ES2293643T3 - Secuencias nucleotidicas de antigenos retroviricos vih-1 del grupo (o subgrupo) o. - Google Patents
Secuencias nucleotidicas de antigenos retroviricos vih-1 del grupo (o subgrupo) o. Download PDFInfo
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Abstract
LA INVENCION SE REFIERE A UNA PROTEINA DE RETROVIRUS VIH-1 GRUPO (O SUBGRUPO) O, O POLIPEPTIDO O PEPTIDO NATURAL O SINTETICO QUE COMPRENDE AL MENOS UNA PARTE DE DICHA PROTEINA, SUSCEPTIBLE DE SER RECONOCIDA POR ANTICUERPOS SUSCEPTIBLE DE SER AISLADOS A PARTIR DE SUERO OBTENIDO TRAS UNA INFECCION POR UNA CEPA VIH-1 GRUPO O VAU, O UNA CEPA VIH-1 GRUPO (O SUBGRUPO O DUR.
Description
Secuencias nucleotídicas de antígenos
retrovíricos VIH-1 del grupo (o subgrupo) O.
La invención se refiere a los antígenos
obtenidos mediante la expresión de secuencias nucleotídicas o
mediante la síntesis química, por ejemplo usando sintetizadores de
la marca Applied-Biosystems presentes en las
variantes de VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O, y
particularmente a los antígenos que corresponden a los que se pueden
aislar de las partículas víricas. A título de ejemplo de virus
VIH-1 del subgrupo O, se hará referencia al aislado
VIH-1_{(VAU)} así como al aislado
VIH-1_{(DUR)}.
Se recuerda que la designación HIV usada en este
texto corresponde a la designación VIH asimismo usado.
La invención se refiere asimismo a los
anticuerpos, policlonales o monoclonales, inducidos por estos
antígenos.
La invención se refiere asimismo a secuencias de
ADN clonadas que presentan una analogía de secuencia, o bien que
presentan una complementariedad con el ARN genómico del virus citado
anteriormente. La invención se refiere asimismo a procedimientos de
preparación de estas secuencias de ADN clonadas. La invención se
refiere asimismo a los polipéptidos que contienen secuencias de
aminoácidos codificados por las secuencias de ADN
clonadas.
clonadas.
Además, la invención se refiere a aplicaciones
de los antígenos mencionados anteriormente, para la detección in
vitro en el ser humano de potencialidad de ciertas formas del
SIDA y, en algunos de ellos, para la preparación de composiciones
inmunógenas y composiciones vacunales contra este retrovirus.
Asimismo, la invención se refiere a las aplicaciones para los
mismos fines de dichos anticuerpos y, para algunos de ellos, a su
aplicación para la producción de principios activos de medicamentos
contra este SIDA humano.
La invención se refiere asimismo a la aplicación
de las secuencias de ADN clonadas y de polipéptidos obtenidos a
partir de estas secuencias como sondas o cebadores, para la
amplificación génica, en kits de diagnóstico.
La invención se refiere asimismo a composiciones
de antígenos, que se pueden obtener mediante síntesis química o
mediante expresión en un hospedante celular recombinante y que
permiten el diagnóstico de una infección debida a un retrovirus
humano de tipo VIH independientemente del subtipo
VIH-1 o VIH-2. Dichas composiciones
comprenden al menos un péptido seleccionado de entre los péptidos
antigénicos comunes a los virus VIH-1,
VIH-2, VIH-1_{(DUR)} y
VIH-1_{(VAU)}, o variantes de estos péptidos
antigénicos que poseen características inmunógenas parecidas.
La invención tiene asimismo por objeto
composiciones que permiten el diagnóstico específico de una
infección debida a un retrovirus humano de tipo
VIH-1, más particularmente el VIH-1
del grupo M, el VIH-2 o el VIH-1
del grupo (o del subgrupo) O, y que comprende al menos un péptido
antigénico específico del virus VIH-1, un péptido
antigénico específico del virus VIH-1 y un péptido
antigénico específico del virus del VIH-1 del grupo
(o del subgrupo) O, o variantes de estos péptidos antigénicos que
poseen características inmunógenas parecidas. Más particularmente,
los péptidos antigénicos derivan de la proteína de cubierta de los
virus VIH-1 del grupo M, VIH-2 y
VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O.
Por otra parte, la invención describe un péptido
que permite una detección de anticuerpos anti-VIH
que los péptidos de la técnica anterior no siempre permitían
detectar basándose en particular en el descubrimiento de una nueva
cepa de VIH-1: VIH-1 DUR. El
antisuero dirigido contra ella no siempre presenta una reactividad
con los péptidos del consenso VIH tal como se usa hoy en día. La
expresión "consenso VIH" se refiere a las regiones conservadas
entre aislados y cuya detección es esencial para la concepción de
vacunas o de reactivos de diagnósticos, y cuya puesta en evidencia
es esencial para la concepción de vacunas o de reactivos
diagnósticos, y cuyas mutaciones confieren la resistencia a los
medicamentos antivíricos. El término "péptido" usado en el
presente texto, define tanto los oligopéptidos como los
polipéptidos.
Se han aislado y caracterizado dos tipos de
virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) que tienen una
responsabilidad en el desarrollo de un SLA o del SIDA. Se ha
aislado y descrito un primer virus denominado LAV-1
o VIH-1 en la solicitud de patente GB 8.324.800 y
en la solicitud EP 84401.834 del 14/09/1984. Este virus también se
ha descrito por F. Barré-Sinoussi et al., en Science (1983),
220. 868-871.
El retrovirus VIH de tipo 2 pertenece a una
clase distinta y tiene sólo un parentesco inmunológico reducido con
los retrovirus VIH de tipo 1. Se han descrito los retrovirus
VIH-2 en la solicitud de patente europea nº
87.400.151.4 publicada con el número 239.425.
El retrovirus VIH-1 es el más
habitual y su presencia es predominante en varias regiones del
mundo. En cuanto al retrovirus VIH-1, se encuentra
lo más frecuentemente en África occidental, aunque su propagación en
el exterior de esta región ya se ha documentado recientemente por
Grez et al., (1994) J. virol. 68,
2161-2168.
El conjunto de los lentivirus de la
inmunodeficiencia de los primates, que comprende los virus de tipo 1
y de tipo 2 de la inmunodeficiencia humana, así como varios tipos
de virus de primates no humanos, aumenta en tamaño y en
complejidad. El más habitual de estos virus, el
VIH-1, se extiende actualmente en forma de epidemia
mundial, y es responsable de un problema de salud pública
importante. Poco después de la identificación y la caracterización
molecular de este virus, se ha reconocido como muy variable, y
comprende actualmente varios subtipos (Myers, 1994, Louwagie, et
al. 1993, Louwagie, et al. 1992, Myers, G. (1994)
VIH-1 subtypes and phylogenetics trees. En: Human
Retrovirus and AIDS 1994; Myers, G., Korber, B.,
Wain-Hobson, S., Smith, R.F. y Pavlakis, G.N., ed.
Los Alamos National Laboratory, Los Alamos, NM.
III-2 - III-9.). Esta distinction
de subtipos se basa esencialmente en la divergencia de los genes
gag y env. Se han identificado al menos 6 subtipos,
denominados A a F, pero algunos son todavía susceptibles de aparecer
de la importante encuesta mundial en curso sobre los aislados del
VIH-1. Se ha encontrado que estos diferentes
subtipos son equidistantes unos de otros, en un perfil filogenético
denominado filogenia en estrella, lo que sugiere que los diferentes
subtipos del VIH-1 habrían evolucionado y divergido
de manera simultánea a partir de un antepasado común.
Recientemente, se han aislado y caracterizado
dos virus distintos de este grupo de virus VIH-1.
Estos dos virus se obtuvieron de pacientes que viven en Camerún, en
África del oeste central (Gürtler et al., 1994, Van den
Heasevelde et al., 1994). Su secuencia, más particularmente
la secuencia de su gen env (cubierta), muestra claramente que estos
virus pertenecían a una categoría distinta del virus emparentado al
VIH-1, denominado VIH-1 del grupo O
(NKENGASONG et al., 1993).
Sin embargo, no se conoce la diversidad de los
aislados dentro de este grupo de virus emparentados al
VIH-1, y no se documentó su propagación fuera de
África.
Una obligación general en la realización de
ensayos serológicos VIH, es evitar tanto las reacciones falsamente
positivas como falsamente negativas, conservando o mejorando la
sensibilidad que permiten los ensayos anteriores en materia de
detección de seropositividad.
Los ensayos basados en el uso de
péptido(s) de consenso, esencialmente derivados del gen
"env" se han considerado como una solución
prácticamente ideal hasta que el descubrimiento de la variante
VIH-1-O hizo entrever la
posibilidad de resultados falsamente negativos (Genomic cloning and
complete sequence analysis of a highly divergent African human
immuno-deficiency virus isolate. J. Virol. 1994; 68:
1586-96; a new subtype of human
immuno-deficiency virus type 1
(MPV-51 00) from Cameroon. J. Virol. 1994;
68:1581-85).
La no reactividad de ciertos ensayos con
antígeno peptídico "env" en pacientes que presentan a
pesar de todo ciertos síntomas clínicos característicos del SIDA o
de los síndromes linfoadenopáticos que les preceden a veces, se
imputa a veces hoy en día a una infección del grupo
VIH-1-O
(VIH-1/VIH-2 seronegativity in
VIH-1 subtype O infected patients, Lancet 1994;
343:1393-94: New VIH-1 subtype in
Switzerland. Lancet 1994; 344:270-71).
La presente invención tiene por objetivo poner a
disposición de los laboratorios de diagnóstico medios, en
particular péptidos específicos que permiten una detección de
anticuerpos anti-VIH que, hasta hoy en día, eran
susceptibles de ser indetectables. La presente solicitud describe
asimismo mezclas de péptidos que proceden de VIH-1
DUR y de péptidos que corresponden a otros VIH, a fin de evitar los
resultados "falsos negativos" potenciales.
Por otra parte, la misma se refiere a un
procedimiento de detección y de discriminación en una muestra
biológica entre anticuerpos característicos de un retrovirus de
tipo VIH-1-M y anticuerpos
característicos de un retrovirus VIH-1 del grupo (o
del subgrupo) O.
La invención se deriva de las observaciones
realizadas en una mujer seropositiva, que había pasado una temporada
en el Camerún y que había revelado una reactividad serológica
atípica durante varios ensayos de detección de la infección del
VIH, habiendo sido estos últimos confirmados mediante técnicas de
"transferencia Western".
Debido a esta reactividad serológica atípica, en
particular a la falta de reactividad en ciertos ensayos de tercera
generación, incluso modificados para el tipo O, los inventores
estimaron interesante emprender una secuenciación de ciertas partes
del genoma de esta cepa VIH-1 DUR, más
específicamente de los genes GAG y ENV.
Sin embargo, las amplificaciones génicas
mediante PCR con la ayuda de cebadores que proceden del grupo M y
de cebadores conocidos del grupo O, no han dado resultados para las
partes que codifican el bucle V3 de gp120, y para la región
inmunodominante de gp41. Sólo la región GAG era amplificable con la
ayuda de cebadores conocidos en la técnica anterior
(Loussert-Ajaka l, Lancet 1994; 343:1393). Otro
objetivo de la presente invención es, por consiguiente, la
determinación de cebadores susceptibles de paliar este problema.
Estos cebadores se podrán denominar indiferentemente "primers"
a continuación.
Se han determinado secuencias parciales de las
glicoproteínas gp41 y gp120, así como de proteínas de cápsido (gen
GAG) a partir de ADN linfocitario y de cultivos víricos, indicando
que esta cepa VIH-1 DUR pertenece al grupo
VIH-1-O, y que difiere de manera
importante del grupo M, más particularmente para gp41 y gp120.
Así, se pudo demostrar, más particularmente a
propósito de la secuencia GAG de VIH-1 _{(DUR)},
la existencia de secuencias de consenso en el grupo O, en varias
zonas, distintas de las secuencias de consenso del grupo M en las
mismas zonas.
La clonación de las secuencias que codifican los
fragmentos de GAG, gp41 y gp120 de VIH-1 _{(DUR)}
se efectuó en un plásmido de Bluescript® que contiene un sitio
PST1. Los productos de amplificación se clonaron según las técnicas
habituales usando los cebadores universales T3 y T7, o bien se
secuenciaron directamente mediante el uso de cebadores de la
amplificación anterior. Las secuencias se determinaron a
continuación mediante el dispositivo automático de secuenciación
Applied Biosystems 373A (ESGS Montigny le Bretonneux, Francia).
En el contexto de la presente invención, se ha
aislado y secuenciado el gen env de un aislado del grupo O,
el VIH-1_{(VAU)}, obtenido de una paciente
francesa que nunca viajó fuera de Europa y que murió de SIDA en
1992. Según su secuencia de cubierta, el
VIH-1_{(VAU)} está emparentado con los dos virus
cameruneses VIH_{ANT70} y VIH_{MVP5180} recientemente
caracterizados. El análisis filogenético de las secuencias
env revela que los tres virus parecen constituir un grupo
distinto, que se denominará aquí VIH-1 grupo O. El
aislamiento del VIH-1_{(VAU)} de esta paciente
indica asimismo que una cierta propagación de los
VIH-1 del grupo O ya se ha producido fuera de
África.
VIH-1_{(VAU)} se aisló en 1992
a partir de una paciente francesa de 41 años que padecía SIDA. Esta
paciente presentaba en 1986 una leuconeutropenia grave asociada con
un carcinoma del cuello uterino. Sin embargo, mostró
progresivamente señales de infecciones oportunistas, con una
disminución del número de células T CD4^{+} circulantes, y murió
de SIDA en 1992. En primer lugar, se detectaron anticuerpos
anti-VIH-1 mediante ELISA (Elavia,
SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR, y ensayo ABBOTT) en 1990.
La paciente nunca había viajado fuera de Europa,
no había utilizado ningún medicamento por vía intravenosa y no
había sufrido ninguna transfusión sanguínea conocida. No se
identificó ninguna pareja sexual de origen africano. Dio a luz a un
niño con buena salud en 1971, pero un hijo, nacido en 1980, murió a
la edad de un año tras un episodio clínico muy sugestivo de SIDA
neo-natal. Su tercer hijo nacido en 1983 y su marido
tienen actualmente una buena salud y no están infectados.
El asilamiento del virus se realizó de la
siguiente manera: se eliminaron las células CD8+ presentes en los
PBMC (linfocitos sanguíneos periféricos) de la paciente con la ayuda
de perlas revestidas de anticuerpos IOT8 (Immunotech). Estos PBMC
restantes se estimularon con PHA, y después se cocultivaron con PBMC
agotados en CD8 que proceden de un donante sano y estimulados con
PHA. El crecimiento vírico en el cocultivo se monitorizó mediante
determinación de la actividad de transcriptasa inversa (RT) del
sobrenadante y mediante un ensayo ELISA de la p24 del
VIH-1 (kit de diagnóstico comercializado por DuPont
de Nemours). El virus obtenido del cocultivo inicial se sometió a
varios pasos en cultivos de PBMC agotados en CD8 y estimulados con
PHA. Se realizaron varias tentativas para infectar mediante el
VIH-1_{(VAU)} varias líneas celulares
transformadas, cuyas células MT4 (Harada, et al. 1989, así
como la descendencia P4-2 de células
Hela-CD4-LTRLacZ (Clavel y Chameau,
1994).
Dos semanas después del cocultivo de los PBMC de
la paciente agotados en CD8, estimulados con PHA, con células
similares de un donante sano, se detectó la producción de virus en
forma de un pico de actividad de la RT en el sobrenadante de
cultivo. Este virus se podía someter entonces a pasos en serie sobre
PBMC normales, agotados en CD8 y estimulados con PHA. En la figura
1, el panel A representa la producción del
VIH-1_{(VAU)} en los sobrenadantes de cultivos de
PBMC infectados, controlados mediante determinación RT (círculos
llenos) y ELISA de captura de antígeno p24 VIH-1
(círculos vacíos). La concentración de p24 VIH-1 se
expresa en ng/ml, y la actividad RT en cpm/\mul. En el panel B,
se efectuó el mismo experimento con un aislado primario estándar
del VIH-1 de un paciente que padece SIDA.
Aunque el crecimiento del
VIH-1_{(VAU)} se detectó fácilmente con la ayuda
de la determinación RT, la detección de virus en los sobrenadantes
de cultivo con la ayuda de ELISA p24 VIH-1 (DuPont)
fue claramente menos sensible. La figura 1 muestra la comparación
entre los perfiles de infección productiva de los PBMC con el
VIH-1_{(VAU)} o bien con un aislado primario del
VIH-1 de un paciente que padece SIDA, determinados
en RT o p24. Para cantidades equivalentes de partículas,
determinadas mediante determinación de la actividad RT en los
sobrenadantes determinados, se detectó aproximadamente 25 veces
menos de la p24 para el VIH-1_{(VAU)} que para el
otro aislado VIH-1. La diferencia pude ser
consecutiva al hecho de que el anticuerpo monoclonal específico de
p24 del VIH-1, que se usa para revestir las placas
ELISA, únicamente presenta una baja afinidad para los productos gag
del VIH-1_{(VAU)}.
Se realizaron varias tentativas negativas para
propagar el VIH-1_{(VAU)} en líneas de células T
humanas transformadas, sensibles al VIH-1. En
particular, cocultivos entre PBMC infectados por el
VIH-1_{(VAU)} y bien células MT4 o bien células
CEM, no han conducido a la propagación del virus. También se ha
Descubierto que este virus no era capaz de infectar células HeLa
CD4^{+} (P4-2) (Clavel y Chameau 1994) que portan
un gen LacZ inducible por el gen tat. Asimismo, no se podía
detectar ninguna replicación del VIH-1_{(VAU)} en
los linfocitos sanguíneos periféricos activados de varios
chimpancés.
El análisis de la secuencia de cubierta
VIH-1_{(VAU)}, que se describirá con mayor detalle
a continuación, y su comparación con el de los dos aislados
cameruneses recientemente descritos indican que los tres virus
pertenecen al mismo grupo de virus emparentados con
VIH-1. Además, esta comparación indica que estas
tres variantes del virus son aproximadamente filogenéticamente
equidistantes unas de otras. Por consiguiente, cada una de las tres
variantes de virus constituye en sí misma un subtipo, distinto de su
grupo, que se denomina ahora VIH-1 del grupo O.
Este grupo es distinto del grupo de los demás aislados
VIH-1, identificados hasta ahora, y que los
inventores denominan aquí VIH-1 del grupo M.
La aparición de este nuevo grupo plantea el
problema de su origen: ¿evolucionó el grupo O a partir de los virus
del grupo M (o inversamente) o cada grupo tiene un pasado distinto?
Los inventores piensan que en la medida en la que al mismo tiempo
el grupo M y el grupo O presentan un perfil de divergencia interna
similar, es verosímil que correspondan cada uno a la
diversificación de antepasados distintos de virus en poblaciones
humanas distintas. No se puede apreciar a partir de los datos
filogenéticos y virológicos actualmente disponibles si el
antepasado de uno o de otro de los dos grupos afectaba los humanos
de manera natural o fue introducido en los humanos a partir de
otras especies. El único virus cercano del VIH-1
presente en un primate no humano es el aislado SNCPZGAB (Huet et
al., 1990), aislado a partir de un chimpancé aparentemente
infectado de manera natural, que es claramente distinto al mismo
tiempo del grupo M; y del grupo O, y para el cual no se ha
encontrado ningún equivalente humano. Es poco probable que los virus
del grupo O hayan evolucionado recientemente a partir de un virus
de chimpancé, en la medida en la que el
VIH-1_{(VAU)} no consiguió replicarse en
linfocitos de chimpancés.
¿Por qué la epidemia del grupo O aparece sólo
ahora, unos 15 a 20 años más tarde que el grupo M? Existen tres
explicaciones posibles: en primer lugar, la introducción del
antepasado de los virus del grupo O en los humanos se habría
producido más recientemente que la del grupo M; en segundo lugar,
podría ser que se haya permitido que el grupo M se propague más
pronto que el grupo O debido a diferentes condiciones sociales en su
región de origen; y en tercer lugar, los virus del grupo O tendrían
una capacidad de transmisión más reducida, en comparación con la de
los virus del grupo M. Se ha propuesto que dicha propiedad explique
la ausencia de propagación mundial significativa del
VIH-1, para el cual una carga vírica más débil en
los sujetos infectados está relacionada con una transmisibilidad
reducida (De Cock et al., 1993). En este aspecto, aunque no
se tiene ningún dato sobre la carga vírica en los pacientes
afectados por un VIH-1 del grupo O, el poder
patógeno de estos virus no parece distinto del poder del
VIH-1. La paciente en la que el
VIH-1_{(VAU)} se asiló murió de SIDA, tal como el
paciente en el que se obtuvo el aislado VIH_{MVP5180} del grupo
O.
Sin embargo, la historia natural de la infección
de la paciente VIH-1_{(VAU)} todavía no es muy
clara, pero existen varias indicaciones de que esta paciente fue
infectada antes de 1980, tal como lo sugiere la muerte en esta
fecha de su segundo hijo que padecía de un síndrome parecido al
SIDA.
La invención se refiere a cualquier variante de
las secuencias de ácido nucleico del virus
VIH-1_{(VAU)} o de cualquier virus equivalente
del grupo O, que contiene proteínas de estructura que presentan las
mismas propiedades inmunológicas que las proteínas de estructura
codificadas por el gen env que comprende la secuencia descrita en
la figura 6 y denominada "vau", designada asimismo por la SEC
ID nº 5.
La presente invención se refiere asimismo a unas
composiciones que contienen antígenos según la invención, o bien
una mezcla de antígenos según la invención, asociados con extractos
originarios de uno o varios VIH-1 del grupo O o de
otros virus variantes, por una parte, y de uno o varios
VIH-1 y/o VIH-2, por otra parte,
siendo estas composiciones eventualmente marcadas. Se puede usar
cualquier tipo de marcador apropiado: enzimáticos, fluorescentes,
radioactivos, etc.
La invención se refiere a los ADN o a los
fragmentos de ADN, más particularmente ADN o fragmentos de ADN
clonados obtenidos a partir del ARN, de ADNc o de cebadores que se
pueden usar en PCR, u otros métodos de amplificación génica
derivados del ARN o del ADN del retrovirus
VIH-1_{(VAU)}. La solicitud describe asimismo ADN
equivalentes, que presentan en particular homologías de secuencia
con el ADN del VIH-1_{(VAU)}, en particular con la
secuencia que codifica la región env de la cepa
VIH-1_{(VAU)} que comprende la secuencia que
corresponde a la SEC ID nº 5 representada en la figura 6 y
denominada "vau". La homología con el VIH-1 del
grupo M es al menos igual a 50%, preferentemente a 70%, y más
ventajosamente todavía a aproximadamente 90%. De manera general, la
solicitud describe cualquier
ADN (o ARN) equivalente capaz de hibridarse con el ADN o con el ARN de un retrovirus VIH-1 del grupo O.
ADN (o ARN) equivalente capaz de hibridarse con el ADN o con el ARN de un retrovirus VIH-1 del grupo O.
La invención se refiere asimismo a las
secuencias de ARN que corresponden a las secuencias de ADN definidas
anteriormente.
La solicitud da a conocer asimismo el gen de la
integrasa del virus VIH-1_{(VAU)} que comprende la
secuencia identificada mediante la denominación SEC ID nº 7, o que
se hibrida con la SEC ID nº 7, y también los ARN que corresponden
al ADN descrito anteriormente.
La invención tiene asimismo por objeto unas
composiciones que contienen los péptidos o polipéptidos codificados
por dicho ADN o fragmentos de ADN.
Se pueden usar oligonucleótidos derivados de la
secuencia VAU o también del gen de la integrasa del virus
VIH-1_{(VAU)}, particularmente oligonucleótidos que comprenden al menos 9 nucleótidos, para la detección de secuencias de ADN o de ARN del virus VIH- del grupo O en muestras biológicas, en cultivos celulares, o en extractos de células, mediante la técnica de la PCR o cualquier otra técnica de amplificación génica. Estas secuencias se podrían utilizar o bien como cebadores de amplificación génica o bien como sondas con vistas a la detección específica de los productos de amplificación génica. Los productos de amplificación o su secuencia correspondiente sintética, obtenidos mediante síntesis química (Applied Biosystems) se pueden usar asimismo como sonda de hibridación.
VIH-1_{(VAU)}, particularmente oligonucleótidos que comprenden al menos 9 nucleótidos, para la detección de secuencias de ADN o de ARN del virus VIH- del grupo O en muestras biológicas, en cultivos celulares, o en extractos de células, mediante la técnica de la PCR o cualquier otra técnica de amplificación génica. Estas secuencias se podrían utilizar o bien como cebadores de amplificación génica o bien como sondas con vistas a la detección específica de los productos de amplificación génica. Los productos de amplificación o su secuencia correspondiente sintética, obtenidos mediante síntesis química (Applied Biosystems) se pueden usar asimismo como sonda de hibridación.
La invención muestra asimismo cualquier
fragmento de al menos 100 nucleótidos que se puede usar como sonda
en reacciones de hibridación y capaz de permitir una reacción con
una parte del genoma de una variante VIH-1_{(VAU)}
en condiciones de hibridación de alta astringencia.
Para la amplificación inicial mediante PCR del
ADN del VIH-1_{(VAU)}, se extrajo el ADN total de
PBMC infectados por el VIH-1_{(VAU)}, y se
amplificó un segmento del gen pol (región integrasa) con la ayuda de
cebadores degenerados:
| cebador 4506: | 5'AGTGGAT(A/T)(T/C)ATAGAAGCAGAAGT3'; | SEC. ID Nº1; |
| cebador 5011: | 5'ACTGC(C/T)CCTTC(A/C/T)CCTTTCCA3'; | SEC. ID Nº2; |
El medio de reacción que incluye 50 mM de KCl,
10 mM de Tris-HCl (pH 8,9), 1,5 mM de MgCl_{2},
0,1 mg/ml de gelatina, 0,2 mM de dNTP, 1u DE Taq Polymerase
(Amersham). Se realizó la PCR durante 43 ciclos a 92ºC durante 10
segundos, 50ºC durante 1 minuto, 72ºC durante 40 segundos.
El producto de amplificación resultante se clonó
en un vector pBluescript, generando el clon ph4 depositado en la
CNCM el 20 de octubre de 1994 con el nº I-1486, que
se usó posteriormente como sonda para detectar automáticamente un
banco lambda de ADN de bajo peso molecular, digerido por EcoRI,
procedente de células infectadas por el
VIH-1_{(VAU)}. Brevemente, las PBMC infectadas por
el VIH-1_{(VAU)} se cocultivaron durante 24 horas
con PBMC nuevas estimuladas con PHA y agotadas en células
CD8^{+}, tras lo cual era visible un efecto citopatógeno marcado
(ECP). Entonces, se extrajo el ADN de bajo peso molécula siguiendo
el método de Hirt (Hirt 1967), y se digirió con la enzima EcoRI. Un
análisis anterior con transferencia de Southern antes de este ADN
mostró que el genoma VIH-1_{(VAU)} contenía un
único sitio EcoRI, que permite la clonación de especies de ADN
circular no integrado que representa la totalidad del genoma
vírico. El producto de digestión resultante se sometió a una
electroforesis sobre gel de agarosa, y la población de fragmentos de
ADN de un tamaño de 8 a 12 kb aproximadamente se purificó y se
ligaturó al ADN lambda Zap digerido por EcoRI (Stratagene). Tras la
encapsidación, la extensión y la detección sistemática por
hibridación con ADN ph4 marcado con ^{32}P, se identificó un clon,
\lambda H34, como positivo y amplificado. El inserto EcoRI se
purificó, se sonificó y se clonó mediante "Shotgun" en el
vector M13mp18 tratado con la fosfatasa, digerido con la enzima
SmaI. Ciento cincuenta de los clones obtenidos se secuenciaron en
un secuenciador de ADN 373a (Applied Biosystems), y las secuencias
resultantes se reunieron en una sola secuencia con la ayuda del
paquete de programas de análisis de ADN
GCG-Wisconsin.
El análisis de esta secuencia reveló numerosos
codones anti-sentido en todos los cuadros de
lectura, lo que sugiere un genoma hipermutado (Vartanian et
al, 1991). Estando esta secuencia inutilizable, se decidió, por
consiguiente, amplificar mediante PCR el gen env del
VIH-1_{(VAU)} con la ayuda del ADN total de PBMC
infectadas mediante el
VIH-1_{(VAU)}, y cebadores oligonucleotídicos derivados de la secuencia \lambda H34:
VIH-1_{(VAU)}, y cebadores oligonucleotídicos derivados de la secuencia \lambda H34:
| cebador TH2 | 5'GCTCTAGATGGGGATCTCCCATGGCAGG3' | Seq. ID Nº 3; |
| cebador UH2 | 5'GCTCTAGATCAGGGAAGAATCCCTGAGTGT3'. | Seq. ID Nº 4. |
La amplificación mediante PCR se efectuó durante
35 ciclos térmicos a 92ºC durante 15 segundos, 52ºC durante 1
minuto, 60ºC durante 2 minutos y 72ºC durante 2 minutos. El producto
de amplificación resultante, de un tamaño de 3,5 kb, se clonó en el
vector M13mp18, y se secuenció mediante reacciones sucesivas, usando
en primer lugar el cebador universal de secuenciación M13, y
después cebadores deducidos de las secuencias corriente arriba. El
análisis de las secuencias nucleotídicas y peptídicas se efectuó con
la ayuda del paquete de programas de análisis de ADN
GCG-Wisconsin. El gen env
VIH-1_{(VAU)} codifica 877 aminoácidos en total,
incluyendo el péptido señal. La secuencia nucleotídica del gen
env VIH-1_{(VAU)} corresponde a la SEC ID
nº 5 (véase la figura 3).
La invención se refiere naturalmente también al
uso de los ADN, ADNc o de sus fragmentos, o de plásmidos
recombinantes u otros vectores equivalentes que contienen estos
fragmentos, como sondas, para la detección de la presencia o no del
virus VIH-1_{(VAU)} en muestras de suero u otros
líquidos o tejidos biológicos obtenidos a partir de pacientes de
los que se sospecha ser portadores del virus
VIH-1_{(VAU)}. Estas sondas se marcan
eventualmente (marcadores radioactivos, enzimáticos, fluorescentes,
etc.). Unas sondas particularmente interesantes para la realización
del procedimiento de detección del virus
VIH-1_{(VAU)} o de una variante de
VIH-1_{(VAU)} se pueden caracterizar porque
comprenden la totalidad o una fracción del ADN complementario del
genoma del virus de VIH-1_{(VAU)} o también en
particular los fragmentos contenidos en diversos clones. Unas sondas
caracterizadas porque comprenden una fracción del ADNc del
VIH-1_{(VAU)} que contiene la totalidad o parte
de la región env forman parte de la invención.
Las sondas usadas en este procedimiento de
detección del virus VIH-1_{(VAU)} o en kits de
diagnóstico, no se limitan de ninguna manera a las sondas descritas
anteriormente. Comprenden cualquier secuencia nucleotídica que
procede del genoma del virus VIH-1_{(VAU)}, de una
variante del VIH-1_{(VAU)} o de un virus próximo
por su estructura, en cuanto que permiten la detección, a partir de
fluidos biológicos de personas susceptibles de presentar SIDA, de
un virus VIH-1 del grupo O, en particular
VIH-1_{(VAU)} mediante hibridación con ADN o ARN
del virus VIH-1_{(VAU)}.
Las sondas que, cuando la hibridación con
VIH-1, proporcionan una reacción fuerte con los VIH
que pertenecen al grupo O y una reacción baja con los
VIH-1 que pertenecen al grupo M son particularmente
ventajosas. A título de ejemplo no limitativo, una sonda fabricada
a partir de la secuencia del gen de la integrasa del virus
VIH-1_{(VAU)} (SEC ID nº 7; figura 7)
proporciona, cuando se hibrida con VIH-1 en
condiciones de hibridación tales como las descritas en la patente
EP 178 978, una reacción fuerte con los VIH del grupo O, y una
reacción baja con los VIH-1 del grupo M.
La detección se puede realizar de cualquier
manera conocida en sí, en particular:
poniendo en contacto estas sondas con los ácidos
nucleicos obtenidos a partir de células contenidas en fluidos
biológicos (por ejemplo el líquido cefalorraquídeo, la saliva,
etc.), o bien con estos fluidos en sí, por cuanto que sus ácidos
nucleicos han sido accesibles para la hibridación con estas sondas,
y ello en condiciones que permiten la hibridación entre estas
sondas y estos ácidos nucleicos, y
mediante una detección de la hibridación
eventualmente producida.
Dicho diagnóstico que usa reacciones de
hibridación se puede realizar asimismo con la ayuda de mezclas de
sondas derivadas respectivamente del
VIH-1_{(VAU)}, del VIH-1 y del
VIH-2, por cuanto que no es necesario hacer la
distinción entre los tipos de virus VIH buscados.
La invención tiene asimismo por objeto vectores
de expresión que contienen la secuencia que codifica para las
proteínas de cubierta de VIH-1; la solicitud
describe asimismo vectores de expresión que contienen la secuencia
que codifica la integrasa.
La invención comprende unas composiciones para
la detección de la presencia o no de virus
VIH-1_{VAU} en muestras de suero u otros líquidos
o tejidos biológicos, obtenidos a partir de pacientes susceptibles
de ser portadores del virus VIH-1_{VAU}. Estas
composiciones se caracterizan porque comprenden al menos una sonda
obtenida a partir de una secuencia nucleotídica que procede o se
deriva del genoma del virus VIH-1_{VAU},
particularmente un fragmento de ADN VIH-1_{VAU}
que contiene la región o una parte de la región que codifica la
proteína env del virus VIH-1_{VAU} o de una
variante de VIH-1_{VAU}.
Ventajosamente, la composición descrita
anteriormente comprende asimismo una sonda obtenida a partir de una
secuencia nucleotídica que procede de VIH-1 o de
VIH-2.
Otras composiciones de diagnóstico comprenden
los cebadores de la invención que se pueden usar en la amplificación
génica de retrovirus del subgrupo O o variantes de estos
retrovirus.
La invención se refiere a una proteína del
retrovirus VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O, o
polipéptido o péptido natural o sintético que comprende al menos
una parte de dicha proteína, susceptibles de ser reconocidos por
anticuerpos aislables a partir de suero obtenido después de una
infección por una cepa de VIH-1 del grupo O
VAU.
La invención se refiere a una proteína de
cubierta externa del retrovirus VIH-1_{VAU}
codificado por el gen que comprende la secuencia que corresponde a
la SEC ID nº 5: Según un modo de realización preferido de la
invención, esta proteína se caracteriza además porque comprende la
secuencia de aminoácidos que corresponde a la SEC ID nº 6
representada en la figura 3, y que comprende los restos de
aminoácidos 1 a 256. La invención tiene asimismo por objeto
cualquier polipéptido o variante, derivado de dicha secuencia, que
tiene un epítopo susceptible de ser reconocido por anticuerpos
inducidos por el virus VIH-1_{VAU}.
Dicha proteína se puede obtener en forma
glucosilada o no glucosilada.
La invención tiene también por objeto una
proteína transmembranaria de cubierta que comprende la cadena de
aminoácidos SEC ID nº 8 representada en la figura 3, entre los
restos de aminoácidos 527 y 877. Esta proteína transmembranaria
está, en el marco de la invención, en forma glucosilada o no.
La invención se refiere a cualquier antígeno, en
particular proteínas, glicoproteínas, polipéptidos o péptidos,
obtenidos mediante la expresión de secuencias que codifican el
genoma VIH-1_{(VAU)} y que tienen propiedades
inmunológicas equivalentes a las del
VIH-1_{(VAU)}. Los antígenos se denominan
equivalentes en el marco de la presente invención por cuanto que
son reconocibles por los mismos anticuerpos, en particular
anticuerpos aislables a partir de suero obtenido de un paciente que
ha sido infectado por un VIH-1_{(VAU)}.
En particular, la invención tiene por objeto los
péptidos o polipéptidos sintetizados químicamente y cuya secuencia
de aminoácidos está contenida en la de las proteínas de cubierta de
VIH-1_{(VAU)}, representada en la figura 3, o los
péptidos o polipéptidos equivalentes.
También se debe incluir, entre los péptidos,
polipéptidos, proteínas o glicoproteínas equivalentes, fragmentos
de los antígenos que anteriores y los péptidos preparados mediante
síntesis química o mediante ingeniería genética, por cuanto que dan
lugar a reacciones inmunológicas cruzadas con los antígenos de los
cuales derivan. En otros términos, la invención se refiere a
cualquier péptido o polipéptido que tiene epítopos idénticos o
parecidos a los epítopos de dichos antígenos, susceptibles de ser
reconocidos por los mismos anticuerpos. Forman parte de este último
tipo de polipéptidos, los productos de expresión de secuencias de
ADN que corresponden a las secuencias de los ADN que codifican
dichos polipéptidos o antígenos.
Más particularmente, los antígenos obtenidos a
partir del virus VIH-1_{(VAU)} o producidos
mediante ingeniería genética o síntesis química habitual y que
presentan el máximo interés en el contexto de la presente invención
son los antígenos que permiten establecer una distinción clara entre
los virus VIH-1_{(VAU)} de la invención y los
virus de los grupos VIH-1 y VIH-2.
En este aspecto, se han observado diferencias considerables a nivel
de la proteína de cubierta del virus
VIH-1_{(VAU)}, así como a nivel del epítopo
inmunodominante de la porción externa de la proteína PM. Parece ser
que las proteínas gag y pol presentan más similitud con el virus
VIH-1 que la proteína de cubierta.
La invención se refiere asimismo a péptidos o
polipéptidos idénticos a la región inmunodominante de la
glicoproteína transmembranaria de cubierta del
VIH-1_{(VAU)}. Esta región se representa en la
figura 3.
Unos polipéptidos preferidos de esta región son,
por ejemplo, los que contienen la secuencia CKNRLIC o que
corresponden a esta secuencia. También puede tratarse de
polipéptidos o péptidos que responden a la secuencia RLLA
LETFIQNWWLLNLWGCKKRLIC o que comprenden está secuencia.
LETFIQNWWLLNLWGCKKRLIC o que comprenden está secuencia.
Otro péptido preferido, identificado a
continuación mediante la denominación "péptido VAU", responde a
la siguiente secuencia, o comprende esta secuencia o cualquier
parte de esta secuencia susceptible de ser reconocida por
anticuerpos dirigidos contra el retrovirus
VIH-1_{(VAU)},
RARLLALETFIQNQQLLNLWGCKNRLICYTSVKWNKT.
Unos Polipéptidos variantes de esta secuencia
son, por ejemplo, los polipéptidos representados en la figura 4
para los aislados VIH-1_{MVP5180} y
VIH-1_{(AN170)}. Estos polipéptidos pueden también
ser derivados de los anteriores mediante inserción y/o supresión
y/o deleción, por ejemplo sustitución conservativa mediante restos
de aminoácidos.
La presente solicitud da a conocer un péptido
que procede del virus VIH-1-O DUR
depositado el 23 de febrero de 1995 a la CNCM con la referencia
I-1542, o un péptido cuya secuencia se distingue de
la del anterior mediante sustitución, deleción o adición de
aminoácidos, conservando sin embargo este péptido distinto las
características antigénicas del anterior.
A continuación se definen otros péptidos
descritos en la solicitud.
Así, un péptido preferido es un péptido que
comprende al menos 4 aminoácidos consecutivos contenidos en la
secuencia GAG representada en la figura 8, o de una secuencia GAG
inmunológicamente parecida que procede de una variante del virus
VIH-1-O DUR, siendo dicha secuencia
inmunológicamente parecida reconocida por anticuerpos que reconocen
también de manera específica al menos una de las secuencias AHPQQA,
LWTTRAGNP contenidas en la secuencia GAG de la figura 8.
Preferentemente, este péptido consiste en un
péptido cuya secuencia de aminoácidos está contenida en una de las
siguientes secuencias:
SPRTLNAWVKAVEEKAFNPEIIPMFMLSEGA (1)
MLNAIGGHQGALQVLKEVIN (2)
GPLPPGQIREPTGSDIAGTTSTQQEQI (3)
IPVGDIYRKWIVLGLNKMVKMYSPVSILDI (4)
QGPKEPFRDYVDRFYKTKLAE (5)
AHPQQA (5 bis)
LWTTRAGNP (5ter),
o bien es una secuencia inmunológicamente
parecida correspondiente, comprendiendo este péptido al menos 4
aminoácidos consecutivos de una de dichas secuencias.
Todavía más preferentemente, este péptido
consiste en un péptido cuya secuencia de aminoácidos está contenida
en una de las siguientes secuencias:
SPRTLNAWVK (6)
GSDIAGTTST (7)
QGPKEPFRDYVDRF (8)
o bien en una secuencia inmunológicamente
parecida correspondiente, comprendiendo este péptido al menos cuatro
aminoácidos consecutivos de una de dichas secuencias.
Unos péptidos particularmente preferidos son los
péptidos que contienen: MVA
- -
- la secuencia de aminoácidos NPEI (9) o
- -
- la secuencia de aminoácidos AVEEKAFNPEIIPMFM (10), y más particularmente los péptidos cuya secuencia de aminoácidos está contenida en una de las siguientes secuencias:
- IGGHQGALQ (23)
- REPTGSDI (24)
o bien en una secuencia inmunológicamente
parecida correspondiente, comprendiendo este péptido al menos 4
aminoácidos consecutivos de una de dichas secuencias, así como el
péptido cuya secuencia de aminoácidos está contenido en la
secuencia de aminoácidos siguiente:
INDEAADWD (25)
o bien en una secuencia inmunológicamente
parecida correspondiente, comprendiendo este péptido al menos 4
aminoácidos consecutivos de dicha secuencia.
La presente solicitud da a conocer las
secuencias de ácidos nucleicos que codifican los péptidos (23), (24)
y (25), así como las secuencias de ácidos nucleicos que codifican
las secuencias inmunológicamente parecidas, así como las
composiciones que comprenden al menos uno de estos ácidos
nucleicos.
La solicitud describe asimismo el uso de al
menos uno de estos ácidos nucleicos para la detección y la
discriminación entre cepas VIH-1 del grupo M y
VIH-1 del grupo O.
Se describe asimismo en la presente solicitud un
péptido que procede del virus
VIH-1-O DUR definido anteriormente,
comprendiendo dicho péptido al menos 4 aminoácidos consecutivos del
bucle V3 de gp120 representado en la figura 9 o de la secuencia
correspondiente inmunológicamente parecida que procede de una
variante del virus VIH-1-O DUR,
siendo dicha secuencia inmunológicamente parecida, reconocida por
anticuerpos que reconocen también de manera específica al menos una
de las secuencias:
KEIKI (12),
EREGKGAN (13),
CVRPGNNSVKEIKI (14),
QIEREGKGANSR (15).
De manera preferida, este péptido contiene:
- a)
- o bien la secuencia
- CVRPGNNSVIOE'IOGPMAWVSMQIEREGKGANSRTAFC (11) o una parte de esta secuencia que contiene al menos 4 aminoácidos
- b)
- o bien una secuencia de aminoácidos distinta de la secuencia de a) en la que uno o varios aminoácidos están sustituidos por uno o varios aminoácidos, con la condición de que el péptido conserve su reactividad con un antisuero contra dicho péptido mencionado anteriormente,
\newpage
- c)
- o bien una secuencia de aminoácidos distinta según a) o b) en la que uno o varios aminoácidos se han suprimido o añadido, con la condición de que el péptido conserve su reactividad con un antisuero contra el péptido de a),
- d)
- o bien una secuencia o parte de una secuencia inmunológicamente parecida correspondiente.
Todavía más preferentemente, este péptido
contiene
- o bien la secuencia KEIKI (12),
- o bien la secuencia EREGKGAN (13),
- o bien la secuencia GPMAWYSM (16).
De manera particularmente preferida, un péptido
tal como se ha definido anteriormente contiene la secuencia de
aminoácidos CVRPGNNSVKEIKI (14), o bien la secuencia QIEREGKGANSR
(15).
La solicitud da a conocer asimismo un péptido
que procede del virus VIH-1-O DUR
tal como se define anteriormente, comprendiendo dicho péptido al
menos 4 aminoácidos consecutivos, cuya secuencia completa está
contenida en la secuencia de la región inmunodominante de la gp41
representada en la figura 9 o en una secuencia correspondiente
inmunológicamente parecida, que procede de una variante del virus
VIH-1-O DUR, siendo dicha secuencia
inmunológicamente parecida reconocida por anticuerpos que reconocen
también específicamente al menos una de las secuencias:
RLLALETLMQNQQL (17),
LNLWGCRGKAICYTSVQWNETWG (18),
CRGKAI (19),
SVQWN (20),
RLLALETLMONQQLLNLWGCRGKAICYTS (21),
QNQQLLNLWGCRGKAICYTSVQWN (22).
De manera preferida, este péptido es un péptido
que contiene la secuencia RLLALETLMQNQQL (17), o
LNLWGCRGKAICYTSVQWNETWG (18), o parte de este péptido (18) que
contiene:
- (a)
- o bien la secuencia CRGKAI (19), o bien la secuencia SVQWN (20) en la que Q, cuando sea apropiado, se sustituye por un aminoácido diferente, sin embargo diferente también de K, o bien las dos secuencias al mismo tiempo,
- (b)
- o bien una secuencia de aminoácidos distinta de la secuencia de a) en la que uno o varios aminoácidos se sustituyen con dos aminoácidos, con la condición de que el péptido conserve su reactividad con un antisuero contra el péptido de a),
- (c)
- o bien una secuencia de aminoácidos distinta según a) o b), en la que uno o varios aminoácidos se suprimieron o se añadieron, con la condición de que el péptido conserve su reactividad con un antisuero contra el péptido de a),
- (d)
- o bien una secuencia o una parte de secuencia inmunológicamente parecida correspondiente.
Todavía más preferentemente, este péptido posee
una u otra de las siguientes características:
- -
- su secuencia N-terminal, que contiene al menos 8 aminoácidos, no está inmunológicamente reconocida por anticuerpos formados contra la secuencia RILAVERY contenida en la región inmunodominante de gp41 de la cepa VIH-1-LAI.
- -
- no está reconocido por anticuerpos formados contra el péptido SGKLIC de la cepa VIH-1-LAI.
- -
- contiene una u otra de las dos secuencias siguientes:
- RLLALETLMONQQLLNLWGCRGKAICYTS (21)
- QNQQLLNLWGCRGKAICYTSVOWN (22)
Se preparó un péptido VAU mediante la técnica
habitual de síntesis peptídica en fase sólida, mediante el método
Fmoc en "flujo continuo". Se preparó el péptido con la ayuda de
un sintetizador Milligen 9050 PEP usando la resina "Millipore"
PEG PAL, sustituida por el primer resto de aminoácido
C-terminal. Las cadenas laterales de los
aminoácidos están protegidas por los siguientes grupos: Pmc por
arginina; Trt por asparagina, glutamina y cisteína; Boc por lisina;
tBu por ácido glutámico; éter tBu por serina, treonina y tirosina.
Los grupos temporales Fmoc se eliminan mediante una disolución de
piperidina al 20% en DMF. Las reacciones de enlace de cada
aminoácido se realizan con 6 equivalentes de DIPCDI y HOBT. Ciertos
restos necesitan un doble enlace, en particular las argininas 1 y
23, las cisteínas 19 y 26, la asparagina 11, las glutaminas 10, 12 y
13, la alanina 4, la isoleucina 9 y las leucinas 2, 3, 14 y 15.
Después del enlace, la resina se seca al vacío.
El péptido se escinde del soporte mediante el agente reactivo K
durante 4 horas a temperatura ambiente. El péptido en bruto se
precipita y se lava con éter etílico. El producto se purifica
mediante cromatografía líquida a alta presión (HPLC) en un aparato
WATERS LC PREP 4000 con cartuchos WATER Delta Pak C18 40x100mm,
caudal 30 ml/mn, gradiente acetonitrilo/TFA al 0,1%. Se reúnen las
fracciones que contienen el péptido, se concentran con el evaporador
rotativo y después se liofilizan.
El péptido (0,025 mM) se disuelve en una
disolución de 10 mM de acetato de amonio. El pH se lleva a 8,5 con
una disolución de 1M de amoniaco. Después de 3 ó 4 horas se reajusta
el pH. La ciclización se monitoriza mediante HPLC a 214 nm y 280
nm, columna WATERS Delta Pak C18 5 \mu, gradiente acetonitrilo/TFA
al 0,1%. La ciclización se termina después de 15 horas. El pH se
lleva a 6 con la ayuda de ácido acético al 97-100%,
la disolución se liofiliza y después se purifica en las mismas
condiciones que para el péptido en bruto.
El péptido se monitoriza mediante HPLC y
mediante espectometría de masas según la técnica de
electropulverización (espectrofotómetro FISON VG Trio 2000).
Fmoc:
Fluoroenil-9-metiloxicarbonilo
Pmc:
pentanometil-8-croman-sulfonilo-6
Trt: tritrilo
Boc: tercbutiloxicarbonilo
tBU: terc-butilo
DMF: dimetilformamida
DIPCDI: Diisopropilcarbodiimida
HOBT:
Hidroxi-1-benzotriazol
TFA: ácido trifluoroacético
Agente reactivo K:
Fenol/agua/tioanisol/etanoditiol/TFA;,5 ml/2,5 ml/1,5 ml/41 ml
El análisis de transferencia Western de una
serie de muestras séricas que provienen de una paciente infectada
por el VIH-1_{(VAU)} se representa en la figura 2.
Se incubaron bandas de nitrocelulosa que portan proteínas separadas
mediante electroforesis y que provienen de partículas de VIH
purificadas (LAV BLOT, SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR), con muestras de
suero, y se evaluó su reactividad según los protocolos recomendados
por el fabricante. Los resultados obtenidos son los siguientes:
Banda 1: proteínas específicas de VIH-2, que se
hicieron reaccionar con una muestra de suero de la paciente
VIH-1_{(VAU)} obtenida en febrero de 1992. Bandas
2 a 7: sueros VIH-1 positivos; sueros de la
paciente VIH-1_{(VAU)}: 2: obtenido en noviembre
de 1990; 3: obtenido en diciembre de 1990; 4: obtenido en febrero
de 1991: 5: obtenido en febrero de 1992; 6: control negativo; 7:
control positivo (suero de un individuo infectado por el
VIH-1). Los nombres y los tamaños de las proteínas
(en kD) se indican en el margen.
La figura 3 muestra una alineación de la
secuencia de aminoácidos de la cubierta de
VIH-1_{(VAU)} con la secuencia correspondiente
del aislado de referencia VIH-LAI
(Wain-Hobson, et al. 1985). Los péptidos
señal, el bucle V3 y el epítopo inmunodominante gp41 están
resaltados mediante rectángulos rayados. El sitio de escisión entre
la glucoproteína de cubierta externa gp120 y la gp41
transmembranaria se indica mediante flechas. Las líneas verticales
entre las letras de aminoácidos indican una identidad completa, los
dos puntos (:) indican una alta homología, y los puntos (.) indican
una homología limitada entre aminoácidos individuales. La alineación
se efectúo usando el programa GAP del paquete de programas
GCG-Wisconsin.
Se ha descrito la versión original (1.0) de los
programas GAP y BESTFET por Paul Haeberli a partir de un estudio
detallado de las publicaciones de Needleman y Vunsch (J. Mol. biol.
48, 443-453 (1970)) y de Smith y Waterman (Adv.
Appl. Math. 2; 482-489 (1981)). Las alineaciones
limitadas se implementaron por Paul Heaberli, y se añadieron al
paquete de programas para constituir la versión 3.0. Después, se
fusionaron en un solo programa por Philip Marquess para constituir
la versión 4.0. Se han modificado las penalidades de ausencia de
separación entre la alineación de las proteínas tal como se sugirió
por Rechid, Vingron y Argos (CABIOS 5; 107-113
(1989).
La alineación de la figura 3 revela numerosas
zonas de alta divergencia, con algunos dominios conservados aquí y
allá. Estas regiones conservadas corresponden más o menos a los
dominios conservados asimismo en los aislados
VIH-1 habituales (Alizon, et al. 1986, Benn,
et al. 1985). Entre los dominios divergentes, el bucle V3,
denominado asimismo determinante principal de neutralización
(Javaherian, et al. 1990, Javaherian, et al. 1989,
Matsushita, et al. 1988) es claramente uno de los más
divergentes, aunque se conserven las dos cisternas que definen el
bucle. La secuencia del epiplón del bucle GPGRAF para el
VIH-1 LAI es GPMAWY en el
VIH-1_{(VAU)}. Este motivo del epiplón es idéntico
al del aislado del grupo O camerunés VIH_{ANT70} (Van den
Heasevelde, et al. 1994), pero es diferente del motivo del
otro aislado del grupo O, VIH_{MVP5180} (Gürtler, et al.
1994), para el que el motivo es GPMRWR.
En la totalidad de la cubierta, se han
identificado en total 29 sitios de N-glicosilación
potenciales, de los cuales 13 se conservan en comparación con otras
proteínas de cubierta del VIH-1. También se han
encontrado en total 19 cisteínas conservadas, lo que indica que se
conserva la arquitectura global de repliegue de la proteína, pero
se han encontrado 5 cisteínas no conservadas.
La figura 4 muestra la alineación múltiple de
los péptidos inmunodominantes en el segmento extracelular de la
glicoproteína de cubierta transmembranaria de diferentes aislados de
VIH-1. Todas las secuencias se comparan con la
secuencia de referencia VIH-1 LAI. Los guiones
indican una identidad con el VIH-1 LAI. La
alineación se efectuó con la ayuda del programa PILEUP del paquete
de programas GCG-Wisconsin.
En el programa PILEVP, la estrategia de unión
representada por el dendogramo se denomina UPGMA, que significa
"Unweighted pair-group method using arithmetic
averages" (Smith, P.H.A Sokal, R.R. (1973) en Numerical Taxonomy
(p. 230-234), W.H. Freeman and Company, San
Francisco, California, USA). Cada alineación en par de PILEVP usa
el método de Needleman y Wunsch (Journal of Molecular Biology 48;
443-453 (1970)).
Tal como lo muestra la figura 4, la secuencia de
aminoácidos del epítopo inmunodominante de la porción externa de la
proteína TM (Gnann, et al., 1987) es sustancialmente
diferente de la de otros aislados de VIH-1 y
VIH-2. Sin embargo, guardó la mayoría de los
aminoácidos que se conservaron entre los virus VIH-1
y VIH-2.
Se ha encontrado que ciertos aminoácidos
particulares estaban conservados solamente entre los virus del grupo
O: tal como es el caso de la lisina en posición 21 en un péptido de
26 aminoácidos, de la treonina en posición 7 y de la asparagina en
posición 11. Estas diferencias podrían explicar la ausencia de
detección de antígenos de cubierta VIH-1 habituales
por uno de los sueros de la paciente
VIH-1_{(VAU)}, y asimismo probablemente por el de
pacientes infectados por otros virus de grupo O. Globalmente, la
comparación entre las secuencias de cubierta VIH-1
LAI y VIH-1_{(VAU)} mostró una identidad de 50%.
