HU219823B - Oligonukleotidok izoprenil-protein-transzferázok kifejeződésének gátlására - Google Patents
Oligonukleotidok izoprenil-protein-transzferázok kifejeződésének gátlására Download PDFInfo
- Publication number
- HU219823B HU219823B HU9501913A HU9501913A HU219823B HU 219823 B HU219823 B HU 219823B HU 9501913 A HU9501913 A HU 9501913A HU 9501913 A HU9501913 A HU 9501913A HU 219823 B HU219823 B HU 219823B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- sequence
- seq
- antisense
- oligonucleotide molecule
- oligonucleotides
- Prior art date
Links
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 64
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 title claims abstract description 18
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- -1 isoprenyl Chemical group 0.000 title claims abstract description 9
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 41
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 44
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 42
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 20
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 7
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 125000004030 farnesyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000002686 geranylgeranyl group Chemical group [H]C([*])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 abstract description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 7
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 abstract description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 55
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 5
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 5
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 4
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 4
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000013823 prenylation Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical group C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 108700038606 rat Smooth muscle Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- VEKHORVJMXDXNE-UHFFFAOYSA-N 2-cyanoethoxyphosphonamidic acid Chemical compound NP(O)(=O)OCCC#N VEKHORVJMXDXNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000010159 Duncan test Methods 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000283977 Oryctolagus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229940059260 amidate Drugs 0.000 description 1
- 210000003433 aortic smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229950004398 broxuridine Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013265 extended release Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003090 iliac artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000006122 isoprenylation Effects 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical group 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 108091005629 prenylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y205/00—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5)
- C12Y205/01—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5) transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5.1)
- C12Y205/01029—Geranylgeranyl diphosphate synthase (2.5.1.29)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Virology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
A találmány izoprenil-proteintranszferázok kifejeződését gátló hatásúoligonukleotidokra és ezek származékaira vonatkozik. A találmánytárgyát képezik továbbá a szóban forgó vegyületeket tartalmazógyógyszerkészítmények, amelyek emberi vagy állati szervezetek olyanmegbetegedéseinek gyógykezelésére alkalmasak, melyeknek kiváltója azabnormális és/vagy szabályozatlan sejtszaporodás. ŕ
Description
A találmány izoprenil-proteintranszferázok kifejeződését gátló hatású oligonukleotidokra és ezek származékaira vonatkozik. A találmány tárgyát képezik továbbá a szóban forgó vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények, amelyek emberi vagy állati szervezetek olyan megbetegedéseinek gyógykezelésére alkalmasak, melyeknek kiváltója az abnormális és/vagy szabályozatlan sejtszaporodás.
Bármely élő szervezetnek, legyen az akár egysejtű vagy többsejtű jellemző tulajdonsága a szaporodás. Ennek a jelenségnek előfeltétele, hogy az örökítőanyagokból (DNS stb.) pontos másolatok készüljenek és azok egyenlő mennyiségben kerüljenek a létrejövő utódsejtekbe. Sok különféle mitogénaktivitású molekula ismeretes, melyek sejtspecifikus módon hatnak. A polipeptid típusú, úgynevezett szignálmolekulák vagy növekedési faktorok nagyon kis mennyiségben, a célsejtekkel kapcsolatba lépve olyan eseménysort idéznek elő, mely kiváltja a DNS-replikációt és a mitózist.
A növekedési faktorok nem közvetlenül a sejtciklusra hatnak, hanem a célsejt plazmamembránjának felszínén lévő transzmembránreceptorok sorával lépnek kapcsolatba és aktiválják őket. Ez a mechanizmus a sejtben láncreakciót indít el, mely mitózishoz vezet. Ugyanaz a receptor sejttípusonként más-más intracelluláris jelenségek beindításáért lehet felelős.
A növekedési faktor és a receptor kapcsolódásának egyik legelső lépéseként a proteinkináz-enzim aktiválása és fehéijék foszforilálása következik be. Ebben a jelátvitelben közreműködő fehérjék egyike a ras fehérje, mely 21 kD molekulatömegű prenilezett protein. A prenilezés poszttranszlációs módosítás, melynek során a fehérjékben lévő cisztein- és izoprenilcsoportok között kovalens kötés jön létre. Ilyen módon az izoprenilezés biztosíthatja a famezil- vagy a geranil-geranil-csoport átvitelét a célfehérjére. Ez a módosítás lehetővé teszi, hogy bizonyos fehéijék a membrán aktív helyéhez kapcsolódjanak. A prenilezés gátlásának egyik következménye így az extracelluláris jelek sejtmaghoz történő továbbításának, és ezáltal a sejtszaporodás megindulásának a megakadályozása.
Ez idáig háromfajta enzimtipus ismeretes, mely a prenilezést katalizálja: a famezil-proteintranszferáz, valamint az 1. és 2. típusú geranil-geranil-proteintranszferáz. Valamennyi enzim felismeri a szubsztrátfehérjék karboxi-terminális végén lévő konszenzusszekvenciát.
Ezen enzimek szintézisének megszüntetése azzal a következménnyel jár, hogy a sejtszaporodáshoz vezető fő jelátviteli utak elzáródnak.
A hagyományosan alkalmazott hatóanyagok a fehérjékkel, a genetikai információ transzlációjának termékeivel lépnek kapcsolatba és gátolják funkciójukat. A jelen találmány ezzel szemben modem terápiás megközelítésre, „antisense” stratégiára irányul. Ez a megoldás a génexpresszió szelektív megváltoztatását jelenti oly módon, hogy valamely nukleotidlánc (oligonukleotid) kapcsolódik a vele komplementer szekvenciához a DNS-, mRNS- vagy pre-mRNS-molekulán, és ezáltal megakadályozza a megfelelő fehérje szintézisét. Az e célra alkalmazott molekulák közvetlenül a genetikai információ átvitelének láncolatában fejtik ki hatásukat.
A transzkripciós termékeket kódoló génszekvenciákkal komplementer oligonukleotidokat nevezik „antisense” oligonukleotidoknak. A transzkripciós termékeket kódoló génszekvenciákkal megegyező szekvenciájú oligonukleotidokat „sense” oligonukleotidoknak hívják. Kezdetben ezeket a vegyületeket arra a célra tervezték, hogy az adott géntermék képződését a megfelelő mRNS-nek az RNáz H enzim által katalizált hidrolitikus hasításával akadályozzák meg. Hamarosan kiderült azonban, hogy ezeknek az „antisense” oligonukleotidoknak a hatásmechanizmusa korántsem ilyen egyszerű. A szóban forgó oligonukleotidok ugyanis kölcsönhatásba léphetnek különféle nem nukleinsav jellegű sejtalkotókkal is. Az „antisense” oligonukleotidok hozzákapcsolódhatnak a génhez, és a keletkező hármas helikális szerkezet megakadályozhatja a transzkripciós termék keletkezését. Ezek az oligonukleotidok a pre-mRNSmolekula intron-exon kapcsolódási pontjaival is kölcsönhatásba léphetnek, megzavarva így a transzkripciós termék helyes hasítását. Az oligonukleotidok a citoplazmában az mRNS-molekulával hibridizálódva RNSDNS duplexet hozhatnak létre, mely egyrészt gyorsan lebomlik az RNáz H enzim hatására, másrészt pedig lehetetlenné teszi a riboszómakomplex továbbhaladását az mRNS-szálon, megakadályozva ezzel a transzlációt. Az oligonukleotidok, különösen pedig a módosított oligonukleotidok ezen túlmenően kölcsönhatásba léphetnek egy sor, a sejtben lévő vegyülettel, így például a fehéijékkel is. Mindezek a kölcsönhatások lehetnek szekvenciaspecifikusak (például a transzkripciós faktorok esetében) vagy nem szekvenciaspecifikusak (például a növekedési faktorok esetében). Ilyen módon oligonukleotidokkal (1-36. szekvencia) előidézhető a sejtbuijánzás leállítása bármelyik fenti mechanizmus vagy azok tetszőleges kombinációja által.
A találmány különösen a fentiekben említett enzimek szintézisének „antisense” oligonukleotidok alkalmazásával történő megakadályozására irányul. Ennek alapján a szóban forgó oligonukleotidok sejtburjánzást gátló ágensként használhatók a szív- és érrendszeri megbetegedések, a rákos folyamatok, bőrbetegségek, bizonyos vírusfertőzések, valamint egyéb, sejtbuijánzással járó kóros elváltozások kezelésében.
Az „antisense” technika alkalmazása során „antisense” oligonukleotidok vagy „antisense” RNS-molekulák használhatók. A két módszer mindazonáltal eltérő. Az utóbbiak esetében a génből származó DNS-szakaszt a normálissal ellentétes irányban építik be a vektor-DNS-be, és így a szóban forgó vektor transzkripciója során egyik DNS-láncon RNS-másolat készül. A fordított génfragmens beépítése olyan RNS in situ szintézisét eredményezi, mely komplementere a sejt által készített normális mRNS-molekulának. Ez az RNS, melyet „antisense” RNS-nek neveznek, hibridizálódni képes a normális körülmények között expresszálódó mRNSmolekulával, és így meggátolja a célfehérje transzlációját. Ezt a módszert alkalmazták Prendergast és munkatársai [Cell Growth and Differentiation, 4, 707-713
HU 219 823 Β (1993)] a famezil-proteintranszferáz szerepének vizsgálata során. A famezil-proteintranszferáz β-alegységét kódoló cDNS klónozását és tisztítását követően génmanipulált célsejtekben expresszálták in situ az „antisense” RNS-t.
Az „antisense” RNS-technika különösen alkalmas eszköz a fehétjék sejtben játszott szerepének felderítésére, de alkalmasint terápiás ágensként is szóba jöhet bonyolult génterápiás protokoll szerint. Az „antisense” oligonukleotidok azonban vonzóbb gyógyszerhatóanyagok, melyeket az engedélyező hatóság klasszikus kémiai vegyületnek tekint. Ezen túlmenően az oligonukleotidok nagy tételben egyszerűen szintetizálhatok klaszszikus vegyészeti módszerekkel, míg az „antisense” RNS-molekulák csak biológiai rendszerekkel állíthatók elő, és további nehézségek is mutatkoznak ipari méretű gyártásukat illetően.
Famezil-proteintranszferázok adagolási módszerére vonatkozik az EP 456180 számú szabadalom. Ez a módszer közelebbről a fameziltranszferázok potenciális inhibitorainak aktivitásmérését teszi lehetővé. Semmi esetre sem alkalmas ez a technika arra, hogy a famezil-proteintranszferázok új, potenciális inhibitorainak szerkezetét meghatározza, és a leírás nem tartalmazza a jelen találmány szerinti molekulák egyikét sem.
A jelen találmány olyan („antisense” vagy „sense”) oligonukleotidokra vonatkozik, amelyek szelektíven képesek hibridizálódni az izoprenil-proteintranszferázok alegységeinek, előnyösen az a- és/vagy β-alegységnek a génjével vagy annak transzkripciós termékeivel. A szóban forgó oligonukleotid mérete 2 és 50 egység közötti, előnyösen 8 és 35 egység közti. Legelőnyösebben a találmány szerinti oligonukleotid 10 és 25 egység közötti méretű.
A jelen találmány szerinti oligonukleotidok bármely ismert, az oligonukleotidok szintézisére szolgáló kémiai módszerrel előállíthatok. Legelőnyösebben a kereskedelemben kapható automata nukleinsavszintetizátorok alkalmazásával készíthetők el az oligonukleotidok. Az oligonukleotidok szintézisének egyik módja a sok közül a Beaucage és munkatársai által leírt βciano-etil-foszforamidát módszer [Tetrahedron Letters, 22, 1859-1862 (1981)].
A jelen találmány az ilyen oligonukleotidok származékaira is vonatkozik, így a molekula teljes gerincén, illetve a 3’-, az 5’- vagy mindkét végén módosított oligonukleotidokra is. Az oligonukleotidok érzékenyek az enzimatikus támadásra, a nukleázok nukleotidokká hidrolizálják őket. Az oligonukleotidok módosítás révén azonban ellenállóvá tehetők a nukleázokkal szemben. Ez történhet a cukorkomponens kémiai jellegének vagy a nukleotidok közötti foszfát-cukor kötésnek a megváltoztatásával. Utóbbi esetre megoldás, ha a foszfo-diészter-láncot például foszforo-tioát-, foszforo-ditioát-, metil-foszfonát-, foszforamidát-, foszfo-etil-triészter-, butil-amidát-, piperazidát- vagy morfolidátlánccal helyettesítjük. Más típusú módosítások a lánc teljes hoszszát, illetve a 3’- és/vagy 5’-véget érinthetik annak érdekében, hogy az oligonukleotidoknak nagyobb ellenálló képességet biztosítsanak a biológiai környezetben.
A nukleotidok közötti foszfátkötések például amidkötésekre cserélhetők (peptidnukleinsavak). Az oligonukleotidok membránon való átjutása elősegíthető hidrofóbbá tételükkel, ami megoldható oly módon, hogy hidrofób szubsztituenseket, például koleszterint, aromás csoportokat vagy alkalmas polimert kapcsolunk hozzájuk. Módosított bázisok is beépíthetők az oligonukleotid-lánc egyes részleteibe vagy akár annak teljes hoszszán. Nukleázrezisztenciát, fokozott hibridizációs képességet vagy jobb sejtbe való bejutást biztosító, konformációsán módosított nukleotidok (például az a-anomer konformációjú oligonukleotidok) építhetők be az oligonukleotid-lánc egyes részleteibe vagy akár annak teljes hosszán. így a „származék” kifejezés a fent leírt, illetve a szakmában jártas szakember által ismert egyéb módszerek bármelyikével módosított nukleotidokra egyaránt vonatkozik.
A találmány szerinti előnyös oligonukleotidok az 1-36. nukleotidszekvenciákkal jellemezhetők. Komplementerszekvenciáik, illetve „sense” oligonukleotid-párjaik a találmány értelmében szintén alkalmazhatók.
A találmány mindazokra az oligonukleotidokra is vonatkozik, melyek az 1 -36. szekvenciáknak legalább egy részletét tartalmazzák.
A találmány tárgyát képezik továbbá azok a gyógyászati készítmények, melyek aktív hatóanyagként legalább egy, a találmány szerinti „antisense” oligonukleotidot, valamint az adott alkalmazásnak megfelelően kiválasztott, gyógyászatilag elfogadható hígítóés/vagy hordozóanyagot tartalmaznak. A készítmény szolgálhat helyi vagy szisztémás kezelésre egyaránt. Az alkalmazás módjának megfelelően lehet injektálható folyadék, liposzómába zárt vagy elnyújtott hatású készítmény, illetve gél, kenőcs vagy más tetszőleges kiszerelési forma.
Végül a találmány a szóban forgó készítmény gyógyászati alkalmazására is vonatkozik abnormális és/vagy szabályozatlan sejtszaporodással járó emberi vagy állati megbetegedések kezelése során.
Az alábbi példák a találmány jobb érthetőségét szolgálják.
1. példa
Az „ antisense ” oligonukleotidok hatása patkány-simaizomsejtek szaporodására
Hím Wistar patkány aortából származó simaizomsejteket kollagenáz- és elasztázenzimekkel végzett emésztéssel izoláltunk, és DMEM táptalajon, 10% magzati botjúszérum (FCS), 2 mM glutamin, 50 egység/ml penicillin, valamint 50 pg/ml sztreptomicin jelenlétében tenyésztettünk. A 24 zsebes mikrotitrálólemezeken végzett 3. és 7. passzálás közötti sejteket használtuk fel.
Három nap tenyésztés után a sejteket szérumban pihentettük 72 órán át. Ezután a sejteket - adott esetben 1% szérum vagy 5 ng/ml bFGF (basic fibroblast growth factor) hozzáadásával végzett stimulálás után - a találmány szerinti termékekkel kezeltük 10~5 M koncentrációban, 24 órán át. Négy órával az inkubáció vége előtt a sejteket triciált timidinnel (1 pCi/ml) jelöltük. A be3
HU 219 823 Β épülést 5% triklór-ecetsav hozzáadásával 10 perc alatt leállítottuk, majd a sejteket 500 μΐ 0,5 N nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük. Ezután 400 ml térfogatú aliquot mintákat vettünk, melyeket 400 μΐ 0,5 N sósavat és 10 ml Instagel-t tartalmazó szcintillációs edényekbe 5 mértünk.
Az oligonukleotidok aktivitását a sejtburjánzás százalékában mért értéke alapján határoztuk meg. A kapott eredményeket a következő táblázat tartalmazza.
| Sejtszaporodás (%) | ||
| (nem stimulált) | (bFGF stimulált) | |
| Kontroll | 100 | 100 |
| 1. szekvencia | 38 | 37 |
| 2. szekvencia | 35 | 40 |
| 3. szekvencia | 75 | 90 |
| 4. szekvencia | 114 | 100 |
| 5. szekvencia | 24 | 13 |
| Sejtszaporodás (%) | ||
| (nem stimulált) | (bFGF stimulált) | |
| 6. szekvencia | 49 | 70 |
| 7. szekvencia | 40 | 40 |
| 8. szekvencia | 119 | 70 |
| 21. szekvencia | 88 | 100 |
| 22. szekvencia | 89 | 86 |
| 23. szekvencia | 58 | 59 |
| 30. szekvencia | 121 | 225 |
| 31. szekvencia | 103 | 111 |
| 32. szekvencia | 111 | 204 |
| 33. szekvencia | 9 | 2 |
| 34. szekvencia | 10 | 2 |
| 35. szekvencia | 13 | 2 |
| 36. szekvencia | 12 | 2 |
2. példa
Dózis/hatás vizsgálat - Az „antisense” oligonukleotidok hatása patkány-simaizomsejtek szaporodására A kísérlet kivitelezése az 1. példában ismertetett módon történt. A sejteket a találmány szerinti vegyületekkel kezeltük ΙΟ-9 Μ, ΙΟ-8 Μ, ΙΟ-7 Μ, ΙΟ-6 M és 10~5 M koncentrációban.
| Koncentráció | Sejtszaporodás (%) | |||||
| 0 | 10’M | 10-8 M | 10_7M | 10-6M | ΙΟ-5 M | |
| 1. szekvencia | 100 | 99 | 108 | 107 | 64 | 25 |
| 2. szekvencia | 100 | 86 | 81 | 90 | 50 | 14 |
| 5. szekvencia | 100 | 95 | 80 | 100 | 66 | 20 |
| 6. szekvencia | 100 | 87 | 69 | 84 | 48 | 20 |
| 7. szekvencia | 100 | 102 | 98 | 96 | 59 | 28 |
3. példa
A méret hatása az „ antisense ” oligonukleotidok in vitro biológiai aktivitására
A kísérlet kivitelezése az 1. példában ismertetett módon történt. A sejteket a találmány szerinti vegyületekkel kezeltük.
| Koncentráció (μΜ) | Gátlóhatás (%) | ||
| (nem stimulált) | (bFGF-vel stimulált) | ||
| Kontroll | - | 0 | 0 |
| 5. szekvencia | 10 | 76 | 87 |
| 30. szekvencia | 10 | -21 | -125 |
| 31. szekvencia | 10 | -3 | -11 |
| 32. szekvencia | 10 | -11 | -104 |
| 2. szekvencia | 1 | 33 | 4 |
| 33. szekvencia | 1 | 87 | 85 |
| 34. szekvencia | 1 | 83 | 89 |
| 35. szekvencia | 1 | 81 | 89 |
| 36. szekvencia | 1 | 85 | 89 |
HU 219 823 Β
4. példa
Az „ antisense ” oligonukleotidok in vivő sejtszaporodást gátló hatásának vizsgálata angioplasztiás modellen (patkány vagy nyúl)
Normális vémyomású hím Wistar patkányokat, illetve New-Zealand nyulakat érzéstelenítettünk és felnyitottunk, hogy hozzáférjünk a csípőartériához. Az artériát megtisztítottuk a környező kötőszövettől és French Fogarty katétert vezettünk bele. A ballont levegővel feltöltve kitágítottuk az artériát, majd háromszor fel- és levezettük, hogy laphámmentes sérülést hozzunk létre.
A 25%-os Pluronic gélben szolubilizált oligonukleotidot azonnal az artériára juttattuk, hogy azt körülvegye. A sebet bezártuk, majd az állatokat 21 nap elteltével megöltük. A laphámmentes artériából készített metszeteket hisztomorfometriás analízisnek vetettük alá, és az intimális, valamint a mediális területek nagyságát megmértük.
