JP2002500650A - Ｒａｆキナーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 置換尿素により、ｒａｆキナーゼによって仲介されるがんの処置方法と、そのような化合物自体。

Description

【発明の詳細な説明】 ＲＡＦキナーゼ阻害剤本発明の背景 ｐ２１ｒａｓがん遺伝子は、ヒト固形がんの発生および進行に対する主要な貢 献者であり、すべてのヒトがんの３０％において突然変異している。Ｂｏｌｔｏ ｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２９，１６５−１７４（１９９４）；Ｂｏｓ，Ｃａｎｃ ｅｒ Ｒｅｓ．，４９，４６８２（１９８９） その正常な非変異形において、ｒａｓタンパクは殆ど成長因子受容体によって 指令されるシグナルトランスダクションカスケードのキーエレメントである。Ｊ ．Ａｖｒｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，ＴＩＢＳ（１９），２７９−２８３（１９９４ ）を見よ。生化学的には、ｒａｓはグアニンヌクレオチド結合タンパクであり、 そしてＧＴＰ結合活性化とＧＤＰ結合休止型の間のサイクリングは、ｒａｓの内 因性ＧＴＰアーゼ活性および他の調節タンパクによって厳密にコントロールされ る。がん細胞におけるｒａｓ突然変異体においては、内因性ＧＴＰアーゼ活性が 緩和され、それ故このタンパクは酵素ｒａｆキナーゼのような下流エフェクター へ構成性成長シグナルを送る。これはこれらの突然変異体を持っている細胞のが ん性成長へ導く。Ｍａｇｎｕｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏ ｇｙ，５，２４７−２５３（１９９４）ｒａｆキナーゼに対する不活性化抗体を 投与することにより、または優先ネガティブｒａｆキ ナーゼもしくは優先ネガティブＭＥＫの同時発現によってｒａｆキナーゼシグナ ル経路を阻害することにより活性ｒａｆの効果を阻害することは、形質転換され た細胞の正常成長表現型への逆転へ導くことが示された。Ｄａｕｍ ｅｔ ａｌ ．，ＴＩＢＳ １９，４７４−４８０（１９９４）；Ｆｒｉｄｍａｎ ｅｔ ａ ｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９，３０１０５−３０１０８（１９９４ ）を見よ。Ｋｏｌｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４９，４２６−４２８ （１９９１）は、アンチセンスＲＮＡによるｒａｆ発現の阻害は膜関連がん遺伝 子において細胞増殖をブロックすることをさらに指示した。同様に、ｒａｆキナ ーゼの阻害（アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドにより）は、種々のタイ プのヒト腫瘍タイプの成長の阻害とインビトロおよびインビボにおいて相関して いた。Ｍａｎｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２（６） ：６６８−６７５（１９９６）本発明の概要 本発明は、ｒａｆキナーゼによって仲介されるがん性細胞成長の処置のための 化合物および方法に向けられる。以下の式の化合物が含まれる。式中、Ｅｔはエ チル、Ｐｔはプロピル、Ｂｕはブチルである。 好ましい化合物は例えば以下の化合物を含む。 もっと好ましいのは以下の化合物である。 これら化合物は、単位投与製剤として経口的、局所的、非経口的、吸入もしく はスプレーにより、または直腸的に投与することができる。ここで使用する非経 口的なる用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射または注入技術を指す 。一以上の化合物が一以上の薬学的に許容し得る無毒性担体およびもし望むなら ば他の活性成分と組合せて存在することができる。好ましい投与方法は非経口で ある。 経口投与を意図した組成物は、薬剤組成物製造のため当業者に既知の任意の適 当な方法に従って製造することができる。そのような組成物は服用し得る製剤を 提供するため、希釈剤、甘味剤、香料、着色剤および保存剤からなる群から選ば れた一以上の剤を含むことができる。錠剤は、錠剤の製造に適した非毒性の薬学 的に許容し得る賦形剤と混合した活性成分を含んでいる。これらの賦形剤は、例 えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムまたはリン酸ナ トリウムのような不活性希釈剤；顆粒化および崩壊剤例えばコーンスターチまた はアルギン酸；および結合剤例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ま たはタルクでよい。錠剤は未被覆でよく、またはそれらの胃腸管内において崩壊 および吸収をおくらせ、それによって長期間にわたって持続作用を提供するため に既知の技術によって被覆されてもよい。例えば、グルセリルモノステアレート またはグリセリルジステアレートのような時間遅延材料を使用することができる 。これらの化合物は固形の急速放出形に調製することもできる。 経口使用のための製剤は活性成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム 、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合される硬カ プセルとして、または活性成分が水もしくは油性媒体、例えば落下生油、液状パ ラフィンもしくはオリーブ油と混合される軟カプセルとして提供することもでき る。 水性懸濁液は水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合した活性物質を含んでい る。そのような賦形剤は懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム 、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリ ウム、ポリビニルピロリドン、トラガントガムおよびアカシアガムであり、分散 もしくは湿潤剤は天然に存在するフォスファチド、例えばレシチン、またはアル キレンオキシドと脂肪酸の縮合生成物例えばポリオキシエチレンステアレート、 またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物例えばヘプタデカ エチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトー ルから得られた部分エステルの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビトー ルモノオレエート、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物 から得られた部分エステルの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビタンモ ノオレエートでよい。水性懸濁液は一以上の保存剤例えばｐ−ヒドロキシ安息香 酸エチルもしくはプロピル、一以上の着色剤、一以上の矯味剤、および一以上の 甘味剤例えばショ糖もしくはサッカリンを含むことができる。 水の添加によって水性懸濁液を調製するために適した分散粉末および顆粒は、 分散剤、懸濁剤および一以上の保存剤と混合した活性成分を提供する。適当な分 散または湿潤剤および懸濁剤は既に述べたものによって例示される。追加の補助 剤、例えば甘味剤、矯味剤および着色剤も存在し得る。 化合物は非水液体製剤の形、例えば活性成分を植物油例えばアラキス油、オリ ーブ油、ゴマ油または落下生油中に、または液体パラフィンのような鉱物油中に 分散することによって製剤化し得る油性懸濁液でもよい。油性懸濁液は増粘剤、 例えば蜜ロウ、硬パラフィンもしくはセチルアルコールを含有し得る。上で述べ たような甘味剤および矯味剤は服用し得る経口製剤を提供するために添加し得る 。これらの組成物はアスコルビン酸のような抗酸化剤の添加によって保存するこ とができる。 本発明の薬剤組成物は水中油型エマルジョンの形であってもよい。油相は植物 油例えばオリーブ油もしくはアラキス油、または鉱油例えば液状パラフィン、ま たはこれらの混合物でよい。適当な乳化剤は天然ガム、例えばアカシアガムもし くはトラガントガム、天然フォスファチド、例えば大豆レシチン、および脂肪酸 とヘキシトール無水物から得られるエステルおよび部分エステル、例えばソルビ タンモノオレエート、および前記部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物 、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートでよい。エマルジョンは 甘味剤および矯味剤を含有し得る。 シロップおよびエリキサーは甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコ ール、ソルビトールもしくはショ糖と配合し得る。そのような製剤は緩和剤、保 存剤および着色剤も含有し得る。 化合物は薬物の経大腸投与のための坐剤の形で投与してもよい。これら組成物 は薬物を、常温では固体であるが、しかし大腸温度において液体であり、それ故 大腸内で溶融して薬物を放出する適当な非刺激性賦形剤と混合することによって 製造することができる。そのような材料はココアバターおよびポリエチレングリ コールである 。 当業者には、特定の投与方法は治療剤を投与する時すべて考慮される種々のフ ァクターに依存することが認められるであろう。 本発明の化合物は、典型的には０．０１ないし２００ｍｇ／日，好ましくは２ ００ｍｇ／ｋｇ ｉｐの投与量において使用される。 しかしながら、特定の患者のための特定の投与レベルは、使用する特定化合物 の活性、年令、体重、一般的健康状態、性別、投与時間、投与ルート、および排 泄速度、薬物組合せおよび治療を受ける重篤度を含む、種々のファクターに依存 することが理解されるであろう。 本発明の化合物は酵素ｒａｆキナーゼの阻害剤である。この酵素はｐ２１ｒａ ｓの下流エフェクターであるので、この阻害剤はｒａｆキナーゼの阻害が指示さ れるヒトまたは動物使用のための薬剤組成物において、例えばｒａｆキナーゼに よって仲介される腫瘍および／またはがん細胞成長の処置において有用である。 特に、化合物はヒトのまたは動物例えばネズミの固形がんの処置に有用である。 何故ならばこれらがんの進行はｒａｓタンパクシグナルトランスダクションカス ケードに依存し、それ故このカスケードの中断により、すなわちｒａｆキナーゼ を阻害することによって処置に応答し易いからである。 ｒａｆキナーゼを阻害する与えられた化合物の活性は、例えばここに開示した 操作に従って日常的にアッセイすることができる。 そのようなインビトロキナーゼアッセイにおいて、ｒａｆは２ｍＭ ２−メル カプトエタノールおよび１００ｍＭ ＮａＣｌを含有する２０ｍＭ Ｔｒｉｓ− ＨＣｌ，ｐＨ８．２中のＭＥＫとインキ ュベートされる。このタンパク溶液２０μｌは水５μｌと、またはＤＭＳＯに溶 解した１０ｍＭストック溶液から蒸留水で希釈した化合物と混合される。キナー ゼ反応は８０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５，１２０ｍＭ ＮａＣｌ，１ ．６ｍＭ ＤＴＴ，１６ｍＭ ＭｇＣｌ₂中の２．５μｌ〔ｒ−³³Ｐ〕ＡＴＰ（ １０００〜３０００ｄｐｍ／ｐｍｏｌ）を加えることによって開始される。反応 混合物は３２℃において通常２２分間インキュベートされ、そしてタンパクへの³³ Ｐの取込みは反応物をフォスフオセルロースマット上に収穫し、１％リン酸で 遊離カウントを洗浄除去し、そして液体シンチレーション計数によってフォスォ リル化を定量することによってアッセイされる。高スループットスクリーニング のために１０μＭ ＡＴＰおよび０．４μＭ ＭＥＫが使用される。一部の実験 においては、キナーゼ反応は等量のＬａｅｍｍｌｉサンプルバッファを加えるこ とによって停止される。サンプルは３分間煮沸され、そしてタンパクは７．５％ Ｌａｅｍｍｌｉゲル上の電気泳動によって分離される。ゲルは固定され、乾燥さ れ、造影プレート（フジ）へ露出される。フォスフォリル化はＦｕｊｉｘ Ｂｉ ｏ−Ｉｍａｇｉｎｇ アナライザーシステムを用いて分析される。ヒストン１の タンパクキナーゼＣ（０．０５ｍＵ；ベーリンガー、マンハイム）フォスフォリ ル化は製造者の指示書に従ってアッセイされる。 インビトロ成長アッセイのため、形質転換しないＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞、ま たは安定的にそれらのＶ−Ｈ−ｒａｓ，ｖ−Ｒａｆもしくはｖ−ｆｏｓを発現す る形質転換した線維芽細胞が得られる（Ｏｎｙｘ）。線維芽細胞ラインは胎児ウ シ血清１０％およびグルタミン２００ｍＭを含んでいる高グルコースを有するＤ ｕｌｂｅｃｃ ｏの修飾イーグル培地中に維持される。ヒト結腸カルシノーマ細胞ライン、ＤＬ Ｄ−１，Ｃｏｌｏ ２０５およびＨＣＴ１１６はＡＴＣＣ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ ，ＭＤ）から得られ、胎児ウシ血清１０％およびグルタミン２００ｍＭを加えた ＲＰＭＩ中に維持される。細胞培養培地および添加剤は、胎児ウシ血清（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌｅｎｅｘａ，ＫＳ）を除いてＧｉｂｃｏ／ＢＲＬ（ Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）から得られる。一部の実験では、３×１０³ 細胞が９６ウエルプレートへ接種され、一夜５％ＣＯ₂インキュベーター中３７ ℃で成長が許容される。増殖は、細胞が培養の最後の１８時間の期間³Ｈ−チミ ジンを取込むことを許容し、細胞をガラス繊維マット上に収穫し、そして液体シ ンチレーション計数によって³Ｈ−チミジン取込みを測定することによって決定 される。 これらのアッセイは、先の式の化合物はｒａｆキナーゼ活性を阻害し、そして 発がん性細胞成長を阻止することを確立する。 ｒａｆキナーゼによって仲介される腫瘍（例えば固形がん）に対する化合物の 阻害効果のインビボアッセイは以下のように実施することができる。 ＣＤＩｎｕ／ｎｕマウス（６〜８週令）は横腹においてヒト結腸アデノカルシ ノーマ細胞ラインの細胞１×１０⁶皮下注射される。マウスは腫瘍サイズが５０ 〜１００ｍｇの間である時、１０日に始まって５０，１００および２００ｍｇ／ ｋｇにおいて腹腔内投与される。動物は１０日間１日１回投与され、３５日まで 週２回キャリパーで腫瘍サイズがモニターされる。 化合物のｒａｆキナーゼに対する、従ってｒａｆキナーゼによっ て仲介される腫瘍（例えば固形がん）に対する阻害効果は、Ｍｏｎｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２（６）：６６８−６７５（１９９ ６）の技術に従ってインビボで証明することができる。 このように本発明の化合物は、例えばカルシノーマ（例えば肺、膵臓、甲状腺 、ぼうこうまたは結腸）、骨髄系障害（例えば骨髄性白血病）またはアデノーマ （例えば絨毛結腸アデノーマ）のような固形がんの処置に有用である。 本発明の化合物は、既知化合物から（または既知化合物からつくることができ る出発物質から）例えば以下に示す一般的製造方法によってつくることができる 。 使用した略号： ＡＣ＝アセチル；Ａｒ＝アリール；Ｂｏｃ＝ｔ−ブトキシカルボニル；Ｂｎ＝ベ ンジル；Ｃｂｚ＝カルボベンジルオキシ；ＤＣＣ＝ジシクロヘキシルカルボジイ ミド；ＤＭＡＰ＝４−ジメチルアミノピリジン；ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホル ムアミド；Ｅｔ＝エチル；ＥｔＯＡｃ＝エチルアセテート；ＬＲＭＳ＝低解像力 質量スペクトル分析；Ｍｅ＝メチル；ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン；Ｐｈ＝フ ェニル；Ｐｒ＝プロピル；Ｐｙｒ＝ピリジン；ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー ；ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸；ＴＭＳ＝トリメチルシリル；Ｔｓ＝ｐ−トルエン スルホニル。 これ以上考究することなく、当業者は以上の説明を用いて本発明をその全範囲 において利用することができるものと信じられる。それ故以下の好ましい特定具 体例は、単に例証的であり開示の残部を少しも限定するものでないと考えるべき である。 以上および以下の実施例において、すべての温度は摂氏で述べられ、そして特 記しない限りすべての部および％は重量による。 以上および以下において引用したすべての特許出願、特許および文献の全体の 記載は参照として取り入れられる。実施例 実験： フラッシュクロマトグラフィーはＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅからのシリカゲル６０ （２３０〜４００メッシュサイズ）を使用して実施された。質量スペクトルデー タは、特記しない限り急速原子衝撃技術（ＦＡＢ）を用いるＫｒａｔｏ−ＭＳ８ ０ＲＦＡスペクトロメーターで得られた。融点はＴｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ Ｕｎｉ−Ｍｅｌｔ装置で測り、そして補正しなかった。 表１ ３−ウレイドチオフェン 表２ Ａのためのヘテロアリール置換基 表３ Ｂのためのフリルまたはピロール置換基 表４ ２−ウレイドチオフェン 上に掲げた一般的方法に従って以下の化合物が合成された。方法Ａ ５−イソプロピル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン 酸メチルエステル（実施例１）の合成： ステップ１ メタノール（１Ｌ）中ナトリウムメトキサイド（１４ｇ）の懸濁液へ、チオグ リコール酸メチル（２２．３ｍｌ）を加えた。溶液を５分間かきまぜ、次にメタ ノール中の３−クロロ−４−メチル−２−ペンテンニトリル（３２．４ｇ）（Ｈ ａｃｋｌｅｒ，Ｒ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅ ｍ．１９８９，２６，１５７５；Ｈａｒｔｍａｎｎ，Ｈ，Ｌｉｅｂｓｈｅｒ，Ｊ ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９８４，２７５；Ｇｕｐｔｏｎ，Ｊ．Ｔ．ｅｔ ａｌ ．，Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｍ．１９８２，１２，３４）を加え、溶液を９ ０分間還流へ加熱した。２０℃へ冷却後、溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチ ルへ溶かし、１Ｎ ＨＣｌで洗い、ＭｇＳＯ₄上で乾燥し、溶媒を減圧留去した 。残渣はヘキサン／酢酸エチルを用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精 製し、所望のアミノチオフェン８．０ｇ（１６％）を得た。 ステップ２： トルエン（１０ｍＬ）中の３−アミノ−５−イソプロピル−２−メチルエステ ル−チオフェン（２３３ｍｇ）の溶液を還流へ加熱した。トルエン（５ｍＬ）中 のｐ−メチルフェニルイソシアネート（１５０ｍＬ）の溶液を１時間にわたって シリンジポンプにより加えた。反応混合物を１時間還流加熱し、２０℃へ冷却し 、そして溶媒を減圧留去した。残渣はヘキサン／ジクロロメタン混液を用いるフ ラッシュクロマトグラフィーにより精製し、泡として実施例１化合物２６５ｍｇ （６８％）を得た。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ１．２８（ｓ，６Ｈ），２．３０ （ｓ，３Ｈ），３．０６（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ）７．１１（ｄ，２ Ｈ），７．３０（ｄ，２Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ）， ９．６７（ｓ，１Ｈ） ５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン 酸メチルエステル（実施例２）は、３−クロロ−４−メチル−２−ペンテンニト リルの代わりに３−クロロ−４，４−ジメチル−２−ペンテンニトリルを用いて この操作に従って合成された。方法Ｂ ５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸 エチルエステル（実施例３）の合成： チタニウムイソプロポキサイド（１ｍＬ）、３−（４−メチルフェニル尿素） −５−ｔ−ブチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（５００ｍｇ，１．４４ｍ ｍｏｌ）、およびエタノール（１０ｍＬ）の溶液を２４時間還流加熱した。溶液 を減圧留去し、得られるオイルを塩化メチレンに溶解し、フラッシュクロマトグ ラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。減圧濃縮は実施例３化合 物１１９ｍｇ（２３％）を与えた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ９．７１（ｓ，１ Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１ ５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），４．２８（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２ ．３３（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｍ，１２Ｈ）方法Ｃ ５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸 メチルアミド（実施例４）の合成： ステップ１ ３−アミノ−５−ｔ−ブチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（２０．０ｇ ，９３．９ｍｍｏｌ），ベンジルクロロホルメート（８０．４ｍＬ，５６３ｍｍ ｏｌ）、炭酸ナトリウム１．１０ｇ，９．９３ｍｍｏｌ），トルエン（４００ｍ Ｌ）および水（５０ｍＬ）の溶液を１８時間還流した。溶液を減圧留去し、得ら れるオイルを酢酸エチルに溶解し、水および食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上 で乾燥し、減圧濃縮し、対応するベンジルカルバメートエステルを 定量的粗収率で得た。 ステップ２ 上のカルバメートエステル（１３．６ｇ，３９．２ｍｍｏｌ）をねじ栓つき容 器中の飽和メチルアミン／メタノール（２００ｍＬ）に溶かした。シアン化ナト リウム（０．９８ｇ，２０ｍｍｏｌ）をこの溶液へ懸濁した。容器をシールし、 ５０℃へ８時間加熱した。溶液を水（５００ｍＬ）へ注ぎ、酢酸エチルで抽出し た。酢酸エチル層を水および食塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧濃 縮した。粗生成物を酢酸エチル／ヘキサンでフラッシュクロマトグラフィー精製 し、Ｎ−メチルアミドカルバメート２．７６ｇ（２０％）を得た。 ステップ３ 上のカルバメート（２．７６ｇ，８ｍｍｏｌ）を１：１の４８％臭化水素酸／ 酢酸にとかし、３０℃へ２４時間加熱した。酸性溶液を冷却し、飽和重炭酸ナト リウムでｐＨ４へ中和した。テトラヒドロフラン中メチルアミン（４ｍＬ，２Ｍ ）を加え、塩化メチレンで抽出した。減圧下溶媒を留去してＮ−メチルアミドア ミン９２２．５ｍｇ（５４％）を得た。 ステップ４ 上のアミン（６００ｍｇ，２．８３ｍｍｏｌ）、ｐ−トリルイソシアネート（ ３５６．４μＬ，２．８３ｍｍｏｌ）およびトルエン２ｍＬの溶液を１８時間還 流加熱した。溶媒を減圧留去し、得られるオイルを酢酸エチル／塩化メチレンを 使用するフラッシュクロマトグラフィーで精製し、実施例４化合物４１７ｍｇ（ ４４％）を得た。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ１０．５３（ｓ，１Ｈ），７．９ ０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），５ ．５９（ｂｓ，１Ｈ），２．９１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），２．３１（ｓ ，３Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）；ｍｐ２０２−２０４℃方法Ｄ ５−ブロモメチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン 酸メチルエステル（実施例５）の合成： ステップ１ 氷浴中冷却に保った無水メタノール（１０ｍＬ）を入れた乾燥３頸フラスコへ 、ナトリウム球（１１６ｍｇ，５．０６ｍｍｏｌ）を加えた。ナトリウム球が完 全に溶解した後、チオグリコール酸メチル（５３７ｍｇ，５．０６ｍｍｏｌ）を 加えた。約５分後、メタノール（１０ｍＬ）中の粗製４−（２−テトラヒドロピ ラノキシ）−２−ブチルニトリル（０．７６ｇ，４．６０ｍｍｏｌ）（Ｍｕｒｒ ａｙ，Ｒ．，Ｚｗｅｉｆｅｌ，Ｇ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８０，１５０） を混合物へ加えた。混合物を室温まで暖め、この温度に２時間保った。混合物を 濃縮し、濃縮物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）とＨ₂Ｏ（５０ｍＬ）間で分配した 。有機層を食塩水（２×５０ｍＬ）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、減圧濃縮し た。粗生成物はＣｈｒｏｍａｔｏｔｒｏｎ（４ｍｍプレート，ヘキサン／ＥｔＯ Ａｃ＝９／１）により精製し、オレンジ色オイルとしてアミノチオフェン（５９ ３ｍｇ，４８％）を得た。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ６．５７（ｓ，１Ｈ），５ ．００（ｂｒｓ，２Ｈ），４．７９−４．７２（ｍ，１Ｈ），４．６２（ｓ，２ Ｈ），３．９０−３．８０（ｍ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．５８−３ ．５３（ｍ ，１Ｈ），１．９０−１．５２（ｍ，６Ｈ），ＧＣ−ＭＳ２７１〔Ｍ〕⁺ ステップ２ ２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わり にトルイジンを用いて、方法Ｅに従ってステップ１のアミンを５−ヒドロキシメ チル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸メチルエス テルへ変換した。¹ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）ｄ９．８６（ｓ，１Ｈ），９．４ ８（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ ），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），５．７１（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ， １Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），２． ２１（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）３２１．２〔Ｍ＋Ｈ〕⁺；ｍｐ １６６−１６８℃ ステップ３ 無水ＤＭＦ中、５−ヒドロキシメチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオ フェン−２−カルボン酸メチルエステル（２５ｍｇ，０．０７８ｍｍｏｌ）の溶 液へ、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２８ｍｇ，０．１５６ｍｍｏｌ）とトリフェ ニルフォスフィン（４１ｍｇ，０．１５６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃ へ加熱し、この温度へ１時間保った。混合物を室温へ冷却した。過剰の試薬を分 解するためメタノール（０．５ｍＬ）を加えた。１０分後Ｅｔ₂Ｏ（２５ｍＬ） を加え、混合物を水（１０ｍＬ），飽和ＮａＨＣＯ₂（２×１０ｍＬ）および食 塩水（１０ｍＬ）で洗った。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、減圧濃縮した。粗 生成物はＣｈｒｏｍａｔｏｔｒｏｎ（２ｍｍプレート，ヘキサン中２％ＥｔＯＡ ｃ）により精 製し、白色固体として実施例５化合物（１２．５ｍｇ，４２％）を得た。¹ＨＮ ＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ９．５９（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．２８ （ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６． ７０（ｂｓ，１Ｈ），４．５９（ｓ，２Ｈ），３．８２（ｓ，ＯＣＨ₃），２． ３４（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）３８２，３８４〔Ｍ＋Ｈ〕⁺； ｍｐ１５７−１５８℃方法Ｅ ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−トリフルオロメチル）−〔１，３，４〕チア ジアゾール−２−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル （実施例６）の合成： ステップ１ −１５℃のジクロロメタン（９０ｍＬ）中のトルエン（３７．８ｍＬ，７３． ０ｍｍｏｌ）中２０％ホスゲン溶液へジクロロメタン（６０ｍＬ）中のピリジン （５．９ｍＬ，７３．０ｍｍｏｌ）および３−アミノ−５−ｔ−ブチルチオフェ ン−２−カルボン酸メチル（１０．３９ｇ，４８．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応 は２０℃へ１８時間を要してゆっくり暖めることによって許容した。得られたス ラリーを減圧濃縮して乾固し、エチルエーテルへ再懸濁し、ガラスフリットを通 してアルゴン圧力で濾過した。溶媒を減圧留去し、イソシアネート残渣はトルエ ン中に０．２Ｍへ希釈した。 ステップ２ ステップ１からのトルエン溶液（４００μｍｏｌ）中の２−アノ−５−トリフ ルオロメチル−１，３，４−チアジアゾール（８４．５ｍｇ，５００μｍｏｌ） の溶液を１８時間かきまぜ、溶媒を減圧 留去した。粗生成物は酢酸エチル／ヘキサンによるフラッシュクロマトグラフィ ーにより精製し、泡として実施例６化合物１４４．３ｍｇ（８８％）を得た。¹ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ１２．５（ｂｓ，１Ｈ），１０．３（ｓ，１Ｈ），７ ．８（ｓ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），１．４（ｓ，９Ｈ）；ＦＡＢ−ＭＳ（ Ｍ＋Ｈ）⁺４０９ ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ウ レイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例９）は、２−アミ ノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりにＮ−メチ ル−３−アミノピラゾールを用いてこの操作に従って合成された。 ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−ｔ−ブチル−〔１，３，４〕チアジアゾー ル−３−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例 １０）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾール の代わりに２−アミノ−５−ｔ−ブチル−１，３，４−チアジアゾールを用いて この操作に従って合成された。 ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１Ｈ−インドール−５−イル）ウレイド〕チオ フェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１１）は、２−アミノ−５−ト リフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりに５−アミノインドー ルを用いてこの操作に従って合成された。 ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−メチルチアゾール−２−イル）ウレイド〕 チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１２）は、２−アミノ−５ −トリフルオロメチル−１，３，４−チ アジアゾールの代わりの２−アミノ−５−メチルチアゾールを用いてこの操作に 従って合成された。 ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−エチル−〔１，３，４〕チアジアゾール− ２−イル）ウレイド〕チアゾール−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１３ ）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代 わりに２−アミノ−５−エチル−１，３，４−チアジアゾールを用いてこの操作 に従って合成された。 ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−メチル−〔１，３，４〕チアジアゾール− ２−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１４ ）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代 わりに２−アミノ−５−メチル−１，３，４−チアジアゾールを用いてこの操作 に従って合成された。 ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−シクロプロピル−〔１，３，４〕チアジア ゾール−２−イル〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１５） は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わ りに２−アミノ−５−シクロプロピル−１，３，４−チアジアゾールを用いてこ の操作に従って合成された。 ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル ）エチル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１６ ）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代 わりに２−（２−アミノエチル）−１−メチルピロールを用いてこの操作に従っ て合成された 。方法Ｆ ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（４−メチフェン−２−イル）ウレイド〕チオフェ ン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１７）の合成： ステップ１ 酢酸（５００ｍＬ）中３−メチルチオフェン（５ｍＬ，５１．５７ｍｍｏｌ） と過硫酸ナトリウム（１８．４８ｇ，７７．６ｍｍｏｌ）と酢酸パラジウム（５ ．８１ｇ，２５．９ｍｍｏｌ）の溶液を還流加熱した。一酸化炭素のゆるい流れ をこの溶液中３時間泡立てた。反応液を２０℃へ冷却し、減圧濃縮した。残渣を ジクロロメタンに溶かし、セライトを加え、溶液を濾過し、次にシリカゲルのパ ッドを通し、そして減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶かし、２Ｎ水酸化カリ ウムで抽出した。水層を酢酸エチルで洗い、ｐＨをＨＣｌ（コンク）でゼロへ低 下させた。生成物は酢酸エチルへ抽出し、飽和食塩水で洗い、減圧濃縮し、３− メチル−２−チオフェンカルボン酸と４−メチル−２−チオフェンカルボン酸の 混合物１．８ｇ（２５％）を得た。 ステップ２ アセトン（７５ｍｌ）中の３−メチル−２−チオフェンカルボン酸および４− メチル−２−チオフェンカルボン酸（１．１１ｇ，７．８１ｍｍｏｌ）とトリメ チルアミン（１．３ｍＬ，９．３８ｍｍｏｌ）の溶液を−１５℃へ冷却し、エチ ルクロロホルメート（１．１２ｍＬ，１１．７２ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。 混合物を１５分間かきまぜ、水（１５ｍＬ）中のアジ化ナトリウム（８６３ｍｇ ，１３．２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を３０分間かきまぜ、次にジクロロメ タンで希釈し、５０％飽和食塩水で洗った。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し 、溶媒を減圧留去した。残渣をヘキサン／酢酸エチルでのフラッシュクロマトグ ラフィーにより精製し、アジドエステルの混合物９１３ｍｇ（７０％）を得た。 ステップ３ 上のアジドエステル混合物（１２０ｍｇ，７１８μｍｏｌ）をトルエン（３ｍ Ｌ）にとかし、１００℃へ５時間加熱し、次に２０℃へ冷却した。３−アミノ− ５−ｔ−ブチル−２−チオフェンカルボン酸メチルエステル（１０６ｍｇ，５０ ０μｍｏｌ）を加え、反応液を９５℃へ１８時間加熱した。反応液を２０℃へ冷 却し、溶媒を減圧留去した。粗生成物はヘキサン／酢酸エチルを用いてフラッシ ュクロマトグラフィーにより精製し、次にジクロロメタンで順相ＨＰＬＣにより 精製し、実施例１７化合物８２．１ｍｇ（４６％）と、３−メチルチオフェン誘 導体１８ｍｇ（１０％）を得た。 ５−ｔ−ブチル−３−（３−チオフェン−２−イルウレイド）チオフェン−２ −カルボン酸メチルエステル（実施例７）は、３−メチル−２−チオフェンカル ボン酸に代えて２−チオフェンカルボン酸を用いて、この操作のステップ２およ び３に従って合成された。 ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−メチルチオフェン−２−イル）ウレイド〕 チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例８）は、３−メチル−２− チオフェンカルボン酸に代えて５−メチル−２−チオフェンカルボン酸を用い、 この操作のステップ２および３に従って合成された。方法Ｇ ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−エチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）ウレイ ド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１８）の合成： ステップ１ ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の３−ニトロピロール（４４６ｍｇ，４．１６ｍｍｏｌ ）、炭酸セシウム（１．６３ｇ，４．９９ｍｍｏｌ）、ヨードエタン（９９８μ Ｌ，１２．４８ｍｍｏｌ）の溶液を２０℃で２．５時間かきまぜた。反応液を酢 酸エチルで希釈し、１Ｎ塩酸（×３）で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を 減圧留去した。粗生成物は１００％ジクロロメタンでフラッシュクロマトグラフ ィーにより精製し、オイルとして４８０ｍｇ（８２％）を得た。 ステップ２ メタノール（１０ｍＬ）中のステップ１の生成物（４８０ｍｇ，３．４３ｍｍ ｏｌ）の溶液へ炭末上の１０％パラジウム（３０ｍｇ）を加えた。混合物を大気 圧で２０℃において１８時間水素添加し、濾過した。溶媒を減圧留去し、オイル として３４２ｍｇ（９１％）を得た。 ステップ３ ステップ２の生成物（３４２ｍｇ，３．１１ｍｍｏｌ）と５−ｔ−ブチル−３ −イソシアナートチオフォン−２−カルボン酸メチル（トルエン２ｍＬ中０．２ Ｍ）の溶液を２０℃で２０時間かきまぜた。溶媒を減圧留去し、粗生成物を酢酸 エチル／ヘキサンを使ってフラッシュクロマトグラフィーで精製し、泡として実 施例１８化合物１３６ｍｇ（６５％）を得た。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ９．７ （ｓ，１Ｈ），８．０（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ），７ ．６５（ｍ，２Ｈ），７．３（ｍ，２Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），１．３（ｓ， ９Ｈ）；ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）⁺３５０ ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−プロピル−１Ｈ−ピロール−３−イル）ウ レイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１９）は、ヨード エタンに代わって臭化アリルを用いてこの操作に従って合成された。 ５−ｔ−３−〔３−（１−プロピル−１Ｈ−ピロール−３−イル）ウレイド〕 チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例２０）は、ヨードエタンに 代わって２−ブロモプロパンを用いてこの操作に従って合成された。 ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ウ レイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例２１）は、３−ニ トロピロールに代わって３−ニトロピラゾールを用いてこの操作に従って合成さ れた。方法Ｈ ５−ｔ−ブチル−３−〔３−ｐ−トリルウレイド）フラン−２−カルボン酸メチ ルエステル（実施例２２）の合成： ステップ１ 乾燥ＴＨＦ６０ｍＬ中の２−ｔ−ブチルフラン４．５ｇ（３６ｍｍｏｌ）の溶 液へ、−７８℃においてＮ₂下ｎ−ブチルリチウム（２５ｍＬ，４ｍｍｏｌ，ヘ キサン溶液中１．６Ｍ，１．１当量）を滴加した。３０分後冷却浴を氷浴にかえ 、混合物を０℃で１時間かきまぜた。ドライアイスから発生させ、そして無水Ｎ ａＳＯ₄塔で乾燥した乾燥ＣＯ₂を−７８℃で２０分間、次に０℃で反応混合物中 に泡立てた。