HU222984B1 - Eljárás molekulák in vitro bevezetésére élő sejtek citoszoljába, fotoszenzibilizáló vegyület alkalmazásával - Google Patents
Eljárás molekulák in vitro bevezetésére élő sejtek citoszoljába, fotoszenzibilizáló vegyület alkalmazásával Download PDFInfo
- Publication number
- HU222984B1 HU222984B1 HU9800153A HU9800153A HU222984B1 HU 222984 B1 HU222984 B1 HU 222984B1 HU 9800153 A HU9800153 A HU 9800153A HU 9800153 A HU9800153 A HU 9800153A HU 222984 B1 HU222984 B1 HU 222984B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- molecules
- compound
- cytosol
- cells
- photosensitizing
- Prior art date
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 152
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 109
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 title claims abstract description 106
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 title claims abstract description 73
- 230000002165 photosensitisation Effects 0.000 title claims abstract description 71
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 25
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 24
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims abstract description 8
- 210000004020 intracellular membrane Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 108700004714 Gelonium multiflorum GEL Proteins 0.000 claims description 46
- PBHVCRIXMXQXPD-UHFFFAOYSA-N chembl2369102 Chemical compound C1=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C1C(C1=CC=C(N1)C(C=1C=CC(=CC=1)S(O)(=O)=O)=C1C=CC(=N1)C(C=1C=CC(=CC=1)S(O)(=O)=O)=C1C=CC(N1)=C1C=2C=CC(=CC=2)S(O)(=O)=O)=C2N=C1C=C2 PBHVCRIXMXQXPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 125000001273 sulfonato group Chemical group [O-]S(*)(=O)=O 0.000 claims description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 10
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 7
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 claims description 6
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 6
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 claims description 6
- MHIITNFQDPFSES-UHFFFAOYSA-N 25,26,27,28-tetrazahexacyclo[16.6.1.13,6.18,11.113,16.019,24]octacosa-1(25),2,4,6,8(27),9,11,13,15,17,19,21,23-tridecaene Chemical class N1C(C=C2C3=CC=CC=C3C(C=C3NC(=C4)C=C3)=N2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 MHIITNFQDPFSES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 claims description 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- JZRYQZJSTWVBBD-UHFFFAOYSA-N pentaporphyrin i Chemical compound N1C(C=C2NC(=CC3=NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 JZRYQZJSTWVBBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 claims description 4
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 claims description 4
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- YNHJECZULSZAQK-UHFFFAOYSA-N tetraphenylporphyrin Chemical compound C1=CC(C(=C2C=CC(N2)=C(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(N=2)=C(C=2C=CC=CC=2)C2=CC=C3N2)C=2C=CC=CC=2)=NC1=C3C1=CC=CC=C1 YNHJECZULSZAQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 2
- 235000017168 chlorine Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000001309 chloro group Chemical class Cl* 0.000 claims description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 claims description 2
- BBNQQADTFFCFGB-UHFFFAOYSA-N purpurin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1 BBNQQADTFFCFGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 208000029499 cancer-related condition Diseases 0.000 claims 1
- 230000003161 proteinsynthetic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 4
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 27
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 description 12
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 8
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 7
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 6
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- ZUELZXZJXUXJCH-UHFFFAOYSA-N 3-[10,15,20-tris(3-hydroxyphenyl)-21,23-dihydroporphyrin-5-yl]phenol Chemical compound Oc1cccc(c1)-c1c2ccc(n2)c(-c2cccc(O)c2)c2ccc([nH]2)c(-c2cccc(O)c2)c2ccc(n2)c(-c2cccc(O)c2)c2ccc1[nH]2 ZUELZXZJXUXJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 AlPcS 2a Chemical compound 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000742 Plant toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108010084592 Saporins Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- HUVXQFBFIFIDDU-UHFFFAOYSA-N aluminum phthalocyanine Chemical class [Al+3].C12=CC=CC=C2C(N=C2[N-]C(C3=CC=CC=C32)=N2)=NC1=NC([C]1C=CC=CC1=1)=NC=1N=C1[C]3C=CC=CC3=C2[N-]1 HUVXQFBFIFIDDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 2
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000002121 endocytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003123 plant toxin Substances 0.000 description 2
- 229910052705 radium Inorganic materials 0.000 description 2
- HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N radium atom Chemical compound [Ra] HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 229930184616 taxin Natural products 0.000 description 2
- KOTXAHKUCAQPQA-AAUVPWARSA-N taxine Chemical compound C1([C@@H]([C@@H](O)C(=O)O[C@@H]2C=3/C[C@@](C([C@H](O)C4=C(C)[C@@H](OC(C)=O)CC(C4(C)C)[C@@H](OC(C)=O)\C=3)=O)(C)[C@@H](O)C2)N(C)C)=CC=CC=C1 KOTXAHKUCAQPQA-AAUVPWARSA-N 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- RHBJMYOTXIENOZ-UHFFFAOYSA-N 2-[10,15,20-tris(2-hydroxyphenyl)-21,23-dihydroporphyrin-5-yl]phenol Chemical compound Oc1ccccc1-c1c2ccc(n2)c(-c2ccccc2O)c2ccc([nH]2)c(-c2ccccc2O)c2ccc(n2)c(-c2ccccc2O)c2ccc1[nH]2 RHBJMYOTXIENOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150102415 Apob gene Proteins 0.000 description 1
- UJKPHYRXOLRVJJ-MLSVHJFASA-N CC(O)C1=C(C)/C2=C/C3=N/C(=C\C4=C(CCC(O)=O)C(C)=C(N4)/C=C4\N=C(\C=C\1/N\2)C(C)=C4C(C)O)/C(CCC(O)=O)=C3C Chemical compound CC(O)C1=C(C)/C2=C/C3=N/C(=C\C4=C(CCC(O)=O)C(C)=C(N4)/C=C4\N=C(\C=C\1/N\2)C(C)=C4C(C)O)/C(CCC(O)=O)=C3C UJKPHYRXOLRVJJ-MLSVHJFASA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 1
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 102000014944 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010064171 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 1
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000005025 clonogenic survival Effects 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000001218 confocal laser scanning microscopy Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000000546 effect on cell death Effects 0.000 description 1
- 230000002828 effect on organs or tissue Effects 0.000 description 1
- 230000001516 effect on protein Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 229960003569 hematoporphyrin Drugs 0.000 description 1
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001093 holography Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005305 interferometry Methods 0.000 description 1
- 210000003093 intracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 108010045758 lysosomal proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002080 lysosomotropic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- XJCPMUIIBDVFDM-UHFFFAOYSA-M nile blue A Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4[O+]=C3C=C(N)C2=C1 XJCPMUIIBDVFDM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000036211 photosensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000012048 reactive intermediate Substances 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 231100000489 sensitizer Toxicity 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000036326 tumor accumulation Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- DAFUFNRZWDWXJP-UHFFFAOYSA-N uroporphyrin i Chemical compound N1C(C=C2C(=C(CC(O)=O)C(C=C3C(=C(CC(O)=O)C(=C4)N3)CCC(O)=O)=N2)CCC(O)=O)=C(CC(O)=O)C(CCC(O)=O)=C1C=C1C(CC(O)=O)=C(CCC(=O)O)C4=N1 DAFUFNRZWDWXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
- A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Catalysts (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
A találmány egyik tárgya eljárás molekulák in vitro bevezetésére élősejtek citoszoljába fotoszenzibilizáló vegyületek és afotoszenzibilizáló vegyületek által abszorbeált fény alkalmazásával,amelynek az a lényege, hogy a) az élő sejtekhez hozzáadják afotoszenzibilizáló vegyületet és a bejuttatandó molekulá(ka)t, amelyekadott esetben rögzítve lehetnek azonos vagy eltérőhordozómolekulákhoz; b) ezután ezeket endolitikusan vagy más módonátjuttatják az endoszómákba, lizoszómákba vagy más, intracellulárismembránnal határolt sejtrészlegekbe; majd c) a sejteket afotoszenzibilizáló vegyület abszorpciós spektrumának megfelelőhullámhosszúságú fénynek teszik ki változó dózisokban, a kívánttúlélési aránytól függően, így az endoszomális, lizoszomális vagy más,intracelluláris sejtalkotó membránokat szétzúzzák, és a citoszolbabejuttatandó molekulákat a citoszolban kibocsátják, amelynek során afénnyel aktivált fotoszenzibilizáló vegyület maga nem pusztítja el asejtek többségét. Az eljárás során a fotoaktivált fotoszenzibilizálóvegyület nem pusztítja el a sejteket. A találmány tárgya továbbá egykészítmény is, amely neoplasztikus vagy más celluláris folyamatok invitro módosítására szolgál meleg vérű állatokban vagysejttenyészetekben, valamint egy olyan készlet is, amely a találmányszerinti eljárás végrehajtásához van előirányozva. Ugyancsak tárgya atalálmánynak fotoszenzibilizáló vegyület alkalmazása is, molekulák élősejtek citoszoljába in vitro bevezetésére szolgáló készítményalkalmazása is, amely az alábbi lépésekből áll: az élő sejtekhezhozzáadják a fotoszenzibilizáló vegyületet és a bejuttatandómolekulá(ka)t, amelyek adott esetben rögzítve lehetnek azonos vagyeltérő hordozómolekulákhoz; ezután ezeket endolitikusan vagy más módonátjuttatják az endoszómákba, lizoszómákba vagy más, intracellulárismembránnal határolt sejtrészlegekbe; majd a sejteket afotoszenzibilizáló vegyület abszorpciós spektrumának megfelelőhullámhosszúságú fénynek teszik ki változó dózisokban a kívánttúlélési aránytól függően, így az endoszomális, li- zoszomális vagymás intracelluláris sejtalkotó membránokat szétzúzzák, és a citoszolbabejuttatandó molekulákat a citoszolban kibocsátják, amelynek során afénnyel aktivált fotoszenzibilizáló vegyület maga nem pusztítja el asejtek többségét. ŕ
Description
KIVONAT
A találmány egyik tárgya eljárás molekulák in vitro bevezetésére élő sejtek citoszoljába fotoszenzibilizáló vegyületek és a fotoszenzibilizáló vegyületek által abszorbeált fény alkalmazásával, amelynek az a lényege, hogy
a) az élő sejtekhez hozzáadják a fotoszenzibilizáló vegyületet és a bejuttatandó molekulá(ka)t, amelyek adott esetben rögzítve lehetnek azonos vagy eltérő hordozómolekulákhoz;
b) ezután ezeket endolitikusan vagy más módon átjuttatják az endoszómákba, lizoszómákba vagy más, intracelluláris membránnal határolt sejtrészlegekbe; majd
c) a sejteket a fotoszenzibilizáló vegyület abszorpciós spektrumának megfelelő hullámhosszúságú fénynek teszik ki változó dózisokban, a kívánt túlélési aránytól függően, így az endoszomális, lizoszomális vagy más, intracelluláris sejtalkotó membránokat szétzúzzák, és a citoszolba bejuttatandó molekulákat a citoszolban kibocsátják, amelynek során a fénnyel aktivált fotoszenzibilizáló vegyület maga nem pusztítja el a sejtek többségét.
Az eljárás során a fotoaktivált fotoszenzibilizáló vegyület nem pusztítja el a sejteket.
