FI93217C

FI93217C - Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten nukleosidijohdannaisten estereiden ja amidien valmistamiseksi

Info

Publication number: FI93217C
Application number: FI894397A
Authority: FI
Inventors: Jo Klaveness; Frode Rise; Kjell Undheim
Original assignee: Nycomed Imaging As
Priority date: 1987-03-24
Filing date: 1989-09-18
Publication date: 1995-03-10
Also published as: AU613026B2; OA09242A; DE3850571D1; EP0342203A1; FI93217B; EP0342203B1; AU1489388A; WO1988007532A1; JPH02503312A; DE3850571T2; ATE108183T1; NZ223990A; FI894397A; FI894397A0

Description

93217

Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten nukleosidijohdannaisten estereiden ja amidien valmistamiseksi 5 Keksinnön kohteena on menetelmä virusta vastustavien yhdisteiden, erityisesti nukleosidijohdannaisten estereiden ja amidien valmistamiseksi. Nämä yhdisteet ovat aktiivisia ihmisen immuunivastetta tuhoavaa virusta (HIV) vastaan, joka on retrovirus, joka aiheuttaa AIDS-sairauden.

10 AIDS on suhteellisen uusi sairaus. Se havaittiin 1981 ja sen jälkeen on tuhansia sairaustapauksia diagnostisoitu. On ennakoitu, että lukumäärä kasvaa satoihin tuhansiin muutaman seu-raavan vuoden aikana. Tilanne on erityisen vakava monissa kes- 15 ki-Afrikan maissa. AIDS on kuolemaan johtava ja n. 40 % kaikista tutkituista tapauksista on päättynyt kuolemaan. Niistä, joiden on diagnostisoitu potevan AIDS'ia yli kolme vuotta sitten, on arvioitu 85 %:n olevan nyt kuollut.

20 Kliinisiä oireita ovat laihtuminen, krooninen ripuli, jatkuva kuume ja altistuminen infektioille johtuen T-solujen vähenemisestä, mikä täten järkyttää immuniteettisysteemin kokonaista-sapainoa. Potilas menettää kykynsä vastustaa muuten harmittomia infektioita.

25

Monia erilaisia menetelmiä on kokeiltu infektion vastustamiseksi. Kokeiltuihin menetelmiin kuuluvat immuunisysteemin stimulointi ja (sekundaaristen) hengenvaarallisten infektioiden tavallinen hoito. Tähän mennessä lupaavin menetelmä on ollut 30 HIV-viruksen monistumisen estäminen. Monia erilaisia yhdisteitä monistumisen häiritsemiseksi on kokeiltu, esim. fosfonofor-maattia (Foscarnet), suramiinia, Evans Blue'ta, 3'-atsido-3'-deoksitymidiiniä (AZT) ja 2',3'-dideoksinukleosidejä.

35 Esimerkiksi EP-patenttihakemuksessa 0 196 185A kuvataan farmaseuttisia koostumuksia, jotka sisältävät AZT, tunnettua yhdistettä, joka on osoittautunut hyvin lupaavaksi AIDS'in ja AIDS-sukuisten oireiden hoidossa. Uskotaan, että AZT toimii 9321 7 2 estämällä käänteisen transkriptaasin, tärkeän entsyymin retro-virusten elinjaksolle.

Lisätyötä on tehty vaihtoehtoisten käänteisten transkriptaasi-5 estimien kehittämiseksi, joiden avulla voitaisiin välttää AZT:n rajoitukset ja haitat, esimerkiksi luuytimen toiminnan pysähtyminen tai tarve toistuvasti antaa suhteellisen suuria määriä, ja näiden ehdotettujen yhdisteiden joukossa oli 2',3'-dideoksinukleosidejä.

10 Näiden yhdisteiden valmistusta ja aktiivisuutta on kuvattu (Mitsuya ja Broder, Proc. Natl. Acad. Sei. 83, 1911 (1986)) ja esitettiin, että sekä 2'- ja 3'-asemien on oltava substituoi-mattomia kun 5'-hydroksiryhmän on oltava läsnä, oletettavasti 15 mahdollistamaan in vivo konversio vastaaviksi nukleotideiksi. Yhdisteillä näytti olevan alempi myrkyllisyys ja parempi teho kuin AZT:llä; 2',3'-dideoksisytidiini läpikäy tällä hetkellä kliinisiä kokeita.

20 EP-patenttihakemuksessa 0 206 497A kuvataan sytosiinin tai puhtaiden emästen 2',3'-dideoksiribofuranosidijohdannaisia virusta vastustavina yhdisteinä. Vaikka siinä viitataan näiden yhdisteiden estereihin mahdollisina metabolisina prekursorei-na, ei millään tavalla viitata siihen, että estereillä voisi 25 olla mitään edullisia ominaisuuksia verrattuna alkuperäisiin 5-hydroksiyhdisteisiin ja mitään esteriä ei ole erityisesti mainittu tai niiden valmistusta esitetty. Ei ole mitään viittausta mihinkään vastaaviin tymidiiniyhdisteisiin tai mihinkään nukleosidijohdannaisiin, joilla on N-asyloituja aminoryh-30 miä.

Nyt olemme havainneet, että 5-hydroksiryhmän esteröinti ja/tai aminoryhmien amidointi, jotka ovat läsnä puriini- tai pyrimi-diinirenkaassa, voi saada aikaan huomattavia etuja suhteessa 35 imeytyvyyteen, kokonaisaktiivisuuteen ja vaikutuskohtaan.

Näin ollen esillä oleva keksintö koskee menetelmää terapeuttisesti aktiivisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava

X

5 9321 7 3

RO—0-~—J

\_7 (I) jossa R on vetyatomi tai fysiologisesti hyväksyttävä asyyli-ryhmä, jolla on kaava R'.CO- tai R'.O.CO-, R1 on C, - C20-alkyyl i, fenyyli (C,-C4) alkyyli tai fenyyli, ja X on 10 ° NR2R3 NR2R3 ΗΊ iTCH3 V n —v 15 | | |

° O

HV 11-il* -N

20 mn\XJ tai '

i I

joissa RJ ja R3, jotka voivat olla samoja tai erilaisia, ovat kumpikin vetyatomi tai fysiologisesti hyväksyttävä asyyliryh-25 mä, jolla on kaava R4.CO- tai R4.O.CO-, joissa R4 on C,-C20-al-kyyli, fenyyli (C|-C4) alkyyli tai fenyyli, sillä ehdolla, että 1) ainakin toisen ryhmistä R ja R2 on oltava asyyliryhmä, 2) kun R on vetyatomi ja X on sytosiiniryhmä, jossa R2 on 30 ryhmä R4.C0-, niin R3 ei ole vetyatomi, 3) kun R on asetyyliryhmä, niin X ei ole tymiiniryhmä, 4) kun R on bentsoyyliryhmä, niin X ei ole tymiiniryhmä eikä N-substituoimaton sytosiiniryhmä, ja 5) kun R on bentsoyyliryhmä, niin X ei ole hypoksantiiniryh- 35 mä, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi .

X on edullisesti tymiiniryhmä.

9321 7 4

Edellä määritettyjä kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää sellaisten lääkkeiden valmistamiseksi, joilla hoidetaan retrovirusinfektioita, erityisesti neurotrooppisia viruksia ja erityisesti HIV-infektioita.

5

Koostumukset voidaan formuloida tavalliseen tapaan sekoittamalla yhtä tai useampaa edellä määritettyä kaavan (I) yhdistettä täyteaineiden ja/tai kantimien kanssa.

10 Asyyliryhmät R, R2 ja R3 kaavassa (I) ovat edullisesti c2-i8" asyyliryhmiä (tässä käytettynä termi "asyyli" on tarkoitettu käsittämään ryhmät, jotka on johdettu joko karboksyyli- tai hiilihapoista). Sopivia esimerkkejä asyyliryhmistä ovat ase-tyyli-, butyryyli-, pivaloyyli-, heksanoyyli-, stearoyyli-, 15 palmitoyyli-, fenyyliasetyyli-, bentsoyyli-, isobutyylioksi-karbonyyli-, etyylioksikarbonyyli- ja bentsyylioksikarbonyy-liryhmät.

Yhdisteet, joissa R2 ja R3 ovat vety ja R on ryhmä R1.0. CO -, 20 kuten edellä on määritetty, ovat erityisen edullisia. Toinen edullinen keksinnön mukaisesti valmistettu yhdisteryhmä on se, jossa R2 on asyyliryhmä, kuten edellä on määritetty, R3 on vety tai asyyliryhmä, kuten edellä on määritetty ja R on vety tai asyyliryhmä, kuten edellä on määritetty. Yleensä R3 on edulli-25 sesti vety.

Kaavan (I) yhdisteiden suolat voivat olla happoadditiosuoloja orgaanisista tai epäorgaanisista hapoista, esimerkiksi vety-kloridi- tai fosforihaposta tai metaanisulfonihaposta, etaa-30 nidisulfonihaposta, 2-naftyylisulfonihaposta, pivaliinihaposta ja pamoiinihaposta. Virusta vastustavia vastaioneja, kuten fosfonoformaattia tai suramiinia voidaan käyttää. Orgaanisia tai epäorgaanisia emässuoloja voidaan muodostaa happamien ryhmien ollessa läsnä molekyylissä; sopivia vastaioneja ovat al-35 kalimetalli-ionit, kuten natrium- ja kaliumionit, kaksiarvoiset ionit, kuten kalsium- ja sinkki-ionit ja orgaaniset ionit, kuten tetra-alkyyliammonium ja koliini tai ionit, jotka on johdettu meglumiinistä tai etyleenidiamiinista. Näitä suoloja 9321 7 5 voidaan muodostaa saattamalla kaavan (I) mukainen yhdiste reagoimaan sopivan hapon tai emäksen kanssa.

Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää retrovirusin-5 fektioiden, erityisesti HIV-infektioiden, hoitoon ja/tai ennalta ehkäisyyn.

Uskotaan, että kaavan (I) esterit eivät itsessään ole kään-teistranskriptaasin estimiä, mutta muuttuvat in vivo 5-hydrok-10 si-2,3-dideoksinukleosideiksi. Joka tapauksessa hydroksi- ja aminoryhmien esteröinti ja/tai amidointi sai aikaan yllättäviä etuja suhteessa imeytyvyyteen ja pidennettyyn aktiivisuuteen. Kaavan (I) yhdisteet ovat lipofiilisempiä kuin lähtöyhdisteet ja tämä mahdollistaa nopean ja tehokkaan absorption maha-suo-15 li-alueelta; absorption nopeus voidaan optimoida valitsemalla huolellisesti asyyliryhmä antamaan haluttu tasapaino lipofii-lisyyden ja hydrofiilisyyden välille. Kaavan (I) yhdisteiden lipofiilinen luonne saa myös aikaan molekyylien kyvyn läpäistä solumembraanit helpommin ja johtaa korkeampiin solunsisäisiin 2 0 pitoisuuksiin, aiheuttaen parannetun annos/vaikutus- suhteen.

Esteriyhdisteiden tasainen hydrolyysi takaa jatkuvan pitoisuuden aktiivista yhdistettä solussa ja mahdollistaa täten pitemmät aikavälit annosten välillä, jolloin päästään aikaisemman alan yhdisteiden, kuten AZT:n huomattavasta haitasta.

25

Lopuksi kaavan (I) mukaiset yhdisteet voivat läpäistä veri-ai-voesteen ja mahdollistaa täten neurologisten häiriöiden hoi-*don, joiden on havaittu liittyvän neurotrooppisten, esim. ret-rovirusten, kuten HIV:n ja lentivirusten läsnäoloon (Yarchoan 30 et ai, The Lancet, tammikuu 17, 1987, sivu 132). Tämä on huomattava etu verrattuna vastaaviin substituoimattomiin yhdisteisiin tai muihin virusta vastustaviin yhdisteisiin ja johon ei ole viitattu missään aikaisemmin aikaisemmalla alalla, esimerkiksi EP-A-0 206 497:ssä. On tehty yrityksiä näiden neuro-35 logisten häiriöiden hoitamiseksi AZT:llä, mutta rajoitetulla menestyksellä.

6 93217

Kaavan (I) mukaisesta yhdisteryhmästä erotuslausumilla poissuljettuja yhdisteitä on kuvattu lukuisissa julkaisuissa; kuitenkaan ei ole mitään viittausta, että ne voisivat olla aktiivisia HIV-virusta vastaan tai mitään muuta mistään muusta lää-5 kekäytöstä. Edellä määritellyt kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa siten, että saatetaan yhdiste, jolla on kaava (II)

10 XB

15 [jossa R on kuten on määritetty edellä ja XB on kuten on määritetty edellä X:lle, paitsi että kukin ryhmistä R ja R2 ja/tai R3 voi lisäksi olla suojaryhmä, sillä ehdolla, että ainakin yksi ryhmistä R, R2 ja R3 on vetyatomi] reagoimaan asylointiai-neen kanssa muodostamaan asyyliryhmä R’CO-, R^CO-, R4C0- tai 20 R4OCO-, mitä seuraa, tarvittaessa, mahdollisten suojaryhmien ja/tai asyylisubstituenttien poistaminen, ja haluttaessa kaavan I mukainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

25 Tulisi ottaa huomioon, että kun lähtöaineessa useampi kuin yksi R:sta, R2:sta ja R3:sta on vety, voi tapahtua diasyloitumista tai triasyloitumista.

Yleisesti olemme havainneet, että käytettäessä happoanhydri-30 dejä asylointiaineina R*CO- tai R4CO-ryhmän muodostamiseksi "0-asylointi tapahtuu helpommin kuin N-asylointi, kun taas käytettäessä happohalogenideja, N-asylointi tai jopa N-diasyloin-ti ovat vallitsevia. Kuitenkin N-asyyliryhmät R4CO- voidaan poistaa selektiivisesti, esimerkiksi saattamalla reagoimaan 35 fenolin, kuten p-metyylifenolin kanssa. Mikäli on toivottavaa taata O-asylointi muodostamaan ryhmä R*OCO-, kun R2 ja R3 pysyvät vetyatomeina, on toivottavaa suojata eksosyklinen typpi-atomi ensin, muodostamaan kaavan (I) yhdiste, jossa R2 ja R3 ovat N-suojaryhmiä, jotka poistetaan O-asyyliryhmän lisäämisen 40 jälkeen. Tällaiset suojaryhmät voivat olla tavallisia N-suoja- n 93217 7 ryhmiä käsittäen muut ryhmät R4OCO-, jotka voidaan selektiivisesti poistaa O-asyyliryhmän RkDCO- läsnäollessa. Täten esimerkiksi N-bentsyylioksikarbonyyliryhmää voidaan käyttää eksosyk-lisen aminon suojaamiseksi ja mikäli O-asyyliryhmä R4OCO- ei 5 ole poistettavissa pelkistämällä, esimerkiksi suoraketjuinen alkoksikarbonyyliryhmä, N-bentsyylioksikarbonyyliryhmä voidaan helposti poistaa selektiivisesti käyttäen vetyä ja jalometal-likatalyyttiä, kuten palladiumia.

10 Yleisesti, mikäli useampi kuin yksi R:stä, R2:sta ja R3:sta on vety, asyloitavien yhdisteiden seos voidaan valmistaa. Kuitenkin yksittäiset aineosat voidaan helposti erottaa, esimerkiksi kromatografisesti.

15 Reaktiossa käytettävillä sopivilla asylointiaineilla on kaava Ac-L, jossa L on jättävä ryhmä. Kun asyyliryhmä Ac- johdetaan karboksyylihaposta, ts. sillä on kaava R*-C0- tai R4-C0-, sopiviin asylointiaineisiin kuuluvat happohalogenidit ja happoan-hydridit edullisesti emäksen läsnäollessa; kun asyyliryhmä 20 johdetaan hiilihaposta, ts. sillä on kaava R^O.CO- tai R4.0.C0-, asylointiaineihin kuuluvat haloformaattiesterit ja reaktiiviset hiilihappodiesterit. Emäs, jota käytetään reaktiossa happohalogenidin tai -anhydridin kanssa, voi olla esimerkiksi heterosyklinen emäs, kuten pyridiini tai dimetyyli-25 aminopyridiini. Jälkimmäinen nostaa reaktionopeutta ja sitä voidaan edullisesti käyttää pyridiinin kanssa. Reaktio toteutetaan tavallisesti inertin liuottimen dimetyyliformamidin tai halogenoidun hiilivedyn·, kuten dikloorimetaanin, läsnäollessa.

30 Kaavan (II) lähtöaineet, joissa R, R2 ja R3 ovat kaikki vety- atomeja, ovat hyvin kuvattuja kirjallisuudessa - katso esimerkiksi Lin et ai, J. Med. Chem. 30, 440 (1987).

Farmaseuttisia koostumuksia voidaan formuloida tavallisten 35 menetelmien avulla, jotka ovat tunnettuja alalla, ja niitä voidaan antaa mitä tahansa sopivaa tietä pitkin, esimerkiksi oraalisesti, peräsuolen kautta, vaginaalisesti, laskimonsisäisesti tai lihaksensisäisesti. Esimerkkejä sopivista formuloin- 93217 8 neista ovat tabletit ja kapselit, vesipitoiset formuloinnit laskimonsisäistä injektiota varten ja öljypohjaiset formuloinnit lihaksensisäistä injektiota varten. Sopiva annosalue on alueella 0,1 - 100 mg/kg elopainoa 24 tunnin aikana. Koostu-5 mukset voivat myös sisältää muita aktiivisia virusta vastustavia aineita, esimerkiksi asykloviriä, fosfonoformaattia, suramiinia, Evans Blue'ta, interferoneja tai AZT.

Keksintöä kuvataan seuraavilla esimerkeillä. Capsugel on tava-10 ramerkki.

Esimerkki 1 2'.3'-dideoksi-5'-O-palmitoyylisytidiini

Palmitoyylikloridia (2,80 g, 10,2 mmoolia) lisätään tipoittain 15 30 minuutin aikana sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa on 2',3'-dideoksisytidiiniä (2,11 g, 10 mmoolia) kuivassa 1:1 py-ridiini/N,N-dimetyyliformamidissa (130 ml) 0°C:ssa. Seosta sekoitetaan 30 tuntia. Vettä (20 ml) lisätään ja seos haihdutetaan. Tuote puhdistetaan silikageelipylväässä metanoli/kloro-20 formi/heksaanilla liuottimena.

Esimerkki 2 5'-O-butyryyli-2'.3'-dideoksiadenosiini

Butyryylikloridia (1,09 g, 10,2 mmoolia) lisätään tipoittain 25 30 minuutin aikana sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa on 2',3'-dideoksiadenosiinia (2,45 g, 10 mmoolia) kuivassa 1:1 pyridiini/N,N-dimetyyliformamidissa (100 ml) 0°C:ssa. Seosta sekoitetaan 0°C:ssa 30 tuntia, vettä (20 ml) lisätään ja seos haihdutetaan. Tuote puhdistetaan silikageelipylväässä metano-30 li/kloroformiliuottimilla.

Esimerkki 3 3'-deoksi-5'-O-heksanpyvlitymidiini 3'-deoksitymidiiniä (0,0100 g, 4,4203 x 10"5 moolia) liuotet-35 tiin seokseen, jossa oli pyridiiniä (0,44 ml) ja dimetyyli- formamidia (0,44 ml) (molemmat tislattu kaisiumhydridistä) ja jäähdytettiin 0°C:seen. Heksanoyylikloridia (vasta tislattua, 0,00682 ml, 4,8622 x 10'5 moolia) lisättiin käsipumpulla. Seos- 9321 7 9 ta sekoitettiin 48 tuntia typen paineessa 0°C:ssa, jolloin ohutkerroskromatografia osoitti osittaista konversiota. N,N-dimetyyli-4-aminopyridiiniä (0,0001 g) lisättiin ilman poissaollessa ja seosta sekoitettiin vielä 24 tuntia, jolloin hek-5 sanoyylikloridia (0,00682 ml, 4,8622 x 10'5 moolia) lisättiin. Vielä 24 tunnin kuluttua lisättiin vettä (2 ml) ja liuos haihdutettiin suurtyhjössä. Vettä lisättiin neljä kertaa (4 x 2 ml) ja jokaisen lisäyksen välissä haihdutettiin suurtyhjössä. Aikaansaatu puolikiinteä aine liuotettiin kloroformiin ja 10 pantiin silikageelipylvääseen (E. Merck 9385) ja eluoitiin kloroformilla ja kloroformi:etanolilla 99:1. Otsikkoyhdiste eluoitiin ensin. Saanto 0,0085 g (59,3 %), sp. 94 - 96°C (korjaamaton) .

15 ‘H-NMR (CDCIj 300 MHz) δ: 0,90 (t, 3H, J 6,8 Hz), 1,32 (m, 4H) , I, 66 (m, 2H), 1,83 (m, 1H), 1,95 (s, 3H), 2,05 (m, 2H), 2,37 (t, 2H, J 7,5 Hz), 2,45 (m, 1H), 4,33 (m, 3H), 6,08 (d d, 1H, J, 4,4 Hz, J2 6,70 Hz), 7,40 (s, 1H), 8,45 (bs, 1H).

20 13C-NMR (CDC13 75 MHz) δ: 12,674, 13,879, 22,288, 24,593, 25,919, 31,285, 32,223, 34,183, 64,801, 78,462, 86,180, 110,508, 135,272, 150,163, 163,530, 173,442.

Esimerkki 4 25 3'-deoksi-S'-0'-palmitovylitvmidiini 3'-deoksitymidiiniä (0,0100 g, 4,4203 x 10'5 moolia) liuotettiin seokseen, jossa oli pyridiiniä (0,221 ml) ja dimetyyli-formamidia (0,221 ml) (molemmat tislattiin kaisiumhydridistä) ja jäähdytettiin 0°C:seen. Palmitoyylikloridia (vasta tislat-30 tua, 0,01476 ml, 4,8623 x 10'5 moolia) lisättiin käsipumpulla. Seosta sekoitettiin 4 päivää typen paineessa, jolloin ohutkerroskromatograf ia osoitti osittaista konversiota. Pyridiiniä (0,221 ml) ja dimetyyliformamidia (0,221 ml) (molemmat jäähdytettynä 0°C:seen) lisättiin ja saatua seosta sekoitettiin 35 10°C:ssa 24 tuntia, samalla kun lisättiin vettä (2 ml). Saatu seos haihdutettiin alhaisessa lämpötilassa suurtyhjössä. Vettä lisättiin vielä neljä kertaa (4x2 ml) ja jokaisen lisäyksen välillä haihdutettiin suurtyhjössä. Saatu puolikiinteä aine 93217 10 suspendoitiin kloroformiin ja pantiin silikageelipylvääseen (E. Merck 9385) ja eluoitiin ensin kloroformilla, sitten kloroformi :metanolilla 9:1. Otsikkoyhdiste eluoitiin ensin. Saanto 0,0076 g (34,7 %) sp. 92 - 94°C (korjaamaton).

5 ‘H-NMR (CDC13 300 MHz) δ: 0,88 (t 3H, J 7,1 Hz), 1,25 (m+s 20H), 1,61 (m 2H), 1,83 (m 1H), 1,95 (s 3H), 2,04 (m 2H), 2,37 (t 2H, J 3 Hz), 2,42 (m 1H), 4,32 (m 3H), 6,07 (dd 1H), 7,40 (s 1H), 8,20 (leveä s, 1H).

10 13C-NMR (CDCIj 75 MHz) δ: 12,68, 14,12, 22,69, 24,91, 25,89, 29,15, 29,25, 29,36, 24,46, 29,60, 29,68 (suuri piikki - 5 hiiliatomia), 31,93, 32,23, 78,47, 86,16, 110,48, 135,25, 150,03, 163,35, 173,48.

15

Esimerkki 5 N4,5'- O-dibentsoyyli-2' . 3'-dideoksisytidiini ia I^-bentsoyvli-2' ,3'-dideoksisytidiini 2'3'-dideoksisytidiiniä (0,0200 g, 9,469 x 10'5 moolia) ja N,N-20 dimetyyliaminopyridiiniä (0,0127 g, 10,367 x 10'5 moolia) liuotettiin dikloorimetaaniin (1,0 ml, tislattu kalsiumhydridis-tä) . Bentsoyylikioridia (0,0146 g, 10,367 x 10‘5 moolia) lisättiin käsipumpulla. Saatua seosta sekoitettiin 24 tuntia ennen tislatun veden (2,0 ml) lisäämistä. Täydellisen haihduttamisen 25 (suurtyhjö) jälkeen jäännös kromatografoitiin silikageelipyl-väässä kloroformilla ja kloroformi:etanolilla 9:1. κή,δ'-Ο-άί-bentsoyyli-2',3'-dideoksisytidiini eluoitiin ensin, mitä seurasi N4-bentsoyyli-2',3'-dideoksisytidiini.

30 N4.5 ' -0-dibentsowli-2 ' .3' -dideoksisytidiini

Saanto 0,0144 g (36,4 %) sp. 180 - 190°C (korjaamaton) (ei uudelleenkiteytetty) ‘H-NMR (CDCI3 300 MHz) δ: 1,76 - 1,92 (m, 1H) , 2,04 - 2,16 (m, 35 1H), 2,18 - 2,30 (m, 1H), 2,54 - 2,70 (m, 1H), 4,47 - 4,56 (m, 1H, H4'), 4,56 (leveä d, 2H, H5'), 6,10 (dd, 1H, Hl'), 7,43 (d, 1H, H5), 7,46 - 7,54 (leveä t, 4H, Ph), 7,56 - 7,64 (leveä t, 2H, Ph), 7,86 (leveä d, 2H, Ph), 8,05 (leveä d, 2H, Ph), 8,26 (d, 1H, H6, J 7,46 Hz), 8,59 (leveä, 1H, NH).

9321 7 11 13C-NMR(CDC13, 75 MHz) δ: 25,03, 33,42, 64,73, 80,16, 88,27, 95,90, 127,42, 128,69, 129,06, 129,36, 129,57, 133,16, 133,16, 133,64, 144,19, 162,06, 166,27.

5 I^-bentsovyli^' ,3' -dideoksisytidiini

Saanto 0,0060 g (28,0 %), sp. 202 - 205°C (korjaamaton) (ei uudelleenkiteytetty).

‘H-NMR (CDCIj 300 MHz) δ: 1,85 - 2,05 (m, 2H) , 2,16 - 2,30 (m, 10 1H), 3,78 - 3,88 ja 4,06 - 4,16 (ABX, 2H, H5'), 4,29 (m, 1H, H4'), 6,12 (dd, 1H, Hl'), 7,41 - 7,64 (m, 3H, Ph), 7,92 (leveä d, 2H, Ph), 8,51 (d, H6), 8,52 (leveä, 1H, NH).

1NMR (DMSOd6) ; 300 MHz) δ: 1,72 - 1,90 (m, 2H) , 1,90 - 2,10 (m, 15 1H), 2,35 - 2,48 (m, 1H), 3,55 - 3,65 ja 3,72 - 3,82 (2H, ABX, H5'), 4,12 (m, 1H, H4'), 5,16 (t, 1H, OH), 5,95 (dd, 1H, Hl'), 7,33 (d, 1H, H5), 7,47 - 7,56 (leveä t, 2H, Ph), 7,59 - 7,66 (leveä t, 2H, Ph), 7,59 - 7,66 (leveä t, 1H, Ph), 7,99 (leveä d, 2H, Ph), 8,55 (d, 1H, H6 J 7,38 Hz), 11,22 (s, 1H, NH).

20 13C-NMR (CDC13 + 5 % DMSOd6, 75 MHz) δ: 23,66, 33,37, 62,00, 82,96, 87,82, 95,76, 127,53, 128,53, 132,34, 132,66, 132,95, 145,30, 154,91, 162,19.

25 Esimerkki 6 N4-bentsoyyli-2'.3'-dideoksi-5'-O-palmitoyylisvtidiini N4-bentsoyyli-2',3'-dideoksisytidiiniä (0,0215 g, 6,797 x 103 moolia) liuotettiin seokseen, jossa oli pyridiiniä (0,25 ml) ja dimetyyliformamidia (0,25 mi). N,N-dimetyyliaminopyridiiniä 30 (0,0083 g, 6,797 x 10'5 moolia) ja palmitoyylikloridia (0,0374 g, 1,359 x 10-4 moolia) lisättiin huoneen lämpötilassa. Saatu seos kuumennettiin 60°C:seen ja sitä sekoitettiin tässä lämpötilassa 12 tuntia, jolloin uusi erä palmitoyylikloridia (0,0374 g, 1,359 x 10-4 moolia) lisättiin huoneen lämpötilassa. 35 Saatu seos kuumennettiin 60°C:seen ja sitä sekoitettiin tässä lämpötilassa 12 tuntia, jolloin uusi erä palmitoyylikloridia (0,0374 g, 1,359 x 10"* moolia) ja pyridiiniä (0,25 ml) lisättiin huoneen lämpötilassa. Lämpötila nostettiin taas 60°C:seen ja pidettiin siinä lämpötilassa 8 tuntia. Vettä (2 ml) lisät- 9321 7 12 tiin ja liuottimet poistettiin suurtyhjössä. Saatu puolikiin-teä aine pantiin silikageelipylvääseen ja eluoitiin kloroformilla ja kloroformi:etanolilla 99:1. Tuote eristettiin valkoisena jauheena, joka kontaminoitunut palmitiinihapolla. Ei 5 tehty mitään yritystä palmitiinihapon poistamiseksi tässä vaiheessa. Saanto (sen jälkeen kun ylimäärä palmitiinihappoa oli poistettu 'H-NMR-integroinnista: 0,0199 g (52,8 %). 1HNMR (CDC13, 300 MHz) δ: 1,95 (t, CH3) , 1,2 - 1,6 (m, CH2-alkyyli) , 2,06 - 2,20 (m, 1H), 2,25 - 2,35 (m, 1H), 2,35 - 2,50 (m, 4H), 10 2,60 - 2,75 (m, 1H), 4,40 - 4,58 (m, 3H, H4' ja H5'), 6,15 (dd, Hl'), 7,55 - 7,80 (m, 4H, Ph + H5), 8,05 (leveä d, 2H, Ph), 8,26 (d, 1H, H6) . 13C-NMR (CDC1S, 75 MHz) (näyte sisälsi vapaata palmitiinihappoa) δ: 14,12, 22,69, 24,71, 24,95, 29,09, 29,17, 29,27, 29,36, 29,36, 29,45, 29,48, 29,60, 29,68, 15 (leveä - voimakas resonanssi - monia hiiliatomeja), 31,92, 33,29, 34,06, 34,22, 64,22, 80,13, 88,43, 96,07, 128,15, 128,76, 132,86, 133,13, 144,80, 163,01, 173,43, 179,60.

Esimerkki 7 20 2'3'-dideoksi-5'-0-palmitowlisvtidiini N4-bentsoyyli-2',3'-dideoksi-5'-O-palmitoyylisytidiiniä (0,0199 g, 3,587 x 10‘5 moolia) (hiukan kontaminoitunut palmitiinihapolla) ja p-metyyli fenolia (0,0256 g, 2,367 x 10-* moolia) liuotettiin tolueeniin (0,5 ml, tislattuna natriumista ja 25 bentsofenonista). Saatua liuosta palautusjäähdytettiin 15 tuntia. Tolueeni haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin sili-kageelipylväässä ja eluoitiin kloroformilla, kloroformi:etanolilla 99 :1 ja kloroformi-.etanolilla 9:1. Edellisen vaiheen p-metyylifenolin bentsoaatti ja palmitiinihappokontaminaatio 30 eluoitiin ensin, mitä seurasi p-metyylifenoli, I^-bentsoyyli-2',3'-dideoksi-5'-O-palmitoyylisytidiini ja 2',3'-dideoksi-5'-O-palmitoyylisytidiini. Saanto (2',3'-dideoksi-5'-O-palmitoyylisytidiini) 0,0107 g (66,2 %) sp. 120 - 122°C (korjaamaton) (ei uudelleenkiteytetty) . ‘H-NMR (CDC13 300 MHz) δ: 0,88 (t, 35 CH3) , 1,2 - 1,38 (leveä s, 22H, alkyyliketju), 1,57 - 1,76 (m, 4H), 1,96 - 2,06 (m, 1H), 2,06 - 2,18 (m, 1H), 2,35 (t, CH2-COO), 2,43 - 2,58 (m, 1H), 4,32 - 4,40 (m, 3H, H5'+H4'), 5,0 -6,0 (hyvin leveä 2H, NH2) , 5,67 (d, 1H, H5, J 7,51 Hz), 6,05 93217 13 (dd, Hl'), 7,79 (d, H6, J 7,51 Hz). 13C-NMR (CDC13, 75 MHz) δ: 14,13, 22,69, 24,91, 25,50, 29,16, 29,27, 29,36, 29,47, 29,61, 29,65 ja 29,69 (nämä kaksi resonanssia kuvaavat useita hiili-atomeja) 31,92, 33,16, 34,21, 64,81, 73,99, 79,18, 87,71, 5 92,82, 96,89, 141,09, 155,74, 165,40, 173,49.

Esimerkki 8 3'-deoksi-5'-0-isobutvvlioksikarbonyvlitymidiini 3'-deoksitymidiiniä (0,0100 g, 4,42 x 10'5 moolia) ja N,N-dime-10 tyyliaminopyridiiniä (0,0059 g 4,8 x 10-4 moolia) suspendoitiin kuivaan dikloorimetaaniin (1 ml) ja jäähdytettiin 0°C:seen. Isobutyylikloroformaattia (12,62 μΐ, 8,84 x 10'5 moolia) lisättiin. Saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 11 päivää. Vettä (2 ml) lisättiin. Täydellisen haihduttamisen jäl-15 keen suurtyhjössä jäännös kromatografoitiin silikageelipyl- väässä. Tuote eluoitiin kloroformilla ja kloroformi:etanolil-la = 99:1, saanto 0,0119 g (82,4 %), sp. 128 - 130°C (korjaamaton) (ei uudelleenkiteytetty). 'H-NMR (CDC13 300 MHz) δ: 0,96 (d, 6H, J 6,75 Hz), 1,95 (s, 3H), 1,91 - 2,18 (m, 4H), 2,4 (m, 20 1H), 3,97 (d, 2H, J 6,59 Hz), 4,32 (m, 1H), 4,40 (ABX, 2H), 6,12 (q, 1H) , 7,56 (s, 1H) , 8,47 (leveä s, 1H) . 13C-NMR (CDC13, 75 MHz) δ: 12,51, 18,89, (2 hiiliatomia), 25,40, 27,81, 32,46, 67,73, 74,61, 78,41, 85,97, 110,58, 135,64, 150,22, 155,21, 163,60. MSCI (isobutaani): 327 (M+l, 41,4), 209 (5,3), 202 25 (7,4), 200 (67,0), 169 (16,5), 167 (18,1), 145 (58,4), 127 (100), 83 (24,6).

Esimerkki 9 " ~ N4.5'-O-di(bentsyvlioksikarbonvvli)-2'.3'-dideoksisvtidiini ia 30 N4-bentsyvlioksikarbonyyli-2'.3'-dideoksisvtidiini 2' , 3'-dideoksisytidiiniä (0,0250 g, 1,178 x 10"* moolia) liuotettiin seokseen, jossa oli pyridiiniä (0,25 ml) ja N,N-dime-tyyliformamidia (0,25 ml) ja jäähdytettiin 0°C:seen. Bentsyy-likloroformaattia (0,0603 g, 3,535 x 10-4 moolia) lisättiin 35 käsipumpulla. N,N-dimetyyliaminopyridiiniä (0,0144 g, 1,178 x 10-4 moolia) lisättiin ja saatua liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 12 tuntia. Ohutkerroskromatografia (silikageeli, kloroformi:etanoli 9:1) osoitti osittaista konversiota tässä 14 9321 7 vaiheessa. Seos jäähdytettiin 0°C:seen ja bentsyyliklorofor-maattia (0,0603 g, 3,534 x 10"4 moolia) lisättiin käsipumpulla. Seosta sekoitettiin vielä 24 tuntia huoneen lämpötilassa. Sitten lisättiin vettä (2 ml) ja liuos haihdutettiin suurtyhjös-5 sä. Saatu puolikiinteä aine pantiin silikageelipylvääseen ja eluoitiin kloroformilla ja kloroformi:etanolilla 99:1.

N4-bentsyylioksikarbonyyli-2',3'-dideoksisvtidiini Saanto 0,0385 g (84,9 %) . Lasimainen aine. ‘H-NMR (CDC13 10 300 MHz) <5: 1,82 - 1,98 (m, 2H) , 2,10 - 2,22 (m, 1H) , 2,42 - 2,59 (m, 1H), 3,05 (leveä, 1H, OH), 3,76 ja 3,80 (ABX, 2H, H5' ), 4,24 (m, H4'), 5,17 (s, 2H, 0-CH2-Ph) , 6,06 (dd, 1H,H1'), 7,24 (d, 1H, H5, J 7,57 Hz) 7,93 (leveä, 1H, NH), 8,50 (d, 1H, H, J 7,57 Hz), 13C-NMR (CDC13, 75 MHz) δ: 24,10, 33,37, 62,93, 15 67,85, 82,72, 88,19, 94,26, 128,33, 128,44, 128,64, 134,94, 145,01, 152,28, 155,23, 162,11.

N4,5'-O-di(bentsyylioksikarbonyyli)-2',3'-dideoksisytidiini eristettiin myös pieninä määrinä. Tämä tuote eluoitiin yhdessä 20 monien kontaminanttien ja hajoamistuotteiden kanssa. Lopulta tuote eristettiin huolellisesti kromatografoimalla uudestaan silikageelipylväässä puhtaalla kloroformieluentilla.

N4.5'-O-di(bentsyylioksikarbonyyli)-2' . 3'-dideoksisytidiini 25 Saanto: 0,0075 g (13,2 %) . Lasimainen aine. ’H-NMR (CDC13 300 MHz) δ: 1,64 - 1,82 (m, 1H), 1,92 - 2,08 (m, 1H), 2,08 -2,22 (m, 1H), 2,46- 2,62 (m, 1H), 4,32 - 4,40 (m, 1H, H5'),

4,34 '-'4,52 (ABX, 2H, H4 *) , 5,21 (s, 2H, CHj-0) , 5,23 -(s, 2H, CH2-0), 6,06 (dd, 1H, Hl'), 7,21 (d, H5, J 7,38 Hz), 7,39 (le-30 veä, 10H, 2Ph), 7,5 (leveä, 1H, NH), 8,16 (d, 1H, H6, J

7,38 Hz). 13C-NMR (CDC13, 75 MHz) δ: 24,83, 33,23, 67,67, 67,95, 70,06, 79,51, 88,10, 94,16, 128,36, 128,52, 128,71, 134,86, 144,05, 152,12, 154,93, 162,05.

9321 7 15

Esimerkki 10 5'-O-asetyyli-2'.3'-dideoksisvtidiini ia N4.5'0-diasetyyli-2'.3'-dideoksisytidiini 2',3'-dideoksisytidiiniä (0,0300 g, 1,42 x 10"* moolia) ja N,N-5 dimetyyliaminopyridiiniä (0,0087 g, 7,10 x 10'5 moolia) liuotettiin seokseen, jossa oli dikloorimetaania (l ml) ja pyri-diiniä (1 ml). Saatu seos jäähdytettiin 0°C:seen ja etikkahap-poanhydridiä (0,0290 g, 2,84 x 10-* moolia) lisättiin käsipum-pulla. Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 24 tun-10 tia. Sitten lisättiin vettä (4 ml) ja liuottimet poistettiin haihduttamalla suurtyhjössä. Saatu kiinteä aine kromatografOltiin silikageelipylväässä ja eluoitiin kloroformi:etanolilla 99:1, kloroformi:etanolilla 9:1 ja kloroformi:etanolilla 7:3.

15 5'-O-asetvvli-2'.3'-dideoksisytidiini

Saanto 0,0120 g (31,3 %) öljy, lasimainen aine. ’H-NMR (CDC13 300 MHz) S: 1,60 - 1,78 (m, 1H), 1,94 - 2,20 (m, 2H), 2,12 (s, 3H), 2,40 - 2,58 (m, 1H), 4,32 (m, 3H, H4'+H5'), 5,77 (d, 1H, H5, J 7,20 Hz), 6,05 (dd, 1H, Hl'), 7,40 (d, 1H, H6, J 20 7,20 Hz), 5,0 - 7,3 (hyvin leveä, 2H, NH2) . I3C-NMR (CDC13, 75 MHz, pulssin viive 3s) δ: 20,85, 25,54, 3'. 02, 65,04, 78,98, 87,54, 93,58, 140,61, 155,76, 165,63, 170,63.

N4.5'-O-diasetyvli-2'.3*-dideoksisvtidiini 25 Saanto 0,0268 g (63,9 %) sp. 230 °C (korjaamaton) (ei uudel- leenkiteytetty) . ’H-NMR (CDC13 300 MHz) δ: 1,63 - 1,80 (m, 1H) , 1,96 - 2,09 (m, 1H) , 2,10 - 2,23 1H) , 2,15 (s, 3H) , 2,30 (s, 3H) , 2,48 (m, 1H) , 4,30 - 4", 45 (m, 3H) , 6;06 (dd, 1H,

Hl'), 7,46 (d, 1H, H5 J 7,54 Hz), 8,19 (d, 1H, H6, J 7,54 Hz), 30 NH ei havaittu. ,3C-NMR (CDC13, 75 MHz, pulssin viive 3s) δ: 20,84, 24,85, 33,21, 64,40, 79,91, 88,20, 96,03, 143,96, 155,04, 162,90, 170,49, 171,12.

Esimerkki 11 35 N*.5'-0-dibentsoyyli-2'.3'-dideoksiadenosiini ia 2'.3'-dideok- si-N^N6. 5* -O-tribentsoyyliadenosiini 2' , 3'-dideoksiadenosiinia (0,0250 g, 1,063 x 10^* moolia) liuotettiin seokseen, jossa oli dikloorimetaania (1,0 ml) ja pyri- 9321 7 16 diiniä (0,25 ml) ja jäähdytettiin 0°C:seen. Bentsoyylikloridia (0,0299 g, 2,125 x 104 moolia) lisättiin käsipumpulla ja lämpötila nostettiin huoneen lämpötilaan. Seosta sekoitettiin 24 tuntia, jäähdytettiin uudestaan 0°C:seen ja bentsoyylikloridia 5 (0,0299 g, 2,125 x 104 moolia) lisättiin toiseen kertaan.

Reaktioseosta sekoitettiin vielä 12 tuntia huoneen lämpötilassa. Vettä (4 ml) lisättiin ja liuottimet ja vesi poistettiin haihduttamalla suurtyhjössä. Saatu puolikiinteä aine kromato-grafoitiin silikageelipylväässä ja eluoitiin kloroformilla ja 10 kloroformi:etanolilla 99:1. Kaikki fraktiot eivät sisältäneet puhtaita yhdisteitä ensimmäisen pylvään jälkeen. Epäpuhtaat fraktiot kromatografoitiin toiseen kertaan silikageelipylväässä ja kloroformilla ja kloroformi:etanolilla 99:1 eluoiden.

15 N6.5'-O-dibentsoyyli-2'.3 *-dideoksiadenosiini

Saanto: 0,0387 g (82 %) . Väritön öljy. 'H-NMR (CDC13 300 MHz) δ: 2,17 - 2,37 (m, 2H), 2,57 - 2,71 (m, 1H), 2,73 (m, 1H), 4,48 - 4,68 (ABX+m, 3H, H5'+H4'), 6,37 (dd, 1H, Hl') 7,39 - 7,66 (vaikeasti luettava, 6H, 2PH), 7,87 - 8,06 (vaikeasti 20 luettava 4H, 2Ph), 8,26 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,99 (leveä s, 1H, NH) . i3C-NMR (CDCI3, 75 MHz, pulssiviive 3s) δ: 26,39, 32,34, 65,51, 79,57, 86,23, 127,79, 128,48, 128,88, 129,49, 129,59, 132,77, 133,68, 141,38, 149,40, 151,05, 152,58, 164,46, 166,30.

25 2'.3*-dideoksi-N6. N6.5'-O-tribentsoyyliadenosiini Saanto: 0,0087 g (15 %) , kirkas lasimainen aine. ‘H-NMR (CDC13 300 MHz) δ: 2,14 - 2,34 (m, 2H) , 2,56 - 2,77 (m, 2H)*, 4,52 -4,63 (m, 3H, H4'+H5'), 6,36 (dd, 1H, Hl'), 7,32 - 7,58 (vai-30 keasti luettava, 9H, 3Ph), 7,83 - 7,89 (dd, 4H, 2Ph), 7,98 -8,02 (dd, 2H, lPh), 8,33 (s, 1H), 8,62 (s, 1H). UC-NMR (CDC13, 75 MHz, pulssiviive 3s) δ: 26,13, 32,37, 65,61, 79,56, 86,18, 128,05, 128,51, 128,71, 129,44, 129,66, 132,96, 133,30, 134,03, 143,29, 151,73, 152,03, 152,29, 166,33, 172,28.