反応混合物を１Ｍ ＨＣＬでｐＨ１へ酸性化し、酢 酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗い、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、濃縮して 淡黄色固体として２−ｔ−ブチル−５−フランカルボン酸４．２ｇ（６９％）を 得た。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ１１．０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，１ Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），６．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１．２９（ｓ， ９Ｈ） ステップ２ 乾燥ＴＨＦ３０ｍＬの上のフランカルボン酸２．０ｇ（１１．９ｍｍｏｌ）の 溶液をＮ₂下−７８℃へ冷却し、これへｎ−ブチルリチウム１５．６ｍＬ（２５ ｍｍｏｌ，ヘキサン溶液中１．６Ｍ，２．１当量）を滴下した。３０分後乾燥Ｔ ＨＦ３ｍＬ（３ｍＬ洗浄液）中のＴｓＮ₃２．３ｇ（１１．９ｍｍｏｌ，１．１ 当量）をカニューレにより滴下した。黄色の溶液は２時間にわたって０℃へ暖め られるのを許容され、次に酢酸カリウム６ｇ（６０ｍｍｏｌ，５当量）が加えら れ、懸濁液は室温で１４時間かきまぜられた。混合物をエーテルで希釈し、水で 抽出した。水相を１Ｍ ＨＣｌでｐＨ１へ酸性化し、酢酸エチルで良く抽出した 。有機相を食塩水でさらに洗い、Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、濃縮した。ＴＭＳＣＨ Ｎ₂のヘキサン溶液（４５ｍＬ，９０ｍｍｏｌ，２．０Ｍ）をエーテル１５０ｍ Ｌおよびメタノール２０ｍＬ中でこの赤色オイルへ加えた。３０分後、混合物を 濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル１０％）へ付し 、無色オイル１．７２ｇを得た。生成物の¹ＨＮＭＲによる分析は、目的化合物 と、同時に溶出された５−ｔ−ブチル−２−フランガルボン酸メチルとの２：３ 混合物であることを示した。混合物はさらに精製することなく用いた。ＦＴＩＲ （フィルム）ｃｍ^-1２９６５（ｓ），２１１８（ｓ），１７２３ （ｓ）；¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ５．９９（ｓ，１Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ ），１．２５（ｓ，９Ｈ） ステップ３ 上の反応で得た混合物１．７２ｇと、セロソルブ３０ｍＬ中Ｐｄ（カーボン上 １０％）０．５ｇを入れたパールボトルを継続して脱気し、Ｈ₂ガスで３回パー ジした。次に反応混合物をＨ₂雰囲気下（４０ｐｓｉ）１時間振とうし、酢酸エ チルで希釈し、セライトを通して濾過した。濃縮液をフラッシュクロマトグラフ ィー（ヘキサン中酢酸エチル２０％）に付し、結晶性固体としてアミン０．５９ ｇ（総収率２５％）と、回収したメチルエステル０．７３ｇ（３４％）を得た。 ＦＴＩＲ（フィルム）ｃｍ^-1３３３０−２９５０（ｓ，ｂｒ），２８５０（ｍ） ，１６８０（ｓ），１６３７（ｓ），１５３７（ｓ），１３４６（ｓ），１１３ １（ｓ）；¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ５．７６（ｓ，１Ｈ），４．２４（ｂｒｓ ，２Ｈ），１．２９（ｓ，９Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ１７８．７，１ ６８．１，１６０．５，１４４．９（ｂｒ），１２４．１，９８．３，５０．５ ，３２．８，２８．３ ステップ４ ホスゲン（１．３ｍＬ，１．９３ｍｍｏｌ，トルエン中１．９３Ｍ溶液、１０ 当量）を乾燥ピリジン１．０ｍＬおよび乾燥トルエン５ｍＬ中のステップ３から の生成物５０ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）の溶液へ室温でＮ₂下急速に加えた。３ ０分後、オレンジ色懸濁液を減圧濃縮し、乾燥トルエン１ｍＬを次々に負荷し、 蒸発（２回）した。最後にトルエン３ｍＬを加え、トルイジン１００ｍｇ（０． ９３ｍｍｏｌ，３．７当量）を加えた。オレンジ色混合物を一夜か きまぜ、酢酸エチルで希釈し、食塩水で洗い、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、そして濃 縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色オイルとし て実施例２２の化合物８０ｍｇ（９６％）を得た。ＦＴＩＲ（フィルム）ｃｍ^-1 ３４００−３２００（ｍ，ｂｒ），２９６６（ｓ），１６７６（ｓ），１５３６ （ｓ），１０９７（ｍ）；¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ８．６８（ｂｒｓ，１Ｈ） ，７．８７（ｂｒｓ，１Ｈ），７．２７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．１ １（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．０２（ｓ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ ），１．２８（ｓ，９Ｈ），¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ１６８．２，１６０． ５，１５２．５，１３７．７，１３４．８，１３４．０，１２９．５，１２６． ０，１２１．４，１００．１，５１．０，３３．０，２８．３，２０．６ ５−ｔ−ブチル−３−〔３−（３，４−ジクロロフェニル）ウレイド〕フラン −２−カルボン酸メチルエステル（実施例２３）は、トルイジンの代わりにアミ ノ−３，４−ジクロロベンゼンを用いてこの操作に従って合成された。方法Ｉ ５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−１Ｈ−ピロール−２−カ ルボン酸メチルエステル（実施例２４）の合成： ステップ１ クロロトリメチルシラン（１７．９ｍＬ，１４１ｍｍｏｌ，２．５当量）を乾 燥メタノール（１００ｍＬ）中のピロール−２−カルボン酸（６．２８ｇ，５６ ．５ｍｍｏｌ）溶液へＮ₂下室温で一時に加える。一夜攪拌後、反応混液を減圧 濃縮し、ジクロロメタンに再溶解し、水洗し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして濃 縮して黄褐 色半結晶固体としてピロール−２−カルボン酸メチル４．６２ｇを得る。これは さらに精製することなく使用した。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ９．３（ｂｒｓ， １Ｈ），６．９６（ｂｒｍ，１Ｈ），６．９２（ｂｒｍ，１Ｈ），６．２９（ｂ ｒｑ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ） ステップ２ 塩化アルミニウム（０．７１０ｇ，５．３３ｍｍｏｌ，２．２当量）を乾燥ジ クロロメタン（１２ｍＬ）中のピロール−２−カルボン酸メチル（０．３０ｇ， ２．４２ｍｍｏｌ）溶液へ室温Ｎ₂下一時に加える。次に２−クロロ−２−メチ ルプロパン（０．２６ｍＬ，２．４２ｍｍｏｌ，１．０当量）をシリンジにより 一時に加える。２時間後、オレンジ色の溶液を飽和炭酸ナトリウム溶液へゆっく り注ぐことによって反応停止する。得られる白色懸濁液をジエチルエーテル（２ ×）で抽出する。合併した有機層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧濃縮して灰色の 固体として５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチル０．４０ｇを得る。 フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中ヘキサン４０％）は白色無定 形固体として所望生成物０．３６ｇ（８１％）を与える。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）ｄ８．８２（ｂｒｓ，１Ｈ），６．８１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），６． ００（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．８３（ｓ，３Ｈ），１．