A sejtszaporodás százalékos mértékét az (intimális terület)/(intimális+mediális terület) arány alapján határoztuk meg.
1. táblázat
| Nyúl-angioplasztiás modell | ||
| Koncentráció (Fg) | Sejtszaporodás (%) | |
| Kontroll | 33,6+8,8 | |
| Placebo (Pluronic F127 gél) | 31,7+5,9 | |
| 2. szekvencia + 5. szekvencia | 200 + 200 | 16,5+4,8 |
2. táblázat
| Patkány-angioplasztiás modell | ||
| Koncentráció (Fg) | Sejtszaporodás (%) | |
| Kontroll | 46,71+4,35 | |
| Placebo (Pluronic FI 27 gél) | 45,20+3,99 | |
| 2. szekvencia | 200 | 28,63+5,51 |
| 2. szekvencia (sense) | 200 | 26,92+3,40 |
| 5. szekvencia | 200 | 34,99+3,06 |
| 5. szekvencia (sense) | 200 | 38,37+2,54 |
Megállapodás szerint a leírásban mindenütt a „(sense)” kifejezés a megfelelő oligonukleotidszekvencia komplementerét jelenti.
5. példa
a) A farnezil-proteintranszferáz „sense” és „antisense” oligonukleotidok in vitro hatásának vizsgálata C6 patkány-gliomasejtekben
A sejteket ötezresével tenyészedényekben levő, 5% lószérummal, valamint 2,5% magzati borjúszérummal kiegészített táptalajra oltottuk, és a tenyészeteket 24 órán át inkubáltuk. Ezután a táptalajt lecseréltük szérummentes, lipofektint tartalmazó friss tápközegre, mely adott esetben különböző oligonukleotidokat tartalmazott 5 mM koncentrációban a transzfekció lefolytatása érdekében. Ötórás inkubálás után a táptalajt újból a kezdetire (5% lószérummal, valamint 2,5% magzati borjúszérummal kiegészítettre) cseréltük, és az inkubálást 37 °C-on további 72 órán át folytattuk. A sejtszaporodást tripszines emésztés utáni sejtszámméréssel értékeltük, melyet Coulter Counter modell-ZM-készülékkel végeztünk.
| 1. nap | 3. nap | |
| Kontroll | 267 000+9 900 | 2 080 000+28 700 |
| 5. szekvencia | 138 000+4 500 | 1 090 000+10 400 |
| 5. szekvencia (sense) | 288 500+43 700 | 2 040 000+25 200 |
| 2. szekvencia | 220 000+12 600 | 1 990 000+17 500 |
| 2. szekvencia (sense) | 157 300+11 400 | 1 150 000+57 500 |
b) A farnezil-proteintranszferáz a-alegység „sense és „antisense oligonukleotidok hatásának vizsgálata az idő függvényében Az előzőekben leírt módon elvégzett kísérlet során a kontroll-, illetve az oligonukleotidokkal kezelt tenyészetekből párhuzamos mintákat vettünk a 3., 7. és 14. napon. A mérési eredményekből számított p érték valamennyi esetben 0,05% alatt maradt.
| Nap | Kontroll (sejtszám) | 5. szekvencia (5 μΜ) (sejtszám) |
| 0. | 5 000 | 5 000 |
| 3. | 950 000 | 350 000 |
| 7. | 2 100 000 | 600 000 |
| 14. | 3 750 000 | 1 350 000 |
6. példa
Sejtburjánzás-ellenes hatás vizsgálata patkányglioblasztómamodellen
a) Az „ antisense ” oligonukleotidok ex vivő hatása a C6 gliomasejtek tumorigenitására A sejteket az előző kísérletekben leírtak szerint kezeltük. 24 órával a farnezil-proteintranszferáz a-alegység „antisense” oligonukleotiddal (5 μΜ) végzett transzfekció után a kezelt, illetve kezeletlen sejtekkel 7-8 hetes, 180-200 g tömegű hím Sprague-Dawley patkányokat oltottunk be intracerebrálisan. Az állatokat 1,5 mg/kg (testtömegre számítva) xilazin, majd ezután 10 perccel 5 mg/kg ketamin ip. injektálásával érzéstelenítettük. A korábban tripszines emésztéssel kinyert sejtekből 3 pl foszfátpufferes sóoldat felhasználásával készített, 1,5xlO5 sejtet tartalmazó szuszpenziót sztereotaxikusan a bal vazális idegdúcba injektáltuk 3 mm-re a középvonaltól, 5 mm mélységben, 10 pl-es Hamilton5
HU 219 823 Β fecskendő alkalmazásával. Az előkísérletek során megbizonyosodtunk róla, hogy a patkányok átlagos túlélési ideje a tumor beültetését követően 24 nap. Az állatok agyának hisztológiai analízise igazolta, hogy a tumor beültetésének hatékonysága 100%-os. Két órával a vágás előtt valamennyi állatba 40 mg bróm-dezoxiuridint injektáltunk. Az állatokat lefejeztük, az agyakat eltávolítottuk, és két napon át 4 °C-on, 70%-os etanolba merítve fixáltuk. A sejtbuqánzás mértékét a két agyfélteke kétparaméteres DNS (BrdU) citofluorimetriás analízisével nyert értékek átlaga alapján határoztuk meg.
