FR2480606A1 - - Google Patents

Abstract

L'INVENTION CONCERNE UNE COLONNE POUR L'ADSORPTION DES PROTEINES DU SANG COMPRENANT UNE ENTREE DE SANG 2 ET UNE SORTIE DE SANG 3 MUNIES CHACUNE D'UN FILTRE 4, ET UNE MATIERE POREUSE 5 DE GARNISSAGE ENTRE LES DEUX FILTRES, CETTE MATIERE AYANT UN DIAMETRE MOYEN DES PORES D DE 30 A 3000A, LE VOLUME OCCUPE PAR LES PORES AYANT DES DIAMETRES DE 0,8D A 1,2D ETANT D'AU MOINS 80 DU VOLUME TOTAL DES PORES; LA COLONNE D'ADSORPTION PERMET D'ELIMINER DES PROTEINES SPECIFIQUES DU SANG PAR ADSORPTION SELECTIVE ET EST UTILE PAR EXEMPLE POUR LE TRAITEMENT DES MALADIES AUTO-IMMUNES ET DU CANCER.

Description

2480f606 Colonne pour l'adsorption des protéines

du sang.

La présente invention concerne une colonne pour l'adsorption des protéines du sang ainsi qu'un procédé

pour éliminer par adsorption les protéines du sang.

Récemment, on s'est beaucoup intéressé aux tech-

niques d'échange du plasma qui peuvent avoir un inté-

rêt important dans le traitement du cancer, des mala-

dies auto-immunes et de l'insuffisance hépatique par exemple. Un tel traitement semble permettre d'éliminer des protéines telles que les anticorps, les facteurs

immunosuppresseurs et les métabolites liés à l'albumine.

Cependant, dans le traitement par échange de plasma, on rejette le plasma des malades et on le remplace par le plasma de donneurs sains si bien que chaque opération

nécessite plusieurs litres de plasma et que le traite-

ment d'un grand nombre de malades est difficile. De plus, les composants utiles sont éliminés en même temps que les composants protéiques inutiles si bien

que ce traitement provoque un grand gaspillage.

D'autre part, les traitements par purification du sang avec un adsorbant ont l'avantage de n'éliminer que les composants inutiles car ils ne nécessitent pas de liquide de remplacement ou n'en nécessitent qu'une

faible quantité. Cependant, lorsqu'on utilise du char-

bon activé ou des résines poreuses comme décrit dans les demandes de brevet non examinées JA No 22 178/1978 (US NI 4 171 289), N0 76 219/1975 (GB NO 1 465 519) et

NO 148 291/1976 dans le traitement des maladies préci-

tées, il est difficile d'obtenir des résultats théra-

peutiques satisfaisants car dans le cas du charbon ac-

tivé, les protéines sont à peine adsorbées malgré l'ad-

sorption des substances de bas poids moléculaire telles que la créatinine et l'acide urique et dans le cas des résines poreuses, les protéines utiles, les vitamines et les sucres sont adsorbés simultanément en grande

quantité avec les protéines à éliminer.

De tels polymères organiques adsorbants sont dé-

crits dans les demandes de brevet non examinées JA No 80 381/1978, No 9 183/1979 et NO 131 586/1979 et ils ont des inconvénients semblables et ne permettent pas

d'atteindre les objectifs de l'invention.

L'invention a pour objets: - une colonne pour adsorber sélectivement des protéines spécifiques du sang;

- une colonne utile pour le traitement des mala-

dies auto-immunes, des maladies cancéreuses, de l'in-

suffisance hépatique, etc, par purification du sang; et

- un procédé pour traiter le sang afin d'en ad-

sorber sélectivement des protéines spécifiques.

L'invention va maintenant être décrite de façon détaillée.

La colonne d'adsorption de l'invention a un ori-

fice d'entrée du sang et un orifice de sortie du sang munis chacun d'un filtre. Les orifices d'entrée et de

sortie peuvent avoir une structure quelconque permet-

tant leur raccordement à un circuit de sang. Le filtre sert à retenir le garnissage adsorbant et il est donc nécessaire que ses mail-les ou sa texture aient une taille inférieure à celle de l'adsorbant. D'autre part, il est nécessaire que le filtre se laisse facilement traverser par le sang. Lorsqu'on traite du sang total,

il est nécessaire que les corpuscules du sang traver-

sent facilement le filtre. Pour ces raisons, on préfè-

re généralement que le filtre ait des ouvertures de

maille de 0,30 à 0,75 mm. Comme on utilise générale-

ment la colonne après autoclavage à la vapeur, le fil-

tre doit de préférence résister à l'autoclavage à la vapeur. A cet égard, on préfère que le filtre soit fait de cellulose ou mieux d'un polyester. La colonne

tubulaire est généralement faite d'une résine synthé-

tique, de nréférence le polypropylène ou un polycarbo-

nate. La forme de la colonne tubulaire doit de préfé-

rence être telle que la surface intérieure soit aussi lisse et régulière que possible pour qu'un passage ré-

gulier du sang à travers la colonne soit assuré.

L'adsorbant que l'on utilise dans l'invention est une matière poreuse ayant un diamètre moyen des pores (D) de 30 à 3 000 A, le rapport du volume occupé

par les pores ayant des diamètres compris dans la gam-

me de 0,8 D à 1,2 D au volume total des pores étant d'au moins 80 %. Lorsque le diamètre moyen des pores

est inférieur à 30 A, les protéines sont à peine ad-

sorbées tandis que lorsque le diamètre moyen des pores est supérieur à 3000 A, la matière poreuse est trop fragile. Il est nécessaire que la matière poreuse que l'on utilise dans l'invention ait une distribution

étroite de la taille des pores telle que lorsqu'on ex-

prime le diamètre moyen des pores par D, les pores ayant des diamètres compris dans la gamme de 0,8 D à

1,2 D occupent au moins 80 Y du volume total des pores.

Lorsque la distribution de la taille des pores est plus large, la sélectivité de l'adsorption diminue de façon indésirable; diverses protéines sont adsorbées

simultanément et il est difficile d'adsorber sélective-

ment uniquement les protéines spécifiques. Aucun des charbons activés ou des résines organiques poreuses

dont on dispose actuellement présente cette distribu-

tion étroite de la taille des pores et par conséquent aucune de ces matières n'est couverte Dar la présente invention. Dans la pratique de l'invention, il est nécessaire de choisir le diamètre moyen des pores de la matière poreuse selon le poids moléculaire de la Drotéine à adsorber. Pour adsorber des protéines ayant des poids moléculaires de 500 à 20 000 par exemple, l'emploi

d'une matière poreuse ayant un diamètre moyen des po-

res compris dans la gamme de 30 à 150 A, permet une

adsorption particulièrement sélective de ces protéines.

