JP2001501975A

JP2001501975A - 亢進した細胞取り込みを有する結合ペプチド核酸

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Publication number: JP2001501975A
Application number: JP11500871A
Authority: JP
Inventors: ニールセン，ペーター・エー; クヌートセン，ヘレ
Original assignee: ペーター・エー・ニールセン
Priority date: 1997-05-28
Filing date: 1998-05-28
Publication date: 2001-02-13
Also published as: IL133087A0; CA2291839A1; AU7602198A; NZ501289A; WO1998053801A1; AU745309B2; EP1003480A1; EP1003480A4

Abstract

(57)【要約】親脂質基に結合し、そしてリポソームに取り込まれているペプチド核酸は、亢進した細胞取り込みおよび分布を示す。ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布はまた、ペプチド核酸の骨格にアミノ酸側鎖を導入することでも増加する。細胞取り込みを調節する方法および動物を治療する方法が提供される。本発明のペプチド核酸は、天然発生核酸塩基およびポリアミド骨格に結合する非天然発生核酸塩基を含む。

Description

【発明の詳細な説明】亢進した細胞取り込みを有する結合ペプチド核酸発明の分野本発明は、親脂質基（lipophilic group）に結合し、そしてリポソームに取り込まれているペプチド核酸（PNA）を含む組成物に関する。該PNAは、ポリアミド骨格に共有結合した天然発生核酸塩基（nucleobase）または非天然発生核酸塩基から構成される。本発明のPNA組成物はさらに、アミノ酸側鎖により修飾されたP NAを含んでもよい。本発明のPNA組成物は、亢進した細胞取り込みおよび分布を示す。リポソームに取り込まれたPNA組成物は、リポソームを含まないPNA組成物より増加した細胞取り込みおよび拡散した分布を示した。発明の背景遺伝子の機能は、その情報をメッセンジャーRNA（mRNA）に転写することにより開始する。リボソーム複合体との相互作用により、mRNAはタンパク質の合成を指示する。このタンパク質合成過程は、翻訳として知られる。翻訳には、多様な補因子、構築ブロック、アミノ酸およびトランスファーRNA（tRNA）の存在が必要であり、これらはすべて正常細胞に存在する。ほとんどの慣用的な薬剤は、１つまたはそれ以上の標的内因性タンパク質、例えば酵素と相互作用し、そして該タンパク質を調節することにより、その効果を発揮する。しかし、典型的には、こうした薬剤は標的タンパク質に特異的でなく、他のタンパク質とも相互作用する。したがって、特定のタンパク質の作用を効果的に調節するには、比較的大量の薬剤用量を使用することが必要である。タンパク質活性の調節を、mRNAとの相互作用またはmRNAの不活性化により達成することが可能であるならば、必要な薬剤量および薬剤の副作用の劇的な減少が達成される可能性がある。こうした相互作用が部位特異的であるならば、必要な薬剤量および副作用のさらなる減少が達成される可能性がある。機能している遺伝子は連続的にmRNAを産生するため、遺伝子転写が完全に停止されることが可能ならば、さらにより都合がよいであろう。オリゴヌクレオチドおよびその類似体（analogue）が開発されてきており、そして診断、治療および研究試薬として用いられてきている。オリゴヌクレオチドへの修飾の１つの例は、非同位体標識、例えばフルオレセイン、ビオチン、ジゴキシゲニン、アルカリホスファターゼ、または他のレポーター分子による標識である。ヌクレアーゼへの耐性を増加させるリボースリン酸骨格への他の修飾も作成されてきている。これらの修飾にはメチルホスホネート類、ホスホロチオエート類およびホスホロジチオエート類などの結合、および２’−Ｏ−メチルリボース糖部分の使用が含まれる。他のオリゴヌクレオチド修飾には、取り込みおよび細胞分布を調節するために作成されるものが含まれる。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、現在、多様な疾患状態の治療のため、ヒトの臨床試験において、アンチセンス剤として用いられている。これらのオリゴヌクレオチド修飾に関し、診断および治療用途におけるいくつかの改善が達成されてきたものの、改善されたオリゴヌクレオチド類似体への要求は存在しつづけている。天然発生リボ核酸またはデオキシリボ核酸以外の骨格に結合する核酸塩基を有するいくつかの既知の核酸類似体が存在する。これらの核酸類似体は、相補的な核酸塩基配列を持つ核酸に結合する能力を有する。とりわけ、例えばＷＯ92/207 02に記載されるようなペプチド核酸（PNA）が、治療および診断試薬として有用であることが示されてきている。これは、これらが一般的に、対応する野生型核酸より、相補的核酸塩基配列に対し高い親和性を持つためである可能性がある。 PNAはDNAおよびRNAへの結合においてオリゴヌクレオチドの有用な代用物である。Egholmら,Nature,1993,365,566および該論文に引用される参考文献。最新の文献はPNAの多様な適用を反映している。Hyrupら，Bioorganic＆Med.Chem.,1996 ,4,5；およびNielsen,Perspectives Drug Disc.Des.,1996,4,76。 PNAはオリゴヌクレオチドに類似であるが組成物が異なる化合物である。PNAにおいて、オリゴヌクレオチドのデオキシリボース骨格は、ペプチド骨格により置き換えられている。ペプチド骨格の各サブユニットは、天然発生または非天然発生核酸塩基に結合している。こうしたペプチド骨格の１つは、アミド結合を通じ連結されたＮ−（2−アミノエチル）グリシンの反復単位で構築される。あらかじめ形成された単量体を介したPNAの合成は、以前ＷＯ 92/20702およびWO 92/20703に記載されており、これらの内容は本明細書に援用される。PNAの構造および合成における、より最近の進歩は、WO 93/12129および1996年７月23日に発行された米国特許第5,539,082号に例示されており、どちらの内容も本明細書に援用される。さらに、文献には、PNAの合成方法、生物学的特性および使用を記載する刊行物が豊富である。例えば、PNAは二本鎖DNAの鎖に取って代わる能力を持つ。Patel,Nature,1993,365,490。PNAの改善された合成方法もまた記載されてきている。Nielsenら，Science，1991，254，1497；およびEgholm,J.Am.Chem. Soc.,1992,114,1895。PNAは相補的なDNAまたはRNAと二重鎖および三重鎖を形成する。Knudsonら,Nucleic Acids Researh,1996,24,494;Nielsenら，J．Am.Chem. Soc.,1996,118,2287;Egholmら,Science,1991,254,1497；Egholmら,J.Am.Chem.So c.,1992,114,1895；およびEgholmら，J.Am.Chem.Soc.，1992,114,9677。 PNAはDNAおよびRNA両方に結合し、そしてPNA/DNAまたはPNA/RNA二重鎖を形成する。生じたPNA/DNAまたはPNA/RNA二重鎖は、より高い融解温度（T_m）により立証されるように、対応するDNA/DNAまたはDNA/RNA二重鎖より強く結合している。 PNA/DNA（RNA）二重鎖のこの高い熱安定性は、DNA/DNAまたはRNA/RNA二重鎖に存在する電荷斥力の除去を生じる、PNA骨格の中性性（neutrality）に起因しているとされている。PNA/DNA（RNA）二重鎖の別の利点は、Ｔ_mが実質的に塩濃度に依存していないことである。一方、DNA/DNA複合体は、イオン強度に非常に依存している。オリゴヌクレオチドによる三重鎖形成は、配列特異的な二重鎖デオキシリボ核酸(DNA)切断が立証されて以来、重点的な研究領域であった。Moserら,Science,1 987，238，645。遺伝子治療、診断精査および他の生体臨床医学的適用における三重鎖形成オリゴヌクレオチドの潜在的な使用は、かなりの関心を引いてきた。 Uhlmannら,Chemical Reviews,1990,90,543。ピリミジンオリゴヌクレオチドは、二本鎖DNAにおけるホモプリン標的への結合を通して、三重らせん構造を形成することが示されてきている。これらの構造において、新たなピリミジン鎖は、DNAの主溝において、ワトソン−クリック（Watson-Crick）プリン鎖と平行に置かれ、そして配列特異的フーグスティーン（Hoogsteen）結合を通じて結合する。配列特異性はチミン認識アデニン（T:A-T）およびプロトン付加シトシン認識グアニン（C⁺:G-C）に由来する。Bestら,J.Am.Chem.Soc.,1995,117,1187。これよりよく研究されていない三重鎖モチーフのうち、プリンリッチオリゴヌクレオチドは二本鎖ＤＮＡのプリン標的に結合する。このモチーフ中の第三の鎖の方向は、ワトソン−クリックプリン鎖と逆平行であり、そして特異性はグアニン認識グアニン（G:G-C）およびチミンまたはアデニン認識アデニン（A:A-Tまたは T:A-T）に由来する。Greenbergら,J.Am.Chem.Soc.,1995,117,5016。ホモピリミジンPNAは相補的なDNAまたはRNAに結合し、高い熱安定性の(PNA)₂/ DNA（RNA）三重鎖を形成することが示されている。Egholmら,Science,1991,254, 1497;Egholmら，J.Am.Chem.Soc.,1992,114,1895;Egholmら,J.Am.Chem.Soc.,1992 ,114,9677。２つのPNA鎖および１つのヌクレオチド鎖を含む三重鎖の形成は、19 93年７月２日に提出された米国特許出願第08/088,661号に報告されており、その内容は本明細書に援用される。フーグスティーン鎖がDNAプリン標的鎖に平行である三重鎖の形成は、逆平行複合体の形成より好ましい。これにより、ビス−PN Aの使用が可能になり、フーグスティーン鎖においてシトシンの代わりに偽イソシトシン（pseudoisocytosine）を用い、pH非依存性熱安定性が増加した三重らせん構造が得られる。Egholmら，J.Am.Chem.Soc.,1992,114,1895。さらに、その内容が本明細書に援用されるWO 96/02558を参照されたい。ペプチド核酸は、DNAおよびRNA両方に関し、DNAまたはRNAのDNAまたはRNAいずれかへの結合親和性より、（それらのＴ_mから決定されるように）より高い結合親和性を有することが示されている。結合親和性のこの増加は、これらのペプチド核酸オリゴマーを、核酸種に対する分子プローブおよび診断剤として、特に有用なものにしている。親和性の増加に加え、PNAはDNA結合に対し、増加した特異性を有する。したがって、PNA/DNA二重鎖ミスマッチは、DNA/DNA二重鎖に比べ、Ｔ_mの８から20℃の減少を示す。Ｔ_mのこの減少は、対応するDNA/DNA二重鎖ミスマッチでは観察されない。Egholmら,Nature 1993,365,566。オリゴヌクレオチドに比べ、PNAのさらなる利点は、PNAのポリアミド骨格が酵素による分解に耐性であることである。かなりの研究が、相補的DNAおよびRNA鎖に結合するオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体の、診断、研究試薬および潜在的な治療剤としての適用に向けられてきた。多くの適用に関し、該オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は、その活性を発現するのに、細胞膜を通して輸送されるかまたは細胞により取り込まれなければならない。 PCT/EP/01219は対応するDNAより強く、相補的なDNAおよびRNAに結合する新規P NAを記載する。これらのPNAに、その活性を調節する、その膜透過性を修飾する、またはその細胞取り込み特性を増加させるであろう基を付加するのが望ましい。PNAの細胞取り込み特性量を増加させる１つの方法は、親脂質基を結合させることである。1993年９月３日に提出された米国特許出願第117,363号は、いくつかのアルカリアミノ官能性（functionality）およびこうした側鎖をオリゴヌクレオチドに結合するその使用を記載している。 1992年９月11日に提出された米国特許出願第07/943,516号およびその対応する公表されたPCT出願WO 94/06815は、とりわけ、細胞取り込みを亢進し、親脂質性を増加させ、より大きい細胞保持を生じ、そして細胞内の化合物の分布を増加させる目的で、他の新規アミン含有化合物およびそのオリゴヌクレオチドへの取り込みを記載している。 1993年９月３日に提出された米国特許出願第08/116,801号は、チオールアルキル官能性を含み、それを通して側鎖が結合するよう誘導体化されたヌクレオシドおよびオリゴヌクレオシドを記載する。最近、多様な生体分子および薬剤を取り込むリポソーム薬剤搬送系が研究され、そして細胞取り込みおよび分布が亢進したことにより、毒性の減少および効能の増加を示すことが見出されてきている。ChonnおよびCullis,Current Opinion in Biotechnology,1995,6,698;Manninoら,Biotechniques,1988,6,682;BlumeおよびCevc,Biochem et Biophys.Acta,1990,1029,91;およびLappalainenら，Antivir al Res.,1994,23,119。リポソームは水性コアおよびコアを被包する脂質二重層から構成される非常に小さな球体である。リポソーム調製法は、文献中に入手可能である。G．Gregoridadis,“Liposome Technology”中，第２巻，G.Gre goridadis（監修）,CRC Press,1993,p.1;WatweおよびBellare,Curr.Sci.,1995,6 8,715。いくつかのリポソーム薬剤が現在、市場にあるかまたは開発中である。C honnおよびCullis,Current Opinion in Biotechnology,1995,6,698。 1995年４月11日に公表されたWO 96/10391は、リポソームを形成するのに用いられるポリエチレングリコール修飾セラミド脂質、およびこれらのリポソームの薬剤搬送媒体（vehicle）としての使用を記載する。 1996年８月15日に公表されたWO 96/24334は、薬剤を細胞の細胞質、特に血管平滑筋組織に搬送するための、アミノマンノース誘導体化コレステロール部分を有する脂質構築物を記載する。 1996年12月19日に公表されたWO 96/40627は、オリゴヌクレオチド、核酸、ペプチドおよび他の剤などの生体分子の搬送に有用な陽イオン脂質含有リポソーム処方を記載する。最近の進歩にも関わらず、亢進した細胞取り込みおよび分布を持つ安定した組成物への要求が依然としてある。発明の概要本発明は、親脂質基に結合し、そしてアミノ酸側鎖が骨格に結合している修飾骨格を有するペプチド核酸（PNA）を提供する。本発明はまた、親脂質基に結合し、リポソームに取り込まれているペプチド核酸（PNA）を含むリポソーム組成物も提供する。本発明のPNAは、ポリアミド骨格に共有結合している核酸塩基を含む。典型的な核酸塩基には、４つの主要な天然発生DNA核酸塩基（すなわち、チミン、シトシン、アデニンおよびグアニン）、他の天然発生核酸塩基（例えば、イノシン、ウラシル、５−メチルシトシン、チオウラシルおよび2,6−ジアミノプリン）および人工核酸塩基（例えば、ブロモチミン、アザアデニン類およびアザグアニン類）が含まれる。これらの核酸塩基は、適切なリンカーを通じ、ポリアミド骨格に結合する。本発明の好ましいペプチド核酸は一般式（I）：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'はアミノ酸側鎖であり；Ｒ^hはOH，NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；ｎは１から30までの整数である。Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である式（I）を有するPNAが好ましい。さらにより好ましいのは、Ｒⁱがフルオレセインで標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である式（I）のPNAである。やはり好ましいのは、ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である式（I）を有するPNAである。