EA029372B1 - Пиразолопиримидиновые соединения - Google Patents

Abstract

В изобретении предложено соединение, представленное следующей структурной формулой:или его фармацевтически приемлемая соль, где R, R, Rи Rраскрыты в формуле изобретения. Также описаны фармацевтические композиции и способы их применения.

Description

изобретение относится, по меньшей мере в частности, к соединению, представленному следующей структурной формулой:

или его фармацевтически приемлемой соли,

где К¹ представляет собой -ΝΗ-СЩ-Су;

Су представляет собой С₃-С₄-циклоалкил, необязательно имеющий в качестве заместителей одну

- 1 029372

или две группы, выбранные из алкила и гидроксила;

К² представляет собой -О-пиридинил, -ХН-(С₂-С₆)гидроксиалкил, необязательно имеющий в качестве заместителя циклопропил или изопропил, или -ХН-(С₃-С₆)циклоалкил, необязательно имеющий в качестве заместителя гидроксил или (СгСДгидроксилалкил;

К⁴ выбран из атома водорода, атома галогена и (С_гС₃)алкила;

К^а представляет собой циклопропил.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения К⁴ представляет собой атом хлора или метил. Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и соединение, представленное структурной формулой (I), описанной выше, или его фармацевтически приемлемую соль.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения субъекта, страдающего раком, включающий введение данному субъекту эффективного количества соединения структурной формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения предложен способ ингибирования активности ТТК у субъекта, нуждающегося в ингибировании активности ТТК, включающий введение данному субъекту эффективного количества соединения, представленного структурной формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения предложено применение соединения, представленного структурной формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в терапии. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанная терапия направлена на лечение субъекта, страдающего раком. Альтернативно, данная терапия направлена на ингибирование активности ТТК у субъекта, нуждающегося в ингибировании активности ТТК.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения предложено применение соединения, представленного структурной формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарства, предназначенного для лечения субъекта, страдающего раком.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения предложено применение соединения, представленного структурной формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарства, предназначенного для ингибирования активности ТТК у субъекта, нуждающегося в ингибировании активности ТТК.

Подробное описание изобретения

Согласно одному из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к соединению, представленному структурной формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли. Изобретение также относится к соединениям, описанным с использованием структурной формулы или названия в разделе "Примеры", и включает как нейтральные формы, так и фармацевтически приемлемые соли данных соединений. Изобретение также относится к лечению данными соединениями и/или с использованием данных соединений (включая их нейтральные формы и фармацевтически приемлемые соли), такому, как описано в данном документе. Ниже приведены конкретные примеры соединений согласно настоящему изобретению:

или его фармацевтически приемлемая соль;

или его фармацевтически приемлемая соль;

- 2 029372

или его фармацевтически приемлемая соль;

или его фармацевтически приемлемая соль.

Термин "алкил", используемый один или в составе более крупной группировки, такой как "гидроксиалкил" и т.п., означает насыщенный алифатический одновалентный углеводородный радикал с нормальной или разветвленной цепью. Если не указано иное, алкильная группа обычно содержит от 1 до 6 атомов углерода, т.е. представляет собой (С₁-С₆)алкил. В контексте данного описания группа "(С₁-С₆)алкил" означает радикал с нормальной или разветвленной цепью, имеющий от 1 до 6 атомов углерода.

Термин "циклоалкил" означает насыщенный алифатический циклический углеводородный радикал, необязательно содержащий одну или более чем одну двойную связь. Данный радикал может представлять собой моноциклическое кольцо, бициклическое кольцо (например, мостиковое бициклическое кольцо), полициклическое (например, трициклическое) кольцо или конденсированное кольцо. Например, моноциклический (С₃-С₇)циклоалкил означает радикал, имеющий от 3 до 7 атомов углерода, образующих моноциклическое кольцо; (С₃-С₇)циклоалкил включает, без ограничения, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.

Некоторые соединения, описанные в данном документе, могут существовать в различных стереоизомерных или таутомерных формах. Стереоизомеры представляют собой соединения, которые отличаются только пространственным расположением. Когда соединение согласно изобретению описано с использованием названия или структуры без указания стереохимии, подразумевается, что данное название или структура включают все возможные стереоизомеры, таутомеры, геометрические изомеры или их комбинации.

Когда геометрический изомер описан с использованием названия или структуры, подразумевается, что изомерная чистота названного или изображенного геометрического изомера составляет по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 99 или 99,9 мас.%. Изомерную чистоту геометрического изомера определяют путем деления массы названного или изображенного геометрического изомера, присутствующего в смеси, на общую массу всех геометрических изомеров, присутствующих в смеси.

Рацемическая смесь представляет собой смесь, содержащую 50% одного энантиомера и 50% другого энантиомера. Настоящее изобретение включает все энантиомерно чистые, энантиомерно обогащенные, диастереомерно чистые, диастереомерно обогащенные и рацемические смеси и диастереоизомерные смеси соединений, описанных в данном патенте.

Энантиомерные и диастереоизомерные смеси могут быть разделены на составляющие их индивидуальные энантиомеры или стереоизомеры с использованием известных методик, таких как газовая хроматография на хиральной фазе, высокоэффективная жидкостная хроматография на хиральной фазе, кристаллизация соединения в виде комплекса с хиральной солью или кристаллизация в хиральном растворителе. Энантиомеры и диастереоизомеры также могут быть получены из диастереомерно или энантиомерно чистых промежуточных соединений, реагентов и катализаторов с использованием известных методик асимметричного синтеза.

Когда соединение описано с использованием названия или структуры, которым соответствует один индивидуальный энантиомер, оптическая чистота соединения, если не указано иное, составляет по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 99 или 99,9% (в этом случае соединение также называют "энантиомерно чистым"). Оптическую чистоту определяют путем деления массы названного или изображенного энантиомера, присутствующего в смеси, на общую массу обоих энантиомеров, присутствующих в смеси.

Когда стереохимия соединения согласно изобретению указана в названии или структуре и данное название или структура включают более одного стереоизомера (например, диастереоизомерную пару), подразумевается, что включены один из данных стереоизомеров или любая смесь данных стереоизоме- 3 029372

ров. Также подразумевается, что стереоизомерная чистота названных или изображенных стереоизомеров составляет по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 99 или 99,9 мас.%. Стереоизомерную чистоту в этом случае определяют путем деления общей массы присутствующих в смеси стереоизомеров, которые соответствуют данному названию или структуре, на общую массу всех стереоизомеров, присутствующих в смеси.

В настоящем изобретении предложены фармацевтически приемлемые соли соединений согласно изобретению. Соединения согласно настоящему изобретению содержат основные аминогруппы и поэтому могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически приемлемой(ыми) кислотой(ами). Подходящие фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот соединений, описанных в данном изобретении, включают соли неорганических кислот (таких как соляная кислота, бромисто-водородная, фосфорная, азотная и серная кислоты) и органических кислот (таких как уксусная кислота, бензолсульфоновая, бензойная, метансульфоновая и пара-толуолсульфоновая кислоты). Соединения согласно настоящему изобретению, содержащие кислотные группы, такие как карбоксильная, могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически приемлемым(и) основанием(ями).

Подходящие фармацевтически приемлемые основные соли включают аммониевые соли, соли щелочных металлов (такие как соли натрия и калия) и соли щелочноземельных металлов (такие как соли магния и кальция). Соединения, содержащие группу четвертичного аммония, также содержат противоанион, такой как хлорид, бромид, иодид, ацетат, перхлорат и тому подобное. Другие примеры таких солей включают гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, метансульфонаты, нитраты, бензоаты и соли с аминокислотами, такими как глутаминовая кислота.

Соединения, описанные в данном патенте, могут ингибировать различные киназы, включая ТТК. Соответственно, в большинстве случаев соединения, описанные в данном документе, могут быть использованы для лечения заболеваний или состояний, ассоциированных с такими киназами. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения соединения, описанные в данном документе, могут ингибировать протеинкиназу ТТК.

Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения соединения, описанные в данном документе, являются ингибиторами протеинкиназы ТТК и могут быть использованы для лечения заболеваний, таких как рак, ассоциированный с такой(ими) киназой(ами).

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу лечения субъекта, страдающего раком, включающему введение данному субъекту эффективного количества соединения, описанного в данном документе. Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения соединения, описанные в данном документе, ингибируют рост опухоли. Например, соединения, описанные в данном документе, ингибируют рост опухоли, которая сверхэкспрессирует ТТК.

Типы рака, которые можно лечить (включая уменьшение вероятности рецидива) способами согласно настоящему изобретению, включают рак легкого, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак головного мозга, нейробластому, рак предстательной железы, меланому, мультиформную глиобластому, рак яичника, лимфому, лейкоз, меланому, саркому, паранеоплазию, остеосаркому, герминому, глиому и мезотелиому. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения рак выбран из лейкоза, острого миелоидного лейкоза, хронического миелогенного лейкоза, рака молочной железы, рака головного мозга, рака толстой кишки, колоректального рака, злокачественного новообразования головы и шеи, гепатоцеллюлярного рака, аденокарциномы легкого, метастатической меланомы, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака яичника и рака почки. Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения рак представляет собой рак легкого, рак толстой кишки, рак головного мозга, нейробластому, рак предстательной железы, меланому, мультиформную глиобластому или рак яичника. Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения рак представляет собой рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, меланому, рак молочной железы, рак толстой кишки, или рак яичника. Согласно еще одному варианту осуществления настоящего изобретения рак представляет собой рак молочной железы, рак толстой кишки и рак яичника. Согласно еще одному варианту осуществления настоящего изобретения рак представляет собой рак молочной железы. Согласно еще одному варианту осуществления настоящего изобретения рак представляет собой базальный подтип рака молочной железы или люменальный В подтип рака молочной железы. Согласно еще одному варианту осуществления настоящего изобретения рак представляет собой базальный подтип рака молочной железы, который сверхэкспрессирует ТТК. Согласно еще одному варианту осуществления настоящего изобретения, базальный подтип рака молочной железы представляет собой ЕК (рецептор эстрогена), НЕК2 и РК (рецептор прогестерона) негативный рак молочной железы. Согласно еще одному варианту осуществления настоящего изобретения рак представляет собой рак мягких тканей. "Рак мягких тканей" является принятым в данной области техники термином, который включает опухоли, происходящие от любой мягкой ткани организма. Такая мягкая ткань соединяет, поддерживает или окружает различные структуры и органы организма и включает, без ограничения, гладкую мышцу, скелетную мышцу, сухожилия, фиброзные ткани, жировую ткань, кровеносные и лимфатические сосуды, периваскулярную ткань, нервы, мезенхимные клетки и синовиальные ткани. Соответственно, рак мягких тканей может представлять собой рак жировой ткани, мышечной ткани, нервной ткани, суставной ткани, кровеносных сосудов, лимфатических сосудов и фиброзных тканей. Рак мягких тканей может быть доброкаче- 4 029372

ственным или злокачественным. Обычно злокачественный рак мягких тканей называется саркома или саркома мягких тканей. Существует много типов опухолей мягких тканей, включая липому, липобластому, гиберному, липосаркому, лейомиому, лейомиосаркому, рабдомиому, рабдомиосаркому, нейрофиброму, шванному (неврилеммому), неврому, злокачественную шванному, неврофибросаркому, нейрогенную саркому, узловатый теносиновит, синовиальную саркому, гемангиому, гломусную опухоль, гемангиоперицитому, гемангиоэндотелиому, ангиосаркому, саркому Капоши, лимфангиому, фиброму, эластофиброму, поверхностный фиброматоз, фиброзную гистиоцитому, фибросаркому, фиброматоз, выбухающую дерматофибросаркому (ΌΡδΡ), злокачественную фиброзную гистиоцитому (МРН), миксому, зернистоклеточную опухоль, злокачественную мезенхимому, альвеолярную саркому мягких тканей, эпителиоидную саркому, светлоклеточную саркому и десмопластическую мелкоклеточную опухоль. В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения рак мягких тканей представляет собой саркому, выбранную из группы, состоящей из фибросаркомы, гастроинтестинальной саркомы, лейомиосаркомы, дедифференцированной липосаркомы, плеоморфной липосаркомы, злокачественной фиброзной гистиоцитомы, круглоклеточной саркомы и синовиальной саркомы.

Согласно некоторым вариантам осуществления в настоящем изобретении предложены способы ингибирования роста клеток, инициирующих развитие опухоли, или уменьшения вероятности рецидива рака у субъекта, который получает противораковую терапию. Данный способ включает стадии:

а) оценка состояния субъекта, чтобы определить, находится рак в стадии ремиссии или нет; и

б) если рак находится в стадии ремиссии, введение данному субъекту эффективного количества ингибитора протеинкиназы ТТК (например, соединения, представленного структурной формулой (I)).

Если рак не находится в стадии ремиссии, способ необязательно включает дополнительную стадию продолжения противораковой терапии, пока рак не перейдет в стадию ремиссии, и затем выполнение стадии (б) введения эффективного количества ингибитора протеинкиназы ТТК (например, соединения, представленного структурной формулой (I)).

В контексте данного описания термин "клетки, инициирующие развитие опухоли" или "Т1С" относится к клеткам, присутствующим внутри некоторых опухолей и обладающим способностью к самоподдержке и пролиферации. Данные клетки иногда называют раковыми стволовыми клетками (С8С); можно наблюдать, что С8С имеют некоторые признаки, характерные для нормальных стволовых клеток, включая схожесть фенотипа и функции раковых и нормальных стволовых клеток. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, Т1С характеризуются тем, что способны образовывать опухоли после ксенотрансплантации в иммунодефицитных мышах.

Согласно некоторым вариантам осуществления в настоящем изобретении предложены способы ингибирования роста клеток, инициирующих развитие опухоли, или уменьшения вероятности рецидива рака у субъекта, имеющего рак в стадии ремиссии, включающие введение данному субъекту эффективного количества ингибитора протеинкиназы ТТК (например, соединения, представленного структурной формулой (I)).

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, например в тех случаях, когда субъект получает лечение с целью уменьшения вероятности рецидива рака, субъект уже прошел лечение с использованием противораковой терапии. Альтернативно, субъект уже прошел лечение с использованием противораковой терапии, и субъект находится в стадии ремиссии.

Согласно некоторым вариантам осуществления в настоящем изобретении предложены способы лечения субъекта, страдающего раком, включающие введение данному субъекту эффективного количества соединения, соединения, представленного структурной формулой (I), в комбинации с эффективной противораковой терапией. В одном из вариантов осуществления изобретения рак представляет собой метастатический рак. "Метастатический рак" представляет собой рак, который распространяется из первичного места его возникновения в другие части организма.

Согласно другому варианту осуществления в настоящем изобретении предложен способ лечения субъекта с лекарственно устойчивым раком. "Лекарственно устойчивый рак" представляет собой рак, который не восприимчив к одному, двум, трем, четырем, пяти или более лекарствам, которые обычно используются для лечения рака. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения лекарственно устойчивый рак обусловлен ростом клеток, инициирующих развитие опухоли.

Для оценки состояния субъекта, которая позволяет определить, находится рак в стадии ремиссии или нет, могут быть использованы подходящие методики, известные в данной области техники. Например, для определения состояния рака можно контролировать размер опухоли и/или опухолевые маркеры, обычно белки, ассоциированные с опухолями. Размер опухоли можно контролировать с использованием методик, формирующих изображение, таких как рентген, МРТ (магнитно-резонансная томография), САТ 8еаи (компьютерная аксиальная томография), ультразвук, маммография, ПЭТ (позитронно-эмиссионная томография) и тому подобное, или путем биопсии.

В описанных способах, например в способах, включающих совместное введение, противораковая терапия выбрана из группы, состоящей из хирургического вмешательства, лучевой терапии, иммунотерапии, эндокринной терапии, генной терапии и введения противоракового агента. Альтернативно, противораковая терапия представляет собой лучевую терапию. Альтернативно, противораковая терапия

- 5 029372

представляет собой иммунотерапию. Альтернативно, противораковая терапия представляет собой введение противоракового агента. Альтернативно, противораковая терапия представляет собой хирургическое вмешательство.

Лучевая терапия представляет собой использование излучения для уничтожения раковых клеток, разрушения раковой опухоли или лечения рака. Типичная лучевая терапия включает, без ограничения, гамма-излучение, радиотерапию нейтронными пучками, радиотерапию электронными пучками, протонную терапию, брахитерапию и радиоизотопную терапию (т.е. системную терапию радиоактивными изотопами).

Эндокринная терапия представляет собой лечение, которое добавляет, блокирует или удаляет гормоны. Например, химиотерапевтические агенты, которые могут блокировать продуцирование или активность эстрогена, используют для лечения рак молочной железы. Кроме того, гормональную стимуляцию иммунной системы используют для лечения конкретных типов рака, таких как почечно-клеточная карцинома и меланома. В одном варианте осуществления настоящего изобретения эндокринная терапия включает введение естественных гормонов, синтетических гормонов или других синтетических молекул, которые могут блокировать или усиливать продуцирование естественных гормонов организма. В другом варианте осуществления настоящего изобретения эндокринная терапия включает удаление железы, которая производит определенный гормон.

В контексте данного описания генная терапия представляет собой введение генов в клетки и биологические ткани субъекта с целью лечения таких заболеваний, как рак. Типичная генная терапия включает, без ограничения, генную терапию с использованием клеток зародышевой линии и соматическую генную терапию.

Иммунотерапия (также называемая терапией с использованием модификаторов биологического ответа, терапией с использованием биопрепаратов, биотерапией, иммунной терапией или биологической терапией) представляет собой лечение, которое для борьбы с заболеванием использует компоненты иммунной системы. Иммунотерапия может помогать иммунной системе распознавать раковые клетки или усиливать ответную реакцию, направленную против раковых клеток. Иммунотерапия включают активную и пассивную иммунотерапию. Активная иммунотерапия стимулирует собственную иммунную систему организма, тогда как пассивная иммунотерапия обычно использует компоненты иммунной системы, полученные вне организма.

Примеры активной иммунотерапии включают, без ограничения, вакцины, в том числе противораковые вакцины, вакцины против опухолевых клеток (аутологичные или аллогенные), вакцины на основе дендритных клеток, антигенные вакцины, антиидиотипические вакцины, ДНК-вакцины, вирусные вакцины или вакцины на основе лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль (Т1Ь), в комбинации с интерлейкином 2 (1Ь-2) или клеточной терапией лимфокин-активированными клетками-киллерами (ЬАК).

Примеры пассивной иммунотерапии включают, без ограничения, моноклональные антитела и таргетную терапию с использованием токсинов. Моноклональные антитела включают голые антитела и конъюгированные моноклональные антитела (также называемые меченые (!аддеб, 1аЬе1еб) или нагруженные антитела). Голые моноклональные антитела не имеют присоединенного к ним лекарства или радиоактивного вещества, тогда как конъюгированные моноклональные антитела соединены, например, с химиотерапевтическим лекарством (антитела, меченные химиотерапевтическим агентом (сйето1аЬе1еб)), радиоактивной частицей (радиомеченые антитела) или токсином (иммунотоксины). Примеры голых моноклональных антител, используемых в качестве лекарств, включают, без ограничения, ритуксимаб (Ритуксан), антитело против антигена СЭ2(). используемое для лечения, например, В-клеточной неходжкинской лимфомы; трастузумаб (Герцептин), антитело против белка НЕК2, используемое для лечения, например, распространенного рака молочной железы; алемтузумаб (Кэмпас), антитело против антигена СЭ52, используемое для лечения, например, В-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза (ВСЬЬ); цетуксимаб (Эрбитукс), антитело против белка ЕСРК (рецептора эпидермального фактора роста), используемое, например, в комбинации с иринотеканом для лечения, например, распространенного колоректального рака и злокачественных новообразований головы и шеи; и бевацизумаб (Авастин) для антиангиогенной терапии, направленной против белка УЕСР, используемый, например, в комбинации с химиотерапией для лечения, например, метастатического колоректального рака. Примеры конъюгированных моноклональных антител включают, без ограничения, радиомеченое антитело ибритумомаб тиуксетан (зевалин), которое доставляет радиоактивность прямо к раковым В-лимфоцитам и используется для лечения, например, В-клеточной неходжкинской лимфомы; радиомеченое антитело тоситумомаб (Веххаг), которое используют для лечения, например, некоторых типов неходжкинской лимфомы; и иммунотоксин гемтузумаба озогамицин (Му1о1аг§), который содержит калихеамицин (саПсНеапист) и используется для лечения, например, острого миелогенного лейкоза (АМЬ); ВЬ22, конъюгированное моноклональное антитело для лечения, например, волосатоклеточного лейкоза; иммунотоксины для лечения, например, лейкозов, лимфом и опухолей головного мозга и радиомеченые антитела, такие как ОисоЗсшТ например, для лечения колоректального рака и рака яичника, и Рго81аЗс1и1, например, для лечения рака предстательной железы.

Дополнительные примеры терапевтических антител, которые могут быть использованы, включают

- 6 029372

Герцептин® (трастузумаб) (СспсШссН. СА), который представляет собой гуманизированное моноклональное антитело против НЕК2 для лечения пациентов с метастатическим раком молочной железы; РеоПро® (абциксимаб) (СсШосог). который связывается с гликопротеиновыми рецепторами типа 1ГЬ/111а тромбоцитов и предупреждает тромбообразование; Зенапакс® (даклизумаб) (РосЬе РЬагтасеийсак, Швейцария), который представляет собой иммунодепрессивное гуманизированное моноклональное антитело против СО25 для предупреждения острого отторжения почечного аллотрансплантата; Панорекс™ (ΡΑΝΌΚΕΧ™), который представляет собой мышиное Г§С2а антитело против антигена клеточной поверхности 17-ГА (С1ахо \Уе11соте/Сеп1осог); ВЕС2, который представляет собой мышиное антиидиотипическое (ΟΌ3 эпитоп) ГдС антитело (ГтС1опе ЗуЧет); ГМС-С225, который представляет собой химерное ГдС антитело против ЕСРК (ГтС1опе ЗуЧет); Витаксин™ (νΓΤΑΧΓΝ™), который представляет собой гуманизированное антитело против интегрина ανβ3 (АррЬеб Мо1еси1аг Еуо1ийоп/МебГтшипе); Кэмпас 1Η/ΕΌΡ-03, который представляет собой гуманизированное Г§С1 антитело против СЭ52 (Ьеикокйе); §шай М195, который представляет собой гуманизированное ГдС антитело против СЭ33 (Рго1е1п Ое5щп ЬаЬ/КапеЬо); Ритуксан™, который представляет собой химерное Г§С1 антитело против СЭ20 (ЮЕС РЬагт/СепеШеск РосНе/Яейуаки); ЬУМРНОСГОЕ™, который представляет собой гуманизированное ГдС антитело против СЭ22 (ГтшипошеШск); ЬУМРНОСЮЕ™ Υ-90 (ГттипотеШск); Ьутркоксап (меченый технецием-99т (Тс-99т); для радионуклидной визуализации; ГттипотеШск); №.1\аоп (против СЭ3; Рго1еш Ое51дп ЬаЬк); СМ3, который представляет собой гуманизированное антитело против ГСАМ3 (молекулы межклеточной адгезии 3 типа) (ГСО3 РЬагш); ЮЕС-114, который представляет собой приматизированное антитело против СЭ80 (ЮЕС РЬагт/МЦщЬЫй); Зевалин™, который представляет собой меченное радиоактивным изотопом мышиное антитело против ί'.Ό20 (ГОЕС/3сЬегт§ АС); ЮЕС-131, который представляет собой гуманизированное антитело против СО40Ь (ЧОЕС/ЕЕи); 1ЭЕС-151, который представляет собой приматизированное антитело против СЭ4 (ЮЕС); ЮЕС-152, который представляет собой приматизированное антитело против СЭ23 (ГОЕС/8е1кадаки); 8МАКТ апкСО3, который представляет собой гуманизированный ГдС против СЭ3 (Рго1еш Ое51дп ЬаЬ); 5С1.1, который представляет собой гуманизированное антитело против фактора С5 комплемента (А1ехюп РЬагш); Э2Е7, который представляет собой гуманизированное антитело против ΤΝΡ-α (фактора некроза опухоли альфа) (САТ/ВА8Р); СЭР870, который представляет собой гуманизированный РаЬ-фрагмент против ΤΝΡ-α (Се1ЬесЬ); ГОЕС-151, который представляет собой приматизированное Г§С1 антитело против СЭ4 (ГОЕС РЬагт/3тйЬК1ше ВеесЬат); МПХ-СЭ4, который представляет собой человеческое ГдС антитело против СЭ4 (Мебагех/ЕкаЕСептаЬ); СО20-стрептавидин (+биотин-иттрий 90; №оКх); СЭР571, который представляет собой гуманизированное Г§С4 антитело против ΤΝΡ-α (Се1ЬесЬ); ЬПР-02, который представляет собой гуманизированное антитело против α4β7 (ЬеикоЗке/СепейесЬ); ОйЬоС1опе ОСТ4А, который представляет собой гуманизированное ГдС антитело против СЭ4 (ОйЬо Вю1есЬ); ΑNΤОVΑ™, который представляет собой гуманизированное ГдС антитело против СО40Ь (Вюдеп); АЭТЕСРЕ№^М, который представляет собой гуманизированное ГдС антитело против "УРАМ (очень позднего антигена-4) (Е1ап); и САТ-152, который представляет собой человеческое антитело против ΤΕΡ-β2 (трансформирующего фактора роста β2) (СатЬгШде АЬ ΤесЬ), но не ограничены ими.

Иммунотерапия, которая может быть использована согласно настоящему изобретению, включает адъювантную иммунотерапию. Примеры включают цитокины, такие как гранулоцитарномакрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ), воспалительный белок макрофагов (МГР)-1-альфа, интерлейкины (включая ГЕ-1, ГЬ-2, ГЬ-4, ГЬ-6, ГЬ-7, ГЬ-12, ГЕ-15, ГЕ-18, ГЬ-21 и ГЕ-27), факторы некроза опухоли (включая ΤΝΡ-α) и интерфероны (включая ГР^альфа, [ΡΝ-бета и ГРИ-гамма); гидроксид алюминия (а1ит); бациллу КальметаГерена (БЦЖ); гемоцианин улитки КеуЬо1е Ьтре! (КЬН); неполный адъювант Фрейнда (ГРА); 03-21; ^ЕΤОX; левамизол и динитрофенил (ЭНР) и их комбинации, такие как, например, комбинации интерлейкинов, например, комбинации ГЬ-2 с другими цитокинами, такими как ГΡN-альфа.

Альтернативно, противораковая терапия, описанная в данном документе, включает введение противоракового агента. "Противораковый агент" представляет собой соединение, введение которого в эффективном количестве субъекту, страдающему раком, позволяет добиться, частично или по существу, одного или более чем одного из следующих результатов: прекращение развития, уменьшение степени распространения рака (например, уменьшения размера опухоли), ингибирование скорости развития рака и уменьшение интенсивности или улучшение клинического симптома или индикатора, ассоциированного с раком (такого как тканевые или сывороточные компоненты), или увеличение продолжительности жизни субъекта.

Противораковый агент, подходящий для использования в способах, описанных в данном изобретении, включает любые противораковые агенты, которые одобрены для лечения рака. Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения противораковый агент включает, без ограничения, антимишеневое антитело, ингибитор ангиогенеза, алкилирующий агент, антиметаболит, алкалоид барвинка, таксан, подофиллотоксин, ингибитор топоизомеразы, гормональный противоопухолевый агент и

- 7 029372

другие противоопухолевые агенты.

Примеры алкилирующих агентов, которые могут быть использованы в способах согласно настоящему изобретению, включают азотистые иприты (например, мехлорэтамин, циклофосфамид, хлорамбуцил, мелфалан и т.д.), этиленимин и метилмеламины (например, гексаметилмеламин, тиотепа), алкил сульфонаты (например, бусульфан), нитрозомочевины (например, кармустин, ломустин, семустин, стрептозоцин и т.д.) или триазены (декарбазин и т.д.), но не ограничены ими. Примеры антиметаболитов, которые могут быть использованы в способах согласно настоящему изобретению, включают аналог фолиевой кислоты (например, метотрексат) или аналоги пиримидина (например, фторурацил, флоксуридин, цитарабин), аналоги пурина (например, меркаптопурин, тиогуанин, пентостатин), но не ограничены ими. Примеры растительных алкалоидов и терпеноидов или их производных включают алкалоиды барвинка (например, винкристин, винбластин, винорелбин, виндезин), подофиллотоксин и таксаны (например, паклитаксел, доцетаксел), но не ограничены ими. Примеры ингибитора топоизомеразы включают иринотекан, топотекан, амсакрин, этопозид, этопозида фосфат и тенипозид, но не ограничены ими. Примеры противоопухолевых агентов включают актиномицин, антрациклины (например, доксорубицин, даунорубицин, валрубицин, идарубицин, эпирубицин), блеомицин, пликамицин и митомицин, но не ограничены ими.

Согласно одному из вариантов осуществления изобретения, противораковые агенты, которые могут быть использованы согласно настоящему изобретению, включают адриамицин, дактиномицин, блеомицин, винбластин, цисплатин, ацивицин; акларубицин; акодазола гидрохлорид; акронин; адозелезин; алдеслейкин; алтретамин; амбомицин; аметантрона ацетат; аминоглутетимид; амсакрин; анастрозол; антрамицин; аспарагиназу; асперлин; азацитидин; азетепу (а/е1ера); азотомицин; батимастат; бензодепу; бикалутамид; бизантрена гидрохлорид; биснафида димезилат; бизелезин; блеомицина сульфат; бреквинар натрия; бропиримин; бусульфан; кактиномицин; калустерон; карацемид; карбетимер; карбоплатин; кармустин; карубицина гидрохлорид; карзелезин; цедефингол; хлорамбуцил; циролемицин; кладрибин; криснатола мезилат; циклофосфамид; цитарабин; дакарбазин; даунорубицина гидрохлорид; децитабин; дексормаплатин; дезагуанин; дезагуанина мезилат; диазиквон (Ша/кцюпс); доксорубицин; доксорубицина гидрохлорид; дролоксифен; дролоксифена цитрат; дромостанолона (Дтото81апо1опе) пропионат; дуазомицин; эдатрексат; эфлорнитина гидрохлорид; элсамитруцин; энлоплатин; энпромат; эпипропидин; эпирубицина гидрохлорид; эрбулозол; эзорубицина гидрохлорид; эстрамустин; эстрамустина фосфат натрия; этанидазол; этопозид; этопозида фосфат; этоприн (е1орг1пе); фадрозола гидрохлорид; фазарабин; фенретинид; флоксуридин; флударабина фосфат; фторурацил; фторцитабин; фосквидон (Го^сцпДопе); фостриецин натрия; гемцитабин; гемцитабина гидрохлорид; гидроксимочевину; идарубицина гидрохлорид; ифосфамид; илмофозин; интерлейкин II (включая рекомбинантный интерлейкин II, или т1Ь2), интерферон альфа-2а; интерферон альфа-2Ъ; интерферон альфа-п1; интерферон альфа-п3; интерферон бетаI а; интерферон гаммаП Ъ; ипроплатин; иринотекана гидрохлорид; ланреотида ацетат; летрозол; лейпролида (1еиргоПДе) ацетат; лиарозола гидрохлорид; лометрексол натрия; ломустин; лозоксантрона гидрохлорид; мазопрокол; майтансин (тау1аи8ше); мехлорэтамина гидрохлорид; мегестрола ацетат; меленгестрола ацетат; мелфалан; меногарил; меркаптопурин; метотрексат; метотрексат натрия; метоприн (те!орппе); метуредепу; митиндомид; митокарцин; митокромин (тйоетотш); митогиллин; митомалцин; митомицин; митоспер; митотан; митоксантрона гидрохлорид; микофеноловую кислоту; нокодазол; ногаламицин; ормаплатин; оксисуран; пегаспаргазу; пелиомицин; пентамустин (рейатикДпе); пепломицина сульфат; перфосфамид; пипоброман; пипосульфан (р1ро8и1Гап); пироксантрона гидрохлорид; пликамицин; пломестан; порфимер натрия; порфиромицин; преднимустин; прокарбазина гидрохлорид; пуромицин; пуромицина гидрохлорид; пиразофурин; рибоприн; роглетимид; сафингол; сафингола гидрохлорид; семустин; симтразен; спарфосат (8ратГо8а1е) натрия; спарсомицин; спирогермания гидрохлорид; спиромустин; спироплатин; стрептонигрин ЩгерЮпщпп); стрептозоцин; сулофенур; тализомицин; текогалан (1есода1ап) натрия; тегафур; телоксантрона гидрохлорид; темопорфин; тенипозид; тероксирон; тестолактон; тиамиприн; тиогуанин; тиотепу; тиазофурин; тирапазамин; торемифена цитрат; трестолона ацетат; трицирибина фосфат; триметрексат; триметрексата глюкуронат; трипторелин; тубулозола гидрохлорид; урамустин; уредепу; вапреотид; вертепорфин; винбластина сульфат; винкристина сульфат; виндезин; виндезина сульфат; винепидина сульфат; винглицината сульфат; винлейрозина сульфат; винорелбина тартрат; винрозидина сульфат; винзолидина сульфат; ворозол; зениплатин; зиностатин; зорубицина гидрохлорид. Другие противораковые агенты/лекарства, которые могут быть использованы согласно настоящему изобретению, включают, без ограничения, 20-эпи-1,25 дигидроксивитамин Ό3; 5этинилурацил; абиратерон; акларубицин; ацилфульвен; адеципенол (аДесурепо1); адозелезин; алдеслейкин; антагонисты АЬЬ-ТК; алтретамин; амбамустин; амидокс (аниДох); амифостин; аминолевулиновую кислоту; амрубицин; амсакрин; анагрелид; анастрозол; андрографолид; ингибиторы ангиогенеза; антагонист Ό; антагонист С; антареликс; антидорсализующий морфогенетический белок-1; антиандроген карциномы простаты; антиэстроген; антинеопластон; антисмысловые олигонуклеотиды; афидиколина глицинат; модуляторы генов апоптоза; регуляторы апоптоза; апуриновую кислоту; ата-СОР-ОЬ-РТВА; аргинин-дезаминазу; асулакрин (аыйасппе); атаместан; атримустин; аксинастатин (ахтаЧайп) 1; аксинастатин (ахша81а1ш) 2; аксинастатин (ахтаЧаОп) 3; азасетрон; азатоксин (а/аЮ.хт); азатирозин; производные

- 8 029372

баккатина III; баланол; батимастат; антагонисты гибридного белка ВСК/АБЬ; бензохлорины; бензоилстауроспорин (Ьсп/оуМаигохроппс); бета-лактамные производные; бета-алетин (Ье1а-а1е1Ыие); бетакламицин В; бетулиновую кислоту; ингибитор ЬРОР (основного фактора роста фибробластов); бикалутамид; бизантрен; бисазиридинилспермин (Ыка/1пйту1крегтте); биснафид; бистратен А; бизелезин; брефлат (Ьгейа!е); бропиримин; будотитан; бутионин сульфоксимин; кальципотриол; калфостин С; производные камптотецина (сатрЮЙюсш); канарипокс 1Ь-2; капецитабин; карбоксамид-амино-триазол; карбоксиамидотриазол; СаКек! М3; САКИ 700; ингибитор, полученный из хряща; карзелезин; ингибиторы казеинкиназ (1СО8); кастаноспермин; цекропин В; цетрореликс; хлорины; хлорхиноксалин сульфонамид; цикапрост; цис-порфирин; кладрибин; аналоги кломифена; клотримазол; коллисмицин (соШкшусш) А; коллисмицин (соШкшусш) В; комбретастатин А4; аналог комбретастатина; конагенин (сопадешп); крамбесцидин 816; криснатол; криптофицин (сгур!орЬусш) 8; производные криптофицина (сгур!орЬусш) А; курацин А; циклопентантрахиноны; циклоплатам; ципемицин (суретусш); цитарабина окфосфат; цитолитический фактор; цитостатин; дакликсимаб (йасП.хипаЬ); децитабин; дегидродидемнин (йеЬуйгойкетши) В; дезлорелин; дексаметазон; дексифосфамид (йехГокГашке); дексразоксан; дексверапамил; диазиквон (йта/кцюпе); дидемнин В; дидокс; диэтилнорспермин; дигидро-5-азацитидин; 9-диоксамицин; дифенил спиромустин; докозанол; доласетрон; доксифлуридин; дролоксифен; дронабинол; дуокармицин (йиосагтусш) ЗА; эбселен; экомустин; эделфозин; эдреколомаб; эфлорнитин; элемен; эмитефур; эпирубицин; эпристерид; аналог эстрамустина; агонисты эстрогена; антагонисты эстрогена; этанидазол; этопозида фосфат; эксеместан; фадрозол; фазарабин; фенретинид; филграстим; финастерид; флавопиридол; флезеластин; флуастерон (Йиак1егоие); флударабин; фтордаунорубицина гидрохлорид; форфенимекс; форместан; фостриецин; фотемустин; гадолиния тексафирин; галлия нитрат; галоцитабин; ганиреликс; ингибиторы желатиназ; гемцитабин; ингибиторы глутатиона; гепсульфам (Ьеркийаш); герегулин; гексаметиленбисацетамид; гиперицин; ибандроновую кислоту; идарубицин; идоксифен; идрамантон; илмофозин; иломастат; имидазоакридоны; имиквимод; иммуностимулирующие пептиды; ингибитор рецептора инсулиноподобного фактора роста 1; агонисты интерферона; интерфероны; интерлейкины; йобенгуан; йоддоксорубицин (юйойохогиЫсш); 4-ипомеанол (1рошеаио1); ироплакт; ирсогладин; изобенгазол (ЕоЬеида/о1е); изогомогаликондрин ОкоНошоНаПсопйпп) В; итасетрон; джасплакинолид; кагалалид (кака1аййе) Р; ламелларина N триацетат; ланреотид; лейнамицин; ленограстим; лентинана сульфат; лептолстатин (1ер1о1к1айи); летрозол; фактор, ингибирующий лейкемию; альфа-интерферон лейкоцитов; лейпролид (1еиргоййе) + эстроген + прогестерон; лейпрорелин; левамизол; лиарозол; аналог линейных полиаминов; липофильный дисахарид-пептид; липофильные соединения платины; лиссоклинамид (ИккосПтпийе) 7; лобаплатин; ломбрицин; лометрексол; лонидамин; лозоксантрон; ловастатин; локсорибин; луртотекан; лютеция тексафирин; лизофиллин; литические пептиды; майтансин; манностатин А; маримастат; мазопрокол; маспин; ингибиторы матрилизина; ингибиторы матриксных металлопротеиназ; меногарил; мербарон; метерелин (ше1еге1ш); метиониназу; метоклопрамид; М1Р ингибитор; мифепристон; милтефосин; миримостим; некомплементарную двухцепочечную РНК; митогуазон; митолактол; аналоги митомицина; митонафид; митотоксин, фактор роста фибробластов-сапорин; митоксантрон; мофаротен; молграмостим; моноклональное антитело, хорионический гонадотропин человека; монофосфорил липид А+ клеточные стенки микобактерий кк; мопидамол; ингибитор генов, ответственных за множественную лекарственную устойчивость; терапия на основе гена-супрессора 1 множественных опухолей; ипритный противораковый агент; микапероксид (шусарегохке) В; экстракт клеточных стенок микобактерий; мириапорон (шупарогоие); Ν-ацетилдиналин; Ν-замещенные бензамиды; нафарелин; нагрестип (иадгекйр); налоксон + пентазоцин; напавин; нафтерпин (иарЫегрщ); нартограстим; недаплатин; неморубицин; неридроновую кислоту; нейтральную эндопептидазу; нилутамид; нисамицин (шкашусш); модуляторы оксида азота; нитроксидный антиоксидант; нитруллин; О6-бензилгуанин; октреотид; окиценон; олигонуклеотиды; онапристон; ондансетрон; ондансетрон; орацин; пероральный стимулятор цитокинов; ормаплатин; озатерон; оксалиплатин; оксауномицин; палауамин (ра1аиатше); пальмитоилризоксин; памидроновую кислоту; панакситриол; паномифен; парабактин; пазеллиптин; пегаспаргаза; пелдезин; пентозана полисульфат натрия; пентостатин; пентрозол; перфлуброн; перфосфамид; периллиловый спирт; феназиномицин (рНет/тотуст); фенилацетат; ингибиторы фосфатаз; пицибанил; пилокарпина гидрохлорид; пирарубицин; пиритрексим; плацетин (р1асейи) А; плацетин (р1асейи) В; ингибитор активатора плазминогена; платиновый комплекс; соединения платины; триаминовый платиновый комплекс; порфимер натрия; порфиромицин; преднизон; пропил бис-акридон; простагландин 12; ингибиторы протеасом; иммунный модулятор на основе белка А; ингибитор протеинкиназы С; ингибиторы протеинкиназы С, микроалгал (ш1сгоа1да1); ингибиторы протеинтирозинфосфатаз; ингибиторы пуриннуклеозидфосфорилазы; пурпурины; пиразолоакридин; конъюгат пиридоксилированного гемоглобина и полиоксиэтилена; антагонисты КаГбелков; ралтитрексед; рамосетрон; ингибиторы фарнезилтрансферазы, нарушающие функцию белков Как; ингибиторы белков Как; ингибитор Как-ОАР; деметилированный ретеллиптин; рения Ке 186 этидронат; ризоксин (г1и/охт); рибозимы; К11 ретинамид; роглетимид; рохитукин; ромуртид; роквинимекс; рубигинон В1; рубоксил; сафингол; саинтопин (каш1орш); ЗагСИИ; саркофитол А; сарграмостим; миметики Зй| 1 (кеиексеи! йейуей шЫЬйог 1); семустин; ингибитор старения 1; смысловые олигонуклеотиды; ингибиторы сигнальной трансдукции; модуляторы сигнальной трансдукции; одноцепочечный антиген- 9 029372

связывающий белок; сизофиран; собузоксан; борокаптат натрия; фенилацетат натрия; солверол (8о1уего1); соматомедин-связывающий белок; сонермин; спарфозовую кислоту; спикамицин Ό; спиромустин; спленопентин; спонгистатин (СропдЩайп) 1; скваламин; ингибитор стволовых клеток; ингибиторы деления стволовых клеток; стипиамид (Γΐίρίαιηίώ;); ингибиторы стромелизинов; сульфинозин (8и1йиокше); суперактивный антагонист вазоактивного интестинального пептида; сурадисту (8игаб181а); сурамин; сваинсонин; синтетические гликозаминогликаны; таллимустин; тамоксифена метиодид; тауромустин; тазаротен; текогалан (1ееода1аи) натрия; тегафур; теллурапирилий (1е11игаругу1шт); ингибиторы теломераз; темопорфин; темозоломид; тенипозид; тетрахлордекаоксид; тетразомин (1е1га/оти1е); талибластин (ШаПЫакйие); тиокоралин; тромбопоэтин; миметик тромбопоэтина; тимальфазин; агонист рецепторов тимопоэтина; тимотринан; тиреостимулирующий гормон; олово этил этиопурпурин; тирапазамин; титаноцена бихлорид; топсентин; торемифен; фактор тотипотентных стволовых клеток; ингибиторы трансляции; третиноин; триацетилуридин; трицирибин; триметрексат; трипторелин; трописетрон; туростерид; ингибиторы тирозинкиназ; тирфостины; ингибиторы иВС; убенимекс; ингибирующий ростовой фактор, секретируемый мочеполовым синусом; антагонисты рецептора урокиназы; вапреотид; вариолин В; генную терапию заболеваний эритроцитов с использованием векторных систем; веларезол; верамин (уегатте); вердины; вертепорфин; винорелбин; винксалтин (уигхаЮпе); витаксин; ворозол; занотерон; зениплатин; зиласкорб и зиностатин стималамер. Предпочтительными дополнительными противораковыми лекарствами являются 5-фторурацил и лейковорин (1еиеоуогш).

Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения противораковые агенты, которые могут быть использованы в способах, описанных в данном изобретении, выбраны из группы, состоящей из паклитаксела, доцетаксела, 5-фторурацила, трастузумаба, лапатиниба, бевацизумаба, летрозола, гозерелина, тамоксифена, цетуксимаба, панитумумаба, гемцитабина, капецитабина, иринотекана, оксалиплатина, карбоплатина, цисплатина, доксорубицина, эпирубицина, циклофосфамида, метотрексата, винбластина, винкристина, мелфалана и их комбинаций.

Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения противораковый агент и соединение, представленное структурной формулой (I), вводят одновременно. При одновременном введении противораковый агент и соединение могут быть введены в составе одного и того же препарата или в составе разных препаратов. Альтернативно, соединение и дополнительный противораковый агент вводят раздельно. Альтернативно, соединение и дополнительный противораковый агент могут быть введены последовательно, в виде отдельных композиций, в течение подходящего временного интервала (например, в течение курса/периода лечения рака (например, в течение от приблизительно 1,5 ч до приблизительно 5 ч, или до приблизительно 10 ч, или до приблизительно 15 ч, или до приблизительно 20 ч; от приблизительно 1 до приблизительно 2 суток, или до приблизительно 5 суток, или до приблизительно 10 суток, или до приблизительно 14 суток)), который определяет опытный клинический врач (например, в течение периода времени, достаточного для того, чтобы фармацевтическое действие двух видов терапии перекрывалось). Соединение и дополнительный противораковый агент могут быть введены в виде однократной дозы или в виде многократных доз с использованием последовательности и схемы введения, подходящих для достижения желаемого терапевтического эффекта (например, ингибирования роста опухоли).

Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения в способах, описанных в данном изобретении, субъект предварительно не получал лечение ингибитором протеинкиназы ТТК (например, соединением, представленным структурной формулой (I)).

Термин "ингибирование роста клеток, инициирующих развитие опухоли" относится к уменьшению скорости пролиферации и/или выживаемости клеток, инициирующих развитие опухоли.

В контексте данного описания термин "уменьшения вероятности рецидива рака" означает частичное или полное ингибирование, замедление повторного развития рака в месте первичной локализации, или рядом с ним, и/или в месте вторичной локализации после периода ремиссии. Данный термин также означает, что вероятность повторного развития рака после лечения, описанного в данном документе, меньше, чем при отсутствии данного лечения.

В контексте данного описания термин "ремиссия" относится к состоянию рака, при котором клинические симптомы или индикаторы, ассоциированные с раком, исчезли или не могут быть зарегистрированы, обычно после того, как субъект успешно прошел лечение с использованием противораковой терапии.

В контексте данного описания "лечение" представляет собой подход для получения благоприятных или желаемых результатов, включая клинические результаты. Благоприятные или желаемые клинические результаты могут включать, без ограничения, смягчение или уменьшение выраженности одного или более чем одного симптома или облегчение или улучшение состояния, уменьшение степени заболевания, стабилизацию (т.е. не ухудшение) течения заболевания, уменьшение вероятности распространения заболевания, задержку или замедление прогрессирования заболевания, улучшение или временное облегчение болезненного состояния, регистрируемые или нерегистрируемые. "Лечение" также может означать повышение выживаемости по сравнению с ожидаемой выживаемостью при отсутствии лечения. "Лечение" также включает уменьшение вероятности рецидива заболевания.

- 10 029372

В контексте данного описания "лечение субъекта, страдающего раком" включает достижение, частичное или существенное, одного или более чем одного из следующих результатов: прекращение развития, уменьшение степени распространения рака (например, уменьшения размера опухоли), ингибирование скорости развития рака, уменьшение интенсивности или улучшение клинического симптома или индикатора, ассоциированного с раком (такого как тканевые или сывороточные компоненты), или увеличение продолжительности жизни субъекта и уменьшение вероятности рецидива рака.

Обычно эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению варьирует в зависимости от различных факторов, таких как вводимое лекарство или соединение, фармацевтический препарат, путь введения, тип заболевания или расстройства, индивидуальные особенности субъекта или организма, которые лечат, и тому подобное, но тем не менее может быть определено специалистом в данной области техники обычным путем. Эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению может быть легко определено средним специалистом с использованием стандартных методик, известных в данной области техники.

Термин "эффективное количество" означает количество, которое при введении субъекту приводит к благоприятным или желаемым результатам, включая клинические результаты, например ингибирует, останавливает или уменьшает распространение рака (например, согласно клиническим симптомам или количеству раковых клеток) у субъекта по сравнению с контролем.

Согласно одному из вариантов осуществления изобретения, эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению изменяется в диапазоне от приблизительно 0,1 до приблизительно 1000 мг/кг массы тела, альтернативно, от приблизительно 1 до приблизительно 500 мг/кг массы тела и, альтернативно, от приблизительно 20 до приблизительно 300 мг/кг массы тела. Согласно другому варианту осуществления изобретения эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению изменяется в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 5000 мг/м, альтернативно, приблизительно от 5 до приблизительно 2500 мг/м и, альтернативно, от приблизительно 50 до приблизительно 1000 мг/м. Специалисту в данной области понятно, что некоторые факторы могут оказывать влияние на величину дозы, требуемой для эффективного лечения субъекта, страдающего раком, или уменьшают вероятность рецидива развития рака. Данные факторы включают тяжесть заболевания или расстройства, предшествующее лечение, общее состояние здоровья и/или возраст субъекта и другие имеющиеся у субъекта заболевания, но не ограничены ими.

Кроме того, в способах, описанных в данном изобретении (включая лечение субъекта, страдающего раком, или уменьшение вероятности рецидива развития рака), "лечение" субъекта или режим введения доз субъекту с использованием эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению может состоять из однократного введения или, альтернативно, включать серию введений. Например, соединение согласно настоящему изобретению можно вводить по меньшей мере один раз в неделю. Однако согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения конкретное лечение предполагает, что соединение можно вводить субъекту от приблизительно одного раза в неделю до одного раза в сутки. Продолжительность лечения зависит от ряда факторов, таких как тяжесть заболевания, возраст пациента, концентрация и активность соединений согласно настоящему изобретению или их комбинация. Также необходимо принимать во внимание, что эффективная доза соединения, применяемого для лечения, может быть увеличена или уменьшена в течение курса лечения с использованием конкретной схемы лечения. Необходимость изменения дозы может стать очевидной после анализа данных, полученных при выполнении стандартных диагностических исследований, известных в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления изобретения может требоваться длительное введение.

"Субъект" представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека, но также может представлять собой животное, нуждающееся в ветеринарной помощи, например домашних животных (например, собак, котов и т.п.), сельскохозяйственных животных (например, крупный рогатый скот, овец, свиней, лошадей и т.п.) и лабораторных животных (например, крыс, мышей, морских свинок и т.п.).

Соединения согласно настоящему изобретению могут быть введены пациенту в различных формах, в зависимости от выбранного пути введения, что понятно специалистам в данной области техники. Соединения согласно настоящему изобретению могут быть введены, например, пероральным, парентеральным, трансбуккальным, сублингвальным, назальным, ректальным путем, с использованием пластыря, пульверизатора или трансдермального введения и в виде фармацевтических композиций, предназначенных для соответствующего введения. Парентеральное введение включает внутривенный, интраперитонеальный, подкожный, внутримышечный, трансэпителиальный, назальный, внутрилегочный, интратекальный, ректальный и местный пути введения. Парентеральное введение может представлять собой непрерывную инфузию в течение фиксированного периода времени.

Соединения согласно настоящему изобретению могут быть представлены в виде соответствующим образом полученных фармацевтических композиций, предназначенных для введения субъекту. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению необязательно включают один или более чем один фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель, такой как лактоза, крахмал, целлюлоза и декстроза. Также могут быть включены другие эксципиенты, такие как корригенты, подсластители и консерванты, такие как метил, этил, пропил и бутил парабены. Более полный перечень подходящих

- 11 029372

эксципиентов можно найти в "НапбЬоок οί РНагтасеибса1 ΕχοίρίοηΙκ" (5'¹' Еб., РНагтасеибса1 Ргекк (2005). Специалисту в данной области техники известно, как можно получить препараты, подходящие для различных путей введения. Стандартные методики и ингредиенты для выбора и получения подходящих препаратов описаны, например, в "РетпщЮп'к РНагтасеийса1 Заеисек" (2003, 20'¹' ебШои) и в "ТНе Иийеб 81а1ек РНагтасоре1а: ТНе Ν;·ιΙίοη;·ι1 Рогти1агу" (И8Р 24 ΝΡ19) (1999). Носители, разбавители и/или эксципиенты являются "приемлемыми" в смысле совместимости с другими ингредиентами фармацевтической композиции и в смысле безопасности для реципиента.

Обычно соединение согласно настоящему изобретению, предназначенное для перорального терапевтического введения, может быть смешано с эксципиентом и введено в форме проглатываемых таблеток, трансбуккальных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, вафель и т.п..

Обычно растворы соединения согласно настоящему изобретению, предназначенные для парентерального введения, могут быть получены в воде, соответствующим образом смешанной с поверхностноактивным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсии также могут быть получены в глицерине, жидких полиэтиленгликолях, ДМСО и их смесях со спиртом или без спирта, и в маслах. Данные препараты, предназначенные для хранения и использования в стандартных условиях, содержат консервант для предотвращения размножения микроорганизмов.

Обычно для инъекционного использования подходят стерильные водные растворы или дисперсии соединения согласно настоящему изобретению и стерильные порошки соединения согласно настоящему изобретению, предназначенные для экстемпорального приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсий.

Соединения согласно настоящему изобретению, предназначенные для назального введения, могут быть представлены в виде препарата в форме аэрозолей, капель, гелей и порошков. Аэрозольные препараты обычно содержат раствор или высокодисперсную суспензию активного вещества в физиологически приемлемом водном или неводном растворителе и обычно присутствуют в количестве, соответствующем одной дозе или нескольким дозам, в стерильной форме, в герметично закрытом контейнере, который может иметь форму картриджа или многоразового контейнера, предназначенных для использования с распылительным устройством. Альтернативно, герметично закрытый контейнер может представлять собой однозарядное устройство для дозирования, такое как назальный ингалятор с однократной дозой или аэрозольный распылитель, оснащенный дозирующим клапаном, который выбрасывается после использования. Когда лекарственная форма включает аэрозольный распылитель, она обычно содержит пропеллент, который может представлять собой сжатый газ, такой как сжатый воздух, или органический пропеллент, такой как фторхлорзамещенный углеводород. Аэрозольные лекарственные формы также могут быть представлены в форме распылителя с помпой.

Соединения согласно настоящему изобретению, предназначенные для трансбуккального или сублингвального введения, могут быть представлены в виде препарата, содержащего носитель, такой как сахар, гуммиарабик, трагакант или желатин и глицерин, в форме таблеток, лепешек или пастилок.

Соединения согласно настоящему изобретению, предназначенные для ректального введения, могут быть представлены в виде препарата в форме суппозиториев, содержащих стандартную суппозиторную основу, такую как масло какао.

Соединения согласно настоящему изобретению могут быть получены с использованием методик, известных специалистам в данной области техники, что проиллюстрировано общими схемами и методиками и описанными ниже препаративными примерами. Все исходные вещества либо имеются в продаже, либо получены с использованием методик, известных специалистам в данной области техники, и методик, описанных ниже.

В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения, соединения по изобретению могут быть получены с использованием методик, аналогичных методикам, известным в данной области техники. Общие методики синтеза соединений, описанных в формуле изобретения, детально изложены ниже в примере А.

Примеры

Пример А. Синтез.

Общие методики.

Имеющиеся в продаже исходные вещества, реагенты и растворители использовали как есть. В общем случае безводные реакции проводили в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон. В качестве катионообменной смолы использовали имеющуюся в продаже смолу РогаРак® Кхи СХ (^а!егк).

Реакции с использованием микроволнового излучения проводили в микроволновом реакторе Вю1аде 1п111а1ог. За ходом реакции обычно следили с использованием ТСХ (тонкослойной хроматографии), выполняемой на силикагелевых планшетах (Мегск), с визуализацией УФ-излучением на длине волны 254 нм, а также с использованием аналитической ВЭЖХ или ЖХ-МС (Вгикег Ехсциге 4000 или система \Уа1егк ЛссцЩу для ИРЬС (сверхэффективной жидкостной хроматографии)). Очистку промежуточных соединений или конечных продуктов выполняли с использованием колоночной флэшхроматографии на силикагеле 60 (230-400 меш) от ЕМИ сНенисаК или 8Шсус1е или с использованием системы Вю!аде 1ко1ега на силикагелевых картриджах КР-81Ь или НР-81Ь или на основном модифициро- 12 029372

ванном силикагеле ΚΡ-ΝΗ и соответствующих картриджах. Очистку с использованием обратно-фазовой ВЭЖХ выполняли на ВЭЖХ-системе Уапаи Ртер81ат модель 8Ό-1, оснащенной обратно-фазовой колонкой Уапаи МоиосЬтот 10 μ С-18, используя приблизительно 5-30% МеСИ, или МеОН/0,05% ТФУ-Н₂О 70-90% МеСИ, или МеОН/0,05% ТФУ в Н₂О в течение 20-40 мин при скорости потока 30-80 мл/мин. Очистку с использованием обратно-фазовой хроматографии также выполняли на системе Вю1а§е 1§о1ета, оснащенной колонкой КР-С18-Н, используя 10-95% МеОН или СН₃СИ/0,1% ТФУ в Н₂О. Спектр протонного ЯМР регистрировали на спектрометре Вгикег 400 МГц и масс-спектры получали с использованием спектрометра Вгикег Е^сщие 4000 или ИРЬС-системы Уа1ет8 ЛссрЩу.

Названия соединений генерированы с использованием программы, встроенной в СатЪпб§е8ойРетктЕ1тет'8 С’ЬетВюЭга\у ИЙта, версия 11.0 или 12.0.

В описании использовали следующие сокращения и аббревиатуры: вод. - водный;

Аг - аргон;

Вос - трет-бутоксикарбонил;

Ъг. - уширенный; са1сб - рассчитанный; б - дублет;

ДХМ - дихлорметан;

ΌΙΡΕΑ - диизопропилэтиламин;

ДМФА - Ν,Ν-диметилформамид;

ДМСО - диметилсульфоксид;

бррГ - 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен;

ч - час(ы);

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография;

ЖХ-МС - жидкостная хроматография/масс-спектрометрия; мин - минута(ы);

т - мультиплет;

МС-ИЭР - масс-спектрометрия с ионизацией электроспреем;

ЯМР - ядерный магнитный резонанс;

Ο/Ν - в течение ночи;

РЕ - петролейный эфир;

РМВ - пара-метоксибензил;

ргер - препаративная;

к.т. - комнатная температура;

8 - синглет;

ί - триплет;

ТФУ - трифторуксусная кислота;

- 13 029372

Промежуточные соединения

4-Бром-Х-циклопропил-2-метилбензамид

К суспензии 4-бром-2-метилбензойной кислоты (43,0 г, 200 ммоль) и оксалил дихлорида (30,5 г, 240 ммоль) в ДХМ (300 мл) добавляли ДМФА (0,1 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. В течение 16 ч реакционная смесь медленно превращалась в прозрачный желтый раствор. Затем растворитель удаляли под вакуумом и данный неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. Полученный неочищенный продукт повторно растворяли в ДХМ (300 мл) и охлаждали до 0°С. Медленно, в течение 15 мин, добавляли смесь ТЕА (42 мл, 300 ммоль) и циклопропиламина (12,6 г, 220 ммоль) в ДХМ (100 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь разбавляли ДХМ (200 мл) и добавляли воду. Полученную смесь экстрагировали ДХМ и объединенные органические экстракты сушили над Мд80₄ и концентрировали с выходом желаемого продукта в виде бледно-розового твердого вещества (50,1 г, 99%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ м.д.: 7.37 (§, 1Н), 7.31 (ά, >8.0 Гц, 1Н), 7.17 (ά, 1=8.1 Гц, 1Н), 5.93 (Ъг. §, 1Н), 2.90-2.85 (т, 1Н), 2.40 (§, 3Н), 0.90-0.85 (т, 2Н), 0.62-0.58 (т, 2Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 253,9; рассчитано для [С₁₁Н₁₂ВгК0+Н]+ 254,0.

Х-(4-Бром-2-метилфенил)циклопропанкарбоксамид

В 100 мл КВГ 4-бром-2-метиланилин (3,7 г, 20 ммоль) и ΌΙΡΕΑ (6,95 мл, 40 ммоль) смешивали с ДМФА (40 мл). Данную реакционную смесь охлаждали до 0°С в ледяной бане и добавляли циклопропанкарбоновой кислоты хлорангидрид (2,1 г, 20 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°С. Добавляли воду и ЕЮАс (этилацетат), фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, сушили над Να₂80₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (4,76 г, 94%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ м.д.: 7.85-7.72 (т, 1Н), 7.38-7.28 (т, 2Н), 7.15-7.02 (т, 1Н), 2.27 (§, 3Н), 1.57-1.48 (т, 1Н), 1.10 (ςυίηί, 1=3.9 Гц, 2Н), 0.92-0.79 (т, 2Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 253,9; рассчитано для [С₁₁Н₁₂ВгК0+Н]+ 254,0.

Х-Циклопропил-2-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензамид

Смесь 4-бром-Х-циклопропил-2-метилбензамида (3,73 г, 14 ммоль), бис-(пинаколато)дибора (5,59 г, 22 ммоль) и К0Ас (4,29 г, 43 ммоль) в ДМФА (37 мл) продували аргоном в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем добавляли РбС1₂(брр1)-ДХМ (0,59 г, 5 мол.%) и данную реакционную смесь нагревали при 100°С в масляной бане в течение 4 ч. После завершения реакции реакционную смесь разбавляли этилацетатом (200 мл) и водой (100 мл). Объединенные слои фильтровали через подушку диатомовой земли (Се1йе) и подушку промывали небольшим количеством ЕЮАс. Водный слой дополнительно экстрагировали этилацетатом (50 мл) и объединенный органический слой промывали солевым раствором, сушили над Να₂80₄, фильтровали и концентрировали с получением в остатке неочищенного масла. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (градиент: ЕЮАс/гексаны 0100%) с выходом указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества кремового цвета (4,15 г, 94%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ м.д.: 7.66 (§, 1Н), 7.63-7.61 (ά, >7.6 Гц, 1 Н), 7.32-7.30 (ά, >7.6 Гц, 1Н), 5.85 (§, 1 Н), 2.93-2.87 (т, 1Н), 2.46 (₈, 3Н), 1.35 (₈, 12Н), 0.90-0.86 (т, 2Н), 0.63-0.59 (т, 2Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 302,2; рассчитано для [С_пН₂₄ВХ0₃+Н]+ 302,2.

3-Бром-5,7-дихлорпиразоло[1,5-а]пиримидин

К перемешиваемому раствору этоксида натрия в ЕЮН, который получали из натрия (281,3 г,

- 14 029372

12,0 моль) и ΕίΘΗ (10 л) с использованием стандартной методики, добавляли малоновой кислоты диэтиловый эфир (963,7 г, 6,02 моль) при температуре окружающей среды и затем соединение 1Н-пиразол-3амин (500 г, 6,02 моль). Данную реакционную смесь подвергали дефлегмации в течение 12 ч. После охлаждения до комнатной температуры осадок собирали путем фильтрования и растворяли в воде. Полученный водный раствор подкисляли путем добавления 2 М НС1 (рН 2). Образовавшийся осадок собирали путем фильтрования и сушили при пониженном давлении с получением пиразоло[1,5-а]пиримидин5,7(4Н,6Н)-диона (649 г, 71%) в виде желтого твердого вещества, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Перемешиваемую суспензию пиразоло[1,5-а]пиримидин-5,7(4Н,6Н)-диона (265 г, 1,75 моль) и Ν,Ν-диметиланилина (335,6 мл) в РОС1₃ (2,00 кг, 13,2 моль) подвергали дефлегмации в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь вливали в ледяную воду и перемешивали в течение 30 мин, нейтрализовали путем добавления насыщенного водного раствора карбоната натрия и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, солевым раствором и сушили над ΜβδΟ₄, фильтровали и упаривали. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (градиент: ЕЮАс/РЕ 1:10) с получением 5,7-дихлорпиразоло[1,5-а]пиримидина (287 г, 87%) в виде желтого твердого вещества. К раствору 5,7-дихлорпиразоло[1,5-а]пиримидина (246,6 г, 1,31 моль) в ΟΠΥΝ (1,8 л) добавляли ΝΒδ (Ν-бромсукцинимид) (245 г, 1,38 моль). Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. После удаления растворителя реакционную смесь очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (градиент: Е1ОАс/РЕ 1:5) с получением указанного в заголовке соединения (313,5 г, 89%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹Н ЯМР (300 МГц, СОС1₃) δ м.д.: 7.04 (δ, 1Н), 8.21 (δ, 1Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 265,9; рассчитано для [С₆Н₂ВгС1₂Н₃+Н]+ 265,9.

3 -Бром-5-хлор-Ы-(циклопропилметил)пиразоло [1,5-а] пиримидин-7-амин

К раствору 3-бром-5,7-дихлорпиразоло[1,5-а]пиримидина (5,0 г, 19 ммоль) в ДХМ (50 мл) добавляли циклопропилметанамин (1,48 г, 21 ммоль) и ΏΙΡΕΑ (6,6 мл, 38 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Добавляли воду и ДХМ, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические экстракты сушили над №8О₄, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэшхроматографии (градиент: ЕЮАс/гексаны 0-50%) с выходом указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (5,25 г, 92%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ м.д.: 7.97 (δ, 1Н), 6.50 (Ьг. δ, 1Н), 5.97 (δ, 1Н), 3.25 (άά, 1=7.3, 5.5 Гц, 2Н), 1.26-1.13 (т, 1Н), 0.74-0.65 (т, 2Н), 0.37 (ц, 1=5.0 Гц, 2Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 301,0; рассчитано для |С|₀1 Ι|₀Βΐ'(Ί\ι·Ι 1|' 301,0.

(1δ,3δ)-3-(((3 -Бром-5-хлорпиразоло [1,5-а] пиримидин-7-ил)амино)метил) -1 -метилциклобутанол

К раствору 3-бром-5,7-дихлорпиразоло[1,5-а]пиримидина (14,6 г, 55,3 ммоль) в ДХМ (200 мл) добавляли цис-гидрокси-3-метилциклобутан-1-метиламин (7,0 г, 60,9 ммоль) и ΏΙΡΕΑ (19,2 мл, 110,6 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Добавляли воду и ДХМ, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические экстракты сушили над №₂δΟ₄, фильтровали и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (18,1 г, 95%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ м.д.: 7.96 (δ, 1Н), 6.60-6.49 (т, 1Н), 5.99 (δ, 1Н), 3.47 (1, 1=6.0 Гц, 2Н), 2.38-2.27 (т, 3Н), 1.96-1.85 (т, 2Н), 1.43 (δ, 3Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 345,1; рассчитано для [С1₂Н₁₄ВгСШ₄О₂+Н]+ 345,0.

трет-Бутил (3-бром-5-хлорпиразоло [1,5-а] пиримидин-7-ил)(циклопропилметил)карбамат

К раствору 3-бром-5-хлор-Ы-(циклопропилметил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-7-амина (5,25 г, 17,5 ммоль) в ДХМ (150 мл) добавляли Вос₂О (5,70 г, 26,2 ммоль), ΏΜΑΡ (4-диметиламинопиридин)

- 15 029372

(0,21 г, 1,75 ммоль) и ТЕА (7,3 мл, 52,5 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Добавляли воду и ДХМ, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические экстракты сушили над ΜβδΟ₄, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (градиент: ЕЮАс/гексаны 0-40%) с выходом указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (6,24 г, 89%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС1з) δ м.д.: 8.12 (δ, 1Н), 6.85 (δ, 1Н), 3.72 (ά, 1=7.3 Гц, 2Н), 1.39 (δ, 9Н), 1.050.94 (т, 1Н), 0.46-0.37 (т, 2Н), 0.13-0.03 (т, 2Н);

МС-ИЭР: [М-С₄Н₈]+ 345,0; рассчитано для [С15Н18ВгС1Х4О2-С4Н8]⁺ 345,0.

трет-Бутил (3 -бром-5-хлорпиразоло [1,5-а] пиримидин-7 -ил)((( 1δ,3δ)-3 -((трет-бутоксикарбонил)окси)-3-метилциклобутил)метил)карбамат

К раствору (1δ,3δ)-3 -(((3-бром-5 -хлорпиразоло [1,5-а] пиримидин-7 -ил) амино)метил)-1 метилциклобутанола (18,1 г, 52,6 ммоль), Вос₂О (34,3 г, 158 ммоль) и ТЕА (22 мл, 157,8 ммоль) в ДХМ (200 мл) добавляли ОМАР (1,28 г, 10,5 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при 40°С. Растворитель удаляли под вакуумом и добавляли воду и ДХМ, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические экстракты сушили над \а5О₄, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (одновременно на 3 колонках Вю1а§е (100 г МО₂); градиент: ЕЮАс/гексаны 0-30%) с выходом указанного в заголовке соединения в виде бежевого твердого вещества (12,7 г, 44%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ м.д.: 8.11 (δ, 1Н), 6.74 (δ, 1Н), 3.88 (ά, 1=6.5 Гц, 2Н), 2.17 (δ, 3Н), 1.991.88 (т, 2Н), 1.47 (δ, 3Н), 1.45 (δ, 9Н), 1.35 (δ, 9Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 545,1; рассчитано для [С₂₂Н₃₀ВгС1₄О₅+Н]+ 545,1.

(1δ,3δ)-3-(((3 -Бром-5 -хлорпиразоло [1,5-а] пиримидин-7-ил)(4-метоксибензил)амино)метил) -1метилциклобутанол

К раствору (1δ,3δ)-3 -(((3-бром-5 -хлорпиразоло [1,5-а] пиримидин-7-ил) амино)метил)-1 метилциклобутанола (12,0 г, 34,7 ммоль) и 4-метоксибензилхлорида (5,2 мл, 38,2 ммоль) в ДМФА (50 мл) добавляли К₂СО₃ (9,6 г, 69,4 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 3 ч при 60°С. Добавляли воду и ЕЮАс, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали водой, сушили над М§8О₄, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (градиент: ЕЮАс/гексаны 10-100%), используя одновременно три колонки. Фракции, содержащие примеси, собирали и очищали путем флэш-хроматографии с использованием вышеупомянутых условий очистки. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и концентрировали с получением желаемого продукта в виде бледножелтого твердого вещества (13,1 г, 81%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС13) δ м.д.: 8.01 (δ, 1Н), 7.17 (ά, 1=8.7 Гц, 2Н), 6.67 (ά, 1=8.7 Гц, 2Н), 6.02 (δ, 1Н), 4.98 (δ, 2Н), 3.83 (ά, 1=6.4 Гц, 2Н), 3.81 (δ, 3Н), 2.25-2.16 (т, 3Н), 1.76-1.72 (т, 2Н), 1.36 (δ, 3Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 467,1; рассчитано для [С₂₀Н₂₂ВгСШ₄О₂+Н]+ 467,1.

трет-Бутил (3-бром-5-(((18,2К)-2-гидроксициклогексил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-7ил)(циклопропилметил)карбамат

К раствору трет-бутил (3-бром-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-7ил)(циклопропилметил)карбамата (9,0 г, 22,5 ммоль) в ΝΜΡ (90 мл) добавляли (1Κ,2δ)-2аминоциклогексанол-НС1 (4,08 г, 27,0 ммоль) и О1РЕА (3,47 г, 25,1 ммоль). Данную реакционную смесь разделяли на шесть порций, каждую из которых помещали в герметично закрываемую пробирку для микроволновой печи. Каждую пробирку нагревали в микроволновой печи в течение 3 ч при 130°С. Добавляли воду и ЕЮАс, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над №₂8О₄, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный

- 16 029372

продукт очищали путем флэш-хроматографии (градиент: ЕЮАе/гексаны 0-50%), используя одновременно три колонки, с выходом указанного в заголовке соединения в виде бежевого твердого вещества (8,51 г, 79%).

Υ ЯМР (400 МГц, СОС1з) δ м.д.: 7.80 (δ, 1Н), 6.08 (δ, 1Н), 5.33-5.19 (т, 1Н), 4.26-4.14 (т, 1Н), 4.134.06 (т, 1Н), 3.61 (ά, 1=7.3 Гц, 2Н), 2.51 (Ьг. δ, 1н), 1.89-1.62 (т, 8Н), 1.55-1.45 (т, 2Н), 1.40 (δ, 9Н), 1.060.95 (т, 1Н), 0.47-0.38 (т, 2Н), 0.17-0.07 (т, 2Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 408,3; рассчитано для [С₂1Н30ВгЫ5О3+Н]⁺ 480,2.

трет-Бутил (3-бром-5-(пиридин-3-илокси)пиразоло[1,5-а]пиримидин-7-ил)(циклопропилметил)карбамат

Смесь трет-бутил (3-бром-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-7-ил)(циклопропилметил)карбамата (400 мг, 1,0 ммоль), 3-гидроксипиридина (475 мг, 5,0 ммоль), ΌΒυ (0,75 мл, 5,0 ммоль) в ДМЭ (диметоксиэтане) (5 мл) помещали в герметично закрываемую пробирку для микроволновой печи. Смесь нагревали в микроволновой печи в течение 1 ч при 85°С. Добавляли воду и ЕЮАе, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над Ыа₂ЗО₄, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (градиент: ЕЮАе/гексаны 0-50%) с выходом указанного в заголовке соединения в виде коричневого масла (367 мг, 80%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СПСЬ) δ м.д.: 8.64 (ά, 1=2.5 Гц, 1Н) 8.54 (άά, 1=4.5, 1.5 Гц, 1Н) 7.97 (δ, 1Н), 7.787.72 (т, 1Н), 7.44-7.38 (т, 1Н) 6.61 (δ, 1Н) 3.71 (ά, 1=7.3 Гц, 2Н) 1.39 (δ, 9 Н), 1.06-1.01 (т, 1Н) 0.45 (δ, 2Н), 0.13-0.09 (т, 2Н);

МС-ИЭР: [М + Н]+ 460,0; рассчитано для [С₂0Н₂₂ВгЫ5О3+Н]+ 460,1.

трет-Бутил (3-бром-5-(циклопентиламино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-7-ил)(((18,38)-3-((третбутоксикарбонил)окси)-3-метилциклобутил)метил)карбамат

К раствору трет-бутил (3-бром-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-7-ил)(((Е^)-3-((третбутоксикарбонил)окси)-3-метилциклобутил)метил)карбамата (0,45 г, 0,83 ммоль) в ΝΜΡ (4 мл) добавляли циклопентиламин (0,085 г, 1,0 ммоль) и ГИРЕА (0,21 г, 1,66 ммоль). Данную реакционную смесь нагревали в микроволновой печи в течение 3 ч при 130°С. Добавляли воду и ЕЮАе, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над Ν₂3Ο₄, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэшхроматографии (градиент: ЕЮАе/гексаны 0-60%) с выходом указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,40 г, 67%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СВС1₃) δ м.д.: 7.79 (δ, 1Н), 5.94 (δ, 1Н), 5.08 (Ьг. δ, 1Н), 4.23 (Ьг. δ, 1Н), 3.85-3.72 (т, 2Н), 2.28-2.06 (т, 5Н), 2.02-1.89 (т, 2Н), 1.81-1.61 (т, 5Н), 1.48 (δ, 4Н), 1.44 (δ, 9Н), 1.36 (δ, 9Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 594,3; рассчитано для [С₂₇Н₄₀Вг^О₅+Н]+ 594,2.

трет-Бутил (3 -бром-5 -(пиридин-3 -илокси)пиразоло [ 1,5-а]пиримидин-7 -ил)((( 1δ,3 δ)-3 -((третбутоксикарбонил)окси)-3-метилциклобутил)метил)карбамат

Смесь трет-бутил (3-бром-5 -хлорпиразоло [ 1,5-а]пиримидин-7 -ил)((( 1δ,3 δ)-3 -((третбутоксикарбонил)окси)-3-метилциклобутил)метил)карбамата (12,7 г, 23,3 ммоль), 3-гидроксипиридина (4,43 г, 46,6 ммоль) и К₂СО₃ (9,65 г, 69,9 ммоль) в ДМФА (100 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой, сушили над №₂5О.1, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Данный неочищенный продукт растирали с Е1₂О и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого твердого вещества (8,43 г, 14,0 ммоль). Маточный раствор концентрировали под вакуумом и очищали путем флэшхроматографии (градиент: ЕЮАе/гексаны 0-40%) с получением указанного в заголовке соединения в

- 17 029372

виде светло-оранжевого твердого вещества (4,07 г, 6,74 ммоль). Твердое вещество, полученное в результате растирания, и твердое вещество, полученное путем флэш-хроматографии, объединяли с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-оранжевого твердого вещества (12,50 г, 89%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ м.д.: 8.65 (ά, 1=2.8 Гц, 1Н), 8.55 (άά, 1=4.6, 1.4 Гц, 1Н), 7.98 (δ, 1Н), 7.787.73 (т, 1Н), 7.46-7.40 (т, 1Н), 6.50 (δ, 1Н), 3.89 (ά, 1=6.8 Гц, 2Н), 2.30-2.15 (т, 3Н), 2.02-1.93 (т, 2Н), 1.50 (δ, 3Н), 1.45 (δ, 9Н), 1.38 (δ, 9Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 604,3; рассчитано для [С₂₇Н₃₄ВгЫ₅О₆+Н]+ 604,2.

(П^)-3-(((3-Бром-5-(пиридин-3-илокси)пиразоло[1,5-а]пиримидин-7-ил)(4метоксибензил)амино)метил)-1 -метилциклобутанол

К раствору (П^)-3-(((3-бром-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-7-ил)(4-метоксибензил)амино)метил)-1-метилциклобутанола (13,1 г, 28,2 ммоль) и 3-гидроксипиридина (4,0 г, 42,3 ммоль) в ДМФА (70 мл) добавляли К₂СО₃ (7,8 г, 56,3 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 22 ч при 80°С. Смесь 60% ЫаН (0,6 г, 15 ммоль) и 3-гидроксипиридина (1,4 г, 14,7 ммоль) в ДМФА перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре и затем добавляли к реакционной смеси. Полученный раствор перемешивали в течение 20 ч при 100°С. Добавляли воду и ЕЮАс, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали водой, сушили над М§8О₄, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэшхроматографии (градиент: ЕЮАс/гексаны 10-100%), используя одновременно три колонки. Фракции, содержащие примеси, собирали и очищали путем флэш-хроматографии (градиент: ЕЮАс/гексаны 50100%). Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и концентрировали с получением желаемого продукта в виде бледно-желтого твердого вещества (9,5 г, 64%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ м.д.: 8.56 (ά, 1=4 Гц, 1Н), 8.45 (ά, 1=8 Гц, 1Н), 8.00 (δ, 1Н), 7.69-7.65 (т, 1Н), 7.36 (άά, 1=4.8, 0.4 Гц, 1Н), 7.19 (ά, 1=8.7 Гц, 2Н), 6.85 (ά, 7= 8.7 Гц, 2Н), 5.71 (δ, 1Н), 4.91 (δ, 2Н), 3.87 (ά, 1=6.7 Гц, 2Н), 3.87 (δ, 3Н), 2.30-2.15 (т, 3Н), 1.77 (ΐ, 1=8.1 Гц, 2Н), 1.37 (δ, 3Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 524,2; рассчитано для [С₂₅Н₂₆ВгЫ₅О₃+Н]+ 524,1.

Ы-Циклоропил-4-(7-((((П^)-3-гидрокси-3-метилциклобутил)метил)(4-метоксибензил)амино)-5(пиридин-3-илокси)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-2-метилбензамид

Смесь (П^)-3-(((3-бром-5-(пиридин-3-илокси)пиразоло[1,5-а]пиримидин-7-ил)(4-метоксибензил)амино)метил)-1-метилциклобутанола (9,5 г, 18,1 ммоль), Ы-циклопропил-2-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензамида (7,6 г, 25,4 ммоль), 2 М К₃РО₄ (23 мл, 45,3 ммоль) в ТГФ (100 мл) продували аргоном в течение 10 мин, затем добавляли РάС1₂άρρΤДХМ (1,5 г, 1,8 ммоль). Полученную смесь нагревали при температуре дефлегмации в масляной бане в течение 16 ч при 84°С. Затем реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и насыщенным раствором ЫаНСО₃. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном и объединенные органические экстракты сушили над М§8О₄, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (градиент: ЕЮАс/гексаны 50-100%), используя одновременно три колонки. Фракции, содержащие примеси, собирали и очищали путем флэш-хроматографии с использованием вышеупомянутых условий очистки. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и концентрировали с получением желаемого продукта в виде оранжевого твердого вещества (9,6 г, 85%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ м.д.: 8.90-8.84 (т, 1Н), 8.55 (ά, 1=4.5 Гц, 1Н), 8.29 (δ, 1Н). 7.88-7.83 (т, 1Н), 7.63 (δ, 1Н), 7.58-7.53 (т, 2Н), 7.35-7.31 (т, 1н), 7.23 (ά, 1=8.6 Гц, 2Н), 6.89 (ά, 1=8.6 Гц, 2Н), 6.19 (Ьг. δ, 1Н), 5.82 (δ, 1Н), 4.99 (δ, 2Н), 3.90 (ά, 1=10.0 Гц, 2Н), 3.80 (δ, 3Н), 2.93-2.90 (т, 1Н), 2.40 (δ, 3Н), 2.362.28 (т, 1Н), 2.22-2.20 (т, 2Н), 1.89-1.88 (т, 1Н), 1.80 (ΐ, 1=8.7 Гц, 2Н), 1.38 (δ, 3Н), 0.88-0.85 (т, 2Н), 0.68-0.64 (т, 2Н);

МС-ИЭР: [М + Н]+ 619,3; рассчитано для [ΟΑΝΑ+Η]* 619,3.

- 18 029372

Получение типичных соединений по изобретению

А1. Ы-Циклопропил-4-(7-((циклопропилметил)амино)-5-(((13,2К-2-гидроксициклогексил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-2-метилбензамида гидрохлорид

Смесь трет-бутил (3-бром-5-(((13,2К)-2-гидроксициклогексил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-7ил)(циклопропилметил)карбамата (8,48 г, 17,7 ммоль), Ы-циклопропил-2-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензамида (6,92 г, 23,0 ммоль), РбС1₂бррГДХМ (1,44 г, 1,76 ммоль) и 2 М К₃РО₄ (26,6 мл, 106,2 ммоль) в ТГФ (60 мл) разделяли на четыре порции, каждую из которых помещали в герметично закрываемую пробирку для микроволновой печи. Каждую пробирку заполняли аргоном и нагревали в микроволновой печи в течение 3 ч при 125°С. Добавляли воду и ЕЮАс, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над Ыа₂ЗО₄, фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэшхроматографии (градиент: ЕЮАс/гексаны 20-100%), используя одновременно две колонки, с выходом желтого твердого вещества.

Соединение, полученное на предыдущей стадии, растворяли в ДХМ (20 мл) и обрабатывали ТФУ (20 мл) в течение 1 ч при комнатной температуре. После завершения реакции растворитель удаляли под вакуумом и неочищенный продукт повторно растворяли в ДХМ (20 мл), нейтрализовали путем добавления насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над ЫаЗО₄, фильтровали и концентрировали. Данный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (градиент: 50-100% ЕЮАс/гексаны, затем МеОН/ДХМ 010%) и растирали с НьО с получением указанного в заголовке соединения в форме свободного основания (белое твердое вещество). Полученное свободное основание растворяли в смеси ДХМ (25 мл) и МеОН (50 мл), затем медленно добавляли НС1 (1 М Е(₂О, 2 экв.). Растворитель удаляли под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в форме НС1-соли, в виде бледно-желтого твердого вещества (2,09 г, выход после 2 стадий: 25%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СО₃ОО) δ м.д.: 8.21 (δ, 1Н), 7.51-7.37 (т, 3Н), 5.67 (Ьг. δ, 1Н), 4.04-3.82 (т, 2Н), 3.46-3.37 (т, 2Н), 2.93-2.82 (т, 1Н), 2.47 (δ, 3Н), 1.89-1.64 (т, 6Н), 1.61-1.42 (т, 2Н), 1.31-1.21 (т, 1Н), 0.88-0.78 (т, 2Н), 0.70-0.58 (т, 4Н), 0.46-0.36 (т, 2Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 475,3; рассчитано для [С₂₇Н₃₄Ы₆О₂+Н]+ 475,3.

Чистота согласно ВЭЖХ: 98% при 254 нм.

А2. Ы-Циклопропил-4-(7-((циклопропилметил)амино)-5-(пиридин-3-илокси)пиразоло[1,5а]пиримидин-3-ил)-2-метилбензамида гидрохлорид

Смесь трет-бутил (3-бром-5-(пиридин-3-илокси)пиразоло[1,5-а]пиримидин-7ил)(циклопропилметил)карбамата (367 мг, 0,80 ммоль), Ы-циклопропил-2-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензамида (289 мг, 0,96 ммоль), РбС1₂бррГДХМ (65 мг, 0,080 ммоль) и 2 М К₃РО₄ (1,4 мл, 2,8 ммоль) в ТГФ (4 мл) помещали в герметично закрываемую пробирку для микроволновой печи. Пробирку заполняли аргоном и нагревали в микроволновой печи в течение 4 ч при 130°С. Добавляли воду и ЕЮАс, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над Ыа₂ЗО₄, фильтровали и концентрировали. Данный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (градиент: ЕЮАс/гексаны 20-100%) с получением желтого масла. Соединение, полученное на предыдущей стадии, растворяли в ДХМ (6 мл) и обрабатывали ТФУ (2 мл) в течение 1 ч при комнатной температуре. После завершения реакции растворитель удаляли под вакуумом и неочищенный продукт повторно растворяли в МеОН (4 мл), фильтровали и очищали путем препаративной ВЭЖХ. Фракции пропускали через колонку РогаРак и растирали с НьО с получением указанного в заголовке соединения в форме свободного основания (белое твердое веществе, 119 мг). За- 19 029372

тем порцию полученного свободного основания (67 мг, 0,15 ммоль) растворяли в МеОН (10 мл) и затем медленно добавляли НС1 (1 М Е1₂О, 2 экв.). Данную смесь концентрировали и растирали с Е1₂О с получением указанного в заголовке соединения в форме НС1-соли, в виде желтого твердого вещества (55 мг, выход после 2 стадий: 25%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОзОО) δ м.д.: 9.10 (б, 1Н), 8.82 (б, 1=6.0 Гц, 1Н), 8.73-8.66 (т, 1Н), 8.41 (б, 1Н), 8.24-8.15 (т, 1Н), 7.69 (б, 1Н), 7.60 (б, 1=8.3 Гц, 1Н), 7.23 (б, 1=8.0 Гц, 1н), 6.07 (б, 1Н), 3.39 (б, 1=7.0 Гц, 2Н), 2.89-2.78 (т, 1Н), 2.29 (б, 3Н), 1.37-1.23 (т, 1Н), 0.86-0.75 (т, 2Н), 0.70-0.56 (т, 4Н), 0.45-0.38 (т, 2Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 455,2; рассчитано для [С26Н26Н₆О2+Н]⁺ 455,2.

Чистота согласно ВЭЖХ: 95,9% при 254 нм.

А3. 4-(5-(Циклопентиламино)-7-((((1Б,3Б)-3-гидрокси-3-метилциклобутил)метил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-Ы-циклопропил-2-метилбензамида гидрохлорид

Смесь трет-бутил (3-бром-5-(циклопентиламино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-7-ил)(((1Б,3Б)-3-((третбутоксикарбонил)окси)-3-метилциклобутил)метил)карбамата (0,40 г, 0,67 ммоль), Ы-циклопропил-2метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензамида (0,26 г, 0,88 ммоль), РбС1₂бррГ-ДХМ (0,055 г, 0,067 ммоль) и 2 М К₃РО₄ (1 мл, 2,01 ммоль) в ТГФ (4 мл) продували аргоном и нагревали в микроволновой печи в течение 3 ч при 130°С. Добавляли воду и ЕЮАс, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над На₂ЗО₄, фильтровали и концентрировали. Данный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (градиент: ЕЮАс/гекс 20-100%) с получением желтого масла. Соединение, полученное на предыдущей стадии, растворяли в ДХМ (10 мл) и обрабатывали ТФУ (3 мл) в течение 3 ч при комнатной температуре. После завершения реакции растворитель удаляли под вакуумом и полученный неочищенный продукт растворяли в МеОН (5 мл). Данную смесь фильтровали и очищали путем препаративной ВЭЖХ. Соединение пропускали через картридж РогаРак и растирали с Е1₂О с получением указанного в заголовке соединения в форме свободного основания (белое твердое вещество). Полученное свободное основание растворяли в МеОН (5 мл) и затем медленно добавляли НС1 (1 М Е1₂О, 2 экв.). Растворитель удаляли под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в форме НС1-соли, в виде светло-оранжевого твердого вещества (75 мг, выход после 2 стадий: 21%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СОэОО) δ м.д.: 8.18 (б, 1Н), 7.42 (б, 3Н), 5.52 (Ьг. б, 1Н), 4.23-4.11 (т, 1Н), 3.683.54 (т, 2Н), 2.93-2.81 (т, 1Н), 2.46 (б, 3Н), 2.38-2.27 (т, 1Н), 2.26-2.07 (т, 4Н), 1.99-1.89 (т, 2Н), 1.881.59 (т, 6Н), 1.35 (б, 3Н), 0.86-0.79 (т, 2Н), 0.66-0.58 (т, 2Н);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 489,4; рассчитано для ^28^6^2+4+ 489,3.

Чистота согласно ВЭЖХ: 99% при 254 нм.

А4. Ы-Циклопропил-4-(7-((((1Б,3Б)-3-гидрокси-3-метилциклобутил)метил)амино)-5-(пиридин-3илокси)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-2-метилбензамида гидрохлорид и его свободное основание

А) Через снятие Вос-защитной группы.

Смесь трет-бутил (3-бром-5-(пиридин-3-илокси)пиразоло [ 1,5-а]пиримидин-7-ил)((( 1б,3 Б)-3-((третбутоксикарбонил)окси)-3-метилциклобутил)метил)карбамата (0,23 г, 0,38 ммоль), Н-циклопропил-2метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензамида (0,15 г, 0,49 ммоль), РбС1₂бррГ-ДХМ (0,15 г, 0,49 ммоль) и 2 М К3РО4 (0,57 мл, 1,14 ммоль) в ТГФ (4 мл) продували аргоном и нагревали в микроволновой печи в течение 3 ч при 130°С. Добавляли воду и ЕЮАс, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над НаЗО₄, фильтровали и концентрировали. Данный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (градиент: ЕЮАс/гексаны 20-60%) с получением желтого масла. Промежуточное соединение, полученное на предыдущей стадии, растворяли в ДХМ (10 мл) и обрабатывали ТФУ (3 мл) в течение 3 ч при комнатной

- 20 029372

температуре. После завершения реакции растворитель удаляли под вакуумом и полученный неочищенный продукт растворяли в МеОН (5 мл). Данную смесь фильтровали и очищали путем препаративной ВЭЖХ. Соединение пропускали через картридж РогаРак и растирали с Е!₂О с получением указанного в заголовке соединения в форме свободного основания (белое твердое вещество). Полученное свободное основание растворяли в МеОН (5 мл), и затем медленно добавляли НС1 (1 М Е!₂О, 2 экв.). Растворитель удаляли под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в форме НС1-соли, в виде бежевого твердого вещества (96 мг, выход после 2 стадий: 47%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭзОЭ) δ м.д.: 9.14 (Ьг. δ, 1Η), 8.89-8.82 (т, 1Η), 8.79-8.71 (т, 1Η), 8.40 (δ, 1Η), 8.31-8.21 (т, 1Η), 7.68 (δ, 1Η), 7.59 (д, 1=9.5 Гц, 1Η), 7.23 (д, 1=8.0 Гц, 1Η), 6.06 (δ, 1Η), 3.56 (д, 1=6.5 Гц, 2Н), 2.88-2.79 (т, 1Η), 2.40-2.31 (т, 1Η), 2.29 (δ, 3Н), 2.26-2.18 (т, 2Η), 1.99-1.89 (т, 2Η), 1.37 (δ, 3Н), 0.85-0.76 (т, 2Η), 0.63-0.53 (т, 2Η);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 499,3; рассчитано для [С₂₈Н₃₍Л₆О₃+Н]+ 499,2.

Чистота согласно ВЭЖХ: 99.5% при 254 нм.

Б) Через снятие РМВ-защитной группы.

Смесь №циклопропил-4-(7-((((^^)-3-гидрокси-3-метилциклобутил)метил)(4-метоксибензил)амино)-5-(пиридин-3-илокси)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-2-метилбензамида (9,6 г, 15,5 ммоль), ТФУ (50 мл) в ЭСЕ (1,2-дихлорэтане) (70 мл) нагревали в масляной бане в течение 4 ч при 50°С. После завершения реакции растворитель удаляли под вакуумом и полученный неочищенный продукт растворяли в смеси МеОН/ДХМ (100 мл/25 мл). Затем добавляли 2 М №₂СО₃ (150 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном и объединенные органические экстракты промывали водой, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали. Данный неочищенный продукт растирали в смеси ДХМ/Е!₂О (10 мл/70 мл) и обрабатывали ультразвуком с получением указанного в заголовке соединения в форме свободного основания, в виде желтоватого твердого вещества (5,9 г, 77%).

¹Н ЯМР (400 МГц, СО₃ОП) δ м.д.: 8.58-8.53 (т, 1Η), 8.50-8.46 (т, 1Η), 8.36 (δ, 1Η), 7.86-7.80 (т, 1Η), 7.76-7.72 (т, 1Η), 7.61-7.55 (т, 2Η), 7.18 (д, 1=8.0 Гц, 1Η), 5.92 (δ, 1Η), 3.52 (д, 1=6.8 Гц, 2Н), 2.862.77 (т, 1Η), 2.38-2.28 (т, 1Η), 2.25 (δ, 3Н), 2.24-2.18 (т, 2Η), 1.99-1.88 (т, 2Η), 1.37 (δ, 3Н), 0.84-0.75 (т, 2Η), 0.64-0.54 (т, 2Η);

МС-ИЭР: [М+Н]+ 499,2; рассчитано для [С₂8НЛО₃+Н]+ 499,2.

Чистота согласно ВЭЖХ: 96,1% при 235 нм.

Следующие соединения по изобретению синтезировали аналогично соединениям, описанным в примерах А1-4_

Структура	Пример № МС рассчитанное; МС-ИЭР [М+Н]+ Форма соли; ВЭЖХ-чистота	II ЯМР
но /ГЛ ν м У /ΥΝΗ V °	А5 [ε28Η30Ν6ο3+Η]+ 499,2; 499,3; свободное основание; 98,9% при 254 нм	(400 МГц, СОзСЮ) δ м.д.: 8,55 (сМ, 7 = 2,8, 0,4 Гц, 1Н), 8,47 (άά, Э= 4,8, 1,6 Гц, 1Н), 8,33 (§, 1 Н), 7,83-7,80 (ш, 1Н), 7,72 (δ, 1Н), 7,58-7,55 (т, 2Н), 7,18 (ά, Э= 8,0 Гц, 1Н), 5,89 (δ, 1Н), 3,49 (ά, Э= 7,6 Гц, 2Н), 2,87-2,78 (т,

- 21 029372

2Н), 2,28-2,23 (ш, 5Н), 1,97-1,92 (ш,

2Н), 1,36 (з, ЗН), 0,82-0,77 (ш, 2Н),

0,62-0,58 (ш, 2Н)

..θ’

А6

[<7₂₇Η₂₈Ν₆Ο₃+Η]⁺

485,2;

485,3;

НС1-соль;

98,8% при 254 нм

(400 МГц, ΓΩ₃ΟΩ) δ м.д.: 9,13 (б, 7 = 2,3 Гц, 1Н), 8,86 (б, = 5,8 Гц, 1Н),

8,77-8,69 (ш, 1Н), 8,40 (з, 1Н), 8,26 (бб, = 8,8, 5,8 Гц, 1Н), 7,67 (з, 1Н), 7,59 (б, 8,0 Гц, 1Н), 7,24 (б, 7 = 8,0

Гц, 1Н), 6,07 (з, 1Н), 4,53-4,39 (ш, 1Н), 3,57 (б, 7= 8,0 Гц, 2Н), 2,89-2,79

А8

[<7₂₇Η₃₄Ν₆Ο₂+Η]⁺

475,3;

475,4;

НСГсоль;

99,3% при 254 нм

А11

[<7₂₇Η₂₈Ν₆Ο₃ + Н]⁺ 485,2 485,2;

НСГсоль;

98,6% при 254 нм

(ш, 1Н), 2,76-2,61 (ш, 1Н), 2,30 (з, ЗН), 2,29-2,21 (ш, 2Н), 2,21-2,08 (ш, 2Н), 0,85-0,78 (ш, 2Н), 0,65-0,58 (ш, 2Н)

(400 МГц, СОДО) δ м.д.: 8,22 (з, 1Н), 7,51-7,36 (ш, ЗН), 5,68 (з, 1Н), 3,77 (з, 2Н), 3,37-3,33 (ш, 2Н), 2,93-2,84 (ш, 1Н), 2,47 (з, ЗН), 2,07-1,95 (ш, 4Н), 1,93-1,72 (ш, 4Н), 1,34-1,19 (ш, 1Н), 0,88-0,78 (ш, 2Н), 0,69-0,59 (ш, 4Н), 0,45-0,37 (ш, 2Н)

(400 МГц, СОДО) δ м.д.: 9,14 (з, 1Н), 8,85 (б, 7 = 5,5 Гц, 1Н), 8,79-8,72 (ш, 1Н), 8,40 (з, 1Н), 8,30-8,21 (ш, 1Н), 7,68 (з, 1Н), 7,59 (б, 7 = 7,8 Гц, 1Н), 7,23 (б, 7 = 8,0 Гц, 1Н), 6,06 (з, 1Н), 4,17-4,06 (ш, 1Н), 3,54 (б, 7= 6,5 Гц, 2Н), 2,88-2,78 (ш, 1Н), 2,53-2,43 (ш, 2Н), 2,29 (з, 4Н), 1,81-1,68 (ш, 2Н), 0,84-0,77 (ш, 2Н), 0,62-0,56 (ш, 2Н)

ΝΗ

А12

[С₂₇Н₃₄И₆О₂+Н]⁺

475,3;

475,4;

НСГсоль;

97,5% при 254 нм

А13

[<7₂₈Η₃₆Ν₆Ο₂ +Н]⁺ 489,3;

489,4

ТФУ-соль;

98,2% при 254 нм

(400 МГц, СО₃(Ш) δ м.д.: 8,18 (з, 1Н), 7,55-7,29 (ш, ЗН), 5,54 (Ьг, з, 1Н), 4,50-4,37 (т, 1Н), 4,26-4,07 (т, 1Н), 3,62 (б, 7 = 6,8 Гц, 2Н), 2,92-2,83 (т, 1Н), 2,75-2,61 (т, 1Н), 2,46 (з, ЗН), 2,31-2,02 (т, 6Н), 1,92-1,56 (т, 6Н), 0,91-0,75 (т, 2Н), 0,71-0,52 (т, 2Н) (400 МГц, СО₃(Ш) δ м.д.: 8,18 (з, 1Н), 7,48-7,36 (т, ЗН), 5,52 (з, 1Н), 4,234,10 (т, 1Н), 3,65-3,57 (т, 2Н), 2,932,75 (т, 2Н), 2,46 (з, ЗН), 2,31-2,21 (т, 2Н), 2,20-2,11 (т, ЗН), 2,06-1,89 (т, 2Н), 1,89-1,50 (т, 6Н), 1,37 (з.ЗН), 0,87-0,79 (т, 2Н), 0,68-0,56 (т, 2Н)

- 22 029372

Пример Б. Анализ ингибирования ТТК.

Активную ТТК получали от 1пуПгодсп в виде рекомбинантного белка непроцессированной ТТК человека с С8Т (глутатион-§-трансферазой) на аминоконце. ТТК человека (остатки 1-275), меченную §ИМО (малым убиквитин-подобным модификатором), содержащим на аминоконце 6 остатков гистидина, экспрессировали в Е.сой и очищали до гомогенности >95% с использованием №²+-агарозы, гельфильтрации и ионообменной хроматографии.

Активность ТТК измеряли с использованием в качестве системы регистрации непрямого ЕЬ1§А (твердофазного иммуноферментного анализа). С8Т-ТТК (0,68 нМ) инкубировали в присутствии 16 мкМ АТФ (81§ша кат. № А7699) или 100 мкМ АТФ, 50 мМ Нерек рН 7,2, 1 мМ ЕСТА, 10 мМ МдС1₂ и 0,1% Плюроник в 96-луночном микротитрационном планшете, предварительно покрытом ТТК человека (остатки 1-275), меченной §ИМО, содержащим на аминоконце 6 остатков гистидина.

Реакцию проводили в течение 30 мин, затем планшет промывали 5 раз буфером для промывания (фосфатно-солевым буфером с добавлением 0,2% Твина 20) и инкубировали в течение 30 мин с первичным антителом (Се11 δί§ηα1ίη§ кат. № 9381) в разбавлении 1:3000. Планшет промывали 5 раз буфером для промывания, инкубировали в течение 30 мин в присутствии вторичного антитела, конъюгированного с пероксидазой хрена (ΒίοΡαά кат. № 1721019, концентрация 1:3000), промывали еще 5 раз буфером для промывания и инкубировали в присутствии ТМВ (3,3',5,5'-тетраметилбензидина) (81дша кат. № Т0440), в качестве субстрата. Колориметрическую реакцию проводили в течение 5 мин, затем добавляли стопраствор (0,5н. серная кислота) и проводили количественную регистрацию сигнала при 450 нм с использованием монохроматического планшет-ридера или планшет-ридера с фильтром (Мо1еси1аг Иеуюек М5 или Весктап ЭТХ880 соответственно).

Ингибирующую способность соединений определяли либо при фиксированной концентрации (10 мкМ), либо при различных концентрациях ингибитора (обычно путем титрования "доза-ответ" в 10 точках в диапазоне концентраций от 0,5 до 0,001 мкМ). Соединения предварительно инкубировали в присутствии фермента в течение 5 мин, затем добавляли АТФ и остающуюся активность количественно определяли с использованием описанного выше анализа активности. % ингибирования соединения определяли с использованием следующей формулы: % ингибирования = 100 х (1 - (экспериментальное значение - фоновое значение)/(высокоактивный контроль - фоновое значение)). Значение ИК₅₀ (концентрации, требуемой для 50% ингибирования) определяли с использованием подгонки к нелинейной 4-параметрической логистической кривой (ХЬй14, ГОВ§) по формуле: (А + (В/(1 + ((х/С)^ЛИ)))), где А = фоновое значение, В = диапазон, С = точка перегиба, И = параметр подгонки кривой.

В таблиеце (см. ниже) приведены диапазоны значений ИК₅₀ типичных соединений, полученные с использованием 100 мкМ АТФ. Диапазоны значений ИК₅₀ указаны как "А", если значения ИК₅₀ меньше или равны 0,1 мкМ, как "В", если значения ИК₅₀ больше 0,1 мкМ и меньше или равны 0,5 мкМ, и как "С", если значения ИК50 больше 0,5 мкМ. Диапазоны значений ИК50, отмеченные звездочкой, получены с использованием для анализа 16 мкМ АТФ (§1§та кат. № А7699).

Пример В. Данные для типичных соединений по изобретению, полученные с использованием линии раковых клеток.

Клетки рака молочной железы (МИА-МВ-468), клетки рака толстой кишки (НСТ116) и клетки рака яичника (ОУСАК-3) высевали (от 1000 до 4000 клеток в объеме 80 мкл/лунку, в зависимости от скорости роста клеток) в 96-луночный планшет и инкубировали в течение 24 ч, затем сверху наносили аликвоту соединения. Соединения, в виде 10 мМ маточных растворов в 100% ДМСО, разбавляли клеточной ростовой средой ИМЕМ (модифицированной по способу Дульбекко средой Игла) (1пуйгодеп, ВигПпдЮп. ΟΝ, Канада), содержащей 10% РВ§ (эмбриональной телячьей сыворотки), до концентраций в диапазоне от 50 нМ до 250 мкМ. Аликвоты (20 мкл) из каждого разведения наносили сверху на клетки, предварительно высеянные в объеме 80 мкл в 96-луночные планшеты, до конечных концентраций соединения в диапазоне от 10 нМ до 50 мкМ. Клетки культивировали в течение 5 суток и затем выполняли анализ с использованием красителя сульфородамин В (§КВ) для определения ингибирующей активности соединений в отношении клеточного роста.

Сульфородамин В (полученный от §1дта, ОакуШе, ΟΝ, Канада) представляет собой водорастворимый краситель, который связывается с основными аминокислотами клеточных белков. Соответственно, колориметрическое измерение связанного красителя позволяет определить общую массу белков и, следовательно, количество клеток. Клетки фиксировали ίη 8Йи путем медленного откачивания культуральной среды и добавления 50 мкл охлажденной до 0°С 10% трихлоруксусной кислоты (ТХУ) на лунку и инкубировали в течение 30-60 мин при 4°С. Планшеты промывали пять раз водой и оставляли сушиться на воздухе в течение 5 мин. В каждую лунку добавляли 50 мкл 0,4% (мас./об.) раствора §КВ в 1% (об./об.) уксусной кислоте и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре для завершения реакции окрашивания. После окрашивания планшеты промывали четыре раза 1% уксусной кислотой для удаления несвязанного красителя и затем оставляли сушиться на воздухе в течение 5 мин. Связанный краситель переводили в раствор путем добавления 100 мкл 10 мМ Трис рН 10,5 на лунку. Оптическую плотность измеряли при 570 нм.

- 23 029372

Процент (%) относительного ингибирования роста рассчитывали путем сравнения с пробами, содержащими только обработанные ДМСО клетки (100%). Для соединений с цитотоксической активностью определяли значения ΟΙ₅₀. Значения ΟΙ₅₀ вычисляли с использованием программы СтарЬРаб ΡΚΙ8Μ (СтарЬРаб 8ойтате, 1пс., Сан-Диего, Калифорния, США). ΟΙ₅₀ (ингибирование роста) - концентрация соединения, вызывающая 50% ингибирование роста клеток.

В таблице (см. ниже) приведены диапазоны значений ΟΙ₅₀ соединений, описанных в примерах, полученных при анализе клеточных линий рака молочной железы (ΜΌΑ-ΜΒ-468), клеточных линий рака толстой кишки (НСТ116) и клеточных линий рака яичника (ОУСАК-3). Приведенные данные показывают, что у исследованных соединений отличаются уровни ингибирования роста/цитотоксической активности в отношении клеток рака молочной железы, рака толстой кишки и рака яичника. Диапазоны значений ΟΙ₅ο указаны как "А," если значения СЕ₀ меньше или равны 0,1 мкМ, как "В," если значения СР₀ больше 0,1 мкМ и меньше или равны 0,5 мкМ, и как "С," если значения ΟΙ₅₀ больше 0,5 мкМ.

Пример Г. Данные по ингибированию типичными соединениями клеток, инициирующих развитие опухоли, рака толстой кишки и яичника

Вещества и методики.

Обработанные колбы Т-75 и 96-луночные планшеты для нетканевых и тканевых культур получали от УУК Витаминную добавку В-27, МЕМ ΝΕΑΑ, пируват натрия, Ь-глутамин, добавку N2, пенициллин-стрептомицин и фунгизон/амфотерицин В получали от ΙηνίΙΐΌβοη. Смесь липидов, гепарин и ЕСР получали от §1§та; ЪРСР получали от ΒΌ Вю8аепсе8. Клетки, инициирующие развитие опухоли (ТЮ), из толстой кишки в соответствии со стандартной методикой поддерживали с использованием обработанных колб Т-75 для нетканевых культур в среде ОМЕМ:Р12, содержащей добавку 0,2Х В-27, 4 мкг/мл гепарина, 1Х МЕМ ΝΕΑΑ, 1Х пируват натрия, 1 мМ глутамин, 10 пг/мкл ЪРСР, 20 пг/мкл ЕСР, добавку 1Х N2, смесь липидов, пенициллин-стрептомицин и фунгизон/амфотерицин В. ТЮ из яичника в соответствии со стандартной методикой поддерживали с использованием обработанных колб Т-75 для тканевых культур в среде ЭМЕМ:Р12. содержащей добавку 1Х В-27, 4 мкг/мл гепарина, 20 пг/мкл ЪРСР, 20 пг/мкл ЕСР и пенициллин-стрептомицин.

Протокол анализа.

Соединения, описанные в данном документе, растворяли в ДМСО и затем разбавляли средой для культивирования клеток для определения их СР₀. ТЮ из толстой кишки трипсинизировали и высевали в обработанные 96-луночные планшеты для нетканевых культур в количестве 4000 клеток/лунку. Через 24 ч в клеточную культуру добавляли соединение в разных концентрациях и конечную концентрацию ЭМ8О доводили до 0,1%. Затем клетки культивировали при 37°С в течение 9 суток. ТЮ из яичника трипсинизировали и высевали в обработанные 96-луночные планшеты для тканевых культур в количестве 1000 клеток/лунку. Через 24 ч в клеточную культуру добавляли соединение в разных концентрациях и конечную концентрацию ЭМ8О доводили до 0,1%. Затем клетки культивировали при 37°С в течение 6 суток. Жизнеспособность клеток оценивали с использованием индикатора аламаровый синий: 10 мкл аламарового синего добавляли в каждую лунку. После инкубирования в течение 4 ч при 37°С регистрировали флуоресценцию, используя для возбуждения длину волны 544 нм и измеряя эмиссию на длине волны 590 нм. СЦо (ингибирование роста) вычисляли с использованием программы СгарЬРаб Рп8т 4.0. Данные по ингибированию роста клеток соединениями, описанными в данном документе, приведены в таблице ниже.

В таблице (см. ниже) приведены диапазоны значений СР₀ соединений, описанных в примерах, полученных при анализе ТЮ (Со1оп 12 и Оуайап 2393Α). Диапазоны значений СР₀ указаны как "А," если значения СР₀ меньше или равны 0,1 мкМ, как "В," если значения СР₀ больше 0,1 мкМ и меньше или равны 0,5 мкМ, и как "С," если значения СР₀ больше 0,5 мкМ.

- 24 029372

!η νΐίΓΟ активность соединений, описанных в примерах

Пример	Диапазон 1С50 для ТТК	Диапазон СЬп для линии раковых клеток	Диапазон СЬп для клеток, инициирующих развитие опухоли
МОА-МВ468	НСТ116	ОУСАК-З	Ον ап ап 2393А	Со1оп 12
А1	А	А	А	А	А	А
А2	А	А	А	А	ΝΏ	ΝΏ
АЗ	А	А	А	А	ΝΌ	ΝΌ
А4	А	А	А	А	А	Νϋ
А5	А	А	А	В	ΝΏ	ΝΏ
А6	А	А	А	А	А	А
А8	А	В	В	С	ΝΏ	Νϋ
А11	А	А	А	А	ΝΏ	Νϋ
А12	А	А	А	А	ΝΩ	Νϋ
А13	А	В	А	В	ΝΏ	Νϋ

N0 - не определено.

Claims (9)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение, представленное следующей структурной формулой:

   или его фармацевтически приемлемая соль, где К¹ представляет собой -ΝΗ-СНз-Су;

   Су представляет собой С₃-С₄-циклоалкил, необязательно имеющий в качестве заместителей одну или две группы, выбранные из (С₁-С₃)алкила и гидроксила;

   К² представляет собой -О-пиридинил, ^Н-(С₂-С₆)гидроксиалкил, необязательно имеющий в качестве заместителя циклопропил или изопропил, или ^Н-(С₃-С₆)циклоалкил, необязательно имеющий в качестве заместителя гидроксил или (С₁-С₂)гидроксилалкил;

   К⁴ выбран из атома водорода, атома галогена и (С1-С3)алкила;

   К^а представляет собой циклопропил.
2. 2. Соединение по п.1, в котором К⁴ представляет собой атом хлора или метил.
3. 3. Соединение, представленное следующей структурной формулой:

   или его фармацевтически приемлемая соль.
4. 4. Соединение, представленное следующей структурной формулой:

   - 25 029372

   или его фармацевтически приемлемая соль.
5. 5. Соединение, представленное следующей структурной формулой:

   или его фармацевтически приемлемая соль.
6. 6. Соединение, представленное следующей структурной формулой:

   или его фармацевтически приемлемая соль.
7. 7. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая соединение по любому из пп.1-6 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
8. 8. Способ лечения рака, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества соединения по любому из пп.1-6 или фармацевтической композиции по п.7.
9. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что рак представляет собой рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, меланому, рак молочной железы, рак толстой кишки или рак яичника.