Pour adsorber des protéines ayant des poids molécu-

laires de 20 000 à 200 000, on préfère un diamètre moyen des pores de 150 à 1000 A tandis que pour les protéines ayant des poids moléculaires de 200 000 à 1 000 000, on préfère un diamètre moyen des pores de

1000 à 3000 A.

Les protéines que l'on peut éliminer par adsorp-

tion selon l'invention comprennent: des protéines ayant des poids moléculaires de 500 à 20 000 telles que les protéines toxiques sécrétées par les serpents venimeux, les scorpions, les oursins venimeux, les araignées venimeuses, les grenouilles, les abeilles, etc, les lysozymes, le cytochrome C et un facteur

immunosuppresseur appelé "a-globuline immunorégula-

trice (IRA)" qui est présente de façon spécifique dans le sang des cancéreux; des protéines ayant des poids

moléculaires de 20 000 à 200 000 telles que les y-glo-

bulines, l'albumine, l'al-antitrypsine (a1AT), la pro-

téine C-réactive 'CRP), l'a l-glycoprotéine acide (AAG),

la protéine acide immunosuppressive (IAP), l'a-foeto-

protéine (AFP) et d'autres facteurs protéiques immuno-

suppresseurs. Les y-globulines constituent un groupe de protéines ayant des poids moléculaires d'environ

000. Les facteurs responsables des maladies auto-

immunes sont des immunoglobulines. Pour traiter ces maladies, on doit éliminer ces facteurs du sang. Les matières poreuses ayant des diamètres moyens des pores de 350 à 900 A permettent d'adsorber de façon efficace et sélective les y-globulines. Donc dans le cas o on

doit éliminer des y-globulines, on préfère particuliè-

rement utiliser des matières poreuses ayant un diamè-

tre moyen des pores compris dans la gamme précitée.

Les facteurs protéiques immunosuppresseurs précités

sont présents dans le sang des cancéreux et ils dimi-

nuent l'attaque des cellules cancéreuses par le systè-

me immunitaire.

Les protéines ayant des poids moléculaires de 200 000 à 1 000 000 que l'on peut éliminer sont par

exemple des compléments (par exemple le Clq), le fibri-

nogène, la microfibrine et des complexes antigène-anti-

corps (complexes immunologiques).

La matière poreuse que l'on utilise dans l'inven-

tion comprend le verre poreux, la silice poreuse, l'a-

lumine poreuse et les céramiques poreuses. On peut pro-

duire le verre poreux par traitement acide d'un verre de borosilicate alcalin moulé par fusion dans lequel une séparation de phase fine s'est produite par suite d'un traitement thermique à une température comprise dans la région de température de transition. On peut produire de la silice poreuse par traitement acide d'une solution aqueuse de silicate de sodium. On peut

produire de l'alumine poreuse par calcination d'élé-

ments moulés en alumine hydratée et produire des céra-

miques Doreuses par frittage d'un granulat céramique avec un liant vitreux. Comme précédemment indiqué, il

est nécessaire que ces matières poreuses aient un dia-

mètre moyen des pores (D) de 30 à 3000 A et un rapport

du volume occupé par les pores ayant un diamètre com-

pris dans la gamme de 0,8 D à 1,2 D au volume total des pores de 80 % ou plus. Parmi les matières poreuses précitées, on préfère celles dont la surface porte des radicaux silanols car elles ont de fortes capacités d'adsorption des protéines mais adsorbent à peine les

comnosants utiles tels que les sucres et les vitamines.

Donc, parmi les matières précitées, on préfère le verre

poreux et la silice poreuse et on préfère tout parti-

culièrement le verre poreux en raison de sa forte capa-

cité d'adsorption et de sa grande résistance mécanique.

On préfère que la matière poreuse ait un volume spéci-

fique des pores d'au moins 0,1 cm3/g et mieux d'au moins 0,5 cm3/g et ne dépassant pas 2.cm3/g, car une matière poreuse ayant un volume spécifique des pores

inférieur à 0,1 cm3/g a une faible capacité d'adsorp-

tion des protéines et une matière poreuse ayant un volume spécifique des pores supérieur à 2 cm3/g a une faible résistance mécanique. On préfère que la matière poreuse soit en particules séparées aux tamis de 4,75 et 0, 053 mm d'ouverture de maille et mieux de 4,75 et 0,297 mm pour l'adsorption des protéines du sang total et de 4,75 et 0,053 mm pour l'adsorption des protéines

du plasma ou du sérum.

Bien que dans l'invention on puisse utiliser la matière poreuse telle quelle, on préfère une matière revêtue d'un polymère hydrophile par suite de sa bonne

compatibilité avec le sang, c'est-à-dire de l'inhibi-

tion de l'adhésion des plaquettes, de l'inhibition de l'hémolyse des globules rouges et de la suppression de l'activation des compléments. Les polymères hydrophiles comprennent des polymères à base d'esters acryliques,

des polymères à base d'esters méthacryliques, des poly-

mères à base d'acrylamide, des polymères à base d'al-

cool vinylique, la polyvinylpyrrolidone, le nitrate de cellulose et la gélatine. Parmi eux, on préfère les polymères à base d'esters acryliques et les polymères

à base d'esters méthacryliques. On préfère tout parti-

culièrement des copolymères d'au moins un ester acryli-

que ou méthacrylique répondant aux formules générales (I) ou (II) ciaprès et d'un monomère polymérisable

comportant un radical époxy répondant aux formules gé-

nérales (III), (IV) ou (V) ci-après

CH2 = CR1

COO-R2-OR4

CH2 = CR1 (II)

dOO-R2-NR4R4'

CR1R1' = CR1

COO-R3-CH-CH2 (III)

o

CR1R1' = CR1'

CH2-OCH2-CH-CH2 (IV)

O o

CR1R1' CR

(

CH-CH2 (V)

o Dans ces formules, R1, R'1 et R"1 reorésentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical méthyle; Rr R2 représente un radical alcoylène bivalent contenant

2 ou 3 atomes de carbone qui peut comporter un ou plu-

sieurs substituants, ou un radical poly(oxy-alcoylène); R3 représente un radical alcoylène bivalent contenant 1 à 3 atomes de carbone qui peut être substitué ou un radical poly(oxyalcoylène); et R4 et R'4 représentent

chacun un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle con-

tenant 1 à 3 atomes de carbone qui reut porter un ra-

dical hydroxy ou amino.

On doit stériliser la matière poreuse revêtue d'un tel polymère hydrophile, de préférence par autoclavage, avant de l'utiliser à des fins thérapeutiques. Pour éviter que lors de la stérilisation, le polymère de la couche de revêtement soit dissous, il est recommandé

d'utiliser comme agent de revêtement un copolymère con-

tenant comme motif constitutif un monomère polymérisa-

ble contenant un radical époxy représenté par les for-

mules' générales (III), (IV) ou (V) ci-dessus puis de

le durcir ou de le réticuler par exemple par traite-

ment thermique pour le rendre insoluble dans l'eau.

La teneur appropriée en monomère polymérisable conte-

nant un radical époxy est de O,1 à 10 % en poids.

On peut, pour revêtir la matière poreuse du poly-

mère hydrophile, appliquer à la matière poreuse une solution de ce polymère dans un solvant approprié tel

que le méthanol ou l'éthanol par immersion, pulvérisa-

tion ou coagulation en phase humide. Il est nécessaire

que la couche de revêtement confère à la matière poreu-

se un degré approprié de compatibilité avec le sang sans pratiquement réduire la capacité d'adsorption de cette matière poreuse. A cet égard, la concentration

appropriée en polymère hydrophile de la solution uti-

lisée pour le traitement de revêtement est comprise

dans la gamme de 0,05 à 2 % et mieux de 0,05 à 0,5 %.

Lorsqu'on revêt la matière poreuse d'un copoly-

mère, comprenant comme motif constitutif un monomère contenant un radical époxy représenté par les formules générales (III), (IV) ou (V) ci-dessus, on peut, pour effectuer une réticulation, chauffer à 80-120C pendant 1 à 24 heures pour rendre le copolymère insoluble dans l'eau. On peut de plus, pour améliorer la sélectivité de

l'adsorption de la matière poreuse utilisée dans l'in-

vention, introduire à sa surface une charge électrique.

Lorsque les protéines à adsorber sont des protéines ba-

siques, on introduit des radicaux chargés négativement tels que les radicaux carboxy ou sulfo et dans le cas

des protéines acides, on introduit des radicaux char-

gés positivement tels que des radicaux amino. Par exem-

ple, on peut, pour introduire le radical amino, trai-

ter la matière poreuse avec un composé de type amino-

silane tel que le y-aminopropyltriéthoxysilane et pour introduire le radical carboxy, faire réagir la matière poreuse aminosilanêe avec de l'anhydride succinique

ou avec de l'acide succinique en présence d'un carbo-

diimide. On peut par exemple, pour introduire le radi-

cal sulfo, introduire un radical aldéhyde par traite-

ment avec le glutaraldéhyde en conditions acides après

l'aminosilanation puis traiter le produit intermé-

diaire avec de la taurine en conditions alcalines.

Un autre procédé d'introduction d'une charge consiste à revêtir la matière poreuse d'un polymère contenant un radical carboxy, sulfo ou amino. On peut citer

comme exemples de tels polymères, l'acide polyacryli-

que, l'acide polyméthacrylique, l'acide polystyrène-

sulfonique et des copolymères de monomères qui ont des motifs constitutifs de ces polymères et de monomères hydrophiles. La concentration appropriée du polymère contenant un radical carboxy, sulfo ou amino, dans la

solution que l'on utilise pour le traitement de revê-

tement, est comprise dans la gamme de 0,05 à 5,0 % et

mieux de 0,1 à 2 %.

Lorsqu'on adsorbe par exemple l'albumine qui est une protéine acide, l'emploi de matières poreuses, à

la surface desquelles on a introduit des radicaux ami-

no, provoque une adsorption très sélective de l'albu-

mine. Comme précédemment indiqué, il est nécessaire que la matière poreuse que l'on utilise dans l'invention ait un diamètre moyen des pores et une distribution

de la taille des pores comprises dans les gammes pré-

citées. On mesure avec un porosimètre à mercure le

diamètre moyen des pores et la distribution de la tail-

le des pores.

La matière poreuse de l'invention qui a une dis-

tribution étroite de la taille des pores a une éxcel-

lente sélectivité d'adsorption des protéines. L'emploi d'une matière poreuse ayant un diamètre moyen des pores

spécifique choisi selon le poids moléculaire de la pro-

téine à adsorber, permet d'adsorber de façon efficace la protéine indésirable sans pratiquement adsorber les composants utiles du sang. Comme précédemment indiqué, la relation entre le poids moléculaire de la protéine

et le diamètre moyen des pores est telle que des dia-

mètres moyens des pores de 30-150 , 150-1000 A et 1000-3000 À correspondent respectivement à des poids

moléculaires de 500-20 000, 20 000-200 000 et 200 000-

1 000 000.

Au contraire, le charbon activé et les résines poreuses utilisés à ce jour dans l'art pour éliminer par adsorption les composants indésirables du sang ne sont pas souhaitables car ils adsorbent non seulement les protéines à éliminer mais également des protéines

utiles, des sucres et des vitamines car leur distribu-

tion de la taille des pores est bien plus large.

L'invention sera mieux comprise à la lecture de

la description détaillée qui suit faite en regard des

dessins annexés dans lesquels: - la figure 1 est une perspective d'une colonne d'adsorption de l'invention; - la figure 2 est une vue schématique d'un système pour adsorber les protéines du sang; et - la figure 3 est une vue schématique d'un autre

système pour adsorber les protéines du sang.

Sur la figure 1 qui illustre un exemple de colonne d'adsorption de l'invention, le corps principal 1 a un orifice d'entrée du sang 2 et un orifice de sortie du sang 3. Les orifices d'entrée et de sortie sont munis chacun d'un filtre 4. Entre les filtres, se trouve

une matière poreuse 5 de garnissage selon l'invention.

Le sang pénètre par l'entrée 2, traverse le filtre 4, vient en contact avec la matière poreuse 5 sur laquelle les protéines sont adsorbées et quitte la colonne par

la sortie 3.

Pour éliminer par adsorption les protéines du sang avec la colonne d'adsorption de l'invention, selon le

mode de réalisation illustré par la figure 2, on pré-

lève le sang d'un malade, on l'introduit dans la colon-

ne d'adsorption au moyen d'une pompe 6 et après en

avoir éliminé les protéines par adsorption, on le ren-

voie au malade. En plus d'un tel système d'emploi gé-

néral, il existe un autre système, illustré par la figure 3, selon lequel on prélève le sang d'un malade, on le sépare en une fraction de corpuscules et une fraction de plasma au moyen d'un séparateur de plasma 7, on fait passer uniquement la fraction de plasma à travers la colonne d'adsorption 1 pour éliminer les protéines par adsorption, puis on combine avec la fraction corpusculaire-et on renvoie le mélange au malade. On peut choisir celui de ces systèmes qui est

le meilleur selon l'objectif à atteindre. On peut éga-

lement incorporer la colonne à un système autre que

ces systèmes de circulation extracorporelle.

