JP2003503018A

JP2003503018A - パピローマウイルスｌ１タンパク質の細胞傷害性ｔ細胞エピトープ、並びに診断法および療法におけるその使用

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Publication number: JP2003503018A
Application number: JP2001500776A
Authority: JP
Inventors: ヨホムス，イングリト; ニーラント，ヨン; オーセン，ヴォルフラム; ファート，シュテファン; シェーファー，クラウス
Original assignee: メディジーン・アクチェンゲゼルシャフト; ドイチェクレープスフォルシュングスツェントルム
Priority date: 1999-06-01
Filing date: 2000-05-31
Publication date: 2003-01-28
Also published as: AU5218900A; AU773822B2; EP1183367B1; WO2000073464A1; EP1183367A1; US6911207B1; DE50013908D1; DE19925235A1; CA2375888A1; ATE349532T1

Abstract

(57)【要約】本発明は、アミノ酸配列、ＡＱＩＦＮＫＰＹＷ、ＡＧＶＤＮＲＥＣＩを有するパピローマウイルスＴ細胞エピトープ、および／または機能的に活性であるその変異体、並びにまた、診断法および療法におけるその使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、アミノ酸配列、ＡＱＩＦＮＫＰＹＷ、ＡＧＶＤＮＲＥＣＩを有する
パピローマウイルス（ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ、以下「乳頭腫ウイルス」
ともいう）Ｔ細胞エピトープ、および／または機能的に活性であるその変異体、
並びにまた、診断法および療法におけるその使用に関する。

【０００２】いぼ（ｗａｒｔ）ウイルスとも称される、パピローマウイルスは、約８０００
塩基対のゲノムサイズおよび直径およそ５５ｎｍの二十面体キャプシドを持つ
、二本鎖ＤＮＡウイルスである。現在まで、１００を越える、異なるヒト病原性
パピローマウイルス種（ＨＰＶ）が知られており、このうちいくつか、例えばＨ
ＰＶ−１６、ＨＰＶ−１８、ＨＰＶ−３１、ＨＰＶ−３３、ＨＰＶ−３９、ＨＰ
Ｖ−４５、ＨＰＶ−５２またはＨＰＶ−５８は、悪性腫瘍を引き起こす可能性が
あり、そして他のもの、例えばＨＰＶ−６、ＨＰＶ−１１またはＨＰＶ−４２は
、良性腫瘍を引き起こす可能性がある。

【０００３】パピローマウイルスゲノムは、３つの部分に分けることが可能であり；第一の
部分は、ウイルス転写および複製のための制御配列を含む、非コード領域に合致
する。第二の領域、「Ｅ」（初期）領域は、多様なタンパク質コード部分Ｅ１−
Ｅ７を含み、このうち例えばＥ６およびＥ７タンパク質は、上皮細胞の形質転換
に責任があり、そしてＥ１タンパク質はＤＮＡコピー数を調節する。Ｅ６および
Ｅ７領域は、悪性変性細胞でも発現される「癌遺伝子」である。第三の領域は、
Ｌ（後期）領域とも称され、２つのタンパク質コード部分Ｌ１およびＬ２を含み
、該部分は、ウイルスキャプシドの構造的構成要素をコードする。Ｌタンパク質
の９０％以上がウイルスキャプシドに存在し、Ｌ１：Ｌ２比は一般的に３０：１
である。本発明にしたがい、用語Ｌ１タンパク質は、パピローマウイルスの主な
キャプシドタンパク質を意味する（ＢａｋｅｒＴ．ら（１９９１）Ｂｉｏｐｈ
ｙｓ．Ｊ．６０，１４４５）。

【０００４】５０％を超える場合で、ＨＰＶ−１６は、子宮頚癌（子宮頚の癌腫）に関連付
けられる。ＨＰＶ−１６は、子宮頚新生物の形成の主なリスク要因である。免疫
系は、該疾患の進行に重要な役割を果たす。したがって、細胞性免疫反応および
特に抗原特異的Ｔリンパ球は、防御機構におそらく重要である。高い悪性度分類
の悪性子宮頚上皮内新生物（ＣＩＮＩＩ／ＩＩＩ）および子宮頚腫瘍では、Ｅ
７遺伝子が、感染上皮のすべての層で、構成性に発現されることが、さらに見出
されてきている。したがって、Ｅ７タンパク質は特に、潜在的な腫瘍抗原および
活性化Ｔ細胞の標的分子とみなされる（例えば、ＷＯ９３／２０８４４を参照
されたい）。しかし、患者中のＥ７誘導細胞性免疫反応は、疾患の経過に影響を
与えるには十分に強くないようである。免疫反応は、適切なワクチンにより、増
幅させることが可能である可能性がある。

【０００５】Ｌ１遺伝子の発現および／またはＬ１およびＬ２遺伝子の同時発現は、キャプ
ソマー（ｃａｐｓｏｍｅｒ）、安定なキャプソマー、キャプシドまたはウイルス
様粒子（ＶＬＰ）の形成を導くことが可能であることを示すことが可能であった
（例えばＷＯ９３／０２１８４、ＷＯ９４／２０１３７またはＷＯ９４／
０５７９２を参照されたい）。キャプソマーは５つのＬ１タンパク質で構成され
る、オリゴマー型配置を意味する。キャプソマーは基本的構築ブロックであり、
これがウイルスキャプシドを構成する。安定なキャプソマーは、集合してキャプ
シドを形成することが不可能なキャプソマーである。キャプシドは、例えば７２
キャプソマーで構成されるパピローマウイルスコートを意味する（Ｂａｋｅｒ
Ｔ．ら（１９９１）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．６０，１４４５）。ＶＬＰは、
形態学的にそしてその抗原性において、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）ウイ
ルスに同一であるキャプシドを意味する。多様な動物系において、中和抗体の形
成により特徴付けられる体液性免疫反応を引き起こすのに、ＶＬＰを使用するこ
とが可能であった。しかし、ウイルス感染がすでに起こっている場合、抗体より
むしろ、ウイルス感染細胞の除去またはウイルス特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴ
Ｌ）反応が必要であるようであるため、Ｌ１および／またはＬ２タンパク質に対
するウイルス中和抗体の形成は、臨床的に比較的重要性が低い。そして、ＶＬＰ
は、細胞傷害性Ｔ細胞反応を引き起こすことが可能であるが、もっぱらキャプシ
ドタンパク質Ｌ１および／またはＬ２に対して向けられる免疫反応は、パピロー
マウイルスにより引き起こされる腫瘍を調節するのに適していないようである。

【０００６】したがって、キャプシドタンパク質Ｌ１および潜在的な腫瘍抗原Ｅ７の融合タ
ンパク質を含む、「キメラパピローマウイルス様粒子」（ＣＶＬＰ）（ＷＯ９
６／１１２７２およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍ．ら（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，
２３４，９３）が開発されてきている。ＣＶＬＰは、Ｅ７タンパク質に対し
て向けられる体液性免疫反応を少ない度合いでしか引き起こさなかった（Ｍｕｌ
ｌｅｒ，Ｍ．ら（１９９７）、上記）。しかし、試験したいくつかのＣＶＬＰ
は、実際、マウスで望ましいＥ７特異的細胞傷害性Ｔ細胞反応を誘導する（Ｐｅ
ｎｇＳ．ら（１９９８）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ２４０，１４７−５７も参照さ
れたい）。その結果、クラスＩＭＨＣ分子を介して提示されるＥ７腫瘍細胞ペ
プチドは、細胞傷害性Ｔ細胞の標的分子に相当するであろうため、ＣＶＬＰは、
ワクチンの開発、並びにすでに確立された感染およびそこから生じる腫瘍の治療
両方のため、関心が持たれる。

【０００７】ＣＶＬＰを含むワクチンは、ＣＶＬＰ偽感染（ｐｓｅｕｄｏ−ｉｎｆｅｃｔｉ
ｎｇ）細胞の原理に基づく。これは、ＣＶＬＰおよびウイルスが、同様に細胞中
に進入し、そこでペプチドにプロセシングされ、そして該ペプチドがＭＨＣクラ
スＩおよびＩＩ分子上に装填され、そして最後に、ＣＤ８またはＣＤ４陽性Ｔ細
胞に提示されることを意味する。本刺激の結果として、ＣＤ８細胞は細胞傷害性
Ｔ細胞に分化し、そしてその後、細胞性免疫反応を引き起こすことが可能であり
、一方、ＣＤ４細胞はＴヘルパー細胞に発展し、そしてＢ細胞を刺激し、体液性
免疫反応を生じ、またはＣＤ８陽性Ｔ細胞を刺激し、細胞傷害性免疫反応を生じ
、そしてそれ自体、感染細胞の溶解を引き起こすことが可能である。