さらに好ましいのは前記Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である式（I）のPNAである。好ましくは、置換基Ｒ^7'が結合する炭素原子は、立体化学的に濃縮されている。以下、「立体化学的に濃縮される」は、有益な影響を提供するのに十分な量、１つの立体異性体が他の立体異性体より多いことを意味する。好ましくは、１つの立体異性体が、50％以上を占める。より好ましくは、１つの立体異性体が、80 ％以上を占める。さらにより好ましくは、１つの立体異性体が、90％以上を占める。さらにより好ましくは、１つの立体異性体が、95％以上を占める。さらにより好ましくは、１つの立体異性体が、99％以上を占める。さらにより好ましくは、１つの立体異性体が、実質的に全量で（quantitatively）存在する。本発明はまた、リポソームに取り込まれたペプチド核酸を含むリポソーム組成物であって、前記ペプチド核酸が：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH，NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；ｎは１から30までの整数である式（I）を有する、前記リポソーム組成物も提供する。Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である式（I）を有するPNAが好ましい。さらにより好ましいのは、Ｒⁱがフルオレセインで標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である式（I）のPNAである。やはり好ましいのは、ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である式（I）を有するPNAである。さらに好ましいのは前記Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である式（I）のPNAである。好ましくは、置換基Ｒ^7'が結合する炭素原子は、立体化学的に濃縮されている。本発明のPNAは、溶液中または固相上いずれかでの標準的ペプチド合成法の適応により合成される。本発明はさらに、PNA骨格にアミノ酸側鎖を取り込み、親脂質基をPNAに結合させ、そしてPNAをリポソームに導入することにより、ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を亢進させる方法も提供する。図の簡単な説明図１は、いくつかの親脂質基の構造を示す。発明の詳細な説明本発明にしたがって、亢進した細胞取り込みおよび分布を示すペプチド核酸およびリポソーム組成物が提供される。本発明のペプチド核酸（PNA）は、適切なリンカーによりポリアミド骨格に結合する複数の核酸塩基から構築されている。本発明の１つの好ましい態様において、PNAは親脂質基に結合している。本明細書において、「結合」は親脂質基を本発明のPNAに結合させることを指す。別の好ましい態様において、本発明のPNAのポリアミド骨格は誘導体化されている。本明細書において、「誘導体化」は、少なくとも１つの天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖をポリアミド骨格に結合することにより、PNAの骨格を修飾することを指す。本発明のリポソーム組成物は、リポソームに取り込まれている本発明のペプチド核酸を含む。したがって、本発明のリポソーム組成物は、リポソームにより被包されているPNAを含む。本発明のPNAおよびリポソーム組成物は、亢進した細胞取り込みおよび分布を示す。本発明のPNAは、式（I）を有し、ここで核酸塩基Ｌは天然に見られる位で天然発生核酸塩基と結合する、すなわち、アデニンまたはグアニンに対し９位で、そしてチミンまたはシトシン、非天然発生核酸塩基（核酸塩基類似体）または核酸塩基結合部分に対し１位で結合する。典型的な核酸塩基には、４つの主要な天然発生DNA核酸塩基（すなわち、チミン、シトシン、アデニンおよびグアニン）、他の天然発生核酸塩基（例えば、イノシン、ウラシル、５−メチルシトシン、チオウラシルおよび2,6−ジアミノプリン）および人工核酸塩基（例えば、ブロモチミン、アザアデニン類およびアザグアニン類）が含まれる。これらの核酸塩基は、適切なリンカーを通じ、ポリアミド骨格に結合する。式（I）のPNAには、その構造内に１つまたはそれ以上のアミノ酸部分が含まれる。これらのアミノ酸は、天然発生でも、または非天然発生でもよい。天然発生アミノ酸には、キラル中心がＤ−立体配置を有するα−アミノ酸が含まれる。こうした天然発生アミノ酸は、必須または非必須アミノ酸のどちらであってもよい。式（I）の本発明のPNAに用いられる非天然発生アミノ酸には、キラル中心がＬ −立体配置を持つα−アミノ酸が含まれる。非天然発生アミノ酸にはまた、天然には存在せず、そして合成により調製される、例えばハロ−およびシアノ−置換ベンジル、テトラヒドロイソキノリルメチル、シクロヘキシルメチル、およびピリジルメチルなどの通常のものでない側鎖を持つアミノ酸が含まれる。他の合成アミノ酸には、β−アミノ酸が含まれる。アミノ酸は、式（I）のPNAに、用いられる単量体の一部として、またはPNAの末端で、導入されてもよい。PNA合成に用いられる単量体構築ブロックに、上述のアミノ酸のいずれを取り込むことも可能である。好ましくは、用いられるアミノ酸はグリシンであり、Ｒ^7'はＨである。Ｒ^7'はまた、メチル、エチル、ベンジル、イソプロピル、p−ヒドロキシベンジル、ハロベンジル、カルボキシメチル、テトラヒドロイソキノリニルメチル、またはアミノヘキサノイルであってもよい。アミノ酸はまた、末端Ｒ^h−CO−基が天然または非天然発生アミノ酸、α− またはβ−アミノ酸のいずれかに由来するアミノアシル基を示し、そしてα−キラル中心でＤ−またはＬ−立体配置を持つように、PNAのＣ末端に結合させてもよい。好ましくは、Ｃ末端アミノ酸はリジンである。アミノ酸はまた、ＲⁱおよびＲ^jの各々が、独立した、天然または非天然発生アミノ酸、α−またはβ−アミノ酸のいずれかに由来するアミノアシル基であり、そしてα−キラル中心でＤ −またはＬ−立体配置を持ってもよい、構造（I）のPNAのＮ末端に取り込まれてもよい。好ましくは、Ｎ末端アミノ酸はリジンである。本発明の式（I）のPNAに結合する親脂質基には、天然および合成脂肪酸、脂肪アルコール誘導体およびジアシルグリセロール誘導体、例えば、アジピン酸、パルミチン酸、デカン酸、オクタデカン酸、オレイン酸、エライジン酸、リノレン酸、胆汁酸、ヘプチルコハク酸、パルミチルコハク酸、ポリグリコール酸、ジオクタデシルグリセロールホスファチジル酸、ジオレオイルグリセロールホスファチジル酸、アダマントイル、オクタデシルオキシカロボニル、およびデカリノイルなどが含まれる。これらの親脂質基は、式（I）のPNA分子のいかなる適切な位置で結合してもよい。好ましくは、親脂質基は、ＲⁱおよびＲ^jの各々が独立して、親脂質基であってもよい、本発明のPNAのＮ末端に結合する。より好ましくは、ＲⁱおよびＲ^jは共にアダマントイル基である。本発明のPNAは、該PNAを検出する簡便な手段を可能にするように、標識、例えば蛍光基が取り込まれている式（I）を有する。蛍光基には、限定されるわけではないが、フルオレセイン、ローダミン、ピレニル、シアニン色素、Cy5^TM（Bio logical Detection Systems，Inc.、ペンシルバニア州ピッツバーグ）などの色素、およびこうした色素の誘導体が含まれる。これらは式（I）のPNAに、該 PNAのいかなる適切な位で取り込まれてもよい。好ましくは各Ｒⁱは蛍光基が結合する化学部分である。Ｒⁱが蛍光基で誘導体化されているアミノ酸であるのがより好ましい。Ｒⁱがε−フルオレセイニル基を持つリジンであるのがさらにより好ましい。本発明のリポソーム組成物は、リポソームに取り込まれている本発明のPNAを含む。リポソーム組成物は、亢進した細胞取り込みおよび分布を示す。リポソームはコロイド分散系であり、そして取り込まれたPNAを環境から保護しながら標的領域に輸送する安定した搬送系を構成する。リポソームは、本発明のPNAのin vitroおよびin vivo安定性を亢進させる、安定した搬送媒体に相当する。リポソームに取り込まれた本発明のPNAを含む、本発明のリポソーム組成物は、当業者に知られる標準的方法にしたがい、適切でそして許容されるキャリアーおよびアジュバントを用い、薬剤組成物として処方してもよい。用いてもよいリポソームには、小単膜小胞(small unilamellar vesicle)(SUV) 、大単膜小胞(large unilamellar vesicle)（LUV）および多膜小胞(multilamell ar vesicle)（MLV）が含まれる。大きさ0.2から0.4μｍの範囲にあるLUVは、水性緩衝剤を含む大きな高分子のかなりの割合を被包することが可能であることが示されてきている（例えばRNA、DNAおよび損なわれていない（intact）ビリオンは水性である内部に被包され、そして生物学的活性型で脳細胞に搬送されることが可能である：Fraleyら,Trends Biochem.Sci.,1981,6,77）。リポソーム組成物は、通常、脂質、特にリン脂質、特に高相転移温度リン脂質が、通常、１つまたはそれ以上のステロイド、特にコレステロールと結合した前記脂質の結合体である。リポソーム産生に有用な脂質の例には、ホスファチジル化合物、例えばホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ脂質類、セレブロシド類およびガングリオシド類が含まれる。特に有用なのは、脂質部分が14から18の炭素原子、特に 16から18の炭素原子を含み、そして飽和している（14から18の炭素原子鎖中に二重結合を欠く）ジアシルホスファチジルグリセロール類である。リン脂質の例には、ホスフアチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンおよびジステアロイルホスファチジルコリンが含まれる。リポソーム標的化は受動的でも能動的でもどちらでもよい。受動標的化は、リポソームが、洞様毛細血管を含む器官内の細網内皮系の細胞に分布する、自然の傾向を利用する。能動標的化は、対照的に、局在化の天然発生部位以外の器官および細胞種への分布を達成するために、ウイルスタンパク質コート（Morishita ら,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1993,90,8474）、モノクローナル抗体（またはその適切な結合部分）、糖、糖脂質またはタンパク質（またはその適切なオリゴペプチド断片）などの特定のリガンドにカップリングさせることによる、またはリポソームの組成物および／または大きさを変化させることによる、リポソームの修飾を伴う。標的化されるコロイド分散系の表面は多様な方法で修飾されてもよい。リポソーム標的化搬送系の場合、標的リガンドを脂質二重層と強く結合させたままにするため、リポソームの脂質二重層に脂質基を取り込んでもよい。脂質鎖を標的リガンドに結合させるため、多様な連結基を用いてもよい。標的リガンドは、本発明のオリゴヌクレオチドの搬送が望ましい細胞上に顕著に見られる特定の細胞表面分子に結合し、例えば（1）搬送が望ましい細胞により顕著に発現される特定の細胞受容体により結合される、ホルモン、成長因子またはそれらの適切なオリゴペプチド断片；または（2）標的細胞に顕著に見られる抗原性エピトープに特異的に結合する、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体、またはそれらの適切な断片（例えば、Fab；F(ab')₂）であってもよい。２つまたはそれ以上の生体活性剤（例えばPNAおよび慣用薬剤、または２つのPNA）を単一のリポソーム内で組み合わせ、そして該リポソームにより搬送してもよい。細胞内安定性および／またはその含有物の標的化を亢進するコロイド分散系に剤を添加することも可能である。本発明のPNAは、遺伝子調節（例えば遺伝子標的薬剤）、診断法、バイオテクノロジーおよび他の研究目的に用いてもよい。該PNAはまた、RNAおよび一本鎖DN A（ssDNA）を標的とし、両方のアンチセンス型遺伝子制御部分を産生するのに用いてもよいし、そして例えば核酸の同定および精製のためのハイブリダイゼーションプローブとして用いてもよい。さらに、該PNAを二本鎖DNA（dsDNA）と三重らせんを形成するように修飾してもよい。dsDNAに配列特異的に結合する化合物は、遺伝子標的薬剤としての適用を有する。これらの化合物は、癌、後天性免疫不全症（AIDS）および他のウイルス感染および遺伝的障害を含む、多様な疾患を治療するのに非常に有用な薬剤である。さらに、これらの化合物は、研究、診断法において、そして特定の核酸の検出および単離のために用いてもよい。遺伝子標的薬剤は、標的遺伝子の制御領域（プロモーター）に相補的な核酸塩基配列（好ましくは10から20単位を含む）を持つよう設計される。したがって、投与の際、遺伝子標的薬剤は該プロモーターに結合し、そしてRNAポリメラーゼがプロモーターに近づくのを妨げる。その結果、mRNAそしてしたがって遺伝子産物（タンパク質）はまったく産生されない。標的がウイルスにとって必須の遺伝子内にあるならば、生存可能な（viable）ウイルス粒子はまったく産生されないであろう。また別に、標的領域はプロモーターから下流であり、RNAポリメラーゼがこの位で終結するようにし、したがって機能しない一部切除mRNA／タンパク質を形成してもよい。 PNAオリゴマーの合成反応中、分子を固体マトリックス上に固定する原理は、固相合成またはメリフィールド(Merrifield)合成として知られる。Merrifield,J.Am.Chem.Soc.,1963,8 5,2149；およびScience,1986,232,341。アミノ酸のペプチドへの段階的または断片的固相構築に関する確立された方法は、通常、架橋スチレン−ジビニルベンゼン・コポリマーのビーズ化マトリックスを使用する。架橋コポリマーは、スチレン単量体のパール重合にジビニルベンゼンの混合物が添加されることにより形成される。通常、１から2％の架橋が使用される。こうしたマトリックスを、本発明の固相PNA合成に用いてもよい。固相の最初の官能化（functionalization）に関し、伝統的固相ペプチド合成と関連し、50以上の方法が記載されている。BaranyおよびMerrifield,“The Pep tides”中，第２巻，Academic Press，ニューヨーク，1979，pp.1；およびStewa rtおよびYoung,“Solid Phase Peptide Synthesis”中，第２版，Pierce Chemic al Company，イリノイ，1984。その性質に関わらず、固相上に官能性を導入する目的は、コポリマー固体支持体および該固体支持体にカップリングされる第一のアミノ酸のＣ末端の間に固定連結（anchoring linkage）を形成することである。認識されるであろうように、固定連結はまた、固体支持体およびアミノ酸Ｎ末端の間に形成されてもよい。固相に存在する官能基の「濃度」は、一般的にグラム当たりのミリモル（mmol/g）で表される。これらの確立された方法はすべて、原則として、本発明の背景内で有用である。 PNA合成の好ましい方法は、最初の官能性としてアミノメチルを使用する。アミノメチルは、ほとんど全量がカルボン酸基とアミド結合を形成するため、「スペーサー」または「ハンドル」基として特に有用である。対応する多くのスペーサーまたはハンドル形成二官能試薬が記載されている。Baranyら,Int.J.Peptide Protein Res.,1987,30,705。特定の官能性（例えばベンズヒドリルアミノ、4− メチルベンズヒドリルアミノおよび4−メトキシベンズヒドリルアミノ）は、PNA 鎖のＣ末端がアミドとして放出されるように、固体支持体から合成PNA鎖を切断する目的で取り込まれてもよく、スペーサー基の導入を必要としない。いかなるこうした官能性も、本発明の背景において有益に使用されてもよい。典型的なＮ保護基は、tert−ブチルオキシカルボニル(BOC)（Carpino,J.Am.Ch em.Soc.,1957,79,4427；McKeyら,J.Am.Chem.Soc.,1957,79,4686；およびAnderso nら,J.Am.Chem.Soc.,1957,79,6180）、9−フルオレニルメチルオキシカルボニル（FMOC）(Carpinoら,J.Am.Chem.Soc.,1970,92,5748およびJ.Org.Chem.,1972,37, 3404)、Adoc(Hassら,J.Am.Chem.Soc.,1966,88,1988)、Bpoc（Sieber,Helv.Chem. Acta.,1968,51,614）、Mcb（Bradyら,J.Org.Chem.,1977,42,143）、Bic（Kempら ,Tetrahedron,1975,4624）、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル(Nps)（Zervasら, J.Am.Chem.Soc.,1963,85,3660）およびジチアスクシノイル（Dts）（Baranyら,J .Am.Chem.Soc.,1977,99,7363）と共に、当業に知られる他の基である。これらのアミノ保護基、特に広く用いられるウレタン官能性に基づくものは、ほとんどの α−アミノ酸のカップリング中、ラセミ化を妨げる（容易に形成されるオキサゾリノン（アズラクトン）中間体の互変異化により仲介される（Goodmanら,J.Am.C hem.Soc.,1964,86,2918））。こうしたアミノ保護基に加え、非ウレタン型アミノ保護基もまた、PNA分子を構築する際、適用されることが可能である。側鎖保護基は、反復アミノ脱保護サイクルの条件に耐性でなければならないため、側鎖保護基の選択は、一般的に、アミノ保護基の選択に依存する。これは、化学的にPNA分子を構築する全体の戦略が、例えば（上述の「BOC−ベンジル」アプローチの場合のように）アミノおよび側鎖保護基の異なる酸安定性に頼っていようと、または（上述の「FMOC−t−Bu」アプローチのように）直交（orthogona l）すなわち化学選択的（chemoselective）保護計画を使用しようと、真実である。第一のアミノ酸のカップリングに続き、固相合成の次の段階は、望ましいPNA 鎖の系統的な仕上げ（elaboration）である。この仕上げには、反復脱保護／カップリングサイクルが含まれる。最後にカップリングされたアミノ酸上の一時的な保護基、例えばBOCまたはFMOCは、Ｎ末端アミン官能基を遊離させるように、適切な処理により、例えば、BOCの場合のトリフルオロ酢酸など酸分解により、またはFMOCの場合のピペリジンなどの塩基処理により、全量が除去される。次の望ましいＮ保護アミノ酸をその後、最後にカップリングされたアミノ酸のＮ末端にカップリングする。この、最後にカップリングされたアミノ酸のＮ末端と、アミノ酸のＣ末端とのカップリングは、いくつかの方法により達成することが可能である。例えば、後続のアミノ酸をいくつかの方法のいずれで活性化されたカルボキシル基を含む形で提供することにより達成してもよく、前記の活性化の方法には、フタルイミドエステル（Nefkensら,J.Am.Chem.Soc.,1961,83,1263 ）、ペンタフルオロフェニルエステル（Kovacsら,J.Am.Chem.Soc.,1963,85,183 ）、イミダゾールエステル（Liら,J.Am.Chem.Soc.,1970,92,7608）、および3− ヒドロキシ−4−オキソ−3,4−ジヒドロキナゾリン（Dhbt-OH）エステル（Konig ら,Chem.Ber.,1973,103,2024および2034）などの活性エステル誘導体の最初の形成、または対称無水物（Wielandら,Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.,1971,10,336）などの無水物の最初の形成が含まれる。また別に、後続のアミノ酸のカルボキシル基を、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（Sheehanら,J.Am.Chem.Soc.,1 955,77,1067）またはその誘導体などの縮合試薬の補助と共に、最後にカップリングされたアミノ酸のＮ末端と直接反応させてもよい。第二級アミノ基を含むPN A分子を構築する際には、ベンゾトリアゾリルＮ−オキシ−トリスジメチルアミノホスホニウム・ヘキサフルオロリン酸（ BOP）、「カストロ試薬（Castro'sreagent）」（Rivailleら,Tetrahedron,1980,36 ,3413）が推奨される。保護基を含む、望ましいPNA鎖の構築に続き、次の段階は、通常、PNA鎖のアミノ酸部分の脱保護および合成されたPNAの固体支持体からの切断であろう。これらの過程は、実質的に同時に行い、それにより望ましい型の遊離PNA分子を提供してもよい。上述の「BOC−ベンジル」保護計画において、側鎖の最後の脱保護および固体支持体からのPNA分子の放出は、強酸、例えば無水HF（Sakakibaraら,Bull.Chem. Soc.Jpn.,1965,38,4921）、ホウ素トリス（トリフルオロ酢酸）（Plessら，Helv .Chim.Acta,1973,46,1609）および、トリフルオロメタンスルホン酸およびメタンスルホン酸（Yajimaら,J.Chem.Soc.,Chem.Comm.,1974,107）などのスルホン酸の使用により行われるのが最も多い。強酸（例えば無水HF）脱保護法は、PNA鎖における感受性残基のアルキル化およびアシル化につながる可能性がある、高い反応性のカルボカチオンを産生する可能性がある。こうした副反応は、アニソール、フェノール、ジメチルスルフィド、およびメルカプトエタノールなどのスカベンジャーの存在により、部分的にしか避けられない。したがって、有害なカルボカチオンの前駆体を除去し不活性スルホニウム塩を形成する、スルフィド補助酸分解S_N2脱保護法(Tamら,J.Am.Chem.Soc.,1983,105,6442およびJ.Am.Chem.Soc. ,1986,108,5242)、いわゆる「低（low）」法が、ペプチドおよびPNA合成にしばしば使用される。脱保護および／またはPNA固体支持体結合の最後の切断の他の方法には、塩基触媒アルコーリシス（Bartonら,J.Am.Chem.Soc.,1973,95,4501）、アンモノリシス、加ヒドラジン分解(Bodanszkyら,Chem.Ind.,1964,1423)、水素分解(Jones,Tetrahedron Lett.1977，2853およびSchlatterら，TetrahedronLe tt．1977，2861)および光分解（RichおよびGurwara,J.Am.Chem.Soc.,1975,97,15 75）を含んでもよい。最後に、慣用ペプチドの化学合成と対照的に、アミノエチルグリシル骨格単位に基づくものなどアキラルPNAの段階的鎖構築は、Ｎ末端またはＣ末端どちらから出発してもよい。当業者は、Ｃ末端で出発する合成は、典型的には保護アミン基および遊離または活性化酸基を使用し、そしてＮ末端で出発する合成は、典型的には保護酸基および遊離または活性化アミン基を使用することを認識するであろう。治療および予防標的となる可能性があるものには、単純疱疹ウイルス（herpes simplex virus）(HSV)、ヒト乳頭腫ウイルス（human papilloma virus）(HPV)、ヒト免疫不全ウイルス（human immunodeficiency virus）（HIV）、カンジダアルビカンス（candida albicans）、インフルエンザウイルス（influenza virus ）、サイトメガロウイルス（cytomegalovirus）（CMV）、細胞間接着分子（ICAM ）、5−リポキシゲナーゼ（5−LO）、ホスホリパーゼＡ₂（PLA₂）、プロテインキナーゼＣ（PKC）、およびrasオンコジーンが含まれる。こうした標的の潜在的な治療には、眼、口唇、性器、および全身の単純疱疹ＩおよびII感染；性器いぼ；子宮頚癌；尋常性ゆうぜい；カポジ肉腫；AIDS；皮膚および全身の真菌感染；インフルエンザ；肺炎；免疫抑制された患者における網膜炎および肺炎；単核細胞症；眼、皮膚および全身の炎症；心臓血管疾患；癌；喘息；乾癬；心臓血管虚脱；心筋梗塞；胃腸疾患；腎臓疾患；慢性関節リウマチ；変形性関節症；急性膵炎；敗血症ショック；およびクローン病が含まれる。一般的に、治療または予防的処置には、こうした療法が必要であると疑われる患者に、通常、薬学的に許容されるキャリアー中の本発明のPNAまたはリポソーム組成物を、特定の疾患の性質、その重症度および患者の全体的な状態に依存して変化するであろう量および期間、投与する。本発明のPNAおよびリポソーム組成物は、キャリアー、増粘剤（thickener）、希釈剤、緩衝剤、保存剤、界面活性剤およびそれらに匹敵するものを含んでもよい、薬剤組成物に処方してもよい。薬剤組成物はまた、ペプチド核酸に加え、１つまたはそれ以上の活性成分、例えば抗菌剤、抗炎症剤、麻酔剤およびそれらに匹敵するものも含んでもよい。薬剤組成物は、局所または全身性治療が望ましいのかに依存して、そして治療される領域に依存して、多くの方法で投与してもよい。投与は局所（眼、膣、直腸、鼻腔内、経皮を含む）、経口または非経口（parenteral）、例えば静脈内点滴、皮下、腹腔内または筋内注射または鞘内または脳室内投与によってもよい。局所投与のための処方には、経皮パッチ（patch）、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、座薬、スプレー、液体および粉末が含まれてもよい。慣用的な薬剤キャリアー、核酸キャリアー、水性、粉末または油性基剤（base）、増粘剤およびそれらに匹敵するものが、特定の環境では必要または望ましい可能性がある。被膜コンドーム、手袋およびそれらに匹敵するものもまた、有用である可能性がある。局所投与にはまた、本発明のPNAおよびリポソーム組成物のエレクトロポレーションによる動物の表皮への搬送も含まれる。1996年12月12日に公表されたZewartら、WO 96/39531。経口投与のための組成物には、粉末または顆粒、水性または非水性媒体中の懸濁物または溶液、カプセル、サシェー剤（sachet）、または錠剤が含まれる。増粘剤、香料、希釈剤、乳化剤、分散補助剤または結合剤が望ましい。本発明のPNAおよびリポソーム組成物を動物の目の硝子体液に直接搬送するための硝子体内注射が、1997年１月21に発行された米国特許第5,595,978号に記載され、その内容は本明細書に援用される。管状器官または組織（例えば、動脈、静脈、尿管または尿道）の分離された部分に本発明のPNAおよびリポソーム組成物を直接搬送するための管内投与は、こうした器官または組織の管腔に影響を与える疾患または状態がある患者の治療に望ましい可能性がある。この投与形態を達成するため、カテーテルまたはカニューレを適切な手段により外科的に導入する。治療しようとする管器官または組織の部分を分離した後、本発明のPNAまたはリポソーム組成物をカテーテルまたはカニューレを通じ注入する。注入カテーテルまたはカニューレをその後、除去し、そして管器官または組織中の流動を、その部分の分離を達成した結紮糸を除去することにより復活させる。Morishitaら,Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.,1993,90 ,8474。本発明のPNAまたはリポソーム組成物を患者の脳に直接搬送するための脳室内投与は、脳に影響を与える疾患または状態がある患者の治療に望ましい可能性がある。投与のこの形態を達成するため、シリコンカテーテルを脳室内に外科的に導入し、そして腹部領域に外科的に移植されている皮下注入ポンプ(Medtronic I nc.、ミネソタ州ミネアポリス)に連結する。Zimmら,Cancer Research,1984,44,1 698；およびShaw,Cancer,1993,72(11 Suppl.),3416。該ポンプを用い、 PNAまたはリポソーム組成物を注入し、そして外部プログラミング装置の補助により、正確な投薬調整および投薬スケジュールの変動を可能にする。ポンプの貯蔵容量は18から20mlであり、そして注入速度は毎時0.1mlから１mlの範囲にあってもよい。毎日から月ごとの範囲の投与頻度、および体重kg当たり0.01μｇから 100ｇの範囲の投与される用量に依存して、ポンプ貯蔵容器は３から10週間間隔で補充される。ポンプの補充はポンプの自動防漏隔膜の経皮穿刺により達成される。脳室内投与の組成物は、無菌水溶液を含んでもよく、これはまた緩衝剤、希釈剤および他の適切な添加物も含んでもよい。本発明のPNAまたはリポソーム組成物を患者の脊柱に直接搬送するための鞘内投与は、中枢神経系の疾患がある患者の治療に望ましい可能性がある。投与のこの経路を達成するため、患者のL3−4腰部脊柱間空にシリコンカテーテルを外科的に移植し、そして上腹部領域に外科的に移植されている皮下注入ポンプに連結する。LuerおよびHatton,TheAnnals of Pharmacotherapy,1993,27,912；Ettinge rら,Cancer,1978,41,1270；およびYaidaら,Regul.Pept.,1995,59,193。該ポンプを用い、PNAまたはリポソーム組成物を注入し、そして外部プログラミング装置の補助により、正確な投薬調整および投薬スケジュールの変動を可能にする。ポンプの貯蔵容量は18から20mlであり、注入速度は毎時0.1mlから１mlの範囲にあってもよい。毎日から月ごとの範囲の投与頻度、および体重kg当たり0.01μｇから100ｇの範囲の投与される用量に依存して、ポンプ貯蔵容器は３から10週間間隔で補充される。ポンプの補充はポンプの自動防漏隔膜の単回経皮穿刺により達成される。鞘内投与の組成物は、無菌水溶液を含んでもよく、これはまた緩衝剤、希釈剤および他の適切な添加物も含んでもよい。本方法を介し、脳または脊柱以外の領域への搬送を達成するため、シリコンカテーテルを、例えば肝臓への搬送のため肝動脈への皮下注入ポンプに連結するよう形成してもよい。Kemenyら,Cancer,1993,71,1964。注入ポンプはまた、全身搬送を達成するのに用いてもよい。Ewelら，Cancer Research，1992，52，3005；およびRubensteinら,J.Surg.Oncol.,1996,62,194。非経口、鞘内または脳室内投与のための組成物、またはリポソーム系は、無菌水溶液を含んでもよく、これはまた緩衝剤、希釈剤および他の適切な添加物も含んでもよい。用量決定は、治療されるべき疾患状態の重症度および反応性に依存し、治療経過は数日から数か月、または治癒が達成されるまでまたは疾患状態の軽減が達成されるまで続く。最適投薬スケジュールは患者体内の薬剤集積測定から計算されてもよい。一般の当業者は、容易に、最適用量、投薬方法論および反復率を決定することが可能である。最適用量は、個々のPNAの相対効能に依存して変化する可能性があり、そして一般的にin vitroおよびin vivo動物モデルで有効であることが見出されるEC₅₀に基づいて概算することが可能である。一般的に用量は体重kg当たり0.01μｇから100ｇであり、そして毎日１回またはそれ以上、毎週、毎月、または毎年、または２から20年毎に１回の投与でもよい。単量体サブユニットの合成単量体サブユニットは、好ましくは、実施例１および２に記載されるように、保護／脱保護過程を介し、（BOC−アミノエチル）グリシンのメチルまたはエチルエステルのいずれかの調製で始まる一般的な計画により合成される。チミン単量体の台成は実施例４および５に記載され、そして保護シトシン単量体の合成は実施例６に記載される。保護アデニン単量体の合成は、ブロモ酢酸エチルでのアデニンのアルキル化( 実施例７)およびＸ線結晶解析による置換位（すなわち９位）の確認を含む。その後、Ｎ⁶−アミノ基を、試薬Ｎ−エチル−ベンジルオキシカルボニルイミダゾール・テトラフルオロホウ酸を用いることにより、ベンジルオキシカルボニル基で保護する（実施例８）。産物エステルの単純加水分解（実施例９）によりＮ⁶ −ベンジルオキシカルボニル−9−カルボキシメチルアデニンが得られ（実施例1 0および11）、これを標準的PNAオリゴマー合成に用いた。保護Ｇ単量体の合成には、出発物質、2−アミノ−6−クロロプリンをブロモ酢酸でアルキル化し（実施例12）、そしてその後6−クロロ基をベンジルオキシ基で置換した（実施例13）。生じた酸をカップリング剤として用いる剤PyBrop^TMと共に（BOC−アミノエチル）グリシンメチルエステル（実施例２由来）とカップリングさせ、そして生じたエステルを加水分解し（実施例14）、保護Ｇ単量体を得た。PNAオリゴマー合成に続き、Ｏ⁶−ベンジル基を、最後のHF切断段階において除去した。本発明のさらなる目的、利点、および新規の特徴は、これらの以下の実施例を調べることにより、当業者に明白になるであろう。以下の実施例は本発明を例示し、そして本発明を制限することを意図しない。当業者は、本明細書に記載される特定の物質、組成物および方法の多くの同等物を認識し、または慣例の実験を通し確認することが可能であろう。こうした同等物は本発明の範囲内であると見なされる。一般的な言及以下の略語は実験例に用いられる：DMF、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド；Tyr 、チロシン；Lys、リジン；DCC、Ｎ,Ｎ−ジシクロヘキシル−カルボジイミド；D CU、Ｎ,Ｎ−ジシクロヘキシル尿素；THF、テトラヒドロフラン；aeg、Ｎ−アセチル−Ｎ−（2'−アミノエチル）グリシン；aek、Ｎ−アセチル−Ｎ−（2'−アミノエチル）リジン；Pfp、ペンタフルオロフェニル;BOC，tert−ブトキシカルボニル：Ｚ、ベンジルオキシカルボニル；NMR、核磁気共鳴；s、一重線；d、二重線；dd、二重線の二重線；t、三重線；q、四重線；m、多重線；b、広い（broa d）；δ、化学シフト；ppm、百万分率（化学シフト）。 