FR3134010A1 - Utilisation cosmétique, nutraceutique et/ou dermatologique d’une souche de Lactobacillus crispatus et/ou d’une composition la comprenant - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne l’utilisation cosmétique, nutraceutique d’une souche de Lactobacillus crispatus en particulier celle déposée sous le numéro CNCM I-5579 et/ou d’une composition la comprenant pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses. Elle concerne également la souche de Lactobacillus crispatus, ou une composition dermatologique la comprenant, pour son utilisation, avantageusement par voie topique, pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et/ou prévenir l’hyperpigmentation de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques.

Description

Utilisation cosmétique, nutraceutique et/ou dermatologique d’une souche deLactobacillus crispatuset/ou d’une composition la comprenant

La présente invention concerne l’utilisation cosmétique, nutraceutique et/ou pharmaceutique, notamment dermatologique, d’une souche deLactobacillus crispatuset/ou d’une composition la comprenant pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher l’augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses.

La structure et l’aspect de la peau sont modifiés avec l’âge et/ou sous l’influence de facteurs extrinsèques et/ou intrinsèques. Ces modifications sont nombreuses et incluent la modification de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses. La peau devient terne, moins lumineuse, moins radieuse, son éclat diminue et le teint est moins homogène avec également l’apparition des taches pigmentaires.

Avec le vieillissement chronologique ou le vieillissement accéléré notamment sous l’effet des radiations, typiquement des ultraviolets ou de la pollution, l’apparition de ces modifications comme les taches pigmentaires est accélérée. Elles sont liées à la présence de mélanine et de lipofuscine, dont l'excès et la distribution anormale dans la peau provoquent l'apparition de taches brunes dite séniles ou pigmentaires, aussi appelées « aged spots ». Celles-ci peuvent apparaitre comme marqueur d’une accélération de la mélanogénèse et sont souvent jugées inesthétiques. Elles rendent le teint non homogène et terne.

La mélanogenèse et le stress oxydant font l’objet de nombreuses études et innovations dans le domaine de la cosmétique pour la mise au point et l’amélioration d’actifs cosmétiques visant à diminuer et/ou empêcher l’augmentation de la pigmentation de la peau saine et/ou des muqueuses saines.

Il existe un besoin dans le domaine de la cosmétique et de la dermatologie d’élaborer des ingrédients actifs naturels alternatifs, capables de diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher l’augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment de préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, en particulier son éclat et/ou sa luminosité et/ou son homogénéité, notamment au sein d’une population plus sujette aux taches pigmentaires, en particulier les peaux de phototype IV à VI telles que définie par la méthode de classification de Fitzpatrick.

Il existe un besoin permanent d’identifier des agents ayant une ou plusieurs de ces propriétés, notamment ayant une efficacité et une innocuité avérée.

De façon particulièrement surprenante, la Demanderesse a découvert queLactobacillus crispatus,une bactérie commensale bénéfique de la peau et/ou des muqueuses possède la propriété de diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses.

La Demanderesse a également découvert de façon inattendue que cette bactérie possède également la propriété de détoxifier la peau et/ou les muqueuses.

L’invention de la Demanderesse est d’autant plus intéressante que la bactérieLactobacillus crispatus, et en particulier celle déposée sous le numéro CNCM I-5579, présente l’avantage d’être naturellement présente sur la peau jeune, à la différence des bactéries utilisées jusqu’à présent dans les traitements cosmétiques et/ou dermatologiques.

Cette invention est encore plus intéressante que la Demanderesse a démontré qu’avec l’âge et/ou sous l’influence de facteurs intrinsèques et/ou extrinsèques, la bactérieLactobacillus crispatusest moins présente et moins abondante sur la peau. Ainsi, l’objet de la présente invention a l’avantage de rééquilibrer et/ou compléter le microbiote de la peau et/ou des muqueuses, en particulier avec une bactérie de la flore cutanée qui diminue et se raréfie avec le temps et/ou l’exposition à des facteurs intrinsèques et/ou extrinsèques.

L’objet de la présente invention convient ainsi particulièrement au traitement des peaux dites matures, notamment des personnes ayant plus de 50 ans.

La souche selon l’invention présente en outre l’avantage d’être un ingrédient facilement formulable, et pouvant être facilement fabriqué à l’échelle industrielle. Il s’agit d’un ingrédient actif topiquement acceptable pour la peau, les muqueuses, qui ne présente pas de risque d’allergie.

Des demandes ont déjà décrit l’utilisation deLactobacillus crispatusen cosmétique. La demande WO9822082 divulgue ainsi l’utilisation de sphingomyélinase pouvant être extraites de bactéries lactiques pour être appliquées par voie topique afin d'augmenter les taux de céramides de la peau et des muqueuses, pour la prévention ou le traitement thérapeutique de plusieurs pathologies.

La demande WO2009031099 divulgue l’utilisation d’un probiotique pour prévenir l'apparition et/ou pour traiter la manifestation de sensations d'inconfort et/ou de signes cutanés associés à un traitement cutané de surface ou à un traitement invasif, à finalité esthétique.

La demande WO2019111189 décrit l’utilisation comprenant un probiotique en particulierLactobacillus paracaseipour la prévention des dommages inflammatoires induits par les radiations UV.

Toutefois, aucune de ces demandes ne divulgue ni ne suggère l’utilisation cosmétique, nutraceutique et/ou pharmaceutique, notamment dermatologique d’une souche deLactobacillus crispatuset/ou d’une composition la comprenant pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses.

Par ailleurs, aucune de ces demandes ne divulgue ni ne suggères non plus l’utilisation d’une souche deLactobacillus crispatuset/ou d’une composition la comprenant pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses.

La présente invention a pour premier objet l’utilisation cosmétique et/ou nutraceutique d’une souche deLactobacillus crispatus, préférentiellement la souche deLactobacillus crispatusdéposée sous le numéro CNCM I-5579, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement les taches brunes et/ou les taches de vieillesse, et/ou détoxifier la peau saine et/ou les muqueuses saines, en particulier des peaux de phototype IV à VI telles que définie par la méthode de classification de Fitzpatrick.

Selon un mode de réalisation particulier de cette utilisation, la souche selon l’invention diminue et/ou inhibe la mélanogenèse, notamment en agissant sur la diminution et/ou l’inhibition de la mélanine, préférentiellement sur la diminution et/ou l’inhibition de la synthèse et/ou de la quantité de mélanine, et/ou en diminuant et/ou inhibant l’activité de la tyrosinase, et/ou en détoxifiant la peau saine et/ou les muqueuses saines.

Selon un aspect de l’invention, la souche selon l’invention peut être utilisée pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines. La souche selon l’invention peut également être utilisée pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint, de la peau saine et/ou des muqueuses saines. La souche selon l’invention peut en outre être utilisée pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement les taches brunes et/ou les taches de vieillesse. La souche selon l’invention peut également être utilisée pour détoxifier la peau saine et/ou des muqueuses saines, notamment par une action antioxydante et/ou sur la peroxydation des lipides et/ou par une augmentation et/ou stimulation de la synthèse de glutathion induit par un stress oxydant.

Elle a également pour objet un procédé de soin cosmétique caractérisé en ce qu’il comprend l’application par voie topique sur au moins une zone de peau saine et/ou de muqueuse saine d’une souche deLactobacillus crispatusselon l’invention, préférentiellement la souche deLactobacillus crispatusCNCM I-5579, ou d’une composition cosmétique la comprenant, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses.

L'invention a encore pour objet une souche deLactobacillus crispatusselon l’invention, préférentiellement la souche deLactobacillus crispatusCNCM I-5579, ou d’une composition pharmaceutique, notamment dermatologique la comprenant, pour la prévention et /ou le traitement des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et/ou prévenir l’hyperpigmentation de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques et/ou pour détoxifier la peau pathologique et/ou les muqueuses pathologiques.

Au sens de la présente invention, on entend par « utilisation cosmétique », une utilisation non pharmaceutique, c'est-à-dire qui n’est pas destinée à un usage thérapeutique et est appliquée sur une partie du corps dite saine, en particulier sur une zone de la peau et/ou des muqueuses dites saine.

Au sens de la présente invention, on entend par « utilisation nutraceutique » une utilisation destinée à être utilisée par voie orale non pharmaceutique, c’est-à-dire qui ne nécessite pas de traitement thérapeutique.

On entend par « peau », toute zone de peau de toute partie du corps et/ou du visage, incluant le cuir chevelu.

Au sens de la présente invention, on entend par « peaux de phototype IV à VI » des types de peaux particuliers classifiées selon l’échelle de Fitzpatrick qui permet de classer les individus selon la réaction de leur peau et cheveux lors d'une exposition aux rayons UV, et/ou classifiées comme telles par un dermatologue en fonction de la teinte de la peau, laquelle dépend notamment du niveau d'activité des mélanocytes, de la création de ces cellules et de leurs regroupements. Préférentiellement, ces peaux foncées de phototype IV à VI proviennent d’origines ethniques caractéristiques, respectivement d’Inde, d’Asie et/ou d’Afrique. En particulier,

- Le phototype IV (type méditerranéen) correspond à une peau claire mate et des cheveux et yeux bruns ou noirs. Les coups de soleil sont rares, la peau bronze bien, d'un brun foncé ;

- Le phototype V (type latino) correspond à une peau claire mate, des cheveux et des yeux noirs. Les coups de soleil sont rares, la peau bronze bien, d'un brun foncé ;

- Le phototype VI (type africain) correspond à une peau très foncé, des cheveux et des yeux noirs. Les coups de soleil sont très exceptionnels.

Selon l’invention, on désigne par « muqueuse(s) », la muqueuse oculaire, la muqueuse nasale, la muqueuse auriculaire, la muqueuse vaginale, la muqueuse uro-génitale et/ou la muqueuse buccale, notamment buccale, labiale et/ou gingivale, préférentiellement, la muqueuse oculaire et/ou buccale, et encore préférentiellement, la muqueuse labiale et/ou oculaire. Avantageusement, elle ne comprend pas la muqueuse vaginale.

Au sens de la présente invention on entend par « peau saine » ou « muqueuse saine » une zone de peau ou de muqueuse sur laquelle est appliquée la souche selon l’invention et dite « non pathologique » par un dermatologue, c’est-à-dire ne présentant pas d’infection, de cicatrice, de maladie, d’inflammation ou d’affection cutanée telle que candidose, impétigo, psoriasis, eczéma, acné ou dermatite, ou de plaies ou de blessures.

Au sens de la présente invention, on entend par « souche deLactobacillus crispatus», la bactérieLactobacillus crispatussous forme entière ou sous forme partielle, notamment sous forme de lysat, sous forme de fraction ou sous forme de métabolites. Avantageusement, la souche deLactobacillus crispatusn’est pas génétiquement modifiée.

La souche deLactobacillus crispatusselon l’invention pourra être issue de toute espèce connue deLactobacillus crispatus. Préférentiellement, la souche deLactobacillus crispatusest l’espèce déposée suivant le traité de Budapest auprès de l'Institut Pasteur (28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15) le 09/09/2020 sous la désignation CNCM I-5579.

L’avantage de cette souche particulière deLactobacillus crispatusest qu’elle est la première espèce deLactobacillus crispatusretrouvée naturellement sur la peau.

Au sens de la présente invention, on entend par « diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation » dépigmenter, blanchir, éclaircir, prévenir l’augmentation, maintenir et/ou préserver et/ou améliorer le teint et/ou la carnation de la peau et/ou des muqueuses, et préférentiellement diminuer et/ou en empêcher l’augmentation de la mélanogenèse, et encore préférentiellement réduire et/ou inhiber totalement ou partiellement l’expression génique et/ou protéique et/ou l’activité de la tyrosinase et/ou réduire et/ou inhiber la synthèse et/ou la quantité de mélanine.

Le processus de pigmentation de la peau est également dénommée « mélanogénèse » et comprend de nombreuses étapes allant de la synthèse de la mélanine dans les mélanocytes à son transport dans les kératinocytes de l’épiderme par l’intermédiaire des mélanosomes. Plusieurs protéines interviennent dans ce processus. La tyrosinase est l’enzyme qui intervient à des étapes clé de la synthèse de mélanine ; elle coopère avec d’autres protéines pour transformer la mélanine en eumelanine et phaéomelanine, les mélanines responsables du processus de pigmentation.

On entend par « diminuer et/ou inhiber la mélanogénèse » réduire et/ou inhiber totalement ou partiellement l’expression génique et/ou protéique et/ou l’activité de la tyrosinase et/ou réduire et/ou inhiber totalement ou partiellement la synthèse et/ou la quantité de mélanine.

On entend selon l’invention par « réduire et/ou inhiber totalement ou partiellement l’activité de la tyrosinase » provoquer une diminution d’au moins 25%, préférentiellement d’au moins 50%, encore préférentiellement d’au moins 75% de l’activité de la tyrosinase en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention, par rapport au niveau d’activité mesurée en l’absence de l’extrait.

Préférentiellement, la mesure de l’activité de la tyrosinase est effectuée sur la tyrosinase extraite des mélanocytes humains dits normaux, encore préférentiellement par mesure de la production de mélanine en mesurant par photométrie l’absorbance à 540 nm à partir de la tyrosinase extraite de mélanocytes humains dits normaux, encore préférentiellement en présence de la souche deLactobacillus crispatuspréparée selon l’exemple 1.e, avantageusement dans les conditions décrites dans l’exemple 3.

On entend selon l’invention par « réduire et/ou inhiber totalement ou partiellement la synthèse et/ou la quantité de mélanine », une diminution de mélanine d’au moins 10 %, préférentiellement d’au moins 20 %, encore préférentiellement d’au moins 30 % de la synthèse et/ou de la quantité de mélanine en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention par rapport à la synthèse et/ou la quantité de mélanine détectée en l’absence de la souche. Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit d’une diminution de la quantité de mélanine en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention préparée selon l’exemple 1.a ou selon l’exemple 1.e. Préférentiellement encore, la quantité de mélanine est mesurée par densité optique à 475 nm à partir de mélanocytes B16 cultivéesin vitrodans un milieu de culture comprenant du sérum de veau fœtal, avantageusement dans les conditions décrites dans l’exemple 2. Dans un autre mode préférentiel, la quantité de mélanine est mesurée par densité optique à 475 nm à partir d’une coculture de mélanocytes et de kératinocytes humains dits normaux, cultivéesin vitrodans un milieu de culture comprenant des facteurs de croissance, avantageusement dans les conditions décrites dans l’exemple 4.

Au sens de la présente invention, on entend par « préserver et/ou améliorer le teint » maintenir et/ou empêcher la diminution et/ou augmenter l’éclat et/ou la luminosité et/ou la radiance et/ou la brillance du teint et/ou l’homogénéité du teint et/ou diminuer et/ou réduire le teint terne et/ou terreux de la peau et/ou des muqueuses.

La mesure de l’éclat du teint, de la luminosité et de l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses peut être étudiée par les techniques de mesure connues par l’homme du métier, notamment peut par exemple être effectuéein vivo, par chromamétrie ou par analyse d’image. Cette dernière méthode de mesurein vivoconsiste à prendre des photographies haute résolution en configuration polarisée croisées du visage de volontaires prises à 45° avant et après application du produit testé. Sur la base de ces photographies numériques, une analyse d'image permet d'extraire et de quantifier des paramètres spécifiques (par exemple : L*, a*, b*, C, h°) reliés à la couleur, l'éclat et l'homogénéité de la peau.

Au sens de la présente invention, on entend par « préserver et/ou améliorer l’éclat du teint » maintenir et/ou empêcher la diminution et/ou augmenter la luminosité et/ou la radiance et/ou la brillance et/ou la clarté, et/ou diminuer et/ou réduire le teint terne et/ou terreux de la peau et/ou des muqueuses.

Au sens de la présente invention, on entend par « préserver et/ou améliorer l’homogénéité du teint » maintenir et/ou empêcher l’augmentation et/ou diminuer la quantité et/ou l’ampleur des imperfections et/ou irrégularités de la couleur du teint en particulier choisies parmi les rougeurs, les taches pigmentaires, les comédons, taches de rousseur et/ou les pores visibles.

La mesure de l’homogénéité du teint de la peau et de la quantité de mélanine dans la peau peut être mesurée par Mexametrie. Cette méthode de mesurein vivoconsiste à utiliser le principe d’absorption/réflexion pour en déduire un index mélanique qui reflète la quantité de mélanine présent au sein de la peau.

Avantageusement, la mesure de l’amélioration du teint est effectuée sur une population de femmes ayant des taches pigmentaires au niveau du visage, préférentiellement par application d’une crème contenant la souche deLactobacillus crispatuspréparée selon l’exemple 1.e, dans les conditions décrites dans l’exemple 7.

On entend par « maintenir et/ou empêcher l’augmentation et/ou diminuer les imperfections et/ou irrégularités de la couleur du teint » empêcher l’augmentation et/ou diminuer la quantité de mélanine au niveau de la peau, d’au moins 2%, avantageusement d’au moins 3% en présence de la souche selon l’invention durant une application de 28 jours sur la peau par rapport à la quantité de mélanine détectée en l’absence de la souche et/ou d’au moins 2%, avantageusement d’au moins 5% en présence de la souche selon l’invention durant une application de 56 jours sur la peau par rapport à la quantité de mélanine détectée en l’absence de la souche.

On entend par « empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires » maintenir et/ou empêcher l’augmentation et/ou diminuer la pigmentation des taches pigmentaires localisées en particulier du nombre et/ou de l’intensité des taches pigmentaires typiquement sur les zones du visage, le décolleté, le cou, le dos, les épaules et/ou des mains, particulièrement des taches sur le dessus des mains.

Les taches pigmentaires sont notamment les taches brunes et/ou sombres et/ou blanches et/ou « aged spots » lorsqu’elles sont localisées sur une partie du corps exposée aux radiations UV et/ou liées au vieillissement chronologique ou UV induit, par exemple lors d’une exposition au soleil. Les taches pigmentaires incluent également les taches de rousseur et/ou les grains de beauté et/ou les taches post-inflammatoires et/ou qui apparaissent en réponse à des agressions, et/ou d’origine hormonales, en particulier dans le cadre d’un chloasma ou mélasma, autrement appelé masque de grossesse, et/ou d’origine médicamenteuse, et/ou pour prévenir et/ou lutter contre les manifestations pigmentaires inesthétiques de la peau et/ou des muqueuses accompagnant une pathologie non cutanée.

La Demanderesse a également découvert que la souche deLactobacillus crispatus, en particulier celle déposée sous la désignation CNCM I-5579, peut être utilisée pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses, notamment la peau et/ou les muqueuses saines.

On entend par « détoxifier la peau et/ou les muqueuses », la prévention et/ou l’inhibition totale et/ou partielle du stress oxydant, notamment par la prévention et/ou l’inhibition totale et/ou partielle de la formation des radicaux libres, et/ou de la peroxydation des lipides et/ou par l’augmentation et/ou la stimulation de la synthèse de glutathion qui a des propriétés antioxydantes et détoxifiantes.

Détoxifier permet de protéger la peau contre les agressions, tant externes qu'internes, qui provoquent un stress oxydatif susceptibles d'altérer son bon fonctionnement et son aspect, en particulier un moyen capable de stimuler les systèmes naturels de protection et de réparation des cellules cutanées et limiter l'induction de dégâts cellulaires.

On entend par « le stress oxydant » la formation d’espèces réactives excessives, y compris les espèces réactives de l’oxygène et les espèces réactives de l’azote, qui se forment lorsque la peau est soumise à un stress oxydatif causé par divers facteurs tels que les ultraviolets solaires, l’infrarouge et la lumière visible, la pollution environnementale, y compris l’ozone et les particules, et le stress psychologique.

En plus d’impacter l’efficacité des systèmes de détoxification de la peau, le stress oxydant peut également exacerber la pigmentation, notamment en induisant une irrégularité du teint, ou encore un trouble pigmentaire.

Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit de réduire et/ou inhiber la formation de radicaux libres DPPH° (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) d’au moins 10%, préférentiellement d’au moins 30%, en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention par rapport à la formation de radicaux libres DPPH° détectée en l’absence de la souche, et/ou réduire et/ou inhiber la libération de radicaux libres intracellulaires induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, d’au moins 20%, préférentiellement d’au moins 50%, en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention par rapport à la libération de radicaux libres intracellulaires détectée en l’absence de la souche.

Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit de réduire et/ou inhiber la formation spontanée de radicaux libres DPPH°, en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention préparée selon l’exemple 1.a et/ou 1.e.

Préférentiellement encore, la formation de radicaux libres DPPH° est mesuréein tubopar densité optique à 530 nm, dans les conditions décrites dans l’exemple 5.a.

Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit de réduire et/ou inhiber la libération de radicaux libres intracellulaires induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention préparée selon l’exemple 1.a.

Préférentiellement encore, la libération de radicaux libres intracellulaires induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, est mesurée par fluorescence émise par la formation de DCF (2’,7-dichlorofluorescéine) à partir de la sonde DCFH-DA (2',7'-dichlorodihydrofluorescéine diacétate) aux longueurs d’onde de 485 nm d’excitation et 538 nm d’émission à partir de fibroblastes humains normaux, dans les conditions décrites dans l’exemple 5.b.

Dans un autre mode de réalisation, il s’agit de « prévenir et/ou inhiber la peroxydation des lipides membranaires », c’est-à-dire d’empêcher et/ou inhiber totalement ou partiellement l’oxydation des lipides induite par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA d’au moins 10%, préférentiellement d’au moins 30% en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention par rapport à la peroxydation lipidique détectée en l’absence de la souche.

Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit de prévenir et/ou inhiber la peroxydation des lipides membranaires induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention préparé selon l’exemple 1.a.

Préférentiellement encore, la peroxydation des lipides membranaires induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, est mesurée par fluorescence de la formation de MalonDiAldehde (MDA) aux longueurs d’ondes de 532 nm d’excitation et 560 nm d’émission à partir de fibroblastes humains normaux, dans les conditions décrites dans l’exemple 5.c.

Selon un autre mode de réalisation, il s’agit de maintenir et/ou stimuler la synthèse de glutathion » c’est-à-dire d’empêcher la diminution et/ou d’augmenter l’expression et/ou la quantité de glutathion en présence d’un stress oxydant, préférentiellement induit par des UVA, d’au moins 20%, préférentiellement d’au moins 50%, en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention par rapport à la synthèse de glutathion détectée en l’absence de la souche.

Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit de maintenir et/ou stimuler la synthèse de glutathion induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention préparé selon l’exemple 1.a.

Préférentiellement encore, la synthèse de glutathion est mesuréein vitropar fluorescence aux longueurs d’onde de 355 nm d’excitation et 430 nm d’émission à partir de fibroblastes humains normaux, dans les conditions décrites dans l’exemple 6.

Selon la présente invention, la souche deLactobacillus crispatuspeut être utilisée sous forme entière, notamment viable et/ou inactivée, notamment morte, et/ou sous forme de lysat, et/ou sous forme de l’une ou plusieurs de ses fractions et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, préférentiellement de son sécrétome.

Pour chacune de ses formes, la souche selon l’invention peut être isolée ou associée à son milieu de culture.

Préférentiellement, la souche selon l’invention est utilisée associée à son milieu de culture, c’est-à-dire contenue dans son milieu de culture..

Au sens de la présente invention, on entend par « milieu de culture » un support contenant les éléments nutritifs permettant la culture et/ou la multiplication de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention. Préférentiellement, il s’agit d’un milieu MRS (gélose de Man, Rogosa et Sharp).

Au sens de la présente invention, on entend par « isolée », non mélangée à un ou des composé(s) susceptible(s) de lui être associé(s) dans son milieu de culture.

Au sens de la présente invention, on entend par « forme entière » sa forme native, une forme dans laquelle l’enveloppe bactérienne est intacte, par opposition à une forme lysée. Lorsqu’elle est utilisée sous forme entière, la soucheLactobacillus crispatuspeut être viable et/ou inactivée et/ou morte.

Au sens de la présente invention, on entend par « viable » une souche deLactobacillus crispatusselon la présente invention capable de former des colonies en culture.

La production de la souche deLactobacillus crispatussous forme entière viable pourra être effectuée selon toute méthode classiquement connue de l’homme du métier. Avantageusement, elle sera effectuée selon le protocole tel que décrit par exemple dans l’exemple 1.a.

Au sens de l'invention, on entend par "inactivée" une souche deLactobacillus crispatusselon la présente invention qui n'est plus capable, temporairement ou définitivement, de former des colonies en culture.

L’inactivation de la souche deLactobacillus crispatuspourra être effectuée selon toute méthode classiquement connue de l’homme du métier. Elle peut notamment être inactivée par irradiation, traitement thermique ou, sous certaines conditions, par traitement haute pression ou par extrusion avantageusement, elle sera effectuée par traitement thermique, encore avantageusement selon le protocole tel que décrit par exemple dans l’exemple 1.b.

L'inactivation thermique peut être réalisée en incubant la souche deLactobacillus crispatuspendant une période de temps donnée, avantageusement d’environ 10 s à 90 min, préférentiellement d’environ 15 minutes à une heure, et à une température avantageusement d’environ 60°C à 150 °C. Préférentiellement, elle sera incubée pendant environ 30 minutes à environ 80°C.

Au sens de l'invention, on entend par "morte", une souche deLactobacillus crispatusselon la présente invention qui n'est plus capable, définitivement, de former des colonies en culture.

Au sens de l'invention, on entend par "lysat", un matériau obtenu à l'issue de la destruction ou dissolution de cellules biologiques par un phénomène dit de lyse cellulaire provoquant ainsi la libération des constituants biologiques intracellulaires naturellement contenus dans les cellules du microorganisme considéré et de fragments de composants de membrane cellulaire. Le lysat mis en œuvre est donc formé en l’ensemble des constituants biologiques intracellulaires et des constituants des parois et membranes cellulaires de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Le lysat pourra être obtenu par toute méthode classiquement connue de l’homme du métier. Elle pourra notamment être obtenue par un choc osmotique, un choc thermique, par ultrasons, par lyse enzymatique, par tyndallisation, ou encore sous contrainte mécanique de type centrifugation, ou par augmentation de la pression ou des combinaisons de ces différentes technologies.

Préférentiellement, le lysat sera obtenu par combinaison d’action mécanique et d’augmentation de la pression. Encore préférentiellement, le lysat sera obtenu selon le protocole tel que décrit par exemple dans l’exemple 1.c.

Dans un mode de réalisation préférentiel de l’invention, le lysat sera associé au milieu de culture de la bactérie.

Au sens de la présente invention, on entend par « fractions », un fragment de la souche deLactobacillus crispatusselon la présente invention dotée d'une efficacité pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses. Cette fraction correspond à une partie non totale des constituants biologiques intracellulaires et des constituants des parois et membranes cellulaires obtenu par lyse de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Selon un mode particulier de l’invention, les fractions peuvent être le protoplasme de la bactérie. Selon un mode particulier de l’invention, la fraction correspond à l’ensemble des constituants biologiques intracellulaires, mais ne contient pas de constituants des parois et membranes cellulaires de la souche deLactobacillus crispatus.

Dans un mode de réalisation préférentiel de l’invention, les fractions seront associées au milieu de culture de la bactérie.

Au sens de la présente invention, on entend par « métabolites » une ou plusieurs molécules organiques et/ou inorganiques issue du métabolisme de la souche deLactobacillus crispatusselon la présente invention et dotée également d'une efficacité pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses. Préférentiellement, il s’agit du sécrétome de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Dans un mode de réalisation particulier de l’invention, les métabolites seront associés au milieu de culture de la bactérie.

Au sens de la présente invention, on entend par « sécrétome », l'ensemble des molécules organiques sécrétées et/ou inorganiques sécrétées par la souche deLactobacillus crispatusselon la présente invention dotée d'une efficacité de diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses.

Le sécrétome pourra être obtenu par toute méthode classiquement connue de l’homme du métier. Avantageusement, il sera obtenu selon le protocole tel que décrit par exemple dans l’exemple 1.e.

Dans un mode de réalisation préférentiel de l’invention, le sécrétome sera associé au milieu de culture de la bactérie.

Selon un mode préférentiel de réalisation de l’invention, la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention sera utilisée sous forme entière viable et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, préférentiellement de son sécrétome.

Selon un mode avantageux de réalisation, la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention ne contient pas de sphingomyélinase.

Selon un mode avantageux de l’invention, la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention est appliquée par voie topique sur la peau saine et/ou les muqueuses saines. De préférence, la peau et/ou les muqueuses sont de phototype IV à VI. Les phototype IV à VI sont tels que définis par la méthode de classification de Fitzpatrick.

Au sens de la présente invention, on entend par « voie topique », l’application locale directe et/ou la vaporisation de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention ou de la composition la comprenant selon l’invention sur la surface de la zone de peau et/ou de muqueuse concernée.

Selon l’invention, la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention peut être utilisée seule, sous forme d’ingrédient actif et/ou dans une composition cosmétique et/ou nutraceutique, et/ou pharmaceutique, notamment dermatologique, préférentiellement destiné(e) à une application par voie topique et/ou par voie orale, encore préférentiellement à une application par voie topique.

Lorsqu’elle est utilisée sous forme entière vivante selon l’invention, et qu’elle est utilisée seule, sous forme d’ingrédient actif, la souche selon l’invention peut être sous forme sèche, c’est-à-dire sous forme de poudre, avantageusement dans de la maltodextrine, préférentiellement en une teneur en souche de 10% à 80% (p/p) en poids de la souche, préférentiellement de 30% à 70% (p/p), encore avantageusement de 40 à 60% (p/p) en poids de la souche par rapport au poids total de poudre.

Alternativement, la forme entière vivante selon l’invention peut être utilisée dispersée et/ou diluée dans un solvant. Préférentiellement, ce solvant contient moins de 20% (v/v) en volume d’eau, encore préférentiellement moins de 5% (v/v) en volume d’eau, encore préférentiellement le solvant ne contient pas d’eau.

Selon un mode alternatif, ce solvant contient moins de 20% (p/p) en poids d’eau, encore préférentiellement moins de 5% (p/p) en poids d’eau, encore préférentiellement le solvant ne contient pas d’eau. Très préférentiellement, ce solvant est une huile cosmétiquement acceptable.

Lorsqu’elle est utilisée sous forme entière inactivée, notamment morte, et/ou sous forme de lysat, et/ou sous forme de l’une ou plusieurs de ses fractions et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, notamment de son sécrétome, et qu’elle est utilisée seule sous forme d’ingrédient actif, la souche selon l’invention peut être sous forme sèche, c’est-à-dire sous forme de poudre, avantageusement dans de la maltodextrine, préférentiellement en une teneur en souche de 1% à 80% (p/p) en poids de la souche, préférentiellement de 3% à 50% (p/p) en poids de la souche, très préférentiellement d’environ 5% ou 20% (p/p) en poids de la souche par rapport au poids total de poudre, encore préférentiellement environ 10% (p/p), encore préférentiellement 10% (p/p) en poids de la souche par rapport au poids total de poudre.

Alternativement, les formes entières inactivées, notamment mortes, et/ou les lysats, et/ou les fractions, et/ou les métabolites, notamment le sécrétome selon l’invention, peuvent être utilisés solubles et/ou dilués et ou dispersés dans un solvant, notamment polaire, tel que l’eau, un alcool, un polyol, un glycol tel que le pentylène glycol et/ou l’hexylène glycol et/ou le caprylyl glycol et/ou le butylene glycol, ou un de leurs mélanges, préférentiellement un mélange hydroglycolique ou hydroalcoolique, encore préférentiellement comprenant un glycol choisi parmi l’hexylène glycol, le caprylyl glycol et leurs mélanges.

Dans un autre mode de réalisation, la souche selon l’invention peut être incorporée dans une composition cosmétique et/ou nutraceutique comprenant au moins un excipient cosmétiquement acceptable et/ou nutraceutiquement acceptable. Préférentiellement, elle est incorporée dans une composition cosmétique comprenant au moins un excipient cosmétiquement acceptable.