【０００８】小ペプチドは、すでに細胞表面上にあるＭＨＣクラスＩ分子に結合し、そして
その後、ＣＤ８またはＣＤ４陽性細胞をさらにプロセシングすることなく刺激し
、細胞性免疫反応を生じることが可能である。しかし、特定のペプチドは、特定
のＭＨＣ分子にしか結合されない可能性がある。したがって、天然集団では、Ｍ
ＨＣ分子の広い多型のため、特定のペプチドは、集団の少数部分によってのみ結
合され、そして提示される可能性がある。本発明にしたがい、提示は、ペプチド
またはタンパク質断片のＭＨＣ分子への結合を意味し、前記結合は、例えば、小
胞体、細胞外空間、エンドソーム、プロエンドソーム、リソソームまたはプロリ
ソソームで起こることが可能であり、そして前記ＭＨＣ分子−ペプチド複合体は
その後、細胞膜の細胞外側に結合し、したがって免疫細胞に特異的に認識される
ことが可能になる。

【０００９】ＣＶＬＰは細胞性および体液性免疫反応を両方引き起こし、そしてＭＨＣ制限
でないため、本技術は、一般的に、ワクチン開発に適しており、これはＬ１部分
が粒子を形成する能力を提供し、そしてさらなる抗原部分が前記Ｌ１部分に融合
しているためである。

【００１０】この種類のＣＶＬＰの開発のため、ＣＶＬＰの免疫原性を直接研究するのに用
いることが可能な、利用可能な機能的アッセイ系を有することが絶対的に必要で
ある。こうしたアッセイ系は、異なる抗原比率を持つＣＶＬＰを、同一アッセイ
系を用いることにより研究することが可能な特性を有するべきである。細胞性免
疫反応は、腫瘍またはウイルス疾患の免疫療法に非常に重要であるため、ＣＶＬ
Ｐにより引き起こされる細胞性免疫反応を測定することを可能にする目的が生じ
た。

【００１１】本目的は、ＭＨＣ分子と、そして特定の態様において、（Ｈ２−Ｄ^b）ＭＨＣ
分子と関連し、例えば、ｉｎｖｉｖｏおよびｉｎｖｉｔｒｏで細胞傷害性Ｔ
細胞反応を引き起こすＴ細胞エピトープを同定することにより、達成された。前
記ペプチドは、好ましくは、配列ＡＱＩＦＮＫＰＹＷ、ＡＧＶＤＮＲＥＣＩを有
する。これらの配列は、ＨＰＶ１６のＬ１ペプチドの一部である。これらは、ア
ミノ酸領域３３０ないし３３８（Ｌ１_330-338）および１６５ないし１７３（Ｌ
１_165-173）を含む。

【００１２】本発明はしたがって、アミノ酸配列、ＡＱＩＦＮＫＰＹＷ、ＡＧＶＤＮＲＥＣ
Ｉを有するＴ細胞エピトープ、および／または機能的に活性であるその変異体に
関する。

【００１３】ＡＱＩＦＮＫＰＹＷまたはＡＧＶＤＮＲＥＣＩの機能的に活性である変異体は
、Ｔ細胞細胞傷害性アッセイ系（例えば本発明の実施例２−５を参照されたい）
において、ＡＱＩＦＮＫＰＹＷまたはＡＧＶＤＮＲＥＣＩの細胞傷害性に比較し
、陰性コントロールの平均および標準偏差の３倍の総計に対応し、好ましくは、
少なくともおよそ３０％であり、特に、少なくともおよそ５０％であり、そして
特に好ましくは、少なくともおよそ８０％である細胞傷害性を有する、Ｔ細胞エ
ピトープを意味する。

【００１４】好ましい変異体の例は、ＡＱＩＦＮＫＰＹＷまたはＡＧＶＤＮＲＥＣＩに、ア
ミノ酸レベルで、少なくともおよそ６５％、好ましくは、少なくともおよそ７５
％、そして特に、少なくともおよそ８５％の配列相同性を有する、Ｔ細胞エピト
ープである。他の好ましい変異体はまた、ＡＱＩＦＮＫＰＹＷまたはＡＧＶＤＮ
ＲＥＣＩに、構造的に相同である、Ｔ細胞エピトープである。こうしたエピトー
プは、Ｔ細胞エピトープ、ＡＱＩＦＮＫＰＹＷ、ＡＧＶＤＮＲＥＣＩに対する特
異的Ｔ細胞を生成し（ＤｅＢｒｕｉｊｎＭ．Ｌ．ら（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１，２９６３−７０；およびＤｅＢｒｕｉｊｎＭ
．Ｌ．（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２，３０１３−２
０）、そして例えば、ペプチド特異的Ｔ細胞による認識のため選択された、合成
的に産生されたペプチドに関しアッセイすることにより、見出すことが可能であ
る（実施例を参照されたい）。Ｔ細胞エピトープは特に、細胞傷害性Ｔ細胞エピ
トープを意味する。しかし、同様にＭＨＣＩ分子を認識することが可能な、非
細胞傷害性Ｔ細胞もまた知られ、したがって、本発明はまた、変異体として、非
細胞傷害性Ｔ細胞エピトープも含む。

【００１５】本発明の別の態様は、化合物の一部であるＴ細胞エピトープであり、該化合物
が、パピローマウイルスの天然発生Ｌ１タンパク質でなく、そしてパピローマウ
イルスの天然発生Ｌ１タンパク質の単独（ｅｘｃｌｕｓｉｖｅｌｙ）Ｎ末端また
は単独Ｃ末端欠失突然変異体でない、前記エピトープである。特定の態様におい
て、アミノ酸配列ＡＱＩＦＮＫＰＹＷ、ＡＧＶＤＮＲＥＣＩを有するＴ細胞エピ
トープ、および／または機能的に活性であるその変異体は、異なるパピローマウ
イルスのＬ１タンパク質中に、またはキメラＬ１タンパク質、例えばＨＰＶ１８
Ｌ１Ｅ７融合タンパク質中に含まれてもよい。本発明のこうした化合物は、ＣＶ
ＬＰを形成する能力を有する可能性がある。

【００１６】化合物の一部として、前記Ｔ細胞エピトープは、好ましくは、さらなるアミノ
酸配列を含むポリペプチドであってもよく、そして特に、融合タンパク質であっ
てもよい。特に、該化合物は、長さ少なくともおよそ５０アミノ酸、好ましくは
、少なくともおよそ３５アミノ酸、特に、少なくともおよそ２０アミノ酸、そし
て特に好ましくは、少なくともおよそ９アミノ酸のポリペプチドであってもよい
。

【００１７】化合物を検出するため、またはそのＴ細胞結合活性を修飾するため、前記化合
物は、Ｔ細胞エピトープおよび／または前記融合タンパク質の化学的、放射性同
位体、非放射性同位体および／または蛍光標識を含んでもよい。

【００１８】本発明にしたがった化学的標識に適した、当業者に知られる化学的物質の例は
：ビオチン、ＦＩＴＣ（フルオレセインイソチオシアネート）またはストレプト
アビジンである。

【００１９】可能な態様において、ペプチドは、少なくとも１つのリジンを含むよう修飾さ
れる。当業者に知られる方式で、ビオチンまたはＦＩＴＣ（フルオレセインイソ
チオシアネート）を前記リジンにカップリングする。本方式で修飾されたペプチ
ドを、適切なＭＨＣ分子に、または適切なＭＨＣ分子を含む細胞に結合させる。
ペプチドはその後、標識アビジンまたはストレプトアビジンを介して、あるいは
ＦＩＴＣ蛍光を介して直接、検出することが可能である。

【００２０】本発明にしたがった放射性同位体標識に適した、当業者に知られる同位体の例
は：³Ｈ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、³²Ｐ、³³Ｐまたは¹⁴Ｃである。本発明にしたがった、非放射性同位体標識に適した、当業者に知られる同位体
の例は：²Ｈ、または¹³Ｃである。

【００２１】本発明にしたがった蛍光標識に適した、当業者に知られる蛍光物質の例は：¹⁵ ² Ｅｕ、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、
フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド（ｐｈｔａｌｄｅｈｙ
ｄｅ）またはフルオレスカミンである。

【００２２】やはり本発明にしたがった標識に用いることが可能な、本明細書に列挙されて
いない、さらなる標識が、当業者に知られる。当業者に知られる本発明の化学的修飾の例は、アセチル、リン酸および／また
は単糖基の転移である。

【００２３】長さおよそ５０アミノ酸の本発明のポリペプチドは、例えば化学的ペプチド合
成により、調製することが可能である。より長いポリペプチドは、好ましくは遺
伝子操作により生成される。したがって、本発明はさらに、以下の構成要素：（
ａ）少なくとも１つの制御配列および（ｂ）本発明の化合物のアミノ酸配列をコ
ードする少なくとも１つの核酸を含む、前記Ｔ細胞エピトープまたは化合物を発
現するための核酸構築物に関する。前記核酸構築物は、好ましくはＤＮＡまたは
ＲＮＡで作成される。適切な制御配列は、例えば、真核細胞における構成性、制
御可能、組織特異的、細胞周期特異的、または代謝特異的発現、あるいは原核細
胞における構成性、代謝特異的、または制御可能発現を可能にする。本発明にし
たがった制御可能配列は、プロモーター、アクチベーター配列、エンハンサー、
サイレンサー、および／またはリプレッサー配列である。

