ES2932076T3

ES2932076T3 - Moduladores agonistas de los receptores de glucocorticoides selectivos (SEGRAM) no esteroideos y usos de los mismos

Info

Publication number: ES2932076T3
Application number: ES18786823T
Authority: ES
Inventors: Pierre Chambon; Guoqiang Hua
Original assignee: Association Pour La Rech A Ligbmc Ari; ASSOCIATION POUR LA RECHERCHE A L'IGBMC (ARI)
Current assignee: Association Pour La Rech A Ligbmc Ari; ASSOCIATION POUR LA RECHERCHE A L'IGBMC (ARI)
Priority date: 2017-10-27
Filing date: 2018-10-23
Publication date: 2023-01-11
Anticipated expiration: 2038-10-23
Also published as: IL274208A; PL3700513T3; DK3700513T3; FI3700513T3; WO2019081517A2; US20190151283A1; WO2019081517A3

Abstract

La presente invención se refiere a los dos enantiómeros de un Modulador Agonístico del Receptor de Glucocorticoides Selectivo (SEGRAM) de Fórmula 1 o un derivado del mismo; a una forma deuterada de un SEGRAM de Fórmula 1 o un derivado del mismo; ya los dos enantiómeros deuterados de un SEGRAM de (Fórmula 1) o un derivado del mismo: o una de sus sales, solvatos y/o profármacos farmacéuticamente aceptables. La presente invención también se refiere a un SEGRAM de Fórmula 1 o un derivado del mismo, o un enantiómero farmacéuticamente aceptable, una forma deuterada, una sal, un solvato y/o un profármaco del mismo, para usar en la prevención o el tratamiento de un trastorno inflamatorio en un sujeto que necesita del mismo. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Moduladores agonistas de los receptores de glucocorticoides selectivos (SEGRAM) no esteroideos y usos de los mismos

Campo de la invención

La presente invención se refiere a moduladores agonistas de los receptores de glucocorticoides selectivos (SEGRAM) para uso en la prevención o tratamiento de un trastorno inflamatorio en un sujeto que lo necesite. En particular, los SEGRAM de la presente invención no inducen ni la transactivación directa ni las funciones de transrepresión directa del receptor de glucocorticoides, y no ejercen los efectos debilitantes de los glucocorticoides sintéticos (GC).

Antecedentes de la invención

Los glucocorticoides (GC) son hormonas primarias del estrés necesarias para la vida que regulan numerosos procesos fisiológicos en un esfuerzo por mantener la homeostasis. Pertenecen a la clase de corticosteroides, que se unen a su receptor afín, el receptor de glucocorticoides (GR).

GR, también conocido como NR3C1 (subfamilia 3 de receptores nucleares, grupo C, miembro 1), está omnipresente entre casi todos los vertebrados, en casi todas las células. Regula la expresión de genes que controlan varios procesos fisiológicos importantes, tales como el desarrollo, el metabolismo y la respuesta inmunitaria.

Estructuralmente, GR es una proteína modular compuesta por varios dominios:

- un dominio de transactivación del terminal N (NTD, o "dominio A/B");

- un dominio de unión al ADN central (DBD, o "dominio C"). Este dominio es el dominio más conservado en la superfamilia de receptores nucleares y contiene dos motivos de dedos de zinc que reconocen y se unen a secuencias de ADN diana, denominados elementos sensibles a glucocorticoides (GRE);

- una región bisagra flexible (o "dominio D");

- un dominio de unión a ligando del terminal C (LBD, o "dominio E"). Este dominio forma un bolsillo hidrófobo para unir GC;

- y un dominio del terminal C (CTD o "dominio F").

Tras la unión de un GC al LBD del GR, el GR sufre un cambio conformacional que da como resultado la exposición de dos señales de localización nuclear ubicadas en la unión DBD/región bisagra y dentro del LBD, respectivamente. Luego, GR se transloca rápidamente al núcleo a través de los poros nucleares, donde puede ejercer una de las tres funciones reguladoras de la transcripción que se detallan a continuación y en la Figura 1.

La primera, llamada "transactivación directa", es una consecuencia de la unión de GR asociado a GC directamente a los GRE positivos que actúan en cis ((+)GRE), activando así la expresión de genes diana. La secuencia consenso (+)GRE, GGAACANNNTGTTCT (siendo N cualquiera de A, T, C o G) (SEQ ID NO: 1), es un palíndromo imperfecto que comprende dos medios sitios de 6 pares de bases separados por 3 pares de bases, por lo que se denomina "IR3" (por "3 repeticiones invertidas").

La segunda función es la "transrepresión ligada indirecta", que surge de la interacción física de los GR unidos a GC con los factores de transcripción proinflamatorios AP-1 y NF-kB. A través de la unión a la subunidad Jun de AP-1 y la subunidad p65 de NF-kB, Gr antagoniza su actividad e interfiere con la función de activación transcripcional de estas dos proteínas. Nissen y Yamamoto, 2000. Genes Dev. 14(18):2314-29; Yang-Yen et al., 1990. Cell. 62(6): 1205-15).

La tercera función, llamada "transrepresión directa", es una consecuencia de la unión de GR asociada a GC directamente al GRE negativo (nGRE) descrito recientemente (2011) (Surjit et al., 2011. Cell. 145(2): 224-41), que media la represión directa de genes específicos. La secuencia consenso nGRE, CTCC(N)ü^.2GGAGA (siendo N cualquiera de A, T, C o G) (SEQ ID NO: 2), también es palindrómica, pero difiere del (+)GRE clásico en secuencia y longitud del espaciador (y por lo que se denomina IR0, IR1 o IR2, según sea el caso).

Las propiedades antiinflamatorias de los GC naturales se demostraron hace más de 60 años (Carryer et al., 1950. J. Allergy 21(4): 282-7). Desde entonces, los derivados sintéticos de GC se han utilizado ampliamente en tratamientos destinados a suprimir o aliviar los trastornos inflamatorios y alérgicos agudos y crónicos en diversas enfermedades. Sin embargo, los tratamientos con GC están asociados con una variedad de efectos secundarios debilitantes graves (Oray et al., 2016. Expert Opin Drug Saf. 15(4): 457-65),tales como diabetes tipo 2, dislipidemia, aumento de peso, deterioro cognitivo, gastritis, esteatosis hepática, osteoporosis, hipertensión, cardiopatía isquémica, dermatoporosis, atrofia cutánea, cataratas, glaucoma, midriasis o supresión de la inmunidad mediada por células. Pueden presentarse diferentes efectos secundarios hasta en el 90% de los pacientes que toman GC durante más de 60 días, independientemente de la dosis y la vía de administración. Algunos de estos efectos secundarios pueden ocurrir incluso en pacientes que toman dosis bajas (< 7.5 mg/día) (Curtis et al., 2006. Arthritis Rheum. 55(3): 420-6; Pereira et al., 2010. Clinics (Sao Paulo). 65(11): 1197-1205).

Antes del descubrimiento de la vía de transrepresión directa en 2011, los efectos antiinflamatorios beneficiosos de los GC se habían atribuido a la vía de transrepresión ligada indirecta, mientras que se pensaba que muchos de los efectos secundarios indeseables que surgían de los tratamientos con GC estaban relacionados solo con la vía de transactivación directa (Clark y Belvisi, 2012. Pharmacol Ther. 134(1): 54-67) (Figura 1).

Por lo tanto, se han realizado intensos esfuerzos en las últimas décadas para desarrollar nuevos ligandos de GR, denominados "disociados" o "moduladores agonistas de los receptores de glucocorticoides selectivos" (SEGRAM), que mantendrían un perfil de transrepresión, mientras que perderían parcial o, lo más idealmente, por completo, sus propiedades de transactivación (Schacke et al., 2004. Proc Natl Acad Sci, USA 101(1): 227-32).

En este sentido, se han desarrollado varios SEGRAM putativos, pero pocos han llegado a los ensayos clínicos. Tal ligando, RU24858, se encontró que exhibía un perfil disociado tan esperado in vitro (Vayssiére et al., 1997. Mol Endocrinol. 11(9): 1245-55). Sin embargo, tras la administración in vivo, estudios fisiopatológicos no pudieron confirmar esta disociación (Belvisi et al., 2001. J Immunol. 166(3): 1975-82).

Más tarde, se ha demostrado que otro ligando no esteroideo sintético, a saber, Mapracorat (también llamado ZK245186 o BOL-303242-X) in vitro actúa como un agente antiinflamatorio en las células epiteliales de la córnea desafiadas con estrés osmótico (Cavet et al., 2010. Mol. Vis 16: 1791-1800), e in vivo en modelos experimentales de ojo seco e inflamación postoperatoria (Shafiee et al., 2011. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52(3): 1422-30), con una actividad comparable a la del esteroide "tradicional" sintético dexametasona, pero efectos secundarios reducidos en la presión intraocular y el peso corporal. Mapracorat también ha sido el producto de estudio de varios ensayos clínicos entre junio de 2009 y julio de 2013: un ensayo clínico de fase II de búsqueda de dosis como un ungüento para la dermatitis atópica (números de ensayo clínico NCT00944632, NCT01228513, NCT01359787, NCT01407510, NCT01408511 y NCT01736462); y ensayos clínicos de fase I, II y III como suspensión oftálmica para la conjuntivitis alérgica (Número de ensayo clínico NCT01289431) e inflamación y dolor después de la cirugía de cataratas (Números de ensayo clínico NCT00905450, NCT01230125, NCT01298752, NCT01591161, NCT01591655 y NCT01736462). Sin embargo, a partir de octubre de 2018, no se dispone de resultados de estudios de estos ensayos y no se ha otorgado ninguna autorización de comercialización, lo que sugiere que Mapracorat podría haber revelado problemas de eficacia y/o efectos secundarios.

Al igual que en 2011, también se demostró que la función de transrepresión directa mediada por GR unido a GC está involucrada en efectos secundarios indeseables (Surjit et al., 2011. Cell. 145(2): 224-41), parecía que dirigirse exclusivamente a la vía de transrepresión ligada indirecta sería eficaz para prevenir los efectos secundarios.

Quedaba, pues, la necesidad de desarrollar SEGRAM apropiados que no pueden inducir de manera eficiente ni la transactivación directa ni las funciones de transrepresión directa de GR, al mismo tiempo que inducen su actividad de transrepresión ligada indirecta y sus propiedades antiinflamatorias in vivo.

Curiosamente, a fines de la década de 1990, Schering AG, ahora Bayer Health Care Pharmaceuticals, desarrolló nuevos compuestos no esteroideos (véase, por ejemplo, la patente de los Estados Unidos No. 6,245,804), reivindicando una actividad antiinflamatoria disociada de sus efectos metabólicos, (véase, por ejemplo, la patente de los Estados Unidos No. 6,323,199). En 2016, el solicitante descubrió que, entre estos compuestos, uno de ellos, el 5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona, en lo sucesivo denominada "CpdX", no induce las funciones de transactivación y transrepresión directa del GR, mientras que sigue induciendo su actividad de transrepresión ligada indirecta (Hua et al., 2016. Proc Natl Acad Sci USA 113(5): E635-43). Nuevamente en 2005, Barker et al., (2005. J. Med Chem. 48(14): 4507-10) habían acoplado varios aglutinantes de GR en el sitio activo de GR, entre los que se encontraban los isómeros R y S del compuesto 5 (correspondientes a CpdX), para desarrollar un "método de acoplamiento de consenso" e identificar residuos clave en el lado de unión de GR; sin embargo, se desconocía la estereoquímica del isómero activo.

En el presente documento, los inventores muestran que, contrariamente a los SEGRAM putativos descritos previamente en la técnica (tales como Mapracorat), CpdX induce selectivamente la "actividad de transrepresión ligada indirecta" de GR, siendo así un SEGRAM apropiado que exhibe selectivamente la función de transrepresión indirecta de GR, mientras que Mapracorat exhibe las tres funciones de GR. Lo que es más importante, los inventores demuestran que, tras la administración a largo plazo a ratones, CpdX y sus nuevos derivados son terapéuticamente tan eficaces como el glucocorticoide sintético dexametasona (Dex), mientras que carecen de los efectos secundarios debilitantes bien establecidos de los glucocorticoides sintéticos.

Resumen

La presente invención se refiere a una composición que comprende un enantiómero de un modulador agonista del receptor de glucocorticoides selectivo (SEGRAM) de Fórmula 1 (CpdX):

(Fórmula 1 -CpdX)

o una de sus sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables,

para uso en la prevención o tratamiento de un trastorno inflamatorio en un sujeto que lo necesite,

en el que el trastorno inflamatorio se selecciona del grupo que comprende dermatitis atópica, dermatitis de contacto, psoriasis, dermatitis solar, eczema, urticaria, vitíligo, eritema nodoso, eritema multiforme, dermatomiositis, esclerodermia, angioedema, liquen plano, venulitis necrosante cutánea, inflamación de la piel por picadura de insecto, rinoconjuntivitis, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), enfermedad de Crohn, colitis, conjuntivitis alérgica y colitis ulcerosa; y

en el que dicho enantiómero del SEGRAM corresponde al segundo pico de elución de una cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) de una mezcla racémica del SEGRAM de Fórmula 1 [CpdX(eB)] o de una mezcla racémica del SEGRAM de Fórmula 1 en su forma deuterada con Fórmula 2 [CpdX-D3(eB)]:

(Fórmula 2 - CpdX-D3)

En una realización, el trastorno inflamatorio se selecciona del grupo que comprende dermatitis atópica, dermatitis de contacto, psoriasis, conjuntivitis alérgica y colitis ulcerosa.

Se relaciona además con una composición que comprende un enantiómero de un modulador agonista del receptor de glucocorticoides selectivo (SEGRAM) de Fórmula 1:

(Fórmula 1 - CpdX)

o una de sus sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables,

en el que el trastorno inflamatorio se selecciona del grupo que comprende dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma alérgica, psoriasis, conjuntivitis alérgica, artritis reumatoide, dermatitis solar, eccema, urticaria, vitiligo, eritema nodoso, eritema multiforme, dermatomiositis, esclerodermia, angioedema, liquen plano, venulitis necrotizante cutánea, inflamación de la piel por picadura de insecto, sinusitis alérgica, rinitis alérgica, fiebre del heno, rinoconjuntivitis, enfermedad inflamatoria intestinal (IBD), enfermedad de Crohn, colitis y colitis ulcerosa; y

en el que dicho enantiómero del SEGRAM corresponde al primer pico de elución de una cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) de una mezcla racémica del SEGRAM de Fórmula 1 en su forma deuterada con Fórmula 2 [CpdX-D3(eA)]:

(Fórmula 2 - CpdX-D3)

En una realización, el trastorno inflamatorio se selecciona del grupo que comprende dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma alérgica, psoriasis, conjuntivitis alérgica, artritis reumatoide y colitis ulcerosa.

En una realización común, dicho enantiómero del SEGRAM de Fórmula 1 no induce o no induce sustancialmente ni una función de transactivación directa ni una función de transrepresión directa del receptor de glucocorticoides, sino que induce selectivamente la función de transrepresión ligada indirecta del receptor de glucocorticoides.

En una realización común, dicho enantiómero del SEGRAM de Fórmula 1 no induce o no induce sustancialmente los efectos secundarios asociados con los fármacos antiinflamatorios esteroideos (SAID) tras la administración a un sujeto que los necesita.

En una realización común, los efectos secundarios asociados con los SAID se seleccionan del grupo que comprende atrofia de la piel; osteoporosis; supresión del crecimiento; pérdida de peso corporal; ganancia de masa grasa; pérdida de masa magra; apoptosis del timo, bazo, riñón y/o glándula suprarrenal; inhibición de la síntesis de corticosterona; supresión suprarrenal; hiperglucemia; resistencia a la insulina; hiperinsulinemia; síndrome metabólico, diabetes tipo 2; e hígado graso.

Definiciones

"Supresión suprarrenal", o "insuficiencia suprarrenal" como se usa en el presente documento, se refiere a una condición en la que las glándulas suprarrenales no producen cantidades adecuadas de cortisol. El uso de esteroides en dosis altas durante más de una semana comienza a producir supresión de las glándulas suprarrenales del sujeto porque los glucocorticoides exógenos suprimen la hormona liberadora de corticotropina (CRH) hipotalámica y la hormona adrenocorticotrópica (ACTH) hipofisaria, así como también inhiben la síntesis de enzimas que sintetizan la corticosterona suprarrenal. Con la supresión prolongada, las glándulas suprarrenales se atrofian y pueden tardar hasta 9 meses en recuperar la función completa después de suspender el glucocorticoide exógeno. Durante este tiempo de recuperación, el sujeto es vulnerable a la insuficiencia suprarrenal durante momentos de estrés, tal como una enfermedad, debida tanto a la atrofia suprarrenal como a la supresión de la liberación de CRH y ACTH.

"CpdX", como se usa en el presente documento, se refiere al modulador agonista del receptor de glucocorticoides selectivos (SEGRAM) de Fórmula 1:

o un enantiómero farmacéuticamente aceptable, forma deuterada, sal y/o solvato del mismo. "CpdX" corresponde a 5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]-isobenzofuran-1(3H)-ona (véase Ejemplo 1, Figura 2A).

"CpdX(eA)", como se usa en el presente documento, se refiere a uno de los dos enantiómeros del SEGRAM de Fórmula 1 o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. "CpdX(eA)" corresponde al primer pico de elución de 5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]-isobenzofuran-1(3H)-ona separado por cromatografía preparativa de fluidos supercríticos (véase Ejemplo 1, Figura 2B).

"CpdX(eB)", como se usa en el presente documento, se refiere a uno de los dos enantiómeros del SEGRAM de Fórmula 1 o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. "CpdX(eB)" corresponde al segundo pico de elución de 5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]-isobenzofuran-1(3H)-ona separado por cromatografía preparativa de fluidos supercríticos (véase Ejemplo 1, Figura 2B).

"CpdX-D3", como se usa en el presente documento, se refiere a una forma racémica deuterada del SEGRAM de Fórmula 1 o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. "CpdX-D3" corresponde a 5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona de Fórmula 2 (véase Ejemplo 1, Figura 2C):

"CpdX-D3(eA)", como se usa en el presente documento, se refiere a uno de los dos enantiómeros del SEGRAM de Fórmula 2 o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. "CpdX-D3(eA)" corresponde al primer pico de elución de 5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona separado por cromatografía preparativa de fluidos supercríticos (véase Ejemplo 1, Figura 2D).

"CpdX-D3(eB)", como se usa en el presente documento, se refiere a uno de los dos enantiómeros del SEGRAM de Fórmula 2 o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. "CpdX-D3(eB)" corresponde al segundo pico de elución de 5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona separado por cromatografía preparativa de fluidos supercríticos (véase Ejemplo 1, Figura 2D).

"Función de transactivación directa del receptor de glucocorticoides (GR)" se refiere a la activación transcripcional de genes que comprenden un elemento de respuesta positivo a glucocorticoides ((+)GRE) (con la SEQ ID NO: 1) unido por un Gr asociado a glucocorticoides (GC) en su región promotora.

"Función de transrepresión directa del receptor de glucocorticoides (GR)" se refiere a la represión transcripcional de genes que comprenden un elemento negativo de respuesta a glucocorticoides (nGRE) (con la SEQ ID NO: 2) unido por un G^rasociado a glucocorticoides (GC) en su región promotora.

"Hígado graso", también conocido como "esteatosis hepática", como se usa en este documento, se refiere a una condición en la que grandes vacuolas de grasa de triglicéridos se acumulan en las células del hígado a través del proceso de esteatosis (es decir, retención anormal de lípidos dentro de una célula). Esta acumulación de grasa también puede ir acompañada de una inflamación progresiva del hígado (hepatitis), denominada esteatohepatitis.

"Supresión del crecimiento" es un efecto adverso importante y bien reconocido de la terapia con medicamentos antiinflamatorios esteroideos (SAID), en particular en niños. El mecanismo de supresión del crecimiento incluye el efecto de los SAID sobre los componentes esenciales del anabolismo y el crecimiento, incluido el metabolismo óseo, la retención de nitrógeno y el efecto sobre la formación de colágeno. Las terapias con SAID también dan como resultado la inhibición de la liberación de la hormona del crecimiento y la biodisponibilidad del factor-1 de crecimiento similar a la insulina (IGF-1). En una realización, la supresión del crecimiento tras la terapia con SAID afecta a todo el cuerpo, con un crecimiento físico atrofiado. En una realización, la supresión del crecimiento tras la terapia con SAID afecta a los órganos internos e incluye timo, bazo, riñón, hígado y glándula suprarrenal.

"Hiperglucemia" es una condición en la cual una cantidad excesiva de glucosa circula en el plasma sanguíneo, como, por ejemplo, superior a 11.1 mmol de glucosa por L de sangre (200 mg de glucosa por dL de sangre). Las pautas de la Asociación Estadounidense de Diabetes clasifican a los sujetos en varios subgrupos, desde levemente hiperglucémicos (con un nivel de glucosa que oscila entre aproximadamente 5.6 y aproximadamente 7 mmol/L de sangre, es decir, de aproximadamente 100 a aproximadamente 126 mg/dL de sangre), a diabéticos (con un nivel de glucosa por encima de 7 mmol/L de sangre, es decir, por encima de 126 mg/dL de sangre). El efecto de los SAID sobre el metabolismo de la glucosa depende de la dosis y provoca un leve aumento de los niveles de glucosa en sangre en ayunas y un mayor aumento de la glucosa en sangre posprandial en pacientes sin diabetes mellitus preexistente. La hiperglucemia inducida por SAID es de origen multifactorial y puede explicarse por el aumento de la gluconeogénesis hepática, la inhibición de la captación de glucosa en el tejido adiposo y/o la alteración de las funciones del receptor y posteriores al receptor inducidas por SAID. Las técnicas para evaluar el desarrollo de hiperglucemia tras la terapia con SAID o tras la administración del SEGRAM de la presente invención a un sujeto que lo necesite son bien conocidas por el experto en la materia e incluyen análisis de sangre con análisis bioquímico y análisis de glucosa (incluido la prueba de azúcar en sangre en ayunas (FBS), la prueba de glucosa en plasma en ayunas (FPG), la prueba de tolerancia a la glucosa, la prueba de glucosa posprandial (PG) y la prueba de glucosa aleatoria).

"Hiperinsulinemia" o "hiperinsulinismo" como se usa en el presente documento, se refiere a una condición en la que circula una cantidad excesiva de insulina en el plasma sanguíneo. La hiperinsulinemia se asocia con hipertensión, obesidad, dislipidemia e intolerancia a la glucosa (todos conocidos colectivamente como "síndrome metabólico").

"Función de transrepresión ligada indirecta del receptor de glucocorticoides (GR)" se refiere a la represión transcripcional de genes que comprenden un sitio de unión a AP-1 (con una secuencia de ácido nucleico ATGAGTCAT) y/o un sitio de unión a NF-^kB (con una secuencia de ácido nucleico SEQ ID NO: 3 - GGGRNNYYCC, siendo R cualquiera de G o A, Y siendo cualquiera de T o C, y N siendo cualquiera de A, T, C o G) en su región promotora, unidos por la subunidad Jun de AP-1 y/o la subunidad p65 de NF-kB respectivamente, unidos por un GR asociado a glucocorticoides (GC).

"Trastorno inflamatorio" se refiere a un estado patológico que resulta en inflamación, por ejemplo, causada por la entrada de leucocitos y/o quimiotaxis de neutrófilos. La inflamación puede resultar de la infección con organismos patógenos y virus, o de medios no infecciosos tales como, por ejemplo, respuesta inmune a antígeno extraño, respuestas autoinmunes, trauma o reperfusión después de infarto de miocardio o accidente cerebrovascular. Las células Th1, Th2 y Th17 son tres subconjuntos de las células T colaboradoras que se sabe que están involucradas en varios trastornos inflamatorios. Se diferencian de las células T CD4 no modificadas (o células Th0) dependiendo de su entorno de citoquinas: IFN-y impulsa la producción de las células Th1 mientras que IL-10 e IL-4 inhiben la producción de las células Th1; por el contrario, IL-4 impulsa la producción de las células Th2 e IFN-y inhibe las células Th2. En cuanto a las células Th17, su producción está impulsada por TGF-p, IL-6, IL-21, IL-23 e IL-33.

"Osteoporosis" es una enfermedad progresiva caracterizada por baja masa ósea, deterioro de la microarquitectura del tejido óseo, fragilidad ósea y el consiguiente aumento del riesgo de fractura. La osteoporosis secundaria, como consecuencia del uso de fármacos sistémicos como los SAID, es una de las complicaciones más debilitantes de la terapia con glucocorticoides, reconocida desde 1940. La dosis acumulativa así como la duración de la exposición de SAID son los determinantes clave en el desarrollo de la osteoporosis. La inhibición de la función de los osteoblastos es el principal efecto de los SAID sobre el metabolismo óseo, lo que conduce a una disminución de la formación ósea. La pérdida ósea comienza inmediatamente después del inicio de la terapia con SAID y tiene lugar principalmente en los primeros seis meses de tratamiento. Además de la pérdida ósea, la terapia con SAID también puede provocar cambios en la integridad arquitectónica del hueso. Las técnicas para evaluar el desarrollo de osteoporosis en la terapia con SAID o tras la administración del SEGRAM de la presente invención a un sujeto que lo necesita son bien conocidas por el experto en la materia e incluyen medir la densidad mineral ósea en la línea base y comparar el resultado de la línea base con mediciones posteriores durante y después del tratamiento. Las técnicas para prevenir la osteoporosis también son bien conocidas por el experto en la materia e incluyen administrar a un paciente que lo necesite un suplemento de calcio y/o vitamina D, y actividad física adecuada.

"Atrofia de la piel", también denominada como "atrofia por esteroides" o "atrofia dérmica inducida por corticosteroides", consiste en una reducción del espesor epidérmico y/o dérmico, regresión de las glándulas sebáceas, pérdida de grasa subcutánea y/o atrofia de la capa muscular. Resulta de la inhibición impulsada por SAID de la actividad mitótica de los fibroblastos y/o de la colagenasa, lo que conduce a una disminución en la síntesis de colágeno y glicosaminoglicanos y una reducción en el diámetro de las fibrillas. Las técnicas para evaluar el desarrollo de atrofia de la piel tras la terapia con SAID o tras la administración del SEGRAM de la presente invención a un sujeto que lo necesite son bien conocidas por el experto en la materia e incluyen el control visual del adelgazamiento de la piel y de la prominencia vascular, uso de calibradores (incluido el calibrador de pliegues de la piel de Harpenden), gravimétrico, ultrasonido, rayos X de tejidos blandos, histiométrico, resistividad eléctrica y análisis transcripcional de los genes Kindlin-1 (Ussar et al., 2008. PLoS Genet. 4(12): e1000289) y REDD1 (Britto et al., 2014. Am J Physiol Endocrinol Metab. 307(11): E983-93; Baida et al., 2015. EMBO Mol Med. 7(1):42-58).

"Solvato", como se usa en el presente documento, se refiere a un complejo molecular que comprende los SEGRAM de Fórmula 1 y una o más moléculas de disolvente farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, etanol. El término "hidratar" se emplea cuando dicho disolvente es agua.

"Efectos secundarios asociados con los medicamentos antiinflamatorios esteroideos (SAID)", como se usa en el presente documento, se refiere a los efectos secundarios (también denominados "efectos debilitantes") comúnmente observados en sujetos sometidos a un tratamiento a corto, mediano o largo plazo con medicamentos antiinflamatorios esteroideos (SAID).

"Trastorno inflamatorio relacionado con Th2" se refiere a cualquier enfermedad, trastorno o condición, en la que las células Th2 apoyan, causan o median el proceso de enfermedad, trastorno o condición o en el que las células Th2 participan en la curación o el alivio de los síntomas de la enfermedad, trastorno o condición, que pueden estar representados por una actividad de Th2 aumentada o reducida.

"Trastorno inflamatorio relacionado con Th17" se refiere a cualquier enfermedad, trastorno o condición, en la que las células Th17 apoyan, causan o median el proceso de enfermedad, trastorno o condición o en el que las células Th17 participan en la curación o el alivio de los síntomas de la enfermedad, trastorno o condición, que pueden estar representados por una actividad de Th17 aumentada o reducida. "Trastorno inflamatorio relacionado con Th1" se refiere a cualquier enfermedad, trastorno o condición, en la que las células Th1 apoyan, causan o median el proceso de enfermedad, trastorno o condición o en el que las células Th1 participan en la curación o el alivio de los síntomas de la enfermedad, trastorno o condición, que pueden estar representados por una actividad de Th1 aumentada o reducida.

Descripción detallada

La presente invención se refiere a una composición que comprende un enantiómero de un modulador agonista del GR selectivo (SEGRAM) de Fórmula 1 o una forma deuterada farmacéuticamente aceptable, sal y/o solvato del mismo, para uso en la prevención y/o tratamiento de ciertos trastornos inflamatorios, como se define en las reivindicaciones.

Los trastornos inflamatorios comprenden trastornos inflamatorios relacionados con células T colaboradoras 2 (Th2), trastornos inflamatorios relacionados con células T colaboradoras 17 (Th17), trastornos inflamatorios relacionados con células T colaboradoras 1 (Th1), trastornos inflamatorios relacionados con Th2 y Th17 (también denominados trastornos inflamatorios mixtos "Th2/Th17"), trastornos inflamatorios relacionados con Th1 y Th17 (también denominados "trastornos inflamatorios Th1/Th17 mixtos"), trastornos inflamatorios relacionados con Th1 y Th2 (también denominados "trastornos inflamatorios Th1/Th2 mixtos"), y trastornos inflamatorios relacionados con Th1, Th2 y Th17 (también denominados "trastornos inflamatorios Th1/Th2/Th17 mixtos").

Trastornos inflamatorios

Ejemplos de trastornos inflamatorios incluyen dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma incluyendo asma alérgica, psoriasis, conjuntivitis alérgica, artritis reumatoide, arteritis de células gigantes (enfermedad de Horton), enfermedad inflamatoria intestinal (IBD) (incluyendo enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y colitis), síndrome metabólico inducido después de la menopausia y esteatosis, periodontitis, enfermedad de Paget, osteoporosis, mieloma múltiple, uveítis, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, destrucción de células p pancreáticas, espondilitis reumatoide, osteoartritis, artritis gotosa y otras afecciones artríticas, gota, dificultad respiratoria en adultos (ARDS), enfermedades inflamatorias pulmonares crónicas, silicosis, sarcoidosis pulmonar, rinitis, anafilaxia, pancreatitis, degeneración muscular, caquexia, incluida la caquexia secundaria a infección, malignidad o síndrome de inmunodeficiencia adquirida, síndrome de Reiter, diabetes tipo I, enfermedad de reabsorción ósea, enfermedad de injerto contra huésped (GVHD), lesión por isquemia-reperfusión, traumatismo craneoencefálico, esclerosis múltiple, paludismo cerebral, sepsis, choque séptico, síndrome de choque tóxico, choque endotóxico, sepsis por gramnegativos, fiebre y mialgias debidas a infecciones tales como influenza y pirosis.

Trastornos inflamatorios relacionados con Th2

Los trastornos inflamatorios relacionados con Th2 pueden representarse mediante una actividad de Th2 mejorada o una actividad de Th2 reducida.

Los trastornos inflamatorios relacionados con Th2 incluyen enfermedades alérgicas y enfermedades infecciosas (particularmente infecciones extracelulares).

Las enfermedades alérgicas relacionadas con Th2 incluyen dermatitis atópica, asma alérgica, sinusitis alérgica, conjuntivitis alérgica, rinitis alérgica, rinoconjuntivitis, fiebre del heno, dermatitis solar, eccema, urticaria, angioedema, eritema nodoso, eritema multiforme, venulitis necrosante cutánea, inflamación de la piel por picadura de insecto y anafilaxia.

De acuerdo con la invención, el trastorno inflamatorio

dermatitis atópica (véase Ejemplo 5).

De acuerdo con la invención, el trastorno inflamatorio es el asma alérgica (véase Ejemplo 6).

De acuerdo con la invención, el trastorno inflamatorio

conjuntivitis alérgica (véase Ejemplo 10). Trastornos inflamatorios relacionados con Th17

Los trastornos inflamatorios relacionados con Th17 se pueden representar mediante una actividad de Th17 mejorada o una actividad de Th17 reducida.

Los trastornos inflamatorios relacionados con Th17 incluyen enfermedades autoinmunes y trastornos proliferativos (por ejemplo, cáncer).

Las enfermedades autoinmunes relacionadas con Th17 incluyen dermatitis de contacto, psoriasis, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal (IBD) (incluida la enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y colitis), periodontitis, enfermedades inflamatorias crónicas, lupus eritematoso, dermatomiositis, vasculitis, síndrome de Sjogren, esclerodermia, esclerosis múltiple, vitíligo, liquen plano, diabetes tipo 2, cardiopatía coronaria, hiperlipidemia, síndrome metabólico inducido después de la menopausia y esteatosis, y enfermedad de injerto contra huésped. De acuerdo con la invención, el trastorno inflamatorio es la dermatitis de contacto (véase Ejemplo 3).

De acuerdo con la invención, el trastorno inflamatorio es la psoriasis (véase Ejemplo 7).

De acuerdo con la invención, el trastorno inflamatorio es la artritis reumatoide (véase Ejemplo 8).

De acuerdo con la invención, el trastorno inflamatorio es la colitis (véase Ejemplo 9).

Trastornos inflamatorios relacionados con Th1

Los trastornos inflamatorios relacionados con Th1 se pueden representar mediante una actividad de Th1 mejorada o actividad de Th1 reducida.

Los trastornos inflamatorios relacionados con Th1 incluyen enfermedades infecciosas (particularmente infecciones intracelulares tales como, por ejemplo, infecciones virales) y trastornos proliferativos (por ejemplo, cáncer).

Propiedades de los SEGRAM de la invención

Función sobre GR

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce o no induce sustancialmente la función de transactivación directa del receptor de glucocorticoides (GR).

Por "no induce la función de transactivación directa del receptor de glucocorticoides (GR)" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el nivel de transcripción de genes que comprende un elemento de respuesta de glucocorticoides positivo ((+)GRE) no es mayor que su nivel de transcripción antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En otras palabras, tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, la transcripción de genes que comprenden un elemento de respuesta a glucocorticoides positivo ((+ GRE) no aumenta en comparación con antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

Por "no induce sustancialmente la función de transactivación directa del receptor de glucocorticoides (GR)" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el nivel de transcripción de genes que comprenden un elemento de respuesta de glucocorticoides positivo ((+)GRE) no es superior a tres veces, dos veces, 1.8 veces, 1.6 veces, 1.5 veces, 1.4 veces, 1.3 veces, 1.2 veces, 1.1 veces o menos que su nivel de transcripción antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En otras palabras, tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, la transcripción de genes que comprenden un elemento de respuesta a glucocorticoides positivo ((+)GRE) no aumenta más de tres veces, dos veces, 1.8 veces, 1.6- veces, 1.5 veces, 1.4 veces, 1.3 veces, 1.2 veces, 1.1 veces o menos en comparación con antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce o no induce sustancialmente la función de transrepresión directa del GR.

Por "no induce la función de transrepresión directa del GR" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el nivel de transcripción de los genes que comprenden un elemento de respuesta a los glucocorticoides negativa (nGRE) no es inferior a su nivel de transcripción antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En otras palabras, tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, la transcripción de genes que comprenden un elemento de respuesta a glucocorticoides negativa (nGRE) no disminuye en comparación con antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

Por "no induce sustancialmente la función de transrepresión directa del GR" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el nivel de transcripción de los genes que comprenden un elemento de respuesta a los glucocorticoides negativa (nGRE) no es inferior a tres veces, dos veces, 1.8 veces, 1.6 veces, 1.5 veces, 1.4 veces, 1.3 veces, 1.2 veces, 1.1 veces o menos su nivel de transcripción antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En otras palabras, tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, la transcripción de genes que comprenden un elemento de respuesta a glucocorticoides negativa (nGRE) no disminuye más de tres veces, dos veces, 1.8 veces, 1.6 veces, 1.5 veces, 1.4 veces, 1.3 veces, 1.2 veces, 1.1 veces o menos en comparación con antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce o no induce sustancialmente ni la transactivación directa ni las funciones de transrepresión directa del GR.

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 induce selectivamente la función de transrepresión ligada indirecta del GR.

Función en células Th

Función en células Th2

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 inhibe o inhibe sustancialmente la diferenciación de las células Th2 de las células Th0.

Por "inhibe la diferenciación de las células Th2 de las células Th0" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el número de las células Th2 no es mayor que su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En una realización, el número de las células Th2 es menor que su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En una realización, el número de las células Th2 es 1.1 veces, 1.2 veces, 1.5 veces, dos veces, 3 veces, 5 veces, 10 veces, 25 veces, 50 veces, 100 veces o más menor que su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

Por "inhibe sustancialmente la diferenciación de las células Th2 de las células Th0" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el número de las células Th2 no es superior al 2 veces, 1.8 veces, 1.6 veces, 1.5 veces, 1.4 veces, 1.3 veces, 1.2 veces, 1.1 veces o menos de su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 inhibe o inhibe sustancialmente la producción de una cualquiera o más de las citoquinas seleccionadas del grupo que comprende o consiste en IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 y TSLP. En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 inhibe o inhibe sustancialmente la producción de una cualquiera o más de las inmunoglobulinas seleccionadas del grupo que comprende o consiste en IgE e IgG1.

Por "inhibe la producción de una cualquiera o más de las citoquinas" e "inhibe la producción de una cualquiera o más de las inmunoglobulinas" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el nivel de expresión de dichas citoquinas o inmunoglobulinas no es mayor que su nivel de expresión antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En una realización, el nivel de expresión de dichas citoquinas o inmunoglobulinas es menor que su nivel de expresión antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En una realización, el nivel de expresión de dichas citoquinas o inmunoglobulinas es 1.1 veces, 1.2 veces, 1.5 veces, dos veces, 3 veces, 5 veces, 10 veces, 25 veces, 50 veces, 100 veces o más inferior a su nivel de expresión antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

Por "inhibe sustancialmente la producción de una cualquiera o más de las citoquinas" e "inhibe sustancialmente la producción de una cualquiera o más de las inmunoglobulinas" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el nivel de expresión de dichas citoquinas o inmunoglobulinas no es superior al doble, 1.8 veces, 1.6 veces, 1.5 veces, 1.4 veces, 1.3 veces, 1.2 veces, 1.1 veces o menos de su nivel de expresión antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

Función en células Th17

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 inhibe o inhibe sustancialmente la diferenciación de las células Th17 de las células Th0.

Por "inhibe la diferenciación de las células Th17 de las células Th0" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el número de las células Th17 no es mayor que su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En una realización, el número de las células Th17 es menor que su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En una realización, el número de las células Th17 es 1.1 veces, 1.2 veces, 1.5 veces, dos veces, 3 veces, 5 veces, 10 veces, 25 veces, 50 veces, 100 veces o más menor que su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

Por "inhibe sustancialmente la diferenciación de las células Th17 de las células Th0" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el número de las células Th17 no es superior al doble, 1.8 veces, 1.6 veces, 1.5 veces, 1.4 veces, 1.3 veces, 1.2 veces, 1.1 veces o menos de su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 inhibe o inhibe sustancialmente la producción de una cualquiera o más de las citoquinas seleccionadas del grupo que comprende o consiste en IL-17a, IL-17c, IL-17f, IL-21, IL-22 , IL-23 y TGFp.

Por "inhibe la producción de una cualquiera o más de las citoquinas" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el nivel de expresión de dichas citoquinas no es mayor que su nivel de expresión antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En una realización, el nivel de expresión de dichas citoquinas es menor que su nivel de expresión antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En una realización, el nivel de expresión de dichas citoquinas es 1.1 veces, 1.2 veces, 1.5 veces, dos veces, 3 veces, 5 veces, 10 veces, 25 veces, 50 veces, 100 veces o más por debajo de su nivel de expresión antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

Por "inhibe sustancialmente la producción de una cualquiera o más de las citoquinas" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al G^r, el nivel de expresión de dichas citoquinas no es superior al doble, 1.8 veces, 1.6 veces, 1.5 veces, 1.4 veces, 1.3 veces, 1.2 veces, 1.1 veces o menos su nivel de expresión antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

Función en células Th1

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 inhibe o inhibe sustancialmente la diferenciación de las células Th1 de las células Th0.

Por "inhibe la diferenciación de las células Th1 de las células Th0" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el número de células Th1 no es mayor que su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En una realización, el número de células Th1 es menor que su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR. En una realización, el número de células Th1 es 1.1 veces, 1.2 veces, 1.5 veces, dos veces, 3 veces, 5 veces, 10 veces, 25 veces, 50 veces, 100 veces o más menor que su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

Por "inhibe sustancialmente la diferenciación de las células Th1 de las células Th0" se entiende que tras la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR, el número de células Th1 celdas no es superior al doble, 1.8 veces, 1.6 veces, 1.5 veces, 1.4 veces, 1.3 veces, 1.2 veces, 1.1 veces o menos de su número antes de la unión del SEGRAM de Fórmula 1 al GR.

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 inhibe o inhibe sustancialmente la producción de una cualquiera o más de las citoquinas seleccionadas del grupo que comprende o consiste en IL-2, IL-12, IL-18, IFN-y y TNFa. En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 inhibe o inhibe sustancialmente la producción de una cualquiera o más de las inmunoglobulinas seleccionadas del grupo que comprende o consiste en IgG2a.

Métodos para medir los niveles de citoquinas/Ig

Los métodos para medir un aumento o disminución en el nivel de citoquinas y anticuerpos secretados son bien conocidos por el experto en la materia e incluyen análisis histológicos y análisis de perfiles de citoquinas y/o inmunoglobulinas.

Los perfiles de citoquinas y/o inmunoglobulinas pueden medirse mediante métodos convencionales utilizando anticuerpos anti-citoquinas (tales como, por ejemplo, anti-IL-1p, anti-IL-2, anti-IL-3, anti-IL-4, anti-IL-5, anti-IL-6, anti-IL-10, anti-IL-12, anti-IL-13, anti-IL-17a, anti-IL-17c, anti-IL-17f, anti-IL-18, anti-IL-21, anti-IL-22, anti-IL-23, anti-IL-33, anti-IFN-y, anti-TNFa, anti-TGFp o anti-TSLP) y/o anti-isotipo (tales como, por ejemplo, anticuerpos anti-IgA, anti-IgE, anti-IgGl, anti-IgG2a, anti-IgG2b, anti-IgG3 o anti-IgM) en un ensayo de citometría de flujo, ensayo ELISA, ensayo ELISA tipo sándwich, ensayo ELISPOT o similar. Otros métodos para medir un perfil de citoquinas incluyen la reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa (RT-PCR), incluida la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR), la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa cuantitativa (q-RT-PCR) y similares.

Efectos secundarios

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce o no induce sustancialmente efectos secundarios tras la administración a un sujeto que lo necesite.

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce o no induce sustancialmente los efectos secundarios asociados con los fármacos antiinflamatorios esteroideos (SAID) tras la administración a un sujeto que lo necesita.

Los ejemplos de SAID incluyen glucocorticoides naturales y glucocorticoides sintéticos. Los ejemplos de glucocorticoides naturales incluyen cortisona, cortodoxona, desoxicortona, hidrocortisona, acetato de prebediolona y pregnenolona. Los glucocorticoides sintéticos incluyen alclometasona, amcinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, cloroprednisona, cloroprednisona, ciclesonida, clobetasol, clobetasona, clocortolona, cloprednol, cortivazol, deflazacort, desonida, desoximetasona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difluprednato fluclorolona, fluclorolona, fludrocortisona, fludroxicortida, acetato de flugestona, flumetasona, flunisolida, fluocinolona, fluocinonida, fluocortina, fluocortolona, fluorometolona, fluperolona, fluprednideno, fluprednisolona, fluticasona, formocortal, halcinonida, halometasona, loteprednol, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, mometasona, parametasona, prednicarbato, prednisolona y prednisona y tixocortol, prednilideno, rimexolona, triamcinolona, triamcinolona y ulobetasol.

Los ejemplos de efectos secundarios asociados con SAID incluyen efectos secundarios musculoesqueléticos, efectos secundarios endocrinos y metabólicos, efectos secundarios gastrointestinales, efectos secundarios cardiovasculares, efectos secundarios dermatológicos, efectos secundarios neuropsiquiátricos, efectos secundarios oftalmológicos y efectos secundarios inmunológicos.

Los efectos secundarios musculoesqueléticos asociados con los SAID incluyen osteoporosis, necrosis avascular del hueso y miopatía.

Los efectos secundarios metabólicos y endocrinos asociados con los SAID incluyen síndrome metabólico; supresión del crecimiento; pérdida de peso corporal; ganancia de masa grasa; pérdida de masa magra; apoptosis del timo, bazo, riñón y/o glándula suprarrenal; inhibición de la síntesis de corticosterona; supresión suprarrenal; hiperglucemia; resistencia a la insulina; hiperinsulinemia; diabetes tipo 2; dislipidemia; hígado graso; y rasgos cushingoides.

Los efectos secundarios gastrointestinales asociados con los SAID incluyen gastritis, úlcera péptica, hemorragia gastrointestinal, perforación visceral y pancreatitis.

Los efectos secundarios cardiovasculares asociados con los SAID incluyen hipertensión, cardiopatía coronaria, cardiopatía isquémica e insuficiencia cardíaca.

Los efectos secundarios dermatológicos asociados con los SAID incluyen atrofia de la piel, dermatoporosis, equimosis, púrpura, erosiones, estrías, retraso en la cicatrización de heridas, aparición fácil de hematomas, acné, hirsutísimo y pérdida de cabello.

Los efectos secundarios neuropsiquiátricos asociados con los SAID incluyen cambios de humor, depresión, euforia, labilidad del estado de ánimo, irritabilidad, acatisia, ansiedad, deterioro cognitivo, psicosis, demencia y delirio.

Los efectos secundarios oftalmológicos asociados con los SAID incluyen cataratas, glaucoma, ptosis, midriasis, infecciones oculares oportunistas y coriorretinopatía serosa central.

Los efectos secundarios inmunológicos asociados con los SAID incluyen supresión de la inmunidad mediada por células, predisposición a infecciones y reactivación de infecciones latentes.

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce o no induce sustancialmente uno o más efectos secundarios asociados con los SAID seleccionados del grupo que comprende o consiste en osteoporosis; necrosis avascular del hueso; miopatía; síndrome metabólico; supresión del crecimiento; pérdida de peso corporal; ganancia de masa grasa; pérdida de masa magra; apoptosis del timo, bazo, riñón y/o glándula suprarrenal; inhibición de la síntesis de corticosterona; supresión suprarrenal; hiperglucemia; resistencia a la insulina; hiperinsulinemia; diabetes tipo 2; dislipidemia; hígado graso; gastritis; úlcera péptica; hemorragia gastrointestinal; perforación visceral; esteatosis hepática; pancreatitis; hipertensión; enfermedad coronaria; enfermedad isquémica del corazón; insuficiencia cardiaca; atrofia de la piel; dermatoporosis; equimosis; púrpura; erosiones; estrías; retraso en la cicatrización de heridas; moretones con facilidad; acné; hirsutismo; perdida de cabello; cambios de humor; depresión; euforia; labilidad del estado de ánimo; irritabilidad; acatisia; ansiedad; deterioro cognitivo; psicosis; demencia; delirio; catarata; glaucoma; ptosis; midriasis; infecciones oculares oportunistas; coriorretinopatía serosa central; supresión de la inmunidad mediada por células; predisposición a infecciones y reactivación de infecciones latentes.

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce o no induce sustancialmente uno o más efectos secundarios asociados con los SAID seleccionados del grupo que comprende o consiste en atrofia de la piel; osteoporosis; supresión del crecimiento; pérdida de peso corporal; ganancia de masa grasa; pérdida de masa magra; apoptosis del timo, bazo, riñón y/o glándula suprarrenal; inhibición de la síntesis de corticosterona; supresión suprarrenal; hiperglucemia; resistencia a la insulina; hiperinsulinemia; e hígado graso.

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce atrofia de la piel tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 11).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce osteoporosis tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 12).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce la supresión del crecimiento tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 13).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce la pérdida de peso corporal tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 13).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce ganancia de masa grasa y/o pérdida de masa magra tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 13).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce la apoptosis del timo, bazo, riñón y/o glándula suprarrenal tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 14).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce la inhibición de la síntesis de corticosterona tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 15).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce la supresión suprarrenal tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 15).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce hiperglucemia tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 16).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce resistencia a la insulina tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 17).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce hiperinsulinemia tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 17).

En una realización, el SEGRAM de Fórmula 1 no induce hígado graso tras la administración a un sujeto que lo necesita (véase Ejemplo 18).

Estructura

De acuerdo con la invención, el SEGRAM es un enantiómero de un compuesto de Fórmula 1:

o una forma deuterada farmacéuticamente aceptable, sal y/o solvato del mismo.

Como se usa en el presente documento, el compuesto de Fórmula 1 es una 5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]-isobenzofuran-1(3H)-ona y se conoce como "CpdX".

De acuerdo con la invención, cada uno de los dos enantiómeros del compuesto de Fórmula 1 se obtienen por separación de una mezcla racémica del compuesto de Fórmula 1 por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC), correspondiendo dichos dos enantiómeros al primer pico de elución [CpdX(eA)] y al segundo pico de elución [CpdX(eB)], respectivamente. SFC es una técnica bien conocida por el experto en la materia. En una realización, cada enantiómero del compuesto de Fórmula 1 se puede purificar eficazmente mediante SFC utilizando una columna de tris-(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilosa.

En una realización de la invención, el compuesto de Fórmula 1 está deuterado.

De acuerdo con la invención, tres átomos de hidrógeno en el compuesto de Fórmula 1 están deuterados. En consecuencia, la forma deuterada de Fórmula 1 es un compuesto de Fórmula 2 o un enantiómero, sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y se denomina "CpdX-D3":

De acuerdo con la invención, los dos enantiómeros del compuesto de Fórmula 2 se obtienen por separación de una mezcla racémica del compuesto de Fórmula 2 por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC), correspondiendo dichos dos enantiómeros al primer pico de elución [CpdX-D3(eA)] y al segundo pico de elución [CpdX-D3(eB)], respectivamente.

SFC es una técnica bien conocida por el experto en la materia. En una realización, cada enantiómero del compuesto de Fórmula 2 se puede purificar eficazmente mediante SFC utilizando una columna de tris-(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilosa.

A continuación, cualquier referencia a un compuesto de Fórmula 1 también incluye compuestos de Fórmula 2 como se definió anteriormente en el presente documento, a menos que se indique explícitamente lo contrario.

Obsérvese que solo los compuestos CpdX(eB), CpdX-D3(eB) y CpdX-D3(eA) forman parte de la presente invención. Las sales farmacéuticamente aceptables del SEGRAM de Fórmula 1 incluyen las sales de adición de ácido y de base del mismo.

Las sales de adición de ácido adecuadas se forman a partir de ácidos que forman sales no tóxicas. Los ejemplos incluyen sales de acetato, adipato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, ciclamato, edisilato, esilato, formiato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, clorhidrato/cloruro, bromhidrato/bromuro, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrógeno fosfato/dihidrógeno fosfato, piroglutamato, sacarato, estearato, succinato, tanato, tartrato, tosilato, trifluoroacetato y xinofoato.

Las sales básicas adecuadas se forman a partir de bases que forman sales no tóxicas. Los ejemplos incluyen sales de aluminio, arginina, benzatina, calcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnesio, meglumina, olamina, potasio, sodio, trometamina, 2-(dietilamino)etanol, etanolamina, morfolina, 4-(2-hidroxietil)morfolina y zinc.

También se pueden formar hemisales de ácidos y bases, por ejemplo, sales de hemisulfato y hemicalcio.

Preferiblemente, las sales farmacéuticamente aceptables incluyen clorhidrato/cloruro, bromhidrato/bromuro, bisulfato/sulfato, nitrato, citrato y acetato.

Las sales farmacéuticamente aceptables del SEGRAM de Fórmula 1 pueden prepararse mediante uno o más de estos métodos:

(i) haciendo reaccionar el SEGRAM de Fórmula 1 con el ácido deseado;

(ii) haciendo reaccionar el SEGRAM de Fórmula 1 con la base deseada;

(iii) eliminando un grupo protector lábil a ácidos o bases de un precursor adecuado del SEGRAM de Fórmula 1; o abriendo el anillo de un precursor cíclico adecuado, por ejemplo, una lactona o lactama, usando el ácido deseado; o (iv) convirtiendo una sal del SEGRAM de Fórmula 1 en otra por reacción con un ácido apropiado o por medio de una columna de intercambio iónico adecuada.

Todas estas reacciones se llevan a cabo típicamente en solución. La sal puede precipitar de la solución y recogerse por filtración o puede recuperarse por evaporación del disolvente. El grado de ionización de la sal puede variar desde completamente ionizada hasta casi no ionizada.

Todas las referencias al SEGRAM de Fórmula 1 incluyen referencias a enantiómeros, formas deuteradas, sales, solvatos, complejos multicomponente y cristales líquidos de los mismos, así como combinaciones de estos.

El SEGRAM de Fórmula 1, como se define en el presente documento, incluye todos los polimorfos y hábitos cristalinos de los mismos, e isómeros de los mismos (incluidos los isómeros ópticos, geométricos y tautoméricos) y compuestos marcados isotópicamente.

Además, aunque generalmente, con respecto a las sales, se prefieren las sales farmacéuticamente aceptables, cabe señalar que la invención en su sentido más amplio también incluye sales no farmacéuticamente aceptables, que pueden usarse, por ejemplo, en el aislamiento y/o purificación del SEGRAM de Fórmula 1. Por ejemplo, las sales formadas con ácidos o bases ópticamente activos pueden usarse para formar sales diastereoisómeras que pueden facilitar la separación de isómeros ópticamente activos del SEGRAM de Fórmula 1.

La siguiente referencia a derivados del compuesto de Fórmula 1 no forma parte de la invención reivindicada.

En una realización, un derivado del compuesto de Fórmula 1 comprende compuestos divulgados en patente de los Estados Unidos No. 6,245,804.

En una realización, el compuesto de Fórmula 1 está comprendido entre los posibles compuestos derivados de Fórmula 3.

En una realización, un derivado de un compuesto de Fórmula 1 es un compuesto de Fórmula 3:

en el que:

W se selecciona de O, S o CH²;

R²se selecciona entre H o CH³; y

Z², Z³, Z⁴, Z⁵y Z6 se seleccionan cada uno independientemente de H, F, Cl, Br, CH³, OCH³, CH²CH³, CH²CH²CH³, CH(CH3)2, C(CH3)3, COCH³, NO², CN, CH=CH²o CONH²,

o un enantiómero farmacéuticamente aceptable, forma deuterada, sal, solvato y/o profármaco del mismo.

En una realización, el compuesto de Fórmula 3 está deuterado. En una realización, al menos un átomo de hidrógeno en el compuesto de Fórmula 3 está deuterado. En una realización, al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más átomos de hidrógeno en el compuesto de Fórmula 3 están deuterados.

En una realización específica, cuando el compuesto de Fórmula 3 está deuterado, Z²se selecciona de D, CD³, OCD³, CH²CD³, CH²CH²CD³, CH(CD3)2, C(CD3)3, COCD³o CH=CD².

En una realización específica y preferida, cuando el compuesto de Fórmula 3 está deuterado, Z²es OCD³.

Enantiómeros

La siguiente sección no forma parte de la invención reivindicada.

También se describen en este documento uno o los dos enantiómeros de un compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo:

o una forma deuterada farmacéuticamente aceptable, sal y/o solvato del mismo.

En una realización, los enantiómeros de un compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo se sintetizan de nuevo (Ejemplo 1, Figura 2A).

En una realización, los enantiómeros de un compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo se obtienen por separación de los dos componentes racémicos presentes en el compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo. (Ejemplo 1, Figura 2B).

En una realización, la separación de los dos componentes racémicos se lleva a cabo mediante cromatografía de fluidos supercríticos (SFC). SFC es una técnica bien conocida por el experto en la materia. En esta realización, cada enantiómero del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo se puede separar de manera eficaz mediante SFC utilizando una columna de tris-(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilosa.

En una realización en la que una mezcla racémica de un compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo se separa mediante SFC, el primer pico de elución se denomina "CpdX(eA)", mientras que el segundo pico de elución se denomina "CpdX(eB)".

SEGRAM deuterados

La siguiente sección no forma parte de la invención reivindicada.

También se describe en este documento una forma deuterada de un compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo:

o un enantiómero, sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización, la forma deuterada de un compuesto de Fórmula 1 comprende al menos un átomo de hidrógeno deuterado. En una realización, la forma deuterada de un compuesto de Fórmula 1 comprende al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 21 átomos de hidrógeno deuterados.

En una realización, la forma deuterada de un compuesto de Fórmula 1 comprende tres átomos de hidrógeno deuterados. Por consiguiente, en una realización, la forma deuterada de un compuesto de Fórmula 1 es un compuesto de Fórmula 2 o un enantiómero, sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y se denomina "CpdX-D3":

Enantiómeros deuterados

La siguiente sección no forma parte de la invención reivindicada.

También se describen en este documento uno o los dos enantiómeros de un compuesto de fórmula 2 o un derivado del mismo:

(Fórmula 2)

o una de sus sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables.

En una realización, los enantiómeros de un compuesto de Fórmula 2 o un derivado del mismo son sintetizados nuevamente (Ejemplo 1, Figura 2C).

En una realización, los enantiómeros de un compuesto de Fórmula 2 o un derivado del mismo se obtienen por separación de los dos componentes racémicos presentes en el compuesto de Fórmula 2 o un derivado del mismo. (Ejemplo 1, Figura 2D).

En algunas realizaciones, la separación de los dos componentes racémicos se lleva a cabo mediante cromatografía de fluidos supercríticos (SFC). SFC es una técnica bien conocida por el experto en la materia. En una realización, cada enantiómero del compuesto de Fórmula 2 o un derivado del mismo se puede separar de manera eficaz mediante SFC utilizando una columna de tris-(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilosa.

En una realización en la que una mezcla racémica de un compuesto de Fórmula 2 o un derivado del mismo se separa mediante SFC, el primer pico de elución se denomina "CpdX-D3(eA)", mientras que el segundo pico de elución se denomina "CpdX-D3(eB)".

Composiciones

Composición

En el presente documento se describe una composición que comprende o consiste en o consiste esencialmente en el SEGRAM de la invención, preferiblemente un compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo.

De acuerdo con la invención, la composición es para uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno inflamatorio en un sujeto que lo necesite, comprendiendo o consistiendo dicha composición o consistiendo esencialmente en un enantiómero del SEGRAM de Fórmula 1, como se define en las reivindicaciones.

Composición farmacéutica

En una realización, la composición es una composición farmacéutica que comprende al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Los excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen agua, solución salina, solución de Ringer, solución de dextrosa y soluciones de etanol, glucosa, sacarosa, dextrano, manosa, manitol, sorbitol, polietilenglicol (PEG), fosfato, acetato, gelatina, colágeno, Carbopol®, aceites vegetales y similares. Además, se pueden incluir conservantes, estabilizantes, antioxidantes, antimicrobianos y agentes tamponantes adecuados, tales como, por ejemplo, BHA, BHT, ácido cítrico, ácido ascórbico, tetraciclina y similares.

Otros ejemplos de excipientes farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en la composición incluyen intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como albúmina sérica humana, sustancias tampón tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas parciales de glicéridos de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato ácido de disodio, fosfato ácido de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros en bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y grasa de lana.

Además, algunos excipientes farmacéuticamente aceptables pueden incluir tensioactivos (por ejemplo, hidroxipropilcelulosa); portadores adecuados, tales como, por ejemplo, disolventes y medios de dispersión que contengan, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido, y similares), mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales, tales como, por ejemplo, aceite de maní y aceite de sésamo; agentes isotónicos, tales como, por ejemplo, azúcares o cloruro de sodio; agentes de recubrimiento, tales como, por ejemplo, lecitina; agentes que retrasan la absorción, tales como, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina; conservantes, tales como, por ejemplo, cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, clorobutanol, timerosal y similares; tampones, tales como, por ejemplo, ácido bórico, bicarbonato de sodio y potasio, boratos de sodio y potasio, carbonato de sodio y potasio, acetato de sodio, bifosfato de sodio y similares; agentes de tonicidad, tales como, por ejemplo, dextrano 40, dextrano 70, dextrosa, glicerina, cloruro de potasio, propilenglicol, cloruro de sodio; antioxidantes y estabilizantes, tales como, por ejemplo, bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, tiosulfito de sodio, tiourea y similares; agentes humectantes o clarificantes no iónicos, tales como, por ejemplo, polisorbato 80, polisorbato 20, poloxámero 282 y tiloxapol; agentes modificadores de la viscosidad, tales como, por ejemplo, dextrano 40, dextrano 70, gelatina, glicerina, hidroxietilcelulosa, hidroximetil propilcelulosa, lanolina, metilcelulosa, vaselina, polietilenglicol, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, carboximetilcelulosa; y similares.

Medicamento

En una realización, la composición es un medicamento.

Composición cosmecéutica

En una realización, la composición es una composición cosmecéutica.

Modos de administración

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica es para ser administrado sistémica o localmente.

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica es para ser administrado por vía oral, por inyección, en forma tópica, transdérmica, subcutánea, transmucosa, percutánea, nasal (tal como, por ejemplo, por aerosol o gotas intranasales), bucal, sublingual, ocular, intraaural, intratraqueal, endoscópica, intraarticular, intraarterial, intramedular, intratecal, intraventricular, intraperitoneal, enteral, rectal o vaginal.

Inyección

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se inyecta, preferentemente se inyecta sistémicamente. Ejemplos de formulaciones adaptadas a inyecciones sistémicas incluyen soluciones o suspensiones líquidas, formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en líquido antes de la inyección. Los ejemplos de inyecciones sistémicas incluyen inyección y perfusión intravenosa, subcutánea, intramuscular, intradérmica e intraperitoneal. En otra realización, cuando se inyecta, la composición, la composición farmacéutica o el medicamento es estéril. Los métodos para obtener una composición farmacéutica estéril incluyen la síntesis con GMP (GMP significa "buenas prácticas de fabricación").

Administración oral

En otra realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se administra por vía oral.

Los ejemplos de formulaciones adaptadas a la administración oral incluyen formas sólidas, formas líquidas y geles.

Los ejemplos de formas sólidas adaptadas a la administración oral incluyen píldoras, tabletas, cápsulas, cápsulas de gelatina blanda, cápsulas de gelatina dura, cápsulas, cápsulas para chupar, tabletas comprimidas, sellos, obleas, píldoras recubiertas de azúcar, tabletas recubiertas de azúcar o tabletas de dispersión/o desintegración, polvo, formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en líquido antes de la administración oral y tableta efervescente.

Los ejemplos de formas líquidas adaptadas a la administración oral incluyen soluciones, suspensiones, soluciones bebibles, elixires, ampollas selladas, pociones, pociones farmacéuticas líquidas, jarabes y licores.

Administración tópica

En otra realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se administra por vía tópica.

La administración tópica caracteriza el suministro, administración o aplicación de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica directamente al sitio de interés para un efecto localizado (generalmente en una o más superficies expuestas o externas del mismo, como la capa más externa de la epidermis, que está expuesta y observable visualmente), por ejemplo, usando las manos, los dedos o una amplia variedad de aplicadores (enrollables, de bola u otro contenedor de barra, contenedor de tubo, bola de algodón, borla para empolvar, Q-tip, bomba, cepillo, felpudo, tela y/o similares). La solicitud puede hacerse, por ejemplo, al colocar, tender, frotar, barrer, verter, esparcir y/o masajear en o sobre la piel, o por cualquier otro método conveniente o adecuado. Preferiblemente, la administración tópica se efectúa sin ninguna absorción significativa de los componentes de la composición en el torrente sanguíneo del sujeto (para evitar un efecto sistémico).

Los ejemplos de formulaciones adaptadas a la administración tópica incluyen barras, labiales, ceras, cremas, lociones, ungüentos, bálsamos, geles, brillos, preparaciones de protección solar, cosméticos, máscaras, lavados sin enjuague o limpiadores, preparaciones depilatorias y/o similares.

La composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se pueden mezclar para formar una crema o loción blanca, suave, homogénea y opaca con, por ejemplo, alcohol bencílico al 1 % o al 2 % (p/p) como conservante, cera emulsionante, glicerina, palmitato de isopropilo, ácido láctico, agua purificada y solución de sorbitol. Además, las composiciones pueden contener polietilenglicol 400 (PEG 400). Se pueden mezclar para formar ungüentos con, por ejemplo, alcohol bencílico al 2% (p/p) como conservante, vaselina blanca, cera emulsionante y tenox II (hidroxianisol butilado, galato de propilo, ácido cítrico, propilenglicol). Las almohadillas tejidas o rollos de material de vendaje, por ejemplo, gasa, pueden impregnarse con las composiciones en solución, loción, crema, ungüento u otra forma similar también puede usarse para aplicación tópica.

En una realización, las formulaciones adaptadas a la administración tópica comprenden aproximadamente 0.001 % p/p, preferiblemente aproximadamente 0.005 % p/p, 0.01 % p/p, 0.02 % p/p, 0.03 % p/p, 0.04 % p/p, 0.05 % p/p, 0.06 % p/p, 0.07 % p/p, 0.08 % p/p, 0.09 % p/p, 0.1 % p/p, 0.2 % p/p, 0.3 % p/p, 0.4 % p /p, 0.5 % p/p, 0.6 % p/p, 0.7 % p/p, 0.8 % p/p, 0.9 % p/p, 1.0 % p/p o más del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo .

Administración transdérmica

En otra realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica también se pueden aplicar tópicamente usando un sistema transdérmico, tal como uno de un adhesivo de polímero de base acrílica con un agente reticulante resinoso impregnado con la composición y laminado a un respaldo impermeable.

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se puede administrar como un parche transdérmico, más particularmente como un parche transdérmico de liberación sostenida. Los parches transdérmicos pueden incluir cualquier forma convencional tal como, por ejemplo, matriz adhesiva, matriz polimérica, parche con reservorio, matriz o estructura laminada de tipo monolítico, y generalmente se componen de una o más capas de respaldo, adhesivos, potenciadores de penetración, una membrana de control de velocidad opcional y un revestimiento de liberación que se retira para exponer los adhesivos antes de la aplicación. Los parches de matriz polimérica también comprenden un material formador de matriz polimérica. Los parches transdérmicos adecuados se describen con más detalle en, por ejemplo, las patentes de los Estados Unidos Nos.

5,262,165; 5,948,433; 6,010,715 y 6,071,531.

Los ejemplos de formulaciones adaptadas a la administración transdérmica incluyen ungüentos, pastas, cremas, películas, bálsamos, parches, tales como, por ejemplo, parche transdérmico, gel, formas liposomales y similares.

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica es un ungüento, pasta, crema; película, bálsamo, parche, tales como, por ejemplo, parche transdérmico, gel, formas liposomales o similares.

En una realización, el ungüento es un ungüento oleaginosa; un ungüento emulsionado tal como, por ejemplo, ungüento de aceite en agua o de agua en aceite; o un ungüento hidrosoluble, preferentemente es un ungüento oleaginoso.

En una realización, el ungüento oleaginoso utiliza bases tales como, por ejemplo, aceites vegetales y animales; grasas vegetales y animales; ceras; vaselina, tal como, por ejemplo, vaselina blanca o aceite de vaselina; y parafina tal como, por ejemplo, parafina líquida o aceite de parafina.

En una realización, la composición transdérmica comprende además uno o más excipientes. Los excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados son bien conocidos por los expertos. Los ejemplos de excipientes adecuados incluyen vehículos, agentes emulsionantes, agentes endurecedores, modificadores de la reología o espesantes, tensioactivos, emolientes, conservantes, humectantes, agentes tampón, disolventes, agentes humectantes y estabilizantes.

Administración ocular

En otra realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica también se puede aplicar por vía intraocular. En una realización, la administración de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica puede ser una administración ocular tópica, tal como, por ejemplo, la administración de gotas para los ojos o bañando el ojo en una solución oftálmica que comprende el inhibidor.

Una solución oftálmica se refiere a preparaciones líquidas, semisólidas o sólidas estériles destinadas a la administración en el globo ocular y/o a la conjuntiva, o para la inserción en el saco conjuntival o para la administración en el segmento posterior del ojo. Como se usa en el presente documento, el término "segmento posterior del ojo" se refiere a los dos tercios posteriores del ojo, que comprende la membrana hialoidea anterior y las estructuras detrás de ella (humor vítreo, retina, coroides, nervio óptico). En particular, una composición oftálmica puede administrarse en el humor vitreo, por ejemplo, por inyección intravítrea. Los ejemplos de composiciones oftálmicas incluyen gotas para los ojos, lociones para los ojos, polvos para gotas para los ojos y polvos para lociones para los ojos, y composiciones para inyectar en el saco conjuntival o en el humor vítreo.

Los ejemplos de vehículos incluyen agua; solución salina tamponada; jalea de petróleo (vaselina, también conocida como parafina blanda blanca); vaselina; aceites, tales como, por ejemplo, aceite mineral, aceite vegetal, aceite animal, aceite de parafina, aceite de ricino o aceite de vaselina; ceras orgánicas e inorgánicas, tales como, por ejemplo, cera microcristalina, parafina, cera de abejas y cera de ozocerita; polímeros naturales, tales como, por ejemplo, xantanos, gelatina, celulosa, colágeno, almidón o goma arábiga; polímeros sintéticos; alcoholes; polioles; y similares. En una realización, el vehículo es una crema base que comprende un agente emulsionante, un ingrediente de fase oleosa y un ingrediente de fase acuosa.

Los ejemplos de excipientes a base de ungüentos o lociones incluyen Vaselina, PlastibaseMC (que es una base preparada con polietileno (peso molecular promedio de aproximadamente 21000 Da) y parafina líquida) y ESMA-PMC (elaborada con cera microcristalina).

Los ejemplos de agentes emulsionantes incluyen alcohol cetílico, alcohol cetoestearílico, alcohol estearílico, carboxi polimetileno, policarbófilo, polietilenglicol y derivados del mismo, polioxietileno y derivados del mismo, tales como, por ejemplo, polisorbato 20 o polisorbato 80, solo o en combinación con alcoholes grasos tales como, por ejemplo, alcohol cetílico, alcohol estearílico y alcohol cetoestearílico, y ésteres de sorbitán, tales como, por ejemplo, éster de ácido graso de sorbitán.

Los ejemplos de ingredientes de la fase oleosa incluyen vaselina, tal como, por ejemplo, vaselina blanca, vaselina amarilla o aceite de vaselina, parafina tal como, por ejemplo, parafina líquida o aceite de parafina, dimeticona y mezclas de los mismos.

Los ejemplos de ingredientes en fase acuosa incluyen agua, glicerol y propilenglicol.

Los ejemplos de agentes endurecedores incluyen alcohol estearílico, alcohol cetoestearílico y alcohol cetílico.

Los ejemplos de modificadores de reología o espesantes incluyen carbómeros tales como, por ejemplo, Carbopol®y aminas de sebo de polioxietileno tales como, por ejemplo, Ethomeen®.

Los ejemplos de tensioactivos incluyen tensioactivos aniónicos, catiónicos, anfóteros y no iónicos, tales como, por ejemplo, laurilsulfato de sodio, alcohol cetoestearílico, alcohol cetílico, laurilsulfato de magnesio, una cera o una combinación de los mismos.

Los ejemplos de emolientes incluyen petrolato blanco o amarillo (vaselina blanca o amarilla), petrolato líquido (vaselina líquida), parafina o Aquaphor.

Los ejemplos de conservantes incluyen conservantes antimicrobianos tales como, por ejemplo, nipagin (hidroxibenzoato de metilo), nipasol (hidroxibenzoato), butilparabeno, etilparabeno, metilparabeno, propilparabeno potásico, propilparabeno sódico, ésteres de parahidroxibenzoato, ácido sórbico, sorbato potásico, ácido benzoico, parabenos, clorobutanol, fenol, timerosal, benzoato sódico y alcohol bencílico.

Los ejemplos de humectantes incluyen propilenglicol y alginato de propilenglicol.

Los ejemplos de agentes tamponantes incluyen hidróxido de sodio, ácido cítrico e hidróxido de potasio.

Los ejemplos de disolventes incluyen agua, isopropanol, alcohol bencílico y propilenglicol.

Los ejemplos de agentes humectantes incluyen glicerina, aceite mineral, aceite de ricino endurecido con polioxietileno y vaselina, propilenglicol, parafinas, ceras, tales como, por ejemplo, cera de abeja, polietilenglicoles o mezclas de los mismos, tales como, por ejemplo, macrogol (macrogol es una mezcla de polietilenglicoles de diferentes pesos moleculares), alcohol estearílico, alcohol bencílico, ésteres de parahidrobenzoato (parabenos), hidrocarburo gelificado, ácido cítrico, escualeno, lanolinas, glicerina, aceite de ricino endurecido con polioxietileno, éster graso de sorbitán, éster graso de glicerina, grasas animales y vegetales, aceites, almidón, tragacanto, derivados de la celulosa, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco, óxido de zinc y mezclas de los mismos.

Los ejemplos de estabilizadores incluyen carbohidratos tales como, por ejemplo, sacarosa, lactosa y trehalosa, alcoholes de azúcar tales como, por ejemplo, manitol y sorbitol, aminoácidos tales como, por ejemplo, histidina, glicina, fenilalanina y arginina.

Administración respiratoria

En otra realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se va a administrar por vía respiratoria, incluso por vía nasal (tal como, por ejemplo, mediante atomizador) y por vía bucal.

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica pueden administrarse mediante cualquiera de una variedad de dispositivos de inhalación conocidos en la técnica para la administración de un agente terapéutico por inhalación. Estos dispositivos incluyen inhaladores de dosis medida, nebulizadores, inhaladores de polvo seco, atomizadores y similares.

Algunos ejemplos específicos de dispositivos de inhalación comercialmente disponibles adecuados para la práctica de esta invención son Cyclohaler, TurbohalerMC (Astra), Rotahalador® (Glaxo), Disco® (Glaxo), inhalador SpirosMC (Dura), dispositivos comercializados por Inhale Therapeutics, AERxMC (Aradigm), nebulizador Ultravent® (Mallinckrodt), el nebulizador Acorn II® (Marquest Medical Products), el inhalador de dosis medida Ventolin® (Glaxo), el inhalador de polvo Spinhaler® (Fisons), el inhalador de vapor suave Respimat® (Boehringer Ingelheim) o similar.

Como reconocerán los expertos en la técnica, la formulación de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica, la cantidad de la formulación administrada y la duración de la administración de una sola dosis dependen del tipo de dispositivo de inhalación empleado.

Para algunos sistemas de administración de aerosol, tal como los nebulizadores, la frecuencia de administración y el tiempo durante el cual se activa el sistema dependerán principalmente de la concentración de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica en el aerosol. Por ejemplo, se pueden usar períodos de administración más cortos a concentraciones más altas de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica en la solución nebulizadora.

Dispositivos tales como inhaladores de dosis medidas pueden producir concentraciones de aerosol más altas y pueden funcionar durante períodos más cortos para administrar la cantidad deseada de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica.

Dispositivos tales como inhaladores de polvo administran el agente activo hasta que se expulsa una carga dada de agente del dispositivo. En este tipo de inhaladores, la cantidad de composición, composición farmacéutica, medicamento o composición cosmecéutica en una determinada cantidad de polvo determina la dosis suministrada en una única administración.

En una realización, las partículas de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica administrada por inhalación tienen un tamaño de partícula preferiblemente inferior a aproximadamente 10 |jm, más preferiblemente en el rango de aproximadamente 1 jm a aproximadamente 5 jm .

Ventajosamente, para la administración como polvo seco, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se prepara en forma de partículas con un tamaño de partícula inferior a aproximadamente 10 jm , preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 jm . Dichas formulaciones se pueden lograr mediante secado por aspersión, molienda, micronización o condensación en el punto crítico de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica.

Las formulaciones de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica para la administración desde un inhalador de polvo seco normalmente incluyen un polvo seco finamente dividido que contiene la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica, pero el polvo también puede incluir un agente de carga, un vehículo, excipiente, otro aditivo o similar. Los ejemplos de aditivos incluyen mono, di y polisacáridos; alcoholes de azúcar y otros polioles, tales como, por ejemplo, lactosa, glucosa, rafinosa, melecitosa, lactitol, maltitol, trehalosa, sacarosa, manitol, almidón, inulina o combinaciones de los mismos; tensioactivos, tales como sorbitoles, dipalmitoilfosfatidilcolina o lecitina; o similar.

Se puede producir un atomizador que incluye la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica forzando la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica a través de una boquilla bajo presión. El tamaño y la configuración de la boquilla, la presión aplicada y la velocidad de alimentación del líquido se pueden elegir para lograr la salida y el tamaño de partícula deseados. Se puede producir una electroaspersión, por ejemplo, por un campo eléctrico en conexión con un capilar o boquilla de alimentación. Las formulaciones de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica adecuada para uso con un atomizador incluirán típicamente la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica en una solución acuosa.

Administración intraarticular

En otra realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se va a administrar por vía intraarticular.

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica pueden administrarse dentro de la articulación de un sujeto que lo necesite. Por ejemplo, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se pueden administrar mediante administración entre el disco o alrededor del disco a un sujeto que tiene un trastorno inflamatorio con dolor de espalda. Por ejemplo, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se pueden administrar mediante inyección entre la rodilla o alrededor de la rodilla a un sujeto que tenga un trastorno inflamatorio con dolor de rodilla.

Administración de liberación sostenida

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se va a administrar en una forma de liberación sostenida. En otra realización, la composición, la composición farmacéutica o el medicamento comprende un sistema de administración que controla la liberación del modulador.

Sujeto

En una realización, el sujeto es un animal. En una realización, el sujeto es un mamífero.

Los ejemplos de mamíferos incluyen primates (incluidos humanos y no humanos), ganado (incluidas vacas), caballos, cerdos, ovejas, cabras, perros y gatos.

En una realización preferida, el sujeto es un ser humano.

En una realización, el sujeto es un adulto (por ejemplo, un sujeto mayor de 18 años en años humanos o un sujeto después de haber alcanzado la capacidad reproductiva). En otra realización, el sujeto es un niño (por ejemplo, un sujeto menor de 18 años humanos o un sujeto antes de que haya alcanzado la capacidad reproductiva).

En una realización, el sujeto es un hombre. En una realización, el sujeto es una mujer.

En una realización, el sujeto es/fue diagnosticado con un trastorno inflamatorio, preferiblemente con un trastorno inflamatorio relacionado con Th1, Th2 y/o Th17. En una realización, el sujeto es/fue diagnosticado con uno cualquiera de los trastornos inflamatorios relacionados con Th1, Th2 y/o Th17 seleccionados del grupo que comprende o consiste en dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma alérgica, sinusitis alérgica, conjuntivitis alérgica, rinitis alérgica, rinoconjuntivitis, arteritis de células gigantes (enfermedad de Horton), fiebre del heno, dermatitis solar, eczema, urticaria, angioedema, eritema nodoso, eritema multiforme, venulitis necrosante cutánea, inflamación de la piel por picadura de insecto, anafilaxia, psoriasis, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal (IBD) (incluida la enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y colitis), periodontitis, enfermedades inflamatorias crónicas, lupus eritematoso, dermatomiositis, vasculitis, síndrome de Sjogren, esclerodermia, esclerosis múltiple, vitiligo, liquen plano, diabetes tipo 2, cardiopatía coronaria, hiperlipidemia, síndrome metabólico inducido por la posmenopausia y esteatosis, y enfermedad de injerto contra huésped.

En una realización, el sujeto es/fue diagnosticado con uno cualquiera de los trastornos inflamatorios relacionados con Th1, Th2 y/o Th17 seleccionados del grupo que comprende o consiste en dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma alérgica, psoriasis, artritis reumatoide y enfermedad inflamatoria intestinal (IBD) (incluyendo enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y colitis).

En una realización, el sujeto corre el riesgo de desarrollar un trastorno inflamatorio, preferiblemente con un trastorno inflamatorio relacionado con Th1, Th2 y/o Th17. En una realización, el sujeto corre el riesgo de desarrollar uno cualquiera trastornos inflamatorios relacionados con Th1, Th2 y/o Th17 seleccionados del grupo que comprende o consiste en dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma alérgica, sinusitis alérgica, conjuntivitis alérgica, rinitis alérgica, rinoconjuntivitis, arteritis de células gigantes (enfermedad de Horton), fiebre del heno, dermatitis solar, eccema, urticaria, angioedema, eritema nodoso, eritema multiforme, venulitis necrosante cutánea, inflamación de la piel por picadura de insecto, anafilaxia, psoriasis, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal (IBD) (incluida la enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y colitis), periodontitis, enfermedades inflamatorias crónicas, lupus eritematoso, dermatomiositis, vasculitis, síndrome de Sjogren, esclerodermia, esclerosis múltiple, vitiligo, liquen plano, diabetes tipo 2, cardiopatía coronaria, hiperlipidemia, síndrome metabólico inducido por la posmenopausia y esteatosis, y enfermedad de injerto contra huésped.

En una realización, el sujeto corre el riesgo de desarrollar uno cualquiera de los trastornos inflamatorios relacionados con Th1, Th2 y/o Th17 seleccionados del grupo que comprende o consiste en dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma alérgica, psoriasis, conjuntivitis alérgica, artritis reumatoide y enfermedad inflamatoria intestinal (IBD) (incluyendo enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y colitis).

Régimen

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica debe administrarse a una dosis determinada por el experto en la materia y adaptada personalmente a cada sujeto.

Se entenderá que el uso diario total de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica será decidido por el médico tratante dentro del alcance del buen juicio médico. La cantidad terapéuticamente eficaz específica para cualquier sujeto en particular dependerá de una variedad de factores que incluyen la enfermedad que se está tratando y la gravedad de la enfermedad; la composición específica empleada, la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del sujeto; el tiempo de administración, vía de administración, la duración del tratamiento; los fármacos usados en combinación o coincidentes con la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica; y como factores bien conocidos en las artes médicas. Por ejemplo, está bien dentro de la experiencia en la técnica comenzar las dosis de un compuesto terapéutico a niveles más bajos que los requeridos para lograr el efecto terapéutico deseado y aumentar gradualmente la dosis hasta que se logre el efecto deseado; pero, por el contrario, puede ser igualmente útil comenzar con una dosis de carga, una forma de alcanzar más rápidamente la concentración en plasma en estado estacionario, y luego seguir con una dosis de mantenimiento calculada para compensar exactamente el efecto del proceso de eliminación.

En una realización, se administrará una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica al menos una vez al día, al menos dos veces al día, al menos tres veces al día.

En una realización, se administrará una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica cada dos, tres, cuatro, cinco, seis días.

En una realización, se administrará una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica dos veces por semana, cada semana, cada dos semanas, una vez al mes.

En una realización, se administrará una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica cada mes, cada dos meses, cada tres meses, cada cuatro meses, cada cinco meses, cada seis meses, una vez al año.

En una realización, se administrará una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica durante un período de tiempo de aproximadamente un día, dos días, tres días, cuatro días, cinco días, seis días, una semana, dos semanas, tres semanas, un mes, dos meses, tres meses, seis meses, un año o durante períodos más largos, tales como, por ejemplo, por varios años o por el resto de la vida del sujeto. En una realización, se administrará una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica hasta el tratamiento o alivio del trastorno inflamatorio, preferiblemente del trastorno inflamatorio relacionado con Th1, Th2 y/o Th17.

En una realización, se va a administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica para un tratamiento crónico. En otra realización, se va a administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica para un tratamiento agudo.

Régimen en masa/peso corporal/día

En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite oscila entre aproximadamente 0.5 pg/kg a aproximadamente 50 mg/kg, preferiblemente entre aproximadamente 5 pg/kg a aproximadamente 25 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 50 pg/kg a aproximadamente 5 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 250 pg/kg a aproximadamente 2.5 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 300 pg/kg a aproximadamente 1 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 350 pg/kg a aproximadamente 800 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 400 pg/kg a aproximadamente 600 pg/kg. En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 500 pg/kg.

En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite oscila entre aproximadamente 1 pg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, preferiblemente entre aproximadamente 10 pg/kg a aproximadamente 50 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 100 pg/kg a aproximadamente 10 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 500 pg/kg a aproximadamente 5 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 750 pg/kg a aproximadamente 2.5 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 800 pg/kg a aproximadamente 2 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 900 pg/kg a aproximadamente 1.5 mg/kg. En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 1 mg/kg.

En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite oscila entre aproximadamente 5 pg/kg a aproximadamente 500 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 50 pg/kg a aproximadamente 250 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 500 pg/kg a aproximadamente 50 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 25 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 1.5 mg/kg a aproximadamente 12.5 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 2 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 2.5 mg/kg a aproximadamente 7.5 mg/kg. En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 5 mg/kg.

En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite varía de aproximadamente 0.5 pg/kg a aproximadamente 250 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 1 pg/kg a aproximadamente 200 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 5 pg/kg a aproximadamente 150 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 10 pg/kg a aproximadamente 100 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 25 pg/kg a aproximadamente 75 pg/kg, preferiblemente desde aproximadamente 30 pg/kg hasta aproximadamente 50 pg/kg. En una realización, la cantidad equivalente diaria en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 40 pg/kg.

En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite varía de aproximadamente 0.1 pg/kg a aproximadamente 10 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 1 pg/kg a aproximadamente 1 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 10 pg/kg a aproximadamente 500 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 20 pg/kg a aproximadamente 450 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 30 pg/kg a aproximadamente 400 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 40 pg/kg a aproximadamente 350 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 45 pg/kg a aproximadamente 300 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 50 pg/kg a aproximadamente 250 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 55 pg/kg a aproximadamente 200 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 60 pg/kg a aproximadamente 150 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 65 pg/kg a aproximadamente 100 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 70 pg/kg a aproximadamente 90 pg/kg. En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 80 pg/kg.

En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite varía de aproximadamente 1 pg/kg a aproximadamente 5 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 10 pg/kg a aproximadamente 2.5 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 25 pg/kg a aproximadamente 2 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 50 pg/kg a aproximadamente 1 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 100 pg/kg a aproximadamente 750 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 150 pg/kg a aproximadamente 600 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 200 pg/kg a aproximadamente 600 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 250 pg/kg a aproximadamente 550 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 300 pg/kg a aproximadamente 500 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 350 pg/kg a aproximadamente 450 pg/kg, preferiblemente de aproximadamente 380 pg/kg a aproximadamente 420 pg/kg. En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 400 pg/kg.

Régimen en masa/día

En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite oscila entre aproximadamente 0.05 pg a aproximadamente 250 pg, de aproximadamente 0.1 pg a aproximadamente 150 pg, de aproximadamente 0.2 pg a aproximadamente 100 pg, de aproximadamente 0.3 pg a aproximadamente 50 pg, de aproximadamente 0.4 pg a aproximadamente 35 pg, de aproximadamente 0.5 pg a aproximadamente 25 pg, de aproximadamente 2.5 pg a aproximadamente 20 pg, preferiblemente de aproximadamente 5 pg a aproximadamente 15 pg. En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 10 pg.

En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite oscila entre aproximadamente 0.1 pg a aproximadamente 500 pg, de aproximadamente 0.2 pg a aproximadamente 300 pg, de aproximadamente 0.4 pg a aproximadamente 200 pg, de aproximadamente 0.6 pg a aproximadamente 100 pg, de aproximadamente 0.8 pg a aproximadamente 75 pg, de aproximadamente 1 pg a aproximadamente 50 pg, de aproximadamente 5 pg a aproximadamente 40 pg, preferiblemente de aproximadamente 10 pg a aproximadamente 30 pg. En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 20 pg.

En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite oscila entre aproximadamente 0.5 pg a aproximadamente 500 pg, preferiblemente de aproximadamente 1 pg a aproximadamente 250 pg, preferiblemente entre aproximadamente 10 pg a aproximadamente 200 pg, preferiblemente de aproximadamente 25 pg a aproximadamente 180 pg, preferiblemente de aproximadamente 50 pg a aproximadamente 160 pg, preferiblemente de aproximadamente 60 pg a aproximadamente 140 pg, preferiblemente de aproximadamente 80 pg a aproximadamente 120 pg. En una realización, la cantidad diaria del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 100 pg.

En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite oscila entre aproximadamente 50 pg a aproximadamente 25 mg, preferiblemente de aproximadamente 50 pg a aproximadamente 15 mg, preferiblemente de aproximadamente 100 pg a aproximadamente 12.5 mg, preferiblemente de aproximadamente 200 pg a aproximadamente 10 mg, preferiblemente de aproximadamente 300 pg a aproximadamente 7.5 mg, preferiblemente de aproximadamente 400 pg a aproximadamente 5 mg, preferiblemente de aproximadamente 500 pg a aproximadamente 4.5 mg, preferiblemente de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 4 mg, preferiblemente de aproximadamente 1.5 mg a aproximadamente 3.5 mg, preferiblemente de aproximadamente 2 mg a aproximadamente 3 mg. En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 2.5 mg.

En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite varía de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 50 mg, preferiblemente de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 30 mg, preferiblemente de aproximadamente 0.2 mg a aproximadamente 25 mg, preferiblemente de aproximadamente 0.4 mg a aproximadamente 20 mg, preferiblemente de aproximadamente 0.6 mg a aproximadamente 15 mg, preferiblemente de aproximadamente 0.8 mg a aproximadamente 10 mg, preferiblemente de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 9 mg, preferiblemente de aproximadamente 2 mg a aproximadamente 8 mg, preferiblemente de aproximadamente 3 mg a aproximadamente 7 mg, preferiblemente de aproximadamente 4 mg a aproximadamente 6 mg. En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 5 mg.

En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 que se administrará a un sujeto que lo necesite varía de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 100 mg, preferiblemente de aproximadamente 0.6 mg a aproximadamente 75 mg, preferiblemente de aproximadamente 0.8 mg. a aproximadamente 60 mg, preferiblemente de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 55 mg, preferiblemente de aproximadamente 2.5 mg a aproximadamente 50 mg, preferiblemente de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 45 mg, preferiblemente de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 40 mg, preferiblemente de aproximadamente 15 mg a aproximadamente 35 mg, preferiblemente de aproximadamente 20 mg a aproximadamente 30 mg, preferiblemente de aproximadamente 23 mg a aproximadamente 27 mg. En una realización, la cantidad diaria equivalente en humanos del compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo que se administrará a un sujeto que lo necesite es de aproximadamente 25 mg.

Terapia de combinación

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica pueden administrarse como parte de una terapia de combinación. Por lo tanto, se incluyen realizaciones que comprenden la coadministración y composiciones y medicamentos que comprenden, además del SEGRAM de Fórmula 1, agentes terapéuticos y/o ingredientes activos adicionales.

Dichos regímenes de múltiples medicamentos, a menudo denominados terapia combinada, pueden usarse para prevenir o tratar un trastorno inflamatorio, preferiblemente para prevenir o tratar un trastorno inflamatorio relacionado con Th1, Th2 y/o Th17.

Además del requisito de eficacia terapéutica, que puede requerir el uso de agentes activos además del SEGRAM de Fórmula 1, puede haber razones adicionales que obliguen o recomienden enfáticamente el uso de combinaciones de fármacos que involucren ingredientes activos que representen una terapia complementaria, es decir, que complementan y suplementan la función que realiza el SEGRAM de Fórmula 1.

Los agentes terapéuticos complementarios adecuados usados con el fin de un tratamiento auxiliar incluyen fármacos que, en lugar de prevenir o tratar directamente un trastorno inflamatorio, preferiblemente previenen o tratan un trastorno inflamatorio relacionado con Th1, Th2 y/o Th17, tratar enfermedades o afecciones que resultan directamente de o indirectamente acompañan al trastorno inflamatorio básico o subyacente, preferiblemente un trastorno inflamatorio relacionado con Th1, Th2 y/o Th17.

Por lo tanto, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica puede administrarse en forma de monoterapia, pero también puede usarse en forma de terapia múltiple en la que el SEGRAM de Fórmula 1 se coadministra en combinación con uno o más de otros agentes terapéuticos.

Los ejemplos de otros agentes activos que pueden administrarse en combinación con la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica incluyen:

(i) fármacos antiinflamatorios esteroideos (SAID), que incluyen:

a. glucocorticoides naturales, tales como, por ejemplo, cortisona, cortodoxona, desoxicortona, hidrocortisona, acetato de prebediolona y pregnenolona;

b. glucocorticoides sintéticos, tales como, por ejemplo, alclometasona, amcinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, cloroprednisona, cloroprednisona, ciclesonida, clobetasol, clobetasona, clocortolona, cloprednol, cortivazol, deflazacort, desonida, desoximetasona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difluprednato, fluclorolona, fluclorolona, fludrocortisona, fludroxicortida, acetato de flugestona, flumetasona, flunisolida, fluocinolona, fluocinonida, fluocortina, fluocortolona, fluorometolona, fluperolona, fluprednideno, fluprednisolona, fluticasona, formocortal, halcinonida, halometasona, loteprednol, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, mometasona, parametasona, prednicarbato, prednisolona, prednisona y tixocortol, prednilideno, rimexolona, triamcinolona, triamcinolona y ulobetasol;

(ii) fármacos antiinflamatorios no esteroideos (NSAID), que incluyen:

a. Inhibidores de TNFa, tales como, por ejemplo, infliximab, adalimumab, certolizumab pegol, golimumab, etanercept, talidomida, lenalidomida y pomalidomida;

b. salicilatos, tales como, por ejemplo, amoxiprina, aspirina, benorilato, diflunisal, faislamina, mesalamina y salicilato de metilo;

c. broncodilatadores, tales como, por ejemplo,

i. agonistas p²-adrenérgicos, tales como, por ejemplo, abediterol, arformoterol, bambuterol, clenbuterol, formoterol, indacaterol, olodaterol, protoquilol, salmefamol, salmeterol y vilanterol;

ii. anticolinérgicos, tales como, por ejemplo, atropina, benztropina, biperideno, clorfeniramina, diciclomina, dimenhidrinato, difenhidramina, doxepina, doxilamina, glicopirrolato, ipratropio, orfenadrina, oxitropio, oxibutinina, bromuro de propantelina, tolterodina, tiotropio, antidepresivos tricíclicos, trihexifenidilo, escopolamina, solifenacina, tropicamida, bupropión, dextrometorfano, doxacurio, hexametonio, mecamilamina y tubocurarina; y

iii. modificadores de leucotrienos, tales como, por ejemplo, 2-TEDC, baicaleína, BW-A4C, BW-B70C, ácido cafeico, cinamil-3,4-dihidroxi-a-cianocinamato (CDC), Cj-13610, curcumina, fenleutóna, hiperforina, Hypericum perforatum, meclofenamato, minociclina, N-estearoildopamina, timegadina, zileutona, AM-103, A m -679, BAYx1005, MK-591, MK-886, 3-metoxitropolona, luteolina, PD-146176, acebilustato, captopril, DG-051, fosinoprilato, JNJ-26993135, SA-6541, SC-57461A, ubenimex, ácido 17-octadecinoico, azelastina, acivicina, complejo de serina-borato y cilastatina;

d. ácidos arilalcanoicos, tales como, por ejemplo, ácidos 2-arilpropiónicos, diclofenaco, indometacina y sulindaco; e. profenos, tales como, por ejemplo, carprofeno, fenoprofeno, flurbiprofeno, ibuprofeno, cetoprofeno, cetorolac, loxoprofeno, naproxeno y ácido tiaprofénico;

f. Ácidos N-arilantranílicos, tales como, por ejemplo, ácidos fenámicos, ácido mefenámico y ácido meclofenámico; g. derivados de pirazolidina, tales como, por ejemplo, fenilbutazona y oxifenilbutazona;

h. oxicams, tales como, por ejemplo, meloxicam y piroxicam;

i. coxibs, tales como, por ejemplo, celecoxib, etoricoxib, parecoxib, rofecoxib y valdecoxib;

j. sulfonanilidas, tales como, por ejemplo, nimesulida;

k. inhibidores de la lipoxigenasa, tales como, por ejemplo, baicaleína, ácido cafeico, ácido eicosatetrainoico, ácido eicosatriinoico, esculetina, flubiprofeno, gosipol, lactona 5-hidroxieicosatetraenoica (HETE), 5(S)-HETE y ácido nordihidroguaiarético;

l. derivados de macrólidos, tales como, por ejemplo, derivados de 9-(S)-dihidroeritromicina;

m. péptido antiinflamatorio (también llamado antiflaminas), tales como, por ejemplo, péptidos derivados de proteínas de vesículas seminales, péptidos de unión a selectina, péptidos catiónicos basados en proteína BPI bactericida/que aumenta la permeabilidad y péptidos derivados de IL-2;

n. citoquinas antiinflamatorias, tales como, por ejemplo, IL-IRa, IL-4, IL-6, IL-10, IL-11 e IL-13;

o. Inhibidores de citoquinas proinflamatorias, tales como, por ejemplo, inhibidores de TNFa e inhibidores de IL-18; p. galectinas, tales como, por ejemplo, galectina-1;

q. anticuerpos que neutralizan moléculas de señalización proinflamatorias/citoquinas, tales como, por ejemplo, anticuerpos contra TNFa, IL-1, IL-18; y

r. estatinas

Las combinaciones anteriores incluyen combinaciones de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica no solo con otro agente activo sino también con dos o más agentes activos.

En una realización, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica y los demás agentes activos terapéuticos pueden administrarse:

- en términos de formas de dosificación, ya sea por separado o en conjunto con cada uno de los otros, y

- en cuanto a su tiempo de administración, ya sea en forma seriada o simultánea.

Por lo tanto, la administración de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica puede ser previa, simultánea o posterior a la administración de los demás agentes activos.

Métodos y usos

En el presente documento se describe un modulador agonista de los GR selectivos (SEGRAM) para uso en la prevención y/o tratamiento de un trastorno inflamatorio en un sujeto que lo necesite. En el presente documento también se describe la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica para usar en la prevención y/o el tratamiento de un trastorno inflamatorio en un sujeto que lo necesite.

En el presente documento también se describe un SEGRAM para usar en la prevención y/o el tratamiento de una actividad mejorada de Th1, Th2 y/o Th17 en un sujeto que lo necesite. En el presente documento también se describe la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica para usar en la prevención y/o el tratamiento de una actividad de mejorada Th1, Th2 y/o Thl7 en un sujeto que lo necesite.

En el presente documento también se describe un SEGRAM para usar en la prevención y/o el tratamiento de un nivel elevado de citoquinas y anticuerpos secretados en un sujeto que lo necesite. En el presente documento también se describe la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica para usar en la prevención y/o el tratamiento de un nivel elevado de citoquinas y anticuerpos secretados en un sujeto que lo necesite.

En una realización, el SEGRAM es un compuesto de Fórmula 1 o un derivado del mismo, o un enantiómero farmacéuticamente aceptable, una forma deuterada, una sal y/o un solvato del mismo.

En una realización, el SEGRAM no induce o no induce sustancialmente ni la transactivación directa, ni las funciones de transrepresión directa del receptor de glucocorticoides (GR). En una realización, el SEGRAM induce las funciones de transrepresión vinculadas indirectas del receptor de glucocorticoides (GR).

En una realización, el SEGRAM no induce o no induce sustancialmente los efectos secundarios asociados con los fármacos antiinflamatorios esteroideos (SAID) tras la administración a un sujeto que lo necesita. En una realización, una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica no induce o no induce sustancialmente efectos secundarios asociados con fármacos antiinflamatorios esteroideos (SAID) tras la administración a un sujeto que los necesita.

En una realización, el SEGRAM, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica son para uso en la prevención y/o tratamiento de un trastorno inflamatorio relacionado con Th1, Th2 y/o Th17. En una realización, el SEGRAM, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se utilizan para prevenir y/o tratar un trastorno inflamatorio seleccionado del grupo que comprende o consiste en dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma alérgica, sinusitis alérgica, conjuntivitis alérgica , rinitis alérgica, rinoconjuntivitis, arteritis de células gigantes (enfermedad de Horton), fiebre del heno, dermatitis solar, eczema, urticaria, angioedema, eritema nodoso, eritema multiforme, venulitis necrosante cutánea, inflamación de la piel por picadura de insecto, anafilaxia, psoriasis, artritis reumatoide, enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) (incluyendo enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y colitis), periodontitis, enfermedades inflamatorias crónicas, lupus eritematoso, dermatomiositis, vasculitis, síndrome de Sjogren, esclerodermia, esclerosis múltiple, vitíligo, liquen plano, diabetes tipo 2, cardiopatía coronaria, hiperlipidemia, síndrome metabólico inducido por la posmenopausia y esteatosis y enfermedad de injerto contra huésped. En una realización, el SEGRAM, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se utilizan para prevenir y/o tratar un trastorno inflamatorio seleccionado del grupo que comprende o consiste en dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma alérgica, psoriasis, conjuntivitis alérgica, artritis reumatoide y enfermedad inflamatoria intestinal (IBD) (incluyendo enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y colitis). En una realización, el SEGRAM, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se utilizan para prevenir y/o tratar la dermatitis atópica. En una realización, el SEGRAM, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se utilizan para prevenir y/o tratar la dermatitis de contacto. En una realización, el SEGRAM, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se utilizan para prevenir y/o tratar el asma alérgica. En una realización, el SEGRAM, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se utilizan para prevenir y/o tratar la psoriasis. En una realización, el SEGRAM, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se utilizan para prevenir y/o tratar la artritis reumatoide. En una realización, el SEGRAM, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se utilizan para prevenir y/o tratar la colitis ulcerosa. En una realización, los usos de la presente invención son para prevenir y/o tratar la conjuntivitis alérgica. En una realización, el SEGRAM, la composición, la composición farmacéutica, el medicamento o la composición cosmecéutica se utilizan para prevenir y/o tratar el síndrome metabólico y la esteatosis inducidos por la posmenopausia.

En una realización, las citoquinas y anticuerpos secretados se seleccionan del grupo que comprende o consiste en IL-1P, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17a, IL-17c, IL-17f, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-33, TSLP, TGFp, CCL4, TNFa, COX2, MMP13, IgE, IgG1 e IgG2a.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es un esquema que muestra las tres funciones reguladoras de la transcripción del receptor de glucocorticoides (GR) tras la unión de un glucocorticoide (GC): a la izquierda, la transactivación directa es la consecuencia de la unión del GR asociado a GC directamente a un GRE positivo ((+)GRE) que actúa cis, activando así la expresión de genes diana. En el medio, la transrepresión directa es la consecuencia de la unión de GR asociado con GC directamente a un GRE negativo que actúa en cis (IR nGRE) que media la represión directa de genes diana. A la derecha, la transrepresión ligada indirecta surge de la interacción física de los GR unidos a GC con los factores de transcripción proinflamatorios AP-1 y/o NF-^kB, lo que antagoniza su actividad.

La Figura 2 comprende dos esquemas para la síntesis de cualquiera de (A) [(R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona] [CpdX], o (C) [(R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona ] [CpdX-D3]; y dos cromatogramas que muestran la separación de los dos enantiómeros de (B) [(R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]-iso-benzofuran-1(3H)-ona] [CpdX], o (D) [(R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona ] [CpdX-D3] a través del método de cromatografía de fluidos supercríticos (SFC).

La Figura 3 es un conjunto de cuatro histogramas que muestran la expresión de los transcritos de ARN como se indica (en relación con la del gen de mantenimiento HPRT) medida por análisis de qRT-PCR (A) del gen REDD1 transactivado con GR que codifica un inhibidor de mTOR; (B) del gen de queratina 5 (K5) transreprimido directamente por GR; (C) del gen de la interleucina-1p (IL-1 p) transreprimido indirectamente por GR; y (D) del gen de la interleucina-6 (IL-6) transreprimido indirectamente por GR. Los transcritos de ARN se extrajeron de orejas de ratón después de un tratamiento tópico de 18 horas con (A y B) etanol [Vehículo], 1 nmol/cm2 de dexametasona [Dex], Mapracorat, (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometii)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX], CpdX(eA), CpdX(eB), (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzo-furan-1(3H)-ona [CpdX-D3], CpdX-D3(eA) o Cpdx-D3(eB); (C y D) como en (A y B), pero con un tratamiento adicional con 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato [TPA] (1 nmol/cm2). Los datos se representan como la media ± SEM de al menos tres experimentos independientes con al menos tres ratones por tratamiento.

La Figura 4 es un histograma que muestra la expresión relativa de ARN medida por análisis por q-RT-PCR de transcritos de ARN de genes que codifican la proteína 1p inflamatoria de macrófagos [CCL4], ciclooxigenasa-2 [COX2], colagenasa 3 [MMP13], interleucina-1p [IL1p] , interleucina-6 [IL6], factor alfa de necrosis tumoral [TNFa], linfopoyetina estromal tímica [TSLP], interleucina-22 [IL22] e interleucina-23 [IL23]. Se destacan las interleucinas proinflamatorias específicas de Th1, Th2 y Th17. Los transcritos de ARN se extrajeron de muestras de piel de oreja de ratón después de la inducción de una inflamación similar a la dermatitis de contacto por tratamiento (1 nmol/cm2) con 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato solamente [TPA], TPA y dexametasona [TPA+Dex], TPA y (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [TPA+CpdX], o TpA y (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona [TPA+CpdX-D3]. Los datos se representan como la media ± SEM de al menos tres experimentos independientes con al menos tres ratones por tratamiento.

La Figura 5 es un histograma de la expresión relativa de ARN medida por análisis por q-RT-PCR de transcritos de ARN de genes que codifican interleucina-1p [IL1p], interleucina-6 [IL6], ciclooxigenasa-2 [COX2] y factor alfa de necrosis tumoral [TNFa], los transcritos de a Rn se extrajeron de muestras de piel de oreja de ratón como se describe en la Figura 4. Dexametasona [Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)-pentilamino] isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX], así como (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil) pentilamino}-isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX-D3], se administraron en etanol (EtOH)(1 nmol/cm2) o una crema (0.0 5%). Los datos se representan como la media ± SEM de al menos tres experimentos independientes con al menos tres ratones por tratamiento.

La Figura 6 es un conjunto de ocho micrografías que muestran secciones de piel de ratones tratados en la Figura 5. Las secciones de piel de oreja de ratón se tiñeron con hematoxilina y eosina. La barra de escala representa 20 pm.

La Figura 7 es un histograma que muestra la expresión relativa de ARN medida por análisis por q-RT-PCR de transcritos de ARN de genes que codifican colagenasa 3 [MMP13], ciclooxigenasa-2 [COX2], interleucina-1p [IL1p], interleucina-6 [IL6], interleucina-10 [IL10], interleucina-13 [IL13] y linfopoyetina estromal tímica [TSLP]. Se destacan las interleucinas proinflamatorias específicas de Th2. Los transcritos de ARN se extrajeron de muestras de piel de oreja de ratón después de la inducción de una inflamación similar a la dermatitis atópica y el tratamiento (1 nmol/cm2) con calcipotriol solo [MC903], calcipotriol y dexametasona [MC903+Dex], calcipotriol y (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [MC903+CpdX], calcipotriol y CpdX(eA) [MC903+CpdX(eA)], calcipotriol y CpdX(eB) [MC903+CpdX(eB)], calcipotriol y (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona [MC903+CpdX-D3], calcipotriol y CpdX-D3(eA) [MC903+CpdX-D3(eA)] o calcipotriol y CpdX-D3(eB) [MC903+CpdX-D3(eB)]. Los datos se representan como la media ± SEM de al menos tres experimentos independientes con al menos tres ratones por tratamiento.

La Figura 8 es un conjunto de ocho micrografías que muestran secciones de piel de ratones tratados como en la Figura 7. Las secciones de piel de orejas de ratón se tiñeron con hematoxilina y eosina. La barra de escala representa 20 pm.

La Figura 9 es un conjunto de dos histogramas que muestran (A) el recuento de células en un lavado broncoalveolar [BAL] y (B) la expresión relativa de ARN medida por análisis por q-RT-PCR de transcritos de ARN extraídos de muestras de pulmón de ratón después de una inducción de 22 días de una inflamación pulmonar similar al asma que incluye 18 días de sensibilización con ovoalbúmina (OVA), seguido de 3 días de desafío con OVA, ya sea solo [OVA] o junto con 1 mg/kg de peso corporal de dexametasona [OVA+Dex] o (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [OVA+CpdX]. (A): se reporta el número (*105) de células totales, eosinófilos, neutrófilos, macrófagos y linfocitos. (B): se reporta la expresión relativa de ARN de los genes que codifican interleucina-1p [IL1p], interleucina-6 [IL6], interleucina-4 [IL4], interleucina-5 [IL5], interleucina-10 [IL10], interleucina-13 [IL13], eotaxina [Eotaxina], proteína1p inflamatoria de macrófagos [CCL4] y factor alfa de necrosis tumoral [TNFa]. Se destacan las interleucinas proinflamatorias específicas de Th2 y Th1. Los datos se representan como la media ± SEM de al menos seis ratones por tratamiento. La significancia estadística en comparación con el tratamiento con OVA se calculó mediante la prueba t de Student; (*) p<0,05; (**) p<0,01; (***) p<0,001.

La Figura 10 es un conjunto de tres micrografías que muestran una inflamación pulmonar similar al asma inducida por ovoalbúmina, después de 18 días de sensibilización con ovoalbúmina (OVA), seguida de un desafío de 3 días como se describe en la Figura 9. Las secciones de pulmón se tiñeron con hematoxilina y eosina. Se indican las regiones peribronquiolar (B) y perivascular (V). La barra de escala representa 40 |jm.

La Figura 11 es un conjunto de cuatro histogramas que muestran (A-B) el recuento de células en un lavado broncoalveolar [BAL] y (C-D) la expresión relativa de ARN medida por análisis por q-RT-PCR de transcritos de ARN extraídos de muestras de pulmón de ratón en D32, después de la inducción de una inflamación pulmonar similar al asma con una sensibilización de 28 días con ácaros del polvo doméstico (HDM), seguida de un desafío con HDM de 3 días, solamente [HDM] o junto con 1 mg/kg de peso corporal de dexametasona [HDM+Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [HDM+CpdX], CpdX(eA) [HDM CpdX(eA)], CpdX(eB) [HDM+CpdX(eB)], (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil) pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona [HDM+CpdX-D3], CpdX-D3(eA) [HDM+CpdX-D3(eA)] o CpdX-D3(eB) [HDM+ CpdX-D3(eB)]. (A-B): se reporta el número (*105) de células totales, eosinófilos, neutrófilos, macrófagos y linfocitos. (C-D):se reporta la expresión relativa de ARN de los genes que codifican interleucina-1p [IL1p], interleucina-6 [IL6], interleucina-4 [IL4], interleucina-5 [IL5], interleucina-13 [IL13], eotaxina [Eotaxina] y proteína inflamatoria de macrófagos-1p [CCL4]. Se destacan las interleucinas proinflamatorias específicas de Th2. Los datos se representan como la media ± SEM de al menos tres experimentos independientes con al menos cuatro ratones por tratamiento. La significancia estadística en comparación con el tratamiento con HDM se calculó mediante la prueba t de Student; (*) p<0,05; (**) p<0,01; (***) p<0,001; (ns) no significativo.

La Figura 12 es un conjunto de ocho micrografías que muestran una inflamación pulmonar similar al asma inducida por ácaros del polvo doméstico (HDM), después de 28 días de sensibilización con HDM, seguida de un desafío de 3 días como se describe en Figura 11. Las secciones de pulmón se tiñeron con hematoxilina y eosina. Se indican las regiones peribronquiolar (B) y perivascular (V). La barra de escala representa 40 jm .

La Figura 13 es un conjunto de dos histogramas que muestran la hiperreactividad de las vías respiratorias a la metacolina (MCh, 50 mg/ml) de ratones en los que se indujo una inflamación pulmonar similar al asma inducida por los ácaros del polvo doméstico (HDM) mediante una sensibilización de 28 días con HDM, seguida de por un desafío de 3 días como se describe en la Figura 11. (A) resistencia de las vías respiratorias, (B) elastancia de las vías respiratorias. Los datos se representan como la media ± SEM con al menos ocho ratones por tratamiento. La significancia estadística en comparación con el tratamiento con HDM solo se calculó mediante ANOVA de dos vías seguido de comparaciones múltiples de Bonferroni; (**) p<0,01; (***) p<0,001; (****) p<0,0001; (ns) no significativo.

La Figura 14 es un histograma que muestra la expresión relativa de ARN medida por análisis por q-RT-PCR de transcritos de ARN de los genes que codifican interleucina-17a [IL17a], interleucina-17c [IL17c], interleucina-17f [IL17f] e interleucina-22 [IL22] . Los transcritos de ARN se extrajeron de muestras de piel de oreja de ratón después de una inducción de 9 días de una inflamación similar a la psoriasis inducida por Aldara®, incluido un tratamiento tópico durante los últimos 5 días con etanol [Aldara+Vehículo], 1 nmol/cm2 de dexametasona [Aldara+Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isoben-zofuran-1(3H)-ona [Aldara+CpdX], (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona [Aldara+CpdX-D3]. Se destacan las interleucinas proinflamatorias específicas de Th17. Los datos se representan como la media ± SEM de al menos tres experimentos independientes con al menos tres ratones por tratamiento.

La Figura 15 es un conjunto de cinco micrografías que muestran una inflamación de la piel de la oreja similar a la psoriasis generada por Aldara®, seguida de tratamientos tópicos de 5 días como se describe en la Figura 14. Las muestras de piel de oreja de ratón se tiñeron con hematoxilina y eosina. La barra de escala representa 20 jm .

La Figura 16 es un conjunto de ocho micrografías que muestran las patas traseras de ratones en los que se indujo una inflamación similar a la artritis inducida por colágeno (T0, paneles de la izquierda) y se trató con una administración intraperitoneal de 10 días (T10) (paneles de la derecha), con NaCl al 0,9 % [Vehículo], 1 mg/kg de peso corporal de dexametasona [Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX], (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)-pentilamino}isobenzo furan-1(3H)-ona [CpdX-D3].

La Figura 17 es un conjunto de dos gráficos que muestran el espesor (en mm) de las patas traseras (al nivel del tobillo) de ratones después de la inducción de una inflamación parecida a la artritis (en T0) y una administración intraperitoneal durante 10 días (T10) (A) con NaCl al 0,9% [Vehículo], 1 mg/kg de peso corporal de dexametasona [Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX] o (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)-pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX-D3]; y (B) con [CpdX-(eA)], [CpdX(eB)], [CpdX-D3(eA)] o [CpdX-D3(eB)]. Los datos se representan como la media ± SEM con al menos seis ratones por tratamiento. La significancia estadística en comparación con el tratamiento con Dex se calculó mediante la prueba t de Student. (*) p<0,05; (ns) indica que la diferencia observada entre los ratones tratados con Dex, los tratados con CpdX y los tratados con CpdX-D3 no es significativa.

La Figura 18 es un histograma que muestra la expresión relativa de ARN medida por análisis por q-RT-PCR de transcritos de ARN de interleucina-1p [IL1p], interleucina-6 [IL6], interleucina-17a [IL17a], interleucina-17f [IL17f] y el factor de necrosis tumoral alfa [TNFa]. Los transcritos de a Rn total se extrajeron de las patas traseras completas de los ratones antes (T0) o después de un tratamiento de 10 días (T10) como se describe en la Figura 17. Se destacan las interleucinas proinflamatorias específicas de Th17 y Th1. Los datos se representan como la media ± SEM con al menos seis ratones por tratamiento.

La Figura 19 es un conjunto de diez micrografías de secciones de colon (a dos aumentos con una barra de escala que representa 50 pm o 20 pm respectivamente) que muestra una colitis ulcerosa inducida por un tratamiento de 13 días con DSS (dextrano sulfato de sodio al 3 %), en comparación con una sección de colon normal [sin tratamiento con DSS], y con secciones de ratones tratados en D11, D l2 y D13 con una administración intraperitoneal de NaCl al 0,9 % [DSS+Vehículo], 1 mg/kg de peso corporal dexametasona [DSS+Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxi-fenil)-2-hidroxi-4- metil-2-(trifluorometil)pentilamino]-isobenzofuran-1(3H)-ona [DSS+CpdX] o (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluoro-fenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)-pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona [DSs+CpdX-D3]. Las secciones de colon se tiñeron inicialmente con hematoxilina y eosina. Flechas de línea continua: infiltración de células inflamatorias de la mucosa; flechas discontinuas: infiltración de células inflamatorias submucosas; punta de flecha: ulceración.

La Figura 20 es un histograma que muestra los análisis por q-RT-PCR comparativos de los transcritos de ARN de los genes que codifican interleucina-1p [IL1p], interleucina-6 [IL6], interleucina-17a [IL17a], interleucina-17f [IL17f], linfopoyetina estromal tímica [TSLP] y colagenasa 3 [MMP13]. Se destacan las interleucinas proinflamatorias específicas de Th17 y Th2. Los transcritos de ARN se extrajeron de muestras de colon de ratones tratados por vía oral con DSS al 3 % (en agua potable) durante 13 días, junto con una administración intraperitoneal en D11, D12 y D13, de NaCl al 0,9 % [DSS+Vehículo], 1 mg/kg de peso corporal de dexametasona [DSS+Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]-isobenzofuran-1(3H)-ona [DSS+CpdX], CpdX(eA) [DSS+ CpdX(eA)], CpdX(eB) [DSS+CpdX(eB)], (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil) pentilamino}isobenzo-furan-1(3H)-ona [DSS+CpdX-D3], CpdX-D3(eA) [DSS+CpdX-D3(eA)] o CpdX-D3(eB) [DSS+ CpdX-D3(eB)]. Los datos se representan como la media ± SEM de al menos tres experimentos independientes con al menos cuatro ratones por tratamiento.

La Figura 21 es (A) un conjunto de nueve micrografías que muestran, 20 minutos después del último tratamiento el día 24, la apariencia clínica de los ojos del ratón tras la inducción de una conjuntivitis alérgica inducida por ovoalbúmina (OVA) que incluye 14 días de sensibilización con OVA, seguida de un desafío de 10 días con NaCl al 0,9% (Vehículo) o con OVA. Los días 22, 23 y 24, los ojos de los ratones expuestos a OVA se trataron conjuntamente con NaCl al 0,9 % [OVA], 0,1% de dexametasona [OVA+Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil) pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [OVA+CpdX], CpdX-(eA) [OVA+CpdX(eA)], CpdX(eB) [OVA+CpdX(eB)], (R/S)-5- {4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometilo)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona [OVA+ CpdX-D3], CpdX-D3(eA) [OVA+CpdX-D3(eA)] o CpdX-D3(eB) [OVA+CpdX-D3(eB)]; y (B) un gráfico que muestra la puntuación clínica (hiperemia conjuntival, edema palpebral y lagrimeo) de ojos de ratón tratados como se describe en (A). Se realizó una puntuación y cada parámetro se calificó en una escala de 0 a 3 (0 = ausencia, 1 = leve, 2 = moderado y 3 = síntomas graves). Por lo tanto, cada animal recibió una puntuación clínica total que oscilaba entre 0 y 9, y los datos se expresaron como la media ± SEM con al menos cuatro ratones por tratamiento.

La Figura 22 es un conjunto de dos histogramas que muestran la expresión relativa (medida mediante análisis q-RT-PCR) de transcritos de ARN de los genes (A) Kindlin-1 (un gen que contiene nGRE) y (B) REDD1 (un gen que contiene GRE). Los ratones se afeitaron en la piel dorsal y luego se trataron tópicamente con etanol [Vehículo], 1 nmol/cm2 de dexametasona [Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]-isobenzo furano-1(3H)-ona [CpdX], [CpdX(eA)], [CpdX(eB)], (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}-isobenzofuran-1-(3H)-ona [CpdX-D3], [CpdX-D3(eA)] o [CpdX-D3(eB)] durante 8 días. Los datos se representan como la media ± SEM de al menos tres experimentos independientes con al menos tres ratones por tratamiento.

La Figura 23 es un histograma que muestra un análisis morfométrico del espesor epidérmico (en pm) en ratones rasurados en la piel dorsal y luego tratados tópicamente durante 8 días como se describe en la Figura 22. Los datos se representan como la media ± SEM de al menos tres experimentos independientes con al menos tres ratones por tratamiento.

La Figura 24 es un conjunto de dieciséis micrografías que muestran la atrofia de la piel en ratones rasurados en la piel dorsal y luego tratados tópicamente como se describe en la Figura 22. Paneles de la izquierda: las muestras de piel se tiñeron con hematoxilina y eosina. Paneles de la derecha: el núcleo se tiñó con DAPI. La barra de escala representa 20 pm.

La Figura 25 es un conjunto de diez gráficos para cinco parámetros de hueso cortical medidos por microCT: (A) volumen óseo/volumen total (%); (B) espesor cortical (mm); (C) área total (mm2); (D) área del hueso (mm2) y (E) área de la médula (mm2). Se trataron ratones de 8 semanas de edad durante tres meses con una inyección subcutánea diaria de NaCl al 0,9% [Vehículo], 1 mg/kg de peso corporal de dexametasona [Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX], [CpdX(eA)], [CpdX(eB)], (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX-D3], [CpdX-D3(eA)] o [CpdX-D3(eB)]. Se utilizó el escáner micro-CT FX Quantum (Perkin Elmer) para realizar mediciones en la parte media de la tibia. Los datos corresponden a la media (como señalan las puntas de flecha) ± SEM para al menos seis ratones por tratamiento. La significancia estadística en comparación con el tratamiento con vehículo se calculó mediante la prueba ANOVA de una vía seguida de la prueba de comparación múltiple de Dunnett (*) p<0,05; (**) p<0,01 (***) p<0,001; (****) p<0,0001; (ns): no significativo.

La Figura 26 es un histograma que muestra la expresión relativa (medida mediante análisis q-RT-PCR) de transcritos de ARN del gen Wnt16 en tibia de ratón. Los ratones de 8 semanas de edad fueron tratados como se indica en Figura 25. Los datos se representan como la media ± SEM con al menos seis ratones por tratamiento.

La Figura 27 es un conjunto de tres gráficos que muestran el cambio desde el inicio (antes del tratamiento) de (A) el peso corporal, (B) el porcentaje de grasa y (C) el porcentaje magro de ratones de 8 semanas de edad tratados como se indica durante tres meses adicionales con una inyección subcutánea diaria de NaCl al 0,9 % [Vehículo], 1 mg/kg de peso corporal de dexametasona [Dex], (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil) pentilamino]iso-benzofuran-1(3H)-ona [CpdX] o (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluoro metil) pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX-D3]. Los datos corresponden a la media (como señalan las puntas de flecha) ± SEM para al menos nueve ratones por tratamiento. La significancia estadística se calculó mediante la prueba de Krustal-Walis seguida de la prueba de comparación múltiple de Dunnett; (*) p<0,05; (**) p<0,01 (***) p<0,001.

La Figura 28 es un conjunto de cuatro histogramas que muestran el peso (en gramos) de (A) timo, (B) bazo, (C) glándula suprarrenal y (D) riñón de ratones de 8 semanas de edad tratados durante tres meses más con una inyección subcutánea diaria de NaCl al 0,9 % [Vehículo], 1 mg/kg de peso corporal de dexametasona [Dex] o (R/S)-5-[4-(5-fluoro -2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX], [CpdX(eA)], [CpdX-(eB)], (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona, [CpdX-D3], [CpdX-D3(eA)] o [CpdX-D3(eB)]. Los datos se representan como la media ± SEM para al menos nueve ratones por tratamiento. La significancia estadística se calculó mediante la prueba t de Student; (*) p<0,05.

Figura 29 es un conjunto de ocho micrografías (con dos aumentos diferentes con una barra de escala que representa 50 |jm o 25 |jm respectivamente) que muestran secciones de glándulas suprarrenales de ratones de 8 semanas de edad tratados como se indica en la Figura 27. La capa de la corteza de la glándula suprarrenal se indica en los paneles de la izquierda mediante flechas de dos puntas, mientras que las zonas fasciculada y glomerulosa de la corteza se indican mediante flechas largas de dos puntas rellenas y flechas pequeñas de dos puntas sin relleno en los paneles de la derecha, respectivamente.

La Figura 30 muestra la síntesis de corticosterona en ratones de 8 semanas de edad tratados como se indica en la Figura 28. (A): expresión relativa en glándulas suprarrenales de ratón de transcritos de ARN (según lo determinado por análisis por q-RT-PCR) de genes del esteroide 11a-hidroxilasa (Cyp11a), del esteroide 11p-hidroxilasa (Cyp11b1), del 3p-hidroxiesteroide deshidrogenasa (HSD3p) y de la aldosterona sintasa (Cyp11b2); (B): niveles de corticosterona plasmática a las 10 am y 6 pm en ratones tratados como se indica. Los datos se representan como la media ± SEM para al menos nueve ratones por tratamiento.

La Figura 31 es un conjunto de dos histogramas que muestran los niveles de glucosa en sangre (mg/dL) en ratones de 8 semanas de edad tratados como se indica en la Figura 28. (A): niveles de glucosa plasmática después de un ayuno nocturno de 14 horas; (B): Prueba de tolerancia a la glucosa intraperitoneal (IPGTT) 2 horas después de una inyección ip de glucosa (2 mg/kg de peso corporal). Los datos se representan como la media ± SEM para al menos seis ratones por tratamiento. La significancia estadística en comparación con el tratamiento con vehículo se calculó mediante la prueba t de Student; (*) p<0,05; (**) p<0,01.

La Figura 32(A) es un histograma que muestra los niveles de insulina en sangre (jg /L) en ratones de 8 semanas de edad tratados como se indica en la Figura 28. Los datos se representan como la media ± SEM para al menos nueve ratones por tratamiento. (B): Prueba de tolerancia a la insulina intraperitoneal (IPITT) 1 hora después de una inyección intraperitoneal de 0,75 U de insulina/kg de peso corporal. Los datos se representan como la media ± SEM con al menos seis ratones por tratamiento. La significancia estadística en comparación con el tratamiento con vehículo se calculó mediante la prueba t de Student, * p<0,01. (C): análisis de transferencia Western de muestras de hígado de ratón para el sustrato 1 del receptor de fosfoinsulina fosforilado en la serina 318 (p-IRS1 S318), el sustrato 1 del receptor de paninsulina (IRS total), proteínas fosfoproteína quinasa B fosforilada en la serina 473 (p-AKT S473) y panproteína quinasa B (AKT total).

La Figura 33 es un conjunto de dieciséis micrografías (con dos aumentos) que muestran una deposición selectiva de lípidos (revelada por tinción con aceite rojo al 5% de secciones de hígado congeladas) en el hígado de ratones de 8 semanas de edad tratados como se indica en la Figura 28.

La Figura 34 es un conjunto de dos histogramas que muestran la expresión relativa de ARN (análisis por q-RT-PCR) de transcritos de ácido graso sintasa (FASN) y estearoil-CoA desaturasa-1 (SCD1) en hígados de ratón. Los ratones de 8 semanas de edad fueron tratados como se indica en la Figura 28. Los datos corresponden a la media ± SEM de al menos nueve ratones por tratamiento. La significancia estadística se calculó mediante la prueba t de Student; (**) p<0,01; (***) p<0,001.

La Figura 35 es un conjunto de dos histogramas que muestran el nivel de colesterol total (mmol/L) y los niveles de ácidos biliares (jmol/L) en sangre de ratones de 8 semanas de edad tratados como se indica en la Figura 28. Los datos se representan como la media ± SEM para al menos nueve ratones por tratamiento.

Ejemplos

La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1: Síntesis de CpdX y CpdX-D3 y separación de sus enantiómeros

Síntesis de CpdX "racémica" y separación de sus enantiómeros CpdX(eA) y CpdX(eB)

La mezcla racémica del denominado compuesto CpdX {(R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona}, se sintetizó como se describe en la Figura 2A con una pureza del 99,5 %, y su identidad se confirmó mediante LCMS (MS+1 = 442.1), HPLC, RMNH y RMNF.

Luego, 300 mg de una mezcla racémica de CpdX se pasaron a través de una columna AD de cromatografía preparativa de fluidos supercríticos (SFC) (250 mm * 30mm * 5 micras; fase móvil: Neu-MeOH; % de B: 20%-20%, 2.3 minutos). Las fracciones recolectadas correspondientes al primer pico de elución (Pico1 de CpdX, Figura 2B) luego se concentraron a presión reducida a 30 °C, se liofilizaron y se purificaron adicionalmente a través de cromatografía en columna C18 Phenomenex Synergi [150 mm * 25 mm * 10 micras; fase móvil: agua (TFA0, al 1 %)-ACN; %B: 50%-80%, 10 minutos]. Las fracciones recolectadas se concentraron a presión reducida a 30 °C y se liofilizaron como un sólido blanco (97.77 mg), cuya identidad se confirmó por LCMS (M^s+1 = 442.1) y SFC (tiempo de retención (RT) = 1.084 min), y se denominó como el enantiómero "CpdX(eA)" (pureza del 97.6 %) (Tabla 1).

Las fracciones recolectadas correspondientes al segundo pico de elución (Pico 2 de CpdX, Figura 2B) se concentraron de manera similar a presión reducida a 30 °C, se liofilizaron y se purificaron adicionalmente mediante cromatografía en columna C18 Phenomenex Synergi [150 mm * 25mm * 10 micras); fase móvil: agua (0,1 % TFA)-ACN; %B: 51%-81%, 12 minutos]. Las fracciones recolectadas se concentraron a presión reducida a 30 °C y se liofilizaron como un sólido blanco (101.72 mg), cuya identidad se confirmó por LCMS (MS+1 = 442.1) y SFC (r T = 1.147 minutos), y se denominó como el enantiómero "CpdX(eB)" con una pureza del 98% (Tabla 1).

Un análisis posterior determinará cuál de los dos enantiómeros CpdX(eA) y CpdX(eB) corresponde a las formas R y S, respectivamente.

Tabla 1

Síntesis de CpdX-D3 "racémica" y separación de sus enantiómeros CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(EB)

La mezcla racémica del denominado compuesto deuterado CpdX-D3, correspondiente al compuesto deuterado {(R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4 -metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona}, se sintetizó como en la Figura 2C con una pureza del 99.3 % y un contenido de deuterio del 98.83 %, y su identidad fue confirmada por LCMS (MS+1=445), HPLC, RMNH y RMNF.

A continuación, se pasaron 84.4 mg de CpdX-D3 a través de una columna DAICEL CHIRALPAK AD-H de cromatografía preparativa de fluidos supercríticos (SFC) (250 mm * 30mm * 5 micras; fase móvil: NH³H²O-MEOH al 0.1%; %B: 20%-20%, 2,3 minutos).

Las fracciones recolectadas correspondientes al primer pico de elución (Pico 1 de CpdX-D3) se concentraron a presión reducida a 30 °C y se liofilizaron como un sólido blanco (32.41 mg), cuya identidad se confirmó por LCMS (M^s+1 = 445) y SFC (RT = 1.082 minutos), y se denominó como el enantiómero "CpdX-D3(eA)" con una pureza del 98.7 %. Las fracciones recolectadas correspondientes al segundo pico de elución (Pico 2 de CpdX-D3) se concentraron a presión reducida a 30 °C y se liofilizaron como un sólido blanco (31.06 mg), cuya identidad se confirmó por LCMS (MS+1 = 445) y SFC (RT = 1.149 minutos), y se denominó como el enantiómero "CpdX-D3(eB)" con una pureza del 99.1 % (Figura 2D).

Un análisis posterior determinará cuál de los dos enantiómeros CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB) corresponde a las formas R y S, respectivamente.

Ejemplo 2: A diferencia de Mapracorat/ZK245186, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB) son moduladores agonistas de GR selectivos (SEGRAM) no esteroideos apropiados (véase la Figura 3) Material y métodos

Se trataron orejas de ratones Balb/C durante la noche durante 18 horas con 1 nmol/cm2 de cualquiera de: - Etanol [vehículo],

- Dexametasona [Dex],

- Mapracorat,

- (R/S)-5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX], - 5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)-pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona

- enantiómero A [CpdX(eA)],

- 5-[4-(5-fluoro-2-metoxifenil)-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)-pentilamino]isobenzofuran-1(3H)-ona

- enantiómero B [CpdX(eB)],

- (R/S)-5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona [CpdX -D3],

- 5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona enantiómero A [CpdX-D3(eA)], o

- 5-{4-[2-(metoxi-D3)-5-fluorofenil]-2-hidroxi-4-metil-2-(trifluorometil)pentilamino}isobenzofuran-1(3H)-ona enantiómero B [CpdX-D3(eB)].

A continuación, se extrajeron los transcritos de ARN de las orejas de los ratones y se analizaron los transcritos de 4 genes mediante q-RT-PCR:

(i) el gen transactivado directamente por GR del inhibidor de mTOR REDD1,

(ii) el gen transreprimido directamente por GR de la queratina 5 (K5) y

(iii) los genes transreprimidos "vinculados" indirectamente al GR de interleucina-1p (IL-1 p) e interleucina-6 (IL-6), ambos activados en presencia de 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato (TPA).

Resultados

Tras el tratamiento con Dex o Mapracorat, los análisis transcripcionales in vivo han demostrado que Mapracorat, al igual que Dex, induce las tres funciones de GR (transactivación directa, transrepresión directa y transrepresión ligada indirecta, resumidas en la Figura 1), con una transactivación similar del gen REDD1 (Figura 3A), una transrepresión directa similar del gen K5 (Figura 3B), y una transrepresión indirecta similar de los genes de IL-1 p (Figura 3C) y de IL-6 (Figura 3D).

Por el contrario, GR exhibe selectivamente una actividad de transrepresión ligada indirecta tras la administración in vivo de CpdX, con niveles de expresión de ARN relativos sin cambio para los genes REDD1 y K5, en comparación con el control (Vehículo). También se obtuvieron resultados similares tras la administración de cualquiera de CpdX(eA) o CpdX(eB), o de sus equivalentes deuterados CpdX-D3, CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB).

Conclusión

Mapracorat no es un modulador agonista del GR selectivo (SEGRAM), lo que indica que Mapracorat puede exhibir, aunque podría ser en menor medida, efectos secundarios similares a los que se encuentran actualmente tras un tratamiento con Dex.

En marcado contraste, CpdX, así como sus dos enantiómeros CpdX(eA) y CpdX(eB), exhiben selectivamente la actividad de transrepresión ligada indirecta de GR, como se esperaba para SEGRAM apropiados. Lo más interesante es que el CpdX deuterado (CpdX-D3) y sus dos enantiómeros [CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB)] exhiben la misma selectividad y propiedades antiinflamatorias que sus contrapartes CpdX.

Ejemplo 3: CpdX y CpdX-D3 son tan eficientes como la dexametasona (Dex) para disminuir una inflamación de Th1/Th2/Th17 similar a la dermatitis de contacto irritante inducida por TPA (véase la Figura 4)

Material y métodos

Las orejas de ratón Balb/C se trataron tópicamente con TPA para inducir una "inflamación similar a la dermatitis de contacto irritante".

Los ratones se trataron durante 4 días con TPA, luego durante 5 días adicionales (hasta D9) con vehículo, TPA solo, TPA y Dex, TPA y CpdX o TPA y CpdX-D3.

En D10, los transcritos de ARN se extrajeron de muestras de piel de oreja de ratón y los transcritos de CCL4, COX2, MMP13, IL-1p, IL-6, TNF-a, TSLP, IL-22 e IL-23 se analizaron mediante q-RT-PCR. Se recogió la piel de la oreja y se llevaron a cabo análisis histológicos (con tinción con H&E) e inmunohistoquímicos (con anticuerpos anti-TSLP).

Resultados

La inflamación de la piel inducida por TPA disminuyó significativamente con el tratamiento con Dex, CpdX o CpdX-D3.

Los análisis de transcritos utilizando extractos de la oreja de estos ratones indicaron que CpdX y CpdX-D3 reprimieron, tan eficientemente como Dex, la transcripción inducida por TPA de genes proinflamatorios. (Figura 4).

El análisis histológico de la piel de la oreja del ratón mostró que la inflamación de la piel de la oreja inducida por TPA disminuyó significativamente mediante el tratamiento con Dex, CpdX o CpdX-D3, en comparación con el control (datos no mostrados).

El análisis inmunoquímico utilizando un anticuerpo específico de TSLP mostró que la expresión de TSLP en la epidermis de ratón tratado con TPA disminuyó fuertemente de forma similar mediante un tratamiento con Dex, CpdX o CpdX-D3 (datos no mostrados).

Conclusión

Tomados en conjunto, estos resultados demuestran que CpdX y CpdX-D3 reprimen las inflamaciones cutáneas inducidas tan eficientemente como Dex, lo que indica que ambos pueden usarse en el tratamiento de inflamaciones cutáneas, especialmente en el tratamiento de trastornos inflamatorios relacionados con Th1/Th2/Th17, como la dermatitis de contacto.

Ejemplo 4: La administración tópica de cualquiera de Dex, CpdX o CpdX-D3, en una formulación en crema o en etanol (EtoH), da como resultado una actividad antiinflamatoria similar (véanse las Figuras 5 y 6)

Material y métodos

Primero, las orejas de los ratones Balb/C se trataron tópicamente con TPA durante 3 días, seguidas de un tratamiento conjunto de tres días sin o con Dex, CpdX o CpdX-D3 en etanol (1 nmol/cm2) o en una crema (0,05% p/p) compuesta por vaselina, parafina líquida, Emulgade® 1000 NI (BASF), galato de propilo, edetato de sodio, ácido sórbico y agua purificada.

Los transcritos de ARN se extrajeron de muestras de piel de oreja de ratón y los transcritos de IL-1p, IL-6, COX2 y TNF-a se analizaron mediante q-RT-PCR. Se recogió la piel de la oreja y se llevaron a cabo análisis histológicos (con tinción con H&E).

Resultados

Los análisis de transcritos de extractos de oreja revelaron una represión similar de los genes proinflamatorios por Dex, CpdX o CpdX-D3 administrados en etanol o en una formulación en crema (Figura 5). El análisis histológico de la piel de oreja de ratón confirmó efectos antiinflamatorios similares (Figura 6).

Conclusión

Tanto CpdX como CpdX-D3, administrados en etanol o en una formulación en crema, tienen la misma eficacia antiinflamatoria en el tratamiento de una inflamación de la piel.

Ejemplo 5: CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB) son tan eficaces como la dexametasona (Dex) para disminuir una inflamación de Th2 similar a la dermatitis atópica inducida por calcipotriol (MC 903) (véanse las Figuras 7 y 8)

Material y métodos

Para investigar la actividad antiinflamatoria de CpdX in vivo, las orejas de ratón Balb/C se trataron tópicamente con calcipotriol (MC 903, un análogo de la vitamina D³), con el fin de inducir una inflamación similar a la dermatitis atópica (AD) (Li et al., 2006. Proc Natl Acad Sci USA 103(31): 11736-41).

Los ratones se trataron durante 14 días con MC 903 y luego durante 8 días adicionales (hasta el D22) con MC 903 solamente (control), MC 903 y Dex, MC 903 y CpdX, MC 903 y CpdX(eA), MC 903 y CpdX(eB), MC 903 y CpdX-D3, MC 903 y CpdX-D3(eA) y MC 903 y CpdX-D3(eB).

En D23, los transcritos de ARN se extrajeron de muestras de piel de oreja de ratón y los transcritos de 7 citoquinas (MMP13, COX2, IL-1p, IL-6, IL-10, IL-13 y TSLP) se analizaron mediante q-RT-PCR. Se recogió la piel de la oreja y se llevaron a cabo análisis histológicos (con tinción con H&E) e inmunohistoquímicos (con anticuerpos anti-TSLP). Resultados

La inflamación de la piel inducida por MC 903 disminuyó significativamente mediante el tratamiento con Dex, CpdX o CpdX-D3.

Los análisis de transcritos de ARN de extractos de la oreja de estos ratones indicaron que CpdX y CpdX-D3 reprimieron, tan eficientemente como Dex, la transcripción inducida por MC 903 de una variedad de genes proinflamatorios (MMP13, COX2, IL-1p, IL-6, IL-10, IL-13 y TSLP), incluidos los de una inflamación de Th2 (IL-10, IL-13 y TSLP) (Figura 7).

El análisis histológico de la piel de la oreja del ratón mostró que la inflamación de la piel de la oreja inducida por MC 903 disminuyó con el tratamiento con Dex, CpdX o CpdX-D3, en comparación con el control (Figura 8).

El análisis inmunohistoquímico utilizando un anticuerpo específico de TSLP mostró que la expresión de la linfocina TSLP en la epidermis de ratón tratada con MC 903 disminuyó fuertemente de manera similar que por Dex, CpdX o CpdX-D3 (datos no mostrados).

También se observaron resultados similares para un tratamiento con CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figuras 7 y 8).

Conclusión

Tomados en conjunto, estos resultados demuestran que una administración tópica de CpdX, su forma deuterada CpdX-D3 o cualquiera de sus enantiómeros [CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB)] reducen tan eficientemente como Dex una inflamación de la piel, lo que indica que todos ellos son útiles en el tratamiento de las inflamaciones de la piel, en particular en el tratamiento de trastornos inflamatorios relacionados con Th2, tal como la dermatitis atópica.

Ejemplo 6: CpdX, CpdX(eA), CpdX-D3 y CpdX-D3(eA), pero no CpdX(eB) ni CpdX-D3(eB), son tan eficientes como la dexametasona (Dex) para disminuir una inflamación de Th2 alérgica pulmonar similar al asma (véanse las Figuras 9 a 13)

Material y métodos

Los glucocorticoides han sido (Pearlman et al., 1997. Ann Allergy Asthma Immunol. 78(4): 356-62), y todavía se utilizan ampliamente en el tratamiento del asma. Para investigar la posible actividad antiinflamatoria de CpdX in vivo, los ratones fueron sensibilizados y desafiados con ovoalbúmina (OVA) o ácaros del polvo doméstico (HDM) para inducir una inflamación pulmonar alérgica similar al asma.

Sensibilización y desafío con ovoalbúmina

Los ratones se sensibilizaron por vía intraperitoneal con 50 |jg de OVA junto con alumbre o con alumbre solo en D0, D7 y D14. A continuación, los ratones se subdividieron en tres grupos, y en D19, D20 y D21, se les expuso por vía intranasal (in) a 10 jg de OVA. El primero y el segundo grupo recibieron por vía intranasal 0.5 mg/kg de peso corporal de Dex o CpdX respectivamente, mientras que el tercer grupo sirvió como control.

En D22, se evaluó la inflamación alérgica pulmonar para cada ratón mediante el examen del líquido de lavado broncoalveolar (BAL). Se contaron las células BAL totales, eosinófilos, neutrófilos, macrófagos y linfocitos. Los transcritos de ARN se extrajeron de muestras de pulmón y los transcritos de ARN de IL-1p, IL-6, IL-4, IL-5, IL-10, IL-13, Eotaxina, CCL4 y TNFa se analizaron mediante q-RT-PCR. También se realizaron análisis histológicos (con tinción con H&E) e inmunohistoquímicos (con anticuerpos específicos para eosinófilos y específicos para neutrófilos) de tejidos pulmonares.

Sensibilización y desafío contra los ácaros del polvo doméstico (HDM)

Los ratones se sensibilizaron por vía intranasal con 1 jg de HDM desde D0 a D4, y se sensibilizaron más por vía intranasal con 10 jg de HDM en D14 y D21. A continuación, los ratones se subdividieron en ocho grupos, y en D29, D30 y D31, cada ratón se expuso de nuevo por vía intranasal a 1 jg de HDM. Los primeros siete grupos recibieron respectivamente 0.5 mg/kg de peso corporal de Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB), mientras que el octavo grupo sirvió como control.

En D32, la capacidad de respuesta de las vías respiratorias se determinó de forma invasiva utilizando un ventilador para animales pequeños controlado por ordenador (sistema FlexVent®, SCIREQ Technologies). Los ratones se anestesiaron con xilazina (15 mg/kg, i.p.), seguido 15 minutos después de una inyección ip de pentobarbital sódico (54 mg/kg). Luego se insertó una aguja de metal de calibre 18 en la tráquea, cada ratón se conectó al ventilador FlexVent® y casi sinusoidalmente ventilado con un volumen corriente de 10 ml/kg a una frecuencia de 150 respiraciones/minuto y una presión positiva al final de la espiración de 2 cm H²O, para lograr un volumen pulmonar medio cercano a la respiración espontánea. Después de la medición inicial, los ratones se expusieron durante 10 segundos a un aerosol de solución salina y, a intervalos de 4.5 minutos, a 50 mg/ml de metacolina. La resistencia y la elastancia de las vías respiratorias se expresaron en cmH²O.s/mL y cmH²O/mL respectivamente.

La inflamación alérgica pulmonar se evaluó mediante el examen del líquido de lavado broncoalveolar (BAL) de cada uno de estos ratones expuestos a HDM. Se contaron las células, eosinófilos, neutrófilos, macrófagos y linfocitos totales del BAL. Los transcritos de ARN se extrajeron de muestras de pulmón. Los transcritos de ARN de IL-1p, IL-6, IL-4, IL-5, IL-13, Eotaxina, CCL4, IL-10 y TNFa se analizaron mediante q-RT-PCR. Se recogieron tejidos pulmonares y también se realizaron análisis histológicos (con tinción con H&E) e inmunohistoquímicos (con anticuerpos específicos de eosinófilos y específicos de neutrófilos).

Resultados

Sensibilización y desafío con ovoalbúmina

Tras el tratamiento con Dex o CpdX, el número total de células eosinófilos, neutrófilos y linfocitos del BAL, disminuyó significativamente en comparación con el grupo de control. El número de macrófagos no se modificó. (Figura 9A).

De acuerdo con estos resultados, los análisis transcripcionales de muestras de pulmón mostraron que las expresiones de IL-1p, IL-6 y de los genes de IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 proinflamatorios de Th2, así como los de la quimiocina quimiotáctica de eosinófilos Eotaxina, CCL4 y TNFa, se redujeron de manera significativa y similar con el tratamiento con Dex o CpdX (Figura 9B).

Los análisis histológicos de secciones de parafina de pulmón demostraron que la infiltración de células inflamatorias peribronquiolar (B) y perivascular (V) disminuyó considerablemente con el tratamiento con Dex o CpdX (Figura 10).

La tinción inmunohistoquímica usando anticuerpos específicos de eosinófilos y específicos de neutrófilos confirmó que tanto los eosinófilos como los neutrófilos se redujeron de manera similar con un tratamiento con Dex o CpdX (datos no mostrados).

Sensibilización y desafío contra los ácaros del polvo doméstico (HDM)

Tras el tratamiento con Dex, CpdX o CpdX-D3, el número total de células, eosinófilos y linfocitos del BAL disminuyó significativamente en comparación con el grupo de control. No se observó ningún cambio significativo en el número de neutrófilos y macrófagos (Figura 11A y B). Los análisis transcripcionales de ARN de muestras de pulmón mostraron que las expresiones de IL-1p, IL-6 y de genes proinflamatorios de Th2 (IL-4, IL-5, IL-13), así como los de la quimiocina quimiotáctica de eosinófilos Eotaxina y CCL4, se redujeron significativamente y de manera similar por Dex, CpdX o CpdX-D3 (Figura 11C y D), mientras que los de IL-10 y TNFa no se vieron afectados (datos no mostrados).

Los análisis histológicos de las secciones de parafina de pulmón demostraron que la infiltración de células inflamatorias peribronquiolares y perivasculares disminuyó considerablemente con el tratamiento con Dex, CpdX o CpdX-D3 (Figura 12).

La tinción inmunohistoquímica con anticuerpos específicos de eosinófilos confirmó que los eosinófilos se redujeron con el tratamiento con Dex, CpdX o CpdX-D3 (datos no mostrados). Sin embargo, no se observó ningún cambio significativo utilizando un anticuerpo específico de neutrófilos (datos no mostrados).

Las pruebas funcionales pulmonares (respuestas a la metacolina analizadas mediante mediciones invasivas de resistencia y elastancia de las vías respiratorias) demostraron que la administración de Dex, CpdX o CpdX-D3 redujo de manera similar la hiperreactividad de las vías respiratorias inducida por HDM (AHR) (Figura 13).

Sorprendentemente, un tratamiento con CpdX(eA) o CpdX-D3(eA), pero no con CpdX(eB) ni CpdX-D3(eB), disminuyó de manera eficiente el número total de células, eosinófilos y linfocitos del BAL (Figura 11A y B), así como la expresión de genes proinflamatorios (Figura 11C y D). Los análisis histológicos de secciones de parafina de pulmón revelaron que la infiltración de células inflamatorias peribronquiolares y perivasculares disminuyó con un tratamiento con CpdX(eA) o CpdX-D3(eA), pero no con un tratamiento con CpdX(eB) ni con CpdX-D3(eB) (Figura 12). En consecuencia, las pruebas funcionales pulmonares mostraron que la administración de CpdX(eA), pero no de CpdX(eB), redujo la hiperreactividad de las vías respiratorias (AHR) inducida por HDM (Figura 13).

Conclusión

Tomados en conjunto, estos resultados demuestran que CpdX y CpdX-D3 reprimieron, tan eficientemente como Dex, las inflamaciones pulmonares inducidas por alérgenos, lo que indica su utilidad potencial para el tratamiento de ls trastornos inflamatorios relacionados con Th2, tales como el asma. Curiosamente, CpdX(eA) y CpdX-D3(eA), pero ni CpdX(eB) ni CpdX-D3(eB), reprimieron de manera eficiente la inflamación pulmonar inducida por HDM, lo que indica que solo CpdX(eA) o CpdX-D3(eA) es el enantiómero activo en el tratamiento del asma.

Ejemplo 7: Una inflamación de Th17 similar a la psoriasis inducida por Aldara se reduce mediante un tratamiento tópico con Dexametasona (Dex), CpdX o CpdX-D3 (véanse las Figuras 14 y 15)

Material y métodos

Las orejas de los ratones Balb/C se trataron tópicamente con Aldara® para inducir una inflamación de la piel similar a la psoriasis (Vinter et al., 2015. Br J Dermatol. 172(2) :345-53). Los ratones fueron tratados durante 9 días con Aldara®, incluido un tratamiento cotópico durante los últimos 5 días con etanol (Vehículo), Dex, CpdX o CpdX-D3.

En D10, los transcritos de ARN se extrajeron de orejas de ratón y se analizaron los transcritos de IL-17a, IL-17c, IL-17f e IL-22 mediante q-RT-PCR. También se recogieron muestras de piel de oreja para análisis histológicos (con tinción con H&E).

Resultados

La inflamación de la piel similar a la psoriasis inducida por Aldara® disminuyó significativamente con el tratamiento con Dex, CpdX o CpdX-D3. Curiosamente, los análisis de transcritos de ARN de extractos de la oreja indicaron que la expresión inducida de las citoquinas IL-17a, IL-17c, IL-17f e IL-22 de Th17, pero no de IL-23, se redujeron de manera similar con un tratamiento con Dex, CpdX o CpdX-D3 (Figura 14 y datos no mostrados).

Los análisis histológicos por tinción con H&E confirmaron estos resultados y mostraron que Dex, CpdX o CpdX-D3 podrían reducir una Inflamación de la piel similar a la psoriasis inducida por Aldara®. (Figura 15).

Conclusión

Estos resultados demuestran que en el ratón, CpdX o CpdX-D3 reprimieron, tan eficientemente como Dex, una inflamación de la piel similar a la psoriasis inducida por Aldara, lo que indica que tanto CpdX como CpdX-D3 son tan eficientes como Dex en el tratamiento de este trastorno inflamatorio de la piel relacionado con Th17.

Ejemplo 8: CpdX, CpdX(eA), CpdX-D3 y CpdX-D3(eA), pero no CpdX(eB), ni CpdX-D3(eB), son tan eficaces como la dexametasona (Dex) para disminuir una inflamación de Th17 por artritis inducida por colágeno (CIA). (véanse las Figuras 16 a 18)

Material y métodos

Los ratones fueron tratados con colágeno para inducir una inflamación similar a la artritis reumatoide de Th17 según lo descrito por Inglis et al., (2007. Arthritis Res Ther. 9(5): R113) y Geboes et al., (2009. Arthritis Rheum. 60(2): 390 5).

A ratones macho (cepa DBA-1) se les inyectaron por vía subcutánea 100 |jg de colágeno por ratón en D0. El grosor de la pata trasera al nivel del tobillo se midió regularmente con un calibrador. Cuando el espesor del tobillo había alcanzado aproximadamente 4 mm (T0, es decir, 30 a 50 días después de la inyección de colágeno en D0), los ratones recibieron una inyección intraperitoneal diaria durante 10 días (T0 a T10) con cualquiera de los vehículos (NaCl al 0,9 %), Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (1 mg/kg de peso corporal diluido en NaCl al 0,9%), y se midió diariamente con un calibrador el espesor de la pata trasera a nivel del tobillo. Se tomaron fotografías de las patas traseras en los días T0 y T10 (antes y después del tratamiento con vehículo, Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB)), con el fin de evaluar el curso de la hinchazón. Los transcritos de ARN se extrajeron de patas traseras completas de ratones tratados con colágeno y no tratados con colágeno en T0 y T10. Los transcritos de IL-1p, IL-6, IL-17a, IL-17f y TNFa se analizaron mediante q-RT-PCR. Resultados

El grosor de la pata trasera mostró un aumento con la inyección de colágeno, mientras que los tratamientos con Dex, CpdX y CpdX-D3 dieron como resultado una rápida disminución de este grosor en 10 días. (Figuras 16 y 17A). Se observó una disminución similar del espesor de la pata trasera en ratones tratados con CpdX(eA) o CpdX-D3(eA), mientras que, en marcado contraste, no se observó dicha disminución con un tratamiento con CpdX(eB) o CpdX-D3(eB). (Figura 17B y datos no mostrados).

En particular, los transcritos de ARN de los genes proinflamatorios que se expresan en las patas traseras de los ratones que desarrollaron una CIA fueron reprimidos de manera similar por un tratamiento con dexametasona, una CpdX, una CpdX(eA), una CpdX-D3 o una CpdX-D3(eA), pero no por un tratamiento con CpdX(eB), ni un tratamiento con CpdX-D3(eB) (Figura 18).

Conclusión

Estos resultados demuestran que tanto CpdX como CpdX-D3, así como sus enantiómeros CpdX(eA), CpdX-D3(eA), pero no sus enantiómeros CpdX(eB) ni CpdX-D3(eB), son tan eficientes como Dex para disminuir una condición inflamatoria de Th17 similar a la artritis reumatoide.

Ejemplo 9: CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB) son tan eficientes como la dexametasona (Dex) para curar una colitis ulcerosa de Th17 inducida por dextrano-sulfato de sodio (DSS) (véanse las Figuras 19 y 20)

Material y métodos

Para investigar la actividad antiinflamatoria de CpdX y CpdX-D3 en una colitis ulcerosa de Th17, se trataron ratones Balb/C con DSS al 3% en agua potable durante 13 días, con o sin administración intraperitoneal de Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (1 mg/kg de peso corporal) en D11, D12 y D13. En D14, se extrajeron transcritos de ARN de colones de ratón. Los transcritos de IL-1p, IL-6, IL-17a, IL-17f, TSLP y MMP13 se analizaron mediante q-RT-PCR. También se recogieron muestras de colon para análisis histológicos (con tinción con H&E).

R e su lta d o s

Los análisis histológicos (secciones de parafina teñidas con H&E) (Figura 19 y datos no mostrados) mostraron daños dramáticos en el colon de los ratones tratados con DSS en comparación con los ratones de control (sin tratamiento con DSS): la estructura normal de las criptas/vellosidades colónicas estaba muy desorganizada o ausente en los ratones tratados con DSS. Además, también se observaron ulceraciones (punta de flecha), así como infiltraciones celulares en las capas mucosas colónicas (flechas continuas) y submucosa (flechas punteadas) del colon. Más particularmente, en ratones tratados durante 3 días con Dex, CpdX, CpdX-D3 o sus dos enantiómeros CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB), la estructura de las vellosidades/criptas colónicas casi se restableció y se redujo significativamente la infiltración celular de la mucosa y la submucosa.

Los análisis transcripcionales mostraron (Figura 20) que los genes proinflamatorios que se sobreexpresaron en la colitis ulcerosa inducida por DSS fueron igualmente reprimidos por Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB).

Conclusión

En conjunto, estos resultados demuestran que CpdX, CpdX-D3 y sus enantiómeros CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB) son tan eficientes como Dex para el tratamiento de un trastorno inflamatorio relacionado con Th17, tal como la colitis ulcerosa.

Ejemplo 10: CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) alivian tan eficientemente como la dexametasona (Dex) una conjuntivitis alérgica inducida por ovoalbúmina (OVA) (véase la Figura 21)

Material y métodos

Para investigar el efecto antiinflamatorio de CpdX o CpdX-D3 en una conjuntivitis alérgica, los ratones Balb/C se sensibilizaron por vía intraperitoneal con 50 |jg de OVA con alumbre en los días D1 y D8, y luego se desafiaron de D15 a D21 con 250 jg de OVA en 5 jL de vehículo esterilizado (NaCl al 0.9%), que se instilaron directamente sobre el saco conjuntival. De D22 a D24, los ratones se dividieron en varios grupos y recibieron instilaciones con OVA solamente, Ov a junto con 0.1 % de cualquiera de Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA ) o CpdX-D3(eB).

La apariencia clínica de los ojos de los ratones se evaluó 20 minutos después de la última instilación en D24. Los signos clínicos (hiperemia conjuntival, edema palpebral y lagrimeo) se puntuaron para evaluar la aparición y la gravedad de la conjuntivitis según lo descrito por Gimenes et al., (2015. Experimental Eye Research 134: 24-32). Los parámetros se clasificaron en una escala de 0 a 3 (0 = ausencia, 1 = leve, 2 = moderado y 3 = síntomas graves), recibiendo cada animal una puntuación clínica total de 0 a 9. Los datos se expresaron como la media ± SEM con al menos cuatro ratones por tratamiento.

Resultados

Veinte minutos después del último desafío con OVA, los ojos de todos los ratones tratados con OVA presentaron signos clínicos evidentes de conjuntivitis alérgica en comparación con los ratones de control (Vehículo) (Figura 21). Estos signos se redujeron considerablemente con el tratamiento con Dex, así como con el tratamiento con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 21).

