ES2325644A1 - Hexapeptidos no proteolizables inhibidores de la glicoproteina 41 del virus del sida. - Google Patents

Abstract

Hexapéptidos no proteolizables inhibidores de la glicoproteína 41 del virus del SIDA.

La presente invención se refiere a la identificación de hexapéptidos, (D), (L) o mixtos, preferiblemente D-hexapéptidos, que inhiben in vitro la fusión de un retrovirus a una célula diana proporcionando nuevas terapias contra la infección del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Se sintetizan dos D-hexapéptidos sintéticos, Gly-Gln-Ile-Asp-Glu-Val y Gly-Gln-Ile-Asp-Gln-Val, con actividad anti-gp41, que han sido desarrollados en base a su capacidad para bloquear la actividad in vitro del péptido de fusión, una secuencia absolutamente conservada entre la mayoría de cepas y aislados clínicos del VIH. Dado el grado de conservación del FP, es previsible que la emergencia de variantes resistentes a estos compuestos sea bastante remota. Además, la presente invención se refiere a la utilización de dichos D-hexapéptidos como componentes únicos o en mezclas complejas como agentes profilácticos o terapéuticos de las infecciones retrovirales, especialmente de VIH tipo 1.

Description

Hexapéptidos no proteolizables inhibidores de la glicoproteína 41 del virus del SIDA.

Sector de la técnica

La presente invención se refiere a la identificación de hexapéptidos, preferiblemente D-hexapéptidos, que inhiben in vitro la fusión de un retrovirus a una célula diana proporcionando nuevas terapias contra la infección del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Además, la presente invención se refiere a la utilización de dichos D-hexapéptidos como componentes únicos o en mezclas complejas como agentes profilácticos o terapéuticos de las infecciones retrovirales, especialmente de VIH tipo 1.

\vskip1.000000\baselineskip

Estado de la técnica

La epidemia de SIDA ha experimentado un rápido crecimiento en los últimos 25 años (número estimado de enfermos a finales de 2004: 39,4 millones). El uso de las terapias antirretrovirales altamente activas (HAART) ha incrementado apreciablemente la esperanza de vida de los infectados por el VIH. Sin embargo, los tratamientos de larga duración han provocado la selección de variantes del virus resistentes a las HAART. Esta situación ha impuesto el desarrollo de nuevos compuestos eficaces en combatir dichas variantes. La adición al arsenal de compuestos anti-VIH del inhibidor de la fusión "enfuvirtide" (también conocido como Fuzeon, T-20, ó DP178) ha supuesto un gran avance para el control de los virus multirresistentes (1-3).

Este compuesto actúa sobre un proceso clave del ciclo infectivo: la fusión de las membranas vírica y celular promovida por la glicoproteína de la envoltura gp120/41 (4). Su principio activo es el péptido T-20 que imita una secuencia helicoidal de gp41 que empaqueta en los surcos hidrofóbicos formados en la zona de contacto entre las hélices de un "coiled-coil" trimérico imperfecto. El empaquetamiento se requiere para cerrar una horquilla que pinza las membranas y provoca su fusión. T-20 inhibe de forma competitiva el proceso de cierre de la pinza y, por tanto, inhibe la fusión (Fig. 1, panel superior).

Sin embargo, el alto coste de producción de "enfuvirtide" y la emergencia de variantes del virus resistentes a este compuesto han puesto en entredicho su utilización generalizada en la terapia del anti-VIH. Por tanto, es necesario trabajar en el desarrollo de nuevos compuestos alternativos y eficaces inhibidores de la fusión, de menor coste, y que puedan ser incluidos dentro de estrategias integradas para el control de la enfermedad. Si estos compuestos actuaran según un mecanismo diferente al del "enfuvirtide", serían utilizables de forma concertada en la eliminación de virus que hayan desarrollado resistencia a los tratamientos HAART. Además podrían representar una alternativa a las terapias de inhibición de la fusión estándar en los casos de resistencia al "enfuvirtide".

La secuencia amino-terminal de la proteína fusogénica gp41 de VIH-1, es hidrofóbica y altamente conservada entre las diferentes cepas, variantes y aislados clínicos (5). Esto es debido a que se requiere para que la proteína desempeñe la función fusogénica (revisado en 6). De acuerdo a su función, esta secuencia se denomina "péptido de fusión" (FP en lo sucesivo). Su alto grado de conservación y su funcionalidad hacen de esta secuencia una diana terapéutica adecuada para el desarrollo de inhibidores anti-gp41. Datos previos indican que determinados oligopéptidos son capaces de interferir con la actividad fusogénica de gp41 (7) así como con la interacción del FP sintético con liposomas
(8).

