ES2271216T3

ES2271216T3 - Uso de los peptidos derivados de la trombina para la terapia de las ulceras dermicas cronicas.

Info

Publication number: ES2271216T3
Application number: ES02703130T
Authority: ES
Inventors: Darrell H. Carney
Original assignee: Orthologic Corp
Current assignee: Capstone Holding Corp
Priority date: 2001-07-27
Filing date: 2002-01-16
Publication date: 2007-04-16
Anticipated expiration: 2022-01-16
Also published as: US7049294B2; US20040209819A1; DK1414487T3; CA2455756C; DE60212143T2; WO2003013569A3; HK1065719A1; ATE328606T1; EP1414487B1; US20090029923A1; AU2002236768B2; US7378500B2; CA2455756A1; CN100509055C; JP4192093B2; CN1556711A; DE60212143D1; WO2003013569A2; JP2004538320A; EP1414487A2

Abstract

El uso de un agonista del receptor no proteolíticamente activado de la trombina, solo o combinado con un antimicrobiano, un desinfectante, un antibiótico, un analgésico o un anti-inflamatorio en la fabricación de un medicamento para promover la curación de una úlcera dérmica crónica de la piel en un sujeto.

Description

Uso de los péptidos derivados de la trombina para la terapia de las úlceras dérmicas crónicas.

Documentos relacionados

Este documento reivindica la prioridad del Documento Provisional 60/308.198 de los EE.UU., archivado de julio el 27 de 2001.

Antecedentes de la invención

Las úlceras dérmicas de la piel son un ejemplo de las lesiones que son particularmente difíciles de tratar porque son resistentes a la curación y por consiguiente a menudo se convierten en lesiones crónicas. Los ejemplos de úlceras dérmicas crónicas incluyen aquellas que resultan de enfermedades venosas (úlceras venosas de estasis), presión excesiva (úlceras del decúbito), úlceras arteriales y úlceras diabéticas.

Las úlceras diabéticas son particularmente problemáticas. Por ejemplo, uno de cada siete individuos con diabetes desarrolla úlceras dérmicas en sus extremidades, que son susceptibles a la infección. El tratamiento de úlceras diabéticas es a menudo prolongado, intensivo y costoso y es común el fracaso del tratamiento. Las tendencias actuales incluyen el desbridamiento, cambios frecuentes de apósitos de la lesión, calzado especialmente adecuado, antibióticos orales o intravenosos, reposo absoluto en cama, hospitalización prolongada y revascularización quirúrgica. Las complicaciones relacionadas con las úlceras pueden en algunos casos requerir amputación. Por lo tanto, hay necesidad de tratamientos que aceleren la velocidad de curación de las úlceras dérmicas crónicas de la piel en general, y de las úlceras diabéticas, en particular.

Sumario de la invención

Ahora se ha encontrado que los agonistas del receptor trombínico no proteolíticamente activado son efectivos en la aceleración de la velocidad de curación de úlceras diabéticas. Por ejemplo, el derivado peptídico de la trombina TP508, administrado tópicamente dos veces a la semana en las dosis de 1,0 \mug o 10,0 \mug aumentó la velocidad a la cual las úlceras diabéticas sanaron y aumentó el porcentaje de los pacientes que experimentaron la oclusión al 100% de la úlcera. De acuerdo con este descubrimiento, son expuestos en la presente solicitud los medicamentos para estimular o acelerar la curación de úlceras dérmicas crónicas.

Los derivados peptídicos de la trombina usados en los métodos divulgados en la presente solicitud son baratos de producir y son eficaces en la aceleración de la velocidad a la cual las úlceras dérmicas crónicas de la piel sanan y en el aumento de la probabilidad de la completa oclusión de la úlcera. También causan pocos, si hubieran algunos, efectos secundarios.

Descripción detallada de la invención

Las úlceras dérmicas de la piel se refieren a las lesiones en la piel causadas por la pérdida de tejido fino superficial que no pueden sanar normalmente debido a los defectos en los procesos curativos, la insuficiencia vascular o la presión. Las úlceras dérmicas de la piel que se pueden tratar por los medicamentos de la presente invención incluyen úlceras del decúbito, úlceras diabéticas, úlceras venosas de estasis y úlceras arteriales. Las lesiones de decúbito se refieren a las úlceras crónicas que resultan de la presión aplicada a las áreas de la piel por períodos largos de tiempo. Las lesiones de este tipo a menudo se llaman escaras o úlceras por presión. Las úlceras venosas de estasis resultan del estancamiento de la sangre o de otros líquidos de las venas defectuosas. Las úlceras arteriales se refieren a la piel necrótica en el área alrededor de las arterias que tienen pobre flujo sanguíneo.

Los solicitantes han descubierto que los compuestos que estimulan o activan el receptor trombínico no activado proteolíticamente (en adelante "NPAR") promueven o estimulan la curación de las úlceras dérmicas crónicas de la piel. Los compuestos que estimulan el NPAR son llamados NPAR agonistas. NPAR tiene una alta compatibilidad con el receptor trombínico presente en la superficie de la mayoría de las células. Este compuesto NPAR es en gran parte responsable de la alta compatibilidad de la aglutinación de la trombina, de la trombina proteolíticamente desactivada, y de los derivados peptídicos de la trombina a las células. NPAR media en la aparición en un número de señales celulares que son iniciadas por la trombina independiente de su actividad proteolítica. Un ejemplo de tal señal es la regulación del annexin V y otras moléculas identificadas por hibridación subtractiva (véase Sower, et. al., Experimental Cells Research: 247:422 (1999)). NPAR por lo tanto es caracterizado por su alta interacción compatible con la trombina en la superficie de la célula y su activación por los derivados proteolíticamente inactivos de la trombina y de los agonistas derivados peptídicos de la trombina según lo descrito abajo. La activación de NPAR puede ser comprobada por la capacidad de las moléculas de estimular la proliferación celular cuando está agregado a los fibroblastos en la presencia de las concentraciones submitogénicas de la trombina o de las moléculas que activan la proteína kinasa C según lo divulgado en la patente No. 5,352,664 y 5,500,412 de los EE.UU. Los de NPAR agonistas se pueden identificar por esta activación o por su capacidad de competir con ^{125-}I-trombina ligada a las células.

Un ejemplo de un NPAR agonista es un derivado peptídico de la trombina, es decir, un polipéptido con menos de cincuenta aminoácidos, preferiblemente menos de treinta y tres aminoácidos y tiene suficiente homología con el fragmento de la trombina humana que corresponde a los aminoácidos de la protrombina 508-530 (Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val: SEQ ID No. 1) que el polipéptido activa el NPAR. Los derivados peptídicos de la trombina descritos en la presente solicitud tienen preferiblemente entre 14 y 23 aminoácidos, más preferiblemente entre 19 y 23 aminoácidos. Opcionalmente, los derivados peptídicos de la trombina descritos en la presente solicitud pueden ser aminados en el C-terminal y/o acilados en el
N-terminal.

En una realización, el derivado peptídico de la trombina que es administrado a la úlcera dérmica crónica de la piel tiene la secuencia siguiente del aminoácido: R1-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-R2: SEQ ID NO. 5. R1 es -H o R3-C(O)-; R2 es -OH o -NR4R5; R3 es -H o grupo alkílico de C1-C6 (preferiblemente -CH_{3}); y R4 y R5 son independientemente -H, grupo alkílico de C1-C6 o, tomado junto con el átomo del nitrógeno al cuál él se enlaza, es un grupo heterocíclico no aromático tal como piperidinil, morfolinil, tiomorfinil o pirolidinil (preferiblemente R4 y R5 son ambos -H). R1 es preferiblemente -H y R2 es -NH_{2}; o R1 es -H y R2 es -OH. Alternativamente, el derivado peptídico de la trombina que es administrado a la úlcera dérmica crónica de la piel tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO. 3: R1-Asp-Asn-Met-Phe-Cys-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-Met-Lys-Ser-Pro-Phe-R2. R1 y R2 están según lo descrito arriba. Se entiende, sin embargo, que cero, un, dos o tres aminoácidos en las posiciones 1-9 y 14-23 en el derivado peptídico de la trombina pueden diferir del correspondiente aminoácido en la SEQ ID NO. 5. También se entiende que cero, un, dos o tres aminoácidos en las posiciones 1-14 y 19-33 en el derivado peptídico de la trombina puede diferir del aminoácido correspondiente en la SEQ ID NO. 3. Preferiblemente, los aminoácidos en el derivado peptídico de la trombina que difieren del aminoácido correspondiente en la SEQ ID No. 3 o la SEQ ID No. 5 son sustituciones conservadoras, y son preferiblemente sustituciones altamente conservadoras. Alternativamente, un fragmento truncado N-terminal de los derivados peptídicos de la trombina con al menos catorce aminoácidos o un fragmento truncado C-terminal de los derivados peptídicos de la trombina con al menos dieciocho aminoácidos puede ser contactado con la úlcera crónica dérmica de la piel.

Un "fragmento truncado C-terminal" se refiere a un fragmento remanente después de quitar un aminoácido o un bloque de aminoácidos del C-termino. Un "fragmento truncado N-terminal" se refiere a un fragmento remanente después de quitar un aminoácido o un bloque de aminoácidos del N-terminal. Debe ser entendido que los términos "fragmento truncado C-terminal" y "fragmento truncado N-terminal" incluyen la acilación en el N-terminal y/o la amidación en el C-terminal, según lo descrito arriba.

Un péptido es acilado en el N-terminal cuando la amina -NH_{2} en el N-terminal se deriva como un grupo acyl R3-C(O)-NH-, donde R3 está según lo descrito arriba. Así, cuando R1 es R3-C(O)-, el N-terminal es un grupo acyl; y cuando R1 es -H, el N-terminal es una amina sin sustituir.

Un péptido es amidado en el C-terminal cuando el ácido carboxílico -COOH en el C-terminal se deriva como una amida -CONR4R5, en donde R4 y R5 están según lo descrito arriba. Así, cuando R2 es -OH, el C-terminal es un ácido carboxílico; y cuando R2 es -NR4R5, el C-terminal es amidado.

Un derivado del péptido de la trombina preferido para el uso en el método divulgado tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO. 2: R1-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-X_{1}-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-X_{2}-Val-R2. R1 y R2 están según lo descrito arriba. Otro derivado del péptido de la trombina preferido para el uso en el método divulgado tiene secuencia de aminoácidos de SEQ ID No. 4: R1-Asp-Asn-Met-Phe-Cys-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-X_{1}-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-X_{2}-Val-Met-Lys-Ser-Pro-Phe-R2. X_{1} es Glu o Gln; X_{2} es Phe, Met, Leu, His o Val; y R1 y R2 están según lo descrito arriba. Alternativamente, los fragmentos truncados N-terminal de estos preferidos derivados peptídicos de la trombina, los fragmentos truncados N-terminal tienen al menos catorce aminoácidos o los fragmentos truncados C-terminal de estos preferidos derivados peptídicos de la trombina, los fragmentos truncados C-terminal tienen al menos dieciocho aminoácidos se pueden usar también en el método divulgado.

TP508 es un ejemplo de un derivado peptídico de la trombina y tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO 5, en donde es R1 -H y R2 es -NH_{2} (SEQ ID NO. 6). Otro ejemplo de derivado peptídico de la trombina tiene la secuencia de aminoácidos de la identificación SEQ ID NO 5, en donde R1 es -H y R2 -OH ("deamida TP508"). Otros ejemplos de los derivados peptídicos de la trombina que se pueden utilizar en el método divulgado incluyen fragmentos truncados N-terminal de TP508 (o de deamida TP508), los fragmentos truncados N-terminal tienen por lo menos catorce aminoácidos o los fragmentos truncados C-terminal de TP508 (o deamida TP508), los fragmentos truncados C-terminal que tienen por lo menos dieciocho aminoácidos.

Una "substitución conservadora" es el reemplazo de un aminoácido con otro aminoácido que tenga igual carga electrónica neta y aproximadamente el mismo tamaño y forma. Los aminoácidos con alifático o alifáticos sustituidos en las cadenas laterales del aminoácido tienen aproximadamente el mismo tamaño cuando el número total de carbono y de heteroátomos en las cadenas laterales se diferencian por no más de cuatro. Tienen aproximadamente la misma forma cuando el número de ramas dentro de sus cadenas laterales se diferencian por no más de una. Los aminoácidos con fenil o con grupos fenilos sustituidos en las cadenas laterales se consideran tener tamaño y forma casi iguales. Se enumeran más adelante cinco grupos de aminoácidos. El sustituir un aminoácido en un polipéptido con otro aminoácido del mismo grupo da lugar a una sustitución conservadora:

: Grupo I: glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, cisteina, y la ocurrencia no natural de aminoácidos con C1-C4 alifático o hidroxilo de C1-C4 sustituyen las cadenas laterales alifáticas (linealmente encadenadas o monoramal).

: Grupo II: ácido glutámico, ácido aspártico y aminoácidos surgidos no naturalmente que con el ácido carboxílico sustituyeron C1-C4 en las cadenas laterales alifáticas (no ramificadas o un punto de rama).

: Grupo III: lisina, ornitina, arginina y aminoácidos surgidos no naturalmente que con la amina o la guanidina sustituyeron C1-C4 en las cadenas laterales alifáticas (no ramificado o un punto de rama).

: Grupo IV: glutamina, sparagina y aminoácidos surgidos no naturalmente que con la amida sustituyeron C1-C4 en las cadenas laterales alifáticas (no ramificado o un punto de rama).

: Grupo V: fenilalanina, fenilglicina, tirosina y triptófano.

Una "sustitución altamente conservadora" es el reemplazo de un aminoácido con otro aminoácido que tenga el mismo grupo funcional en la cadena lateral y casi el mismo tamaño y forma. Los aminoácidos con alifático o las cadenas laterales con aminoácidos alifáticos sustituidos tienen casi el mismo tamaño cuando el número total de carbonos y de heteroátomos en las cadenas laterales se diferencian por no más de dos. Tienen casi la misma forma cuando tienen el mismo número de ramas en sus cadenas laterales. El ejemplo de sustituciones altamente conservadoras incluye valina por leucina, treonina por serina, ácido aspártico por ácido glutámico y fenilglicina por fenilalanina. Ejemplos de las sustituciones que no son altamente conservadoras incluyen alanina por valina, alanina para serina y ácido aspártico por serina.

Un "sujeto" es preferiblemente un ser humano, pero puede también ser un animal necesitado de tratamiento, v.g., animales afectivos (v.g., perros, gatos, y similares), animales del campo (v.g., vacas, cerdos, caballos y similares) y animales de laboratorio (v.g., ratas, ratones, conejillos de indias y similares).

La composición usada en la presente invención para promover la curación de úlceras dérmicas crónicas puede además abarcar un botiquín farmacéutico idóneo para la administración tópica local en la cual el derivado peptídico de la trombina o el NPAR agonista esta disuelto o en suspensión. Los ejemplos de botiquines farmacéuticos aceptables incluyen, por ejemplo, sales, aerosoles, geles inertes comercialmente disponibles, o líquidos complementados con albúmina, metilcelulosa o una matriz del colágeno. Típicos de tales formulaciones son los ungüentos, cremas y se geles. Los ungüentos están preparados típicamente usando una base oleaginosa, v.g., conteniendo aceites o hidrocarburos, tales como petrolato blanco o aceite mineral, o una base absorbente, v.g., consistiendo en una sustancia o sustancias anhidras absorbentes, por ejemplo lanolina anhidra. Siguiendo la formación de la base, los ingredientes activos se agregan en la concentración deseada. Las cremas abarcan generalmente una fase del aceite (fase interna) que contiene los aceites típicamente preparados, hidrocarburos, y similares, tales como ceras, petrolato, aceite mineral y similares, y una fase acuosa (fase continua), compuesta de agua y cualesquiera sustancias solubles en agua, tales como sales agregadas. Las dos fases se estabilizan por medio de un agente emulsionador, por ejemplo, un agente tensoactivo, tal como sulfato lauril de sodio; coloides hidrofílicos, tales como arcillas coloidales del acacia, beegum, y similares. Sobre la formación de la emulsión, los ingredientes activos se agregan en la concentración deseada. Los geles consisten de una base seleccionada de una base oleaginosa, agua, o una base suspensión-emulsión, según lo descrito previamente. A la base se agrega un agente de gelificación que forme una matriz en la base, aumentando su viscosidad a una consistencia semisólida. Los ejemplos de los agentes de gelificación son hidroxipropil celulosa, polímeros ácidos de acrílico y similares. Los ingredientes activos se agregan a la formulación en la concentración deseada en un punto precedente a la adición del agente de gelificación o puede ser mezclado después del proceso de la congelación.

La presente invención se dirige a promover la curación de las úlceras dérmicas crónicas de la piel.

Una "cantidad efectiva" es la cantidad de NPAR agonista o la derivación del péptido de la trombina que resulte un mayor curador de las lesiones y aumenta el crecimiento y proliferación de las células endoteliales, keratinocitos y fibroblastos que en la ausencia de NPAR agonista o del péptido derivado de la trombina. Alternativamente, una "cantidad efectiva" es la cantidad de NPAR agonista o del derivado péptico de la trombina que da lugar a una mayor probabilidad que la úlcera dérmicas crónica cure totalmente que en ausencia del NPAR agonista o del derivado péptido de la trombina. El agonista se administra por un período de tiempo suficiente para alcanzar el efecto terapéutico deseado. La cantidad administrada dependerá de la cantidad de crecimiento dérmico que se desea, la salud, el tamaño, el peso, la edad y el sexo del sujeto, la naturaleza de la úlcera dérmica crónica de la piel (v.g., el tipo de severidad de la úlcera dérmica de la piel). Típicamente, entre 0,1 \mug y 1 mg por día del NPAR agonista o del derivado peptídico de la trombina (preferiblemente entre 1 \mug y 100 \mug por día) es administrado por la aplicación directa a la úlcera dérmica crónica de la piel. Generalmente, el portador farmacéutico suficiente o el solvente inerte se utilizan para cubrir la herida.

En ciertos casos donde se están tratando las úlceras dérmicas crónicas de la piel, puede ser ventajoso al administrar unos o más agentes farmacológicos activos adicionales a la úlcera dérmica crónica de la piel junto con un derivado peptídico de la trombina o NPAR agonista. Por ejemplo, la infección es una amenaza para cualquier úlcera dérmica crónica de la piel. Un aspecto del la presente invención está en coadministrar a la úlcera dérmica crónica de la piel un antimicrobiano, un desinfectante o un antibiótico. El control del dolor y la inflamación son también aspectos importantes del tratamiento de las úlceras dérmica crónicas de la piel. Los NPAR agonistas y los derivados del péptido de la trombina pueden también ser coadministrados a una úlcera dérmica crónica de la piel junto con un agente que alivie el dolor, por ejemplo un analgésico o un agente anti-inflamatorio.

Los derivados peptídicos de la trombina se pueden sintetizar por el método de síntesis de la fase sólida del péptido (v.g., BOC o FMOC), por síntesis de la fase de la solución, o por otras técnicas convenientes incluyendo combinaciones de los métodos precedentes. Los métodos de BOC y de FMOC, se establecen y se utilizan extensamente los que se describen en Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 88:2149 (1963); Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, C.H. Li, Ed., Academic Press, 1983, pp. 48-267; y Barany y Merrifield, The Peptides, E. Gross and J. Meienhofer, Eds., Academic Press, New York, 1980, pp. 3-285. Methods of solid phase peptide synthesis se describen en Merrifield, R.B., Science, 232:341 (1986); Carpino, L.A. y Han, G.Y., J. Org. Chem, 37:3404 (1972); y Gauspohl, H. et al., Synthesis, 5:315 (1992)).

La aceleración de la curación de las lesiones viscosas en ratas normales por la trombina peptídica sintética de la TP 508 (Chrysalin) se describe en Stiernberg et al. (2000) Wound Rep.Reg. 8:204-215.

Ejemplificación Metodología - diseño del estudio

Este estudio fue multicéntrico, aleatorio, a doble ciega, en tres cortes fásicos de un estudio piloto fase IIa evaluativo del péptido sintético de la trombina TP508 para la aceleración de la curación de la úlcera diabética crónica. Se seleccionaron al azar los pacientes para cada uno de los tres grupos del tratamiento tópicos: en 1 \mug de TP508 en salino aplicado dos veces semanalmente, 10 \mug de TP508 en salino aplicado dos veces semanalmente, o aplicado un placebo salino dos veces semanalmente. Todos los pacientes recibieron un régimen estándar de cuidado de la úlcera diabética consistente en un desbridamiento rápido inicial, limpieza de la lesión, vendaje de la lesión y descompresión de la lesión. Las lesiones fueron evaluadas dos veces a la semana durante 20 semanas, o hasta la oclusión de la lesión si era anterior. Los pacientes eran removidos del estudio si desarrollaban una infección clínica o si la condición de la lesión era significativamente deteriorada. En cada evaluación (dos veces a la semana) se rastreó el perímetro de la lesión para determinar el área de la lesión, y la lesión fue fotografiada con una cámara digital. Los análisis de química sanguínea y hematológico fueron realizados al inscribir al paciente, y en las semanas 5, 10, 15 y 20. Una evaluación radiográfica fue realizada cada cinco semanas para estudiar los efectos en la composición del hueso subyacente.

Criterios de inclusión/exclusión

Se permitió participar en el estudio a varones y hembras con un rango de edad entre 30 y 65 años. Para las hembras con potencial de embarazo se utilizó un método aceptable de control de natalidad por análisis de orina para el embarazo antes de incorporase al estudio. Para ser incluido en el estudio un paciente con patología diabética tuvo que ser documentado con un análisis sanguíneo de glucosa y HgbA1C, pero con excepción de la condición diabética los pacientes debían tener una salud razonablemente buena. La úlcera a ser tratada (úlcera del estudio) debía estar situada debajo de la rótula, en Grado 1 de Wagner (la lesión debía pasar a través de la epidermis y penetrar en la dermis), el Grado 2, o el Grado moderado 3 al periostio (sin implicación del hueso o del tendón). La úlcera del estudio debía estar entre de 1,0 cm de diámetro (0,9 cm^{2} de área) y 7,0 cm de diámetro (cerca de 38,5 cm^{2} de área). La úlcera en estudio debe también haber estado presente por un mínimo de ocho (8) semanas y un máximo de dos (2) años sin curación durante ese tiempo. La medición basal de la tensión del oxígeno de la lesión de los pacientes (TcPO2) tuvo que ser mayor que o igual a 20 mm de Hg según lo medido por los sensores térmicos del oxígeno. Además, se les pidió a los pacientes ser capaces de comprender las instrucciones del estudio a seguir, obedecer el régimen de tratamiento y cualquier descompresión prescrita de la presión de la lesión, y proporcionar su consentimiento de participación.

Número de pacientes (planeados y analizados)

El estudio fue planeado para una inscripción total de 60 pacientes, con 20 pacientes por grupo de tratamiento. Un total de 60 pacientes se alistaron y fueron tratados en el estudio. De estos 60 pacientes, 12 pacientes descontinuaron el estudio prematuramente. Cuatro pacientes descontinuaron debido a lesiones infectadas, dos discontinuaron debido a osteomielitis, un paciente discontinuó debido a amputación, un paciente discontinuó debido a infarto del miocardio, dos pacientes se retiraron del estudio por razones no médicas, un paciente debido a lesión empeorada, y un paciente tomó un medicamento no autorizado. Ninguna de las causas de la discontinuación del estudio fue relacionada con el uso de la droga.

Eficacia (I)

La finalidad primaria de la eficacia era la proporción de los pacientes que alcanzaran la total oclusión de la lesión. La oclusión total de la lesión fue definida como 100% de epitelilización sin drenaje y sin infección, según lo determinado por la inspección visual por el clínico. La diferencia en proporciones entre los grupos de tratamiento fue comparada. Las finalidades secundarias incluyeron el tiempo hasta el 100% de oclusión de la lesión del estudio, el tiempo hasta el 80% y el 50% de oclusión de la lesión del estudio y la cantidad de oclusiones de las lesiones (como cambio de porcentaje de la línea de tamaño de base de la lesión) en 3, 5, 10, 15, y 20 semanas.

Eficacia (II)

Tres grupos de análisis de pacientes fueron definidos para estudiar mejor la eficacia. El grupo Intento de Población A Tratar (IPT) incluyó a los 60 pacientes que recibían el medicamento del estudio y fue utilizado sobre todo para la evaluación de seguridad. El grupo Por Protocolo (PP) incluyó a 40 pacientes que se encontraron con un sistema predefinido de criterios para asegurar la mayor conformidad con el protocolo. El Grupo de Eficacia incluyó a 46 pacientes que encontraron las normas que fueron previamente seleccionadas para develar la más relevante para permitir una evaluación exacta de la curación de la lesión. Los resultados finales primarios y secundarios se describen para cada grupo de pacientes. Las tendencias positivas de las reacciones similares a cierta dosis para el efecto del tratamiento en la finalidad primaria fueron consideradas en todos los grupos de tratamiento, con el efecto más pronunciado en el grupo Por Protocolo (PP).

Finalidad primaria

La finalidad primaria de la eficacia fue el porcentaje de los pacientes que alcanzaron la oclusión total de la lesión en el plazo de veinte semanas.

La siguiente tabla resume los resultados de la finalidad primaria de la eficacia de la oclusión para las tres poblaciones del análisis:

100% Velocidad de Oclusión	Salina (%)	1,0 \mug (%)	10 \mug (%)
PP	5/15 (33)	5/11 (45)	8/14 (57)
IPT	10/21 (48)	11/21 (52)	11/18 (61)
EP	6/16 (38)	8/15 (53)	9/16 (60)
PP - Población Por Protocolo
IPT - Intento de Población a Tratar
EP - Eficacia de la Población

Estos resultados muestran una relación de la reacción a cierta dosis para el 100% de oclusión en todas las poblaciones examinadas, con 1,0 \mug de tratamiento se obtuvo por resultado de un cuatro a un quince por ciento de más oclusión que con los controles del placebo salinos, y el tratamiento de 10 \mug obtuvo el resultado de un trece a un veinticuatro por ciento más de oclusión que con los controles del placebo salino. Específicamente, en el tratamiento del grupo Por Protocolo (PP), cinco de quince o el 33% curaron en el grupo del placebo salino, cinco de once o el 45% curaron en el grupo de 1 \mug de tratamiento, y ocho de catorce o el 57% curaron en el grupo de 10 \mug. En el grupo de eficacia (EP) se prefirió incluir las lesiones ligeramente más pequeñas y ligeramente más grandes que aquéllas exigidas más estrictamente en el grupo de Por Protocolo, esta tendencia fue considerada otra vez con el 38% de curación en el grupo placebo, el 53% de curación en el grupo de 1 \mug, y el 60% de curación en el grupo de 10 \mug. La diferencia fue observada otra vez en la población intento de tratamiento (IPT), aunque el porcentaje que curó en el grupo del placebo salino era mayor (el 48%) porque este grupo incluyó varias lesiones pequeñas y superficiales que curaron, pero no se encontraron en el protocolo definidas como lesiones diabéticas crónicas para el estudio.

Estos resultados se asemejan favorablemente a los ensayos clínicos para Regranex®, donde los datos compilados a partir de cuatro ensayos clínicos controlados y seleccionados al azar muestran que 83 de 254 o el 33% de las lesiones curaron con el placebo vehículo a las 20 semanas y 122 de 285 o el 43% de las lesiones tratadas con Regranex® curaron a las 20 semanas (vea FOI, FDA Clinical Review de BLA-961408, OMJ Pharmaceuticals, December, 9, 1997, page 55, y http/www.fda.gov/cber/products.becamj 121697.htm, actualizado 5 de Marzo, 2001 y accesado el 25 de julio, 2001).

Finalidades secundarias

Las finalidades secundarias incluyen el tiempo hasta el 100% de oclusión, el tiempo hasta el 80% de oclusión, el tiempo hasta del 50% de oclusión, y la cantidad de oclusiones de la lesión como cambio de porcentaje en el tamaño de la lesión de base en 3, 5, 10, 15, y 20 semanas. Las técnicas Kaplan-Meier del análisis de supervivencia fueron utilizadas para examinar el tiempo hasta el término del acontecimiento.

En el grupo de Población por Protocolo (PP), el tiempo medio para el 100% de oclusión fue 87 días para el grupo del tratamiento de 10 \mug, contra 122 días para el grupo del tratamiento de 1 \mug. El tiempo medio para la oclusión hasta el 100% no fue alcanzado en 140 días en el grupo de control salino. Así, el tiempo de curación en este grupo por protocolo aparece ser acortado en el grupo de tratamiento de 10 \mug por lo menos en 53 días en relación con los controles placebo. El análisis Kaplan-Meier para el tiempo al 100% de oclusión en el grupo de Población por Protocolo (PP) predice que en 14 semanas habría un 30% de probabilidad de una oclusión de la lesión en el grupo de control placebo, cerca del 40% de probabilidad de oclusión de lesiones tratadas con 1 \mug, y una probabilidad mayor que el 60% de oclusión de lesiones tratadas con 10 \mug.

Un efecto similar de la dosis fue encontrado en el tiempo hasta el 80% de la oclusión de la lesión con el tiempo medio hasta el 80% de la oclusión de 32 días para el grupo de tratamiento de 10 \mug, contra 47 días para el grupo de tratamiento de 1 \mug y 57 días para el grupo de control salino. No hubo un efecto obvio de la dosis en el tiempo hasta la oclusión hasta el 50% de la lesión con el tiempo medio hasta la oclusión del 50% siendo 21 días en el grupo de 10 \mug contra 32 días en el grupo del tratamiento de 1 \mug y 28 días para el grupo de control salino.

En Eficacia Población, el tiempo medio hasta el 100% de oclusión de la lesión fue de 87 días para el grupo de tratamiento de 10 \mug contra 116 días para el grupo de 1 \mug. El tiempo medio al 100% de oclusión no fue alcanzado en el grupo de control salino. Para el tiempo hasta el 80% de oclusión de la lesión el tiempo medio fue 46 días en los grupos de la dosis de 10 \mug contra 49 días en los grupos de la dosis de 1 \mug y 39 días en el grupo de control salino. Para el tiempo hasta el 50% de oclusión, el tiempo medio fue 21 días en el grupo del tratamiento de 10 \mug contra 29 días y 28 días para el grupo de control salino de 1 \mug, respectivamente.

En Intento de Población a Tratar (ITP) el tiempo medio hasta el 100% de oclusión de la lesión fue 87 días para el tratamiento del grupo de 10 \mug contra 105 días para el grupo de 1 \mug y 102 días para el grupo de control salino. Para el tiempo hasta el 80% de oclusión de la lesión, el tiempo medio fue 31 días en el grupo de la dosis de 10 \mug contra 49 días en el grupo de la dosis de 1 \mug y 29 días en el grupo de control salino. Para el tiempo hasta el 50% de oclusión, el tiempo medio fue de 17 días en los grupos del tratamiento de 10 \mug contra 29 días y 17.5 días para los de 1 \mug y los grupos de control salinos, respectivamente.

Estos resultados demuestran un porcentaje creciente de oclusión de la úlcera para los pacientes tratados con TP508 e indican tiempos promedios que reflejan una velocidad más rápido de curación.

Claims

1. El uso de un agonista del receptor no proteolíticamente activado de la trombina, solo o combinado con un antimicrobiano, un desinfectante, un antibiótico, un analgésico o un anti-inflamatorio en la fabricación de un medicamento para promover la curación de una úlcera dérmica crónica de la piel en un sujeto.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que la úlcera dérmica crónica de la piel es una úlcera diabética.

3. El uso de la reivindicación 1, en el que la úlcera dérmica crónica de la piel es una úlcera del decúbito, una úlcera venosa de estasis o una úlcera arterial.

4. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el agonista es un derivado peptídico de la trombina.

5. El uso de la reivindicación 4, en el que el agonista es un derivado peptídico de la trombina que tiene la secuencia de aminoácidos R1-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-R2 (SEQ IDE No.: 5),

en el que:

: R1 es -H o R3-C(O)-;

: R2 es -OH o -NR4R5;

: R3 es -H o un grupo alquilo C1-C6; y

: R4 y R5 son independientemente -H, un grupo alquilo C1-C6 o, tomado junto con el átomo de nitrógeno al cual ellos se enlazan, un grupo heterocíclico no aromático;

: a condición de que cero, uno dos o tres aminoácidos en las posiciones 1-9 y 14-23 en el derivado del peptídico de la trombina difieren del aminoácido en la posición correspondiente de la SEQ IDE No.: 5; un fragmento truncado N-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos catorce aminoácidos; o un fragmento truncado C-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos dieciocho aminoácidos.

6. El uso de la reivindicación 4, en el que el derivado del peptídico de la trombina tiene la secuencia de aminoácidos R1-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-R2 (SEQ ID No.:5), a condición de que cero, un, dos o tres aminoácidos en las posiciones 1-9 y 14-23 en el derivado del peptídico de la trombina son sustituciones conservadoras del aminoácido en la posición correspondiente de la SEQ ID No.: 5; un fragmento truncado N-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos catorce aminoácidos; o un fragmento truncado C-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos dieciocho aminoácidos.

7. El uso de la reivindicación 6, en el que el derivado peptídico de la trombina tiene la secuencia de aminoácidos R1-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-X1-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-X2-Val-R2 (SEQ ID No.: 2), en el que X1 es Glu o Gln y X2 es Phe, Met, Leu, His o Val; o un fragmento truncado N-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos catorce aminoácidos; o un fragmento truncado C-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos dieciocho aminoácidos.

8. El uso de la reivindicación 7, en el que el derivado peptídico de la trombina tiene la secuencia de aminoácidos R1-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-R2 (SEQ IDNo.:2); un fragmento truncado N-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos catorce aminoácidos; o un fragmento truncado C-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos dieciocho aminoácidos.

9. El uso de la reivindicación 4, en el que el derivado peptídico de la trombina tiene la secuencia de aminoácidos H-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-NH2 (SEQ ID No.: 6)

10. El uso de la reivindicación 4, en el que el derivado peptídico de la trombina tiene la secuencia de aminoácidos R1-Asp-Asn-Met-Phe-Cys-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-Met-Lys-Ser-Pro-Phe-R2 (SEQ ID No.: 3), en el que:

: R1 es -H o R3-C(O)-;

: R2 es -OH o -NR4R5;

: R3 es -H o un grupo alquilo C1-C6; y

: a condición de que cero, un, dos o tres aminoácidos en las posiciones 1-14 y 19-33 del derivado del peptídico de la trombina se diferencien del aminoácido en la posición correspondiente de la SEQ ID No.: 3; un fragmento truncado N-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos catorce aminoácidos; o un fragmento truncado C-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos dieciocho aminoácidos.

11. El uso de la reivindicación 10, en el que el derivado peptídico de la trombina tiene la secuencia de aminoácidos R1-Asp-Asn-Met-Phe-Cys-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-Met-Lys-Ser-Pro-Phe-R2 (SEQ ID No.: 3), a condición de que cero, un, dos o tres aminoácidos en las posiciones 1-14 y 19-33 del derivado peptídico de la trombina son substituciones conservadoras del aminoácido en la posición correspondiente de SEQ ID NO.: 3); un fragmento truncado N-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos catorce aminoácidos; o un fragmento truncado C-terminal del derivado del peptídico de la trombina que tiene por lo menos dieciocho aminoácidos.

12. El uso de la reivindicación 10, en el que el derivado del peptídico de la trombina tiene la secuencia de aminoácidos R1-Asp-Asn-Met-Phe-Cys-Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-X1-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-X2-Val-Met-Lys-Ser-Pro-Phe-R2 (SEQ ID No.: 4), en el que X1 es Glu o Gln y X2 es Phe, Met, Leu, His o Val; un fragmento truncado N-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos catorce aminoácidos; un fragmento truncado C-terminal del derivado peptídico de la trombina que tiene por lo menos dieciocho aminoácidos.

13. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, 10 o 12, en el que R1 es -H y R2 es -NH_{2}

14. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, 10 o 12, en el que R1 es -H y R2 es -OH.

15. El uso de la reivindicación 12, en el que X1 es Glu y X2 es Phe.

16. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que el sujeto es un animal afectivo, un animal del campo o un animal de laboratorio.

17. El uso de un agonista del receptor no proteolíticamente activado de la trombina en ausencia de un inhibidor del agente proteasa en la fabricación de un medicamento para promover la curación de una úlcera dérmica crónica de la piel en un sujeto.