【００２４】真核生物における構成性発現を可能にする、適切な制御可能要素の例は、ＲＮ
ＡポリメラーゼＩＩＩに認識されるプロモーターまたはウイルスプロモーター、
例えばＣＭＶエンハンサー、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、およ
び例えばＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＥＢＶ、ＨＴＬＶまたはＨＩＶに由
来するウイルスプロモーターおよびアクチベーター配列である。

【００２５】真核生物における制御可能発現を可能にする制御可能要素の例は、対応するリ
プレッサーと組み合わせたテトラサイクリンオペレーターである（Ｇｏｓｓｅｎ
Ｍ．ら（１９９４）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５，
５１６−２０）。

【００２６】真核生物における組織特異的発現を可能にする制御可能要素の例は、特定の細
胞種中でのみ発現されるタンパク質をコードする遺伝子のプロモーターまたはエ
ンハンサー由来のプロモーターまたはアクチベーター配列である。

【００２７】真核生物における細胞周期特異的発現を可能にする制御可能要素の例は、以下
の遺伝子：ｃｄｃ２５Ｃ、サイクリンＡ、サイクリンＥ、ｃｄｃ２、Ｅ２Ｆ、Ｂ
−ｍｙｂまたはＤＨＦＲのプロモーターである（ＺｗｉｃｋｅｒＪ．およびＭ
ｕｌｌｅｒＲ．（１９９７）ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ．１３，３−６）
。

【００２８】真核生物における代謝特異的発現を可能にする制御可能要素の例は、低酸素、
グルコース欠乏、リン酸濃縮または熱ショックにより制御されるプロモーターで
ある。

【００２９】トランスフェクション、形質転換または感染により、前記核酸を導入し、そし
てしたがって真核または原核細胞においてポリペプチドを発現させることを可能
にするため、核酸は、プラスミドとして、あるいはウイルスまたは非ウイルスベ
クターの一部として存在してもよい。したがって、本発明はさらに、本発明のポ
リペプチドをコードする核酸を含むベクター、特に発現ベクターに関する。ここ
で特に適切なウイルスベクターは：バキュロウイルス、ワクシニアウイルス、ア
デノウイルス、アデノ関連ウイルスおよびヘルペスウイルスである。ここで特に
適切な非ウイルスベクターは：ビロソーム、リポソーム、陽イオン性脂質または
ポリリジン結合ＤＮＡである。

【００３０】本発明はさらに、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む、好ましくは提示
する細胞に関する。特定の態様において、細胞は、言及されるベクターの１つに
、トランスフェクション、形質転換され、または感染する。本細胞は、各場合に
用いられる制御可能配列の活性化を導く、当業者に知られる条件下で、本発明の
ポリペプチドを発現する。その後、例えば、上述の標識の１つを使用することに
より、該ポリペプチドを前記細胞から単離し、そして精製してもよい。遺伝子操
作およびそれに続く本発明の発現された化合物の精製による調製に適した細胞は
、原核および真核細胞、特に細菌細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母
細胞、例えばＳ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、昆虫細胞、例え
ばスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ
）細胞（Ｓｆ−９）またはトリコプルシア・ニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎ
ｉ）細胞、あるいは哺乳動物細胞、例えばＣＯＳ細胞またはＨｅＬａ細胞である
。

【００３１】特定の態様は、本発明のポリペプチドを発現する細胞自体を用い、そして特に
好ましい態様において、該細胞は、細胞表面上のＭＨＣ−１分子を介し、本発明
のポリペプチドの一部を提示する。本発明の細胞を調製するのに適した細胞は、
抗原提示細胞、例えばＢ細胞、マクロファージ、樹状細胞、胚性細胞または線維
芽細胞であり、好ましい態様において、Ｂ１６Ｆ１０、Ｂ６、Ｃ３、ＥＬ４、Ｒ
ＭＡまたはＲＭＡ−Ｓ細胞である。Ｔ細胞エピトープを含むポリペプチドを提示
する、本発明の細胞は、免疫細胞、特にＴ細胞を再刺激するための、および／ま
たはＴ細胞活性化を測定するための標的細胞として使用してもよい。本発明にし
たがい、標的細胞は、ＭＨＣ分子を介してＴ細胞エピトープを提示し、そしてし
たがって、Ｔ細胞活性化、特に該細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞反応を特異的に
引き起こす細胞を意味する。

【００３２】さらに、Ｔ細胞エピトープ含有化合物は、該化合物が、共有的に、あるいは疎
水性相互作用、イオン結合または水素結合により、少なくとも１つのさらなる種
、例えばペプチド、タンパク質、ペプトイド、直線または分枝オリゴまたは多糖
および核酸に連結されることにより特徴づけられる複合体の一部であってもよい
。

【００３３】したがって、本発明は、Ｔ細胞エピトープまたは化合物および少なくとも１つ
のさらなる化合物を含む複合体に関する。好ましい態様において、該ポリペプチ
ドは、ＭＨＣクラスＩ分子に、好ましくはＨ２−Ｄ^b四量体としての該分子に連
結される。ヒトまたはネズミＭＨＣクラスＩ分子、特にＣ５７Ｂｌ／６マウス由
来のＭＨＣクラスＩ分子が特に好ましい。ＡｌｔｍａｎＪ．Ｄ．ら（１９９６
，Ｓｃｉｅｎｃｅ２７４，９４−６）による技術を用い、例えば、ペプチ
ド特異的細胞傷害性Ｔ細胞のＴ細胞受容体に結合することが可能な、適切な結合
されたペプチドを含むＨ２−Ｄ^b四量体を調製することが可能である。

【００３４】別の態様は、本発明の化合物または前記複合体の支持体成分への固定である。
適切な支持体成分の例は、セラミック、金属、特に貴金属、ガラス、プラスチッ
ク、結晶成分、あるいは本支持体、特に前記成分の薄層、あるいは（バイオ）分
子フィラメント、例えばセルロースまたは構造タンパク質である。

【００３５】本発明の複合体を精製するため、該複合体の構成要素はさらにまた、タンパク
質タグを含んでもよい。本発明のタンパク質タグは、例えばマトリックスに対す
る高親和性吸着、複合体の無視できる溶出を伴う、適切な緩衝液でのストリンジ
ェントな洗浄およびそれに続く吸着された複合体の特異的溶出を可能にする。当
業者に知られるタンパク質タグの例は、ＮまたはＣ末端（ＨＩＳ）₆タグ、ｍｙ
ｃタグ、ＦＬＡＧタグ、赤血球凝集素タグ、グルタチオントランスフェラーゼ（
ＧＳＴ）タグ、キチン結合親和性を持つインテインタグまたはマルトース結合タ
ンパク質（ＭＢＰ）タグである。本発明のタンパク質タグは、Ｎ末端、Ｃ末端お
よび／または内部に位置してもよい。

【００３６】本発明は、更に、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの化合物による
Ｔ細胞活性化の in vitro 検出方法に関する。この種類の方法は、好ましくは、
次の三つの工程を含む。

【００３７】（ａ）第一工程において、細胞を、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一
つの化合物によって刺激する。この化合物は、Ｔ細胞エピトープを含有する少な
くとも一つの本発明の化合物、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本
発明の複合体、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定なキャプ
ソメア、少なくとも一つのＶＬＰ、少なくとも一つのＣＶＬＰおよび／または少
なくとも一つのウイルスであってよい。好ましい態様において、免疫細胞を、Ｃ
ＶＬＰと一緒のインキュベーションによって刺激する。この刺激は、例えば、ワ
クチン接種の形で、またはＣＶＬＰと一緒に免疫細胞を in vitro でインキュベ
ートすることによって行うことができる。この方法で刺激される免疫細胞は、例
えば、ワクチン接種後に、脾臓、リンパ節または血液から得られるおよび／また
は培養される。

【００３８】（ｂ）第二工程において、細胞を、本発明の少なくとも一つのＴ細胞エピトー
プ、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の化合物、Ｔ細胞エピ
トープを提示する少なくとも一つの標的細胞とおよび／または本発明の少なくと
も一つの複合体と一緒にインキュベートする。