NMRスペクトルは、テトラメチルシランを内部標準として用い、JEOL FX90Q分光計またはBruker 250 MHz上に記録された。質量分析は、VG FAB供給源およびプローブに適応させたMassLab VG 12-250四重極（quadropole）計器上で行った。融点はBuchi融点装置上に記録され、そして修正されていない。Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドは4Å分子ふるい上で乾燥させ、蒸留しそして4Å分子ふるい上で保存した。ピリジン(HPLC品質）を4Å分子ふるい上で乾燥させ、そして保存した。他の使用溶媒は入手可能な最高の品質であるか、または使用前に蒸留した。ジオキサンは使用前に塩基性アルミナを通過させた。BOC−無水物、4−ニトロフェノール、ブロモ酢酸メチル、ベンジルオキシカルボニルクロリド、ペンタフルオロフェノールはすべて、Aldrich Chemical Companyから得た。チミン、シトシン、アデニンはすべて、Sigmaから得た。薄層クロマトグラフィー（tlc）は以下の溶媒系を用いて行った：（1）クロロホルム：トリエチルアミン：メタノール、７：１：２；（2）塩化メチレン：メタノール、９：１；（3）クロロホルム：メタノール：酢酸、85：10:5。点はUV （254nm）およびまたはニンヒドリン溶液（1−ブタノール1000mlおよび酢酸30ml 中、ニンヒドリン３g）をスプレーした後120℃で５分加熱し、そしてスプレー、加熱を再度行うことにより視覚化した。 PNAオリゴマーのカルボキシ末端（Ｃ末端）を多様な官能基で置換してもよい。１つの方法では、これは異なる樹脂の使用を通じて行われる。PNAオリゴマーのアミノ末端（Ｎ末端）もまた、最後のカップリング段階において最後のPNA単量体に対し、カルボン酸に基づくキャップ試薬を用いてキャッピングしてもよく、または多用な結合基で置換してもよい。ＣおよびＮ末端基の代表的な例を以下に示す。使用される樹脂調製されるaeg-PNA／aeg-PNA誘導体（キャッピング試薬＝アセチル）メリフィールド CH₃CONH-(PNA)-COOH H₂N-(PNA)-COOH Lys置換メリフィールド H₂N-(PNA)-Lys-COOH メリフィールド H₂N-(PNA)-CONH₂ Lys置換MBHA H₂N-(PNA)-Lys-CONH₂ Lys置換メリフィールド CH₃CONH-(PNA)-Lys-COOH H₂N-(PNA)-COOH Lys置換メリフィールド H₂N-(PNA)-Lys-COOH メリフィールド H₂N-(PNA)-CONH₂ MBHA H₂N-(PNA)-CONH₂ Lys置換MBHA H₂N-(PNA)-Lys-CONH₂ MBHA CH₃CONH-(PNA)-CONH₂ H₂N-(PNA)-CONH₂ Lys置換MBHA CH₃CONH-(PNA)-Lys-CONH₂ （キャッピング試薬＝Ｎ−Bocグリシン）メリフィールド BocGly-(PNA)-COOH Lys置換メリフィールド BocGly-(PNA)-Lys-COOH MBHA BocGly-(PNA)-CONH₂ Lys置換MBHA BocGly-(PNA)-Lys-CONH₂ （キャッピング試薬＝1.グリシン；2.コール酸（Chol））メリフィールド Chol-Gly-(PNA)-COOH Lys置換メリフィールド Chol-Gly-(PNA)-Lys-COOH MBHA Chol-Gly-(PNA)-CONH₂ Lys置換MBHA Chol-Gly-(PNA)-Lys-CONH₂ さらなる例は、1994年７月15日に出願され、そして本明細書に援用される米国特許出願第08/275,951号に見られる。実施例１Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ'−（BOC−アミノエチル）グリシンの合成アミノエチルグリシン（52.86g、0.447mol）を水（900ml）に溶解し、そしてジオキサン（900ml）を添加した。２Ｎ NaOHでｐＨを11.2に調整した。ｐＨを11 .2に維持しながら、tert−ブチル−p−ニトロフェニルカルボネート（128.4g、0 .537mol）をジオキサン（720ml）に溶解し、そして２時間にわたり一滴ずつ添加した。少なくともさらに３時間ｐＨを11.2に維持し、そしてその後、攪拌しながら一晩置いた。黄色溶液を０℃に冷却し、そして２Ｎ HClでpHを3.5に調整した。混合物をクロロホルム（4ｘ100ml）で洗浄し、そして０℃で２ＮNaOHで水相のｐＨを9.5に再調整した。ベンジルオキシカルボニルクロリド（73.5ml、0.515mo l）を半時間にわたり添加する一方、２Ｎ NaOHでｐＨを9.5に維持した。続く４時間、頻繁にｐＨを調整し、そして溶液を攪拌しながら一晩置いた。翌日、溶液をエーテル（3x600ml）で洗浄し、そしてその後０℃で２Ｎ HClで溶液のｐＨを1 .5に調整した。表題化合物を酢酸エチル（5x1000ml）を用いた抽出により単離した。酢酸エチル溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させた。これにより産物138ｇが得られ,これをエーテル(300 ml)に溶解し、そして石油エーテル（1800ml）の添加により沈澱させた。収量124 .7ｇ（79％）。融点64.5−85℃。C₁₇H₂₄N₂O₆分析の観察値（計算値）、ＵＶスペクトル（200nm−300nm）が同一であり、小さいピークがビス−Ｚ−AEG からなることが示される。実施例２Ｎ'−BOC−アミノエチルグリシンエステルの合成（a）エチルエステル：Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ'−（BOC−アミノエチル）グリシン（60g、0.170mol）およびＮ,Ｎ−ジメチル−4−アミノピリジン（6g）を無水エタノール（500ml）に溶解し、そしてDCC（42.2g、0.204mol）を添加する前に0℃に冷却した。氷槽を５分後に除去し、そしてさらに２時間攪拌を続けた。沈澱したDCU（32.5g、乾燥）を濾過により除去し、そしてエーテル（ 3ｘ100ml）で洗浄した。合わせた濾過物を、希釈した硫酸水素カリウム（2ｘ400 ml）、希釈した炭酸水素ナトリウム（2ｘ400ml）および飽和塩化ナトリウム（1 ｘ400ml）で連続的に洗浄した。有機相を濾過し、そして硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させ、DCUをいくらか含む油状物質66.1gを得た。該油状物質を無水エタノール（600ml）に溶解し、そして炭素（6.6g）中の10 ％パラジウムを添加した。溶液を大気圧で水素化した。4時間後、理論上の4.2ｌから3.3ｌが消費された。反応混合物をセライト（celite）を通して濾過し、そして真空で蒸発乾固させ、油状物質39.5g（94％）を得た。油状物質の一部、13g をシリカゲル（SiO₂、600g）クロマトグラフィーにより精製した。塩化メチレン中の20％石油エーテル300mlで溶出した後、表題化合物を塩化メチレン中の5％メタノール1700mlで溶出した。溶媒を真空で分画から除去し、満足できる純度の産物8.49ｇを得た。また別に未精製成分10ｇをKugelrohr蒸留により精製した。（b）メチルエステル：メタノールをエタノールに対し置換し、エチルエステルに関する上述の方法を用いた。最終産物はカラムクロマトグラフィーにより精製した。実施例３（Ｎ'−BOC−アミノエチル）グリシンエチルエステルの大規模な別の合成（a） BOC−アミノアセトアルデヒドの調製 3−アミノ−1,2−プロパンジオール（80g，0.88mol）を水（1500ml）に溶解し、そして溶液を4℃に冷却した後、一部にBOC無水物（230g、1.05mol）を添加した。水槽中で溶液をゆるやかに室温まで加熱した。水酸化ナトリウムを一滴ずつ添加することにより、ｐＨを10.5に維持した。反応経過にわたり、水480mlに溶解した総量70.2ｇのNaOHを添加した。一晩攪拌した後、酢酸エチル（1000ml）を添加し、混合物を0℃に冷却し、そして４Ｍ塩酸の添加によりｐＨを2.5に調整した。酢酸エチル層を除去し、そして酸性水溶液をさらに酢酸エチル（8ｘ500ml）で抽出した。合わせた酢酸エチル溶液を、回転蒸発装置を用い、体積1500mlに減少させた。生じた溶液を半飽和硫酸水素カリウム（1500ml）そしてその後、飽和塩化ナトリウムで洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させた。収量：145.3ｇ（86％）。 3−BOC−アミノ−1,2−プロパンジオール(144.7g、0.757mol)を水(750ml)に懸濁し、そして過ヨウ素酸カリウム（191.5g、0.833mol）を添加した。混合物を窒素下で2.5時間攪拌し、そして沈澱したヨウ素酸カリウムを濾過により除去し、そして水（100ml）で一度洗浄した。水相をクロロホルム（6ｘ400ml）で抽出した。クロロホルム抽出物を乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。収量：油 102ｇ（93％）。BOC−アミノアセトアルデヒドの２つの部分を、84℃および0.3m mHgでKugelrohr蒸留により精製した。収量：無色油として79g（77％）。（b）（Ｎ'−BOC−アミノエチル）グリシンメチルエステルの調製炭素中のパラジウム（10％、2.00g）を、メタノール（150ml）中のBOC−アミノアセトアルデヒド（10g、68.9mmol）溶液に0℃で添加した。メタノール（150m l）中の酢酸ナトリウム（11.3g、438mmol）、およびメタノール（75ml）中のグリシンメチルエステル塩酸（8.65g、68.9mmol）を添加した。混合物を大気圧で2 .5時間水素化し、その後セライトを通じて濾過し、そして真空で蒸発乾固させた。成分を水（150ml）に再溶解し、そして0.5Ｎ NaOHでｐＨを８に調整した。水溶液を塩化メチレン（5ｘ150ml）で抽出した。合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。これにより（Ｎ'−BOC−アミノエチル）グリシンメチルエステルの収量14.1g（88％）が生じた。未精製成分を120℃および 0.5mmHgでKugelrohr蒸留により精製し、無色油11.3ｇ（70％）を得た。産物はtl c分析（塩化メチレン中10％メタノール）により、実施例26で産生された成分より高い純度を有した。また別に、（触媒としてのPd(C)と共に）水素の代わりに減少剤としてシアノホウ水素化ナトリウムを用いてもよいが、収率（42％）はより低かった。（c）（Ｎ'−BOC−アミノエチル）グリシンエチルエステルの調製表題化合物を、グリシンメチルエステル塩酸に対しグリシンエチルエステル塩酸を置換し、上記の方法により調製した。また、用いた溶媒はエタノールであった。収率は78％だった。実施例４１−（BOC−aeg）チミンエチルエステルの合成Ｎ'−BOC−アミノエチルグリシンエチルエステル（13.5g、54.8mmol）、DhbtO H（9.84g、60.3mmol）および１−カルボキシメチルチミン（11.1g、60.3mmol）をDMF（210ml）に溶解した。塩化メチレン（210ml）を添加した。溶液をエタノール／氷槽で0℃に冷却し、そしてDCC（13.6g、65.8mmol）を添加した。１時間後、氷槽を除去し、そして室温で攪拌をさらに２時間続けた。沈澱したDCUを濾過により除去し、そして塩化メチレン（2ｘ75ml）で２回洗浄した。合わせた濾過物にさらに塩化メチレン（650ml）を添加した。溶液を、希釈した炭酸水素ナトリウム（3ｘ500ml）、希釈した硫酸水素カリウム（2ｘ500ml）、および飽和塩化ナトリウム（1ｘ500ml）で連続的に洗浄した。沈澱のいくらかは、濾過により有機相から除去した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させた。油状残渣を塩化メチレン（150ml）に溶解し、濾過し、そして0℃で石油エーテル（350ml）を添加することにより表題化合物を沈澱させた。塩化メチレン／石油エーテル処置をもう一度繰り返した。これによりHP LCにより99％以上の純度である成分16g（71％）が得られた。実施例５１−（BOC−aeg）チミンの合成実施例４の成分をTHF（194ml、0.2Ｍの溶液が得られる）に懸濁し、そして１Ｍ水酸化リチウム水溶液（116ml）を添加した。混合物を室温で45分攪拌し、そしてその後、残渣DCUを除去するため濾過した。水（40ml）を溶液に添加し、その後、塩化メチレン（300ml）で洗浄した。さらに水（30ml）を添加し、そして該アルカリ溶液を塩化メチレン（150ml）でもう一度洗浄した。水溶液を0℃に冷却し、そして１Ｎ HCl（およそ110ml）を一滴ずつ添加することによりｐＨを２に調整した。表題化合物を酢酸エチル（9ｘ200ml）で抽出し、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させた。残渣をメタノールからもう一度蒸発させ、一晩乾燥させた後、無色ガラス状固体を得た。収量：9. 57g（64％）。HPLC＞98％。Ｒ_T＝14.8分。C₁₆H₂₄N₄O₇・0.25H₂O分析の観察値（計算値）、Ｃ:49.29（49.42）；Ｈ:6.52（6.35）；Ｎ：14.11（14.41）。第二級アミドの周囲で回転が制限されたため、シグナルのいくつかは２：１の比で二重になっていた（大きいものはmj.、小さいものはmi.とリストに示している。）実施例６Ｎ⁴−ベンジルオキシカルボニル−１−（BOC−aeg）シトシンの合成Ｎ'−BOC−アミノエチルグリシンエチルエステル(5g、20.3mmol)、DhbtOH（3. 64g、22.3mmol）およびＮ⁴−ベンジルオキシカルボニル−１−カルボキシメチルシトシン（6.77g、22.3mmol）をDMF（100ml）に懸濁した。塩化メチレン(100ml) を添加した。溶液を0℃に冷却し、そしてDCC(5.03g、24.4mmol)を添加した。２時間後、氷槽を除去し、そして室温で攪拌をさらに１時間続けた。反応混合物をその後、真空で蒸発乾固させた。残渣をエーテル（100ml）に懸濁し、30分激しく攪拌した。固体成分を濾過により分離し、そしてエーテル洗浄処置を２回繰り返した。成分をその後、希釈炭酸水素ナトリウム（およそ4％溶液、100ml）で15 分激しく攪拌し、濾過し、そして水で洗浄した。この処置をその後、もう一度繰り返し、乾燥後、黄色い固体成分17gが残った。固体をその後、ジオキサン（200 ml）で還流し、そして熱いうちに濾過した。冷却した後、水（200ml）を添加した。沈澱成分を濾過により分離し、水で洗浄し、そして乾燥させた。HPLC（260n mで観察）によれば、この成分はDCUの他は、99％以上の純度を有した。該エステルをその後、THF（100ml）に懸濁し、0℃に冷却し、そして１ＮLiOH（61ml）を添加した。15分攪拌した後、混合物を濾過し、そして濾過物を塩化メチレン（2 ｘ150ml）で洗浄した。該アルカリ溶液をその後0℃に冷却し、そして１ＮHClでp Hを2.0に調整した。表題化合物を濾過により分離し、そして水で一度洗浄し、乾燥後白色粉末11.3gが残った。該成分を塩化メチレン（300ml）に懸濁し、そして石油エーテル（300ml）を添加した。濾過および洗浄により、乾燥後7.1ｇ（69％）が得られた。HPLCは99％の純度を示した。Ｒ_T＝19.5分であり、そしてＺ−脱保護単量体である可能性が最も高い少量の不純物（およそ1％）が12.6分に見られた。C₂₃H₂₉N₅O₈分析の観察値（計算値）、実施例７ 9−カルボキシメチルアデニンエチルエステルの合成アデニン（10g、74mmol）および炭酸カリウム（10.29g、74mmol）をDMFに懸濁し、そしてブロモ酢酸エチル（8.24ml、74mmol）を添加した。懸濁物を窒素下で、室温で2.5時間攪拌し、そしてその後、濾過した。固体残渣をDMF（10ml）で３回洗浄した。合わせた濾過物を真空で蒸発乾固させた。水(200ml)を黄橙色固体成分に添加し、そして４Ｎ HClでｐＨを６に調整した。0℃で10分攪拌した後、固体を濾過して除き、水で洗浄し、そして96％エタノール(150ml)から再結晶させた。表題化合物を濾過により分離し、そしてエーテルで完全に洗浄した。収量：3.4g（20％）。融点215.5−220℃。C₉H₁₁N₅O₂分析の観察値（計算値）、アルキル化の位は、96％エタノールからの再結晶により得られた結晶のＸ線結晶解析により確認した。また別に、9−カルボキシメチルアデニンエチルエステルを以下の方法により調製してもよい。窒素注入口、機械的攪拌器および注入漏斗を備えた２１の三つ首フラスコ中のDMF（1100ml）に懸濁したアデニン（50g、0.37mol）に、ヘキサン洗浄水素化ナトリウム−ミネラルオイル分散物16.4g（0.407mol）を添加した。