ES2324337T3 - Glicerolisis en fase solida. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para preparar una mezcla de reacción en fase sólida enzimática para la preparación de un sólido que presenta más de 40% de monoglicéridos, comprendiendo dicho procedimiento: (i) fundir un glicérido, opcionalmente con una lecitina, para formar una fase grasa; (ii) añadir a dicha fase grasa una solución de lipasa en glicerol, en la que el glicerol se encuentra en una cantidad de por lo menos 14% en peso de la mezcla total, y agitar la mezcla resultante; (iii) homogeneizar dicha mezcla; (iv) tratar dicha mezcla para formar dicha mezcla de reacción en fase sólida enzimática: de manera que si la lecitina no está presente, el glicérido presenta entonces un valor de yodo de entre 5 y 35, y un contenido de grasa sólida de más de 75% a 20ºC, en el que dicha mezcla de reacción en fase sólida enzimática es, a continuación, (i) cristalizada mediante pulverización, o (ii) granulada, exfoliada o extruida y triturada.
Description
Glicerólisis en fase sólida.
La presente invención se refiere a una
combinación de ingredientes activos para su utilización en la
industria alimentaria. En particular, la invención se refiere a una
reacción glicerolítica en fase sólida que proporciona productos que
presentan un nivel sorprendentemente alto de monoglicéridos.
La lipasa se ha utilizado en la industria de la
levadura durante varios años, habiéndose desarrollado una variedad
de aplicaciones distintas. Sin embargo, los estudios realizados han
revelado que en ciertas aplicaciones existen a menudo
inconvenientes asociados a la utilización de la lipasa. En
particular, uno de los factores limitativos para la utilización de
la lipasa en la preparación del pan, es que ciertos sustratos, tales
como la harina de trigo, sólo contienen aproximadamente un 2% de
lípidos, de los cuales sólo una parte está disponible para el
ataque enzimático. Las investigaciones recientes se han centrado,
por tanto, en la posibilidad de combinar la lipasa con un lípido
para obtener la mejoría beneficiosa de utilizar la lipasa en la
preparación del pan.
La patente EP 445 692 da a conocer un
procedimiento para producir monoglicéridos. La solicitud de patente
europea 0585988 (Gist Brocades) da a conocer que un efecto
antirrancio de mejora se obtiene cuando se añade la lipasa a la
masa, como resultado de la formación de los monoglicéridos. Sin
embargo, se ha mostrado que el nivel de monoglicéridos aumenta sólo
una por una cantidad marginal (WO 98/45453, Danisco A/S), ya que la
lipasa que se añade a la masa puede también degradar fácilmente el
monoglicérido a glicerol y ácidos grasos libres. Este efecto se
observa en las masas que contienen sólo lípidos endógenos, así como
en las masas que contienen grasa/aceite añadidos.
Es bien conocido que algunas lipasas pueden
actuar en entornos acuosos muy escasos. McNeill et al [JAOCS, Vol
68, nº 1 (enero 1991), 1-5], Bornscheuer et
al, [Enzime and Microbial Technology, 17:
578-586,1995] y Thide et al [JAOCS Vol 71,
nº 3 (marzo 1994), 339-342] han mostrado que es
posible llevar a cabo reacciones glicerolíticas en mezclas de
grasa/aceite y glicerol añadiendo lipasas específicas y dejando que
la reacción glicerolítica se produzca por debajo de la temperatura
de fusión de la grasa/aceite. Sin embargo, McNeill et al han
demostrado asimismo que es considerablemente más difícil llevar a
cabo la glicerólisis en la fase sólida con grasa completamente
endurecida, tal como sebo hidrogenado.
Un objeto de la presente invención son los
problemas que asociados a los procedimientos mencionados
anteriormente de la técnica anterior. En particular, un objeto de
la invención es la mejora del rendimiento de los monoglicéridos y
la superación de los problemas asociados con la realización de la
glicerólisis con grasas endurecidas.
Así, en el sentido más amplio, la presente
invención proporciona una reacción enzimática en fase sólida para
la preparación de un sólido que posea más del 40% de monoglicéridos,
combinando grasa endurecida, glicerol, lipasa y, opcionalmente,
lecitina.
Más específicamente, la presente invención
proporciona una mezcla de reacción enzimática en fase sólida para
preparar un sólido que posea más de un 40% de monoglicéridos:
en la que la mezcla de reacción comprende:
- (i)
- lipasa;
- (ii)
- por lo menos 14% en peso de glicerol; y
- (iii)
- glicérido;
y opcionalmente,
- (iv)
- lecitina
de forma tal que si (iv) no se encuentra,
entonces el glicérido (iii) posee un valor de yodo de entre 5 y 35,
y un contenido en grasa sólida superior al 75% a 20ºC; en la que la
mezcla de reacción está en forma pulverulenta.
En particular, la invención proporciona una
mezcla de grasa endurecida, glicerol, lipasa y opcionalmente,
lecitina, que puede prepararse de forma pulverulenta y almacenarse
bajo condiciones controladas de temperatura. La reacción
glicerolítica puede tener lugar entonces en forma pulverulenta.
De esta forma, se puede obtener un producto
pulverulento que contiene un alto nivel de monoglicéridos, una
lipasa activa, y, opcionalmente, lecitina. Dichos productos
reactivos son de interés comercial en la industria de la
panificación, pues los monoglicéridos son conocidos por llevar a
cabo una contribución significativa al antienranciamiento. Además,
la lecitina (si está presente) contribuye a tonificar la pasta,
mientras que la lipasa contribuye a una mejora en la estabilidad de
la pasta y en la estructura de las migajas.