【００３９】（ｃ）第三工程において、Ｔ細胞活性化を決定する。これに適した方法の例は
、Ｔ細胞によるサイトカイン産生または分泌、Ｔ細胞上の表面分子発現、標的細
胞溶解または細胞増殖の検出である。これに適した方法の例は、サイトカインア
ッセイ（cytokinassay）（Chapter 6.2 to 6.24 in Current Protocols in Immu
nology (1999), edited by Coligan J.E., Kruisbeek A.M., Margulies D.H., S
hevach E.M. and Strober W., John Wiley & Sons）、ＥＬＩＳＰＯＴ（Chapter
6.19 in Current Protocols in Immunology, 上記）、⁵¹Ｃｒ放出検定（Chapte
r 3.11 in Current Protocols in Immunology, 上記）または増殖の検出（Chapt
er 3.12 in Current Protocols in Immunology, 上記）である。用いられる方法
により、これに関して、細胞傷害性Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞
のような免疫細胞と他の細胞とを区別することも可能である。本発明の標識を含
有する、本発明の化合物、複合体、および／または細胞の使用は、標識された化
合物、複合体および／または細胞のＴ細胞への結合の検出によってＴ細胞エピト
ープを認識するＴ細胞の検出を可能にする。好ましい態様において、Ｔ細胞の表
面への本発明のＭＨＣ−ポリペプチド複合体の結合を検出する。これは、ＭＨＣ
複合体自体が標識される、例えば、蛍光標識されるように、または追加の工程に
おいて、ＭＨＣ特異的な標識された、例えば、蛍光標識された抗体が、ＭＨＣ複
合体を順次検出するために用いられるように行うことができる。次に、Ｔ細胞の
蛍光標識を、例えば、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）で測定し且つ評価す
ることができる。Ｔ細胞への複合体の結合を検出するもう一つ可能な方法は、Ｔ
細胞活性化を再度測定することである（サイトカイン検定、Elispot、⁵¹Ｃｒ放
出検定、増殖、上を参照されたい）。しかしながら、これには、共受容体（例え
ば、ＣＤ２８）の、例えば、共受容体特異的抗体（抗ＣＤ２８）および／または
他の非特異的活性化因子（ＩＬ−２）による同時刺激が必要である。

【００４０】本発明は、更に、工程（ａ）の後に導入される追加工程（ａ’）を含有する方
法に関する。（ａ’）工程（ａ）に続くこの追加工程（ａ’）において、単離されるまたは
培養される細胞を、Ｔ細胞エピトープを含有する本発明の化合物を負荷された少
なくとも一つの標的細胞、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明
の複合体、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定なキャプソメ
ア、少なくとも一つのＶＬＰ、少なくとも一つのＣＶＬＰおよび／または少なく
とも一つのウイルスと一緒に、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本
発明の複合体、および／またはＴ細胞エピトープを提示する少なくとも一つの標
的細胞と一緒に、工程（ｂ）の前に少なくとも約１２日間、特には、約５日間同
時培養する。

【００４１】同時培養とは、細胞を、（ｉ）Ｔ細胞エピトープを含有する本発明の化合物を負荷された少なくとも一
つの標的細胞、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の複合体、
少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定なキャプソメア、少なく
とも一つのＶＬＰ、少なくとも一つのＣＶＬＰおよび／または少なくとも一つの
ウイルスの存在下において、（ii）Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の複合体の存在下
において、（iii）Ｔ細胞エピトープを提示する少なくとも一つの標的細胞の存在下にお
いて、同一成長培地および同一組織培養容器中で成長させることを意味する。

【００４２】本発明は、更に、Ｔ細胞エピトープを提示する標的細胞を製造する方法に関す
る。ここで、異なったＴ細胞エピトープの組合せを標的細胞に負荷することは可
能である。好ましい態様において、標的細胞を、Ｔ細胞エピトープを含有する少
なくとも一つの化合物および／またはＴ細胞エピトープを含有する少なくとも一
つの複合体と一緒にインキュベートする。特に好ましい態様において、標的細胞
を、本発明のポリペプチドを含有する成長培地中でまたは本発明の結合したポリ
ペプチドを含むＭＨＣクラスＩ複合体と一緒にインキュベートする。ＭＨＣクラ
スＩ複合体は、例えば、Ｈ２−Ｄ^b四量体として存在しうる。これに関して、四
量体は、通常は、４個のペプチドを結合している。これらは、同一でありうるし
、またはそれ以外には、異なったペプチド種でありうる。更に好ましい態様にお
いて、標的細胞を、核酸および／またはベクターを用いてトランスフェクション
させる、形質転換させるおよび／または感染させる。特に好ましい態様では、標
的細胞を、ワクシニアウイルスベクターを用いて感染させる。本発明の方法は、
抗原提示細胞、例えば、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、胚性細胞または線
維芽細胞を用いて、そして好ましい態様では、Ｂ１６Ｆ１０、Ｂ６、Ｃ３、ＥＬ
４、ＲＭＡまたはＲＭＡ−Ｓ細胞を用いて行われる。

【００４３】用いられるＣＶＬＰは、乳頭腫ウイルスＬ１タンパク質またはその変異型、特
に、ＨＰＶ１６Ｌ１タンパク質および、必然的ではないが、Ｌ１に異種のタン
パク質またはその変異型を含有する。それら二つのタンパク質は、直接的にまた
は間接的に結合していてよい。本発明によれば、直接的に結合するとは、二つの
タンパク質が互いに、例えば、ペプチド結合またはジスルフィド結合によって共
有結合していることを意味する。間接的に結合するとは、それらタンパク質が、
非共有結合、例えば、疎水的相互作用、イオン結合または水素結合によって結合
していることを意味する。もう一つの態様において、ＣＶＬＰは、Ｌ１タンパク
質またはその変異型の他に、乳頭腫ウイルスＬ２タンパク質を含有する。

【００４４】本発明のＬ１タンパク質の好ましい態様の例は、一つまたはそれ以上の欠失、
特に、Ｃ末端欠失を有するＬ１タンパク質である。Ｃ末端欠失は、Ｃ末端に位置
する核局在化シグナルが欠失しているので、ウイルス様粒子形成の効率を増加さ
せることが可能であるという利点を有する。したがって、Ｃ末端欠失は、好まし
くは、約３５個までのアミノ酸、具体的には、約２５個〜約３５個のアミノ酸、
特に、約３２個〜約３４個のアミノ酸である。例えば、ＨＰＶ１６Ｌ１タンパ
ク質の３２アミノ酸長さＣ末端欠失は、ウイルス様粒子の形成を少なくとも約１
０倍増加させうるのに充分である。更に、Ｌ１タンパク質は、一つまたはそれ以
上の突然変異を有することがありうるし、またはＬ１部分は、種々の乳頭腫ウイ
ルスのＬ１タンパク質から構成されていてよい。本発明のＬ１タンパク質の共通
の特徴は、それらが、ＶＬＰまたはＣＶＬＰの形成を可能にするということおよ
びそれらが本発明の少なくとも一つのＴ細胞エピトープを含有するということで
ある。

【００４５】好ましい態様において、Ｌ１タンパク質またはその変異型およびＬ１に異種の
タンパク質は、融合タンパク質である。複数の種々のタンパク質またはそれらの
一部分から構成される異種タンパク質も含まれる。これらは、例えば、タンパク
質のエピトープ、具体的には、細胞傷害性Ｔ細胞エピトープでもありうる。これ
に関して、本発明によるエピトープは、約５０アミノ酸、好ましくは、少なくと
も約３５アミノ酸、具体的には、少なくとも約２０アミノ酸、特に好ましくは、
少なくとも約９アミノ酸長さの合成ポリペプチドの一部分であってもい。

【００４６】好ましくは、ウイルスタンパク質に由来する、例えば、ＨＩＶ、ＨＢＶまたは
ＨＣＶ、好ましくは、乳頭腫ウイルス、詳しくは、ヒト乳頭腫ウイルスに由来す
る、Ｌ１に異種のタンパク質である。

【００４７】好ましい態様において、そのウイルスタンパク質は、乳頭腫ウイルスＥタンパ
ク質、好ましくは、Ｅ６および／またはＥ７タンパク質である。Ｅタンパク質が
欠失Ｅタンパク質、好ましくは、Ｃ末端欠失、特には、Ｃ末端欠失Ｅ７タンパク
質である場合には、欠失Ｌ１タンパク質に関連するこれら構築物は、好ましくは
、ウイルス様粒子を形成しうるので、それは特に好適である。特に好ましいのは
、５５個までのアミノ酸、好ましくは、約５個〜約５５個のアミノ酸、特に、約
３８個〜約５５個のアミノ酸の欠失である。

【００４８】もう一つの態様において、Ｌ１に異種のタンパク質は、非ウイルス病原体の抗
原に由来しうる。同様に、それらは、例えば、チログロブリン、ミエリン塩基性
タンパク質または透明帯糖タンパク質３（ＺＰ₃）のような自己免疫抗原に由来
しうるが、これらは、例えば、甲状腺炎、多発性硬化症、卵巣炎または慢性関節
リウマチのような特定の自己免疫疾患に関係している。好ましい態様において、
Ｌ１に異種のタンパク質は、腫瘍抗原、好ましくは、ＭＡＲＴのような黒色腫抗
原、Ｈｅｒ２ｎｅｕ（ｃ−ｅｒｂＢ２）、ＢＣＲＡ−１またはＣＡ１２５のよ
うな卵巣癌抗原、ＣＡ１２５のような結腸癌抗原、またはＨｅｒ２ｎｅｕ（ｃ
−ｅｒｂＢ２）、ＢＣＲＡ−１、ＢＣＲＡ−２のような胸部癌抗原に由来する。

【００４９】本発明は、更に、試料からの調製によって得られるＴ細胞の活性化の in vitr
o 検出方法に関する。この方法は、ある試料、例えば、患者の血液試料またはネ
ズミ膵臓が、乳頭腫ウイルスＬ１タンパク質特異的細胞傷害性Ｔ細胞を含有して
いるかどうか決定することを可能にする。この種類の検出方法は、次の行程を含
む。

