ES2561356T3

ES2561356T3 - Derivados de camptotecina con actividad antitumoral

Info

Publication number: ES2561356T3
Application number: ES07786063.3T
Authority: ES
Inventors: Gabriele Fontana; Ezio Bombardelli; Carla Manzotti; Arturo Battaglia; Cristian Samori
Original assignee: Indena SpA
Current assignee: Indena SpA
Priority date: 2006-07-26
Filing date: 2007-07-13
Publication date: 2016-02-25
Anticipated expiration: 2027-07-13
Also published as: ITMI20061473A1; US8217053B2; AU2007278500A1; RU2450008C2; EP2044079B1; PT2044079E; NO341812B1; BRPI0714553B8; JP2009544634A; CN101495486B; DK2044079T3; HUE027890T2; PL2044079T3; KR20090033456A; CN101495486A; RU2009102243A; AU2007278500A2; BRPI0714553A2; IL196653A; MX2009000827A

Abstract

Compuestos de fórmula general I:**Fórmula** en la que: R es F, Cl, Br, I, -N3, NH2, -NR'R", -COOR', -CONR'R", -NHR"'-NR'R" en los que R', R" y R'" pueden ser H, alquilo, arilo, arilalquilo, acilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo; R1 es alquilo, aminoalquilo, hidroxialquilo, nitrilo, -NH-O-alquilo, -NH-O-arilo, sililalquilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, alcoxi, aminoalquilo; R3 es hidrógeno, alcoxi, aminoalquilo, en los que los grupos alquilo, acilo, alcoxi, aminoalquilo o -NH-O-alquilo pueden contener de 1 a 8 átomos de carbono, en una cadena lineal o ramificada, y los grupos arilo y ariloxi pueden contener de 5 a 10 átomos de carbono; las sales farmacéuticamente aceptables, enantiómeros, diastereómeros de los mismos y las mezclas correspondientes.

Description

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DESCRIPCION

Derivados de camptotecina con actividad antitumoral

La presente invencion se refiere a nuevos derivados de camptotecina que tienen actividad antitumoral, a los procedimientos para la preparacion de los mismos, al uso de los mismos como farmacos antitumorales y a composiciones farmaceuticas que los contienen.

Antecedentes de la invencion

La camptotecina es un alcaloide extrafdo de Camptotheca acuminata (Nyssaceae), descrita por primera vez por Wall y Wani en 1966 (J. Am. Chem. Soc. 1966, 88, 3888-3890). La camptotecina, aunque dotada de una actividad antitumoral de amplio espectro, especialmente frente de a tumores de colon y otros tumores solidos y leucemias, no se usa en terapia debido a su alta toxicidad, que se manifiesta particularmente en forma de cistitis hemorragica, toxicidad gastrointestinal y mielosupresion.

Se han sintetizado diversos analogos de camptotecina con el fin de obtener compuestos que tengan baja toxicidad y alta solubilidad. En la actualidad, se usan dos farmacos en la practica clmica, en concreto CPT-11 y topotecan. Otros derivados, tales como belotecan, rubitecan, exatecan, gimatecan, pegamotecan, lurtotecan, karenitecina, afeletecan, homocamptotecina, diflomotecan, y muchos otros, se encuentran en experimentacion clmica. El compuesto CPT-11 es un profarmaco altamente soluble para 10-hidroxi-7-etilcamptotecina (conocido habitualmente como SN-38), aprobado para el tratamiento de numerosos tumores solidos y ascitis (colorrectal, piel, estomago, pulmon, cuello uterino, ovario, linfoma no Hodgkin).

El topotecan es un compuesto soluble en solucion fisiologica, activo contra los tumores de pulmon, estomago, tngado, ovario, mama, prostata, esofago, recto, sarcomas de tejidos blandos, cabeza y cuello, glioblastoma y leucemias mielocfticas cronicas y agudas. Sin embargo, el topotecan muestra importantes efectos secundarios, tales como neutropenia y trombocitopenia.

El lurtotecan es un derivado mas soluble, que tiene actividad en tumores de cuello, ovario, mama, colorrectal y microcitoma pulmonar. Sin embargo, el lurtotecan tambien tiene toxicidad hematica.

El rubitecan es un profarmaco para el uso oral eficaz contra tumores de pancreas, ovario y mama.

La camptotecina y sus analogos, como ocurre con todos los inhibidores de la topoisomerasa I, son eficaces contra tumores resistentes a farmacos convencionales, incluyendo inhibidores de la topoisomerasa II; mantienen altos niveles de topoisomerasa durante el ciclo celular completo; no inducen resistencia multifarmaco (Pgo o MRP) o metabolismo de destoxificacion mediado por la enzima.

En la actualidad, la investigacion se centra en nuevos inhibidores de la topoisomerasa I que tengan menor toxicidad que la de los farmacos usados actualmente.

Los derivados de camptotecina de anillo abierto muestran una alta union a protemas (en particular a albumina) y una baja distribucion en los tejidos tumorales. En consecuencia, el producto se acumula en el cuerpo y los tumores se ven poco afectados.

Por el contrario, la alta lipofilia de la forma de lactona promueve la adhesion de derivados de camptotecina a las membranas celulares, particularmente a eritrocitos, afectando a la relacion de distribucion de tejido/plasma. Por esta razon, la investigacion se esta centrando en dos enfoques alternativos: a) diseno de productos de baja union a protemas que aun tengan una buena solubilidad; b) diseno de productos muy potentes que tengan efecto terapeutico incluso a dosis extremadamente bajas.

Las modificaciones en las posiciones 7, 9, 10 y 11 se han mostrado normalmente bien toleradas sin afectar a la estabilidad del complejo ternario ADN-Topoisomerasa I-camptotecina, cuya formacion es responsable de la actividad antitumoral de los compuestos.

Los productos con la configuracion 20R se han mostrado inactivos o mucho menos activos que los productos con la configuracion 20S - que coincide con la configuracion natural.

Por lo general, las modificaciones en la posicion 5 se consideran desfavorables para la formacion del complejo ternario, mientras que se ha informado que las modificaciones en los anillos de piridona D y E son perjudiciales para la actividad del producto.

El documento de Patente US 5 972 955 desvela derivados de camptotecina que tienen una actividad antitumoral caracterizada por el atomo de oxfgeno del ceto del anillo D.

Divulgacion de la invencion

En un primer aspecto, la invencion se refiere a derivados de camptotecina de formula general I:

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en la que:

R es F, Cl, Br, I, -N3, NH2, -NR'R", -COOR', -CONR'R", -NHR"' -NR'R" en los que R', R" y R'" pueden ser H, alquilo, arilo, arilalquilo, acilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo;

R1 es alquilo, aminoalquilo, hidroxialquilo, nitrilo, -NH-O-alquilo -NH-O-arilo, sililalquilo;

R2 es hidrogeno, hidroxilo, alcoxi, aminoalquilo;

R3 es hidrogeno, alcoxi, aminoalquilo,

en los que los grupos alquilo, acilo, alcoxi, aminoalquilo o -NH-O-alquilo pueden contener de 1 a 8, preferentemente de 1 a 4 atomos de carbono, en una cadena lineal o ramificada, y los grupos arilo y ariloxi pueden contener de 5 a 10 atomos de carbono;

las sales farmaceuticamente aceptables, isomeros, enantiomeros, diastereomeros de los mismos y las mezclas correspondientes.

Los compuestos de la invencion muestran baja union a protemas y tienen buena solubilidad y elevada potencia incluso a dosis muy bajas.

La ruta sintetica preferente para la preparacion de los compuestos de la invencion se ilustra en el Esquema I en el que:

a) proteccion de los grupos hidroxi precursores;

b) conversion del anillo de piridona en un anillo de tiopiridona;

c) retirada de los grupos protectores.

imagen2

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En el Esquema I, R, R1, R2 y R3 tienen los significados descritos anteriormente, y PG es un grupo protector de hidroxi.

Los precursores pueden estar disponibles en el mercado u obtenerse como se describe en la bibliograffa. Para la preparacion de los productos derivatizados en la posicion 5, se puede seguir el enfoque descrito en el Esquema II, que comprende:

a) proteccion de los grupos hidroxi precursores;

b) derivatizacion en 5 mediante la formacion de un carbanion y reaccion con un reactivo electrofilo;

c) transformacion del carbonilo 16a en tiocarbonilo;

d) desproteccion de los grupos hidroxi;

en el que las etapas b) y c) se pueden invertir.

imagen3

En el Esquema II, R, R1, R2 y R3 tienen los significados descritos anteriormente, y PG es un grupo protector de OH.

La formacion del carbanion en la posicion 5 se puede obtener tratando el precursor con una base organica fuerte, preferentemente LiHMDS.

El carbanion se hace reaccionar in situ con un electrofilo, tal como una fuente de halogeno, un azadicarboxilato, isocianato, derivado de clorocarbonilo, tosilazida.

La conversion del anillo de piridona en un anillo de tiopiridona se puede obtener por reaccion con 2,4-bis(4-metoxifenil)-1,2,3,4-ditiafosfetano-2,4-disulfuro (conocido habitualmente como reactivo de Lawesson) (Cava P.M. y col., Tetrahedron 1985, 41,5061; Cherkasov RA y col., Tetrahedron 1985 41,2567; Ghattas AAG y col., Sulfur Lett. 1982, 1,69; Y de B y col., Tetrahedron 1984, 40,2047) o con un reactivo equivalente. Es preferente el reactivo de Lawesson.

Los sililos y carbamatos o una combinacion de los mismos son preferentes como grupos protectores de hidroxi.

Los compuestos de la invencion se sometieron a ensayo en un ensayo de citotoxicidad con una diversidad de celulas tumorales. A modo de ejemplo, se informan los datos de citotoxicidad en la lmea celular NCI-H460 (cancer NSCL) correspondientes a dos compuestos de formula (I), usando camptotecina y los farmacos Topotecan y SN-38 como referencias:

Nombre: Formula CI50 NCI-H460 (pg/ml) Recuento celular

Camptotecina: PM=348^^ C20H16N2O4 0,115 ± 0,0174

Topotecan: I h°WH PM = 421 ho4—P C23H23N305 —J £ 0,63 ± 0,44

SN38: PM =392,42 C22H20N2O5 ° 0,0865 ± 0,0049

IDN 6070 tiocamptotecina: PM = 364 —/ C20H16N2O3S )_|0/ ^ 0,05 ± 0,021

IDN 6092: PM =405,44 HOy—^ C20H15N503S —' 0 0,3 ± 0,07

IDN 6093: PM =405.44 HO-)—df C20H15N5O3S —' Q 0,72 ± 0,2

IDN 6156 Tio-SN38: HO rrxy PM =408.48 HO“)—/ C22H20N2O4S —J q 0,0095 ± 0,0007

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(continuacion)

Nombre: Formula CI50 NCI-H460 (pg/ml) Recuento celular

IDN 6180 Tio-topotecan: 1 rN. HO S I T T/K N^-h> h°4-V PM: 437,52 -------' V, ' C23H23N304S 0,115 ± 0,021

IDN 6181 10-hidroxi-tiocamptotecina: PM = 380,43 HOy ^ C20H16N2O4S -------- Q 0,035 ± 0,011

Los ensayos de citotoxicidad mostraron que los derivados sulfurados de camptotecina son en promedio 10 veces mas potentes que los analogos no sulfurados.

Los compuestos mas activos se evaluaron en un ensayo de escision de ADN que midio la concentracion activa y la persistencia al dano (vease la seccion de "Ejemplos"). Los derivados de formula (I) muestran sorprendentemente mayor persistencia en el bloqueo de la replicacion de ADN que los estandares de referencia (particularmente topotecan y camptotecina), mientras que mantienen una actividad citotoxica eficaz.

Ademas, los derivados sulfurados se mostraron mas activos que los analogos no sulfurados tambien en este caso, ya que indujeron dano en el ADN a menores concentraciones y con mayor persistencia en el tiempo.

El compuesto tio-SN38 (IDN6156) se transformo en tio-CPT11 (tio-Irinotecan) de acuerdo con procedimientos para la conversion de SN38 en CPT11 (Irinotecan) informados en la bibliograffa. El compuesto tio-irinotecan resultante se comparo in vivo con analogos no sulfurados similares en uso clmico (CPT11) en un modelo de tumor de pulmon altamente sensible a las referencias estandar.

Los datos informados en la siguiente tabla muestran que el compuesto sulfurado tio-CPT11 es mas potente que el analogo no sulfurado CPT11, mientras que mantiene el mismo nivel de eficacia con mejor tolerarabilidad e mdice terapeutico.

Farmacoa: Dosis (mg/kg/iny.) TWI%b LCKc (0,5 g) Maxd BWL% Tox/Tote

CPT 11: 50 91 1,8 15 0/5

Tio-CPT11: 10 94 2,3 9 0/5

En un aspecto adicional, la invencion se refiere a composiciones farmaceuticas que contienen un compuesto de formula (I) junto con vetnculos y excipientes farmaceuticamente aceptables. Las formas farmaceuticas adecuadas para la administracion oral o parenteral de los compuestos (I) pueden ser solidas, preferentemente capsulas, comprimidos y granulos, o lfquidas, preferentemente soluciones inyectables o de infusion.

Los compuestos de la invencion formulados adecuadamente se pueden usar para el tratamiento de tumores solidos y leucemias, en particular tumores de pulmon, ovario, mama, estomago, tngado, prostata, sarcomas de tejidos blandos, cabeza y cuello, esofago, pancreas, colon, recto, glioblastoma, y leucemias mielocfticas cronicas y agudas.

Ejemplos

EJEMPLO I - 20-OTES-camptotecina

Se suspende camptotecina (0,100 g, 0,287 mmol) en dimetilformamida anhidra (3 ml), en atmosfera inerte, y a la suspension resultante se anade imidazol (0,980 g, 1,44 mmol). La mezcla se agita durante 10 minutos, y posteriormente se anade gota a gota a la misma cloruro de trietilsililo (TES-Cl) (0,193 ml, 1,15 mmol), seguido de la adicion de 4-dimetilamino piridina (DMAP) (0,040 g 0,287 mmol). Despues de 46 h, la mezcla de reaccion se evapora

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al vado, (control por TLC de la desaparicion completa del reactivo, eluyente CH2Cl2/MeOH = 30/1). El solido se redisuelve posteriormente en CH2Cl2 y se lava con H2O y NH4Cl saturado. La fase acuosa se extrae con CH2O2 (2 x 10 ml). Las fases organicas se combinan y se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vado, obteniendo de este modo el producto deseado (0,133 g, 0,287 mmol) en forma de un solido de color amarillo palido.

RMN 1H (CDCla, 400 MHz) 6 8,37 (s, 1H, Ar, H-7), 8,25 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,92 (d, 1 H, J = 8,0 Hz, Ar), 7,82 (t, 1 H, J = 8,0 Hz, Ar), 7,65 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,57 (s, 1 H, H-14), 5,67 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,29 (s, 2H, H-5), 5,25 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 2,00-1,84 (m, 2H, H-19), 1,03-0,93 (m, 12 H), 0,80-0,71 (m, 6 H). RMN 13C (CDCla, 100 MHz) 6 171,7, 157,6, 152,5, 151,5, 149,0, 145,9, 130,9, 130,4, 130,0, 128,4, 128,1, 128,0, 127,9, 118,9, 94,4,

75,3, 66,0, 50,0, 33,2, 7,9, 7,2, 6,4.

EJEMPLO II - 20-OTES-Tio-camptotecina

Se disuelve 20-OTES camptotecina (0,664 g, 1,44 mmol) en xileno anhidro (20 ml) con agitacion en atmosfera inerte. Posteriormente se anade reactivo de Lawesson (LR), (0,523 g, 1,29 mmol) y la reaccion se calienta a 90 °C. La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 18 h a 90 °C, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 1/1). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SO2, Hexano/AcOEt = 4/1 y a continuacion 7/2), obteniendo de este modo el producto deseado (0,578 g, 1,21 mmol, 84 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 8,46 (s, 1 H, Ar, H-7) 8,29 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 8,03 (s, 1H, H-14), 7,97 (d, 1H, J =

8.4 Hz, Ar), 7,86 (t, 1H, J = 21,8 Hz, Ar), 7,69 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 6,15 (d, 1 H, J = 16,9 Hz, H-17), 5,62 (d, 1 H, J =

21.0 Hz, H-5), 5,57 (d, 1 H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,34 (d, 1 H, J = 16,9 Hz, H-17), 1,94 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-19), 1,90 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-19), 1,05-0,91 (m, 12 H), 0,82-0,71 (m, 6 H). RMN 13C (CDCls, 100 MHz) 6 172,3, 171,5, 151,9,

149,1, 148,3, 147,2, 130,8, 130,6, 130,6, 130,1, 128,3, 128,2, 128,2, 128,0. 104,5, 75,0. 68,8, 56,3, 33,5, 7,7, 7,2, 6,4.

EJEMPLO III - Preparacion de Tio-camptotecina (IDN 6070)

Se disuelve 20-OTES Tio-camptotecina (0,150 g, 0,314 mmol) en THF anhidro (10 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y se anade gota a gota a la misma posteriormente EtsN^3HF (0,140 ml, 0,816 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 48 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 1/1). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 2/1 y a continuacion 1/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,112 g, 0,307 mmol, 98 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (CDCls, 400 MHz) 6 8,46 (s, 1H, Ar, H-7), 8,27 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 8,13 (s, 1H, H-14), 7,97 (d, 1H, J =

8.4 Hz, Ar), 7,86 (t, 1H, J = 21,8 Hz, Ar), 7,70 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 6,25 (d, 1H, J = 16,9 Hz, H-17), 5,62 (d, 1 H, J =

21.0 Hz, H-5), 5,58 (d, 1 H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,37 (d, 1 H, J = 16,9 Hz, H-17), 3,80 (s, 1 H, OH), 1,90 (c, 2H, H- 19),

1,03 (t, 3 H, J = 7,2 Hz, Me). RMN 13C (CDCls, 100 MHz) 6 173,5, 172,6, 151,8, 149,1, 148,7, 145,5, 130,9, 130,8,

130,5, 129,9, 128,3 (2 C), 128,2, 128,0, 104,3, 72,3, 69,2, 56,3, 32,0, 7,8.

EJEMPLO IV - 20-OTES SN-38

Se suspende SN-38 (0,100 g, 0,255 mmol) en dimetilformamida anhidra (5 ml), en atmosfera inerte y a la suspension resultante se anade imidazol (0,087 g, 1,28 mmol). La mezcla se agita durante 10 minutos, posteriormente se anade gota a gota a la misma cloruro de trietilsililo (TES-Cl), (0,171 ml, 1,02 mmol), seguido de la adicion de 4-dimetilamino piridina (DMAP) (0,031 g, 0,255 mmol). Despues de 52 h, la mezcla de reaccion se evapora al vado, monitorizando por TLC (CH2Cl2/MeOH = 10/1) la desaparicion completa del reactivo. El solido se redisuelve posteriormente en CH2Cl2 y se lava con H2O y NH4Cl saturado. La fase acuosa se extrae con CH2Cl2 (2 x 10 ml). Las fases organicas se combinan y se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vado, obteniendo de este modo el producto deseado (0,121 g, 0,240 mmol, 94 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

RMN 1H (CDCls, 400 MHz) 6 9,26 (s a, 1 H, OH), 8,14 (d, 1 H, J = 9,2 Hz, Ar, H-12), 7,58 (s, 1 H, H-14), 7,49 (dd, 1H, Ji = 9,2 Hz J2 = 2,2 Hz, H-11), 7,46 (d, 1H, J = 2,2 Hz, H-9), 5,70 (d, 1 H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,28 (d, 1 H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,23 (s, 2H, H-5), 3,05 (c, 2H, J = 7,5 Hz), 1,97-1,81 (m, 2H, H-19), 1,32 (t, 3 H, J = 7,5 Hz, Me), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,77-0,68 (m, 6 H). RMN 13C (CDCls, 100 MHz) 6 172,1, 157,9, 156,6, 152,1, 149,0, 146,7, 144,6, 143,6, 131,9,

128,7, 126,9, 122,8, 117,9, 105,5, 98,5, 75,4, 65,9, 49,5, 32,9, 23,2, 13,5, 7,8, 7,2, 6,4.

EJEMPLO V - 10-OTBDMS-20-OTES SN-38

Se disuelve 20-OTES SN-38 (0,121 g, 0,240 mmol) en una mezcla anhidra de CH2O2/THF = 1:1 (8 ml) en atmosfera inerte. Se anade a esta imidazol (0,081 g, 1,20 mmol) seguido, despues de 10 minutos, de cloruro de terc-butildimetilsililo (TBDMS-Cl), (0,144 mg, 0,957 mmol), y a continuacion de 4-dimetilamino piridina (DMAP), (0,029 g 0,240 mmol). Despues de 18 h, la mezcla de reaccion se evapora al vado, monitorizando por TLC (Hexano/AcOEt = 1/1) la desaparicion del reactivo. El solido se redisuelve posteriormente en CH2Cl2 y se lava con H2O y NH4Cl saturado. La fase acuosa se extrae con CH2O2 (2 x 10 ml) y las fases organicas se combinan, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vado. El residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,127 g, 0,205 mmol, 85 %) en forma de un solido de color

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amarillo palido.

RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) 6 8,14 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,49 (s, 1 H, H-14), 7,40 (d, 1 H, J = 2,2 Hz, H-9), 7,38 (dd, 1 H, Ji = 8,8 Hz J2 = 2,5 Hz, H-11), 5,67 (d, 1 H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,25 (d, 1 H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,23 (s, 2H, H-5), 3,11 (c, 2H, J = 7,6 Hz), 1,99-1,82 (m, 2H, H-19), 1,38 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me), 1,04 (s, 9 H), 1,00-0,92 (m, 12 H), 0,78-0,69 (m, 6 H), 0,30 (s, 6 H). RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) 6 171,9, 157,7, 155,1, 151,5, 150,1, 146,8, 145,6, 143,5,

132,2, 128,2, 126,9, 125,9, 118,0, 110,5, 97,7, 75,4, 66,0, 49,3, 33,2, 25,6, 23,1, 18,3, 13,7, 7,9, 7,2, 6,4, -4,3.

EJEMPLO VI - 10-OTBDMS 20-OTES TioSN-38

Se disuelve SN-38 10-OTBDMS 20-OTES (0,127 g, 0,205 mmol) en xileno anhidro (6 ml) con agitacion en atmosfera inerte. Posteriormente se anade reactivo de Lawesson (LR), (0,075 g, 0,184 mmol) y la reaccion se calienta a 90 °C. La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 23 h a 90 °C, monitorizando por TLC (Hexano/AcOEt = 2/1) la desaparicion del reactivo. El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 5/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,042 g, 0,066 mmol, 32 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 8,17 (d, 1H, J = 8,9 Hz, Ar, H-12), 7,96 (s, 1 H, H-14), 7,43 (d, 1 H, J = 2,6 Hz, H-9), 7,41 (dd, 1 H, Ji = 8,8 Hz J2 = 2,6 Hz, H-11), 6,16 (d, 1H, J = 17,1 Hz, H-17), 5,56 (d, 1H, J = 20,0 Hz, H-5), 5,50 (d, 1H, J =

20,0 Hz, H-5), 5,33 (d, 1 H, J = 16,5 Hz, H-17), 3,18 (c, 2H, J = 7,6 Hz), 1,91 (c, 2H, J = 7,4 Hz, H-19), 1,41 (t, 3 H, J =

7,6 Hz, Me), 1,05 (s, 9 H), 1,03-0,92 (m, 12 H), 0,81-0,72 (m, 6 H), 0,31 (s, 6 H). RMN 13C (CDCla, 100 MHz) 6 172,1,

171,5, 155,4, 149,4, 149,3, 147,4, 145,7, 143,6, 132,4, 129,9, 128,5, 126,5, 126,2, 110,5, 104,1, 75,0, 68,8, 55,8, 33,5,

25,7, 23,2, 18,4, 13,9, 7,8, 7,2, 6,5, -4,3.

EJEMPLO VII - 20-OTES TioSN-38

Se disuelve 10-OTBDMS 20-OTES TioSN-38 (0,042 g, 0,066 mmol) en THF anhidro (4 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma EtaN^3HF (0,013 ml, 0,080 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 3h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 2/1). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 2/1 y a continuacion 1/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,034 g, 0,065 mmol, 99 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 8,19 (d, 1 H, J = 9,2 Hz, Ar, H-12), 7,96 (s, 1 H, H-14), 7,44 (dd, 1 H, Ji = 8,8 Hz J2 =

2.6 Hz, H-11), 7,43 (d, 1 H, J = 2,6 Hz, H-9), 6,16 (d, 1H, J = 17,1 Hz, H-17), 6,02 (s a, 1H, OH), 5,55 (d, 1H, J =

19,7 Hz, H-5), 5,49 (d, 1 H, J = 19,7 Hz, H-5), 5,33 (d, 1 H, J = 16,9 Hz, H-17), 3,16 (c, 2H, J = 7,8 Hz), 1,91 (c, 2H, J =

7.6 Hz, H-19), 1,39 (t, 3 H, J = 7,9 Hz, Me), 1,03-0,92 (m, 12 H), 0,81-0,72 (m, 6 H). RMN 13C (CDCla, 100 MHz) 6

172.0, 171,7, 155,6, 149,1, 149,0, 147,3, 145,2, 143,7, 132,5, 130,0, 128,7, 126,7, 122,4, 105,5, 104,2, 75,1, 68,9,

55,8, 33,5, 23,1, 13,7, 7,7, 7,2, 6,4.

EJEMPLO VIII - TioSN-38 (IDN 6156)

Se disuelve 20-OTES TioSN-38 (0,034 g, 0,065 mmol) en THF anhidro (4 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma EtaN^3HF (0,025 ml, 0,150 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 40 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 1/1). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/3), obteniendo de este modo el producto deseado (0,026 g, 0,064 mmol, 98 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (THF-da, 400 MHz) 6 9,23 (s a, 1 H, OH), 8,06 (d, 1 H, J = 9,2 Hz, Ar, H-12), 7,88 (s, 1 H, H-14), 7,41 (d, 1 H, J = 2,8 Hz, H-9), 7,38 (dd, 1 H, Ji = 9,2 Hz J2 = 2,8 Hz, H-11), 6,08 (d, 1H, J = 17,2 Hz, H-17), 5,67 (s a, 1H, OH), 5,50 (s, 2H, H-5), 5,33 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 3,22 (c, 2H, J = 7,8 Hz), 1,90 (c, 2H, J = 7,6 Hz, H-19), 1,42 (t, 3 H, J =

7.6 Hz, Me), 0,97 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (THF-da, 100 MHz) 6 173,0, 172,1, 157,5, 149,6, 149,2, 146,1,

145.0, 142,6, 132,3, 130,1, 128,9, 127,6, 122,3, 104,9, 102,3, 72,3, 68,5, 55,8, 31,7, 22,7, 13,1, 7,3.

EJEMPLO IX - 20-OTES Topotecan

Se suspende topotecan (0,100 g, 0,238 mmol) en dimetilformamida anhidra (5 ml), en atmosfera inerte y a la suspension resultante se anade imidazol (0,081 g, 1,19 mmol). La mezcla se agita durante 10 minutos, y posteriormente se anade gota a gota a la misma cloruro de trietilsililo (TES-Cl), (0,160 ml, 0,952 mmol), seguido de la adicion de 4-dimetilaminopiridina, (DMAP), (0,029 g 0,238 mmol). Despues de 52 h, la mezcla de reaccion se evapora al vado, monitorizando por TLC (CH2Ch/MeOH = 10/1) la desaparicion completa del reactivo. El solido se redisuelve posteriormente en CHCh y H2O y NH4O saturado, y la fase acuosa se extrae con CHCh (2 x 15 ml). Las fases organicas se combinan y se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vado, obteniendo de este modo el producto deseado (0,120 g, 0,224 mmol, 94 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

RMN 1H (CDCla, 400 MHz) 6 9,65 (s a, 1 H), 8,26 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,14 (d, 1 H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,80 (d, 1 H, J =

8,8 Hz, Ar, H-11), 7,58 (s, 1 H, H-14), 5,67 (d, 1 H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,25 (d, 1 H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,20 (s, 2H, H-5),

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

4,71 (s, 2 H), 2,81 (s, 6H, 2 Me), 1,97-1,81 (m, 2H, H-19), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,77-0,68 (m, 6 H). RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) 6 172,1, 157,9, 156,6, 152,1, 150,8, 146,8, 144,3, 134,3, 131,2 129,9, 127,9, 123,0, 118,9, 110,1, 98,5, 75,4,

65,9, 51,1, 50,0, 43,1, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

EJEMPLO X - 10-OTBDMS 20-OTES Topotecan

Se disuelve 20-OTES topotecan (0,120 g, 0,224 mmol) en una mezcla anhidra de CH2CI2/THF = 1:1 (8 ml) en atmosfera inerte. Se anade imidazol (0,076 g, 1,12 mmol) seguido, despues de 10 minutos, de cloruro de terc-butildimetilsililo (TBDMS-Cl), (0,135 mg, 0,896 mmol), y a continuacion de 4-dimetilamino piridina (DMAP), (0,027 g 0,224 mmol). Despues de 21 h, la mezcla de reaccion se evapora al vado, monitorizando por TLC (Hexano/AcOEt = 1/1) la desaparicion del reactivo. El solido se redisuelve posteriormente en CHCh y H2O y NH4O saturado, y la fase acuosa se extrae con CHCh (2 x 15 ml). Las fases organicas se combinan y se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vado. El residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SO2, Hexano/AcOEt = 1/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,116 g, 0,179 mmol, 80 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

RMN 1H (CDCla, 400 MHz) 6 8,26 (s, 1H, Ar, H-7), 8,14 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,81 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-11), 7,59 (s, 1H, H-14), 5,64 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,22 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,19 (s, 2H, H-5), 4,71 (s, 2 H), 2,81 (s, 6H, 2 Me), 1,97-1,81 (m, 2H, H-19), 1,04 (s, 9 H), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,77-0,68 (m, 6 H), 0,30 (s, 6 H). RMN 13C (CDCla, 100 MHz) 6 171,7, 157,7, 155,1, 151,5, 150,0, 146,8, 144,3, 134,3, 131,2 129,9, 127,9, 123,0, 118,9, 110,1,

98,5, 75,4, 65,9, 51,1, 50,0, 43,9, 32,9, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

EJEMPLO XI - 10-OTBDMS 20-OTES Tio-Topotecan

Se disuelve 10-OTBDMS 20-OTES Topotecan (0,116 g, 0,179 mmol) en xileno anhidro (6 ml) con agitacion, en atmosfera inerte. Posteriormente se anade reactivo de Lawesson (LR), (0,065 g, 0,161 mmol) y la reaccion se calienta a 90 °C. La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 23 h a 90 °C, monitorizando por TLC (Hexano/AcOEt = 2/1) la desaparicion del reactivo. El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 5/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,047 g, 0,072 mmol, 40 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (CDCls, 400 MHz) 6 8,35 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,17 (d, 1 H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,96 (s, 1H, H-14), 7,85 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-11), 6,16 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,52 (d, 1 H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,48 (d, 1 H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 4,73 (s, 2 H), 2,81 (s, 6H, 2 Me), 1,92 (c, 2H, J = 7,6 Hz, H-19), 1,04 (s, 9 H), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,77-0,68 (m, 6 H), 0,30 (s, 6 H). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2,

144.3, 134,3, 132,1 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 75,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

EJEMPLO XII - 20-OTES Tio-Topotecan

Se disuelve 10-OTBDMS 20-OTES Tio-Topotecan (0,047 g, 0,072 mmol) en THF anhidro (4 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma EtsN^3HF (0,014 ml, 0,086 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 4 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 2/1). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 2/1 y a continuacion 1/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,039 g, 0,071 mmol, 99 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (CDCls, 400 MHz) 6 8,36 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,17 (d, 1 H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,96 (s, 1H, H-14), 7,85 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-11), 6,16 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 6,02 (s a, 1 H, OH), 5,52 (d, 1 H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,48 (d, 1 H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 4,73 (s, 2 H), 2,81 (s, 6H, 2 Me), 1,92 (c, 2H, J = 7,2 Hz, H- 19), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,77-0,68 (m, 6 H). RMN 13C (CDCls, 100 MHz) 6 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2, 144,3,

134.3, 132,1 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 75,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

EJEMPLO XIII - Tio-Topotecan (IDN 6180)

Se disuelve 10-OH 20-OTES Tio-Topotecan (0,039 g, 0,071 mmol) en THF anhidro (4 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma EtsN^3HF (0,026 ml, 0,163 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 40 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 1/2). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/3), obteniendo de este modo el producto deseado (0,030 g, 0,069 mmol, 98 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (CDCls, 400 MHz) 6 8,36 (s, 1H, Ar, H-7), 8,17 (d, 1 H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,96 (s, 1H, H-14), 7,85 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar, H-11), 6,16 (d, 1H, J = 16,5 Hz, H-17), 6,02 (s a, 1 H, OH), 5,52 (d, 1 H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,48 (d, 1 H, J = 21,0 Hz, H-5), 5,33 (d, 1 H, J = 16,5 Hz, H-17), 4,73 (s, 2 H), 3,84 (s a, 1 H, OH), 2,81 (s, 6H, 2 Me), 1,92 (c, 2H, J = 7,6, Hz H-19), 1,03 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (CDCls, 100 MHz) 6 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2,

144.3, 134,3, 132,1, 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 72,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 7,8.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

EJEMPLO XIV - Preparacion de 20-OTES 10-hidroxicamptotecina

Se suspende 10-Hidroxicamptotecina (0,100 g, 0,275 mmol) en dimetilformamida anhidra (5 ml), en atmosfera inerte y a la suspension resultante se anade imidazol (0,225 g, 3,31 mmol). La mezcla se agita durante 10 minutes, y posteriormente se anade gota a gota a la misma cloruro de trietilsililo (TES-Cl), (0,460 ml, 2,75 mmol), seguido de la adicion de 4-dimetilamino piridina (DMAP) (0,068 g, 0,550 mmol). Despues de 24 h la mezcla de reaccion se evapora al vacte, monitorizando por TLC la desaparicion completa del reactivo (CH2Cl2/MeOH = 20/1). El solido se redisuelve posteriormente en CH2Cl2 y se lava con H2O y NH4Cl saturado. La fase acuosa se extrae con CH2O2 (2 x 10 ml). Las fases organicas se combinan, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vacte, obteniendo de este modo el producto deseado (0,124 g, 0,259 mmol, 94 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

RMN 1H (CDCla + 5 % de CD3OD, 400 MHz) 6 8,10 (s, 1H, Ar, H-7), 8,05 (d, 1H, J = 9,2 Hz, Ar), 7,50 (s, 1 H, H-14), 7,39 (dd, 1 H, Ji = 9,2 Hz J2 = 2,4 Hz, H-11), 7,11 (d, 1H, J = 2,2 Hz, H-9), 5,60 (d, 1 H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,21 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,15 (s, 2H, H-5), 1,97-1,81 (m, 2H, H-19), 0,98-0,88 (m, 12 H), 0,76-0,68 (m, 6 H). RMN 13C (CDCls + 5% de CD3OD, 100 MHz) 6 172,2, 157,8, 156,7, 151,8, 149,2, 146,1, 144,1, 130,9, 129,8, 129,0, 128,6, 123,2,

117,8, 108,8, 98,1, 75,4, 65,8, 50,0, 32,9, 7,7, 7,1, 6,3.

EJEMPLO XV - 10-OTBDMS-20-OTES Camptotecina

Se disuelve 10-Hidroxi-20-OTES-Camptotecina (0,105 g, 0,219 mmol) en una mezcla anhidra de CH2Cl2/THF = 1:1 (4 ml) y en atmosfera inerte. Se anade imidazol (0,097 g, 1,42 mmol) seguido, despues de 10 minutos, de cloruro de terc-butildimetilsililo (TBDMS-Cl), (0,164 mg, 1,10 mmol), y a continuacion de 4-dimetilamino piridina (DMAP) (0,040 g, 0,329 mmol). Despues de 18 h, la mezcla de reaccion se evapora al vacte, monitorizando por TLC la desaparicion completa del reactivo (Ciclohexano/AcOEt = 1/3). El solido se redisuelve posteriormente en CH2Cl2 y se lava con H2O y NH4Cl saturado, y la fase acuosa se extrae con CH2Cl2 (2 x 10 ml). Las fases organicas se combinan, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vacte. El residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SO2, Ciclohexano/AcOEt = 1/3), obteniendo de este modo el producto deseado (0,117 g, 0,197 mmol, 90 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

RMN 1H (CDCla, 400 MHz) 6 8,22 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,13 (d, 1 H, J = 9,2 Hz, Ar, H-12), 7,51 (s, 1H, H-14), 7,39 (dd, 1H, Ji = 9,2 Hz J2 = 2,8 Hz, H-11), 7,22 (d, 1 H, J = 2,8 Hz, H-9), 5,66 (d, 1 H, J = 16,5 Hz, H-17), 5,25 (s, 2H, H-5), 5,24 (d, 1 H, J = 16,5 Hz, H-17), 1,99-1,82 (m, 2H, H-19), 1,03 (s, 9 H), 1,00-0,92 (m, 12 H), 0,78-0,69 (m, 6 H), 0,29 (s, 6 H). RMN 13C (CDCls, 100 MHz) 6 172,0, 157,7, 155,1, 151,5, 150,6, 146,1, 145,1, 131,4, 129,4, 129,3, 128,7, 126,7, 118,3,

114,5, 97,7, 75,3, 66,0, 49,9, 33,1, 25,6, 18,3, 7,9, 7,2, 6,4, -4,3.

EJEMPLO XVI - 10-OTBDMS-20-OTES Tio-Camptotecina

Se disuelve 10-OTBDMS 20-OTES Camptotecina (0,350 g, 0,589 mmol) en xileno anhidro (10 ml) con agitacion en atmosfera inerte. Posteriormente se anade reactivo de Lawesson (LR), (0,590 g, 1,47 mmol) y la reaccion se calienta a 90 °C. La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 18 h a 95 °C, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Ciclohexano/AcOEt = 1/1). El disolvente se retira por evaporacion al vacte y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Ciclohexano/AcOEt = 4/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,323 g, 0,530 mmol, 90 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (CDCls, 400 MHz) 6 8,28 (s, 1H, Ar, H-7), 8,16 (d, 1 H, J = 8,8 Hz, Ar, H-12), 7,97 (s, 1H, H-14), 7,40 (dd, 1H, Ji = 9,2 Hz J2 = 2,8 Hz, H-11), 7,26 (d, 1H, J = 2,8 Hz, H-9), 6,15 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,58 (d, 1 H, J = 20,0 Hz, H-5), 5,53 (d, 1H, J = 20,0 Hz, H-5), 5,33 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 1,91 (c, 2H, J = 7,4 Hz, H-19), 1,04 (s, 9 H), 1,02-0,92 (m, 12 H), 0,82-0,72 (m, 6 H), 0,30 (s, 6 H). RMN 13C (CDCls, 100 MHz) 6 172,1, 171,5, 155,5, 149,8, 148,6,

147,3, 145,3, 131,5, 130,1, 129,8, 129,1, 128,3, 127,0, 114,5, 104,0, 75,0, 68,8, 56,3, 33,5, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

EJEMPLO XVII - Preparacion de 10-hidroxi-Tio-Camptotecina (IDN 6181)

Se disuelve 10-OTBDMS 20-OTES Tio-camptotecina (0,320 g, 0,524 mmol) en THF anhidro (8 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma EtaN^3HF (0,670 ml, 4,19 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 20 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (CH2Cl2/MeOH = 25/1). El disolvente se retira por evaporacion al vacte y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, CH2Ch/MeOH = 25/1 y a continuacion 20/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,189 g, 0,498 mmol, 95 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (THF-da, 400 MHz) 6 9,20 (s a, 1 H, OH), 8,37 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,05 (d, 1 H, J = 9,2 Hz, Ar, H-12), 7,89 (s, 1 H, H-14), 7,39 (dd, 1 H, Ji = 9,2 Hz J2 = 2,8 Hz, H-11), 7,22 (d, 1 H, J = 2,8 Hz, H-9), 6,07 (d, 1H, J = 17,2 Hz, H-17), 5,70 (s a, 1 H, OH), 5,47 (s, 2H, H-5), 5,33 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 1,89 (c, 2H, J = 7,6 Hz, H-19), 0,97 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (THF-da, 100 MHz) 6 173,0, 172,1, 157,4, 149,7, 149,0, 146,1, 144,5, 131,3, 130,5, 130,2, 129,7, 128,6,

123,0, 108,9, 102,3, 72,3, 68,5, 56,5, 31,7, 7,3.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

EJEMPLO XVIII -Clorhidrato de Tio-topotecan (IDN 6180)

Se disuelve 10-Hidroxi-Tio-Camptotecina (0,150 g, 0,421 mmol) en una mezcla de CH2CI2 anhidro (3,5 ml) y n-propanol (1,8 ml) con agitacion en atmosfera inerte. Posteriormente, se anade gota a gota a la misma bis(dimetilamino)metano (0,092 g, 0,905 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 4 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (CH2Cl2/MeOH = 25/1). Despues de aproximadamente 5 h, se anade una mezcla de 0,125 g de HCl concentrado en 1 ml de n-propanol y la mezcla se hace reaccionar durante otras 16 h. El producto se filtra y se lava repetidamente con CH2O2 y Et2O, obteniendo de este modo el producto deseado (0,168 g, 0,370 mmol, 88 %) en forma de un solido de color rojo-naranja.

RMN 1H (DMSO-da, 400 MHz) 6 11,51 (s a, 1H, OH), 9,78 (s a, 1H, OH), 9,06 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,21 (d, 1 H, J = 8,8 Hz, Ar), 7,76 (s, 1 H, H-14), 7,72 (d, 1 H, J = 8,8 Hz, Ar), 5,91 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,50 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,49 (s, 2H, H-5), 4,73 (s, 1 H, CH2NMe2), 4,72 (s, 1 H, CH2NMe2), 2,83 (s, 3 H, Me), 2,82 (s, 3 H, Me), 1,87 (c, 2H, J =

7,6 Hz, H-19), 0,85 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (DMSO-d6, 100 MHz) 6 172,7, 172,1, 158,8, 149,6, 148,8, 147,0,

144,2, 133,7, 130,6, 130,6, 129,9, 127,5, 123,2, 109,1, 103,6, 72,8, 68,6, 57,4, 51,1,43,1, 31,2, 8,3.

EJEMPLO XIX - 5-F-20-OTES-Camptotecina

Se disuelve 20-OTES Camptotecina (0,100 g, 0,216 mmol) en THF anhidro (6 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y a continuacion se enfna a una temperatura de -78 °C y se anade gota a gota a la misma una solucion 1,0 M de LiHMDS en THF (0,260 ml, 0,260 mmol). Despues de 20', se anade NFSI (0,089 g, 0,281 mmol) en THF anhidro (2 ml). Despues de 2 h a -78 °C, se deja que la temperatura alcance 25 °C y la desaparicion del reactivo se monitoriza por TLC (Hexano/AcOEt = 1/2). Se observa la formacion de los dos diastereomeros. Despues de 3 h a temperatura ambiente, la reaccion se interrumpe mediante la adicion de NH4Cl saturado. La fase acuosa se extrae con CH2Cl2 (3 x 15 ml) y las fases organicas se combinan, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vado. El residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 3/1, a continuacion 2/1 y finalmente 1/1), obteniendo de este modo una mezcla de los dos isomeros (0,101 g, 0,210 mmol, 97 %,) (relacion de isomeros 1:1) en forma de un solido de color amarillo palido. Los dos isomeros se separan mediante cromatograffa adicional. En orden de elucion:

1er diastereomero: RMN 1H (CDCla, 400 MHz) 6 8,52 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,25 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,96 (d, 1 H, J =

8.4 Hz, Ar), 7,87 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,69 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,47 (d, 1 H, 1Jhf = 61,2 Hz, H-5), 7,45 (s, 1 H, H-14), 5,62 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,22 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 2,02-1,84 (m, 2H, H-19), 1,03-0,93 (m, 12 H), 0,80-0,71 (m, 6 H). RMN 13C (CDCla, 100 MHz) 6 171,4, 157,5, 152,3, 151,1, 150,2 (d, J = 1,5 Hz), 150,3 (d, J =

1.5 Hz), 143,6 (d, J = 5,3 Hz), 133,7, 131,7, 130,2, 128,9, 128,4, 127,9 (d, J = 15,0 Hz), 126,3 (d, J = 15,0 Hz),

121,8, 98,9, 93,8 (d, 1Jcf = 213,2 Hz, C-5), 75,1, 65,7, 33,1, 7,8, 7,2, 6,4.

2° diastereomero: RMN 1H (CDCh, 400 MHz) 6 8,51 (s, 1H, Ar, H-7), 8,25 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,96 (d, 1 H, J =

8,4 Hz, Ar), 7,87 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,68 (t, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,51 (d, 1H, 1Jhf = 60,8 Hz, H-5), 7,42 (s, 1H, H-14), 5,62 (d, 1 H, J = 17,2 Hz, H-17), 5,20 (d, 1H, J = 17,2 Hz, H-17), 2,02-1,82 (m, 2H, H-19), 1,04-0,93 (m, 12 H), 0,80-0,71 (m, 6 H). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 171,2, 157,8, 152,5, 151,2, 150,3, 143,7, 133,7 (d, J = 2,4 Hz), 131,7, 130,2, 128,9, 128,3, 127,9 (d, J = 2,3 Hz), 126,3 (d, J = 16,7 Hz), 121,8 (d, J = 1,5 Hz), 99,0, 93,8 (d, 1Jcf =

214,8 Hz, C-5), 75,0, 65,8, 33,3, 7,9, 7,1, 6,4.

EJEMPLO XX- Preparacion del 1er diastereomero de 5-F-20-OH-camptotecina

Se disuelve el primer diastereomero de 5-F-20-OTES-camptotecina (0,025 g, 0,052 mmol) en THF anhidro (5 ml) con agitacion en atmosfera inerte. Posteriormente se anade gota a gota a la misma Et3^3HF (0,060 ml, 0,368 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 28 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 1/2). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se cromatograffa (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,019 g, 0,051 mmol, 98 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

RMN 1H (CDCh, 400 MHz) 6 8,52 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,25 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,96 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,87 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,69 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,59 (s, 1 H, H-14), 7,46 (d, 1 H, 1Jhf = 61,2 Hz, H-5), 5,69 (d, 1 H, J =

16,8 Hz, H-17), 5,26 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 3,87 (s a, 1 H, OH), 2,01-1,81 (m, 2H, H-19), 1,05 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 173,5, 157,6, 151,1, 151,0, 150,2, 144,1, 133,9, 131,9, 130,0, 129,0, 128,5, 127,8,

126,4, 121,7, 98,8, 93,8 (d, 1Jcf = 214,0 Hz, C-5), 72,5, 66,0, 31,5, 7,8.

EJEMPLO XXI - Preparacion del 2o diastereomero de 5-F-20-OH-camptotecina

Se disuelve el segundo diastereomero de 5-F-20-OTES-camptotecina (0,025 g, 0,052 mmol) en THF anhidro (5 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y se anade gota a gota a la misma posteriormente Et3^3HF (0,060 ml, 0,368 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 28 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 1/2). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se cromatograffa (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,018 g, 0,050 mmol, 97 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 8,52 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,24 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,96 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,88 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,69 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,56 (s, 1H, H-14), 7,51 (d, 1H, 1Jhf = 60,4 Hz, H-5), 5,69 (d, 1H, J =

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

16,4 Hz, H-17), 5,25 (d, 1 H, J = 16,4 Hz, H-17), 3,87 (s a, 1 H, OH), 1,98-1,78 (m, 2H, H-19), 1,04 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 173,3, 157,7, 151,2, 151,2, 150,2, 144,2, 133,8, 131,9, 130,0, 129,0, 128,5, 127,8,

126.4, 121,6, 98,9, 93,7 (d, 1Jcf = 214,0 Hz, C-5), 72,5, 66,1, 31,6, 7,8.

EJEMPLO XXII - Preparacion de 5-N3-20-OTES-camptotecina

Se disuelve 20-OTES Camptotecina (0,100 g, 0,216 mmol) en THF anhidro (6 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y a continuacion se enfna a una temperatura de -78 °C y se anade gota a gota a la misma una solucion 1,0 M de LiHMDS en THF (0,260 ml, 0,260 mmol). Despues de 20 min, se anade tosilazida (TsN3) (0,055 g, 0,281 mmol) en THF anhidro (2 ml). Despues de 2 h a -78 °C, se deja que la temperatura alcance 25 °C y la desaparicion del reactivo se monitoriza por TLC (Hexano/AcOEt = 2/1). Se observa la formacion de los dos diastereomeros. Despues de 2h 30 min a temperatura ambiente, la reaccion se interrumpe mediante la adicion de NH4Cl saturado. La fase acuosa se extrae con CH2Cl2 (3 x 15 ml) y las fases organicas se combinan, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vado. El residuo, que consiste en los dos diastereomeros, se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 3/1, a continuacion 2/1 y finalmente 1/1), obteniendo de este modo (0,106 g, 0,210 mmol, 97 %) de una mezcla de los dos isomeros (relacion de los isomeros 1:1) en forma de un solido de color amarillo palido. Los dos isomeros se separan mediante cromatograffa adicional. En orden de elucion:

1er diastereomero: RMN 1H (CDCla, 400 MHz) 6 8,45 (s, 1H, Ar, H-7), 8,25 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,95 (d, 1 H, J =

8.4 Hz, Ar), 7,86 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,68 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,49 (s, 1 H, H-14), 6,97 (s, 1 H, H-5), 5,65 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,26 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 2,01-1,84 (m, 2H, H-19), 1,03-0,94 (m, 12 H), 0,80-0,71 (m, 6 H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) 6 171,6, 158,3, 152,2, 150,8, 150,0, 144,0, 132,9, 131,4, 130,1, 128,6, 128,3,

128.2, 128,1, 120,8, 98,7, 75,4, 75,2, 65,7, 33,1, 7,9, 7,2, 6,4.

2° diastereomero: RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 8,45 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,24 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,95 (d, 1 H, J =

8.4 Hz, Ar), 7,86 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,68 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,46 (s, 1 H, H-14), 6,99 (s, 1 H, H-5), 5,66 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,22 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 2,02-1,84 (m, 2H, H-19), 1,03-0,94 (m, 12 H), 0,80-0,71 (m, 6 H). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) 6 171,4, 158,4, 152,3, 150,9, 150,0, 144,0, 132,9, 131,4, 130,1, 128,6, 128,3,

128.2, 128,1, 120,8, 98,7, 75,3, 75,1, 65,8, 33,3, 7,9, 7,2, 6,4.

EJEMPLO XXIII - Preparacion del 1er diastereomero de 5-N3-20-OH-camptotecina

Se disuelve el diastereomero 1 de 5-N3-20-OTES-camptotecina (0,070 g, 0,139 mmol) en THF anhidro (6 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma Et3N^3HF (0,170 ml, 1,016 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 26 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt =1/1). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,053 g, 0,136 mmol, 98 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 8,44 (s, 1H, Ar, H-7), 8,24 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,93 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,85 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,67 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,63 (s, 1H, H-14), 6,97 (s, 1H, H-5), 5,70 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,29 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 3,99 (s a, 1 H, OH), 2,00-1,84 (m, 2H, H-19), 1,04 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) 6 173,6, 158,3, 150,8, 150,7, 149,8, 144,4, 133,1, 131,5, 129,9, 128,6, 128,3, 128,3, 128,1, 120,6, 98,6,

75.4, 72,7, 66,0, 31,5, 7,8.

EJEMPLO XXIV - Preparacion del 2o diastereomero de 5-N3-camptotecina

Se disuelve el diastereomero 2 de 5-N3-20-OTES-camptotecina (0,055 g, 0,109 mmol) en THF anhidro (6 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma Et3N^3HF (0,135 ml, 0,820 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 26 h a temperatura ambiente, monitorizando la desaparicion del reactivo de partida por TLC (Hexano/AcOEt = 1/1). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,042 g, 0,107 mmol, 98 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

RMN 1H (CDCla, 400 MHz) 6 8,45 (s, 1 H, Ar, H-7), 8,23 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,95 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,85 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,68 (t, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,60 (s, 1H, H-14), 7,00 (s, 1H, H-5), 5,74 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,28 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17), 3,86 (s a, 1 H, OH), 1,98-1,82 (m, 2H, H-19), 1,04 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 173,4, 158,4, 150,9, 150,7, 149,8, 144,5, 133,0, 131,5, 129,9, 128,6, 128,4, 128,3, 128,1, 120,6, 98,6, 75,3, 72,6, 66,1, 31,6, 7,8.

EJEMPLO XXV - Preparacion de 5-NH2-camptotecina

Se disuelve el diastereomero 2 de 5-N3-20-OH-camptotecina (0,050 g, 0,129 mmol) en una mezcla de THF anhidro (1,5 ml) y MeOH anhidro (6 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade Pd/C (14 mg ~ 10 %) y se realizan dos ciclos de vado/H2 (presion de globo de H2). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 3 h a temperatura ambiente monitorizando por TLC (Hexano/AcOEt = 1/3) la desaparicion del reactivo, y a continuacion se filtra a traves de Celite y se lava con CH2O2 (2 x 15 ml). El disolvente se retira por evaporacion al vado. La espectroscopfa por RMN 1H de la reaccion en bruto revela la presencia del producto deseado en forma de una mezcla 1:1 de dos epfmeros en la posicion C5. La cromatograffa ultrarrapida (SiO2, CH2Ch/MeOH - 35/1 y a continuacion 25/1)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

permite recuperar la mezcla de los dos diastereomeros (0,046 g, 0,126 mmol, 98 %).

RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 8,48 (s, 1H, Ar, H-7), 8,22-8,17 (m, 1H, Ar), 7,95-7,90 (m, 1 H, Ar), 7,85-7,78 (m, 1 H, Ar), 7,68-7,60 (m, 1 H, Ar), 7,58 (s, 0,5 H, H-14), 7,54 (s, 0,5 H, H-14) 6,50 (s, 0,5 H, H-5), 6,47 (s, 0,5 H, H-5), 5,74-5,64 (m, 1H, H-17), 5,28-5,22 (m, 1H, H-17), 4,00-2,40 (s a, 3 H, OH + NH2), 1,98-1,82 (m, 2H, H-19), 1,07-1,01 (m, 3 H, Me). RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) 6 173,8 (2 C), 158,5 (2 C), 151,2 (2 C), 150,4 (2 C), 149,7 (2 C), 144,5 (2 C), 132,7 (2 C), 131,0 (2 C), 129,8 (2 C), 128,5 (2 C), 128,3 (2 C), 128,0 (2 C), 127,8 (2 C), 120,2 (2 C), 113,8 (2 C), 97,7 (2 C), 72,7 (2 C), 66,3, 66,0, 31,5 (2 C), 7,8, 7,8.

EJEMPLO XXVI - 5-di-t-Butoxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina

Se disuelve 20-OTES Camptotecina (0,100 g, 0,216 mmol) en THF anhidro (6 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y a continuacion se enfffa a una temperatura de -78 °C y se anade gota a gota a la misma una solucion 1,0 M de LiHMDS en THF (0,281 ml, 0,281 mmol). Despues de 20', se anade azodicarboxilato de di-terc-butilo (DTBAC) (0,075 g, 0,324 mmol) en THF anhidro (2 ml). Despues de 4 h a -78 °C, la desaparicion del reactivo se monitoriza por TLC (Hexano/AcOEt = 3/1). Se observa la formacion de los dos diastereomeros. La reaccion se interrumpe mediante la adicion de NH4Cl saturado. La fase acuosa se extrae con CH2Cl2 (3 x 15 ml) y las fases organicas se combinan, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vado. El residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 3/1), obteniendo de este modo una mezcla de los dos isomeros (0,145 g, 0,210 mmol, 97 %). Los dos isomeros se separan mediante cromatograffa adicional. En orden de elucion:

1er diastereomero: RMN 1H (CDCla, 400 MHz) 6 8,80 (s a, 1 H, Ar), 8,23 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 8,01 (d a, 1 H, Ar), 7,90-7,71 (m, 2H, Ar), 7,70-7,45 (m, 2H, Ar + H-14), 6,52 (s a, 1H, H-5), 5,61 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,23 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 2,03-1,81 (m, 2H, H-19), 1,79-1,08 (s a, 18 H), 1,06-0,92 (m, 12 H), 0,80-0,70 (m, 6 H). RMN 13C (CDCla, 100 MHz) 6 171,7, 157,8, 155,5, 155,5, 152,0, 152,0, 151,2, 149,4, 145,0, 132,1, 130,6, 130,0, 128,7,

128,4, 127,9, 119,9, 98,2, 82,7, 81,5, 79,7, 75,2, 65,7, 33,2, 28,3, 27,6, 7,7, 7,2, 6,4.

2o diastereomero: RMN 1H (CDCh, 400 MHz) 6 8,79 (s a,1 H, Ar), 8,23 (d, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 8,01 (d a, 1 H, Ar), 7,85-7,76 (m, 2H, Ar), 7,65 (t a, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,52 (s, 1H, H-14), 6,54 (s a, 1H, H-5), 5,61 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,22 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 2,03-1,82 (m, 2H, H-19), 1,76-1,08 (s a, 18 H), 1,04-0,92 (m, 12 H), 0,80-0,70 (m, 6 H). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 171,5, 157,9, 155,5, 155,5, 152,3, 152,0, 151,2, 149,4, 145,1, 132,1, 130,6,

130,0, 128,7, 128,4, 127,9, 119,9, 98,2, 82,9, 81,5, 79,6, 75,2, 65,8, 33,3, 28,3, 27,4, 7,8, 7,2, 6,4.

EJEMPLO XXVII - Preparacion del 1er diastereomero de 5-di-t-butoxicarbonilhidrazino-20-OH-camptotecina

Se disuelve el primer diastereomero de 5-di-t-Butoxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0,050 g, 0,072 mmol) en THF anhidro (4 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma Et3^3HF (0,088 ml, 0,542 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 35 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 3/2). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 3/2), obteniendo de este modo el compuesto deseado (0,041 g, 0,071 mmol, 98 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

El producto se purifica adicionalmente por cristalizacion en CH2Ch/Pentano = 1/50.

RMN 1H (CDCh, 400 MHz) 6 8,77 (s a, 1 H, Ar), 8,16 (d a, 1 H, J = 8,0 Hz, Ar), 7,97 (s a, 1 H, Ar), 7,86-7,50 (m, 4 H, Ar), 6,51 (s a, 1 H, H-5), 5,66 (d, 1 H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,24 (d, 1 H, J = 16,4 Hz, H-17), 3,86 (s a, 1 H, OH), 2,00-1,80 (m, 2H, H-19), 1,79-1,13 (s a, 18 H), 1,03 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 173,7, 157,9, 155,5, 155,5,

152.1, 151,3, 150,7, 149,6, 145,7, 132,3, 130,7, 129,9, 128,7, 127,9, 127,6, 120,0, 97,9, 82,8, 81,6, 79,7, 72,7, 66,1,

31.8, 28,3, 27,7, 7,7.

EJEMPLO XXVIII- Preparacion del 2o diastereomero de 5-di-t-butoxicarbonilhidrazino-20-OH-camptotecina

Se disuelve el 2° diastereomero de 5-di-t-Butoxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0,050 g, 0,072 mmol) en THF anhidro (4,5 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y se anade gota a gota a la misma posteriormente Et3^3HF (0,088 ml, 0,542 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 35 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 3/2). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 3/2), obteniendo de este modo el compuesto deseado (0,040 g, 0,069 mmol, 96 %) en forma de un solido de color amarillo palido.

El producto se purifica adicionalmente por cristalizacion en CH2Cl2/Pentano = 1/50.