La mezcla de reacción en fase sólida de la
presente invención comprende glicérido.
En una forma de realización preferida, el
glicérido se encuentra en la mezcla de reacción en una cantidad de
entre 1% a 86% en peso.
En un primer aspecto preferido, la mezcla de
reacción en fase sólida de la invención comprende lecitina. En
presencia de lecitina, el glicérido de la mezcla de reacción puede
estar constituido por cualquier grasa endurecida, que incluye grasa
completamente endurecida.
El término "grasa endurecida" o "grasa
hidrogenada" hace referencia a grasa que se ha expuesto a un
procedimiento de hidrogenación (Ullmanns Encyclopedia of Industrial
Chemistry, sexta edición, Fats and Fatty Oils, 4.3 y 8).
Típicamente, la grasa se somete a hidrogenación catalítica en
presencia de un catalizador metálico de transición, por ejemplo, un
catalizador de níquel, paladio o platino.
La grasa completamente endurecida se define como
una grasa que tiene un Valor de Yodo (IV) menor de 5, donde el
valor de yodo se mide mediante la técnica convencional IUPAC
(International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC),
Standard Method for the Analysis of Oils, Fats and Derivatives,
Method 2.205).
Debe considerarse que la técnica anterior no ha
dado a conocer ni ha sugerido la utilización de lecitina para
obtener un producto que tenga un alto contenido en monoglicéridos, a
partir de un procedimiento glicerolítico en fase sólida.
En un segundo aspecto, la mezcla de reacción de
la invención no comprende lecitina.
En ausencia de lecitina, el glicérido de la
presente mezcla de reacción posee un valor de yodo de entre 5 y 35,
y un contenido de grasa sólida superior al 75% a 20ºC.
El término contenido de grasa sólida (SFC) se
define y mide según el Procedimiento IUPAC 2.150 (International
Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC), Standard Method for the
Analysis of Oils, Fats and Derivatives).
De acuerdo con esto, el término "sólido"
que se utiliza en relación a grasas y aceites, significa que el
aceite/grasa en cuestión contiene grasa sólida según la definición
anteriormente mencionada para el contenido de grasa sólida.
El "valor de yodo" de un glicérido o de una
grasa es el que se mide mediante el procedimiento IUPAC mencionado
anteriormente.
Por tanto, para obtener un producto que posea
una cantidad de monoglicérido superior al 40%, en ausencia de
lecitina, el componente glicérido de la mezcla de reacción no deberá
comprender sólo grasa completamente endurecida. Así, para obtener
un producto con el nivel deseado de monoglicérido, el componente
glicérido debe comprender por lo menos una grasa no saturada. En
algunos casos, el glicérido puede ser una grasa no saturada, o una
mezcla de grasas no saturadas, donde la grasa no saturada o mezcla,
posee un valor de yodo de entre 5 y 35. En otros casos, el
componente glicérido puede ser una mezcla de por lo menos una grasa
no saturada y por lo menos una grasa saturada, de modo que el valor
de yodo de la mezcla esté entre 5 y 35.
En una forma de realización preferida de la
invención, en ausencia de lecitina, el componente glicérido de la
mezcla de reacción posee un valor de yodo de entre 5 y 25.
En una forma de realización más preferida, en
ausencia de lecitina, el glicérido posee un valor de yodo de entre
5 y 15. Más preferentemente, incluso, en ausencia de lecitina, el
glicérido tiene un valor de yodo de entre 5 y 10.
Deberá considerarse que la técnica anterior no
da a conocer procedimientos de glicerólisis en fase sólida que den
lugar a productos con un contenido de monoglicéridos superior al 40%
y que sean apropiados para utilizar con las grasas endurecidas de
la presente invención. Tampoco la técnica anterior sugiere técnicas
apropiadas para actuar con dichas mezclas de reacción
glicerolíticas en fase sólida.
Preferentemente, el glicérido de la presente
invención es obtenido a partir del aceite de palma, aceite de
girasol, aceite de semilla de colza, aceite de soja, aceite de
cártamo, aceite de semilla de algodón, aceite de nuez molida,
aceite de maíz, aceite de oliva, aceite de cacahuete, manteca de
cerdo, sebo, o sus mezclas.
En una forma de realización preferida de la
invención, el glicérido de la mezcla de reacción es un
triglicérido.
En una forma de realización preferida
alternativa, el glicérido es un diglicérido.
El término "triglicérido" significa
preferentemente un triéster de glicerol y un ácido graso. Más
preferentemente, el triglicérido es un triéster de glicerol, y un
ácido graso de C_{4} a C_{24}.
Preferentemente, el triglicérido se selecciona
de entre triglicéridos que tienen una cadena de ácido graso que
posee una longitud no superior a 14 carbonos, triglicéridos que
tengan una cadena de ácidos graso con una longitud de 4 a 14
carbonos, triglicéridos que tengan una cadena de ácido graso con una
longitud de entre 6 a 14 carbonos, triglicéridos que tengan una
cadena de ácidos graso con una longitud de 8 a 14 carbonos,
triglicéridos que tengan una cadena de ácido graso con una longitud
de entre 10 a 14 carbonos, triglicéridos que tengan una cadena de
ácidos graso con una longitud de 12 carbonos, triglicéridos que
tengan una cadena de ácido graso con una longitud de entre 16 a 24
carbonos, triglicéridos que tengan una cadena de ácidos graso con
una longitud de 16 a 22 carbonos, triglicéridos que tengan una
cadena de ácido graso con una longitud de entre 18 a 22 carbonos,
triglicéridos que tengan una cadena de ácidos graso con una longitud
de 18 a 20 carbonos, sus mezclas y derivados.
En una forma de realización muy preferida de la
invención, el triglicérido utilizado en la mezcla de reacción es
estearina endurecida de palma.
La estearina de palma puede obtenerse mediante
la cristalización del aceite de palma bajo condiciones de
enfriamiento controladas, seguido por la separación para lograr una
fase líquida de baja temperatura de fusión (oleína de palma) y una
fase sólida de alta temperatura de fusión (estearina de palma). Más
detalles pueden encontrarse en Bailey's Industrial Oil and Fat
products, quinta edición, Volumen 2, página 321. El término
estearina fraccionada de palma hace referencia al componente
aislado de estearina de palma que puede obtenerse mediante dicho
procedimiento.
La mezcla de reacción de la presente invención
comprende opcionalmente lecitina. En presencia de lecitina, no se
aplica la condición limitativa que se refiere al valor de yodo y al
contenido de grasa sólida (a 20ºC) del componente glicérido.
Por definición, la lecitina comprende una mezcla
de los diglicéridos de los ácidos esteárico, palmítico y oleico,
unidos a un éster de colina del ácido fosfórico (Merck Index, 12ª
edición, 5452).
Preferentemente, cuando la lecitina se encuentra
presente, la lecitina se selecciona de entre lecitina vegetal,
lecitina en polvo, lecitina sintética, o lecitina hidrolizada.
Preferentemente, la lecitina es lecitina de soja.
Preferentemente, cuando la lecitina está
presente, la lecitina está en una cantidad de entre el 1% y el 50%
en peso de la mezcla de reacción total.
La mezcla de reacción de la presente invención
comprende además lipasa. La lipasa puede ser una de tipo salvaje o
una lipasa mutante. La lipasa puede prepararse utilizando la
tecnología del ADN recombinante.
La lipasa puede obtenerse a partir de un número
de distintas fuentes.
Preferentemente, la lipasa se obtiene a partir
de Pseudomonas sp., Chromobacterium viscosum, Pseudomonas
cepacia, Pseudomonas stutzeri, Pseudomonas fluorescens, Mucor
meihei o Candida antartica.
La mezcla de reacción de la presente invención
comprende además glicerol, en una cantidad de por lo menos el 14%
en peso de la mezcla de reacción total.
En una forma de realización preferida, el
glicerol está presente en una cantidad entre el 14% y el 25% en
peso de la mezcla de reacción total.
Más preferentemente, el glicerol está presente
en una cantidad entre el 16% y el 19% en peso de la mezcla de
reacción total.
La mezcla de reacción de la presente invención
puede comprender además uno o más componentes adicionales. Dichos
componentes adicionales incluyen, por ejemplo, antioxidantes que
mejoran la estabilidad oxidativa.
La mezcla de reacción puede comprender además
uno o más portadores sólidos para ayudar al suministro del glicerol.
Ejemplos de portadores sólidos apropiados incluyen fibras, fibras
de remolacha, hidrocoloides, carbonato cálcico, fosfato tricálcico,
sílice, y sílice fusionada.
En algunos casos, una de las limitaciones de la
cristalización de las grasas mediante el rociado, anterior a la
glicerólisis en fase sólida, es que el glicerol puede hacer que el
polvo se convierta en ligeramente graso. Para mejorar este problema
puede añadirse a la mezcla de reacción un portador sólido para el
glicerol, para que actúe como un sistema de suministro para el
glicerol. Un ejemplo de un portador sólido para el glicerol es la
fibra de remolacha azucarada, por ejemplo, Fibrex. La presencia de
un portador sólido permite la mejora en el tratamiento de la mezcla
de reacción, que a su vez conduce a un producto de mejor calidad.
Además, la presencia de un portador sólido permite asimismo un
aumento en la absorción acuosa, lo que es ventajoso en ciertas
aplicaciones tales como en la industria de la levadura y en la
preparación del pan. Más específicamente, el aumento de la
absorción acuosa en la preparación del pan contribuye a un aumento
de la humedad y frescura del pan.
Típicamente, los ingredientes de la mezcla de
reacción de la invención son tratados en un polvo sólido y
almacenados bajo condiciones de temperatura controlada. La
glicerólisis para formar el deseado producto monoglicérido con un
alto rendimiento puede entonces tener lugar en la fase sólida.
En una forma de realización preferida, el
monoglicérido que se forma en la reacción enzimática en fase sólida
de la invención se forma a una temperatura de entre -10 y 50ºC.
En una forma de realización muy preferida, el
monoglicérido se forma a una temperatura de entre 25 y 45ºC.
El producto de glicerólisis en fase sólida
obtenido a partir de la reacción de la invención, tiene la intención
de utilizarse en la industria de la levadura y en otras
aplicaciones.
Generalmente, la lipasa es todavía activa cuando
el producto de glicerólisis en fase sólida se utiliza, por ejemplo,
cuando se añade a una masa. En algunos casos, es ventajoso tener
presente lipasa activa. Verdaderamente, experimentos han mostrado
que los productos de glicerólisis preparados según la presente
invención que contienen lipasa activa, son de particular interés en
ciertas aplicaciones de la industria de la levadura, a causa de que
el monoglicérido y la lecitina contribuyen a una mejoría en la
suavidad, mientras que la lipasa y la lecitina tienen un efecto
tonificante de la masa.
Sin embargo, en ciertas otras aplicaciones, el
nivel de actividad lipásica es a menudo demasiado alto y puede
causar efectos secundarios. Así, el producto de glicerólisis
preparado a partir de la presente mezcla de reacción, puede
combinarse con un inhibidor de la lipasa, por ejemplo, ferricloruro
(FeCl_{3}). De esta forma, si es necesario, la actividad de la
lipasa puede regularse, dependiendo de la aplicación.
Otro aspecto de la invención se refiere a un
procedimiento para preparar una mezcla de reacción en fase sólida
enzimática para la consecución de un sólido que presente más de 40%
en peso de monoglicérido, comprendiendo dicho procedimiento:
- (i)
- fundir un glicérido, opcionalmente con una lecitina, para formar una fase grasa;
- (ii)
- adición a dicha fase grasa de una solución de lipasa en glicerol, en la que el glicerol se encuentra en una cantidad de por lo menos un 14% en peso de la mezcla total, y agitación de la mezcla resultante;
- (iii)
- homogeneización de dicha mezcla;
- (iv)
- tratamiento de dicha mezcla para formar dicha mezcla de reacción enzimática en fase sólida:
de tal forma que si la lecitina no está
presente, el glicérido tiene entonces un valor de yodo entre 5 y 35,
y un contenido de grasa sólida de más del 75% a 20ºC, donde dicha
mezcla de reacción enzimática en fase sólida es, a continuación (i)
cristalizada mediante pulverización, o (ii) granulada, exfoliada o
extruida y triturada.
En una forma de realización preferida, la mezcla
de reacción de la presente invención es cristalizada mediante
pulverización.
La cristalización mediante pulverización es una
operación unitaria, similar al secado mediante pulverización, que
se utiliza para atomizar una mezcla. La técnica utiliza una torre de
pulverización y resultará evidente para los expertos en la materia.
En primer lugar, la mezcla líquida es atomizada mediante una tobera
de pulverización o rueda para formar pequeñas partículas líquidas.
Las partículas se enfrían entonces por debajo de su temperatura de
ebullición mediante un flujo de aire frío en la torre de
pulverización, provocando la mezcla atomizada, para cristalizar
como finas partículas o un polvo. Otras referencias con respecto a
la cristalización mediante pulverización, pueden encontrarse en
Ullmanns Encyclopedia, sexta edición, Crystallization and
Precipitation, 10.4. Opcionalmente, después de la cristalización
mediante pulverización, las partículas pueden tratarse
posteriormente mediante molienda criogénica.
En otra forma de realización preferida, la
mezcla de reacción enzimática en fase sólida de la presente
invención es granulada, exfoliada o extruida, y triturada.
El granulado es una operación unitaria que se
utiliza para obtener gránulos sólidos a partir de una mezcla. El
procedimiento es bien conocido en la técnica y utiliza una banda de
metal enfriado sobre la cual se deposita la mezcla. Típicamente, la
mezcla se deposita mediante una serie de pequeños orificios para
formar pequeñas gotitas que se solidifican sobre la banda enfriada.
Más detalles con respecto al granulado pueden encontrarse en el
Perry's Chemical Engineers' Handbook, sexta edición, Equipment for
Fusion of Solids, p. 11-45.
La exfoliación es una operación unitaria que
resultará evidente para los expertos en la materia, que se utiliza
para obtener un sólido a partir de una mezcla. La técnica implica la
cristalización de la mezcla sobre una banda conductora metálica o
sobre un bidón que rota con una unidad enfriadora. El material
solidificado puede entonces rasparse del bidón o de la banda con un
cuchillo. Más detalles sobre la técnica se describen en el Perry's
Chemical Engineers' Handbook, sexta edición, Equipment for the
Fusion of Solids, p. 11-45. El material obtenido a
partir del procedimiento de formación de laminillas puede
convertirse a continuación en un polvo mediante molienda criogénico
(o molienda a baja temperatura).
Otro aspecto de la invención se refiere a la
utilización de la mezcla de reacción en fase sólida para preparar
un producto alimenticio. Mediante el término "producto
alimenticio" hace referencia a una sustancia que resulta
adecuado para el consumo animal o humano.
\newpage
Preferentemente, el producto alimenticio que
comprende el producto de glicerólisis es seleccionado de entre
artículos cocidos, que incluyen panes, pastelitos, productos de masa
dulce, masas laminadas, masas líquidas para rebozar, bollos,
rosquillas, galletas, galletas saladas, galletas dulces; productos
de confitería, incluyendo chocolate, golosinas, caramelos, halawa,
chicles, incluyendo chicles edulcorados con azúcar y libres de
azúcar, chicles de globo, chicles de globo blandos, goma de mascar
y pudín; productos congelados que incluyen sorbetes, productos
lácteos preferentemente congelados, que incluyen helados y leche
helada; productos lácteos, que incluyen crema de café, nata
montada, crema pastelera, bebidas lácteas y yogures; mousse
(productos alimenticios espumosos), cremas vegetales batidas,
productos cárnicos, que incluyen productos cárnicos tratados;
aceites y grasas comestibles, productos batidos aireados y no
aireados, emulsiones de aceite en agua, emulsiones de agua en
aceite, margarina, mantecas y pastas para untar, que incluyen pastas
para untar de grasa escasa y muy escasa, aliños, mayonesa, salsas
para mojar, salsas basadas en cremas, sopas basadas en cremas,
bebidas, emulsiones de especias, salsas y mayonesa.
Otro aspecto de la invención se refiere a la
utilización de la mezcla de reacción en fase sólida de la invención,
para preparar un sólido que posea más de un 40% de
monoglicérido.
La presente invención se describirá a
continuación únicamente a título de ejemplo y haciendo referencia a
las figuras adjuntas, en las que:
la Figura 1 muestra el efecto de añadir el
producto de glicerólisis en fase sólida
(2192-6-1C), con y sin inhibidor de
la lipasa, a una muestra de masa. El efecto se mide en términos de
los ácidos grasos libres por mil (\textperthousand) que
permanecen en la masa. Otras referencias a la Figura 1 pueden
encontrarse en la sección de ejemplos.
La Figura 2 muestra un ejemplo típico
(2135-135) del análisis TLC de los productos de
reacción glicerolíticos en fase sólida, después de elusión con
P-éter:
metil-t-butil-cetona
(MTBK): ácido acético (70:30:1), tinción en solución de vanadato y
calentamiento a 100ºC.
Lipasa: #2402 LIPOSAM Pseudomonas sp.
Lipasa
Lipasa de Chromobacterium viscosum (lotes
#2405, #2450 y #2474) de EUROPA-Bioproducts, Reino
Unido.
Estearina de palma endurecida 038500:
\vskip1.000000\baselineskip
Estearina de palma fraccionada: Palmotex
98T, Aarhus Olie, Dinamarca:
\vskip1.000000\baselineskip
Índice de grasa sólida:
\vskip1.000000\baselineskip
Estearina de palma endurecida, Grindsted
PS 101:
Lecitina en polvo: Sternpur, Stern
Lecithin & Soja GmbH & Co. KB, Hamburg
\vskip1.000000\baselineskip
Lecitina de soja 003175:
\vskip1.000000\baselineskip
Lecitina hidrolizada: Lecitina H,
036702:
\vskip1.000000\baselineskip
Los productos de la reacción se analizaron
mediante TLC utilizando placas Kieselgel F 60 de Merck.
Sistema de elución: P-éter:MTBK:ácido acético
70:30:1
Desarrollo: Inmersión en solución de vanadato,
seguido por calentamiento a 100ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
Cromatógrafo capilar de gas Perkin Elmer 8420
equipado con columna de sílice WCOT fusionada, de 12,5 m x 0,25 mm
ID x 0,1 ìm de fenil-metil-silicona
al 5% (CP Sil 8 CB de Crompack).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación de la muestra: 50 mg de
lípidos se disolvieron en 12 ml de heptano:piridina 2:1 que contenía
un estándar interno de heptadecano, 2 mg/ml. 500 \mul de la
muestra se transfirieron a un vial rizado. Se añadieron y se
hicieron reaccionar durante 15 minutos a 90ºC, 100 ìl de MSTFA
(N-metil-N-trimetilsililtrifluoacetamida).
Cálculo: Los factores de respuesta para
los mono-di-glicéridos y los ácidos
grasos libres se determinan a partir de mezclas de referencia de
estos componentes. Basándose en estos factores de respuesta, se
calcularon en la muestra los
mono-di-triglicéridos, los ácidos
grasos libres y el glicerol.
\vskip1.000000\baselineskip
Se mezclaron 10 g de harina Danesa (Reform), 0,1
g de levadura seca (Le Saffre), 0,3 g de sal, y agua hasta 500
Unidades Brabender (BU) en un mini Farinógrafo Brabender durante 6
minutos. La masa se dispone en un matraz de plástico con tapa
durante 60 minutos a 32ºC. Entonces, la masa se congela y se
liofiliza.
\vskip1.000000\baselineskip
Se congelaron 20 g de la masa completamente
comprobada inmediatamente y se liofilizaron. La masa liofilizada se
molió en un molino de café y se hizo pasar a través de una malla de
800 micrones. Se escalaron 2 g de la masa liofilizada en un tubo de
centrífuga de 15 ml con una tapa de tornillo, añadiéndose 10 ml de
butanol saturado con agua (WSB). El tubo de centrífuga se dispuso
en un baño de agua hirviendo durante 10 minutos. Los tubos se
dispusieron en un Rotamix y se hicieron rotar a 45 rpm durante 20
minutos a temperatura ambiente. Los tubos se situaron entonces otra
vez en un baño de agua hirviendo durante 10 minutos y se hicieron
rotar en el Rotamix durante 30 minutos a temperatura ambiente. Los
tubos se centrifugaron a 3.500 g durante 5 minutos, y 5 ml del
sobrenadante se transfirieron a un vial. El WSB se evaporó hasta
sequedad bajo una corriente de nitrógeno.
Los ácidos grasos libres en el extracto se
analizaron como sales de Cu en iso-octano, medidos a
715 mm y cuantificados según una curva de calibración basada en
ácido oleico (Kwon, D.Y. y J.S. Rhee (1986), A Simple and Rapid
Colourimetric Method for Determination of Free Fatty Acids for
Lipase Assay, JAOCS 63:89).
\vskip1.000000\baselineskip
Se cristalizaron estearina de palma
completamente endurecida, estearina de palma fraccionada, y lipasa
disuelta en glicerol mediante pulverización. El procedimiento se
muestra a continuación de la tabla 1.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La estearina de palma endurecida se fundió a
65ºC. La lipasa se disolvió en agua, seguido por la adición del
glicerol. La fase lipasa/glicerol se añadió a la fase de grasa a
60ºC. La mezcla se agitó a 60ºC y se transfirió entonces al
recipiente de pulverización a 60ºC. Durante la intensa mezcla con un
mezclador Turrax, esta mezcla se cristalizó mediante pulverización
utilizando la técnica de pulverización de "embudo". La técnica
de pulverización de embudo es similar a la cristalización mediante
pulverización, con la modificación de que la grasa fundida se
bombea mediante una tobera de pulverización a un embudo en el que la
grasa cristaliza a un polvo. Las muestras se almacenaron a 25ºC y
40ºC, y una tercera muestra se cicló entre 25ºC y 40ºC. Después de
uno y siete días de almacenamiento, las muestras se analizaron
mediante TLC.
\newpage
El análisis TLC reveló que la muestra número 4
produjo un alto nivel no habitual de monoglicérido. Las muestras se
sometieron también al análisis GLC (Tabla 2).
El análisis GLC confirmó que un nivel bastante
alto de monoglicérido se formó en la muestra
2133-134-4 que contenía una mezcla
de grasa completamente endurecida y estearina de palma (Palmotex
T98). El nivel de monoglicérido en la muestra
2133-134-4 deberá compararse con un
20-25% de monoglicérido que es la concentración de
equilibrio del monoglicérido cuando la glicerólisis enzimática
tiene lugar en forma líquida.
Estos resultados indican también que las
muestras 1, 2 y 3 con sólo grasa saturada (y no lecitina) produjeron
niveles bastante bajos de monoglicéridos comparados con la muestra
4, confirmando de esta forma que es necesario tener alguna grasa no
saturada en la mezcla de reacción para obtener un alto nivel de
monoglicérido.
\vskip1.000000\baselineskip
En vez del triglicérido no saturado, se añadió
polvo de lecitina en distintas concentraciones a la estearina de
palma completamente endurecida (Tabla 3).
\vskip1.000000\baselineskip
La estearina de palma endurecida y el polvo de
lecitina se fundieron a 65ºC. La lipasa se disolvió en agua,
seguido por la adición del glicerol. La fase lipasa/glicerol se
añadió a la fase de grasa a 60ºC y se agitó durante 1 hora a 60ºC.
La muestra fue homogeneizada entonces en un mezclador Ultra Turrax y
se cristalizó sobre una placa de aluminio. Las muestras se
almacenaron a 25ºC y 40ºC y se analizaron mediante TLC después de
uno y siete días.
El análisis TLC mostró que se produjo un alto
nivel de monoglicérido cuando la lecitina en polvo se combinó con
la estearina de palma endurecida. Esto fue confirmado también
mediante análisis GLC de las muestras que estaban almacenadas a
40ºC durante siete días (Tabla 4).
\vskip1.000000\baselineskip
Se puede apreciar a partir de la tabla 4 está
claro que el polvo de lecitina mejora la reacción glicerolítica de
la estearina de palma endurecida. El nivel más alto de glicerólisis
se obtiene con el 30% de la lecitina en polvo en la fase de
grasa.
\vskip1.000000\baselineskip
El efecto del nivel de glicerol para la reacción
glicerolítica se ensayó con la estearina de palma endurecida. La
lecitina de soja se ensayó en vez de la lecitina en polvo (Tabla 5),
pues la lecitina en polvo no constituye siempre la mejor elección
de lecitina para ciertas aplicaciones alimenticias, por ejemplo, la
margarina para freír.
\vskip1.000000\baselineskip
Estos ejemplos se prepararon de la misma forma
que se mencionó anteriormente, y se almacenaron durante siete días
y se analizaron mediante GLC (tabla 6).
\vskip1.000000\baselineskip
Este experimento confirma que la lecitina de
soja promueve también la glicerólisis de la estearina de palma
endurecida. La importancia de tener un nivel suficientemente alto de
glicerol para la conversión al monoglicérido se confirma asimismo
en este experimento.
\vskip1.000000\baselineskip
La reacción glicerolítica con polvo de lecitina
y estearina de palma endurecida, se repitió logrando el polvo
mediante un sistema de pulverización "de embudo". Se ensayaron
ambas lipasas, la #2402 de Pseudomonas sp. y la #2450 de
Chromobacterium viscosum (Tabla 7).
\vskip1.000000\baselineskip
La estearina de palma endurecida y el polvo de
lecitina se unieron conjuntamente y se enfriaron a 65ºC. La lipasa
se disolvió en agua, seguido por la adición del glicerol. La fase
lipasa/glicerol se añadió a la fase de grasa y se agitó durante una
hora a 55ºC. La muestra fue homogeneizada entonces en un mezclador
Ultra Turrax y se pulverizó a 60ºC.
Las muestras del polvo cristalizado mediante
pulverización se almacenaron a
- A)
- 25ºC
- B)
- 40ºC
- C)
- Ciclos de temperatura de 35ºC-45ºC
\vskip1.000000\baselineskip
Después de siete días de almacenamiento, las
muestras se analizaron mediante GLC (Tabla 8).
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados indican que el nivel de
monoglicérido no es superior para las muestras sometidas a ciclos
térmicos que para las muestras que se almacenan a 40ºC.
Las muestras 3 y 4 contenían una proporción
menor de glicerol, y produjeron un nivel más bajo del monoglicérido,
como antes (Tabla 6).
\vskip1.000000\baselineskip
Debido a que la lecitina en polvo no resulta
adecuada para ciertas aplicaciones, se ensayó la reacción
utilizando, en vez de ella, lecitina normal de soja. Tal como se
muestra en la Tabla 9, se prepararon muestras para glicerólisis que
contenían estearina de palma endurecida y lecitina de soja.
\vskip1.000000\baselineskip
La estearina de palma endurecida y la lecitina
de soja se fundieron conjuntamente 60ºC. La lipasa se disolvió en
agua, seguido por la adición del glicerol. La mezcla lipasa/glicerol
se añadió a la fase de grasa y se agitó durante 10 minutos a
55ºC.
La muestra fue homogeneizada, cristalizada y
almacenada entonces a
- (A)
- 25ºC durante siete días, seguido por ciclos térmicos de 35-45ºC durante 12 horas.
- (B)
- 40ºC durante siete días
Las muestras se analizaron mediante GLC (Tabla
10)
Estos resultados indican una mejoría
significativa en el nivel del monoglicérido obtenido mediante
glicerólisis cuando la lecitina de soja se utiliza en vez de la
lecitina en polvo. También es destacable que las muestras 3 y 4,
con los niveles más bajos de lecitina, dieron lugar al nivel más
alto de monoglicérido, y los resultados confirman que sólo pequeñas
cantidades de lecitina de soja son necesarias para obtener una alta
conversión de la grasa endurecida al monoglicérido, mediante
glicerólisis en fase sólida.
El experimento 2192-18 se
repitió a una escala más grande mediante pulverización del
"embudo", y se ensayaron tanto la lecitina de soja como la
lecitina hidrolizada (Lecitina H) (Tabla 11).
Se fundieron Grindsted P S101 y lecitina a 70ºC.
Se disolvió la lipasa en agua y se añadió glicerol. La fase
lipasa/glicerol se añadió a la fase grasa a 60ºC. La muestra se
homogeneizó entonces durante 5 minutos y se cristalizó mediante
pulverización utilizando una técnica de pulverización "embudo".
Las muestras se almacenaron a 25ºC y 40ºC. Durante el
almacenamiento, las muestras se extrajeron después de uno, dos y
seis días y se analizaron mediante TLC. Después de siete días de
almacenamiento, las muestras se almacenaron a 40ºC y se analizaron
mediante GLC (Tabla 12).
Los resultados en la tabla 12 confirman que es
posible utilizar tanto la lecitina de soja como la lecitina H
combinadas con la estearina de palma endurecida para producir
niveles altos de monoglicérido mediante glicerólisis en forma de
polvo.
En este experimento, se utilizó la lipasa de
Chromobacterium viscosum #2474 como un catalizador para la
glicerólisis en fase sólida de la estearina de palma completamente
hidrogenada, Grindsted PS 101 combinado con lecitina de soja al
7,5%. En vez de lecitina de soja, estearina de palma fraccionada al
10%, Palmotex T98, se ensayó en combinación con Grindsted PS 101. A
esta concentración de Palmotex T98, se podrá obtener fácilmente un
polvo a partir de la fórmula mediante cristalización por
pulverización.
Una de las limitaciones asociadas a utilizar la
cristalización de la grasa mediante pulverización, seguido por la
glicerólisis en fase sólida, es que el glicerol hace que el polvo
sea un poco graso. Esto puede eliminarse añadiendo un portador
sólido para el glicerol, que actúa como un sistema de suministro
para él. En el experimento siguiente, se añadió fibra de remolacha
de azúcar FIBREX para demostrar esta teoría. La fórmula para los
experimentos se muestra a continuación de la Tabla 13.
Las muestras se prepararon según el
procedimiento siguiente:
Grindsted PS 101 y la lecitina de soja o
Palmotex T98 se fundieron conjuntamente y se enfriaron a 60ºC. La
lipasa #2474 se dispersó en agua y se añadió glicerol. Se añadió el
Fibrex antes de llevar a cabo la cristalización mediante
pulverización. La mezcla se homogeneizó mezclando mediante Ultra
Turrax, seguido por cristalización mediante pulverización. La
mezcla se guardó a 40ºC durante siete días y se analizó mediante
GLC.
Los resultados del análisis GLC se muestran en
la tabla 14.
Los resultados en la tabla 14 confirman que
puede alcanzarse una glicerólisis en fase sólida muy eficiente de
la estearina de palma completamente hidrogenada añadiendo lecitina
de soja al 7,5% y utilizando como catalizador la lipasa de
Chromobacterium viscosum.
Los resultados confirman asimismo que cuando la
lecitina de soja es sustituida por grasa parcialmente saturada, la
glicerólisis en fase sólida es menos eficiente. Además, añadiendo
una fibra de remolacha de azúcar, tal como Fibrix, disminuye el
grado de glicerólisis. Este efecto puede atribuirse a la competición
por el agua en la mezcla de reacción, que hace que la enzima sea
menos eficiente.
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de glicerólisis en fase sólida tiene
la intención de utilizarse en la industria de la levadura y para
otras aplicaciones. Sin embargo, la lipasa es todavía activa cuando
se añade a la masa y para ciertas aplicaciones, el nivel de la
actividad lipásica puede ser demasiado alto y causar efectos
secundarios.
\newpage
Para una investigación más exhaustiva, se llevó
a cabo un experimento para investigar el efecto de combinar el
producto de glicerólisis en fase sólida
2192-6-1C con un inhibidor de la
lipasa en un sistema de masa. Los ensayos iniciales mostraron que
el ferricloruro constituye un inhibidor eficiente para ciertas
lipasas.
Se preparó un modelo de masa según la
formulación que se ha expuesto anteriormente y con las adiciones que
se muestran en la Tabla 15. Se extrajo la masa con butanol saturado
con agua y se determinó la cantidad de ácidos grasos libres.
Los resultados de los análisis de los ácidos
grasos se representan en la Figura 1. Los resultados indican que es
posible combinar un producto de glicerólisis en fase sólida con un
inhibidor lipásico, lo cual reduce la actividad de la lipasa en la
masa.
Claims (24)
1. Procedimiento para preparar una mezcla de
reacción en fase sólida enzimática para la preparación de un sólido
que presenta más de 40% de monoglicéridos, comprendiendo dicho
procedimiento:
- (i)
- fundir un glicérido, opcionalmente con una lecitina, para formar una fase grasa;
- (ii)
- añadir a dicha fase grasa una solución de lipasa en glicerol, en la que el glicerol se encuentra en una cantidad de por lo menos 14% en peso de la mezcla total, y agitar la mezcla resultante;
- (iii)
- homogeneizar dicha mezcla;
- (iv)
- tratar dicha mezcla para formar dicha mezcla de reacción en fase sólida enzimática:
de manera que si la lecitina no está presente,
el glicérido presenta entonces un valor de yodo de entre 5 y 35, y
un contenido de grasa sólida de más de 75% a 20ºC, en el que dicha
mezcla de reacción en fase sólida enzimática es, a continuación,
(i) cristalizada mediante pulverización, o (ii) granulada, exfoliada
o extruida y triturada.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que dicha mezcla de reacción en fase sólida enzimática es
cristalizada mediante pulverización, y tratada opcionalmente
mediante molienda criogénica.