混合物を２時間激しく攪拌し、その後ブロモ酢酸エチル（75ml、0.67mol）を３時間にわたり一滴ずつ添加した。混合物をさらに１時間攪拌し、その後tlcによりアデニンの完全な変換が示された。混合物を１mmHgで蒸発乾固させ、そして油状残渣に水（500ml）を添加し、表題化合物の結晶化を起こした。該固体を96 ％エタノール(600ml)から再結晶させた。収量（乾燥後):53.7g(65.6％)。HPLC（ 215nm）純度＞99.5％。実施例８Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−9−カルボキシメチルアデニンエチルエステルの合成 9−カルボキシメチルアデニンエチルエステル(3.4ｇ、15.4mmol)を乾燥DMF（5 0ml）に穏やかに加熱することにより溶解し、20℃に冷却し、そして塩化メチレン（50ml）中のＮ−エチル−ベンジルオキシカルボニルイミダゾール・テトラフルオロホウ酸（62mmol）溶液を、氷槽中で15分にわたり添加した。沈澱がいくらか観察された。氷槽を除去し、そして溶液を一晩攪拌した。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（100ml）で処理した。10分攪拌した後、相を分離し、そして有機相を、１体積の水、希釈硫酸水素カリウム（2回）、および飽和塩化ナトリウムで連続的に洗浄した。溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させ、油状成分11gを得た。該成分を塩化メチレン（25ml）に溶解し、0℃ に冷却し、そして石油エーテル（50ml）で沈澱させた。この処置をもう一度繰り返し、表題化合物3.45g（63％）を得た。融点132-35℃。 C₁₇H₁₇N₅O₄分析の観察値（計算値）、実施例９Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−9−カルボキシメチルアデニンの合成Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−9−カルボキシメチルアデニンエチルエステル（3.2g、9.01mmol）をメタノール（50ml）と混合し、0℃に冷却した。水酸化ナトリウム溶液（2Ｎ、50ml）を添加し、それにより成分は素早く溶解した。30 分後、0℃で、該アルカリ溶液を塩化メチレン（2ｘ50ml）で洗浄した。0℃で４Ｎ HClで水溶液のpHを１に調整し、それにより表題化合物が沈澱した。濾過、水での洗浄、および乾燥後の収量は3.08g（104％）であった。産物は塩を含み、そして元素分析はそれを反映した。C₁₅H₁₃N₅O₄分析の観察値（計算値）、系１でのHPLC（215nm、260nm）：15.18分、少量の不純物は全部で2％未満。実施例10 Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−1−（BOC−aeg）アデニンエチルエステルの合成Ｎ'−BOC−アミノエチルグリシンエチルエステル(2g、8.12mmol)、DhbtOH（1. 46g、8.93mmol）およびＮ⁶−ベンジルオキシカルボニル−9−カルボキシメチルアデニン（2.92g、8.93mmol）をDMF（15ml）に溶解した。塩化メチレン（15ml）をその後、添加した。溶液をエタノール／水槽で0℃に冷却した。DCC（2.01g、9 .74mmol）を添加した。2.5時間後、氷槽を除去し、そして攪拌を室温でさらに1.5時間続けた。沈澱したDCUを濾過により除去し、そしてDMF（1 5ml）で１回、そして塩化メチレン（2ｘ15ml）で２回洗浄した。合わせた濾過物に、さらに塩化メチレン（100ml）を添加した。溶液を、希釈炭酸水素ナトリウム（2ｘ100ml）、希釈硫酸水素カリウム（2ｘ100ml）および飽和塩化ナトリウム（1ｘ100ml）で連続的に洗浄した。有機相を真空で蒸発乾固させ、黄色油状物質を3.28g（73％）得た。未精製産物のHPLCにより、主ピークより極性の高いおよび低いもの両方の、いくつかの不純物を含む、わずか66％の純度が示された。該油を無水エタノール（50ml）に溶解し、そして活性炭を添加した。５分攪拌した後、溶液を濾過した。濾過物を水（30ml）と混合し、そして一晩攪拌した。翌日、白色沈澱物を濾過により除去し、水で洗浄し、そして乾燥させ、HPLCによると 98％より高い純度である成分1.16g（26％）を得た。母液に水を添加することにより、さらに純度およそ95％の0.53gの産物が得られた。C₂₆H₃₃N₇O₇・H₂O分析の観察値（計算値）、スペクトルは、エタノールおよびDCUの痕跡を示した。実施例11 Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−1−（BOC−aeg）アデニンの合成Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−1−（BOC−aeg）アデニンエチルエステル（ 1.48g、2.66mmol）をTHF（13ml）に懸濁し、そして混合物を0℃に冷却した。水酸化リチウム（8ml、１Ｎ）を添加した。15分攪拌した後、反応混合物を濾過し、さらに水（25ml）を添加し、そして溶液を塩化メチレン（2ｘ25ml）で洗浄した。１Ｎ HClで水溶液のｐＨを２に調整した。沈殿物を濾過により分離し、水で洗浄し、そして乾燥させ、産物0.82g（58％）を得た。塩化メチレン／石油エーテルから産物をさらに２回沈澱させた。収量（乾燥後）:0.77g（55％）。融点119℃（分解(decomp.)）。C₂₄H₂₉N₇O₇・H₂O分析の観察値（計算値）、実施例12 2−アミノ−6−クロロ−9−カルボキシメチルプリンの合成 DMF（50ml）中の2−アミノ−6−クロロプリン（5.02g、29.6mmol）および炭酸カリウム(12.91g、93.5mmol)の懸濁物に、ブロモ酢酸(4.7g、22.8mmol)を添加した。混合物を窒素下で20時間、激しく攪拌した。水（150ml）を添加し、そして溶液をセライトを通じて濾過し、透明な黄色溶液を得た。該溶液を４Ｎ塩酸でpH ３に酸性化した。沈澱物を濾過し、そしてsicapentで、真空で乾燥させた。収量：3.02g（44.8％）。実施例13 2−アミノ−6−ベンジルオキシ−9−カルボキシメチルプリンの合成ナトリウム（2g、87mmol）をベンジルアルコール（20ml）に溶解し、加熱して 130℃にし２時間置いた。0℃に冷却した後、DMF（85ml）中の2−アミノ−6−クロロ−9−カルボキシメチルプリン（4.05g、18mmol）をゆっくりと添加し、そして生じた懸濁物を20℃で一晩攪拌した。水酸化ナトリウム溶液（１Ｎ、100ml）を添加し、そして透明な溶液を酢酸エチル（3ｘ100ml）で洗浄した。水相をその後、４Ｎ塩酸でpH３に酸性化した。沈澱物を酢酸エチル（200ml）に溶解し、そして水相を酢酸エチル（2ｘ100ml）で抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（2ｘ75ml）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして真空で蒸発乾固させた。残渣をエタノール（300ml）から再結晶させた。sicapentでの真空乾燥後の収量：2.76g（52％）。融点159−65℃。分析（計算値、観察値）、実施例14 Ｎ−（[2−アミノ−6−ベンジルオキシ−プリン−9−イル]−アセチル）−Ｎ− （2−BOC−アミノエチル）グリシン[BOC−Gaeg−ＯＨ単量体]の合成 2−アミノ−6−ベンジルオキシ−9−カルボキシメチル−プリン（0.5g、1.67m mol）、メチル−Ｎ（2−[tert−ブトキシカルボニルアミノ]エチル）グリシネート（0.65g、2.8mmol）、ジィソプロピルエチルアミン（0.54g、4.19mmol）、およびブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム−ヘキサフルオロ−リン酸（Py BroP（登録商標））（0.798g、1.71mmol）をDMF（2ml）中で４時間攪拌した。透明な溶液を炭酸水素ナトリウムの氷冷溶液（１Ｎ、40ml）に注ぎ、そして酢酸エチル（3ｘ40ml）で抽出した。有機層を硫酸水素カリウム溶液（１Ｎ、2ｘ40ml）、炭酸水素ナトリウム（１Ｎ、1ｘ40ml）および飽和塩化ナトリウム溶液（60ml ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、真空で蒸発させ、固体残渣を２：１酢酸エチル／ヘキサン（20ml）から再結晶させ、収率63％のメチルエステルを得た。MS-FAB、514（M+1）。濃水酸化ナトリウム（1ml）を含む1：2エタノール／水（30ml）に該エステルを溶解することにより、加水分解を達成した。２時間攪拌した後、溶液を濾過し、そして４Ｎ塩酸を添加することにより、ｐＨ３に酸性化した。表題化合物を濾過により得た。収量：370mg（加水分解に対し7 2％）。HPLCによる純度は99％以上だった。第二級アミドの周囲で回転が制限されたため、シグナルのいくつかは２：１の比で二重になっていた（大きいものは mj、小さいものはmiとリストに示している。）実施例15 エチル−Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6−ジアミノプリン−9−イル −アセテートの合成乾燥DMF（90ml）中の2,6−ジアミノプリン（3g、19.46mmol）の懸濁物にNaH（油中60％、0.87g、21.75mmol）を添加した。１時間後、ブロモ酢酸エチル（4.23 g、25.34mmol）を添加した。反応混合物は30分後に均質となり、そしてさらに90 分攪拌した。DMFを真空で除去すると、褐色粉末が生じた。該褐色粉末をその後、1,4−ジオキサン（200ml）で10分還流し、そしてセライトを通して濾過した。溶液を濃縮し、薄黄色粉末を得た。1,4−ジオキサン（150ml）中の薄黄色粉末（ 5.52g）に、新たに調製されたＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ'−メチルイミダゾリウムトリフレート（10.7g、29.2mmol）を添加した。反応混合物を室温で1 6時間攪拌し、赤い溶液を生じた。ジオキサンを真空で除去し、そして未精製成分をMeOH：ジエチルエーテルから再結晶させ、クリーム色固体として表題化合物 4.56g（63％）を得た。実施例16 Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6−ジアミノプリン−9−イル−酢酸の合成エチル−Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6−ジアミノプリン−9−イル−アセテート（3g、8.1mmol）をNaOH（2Ｎ、30ml）に溶解した。１時間後、溶液を２Ｍ HClでpH2.5に酸性化した。沈澱を濾過し、水で洗浄し、そして乾燥させ、白色固体としての表題化合物2.82g（98％）を得た。 IR（KBr）：3300、3095、1750、1630、1590、1410。実施例17 BOC−アミノアセトアルデヒドの合成表題化合物は公表された論文の方法にしたがい調製した（Dueholmら，Organic Preparations and Procedures Intl.,1993,25,457）。実施例18 ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）−リジンアリルエステルの合成表題化合物は公表された論文の方法にしたがい調製した（WaldmannおよびHors t,Liebigs Ann.Chem.,1983,1712）。実施例19 Ｎ−（BOC−アミノエチル）−ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）−リジンアリルエステルの合成 ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）−リジンアリルエステル（実施例18由来）をメタノール（50ml）に溶解し、そして0℃に冷却した。生じた溶液にシアノホウ水素化ナトリウム（5.9mmol）、続いて酢酸（0.75ml）を添加した。５分後、BOC−アミノアセトアルデヒド（13.3mmol）を添加し、そして反応混合物をさらに１時間攪拌した。メタノールを真空で除去し、そして該油を酢酸エチル（40ml）に溶解し、飽和水性NaHCO₃、食塩水で洗浄し、Na₂SO₄で乾燥させ、そして濃縮し、無色透明油を得た。この油を乾燥エーテル（80ml）に溶解し、-2 0℃に冷却し、そしてエーテル中の等モルのHClをゆっくり添加した。生じた白色固体を濾過により収集し、そして空気乾燥した。空気乾燥した白色固体の乾燥エーテルからの沈澱により分析上純粋な表題化合物を得た。実施例20 Ｎ−（BOC−アミノエチル）−Ｎ−[Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6− ジアミノプリン−９−イル−アセチル]−ε−(2−クロロベンジルオキシカルボニル)−リジンアリルエステルの合成 DMF(150ml)中のＮ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6−ジアミノプリン− 9−イル−酢酸（3.6g、10.5mmol）にＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（2.75 ml、21mmol）、およびＮ−（BOC−アミノエチル）−ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）−リジンアリルエステル塩酸（7.31g、15.8mmol）を添加した。反応混合物を窒素下で20分攪拌し、そしてブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム−ヘキサフルオロリン酸（PyBrop、5.4g、11.6mmol）を添加した。反応混合物を、窒素ガス中で室温で一晩攪拌した。生じた混合物を濃縮し、そして酢酸エチルに溶解した。該酢酸エチル溶液を水性飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、分離しそして濃縮した。未精製成分を、溶出剤として酢酸エチル：ヘキサン：メタノール（6：3：1、v/v/v）を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。適切な分画の濃縮および乾燥により表題化合物3.1g（ 37％）が得られた。実施例21 Ｎ−（BOC−アミノエチル）−Ｎ−[Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6− ジアミノプリン−9−イル−アセチル]−ε−(2−クロロベンジルオキシカルボニル)−リジンの合成Ｎ−（BOC−アミノエチル）−Ｎ−[Ｎ⁶−（ベンジルオキシカルボニル）−2,6 −ジアミノプリン−9−イル−アセチル]−ε−(2−クロロベンジルオキシカルボニル)−リジンアリルエステル塩酸（3.1g、3.93mmol）にTHF（100ml）、モルホリン（3.5ml。39.3mmol）、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（0）（0.45g、0.393mmol）を添加した。反応混合物を窒素下で室温で2.5時間攪拌した。生じた混合物を濃縮し、そして酢酸エチルに溶解した。酢酸エチル溶液を水性飽和硫酸水素カリウム（水で半分に希釈したもの）で洗浄し、分離し、そして濃縮した。未精製成分を、溶出液としてクロロホルム：メタノール（9：1、v/v)を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。適切な分画の濃縮および乾燥により表題化合物1.25g（42 ％）が得られた。実施例22 グアニン単量体（BOC−Gaek−OH）の調製Ｎ⁶−ベンジル−9−カルボキシメチレン−グアニン（2.63g、8.78mmol）にDIE A（2.6ml、20mmol）、DMF（30ml）、ジクロロメタン（70ml）、およびＮ−（BOC −アミノエチル）−ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）−リジンアリルエステル（3.7g、8.04mmol）を添加した。反応混合物を窒素下で20分攪拌した。PyBrop（４g、8.58mmol）を添加し、そして反応混合物をさらに16時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、そして残渣を、クロロホルム／ヘキサン／メタノール（12：7：1、v/v/v）を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、アリルエステルとしての表題化合物４g（60％）を得た。