【００５０】（ａ”）第一工程において、細胞を、例えば、患者から採血することによって
または例えば、ネズミ膵臓またはリンパ節の調製によって得る。次に、それら細
胞を成長培地中に取り、培養する。

【００５１】（ｂ）第二工程において、細胞を、Ｔ細胞エピトープを提示する少なくとも一
つの標的細胞と一緒にまたはＴ細胞エピトープを含有する化合物を成分として含
む少なくとも一つの複合体と一緒にインキュベートする。

【００５２】（ｃ）第三工程において、Ｔ細胞活性化を決定する。これに適した方法の例は
、Ｔ細胞によるサイトカイン産生または分泌、Ｔ細胞上の表面分子発現、標的細
胞溶解または細胞増殖の検出である。これに適した方法の例は、サイトカインア
ッセイ（Chapter 6.2 to 6.24 in Current Protocols in Immunology (1999), e
dited by Coligan J.E., Kruisbeek A.M., Margulies D.H., Shevach E.M. and
Strober W., John Wiley & Sons）、ＥＬＩＳＰＯＴ（Chapter 6.19 in Current
Protocols in Immunology, 上記）、⁵¹Ｃｒ放出検定（Chapter 3.11 in Curren
t Protocols in Immunology, 上記）または増殖の検出（Chapter 3.12 in Curre
nt Protocols in Immunology, 上記）である。用いられる方法により、これに関
して、細胞傷害性Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞のような免疫細胞
と他の細胞とを区別することも可能である。本発明の標識を含有する、本発明の
化合物、複合体、および／または細胞の使用は、標識された化合物、複合体およ
び／または細胞のＴ細胞への結合の検出によってＴ細胞エピトープを認識するＴ
細胞の検出を可能にする。好ましい態様では、Ｔ細胞の表面への本発明のＭＨＣ
−ポリペプチド複合体の結合を検出する。これは、ＭＨＣ複合体自体が標識され
る、例えば、蛍光標識されるように、または追加の工程において、ＭＨＣ特異的
な標識された、例えば、蛍光標識された抗体が、ＭＨＣ複合体を順次検出するた
めに用いられるように行うことができる。次に、Ｔ細胞の蛍光標識を、例えば、
蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）で測定し且つ評価することができる。Ｔ細
胞への複合体の結合を検出するもう一つ可能な方法は、Ｔ細胞活性化を再度測定
することである（サイトカイン検定、Elispot、⁵¹Ｃｒ放出検定、増殖、上を参
照されたい）。しかしながら、これには、共受容体（例えば、ＣＤ２８）の、例
えば、共受容体特異的抗体（抗ＣＤ２８）および／または他の非特異的活性化因
子（ＩＬ−２）による同時刺激が必要である。

【００５３】本発明は、更に、工程（ａ”）の後に導入される追加工程（ａ’）を含有する
方法に関する。（ａ’）工程（ａ”）に続くこの追加工程（ａ’）において、単離されるまた
は培養される細胞を、Ｔ細胞エピトープを含有する本発明の化合物を負荷された
少なくとも一つの標的細胞、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発
明の複合体、少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定なキャプソ
メア、少なくとも一つのＶＬＰ、少なくとも一つのＣＶＬＰおよび／または少な
くとも一つのウイルスと一緒に、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの
本発明の複合体、および／またはＴ細胞エピトープを提示する少なくとも一つの
標的細胞と一緒に、工程（ｂ）の前に少なくとも約１２日間、特には、約５日間
同時培養する。

【００５４】同時培養とは、細胞を、（ｉ）Ｔ細胞エピトープを含有する本発明の化合物を負荷された少なくとも一
つの標的細胞、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の複合体、
少なくとも一つのキャプソメア、少なくとも一つの安定なキャプソメア、少なく
とも一つのＶＬＰ、少なくとも一つのＣＶＬＰおよび／または少なくとも一つの
ウイルスの存在下において、（ii）Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の複合体の存在下
において、（iii）Ｔ細胞エピトープを提示する少なくとも一つの標的細胞の存在下にお
いて、同一成長培地および同一組織培養容器中で成長させることを意味する。

【００５５】本発明は、更に、Ｔ細胞の活性化の in vitro 検出のための検定システム（キ
ット）であって、（ａ）少なくとも一つの本発明のＴ細胞エピトープ、少なくとも一つの本発明
の化合物、少なくとも一つの本発明のベクター、少なくとも一つの本発明の細胞
および／または少なくとも一つの本発明の複合体、および（ｂ）免疫系のエフェクター細胞、好ましくは、Ｔ細胞、具体的には、細胞傷
害性Ｔ細胞またはＴヘルパー細胞を含む検定システムに関する。

【００５６】本発明は、更に、Ｔ細胞の活性化の in vitro 検出のための検定システム（キ
ット）であって、（ａ）少なくとも一つの本発明のＴ細胞エピトープ、少なくとも一つの本発明
の化合物、少なくとも一つの本発明のベクター、少なくとも一つの本発明の細胞
および／または少なくとも一つの本発明の複合体、および（ｂ）免疫系のエフェクター細胞、好ましくは、Ｔ細胞、具体的には、細胞傷
害性Ｔ細胞またはＴヘルパー細胞を含む検定システムに関する。

【００５７】具体的な態様において、検定システムは、例えば、患者の血液試料中またはネ
ズミ膵臓中に存在するＬ１タンパク質特異的細胞傷害性Ｔ細胞を決定するのに用
いられる。この場合、（ｂ）に記載の細胞は、検定システム中に含有される対照
細胞であり、第一キット成分である（ａ）に挙げられる物質によるその活性化は
、標準として役立つ。この反応で認められる活性化を、患者またはマウスから単
離された細胞の、キット成分（ａ）によるＴ細胞活性化と比較する。

【００５８】もう一つ具体的な態様において、検定システムは、例えば、Ｔ細胞エピトープ
を含有する化合物、Ｔ細胞エピトープを含有する複合体、キャプソメア、安定な
キャプソメア、ＶＬＰ、ＣＶＬＰおよび／またはウイルスのＬ１タンパク質特異
的抗原性を決定するのに用いられる。この場合、（ａ）に記載の物質は、第二キ
ット成分である（ｂ）に挙げられる細胞への活性化作用が標準として役立つ対照
物質である。この反応で認められる活性化を、キット成分（ｂ）へのＴ細胞エピ
トープ含有化合物、Ｔ細胞エピトープを含む複合体、キャプソメア、安定なキャ
プソメア、ＶＬＰ、ＣＶＬＰおよび／またはウイルスの活性化作用と比較する。

【００５９】本発明は、更に、免疫応答を引き起こすまたは検出するための、少なくとも一
つのＴ細胞エピトープ、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の
化合物、Ｔ細胞エピトープ含有化合物をコードする核酸を含有する少なくとも一
つの本発明のベクター、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の
細胞、および／またはＴ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の複
合体の使用に関する。

【００６０】 in vitro の並びに in vivo の免疫細胞刺激に適した細胞は、具体的には、本
発明の分子の少なくとも一つを、それらのＭＨＣクラスＩ分子によって提示する
細胞である。抗原提示に適した細胞の例は、免疫細胞と一緒に培養されることに
よって特定のＴ細胞を刺激することができるＢ細胞、樹状細胞、マクロファージ
、胚性細胞または線維芽細胞である。

【００６１】具体的な態様において、免疫応答を検出するために、本発明の化合物、例えば
、本発明のＴ細胞エピトープを更に含有するＨＰＶ１８Ｌ１Ｅ７融合タンパク
質を用いることは可能である。このような本発明の化合物は、ＣＶＬＰを形成す
る能力を有することがありうる。

【００６２】本発明は、更に、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の化合
物、Ｔ細胞エピトープ含有化合物をコードする核酸を含有する少なくとも一つの
ベクター、Ｔ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の細胞、および
／またはＴ細胞エピトープを含有する少なくとも一つの本発明の複合体、および
適宜、薬学的に許容しうる担体を含有する薬剤または診断薬に関する。

【００６３】当業者に知られている担体の例は、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、
ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然または改質セルロー
ス、ポリアクリルアミド、アガロース、水酸化アルミニウムまたは磁鉄鉱である
。

【００６４】本発明の薬剤または診断薬は、溶液中に存在してよい、固体マトリックスに結
合していてよいおよび／またはアジュバントと混合されていてよい。この薬剤または診断薬は、いろいろな方法で投与することができる。当業者に
知られている投与形式の例は、例えば、経口、鼻腔内、静脈内、筋肉内および／
または局所投与による非経口、限局性および／または全身性投与である。好適な
投与形式は、例えば、特定の乳頭腫ウイルス感染の自然の感染経路によって影響
される。投与される量は、患者の年齢、体重および全身の健康状態、および乳頭
腫ウイルス感染の種類に依る。この薬剤または診断薬は、カプセル剤、液剤、懸
濁剤、エリキシル剤（経口投与用）または滅菌液剤若しくは懸濁剤（非経口また
は鼻腔内投与用）の形で投与することができる。用いることができる不活性な且
つ免疫学的に許容しうる担体は、例えば、生理食塩水またはリン酸緩衝化生理食
塩水である。薬剤は、治療的有効量で投与される。これらは、防御免疫応答を引
き起こすのに充分な量である。