35 9321 7 17

Esimerkki 12 5'-O-bentsovyli-2'.3'-dideoksiadenosiini (vaihtoehto A) 2 ' , 3 '-dideoksi-N*,N6, 5'-0-tribentsoyyliadenosiinia (0,0294 g, 5,369 x 10's moolia) ja p-metyylifenolla (0,0290 g, 2,685 x 10^ 5 moolia) liuotettiin tolueeniin (1,0 ml tislattuna natriumista ja bentsofenonista) ja sekoitettiin 50°C:ssa 1 tunti. Lämpötila nostettiin sitten 110°C:seen ja pidettiin siinä 24 tuntia. (Konversio 2',3'-dideoksi-N*,N6,5'-O-tribentsoyyli-2',3'-dide-oksiadenosiinista oli nopea (TLC) ja konversio N*,5'-O-dibent- 10 soyyli-2',3'-dideoksiadenosiinista 5'-0-bentsoyyli-2',3'-dide-oksiadenosiiniksi oli hidas (TLC)). Tolueeni haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin silikageelipylväässä kloroformilla, kloroformi:etanolilla 99:1 ja kloroformi:etanolilla 9:1.

15 Saanto 0,0079 g (43,3 %). Öljy, muodostaa vaahtoa tyhjökuivat-taessa. ‘H-NMR (CDC13 300 MHz) δ: 2,14 - 2,32 (m, 2H) , 2,52 -2,64 (m, 1H), 2,65 - 2,77 (m, 1H), 4,50- 4,66 (m, 3H, H4' ja H5'), 5,66 (leveä s, 1H, NH), 6,31 (dd, 1H, Hl'), 7,40 - 7,47 (m, 2H, Ph), 7,53 - 7,61 (m, 1H, Ph), 7,96 - 8,02 (m, 2H, Ph), 20 8,05 (s, 1H) , 8,34 (s, 1H) . I3C-NMR (CDC13, 75 MHz, pulssiviive 3s) δ: 26,40, 32,38, 65,60, 79,29, 85,84, 120,29, 128,46, 129,55, 129,62, 133,26, 138,80, 149,28, 152,95, 155,34, 166,35.

25 5'-O-bentsowli-2',2'-dideoksiadenosiini (vaihtoehto B) N6,5'-0-dibentsoyyli-2',3'-dideoksiadenosiinia (0,0200 g, 4,510 x 10'5 moolia) ja p-metyyli fenolia (0,0122 g, 1,127 x ΙΟ"4 moolia) liuotettiin tolueeniin (1,0 ml', tislattuna natriumista ja bentsofenonista) ja sitä sekoitettiin 50°C:ssa 1 tunti.

30 Lämpötila nostettiin 110°C:seen, jossa sitä pidettiin 24 tuntia. Tolueeni haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin silikageelipylväässä kloroformilla, kloroformi:etanolilla 99:1 ja kloroformi:etanolilla 9:1.

35 Saanto 0,0064 g (41,8 %) . ('H-NMR- ja 13C-NMR spektritiedostot olivat identtisiä verrattuna 2',3'-dideoksi-N6,N6,5'-O-tribent-soyyliadenosiinin ja p-metyylifenolin reaktiosta saatuihin).

9321 7 18

Esimerkki 13 2 ' . 3 '-dideoksi-N^palmitoyylisvtidiini ia 2 ' . 3 '-dideoksi-N4.5' -O-dipalmitovylisytidiini 2' , 3'-dideoksisytidiiniä (0,005 g, 2,356 x 10'5 moolia) liuo-5 tettiin seokseen, jossa oli pyridiiniä (0,22 ml) ja dimetyy-liformamidia (0,22 ml) ja jäähdytettiin 0°C:seen. Palmitoyyli-kloridia (8 /xl, 2,59 x 10's moolia) lisättiin käsipumpulla.

Sakat muodostuivat välittömästi. Liukoisuuden parantamiseksi lisättiin lisää pyridiiniä (0,22 ml). 48 tunnin sekoittamisen 10 jälkeen lämpötila nostettiin 15°C:seen. 24 lisätunnin jälkeen tässä lämpötilassa palmitoyylikloridia (10 /xl, 3,24 x 10'5 moolia) ja N,N-dimetyyliaminopyridiiniä (katalyyttinen määrä) lisättiin. Reaktioseosta sekoitettiin 4 päivää 0 °C:ssa. Vettä (2 ml) lisättiin ja liuos haihdutettiin suurtyhjössä. Vettä 15 lisättiin neljä kertaa (4x2 ml) haihduttamalla täydellisesti jokaisen lisäyksen jälkeen. Tuotteet eristettiin liekkikroma-tografisesti silikageelillä kloroformilla ja sen jälkeen kloroformi :etanolilla 9:1 eluoiden.

20 2' .3' -dideoksi-N^palmitoyylisytidiini

Saanto: 0,0032 g (30 % valkoinen jauhe. lH-NMR (CDC13 200 MHz) δ: 0,87 (t, 6H, 2 x CH3) , 1,21 - 1,40 (leveä, 24H) , 1,44 - 1,80 (leveä, 4H), 1,80 - 2,00 (m, 2H), 2,10 - 2,25 (m, 1H), 2,30 - 2,42 (t, 4H), 2,43 - 2,60 (m, 1H), 3,81 ja 4,07 (dxAB, 2H 25 H5'), 4,20 - 4,27 (m, 1H, H4'), 6,07 (dd, Hl'), 7,40 (H5), 8,15 - 8,25 (leveä, 1H, NH). 8,37 (d, H6, J 7,32 Hz).

2' . 3r -dideoksi-N4.5* -O-dipalmitovylisytidiini Saanto: 0,0049 g (30 %) valkoinen jauhe.

30

Esimerkki 14 2' . 3'-dideoksi-I^-heksanovyli-sytidiini ia 2' . 3'-dideoksi-N4.5 ' -0-diheksanowlisvtidiini 2', 3'-dideoksisytidiiniä (0,0050 g, 2,356 x 10‘5 moolia) liuo-35 tettiin seokseen, jossa oli pyridiiniä (0,22 ml) ja dimetyyli-formamidia (0,22 ml) ja jäähdytettiin 0°C:seen. Heksanoyyli-kloridia (3,7 μΐ, 2,60 x 10~5 moolia) lisättiin käsipumpulla. Saatua seosta sekoitettiin 0°C:ssa 48 tuntia. Lämpötila nos- 19 93217 tettiin 15 °C:seen ja seosta sekoitettiin 24 tuntia, jolloin heksanoyylikloridia (3,7 μΐ) ja N,N-dimetyyliaminopyridiiniä (katalyyttinen määrä) lisättiin. Saatua liuosta sekoitettiin 0°C:ssa 5 päivää. Liuottimet haihdutettiin sitten suurtyhjös-5 sä. Vettä lisättiin neljä kertaa (4 x 2 ml) haihduttamalla täydellisesti jokaisen lisäyksen jälkeen. Tuotteet eristettiin kromatografisesti silikageelipylväässä kloroformilla ja kloroformi:etanolilla 9:1 eluoiden.

10 2' .3' -dideoksi-r^-heksanoyylisvtidiini

Saanto: 0,0018 g (24 %) valkoisena jauheena. ‘H-NMR (CDC13 200 MHz) Ö: 0,88 (t 3H), 1,15 - 1,40 (m, 4H), 1,55 - 1,75 (m, 2H), 1,85 - 1,98 (m, 2H), 2,10 - 2,25 (m, 2H), 2,41 (t, 2H), 2,4 - 2,6 (m, 2H), 3,93 (dxÄB, J AH4' 2,62 Hz, J BH4' 3,92 Hz, 15 JAB12,00 Hz, 2H), 4,25 (m, 1H, H4'), 6,06 (dd, 1H, Hl'), 7,41 (leveä d, 1H, H5'), MSCI (isobutaani): 310 (M+l, 2,6), 252 (3,3), 250 (4,0), 248 (2,5), 212 (4,8), 211 (12,5), 210 (100,0), 201 (3,1), 199 (4,3), 154 (2,7), 153, (9,8), 152 (5,5), 138 (2,9), 116 (2,4), 113 (3,6), 112 (24,6), 109 (2,6), 20 101 (35,9), 85 (4,3), 83 (9,0).

2 ' , 3 ' -dideoksi-N4^ ' -O-diheksanoyylisvtidiini

Saanto: 0,0031 g (32 %) valkoisena jauheena. 'H-NMR (CDC13 200 MHz) δ: 0,89 (leveä t, 6H, 2-CH3), 1,2 - 1,4 (m, 10H) , 25 1,5 - 1,85 (m, 5H), 1,85 - 2,10 (m, 1H), 2,10 - 2,25 (m, 1H), 2,30 - 2,50 (t, 4H, 2xCH2-CO) , 2,45 - 2,65 (m, 1H) , 4,25 - 4,50 (m, 3H, H4'+H5'), 6,05 (d, Hl'), 8,18 (d, 1H, H6), 8,0 - 8,5 (leveä, 1H, NH) . MSCI (isobutaani): 408 (M+l, 3,5), 311 (1,-0), 310 (2,3), 247 (1,0), 245 (2,9), 233 (1,2), 211 (3,7), 210 30 (11,1), 200 (12,0), 199 (100), 148 (2,5), 147 (22,4), 117 (3,2), 112 (7,6), 99 (9,5), 83 (17,9), 88 (17,0), 81 (6).

Esimerkki 15 N4-bentswlioksikarbonwli-2 ' . 3 ' -dideoksi-5' -O-etyylioksikar-35 bonyylisvtidiini N4-bentsyylioksikarbonyyli-2',3'-dideoksisytidiiniä (0,0358 g, 1,037 x 10^* moolia) liuotettiin tetrahydrofuraaniin (1,0 ml), tislattuna natriumista ja bentsofenonista) ja jäähdytettiin 20 93217 -78°C:seen. Natriumhydridiä (0,0045 g 80 %:sena öljyssä, 1,05 x 104 moolia) lisättiin ja seoksen annettiin lämmetä lämpötilaan. Reaktioseos jäähdytettiin uudestaan 0°C:seen, kun vetykaasun muodostuminen päättyi. Etyylikloroformaattia 5 (0,0111 ml, 1,1403 x 104 moolia (98 %)) lisättiin ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 6 tuntia. Etyylikloroformaattia (0,0111 ml, 1,1403 x 104 moolia) lisättiin kaikki yhdellä kertaa ja sekoittamista jatkettiin vielä 4 tuntia. Kyllästettyä ammoniumkloridia (1 ml) lisättiin ja koko seos haih-10 dutettiin suurtyhjössä. Saatu kiinteä aine (NH4C1 mukaanlukien) panostettiin silikageelipylvääseen ja tuote eluoitiin kloroformi :etanolilla 99:1 ja kloroformi:etanolilla 9:1.

Saanto: 0,0350 g (80,9 %) . Öljy. ^-NMR (CDC1, 300 MHz) δ: 1,34 15 (t, CH3) , 1,70 - 1,86 (m, 1H) , 1,97 - 2,10 (m, 1H) , 2,10 - 2,23 (m, 1H) , 2,48 - 2,62 (m, 1H) , 4,24 (k, CH2-CH2) , 4,30 - 4,50 (m, 3H, H4' +H5' ) , 5,22 (s, CH2-0). 1JC-NMR (CDC13, 75 MHz) Ö: 14,23, 24,81, 33,20, 64,50, 67,36, 67,87, 79,55, 88,06, 94,13, 134,95, 144,05, 152,21, 154,94, 162,09.

20

Esimerkki 16 2'.3'-dideoksi-5'-O-etyylioksikarbonyylisytidiini f^-bentsyylioksikarbonyyli-S'-O-etyylioksikarbonyyli-2',3'-di-deoksisytidiiniä (0,0350 g, 8,387 x 10"5 moolia) lisättiin sus-25 pensioon, jossa oli palladiumia hiilellä (5 % palladiumia, 0,0040 g) etanolissa (1,0 ml). Ilma korvattiin typellä toistuvalla imulla ja typen lisäyksellä. Vetykaasua lisättiin evakuoituun pulloon (15 ml:n pullo) kaasutiiviillä injektioruiskulla (5 ml). Reaktiopulloa ravisteltiin tässä vedyn paineessa 30 (1/3 atmosfääriä) yksi tunti. Ohutkerroskromatografia osoitti substraatin osittaisen kulutuksen ja polaarisemman tuotteen muodostumisen. Reaktio hidastui jonkun ajan kuluttua ja vedyn paine kasvoi 1 atmosfääriin. 30 lisäminuutin kuluttua lisää palladiumia hiilellä lisättiin (0,0200 g) ja pelkistämistä 35 jatkettiin, kunnes koko substraatti oli käytetty (TLC) (2 tuntia) . Liuotin haihdutettiin ja saatu musta (hiili) kiinteä aine sekä suodatettiin että kromatografoitiin silikageelipyl- il 21 93217 väässä. Eluentit olivat kloroformi, kloroformi:etanoli 99:1 ja kloroformi:etanoli 9:1.

Saanto: 0,0080 g (38,9 %) lasimaista ainetta. ‘H-NMR (CDC13 5 300 MHz) δ: 1,33 (t, CH3) , 1,65 - 1,85 (m, 1H) , 1,90 - 2,18 (m, 1H) , 2,40 - 2,55 (m, 1H) , 4,23 (k, £H2-CH3) , 4,28 - 4,43 (m, 3H, H4'+H5'), 5,74 (d, H5, J 7,44 Hz), 6,07 (dd, 1H, Hl'), 7,78 (d, 1H, H6, J 7,44 Hz), 5,2 - 7,3 (hyvin leveä, 2H, NH2) . ,3C-NMR (CDC13, 75 MHz, pulssiviive 3s) ö: 14,24, 25,31, 32,99, 10 64,39, 67,90, 78,68, 87,36, 93,54, 140,90, 154,99, 155,87, 165,63.

Esimerkki 17 5'-0-butyroyvli-2*.3*-dideoksisytidiini ia N*.5'-O-dibutyroyy-15 li-2'.3*-dideoksisytidiini 2' , 3 '-dideoksisytidiiniä (0,0200 g, 9,467 x 10~5 moolia) ja N,N-dimetyyliaminopyridiiniä (0,0116 g, 9,467 x 10'5 moolia) liuotettiin seokseen, jossa oli pyridiiniä (1 ml) ja dikloo-rimetaania (l ml). Saatu seos jäähdytettiin 0°C:seen ja n-voi-20 happoanhydridiä (0,0236 g, 1,420 x 10^ moolia) (95 %) lisättiin injektioruiskulla. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 tuntia, vettä (2 ml) lisättiin. Vesi ja orgaaniset liuottimet poistettiin suurtyhjöhaihduttamalla. Tuotteet puhdistettiin kromatografisesti silikageelipylväässä kloroformi:-25 etanolilla 9:1 eluoiden.

5'-O-butyroyyli-2'.3'-dideoksisytidiini

Saanto: 0,0168 g (47,0 %) . ‘H-NMR (CDC13 100 MHz) δ: 0,96 (t, CH3) , 1,47 - 1,83 (m, 1H) , 1,68 (k, CH2) , 1,83 - 2,20 (m, 2H) , 30 2,20 - 2,67 (m, 1H) , 2,35 (t, CH2) , 4,35 (leveä, 3H, H4'+H5') , 5,76 (d, 1H, H5, J 7,3 Hz), 6,04 (dd, 1H, Hl'), 5,5 - 7,2 (hyvin leveä, 2H, NH2) , 7,73 (d, 1H, H6) .

N4.5'-0-dibutvroyvli-2'.3'-dideoksisytidiini 35 Saanto: 0,0021 g (4,1 %) . Öljy. ‘H-NMR (CDC13 100 MHz) δ: 0,98 (t, CH3) , 1,00 (t, CH3) , 1,7 (2xk, 2-CH2), 2,0 - 2,5 (2xt, 2- CH2), 4,37 (leveä, 3H, H4'+H5'), 6,05 (dd, 1H, Hl'), 7,42 (d, 22 93217 1H, H5, J 7,8 Hz), 8,18 (d, 1H, H6, J 7,8 Hz), 8,0 (leveä, 1H, NH), H2' ja H3' peittyy muista huipuista.

Esimerkki 18 5 2'.3'-dideoksi-5'-O-propiowlisvtidiini ia 2'3'-dideoksi- N4.5' -0-dipropiowlisytidiini 2' , 3'-dideoksisytidiiniä (0,0200 g, 9,467 x 10'5 moolia) ja N,N-dimetyyliaminopyridiiniä (0,0116 g, 9,467 x 10'5 moolia) liuotettiin seokseen, jossa oli pyridiiniä (1 ml) ja dikloo-10 rimetaania (1 ml). Saatu seos jäähdytettiin 0°C:seen ja pro-pionihappoanhydridiä (0,0185 g, 1,42 x 10~* moolia) lisättiin käsipumpulla. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 14 tuntia, vettä (2 ml) lisättiin. Vesi ja orgaaniset liuottimet poistettiin haihduttamalla suurtyhjössä. Tuotteet puhdistet-15 tiin kromatografisesti silikageelipylväässä kloroformi:-etanolilla 9:1 eluoiden.

2 ' . 3 ' -dideoksi-I^-S' -O-dioropioyylisytidiini

Saanto: 0,0132 g (43,1 %) . Öljy. 'H-NMR (CDC13 100 MHz) δ: 1,19 20 (t, 2CH3) , 1,43 - 2,78 (monia multippeleitä, 4H, H2'+H3'), 2,46 (2xk, 2CH2) , 4,38 (leveä, 3H, H4'+H5'), 6,60 (dd, 1H, Hl'), 7,44 (d, 1H, H5, J 7,3 Hz), 6,19 (d, 1H, H6, J 7,3 Hz), 9,0 (leveä, 1H, NH).

25 2 ' . 3 '-dideoksi-5'-O-propioyylisytidiini

Saanto: 0,0085 g (33,5 %) . Öljy. ^-NMR (CDC13 100 MHz) δ: 1,18 (t, CH3) , 1,43 - 2,70 (monia multippeleitä 4H, H2'+H3'), 2,40 (k, CH2) , 4,33 (leveä, 3H, H4'+H5'), 5,73 '(d, 1H, H5, J

7,8 Hz), 6,50 (dd, 1H, Hl.'), 7,79 (d, 1H, H6, J 7,8 Hz), 5,0 -30 7,3 (hyvin leveä, 2H, NH2) .

Farmaseuttinen esimerkki A

Kapseleiden valmistus oraalista käyttöä varten 5'-O-butyryyli-2',3'-dideoksiadenosiini 50 mg 35 Amylum maydis q.s.

Jauhe sekoitettiin ja täytettiin koviin gelatiinikapseleihin (Capsugel koko 00).

il 93217 23

Farmaseuttinen esimerkki B Veteen valmistus N6,5'-O-dibentsoyyli-2',3'-dideoksiadenosiini 1 g nestemäinen parafiini 100 g 5 valkoinen pehmeä parafiini 1000 g:ksi

Valkoinen pehmeä parafiini sulatettiin ja lisättiin nestepara-fiiniin ja sekoitettiin kunnes seos jäähtyi. N6, 5'-O-di-bent-soyyli-23'-dideoksiadenosiini kuivajauhettiin osan kanssa 10 perustaa ja lisättiin asteittain jäljelle jäänyt perusta. Voide täytettiin lakattuihin alumiiniputkiin (20 g) ja suljettiin. Voide sisälsi 0,1 % N*,5'-O-dibentsoyyli-2',3'-dideok-siadenosiinia.

15 Farmaseuttinen esimerkki C

Suspensio ruoansulatuskanavan ulkopuolista antomuotoa varten 2',3'-dideoksi-5'-O-palmitoyylisytidiini 200 g polysorbaatti 80 3 g sorbitoli 400 g 20 bentsyylialkoholi 8 g vesi 1000 mlrksi IM HC1 q.s.

Polysorbaatti 80, sorbitoli ja bentsyylialkoholi liuotettiin 25 500 ml:aan tislattua vettä. 2',3'-dideoksi-5'-O-palmitoyyli sytidiini seulottiin 0,15 mm:n seulan läpi ja dispergoitiin liuokseen voimakkaasti sekoittaen. pH säädettiin arvoon 4,5 lisäämällä tipoittain IM HC1. Vettä lisättiin 1000 ml:ksi, suspensio täytettiin 1 ml:n ampulleihin. Ampullit steriloitiin 30 säteilyllä. Jokainen ampulli sisälsi 200 mg 2',3'-dideoksi-5- O-palmitoyylisytidiiniä.

24 93217

Farmaseuttinen esimerkki D

Tablettien valmistus grammaa N4,5'-O-diasetyyli-2',3'-dideoksisytidiini 200 laktoosi 85 5 polyvinyylipyrrolidoni 5 tärkkelys 42 talkkijauhe 15 magnesiumstearaatti 3 10 N4,5'-O-diasetyyli-23'-dideoksisytidiini ja laktoosi seulot tiin 0,15 mm:n seulan läpi ja sekoitettiin yhdessä 10 minuuttia. Sekoitettu jauhe kostutettiin vesipitoisella polyvinyyli-pyrrolidoniliuoksella. Massa granuloitiin ja kuivattu (40°C) granulaatti sekoitettiin tärkkelyksen, talkkijauheen ja mag- 15 nesiumstearaatin kanssa. Granulaatti puristettiin tableteiksi. Tabletin läpimitta oli 11 mm, tabletti painoi 350 mg ja jokainen tabletti sisälsi 200 mg N4, 5'-O-diasetyyli-2', 3' -dideoksisytidiiniä.

20 Farmaseuttinen esimerkki E

Suspension valmistus peräsuolen sisäistä antomuotoa varten Metyyliparahydroksibentsoaattia (70 mg) ja propyyliparahydrok-sibentsoaattia (15 mg) liuotettiin veteen (100 ml) 90°C:ssa. Jäähdyttämisen jälkeen 30°C:seen lisättiin metyyliselluloosaa 25 (2 g) ja seosta ravisteltiin 3 tuntia. 1 g N4-bentsoyyli-2' , 3'- dideoksisytidiiniä seulottiin 0,15 mm:n seulan läpi ja disper-goitiin liuokseen voimakkaasti sekoittaen. Suspensio täytet-~ trin 100 ml:n putkiloon. Suspensio sisälsi 10 mg I^-bentsoyyli-2',3'-dideoksisytidiiniä/ml.

30

II

25 93217

Farmaseuttinen esimerkki F

Orgaaninen valmistus grammaa 2 ' , 3 ' -dideoksi-I^-heksanoyylisytidiini 10 karboks imetyyliselluloosa l,5 5 sorbitoli 200 natriumbentsoaatti 1,0 appelsiiniesanssi 0,3 aprikoosiesanssi 0,7 etanoli 50 10 vesi 236,5

Karboksimetyyliselluloosa, sorbitoli ja natriumbentsoaatti liuotettiin veteen sekoittaen 2 tuntia. Esanssien liuos etanolissa lisättiin. 2' , 3'-dideoksi-N’-heksanoyylisytidiini seulot-15 tiin 0,15 mm:n seulan läpi ja dispergoitiin liuokseen voimakkaasti sekoittaen. Suspensio (10 g) täytettiin 20 ml:n putkiloon. Jokainen putkilo sisälsi 200 mg 2',3'-dideoksi-N4-heksanoyylisytidiiniä.

20 Farmaseuttinen esimerkki G

Injektoitavan liuoksen valmistus 10 mg 5'-O-asetyyli-2',3'-dideoksisytidiiniä liuotettiin 10 ml:aan 0,9-%:sta natriumkloridia. pH säädettiin 4,5:een IN HCl:llä. Liuos steriilisuodatettiin ja täytettiin 10 ml:n am-25 pulleihin. Liuos sisälsi 1 mg 5'-O-asetyyli-2',3'-dideoksi-sytidiiniä/ml.

Farmaseuttinen esimerkki H Tablettien valmistus (kontrolloitu 30 vapautusformulointi) grammaa 2',3'-dideoksi-5'-O-etyylioksikarbonyyli-sytidiini 500 hydroksipropyylimetyyliselluloosa 120 (Methocel K15) 35 laktoosi 45

Povidoni 3 0 magnesiumstearaatti 5 9321 7 26 2',3'-dideoksi-5'-O-etyylioksikarbonyylisytidiiniä, hydroksi-propyylimetyyliselluloosaa ja laktoosia sekoitettiin yhdessä 20 minuuttia ja granuloitiin Povidoni-liuoksella. Magnesium-stearaatti lisättiin ja seos puristettiin tableteiksi. Table-5 tin läpimitta oli 13 mm, tabletin paino oli 700 mg ja jokainen tabletti sisälsi 500 mg 2',3'-dideoksi-5'-O-etyylioksikarbo-nyylisytidiiniä.

il

Claims

93217

1. Menetelmä terapeuttisesti aktiivisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava

5 X RO-v^O—1 v_y (i> 10 jossa R on vetyatomi tai fysiologisesti hyväksyttävä asyyli-ryhmä, jolla on kaava R'.CO- tai R1.0.CO-, R1 on C, - C20-alkyyl i, fenyyli (C,-C4) alkyyli tai fenyyli, ja X on

15 M* nr2r3 nr2r3 ' CXr - 1. i 20 tai Olj ; 25 1 | joissa R2 ja R3, jotka voivat olla samoja tai erilaisia, ovat kumpikin vetyatomi tai fysiologisesti hyväksyttävä asyyliryh-mä, jolla on kaava R4.CO- tai R4.O.CO-, joissa R4 on C,-C20-al-- 30 kyyli, f enyyli (C,-C4) alkyyli tai fenyyli, sillä ehdolla, että 1. ainakin toisen ryhmistä R ja R2 on oltava asyyliryhmä, 2. kun R on vetyatomi ja X on sytosiiniryhmä, jossa R2 on ryhmä R4.C0-, niin R3 ei ole vetyatomi, 35 3) kun R on asetyyliryhmä, niin X ei ole tyrniiniryhmä, 4. kun R on bentsoyyliryhmä, niin X ei ole tymiiniryhmä eikä N-substituoimaton sytosiiniryhmä, ja 5. kun R on bentsoyyliryhmä, niin X ei ole hypoksantiiniryh-mä, 93217 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että saatetaan yhdiste, jolla on kaava (II) *°xy 10 [jossa R on kuten on määritetty edellä ja XB on kuten on määritetty edellä X:lle, paitsi että kukin ryhmistä R ja R2 ja/tai R3 voi lisäksi olla suojaryhmä, sillä ehdolla, että ainakin yksi ryhmistä R, R2 ja R3 on vetyatomi] reagoimaan asylointiai-15 neen kanssa muodostamaan asyyliryhmä R*CO-, R’OCO-, R4CO- tai R40C0-, mitä seuraa, tarvittaessa, mahdollisten suojaryhmien ja/tai asyylisubstituenttien poistaminen, ja haluttaessa kaavan I mukainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi. 20

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R2 ja R3 ovat vetyatomeja ja R on ryhmä R'.O.CO-, jossa R1 on Ci-C20-al-kyyli, fenyyli (C,-C4) alkyyli tai fenyyli. 25

3. Patenttivaatimuksen l mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R2 on ryhmä, jolla on kaava R4.CO- tai R4.O.CO-, joissa R4 on ^-Ο20-alkyyli, fenyyli (Cj-C4)alkyyli tai fenyyli, R3 on vetyatomi tai 3. ryhmä, kuten on määritetty R2:lle, ja R on vetyatomi tai ryhmä, jolla on kaava R'.CO- tai R’.O.CO-, joissa R1 on C,-C20-alkyyli, fenyyli (C,-C4) alkyyli tai fenyyli. n 93217