A találmány tárgya továbbá egy készítmény is, amely neoplasztikus vagy más celluláris folyamatok in vitro módosítására szolgál meleg vérű állatokban vagy sejttenyészetekben, valamint egy olyan készlet is, amely a találmány szerinti eljárás végrehajtásához van előirányozva. Ugyancsak tárgya a találmánynak fotoszenzibilizáló vegyület alkalmazása is, molekulák élő sejtek citoszoljába in vitro bevezetésére szolgáló készítmény alkalmazása is, amely az alábbi lépésekből áll: az élő sejtekhez hozzáadják a fotoszenzibilizáló vegyületet és a bejuttatandó molekulá(ka)t, amelyek adott esetben rögzítve lehetnek azonos vagy eltérő hordozómolekulákhoz; ezután ezeket endolitikusan vagy más módon átjuttatják az endoszómákba, lizoszómákba vagy más, intracelluláris membránnal határolt sejtrészlegekbe; majd a sejteket a fotoszenzibilizáló vegyület abszorpciós spektrumának megfelelő hullámhosszúságú fénynek teszik ki változó dózisokban a kívánt túlélési aránytól függően, így az endoszomális, lizoszomális vagy más intracelluláris sejtalkotó membránokat szétzúzzák, és a citoszolba bejuttatandó molekulákat a citoszolban kibocsátják, amelynek során a fénnyel aktivált fotoszenzibilizáló vegyület maga nem pusztítja el a sejtek többségét.
A leírás terjedelme 24 oldal (ezen belül 13 lap ábra)
HU 222 984 B1
HU 222 984 Bl
A találmány tárgya eljárás molekulák élő sejtek citoszoljába történő in vitro bevezetésére fotoszenzibilizáló vegyületek és ez utóbbiak által abszorbeált fény alkalmazásával. A találmány fotoszenzibilizáló vegyület olyan készítmény előállításához való alkalmazására is vonatkozik, amely molekulák élő sejtek citoszoljába történő in vitro bevezetésére szolgál. A találmány tárgya továbbá készítmény neoplasztikus vagy más celluláris folyamatok in vitro módosítására meleg vérű állatokban vagy sejttenyészetekben. Ugyancsak tárgya a találmánynak egy, az eljárás foganatosítására szolgáló készlet is.
A molekulák legnagyobb része nem képes könnyen áthatolni a sejtmembránokon. A molekuláknak az élő sejtek citoszoljába történő bevezetésére szolgáló eljárások jól alkalmazhatók a biológiai folyamatok befolyásolására és tanulmányozására. A napjainkban leggyakrabban alkalmazott módszerek közé tartoznak - egyebek mellett - például a következők: mikroinjektálás; vörösvérsejt-kísértettel (red blood cell ghost; a hemoglobinját elvesztett vörösvérsejttel) médiáit fúzió és liposzómafuzió; pinoszómák ozmitikus lízise; töredékfeltöltés; elektroporáció; valamint kalcium-foszfát- és vírusmediált transzfektálás. Ezek az eljárások ugyan alkalmasak a tenyészetben lévő sejtek vizsgálatára, ugyanakkor azonban gyakran nehezen kivitelezhetők, időigényesek, nem elég hatékonyak, vagy jelentős sejtpusztulást idéznek elő. így az olyan, biológiai és orvosi kutatásokban, illetve terápiás folyamatokban történő felhasználás szempontjából, amelyekben a sejtek megtartják funkcionális jellegüket, a jelenleg használatos módszerek nem tekinthetők optimális megoldásoknak.
Jól ismert, hogy a porfirinek és más fotoszenzibilizáló (fényérzékenyítő) vegyületek citotoxikus hatást váltanak ki a sejteken és szöveteken. Ezek az effektusok azon a tényen alapulnak, hogy a fotoszenzibilizáló vegyületek megvilágítás hatására a sejtek és a sejtstruktúrák membránjait szétbomlasztó szinglett (nascens) oxigént tesznek szabaddá; ha a roncsolás kiterjedt, ez akár a sejt elhalását is eredményezheti. Ezeket a hatásokat már jelenleg is felhasználják a neoplasztikus betegségek számos típusának a kezelésére. Az ilyen jellegű kezelést fotodinamikus terápiának (photodynamic therapy, PDT) nevezik, amelynek során egy fotoszenzibilizáló és tumorlokalizáló festék injektálása után a tumorrégiót fénnyel megvilágítják. A citotoxikus hatást főleg a szinglett oxigén képződése váltja ki. A szinglett oxigén reaktív intermediernek rendkívül rövid (<0,04 ps) az élettartama a sejtekben. így a fotodinamikus terápia a megvilágítás ideje alatt és csak a szinglett oxigén képződési helyeinek közvetlen közelében fejti ki primer citotoxikus hatását. A szinglett oxigén a proteinekkel (hisztidinnel, triptofánnal, metioninnal, ciszteinnel, tirozinnal), a DNS-sel (guaninnal), a telítetlen zsírsavakkal és a koleszterinnel reakcióba lép, amelynek során az említett anyagok oxidálódnak. A fotodinamikus terápia egyik előnye az, hogy a meg nem világított szövetek nem károsodnak. Számos szabadalmi dokumentum foglalkozik a fotodinamikus terápiának a nemkívánatos sejtpopulációk, például a neoplasztikus sejtek elroncsolására irányuló felhasználásával. Igen sok szabadalmi dokumentum tárgyát képezik fotodinamikus vegyületek. Ezek egy része önmagukban az ilyen jellegű vegyületekre vonatkozik, mások pedig a fotodinamikus vegyületeknek az olyan immunglobulinokkal alkotott konjugátumaival foglalkoznak, amely immunglobulinok a neoplasztikus sejtreceptor-determinánsokat megcélozva fokozzák a komplexek sejtspecifitását. Bizonyos fotokémiai vegyületek, például a hematoporfinszármazékok különleges hajlamot mutatnak a rosszindulatú sejtekben történő koncentrálódásra. A nemkívánatos sejtek elpusztítására szolgáló eljárásokat és vegyületeket ismertetnek - egyebek mellett - például a következő szabadalmi dokumentumokban: 173 319 számú norvégiai szabadalmi leírás, 90 0731, 90 2634, 90 1018, 94 1548, 85 1897, 93 4837, 92 4151 és 89 1491 számú norvégiai szabadalmi bejelentés. Ezek a szabadalmak/szabadalmi bejelentések a jelen bejelentés elsőbbségi napja, vagyis 1994. 08. 08. előtt már nyilvánosságra kerültek.
A PCT/US93/00683 számú nemzetközi bejelentésben, amelynek közzététele a jelen találmányi bejelentés elsőbbségi napja előtt megtörtént, egy olyan hatóanyagbejuttató rendszert ismertetnek, amely kopolimer hordozókhoz kapcsolva egy rákellenes hatóanyagot és egy fotoaktiválható hatóanyagot tartalmaz. A beadás során a komplex pinocitózis vagy fagocitózis útján belép a sejt belső terébe, majd az endoszómák, valamint a lizoszómák belsejében lokalizálódik. A lizoszómákban az antineoplasztikus vegyület és a polimer közötti kötés elhidrolizál, aminek eredményeként az antineoplasztikus vegyület passzív diffúzióval képes a lizoszómamembránon áthatolva bejutni a citoszolba. Ily módon ennek az eljárásnak a felhasználhatósága erősen korlátozott, mivel csak olyan kis méretű molekulával rendelkező vegyületek bejuttatására alkalmazható, amelyek képesek a lizoszómamembránokon átdiffundálni. Miután elegendő időt hagytak a diffúzióhoz, bekapcsolnak egy, a fotoaktiválható vegyület aktiválásához megfelelő hullámhosszúságú és energiájú fényforrást. A rákellenes hatóanyag és a fotoaktiválható hatóanyag kombinált hatása elroncsolja a sejtet. A fotoaktiválható vegyületek valamennyi ismert felhasználása a sejtstruktúrának a sejt elhalásához vezető kiterjedt elroncsolására irányul. Ez idáig nem ismert olyan eljárás, amely arra irányulna, hogy az endoszóma/lizoszóma membránok lokalizált széttöredezése után a membránon áthatolni nem képes molekulákat lehessen bejuttatni a citoszolba.
A GB 2 209 468 A lajstromszámú brit szabadalmi leírásból fényérzékenyítő szereket tartalmazó liposzómák ismerhetők meg, amelyeket ha fényhatásnak tesznek ki, destabilizálják a lipid-kettősréteget, és ezáltal stimulálják a liposzómák fúzióját és/vagy a liposzómák membránkötött alkotórészeinek a cseréjét. Ebben az esetben tehát liposzómákat alkalmaznak molekulák sejtekbe intemalizálásához.
A jelen találmány tárgya eljárás molekuláknak tenyészetben vagy szövetekben lévő élő sejtek citoszoljába történő bejuttatására, amelynek során a sejteket egy fotoaktiválható vegyülettel és a citoszolba bejuttatandó egy- vagy többfajta molekulával kezeljük, ahol a fotoaktiválható vegyület és az egy- vagy többfajta moleku2
HU 222 984 Bl la felvételét különféle hordozókkal segíthetjük elő, majd a sejteket alkalmas hullámhosszúságú és energiájú fénnyel megvilágítva az endoszóma-, valamint lizoszómamembránokat elroncsoljuk, és az egy- vagy többfajta molekulát bejuttatjuk a citoszolba anélkül, hogy a sejtek legnagyobb része elvesztené működőképességét. A fotoszenzibilizátor és a citoszolba bejuttatandó egyvagy többfajta molekula tetszés szerint kapcsolható alkalmas hordozókhoz, melyek lehetnek ugyanazok vagy különbözőek, megkönnyítve az adott molekulák felvételét, melynek során a hordozók a bevitelhez mind a fotoszenzibilizátorhoz, mind a molekulához, vagy csak a fotoszenzibilizátorhoz, vagy csak a molekulához kapcsolódnak.
A kitűzött célt a találmány értelmében olyan, molekulák élő sejtek citoszoljába in vitro bevezetésére szolgáló eljárással oldottuk meg fotoszenzibilizáló vegyületek és a fotoszenzibilizáló vegyületek által abszorbeált fény alkalmazásával, amely eljárásnak az a lényege, hogy
a) az élő sejtekhez hozzáadjuk a fotoszenzibilizáló vegyületet és a bejuttatandó molekulá(ka)t, amely(ek) adott esetben rögzítve lehet(nek) azonos vagy eltérő hordozómolekulákhoz;
b) ezután ezeket endolitikusan vagy más módon átjuttatjuk az endoszómákba, lizoszómákba vagy más, intracelluláris membránnal határolt sejtrészlegekbe; majd
c) a sejteket a fotoszenzibilizáló vegyület abszorpciós spektrumának megfelelő hullámhosszúságú fénynek tesszük ki változó dózisokban a kívánt túlélési aránytól függően, így az endoszomális, lizoszomális vagy más intracelluláris sejtalkotó membránokat szétzúzzuk, és a citoszolba bejuttatandó molekulákat a citoszolban kibocsátjuk, amelynek során a fénnyel aktivált fotoszenzibilizáló vegyület maga nem pusztítja el a sejtek többségét.
Az eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint az említett hordozómolekulákat rögzítjük mind a citoszolban kibocsátandó vegyülethez, mind a fotoszenzibilizáló vegyülethez; vagy legalább egy hordozót rögzítünk a citoszolban kibocsátandó vegyülethez, és egy másik, hasonló vagy eltérő hordozót rögzítünk a fotoszenzibilizáló vegyülethez. Az is előnyös lehet, ha a citoszolban az alábbi molekulák valamelyikét bocsátjuk ki: DNS, oligo(dezoxi)nukleotidok, mRNS, antiszensz DNS, cukrok, fehéqék, peptidek, membránon át nem hatoló gyógyszerek, egyéb, membránon át nem hatoló vegyületek, valamint az említett molekulák kovalensen vagy nem kovalensen kötött kombinációi; célszerűen a citoszolba fehérjéket vagy peptideket bocsátunk ki. Az is célszerű lehet, ha a citoszolban fehéqe-szintetikusaktivitást módosító anyagokat bocsátunk ki.
Az eljárás egy másik foganatosítási módjára az jellemző, hogy a citoszolban gelomint, szeporint vagy agrosztint vagy ezek valamely kombinációját bocsátjuk ki. Egy további eljárási ismérvnek megfelelően fotoszenzibilizáló vegyületként a következő vegyületek valamelyikét adjuk az élő sejtekhez: porfirinok, ftalocianinok, purpurinok, klozinok, benzoporfirinok, naftalocianinok, kationos festékek, tetraciklinek és lizoszomatrop gyenge bázisok, valamint származékaik; ebben az esetben előnyös, ha fotoszenzibilizáló vegyületként a szomszédos fenilcsoportokon két szulfonátcsoporttal rendelkező tetrafenil-porfirint, azaz TPPS2a-t, vagy négy szulfonátcsoporttal rendelkező znezo-tetrafenil-porfint, vagyis TPPS4-et, vagy a szomszédos fenilcsoportokon két szulfonátcsoporttal rendelkező alumínium-ftalocianint, vagyis AlPcS2a-t, vagy mindezek bármely kombinációját adjuk az élő sejtekhez. Előnyös lehet továbbá, ha hordozómolekulákként helyre irányuló molekulákat rögzítünk, amelyek megkönnyítik a fotoszenzibilizáló vegyület vagy a citoszolban kibocsátandó molekulák felvételét; valamint ha a túlélő sejtek hányadosát a fény mennyiségének a fotoszenzibilizáló vegyület koncentrációjának figyelembevételével történő megválasztásával szabályozzuk.
A találmány tárgyát képezi egy készítmény (kompozíció) is neoplasztikus vagy más celluláris folyamatok in vitro módosítására meleg vérű állatokban vagy sejttenyészetekben, amelynek az a lényege, hogy tartalmaz egy, a citoszolban kibocsátandó, membránon át nem hatoló vegyületet, és egy fotoszenzibilizáló vegyületet, amely fénnyel történő aktiválás hatására szétzúzza az intracelluláris sejtmembránokat; a nevezett komponensek adott esetben hozzákapcsolhatók azonos vagy különböző hordozómolekulákhoz annak érdekében, hogy megkönnyítsék az átjutást az intracelluláris sejtrészlegekbe, például endoszómákba, lizoszómákba, vagy más intracelluláris részlegekbe. E készítmény egy kiviteli alakjára az jellemző, hogy az említett hordozómolekulák rögzítve vannak mind a citoszolban kibocsátandó, celluláris folyamatokat módosító vegyülethez, mind a fotoszenzibilizáló vegyülethez; vagy legalább egy hordozó van rögzítve a citoszolban kibocsátandó vegyülethez, és egy másik, hasonló vagy eltérő hordozó van rögzítve a fotoszenzibilizáló vegyülethez. Célszerű lehet, ha az említett, a citoszolban kibocsátandó vegyület egy antineoplasztikus vegyület; előnyösen az antineoplasztikus vegyület gelonin.
Egy másik készítményismérvnek megfelelően a citoszolban kibocsátandó vegyület DNS, oligo(dezoxi)nukleotidok, mRNS, antiszensz DNS, cukrok, fehéqék, peptidek, membránon át nem hatoló gyógyszerek, más, membránon át nem hatoló molekulák valamelyike, vagy az említett molekulák valamely kovalensen vagy nem kovalensen összekapcsolt kombinációja. Előnyös lehet, ha a fotoszenzibilizáló vegyületek porfirinok, ftalocianinok, purpurinok, klorinok, benzoporfirinok, naftalocianinok, kationos festékek, tetraciklinek és lizoszomotrop gyenge bázisok, vagy mindezek származékai; ebben az esetben a fotoszenzibilizáló vegyületet tetrafenil-porfinként szulfonátcsoporttal szomszédos fenilcsoportok képezhetik.
Egy másik készítményismérvnek megfelelően a hordozómolekula helyre irányuló molekula, amely megkönnyíti a fotoszenzibilizáló vegyület vagy a citoszolban kibocsátandó molekulák felvételét.
A készítmény egyik további ismérve, hogy rákterápiában alkalmazható.
A készítmény egy további kiviteli alakjára az jellemző, hogy az említett, a citoszolban kibocsátandó vegyület DNS, oligo(dezoxi)nukleotid, mRNS vagy antiszensz
HU 222 984 Bl
DNS, vagy az említett molekulák kovalensen vagy nem kovalensen kötött kombinációi, génterápiákon való alkalmazáshoz.
Az eljárás foganatosítására szolgáló készletre az jellemző, hogy tartalmazza a fotoszenzibilizáló vegyületeket, a szállítandó molekulákat, és kívánt esetben tartalmaz olyan hordozóvegyületeket, amelyek megkönnyítik ezeknek a molekuláknak a szállítását.
Az ugyancsak a találmány tárgyát képező, molekulák élő sejtek citoszoljába in vitro bevezetésére szolgáló készítmény gyártásához fotoszintetizáló vegyület alkalmazásának az a lényege, hogy a nevezett alkalmazás az alábbi lépésekből áll:
a) az élő sejtekhez hozzáadjuk a fotoszenzibilizáló vegyületet és a bejuttatandó molekulá(ka)t, amelyek adott esetben rögzítve lehetnek azonos vagy eltérő hordozómolekulákhoz;
b) ezután ezeket endolitikusan vagy más módon átjuttatjuk az endoszómákba, lizoszómákba vagy más, intracelluláris membránnal határolt sejtrészlegekbe; majd
c) a sejteket a fotoszenzibilizáló vegyület abszorpciós spektrumának megfelelő hullámhosszúságú fénynek tesszük ki változó dózisokban a kívánt túlélési aránytól függően, így az endoszomális, lizoszomális vagy más intracelluláris sejtalkotó membránokat szétzúzzuk, és a citoszolba bejuttatandó molekulákat a citoszolban kibocsátjuk, amelynek során a fénnyel aktivált fotoszenzibilizáló vegyület maga nem pusztítja el a sejtek többségét.
Célszerű, ha az említett hordozómolekulák, szállítandó molekulák és fotoszenzibilizáló molekulák a 2-9. igénypontok bármelyikében meghatározottak; valamint ha a túlélő sejtek hányadosát a fény mennyiségének a fotoszenzibilizáló vegyület koncentrációjának figyelembevételével történő megválasztásával szabályozzuk. Az alkalmazási találmányunk például génterápiához vagy rák kezelésére alkalmazható.
A találmány szerinti eljárás előnyösen alkalmazható rákkal kapcsolatos állatok kezelésére szolgáló gyógyszer előállításához.
A találmány szerinti eljárással tehát bármely molekula bejuttatható élő sejt citoszoljába, és ezt követően a molekulák hozzáférhetők a citoszolban, és a sejtek megtartják működőképességüket. Ezt úgy érjük el, hogy a sejteket egy célkiválasztó immunglobulinokkal és a citoszolba bejuttatandó molekulákkal összekapcsolt vagy azoktól elkülönített fotoaktiválható vegyülettel és hordozómolekulákkal kezeljük, a sejtek felveszik a fotoaktiválható vegyületet, amely az endoszómákban, liposzómákban vagy más sejtalkotókban lokalizálódik, majd a sejteket a fotoszenzibilizáló vegyület aktiválására alkalmas hullámhosszúságú fénnyel világítjuk meg, amelynek eredményeként csak az endoszóma, lizoszóma és egyéb sejtalkotó membránok roncsolódnak, és a molekulák bejutnak a citoszolba anélkül, hogy a fotoaktiválható vegyület hatására és az endoszóma/lizoszóma tartalom lehetséges hatására a sejtek elveszítenék működőképességüket.
Bizonyított tény, hogy számos hatóanyag, egyebek mellett például a di- és tetraszulfonált alumínium-ftalocianin, a szulfonált tetrafenil-porfmok (TPPSn), a níluskék, a chlorin-e6 származékok, az uroporfirin I, a filloeritrin, valamint a hematoporfirin és a metilénkék a tenyészetben lévő sejtek endoszómáiban és lizoszómáiban lokalizálódik. A legtöbb esetben ez az endocitikus aktivitás következménye. Megfigyeltük, hogy a sejtek lizoszómáiban fotoszenzibilizátorokat tartalmazó sejtek megvilágítása a lizoszómákat permeábilissé teszi, és így a fotoszenzibilizátorok szabaddá válnak. Bizonyos esetekben, például a TPPS2a és a TPPS! esetében a fotodinamikus terápia után jelentős enzimaktivitást figyeltünk meg a citoszolban, ami azt jelzi, hogy a lizoszóma tartalma szabaddá válva bejut a citoszolba, mégpedig anélkül, hogy a lizoszóma tartalma elveszítené aktivitását. A fotoszenzibilizáló festékeknek ez a hatása - a találmány szerinti megoldás értelmében - felhasználható az endocitizált molekuláknak az endoszómákból és lizoszómákból történő kiszabadítására.
A molekuláknak a sejtcitoplazmába történő bevezetését úgy valósíthatjuk meg, hogy először a sejteket egy olyan fotoszenzibilizáló festékkel és a sejtek citoszoljába bejuttatandó egy vagy több olyan molekulával, valamint adott esetben olyan hordozómolekulákkal és olyan immunglobulinokkal kezeljük, amelyek mindegyike elsősorban az endoszómákban és/vagy a lizoszómákban lokalizálódik. Másodszor a sejteket vagy szöveteket egy fotodinamikus reakció redukálására alkalmas hullámhosszúságú és energiájú fénnyel megvilágítjuk. Ez a fotodinamikus reakció a lizoszóma- és/vagy endoszómamembránok roncsolódását eredményezi, és így a vesiculák tartalma szabaddá válva bejut a citoszolba.
A találmány szerinti megoldás lényegét az 1. ábra mutatja be. Elengedhetetlen feltétel, hogy a fotoszenzibilizátor és a sejtekbe bevezetendő molekula ugyanabban a sejtalkotóban helyezkedjen el. Hangsúlyozni kell azt is, hogy a külsőleg hozzáadott molekulák a lizoszómáktól és az endoszómáktól eltérő intracelluláris sejtalkotókban, például a Golgi-apparátusban és az endoplazmatikus reticulumban akkumulálódhatnak. Ilyen esetekben az ugyanazon sejtalkotókban lokalizálódó fotoszenzibilizáló molekulák fénnyel kombinálva felhasználhatók ugyanazokra a célokra, mint amelyeket a fentiekben említettünk, biztosítva azt, hogy a fénymennyiség és a fotoszenzibilizáló vegyület kombinációja nem károsítja a sejtek működőképességét.
A jelen találmány azon az in vitro bizonyításunkon alapul, amelynek értelmében egy fotoszenzibilizátor, például a TPPS2a (a TPPS2a egy olyan tetrafenil-porfm, amely a szomszédos fenilcsoportokon két szulfonátcsoportot tartalmaz) fénnyel kombinálva a sejtek nagyobb részének elpusztítása nélkül képes kiváltani a funkcionálisan intakt lizoszómatartalom szabaddá válását. Ugyanilyen hatás érhető el akkor is, ha más fotoszenzibilizáló vegyületeket alkalmazunk önmagukban, vagy pedig más olyan molekulákkal vagy részecskékkel társítva/kapcsolva, amelyeket a fotoszenzibilizátoroknak az endoszómákhoz/lizoszómákhoz vagy más intracelluláris sejtalkotókhoz történő irányításához vektorokként
HU 222 984 Bl használunk. Az ilyen vektorok szövet- vagy sejtspecifikus antitestek vagy más olyan ligandok lehetnek, amelyek a sejtfelülethez kötődnek, és így fokozzák a fotoszenzibilizátomak a receptormediált endocitózis útján történő felvételét. Egy másik vektor például a helyreállított LDL-részecskék alkalmazása lehet. A receptormediált endocitózis ezeket a részecskéket is felveszi. A natív LDL-hez történő előzetes kötéshez képest ily módon növelhető az egy LDL-részecskére eső fotoszenzibilizátor molekulák és az LDL-részecskékhez kapcsolódó kötések száma.
A találmány szerinti megoldás nemcsak in vitro alkalmazható, hanem in situ kezeléssel vagy ex vivő kezelés, majd a kezelt sejtek injektálása útján in vivő is felhasználható. Az endoszómákba és lizoszómákba történő felvétel ugyanúgy fokozható, mint ahogyan azt az in vitro kezeléssel kapcsolatban ismertettük. Valamennyi szövet mindaddig kezelhető, amíg a célsejtek felveszik a fotoszenzibilizátort, és a fény megfelelően bejuttatható a fotoszenzibilizátorhoz.
A jelen találmány alapját egy fotoszenzibilizátor és a fény együttesen alkotja. A fotoszenzibilizátomak abszorbeálnia kell a fényt, illetve a fénynek ki kell váltania a fotoszenzibilizátomak egy geijesztett állapotát. Az alkalmazott hullámhossztartomány értéke az adott fotoszenzibilizátortól függ. A megvilágításnak nem kell szükségszerűen monkromatikusnak vagy párhuzamosítottnak (kollimáltnak) lennie. Minden, megfelelő hullámhosszokon emittáló fényforrás felhasználható.
Úgy tűnik, hogy a találmány szerinti fotodinamikus hatás - meglepő módon - semlegesíti a szabaddá váló lizoszómatartalom potenciális citotoxikus hatását. Bebizonyítottuk, hogy az NHIK 3025 sejtek tenyészetében a TPPS2a fotodinamikus hatása alapvetően gátolja a lizoszomális katepszint. Ez a találmány szerinti megoldásnak egy rendkívül váratlan hatása, amely - a molekuláknak az endoszomális/lizoszomális membránok széttörése útján a citoszolba történő bejuttatása után hozzájárul a sejtek életképességének és működőképességének fenntartásához.
Kísérleti példák és klinikai felhasználás
1. Rákkezelés
Számos fotoszenzibilizátor elsődlegesen a neoplasztikus szövetekben akkumulálódik. A tumorokban történő felhalmozódásnak a környező szövetekhez viszonyított szelektivitása két-háromszoros, de ez a szorzó bizonyos esetekben, például az agyszövetekben nagyobb, például harmincszoros is lehet. A találmány szerinti megoldás alkalmazásával bejuttathatok a citoszolba az olyan, a rák kezelésének szempontjából klinikai jelentőségű molekulák is, amelyeket egyébként a citoszol csak igen gyengén vagy egyáltalán nem vesz fel. Az ilyen típusú molekulák egyik példája az alábbiakban részletezett gelonin. Ugyanakkor azonban számos más molekula is felhasználható, akár önmagában, akár pedig más molekulákhoz (például antitestekhez, transzferrinhez, fotoszenzibilizátorhoz, helyreállított LDL-részecskéken lévő apoB-hez) kapcsolva. Az ilyen kombinációs kezelés előnye az, hogy 1. a tumorszövetek mélyebb rétegeiben fokozott citotoxikus hatás lép fel, mivel a lizoszómák és endoszómák széttöredezéséhez a fény kisebb és szubtoxikus dózisai is elegendőek; 2. nagyobb a toxin specifitása, mivel a fotodinamikus terápia csak a tumor helyének területét érinti.
2. Génterápia
A génterápia, azaz géneknek a beteg sejtekbe történő terápiás célú bevitele, ígéretes módszer számos genetikai rendellenesség, például rák, cisztikus fibrosis, cardiovascularis betegségek és nagyszámú egyéb betegség kezelésére. Jelenleg a legnagyobb probléma a transzfekció, amelynek in vivő kell megtörténnie, illetve bizonyos esetekben végrehajtható ex vivő is. Napjainkban a leggyakrabban alkalmazott vektorok, azaz a DNS-molekulálmak a sejtekbe történő bejutását elősegítő struktúrák, különböző típusú vírusok, különösen retro- és adenovírusok. Ezeknek a módszereknek a hátrányai közé tartozik például a vektor gyenge stabilitása, a korlátozott specifitás, a gyenge eredményesség, valamint az, hogy vírus-DNS-t kell humán sejtekbe bejuttatni.
Az endoszómák és/vagy litoszómák fotokémiai úton indukált széttöredezésének segítségével a DNS, akár antiszensz DNS-ként, akár teljes génekként, bevezethető a sejtekbe. A kezelés in vivő végrehajtható.
3. Kísérleti felhasználás
A találmány szerinti megoldás felhasználható rendkívül sokféle molekulának a tenyészetben lévő sejtekbe történő bevezetésére; ilyenek például a gének, az antitestek, a manipulált proteinek és az olyan vegyületek, amelyek egyébként a plazmamembránon általában nem képesek áthatolni.
A találmány szerinti megoldás illusztrálására, illetve részletesebb bemutatásához a mellékelt ábrákat használjuk fel, amelyeket röviden az alábbiakban ismertetünk.
1. ábra: Az ábra azt mutatja be, hogy a találmány szerinti megoldás alkalmazásával hogyan juttathatók be különféle molekulák a celluláris citoszolba. Az I fázisban a fotoszenzibilizátor (S) és a kiválasztott molekulák (M) sejtek általi endocitózisa játszódik le (az ábrán az endocitikus folyamatot iniciáló plazmamembrán invagináció látható). AII fázisban mindkét anyag ugyanabba a vesiculába záródik. Amikor a vesiculát megvilágítjuk, a vesicula membránja széttöredezik, és a vesicula tartalma szabaddá válik.
2. ábra: Az ábra NHIK 3025 sejtekben a geloninnal, TPPS2a jelenlétében vagy TPPS2a nélkül végzett kezelés és 50 másodperces megvilágítás utáni proteinszintézist mutatja be. A szimbólumok jelentése a következő: O, TPPS2a+fény;·, - TPPS2a-fény; V, + TPPS2a-fény; ▼, - TPPS2a+fény. A sejteket 3,2 pg/ml TPPS2a-val és a megadott koncentrációjú geloninnal egy éjszakán keresztül kezeltük. Valamennyi esetben ugyanolyan fénymennyiséget alkalmaztunk. A proteinszintézist úgy határoz5
HU 222 984 Bl tűk meg, hogy 24 órával a megvilágítás után mértük a proteinekbe beépült [3H]leucin mennyiségét.
3. ábra: Az ábra a TPPS2a-val és csak fénnyel (O), illetve 0,2 pg/ml geloninnal kombinációban (V) vagy a 2. ábránál ismertetetteknek megfelelően 2,0 pg/ml geloninnal kezelt sejtek esetén nyert dózis-válasz görbéket mutatja be.
4. ábra: Az ábra NHIK 3025 sejtekben a 3,2 pg/ml
TPPS^-val és fénnyel, 0,2 pg/ml gelonin jelenlétében vagy gelonin nélkül végzett kezelés utáni proteinszintézist mutatja be. A szimbólumok jelentése a következő: ·, TPPS2a-gelonin; O, TPPS2a+gelonin. A sejteket gelonin jelenlétében vagy gelonin nélkül egy éjszakán keresztül reagáltattuk a TPPS^-val, és a jelzett fénymennyiségeket alkalmaztuk. A proteinszintézist a proteinekbe beépült [3H]leucin mennyiségének mérésével határoztuk meg.
5. ábra: Az ábra V79 sejtekben a 25 pg/ml
AlPcS2-vel és fénnyel, 1 pg/ml gelonin jelenlétében vagy gelonin nélkül végzett kezelés utáni proteinszintézist mutatja be. A szimbólumok jelentése a következő: fotoszenzibilizátor+toxinjO, fotoszenzibilizátor.
6. ábra: Az ábra H146 sejtekben a 0,3 pg/ml
TPPS2a-val és fénnyel, 1 pg/ml gelonin jelenlétében vagy gelonin nélkül végzett kezelés utáni proteinszintézist mutatja be. A szimbólumok jelentése azonos az 5. ábránál megadottakkal.
7. ábra: Az ábra V79 sejtekben az 1 pg/ml
TPPS2a-val és fénnyel, 1 pg/ml gelonin jelenlétében vagy gelonin nélkül végzett kezelés utáni proteinszintézist mutatja be. A szimbólumok jelentése azonos az 5. ábránál megadottakkal.
8. ábra: Az ábra NHIK 3025 sejtekben a 3,2 pg/ml
TPPS^-val és fénnyel, 1 pg/ml agrosztin jelenlétében vagy agrosztin nélkül végzett kezelés utáni proteinszintézist mutatja be. A szimbólumok jelentése azonos az 5. ábránál megadottakkal.
9. ábra: Az ábra NHIK 3025 sejtekben a 3,2 pg/ml
TPPS2a-val és fénnyel, 1 pg/ml saporin jelenlétében vagy saporin nélkül végzett kezelés utáni proteinszintézist mutatja be. A szimbólumok jelentése azonos az 5. ábránál megadottakkal.
10. ábra: Az ábra NHIK 3025 sejtekben a
0,25 pg/ml 3-THPP-vel és fénnyel, 1 pg/ml gelonin jelenlétében vagy gelonin nélkül végzett kezelés utáni proteinszintézist mutatja be. A szimbólumok jelentése azonos az 5. ábránál megadottakkal.
11. ábra: Az ábra COS-7 sejtekben a 3 pg/ml
TPPS2a-val és fénnyel, 1 pg/ml gelonin jelenlétében vagy gelonin nélkül végzett kezelés utáni proteinszintézist mutatja be. A szimbólumok jelentése azonos az 5. ábránál megadottakkal.
12. ábra: Az ábra NHIK 3025 sejtekben a geloninnal, TPPS4 jelenlétében vagy TPPS4 nélkül végzett kezelés és 50 másodperces megvilágítás utáni proteinszintézist mutatja be. A szimbólumok jelentése a következő: , TPPS4+fény; ▼, - TPPS4-fény; ó, + RPPS4-fény. A sejteket 75 pg/ml TPPS4gyel és a megadott koncentrációjú geloninnal egy éjszakán keresztül kezeltük. Valamennyi esetben ugyanolyan fénymennyiséget alkalmaztunk. A proteinszintézist úgy határoztuk meg, hogy 24 órával a megvilágítás után mértük a proteinekbe beépült [3H]leucin mennyiségét.
13. ábra: Az ábra OHS-sejtekben mutatja be a proteinszintézist a következő kezelés után: 18 óra TPPS2a-val, majd 4 óra TPPS^ nélkül és 3 pg/ml gelonin jelenlétében vagy gelonin nélkül a megvilágítás előtt. A négyórás időtartam alatt a lizoszóma proteindegradáció megakadályozása érdekében a sejteket 50 pM chloroquine-ban vagy 10 mM ammónium-kloridban inkubáltuk.
A következőkben az alábbi, nem korlátozó jellegű példákon keresztül mutatjuk be részletesebben a találmány szerinti megoldást.
1. példa
Ez a példa azt kívánja bemutatni, hogy a fotodinamikus kezelés hatására felszabadul és a citoszolba bejut egy, a proteinszintézist gátló vegyület.
Számos növényi toxin oly módon öli el a sejteket, hogy a toxin belép a citoszolba, és enzimatikusan inaktiválja a riboszomális funkciót. A legtöbb citotoxikus növényi protein két, diszulfidhidakkal összekapcsolt, A és B polipeptidláncból áll. A B lánc funkciója az, hogy a proteint hozzákösse a sejtek felületéhez, míg az A lánc hordozza az enzimatikus aktivitást. A gelonin egy olyan növényi toxin, amely sejtmentes rendszerekben hatásosan gátolja a proteinszintézist, viszont intakt sejtekre csak gyenge hatást fejt ki, illetve az intakt sejtekkel szemben hatástalan. Az intakt sejtek esetén tapasztalt gyenge citotoxikus hatás feltehetően annak a következménye, hogy a geloninban nincsen B lánc.
NHIK 3025 sejteket (I) általános képletű TPPS2aval és geloninnal, együttesen vagy egymástól elkülönítve inkubáltunk 18 órán keresztül, majd ezt követően a sejteket egy órán keresztül TPPS2a-ban és geloninmentes médiumban inkubáltuk, mielőtt a sejteket megvilágítottuk.
A nevezett sejteket a Norvégián Rádium Hospitalban fejlesztették ki, és ott, a Dept. 1 of Biophisicsnél, név szerint Dr. Kristian Bergnél (Montebello, N-U310, Oslo, Norvégia) rendelkezésre állnak.
A proteinszintézist a megvilágítás után 24 órával mértük. A fotodinamikus kezelés, amely önmagában a sejtek
HU 222 984 Bl
10-20%-át elpusztítja, a proteinszintézist 30-40%-kal csökkentette (2. ábra). Amint az a 2. ábrán látható, a gelonin fény jelenlétében vagy fény nélkül bizonyos mértékig önmagában is gátolja a proteinszintézist. Viszont a PDT és gelonin kombináció IC50=0,2 pg/ml geloninkoncentráció mellett teljes mértékben gátolja a proteinszintézist. Ez azt jelzi, hogy a fotodinamikus kezelés nélkül a gelonin lényegében nem jut be a citoszolba. Ez a példa azt jelzi, hogy a TPPS2a és a fény alkalmas funkcionálisan intakt makromolekuláknak a sejtcitoszolba történő bejuttatására.
á2 (I)
TPPS4: — SO3-;
TPPS2C* ^-1ί3 = ^θ3 —Í R-2t4 = Hj
TPPS2a: R1,2=SO3-;R3i4=H;
TPPSp Rj=SO3-; R2_4=H.
2. példa
Ez a példa azt mutatja be, hogy hogyan használhatjuk fel a festék által abszorbeált hullámhosszúságú fény mennyiségét a túlélő sejtfrakció méretének meghatározásához.
NHIK 3025 sejteket az 1. példában ismertetetteknek megfelelően TPPS2a-val és geloninnal inkubáltunk.
A sejtek klonogén túlélését a megvilágítás után 24 órával mértük. Amint az a 3. ábrán látható, a TPPS^val és a fénnyel gyakorlatilag az összes sejtet elpusztítottuk, amikor növeltük a megvilágítást. Ez összhangban van a nemkívánatos sejtek PDT-vel történő elpusztítására vonatkozó korábbi megfigyelésekkel. Ha a rendszerhez gelonint adunk, a túlélési arány csökken, ami annak a következménye, hogy a gelonin gátlóhatást fejt ki a proteinszintézisre, jelezve azt, hogy a gelonin szabaddá válva bejut a citoszolba. A hozzáadott gelonin koncentrációjának növelésével több gelonin jut be a citoszolba, amit a sejtek fokozott fényinaktivációs érzékenysége jelez.
A találmány szerinti megoldás ennek megfelelően lehetőséget kínál minden egyes esetben egy adott túlélési szint beállítására, valamint a fotoszenzibilizáló vegyület és a megvilágítás olyan kombinációjának a megválasztására, amely a sejtek kívánt frakcióját életben tartja.
3. példa
Ez a példa azt mutatja be, hogy a fénymennyiségek változtatásával hogyan szabályozható a citoszolban a szabaddá vált geloninnak a relatív proteinszintézis által meghatározott mennyisége.
NHIK 3025 sejteket az 1. példában ismertetetteknek megfelelően TPPS2a-val és geloninnal inkubáltunk.
A 4. ábrán látható, hogy az 50 másodperces toxikus dózis feletti fénymennyiségek növelték a citoszolban a relatív proteinszintézissel meghatározott geloninfrakciót.
A 4-11. példa különböző sejtvonalakon, valamint különböző fotoszenzibilizátorokkal és toxinokkal mutatja be a találmány szerinti eljárás alkalmazását. A fotoszenzibilizátorok intracelluláris lokációja lizoszomális (TPPS4, TPPS2a, AlPcS2a) és extralizoszomális (3.HTPP). A leírásban alkalmazott rövidítések jelentései a következők: AlPcS2a=a szomszédos fenilcsoportokon két szulfonátcsoporttal rendelkező alumínium-ftalocianin; TPPS4=négy szulfonátcsoporttal rendelkező mezotetrafenil-porfin; TPPS2a=a szomszédos fenilcsoportokon két szulfonátcsoporttal rendelkező zwezo-tetrafenil-porfin; 3-THPP=tetra(hidroxi-fenil)-porfin. A következő sejtvonalakat alkalmazzuk: NHIK 3025=humán cervixből in situ előállított karcinómasejtek; V79 (ATCC CCL93)=kínaihörcsög-tüdőfíbroblasztok; COS-7 (ATCC CRL-1651)=SV40-transzformált afrikai kabócamajom-vesesejtek (CV1 emberszabású majomszerű sejtek); OHS=humán osteosarcomasejtek; és H146 (ATCC HTB-173)=kis sejtes tüdőráksejtek. Valamennyi kísérletet az 1. példában ismertetetteknek megfelelően hajtottuk végre. Az OHS-t a Norvégián Rádium Hospitalban fejlesztették ki, és azok ott bárki számára rendelkezésre állnak, a Dept. of Biophisicsnél dr. Kristian Bergnél (Montebello, NO31U Oslo, Norvégia).
4. példa
Ez a példa az AlPcS2a fotoszenzibilizátor V79 sejtekben, taxinként geloninnal és gelonin nélkül történő alkalmazására vonatkozik (5. ábra). Egy specifikus fénymennyiség (besugárzási idő) megválasztásával azt igazoljuk, hogy taxin nélkül csak nagyon kis sejtkárosodás alakul ki, amit a proteinszintézisben tapasztalt csekély mértékű csökkenés bizonyít, ugyanakkor geloninnal a proteinszintézis rendkívül nagy mértékben csökken. Ez azt mutatja, hogy a geloninmolekuláknak a sejtekbe a lizoszómákon keresztül történő bejutása még úgy sem okozza a sejtek lényeges károsodását, hogy az AlPcS2a intracelluláris lokalizációja lizoszomális [Moan, J., Berg, K., Anholt, H., and Madslien, K., „Sulfonated alumínium phtalocyanines as sensitisers fór photochemotherapy. Effects of small light doses on localization, dye fluorescence and photosensitivity in V79 cells.”, Int. J. Cancer, 58, 865-870 (1994)].
5. példa
Ez a példa azt mutatja be, hogy a gelanin toxinnak a H146 sejtekbe történő transzportja nem befolyásolja
HU 222 984 Bl hátrányosan a sejtek életképességét (6. ábra). Ismert, hogy a TPPS2a a sejtben lizoszomálisan lokalizált [Berg., K., Western, A., Bommer, J., and Moan, J., „Intracellular localisation of sulfonated meso-tetraphenylporphines in a humán carcinoma cell line.”, Photochem. Photobiol., 52, 481-487 (1990); Berg, K., Madslien, K., Bommer, J. C., Oftebro, R., Winkelman, J. C., and Moan, J., „Light induced relocalization os sulfonated meso-tetraphenylporphines in NHIK 3025 cells and effects os dose ffactionation.”, Photochem. Photobiol., 53, 203-210 (1991); Berg, K. and Moan, J., „Lysosomes as photochemical targets.”, Int. J. Cancer, 59, 814-822 (1994)].
6. példa
A példa a találmány szerinti eljárás V79 sejtekben, TPPS2a mint fotoszenzibilizátor alkalmazásával történő alkalmazását mutatja be (7. ábra).
7. példa
Ebben a példában az agrosztin toxint TPPS2a fotoszenzibilizátor alkalmazásával NHIK 3025 sejtekbe transzportáljuk (8. ábra).
8. példa
Ebben a példában a saporin toxint TPPS2a fotoszenzibilizátor alkalmazásával NHIK 3025 sejtekbe transzportáljuk (9. ábra).
9. példa
Összehasonlító példa. Ha egy olyan fotoszenzibilizátort (3-THPP) alkalmazunk, amely nem jut be az encocitikus vesiculumokba (azaz az endoszómákba és lizoszómákba) [Peng, Q., Danielsen, Η. E., and Moan, J., „Potent photosenzitizers fór photodynamic therapy of cancer: Applications of confocal laser scanning microscopy fór fluorescence detection of photosensitizing fluorophores in neoplactic cells and tissues.” Proceedings of Microscopy, Holography, and Interferometry in Biomedicine, SPIE, Vol. 2083:71-82 (1994)], a 3HTPP-nek a proteinszintézisre gyakorolt hatásában nincs észrevehető különbség abból a szempontból, hogy a folyamat gelonin jelenlétében vagy pedig gelonin nélkül játszódik le (10. ábra). Tehát a gelonin nem jut be a sejtek citoszoljába.
10. példa
Ebben a példában a gelonint TPPS2a fotoszenzibilizátor alkalmazásával COS-7 sejtekbe transzportáljuk a találmány szerinti megoldásnak megfelelően (11. ábra).
11. példa
Ebben a példában a gelonint TPPS2a fotoszenzibilizátor alkalmazásával OHS-sejtekbe transzportáljuk a találmány szerinti megoldásnak megfelelően (13. ábra). Ebben a sejtvonalban jelentős proteindegradáció történik a lizoszómákban; ezt a proteindegradációt a jelen példában úgy gátoljuk, hogy a sejteket 4 órán keresztül 50 μΜ chloquine-ban vagy 10 mM ammónium-kloridban inkubáljuk.
12. példa
Az 1. példához hasonlóan, ebben a példában azt mutatjuk be, hogy a geloninkoncentráció függvényében miként jut be a gelonin az NHIK 3025 sejtekbe, amikor a sejteket TPPS4-gyel és a gelonin különböző koncentrációival inkubáltuk, majd megvilágítottuk (12. ábra). Amikor a sejteket csak geloninnal inkubáltuk, majd megvilágítottuk, vagy pedig TPPS4-gyel és geloninnal inkubáltuk, de megvilágítást nem alkalmaztunk, a gelonin nem jutott be a sejtekbe.
A példák azt igazolják, hogy különféle molekulák sokféle sejt sejtcitoszoljába bejuttathatok különféle fotoszenzibilizátorok és fénymennyiségek alkalmazásával. A sejteket el nem ölő fotoszenzibilizátorok és fénymennyiségek alkalmazása után az exogén molekulák mindaddig bejuttathatok a sejtcitoszolba, amíg a bevezetendő molekulák és a fotoszenzibilizátorok ugyanazokba a sejtalkotókba transzportálódnak. A biológiai komponensekre gyakorolt fotokémiai hatást az adott összetevőben lévő fotoszenzibilizátor mennyisége, az alkalmazott fénymennyiség és a fényforrás spektrális tulajdonságai határozzák meg. A tenyészetben lévő sejtekre gyakorolt fotokémiai hatást legjobban úgy értékelhetjük, hogy a kezelés után 24 órával vagy még hosszabb idő elteltével a sejtek túlélését mérjük. Huszonnégy órával a kezelés után a sejtpusztulásra gyakorolt hatás és a proteinszintézisre gyakorolt hatás között szoros összefüggés áll fenn.
Claims (26)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás molekulák in vitro bevezetésére élő sejtek citoszoljába fotoszenzibilizáló vegyületek és a fotoszenzibilizáló vegyületek által abszorbeált fény alkalmazásával, azzal jellemezve, hogya) az élő sejtekhez hozzáadjuk a fotoszenzibilizáló vegyületet és a bejuttatandó molekulá(ka)t, amely(ek) adott esetben rögzítve lehet(nek) azonos vagy eltérő hordozómolekulákhoz;b) ezután ezeket endolitikusan vagy más módon átjuttatjuk az endoszómákba, lizoszómákba vagy más, intracelluláris membránnal határolt sejtrészlegekbe; majdc) a sejteket a fotoszenzibilizáló vegyület abszorpciós spektrumának megfelelő hullámhosszúságú fénynek tesszük ki változó dózisokban a kívánt túlélési aránytól függően, így az endoszomális, lizoszomális vagy más intracelluláris sejtalkotó membránokat szétzúzzuk, és a citoszolba bejuttatandó molekulákat a citoszolban kibocsátjuk, amelynek során a fénnyel aktivált fotoszenzibilizáló vegyület maga nem pusztítja el a sejtek többségét.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett hordozómolekulákat rögzítjük mind a citoszolban kibocsátandó vegyűlethez, mind a fotoszenzibilizáló vegyűlethez; vagy legalább egy hordozót rögzítünk a citoszolban kibocsátandó vegyűlethez, és egy másik, hasonló vagy eltérő hordozót rögzítünk a fotoszenzibilizáló vegyűlethez.HU 222 984 Bl
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a citoszolban az alábbi molekulák valamelyikét bocsátjuk ki: DNS, oligo(dezoxi)nukleotidok, mRNS, antiszensz DNS, cukrok, fehéqék, peptidek, membránon át nem hatoló gyógyszerek, egyéb, membránon át nem hatoló vegyületek, valamint az említett molekulák kovalensen vagy nem kovalensen kötött kombinációi.
- 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a citoszolba fehérjéket vagy peptideket bocsátunk ki.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a citoszolban fehéqe-szintetikusaktivitást módosító anyagokat bocsátunk ki.
- 6. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a citoszolban gelonint, szeporint vagy agrosztint, vagy ezek valamely kombinációját bocsátjuk ki.
- 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy fotoszenzibilizáló vegyületként a következő vegyületek valamelyikét adjuk az élő sejtekhez: porfirinok, ftalocianinok, purpurinok, klozinok, benzoporfirinok, naftalocianinok, kationos festékek, tetraciklinek és lizoszomatrop gyenge bázisok, valamint származékaik.
- 8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy fotoszenzibilizáló vegyületként a szomszédos fenilcsoportokon két szulfonátcsoporttal rendelkező tetrafenil-porfirint, azaz TPPS2a-t, vagy négy szulfonátcsoporttal rendelkező zwezo-tetrafenil-porfint, vagyis TPPS4-et, vagy a szomszédos fenilcsoportokon két szulfonátcsoporttal rendelkező alumínium-ftalocianint, vagyis AlPcS^-t, vagy mindezek bármely kombinációját adjuk az élő sejtekhez.
- 9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hordozómolekulákként helyre irányuló molekulákat rögzítünk, amelyek megkönnyítik a fotoszenzibilizáló vegyület vagy a citoszolban kibocsátandó molekulák felvételét.
- 10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a túlélő sejtek hányadosát a fény mennyiségének a fotoszenzibilizáló vegyület koncentrációjának figyelembevételével történő megválasztásával szabályozzuk.
- 11. Készítmény neoplasztikus vagy más celluláris folyamatok in vitro módosítására meleg vérű állatokban vagy sejttenyészetekben, azzal jellemezve, hogy tartalmaz egy, a citoszolban kibocsátandó, membránon át nem hatoló vegyületet, és egy fotoszenzibilizáló vegyületet, amely fénnyel történő aktiválás hatására szétzúzza az intracelluláris sejtmembránokat; a nevezett komponensek adott esetben hozzákapcsolhatók azonos vagy különböző hordozómolekulákhoz annak érdekében, hogy megkönnyítsék az átjutást az intracelluláris sejtrészlegekbe, például endoszómákba, lizoszómákba vagy más intracelluláris részlegekbe.
- 12. A 11. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az említett hordozómolekulák rögzítve vannak mind a citoszolban kibocsátandó, celluláris folyamatokat módosító vegyülethez, mind a fotoszenzibilizáló vegyülethez; vagy legalább egy hordozó van rögzítve a citoszolban kibocsátandó vegyülethez, és egy másik, hasonló vagy eltérő hordozó van rögzítve a fotoszenzibilizáló vegyülethez.
- 13. A 11. vagy 12. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az említett, a citoszolban kibocsátandó vegyület egy antineoplasztikus vegyület.
- 14. A 13. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az antineoplasztikus vegyület gelonin.
- 15. All. vagy 12. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a citoszolban kibocsátandó vegyület DNS, oligo(dezoxi)nukleotidok, mRNS, antiszensz DNS, cukrok, fehérjék, peptidek, membránon át nem hatoló gyógyszerek, más, membránon át nem hatoló molekulák valamelyike, vagy az említett molekulák valamely kovalensen vagy nem kovalensen összekapcsolt kombinációja.
- 16. A 11-15. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a fotoszenzibilizáló vegyületek porfirinok, ftalocianinok, purpurinok, klorinok, benzoporfirinok, naftalocianinok, kationos festékek, tetraciklinek és lizoszomatrop gyenge bázisok, vagy mindezek származékai.
- 17. A 16. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a fotoszenzibilizáló vegyületet tetrafenilporfinként szulfonátcsoporttal szomszédos fenilcsoportok képezik.
- 18. A 11-17. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a hordozómolekula helyre irányuló molekula, amely megkönnyíti a fotoszenzibilizáló vegyület vagy a citoszolban kibocsátandó molekulák felvételét.
- 19. A 11-18. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy rákterápiában alkalmazható.
- 20. A 11., 12. vagy 16-18. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az említett, a citoszolban kibocsátandó vegyület DNS, oligo(dezoxijnukleotid, mRNS vagy antiszensz DNS, vagy az említett molekulák kovalensen vagy nem kovalensen kötött kombinációi, génterápiákon való alkalmazáshoz.
- 21. Készlet az 1-9. igénypont szerinti eljárás kivitelezésére, azzal jellemezve, hogy tartalmazza a fotoszenzibilizáló vegyületeket, a szállítandó molekulákat, és kívánt esetben tartalmaz olyan hordozóvegyületeket, amelyek megkönnyítik ezeknek a molekuláknak a szállítását.
- 22. Fotoszenzibilizáló vegyület alkalmazása molekulák élő sejtek citoszoljába in vitro bevezetésére szolgáló készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy a nevezett alkalmazás az alábbi lépésekből áll:a) az élő sejtekhez hozzáadjuk a fotoszenzibilizáló vegyületet és a bejuttatandó molekulá(ka)t, amelyek adott esetben rögzítve lehetnek azonos vagy eltérő hordozómolekulákhoz;b) ezután ezeket endolitikusan vagy más módon átjuttatjuk az endoszómákba, lizoszómákba vagy más, intracelluláris membránnal határolt sejtrészlegekbe; majdc) a sejteket a fotoszenzibilizáló vegyület abszorpciós spektrumának megfelelő hullámhosszúságú fénynek tesszük ki változó dózisokban a kívánt túl9HU 222 984 Bl élési aránytól függően, így az endoszomális, lizoszomális vagy más intracelluláris sejtalkotó membránokat szétzúzzuk, és a citoszolba bejuttatandó molekulákat a citoszolban kibocsátjuk, amelynek során a fénnyel aktivált fotoszenzibilizáló vegyü- 5 let maga nem pusztítja el a sejtek többségét.
- 23. A 22. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az említett hordozómolekulák, szállítandó molekulák és fotoszenzibilizáló molekulák a 2-9. igénypontok bármelyikében meghatározottak.
- 24. A 22. vagy 23. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a túlélő sejtek hányadosát a fény mennyiségének a fotoszenzibilizáló vegyület koncentrációjának figyelembevételével történő megválasztásával szabályozzuk.
- 25. A 22-24. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás génterápiához vagy rák kezeléséhez.
- 26. Az 1. igénypont szerinti eljárás alkalmazása rákkal kapcsolatos állapotok kezelésére (alkalmas gyógy10 szer előállítására).
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO943327A NO180167C (no) | 1994-09-08 | 1994-09-08 | Fotokjemisk fremgangsmåte til å innföre molekyler i cellers cytosol |
| PCT/NO1995/000149 WO1996007432A1 (en) | 1994-09-08 | 1995-09-04 | Transfer of molecules into the cytosol of cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT77469A HUT77469A (hu) | 1998-05-28 |
| HU222984B1 true HU222984B1 (hu) | 2004-01-28 |
Family
ID=19897382
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9800153A HU222984B1 (hu) | 1994-09-08 | 1995-09-04 | Eljárás molekulák in vitro bevezetésére élő sejtek citoszoljába, fotoszenzibilizáló vegyület alkalmazásával |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5876989A (hu) |
| EP (1) | EP0783323B1 (hu) |
| JP (1) | JP4148328B2 (hu) |
| KR (2) | KR100529967B1 (hu) |
| CN (1) | CN1222309C (hu) |
| AT (1) | ATE209507T1 (hu) |
| AU (1) | AU700797B2 (hu) |
| BR (1) | BRPI9508825B8 (hu) |
| CA (1) | CA2199290C (hu) |
| CZ (1) | CZ65897A3 (hu) |
| DE (1) | DE69524238T2 (hu) |
| ES (1) | ES2163527T3 (hu) |
| FI (1) | FI121328B (hu) |
| HK (1) | HK1004110A1 (hu) |
| HU (1) | HU222984B1 (hu) |
| MX (1) | MX9701676A (hu) |
| NO (1) | NO180167C (hu) |
| NZ (2) | NZ293008A (hu) |
| PT (1) | PT783323E (hu) |
| WO (1) | WO1996007432A1 (hu) |
Families Citing this family (83)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NO180167C (no) | 1994-09-08 | 1997-02-26 | Photocure As | Fotokjemisk fremgangsmåte til å innföre molekyler i cellers cytosol |
| US6210356B1 (en) * | 1998-08-05 | 2001-04-03 | Ekos Corporation | Ultrasound assembly for use with a catheter |
| US6176842B1 (en) * | 1995-03-08 | 2001-01-23 | Ekos Corporation | Ultrasound assembly for use with light activated drugs |
| DE69840046D1 (de) * | 1997-03-19 | 2008-11-06 | Lucid Inc | Zellchirurgie unter benutzung konfokaler mikroskopie |
| US6676626B1 (en) | 1998-05-01 | 2004-01-13 | Ekos Corporation | Ultrasound assembly with increased efficacy |
| US6582392B1 (en) * | 1998-05-01 | 2003-06-24 | Ekos Corporation | Ultrasound assembly for use with a catheter |
| US6835393B2 (en) * | 1998-01-05 | 2004-12-28 | University Of Washington | Enhanced transport using membrane disruptive agents |
| US6399769B1 (en) * | 1998-01-20 | 2002-06-04 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Method of making sulfanatophenyl substituted porphines |
| GB9905911D0 (en) * | 1999-03-15 | 1999-05-05 | Photocure As | Method |
| AU6871800A (en) * | 1999-09-09 | 2001-04-17 | Center For Advanced Science And Technology Incubation, Ltd. | Method of piercing membrane and apparatus therefor |
| US20040220100A1 (en) * | 2000-07-21 | 2004-11-04 | Essentia Biosystems, Inc. | Multi-component biological transport systems |
| IL154044A0 (en) * | 2000-07-21 | 2003-07-31 | Essentia Biosystems Inc | Multi-component pharmaceutical compositions containing a complex of a positively charged backbone and a negatively charged backbone and methods for the preparation thereof |
| BRPI0115794B1 (pt) * | 2000-11-29 | 2015-09-15 | Pci Biotech As | método para introduzir uma molécula em uma célula, composição farmacêutica, e, uso de uma molécula de transferência associada com um veículo viral e um agente fotossensibilizante ou de uma célula |
| ES2383516T3 (es) * | 2000-11-29 | 2012-06-21 | Pci Biotech As | Internalización fotoquímica para suministrar moléculas en el citosol |
| US20020098472A1 (en) * | 2000-11-30 | 2002-07-25 | Erlach Julian Van | Method for inserting a microdevice or a nanodevice into a body fluid stream |
| US20020137901A1 (en) * | 2001-01-22 | 2002-09-26 | Cavanaugh Philip Gerard | Synthesis, and photodynamic therapy-mediated anti-cancer, and other uses of chlorin e6-transferrin |
| AU2002250034A1 (en) * | 2001-02-08 | 2002-08-19 | Sequitur, Inc. | Methods of light activated release 0f ligands from endosomes |
| CN1313158C (zh) * | 2001-06-20 | 2007-05-02 | 大日本住友制药株式会社 | 促进核酸转移的方法 |
| GB0121023D0 (en) * | 2001-08-30 | 2001-10-24 | Norwegian Radium Hospital Res | Compound |
| EP1647232B1 (en) | 2001-12-03 | 2011-08-17 | Ekos Corporation | Catheter with multiple ultrasound radiating members |
| US7141044B2 (en) * | 2001-12-11 | 2006-11-28 | Ekos Corporation | Alternate site gene therapy |
| ATE529512T1 (de) | 2002-02-01 | 2011-11-15 | Life Technologies Corp | Doppelsträngige oligonukleotide |
| EP1572902B1 (en) * | 2002-02-01 | 2014-06-11 | Life Technologies Corporation | HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES |
| US20060009409A1 (en) | 2002-02-01 | 2006-01-12 | Woolf Tod M | Double-stranded oligonucleotides |
| US8226629B1 (en) | 2002-04-01 | 2012-07-24 | Ekos Corporation | Ultrasonic catheter power control |
| US20040248094A1 (en) * | 2002-06-12 | 2004-12-09 | Ford Lance P. | Methods and compositions relating to labeled RNA molecules that reduce gene expression |
| GB0215534D0 (en) * | 2002-07-04 | 2002-08-14 | Ecole Polytech | Selective photochemotherapy using oligonucleotide targeting agents |
| US20040029275A1 (en) * | 2002-08-10 | 2004-02-12 | David Brown | Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs |
| US6921371B2 (en) * | 2002-10-14 | 2005-07-26 | Ekos Corporation | Ultrasound radiating members for catheter |
| JP2006517790A (ja) * | 2003-01-09 | 2006-08-03 | インヴィトロジェン コーポレーション | ポリペプチド−核酸複合体の細胞の送達および活性化 |
| US7332477B2 (en) * | 2003-07-10 | 2008-02-19 | Nitto Denko Corporation | Photocleavable DNA transfer agent |
| EP1667732B1 (en) * | 2003-09-29 | 2010-04-21 | Nitto Denko Corporation | Biodegradable polyacetals for in vivo polynucleotide delivery |
| WO2005061717A1 (ja) * | 2003-12-19 | 2005-07-07 | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | 新規な核酸導入法 |
| US9211248B2 (en) | 2004-03-03 | 2015-12-15 | Revance Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for topical application and transdermal delivery of botulinum toxins |
| AU2005218665A1 (en) | 2004-03-03 | 2005-09-15 | Revance Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for topical application and transdermal delivery of botulinum toxins |
| SG150570A1 (en) | 2004-03-03 | 2009-03-30 | Revance Therapeutics Inc | Compositions and methods for topical diagnostic and therapeutic transport |
| GB0415263D0 (en) * | 2004-07-07 | 2004-08-11 | Norwegian Radium Hospital Res | Method |
| US20060094781A1 (en) * | 2004-11-04 | 2006-05-04 | Syneron Medical Ltd. | Method of treating extracellular matrix |
| FR2877943B1 (fr) * | 2004-11-16 | 2008-09-05 | Univ De Coimbra | Nouveaux derives de porphyrine, notamment chlorines et/ou bacteriochlorine, et leurs applications en therapie photodynamique |
| US20090247464A1 (en) | 2005-03-03 | 2009-10-01 | Revance Therapeutics, Inc. | Compositions and Methods for Topical Application and Transdermal Delivery of an Oligopeptide |
| BRPI0608249A2 (pt) | 2005-03-03 | 2009-12-08 | Revance Therapeutics Inc | formulação, método para aplicação tópica e kit para distribuição transdérmica de toxina botulìnica |
| US7674452B2 (en) * | 2005-03-16 | 2010-03-09 | Nitto Denko Corporation | Polymer coating of cells |
| BRPI0501037B8 (pt) * | 2005-03-18 | 2021-07-27 | Fund De Amparo A Pesquisa Do Estado De Sao Paulo | uso de crotamina e composição |
| EP1948230A4 (en) * | 2005-11-17 | 2010-03-10 | Revance Therapeutics Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR TOPICAL APPLICATION AND TRANSDERMAL DELIVERY OF BOTULIN TOXINES WITH A REDUCED NUMBER OF NON-TOXIC PROTEINS |
| WO2007109584A1 (en) * | 2006-03-16 | 2007-09-27 | University Of Washington | Temperature-and ph-responsive polymer compositions |
| GB0613753D0 (en) * | 2006-07-11 | 2006-08-23 | Norwegian Radium Hospital Res | Method |
| EP2099496A2 (en) * | 2006-12-08 | 2009-09-16 | Massachusetts Institute of Technology | Delivery of nanoparticles and/or agents to cells |
| US20080226551A1 (en) * | 2006-12-29 | 2008-09-18 | Revance Therapeutics, Inc. | Transport Molecules Using Reverse Sequence HIV-TAT Polypeptides |
| MX2009007068A (es) * | 2006-12-29 | 2009-07-10 | Revance Therapeutics Inc | Composiciones y metodos de aplicacion topica y suministro transdermico de toxinas botulinicas estabilizadas con fragmentos de polipeptido provenientes de hiv-tat. |
| US10182833B2 (en) | 2007-01-08 | 2019-01-22 | Ekos Corporation | Power parameters for ultrasonic catheter |
| US7981688B2 (en) | 2007-03-08 | 2011-07-19 | University Of Washington | Stimuli-responsive magnetic nanoparticles and related methods |
| WO2009002881A1 (en) | 2007-06-22 | 2008-12-31 | Ekos Corporation | Method and apparatus for treatment of intracranial hemorrhages |
| WO2009079415A1 (en) * | 2007-12-14 | 2009-06-25 | Ekos Corporation | Ultrasound pulse shaping |
| GB0811955D0 (en) | 2008-06-30 | 2008-07-30 | Pci Biotech As | Method |
| US8426214B2 (en) * | 2009-06-12 | 2013-04-23 | University Of Washington | System and method for magnetically concentrating and detecting biomarkers |
| GB0914286D0 (en) | 2009-08-14 | 2009-09-30 | Pci Biotech As | Method |
| GB0914287D0 (en) | 2009-08-14 | 2009-09-30 | Pci Biotech As | Compositions |
| US9080933B2 (en) | 2009-11-09 | 2015-07-14 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Stimuli-responsive polymer diagnostic assay comprising magnetic nanoparticles and capture conjugates |
| US20110117668A1 (en) * | 2009-11-09 | 2011-05-19 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Self-powered smart diagnostic devices |
| GB201208548D0 (en) * | 2012-05-15 | 2012-06-27 | Pci Biotech As | Compound and method |
| US20160040128A1 (en) | 2013-03-15 | 2016-02-11 | Pci Biotech As | Method |
| GB2517707B (en) * | 2013-08-28 | 2020-09-02 | Pci Biotech As | A device for light-induced rupture of endocytic vesicles to effect the delivery of an antigen |
| ES2959398T3 (es) | 2013-08-28 | 2024-02-26 | Pci Biotech As | Compuesto y método para vacunación e inmunización |
| US10973896B2 (en) | 2014-04-11 | 2021-04-13 | Pci Biotech As | Treatment or prevention of melanoma using photochemical internalization of a melanoma antigen |
| CA2959207A1 (en) | 2014-08-28 | 2016-03-03 | Pci Biotech As | Expression of an antigenic molecule on the surface of a cell using a photosensitizing agent and a cytokine |
| GB201503776D0 (en) | 2015-03-05 | 2015-04-22 | Pci Biotech As | Compound and method |
| CN107708581B (zh) | 2015-06-10 | 2021-11-19 | Ekos公司 | 超声波导管 |
| JP2019530718A (ja) | 2016-10-14 | 2019-10-24 | ピーシーアイ バイオテック エイエス | ゲムシタビンのＴＰＣＳ−２ａ誘導性光化学的内在化を用いた胆管癌の処置 |
| GB201718631D0 (en) | 2017-11-10 | 2017-12-27 | Pci Biotech As | Method |
| GB201801169D0 (en) * | 2018-01-24 | 2018-03-07 | Pci Biotech As | Method |
| JP2021531345A (ja) | 2018-07-16 | 2021-11-18 | ディーシープライム・ベスローテン・フェンノートシャップDcprime B.V. | 腫瘍ワクチン接種に用いるための組合せ製品 |
| WO2020217226A1 (en) | 2019-04-25 | 2020-10-29 | Dcprime B.V. | Methods of tumor vaccination |
| CN110711249B (zh) * | 2019-09-19 | 2020-10-27 | 北京化工大学 | 一种溶酶体膜包覆纳米颗粒的制备方法 |
| US20210322471A1 (en) | 2020-03-27 | 2021-10-21 | Dcprime B.V. | In vivo use of modified cells of leukemic origin for enhancing the efficacy of adoptive cell therapy |
