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EP4499120A1 - Utilisation cosmétique, nutraceutique et/ou dermatologique d'une souche de lactobacillus crispatus et/ou d'une composition la comprenant - Google Patents

Utilisation cosmétique, nutraceutique et/ou dermatologique d'une souche de lactobacillus crispatus et/ou d'une composition la comprenant

Info

Publication number
EP4499120A1
EP4499120A1 EP23717048.5A EP23717048A EP4499120A1 EP 4499120 A1 EP4499120 A1 EP 4499120A1 EP 23717048 A EP23717048 A EP 23717048A EP 4499120 A1 EP4499120 A1 EP 4499120A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
skin
strain
mucous membranes
lactobacillus crispatus
healthy
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
EP23717048.5A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Laura AVERSA
Louis Danoux
Sabrina LEOTY-OKOMBY
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BASF Beauty Care Solutions France SAS
Original Assignee
BASF Beauty Care Solutions France SAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BASF Beauty Care Solutions France SAS filed Critical BASF Beauty Care Solutions France SAS
Publication of EP4499120A1 publication Critical patent/EP4499120A1/fr
Pending legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
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    • A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
    • A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists

Definitions

  • the present invention relates to the cosmetic, nutraceutical and/or pharmaceutical, in particular dermatological, use of a strain of Lactobacillus crispatus and/or of a composition comprising it to reduce pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or prevent increased pigmentation of the skin and/or mucous membranes.
  • the structure and appearance of the skin are modified with age and/or under the influence of extrinsic and/or intrinsic factors. These changes are numerous and include changes in the pigmentation of the skin and/or mucous membranes.
  • the skin becomes dull, less luminous, less radiant, its radiance diminishes and the complexion is less homogeneous with the appearance of pigment spots.
  • Melanogenesis and oxidative stress are the subject of numerous studies and innovations in the field of cosmetics for the development and improvement of cosmetic active ingredients aimed at reducing and/or preventing the increase in skin pigmentation. healthy and/or healthy mucous membranes.
  • skin and/or mucous membranes in particular to preserve and/or improve the complexion of the skin and/or mucous membranes, in particular its radiance and/or its luminosity and/or its homogeneity, particularly within a population more prone to tasks pigmentary, in particular phototype IV to VI skin as defined by the Fitzpatrick classification method.
  • Lactobacillus crispatus a beneficial commensal bacteria of the skin and/or mucous membranes
  • the Applicant's invention is all the more interesting since the bacteria Lactobacillus crispatus, and in particular that deposited under the number CNCM I-5579, has the advantage of being naturally present on young skin, unlike bacteria used until now in cosmetic and/or dermatological treatments.
  • the object of the present invention has the advantage of rebalancing and/or supplementing the microbiota of the skin and/or mucous membranes, in particular with a bacteria of the skin flora which diminishes and becomes rarer over time and/or exposure to intrinsic and/or extrinsic factors.
  • the object of the present invention is thus particularly suitable for the treatment of so-called mature skin, in particular of people over 50 years old.
  • the strain according to the invention also has the advantage of being an easily formulated ingredient, and can be easily manufactured on an industrial scale. It is an active ingredient topically acceptable for the skin and mucous membranes, which does not present any risk of allergy.
  • Application WO9822082 thus discloses the use of sphingomyelinase which can be extracted from lactic acid bacteria to be applied topically in order to increase the levels of ceramides in the skin and mucous membranes, for the prevention or therapeutic treatment of several pathologies.
  • Application W02009031099 discloses the use of a probiotic to prevent the appearance and/or to treat the manifestation of sensations of discomfort and/or skin signs associated with a surface skin treatment or an invasive treatment, for aesthetic purposes .
  • Application WO2019111189 describes the use comprising a probiotic in particular Lactobacillus paracasei for the prevention of inflammatory damage induced by UV radiation.
  • the first subject of the present invention is the cosmetic and/or nutraceutical use of a strain of Lactobacillus crispatus, preferably the strain of Lactobacillus crispatus deposited under the number CNCM I-5579, to reduce the pigmentation of the skin and/or mucous membranes.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention is in particular used as a cosmetic and/or nutraceutical active ingredient.
  • the strain according to the invention can be used to preserve and/or improve the complexion of healthy skin and/or healthy mucous membranes.
  • the strain according to the invention can also be used to preserve and/or improve the radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion, healthy skin and/or healthy mucous membranes.
  • the strain according to the invention can also be used to prevent the appearance and/or reduce the presence of pigment spots on healthy skin and/or healthy mucous membranes, preferably brown spots and/or age spots.
  • the strain according to the invention can also be used to detoxify healthy skin and/or healthy mucous membranes, in particular by an antioxidant action and/or on lipid peroxidation and/or by an increase and/or stimulation of glutathione synthesis. induced by oxidative stress.
  • a cosmetic treatment process characterized in that it comprises the topical application to at least one area of healthy skin and/or healthy mucous membrane of a strain of Lactobacillus crispatus according to the invention, preferably the Lactobacillus crispatus strain CNCM I-5579, or a cosmetic composition comprising it, to reduce skin pigmentation and/or mucous membranes and/or prevent its increase, in particular to preserve and/or improve the complexion of healthy skin and/or healthy mucous membranes, preferably to preserve and/or improve radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion of healthy skin and/or healthy mucous membranes, and/or to prevent the appearance and/or reduce the presence of pigment spots in healthy skin and/or healthy mucous membranes, and/or detoxify the skin and /or mucous membranes.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention is in particular used as a cosmetic and/or nutraceutical active ingredient.
  • the invention also relates to a strain of Lactobacillus crispatus according to the invention, preferably the strain of Lactobacillus crispatus CNCM I-5579, or to a pharmaceutical composition, in particular dermatological composition comprising it, for the prevention and/or treatment of pathologies of the skin and/or mucous membranes associated with an increase in pigmentation of the skin and/or mucous membranes, in particular to depigment and/or prevent hyperpigmentation of pathological skin and/or pathological mucous membranes, to reduce pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or to prevent its increase, in particular to preserve and/or improve the complexion of the pathological skin and/or the pathological mucous membranes, preferably to preserve and/or improve the radiance and/or the brightness and/or homogeneity of the complexion of the pathological skin and/or pathological mucous membranes, and/or to prevent the appearance and/or reduce the presence of pigment spots of the pathological skin and/or pathological mucous membranes and
  • “nutraceutical use” means a use intended for non-pharmaceutical oral use, that is to say which does not require or involve therapeutic treatment.
  • “Skin” means any area of skin on any part of the body and/or face, including the scalp.
  • phototype IV to VI skin means particular skin types classified according to the Fitzpatrick scale which makes it possible to classify individuals according to the reaction of their skin and hair during exposure to UV rays, and/or classified as such by a dermatologist according to the tone of the skin, which depends in particular on the level of activity of the melanocytes, the creation of these cells and their groupings.
  • these dark skin types of phototype IV to VI come from characteristic ethnic origins, respectively from India, Asia and/or Africa.
  • Phototype IV (Mediterranean type) corresponds to light matte skin and brown or black hair and eyes. Sunburns are rare, the skin tans well, a dark brown;
  • Phototype V corresponds to light matte skin, black hair and eyes. Sunburns are rare, the skin tans well, a dark brown;
  • the term "mucosa(s)" means the ocular mucosa, the nasal mucosa, the ear mucosa, the vaginal mucosa, the urogenital mucosa and/or the oral mucosa, in particular buccal, labial and/or gingival, preferably, the ocular and/or oral mucosa, and even more preferably, the labial and/or ocular mucosa.
  • it does not include the vaginal mucosa.
  • the term “healthy skin” or “healthy mucosa” means an area of skin or mucosa to which the strain according to the invention is applied and called “non-pathological” by a dermatologist, i.e. -meaning no infection, scar, disease, inflammation or skin condition such as candidiasis, impetigo, psoriasis, eczema, acne or dermatitis, or sores or injuries.
  • the term “Lactobacillus crispatus strain” means the bacterium Lactobacillus crispatus in whole form or in partial form, in particular in the form of lysate, in the form of a fraction or in the form of metabolites.
  • the Lactobacillus crispatus strain is not genetically modified.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention may be derived from any known species of Lactobacillus crispatus.
  • the strain of Lactobacillus crispatus is the species deposited according to the Budapest Treaty at the Pasteur Institute (28 rue du Dondel Roux, F -75024 Paris cedex 15) on 09/03/2020 under the designation CNCM I-5579 .
  • the process of skin pigmentation is also called “melanogenesis” and includes numerous stages ranging from the synthesis of melanin in melanocytes to its transport into the keratinocytes of the epidermis via melanosomes.
  • Tyrosinase is the enzyme which intervenes at key stages of melanin synthesis; it cooperates with other proteins to transform melanin into eumelanin and phaeomelanin, the melanins responsible for the pigmentation process.
  • the term “reduce and/or totally or partially inhibit the activity of tyrosinase” is understood to cause a reduction of at least 25%, preferably of at least 50%, more preferably of at least 75% of the activity of tyrosinase in the presence of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention, compared to the level of activity measured in the absence of the extract.
  • the measurement of tyrosinase activity is carried out on the tyrosinase extracted from so-called normal human melanocytes, still preferentially by measuring the production of melanin by photometrically measuring the absorbance at 540 nm from the tyrosinase extracted from melanocytes so-called normal humans, more preferably in the presence of the strain of Lactobacillus crispatus prepared according to Example 1.e, advantageously under the conditions described in Example 3.
  • the term "reduce and/or totally or partially inhibit the synthesis and/or the quantity of melanin” means a reduction in melanin of at least 10%, preferably at least 20%, more preferably by at least 30% of the synthesis and/or the quantity of melanin in the presence of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention compared to the synthesis and/or the quantity of melanin detected in the absence of the strain.
  • this involves a reduction in the quantity of melanin in the presence of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention prepared according to Example 1.a or according to Example 1 .e.
  • the quantity of melanin is measured by optical density at 475 nm from B16 melanocytes cultured in vitro in a culture medium comprising fetal calf serum, advantageously under the conditions described in Example 2.
  • the quantity of melanin is measured by optical density at 475 nm from a coculture of so-called normal human melanocytes and keratinocytes, cultured in vitro in a culture medium comprising growth factors, advantageously under the conditions described in Example 4.
  • the term "preserve and/or improve the complexion” means maintaining and/or preventing the reduction and/or increasing the radiance and/or luminosity and/or the radiance and/or shine of the complexion and/or the homogeneity of the complexion and/or diminish and/or reduce the dull and/or earthy complexion of the skin and/or mucous membranes.
  • the measurement of the radiance of the complexion, the luminosity and the homogeneity of the complexion of the skin and/or the mucous membranes can be studied using measurement techniques known to those skilled in the art, in particular can for example be carried out in vivo, by chromametry or by image analysis.
  • This last in vivo measurement method consists of taking high-resolution photographs in a crossed polarized configuration of the faces of volunteers taken at 45° before and after application of the product tested. On the basis of these digital photographs, an image analysis makes it possible to extract and quantify specific parameters (for example: L*, a*, b*, C, h°) related to color, brightness and the homogeneity of the skin.
  • the term “preserve and/or improve the radiance of the complexion” means maintaining and/or preventing the reduction and/or increasing luminosity and/or radiance and/or shine and/or clarity. , and/or diminish and/or reduce the dull and/or earthy complexion of the skin and/or mucous membranes.
  • the term "preserving and/or improving the homogeneity of the complexion” means maintaining and/or preventing the increase and/or reducing the quantity and/or extent of imperfections and/or irregularities of the complexion.
  • complexion color in particular chosen from redness, pigment spots, blackheads, freckles and/or visible pores.
  • Measuring the evenness of skin tone and the amount of melanin in the skin can be measured by Mexametrie.
  • This in vivo measurement method consists of using the absorption/reflection principle to deduce a melanin index which reflects the quantity of melanin present in the skin.
  • the measurement of the improvement in complexion is carried out on a population of women having pigment spots on the face, preferably by application of a cream containing the strain of Lactobacillus crispatus prepared according to example 1.e, in the conditions described in Example 7.
  • the term "maintain and/or prevent the increase and/or reduce imperfections and/or irregularities in the color of the complexion” means to prevent the increase and/or decrease the quantity of melanin in the skin, by at least 2%, advantageously at least 3% in the presence of the strain according to the invention during a 28-day application to the skin relative to the quantity of melanin detected in the absence of the strain and/or at least 2%, advantageously at least 5% in the presence of the strain according to the invention during a 56-day application to the skin compared to the quantity of melanin detected in the absence of the strain.
  • preventing the appearance and/or reducing the presence of pigment spots means maintaining and/or preventing the increase and/or reducing the pigmentation of localized pigment spots, in particular the number and/or intensity of the pigment spots. typically on areas of the face, beaulleté, neck, back, shoulders and/or hands, particularly spots on the tops of the hands.
  • Pigment spots include brown and/or dark and/or white spots and/or “aged spots” when they are located on a part of the body exposed to UV radiation and/or linked to chronological or UV-induced aging, for example during exposure to the sun. Pigment spots also include freckles and/or moles and/or postinflammatory spots and/or which appear in response to attacks, and/or of hormonal origin, in particular in the context of chloasma or melasma, otherwise called mask of pregnancy, and/or of medicinal origin, and/or to prevent and/or combat unsightly pigmentary manifestations of the skin and/or mucous membranes accompanying a non-cutaneous pathology.
  • strain of Lactobacillus crispatus in particular that deposited under the designation CNCM I-5579, can be used to detoxify the skin and/or mucous membranes, in particular healthy skin and/or mucous membranes.
  • detoxifying the skin and/or mucous membranes is meant the prevention and/or total and/or partial inhibition of oxidative stress, in particular by the prevention and/or total and/or partial inhibition of the formation of free radicals, and/or lipid peroxidation and/or by increasing and/or stimulating the synthesis of glutathione which has antioxidant and detoxifying properties.
  • Detoxifying helps protect the skin against attacks, both external and internal, which cause oxidative stress likely to alter its proper functioning and appearance, in particular a means capable of stimulating the natural protection and repair systems of skin cells. and limit the induction of cellular damage.
  • Oxidative stress means the formation of excessive reactive species, including reactive oxygen species and reactive nitrogen species, which form when the skin is subjected to oxidative stress caused by various factors. such as solar ultraviolet, infrared and visible light, environmental pollution including ozone and particulate matter, and psychological stress.
  • oxidative stress can also exacerbate pigmentation, in particular by inducing uneven skin tone or even a pigmentary disorder.
  • this involves reducing and/or inhibiting the formation of DPPH° (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) free radicals by at least 10%, preferably by at least 10%. less 30%, in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention compared to the formation of DPPH° free radicals detected in the absence of the strain, and/or reduce and/or inhibit the release of induced intracellular free radicals by oxidative stress, preferably by UVA, of at least 20%, preferably of at least 50%, in the presence of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention in relation to the release of intracellular free radicals detected in absence of the strain.
  • oxidative stress preferably by UVA
  • this involves reducing and/or inhibiting the spontaneous formation of DPPH° free radicals, in the presence of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention prepared according to example 1.a and/or 1.e.
  • the formation of DPPH° free radicals is measured in tubo by optical density at 530 nm, under the conditions described in Example 5.a.
  • the invention involves reducing and/or inhibiting the release of intracellular free radicals induced by oxidative stress, preferably by UVA, in the presence of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention prepared according to example 1.a.
  • the release of intracellular free radicals induced by oxidative stress is measured by fluorescence emitted by the formation of DCF (2',7-dichlorofluorescein) from the DCFH-DA probe (2', 7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate) at wavelengths of 485 nm excitation and 538 nm emission from normal human fibroblasts, under the conditions described in Example 5.
  • DCF 2',7-dichlorofluorescein
  • DCFH-DA probe 2', 7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate
  • it involves “preventing and/or inhibiting the peroxidation of membrane lipids”, that is to say preventing and/or totally or partially inhibiting the oxidation of lipids induced by a oxidative stress, preferably by UVA of at least 10%, preferably at least 30% in the presence of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention compared to the lipid peroxidation detected in the absence of the strain.
  • this involves preventing and/or inhibiting the peroxidation of membrane lipids induced by oxidative stress, preferably by UVA, in the presence of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention prepared according to example 1.a.
  • the peroxidation of membrane lipids induced by oxidative stress is measured by fluorescence of the formation of MalonDiAldehde (MDA) at wavelengths of 532 nm excitation and 560 nm emission from of normal human fibroblasts, under the conditions described in Example 5.c.
  • MDA MalonDiAldehde
  • it involves maintaining and/or stimulating the synthesis of glutathione, that is to say preventing the decrease and/or increasing the expression and/or quantity of glutathione. in the presence of oxidative stress, preferably induced by UVA, of at least 20%, preferably at least 50%, in the presence of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention in relation to the synthesis of glutathione detected in the absence of the strain.
  • oxidative stress preferably induced by UVA
  • the invention involves maintaining and/or stimulating the synthesis of glutathione induced by oxidative stress, preferably by UVA, in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention prepared according to Example 1.a.
  • the synthesis of glutathione is measured in vitro by fluorescence at wavelengths of 355 nm excitation and 430 nm emission from normal human fibroblasts, under the conditions described in Example 6.
  • the strain of Lactobacillus crispatus can be used in whole form, in particular viable and/or inactivated, in particular dead, and/or in the form of lysate, and/or in the form of one or more of its fractions and /or in the form of one or more of its metabolites, preferably its secretome.
  • the strain according to the invention can be isolated or associated with its culture medium.
  • the strain according to the invention is used associated with its culture medium, that is to say contained in its culture medium.
  • the term “culture medium” means a support containing the nutrients allowing the cultivation and/or multiplication of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention.
  • it is an MRS medium (Man, Rogosa and Sharp agar).
  • the term “viable” means a strain of Lactobacillus crispatus according to the present invention capable of forming colonies in culture.
  • the production of the strain of Lactobacillus crispatus in whole viable form can be carried out according to any method conventionally known to those skilled in the art. Advantageously, it will be carried out according to the protocol as described for example in example 1.a.
  • the term “inactivated” means a strain of Lactobacillus crispatus according to the present invention which is no longer capable, temporarily or permanently, of forming colonies in culture.
  • the inactivation of the Lactobacillus crispatus strain can be carried out using any method conventionally known to those skilled in the art. It can in particular be inactivated by irradiation, heat treatment or, under certain conditions, by high pressure treatment or by extrusion advantageously, it will be carried out by heat treatment, again advantageously according to the protocol as described for example in example 1.b.
  • Thermal inactivation can be carried out by incubating the Lactobacillus crispatus strain for a given period of time, advantageously from approximately 10 s to 90 min, preferably from approximately 15 minutes to one hour, and at a temperature advantageously of approximately 60 °C to 150°C. Preferably, it will be incubated for around 30 minutes at around 80°C.
  • “dead” means a strain of Lactobacillus crispatus according to the present invention which is no longer capable, definitively, of forming colonies in culture.
  • the term "lysate” means a material obtained following the destruction or dissolution of biological cells by a phenomenon called cell lysis thus causing the release of intracellular biological constituents naturally contained in the cells of the considered microorganism and fragments of cell membrane components.
  • the lysate used is therefore formed of all the intracellular biological constituents and the constituents of the cell walls and membranes of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • the lysate can be obtained by any method conventionally known to those skilled in the art. It may in particular be obtained by an osmotic shock, a thermal shock, by ultrasound, by enzymatic lysis, by tyndallization, or even under mechanical stress such as centrifugation, or by increasing the pressure or combinations of these different technologies.
  • the lysate will be obtained by a combination of mechanical action and increased pressure. Still preferably, the lysate will be obtained according to the protocol as described for example in example 1.c.
  • the lysate will be associated with the culture medium of the bacteria.
  • the lysate obtained does not contain active enzyme, in particular active sphingomyelinase.
  • the term "fractions" means a fragment of the strain of Lactobacillus crispatus according to the present invention having an effectiveness in reducing the pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or preventing its increase, in particular to preserve and/or improve the complexion of the skin and/or mucous membranes, preferably to preserve and/or improve the radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion of the skin and/or mucous membranes, and/or to prevent the appearance and/or reduce the presence of pigment spots on the skin and/or mucous membranes and/or detoxify the skin and/or mucous membranes.
  • This fraction corresponds to a non-total part of the intracellular biological constituents and the constituents of the cell walls and membranes obtained by lysis of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • the fractions can be the protoplasm of the bacteria.
  • the fraction corresponds to all of the intracellular biological constituents, but does not contain constituents of the cell walls and membranes of the Lactobacillus crispatus strain.
  • the fraction obtained does not contain any active enzyme, in particular active sphingomyelinase.
  • the fractions will be associated with the culture medium of the bacteria.
  • the term “metabolites” means one or more organic and/or inorganic molecules resulting from the metabolism of the strain of Lactobacillus crispatus according to the present invention and also having an effectiveness in reducing the pigmentation of the skin and /or mucous membranes and/or prevent its increase, in particular to preserve and/or improve the complexion of the skin and/or mucous membranes, preferably to preserve and/or improve radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion of the skin and/or mucous membranes, and/or to prevent the appearance and/or reduce the presence of pigment spots on the skin and/or mucous membranes and/or detoxify the skin and/or mucous membranes.
  • it is the secretome of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • the metabolites will be associated with the culture medium of the bacteria.
  • secretome means all of the secreted organic and/or inorganic molecules secreted by the strain of Lactobacillus crispatus according to the present invention having an effectiveness in reducing the pigmentation of the skin and/or or mucous membranes and/or to prevent its increase, in particular to preserve and/or improve the complexion of the skin and/or mucous membranes, preferably to preserve and/or improve radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion of the skin and/or mucous membranes, and/or to prevent the appearance and/or reduce the presence of pigment spots on the skin and/or mucous membranes and/or detoxify the skin and/or mucous membranes.
  • the secretome can be obtained by any method conventionally known to those skilled in the art. Advantageously, it will be obtained according to the protocol as described for example in example 1.e.
  • the secretome will be associated with the culture medium of the bacteria.
  • the metabolites and/or the secretome do not contain any active enzyme, in particular active sphingomyelinase.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention will be used in whole viable form and/or in the form of one or more of its metabolites, preferably its secretome.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention will be used in an effective quantity to reduce the pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or prevent the increase in pigmentation of the skin and/or mucous membranes.
  • the Lactobacillus crispatus strain according to the invention does not contain sphingomyelinase.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention is applied topically to healthy skin and/or healthy mucous membranes.
  • the skin and/or mucous membranes are phototype IV to VI.
  • Phototypes IV to VI are as defined by the Fitzpatrick classification method.
  • the term “topical route” means the direct local application and/or vaporization of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention or of the composition comprising it according to the invention on the surface of the affected area of skin and/or mucous membrane.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention can be used alone, in the form of active ingredient and/or in a cosmetic and/or nutraceutical, and/or pharmaceutical composition, in particular dermatological, preferably intended for topical and/or oral application, more preferably for topical application.
  • the strain according to the invention can be in dry form, that is to say in of powder, advantageously in maltodextrin, preferably in a strain content of 10% to 80% (w/w) by weight of the strain, preferably from 30% to 70% (w/w), more advantageously from 40 to 60% (w/w) in weight of the strain relative to the total weight of powder.
  • the whole living form according to the invention can be used dispersed and/or diluted in a solvent.
  • this solvent contains less than 20% (v/v) by volume of water, still preferably less than 5% (v/v) by volume of water, still preferably the solvent does not contain water.
  • this solvent contains less than 20% (w/w) by weight of water, still preferably less than 5% (w/w) by weight of water, still preferably the solvent does not contain water .
  • this solvent is a cosmetically acceptable oil.
  • the strain according to the invention can be in dry form, that is to say in powder form, advantageously in maltodextrin, preferably in a strain content of 1% to 80% (w/w) by weight of the strain, preferably from 3% to 50% (w/w) by weight of the strain, very preferably around 5% or 20% ( p/w) by weight of the strain relative to the total weight of powder, still preferably around 10% (w/w), still preferably 10% (w/w) by weight of the strain relative to the total weight of powder.
  • the whole inactivated forms, in particular dead, and/or the lysates, and/or the fractions, and/or the metabolites, in particular the secretome according to the invention can be used soluble and/or diluted and or dispersed in a solvent , in particular polar, such as water, an alcohol, a polyol, a glycol such as pentylene glycol and/or hexylene glycol and/or caprylyl glycol and/or butylene glycol, or one of their mixtures, preferably a hydroglycolic or hydroalcoholic mixture, more preferably comprising a glycol chosen from hexylene glycol, caprylyl glycol and their mixtures.
  • a solvent in particular polar, such as water, an alcohol, a polyol, a glycol such as pentylene glycol and/or hexylene glycol and/or caprylyl glycol and/or butylene glycol, or one of their mixtures, preferably a hydroglycolic or
  • the strain according to the invention can be incorporated into a cosmetic and/or nutraceutical composition comprising at least one cosmetically acceptable and/or nutraceutically acceptable excipient.
  • a cosmetic composition comprising at least one cosmetically acceptable excipient.
  • the term “cosmetically acceptable” excipient means a topically acceptable compound and/or solvent, that is to say one which does not induce an allergic response upon contact with the skin, including the scalp. human, and/or mucous membranes, non-toxic, not unstable, chemically.
  • the strain according to the invention will be incorporated into a cosmetic composition alone, that is to say it will not be used to ferment plant extracts.
  • the cosmetic composition comprising the strain according to the invention does not comprise fermented plant extracts by the strain.
  • the strain according to the invention is present in the cosmetic composition in an effective quantity, namely a concentration of 1x10' 4 % to 10% (w/w) by weight, preferably between 1x10' 4 % and 5% (w/w) by weight, still advantageously between 1x10' 3 % and 0.5% (w/w) by weight, relative to the total weight of the composition, said composition further comprising at least one cosmetically acceptable excipient.
  • the strain according to the invention when used in the form of one or more of its metabolites, in particular its secretome, it is present in the cosmetic composition in an amount effective for reducing the pigmentation of the skin and/or or mucous membranes and/or prevent the increase in pigmentation of the skin and/or mucous membranes, namely a concentration of 0.05 to 0.5% (w/w) by weight, more preferably at a concentration of approximately 0.1% (w/w) by weight, relative to the total weight of the composition, said composition further comprising at least one cosmetically acceptable excipient.
  • the strain according to the invention when used in whole viable form, it is present in the cosmetic composition, in an amount effective for reducing the pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or preventing the increase pigmentation of the skin and/or mucous membranes, namely a concentration of 0.01 to 0.1% (w/w) by weight, more preferably at a concentration of approximately 0.025% (w/w) by weight , relative to the total weight of the composition, said composition further comprising at least one cosmetically acceptable excipient.
  • the cosmetic composition of the invention can be chosen from a suspension or a solution, aqueous or oily, an aqueous cream or gel or an oily gel, in particular a shower gel, a shampoo; a milk ; an emulsion, a microemulsion or a nanoemulsion, in particular oil-in-water or water-in-oil or multiple or siliconized; a mask; a serum; lotion; liquid soap; a dermatological bar; an ointment ; a balm; a butter; a foam; a patch; an anhydrous product, preferably liquid, pasty or solid, for example in the form of makeup powders, rods or sticks, in particular in the form of lipstick.
  • It can also be a makeup product or a makeup remover product.
  • the strain of Lactobacillus crispatus or the composition of the invention is intended to be applied to healthy skin and/or healthy mucous membranes of all or part of the body and/or the face and/or the scalp, preferably the legs, thighs, arms, stomach, neckline, neck, armpits, lips, preferably all or part of the face, and preferably the cheeks, forehead, chin, lips, eye contour .
  • the strain and/or the composition comprising it is intended to be applied to an area of healthy skin presenting a dull complexion and/or an area of non-homogeneous healthy skin and/or an area of healthy skin with the appearance pigment spots.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention is particularly suitable for the formulation of so-called neutral and gentle composition for respect for the sebaceous gland, particularly the skin including the scalp and/or mucous membranes.
  • strain of Lactobacillus crispatus according to the invention can be presented in all the galenic forms conventionally used for oral application, in particular in the form of nutraceutical active ingredient and/or nutraceutical composition.
  • compositions according to the invention may contain any suitable solvent and/or any suitable vehicle and/or any suitable excipient, optionally in combination with other compounds of interest.
  • the excipient contains for example at least one compound chosen from the group comprising preservatives, emollients, emulsifiers, surfactants, moisturizers, thickeners, conditioners, mattifying agents, stabilizers , antioxidants, texturing agents, shine agents, film-forming agents, solubilizers, pigments, dyes, perfumes and sun filters.
  • excipients are preferably chosen from the group consisting of amino acids and their derivatives, polyglycerols, esters, polymers and cellulose derivatives, lanolin derivatives, phospholipids, lactoferrins, lactoperoxidases, stabilizers based on sucrose, vitamins E and its derivatives, natural and synthetic waxes, vegetable oils, triglycerides, unsaponifiables, phytosterols, plant esters, silicones and its derivatives, protein hydrolysates, Jojoba oil and its derivatives derivatives, lipo/water-soluble esters, betaines, am inoxides, plant extracts, sucrose esters, titanium dioxides, glycines, and parabens, and more preferably from the group consisting of butylene glycol, steareth-2, steareth-21, glycol-15 stearyl ether, cetearyl alcohol, phenoxyethanol, methylparaben, ethylparaben, propylparaben, but
  • anti-acne agents for example: clove oil, menthol, camphor, eucalyptus oil, eugenol, menthyl lactate, witch hazel distillate
  • anti-acne agents for example: clove oil, menthol, camphor, eucalyptus oil, eugenol, menthyl lactate, witch hazel distillate
  • antimicrobial agents for example: iodopropyl butylcarbamate
  • antioxidants for example: iodopropyl butylcarbamate
  • binders biological additives, buffering agents, bulking agents, chelating agents, additives, biocidal agents, denaturants, thickeners, and vitamins, and derivatives or equivalents thereof, film-forming materials, polymers, opacifying agents, pH adjusters, reducing agents, depigmenting or lightening agents (for example: hydroquinone, kojic acid, ascorbic acid, magnesium ascorbyl phosphate, ascorby
  • the cosmetic composition may also include other cosmetic and/or nutraceutical agents having the same properties and inducing a synergistic effect or not with the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention, or cosmetic agents with complementary effects.
  • These may for example be depigmenting and/or lightening ingredients and/or intended to reduce pigment spots on the skin, such as niacinamide or vitamin B3, arbutin, azelaic acid, ascorbic acid or its derivatives, a combination of Saxifraga sarmentosa, Psidium guajava and Carica papaya plant extracts, marketed by BASF Beauty Care Solutions France under the name DermawhiteTM WF, a combination of sulphites and extracts of Camellia sinensis, Scutellaria baicalensis, Cucumis sativus , Pyrus malus, marketed under the name PhytolightTM BG, a standardized extract of Lansium domesticum leaves marketed under the name DN-AuraTM, a combination of a pea extract and sucrose dilaurate marketed under the name ActiwhiteTM, derivatives of 4-hydroxyphenoxy acetic acid, in particular 2-(4-hydroxyphenoxy)-propionic acid marketed under the name Radians
  • active ingredients which may be combined with the strain according to the invention, it may be a plant extract having similar properties of preventing the appearance of pigmentation and/or increasing the radiance of the complexion, in particular an extract of the mushroom Inonotus obliquus marketed under the name InolixirTM by the applicant, an extract of Argania spinosa oil marketed under the name ArganylTM by the applicant, an extract of Moringa oleifera seeds marketed under the name of PurisoftTM by the applicant, a combination of an extract of Salvia miltiorrhiza and niacinamide marketed under the name of ColIRepairTM by the applicant, an extract of Achillea millefolium marketed under the name of NeurobioxTM by the applicant, an extract of Cassia alata leaves sold under the name DN-AgeTM and/or an extract of lychee sold under the name LitezermTM as anti-oxidant active ingredients, a chicory extract sold under the name Lox-AgeTM
  • these may also include anti-aging active ingredients and/or tightening agents for a synergistic effect with the Lactobacillus crispatus strain.
  • active ingredients increasing the gene and/or protein expression of collagen or active ingredients preventing the degradation of collagen such as retinol, vitamin C, an extract of Davilla rugosa marketed under the name CollguardTM by BASF Beauty Care Solutions, a Hibiscus abelmoschus seed extract marketed under the name LinefactorTM, a soy protein hydrolyzate extract marketed under the name PhytokineTM, a peptide marketed under the name DermicanTM by the applicant or the products marketed under the names MatrixylTM, Matrixyl 3000TM and RegestrilTM by the company Sederma or Neuroguard by the company Codif, or even EternalineTM by the company Silab.
  • the tensing agents which can be used in the invention can be chosen from synthetic polymers, such as polyurethane latexes or acrylic latexes, polymers of natural origin, in particular polyholosides in the form of starch or in the form of carrageenans, alginates, agars, gellans, cellulose polymers and pectins; plant proteins and protein hydrolysates; mixed silicates; wax microparticles; colloidal particles of inorganic filler chosen for example from silica, silica-alumina composites; as well as their mixtures.
  • the Lactobacillus crispatus strain according to the invention may be combined with a cosmetic agent chosen from benzoic acid and/or its salts, levulinic acid and/or its salts such as sodium levulinate, acid sorbic and/or its salts, anisic acid and/or its salts, and their mixture.
  • a cosmetic agent chosen from benzoic acid and/or its salts, levulinic acid and/or its salts such as sodium levulinate, acid sorbic and/or its salts, anisic acid and/or its salts, and their mixture.
  • the cosmetic and/or dermatological composition of the present invention also contains one or more tensing agents and/or one or more antimicrobial agents and/or one or more anti-radical agents and/or one or more soothing agents and/or one or more agents. slimming agents and/or one or more agents active on the microcirculation.
  • antimicrobial agents associated with the Lactobacillus crispatus strain in non-viable form in a preferred embodiment of the present invention mention may be made of 2,4,4'-trichloro-2'-hydroxy diphenyl ether (or triclosan), 3 ,4,4'-trichlorobanilide, phenoxyethanol, phenoxypropanol, phenoxyisopropanol, hexamidine isethionate, metronidazole and its salts, miconazole and its salts, itraconazole, terconazole, econazole, ketoconazole, saperconazole , fluconazole, clotrimazole, butoconazole, oxiconazole, sulfaconazole, sulconazole, terbinafine, undecylenic acid and its salts, benzoyl peroxide, 3-hydroxy benzoic acid, 4-hydroxy acid benzoic acid, phytic acid, N-acetyl
  • Anti-free radical agents can be vitamin C and its derivatives including ascorbyl glucoside, phenols and polyphenols, in particular tannins, ellagic acid and tannic acid; epigallocatechin and natural extracts containing it, in particular green tea extracts; anthocyanins; phenolic acids, stilbenes; actives scavengers of mono- or polycyclic aromatic compounds, tannins such as ellagic acid and indole derivatives and/or active scavengers of heavy metals such as EDTA, anti-radical actives such as vitamin E and its derivatives such as tocopheryl acetate; bioflavonoids; coenzyme Q10 or ubiquinone.
  • vitamin C and its derivatives including ascorbyl glucoside, phenols and polyphenols, in particular tannins, ellagic acid and tannic acid; epigallocatechin and natural extracts containing it, in particular green tea extracts; anthocyanins; phenolic
  • pentacyclic triterpenes ursolic acid and its salts, oleanolic acid and its salts, betulinic acid and its salts, salts of salicylic acid
  • pentacyclic triterpenes ursolic acid and its salts
  • oleanolic acid and its salts oleanolic acid and its salts
  • betulinic acid and its salts salts of salicylic acid
  • salicylic acid can be used as soothing agents included in the composition of the invention.
  • zinc salicylate bisabolol, Allantoin, unsaturated omega 3 oils, cortisone, hydrocortisone, indomethacin and beta methasone
  • anti-inflammatory active ingredients and in particular those described in application FR2847267, in particular the root extract of Pueraria lobata marketed under the name InhipaseTM by the applicant, the extracts of Theobroma cacao.
  • the active ingredients acting on microcirculation, vasoprotectors or vasodilators can be chosen from flavonoids, ruscogenins, nicotinates and essential oils.
  • the slimming active ingredients can be chosen in particular from lipoprotein lipase inhibitor agents such as those described in patent US2003086949 (Coletica) and in particular an extract of Peruvian liana (Uncaria tomentosa), draining active ingredients, in particular hesperitin laurate (FlavagrumTM), or quercitin caprylate (FlavengerTM); agents that inhibit the enzyme phosphodiestarase, agents that activate adenylate cyclase, cAMP and/or active ingredients capable of trapping spermine and/or spermidine.
  • lipoprotein lipase inhibitor agents such as those described in patent US2003086949 (Coletica) and in particular an extract of Peruvian liana (Uncaria tomentosa), draining active ingredients, in particular hesperitin laurate (FlavagrumTM), or quercitin caprylate (FlavengerTM); agents that inhibit the enzyme phosphodiestarase, agents that activate adenylate
  • the present invention also relates to a cosmetic treatment process comprising the topical application to at least one area of healthy skin and/or healthy mucous membrane of a strain of Lactobacillus crispatus according to the invention, or of a composition cosmetic comprising it, to reduce the pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or prevent its increase, in particular to preserve and/or improve the complexion of healthy skin and/or healthy mucous membranes, preferably to preserve and/or improve the radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion of healthy skin and/or healthy mucous membranes, and/or to prevent the appearance and/or reduce the presence of pigment spots healthy skin and/or healthy mucous membranes and/or detoxify the skin and/or mucous membranes.
  • the Lactobacillus crispatus strain according to the invention preferably in the form of a cosmetic composition according to the invention, is used in regular topical application and preferably at least once a day, advantageously twice a day, for at least 10 days, preferably for 20 days, and even more preferably for at least 28 days.
  • the topical application of a strain of Lactobacillus crispatus according to the invention or of a cosmetic composition comprising it is carried out on healthy skin and/or healthy mucous membranes of all or part of the body and/or or the face and/or scalp, preferably the legs, thighs, arms, stomach, neckline, neck, armpits, lips, even preferably all or part of the face, and preferably the cheeks, forehead , chin, lips, eye contour.
  • the cosmetic composition comprises the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention at a concentration of between 1x10' 4 % and 10% (w/w) by weight, preferably between 1x10 ' 4 % and 5% (w/w) by weight, still advantageously between 1x10' 3 % and 0.5% (w/w) by weight, relative to the total weight of the composition, said composition further comprising an excipient cosmetically acceptable.
  • the cosmetic treatment process according to the invention aims to reduce the pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or to prevent its increase, in particular to preserve and/or improve the complexion of healthy skin and/or healthy mucous membranes, preferably to preserve and/or improve the radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion of healthy skin and/or healthy mucous membranes, and/or to prevent the appearance and/or reduce the presence of pigment spots on healthy skin and/or healthy mucous membranes, advantageously includes the following steps: - The identification on the individual of an area of healthy skin and/or healthy mucous membrane, for which it is desired to reduce the pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or prevent its increase, in particular to preserve and/or improve the complexion of healthy skin and/or healthy mucous membranes, preferably to preserve and/or improve the radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion of healthy skin and/or healthy mucous membranes, and/ or to prevent the
  • a cosmetic composition comprising the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention, in an effective quantity to reduce the pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or prevent its increase, in particular to preserve and/or improve the complexion of healthy skin and/or healthy mucous membranes, preferably to preserve and/or improve the radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion healthy skin and/or healthy mucous membranes, and/or to prevent the appearance and/or reduce the presence of pigment spots in healthy skin and/or healthy mucous membranes, namely in a content of Lactobacillus crispatus strain included advantageously between 1x10' 4 % and 10% (w/w) by weight, preferably between 1x10' 4 % and 5% (w/w) by weight, still advantageously between 1x10' 3 % and 0.5% (w/w ) by weight, relative to the total weight of the composition.
  • topically and/or orally acceptable means an ingredient suitable for application respectively topically and/or orally, non-toxic, non-irritating to the skin including the scalp and does not does not induce an allergic response, and which is not chemically unstable.
  • the subject of the invention is also the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention, alone or in a pharmaceutical composition, preferably dermatological, comprising it, for its use, advantageously topically for the treatment and/or prevention of skin pathologies. and/or mucous membranes involving hyperpigmentation and/or an increase in pigmentation, in particular a reduction in the radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion of the pathological skin and/or the pathological mucous membranes, and/ or an increase in the appearance of pigment spots in pathological skin and/or pathological mucous membranes, and/or an increase in the activity of melanogenesis, in particular through an increase in melanin and/or tyrosinase activity, and/or an increase in oxidative stress of pathological skin and/or pathological mucous membranes.
  • the subject of the invention is the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention or a pharmaceutical composition, preferably dermatological, comprising it, for its use, advantageously topically, for the treatment and/or prevention of skin pathologies. and/or mucous membranes associated with an increase in pigmentation of the skin and/or mucous membranes, in particular to depigment and/or prevent hyperpigmentation of pathological skin and/or pathological mucous membranes, and/or for the treatment and/or mucous membranes. or the prevention of skin and/or mucous membrane pathologies associated with oxidative stress.
  • the invention also relates to a method for the treatment and/or prevention of pathologies of the skin and/or mucous membranes involving hyperpigmentation and/or an increase in pigmentation, in particular a reduction in radiance and/or brightness and/or homogeneity of the complexion of the pathological skin and/or pathological mucous membranes, and/or an increase in the appearance of pigment spots of the pathological skin and/or pathological mucous membranes, and/or an increase in the activity of melanogenesis, in particular through an increase in melanin and/or tyrosinase activity, and/or an increase in oxidative stress of pathological skin and/or pathological mucous membranes, said method comprising: administration, advantageously topically, of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention, alone or in a pharmaceutical composition, preferably dermatological comprising it, in a pharmaceutically effective quantity in a subject in need.
  • the subject of the invention is a method for the treatment and/or prevention of pathologies of the skin and/or mucous membranes associated with an increase in pigmentation of the skin and/or mucous membranes, in particular for depigmentation and/or or prevent hyperpigmentation of pathological skin and/or pathological mucous membranes, and/or for the treatment and/or prevention of pathologies of the skin and/or mucous membranes associated with oxidative stress, said method comprising the administration, advantageously topically, from the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention or a pharmaceutical composition, preferably dermatological, comprising it, in a pharmaceutically effective quantity in a subject in need.
  • the invention also relates to the use of the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention, alone or in a pharmaceutical composition, preferably dermatological comprising it, for the preparation of a medication, advantageously for topical administration, for the treatment and /or the prevention of pathologies of the skin and/or mucous membranes involving hyperpigmentation and/or an increase in pigmentation, in particular a reduction in the radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the complexion of the pathological skin and/or pathological mucous membranes, and/or an increase in the appearance of pigment spots in the pathological skin and/or pathological mucous membranes, and/or an increase in the activity of melanogenesis, in particular through an increase in melanin and/or tyrosinase activity, and/or an increase in oxidative stress of pathological skin and/or pathological mucous membranes,
  • treatment and/or prevention of pathologies of the skin and/or mucous membranes to depigment and/or prevent hyperpigmentation is understood, in particular by “treatment and/or prevention of pathologies of the skin and/or mucous membranes associated with an increase in pigmentation of the skin and/or mucous membranes, in particular to depigment and/or prevent hyperpigmentation”, a pigmentary disturbance caused by skin pathologies and/or mucous membranes, such as disease Addison's disease, liver failure, purpura, melanoma, chloasma, dermatosis papulosa nigra, which is called pathological hyperpigmentation, or even acne, eczema, atopic dermatitis, rosacea, rosacea, redness, preferably chosen from Addison's disease, liver failure, purpura, melanoma, chloasma,
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention can be found in the form of a pharmaceutical composition, preferably dermatological, comprising at least one pharmaceutically and/or dermatologically acceptable excipient.
  • said composition is applied topically and/or orally, preferably topically.
  • Example 1 Preparation of different forms of Lactobacillus crispatus
  • Example 1.a production of whole viable form of Lactobacillus crispatus.
  • MRS type culture medium Man's Agar, Rogosa, Sharpe
  • Example 1.b production of the entire inactivated form of Lactobacillus crispatus
  • Example 1.c production of the lysate of the bacteria Lactobacillus crispatus
  • Example 1.d production of the secretome of the bacterium Lactobacillus crispatus
  • Example 1.e production of the secretome of the bacteria Lactobacillus crispatus in powder form
  • Example 2 Inhibition of melanin synthesis by melanocytes in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • Melanocytes from a B-16 murine line were seeded in a 96-well plate at a rate of 8000 cells/cm 2 , then cultured in MEM medium (Minimum Essential Medium) supplemented with 10% FBS (Fetal Bovine Serum) at 37°C, 5% CO2 and 95% Relative Humidity for 3 days.
  • MEM medium Minimum Essential Medium
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • the medium was then removed and replaced with 200pL of the medium previously described with the addition of 1 pM of NDP-a-MSH (analog of melanotropic hormone) used as a stimulator of melanin synthesis and in the presence of the Lactobacillus crispatus strain. according to example 1.a at a concentration of 0.1% (w/w), for 5 days.
  • NDP-a-MSH analog of melanotropic hormone
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to Example 1.a product of the invention showed a significant inhibition of 52% of melanin synthesis by melanocytes of the B-16 murine line cultured in vitro. It can therefore be used to reduce pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or prevent its increase.
  • Example 3 Inhibition of tyrosinase activity in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • Tyrosinase is a key enzyme in the melanin synthesis process responsible for skin tone.
  • the tyrosinase used is extracted from normal human melanocytes.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to Example 1.e of the invention showed a significant inhibition of the activity of tyrosinase extracted from human melanocytes by 99%. Through this action of inhibiting tyrosinase activity, the Lactobacillus crispatus strain can therefore be used to reduce the pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or prevent its increase.
  • Example 4 Inhibition of melanin synthesis in a co-culture of melanocytes and keratinocytes in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • Normal human keratinocytes and human melanocytes from newborns were seeded at 20,000 cells/cm 2 and 10,000 cells/cm 2 respectively, then cultured for 7 days at 37°C under 5% CO2 and at 95% relative humidity. in a mixture of 50%/50% (v/v) of culture medium for melanocytes and culture medium for keratinocytes, supplemented with growth factors.
  • the culture medium was replaced with a mixture of DMEM culture medium (Dulbecco's modified Eagle's minimum essential medium) without antibiotic and melanocyte medium without growth factor, and supplemented with 40pM oleic acid.
  • DMEM culture medium Dulbecco's modified Eagle's minimum essential medium
  • This culture medium without addition of the strain according to the invention was used as an untreated control (Control).
  • the secretome of the bacteria Lactobacillus crispatus obtained according to Example 1.e was added at a concentration of 0.1% (w/w) relative to the total weight of the culture medium and the secretome.
  • the cultures were continued for 72 hours at 37°C under 5% CO2 and at 95% relative humidity, then the culture medium was renewed. After 48 hours of additional culture, the medium was then eliminated, then the cells rinsed with PBS (phosphate buffer). Then, a 1 N sodium hydroxide solution containing 10% Dimethylsulfoxide (DMSO) was added to each well of the plate. 200pL from each well were transferred to a transparent plate. The optical density reflecting the quantity of melanin was read at 475nm.
  • PBS phosphate buffer
  • DMSO Dimethylsulfoxide
  • results were the average of the tests performed ⁇ the standard deviation, expressed as a percentage, relative to the untreated control normalized to 100%.
  • Statistical analysis of the results was carried out in relation to the untreated control using the One-Way AN OVA test.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to Example 1.e of the invention showed a significant reduction of 32% in the synthesis of melanin by melanocytes cocultured in vitro with human skin keratinocytes.
  • the strain of Lactobacillus crispatus, and in particular its secretome can therefore be used to reduce the pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or prevent its increase.
  • Example 5 Reduction of oxidative stress in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • Example 5.a Reduction in the formation of DPPH° free radicals in tubo in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • the dosage of the anti-radical activity of the Lactobacillus crispatus strain was evaluated by a test using DPPH° (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl).
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to Example 1.a was mixed in PBS (phosphate buffer saline) at a concentration of 0.05% (w/w), and according to Example 1.e at a concentration of 0.7% (w/w).
  • PBS phosphate buffer saline
  • a negative control was carried out using the strain dissolution solvent, PBS, and a positive control was carried out with vitamin C at 1 mM.
  • Each of the solutions containing the invention, the negative control or the positive control was mixed at 50%/50% (v/v) in a DPPH° solution, in wells of 96-well plates.
  • Each of the solutions containing the invention, the negative control or the positive control was also mixed at 50%/50% (v/v) in an ethanol solution which is the solvent for DPPH°, in order to produce a blank, in this same plate.
  • the product of the invention was compared to its negative control (PBS alone in the absence of the Lactobacillus crispatus strain).
  • the positive vitamin C control was compared to its negative control, water.
  • the statistical analysis was carried out by a One Way ANOVA analysis of variance for the invention and by a Student test for vitamin C.
  • the strain of Lactobacillus crispatus according to example 1.a of the invention showed a significant in tubo anti-radical activity of 34%.
  • the Lactobacillus crispatus strain according to Example 1.e of the invention showed an in tubo anti-radical activity of 31%.
  • the Lactobacillus crispatus strain can therefore be used to detoxify the skin and/or mucous membranes, to reduce the pigmentation of the skin and/or mucous membranes and/or prevent its increase.
  • Example 5 Decrease in the release of cellular free radicals induced by UVs within fibroblasts in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • So-called “normal” human fibroblasts that is to say not presenting pathology, from a healthy donor were seeded in a 24-well plate at a rate of 30,000 cells/cm 2 , then cultured in a DMEM medium ( modified Eagle's minimum essential medium Dulbecco) / Ham's F-12, supplemented with 10% FCS and 0.5% antibiotic, for 96 hours at 37°C, under 5% CO2 and 95% relative humidity.
  • DMEM medium modified Eagle's minimum essential medium Dulbecco
  • Ham's F-12 supplemented with 10% FCS and 0.5% antibiotic
  • Example 1a 0.5 mL of the cell suspension was incubated for 72 hours in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to Example 1.a at a concentration of 0.0125% (w/w), or an antioxidant control (Vitamin E at 0.0003% (v/v)) in EMEM medium (Eagle's minimum essential medium) supplemented with 1% FCS and 0.5% antibiotic.
  • EMEM medium Eagle's minimum essential medium
  • This culture medium without addition of the strain according to the invention was used as an untreated control (UVA control alone - Oxidative stress control).
  • a DCFH-DA (2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate) probe solubilized at 10 pM in PBS (phosphate buffer) was incubated with the cells. After the first hour of incubation at 37°C under 5% CO2 and 95% relative humidity, the cells were rinsed with PBS, and irradiated with UVA at 20J/cm 2 for 3 hours. A non-irradiated control was also produced. After irradiation, the irradiated medium was removed, and the cells were rinsed with PBS. The reading of the fluorescence on the cell layer linked to the formation of DCF (2', 7-dichlorofluorescein) from the probe (DCFH-DA) was read at 485 nm excitation and 538 nm emission.
  • the results were compared against the UVA alone control normalized to 100% and statistically compared using the One Way ANOVA analysis of variance test.
  • the Lactobacillus crispatus strain according to example 1.a of the invention showed a significant reduction at the cellular level of 56% in the release of intracellular free radicals induced by UVA oxidative stress.
  • the Lactobacillus crispatus strain can therefore be used to detoxify the skin and/or mucous membranes and/or preserve and/or improve radiance and/or luminosity and/or homogeneity of the skin and/or mucous membranes, preferably reducing the presence and/or preventing the appearance of pigment spots on the skin and/or mucous membranes, particularly when these undergo oxidative stress, preferably by UVA.
  • Example 5.c Decrease in the peroxidation of membrane lipids induced by UVs within fibroblasts in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • So-called “normal” human fibroblasts that is to say not presenting pathology, from a healthy donor were seeded in a 24-well plate at a rate of 30,000 cells/cm 2 , then cultured in a medium DMEM/Ham's F-12, supplemented with 10% FCS and 0.5% antibiotic, for 96 hours at 37°C, under 5% CO2 and 95% relative humidity. Then, 0.5 mL of the cell suspension was incubated for 72 hours in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to Example 1.a at a concentration of 0.00625% (w/w), or an antioxidant control (Vitamin E at 0.0003% (v/v)) in EMEM medium supplemented with 1% FCS and 0.5% antibiotic.
  • This culture medium without addition of the strain according to the invention was used as an untreated control (after irradiation, constitutes the UVA control alone - Oxidative stress control).
  • the cells were rinsed with PBS, and irradiated with UVA at 20J/cm 2 for 3 hours. A non-irradiated control was also produced. After irradiation, the supernatants were collected and the cells were rinsed with PBS.
  • results were the average of the tests carried out and were expressed as Mean +/- one standard deviation.
  • the results were compared against the UVA alone control normalized to 100% and statistically compared using the One Way ANOVA analysis of variance test.
  • the Lactobacillus crispatus strain according to example 1.a of the invention showed a significant reduction at the cellular level in the formation of MDA induced by UVA of 32%.
  • the Lactobacillus crispatus strain can therefore be used to detoxify the skin and/or mucous membranes, particularly when they undergo oxidative stress, notably UVA stress.
  • Example 6 Stimulation of cellular antioxidant defenses after UV irradiation within fibroblasts in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • So-called “normal” human fibroblasts that is to say not presenting any pathology, from a healthy donor were seeded in a 24-well plate at a rate of 30,000 cells/cm 2 , then cultured in a DMEM/ Ham's F-12, supplemented with 10% FCS and 0.5% antibiotic, for 96 hours at 37°C, under 5% CO2 and 95% relative humidity.
  • This culture medium without addition of the strain according to the invention was used as an untreated control (after irradiation, constitutes the UVA control alone - Oxidative stress control).
  • Example 1a 0.5 mL of the cell suspension was incubated for 72 hours with the Lactobacillus crispatus strain according to Example 1.a at a concentration of 0.0125% (w/w), or an antioxidant control (Vitamin E at 0.0003% (v/v)) in EMEM medium supplemented with 1% FCS and 0.5% antibiotic.
  • the cells were rinsed with PBS, and irradiated with UVA at 20J/cm 2 for 3 hours. A non-irradiated control was also produced. After irradiation, the irradiated medium was removed, and the cells were rinsed with PBS.
  • Lactobacillus crispatus strain according to example 1.a of the invention showed a significant increase in cellular antioxidant defenses by an increase in glutathione of 54% after UVA irradiation.
  • the strain of Lactobacillus crispatus can therefore be used to detoxify the skin and/or mucous membranes, particularly when they undergo oxidative stress, notably a UVA stress.
  • Example 7 In vivo measurement of the reduction in the quantity of melanin in the skin in the presence of the Lactobacillus crispatus strain according to the invention.
  • the assessment of the skin's melanin content was carried out using a device called Mexameter which uses the absorption/reflection principle. From the Mexameter measurements, a melanin index is deduced. A decrease in this index corresponds to a decrease in melanin.
  • Example 8 Example of a cosmetic composition comprising the strain of Lactobacillus crispatus according to the invention
  • Example 8. a Example of a cosmetic composition comprising the strain of Lactobacillus crispatus according to Example 1.a
  • Lactobacillus crispatus strain obtained according to Example 1 was added just before application to the skin in a formulation as defined below according to Table 8, at a final concentration of 0.05% (w/w ) relative to the total weight of the formulation.
  • Example 8 Example of cosmetic composition comprising the strain of

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Abstract

La présente invention concerne l'utilisation cosmétique, nutraceutique d'une souche de Lactobacillus crispatus et/ou d'une composition la comprenant pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l'éclat et/ou la luminosité et/ou l'homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l'apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses. Elle concerne également la souche de Lactobacillus crispatus, ou une composition dermatologique la comprenant, pour son utilisation pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et/ou prévenir l'hyperpigmentation de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques.

Description

Utilisation cosmétique, nutraceutique et/ou dermatologique d’une souche de Lactobacillus crispatus et/ou d’une composition la comprenant
La présente invention concerne l’utilisation cosmétique, nutraceutique et/ou pharmaceutique, notamment dermatologique, d’une souche de Lactobacillus crispatus et/ou d’une composition la comprenant pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher l’augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses.
La structure et l’aspect de la peau sont modifiés avec l’âge et/ou sous l’influence de facteurs extrinsèques et/ou intrinsèques. Ces modifications sont nombreuses et incluent la modification de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses. La peau devient terne, moins lumineuse, moins radieuse, son éclat diminue et le teint est moins homogène avec également l’apparition des taches pigmentaires.
Avec le vieillissement chronologique ou le vieillissement accéléré notamment sous l’effet des radiations, typiquement des ultraviolets ou de la pollution, l’apparition de ces modifications comme les taches pigmentaires est accélérée. Elles sont liées à la présence de mélanine et de lipofuscine, dont l'excès et la distribution anormale dans la peau provoquent l'apparition de taches brunes dite séniles ou pigmentaires, aussi appelées « aged spots ». Celles-ci peuvent apparaitre comme marqueur d’une accélération de la mélanogénèse et sont souvent jugées inesthétiques. Elles rendent le teint non homogène et terne.
La mélanogenèse et le stress oxydant font l’objet de nombreuses études et innovations dans le domaine de la cosmétique pour la mise au point et l’amélioration d’actifs cosmétiques visant à diminuer et/ou empêcher l’augmentation de la pigmentation de la peau saine et/ou des muqueuses saines.
Il existe un besoin dans le domaine de la cosmétique et de la dermatologie d’élaborer des ingrédients actifs naturels alternatifs, capables de diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher l’augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment de préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, en particulier son éclat et/ou sa luminosité et/ou son homogénéité, notamment au sein d’une population plus sujette aux taches pigmentaires, en particulier les peaux de phototype IV à VI telles que définie par la méthode de classification de Fitzpatrick.
Il existe un besoin permanent d’identifier des agents ayant une ou plusieurs de ces propriétés, notamment ayant une efficacité et une innocuité avérée.
De façon particulièrement surprenante, la Demanderesse a découvert que Lactobacillus crispatus, une bactérie commensale bénéfique de la peau et/ou des muqueuses possède la propriété de diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses.
La Demanderesse a également découvert de façon inattendue que cette bactérie possède également la propriété de détoxifier la peau et/ou les muqueuses.
L’invention de la Demanderesse est d’autant plus intéressante que la bactérie Lactobacillus crispatus, et en particulier celle déposée sous le numéro CNCM I-5579, présente l’avantage d’être naturellement présente sur la peau jeune, à la différence des bactéries utilisées jusqu’à présent dans les traitements cosmétiques et/ou dermatologiques.
Cette invention est encore plus intéressante que la Demanderesse a démontré qu’avec l’âge et/ou sous l’influence de facteurs intrinsèques et/ou extrinsèques, la bactérie Lactobacillus crispatus est moins présente et moins abondante sur la peau. Ainsi, l’objet de la présente invention a l’avantage de rééquilibrer et/ou compléter le microbiote de la peau et/ou des muqueuses, en particulier avec une bactérie de la flore cutanée qui diminue et se raréfie avec le temps et/ou l’exposition à des facteurs intrinsèques et/ou extrinsèques.
L’objet de la présente invention convient ainsi particulièrement au traitement des peaux dites matures, notamment des personnes ayant plus de 50 ans. La souche selon l’invention présente en outre l’avantage d’être un ingrédient facilement formulable, et pouvant être facilement fabriqué à l’échelle industrielle. Il s’agit d’un ingrédient actif topiquement acceptable pour la peau, les muqueuses, qui ne présente pas de risque d’allergie.
Des demandes ont déjà décrit l’utilisation de Lactobacillus crispatus en cosmétique. La demande WO9822082 divulgue ainsi l’utilisation de sphingomyélinase pouvant être extraites de bactéries lactiques pour être appliquées par voie topique afin d'augmenter les taux de céramides de la peau et des muqueuses, pour la prévention ou le traitement thérapeutique de plusieurs pathologies.
La demande W02009031099 divulgue l’utilisation d’un probiotique pour prévenir l'apparition et/ou pour traiter la manifestation de sensations d'inconfort et/ou de signes cutanés associés à un traitement cutané de surface ou à un traitement invasif, à finalité esthétique.
La demande WO2019111189 décrit l’utilisation comprenant un probiotique en particulier Lactobacillus paracasei pour la prévention des dommages inflammatoires induits par les radiations UV.
Toutefois, aucune de ces demandes ne divulgue ni ne suggère l’utilisation cosmétique, nutraceutique et/ou pharmaceutique, notamment dermatologique d’une souche de Lactobacillus crispatus et/ou d’une composition la comprenant pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses.
Par ailleurs, aucune de ces demandes ne divulgue ni ne suggères non plus l’utilisation d’une souche de Lactobacillus crispatus et/ou d’une composition la comprenant pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses.
La présente invention a pour premier objet l’utilisation cosmétique et/ou nutraceutique d’une souche de Lactobacillus crispatus , préférentiellement la souche de Lactobacillus crispatus déposée sous le numéro CNCM I-5579, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement les taches brunes et/ou les taches de vieillesse, et/ou détoxifier la peau saine et/ou les muqueuses saines, en particulier des peaux de phototype IV à VI telles que définie par la méthode de classification de Fitzpatrick. Dans le cadre de l’invention, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention est en particulier utilisée en tant que principe actif cosmétique et/ou nutraceutique.
Selon un mode de réalisation particulier de cette utilisation, la souche selon l’invention diminue et/ou inhibe la mélanogenèse, notamment en agissant sur la diminution et/ou l’inhibition de la mélanine, préférentiellement sur la diminution et/ou l’inhibition de la synthèse et/ou de la quantité de mélanine, et/ou en diminuant et/ou inhibant l’activité de la tyrosinase, et/ou en détoxifiant la peau saine et/ou les muqueuses saines.
Selon un aspect de l’invention, la souche selon l’invention peut être utilisée pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines. La souche selon l’invention peut également être utilisée pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint, de la peau saine et/ou des muqueuses saines. La souche selon l’invention peut en outre être utilisée pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement les taches brunes et/ou les taches de vieillesse. La souche selon l’invention peut également être utilisée pour détoxifier la peau saine et/ou des muqueuses saines, notamment par une action antioxydante et/ou sur la peroxydation des lipides et/ou par une augmentation et/ou stimulation de la synthèse de glutathion induit par un stress oxydant.
Elle a également pour objet un procédé de soin cosmétique caractérisé en ce qu’il comprend l’application par voie topique sur au moins une zone de peau saine et/ou de muqueuse saine d’une souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention, préférentiellement la souche de Lactobacillus crispatus CNCM I-5579, ou d’une composition cosmétique la comprenant, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses. Dans le cadre de l’invention, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention est en particulier utilisée en tant que principe actif cosmétique et/ou nutraceutique.
L'invention a encore pour objet une souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention, préférentiellement la souche de Lactobacillus crispatus CNCM I-5579, ou d’une composition pharmaceutique, notamment dermatologique la comprenant, pour la prévention et /ou le traitement des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et/ou prévenir l’hyperpigmentation de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques et/ou pour détoxifier la peau pathologique et/ou les muqueuses pathologiques. Dans le cadre de l’invention, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention est en particulier utilisée en tant que principe actif.
Au sens de la présente invention, on entend par « utilisation cosmétique », une utilisation non pharmaceutique, c'est-à-dire qui n’est pas destinée à un usage thérapeutique et est appliquée sur une partie du corps dite saine, en particulier sur une zone de la peau et/ou des muqueuses dites saine.
Au sens de la présente invention, on entend par « utilisation nutraceutique » une utilisation destinée à être utilisée par voie orale non pharmaceutique, c’est-à-dire qui ne nécessite et n’implique pas de traitement thérapeutique. On entend par « peau », toute zone de peau de toute partie du corps et/ou du visage, incluant le cuir chevelu.
Au sens de la présente invention, on entend par « peaux de phototype IV à VI » des types de peaux particuliers classifiées selon l’échelle de Fitzpatrick qui permet de classer les individus selon la réaction de leur peau et cheveux lors d'une exposition aux rayons UV, et/ou classifiées comme telles par un dermatologue en fonction de la teinte de la peau, laquelle dépend notamment du niveau d'activité des mélanocytes, de la création de ces cellules et de leurs regroupements. Préférentiellement, ces peaux foncées de phototype IV à VI proviennent d’origines ethniques caractéristiques, respectivement d’Inde, d’Asie et/ou d’Afrique. En particulier,
- Le phototype IV (type méditerranéen) correspond à une peau claire mate et des cheveux et yeux bruns ou noirs. Les coups de soleil sont rares, la peau bronze bien, d'un brun foncé ;
- Le phototype V (type latino) correspond à une peau claire mate, des cheveux et des yeux noirs. Les coups de soleil sont rares, la peau bronze bien, d'un brun foncé ;
- Le phototype VI (type africain) correspond à une peau très foncé, des cheveux et des yeux noirs. Les coups de soleil sont très exceptionnels.
Selon l’invention, on désigne par « muqueuse(s) », la muqueuse oculaire, la muqueuse nasale, la muqueuse auriculaire, la muqueuse vaginale, la muqueuse urogénitale et/ou la muqueuse buccale, notamment buccale, labiale et/ou gingivale, préférentiellement, la muqueuse oculaire et/ou buccale, et encore préférentiellement, la muqueuse labiale et/ou oculaire. Avantageusement, elle ne comprend pas la muqueuse vaginale.
Au sens de la présente invention on entend par « peau saine » ou « muqueuse saine » une zone de peau ou de muqueuse sur laquelle est appliquée la souche selon l’invention et dite « non pathologique » par un dermatologue, c’est-à-dire ne présentant pas d’infection, de cicatrice, de maladie, d’inflammation ou d’affection cutanée telle que candidose, impétigo, psoriasis, eczéma, acné ou dermatite, ou de plaies ou de blessures. Au sens de la présente invention, on entend par « souche de Lactobacillus crispatus », la bactérie Lactobacillus crispatus sous forme entière ou sous forme partielle, notamment sous forme de lysat, sous forme de fraction ou sous forme de métabolites. Avantageusement, la souche de Lactobacillus crispatus n’est pas génétiquement modifiée.
La souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention pourra être issue de toute espèce connue de Lactobacillus crispatus. Préférentiellement, la souche de Lactobacillus crispatus est l’espèce déposée suivant le traité de Budapest auprès de l'institut Pasteur (28 rue du Docteur Roux, F -75024 Paris cedex 15) le 09/09/2020 sous la désignation CNCM I-5579.
L’avantage de cette souche particulière de Lactobacillus crispatus est qu’elle est la première espèce de Lactobacillus crispatus retrouvée naturellement sur la peau.
Au sens de la présente invention, on entend par « diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation » dépigmenter, blanchir, éclaircir, prévenir l’augmentation, maintenir et/ou préserver et/ou améliorer le teint et/ou la carnation de la peau et/ou des muqueuses, et préférentiellement diminuer et/ou en empêcher l’augmentation de la mélanogenèse, et encore préférentiellement réduire et/ou inhiber totalement ou partiellement l’expression génique et/ou protéique et/ou l’activité de la tyrosinase et/ou réduire et/ou inhiber la synthèse et/ou la quantité de mélanine.
Le processus de pigmentation de la peau est également dénommée « mélanogénèse » et comprend de nombreuses étapes allant de la synthèse de la mélanine dans les mélanocytes à son transport dans les kératinocytes de l’épiderme par l’intermédiaire des mélanosomes. Plusieurs protéines interviennent dans ce processus. La tyrosinase est l’enzyme qui intervient à des étapes clé de la synthèse de mélanine ; elle coopère avec d’autres protéines pour transformer la mélanine en eumelanine et phaéomelanine, les mélanines responsables du processus de pigmentation.
On entend par « diminuer et/ou inhiber la mélanogénèse » réduire et/ou inhiber totalement ou partiellement l’expression génique et/ou protéique et/ou l’activité de la tyrosinase et/ou réduire et/ou inhiber totalement ou partiellement la synthèse et/ou la quantité de mélanine.
On entend selon l’invention par « réduire et/ou inhiber totalement ou partiellement l’activité de la tyrosinase » provoquer une diminution d’au moins 25%, préférentiellement d’au moins 50%, encore préférentiellement d’au moins 75% de l’activité de la tyrosinase en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention, par rapport au niveau d’activité mesurée en l’absence de l’extrait.
Préférentiellement, la mesure de l’activité de la tyrosinase est effectuée sur la tyrosinase extraite des mélanocytes humains dits normaux, encore préférentiellement par mesure de la production de mélanine en mesurant par photométrie l’absorbance à 540 nm à partir de la tyrosinase extraite de mélanocytes humains dits normaux, encore préférentiellement en présence de la souche de Lactobacillus crispatus préparée selon l’exemple 1.e, avantageusement dans les conditions décrites dans l’exemple 3.
On entend selon l’invention par « réduire et/ou inhiber totalement ou partiellement la synthèse et/ou la quantité de mélanine », une diminution de mélanine d’au moins 10 %, préférentiellement d’au moins 20 %, encore préférentiellement d’au moins 30 % de la synthèse et/ou de la quantité de mélanine en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention par rapport à la synthèse et/ou la quantité de mélanine détectée en l’absence de la souche. Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit d’une diminution de la quantité de mélanine en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention préparée selon l’exemple 1.a ou selon l’exemple 1.e. Préférentiellement encore, la quantité de mélanine est mesurée par densité optique à 475 nm à partir de mélanocytes B16 cultivées in vitro dans un milieu de culture comprenant du sérum de veau fœtal, avantageusement dans les conditions décrites dans l’exemple 2. Dans un autre mode préférentiel, la quantité de mélanine est mesurée par densité optique à 475 nm à partir d’une coculture de mélanocytes et de kératinocytes humains dits normaux, cultivées in vitro dans un milieu de culture comprenant des facteurs de croissance, avantageusement dans les conditions décrites dans l’exemple 4.
Au sens de la présente invention, on entend par « préserver et/ou améliorer le teint » maintenir et/ou empêcher la diminution et/ou augmenter l’éclat et/ou la luminosité et/ou la radiance et/ou la brillance du teint et/ou l’homogénéité du teint et/ou diminuer et/ou réduire le teint terne et/ou terreux de la peau et/ou des muqueuses.
La mesure de l’éclat du teint, de la luminosité et de l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses peut être étudiée par les techniques de mesure connues par l’homme du métier, notamment peut par exemple être effectuée in vivo, par chromamétrie ou par analyse d’image. Cette dernière méthode de mesure in vivo consiste à prendre des photographies haute résolution en configuration polarisée croisées du visage de volontaires prises à 45° avant et après application du produit testé. Sur la base de ces photographies numériques, une analyse d'image permet d'extraire et de quantifier des paramètres spécifiques (par exemple : L*, a*, b*, C, h°) reliés à la couleur, l'éclat et l'homogénéité de la peau.
Au sens de la présente invention, on entend par « préserver et/ou améliorer l’éclat du teint » maintenir et/ou empêcher la diminution et/ou augmenter la luminosité et/ou la radiance et/ou la brillance et/ou la clarté, et/ou diminuer et/ou réduire le teint terne et/ou terreux de la peau et/ou des muqueuses.
Au sens de la présente invention, on entend par « préserver et/ou améliorer l’homogénéité du teint » maintenir et/ou empêcher l’augmentation et/ou diminuer la quantité et/ou l’ampleur des imperfections et/ou irrégularités de la couleur du teint en particulier choisies parmi les rougeurs, les taches pigmentaires, les comédons, taches de rousseur et/ou les pores visibles.
La mesure de l’homogénéité du teint de la peau et de la quantité de mélanine dans la peau peut être mesurée par Mexametrie. Cette méthode de mesure in vivo consiste à utiliser le principe d’absorption/réflexion pour en déduire un index mélanique qui reflète la quantité de mélanine présent au sein de la peau.
Avantageusement, la mesure de l’amélioration du teint est effectuée sur une population de femmes ayant des taches pigmentaires au niveau du visage, préférentiellement par application d’une crème contenant la souche de Lactobacillus crispatus préparée selon l’exemple 1 .e, dans les conditions décrites dans l’exemple 7. On entend par « maintenir et/ou empêcher l’augmentation et/ou diminuer les imperfections et/ou irrégularités de la couleur du teint » empêcher l’augmentation et/ou diminuer la quantité de mélanine au niveau de la peau, d’au moins 2%, avantageusement d’au moins 3% en présence de la souche selon l’invention durant une application de 28 jours sur la peau par rapport à la quantité de mélanine détectée en l’absence de la souche et/ou d’au moins 2%, avantageusement d’au moins 5% en présence de la souche selon l’invention durant une application de 56 jours sur la peau par rapport à la quantité de mélanine détectée en l’absence de la souche.
On entend par « empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires » maintenir et/ou empêcher l’augmentation et/ou diminuer la pigmentation des taches pigmentaires localisées en particulier du nombre et/ou de l’intensité des taches pigmentaires typiquement sur les zones du visage, le décolleté, le cou, le dos, les épaules et/ou des mains, particulièrement des taches sur le dessus des mains.
Les taches pigmentaires sont notamment les taches brunes et/ou sombres et/ou blanches et/ou « aged spots » lorsqu’elles sont localisées sur une partie du corps exposée aux radiations UV et/ou liées au vieillissement chronologique ou UV induit, par exemple lors d’une exposition au soleil. Les taches pigmentaires incluent également les taches de rousseur et/ou les grains de beauté et/ou les taches postinflammatoires et/ou qui apparaissent en réponse à des agressions, et/ou d’origine hormonales, en particulier dans le cadre d’un chloasma ou mélasma, autrement appelé masque de grossesse, et/ou d’origine médicamenteuse, et/ou pour prévenir et/ou lutter contre les manifestations pigmentaires inesthétiques de la peau et/ou des muqueuses accompagnant une pathologie non cutanée.
La Demanderesse a également découvert que la souche de Lactobacillus crispatus, en particulier celle déposée sous la désignation CNCM I-5579, peut être utilisée pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses, notamment la peau et/ou les muqueuses saines.
On entend par « détoxifier la peau et/ou les muqueuses », la prévention et/ou l’inhibition totale et/ou partielle du stress oxydant, notamment par la prévention et/ou l’inhibition totale et/ou partielle de la formation des radicaux libres, et/ou de la peroxydation des lipides et/ou par l’augmentation et/ou la stimulation de la synthèse de glutathion qui a des propriétés antioxydantes et détoxifiantes.
Détoxifier permet de protéger la peau contre les agressions, tant externes qu'internes, qui provoquent un stress oxydatif susceptibles d'altérer son bon fonctionnement et son aspect, en particulier un moyen capable de stimuler les systèmes naturels de protection et de réparation des cellules cutanées et limiter l'induction de dégâts cellulaires.
On entend par « le stress oxydant » la formation d’espèces réactives excessives, y compris les espèces réactives de l’oxygène et les espèces réactives de l’azote, qui se forment lorsque la peau est soumise à un stress oxydatif causé par divers facteurs tels que les ultraviolets solaires, l’infrarouge et la lumière visible, la pollution environnementale, y compris l’ozone et les particules, et le stress psychologique.
En plus d’impacter l’efficacité des systèmes de détoxification de la peau, le stress oxydant peut également exacerber la pigmentation, notamment en induisant une irrégularité du teint, ou encore un trouble pigmentaire.
Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit de réduire et/ou inhiber la formation de radicaux libres DPPH° (2,2-diphenyl-1 -picrylhydrazyl) d’au moins 10%, préférentiellement d’au moins 30%, en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention par rapport à la formation de radicaux libres DPPH° détectée en l’absence de la souche, et/ou réduire et/ou inhiber la libération de radicaux libres intracellulaires induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, d’au moins 20%, préférentiellement d’au moins 50%, en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention par rapport à la libération de radicaux libres intracellulaires détectée en l’absence de la souche.
Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit de réduire et/ou inhiber la formation spontanée de radicaux libres DPPH°, en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention préparée selon l’exemple 1.a et/ou 1.e.
Préférentiellement encore, la formation de radicaux libres DPPH° est mesurée in tubo par densité optique à 530 nm, dans les conditions décrites dans l’exemple 5.a.
Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit de réduire et/ou inhiber la libération de radicaux libres intracellulaires induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention préparée selon l’exemple 1.a.
Préférentiellement encore, la libération de radicaux libres intracellulaires induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, est mesurée par fluorescence émise par la formation de DCF (2’,7-dichlorofluorescéine) à partir de la sonde DCFH-DA (2',7'-dichlorodihydrofluorescéine diacétate) aux longueurs d’onde de 485 nm d’excitation et 538 nm d’émission à partir de fibroblastes humains normaux, dans les conditions décrites dans l’exemple 5. b.
Dans un autre mode de réalisation, il s’agit de « prévenir et/ou inhiber la peroxydation des lipides membranaires », c’est-à-dire d’empêcher et/ou inhiber totalement ou partiellement l’oxydation des lipides induite par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA d’au moins 10%, préférentiellement d’au moins 30% en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention par rapport à la peroxydation lipidique détectée en l’absence de la souche.
Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit de prévenir et/ou inhiber la peroxydation des lipides membranaires induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention préparé selon l’exemple 1.a.
Préférentiellement encore, la peroxydation des lipides membranaires induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, est mesurée par fluorescence de la formation de MalonDiAldehde (MDA) aux longueurs d’ondes de 532 nm d’excitation et 560 nm d’émission à partir de fibroblastes humains normaux, dans les conditions décrites dans l’exemple 5.c.
Selon un autre mode de réalisation, il s’agit de maintenir et/ou stimuler la synthèse de glutathion » c’est-à-dire d’empêcher la diminution et/ou d’augmenter l’expression et/ou la quantité de glutathion en présence d’un stress oxydant, préférentiellement induit par des UVA, d’au moins 20%, préférentiellement d’au moins 50%, en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention par rapport à la synthèse de glutathion détectée en l’absence de la souche.
Dans un mode préférentiel de réalisation de l’invention, il s’agit de maintenir et/ou stimuler la synthèse de glutathion induit par un stress oxydant, préférentiellement par des UVA, en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention préparé selon l’exemple 1.a.
Préférentiellement encore, la synthèse de glutathion est mesurée in vitro par fluorescence aux longueurs d’onde de 355 nm d’excitation et 430 nm d’émission à partir de fibroblastes humains normaux, dans les conditions décrites dans l’exemple 6.
Selon la présente invention, la souche de Lactobacillus crispatus peut être utilisée sous forme entière, notamment viable et/ou inactivée, notamment morte, et/ou sous forme de lysat, et/ou sous forme de l’une ou plusieurs de ses fractions et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, préférentiellement de son sécrétome.
Pour chacune de ses formes, la souche selon l’invention peut être isolée ou associée à son milieu de culture.
Préférentiellement, la souche selon l’invention est utilisée associée à son milieu de culture, c’est-à-dire contenue dans son milieu de culture.
Au sens de la présente invention, on entend par « milieu de culture » un support contenant les éléments nutritifs permettant la culture et/ou la multiplication de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention. Préférentiellement, il s’agit d’un milieu MRS (gélose de Man, Rogosa et Sharp).
Au sens de la présente invention, on entend par « isolée », non mélangée à un ou des composé(s) susceptible(s) de lui être associé(s) dans son milieu de culture.
Au sens de la présente invention, on entend par « forme entière » sa forme native, une forme dans laquelle l’enveloppe bactérienne est intacte, par opposition à une forme lysée. Lorsqu’elle est utilisée sous forme entière, la souche Lactobacillus crispatus peut être viable et/ou inactivée et/ou morte.
Au sens de la présente invention, on entend par « viable » une souche de Lactobacillus crispatus selon la présente invention capable de former des colonies en culture.
La production de la souche de Lactobacillus crispatus sous forme entière viable pourra être effectuée selon toute méthode classiquement connue de l’homme du métier. Avantageusement, elle sera effectuée selon le protocole tel que décrit par exemple dans l’exemple 1 .a.
Au sens de l'invention, on entend par "inactivée" une souche de Lactobacillus crispatus selon la présente invention qui n'est plus capable, temporairement ou définitivement, de former des colonies en culture.
L’inactivation de la souche de Lactobacillus crispatus pourra être effectuée selon toute méthode classiquement connue de l’homme du métier. Elle peut notamment être inactivée par irradiation, traitement thermique ou, sous certaines conditions, par traitement haute pression ou par extrusion avantageusement, elle sera effectuée par traitement thermique, encore avantageusement selon le protocole tel que décrit par exemple dans l’exemple 1.b.
L'inactivation thermique peut être réalisée en incubant la souche de Lactobacillus crispatus pendant une période de temps donnée, avantageusement d’environ 10 s à 90 min, préférentiellement d’environ 15 minutes à une heure, et à une température avantageusement d’environ 60°C à 150 °C. Préférentiellement, elle sera incubée pendant environ 30 minutes à environ 80°C.
Au sens de l'invention, on entend par "morte", une souche de Lactobacillus crispatus selon la présente invention qui n'est plus capable, définitivement, de former des colonies en culture.
Au sens de l'invention, on entend par "lysat", un matériau obtenu à l'issue de la destruction ou dissolution de cellules biologiques par un phénomène dit de lyse cellulaire provoquant ainsi la libération des constituants biologiques intracellulaires naturellement contenus dans les cellules du microorganisme considéré et de fragments de composants de membrane cellulaire. Le lysat mis en œuvre est donc formé en l’ensemble des constituants biologiques intracellulaires et des constituants des parois et membranes cellulaires de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention. Le lysat pourra être obtenu par toute méthode classiquement connue de l’homme du métier. Elle pourra notamment être obtenue par un choc osmotique, un choc thermique, par ultrasons, par lyse enzymatique, par tyndallisation, ou encore sous contrainte mécanique de type centrifugation, ou par augmentation de la pression ou des combinaisons de ces différentes technologies.
Préférentiellement, le lysat sera obtenu par combinaison d’action mécanique et d’augmentation de la pression. Encore préférentiellement, le lysat sera obtenu selon le protocole tel que décrit par exemple dans l’exemple 1 .c.
Dans un mode de réalisation préférentiel de l’invention, le lysat sera associé au milieu de culture de la bactérie.
Préférentiellement, le lysat obtenu ne contient pas d’enzyme active, notamment de sphingomyélinase active.
Au sens de la présente invention, on entend par « fractions », un fragment de la souche de Lactobacillus crispatus selon la présente invention dotée d'une efficacité pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses. Cette fraction correspond à une partie non totale des constituants biologiques intracellulaires et des constituants des parois et membranes cellulaires obtenu par lyse de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
Selon un mode particulier de l’invention, les fractions peuvent être le protoplasme de la bactérie. Selon un mode particulier de l’invention, la fraction correspond à l’ensemble des constituants biologiques intracellulaires, mais ne contient pas de constituants des parois et membranes cellulaires de la souche de Lactobacillus crispatus. Selon un mode particulier de l’invention, la fraction obtenue ne contient pas d’enzyme active, notamment de sphingomyélinase active.
Dans un mode de réalisation préférentiel de l’invention, les fractions seront associées au milieu de culture de la bactérie.
Au sens de la présente invention, on entend par « métabolites » une ou plusieurs molécules organiques et/ou inorganiques issue du métabolisme de la souche de Lactobacillus crispatus selon la présente invention et dotée également d'une efficacité pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses. Préférentiellement, il s’agit du sécrétome de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
Dans un mode de réalisation particulier de l’invention, les métabolites seront associés au milieu de culture de la bactérie.
Au sens de la présente invention, on entend par « sécrétome », l'ensemble des molécules organiques sécrétées et/ou inorganiques sécrétées par la souche de Lactobacillus crispatus selon la présente invention dotée d'une efficacité de diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau et/ou des muqueuses, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses.
Le sécrétome pourra être obtenu par toute méthode classiquement connue de l’homme du métier. Avantageusement, il sera obtenu selon le protocole tel que décrit par exemple dans l’exemple 1 .e.
Dans un mode de réalisation préférentiel de l’invention, le sécrétome sera associé au milieu de culture de la bactérie. Selon un mode particulier de l’invention, les métabolites et/ou le sécrétome ne contiennent pas d’enzyme active, notamment de sphingomyélinase active.
Selon un mode préférentiel de réalisation de l’invention, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention sera utilisée sous forme entière viable et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, préférentiellement de son sécrétome.
De façon préférentielle, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention sera utilisée en quantité efficace pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher l’augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses.
Selon un mode avantageux de réalisation, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention ne contient pas de sphingomyélinase.
Selon un mode avantageux de l’invention, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention est appliquée par voie topique sur la peau saine et/ou les muqueuses saines. De préférence, la peau et/ou les muqueuses sont de phototype IV à VI. Les phototype IV à VI sont tels que définis par la méthode de classification de Fitzpatrick.
Au sens de la présente invention, on entend par « voie topique », l’application locale directe et/ou la vaporisation de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention ou de la composition la comprenant selon l’invention sur la surface de la zone de peau et/ou de muqueuse concernée.
Selon l’invention, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention peut être utilisée seule, sous forme d’ingrédient actif et/ou dans une composition cosmétique et/ou nutraceutique, et/ou pharmaceutique, notamment dermatologique, préférentiellement destiné(e) à une application par voie topique et/ou par voie orale, encore préférentiellement à une application par voie topique.
Lorsqu’elle est utilisée sous forme entière vivante selon l’invention, et qu’elle est utilisée seule, sous forme d’ingrédient actif, la souche selon l’invention peut être sous forme sèche, c’est-à-dire sous forme de poudre, avantageusement dans de la maltodextrine, préférentiellement en une teneur en souche de 10% à 80% (p/p) en poids de la souche, préférentiellement de 30% à 70% (p/p), encore avantageusement de 40 à 60% (p/p) en poids de la souche par rapport au poids total de poudre.
Alternativement, la forme entière vivante selon l’invention peut être utilisée dispersée et/ou diluée dans un solvant. Préférentiellement, ce solvant contient moins de 20% (v/v) en volume d’eau, encore préférentiellement moins de 5% (v/v) en volume d’eau, encore préférentiellement le solvant ne contient pas d’eau.
Selon un mode alternatif, ce solvant contient moins de 20% (p/p) en poids d’eau, encore préférentiellement moins de 5% (p/p) en poids d’eau, encore préférentiellement le solvant ne contient pas d’eau. Très préférentiellement, ce solvant est une huile cosmétiquement acceptable.
Lorsqu’elle est utilisée sous forme entière inactivée, notamment morte, et/ou sous forme de lysat, et/ou sous forme de l’une ou plusieurs de ses fractions et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, notamment de son sécrétome, et qu’elle est utilisée seule sous forme d’ingrédient actif, la souche selon l’invention peut être sous forme sèche, c’est-à-dire sous forme de poudre, avantageusement dans de la maltodextrine, préférentiellement en une teneur en souche de 1 % à 80% (p/p) en poids de la souche, préférentiellement de 3% à 50% (p/p) en poids de la souche, très préférentiellement d’environ 5% ou 20% (p/p) en poids de la souche par rapport au poids total de poudre, encore préférentiellement environ 10% (p/p), encore préférentiellement 10% (p/p) en poids de la souche par rapport au poids total de poudre.
Alternativement, les formes entières inactivées, notamment mortes, et/ou les lysats, et/ou les fractions, et/ou les métabolites, notamment le sécrétome selon l’invention, peuvent être utilisés solubles et/ou dilués et ou dispersés dans un solvant, notamment polaire, tel que l’eau, un alcool, un polyol, un glycol tel que le pentylène glycol et/ou l’hexylène glycol et/ou le caprylyl glycol et/ou le butylene glycol, ou un de leurs mélanges, préférentiellement un mélange hydroglycolique ou hydroalcoolique, encore préférentiellement comprenant un glycol choisi parmi l’hexylène glycol, le caprylyl glycol et leurs mélanges. Dans un autre mode de réalisation, la souche selon l’invention peut être incorporée dans une composition cosmétique et/ou nutraceutique comprenant au moins un excipient cosmétiquement acceptable et/ou nutraceutiquement acceptable. Préférentiellement, elle est incorporée dans une composition cosmétique comprenant au moins un excipient cosmétiquement acceptable.
On entend, au sens de la présente invention, par excipient « cosmétiquement acceptable », un composé et/ou solvant topiquement acceptable, c’est-à-dire n’induisant pas de réponse allergique au contact de la peau, incluant le cuir chevelu humain, et/ou les muqueuses, non toxique, non instable, chimiquement.
Dans un mode de réalisation préférentiel, la souche selon l’invention sera incorporée dans une composition cosmétique seule, c’est-à-dire qu’elle ne sera pas utilisée pour fermenter des extraits végétaux. En d’autres termes, la composition cosmétique comprenant la souche selon l’invention ne comprend pas de fermentât d’extraits végétaux par la souche.
Dans un mode de réalisation préférentiel de l’invention, la souche selon l’invention est présente dans la composition cosmétique en une quantité efficace, à savoir une concentration de 1x10’4% à 10% (p/p) en poids, préférentiellement entre 1x10’4% et 5% (p/p) en poids, encore avantageusement entre 1x10’3% et 0,5% (p/p) en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable.
De manière particulièrement avantageuse, lorsque la souche selon l’invention est utilisée sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, notamment de son sécrétome, elle est présente dans la composition cosmétique en une quantité efficace pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher l’augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, à savoir une concentration de 0,05 à 0,5% (p/p) en poids, encore préférentiellement à une concentration d’environ 0,1 % (p/p) en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable. De manière particulièrement avantageuse, lorsque la souche selon l’invention est utilisée sous forme entière viable, elle est présente dans la composition cosmétique, en une quantité efficace pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher l’augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, à savoir une concentration de 0,01 à 0,1 % (p/p) en poids, encore préférentiellement à une concentration d’environ 0,025% (p/p) en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable.
La composition cosmétique de l’invention peut être choisie parmi une suspension ou une solution, aqueuse ou huileuse, une crème ou un gel aqueux ou un gel huileux, notamment un gel douche, un shampoing ; un lait ; une émulsion, une microémulsion ou une nanoémulsion, notamment huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple ou siliconée ; un masque ; un sérum ; une lotion ; un savon liquide ; un pain dermatologique ; une pommade ; un baume ; un beurre ; une mousse ; un patch ; un produit anhydre, de préférence liquide, pâteux ou solide, par exemple sous forme de poudres de maquillage, de bâtonnet ou de stick, notamment sous forme de rouge à lèvres.
Il peut également s’agir d’un produit de maquillage ou d’un produit de démaquillage.
De façon avantageuse, la souche de Lactobacillus crispatus ou la composition de l’invention est destinée à être appliquée sur la peau saine et/ou les muqueuses saines de tout ou partie du corps et/ou du visage et/ou du cuir chevelu, préférentiellement les jambes, les cuisses, les bras, le ventre, le décolleté, le cou, les aisselles, les lèvres, encore préférentiellement tout ou partie du visage, et préférentiellement les joues, le front, le menton, les lèvres, le contour des yeux.
De façon avantageuse, la souche et/ou la composition la comprenant est destinée à être appliquée sur une zone de peau saine présentant un teint terne et/ou une zone de peau saine non homogène et/ou une zone de peau saine avec l’apparition de taches pigmentaires.
De manière préférentielle, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention est particulièrement adaptée pour la formulation de composition dite neutre et douce pour le respect de la glande sébacée, notamment de la peau incluant le cuir chevelu et/ou des muqueuses.
De manière alternative, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques classiquement utilisées pour une application par voie orale, notamment sous forme d’ingrédient actif nutraceutique et/ou de composition nutraceutique.
Les compositions selon l’invention peuvent contenir tout solvant approprié et/ou tout véhicule approprié et/ou tout excipient approprié, éventuellement en combinaison avec d’autres composés d’intérêt.
De ce fait, pour ces compositions, l'excipient contient par exemple au moins un composé choisi parmi le groupe comprenant les conservateurs, les émollients, les émulsifiants, les tensioactifs, les hydratants, les épaississants, les conditionneurs, les agents matifiants, les stabilisants, les antioxydants, les agents de texture, les agents de brillance, les agents filmogènes, les solubilisants, les pigments, les colorants, les parfums et les filtres solaires. Ces excipients sont de préférence choisis parmi le groupe consistant en les acides aminés et leurs dérivés, les polyglycérols, les esters, les polymères et dérivés de cellulose, les dérivés de Lanoline, les phospholipides, les lactoferrines, les lactoperoxydases, les stabilisants à base de sucrose, les vitamines E et ses dérivés, les cires naturelles et synthétiques, les huiles végétales, les triglycérides, les insaponifiables, les phytostérols, les esters végétaux, les silicones et ses dérivés, les hydrolysats de protéines, l’huile de Jojoba et ses dérivés, les esters lipo/hydrosolubles, les bétaïnes, les am inoxydes, les extraits de plantes, les esters de Saccharose, les dioxydes de Titane, les glycines, et les parabens, et encore de préférence parmi le groupe consistant en le butylène glycol, le stéareth-2, le stéareth- 21 , le glycol-15 stéaryl éther, le cétéaryl alcool, le phénoxyéthanol, le méthylparaben, l’éthylparaben, le propylparaben, le butylparaben, le butylène glycol, les tocophérols naturels, la glycérine, le dihydroxycétyl sodium phosphate, I’ isopropyl hydroxycétyl éther, le glycol stéarate, la triisononanoïne, l’octyl cocoate, le polyacrylamide, l’ isoparaffine, le laureth-7, un carbomer, le propylène glycol, le glycérol, le bisabolol, une diméthicone, l’hydroxyde de sodium, le PEG 30-dipolyhydroxystérate, les triglycérides caprique/caprylique, le cétéaryl octanoate, le dibutyl adipate, l’huile de pépin de raisin, l’huile de jojoba, le sulfate de magnésium, l’EDTA, une cyclométhicone, la gomme de xanthane, l’acide citrique, le lauryl sulfate de sodium, les cires et les huiles minérales, l’isostéaryl isostéarate, le dipélargonate de propylène glycol, l’isostéarate de propylène glycol, le PEG 8, la cire d'abeille, les glycérides d’huile de cœur de palme hydrogénée, les glycérides d’huile de palme hydrogénée, l’huile de lanoline, l’huile de sésame, le cétyl lactate, le lanoline alcool, l’huile de ricin, le dioxyde de titane, le lactose, le saccharose, le polyéthylène basse densité, une solution isotonique salée, et leurs mélanges.
De nombreux ingrédients cosmétiquement actifs sont connus par l'homme du métier pour améliorer la santé et/ou l'apparence physique de la peau (y compris le cuir chevelu) et/ou des muqueuses. L'homme du métier sait formuler les compositions cosmétiques, nutraceutiques ou dermatologiques pour obtenir les meilleurs effets. D'autre part, ces composés peuvent avoir un effet de synergie lorsqu'ils sont combinés les uns aux autres. Ces combinaisons sont également couvertes par la présente invention. Le CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992) décrit différents ingrédients cosmétiques et pharmaceutiques utilisés couramment dans l'industrie cosmétique et pharmaceutique, qui sont en particulier adaptés à une utilisation topique. Des exemples de ces classes d'ingrédients comprennent, sans en être limités, les composés suivants: abrasifs, absorbants, composés à but esthétique tel que les parfums, les pigments, les colorants, les huiles essentielles, les astringents, etc. (par exemple: l’huile de clou de girofle, menthol, camphre, l’huile d’eucalyptus, eugénol, menthyl lactate, distillât d’hamamélis), les agents anti-acné, les agents anti- floculants, les agents antimousse, les agents antimicrobiens (par exemple: iodopropyl butylcarbamate), les antioxydants, les liants, les additifs biologiques, les agents tampons, les agents gonflants, les agents chélatants, les additifs, les agents biocides, les dénaturants, les épaississants, et les vitamines, et les dérivés ou équivalents de ceux-ci, les matériaux formant des films, les polymères, les agents opacifiants, les ajusteurs de pH, les agents réducteurs, les agents dépigmentants ou éclaircissants (par exemple : hydroquinone, acide kojique, acide ascorbique, magnésium ascorbyl phosphate, ascorbyl glucosamine), les agents de conditionnement (par exemple : les humectants).
La composition cosmétique pourra comprendre par ailleurs d’autres agents cosmétiques et/ou nutraceutiques possédant les mêmes propriétés et induisant un effet synergique ou non avec la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention, ou des agents cosmétiques à effets complémentaires.
Il peut s’agir par exemple d’ingrédients dépigmentant et/ou éclaircissant et/ou destinés à diminuer les taches pigmentaires de la peau, tels que le niacinamide ou vitamine B3, l’arbutine, l’acide azélaique, l’acide ascorbique ou ses dérivés, une combinaison des extraits de plante Saxifraga sarmentosa, Psidium guajava et Carica papaya, commercialisée par BASF Beauty Care Solutions France sous le nom de Dermawhite™ WF, une combinaison de sulfites et d’extraits de Camellia sinensis, Scutellaria baicalensis, Cucumis sativus, Pyrus malus, commercialisée sous le nom de Phytolight™ BG, un extrait standardisé de feuilles de Lansium domesticum commercialisé sous le nom DN-Aura™, une combinaison d’un extrait de pois et de sucrose dilaurate commercialisée sous le nom de Actiwhite™, des dérivés de l’acide 4-hydroxyphenoxy acétique, en particulier l’acide 2-(4-hydroxyphenoxy)-propionique commercialisé sous le nom de Radianskin™ par BASF Beauty Care Solutions France, ou un extrait de polysaccharides purifiés provenant de graines de Cassia angustifolia commercialisé sous le nom Hyalurosmooth™, un extrait de protéases stabilisés isolé à partir de latex de Carica papaya commercialisé sous le nom X-Pressin™, un liposome cationique encapsulant de l’acide férulique commercialisé sous le nom Cytovector ferulic™, ou encore un complexe d’acide glycolique et de L-arginine commercialisé sous le nom AH-care™ par BASF Beauty Care Solutions France.
Parmi d’autres ingrédients actifs qui pourront être combinés à la souche selon l’invention, il peut s’agir d’extrait de plante possédant des propriétés similaires de prévention de l’apparition de la pigmentation et/ou d’augmentation de l’éclat du teint, notamment un extrait du champignon Inonotus obliquus commercialisé sous le nom Inolixir™ par la demanderesse, un extrait d’huile d’Argania spinosa commercialisé sous le nom d’Arganyl™ par la demanderesse, un extrait de graines de Moringa oleifera commercialisé sous le nom de Purisoft™ par la demanderesse, une combinaison d’un extrait de Salvia miltiorrhiza et de niacinamide commercialisée sous le nom de ColIRepair™ par la demanderesse, un extrait d’Achillea millefolium commercialisé sous le nom de Neurobiox™ par la demanderesse, un extrait de feuilles de Cassia alata commercialisé sous le nom de DN-Age™ et/ou un extrait de litchi commercialisé sous le nom de Litchiderm™ en tant qu’actifs anti-oxydants, d’un extrait de chicorée commercialisé sous le nom de Lox-Age™, un extrait de levure commercialisé sous le nom de Vitacell™, un extrait de Polygonum bistorta commercialisé sous le nom de Perlaura™, un extrait de galanga commercialisé sous le nom de Hyalufix™, d’un extrait de maïs commercialisé sous le nom de Deliner™ ou un extrait de Voandzeia subterranea commercialisé sous le nom d’Epigenist™ par la demanderesse ou encore des actifs favorisant la fermeté de la peau tels qu’un tétrapeptide synthétique commercialisé sous le nom de Dermican™, un extrait d’Hibiscus abelmoschus commercialisé sous le nom de Linefactor™, un extrait purifié de pois commercialisé sous le nom de Proteasyl™, un extrait de Manilkara multinervis commercialisé sous le nom d’Elestan™ par la demanderesse. Un extrait de la plante Origanum majorana commercialisé sous le nom de Dermagenist™ et/ou un extrait de Khaya senegalensis commercialisé sous le nom de Collalift®18 et/ou un extrait d’Eperua falcata commercialisé sous le nom de d’Eperuline™ ou encore un extrait comprenant des phytostérols, notamment du [3-sitostérol et/ou du campestérol et/ou du brassicastérol provenant d’huile de colza et commercialisé par la demanderesse sous le nom de Phytosoothe™, pourront aussi être ajoutés dans la composition cosmétique.
Il peut s’agir par ailleurs d’ingrédients actifs anti-âge et/ou agents tenseurs pour un effet de synergie avec la souche de Lactobacillus crispatus. Avantageusement, il s’agit d’ingrédients actifs augmentant l’expression génique et/ou protéique du collagène ou d’ingrédients actifs empêchant la dégradation du collagène tels que le rétinol, la vitamine C, un extrait de Davilla rugosa commercialisé sous le nom de Collguard™ par BASF Beauty Care Solutions, un extrait de graine d’Hibiscus abelmoschus commercialisé sous le nom de Linefactor™, un extrait d’hydrolysat de protéine de soja commercialisé sous le nom de Phytokine™, un peptide commercialisé sous le nom de Dermican™ par la demanderesse ou encore les produits commercialisés sous les noms de Matrixyl™, Matrixyl 3000™ et Regestril™ par la société Sederma ou Neuroguard par la société Codif, ou encore Eternaline™ par la société Silab.
Les agents tenseurs utilisables dans l’invention peuvent être choisis parmi les polymères synthétiques, tels que les latex de polyuréthanne ou les latex acryliques, les polymères d'origine naturelle, notamment les polyholosides sous forme d'amidon ou sous forme de carraghénanes, alginates, agars, gellanes, polymères cellulosiques et pectines; les protéines et hydrolysats de protéines végétales ; les silicates mixtes ; les microparticules de cire ; les particules colloïdales de charge inorganique choisies par exemple parmi la silice, les composites silice-alumine ; ainsi que leurs mélanges.
D’une manière avantageuse, la souche Lactobacillus crispatus selon l’invention pourra être combinée avec un agent cosmétique choisi parmi l’acide benzoïque et/ou ses sels, l’acide levulinique et/ou ses sels comme le sodium levulinate, l’acide sorbique et/ou ses sels, l’acide anisique et/ou ses sels, et leur mélange.
Il peut enfin s’agir d’ingrédients cosmétiques comme par exemple des agents antimicrobiens, agents anti-radicalaires, agents apaisants, calmants ou relaxants, agents agissant sur la microcirculation pour améliorer l’éclat du teint, en particulier du visage, agents cicatrisants ou agents amincissants. Avantageusement la composition cosmétique et/ou dermatologique de la présente invention contient également un ou plusieurs agents tenseurs et/ou un ou plusieurs agents antimicrobiens et/ou un ou plusieurs agents antiradicalaires et/ou un ou plusieurs agents apaisants et/ou un ou plusieurs agents amincissants et/ou un ou plusieurs agents actifs sur la microcirculation.
Parmi les agents antimicrobiens associés à la souche de Lactobacillus crispatus sous forme non viable dans un mode préférentiel de la présente invention, on peut citer le 2,4,4'-trichloro-2'-hydroxy diphényl éther (ou triclosan), le 3,4,4'-trichlorobanilide, le phénoxyéthanol, le phénoxypropanol, le phénoxyisopropanol, l'hexamidine iséthionate, le métronidazole et ses sels, le miconazole et ses sels, l'itraconazole, le terconazole, l'éconazole, le kétoconazole, le saperconazole, le fluconazole, le clotrimazole, le butoconazole, l'oxiconazole, le sulfaconazole, le sulconazole, la terbinafine, l'acide undécylénique et ses sels, le peroxyde de benzoyle, l'acide 3- hydroxy benzoïque, l'acide 4-hydroxy benzoïque, l'acide phytique, l'acide N-acétyl-L- cystéine, l'acide lipoïque, l'acide azélaïque et ses sels, l'acide arachidonique, le résorcinol, l'octoxyglycérine, l'octanoylglycine, le caprylyl glycol, l'acide 10-hydroxy-2- décanoïque, le farnesol, les phytosphingosines et leurs mélanges.
Les agents anti-radicalaires peuvent être la vitamine C et ses dérivés dont le glucoside d'ascorbyle, les phénols et polyphénols, en particulier les tannins, l'acide ellagique et l'acide tannique; l'épigallocatéchine et les extraits naturels en contenant, en particulier les extraits de thé vert; les anthocyanes; les acides phénols, les stilbènes; des actifs piégeurs de composés aromatiques mono- ou polycycliques, les tannins tels que l'acide ellagique et les dérivés indoles et/ou des actifs piégeurs de métaux lourds tels que l'EDTA, des actifs anti-radicalaires tels que la vitamine E et ses dérivés tels que l'acétate de tocophéryle ; les bioflavonoïdes; la coenzyme Q10 ou ubiquinone.
Comme agents apaisants entrant dans la composition de l'invention, on peut utiliser les triterpènes pentacycliques, l'acide ursolique et ses sels, l'acide oléanolique et ses sels, l'acide bétulinique et ses sels, les sels de l'acide salicylique et en particulier le salicylate de zinc, le bisabolol, l'allantoïne, les huiles insaturées en oméga 3, la cortisone, l'hydrocortisone, l'indométhacine et la beta méthasone, les actifs antiinflammatoires, et notamment ceux décrits dans la demande FR2847267, en particulier l’extrait de racine de Pueraria lobata commercialisé sous le nom Inhipase™ par la demanderesse, les extraits de Theobroma cacao.
Les ingrédients actifs agissant sur la microcirculation, vasoprotecteurs ou vasodilatateurs, peuvent être choisis parmi les flavonoïdes, les ruscogénines, les nicotinates, les huiles essentielles.
Les actifs amincissants peuvent être notamment choisis parmi les agents inhibiteurs de la lipoprotéine lipase tels que ceux décrits dans le brevet US2003086949 (Coletica) et en particulier un extrait de liane du Pérou (Uncaria tomentosa)', les actifs drainants, notamment l’hesperitine laurate (Flavagrum™), ou quercitine caprylate (Flavenger™); les agents inhibiteurs de l’enzyme phosphodiestarase, les agents activateurs de I’ adenylate cyclase, l’AMPc et/ou les actifs capable de piéger la spermine et/ou la spermidine. On peut citer un extrait de racine de Coleus Forskohlii, un extrait de Cecropia obtusa, d’Uva lactuca, la caféine, la forskoline, la théophylline, la théobromine et/ou leurs dérivés, un produit de kappa carraghénanes hydrolysé dénommé Slimexcess™ commercialisé par la demanderesse et/ou leurs mélanges.
La présente invention a également pour objet un procédé de soin cosmétique comprenant l’application par voie topique sur au moins une zone de peau saine et/ou de muqueuse saine d’une souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention, ou d’une composition cosmétique la comprenant, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses.
De manière avantageuse, la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention, préférentiellement sous la forme d’une composition cosmétique selon l’invention, est utilisée en application topique régulière et préférentiellement au moins une fois par jour, avantageusement deux fois par jour, pendant au moins 10 jours, préférentiellement pendant 20 jours, et encore préférentiellement pendant au moins 28 jours.
De manière avantageuse, l’application par voie topique d’une souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention ou d’une composition cosmétique la comprenant, est effectuée sur la peau saine et/ou les muqueuses saines de tout ou partie du corps et/ou du visage et/ou du cuir chevelu, préférentiellement les jambes, les cuisses, les bras, le ventre, le décolleté, le cou, les aisselles, les lèvres, encore préférentiellement tout ou partie du visage, et préférentiellement les joues, le front, le menton, les lèvres, le contour des yeux.
Dans un mode de réalisation avantageux du procédé cosmétique selon l’invention, la composition cosmétique comprend la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention à une concentration comprise entre 1x10’4% et 10% (p/p) en poids, préférentiellement entre 1x10’4% et 5% (p/p) en poids, encore avantageusement entre 1x10’3% et 0,5% (p/p) en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre un excipient cosmétiquement acceptable.
Le procédé de soin cosmétique selon l'invention a pour objet de diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou d’empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, comprend avantageusement les étapes suivantes : - L’identification sur l’individu d’une zone de peau saine et/ou de muqueuse saine, pour laquelle on souhaite diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et
- L’application topique sur cette zone de peau saine et/ou de muqueuse saine, d’une composition cosmétique comprenant la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention, en une quantité efficace pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, à savoir en une teneur de souche de Lactobacillus crispatus comprise avantageusement entre 1x10’4% et 10% (p/p) en poids, préférentiellement entre 1x10’ 4% et 5% (p/p) en poids, encore avantageusement entre 1x10’3% et 0,5% (p/p) en poids, par rapport au poids total de la composition.
Au sens de la présente invention, on entend par « topiquement et/ou oralement acceptable », un ingrédient adapté à une application respectivement par voie topique et/ou orale, non toxique, non irritant pour la peau y compris le cuir chevelu et n’induisant pas de réponse allergique, et qui n’est pas instable sur le plan chimique.
L’invention a également pour objet la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention, seule ou dans une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique la comprenant, pour son utilisation, avantageusement par voie topique pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses impliquant une hyperpigmentation et/ou une augmentation de la pigmentation, notamment une diminution de l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou une augmentation de l’apparition des taches pigmentaires de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou une augmentation de l’activité de la mélanogenèse, notamment en passant par une augmentation de la mélanine et/ou de l’activité de la tyrosinase, et/ou une augmentation du stress oxydatif de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques.
En particulier, l’invention a pour objet la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention ou une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique la comprenant, pour son utilisation, avantageusement par voie topique, pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et/ou prévenir l’hyperpigmentation de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées au stress oxydatif.
L’invention a également pour objet une méthode pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses impliquant une hyperpigmentation et/ou une augmentation de la pigmentation, notamment une diminution de l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou une augmentation de l’apparition des taches pigmentaires de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou une augmentation de l’activité de la mélanogenèse, notamment en passant par une augmentation de la mélanine et/ou de l’activité de la tyrosinase, et/ou une augmentation du stress oxydatif de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, ladite méthode comprenant l’administration, avantageusement par voie topique, de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention, seule ou dans une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique la comprenant, en une quantité pharmaceutiquement efficace chez un sujet en ayant besoin.
En particulier, l’invention a pour objet une méthode pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et/ou prévenir l’hyperpigmentation de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées au stress oxydatif, ladite méthode comprenant l’administration, avantageusement par voie topique, de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention ou une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique la comprenant, en une quantité pharmaceutiquement efficace chez un sujet en ayant besoin.
L’invention a également pour objet l’utilisation de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention, seule ou dans une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique la comprenant, pour la préparation d’un médicament, avantageusement à administration topique, pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses impliquant une hyperpigmentation et/ou une augmentation de la pigmentation, notamment une diminution de l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou une augmentation de l’apparition des taches pigmentaires de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou une augmentation de l’activité de la mélanogenèse, notamment en passant par une augmentation de la mélanine et/ou de l’activité de la tyrosinase, et/ou une augmentation du stress oxydatif de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques,
En particulier, l’invention a pour objet l’utilisation de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention ou une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique la comprenant, pour la préparation d’un médicament, avantageusement à administration par voie topique, pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et/ou prévenir l’hyperpigmentation de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées au stress oxydatif.
Au sens de la présente invention, on entend d’un point de vue dermatologique par « traitement et/ou prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses pour dépigmenter et ou prévenir l’hyperpigmentation », notamment par « traitement et/ou prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et ou prévenir l’hyperpigmentation », un dérèglement pigmentaire sous l’effet de pathologies de la peau et/ou des muqueuses, comme par exemple la maladie d’Addison, l’insuffisance hépatique, un purpura, un mélanome, un chloasma, une dermatosis papulosa nigra, que l’on qualifie d’hyperpigmentation pathologique, ou bien encore, l’acné, l’eczéma, la dermatite atopique, la rosacée, la couperose, des rougeurs, préférentiellement choisies parmi la maladie d’Addison, l’insuffisance hépatique, un purpura, un mélanome, un chloasma, une dermatosis papulosa nigra, l’acné, la dermatite atopique, la rosacée, les rougeurs.
Au sens de la présente invention, on entend d’un point de vue dermatologique par « traitement et/ou prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées au stress oxydatif », le traitement et/ou la prévention de nombreuses maladies cutanées liées à un stress oxydatif excessif, parmi lesquels le psoriasis, certains eczémas, l’acné, le vitiligo, ou bien encore certains cancers cutanés, préférentiellement choisies parmi le vitiligo.
La souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention peut se trouver sous la forme d’une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique, comprenant au moins un excipient pharmaceutiquement et/ou dermatologiquement, acceptable. Dans un mode de réalisation de l’invention, ladite composition est appliquée par voie topique et/ou orale, préférentiellement par voie topique.
Avantageusement, elle est présente dans la composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique, à une concentration de 1x10’4% à 10% (p/p) en poids, préférentiellement entre 1x10’4% et 5% (p/p) en poids, encore avantageusement entre 1x10’3% et 0,5% (p/p) en poids par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient pharmaceutiquement, préférentiellement dermatologiquement acceptable.
L’invention sera mieux comprise à la lecture de la description des figures et des exemples qui suivent.
Des exemples faisant référence à la description de l’invention sont présentés ci-après. Ces exemples sont donnés à titre d’illustration et ne sauraient limiter en aucun cas la portée de l’invention. Chacun des exemples a une portée générale.
Les exemples font partie intégrante de la présente invention et toute caractéristique apparaissant nouvelle par rapport à un état de la technique antérieure quelconque à partir de la description prise dans son ensemble, incluant les exemples, fait partie intégrante de l'invention.
D'autre part, dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire, la température est exprimée en degré Celsius sauf indication contraire, et la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire.
Exemples
Exemple 1 . Préparation de différentes formes de Lactobacillus crispatus Exemple 1 .a : production de forme entière viable de Lactobacillus crispatus.
Les bactéries Lactobacillus crispatus (CNCM I-5579) isolées ont été ensemencées dans un milieu de culture de type MRS (Gélose de Man, Rogosa, Sharpe), incubées à 37°C en anaérobie. Le pH a été maintenu à une valeur de pH = 6, et le milieu a été incubé 24h. En fin d’incubation, le milieu a été centrifugé, le concentré cellulaire a été lyophilisé en présence de maltodextrine, pour une quantité finale de maltodextrine de 50% (p/p) en poids par rapport au poids total de l’ingrédient.
Exemple 1 .b : production de la forme entière inactivée de Lactobacillus crispatus
Les bactéries Lactobacillus crispatus (CNCM I-5579) isolées ont été ensemencées dans un milieu de culture de type MRS, incubées à 37°C en anaérobie. Le pH a été maintenu à une valeur de pH = 6, et le milieu a été incubé 24h. En fin d’incubation le milieu a été centrifugé, le concentré cellulaire a été inactivé en le chauffant à 80°C pendant 30 minutes. Le concentré cellulaire a ensuite été re suspendu dans de la glycérine.
Exemple 1 .c : production du lysat de la bactérie Lactobacillus crispatus
Les bactéries Lactobacillus crispatus (CNCM I-5579) isolées ont été ensemencées dans un milieu de culture de type MRS, incubées à 37°C en anaérobie. Le pH a été maintenu à une valeur de pH = 6, et le milieu a été incubé 24h. En fin d’incubation l’ensemble a été passé à l’homogénéisateur haute pression. Le lysat a ensuite été re suspendu dans de la glycérine.
Exemple 1 .d : production du sécrétome de la bactérie Lactobacillus crispatus Les bactéries Lactobacillus crispatus (CNCM I-5579) isolés ont été ensemencées dans un milieu de culture de type MRS, incubées à 37°C en anaérobie. Le pH a été maintenu à une valeur de pH = 6, et le milieu a été incubé 24h. En fin d’incubation le milieu a été filtré pour récupérer le sécrétome de la bactérie. Le sécrétome a ensuite été dilué dans de la glycérine.
Exemple 1.e : production du sécrétome de la bactérie Lactobacillus crispatus sous forme de poudre
Les bactéries Lactobacillus crispatus (CNCM I-5579) isolés ont été ensemencées dans un milieu de culture de type MRS, incubées à 37°C en anaérobie. Le pH a été maintenu à une valeur de pH = 6, et le milieu a été incubé 24h. En fin d’incubation le milieu a été filtré pour récupérer le sécrétome de la bactérie. Le sécrétome a ensuite été atomisé avec de la maltodextrine, pour une quantité finale de maltodextrine de 90% (p/p) en poids par rapport au poids total de l’ingrédient.
Exemple 2 : Inhibition de la synthèse de mélanine par les mélanocytes en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
Des mélanocytes d’une lignée murine B-16 ont été ensemencés en plaque 96 puits à raison de 8000 cellules/cm2, puis cultivés dans un milieu MEM (Milieu Essentiel Minimum) supplémenté avec 10% de SVF (Sérum de Veau Fœtal) à 37°C, 5% de CO2 et 95% d'Humidité Relative pendant 3 jours.
Le milieu a ensuite été retiré et remplacé par 200pL du milieu précédemment décrit avec l’ajout de 1 pM de NDP-a-MSH (analogue de l’hormone mélanotrope) utilisé comme stimulateur de synthèse de mélanine et en présence de la souche Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.a à une concentration de 0,1 % (p/p), ce durant 5 jours.
Le même milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention mais avec l’ajout de 1 pM de NDP-a-MSH ou avec l’ajout d’acide kojique à 0,01 % (p/p) ont été utilisés comme témoins de manipulation, respectivement comme témoin stimulateur de mélanine et témoin inhibiteur de mélanine.
Le même milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention mais avec de l’éthanol a été utilisé comme témoin (Contrôle).
Après 5 jours d’incubation les cellules ont été lysées avec une solution de soude (NaOH) ou de potasse (KOH). L’absorbance a été mesurée à 475nm. La quantité de mélanine a été déduite d’une courbe de gamme étalon constituée de différentes concentrations de mélanine synthétique commerciale.
Les résultats d’absorbance ont été normalisés par rapport à l’absorbance obtenue avec le même milieu cellulaire en l’absence la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention (Contrôle). Les résultats présentés correspondent à la moyenne de 6 replicats (n=6).
Résultats
La souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.a produit de l’invention a montré une inhibition significative de 52% de la synthèse de mélanine par les mélanocytes de lignée murine B-16 cultivés in vitro. Elle peut donc être utilisée pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation.
Exemple 3 : Inhibition de l’activité de la tyrosinase en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
La tyrosinase est une enzyme clé dans le processus de synthèse de la mélanine responsable de la carnation. La tyrosinase utilisée est extraite de mélanocytes humains normaux.
La souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.e à une concentration de 0,05% (p/p) ou un composé de référence (acide kojique) à une concentration allant de 0,25 mM à 8 mM , ont été pré-incubés avec l'enzyme pendant 10 minutes sur glace. Ensuite, le substrat de la tyrosinase, la L-Tyrosine à une concentration finale de 1 mM a été ajouté au milieu et les plaques ont été incubées à 37°C pendant 24 heures.
Le même extrait enzymatique sans ajout de la souche selon l’invention mais avec de l’éthanol a été utilisé comme témoin (Contrôle). L'activité enzymatique a été évaluée en mesurant la production de mélanine par densité optique (DO) à 540 nm à l’aide d’un lecteur de microplaques.
Les mesures de densité optique ont également été effectuées sans ajout de substrat (n=1 ) afin de détecter une éventuelle interférence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1 .e ou du composé de référence pour chaque concentration testée.
Le pourcentage d’inhibition de l’activité de la tyrosinase a été calculé selon la formule suivante :
% d’inhibition : 100-[Valeur DO/Moyenne DO du contrôle x 100]
Toutes les conditions expérimentales ont été réalisées en n=3. Les comparaisons intergroupes ont été réalisées par un test t de Student non apparié.
La souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.e de l’invention a montré une inhibition significative de l’activité de la tyrosinase extraite de mélanocytes humains de 99%. Par cette action d’inhibition de l’activité de la tyrosinase, la souche de Lactobacillus crispatus peut donc être utilisée pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation.
Exemple 4 : Inhibition de la synthèse de mélanine dans une co-culture de mélanocytes et de kératinocytes en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
Des kératinocytes humains normaux et des mélanocytes humains de nouveau-né ont été ensemencés respectivement à 20000 cellules/cm2 et 10000 cellules/cm2, puis cultivés durant 7 jours à 37°C sous 5% CO2 et à 95% d’humidité relative dans un mélange de 50%/50% (v/v) de milieu de culture pour mélanocytes et de milieu de culture pour kératinocytes, supplémenté en facteurs de croissance.
Après une semaine de culture, le milieu de culture a été remplacé par un mélange de milieu de culture DMEM (milieu minimum essentiel de Eagle modifié Dulbecco) sans antibiotique et un milieu pour mélanocytes sans facteur de croissance, et supplémenté avec 40pM d’acide oléique.
Ce milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention a été utilisé comme témoin non traité (Contrôle).
A ce même milieu, il a été ajouté le sécrétome de la bactérie Lactobacillus crispatus obtenus selon l’exemple 1.e à une concentration de 0,1 % (p/p) par rapport au poids total du milieu de culture et du sécrétome.
Le même milieu de culture sans la souche, mais en présence de Rucinol à 0,002% (p/p) et a été utilisé comme témoin positif.
Les cultures ont été poursuivies 72h à 37°C sous 5% CO2 et à 95% d’humidité relative, puis le milieu de culture a été renouvelé. Après 48h de culture additionnelle, le milieu a ensuite été éliminé, puis les cellules rincées par du PBS (tampon phosphate). Puis, une solution de soude 1 N contenant 10% de Dimethylsulfoxide (DMSO) a été rajoutée dans chaque cupule de la plaque. 200pL de chaque cupule ont été transférés dans une plaque transparente. La Densité optique reflétant la quantité de mélanine a été lue à 475nm.
Les résultats ont été la moyenne des essais effectués ± l'écart-type, exprimé en pourcentage, par rapport au contrôle non traité normalisé à 100%. L’analyse statistique des résultats a été faite par rapport au témoin non traité en utilisant le test One-Way AN OVA.
Résultats
La souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.e de l’invention a montré une diminution significative de 32% de la synthèse de mélanine par les mélanocytes cocultivés in vitro avec les kératinocytes cutanés humain. Ainsi, la souche de Lactobacillus crispatus, et en particulier son sécrétome peut donc être utilisée pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation. Exemple 5 : Diminution du stress oxydatif en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
Exemple 5.a : Diminution de la formation de radicaux libres DPPH° in tubo en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
Le dosage de l’activité antiradicalaire de la souche Lactobacillus crispatus a été évalué par un test utilisant le DPPH° (2,2-diphenyl-1 -picrylhydrazyl).
Il a été mélangé dans du PBS (Tampon phosphate salin) la souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.a à une concentration de 0,05% (p/p), et selon l’exemple 1.e à une concentration de 0,7% (p/p).
Un témoin négatif a été réalisé à l’aide du solvant de dissolution de la souche, le PBS et un témoin positif a été réalisé avec de la vitamine C à 1 mM.
Chacune des solutions contenant l’invention, le témoin négatif ou le témoin positif a été mélangée à 50%/50% (v/v) dans une solution de DPPH°, dans des puits de plaques de 96 puits.
Chacune des solutions contenant l’invention, le témoin négatif ou le témoin positif a également été mélangée à 50%/50% (v/v) dans une solution d’éthanol qui est le solvant du DPPH°, afin de réaliser un blanc, dans cette même plaque.
L’ensemble a été incubé durant 30 minutes sous agitation. En fin d’incubation, la densité optique (DO) a été mesurée à une longueur d’onde de 530 nm pour estimer la quantité de radicaux libres formés dans chacune des conditions testées.
Les résultats de la mesure des radicaux DPPH° pour obtenir l’activité anti-radicalaire de l’invention ont été la moyenne de 6 essais (n=6) et ont été exprimés en pourcentage moyen +/- un écart type. Le produit de l’invention a été comparé à son témoin négatif (PBS seul en l’absence de la souche de Lactobacillus crispatus). Le témoin positif vitamine C a été comparé à son témoin négatif, l’eau. L’analyse statistique a été conduite par une analyse de variance One Way ANOVA pour l’invention et par un test de student pour la vitamine C.
La souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.a de l’invention a montré une activité anti-radicalaire in tubo significative de 34%. La souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.e de l’invention a montré une activité anti-radicalaire in tubo de 31 %. Par cette action de diminution de la production de radicaux libres, la souche de Lactobacillus crispatus peut donc être utilisée pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation.
Exemple 5. b : Diminution de la libération de radicaux libres cellulaires induits par les UVs au sein de fibroblastes en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
Des fibroblastes humains dits « normaux », c’est-à-dire ne présentant pas de pathologie, issus d’une donneuse saine ont été ensemencés en plaque 24 puits à raison de 30000 cellules/cm2, puis cultivés dans un milieu DMEM (milieu minimum essentiel de Eagle modifié Dulbecco) / Ham’s F-12, supplémenté avec 10% de SVF et 0,5% d’antibiotique, pendant 96h à 37°C, sous 5% de CO2 et 95% d’humidité relative. Puis, 0,5mL de la suspension cellulaire a été incubé 72h en présence de la souche Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.a à une concentration de 0,0125% (p/p), ou d’un témoin antioxydant (Vitamine E à 0,0003% (v/v)) dans un milieu EMEM (milieu minimum essentiel de Eagle) supplémenté de 1 % de SVF et 0,5% d’antibiotique.
Ce milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention a été utilisé comme témoin non traité (témoin UVA seul - Contrôle de stress oxydant).
Une sonde DCFH-DA (2',7'-dichlorodihydrofluorescéine diacétate) solubilisée à 10pM dans du PBS (tampon phosphate) a été incubée avec les cellules. Après la première heure d’incubation à 37°C sous 5% de CO2 et 95% d’humidité relative, les cellules ont été rincées par du PBS, et irradiées par des UVA à 20J/cm2 pendant 3 heures. Un témoin non irradié a également été réalisé. Après irradiation, le milieu irradié a été éliminé, et les cellules ont été rincées par du PBS. La lecture de la fluorescence sur le tapis cellulaire liée à la formation du DCF (2’, 7- dichlorofluorescéine) à partir de la sonde (DCFH-DA) a été lue à 485 nm d’excitation et 538nm d’émission.
Les résultats ont été la moyenne de 12 replicats (n=12) et ont été exprimés en Moyenne +/- un écart type. Les résultats ont été comparés par rapport au témoin UVA seuls normalisé à 100% et comparés statistiquement en utilisant le test d’analyse de variance One Way ANOVA.
La souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.a de l’invention a montré une diminution significative au niveau cellulaire de 56 % de la libération de radicaux libres intracellulaires induit par un stress oxydant aux UVA. Par cette action de diminution de la libération de radicaux libres intracellulaires induit par les UVA, la souche de Lactobacillus crispatus peut donc être utilisée pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses et/ou préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité de la peau et/ou des muqueuses, préférentiellement diminuer la présence et/ou empêcher l’apparition des taches pigmentaires de la peau et/ou des muqueuses, notamment lorsque celles-ci subissent un stress oxydant, préférentiellement par des UVA.
Exemple 5.c : Diminution de la peroxydation des lipides membranaires induits par les UVs au sein de fibroblastes en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
Des fibroblastes humains dits « normaux », c’est-à-dire ne présentant pas de pathologie, issus d’une donneuse saine ont été ont été ensemencés en plaque 24 puits à raison de 30000 cellules/cm2, puis cultivés dans un milieu DMEM/Ham’s F-12, supplémenté avec 10% de SVF et 0,5% d’antibiotique, pendant 96h à 37°C, sous 5% de CO2 et 95% d’humidité relative. Puis, 0,5mL de la suspension cellulaire a été incubé 72h en présence de la souche Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1 .a à une concentration de 0,00625% (p/p), ou d’un témoin antioxydant (Vitamine E à 0,0003% (v/v)) dans un milieu EMEM supplémenté de 1 % de SVF et 0,5% d’antibiotique.
Ce milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention a été utilisé comme témoin non traité (après irradiation, constitue le témoin UVA seul - Contrôle de stress oxydant).
Après la première heure d’incubation à 37°C sous 5% de CO2 et 95% d’humidité relative, les cellules ont été rincées par du PBS, et irradiées par des UVA à 20J/cm2 pendant 3 heures. Un témoin non irradié a également été réalisé. Après irradiation, les surnageants ont été récupérés et les cellules ont été rincées par du PBS.
Une quantité de 0,5 mL des surnageants a été transférée dans un tube en verre Pyrex auquel il a été rajouté une solution d’acide trichloroacétique à 40% et 2% d’acide thiobarbiturique. Le mélange obtenu a été chauffé 30 minutes à 100°C. Puis, la formation de MDA (MalonDiAldehde), qui est un produit d’oxydation libéré suite à la peroxydation des lipides induite par les UVA, a été mesurée par fluorescence à 532nm d’excitation et 560nm d’émission.
Les résultats ont été la moyenne des essais réalisés et ont été exprimés en Moyenne +/- un écart type. Les résultats ont été comparés par rapport au témoin UVA seuls normalisé à 100% et comparés statistiquement en utilisant le test d’analyse de variance One Way ANOVA.
La souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.a de l’invention a montré une diminution significative au niveau cellulaire de la formation de MDA induites par les UVA de 32%. Par cette action de diminution de la peroxydation des lipides en présence de stress par les UVs, la souche de Lactobacillus crispatus peut donc être utilisée pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses, notamment lorsque celles-ci subissent un stress oxydant, notamment un stress par les UVA.
Exemple 6 : Stimulation des défenses antioxydantes cellulaires après irradiation par les UVs au sein de fibroblastes en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
Des fibroblastes humains dits « normaux », c’est-à-dire ne présentant pas de pathologie, issus d’une donneuse saine ont été ensemencés en plaque 24 puits à raison de 30000 cellules/cm2, puis cultivés dans un milieu DMEM/Ham’s F-12, supplémenté avec 10% de SVF et 0,5% d’antibiotique, pendant 96h à 37°C, sous 5% de CO2 et 95% d’humidité relative.
Ce milieu de culture sans ajout de la souche selon l’invention a été utilisé comme témoin non traité (après irradiation, constitue le témoin UVA seul - Contrôle de stress oxydant).
Puis, 0,5mL de la suspension cellulaire a été incubé 72h avec en présence de la souche Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.a à une concentration de 0,0125% (p/p), ou d’un témoin antioxydant (Vitamine E à 0,0003% (v/v)) dans un milieu EMEM supplémenté de 1 % de SVF et 0,5% d’antibiotique.
Après la première heure d’incubation à 37°C sous 5% de CO2 et 95% d’humidité relative, les cellules ont été rincées par du PBS, et irradiées par des UVA à 20J/cm2 pendant 3 heures. Un témoin non irradié a également été réalisé. Après irradiation, le milieu irradié a été éliminé, et les cellules ont été rincées par du PBS.
De la soude (NaOH) 1 N a été rajoutée dans chaque cupule, suivie d’une solution de o-phtaldialdehyde (OPT) diluée au 1 Z15eme dans du tampon GSH (L-glutathion réduit). L’ensemble a été incubé 15 minutes à température ambiante. Puis la quantité de glutathion a été mesurée par fluorescence à 355 nm d’excitation et 430 nm d’émission. Les résultats ont été la moyenne des essais réalisés et ont été exprimés en Moyenne +/- un écart type. Les résultats ont été comparés par rapport au témoin UVA seuls normalisé à 100% et comparés statistiquement en utilisant le test d’analyse de variance One Way ANOVA.
La souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.a de l’invention a montré une augmentation significative des défenses antioxydantes cellulaires par une augmentation de glutathion de 54% après irradiation par les UVA.
Par cette action d’augmentation des défenses antioxydantes cellulaires en présence de stress oxydant par les UVAs, la souche de Lactobacillus crispatus peut donc être utilisée pour détoxifier la peau et/ou les muqueuses, notamment lorsque celles-ci subissent un stress oxydant, notamment un stress par les UVA.
Exemple 7 : Mesure in vivo de la diminution de la quantité de mélanine au niveau de la peau en présence de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’invention.
Une population de 30 femmes chinoises de phototype II à IV, âgées de 40 à 50 ans ayant des taches pigmentaires au niveau du visage s’est appliquée en hémi-visage une crème sous forme d’émulsion comprenant une concentration finale en poids de la souche Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.e de 1 % (p/p) par rapport au poids total de la crème (Formulation exemple 8. b), ou sans ledit extrait remplacé par de l’eau (placebo), à raison de 2 applications par jour et ce, pendant 2 mois.
L’évaluation du contenu de la peau en mélanine a été réalisée à l’aide d’un appareil appelé Mexamètre qui utilise le principe d’absorption/réflexion. A partir des mesures du Mexamètre, il est déduit un index mélanique. Une diminution de cet index correspond à une diminution de la mélanine.
L’efficacité de la composition contenant la souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.e a été comparée avec celle de l’émulsion dite placébo.
L’index mélanique a été mesurée au début de l’étude (DO) après un mois d’application (D28) et enfin après 2 mois d’application (D56).
L’efficacité de la formulation contenant la souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.e et de la formule placébo ont été exprimées en moyenne et ont été comparées par rapport aux valeurs du début de l’étude (DO) et comparées entre la formulation contenant la souche de Lactobacillus crispatus avec celle contenant le placebo, en utilisant le test de Student ou le test de Wilcoxon.
La formulation de la souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1.e a significativement diminué la quantité de mélanine cutanée mesurée via l’index mélanique à l’aide d’un Mexametre.
Ces résultats montrent l’effet bénéfique de la souche de Lactobacillus crispatus mise en formulation pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité de la peau saine et/ou des muqueuses saines.
Exemple 8 : Exemple de composition cosmétique comprenant la souche de Lactobacillus crispatus selon l'invention Exemple 8. a : Exemple de composition cosmétique comprenant la souche de Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1 .a
La souche de Lactobacillus crispatus obtenue selon l’exemple 1 .a a été ajoutée juste avant l’application sur la peau dans une formulation telle que défini ci-dessous selon la Table 8, à une concentration finale de 0,05% (p/p) par rapport au poids total de la formulation.
Exemple 8. b : Exemple de composition cosmétique comprenant la souche de
Lactobacillus crispatus selon l’exemple 1 .e
Les proportions sont exprimées en % et les noms en majuscules correspondent aux noms INCI des ingrédients.
On procède selon les méthodes connues de l’homme du métier pour mélanger ensemble les différentes phases A, B, C à température ambiante, en ajoutant B en A en remuant, puis C dans AB. On ajuste le pH à 4,9 avec D. Puis on ajoute la phase E. Enfin, on homogénéise par Ultra Turrax pour préparer une composition selon la présente invention. (original sous forme électronique)
(Cette feuille ne fait pas partie de la demande internationale ni ne compte comme une feuille de celle-ci)
RÉSERVÉ À L'OFFICE RÉCEPTEUR
RÉSERVÉ AU BUREAU INTERNATIONAL

Claims

Revendications
1. Utilisation cosmétique et/ou nutraceutique d’une souche de Lactobacillus crispatus, préférentiellement la souche de Lactobacillus crispatus étant l’espèce déposée sous la désignation CNCM I-5579, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation.
2. Utilisation selon la revendication 1 , dans laquelle la souche diminue et/ou inhibe la mélanogenèse, notamment en agissant sur la diminution et/ou l’inhibition de la mélanine, préférentiellement sur la diminution et/ou l’inhibition de la synthèse et/ou de la quantité de mélanine, et/ou en diminuant et/ou inhibant l’activité de la tyrosinase, et/ou en détoxifiant la peau saine et/ou les muqueuses saines.
3. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines.
4. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint, de la peau saine et/ou des muqueuses saines.
5. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement les taches brunes et/ou les taches de vieillesse.
6. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour détoxifier la peau saine et/ou les muqueuses saines, notamment par une action antioxydante et/ou sur la peroxydation des lipides et/ou par une augmentation et/ou stimulation de la synthèse de glutathion induit par un stress oxydant.
7. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la souche est utilisée sous forme entière, notamment viable et/ou inactivée, notamment morte, et/ou sous forme de lysat, et/ou sous forme de l’une ou plusieurs de ses fractions, et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, préférentiellement de son sécrétome.
8. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la souche de Lactobacillus crispatus est celle déposée sous le numéro CNCM I-5579.
9. Utilisation selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle la souche de Lactobacillus crispatus est utilisée sous forme entière viable et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, préférentiellement de son sécrétome.
10. Utilisation selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle la souche de Lactobacillus crispatus est associée à son milieu de culture.
11 . Utilisation selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle la souche de Lactobacillus crispatus est appliquée par voie topique sur la peau saine et/ou les muqueuses saines.
12. Utilisation selon la revendication 11 dans laquelle la peau est de phototype IV à VI.
13. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, telle que la souche de Lactobacillus crispatus est présente dans une composition cosmétique à une concentration de 1x10’4% à 10% en poids, préférentiellement entre 1x10’4% et 5% en poids, encore avantageusement entre 1x10’3% et 0,5% en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable.
14. Procédé de soin cosmétique caractérisé en ce qu’il comprend l’application par voie topique sur au moins une zone de peau saine et/ou de muqueuse saine d’une souche de Lactobacillus crispatus telle que définie selon l’une des revendications 7 à 10, ou d’une composition cosmétique selon la revendication 13, pour diminuer la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses et/ou empêcher son augmentation, notamment pour préserver et/ou améliorer le teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, préférentiellement pour préserver et/ou améliorer l’éclat et/ou la luminosité et/ou l’homogénéité du teint de la peau saine et/ou des muqueuses saines, et/ou pour empêcher l’apparition et/ou diminuer la présence des taches pigmentaires de la peau saine et/ou des muqueuses saines et/ou détoxifier la peau et/ou les muqueuses.
15. Procédé de soin cosmétique selon la revendication 14, dans laquelle l’application par voie topique d’une souche de Lactobacillus crispatus telle que définie selon l’une des revendications 7 à 10, ou d’une composition cosmétique selon la revendication 13, est effectuée sur la peau saine et/ou les muqueuses saines de tout ou partie du corps et/ou du visage et/ou du cuir chevelu, préférentiellement les jambes, les cuisses, les bras, le ventre, le décolleté, le cou, les aisselles, les lèvres, encore préférentiellement tout ou partie du visage, et préférentiellement les joues, le front, le menton, les lèvres, le contour des yeux.
16. Procédé de soin cosmétique selon l’une quelconque des revendications 14 à 15, dans lequel la composition cosmétique comprend la souche de Lactobacillus crispatus telle que définie selon l’une des revendications 7 à 10 à une concentration de 1x10’4% à 10% en poids, préférentiellement entre 1x10’ 4% et 5% en poids, encore avantageusement entre 1x10’3% et 0,5% en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable.
17. Souche de Lactobacillus crispatus, ou une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique la comprenant, pour son utilisation, avantageusement par voie topique, pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées à une augmentation de la pigmentation de la peau et/ou des muqueuses, notamment pour dépigmenter et/ou prévenir l’hyperpigmentation de la peau pathologique et/ou des muqueuses pathologiques, et/ou pour le traitement et/ou la prévention des pathologies de la peau et/ou des muqueuses associées au stress oxydatif.
18. Souche selon la revendication 17 dans laquelle la souche est utilisée sous forme entière, notamment viable et/ou inactivée, notamment morte, et/ou sous forme de lysat, et/ou sous forme de l’une ou plusieurs de ses fractions, et/ou sous forme d’un ou plusieurs de ses métabolites, préférentiellement de son sécrétome, et/ou dans laquelle la souche est associée à son milieu de culture.
19. Souche de Lactobacillus crispatus pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 17 à 18, caractérisé en ce qu’elle se trouve sous la forme d’une composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique, comprenant au moins un excipient dermatologiquement acceptable. Souche de Lactobacillus crispatus pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 17 à 19, caractérisé en ce qu’elle est présente dans la composition pharmaceutique, préférentiellement dermatologique, à une concentration de 1x10’4% à 10% en poids, préférentiellement entre 1x10’4% et 5% en poids, encore avantageusement entre 1x10’3% et 0,5% en poids, par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient pharmaceutiquement, préférentiellement dermatologiquement, acceptable. Souche de Lactobacillus crispatus pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 17 à 20, caractérisée en ce que la souche est telle que définie selon l’une des revendications 7 à 10.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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NZ770210A (en) * 2018-05-23 2024-03-22 Ko Biolabs Inc Lactobacillus crispatus kbl693 strain and use thereof
KR102121540B1 (ko) * 2019-12-31 2020-06-10 (주)더마랩 별꽃의 락토바실러스 발효추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
CN111617025B (zh) * 2020-06-12 2021-01-29 广州市千邦化妆品有限公司 美白祛斑抗糖化的发酵产物化妆品
FR3117340B1 (fr) * 2020-12-15 2024-01-05 Basf Beauty Care Solutions France Sas Utilisation cosmétique, nutraceutique ou dermatologique d’une souche deLactobacillus crispatus et / ou d’une composition la comprenant

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