Comme précédemment indiqué, l'invention permet de

traiter diverses affections car on peut maintenant éli-

miner sélectivement par adsorption.des protéines spéci-

fiques présentes dans le sang. Dans la présente des-

cription, le sang englobe le sang total, le plasma et le sérum. Par exemple, dans les maladies auto-immunes

(telles que l'anémie hémolytique auto-immune, la glomé-

rulonéphrite, la polyarthrite rhumatoide chronique, le

lupus érythémateux disséminé, la sclérodermie généra-

lisée, la périartérite noueuse, etc), des anticorps

(immunoglobulines ayant des poids moléculaires d'envi-

ron 160 000) dirigés contre les propres organes du malade ou des composants de son organisme sont produits et constituent les facteurs pathogènes principaux. Les anticorps sont présents dans le sang tels quels ou sous

forme de complexes antigène-anticorps (complexes immu-

nitaires, ayant des poids moléculaires de 200 000 à

1 000 000). Donc, on peut, pour effectuer le traite-

ment, éliminer les immunoglobulines par adsorption avec une matière poreuse ayant un diamètre moyen des

pores de 350 à 900 À ou éliminer les complexes antigène-

anticorps par adsorntion avec une matière poreuse ayant un diamètre moyen des pores de 1000 à 3000 A. Egalement dans les transplantations d'organe, o il se forme des anticorps (immunoglobulines) contre les organes transplantés, ce qui provoque une réaction de rejet, on peut, pour empêcher la réaction de rejet, éliminer les anticorps par adsorption avec la matière poreuse précitée. De plus, dans le sang des malades atteints d'un cancer, il existe des facteurs immunosuppresseurs

que l'on suppose être des antigènes, tels que l'a-glo-

buline immunorégulatrice (IRA, poids moléculaire

500-10 000), l'ca1-antitrypsine (aLAT), la protéine C-

réactive (CRP, poids moléculaire: environ 140 000),

l'ac-glycoprotéine acide (AAG), la protéine acide immu-

nosuppressive (IAP, poids moléculaire: environ 59 000) et l'afoetoprotéine (AFP, poids moléculaire: environ 74 000) ainsi que des facteurs immunosuppresseurs que l'on suppose être des anticorps (poids moléculaire 000-200 000), et ces facteurs empêchent que les cellules cancéreuses soient attaquées par le système

immunitaire. Comme les quantités de ces facteurs immu-

nosuppresseurs diffèrent selon la nature du cancer, on peut traiter le cancer par élimination des facteurs immunosuppresseurs principaux par adsorption avec une

matière poreuse ayant un diamètre moyen des pores ap-

* proprié (30 à 150 À pour l'a-globuline immunorégula-

trice; 150-1000 A pour les autres).

Dans le cas d'une insuffisance hépatique, une quan-

tité importante de métabolites (par exemple de la bili-

rubine) est présente dans le sang sous une forme liée à l'albumine et provoque un ictère. Donc, on peut, pour

traiter l'insuffisance hépatique, éliminer les métabo-

lites fixés à l'albumine avec une matière poreuse ayant

un diamètre moyen des pores de 150 à 1000 A et un radi-

cal amino à sa surface.

Comme précédemment indiqué, l'invention est utile

pour traiter diverses affections. Lorsqu'il est néces-

saire, on peut utiliser une colonne garnie de deux

matières poreuses ou plus ou utiliser plusieurs colon-

nes, pour accroltre l'effet thérapeutique ou pour

traiter simultanément deux affections ou plus.

De façon générale, on utilise la colonne de l'in-

vention après stérilisation. Les procédés préférés de stérilisation sont entre autres la stérilisation à la

vapeur sous pression et la stérilisation par rayons oy.

L'invention est illustrée par les exemples non

limitatifs suivants.

EXEMPLE 1.

On traite du verre poreux CPG-10-75 (diamètre O moyen des pores D = 90 A, rapport du volume occupé par les pores ayant des diamètres de 0,8 à 1,2 D au volume [ot:a] des pores = 98 %, volume spécifique des pores = 0,54 cm3/g, surface spécifique = 174 m2/g, taille des particules = 0,180-0,125 mm) (exemple 1-.1),

produit de Electro Nucleonics, Inc., avec du y-amino-

propyltriéthoxysilane dans du toluène à reflux pour introduire des radicaux amino, puis on fait réagir

avec de l'anhydride succinique dans du dioxanne anhy-

dre pour obtenir du verre poreux carboxylé (exemple 1-2). Séparément, on plonge du verre poreux CPG-10-75

dans une solution à 1 % en poids d'un copolymère cons-

titué de 79 % de méthacrylate d'hydroxyéthyle, 20

d'acide méthacrylique et 1 % de méthacrylate de glyci-

dyle dans l'éthanol puis on sèche et on chauffe pour obtenir un verre poreux revêtu d'un polymère hydrophile

contenant des groupes carboxy (exemple 1-3).

On carboxyle conMe dans l'exemple 1-2 pour obtenir

un produit (exemple 1-5) du verre poreux FPG-lOOL(dia-

mètre moyen des pores D = 96 A, rapport du volume occu-

pé par les nores ayant des diamètres de 0,8 D à 1,2 D au volume total des pores = 82 %, volume spécifique des pores = 0,60 cm3/g, surface spécifique = 171 m2/g, taille des particules = 0,180 - 0,125 mm) (exemple 1-4) qui est un produit de Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

On revêt le verre poreux FPG-!OOL avec le rneme uoly-

mère hydrophile et de la même façon que dans l'exemple

1-3 pour obtenir un produit (exemple 1-6).

De plus, on utilise un verre poreux CPG-10-170 o (diamètre moyen des pores D = 220 A, rapDport du.o!ue occupé par les pores ayant des diamètres de 0,8 à 1,2D au volume total des pores = 90 %, volume spécifique des pores = 1,23 cm3/g, surface spécifique = 140 m2/g, taiile des particules = 0,180-0,12 saun) (exeMrple 1-7)

et du verre poreux CPG-10-240 (diamètre moyen des no-

o res D = 370 A, rapport du volume occupé par les:or.es ayant des diamètres de 0,8 D à 1,2 D au volume total des pores = 86 %, volume spécifique des pores = 1,34

cm3/g, surface spécifique = 97 m2/g, taille des:arti-

cules = 0,180-0,125 mm) (exemple 1-8) qui sont tous deux des produits d'Electro Nucleonics, Inc. On utilise

c;-:- -, ext-emple 't'-in - -<-e::emle..

Lbon a-c-tivé BAC-.MIJ-L (produit de Kureha Cher., Co., aar-

une distribution large de la taille des Dores).

2o On étudie ces matières pour déterminer leur c -

cite d 'adsption. du lysozyrse de blanc d'oeuf..--

du cytochrome C de coeur de cheval (Sigma) et de la

sérum-albumine bovine (fraction V, Sigma). Les résul-

tats obtenus fi.gurent dans le tableau I.

TABLEAU I

Capacités d'adsorption des protéines (en 3 heures) .

Exemple N Diamètre Lysozyme Cytochrome Albumine

(Verre moyen (poids mo- (poids mo- (poids mo-

poreux) des pores léculaire léculaire léculaire

14 600) 12 800) 60 000

environ)

1-1

(CPG-10-75)

1-2

(CPG-10-75)

1-3

(CPG-10-75)

1-4

(FPG-1OOL)

1-5 (FPG-lOOL)

1-6

(FPG-100L)

1-7

(CPG-10-170)

1-8

(CPG-10-240)

1-9(témoin) (BAC-MrU-L) A 111,Omg/g 61,2 69,2 ,8 , 6 ,4 67,8 112,8 106,0 mg/g 0 mg/g o o o o o 67,8 59,0 102,6 114,0 7,8 2,4 OCalculées à partir de la concentration en protéines

du surnageant.

On détermine l'albumine selon la méthode au vert

de bromocrésol, le cytochrome C par adsorption ultra-

violette et le lysozyme selon la méthode au biuret.

Conditions d'essai: concentration initiale en protéi-

nes: lysozyme 2 g/dl, albumine 2 g/dl, cytochrome C 2 g/dl, dans du tampon salé phosphaté à 0,9 %; rapport

du bain: 3 ml/0,5 g d'adsorbant; 370C, avec agita-

tion à 120 cycles/min.

Comme le montre le tableau I, les matières poreu-

ses de l'exemple 1-1 à l'exemple 1-6 qui ont chacune un diamètre moyen des pores inférieur à 150 A adsor- bent bien le lysozyme et le cytochrome Cqui sont des protéines de bas poids moléculaire, mais n'adsorbent absolument pas la sérum-albumine. Au contraire, les matières poreuses de l'exemple 1-7 et de l'exemple

1-8 qui ont chacune un diamètre moyen des pores supé-

rieur à 150 A présentent une faible sélectivité pour

le lysozyme ou la sérum-albumine.

EXEMPLE 2.

On plonge du verre poreux CPG-10-240 (voir l'exem-

ple 1-8) (exemple 2-1) qui est un produit d'Electro Nucleonics, Inc. dans une solution à 1 % en poids d'un copolymère cromposé de 79 % en poids de méthacrylate d'hydroxyéthyle, 20 % en poids d'acide méthacrylique

et 1 % en poids de méthacrylate de- glycidyle dans l'é-

thanol puis on sèche et on chauffe pour obtenir un verre poreux revêtu du polymère hydrophile (exemple 2-2). On revêt avec le même polymère hydrophile et de la même façon que dans l'exemple 2-2 pour obtenir un

produit (exemple 2-4) du verre poreux FPG-250L (dia-

mètre moyen des pores D = 220 A, rapport du volume occupé par les pores ayant des diamètres de 0,8 D à

1,2 D au volume total des pores = 96 %, volume spéci-

fique des pores = 0,89 cm3/g, surface spécifique 103 m2/g, taille des particules = 0,180-0,125 mm) (exemple 2-3) qui est un produit de Wako Pure Chemical

Industries, Ltd.).

On revêt avec le même polymère hydrophile et de la même façon que dans l'exemple 2-2 pour obtenir un produit (exemple 2-6) du verre poreux FPG100L (voir

l'exemple 1-4) (exemple 2-5) qui est un produit de Wako.

On utilise comme exemple témoin (exemple 2-7) des

perles de charbon activé BAC-MU-L (voir l'exemple 1-9).

Les capacités d'adsorption de ces matières vis-

à-vis de la sérum-albumine bovine (fraction V, Sigma) et des y-globulines sériques bovines (fraction II,.

Sigma) figurent dans le tableau II.

Comme le montre ce tableau, les matières poreuses de l'exemple 2-1 à l'exemple 2-4 qui ont chacune un diamètre moyen des pores supérieur à 150 A, adsorbent bien l'albumine et les y-globulines tandis que les matières poreuses de l'exemple 2-5 et de l'exemple 2-6 qui ont un diamètre moyen des pores inférieur à 150 A,

n'adsorbent pas du tout l'albumine ni les y-globulines.

TABLEAU II

Capacités d'adsorption des protéines (en 3 heures)O.

Exemple Diamètre Sérum-albumine y-globulines de NO moyen bovine (poids sérum de boeuf des pores moléculaire (poids moléculaire environ 60 000)environ 160 000) 2-1 370 A 60 mg/g 53 mg/g

2-2 " 44 28

2-3 220 83 36

2-4 " 70 20

2-5 96 O o

2-6 " O O

2-7 2,4 o

oCalculées pour la concentration en protéines du sur-

nageant. On les détermine dans le cas de l'albumine selon la méthode au vert de bromocrésol et dans le cas des

protéines totales selon la méthode du biuret et on cal-

cule la concentration des y-globulines par la diffé-

rence entre les protéines totales et l'albumine.

Conditions d'essai: concentration initiale en pro-

téines: sérum-albumine bovine 2 g/dl, y-globulines de sérum de boeuf 2 g/dl, en mélange dans du soluté salé tamponné; rapport du bain: 6 ml/g d'adsorbant; 37 C avec agitation à 120 cycles/min.

EXEMPLE 3.

A 0,5 g de chacun des verres poreux CPG-10-240

(voir l'exemple 1-85 (exemple 3-1), CPG-10-500 (dia-

a mètre moyen de's pores D = 700 A, rapport du volume occupé par les pores ayant des diamètres de 0,8 à 1,2 D au volume total des pores = 99 %, volume spécifique des pores = 0,87 cm3/g, surface spécifique = 39 m2/g, taille des particules = 0,180-0,125 mm) (exemple 3-2) o

et CPG-10-700 (diamètre moyen des pores D = 880 A, rap-

port du volume occupé par les pores ayant des diamè-

tres de 0,8 à 1,2 D au volume total des pores = 99 %,

volume spécifique des pores = 1,25 cm3/g, surface spé-

cifique = 37 m2/g, taille des particules = 0,180-0,125 mm) (exemple 3-3) qui sont tous des produits d'Electro Nucleonics, Inc., on ajoute 3000 1 d'une solution de

sérum-albumine bovine (fraction V, Sigma) et de y-glo-

bulines de sérum de boeuf (fraction II, Sigma) dans du tampon salé phosphaté avec une concentration de chacune de ces matières de 2 g/dl et on agite le mélange à 37 C à 120 cycles/min. On prélève périodiquement des échantillons de surnageant dans lesquels on détermine l'albumine selon la méthode au vert de bromocrésol et les protéines totales selon la méthode du biuret et on

calcule la concentration en y-globulines par la diffé-

rence entre les protéines totales et l'albumine. Le diamètre moyen des pores des verres Doreux utilisés et leur capacité d'adsorption de l'albumine et des y-globulines figurent dans le tableau III. Lorsqu'on compare ces résultats à ceux obtenus dans l'exenmple 2, on voit que les matières poreuses ayant des diamètres

moyens des pores de 350 à 900 A présentent une excel-

lente sélectivité d'adsorption des y-globulines.

TABLEAU III

Capacités d'adsorption des protéines (en 3 heures).

ExemDle Diamètre y-globulines Albumine N moyen des pores 3-1 370 A 53,1 mg/g 58,2 mg/g

3-2 700 34,8 25,2

3-3 880 42,6 36,6

EXEMPLE 4.

On plonge dans 200 ml d'une solution à 5 % de y-aminopropyltriéthoxysilane dans le toluène, 25 g de chacun des verres poreux CPG-10-500 (voir l'exemple 3-2), CPG-10-700 (voir l'exemple 3-3) et CPG10-1000 (diamètre moyen des pores D = 1300 A, ra-port du volume occupé par les pores ayant des diamètres de 0,8 à 1,2 D au volume total des pores = 90 %, volume spécifique

3 2

des pores = 1,05 cm3/g, surface spécifique = 28 m2/g,

taille des particules 0,180-0,125 mm) qui est un pro-

duit d'Electro Nucleonics Inc. et on chauffe à reflux pendant une nuit. On lave avec du toluène les verres CPG ainsi aminés et on sèche. On plonge 10 q de chaque

verre CPG aminé dans 100 ml d'une solution à 10 % d'an-

hydride succinique dans le dioxanne et on agite le mé-

lange à 40 C pendant 7 heures. On lave les verres CPG ainsi carboxylés (respectivement exemples 4-1, 4-2 et 4-3) avec du dioxanne et on sèche. On prélève 0,5 g

de chaque verre CPG carboxylé et on détermine la capa-

cité d'adsorption de l'albumine et des y-globulines

selon les méthodes utilisées dans l'exemple 3. Les ré-

sultats obtenus figurent dans le tableau IV.

TABLEAU IV

Capacités d'adsorption des protéines des verres CPG

carboxylés (en 3 heures).

Exemple Diamètre y-globulines Albumine N moyen des pores 4-1 700 A 36,0 mg/g 31,2 mg/g

4-2 880 68,9 O

4-3 1300 27,6 27,6

EXEMPLE 5.

On revêt par pulvérisation avec un copolymère de méthacrylate d'hydroxyéthyle et d'acide méthacrylique le verre CPG-10-1000 carboxylé ayant un diamètre moyen

des pores de' 1300 A préparé dans l'exemple 4 pour ob-

tenir un pourcentage pondéral de la couche de revête-

ment de 0,2 %. On détermine les capacités d'adsorption de l'albumine et des y-globulines du produit selon les méthodes utilisées dans l'exemple 3. Les capacités d'adsorption de l'albumine et des y-globulines en 3

heures sont respectivement de 15,0 mg/g et de 75,0 mg/g.

On voit donc que ce traitement de revêtement réduit la

capacité d'adsorption de l'albumine du verre CPG carbo-

xylé mais accroit sa capacité d'adsorption des y-glo-

bulines.

EXEMPLE 6.

On revêt par pulvérisation avec de l'acide poly-

acrylique le verre poreux CPG-10-1000 (voir l'exemple 4) qui est un produit d'Electro Nucleonics, Inc. (le pourcentage pondéral du revêtement est de 0,5 %) et on chauffe à 120 C pendant 2 heures. On détermine les

capacités d'adsorption de l'albumine et des y-globu-

lines de ce produit selon les méthodes utilisées dans l'exemple 3. Les capacités d'adsorption de l'albumine et des y-globulines en 3 heures sont respectivement

de 42,0 mg/g et de 60,0 mg/g. On voit donc que le re-

vêtement avec un polymère carboxylé accroit la capa-

cité d'adsorption des y-globulines du verre CPG.

EXEMPLE 7.

On aminosilane comme dans l'exemple 4 le verre

poreux CPG-10-500 (voir l'exemple 3-2) qui est un pro-

duit d'Electro Nucleonics Inc. On prélève 5 g du pro-

duit de silanation, on ajoute 50 ml d'une solution à 5 x de glutaraldéhyde dans l'acide chlorhydrique 1 N

et on agite le mélange à la température ordinaire pen-

dant 17 heures. On lave soigneusement le verre CPG avec de l'eau puis on ajoute 50 ml d'une solution à % de taurine dans l'hydroxyde de sodium 1 N et on agite le mélange à la température ordinaire pendant 8

heures. On détermine les capacités d'adsorption de l'al-

bumine et des y-globulines du verre CPG portant des

radicaux sulfo ainsi obtenu, selon les procédés utili-

sés dans l'exemple 3. Les quantités d'albumine et de y-globulines adsorbées en 3 heures sont respectivement de 25,8 mg/g et de 63,6 mg/g. Ces résultats indiquent que l'introduction d'un radical sulfo accroit plus la

capacité d'adsorption des y-globulines que l'introduc-

tion d'un radical carboxy.

EXEMPLE 8.

On plonge 25 g de chacun des verres poreux CPG-10-

500 (voir l'exemple 3-2), CPG-10-700 (voir-l'exemple 3-3) et CPG-10-1000 (voir l'exemple 4) qui sont des produits d'Electro Nucleonics Inc., dans 200 ml d'une solution à 5 % de y-amino-propyltriéthoxysilane dans le toluène et on chauffe à reflux pendant une nuit. On détermine la capacité d'adsorption de l'albumine et des y-globulines selon les méthodes utilisées dans l'exemple 3 de 0,5 g de chacun des verres CPG non traités (respectivement exemples 8-1, 8-3 et 8-5) et des verres CPG aminés (respectivement exemples 8-2, 8-4 et 8-6). Les résultats obtenus figurent dans le tableau V. Pour tous les diamètres moyens des pores, les résultats montrent que l'introduction-d'un radical amino accroit la capacité d'adsorption de l'albumine, mais diminue la capacité d'adsorption des y-globulines.

TABLEAU V

Capacités d'adsorption des protéines des verres poreux

(en 3 heures).

Exemple Diamètre Introduction Albumine y-globuline NO moyen d'un radical des pores amino 8-1 700 A non 25,2 mg/g 34,8 mg/g 8-2 " oui 38,4 'O 8-3 880 non 36,6 42,6 8-4 " oui 53,4 3,6 8-5 1300 non 48,0 9,0 8-6 " oui 64,2 '0O

EXEMPLE 9.

On traite avec du y-aminopropyltriéthoxysilane dans du toluène à reflux le verre poreux CPG-10-1400 o

(diamètre moyen des pores D = 1400 A, rapport du volu-

me occupé par les pores ayant des diamètres de 0,8 à

1,2 D au volume total des pores = 99 %, volume spéci-

fique des pores = 0,66 cm3/g, surface spécifique = 8,3 m2/g, taille des particules = 0,180-0,125 mm) qui

est un produit d'Electro Nucleonics Inc. On fait en-

suite réagir le produit d'amination avec de l'anhydride succinique dans du dioxanne anhydre pour obtenir un verre CPG-10-1400 modifié portant un radical carboxy

(exemple 9-1).

