FI117758B - Förfarande för producering av ett vaccin innehållande försvagat varicella zoster virus - Google Patents

Claims (8)

1. Förfarande för framställning av levande varicella zoster virus (VZV) vaccin, kännetecknat av att 5 man a. odlar celler som är mottagliga för VZV-infek-tion, och som är valda bland diploida celler av mänska, tili konfluenstillständ i en kultur bestäende av ett lager under näringsbetingelser där det finns tillräckligt 10 med näring för att garantera cellreplikation tili konflu- enstillständ, och tillsätter en disackarid som inte me-taboliseras; b. infekterar celler som odlats närä konfluenstillständ enligt steg a med celler som infekterats av VZV; 15 c. bibehäller den VZV-infekterade odlingen i ett rikligt näringstillständ i ungefär 22 - 96 timmar och tar den tillvara da den infektiösa VZV-produktionen kul-minerar; d. tvättar den VZV-infekterade odlingen med en fy- 20 siologisk lösning innan man tar tillvara de VZV-infekterade cellerna; „ e. tar tillvara de VZV-infekterade cellerna i en • · • ]' minimal volym av en stabiliserande lösning och antingen *·1 1 söndrar cellerna genast eller fryser ner cellerna för se- 25 nare söndring; Φ · ·.· · f. söndrar de VZV-infekterade cellerna för att op- βι1ϊ1 timalt frigöra tili cellerna anknutna VZV, och avlägsnar ·1·1: cellrester för att erhälla ett cellfritt VZV preparat.

2. Förfarande enligt patentkrav 1, känneteck- . 30 n a t av att näringsbetingelserna i steg a antingen inne- • · · t···, haller en stor volym minimalt medium eller en mindre volym • · *!' rikt medium.

3. Förfarande för att framställa ett levande, för- svagat, cellfritt varciella zoster virus (VZV) vaccin, 35 kännetecknat av att man • · · • m « • · · • ·· • » 53 11 7758 a. odlar celler som är mottagliga för VZV-infektion till konfluenstillstand, varvid odlandet omfat-tar: 1. en cellympningfas, 2. en cellodlingsfas i en volym av ett medium som är tillräckligt för att garantera cellreplikation till konfluenstillstand, och 3. en preinfektionsfas där cellerna exponeras för en icke-giftig, icke-metaboliserbar disackarid; 10 b. infekterar cellerna som odlats närä konfluens tillstand enligt steg a med celler som infekterats av för-svagat VZV, c. bibehaller den VZV-infekterade odlingen i en stor volym av minimalt medium eller en mindre volym rikt 15 medium i 22 - 96 timmar tills VZV-produktionen kulminerar; d. tvättar den VZV-infekterade odlingen med en fy-siologisk lösning fore tillvaratagandet; e. tar tillvara den VZV-infekterade odlingen genom att 1. avlägsna vätska, 2. tillsätta en minimal volym av en stabiliserande .. lösning, • 3. skrapa eller kemiskt frigöra de VZV-infekterade • · · *·' * cellerna, * 4. eventuellt frysa ner de frigjorda VZV-infek- • * : terade cellerna vid ca -70 °C; ..*♦* f. söndrar de frigjorda VZV-infekterade cellerna ΓΓ: för att optimalt frigöra cellbundet VZV, och avlägsnar cellrester, och eventuellt lyofiliserar de cellfria VZV . 30 eller förvarar dem i flytande frusen form.

• · · .···, 4. Förfarande enligt patentkrav 1 eller 3, kän- • · ·' netecknat av att cellerna som är mottagliga för VZV- * * infektion är MRC-5-celler, VZV är Oka-stammen av försvagat *’*· varciella zoster virus, odlingstemperaturen är 30 - 37 °C, 35 och disackariden är sackaros som tillsätts i en koncentra- • · · .·. j tion av ca 20 - 60 mM. « · · • ♦ 54 1 1 7758

5. Förfarande enligt nagot av patentkraven 1-4, kännetecknat av att mediet är SRFE-2, eventuellt be-rikat med ca 0,02 - 0,4 mg/ral sojalipider, och viruset frigörs frän cellerna genom sonikering eller DOUNCE homo- 5 genisering eller bäda.

6. Förfarande enligt patentkrav 3 för framställ-ning av levande, försvagat, cellfritt varicella zoster virus (VZV) vaccin, kännetecknat av att man: a. odlar MRC-5 celler tili konfluenstillständ, 10 varvid odlandet omfattar: 1. en cellympningsfas i EBME, 2. en cellodlingsfas i SFRE-2 som berikats med ca 0,2 mg/ml sojalipider, börjande frän ca 3 dygn efter cell-ympningen, 3. en preinfektionsfas där MRC-5-cellerna expone- ras för 20 - 50 mM sackaros i ca 24 - 96 timmar före infektion; b. infekterar cellerna som odlats närä konfluenstillständ enligt steg a med försvagade VZV-infekterade

20 MRC-5-celler; c. bibehäller den VZV-infekterade odlingen i ett ,, rikligt naringstillständ i ca 37 - 96 timmar och tar tili- • · vara den dä VZV-produktionen kulminerar; * · · *·1 1 d. tvättar odlingen med f osfatbuf f rad saltlösning M.1 25 som eventuellt berikats med 1 - 100 mM NH4C1 eller kloro- * · : kin; "1 e. tar tillvara de VZV-infekterade MRC-5-cellerna 4 t · · genom att: 1. avlägsna vätska; ..1. 30 2. tillsätta en minimal volym av stabiliseringsme- • · 4 .···. del som eventuellt innehäller ca 1 - 100 mM NH4C1 eller • · klorokin ca 230 μΜ; • 1 3. skrapa cellerna eller frigöra cellerna kemiskt, * 4. eventuellt frysa ner de frigjorda VZV-infek-35 terade cellerna vid -70 °C; • · · • · » 4 · • · · 55 11 7758 f. söndrar de frigjorda VZV-infekterade cellerna genom 1. DOUCE-homogenisering, 2. genom att bilda pellets av resterna och halla kvar supernatanten, 3. sonikera pel-leten och bilda nya pellets, och 4. kombinera supernatan-5 terria frän stegen f-2 och f-3; g) späder ut produkten frän steg f i ett stabi-liseringsmedel och fyller produkten i enhetsdoser för lyo-filisering och lagring vid 4 °C eller lägre sä att minst ca 1000 plackbildande enheter (PFU) finns per dos vid se-10 nare användning.

7. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-5, kännetecknat av att den fysiologiska lösningen i steg d innehäller ett lysosomotropiskt ämne valt bland amraoni-umklorid och klorokin. 15

8. Förfarande enligt nägot av de föregäende pa tentkraven, kännetecknat av att infektionen med VZV-infekterade celler i steg b ger en infektionsfaktor som är 1:125 eller större. . : *· • * • · · * ! 1 1 • * · ft ft · • · * • # * • « · * · * ; • · • * · • · · • · · * • · ft ft · · · • · · • · · • · · • · * ··· * * · ft·*'.' ft ♦ ft · ft * ft • • ft · · ft ft ft · ft • · ft ft · ft · ft ft ft • ft* ft · ft • · ft · ft ft ft « ft ft • ·