On entend, au sens de la présente invention, par excipient « cosmétiquement acceptable », un composé et/ou solvant topiquement acceptable, c’est-à-dire n’induisant pas de réponse allergique au contact de la peau, incluant le cuir chevelu humain, et/ou les muqueuses, non toxique, non instable, chimiquement.

Dans un mode de réalisation préférentiel de l’invention, la souche selon l’invention est présente dans la composition cosmétique, à une concentration de 1x10^-4% à 10% (p/p) en poids, préférentiellement entre 1x10^-4% et 5% (p/p) en poids, encore avantageusement entre 1x10^-3% et 0,5% (p/p) en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable.

De manière particulièrement avantageuse, lorsque la souche selon l’invention est utilisée sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, notamment de son sécrétome, elle est présente dans la composition cosmétique, à une concentration de 0,05 à 0,5% (p/p) en poids, encore préférentiellement à une concentration d’environ 0,1% (p/p) en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable.

De manière particulièrement avantageuse, lorsque la souche selon l’invention est utilisée sous forme entière viable, elle est présente dans la composition cosmétique, à une concentration de 0,01 à 0,1% (p/p) en poids, encore préférentiellement à une concentration d’environ 0,025% (p/p) en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable.

La composition cosmétique de l’invention peut être choisie parmi une suspension ou une solution, aqueuse ou huileuse, une crème ou un gel aqueux ou un gel huileux, notamment un gel douche, un shampoing ; un lait ; une émulsion, une microémulsion ou une nanoémulsion, notamment huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple ou siliconée ; un masque ; un sérum ; une lotion ; un savon liquide ; un pain dermatologique ; une pommade ; un baume ; un beurre ; une mousse ; un patch ; un produit anhydre, de préférence liquide, pâteux ou solide, par exemple sous forme de poudres de maquillage, de bâtonnet ou de stick, notamment sous forme de rouge à lèvres.

Il peut également s’agir d’un produit de maquillage ou d’un produit de démaquillage.

De façon avantageuse, la souche deLactobacillus crispatusou la composition de l’invention est destinée à être appliquée sur la peau saine et/ou les muqueuses saines de tout ou partie du corps et/ou du visage et/ou du cuir chevelu, préférentiellement les jambes, les cuisses, les bras, le ventre, le décolleté, le cou, les aisselles, les lèvres, encore préférentiellement tout ou partie du visage, et préférentiellement les joues, le front, le menton, les lèvres, le contour des yeux.

De façon avantageuse, la souche et/ou la composition la comprenant est destinée à être appliquée sur une zone de peau saine présentant un teint terne et/ou une zone de peau saine non homogène et/ou une zone de peau saine avec l’apparition de taches pigmentaires.

De manière préférentielle, la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention est particulièrement adaptée pour la formulation de composition dite neutre et douce pour le respect de la glande sébacée, notamment de la peau incluant le cuir chevelu et/ou des muqueuses.

De manière alternative, la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques classiquement utilisées pour une application par voie orale, notamment sous forme d’ingrédient actif nutraceutique et/ou de composition nutraceutique.

Les compositions selon l’invention peuvent contenir tout solvant approprié et/ou tout véhicule approprié et/ou tout excipient approprié, éventuellement en combinaison avec d’autres composés d’intérêt.

De ce fait, pour ces compositions, l'excipient contient par exemple au moins un composé choisi parmi le groupe comprenant les conservateurs, les émollients, les émulsifiants, les tensioactifs, les hydratants, les épaississants, les conditionneurs, les agents matifiants, les stabilisants, les antioxydants, les agents de texture, les agents de brillance, les agents filmogènes, les solubilisants, les pigments, les colorants, les parfums et les filtres solaires. Ces excipients sont de préférence choisis parmi le groupe consistant en les acides aminés et leurs dérivés, les polyglycérols, les esters, les polymères et dérivés de cellulose, les dérivés de Lanoline, les phospholipides, les lactoferrines, les lactoperoxydases, les stabilisants à base de sucrose, les vitamines E et ses dérivés, les cires naturelles et synthétiques, les huiles végétales, les triglycérides, les insaponifiables, les phytostérols, les esters végétaux, les silicones et ses dérivés, les hydrolysats de protéines, l’huile de Jojoba et ses dérivés, les esters lipo/hydrosolubles, les bétaïnes, les aminoxydes, les extraits de plantes, les esters de Saccharose, les dioxydes de Titane, les glycines, et les parabens, et encore de préférence parmi le groupe consistant en le butylène glycol, le stéareth-2, le stéareth-21, le glycol-15 stéaryl éther, le cétéaryl alcool, le phénoxyéthanol, le méthylparaben, l’éthylparaben, le propylparaben, le butylparaben, le butylène glycol, les tocophérols naturels, la glycérine, le dihydroxycétyl sodium phosphate, l’isopropyl hydroxycétyl éther, le glycol stéarate, la triisononanoïne, l’octyl cocoate, le polyacrylamide, l’isoparaffine, le laureth-7, un carbomer, le propylène glycol, le glycérol, le bisabolol, une diméthicone, l’hydroxyde de sodium, le PEG 30-dipolyhydroxystérate, les triglycérides caprique/caprylique, le cétéaryl octanoate, le dibutyl adipate, l’huile de pépin de raisin, l’huile de jojoba, le sulfate de magnésium, l’EDTA, une cyclométhicone, la gomme de xanthane, l’acide citrique, le lauryl sulfate de sodium, les cires et les huiles minérales, l’isostéaryl isostéarate, le dipélargonate de propylène glycol, l’isostéarate de propylène glycol, le PEG 8, la cire d'abeille, les glycérides d’huile de cœur de palme hydrogénée, les glycérides d’huile de palme hydrogénée, l’huile de lanoline, l’huile de sésame, le cétyl lactate, le lanoline alcool, l’huile de ricin, le dioxyde de titane, le lactose, le saccharose, le polyéthylène basse densité, une solution isotonique salée, et leurs mélanges.

De nombreux ingrédients cosmétiquement actifs sont connus par l'homme du métier pour améliorer la santé et/ou l'apparence physique de la peau (y compris le cuir chevelu) et/ou des muqueuses. L'homme du métier sait formuler les compositions cosmétiques, nutraceutiques ou dermatologiques pour obtenir les meilleurs effets. D'autre part, ces composés peuvent avoir un effet de synergie lorsqu'ils sont combinés les uns aux autres. Ces combinaisons sont également couvertes par la présente invention. Le CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992) décrit différents ingrédients cosmétiques et pharmaceutiques utilisés couramment dans l'industrie cosmétique et pharmaceutique, qui sont en particulier adaptés à une utilisation topique. Des exemples de ces classes d'ingrédients comprennent, sans en être limités, les composés suivants: abrasifs, absorbants, composés à but esthétique tel que les parfums, les pigments, les colorants, les huiles essentielles, les astringents, etc. (par exemple: l’huile de clou de girofle, menthol, camphre, l’huile d’eucalyptus, eugénol, menthyl lactate, distillat d’hamamélis), les agents anti-acné, les agents anti-floculants, les agents antimousse, les agents antimicrobiens (par exemple: iodopropyl butylcarbamate), les antioxydants, les liants, les additifs biologiques, les agents tampons, les agents gonflants, les agents chélatants, les additifs, les agents biocides, les dénaturants, les épaississants, et les vitamines, et les dérivés ou équivalents de ceux-ci, les matériaux formant des films, les polymères, les agents opacifiants, les ajusteurs de pH, les agents réducteurs, les agents dépigmentants ou éclaircissants (par exemple : hydroquinone, acide kojique, acide ascorbique, magnésium ascorbyl phosphate, ascorbyl glucosamine), les agents de conditionnement (par exemple : les humectants).

La composition cosmétique pourra comprendre par ailleurs d’autres agents cosmétiques et/ou nutraceutiques possédant les mêmes propriétés et induisant un effet synergique ou non avec la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention, ou des agents cosmétiques à effets complémentaires.

Il peut s’agir par exemple d’ingrédients dépigmentant et/ou éclaircissant et/ou destinés à diminuer les taches pigmentaires de la peau, tels que le niacinamide ou vitamine B3, l’arbutine, l’acide azélaique, l’acide ascorbique ou ses dérivés, une combinaison des extraits de plante Saxifraga sarmentosa, Psidium guajava et Carica papaya, commercialisée par BASF Beauty Care Solutions France sous le nom de Dermawhite™ WF, une combinaison de sulfites et d’extraits de Camellia sinensis, Scutellaria baicalensis, Cucumis sativus, Pyrus malus, commercialisée sous le nom de Phytolight^TMBG, un extrait standardisé de feuilles de Lansium domesticum commercialisé sous le nom DN-Aura^TM, une combinaison d’un extrait de pois et de sucrose dilaurate commercialisée sous le nom de Actiwhite™, des dérivés de l’acide 4-hydroxyphenoxy acétique, en particulier l’acide 2-(4-hydroxyphenoxy)-propionique commercialisé sous le nom de Radianskin™ par BASF Beauty Care Solutions France, ou un extrait de polysaccharides purifiés provenant de graines de Cassia angustifolia commercialisé sous le nom Hyalurosmooth^TM, un extrait de protéases stabilisés isolé à partir de latex de Carica papaya commercialisé sous le nom X-Pressin^TM, un liposome cationique encapsulant de l’acide férulique commercialisé sous le nom Cytovector ferulic^TM, ou encore un complexe d’acide glycolique et de L-arginine commercialisé sous le nom AH-care^TMpar BASF Beauty Care Solutions France.

Parmi d’autres ingrédients actifs qui pourront être combinés à la souche selon l’invention, il peut s’agir d’extrait de plante possédant des propriétés similaires de prévention de l’apparition de la pigmentation et/ou d’augmentation de l’éclat du teint, notamment un extrait du champignon Inonotus obliquus commercialisé sous le nom Inolixir^TMpar la demanderesse, un extrait d’huile d’Argania spinosa commercialisé sous le nom d’Arganyl™ par la demanderesse, un extrait de graines de Moringa oleifera commercialisé sous le nom de Purisoft™ par la demanderesse, une combinaison d’un extrait de Salvia miltiorrhiza et de niacinamide commercialisée sous le nom de CollRepair™ par la demanderesse, un extrait d’Achillea millefolium commercialisé sous le nom de Neurobiox™ par la demanderesse, un extrait de feuilles de Cassia alata commercialisé sous le nom de DN-Age™ et/ou un extrait de litchi commercialisé sous le nom de Litchiderm™ en tant qu’actifs anti-oxydants, d’un extrait de chicorée commercialisé sous le nom de Lox-Age™, un extrait de levure commercialisé sous le nom de Vitacell™, un extrait de Polygonum bistorta commercialisé sous le nom de Perlaura™, un extrait de galanga commercialisé sous le nom de Hyalufix™, d’un extrait de maïs commercialisé sous le nom de Deliner™ ou un extrait de Voandzeia subterranea commercialisé sous le nom d’Epigenist™ par la demanderesse ou encore des actifs favorisant la fermeté de la peau tels qu’un tétrapeptide synthétique commercialisé sous le nom de Dermican™, un extrait d’Hibiscus abelmoschus commercialisé sous le nom de Linefactor™, un extrait purifié de pois commercialisé sous le nom de Proteasyl™, un extrait de Manilkara multinervis commercialisé sous le nom d’Elestan™ par la demanderesse. Un extrait de la plante Origanum majorana commercialisé sous le nom de Dermagenist™ et/ou un extrait de Khaya senegalensis commercialisé sous le nom de Collalift®18 et/ou un extrait d’Eperua falcata commercialisé sous le nom de d’Eperuline™ ou encore un extrait comprenant des phytostérols, notamment du β-sitostérol et/ou du campestérol et/ou du brassicastérol provenant d’huile de colza et commercialisé par la demanderesse sous le nom de Phytosoothe™, pourront aussi être ajoutés dans la composition cosmétique.

Il peut s’agir par ailleurs d’ingrédients actifs anti-âge et/ou agents tenseurs pour un effet de synergie avec la souche deLactobacillus crispatus. Avantageusement, il s’agit d’ingrédients actifs augmentant l’expression génique et/ou protéique du collagène ou d’ingrédients actifs empêchant la dégradation du collagène tels que le rétinol, la vitamine C, un extrait deDavilla rugosacommercialisé sous le nom de Collguard^TMpar BASF Beauty Care Solutions, un extrait de graine d’Hibiscus abelmoschuscommercialisé sous le nom de Linefactor^TM, un extrait d’hydrolysat de protéine de soja commercialisé sous le nom de Phytokine^TM, un peptide commercialisé sous le nom de Dermican^TMpar la demanderesse ou encore les produits commercialisés sous les noms de Matrixyl^TM, Matrixyl 3000^TMet Regestril^TMpar la société Sederma ou Neuroguard par la société Codif, ou encore Eternaline^TMpar la société Silab.

Les agents tenseurs utilisables dans l’invention peuvent être choisis parmi les polymères synthétiques, tels que les latex de polyuréthanne ou les latex acryliques, les polymères d'origine naturelle, notamment les polyholosides sous forme d'amidon ou sous forme de carraghénanes, alginates, agars, gellanes, polymères cellulosiques et pectines; les protéines et hydrolysats de protéines végétales ; les silicates mixtes ; les microparticules de cire ; les particules colloïdales de charge inorganique choisies par exemple parmi la silice, les composites silice-alumine ; ainsi que leurs mélanges.

D’une manière avantageuse, la soucheLactobacillus crispatusselon l’invention pourra être combinée avec un agent cosmétique choisi parmi l’acide benzoïque et/ou ses sels, l’acide levulinique et/ou ses sels comme le sodium levulinate, l’acide sorbique et/ou ses sels, l’acide anisique et/ou ses sels, et leur mélange.

Il peut enfin s’agir d’ingrédients cosmétiques comme par exemple des agents antimicrobiens, agents anti-radicalaires, agents apaisants, calmants ou relaxants, agents agissant sur la microcirculation pour améliorer l’éclat du teint, en particulier du visage, agents cicatrisants ou agents amincissants. Avantageusement la composition cosmétique et/ou dermatologique de la présente invention contient également un ou plusieurs agents tenseurs et/ou un ou plusieurs agents antimicrobiens et/ou un ou plusieurs agents antiradicalaires et/ou un ou plusieurs agents apaisants et/ou un ou plusieurs agents amincissants et/ou un ou plusieurs agents actifs sur la microcirculation.

Parmi les agents antimicrobiens associés à la souche deLactobacillus crispatussous forme non viable dans un mode préférentiel de la présente invention, on peut citer le 2,4,4'-trichloro-2'-hydroxy diphényl éther (ou triclosan), le 3,4,4'-trichlorobanilide, le phénoxyéthanol, le phénoxypropanol, le phénoxyisopropanol, l'hexamidine iséthionate, le métronidazole et ses sels, le miconazole et ses sels, l'itraconazole, le terconazole, l'éconazole, le ketoconazole, le saperconazole, le fluconazole, le clotrimazole, le butoconazole, l'oxiconazole, le sulfaconazole, le sulconazole, la terbinafine, l'acide undécylénique et ses sels, le peroxyde de benzoyle, l'acide 3-hydroxy benzoïque, l'acide 4-hydroxy benzoïque, l'acide phytique, l'acide N-acétyl-L-cystéine, l'acide lipoïque, l'acide azélaïque et ses sels, l'acide arachidonique, le résorcinol, l'octoxyglycérine, l'octanoylglycine, le caprylyl glycol, l'acide 10-hydroxy-2-décanoïque, le farnesol, les phytosphingosines et leurs mélanges.

Les agents anti-radicalaires peuvent être la vitamine C et ses dérivés dont le glucoside d'ascorbyle, les phénols et polyphénols, en particulier les tannins, l'acide ellagique et l'acide tannique; l'épigallocatéchine et les extraits naturels en contenant, en particulier les extraits de thé vert; les anthocyanes; les acides phénols, les stilbènes; des actifs piégeurs de composés aromatiques mono- ou polycycliques, les tannins tels que l'acide ellagique et les dérivés indoles et/ou des actifs piégeurs de métaux lourds tels que l'EDTA, des actifs anti-radicalaires tels que la vitamine E et ses dérivés tels que l'acétate de tocophéryle ; les bioflavonoïdes; la coenzyme Q10 ou ubiquinone.

Comme agents apaisants entrant dans la composition de l'invention, on peut utiliser les triterpènes pentacycliques, l'acide ursolique et ses sels, l'acide oléanolique et ses sels, l'acide bétulinique et ses sels, les sels de l'acide salicylique et en particulier le salicylate de zinc, le bisabolol, l'allantoïne, les huiles insaturées en oméga 3, la cortisone, l'hydrocortisone, l'indométhacine et la beta méthasone, les actifs anti-inflammatoires, et notamment ceux décrits dans la demande FR2847267, en particulier l’extrait de racine dePueraria lobatacommercialisé sous le nom Inhipase™ par la demanderesse, les extraits de Theobroma cacao.

Les ingrédients actifs agissant sur la microcirculation, vasoprotecteurs ou vasodilatateurs, peuvent être choisis parmi les flavonoïdes, les ruscogénines, les nicotinates, les huiles essentielles.

Les actifs amincissants peuvent être notamment choisis parmi les agents inhibiteurs de la lipoprotéine lipase tels que ceux décrits dans le brevet US2003086949 (Coletica) et en particulier un extrait de liane du Pérou (Uncaria tomentosa); les actifs drainants, notamment l’hesperitine laurate (Flavagrum™), ou quercitine caprylate (Flavenger™); les agents inhibiteurs de l’enzyme phosphodiestarase, les agents activateurs de l’adenylate cyclase, l’AMPc et/ou les actifs capable de piéger la spermine et/ou la spermidine. On peut citer un extrait de racine deColeus Forskohlii, un extrait deCecropia obtusa, d’Uva lactuca, la caféine, la forskoline, la théophylline, la théobromine et/ou leurs dérivés, un produit de kappa carraghénanes hydrolysé dénommé Slimexcess™ commercialisé par la demanderesse et/ou leurs mélanges.

La présente invention a également pour objet un procédé de soin cosmétique comprenant l’application par voie topique sur au moins une zone de peau saine et/ou de muqueuse saine d’une souche deLactobacillus crispatusselon l’invention, ou d’une composition cosmétique la comprenant, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses.

De manière avantageuse, la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention, préférentiellement sous la forme d’une composition cosmétique selon l’invention, est utilisée en application topique régulière et préférentiellement au moins une fois par jour, avantageusement deux fois par jour, pendant au moins 10 jours, préférentiellement pendant 20 jours, et encore préférentiellement pendant au moins 28 jours.

De manière avantageuse, l’application par voie topique d’une souche deLactobacillus crispatusselon l’invention ou d’une composition cosmétique la comprenant, est effectuée sur la peau saine et/ou les muqueuses saines de tout ou partie du corps et/ou du visage et/ou du cuir chevelu, préférentiellement les jambes, les cuisses, les bras, le ventre, le décolleté, le cou, les aisselles, les lèvres, encore préférentiellement tout ou partie du visage, et préférentiellement les joues, le front, le menton, les lèvres, le contour des yeux.

Dans un mode de réalisation avantageux du procédé cosmétique selon l’invention, la composition cosmétique comprend la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention à une concentration comprise entre 1x10^-4% et 10% (p/p) en poids, préférentiellement entre 1x10^-4% et 5% (p/p) en poids, encore avantageusement entre 1x10^-3% et 0,5% (p/p) en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre un excipient cosmétiquement acceptable.

Le procédé de soin cosmétique selon l'invention a pour objet de diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, comprend avantageusement les étapes suivantes :

- L’identification sur l’individu d’une zone de peau saine et/ou de muqueuse saine, pour laquelle on souhaite diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et

- L’application topique sur cette zone de peau saine et/ou de muqueuse saine, d’une composition cosmétique comprenant la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention, en une quantité efficace pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, à savoir en une teneur de souche deLactobacillus crispatuscomprise avantageusement entre 1x10^-4% et 10% (p/p) en poids, préférentiellement entre 1x10^-4% et 5% (p/p) en poids, encore avantageusement entre 1x10^-3% et 0,5% (p/p) en poids, par rapport au poids total de la composition.

Au sens de la présente invention, on entend par « topiquement et/ou oralement acceptable », un ingrédient adapté à une application respectivement par voie topique et/ou orale, non toxique, non irritant pour la peau y compris le cuir chevelu et n’induisant pas de réponse allergique, et qui n’est pas instable sur le plan chimique.

L’invention a également pour objet la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention, seule ou dans une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique la comprenant, pour son utilisation, avantageusement par voie topique pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses impliquant une hyperpigmentation et/ou une augmentation de la pigmentation, notamment une diminution de l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou une augmentation de l’apparition des taches pigmentaires de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou une augmentation de l’activité de la mélanogenèse, notamment en passant par une augmentation de la mélanine et/ou de l’activité de la tyrosinase, et/ou une augmentation du stress oxydatif de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques.

En particulier, l’invention a pour objet la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention ou une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique la comprenant, pour son utilisation, avantageusement par voie topique, pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et/ou prévenir l’hyperpigmentation de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées au stress oxydatif.

Au sens de la présente invention, on entend d’un point de vue dermatologique par « traitement et/ou prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses pour dépigmenter et ou prévenir l’hyperpigmentation », un dérèglement pigmentaire sous l’effet de pathologies de la peau et/ou des muqueuses, comme par exemple la maladie d’Addison, l’insuffisance hépatique, un purpura, un mélanome, un chloasma, une dermatosis papulosa nigra, que l’on qualifie d’hyperpigmentation pathologique, ou bien encore, l’acné, l’eczéma, la dermatite atopique, la rosacée, la couperose, des rougeurs.

Au sens de la présente invention, on entend d’un point de vue dermatologique par « traitement et/ou prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées au stress oxydatif », le traitement et/ou la prévention de nombreuses maladies cutanées liées à un stress oxydatif excessif, parmi lesquels le psoriasis, certains eczémas, l’acné, le vitiligo, ou bien encore certains cancers cutanés.

La souche deLactobacillus crispatusselon l’invention peut se trouver sous la forme d’une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique, comprenant au moins un excipient pharmaceutiquement et/ou dermatologiquement, acceptable. Dans un mode de réalisation de l’invention, ladite composition est appliquée par voie topique et/ou orale, préférentiellement par voie topique.

Avantageusement, elle est présente dans la composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique, à une concentration de 1x10^-4% à 10% (p/p) en poids, préférentiellement entre 1x10^-4% et 5% (p/p) en poids, encore avantageusement entre 1x10^-3% et 0,5% (p/p) en poids par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient pharmaceutiquement, préférentiellement dermatologiquement acceptable.

L’invention sera mieux comprise à la lecture de la description des figures et des exemples qui suivent.

Des exemples faisant référence à la description de l’invention sont présentés ci-après. Ces exemples sont donnés à titre d’illustration et ne sauraient limiter en aucun cas la portée de l’invention. Chacun des exemples a une portée générale.

Les exemples font partie intégrante de la présente invention et toute caractéristique apparaissant nouvelle par rapport à un état de la technique antérieure quelconque à partir de la description prise dans son ensemble, incluant les exemples, fait partie intégrante de l'invention.

D'autre part, dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire, la température est exprimée en degré Celsius sauf indication contraire, et la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire.

Exemples

Exemple 1. Préparation de différentes formes deLactobacillus crispatus

Exemple 1.a : production de forme entière viable deLactobacillus crispatus.

Les bactériesLactobacillus crispatus(CNCM I-5579) isolées ont été ensemencées dans un milieu de culture de type MRS (Gélose de Man, Rogosa, Sharpe), incubées à 37°C en anaérobie. Le pH a été maintenu à une valeur de pH = 6, et le milieu a été incubé 24h. En fin d’incubation, le milieu a été centrifugé, le concentré cellulaire a été lyophilisé en présence de maltodextrine, pour une quantité finale de maltodextrine de 50% (p/p) en poids par rapport au poids total de l’ingrédient.

Exemple 1.b : production de la forme entière inactivée deLactobacillus crispatus

Les bactériesLactobacillus crispatus(CNCM I-5579) isolées ont été ensemencées dans un milieu de culture de type MRS, incubées à 37°C en anaérobie. Le pH a été maintenu à une valeur de pH = 6, et le milieu a été incubé 24h. En fin d’incubation le milieu a été centrifugé, le concentré cellulaire a été inactivé en le chauffant à 80°C pendant 30 minutes. Le concentré cellulaire a ensuite été re suspendu dans de la glycérine.

Exemple 1.c : production du lysat de la bactérieLactobacillus crispatus

Les bactériesLactobacillus crispatus(CNCM I-5579) isolées ont été ensemencées dans un milieu de culture de type MRS, incubées à 37°C en anaérobie. Le pH a été maintenu à une valeur de pH = 6, et le milieu a été incubé 24h. En fin d’incubation l’ensemble a été passé à l’homogénéisateur haute pression. Le lysat a ensuite été re suspendu dans de la glycérine.

Exemple 1.d : production du sécrétome de la bactérieLactobacillus crispatus

Les bactériesLactobacillus crispatus(CNCM I-5579) isolés ont été ensemencées dans un milieu de culture de type MRS, incubées à 37°C en anaérobie. Le pH a été maintenu à une valeur de pH = 6, et le milieu a été incubé 24h. En fin d’incubation le milieu a été filtré pour récupérer le sécrétome de la bactérie. Le sécrétome a ensuite été dilué dans de la glycérine.

Exemple 1.e : production du sécrétome de la bactérieLactobacillus crispatussous forme de poudre

Les bactériesLactobacillus crispatus(CNCM I-5579) isolés ont été ensemencées dans un milieu de culture de type MRS, incubées à 37°C en anaérobie. Le pH a été maintenu à une valeur de pH = 6, et le milieu a été incubé 24h. En fin d’incubation le milieu a été filtré pour récupérer le sécrétome de la bactérie. Le sécrétome a ensuite été atomisé avec de la maltodextrine, pour une quantité finale de maltodextrine de 90% (p/p) en poids par rapport au poids total de l’ingrédient.

Exemple 2 : Inhibition de la synthèse de mélanine par les mélanocytes en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Des mélanocytes d’une lignée murine B-16 ont été ensemencés en plaque 96 puits à raison de 8000 cellules/cm², puis cultivés dans un milieu MEM (Milieu Essentiel Minimum) supplémenté avec 10% de SVF (Sérum de Veau Fœtal) à 37°C, 5% de CO₂et 95% d‘Humidité Relative pendant 3 jours.

Le milieu a ensuite été retiré et remplacé par 200μL du milieu précédemment décrit avec l’ajout de 1μM de NDP-α-MSH (analogue de l’hormone mélanotrope) utilisé comme stimulateur de synthèse de mélanine et en présence de la soucheLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a à une concentration de 0,1% (p/p), ce durant 5 jours.

Le même milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention mais avec l’ajout de 1μM de NDP-α-MSH ou avec l’ajout d’acide kojique à 0,01% (p/p) ont été utilisés comme témoins de manipulation, respectivement comme témoin stimulateur de mélanine et témoin inhibiteur de mélanine.

Le même milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention mais avec de l’éthanol a été utilisé comme témoin (Contrôle).

Après 5 jours d’incubation les cellules ont été lysées avec une solution de soude (NaOH) ou de potasse (KOH). L’absorbance a été mesurée à 475nm.

La quantité de mélanine a été déduite d’une courbe de gamme étalon constituée de différentes concentrations de mélanine synthétique commerciale.

Les résultats d’absorbance ont été normalisés par rapport à l’absorbance obtenue avec le même milieu cellulaire en l’absence la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention (Contrôle). Les résultats présentés correspondent à la moyenne de 6 replicats (n=6).

Résultats

	Contrôle (éthanol)	NDP-α-MSH 1µM (Témoin simulation mélanine)	Acide kojique 0,01% (p/p) (Témoin inhibition mélanine)	Produit de l’inventionLactobacillus crispatus(Exemple 1.a à 0,1% p/p)
Moyenne mélanine (%)	24	100	18	48
Ecart-type	4	8	4	5
Statistique / NDP-α-MSH	(*) P<0,001 (Student T test)	NA	(*) P<0,001 (Student T test)	(*) p<0,05 (One way ANOVA)

La souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a produit de l’invention a montré une inhibition significative de 52% de la synthèse de mélanine par les mélanocytes de lignée murine B-16 cultivésin vitro. Elle peut donc être utilisée pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation.

Exemple 3 : Inhibition de l’activité de la tyrosinase en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

La tyrosinase est une enzyme clé dans le processus de synthèse de la mélanine responsable de la carnation. La tyrosinase utilisée est extraite de mélanocytes humains normaux.

La souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.e à une concentration de 0,05% (p/p) ou un composé de référence (acide kojique) à une concentration allant de 0,25 mM à 8 mM , ont été pré-incubés avec l'enzyme pendant 10 minutes sur glace. Ensuite, le substrat de la tyrosinase, la L-Tyrosine à une concentration finale de 1 mM a été ajouté au milieu et les plaques ont été incubées à 37°C pendant 24 heures.

Le même extrait enzymatique sans ajout de la souche selon l’invention mais avec de l’éthanol a été utilisé comme témoin (Contrôle).

L'activité enzymatique a été évaluée en mesurant la production de mélanine par densité optique (DO) à 540 nm à l’aide d’un lecteur de microplaques.

Les mesures de densité optique ont également été effectuées sans ajout de substrat (n=1) afin de détecter une éventuelle interférence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.e ou du composé de référence pour chaque concentration testée.

Le pourcentage d’inhibition de l’activité de la tyrosinase a été calculé selon la formule suivante :

% d’inhibition : 100-[Valeur DO/Moyenne DO du contrôle x 100]

Toutes les conditions expérimentales ont été réalisées en n=3. Les comparaisons intergroupes ont été réalisées par un test t de Student non apparié.

	Contrôle non traité (éthanol)	Produit de l’inventionLactobacillus crispatus(Exemple 1.e à 0,05% (p/p))
Moyenne d’inhibition de la tyrosinase humaine (%)	0	99
Ecart sur la moyenne	3	0
Statistique /contrôle	NA	*** (p<0.001)

La souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.e de l’invention a montré une inhibition significative de l’activité de la tyrosinase extraite de mélanocytes humains de 99%. Par cette action d’inhibition de l’activité de la tyrosinase, la souche deLactobacillus crispatuspeut donc être utilisée pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation.

Exemple 4 : Inhibition de la synthèse de mélanine dans une co-culture de mélanocytes et de kératinocytes en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Des kératinocytes humains normaux et des mélanocytes humains de nouveau-né ont été ensemencés respectivement à 20000 cellules/cm²et 10000 cellules/cm², puis cultivés durant 7 jours à 37°C sous 5% CO₂et à 95% d’humidité relative dans un mélange de 50%/50% (v/v) de milieu de culture pour mélanocytes et de milieu de culture pour kératinocytes, supplémenté en facteurs de croissance.

Après une semaine de culture, le milieu de culture a été remplacé par un mélange de milieu de culture DMEM (milieu minimum essentiel de Eagle modifié Dulbecco) sans antibiotique et un milieu pour mélanocytes sans facteur de croissance, et supplémenté avec 40µM d’acide oléique.

Ce milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention a été utilisé comme témoin non traité (Contrôle).

A ce même milieu, il a été ajouté le sécrétome de la bactérieLactobacillus crispatusobtenus selon l’exemple 1.e à une concentration de 0,1% (p/p) par rapport au poids total du milieu de culture et du sécrétome.

Le même milieu de culture sans la souche, mais en présence de Rucinol à 0,002% (p/p) et a été utilisé comme témoin positif.

