T patent/DK0772619T4/da active
- 1995-02-07 AU AU19127/95A patent/AU713040B2/en not_active Expired
- 1995-02-07 AT AT95911630T patent/ATE328890T1/de active
- 1995-02-07 DE DE69535036T patent/DE69535036T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-07 AT AT01202811T patent/ATE420171T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-02-07 AT AT01202813T patent/ATE509102T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-02-07 WO PCT/US1995/001570 patent/WO1996002555A1/en active IP Right Grant
- 1995-02-07 ES ES95911630T patent/ES2267100T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-07 EP EP01202811A patent/EP1167377B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-07 EP EP01202813A patent/EP1167378B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-07 US US08/386,063 patent/US6194388B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-07 EP EP95911630A patent/EP0772619B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-07 EP EP01202814A patent/EP1167379A3/en not_active Ceased
- 1995-02-07 ES ES01202813T patent/ES2366201T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-07 PT PT95911630T patent/PT772619E/pt unknown
- 1995-02-07 JP JP50499196A patent/JP3468773B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-07 ES ES01202811T patent/ES2320315T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-07 CA CA002194761A patent/CA2194761C/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-05-13 HK HK02103584.4A patent/HK1043598A1/en unknown
- 2002-06-26 HK HK02104747.6A patent/HK1044950A1/en not_active IP Right Cessation
- 2002-06-26 HK HK02104746.7A patent/HK1044949B/en not_active IP Right Cessation
- 2002-10-16 JP JP2002302338A patent/JP2003144184A/ja not_active Withdrawn
-
2003
- 2003-06-23 JP JP2003178740A patent/JP2004024261A/ja not_active Withdrawn
- 2003-06-23 JP JP2003178741A patent/JP4126252B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-03-11 JP JP2004069838A patent/JP2004215670A/ja not_active Withdrawn
-
2008
- 2008-01-25 JP JP2008015654A patent/JP2008169216A/ja not_active Withdrawn
-
2009
- 2009-03-10 JP JP2009057160A patent/JP2009148296A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008169216A (ja) * | 1994-07-15 | 2008-07-24 | Univ Of Iowa Research Foundation | 免疫調節オリゴヌクレオチド |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4126252B2 (ja) | 免疫調節オリゴヌクレオチド | |
| US8114848B2 (en) | Immunomodulatory oligonucleotides | |
| AU754463B2 (en) | Immunomodulatory oligonucleotides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060127 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20060424 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20060501 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060602 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20071001 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080125 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20080331 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20080415 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20080512 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110516 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120516 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130516 Year of fee payment: 5 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |