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ES2986970T3 - Conjugados de biomoléculas - Google Patents

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ES2986970T3
ES2986970T3 ES21167338T ES21167338T ES2986970T3 ES 2986970 T3 ES2986970 T3 ES 2986970T3 ES 21167338 T ES21167338 T ES 21167338T ES 21167338 T ES21167338 T ES 21167338T ES 2986970 T3 ES2986970 T3 ES 2986970T3
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ES
Spain
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formula
mmol
ethoxy
group
acid
Prior art date
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Active
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ES21167338T
Other languages
English (en)
Inventor
Eric Schwartz
Laura Akullian D'agostino
Hernan Cuervo
Wesley Austin
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Celgene Corp
Original Assignee
Celgene Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Abstract

La presente invención se refiere a conjugados de biomoléculas que comprenden una biomolécula en la que al menos un aminoácido no natural (NNAA) es parte integral de la estructura de la biomolécula y en la que el NNAA es un punto de unión de un enlazador al que se une una carga útil, en particular un agente citotóxico. Más específicamente, esta invención se refiere a conjugados de agentes de unión a células y productos de liberación activa que comprenden agentes citotóxicos en los que los conjugados se producen por medio de una reacción de cicloadición. Se proporcionan métodos de producción, composiciones farmacéuticas y métodos de uso. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

d e s c r ip c ió n
Conjugados de biomoléculas
Referencia cruzada con las solicitudes relacionadas
Se reivindica el beneficio de las solicitudes provisionales de los Estados Unidos número de serie 62/087,369, presentada el 4 de diciembre de 2014.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a conjugados de biomoléculas que comprenden una biomolécula en donde al menos un aminoácido no natural (NNAA) es parte integral de la estructura de la biomolécula y en donde el NNAA es un punto de unión de un enlazador al que se le aplica una carga útil, particularmente se adjunta un agente citotóxico. Esta invención se refiere además a conjugados de agentes de unión celular y agentes citotóxicos en donde los conjugados se producen por medio de una reacción de cicloadición. Se proporcionan métodos de producción, composiciones farmacéuticas y métodos de<uso>.
El alcance de la invención es definido por las reivindicaciones. Cualquiera de las referencias en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para usar en un método para el tratamiento del cuerpo humano<o>animal mediante terapia.
Antecedentes de la invención
Las terapéuticas con anticuerpos de próxima generación (NGA) con modificaciones en la arquitectura de los anticuerpos representan un área clave de la investigación y el desarrollo de anticuerpos monoclonales (mAb). La oncología es el foco principal, con aproximadamente el 50 % de la cartera de mAb oncológicos que consiste de NGA. Syed, B.A., y otros, Next-Generation Antibodies, Nature Reviews Drug Discovery, 13:413 (2014). L<os>conjugados anticuerpo-fármaco (ADC), I<os>más destacados de las nuevas plataformas de tecnologías de anticuerpos, generalmente comprenden un agente citotóxico unido a un mAb mediante enlazadores químicos. Al ofrecer suministro dirigido de agentes quimioterapéuticos directamente al tejido canceroso, I<os>ADC pueden aumentar la eficacia clínica de I<os>mAb y permitir el despliegue de citotoxinas que son demasiado potentes para la administración sistémica. El primer producto ADC, gemtuzumab ozogamicina (MYLOTARG®; Wyeth), un mAb específico contra CD33 enlazado a calicheamicina para el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (AML), fue aprobado en 2000, pero retirado en 2010 por motivos de seguridad. Han surgido nuevas plataformas para el desarrollo de ADC, tal como la plataforma de carga útil de anticuerpos dirigidos (TAP; Seattle Genetics e ImmunoGen). A finales de 2011, brentuximab vedotin (ADCETRIS®; Seattle Genetics), un mAb específico de CD30 enlazado al agente antimitótico monometil auristatina E (MMAE) para el tratamiento del linfoma no Hodgkin (NHL), se convirtió en el primero de I<os>nuevos ADC en obtener la aprobación de la Administración de Alimentos y Fármacos de Estados Unidos (FDA). La segunda aprobación fue adotrastuzumab-emtansina (KADCYLA®; Genentech/Roche) a principios de 2013. Ado-trastuzumab-emtansina y el mAb pertuzumab (PERJETA®; Roche (aprobado en 2012)) se desarrollaron como extensiones de línea de trastuzumab (HERCEPT<i>N®; Roche), dirigido a HER2 (también conocido como ERBB2) con diferentes modos de acción; PERJETA® inhibe la dimerización de HER2-HER3, mientras que ado-trastuzumab-emtansina suministra una carga útil citotóxica a las células.
Se han enlazado químicamente moléculas citotóxicas, radionúclidos y ciertos fármacos quimioterapéuticos a anticuerpos monoclonales que se unen a antígenos de superficie celular específicos de tumores<o>asociados a tumores. Ver, por ejemplo, I<os>documentos WO 00/02587, WO 02/060955, WO 02/092127; US 2014/0051836; y las patentes de Estados Unidos 8198417, 8012485, 5475092, 6340701, y 6171586.
L<os>procesos de desarrollo de mAb existentes utilizan habitualmente técnicas tales como la ingeniería de bisagras y la maduración por afinidad. Sin embargo, es un desafío mejorar la eficacia y minimizar I<os>efectos secundarios indeseables de la terapia inmunoconjugada.
Resumen de la invención
La presente invención se define por las reivindicaciones adjuntas.
La presente invención se refiere a:
(1) Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en la fórmula 13
y la fórmula 14
(2) un conjugado de fórmula 111
Fórmula III
en donde:
CB es un agente aglutinante celular;
M es un aminoácido no natural;
A' es
como se muestra en el compuesto de la fórmula 13 e 14 de acuerdo con la reivindicación 1;
D es
E se selecciona del grupo que consiste en
y
m es 1;
(3) un proceso para preparar un conjugado de Fórmula 111, el proceso comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de Fórmula I con un compuesto de Fórmula II
Fórmula I Fórmula II Fórmula III en donde
La Fórmula I es la Fórmula 13<o>14 como se definió anteriormente,
con referencia a la Fórmula II, CB es un agente aglutinante celular; M es un aminoácido no natural; T es un grupo azida; y
con referencia a la Fórmula III, A', E y D son como se definieron en (2) anteriormente;
(4) una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un conjugado de acuerdo con (3) anterior y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable;
(5) un conjugado de acuerdo con (3) anterior para usar en el tratamiento de un trastorno en un mamífero.
(6) un conjugado para el<uso>de acuerdo con (5), en donde el trastorno se selecciona del grupo que consiste en tumores malignos, enfermedades autoinmunitarias, rechazos de injertos, enfermedad de injerto contra huésped, infecciones virales, infecciones por microorganismos e infecciones por parásitos.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 ilustra un ejemplo de preparación de un compuesto de Fórmula I al formar primero un grupo enlazador amida seguido de una extensión del enlazador (el compuesto no está abarcado por las reivindicaciones adjuntas). La Figura 2 ilustra un ejemplo de preparación de un compuesto de Fórmula I y los intermediarios correspondientes (el compuesto no está abarcado por las reivindicaciones adjuntas).
La Figura 3 muestra la preparación de un intermediario en donde un alquino deformado se conecta a un fragmento de un enlazador.
La Figura 4 describe la preparación de un compuesto de Fórmula I al formar primero un grupo enlazador amida seguido de la extensión del enlazador (el compuesto no está abarcado por las reivindicaciones adjuntas).
La Figura 5 describe la preparación de un intermediario en donde un alquino deformado se conecta a un enlazador. La Figura 6 ilustra una reacción de cicloadición 1,3-dipolar.
La Figura 7 ilustra esquemáticamente los enlaces amida usados para unir agentes citotóxicos.
La Figura 8 muestra un ejemplo de NNAA.
La Figura 10 ilustra un ejemplo de esquema sintético para un compuesto de la presente invención. La Figura 16 ilustra un ejemplo de esquema sintético para un compuesto de la presente invención. La Figura 17 ilustra un ejemplo de esquema sintético para un compuesto de la presente invención. Descripción detallada de la invención
A menos que se defina de cualquier otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente descripción tienen el mismo significado que el que se conoce comúnmente por el experto en la técnica a la que pertenece la invención.
Las terapéuticas anticancerosas dirigidas descritas en la presente descripción están diseñadas para reducir las toxicidades no específicas y aumentar la eficacia con relación a la quimioterapia contra el cáncer convencional. Este enfoque se materializa en la poderosa capacidad de direccionamiento de los anticuerpos monoclonales para suministrar específicamente terapéuticas conjugadas altamente potentes a una célula que presenta antígenos específicos del cáncer<o>asociados al cáncer. Las cargas útiles, particularmente I<os>agentes citotóxicos, se acoplan a moléculas dirigidas tales como anticuerpos<o>ligandos que se unen con un alto grado de especificidad a las células cancerosas para formar compuestos denominados en la presente descripción conjugados de biomoléculas (conjugados)<o>conjugados anticuerpo-fármaco (ADC)<o>inmunoconjugados. L<os>conjugados descritos en la presente descripción deberían ser menos tóxicos porque dirigen un agente citotóxico a células, por ejemplo células cancerosas de la sangre, que presentan<o>sobreexpresan de cualquier otra manera el antígeno<o>receptor de superficie celular particular.
Se debe entender que en la siguiente descripción detallada y las reivindicaciones adjuntas, las abreviaturas y nomenclatura empleadas son aquellas que son fundamentalmente estándar en química.
A menos que se indique de cualquier otra manera, I<os>siguientes términos y frases usados en la presente descripción tienen las siguientes definiciones: "Alquilo" es un resto hidrocarbonado Cl-C18 que contiene átomos de carbono normales, secundarios, terciarios<o>cíclicos. L<os>ejemplos de radicales alquilo incluyen restos hidrocarbonados C1-C8 tales como: metilo (Me, -CH3), etilo (Et, -CH2CH3), 1 -propilo (n-Pr, n-propilo, -CH2CH2CH3), 2-propilo (i-Pr, i-propilo, -CH(CH3)2), 1 -butilo (n-Bu, n-butilo, -CH2CH2CH2CH3), 2-metiM -propilo (<í>-B<u>, i-butilo, -CH2CH(CH3)2), 2-butilo (<s>-B<u>, s-butilo, -CH(CH3)CH2CH3), 2-metil-2-propilo (t-Bu, t-butilo, -C(CH3)3), 1-pentilo (n-pentilo, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-pentilo (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-pentilo (-CH(CH2CH3)2), 2-metil-2-butilo (— C(CH3)2CH2CH3), 3-metil-2-butilo (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-metil-1-butilo (—CH2CH2CH(CH3)2), 2-metil-1-butilo (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-hexilo (— CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-hexilo (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-hexilo (—CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-metil-2-pentilo (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-metil-2-pentilo (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-metil-2-pentilo (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-metil-3-pentilo (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-metil-3-pentilo (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-dimetil-2-butilo (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-dimetil-2-butilo (-CH(CH3)C(CH3)3, 1-heptilo, 1-octilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicioheptilo y ciclooctilo. Un grupo alquilo puede estar sustituido<o>no sustituido.
"Alquenilo" es un resto hidrocarbonado C2-C18 que contiene átomos de carbono normales, secundarios, terciarios<o>cíclicos con al menos un sitio de insaturación, es decir, un doble enlace sp2 carbono-carbono. L<os>ejemplos de radicales alquenilo incluyen restos de hidrocarburos C2-C8 tales como: etileno<o>vinilo (-CH=CH2), alilo (-CH2CH=CH2), 1 -ciclopent-1-enilo, 1-ciclopent-2-enilo, 1-ciclopent-3-enilo, 5-hexenilo (-CH2CH2CH2CH2CH=CH2), 1 -ciclohex-1-enilo, 1-ciclohex-2-enilo y 1-ciclohex-3-enilo. Un grupo alquenilo puede estar sustituido<o>no sustituido.
"Alquinilo" es un resto hidrocarbonado C2-C18 que contiene átomos de carbono normales, secundarios, terciarios<o>cíclicos con al menos un sitio de insaturación, es decir, un triple enlace sp carbono-carbono.
L<os>ejemplos de radicales alquinilo incluyen restos hidrocarbonados C2-C8 tales como acetilénico (—C=CH) y propargilo (-CH2C=CH). Un grupo alquinilo puede estar sustituido<o>no sustituido.
"Amino" está sustituido<o>no sustituido a menos que se indique de cualquier otra manera. Un grupo amino puede estar sustituido con uno<o>dos sustituyentes seleccionados de hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilalquilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo, arilo sustituido<o>no sustituido, aminoalquilo, acilo, por ejemplo formilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alquilsulfonilo<o>arilsulfonilo, y es preferentemente amino, metilamino, dimetilamino, propilamino, bencilamino, hidroxietil-metil-amino, di(hidroxietil)amino, dimetilaminoetilamino, acetilamino, acetil-metil-amino, benzoilamino, metilsulfonilamino<o>fenilsulfonilamino, especialmente amino<o>dimetilamino.
"Arilo" significa cualquier grupo aromático basado en carbono, que incluye benceno, naftaleno, fenilo, bifenilo y fenoxibenceno. Un grupo arilo puede estar sustituido<o>no sustituido. El término "heteroarilo" se define como un grupo que contiene un grupo aromático que tiene al menos un heteroátomo incorporado dentro del anillo del grupo aromático. L<os>ejemplos de heteroátomos incluyen, pero no se limitan a, nitrógeno, oxígeno, azufre, 10 y fósforo. El término "no heteroarilo", que se incluye en el término "arilo", define un grupo que contiene un grupo aromático que no contiene un heteroátomo. El grupo arilo<o>heteroarilo puede estar sustituido<o>no sustituido. El grupo arilo<o>heteroarilo puede estar sustituido con uno<o>más grupos que incluyen, pero no se limitan a, alquilo, alquilo halogenado, alcoxi, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aldehido, amino, ácido carboxílico, éster, éter, 15 haluro, hidroxi, cetona, nitro, sililo, sulfo-<oxo>, sulfonilo, sulfona, sulfóxido<o>tiol como se describió en la presente descripción. El término "biarilo" es un tipo especifico de grupo arilo y se incluye en la definición de arilo. Biarilo se refiere a dos grupos arilo que están unidos mediante una estructura de anillo fusionado, como en el naftaleno,<o>están unidos mediante uno<o>más enlaces carbono-carbono, como en el bifenilo.
"Heterocíclico<o>heterociclilo" es un anillo mono<o>bicíclico saturado, parcialmente saturado<o>insaturado que contiene de 4-12 átomos de I<os>cuales al menos un átomo se elige de nitrógeno, azufre<u>oxigeno, que puede, a menos que se especifique de cualquier otra manera, estar enlazado a carbono<o>nitrógeno, en donde un grupo -CH2- puede sustituirse opcionalmente por un -C(O)-, y un átomo de azufre del anillo puede oxidarse opcionalmente para formar S-óxido(s). L<os>ejemplos de heterociclilos incluyen, pero no se limitan a, pirrolidinilo, morfolino, piperidilo, piridilo, piranilo, pirrolilo, isotiazolilo, indolilo, quinolilo, tienilo, furilo, 1,3-benzodioxolilo, tiadiazolilo, piperazinilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiazolidinilo, pirrolidinilo, tiomorfolino, pirazolilo, pirrolinilo, homopiperazinilo, tetrahidropiranilo, imidazolilo, pirimidilo, pirazinilo, piridazinilo, isoxazolilo, 4-piridona, 1-isoquinolona, 2-pirrolidona, 4-tiazolidona, imidazo[1,2-a]piridina<o>3-aza-8oxabiciclo[3,2,1]hexano. L<os>heterociclos se describen en Paquette, Leo<a>.; "Principies of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.<a>. Benjamin, Nueva York, 1968), particularmente los Capítulos 1, 3, 4, 6, 7 y 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, Aseries of Monographs" (John Wiley & Sons, Nueva York, 1950 al presente), en particular los volúmenes 13, 14, 16, 19, y 28; y J. Am. Chem. S<oc>. (1960) 82:5566. Un grupo heterocíclico puede estar sustituido<o>no sustituido.
"Carbamoilo" puede estar sustituido<o>no sustituido a menos que se indique de cualquier otra manera. Un grupo carbamoilo puede estar sustituido por uno<o>dos sustituyentes seleccionados de hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilalquilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo, arilo sustituido<o>no sustituido,<o>aminoalquilo,<o>carbamoilo, en donde los sustituyentes y el átomo de nitrógeno del grupo carbamoilo representan un heterociclilo de 5<o>6 miembros que comprende además 0, 1<o>2 heteroátomos seleccionados de N, O y S; y es preferentemente carbamoilo, metilcarbamoilo, dimetilcarbamoilo, propilcarbamoilo, hidroxietil-metil-carbamoilo, di(hidroxietil)carbamoilo, dimetilaminoetilcarbamoilo<o>pirrolidinocarbonilo, piperidinocarbonilo, N-metilpiperazinocarbonilo<o>morfolinocarbonilo, especialmente carbamoilo<o>dimetilcarbamoilo.
"Carbociclo" indica un anillo saturado<o>insaturado que tiene de 3 a 7 átomos de carbono como un monociclo<o>de 7 a 12 átomos de carbono como un biciclo. L<os>carbociclos monocíclicos tienen de 3 a 6 átomos en el anillo, aún más típicamente 5<o>6 átomos en el anillo. L<os>carbociclos bicíclicos tienen de 7 a 12 átomos en el anillo, por ejemplo, dispuestos como un sistema biciclo [4,5], [5,5], [5,6]<o>[6,6],<o>9<o>10 átomos en el anillo dispuestos como un sistema biciclo [5,6]<o>[6,6]. L<os>ejemplos de carbociclos monocíclicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, 1-ciclopent-1-enilo, 1-ciclopent-2-enilo, 1-ciclopent-3-enilo, ciclohexilo, 1-ciclohex-1-enilo, 1-ciclohex-2-enilo, 1-ciclohex-3-enilo, cicloheptilo y ciclooctilo. Un grupo carbociclo puede estar sustituido<o>no sustituido.
Un aminoácido no natural (NNAA) se refiere a un aminoácido que no es uno de los 20 aminoácidos que se encuentran en la naturaleza. L<os>ejemplos de tales NNAA incluyen aminoácidos que tienen un grupo azida. L<os>ejemplos de NNAA incluyen azidofenilalanina<o>azido-para-metil-fenilalanina.
Un "grupo enlazador" como se define en la presente descripción, por ejemplo, se refiere a un grupo funcional entre un enlazador (E) y una carga útil (D). L<os>ejemplos de un grupo enlazador incluyen amida, éster, carbamato, éter, tioéter, disulfuro, hidrazona, oxima, semicarbazida, urea, carbonato, grupo lábil a ácidos, grupo fotolábil, grupo lábil a peptidasa y grupo lábil a esterasa. Ver, por ejemplo, los documentos US 5208020; 5475092; 6441163; 6716821; 6913748; 7276497; 7276499; 7368565; 7388026 y 7414073.
Un "enlazador" (brazo separador) se refiere a un resto químico entre dos grupos enlazadores. Por ejemplo, en CB-E-D, el enlazador (E) es el resto químico entre un grupo enlazador con el agente aglutinante celular (<c>B) y un grupo enlazador con una carga útil (D). Un enlazador puede ser escindible<o>no escindible. Un enlazador une un agente citotóxico con un agente aglutinante celular<o>un resto químico que puede conectarse además a un agente aglutinante celular. Por ejemplo, un enlazador une un maitansinoide a un resto químico tal como un alquino deformado, que es capaz de conectarse, como se describió en la presente descripción, a un anticuerpo que contiene un aminoácido no natural sustituido con azida mediante cicloadiciones de Huisgen (también conocidas como reacciones Sharpless "click").
Las preparaciones y aplicaciones de enlazadores están fácilmente disponibles para un experto en la técnica. Ver Goldmacher y otros, Antibody-drug Conjugates and Immunotoxins: From Pre-clinical Development to Therapeutic Applications, Capítulo 7, en Linker Technology and Impact of Linker Design on ADC Properties, editado por Phillips GL; Ed. Springer Science and Business Media, Nueva York (2013). Las estructuras enlazadoras también se describen en los documentos US 8198417; 8012485; 7989434; 6333410; 5416064, y 520802<o>.
"Enlazadores escindibles" son enlazadores que pueden escindirse en condiciones suaves. L<os>enlazadores que contienen disulfuro son enlazadores que se pueden escindir mediante el intercambio de disulfuro que se produce en condiciones fisiológicas. L<os>enlazadores lábiles a ácidos son enlazadores que se pueden escindir a pH ácido. Por ejemplo, ciertos compartimientos intracelulares, tales como los endosomas y lisosomas, tienen un pH ácido (pH 4-5), y proporcionan las condiciones adecuadas para escindir los enlazadores lábiles a ácidos. L<os>enlazadores que son fotolábiles son útiles en la superficie corporal y en muchas cavidades corporales que son accesibles a la luz.
Además, la luz infrarroja puede penetrar el tejido. Ciertos enlazadores pueden ser escindidos por peptidasas nativas. Ver, por ejemplo,Trouet, y otros, 79 Proc. Nati. Acad. S<cí>. USA, 626-629 (1982) y Umemoto, y otros, 43 Int. J. Cáncer, 677-684 (1989). L<os>péptidos están compuestos de a-aminoácidos y enlaces peptídicos, que son enlaces amida entre el carboxilato de un aminoácido y el grupo a-amino de otro aminoácido, y así sucesivamente. Otros enlaces amida, tales como el enlace entre un carboxilato y el grupo £-amino de la lisina, no se entienden como enlaces peptídicos y se consideran no escindibles. Muchos enlazadores conocidos en la técnica pueden escindirse mediante esterasas. Solo ciertos ésteres conocidos en la técnica pueden ser escindidos por esterasas presentes dentro<o>fuera de las células. L<os>ésteres se forman por la condensación de un ácido carboxílico y un alcohol. L<os>ésteres simples son ésteres producidos con los alcoholes simples, tales como los alcoholes alifáticos, y los alcoholes aromáticos pequeños y cíclicos pequeños.
Un "enlazador no escindible" es cualquier resto químico que es capaz de unir una carga útil, por ejemplo, un agente citotóxico, a un agente aglutinante celular de una manera estable covalente y no se incluye en las categorías enumeradas anteriormente como enlazadores escindibles. Por lo tanto, los enlazadores no escindibles son generalmente resistentes a la escisión inducida por ácido, a la escisión inducida por luz, a la escisión inducida por peptidasa, a la escisión inducida por esterasa y a la escisión de enlaces disulfuro.
El término "sal farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente descripción se refiere a sales orgánicas<o>inorgánicas farmacéuticamente aceptables de un conjugado de biomolécula de la invención. Las sales ilustrativas incluyen sales de sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, lactato, salicilato, citrato ácido, tartrato, oleato, tanato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato "mesilato", etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato, pamoato (es decir, 1,1'-metilen-bis-(2-hidroxi-3-naftoato), sales de metales alcalinos (por ejemplo, sodio y potasio), sales de metales alcalinotérreos (por ejemplo, magnesio) y sales de amonio. Una sal farmacéuticamente aceptable puede implicar la inclusión de otra molécula tal como un ion acetato, un ion succinato<u>otro contraión. El contraión puede ser cualquier resto orgánico<o>inorgánico, que estabiliza la carga en el compuesto original. Además, una sal farmacéuticamente aceptable puede tener más de un átomo cargado en<su>estructura. L<os>casos en los que múltiples átomos cargados son parte de la sal farmacéuticamente aceptable pueden tener múltiples contra iones. Por lo tanto, una sal farmacéuticamente aceptable puede tener uno<o>más átomos cargados y/o uno<o>más contra iones.
El término "cantidad terapéuticamente efectiva"<o>"cantidad efectiva" significa esa cantidad de compuesto activo<o>conjugado que provoca la respuesta biológica<o>el efecto terapéutico deseado en un sujeto. Tal respuesta incluye alivio de los síntomas de la enfermedad<o>trastorno que se trata, prevención, inhibición<o>un retraso en la reaparición del síntoma de la enfermedad<o>de la propia enfermedad, un aumento en la longevidad del sujeto comparado con la ausencia del tratamiento,<o>prevención, inhibición<o>retraso en la progresión del síntoma de la enfermedad<o>la propia enfermedad. La determinación de la cantidad efectiva está bien dentro de la capacidad de los expertos en la técnica, especialmente a la luz de la descripción detallada que se proporciona en la presente descripción. La toxicidad y la eficacia terapéutica se determinan mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares y estudios con animales. La cantidad efectiva de un conjugado de la presente invención<u>otro agente terapéutico a administrar a un sujeto dependerá de la etapa, categoría y estado de la afección, mieloma múltiple<o>leucemia, por ejemplo, y características del sujeto, tales como estado de salud general, edad, sexo, peso corporal y tolerancia a los fármacos. La cantidad efectiva de un conjugado de la presente invención<u>otro agente terapéutico a administrar también dependerá de la vía de administración y la forma de dosificación. Se prefieren las vías de administración intravenosa (IV) y subcutánea (SC). La cantidad de dosificación y el intervalo pueden ajustarse individualmente para proporcionar niveles en plasma del compuesto activo que son suficientes para mantener los efectos terapéuticos deseados.
Las definiciones y convenciones estereoquímicas usadas en la presente descripción generalmente siguen S. R Parker, Ed., Dictionary of Chemical Terms McGraw-Hill (1984) McGraw-Hill Book Company, Nueva York; y Eliel, E. y Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1994. A menos que se especifique de cualquier otra manera, los compuestos de esta invención pretenden incluir todos los estereoisómeros, que existen como un solo isómero<o>en mezcla con otros isómeros.
En los compuestos de Fórmula I descritos en la presente descripción, (A) es un anillo deformado, es decir, un anillo alquino deformado. El alquino deformado (A) y el agente citotóxico (D) están conectados mediante un enlazador (E)m.
f ó r m u l a i
Fórmula I:
Fórmula I
en donde A es un anillo, siempre y cuando A sea un anillo con un alquino deformado cuando la línea de puntos representa un enlace,<o>A es un anillo con un alqueno deformado cuando la línea de puntos está ausente;
En otras palabras, la Fórmula I incluye ambas estructuras siguientes:
Fórmula la
Fórmula Ib
En la presente invención, la Fórmula I es la Fórmula 13<o>14 como se definió en la reivindicación 1.
En la presente invención, m es 1.
En la presente invención, D es
En la presente invención, E se selecciona del grupo que consiste en
Cada E en -(E)<m>- puede ser igual<o>diferente.
En modalidades ilustrativas, cada E puede derivarse de un resto basado en maleimido seleccionado de 4-(maleimidometil)cidohexanocarboxilato de N-succinimidilo (SMCC), N-succinimidil-4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-1-carboxilo-(6-amidocaproato) (LC-SMCC), éster N-succinimidílico del ácido K-maleimidoundecanoico (<k>MUA), éster N-succinimidílico del ácido y-maleimidobutírico (GMBS), éster N-hidroxisuccinimida del ácido E-maleimidcaproico (EMCS), éster de m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida (MBS), éster de N-(a-maleimidoacetoxi)-succinimida (A<m a s>), hexanoato de succinimidil-6-(P-maleimidopropionamido) (SMPH), 4-(p-maleimidofenil)-butirato de N-succinimidilo (SMPB), isocianato de N-(p-maleimidofenilo) (PMPI),<o>una variante de sulfosuccinimidilo<o>un análogo del mismo. En otras modalidades ilustrativas, cada E también puede derivarse de un resto basado en haloacetilo seleccionado de N-succinimidil-4-(yodoacetil)-aminobenzoato (SIAB), yodoacetato de N-succinimidilo (SIA), bromoacetato de N-succinimidilo (SBA), 3-(brornoacetarnido)propionato de N-succinimidilo (SBAP),<o>una variante de sulfosuccinimidilo<o>un análogo del mismo.
La síntesis de compuestos de Fórmula I está bien dentro de la experiencia de un experto en la técnica. En la Figura 1 y la Figura 2 se ilustran rutas ilustrativas que se pueden realizar fácilmente para la síntesis de compuestos de Fórmula I e intermediarios.
El término "anillo deformado" (A),<comio>se usa en la presente descripción, se refiere a un anillo alquino deformado. Anillos alquinos deformados (A) de fórmula I
L<os>anillos de alquinos deformados (A) tienen ángulos de enlace para los carbonos con hibridación sp inferiores a 180°, por el contrario a los alquinos lineales. L<os>anillos alquinos deformados se pueden sustituir en los anillos y/o en<sus>cadenas laterales. L<os>anillos alquinos deformados, como se hace referencia en la presente descripción, también incluyen derivados con grupos funcionales reactivos para conectar enlazadores (E).
El anillo alquino deformado (A) de Fórmula I le permite reaccionar eficientemente con NNAAque contiene azida en condiciones suaves sin la adición de catalizadores de cobre. Las preparaciones de varios alquinos deformados y<sus>reacciones con compuestos que contienen azidas se conocen bien en la literatura, que incluye Martell y otros, Molecules, 2014, 19(2), 1378-93;Sletten y otros, Org. Lett. 2014, 16(6), 1634-7; Debets y otros, A<cc>. Chem. Res. 2011, 44(9), 805-15; Jewett y otros, Org. Lett. 2011, 13(22), 5937-9; Jewett y otros, Chem. S<oc>. Rev. 2010, 39(4), 1272 9; Bertozzi y otros, J. Am. Chem. S<oc>.2010,<i>32, 3688; Jewett y otros Chem. S<oc>. Rev. 2010 Apr; 39(4): 1272-9.
L<os>ejemplos incluyen dibenzociclooctino, cid ooct-4-inol, carbonato de N-succinimidilo de (1R,8S,9S)-bicid o[6.1.0]non-4-¡n-9-¡lmet¡lo, así como también<sus>derivados y análogos.
L<os>anillos de alquino deformados pueden estar conectados a un enlazador (E), por ejemplo, mediante un enlace amida, un enlace amina, un enlace éter<o>un enlace éster.
Espedes de Fórmula I de acuerdo con la invención
Fórmula II
La Fórmula II usada en el proceso de la presente invención es la siguiente:
Fórmula II
en donde CB es un agente aglutinante celular; M es un aminoácido no natural; y T es un grupo azida.
En ciertas modalidades, M tiene la siguiente estructura:
(CH2)pVW(CH2)—
<r>6<h n>^<c o r>7
Fórmula IV
en donde:
p y q son cada uno independientemente un número entero de 0-10;
R6 es H, aminoácido, polipéptido<o>grupo de modificación del extremo amino,<o>un enlace;
R7 es OH, aminoácido, polipéptido<o>grupo de modificación del extremo carboxi,<o>un enlace;
V es un alquilo, arilo, carbociclo, heterodclo<o>está ausente; y
W es O, N, S<o>está ausente; siempre y cuando, cuando R6 es un enlace, el aminoácido no natural está conectado al agente aglutinante celular a través de R6, y cuando R7 es un enlace, el aminoácido no natural está conectado al agente aglutinante celular a través de R7
En algunas modalidades, p y q son cada uno independientemente un número entero de 0-8. En algunas modalidades, p y q son cada uno independientemente un número entero de 0-6. En algunas modalidades, p y q son cada uno independientemente un número entero de 0-4. En alguna modalidad, p y q son cada uno independientemente un número entero de 0-2.
L<os>NNAA (M) llevan una cadena lateral (T) que es cualquier sustituyente distinto de las cadenas laterales presentadas por cualquiera de los veinte aminoácidos naturales. Debido a que los NNAA típicamente difieren de los aminoácidos naturales solo en la estructura de la cadena lateral, los NNAA forman enlaces amida con otros aminoácidos, que incluyen los aminoácidos naturales, de la misma manera que existen en los polipéptidos naturales. Una cadena lateral de un aminoácido no natural comprende opcionalmente un alquil-, aril-, acil-, ceto-, azida-, hidroxilo-, hidrazina, ciano-, halo-, hidrazida, alquenilo, alquinilo, éter, tiol, seleno-, sulfonilo-, borato, boronato, fosfo, fosfono, fosfina, heterocíclico, enona, imina, aldehido, éster, tioácido, hidroxilamina, grupo amino<o>tetrazina,<o>cualquiera de<sus>combinaciones. Otros aminoácidos de interés no naturales que pueden ser adecuados para usar en la presente invención incluyen aminoácidos que comprenden un reticulante fotoactivable, aminoácidos marcados por espin, aminoácidos fluorescentes, aminoácidos que se unen a metales, aminoácidos que contienen metales. aminoácidos radiactivos, aminoácidos con nuevos grupos funcionales, aminoácidos que interactúan de forma covalente<o>no covalente con otras moléculas, aminoácidos fotoenjaulados y/o fotoisomerizables, aminoácidos que comprenden biotina<o>un análogo de biotina, aminoácidos glicosilados tales como una serina sustituida con azúcar, otros aminoácidos modificados con carbohidratos, aminoácidos que contienen ceto, aminoácidos que comprenden polietilenglicol<o>poliéter, aminoácidos sustituidos con átomos pesados, aminoácidos químicamente escindibles y/o fotoescindibles, aminoácidos con cadenas laterales alargadas en comparación con los aminoácidos naturales, que incluyen los poliéteres<o>hidrocarburos de cadena larga, que incluyen más de aproximadamente 5<o>más de aproximadamente 10 carbonos, aminoácidos que contienen azúcares enlazados a carbonos, aminoácidos con actividad redox, aminoácidos que contienen aminotioácidos y aminoácidos que comprenden uno<o>más restos tóxicos. Varios aminoácidos no naturales y<su>síntesis se proporcionan en los documentos US 7632924, US 2014004603<o>, US 20140066598 y US 20140051836. La Figura 8 muestra un ejemplo de NNAA. Ver también Spicer, CD, y otros, Nature Communications, 5:474<o>(2014).
En modalidades de la invención, los aminoácidos no codificados de forma natural incluyen un grupo funcional de cadena lateral que reacciona eficientemente y selectivamente con grupos funcionales que no se encuentran en los 20 aminoácidos comunes, específicamente un grupo azida, para formar conjugados estables. Un agente aglutinante celular que incluye un aminoácido no codificado de forma natural que contiene un grupo funcional azida se puede hacer reaccionar con un compuesto que contiene un resto alquino para formar un conjugado estable resultante de la reacción selectiva de los grupos funcionales azida y alquino para formar un producto de cicloadición Huisgen [3+2]. Los aminoácidos no naturales que contienen azidas ilustrativas para incorporar al agente aglutinante celular se pueden representar como sigue:
(CH2)pUVW(CH2)qT
F^ H N ^ C O R 7
Fórmula XI
en donde p y q son cada uno de 0-10; R6 es H, aminoácido, polipéptido<o>grupo de modificación del extremo amino; R7es OH, aminoácido, polipéptido<o>grupo de modificación del extremo carboxi; U es carbonilo, aminocarbonilamino, carbamoilo, aminocarboniloxi<o>está ausente; V es un alquilo, arilo, carbociclo, heterociclo<o>está ausente; W es O, N, S<o>está ausente; y T es un grupo azida.
En algunas modalidades, V es un arilo y W está ausente. En algunas modalidades, R6 es H y R7 es OH. En algunas modalidades, U es carbonilo, aminocarbonilamino, carbamoilo<o>aminocarboniloxi; V es un heterociclo<o>está ausente; W está ausente; y T es un grupo azida. La presente invención contempla expresamente todos los isómeros, que incluyen tautómeros y estereoisómeros (R y S), como un isómero individual<o>como una mezcla, y todas las formas salinas de un aminoácido no natural. L<os>aminoácidos no naturales que contienen azidas ilustrativas incluyen los siguientes:
L<os>términos "azido" y "azida" se usan indistintamente en la presente invención y ambos se refieren a un grupo -N3. Muchos aminoácidos que contienen azidas están disponibles en fuentes comerciales. Por ejemplo, la 4-azidofenilalanina puede obtenerse de Chem-lmpex International, Inc. (Wood Dale, Illinois). Ácido (S)-5-azido-2-(Fmocamino)pentanoico, sal (diciclohexilamonio) del ácido (S)-(-)-2-azido-6-(Boc-amino)hexanoico, sal de ciclohexilamonio del ácido (S)-2-azido-3-(4-terc-butoxifenil)propiónico, sal de ciclohexilamonio del ácido (S)-2-azido-3-(3-indolil)propiónico, sal de ciclohexilamonio del ácido (S)-2-azido-3-metilbutírico, La sal ciclohexilamonio del ácido (S)-2-azido-4-(metiltio)butanoico, sal (diciclohexilamonio) del ácido (S)-2-azido-3-fenilpropiónico y la sal ciclohexilamonio del ácido (S)-2-azido-propiónico están comercialmente disponibles en Sigma-Aldrich. Para aquellos aminoácidos que contienen azida que no están disponibles comercialmente, el grupo azida se puede preparar relativamente fácilmente mediante el<uso>de métodos estándar conocidos por los expertos en la técnica, que incluyen, por ejemplo, el desplazamiento de un grupo saliente adecuado (que incluye haluro, mesilato, tosilato)<o>mediante la apertura de una lactona adecuadamente protegida. Ver, por ejemplo, Advanced Organic Chemistry by March (Tercera Edición, 1985, Wiley y Sons, Nueva York).
Síntesis de biomoléculas y NNAA
L<os>anticuerpos que comprenden NNAA específicos de sitio se pueden producir, por ejemplo, en un sistema libre de células procarióticasin vitro.La inserción específica de sitioin vitrode azido-fenilalanina<o>azido-para-metilfenilalanina, por ejemplo, en un péptido sintético en crecimiento por medio de un par ortogonal de ARNt sintetasa/ARNt se logra en donde el ARNt cargado reconoce un codón sin sentido.
Se conocen en la técnica sistemas escalables de síntesis de proteínas libres de células para la inserción específica de sitio del NNAAy para la producción completa de anticuerpos, que incluyen los enlaces disulfuro. Swartz, JR., y otros, Simplifying and Streamlining Escherichia Coli-Based Cell-Free Protein Synthesis. Biotechnol. Prog. 28(2):4<i>3 (20<i>2) PMID: 22275217;Swartz, JR., y otros, Cell-free Production of Antibody Fragment Bioconjugates for E<x>Vivo Detection of Tumor Cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 390(3):971(2009) PMID: 19852937;Swartz, JR., y otros, An Integrated Cell-Free Metabolic Platform for Protein Production and Synthetic Biology. Mol. Syst. Biol. 4:220 (2008).Ver,por ejemplo Swartz, y otros, methods of in vitro protein synthesis US 7338789 y casos relacionados. Documento US 8715958. Ver también los documentos US 7332571, 7385028, 7696312, 7928163y 8008428. Schultz, PG, y otros, Development of Improved tRNAs for In Vitro Biosynthesis of Proteins Containing Unnatural Amino Acids. Chem Biol.
3(12): 1<o>33 (1996); Schultz, PG, y otros, A General Method for Site-Specific Incorporation of Unnatural Amino Acids into Proteins. Science 244(4901):182 (1989); DieterSoll, y otros, When Protein Engineering Confronts the tRNA World. PNAS US 94(19):10007 (<i>997). Voloshin, y otros, 8778631 Method for Introducing Non-Native Amino Acids into Preselected Positions of a Polypeptide Using a Cell-Free Synthesis System. Incorporación sitio específicoin vivode aminoácidos no naturales: Ver, por ejemplo, los documentos US 7045337; 8173392; 8114648; 803OO74; 7915025; 76383OO; 7368275; 8173364; 8183O12; 7713721; 7354761; 7O8397O; 8O12739; 7O8397O; 7432O92; 8114629; 8O71344; 791O345; 7524647; 76O8423.
Productos de liberación activa
L<os>conjugados de biomoléculas de la presente invención están destinados a la administración a mamíferos, por ejemplo, para el tratamiento de enfermedades. L<os>conjugados de biomoléculas comprenden una biomolécula en donde al menos un aminoácido no natural (NNAA) es integral a la estructura de la biomolécula y en donde el NNAA es un punto de unión de un enlazador al que se une una carga útil, particularmente un agente citotóxico. L<os>conjugados de biomoléculas de la presente invención generalmente liberan compuestos activos que comprenden un agente citotóxico de carga útil después de la administración.
Una modalidad de un compuesto de liberación activa (correspondiente al empleo de NNAA azido-para-metilfenilalanina (M2) y Fórmula I (compuesto 14) de la presente invención comprende generalmente el aminoácido de origen no natural, el enlazador y la carga útil como sigue:
Este producto de liberación activa existe, por ejemplo, en forma regioisomérica. Dado que 14 existe como dos regioisómeros, el catabolito también existe como dos regioisómeros. Como ahora aprecian los expertos en la técnica, en vista de esta descripción, productos de liberación activa análogos que comprenden fundamentalmente el aminoácido no natural, el enlazador y la carga útil, se generan tras/después de la administración de los conjugados de biomoléculas descritos en la presente descripción. En consecuencia, un aspecto de la presente invención (un ejemplo del cual es AR4) es un producto de liberación, correspondiente a cada uno de los compuestos de Fórmula I descritos en la presente descripción, que comprende un aminoácido no natural descrito en la presente descripción, el enlazador y la carga útil.
Producción de conjugados de biomoléculas
Conjugados de Fórmula 111 por medio de reacciones de cicloadición 1,3-dipolares
La reacción de cicloadición entre compuestos de Fórmula I que contienen un alquino deformado y compuestos de Fórmula II que contienen al menos un aminoácido no natural sustituido con azida es un enfoque selectivo y biocompatible (cicloadición azida triple enlace [3+2] (<o>reacción "clic")) a la producción de conjugados de fórmula 111. La línea de puntos de Fórmula I (A) representa un alquino deformado. La fórmula II (T) es un grupo azida en el NNAA (M). Se definen otros grupos y sustituyentes supra.
Esquema I
L<os>grupos funcionales azida y alquino deformado son en gran medida inertes frente a moléculas biológicas en un entorno acuoso, lo que permite el<uso>de las reacciones de cicloadición azida-alquino descritas en la presente descripción para el acoplamiento de agentes citotóxicos (D) a agentes aglutinantes celulares (CB) como se ilustra en el Esquema I. Ver, por ejemplo, la Figura 6A.
L<os>triazoles resultantes tienen similitudes con el ubicuo resto amida que se encuentra en la naturaleza, pero a diferencia de las amidas, no son susceptibles a la escisión hidrolítica<o>catalizada enzimáticamente. Adicionalmente, los triazoles son casi imposibles de oxidar<o>reducir en condiciones fisiológicas. Las reacciones de cicloadición empleadas para ensamblar conjugados de la presente invención, también conocidas como química de "clic", son la reacción entre un 1,3-dipol, por ejemplo, una azida, y un dipolarófilo, por ejemplo, un alquino sustituido, para formar un anillo de cinco miembros. La reactividad aumentada resultante del alquino deformado permite que la reacción de cicloadición entre I<os>compuestos de fórmula I y I<os>compuestos de fórmula II se desarrolle suavemente a temperatura ambiente sin el<uso>de cobre<u>otros catalizadores. L<os>procedimientos para la reacción de cicloadición libre de cobre se conocen bien en el campo de la química. Ver, por ejemplo Lutz, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 2008, 47(12), 2182-4; Bertozzi y otros, Angew. chem. Int. Ed. 2009, 48, 6974; Bertozzi y otros, J. Am. Chem. S<oc>.2010, 132, 3688; Jewett y otros, Chem. S<oc>. Rev. 2010, 39(4), 1272-9, Schultz y otros, Org. Lett. 2010, 12 (10), 2398-401. Las condiciones de reacción para la cicloadición general libre de cobre sobre sustratos simples se conocen bien en la técnica (por ejemplo, temperatura ambiente en acetonitrilo). Ver, por ejemplo, la Figura 6A.
L<os>métodos para producir biomoléculas que comprenden al menos un NNAA sustituido con azida, preferentemente una pluralidad de cada uno, por ejemplo, 2-50, 2-25, 2-15, 2-10<o>2-5 de cada uno, están dentro del alcance de la invención descrito en la presente descripción. Como corolario, I<os>métodos para producir biomoléculas, por ejemplo, especies de anticuerpos, que tienen al menos una especie de carga útil conjugada con azida cicloadición triple enlace [3+2], están dentro del alcance de la invención descrito en la presente descripción. Las biomoléculas, por ejemplo, especies de anticuerpos, que tienen una pluralidad, por ejemplo, 2-100, 2-50, 2-25, 2-10<o>2-5, de especies de carga útil conjugadas con cicloadición de azida triple enlace (3+2) están dentro el alcance de la invención descrito en la presente descripción.
Enlazadores ramificados
Al unir aproximadamente 2 enlazadores por anticuerpo como se describió de cualquier otra manera en la presente descripción, cada enlazador tiene un punto de ramificación de manera que se pueden unir dos cargas útiles, por ejemplo.
Existen muchas permutaciones de este tipo de enfoque, como pueden apreciar I<os>expertos habituales.
Carga útil, agentes citotóxicos y maitansinoides
"Agente citotóxico", como se usa en la presente descripción, se refiere a cualquier compuesto que dé como resultado el crecimiento estático, la disminución de la viabilidad<o>la inducción de la muerte de ciertos tipos celulares. L<os>agentes citotóxicos incluyen, por ejemplo, maitansinoides y análogos de maitansinoides, taxoides, CC-1065 y análogos, dolastatina y análogos, zelesina y análogos, dímeros y análogos de pirrolobenzodiazepina; citotoxinas de productos naturales y análogos sintéticos que incluyen critoficinas, amatoxinas, tubulisinas, así como también cualquier otro potente agente de molécula pequeña, natural<o>no natural. Compuestos de monometilvalina. Ver, por ejemplo, I<os>documentos US 7994135; 7964567; 7964566; 7745394; 7498298.
L<os>maitansinoides, por ejemplo, inhiben la formación de microtúbulos y son altamente tóxicos para las células de mamíferos. En la presente invención, la carga útil es un agente citotóxico que es un maitansinoide.
Maitansinoides
L<os>maitansinoides son fármacos altamente citotóxicos. La maitansina se aisló por primera vez por Kupchan,y otrosdel arbusto del este de ÁfricaMaytenus serratay ha demostrado ser de 100 a 1000 veces más citotóxico que I<os>agentes quimioterapéuticos contra el cáncer convencionales como el metotrexato, la daunorrubicina y la vincristina (documento US 3896111). Subsecuentemente, se descubrió que ciertos microbios también producen maitansinoides, tales como el maitansinol y I<os>ésteres C-3 de maitansinol (documento US 4151042). También se han informado ésteres sintéticos C-3 de maitansinol y análogos de maitansinol (Kupchan y otros, 21 J. Med. Chem. 31-37 (1978); Higashide, y otros, 270 Nature 721-722 (1977); Kawai, y otros, 32 Chem. Pharm. B<u>II. 3441-3451 (1984)). L<os>ejemplos de análogos de maitansinol a partir de I<os>cuales se han preparado ésteres C-3 incluyen maitansinol con modificaciones en el anillo aromático (por ejemplo, descloro)<o>en C-9, C-14 (por ejemplo, grupo metilo hidroxilado), C-15, C-18, C-20 y C-4,5. Se han informado varios inmunoconjugados que incorporan maitansinoides, que incluyen I<os>documentos US 868592<o>, 8624003, 861393<o>, 8603483, 8563509, 8337856, 8236319, 633341<o>, 6441163 y US 20140023665.
L<os>maitansinoides se conocen bien en la técnica. L<os>ejemplos de análogos de maitansinol incluyen aquellos que tienen anillos aromáticos modificados y/o modificaciones en otras posiciones. Tales maitansinoides se describen, por ejemplo, en los documentos US 4256746, 4294757, 4307016, 4313946, 4315929, 4322348, 4331598, 436165<o>, 4362663, 4364866, 4424219, 4371533, 4450254,5475092, 5585499,5846545, 6333410y US 20140023665.
Los ejemplos de análogos de maitansinol que tienen un anillo aromático modificado incluyen:
(1) C-19-des-cloro (documento US 4256746) (preparado mediante reducción LAH de ansamitocina P2);
(2) C-20-hidroxi (<o>C-20-desmetil)+/-C-19-des-cloro (documentos US 436165<o>y 4307016) (preparado por desmetilación mediante el<uso>de Streptomyces<o>Actinomyces<o>descloración mediante el<uso>de LAH); y (3) demetoxi C-20, aciloxi C-20 (-OCOR), /-descloro (documento US 4294757) (preparado por acilación mediante el<uso>de cloruros de acilo).
L<os>ejemplos específicos de análogos de maitansinol que tienen modificaciones de otras posiciones incluyen:
(1) C-9-SH (documento US 4424219) (preparado por la reacción de maitansinol con H2S<o>P2S5);
(2) C-14-alcoximetilo (desmetoxi/CH20R) (documento US4331598);
(3) C-14-hidroximetilo o aciloximetilo (CH2OH o CH2OAc) (documento US 4450254) (preparado a partir de Nocardia);
(4) C-15-hidroxi/aciloxi (documento US 4364866) (preparado mediante la conversión de maitansinol por Streptomyces);
(5) C-15-metoxi (documentos US 4313946 y 4315929) (aislado de Trewia nudlflora);
(6) C-18-N-desmetilo (documentos US 4362663 y 4322348) (preparado mediante la desmetilación de maitansinol por Streptomyces); y
(7) 4,5-desoxi (documento US 4371533) (preparado mediante la reducción de tricloruro de titanio/LAH de maitansinol).
Además, el documento US 633341<o>proporciona un proceso mejorado para la preparación y purificación de maitansinoides que contienen tiol adecuados para enlazarse a agentes aglutinantes celulares.
L<os>ejemplos de maitansinoides también incluyen los siguientes:
En algunos de estos maitansinoides, p es 1-8. En algunos maitansinoides, p es 1-6. En algunos maitansinoides, p es 1-4. En algunos maitansinoides, p es 1-2. En algunos maitansinoides, p es 1.
Se conoce que muchas posiciones del maitansinol son útiles como posición de enlace, en dependencia del tipo de enlace. Por ejemplo, para formar un enlace éster, la posición C-3 que tiene un grupo hidroxilo, la posición C-14 modificada con hidroximetilo, la posición C-15 modificada con un grupo hidroxilo y la posición C-20 que tiene un grupo hidroxilo son todas adecuadas. Se prefiere la posición C-3.
Losagentes citotóxicos que comprenden maitansinoides ysu usoterapéutico se describen en los documentos US 5208020; 5416064; 7276497; 7851432; 7473796; 7601354; 7303749; 8198417; 8163888; 7989598; 8088387.
Enlace de unión a maitansinoide
En algunas modalidades, un maitansinoide se puede enlazar a (E) en una sola etapa. En algunas modalidades, un maitansinoide puede formar primero un grupo enlazador con un fragmento de un enlazador seguido de la extensión del enlazador. La Figura 1 y la Figura 2, por ejemplo, ilustran (para compuestos no abarcados por las reivindicaciones) enfoques para enlazar un maitansinoide a un enlazador al formar primero un grupo enlazador amida, seguido de la extensión del enlazador.
Biomoléculas que incluyen agentes aglutinantes celulares
El término biomolécula, como se usa en la presente descripción, se refiere generalmente a una estructura de origen naturalosintético que presenta afinidad por,ode cualquier otra manera capacidad para unirseointeractuar con una determinada diana biológica, preferentementein vivo.Las biomoléculas parasuempleo en la presente invención son, por ejemplo, entidades basadas en proteínas que presentan estructuras secundarias y, en algunas modalidades, terciarias y/o cuaternarias. Las biomoléculas pueden tener modificaciones postraduccionales que incluyen, por ejemplo, glicosilación, fosforilación, desamidación y/u oxidación.Losligandos y receptores son cada uno de ellos clases de ejemplo de biomoléculas parasuempleo en los conjugados de la presente invención. Las formas solubles de ligandos y receptores, por ejemplo, generalmente construcciones de fusión, se conocen bien en la técnica, que incluyen las fusiones de IgGI-Fc humana, por ejemplo. El ligando soluble así como también las construcciones de fusión de receptores son clases ilustrativas de biomoléculas parasuempleo en las estructuras conjugadas de la presente invención. Las biomoléculas preferidas para los conjugados de fármacos de la presente invención, en este momento, son anticuerpos, particularmente anticuerpos monoclonales (mAb), que incluyen anticuerpos biespecíficos, y fragmentos funcionales de los mismos. Las modificaciones de la arquitectura de los anticuerpos también representan un área ejemplo de biomoléculas para usaren conjugados de la presente invención. Ver Next-Generation Antibodies, Nature Reviews Drug Discovery, 13:413 (2014). Un enfoque de biomolécula alternativo es proporcionar un ligando alternativo que pueda cumplir funciones de afinidad similares a las de los anticuerpos, que incluyen las modalidades de DARP (proteína repetida de anquirina diseñada).
La efectividad de los conjugados de la invención como agentes terapéuticos depende de la selección cuidadosa de un agente aglutinante celular adecuado.Losagentes aglutinantes celulares pueden ser de cualquier tipo actualmente conocido,oque se conozcan e incluye péptidos y no péptidos. Generalmente los más preferidos son los anticuerpos, las construcciones de fusión de ligandos y los anticuerpos biespecíficos.Losejemplos de agentes aglutinantes celulares incluyen anticuerpos monoclonales, fragmentos de anticuerpos tales como Fab, Fab' y F(ab')2,Fvy, particularmente, anticuerpos biespecíficos.
Actividad y eficacia
Losconjugados de maitansinoide de agentes aglutinantes celulares de la invención pueden evaluarse porsucapacidad para suprimir el crecimiento y/o la proliferación de diversas líneas celularesin vitro.Por ejemplo, para la evaluación de la citotoxicidad de estos conjugados pueden usarse líneas celulares tales como la línea celular de carcinoma de colon humano COLO205, la línea celular de melanoma humano A375, la línea celular de leucemia mieloide humana HL60, la línea celular de carcinoma de mama humano SKBR3ola línea celular de carcinoma epidermoide humano KB. Las células que se van a evaluar se pueden exponer, por ejemplo, a los compuestos durante 24 horas y las fracciones supervivientes de células se pueden medir en ensayos directos mediante métodos conocidos. Ver, por ejemplo Goldmacher y otros, 135 J. Immunol. 3648-3651 (1985) y Goldmacher y otros, 102 J. Cell Biol. 1312 1319 (1986).Losvalores de CI50 para la inhibición del crecimiento y/o muerte celular se calculan a partir de los resultados de los ensayos.
Métodos deuso
Losconjugados descritos en la presente descripción pueden usarse en un método para dirigir un agente citotóxico a una población celular seleccionada, el método comprende poner en contacto una población celularotejido sospechoso de contener la población celular seleccionada con un conjugado de agente citotóxico de agente aglutinante celular, en donde unoomás agentes citotóxicos están enlazados covalentemente al agente aglutinante celular a través de un enlazador. El agente aglutinante celular se une a células de la población celular seleccionada.Losconjugados descritos en la presente descripción también pueden usarse en un método para destruir células, el método comprende poner en contacto las células con un conjugado de maitansinoide de agente aglutinante celular, por ejemplo, en donde unoomás maitansinoides están enlazados covalentemente al agente aglutinante celular a través de un enlazador, por ejemplo, y el agente aglutinante celular se une a las células. En algunos casos, después de la unión, por ejemplo CD74, la célula diana internaliza todo el conjugado.Losconjugados de la presente invención también se pueden usar en un método de tratamiento de afecciones que incluyen tumores malignos, enfermedades autoinmunitarias, rechazos de injertos, enfermedades de injerto contra huésped, infecciones virales, infecciones por microorganismos e infecciones por parásitos, el método comprende administrar a un sujeto que necesite el tratamiento una cantidad efectiva de un conjugado de agente citotóxico de agente aglutinante celular, en donde uno o más agentes citotóxicos están enlazados covalentemente al agente aglutinante celular a través de un enlazador y el agente aglutinante celular se une a células enfermas<o>infectadas de la afección.
Los ejemplos de afecciones médicas que pueden tratarse mediante el uso de los conjugados de la presente invención incluyen enfermedades malignas de cualquier tipo, que incluyen, por ejemplo, afecciones hematológicas que incluyen cánceres de sangre, MDS, afecciones leucémicas, linfoma, mieloma, cáncer de pulmón, mama, colon, próstata, riñón, páncreas, ovario y órganos linfáticos; enfermedades autoinmunitarias, tales como lupus sistémico, artritis reumatoide y esclerosis múltiple; rechazos de injertos, tales como rechazo de trasplante renal, rechazo de trasplante de hígado, rechazo de trasplante de pulmón, rechazo de trasplante cardiaco y rechazo de trasplante de médula ósea; enfermedad de injerto contra huésped; infecciones virales, tales como infección por CMV, infección por VIH; y otras condiciones determinadas por un experto en la técnica. Los conjugados de la presente invención pueden usarse para tratar afecciones oncológicas, tumores, afecciones hematológicas, particularmente neoplasias malignas de células B, mieloma múltiple y linfomas de células B, por ejemplo.
Para uso clínicoin vivo,Ios conjugados de la presente invención se pueden suministrar como una solución o un polvo liofilizado en el que se evalúan la esterilidad y Ios niveles de toxinas. Los conjugados se pueden administrar, por ejemplo, semanalmente durante 4 semanas en forma de bolo intravenoso cada semana. Se pueden administrar dosis en bolo de 50 a 500 ml de solución salina normal a la que se pueden añadir, por ejemplo, de 5 a 10 ml de albúmina sérica humana. Las dosis pueden ser de 10 mg a 2o0o mg por administración, por vía intravenosa (intervalo, por ejemplo, de 100 ng a 200 mg/kg por día). Después de una a seis (1-6) semanas, por ejemplo, de dos a cuatro (2-4) semanas, por ejemplo, de tratamiento, el paciente puede continuar la recepción del tratamiento semanalmente.
Las condiciones de<uso>clínico y no clínico las determina fácilmente un experto en la técnica. Un experto en la técnica puede determinar protocolos clínicosin vivoespecíficos con respecto a la vía de administración, excipientes, diluyentes, dosis, tiempos, etc., según lo justifique la situación clínica.
Se pueden administrar otros agentes activos junto con el conjugado.
Ejemplo I
Conjugación de anticuerpo y fármaco
1. Almacenamiento
La proteína se almacena a -80 °C y el enlazador del fármaco se almacena a 4 °C o -20 °C para almacenamiento a largo plazo.
2. Cálculos
Calcular la cantidad de proteína y enlazador del fármaco. Concentración de solución madre de proteína X I mg/ml, concentración de proteína final deseada X2 mg/ml, concentración de solución madre de fármaco X3 mM y proteína CB a conjugar X4 mg. Una relación molar recomendada de proteína a fármaco es 10:1, pero puede ser tan baja, por ejemplo, 5:1. El MW de la proteína puede provocar un ajuste del cálculo si no es 150 K.
Concentración de solución madre de proteínas mg/ml 4,5 4,5 X1 Concentración de proteína final deseada mg/ml 3 3 X2 Concentración de la solución madre de fármaco mM 5 5 X3
Proteína a ser conjugada mg 0,1 10 X4
Relación de proteína a fármaco 10 10 10
MW de la proteína KDa 150 150 150 Concentración final del enlazador del fármaco<u>M 200 200
Volumen de reacción<u>I 33,3 3333,3
Proteína necesaria para la conjugación<u>I 22,2 2222,2
Fármaco necesario para la conjugación<u>I 1,3 133,3
Se necesita tampón PBS<u>I 9,8 977,8
3. Conjugación
Se preparan cantidades apropiadas de proteína y enlazador del fármaco a temperatura ambiente y se mezclan para la conjugación.
Ejemplo 1: [concentración de solución madre de proteínas] = 4,5 mg/ml, [concentración final de proteína deseada] = 3 mg/ml, [concentración de solución madre de fármaco] = 5 mM, 0,1 mg de proteína para conjugación.
Se añaden 9,8 ul de tampón PBS y 1,3 ul de fármaco a 22,2 ul de proteína en un microtubo. Colocar el tubo en el rotador de tubos a temperatura ambiente (~22 °C) durante 16 horas. Típicamente, esta cantidad de conjugado de anticuerpo y fármaco es suficiente para el análisis DAR, la unión celular y los ensayos de muerte.
Ejemplo 2: [concentración de solución madre de proteínas] = 4,5 mg/ml, [concentración final de proteína deseada] = 3 mg/ml, [concentración de solución madre de fármaco] = 5 mM, 10 mg de proteína para conjugación.
Se añaden 977,8 ul de tampón PBS y 133,3 ul de fármaco a 2222,2 ul de proteína en un tubo de centrífuga de 15 ml. Colocar el tubo en el rotador de tubos a temperatura ambiente (~22 °C) durante 16 horas de conjugación.
La duración y la temperatura de la conjugación pueden variar para diferentes variantes de anticuerpos. Se recomienda temperatura ambiente y 16 horas.
4. Eliminación de fármacos libre
El fármaco libre se puede eliminar al desalinizar la mezcla de conjugación mediante el<uso>de columnas de desalinización Thermo Scientific Zeba Spin 7K MWCO. Seleccionar el tamaño de la columna basado en el volumen de la muestra.
Ejemplo II
Ensayo de muerte celular
L<os>efectos de citotoxicidad de las biomoléculas conjugadas en las células diana positivas se midieron con un ensayo de proliferación celular. Las células diana positivas y diana negativas se obtuvieron de ATCC y se mantuvieron en RPMI, alto contenido de glucosa (Cellgro-Mediatech; Manassas, VA) suplementado con suero bovino fetal inactivado por calor al 20 % (Hyclone; Thermo Scientific; Waltham, MA), glutamax 2 mM ( Invitrogen; Carlsbad, CA) y 1<x>penicilina/estreptomicina (Cellgro-Mediatech; Manassas, VA). Se sembraron un total de 20000 células en un volumen de 40 |jL en una placa de poliestireno blanca de fondo plano de media área de 96 pocilios el día del ensayo. L<os>cables conjugados se formularon a una concentración 2<x>en medio RPMI y se filtraron a través de placas de filtro de 96 pocilios MultiScreen HTS (Millipore; Billerica, MA). Se añadieron cables conjugados esterilizados por filtración a los pocilios de tratamiento y las placas se cultivaron a 37 °C en una incubadora de C02 durante 72 h. Para medir la viabilidad celular, se añadieron 80<j>L de reactivo Cell Titer-Glo® (Promega Corp.; Madison, Wl) a cada pocilio y las placas se procesaron según las instrucciones del producto. La luminiscencia relativa se midió en un lector de placas ENVISlON® (Perkin-Elmer; Waltham, MA). Las lecturas de luminiscencia relativa se convirtieron en % de viabilidad mediante el<uso>de células no tratadas como controles. L<os>datos se ajustaron con un análisis de regresión no lineal, mediante el<uso>de log(inhibidor) contra la respuesta, pendiente variable, ecuación de ajuste de 4 parámetros m GraphPad Prism (GraphPad<v>5.00, software; San Diego, CA). L<os>datos se expresaron como % de viabilidad celular relativa contra la dosis de ADC en nM.
Ejemplo lll
A. Síntesis del ácido glutárico maitan-N-Me-L-Ala a partir de maitan-N-Me-L-Ala
Maitan-N-Me-L-Ala (250 mg, 0,385 mmol) (preparar según el procedimiento indicado en J. Med. Chem. 2006, 49,4392),anhídrido glutárico (440 mg, 3,85 mmol) y NaHCOa acuoso saturado (1 mi) se disuelve en THF (10 mi). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente en argón durante 2 h. La mezcla de reacción se diluye con agua y el pH se ajusta a 2 con ácido fórmico concentrado. La mezcla de reacción resultante se extrae dos veces con acetato de etilo. La capa orgánica combinada se lava con salmuera, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se filtra. El residuo crudo se purifica mediante cromatografía de fase inversa mediante el<uso>de una columna C18 de 20-40 mieras (50 g), se eluye con un gradiente (10-95 % durante 18 minutos) de aeetonitrilo (A<c>OH al 0,1 %) en agua (A<c>OH al 0,1 %), se liofiliza para producir ácido maitan-N-Me-L-Ala glutárico 32 (205 mg, 0,268 mmol, 70 % de rendimiento) como un sólido blanco. MSm/z:764,7 [MH+], 747,1 [M-18], 786,7 [M+ Na]; 1HNMR (500 MH<z>, CDCIs) 6 : 0,74 (3H,S), 1,191,27 (8H, m), 1,38-1,42(1H, m), 1,62 (3H, S), 1,80-1,85 (1H, m), 1,91-1,96 (2H, m), 2,12-2,18 (1H, m), 2,30-2,45 (5H, m), 2,55 (1H, t), 2,79 (3H,<s>), 2,95 (1H, d), 3,05 (1H, d), 3,15 (3H,<s>), 3,32 (3H,<s>), 3,44 (1H, d), 3,58 (1H, d), 3,93 (3H,<s>) , 4,24 (1H, t), 4,68-4,72 (1H, m), 5,32 (1H, bs), 5,58-5,63 (1H, m), 6,34-6,39 (1H, m), 6,58-6,65 (2H, m), 6,78 (1H,<s>).
B. Síntesis del éster NHS del ácido glutárico maitan-N-Me-L-Ala a partir del ácido glutárico maitan-N-Me-L-Ala
Se disuelve una solución de ácido glutárico maitan-N-Me-L-Ala (205 mg, 0,268 mmol) en diclorometano (10 ml) y se trata con N-hidroxisuccinimida (NHS, 62 mg, 0,54 mmol) y clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (EDCI, 128 mg, 0,67 mmol). La mezcla de reacción se agita durante toda la noche a temperatura ambiente en argón. La mezcla de reacción se lava con agua seguido de salmuera, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se filtra. El solvente se evapora a presión reducida para dar el residuo crudo. El residuo crudo se purifica mediante cromatografía de fase inversa mediante el<uso>de una columna C18, 20-40 mieras (50 g), eluida con un gradiente (10-95 % durante 18 minutos) de aeetonitrilo (A<c>OH al 0,1 %) en agua ( A<c>OH al 0,1 %), se liofilizó para proporcionar el éster NHS del ácido glutárico maitan-N-Me-L-Ala (190 mg, 0,22 mmol, rendimiento del 82 %) como un sólido blanco. MSm/z;862,0 [MH+], 844,6 [M-18], 884,0 [M+ Na]; 1HNMR (500 MH<z>, CDCIs) 6: 0,73 (3H,<s>), 1,16-1,24 (8H, m), 1,35-1,42 (1H, m), 1 ,45- 1,54 (4H, m), 1,58 (3H,<s>), 1,85-1,91 (1H, m), 2,01-2,12 (2H, m), 2,29-2,36 (1H, m), 2,42-2,57 (3H, m), 2,62 (2H, t) , 2,78 (3H,<s>), 2,98 (1H, d), 3,05 (1H, d), 3,12 (3H,<s>), 3,21 (1H, bs), 3,29 (3H,<s>), 3,43 (1H, d), 3,56 (1H, d), 3,92 (3H,<s>), 4,21 (1H, t), 4,71 (1H, dd), 5,28-5,34 (1H, m), 5,57-5,63 (1H, m), 6,15 (1H,<s>), 6,33-6,38 (1H, m), 6,58 (1H,<s>), 6,67 (1H, d), 6,75 (1H,<s>).
C. Síntesis del ácido PEG4 glutárico maitan-N-Me-L-Ala a partir del éster NHS del ácido glutárico maitan-N-Me-L-Ala
Se disuelve una solución de éster NHS del ácido glutárico maitan-N-Me-L-Ala (190 mg, 0,22 mmol) y ácido amino-PEG4 (133 mg, 0,50 mmol) en una mezcla de aeetonitrilo (25 ml) y agua (8 ml) y se trató con NaHCC3 acuoso saturado (6 ml). La mezcla de reacción se agita durante toda la noche a temperatura ambiente en argón y se concentra a presión reducida. El residuo crudo se purifica mediante cromatografía de fase inversa mediante el<uso>de una columna C18, 20-40 mieras (50 g), eluida con un gradiente (10-95 % durante 18 minutos) de aeetonitrilo (A<c>OH al 0,1 %) en agua (A<c>OH al 0,1 %), se liofilizó para producir ácido PEG4 glutárico maitan-N-Me-L-Ala (170 mg, 0,168 mmol, 76 % de rendimiento) como un sólido blanco. MSm/z;1012,7 [MH+], 995,4 [M-18], 1034,2 [M+ Na]; 1HNMR (500 MH<z>, CDCIs) 6: 0,73 (3H,<s>), 1,13-1,28 (8H, m), 1,32-1,42 (1H, m), 1,53-1,61 (5H, m), 1,78-1,85 (1H, m), 1,89-1,95 (1H, m), 2,08 2,13 (1H, m), 2,15-2,28 (3H, m), 2,39-2,47 (1H, m), 2,49-2,55 (2H, m), 2,82 (3H,<s>), 2,93 (1H, d), 3,05 (1H, d), 3,12 (3H,<s>), 3,29-3,38 (5H, m), 3,42 (1H, d), 3,50-3,61 (16H, m), 3,66-3,72 (2H, m), 3,95 (3H,<s>), 4,23 (1H, t), 4,71-4,77 (1H, m), 5,13-5-19 (1H, bs), 5,57-5,62 (1H, m), 6,32-6,38 (2H, m), 6,51-6,59 (2H, m), 6,75 (1H,<s>).
D. Síntesis del éster NHS del ácido PEG4 glutárico maitan-N-Me-L-Ala a partir del ácido PEG4 glutárico maitan-N-Me-L-Ala
Se disuelve una solución de ácido PEG4 glutárico maitan-N-Me-L-Ala (170 mg, 0,168 mmol) en diclorometano (15 ml) y se trata con N-hidroxisueeinimida (NHS, 39 mg, 0,336 mmol) y 1-[elorhidrato de 3-(dimetilamino)propil]-3-etilearbodiimida (EDCI, 81 mg, 0,42 mmol). La mezcla de reacción se agita durante toda la noche a temperatura ambiente en argón y se concentra a presión reducida. El residuo crudo se purifica mediante cromatografía de fase inversa mediante el<uso>de una columna C18, 20-40 mieras (50 g), eluida con un gradiente (10-95 % durante 18 minutos) de aeetonitrilo (A<c>OH al 0,1 %) en agua (A<c>OH al 0,1 %), se liofilizó para dar el éster NHS del ácido PEG4 glutárico maitan-N-Me-L-Ala (150 mg, 0,135 mmol, 80 %) como un sólido blanco. MSm/z;1109,6 [MH+], 1092,5 [M-18], 1131,3 [M+ Na]; 1HNMR (500 MH<z>, CDCIs) 6: 0,74 (3H,<s>), 1,14-1,27 (8H, m), 1,34-1,42 (1H, m), 1,43-1,52 (4H, m), 1,59 (3H,<s>), 1,77-1,84 (1H, m), 1,88-1,96 (1H, m), 2,10-2,18 (3H, m), 2,21-2,28 (1H, m), 2,37-2,43 (1H, m), 2,53 (1H, t), 2,82-2,88 (4H, m), 2,96 (1H, d), 3,05(1H, d), 3,15 (3H,<s>), 3,29-3,36 (5H, m), 3,42-3,49 (4H, m), 3,52-3,61 (16H, m), 3,78 (1H, t), 3,92 (3H,<s>), 4,20 (1H, t), 4,69-4,73 (1H, m), 5,28 (1H, bs), 5,55-5,63 (1H, m), 6,18 (1H,<s>), 6,32-6,40 (1H, m), 6,60-6,68 (2H, m), 6,75 (1H,<s>).
E. Síntesis de PEG4-DIBCO glutárico de maitan-N-Me-L-Ala a partir del éster NHS del ácido PEG4 glutárico de maitan-N-Me-L-Ala
Se disuelve una solución de éster NHS del ácido PEG4 glutárico maitan-N-Me-L-Ala (150 mg, 0,135 mmol) y amina trieícliea (55 mg, 0,173 mmol) en una mezcla de aeetonitrilo (12 ml) y agua (4 ml) y tratado con NaHCOa acuoso saturado (3 ml). La mezcla de reacción se agita durante toda la noche a temperatura ambiente en argón y se concentra a presión reducida. El residuo crudo se purifica mediante cromatografía de fase inversa mediante el<uso>de una columna C18, 20-40 mieras (50 g), al eluir con un gradiente (10-95 % durante 18 minutos) de aeetonitrilo (A<c>OH al 0,1 %) en agua (A<c>OH al 0,1 %), se liofilizó para obtener maitan-N-Me-L-Ala glutárico PEG4-DIBCO (105 mg, 0,08 mmol, 60 % de rendimiento) como un sólido blanco. MSm/z;1312,9 [MH+], 1295,4 [M-18], 1334,6 [M+ Na]; 1HNMR (500 MH<z>, CDCI3) 6: 0,82 (3H,<s>), 1,01-1,08 (2H, m), 1,23-1,32 (8H, m), 1,39-1,51 (3H, m), 1,58-1,66 (4H, m), 1,88-1,96 (2H, m), 1,98-2,03 (1H, m), 2,19-2,26 (4H, m), 2,30-2,36 (1H, m), 2,42 (2H, t), 2,47-2,52 (1H, m), 2,59-2,65 (1H, m), 2,88 (3H,<s>), 3,02-3,14 (4H, m), 3,21 (3H,<s>), 3,35-3,43 (5H, m), 3,49-3,52 (3H, m), 3,58-3,70 (18H, m), 4,00 (3H,<s>), 4,31 (1H, t), 4,79-4,82 (1H, m), 5,17 (1H, d), 5,33 (1H, bs), 5,65-5,70 (1H, m), 6,19 (1H, dd), 6,26 (1H, d), 6,32 (1H, dd), 6,41-6,47 (1H, m), 6,68-6,71 (2H, m), 6,84 (1H,<s>), 7,31-7,44 (7H, m), 7,70-7,72 (1H, m).
F. Síntesis de ácido 6-(2, 2, 2-trifluoroacetilamino) hexanoico a partir de ácido 6-aminohexanoico
Se añaden trifluoroacetato de etilo (5,7 ml, 6,8 g, 48 mmol) y trietilamina (5,4 ml, 3,9 g, 39 mmol) a una suspensión de ácido 6-aminohexanoico (5,00 g, 38,1 mmol) en metanol seco (19 ml). La mezcla de reacción se agita durante 17 horas a temperatura ambiente en argón. Luego se añade éter (100 ml) y se lava con 100 ml de HCl acuoso 2 M. La capa acuosa se extrae dos veces con 100 ml de éter. Las capas orgánicas se combinan, se lavan con 150 ml de salmuera y se secan sobre sulfato de sodio anhidro. Después de filtrar, concentrar y secar al vacío, se obtiene el producto (8,66 g, 100 %, 38,1 mmol) como un sólido blanquecino. MS (ESI+)m/z;228 [M++H+]; MS (ESI-)m/z;226 [M"-H"];1HNMR (300 MH<z>, DMSO-d6) 6:1,21-1,29 (2H, m), 1,41-1,53 (4H, m), 2,16-2,21 (2H, t), 3,12-3,18 (2H, q), 9,39 (1H,<s>, br), 11,99(1H,<s>).
G. Síntesis de cloruro de 6-(2, 2, 2-trifluoro-acetilamino)-hexanoilo a partir de ácido 6-(2,2,2-trifluoroacetilamino)hexanoico
Se enfría a 0 °C una suspensión de PEG4-DIBCO glutárico maitan-N-Me-L-Ala (8,66 g, 38,1 mmol) en cloruro de metileno (190 ml). Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (16,1 ml, 24,2 g, 190 mmol) durante 6 minutos. Luego se añade DMF (8 gotas). La mezcla de reacción se agita durante 1 hora a 0 °C y luego durante 2,5 horas a temperatura ambiente. Luego se concentra y se seca al vacío para dar el producto (9,36 g, 100 %, 38,1 mmol) como un Jarabe ámbar claro.1H NMR (300 MH<z>, CDCIs) 6: 1,36-1,46 (2H, m), 1,57-1,67 (2H, m), 1,70-1,80 (2H, m), 2,89-2,94 (2H, t), 3,34-3,41 (2H, q), 6,40 ( 1H, br).
H. Síntesis de oxima de dibenzo[a,d]ciclohepten-5-ona a partir de dibenzo[a,d]ciclohepten-5-ona
Una solución de dibenzo[a,d]ciclohepten-5-ona (25,0 g, 121 mmol) e hidroxilamina HCl (12,6 g, 181 mmol) en piridina (70 ml) se somete a reflujo durante<i>5,5 h. La mezcla de reacción se deja enfriar a temperatura ambiente y se concentra al vacío. El residuo se reparte entre 300 ml de HCl acuoso al 5 %/hielo y 200 ml de acetato de etilo. La capa acuosa se extrae dos veces con 150 ml de acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con 250 ml de salmuera. Después de secar con sulfato de sodio anhidro, filtrar, concentrar y secar, se obtiene el producto como un sólido amarillo-beige claro (26,8 g, 121 mmol). MS (ESI+)m/z;222[M++H+]; MS (ESI-)m/z;220 [M'-H'];1HNMR (300 MH<z>, CDCIs) 6,91-6,92 (2H, d), 7,33-7,43 (6H, m), 7,56-7,61 (1H, m), 7,65-7,68 (1H, m), 8,55 (1H,<s>).
<i>. De dibenzo[a,d]ciclohepten-5-ona oxima a 5,6-dihidro-dibenzo[b,f]azocina
Se enfría una solución de hidruro de diisobutilaluminio en diclorometano (1,0 M, 192 ml) en un baño de agua y se añade dibenzo[a,d]ciclohepten-5-ona oxima sólida (8,48 g, 38,3 mmol) en porciones a una velocidad que mantenga la temperatura entre 15 °C y 27 °C. Se retira el baño de agua y la solución resultante se agita a temperatura ambiente durante 3 días. La solución se enfría en un baño de agua y se añade sulfato de sodio sólido decahidratado (20,4 g, 63,3 mmol) en porciones a una velocidad para mantener la temperatura entre 12 °C y 30 °C. Se añade celite y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante 1 hora. L<os>compuestos inorgánicos se separan por filtración y se lavan generosamente con acetato de etilo. Las soluciones orgánicas se combinan y I<os>solventes se evaporanal vacío.El residuo se aplica a una columna de gel de sílice (150 g) y se eluye con un gradiente de diclorometano (20 % a 100 %) en hexanos para proporcionar el producto, 5,0 g (63 %), como un sólido amarillo. MS m/z;208,4 MH+;1H NMR (300 MH<z>, CDCIs) 6: 4,29 (1H, br<s>), 4,59 (2H,<s>), 6,39 (1H, d), 6,50 (1H, d de d), 6,58 (1H, d), 6,61-6,66 (1H, m), 6,89-6,95 (1H, m), 7,00 (1H, d de d), 7,19-7,32 (4H, m).
J. Síntesis de N-[6-[6H-Dibenzo[b,f]azocin-5-il)-6-oxo-hexil]-2,2,2-trifluoroacetamida (26) a partir de 5,6-dihidrodibenzo [b,f]azocina y cloruro de 6-(2,2,2-trifluoroacetilamino)-hexanoilo
Se añade piridina (8,5 ml, 8,3 g, 110 mmol) a una solución de 5,6-dihidro-dibenzo[b,f]azocina (7,29 g, 35,2 mmol) en cloruro de metileno seco (72 ml). A continuación se añade cloruro de 6-(2,2,2-trifluoroacetilamino)-hexanoilo (10,7 g, 45,6 mmol) en 25 ml de cloruro de metileno durante 4 minutos. La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante aproximadamente 2 horas y luego se diluye con 180 ml de cloruro de metileno y se lava con 3<x>150 ml de agua. Las capas orgánicas se lavaron con 150 ml de salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron. El producto crudo se somete a cromatografía ultrarrápida (I<sco>) en un cartucho de gel de sílice de 330 g con 0-50 % de acetato de etilo/hexano. Después de concentrar y secar, se obtienen 14,0 g (95,9 %, 33,6 mmol) de producto puro como una goma ámbar transparente, muy pálida. MS (ESI+)m/z;417 [M++H+], MS (ESI-)m/z;415 [M--H-];1HNMR (300 MH<z>, DMSO-d6) 6 0,95-1,03 (2H, m), 1,22-1,37 (4H, m), 1,69-1,79 (1H, m), 1,87-1,97 (1H, m), 3,00-3,06 (2H, q), 4,14-4,19 (1H, d), 5,34-5,39 (1H, d), 6,61-6,65 (1H, d), 6,74-6,78 (1H, d), 7,15-7,19 (3H, m), 7,27 7,38 (5H, m), 9,31 (1H, br).
K. Síntesis de N-[6-(11,12-Dibromo-11,12-dihidro-6H-dibenzo[b,f]azocin-5-il)-6-oxohexil]-2,2,2-trifluoro-acetamida de N-[6-(6H-Dibenzo[b,f]azocin-5-il)-6-oxo-hexil]-2,2,2-trifluoro-acetamida
Se añade tribromuro de piridinio (8,48 g, 26,5 mmol) a una solución de N-[6-(6H-dibenzo[b,f]azocin-5-il)-6-oxo-hexil]-2,2,2-trifluoro-acetamida (9,95 g, 23,9 mmol), en cloruro de metileno (20<o>ml). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente en argón durante 4,5 horas y luego se lava con 1 ) 2<x>120 ml de HCl acuoso 0,5 M, 2) 120 ml de agua y 3) 120 mi de salmuera. Después de secar con sulfato de sodio anhidro, filtrar y concentrar, el producto crudo se somete a cromatografía ultrarrápida (I<sco>) en un cartucho de gel de sílice de 330 g con acetato de etilo hexano al 0-50 %. Después de concentrar y secar, el producto se disuelve dos veces en 150 mi de cloruro de metileno y se concentra. Se seca al vacío para dar 10,5 g (76,1 %, 18,2 mmol) de producto como una espuma gris pizarra muy pálida. MS (ESI+)m/z;577 [M++H+]; MS (ESI-)m/z;575 [M--H-];1HNMR (300 MH<z>, DMSO-da) 6: 1,13-1,20 (2H, m), 1,35 1,59 (4H, m), 1,95-2,29 (2H, m), 3,07-3,13 (2H, q), 4,17-5,08 (1H, m), 5,69-5,87 (2H, m), 6,97-7,31 (7H, m), 7,55-7,65 (1H, m), 9,33 (1H,<s>).
L. Síntesis de N-(6-trifluoroacetamidohexanoil)-5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[b,f]azocina a partir de N-[6-(11,12-dibromo-11,12-dihidro-6H-dibenzo[b,f]azocin-5-il)-6-oxo-hexil]-2,2,2-trifluoro-acetamida
Una solución de N-[6-(11,12-dibromo-11,12-dihidro-6H-dibenzo[b,f]azocin-5-il)-6-oxohexil]-2,2,2-trifluoro-acetamida (6,76 g, 11,7 mmol) en THF seco (31 mi) a una solución de terc-butóxido de potasio/THF 1 M (35 mi, 35 mmol). La mezcla de reacción se agita durante 2 horas a temperatura ambiente en argón. Se añaden lentamente aproximadamente 8,5 mi de agua para detener la reacción y se diluye con aproximadamente 180 mi de acetato de etilo. Luego se lava con 200 mi de HCl acuoso al 1 %, 200 mi de agua y 200 mi de salmuera. La capa orgánica se seca con sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra. El producto crudo se purifica mediante cromatografía ultrarrápida (I<sco>) en un cartucho de gel de sílice de 120 g con 0-10 % de acetato de etilo/cloruro de metileno. Después de concentrar y secar, el producto se obtiene como una goma/espuma de color coral (3,05 g, 62,8 %, 7,36 mmol). MS (ESI-)m/z;413[M'-H']; 1HNMR (300 MH<z>, CDCI<s>) 60,96-1,15 (2H, m), 1,23-1,49 (4H, m), 1,88-1,98 (1H, m), 2,04-2,26 (1H, m), 3,02-3,27 (2H, m), 3,64-3,69 (1H, d), 5,14-5,18 (1H, d), 6,58 (1H, br), 7,24-7,44 (7H, m), 7,68-7,70 (1H, d).
M. Síntesis de N-(6-aminohexanoil)-5,6-dihidro-11,12-dideshidrodibenzo[b,f]azocina a partir de N-(6-trifluoroacetamidohexanoil)-5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[b,f]azocina
Se añade lentamente una solución de carbonato de potasio (1,00 g, 7,24 mmol) en agua (7,5 mi) a una solución de N-(6-trifluoroacetamidohexanoil)-5,6-dihidro-1 1,12-dideshidrobenzo[b,f]azocina (1,04 g, 2,51 mmol) en metanol (10 mi). La mezcla de reacción se agita durante 49 horas a temperatura ambiente. Se concentra y se reparte en 40 mi de cloroformo/40 mi de salmuera. La capa acuosa se extrae con 40 mi de cloroformo. Se combinan las capas orgánicas y se añaden 40 mi de acetato de etilo para ayudar a la solubilidad. Después de secar con sulfato de sodio anhidro, filtrar y concentrar, el producto crudo se purifica mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (Isco) en 2 inyecciones mediante el<uso>de una columna C18 de 275 g, 20-40 mieras, eluida con acetonitrilo al 5-95 % (A<c>OH al 0,1 %)/agua (AcOH al 0,1 %). Después de la liofilización, el producto se obtiene como la sal de ácido acético (espuma amarillo elaro-beige: 0,577 g, 60,7 %, 1,52 mmol). MS (ESI+)m/z;319[M++H+]. 1HNMR (300 MH<z>, CDCI<s>) 60,98-1,07 (2H, m), 1,27-1,44 (4H, m), 1,85-1,95 (4H, m), 2,14-2,23 (1H, m), 2,54-2,59 (2H, t), 3,62-3,67 (2H, d), 5,13-5,17 (1H, d), 6,20 (3H, br), 7,23-7,42 (7H, m), 7,67-7,70 (1H, d).
Ejemplo IV
I4 sintético
A. Síntesis de N-Me-PEG4-N-Me-DIBCO glutárieo de maitan-N-Me-L-Ala (I4) a partir de éster NHS del ácido glutárieo de maitan-N-Me-L-Ala y DIBCO-dimetil-PEG4-amina
Se disuelve una solución de éster NHS del ácido glutárieo maitan-N-Me-L-Ala (160 mg, 0,186 mmol) y DIBCO-dimetil-PEG4-amina (210 mg, 0,354 mmol) en una mezcla de acetonitrilo (5 mi) y se trata agua (1 mi) con NaHCOa acuoso saturado (0,5 mi). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante toda la noche en argón y luego se concentra a presión reducida. El residuo crudo se purifica mediante cromatografía de fase inversa mediante el uso de una columna C18, 20-40 mieras (50 g), al eluir con un gradiente (10-95 % durante 18 min) de acetonitrilo (A<c>OH al 0,1 %) en agua (AcOH al 0,1 %), se liofilizó para obtener maitan-N-Me-L-Ala glutárieo N-Me-pEG4-N-Me-DIBCO (I4) (135 mg, 0,10 mmol, 54 % de rendimiento) como un sólido blanco. MS m/z;1340,9 [MH+], 1323,4 [M-18], 1362,6 [M+ Na];1HNMR (500 MH<z>, CDCI<s>) 6: 0,82 (3H,<s>), 0,99-1,01 (2H, m), 1,26-1,33 (8H, m), 1,42-1,48 (3H, m), 1,60-1,67 (4H, m), 1,88-1,96 (2H, m), 1,98-2,03 (1H, m), 2,11 (3H,<s>), 2,19-2,21 (2H, m), 2,36-2,38 (2H, m), 2,42-2,44 (1H, m), 2,53 2,64 (5H, m), 2,82-2,90 (6H,<im>), 3,00-3,14 (5H, m), 3,19-3,22 (4H, m), 3,38 (3H,<s>), 3,47-3,70 (17H, m), 3,78 (2H, m), 4,00 (3H,<s>), 4,31 (1H, t), 4,78-4,81 (1H, m), 5,19 (1H, d), 5,40 (1H, bs), 5,67-5,72 (1H, m), 6,35 (1H,<s>), 6,42-6,48 (1H, m), 6,70-6,76 (2H, m), 6,85 (1H, s), 7,29-7,44 (8H, m), 7,72-7,74 (1H, m).
B. Síntesis de ácido 3-[2-(2-{2-[2-(2, 2, 2-trifluoro-acetilamino)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-propiónieo a partir de ácido 3-(2-{2-[2-(2-amino-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-propiónieo y trifluoroaeetato de etilo
Se añaden trifluoroaeetato de etilo (1,4 mi, 1,7 g, 12 mmol) y trietilamina (1,3 mi, 0,94 g, 9,3 mmol) a una solución de ácido 3-(2-{2-[2-(2-amino-etoxi)-etoxi ]-etoxi}-etoxi)-propiónico (2,43 g, 9,16 mmol) en metanol (8,0 mi). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 17,5 horas en argón y se concentra. Luego el producto crudo se purifica mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (Isco) en una columna de oro Isco C18 de 275 g con 5-95 % de aeetonitrilo/agua (con ácido acético al 0,1 %). Después de la liofilización, el producto se obtiene como un jarabe amarillo pálido (1,79 g, 54,1 %, 4,95 mmol).
MSm/zMH+362;1HNMR (300 MHz , DMSO-da) 6: 2,40-2,45 (2H, t), 3,32-3,36 (2H, m), 3,47-3,51 (14H, m), 3,56-3,60 (2H, m), 9,47 (1H, br), 12,15 (1H, br).
C. Síntesis de éster metílico del ácido 3-[2-(2-{2-[2-(2, 2, 2-tr¡fluoro-acet¡lamino)-etox¡]-etox¡}-etox¡)-etox¡]-prop¡ón¡co a partir de ácido 3-[2-(2-{2-[2-(2, 2, 2-trifluoro-acetilamino)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-propiónico
Una solución de ácido 3-[2-(2-{2-[2-(2,2,2-trifluoro-acetilamino)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-propiónico (0,520 g, 1,43 mmol) en diclorometano (lO ml) y metanol (5 ml) se trata con una solución de 2 M de (trimetilsilil)diazometano en éter dietílico (1 ml, 2 mmol) y se agita a rt durante 1 hora. Se añade una alícuota adicional de una solución de 2 M de (trimetilsilil) diazometano en éter dietílico (1 ml, 2 mmol) y la solución se agita a r.t. durante 1 día. L<os>solventes se evaporanal vacío.El producto se aplica a una columna de gel de sílice (40 g) y se eluye con un gradiente (1-1O %) de metanol en diclorometano para proporcionar el producto final como un aceite amarillo pálido, 0,536 g (1OO %). MS (ESI+)m/z;376,O [MH+].1HNMR (3OO MHz , CDCIs) 6: 2,60 (2H, t), 3,51-3,56 (2H, m), 3,60-3,64 (14H, m), 3,66 (3H, s), 3,73 (2H, t) y 7,86 (1H, br<s>).
D. Síntesis de éster metílico del ácido 3-12-[2-(2-12-[metil-(2,2,2-trifluoro-aeetil)-amino]-etoxil-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propiónico a partir de éster metílico del ácido 3-[2-(2-{2-[2-(2,2,2-trifluoroacetilamino)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-propiónico
Una solución de éster metílico del ácido 3-[2-(2-{2-[2-(2,2,2-trifluoro-acetilamino)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-propiónico 175 (O,29O g, 0,77 mmol) en DMF (4 ml, se trata con carbonato de potasio (O,32O g, 2,31 mmol) y yoduro de metilo (0,287 ml, 4,63 mmol) y la mezcla resultante se agita a rt durante 1 día. La mezcla se enfría en un baño de hielo y se trata con ácido clorhídrico 1 N frío (1 ml). La solución resultante se aplica a una columna C18 de fase inversa, de 20 40 mieras (50 g) y se eluye con un gradiente (5-95 %) de acetonitrilo (AcOH al 0,1 %) en agua (AcOH al 0,1 %) y se liofiliza para proporcionar el producto, 0,217 g (72 %) como un aceite incoloro, 0,29 g (64 %). lCm S (ESI+)m/z;39o,O [MH+].1HNMR (3OO MHz , CDCIs) 6: 2,60 (2H, t), 3,21 (2H, q), 3,58- 3,70 (17H, m) superpuestos a 3,68 (3H, s) y 3,75 (2H, t).
E. Síntesis de la sal sódica del ácido 3-(2-{2-[2-(2-metilamino-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-propiónieo a partir de éster metílico del ácido 3-{2-[2-(2-{2-[metil-(2, 2,2-trifluoro-acetil)-amino]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propiónieo
Una solución del éster metílico del ácido 3-{2-[2-(2-{2-[metil-(2,2,2-trifluoro-acetil)-amino]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propiónieo (0,433 g, 1,1 mmol) en metanol (1 ml) se trata con hidróxido de sodio acuoso 1 M (2,9 ml, 2,9 mmol) y se calienta a 60 °C durante 2 horas. La solución se enfría a rt y I<os>solventes se evaporanal vacío.El material se disuelve en acetonitrilo y el solvente se evapora al vacío (repetido dos veces). El residuo resultante se seca al vacío y se usa sin purificación adicional en la etapa subsecuente. MS (ESI+) m/z;28o,4 [MH+]. 1HNMR (3OO MH<z>, DMSO-d6) 6: 1,89 (2H, t), 1,94-1,99 (6H, m), 2,99-3,14 (1OH, m), 2,95 (6H, d )y 8,90 (1H, br<s>).
F. Síntesis del ácido 3-{2-[2-(2-{2-[metil-(2, 2, 2-trifluoro-acetil)-amino]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propiónieo a partir de la sal sódica del ácido 3-(2-{2-[2-(2-metilamino-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-propiónieo
Se añade anhídrido de ácido trifluoroaeétieo (6 ml) a la sal sódica del ácido 3-(2-{2-[2-(2-metilamino-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-propiónico y la mezcla se agita a rt durante 3 horas. El solvente se evapora al vacío. El residuo se disuelve en aeetonitrilo:agua (1:1) y se aplica a una columna C18 de fase inversa, 2O-4O mieras (15O g) y se eluye con un gradiente (5-95 %) de acetonitrilo (A<c>O<h>al 0,1 %) en agua (A<c>OH al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar el producto como un aceite incoloro, 0,383 g (92 %, para 2 etapas). MS (ESI+)m/z;376,0 [MH+]. MS (ESI-)m/z;374,0 [M-H]-. 1HNMR (3OO MHz , CDCIs) 6: 2,58-2,71 (2H, m), 3,13 y 3,22 (3H, cada s), 3,63 (16H, m) y 3,76 (2H, t).
G. Síntesis de N-[6-(5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[£),/]azocin-5-il)-6-oxo-hexil]-N-metil-3-[2-[2-(2-{2-[metil-(2,2,2-trifluoro-aeetil)-amino]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionamida de la sal del ácido 1 -(5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[b,f]azoein-5-il)-6-metilamino-hexan-1-ona acético y ácido 3-{2-[2-(2-{2-[metil-(2,2,2-trifluoro-aeetil)-amino]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propiónieo
Una solución de la sal del ácido 1-(5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[b,f]azoein-5-il)-6-metilamino-hexan-1-ona acético (0,283 g, 0,721 mmol) en diclorometano (20 ml) se lava con bicarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y se seca sobre sulfato de sodio. El solvente se evaporaal vacíopara proporcionar la base libre de 1 -(5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[b,f]azoein-5-il)-6-metilamino-hexan-1-ona, 0,22 g (92 %), que se usa en la etapa subsecuente.
Una solución de ácido 3-{2-[2-(2-{2-[metil-(2, 2, 2-trifluoro-acetil)-amino]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propiónieo (0,248 g, 0,660 mmol) en DMF (4 ml) se trata con difenilfosfinato de pentafluorofenilo (O,3O5 g, 0,794 mmol) yN, N-diisopropiletilamina. La solución resultante se añade a la base libre de 1-(5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[b,/]azocin-5-il)-6-metilamino-hexan-1-ona (0,22 g, 0,662 mmol) y se agitó a rt durante 20 horas. Se añade agua (1 ml) y la solución se aplica a una columna C18 de fase inversa, 2O-4O mieras (15O g) y se eluye con un gradiente (30-95 %) de acetonitrilo (A<c>O<h>al 0,1 %) en agua (A<c>OH al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar el producto como un aceite incoloro, 0,322 g (71 %). MS (ESI+)m/z;690,0 [MH+] y 712,0 [MNa+].1HNMR (3OO MHz , CDCIs) 6: 0,92-1,03 (2H, m), 1,26-1,34 (2H, m), 1,35-1,46 (2H, m), 1,87-1,97 (1H, m), 2,15-2,21 (1H, m), 2,50-2,57 (2H, m), 2,79 y 2,89 (Juntos 3H, cadas), 3,04-3,07 (1H, m), 3,10 y 3,21 (Juntos 3H, cada s), 3,14-3,19 (1H, m), 3,61-3,69 (17H, m), 3,73-3,77 (2H, m), 5,16 (1H, d de d), 7,22-7,43 (7H, m )y7,70(1H , d).
H. Síntesis de W-[6-(5,6-dihidro-11,12-d¡desh¡drobenzo[£),f]azoc¡n-5-¡I)-6-oxo-hex¡I]-N-met¡I-3-(2-{2-[2-(2-met¡Iam¡noetoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-propionamida de W-[6-(5,6-dihidro-11,12-d¡desh¡drobenzo[£),f]azoc¡n-5-¡I)-6-oxo-hex¡I]-W-met¡l-3-12-[2-(2-12-[met¡l-(2,2,2-trifluoro-acet¡l)-am¡no]-etox¡l-etox¡)-etox¡]-etox¡l-prop¡onam¡da
Una solución de W-[6-(5,6-dih¡dro-11,12-d¡desh¡drobenzo[b,t]azoc¡n-5-¡I)-6-oxo-hex¡I]-A/-met¡I-3-{2-[2-(2-{2-[met¡I-(2,2,2-trifluoro-acet¡l)-am¡no]-etox¡}-etox¡)-etox¡]-etox¡}-prop¡onam¡da (0,322 g, 0,467 mmol) en metanol (10 ml) se trata con carbonato de potasio (0,323 g, 2,33 mmol) y la mezcla se agita a rt durante un día. Se añade una porción adicional de carbonato de potasio (0,323 g, 2,33 mmol) y se continúa la agitación durante un día adicional. Los compuestos inorgánicos se eliminan mediante filtración y el solvente se evapora al vacío. El residuo se disuelve en acetonitrilo/agua (1/1) y se aplica a una columna C18 de fase inversa, 20-40 mieras (150 g) y se eluye con un gradiente (5-95 %) de acetonitrilo (A<c>OH al 0,1 %) en agua (A<c>OH al 0,1 %) y se liofilizó para proporcionar N-[6-(5,6-dihidro-11,12-d¡desh¡drobenzo[b,f]azoc¡n-5-¡I)-6-oxo-hex¡I]-A/-met¡I-3-{2-[2-(2-{2-[met¡I-(2,2,2-tr¡fluoro-aeet¡I)-am¡no]-etox¡}-etox¡)-etoxi]-etoxi}-prop¡onam¡da, 0,218 g (71 %), y producto ligeramente impuro, 0,048 g (16 %). MS (ESI+) m/z:594,0 [MH+]. 1HNMR (300 MHz , DMSO-d6) 6: 0,85-0,90 (2H, m), 1,11-1,29 (4H, m), 1,75-1,86 (1H, m), 2,12-2,17 (1H, m), 2,27 (3H, m), 2,40(1H, t), 2,46 (1H, t), 2,59 (2H, t), 2,66y2,80 (Juntos 3H, cadas), 2,98-3,09 (2H, m), 3,42-3,63 (17H, m), 5,04 (1H, d), 7,30-7,49 (6H, m), 7,57 (1H, d) y 7,63 (1H, d).
I. Síntesis de clorhidrato de ácido 6-metilaminohexanoieo a partir de N-metileaprolaetama
Una solución de N-metileaprolaetama (1,12 g, 8,81 mmol) en 5,3 ml de HCl acuoso concentrado y 6,7 ml de agua se somete a reflujo durante i 9,5 horas. La mezcla de reacción se deja enfriar a temperatura ambiente y se añaden 20 ml de agua. Luego se concentra. Se añaden 10 ml de agua y la mezcla se concentra nuevamente. Lo siguiente se realiza dos veces: Luego se añaden 5 ml de acetona y se concentra la mezcla. Se seca al vacío para dar el producto (1,57 g, 98,1 %, 8,64 mmol) como un semisólido de color crema.
MSm/zMH+ 146;1HNMR (300 MHz , DMSO-d6) 6: 1,24-1,34 (2H, m), 1,44-1,62 (4H, m), 2,18-2,23 (2H, t), 2,77-2,86 (2H, m), 8,70 (2H, br), 12,05 (1H, s, br).
J. Síntesis de ácido 6-[metil-(2, 2, 2-trifluoroacet¡l)-am¡no]-hexano¡eo a partir de clorhidrato de ácido 6-metilaminohexanoieo
Se disuelve clorhidrato de ácido 6-metilaminohexanoieo (5,38 g, 29,6 mmol) en 20 ml de metanol y se añaden trifluoroaeetato de etilo (4,4 ml, 5,3 g, 37 mmol) y trietilamina (8,3 ml, 6,0 g, 60 mmol). La mezcla de reacción se agita en argón a temperatura ambiente durante 19,5 h. Se añaden 80 ml de HCl acuoso 2 M y la mezcla se extrae con 3<x>60 ml de éter. Luego, las capas orgánicas combinadas se lavan con 100 ml de salmuera, se secan con sulfato de sodio anhidro, se filtran, se concentran y se secan al vacío para producir el producto como un Jarabe transparente amarillo pálido (6,86 g, 96,1 %, 28,4 mmol).
MSm/zMH+ 242;1HNMR (300 MHz , DMSO-d6) 6: 1,16-1,28 (2H, m), 1,45-1,60 (4H, m), 2,17-2,24 (2H, m), 2,94 (1H, s), 3,06-3,07 (2H, q), 3,32-3,39 (2H, m).
K. Síntesis de cloruro de 6-[metil-(2, 2, 2-trifluoroaeet¡l)-am¡no]-hexano¡lo a partir de ácido 6-[metil-(2, 2, 2-trifluoroacet¡l)-am¡no]-hexano¡eo
Una solución de ácido 6-[metil-(2, 2, 2-trifluoroacet¡l)-am¡no]-hexano¡eo (6,84 g, 28,4 mmol) en cloruro de metileno (140 ml) en argón se enfría a 0 °C. Se añade lentamente cloruro de oxalilo (12 ml, 18 g, 142 mmol) y luego se añaden 6 gotas de DMF. La mezcla se agita a 0 °C durante 1 hora y a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Luego se concentra y se seca al vacío para producir el producto como un aceite ámbar claro (6,54 g, 88,9 %, 25,2 mmol). 1HNMR (300 MHz , CDCI3) 6: 1,35-1,43 (2H, m), 1,57-1,81 (4H, m), 2,89-2,94 (2H, m), 3,02 (1H, s), 3,11-3,13 (2H, q), 3,37-3,46 (2H, m).
L. Síntesis de d¡benzo[a,d]e¡eIohepten-5-ona oxima a partir de d¡benzo[a,d]e¡eIohepten-5-ona
Una solución de d¡benzo[a,d]e¡eIohepten-5-ona (25,0 g, 121 mmol) e hidroxilamina HCl (12,6 g, 181 mmol) en piridina (70 ml) se somete a reflujo durante 15,5 horas. La mezcla de reacción se deja enfriar a rt y se concentraal vacío.El residuo se reparte entre HCl acuoso al 5 %/hieIo (300 ml) y acetato de etilo (200 ml). La capa acuosa se extrae dos veces con acetato de etilo (150 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavan con salmuera (250 ml) y se secan sobre sulfato de sodio. El solvente se evaporaal vacíopara proporcionar el producto como un sólido amarillo-beige claro, 26,8 g (100 %). MS (ESI+)mlz:222 [MH+]; MS (ESI-)mlz:220 [MH-];1H NMR (300 MHz , CDCI3) 6: 6,91-6,92 (2H, d), 7,33-7,43 (6H, m), 7,56-7,61 (1H, m), 7,65-7,68 (1H, m), 8,55 (1H,<s>).
M. d¡benzo[a,d]e¡eIohepten-5-ona oxima a 5,6-dih¡dro-d¡benzo[b,f]azoe¡na
Se enfría una solución de hidruro de diisobutilaluminio en diclorometano (1,0 M, 192 mi) en un baño de agua y se añade dibenzo[a,d]ciclohepten-5-ona oxima sólida (8,48 g, 38,3 mmol) en porciones a una velocidad para mantener la temperatura entre 15-27 °C. Se retira el baño de agua y la solución resultante se agita a temperatura ambiente durante 3 días. La solución se enfría en un baño de agua y se añade sulfato de sodio sólido decahidratado (20,4 g, 63,3 mmol) en porciones a una velocidad para mantener la temperatura entre 12-30 °C. Se añade celite y la mezcla se agita a rt durante 1 hora. L<os>compuestos inorgánicos se separan por filtración y se lavan generosamente con acetato de etilo. Las soluciones orgánicas se combinan y los solventes se evaporanal vacío.El residuo se aplica a una columna de gel de sílice (150 g) y se eluye con un gradiente de diclorometano (20-100 %) en hexanos para proporcionar el producto, 5,0 g (63 %), como un sólido amarillo. MSm/z:208,4 [MH+]; 1HNMR(300 MH<z>, CDCI3) 6: 4,29 (1H, br<s>), 4,59 (2H,<s>), 6,39 (1H, d), 6,50 (1H, d de d), 6,58 (1H, d), 6,61-6,66 (1H, m), 6,89-6,95 (1H, m), 7,00 (1H, d de d), 7,19-7,32 (4H, m).
N. Síntesis de N-[6-(6H-dibenzo [b, f]azocin-5-ii)-6-oxo-hexii]-2, 2, 2-trifiuoro-N-metiI-acetamida a partir de 5, 6-dihidrodibenzo [b,f]azocina (24) y cloruro de 6-[metiI-(2,2,2-trifiuoroacetiI)-amino]-hexanoiIo
Se añaden piridina (3,6 mi, 3,5 g, 45 mmol) y cloruro de 6-[metiI-(2,2,2-trifiuoroacetiI)-amino]-hexanoiIo (4,64 g, 17,9 mmol) en cloruro de metileno (8 mi) a una solución de N-[6-(6H-dibenzo [b,f]azocin-5-ii)-6-oxo-hexii]-2, 2, 2-trifiuoro-N-metil-acetamida (26a) de 5, 6-dihidro-dibenzo [b,f]azocina (3,11 g, 15,0 mmol) en cloruro de metileno (40 mi). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente en una argón durante 2,5 horas. Luego se diluye con 150 mi de cloruro de metileno y se lava con 150 mi de agua. La capa acuosa se extrae con 150 mi de cloruro de metileno. Luego, las capas orgánicas combinadas se lavan con 150 mi de salmuera, se secan con sulfato de sodio anhidro, se filtran y se concentran. El producto crudo se somete a cromatografía ultrarrápida (I<sco>) en un cartucho de gel de sílice de 220 g (I<sco>) con 0-50 % de acetato de etilo/hexano. Después de concentrar y secar al vacío, el producto se obtiene en forma de un Jarabe espeso amarillo. (5,64 g, 87,4 %, 13,1 mmol).
MSm/zMH+ 431; 1HNMR (300 MH<z>, DMSO-d6) 6: 0,90-1,00 (2H, m), 1,26-1,40 (4H, m), 1,70-1,82 (1H, m), 1,88-1,98 (1H, m), 2,86 (1H,<s>), 2,99-3,01 (2H, q), 3,18-3,26 (2H, m), 4,12-4,18 (1H, dd), 5,32-5,39 (1H, dd), 6,61-6,66 (1H, dd), 6,73-6,79 (1H, dd), 7,13-7,20 (3H, m), 7,25-7,38 (5H, m).
O. Síntesis de N-[6-(11, 12-dibromo-11, 12-dihidro-6H-dibenzo [6,fjazoein-5-iI)-6-oxo-hexiI]-2, 2, 2-trifiuoro-N-metiI-acetamida de N-[6-(6H-dibenzo[b,f]azocin-5-iI)-6-oxo-hexiI]-2,2,2-trifIuoro-N-metiI-aeetamida
Se añade tribromuro de piridinio (1,47 g, 4,60 mmol) a una solución de N-[6-(6H-dibenzo[b,f]azoein-5-ii)-6-oxo-hexiI]-2,2,2-trifiuoro-N-metii-acetamida (1,80 g, 4,18 mmol) en cloruro de metileno (7,8 mi). La mezcla de reacción se agita durante aproximadamente 3 horas. Se diluye con 100 mi de cloruro de metileno y se lava con 2<x>55 mi de HCI acuoso al 5 %. Luego se lava la capa orgánica con 55 mi de salmuera, se seca con sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra. El producto crudo se somete a cromatografía ultrarrápida (I<sco>) en un cartucho de sílice de 120 g (I<sco>Gold) con 0-50 % de acetato de etilo/hexano. Se concentra y se seca al vacío para dar el producto como una espuma blanca (1,93 g, 78,1 %, 3,27 mmol).
MSm/zMH+ 591; 1HNMR (300 MH<z>, DMSO-d6) 6: 1,10-1,19 (2H, m), 1,38-1,63 (4H, m), 2,02-2,33 (2H, m), 2,90 (1H,<s>), 3,02-3,03 (2H, d), 3,28-3,34 (2H, m), 4,18-5,09 (1H, m), 5,69-5,75 (1H, m), 5,81-5,87 (1H, t), 6,97-7,31 (7H, m), 7,55-7,65 (1H, m).
P. Síntesis de N-[6-(5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[6,f]azocin-5-iI)-6-oxo-hexiI]-2,2,2-trifIuoro-N-metiI-aeetamida de N-[6-(11,12-dibromo-11,12-dihidro-6H-dibenzo[6,f]azocin-5-iI)-6-oxo-hexiI]-2,2,2-trifIuoro-N-metiI-acetamida
Una solución de f-butóxido de potasio en THF (1,0 M, 5,3 mi, 5,3 mmol) se añade gota a gota a una solución de N-[6-(11,12-dibromo-11,12-dihidro-6H-dibenzo[6,f]azocin-5-iI)-6-oxo-hexiI]-2,2,2-trifIuoro-N-metiIaeetamida (1,2 g, 2,03 mmol) en THF (15 mi), se enfrió en un baño de hielo y se agitó durante 1 hora. La solución se diluye con acetato de etilo y se vierte lentamente en HCI 1 N con agitación rápida y se enfría en un baño de hielo. La capa orgánica se separa y la capa acuosa se extrae con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera y se secan sobre sulfato de sodio. L<os>solventes se evaporanal vacío,y el residuo se aplica a una columna de gel de sílice (40 g) y se eluye con un gradiente (20-80 %) de acetato de etilo en hexanos para producir el producto, 0,681 g (80 %), como un aceite ámbar. MS (ESI+)m/z:429,2 [MH+]. 1HNMR (300 MH<z>, CDCI3) : 0,93-1,05 (2H, m), 1,31-1,48 (4H, m), 1,87-1,99 (1H, m), 2,15-2,24 (1H, m), 2,94 (3H, d), 3,14-3,27 (2H, m), 3,66 (1H, d de d), 5,16 (1H, d de d), 7,24-7,431 (7H, m) y 7,70 (1H, d).
Q. Síntesis de sal de ácido 1-(5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[b,f]azocin-5-iI)-6-metiIamino-hexan-1-ona acético de N-[6-(5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[6,f]azocina)-6-oxo-hexiI]-2,2,2-trifIuoro-N-metiI-aeetamida
Una solución de N-[6-(5,6-dihidro-11,12-dideshidrobenzo[b,f]azocina)-6-oxo-hexiI]-2,2,2-trifIuoro-N-metiI-acetamida (0,681 g, 1,61 mmol) en metanol (10 mi) se trata con carbonato de potasio (0,67 g, 4,85 mmol) y agua (1 mi) y se agitó a rt durante 18 horas. El solvente se evaporaal vacío,y el residuo se disuelve en diclorometano y se lava con agua. El solvente se evaporaal vacío,y el residuo se aplicó a una columna C18 de fase inversa, 20-40 mieras (150 g) y se eluyó con un gradiente (5-95 %) de aeetonitrilo (A<c>OH al 0,1 %) en agua (A<c>OH al 0,1 %). L<os>solventes se eliminan mediante liofilización para dar el producto, como la sal de ácido acético, 0,533 g (84 %), un sólido tostado pegajoso. MS(ESI+)m/z;333,2 [MH+]. 1HNMR (300 MH<z>, DMSO-da) 6: 0,88-0,96 (2H, m), 1,11-1,28 (4H, m), 1,75-1,85 (1H, m) superpuesto a 1,80 (3H,<s>), 2,07-2,18 (1H, m), 2,22 (3H,<s>), 2,31 (2H, t), 3,61 (1H, d), 5,04(1H, d) y 7,28-7,64 (8H, m).

Claims (1)

  1. r e iv in d ic a c io n e s Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en la fórmula 13
    Fórmula III en donde: CB es un agente aglutinante celular; M es un aminoácido no natural; A' es
    como se muestra en el compuesto de la fórmula 13 e 14 de acuerdo con la reivindicación 1; D es
    E se selecciona del grupo que consiste en
    y m es 1. Un conjugado de acuerdo con la reivindicación 2, en donde M presenta la estructura
    Fórmula IV en donde p y q son cada uno un número entero de 0-10; R6 es H, aminoácido, polipéptido<o>un enlace; R7 es OH, aminoácido, polipéptido<o>un enlace; V es un alquilo, arilo, carbociclo, heterociclo<o>está ausente; y W es O, N, S<o>está ausente. Un conjugado de acuerdo con la reivindicación 3, en donde M se selecciona del grupo que consiste en
    Un proceso para preparar un conjugado de fórmula 111, el proceso comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula I con un compuesto de fórmula II
    Fórmula I Fórmula II Fórmula III en donde La fórmula I es la fórmula 13<o>14 como se definió en la reivindicación 1, con referencia a la fórmula II, CB es un agente aglutinante celular; M es un aminoácido no natural; T es un grupo azida; y con referencia a la fórmula III, A', E y D son como se definieron en la reivindicación 2. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 3 a 4 y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. Un conjugado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 3 a 4 para usar en el tratamiento de un trastorno en un mamífero. Un conjugado para el<uso>de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el trastorno se selecciona del grupo que consiste en tumores malignos, enfermedades autoinmunitarias, rechazos de injertos, enfermedad de injerto contra huésped, infecciones virales, infecciones por microorganismos e infecciones por parásitos.
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018002016A1 (en) * 2016-06-28 2018-01-04 Ventana Medical Systems, Inc. Application of click chemistry for signal amplification in ihc and ish assays
JP2020507584A (ja) * 2017-02-10 2020-03-12 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ イリノイＴｈｅ Ｂｏａｒｄ Ｏｆ Ｔｒｕｓｔｅｅｓ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｉｌｌｉｎｏｉｓ 癌選択的標識および標的化のためのトリガー活性化可能な糖コンジュゲート
CN107080751A (zh) * 2017-04-27 2017-08-22 皖西学院 一种治疗增生性骨关节病的西药组合物及其应用
ES2926195T3 (es) 2017-08-04 2022-10-24 Bicycletx Ltd Ligandos peptídicos bicíclicos específicos de CD137
WO2019118314A2 (en) * 2017-12-13 2019-06-20 Merck Sharp & Dohme Corp. Scintillation proximity assay system comprising mutant dehalogenase
WO2020245229A1 (en) * 2019-06-03 2020-12-10 Synaffix B.V. Acetal-based cleavable linkers
EP4188938A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 BicycleTX Limited Peptide-based linkers

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
ES2149768T3 (es) 1992-03-25 2000-11-16 Immunogen Inc Conjugados de agentes enlazantes de celulas derivados de cc-1065.
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US7067109B1 (en) 1998-07-13 2006-06-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Cancer treatment kits comprising therapeutic conjugates that bind to aminophospholipids
US7303749B1 (en) 1999-10-01 2007-12-04 Immunogen Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
EP1229934B1 (en) 1999-10-01 2014-03-05 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
DE60032633T2 (de) 1999-11-24 2007-10-04 Immunogen Inc., Cambridge Zytotoxische mittel, die taxane enthalten und ihre therapeutische anwendung
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
NZ545176A (en) 2001-01-29 2008-05-30 Biogen Idec Inc Modified antibodies reactive with CD20 and methods of use
JP2004537984A (ja) 2001-04-19 2004-12-24 ザ スクリップス リサーチ インスティテュート 直交ｔＲＮＡ−アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ対を生産するための方法及び組成物
EP1392361A4 (en) 2001-05-11 2009-08-05 Univ Texas ANTI-CD26 MONOCLONAL ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF DISEASES ASSOCIATED WITH CD26 EXPRESSIVE CELLS
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
JP2005539009A (ja) 2002-08-02 2005-12-22 イミュノジェン・インコーポレーテッド 新規の効力のあるタキサンを含む細胞毒性物質、および、それらの治療用途
AU2003259163B2 (en) 2002-08-16 2008-07-03 Immunogen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
WO2004016778A1 (en) 2002-08-19 2004-02-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Improved methods of in vitro protein synthesis
ATE526414T1 (de) 2002-10-16 2011-10-15 Scripps Research Inst Ortsspezifische einbindung von ketoaminosäuren in proteine
EP1613735B1 (en) 2003-04-17 2012-01-25 The Scripps Research Institute Expanding the eukaryotic genetic code
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
CN102940889A (zh) 2003-05-14 2013-02-27 伊缪诺金公司 药物缀合物组合物
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
WO2005035727A2 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Ambrx, Inc. Polymer derivatives
PT2489364E (pt) 2003-11-06 2015-04-16 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos
JP5064037B2 (ja) 2004-02-23 2012-10-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 複素環式自壊的リンカーおよび結合体
WO2006009901A2 (en) 2004-06-18 2006-01-26 Ambrx, Inc. Novel antigen-binding polypeptides and their uses
US8603483B2 (en) 2004-12-09 2013-12-10 Janssen Biotech, Inc. Anti-integrin immunoconjugates, methods and uses
US7385028B2 (en) 2004-12-22 2008-06-10 Ambrx, Inc Derivatization of non-natural amino acids and polypeptides
AU2007325952B8 (en) 2006-06-29 2013-06-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Cell-free synthesis of proteins containing unnatural amino acids
KR101764081B1 (ko) 2008-04-30 2017-08-01 이뮤노젠 아이엔씨 가교제 및 그 용도
DK2437790T3 (da) 2009-06-03 2019-05-20 Immunogen Inc Konjugeringsfremgangsmåder
US9156854B2 (en) 2011-04-18 2015-10-13 Immunogen, Inc. Maytansinoid derivatives with sulfoxide linker
EP2859017B1 (en) 2012-06-08 2019-02-20 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US9732161B2 (en) 2012-06-26 2017-08-15 Sutro Biopharma, Inc. Modified Fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
ES2728864T3 (es) 2012-08-31 2019-10-29 Sutro Biopharma Inc Aminoácidos modificados que comprenden un grupo azido
FI3912642T3 (fi) * 2012-10-23 2023-07-07 Synaffix Bv Muokattu vasta-aine, vasta-ainekonjugaatti ja menetelmä niiden valmistamiseksi
EP3566750A3 (en) * 2013-02-28 2020-04-08 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents

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Publication number Publication date
IL252618B (en) 2022-04-01
EP4289483A3 (en) 2024-02-28
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