JP2002519425A - 神経変性疾患および癌の処置に有用な新規なインドロカルバゾール誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 タウ高燐酸化により特徴づけられる痴呆［アルツハイマー病（ＡＤ）、前頭葉変性（ＦＬＤ）銀親和性粒子病、ＣＮＳにおけるウイルス感染症の後期合併症としての亜急性硬化性汎脳炎（ＳＳＰＥ）］および癌の処置に利用可能性のある有用な新規なインドロカルバゾール誘導体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の分野 タウ(tau hyperphosphorylation)高燐酸化により特徴づけられる痴呆［アルツ
ハイマー病（ＡＤ）、前頭葉変性（ＦＬＤ）、銀親和性粒子病、ＣＮＳにおける
ウイルス感染症の後期合併症としての亜急性硬化性汎脳炎（ＳＳＰＥ）］、およ
び癌の処置に利用可能性のある有用な新規なインドロカルバゾール。

【０００２】 発明の背景 数種の痴呆、最も重要にはアルツハイマー病（ＡＤ）、は神経細線維もつれ(n
eurofibrillary tangles)（ＮＦＴ）と称する微細管−関連タウ蛋白質よりなる
細胞内集合体の生成により特徴づけられる。痴呆の臨床的症候群に関するこの生
化学的異常の重要性は本質的に以下の３つの事実により説明される：（ｉ）痴呆
と皮質の種々の部分中のＮＦＴの程度および密度との間に密な関連性がある［例
えば、Bancher C. et al. (1993) Neurosci. Lett. 162, 179-182)］、（ii）細
胞体および／または神経突起中のＮＦＴを含有する個々のニューロンが形態学的
に変性する、すなわちシナプス連結を失いそして最後は死滅する［Braak E. et
al. ( 1994) Acta Neuropathol. 87, 554-567; Callahan L.M. et al., (1995)
Neurobiol. Aging 16, 311-314］、（iii）種々のその他の関連のない痴呆にお
けるＮＦＴのある種の密度は例外なく痴呆と常に関連する。

【０００３】 ＮＦＴに含有されるタウ蛋白質は激しく高燐酸化される［Goedert M. et al.
(1995) Neurobiol. Aging 16, 325-334; Hasegawa M. et al. (1996) FEBS Lett
. 384, 25-30］。この異常な燐酸化が蛋白質をその本来の機能、すなわちニュー
ロンの一体性に関して基本的に重要である微細管細胞骨格の安定化、を保有させ
なくする［Iqbal K. et al. (1994) FEBS Lett. 349, 104-108; Garver T.D. et
al. (1996) J. Neuros ci. Res. 44, 12-20］。これがＡＤ脳内の健全な微細管
の不足を説明する。脱燐酸化はタウの能力を回復させるため、燐酸化だけがこの
効果の原因となる。

【０００４】 タウ燐酸化、細胞骨格不安定化、シナプス損失およびニューロン変性、および
最終的には痴呆の間の関係のために、タウ高燐酸化の病理学的過程を妨げる薬学
的手段を有することは治療上望ましいであろう。

【０００５】 ＮＦＴにおける高燐酸化されたタウの特徴は蛋白質キナーゼＥＲＫ２がＡＤに
おけ病理学的タウ変異の原因となることを示唆する［Drewes G. et al. (1990)
EMBO J. 11, 2131-2138; Roder H.M. et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. C
ommun. 193, 639-647］。ＥＲＫ２はＡＤにおいて異常に活性化された状態で存
在しうる［Roder H.M. et al. (1995) J. Neurochem. 64, 2203-2212］。ＥＲＫ
２の抑制は従ってタウ高燐酸化を妨げそして最終的にはニューロン中のＮＦＴ生
成を停止するための妨害点であると示唆された。

【０００６】 ＡＤ−類似のタウ高燐酸化は数種の細胞モデル（脳薄片を含む）中で誘発する
ことができ、タウをインビトロでＥＲＫ２により燐酸化されたタウとは区別ので
きない燐酸化状態に転化させる。最も納得のいく細胞モデルはＰＰ２Ａ抑制を包
含する［Sauti r, P.E. et al., Neurodegeneration 3, 53-60 (1994); Harris
K.A. et al., Ann. Neurol. 33, 77-87 (1993)］。

【０００７】 しかしながら、生物学的モデルシステムにおいてＥＲＫ２を抑制しそしてそれ
によりＡＤ−類似のタウ高燐酸化を妨げる化合物はこれまでに開示されていない
。そのような化合物はタウ高燐酸化に有利な方法で関係する神経細線維変性の過
程に影響を与えることが予期されうる。

【０００８】 しばしばＭＡＰ−キナーゼ類と称するＥＲＫ族の蛋白質キナーゼ類はＣＮＳ以
外の種々の重要な細胞調節事象、例えば成長、分化および炎症、にも関係があっ
た［例えば、Sale E.M. et al., EMBO J. 14, 674-684 (1995); Pages G. et al
., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 8319-8323 (1993); Cowley S. et al., C
ell 77, 841-852 (1994)］。従って、異常なＥＲＫ活性化は成長および分化制御
の欠損により特徴づけられる数種の疾患に関係していた。ある種の腫瘍では構成
要素をなすＥＲＫ活性化はＥＲＫ不活性化剤を妨げる信号形質導入蛋白質または
ウイルス蛋白質中の優勢な（活性化）突然変異による細胞形質転換と関連がある
［Sontag E. et al., Cell 75, 887-897 (1993); Leever s S.J. and Marshall
C.J., EMBO J. 11, 569-574 (1992); Gallego G. et al., Proc. Natl. Acad. U
SA 89, 7355-7359 (1992); Gupta S.K. et al., J. Biol. Chem. 267, 7987-799
0 (1992)］。

【０００９】 癌のための開示されたキナーゼ抑制剤の使用もそれらがｃｄｃ２キナーゼを抑
制する能力により示される。細胞周期制御におけるｃｄｃ２および同族体（ｃｄ
ｋ類）キナーゼ類の役割は非常に良く認識されている［Norbury, C., and Nurse
P., Annu. Rev. Biochem. 61, 441-470 (1992)］。これらの酵素の調節は静止
状態（ＳＴＡＲＴ）から細胞周期への委託(commitment)および細胞周期の数段階
を通った定序トランジション(ordered transition)の両者にとって必須である。
調節の必要性はｃｄｋ類、例えばサイクリンサブユニット、の多くの正および負
の調節特徴の存在、燐酸化の抑制（Ｔｈｒ）および活性化（Ｔｙｒ）、並びに内
因性ペプチド抑制剤に反映される。

【００１０】 細胞周期および増殖の制御におけるｃｄｋ類のこの中心的役割のために、それ
らは癌療法用の魅力的な薬品目標として考えられる［例えば、Filguera de Azev
edo W. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 2735-2740 (1996)］。

【００１１】 関連技術の記述 本発明の化合物に構造的に関連があるインドロカルバゾール誘導体は文献に記
載されている。これらの化合物の多くは天然生成物Ｋ２５２ａから誘導される。
Ｋ２５２ａの製造および単離は最初に Kase, et al. [J. of Antibiotics 39, 1
059 (1986)] により発表された。Ｋ２５２ａ、ｂ、ｃおよびｄのその後の構造解
明は同年に Yasuzawa et al. [J. of Antibiotics 39, 1072 (1986)] により報
告された。最初の開示および構造解明から、Ｋ２５２ａは種々の酵素および細胞
に基づく検定において活性であることが示された。特に、これらの化合物は有効
な蛋白質キナーゼＣ（ＰＫＣ）活性を示した。主張された最も一般的な用途は、
癌、ＥＰ ０ ３２３ １７１（優先権主張日２４−１２−８７）、ＥＰ ０ ６４
３ ９６６（優先権主張日３−３−９３）、ＵＳ４,９２３,９８６（優先権主張
日９−３−８７）、ＵＳ４,８７７,７７６（優先権主張日２４−１２−８７）、
ＷＯ ９４ ２７９８２（優先権主張日２８−５−９３）；神経変性疾患、ＷＯ
９５ ０７９１１（優先権神経１６−９−９３）、ＷＯ ９４ ０２４８８（優先
権主張日２４−７−９２）、抗菌剤［Prudhomme et al., J. Antibiotics 47, 7
92 (1994)］、および高血圧症（Hachisu et al., Life Sciences 44, 1351 (198
9)］を包含する。

【００１２】

【化１０】

【００１３】 一般的には、本発明に関連する先行技術の化合物はＫ２５２ａから誘導されそ
してテトラヒドロフラン部分がアグリコンに結合されて２つのグリコシド結合を
形成するような基本的コア構造を含有する。Ｋ２５２ａコア構造の変更はラクタ
ムおよびインドール部分上への追加置換基、並びにα−ヒドロキシエステルの変
更を包含する。コア構造中のテトラヒドロフラン酸素はさらなる変更の機会を制
限する。

【００１４】 発明の要旨 Ｋ２５２ａコア構造のテトラヒドロフラン酸素位置における炭素の導入は２つ
のグリコシド結合を除去しそして電子に富んだ置換された原子を電子的により中
性の大きいテトラ−置換された部分で置換することによりコア構造を意義あるほ
ど変化させる。この変化はまた例えば効力、選択性、安定性、毒性、バイオアベ
イラビリティなどの如き性質を強化させうる官能基を導入するさらなる機会も与
え、それらは改良された生物学的特徴およびその結果としてより良好な治療剤を
もたらしうる。

【００１５】 この重要な変更を含む化合物は先行技術の化合物を製造するために使用される
合成方法によっては全く得られない。

【００１６】 本発明の一面によれば、以下の式Ｉ：

【００１７】

【化１１】

【００１８】 ［式中、ＺはＯまたは２Ｈ（この場合には二重結合は２つの単結合である）であ
り、 Ｒ₁はＨ、ＯＨ、ＣＯ₂Ｒ₉、ＣＯＮＨＲ₉、ＣＨ₂ＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀で
あり、 Ｒ₂はＨまたはＯＨであり、Ｒ₃はＨまたはＯＨであり、Ｒ₄はＨまたはＯＨであ
り、 Ｒ₅はＨ、ＯＨ、ＮＲ₉Ｒ₁₀、ＮＨＣＯＲ₉、ＯＣＯＲ₉、ＯＣＲ₉、ハライド、Ｃ
ＯＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀であり、 Ｒ₆はＨ、ＯＨ、ＮＲ₉Ｒ₁₀、ＮＨＣＯＲ₉、ＯＣＯＲ₉、ＯＣＲ₉、ハライド、Ｃ
ＯＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀であり、 Ｒ₇はＨ、ＯＨ、Ｏまたはハライドであり、 Ｒ₈はＨ、ＯＨ、ハライドまたはなし(nothing)（Ｒ₇がＯである時）であり、 Ｒ₉は炭素数１〜６のアルキル、炭素数３〜６のシクロアルキルまたはＨであり
、 Ｒ₁₀は炭素数１〜６のアルキル、炭素数３〜６のシクロアルキルまたはＨである
］ を有する物質が提供される。ある種の好ましい態様では、ＺはＯであり、Ｒ₁は
ＯＨ、ＣＯ₂Ｒ₉、ＣＨＮＨＲ₉またはＣＨ₂ＯＲ₉であり、Ｒ₄はＨであり、Ｒ₅は
Ｈであり、Ｒ₆はＨであり、そしてＲ₈はＨである。他の好ましい態様では、Ｚは
Ｏであり、Ｒ₁はＣＯ₂ＣＨ₃またはＣＯＮＨＣＨ₃であり、Ｒ₂はＨであり、Ｒ₃は
ＯＨであり、Ｒ₄はＨであり、Ｒ₅はＨであり、そしてＲ₆はＨである。最も好ま
しい物質は

【００１９】

【化１２】

【００２０】 である。

【００２１】 本発明の別の面によると、薬剤組成物が提供される。薬剤組成物は上記の物質
を薬剤学的に許容可能な担体と一緒に包含する。好ましい薬剤組成物は以上で記
載された通りである。特に好ましい薬剤組成物は経口投与形態に調合されたもの
である。

【００２２】 幾つかの態様では、薬剤組成物は物質を痴呆に関連する異常な高燐酸化を抑制
するのに有効な量で含有する。別の態様では、薬剤組成物は物質をｃｄｋキナー
ゼ、例えばｃｄｃ２キナーゼ、を抑制するのに有効な量で含有する。さらに別の
態様では、薬剤組成物は物質を細胞増殖を抑制するのに、そしてある種の態様で
は異常量のｃｄｋキナーゼを示す癌細胞による癌細胞増殖を抑制するのに有効な
量で含有する。

【００２３】 本発明の別の態様によると、患者において式Ｉの化合物を結合するキナーゼを
抑制する方法が提供される。式Ｉの化合物はそのような処置が必要な患者に患者
においてキナーゼ活性を抑制するのに有効な量で投与される。好ましい化合物は
以上で記載されている通りである。一つの態様では、患者は痴呆がありそして化
合物は痴呆の異常な高燐酸化特徴を抑制するのに有効な量で投与される。痴呆は
、とりわけ、アルツハイマー病であることができ、そして化合物はアルツハイマ
ー病における異常なタウ高燐酸化の特徴であるＥＲＫ２の燐酸化活性を抑制する
のに有効な量で投与することができる。

【００２４】 本発明の別の面によると、異常な水準のｃｄｋキナーゼ活性を示す癌を有する
患者を処置する方法が提供される。この方法はそのような処置を必要とする患者
に式Ｉの化合物をｃｄｋキナーゼ活性を抑制するのに有効な量で投与することを
包含する。幾つかの態様では、キナーゼはｃｄｃ２キナーゼである。好ましい化
合物は以上で記載されている通りである。

【００２５】 本発明の別の面によると、式Ｉの化合物を製造するための中間体が提供される
。中間体は以下の本文に詳細に記載されている。特に重要な中間体は１３、１９
および２４の番号がついたものである。

【００２６】 本発明のさらに別の態様によると、薬品の製造における式Ｉの化合物の使用を
包含する方法が提供される。特別な態様では、薬品は痴呆（例えばアルツハイマ
ー病）、増殖性障害（例えば癌）を処置するためのものである。本発明のこれら
および他の面を以下でさらに詳細に記載する。

【００２７】 本発明の別の面によると、上記の化合物を製造するための中間体が提供される
。これらは

【００２８】

【化１３】

【００２９】 ［式中、Ｚ＝Ｏまたは２Ｈ（この場合には二重結合は２つの単結合である）であ
り、

【００３０】

【化１４】

【００３１】 であり、但しＲ₁₁がＨでない時にはＲ₁₂はＨでありそしてＲ₁₂がＨでない時には
Ｒ₁₁はＨであり、 Ｒ₁₃,Ｒ₁₃′＝ＨまたはＯＰ′であり、そしてＲ₁₄はＨまたはＯＰである］ を含んでなる物質である。好ましくは、ＺはＯでありそしてＲ₁₃およびＲ₁₃′は
Ｈである。最も好ましい物質は化合物１４である。Ｐは保護基である。ＯＰに関
する好ましいＰはベンジル−およびｔ−ブチル−ジメチルシリルである。最も好
ましくは、物質は化合物１２、１３、１８、１９、２３または２４である。

【００３２】 他の物質は

【００３３】

【化１５】

【００３４】 ［式中、ＺはＯまたは２Ｈであり、Ｒ₁₃およびＲ₁₃′＝ＨまたはＯＰであり、そ
してＲ₁₄＝Ｏ、Ｈ、ＯＨまたはＯＰである］ である。好ましくは、ＺはＯでありそしてＲ₁₃およびＲ₁₃′はＨである。最も好
ましくは、物質は化合物１４である。

【００３５】 異性体混合物を包含する前記の化合物の混合物も意図される。

【００３６】 図面の簡単な説明 図１は化合物ＣIIIがオカダ酸(okadaic acid)により引き起こされるタウ高燐
酸化を妨げることを示すオカダ酸で刺激された細胞上のブロットの図面である。

【００３７】 図２は種々の燐酸化状態でのヒトＳＹ５Ｙ細胞からおよび新生児ラット脳から
のタウとＡＤ−脳からのＰＨＦ−タウとのウェスタン−ブロット比較である。図
２ＡはヒトＳＹ５Ｙ細胞を示す。図２Ｂは新生児ラット脳を示す。図２ＣはＡＤ
−脳からのＰＨＦ−タウを示す。

【００３８】 図３はＰＰ２Ｂによる予めの脱燐酸化なしおよびありのＰＫ４０によるインビ
トロでの新生児ラットタウ燐酸化を示す一対のゲルの図面である。

【００３９】 図４はＣIIIと同様な化合物がＥＲＫ２の抑制剤としてＳＹ５Ｙ細胞モデルシ
ステム中の異常なＡＤ−類似高燐酸化を妨げることを示すブロットの図面である
。

【００４０】 図５は成体ラット海馬脳薄片におけるＡＤ−類似タウ高燐酸化の妨害である。
ＳＹ５Ｙ細胞と同様な実験モデル(experimental paradigm)では、タウ高燐酸化
はＣIIによりＳＹ５Ｙ細胞中と同様な投与量で妨げられる。ＡＤ−類似タウ高燐
酸化に関する最近では最も明確な基準であるＡＰ４２２による結果は一般的に使
用されるｍＡｂ ＡＴ８によるものと同一であり、ＡＰ４２２でなくＡＴ８反応
性がＥＲＫ２以外のキナーゼにより誘発されうるためにＥＲＫ２が単独で全ての
オカダ酸で誘発される変化の原因であることを示している。 最も明確な基準であるＡＰ４２２による結果は一般的に使用されるｍＡｂ ＡＴ
８によるものと同一であり、ＡＰ４２２でなくＡＴ８反応性がＥＲＫ２以外のキ
ナーゼにより誘発されうるためにＥＲＫ２が単独で全てのオカダ酸で誘発される
変化の原因であることを示している。

【００４１】 本発明の詳細な記述 本発明はシクロペンタンコア構造を含有するある種の新規なインドロカルバゾ
ール誘導体に関しそしてある種の癌および神経変性障害を包含する種々の障害の
処置用に医学的に有用でありうる。化合物はＥＲＫ２および／またはｃｄｋ、そ
して特に、ｃｄｃ２、抑制活性を有する。

【００４２】 好ましい化合物を包含する本発明の化合物は以上で記載されている。本発明の
一面は炭素原子を有するある種の先行技術の分子（Ｋ２５２ａおよび同族体）の
テトラヒドロフラン部分の酸素分子の置換である。そのような種類の物質はこの
種類の物質を製造するための合成工程も提供する本発明より前には入手できなか
った。この工程も本発明の一面を構成する。この種の物質を製造するための工程
は実施例部分で以下に詳細に記載されている。

【００４３】 本発明の最も好ましい化合物は以下に示されそして命名されている： ＣＩ。９,１２−メタノ−１Ｈ−ジインドロ[１,２,３−ｆｇ：３′,２′,１′−
ｋｌ]ピロロ[３,４−Ｉ][１,６]ベンゾジアゾシン−１,３(２Ｈ)−ジオン,９,１
０,１１,１２−テトラヒドロ−８,１０,１１−トリヒドロキシ−(８α,９α,１
０α,１１α,１２α)。 ＣII。９,１２−メタノ−１Ｈ−ジインドロ[１,２,３−ｆｇ：３′,２′,１′−
ｋｌ]ピロロ[３,４−Ｉ][１,６]ベンゾジアゾシン−１０−カルボキサミド,２,
３,９,１０,１１,１２−ヘキサヒドロ−１０−ヒドロキシ−Ｎ−メチル−１,３
−ジオキソ−(９α,１０β,１２α)。 ＣIII。９,１２−メタノ−１Ｈ−ジインドロ[１,２,３−ｆｇ：３′,２′,１′
−ｋｌ]ピロロ[３,４−Ｉ][１,６]ベンゾジアゾシン−１０−カルボン酸,２,３,
９,１０,１１,１２−ヘキサヒドロ−１０−ヒドロキシ−１,３−ジオキソメチル
エステル,(９α,１０β,１２α)。

【００４４】 本発明はまた上記の化合物を製造するための中間体も包含する。中間体は以上
に記載されている。異性体混合物を包含する混合物もまた出発分子の対称性によ
って生ずるかもしれない。そのような混合物は本発明の範囲内である。

【００４５】 本発明の全範囲の化合物を製造するためには、当業者に既知の化学と共に、以
下に記載する化学だけが必要である。特に、コア構造の変更は例えばＷＯ９４／
０２４８８、ＷＯ９４／２７９８２、ＷＯ９４／０４５４１並びにｋ２５２ａの
誘導体を示す多数の他の米国特許および公開された出願に詳述されているｋ２５
２ａと同様な変更を行うために使用されるもののようなルーチンの化学を用いて
行うことができる。

【００４６】 ここで使用される患者は人間、霊長類、馬、牛、豚、羊、山羊、犬、猫および
齧歯動物を意味する。

【００４７】 本発明の薬剤調合物は患者に対して有効量で投与される。有効量は処置される
特定の症状の開始を遅らせる、進行を抑制する、開始もしくは進行を全て一緒に
停止させる、または診断するために必要な量を意味する。一般的には、痴呆を処
置するための有効量は痴呆の異常な高燐酸化特性に好影響を与えるのに必要な量
である。一つの態様では、有効量はアルツハイマー病に関連する異常なタウ高燐
酸化に好影響を与えるのに必要な量である。一般的には、癌を処置するための有
効量は哺乳動物の癌細胞増殖にその場で好影響を与えるのに必要な量である。患
者に投与される時には、有効量は、もちろん、処置される特定の症状；症状の重
さ；年令、身体条件、大きさおよび体重を包含する個々の患者のパラメーター；
同時に行われる処置；処置の頻度；並びに投与方式に依存するであろう。これら
の要素は当業者に既知でありそして一般的な実験で指定することができる。最大
投与量、すなわち、徹底した医学判断(sound medical judgement)に従う最高安
全投与量、を使用することが一般的に好ましい。

【００４８】 種々の投与経路を利用できる。選択される特定の方式は、もちろん、処置され
る特定の症状、選択される特定の薬品、処置される症状の重さおよび治療効果に
必要な投与量に依存するであろう。本発明の方法は、一般的に述べると、医学的
に許容可能なであるいずれかの投与方式を用いて実施することができ、臨床的に
許容できない悪影響を引き起こさずに有効水準の活性化合物を生成するいずれか
の方式を意味する。そのような投与方式は経口、直腸、舌下、局部、鼻、経皮、
皮内または非経口経路を包含する。「非経口」という語は皮下、静脈内、筋肉内
、または注入を包含する。経口経路が好ましい。

【００４９】 投与量は、局部的にまたは全身的に、所望する薬品水準を得るように適宜調節
することができる。一般的には、活性化合物の１日の経口投与量は１日当たり約
０.０１ｍｇ／ｋｇ〜１日当たり１０００ｍｇ／ｋｇであろう。１日当たり約１
〜１０００ｍｇ／ｍ²の範囲内のIV投与量が有効であろうと予測される。患者に
おける応答がそのような投与量で不充分である場合には、より高い投与量（また
は異なるより局部化した分配経路による有効なより高い投与量）でも患者耐性が
許容できる程度まで使用することができる。

【００５０】 組成物は簡便には単位投与量形態にすることができそして薬学技術で既知の方
法のいずれかにより製造することができる。全ての方法は本発明の共役体を１種
もしくはそれ以上の修飾成分を構成する担体と一緒にする段階を包含する。一般
的には、化合物を液体担体、微細分割状固体担体、または両者と関連して均一に
且つ密に一緒にし、そして次に、必要なら、生成物を成形することにより組成物
が製造される。

【００５１】 経口投与に適する組成物は各々が予め決められた量の活性化合物を含有する例
えばカプセル剤、カシェ剤、錠剤、またはロゼンジの如き分離単位として存在で
きる。他の組成物は水性液もしくは非−水性液体中の懸濁液、例えばシロップ剤
、エリキシル剤、または乳剤を包含する。

【００５２】 他の分配システムは時間−放出、遅延放出または持続放出分配システムを包含
することができる。そのようなシステムは本発明の活性化合物の繰り返し投与を
回避することができ、患者および医師にとって簡便さを増加させる。多くのタイ
プの放出分配システムを利用可能でありそして当業者に既知である。それらは重
合体をベースとしたシステム、例えばポリ乳酸およびポリグリコール酸、ポリ無
水物およびポリカプロラクトン；ステロール類、例えばコレステロール、コレス
テロールエステル類および脂肪酸類または中性脂肪類、例えばモノ−、ジおよび
トリグリセリド類を包含する脂質である非重合体システム；ヒドロゲル放出シス
テム；シラスチックシステム；ペプチドをベースとしたシステム；ワックスコー
テイング、一般的な結合剤および賦形剤を使用する圧縮錠剤、部分的に融合した
移植物などを包含する。さらに、ポンプをベースとしたハードウエア分配システ
ムを使用することもでき、それらの一部は移植用に適用される。

【００５３】 長期持続放出移植物を使用することもできる。ここで使用される「長期］放出
は移植物が治療水準の活性成分を少なくとも３０日間にわたり、そして好ましく
は６０日間にわたり、分配するように構成されそして配置されることを意味する
。長期持続放出移植物は当業者に既知でありそして上記の放出システムの一部を
包含する。そのような移植物は、移植物を固体腫瘍の近くにまたは直接その中に
入れ、それにより本発明の化合物の局部化された高い投与量を与えることにより
、固体腫瘍の処置において特に有用である。

【００５４】 投与時には、本発明の調合物は薬剤学的に許容可能な組成物中で適用される。
そのような調合物は一般的には塩、緩衝剤、防腐剤、相容性担体、および場合に
より他の治療成分を含有することができる。薬品中で使用される時には、塩は薬
剤学的に許容可能であるべきであるが、薬剤学的に許容不能な塩を薬剤学的に許
容可能な塩を製造するために簡便に使用してもよくそして本発明の範囲から除外
されない。そのような塩は下記の酸類から製造されるものを包含するがそれらに
限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、燐酸、マレイン酸、酢酸、サリ
チル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、蟻酸
、マロン酸、琥珀酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸
。また、薬剤学的に許容可能な塩をアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、例
えばナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩、として製造することもできる。

【００５５】 適する緩衝剤は、酢酸および塩（１〜 ２％Ｗ／Ｖ）、クエン酸および塩（１
〜３％Ｗ／Ｖ）、並びに燐酸および塩（０.８〜２％Ｗ／Ｖ）である。

【００５６】 適する防腐剤はベンズアルコニウムクロリド（０.００３〜０.０３％Ｗ／Ｖ）
、クロロブタノール（０.３〜０.９％Ｗ／Ｖ）、パラベン類（０.０１〜０.２５
％Ｗ／Ｖ）およびチメロサール（０.００４〜０.０２％Ｗ／Ｖ）を包含する。

【００５７】 適する担体は薬剤学的に許容可能な担体である。薬剤学的に許容可能な担体と
いう語は人間または他の動物への投与に適する１種もしくはそれ以上の相容性の
固体もしくは液体の充填剤、希釈剤またはカプセル化物質を意味する。「担体」
という語は活性成分と組み合わせて適用を促進する天然もしくは合成の有機また
は無機成分を示す。薬剤組成物の成分は本発明の分子と、そして相互同士で、所
望する薬剤学的効果を実質的に損なうような相互作用のない方法で混合すること
が可能である。経口、皮下、静脈内、筋肉内などに適する担体調合物は Remingt
on’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA 並びにＫ
２５２ａおよびその同族体に関連する多くの先行技術特許に見ることができる。

【００５８】 本発明で有用な化合物は他の治療剤と共に分配することができる。癌の場合に
は、化合物は別個にまたは抗癌カクテルの形態で分配されるであろう。抗癌カク
テルは本発明の化合物のいずれか１種と他の抗癌剤、例えば抗癌薬、サイトカイ
ン、および／または１種もしくはそれ以上の補充相乗剤との混合物である。癌の
処置におけるカクテルの使用は一般的である。この態様では、一般的な投与賦形
剤（例えば、丸剤、錠剤、移植物、注射溶液、など）は本発明で有用な化合物（
上記）および抗癌薬および／または補充相乗剤を含有することができるであろう
。

【００５９】 それ故、式Ｉでない化合物および式Ｉの化合物のカクテルが意図される。式Ｉ
でない抗−腫瘍化合物は以下のものを包含する： 抗腫瘍剤：アシビシン(Acivicin)、アクラルビシン(Aclarubicin)、アコダゾ
ールヒドロクロリド(Acodazole Hydrochloride)、アクロニン(Acronine)、アド
ゼレシン(Adozelesin)、アルデスロイキン(Aldesleukin)、アルトレタミン(Altr
etamine)、アンボマイシン(Ambomycin)、アメタントロンアセテート(Ametantron
e Acetate)、アミノグルテチミド(Aminoglutethimide)、アンサクリン(Amsacrin
e)、アナストロゾール(Anastrozole)、アンスラマイシン(Anthramycin)、アスパ
ラギナーゼ(Asparaginase)、アスペルリン(Asperlin)、アザシチジン(Azacitidi
ne)、アゼテパ(Azetepa)、アゾトマイシン(Azotomycin)、バチマスタト(Batimas
tat)、ベンゾデパ(Benzodepa)、ビカルタミド(Bicalutamide)、ビサントレンヒ
ドロクロリド(Bisantrene Hydrochloride)、ビスナフィドジメシラート(Bisnafi
de Dimesylate)、ビゼレシン(Bizelesin)、ブレオマイシンサルフェート(Bleomy
cin Sulfate)、ブレキナルナトリウム(Brequinar Sodium)、ブロピリミン(Bropi
rimine)、ブスルファン(Busulfan)、カクチノマイシン(Cactinomycin)、カルス
テロン(Calusterone)、カラセミド(Caracemide)、カルベチマー(Carbetimer)、
カルボプラチン(Carboplatin)、カルムスチン(Carmustine)、カルビシンヒドロ
クロリド(Carubicin Hydrochloride)、カルゼレシン(Carzelesin)、セデフィン
ゴル(Cedefingol)、クロランブシル(Chlorambucil)、シロレマイシン(Cirolemyc
in)、シスプラチン(Cisplatin)、クラドリビン(Cladribine)、クリスナトールメ
シラート(Crisnatol Mesylate)、シクロホスファミド(Cyclophosphamide)、シタ
ラビン(Cytarabine)、ダカルバジン(Dacarbazine)、ダクチノマイシン(Dactinom
ycin)、ダウノルビシンヒドロクロリド(Daunorubicin Hydrochloride)、デシタ
ビン(Decitabine)、デキソルマプラチン(Dexormaplatin)、デザグアニン(Dezagu
anine)、デザグアニンメシラート(Dez aguanine Mesylate)、ジアジクオン(Diaz
iquone)、ドセタキセル(Docetaxel)、ドキソルビシン(Doxorubicin)、ドキソル
ビシンヒドロクロリド(Doxorubicin Hydrochloride)、ドロロキシフェン(Drolox
ifene)、ドロロキシフェンサイトレート(Droloxifene Citrate)、ドロモスタノ
ロンプロピオネート(Dromostanolone Propionate)、デュアゾマイシン(Duazomyc
in)、エダトレキセート(Edatrexate)、エフロルニチンヒドロクロリド(Eflornit
hine Hydrochloride)、エルサミトルシン(Elsamitrucin)、エンロプラチン(Enlo
platin)、エンプロメート(Enpromate)、エピプロピジン(Epipropidine)、エピル
ビシンヒドロクロリド(Epirubicin Hydrochloride)、エルブロゾール(Erbulozol
e)、エソルビシンヒドロクロリド(Esorubicin Hydrochloride)、エストラムスチ
ン(Estramu stine)、エストラムスチンホスフェートナトリウム(Estramustine P
hosphate Sodium)、エタニダゾール(Etanidazole)、エチオダイズドオイルＩ１
３１(Ethiodized Oil I 131)、エトポシド(Etoposide)、エトポシドホスフェー
ト(Etoposide Phosphate)、エトプリン(Etoprine)、ファドロゾールヒドロクロ
リド(Fadrozole Hydrochloride)、ファザラビン(Fazarabine)、フェンレチニド(
Fenreti nide)、フロクスリジン(Floxuridine)、フルダルビンホスフェート(Flu
darabine Phosphate)、フルオロウラシル(Fluorouracil)、フルロシタビン(Flur
ocitabine)、フォスキドン(Fosquidone)、フォストリエシンナトリウム(Fostrie
cin Sodium)、ゲンシタビン(Gemcitabine)、ゲンシタビンヒドロクロリド(Gemci
tabine Hydrochloride)、金Ａｕ１９８、ヒドロキシウレア、イダルビシンヒド
ロクロリド(Idar ubicin Hydrochloride)、イフォスファミド(Ifosfamide)、イ
ルモフォシン(Ilmofosine)、インターフェロンアルファ−２ａ(Interferon Alfa
-2a)、インターフェロンアルファ−２ｂ(Interferon Alfa-2b)、インターフェロ
ンアルファ−ｎｌ(Interferon Alfa-n1)、インターフェロンアルファ−ｎ３(Int
erferon Alfa-n3)、インターフェロンベータ−Ｉａ(Interferon Beta-Ia)、イン
ターフェロンガンマ−Ｉｂ(Interferon Gamma-Ib)、イプロプラチン(Iproplatin
)、イリノテカンヒドロクロリド(Irinotecan Hydrochloride)、ランレオチドア
セテート(Lanreotide Acetate)、レトロゾール(Letrozole)、ロイプロリドアセ
テート(Leuprolide Acetate)、リアロゾールヒドロクロリド(Liarozole Hydroch
loride)、ロメトレキソールナトリウム(Lometrexol Sodium)、ロムスチン(Lomus
tine)、ロソキサントロンヒドロクロリド(Losoxantrone Hydrochloride)、マソ
プロコル(Masoprocol)、メイタンシン(Maytansine)、メクロレタミンヒドロクロ
リド(Mechlorethamine Hydrochloride)、メゲストロールアセテート(Megestrol
Acetate)、メレンゲストロールアセテート(Melengestrol Acetate)、メルファラ
ン(Melphalan)、メノガリル(Menogaril)、メルカプトプリン(Mercaptopurine)、
メトトレキセート(Methotrexate)、メトトレキセートナトリウム(Methotrexate
Sodium)、メトプリン(Metoprine)、メツレデパ(Meturedepa)、ミチンドミド(Mit
indomide)、ミトカルシン(Mitocarcin)、ミトクロミン(Mitocromin)、ミトギリ
ン(Mitogillin)、ミトマルシン(Mitomalcin)、ミトマイシン(Mitomycin)、ミト
スペル(Mitosper)、ミトタン(Mitotane)、ミトキサントロンヒドロクロリド(Mit
ox antrone Hydrochloride)、ミコフェノール酸、ノコダゾール(Nocodazole)、
ノガラマイシン(Nogalamycin)、オルマプラチン(Ormaplatin)、オキシスラン(Ox
isuran)、パクリタキセル(Paclitaxel)、ペガスパルガーゼ(Pegaspargase)、ペ
リオマイシン(Peliomycin)、ペンタムスチン(Pentamustine)、ペプロマイシンサ
ルフェート(Peplomycin Sulfate)、ペルフォスファミド(Perfosfamide)、ピポブ
ロマン(Pipobroman)、ピポスルファン(Piposulfan)、ピロキサントロンヒドロク
ロリド(Piroxantrone Hydrochloride)、プリカマイシン(Plicamycin)、プロメス
タン(Plomestane)、ポルフィマーナトリウム(Porfimer Sodium)、ポルフィロマ
イシン(Porfiromycin)、プレドニムスチン(Prednimustine)、プロカルバジンヒ
ドロクロリド(Procarbazine Hydrochloride)、プロマイシン(Puromycin)、プロ
マイシンヒドロクロリド(Puromycin Hydrochloride)、ピラゾフリン(Pyrazofuri
n)、リボプリン(Riboprine)、ログレチミド(Rogletimide)、サフィンゴル(Safin
gol)、サフィンゴルヒドロクロリド(Safingol Hydrochloride)、セムスチン(Sem
ustine)、シントラゼン(Simtrazene)、スパルフォセートナトリウム(Sparfosate
Sodium)、スパルソマイシン(Sparsomycin)、スピロゲルマニウムヒドロクロリ
ド(Spirogermanium Hydrochloride)、スピロムスチン(Spiromustine)、スピロプ
ラチン(Spiroplatin)、ストレプトニグリン(Spreptonigrin)、ストレプトゾシン
(Spreptozocin)、塩化ストロンチウムＳｒ８９、スロフェヌル(Sulofenur)、タ
リソマイシン(Talisomycin)、タキサン(Taxane)、タキソイド(Taxoid)、テコガ
ランナトリウム(Tecogalan Sodium)、テガフル(Tegafur)、テロキサントロンヒ
ドロクロリド(Teloxantrone Hydrochloride)、テモポルフィン(Temoporfin)、テ
ニポシド(Teniposide)、テロキシロン(Teroxirone)、テストラクトン(Testolact
one)、チアミプリン(Thiamiprine)、チオグアニン(Thioguanine)、チオテパ(Thi
otepa)、チアゾフリン(Tiazofurin)、チラパザミン(Tirapazamine)、トポテカン
ヒドロクロリド(Topotecan Hydrochloride)、トレミフェンサイトレート(Toremi
fene Citrate)、トレストロンアセテート(Trestolone Acetate)、トリシリビン
ホスフェート(Triciribine Phosphate)、トリメトレキセート(Trimetrexate)、
トリメトレキセートグルクロネート(Trimetrexate Glucuronate)、トリプトレリ
ン(Triptorelin)、ツブロゾールヒドロクロリド(Tubulozole Hydrochloride)、
ウラシルマスタード(Uracil Mustard)、ウレデパ(Urede pa)、バプレオチド(Vap
reotide)、ベルテポルフィン(Verteporfin)、ビンブラスチンサルフェート(Vinb
lastine Sulfate)、ビンクリスチンサルフェート(Vincristine Sulfate)、ビン
デシン(Vindesine)、ビンデシンサルフェート(Vindesine Sulfate)、ビンピジン
サルフェート(Vinepidine Sulfate)、ビングリシネートサルフェート(Vinglycin
ate Sulfate)、ビンレウロシンサルフェート(Vinleuros ine Sulfate)、ビノレ
ルビンタルトレート(Vinorelbine Tartrate)、ビンロシジンサルフェート(Vinro
sidine Sulfate)、ビンゾリジンサルフェート(Vinzolidine Sulfate)、ボロゾー
ル(Vorozole)、ゼニプラチン(Zeniplatin)、ジノスタチン(Zinostatin)、ゾルビ
シンヒドロクロリド(Zorubicin Hydrochloride)。他の抗−腫瘍化合物は下記の
ものを包含する：２０−エピ−１,２５ジヒドロキシビタミンＤ３、５−エチニ
ルウラシル、アビラテロン(abiraterone)、アクラルビシン(aclarubicin)、アシ
ルフルベン(acylfulvene)、アデシペノール(adecypenol)、アドゼレシン(adozel
esin)、アルデスロイキン(aldesleukin)、ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト、アルト
レタミン(altretamine)、アンバムスチン(ambamustine)、アミドックス(amidox)
、アミフォスチン(amifostine)、アミノレブリン酸、アンルビシン(amrubicin)
、アンサクリン(a msacrine)、アナグレリド(anagrelide)、アナストロゾール(a
nastrozole)、アンドログラフォリド(andrographolide)、脈管形成抑制剤：アン
タゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリックス(Antarelix)、抗−背側形
態発生蛋白質−１、抗男性ホルモン、抗前立腺癌剤、抗エストロゲン、抗腫瘍剤
、アンチセンス(antisense)オリゴヌクレトチド類、アフィジコリングリシネー
ト(aphidicolin glycinate)、細胞消滅遺伝子モジュレーター、細胞消滅調節剤
、アプリン酸、アラ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ(algin
ine deaminase)、アスラクリン(asulacrine)、アタメスタン(atamestane)、アト
リムスチン(atrimustine)、アキシナスタチン１(axinastin 1)、アキシナスタチ
ン２(axinastin 2)、アキシナスタチン３(axinastin 3)、アザセトロン(azasetr
on)、アザトキシン(azatoxin)、アザチロシン(azatyrosine)、バッカチンIII(ba
ccatin III )誘導体、バラノール(balanol)、バチマスタト(batimastat)、ＢＣ
Ｒ／ＡＢＬアンタゴニスト、ベンゾクロリン類(benzochlorins)、ベンゾイルス
タウロスポリン(benzoylstaurosporine)、ベータラクタム誘導体、ベータ−アレ
チン(beta-alethine)、ベータクラマイシンＢ(betaclamycin B)、ベツリニック
・アシド(betulinic acid)、ｂＦＧＦ抑制剤、ビカルタミド(bicalutamide)、ビ
サントレン(bisantrene)、ビスアジリジニルスペルミン(bisaziridinylspermine
)、ビスナフィド(bisnafide)、ビストラテンＡ(bistratene A)、ビゼレシン(biz
elesin)、ブレフラート(breflate)、ブロピリミン(bropirimine)、ブドチタン(b
udotitane)、ブチオニンスルホキシミン(buthionine sulfoximine)、カルシポト
リオール(calcipotriol)、カルホスチンＣ(calphostin C)、カンプトテシン(cam
ptothecin)誘導体、カナリポックスIL−２(canarypox IL-2)、カペシタビン(cap
ecitabine)、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリア
ゾール、カレストＭ３(CaRest M3)、カーン７００(CARN 700)、軟骨誘導抑制剤
、カルゼレシン(carzelesin)、カゼインキナーゼ抑制剤（ＩＣＯＳ）、カスタノ
スペルミン(castanospermine)、セクロピンＢ(cecropin B)、セトロレリックス(
cetrorelix)、クロリン類、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト(
cicaprost)、シス−ポルフィリン(cis-porphyrin)、クラドリビン(cladribine)
、クロミフェン(clomifene)同族体、クロトリマゾール(clotrimazole)、コリス
マイシンＡ(collismycin A)、コリスマイシンＢ(collismycin B)、コンブレタス
タチンＡ４(combretastatin A4)、コンブレタスタチン(combretastatin)同族体
、コナゲニン(conagenin) 、クランベスシジン８１６(crambescidin 816)、クリ
スナトール(crisnatol)、クリプトフィシン８(cryptophycin 8)、クリプトフィ
シンＡ(cryptophycin A)誘導体、クラシンＡ(curacin A)、シクロペンタントラ
キノン類、シクロプラタム(cycloplatam)、シペマイシン(cypemycin)、シタラビ
ンオクフォスフェート(cytarabine ocfosfate)、細胞溶解要素、シトスタチン(c
ytostatin)、ダクリキシマブ(dacliximab)、デシタビン(decitabine)、デヒドロ
ジデムニンＢ(d ehydrodidemnin B)、デスロレリン(deslorelin)、デキシフォス
ファミド(dexifosfamide)、デクスラゾキサン(dexrazoxane)、デクスベラパミル
(dexverapamil)、ジアジクオン(diaziquione)、ジデムニンＢ(didemnin B)、ジ
ドックス(didox)、ジエチルノルスペルミン(diethylnorspermine)、ジヒドロ−
５−アザシチジン(dihydro-5-azacytidine)、ジヒドロタキソール,９−(dihydro
taxol,9-)、ジオキサマイシン(dioxamycin)、ジフェニルスピロムスチン(diphen
yl spiromustine)、ドコサノール(docosanol)、ドラセトロン(dolasetron) 、ド
キシフルリジン(doxifluridine)、ドロロキシフェン(droloxifene)、ドロナビノ
ール(dronabinol)、デュオカルマイシンＳＡ(duocarmycin SA)、エブセレン(ebs
elen)、エコムスチン(ecomustine)、エデルフォシン(edelfos ine)、エドレコロ
マブ(edrecolomab)、エフロルニチン(eflornithine)、エレメン(elemene)、エミ
テフル(emitefur)、エピルビシン(epirubicin)、エプリステリド(epristeride)
、エストラムスチン(estramustine)同族体、エストロゲンアゴニスト、エストロ
ゲンアンタゴニスト、エタニダゾール(etanidazole)、エトポシドホスフェート(
etoposide phosphate)、エキセメスタン(exemestane)、ファドロゾール(fadr oz
ole)、ファザラビン(fazarabine)、フェンレチニド(fenretinide)、フィルグラ
スチム(filgrastim)、フィナステリド(finasteride)、フラボピリドール(flavop
iridol)、フレゼラスチン(flezelastine)、フルアステロン(fluasterone)、フル
ダラビン(fludarabine)、フルオロダウノルニシンヒドロクロリド(fluorodaunor
unicin hydrochloride)、フォルフェニメックス(forfenimex)、フォルメスタン(
formestane)、フォストリエシン(fostriecin)、フォテムスチン(fotemustine)、
ガドリニウムテキサフィリン(gadolinium texaphyrin)、硝酸ガリウム、ガロシ
タビン(galocitabine)、ガニレリックス(ganirelix)、ゼラチナーゼ(gelatinase
)抑制剤、ゲンシタビン(gemcitabine)、グルタチオン(glutathione)抑制剤、ヘ
プスルファム(hepsulfam)、ヘレグリン(heregulin)、ヘキサメチレンビスアセト
アミド、ヒペリシン(hypericin)、イバンドロニック・アシド(ibandronic acid)
、イダルビシン(idarubicin)、イドキシフェン(idoxifene)、イドラマントン(id
ramantone)、イルモフォシン(ilmofosine)、イロマスタト(ilomastat)、イミダ
ゾアクリドン類、イミキモド(imiquimod)、免疫刺激ペプチド類、インスリン−
類似成長要素−１受容体抑制剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロ
ン類、インターロイキン類、ヨーベングアン(iobenguan e)、ヨードドキソルビ
シン(iododoxorubicin、イポメアノール,４−(ipomeanol,4-)、イリノテカン(ir
inotecan)、イロプラクト(iroplact)、イルソグラジン(irsogladine)、イソベン
ガゾール(isobengazole)、イソホモハリコンドリンＢ(isohomohalicondrin B)、
イタセトロン(itasetron)、ジャスプラキノリド(jasplakinolide)、カハラリド
Ｆ(kahalalide F)、ラメラリン−Ｎトリアセテート(lamell arin-N triacetate)
、ランレオチド(lanreotide)、レイナマイシン(leinamycin)、レノグラスチム(l
enograstim)、レンチナンサルフェート(lentinan sulfate)、レプトルスタチン(
leptolstatin)、レトロゾール(letrozole)、白血病抑制要素、白血球アルファイ
ンターフェロン、ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステレン(leuprolide +
estrogen + progesterone)、ロイプロレリン(leuprorelin)、レバミソール(leva
misole)、リアロゾール(liarozole)、線状ポリアミン同族体、親油性二糖ペプチ
ド、親油性白金化合物、リッソクリナミド７(lissoclinamide 7)、ロバプラチン
(lobaplatin)、ロンブリシン(lombricine)、ロメトレキソール(lometrexol)、ロ
ニダミン(lonidamine)、ロソキサントロン(losoxantrone)、ロバスタチン(lovas
tatin)、ロキソリビン(loxoribine)、ルルトテカン(lurtotecan)、ルテチウムテ
キサフィリン(lutetium texaphyrin)、リソフィリン(lysofylline)、溶菌ペプチ
ド類、マイタンシン(maitansine)、マンノスタチンＡ(mannostatin A) マリマス
タト(marimastat)、マソプロコル(masoprocol)、マスピン(maspin)、マトリリシ
ン(matrilysin)抑制剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ(matrix metallopro
teinase)抑制剤、メノガリル(menogaril)、メルバロン(merbarone)、メテレリン
(meterelin)、メチオニナーゼ(methioninase)、メトクロプラミド(metocloprami
de)、ＭＩＦ抑制剤、ミフェプリストン(mifepristone)、ミルテフォシン(miltef
osine)、ミリモスチム(mirimostim)、不適正二本鎖ＲＮＡ、ミトグアゾン(mitog
uazone)、ミトラクトール(mitolactol)、ミトマイシン(mitomycin)同族体、ミト
ナフィド(mitonafide)、ミトトキシン(mitotoxin)線維芽細胞成長要素−スポリ
ン(spo rin)、ミトキサントロン(mitoxantrone)、モファロテン(mofarotene)、
モルグラモスチム(molgramostim)、モノクローン抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロフ
ィン(gonadotrophin)、モノホスホリル脂質Ａ＋ミオバクテリア細胞壁ｓｋ、モ
ピダモル(mopidamol)、複合薬品耐性遺伝子抑制剤、複合腫瘍抑制剤１をベース
にした療法、マスタード抗癌薬、ミカペロキシドＢ(mycaperoxide B)、ミコバク
テリア細胞壁抽出物、ミリアポロン(myriaporone)、Ｎ−アセチルジナリン、Ｎ
−置換されたベンズアミド類、ナファレリン(nafarelin)、ナグレスチップ(nagr
estip、ナロキソン＋ペンタゾシン(naloxone + pentazocine)、ナパビン(napavi
n)、ナフテルピン(naphterpin)、ナルトグラスチム(nartograstim)、ネダプラチ
ン(nedaplatin)、ネモルビシン(nemorubicin)、ネリドロニック・アシド(neridr
onic acid)、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド(nilutamide)、ニサマイシン
(nisa maycin)、酸化窒素調節剤、ニトロキシド(nitroxide)酸化防止剤、ニトル
リン(nitrullyn)、Ｏ６−ベンジルグアニン、オクトレオチド(octreotide)、オ
キセノン(okicenone)、オリゴヌクレオチド類、オナプリストン(onapristone)、
オンダンセトロン(ondansetron)、オンダンセトロン(ondansetron)、オラシン(o
racin)、経口サイトキン誘発剤、オルマプラチン(ormaplatin)、オサテロン(osa
terone)、オキサリプラチン(oxaliplatin)、オキサウノマイシン(oxaunomycin)
、パクリタキセル(paclitaxel)同族体、パクリタキセル(paclitaxel)誘導体、パ
ラウアミン(palauamine)、パルミトイルリゾキシン(palmitoylrhizoxin)、パミ
ドロニック・アシド(pamidronic acid)、パナキシトリオール(panaxytriol)、パ
ノミフェン(panomifene)、パラバクチン(parabactin)、パゼリプチン(pazellipt
ine)、ペガスパルガーゼ(peg aspargase)、ペルデシン(peldesine)、ペントサン
ポリサルフェートナトリウム(pentosan polysulfate sodium)、ペントスタチン(
pentostatin)、ペントロゾール(pentrozole)、ペルフルブロン(perflubron)、ペ
ルフォスファミド(perfosfamide) 、ペリリルアルコール(perillyl alcohol)、
フェナジノマイシン(phenazinomycin)、酢酸フェニル、ホスファターゼ抑制剤、
ピシバニル(picibanil)、ピロカルピンヒドロクロリド(pilocarpine hydrochlor
ide)、ピラルビシン(pirarubicin)、ピリトレキシム(piritrexim)、プラセチン
Ａ(placetin A)、プラセチンＢ(placetin B)、プラスミノーゲン活性化物質抑制
剤、白金錯体、白金化合物、白金−トリアミン錯体、ポルフィマーナトリウム(p
orfimer sodium)、ポルフィロマイシン(porfiromycin)、プロピルビス−アクリ
ドン、プロスタグランジンＪ２、プロテアゾーム(proteazome)抑制剤、蛋白質Ａ
をベースとした免疫調節剤、蛋白質キナーゼＣ抑制剤、蛋白質キナーゼＣ抑制剤
、ミクロアルガル(microalgal)、蛋白質チロシンホスファターゼ抑制剤、プリン
ヌクレオシドホスホリラーゼ抑制剤、プルプリン類(purpurins)、ピラゾロアク
リジン(pyrazoloacridine)、ピリドキシル化されたヘモグロビンポリオキシエチ
レン共役体、ラフアンタゴニスト、ラルチトレキセド(raltitrexed)、ラモセト
ロン(ramosetron)、ラスファルネシル(ras farnesyl)蛋白質トランスフェラーゼ
抑制剤、ラス抑制剤、ラス−ＧＡＰ抑制剤、脱メチル化されたレテリプチン(ret
elliptine)、レニウムＲｅ１８６エチドロナート(etidronate)、リゾキシン(rhi
zoxin)、リボザイム類、ＲIIレチナミド(RII retinamide)、ログレチミド(rogle
timide)、ロヒツキン(rohitukine)、ロムルチド(romurtide)、ロキニメックス(r
oquinimex)、ルビジノンＢ１(rubiginone B1)、ルボキシル(ruboxyl)、サフィン
ゴル(safingol)、サイントピン(saintopin)、サルＣＮＵ(SarCNU) 、サルコフィ
トールＡ(sarcophytol A)、サルグラモスチム(sargramostim)、Ｓｄｉ１疑似体(
Sdi 1 mimetics)、セムスチン(semustine)、老化誘導抑制剤１、センス(sense)
オリゴヌクレオチド類、信号形質導入抑制剤、信号形質導入調節剤、一本鎖抗原
結合蛋白質、シゾフィラン(sizofiran)、ソブゾキサン(sobuzoxane)、ホウカプ
チン酸ナトリウム、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール(sol verol)、ソマ
トメジン(somatomedin)結合蛋白質、ソネルミン(sonermin)、スパルフォシック
・アシド(sparfosic acid)、スピカマイシンＤ(spicamycin D)、スピロムスチン
(spiromustine)、スプレノペンチン(splenopentin)、スポンジスタチン１(spong
istatin 1)、スクアラミン(squalamine)、幹細胞抑制剤、幹細胞分割抑制剤、ス
チピアミド(stipiamide)、ストロメリシン(stromelysin)抑制剤、スルフィノシ
ン(sulfinosine)、超活性血管活性腸ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ(sura
dista)、スラミン(suramin)、スウェインソニン(swainsonine)、合成グリコサミ
ノグリカン類、タリイムスチン(taliimustine)、タモキシフェンメチオジド(tam
oxifen methiodide)、タウロムスチン(tauromustine)、タザロテン(tazarotene)
、テコガランナトリウム(tecogalan sodium)、テガフル(tegafur)、テルラピリ
リウム(tellur apyrylium)、テロメラーゼ抑制剤、テモポルフィン(temoporfin)
、テモゾロミド(temozolomide)、テニポシド(teniposide)、テトラクロロデカオ
キシド、テトラゾミン(tetrazomine)、タリブラスチン(thaliblastine)、タリド
ミド(thalidomide)、チオコラリン(thiocoraline)、スロンボポイエチン(thromb
opoietin)、スランボポイエチン疑似体(thrombopoietin mimetic)、チマルファ
シン(thymalfasin)、チモポイエチン(thymopoietin)受容体アゴニスト、チモト
リナン(thymotrinan)、甲状腺刺激ホルモン、錫エチルエチオプルプリン(tin et
hyl etiopurpurin)、チラパザイン(tirapazamine)、チタノセンジクロリド(tita
nocene dichloride)、トポテカン(topotecan)、トプセンチン(topsentin)、トレ
ミフェン(toremifene)、全能性幹細胞要素、翻訳抑制剤、トレチノイン(tretino
in)、トリアセチルウリジン(triacetyluridine)、トリシリビン(triciribine)、
トリメトレキセート(trimetrexate)、トリプトレリン(triptorelin)、トロピセ
トロン(tropisetron)、ツロステリド(turosteride)、チロシンキナーゼ抑制剤、
チルフォスチン類(tyrphostins)、ＵＢＣ抑制剤、ウベニメックス(ubenimex)、
尿生殖洞で誘導された成長抑制剤要素、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バ
プレオチド(vapreotide)、バリオリンＢ(vari olin B)、ベクターシステム、赤
血球遺伝子療法、ベラレゾル(velaresol)、ベラミン(beramine)、ベルジン類(ve
rdins)、ベルテポルフィン(verteporfin)、ビノレルビン(vinorelbine)、ビンキ
サルチン(vinxaltine)、ビタキシン(vitaxin)、ボロゾール(vorozole) 、ザノテ
ロン(zanoterone)、ゼニプラチン(zeniplatin)、ジラスコルブ(zilascorb)、ジ
ノスタチン(zinostatin) 刺激剤。

【００６０】 抗癌補助相乗剤：三環式抗鬱薬（例えば、イミプラミン(imipramine)、デシプ
ラミン(desipramine)、アミトリプチリン(amitryptyline)、クロミプラミン(clo
mipramine)、トリミプラミン(trimipramine)、ドキセピン(doxepin)、ノルトリ
プチリン(nortriptyline)、プロトリプチリン(protriptyline)、アモキサピン(a
moxapine)およびマプロチリン(maprotiline)）、非−三環式抗鬱薬（例えば、セ
ルトラリン(sertraline)、トラゾドン(trazodone)およびシタロプラム(citalopr
am)）、Ｃａ⁺⁺アンタゴニスト（例えば、ベラパミル(verapamil)、ニフェジピン
(nifedipine)、ニトレンジピン(nitrendipine)およびカロベリン(caroverine)）
、カルモジュリン抑制剤（例えば、プレニルアミン(prenylamine)、トリフルオ
ロペラジン(trifluroperazine)およびクロミプラミン(clomipramine)）、アンフ
ォテリシンＢ(Amphotericin B)、トリパラノール(T riparanol)同族体（例えば
、タモキシフェン(tamoxifen)）、抗不整脈薬（例えば、キニジン(quinidine)）
、抗高血圧症薬（例えば、レセルピン(reserpine)）、チオール除去剤（例えば
、ブチオニン(buthionine)およびスルフォキシミン(sulfoximine)）並びに複合
薬品耐性減少剤、例えばクレマフォルＥＬ(Cremaphor EL)。本発明の化合物はま
た例えば顆粒球コロニー刺激要素の如きサイトキン類と共に投与することもでき
る。

【００６１】 本発明の共役体はまた、一般的には、乾癬、光線性角化症を包含する哺乳動物
の癌以外の細胞増殖障害を処置するためにも有用である。 一般的な製造方法 本発明の化合物は既知の化学反応および工程の使用により製造することができ
る。それにもかかわらず、下記の一般的な製造方法が抑制剤を合成する際の読者
を助けるために表示される。特定例に関するより詳細な工程は以下の実験部分に
示される。

【００６２】 一般的な方法では、下記の一般的な記述が適用される。Ｐと表示された基は保
護基を表す。種々の異なる保護基を利用可能性のある反応性官能基（例えば、イ
ミド窒素、ヒドロキシル、カルボン酸）を保護するために使用できること並びに
特定の選択は指定された目標化合物を製造するために必要な反応条件に依存する
であろうことは当業者により認識されうる。そのような保護基の記述は Protect
ive Groups in Organic Synthesis, Second Edition, T.W. Green and P.G.M. W
uts, John Wiley and Sons, New York, 1991 に見られる。

【００６３】 Ｘと表示される基は脱離基を表す。数種の官能基、例えばハライド、メシラー
ト、トシラートおよびトリフラート、が脱離基として作用しうることは当業者に
既知である。特定の脱離基の選択は典型的には例えば求核剤の反応性、化合物の
安定性および合成の容易さの如き要素に依存する。Ｒが利用可能性のある反応性
官能基、例えばアルコールまたはアミン、を表す場合には、適当な保護および脱
保護段階が必要となるかもしれないことは理解される。これらの方法の全ての変
じうる基はそれらが特に以下で定義されていないなら一般的な記述に記載されて
いる通りであることも理解される。指定された記号（すなわち、Ｒ₄）を有する
変じうる基が１回より多く使用される時には、これらの基の各々をその記号の定
義の範囲内で独立して変えることができる。 一般方法Ａ シクロペンタン環がシス−ジヒドロキシル化されインドロカルバゾール部分に
対してアンチである（Ｒ¹,Ｒ²,式Ｉ＝−ＯＨ）本発明の化合物は方法Ａにより簡
便に製造される。この方法における第一の重要な段階は適当なシクロペンタン（
エン）求電子剤を用いる保護されたインドロ[２,３−ａ]カルバゾール部分のア
ルキル化を包含する。保護されたインドロ[２,３−ａ]カルバゾール部分は簡便
には文献［Lowinger, T.B. et al., Tetrahedron Lett. 36, 8383 (1995)、Ｐ＝
パラメトキシベンジル］に記載された方法を用いて製造される。Ｒ¹⁴＝−Ｈであ
りそしてＸ＝ＯＭｓである求電子剤１１は市販の３−アセトキシ−シクロペンテ
ン−２−オールからメタンスルホニルクロリドおよびトリエチルアミンを用いる
処理により製造することができる。Ｒ¹⁴≠Ｈである誘導体は当業者に既知の標準
的方法を用いて製造することができる。ＤＭＦのような極性のプロトン性溶媒中
でのＣｓ₂ＣＯ₃またはＮａＨのような塩基を用いる保護されたインドロ[２,３−
ａ]カルバゾールの処理およびその後のアルキル化剤（１１）の添加が所望する
モノアルキル化物質を与える。１２からアルコール１３への転化は当業者に既知
の種々の方法により行うことができる。一つの方法はエステル交換反応を包含し
、そこではアセテート部分が触媒性ＮａＣＮを用いる処理によりアルコール溶媒
に移される。１４の７−員環を形成するためのアルコール１３の環化はトリフェ
ニルホスフィンおよびアゾジカルボン酸ジエチルを用いてミツノブ反応として知
られる反応で行うことができる。この化学作用の優れた概観は Organic Reactio
ns 42, 335 (1992) に記載されている。１４からジオール１５への酸化はＯｓＯ ₄ で触媒作用を受けるシス−ヒドロキシル化により行うことができる。酸化反応
は触媒量のＯｓＯ₄を用いて例えばＮ−メチルモルホリンＮ−オキシド（ＮＭＯ
）の如き再酸化剤を用いて水性テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）またはアセトン溶
液の中で簡便に行われる。他の金属−類似マンガンおよびルテニウムを用いる同
様な酸化を使用することもできる。保護基Ｐを中間体１５から除去するために使
用される方法は使用される特定の基に依存するであろう。Ｐがｐ−メトキシベン
ジルである１５の脱保護は高められた温度におけるトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）
を用いる処理により行うことができる。アニソールのようなカチオン捕獲剤の反
応混合物への添加がより高い収率をしばしばもたらす。当業者は種々のＲ基の反
応性により別の保護基が必要かもしれないことを認識するであろう。 スキーム１方法Ａ

【００６４】

【化１６】

【００６５】 一般的方法Ｂ シクロペンタン環がシス−ジヒドロキシル化されインドロカルバゾール部分に
対してアンチであり（Ｒ¹,Ｒ²,式Ｉ＝−ＯＨ）そしてＲ¹⁴＝ヒドロキシルまたは
ヒドロキシル基から誘導された置換基である本発明の化合物は方法Ｂにより簡便
に製造される。この方法における第一の重要な段階は適当な求電子剤（１７）を
用いる保護されたインドロ[２,３−ａ]カルバゾール部分のアルキル化を包含す
る。保護されたインドロ[２,３−ａ]カルバゾール部分は簡便には文献［Lowinge
r, T.B. et al., Tetrahedron Lett. 36, 8383 (1995)、Ｐ＝パラメトキシベン
ジル］に記載された方法を用いて製造される。ＤＭＦのような極性のプロトン性
溶媒中でのＮａＨまたはＣｓ₂ＣＯ₃のような塩基を用いるメシラート１７（Joho
nson et al. ...）を用いる保護されたインドロ[２,３−ａ]カルバゾール部分の
アルキル化がモノアルキル化された生成物１８を与える。標準的な加水分解条件
を用いるアセトニド部分の脱保護がジアルコール１９を与える。ジアルコール１
９をヒドロキシル指定エポキシド化およびその後の分子内アルキル化またはミツ
ノブ条件を用いる環化およびその後のＯｓＯ₄を用いるシス−ヒドロキシル化に
より環化した生成物２０に転化させることができる。Ｐがｐ−メトキシベンジル
である２０の脱保護は高められた温度におけるトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用
いる処理により行うことができる。アニソールのようなカチオン捕獲剤の反応混
合物への添加がより高い収率をしばしばもたらす。当業者は種々のＲ基の反応性
により別の保護基が必要かもしれないことを認識するであろう。 スキーム２一般的方法Ｂ

【００６６】

【化１７】

【００６７】 一般的方法Ｃ スキーム３に示されるようなα−ヒドロキシカルボキシル部分を有する本発明
の化合物は方法Ｃを用いて簡便に製造される。この方法における第一の重要な段
階は適当なシクロペンテン求電子剤を用いる保護されたインドロ[２,３−ａ]カ
ルバゾール部分のアルキル化を包含する。保護されたインドロ[２,３−ａ]カル
バゾール部分１０は簡便には文献［Lowinger, T.B. et al., Tetrahedron Lett.
36, 8383 (1995)、Ｐ＝パラメトキシベンジル］に記載された方法を用いて製造
される。求電子剤２２はシクロペンテン−３−オールからメタンスルホニルクロ
リドおよびトリエチルアミンを用いる処理により製造することができる。シクロ
ペンテン−３−オールは J. Org. Chem. 32, 4138 (1967) に記載された工程に
従い製造することができる。ＤＭＦのような極性のプロトン性溶媒中でのＣｓ₂
ＣＯ₃またはＮａＨのような塩基を用いる保護されたインドロ[２,３−ａ]カルバ
ゾール部分の処理およびその後のアルキル化剤（２２）の添加が所望するモノア
ルキル化された生成物２３を与える。その後の二重結合の活性化はＯｓＯ₄によ
り例えばＮ−メチルモルホリンＮ−オキシド（ＮＭＯ）の如き再酸化剤を用いて
水性ＴＨＦまたはアセトン溶液の中で行うことができる。ミツノブ条件を用いる
ジオール２４の環化がビスアルキル化された付加物２５を与える。このミツノブ
化学作用の最近の概観は Organinc Reactoins, 42, 335 (1992) に見られる。ア
ルコール２５からケトン２６への酸化は当業者に既知の広範囲の試薬および反応
条件を用いて行うことができる。一つの一般的な方法は例えば塩化メチレンの如
きプロトン性溶媒中でのクロロ蟻酸ピリジニウム（ＰＣＣ）のようなクロムをベ
ースとした試薬の使用を包含する。広範囲の求核剤をケトン部分に立体選択的方
法で加えることができる。α−ヒドロキシカルボキシル基を生成するためにはカ
ルボン酸アニオン同等物を加えることが簡便である。この方式の一般的な概観は
”Unpoled Synthons”, Hase T.A., Ed.; John Wiley & Sons, 1987 に記載さ
れている。カルボン酸アニオン同等物の一例はオルトチオホルミルカルバニオン
［例えば、ＬｉＣ(ＳＭｅ)₃］である。この求核剤はトリス(メチルチオ)メタン
をｎ−ＢｕＬｉのような強塩基で処理することにより簡便に製造される。一般的
には、ケトンへの求核剤の添加はアグリコン部分と逆に起きる。チオカルボン酸
オルトエステルは三弗化ホウ素エーテレートまたは酸化水銀（II）のようなルイ
ス酸により容易に加水分解される。エステルまたはカルボン酸のいずれかは加水
分解で使用される試薬によってオルトエステルから得ることができる。メチルエ
ステル（２８、Ｑ＝ＯＭｅ）はオルトエステルを水性メタノール中で塩化水銀（
II）および酸化水銀（II）で処理することにより簡便に得られる。対応するカル
ボン酸（２８、Ｑ＝ＯＨ）はＴＨＦ水溶液中での三弗化ホウ素エーテレートを用
いる処理により得ることができる。製造されると、カルボン酸はカルボニルジイ
ミダゾール（ＣＤＩ）のようなカップリング試薬を介してアミド類（２８、Ｑ＝
ＮＨＭｅ）を製造するための中間体として使用することができる。これらの前駆
体は当業者に既知である。保護基Ｐを中間体２８から除去するために使用される
方法は使用される特定の保護基に依存するであろう。Ｐがｐ−メトキシベンジル
（ＰＭＢ）である２８の脱保護は高められた温度におけるトリフルオロ酢酸（Ｔ
ＦＡ）を用いる処理により行うことができる。アニソールのようなカチオン捕獲
剤の反応混合物への添加がより高い収率の反応をしばしばもたらす。当業者は種
々のＲ基の反応性により別の保護基が必要かもしれないことを認識するであろう
。 スキーム３方法Ｃ

【００６８】

【化１８】

【００６９】 実施例 実施例１：９,１２−メタノ−１Ｈ−ジインドロ[１,２,３−ｆｇ：３′,２′,１
′−ｋｌ]ピロロ[３,４−Ｉ][１,６]ベンゾジアゾシン−１,３(２Ｈ)−ジオン,
９,１０,１１,１２−テトラヒドロ−１０,１１−ジヒドロキシ−(９α,１０α,
１１α,１２α)の合成 ＥＲＫ２抑制活性を有するさらなる化合物を開発するために、一連のＫ２５２
ａの合成的に変更された誘導体を製造した。ＰＫＣ／ＰＫＡを越えるＰＫ４０の
好ましい抑制が少なくとも２−３桁の大きさの差により保たれている４種のその
ような化合物が実施例１−４に記載されている。

【００７０】 これらのＡＴＰ同族体がＰＫ４０上のＡＴＰ結合部位に対して結合することに
よりＰＫ４０（ＥＲＫ２）の抑制剤として作用することが信じられる。ＰＫ４０
はＡＴＰ同族体による抑制に特に敏感であるようであり、Ｋ２５２ａおよびＡＴ
Ｐ自体と同様な選択性を生ずる。

【００７１】

【化１９】

【００７２】 段階１。(１Ｓ,４Ｒ)−シス−４−アセトキシ−２−シクロペンテン−１−オー
ル（５３ｍｇ、０.３７ミリモル）およびトリエチルアミン（０.７７ｍＬ、０.
５５ミリモル）のベンゼン（０.８ｍＬ）とペンタン（０.８ｍＬ）との混合物中
溶液を−５℃〜０℃に冷却しそして塩化メタンスルホニル（０.０４３ｍＬ、０.
５６ミリモル）で温度が０℃より下に保たれるような速度で処理した。白色沈澱
が観察された。

【００７３】 別の丸底フラスコ中で、アグリコン［Tetrahedron Letters 36, 8383 (1995)
に記載された処方を用いて製造された］（３１９ｍｇ、０.７２ミリモル）のＤ
ＭＦ（６.０ｍＬ）中溶液を−５℃〜０℃に１時間にわたり冷却し、反応混合物
を食塩水で反応停止させそして酢酸エチルで抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で
乾燥し、濾過しそして真空中で濃縮した。ＭＰＬＣ（シリカ、５０−１００％Ｃ
Ｈ₂Ｃｌ₂−ヘキサン類）による精製が目標化合物（５５ｍｇ、２２２６％）を黄
色固体状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１２.１９（ｓ，１Ｈ）、
９.１９（ｄ，Ｊ＝２.７Ｈｚ，１Ｈ）、９.１０（ｄ，Ｊ＝２.７Ｈｚ，１Ｈ）、
７.７８−６.８７（ｍ，１０Ｈ）、６.８１（ｍ，１Ｈ）、６.５１（ｍ，１Ｈ）
、６.３６（ｍ，１Ｈ）、６.１３（ｍ，１Ｈ）、４.８２（ｓ，２Ｈ）、３.６９
（ｓ，３Ｈ）、２.６８（ｍ，２Ｈ）、２.１０（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−Ｌ
ＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）５６９（Ｍ＋，４４）、５０８（３２）、４６２
（１００）、４４４（５０）、４２９（３０）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.４（シリカ，７
％ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン類）；融点＞２００℃。

【００７４】

【化２０】

【００７５】 段階２。段階１からの酢酸エステル（３０ｍｇ、０.０５ミリモル）およびシア
ン化ナトリウム（１０ｍｇ、０.２ミリモル）のエタノール（２.０ｍＬ）中溶液
を出発物質がＴＬＣにより観察されなくなるまで（２時間）還流下で加熱した。
混合物を真空中で濃縮し、水（２０ｍＬ）中で洗浄しそしてＥｔＯＡｃ（２０ｍ
Ｌ）で抽出した。有機抽出物をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥しそして濃縮して黄色油を耐
えた。ＭＰＬＣ（シリカ、０−１５％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）による精製が目
標アルコール（２７ｍｇ、９０％）を橙色粉末状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆）δ１２.１７（ｓ，１Ｈ）、９.１９（ｄ，Ｊ＝２.６Ｈｚ，１Ｈ）、
９.１０（ｄ，Ｊ＝２.５Ｈｚ，１Ｈ）、７.７８−６.８７（ｍ，１０Ｈ）、６.
７９（ｍ，１Ｈ）、６.２８（ｍ，２Ｈ）、５.２５（ｍ，２Ｈ）、４.８３（ｓ
，２Ｈ）、３.６８（ｓ，３Ｈ）、２.５４（ｍ，２Ｈ）；ＴＬＣ（シリカ，１０
％ ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）。

【００７６】

【化２１】

【００７７】 段階３。段階２からのアルコールをアゾジカルボン酸ジエチル（６５.１ｍｇ、
０.４６ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（１４１ｍｇ、０.５４ミリモ
ル）のテトラヒドロフラン（４.０ｍＬ）中溶液に加えた。室温で一晩撹拌した
後に、反応を食塩水で停止させそしてＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ₂Ｓ
Ｏ₄上で乾燥し、濾過しそして真空中で濃縮した。生じた褐色油をＭＰＬＣ（シ
リカ、２０−３０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン類）により精製して環化した生成物（
６０ｍｇ、３１％）を黄色粉末状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ９
.０７（ｓ，１Ｈ）、９.０４（ｓ，１Ｈ）、８.０２−６.８７（ｍ，１０Ｈ）、
６.４１（ｓ，２Ｈ）、６.２２（ｍ，２Ｈ）、４.８３（ｓ，２Ｈ）、３.６８（
ｓ，３Ｈ）、３.１５（ｍ，１Ｈ）、２.７１（ｍ，１Ｈ）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.７５
（シリカ，５０％ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン類）。

【００７８】

【化２２】

【００７９】 段階４。段階３からのイミド（４９.１ｍｇ、０.０９６ミリモル）のアニソール
（０.６８ｍＬ）中溶液を室温で１５分間撹拌しそして０℃より上に冷却した。
次の２０分間にわたり、トリフルオロ酢酸（６.８ｍＬ）を溶液に加えた。橙色
混合物を放置して室温に暖めた後に、溶液を一晩加熱還流した。溶媒を真空中で
除去した後に、生じた褐色油を飽和水性ＮａＨＣＯ₃（２０ｍＬ）で洗浄しそし
てＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濾過し
そして真空中で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、０−１０％
ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）による生じた油の精製が脱保護されたイミドを橙色粉
末（３４.９ｍｇ、９３％）状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１１.
０６（ｓ，１Ｈ）、９.０６（ｓ，１Ｈ）、６.２２（ｄ，Ｊ＝２.２Ｈｚ，２Ｈ
）、３.１２（ｍ，１Ｈ）、２.７０（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）
ｍ／ｚ（相対強度）３９０（Ｍ＋Ｈ，６０）、３６９（３２）、３４７（６２）
、３１９（３０）、３０５（１８）、２９３（２２）、２７７（１００）、２６
７（１８）、２５４（２８）、２４１（１４）、２０７（１４）；ＴＬＣ：Ｒ_f
０.５０（５％ ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）；融点＞２３０℃。

【００８０】

【化２３】

【００８１】 段階５−実施例２の製造。段階４からのイミド（１４.４ｍｇ、０.０４ミリモル
）およびＮ−メチルモルホリン（０.２ｍＬ）のテトラヒドロフラン（０.４ｍＬ
）中溶液を四酸化オスミウム（０.１ｍＬ、ＴＨＦ中１.０Ｍ）で処理しそして室
温で１時間（出発物質がＴＬＣ、ＥｔＯＡｃにより残らなくなるまで）撹拌した
。反応混合物をＮａＨＳＯ₃（１.５ｍＬ、２Ｍ水溶液）で反応停止させそして１
時間にわたり激しく撹拌した。溶液を食塩水で希釈しそしてＥｔＯＡｃで抽出し
た。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥しそして真空中で濃縮した。生じた黄色油をＨ
ＰＬＣ（０−３％ＭｅＯＨ−クロロホルム）により精製して目標ジオールを赤橙
色粉末（９.５ｍｇ、６１％）状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１
１.０５（ｓ，１Ｈ）、９.０５（ｓ，１Ｈ）、９.０２（ｓ，１Ｈ）、７.８５（
ｓ，１Ｈ）、７.６５（ｍ，２Ｈ）、７.３９（ｍ，２Ｈ）、５.５１（ｍ，２Ｈ
）、５.３９（ｍ，２Ｈ）、４.０６（ｓ，２Ｈ）、３.２７（ｍ，１Ｈ）；２.４
０（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）４２４（Ｍ＋
Ｈ，３４）、３８１（２４）、３６２（１２）、３１０（１６）、１８５（４２
）、１２１（７２）、９３（１００）、５５（５０）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.２（Ｅｔ
ＯＡｃ−）；融点＞２３０℃。 実施例２：９,１２−メタノ−１Ｈ−ジインドロ[１,２,３−ｆｇ：３′,２′,１
′−ｋｌ]ピロロ[３,４−Ｉ][１,６]ベンゾジアゾシン−１０−カルボン酸,２,
３,９,１０,１１,１２−ヘキサヒドロ−１０−ヒドロキシ−１,３−ジオキソメ
チルエステル,(９α,１０β,１２α)の合成

【００８２】

【化２４】

【００８３】 段階１。シクロペンテン−３−オール［J. Org. Chem. 32, 1967, 4138 に記載
された処方を用いて製造された］（２.１ｇ、２５.０ミリモル）およびトリエチ
ルアミン（３.６０ｍＬ、２５.８ミリモル）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１５.０ｍＬ）中溶
液を０℃に冷却しそして塩化メタンスルホニル（１.９ｍＬ、２４.５ミリモル）
で温度が０℃より下になるような速度で処理した。室温に暖めそして２時間撹拌
した後に、反応混合物を食塩水（４０ｍＬ）で反応停止させそしてＣＨ₂Ｃｌ₂（
９０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濾過しそして真空
中で濃縮した。ＭＰＬＣ（シリカ、１５−４０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン類）によ
る精製が所望するメシラートを薄黄色液体（３.７４ｇ、９２％）状で与えた。
¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ５.７４（ｍ，２Ｈ）、５.３８（ｍ，１Ｈ）、３.
０２（ｓ，３Ｈ）２.８４−２.６３（ｍ，４Ｈ）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.４（４０％
ＥｔＯＡｃ−ヘキサン類）。

【００８４】

【化２５】

【００８５】 段階２。アグリコン［Tetrahedron Lett. 36, 1995, 8383 に記載された処方を
用いて製造された］（３.７２ｇ、８.３ミリモル）のジメチルホルムアミド（５
０ｍＬ）中溶液を６０℃−６５℃に加熱しそして炭酸セシウム（１０.９ｇ、３
３.３ミリモル）で処理した。生じた濃赤色混合物を３０分間撹拌した。次の４
時間にわたり、段階１からのメシラート（４.０４ｇ、２４.９ミリモル）を５０
０ｍｇ部分ずつ加えそして混合物を２日間にわたり６５−７０℃で撹拌した。室
温に冷却した後に、反応混合物を食塩水（３００ｍＬ）で反応停止させそしてＥ
ｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濾過しそ
して真空中で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、２５−２５％
ＣＨ₂Ｃｌ₂−ヘキサン類）による精製が所望するモノアルキル化された生成物を
橙色粉末（２.０ｇ、４７％）状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１
２.１３（ｓ，１Ｈ）、９.２１（ｄ，Ｊ＝２.６Ｈｚ，１Ｈ）、９.０９（ｄ，Ｊ
＝２.７Ｈｚ）、７.７７−６.８７（ｍ，１０Ｈ）、６.０７（ｓ，２Ｈ）、４.
７９（ｓ，２Ｈ）、３.６８（ｓ，３Ｈ）、３.２５−３.１７（ｍ，２Ｈ）、３.
０１−２.９３（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）
５１１（Ｍ＋，２０）、４１９（１４）、３９１（３０）、３７８（６４）、３
６３（５４）、２５５（８）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.５（６０％ ＥｔＯＡｃ−ヘキサ
ン類）。

【００８６】

【化２６】

【００８７】 段階３。段階２からのシクロペンテン中間体（１.６７ｇ、３.２６ミリモル）、
および４−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド（６０％水溶液、０.５５ｍＬ、５.
３１ミリモル）のテトラヒドロフラン（３９ｍＬ）中溶液をＯｓＯ₄（３.９１ｍ
Ｌ、ＴＨＦ中０.１Ｍ、０.１２当量）で処理しそして一晩撹拌した。混合物を２
.０Ｍ亜硫酸水素ナトリウム水溶液で反応停止させそして３０分間撹拌した後に
、溶液をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で抽出しそして食塩水（３００ｍＬ）で洗浄
した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濾過しそして真空中で濃縮した。フラッ
シュクロマトグラフィー（シリカ、０−１０％ＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ）による精
製が目標化合物を橙黄色固体（１.４３ｇ、８０％）状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（
ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１２.０４（ｓ，１Ｈ）、９.２３（ｄ，Ｊ＝２.７Ｈｚ，１Ｈ
）、９.１０（ｄ，Ｊ＝２.７Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０−６.８７（ｍ，１０Ｈ）、
６.１１（ｍ，１Ｈ）、４.８１（ｍ，４Ｈ）、４.７４（ｍ，２Ｈ）、３.６８（
ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）５４５（Ｍ＋，１
８）、４３８（４０）、３３８（１０）、２５５（８）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.２（５
％ ＭｅＯＨ−クロロホルム）。

【００８８】

【化２７】

【００８９】 段階４。段階３からのジオール中間体（２７７ｍｇ、０.４２ミリモル）および
トリフェニルホスフィン（３８３ｍｇ、１.４６ミリモル）のテトラヒドロフラ
ン（２６ｍＬ）中溶液をアゾジカルボン酸ジエチル（０.１６ｍＬ、０.９８ミリ
モル）で反応混合物の生じた橙黄色がその元の黄色に戻るような速度で処理した
。添加が完了した後に、混合物を２日間撹拌しそして引き続き１日間加熱還流し
た。反応混合物を食塩水（１００ｍＬ）で反応停止させそしてＥｔＯＡｃ（１６
０ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濾過しそして真空中で濃
縮した。ＭＰＬＣ（シリカ、０−２０％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）による生じた
油の精製が環化された生成物を橙色粉末（１６５ｍｇ、７５％）状で与えた。¹
Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ９.１３（ｄ，Ｊ＝２.７Ｈｚ，１Ｈ）、９.０８
（ｄ，Ｊ＝２.７Ｈｚ，１Ｈ）、８.０４−６.９６（ｍ，１０Ｈ）、５.９８（ｍ
，１Ｈ）、５.７０（ｍ，１Ｈ）、５.４１（ｍ，１Ｈ）、４.８９（ｓ，２Ｈ）
、４.２９（ｍ，１Ｈ）、３.７７（ｓ，３Ｈ）、３.２２（ｍ，１Ｈ）、２.６８
（ｍ，１Ｈ）、２.４５（ｍ，１Ｈ）、２.０５（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−Ｌ
ＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）５２７（Ｍ＋，３２）、４２０（６２）；ＴＬＣ
：Ｒ_f０.５（３０％ ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）。

【００９０】

【化２８】

【００９１】 段階５。クロロ蟻酸ピリジニウム（８９ｍｇ、０.４１ミリモル）のＣＨ₂Ｃｌ₂
（２.０ｍＬ）中溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂（１８ｍＬ）中溶液状の段階４からのアルコ
ール（１４０ｍｇ、０.２７ミリモル）で処理した。クロロ蟻酸ピリジニウムの
第二部分（４０ｍｇ）を褐色混合物に加えた。混合物を２時間撹拌した後に、溶
液をシリカゲルの短いパッドを通して濾過しそして真空中で濃縮した。フラッシ
ュクロマトグラフィー（シリカ、８０−１００％ＣＨ₂Ｃｌ₂−ヘキサン類）によ
る精製が目標ケトンを黄色粉末（１０８ｍｇ、７７％）状で与えた。¹Ｈ ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ９.０５（ｄ，Ｊ＝２.６Ｈｚ，１Ｈ）、９.０３（ｄ，Ｊ
＝２.４Ｈｚ，１Ｈ）、７.９８−６.８６（ｍ，１０Ｈ）、６.１４（ｍ，１Ｈ）
、５.５８（ｍ，１Ｈ）、４.８２（ｓ，２Ｈ）、３.６８（ｓ，３Ｈ）、３.４４
（ｍ，１Ｈ）、３.２２（ｍ，１Ｈ）、３.００（ｍ，１Ｈ）、２.５０（ｍ，１
Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）５２５（Ｍ＋，１４）、
４１８（３０）、２８１（３４）、１８５（１００）、１４７（３８）、１２１
（６６）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.６（２０％ ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）。

【００９２】

【化２９】

【００９３】 段階６。トリス(メチルチオ)メタン（０.１６ｍＬ、１.１５ミリモル）のテトラ
ヒドロフラン（３.０ｍＬ）中溶液を−７８℃に冷却しそしてｎ−ブチルリチウ
ム（０.５９ｍＬ、１.６Ｍ、０.９４ミリモル）で処理した。２０分間撹拌した
後に、段階５からのケトン（１９９ｍｇ、０.３８ミリモル）のテトラヒドロフ
ラン（６.０ｍＬ）中溶液を反応混合物に加えそして２時間撹拌した。飽和塩化
アンモニウム溶液（１０ｍＬ）で反応停止させそして室温に暖めた後に、反応混
合物を水（１０ｍＬ）で希釈しそしてＥｔＯＡｃ（９０ｍＬ）で抽出した。有機
層を分離し、Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥しそして真空中で濃縮した。生じた油のフラッ
シュクロマトグラフィー（シリカ、２０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン類）による精製
が付加生成物を黄色固体（６７ｍｇ、２６％）状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆）δ９.０６（ｍ，２Ｈ）、８.１７−６.８７（ｍ，１０Ｈ）、５.７
４（ｍ，１Ｈ）、５.０５（ｓ，１Ｈ）、４.８５（ｓ，２Ｈ）、３.６９（ｓ，
３Ｈ）、３.０１（ｍ，２Ｈ）、２.１７（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭ
Ｓ）ｍ／ｚ（相対強度）６７９（Ｍ＋，１２）、５７２（２２）、４８８（２４
）、３１０（１００）、２８４（８６）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.８（５０％ ＥｔＯＡ
ｃ−ヘキサン類）。

【００９４】

【化３０】

【００９５】 段階７。段階６からのチオカルボン酸オルトエステル中間体（５０ｍｇ、０.０
７４ミリモル）のテトラヒドロフラン（５.０ｍＬ）中溶液をメタノール（１２.
０ｍＬ）、水（１.０ｍＬ）、酸化水銀（II）（８４ｍｇ、０.３９ミリモル）お
よび塩化水銀（II）（２３６ｍｇ、０.８７ミリモル）で処理した。反応混合物
を加熱還流した。溶液を食塩水（３０ｍＬ）で希釈しそしてＣＨ₂Ｃｌ₂（６０ｍ
Ｌ）で抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濾過しそして真空中で濃縮し
た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、０−３％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂ ）による精製が目標エステルを橙色固体（１８ｍｇ、４２％）状で与えた。¹Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ９.２５（ｍ，２Ｈ）、７.６０−７.４０（ｍ，８Ｈ）
、６.８８−６.８５（ｍ，２Ｈ）、５.６１（ｍ，１Ｈ）、５.４０（ｍ，１Ｈ）
、４.９３（ｓ，２Ｈ）、４.０３（ｓ，３Ｈ）、３.７７（ｓ，３Ｈ）、３.２１
（ｍ，２Ｈ）、２.８８（ｍ，１Ｈ）、２.７７（ｍ，１Ｈ）、１.９５（ｍ，１
Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）５８５（Ｍ＋，８）、４
７８（８）、２７７（１１）、１８５（１００）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.１５（５０％
ＥｔＯＡｃ−ヘキサン類）。

【００９６】

【化３１】

【００９７】 段階８。実施例３の製造。段階７からのエステル中間体（１８ｍｇ、０.０３ミ
リモル）の溶液をアニソール（０.３ｍＬ）中に１５分間にわたり溶解させそし
て引き続きトリフルオロ酢酸（２.７ｍＬ）で処理した。反応混合物を２時間に
わたり（出発物質がＴＬＣ、５％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂により残らなくなるま
で）加熱還流した。溶液を真空中で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（
シリカ、１０−２０％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）による精製が目標イミドを黄色
固体（１１.０ｍｇ、７７％）状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１
１.０４（ｓ，１Ｈ）、９.０３（ｍ，２Ｈ）、７.９０−７.３３（ｍ，６Ｈ）、
５.８１（ｍ，１Ｈ）、５.７１（ｍ，１Ｈ）、５.５４（ｓ，１Ｈ）、３.８３（
ｓ，３Ｈ）、３.０８（ｍ，２Ｈ）、２.７６（ｍ，１Ｈ）、１.７１（ｍ，１Ｈ
）；¹³ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１７５.３（Ｃ＝Ｏ）、１７１（Ｃ＝Ｏイミ
ド）、１７０（Ｃ＝Ｏイミド）、１４２.０、１４０.０、１２９.７、１２８.４
、１２６.８、１２６.７、１２４.４、１２１.３、１２１.３、１２１.２、１２
０.４、１２０.２、１１９.６、１１９.５、１１９.４、１１５.３、１１０.４
、１０９.７、８１.１（ＣＯＨ）、６１.７（ＣＨＮ）、５５.２（ＣＨＮ）、５
２.０７（ＯＣＨ₃）、４５.３（ＣＨ₂）、３９.０（ＣＨ₂）；ＭＳ（ＦＡＢ−Ｌ
ＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）４６６（Ｍ＋Ｈ，１４）、４２３（６）、１８５
（２８）、９３（１００）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.２（５％ ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂
）；融点＞２３０℃。 実施例３：９,１２−メタノ−１Ｈ−ジインドロ[１,２,３−ｆｇ：３′,２′,１
′−ｋｌ]ピロロ[３,４−Ｉ][１,６]ベンゾジアゾシン−１,３,１０(２Ｈ,９Ｈ)
−トロン,１１,１２−ジヒドロの合成

【００９８】

【化３２】

【００９９】 段階１。実施例４の製造。実施例２の段階５からのケトン（１５ｍｇ、０.０２
９ミリモル）の溶液をアニソール（０.３ｍＬ）中に１５分間にわたり溶解させ
そして引き続きトリフルオロ酢酸（２.７ｍＬ）で処理した。混合物を還流温度
に出発物質がＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）により検出されなくなる
まで加熱還流した。溶液を減圧下で濃縮しそしてフラッシュクロマトグラフィー
（シリカ、０−１０％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）により精製して目標ケトン（８
.９ｍｇ、７７％）を黄色固体状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ９.１６
（ｍ，２Ｈ）、７.６８−７.２４（ｍ，７Ｈ）、５.９０（ｍ，１Ｈ）、５.２３
（ｍ，１Ｈ）、３.３２（ｍ，１Ｈ）、３.１４−２.９３（ｍ，２Ｈ）、２.５２
（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）４０５（Ｍ＋Ｈ
，１２）、３５４（１２）、３２４（１８）、２２４（１８）、１９１（５２）
；ＴＬＣ：Ｒ_f０.４（１０％ ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）；融点＞２２５℃。 実施例４：９,１２−メタノ−１Ｈ−ジインドロ[１,２,３−ｆｇ：３′,２′,１
′−ｋｌ]ピロロ[３,４−Ｉ][１,６]ベンゾジアゾシン−１０−カルボキサミド,
２,３,９,１０,１１,１２−ヘキサヒドロ−１０−ヒドロキシ−Ｎ−メチル−１,
３−ジオキソ−(９α,１０β,１２α)の合成

【０１００】

【化３３】

【０１０１】 段階１。実施例２の段階６からのチオカルボン酸オルトエステル中間体（２８ｍ
ｇ、０.０４ミリモル）の２０％Ｈ₂Ｏ−テトラヒドロフラン（１.３ｍＬ）中溶
液を酸化水銀（II）（４５ｍｇ、０.２１ミリモル）および三弗化ホウ素ジエチ
ルエーテレート（０.０７３ｍＬ、０.５９ミリモル）で処理した。反応混合物を
室温で２時間にわたり［１つだけの大きな点がＴＬＣ（２：３：９５酢酸−メタ
ノール−ＣＨ₂Ｃｌ₂）により見られるまで］撹拌し、水（１０ｍＬ）で希釈しそ
してＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濾過
しそして真空中で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、０−１０
％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）による精製が目標酸を橙色固体（７６％、１８.０
ｍｇ）状で与えた。ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）５７１（Ｍ
＋，８）、４６４（１４）、３８１（３２）、３３０（８８）、１８１（１００
）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.３（２：３：９５酢酸−メタノール−ＣＨ₂Ｃｌ₂）。

【０１０２】

【化３４】

【０１０３】 段階２。段階１からのカルボン酸（２０ｍｇ、０.０３４ミリモル）のテトラヒ
ドロフラン（２.５ｍＬ）中溶液を０℃に冷却しそして１,１′−カルボニルジイ
ミダゾール（６０ｍｇ、０.３７ミリモル）で処理しそして１０分間撹拌した。
約５０％メチルアミン−テトラヒドロフランの溶液（２ｍＬ）を反応に急速添加
した。５分後に、出発物質はＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）により観
察されずそして反応混合物を飽和クエン酸溶液（３.０ｍＬ）を用いて反応停止
させた。室温に暖めた後に、溶液を食塩水（１５ｍＬ）で希釈しそしてＥｔＯＡ
ｃ（２０ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濾過しそして真空
中で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、０−２０％ＥｔＯＡｃ
−ＣＨ₂Ｃｌ₂）による精製が目標メチルアミド（７.０ｍｇ、３５％）を与えた
。ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）ｍ／ｚ（相対強度）５８４（Ｍ＋，６）、４７７
（８）、２５３（８）、１６９（８４）、１３２（３０）、８５（１００）；Ｔ
ＬＣ：Ｒ_f０.３（２０％ ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）。

【０１０４】

【化３５】

【０１０５】 段階３。実施例５の製造。段階２からの保護されたメチルアミド（７.０ｍｇ、
０.０１ミリモル）の溶液をアニソール（０.５ｍＬ）中に１０分間にわたり溶解
させそして引き続きトリフルオロ酢酸（４.５ｍＬ）で処理した。混合物を８時
間にわたり加熱還流した［出発物質はＴＬＣ（５０％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）
により観察されなかった］。混合物を真空中で濃縮しそしてフラッシュクロマト
グラフィー（シリカ、１０−２０％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）により精製してメ
チルアミドを橙色粉末（３.４ｍｇ、６１％）状で与えた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳ
Ｏ−ｄ₆）δ１１.０３（ｓ，１Ｈ）、９.０４（ｍ，２Ｈ）、７.９４−７.３２
（ｍ，７Ｈ）、５.８１（ｍ，１Ｈ）、５.５９（ｓ，１Ｈ）、５.４１（１Ｈ）
、３.２５−３.０５（ｍ，２Ｈ）、２.６６（ｄ，Ｊ＝１.５Ｈｚ，３Ｈ）、２.
６４（ｍ，１Ｈ）、１.７４（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）ｍ／ｚ
（相対強度）４６５（Ｍ＋Ｈ，１４）、３６１（８２）、３４６（３８）、３２
２（１００）、３１５（３８）；ＴＬＣ：Ｒ_f０.４（５０％ ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂ Ｃｌ₂）；融点＞２３０℃。 実施例５：抑制剤検定用のキナーゼ類の製造および分析 キナーゼ類の製造： ＰＫＣの製造：ＰＫＣをラットの脳から Woodgett J.R. and Hunter T ., J.
Biol. Chem 262, 4836-4843 (1987) の方法を用いて精製した。

【０１０６】 ｃＡＭＰ−依存性キナーゼ類の製造：牛の心臓ＰＫＡの触媒サブユニットはシ
グマ(Sigma)から商業的に得られた。

【０１０７】 ｃｄｃ２キナーゼの製造：ヒトｃｄｃ２キナーゼは Marshak D.M. et al., J.
Cell Biochem., 45, 391-400 (1991) に従いノコダゾールで分裂停止させたＨ
ｅＬａ細胞から製造された。

【０１０８】 ＥＲＫ２の製造：Ｎ−末端ヒスチジン（ｈｉｓ）標識を有する組み換えヒトＥ
ＲＫ２は下記の通りにして製造された：ＥＲＫ２ｃＤＮＡクローンを公表された
ヒト配列［Gonzales F.A. et al, FEBS Lett. 304, 170-178 (1992)］に合致す
るプライマーを有するＰＣＲによりヒト前頭葉ライブラリーから増殖させた。ヒ
スチジン標識を部位−特異的突然変異誘発により導入した。ｃＤＮＡをｐＥＴ−
１４ｂ（ノバゲン(Novagen)）ベクター中でクローン化させそして大腸菌溶原菌
株Ｂ１２１ｐＬｙｓＳにトランスフェクションした。単独コロニー形質転換細胞
をｐＬｙｓＳを維持するための３５ｍｇ／ｍｌのクロランフェニコール(chloram
phenicol)および５０ｍｇ／ｍｌのカナマイシンを含有するＦＢ培地の中で０.６
のＯ.Ｄ.₆₀まで成長させた。培養を次に０.４ｍＭ ＩＰＴＧを用いて４時間にわ
たり誘発させた。発現したＥＲＫ２蛋白質を次に１０％ＳＤＳ ＰＡＧＥ上でク
ーマーブルー染色および抗−ＥＲＫウェスタンブロット法の両者により分析した
。０.５−１からの細菌粒子［培養物を−７８℃で凍結−解凍しそして超音波に
より３分間にわたり１５ｍｌのＮｉ²⁺カラム緩衝液（２０ｍＭ トリス ＨＣＬ
ｐＨ７.９、０.５Ｍ ＮａＣｌ、５ｍＭイミダゾール、ノバゲン）中で均質化し
た。３５,０００×ｇにおける３０分間にわたる遠心後に、上澄み液を１ｍｌの
Ｎｉ²⁺充填樹脂（ノバゲン）上に充填した。６０ｍＭイミダゾールを含有するカ
ラム緩衝液で洗浄した後にＥＲＫ２蛋白質を１Ｍイミダゾールを含有するカラム
緩衝液で溶離した。画分を含有するＥＲＫ２をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより同定しそ
してモノＱＡ−緩衝液（２５ｍＭトリスＨＣＬ、ｐＨ７.５ ２５ｍＭ ＮａＣｌ
、１ｍＭ ＥＤＴＡ）中に透析した。透析物をＨＲ５／５モノＱＦＰＬＣカラム
（ファーマシア(Farmacia)）上に充填しそして３０ｍｌ勾配でモノＱＡ−緩衝液
から２５０ｍＭ ＮａＣｌを含有する同一緩衝液（モノＱＢ−緩衝液）まで１ｍ
ｌ／分で溶離して３０画分を集めた。画分＃１９−２０および＃２７−２８は典
型的には、ウェスタンブロット法により同定されたように、２種のＥＲＫ２配座
異性体を含有していた。最初の画分だけがＨＲ５／５フェニルスペローズ(Pheny
lsuperose)ＦＰＬＣ（ファーマシア）に適用されそして１５ｍｌ勾配で２５ｍＭ
トリス、ｐＨ７.５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴか
ら２５ｍＭ ＮａＣｌおよび６０％エチレングリコールを含有する同一緩衝液ま
で０.５ｍｌ／分から勾配の終わりの０.１ｍｌ／分に減少する流速で溶離された
。均質なＥＲＫ２は典型的には１３−１４ｍｌ後に溶離した。

【０１０９】 ＥＲＫ２から活性ＰＫ４０形態への活性化のためには約１ｍｇの精製したヒス
チジン標識のついたＥＲＫ２を Roder H.M. et al., J. Neurochem. 64, 2203-2
212 (1995) に従い牛の脳から製造された２５ｍｌのＣＭ−セファロース(Sephar
os e)溶離液画分と混合し、２ｍＭ Ｍｇ²⁺／０.５ｍＭ ＡＴＰに調節しそして３
７℃で２時間温置した。混合物を各々１リットルのＮｉ²⁺カラム結合緩衝液（２
０ｍＭトリス、ｐＨ２.９、５００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭイミダゾール）の中で
２回透析して痕跡量のＤＴＴを除去しそして０.３ｍＬのＮｉ²⁺充填カラム（ノ
バゲン）上に２５ｍＬ／時で充填した。１０ｍＬのカラム緩衝液およびその後に
４０ｍＭイミダゾールを含有する４ｍＬカラム緩衝液で洗浄した後に均質な活性
化したＰＫ４０^erk2を１Ｍイミダゾールを含有する４ｍＬのカラム緩衝液で溶離
した。生成物を１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.０、１ｍＭ ＥＤＴＡの中で充分
透析してイミダゾールおよび痕跡量のＮｉ²⁺を除去し、そして最後に１０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.０、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴの中で透析した。 キナーゼ活性に関する検定： ＰＫ４０^erk2を５０μｌの２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.０、１ｍＭ ＭｇＣ
ｌ₂、１ｍＭ ＤＴＴ、０.２５ｍＭ ＡＴＰ、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡの中で１５−
３０ｎｇのＰＫ４０^erk2および基質としての０.１ｍｇ／ｍＬのミエリン塩基性
蛋白質（シグマ(Sigma )）を用いて検定した。

【０１１０】 ＰＫＣを５０μｌの２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.０、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂、２
ｍＭ ＣａＣｌ₂、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、０.２５ｍＭ ＡＴＰ、０.
２ｍｇ／ｍＬのホスファチジルセリンの中で、２０ｇのＰＫＣおよび基質として
の０.０８ｍｇ／ｍＬのヒストンIII−Ｓを用いて検定した。

【０１１１】 ＰＫＡの触媒サブユニットを５０μｌの２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.０、１
ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴの中で、７０ｎｇのＰＫＡお
よび基質としての０.１ｍｇ／ｍＬのヒト組み換えタウ蛋白質を用いて検定した
。

【０１１２】 ｃｄｃ２キナーゼを５０μｌの２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.０、１ｍＭ Ｍ
ｇ²⁺、０.２５ｍＭ ＡＴＰ（１５０−３００ｃｐｍ／ｐモル）、１ｍＭ ＤＴＴ
の中で０.５ｎｇのｃｄｃ２キナーゼ、基質としての５μｇのヒト組み換えタウ
、および担体としての０.１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡを用いて検定した。 キナーゼ抑制剤の効力の測定 酵素、基質および抑制剤を０.２５ｍＭ γ³²Ｐ−ＡＴＰとの反応を開始する前
に５−１０分間にわたり４℃において２％の最終濃度のＤＳＭＯを含有する検定
緩衝液の中で予備温置した。サンプルを３７℃で３０分間にわたり温置しそして
反応を１０％トリクロロ酢酸／２％ピロ燐酸ナトリウム（ＴＣＡ／ＰＰＡ）を用
いて終結させ、次に細胞回収器付きのグラスファイバーフィルター（タイプＡ）
（トンテック(Tomtec)）の上で濾過した。フィルターマットを背景放射能が除か
れるまでＴＣＡ／ＰＰＡで数時間にわたり２回洗浄した。沈澱数をフィルターマ
ット上でマイクロベータ・シンチレーション・カウンター・システム(microbeta
scintilation counter system)（ワラック−ファーマシナ(Wa llac-Pharmacia)
）を用いて直接定量化した。抑制剤データを曲線のあてはめにかけそしてＩＣ₅₀ 値をこれらの曲線からグラフィット(GraphIt)プログラムを用いて計算した。実施例６：ＳＹ５Ｙ細胞モデル中で抑制剤がＡＤ−類似タウ高燐酸化を妨げる効
力の測定 インビトロで、そして多分インビボでも、タウは複数のキナーゼ類のための基
質である。タウのＡＤ−類似高燐酸化を特異的に妨害する抑制剤を評価するため
の主な問題はモデルシステムにおいてタウの正常および異常な燐酸化の間を明白
に区別することである。細胞系統ＳＹ５Ｙでは、ヒト起源であるためヒトＡＤ脳
からのもつれと関連するタウを用いて比較を行うことができる。胎児の脳内のよ
うに、ＳＹ５Ｙ細胞はタウの６つのスプライス異性体の１つだけを発現し、タウ
燐酸化状態の検査を簡素化する。 方法 ＳＫＮＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞をフィブロネクチンでコーテイングされた６ウェル
（３０ｍｍ²）培養皿（バイオコート(Biocoat)^TM、コラボラティブ・バイオメデ
ィカル・プロダクツ・インコーポレーテッド(Collaborative Biomedical Produc
ts, Inc.)の上に置きそして１５％の熱で不活性化された牛血清（ＪＲＨバイオ
サイエンス(JRH Bioscience)）、０.１ｍＭ非−必須アミノ酸溶液、２ｍＭグル
タミン酸およびペン／ストレップ／フンジゾン(pen/strep/fungizone)（ギブコ
ＢＲＬライフ・テクノロジース・インコーポレーテッド(GibcoBRL Life Technno
logies, Inc.)が補充された５ｍＬの５０％Ｄ−ＭＥＭ／５０％Ｆ−１２養分混
合物（Ｈａｍ）の中で成長させて集密させた。細胞培養培地は４８時間毎に交換
した。

【０１１３】 薬品試験のために、細胞を常法通りに１ｍＬ（３０ｍｍ²）の中で６０分間に
わたり抑制剤で３０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭ、１ｍＭ、３ｍＭおよび１０
ｍＭの濃度で予備処理した。化合物原料は全てＤＭＳＯ中１０ｍＭでありそして
ＤＭＳＯ中で希釈が行われた。細胞を次に１μＭオカダ酸（アンモニウム塩、Ｌ
Ｃラボラトリーズ(LC Laboratories)、ＤＭＳＯ中に１ｍＭで溶解された）で９
０分間にわたり処理した。対照を包含する全ての実験は０.５〜１％の間の最終
濃度のＤＭＳＯを含有した。

【０１１４】 細胞を３０ｍｍ²板から取り出しそして１ｍＬの氷冷ＰＢＳの中に静かな粉砕
により懸濁させ、微小遠心管(microcentrifuge tubes)の中に移しそして１４,０
００×ｇにおいて１２秒間にわたり沈澱させた。上澄み液を除去しそして細胞を
２５０μｌの冷たい均質化緩衝液（５０ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５.８、５ｍＭピロ燐
酸ナトリウム、５０ｍＭ燐酸ｐ−ニトロフェニル、１μＭオカダ酸、２ｍＭオル
トバナジン酸Ｎａ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、１０
∧グリセロール、１０μＭロイペプチン、１μＭペプスタチン、１ｍｇ／ｍｌア
プロチニン、１０μＭキモスタチン、１ｍＭ ＰＭＳＦ、および１％トリトン(TR
ITON)^TM×１００）の中で溶解させそして短時間撹拌して溶解を助けた。細胞片
を遠心により１４,０００×ｇにおいて５分間にわたり４℃で除去しそして細胞
上澄み液を以下に記載されている抗−ＥＲＫ２抗−タウウェスタンブロット法に
より分析した。

【０１１５】 ２５ｍＬの全細胞溶解物を１０％トリス−グリシンポリアクリルアミドゲル（
ノベックス(Novex)、１.５ｍｍ×１０ウェル）上に１００ボルトで２.５時間に
わたり流しそしてニトロセルロース（ノベックス）上で一晩にわたり２３ボルト
または１.５時間にわたり１００Ｖにおいて転移緩衝液(transfer buffer)［Towb
in et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 4350-4354 (1979)］の中で４℃に
おいてウェスタンブロットした。ブロットをＥＲＫ２およびホスホチロシン免疫
反応性に関して抗−ＥＲＫ１＋２（Ｚ０３３、ザイムド・ラボラトリーズ・イン
コーポレーテッド(Zymed Laboratories, Inc.)、１：５,０００）および抗−ホ
スホチロシン（４Ｇ１０、アップステート・バイオテクノロジー・インコーポレ
ーテッド(Upstate Biotechnology Inc.)、１：１,０００）ｍＡｂｓを用いて分
析した。ブロットをまた燐酸化−敏感性タウ免疫−反応性に関してｍＡｂ Ｔａ
ｕ−１（ベーリンゲル・マンハイム(Boehringer Mannheim)、１：５,０００）を
用いてそして燐酸化依存性ｍＡｂ ＡＴ８をＦＨＦ−タウ（バイオソース・イン
ターナショナル(Biosource International)、１：２００）に対して分析した。
ブロットを１６時間にわたり３７℃で５ｍＬの５０ｍＭトリス−ＨＣＩ（ｐＨ８
.５）中の１００単位／ｍＬのアルカリ性ホスファターゼ（ギブコ(Gibco)ＢＲＬ
）、０.１ｍＭ ＥＤＴＡで処理した後に全Ｔａｕ集団をＴａｕ−１免疫ブロット
法により検出した。全てのブロットをＥＣＬ（促進化学蛍光）ウェスタンブロッ
ト処方（アメルシャム・ライフ・サイエンス(Amersham Life Science)）を使用
してホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ−結合された羊の抗−マウス二次抗
体を用いて現像しそしてコダック(Kodak)Ｘ−ＯＭＡＴ ＡＲ科学用映写フィルム
上で分析した。フィルムをアドベ・フォトショップ(Adobe Photoshop)の中で走
査させそしてＮＩＨイメージ(NIH Image)１.４４の中に入れ、そこで濃度計分析
を行った。細胞抽出物中の濃度計で測定されたｍＡｂＴａｕ−１免疫反応活性を
ブロット上での脱燐酸化後のＴａｕ−１反応に標準化することによりタウ燐酸化
における変化を評価した。脱燐酸化の前後のＴａｕ−１の反応性の比はオカダ酸
で処理されなかった対照細胞から得られた比（１００％）と比べた％で示された
。新生児ラットの脳から単離された蛋白質が幾つかの実験で比較用に使用された
。 結果 インビトロキナーゼ検定で試験したＣIIおよびＣIIIを包含する本発明の化合
物の効力は細胞中でのタウ高燐酸化のそれらの抑制活性と良く相関していた。さ
らに、化合物の各々はＥＲＫ２抑制とタウ高燐酸化との間の相関性も示した。

【０１１６】 インビトロでのＰＫ４０活性の抑制の効力効力と、ＳＹ５Ｙ細胞中のＯＡ−誘
発されたＥＲＫ２のタウ燐酸化との相関性。ＥＲＫ２燐酸化をＥＲＫ２ウェスタ
ン−ブロット（例えば図１の）から濃度計で測定された低移動度／全ＥＲＫ２の
比として定量化した。タウ高燐酸化はブロットのホスファターゼ処理によるエピ
トープの脱マスキング(unmasking)後の濃度計で測定された標準化されたＴａｕ
−１免疫活性対全Ｔａｕ−１反応性として示された。

【０１１７】 図２では、未処理のＳＹ５Ｙ細胞からのタウが完全な高／脱燐酸化状態（イン
ビトロでのそれぞれＰＫ４０（ＥＲＫ２）およびホスファターゼ２Ｂを用いる処
理により得られる）並びにＡＤ脳からのＰＨＦ−タウに対してＴａｕ−１免疫反
応性および電気泳動移動度に関して比較される。タウ蛋白質を組織から単離され
た状態でＰＰ２Ｂカルシネウリン(calcineurin)で徹底的に脱燐酸化されたまた
はインビトロでＰＫ４０で高燐酸化されたタウと比べて分析された。ウェスタン
−ブロットはｍＡｂ Ｔａｕ−１（図２Ａ、Ｂ、上部パネル）またはＡＴ８（図
２Ｃ、レーン４−６）で染色された。相対的なゲル移動度および充填量はブロッ
ト上のホスファターゼ処理によるエピトープの完全な脱マスキング後にＴａｕ−
１により可視化された（図２Ａ、Ｂ、下部パネル、図２Ｃ、レーン１−３）。胎
児タウの燐酸化はＳＹ５Ｙタウと同様であるようである。いずれの場合にも、Ｐ
Ｋ４０による高燐酸化は残存Ｔａｕ−１反応性を完全に減少させそして小さい追
加移動度シフトを誘発する。これらの基準によりインビトロでＰＫ４０により高
燐酸化されたＳＹ５Ｙタウはオカダ酸導入後にその場で高燐酸化されたタウおよ
びＰＨＦ−タウとは区別できない。ＰＨＦ−タウの可溶性画分を精製されたＰＨ
Ｆから水またはＳＤＳにより抽出した。

【０１１８】 図２はＳＹ５Ｙ細胞では利用可能性のあるＴａｕ−１反応性のほとんどは燐酸
化によりすでにマスキングされておりそしてタウの電気泳動移動度は最大近くま
で阻害される。図２の基準により、ＳＹ５Ｙ細胞中のタウの燐酸化状態は新生児
ラットの脳内のタウとは実質的に異なるようにはみえない（図２Ｃ）。これは多
分成体の脳からのタウにも同様に適用され、その理由はタウの単離に際して死後
人為結果を回避する最新のデータは胎児の燐酸化状態は成体状態より高いという
これまでになされた説に反対する結論を出したためである。

【０１１９】 インビトロでのＰＫ４０（ＥＲＫ２）による高燐酸化はＳＹ５Ｙ細胞から単離
された状態でタウ性質における小さいが検出可能な変化を誘発する。この状態で
のみタウの電気泳動移動度はもつれから抽出された対応する病理学的に燐酸化さ
れたスプライスイソ形態のゲル移動度に正確に一致する（図２Ｃ）。細胞中では
、オカダ酸を用いる蛋白質ホスファターゼ２Ａの抑制により同じ異常な燐酸化状
態を誘発させることができる。 実施例７： 方法 ＰＰ２Ｂによる予めの脱燐酸化ありまたはなしでのＰＫ４０によりインビトロ
で高燐酸化された新生児ラットタウ。等量の精製された３２Ｐ−高燐酸化タウサ
ンプルをトリプシンで消化させ、そしてペプチド類を２Ｄ電気泳動により分析し
た。結果は図３に示されている。ペプチド類の標識つけは計数することにより定
量化された（各点に関して示されたｃｐｍ）。全ｃｐｍの比較は燐酸化が利用可
能なＥＲＫ２部位の約１／５だけを遊離させたことを示した。 結果 ここに示されたデータで観察された免疫化学およびゲル移動度性質における小
さい変化が有用であることを示すために、新生児ラット細胞中のタウの脱燐酸化
／高燐酸化度を引き起こす大きなＡＤ−類似高燐酸化効果を評価するための関連
モデルを観察した。インビトロおよび細胞中の異常なＡＤ−類似燐酸化に関連す
るタウの小さい変化は燐酸化状態における小さい変化を必ずしも反映するもので
はない。図３に示されているように、予備燐酸化されていないＰＫ４０（ＥＲＫ
２）による胎児／新生児ラットの脳からのタウの高燐酸化度はタウが高燐酸化前
に完全に脱燐酸化される時に観察された脱燐酸化度より約２０％ほど低い。さら
に、この比較研究におけるタウの二次元ホスホペプチドマップは定量的に区別で
きない（図３）。 実施例８：ＰＫ４０の抑制剤がＡＤ−類似高燐酸化を妨げる。 方法 化合物ＣIIIはＥＲＫ２燐酸化およびタウ高燐酸化を関連のある方式で妨げる
（図４）。対照細胞（レーンＣ）と比べて、ＥＲＫ２の小さいゲル移動度シフト
（レーンＯＡ）およびＥＲＫ２の調節Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒモチーフ（抗−活
性ＥＲＫ２）の二重燐酸化に敏感なｍＡｂとの反応性の誘発により示されるよう
に、１μＭオカダ酸はＥＲＫ２燐酸化／活性化を誘発した。両方の効果は＞１μ
Ｍの化合物ＣIIIにより妨げられた（約１μＭにおけるＩＣ₅₀、１０μＭにおい
て完全）。ＥＲＫ２に対する効果と非常に相関性のあるものは、Ｔａｕ−１反応
性の除去およびＡＤ−類似タウに典型的な小さいゲル移動度シフトの妨害により
追跡されたように、ＯＡが誘発するタウ燐酸化の妨害であった。１０μＭにおい
ては、完全に分裂停止されたＥＲＫ２活性化では、タウ燐酸化状態（ホスホイソ
形態パターンを包含する）は対照細胞中の正常な燐酸化と比べて未変化のままで
あった。

【０１２０】 好ましい化合物ＣIIIによるタウ高燐酸化の妨害（図１）。オカダ酸は１μＭ
においてＡＤのＰＨＦ−タウ中のようにＴａｕ−１エピトープ（上部パネル）の
完全な除去を誘発した。ヒトＰＨＦ−タウに対応する電気泳動移動度におけるシ
フトはマスキングされたＴａｕ−１エピトープを回収するための二重ウェスタン
ブロット（下部パネル）のホスファターゼ処理により可視化された。化合物ＣII
Iは投与量依存方法でタウ高燐酸化を妨げる。全有効投与量（＞１μＭ）におい
て、タウは対照細胞（レーンＣ）中の正常状態と同様に燐酸化状態で残った。オ
カダ酸により処理されなかった正常細胞中のタウはかなりの程度まで燐酸化され
、この正常な燐酸化はＣIIIにより明らかに影響を受けなかった。燐酸化後のＴ
ａｕ−１信号に対する濃度計で測定されたＴａｕ−１信号の比である全タウ集団
の標準化測定値がＩＣ₅₀値を測定するための定量的分析のための基準を生じた。 結果 ＣIIIにより例示されるＰＫ４０（ＥＲＫ２）の抑制剤はＳＹ５Ｙ細胞モデル
システム中の異常なＡＤ−類似高燐酸化を妨害可能であることを実際に証明する
。図１はＣIIIの増加する濃度がタウのオカダ酸で誘発された高燐酸化を妨げる
ことを示す。この保護効果は同一細胞中のＥＲＫ２の活性化用燐酸化の妨害と非
常に相関性がある。ＥＲＫ２に結合することにより、ＣIIIはＥＲＫ２の活性並
びに（自己燐酸化によるまたは別のキナーゼによる）その活性化の両者を抑制す
ることができ、両者は細胞タウ高燐酸化活性の排除に本質的に影響を与える。さ
らに、タウの正常な細胞燐酸化状態は同一濃度範囲内でＣIIIにより影響を受け
ず、細胞選択性の事例を示している（図示されていない）。実施例９：抑制剤がラット海馬脳薄片中のＡＤ−類似タウ高燐酸化を妨げる効力
の測定 方法 成体の雄のロング−エバンス(Long-Evans)ラットをＣＯ₂麻酔にかけそして斬
首により犠牲にした。脳を急いで（＜２分間）除去しそして海馬全体をブラント
スパチュラを用いて解剖した。海馬をマックイルウェイン(McIlwain)組織切断器
を用いて４５０ｍＭ薄片に切断しそして下記のｍＭによる組成：ＮａＣｌ、１２
４；ＫＣｌ、３.３３；ＣａＣｌ₂、０.０１；ＫＨ₂ＰＯ₄、１.２５；ＭｇＳＯ₄
、１.３３；ｎＡｈｃｏ₃、２５.７；Ｄ−グルコース、１０；ＨＥＰＥＳ、２０
の氷冷低Ｃａ²⁺クレブス−炭酸水素塩緩衝液の中に入れた。薄片を分離しそして
１つの管当たり５−８個を５ｍＬの低Ｃａ²⁺緩衝液の中に入れそして少なくとも
３０分間にわたり３３−３４℃において水飽和酸素化（９５％Ｏ₂、５％ＣＯ₂）
しながら温置した。約３０分後に、溶液を生理的水準のＣａ²⁺（１.３ｍＭ）を
含有する緩衝液で交換しそしてさらに３０分間にわたり温置した。

【０１２１】 少なくとも１時間の全平衡期間後に、薄片を賦形剤または抑制剤で３０ｎＭ〜
１０μＭの範囲の濃度において１時間にわたり予備処理し、そして次に賦形剤ま
たはオカダ酸のいずれかに９０分間にわたり露呈した。処理後に、緩衝液を除去
しそして薄片を５００μｌの均質化緩衝液（１００ｍＭ ＫＨ₂ＰＯ₄、ｐＨ６.５
、２ｍＭ ＥＧＴＡ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、１μＭオカダ酸並びに下記のプロテアー
ゼ抑制剤：アプロチニン（１０μｇ／ｍｌ）、ロイペプチン（１０μＭ）、キモ
スタチン（４０μＭ）、ＰＭＳＦ（１００μＭ）およびペプスタチン（６μｇ／
ｍｌ））の中で１０−２０秒間にわたり超音波処理した。

【０１２２】 超音波処理後に、サンプルを１６,０００×ｇで３０分間にわたり遠心しそし
て上澄み液を除去した。上澄み液の１００℃における５分間にわたる沸騰後に、
蛋白質の濃度をＢＣＡ検定（ピエース(Pierce)）によりＢＳＡを標準として使用
して測定しそしてサンプルを蛋白質濃度と等しくなるように標準化した。

【０１２３】 熱安定性上澄み液のアリコートを１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で分離しそしてＳ
Ｙ５Ｙ試験に関して記載されているような燐酸化−敏感性タウｍＡｂ Ｔａｕ−
１およびＰＨＦ−Ｔａｕ ｍＡｂ ＡＴ８を用いてウェスタンブロットした。ブロ
ットをＥＣＬキット（アメルシャム・ライフ・サイエンス(Amersham Life Scien
ce)）により現像した。ＡＴ８免疫活性をコダックＸ０ＯＭＡＴ ＡＲフィルム上
でバイオラド映写濃度計ＧＳ６７０を用いて定量化すると、最強信号は１２のＯ
.Ｄ.を越えなかった。 結果 成体ラットから単離されたての海馬脳薄片を同様な実験用に脳にさらに関連し
た条件下で使用した（図５）。ここでも、オカダ酸はＡＤ−類似タウ高燐酸化を
誘発したが、ＣIIはそれをＳＹ５Ｙ細胞中と同じＩＣ₅₀で妨げた（０.１μＭ）
。

【０１２４】 オカダ酸は新規な燐酸化依存性ｍＡｂ ＡＰ４２２との反応性を誘発した。こ
の応答はより一般的なｍＡｂ ＡＴ８を用いる応答と同じ投与量で抑制され（図
５）、単独タウ高燐酸化活性を示している。このｍＡｂを用いるタウのin vitro
反応性はＥＲＫ２によってのみ誘発されうるが、他の候補タウキナーゼ類（例え
ば、ｃｄｋ、ＧＳＫ３）を誘発せず、ＥＲＫ２が関連薬品目標であるという独立
基準を提供する。

【０１２５】 インビトロでＰＫ４０（ＥＲＫ２）により誘発されるＡＰ４２２反応性の強さ
はＡＤ−脳から単離されたＰＨＦ−タウのもの（図示されていない）と一致する
。対照的に、ラットの脳中での死後脱燐酸化を回避するための多くの伝統的な予
防手段を用いても、ＡＰ４２２反応性は正常な成体タウ中では完全に存在しない
。これはＡＤ中のタウ高燐酸化が定量的に異常であり、そして異常なタウキナー
ゼとしてのＥＲＫ２の病理学的活性化よりむしろ正常なキナーゼ類の促進された
活性を包含しないことを示唆する。

【０１２６】 成体ラットの海馬脳薄片中のＡＤ−類似タウ高燐酸化の妨害。ＳＹ５Ｙ細胞と
同様な実験モデルでは、タウ高燐酸化は誘導体ＣIIによりＳＹ５Ｙ細胞中と同様
な投与量において妨げられた。ＡＤ−類似タウ高燐酸化用の最近の最も明確な基
準であるＡＰ４２２を用いる結果は一般的に使用されるｍＡｂ ＡＴ８を用いる
ものと同一であり、ＥＲＫ２だけがタウ燐酸化における全てのオカダ酸で誘発さ
れる変化の原因であることに注目すること。表１：ＥＲＫ２（ＰＫ４０）の抑制剤としての好ましい化合物の性質、ＰＨＦ−
タウ生成の生物学的モデル中のＥＲＫ２、ｃｄｃ２、およびタウ高燐酸化の活性
化（ＩＣ₅₀値、μＭ） ＣII ＣIII ＰＫ４０（ＥＲＫ２） ０.０４４ ＞＞３０ ｃｄｃ２ ０.０４４ ３.８ ＰＫＡ ０.６５^a) ＞１００ ＰＫＣ ０.６５^a) ＞１００ ＳＹ５Ｙ細胞^b)中のＥＲＫ２活性化の抑制 ０.５７ ５.７ タウ高燐酸化 ０.５８ ３.６脳薄片^b)中のタウ高燐酸化の抑制 ０.１８ ０.９ ^a) ＝部分的抑制のみ^b) ＝三回の測定値の平均^c) ＝正常なタウ燐酸化の同時抑制

【図面の簡単な説明】

【図１】 化合物ＣIIIがオカダ酸（okadaic acid)により引き起こされるタウ高燐酸化を
妨げることを示すオカダ酸で刺激された細胞上のブロットの図面である。

【図２】 種々の燐酸化状態でのヒトＳＹ５Ｙ細胞からおよび新生児ラット脳からのタウ
とＡＤ−脳からのＰＨＦ−タウとのウェスタン−ブロット比較である。図２Ａは
ヒトＳＹ５Ｙ細胞を示す。図２Ｂは新生児ラット脳を示す。図２ＣはＡＤ−脳か
らのＰＨＦ−タウを示す。

【図３】 ＰＰ２Ｂによる予めの脱燐酸化なしおよびありのＰＫ４０によるインビトロで
の新生児ラットタウ燐酸化を示す一対のゲルの図面である。

【図４】 ＣIIIと同様な化合物がＥＲＫ２の抑制剤としてＳＹ５Ｙ細胞モデルシステム
中の異常なＡＤ−類似高燐酸化を妨げることを示すブロットの図面である。

【図５】 成体ラット海馬脳薄片におけるＡＤ−類似タウ高燐酸化の妨害である。ＳＹ５
Ｙ細胞と同様な実験モデル(experimental paradigm)では、タウ高燐酸化はＣII
によりＳＹ５Ｙ細胞中と同様な投与量で妨げられる。ＡＤ−類似タウ高燐酸化に
関する最近では最も明確な基準であるＡＰ４２２による結果は一般的に使用され
るｍＡｂ ＡＴ８によるものと同一であり、ＡＰ４２２でなくＡＴ８反応性がＥ
ＲＫ２以外のキナーゼにより誘発されうるためにＥＲＫ２が単独で全てのオカダ
酸で誘発される変化の原因であることを示している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (71)出願人 Ｂａｙｅｒｗｒｋ，Ｌｅｖｅｒｋｕｓｅ ｎ，ＢＲＤ (72)発明者 バンザント，マイケル・シー アメリカ合衆国コネチカツト州06437ギル フオード・バーカーヒルドライブ56 Ｆターム(参考） 4C050 AA01 AA02 AA07 BB04 CC04 CC11 EE03 FF03 GG03 HH01 4C086 AA01 AA02 AA03 CB03 CB11 MA01 MA04 MA52 NA14 ZA16 ZB26 ZC20

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （式Ｉ） 【化１】 ［式中、ＺはＯまたは２Ｈであり、 Ｒ₁はＨ、ＯＨ、ＣＯ₂Ｒ₉、ＣＯＮＨＲ₉、ＣＨ₂ＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀で
   あり、 Ｒ₂はＨまたはＯＨであり、Ｒ₃はＨまたはＯＨであり、Ｒ₄はＨまたはＯＨであ
   り、 Ｒ₅はＨ、ＯＨ、ＮＲ₉Ｒ₁₀、ＮＨＣＯＲ₉、ＯＣＯＲ₉、ＯＣＲ₉、ハライド、Ｃ
   ＯＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀であり、 Ｒ₆はＨ、ＯＨ、ＮＲ₉Ｒ₁₀、ＮＨＣＯＲ₉、ＯＣＯＲ₉、ＯＣＲ₉、ハライド、Ｃ
   ＯＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀であり、 Ｒ₇はＨ、ＯＨ、Ｏまたはハライドであり、 Ｒ₈はＨ、ＯＨ、ハライドまたはなし（Ｒ₇がＯである時）であり、 Ｒ₉は炭素数１〜６のアルキル、炭素数３〜６のシクロアルキルまたはＨであり
   、 Ｒ₁₀は炭素数１〜６のアルキル、炭素数３〜６のシクロアルキルまたはＨである
   ］ を含んでなる物質。
2. 【請求項２】 ＺがＯであり、Ｒ₁がＯＨ、ＣＯ₂Ｒ₉、ＣＯＮＨＲ₉またはＣ
   Ｈ₂ＯＲ₉であり、Ｒ₄がＨであり、Ｒ₅がＨであり、Ｒ₆がＨであり、そしてＲ₈が
   Ｈである、請求項１の物質。
3. 【請求項３】 ＺがＯであり、Ｒ₁がＣＯ₂ＣＨ₃またはＣＯＮＨＣＨ₃であり
   、Ｒ₂がＨであり、Ｒ₃がＯＨであり、Ｒ₄がＨであり、Ｒ₅がＨであり、そしてＲ ₆ がＨである、請求項１の物質。
4. 【請求項４】 物質が 【化２】 よりなる群から選択される、請求項１の物質。
5. 【請求項５】 請求項１の物質、および 薬剤学的に許容可能な担体 を含んでなる薬剤組成物。
6. 【請求項６】 請求項２の物質、および 薬剤学的に許容可能な担体 を含んでなる薬剤組成物。
7. 【請求項７】 請求項３の物質、および 薬剤学的に許容可能な担体 を含んでなる薬剤組成物。
8. 【請求項８】 請求項４の物質、および 薬剤学的に許容可能な担体 を含んでなる薬剤組成物。
9. 【請求項９】 経口投与形態にある請求項５の薬剤組成物。
10. 【請求項１０】 経口投与形態にある請求項６の薬剤組成物。
11. 【請求項１１】 経口投与形態にある請求項７の薬剤組成物。
12. 【請求項１２】 経口投与形態にある請求項８の薬剤組成物。
13. 【請求項１３】 患者において式Ｉの化合物を結合するキナーゼを抑制する
    方法であって、そのような処置を必要とする患者に以下の式Ｉ： 【化３】 ［式中、ＺはＯまたは２Ｈであり、 Ｒ₁はＨ、ＯＨ、ＣＯ₂Ｒ₉、ＣＯＮＨＲ₉、ＣＨ₂ＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀で
    あり、 Ｒ₂はＨまたはＯＨであり、Ｒ₃はＨまたはＯＨであり、Ｒ₄はＨまたはＯＨであ
    り、 Ｒ₅はＨ、ＯＨ、ＮＲ₉Ｒ₁₀、ＮＨＣＯＲ₉、ＯＣＯＲ₉、ＯＣＲ₉、ハライド、Ｃ
    ＯＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀であり、 Ｒ₆はＨ、ＯＨ、ＮＲ₉Ｒ₁₀、ＮＨＣＯＲ₉、ＯＣＯＲ₉、ＯＣＲ₉、ハライド、Ｃ
    ＯＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀であり、 Ｒ₇はＨ、ＯＨ、Ｏまたはハライドであり、 Ｒ₈はＨ、ＯＨ、ハライドまたはなし（Ｒ₇がＯである時）であり、 Ｒ₉は炭素数１〜６のアルキル、炭素数３〜６のシクロアルキルまたはＨであり
    、 Ｒ₁₀は炭素数１〜６のアルキル、炭素数３〜６のシクロアルキルまたはＨである
    ］ の化合物を投与することを含んでなる方法。
14. 【請求項１４】 ＺがＯであり、Ｒ₁がＯＨ、ＣＯ₂Ｒ₉、ＣＯＮＨＲ₉または
    ＣＨ₂ＯＲ₉であり、Ｒ₄がＨであり、Ｒ₅がＨであり、Ｒ₆がＨであり、そしてＲ₈ がＨである、請求項１３の方法。
15. 【請求項１５】 ＺがＯであり、Ｒ₁がＣＯ₂ＣＨ₃またはＣＯＮＨＣＨ₃であ
    り、Ｒ₂がＨであり、Ｒ₃がＯＨであり、Ｒ₄がＨであり、Ｒ₅がＨであり、そして
    Ｒ₆がＨである、請求項１３の方法。
16. 【請求項１６】 化合物が 【化４】 よりなる群から選択される、請求項１３の方法。
17. 【請求項１７】 患者がタウ(tau)高燐酸化により特徴づけられる痴呆があ
    りそして該化合物が該高燐酸化を抑制するのに有効な量で投与される、請求項１
    ３〜１６のいずれかの方法。
18. 【請求項１８】 高燐酸化がアルツハイマー病の特徴でありそして化合物が
    アルツハイマー病における異常なタウ高燐酸化の特徴であるＥＲＫ２の燐酸化活
    性を抑制するのに充分な量で投与される、請求項１７の方法。
19. 【請求項１９】 患者において異常な細胞増殖を抑制する方法であって、そ
    のような処置を必要とする患者に以下の式Ｉ： 【化５】 ［式中、ＺはＯまたは２Ｈであり、 Ｒ₁はＨ、ＯＨ、ＣＯ₂Ｒ₉、ＣＯＮＨＲ₉、ＣＨ₂ＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀で
    あり、 Ｒ₂はＨまたはＯＨであり、Ｒ₃はＨまたはＯＨであり、Ｒ₄はＨまたはＯＨであ
    り、 Ｒ₅はＨ、ＯＨ、ＮＲ₉Ｒ₁₀、ＮＨＣＯＲ₉、ＯＣＯＲ₉、ＯＣＲ₉、ハライド、Ｃ
    ＯＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀であり、 Ｒ₆はＨ、ＯＨ、ＮＲ₉Ｒ₁₀、ＮＨＣＯＲ₉、ＯＣＯＲ₉、ＯＣＲ₉、ハライド、Ｃ
    ＯＯＲ₉、またはＣＯＮＲ₉Ｒ₁₀であり、 Ｒ₇はＨ、ＯＨ、Ｏまたはハライドであり、 Ｒ₈はＨ、ＯＨ、ハライドまたはなし（Ｒ₇がＯである時）であり、 Ｒ₉は炭素数１〜６のアルキル、炭素数３〜６のシクロアルキルまたはＨであり
    、 Ｒ₁₀は炭素数１〜６のアルキル、炭素数３〜６のシクロアルキルまたはＨである
    ］ の化合物を患者において該キナーゼ活性を抑制するのに有効な量で、患者におい
    て該望ましくない増殖を抑制するのに充分な量で投与することを含んでなる方法
    。
20. 【請求項２０】 ＺがＯであり、Ｒ₁がＯＨ、ＣＯ₂Ｒ₉、ＣＯＮＨＲ₉または
    ＣＨ₂ＯＲ₉であり、Ｒ₄がＨであり、Ｒ₅がＨであり、Ｒ₆がＨであり、そしてＲ₈ がＨである、請求項１９の方法。
21. 【請求項２１】 ＺがＯであり、Ｒ₁がＣＯ₂ＣＨ₃またはＣＯＮＨＣＨ₃であ
    り、Ｒ₂がＨであり、Ｒ₃がＯＨであり、Ｒ₄がＨであり、Ｒ₅がＨであり、そして
    Ｒ₆がＨである、請求項１９の方法。
22. 【請求項２２】 物質が 【化６】 よりなる群から選択される、請求項１９の方法。
23. 【請求項２３】 異常な細胞増殖が異常な水準のｃｄｃ２キナーゼを発現す
    る癌から生ずる、請求項１９〜２２のいずれか１つの方法。
24. 【請求項２４】 【化７】 ［式中、Ｚ＝Ｏまたは２Ｈ（この場合には二重結合は２つの単結合である）であ
    る］ を含んでなる物質。
25. 【請求項２５】 ＺがＯであり、Ｒ₁₃＝ＨでありそしてＲ₁₃′＝Ｈである請
    求項２４の組成物。
26. 【請求項２６】 【化８】 よりなる群から選択される請求項２４の組成物。
27. 【請求項２７】 【化９】 ［式中、Ｚ＝Ｏまたは２Ｈであり、Ｒ₁₃、Ｒ₁₃′＝ＨまたはＯＰであり、そして
    Ｒ₁₄＝Ｏ、Ｈ、ＯＨまたはＯＰであり、好ましくは、ＺはＯでありそしてＲ₁₃お
    よびＲ₁₃′はＨである］ を含んでなる物質。
28. 【請求項２８】 Ｚ＝ＯでありそしてＲ₁₃およびＲ₁₃′＝Ｈである請求項２
    ７の組成物。