該アリルエステル（4g、5.37mmol）にTHF（100ml）、テトラキスパラジウム（ 0）（0.18g、0.15mmol）およびモルホリン（6.1ml、70mmol）を添加した。反応混合物を窒素下で2.5時間攪拌し、そして濃縮した。残渣を、クロロホルム／ヘキサン／メタノール（11:8：1、v/v/v）を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物2.67g（60％）を得た。実施例23 アデニン単量体（BOC−Aaek−OH）の調製上述の実施例22のグアニン単量体に用いた方法にしたがい、Ｎ⁶−ベンジル−9 −カルボキシメチレン−アデニンを用い、アデニン単量体の合成を行った。実施例24 シトシン単量体（BOC−Caek−OH）の調製Ｎ−（BOC−アミノエチル）−ε−（2−クロロベンジルオキシカルボニル）− リジンアリルエステル（8.21g、17.7mmol）にトリエチルアミン（10ml、98mmol ）およびジクロロメタン（200ml）を添加した。溶液を窒素下で氷槽中で約0℃に冷却した。冷却した溶液にクロロアセチルクロリド(2.2ml、27.6mmol)を10分にわたり添加し、そして反応混合物を室温で16時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、そして残渣を、酢酸エチル／ヘキサン（1：1、v/v）を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、Ｎ−アセチル化リジン骨格6.54 g（68％）を得た。 0℃でのピリジン中のクロロギ酸ベンジル処理により、シトシンをＮ⁴−位で保護し、Ｎ⁴−ベンジル−シトシンを得た。Ｎ⁴−ベンジル−シトシン（1.31g、5.34mmol）にDMF（200ml）、およびミネラルオイル中の60％NaH（0.22g、5.4mmol）を添加し、そして生じた混合物を窒素下で30分攪拌した。生じた混合物にDMF（25ml）中のＮ−アセチル化リジン骨格（2.9g、5.34mmol）を添加し、そして混合物を16時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、そして残渣をジクロロメタン（250ml）に溶解した。ジクロロメタン相を水（200ml）で洗浄し、そして濃縮した。生じた残渣を、ジクロロメタン：ヘキサン：メタノール（8：2：1）を用いるシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、アリルエステルとしてアミノエチル−リジン骨格に結合するシトシン2.4g（85％）を得た。該アリルエステルを、上述の実施例22に用いられる方法にしたがい、パラジウムを用いて脱保護することにより、活性単量体に変換し、表題化合物1.05ｇ（46 ％）が得られる。実施例25 チミン単量体(BOC−Taek−OH）の調製チミン単量体を、上述の実施例24の方法にしたがい調製した。実施例26 Ｈ−Taeg−Aaeg−[Taeg]₈−Lys−NH₂の固相合成（a） BOC−Taeg−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₈−Lys（CIZ）−MBHA樹脂の段階的構築約0.3ｇの湿BOC−[Taeg]₈−Lys（CIZ）−MBHA樹脂を３ml SPPS反応容器中に置いた。BOC−Taeg−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₈−Lys（CIZ）−MBHA樹脂を、0.19ＭのB OC−Ａ(Z)aeg−OHを50％DMF/CH₂Cl₂ 2.5ml中の0.15Ｍ DCCと共に利用するＡ（Ｚ）aeg残基のin situ DCCカップリング（単一）および純CH₂Cl₂中の0.15Ｍ BOC− Taeg−Opfpの単一カップリングにより構築した(「合成プロトコルＩ」)。合成は定量的ニンヒドリン反応によりモニターし、Ａ（Ｚ）aegの約50％の取り込みおよびTaegの約96％の取り込みが示された。（b）Ｈ−Taeg−Aaeg−[Taeg]₈−Lys−NH₂の切断、精製、および同定保護BOC−Taeg−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₈−Lys（CIZ）−BHA樹脂を塩化メチレン中の50％トリフルオロ酢酸で処理し、HF切断の前に、Ｎ末端BOC基（潜在的に有害なtert−ブチル陽イオンの前駆体）を除去した。中和および洗浄(「合成プロトコルＩ」の段階2−4のものと同様の方法で行われた)、および真空での２時間の乾燥後、生じたＨ−[Taeg]₅−BHA樹脂53.1mgを、0℃で60分攪拌しながら、HF：アニソール（9：1、v/v）５mlで切断した。HFを除去した後、残渣を乾燥ジエチルエーテル（4ｘ15ml、各15分）と共に攪拌し、アニソールを除去し、フリットした（fritted）ガラス漏斗を通して重力下で濾過し、そして乾燥させた。該ＰＮＡをその後、10％酢酸水溶液60ml（4ｘ15ml、攪拌し各15分）で抽出した。本溶液のアリコットを分析用逆相HPLCにより分析し、未精製PNAの純度を確認した。1 3分の主ピークは、総吸光度の約93％と計測された。残った溶液を凍結しそして凍結乾燥させ、未精製成分約15.6mgを得た。14.4分の主ピークは、総吸光度の50 ％未満と計測された。未精製産物の一部0.5mgを精製し、約0.1mgのＨ−Taeg−Aa eg−[Taeg]₈−Lys−NH₂を得た。（MH+）⁺に関し、計算m/z値は2816.16であり、そして測定m/z値は2816.28であった。（c）合成プロトコルＩ（1）TFA/CH₂Cl₂（1：1、v/v）、2.5mlで３ｘ１分および１ｘ30分、BOC脱保護；（2）CH₂Cl₂、2.5mlで6ｘ1分洗浄；（3）DIEA/CH₂Cl₂（1：19、v/v）、2. 5mlで３ｘ２分中和；（4）CH₂Cl₂、2.5mlで６ｘ１分洗浄、および１分乾燥（dra in）；（5）PNA樹脂試料２−５mgを除去し、そして置換を測定する定量的ニンヒドリン分析のため完全に乾燥させた；(6)DMF1.25mlに溶解した0.47mmol(0.25g） BOC−Ａ（Ｚ）aeg−OHの添加に続き、CH₂Cl₂1.25ml中の0.47mmol（0.1g）DCCまたはCH₂Cl₂2.5ml中の0.36mmol（0.2g）BOC−Taeg−Opfpの添加；カップリング反応を、震蕩しながら全部で20−24時間進める；（7）DMF2.5mlで１ｘ２分洗浄；（8）CH₂Cl₂、2.5mlで４ｘ１分洗浄；（9）DIEA/CH₂Cl₂（1：19、v/v）、2.5ml で２ｘ２分中和；（10）CH₂Cl₂、2.5mlで６ｘ１分洗浄；（11）保護PNA樹脂試料２−５mgを除去し、そしてカップリングの度合いを測定する定量的ニンヒドリン分析のため完全に乾燥させた；(12)無水酢酸／ピリジン／CH₂Cl₂（1：1：2、v/v /v）の混合物25mlで２時間アセチル化することによる、未反応アミノ基のブロッキング（最後のサイクルの後は除く）；および（13）CH₂Cl₂、2.5mlで６ｘ１分洗浄；（14）保護PNA樹脂試料２ｘ２−５mgを除去し、DIEA/CH₂Cl₂（1：19、v/v ）で中和し、そしてニンヒドリン分析のためCH₂Cl₂で洗浄する。実施例27 Ｈ−[Taeg]₂−Aaeg−[Taeg]₅−Lys−NH₂の固相合成（a） BOC−[Taeg]₂−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₅−Lys（CIZ）−MBHA樹脂の段階的構築約0.5ｇの湿BOC−[Taeg]₅−Lys（CIZ）−MBHA樹脂を５ml SPPS反応容器中に置いた。BOC−[Taeg]₂−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₅−Lys（CIZ）−MBHA樹脂を、0.15Ｍから0.2Ｍの保護PNA単量体（遊離酸）を純CH₂Cl₂２ml中の等量のDCCと共に利用するＡ（Ｚ）aegおよびTaeg残基両方のin situ DCCカップリングにより構築した（「合成プロトコルII」）。合成は定量的ニンヒドリン反応によりモニターし、３回カップリングした後のＡ（Ｚ）aegの総量約82％の取り込み（第一のカップリングは約50％取り込みを示し;50％DHF/CH₂Cl₂中の第四のHOBt媒介カップリングは総カップリング収量を有意に増加させなかった）およびTaeg残基の量的な取り込み（単一カップリング）を示した。（b）Ｈ−[Taeg]₂−Aaeg−[Taeg]₅−Lys−NH₂の切断、精製、および同定保護BOC−[Taeg]₂−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₅−Lys（CIZ）−BHA樹脂を実施例26 （b）に記載されるように処理し、乾燥Ｈ−[Taeg]₂−Ａ（Ｚ）aeg−[Taeg]₅−Ly s（CIZ）−BHA樹脂102.5mgのHF切断に際し、未精製成分約16.2mgを得た。未精製産物のごく少量の一部を精製した。(ＭＨ+)⁺に関し、計算m/z値は2050.85 であり、そして測定m/z値は2050.90であった。（c）合成プロトコルII （1）TFA/CH₂Cl₂（1：1、v/v）、２mlで３ｘ１分および１ｘ30分、BOC脱保護；（2）CH₂Cl₂、２mlで６ｘ１分洗浄；（3）DIEA/CH₂Cl₂（1：19、v/v）、２ml で３ｘ２分中和；（4）CH₂Cl₂、２mlで６ｘ１分洗浄、および１分乾燥；（5）PN A樹脂試料２−５mgを除去し、そして置換を測定する定量的ニンヒドリン分析のため完全に乾燥させた；（6）CH₂Cl₂1.5mlに溶解した0.44mmol（0.23g）BOC−Ａ（Ｚ）aeg−OHの添加に続き、CH₂Cl₂0.5ml中の0.44mmol（0.09g）DCCまたはCH₂C l₂1.5ml中の0.33mmol（0.13g）BOC−Taeg−OHの添加に続き、CH₂Cl₂0.5ml中の0. 33mmol（0.07g）DCCの添加；カップリング反応を、震蕩しながら全部で20−24時間進める；（7）DMF２mlで１ｘ２分洗浄；（8）CH₂Cl₂、２mlで４ｘ１分洗浄；（9）DIEA/CH₂Cl₂(1：19、v/v)、２mlで２ｘ２分中和；（10）CH₂Cl₂、２mlで６ｘ１分洗浄；（11）保護PNA樹脂試料２−５mgを除去し、そしてカップリングの度合いを測定する定量的ニンヒドリン分析のため完全に乾燥させた；（12）無水酢酸／ピリジン／CH₂Cl₂（1：1：2、v/v/v)の混合物25mlで２時間アセチル化することによる、未反応アミノ基のブロッキング（最後のサイクルの後は除く）； (13)CH₂Cl₂、２mlで６ｘ１分洗浄；および（14）保護PNA樹脂試料２ｘ２−５mg を除去し、DIEA/CH₂Cl₂（1：19、v/v）で中和し、そしてニンヒドリン分析のためCH₂Cl₂で洗浄する。実施例28 PNA合成および性質決定の標準的プロトコル器械：PerSeptive Biosystems 8909 Expedite 合成スケール：2マイクロモル試薬：洗浄液Ａ：NMP中の20％DMSO 洗浄液Ｂ：NMP中の20％DMSO中の２Ｍコリジン脱ブロック剤：5％ｍ−クレゾール、95％TFA 中和剤：NMP中の20％DMSO中の１Ｍ DIEA キャップ：0.5Ｍ無水酢酸、NMP中の20％DMSO中の1.5Ｍコリジン活性化剤：DMF中の0.2Ｍ HATU 単量体：２Ｍコリジン中0.22Ｍ（DMF中50％ピリジン）合成：固体支持体（BOC−BHA−PEG−樹脂）を708μｌの洗浄液Ａで洗浄する。脱ブロック剤（177μl）を6.3分にわたり３回カラムを通過させる。樹脂をその後1416μｌの洗浄液Ａで洗浄する。遊離アミンを中和剤1063μｌで中和する。樹脂を1062μｌの洗浄液Ｂで洗浄する。単量体および活性化剤（各141μｌ）を14 分にわたりゆっくりとカラムに添加する。樹脂を708μｌの洗浄液Ｂおよび708μ ｌの洗浄液Ａで洗浄する。未反応アミンを、５分にわたりキャップ溶液708μｌをゆっくり添加することによりキャップする。樹脂をその後2124μｌの洗浄液Ａで洗浄する。望ましいPNA配列の合成が完了するまでサイクルを繰り返す。切断：PNA樹脂を５mlのMeOHで洗浄し、そして真空下で乾燥させる。乾燥樹脂を1 .5ml Durapore限外濾過装置に空ける。チオアニソール（25μｌ）、25μｌのｍ −クレゾール、100μｌのTFAおよび100μｌのTFMSAを樹脂に添加し、約30秒ボルテックスし、そして２時間置く。反応混合物をその後、10Ｋで５分遠心分離し、そして樹脂を含む内部試験管を除去する。エーテルおよそ1.5mlをTFA溶液に添加し、産物を沈澱させる。TFA溶液をボルテックスした後、10Ｋで２分遠心分離する。エーテルを真空で除去する。エーテル沈澱および遠心分離をさらに２回繰り返す。乾燥沈澱物を熱ブロック（55℃）で15から30分加熱し、過剰なエーテルを除き、そして200μlのH₂Oに再溶解する。1.5ml Durapore限外濾過装置中のDowex アセテート樹脂100mgに溶媒を添加し、ボルテックスし、30分置き、そして10Ｋで２分遠心分離する。性質決定:１mlのH₂O中の試料１μｌの吸光度を260nmで測定する。1％酢酸を含むH₂O中のィソプロパノール（50％）(100μｌ）を試料4μｌに添加する。本試料をエレクトロスプレー質量分析により性質決定する。共通の略語 NMP：Ｎ−メチルピロリジノン TFA：トリフルオロ酢酸 DIEA：Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン HATU：Ｏ−（7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−1,1,3,3−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロリン酸 TFMSA：トリフルオロメタンスルホン酸実施例２９結合PNAオリゴマーの合成および細胞取り込み実施例28の方法、実施例５から14までのアミノエチルグリシンPNA単量体、および実施例15から21までの単量体を用い、以下のPNA単量体を合成した。［（+）＝PNA凝集；＝細胞取り込み見られず；+＝細胞取り込みが見られる；o＝リポソームあり；x＝リポソームなし；Tkはアミノエチルリジン骨格に結合するチミンであり；LysはＤ−リジンであり；Adaはアダマンチルであり；そしてFlはフルオレセイニルリジンである。］実施例30 リノレニル−TAG−CAG−AGG−AGC−TC（配列番号１）の合成リノレン酸(40マイクロモル)をカップリング溶媒(100μｌ)(20％DMSO/NMP中の 0.5Ｍ DIEA)に溶解し、これにHATU（0.4Ｍを90μｌ）を添加し、そして溶液を混合した。2分の活性化時間の後、溶液を保護PNA樹脂（15.4mg、2マイクロモル）と混合した。1時間後、樹脂を20％DMSO/NMP、CH₂Cl₂およびMeOH（各約３ml）で洗浄した。生じたリノレニル結合PNAを固体支持体から切断し、そして実施例28 に記載される方法にしたがい、性質決定した。実施例31 オレイル−TAG−CAG−AGG−AGC−TC（配列番号１）の合成オレイン酸(40マイクロモル)をカップリング溶媒(100μｌ)(20％DMSO/NMP中の 0.5Ｍ DIEA)に溶解し、これにHATU（0.4Ｍを90μｌ）を添加し、そして溶液を混合した。２分の活性化時間の後、溶液を保護PNA樹脂（5.4mg、2マイクロモル）と混合した。1時間後、樹脂を20％DMSO/NMP、CH₂Cl₂およびMeOH（各約３ml）で洗浄した。生じたオレイル結合PNAを固体支持体から切断し、そして実施例28に記載される方法にしたがい、性質決定した。実施例32 カプロイル−Gly−TAG−CAG−AGG−AGC−TC（配列番号１）の合成カプロイル−Gly(40マイクロモル）をカップリング溶媒(100!tl) (20％DMSO/ NMP中の0.5Ｍ DIEA）に溶解し、これにHATU（0.4Ｍを90μｌ）を添加し、そして溶液を混合した。2分の活性化の後、溶液を保護PNA樹脂（15.4mg、2マイクロモル）と混合した。1時間後、樹脂を20％DMSO/NMP、CH₂Cl₂およびMeOH（各約３ml ）で洗浄した。生じたPNAを固体支持体から切断し、そして実施例28に記載される方法にしたがい、性質決定した。実施例33 Ｎ−BOC−ε−（フルオレセイニルカルボニル）−Ｄ−リジンおよびそのエチルエステルの合成 α−BOC保護リジンエチルエステルをTHFおよびDMFの混合物中で過剰のフルオレセインイソシアネートで、室温で数時間処理した。出発アミノ酸の消滅に関し、反応をtlcによりモニターした。反応をその後、等量の水およびクロロホルムで処理し、そして相分離した。水相をさらにクロロホルムで抽出し、そしてこうして得られた合わせた有機溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させた。本溶液を真空で濃縮し、そして得られた未精製産物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、Ｎ−BOC−ε−（フルオレセイニルカルボニル）−Ｄ−リジンエチルエステルを得た。該エチルエステルを、１Ｍ水性水酸化リチウムおよび溶媒としてテトラヒドロフランを用い、加水分解した。反応の進行をtlcにより追い、そして完了に際し、反応混合物を水で処理し、そしてその後ジクロロメタンで２回洗浄した。該塩基性溶液をその後、10℃未満に冷却し、１Ｎ HClで４以下のpHに中和し、そして酢酸エチルを用い産物を抽出した。硫酸マグネシウムを用い有機抽出物を乾燥させ、そして真空で濃縮し、そしてＮ−BOC−ε−（フルオレセイニルカルボニル）−Ｄ−リジンを得た。実施例34 Ｎ−BOC−ε−（フルオレセイニルカルボニル）−Ｄ−リジンの、配列GGT−GCT −CAC−TGC−GGC−Lys−NH₂（配列番号2）のPNAへのカップリング配列GGT−GCT −CAC−TGC−GGC−Lys−NH₂のPNAは、（実施例27および28におけるような）標準的PNA合成プロトコルにしたがい合成し、そしてリジン誘導体化合成樹脂で開始した。樹脂に結合したPNAのＮ末端BOC基は:1．３mlの1：1v/vTFA／ＤＣＭ、1ｘ2 分およびその後1ｘ0.5時間 2．３ml DCMで、4ｘ20秒洗浄３ml DMFで、2ｘ20秒洗浄３ml DCMで、2ｘ20秒洗浄 30秒乾燥 3．３ml DIEA/DCM１：19v/vで、2ｘ3分洗浄を用い、脱保護した。フルオレセイニルリジンのカップリングをその後、以下の段階にしたがい行った： 1．３ml DCMで、4ｘ20秒洗浄１分乾燥 2．４等量のDIC、および４等量の1：1v/v DCM/DMFに溶解したＮ−BOC−ε−（フルオレセイニルカルボニル）−Ｄ−リジンの添加（該アミノ酸の最終濃度は 0.1Ｍ） 3．室温で震蕩しながら0.5時間カップリングを進める 4．20秒乾燥３ml DMFで、2ｘ20秒および1ｘ2分洗浄３ｍｌＤＣＭで、4ｘ20秒洗浄 5．３ml DIEA/DCM１：19v/vで、2ｘ3分洗浄３ml DCMで、4ｘ20秒洗浄；１分乾燥 6．定性Kaiser試験を行う。陰性結果は100％近いカップリングを示す。 BOC基を切断し、そしてその後該PNA(Fl−GGT−GCT−CAC−TGC−GGC−Lys−NH₂ )を切断し、そして実施例27および28のように精製した。また別に、該PNAを樹脂に結合したまま残し、そして実施例35のように親脂質基での誘導体化に用いた。実施例35 Ada−Fl−GGT−GCT−CAC−TGC−GGC−Lys−NH₂（配列番号2）の合成樹脂に結合したFl−GGT−GCT−CAC−TGC−GGC−Lys−NH₂PNAのＮ末端BOC基を（実施例34におけるように）まず切断し、そして遊離のアミノ末端をその後以下のように誘導体化した：アダマントイルクロリド100マイクロモルを1：5v/v DIEA/DMFに溶解し、樹脂結合PNA（BOC基が切断されているＮ末端以外は完全に保護されている）２マイクロモルに添加した。反応１時間後、樹脂を20％NMP/DMSO、DCMおよびメタノール各３mlで洗浄した。PNAを樹脂から切断し、そして実施例27および28のような標準的プロトコルにしたがい精製した。実施例36 アダマンチル−Ahx−TAG−CAG−AGG−AGC−TC（配列番号1）の合成アダマンチルカルボニルクロリド（100マイクロモル）をDMF（1.0ml）およびD IEA（200マイクロモル）に溶解した。本溶液を、アミノヘキサン酸基連結基が結合した保護PNA樹脂（15.4mg、２マイクロモル）と混合した。１時間後、樹脂を2 0％DMSO/NMP、CH₂Cl₂およびメタノール（各約３ml）で洗浄した。生じたPNAを、既知の方法および技術にしたがい、固体支持体から切断した。実施例37 PNA／リポソームの調製 PNAアダマンチル−（Fl^*）−TTT AGC TTC AGC−LysNH₂（配列番号3）、ここで Fl^*はフルオレセイン化PNA単量体である、を含むリポソームを、Campbell.Biote chniques,1995,18,1027により記載されるエタノール注入法の修飾法により調製した。DOPE（ジオレイル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン）（13.4mm ol）およびDDAB（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）（6.6mmol）を96％エタノール１mlに溶解した。DMSO中のPNA溶液（10ml、2.5mM）を該脂質混合物（40ml）と混合した。生じた成分50mlをその後、ボルテックスしながら無菌蒸留H₂O（１ml）に迅速に添加した。生じたPNAのリポソーム混合物中の濃度は25 mMであった。細胞取り込み実験には、該PNA−リポソーム混合物（40ml）をOptiM EM^TM（1ml）に添加し、そして細胞に与えた。PNAの最終濃度は１mMであった。リポソームトランスフェクション試薬：商業的に入手可能なトランスフェクションリポソーム試薬４つを使用した：Lipofectin^TM（Gibco BRL）、Lipofectamin^T ^M （Gibco BRL）、Tfx-50（Promega）およびDOTAP^TM（Boehringer Mannheim）。各リポソーム試薬を結合PNA1118と混合し、培地（1ml）中の最終PNA濃度を1mMにした。PNA細胞取り込みに関する各リポソーム試薬の最適濃度を決定した。以下の表はOptiMEM 1ml当たりに用いられる試薬の量を示す。 Lipofectin^TM Lipofectamin^TM Tfx-50^TM DOTAP^TM ２ml ４ml 10ml 10ml 細胞：ヒト癌細胞株HeLaを、Glutamax^TM、ペニシリン、ストレプトマイシンおよびウシ胎児血清を含むRPMI 1640培地で増殖させた。実験前日、カバーガラスを含む35mmプレート中に2ｘ10⁵細胞の密度で、細胞を蒔いた。翌日、細胞をOptiME Mで一度洗浄し、その後１μＭ PNAまたはPS-ODN、どちらかを単独で含むOptiMEM １mlを、上述のように、４つのリポソーム試薬の１つと混合するか、またはDOPE /DDABリポソームに取り込んだ。一晩インキュベーションした後、PNA処理細胞を、氷上で3％ホルムアルデヒド／0.2％グルタルアルデヒド中で固定した。その後、カバーガラスを対物ガラス上に乗せ、そしてLeits Diaplan顕微鏡上で蛍光顕微鏡検査により細胞を観察した。Kodak Ektacrome 1600ASAフィルムにより顕微鏡写真を撮影した。実施例38 結合PNAの細胞取り込み表題の式を有する４つの結合PNA（実施例30−32および36）を、実施例28に例示される標準的方法にしたがい調製した。リジン残基を、Boc−Lys−ClCbz（ClC bz＝2−クロロベンジルオキシカルボニル）を用い、修飾MBHA樹脂を用いることによりPNAに取り込んだ（Dueholm,J.Org.Chem.,1994,59,5767）。PNAオリゴマーをその後、ε−アミノ基であらかじめフルオレセイン化された保護Lys基を用い、伸長した。アミノ基の脱保護の後、親脂質基を結合することにより、支持体に結合した結合PNAが得られた。固体支持体から切断することにより、蛍光標識を有する遊離PNA結合体が得られた。調べた親脂質基（R）には、（図１に示されるように）アダマントイル、デカノイル、ヘプチル−スクシニルおよびパルミチル −スクシニル基が含まれる。４つの結合PNAのストック溶液は該PNAをDMSOに溶解することにより、調製した。これらのストック溶液の希釈は、水またはOptiMEM（Gibco BRL）のいずれかで行った。ヒト癌細胞株HeLaを、Glutamax^TM、ペニシリン、ストレプトマイシンおよびウシ胎児血清（10％v/v）を含むRPMI 1640培地で増殖させた。実験前日、カバーガラスを含む35mmプレート中に2ｘ10⁵細胞の密度で、細胞を蒔いた。翌日、細胞をOptiMEMで一度リンスし、その後OptiMEM１ml中の3μＭPNAを添加し、そしてさらにインキュベーションした。PNA取り込みを視覚化するため、カバーガラスをPBSで２回洗浄し、そして細胞を、氷上で3％ホルムアルデヒド／0.2％グルタルアルデヒド中で15分固定した。PBSで２回洗浄した後、PBS中の90％グリセロールを用い、カバーガラスを対物ガラス上に乗せ、そしてLeits Diaplan顕微鏡上で蛍光顕微鏡検査により細胞を観察した。Kodak Ektacrome 1600 ASAフィルムにより顕微鏡写真を撮影した。培養中のヒト細胞への取り込みに関し、４つの結合PNAを試験した。PNAは細胞培地に直接添加した。カバーガラス上で増殖させたHeLa細胞を、無血清培地中で PNA（3μＭ）と一晩インキュベーションし、その後固定し、そして蛍光顕微鏡検査により調べた。パルミチル−スクシニルおよびヘプチル−スクシニル結合PNA は共に、すべての細胞において点状および斑点状の蛍光を示した。一般的に斑点は細胞上に均等に分布しており、細胞の縁、おそらく細胞膜で亢進した染色を持つ傾向があった。アダマントイルおよびデカノイル結合PNAは、より少ない細胞結合蛍光を示し、細胞外に大きな蛍光凝集物が見られた。パルミチル−スクシニルPNA結合体をさらに共焦点顕微鏡検査により研究し、細胞内部のPNA結合体の正確な局在および分布を決定した。細胞を上記の研究から選択し、そしてさらに12切片を通してスキャンした。映像により、PNA結合体が実際に細胞に取り込まれており、そして細胞質全体に斑点として分布していることが確認された。外見上、核には蛍光はなかった。このパターンは取り込みのエンドサイトーシス経路を示し、PNA結合体がエンドソームに落ち着くことを暗示する。パルミチル−スクシニルPNA結合体をまた、時間経過実験においても観察した。細胞を3μＭのPNAの存在下で異なる時間インキュベーションした。PNA 結合体の細胞による取り込みはインキュベーションの24時間まで時間と共に増加し、その時点でPNA含有培地を新鮮な血清含有培地と置き換えた。48時間後、細胞内PNAは、細胞の区画、おそらく二次リソソーム中に濃縮された。72時間後、細胞内に残るPNAは実質的になかった。実施例39 結合PNAを用いたin vitro翻訳検定配列Ｒ−Lys(フルオレセイン)−TTT−AGC−TTC−CTT−AGC−Lys−NH₂（配列番号3）を有するPNAは、CAT mRNAのAUG開始コドンのすぐ5'側の15ヌクレオチドに相補的であり、そして対応する非結合PNAは以前、in vitroでCATの翻訳を阻害することが可能であることが示されている。実施例38の４つの結合PNA（配列番号2 ）を本検定で試験した。４つの結合PNAはすべて、非結合PNAと同様の濃度でCAT 翻訳を特異的に阻害した。実施例40 PNA結合体（配列番号2）を用いたリポソーム構築物の調製配列番号２を有する２つの結合PNAを用い、リポソーム構築物を調製した。Cam pbellによりBiotechniques,1995,18,1027に記載されるエタノール注入法の修飾法により、アダマントイルおよびデカノイル結合PNAをリポソームと結合させた。本方法に続き、DOPE（ジオレイル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン）13.4マイクロモルおよびDDAB（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）6.6マイクロモルを無水エタノール１mlに溶解した。PNA溶液（10μｌ、３mM P NA/DMSO）を該脂質混合物40μｌと混合した。生じた反応混合物50μｌをその後、ボルテックス混合しながら無菌蒸留H₂O１mlに迅速に添加した。リポソーム混合物中のPNA濃度はしたがって、30μＭであった。細胞取り込み実験には、PNA− リポソーム混合物60μｌをOptiMEM１mlに添加し、そして細胞に与えた。結合PNAのリポソーム構築物への取り込みを、蛍光顕微鏡検査により確認した。蛍光顕微鏡写真により、PNA結合体で見られたように、細胞に結合した蛍光の斑点が示された。さらに、より拡散した蛍光が細胞の全体に観察され、いくつかの細胞では核に蛍光が観察された。他の細胞を用いた場合（COS-7、ミドリザル腎臓由来細胞；およびNIH 3T3、マウス繊維芽細胞）、同一の取り込みパターンが観察された。実施例41 アダマンチル結合PNAの細胞取り込みアダマンチル−PNA（実施例35または36にしたがい調製されたもの）の細胞取り込みを測定し、そしてまた、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの取り込みとも比較した。アダマンチル結合PNAおよびオリゴヌクレオチドを１μＭ濃度で、集密に達していない（subconfluent）HeLa細胞に直接添加し、そして一晩置いた。細胞を次に固定し、そして取り込みを蛍光顕微鏡検査により視覚化した。オリゴヌクレオチドは、主として細胞質でのみ密集し、そして核には欠ける細かい点状蛍光を示した。PNAでは点状蛍光が同様に観察された。しかし、斑点は幾分大きく、そして細胞質および細胞膜上の両方に存在した。アダマンチル−PNAの取り込みを改善する試みの中で、通常DNAのトランスフェクションに用いられる多様な商業的に入手可能な陽イオンリポソームと、PNAを組み合わせた。さらに、脂質DOPEおよびDDABから構成されるPNA含有リポソームもまた調製した。理論上、PNAの疎水性アダマンチル基は、リポソームの脂質層に挿入されており、そしてしたがってPNAを捕獲（entrap）しているはずである。リポソームは、プラスミドDNAを細胞に輸送するのに有効であると報告された単純エタノール注入法により調製された。異なるPNA−リポソーム混合物を、最終PNA濃度1μＭで細胞に与え、そして一晩インキュベーションした。リポソーム試薬またはDOPE/DDABリポソームのいずれかが存在することにより、PNAが単独で添加された場合と比較して、細胞内によりはるかに拡散した蛍光が生じた。しかし、蛍光はそれでも細胞質に限定され、核取り込みの徴候はなかった。対照的に、オリゴヌクレオチドをLipofectamine^TMと混合し、そして最終濃度1μＭで細胞に与えると、細胞の大部分は蛍光染色された核を有した。結論として、アダマンチル結合PNAを細胞に添加すると、PNAが細胞のエンドソームまたはリソソーム区画に落ち着く、エンドサイトーシス経路を連想させる取り込みパターンを生じる。PNAをリポソームトランスフェクション試薬とあらかじめ混合するか、またはDOPE/DDABリポソームに取り込むと、よりはるかに拡散した様式で細胞質中に分布する。当業者は、本発明の好ましい態様に多くの改変および修飾を施してもよく、そしてこうした改変および修飾は本発明の精神から逸脱することなくなされることが可能であることを認識するであろう。したがって、添付の請求項は、本発明の真の精神および範囲内にある、こうしたすべての同等の変動を覆うことが意図される。

【手続補正書】【提出日】平成１２年１月２０日（２０００．１．２０）【補正内容】請求の範囲１．式：を有するペプチド核酸であって：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記ペプチド核酸。２．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項１のペプチド核酸。３．Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である、請求項２のペプチド核酸。４．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項１のペプチド核酸。５．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項４のペプチド核酸。６．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項１のペプチド核酸。７．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項１のペプチド核酸。８．リポソームに取り込まれたペプチド核酸を含む組成物であって、前記ペプチド核酸が、式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記組成物。９．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項８の組成物。１０．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項９の組成物。１１．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項８の組成物。１２．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項１１の組成物。１３．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項８の組成物。１４．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項８の組成物。１５．ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって：前記ペプチド核酸の骨格位を誘導体化し；そして段階（ａ）の誘導体化ペプチド核酸を親脂質基と結合する段階を含む、前記方法。１６．前記の誘導体化が、少なくとも１つの天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖を前記ペプチド核酸の骨格に結合させることを含む、請求項１５の方法。１７．前記の誘導体化が、天然発生アミノ酸の側鎖を前記ペプチド核酸の骨格に結合させることを含む、請求項１６の方法。１８．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項１７の方法。１９．前記親脂質基がアダマンチル基である、請求項１５の方法。２０．さらに、段階（ｂ）のペプチド核酸をリポソームに導入することを含む、請求項１５の方法。２１．ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって：前記ペプチド核酸を親脂質基と結合し；そして段階（ａ）の結合ペプチド核酸をリポソームに導入する段階を含む、前記方法。２２．前記親脂質基がアダマンチル基である、請求項２１の方法。２３．請求項１のペプチド核酸および少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアー、結合剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤または界面活性剤を含む、薬剤組成物。２４.請求項８の組成物および少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアー、結合剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤または界面活性剤を含む、薬剤組成物。２５．インビトロまたはヒトを除く動物において、細胞または組織におけるペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって、該細胞または組織にペプチド核酸を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記方法。２６．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項２５の方法。２７．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項２６の方法。２８．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項２５の方法。２９．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項２８の方法。３０．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項２５の方法。３１．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項２５の方法。３２．インビトロまたはヒトを除く動物において、細胞または組織におけるペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって、該細胞または組織にリポソームに取り込まれているペプチド核酸を含む組成物を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記方法。３３．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項３２の方法。３４．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項３３の方法。３５．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項３２の方法。３６．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項３５の方法。３７．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項３２の方法。３８．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項３２の方法。３９．ヒトを除く動物を治療する方法であって、該動物にペプチド核酸の治療的に有効な量を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記方法。４０．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項３９の方法。４１．Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である、請求項４０の方法。４２．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項３９の方法。４３．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項４２の方法。４４．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項３９の方法。４５．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項３９の方法。４６．ヒトを除く動物を治療する方法であって、リポソームに取り込まれているペプチド核酸を含む組成物の治療的に有効な量を該動物に投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはＯＨ、ＮＨ₂、またはＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から３０までの整数である前記方法。４７．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項４６の方法。４８．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項４７の方法。４９．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項４６の方法。５０．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項４６の方法。５１．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項４６の方法。５２．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項４６の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 31/18 Ａ６１Ｐ 35/00 35/00 Ｃ０７Ｋ 1/00 Ｃ０７Ｋ 1/00 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＺＮＡＡＣ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＡＣ１２Ｑ 1/68 ＺＮＡＡ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．式：を有するペプチド核酸であって：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH、NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記ペプチド核酸。２．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項１のペプチド核酸。３．Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である、請求項２のペプチド核酸。４．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項１のペプチド核酸。５．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項４のペプチド核酸。６．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項１のペプチド核酸。７．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項１のペプチド核酸。８．リポソームに取り込まれたペプチド核酸を含む組成物であって、前記ペプチド核酸が、式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH、NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記組成物。９．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項８の組成物。 10．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項９の組成物。 11．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項８の組成物。 12．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項11の組成物。 13．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項８の組成物。 14．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項８の組成物。 15．ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって：（a）前記ペプチド核酸の骨格位を誘導体化し；そして（b）段階（a）の誘導体化ペプチド核酸を親脂質基と結合する段階を含む、前記方法。 16．前記の誘導体化が、少なくとも１つの天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖を前記ペプチド核酸の骨格に結合させることを含む、請求項15の方法。 17．前記の誘導体化が、天然発生アミノ酸の側鎖を前記ペプチド核酸の骨格に結合させることを含む、請求項16の方法。 18．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項17の方法。 19．前記親脂質基がアダマンチル基である、請求項15の方法。 20．さらに、段階（b）のペプチド核酸をリポソームに導入することを含む、請求項15の方法。 21．ペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって：（a）前記ペプチド核酸を親脂質基と結合し；そして（b）段階（a）の結合ペプチド核酸をリポソームに導入する段階を含む、前記方法。 22．前記親脂質基がアダマンチル基である、請求項21の方法。 23．請求項１のペプチド核酸および少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアー、結合剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤または界面活性剤を含む、薬剤組成物。 24．請求項８の組成物および少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアー、結合剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤または界面活性剤を含む、薬剤組成物。 25．細胞または組織におけるペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって、該細胞または組織にペプチド核酸を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH，NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記方法。 26．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項25の方法。 27．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項26の方法。 28．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項25の方法。 29．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項28の方法。 30．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項25の方法。 31．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項25の方法。 32．細胞または組織におけるペプチド核酸の細胞取り込みおよび分布を調節する方法であって、該細胞または組織にリポソームに取り込まれているペプチド核酸を含む組成物を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH，NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記方法。 33．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項32の方法。 34．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項33の方法。 35．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項32の方法。 36．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項35の方法。 37．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項32の方法。 38．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項32の方法。 39．動物を治療する方法であって、該動物にペプチド核酸の治療的に有効な量を投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり、少なくとも１つのＲ^7'は天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOH、NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記方法。 40．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項39の方法。 41．Ｒ^7'の少なくとも１つがＤ−リジンの側鎖である、請求項40の方法。 42．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項39の方法。 43．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項42の方法。 44．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項39の方法。 45．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項39の方法。 46．動物を治療する方法であって、リポソームに取り込まれているペプチド核酸を含む組成物の治療的に有効な量を該動物に投与することを含み、前記ペプチド核酸が式：を有し、ここで：各Ｌは、独立して、天然発生核酸塩基または非天然発生核酸塩基であり；各Ｒ^7'は水素または天然発生または非天然発生アミノ酸の側鎖であり；Ｒ^hはOＨ、NH₂、またはNHLysNH₂であり；ＲⁱおよびＲ^jの各々は、独立して、親脂質基または蛍光基で標識されたアミノ酸であり；またはＲⁱおよびＲ^jは共に親脂質基であり；そしてｎは１から30までの整数である前記方法。 47．前記Ｒ^7'の少なくとも１つが天然発生アミノ酸の側鎖である、請求項46の方法。 48．前記アミノ酸がＤ−リジンである、請求項47の方法。 49．Ｒⁱが蛍光基で標識されたＤ−リジンであり、そしてＲ^jがアダマントイル基である、請求項46の方法。 50．前記蛍光基がフルオレセインである、請求項46の方法。 51．ＲⁱおよびＲ^jが共にアダマントイル基である、請求項46の方法。 52．Ｒ^7'がアミノ酸の側鎖であり、そして該側鎖が結合する炭素原子が立体化学的に濃縮されている、請求項46の方法。