【００６５】具体的な態様において、本発明の化合物、例えば、本発明のＴ細胞エピトープ
を更に含有するＨＰＶ１８Ｌ１Ｅ７融合タンパク質を薬剤または診断薬として
用いることは可能である。このような本発明の化合物は、ＣＶＬＰを形成する能
力を有することがありうる。

【００６６】図面および次の実施例は、本発明を制限することなく、より詳細に説明するた
めのものである。実施例１．出発物質の説明 - ＨＰＶ１６Ｌ１Δ_CＥ７_1-55ＣＶＬＰの製造は、ドイツ特許出願ＤＥ１９
８１２９４１．６号にしたがって行われた（Mueller M.et al. (1997) Virology
234,93-111 も参照されたい）。

【００６７】 - Ｌ１ＶＬＰ（Mueller M.et al. (1997) Virology 234,93-111 を参照され
たい）。 - Ｃ５７Ｂｌ／６マウスは、Charles River Laboratories（Wilmington, ＭＡ
，ＵＳＡ）から入手した。

【００６８】 - ＭＶＡ−Ｌ１Δ_Cは、感染した細胞中でＨＰＶ１６Ｌ１Δ_Cを発現する組換
えネズミワクシニアウイルスを意味する。 - ＭＶＡ−Ｆ６は、ワクシニアウイルス（対照ウイルス）である。

【００６９】 - Ｂ６細胞は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスからの胚性幹細胞を意味する。 - Ｃ３細胞は、ＨＰＶ１６およびｒａｓで形質転換されたＢ６胚性細胞を意味
する（Feltkamp M.C. et al. (1993) Eur.J.Immunol. 23,2242-9 を参照された
い）。

【００７０】 - ＲＭＡ細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの胸腺腫に由来する（Ljunggren H.G.
& Kaerre K. (1985) J.Exp.Med. 162,1745-59 を参照されたい）。 - ＲＭＡ−Ｓ細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの胸腺腫に由来する（Ljunggren
H.G. & Kaerre K. (1985) J.Exp.Med. 162,1745-59 を参照されたい）。それら
は、抗原プロセッシングに関連した輸送においてある欠点を有し、これは、小胞
体中へのＭＨＣ−１分子の負荷を止める。それにもかかわらず、細胞表面上に存
在している負荷されないＭＨＣ−１分子は、例えば、ペプチド含有培地中で細胞
をインキュベートすることによって負荷することができるので、これら細胞は、
抗原を提示するのに極めて適している（Powis S.J. et al. (1991) Nature 354,
528-31 を参照されたい）。

【００７１】 - ＥＬ４細胞は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの胸腺腫に由来する（Shevach E.M. e
t al. (1972) J.Immunol. 108,1146-51 を参照されたい）。例えば、ＡＴＣＣ
ＴＩＢ−４９。

【００７２】 - 細胞は、それぞれの場合に、１０％ウシ胎児血清、カナマイシンおよびアン
ピシリンを含むＲＰＭＩ培地（Gibco ＢＲＬ，Eggenstein Germany）中において
３７℃および５％ＣＯ₂で培養した。

【００７３】 - ＡＭペプチドは、インフルエンザ核タンパク質のアミノ酸３６６〜３７４の
配列：ＡＳＮＥＮＭＥＴＭを意味する（Townsend A.R. et al. (1986) Cell 44,
959-68 を参照されたい）。

【００７４】 - Ｌ１ペプチドは、Ｌ１主要キャプシドタンパク質のＨＰＶ１６由来ペプチド
を意味する。２．Ｌ１ＶＬＰを用いた免疫感作後のＬ１特異的ＣＴＬの誘導（ａ）ＶＬＰを用いたマウスの免疫感作：２匹のＣ５７Ｂｌ／６マウスに、１０μｇのＬ１ＶＬＰを用いて（マウス１
）または対照として緩衝液を用いて（マウス２）免疫感作した。６週間後、脾臓
細胞を単離した。

【００７５】（ｂ）抗原提示細胞（標的細胞）の製造：Ｂ６細胞を、γインターフェロンと一緒に２．５日間インキュベートした後、
抗原提示細胞を製造するためにＭＶＡ−Ｌ１Δ_Cウイルス（ＭＯＩ＝５）を用い
てまたは対照細胞を製造するためにＭＶＡ−Ｆ６を用いて一晩感染させ、１６時
間培養した。次の工程において、感染したＢ６細胞に照射することによって、更
に成長するのを妨げた。

【００７６】（ｃ）単離された脾臓細胞の再刺激：マウス１および２からの脾臓細胞を、それぞれの場合において、脾臓細胞のＴ
細胞に刺激細胞として作用するＬ１Δ_C発現性Ｂ６細胞と一緒に５日間培養した
。

【００７７】（ｄ）単離された脾臓細胞の細胞傷害性検定：マウス１（ＶＬＰワクチン接種された）および２（緩衝液接種された）の刺激
された脾臓細胞（エフェクター細胞）を、それぞれの場合に⁵¹Ｃｒの存在下にお
いて３７℃で１時間予めインキュベートされた、ＭＶＡ−Ｌ１Δ_Cに感染したか
またはＭＶＡ−Ｆ６に感染したＢ６細胞（標的細胞）と一緒に、５種類の異なっ
たエフェクター細胞対標的細胞比で４時間インキュベートした。標的細胞の特異
的溶解を、放射性⁵¹Ｃｒの放出によってβカウンターで測定した（図１を参照さ
れたい）。

【００７８】結果：Ｌ１に免疫感作されたマウスの脾臓細胞は、ＭＶＡ−Ｌ１Δ_Cに感染し
た標的細胞を溶解したが、ＭＶＡ−Ｆ６に感染した標的細胞を溶解しなかった。
したがって、それら脾臓細胞は、Ｌ１タンパク質に関して特異的細胞傷害性を有
した。緩衝液を接種されたマウスに由来する対照脾臓細胞は、標的細胞に対する
溶解活性を示さなかった。

【００７９】３．Ｌ１特異的Ｔ細胞（ＶＬＰワクチン接種マウス）による標的細胞のペプチド特異的溶解（ａ）抗原提示細胞の製造： ⁵¹Ｃｒを用いた３７℃で１時間のインキュベーション中に、ＲＭＡ−Ｓ細胞を
、ペプチド（５０μＭ濃度）と一緒に更にインキュベートした。用いられたペプ
チドは、次のいずれかであった。

【００８０】・Ｌ１_330-338、・Ｌ１_165-173または・ＡＭペプチド（対照として）。

【００８１】（ｂ）単離された脾臓細胞の細胞傷害性検定：実施例１ｃによって製造されたマウス１（ＶＬＰワクチン接種された）および
２（緩衝液接種された）の刺激された脾臓細胞（エフェクター細胞）を、ペプチ
ドとインキュベートされたＲＭＡ−Ｓ細胞（標的細胞）と一緒に、０．５μｇ／
ｍｌの特定のペプチドの存在下において、６種類の異なったエフェクター細胞対
標的細胞比で４時間インキュベートした。標的細胞の特異的溶解を、放射性⁵¹Ｃ
ｒの放出によってβカウンターで測定した（図２を参照されたい）。

【００８２】結果：Ｌ１に免疫感作されたマウス１の脾臓細胞が、Ｌ１_165-173と予めイン
キュベートされた標的細胞を有効に溶解することは可能であったが、Ｌ１_330-33 ₈ またはＡＭ対照ペプチドを用いたＲＭＡ−Ｓ細胞の予めのインキュベーション
は、それら刺激された脾臓細胞によるＲＭＡ−Ｓ細胞の明瞭な溶解を全く引き起
こさなかった。緩衝液を接種されたマウス２の脾臓細胞は、ペプチドと予めイン
キュベートされたＲＭＡ−Ｓ細胞のいずれにも、特異的溶解活性を示さなかった
。したがって、ペプチドＬ１_165-173は、これら細胞における特異的細胞傷害性
Ｔ細胞エピトープである。

【００８３】４．Ｌ１特異的Ｔ細胞（ＣＶＬＰワクチン接種マウス）による標的細胞のペプチド特異的溶解（ａ）ＣＶＬＰを用いたマウスの免疫感作：マウスに、１０μｇのＬ１Δ_CＥ７_1-55ＣＶＬＰを用いて免疫感作した。２週
間後に脾臓細胞を単離した。

【００８４】（ｂ）抗原提示細胞の製造：ＥＬ４細胞を、１（ｂ）に記載のようにＭＶＡ−Ｌ１Δ_Cを用いて感染させた
。ＲＭＡ−Ｓ細胞に、３（ａ）に記載のようにＬ１_165-173を負荷した。

