[go: up one dir, main page]

ES2962675T3 - Anticuerpos tetravalentes biespecíficos y procedimientos para la fabricación y utilización de los mismos - Google Patents

Anticuerpos tetravalentes biespecíficos y procedimientos para la fabricación y utilización de los mismos Download PDF

Info

Publication number
ES2962675T3
ES2962675T3 ES15874217T ES15874217T ES2962675T3 ES 2962675 T3 ES2962675 T3 ES 2962675T3 ES 15874217 T ES15874217 T ES 15874217T ES 15874217 T ES15874217 T ES 15874217T ES 2962675 T3 ES2962675 T3 ES 2962675T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
antibody
her2
antibodies
bispecific tetravalent
bispecific
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES15874217T
Other languages
English (en)
Inventor
Zeren Gao
Yi Zhu
phil Tan
Blair Renshaw
Brian Kovacevich
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Baili Bio Chengdu Pharmaceutical Co Ltd
Systimmune Inc
Original Assignee
Baili Bio Chengdu Pharmaceutical Co Ltd
Systimmune Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Baili Bio Chengdu Pharmaceutical Co Ltd, Systimmune Inc filed Critical Baili Bio Chengdu Pharmaceutical Co Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2962675T3 publication Critical patent/ES2962675T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3015—Breast
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5152—Tumor cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Un anticuerpo tetravalente biespecífico que comprende una IgG que tiene un par de cadenas pesadas y un par de cadenas ligeras, y dos componentes scFv que están conectados a los terminales C o N de las cadenas pesada o ligera. El anticuerpo tetravalente biespecífico puede tener especificidad de unión por dos epítopos diferentes en el receptor HER2. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Anticuerpos tetravalentes biespecíficos y procedimientos para la fabricación y utilización de los mismos
CAMPO TÉCNICO
[0001] La presente divulgación se refiere en general al campo técnico de los anticuerpos y, más particularmente, se refiere a anticuerpos biespecíficos.
ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR
[0002] HER2, un miembro de la familia de receptores ErbB/HER, está sobreexpresado y/o desregulado en varios cánceres de mama y ovario (King, Kraus y Aaronson, Science 1985; 229: 974-976; Slamon et al., Science 1989; 244:707-712). Las terapias dirigidas a HER2 se han utilizado con éxito en la clínica y han sido aprobadas por la FDA de EE. UU. Dichos agentes terapéuticos con anticuerpos incluyen trastuzumab (Horton, Cancer Control 2001: 8(1), 103-110) y pertuzumab (Badache and Hynes, Cancer Cell; 5(4): 299-301). Varios estudios han indicado que se puede lograr una mejora terapéutica combinando dos o más anticuerpos anti-HER2 con epítopos distintos, tales como trastuzumab y pertuzumab, en comparación con una monoterapia con un solo anticuerpo (Kasprzyk et al., Cancer Res<1992; 52: 2771-2776, Ben-Kasus et al., Proc Natl Acad Sci>U<sa>,<106(9) 3294-3329). Trastuzumab, que se une al>dominio extracelular 4 de HER2, inhibe la señalización independiente del ligando, estimula la ADCC, bloquea la eliminación de HER2, pero no inhibe la dimerización de HER2. Pertuzumab, que se une al dominio extracelular 2, inhibe la dimerización de HER2 y la dimerización con otros receptores de la familia HER, inhibe múltiples vías de señalización mediadas por HER dependientes de ligando y estimula ADCC (O'Sullivan and Connolly, Oncology 2014; 28(3): 186-194).
[0003] La FDA aprobó en 2013 una combinación de pertuzumab y trastuzumab para el tratamiento del cáncer metastásico HER2 positivo como un nuevo tratamiento para el cáncer de mama HER2 positivo, basándose en el beneficio clínico sustancial observado sobre el Trastuzumab solo (Baselga et al. N Engl J Med. 12 de enero de 2012; 366(2): 109-19). Sin embargo, la eficacia del uso de la combinación simple de dos o más anticuerpos monoclonales es subóptima. Además, el coste de producir dos o más anticuerpos monoclonales por separado es elevado.
[0004] Por lo tanto, existe la necesidad de mejorar la eficacia del tratamiento del cáncer combinando anticuerpos monoclonales y reducir el coste asociado con las producciones de anticuerpos monoclonales.
[0005] Brack et al (2014), Mol Cancer Ther, 13(8), 2030-2039 describe un FynomAb biespecífico dirigido a HER2 con actividad antitumoral supuestamente superior y un nuevo modo de acción. El documento US 2014/056895 A1 describe proteínas de unión similares a anticuerpos de región variable dual que tienen una región de unión cruzada. El documento US 2010/0256338 A1 describe anticuerpos multiespecíficos que comprenden anticuerpos de longitud completa y fragmentos Fab de cadena sencilla. Hu et al (2015), Cancer Res, 75, 1, 159-170 describe anticuerpos cuatro en uno que supuestamente tienen una actividad inhibidora del cáncer superior contra EGFR, HER2, HER3 y VEGF mediante la alteración de la interferencia de HER/MET. El documento WO 2014/144357 A1 describe anticuerpos biespecíficos tetravalentes. El documento US 2014/135482 Al describe anticuerpos biespecíficos anti-ErbB3/anti-cMet. Li et al (2013), Cancer Res; 73(21), 6471-6483 describe un anticuerpo biespecífico para ErbB2 que supuestamente supera la resistencia del trastuzumab a través del bloqueo completo de la heterodimerización de ErbB2.
CARACTERÍSTICAS DE LA INVENCIÓN
[0006] La divulgación da a conocer un anticuerpo tetravalente biespecífico, comprendiendo dicho anticuerpo tetravalente biespecífico: un primer polipéptido de cadena pesada de IgG1, conector y dominio Fv de cadena sencilla (scFv) que comprende la SEQ ID NO: 40, un segundo polipéptido de cadena pesada de IgG1, conector y dominio scFv que comprende la SEQ ID NO: 40, un primer polipéptido de cadena ligera kappa que comprende la SEQ ID NO: 35, y un segundo polipéptido de cadena ligera kappa que comprende la SEQ ID NO: 35; en el que la primera y segunda cadenas pesadas de IgG1 y la primera y segunda cadenas ligeras kappa forman un resto de IgG con una especificidad de unión al dominio 4 de HER2; y en el que el primero y segundo dominios scFv tienen cada uno una especificidad de unión al dominio 2 de HER2. Los objetivos y ventajas de la divulgación resultarán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de realizaciones preferentes de la misma en relación con los dibujos que se acompañan.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
[0007] La presente divulgación se puede describir a continuación con referencia a las figuras, en las que los números de referencia similares indican elementos similares.
La figura 1 muestra una estructura de anticuerpo tetravalente biespecífico.
La figura 2 muestra diagramas de bloques funcionales de los anticuerpos tetravalentes biespecíficos de ejemplo 4X1, 4X2, 4X3 y 4X4.
La figura 3 muestra el diagrama de bloques funcionales de anticuerpos monoespecíficos de ejemplo, 4C1 y 4C2.
La figura 4 muestra el diagrama de bloques funcionales de los anticuerpos Fc-scFv de ejemplo 4C3, 4C4, 4C5, 4C6, 4C7, 4C8, 4C10 y 4C11.
La figura 5 muestra el efecto de los anticuerpos SI-4X y SI-4C sobre la proliferación de células BT-474.
La figura 6 muestra el efecto de extender la longitud del conector de 10 aminoácidos a 30 aminoácidos sobre la proliferación de células BT-474.
La figura 7 muestra el efecto de extender la longitud del conector hasta 40 aminoácidos sobre la proliferación de células BT-474.
La Figura 8 muestra el efecto de los anticuerpos SI-4X sobre la internalización de HER2 en células BT-474.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
[0008] Esta divulgación da a conocer anticuerpos tetravalentes biespecíficos según se reivindica. Los anticuerpos pueden tener la ventaja de reconocer de manera simultánea los dominios extracelulares 2 y 4 de HER2.
[0009] Debe señalarse que, tal como se utiliza en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "y" y "el/la" en toda esta memoria descriptiva y reivindicaciones, la palabra "comprenden" o variaciones tales como "comprende" o "que comprende", se entenderá que implican la inclusión de un número entero o grupo de números enteros indicados, pero no la exclusión de cualquier otro número entero o grupo de números enteros que incluyan referentes plurales, a menos que el contexto indique claramente lo contrario.
[0010] Los "fragmentos de anticuerpo" comprenden una parte de un anticuerpo intacto, preferiblemente la región variable o de unión al antígeno del anticuerpo intacto. Entre los ejemplos de fragmentos de anticuerpos se incluyen Fv, Fab, Fab', F(ab')2, Fab'-SH; diacuerpos; anticuerpos lineales (véase la patente de Estados Unidos n.° 5.641.870, ejemplo 2; Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)); moléculas de anticuerpos de cadena sencilla (por ejemplo, scFv). Si bien en la presente descripción, y a lo largo de la memoria descriptiva, se hace referencia a anticuerpos y diversas propiedades de los anticuerpos, la misma divulgación también se aplica a fragmentos de anticuerpos funcionales, por ejemplo, fragmentos Fab de acción dual.
[0011] En un aspecto, se da a conocer un anticuerpo tetravalente biespecífico, comprendiendo dicho anticuerpo tetravalente biespecífico:
un primer polipéptido de cadena pesada de IgG1, conector y dominio Fv de cadena sencilla (scFv) que comprende la SEQ ID NO: 40, un segundo polipéptido de cadena pesada de IgG1, conector y dominio scFv que comprende la SEQ ID NO: 40, un primer polipéptido de cadena ligera kappa que comprende la SEQ ID NO: 35, y un segundo polipéptido de cadena ligera kappa que comprende la SEQ ID NO: 35;
en el que la primera y segunda cadenas pesadas de IgG1 y la primera y segunda cadenas ligeras kappa forman un resto de IgG con una especificidad de unión al dominio 4 de HER2; y
en el que el primero y segundo dominios scFv tienen cada uno una especificidad de unión al dominio 2 de HER2.
[0012] Los anticuerpos tetravalentes biespecíficos tienen la actividad de inhibir el crecimiento de células cancerosas. Un anticuerpo puede tener una constante de disociación (Kd) de ^ 80 nM, ^ 50 nM, ^ 30 nM, ^ 20 nM, ^ 10 nM o ^ 0,1 nM para su diana. El anticuerpo puede unirse a ambas dianas de manera simultánea. El anticuerpo puede unirse al dominio 2 de HER2 con una Kd inferior a 1 nM, 10 nM, 20 nM, 50 nM o 100 nM. El anticuerpo puede unirse al dominio 4 de HER2 con una Kd inferior a 5 nM, 10 nM, 20 nM, 50 nM o 100 nM. El anticuerpo puede unirse al dominio 4 de HER2 con una Kd inferior a 30 nM y se puede unir al dominio 2 de HER2 con una Kd inferior a 30 nM. El anticuerpo puede unirse al dominio 4 de HER2 con una Kd inferior a 50 nM y se une de manera simultánea al dominio 2 de HER2 con una Kd inferior a 20 nM.
[0013] En algunas realizaciones, el resto IgG puede proporcionar estabilidad a los dominios scFv. Además y de manera alternativa, el resto IgG puede proporcionar especificidad al epítopo. En algunas realizaciones, el anticuerpo biespecífico puede mediar ADCC (citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos) hacia células que expresan HER2.
[0014] En algunas realizaciones, el anticuerpo puede unirse a múltiples dominios en el antígeno HER2 de manera simultánea.
[0015] En algunas realizaciones, el anticuerpo puede proporcionar una inhibición tumoral más fuerte en ensayos de proliferación in vitro e in vivo que los controles parentales de anticuerpos monoespecíficos o la combinación de controles parentales de anticuerpos monoespecíficos. Sin querer limitarse a ninguna teoría, se cree que, al actuar contra el mismo antígeno de dos epítopos diferentes, el anticuerpo tetravalente biespecífico descrito en el presente documento puede mejorar la internalización del receptor (HER2) y regular negativamente la vía de señalización de manera más eficiente que cada uno del anticuerpo monoespecífico individual o la combinación de los dos anticuerpos monoespecíficos.
[0016] En algunas realizaciones, el anticuerpo tetravalente biespecífico puede inhibir el crecimiento de células cancerosas. En algunas realizaciones, la célula cancerosa puede expresar HER2. En algunas realizaciones, el anticuerpo tetravalente biespecífico puede inhibir el crecimiento de células cancerosas. En algunas realizaciones, la célula cancerosa puede expresar HER2+.
[0017] En otro aspecto, la divulgación da a conocer ácidos nucleicos aislados que codifican los anticuerpos tetravalentes biespecíficos, tal como se reivindica.