3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2,
en el que la mezcla de reacción en fase sólida enzimática contiene
un portador sólido para el glicerol.
4. Procedimiento según la reivindicación 3, en
el que el portador sólido para el glicerol es la fibra de remolacha
azucarera.
5. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que dicha mezcla de reacción en fase sólida enzimática es
granulada, exfoliada o extruida, y triturada.
6. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
para preparar un sólido que presenta más de 40% de
monoglicéridos;
en la que la mezcla de reacción comprende:
- (i)
- lipasa;
- (ii)
- por lo menos 14% en peso de glicerol; y
- (iii)
- glicérido;
y opcionalmente,
- (iv)
- lecitina;
de manera que si (iv) no está presente el
glicérido (iii) presenta entonces un valor de yodo de entre 5 y 35,
y un contenido en grasa sólida superior a 75% a 20ºC; y en la que la
mezcla de reacción está en forma pulverulenta.
7. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según la reivindicación 6, en la que la mezcla de reacción es
cristalizada mediante pulverización, y tratada opcionalmente
mediante molienda criogénica.
8. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según la reivindicación 6 ó 7, en la que dicha mezcla de reacción
en fase sólida enzimática contiene un portador sólido para el
glicerol.
9. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según la reivindicación 8, en la que dicho portador sólido para el
glicerol es la fibra de remolacha azucarera.
10. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según la reivindicación 6, en la que la mezcla de reacción es
granulada, exfoliada o extruida, y triturada.
11. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, en la que en
ausencia de (iv), el glicérido (iii) presenta un valor de yodo de
entre 5 y 15.
12. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 11, en la que el
glicérido es un triglicérido.
\newpage
13. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 11, en la que el
glicérido es un diglicérido.
14. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según la reivindicación 12 ó 13, en la que el glicérido es obtenido
a partir de aceite de palma, aceite de girasol, aceite de semilla de
colza, aceite de soja, aceite de cártamo, aceite de semilla de
algodón, aceite de nuez molida, aceite de maíz, aceite de oliva,
aceite de cacahuete, manteca de cerdo, sebo o sus mezclas.
15. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según la reivindicación 12, en la que el triglicérido es estearina
de palma endurecida.
16. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 15, en la que la
lecitina es seleccionada de entre lecitina vegetal, lecitina en
polvo, lecitina sintética o lecitina hidrolizada.
17. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 16, en la que la
lipasa es obtenida a partir de Pseudomonas sp., Chromobacterium
viscosum, Pseudomonas cepacia, Pseudomonas stutzeri, Pseudomonas
fluorescens, Mucor meihei o Candida antartica.
18. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10 ó 12 a 17, en la
que la lecitina está presente en una cantidad de 1% a 50% en
peso.
19. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 18, en la que el
glicérido está presente en una cantidad de 1% a 86% en peso.
20. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 19, en la que el
glicerol está presente en una cantidad de 14% a 25% en peso.
21. Mezcla de reacción en fase sólida enzimática
según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 20, en la que dicho
monoglicérido se forma a una temperatura de entre -10 y 50ºC.
22. Utilización de la mezcla de reacción en fase
sólida según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 21 para
preparar un producto alimenticio.
23. Utilización según la reivindicación 22, en
el que el producto alimenticio es seleccionado de entre panes,
pastelitos, productos de masa dulce, masas laminadas, masas líquidas
para rebozar, bollos, rosquillas, galletas, galletas saladas,
galletas dulces, chocolate, golosinas, caramelos, halawa, chicles,
chicles edulcorados con azúcar y libres de azúcar, chicles de
globo, chicles de globo blando, gomas de mascar, pudín, sorbetes,
productos lácteos congelados, helado, leche helada, crema de café,
nata montada, crema pastelera, bebidas lácteas, yogures, mousse,
cremas vegetales batidas, productos cárnicos, productos cárnicos
tratados, aceites y grasas comestibles, productos batidos aireados
y no aireados, emulsiones de aceite en agua, emulsiones de agua en
aceite, margarina, mantecas, pastas para untar, pastas para untar
bajas en grasa y muy bajas en grasa, aliños, salsas para mojar,
salsas basadas en cremas, sopas basadas en cremas, bebidas,
emulsiones de especias, salsas y mayonesa.
24. Utilización de una mezcla de reacción en
fase sólida enzimática para preparar un sólido que presenta más de
40% de monoglicéridos a partir de la mezcla de reacción:
en la que la mezcla de reacción comprende:
- (i)
- lipasa;
- (ii)
- por lo menos 14% en peso de glicerol; y
- (iii)
- glicérido;
y opcionalmente,
- (iv)
- lecitina
de manera que si (iv) no está presente, el
glicérido (iii) presenta entonces un valor de yodo de entre 5 y 35,
y un contenido en grasa sólida superior a 75% a 20ºC; y en la que la
mezcla de reacción está en forma pulverulenta.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0019118 | 2000-08-03 | ||
GBGB0019118.9A GB0019118D0 (en) | 2000-08-03 | 2000-08-03 | Solid phase glycerolysis |
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