【００８５】（ｃ）単離された脾臓細胞の再刺激：４（ａ）の単離された脾臓細胞を、４（ｂ）に記載の二つの細胞種類、ＥＬ４
／ＭＶＡ−Ｌ１Δ_CおよびＲＭＡ−Ｓ／Ｌ１_165-173と一緒に、それぞれの場合に
１２日間インキュベートした。

【００８６】（ｄ）単離された脾臓細胞の細胞傷害性検定次に、細胞傷害性検定を、実施例２（ｄ）または３（ｂ）から類推して行った
。それぞれの場合に、ＥＬ４／ＭＶＡ−Ｌ１Δ_C細胞またはＲＭＡ−Ｓ／Ｌ１₁₆₅ _-173 細胞の溶解を、５種類の異なったエフェクター細胞対標的細胞比で測定した
。用いられた対照は、中空ＭＶＡ−Ｆ６ベクターに感染したＥＬ４細胞かまたは
、Ｌ１_165-173と一緒に予めインキュベートされなかったＲＭＡ−Ｓ細胞であっ
た（図３を参照されたい）。

【００８７】結果：図３は、実施例１または２から類推した⁵¹Ｃｒ放出検定の分析を示す。
ＥＬ４／ＭＶＡ−Ｌ１Δ_C細胞と一緒に培養後のおよびＲＭＡ−Ｓ／Ｌ１_165-173 細胞と一緒に培養後の脾臓細胞は両方とも、Ｌ１ペプチド提示標的細胞（ＥＬ４
／ＭＶＡ−Ｌ１Δ_C細胞またはＲＭＡ−Ｓ／Ｌ１_165-173細胞）を有効に溶解する
ことが可能であったが、対照細胞は溶解されなかった。Ｌ１発現性細胞の認識は
、ペプチド提示細胞のそれに匹敵することから、ペプチドＬ１_165-173は、Ｔ細
胞応答を引き起こすのに本質的に関与していると結論することができる。

【００８８】この結果は、更に、ＨＰＶ１６ペプチドＬ１_165-173に対するＣＤ８Ｔ細胞応
答が、ＣＶＬＰワクチン接種マウスにおいて引き起こされることを示す。これに
関して、マウスのワクチン接種が、ＶＬＰ（実施例３を参照されたい）を用いて
行われたかまたはＣＶＬＰ（この実施例）を用いて行われたかどうかは、重要で
はない。

【００８９】５．Ｌ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞マウスに、１０⁷個のＣ３細胞（ＨＰＶ１６およびｒａｓで形質転換された）
を用いて２回ワクチン接種した。次に、脾臓細胞を単離し、刺激細胞としての照
射Ｃ３細胞の存在下で培養し、そしてＣ３細胞の添加によって再刺激した。それ
ら脾臓細胞を希薄にすることによって“脾臓細胞クローン”を培養された。次に
、これらクローンを、それらがＣ３細胞をいかに効率よく溶解するかについて細
胞傷害性検定で検定した。同検定において、これらクローンは、Ｂ６細胞、ＲＭ
Ａ細胞またはＲＭＡ−Ｅ７細胞をほとんど効率よく溶解しなかった（ＨＰＶ１６
を用いた形質転換のために、Ｃ３細胞はＥ７も発現する）。図４は、Ｃ３細胞を
、明らかに、Ｂ６細胞、ＲＭＡ−Ｅ７細胞またはＲＭＡ細胞より効率よく溶解す
るこれら３種類の細胞傷害性クローン（＝Ｔ細胞系）を示す。

【００９０】次に、これら３種類のＴ細胞系を、前の実施例にいずれかによって、Ｃ３細胞
、Ｂ６細胞、ＲＭＡ−Ｓ細胞、そして更には、種々のＬ１ペプチド（Ｌ１−１〜
Ｌ１−１５；それぞれの場合に５０μＭ濃度）を予め負荷されたＲＭＡ−Ｓ細胞
を溶解するそれらの能力について検定した。図５は、Ｔ細胞系７Ａおよび１１Ｃ
が、Ｌ１−１４を負荷されたＲＭＡ−Ｓ細胞を極めて効率よく溶解することがで
きるということを示す。したがって、これらＴ細胞系は、Ｌ１ペプチド３３０−
３３８（Ｌ１_330-338）であるペプチドＬ１−１４に特異的である。他の検定さ
れたペプチドは、これらＴ細胞系によって認識されなかった。これら検定された
ペプチドの配列は、次の通りである。

【００９１】Ｌ１−１：ＧＡＭＤＦＴＴＬ，Ｌ１−２：ＧＤＳＬＦＦＹＬ，Ｌ１−３：ＭＱ
ＶＴＦＩＹＩ，Ｌ１−４：ＶＹＨＩＦＦＱＭ，Ｌ１−５：ＶＨＴＧＦＧＡＭ，Ｌ
１−６：ＫＹＰＤＹＩＫＭ，Ｌ１−７：ＶＴＦＩＹＩＬＶ，Ｌ１−８：ＬＥＤＴ
ＹＲＦＶ，Ｌ１−９：ＧＮＱＬＦＶＴＶ，Ｌ１−１０：ＫＫＹＴＦＶＴＶ，Ｌ１
−１１：ＥＮＤＶＮＹＨＩ，Ｌ１−１２：ＡＧＶＤＮＲＥＣＩ，Ｌ１−１３：Ｔ
ＶＧＥＮＶＰＤＤＬ，Ｌ１−１４：ＡＱＩＦＮＫＰＹＷ，Ｌ１−１５：ＹＫＮＴ
ＮＦＫＥＹＬ。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ＶＬＰかまたは緩衝液を用いてワクチン接種されたマウスの脾臓細胞
によるＭＶＡ−Ｌ１Δ_CかまたはＭＶＡ−Ｆ６に感染した種々のネズミＢ６細胞
の特異的溶解の図式分析を示す。特異的に溶解された細胞の百分率を、エフェク
ター細胞対標的細胞の比の関数としてプロットする。

【図２】図２は、ＶＬＰまたは緩衝液を用いてワクチン接種されたマウスの脾臓細胞に
よるＬ１_330-338か、Ｌ１_165-173かまたはＡＭを示す種々のＲＭＡ−Ｓ細胞の特
異的溶解の図式分析を示す。特異的に溶解された細胞の百分率を、エフェクター
細胞対標的細胞の比の関数としてプロットする。

【図３】図３は、ＭＶＡ−Ｌ１Δ_Cに感染したＥＬ４細胞を用いて（左）、またはＬ１₁ _65-173 を負荷されたＲＭＡ−Ｓ細胞を用いて予め再刺激されたＴ細胞による４種
類の異なった細胞系の特異的溶解の図式分析を示す。特異的に溶解された細胞の
百分率を、エフェクター細胞対標的細胞の比の関数としてプロットする。