| US12091681B2 (en) | 2020-03-27 | 2024-09-17 | Mendus B.V. | Ex vivo use of modified cells of leukemic origin for enhancing the efficacy of adoptive cell therapy |
| CN114163508B (zh) * | 2020-09-11 | 2024-07-16 | 王月志 | 能破坏细胞的氨基酸序列及相关核苷酸序列和相关的应用 |
| US20220168407A1 (en) | 2020-11-05 | 2022-06-02 | Dcprime B.V. | Use of tumor-independent antigens in immunotherapies |
| GB202101726D0 (en) | 2021-02-08 | 2021-03-24 | Pci Biotech As | Method |
| EP4304633A1 (en) | 2021-03-12 | 2024-01-17 | Mendus B.V. | Methods of vaccination and use of cd47 blockade |
| GB202115451D0 (en) | 2021-10-27 | 2021-12-08 | Pci Biotech As | Method |
| WO2024068795A1 (en) | 2022-09-27 | 2024-04-04 | Pci Biotech As | Method for releasing viral vectors |
| GB202301312D0 (en) | 2023-01-30 | 2023-03-15 | Pci Biotech As | Method and product |
| GB202404168D0 (en) | 2024-03-22 | 2024-05-08 | Pci Biotech As | Method |
Family Cites Families (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU563827B2 (en) | 1982-07-01 | 1987-07-23 | Millipore Corp. | Filtration apparatus |
| US4649151A (en) * | 1982-09-27 | 1987-03-10 | Health Research, Inc. | Drugs comprising porphyrins |
| US4704255A (en) | 1983-07-15 | 1987-11-03 | Pandex Laboratories, Inc. | Assay cartridge |
| US5066274A (en) * | 1985-04-30 | 1991-11-19 | Nippon Petrochemicals Company, Ltd. | Tetrapyrrole therapeutic agents |
| US5076950A (en) | 1985-12-20 | 1991-12-31 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Magnetic composition for particle separation |
| US4895706A (en) | 1986-10-28 | 1990-01-23 | Costar Corporation | Multi-well filter strip and composite assemblies |
| US5095030A (en) * | 1987-01-20 | 1992-03-10 | University Of British Columbia | Wavelength-specific cytotoxic agents |
| HU204856B (en) | 1987-08-12 | 1992-02-28 | Orszagos Mueszaki Fejlesztesi | Process for releasing cell mixtures and tissues from undesired populations and for producing monoclonal antibody - hematoporphyrin conjugates |
| NO891491L (no) * | 1987-08-12 | 1989-04-11 | Peter Nemeth | Prosedyre for befrielse av celleblandinger og vev for uoenskede populasjoner. |
| GB8721108D0 (en) * | 1987-09-08 | 1987-10-14 | Salford University Of | Liposomes |
| US5284647A (en) * | 1988-03-18 | 1994-02-08 | Schering Aktiengesellschaft | Mesotetraphenylporphyrin complex compounds, process for their production and pharmaceutical agents containing them |
| US5256532A (en) | 1988-05-02 | 1993-10-26 | Zynaxis Technologies, Inc. | Methods, reagents and test kits for determination of subpopulations of biological entities |
| US4925736A (en) * | 1988-07-06 | 1990-05-15 | Long Island Jewish Medical Center | Topical hematoporphyrin |
| GB8905001D0 (en) | 1989-03-04 | 1989-04-19 | Univ Leicester | Screening for natural products of microbial metabolism |
| US4935498A (en) * | 1989-03-06 | 1990-06-19 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Expanded porphyrins: large porphyrin-like tripyrroledimethine-derived macrocycles |
| US5567687A (en) * | 1989-03-06 | 1996-10-22 | University Of Texas | Texaphyrins and uses thereof |
| US5328470A (en) * | 1989-03-31 | 1994-07-12 | The Regents Of The University Of Michigan | Treatment of diseases by site-specific instillation of cells or site-specific transformation of cells and kits therefor |
| US5059619A (en) * | 1989-06-14 | 1991-10-22 | Quadra Logic Technologies, Inc. | Stable freeze-dried polyhematoporphyrin ether/ester |
| DE3919873A1 (de) | 1989-06-19 | 1990-12-20 | Behringwerke Ag | Magnetische protein-konjugate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| GB8916859D0 (en) | 1989-07-24 | 1989-09-06 | Dynal As | Hapten linking |
| GB8929297D0 (en) | 1989-12-29 | 1990-02-28 | Dynal As | Method of separation |
| US5200084A (en) | 1990-09-26 | 1993-04-06 | Immunicon Corporation | Apparatus and methods for magnetic separation |
| US5491068A (en) | 1991-02-14 | 1996-02-13 | Vicam, L.P. | Assay method for detecting the presence of bacteria |
| US5179120A (en) * | 1991-06-28 | 1993-01-12 | Cytopharm, Inc. | Porphycene compounds for photodynamic therapy |
| PL165249B1 (pl) * | 1991-10-29 | 1994-11-30 | Wojskowa Akad Tech | Sposób otrzymywania soli kompleksowych hematoporfiryny i jej pochodnych PL PL PL PL PL PL PL |
| US5376546A (en) * | 1991-11-04 | 1994-12-27 | Xoma Corporation | Analogs of ribosome-inactivating proteins |
| US5258453A (en) * | 1992-01-21 | 1993-11-02 | University Of Utah | Drug delivery system for the simultaneous delivery of drugs activatable by enzymes and light |
| DE69331467T2 (de) * | 1992-03-16 | 2002-11-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonukleotide modulation von protein kinase c |
| CA2131090A1 (en) | 1992-03-20 | 1993-09-21 | Peter Leonard Grant | Method and apparatus for the analysis of biological material |
| WO1993022443A1 (en) * | 1992-04-24 | 1993-11-11 | Sri International | In vivo homologous sequence targeting in eukaryotic cells |
| AU2593192A (en) | 1992-09-14 | 1994-04-12 | Oystein Fodstad | Detection of specific target cells in specialized or mixed cell population and solutions containing mixed cell populations |
| AU680843B2 (en) * | 1992-11-03 | 1997-08-14 | Gene Shears Pty. Limited | TNF-alpha ribozymes and degradation resistant mRNA derivatives linked to TNF-alpha ribozymes |
| FR2700010B1 (fr) | 1992-12-24 | 1995-03-17 | Rocher Yves Biolog Vegetale | Méthode et dispositif pour tester la réactivité de cellules à l'égard de produits. |
| US5374531A (en) | 1993-03-22 | 1994-12-20 | Zynaxis, Inc. | Immunoassay for determination of cells |
| US5861310A (en) * | 1993-11-03 | 1999-01-19 | Dana-Farber Cancer Institute | Tumor cells modified to express B7-2 with increased immunogenicity and uses therefor |
| US5491084A (en) * | 1993-09-10 | 1996-02-13 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Uses of green-fluorescent protein |
| US6015897A (en) * | 1993-12-07 | 2000-01-18 | Neorx Corporation | Biotinamido-n-methylglycyl-seryl-o-succinamido-benzyl dota |
| US5514340A (en) | 1994-01-24 | 1996-05-07 | Magnetix Biotechnology, Inc. | Device for separating magnetically labelled cells |
| NO180658C (no) | 1994-03-10 | 1997-05-21 | Oeystein Fodstad | Fremgangsmåte og anordning for deteksjon av spesifikke målceller i spesialiserte eller blandede cellepopulasjoner og opplösninger som inneholder blandede cellepopulasjoner |
| NO180167C (no) * | 1994-09-08 | 1997-02-26 | Photocure As | Fotokjemisk fremgangsmåte til å innföre molekyler i cellers cytosol |
| US5872007A (en) * | 1995-02-17 | 1999-02-16 | Hybridon, Inc. | CAPL-specific oligonucleotides and methods of inhibiting metastatic cancer |
-
1994
- 1994-09-08 NO NO943327A patent/NO180167C/no not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-09-04 CN CNB951960652A patent/CN1222309C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-04 BR BRPI9508825A patent/BRPI9508825B8/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-09-04 PT PT95932244T patent/PT783323E/pt unknown
- 1995-09-04 AT AT95932244T patent/ATE209507T1/de active
- 1995-09-04 NZ NZ293008A patent/NZ293008A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-09-04 AU AU35347/95A patent/AU700797B2/en not_active Expired
- 1995-09-04 EP EP95932244A patent/EP0783323B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-04 CA CA2199290A patent/CA2199290C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-04 HU HU9800153A patent/HU222984B1/hu active IP Right Grant
- 1995-09-04 CZ CZ97658A patent/CZ65897A3/cs unknown
- 1995-09-04 WO PCT/NO1995/000149 patent/WO1996007432A1/en not_active Application Discontinuation
- 1995-09-04 ES ES95932244T patent/ES2163527T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-04 MX MX9701676A patent/MX9701676A/es unknown
- 1995-09-04 US US08/793,794 patent/US5876989A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-04 JP JP50940496A patent/JP4148328B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-09-04 DE DE69524238T patent/DE69524238T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-04 NZ NZ509519A patent/NZ509519A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-09-14 KR KR10-2003-7005142A patent/KR100529967B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1995-09-14 KR KR1019970701520A patent/KR100395615B1/ko not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-03-07 FI FI970983A patent/FI121328B/fi not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-04-24 HK HK98103468A patent/HK1004110A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-09-01 US US09/144,750 patent/US6680301B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-11-01 US US10/286,632 patent/US20030134813A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU222984B1 (hu) | Eljárás molekulák in vitro bevezetésére élő sejtek citoszoljába, fotoszenzibilizáló vegyület alkalmazásával | |
| Kwiatkowski et al. | Photodynamic therapy–mechanisms, photosensitizers and combinations | |
| Berg et al. | Porphyrin‐related photosensitizers for cancer imaging and therapeutic applications | |
| Dougherty et al. | Photodynamic therapy | |
| Phillips | The photochemistry of sensitisers for photodynamic therapy | |
| Reddi | Role of delivery vehicles for photosensitizers in the photodynamic therapy of tumours | |
| Moan | Porphyrin-sensitized photodynamic inactivation of cells: a review | |
| Garland et al. | Designing photosensitizers for photodynamic therapy: strategies, challenges and promising developments | |
| Selbo et al. | Photochemical internalisation: a novel drug delivery system | |
| Cincotta et al. | Novel photodynamic effects of a benzophenothiazine on two different murine sarcomas | |
| Boyle et al. | Biological activities of phthalocyanines. XIV. Effect of hydrophobic phthalimidomethyl groups on the in vivo phototoxicity and mechanism of photodynamic action of sulphonated aluminium phthalocyanines | |
| EP2308508A1 (en) | Photodynamic therapy using chemoluminescence and a ligand-photosensitiser conjugate | |
| Guardiano et al. | Tetra-n-propylporphycene as a tumour localizer: pharmacokinetic and phototherapeutic studies in mice | |
| Abels et al. | Targeting of the tumor microcirculation by photodynamic therapy with a synthetic porphycene | |
| Moor et al. | Mechanisms of photodynamic therapy | |
| Jori et al. | Strategies for tumor targeting by photodynamic sensitizers | |
| CZ9727U1 (cs) | Prostředek pro modifikaci buněčných zejména nádorových procesů | |
| Peng | Correlation of intracellular and intratumoral photosensitizer distribution with photodynamic effect | |
| Kostron et al. | Photodynamic Therapy | |
| Wang | Studies of photochemical internalisation: mechanisms and strategies in cancer therapeutics | |
| Reich et al. | Liposome-administered tetramethylhematoporphyrin (TMHP) as a photodynamic agent for bladder tumor cells | |
| Woodhams et al. | Julie Tzu-Wen Wang | |
| Jori et al. | Phthalocyanines as phototherapeutic agents for tumors | |
| Phillips | The photochemistry of sensitisers for photodynamic therapy zyxwvutsrqpon | |
| Calzavara-Pinton et al. | photosensitizer distribution with photodynamic effect |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20031127 |