| BrdU jelöltségi index | |
| Kontroll | 4,7+1,9 |
| 2. szekvencia (5 μΜ) | 2,3+0,7 |
| 5. szekvencia (1 μΜ) | 2,4+0,5 |
b) Az „antisense” oligonukleotidok in vivő hatása a C6 gliomasejtek tumorigenitására Petri-csészében készített 48 órás sejttenyészetből származó kezeletlen C6 gliomasejteket patkányok bal agyféltekéjébe injektáltunk sztereotaxikusan, az előzőekben leírt módon. Nyomban az injektálás után olyan Alzet-pumpát szereltünk az állatok hátára, amely vivőanyagot, „sense”, illetve „antisense” oligonukleotidot tartalmazott 5 μΜ napi dózist biztosító mennyiségben. A különböző anyagok eljuttatása az injektálás helyére 0,5 mm átmérőjű csövön át történt. Az adatok statisztikai kiértékelését a post hoc Duncan-teszttel végeztük.
| BrdU jelöltségi index | |
| Kontroll | 8,02+0,24 |
| 5. szekvencia (sense) | 6,82+0,26 |
| 5. szekvencia | 4,94+0,30 |
SZEKVENCIALISTA (2) INFORMÁCIÓK AZ 1. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 1. szekvencia AGAAGCCATG AT (2) INFORMÁCIÓK A 2. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 2. szekvencia GGACGTGACT GT (2) INFORMÁCIÓK A 3. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 3. szekvencia AAGGAGTAGC AG (2) INFORMÁCIÓK A 4. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 4. szekvencia CAGGCAGTAG CA (2) INFORMÁCIÓK AZ 5. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 5. szekvencia CCCGTCGTCC AT (2) INFORMÁCIÓK A 6. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 6. szekvencia CTGTCCCTGT AC (2) INFORMÁCIÓK A 7. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 7. szekvencia ACTTCTCTCT CC (2) INFORMÁCIÓK A 8. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 8. szekvencia ACTTGGTCCT AA (2) INFORMÁCIÓK A 9. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 9. szekvencia GCCATCATTC TG
HU 219 823 Β (2) INFORMÁCIÓK A 10. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 10. szekvencia GATCTGGACC AC (2) INFORMÁCIÓK All. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 11. szekvencia CTCAATAGCA TC (2) INFORMÁCIÓK A 12. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 12. szekvencia GTTTTTGGGC TG (2) INFORMÁCIÓK A 13. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 13. szekvencia TCTCACATCC TC (2) INFORMÁCIÓK A 14. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 14. szekvencia TTGTAAGAAC TG (2) INFORMÁCIÓK A 15. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 15. szekvencia GAAGTGCTTC TC (2) INFORMÁCIÓK A 16. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 16. szekvencia GCCTCTTTTC AG (2) INFORMÁCIÓK A 17. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 17. szekvencia GGCATCTGTC AG (2) INFORMÁCIÓK A 18. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIA JELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEPRÁSA: 18. szekvencia CGGCTGGCAT CC (2) INFORMÁCIÓK A 19. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 19. szekvencia GAACTGACAC AC (2) INFORMÁCIÓK A 20. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 20. szekvencia ACGATCACAT CA (2) INFORMÁCIÓK A 21. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 21. szekvencia ATCAACATGC AG (2) INFORMÁCIÓK A 22. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 22. szekvencia CTGCATATCG AC (2) INFORMÁCIÓK A 23. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár
HU 219 823 Β (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 23. szekvencia CAGTGCACCA GC (2) INFORMÁCIÓK A 24. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 24. szekvencia CTGCAGCCTC GG (2) INFORMÁCIÓK A 25. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 25. szekvencia ACTCTCTGGA CC (2) INFORMÁCIÓK A 26. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 26. szekvencia CAAGAATCCT CG (2) INFORMÁCIÓK A 27. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 27. szekvencia ACATCTGCTC TG (2) INFORMÁCIÓK A 28. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 28. szekvencia TCTGTACTCG TC (2) INFORMÁCIÓK A 29. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 29. szekvencia CTACAGTACA GC (2) INFORMÁCIÓK A 30. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 15 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 30. szekvencia CCCGTCGTCC ATAGG (2) INFORMÁCIÓK A 31. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 18 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 31. szekvencia CCCGTCGTCC ATAGGGGA (2) INFORMÁCIÓK A 32. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 21 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 32. szekvencia CCCGTCGTCC ATAGGGGACG C (2) INFORMÁCIÓK A 33. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 15 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 33. szekvencia GGACGTGACT GTTTC (2) INFORMÁCIÓK A 34. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 18 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 34. szekvencia GGACGTGACT GTTTCCAC (2) INFORMÁCIÓK A 35. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 21 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 35. szekvencia GGACGTGACTBGTTTCCACTG A (2) INFORMÁCIÓK A 36. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 24 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris
HU 219 823 Β (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 36. szekvencia GGACGTGACT GTTTCCACTG AGTC
Claims (11)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Oligonukleotid-molekula, amely 10-25 egységből áll, és szelektíven képes hibridizálódni az izoprenilproteintranszferáz-enzimek alegységeinek génjével vagy annak transzkripciós termékeivel.