３１（ｓ，９ Ｈ） ステップ３ 発煙硝酸（０．５７ｍＬ，１３．６ｍｍｏｌ，１．５当量）をシリンジにより 濃硫酸（１９ｍＬ）中の５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチル（１． ６５ｇ，９．１０ｍｍｏｌ）の不均一混 合物へＮ₂下室温で一時に加える。１時間後、反応物を氷水へ注ぎ、固体炭酸ナ トリウムでｐＨ７へゆっくり中和し、ジエチルエーテルで抽出（×２）し、乾燥 し（ＮａＳＯ₄）、減圧濃縮する。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ジク ロロメタン中３０％ヘキサン）へ付し、高い移動度を有するビスニトロ化物０． ２７ｇに加え、所望生成物０．４４ｇを得た。混合フラクションの再クロマトグ ラフィーは５−ｔ−ブチル−３−ニトロピロール−２−カルボン酸メチル０．２ ２ｇをさらに与える（総収率３２％）。モノニトロ化物¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） ｄ９．２２（ｂｒｓ，１Ｈ），６．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．９ ３（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，９Ｈ）；ビスニトロ化物¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）ｄ９．１７（ｂｒｓ，１Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），１．５２（ｓ，９Ｈ） 経路Ａ ステップ４ １６×１００ｍｍ使い捨てガラスカルチャー管を取り付けたパール水素化ボト ルに、乾燥メタノール（１ｍＬ）中の５−ｔ−ブチル−３−ニトロピロール−２ −カルボン酸メチル（１４ｍｇ，０．０６２ｍｍｏｌ）とＰｄ（カーボン上１０ ％，３ｍｇ）を仕込む。反応容器は次第に脱気し、Ｈ₂ガスで３回パージする。 次に反応混合物をＨ₂雰囲気下（３５ｐｓｉ）１時間振とうし、ジクロロメタン で希釈し、セライトを通して濾過する。濾液を減圧濃縮し、明黄色オイルとして ３−アミノ−５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチルを得る（粗収率１ ００％）。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ７．８９（ｂｒｓ，２Ｈ），５．５２（ｄ ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ ），３．８２（ｓ，３Ｈ），１．２６（ｓ，９Ｈ） ステップ５ ホスゲン（０．３２ｍＬ，０．６２ｍｍｏｌ，トルエン中１．９３Ｍ，１０当 量）を乾燥トルエン中３−アミノ−５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メ チル（１２．２ｍｇ，０．０６２ｍｍｏｌ）およびピリジン（２４７ｍＬ，３． ０６ｍｍｏｌ，４９．４当量）の溶液へ加える。３０分後、オレンジ色懸濁液を 減圧濃縮し、次に乾燥トルエンを次々に仕込み、蒸発（２×）した。最後にトル エン（２ｍＬ）を加え、ｐ−トルイジン（１０ｍｇ，０．０９４ｍｍｏｌ）を加 えた。混合物を３時間加熱し、減圧濃縮する。残渣は調製的ＴＬＣ（２プレート ，厚み０．２５ｍｍ，２０×２０ｃｍ，ジクロロメタン中メタノール２％）によ って精製する。大きなＵＶバンドを単離し、生成物をジクロロメタン中２％メタ ノールで抽出し、淡黄色無定形固体として実施例２４の化合物１６．４ｍｇ（８ ０％）を得る。ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒペレット）ｃｍ^-1３３４１（ｓ），２９４７ （ｍ），１６７６（ｓ），１５８３（ｓ），１５４８（ｓ），１４５６（ｓ）， １２７９（ｓ），１０９４（ｓ）；ＭＳ（ＥＳ）＝３３０．１（ｍ＋１）；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ８．４５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１９（ｂｒｓ，１Ｈ） ，７．２７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．１４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｍ ｚ），６．９５（ｂｒｓ，１Ｈ），６．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），３ ．７３（ｓ，３Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｓ，９Ｈ）；¹³ＣＮＭ Ｒ（ＭｅＯＤ，ＣＤＣｌ₃）ｄ１６１．８９，１５３．５１，１４７．６２，１ ３６．１５，１３２．１７，１２８．９０，１１９．５８，１０５．９２，９７ ．３６，５０ ．００，３１．４２，２８．９９，１９．６５ ５−ｔ−ブチル−１−メチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−１Ｈ−ピロー ル−２−カルボン酸メチルエステル（実施例２５）の合成： 経路Ｂ ステップ６ ジクロロメタン（１ｍＬ）中の５−ｔ−ブチル−３−ニトロピロール−２−カ ルボン酸メチル（１００ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）、ベンジルトリメチルアンモ ニウムブロマイド（１５８ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ；１当量）およびジメチル硫 酸（４６ｍＬ，０．４９ｍｍｏｌ，１．１当量）の冷溶液（−１０℃）へ、水酸 化ナトリウム（０．２１ｇ，２．６５ｍｍｏｌ，５０％水溶液，６当量）を加え る。５分後冷却浴を除去し、混合物を室温で４時間かきまぜる。反応混合物をジ クロロメタンで希釈し、水（１×），１０％酢酸アンモニウム（２×）で洗い、 乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧濃縮し、明黄色オイルを得る。残渣をフラッシュク ロマトグラフィー（ジクロロメタン中３０％ヘキサン）により精製し、放置する と固化する淡黄色オイルとして、５−ｔ−ブチル−１−メチル−３−ニトロピロ ール−２−カルボン酸メチルエステル６１ｍｇ（６２％）を得る。¹ＨＮＭＲ（ ＣＤＣｌ₃）ｄ６．４７（ｓ，１Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ， ３Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ） ステップ７ 上のニトロ化合物を３−アミノ−５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メ チルと同様な態様で還元し、３−アミノ−１−メチル−５−ｔ−ブチルピロール −２−カルボン酸メチルをオイルとして ５９ｍｇ得る（粗収率１００％）。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ５．４８（ｓ，１ Ｈ），４．３４（ｂｒｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，９Ｈ ）；¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ１６２．２４，１４８．９５，１４２．２７， １０７．３９，９５．７３，５０．５５，５０．０４，３４．７３，３１．９２ ，２９．６７ ステップ５ 乾燥ピリジン（１ｍＬ）および乾燥トルエン（２ｍＬ）中の３−アミノ−１− メチル−５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチル（５９ｍｇ，０．２８ ０ｍｍｏｌ）の溶液へ、ホスゲン（１．４５ｍＬ，２．８０ｍｍｏｌ），トルエ ン中１．９３Ｍ溶液）をすばやく加える。追加の乾燥トルエン（３ｍＬ）を不均 一混合物の攪拌を助けるために加える。３０分後、オレンジ色懸濁液を減圧濃縮 し、次々に乾燥トルエン（１ｍＬ）を加え蒸発（２×）する。最後にトルエン（ ３ｍＬ）を加え、ｐ−トルイジン（１１１ｍｇ，１．０４ｍｍｏｌ，３．７当量 ）を加える。生成する均一混合物を一夜攪拌し、ジクロロメタンで希釈し、１Ｍ ＨＣｌで洗う。水相をジクロロメタンで逆抽出（２×）し、合併した有機相を 乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン 中酢酸エチル１０％と２５％）によって精製し、淡黄色固体として実施例２５の 化合物６６ｍｇ（６９％）を得る。ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒペレット）ｃｍ^-1２３６ ４（ｓ），２３３５（ｓ），１６５９（ｍ），１５７９（ｍ），１５４２（ｍ） ，１３５４（ｗ），１２３２（ｗ）；¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ８．８１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．２６（ａｐｄ，３Ｈ（２Ｈ＋１ＮＨ），Ｊ＝８．４Ｈｚ） ，７．１１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．８０（ｓ，１Ｈ），３．８８（ ｓ，３Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．３５（ｓ，９ Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ１６１．９５，１５３．０１，１４８．５９ ，１５３．３４，１３３．９７，１３３．７８，１２９．５４，１２２．０２， １０８．８２，９８．７６，５０．３８，３５．０３，３２．１２，３１．３７ ，２９．７６方法Ｊ ５−ｔ−ブチル−２−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−３−カルボン酸 メチルエステル（実施例２６）の合成： ステップ１ シアン酢酸メチル（４．００ｇ，４０．４ｍｍｏｌ），イオウ（１．２９ｇ， ４０．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２０ｍＬ）の溶液へ室温でトリメチルアミン （３．０４ｍＬ，２１．８ｍｍｏｌ）を加えた。３，３−ジメチルブチルアルデ ヒド（５．０８ｇ，４０．４ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌し、水（２００ｍＬ ）中へ注いだ。固体を濾去し、濾液を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層をシ リカゲル詰物を通して濾過し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーに よる精製は２−アミノ−５−ｔ−ブチルチオフェン−３−カルボン酸メチル４． １９ｇ（４９％）を与えた。 ステップ２ 次に２−アミノ−５−ｔ−ブチルチオフェン−３−カルボン酸メチルを方法Ａ ，ステップ２に記載した条件のもとにｐ−トリルイソシアネートと縮合し、実施 例２６の化合物２９ｍｇ（１８％）を製造した。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）ｄ１０ ．３７（ｓ，１Ｈ），７ ．３２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ） ，６．８２（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｂｒｓ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ）， ２．３４（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）；ｍｐ１０９−１１１℃ ５−ｔ−ブチル−２−（３−フェニルウレイド）チオフェン−３−カルボン酸メ チルエステル（実施例２７）は、ｐ−トリルイソシアネートに代えてフェニルイ ソシアネートを使用し、この方法に従って合成された。 ５−ｔ−ブチル−２−（３−（５−エチル−〔１，３，４〕チアジアゾール− ２−イル）ウレイド）チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル（実施例２８ ）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールに代 えて２−アミノ−５−エチル−１，３，４−チアジアゾールを使用し、この方法 および次に方法Ｅに従って合成された。 ５−イソプロピル−２−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−３−カルボ ン酸メチルエステル（実施例２９）は、３，３，−ジメチルブチルアルデヒドに 代えて３−メチルブチルアルデヒドを使用し、この方法ステップ１と、２−アミ ノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールに代えてトルイジン を使用し、方法Ｅに従って合成された。 ５−イソプロピル−２−〔３−（５−メチルチオフェン−２−イル）ウレイド 〕チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル（実施例３０）は、３，３−ジメ チルブチルアルデヒドに代えて３−メチルブチルアルデヒドを使用し、この方法 ステップ１と、３−メチル−２−チオフェンカルボン酸に代えて５−メチルチオ フェン−２− カルボン酸を使用する方法Ｆステップ２および３に従って合成された。 以上の実施例は、以上の実施例に使用したものを本発明の一般的にまたは特定 的に記載した反応剤および／または作業条件に代えることによって同様な成功度 をもってくり返すことができる。 以上の記載から、当業者は本発明の本質的特徴を容易に確かめることができ、 そしてその精神および範囲から逸脱することなく本発明を種々の用途および条件 に適応させるように種々の変更および修飾を加えることができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/4155 Ａ６１Ｋ 31/4155 31/427 31/427 31/433 31/433 31/437 31/437 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 307/66 Ｃ０７Ｄ 307/66 333/38 333/38 333/40 333/40 409/12 409/12 417/12 417/12 471/04 １０６ 471/04 １０６Ｃ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ロジャース，ダニエル エイチ アメリカ合衆国92007、カリフォルニア、 サンジエゴ、カミントセプチモ1333 (72)発明者 リヨンズ，ジョン アメリカ合衆国94556、カリフォルニア、 モラガ、アスコットドライブ＃Ｂ、2038 (72)発明者 カッツ，マイケル イー アメリカ合衆国06492、コネチカット、ウ ォーリングフォード、ヒュールステッドレ ーン12 (72)発明者 カーリンガル，ヨランダ ブィ アメリカ合衆国06405、コネチカット、ブ ランフォード、ストーンリッジレーン14 (72)発明者 ダリー，ロバート アメリカ合衆国06512、コネチカット、イ ーストヘブン、アリカットウエイ86 (72)発明者 リー，ウエンディ アメリカ合衆国06518、コネチカット、ハ ムデン、エバーグリーンアベニュー282 (72)発明者 スミス，ロジャー エイ アメリカ合衆国06443、コネチカット、マ ディソン、ウインターヒルロード65 (72)発明者 ブルム，チエリ エル アメリカ合衆国94501、カリフォルニア、 アラメダ、マディソンストリート3005

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 下記式の化合物を投与することよりなるｒａｆキナーゼによって仲介さ れるがん細胞の成長を処置する方法。 又は ２．下記式の化合物を投与することよりなる請求項１の方法。 又は ３．下記式の化合物を投与することよりなる請求項１の方法。 又は ４． 下記式化合物を投与することよりなる請求項１の方法。 又は ５．下記式の化合物を投与することよりなる請求項１の方法。 又は ６．下記式の化合物を投与することよりなる請求項１の方法。 又は ７．下記式の化合物を投与することよりなる請求項１の方法。 又は ８． 下記式の化合物。 又は ９． 下記式の請求項８の化合物。 又は １０． 下記式の請求項８の化合物。 又は １１． 下記式の請求項８の化合物。 又は １２．下記式の請求項８の化合物。 又は １３． 下記式の請求項８の化合物。 又は １４． 下記式の請求項８の化合物。 又は １５． 請求項８の化合物および生理学的に許容し得る担体を含んでいる薬剤 組成物。 １６． 請求項１４の化合物および生理学的に許容し得る担体を含んでいる薬 剤組成物。 １７． 請求項８の化合物および生理学的に許容し得る担体を含み、無菌の形 にある薬剤組成物。