On traite comme dans l'exemple 9-1, du verre no-

O reux CPG-10-2000 (diamètre moyen des nores D = 2800 A,

rapport du volume occupé par les pores ayant des dia-

mètres de 0,8 à 1,2 D au volume total des pores = 99 %,

volume spécifique des pores = 0,66 cm3/g, surface spé-

cifique = 8,3 m2/g, taille des particules = 0,180-

0,125 mm) (exemple 9-2), qui est un produit d'Electro Nucleonics Inc., pour obtenir un verre modifié portant un radical carboxy (exemple 9-3). De plus, on plonge du verre poreux CPG-10-2000 dans une solution à 1 % en poids d'un copolymère préparé à partir de 79 % en poids de méthacrylate d'hydroxyéthyle, 20 % en poids d'acide méthacrylique et 1 % en poids de méthacrylate de glycidyle dans l'éthanol, puis on sèche et on traite par chauffage pour obtenir un verre CPG-10-2000

modifié revêtu du polymère hydrophile (exemple 9-4).

On traite comme dans l'exemple 9-1 du verre po-

o reux FPG-2000L (diamètre moyen des pores D = 2200 A,

rapport du volume occupé par les pores ayant des dia-

mètres de 0,8 à 1,2 D au volume total des pores = 90 %,

volume spécifique des pores = 0,92 cm3/g, surface spé-

cifique = 14 m2/g, taille des particules = 0,180-0,125

mm) (exemple 9-5) qui est un produit de Wako Pure Che-

mical Industries Ltd. pour obtenir un produit à la sur-

face duquel on a introduit un radical carboxy (exemple 9-6).

On traite comme dans l'exemple 9-1 du verre po-

reux CPG-10-700 (voir l'exemple 3-3) (exemple 9-7) qui est un produit d'Electro Nucleonics Inc. pour obtenir

un produit à la surface duquel on a introduit un radi-

cal carboxy (exemple 9-8).

On détermine les capacités d'adsorption de ces matières poreuses pour l'uréase (type III, Sigma, poids moléculaire = 470 000) et pour les yglobulines bovines (fraction II, Sigma, poids moléculaire = 000). On agite à 37 C pendant 3 heures un mélange de chaque matière et d'une solution des protéines dans du tampon salé phosphaté avec un rapport du bain de 6 ml/g d'adsorbant, la concentration initiale de chaque

protéine étant de 2 g/dl. On détermine les concentra-

tions en protéines du surnageant selon la méthode du biuret et à partir de ce résultat, on calcule les capacités d'adsorption des protéines. Les résultats obtenus figurent dans le tableau VI.

TABLEAU VI

Capacités d'adsorption des protéines (en 3 heures).

Exemple Diamètre Uréase y-globulines No moyen des pores 9-1 1400 A 9,6 mg/g 3,0 mg/g

9-2 2800 5,4 -

9-3 2800 18,6 0

9-4 2800 12,0 0

9-5.2200 2,0 O

9-6 2200 16,2 1,2

9-7 880 - 3,5 45,0

9-8 880 2,0 69,0

Comme le montrent nettement les valeurs du tableau VI, l'emploi de matières poreuses ayant un diamètre o moyen des pores compris dans la gamme de 1000 à 3000 A

dans les exemples 9-1 à 9-6 s'accompagne d'une adsorp-

tion sélective d'uréase qui est une protéine de poids

moléculaire élevé sans qu'il y ait pratiquement d'ad-

* sorption des y-globulines de bas poids moléculaire.

Au contraire, les matières poreuses ayant un diamètre moyen des pores inférieur à 1000 A utilisées dans l'exemnle 9-7 et l'exemple 9-8 n'adsorbent presque pas l'uréase mais adsorbent des quantités relativement

importantes de y-globulines.

EXEMPLE 10.

On utilise dans l'exemple 10-1 le verre poreux CPG-10-1400 (voir l'exemple 9) qui est un produit

d'Electro Nucleonics Inc. On traite comme dans l'exem-

ple 9-1 le verre poreux FPG-700L (diamètre moyen des o

pores D = 720 A, rapport du volume occupé par les po-

res ayant des diamètres de 0,8 à 1,2 D au volume total des pores = 99 %, volume spécifique des pores = 0,95

cm3/g, surface spécifique = 37 m2/g, taille des parti-

cules = 0,180-0,125 mm) qui est un produit de Wako Pure Chemical Industries Ltd., pour introduire à sa surface un radical carboxy et on utilise le produit

dans l'exemple 10-2. On détermine les capacités d'ad-

sorption de la catalase de foie de boeuf (Miles Labo-

ratories, poids moléculaire = 240 000) dans les memes conditions d'essai que dans les exemples 9-1 à 9-6 si ce n'est que la concentration initiale en protéine est de 2,3 g/dl. Les résultats obtenus figurent dans le

tableau VII. Ces résultats montrent qu'une matière po-

reuse ayant un diamètre moyen des pores ne dépassant o pas 1000 A est nécessaire pour adsorber la catalase

ayant un poids moléculaire de 240 000.

TABLEAU VII

Capacités d'adsorption des protéines (catalase)

(en 3 heures).

Diamètre moyen Catalase des pores Exemple 10-1 1400 A 19,0 mg/g Exemple 10-2 720 O

EXEMPLE 11.

On plonge dans une solution à 0,25 % en poids d'un

copolymère constitué de 99,5 % de méthacrylate d'hydro-

xyméthyle et 0,5 % de méthacrylate de glycidyle dans l'éthanol, 50 ml de verre CPG-10-350 (diamètre moyen des pores D = 380 A, rapport du volume occupé par les pores ayant un diamètre de 0,8 à 1,2 D au volume total des pores = 86 %, volume spécifique des pores = 1,39

cm3/g, surface spécifique = 90 m2/g, taille des parti-

cules = 0,180-0,125 mm) qui est un produit d'Electro Nucleonics Inc. puis on sèche et chauffe le produit et on en garnit une colonne de polypropylène (dont

les deux extrémités sont munies d'un filtre en poly-

ester de 80 Pm d'ouverture de maille. On effectue une expérience de circulation in vivo dans la colonne du sang total d'un lapin mâle pesant 3,46 kg pendant une heure avec un débit d'environ 5 ml/min. On prélève

des échantillons de sang dans la canalisation arté-

rielle et la canalisation veineuse et on en sépare le plasma par centrifugation. On analyse le plasma avec

une chromatographie liquide haute performance (appa-

reil: ALC/GPC type 244 (Waters Associates Inc.), colonne: G-3000SW (diamètre intérieur 7,5 mm, longueur 600 mm, Toyo. Soda), éluant: tampon phosphate 1/15 M (NaCl 0,15 M, pH 6,0), débit: 1,0 ml/min, détecteur: UV (280 nm)) et à partir des hauteurs des pics du chromatogramme, on calcule les taux d'élimination de

l'albumine et des y-globulines.