RMN 1H (CDCh, 400 MHz) 6 8,79 (s a, 1 H, Ar), 8,22 (d a, 1 H, J = 8,4 Hz, Ar), 7,99 (s a, 1 H, Ar), 7,88-7,50 (m, 4 H, Ar), 6,53 (s a, 1 H, H-5), 5,65 (d, 1 H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,26 (d, 1 H, J = 16,4 Hz, H-17), 3,80 (s a, 1 H, OH), 2,00-1,80 (m, 2H, H-19), 1,79-1,13 (s a, 18 H), 1,03 (t, 3 H, J = 7,2 Hz, Me). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 173,6, 157,9, 155,4, 155,4,

152.1, 151,3, 150,8, 149,5, 145,6, 132,3, 130,8, 129,8, 128,7, 127,9, 127,8, 119,8, 98,0, 83,0, 81,5, 79,7, 72,7, 66,3,

31.8, 28,3, 27,7, 7,8.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

EJEMPLO XXIX - Preparacion de 5-dibenciloxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina

Se disuelve Camptotecina 20-OTES (0,100 g, 0,216 mmol) en THF anhidro (6 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y a continuacion se enfna a una temperatura de -78 °C y se anade gota a gota a la misma una solucion 1,0 M de LiHMDS en THF (0,281 ml, 0,281 mmol). Despues de 20', se anade azodicarboxilato de dibencilo (0,097 g, 0,324 mmol) en THF anhidro (2 ml). Despues de 3 h a -78 °C, se deja que la temperatura alcance 25 °C y la desaparicion del reactivo se monitoriza por TLC (Hexano/AcOEt = 3/1). Se observa la formacion de los dos diastereomeros. Despues de 90 min a temperatura ambiente, la reaccion se interrumpe mediante la adicion de NH4Cl saturado. La fase acuosa se extrae con CH2Cl2 (3 x 15 ml) y las fases organicas se combinan, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran al vado. El residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 4/1 y a continuacion 7/2), obteniendo de este modo un solido de color amarillo palido (0,161 g, 0,212 mmol, 98 %). Los dos isomeros se separan mediante cromatograffa adicional. En orden de elucion:

1er diastereomero: RMN 1H (CDCh, 400 MHz) 6 8,70 (s a, 1H, Ar), 8,39 (s a, 1 H, Ar), 8,22 (d a, 1H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,95 (d a, 1 H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,83 (t a, 1 H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,65 (t a, 1 H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,64-7,00 (m, 11 H, Ar + H-14), 6,49 (s a, 1H, H-5), 5,57 (d, 1 H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,47-4,44 (m, 5 H), 1,98-1,82 (m, 2H, H-19), 1,02-0,89 (m, 12 H), 0,80-0,70 (m, 6 H). RMN 13C (CDCla, 100 MHz) 6 171,6, 158,0, 156,3, 156,3, 153,0, 152,2, 151,0, 149,6,

144.8, 135,3, 132,1, 130,6, 130,0, 128,6-127,8 (11 C), 119,9, 98,4, 79,5, 75,2, 68,4, 67,9, 65,6, 33,0, 7,9, 7,2, 6,4. 2o diastereomero: RMN 1H (CDCh, 400 MHz) 6 8,85 (s a, 1 H, Ar), 8,58 (s a, 1 H, Ar), 8,20 (s a, 1H, Ar), 7,93 (s a, Ar), 7,81 (t a, 1 H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,63 (t a, 1 H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,56-6,90 (m, 11 H, Ar + H-14), 6,52 (s a, 1 H, H-5), 5,55 (d, 1H, J = 16,8 Hz, H-17), 5,44-4,71 (m, 5 H), 1,98-1,80 (m, 2H, H-19), 1,05-0,90 (m, 12 H), 0,81-0,70 (m, 6 H). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 171,5, 157,9, 156,4, 156,4, 152,9, 152,4, 150,9, 149,4, 144,8, 135,3, 132,1, 130,6,

129.9, 128,6-127,8 (11 C), 119,9, 98,5, 79,3, 75,2, 68,4, 67,8, 65,6, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

EJEMPLO XXX - Preparacion del 1er diastereomero de 5-dibenciloxicarbonilhidrazino-20-OH-camptotecina

Se disuelve el 1er diastereomero de 5-dibenciloxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0,140 g, 0,184 mmol) en THF anhidro (6 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma Et3^3HF (0,225 ml, 1,380 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 52 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 1/3). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt =1/1 y a continuacion 2/3), obteniendo de este modo (0,113 g, 0,175 mmol, 95 %) en forma de un solido de color amarillo palido. El producto se purifica adicionalmente por cristalizacion en CH2Ch/Pentano = 1/50.

RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 8,67 (s a, 1 H, Ar), 8,39 (s a, 1 H, Ar), 8,12 (d a, 1 H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,95 (s a, 1 H, Ar), 7,74 (t a, 1 H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,65-6,66 (m, 12H, Ar + H-14), 6,48 (s a, 1H, H-5), 5,55 (d, 1H, J = 16,0 Hz, H-17), 5,42-4,44 (m, 5 H), 3,86 (s a, 1 H, OH), 1,92-1,72 (m, 2H, H-19), 0,95 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 173,5, 158,0, 156,2, 156,0, 153,0, 150,9, 150,9, 149,5, 145,3, 135,4, 132,2, 130,7, 129,8, 128,7-127,8 (11 C), 119,9, 98,2, 79,6, 72,7, 68,5, 68,0, 165,9, 31,6, 7,8.

EJEMPLO XXXI - Preparacion del 2o diastereomero de 5-dibenciloxicarbonilhidrazino-20-OH-camptotecina

Se disuelve el 2° diastereomero de 5-dibenciloxicarbonilhidrazino-20-OTES-camptotecina (0,140 g, 0,184 mmol) se disuelve en THF anhidro (6 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma Et3^3HF (0,150 ml, 0,921 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 55 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC la desaparicion del reactivo (Hexano/AcOEt = 3/2). El disolvente se retira por evaporacion al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), obteniendo de este modo el compuesto deseado (0,113 g, 0,175 mmol, 95 %) en forma de un solido de color amarillo palido. El producto se purifica adicionalmente por cristalizacion en CH2Cl2/Pentano = 1/50.

RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 8,71 (s a, 1H, Ar), 8,34 (s a, 1H, Ar), 8,18 (s a, 1 H, Ar), 7,94 (s a, 1H, Ar), 7,79 (t a, 1 H, J = 7,6 Hz, Ar), 7,70-6,70 (m, 12H, Ar + H-14), 6,52 (s a, 1H, H-5), 5,53 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17), 5,44-4,48 (m, 5 H), 3,87 (s a, 1H, OH), 1,90-1,70 (m, 2H, H-19), 0,99 (t, 3 H, J = 7,6 Hz, Me). RMN 13C (CDCh, 100 MHz) 6 173,4, 158,0,

156,3, 156,1, 153,0, 151,0, 150,9, 149,6, 145,3, 135,5, 132,3, 130,8, 129,8, 128,7, 127,8 (11 C), 119,8, 98,4, 79,5, 72,7, 68,5, 67,8, 66,0, 31,6, 7,7.

EJEMPLO XXXII - Preparacion de 20-OTES-Gimatecan

Se disuelve gimatecan (0,040 g, 0,089 mmol) en dimetilformamida anhidra (4 ml), en atmosfera inerte, y se anade imidazol (0,030 g, 0,445 mmol). La mezcla se agita durante 10 minutos, y posteriormente se anade gota a gota a la misma cloruro de trietilsililo (TES-Cl) (0,060 ml, 0,358 mmol), seguido de 4-dimetilaminopiridina (DMAP) (0,01 1 g 0,089 mmol). Despues de 75 h, la mezcla de reaccion se evapora al vado, monitorizando por TLC (Hexano/AcOEt = 1/1) la desaparicion completa del reactivo. El solido se redisuelve posteriormente en CH2Chy H2O y NH4Cl saturado, y la fase acuosa se extrae con CH2Cl2 (3 x 10 ml). El residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 1/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,048 g, 0,085 mmol, 95 %) en forma de un solido de color amarillo. (Mezcla E/Z = 70/30).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) 6 9,02 (s, 1 H, CH=NEJ 8,29 (d, 1 H, J = 8,42 Hz, Ar, H-12E + H-12Z), 8,23 (d, 1H, J =

7.6 Hz, H-9E), 8,00 (s, 1H, CH=N Z), 7,99 (d, 1 H, J = 7,6 Hz, H-9Z), 7,83 (t, 1 H, J = 7,4 Hz, H-11E + H-11Z), 7,68 (t, 1

H, J = 7,4 Hz, H-10E + H-10Z), 7,57 (s, 1H, H-14E + H-14Z), 5,67 (d, 1H, J = 16,4 Hz, H-17E + H-17Z), 5,43 (s, 2H, H-5E), 5,26 (d, 1 H, J = 16,4 Hz, H-17E), 5,25 (d, 1 H, J = 16,4 Hz, H-17Z), 5,20 (s, 2H, H-5Z), 2,00-1,84 (m, 2H, H-19E+ H-19Z), 1,50 (s, 9 H, O*BuE), 1,35 (s, 9 H, O*BUZ), 1,02-0,94 (m, 12H, E + Z), 0,80-0,70 (m, 6H, E + Z). RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) 6 171,9 (E + Z, C-21), 157,5 (E + Z, C-16a), 152,5 (E), 152,3 (Z), 151,3 (E + Z), 149,7 (E), 149,0 (Z), 145,7 (E + Z), 142,2 (CH=N E), 139,4 (CH=N Z), 132,9 (E), 132,1 (Z), 130,9 (E, CH, Ar), 130,6 (Z, CH, Ar), 130,3 (Z, CH; Ar), 130,1 (E, CH, Ar), 128,1 (E + Z, CH, Ar), 125,6 (Z), 125,4 (E), 124,7 (Z, CH, Ar), 122,8 (E, CH, Ar), 119,1 (Z),

118,9 (E), 98,3 (Z, C-14), 98,1 (E, C-14), 81,4 (E, OC(CH3)3), 81,2 (Z, OC(CH3)3), 75,3 (E + Z, C-20), 66,0 (E + Z, C-17),

52.7 (E, C-5), 51,2 (Z, C-5), 33,3 (E, C-19), 33,2 (Z, C-19), 27,6 (OC(CH3)3 E), 27,5 (OC(CH3)3 Z), 7,9 (E + Z C-18), 7,2 (E + Z), 6,4 (E + Z).

EJEMPLO XXXIII - Preparacion de 20-OTES-Tio-Gimatecan

Se disuelve 20-OTES Gimatecan (0,080 g, 0,143 mmol) en xileno anhidro (6 ml) con agitacion y atmosfera inerte. Posteriormente se anade reactivo de Lawesson (LR), (0,087 g, 0,214 mmol), y la reaccion se calienta a 90 °C. La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 18 h a 90 °C, monitorizando por TLC (Hexano/AcOEt = 3/1) la desaparicion del reactivo. El disolvente se evapora al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SO2, Hexano/AcOEt = 4/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,060 g, 0,102 mmol, 71 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 9,06 (s, l H, CH=NE) 8,33 (d, 1H, J = 8,4 Hz, Ar, H-12E), 8,27 (d, 1 H, J = 7,6 Hz, H-9E), 8,02 (s, l H, H-14 E), 7,87 (t, 1 H, J = 7,4 Hz, H-11E), 7,73 (t, 1H, J = 7,4 Hz, H-10E), 7,57 (s, 1H, H-14E + H-14Z), 6,18 (d, 1H, J = 17,2 Hz, H-17E), 5,73 (s, 2H, H-5E), 5,35 (d, 1 H, J = 17,2 Hz, H-17E), 1,93 (c, 2H, J = 7,2 Hz, H-19E), 1,55 (s, 9 H, O*BUE), 1,06-0,92 (m, 12H, E), 0,82-0,72 (m, 6H, E). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) 6 172,4, 171,5, 151,8, 149,8, 148,0, 146,9, 141,9, 132,3, 131,0, 130,7, 130,3, 128,4, 125,6, 125,1, 122,9, 104,3, 81,8, 75,0, 68,9, 59,2, 33,6, 27,6, 7,8, 7,2, 6,5.

EJEMPLO XXXIV - Preparacion de Tio-Gimatecan

Se disuelve 20-OTES Tio-Gimatecan (0,060 g, 0,104 mmol) en THF anhidro (8 ml) con agitacion en atmosfera inerte, y posteriormente se anade gota a gota a la misma Et3N^3HF (0,127 ml, 0,780 mmol). La mezcla de reaccion se hace reaccionar durante 18 h a temperatura ambiente, monitorizando por TLC (CH2Ch/MeOH = 25/1) la desaparicion del reactivo. El disolvente se evapora al vado y el residuo se purifica por cromatograffa ultrarrapida (SiO2, Hexano/AcOEt = 2/1), obteniendo de este modo el producto deseado (0,048 g, 0,102 mmol, 95 %) en forma de un solido de color amarillo intenso.

RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) 6 9,02 (s, 1H, CH=N E) 8,28 (d, 1H, J = 8,42 Hz, Ar, H-12E + H-12Z), 8,23 (d, 1H, J =

7.6 Hz, H-9E), 8,09 (s a, 1H, H-14E + H-14Z), 8,08 (s, 1 H, CH=NZ), 8,04 (d, 1 H, J = 7,6 Hz, H-9Z), 7,85 (t, 1 H, J =

7,4 Hz, H-11E + H-11Z), 7,70 (t, 1H, J = 7,4 Hz, H-10E + H-10Z), 6,26 (d, 1 H, J = 16,8 Hz, H-17E), 6,24 (d, 1H, J =

16.8 Hz, H-17Z), 5,67 (s, 2H, H-5E), 5,51 (s, 2H, H-5Z), 5,37 (d, 1 H, J = 16,4 Hz, H-17E + H-17Z), 3,87 (s a, 1 H, OH),

I, 89 (c, 2H, H-19E + H-19Z), 1,55 (s, 9H, O*BuZ), 1,42 (s, 9H, O*Bu Z), 1,03 (t, 3 H, J = 7,2 Hz, H-18 Z), 1,02 (t, 3 H, J = 7,2 Hz, H-18 E). RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) 6 173,5, 172,5, 151,7, 149,7, 148,4, 145,2, 141,9 (CH=N E), 139,0 (CH=N Z), 132,3, 130,8, 130,6, 130,5, 128,5, 125,5, 125,0, 122,9, 104,0, 81,8, 72,3, 69,3, 59,2, 32,1, 27,6, 7,7.

EJEMPLO XXXV - Ensayo de inhibicion de crecimiento celular

Se cultivaron celulas H460 de tumor de pulmon macrodtico humano en medio RPMI-1640 que contema un 10 % de suero de ternera fetal. Se determino la sensibilidad celular mediante el ensayo de inhibicion de crecimiento despues de 1 o 72 h de exposicion de farmaco. Se recogieron las celulas en crecimiento logafftmico y se sembraron por duplicado en placas de 6 pocillos. Veinticuatro horas despues de la siembra, las celulas se expusieron a los farmacos y se contaron con un contador Coulter 72 horas despues de la exposicion a los farmacos para la determinacion de los valores de CI50. El valor de CI50 se define como la concentracion que inhibe en un 50 % el crecimiento celular en comparacion con el crecimiento de los controles sin tratar.

EJEMPLO XXXVI - Ensayo de ruptura de ADN dependiente de topoisomerasa-I

Se determinaron las rupturas de ADN usando un gel purificado BamHI-EcoRI DNA SV40 de 751 pb (Beretta GL, Binaschi M, Zagni y, Capuani L, Capranico G. Tethering a type IB topoisomerase to a DNA site by enzyme fusion to a heterologous site-selective DNA-binding protein domain. Cancer Res 1999; 59:3689-97). Los fragmentos de ADN se marcaron unicamente en 3'. La reaccion de ruptura de ADN (20.000 cpm/muestra) se realizo en 20 ml de Tris-HCl 10 mM (pH 7,6), KCI 150 mM, MgCh 5 mM, 15 pg/ml de BSA, tiotreitol 0,1 mM, y la enzima humana recombinante (longitud completa top1) durante 30 min a 37 °C. Las reacciones se bloquearon usando un 0,5 % de SDS y 0,3 mg/ml de proteinasa K durante 45 min a 42 °C. Se sometio a ensayo la persistencia del dano de ADN a diferentes tiempos anadiendo NaCl 0,6 M despues de incubacion de 30 min con farmaco 10 pM. Despues de precipitacion, se resuspendio el ADN en tampon de desnaturalizacion (formamida al 80 %, NaOH 10 mM, EDTA 0,01 M y 1 mg/ml de colorante) antes de la siembra en gel de desnaturalizacion (poliacrilamida al 7 % en tampon TBE). Se midieron todos los niveles de ruptura de ADN por medio de un equipo Phospholmager modelo 425 (Molecular Dynamics) (Dallavalle

S, Ferrari A, Biasotti B, y col. Novel 7-oxyiminomethyl camptothecin derivatives with potent in vitro and in vivo antitumor activity. J Med Chem 2001; 44:3264-74).

Persistencia del dano de ADN (%)

Compuestos: Tiempo (min)

: 0 1 5 10

Topotecan: 100 65 20 10

Camptotecina: 100 58 23 20

SN38: 100 60 33 28

IDN 6070: 100 33 10 10

IDN 6181: 100 88 50 22

IDN 6156: 100 100 80 60

IDN 6092: 100 35 18 15

Claims

5

10

15

20

25

REIVINDICACIONES

1. Compuestos de formula general I:

imagen1

en la que:

R es F, Cl, Br, I, -N3, NH2, -NR'R", -COOR', -CONR'R", -NHR"'-NR'R" en los que R', R" y R'" pueden ser H, alquilo, arilo, arilalquilo, acilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo;

R1 es alquilo, aminoalquilo, hidroxialquilo, nitrilo, -NH-O-alquilo, -NH-O-arilo, sililalquilo;

R2 es hidrogeno, hidroxilo, alcoxi, aminoalquilo;

R3 es hidrogeno, alcoxi, aminoalquilo,

en los que los grupos alquilo, acilo, alcoxi, aminoalquilo o -NH-O-alquilo pueden contener de 1 a 8 atomos de carbono, en una cadena lineal o ramificada, y los grupos arilo y ariloxi pueden contener de 5 a 10 atomos de carbono;

las sales farmaceuticamente aceptables, enantiomeros, diastereomeros de los mismos y las mezclas correspondientes.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que los grupos alquilo, acilo, alcoxi, aminoalquilo o -NH-O-alquilo contienen de 1 a 4 atomos de carbono.
3. Un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en:

a) tio-camptotecina;

b) tio-homocamptotecina;

c) tioSN38;

d) tio-topotecan;

e) tioirinotecan;

f) tiogimatecan.
4. Un procedimiento de preparacion de compuestos de formula (I), que comprende las etapas mostradas en el Esquema I, en el que:

a) proteccion de grupos hidroxi precursores;

b) conversion del anillo de piridona en un anillo de tiopiridona;

c) retirada de los grupos protectores;

5

imagen2
5. Un procedimiento de preparacion de los compuestos de formula (I), que comprende las etapas mostradas en el Esquema II, en el que:

a) proteccion de los grupos de hidroxi precursores;

b) derivatizacion en 5 mediante la formacion de un carbanion y reaccion con un reactivo electrofilo;

c) transformacion del carbonilo 16a en tiocarbonilo;

d) desproteccion de los grupos hidroxi;

en el que las etapas b) y c) se pueden invertir:

imagen3

imagen4
6. Una composicion farmaceutica que contiene un compuesto de formula (I) junto con vehnculos y excipientes farmaceuticamente aceptables.

5 7. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 6, que esta en una forma adecuada para la

administracion oral o parenteral.
8. El uso de un compuesto como se reivindica en las reivindicaciones 1-3 o de una composicion como se reivindica en las reivindicaciones 6-7 para la preparacion de un farmaco para el tratamiento de tumores.
9. El uso de acuerdo con la reivindicacion 8, en el que dicho farmaco se usa para el tratamiento de tumores solidos y 10 leucemias.
10. El uso de acuerdo con la reivindicacion 9, en el que los tumores solidos y las leucemias se seleccionan entre tumores de pulmon, ovario, mama, estomago, hngado, prostata, sarcomas de tejidos blandos, esofago, pancreas, cabeza y cuello, glioblastoma, leucemias mielocfticas cronicas y agudas.