【図４】図４は、３種類の異なった細胞傷害性Ｔ細胞系による４種類の異なった標的細
胞系の特異的溶解の図式分析を示す。

【図５】図５は、３種類の異なった細胞傷害性Ｔ細胞系による、いろいろな標的細胞、
すなわち、種々の細胞系かまたはＬ１ペプチドＬ１−１〜Ｌ１−１５を負荷され
たＲＭＡ−Ｓ細胞の特異的溶解の図式分析を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 37/04 ４Ｃ０８７Ａ６１Ｐ 37/04 Ｃ０７Ｋ 14/47 ４Ｈ０４５Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 5/10 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｌ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＧ０１Ｎ 33/569 5/00 Ｂ (71)出願人ドイチェクレープスフォルシュングスツェントルムＤｃｕｔｓｃｈｅＫｒｃｂｓｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｚｅｎｔｒｕｍドイツ連邦共和国ハイデルベルクイムノイエンハイマーフェルト 280 ＩｍＮｅｕｅｎｈｅｉｍｅｒＦｅｌｄ 280，69120 Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｂ．Ｒ．Ｄｃｕｔｓｃｈｌａｎｄ (72)発明者ヨホムス，イングリトドイツ連邦共和国デー−82194 グレーベンツェル，フライラントシュトラーセ 15 アー (72)発明者ニーラント，ヨンドイツ連邦共和国デー−81477 ミュンヘン，エングレシュトラーセ４ (72)発明者オーセン，ヴォルフラムドイツ連邦共和国デー−69123 ハイデルベルク，グレンツヘーファー・ヴェーク 28／５ (72)発明者ファート，シュテファンドイツ連邦共和国デー−82194 グレーベンツェル，フライラントシュトラーセ 15 アー (72)発明者シェーファー，クラウスドイツ連邦共和国デー−68623 ランペルトハイム，ゴテンヴェーク 13 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA41 BA63 CA04 DA02 EA02 GA11 HA01 HA11 4B063 QA01 QA19 QQ08 QR32 QR55 QR77 QS34 QS40 4B065 AA90Y AA92X AB01 AC20 BA02 CA24 CA44 4C084 AA13 MA05 MA17 MA23 MA37 MA52 MA59 MA66 NA14 ZB092 ZB262 4C085 AA02 AA03 AA08 AA38 BA76 BB11 GG02 GG03 GG08 GG10 4C087 AA01 BC83 MA05 MA17 MA23 MA37 MA52 MA59 MA66 NA14 ZB09 ZB26 4H045 AA11 AA20 BA15 CA40 DA01 EA22 EA28 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】アミノ酸配列、ＡＱＩＦＮＫＰＹＷ、ＡＧＶＤＮＲＥＣＩ
を有するＴ細胞エピトープ、および／または機能的に活性であるその変異体。
【請求項２】前記変異体が、ＡＱＩＦＮＫＰＹＷまたはＡＧＶＤＮＲＥ
ＣＩに、アミノ酸レベルで、少なくとも６５％、好ましくは、少なくとも７５％
、そして特に、少なくとも８５％の配列相同性を有することで特徴付けられる、
請求項１記載のＴ細胞エピトープ。
【請求項３】前記変異体が、ＡＱＩＦＮＫＰＹＷまたはＡＧＶＤＮＲＥ
ＣＩに、構造的に相同であることで特徴付けられる、請求項１記載のＴ細胞エピ
トープ。
【請求項４】Ｔ細胞エピトープが細胞傷害性Ｔ細胞エピトープであるこ
とで特徴付けられる、請求項１−３のいずれかに記載のＴ細胞エピトープ。
【請求項５】パピローマウイルスの天然発生Ｌ１タンパク質でなく、す
なわちそれ自体、またはそのヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列が遺伝的
に修飾されている天然発生Ｌ１タンパク質であり、そしてパピローマウイルスの
天然発生Ｌ１タンパク質の単独Ｎ末端または単独Ｃ末端欠失突然変異体でない、
請求項１ないし４のいずれかに記載のＴ細胞エピトープを含む化合物。
【請求項６】化合物がポリペプチド、特に融合タンパク質であることで
特徴付けられる、請求項５記載の化合物。
【請求項７】化合物が、長さ少なくとも５０アミノ酸、好ましくは、少
なくとも３５アミノ酸、特に、少なくとも２０アミノ酸、そして特に好ましくは
、少なくとも１０アミノ酸のポリペプチドであることで特徴付けられる、請求項
５または６記載の化合物。
【請求項８】化合物が、Ｔ細胞エピトープおよび／または前記融合タン
パク質の化学的、放射性、非放射性同位体、および／または蛍光標識、並びに／
あるいはＴ細胞エピトープおよび／または融合タンパク質の化学的修飾を含むこ
とで特徴付けられる、請求項５−７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】Ｔ細胞エピトープまたは請求項５−８のいずれかに記載の
Ｔ細胞エピトープを含む化合物をコードすることで特徴付けられる核酸。
【請求項１０】請求項９記載の核酸を含むことで特徴付けられる、ベク
ター、特に発現ベクター。
【請求項１１】請求項５−８のいずれかに記載の少なくとも１つのＴ細
胞エピトープを含む、好ましくは提示することで特徴付けられる細胞。
【請求項１２】細胞を、請求項９記載の核酸および／または請求項１０
記載のベクターでトランスフェクション、形質転換するおよび／または該核酸お
よび／またはベクターに感染させることで特徴付けられる、請求項１１記載の細
胞。
【請求項１３】細胞を、請求項５−８のいずれかに記載の少なくとも１
つの化合物および／または請求項５−８のいずれかに記載のＴ細胞エピトープを
含む、請求項１５−１７のいずれかに記載の少なくとも１つの複合体とインキュ
ベーションしたことで特徴付けられる、請求項１１記載の細胞。
【請求項１４】細胞がＢ細胞、マクロファージ、樹状細胞、胚性細胞、
線維芽細胞、Ｂ１６Ｆ１０、Ｂ６、Ｃ３、ＥＬ４、ＲＭＡまたはＲＭＡ−Ｓ細胞
であることで特徴付けられる、請求項１１または１２記載の細胞。
【請求項１５】請求項１−４のいずれかに記載のＴ細胞エピトープ、ま
たは請求項５−８のいずれかに記載の化合物、および少なくとも１つのさらなる
化合物を含む、複合体。
【請求項１６】少なくとも１つのＭＨＣクラスＩ分子を、好ましくはＨ
２−Ｄ^b四量体として含むことで特徴付けられる、請求項１５記載の複合体。
【請求項１７】前記ＭＨＣクラスＩ分子が、ヒトまたはネズミＭＨＣク
ラスＩ分子、特にＣ５７Ｂｌ／６マウス由来のＭＨＣクラスＩ分子であることで
特徴付けられる、請求項１６記載の複合体。
【請求項１８】請求項１−４のいずれかに記載のＴ細胞エピトープを含
む少なくとも１つの化合物によるＴ細胞活性化のｉｎｖｉｔｒｏ検出法であっ
て、以下の工程：ａ）少なくとも１つの前記化合物を用いた細胞の刺激；ｂ）請求項１−４のいずれかに記載のＴ細胞エピトープまたは請求項１５−１７
のいずれかに記載の複合体を提示する、少なくとも１つの標的細胞の添加、およ
びｃ）Ｔ細胞活性化の決定を含む、前記方法。
【請求項１９】工程ａ）の後に、以下のさらなる工程ａ’）：ａ’）およそ１２日間、特に、少なくとも５日間：（ｉ）請求項５−８のいずれかに記載の化合物、請求項１５−１７のいずれか
に記載の少なくとも１つの複合体、少なくとも１つのキャプソマー、少なくとも
１つの安定なキャプソマー、少なくとも１つのＶＬＰ、少なくとも１つのＣＶＬ
Ｐ、および／または少なくとも１つのウイルスを装填した少なくとも１つの標的
細胞、（ｉｉ）請求項１５−１７のいずれかに記載の少なくとも１つの複合体、（ｉｉｉ）および／または請求項１−４のいずれかに記載のＴ細胞エピトープ
を提示する少なくとも１つの標的細胞と、細胞の同時培養を、工程ｂ）の前に含むことで特徴付けられる、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】標的細胞を、請求項５−８のいずれかに記載の少なくと
も１つの化合物および／または請求項５−８のいずれかに記載のＴ細胞エピトー
プを含む、請求項１５−１７のいずれかに記載の少なくとも１つの複合体とイン
キュベーションすることで特徴付けられる、請求項１１、１３、１４、１８また
は１９のいずれかに記載の標的細胞の産生法。
【請求項２１】標的細胞を、請求項９記載の核酸および／または請求項
１０記載のベクターでトランスフェクション、形質転換するおよび／または該核
酸および／または該ベクターに感染させることで特徴付けられる、請求項１１、
１２、１４、１８または１９のいずれかに記載の標的細胞の産生法。
【請求項２２】標的細胞がＢ細胞、マクロファージ、樹状細胞、胚性細
胞、線維芽細胞、Ｂ１６Ｆ１０、Ｂ６、Ｃ３、ＥＬ４、ＲＭＡまたはＲＭＡ−Ｓ
細胞であることで特徴付けられる、請求項２０または２１記載の標的細胞の産生
法。
【請求項２３】工程ａ）の代わりに、以下の工程ａ”）：ａ”）Ｔ細胞を含む試料の産生および調製、並びにそれに続く培養を行うことで特徴付けられる、請求項１８または１９記載の方法。
【請求項２４】ａ）請求項１−４のいずれかに記載の少なくとも１つの
Ｔ細胞エピトープ、請求項５−８のいずれかに記載の少なくとも１つの化合物、
請求項１０記載の少なくとも１つのベクター、請求項１１−１４のいずれかに記
載の少なくとも１つの細胞、および／または請求項１５−１７のいずれかに記載
の少なくとも１つの複合体、およびｂ）免疫系のエフェクター細胞、好ましくはＴ細胞、特に細胞傷害性Ｔ細胞また
はＴヘルパー細胞を含む、Ｔ細胞活性化のｉｎｖｉｔｒｏ検出のためのアッセイ系。
【請求項２５】免疫反応を引き起こすまたは検出するための、請求項１
−４のいずれかに記載の少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、請求項５−８のい
ずれかに記載の少なくとも１つの化合物、請求項１０記載の少なくとも１つのベ
クター、請求項１１−１４のいずれかに記載の少なくとも１つの細胞、および／
または請求項１５−１７のいずれかに記載の少なくとも１つの複合体の使用。
【請求項２６】請求項５−８のいずれかに記載の少なくとも１つの化合
物、請求項１０記載の少なくとも１つのベクター、請求項１１−１４のいずれか
に記載の少なくとも１つの細胞、および／または請求項１５−１７のいずれかに
記載の少なくとも１つの複合体、並びに必要な場合、薬学的に許容しうるキャリ
アーを含む、医薬品または診断剤。
【請求項２７】請求項５−８のいずれかに記載の少なくとも１つの化合
物、請求項１０記載の少なくとも１つのベクター、請求項１１−１４のいずれか
に記載の少なくとも１つの細胞、および／または請求項１５−１７のいずれかに
記載の少なくとも１つの複合体が、溶液中に、固体マトリックスに結合し、およ
び／またはアジュバントと混合され、存在することで特徴付けられる、請求項２
６記載の医薬品または診断剤。