HU226935B1

HU226935B1 - Analogs of parathyroid hormone

Info

Publication number: HU226935B1
Application number: HU9901718A
Authority: HU
Inventors: Zheng Xin Dong
Original assignee: Ipsen Pharma Sas
Priority date: 1995-07-13
Filing date: 1996-07-03
Publication date: 2010-03-29
Also published as: KR100563602B1; DK0847278T3; KR100563112B1; AU6483496A; IL122837A0; HUP9901718A2; EP0847278A1; AU707094B2; IL122837A; DK1405861T3; SK3198A3; KR100500853B1; KR20040041709A; WO1997002834A1; KR20040053215A; TW482766B; EP1405861B1; ATE442159T1; HK1096976A1; KR20040042907A

Description

A parathyroid hormon („PTH”) egy polipeptid, melyet a mellékpajzsmirigy termel. A hormon érett, véráramban keringő formája 84 aminosavmaradékot tartalmaz. A PTH biológiai hatása reprodukálható az N-terminális peptid fragmenssel (1-34 aminosavmaradék). A parathyroid hormonnal rokon fehérje („PTHrP) 139-173 aminosavat tartalmaz, melynek N-terminálisa homológ a PTH-nal. A PTHrP sok biológiai hatása azonos a PTH hatásával, ilyen kötődése a közös PTH/PTHrP receptorhoz is (Tregear és munkatársai: Endocrinol., 93, 1349, 1983). Számos, különböző eredetű PTH peptidet jellemeztek már, ilyenek a humán, marha, patkány és csirke eredetűek (Nissenson és munkatársai: Receptor 3, 193, 1993).

A PTH növeli a csont tömegét és egyúttal javítja minőségét is (Dempster és munkatársai: Endocrine Rév., 14, 690, 1993 és Riggs: Amer. J. Med., 91, Suppl. 5B, 37S, 1991). Az időszakosan adagolt PTH anabolikus hatását megfigyelték mind egyidejű antireszorptív terápiában részesülő, mind abban nem részesülő oszteoporotikus nőkön és férfiakon (Slovik és munkatársai: J. Boné Miner. Rés., 1, 377, 1986; Reeve és munkatársai: Br. Med. J., 301, 314, 1990 és

Hesch R-D., és munkatársai: Calcif. Tissue Inti., 44, 176, 1989).

Az EP-A-293158 számú szabadalmi iratban olyan peptidhormon-analógokat mutatnak be, amelyek a parathyroid hormon olyan változatai, ahol Gly¹² a követ10 kező csoportból választott aminosawal szubsztituált L-Pro, D-Pro, L-ala, D-ala, Aib és NMeGly.

Chorev és társai (Biochemistry 1990, 29. kötet, 6. szám, 1580-1586. oldalak) a parathyroid hormon 12-es pozíciójában változatait és a megfelelő parathy15 roid hormon fehérjéket ismertetik.

A találmány összefoglalása

A találmány tárgyát képezik egyrészt a PTH(1 —34) peptidanalógok, melyek általános képlete ^A₁-Val-A₃-Glu-A₅-Gln-A₇-A₈-His-Asn-A₁₁- A₁₂-Lys-His-A₁₅· >

-A^-Ai 7'Ái 8“Ai9-Arg-A₂₁-Glu-A₂₃-A₂₄-Arg-Lys-A₂y-A₂₈-GI n -A₃₀-A₃ -| -A₃₂-A₃₃-A₃₄- R₃, ahol

A! jelentése Ser, Alá vagy Dap,

A₃ jelentése Ser, Thr vagy Aib,

A₅ jelentése Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pál, Phe 30 vagy p-X-Phe, ahol X jelentése hidroxilcsoport, halogénatom vagy metilcsoport,

A₇ jelentése Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pál, Phe vagy p-X-Phe, ahol X jelentése hidroxilcsoport, halogénatom vagy metilcsoport, 35

A₈ jelentése Met, Nva, Leu, Val, Ile, Cha vagy Nle,

Αμ jelentése Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pál,

Phe vagy p-X-Phe, ahol X jelentése hidroxilcsoport, halogénatom vagy metilcsoport,

Árjelentése Gly, 40

A₁₅ jelentése Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pál,

A₁₆ jelentése Ser, Asn, Alá vagy Aib,

A₁₇ jelentése Ser, Thr vagy Aib, 45

Árjelentése Met, Nva, Leu, Val, Ile, Nle, Cha vagy Aib,

A₁₉ jelentése Glu vagy Aib,

A₂₁ jelentése Val, Cha vagy Met,

A₂₃ jelentése Trp vagy Cha, 50

A₂₄ jelentése Leu vagy Cha,

A₂₇ jelentése Lys, Aib, Leu, hArg, Gin vagy Cha,

A₂₈ jelentése Leu vagy Cha,

A₃₀ jelentése Asp vagy Lys,

A₃₁ jelentése Val, Nle, Cha vagy törölve, 55

A₃₂ jelentése His vagy törölve,

A₃₃ jelentése Asn vagy törölve,

A₃₄ jelentése Phe, Tyr, Amp, Aib vagy törölve,

R·! és R₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-12 szénatomos alkilcsoport, 2-12 szénatomos 60 alkenilcsoport, 7-20 szénatomos fenil-alkil-csoport, 11-20 szénatomos naftil-alkil-csoport, 1-12 szénatomos hidroxi-alkil-csoport, 2-12 szénatomos hidroxi-alkenil-csoport, 7-20 szénatomos hidroxi-fenil-alkilcsoport vagy 11-20 szénatomos hidroxi-naftil-alkilcsoport;

vagy az R₁ és R₂ csoport közül kizárólag az egyik csoport jelentése COE^ ahol E₁ jelentése 1-12 szénatomos alkilcsoport, 2-12 szénatomos alkenilcsoport, 7-20 szénatomos fenil-alkil-csoport, 11-20 szénatomos naftil-alkil-csoport, 1-12 szénatomos hidroxi-alkilcsoport, 2-12 szénatomos hidroxi-alkenil-csoport, 7-20 szénatomos hidroxi-fenil-alkil-csoport vagy 11-20 szénatomos hidroxi-naftil-alkil-csoport, és

R₃ jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport,

1-12 szénatomos alkoxicsoport vagy NH-Y-CH₂-Z, ahol Y jelentése 1-12 szénatomos szénhidrogénrész és Z jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport, CO₂H vagy CONH₂ csoport;

feltéve, hogy A₃, A₁₆, A₁₇, A₁₈, A₁₉ és A₃₄ közül legalább egy jelentése Aib;

vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.

A fenti általános képletnek megfelelő vegyületek alcsoportját képezik azok, melyekben A₃ jelentése Ser, A₅ jelentése Ile, A₇ jelentése Leu vagy Cha, A₈ jelentése Met, Nva, Leu, Val, Ile vagy Nle, Αμ jelentése Leu vagy Cha, A₁₂ jelentése Gly, A₁₅ jelentése Leu vagy Cha, Árjelentése Asn vagy Aib, A₁₇ jelentése Ser, A₁₈jelentése Met vagy Nle, A₂₁ jelentése Val, A₂₇ jelentése Lys, hArg vagy Cha, A₃₁ jelentése Val, Nle vagy Cha, A₃₂ jelentése His, A₃₃ jelentése Asn, A₃₄ jelentése Phe, Tyr, Amp vagy Aib, R₁ jelentése hidrogénatom, R₂ jelentése hidrogénatom és R₃ jelentése NH₂, feltéve, hogy A₇, A^, A^₈, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ és A₃-| közül

HU 226 935 Β1 legalább egy jelentése Cha. Kívánt esetben A₇ és A-) -] közül legalább egy jelentése lehet Cha, vagy Αή₅, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ és A₃₁ közül legalább egy jelentése Cha.

Egy még további alcsoportban A₃ jelentése Ser vagy Aib, A₅ jelentése Ile, A₇ jelentése Leu vagy Cha, A₈ jelentése Met, Nva, Leu, Val, Ile vagy Nle, A-)-) jelentése Leu vagy Cha, A₁₅ jelentése Leu vagy Cha, A₁₆ jelentése Asn vagy Aib, A₁₈ jelentése Met, Aib vagy Nle, A₂i jelentése Val, A₂₇ jelentése Lys, Aib, Leu, hArg vagy Cha, A₃₁ jelentése Val, Nle vagy Cha, A₃₂ jelentése His, A₃₃ jelentése Asn, A₃₄ jelentése Phe, Tyr, Amp vagy Aib, Rí jelentése hidrogénatom, R₂ jelentése hidrogénatom és R₃ jelentése NH₂. Kívánt esetben A₇ és A^ közül legalább egy jelentése lehet Cha, és A₁₆, A_igés A₃₄ közül legalább egy jelentése Aib; vagy A₂₄, A₂₈és A₃i közül legalább egy jelentése lehet Cha és Α·|₆ és A₁₇ közül legalább egy jelentése Aib.

Egy még további alcsoportban legalább egy A·, jelentése Dap, A₇ jelentése β-Nal, Trp, Pál, Phe vagy p-X-Phe és A₁₃ jelentése β-Nal, Trp, Pál, Phe vagy p-X-Phe. Például amelyekben A! jelentése Ser, Gly vagy Dap, A₃ jelentése Ser vagy Aib, A₈ jelentése Met, Nva, Leu, Val, Ile vagy Nle, Α·|₆ jelentése Asn vagy Aib, A₁₈ jelentése Met, Aib vagy Nle, A₂₁ jelentése Val, A₂₇jelentése Lys, Aib, Leu, hArg, vagy Cha, A₃₁ jelentése

Val, Nle vagy Cha, A₃₂ jelentése His, A₃₃ jelentése Asn, A₃₄ jelentése Phe, Tyr, Amp vagy Aib, Rí jelentése hidrogénatom, R₂ jelentése hidrogénatom és R₃ jelentése NH₂.

A találmány szerinti, fenti általános képletnek megfelelő peptidek például a következők:

[Aib¹⁶]hPTH(1-34)NH2; (Aib¹⁹)hPTH(1-34)NH2; [Aib³⁴]hPTH(1 —34)NH2; [Aib¹⁶-¹⁹]hPTH(1-34)NH2; [Aib¹⁶’¹⁹’³⁴]bPTH(1-34)NH2; [Aib¹⁶’³⁴]hPTH(1-34)NH2; (Aib¹⁹’³⁴]hPTH(1-34)NH2; [Cha⁷¹¹, Nle⁸·¹⁸, Aib¹⁶·¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(1-34)NH2; [Cha⁷¹¹, Nle⁸·¹⁸·³¹, Aib¹⁶·¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(1-34)NH2; [Cha⁷, Aib¹⁶]hPTH(1-34)NH2; [Cha¹¹, Aib¹⁶]hPTH(1-34)NH₂; [Cha⁷,

Aib³⁴]hPTH(1-34)NH2; [Cha¹¹, Aib³⁴]hPTH(1-34)NH2; [Cha²⁷, Aib¹⁶] hPTH (1-34) NH2; [Cha²⁷, Aib³⁴]hPTH(1-34)NH2; [Cha²⁸, Aib¹⁶]hPTH(1-34)NH2; [Cha²⁸, Aib³⁴]hPTH(1-34)NH2; [Cha⁷·¹¹, Aib¹⁹, Lys³⁰]hPTH(1-34)NH₂; [Cha⁷·¹¹, Nle⁸·¹⁸,

Aib³⁴]hPTH(1—34)NH2; [Aib³]hPTH(1-34)NH2; [Cha^{7 11}, Aib¹⁹]hPTH(1-34)NH2; [Cha⁷¹¹, Aib¹⁶]hPTH(1-34)NH2; [Aib¹⁷]hPTH(1 —34)NH2; [Cha⁷·¹¹, Nle⁸·¹⁸, Aib¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(1-34)NH2; [Cha⁷¹¹, Nle⁸·¹⁸, Aib¹⁹, Lys³⁰, Tyr^hPTHÍ 1 -34)NH2; [Aib¹⁷]h PTH( 1 -34)NH2.

A találmány tárgyát képezik másrészt peptidek, melyek általános képlete

A-] -Val-A₃-Glu-A₅-Gln-A₇-A₈-His-A₁ q-A-] -]-A-]₂-Lys-A-] ₄-A-]₃R/ ^A16^A17^A18^A1₉-Arg-Arg-A₂₂-A₂₃-A₂₄-A₂₅-A₂₆-A₂₇-A₂₈-A29-A30-A31 -A₃₂-A₃₃-A₃₄-R₃,

A₁ jelentése Alá, Ser vagy Dap,

A₃ jelentése Ser vagy Aib,

A₅ jelentése His, Ile vagy Cha,

A₇ jelentése Leu, Cha, Nle, β-Nal, Trp, Pál, Phe vagy p-X-Phe, ahol X jelentése hidroxilcsoport, halogénatom vagy metilcsoport,

A₈ jelentése Leu, Met vagy Cha,

A₁₀ jelentése Asp vagy Asn,

A·,·, jelentése Lys, Leu, Cha, Phe vagy β-Nal, Árjelentése Gly,

Árjelentése Ser vagy His,

A₁₅ jelentése Ile vagy Cha,

A₁₆ jelentése Gin vagy Aib,

A-|₇ jelentése Asp vagy Aib,

A₁₈ jelentése Leu, Aib vagy Cha,

A_ig jelentése Arg vagy Aib,

A₂₂ jelentése Glu, Aib vagy Cha,

A₂₃ jelentése Leu, Lys vagy Cha,

A₂₄ jelentése Leu, Lys vagy Cha,

A₂₅ jelentése Aib vagy Glu,

A₂₆ jelentése Aib vagy Lys,

A₂₇ jelentése Leu, Lys vagy Cha,

A₂₈ jelentése Leu, Lys vagy Cha,

A₂₉ jelentése Glu vagy Aib,

A₃₀ jelentése Cha, Aib vagy Lys,

A₃₁ jelentése Leu, Cha vagy Lys,

A₃₂ jelentése His,

A₃₃ jelentése Thr,

A₃₄ jelentése Alá,

R-ι és R₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-12 szénatomos alkilcsoport, 7-20 szénatomos fenil-alkil-csoport, 11-20 szénatomos naftil-alkilcsoport, 1-12 szénatomos hidroxi-alkil-csoport,

2-12 szénatomos hidroxi-alkenil-csoport, 7-20 szénatomos hidroxi-fenil-alkil-csoport vagy 11-20 szénatomos hidroxi-naftil-alkil-csoport; vagy az R₁ és R₂ csoport közül kizárólag az egyik csoport jelentése COE-|, ahol E1 jelentése 1-12 szénatomos alkilcsoport, 2-12 szénatomos alkenilcsoport, 7-20 szénatomos fenil-alkil-csoport, 11-20 szénatomos naftil-alkilcsoport, 1-12 szénatomos hidroxi-alkil-csoport, 2-12 szénatomos hidroxi-alkenil-csoport, 7-20 szénatomos hidroxi-fenil-alkil-csoport vagy 11-20 szénatomos hidroxi-naftil-alkil-csoport, és

R₃ jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, 1-12 szénatomos alkoxicsoport vagy NH-Y-CH₂-Z, ahol Y jelentése 1-12 szénatomos szénhidrogénrész és Z jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport, CO₂H vagy CONH₂ csoport;

feltéve, hogy (i) A₁₆ és A₁₉ közül legalább egy jelentése Aib; és (ii) A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ vagy A₃₁ közül legalább egy jelentése Lys; vagy gyógyászati célra alkalmazható sóik.

A most idézett képletnek megfelelő peptidekre specifikus példák - nem korlátozó jelleggel - a következők:

HU 226 935 Β1 [Aib¹⁶, Ty^lhPTHrPÍI^JN^;

[Aib¹⁹]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Aib¹⁶’¹⁹]hPTHrP(1 —34)NH₂;

[Cha⁷’¹¹][Aib¹⁶]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Cha⁷’¹¹][Aib¹⁹]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Glu²²²⁵, Leu²³·²⁸’³¹, Aib²⁹,

Lys²⁶’³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Glu²²·²⁵’²⁹, Leu²³·²⁸’³¹, Lys²⁶,

Aib³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Cha²², Leu²³·²⁸’³¹, Glu²⁵, Lys²⁶·³⁰,

Aib²⁹]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Cha²², Leu²³·²⁸’³¹, Glu²⁵·²⁹, Lys²⁶,

Aib³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Glu²²·²⁵, Leu²³·²⁸·³¹, Lys²⁶·²⁷·³⁰,

Aib²⁹]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Glu²²·²⁵, Lys²³·²⁶·³⁰, Leu²⁸·³¹,

Aib²⁹]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Glu²²’²⁵, Leu²³’³¹, |_γ526,28,30₍

Aib²⁹]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Cha⁷’¹¹, Glu²²·²⁵, Leu²³·²⁸’³¹, Aib²⁹, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP-(1-34)NH₂;

[Cha⁷·¹¹, Glu²²·²⁵’²⁹, Leu²³·²⁸’³¹, Lys²⁶,

Aib³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Cha¹⁵, Glu²²·²⁵, Leu²³·²⁸·³¹, Aib²⁹, Lys²⁶· ³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Cha¹⁵, Glu²²·²⁵’²⁹, Leu²³·²⁸’³¹, Lys²⁶,

Aib³⁰]hPTHrP-(1-34)NH₂;

[Cha⁷·⁸, Glu²²·²⁵, Leu²³·²⁸’³¹, Aib²⁹,

Lys²⁶’³⁰]hPTHrP-(1-34)NH₂;

[Cha⁷’⁸ Glu²²’²⁵’²⁹, Leu²³’²⁸’³¹, Lys²⁶,

Aib³⁰]hPTHrP-(1-34)NH₂;

[Ser¹, Ile⁵, Cha⁷· ¹¹, Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Glu²²· ²⁵, Leu²³’²⁸’³¹, Aib²⁹, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Ser¹, Ile⁵, Cha⁷·¹¹, Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Glu²²·²⁵·²⁹, Leu²³·²⁸’³¹, Lys²⁶, Aib³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Ser¹, Ile⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu¹¹, His¹⁴, Aib¹⁶]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Aib²², Leu²³·²⁸’³¹, Glu²⁵·²⁹,

Lys²⁶’³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Glu²²’²⁹, Leu²³’²⁸’³¹, Aib²⁵,

Lys²⁶’³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Glu²²·²⁵’²⁹, Leu²³·²⁸’³¹, Aib²⁶,

Lys³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

[Ser¹, Ile⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu¹¹’²³’²⁸’³¹, His¹⁴, Glu²²·²⁵, Aib²⁹, Lys²⁶’³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂;

vagy [Ser¹, Ile⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu¹¹’²³’²⁸’³¹, His¹⁴, Glu²²·²⁵’²⁹, Lys²⁶, Aib³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂.

A dokumentumban az N-terminális aminosav kivételével az összes aminosavrövidítés (például Ala vagy A-|) -NH-CH(R)-CO- szerkezetet jelent, ahol R az aminosav oldalláncát jelenti (például Ala esetében CH₃-csoportot). Az N-terminális aminosav esetében a rövidítés =N-CH(R)-CO- szerkezetet jelent, ahol R az aminosav oldalláncát jelenti. β-Nal, Nle, Dap, Cha, Nva, Amp, Pál és Aib a következő a-aminosavak rövidítését jelenti: p-(2-naftil)-alanin, norleucin, α,βdiamino-propionsav, ciklohexil-alanin, norvalin, 4-amino-fenil-alanin, 3-piridinil-alanin, illetve a-amino-izovajsav.

A fenti képletben a hidroxi-alkil-, (hidroxi-fenil)-alkilés (hidroxi-naftil)-alkil-csoportok 1-4 hidroxilszubsztituest tartalmazhatnak. Ezenkívül COE₁ jelentése -C=O.E₁,.A-C=O.E₁ csoport lehet - nem korlátozó jelleggel - acetil- és fenil-propionil-csoport.

A találmány szerinti peptidet a leírásban másik formában is jelöltük, például [Cha⁷· ¹¹]hPTH(1-34)NH2 formában, ahol a természetes szekvenciában végzett aminosavszubsztitúciót írtuk a második zárójelpár közé (például Cha⁷ áll Leu⁷ helyett és Cha¹¹ áll Leu¹¹ helyett a hPTH-ban). A rövidítések közül hPTH jelenti a humán PTH-t, hPTHrP a humán PTHrP-t, rPTH a patkány PTH-t és bPTH a marha PTH-t. A zárójelben levő számok a peptidben jelen levő aminosavak pozícióját jelölik, például hPTH(1—34) a humán PTH 1-től 34-ig terjedő aminosavszekvenciáját jelenti a peptidben. A hPTH(1-34), hPTHrP(1-34), bPTH(1-34) és rPTH(1-34) szekvenciák listája Nissenson és munkatársai közleményében található (Receptor 3, 193, 1993). A PTH(1-34)NH2 képletben „NH₂” azt jelenti, hogy a peptid C-terminálisa amidált, PTH(1—34) ugyanakkor a C-terminálison szabad savval rendelkezik.

Mindegyik találmány szerinti peptid stimulálni tudja a csont növekedését például emlősökben, így emberben is. Tehát jól alkalmazható oszteoporózis vagy csonttörés kezelésében, akár egyedül, akár antireszorptív terápiával [bisz(foszfonátok), kalcitonin] kombinálva.

A találmány szerinti peptideket előállíthatjuk gyógyászati célra alkalmas sóik formájában. Ilyen sók lehetnek - nem korlátozó jelleggel - a szerves savakkal (például ecetsav, tejsav, almasav, citromsav, aszkorbinsav, borostyánkősav, benzoesav, metánszulfonsav, toluolszulfonsav vagy pamoasav), szervetlen savakkal (például sósav, kénsav vagy foszforsav) és polimer savakkal (csersav, karboxi-metil-cellulózsav, poli(tejsav), poli(glikolsav) vagy poli(tejsav-glikolsav-kopolimerek) képezett sók.

A találmány szerinti peptidek gyógyászatilag hatásos mennyiségéből és gyógyászati célra alkalmas hordozóból (például magnézium-karbonát, laktóz vagy egy foszfolipid, mellyel a hatóanyag micellát képez) együtt terápiás készítményt képezünk (például pirula, tabletta, kapszula vagy folyadék), mely alkalmas arra, hogy beadjuk a betegnek (orálisan, intravénásán, transzdermálisan, pulmonálisan, vaginálisan, szubkután, nazálisán, iontoforetikusan vagy intratracheálisan). Az orálisan adagolható pirulát, tablettát vagy kapszulát bevonhatjuk valamely anyaggal, mely megvédi az aktív készítményt a gyomorban levő sav és bélenzimek hatásával szemben, annyi ideig, mely elegendő ahhoz, hogy emésztetlenül haladhasson tovább a vékonybélbe. A terápiás készítményt biológiailag lebomló és biológiailag nem lebomló, nyújtott hatású formában is előállíthatjuk szubkután és intramuszkuláris adagolás céljára (3 773 919 és 4 767 628 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások és a WO 94/15587 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentés). Folyamatos adagolás is biztosítható implantált vagy külső szivattyú (INFUSAID™ szivattyú) segítségével.

HU 226 935 Β1

Az adagolást végezhetjük időszakosan, például napi egy injekció formájában vagy folyamatosan, kis adagokban, például valamely nyújtott hatású formuláció segítségével.

A fenti megbetegedések és rendellenességek kezelésére alkalmas találmány szerinti peptidek dózisa függ az adagolás módjától, a kezelendő egyén korától, testtömegétől és állapotától, de az adagolás végül a kezelőorvos vagy állatorvos döntésére van bízva.

A találmány oltalmi körébe tartozik a fenti általános képletű peptid alkalmazása olyan megbetegedések vagy rendellenességek kezelésére, melyek kapcsolatba hozhatók a csontnövekedéssel vagy hasonló problémákkal, ilyen például az oszteoporózis vagy a csonttörés.

A találmány további szempontjait és előnyeit a részletes leírásban és az igénypontokban ismertetjük.

A találmány részletes ismertetése

A leírás alapján a találmány teljes egészében megvalósítható. A következő példák - nem korlátozó jelleggel - a leírás bemutatására szolgálnak. Az itt közölt idézeteket referenciaként soroljuk fel.

Szerkezet

A közlemények értelmében a PTH(1-34) molekulában két amfofil α-hélix terület található (Barden és munkatársai: Biochem., 32, 7126, 1992). Az első a-hélixet a 4-13 aminosavmaradékok képezik, míg a második α-hélixet a 21-29 aminosavmaradékok. A találmány szerinti peptidek közül egyesek a PTH(1-34) ezen két területén belül vagy közelében Cha szubsztitúciót tartalmaznak, így Cha⁷-et és Cha¹¹-et az első α-hélixen belül vagy Cha²⁷-et és Cha²⁸-at a második α-hélixen belül.

A találmány tárgyát képezik még a PTH(1—34) olyan változatai is, melyekben az α-hélixek szomszédos aminosav maradéka Aib, például Aib¹⁶, Aib¹⁹ és Aib³⁴; hArg²⁷ és Nle³¹, vagy pedig az N-terminális szubsztitúciója Dpa-val.

Szintézis

A találmány szerinti peptideket szabványos szilárd fázisú szintézissel állítottuk elő (Stewart J. M. és munkatársai: Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Co., 2. kiadás, 1984). A következőkben [Aib³⁴]hPTH(1-34)NH₂szintézisét ismertetjük. A találmány szerinti többi peptidet analóg módon készítheti el bármely szakember.

A peptidet egy Applied Biosystems (Foster City, CA) peptid szintetizátoron szintetizáltuk (model 430A), melyet úgy módosítottunk, hogy gyorsított Boc-kémiás szilárd fázisú peptidszintézisre legyen alkalmas (Schnoize és munkatársai: Int. J. Peptide Protein Rés., 90, 180, 1992). 4-Metil-benzhidril-amin (MBHA) gyantát (Peninsula, Belmont, CA) alkalmaztunk, melyben a szubsztitúció foka 0,93 mmol/g volt. A Boc-aminosavakat (Bachem, CA, Torrance, CA, Nova Biochem., La Jolla, CA) a következő oldallánc-védőcsoportokkal használtuk: BocArg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHx|)-OH, Boc-Asn(Xan)-OH, Boc-Glu(OcHx|)-OH, Boc-His(DNP)-OH, Boc-Asn-GH, Boc-Val-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Ser-OH, Boc-Gly-OH,

Boc-Met-OH, Boc-GIn-OH, Boc-lle-OH, Boc-Lys(2CIZ), Boc-Ser(Bzl)-OH és Boc-Trp(Fm)-OH. A szintézist 0,14 mmol méretben kiviteleztük. A Boc csoportokat 2x1 percig tartó 100%-os TFA-as kezeléssel távolítottuk el. A Boc-aminosavakat (2,5 mmol) 4 ml DMF-ban előaktiváltuk 2,0 mmol HBTU-val és 1,0 mmol DlEA-val, majd kapcsoltuk anélkül, hogy előzőleg semlegesítettük volna a peptid-gyanta-TFA sót. A kapcsolási idő 5 percet tett ki, kivéve a Boc-Aib-OH-t és a következő maradékot Boc-Asn(Xan)-OH -, ahol a kapcsolási idő 20 perc volt.

A peptidlánc felépítése után a gyantát a His oldalláncon levő DNP-csoport eltávolítása céljából 2x30 percig kezeltük 20% merkapto-etanol/10% DIEA DMF-os oldatával. Az N-terminális Boc-csoport eltávolítására 2x2 percig 100%-os TFA-as kezelést alkalmaztunk. A peptidgyanta 1x1 percig tartó semlegesítése (10% DIEA DMF-ban) után 2x30 perces kezelést végeztünk 15% etanol-amin/15% víz/70% DMF oldattal a Trp oldalláncán levő formilcsoport eltávolítására. A peptidgyantát, melyről részlegesen eltávolítottuk a védőcsoportokat, DMF-al és DCM-el mostuk, majd csökkentett nyomáson szárítottuk. A végső lehasításnál a peptidgyantát 10 ml 1 ml anizolt tartalmazó HF-dal kevertettük 75 percig 0 °C-on, majd nitrogénáramban eltávolítottuk a HF-ot. A maradékot éterrel mostuk (6x10 ml) és 4 mol/l ecetsavval (6x10 ml) extraháltuk.

A vizes extraktumban levő peptidkeveréket preparatív, fordított fázisú, nagynyomású folyadékkromatográfiával (HPLC) tisztítottuk fordított fázisú Vydac™ C₁₈ oszlop (Nest Group, Southborough, MA) felhasználásával. Az oszlopot lineáris gradienssel eluáltuk (130 perc alatt 10%—45% B oldat), 10 ml/perces áramlási sebesség mellett (A oldat=0,1 % vizes TFA; B oldat=0,1% TFA-t tartalmazó acetonitril). Frakciókat gyűjtöttünk, melyeket analitikai HPLC-n vizsgáltunk. Egyesítettük a tiszta terméket tartalmazó frakciókat és szárazra liofilizáltuk. Hozam: 62,3 mg fehér, szilárd anyag, melynek tisztasága az analitikai HPLC szerint 99% fölött volt. Az electrospray tömegspektrométeres analízis szerint molekulatömege 4054,7 (ami jó egyezést mutat a számított molekulatömeggel: 4054,7).

Az [Cha⁷’¹¹]hPTH(1-34)NH2 szintézisét és tisztítását ugyanolyan módon végeztük, mint az [Aib³⁴]hPTH(1—34)NH2 fenti szintézisét. A védett aminosavat - Boc-Cha-OH-t - Bachem, CA-tól szereztük be. A végtermék tisztasága 98% fölött volt és az electronspray tömegspektrométeren mért molekulatömeg 4197,0 volt (számított molekulatömeg: 4196,9).

A fenti rövidítések jelentése a következő: Boc=terc-butil-oxi-karbonil, HF=hidrogén-fluorid, Fm=formil, Xan=xantil, Bzl=benzil, Tos=tozil,

DNP=2,4-dinitro-fenil, DMF=dimetil-formamid, DCM=diklór-metán, HBTU=2-(1 H-benzotriazol-1-il)1,1,3,3-tetrametil-urónium-(hexafluor-foszfát), DIEA=diizopropil-etil-amin, HOAc=ecetsav, TFA=trifluor-ecetsav, 2CIZ=(2-klór-benzil)-oxi-karbonil és OcHxl=O-ciklohexil.

A fenti általános képletben az R.| és R₂ szubsztituenseket a szakmában ismert standard eljárással kap5

HU 226 935 Β1 csolhatjuk az N-terminális aminosav szabad aminocsoportjához, például az alkilcsoportokat - az 1-12 szénatomos alkilcsoportot - reduktív alkilezéssel. A hidroxialkil-csoportokat, például az 1-12 szénatomos hidroxialkil-csoportokat, szintén reduktív alkilezéssel kapcsol- 5 hatjuk a molekulához, miközben a szabad hidroxilcsoportot terc-butil-észter-csoporttal védjük. Az acilcsoportokat, például COE_ret a szabad sav kapcsolásával építhetjük be, így EiCOOH-t az N-terminális aminosav szabad aminocsoportjához úgy, hogy metilén-kloridos 10 oldatban egy óra hosszat kevertetjük a kész gyantát

3-3 ekvivalens szabad savval és diizopropil-karbodiimiddel, majd a kapott gyantát végigfuttatjuk a fenti mosóeljárások (a)-(f) lépésén. Ha a szabad sav szabad hidroxilcsoportot tartalmaz, amilyen például a hidroxi- 15 fenil-propionsav, akkor a kapcsolást további 3 moláris ekvivalens HOBT-vel kell végezni.

A találmány szerinti további peptideket analóg módon állíthatja elő bármely szakmában járatos egyén.

Funkcionális analízisek

A) Kötődés a PTH-receptorhoz

Mértük a találmány szerinti peptidek kötődését az SaOS-2-η (humán oszteoszarkómasejtek) levő PTHreceptorhoz. Az SaOS-2 sejteket (American Type Cul- 25 tűre Collection, Rockville, MD; ATCC#HTB 85) 10% totális marhaszérummal (FBS) és 2 mM glutaminnal kiegészített RPMI 1640 táptalajon (Sigma, St. Louis,

MO), 37 °C-on, nedvesített, 5% CO₂-t tartalmazó levegőatmoszférában tartottuk fenn. A táptalajt 3 vagy 30 4 naponta cseréltük és a sejtekből hetente tripszinezéssel második tenyészetet készítettünk.

Az SaOS-2 sejteket 4 napig tartottuk fenn, míg össze nem folytak. A táptalajt kicseréltük 5% FBS-t tartalmazó RPMI 1640 táptalajra és 2 óra hosszat inku- 35 báltuk szobahőfokon 10><10⁴ cpm mono-¹²⁵l-[Nle⁸’¹⁸, Tyr³⁴ (3-¹²⁵l)j- bPTH(1-34)NH₂-vel a találmány szerinti kompetitív peptidek jelenlétében, különböző,

10^-11 M-10^-4 M koncentrációban. A sejteket négyszer mostuk jéghideg PBS-sel és lízisnek vetettük alá 0,1 M 40 NaOH-val, majd szcintillációs műszerrel mértük a sejtekhez társuló radioaktivitást. A mono-¹²⁵l-[Nle⁸’¹⁸, Tyr³⁴(3-¹²⁵l)]-bPTH(1 —34)NH₂ szintézisét Goldman M.

E. és munkatársai szerint végeztük (Endocrinol., 123, 1468, 1988).

Megmértük a különböző találmány szerinti peptidek kötődését és mindegyik pepiidnek kiszámítottuk az IC₅₀-értékét (mono-¹²⁵l-[Nle⁸’¹⁸, Tyr³⁴(3-¹²⁵l )]bPTH(1-34)NH₂ kötődés teljes gátlásához szükséges mennyiség fele).

Az 1. táblázatból látható, hogy az összes vizsgált peptidnek nagy kötődési affinitása volt az SaOS-2 sejt PTH-receptorához.

B) Az adenilát-cikláz-aktivitás stimulálása

Mértük a találmány szerinti peptidek azon képességét, hogy mennyire tudnak biológiai választ indukálni az SaOS-2 sejtekben. Specifikusabban, meghatároztuk az adenilát-ciklázon észlelt bármely stimulálást oly módon, hogy Rodan és munkatársai (J. Clin. Invest, 72, 1511, 1983) és Goldman és munkatársai (Endocrinol., 123, 1468, 1988) szerint mértük a cAMP (adenozin-3’,5’-monofoszfát) szintézis szintjét. 24 lyukú lemezeken levő összefolyó SaOS-2 sejteket 37 °C-on 2 óra hosszat inkubáltunk friss táptalajban 0,5 pCi [³H]adeninnel (26,9 Ci/mmol, New England Nuclear, Boston, Ma), majd kétszer mostuk Hank-féle egyensúlyban levő sóoldattal (Gibco, Gaithersburg, MD). A sejteket 15 percig friss táptalajban kezeltük 1 mM IBMX-szel (izobutil-metil-xantin, Sigma, St. Louis, Mo), majd hozzáadtuk a táptalajhoz a találmány szerinti peptideket és 5 percig inkubáltunk. A reakciót 1,2 M triklór-ecetsav (TCA) (Sigma, St. Louis, MO) hozzáadásával állítottuk le, ezt követte a minta semlegesítése 4 mol/l KOH-dal. A cAMP-t kétoszlopos kromatográfiás módszerrel (Salmon és munkatársai: Anal. Biochem. 58, 541, 1974) izoláltuk. A radioaktivitást szcintillátorban határoztuk meg (Liquid ScintiHátion Counter 2200CA, PACKAARD, Downers Grove, IL).

Kiszámítottuk a vizsgált peptidek IC₅₀-értékét (adenilát-cikláz maximális stimulálásához szükséges mennyiség fele) és felsoroltuk az 1. táblázatban. Az összes vizsgált peptid erőteljesen stimulálta az adenilát-cikláz-aktivitást, ez egy biokémiai út, mely indikátora az oszteoblasztszaporodásnak (például csontnövekedésnek).

1. táblázat

Peptid	Kd (\|ÍM)	EC₅₀ (nM)
[Aib¹⁶]hPTH(1—34)NH₂	0,004	0,7
[Aib¹⁹]hPTH(1—34)NH₂	0,005	0,6
[Aib³⁴]hPTH(1-34)NH₂	0,007	3
[Cha⁷.11, Nle⁸¹⁸, Aib¹⁶¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(1-34)NH₂	0,005	1,5
[Cha⁷.11, Nle⁸¹⁸³¹, Aib¹⁶¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(1 -34)NH₂	0,04	4
[Cha⁷.n, Nle⁸.¹⁸, Aib³⁴]hPTR(1 -34)NH₂	0,03	1,5
[Cha⁷.11, Aib¹⁹]PTH(1-34)NH₂	0,007	0,5
[Cha⁷.11, Aib¹⁶]hPTH(1 -34)N H₂	0,004	1,1
[Aib¹⁶¹⁹]hPTH(1-34)NH₂	0,004	0,6
[Aib³]hPTH(1—34)NH₂	0,004	1,1

HU 226 935 Β1

1. táblázat (folytatás)

Peptid	Kd (\|iM)	EC₅₀ (nM)
[Cha⁷.¹¹, Aib¹⁹, Lys³⁰]hPTH(1-34)NH₂	0,004	2
[Aib¹⁷]hPTH(1—34)	0,05	3

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Peptid, melynek általános képlete:

^A₁-Val-A3-Glu-A₅-Gln-A₇-A₈-His-Asn-A₁₁-A₁₂-Lys-His-A₁₅)

-Α·|₆-Αι ₇-A\ ₈-A₁₉-Arg-A₂₁-Glu-A₂₃-A₂₄-Arg-Lys-A₂₇-A₂₈-GI η-Α₃₀-Α₃₁ -A₃₂-A33-A₃4- R₃, ahol

A₁ jelentése Ser, Alá vagy Dap, 20

A₃ jelentése Ser, Thr vagy Aib,

A₅ jelentése Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pál, Phe vagy p-X-Phe, ahol X jelentése hidroxilcsoport, halogénatom vagy metilcsoport,

A₇ jelentése Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pál, Phe 25 vagy p-X-Phe, ahol X jelentése hidroxilcsoport, halogénatom vagy metilcsoport,

A₈ jelentése Met, Nva, Leu, Val, Ile, Cha vagy Nle,

A-i-i jelentése Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pál,

Phe vagy p-X-Phe, ahol X jelentése hidroxilcsoport, ha- 30 logénatom vagy metilcsoport,

A₁₂ jelentése Gly,

Α-is jelentése Leu, Nle, Ile, Cha, β-Nal, Trp, Pál,

Phe vagy p-X-Phe, ahol X jelentése hidroxilcsoport, halogénatom vagy metilcsoport, 35

A₁₆ jelentése Ser, Asn, Alá vagy Aib,

A₁₇ jelentése Ser, Thr vagy Aib,

Árjelentése Met, Nva, Leu, Val, Ile, Nle, Cha vagy Aib,

A-ig jelentése Glu vagy Aib, 40

A₂₁ jelentése Val, Cha vagy Met,

A₂₃ jelentése Trp vagy Cha,

A₂₄ jelentése Leu vagy Cha,

A₂₇ jelentése Lys, Aib, Leu, hArg, Gin vagy Cha,

A₂₈ jelentése Leu vagy Cha, 45

A₃₀ jelentése Asp vagy Lys,

A₃i jelentése Val, Nle, Cha vagy törölve,

A₃₂ jelentése His vagy törölve,

A33 jelentése Asn vagy törölve,

A₃₄ jelentése Phe, Tyr, Amp, Aib vagy törölve, 50

R₁ és R₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-12 szénatomos alkilcsoport, 2-12 szénatomos alkenilcsoport, 7-20 szénatomos fenil-alkil-csoport, 11-20 szénatomos naftil-alkil-csoport, 1-12 szénatomos hidroxi-alkil-csoport, 2-12 szénatomos hidroxi-al- 55 kenil-csoport, 7-20 szénatomos hidroxi-fenil-alkilcsoport vagy 11-20 szénatomos hidroxi-naftil-alkilcsoport;

vagy az R.| és R₂ csoport közül kizárólag az egyik csoport jelentése COE^ ahol E-| jelentése 1-12 szén- 60 atomos alkilcsoport, 2-12 szénatomos alkenilcsoport, 7-20 szénatomos fenil-alkil-csoport, 11-20 szénatomos naftil-alkil-csoport, 1-12 szénatomos hidroxi-alkilcsoport, 2-12 szénatomos hidroxi-alkenil-csoport, 7-20 szénatomos hidroxi-fenil-alkil-csoport vagy 11-20 szénatomos hidroxi-naftil-alkil-csoport, és

R₃ jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, 1-12 szénatomos alkoxicsoport vagy NH-Y-CH₂-Z, ahol Y jelentése 1-12 szénatomos szénhidrogénrész és Z jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport, CO₂H vagy CONH₂ csoport;

feltéve, hogy A₃, A₁₆, A₁₇, A₁₈, A₁₉ és A₃₄ közül legalább egy jelentése Aib;

vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
2. Az 1. igénypont szerinti peptid, amelyben A₇, A-] 1, A₁₅, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ és A₃₁ közül legalább egy jelentése Cha; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
3. A 2. igénypont szerinti peptid, ahol

A₃ jelentése Ser,

A₅ jelentése Ile,

A₇ jelentése Leu vagy Cha,

A₈ jelentése Met, Nva, Leu, Val, Ile vagy Nle,

Α_ή jelentése Leu vagy Cha,

A₁₂ jelentése Gly,

A₁₅ jelentése Leu vagy Cha,

A₁₆ jelentése Asn vagy Aib,

A₁₇ jelentése Ser,

Árjelentése Met vagy Nle,

A₂₁ jelentése Val,

A₂₇ jelentése Lys, hArg vagy Cha,

A₃₁ jelentése Val, Nle vagy Cha,

A₃₂ jelentése His,

A₃₃ jelentése Asn,

A₃₄ jelentése Phe, Tyr, Amp vagy Aib,

Rí jelentése hidrogénatom,

R₂ jelentése hidrogénatom és

R₃ jelentése NH₂;

vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
4. A 3. igénypont szerinti peptid, melyben A₇ és A^ közül legalább egy jelentése Cha; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.

HU 226 935 Β1
5. A 3. igénypont szerinti peptid, melyben A₁₅, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ és A₃i közül legalább egy jelentése Cha; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
6. Az 1. igénypont szerinti peptid, ahol

A₃ jelentése Ser vagy Aib

A₅ jelentése Ile,

A₇ jelentése Leu vagy Cha,

A₈ jelentése Met, Nva, Leu, Val, Ile vagy Nle,

A11 jelentése Leu vagy Cha,

A₁₅ jelentése Leu vagy Cha,

A₁₆ jelentése Asn vagy Aib,

A_q8 jelentése Met, Aib vagy Nle,

A₂₁ jelentése Val,

A₂₇ jelentése Lys, Aib, Leu, hArg vagy Cha,

A₃₁ jelentése Val, Nle vagy Cha,

A₃₂ jelentése His,

A₃₃ jelentése Asn,

A₃₄ jelentése Phe, Tyr, Amp vagy Aib,

Rí jelentése hidrogénatom,

R₂ jelentése hidrogénatom és

R₃ jelentése NH₂;

vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
7. A 6. igénypont szerinti peptid melyben A₃, Ai@, A₁₇, A₁₉ és A₃₄ közül legalább egy jelentése Aib; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
8. A 7. igénypont szerinti peptid, ahol a peptid [Aib¹⁶]hPTH(1-34)NH2; [Ai b¹⁹]h PTH( 1 -34) N H2; [Aib³⁴]hPTH(1—34)NH2; [Aib¹⁶·¹⁹]hPTH( 1 -34)NH2; [Aib³]hPTH(1-34)NH2; [Aib¹⁷]hPTH(1 -34)NH2; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
9. A 2. igénypont szerinti peptid, ahol

A₃ jelentése Ser vagy Aib,

A₅ jelentése Ile,

A₇ jelentése Leu vagy Cha,

A₈ jelentése Met, Nva, Leu, Val, Ile vagy Nle,

A-) -] jelentése Leu vagy Cha,

A15 jelentése Leu vagy Cha,

A₁₆ jelentése Asn vagy Aib,

A₁₈ jelentése Met, Aib vagy Nle,

5 A₂i jelentése Val,

A₂₇ jelentése Lys, Aib, Leu, hArg vagy Cha,

A₃₁ jelentése Val, Nle vagy Cha,

A₃₂ jelentése His,

A₃₃ jelentése Asn,
10 A₃₄ jelentése Phe, Tyr, Amp vagy Aib,

R-ι jelentése hidrogénatom,

R₂ jelentése hidrogénatom és

R₃ jelentése NH₂;

vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.

15 10. A 9. igénypont szerinti peptid, melyben A₇ és

A11 közül legalább egy jelentése Cha, és Ai@, A_q9 és A₃₄ közül legalább egy jelentése Aib; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
11. A 10. igénypont szerinti peptid, ahol a peptid a

20 [Cha⁷’¹¹, Nle⁸’¹⁸, Aib¹⁶’¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(1-34)NH₂;

[Cha⁷·¹¹, Nle⁸·¹⁸’³¹, Aib¹⁶·¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(1-34)NH₂;

[Cha⁷·¹¹, Aib¹⁹]hPTH(1-34)NH₂;

[Cha⁷’¹¹, Aib¹⁶]hPTH(1-34)NH₂;

[Cha⁷·¹¹, Nle⁸·¹⁸, Aib³⁴]hPTH(1-34)NH2 vagy 25 [Cha⁷·¹¹, Aib¹⁹, Lys³⁰]hPTH(1-34)NH2;

vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
12. A 9. igénypont szerinti peptid, melyben A₂₄, A₂₈és A₃₁ közül legalább egy jelentése Cha és A₁₆ és A₁₇közül legalább egy jelentése Aib; vagy gyógyászati cél30 ra alkalmas sóik.
13. A 12. igénypont szerinti peptid, ahol a peptid a [Cha²⁸, Nle⁸·¹⁸, Aib¹⁶·¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(1-34)NH₂ vagy [Cha²⁸, Aib¹⁶’¹⁹]hPTH(1-34)NH₂;

vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.

35
14. Peptid, melynek általános képlete:

K

A-ι-Val-AQ-Glu-As-GIn-Ay-Aö-His-A-i q-A-i -i-A-io^Lys-A-i ζτΑ-ιςr₂

-A_{q 6}-A_{q 7}-A_{q 8}-A_{q 9}-Arg-Arg-A; -A₂₉-A₃₉-A_{3 q} -A₃₂-A₃₃-A₃₄-R_; ahol

A_q jelentése Alá, Ser vagy Dap, 45

A₃ jelentése Ser vagy Aib,

A₅ jelentése His, Ile vagy Cha,

A₇ jelentése Leu, Cha, Nle, β-Nal, Trp, Pál, Phe vagy p-X-Phe, ahol X jelentése hidroxilcsoport, halogénatom vagy metilcsoport, 50

A₈ jelentése Leu, Met vagy Cha,

A₁₀ jelentése Asp vagy Asn,

A-)-] jelentése Lys, Leu, Cha, Phe vagy β-Nal,

A_q2 jelentése Gly,

A₁₄ jelentése Ser vagy His, 55

A₁₅ jelentése Ile vagy Cha,

A-|g jelentése Gin vagy Aib,

A₁₇ jelentése Asp vagy Aib,

A₁₈ jelentése Leu, Aib vagy Cha,

A₁₉ jelentése Arg vagy Aib, 60 >-A₂₃-A₂₄-A₂₅-A₂₆-A₂₇-A₂₈A₂₂ jelentése Phe, Glu, Aib vagy Cha,

A₂₃ jelentése Phe, Leu, Lys vagy Cha,

A₂₄ jelentése Leu, Lys vagy Cha,

A₂₅ jelentése His, Aib vagy Glu,

A₂₆ jelentése His, Aib vagy Lys,

A₂₇ jelentése Leu, Lys vagy Cha,

A₂₈ jelentése Ile, Leu, Lys vagy Cha,

A₂₉ jelentése Alá, Glu vagy Aib,

A₃₀ jelentése Glu, Cha, Aib vagy Lys,

A₃₁ jelentése Ile, Leu, Cha, Lys vagy törölve,

A₃₂ jelentése His vagy törölve,

A₃₃ jelentése Thr vagy törölve,

A₃₄ jelentése Alá vagy törölve,

Rí és R₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-12 szénatomos alkilcsoport, 7-20 szénatomos fenil-alkil-csoport, 11-20 szénatomos naftil-alkilcsoport, 1-12 szénatomos hidroxi-alkil-csoport,

HU 226 935 Β1

2-12 szénatomos hidroxi-alkenil-csoport, 7-20 szénatomos hidroxi-fenil-alkil-csoport vagy 11-20 szénatomos hidroxi-naftil-alkil-csoport;

vagy az R-| és R₂ csoport közül kizárólag az egyik csoport jelentése COE^ ahol E₁ jelentése 5

I- 12 szénatomos alkilcsoport, 2-12 szénatomos alkenilcsoport, 7-20 szénatomos fenil-alkil-csoport,

II- 20 szénatomos naftil-alkil-csoport, 1-12 szénatomos hidroxi-alkil-csoport, 2-12 szénatomos hidroxialkenil-csoport, 7-20 szénatomos hidroxi-fenil-alkil- 10 csoport vagy 11-20 szénatomos hidroxi-naftil-alkilcsoport, és

R₃ jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport,

1-12 szénatomos alkoxicsoport vagy NH-Y-CH₂-Z, ahol Y jelentése 1-12 szénatomos szénhidrogénrész 15 és Z jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport, CO₂H vagy CONH₂ csoport;

feltéve, hogy A₃, A₁₆, A₁₇, A₁₈, A_ig, A₂₂,

A₂₅, A₂₆, A₂₉ vagy A₃₀ közül legalább egy jelentése Aib; 20 vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
15. A 14. igénypont szerinti peptid, ahol A₂₂ jelentése Phe vagy Cha, A₂₃ jelentése Phe vagy Cha, A₂₅ jelentése His, A₂₆ jelentése His, A₂₇ jelentése Leu vagy Cha, A₂₈ jelentése Ile vagy Cha, A₂₉ jelentése Alá, A₃₀ 25 jelentése Glu vagy Lys, A₃₁ jelentése Ile vagy Cha, A₃₂jelentése His, A₃₃ jelentése Thr és A₃₄ jelentése Alá; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
16. A 15. igénypont szerinti peptid, ahol A₇ és A^ közül legalább egy jelentése Cha; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
17. A 15. igénypont szerinti peptid, ahol A₁₆ és A₁₉közül legalább egy jelentése Aib; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
18. A 14. igénypont szerinti peptid, ahol A₂₂ jelentése Glu, Aib vagy Cha, A₂₃ jelentése Leu, Lys vagy Cha, A₂₅ jelentése Aib vagy Glu, A₂₆ jelentése Aib vagy Lys, A₂₈ jelentése Leu, Lys vagy Cha, A₂₉ jelentése Glu vagy Aib, A₃₀ jelentése Cha, Aib vagy Lys ’ A₃i jelentése Leu, Cha vagy Lys, A₃₂ jelentése His, A₃₃ jelentése Thr és A₃₄ jelentése Alá; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
19. A 18. igénypont szerinti peptid, ahol A₇ és A^ közül legalább egy jelentése Cha; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
20. A 18. igénypont szerinti peptid, ahol A₁₆ és A₁₉közül legalább egy jelentése Aib; vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.
21. Peptid, melynek általános képlete:

A; -Val-A₃-Glu-A₈-Gln-A₇-A₈-His-A^ q-A; ;-A;₂-Lys-A; ₄-A^₈r₂ ^x

-A₁₆-A₁₇-A₁₈-A₁₉-Arg-Arg-A₂₂-A₂₃-A₂₄-A₂₅-A₂₆-A₂₇-A₂₈-A₂₉-A₃₀-A₃ ή -A₃₂-A₃₃-A₃₄-R₃, ahol

A! jelentése Alá, Ser vagy Dap,

A₃ jelentése Ser vagy Aib,

A₅ jelentése His, Ile vagy Cha,

A₇ jelentése Leu, Cha, Nle, β-Nal, Trp, Pál, Phe vagy p-X-Phe, ahol X jelentése hidroxilcsoport, halogénatom vagy metilcsoport,

A₈ jelentése Leu, Met vagy Cha,

A₁₀ jelentése Asp vagy Asn,

A11 jelentése Lys, Leu, Cha, Phe vagy β-Nal, Árjelentése Gly,

Árjelentése Ser vagy His,

A₁₅ jelentése Ile vagy Cha,

A₁₆ jelentése Gin vagy Aib,

A₁₇ jelentése Asp vagy Aib,

A₁₈ jelentése Leu, Aib vagy Cha,

A₁₉ jelentése Arg vagy Aib,

A₂₂ jelentése Glu, Aib vagy Cha,

A₂₃ jelentése Leu, Lys vagy Cha,

A₂₄ jelentése Leu, Lys vagy Cha,

A₂₅ jelentése Aib vagy Glu,

A₂₆ jelentése Aib vagy Lys,

A₂₇ jelentése Leu, Lys vagy Cha,

A₂₈ jelentése Leu, Lys vagy Cha,

A₂₉ jelentése Glu vagy Aib,

A₃₀ jelentése Cha, Aib vagy Lys A₃₁ jelentése Leu, Cha vagy Lys,

A₃₂ jelentése His,

A₃₃ jelentése Thr,

A₃₄ jelentése Alá,

R·! és R₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-12 szénatomos alkilcsoport, 7-20 szénatomos fenil-alkil-csoport, 11-20 szénatomos naftil-alkilcsoport, 1-12 szénatomos hidroxi-alkil-csoport, 2-12 szénatomos hidroxi-alkenil-csoport, 7-20 szénatomos hidroxi-fenil-alkil-csoport vagy 11-20 szénatomos hidroxi-naftil-alkil-csoport;

vagy az R₁ és R₂ csoport közül kizárólag az egyik csoport jelentése COE^ ahol E·, jelentése 1-12 szénatomos alkilcsoport, 2-12 szénatomos alkenilcsoport, 7-20 szénatomos fenil-alkil-csoport, 11-20 szénatomos naftil-alkil-csoport, 1-12 szénatomos hidroxi-alkilcsoport, 2-12 szénatomos hidroxi-alkenil-csoport, 7-20 szénatomos hidroxi-fenil-alkil-csoport vagy 11-20 szénatomos hidroxi-naftil-alkil-csoport, és

R₃ jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, 1-12 szénatomos alkoxicsoport vagy NH-Y-CH₂-Z, ahol Y jelentése 1-12 szénatomos szénhidrogénrész és Z jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport, CO₂H vagy CONH₂ csoport;

feltéve, hogy A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ vagy A₃₁ közül legalább egy jelentése Lys; továbbá feltéve, hogy A₁₆, vagy A₁₉ közül legalább egy jelentése Aib;

vagy gyógyászati célra alkalmas sóik.

HU 226 935 Β1
22. A [Glu²²·²⁵, Leu²³·²⁸·³¹, Aib²⁹,

Lys²⁶’³⁰]hPTHrP(1-34)NH₂ képletű peptid.
23. Az előző igénypontok bármelyike szerinti peptidek vagy gyógyászati célra alkalmas sóik gyógyászati készítményekben való alkalmazásra. 5
24. A 23. igénypont szerinti peptidek vagy gyógyászati célra alkalmas sóik csontnövekedés stimulálására szolgáló gyógyászati készítményekben való alkalmazásra.
25. Az 1-24. igénypontok bármelyike szerinti peptid vagy gyógyászati célra alkalmas sóik oszteoporózis és/vagy csonttörések kezelésére szolgáló gyógyászati készítményekben való alkalmazásra.
26. Az 1-22. igénypontok bármelyike szerinti peptidek vagy gyógyászati célra alkalmas sóik alkalmazása csontnövekedés stimulálására szolgáló gyógyszerek vagy oszteoporózis és/vagy csonttörések kezelésére szolgáló gyógyszerek előállításában.

Kiadja a Magyar Szabadalmi Hivatal, Budapest Felelős vezető: Szabó Richárd osztályvezető Windor Bt., Budapest