- 2. Az 1. igénypont szerinti olyan oligonukleotidmolekula, amely az 1-3., 5-7., 23. és 33-36. szekvenciák legalább valamelyikét tartalmazza.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti oligonukleotidmolekula, amely képes hibridizálódni az izoprenil-proteintranszferáz-enzimek a- és/vagy β-alegységeinek génjével vagy annak transzkripciós termékeivel.
- 4. Az 1-3. igénypont bármelyike szerinti oligonukleotid-molekula, ahol a szóban forgó izoprenil-proteintranszferáz a következő enzimek valamelyike: farnezil-proteintranszferáz, 1. típusú geranil-geranil-proteintranszferáz vagy 2. típusú geranil-geranil-proteintranszferáz.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti oligonukleotid-molekula, amely módosított láncszerkezettel rendelkezik.
- 6. Az 5. igénypont szerinti oligonukleotid-molekula, amelyben a nukleotidbázisok legalább egyike módosított.
- 7. A 6. igénypont szerinti oligonukleotid-molekula, amelyben a módosított nukleotidbázis α-anomer konformációjú.
- 8. Az 5. igénypont szerinti oligonukleotid-molekula, amelyben a kötőcsoportok legalább egyike módosított.
- 9. Az 5. igénypont szerinti oligonukleotid-molekula, amely a 3’- és/vagy az 5’-helyzetben módosítva van.
- 10. A 9. igénypont szerinti oligonukleotid-molekula, amely a 3’- és/vagy az 5’-helyzetben hidrofób csoporttal vagy védőcsoporttal végzett szubsztitúcióval van módosítva.
- 11. Gyógyászati készítmény, amely hatóanyagként legalább egy, az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti oligonukleotid-molekulát tartalmaz, a kívánt úton történő alkalmazásnak megfelelő, gyógyászatilag elfogadható hígító- és/vagy hordozóanyagokkal elegyítve.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9413035A GB9413035D0 (en) | 1994-06-29 | 1994-06-29 | Antisense oligonucleeotides |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9501913D0 HU9501913D0 (en) | 1995-08-28 |
| HUT72133A HUT72133A (en) | 1996-03-28 |
| HU219823B true HU219823B (hu) | 2001-08-28 |
Family
ID=10757497
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9501913A HU219823B (hu) | 1994-06-29 | 1995-06-28 | Oligonukleotidok izoprenil-protein-transzferázok kifejeződésének gátlására |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5856461A (hu) |
| EP (1) | EP0692535A1 (hu) |
| JP (1) | JPH0851985A (hu) |
| KR (1) | KR960000914A (hu) |
| CN (1) | CN1124142A (hu) |
| AU (1) | AU689887B2 (hu) |
| BR (1) | BR9503015A (hu) |
| CA (1) | CA2152233A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ291496B6 (hu) |
| DZ (1) | DZ1903A1 (hu) |
| FI (1) | FI953170L (hu) |
| FR (2) | FR2721827A1 (hu) |
| GB (2) | GB9413035D0 (hu) |
| HU (1) | HU219823B (hu) |
| IE (1) | IE950477A1 (hu) |
| MA (1) | MA23595A1 (hu) |
| NO (1) | NO952601L (hu) |
| NZ (1) | NZ272398A (hu) |
| OA (1) | OA10221A (hu) |
| PL (1) | PL309384A1 (hu) |
| RU (1) | RU2112766C1 (hu) |
| SE (1) | SE9502259L (hu) |
| SK (1) | SK83895A3 (hu) |
| TN (1) | TNSN95068A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA955288B (hu) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0840605A4 (en) * | 1995-07-13 | 2000-05-10 | Univ Cincinnati | COMPOUNDS FOR USE IN THE TREATMENT OF NEUROFIBROMATOSE |
| CN1301731A (zh) * | 1999-12-24 | 2001-07-04 | 上海博德基因开发有限公司 | 一种新的多肽——多异戊二烯基合成酶蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸 |
| AU2002230651A1 (en) * | 2000-12-07 | 2002-06-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Human g-protein coupled receptor expressed highly in kidney |
| US20030212017A1 (en) * | 2002-05-10 | 2003-11-13 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of farnesyl transferase beta subunit expression |
| US7507808B2 (en) * | 2002-12-12 | 2009-03-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of endothelial lipase expression |
| EP1667522B1 (en) | 2003-09-09 | 2018-01-17 | Geron Corporation | Modified oligonucleotides for telomerase inhibition |
| US8785409B2 (en) * | 2007-01-30 | 2014-07-22 | Geron Corporation | Compounds having anti-adhesive effects on cancer cells |
| JOP20200257A1 (ar) | 2014-05-01 | 2017-06-16 | Geron Corp | تركيبات أوليجو نوكليوتيد وطرق لتحضيرها |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4571421A (en) * | 1979-11-05 | 1986-02-18 | Genentech, Inc. | Mammalian gene for microbial expression |
| US5004803A (en) * | 1988-11-14 | 1991-04-02 | Genetics Institute, Inc. | Production of procoagulant proteins |
| US5420245A (en) * | 1990-04-18 | 1995-05-30 | Board Of Regents, The University Of Texas | Tetrapeptide-based inhibitors of farnesyl transferase |