Les résultats qui figurent dans le tableau VIII montrent de façon évidente que 70 % des y-globulines

du sang sont éliminées en une heure tandis que la dimi-

nution de la teneur en albumine n'est que de 20 %.

TABLEAU VIII

Elimination de l'albumine et des y-globulines du sang

de lapin.

Temps de Albumine (%) y-globulines (%) circulation 1 heure Artériel 23 63 Veineux 27 68

EXEMPLE 12.

On garnit une colonne de polypropylène (voir

l'exemple 11) de 2 g de verre CPG-10-75 (voir l'exem-

ple 1) et on y fait circuler à 370C pendant 3 heures à un débit d'environ 3 ml/min du sang total de lapin

contenant 120 mg de lysozyme de blanc d'oeuf. On dé-

termine à des intervalles d'une heure selon la méthode

indiquée dans l'exemple 11 les concentrations en lyso-

zyme, en albumine et en y-globulines.

Les résultats qui figurent dans le tableau IX

montrent nettement que le lysozyme est éliminé spéci-

fiquement en trois heures tandis que l'albumine et, les

y-globulines ne sont pas du tout éliminées.

TABLEAU IX

Elimination du lysozyme du sang de lapin.

Temps de Lysozyme Albumine -y-globulines circulation (%) () (X) 1 heure 95 0 O 2 heures 99 O O 3 heures 100 0 o

EXEMPLE 13.

On incube avec 100 mg de sérum-albumine bovine à

370C pendant 30 minutes de l'antisérum de lapin anti-

sérum-albumine bovine obtenu à partir de lapins immu-

nisés par la sérum-albumine bovine. On filtre avec une

membrane filtrante ayant des pores de 0,2 pm pour ob-

tenir du sérum de lapin contenant le complexe immuni-

taire soluble.

On garnit de verre CPG-10-2000 carboxylé (voir l'exemple 9-3) une colonne de polypropylène (colonne de type analogue à celle de l'exemple 12) et on fait circuler 10 ml du sérum de lapin précité à travers cette colonne à 370C pendant trois heures à un débit

d'environ 3 ml/min. On détermine par analyse par chro-

matographie liquide haute performance (dans les mêmes conditions que dans l'exemple 11 si ce n'est qu'on utilise une colonne G-4000SW (diamètre intérieur 7,5 mm, longueur 600 mm, Toyo Soda)) les variations de la concentration du complexe immunitaire dans le sérum

de lapin.

Les résultats figurent dans le tableau X. La te-

neur du complexe immunitaire diminue d'environ 30 % en 3 heures tandis que la teneur des autres protéines

(principalement l'albumine et y-globulines) ne s'abais-

se que de 7 %. On voit donc que la colonne de l'inven-

tion est capable d'éliminer sélectivement un complexe

immunitaire dans le sérum de lapin.

TABLEAU X

Elimination de complexe immunitaire du sérum de lapin.

Temps de Complexe immunitaire Autres protéines circulation (%) (x) 1 heure 5 2 heures 8 0 3 heures 30 7

Claims (13)

REVENDICATIONS

1. Colonne pour adsorber les protéines du sang, caractérisée en ce qu'elle comprend une entrée du sang (2) et une sortie du sang (3), munies chacune d'un filtre (4) avec une matière poreuse de garnissage (5) entre les deux

filtres, cette matière poreuse ayant un diamètre moyen des-

pores (D) de 30 à 3 000 A avec un rapport du volume occupé par les pores ayant un diamètre compris dans la gamme de

0,8D à 1,2D au volume total des pores d'au moins 80 %.

2. Colonne d'adsorption selon la revendication 1, caractérisée en ce que le diamètre moyen des pores de la matière poreuse (3) est compris dans les gammes de 30 à A, de 150 à 1 000 A ou de 1 000 à 3 000 A, si bien que les protéines ayant des poids moléculaires respectifs de 500 à 20 000, de 20 000 à 200 000 ou de 200 000 à 1 000 000,

peuvent y être adsorbées.

3. Colonne d'adsorption selon la revendication 1, caractérisée en ce que le diamètre moyen des pores de la matière poreuse (5) est compris, dans la gamme de 350 à

900 A si bien que les y-globulines peuvent y être adsorbées.

4. Colonne d'adsorption selon l'une quelconque

des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la matière

poreuse est revêtue d'un polymère hydrophile.

5. Colonne d'adsorption selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'on choisit le polymère hydrophile parmi les polymères à base d'acrylamiCe, les polymères i

base d'alcool vinylique,-la nolyvinylpyrrolidone, le ni-

trate de cellulose et la gélatine, de préférence les poly-

mères à base d'esters acryliques, les polymères à base

d'esters méthacryliques, et plus particulièrement les po-

lymères à base d'acide acrylique ou méthacrylique dans les-

quels un monomère polymérisable contenant un radical époxy est copolymérisé. e

6. Colonne d'adsorption selon l'une quelconque

des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la sur-

face de la matière poreuse (5) est chargée négativement.

7. Colonne d'adsorption selon l'une quelconque

des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la ma-

tière poreuse (5) porte à sa surface des radicaux carboxy

ou sulfo, ou bien des radicaux silanols.

8. Colonne d'adsorption selon l'une quelconque

des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la matiè-

re poreuse (5) est un verre poreux produit par traitement acide d'un verre de borosilicate alcalin présentant une

structure de séparation de phase fine.

9. Colonne d'adsorption selon l'une quelconque

des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le volume

spécifique des pores de la matière poreuse (5) n'est pas inférieur à 0,5 cm3/g, est de préférence compris dans la

gamme de 0,5 à 2 cm3/g.

10. Colonne d'adsorption selon l'une quelconque

des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que les filtres

(4) sont faits tous deux de polyester ou de cellulose.

11. Colonne d'adsorption selon l'une quelconque

des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que les filtres

(4) ont tous deux une ouverture de maille de 0,30 à

0,075 mm.

12. Application d'une matière poreuse à la pré-

paration d'une colonne selon la revendication 1 pour l'ad-

sorption des protéines du sang comprenant une entrée du sang (2) et une sortie du sang (3) munies chacune d'un filtre (4) et avec une matière poreuse (5) de garnissage entre les deux filtres, laquelle matière poreuse présente un diamètre moyen des pores (D) de 30 à 3 000 A avec un rapport du volume occupé par les pores ayant des diamètres compris dans la gamme de 0,8D à 1,2D au volume total des

pores d'au moins 80 %.

13. Application d'une matière poreuse selon la

revendication 12, à la préparation d'une colonne d'adsorp-

tion selon l'une quelconque des revendications 2, 3 ou 8.