Les cultures ont été poursuivies 72h à 37°C sous 5% CO₂et à 95% d’humidité relative, puis le milieu de culture a été renouvelé. Après 48h de culture additionnelle, le milieu a ensuite été éliminé, puis les cellules rincées par du PBS (tampon phosphate). Puis, une solution de soude 1N contenant 10% de Dimethylsulfoxide (DMSO) a été rajoutée dans chaque cupule de la plaque. 200µL de chaque cupule ont été transférés dans une plaque transparente. La Densité optique reflétant la quantité de mélanine a été lue à 475nm.

Les résultats ont été la moyenne des essais effectués ± l'écart-type, exprimé en pourcentage, par rapport au contrôle non traité normalisé à 100%. L’analyse statistique des résultats a été faite par rapport au témoin non traité en utilisant le test One-Way ANOVA.

Résultats

	Témoin non traité	Rucinol 0,002% (p/p) (Témoin positif)	Produit de l’inventionL actobacillus crispatusà 0,1% (p/p) (Exemple 1.e)
Quantité moyenne de mélanine (%)	100	72	68
Ecart-type	10	3	7
% d’inhibition	NA	28	32
Statistique /contrôle	NA	P<0.01	P<0.01

La souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.e de l’invention a montré une diminution significative de 32% de la synthèse de mélanine par les mélanocytes cocultivésin vitroavec les kératinocytes cutanés humain. Ainsi, la souche deLactobacillus crispatus, et en particulier son sécrétome peut donc être utilisée pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation.

Exemple 5 : Diminution du stress oxydatif en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Exemple 5.a : Diminution de la formation de radicaux libres DPPH°in tuboen présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Le dosage de l’activité antiradicalaire de la soucheLactobacillus crispatusa été évalué par un test utilisant le DPPH° (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl).

Il a été mélangé dans du PBS (Tampon phosphate salin) la souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a à une concentration de 0,05% (p/p), et selon l’exemple 1.e à une concentration de 0,7% (p/p).

Un témoin négatif a été réalisé à l’aide du solvant de dissolution de la souche, le PBS et un témoin positif a été réalisé avec de la vitamine C à 1 mM.

Chacune des solutions contenant l’invention, le témoin négatif ou le témoin positif a été mélangée à 50%/50% (v/v) dans une solution de DPPH°, dans des puits de plaques de 96 puits.

Chacune des solutions contenant l’invention, le témoin négatif ou le témoin positif a également été mélangée à 50%/50% (v/v) dans une solution d’éthanol qui est le solvant du DPPH°, afin de réaliser un blanc, dans cette même plaque.

L’ensemble a été incubé durant 30 minutes sous agitation. En fin d’incubation, la densité optique (DO) a été mesurée à une longueur d’onde de 530 nm pour estimer la quantité de radicaux libres formés dans chacune des conditions testées.

Les résultats de la mesure des radicaux DPPH° pour obtenir l’activité anti-radicalaire de l’invention ont été la moyenne de 6 essais (n=6) et ont été exprimés en pourcentage moyen +/- un écart type. Le produit de l’invention a été comparé à son témoin négatif (PBS seul en l’absence de la souche deLactobacillus crispatus). Le témoin positif vitamine C a été comparé à son témoin négatif, l’eau. L’analyse statistique a été conduite par une analyse de variance One Way ANOVA pour l’invention et par un test de student pour la vitamine C.

	Témoin négatif (PBS)	Vitamine C 1mM	Produit de l’invention (exemple 1e à 0,7% (p/p))	Produit de l’inventionLactobacillus crispatus(Exemple 1a à 0,05% (p/p))
Moyenne radicaux (%)	100	0	68,81	66,19
Ecart-type	4.33	0	3,44	2,21
Statistique / contrôle	NA	P<0,001 (Student t test)	Not tested	P<0,001 (One way ANOVA)

La souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a de l’invention a montré une activité anti-radicalairein tubosignificative de 34%. La souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.e de l’invention a montré une activité anti-radicalairein tubode 31%. Par cette action de diminution de la production de radicaux libres, la souche deLactobacillus crispatuspeut donc être utilisée pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation.

Exemple 5.b : Diminution de la libération de radicaux libres cellulaires induits par les UVs au sein de fibroblastes en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Des fibroblastes humains dits « normaux », c’est-à-dire ne présentant pas de pathologie, issus d’une donneuse saine ont été ensemencés en plaque 24 puits à raison de 30000 cellules/cm², puis cultivés dans un milieu DMEM (milieu minimum essentiel de Eagle modifié Dulbecco) / Ham’s F-12, supplémenté avec 10% de SVF et 0,5% d’antibiotique, pendant 96h à 37°C, sous 5% de CO₂et 95% d’humidité relative.

Puis, 0,5mL de la suspension cellulaire a été incubé 72h en présence de la soucheLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a à une concentration de 0,0125% (p/p), ou d’un témoin antioxydant (Vitamine E à 0,0003% (v/v)) dans un milieu EMEM (milieu minimum essentiel de Eagle) supplémenté de 1% de SVF et 0,5% d’antibiotique.

Ce milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention a été utilisé comme témoin non traité (témoin UVA seul - Contrôle de stress oxydant).

Une sonde DCFH-DA (2',7'-dichlorodihydrofluorescéine diacétate) solubilisée à 10μM dans du PBS (tampon phosphate) a été incubée avec les cellules. Après la première heure d’incubation à 37°C sous 5% de CO₂et 95% d’humidité relative, les cellules ont été rincées par du PBS, et irradiées par des UVA à 20J/cm² pendant 3 heures. Un témoin non irradié a également été réalisé. Après irradiation, le milieu irradié a été éliminé, et les cellules ont été rincées par du PBS.

La lecture de la fluorescence sur le tapis cellulaire liée à la formation du DCF (2’,7-dichlorofluorescéine) à partir de la sonde (DCFH-DA) a été lue à 485 nm d’excitation et 538nm d’émission.

Les résultats ont été la moyenne de 12 replicats (n=12) et ont été exprimés en Moyenne +/- un écart type. Les résultats ont été comparés par rapport au témoin UVA seuls normalisé à 100% et comparés statistiquement en utilisant le test d’analyse de variance One Way ANOVA.

	Témoin UVA seul (Contrôle de stress oxydant)	Vitamine E 0,0003% (v/v)	Produit de l’inventionLactobacillus crispatus(Exemple 1a à 0,0125% (p/p))
Moyenne radicaux mesurés par sonde fluorescente DCF (%)	100	71	44
Ecart-type	8	25	21
Statistique / contrôle	NA	P<0,05 (Test t de student)	P<0,05 (test t de student)

La souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a de l’invention a montré une diminution significative au niveau cellulaire de 56 % de la libération de radicaux libres intracellulaires induit par un stress oxydant aux UVA. Par cette action de diminution de la libération de radicaux libres intracellulaires induit par les UVA, la souche deLactobacillus crispatuspeut donc être utilisée pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses et/ou préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement diminuer la présence et/ou empêcher l’apparition des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses, notamment lorsque celles-ci subissent un stress oxydant, préférentiellement par des UVA.

Exemple 5.c : Diminution de la peroxydation des lipides membranaires induits par les UVs au sein de fibroblastes en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Des fibroblastes humains dits « normaux », c’est-à-dire ne présentant pas de pathologie, issus d’une donneuse saine ont été ont été ensemencés en plaque 24 puits à raison de 30000 cellules/cm², puis cultivés dans un milieu DMEM/Ham’s F-12, supplémenté avec 10% de SVF et 0,5% d’antibiotique, pendant 96h à 37°C, sous 5% de CO₂et 95% d’humidité relative.

Puis, 0,5mL de la suspension cellulaire a été incubé 72h en présence de la soucheLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a à une concentration de 0,00625% (p/p), ou d’un témoin antioxydant (Vitamine E à 0,0003% (v/v)) dans un milieu EMEM supplémenté de 1% de SVF et 0,5% d’antibiotique.

Ce milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention a été utilisé comme témoin non traité (après irradiation, constitue le témoin UVA seul - Contrôle de stress oxydant).

Après la première heure d’incubation à 37°C sous 5% de CO₂et 95% d’humidité relative, les cellules ont été rincées par du PBS, et irradiées par des UVA à 20J/cm² pendant 3 heures. Un témoin non irradié a également été réalisé. Après irradiation, les surnageants ont été récupérés et les cellules ont été rincées par du PBS.

Une quantité de 0,5 mL des surnageants a été transférée dans un tube en verre Pyrex auquel il a été rajouté une solution d’acide trichloroacétique à 40% et 2% d’acide thiobarbiturique. Le mélange obtenu a été chauffé 30 minutes à 100°C. Puis, la formation de MDA (MalonDiAldehde), qui est un produit d’oxydation libéré suite à la peroxydation des lipides induite par les UVA, a été mesurée par fluorescence à 532nm d’excitation et 560nm d’émission.

Les résultats ont été la moyenne des essais réalisés et ont été exprimés en Moyenne +/- un écart type. Les résultats ont été comparés par rapport au témoin UVA seuls normalisé à 100% et comparés statistiquement en utilisant le test d’analyse de variance One Way ANOVA.

	Témoin UVA seul (Contrôle de stress oxydant)	Vitamine E 0,0003% (v/v)	Produit de l’inventionLactobacillus crispatus(Exemple 1a à 0,00625% p/p)
Moyenne MDA libérée (%)	100	48	68
Ecart-type	11	10	12
Statistique / contrôle	NA	P<0,001 (Test t de student)	P<0,001 (test t de student)

La souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a de l’invention a montré une diminution significative au niveau cellulaire de la formation de MDA induites par les UVA de 32%. Par cette action de diminution de la peroxydation des lipides en présence de stress par les UVs, la souche deLactobacillus crispatuspeut donc être utilisée pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses, notamment lorsque celles-ci subissent un stress oxydant, notamment un stress par les UVA.

Exemple 6 : Stimulation des défenses antioxydantes cellulaires après irradiation par les UVs au sein de fibroblastes en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Des fibroblastes humains dits « normaux », c’est-à-dire ne présentant pas de pathologie, issus d’une donneuse saine ont été ensemencés en plaque 24 puits à raison de 30000 cellules/cm², puis cultivés dans un milieu DMEM/Ham’s F-12, supplémenté avec 10% de SVF et 0,5% d’antibiotique, pendant 96h à 37°C, sous 5% de CO₂et 95% d’humidité relative.

Ce milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention a été utilisé comme témoin non traité (après irradiation, constitue le témoin UVA seul - Contrôle de stress oxydant).

Puis, 0,5mL de la suspension cellulaire a été incubé 72h avec en présence de la soucheLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a à une concentration de 0,0125% (p/p), ou d’un témoin antioxydant (Vitamine E à 0,0003% (v/v)) dans un milieu EMEM supplémenté de 1% de SVF et 0,5% d’antibiotique.