| US5185248A (en) * | 1990-05-08 | 1993-02-09 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Farnesyl-protein transferase assay for identifying compounds that block neoplastic transformation |
| JP3602530B2 (ja) * | 1991-03-07 | 2004-12-15 | ヴァイロジェネティクス コーポレイション | 遺伝子操作したワクチン菌株 |
| NZ244820A (en) * | 1991-10-25 | 1994-01-26 | Isis Pharmaceuticals Inc | Oligonucleotide inhibitor of epstein-barr virus. |
| US5348853A (en) * | 1991-12-16 | 1994-09-20 | Biotronics Corporation | Method for reducing non-specific priming in DNA amplification |
| US5585479A (en) * | 1992-07-24 | 1996-12-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Antisense oligonucleotides directed against human ELAM-I RNA |
-
1994
- 1994-06-29 GB GB9413035A patent/GB9413035D0/en active Pending
-
1995
- 1995-06-20 CA CA002152233A patent/CA2152233A1/en not_active Abandoned
- 1995-06-21 FR FR9507367A patent/FR2721827A1/fr active Pending
- 1995-06-21 NZ NZ272398A patent/NZ272398A/en unknown
- 1995-06-21 SE SE9502259A patent/SE9502259L/xx not_active Application Discontinuation
- 1995-06-21 EP EP95401463A patent/EP0692535A1/fr not_active Withdrawn
- 1995-06-21 FR FR9507366A patent/FR2721930B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-23 US US08/494,301 patent/US5856461A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-26 ZA ZA955288A patent/ZA955288B/xx unknown
- 1995-06-26 SK SK838-95A patent/SK83895A3/sk unknown
- 1995-06-26 TN TNTNSN95068A patent/TNSN95068A1/fr unknown
- 1995-06-27 DZ DZ950080A patent/DZ1903A1/fr active
- 1995-06-27 FI FI953170A patent/FI953170L/fi unknown
- 1995-06-27 AU AU23299/95A patent/AU689887B2/en not_active Ceased
- 1995-06-27 CZ CZ19951688A patent/CZ291496B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-06-28 NO NO952601A patent/NO952601L/no not_active Application Discontinuation
- 1995-06-28 IE IE950477A patent/IE950477A1/en not_active IP Right Cessation
- 1995-06-28 PL PL95309384A patent/PL309384A1/xx unknown
- 1995-06-28 KR KR1019950017763A patent/KR960000914A/ko not_active Application Discontinuation
- 1995-06-28 HU HU9501913A patent/HU219823B/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-06-28 CN CN95108109A patent/CN1124142A/zh active Pending
- 1995-06-28 RU RU95110774/04A patent/RU2112766C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-06-28 MA MA23939A patent/MA23595A1/fr unknown
- 1995-06-29 JP JP7163358A patent/JPH0851985A/ja active Pending
- 1995-06-29 OA OA60679A patent/OA10221A/fr unknown
- 1995-06-29 BR BR9503015A patent/BR9503015A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-06-29 GB GB9513246A patent/GB2290791B/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0690726B1 (en) | Antisense inhibition of c-myc to modulate the proliferation of smooth muscle cells | |
| Zon | Oligonucleotide analogues as potential chemotherapeutic agents | |
| EP0732929B1 (en) | Therapeutic use of cis-element decoys in vivo | |
| JP4643906B2 (ja) | 遺伝子発現の標的化阻害のための合成二本鎖オリゴヌクレオチド | |
| JP2015523853A (ja) | Ａｔｐ２ａ２発現を調節するための組成物及び方法 | |
| JP2015518710A (ja) | ヘモグロビン遺伝子ファミリー発現を調節するための組成物及び方法 | |
| WO1994017086A1 (en) | Gene regulation by targeting putative intramolecular triple helix | |
| SK1162002A3 (en) | Oligonucleotide for inhibiting the expression of human eg5 and pharmaceutical composition comprising this oligonucleotide | |
| HU219823B (hu) | Oligonukleotidok izoprenil-protein-transzferázok kifejeződésének gátlására | |
| EP1071764B1 (en) | Antisense oligonucleotides for the inhibition of integrin alphav-subunit expression | |
| WANG et al. | A comparison of guanosine-quartet inhibitory effects versus cytidine homopolymer inhibitory effects on rat neointimal formation | |
| WO2001074346A2 (en) | Sensitization of cells to cytotoxic agents using oligonucleotides directed to nucleotide excision repair or transcritpion coupled repair genes | |
| PT1414961E (pt) | Novos derivados oligorribonucleotídeos para a inibição orientada da expressão genética | |
| US20030176384A1 (en) | Antisense oligonucleotides for the inhibition of integrin alphav -subunit expression | |
| Simons | Endogenous expression modification: antisense approaches | |
| WO2001027264A1 (fr) | Ribozymes agissant sur un facteur de croissance provenant des plaquettes humaines | |
| AU2003271376B8 (en) | Antisense Oligonucleotides for the Inhibition of Integrin alpha-Subunit Expression | |
| Han | Sequence specificity of teniposide-induced deletion and insertion mutations at the aprt locus of chinese hamster cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |