HU221340B1 - Adenoviral vectors of animal origin and use thereof in gene therapy - Google Patents
Adenoviral vectors of animal origin and use thereof in gene therapy Download PDFInfo
- Publication number
- HU221340B1 HU221340B1 HU9503297A HU9503297A HU221340B1 HU 221340 B1 HU221340 B1 HU 221340B1 HU 9503297 A HU9503297 A HU 9503297A HU 9503297 A HU9503297 A HU 9503297A HU 221340 B1 HU221340 B1 HU 221340B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- adenovirus
- gene
- adenoviruses
- use according
- human
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
A találmány egy heterológ DNS-szekvenciát tartalmazó állati eredetűrekombináns adenovírusnak az emberi test sebészeti és/vagy terápiáskezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására valófelhasználására vonatkozik. ŕ
Description
A találmány új virális vektorokra, előállításukra és génterápiás felhasználásukra vonatkozik. Vonatkozik továbbá az említett virális vektorokat tartalmazó gyógyszerkészítményekre is. Részletesebben, a találmány állati eredetű rekombináns adenovírusok génterápiás felhasználására vonatkozik.
A génterápia abból áll, hogy a érintett sejtbe vagy szövetbe genetikai információt vezetnek be, és így korrigálnak egy hiányosságot vagy rendellenességet (mutációt, aberráns expressziót). Ezt a genetikai információt bevihetik in vitro egy, a szervezetből kivont sejtbe, és az így transzformát sejtet azután visszavezetik a szervezetbe, vagy közvetlenül in vivő a megfelelő szövetbe. Ebben a második esetben különböző technikák léteznek, közöttük különböző transzfekciós eljárások, amelyek DNS és DEAE-dextrán [Pagano et al., J. Virol. 1, 891 (1967)], DNS és nukleáris proteinek [Kaneda et al., Science 243, 375 (1989)], DNS és lipidek [Felgner et al., PNAS 84, 7413 (1987)] komplexeit, illetve liposzómákat [Fraley et al., J. Bioi. Chem. 255, 10431 (1980)] stb. alkalmaznak. Nemrégen felmerült a vírusok, mint vektorok alkalmazásának lehetősége géntranszfer céljából mint egy ígéretes alternatíva a fenti fizikai transzfekciós technikákkal szemben. Ebben a tekintetben különböző vírusokat teszteltek azon képességükre, hogy bizonyos sejtpopulációkat fertőznek-e. Különösen a retrovírusokat (RSV, HMS, MMS stb.), a HSV vírust, az adenoasszociált vírusokat és az adenovírusokat vizsgálták.
Ezen vírusok közül az adenovírusok rendelkeznek néhány, a génterápiás felhasználás szempontjából érdekes tulajdonsággal. Nevezetesen elég széles a gazdaspektrumuk, képesek a nyugalmi állapotú sejteket fertőzni, és nem integrálódnak a fertőzött sejt genomjába. Ezen okokból az adenovírusokat már alkalmazták in vivő géntranszferre. Különböző adenovírusból származó vektorokat állítottak elő, amelyek különböző géneket tartalmaztak (β-gal, OTC, α-1ΑΤ, citokinek stb). Minden, az irodalomban eddig leírt, emberi génterápiában használható adenovírus eredetű vektort ez idáig emberi adenovírusból kiindulva állítottak elő. Valóban ezek látszottak a legmegfelelőbbnek ilyen felhasználásra.
Az alkalmazott adenovírusokat a multiplikáció és az in vivő fertőző partikulaképzés kockázatának csökkentésére általában olyan módon módosítják, hogy képtelenek legyenek a fertőzött sejtben replikálódni. így a technika állásában leírt konstrukciók El (Ela és/vagy Elb) régióikban deletáltak, és esetleg az E3 régióban is, amelynek szintjén a kérdéses szekvenciák inszertálva vannak [Levrero et al., Gene 101, 195 (1991); Gosh-Choudrhury et al., Gene 50, 161 (1986)]. Ezen a szükséges modifikációs lépésen felül a technika állásában leírt vektorok mégis megőriznek olyan hátrányokat, amelyek korlátozzák a génterápiás felhasználásukat, többek között a vad adenovírusokkal való rekombináció kockázatát. A találmány egy előnyös megoldást nyújt erre a problémára.
A találmány valójában állati eredetű rekombináns adenovírusok emberi génterápiában való használatára vonatkozik. A találmány annak a felismerésnek az eredménye, hogy az állati eredetű adenovírusok képesek nagy hatásossággal fertőzni az emberi sejteket. A találmány azon a felismerésen alapul, hogy az állati eredetű adenovírusok nem képesek azokban a humán sejtekben szaporodni, melyekben tesztelték azokat. Végül a találmány alapja az a meglepő felfedezés is, hogy az állati eredetű adenovírusok nem transzkomplementálódnak a humán adenovírusokkal, ami a rekombináció és in vivő szaporodás minden kockázatát megszünteti, ami egy humán adenovírus jelenlétében fertőző partikulák képződéséhez vezetne. A találmány szerinti vektorok tehát különösen előnyösek, mivel erősen visszaszorítják, sőt megszüntetik a génterápiában a vírusvektorok használatából adódó olyan kockázatokat, mint a patogenitás, a transzmisszió, a replikáció stb.
A találmány így olyan virális vektorokat szolgáltat, melyek különösen alkalmasak kívánt DNS-szekvenciák transzferére és/vagy expressziójára az embernél.
A találmány tárgya tehát egy heterológ DNS-szekvenciát tartalmazó állati eredetű rekombináns adenovírus használata az emberi test terápiás és/vagy sebészeti kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
A találmány keretein belül alkalmazható állati eredetű adenovírusok különböző eredetűek lehetnek, a humán adenovírusok kivételével. Humán adenovírusok azok, melyek természetesen fertőzőek az emberre, és melyeket általában a HAd vagy az Ad kifejezéssel jelölnek.
Részletesebben a találmány keretein belül alkalmazható állati eredetű adenovírusok kutya, szarvasmarha, egér [például Mavl, Beard et al., Virology 75, 81 (1990)], juh, sertés, madár vagy majom (például SAV) eredetűek lehetnek.
Még részletesebben a madár adenovírusok közül megemlíthetjük az ATCC-nél hozzáférhető 1-10 szerotípusokat, mint például a Phelps (ATCC VR-432), Fontes (ATCC VR-280), P7-A (ATCC VR-827), IBH2A (ATCC VR-828), J2A (ATCC VR-829), T8A (ATCC VR-830), K-ll (ATCC VR-921) törzsek vagy az ATCC VR-831-835 referenciatörzsek. A szarvasmarha adenovírusok közül különböző ismert szerotípusokat használhatunk, többek között az ATCC-nél ATCC VR-313,314, 639-642,768 és 769 számon hozzáférhetőket (1-8 típusok). Az egér FL (ATCC VR550) és E20308 (ATCC VR-528) adenovírusokat, az 5. típusú (ATCC VR-1343) vagy a 6. típusú (ATCC VR1340) juh adenovírusokat, a sertés 5359 adenovírust vagy a majom adenovírusokat, mint többek között az ATCC-nél VR-591-594, 941-9443, 195-203 stb. számon hozzáférhető referencia adenovírusok, szintén megemlíthetjük.
Előnyösen a találmány keretein belül kutyaeredetű adenovírusokat, nevezetesen a CAV2 adenovírusok bármely törzsét [Manhattan törzs vagy A26/61 (ATCC VR-800) például] használjuk. A kutya adenovírusok számos strukturális vizsgálat tárgyai voltak. így a CAV1 és a CAV2 teljes restrikciós térképét leírták az irodalomban [Spibey et al., J. Gén. Virol. 71, 165 (1989)], és az Ela, E3 géneket csakúgy, mint az ITR szekvenciákat klónozták és szekvenálták [lásd többek között Spibey et al., Vírus Rés. 14, 241 (1989); Linné,
HU 221 340 BI
Vírus Rés. 23, 119 (1992); WO 91/11525], Másrészt a kutyaeredetű adenovírusokat már használták kutyák veszettség, parvovírusok stb. elleni immunizálására szolgáló vakcinák előállítására [WO 91/11525]. Mégis mostanáig ezen vírusok emberi génterápiára való alkalmazásának lehetőségét soha nem vetették fel az irodalomban. Ezen felül nem mérlegelték egy ilyen alkalmazás jelentőségét sem.
A találmány keretein belül alkalmazott adenovírusoknak előnyösen defektíveknek kell lenniük, azaz képtelennek kell lenniük autonóm módon terjedni abban a szervezetben, amelybe bevezették. Amint fentebb jeleztük, a leírás bemutatja, hogy az állati eredetű adenovírusok képesek az emberi sejteket fertőzni, de nem képesek terjedni bennük. Ebben az értelemben tehát ezek természetes módon defektívek az embernél, és ellentétben az emberi adenovírusok alkalmazásával, nem követelik meg ebben a tekintetben a genetikai módosítást. Mindazonáltal ezen adenovírusok defektív karaktere a genom genetikai módosításával megsokszorozható, többek között az említett vírusok sejtekben való replikációjához szükséges szekvenciák módosításával. Ezeket a régiókat eliminálhatjuk (teljesen vagy részben), vagy működésképtelenné tehetjük, vagy más szekvenciák, nevezetesen heterológ DNS-szekvenciák inszerciójával módosíthatjuk.
Az adenovírus eredete szerint a replikációhoz szükséges szekvenciák kevéssé változhatnak. Mégis általában a genom végéhez közel helyezkednek el. így a CAV2 esetében az Ela régiót azonosították, klónozták és szekvenálták [Spibey et al., Vírus Rés. 14, 241 (1989)]. Ez az adenovírus genomjának bal végén egy 2 kb fragmentumon helyezkedik el.
Másrészt ezeken az adenovírusokon más genetikai módosításokat is végezhetünk, többek között az embernél nem kívánatos vírusproteinek termelődésének elkerülésére, jelentős méretű heterológ DNS-szekvencia vagy humán adenovírus-genom meghatározott régióinak beépítésére (például az E3 gén).
A találmány értelmében a „hererológ DNS-szekvencia” kifejezés jelöl minden olyan, a vírusba bevezetett DNS-szekvenciát, amelynek a transzferé és/vagy expressziója kívánatos az embernél.
Részletesebben a heterológ DNS-szekvencia tartalmazhat egy vagy több terápiás gént és/vagy egy vagy több antigenikus peptidet kódoló gént.
A találmány egy jellegzetes megvalósítási módja tehát részletesebben állati eredetű adenovírusoknak terápiás gének emberbe való átvitelére szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására való alkalmazására vonatkozik. A terápiás gén, amely így átvihető, bármely gén lehet, amelynek a transzkripciója és esetleg a tradukciója a célsejtben terápiás hatással rendelkező terméket hoz létre.
Részletesebben szó lehet terápiás hatással rendelkező proteintermékeket kódoló génekről. Az így kódolt proteintermék lehet egy protein, egy peptid, egy aminosav stb. Ez a termék a célsejt tekintetében lehet homológ (azaz egy termék, amely a célsejtben normálisan kifejeződik, amikor az nem mutat semmilyen patológiát). Ebben az esetben egy protein expressziója lehetővé teszi például egy elégtelen expresszió vagy egy módosítás miatt inaktív vagy kevéssé aktív protein expressziójának gyógyítását a sejtben, vagy az említett protein kifejezésének megnövelését. A terápiás gén egy celluláris protein mutánsát is kódolhatja, amely megnövekedett stabilitással, módosított aktivitással stb. rendelkezik. A proteintermék lehet heterológ is a célsejtre nézve. Ebben az esetben a kifejezett protein egy hiányos aktivitást adhat át vagy egészíthet ki a sejtben, így téve lehetővé annak egy betegség elleni küzdelmét.
Részletesebben a jelen találmány értelmében a terápiás termékek közül az enzimeket, a vérszármazékokat, a hormonokat, a limfokinokat: interleukinok, interferonok stb. [FR 9203120], a növekedési faktorokat, a neurotranszmittereket vagy azok prekurzorait vagy szintézisenzimeit, a trofikus faktorokat: BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, NT3, NT5 stb; az apolipoproteineket: ApoAI, ApoAIV, ApoE stb. [FR 93 05125], a disztrofint vagy egy minidisztrofint [FR 911947], a tumor szupresszor géneket: p53, Rb, RaplA, DCC, k-rev stb. [FR 93 04745], a véralvadásban szerepet játszó faktorokat kódoló géneket: VII, VIII, IX faktorok stb. említhetjük meg.
A terápiás gén lehet egy antiszensz gén vagy szekvencia, amelynek expressziója a célsejtben lehetővé teszi a génexpresszió vagy a celluláris mRNS átírásának szabályozását. Az ilyen szekvenciák a célsejtben átíródhatnak az mRNS-sel komplementer RNS-sé, és így gátolhatják azok proteinné történő átírását, az EP 140 308 szabadalmi iratban leírt módszerek szerint.
Amint fentebb jeleztük, a heterológ DNS-szekvencia tartalmazhat egy vagy több antigenikus peptidet kódoló gént, amely képes az embernél immunválaszt előidézni. A találmány ebben a jellegzetes megvalósítási módjában lehetővé teszi olyan vakcinák létrehozását, amelyek lehetővé teszik az ember immunizálását többek között mikroorganizmusok vagy vírusok ellen. Szó lehet többek között az Epstein-barr vírusra, a hepatitisB vírusra [EP 185 573], a pszeudo-veszettség vírusára, vagy a tumorokra [EP 259 212] specifikus antigenikus peptidekről.
Általában a heterológ DNS-szekvencia a terápiás és/vagy az antigenikus peptidet kódoló gén expresszióját a fertőzött sejtben lehetővé tevő szekvenciákat is tartalmaz. Szó lehet a tárgyalt gén expressziójáért természetesen felelős szekvenciákról, amennyiben ezek a szekvenciák képesek a fertőzött sejtben működni. Szó lehet eltérő eredetű (más proteinek expressziójáért felelős, vagy szintetikus) szekvenciákról is. Többek között szó lehet eukarióta vagy virális gének promoter szekvenciáiról. Például szó lehet a fertőzni kívánt sejt genomjából származó promoter szekvenciákról. Éppúgy szó lehet egy vírus genomjából származó promoter szekvenciákról is, beleértve a használt adenovírust is. Ebben a tekintetben megemlíthetjük például az E1A, MLP, CMV, RSV stb. gének promotereit. Ezen felül ezeket az expressziós szekvenciákat módosíthatjuk aktivációs, regulációs, stb. szekvenciák hozzáadásával. Másrészt, ha a beépített gén nem tartalmaz expressziós
HU 221 340 Β1 szekvenciákat, azt a defektiv vírus genomjába egy ilyen szekvencia után építhetjük be.