[0018] En un aspecto adicional, la divulgación da a conocer vectores de expresión que tienen los ácidos nucleicos aislados que codifican el anticuerpo tetravalente biespecífico, tal como se reivindica.
[0019] Los vectores pueden expresarse en una célula huésped. La célula huésped puede ser procariótica o eucariota.
[0020] En un aspecto adicional, la divulgación da a conocer células huésped que tienen los ácidos nucleicos aislados que codifican el anticuerpo tetravalente biespecífico, tal como se reivindica o los vectores de expresión que incluyen dichas secuencias de ácidos nucleicos.
[0021] En el presente documento se describe un procedimiento para producir anticuerpos tetravalentes biespecíficos. El procedimiento puede incluir cultivar las células huésped descritas anteriormente de manera que se produzca el anticuerpo.
[0022] En un aspecto adicional, la divulgación da a conocer inmunoconjugados que incluyen los anticuerpos tetravalentes biespecíficos, tal como se reivindica, y un agente citotóxico.
[0023] En un aspecto adicional, la divulgación da a conocer composiciones farmacéuticas que comprenden los anticuerpos tetravalentes biespecíficos, tal como se reivindican o los inmunoconjugados descritos en el presente documento y un portador farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, la composición puede incluir además un radioisótopo, un radionúclido, una toxina, un agente terapéutico, un agente quimioterapéutico o una combinación de los mismos.
[0024] Un anticuerpo tetravalente biespecífico puede usarse en un procedimiento para tratar un sujeto con un cáncer. El procedimiento puede incluir la etapa de administrar al sujeto una cantidad eficaz de un anticuerpo tetravalente biespecífico descrito en el presente documento. El cáncer puede incluir células que expresan HER2, un dominio, un epítopo, un fragmento o un derivado del mismo. El cáncer puede ser cáncer de mama HER2+, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, cáncer gástrico, cáncer de esófago, cáncer de cabeza y cuello y cáncer de pulmón de células no pequeñas.
[0025] El procedimiento puede incluir, además, la coadministración de una cantidad eficaz de un agente terapéutico. El agente terapéutico puede ser, por ejemplo, un anticuerpo, un agente quimioterapéutico, una enzima o una combinación de los mismos. El agente terapéutico puede ser un agente antiestrógeno, un inhibidor del receptor de tirosina o una combinación de los mismos.
[0026] El agente terapéutico puede ser capecitabina, cisplatino, trastuzumab, fulvestrant, tamoxifeno, letrozol, exemestano, anastrozol, aminoglutetimida, testolactona, vorozol, formestano, fadrozol, letrozol, erlotinib, lafatinib, dasatinib, gefitinib, imatinib, pazopinib, lapatinib, sunitinib, nilotinib, sorafenib, nab-palitaxel. El sujeto que necesita dicho tratamiento puede ser un ser humano. El agente terapéutico puede ser un producto biológico. El agente terapéutico puede ser un inhibidor de puntos de control que incluye, pero sin limitación, PD1, PDL1, CTLA4, 4-1BB, OX40, GITR, TIM3, LAG3, TIGIT, CD40, CD27, HVEM, BTLA, VISTA y B7H4.
[0027] Un anticuerpo tetravalente biespecífico puede usarse en un procedimiento para tratar a un sujeto administrando al sujeto una cantidad eficaz del anticuerpo tetravalente biespecífico para inhibir la actividad biológica de un receptor HER2.
[0028] En la Figura 1 se muestra un diagrama de la estructura general de un anticuerpo tetravalente biespecífico. El anticuerpo tetravalente biespecífico puede incluir dos cadenas pesadas de IgG1 humana, dos cadenas ligeras kappa humanas y dos dominios Fv de cadena sencilla (scFv). Las dos cadenas pesadas de IgG1 humanas y las cadenas ligeras kappa humanas forman un resto de IgG. Los dos dominios scFv están conectados, respectivamente, al residuo C-terminal de las cadenas pesadas de IgG1 humanas con un conector con una secuencia de aminoácidos de repeticiones de gly-gly-gly-gly-ser-, también conocido como (G4S)n. n puede ser un número entero. n puede ser de 2 a 10. n puede ser de 1 a 15. El scfv puede estar en el orden: N terminal-pesada variable-enlazador-ligera variable-C terminal. El enlazador de scFv puede incluir una secuencia de aminoácidos de repetición de gly-gly-gly-gly-ser, también conocido como (G4S)m. m es un número entero. Por ejemplo, m puede ser 3 o 4. Para todas las construcciones, las secuencias de aminoácidos CH1, CH2, CH3 y CL pueden ser idénticas. Hay 4 anticuerpos biespecíficos denominados 4X1,4X2, 4X3 y 4X4. Estos se representan en la figura 2.
[0029] Cada anticuerpo tetravalente biespecífico puede unirse de manera específia al dominio extracelular 2 de HER2 en un extremo y al dominio extracelular 4 de HER2 en el otro extremo. Estos 2 dominios de unión anti-HER2 se denominan 4C1 y 4C2, respectivamente. La estructura 4X1 tiene el dominio de unión 4C1 en el extremo amino terminal del anticuerpo biespecífico en un formato de cadena pesada y ligera IgG1/kappa convencional, con 4C2 añadido en el extremo carboxilo terminal como un Fv de cadena sencilla. 4X2 está en la orientación opuesta con 4C2 ubicado en el extremo amino terminal y 4C1 como el Fv de cadena sencilla carboxilo terminal. Hay una variedad de tipos adicionales de estructuras de anticuerpos biespecíficos que podrían crearse usando estos pares de unión, incluidos cambios en las secuencias del enlazador y del conector y la ubicación y/o formato alternativo de estos dominios de unión. Por ejemplo, se pueden crear 4X3 extendiendo el conector de 4X1 desde (G4S)x2 a (G4S)x6 y 4X4 extendiendo el conector de 4X2 desde (G4S)x2 a (G4S)x6.
[0030] Para estudiar el efecto de la longitud del conector, se han generado múltiples construcciones de Fc-scFv denominadas 4C3, 4C4, 4C5, 4C6, 4C7, 4C8, 4C10 y 4C11. 4C3 contenía scfv de 4C1, mientras que 4C4 contenía scfv de 4C2. Se generaron variantes de conectores de (G4S)x3 a (G4S)x8 para 4C4 y se muestran en la figura 4, por ejemplo, 4C5 tiene una longitud de conector de 15 aminoácidos (G4S)x3, mientras que 4C11 tiene una longitud de conector de 40 aminoácidos (G4S) x8. La TABLA 1 muestra la longitud del conector para diferentes variantes.
TABLA 1. D n min i n v ri n l n i l nector
[0031] Se generaron fragmentos de ADN de cadena ligera variable, cadena pesada variable y Fv de cadena sencilla (scFv) mediante síntesis génica. Se generaron fragmentos de ADN de la cadena pesada Gamma-1 humana y de la cadena ligera kappa humana mediante síntesis génica. Los fragmentos se ensamblaron mediante ligadura de ADN utilizando sitios de restricción y se clonaron en un vector que está diseñado para la expresión transitoria en células de mamíferos. El vector contiene un fuerte promotor derivado de CMV y otros elementos en dirección 5' y dirección 3' necesarios para la expresión transitoria. Se verificó que los plásmidos de expresión de IgG resultantes contenían las secuencias de ADN esperadas mediante secuenciación de ADN. La expresión transitoria de las construcciones de anticuerpos se logró usando la transfección de células HEK293F adaptadas en suspensión con PEI lineal, tal como se describe en CSH Protocols; 2008; doi:10.1101/pdb.prot4977. De manera resumida, añadir ADN a cada tubo que contiene medio de expresión F17 que haya sido precalentado a 37 °C, seguido de PEI. Incubar durante 15 minutos a temperatura ambiente y añadir la mezcla de a Dn /PEI al matraz que contiene células HEK293 a una densidad de alrededor de 1 * 106 células/ml en medio completo F17. Incubar durante 5 días a 37 °C con agitación, después de lo cual la muestra se centrifugó y el sobrenadante se recogió y almacenó a 4 °C para su purificación.
[0032] Los anticuerpos se purificaron a partir de los sobrenadantes de transfección resultantes usando cromatografía de afinidad para proteínas y cromatografía de exclusión por tamaño cuando fue necesario. La calidad de las proteínas se analiza mediante la columna Superdex 200. La proteína utilizada para todos los ensayos tiene una pureza superior al 90 %.
[0033] Los anticuerpos biespecíficos específicos de dos epítopos diferentes de HER2 se pueden usar para el tratamiento de muchos cánceres expresados en HER2, tales como cánceres de mama, ovario, estómago, esófago, próstata, pulmón y neuroendocrinos.
[0034] En una realización, el anticuerpo biespecífico tiene especificidad dual tetravalente. Incluye una IgG y dos scFv, lo que proporciona dos especificidades de unión diferentes en comparación con el anticuerpo monoespecífico IgG. El componente IgG proporciona estabilidad frente a otros anticuerpos biespecíficos que utilizaban únicamente scFv como la tecnología BiTE (Lutterbuese et al, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 107.28 (2010): 12605-12610. PMC. Web. 2 de diciembre de 2014) y otras (Patente de Estados Unidos n.° 7332585). También es capaz de mediar en ADCC, mientras que aquellos sin componente Fc no pueden (Patente de Estados Unidos n° 7332585). La naturaleza de especificidad dual tetravalente proporciona al anticuerpo biespecífico una capacidad de unión simultánea sobre algunos otros anticuerpos biespecíficos, que solo pueden unirse a un antígeno a la vez (Kontermann, MAbs. Marzo-abril 2012; 4(2):182-97; Schanzer et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2011, 55(5):2369; EP272942).
[0035] Para facilitar la narración, las secuencias de los anticuerpos biespecíficos o relacionadas con los mismos se resumen en la TABLA 2 a continuación.
TABLA 2. Resumen de secuencias de nucleótidos y aminoácidos de anticuerpos biespecíficos o relacionadas con los mismos
EJEMPLOS
Ejemplo 1
[0036] Para evaluar el potencial inhibidor del crecimiento de los anticuerpos anti-HER2, se analizó el efecto sobre la proliferación de células BT-474 (ATCC HTB-20, Manassas, Va.) que son una línea tumoral de carcinoma ductal mamario. Las células se sembraron en placas de cultivo de tejidos de 96 pocillos a una densidad de 6000 células/pocillo en 100 pl de medio RPMI-1640 que contenía suero bovino fetal al 1%. Después de 4 horas, se agregaron anticuerpos de prueba en diversas concentraciones, que oscilaban entre 0,0061 nM y 400 nM. Las células se cultivaron en presencia de anticuerpos de prueba durante 7 días. A cada pocillo se le añadieron 20 pl de reactivo MTS (Promega, Madison, WI) y las células se incubaron a 37 °C durante 2 horas. El MTS es captado fácilmente por las células en proliferación activa, es reducido a formazán (que absorbe fácilmente luz a 490 nm) y, a continuación, es secretado al medio de cultivo. Después de la incubación, Los valores de DO490 se midieron utilizando un lector de absorbancia ELx800 de BioTek (Winooski, VT). Los valores de DO490 para las células de control (tratadas con medio solo) también se obtuvieron de esta manera en el momento de la adición de anticuerpos para establecer la actividad metabólica inicial. La proliferación se puede calcular restando la DO490 inicial de control de la DO490 de las 72 horas. Los datos de las valoraciones de anticuerpos se expresaron en % de la población de control de acuerdo con la siguiente fórmula: % de proliferación de control = (proliferación de prueba/proliferación de control)*100.
[0037] El efecto de SI-4X1 y SI-4X2 sobre la proliferación de BT-474 se muestra en la FIG. 5. Ambas moléculas tuvieron un efecto antiproliferativo, pero ninguno fue tan eficaz como el anticuerpo de control SI-4C2 o la combinación de los anticuerpos de control SI-4C1 y SI-4C2. Aumentar la longitud del enlazador GaS conector que separa el scfv C-terminal de hulgG de 2 repeticiones a 6 repeticiones aumentó la eficacia, tal como se puede observar en SI-4X3. Se sospecha que la menor eficacia de los anticuerpos biespecíficos podría ser el resultado de la actividad proproliferativa suministrada por el scFv C-terminal. Existe precedente en la literatura para anticuerpos anti-Her2 que muestran actividad agonista dependiendo de su estructura. Para investigar esto, se creó una serie de moléculas de control que contenían el mismo scFv anti-Her2, pero con enlazadores GaS progresivamente más largos. Tal como puede observarse en la FIG. 6, el efecto antiproliferativo fue directamente proporcional al número de elementos GaS en el enlazador, donde SI-4C8 (6 repeticiones) mostró el mayor grado de actividad antiproliferativa, mientras que SI-4C4 (2 repeticiones) exhibió actividad agonista. Este efecto es aún más pronunciado cuando el enlazador aumenta a 7 (SI-4C10) y 8 (SI-4C11) repeticiones y se puede observar en la FIG. 7.
Ejemplo 2
[0038] Se probó la capacidad de los anticuerpos anti-Her2 para ser internalizados por células BT-474. Se permitió que alícuotas de un miligramo de anticuerpo en PBS estándar reaccionaran con ácido carboxílico Alexa Fluor 488, éster de TFP (Thermo Fisher #A-10235, Waltham, MA) durante una hora a temperatura ambiente. El colorante no incorporado se eliminó mediante filtración en gel usando una columna Bio-Gel P-30. Después de la conjugación, se incubaron alícuotas de 3*105 células BT-474 con 50 nM de cada anticuerpo marcado con Alexa 488 en medio completo (RPMI-1640 FBS al 10%) durante 1 hora a 37 °C o 4 °C (hielo). Después de la incubación, las células se lavaron dos veces en una centrífuga fría con PBS enfriado con hielo. A continuación, las células se resuspendieron en anticuerpo de conejo anti-Alexa488 de neutralización 500 nM (Thermo Fisher #A-11094, Waltham, MA) o en anticuerpo de control de isotipo IgG de conejo 500 nM (Jackson ImmunoResearch Laboratories #011-000-003, West Grove, PA) y se incubaron en hielo durante 30 minutos. A cada muestra se le añadieron dos volúmenes de paraformaldehído al 2 % y se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente. A continuación, las células se lavaron una vez con 1 ml de PBS enfriado con hielo, se resuspendieron en 200 pl de PBS y se analizaron usando un citómetro de flujo FACScalibur. Se utilizó la fluorescencia como media geométrica (GMFI) de 2*104 eventos por muestra para calcular el porcentaje de anticuerpo internalizado. Dado que no debería tener lugar la internalización a 4 °C, la fluorescencia medida en muestras incubadas en hielo, seguida de la incubación con el anticuerpo anti-Alexa488, se consideró que era fluorescencia de superficie de fondo no neutralizable y se restó de los valores de GMFI obtenidos en muestras incubadas a 37 °C antes de la neutralización. La intemalización se calculó de la siguiente manera:%de intemalización = (GMFI neutralizada/GMFI no neutralizada)*100.
[0039] Los resultados se pueden observar en la figura 8. El anticuerpo biespecífico SI-4X2 se internalizó en mayor grado (39,3 %) que los anticuerpos monoespecíficos de control SI-4C1 (18,29 %) y SI-4C2 (14,97 %), así como la combinación de SI-4C1 SI- 4C2 (29,19 %).
Composiciones farmacéuticas
[0040] El término "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad de un fármaco eficaz para lograr un efecto deseado, por ejemplo, para mejorar una enfermedad en un sujeto. Cuando la enfermedad es un cáncer, la cantidad eficaz del fármaco puede inhibir (por ejemplo, ralentizar hasta cierto punto, inhibir o detener) una o más de las siguientes características de ejemplo que incluyen, sin limitación, crecimiento de células cancerosas, proliferación de células cancerosas, motilidad de células cancerosas, infiltración de células cancerosas en órganos periféricos, metástasis tumoral y crecimiento tumoral. Cuando la enfermedad es un cáncer, la cantidad eficaz del fármaco puede alternativamente realizar una o más de las siguientes acciones cuando se administra a un sujeto: ralentizar o detener el crecimiento del tumor, reducir el tamaño del tumor (por ejemplo, volumen o masa), aliviar hasta cierto punto uno o más de los síntomas asociados con el cáncer, alargar la supervivencia libre de progresión, dar como resultado una respuesta objetiva (incluyendo, por ejemplo, una respuesta parcial o una respuesta completa), y aumentar el tiempo de supervivencia general. En la medida en que el fármaco pueda prevenir el crecimiento y/o destruir las células cancerosas existentes, es citostático y/o citotóxico.
[0041] Con respecto a la formulación de composiciones adecuadas para la administración a un sujeto, tal como un paciente humano que necesita tratamiento, los anticuerpos descritos en el presente documento se pueden mezclar o combinar con portadores farmacéuticamente aceptables conocidos en la técnica dependiendo de la ruta de administración elegida. No existen limitaciones particulares para los modos de aplicación de los anticuerpos descritos en el presente documento, y la elección de rutas de administración adecuadas y composiciones adecuadas se conoce en la técnica sin experimentación indebida.
[0042] Aunque son posibles muchas formas de administración, una forma de administración de ejemplo sería una solución inyectable, en particular para inyección intravenosa o intraarterial. Normalmente, una composición farmacéutica adecuada para inyección puede incluir portadores o excipientes farmacéuticamente adecuados, tales como, sin limitación, un tampón, un tensioactivo o un agente estabilizador. Entre los tampones de ejemplo se pueden incluir, sin limitación, tampón acetato, fosfato o citrato. Entre los tensioactivos de ejemplo se pueden incluir, sin limitación, polisorbato. Un estabilizador de ejemplo puede incluir, sin limitación, albúmina humana.
[0043] De manera similar, los expertos en la materia tienen la capacidad de determinar la cantidad o concentración eficaz de los anticuerpos descritos en el mismo para tratar de manera eficaz una afección, tal como un cáncer. Una persona experta en la materia puede obtener otros parámetros, tales como las proporciones de los diversos componentes en la composición farmacéutica, las dosis de administración y la frecuencia, sin experimentación excesiva. Por ejemplo, una solución inyectable adecuada puede contener, sin limitación, de aproximadamente 1 a aproximadamente 20, de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mg de anticuerpos por ml. La dosis de ejemplo puede ser, sin limitación, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 20, de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal. La frecuencia de administración del ejemplo podría ser, sin limitación, una vez por día o tres veces por semana.
[0044] Si bien la presente divulgación se ha descrito con referencia a realizaciones o ejemplos particulares, se puede entender que las realizaciones son ilustrativas y que el alcance de la divulgación no está tan limitado. Realizaciones alternativas de la presente divulgación pueden resultar evidentes para aquellos con experiencia habitual en la materia a la que pertenece la presente divulgación.
[0045] Por consiguiente, el alcance de la presente divulgación está definido por las reivindicaciones adjuntas y está respaldado por la descripción anterior.

Claims (5)

REIVINDICACIONES
1. Anticuerpo tetravalente biespecífico, comprendiendo dicho anticuerpo tetravalente biespecífico:
un primer polipéptido de cadena pesada de IgG1, conector y dominio Fv de cadena sencilla (scFv) que comprende la SEQ ID NO: 40, un segundo polipéptido de cadena pesada de IgG1, conector y dominio scFv que comprende la SEQ ID NO: 40, un primer polipéptido de cadena ligera kappa que comprende la SEQ ID NO: 35, y un segundo polipéptido de cadena ligera kappa que comprende la SEQ ID NO: 35;
en el que la primera y segunda cadenas pesadas de IgG1 y la primera y segunda cadenas ligeras kappa forman un resto de IgG con una especificidad de unión al dominio 4 de HER2; y
en el que el primero y segundo dominios scFv tienen cada uno una especificidad de unión al dominio 2 de HER2.
2. Ácido nucleico aislado que codifica el anticuerpo tetravalente biespecífico de la reivindicación 1.
3. Vector de expresión que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 2.
4. Célula huésped que comprende el ácido nucleico aislado de la reivindicación 2, o que comprende el vector de expresión de la reivindicación 3.
5. Composición farmacéutica que comprende el anticuerpo tetravalente biespecífico de la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable.
ES15874217T 2014-12-22 2015-12-19 Anticuerpos tetravalentes biespecíficos y procedimientos para la fabricación y utilización de los mismos Active ES2962675T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462095348P 2014-12-22 2014-12-22
PCT/US2015/066952 WO2016106158A1 (en) 2014-12-22 2015-12-19 Bispecific tetravalent antibodies and methods of making and using thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2962675T3 true ES2962675T3 (es) 2024-03-20

Family

ID=56151464

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES15874217T Active ES2962675T3 (es) 2014-12-22 2015-12-19 Anticuerpos tetravalentes biespecíficos y procedimientos para la fabricación y utilización de los mismos
ES15874216T Active ES2995733T3 (en) 2014-12-22 2015-12-19 Bispecific tetravalent antibodies and methods of making and using thereof

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES15874216T Active ES2995733T3 (en) 2014-12-22 2015-12-19 Bispecific tetravalent antibodies and methods of making and using thereof

Country Status (22)

Country Link
US (2) US10717783B2 (es)
EP (3) EP3237005B1 (es)
JP (2) JP6947639B2 (es)
KR (4) KR102590385B1 (es)
CN (11) CN113512120B (es)
AU (1) AU2015369831B2 (es)
CA (2) CA2969867C (es)
DK (1) DK3237005T3 (es)
ES (2) ES2962675T3 (es)
FI (1) FI3237005T3 (es)
HR (1) HRP20241502T1 (es)
HU (1) HUE069256T2 (es)
IL (3) IL286835B2 (es)
LT (1) LT3237005T (es)
NZ (1) NZ732628A (es)
PL (1) PL3237005T3 (es)
PT (1) PT3237005T (es)
RS (1) RS66070B1 (es)
SG (1) SG11201704741PA (es)
SI (1) SI3237005T1 (es)
SM (1) SMT202400477T1 (es)
WO (2) WO2016106157A1 (es)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3237005B1 (en) * 2014-12-22 2024-09-18 Systimmune, Inc. Bispecific tetravalent antibodies and methods of making and using thereof
US12428483B2 (en) 2014-12-22 2025-09-30 Systimmune, Inc. Bispecific tetravalent antibodies and methods of making and using thereof
AU2016206707A1 (en) * 2015-01-14 2017-08-10 Compass Therapeutics Llc Multispecific immunomodulatory antigen-binding constructs
CN106632681B (zh) * 2016-10-11 2017-11-14 北京东方百泰生物科技有限公司 抗egfr和抗cd3双特异抗体及其应用
CN108948195B (zh) * 2017-05-23 2022-05-31 胡毅 一种抗egfr/pd-l1双靶向抗体、其制备方法及用途
CN110869389B (zh) * 2017-06-25 2023-07-28 西雅图免疫公司 抗ror1抗体及其制备和使用方法
SG11202003237QA (en) * 2017-11-02 2020-05-28 Systimmune Inc Bispecific antibodies and methods of making and using thereof
SG11202005595YA (en) * 2018-01-15 2020-07-29 Nanjing Legend Biotech Co Ltd Antibodies and variants thereof against tigit
CN107974461A (zh) * 2018-01-18 2018-05-01 东北农业大学 一种高效表达anti-hEGFR基因的真核表达载体构建方法
CN108220244A (zh) * 2018-01-18 2018-06-29 东北农业大学 一种含重组人表皮生长因子受体抗体基因的cho细胞株、筛选方法及其生产工艺
MX2020010728A (es) * 2018-04-13 2020-11-06 Affimed Gmbh Constructos de fusion de anticuerpos que se acoplan a celulas nk.
JP7475054B2 (ja) * 2018-05-16 2024-04-26 アーベル リミテッド 二重特異性抗体の組成物及びその使用方法
JP7193058B2 (ja) * 2018-08-08 2022-12-20 イミューンオンコ バイオファーマシューティカルズ （シャンハイ） インコーポレイテッド Ｃｄ４７およびｈｅｒ２を標的とする組換え二機能性タンパク質
CN110850068B (zh) * 2018-08-21 2023-08-15 上海恒润达生生物科技股份有限公司 一种嵌合抗原受体亲和力检测方法
EP3853247A2 (en) * 2018-09-19 2021-07-28 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods and uses of variant cd80 fusion proteins and related constructs
WO2020102233A1 (en) * 2018-11-13 2020-05-22 Jn Biosciences Llc Bispecific antibodies for activation of immune cells
JP7680358B2 (ja) * 2019-01-30 2025-05-20 ザ ウィスター インスティテュート オブ アナトミー アンド バイオロジー 癌抗原を標的とするｄｎａコード化二重特異性ｔ細胞エンゲージャーおよび癌治療薬における使用方法
WO2021020845A1 (en) * 2019-07-26 2021-02-04 Abl Bio Inc. Anti-egfr/anti-4-1bb bispecific antibody and use thereof
MX2022001682A (es) * 2019-08-08 2022-05-13 Regeneron Pharma Nuevos formatos de moleculas de union a antigenos.
CN118459602A (zh) * 2019-11-06 2024-08-09 西雅图免疫公司 制导和导航控制蛋白及其制备和使用方法
AR121384A1 (es) * 2020-02-19 2022-06-01 Denali Therapeutics Inc Proteínas biespecíficas anti-her2 diseñadas por ingeniería genética
TWI874613B (zh) * 2020-03-17 2025-03-01 美商西雅圖免疫公司 微型導引和導航控制(miniGNC)類抗體蛋白及其製造和使用方法
CN111548424A (zh) * 2020-06-05 2020-08-18 上海科弈药业科技有限公司 一种靶向egfr与cd47的多功能融合蛋白及其应用
JP2023542337A (ja) * 2020-09-21 2023-10-06 システィミューン， インク． Ｅｇｆｒ結合複合体、その製造及び使用方法
JP7720989B2 (ja) * 2021-08-25 2025-08-08 システィミューン， インク． Ｅｇｆｒ及びｈｅｒ３を標的とする二重特異性四価抗体
US20250223376A1 (en) * 2021-09-20 2025-07-10 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer
CA3233721A1 (en) * 2021-10-03 2023-04-06 Sa XIAO Methods of treating cancer and the pharmaceutical compositions thereof
WO2023083381A1 (zh) * 2021-11-15 2023-05-19 成都百利多特生物药业有限责任公司 双特异性抗体-喜树碱类药物偶联物及其医药用途
WO2023241480A1 (zh) * 2022-06-13 2023-12-21 三优生物医药(上海)有限公司 抗pd-l1、vegf和egfr三特异性抗体及其应用
AU2023334288A1 (en) * 2022-08-31 2025-03-20 Systimmune, Inc. Biepitopic tetravalent antibody targeting egfr
CN116063564A (zh) * 2022-10-08 2023-05-05 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种纯化融合蛋白的方法
CN118829655A (zh) * 2023-02-15 2024-10-22 浙江时迈药业有限公司 Egfr和lag3双靶向的双特异性抗体及其用途
CN121443647A (zh) * 2023-07-07 2026-01-30 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 EGFR/c-MET双特异性结合蛋白及其用途
WO2025026282A1 (en) * 2023-07-29 2025-02-06 Shanghai Kaijin Biotechnology, Ltd Modified type e multi-specific antibodies
WO2025117871A1 (en) * 2023-11-29 2025-06-05 Systimmune, Inc. Bispecific tetravalent antibody targeting her2 and her3
WO2025140662A1 (en) * 2023-12-29 2025-07-03 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Anti-egfr/her3 antibodies and uses thereof
WO2025190404A1 (zh) * 2024-03-14 2025-09-18 珠海普米斯生物科技有限公司 双特异性抗体、抗体药物偶联物及其应用

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2200753B (en) 1986-12-23 1991-01-23 Brookes & Gatehouse Speed measurement device
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
WO2003066662A2 (en) * 2002-02-05 2003-08-14 Genentech, Inc. Protein purification
US7332585B2 (en) 2002-04-05 2008-02-19 The Regents Of The California University Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof
ZA200702427B (en) * 2004-09-17 2008-12-31 Domantis Ltd Compositions monovalent for CD40L binding and methods of use
WO2007147001A2 (en) * 2006-06-14 2007-12-21 Imclone Systems Incorporated Lyophilized formulations of anti-egfr antibodies
EP2091975A4 (en) * 2006-11-21 2013-05-22 Univ California ANTIBODIES TO THE EGFR FAMILY, BICE-SPECIFIC ANTIBODIES TO THE EGFR FAMILY AND METHOD FOR THEIR USE
AR075896A1 (es) * 2009-03-20 2011-05-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-her (factor de crecimiento epidermico)
JP2012521768A (ja) * 2009-03-27 2012-09-20 ジモジェネティクス・インコーポレイテッド 抗体−受容体の組み合わせを含む多特異的結合性タンパク質を用いるための組成物および方法
PE20120591A1 (es) * 2009-04-02 2012-05-23 Roche Glycart Ag Anticuerpos multiespecificos que comprenden anticuerpos de longitud completa y fragmentos fab de cadena sencilla
BRPI1012589A2 (pt) * 2009-04-07 2016-03-22 Roche Glycart Ag anticorpos bi-específicos anti-erbb-3/anti-c-met
AU2010289527C1 (en) * 2009-09-01 2014-10-30 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US10208128B2 (en) * 2009-11-04 2019-02-19 Affibody Ab HER3 binding polypeptides
WO2012044612A1 (en) * 2010-09-30 2012-04-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Generation, characterization and uses thereof of anti-her3 antibodies
CN103384681B (zh) * 2010-12-23 2018-05-18 霍夫曼-拉罗奇有限公司 结合剂
TWI622597B (zh) 2011-03-28 2018-05-01 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
US20140170148A1 (en) * 2011-04-20 2014-06-19 Genmab A/S Bispecific antibodies against her2
CA2832387A1 (en) * 2011-04-20 2012-10-26 Genmab A/S Bispecifc antibodies against her2
SG194620A1 (en) * 2011-04-25 2013-12-30 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-b7-h3 antibody
CN102250246A (zh) 2011-06-10 2011-11-23 常州亚当生物技术有限公司 抗VEGF/PDGFRβ双特异性抗体及其应用
CN102250247B (zh) * 2011-06-15 2013-06-19 常州亚当生物技术有限公司 一种抗vegf/ang2双特异性抗体及其应用
US9718893B2 (en) * 2011-12-19 2017-08-01 Synimmune Gmbh Bispecific antibody molecule
US8961971B2 (en) * 2011-12-22 2015-02-24 Development Center For Biotechnology Bispecific T-cell activator antibody
JP2015514710A (ja) * 2012-03-27 2015-05-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｈｅｒ３阻害剤に関する診断及び治療
CA2878640C (en) * 2012-07-13 2023-10-24 Zymeworks Inc. Multivalent heteromultimer scaffold design and constructs
SMT201800624T1 (it) * 2012-11-21 2019-01-11 Janssen Biotech Inc Anticorpi egfr/c-met bispecifici
CN103333179B (zh) * 2012-12-21 2017-06-16 百奥泰生物科技(广州)有限公司 类美登素衍生物及其制备方法和用途
WO2014144357A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Merck Patent Gmbh Tetravalent bispecific antibodies
CN104211814A (zh) * 2013-05-29 2014-12-17 三星电子株式会社 用于消耗靶膜蛋白的组合物
EP3237005B1 (en) 2014-12-22 2024-09-18 Systimmune, Inc. Bispecific tetravalent antibodies and methods of making and using thereof

Also Published As

Publication number Publication date
SG11201704741PA (en) 2017-07-28
LT3237005T (lt) 2024-11-11
EP3237005A4 (en) 2018-05-23
CN113512122A (zh) 2021-10-19
AU2015369831B2 (en) 2019-07-11
US20170369587A1 (en) 2017-12-28
EP3237006A4 (en) 2018-05-30
CN113105551B (zh) 2024-10-25
IL286835B1 (en) 2023-11-01
JP2021119149A (ja) 2021-08-12
CN113512121A (zh) 2021-10-19
CN113512120A (zh) 2021-10-19
CA2969867A1 (en) 2016-06-30
EP3237006B1 (en) 2023-08-16
NZ732628A (en) 2019-01-25
CN113150165B (zh) 2024-09-03
CA3138083A1 (en) 2016-06-30
CN117467017A (zh) 2024-01-30
CN113150165A (zh) 2021-07-23
PL3237005T3 (pl) 2025-01-27
KR20170091162A (ko) 2017-08-08
WO2016106158A1 (en) 2016-06-30
KR102823201B1 (ko) 2025-06-23
IL305193A (en) 2023-10-01
CN107206074B (zh) 2023-12-01
SI3237005T1 (sl) 2025-02-28
CN113512121B (zh) 2024-10-25
KR20230149328A (ko) 2023-10-26
CN107206074A (zh) 2017-09-26
RS66070B1 (sr) 2024-11-29
EP3237005B1 (en) 2024-09-18
US20170073418A1 (en) 2017-03-16
JP6947639B2 (ja) 2021-10-13
IL286835B2 (en) 2024-03-01
IL252811A0 (en) 2017-08-31
CN106659779B (zh) 2021-05-18
CN113512123A (zh) 2021-10-19
KR102590385B1 (ko) 2023-10-18
US10717783B2 (en) 2020-07-21
PT3237005T (pt) 2024-11-18
KR20230104988A (ko) 2023-07-11
EP4491195A2 (en) 2025-01-15
ES2995733T3 (en) 2025-02-11
CN113105553A (zh) 2021-07-13
CN113512120B (zh) 2024-08-02
CN113512122B (zh) 2024-09-10
CN113105551A (zh) 2021-07-13
IL286835A (en) 2021-10-31
DK3237005T3 (en) 2024-11-18
CN113105553B (zh) 2024-09-10
AU2015369831A1 (en) 2017-06-29
CN113512123B (zh) 2024-10-25
US10919977B2 (en) 2021-02-16
JP7335290B2 (ja) 2023-08-29
HUE069256T2 (hu) 2025-02-28
FI3237005T3 (fi) 2024-12-02
WO2016106157A1 (en) 2016-06-30
JP2018509175A (ja) 2018-04-05
KR20250094744A (ko) 2025-06-25
IL252811B (en) 2021-10-31
CA2969867C (en) 2022-01-25
EP3237006A1 (en) 2017-11-01
SMT202400477T1 (it) 2025-01-14
HRP20241502T1 (hr) 2025-01-03
EP3237005A1 (en) 2017-11-01
EP4491195A3 (en) 2025-04-02
CN106659779A (zh) 2017-05-10
CN113105552B (zh) 2024-09-20
KR102548827B1 (ko) 2023-06-30
CN113105552A (zh) 2021-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2962675T3 (es) Anticuerpos tetravalentes biespecíficos y procedimientos para la fabricación y utilización de los mismos
ES2711377T3 (es) Molécula Fv de unión a antígenos multivalente
ES2847155T3 (es) Moléculas multiespecíficas que fijan como objetivo CLL-1
ES3024433T3 (en) Fc binding fragments comprising a pd-l1 antigen-binding site
ES3031307T3 (en) Proteins binding nkg2d, cd16 and egfr
ES2975528T3 (es) Anticuerpos biespecíficos contra ceacam5 y cd3
WO2020253568A1 (zh) 抗cd73抗体及其应用
BR112014001573B1 (pt) Molécula fv ao antígeno multivalente
ES2800674T3 (es) Polipéptidos biespecíficos de unión a antígeno
US20230340119A1 (en) Composition of triax antibodies and method of making and using thereof
ES2871598T3 (es) Anticuerpo novedoso contra EGFRvIII y composición que comprende el mismo
US9499622B2 (en) Anti-EGFR/anti-HER2 bispecific antibodies with anti-EGFR DARPins
TW202542198A (zh) Cd137結合分子及其用途
US12428483B2 (en) Bispecific tetravalent antibodies and methods of making and using thereof
CN109195626A (zh) 结合死亡受体4和死亡受体5的高效抗体
CN117946274B (zh) 抗cd73抗体及其应用
HK40120554A (en) Bispecific tetravalent antibodies and methods of makiing and using thereof
TW202540193A (zh) 雙特異性抗體、抗體藥物偶聯物及其應用
TW202540187A (zh) 結合分子及抗體藥物偶聯物和用途
CN119816519A (zh) 抗ror1抗体、包含其的双特异性抗体及其用途
HK40088764A (zh) 结合死亡受体4和死亡受体5的抗体
CN120018859A (zh) 抗尿激酶型纤溶酶原激活物受体抗体及其使用方法
HK1233941B (zh) 双特异性四价抗体及其制造和使用方法