Conclusión

Estos resultados demuestran que CpdX, CpdX-D3 y sus enantiómeros CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB) reducen, tan eficientemente como Dex, una conjuntivitis alérgica inducida por ovoalbúmina (OVA).

Ejemplo 11: En marcado contraste con la dexametasona (Dex), un tratamiento tópico con cualquiera de CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) no induce atrofia de la epidermis de la piel (véanse las Figuras 22 a 24)

Material y métodos

La atrofia de la piel es una grave limitación a los tratamientos tópicos con glucocorticoides. Schoepe et al., 2006. Exp. Dermatol. 15(6): 406-20).

Para investigar si, de manera similar a Dex, una administración tópica de CpdX podría provocar una atrofia de la piel, se afeitó la piel dorsal de ratones Balb/C. Etanol (Vehículo), Dex, CpdX o cualquiera de sus dos enantiómeros CpdX(eA) o CpdX(eB), así como la forma deuterada CpdX-D3 o cualquiera de sus dos enantiómeros CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB), se aplicaron tópicamente sobre la piel dorsal durante 8 días.

Una vez finalizados los tratamientos, se extrajeron los transcritos de ARN de las muestras de piel dorsal y se analizaron los transcritos de los genes Kindlin-1 y REDD1 mediante q-RT-PCR. También se realizaron análisis histológicos y morfométricos de la piel dorsal.

R e su lta d o s

Se ha informado que una pérdida de la proteína Kindlin-1 da como resultado una atrofia de la piel epidérmica (Ussar et al., 2008. PLoS Genet. 4(12): e1000289), mientras que, en marcado contraste, la pérdida de la proteína Reddl previene una atrofia de la piel inducida por Gc (Britto et al., 2014. Am J Physiol Endocrinol Metab. 307(11): E983-93; Baida et al., 2015. EMBO Mol Med. 7(1): 42-58).

Lo que es más interesante, los análisis transcripcionales de las muestras de piel dorsal indicaron claramente que la transcripción del gen Kindlin-1 (que contiene un nGRE) disminuye considerablemente con un tratamiento tópico con Dex, pero no con un tratamiento con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 22A). Por el contrario, la transcripción del gen REDD1 (que contiene un GRE) aumenta significativamente mediante un tratamiento con Dex, pero no con una CpdX, una CpdX(eA), una CpdX(eB), una CpdX-D3, una CpdX-D3(eA) ni con una CpdX-D3(eB) (Figura 22B).

De acuerdo con los análisis de transcritos de ARN, los análisis morfométricos mostraron que el espesor de la epidermis disminuye en “ 65 % después de un tratamiento con Dex de ocho días. Por el contrario, el espesor de la epidermis no disminuye significativamente con un tratamiento con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 23). Estos datos son totalmente consistentes con el análisis histológico que demuestra que una aplicación de Dex, en marcado contraste con la de CpdX o su forma deuterada CpdX-D3 o cualquiera de sus enantiómeros, induce severamente una atrofia cutánea (Figura 24).

Conclusión

Nuestros resultados claramente demuestran que, en marcado contraste con un tratamiento tópico con Dex, un tratamiento tópico con CpdX, o su forma deuterada CpdX-D3, o cualquiera de sus enantiómeros [CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB)], no da como resultado una atrofia epidérmica de la piel, lo que indica que CpdX y CpdX-D3 se pueden usar de manera segura en tratamientos de la piel.

Ejemplo 12: Un tratamiento de tres meses con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) no afecta la formación ósea cortical ni trabecular, a diferencia de un tratamiento con Dexametasona (Dex) (véanse las Figuras 25 y 26)

Material y métodos

Ratones macho B6 (8 semanas de edad) fueron sometidos diariamente durante tres meses a una inyección subcutánea de vehículo (NaCl al 0,9%), Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX -D3(eA) o CpdX-D3(eB) (1 mg/kg de peso corporal, diluido en NaCl al 0,9%).

De cada animal incluido en los experimentos, se diseccionaron un fémur y la tibia ipsilateral y se conservaron en etanol al 70 % para un análisis posterior de la microestructura ósea mediante micro-CT. Se utilizó el escáner micro-CT FX Quantum (Perkin Elmer) para realizar mediciones en el fémur distal y la parte media de la tibia. Todos los escaneos se realizaron con un tamaño de vóxel isotrópico de 10 pm, corriente de tubo de 160 pA y voltaje de tubo de 90 kV.

Las mediciones morfológicas en 3D se realizaron utilizando el software CTAn (Bruker). Los parámetros del hueso cortical, que se midieron en el eje medio de la tibia, incluyeron medidas de la fracción de volumen óseo en comparación con el volumen total, el espesor cortical, el área total, el área ósea y el área de la médula. La región de interés se seleccionó debajo de la cresta tibial distal y se continuó durante 20 cortes hacia el extremo proximal de la tibia. Los parámetros del hueso trabecular se midieron en la metafisis distal de los fémures e incluyeron la fracción de volumen óseo, el espesor trabecular, el número trabecular y el espaciado trabecular. La región de interés se seleccionó debajo de la placa de crecimiento distal donde la estructura de la tapa epifisaria desapareció por completo y continuó durante 100 cortes hacia el extremo proximal del fémur.

La significancia estadística en comparación con el tratamiento con vehículo se calculó mediante la prueba ANOVA de una vía seguida de la prueba de comparación múltiple de Dunnett, * p<0,05; ** p<0,01; *** p<0,001; **** p<0,0001.

Resultados

La osteoporosis es un efecto secundario indeseable frecuente del tratamiento clínico a largo plazo con glucocorticoides (Canalis, 2003. Curr Opin Rheumatol. 15(4): 454-7). Como era de esperar, después de un tratamiento con Dex de tres meses, se observaron fenotipos similares a la osteoporosis en el hueso cortical de la tibia del ratón: el volumen óseo disminuyó significativamente en comparación con el volumen total (Figura 25A), el espesor cortical se redujo drásticamente (Figura 25B) y también se redujo el área del hueso, pero no el área de la médula (Figuras 25D y E). Sorprendentemente, pero de acuerdo con un informe anterior (Grahnemo et al., 2015. J Endocrinol. 224(1): 97-108), un tratamiento con Dex aumentó el volumen del hueso trabecular del ratón debido a un aumento en el número de trabéculas y una disminución del espacio trabecular, sin cambios en el espesor trabecular (datos no mostrados).

Es importante destacar que, en marcado contraste con el tratamiento con Dex, esta administración de tres meses de CpdX o CpdX-D3, así como cualquiera de sus enantiómeros CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB), no afectó la formación ósea en huesos corticales y trabeculares (Figura 25 y datos no mostrados).

Se ha informado que la expresión del gen WNT16 afecta la densidad mineral ósea, el espesor del hueso cortical, la resistencia ósea y el riesgo de fractura osteoporótica. Zheng et al., 2012. PLoS Genet. Jul; 8(7): e1002745). Los análisis transcripcionales de muestras de tibia de ratón demostraron que la transcripción del gen WNT16 disminuyó en un 50 % con un tratamiento con Dex, pero no con un tratamiento con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 26).

Conclusión

Estos resultados indican que CpdX, CpdX-D3 y cualquiera de sus enantiómeros [CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB)] podrían usarse de manera segura para tratamientos clínicos de enfermedades inflamatorias a diferencia de Dex, no afectan la formación de hueso.

Ejemplo 13: A diferencia de la dexametasona (Dex), un tratamiento a largo plazo con CpdX o CpdX-D3 no induce una pérdida de peso corporal ni un cambio en la composición corporal (véase la Figura 27)

Material y métodos

Ratones macho B6 (8 semanas de edad) fueron sometidos diariamente durante tres meses a una inyección subcutánea de cualquiera de los vehículos (NaCl al 0,9%), Dex, CpdX o CpdX-D3 (1 mg/kg de peso corporal, diluidos en el vehículo). Se utilizó una máquina pDEXA para determinar la masa magra y la masa grasa. La significancia estadística se calculó mediante la prueba de Krustal-Walis seguida de una prueba de comparación múltiple de Dunnett, * p<0,05; ** p<0,01; *** p<0,001.

Resultados

Ratones de 8 semanas de edad que, cuando se trataron durante 3 meses ya sea con vehículo, CpdX o CpdX-D3, mostraron un aumento similar de peso corporal (Figura 27A), así como un aumento proporcional de la masa grasa (Figura 27B) y porcentaje magro (Figura 27C). Por el contrario, los ratones tratados con Dex exhibieron una pérdida neta en el peso corporal total (Figura 27A), junto con un aumento desproporcionado de grasa (Figura 27B) y una disminución de la masa magra (Figura 27C).

Conclusión

Estos resultados indican que una administración a largo plazo de CpdX o CpdX-D3, a diferencia de la de Dex, no produce una pérdida de peso corporal, ni un aumento de la masa grasa ni una disminución de la masa magra.

Ejemplo 14: Tras una administración in vivo, los ratones tratados con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) no muestran los efectos secundarios "tóxicos" indeseables específicos del tejido observados en ratones tratados con dexametasona (Dex) (véase la Figura 28)

Material y métodos

Ratones macho B6 (8 semanas de edad) fueron sometidos diariamente durante tres meses a una inyección subcutánea de vehículo (NaCl al 0,9%), Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (1 mg/kg de peso corporal, diluido en vehículo). Después de estos tratamientos, se recolectaron y pesaron cuatro órganos (timo, bazo, glándula suprarrenal y riñón).

Resultados

Los glucocorticoides son bien conocidos por inducir una drástica apoptosis del timo (Cohen, 1992. Semin Immunol.

4(6): 363-9). En consecuencia, después de un tratamiento de tres meses, no se encontró timo en dieciséis de los diecinueve ratones tratados con Dex. En marcado contraste, un tratamiento con CpdX, su forma deuterada CpdX-D3, o sus enantiómeros CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) no resultó en ninguna apoptosis significativa del timo (Figura 28A).

El peso del bazo se redujo en más del 50 % en los ratones tratados con Dex, mientras que no disminuyó en ratones tratados con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 28B). También se observó selectivamente una pérdida débil, pero significativa, del peso del riñón en ratones tratados con Dex (Figura 28D).

Curiosamente, el peso de la glándula suprarrenal, en la que tiene lugar la síntesis de corticosterona, disminuyó con un tratamiento con Dex, mientras que aumentó con un tratamiento con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 28C).

Conclusión

Tras un tratamiento a largo plazo in vivo, y en marcado contraste con la administración del glucocorticoide sintético Dexametasona, la administración de CpdX o su forma deuterada CpdX-D3, o cualquiera de sus enantiómeros [CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB)], no es tóxica, sobre todo para el timo, el bazo y la glándula suprarrenal.

Ejemplo 15: Una inyección subcutánea diaria a largo plazo de dexametasona (Dex) inhibe la síntesis de corticosterona que, en marcado contraste, aumenta con un tratamiento similar con cualquiera de CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (véanse las Figuras 29 y 30)

Material y métodos

Ratones macho B6 (8 semanas de edad) fueron sometidos diariamente durante tres meses a una inyección subcutánea de vehículo (NaCl al 0,9%), Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (1 mg/kg de peso corporal, diluido en vehículo).

Después de este tratamiento a largo plazo, se extrajo sangre a las 10 am y a las 6 pm mediante punción retroorbital en viales recubiertos con heparina de litio, y se determinó el nivel plasmático de corticosterona. Se recogieron y pesaron las glándulas suprarrenales. Se extrajeron los transcritos de ARN y se analizaron los transcritos de los genes Cyp11a, Cyp11b1, Cyp1lb2 y HSD3p mediante q-RT-PCR. También se realizaron análisis histológicos de las glándulas suprarrenales.

Resultados

La corticosterona se sintetiza en la zona fasciculada de la capa de la corteza de la glándula suprarrenal. Después de un tratamiento de tres meses con Dex, las capas de la corteza (vease la flecha de dos puntas en los paneles de la izquierda), más notablemente la zona fasciculada (vease la flecha de dos puntas en negrita en los paneles de la derecha) de las glándulas suprarrenales se redujeron drásticamente (Figura 29), mientras que aumentaron notablemente con la administración de CpdX o su forma deuterada CpdX-D3, o cualquiera de sus enantiómeros CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 29 y datos no mostrados).

Los análisis transcripcionales de muestras de glándulas suprarrenales de ratón demostraron que los transcritos de los genes Cyp11a, Cyp11b1 y HSD3p, que están involucrados en la vía de síntesis de corticosterona, fueron inhibidos por el tratamiento con Dex, mientras que aumentaron mediante tratamientos con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 30A).

En comparación con los ratones de control (Vehículo), los ratones tratados con Dex exhibieron niveles de corticosterona mucho más bajos tanto a las 10 am como a las 6 pm mientras que, en marcado contraste, los ratones tratados con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB) exhibieron un nivel de corticosterona mucho más alto a las 10 am (Figura 30B).

Curiosamente, los análisis transcripcionales de muestras de glándulas suprarrenales de ratón también mostraron que la transcripción del gen Cyp11b2, que está involucrado en la vía de síntesis de aldosterona, es inhibida por el tratamiento con Dex, pero no por el tratamiento con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 30A). De acuerdo con este resultado, los análisis histológicos revelaron que la zona glomerulosa (la zona más externa de la capa de la corteza, véanse las flechas pequeñas sin relleno de dos puntas en los paneles de la derecha de la Figura 29), que produce aldosterona, se redujo drásticamente con el tratamiento con Dex, pero no con el tratamiento con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 29 y datos no mostrados).

Conclusión

Lo más interesante es que estos datos indican que los efectos antiinflamatorios beneficiosos de CpdX y de su forma deuterada CpdX-D3 [así como cualquiera de sus enantiómeros CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) y CpdX-D3(eB)] que se producen a través de la represión de genes proinflamatorios, son el resultado de (i) la unión directa de CpdX o CpdX-D3 al GR, que activa su función de transrepresión indirecta vinculada, y (ii) una activación adicional de esta función de transrepresión indirecta se debe a un aumento del nivel de corticosterona en sangre inducido por CpdX o CpdX-D3, más notablemente durante el período de descanso.

Ejemplo 16: En marcado contraste con una administración de tres meses de dexametasona (Dex), una administración de tres meses in vivo de cualquiera de CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) no induce hiperglucemia (véase la Figura 31)

Material y métodos

Tras una administración prolongada de glucocorticoides, la hiperglucemia es un efecto secundario indeseable frecuente (Clore y Thurby-Hay, 2009. Endocr Pract. 15(5): 469-74).

Ratones macho B6 (8 semanas de edad) fueron sometidos diariamente durante tres meses a una inyección subcutánea de cualquiera de vehículo (NaCl al 0,9%), Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (1 mg/kg de peso corporal, diluido en vehículo). Los ratones estuvieron en ayunas durante la noche. La concentración de glucosa en sangre del ratón se midió antes (T⁰) y durante dos horas (T¹²⁰) después de la inyección ip de glucosa (2 mg/kg de peso corporal).

R e su lta d o s

Después de un tratamiento de tres meses, el nivel de glucosa en sangre en los ratones tratados con Dex fue significativamente mayor que en los ratones tratados con solución salina (vehículo), CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 31A).

Una prueba de tolerancia intraperitoneal a la glucosa (IPGTT) mostró que, tras la inyección de glucosa, se observó un nivel de glucosa en sangre significativamente mayor durante un período de dos horas en ratones tratados con Dex, mientras que no hubo diferencia significativa entre estos niveles en ratones tratados con control, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 31B).

Conclusión

Estos resultados anteriores indican que, en contraste con Dex, un tratamiento con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) no afecta significativamente el control del nivel de glucosa en sangre.

Ejemplo 17: Una administración in vivo durante tres meses de cualquiera de CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB), a diferencia de la dexametasona (Dex), no induce resistencia a la insulina (véanse las Figuras 31 y 32)

Material y métodos

Es bien sabido que la exposición crónica de los seres humanos a los glucocorticoides (GC) produce resistencia a la insulina en todo el cuerpo (Geer et al., 2014. Endocrinol Metab Clin North Am. 43(1): 75-102).

Ratones macho B6 (8 semanas de edad) fueron sometidos diariamente durante tres meses a una inyección subcutánea de cualquiera de vehículo (NaCl al 0,9%), Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (1 mg/kg de peso corporal, diluido en vehículo). Después de tres meses, la sangre se recogió a las 10 a. m. por punción retroorbital en viales recubiertos con heparina de litio y se determinó el nivel plasmático de insulina.

Para la prueba de tolerancia intraperitoneal a la insulina (IPITT), los ratones se mantuvieron en ayunas durante 6 horas antes de la prueba. La concentración de glucosa en sangre se midió tanto antes (T⁰) como durante un período de una hora después de la inyección ip de insulina (0,75 U/kg de peso corporal).

Después de este tratamiento de tres meses, se recogieron muestras de hígado y se lisaron en tampón RIPA (Tris 20 mM pH 8, NaCl 150 mM, glicerol al 10 %, NP-40 al 1 % y EDTA 2 mM). Se usaron anticuerpos de Cell Signaling para evaluar mediante transferencia Western el nivel relativo de p-IRS1 (S318), IRS-1, p-AKT (S473) y AKT.

Resultados

Después de un tratamiento de tres meses, el nivel de insulina en sangre reveló una hiperinsulinemia en los ratones tratados con Dex, pero no en los ratones tratados con solución salina (Vehículo), CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (Figura 32A). Como se observó una hiperglucemia en ratones tratados con Dex (Figura 31A) y una prueba IPITT reveló una respuesta significativamente alterada a la insulina en estos ratones (Figura 32B), pueden revelar una resistencia a la insulina. De acuerdo con esta sugerencia, los análisis de transferencia Western de extractos de hígado mostraron en ratones tratados con Dex, pero no en ratones tratados con vehículo, CpdX o CpdX-D3, una disminución en el sustrato 1 del receptor de insulina fosforilado (p-IRS1 S318) (Figura 32C). Como era de esperar, la fosforilación de la proteína quinasa B estimulada por insulina (p-AKT S473) también disminuyó en los ratones tratados con Dex (Figura 32^c).

Conclusión

Estos resultados indican que, a diferencia de la Dexametasona, un tratamiento con CpdX, su forma deuterada CpdX-D3, o cualquiera de sus enantiómeros [CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB)], no induce resistencia a la insulina.

Ejemplo 18: En marcado contraste con la dexametasona (Dex), un tratamiento de tres meses in vivo con CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) no induce hígado graso (véanse las Figuras 33 a 35)

Material y métodos

Ratones macho B6 (8 semanas de edad) fueron sometidos diariamente durante tres meses a una inyección subcutánea de cualquiera de vehículo (NaCl al 0,9%), Dex, CpdX, CpdX(eA), CpdX(eB), CpdX-D3, CpdX-D3(eA) o CpdX-D3(eB) (1 mg/kg de peso corporal, diluido en vehículo). Después de este tratamiento, se extrajo sangre a las 10 am, mediante punción retroorbital en viales recubiertos con heparina de litio. Se determinaron los niveles plasmáticos de colesterol total y ácidos biliares.

Se recogieron muestras de hígado. El depósito de lípidos en el hígado se reveló mediante tinción con aceite rojo al 5% de secciones congeladas. Los transcritos de ARN se extrajeron de muestras de hígado y los transcritos de los genes de ácido graso sintasa (FASN) y estearoil-CoA desaturasa 1 (SCD1) se analizaron mediante q-RT-PCR.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende un enantiómero de un modulador agonista de los receptores de glucocorticoides selectivos (SEGRAM) de Fórmula 1:

(Fórmula 1- CpdX)

o una de sus sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables,

en la que el trastorno inflamatorio se selecciona del grupo que comprende dermatitis atópica, dermatitis de contacto, psoriasis, dermatitis solar, eczema, urticaria, vitíligo, eritema nodoso, eritema multiforme, dermatomiositis, esclerodermia, angioedema, liquen plano, venulitis necrosante cutánea, inflamación de la piel por picadura de insecto, rinoconjuntivitis, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), enfermedad de Crohn, colitis, conjuntivitis alérgica y colitis ulcerosa; y

en la que dicho enantiómero del SEGRAM corresponde al segundo pico de elución de una cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) de una mezcla racémica del SEGRAM de Fórmula 1 [CpdX(eB)] o de una mezcla racémica del SEGRAM de Fórmula 1 en su forma deuterada con Fórmula 2 [CpdX-D3(eB)]:

(Fórmula 2 - CpdX-D3)

2. Una composición que comprende un enantiómero de un modulador agonista de los receptores de glucocorticoides selectivos (SEGRAM) de Fórmula 1:

o una de sus sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables,

en la que el trastorno inflamatorio se selecciona del grupo que comprende dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma alérgica, psoriasis, conjuntivitis alérgica, artritis reumatoide, dermatitis solar, eczema, urticaria, vitÍligo, eritema nodoso, eritema multiforme, dermatomiositis, esclerodermia, angioedema, liquen plano, venulitis necrosante cutánea, inflamación de la piel por picadura de insecto, sinusitis alérgica, rinitis alérgica, fiebre del heno, rinoconjuntivitis, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), enfermedad de Crohn, colitis, y colitis ulcerosa; y

en la que dicho enantiómero del SEGRAM corresponde al primer pico de elución de una cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) de una mezcla racémica del SEGRAM de Fórmula 1 en su forma deuterada con Fórmula 2 [CpdX-D3(eA)]:

(Fórmula 2 - CpdX-D3)

3. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en la que dicho enantiómero del SEGRAM no induce o no induce sustancialmente ni una función de transactivación directa, ni una función de transrepresión directa del receptor de glucocorticoides, sino que induce selectivamente la función de transrepresión ligada indirecta del receptor de glucocorticoides.

4. La composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicho enantiómero del SEGRAM no induce o no induce sustancialmente efectos secundarios asociados con fármacos antiinflamatorios esteroideos (SAID) tras la administración a un sujeto que lo necesite.

5. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 4, en la que los efectos secundarios asociados con los SAID se seleccionan del grupo que comprende atrofia de la piel; osteoporosis; supresión del crecimiento; pérdida de peso corporal; ganancia de masa grasa; pérdida de masa magra; apoptosis del timo, bazo, riñón y/o glándula suprarrenal; inhibición de la síntesis de corticosterona; supresión suprarrenal; hiperglucemia; resistencia a la insulina; hiperinsulinemia; síndrome metabólico, diabetes tipo 2; e hígado graso.

6. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el trastorno inflamatorio se selecciona del grupo que consiste en dermatitis atópica, dermatitis de contacto, psoriasis, conjuntivitis alérgica y colitis ulcerosa.

7. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 2, en la que el trastorno inflamatorio se selecciona del grupo que consiste en dermatitis atópica, dermatitis de contacto, asma alérgica, psoriasis, conjuntivitis alérgica, artritis reumatoide y colitis ulcerosa.