En la solicitud de patente WO 03/104262 A2 se describen péptidos diseñados para inhibir la fusión de la proteína gp41 del VIH a células diana, así como en la solicitud de patente WO 2004/047730 A2 se describe un compuesto químico de peso molecular entre 200 y 1200 Daltons, y logP de -2.0 a +5.5, capaz de actuar recíprocamente con la cavidad hidrofóbica y bloquear la formulación de la fusión con el "coiled coil" de la gp41.

Pero todos estos métodos para tratar de prevenir la infección por VIH y de curar el SIDA aún son limitados. Por lo tanto, todavía existe la necesidad de desarrollar nuevos inhibidores virales, especialmente inhibidores que no sean tóxicos o tengan una toxicidad aceptablemente baja.

Existen diversos métodos de síntesis de péptidos que se distinguen por el estado físico de la fase en la que tiene lugar dicha síntesis, es decir en fase líquida o fase sólida (véanse por ejemplo, las solicitudes de patente WO 2005/063791 A2, WO 2005/063792 A2 y WO 2005/063793 A2). En la fase sólida, un primer aminoácido o péptido se une a un soporte insoluble, tal como una resina. Grupos sucesivos de aminoácidos o péptidos se van añadiendo hasta que se ha obtenido el péptido deseado. Entonces, dicho péptido se separa de la resina, se aísla y se identifica.

Teniendo en cuenta estos precedentes, nosotros decidimos sintetizar y aislar D-hexapéptidos (no hidrolizables por las proteasas celulares) que interfirieran con FP como posibles nuevos agentes "inhibidores de fusión" por VIH, y que funcionaran según un mecanismo diferente al de "enfuvirtide". Nuestra previsión es que estas secuencias actúan bloqueando la inserción del FP en la membrana blanco celular y/o interfiriendo con los procesos de auto-ensamblaje que ocurren en su superficie (Fig. 1, panel inferior).

Bibliografía

1. Wild, C. T., Shugars, D.C., Greenwell, T.K., McDanal, C.B., y Matthews, D.J. (1994). Peptides corresponding to a predictive alpha-helical domain of human immunodeficiency virus type 1 gp41 are potent inhibitors of virus infection. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 9770-9774.

2. Kilby, J.M., Hopkins, S., Venetta, T.M., et al. (1998) Potent supression of HIV-1 replication in humans by T-20, a peptide inhibitor of gp41-mediated virus entry. Nature Medicine 4, 1302-1307.

3. Schneider, S.E., Bray, B.L., Mader, C.J. et al. (2005). Development of HIV fusion inhibitors. J. Peptide Sci. 11, 744-753.

4. Doms, R. W., y Moore, J. P. (2000). HIV-1 membrane fusion: targets of opportunity. J. Cell Biol. 151, F9-F13.

5. Gallaher, W. R. (1987). Detection of a fusion peptide sequence in the transmembrane protein of the human immunodeficiency virus. Cell 50, 327-328.

6. Nieva J.L., y Agirre, A. (2003). Are fusion peptides a good model to study viral cell fusion? Biochim. Biophys. Acta, 1614, 104-115.

7. Owens, R.J., Tanner, C.C., Mulligan, M.J., Srinivas, R., y Compans, R.W. (1990). Oligopeptide inhibitors of HIV-induced syncytium formation. AIDS Res. Hum. Retroviruses 6, 1289-1296.

8. Pereira, F.B., Goñi, F.M., y Nieva, J.L. (1997). Membrane fusion induced by the HIV-1 fusion peptide: modulation by factors affecting gp41 activity and potential anti-HIV compounds. AIDS Res. Hum. Retroviruses 13, 1203-1211.

Descripción de la invención

En la presente invención se describe la identificación de dos D-hexapéptidos sintéticos, con actividad anti-gp41, que han sido desarrollados en base a su capacidad para bloquear la actividad in vitro del péptido de fusión, una secuencia absolutamente conservada entre la mayoría de cepas y aislados clínicos del VIH.

Dado el grado de conservación del FP, es previsible que la emergencia de variantes resistentes a estos compuestos sea bastante remota.

La presente invención consiste en la síntesis e identificación de dos D-hexapéptidos (Fig. 2, #2 y #5) como inhibidores efectivos de la actividad fusogénica de gp41. Estos péptidos han sido identificados mediante un proceso de rastreo posicional en librerías peptídicas. De hecho creemos que todos los D-hexapéptidos que resultarían de sustituir la posición 5 con cualquiera de los (D) estereoisómeros de los aminoácidos conocidos presentaría la misma actividad inhibitoria frente al VIH. La actividad de dichos péptidos se manifiesta como inhibición de la interacción de la secuencia FP con membranas y como inhibición de la facultad de fusionar células cuando gp120/41 se expresa en la superficie de las células en cultivo (Figs. 3-5). Se demuestra que los péptidos tienen secuencias de aminoácidos características ya que un péptido relacionado de secuencia parecida (con un único cambio químicamente no conservativo de residuo de aminoácido en la posición 2) no presenta actividad anti- gp41 (Figs. 2, 3). Se describe la utilización de los péptidos como compuestos inhibidores de la fusión del VIH-1, de posible utilidad en la lucha contra variantes del virus resistentes a los tratamientos utilizados como terapia.

Exposición detallada de al menos un modo de realización 1. Síntesis y purificación de péptidos 1.1 Procedimiento de síntesis

La biblioteca combinatoria peptídica y los péptidos individuales fueron sintetizados utilizando la metodología de síntesis múltiple de péptidos en fase sólida y siguiendo los procedimientos estándar con el grupo base-lábil N-(9-fluorenil)-metoxicarbonilo (Fmoc) para la protección de la función \alpha-amino. Los principios de la síntesis en fase sólida fueron desarrollados con el propósito de proporcionar una forma rápida, sencilla y efectiva de sintetizar péptidos y pequeñas proteínas. La metodología utilizada consiste en la compartimentación de la resina polimérica, que sirve como soporte sólido, en pequeñas bolsas de polipropileno semipermeable que permiten el flujo de disolventes, mientras que la resina permanece en su interior. Esta metodología permite que en un mismo proceso sintético se puedan sintetizar tantos péptidos (o en el caso de las bibliotecas mezclas de péptidos) como bolsas que se incorporen al proceso. Los péptidos fueron sintetizados sobre una resina de poliestireno aminometil-RAM (RAPP Polymere). Es una resina de alta sustitución, de 0,76 meq/g de resina, que se utiliza para péptidos. Utilizando esta resina, los péptidos se obtienen con el extremo carboxi-terminal (Ct) amidado. Todos los aminoácidos utilizados (Novabiochem y SENN Chemicals) tienen el grupo amino protegido con el grupo protector Fmoc y las cadenas laterales protegidas por diferentes grupos protectores, dependiendo de la funcionalidad de la cadena. Se utilizó el grupo protector trifenilo (Trt) para los aminoácidos cisteina, histidina, asparagina y glutamina; el grupo terc-butilo (t-Bu) para los aminoácidos aspártico, glutamico, serina, treonina y tirosina; el grupo 2,2,5,7,8-Pentametilcroman-6-sulfonilo (Pmc) para arginina; y el grupo tert-butoxicarbonilo (BOC) para lisina y triptófano (Tabla 1).

TABLA 1 Nomenclatura de los aminoácidos

1

En la síntesis de péptidos se utilizan los esteroisómeros L (en adelante L-aminoácidos) así como los estereoisómeros D (en adelante D-aminoácidos) de los aminoácidos naturales. En este ejemplo se utilizaron los D-aminoácidos y se sintetizaron los tres D-hexapéptidos de la Figura 2. El procedimiento de síntesis de péptidos aparece esquematizado en la Figura 6 y consiste en ciclos sucesivos de desprotección del grupo amino de la resina o del último aminoácido acoplado (por liberación del grupo protector Fmoc) y acople del siguiente aminoácido mediante la activación de su grupo carboxilo (Stewart & Young, 1984; Baldwin et al., 1995). El protocolo utilizado consiste en:

1.

Desprotección del grupo amino. Se utilizó un 20% de piperidina en dimetilformamida (DMF) que produce la ruptura y liberación del grupo Fmoc. Se realizó dos veces, una primera de 5 min, en la que se libera aproximadamente el 80% del grupo Fmoc, y una final de 20 min para eliminar totalmente el Fmoc.

2.

Acoplamiento del aminoácido. Mediante un cálculo matemático, se determinó la cantidad de aminoácido necesaria teniendo en cuenta un rendimiento de síntesis del 60% y se utilizó un exceso de 6 veces, disuelto en DMF. Para favorecer los acoplamientos se utilizó diisopropilcarbodiimida (DIC) y 1-hidroxibenzotriazol anhidro (HOBt). Por cada equivalente de aminoácidos, se añadió un equivalente de HOBt y dos equivalentes de DIC. El DIC actúa como agente acopiador formando un complejo temario con el ácido y la amina y favoreciendo la formación del enlace peptídico. El HOBt activa el extremo carboxilo de los aminoácidos en forma de ésteres asimétricos. Los acoplamientos se realizaron durante 1 h 30 min a temperatura ambiente y en agitación.

3.

Después de cada una de las etapas anteriores se realizaron una serie de lavados de la resina:

\ding{226}

Tres lavados con DMF que eliminan los restos de Fmoc después de la desprotección o los restos de mezcla de acoplamiento.

\ding{226}

Tres lavados con isopropanol que producen la contracción de la resina para facilitar los lavados de los huecos intersticiales de la resina.

\ding{226}

Tres lavados con diclorometano (DCM) que produce la expansión de la resina facilitando el siguiente paso (bien sea la desprotección, el acoplamiento o la escisión del péptido de la resina)

4.

Cada paso de desprotección y acoplamiento se verificó mediante el test de Kaiser. Este test se basa en la reacción de la ninhidrina con los grupos amino libre y se aplica a una pequeña alícuota de resina. De esta forma, el aminoácido o la resina desprotegidos del grupo Fmoc deberían dar un color azul intenso con el reactivo. Si el aminoácido es prolina se obtiene un color marrón. Después del acople de un aminoácido, o en el caso de una desprotección incompleta, el test de Kaiser dará negativo obteniéndose un color amarillo. El test de Kaiser es destructivo, por lo que se debe utilizar con la mínima cantidad de resina. Además, es cualitativo, de forma que no distingue diferentes grados de desprotección. Por ello, la desprotección se confirmó, además, con la medida de la absorbancia a 290 nm (coeficiente de extinción molar (\varepsilon) es 4.950 M^{-1}cm^{-1}) del grupo Fmoc libre. Estas cuatro primeras etapas se repiten dependiendo del número de aminoácidos que tiene el péptido a sintetizar. En nuestro ejemplo se repitieron seis veces para cada aminoácido.

5.

Acetilación del extremo amino-terminal (Nt). Después del último acoplamiento, se eliminó el grupo Fmoc del grupo amino (paso 1) y el extremo Nt libre se acetiló con un 20% de anhídrido acético en DMF. Se realizaron de nuevo los lavados del paso 3.

6.

Finalmente, se procedió a la desprotección completa de las cadenas laterales de los aminoácidos así como al corte de la resina. Se sacó la resina de cada bolsa por separado y se colocó en una columna de plástico. Se realizó mediante el tratamiento con una mezcla de 70% de trifluoroacético (TFA), 20% de diclorometano (DCM), 5% de agua, 2,5% de etanoditiol (EDT), 2,5% de clorotriisobutilsilano (CTIBS) a temperatura ambiente durante 4 horas. El agua, el etanoditiol y el clorotrisobutilsilano actúan como atrapadores de los radicales libres obtenidos en la desprotección de los grupos protectores de las cadenas laterales de los aminoácidos.

7.

Precipitación y liofilización del péptido. Después de filtración de la resina y lavado con TFA, los péptidos cortados se precipitaron en t-butilmetileter frío durante al menos 12 h a -80ºC, se centrifugaron a 3.000 rpm durante 15 min (centrífuga SANYO MSE), se disolvieron en ácido acético y se liofilizaron. Tras esta primera liofilización, se procedió a la reconstitución de los péptidos para lo que se disolvieron en una disolución de agua:acetonitrilo (H_{2}O:CH_{3}CN proporción 80:20, respectivamente) y se volvieron a liofilizar.

1.2 Purificación de los péptidos individuales

Tras la síntesis, se realizó un proceso de purificación y análisis de la calidad que aparece reflejado en la Figura 7 con un ejemplo.

Se analizó el perfil cromatográfico de cada péptido por cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa (RP-HPLC). Se utilizó un inyector Waters 717 plus, un detector fotodiodo Waters 996, y un sistema de bombas Waters 600. La fase estacionaria consistía en una columna de sílice C18 en fase reversa (RP-18) con un tamaño de partícula de 5 \mum y de 12,5 cm de longitud y 0,8 cm de diámetro (LiChrospher®100, Merck). La fase móvil consistió en una mezcla H_{2}O:CH_{3}CN. Una pequeña cantidad de péptido se disolvió en H_{2}O:CH_{3}CN (90:10) y se analizó. En primer lugar los péptidos eluyeron de la columna mediante un gradiente lineal de acetonitrilo desde 10% a 90% en agua (ambos eluyentes contenían un 0,1% de TFA que actúa como disgregante) durante 30 min a un flujo de 1 ml/min. De esta forma se observaron diferentes tiempos de retención en función de la hidrofobicidad del péptido. Dependiendo del perfil cromatográfico de los péptidos a purificar, se trabajó en isocrático o en gradiente lineal. En isocrático, la proporción de H_{2}O:CH_{3}CN es fija y se determinó para cada uno de los péptidos. En el caso de utilizar un gradiente se determinó la mínima y la máxima cantidad necesaria de agua o acetonitrilo para la elución del péptido (Figura 7A). En cualquier caso el pico eluido correspondiente al péptido se detectó mediante medida de la absorbancia a 220 nm (longitud de onda a la cual se detecta el enlace peptídico) y a 280 nm (donde se detectan los aminoácidos aromáticos). Una vez determinado el perfil cromatográfico de cada uno de los péptidos sintetizados, se purificaron mediante la técnica de RP-HPLC preparativa. El aparato utilizado consistió en un inyector y controlador de bombas Waters Delta Prep. 3000, un detector de ultravioleta (UV) L-7400 (Merck) y una columna LiChrosorb® RP-18 con un tamaño de partícula de 7 \mum y de 27 cm de longitud y 3,5 cm de diámetro (Merck). Mediante la purificación se eliminaron los péptidos truncados obtenidos de la síntesis así como posibles componentes residuales. El pico correspondiente al péptido purificado se caracterizó por RP-HPLC analítica (Figura 7B) y su identidad se confirmó por espectrometría de masas MALDI-TOF ("matriz-assisted laser desorption/ionization time-of-flight") (Figura 7C). Los péptidos se disolvieron en el tampón 5 mM del ácido 3-(N-morfolino)-propanesulfónico (MOPS) a pH 7 y la concentración se cuantificó por espectrofotometría (A_{280}, \varepsilon^{280} = 5.600 M^{-1} cm^{-1}).

2. Obtención biotecnológica de los hexapéptidos

La producción de los péptidos obtenidos en un soporte sólido según el apartado anterior también puede 1Ievarse a cabo mediante estrategias derivadas de la biotecnología, con técnicas conocidas por el experto en la materia utilizando la metodología del ADN recombinante y de la transformación genética de organismos. Se puede obtener una síntesis selectiva de un estereisómero determinado, por ejemplo, el D-hexapéptido, utilizando un organismo transformado genéticamente que sea un organismo productor a gran escala del péptido de interés.

Ejemplos

Un ejemplo de realización se ilustra en la Figura. 4.

1)

El hexapéptido #2 se sintetizó como se ha descrito en el apartado precedente.

2)

El hexapéptido #2 se añadió a una concentración de 50 \muM al medio de cultivo celular (GMEM-S suplementado con 1 mM piruvato sódico, y 0.4 mM de sulfoxamina de metionina).

3)

Las células expresadoras de la proteína gp120/41 del VIH-1 (células efectoras) se incubaron con el medio suplementado con el D-hexapéptido durante 1 hora a 37ºC.

4)

Posteriormente se añadieron células expresadoras del receptor CD4 que además sintetizan endógenamente el co-receptor CXCR4 (células diana).

5)

Las placas se revelaron después de 16 horas de co-incubación. La actividad gp41 se detecta por la formación de células multinucléadas (panel CTL) producto de la fusión de las membranas plasmáticas. Se observa que el hexapéptido #2 tuvo un efecto inhibidor del proceso comparable al de T-20 en esas condiciones experimentales.

Descripción de las figuras

Figura 1

Ciclo funcional de la gp41 (A) y mecanismos de acción propuestos (B) para el inhibidor enfuvirtide (T-20) y los agentes bloqueantes de la actividad del péptido de fusión objeto de la invención (D-hexapéptido).

A) La activación de la proteína de superficie (1) expone el "Fusion peptide" de gp41 lo que facilita su inserción en la membrana celular (2). Posteriormente, el colapso coordinado de varias proteínas o cierre de la horquilla (3) provoca la yuxtaposición de las membranas, su mezcla y la apertura de una conexión acuosa entre el virus y la célula (4). B) La fusión se inhibiría de acuerdo a mecanismos diferentes: por bloqueo del cierre de la horquilla (T-20), bloqueando la inserción en membrana celular del péptido de fusión (D-hexapéptido).

Figura 2

Secuencia de aminoácidos de los D-hexapéptidos que se describen en la presente invención como agentes bloqueantes de la actividad del péptido de fusión y que resultan inhibidores de la fusión de membranas inducida por la proteína gp41 del virus de la inmunodeficiencia humana (#2 y #5) y del D-hexapéptido #4 utilizado como control negativo, y cuya secuencia sólo se diferencia del #5 en el aminoácido situado en la posición 2.

Figura 3

Efecto de diferentes D-hexapéptidos inhibidores identificados por desconvolución de una librería peptídica (rastreo posicional) sobre la actividad gp41. El efecto se ha medido como inhibición de la fusión célula-célula, inducida por gp41 del VIH-1 expresada en células CHO, que se produce cuando se mezclan con células HeLa que expresan los receptores CD4 (aislado BH10: número de acceso Gen Bank M15654). La concentración de hexapéptido era 5 \muM y la temperatura 37ºC. La incubación en el medio de cultivo celular (GMEM-S suplementado con 1 mM piruvato sódico, y 0.4 mM de sulfoxamina de metionina) se realizó durante 16 horas. Las barras corresponden al número de núcleos en placas sincitiales (células fusionadas con más de 4 núcleos) por campo después de ese tiempo. Se representan medias de 4 medidas individuales más las desviaciones estandar.

Figura 4

Efecto inhibidor del D-hexapéptido #2 (gqidev) (50 \muM) sobre la actividad gp41 del VIH-1 (aislado BH10: número de acceso Gen Bank M15654) en las condiciones descritas en la anterior figura. En las células sin tratar (CTL) se observa la formación de sincitios (células multinucleadas producto de la actividad gp41). Como control positivo de inhibición se muestran células tratadas con 20 nM de T-20 (enfuvirtide). La muestra en presencia únicamente de gqidev se procesó según el protocolo descrito en la figura anterior. Estas dos muestras reflejan una inhibición de gp41 comparable.

Figura 5

Cuantificación del efecto inhibidor de los D-hexapéptidos #2 (círculos y línea discontinua) y #5 (cuadrados y línea discontinua) sobre la capacidad de gp41 para inducir fusión celular (formación de sincitios). Las líneas representan ajustes a funciones de tipo hiperbólico. El ensayo en presencia de cantidades crecientes de hexapéptido se realizó y cuantificó de acuerdo a lo descrito en el pie de la figura 3. El 100% de inhibición corresponde a la ausencia total de núcleos en placas sincitiales, y el 0% al número de núcleos en dichas placas en muestras control sin tratar con hexapéptido.

Claims (4)

1. Hexapéptidos, destinados al tratamiento del SIDA al inhibir la actividad fusogénica de la glicoproteína viral gp 41, del VIH, caracterizados por las secuencias Gly-Gln-Ile-Asp-Glu-Val ó Gly-Gln-Ile-Asp-Gln-Val.

2. Uso de hexapéptidos caracterizados por las secuencias Gly-Gln-Ile-Asp-Glu-Val o Gly-Gln-Ile-Asp-Gln-Val para la elaboración de una composición farmacéutica destinada al tratamiento o prevención del SIDA.

3. Composición farmacéutica destinada al tratamiento o prevención del SIDA que comprende hexapéptidos caracterizados por las secuencias Gly-Gln-Ile-Asp-Glu-Val ó Gly-Gln-Ile-Asp-Gln-Val.

4. Virus VIH incapaz de infectar células humanas caracterizado porque presenta unido a la glicoproteína gp 41 un hexapéptido caracterizado por las secuencias Gly-Gln-Ile-Asp-Glu-Val ó Gly-Gln-Ile-Asp-Gln-Val produciendo, la unión del hexapéptido, la inhibición de la actividad fusogénica de la glicoproteína viral gp 41 y, por consiguiente, impidiendo la entrada del virus en la célula huésped.