Après la première heure d’incubation à 37°C sous 5% de CO₂et 95% d’humidité relative, les cellules ont été rincées par du PBS, et irradiées par des UVA à 20J/cm² pendant 3 heures. Un témoin non irradié a également été réalisé. Après irradiation, le milieu irradié a été éliminé, et les cellules ont été rincées par du PBS.

De la soude (NaOH) 1N a été rajoutée dans chaque cupule, suivie d’une solution de o-phtaldialdehyde (OPT) diluée au 1/15^emedans du tampon GSH (L-glutathion réduit). L’ensemble a été incubé 15 minutes à température ambiante. Puis la quantité de glutathion a été mesurée par fluorescence à 355 nm d’excitation et 430 nm d’émission.

Les résultats ont été la moyenne des essais réalisés et ont été exprimés en Moyenne +/- un écart type. Les résultats ont été comparés par rapport au témoin UVA seuls normalisé à 100% et comparés statistiquement en utilisant le test d’analyse de variance One Way ANOVA.

	Témoin UVA seul (Contrôle de stress oxydant)	Vitamine E 0,0003% (v/v)	Produit de l’inventionLactobacillus crispatus(Exemple 1a à 0,0125% (p/p))
Moyenne de glutathion (%)	100	100	154
Ecart-type	11	13	41
Statistique / contrôle	NA	NS	P<0,05 (test t de student)

La souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a de l’invention a montré une augmentation significative des défenses antioxydantes cellulaires par une augmentation de glutathion de 54% après irradiation par les UVA.

Par cette action d’augmentation des défenses antioxydantes cellulaires en présence de stress oxydant par les UVAs, la souche deLactobacillus crispatuspeut donc être utilisée pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses, notamment lorsque celles-ci subissent un stress oxydant, notamment un stress par les UVA.

Exemple 7 : Mesurein vivode la diminution de la quantité de mélanine au niveau de la peau en présence de la souche deLactobacillus crispatusselon l’invention.

Une population de 30 femmes chinoises de phototype II à IV, âgées de 40 à 50 ans ayant des taches pigmentaires au niveau du visage s’est appliquée en hémi-visage une crème sous forme d’émulsion comprenant une concentration finale en poids de la soucheLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.e de 1% (p/p) par rapport au poids total de la crème (Formulation exemple 8.b), ou sans ledit extrait remplacé par de l’eau (placebo), à raison de 2 applications par jour et ce, pendant 2 mois.

L’évaluation du contenu de la peau en mélanine a été réalisée à l’aide d’un appareil appelé Mexamètre qui utilise le principe d’absorption/réflexion. A partir des mesures du Mexamètre, il est déduit un index mélanique. Une diminution de cet index correspond à une diminution de la mélanine.

L’efficacité de la composition contenant la souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.e a été comparée avec celle de l’émulsion dite placébo.

L’index mélanique a été mesurée au début de l’étude (D0) après un mois d’application (D28) et enfin après 2 mois d’application (D56).

L’efficacité de la formulation contenant la souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.e et de la formule placébo ont été exprimées en moyenne et ont été comparées par rapport aux valeurs du début de l’étude (D0) et comparées entre la formulation contenant la souche deLactobacillus crispatusavec celle contenant le placebo, en utilisant le test de Student ou le test de Wilcoxon.

	Produit de l’inventionLactobacillus crispatus(Exemple 1e à 1% (p/p))	Placebo
Index mélanique à D28 (en % vs D0)	-3,1% (p<0,001 vs D0 ; p<0,001 vs placebo)	-0,1%
Index mélanique à D56 (en % vs D0)	-5,5% (p<0,01 vs D0 ; p<0,01 vs placebo)	+1%

La formulation de la souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.e a significativement diminué la quantité de mélanine cutanée mesurée via l’index mélanique à l’aide d’un Mexametre.

Ces résultats montrent l’effet bénéfique de la souche deLactobacillus crispatusmise en formulation pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité de la peau saine et/ou des muqueuses saines.

Exemple 8 : Exemple de composition cosmétique comprenant la souche deLactobacillus crispatusselon l'invention

Exemple 8.a : Exemple de composition cosmétique comprenant la souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.a

La souche deLactobacillus crispatus obtenueselon l’exemple 1.a a été ajoutée juste avant l’application sur la peau dans une formulation telle que défini ci-dessous selon la Table 8, à une concentration finale de 0,05% (p/p) par rapport au poids total de la formulation.

Dénomination	Quantité (% en poids total)
Phase A
Alcool cétéarylique, lécithine, sulfate de cétéaryle de sodium, huile d'olus	3,00
Glycérides Végétaux Hydrogénés	2,50
Caprylyl Caprylate/Caprate	6,50
Carbonate de dicaprylyle	4,00
Phase B
Eau	66,35
Butylène Glycol	10,00
Benzoate de Sodium	0,25
Phase C
Glycérine	5,00
Gomme xanthane	1,00
Phase D
Glycérine, eau, Levulinate de Sodium, Anisate de sodium	1,00
Acide citrique	0,40

Exemple 8.b : Exemple de composition cosmétique comprenant la souche deLactobacillus crispatusselon l’exemple 1.e

Les proportions sont exprimées en % et les noms en majuscules correspondent aux noms INCI des ingrédients.

Phase A
GLYCERIN	5,00
BUTYLENE GLYCOL	10,00
XANTHAN GUM	2,00
Phase B
Eau	58,95
Sodium benzoate	0,25
GLYCERINE, EAU, SODIUM LEVULINATE, SODIUM ANISATE	1,00
Phase C
POLYGLYCERYL-2 DIPOLYHYDROXYSTEARATE	1,00
DIPROPYLHEPTYL CARBONATE	3,00
DICAPRYLYL CARBONATE	3,00
CAPRYLYL CAPRYLATE/CAPRATE	10,00
LAURETH-7 CITRATE	0,50
Phase D
Acide citrique	0,30
Phase E
Extrait deLactobacillus crispatusobtenu selon exemple 1e	1,00
Eau	4,00

On procède selon les méthodes connues de l’homme du métier pour mélanger ensemble les différentes phases A, B, C à température ambiante, en ajoutant B en A en remuant, puis C dans AB. On ajuste le pH à 4,9 avec D. Puis on ajoute la phase E. Enfin, on homogénéise par Ultra Turrax pour préparer une composition selon la présente invention.

Claims (21)

1. Utilisation cosmétique et/ou nutraceutique d’une souche deLactobacillus crispatus, préférentiellement la souche deLactobacillus crispatusétant l’espèce déposée sous la désignation CNCM I-5579, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation.
2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle la souche diminue et/ou inhibe la mélanogenèse, notamment en agissant sur la diminution et/ou l’inhibition de la mélanine, préférentiellement sur la diminution et/ou l’inhibition de la synthèse et/ou de la quantité de mélanine, et/ou en diminuant et/ou inhibant l’activité de la tyrosinase, et/ou en détoxifiant la peau saine et/ou les muqueuses saines.
3. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines.
4. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint, de la peau saine et/ou des muqueuses saines.
5. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement les taches brunes et/ou les taches de vieillesse.
6. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour détoxifier la peau saine et/ou les muqueuses saines, notamment par une action antioxydante et/ou sur la peroxydation des lipides et/ou par une augmentation et/ou stimulation de la synthèse de glutathion induit par un stress oxydant.
7. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la souche est utilisée sous forme entière, notamment viable et/ou inactivée, notamment morte, et/ou sous forme de lysat, et/ou sous forme de l’une ou plusieurs de ses fractions, et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, préférentiellement de son sécrétome.
8. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la souche deLactobacillus crispatusest celle déposée sous le numéro CNCM I-5579.
9. Utilisation selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle la souche deLactobacillus crispatusest utilisée sous forme entière viable et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, préférentiellement de son sécrétome.
10. Utilisation selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle la souche deLactobacillus crispatusest associée à son milieu de culture.
11. Utilisation selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle la souche deLactobacillus crispatusest appliquée par voie topique sur la peau saine et/ou les muqueuses saines.
12. Utilisation selon la revendication 11 dans laquelle la peau est de phototype IV à VI.
13. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, telle que la souche deLactobacillus crispatusest présente dans une composition cosmétique à une concentration de 1x10^-4% à 10% en poids, préférentiellement entre 1x10^-4% et 5% en poids, encore avantageusement entre 1x10^-3% et 0,5% en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable.
14. Procédé de soin cosmétique caractérisé en ce qu’il comprend l’application par voie topique sur au moins une zone de peau saine et/ou de muqueuse saine d’une souche deLactobacillus crispatustelle que définie selon l’une des revendications 7 à 10, ou d’une composition cosmétique selon la revendication 13, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses.
15. Procédé de soin cosmétique selon la revendication 14, dans laquelle l’application par voie topique d’une souche deLactobacillus crispatustelle que définie selon l’une des revendications 7 à 10, ou d’une composition cosmétique selon la revendication 13, est effectuée sur la peau saine et/ou les muqueuses saines de tout ou partie du corps et/ou du visage et/ou du cuir chevelu, préférentiellement les jambes, les cuisses, les bras, le ventre, le décolleté, le cou, les aisselles, les lèvres, encore préférentiellement tout ou partie du visage, et préférentiellement les joues, le front, le menton, les lèvres, le contour des yeux.
16. Procédé de soin cosmétique selon l’une quelconque des revendications 14 à 15, dans lequel la composition cosmétique comprend la souche deLactobacillus crispatustelle que définie selon l’une des revendications 7 à 10 à une concentration de 1x10^-4% à 10% en poids, préférentiellement entre 1x10^-4% et 5% en poids, encore avantageusement entre 1x10^-3% et 0,5% en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable.
17. Souche deLactobacillus crispatus, ou une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique la comprenant, pour son utilisation, avantageusement par voie topique, pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et/ou prévenir l’hyperpigmentation de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées au stress oxydatif.
18. Souche selon la revendication 17 dans laquelle la souche est utilisée sous forme entière, notamment viable et/ou inactivée, notamment morte, et/ou sous forme de lysat, et/ou sous forme de l’une ou plusieurs de ses fractions, et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, préférentiellement de son sécrétome, et/ou dans laquelle la souche est associée à son milieu de culture.
19. Souche deLactobacillus crispatuspour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 17 à 18, caractérisé en ce qu’elle se trouve sous la forme d’une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique, comprenant au moins un excipient dermatologiquement acceptable.
20. Souche deLactobacillus crispatuspour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 17 à 19, caractérisé en ce qu’elle est présente dans la composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique, à une concentration de 1x10^-4% à 10% en poids, préférentiellement entre 1x10^-4% et 5% en poids, encore avantageusement entre 1x10^-3% et 0,5% en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient pharmaceutiquement, préférentiellement dermatologiquement, acceptable.
21. Souche deLactobacillus crispatuspour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 17 à 20, caractérisée en ce que la souche est telle que définie selon l’une des revendications 7 à 10.