Másrészt a heterológ DNS-szekvencia, jellemzően a terápiás gén felett, tartalmazhat egy, a szintetizált terápiás terméket a célsejt szekréciós útján irányító szignálszekvenciát is. Ez a szignálszekvencia lehet a terápiás termék természetes szignálszekvenciája, de szó lehet bármely más funkcionális szignálszekvenciáról vagy egy mesterséges szignálszekvenciáról is.
A találmány szerinti defektiv adenovírusokat bármely, a szakember számára ismert technikával előállíthatjuk. Jellemzően a WO 91/11525 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentésben leírt eljárás szerint állíthatók elő. Az előállítás klasszikus technikája egy állati adenovírus és egy, többek között a beépíteni kívánt heterológ DNS-t is hordozó plazmid közötti homológ rekombináción alapul. A homológ rekombináció az említett adenovírus és plazmid egy megfelelő sejtvonalba történt kotranszfekciója után következik be. Az alkalmazott sejtvonal előnyösen transzformálható kell legyen az említett elemekkel, és abban az esetben, ha egy módosított állati eredetű adenovírust használunk, a sejtvonal tartalmazhat, ha szükséges, a defektív adenovírus genomjának egy részét komplementálni képes szekvenciákat, előnyösen integrált formában, a rekombináció veszélyét elkerülendő. Sejtvonalra példaként megemlíthetjük a GHK kutyavese sejtvonalat (Flow laboratories) vagy az MDCK sejtvonalat. A sejtek tenyésztésének és a vírusok vagy a virális DNS előállításának körülményeit az irodalomban leírták [lásd többek között Macatney et al., Science 44, 9 (1988); Fowlkes et al., J. Mól. Bioi. 132, 163 (1979)].
Ezután az elszaporított vektorokat a molekuláris biológia klasszikus módszerei szerint összegyűjtjük és tisztítjuk.
A találmány egy másik tárgya egy állati eredetű adenovírus, amely legalább egy, az előbbiekben definiált terápiás gént tartalmazó heterológ DNS-szekvenciát tartalmaz.
A találmány tárgya minden olyan gyógyszerkészítmény, amely egy, a fentiekben definiált állati eredetű rekombináns adenovírust tartalmaz. A találmány szerinti gyógyszerkészítményeket külsőleg, orális, parenterális, intranazális, intravénás, intramuszkuláris, szubkután, intraokuláris stb. úton történő beadáshoz formulázhatjuk.
Előnyösen a gyógyszerkészítmény az injektálható formulázáshoz gyógyszerészetileg elfogadható hordozót tartalmaz. Különösen sóoldatokról (mononátrium-, dinátrium-foszfát, nátrium-, kálium-, kalcium- vagy magnézium-klorid stb., vagy ilyen sók keveréke), steril, izotóniás oldatokról, vagy száraz készítményekről, többek között liofilezettekről lehet szó, amelyek az adott esettől függően steril víz vagy fiziológiás szérum hozzáadásával lehetővé teszik injektálható oldatok készítését.
Az injekcióhoz használt vírusok dózisát különböző paraméterek, nevezetesen a beadás módja, az illető betegség, a kifejezni kívánt gén vagy az előírt kezelés időtartama figyelembevételével határozhatjuk meg. Általában a találmány szerinti rekombináns adenovírusokat 104 és 1014 pfu/ml, előnyösen ÍO6 és 1010 pfü/ml közötti dózisban formulázzák és adják be. A pfu („plaque forming unit”) kifejezés egy vírusoldat fertőzőképességét fejezi ki, és egy megfelelő sejtkultúra fertőzésével és a fertőzött sejteken keletkezett plakkok általában 5 nap elteltével történő megszámlálásával határozzák meg. Egy virális oldat pfü titerének meghatározási technikái az irodalomból jól dokumentáltak.
A beépített heterológ DNS-szekvencia szerint a találmány szerinti adenovírusokat számos betegség kezelésére vagy megelőzésére használhatjuk, beleértve a genetikai betegségeket (disztrófia, cisztikus fibrózis stb.), a neurodegeneratív betegségeket (Alzheimer, Parkinson, ALS, stb.), a rákokat, a véralvadás zavaraival vagy a diszlipoproteinémiával kapcsolt betegségeket, a virális fertőzésekkel kapcsolt betegségeket (hepatitisz, AIDS, stb.), stb.
A találmányt részletesebben leírják az itt következő példák, amelyeket szemléltetőknek kell tekinteni, nem pedig az oltalmi kört korlátozóknak.
Az ábrák leírása
1. ábra: A CAV2 adenovírus Manhattan törzsének restrikciós térképe (Spribey és munkatársai után, az előzőekben idézve)
2. ábra: 1 pl, p2 (2a. ábra) és p3 (2b. ábra) plazmidok térképe
3. ábra: Egy heterológ DNS-szekvenciát tartalmazó rekombináns kutya adenovírus előállításának stratégiája.
A molekuláris biológia általános technikái
A molekuláris biológiában használt klasszikus eljárások, mint például a plazmid DNS preparatív extrakciója, a plazmid DNS cézium-klorid-gradiens centrifügálása, az akrilamid vagy agaróz gélelektroforézis, a DNS fragmentumok elektroelúcióval való tisztítása, a proteinek fenolos vagy fenol-kloroformos extrakciója, a DNS etanolos vagy izopropil-alkoholos kicsapása, az Escherichia coli transzformálása, stb. a szakemberek számára jól ismertek, és az irodalom részletesen tárgyalja azokat [Maniatis T. et al., „Molecular Cloning, a Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y., 1982; Ausubel F. M. et al. (eds), „Current Protocols in Molecular Biology”, John Wiley & Sons, New York, 1987].
A pBR322, pUC plazmidok és az M13 sorozat fágjai a kereskedelemből beszerezhetők (Bethesda Research Laboratories).
A ligálásokhoz a DNS-fragmentumokat agaróz vagy akrilamid gélelektroforézissel méretük szerint elválasztjuk, fenollal vagy fenol-kloroform elegyével extraháljuk, etanollal kicsapjuk, majd a forgalmazó (Biolabs) előírásai szerint T4 DNS ligáz jelenlétében inkubáljuk.
A túllógó 5’ végek betöltését E. coli DNS polimerázának Klenow fragmentumával (Biolabs) végezhetjük, a forgalmazó előírásai szerint. A túllógó 3’ végek leemésztését T4 DNS polimeráz jelenlétében végezzük, a gyártó előírásai szerint. A túllógó 5’ végek leemésztését SÍ nukleázos kezeléssel végezzük.
HU 221 340 Bl
A szintetikus oligonukleotidok által irányított in vitro mutagenezist a Taylor és munkatársai [Nucleic Acids Rés. 13, 8749-8764 (1985)] által kifejlesztett eljárással, az Amersham által forgalmazott kitet használva végezhetjük.
Az úgynevezett PCR technikával [Polymerasecatalyzed Chain Reaction, polimeráz-katalizált láncreakció, Saiki R. K. et al., Science 230, 1350-1354 (1985); Mullis K. B. et Falcona F. A., Meth. Enzym. 155, 335-350 (1987)] történő enzimatikus DNS amplifikációt egy „DNA thermal cycler”-t alkalmazva (Perkin Elmer Cetus) végezhetjük, a gyártó előírásai szerint.
A DNS-szekvenciák meghatározását a Sanger és munkatársai által kifejlesztett módszer [Proc, Natl. Acad. Sci. USA, 74, 5463-5467 (1977)] szerint végezhetjük, az Amersham által forgalmazott kittel.
Példák
1. példa
Humán sejtek fertőzése kutyaeredetű adenovírusokkal.
Ez a példa az állati (kutya) eredetű adenovírusok azon képességét mutatja be, hogy képesek emberi sejteket fertőzni.
7.7 példa
A használt sejtvonalak.
Ebben a példában a következő sejtvonalakat használtuk:
- humán 293 embrionális vese sejtvonal [Graham et al., J. Gén. Virol. 36, 59 (1977)]. Ez a vonal tartalmazza többek között genomjába integrált módon a humán Ad5 adenovírus genomjának bal részét (12%).
- humán KB sejtvonal: ehhez a humán epidermális karcinómából származó sejtvonalhoz, valamint a tenyésztését lehetővé tevő körülményekhez az ATCC-nél (referencia: CCL17) lehet hozzáférni.
- humán HeLa sejtvonal: ehhez a humán epiteliális karcinómából származó sejtvonalhoz, valamint a tenyésztését lehetővé tevő körülményekhez az ATCC-nél (referencia: CCL2) lehet hozzáférni.
- kutya MDCK sejtvonal: az MDCK sejtek tenyésztési körülményeit többek között Macatney és munkatársai írták le [Science 44, 9 (1988)].
7.2 példa
Fertőzés
A fent említett sejtvonalakat a CAV2 vírussal (Manhattan törzs) fertőztük. Ehhez a sejteket (körülbelül 107/üveg) 1 órán át 37 °C-on inkubáltuk 10 pfu/sejt vírus jelenlétében. Azután 5 ml tápközeget adtunk hozzá, és a tenyésztést tovább végeztük 37 °C-on körülbelül 48 órán át. Ekkor a sejtekben episzómaként jelenlévő DNS-t analizáltuk. A kapott eredmények azt mutatták, hogy minden sejtvonalban jelen van a CAV2 DNS a magban, ami igazolja azok fertőzhetőségét kutya adenovírussal.
2. példa
A kutyaeredetű adenovírusok terjedésének hiánya emberi sejtekben.
Ez a példa azt mutatja be, hogy a kutya adenovírusok ugyan képesek fertőzni a humán sejteket, de nem terjednek azokban.
A sejtek 1. példa szerinti fertőzése után a CAV2 DNS mennyiségét meghatároztuk az idő folyamán a következő eljárás szerint: a sejtekben jelenlevő episzomális DNS-t a Hirt és munkatársai által leírt módszerrel [J. Virol. 45, 91 (1983)] összegyűjtöttük, és a DNS mennyiségét egy etalonskálával határoztuk meg. A kapott eredmények azt mutatják, hogy a vírus DNS mennyisége nem növekszik a KB és a 293 sejtekben, ami igazolja, hogy ezekben a sejtekben a CAV2 replikációja teljesen hiányzik. Az MDCK és a HeLa sejtekben a CAV2 virális DNS mennyiségének enyhe növekedése figyelhető meg. Ennek ellenére a virális partikulák kialakulásának mérése azt mutatja, hogy a CAV2 nem terjed a humán 293, KB és HeLa sejtekben, csak a kutya MDCK sejtvonalban. A terjedést a fertőzött sejtek begyűjtésével, az esetleges vírusok fagyasztással/olvasztással történő felszabadításával, és MDCK sejteknek az így kapott felülúszóval történő fertőzésével mértük az előzőekben leírt körülmények között. 48 óra tenyésztés után az így fertőzött MDCK sejtekben a virális DNS hiánya igazolta, hogy a humán sejtekben nem történt semmilyen virális terjedés.
Ezek az eredmények tisztán mutatják, hogy a kutya adenovírusok képtelenek emberi sejtekben terjedni.
3. példa
A kutya adenovírusok humán adenovírusok általi transzkomplementációja hiányának bizonyítása.
Ez a példa azt mutatja be, hogy a kutya adenovírusok terjedésének hiányát humán sejtekben nem transzkomplementálja a humán adenovírusok jelenléte.
A humán 293, KB és HeLa sejtvonalak sejtjeit és a kutya MDCK vonal sejtjeit koinfektáltuk a CAV2 adenovírussal és a humán Ad5 adenovírussal. A virális DNS (kutya és humán) jelenlétét a sejtekben, és a DNS mennyiségének mérését az idő változásával, valamint a terjedés mérését az 1. példában leírtak szerint valósítottuk meg. A kapott eredmények azt jelzik, hogy a CAV2 DNS mennyisége nem emelkedik az idővel a KB és a 293 sejtekben, ami azt mutatja, hogy a humán Ad5 adenovírus jelenléte nem indukálja transzkomplementáció útján a CAV2 replikációját ezekben a sejtekben. A virális DNS hiánya a KB, 293 és HeLa sejtekből származó esetleges vírusokkal fertőzött MDCK sejtekben ugyanúgy azt mutatja, hogy a CAV2 adenovírus egyáltalán nem terjed humán sejtvonalakban, még humán adenovírusok jelenlétében sem.
4. példa
A CAV2 egy genomiális DNS-bankjának előállítása
A CAV2 adenovírus genomjának restrikciós fragmentumaiból egy plazmidbankot hoztunk létre. Ezt a bankot a CAV2 Smal és PstI enzimekkel való emésztésével, majd a Smal A, B, C, D, E, F, I és J, valamint a
HU 221 340 Β1
Pstl A, B, C, D, E, F, G, Η (1. ábra) fragmentumok pGEM3Zf+ (Promega) vektorba történő klónozásával kaptuk meg. A Smal C fragmentumot hordozó plazmidot ezután kotranszfektáltuk MDCK sejtekbe a pUC4KIXX (Pharmacia) plazmiddal, amely a neomicinrezisztencia-gént hordozza, hogy így egy CAV2 E1A és E1B génjeit konstitutívan kifejező MDCK vonalat hozzunk létre. Ez a vonal lehetővé teszi az ezekben a régiókban deletált rekombináns vírusok előállítását (v. ö. 5.2 példa)
5. példa
Az interleukin-2 gént az Ad2 MLP promoterének kontrollja alatt tartalmazó rekombináns kutya adenovírus előállítása.
Két stratégiát dolgoztunk ki az interleukin-2 gént a humán Ad2 MLP promoterének kontrollja alatt tartalmazó rekombináns kutya adenovírus előállítására.
5.1 példa
Az első a kívánt heterológ DNS-szekvencia (MLP promoter - interleukin-2 gén) a teljes CAV2 genom E4 régiója és jobb ITR-e közé történő beépítéséből áll, a Smal restrikciós hely szintjén. Egy ilyen rekombináns előállítását ligálással, vagy egy, a kívánt heterológ DNS-szekvenciát hordozó plazmid és a CAV2 genom in vivő rekombinációjával valósítottuk meg. Az interleukin-2 génjét az MLP promoter irányítása alatt hordozó rekombináns adenovírusok előállításához használt plazmidokat a következő módon hoztuk létre (2. ábra):
- egy pl-gyel jelölt első plazmidot a CAV2 Sáli B fragmentumának (1. ábra), amely többek között a jobb ITR-t tartalmazza, egy Smal helynek, és az E4 génnek a pGem3Zf+ (Promega) plazmidba történő klónozásával kaptunk meg, a Smal hely egyedi a pihen;
- a heterológ DNS-szekvenciát (MLP promoter interleukin-2 gén) a pl plazmid Smal helyére vezettük be, hogy így a p2 plazmidot kapjuk; és
- a genomiális bank Pstl D fragmentumában jelenlevő Pstl-Sáli fragmentumot, amely az E3 gén egy részét tartalmazza, ezután a p2 megfelelő helyeire klónoztuk, hogy így a p3 plazmidot kapjuk (2. ábra).
Az így kapott plazmidokat használtuk a rekombináns adenovírusok előállítására a két következő eljárást követve (lásd 3. ábra):
a) a Sall-gyel emésztett p2 plazmidnak a CAV2 Sáli A fragmentumába való ligálása, és a ligációs termék MDCK sejtekbe való transzfekciója (3a ábra),
b) a p3 plazmid és a CAV2 Sáli A fragmentuma közötti rekombináció az MDCK sejtekben történt kotranszfekció után (3b ábra). A kapott adenovírusokat azután izoláltuk és amplifikáltuk a szakemberek számára ismert eljárásokkal.
Ezek az eljárások lehetővé teszik az interleukin-2 gént hordozó rekombináns kutya adenovírus előállítását, amely e terápiás génnek az emberbe történő transzferére használható (3. ábra).
5.2 példa
A második kidolgozott stratégia a CAV2 El A és E1B génjeit konstitutívan kifejező MDCK sejtvonal használatán alapul (v. ö. 4. példa). Ez a vonal lehetővé teszi az ezekben a régiókban deletált kutya adenovírusok transzkomplementációját, és így olyan rekombináns vírusok előállítását, melyekben a heterológ DNSszekvencia az El régióba helyettesített. Ehhez egy olyan plazmidot készítettünk, amely a CAV2 genom bal végét (ITR szekvencia és a kapszidképződésért felelős szekvenciák) és a heterológ DNS-szekvenciát tartalmazza. Ezt a plazmidot a fent leírt MDCK sejtekbe kotranszfektáltuk, egy, a saját bal végében deletált CAV2 adenovírus genomjának jelenlétében. A termelt rekombináns kutya adenovírusokat összegyűjtöttük, esetleg amplifikáltuk és emberi használat céljára konzerváltuk.
Claims (18)
1. Heterológ DNS-szekvenciát tartalmazó állati eredetű rekombináns adenovírus alkalmazása az emberi test terápiás és/vagy sebészeti kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás terápiás gének emberbe való transzferére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
3. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás egy vakcina előállítására.
4. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a terápiás gén egy terápiás proteinterméket kódoló gén.
5. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a terápiás gén egy antiszensz gén vagy szekvencia.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az adenovírust kutya, szarvasmarha, egér, juh, sertés, madár és majom adenovírusok közül választjuk ki.
7. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az adenovírus egy kutya adenovírus, előnyösen a CAV2 adenovírus törzsei közül választott adenovírus.
8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az adenovírus genomjából hiányoznak a replikációhoz szükséges szekvenciák.
9. A 8. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az adenovírus genomjából az E1A és E1B régiók hiányoznak.
10. Állati eredetű rekombináns adenovírus, amely legalább egy, az enzimek, vérszármazékok, hormonok, limfokinek, növekedési faktorok, neurotranszmitterek vagy azok prekurzorai vagy szintézisenzimei, trofikus faktorok, apolipoproteinek, disztrofm vagy egy minidisztrofin, tumor szupresszorok és a véralvadásban szerepet játszó faktorok közül választott terápiás proteinterméket kódoló gént tartalmaz beépítve.
HU 221 340 Β1
11. Állati eredetű rekombináns adenovírus, amely legalább egy antiszensz szekvenciát tartalmaz beépítve.
12. A 10. vagy all. igénypont szerinti adenovírus, azzal jellemezve, hogy a beépített gén vagy gének expresszióját lehetővé tevő promoter szekvenciákat is tar- 5 talmaz.
13. A 10-12. igénypontok szerinti adenovírus, azzal jellemezve, hogy a terápiás gén expressziós terméke szekréciójának elősegítését lehetővé tevő szignálszekvenciákat is tartalmaz.
14. A 10-13. igénypontok szerinti adenovírus, azzal jellemezve, hogy az adenovírust kutya, szarvasmarha, egér, juh, sertés, madár és majom adenovírusok közül választjuk.
15. A 14. igénypont szerinti adenovírus, azzal jellemezve, hogy az adenovírus egy kutya adenovírus, előnyösen a CAV2 adenovírus törzsei közül választott adenovírus.
16. A 10-15. igénypontok bármelyike szerinti adenovírus, azzal jellemezve, hogy az adenovírus genomjából hiányoznak legalább a replikációhoz szükséges szekvenciák.
17. A 16. igénypont szerinti adenovírus, azzal jelle10 mezve, hogy egy másik állati vagy humán adenovírus régióit tartalmazza.
18. Gyógyszerkészítmény, amely egy vagy több, a 10-17. igénypontok bármelyike szerinti adenovírust tartalmaz.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9305954A FR2705361B1 (fr) | 1993-05-18 | 1993-05-18 | Vecteurs viraux et utilisation en thérapie génique. |
| PCT/FR1994/000531 WO1994026914A1 (fr) | 1993-05-18 | 1994-05-06 | Vecteurs adenoviraux d'origine animale et utilisation en therapie genique |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9503297D0 HU9503297D0 (en) | 1996-01-29 |
| HUT73465A HUT73465A (en) | 1996-08-28 |
| HU221340B1 true HU221340B1 (en) | 2002-09-28 |
Family
ID=9447235
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9503297A HU221340B1 (en) | 1993-05-18 | 1994-05-06 | Adenoviral vectors of animal origin and use thereof in gene therapy |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6294377B1 (hu) |
| EP (1) | EP0698108B2 (hu) |
| JP (2) | JP3995259B2 (hu) |
| KR (1) | KR100379569B1 (hu) |
| CN (1) | CN1067722C (hu) |
| AT (1) | ATE209686T1 (hu) |
| AU (1) | AU696495B2 (hu) |
| BR (1) | BR9406720A (hu) |
| CA (1) | CA2163256C (hu) |
| CZ (1) | CZ284903B6 (hu) |
| DE (1) | DE69429260T3 (hu) |
| DK (1) | DK0698108T4 (hu) |
| ES (1) | ES2167365T5 (hu) |
| FI (1) | FI118538B (hu) |
| FR (1) | FR2705361B1 (hu) |
| HU (1) | HU221340B1 (hu) |
| IL (1) | IL109644A (hu) |
| NO (1) | NO320818B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ266475A (hu) |
| PL (1) | PL182814B1 (hu) |
| PT (1) | PT698108E (hu) |
| RU (1) | RU2233333C2 (hu) |
| SK (1) | SK282354B6 (hu) |
| UA (1) | UA66417C2 (hu) |
| WO (1) | WO1994026914A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA943358B (hu) |
Families Citing this family (123)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU663702B2 (en) | 1991-03-06 | 1995-10-19 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for the selective inhibition of gene expression |
| US5747469A (en) | 1991-03-06 | 1998-05-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions comprising DNA damaging agents and p53 |
| US6410010B1 (en) | 1992-10-13 | 2002-06-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant P53 adenovirus compositions |
| IL113052A0 (en) | 1994-03-23 | 1995-06-29 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Recombinant viruses, their preparation and their use in gene therapy |
| JP3816518B2 (ja) | 1994-06-10 | 2006-08-30 | ジェンベク、インコーポレイティッド | 相補的なアデノウイルスベクター系と細胞系 |
| FR2722507B1 (fr) * | 1994-07-12 | 1996-08-14 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Adenovirus comportant un gene codant pour une no synthase |
| FR2724320B1 (fr) * | 1994-09-13 | 1996-12-20 | Transgene Sa | Nouvel implant pour le traitement des maladies acquises |
| FR2725213B1 (fr) * | 1994-10-04 | 1996-11-08 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Vecteurs viraux et utilisation en therapie genique |
| FR2726285B1 (fr) * | 1994-10-28 | 1996-11-29 | Centre Nat Rech Scient | Adenovirus depourvus de particules contaminantes viables, preparation et utilisation |
| FR2727689A1 (fr) | 1994-12-01 | 1996-06-07 | Transgene Sa | Nouveau procede de preparation d'un vecteur viral |
| CN100569297C (zh) | 1995-02-28 | 2009-12-16 | 加利福尼亚大学董事会 | 基因转移介导的血管形成疗法 |
| US6752987B1 (en) | 1995-02-28 | 2004-06-22 | The Regents Of The University Of California | Adenovirus encoding human adenylylcyclase (AC) VI |
| FR2731710B1 (fr) * | 1995-03-14 | 1997-04-30 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Virus recombinants exprimant la lecithine cholesterol acyltransferase et utilisations en therapie genique |
| FR2732357B1 (fr) | 1995-03-31 | 1997-04-30 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Vecteurs viraux et utilisation pour le traitement des desordres hyperproliferatifs, notamment de la restenose |
| US5756283A (en) * | 1995-06-05 | 1998-05-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for improved production of recombinant adeno-associated viruses for gene therapy |
| US6281010B1 (en) | 1995-06-05 | 2001-08-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adenovirus gene therapy vehicle and cell line |
| AU6261696A (en) * | 1995-06-05 | 1996-12-24 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | A replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a vaccine carrier |
| US5698202A (en) * | 1995-06-05 | 1997-12-16 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a rabies vaccine carrier |
| US6783980B2 (en) | 1995-06-15 | 2004-08-31 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| ATE445705T1 (de) | 1995-06-15 | 2009-10-15 | Crucell Holland Bv | Verpackungssysteme für humane rekombinante adenoviren zur gentherapie |
| US6265212B1 (en) | 1995-06-15 | 2001-07-24 | Introgene B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| AUPN477695A0 (en) * | 1995-08-14 | 1995-09-07 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Gene therapy |
| FR2740344B1 (fr) * | 1995-10-31 | 1997-11-21 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Application de la proteine gax au traitement de cancers |
| WO1998000166A1 (en) * | 1996-07-03 | 1998-01-08 | Merial, Inc. | Recombinant canine adenovirus (cav) containing exogenous dna |
| AU4255397A (en) * | 1996-09-06 | 1998-03-26 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Chimpanzee adenovirus vectors |
| US6638502B1 (en) | 1997-04-28 | 2003-10-28 | Gencell Sas | Adenovirus-mediated intratumoral delivery of an angiogenesis antagonist for the treatment of tumors |
| EP2386629A1 (en) | 1997-10-14 | 2011-11-16 | Darwin Molecular Corporation | Thymidine kinase mutants and fusion proteins having thymidine kinase and guanylate kinase activities |
| US6875606B1 (en) | 1997-10-23 | 2005-04-05 | The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Human α-7 nicotinic receptor promoter |
| US6653088B1 (en) | 1997-10-24 | 2003-11-25 | Aventis Pharma S.A. | Interaction test for the investigation of inhibitory molecules of the interaction between a presenilin and the β-amyloid peptide |
| DK1049767T3 (da) | 1998-01-08 | 2005-09-19 | Aventis Pharma Inc | En transgen kanin, der udtrykker et funktionelt humant lipoprotein(A) |
| US6670188B1 (en) | 1998-04-24 | 2003-12-30 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| US6225456B1 (en) | 1998-05-07 | 2001-05-01 | University Technololy Corporation | Ras suppressor SUR-5 |
| US6506889B1 (en) | 1998-05-19 | 2003-01-14 | University Technology Corporation | Ras suppressor SUR-8 and related compositions and methods |
| US6414129B1 (en) | 1998-08-11 | 2002-07-02 | Darwin Discovery Ltd. | Identification of the gene causing the mouse scurfy phenotype and its human ortholog |
| US20040009535A1 (en) | 1998-11-27 | 2004-01-15 | Celltech R&D, Inc. | Compositions and methods for increasing bone mineralization |
| ES2350454T3 (es) | 1998-11-27 | 2011-01-24 | Ucb Pharma S.A. | Composiciones y métodos para incrementar la mineralización de la sustancia ósea. |
| US7063850B1 (en) | 1998-12-22 | 2006-06-20 | University Of Tennessee Research Foundation | Protective antigen of group A Streptococci |
| US6441156B1 (en) | 1998-12-30 | 2002-08-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Calcium channel compositions and methods of use thereof |
| FR2794771B1 (fr) | 1999-06-11 | 2001-08-10 | Aventis Pharma Sa | Adenovirus recombinants codant pour le transporteur specifique de l'iode (nis) |
| FR2799472B1 (fr) | 1999-10-07 | 2004-07-16 | Aventis Pharma Sa | Preparation d'adenovirus recombinants et de banques adenovirales |
| WO2001048164A2 (en) | 1999-12-27 | 2001-07-05 | The Regents Of The University Of California | Modified adenylylcyclase type vi useful in gene therapy for congestive heart failure |
| DE60142023D1 (de) | 2000-01-12 | 2010-06-17 | Univ Yale | Nogo rezeptor-vermittelte blockade des axonalen wachstums |
| AU2001245988A1 (en) | 2000-03-24 | 2001-10-08 | Biosphere Medical, Inc. | Microspheres for active embolization |
| GB0018307D0 (en) | 2000-07-26 | 2000-09-13 | Aventis Pharm Prod Inc | Polypeptides |
| US7060442B2 (en) | 2000-10-30 | 2006-06-13 | Regents Of The University Of Michigan | Modulators on Nod2 signaling |
| BR0116756A (pt) | 2000-12-28 | 2005-01-04 | Wyeth Corp | Proteìna protetora recombinante de streptococcus pneumoniae e uso da mesma |
| EP1967525B1 (en) | 2001-05-08 | 2012-11-14 | Darwin Molecular Corporation | A method for regulating immune function in primates using the foxp3 protein |
| AUPR518501A0 (en) | 2001-05-22 | 2001-06-14 | Unisearch Limited | Yin yang-1 |
| AU2002325346A1 (en) | 2001-07-05 | 2003-01-21 | Aventis Pharma S.A. | Method of administration of a gene of interest to the heart and vasculature |
| US7582425B2 (en) | 2001-09-21 | 2009-09-01 | The Regents Of The University Of Michigan | Atlastin |
| US7108975B2 (en) | 2001-09-21 | 2006-09-19 | Regents Of The University Of Michigan | Atlastin |
| US20040023910A1 (en) * | 2001-09-28 | 2004-02-05 | Zhiming Zhang | Use of cyr61 in the treatment and diagnosis of human uterine leiomyomas |
| MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
| AU2002365223A1 (en) | 2001-10-26 | 2003-09-02 | Id Biomedical Corporation Of Washington | Multivalent streptococcal vaccine compositions and methods for use |
| WO2003049763A1 (en) | 2001-12-12 | 2003-06-19 | Fh Faulding & Co Limited | Composition for the preservation of viruses |
| US20030158112A1 (en) | 2002-02-15 | 2003-08-21 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Selective induction of apoptosis to treat ocular disease |
| WO2003100008A2 (en) | 2002-05-24 | 2003-12-04 | Schering Corporation | Neutralizing human anti-igfr antibody |
| US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
| FR2845395B1 (fr) * | 2002-10-08 | 2008-05-30 | Agronomique Inst Nat Rech | Vecteurs adenoviraux recombinants et leurs applications |
| US9532994B2 (en) | 2003-08-29 | 2017-01-03 | The Regents Of The University Of California | Agents and methods for enhancing bone formation by oxysterols in combination with bone morphogenic proteins |
| US7432057B2 (en) | 2004-01-30 | 2008-10-07 | Michigan State University | Genetic test for PSE-susceptible turkeys |
| RU2448157C2 (ru) | 2004-05-26 | 2012-04-20 | Псиоксус Терапьютикс Лимитед | Химерные аденовирусы для применения для лечения злокачественного новообразования |
| US7604798B2 (en) | 2004-07-15 | 2009-10-20 | Northwestern University | Methods and compositions for importing nucleic acids into cell nuclei |
| BRPI0513390A (pt) | 2004-07-16 | 2008-05-06 | Us Gov Health & Human Serv | vacinas contra aids contendo construções de ácido nucléico cmv/r |
| SI2002003T1 (sl) | 2005-05-27 | 2016-05-31 | Ospedale San Raffaele S.R.L. | Genski vektor, ki vsebuje mi-RNA |
| AU2007217366A1 (en) | 2006-02-27 | 2007-08-30 | The Regents Of The University Of California | Oxysterol compounds and the hedgehog pathway |
| AU2007276793B2 (en) | 2006-07-28 | 2014-01-16 | Sanofi | Composition and method for treatment of tumors |
| PL2829551T3 (pl) | 2006-10-19 | 2018-04-30 | Csl Limited | Antagonisty przeciwciała o wysokim powinowactwie wobec receptora alfa 1 interleukiny-13 |
| CA2666682C (en) | 2006-10-19 | 2014-07-08 | Merck & Co., Inc. | Anti-il-13r.alpha.1 antibodies and their uses thereof |
| AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
| CN101951915A (zh) | 2007-12-03 | 2011-01-19 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于刺猬蛋白信号、骨诱导、抗脂肪形成和wnt信号的激活的氧固醇 |
| CN102203122A (zh) | 2008-11-05 | 2011-09-28 | 惠氏有限责任公司 | 用于预防β-溶血链球菌(BHS)疾病的多组分免疫原性组合物 |
| EP2373338B1 (en) | 2008-12-03 | 2017-02-15 | The Johns Hopkins University | Annexina2 as immunological target |
| ES2629630T3 (es) * | 2008-12-04 | 2017-08-11 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con eritropoyetina (EPO) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a EPO |
| WO2010096561A1 (en) | 2009-02-18 | 2010-08-26 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Synthetic hiv/siv gag proteins and uses thereof |
| WO2011116351A2 (en) | 2010-03-19 | 2011-09-22 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| ES2664572T3 (es) * | 2010-05-26 | 2018-04-20 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el homólogo atonal 1 (ATOH1) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a ATOH1 |
| HUE054179T2 (hu) * | 2010-06-23 | 2021-08-30 | Curna Inc | Nátriumcsatornás, feszültségfüggõ, alfa alegységgel (SCNA) kapcsolatos betegségek kezelése a természetes antiszensz (SCNA)-transzkripció gátlásával |
| EP2608805B1 (en) | 2010-08-23 | 2017-07-05 | Wyeth LLC | STABLE FORMULATIONS OF NEISSERIA MENINGITIDIS rLP2086 ANTIGENS |
| MY166172A (en) | 2010-09-10 | 2018-06-07 | Wyeth Llc | Non-lipidated variants of neisseria meningitidis orf2086 antigens |
| US9458456B2 (en) | 2011-04-01 | 2016-10-04 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer |
| WO2013103401A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| EP4043029A1 (en) | 2012-03-09 | 2022-08-17 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
| CN104395331B (zh) | 2012-05-07 | 2016-11-02 | 加利福尼亚大学董事会 | 诱导骨生成和hedgehog 信号传导且抑制脂肪形成的氧固醇类似物氧固醇化合物133 |
| WO2014107739A1 (en) | 2013-01-07 | 2014-07-10 | Eleven Biotherapeutics, Inc. | Antibodies against pcsk9 |
| EP2946016A4 (en) * | 2013-01-15 | 2016-11-23 | Univ California | ADENOVIRES AND THEIR USE |
| CA2903716C (en) | 2013-03-08 | 2019-04-09 | Pfizer Inc. | Immunogenic fusion polypeptides |
| US10981961B2 (en) | 2013-03-11 | 2021-04-20 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Delivery of card protein as therapy for occular inflammation |
| EP2991652A4 (en) | 2013-05-02 | 2016-12-07 | Univ California | BONE-LAYERED BONE-RELATED OSTEOGENIC OXYSTEROL AGENTS |
| EP3041502A2 (en) | 2013-09-08 | 2016-07-13 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| EP3372236A1 (en) | 2013-10-25 | 2018-09-12 | PsiOxus Therapeutics Limited | Oncolytic adenoviruses armed with heterologous genes |
| WO2015127094A1 (en) | 2014-02-19 | 2015-08-27 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Delivery of nrf2 as therapy for protection against reactive oxygen species |
| KR102335810B1 (ko) * | 2014-06-17 | 2021-12-03 | 니뽄 신야쿠 가부시키가이샤 | 안티센스 핵산 |
| IL292999A (en) | 2014-11-14 | 2022-07-01 | Voyager Therapeutics Inc | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als) |
| WO2016122791A1 (en) | 2015-01-30 | 2016-08-04 | The Regents Of The University Of California | Spinal subpial gene delivery system |
| CN107249626A (zh) | 2015-02-19 | 2017-10-13 | 辉瑞大药厂 | 脑膜炎奈瑟球菌组合物及其方法 |
| CA2984038C (en) | 2015-04-30 | 2023-01-03 | Psioxus Therapeutics Limited | Oncolytic adenovirus encoding a b7 protein |
| CN108289909A (zh) | 2015-10-19 | 2018-07-17 | 巴尔的摩马里兰大学 | 用于产生工程改造的人原代血液树突细胞系的方法 |
| US11155622B2 (en) | 2015-12-17 | 2021-10-26 | Psioxus Therapeutics Limited | Virus encoding an anti-TCR-complex antibody or fragment |
| CN108884022B (zh) | 2016-03-28 | 2022-01-28 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于治疗神经元的过度兴奋的方法和组合物 |
| US11560412B2 (en) | 2016-04-01 | 2023-01-24 | University Of Maryland, Baltimore | Compositions comprising GRIM-19 therapeutics and methods of use |
| JP7045362B2 (ja) | 2016-04-20 | 2022-03-31 | セントロ デ インベスティガシオンス エネルジェチカス メディオアンビエンタゥス イェ テクノロジカス オー．エイ． エム．ピー． | Ｐｋｌｒの遺伝子発現増強のための組成物および方法 |
| GB201713765D0 (en) | 2017-08-28 | 2017-10-11 | Psioxus Therapeutics Ltd | Modified adenovirus |
| KR102427563B1 (ko) | 2016-08-29 | 2022-08-03 | 싸이오서스 테라퓨틱스 엘티디. | 이중특이성 T 세포 활성화제(Bispecific T cell activator)가 보강된 아데노바이러스 |
| EA201990711A1 (ru) | 2016-09-20 | 2019-09-30 | Бёрингер Ингельхайм Ветмедика Гмбх | Новый ehv сайт инсерции orf70 |
| US10329586B2 (en) | 2016-09-20 | 2019-06-25 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Canine adenovirus vectors |
| MY199909A (en) | 2016-09-20 | 2023-11-29 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Promoters |
| EP3515480A1 (en) | 2016-09-20 | 2019-07-31 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | New swine influenza vaccine |
| PE20191107A1 (es) | 2017-01-31 | 2019-08-26 | Pfizer | Composiciones de neisseria meningitidis y metodos respectivos |
| AU2018352236A1 (en) | 2017-10-16 | 2020-04-23 | The Curators Of The University Of Missouri | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) |
| EP3697452A4 (en) | 2017-10-16 | 2021-11-24 | Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas, O.A., M.P. | LENTIVIRAL VECTORS FOR THE ADMINISTRATION OF PKLR TO TREAT PYRUVATE KINASE DEFICIENCY |
| WO2019079242A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS) |
| US12036257B2 (en) | 2017-10-31 | 2024-07-16 | Kalivir Immunotherapeutics, Inc. | Platform oncolytic vector for systemic delivery |
| CN112567035A (zh) | 2018-07-02 | 2021-03-26 | 沃雅戈治疗公司 | 肌萎缩侧索硬化症及脊髓相关病症的治疗 |
| WO2020010035A1 (en) | 2018-07-02 | 2020-01-09 | Voyager Therapeutics, Inc. | Cannula system |
| WO2021247995A2 (en) | 2020-06-04 | 2021-12-09 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating neuropathic pain |
| CA3185267A1 (en) | 2020-08-07 | 2022-02-10 | Spacecraft Seven, Llc | Plakophilin-2 (pkp2) gene therapy using aav vector |
| CA3215344A1 (en) | 2021-04-30 | 2022-11-03 | Kalivir Immunotherapeutics, Inc. | Oncolytic viruses for modified mhc expression |
| CA3234811A1 (en) | 2021-10-20 | 2023-04-27 | Steven Goldman | Rejuvenation treatment of age-related white matter loss |
| CA3236365A1 (en) | 2021-11-02 | 2023-05-11 | University Of Rochester | Tcf7l2 mediated remyelination in the brain |
| WO2024091824A1 (en) | 2022-10-26 | 2024-05-02 | Ada Forsyth Institute, Inc. | Differentiation and reprogramming of chondrocyte |
| WO2024163747A2 (en) | 2023-02-02 | 2024-08-08 | University Of Rochester | Competitive replacement of glial cells |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA858044B (en) * | 1984-11-01 | 1987-05-27 | American Home Prod | Oral vaccines |
| IE903130A1 (en) * | 1989-09-15 | 1991-03-27 | Regeneron Pharma | Ciliary neurotrophic factor |
| GB9001766D0 (en) * | 1990-01-25 | 1990-03-28 | Univ Court Of The University O | Vaccines |
| FR2681786A1 (fr) * | 1991-09-27 | 1993-04-02 | Centre Nat Rech Scient | Vecteurs recombinants d'origine virale, leur procede d'obtention et leur utilisation pour l'expression de polypeptides dans des cellules musculaires. |
| FR2688514A1 (fr) * | 1992-03-16 | 1993-09-17 | Centre Nat Rech Scient | Adenovirus recombinants defectifs exprimant des cytokines et medicaments antitumoraux les contenant. |
| AU670933B2 (en) * | 1992-03-27 | 1996-08-08 | Collimore Enterprises Pty Ltd | Formwork device |
-
1993
- 1993-05-18 FR FR9305954A patent/FR2705361B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-05-06 CN CN94192150A patent/CN1067722C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 DE DE69429260T patent/DE69429260T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 PL PL94311660A patent/PL182814B1/pl unknown
- 1994-05-06 HU HU9503297A patent/HU221340B1/hu unknown
- 1994-05-06 US US08/553,317 patent/US6294377B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 EP EP94916259A patent/EP0698108B2/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 PT PT94916259T patent/PT698108E/pt unknown
- 1994-05-06 ES ES94916259T patent/ES2167365T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 DK DK94916259T patent/DK0698108T4/da active
- 1994-05-06 CZ CZ953028A patent/CZ284903B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 WO PCT/FR1994/000531 patent/WO1994026914A1/fr active IP Right Grant
- 1994-05-06 AU AU67878/94A patent/AU696495B2/en not_active Expired
- 1994-05-06 RU RU95122419/13A patent/RU2233333C2/ru active
- 1994-05-06 BR BR9406720A patent/BR9406720A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-05-06 NZ NZ266475A patent/NZ266475A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 AT AT94916259T patent/ATE209686T1/de active
- 1994-05-06 KR KR1019950705128A patent/KR100379569B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 CA CA002163256A patent/CA2163256C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 SK SK1447-95A patent/SK282354B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 UA UA95114778A patent/UA66417C2/xx unknown
- 1994-05-06 JP JP52504994A patent/JP3995259B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-12 IL IL10964494A patent/IL109644A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-05-16 ZA ZA943358A patent/ZA943358B/xx unknown
-
1995
- 1995-11-07 NO NO19954466A patent/NO320818B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-11-17 FI FI955552A patent/FI118538B/fi not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-02-05 JP JP2004029636A patent/JP2004180689A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU221340B1 (en) | Adenoviral vectors of animal origin and use thereof in gene therapy | |
| JP3816952B2 (ja) | 治療遺伝子と免疫保護遺伝子とを含む欠陥アデノウイルス | |
| RU2219241C2 (ru) | Дефектный рекомбинантный аденовирусный вектор (варианты) | |
| KR100510822B1 (ko) | 재조합 아데노바이러스 제조용 세포 | |
| KR100403708B1 (ko) | 재조합아데노-수반바이러스(aav)제조방법및이의용도 | |
| JP4733795B2 (ja) | ヒツジアデノウイルスベクターを用いた遺伝子治療 | |
| JP4376454B2 (ja) | アデノウイルスベクター及び相同組換えイベントの低減方法 | |
| KR19980702139A (ko) | 재조합 아데노바이러스 게놈의 제조방법 | |
| AU699867B2 (en) | Recombinant adenoviruses for gene therapy in cancers | |
| US6200798B1 (en) | Defective recombinant adenoviruses with inactivated IVa2 gene | |
| EP3305904B1 (en) | Poxvirus-derived promoter, and vector comprising same | |
| US7264818B2 (en) | BAV packaging regions and E1 transcriptional control regions | |
| US7687615B2 (en) | PAV regions for encapsidation and E1 transcriptional control |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: AVENTIS PHARMA S.A., FR Free format text: FORMER OWNER(S): RHONE-POULENC RORER S.A., FR; CENTELION, FR; GENCELL S.A., FR |