La secuencia de cubierta VIH-1_{(VAU)} también se
comparó con la de otros representantes VIH de los cuales los dos
miembros del grupo O del VIH-1 están descritos y
secuenciados: VIH-_{ANT70} y VIH_{MVP5180}, y
SIV. Los resultados de este análisis, representados en la Tabla 1,
establecen que VIH-1_{(VAU)} pertenece al grupo O.
La cubierta de VIH-1_{(VAU)} es idéntica en 70% a
la cubierta VIH-_{ANT70}, e idéntica en 71% a
VIH_{MVP5180}. Entre los subtipos de VIH-1 más
corrientes, la identidad a nivel de la cubierta es comparable,
comprendida entre
74% y 80%.
74% y 80%.
Se analizó la relación entre el
VIH-1_{(VAU)}, otros miembros de la filogenia de
los VIH-1 y los dos virus recientemente descritos
del grupo O, mediante construcción de un árbol filogenético de
parcimonia no ponderada con la ayuda de la secuencia nucleotídica
de la región transmembranaria env. El resultado de este
análisis se representa en la fig. 5 en la que las cifras indican el
número de cambios nucleotídicos. La figura 5 muestra que el
VIH-1_{(VAU)} es más o menos equidistante de los
dos otros virus del grupo O, y que, globalmente, estos tres virus
parecen ser aproximadamente equidistantes unos de otros. En efecto,
el número de cambios nucleotídicos entre el
VIH-1_{MVP5180} y el
VIH-1_{(VAU)} es de 218 en el segmento de genoma
analizado, mientras que la distancia es de 183 entre el
VIH-1_{MVP5180} y el
VIH-1_{ANT70}, y de 213 entre el
VIH-1_{ANT70} y el
VIH-1_{(VAU)}. Este perfil de divergencia es muy
similar a lo que se encuentra en el conjunto de los demás subtipos
de VIH-1, en el que el número de cambios
nucleotídicos únicos que se encuentran entre dos subgrupos
distintos está comprendido entre 157 (subtipo E al subtipo F) y 219
(subtipo A al subtipo D).
La tabla 1 muestra la comparación de las
secuencias de cubierta de diferentes virus emparentados al
VIH-1. Las cifras indican el porcentaje de
identidad en aminoácidos entre secuencias de cubierta, tal como se
calcularon con la ayuda del programa GAP del paquete de programas
GCG-Wisconsin. *: para el VIH_{ANT70}, se usó sólo
la proteína de cubierta externa en la comparación.
De manera general, la invención se refiere a
cualquier composición que se puede usar para la detección in
vitro de la presencia en un fluido biológico, en particular de
personas que han estado en contacto con el
VIH-1_{(VAU)}, o de anticuerpos contra al menos
uno de los antígenos VIH-1_{(VAU)}. Esta
composición se puede aplicar al diagnóstico selectivo de la
infección mediante VIH-1 del grupo O, usando
técnicas de diagnóstico tales como se describen en las solicitudes
de patente EP 84401.834 y EP 87400.151.4. En el contexto de la
presente invención, se usa cualquier constituyente que comprende
determinantes antigénicos capaces de ser reconocidos por
anticuerpos producidos contra el
VIH-1_{(VAU)}, por ejemplo antígenos o péptidos recombinantes o péptidos sintetizados químicamente definidos a partir de la secuencia de la cubierta VIH-1_{(VAU)}. A este respecto, la invención se refiere más particularmente a unas composiciones que contienen al menos una de las proteínas de cubierta del virus VIH-1_{(VAU)}. Se mencionará, a título de ejemplos de composiciones, las que contienen proteínas, glucoproteínas o péptidos de la proteína de cubierta que corresponden a la totalidad de la región 590-620 de la proteína gp41 del VIH-1_{(VAU)} o a la partes de esta región específicas del
VIH-1_{(VAU)} tales como los péptidos -TFIQN- o -WGCKNR-.
VIH-1_{(VAU)}, por ejemplo antígenos o péptidos recombinantes o péptidos sintetizados químicamente definidos a partir de la secuencia de la cubierta VIH-1_{(VAU)}. A este respecto, la invención se refiere más particularmente a unas composiciones que contienen al menos una de las proteínas de cubierta del virus VIH-1_{(VAU)}. Se mencionará, a título de ejemplos de composiciones, las que contienen proteínas, glucoproteínas o péptidos de la proteína de cubierta que corresponden a la totalidad de la región 590-620 de la proteína gp41 del VIH-1_{(VAU)} o a la partes de esta región específicas del
VIH-1_{(VAU)} tales como los péptidos -TFIQN- o -WGCKNR-.
La invención se refiere asimismo a composiciones
que asocian proteínas y/o glucoproteínas y/o péptidos
VIH-1_{(VAU)} recombinantes o sintéticos, con
proteínas y/o glucoproteínas y/o péptidos VIH-1 y/o
VIH-2 y/o de otro VIH-1 del grupo O
obtenidos mediante extracción o en lisados o mediante recombinación
o mediante síntesis química y/o de péptidos derivados de estas
proteínas o glucoproteínas, y susceptibles de ser reconocidos por
anticuerpos inducidos por el virus VIH-1 y/o
VIH-2 y/o VIH-1 del grupo O.
Las composiciones de diagnóstico que contienen
determinantes antigénicos capaces de ser reconocidos por anticuerpos
dirigidos contra el VIH-1_{(VAU)}, en particular
las composiciones peptídicas, se pueden incluir en o asociar con
composiciones o kits ya disponibles para la detección de la
infección de los retrovirus VIH-1 y/o
VIH-2, a fin de extender el espectro de detección
de los kits para la detección de los retrovirus
VIH-1 del grupo O.
A título de ejemplos no limitativos:
- -
- proteínas del núcleo (core), particularmente las proteínas gag, pol, VIH-1 y VIH-2, o péptidos de éstas, y proteínas o péptidos de cubierta VIH-1_{(VAU)},
- -
- o bien glucoproteínas de cubierta VIH-1, glucoproteínas de cubierta VIH-2 y glucoproteínas de cubierta VIH-1_{(VAU)},
- -
- o bien mezclas de proteínas y/o de glucoproteínas VIH-1, de proteínas y/o de glucoproteínas VIH-2, y de proteínas y/o de glucoproteínas de cubierta VIH-1_{(VAU)}.
Es importante observar que, aunque los
anticuerpos de pacientes infectados por virus VIH-1
del grupo O reaccionan altamente con antígenos gag y pol de virus
VIH-1 del grupo M, su reactividad es prácticamente
nula con antígenos de cubierta de virus del grupo M. Por lo tanto,
es importante que la composición de la presente invención comprenda
al menos una proteína o un péptido de cubierta
VIH-1_{(VAU)} a fin de que este virus pueda ser
detectado con certeza.
Por consiguiente, dichas composiciones, usadas
en el diagnóstico, ayudan al diagnóstico del SIDA o de los síntomas
asociados, que se extienden en un espectro más amplio de los agentes
etiológicos responsables. Es inútil decir que el uso de
composiciones de diagnóstico que contienen solamente proteínas y/o
glucoproteínas de cubierta VIH-1_{(VAU)} no es
menos útil para la detección más selectiva de la categoría de
retrovirus que puede ser responsable de la
enfermedad.
enfermedad.
La presente invención se refiere a un
procedimiento de diagnóstico in vitro de la invención por los
VIH, agentes etiológicos del SIDA y de síndromes emparentados, que
comprende la puesta en contacto de un suero o de otro medio
biológico, que procede de un paciente o sujeto que constituye el
objeto del diagnóstico, con una composición que contiene al menos
una proteína, una glucoproteína o un péptido
VIH-1_{(VAU)}, y la detección de una eventual
reacción inmunológica. Se han descrito anteriormente ejemplos de
dichas composiciones.
Unos métodos preferidos usan, por ejemplo,
reacciones inmunoenzimáticas de tipo ELISA o de inmunofluorescencia.
Las detecciones se pueden realizar mediante inmunofluorescencia
directa o indirecta, o mediante determinaciones inmunoenzimáticas
directas o indirectas.
Dichas detecciones comprenden por ejemplo:
- -
- depositar cantidades determinadas del extracto o de las composiciones antigénicas previstas de acuerdo con la presente invención en los pocillos de una microplaca;
- -
- introducir en cada pocillo de un suero diluido o no, susceptible de contener anticuerpos cuya presencia se deba detectar in vitro;
- -
- incubar la microplaca;
- -
- lavar cuidadosamente la microplaca con un tampón apropiado;
- -
- introducir en los pocillos de la microplaca anticuerpos marcados específicos anti-inmunoglobulina humana, realizándose la marcación mediante una enzima seleccionada de entre las capaces de hidrolizar un sustrato de tal manera que este último sufre entonces una modificación de su absorción de las radiaciones, al menos en una banda de longitud de onda determinada, y
- -
- detectar, preferentemente de manera comparativa con relación a un control, de la importancia de la hidrólisis del sustrato como medida de riesgos potenciales, o de la presencia efectiva de la infección.
La presente invención se refiere asimismo a
estuches o kits de diagnóstico de la infección mediante el virus
VIH-1_{(VAU)}, los cuales comprenden en
particular:
- -
- un extracto, una fracción más purificada o un antígeno sintético derivado de los tipos de virus indicados anteriormente, siendo este extracto, esta fracción o este antígeno marcados, por ejemplo, de manera radioactiva, enzimática, fluorescente u otro,
- -
- unos anticuerpos antiinmunoglobulinas humanas, o una proteína A (fijados de manera ventajosa en un soporte insoluble en agua) tales como, por ejemplo, perlas de agarosa) o unos pocillos de microplacas, etc.),
- -
- eventualmente una muestra de fluido biológico, o células obtenidos a partir de un sujeto de control negativo,
- -
- unos tampones y, cuando sea apropiado, unos sustratos para la visualización del marcado.
La invención tiene asimismo por objeto unas
composiciones inmunógenas capaces de inducir la formación de
anticuerpos que reconocen antígenos que se pueden obtener mediante
síntesis química o mediante recombinación.
Se evaluó la capacidad de los anticuerpos
séricos de la paciente infectada por el
VIH-1_{(VAU)} para reaccionar con preparaciones
antigénicas VIH-1 con la ayuda de diversos kits
disponibles en el comercio: SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR, (GENELAVIA
MIXT) ABBOTT, WELLCOME, y BEHRING. Se examinó la reactividad de
estos anticuerpos con diferentes proteínas VIH-1
con la ayuda del kit de transferencia de western de SANOFI
DIAGNOSTICS PASTEUR, siguiendo los protocolos recomendados por el
fabricante.
Más precisamente, el suero de la paciente se
examinó varias veces con la ayuda de kits de ELISA específicos del
VIH-1. En primer lugar se ensayó en 1990, y resultó
positivo, y se anotó 7,33 (esta cifra corresponde a la relación de
la DO medida sobre la DO del ruido de fondo) con el kit SANOFI
DIAGNOSTICS PASTEUR, 3,50 con el kit ABBOTT y 2,70 con el kit
WELLCOME. Durante el uso de los reactivos específicos al mismo
tiempo del VIH-1 y del VIH-2, el
suero se anotó 1,42 con el kit de Behring y 4,40 con el kit
WELLCOME.
La capacidad del suero de la paciente para
reaccionar en diferentes fechas con diferentes proteínas de
estructura VIH-1 se estudió con la ayuda de la
determinación mediante inmunomarcación LAV BLOT
VIH-1, ensayo comercializado por SANOFI DIAGNOSTICS
PASTEUR. Tal como lo muestra la figura 5, con todas las muestras de
suero ensayadas, se observa sólo una muy baja reactividad del suero
con las proteínas env VIH-1 gp160 y gp120.
Sin embargo, el suero reaccionó altamente con las proteínas gag del
VIH-1 p55 (precursor de gag) y p24 (CA), y con los
productos pol p66 (RT) y p34 (IN). En la inmunomarcación de
VIH-2, se observó sólo una reactividad muy baja con
la p26 gag.
Esto ilustra que la detección de anticuerpos
específicos del grupo O con kits de diagnóstico sérico disponibles
en el comercio debe ser controlada cuidadosamente. Aunque
anticuerpos séricos de pacientes infectados por virus del grupo O
presenten fuertes reacciones cruzadas con los antígenos gag y pol
del grupo M, éstos presentan poco o nada de reacción con los
antígenos de cubierta del grupo M. Por lo tanto, se puede suponer
que una proporción significativa de estos pacientes podría no ser
detectada durante el uso de ciertos kits a base de agentes
reactivos antigénicos de cubierta del grupo M. En efecto, en un
primer estudio reciente de varios sueros de pacientes infectados
por el grupo O, se encontró que la capacidad para detectar
anticuerpos específicos del grupo O era muy diferente según el kit
de detección usado (Loussert-Ajaka, I., Ly, T.D.,
Chaix, M.L., Ingrand, D., Saragosti, S., Courroucé, AM.,
Brun-Vézinet, F. y Simon, F. (1994).
VIH-1/VIH-2 seronegativity in
VIH-1 subtype O infected patients. Lancet. 343,
1393-1394.). Esto implica que es necesario un
estudio cuidadoso y profundo de la reactividad de un gran número de
sueros del grupo O con todos los kits de diagnóstico disponibles en
el mercado.
La invención se refiere a un suero susceptible
de ser producido en el animal mediante inoculación del
VIH-1_{(VAU)}, particularmente los epítopos
antigénicos del VIH-1_{(VAU)}, y más
particularmente los epítopos antigénicos de la proteína de cubierta
del virus VIH-1_{(VAU)}. La invención se refiere
más particularmente a los anticuerpos policlonales más
específicamente orientados contra cada uno de los antígenos, en
particular proteínas o glucoproteínas del virus. La invención se
refiere asimismo a anticuerpos monoclonales producidos mediante
diferentes técnicas, siendo estos anticuerpos monoclonales
orientados respectivamente, de forma más específica, contra las
diferentes proteínas del VIH-1_{(VAU)},
particularmente las proteínas de cubierta del
VIH-1_{(VAU)}.
Estos anticuerpos policlonales o monoclonales se
pueden usar en diferentes aplicaciones. Se mencionará esencialmente
su uso para neutralizar las proteínas correspondientes, incluso
inhibir la infecciosidad del virus entero. También se pueden usar,
por ejemplo, para detectar los antígenos víricos en las
preparaciones biológicas, o para realizar operaciones de
purificación de las proteínas y/o de las glucoproteínas
correspondientes, por ejemplo durante el uso en columnas de
cromatografía de afinidad.
A título de ejemplo, anticuerpos
anti-cubierta o anticuerpos anti-gag
son agentes reactivos que se pueden usar en el diagnóstico, en
particular para la detección de partículas VIH-1 del
grupo O mediante ELISA de captura de antígeno.
La invención se refiere a anticuerpos dirigidos
contra uno o varios antígenos del virus
VIH-1_{(VAU)} producidos a partir de secuencias
de aminoácidos del VIH-1_{(VAU)}. Recientemente,
se han descrito técnicas de obtención de anticuerpos a partir de
epítopos antigénicos parecidos a los epítopos antigénicos del virus
VIH-1_{(VAU)} de la presente invención.
La técnica de preparación de anticuerpos
descrita en la publicación de ULMER et al., 1993, puede ser
usada por el experto en la materia para preparar anticuerpos de la
presente invención, formando las modificaciones que permiten
adaptar esta técnica a los antígenos de la presente invención parte
de los conocimientos del experto en la técnica.
Se ha verificado la inmunoreactividad del
péptido vau, después de la preparación de las placas ELISA
experimentales, según un protocolo establecido para un ensayo de
detección sistemática de los anticuerpos anti-VIH.
Este ensayo se basa en la detección de una fase sólida preparada
con el péptido que imita el epítopo inmunodominante de la
glucoproteína de cubierta del virus VIH-1 del grupo
(o del subgrupo) O, aislado VAU. La realización del ensayo se calcó
del protocolo propuesto por el estuche GENELAVIA® MIXT, con los
reactivos de este estuche.
Los datos experimentales reunidos en las dos
tablas de las figuras 21 y 22 demuestran que:
- a)
- los cuatro sueros extraídos de pacientes contaminados por el virus VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O son muy reactivos en el péptido vau;
- b)
- los diez sueros considerados extraídos de pacientes contaminados por el virus VIH-1 (del grupo o del subgrupo) O, entre los 19 sueros transmitidos por el Instituto Pasteur de Yacoundé, son asimismo altamente reactivos en este mismo péptido;
- c)
- los sueros (4 muestras) extraídos de sujetos contaminados por el virus VIH-1 del subtipo B (en fase aguda) no son reactivos en el péptido vau;
- d)
- los sueros extraídos de donantes de sangre asintomáticos (48 muestras ensayadas) no son reactivos en el péptido vau; estos datos experimentales, aunque limitados (debido a la pobreza de las muestras positivas en anticuerpos VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O)) atestan de la sensibilidad y especificidad del péptido seleccionado.
Se desprende de lo que precede, que la solicitud
describe asimismo la detección del virus
VIH-1_{(VAU)} o de una variante gracias al uso de
los anticuerpos descritos anteriormente en un procedimiento que usa
diferentes etapas, estando estas etapas específicamente previstas
para mostrar las propiedades características del virus
VIH-1_{(VAU)}.
La invención se refiere asimismo a la detección
del virus VIH-1_{(VAU)} mediante hibridación
molecular.
De manera general, este procedimiento de
detección del virus VIH-1_{(VAU)} o de una
variante en muestras de suero o de otros líquidos biológicos o de
tejidos, obtenidos a partir de pacientes susceptibles de ser
portadores del virus VIH-1_{(VAU)} comprende las
siguientes etapas:
- -
- fabricar al menos una sonda eventualmente marcada;
- -
- al menos una etapa de hibridación realizada en condiciones que permiten la hibridación mediante la puesta en contacto del ácido nucleico de la muestra sospechosa con dicha sonda marcada, y eventualmente inmovilización del complejo formado sobre un soporte sólido apropiado;
- -
- cuando sea apropiado, lavar dicho soporte sólido con una disolución de lavado adecuado;
- -
- detectar dicho complejo, y por lo tanto detectar la presencia o no del virus VIH-1_{(VAU)} mediante un método apropiado de detección conocido por el experto en la técnica.
En otro modo de realización preferido del
procedimiento según la invención, la hibridación citada
anteriormente se realiza en condiciones no astringentes, y el
lavado del soporte (membrana) se realiza en condiciones adaptadas a
las de la hibridación.
Usando una serología o una técnica de
amplificación génica tal como la Polymerase Chain Reaction (PCR)
específica, se evaluó de forma precisa la importancia de la
epidemia del VIH-1 del grupo O. Se encontró que 5 a
10% de los pacientes infectados por un VIH-1 en el
Camerún están realmente infectados por virus del grupo O. Sin
embargo, salvo el aislado de virus descrito aquí, no se documentó la
propagación de virus del grupo O fuera de África occidental
central. La paciente en la que se aisló el
VIH-1_{(VAU)} siempre vivió en Francia y nunca
viajó a África. Hasta hoy en día, no se tiene ninguna prueba precisa
en cuanto al origen de su infección, pero este caso indica que ya
se ha producido una cierta propagación de los virus del grupo O en
Europa.
La solicitud describe además un procedimiento de
detección y de discriminación en una muestra biológica entre
anticuerpos característicos de un retrovirus VIH-1
del grupo (o del subgrupo) O, y anticuerpos característicos de un
retrovirus de tipo VIH-1 M, caracterizado porque se
pone en contacto esta muestra biológica con un péptido que no
reacciona a los anticuerpos característicos de un retrovirus de tipo
VIH-1 M, en particular uno seleccionado de entre
los péptidos (1), (2), (3), (4), (5bis), (9) y (10) descritos
anteriormente.
Asimismo, se da a conocer un procedimiento de
detección y de discriminación en una muestra biológica entre
anticuerpos característicos de un retrovirus VIH-1
del grupo (o del subgrupo) O, y anticuerpos característicos de un
retrovirus de tipo VIH-1-M,
caracterizado porque se pone en contacto esta muestra biológica con
el péptido que procede de uno de los virus VIH-1 M
tomado en consideración en las figuras 8 u 9 homólogo de un péptido
seleccionado de entre los péptidos (1), (2), (3), (4), (5bis),
(5ter), (9) y (10), resultando la secuencia de este péptido
homólogo de las alineaciones verticales de sus propios aminoácidos
sucesivos, contenidos a su vez en la secuencia peptídica pertinente
relativa al virus VIH-1-M
correspondiente y representada en la figura 8 ó 9 con los
aminoácidos sucesivos de la secuencia del péptido elegido, tal como
se desprende también de la figura 8 ó 9.
El procedimiento de detección y de
discriminación entre infección mediante un retrovirus
VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O y de un
retrovirus VIH-1 del subgrupo M se caracteriza
porque se pone en contacto el suero que procede de las personas
sometidas a un ensayo de diagnóstico de SIDA, en particular con el
péptido RILAVERY.
Además, el procedimiento de detección de la
infección debida a un retrovirus VIH-1 del subgrupo
O, o del VIH-1 del subgrupo M, se caracteriza
porque se usan mezclas de dos categorías de péptidos,
correspondiendo los de la primera categoría a los péptidos (1),
(2), (3), (4), (5bis), (5ter), (9) y (10).
Por otra parte, el procedimiento de
discriminación entre una infección debida a un retrovirus
VIH-1-O DUR y una infección debida
a otro tipo de retrovirus VIH-1-O,
se caracteriza porque se pone en contacto la muestra biológica
estudiada con cualquiera de los péptidos (11) a (15), o de los
péptidos (17) a (20).
Alternativamente, se trata de un procedimiento
de discriminación entre una infección por un retrovirus
VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O y un retrovirus
VIH-1 del subgrupo M que usa una serina proteasa
cuya acción de escisión se efectúa a nivel de un dipéptido SR, y
que comprende la detección de una escisión o de una no escisión del
bucle V3 de la gp120 del retrovirus según que este retrovirus sea un
retrovirus VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O o un
retrovirus VIH-1 del subgrupo M.
La solicitud da a conocer además una composición
para la detección y la discriminación en una muestra biológica
entre un retrovirus VIH-1 del subgrupo M y un
retrovirus VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O, que
comprende una mezcla de dos categorías de péptidos, siendo la
primera en particular los identificados (1), (2), (3), (4), (5bis),
(5ter), (9) y (10).
Se describen asimismo los anticuerpos
monoclonales específicos de las secuencias de cada uno de los
péptidos (1) a (20).
La solicitud se refiere asimismo a un plásmido
seleccionado de entre los depositados en la CNCM el 24 de febrero
de 1995 con las referencias I-1548,
I-1549 y I-1550, y describe asimismo
ácidos nucleicos que contienen una secuencia que codifica cada uno
de los péptidos (1) a (20) definidos en la presente invención.
Entre las secuencias de ácidos nucleicos
preferidos, se elegirán en particular las secuencias nucleotídicas
representadas en las figura 10, 11 ó 12.
La solicitud se refiere asimismo a los vectores
que contienen un ácido nucleico tal como se ha definido
anteriormente, y describe asimismo unas células susceptibles de
contener cualquiera de dichos ácidos nucleicos o de dichos
vectores.
La presente solicitud describe asimismo un virus
tal como el depositado en la CNCM el 23 de febrero de 1995 con la
referencia I-1542.
Un virus dado a conocer en la solicitud es un
virus del mismo grupo que el anterior, caracterizado porque unos
péptidos de consenso de este virus son reconocidos por anticuerpos
que reconocen específicamente un polipéptido o un péptido definido
anteriormente.
Se da a conocer asimismo el ARN genómico de este
virus asimismo dado a conocer, así como un estuche o un kit de
detección de anticuerpos en el suero o en cualquier otra muestra
biológica de un paciente susceptible de estar infectado por un
retrovirus humano de tipo VIH, caracterizado porque comprende:
- -
- al menos un polipéptido o un péptido que tiene en particular por secuencia una de las secuencias (1) a (20) descritas anteriormente,
- -
- unos medios que permiten la reacción de la formación del complejo inmunológico entre el(los) polipépti- do(s) o el(los) péptido(s),
- -
- los anticuerpos eventualmente presentes en la muestra biológica a ensayar, por ejemplo, si es necesario, uno o varios tampones de incubación,
- -
- una muestra de control negativo, y
- -
- unos medios de revelación del complejo antígeno/anticuerpo formado.
Este estuche contiene, además, al menos un
polipéptido o un péptido de consenso derivado de otra cepa VIH, o
de un polipéptido o de un péptido que comprende,
una secuencia de aminoácidos distinta de la
secuencia de este polipéptido o péptido, en la que uno o varios
aminoácidos se sustituyen por otros aminoácidos, con la condición de
que el polipéptido o el péptido conserve su reactividad con un
antisuero contra el polipéptido o el péptido de consenso,
o bien una secuencia de aminoácidos en la que
uno o varios aminoácidos se suprimieron o se añadieron, con la
condición de que el polipéptido o el péptido conserve su reactividad
con un antisuero contra el polipéptido o el péptido de
consenso.
Preferentemente, un estuche contendrá, además,
al menos un polipéptido o un péptido derivado de otra cepa VIH,
preferentemente de la cepa VIH-LAI.
Se da a conocer asimismo una composición
polipeptídica para le diagnóstico in vitro de una infección
debida a un retrovirus según la invención, o a una de sus
variantes, efectuándose este diagnóstico en una muestra biológica
susceptible de contener los anticuerpos formados después de dicha
infección. Esta composición se caracteriza porque comprende al
menos uno de los péptidos (1) a (20).
La muestra biológica puede estar constituida en
particular por sangre, por plasma, por suero o por cualquier otro
extracto biológico. Las composiciones anteriores son que se pueden
usar para la detección de anticuerpos en una de dichas muestras
biológicas.
La solicitud da a conocer asimismo un método de
diagnóstico in vitro de una infección debida específicamente
a un retrovirus de tipo VIH, caracterizado porque comprende las
etapas siguientes:
- -
- poner en contacto una muestra biológica susceptible de contener anticuerpos producidos a consecuencia de una infección mediante un retrovirus VIH- del grupo (o del subgrupo) O, con un péptido tal como el definido anteriormente, o con una composición peptídica tal como la definida anteriormente, en condiciones apropiadas que permiten la formación de un complejo inmunológico de tipo antígeno/anticuerpo,
- -
- detectar la eventual presencia del complejo.
Por otra parte, se describe una composición
inmunógena, caracterizada porque comprende al menos un péptido en
asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable para la
constitución de vacunas.
La invención se refiere asimismo a un
procedimiento de preparación de las proteínas de cápsido y de las
glucoproteínas gp41 y gp120 de una cepa retrovírica según la
invención, estando el procedimiento caracterizado porque comprende
las siguientes etapas:
- -
- lisar las células infectadas por un retrovirus VIH-1 según la invención y separar el sobrenadante y las células infectadas, o lisar los residuos víricos preparados mediante centrifugación,
- -
- depositar el extracto celular y/o el extracto vírico sobre un inmunoadsorbente que contiene anticuerpos purificados, obtenidos a partir de un suero de un sujeto infectado por un retrovirus según la invención, y fijados ventajosamente sobre un soporte adaptado, teniendo dicho suero del sujeto infectado la capacidad de reaccionar altamente con proteínas de cubierta del virus según la invención,
- -
- incubar en presencia de un tampón y durante un tiempo suficientemente largo para obtener la formación de un complejo inmunológico antígeno/anticuerpo,
- -
- lavar el inmunoadsorbente con un tampón para eliminar las moléculas no retenidas sobre el soporte,
- -
- recuperar las proteínas antigénicas buscadas.
Según un primer modo de realización de este
procedimiento de preparación, la separación y la recuperación de
las proteínas de cápsido y de las glucoproteínas gp41 y gp120 de
VIH-1 DUR se realizan mediante electroforesis y
mediante electrorreducción de las proteínas.
Según otro modo de realización de este
procedimiento de preparación, la recuperación de las proteínas se
obtiene mediante:
- -
- elución de las proteínas fijadas sobre el inmunoadsorbente anterior,
- -
- purificación de los productos así eluidos sobre una columna de cromatografía que contiene, fijados sobre el soporte de separación, anticuerpos que reconocen las proteínas de cápsido y las glucoproteínas gp41 y gp120 del VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O DUR.
Asimismo, está comprendido en el ámbito de la
invención un procedimiento de producción de un polipéptido o de un
péptido según la invención, siendo este polipéptido o este péptido
obtenido
- -
- mediante la expresión de un ácido nucleico de la invención,
- -
- o mediante síntesis química, por adición de aminoácidos hasta obtener este polipéptido o este péptido.
Se pueden usar los principios y los
procedimientos habituales de la ingeniería genética ("Molecular
cloning"), Sambrook, Fritsch, Maniatis, CSH 1989).
Entra asimismo en el ámbito de la invención un
procedimiento de producción de un ácido nucleico definido
anteriormente, que se puede producir mediante aislamiento de un
virus de la invención, o mediante síntesis química, o usando
técnicas de amplificación in vitro de ácidos nucleicos a
partir de cebadores específicos.
Unos cebadores oligonucleotídicos, asimismo
según la invención, tienen una secuencia que consiste en al menos
ocho nucleótidos consecutivos de las secuencias nucleotídicas
siguientes:
ATT CCA ATA CAC TAT TGT GCT CCA -3'
AAA GAA TTC TCC ATG ACT GTT AAA -3'
GGT ATA GTG CAA CAG CAG GAC
AAC-3'
AGA GGC CCA TTC ATC TAA
CTC-3'
Estos cebadores se pueden usar durante un
proceso de amplificación génica, por ejemplo mediante PCR o una
técnica equivalente, durante una secuencia nucleotídica que codifica
para un péptido de la invención. Unos ensayos realizados con estos
cebadores proporcionaron unos resultados concluyentes.
Asimismo, la invención se refiere a un estuche
que permite la amplificación por PCR o una técnica equivalente
descrita anteriormente.
Se describe asimismo un procedimiento de
detección de la presencia en una muestra biológica de
ácido(s) nuclei-
co(s) característico(s) de un retrovirus VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O DUR, e incluido de un retrovirus según la invención. Este procedimiento comprende la puesta en contacto de un ADNc formado a partir de ARN contenido(s) en esta muestra biológica, en condiciones que permiten la hibridación de este ADNc con el genoma retrovírico, y la realización de una amplificación génica sobre esta muestra vírica.
co(s) característico(s) de un retrovirus VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O DUR, e incluido de un retrovirus según la invención. Este procedimiento comprende la puesta en contacto de un ADNc formado a partir de ARN contenido(s) en esta muestra biológica, en condiciones que permiten la hibridación de este ADNc con el genoma retrovírico, y la realización de una amplificación génica sobre esta muestra vírica.
La solicitud da a conocer asimismo un lisado
tal como se obtiene mediante lisis de las células infectadas por un
virus según la invención.
Se describe asimismo un extracto proteico de una
cepa VIH-1_{(DUR)} (o
VIH-1_{(VAU)}) que contiene en particular un
polipéptido o un péptido tal como el descrito anteriormente.
La solicitud se refiere a péptidos particulares
que proceden de estructura de VIH-1 del grupo (o del
subgrupo) O DUR, o de variantes de este retrovirus, y que
permiten
discriminar, según el caso
- -
- de manera global entre VIH-1 que pertenecen a la categoría O y VIH-1 que pertenecen a la categoría M,
- -
- o más específicamente entre virus que pertenecen al subgrupo característico del VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O DUR, y otros virus del subgrupo O,
o bien, por el contrario, reconocer la mayoría,
sino todos los retrovirus, al mismo tiempo del grupo (o del
subgrupo) O y del subgrupo M.
Se contemplan asimismo los péptidos
correspondientes, y que proceden de proteínas de estructura
correspondientes de otros virus del VIH-1 del grupo
(o del subgrupo) O, o VIH-1 del subgrupo M, en
particular los derivados de las proteínas de estructura GAG, gp120
y gp41, de los cuales se indican partes en los dibujos, derivando
estos péptidos homólogos de su alineación, tal como se desprende de
los dibujos con los péptidos que proceden del VIH-1
del grupo (o del subgrupo) O DUR, más particularmente identificados
en el presente texto.
Por vía de simetría, se pueden usar ciertos
péptidos homólogos en aquellos ensayos que permiten proceder a
dichas discriminaciones, entendiéndose entonces que se usan en lugar
de los péptidos correspondientes, que proceden de las proteínas de
estructura GAG, gp120 y gp41.
Con la ayuda de la secuencia VAU y de su
correlación con las secuencias MVP5180 y ANT70, se definieron
cebadores oligonucleotídicos que se esfuerzan por ser específicos
del subgrupo O en su totalidad para la región V3 y la región gp41.
Éstas permitieron amplificar la cepa DUR y han constituido, por
consiguiente, una solución al problema de amplificación encontrado.
La posición así como la secuencia de estos cebadores VIH del
subgrupo O se representan en la figura 13. Estos cebadores permiten
la obtención de una banda de amplificación visible en coloración con
bromuro de etidio con una sola etapa de 30 ciclos de PCR. Se
obtuvieron secuencias parciales:
- -
- GAG: 513 pares de bases (171 aminoácidos) = SEC ID nº 9
- -
- Gp120 bucle V3: 525 pares de bases (175 aminoácidos) = SEC ID nº 10
- -
- Gp41 región inmunodominante: 312 pares de bases (104 aminoácidos) = SEC ID nº 11.
Las comparaciones nucleotídicas (figura 15) y
protídicas (figura 16) de las secuencias DUR con secuencias
MVP5180, ANT y VAU para el subgrupo O, LAI para el VIH-1 de consenso, MAL secuencia africana VIH-1 representativa y CPZ para el CIV del chimpancé gabonés, muestran que DUR está tan distante de los demás VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O publicados como éstos lo están entre sí.
MVP5180, ANT y VAU para el subgrupo O, LAI para el VIH-1 de consenso, MAL secuencia africana VIH-1 representativa y CPZ para el CIV del chimpancé gabonés, muestran que DUR está tan distante de los demás VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O publicados como éstos lo están entre sí.
Las diferencias son mínimas en la región GAG y
máximas en la región del bucle V3 de gp120, en el que la comparación
proteica alcanza 40% de diferencia (figura 16). Los árboles
filogénicos confirman por una parte que la cepa DUR forma parte del
subgrupo O, y, por otra parte la importancia de las diferencias
entre las diversas cepas O descritas, sin que por ello se liberen
claramente unas ramificaciones de subtipos (figura 17).
Durante la comparación de la secuencia GAG
obtenida en las otras dos cepas O denominadas ANT70 y MVP5180, así
como la dos otras secuencias representativas del grupo M (figura 8),
se pudo constatar que existe un consenso O en varias zonas,
distintos del consenso M en las mismas zonas. También se pueden
señalar dos zonas hipervariables, más variables para O que para M,
y algunas diferencias puntuales para una u otra cepa. Sin embargo,
las regiones SPRT... SEGA, MLNAI...KEVIN, GPLPP....CQEQI,
VGD....SPV parecen discriminativas del consenso O frente al consenso
M.
Las regiones QQA y LWTTRAGNP son regiones
hipervariables. La cepa VIH-1 del grupo (o del
subgrupo) O DUR se singulariza en tres posiciones frente al
consenso M y O (L para 1 y 2 veces para E), y toma un aminoácido
específico en tres posiciones hipervariables aisladas: V posición
L9; A posición A77; L posición 110.
Además, es posible definir en la región GAG unos
segmentos comunes al grupo O y al grupo M tales como SPRTLNAWVK,
GSDIAGTTST y QGPKEPFRDYVDRF.
Este estudio comparativo reveló diferencias
considerables que alcanzan 56% de diferencias proteicas con el
consenso VIH-1 del subgrupo M, y 35 a 42% con los
demás VIH-1 del grupo (o del subgrupo) O.
Las alineaciones de secuencias peptídicas de las
regiones del bucle V3 de gp120 y de la región inmunodominante de
gp41 se indican en la figura 9. La secuencia del interior del bucle
V3 de la cepa DUR difiere sustancialmente de la del consenso
VIH-1 del subgrupo M. Comparte el motivo GPMAWYSM
con las cepas VAU y ANT70, pero no con la cepa MVP que presenta dos
sustituciones: R por A y R por Y.
Las partes izquierda y derecha del bucle V3 son
claramente diferentes de cualquier otro VIH conocido, y no deja
suponer otras reactividades cruzadas. Además, el bucle V3 de DUR es
más largo de un aminoácido que las demás secuencias O, a su vez más
largas de otro aminoácido que las secuencias del grupo
VIH-1 M.
El "minibucle" de la cepa DUR, de secuencia
CRGKAIC, resultó muy específico de esta cepa: constituiría un
epítopo (véase la figura 9). Además, está secuencia sería
susceptible de intervenir en la modificación de las condiciones de
despliegue de la glucoproteína gp41 y, por consiguiente, en la
infecciosidad de la cepa.
Una larga secuencia de 11 aminoácidos que
flanquea a la izquierda este bucle es idéntica a la secuencia VAU.
Se puede observar un polimorfismo de la cepa DUR para una posición S
o T según los clones analizados.
Se representan asimismo en la figura 9 péptidos
correspondientes que proceden de otras cepas retrovíricas
conocidas.
La cepa DUR permite definir asimismo un consenso
VIH del subgrupo O de la región gp41, del cual se podrían usar
varias regiones homólogas suficientemente largas. Estas regiones
homólogas son, entre otras: RL*ALET, QNQQ, LWGC, CYTV
(representando * un aminoácido variable).
El antisuero anti-DUR no
reacciona con los péptidos del bucle V3 del consenso
VIH-1-M, VIH-1 MAL,
VIH-1 CPZ o VIH-1 del grupo (o
subgrupo) O MVP5180, pero reacciona sin embargo con el péptido del
bucle V3 del VIH-1-O ANT70. En
cuanto a la región inmunodominante gp41, éste no reacciona con el
consenso VIH-1 del subgrupo M "habitual", pero
reacciona sin embargo, débilmente pero de manera sorprendente, con
el consenso VIH-1 del subgrupo M extendido a la
derecha.
\vskip1.000000\baselineskip
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Cell 40, 9-17.
(1) INFORMACIONES GENERALES:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: INSTITUT PASTEUR
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- DIRECCIÓN: 25-28 Rue du Docteur Roux
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: PARIS
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: FRANCE
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL: 75724 CEDEX 15
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: SECUENCIAS NUCLEÓTIDOAS QUE CODIFICAN ANTÍGENOS RETROVÍRICOS DEL VIH-1 DEL GRUPO (O DEL SUBGRUPO) O, PÉPTIDOS DE TRANSMEMBRANARIOS DE CUBIERTA Y DE PROTEÍNA DE CÁPSIDO DE RETROVIRUS Y PÉPTIDOS
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 103
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- FORMATO LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE SOPORTE: Disquete
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- PROGRAMA: PatentIn Release #1.0, Versión #1.30 (OEB)
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- DATOS DE SOLICITUD ACTUAL: NÚMERO DE LA SOLICITUD: PCT/FR 95/01391
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: FR 9412554
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE SOLICITUD: 20-oct-1994
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: FR 9502526
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE SOLICITUD: 03-mar-1995
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Otro ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESCRIPCIÓN: /desc = "oligonucleótido"
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGTGGATWYA TAGAAGCAGA AGT
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Otro ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESCRIPCIÓN: /desc = "oligonucleótido"
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACTGCYCCTT CHCCTTTCCA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 28 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Otro ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESCRIPCIÓN: /desc = "oligonucleótido"
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTCTAGATG GGGATCTCCC ATGGCAGG
\hfill28
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 30 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Otro ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESCRIPCIÓN: /desc = "oligonucleótido"
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTCTAGATC AGGGAAGAAT CCCTGAGTGT
\hfill30
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
-
100
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
-
103
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
-
104
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 10:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 32 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 11:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 11:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 12:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 12:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 13:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 30 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 13:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 14:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 14:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 15:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 15:
\vskip0.800000\baselineskip
-
110
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 16:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 16:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.800000\baselineskip
-
111
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 17:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 14 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 17:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 18:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 18:
\vskip0.800000\baselineskip
-
113
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 19:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 19:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 20:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 20:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.800000\baselineskip
-
115
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 21:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 21:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.800000\baselineskip
-
116
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 22:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 22:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.800000\baselineskip
-
117
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 23:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 23:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.800000\baselineskip
-
118
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 24:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 24:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.800000\baselineskip
-
119
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 25:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 14 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 25:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 26:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 12 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 26:
\vskip0.800000\baselineskip
-
121
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 27:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 27:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 28:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 28:
\vskip0.800000\baselineskip
-
123
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 29:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 14 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 29:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 30:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 30:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 31:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 31:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.800000\baselineskip
-
126
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 32:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 32:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.800000\baselineskip
-
127
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 33:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 28 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 33:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 34:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 34:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 35:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 35:
\vskip0.800000\baselineskip
-
130
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 36:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 36:
\vskip0.800000\baselineskip
-
131
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 37:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 37:
\vskip0.800000\baselineskip
-
132
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 38:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 38:
\vskip0.800000\baselineskip
-
133
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 39:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 39:
\vskip0.800000\baselineskip
-
134
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 40:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 40:
\vskip0.800000\baselineskip
-
135
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 41:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 41:
\vskip0.800000\baselineskip
-
136
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 42:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Otro ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESCRIPCIÓN: /desc = "oligonucleótido"
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 42:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATTCCAATAC ACTATTGTGC TCCA
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 43:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Otro ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESCRIPCIÓN: /desc = "oligonucleótido"
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 43:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAAGAATTCT CCATGACTGT TAAA
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 44:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Otro ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESCRIPCIÓN: /desc = "oligonucleótido"
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 44:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTATAGTGC AACAGCAGGA CAAC
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 45:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Otro ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESCRIPCIÓN: /desc = "oligonucleótido"
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 45:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGAGGCCCAT TCATCTAACT C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 46:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 526 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 46:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 47:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 351 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 47:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 48:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 516 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 48:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 49:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 345 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 49:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 50:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 50:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 51:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 51:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 52:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 52:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 53:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 53:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 54:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 54:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 55:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 55:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 56:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 56:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 57:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 57:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 58:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 58:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 59:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 59:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 60:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 60:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 61:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 61:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 62:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 62:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 63:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 2621 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 63:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 64:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 453 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 64:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 65:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 170 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 65:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 66:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 170 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 66:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 67:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 170 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 67:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 68:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 169 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 68:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 69:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 169 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 69:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 70:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 169 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 70:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 71:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 71:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 72:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 72:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 73:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 36 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 73:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 74:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 74:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 75:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 75:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 76:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 76:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 77:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 77:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 78:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 78:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 79:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 33 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 79:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 80:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 80:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 81:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 36 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 81:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 82:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 82:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 83:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 83:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 84:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 84:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 85:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 36 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 85:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 86:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 86:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 87:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 36 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 87:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 88:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 88:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 89:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 89:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 90:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 90:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 91:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 91:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 92:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 92:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 93:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 93:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 94:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 94:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 95:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 513 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 95:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 96:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 171 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 96:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 97:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 525 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 97:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 98:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 175 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 98:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 99:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 312 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 99:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 100:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 104 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 100:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 101:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 101:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 102:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 877 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 102:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIONES PARA LA SEC ID nº: 103:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 861 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE HEBRAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID nº: 103:
Claims (33)
1. Ácido nucleico que permite la detección del
virus VIH-1_{VAU} que comprende la secuencia SEC
ID nº 5 tal comos e representa en la figura 6.
2. Ácido nucleico que se puede usar como sonda
que consiste en un fragmento de al menos 100 pares de bases de la
secuencia SEC ID nº 5 de un ácido nucleico según la reivindicación
1.
3. Ácido nucleico que se puede usar como sonda
según la reivindicación 2, que se selecciona de entre el grupo
constituido por:
- (i)
- una secuencia amplificada en el gen env de VIH-1_{VAU} con la ayuda de los cebadores situados en las posiciones 640 a 663 (5'-ATT CCC ATA CAC TAT TGT GCT CCA-3') y 1138 a 1161 (5'-AAA GAA TTC TCC ATG ACA GTT AAA-3') del gen env de VIH-1_{VAU}, y
- (ii)
- una secuencia amplificada en el gen env de VIH-1_{VAU} con la ayuda de los cebadores situados en las posiciones 1684 a 1707 (5'-GGT ATA GTG CAA CAG CAG GAT AAC-3') y 2026 a 2046 (5'-AGA GGC CCA TTC ATC TAA CTC-3') del gen env de VIH-1_{VAU}.
4. Ácido nucleico que se puede usar como sonda
según la reivindicación 1, que consiste en una secuencia amplificada
en el genoma de VIH-1_{VAU} con la ayuda de
cebadores Th2 (5'-GCT CTA GAT GGG GAT CTC CCA TGG
CAG G-3') y UH2 (5'-GCT CTA GAT CAG
GGA AGA ATC CCT GAG TGT-3').
5. Ácido nucleico que se puede usar como sonda
según la reivindicación 2 ó 3, que se obtiene mediante síntesis
química.
6. Ácido nucleico que se puede usar como sonda,
que consiste en un fragmento de un ácido nucleico según la
reivindicación 1, y que codifica para un polipéptido de la proteína
de cubierta, seleccionado de entre el grupo constituido por
secuencias que contienen o que corresponden a:
- (i)
- la secuencia CKNRLIC;
- (ii)
- la secuencia RLLALETFIQNQQLLNLWGCKNRLIC;
- (iii)
- la secuencia RARLLALETFIQNQQLLNLWGCKNRLICYTSVKWNKT;
- (iv)
- el bucle V3 de secuencia CERPGNQKfMAGPMAWYSMALSNTKGDTRAAYC;
- (v)
- la secuencia TFIQN;
- (vi)
- la secuencia WGCKNR;
- (vii)
- los aminoácidos 1 a 256 de la SEC ID nº: 6 tal como se representa en la Figura 3; y
- (viii)
- los aminoácidos 527 a 877 de la SEC ID nº: 6 tal como se representa en la Figura 3.
7. Ácido nucleico que se puede usar como sonda
según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado
porque está marcado, en particular por marcadores radioactivos,
enzimáticos o fluorescentes.
8. Ácido nucleico según la reivindicación 1,
caracterizado porque se trata de ARN.
9. Composición apropiada para la detección de la
presencia o no de un retrovirus VIH-1_{VAU} en
muestras de suero o de otros líquidos o tejidos biológicos
obtenidos a partir de pacientes susceptibles de ser portadores de
un retrovirus VIH-1_{VAU}, estando dicha
composición caracterizada porque comprende al menos una sonda
según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8.
10. Péptido o polipéptido seleccionado de entre
el grupo constituido por:
- -
- un polipéptido que consiste en la SEC ID nº: 6 tal como se representa en la Figura 3, y codificado por un ácido nucleico que consiste en la SEC ID nº: 5 tal como se representa en la Figura 6,
- -
- una parte de la proteína env de la SEC ID nº: 5 tal como se representa en la Figura 3 codificada por un ácido nucleico que consiste en un fragmento de al menos 100 pares de bases de la secuencia SEC ID nº: 5 tal como se representa en la Figura 6, y
- -
- un polipéptido (i) de secuencia CKNRLIC, (ii) de secuencia RLLALETFIQNQQLLNLWGCKNRLIC, (iii) de secuencia RARLLALETFI QNQQLLNLWGCKNRLICYTSVKWNKT, (iv) de secuencia CERPGNQKI MAGPMAWYSMALSNTKGOTRAAYC, (v) de secuencia TFIQN, (vi) de secuencia WGCKNR,(vii) que consiste en los aminoácidos 1 a 526 de la SEC ID nº: 6 tal como se representa en la Figura 3, o (viii) que consiste en los aminoácidos 527 a 877 de SEC ID nº: 6 tal como se representa en la Figura 3.
11. Proteína de cubierta del retrovirus
VIH-1_{VAU}, caracterizada porque se puede
obtener mediante la expresión en un hospedante celular de un ácido
nucleico que corresponde a SEC ID nº: 5 tal como se representa en la
Figura 6, y porque dicha proteína comprende la secuencia de
aminoácidos comprendida entre los residuos 1 y 526 de la SEC ID nº:
6 tal como se representa en la Figura 3, o bien la secuencia de
aminoácidos comprendida entre los restos 527 a 877 de la SEC ID nº:
6 tal como se representa en la Figura 3.
12. Polipéptido o péptido cuya secuencia está
contenida en la de las proteínas de cubierta
VIH-1_{VAU} según la reivindicación 11,
caracterizado porque comprende un epítopo susceptible de ser
reconocido por anticuerpos inducidos por el virus
VIH-1_{VAU}.
13. Polipéptido o péptido según la
reivindicación 12, caracterizado porque comprende una
secuencia elegida entre las siguientes secuencias:
- (i)
- la secuencia CKNRLIC;
- (ii)
- la secuencia RLLALETFIQNQQLLNLWGCKNRLIC, o
- (iii)
- la secuencia RARLLALETFIQNQQLLNLWGCKNRUCYTSVKWNKT-
14. Polipéptido derivado del polipéptido según
la reivindicación 13 (ii) por sustitución conservativa de
aminoácidos, por cuanto que dicho polipéptido conserva las mismas
características antigénicas, seleccionado de entre el grupo
constituido por:
- (i)
- la secuencia RLLALETFIQNWWLLNLWGCKNRLIC; y
- (ii)
- la secuencia RLLALETLLQNQQLLSLWGCKGKLVC.
15. Péptido o polipéptido según cualquiera de
las reivindicaciones 12 a 14, caracterizado porque se trata
de un péptido sintético.
16. Composición apropiada para la detección
in vitro de la presencia en una muestra biológica humana de
anticuerpos anti-VIH-1_{VAU},
comprendiendo dicha composición al menos un antígeno que comprende
un polipéptido o un péptido de la proteína de cubierta de un
retrovirus VIH-1_{VAU}, tal como se define en una
cualquiera de las reivindicaciones 10 a 15.
17. Composición según la reivindicación 16,
caracterizada porque comprende además un antígeno tal como
una proteína, una glucoproteína, un polipéptido o un péptido de un
virus VIH-1 que no pertenece al grupo O y/o de un
virus VIH-2 o un péptido derivado de un virus
VIH-1 que no pertenece al grupo O y/o de un virus
VIH-2 que tiene un epítopo susceptible de ser
reconocido por los anticuerpos inducidos por el virus
VIH-1 que no pertenece al grupo O y/o el virus
VIH-2.
18. Composición según la reivindicación 17,
caracterizada porque las proteínas y/o las glucoproteínas de
VIH-1 que no pertenece al grupo O y/o de
VIH-2 son proteínas GAG, POL o fragmentos de las
proteínas GAG o
POL.
POL.
19. Composición según la reivindicación 17,
caracterizada porque las proteínas y/o las glucoproteínas de
VIH-1 que no pertenece al grupo O y/o de
VIH-2 son glucoproteínas de cubierta.
20. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 16 a 19, apropiada para la detección in
vitro de la presencia en una muestra biológica humana de
anticuerpos anti-VIH-1_{VAU},
caracterizada porque dicha composición comprende una
secuencia peptídica que corresponde al conjunto de la región
590-620 de la proteína gp41 de
VIH-1_{VAU} o a una parte de esta región.
VIH-1_{VAU} o a una parte de esta región.
21. Composición según la reivindicación 20,
caracterizada porque dicha secuencia peptídico es la
secuencia TFIQN, CKNRLIC o WGCKNR.
22. Anticuerpo susceptible de reconocer una
proteína, un péptido o un polipéptido según una de las
reivindicaciones 10 a 15.
\newpage
23. Procedimiento de diagnóstico in vitro
de una infección ocasionada por el virus
VIH-1_{VAU}, comprendiendo dicho
procedimiento:
- -
- poner en contacto un suero u otro medio biológico que procede de un enfermo que constituye el objeto del diagnóstico con al menos una proteína, un péptido o un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 15, o una composición según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 21, y
- -
- detectar una reacción inmunológica.
24. Agente reactivo necesario para la reacción
de la transferencia Western o de ELISA que comprende una proteína,
un péptido o un polipéptido según una de las reivindicaciones 10 a
15, o una composición según cualquiera de las reivindicaciones 16 a
21.
25. Secuencia nucleotídica según la
reivindicación 1, para el uso en la inducción in vivo de la
síntesis de anticuerpos dirigidos contra el antígeno codificado por
dicha secuencia.
26. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 16 a 21, capaz de inducir anticuerpos en el
animal.
27. Estuche (kit) de detección in vitro
en una muestra biológica de un retrovirus
VIH-1_{VAU}, caracterizado porque
comprende como sonda eventualmente marcada, al menos una secuencia
nucleotídica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una
composición según la reivindicación 9, y eventualmente otra sonda
según la reivindicación 9, eventualmente inmovilizada sobre un
soporte sólido.
28. Estuche según la reivindicación 27,
caracterizado porque comprende asimismo los agentes reactivos
necesarios para la realización de una hibridación.
29. Procedimiento de detección de la presencia o
no del virus VIH-1_{VAU} en muestras de suero u
otros líquidos o tejidos biológicos obtenidos a partir de pacientes
que se sospecha podrían ser portadores del virus
VIH-1_{VAU} que comprende:
- -
- poner en contacto una sonda según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, o bien con los ácidos nucleicos obtenidos a partir de células contenidas en fluidos biológicos, o bien con estos mismo fluidos por cuanto que sus ácidos nucleicos se han hecho accesibles para la hibridación con esta sonda, en condiciones que permiten la hibridación entre esta sonda y estos ácidos nucleicos, y
- -
- detectar la hibridación eventualmente producida.
30. Procedimiento de producción de un antígeno,
de un polipéptido o de un péptido mediante la expresión de un ácido
nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
31. Oligonucleótidos de la secuencia env
de VIH-1_{VAU} de secuencia
- (i)
- 5'-ATT CCC ATA CAC TAT TGT GCT CCA-3'
- (ii)
- 5'-AAA GAA TTC TCC ATG ACA GTT AAA-3'
- (iii)
- 5'-GGT ATA GTG CAA CAG CAG GAT AAC-3'
- (iv)
- 5'-AGA GGC CCA TTC ATC TAA CTC-3'.
32. Composición apropiada para la detección de
la presencia o no de un retrovirus VIH-1_{VAU} en
una muestra biológica, estando dicha composición
caracterizada porque comprende al menos dos oligonucleótidos
elegidos entre:
- (i)
- los oligonucleótidos (i) y (ii) de la reivindicación 31, o
- (ii)
- los oligonucleótidos (iii) y (iv) de la reivindicación 31.
33. Procedimiento de detección de un virus
VIH-1 del grupo O en muestras biológicas, cultivos
celulares o extractos de células que comprende la amplificación de
las secuencias contenidas en dichas muestras, cultivos o extractos,
mediante técnica de PCR u otra técnica de amplificación génica con
una composición según la reivindicación 32.
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