ES2208649T3

ES2208649T3 - Nuevas beta-lactamas, procedimiento para la preparacion de taxanos y de taxanos que contienen una cadena lateral.

Info

Publication number: ES2208649T3
Application number: ES94301809T
Authority: ES
Inventors: John K. Thottathil; Ivan D. Trifunovich; David J. Kucera; Wen-Sen Li
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1993-03-19
Filing date: 1994-03-14
Publication date: 2004-06-16
Anticipated expiration: 2014-03-14
Also published as: FI941286A0; US6350886B1; HK1002005A1; IL123063A0; IL108763A0; EP0617018A1; US7176326B2; DE69433188D1; US6350887B1; KR100309973B1; IL123063A; PT617018E; AU676879B2; CN1097416A; US20020137927A1; US20050107605A1; CY2405B1; CN1271729A; EP0617018B1; SG50463A1

Abstract

LAS (BETA)-LACTAMAS DE LA FORMULA (I) ENCUENTRAN UTILIDAD COMO PRODUCTOS INTERMEDIOS EN LA PREPARACION DE TAXANOS DE CADENA LATERAL TALES COMO EL TAXOL Y LOS DERIVADOS DEL TAXOL. LA INVENCION TAMBIEN SE REFIERE A NUEVOS METODOS DE ACOPLAR (BETA)-LACTAMAS PARA FORMAR TAXANOS QUE SOPORTEN CADENAS LATERALES, Y A NUEVOS TAXANOS QUE SOPORTAN CADENAS LATERALES. R1-R5 SON SEGUN SE DESCRIBE EN LA DESCRIPCION.

Description

Nuevas \beta-lactamas, procedimientos para la preparación de taxanos y de taxanos que llevan cadena lateral.

La presente invención trata de nuevas \beta-lactamas. Las \beta-lactamas de la presente invención encuentran utilidad como compuestos intermedios en la preparación de taxanos que llevan cadena lateral, como taxol y derivados de taxol. La presente invención también trata de nuevos procedimientos de acoplamiento de \beta-lactamas para formar dichos taxanos que llevan cadena lateral y de nuevos taxanos que llevan cadena lateral.

Los taxanos son compuestos diterpeno que tienen utilidad en el campo farmacéutico. Por ejemplo, el taxol, un taxano que tiene la estructura:

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en la que Ph es fenilo, Ac es acetilo y Bz es benzoilo, se ha descubierto que es un eficaz agente anticancerígeno.

Se pueden encontrar taxanos de origen natural como el taxol en materiales vegetales y se han aislado de los mismos. Dichos taxanos pueden, sin embargo, estar presentes en materiales vegetales en cantidades relativamente pequeñas de forma que, en el caso del taxol, por ejemplo, se puede requerir una gran cantidad de tejos de crecimiento lento, ya que son una fuente del compuesto. Así, la técnica ha continuado la búsqueda de rutas sintéticas, incluyendo las rutas semisintéticas para la preparación de taxanos de origen natural como el taxol, así como rutas para la preparación de análogos sintéticos de los mismos, útiles farmacéuticamente.

El documento EP0400971 (Universidad del Estado de Florida) describe unas series de \beta-lactamas, un procedimiento para su preparación y un procedimiento para la preparación de taxol que implica el uso de dichas \beta-lactamas.

El documento WO93/06079 (Universidad del Estado de Florida) describe un procedimiento para la preparación de ésteres de isoserina sustituidos con N-acilo, N-sulfonilo y N-fosforilo en los que se hace reaccionar un alcóxido de metal con una \beta-lactama. De forma similar, el documento WO93/06094 (Univ. del Estado de Florida) trata de alcóxidos metálicos útiles en la preparación de taxol.

El documento WO90/10443 (Universidad de Kansas) describe derivados de taxol que tienen una solubilidad en agua mejorada comparada con la del taxol per se y que aún exhiben buena actividad antitumoral.

El documento EP0537905 (Virginia Tech Intellectual Properties, Inc.) describe derivados de taxol solubles en agua con actividad antineoplástica. Dichos derivados incluyen derivados de 2'-acriloiltaxol y de 2'-O-acil taxol sulfonados.

El documento EP0495718 (Rhone-Poulenc-Rorer SA) trata de compuestos \beta-fenilisoserina-(2R,3S) y de sales de los mismos, junto con procedimientos de preparación de los mismos y trata de su uso en la síntesis de derivados de taxano.

El documento EP0569281 (Bristol-Myers Squibb Company) trata de derivados de taxol 2'-N-sustituido-aminobencil benzoato o 2'-N-sustituido-amino-benzoato sustituidos opcionalmente con un grupo (fosfonooxifenil) alcanoiloxi, (fosfonooxi) alcanoiloxi o [(fosfonooxialquil)-fenil] alcanoiloxi en la posición C-7. Dichos derivados tienen una apreciable solubilidad en agua y buena actividad antitumoral.

La presente invención proporciona nuevos compuestos \beta-lactama con la siguiente fórmula I:

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en la que

R^{1} y R^{2} son:

: (i) ambos el mismo grupo alquilo; o

: (ii) forman juntos un grupo cicloalquilo; o

: (iii) forman juntos un grupo cicloalquenilo; o

: (iv) forman juntos un grupo heterociclo;

en la que el átomo de carbono marcado con un asterisco al que están unidos R^{1} y R^{2} no es asimétrico;

R^{3} es alquilo;

R^{4} es arilo;

R^{5} es hidrógeno, arilcarbonilo o alquiloxicarbonilo o tal como una \beta-lactama en forma de sal, en la que

"alquilo" significa un grupo tal que tiene 1-10 átomos de carbono en una cadena y que está sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes halo, alcoxi, alquiltio, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalilo, cicloalquenilo, hidroxi o hidroxi protegido, carboxilo (-COOH), alquiloxicarbonilo, alquilcarboniloxi, carbamoilo (NH_{2}-CO-), amino (-NH_{2}), mono o dialquilamino o tiol (-SH);

"cicloalquilo" significa un grupo tal que tiene 1 a 3 anillos y 3-7 átomos de carbono por anillo, estando el grupo sustituido opcionalmente con "alquilo" como se ha definido anteriormente o con uno o más de los sustituyentes incluidos en la definición de "alquilo";

"cicloalquenilo" significa "cicloalquilo" como se ha definido anteriormente pero que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono que forma un anillo parcialmente insaturado;

"arilo" significa un grupo aromático homocíclico que contiene 1 ó 2 anillos y 6 a 12 átomos de carbono y que está sustituido opcionalmente con uno o más grupos nitro o como en la definición anterior de "cicloalquilo";

"alcoxi" significa "alquilo" como se ha definido anteriormente pero unido a través de un enlace de oxígeno (-O-) y

"heterociclo" significa un grupo tal que contiene al menos un átomo hetero en al menos un anillo y sustituido opcionalmente como en la definición anterior de "cicloalquilo".

Las \beta-lactamas de la presente invención son útiles como compuestos intermedios en la preparación de taxanos que llevan cadena lateral, como taxol y derivados de taxol. En especial, estos compuestos se pueden acoplar con un radical taxano para formar la cadena lateral mencionada.

Como la estereoquímica de los taxanos puede afectar a su actividad farmacéutica, es deseable emplear los compuestos intermedios \beta-lactama que proporcionarán el producto taxano final con la estereoquímica que se busca. En las \beta-lactamas de la presente invención, el carbono marcado con un asterisco en la fórmula I anterior no es un carbono asimétrico. Allí donde dicho centro de carbono es asimétrico, se puede formar una mezcla de diastereoisómeros. Las
\beta-lactamas de la presente invención proporcionan resultados superiores en relación con las \beta-lactamas que contienen un carbono asimétrico en la posición correspondiente ya que, cuando se preparan los últimos compuestos o cuando éstos se acoplan con un radical taxano, los productos se forman como una mezcla de estereoconfiguraciones. La formación de dicha mezcla de estereoisómeros da como resultado un uso ineficiente de los materiales de partida y complica los procedimientos de separación y de purificación.

Las \beta-lactamas con la fórmula I de la presente invención son además ventajosas en términos del rendimiento y de la pureza del producto taxano final. En especial, las \beta-lactamas de la presente invención permiten una conversión eficiente y, por lo tanto, el uso de menores cantidades de materiales de partida, así como procedimientos de separación y purificación simplificados cuando se usan como compuestos intermedios en la preparación de taxanos que llevan cadena lateral.

La presente invención también proporciona nuevos procedimientos para el uso de las \beta-lactamas mencionadas con la fórmula I en la preparación de taxanos que llevan cadena lateral y en la preparación de los nuevos taxanos que llevan cadena lateral.

La presente invención se describe además del modo siguiente.

El término "alquilo", como se usa en la presente invención sólo o como parte de otro grupo, denota grupos hidrocarburo saturados de cadena lineal o ramificada opcionalmente sustituidos, que tienen 1 a 10 átomos de carbono en la cadena. A modo de ejemplo de dichos grupos no sustituidos se incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo,
n-butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilpentilo, nonilo,
decilo, undecilo, dodecilo y similares. Sustituyentes a modo de ejemplo pueden incluir a aquellos listados en la presente invención anteriormente.

El término "alquilo inferior", como se usa en la presente invención, denota dichos grupos opcionalmente sustituidos como se describieron anteriormente para alquilos que tienen 1 a 4 átomos de carbono en la cadena normal.

El término "alquiltio", como se usa en la presente invención, denota un grupo alquilo como se describió anteriormente unido a través de un enlace (-S-), respectivamente. El término "alquiloxicarbonilo", como se usa en la presente invención, denota un grupo alcoxi unido a través de un grupo carbonilo. El término "alquilcarboniloxi", como se usa en la presente invención, denota un grupo alquilo unido a través de un grupo carbonilo que está, a su vez, unido a través de un enlace de oxígeno. Los términos "monoalquilamino" y "dialquilamino" denotan un grupo amino sustituido por uno o por dos grupos alquilo, respectivamente, como se describieron anteriormente.

El término "alquenilo", como se usa en la presente invención solo o como parte de otro grupo, denota dichos grupos opcionalmente sustituidos como se describió para alquilo, grupos que contienen además al menos un doble enlace carbono-carbono. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen uno o más grupos alquilo como se describieron anteriormente, o uno o más grupos descritos anteriormente como sustituyentes alquilo.

El término "alquinilo", como se usa en la presente invención solo o como parte de otro grupo, denota dichos grupos opcionalmente sustituidos como se describió para alquilo, grupos que contienen además al menos un triple enlace carbono-carbono. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen uno o más grupos alquilo como se describieron anteriormente, o uno o más grupos descritos anteriormente como sustituyentes alquilo.

El término "cicloalquilo", como se usa en la presente invención solo o como parte de otro grupo, denota sistemas de anillos de hidrocarburos cíclicos saturados, opcionalmente sustituidos, que contienen preferiblemente 1 a 3 anillos y 3 a 7 átomos de carbono por anillo. Grupos no sustituidos a modo de ejemplo de los mismos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclodecilo, ciclododecilo y adamantilo. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen uno o más grupos alquilo como se describieron anteriormente, o uno o más grupos descritos anteriormente como sustituyentes alquilo.

El término "cicloalquenilo", como se usa en la presente invención solo o como parte de otro grupo, denota dichos grupos opcionalmente sustituidos como se describieron anteriormente para cicloalquilo, grupos que contienen además al menos un doble enlace carbono-carbono que forma un anillo parcialmente insaturado. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen uno o más grupos alquilo como se describieron anteriormente, o uno o más grupos descritos anteriormente como sustituyentes alquilo.

Los términos "ar" o "arilo", como se usan en la presente invención solos o como parte de otro grupo, denotan grupos aromáticos homocíclicos, opcionalmente sustituidos, que contienen preferiblemente 1 ó 2 anillos y 6 a 12 carbonos en el anillo. Grupos no sustituidos a modo de ejemplo de los mismos incluyen fenilo, bifenilo y naftilo. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen uno o más, preferiblemente tres o menos, grupos nitro, grupos alquilo como se describieron anteriormente, o grupos descritos anteriormente como sustituyentes alquilo.

El término "arilcarbonilo", como se usa en la presente invención solo o como parte de otro grupo, denota un grupo arilo como se describió anteriormente unido a través de un grupo carbonilo.

Los términos "heterociclo" o "heterocíclico", como se usan en la presente invención solos o como parte de otro grupo, denotan grupos cíclicos aromáticos o no aromáticos, completamente saturados o insaturados, opcionalmente sustituidos que tienen al menos un heteroátomo en al menos un anillo, preferiblemente grupos monocíclicos o bicíclicos que tienen 5 ó 6 átomos de carbono en cada anillo. El grupo heterociclo puede, por ejemplo, tener 1 ó 2 átomos de oxígeno, 1 ó 2 átomos de azufre y/o 1 a 4 átomos de nitrógeno en el anillo. Cada grupo heterociclo puede estar unido a través de cualquier carbono o heteroátomo del sistema de anillos. Grupos heterociclo a modo de ejemplo incluyen a los siguientes: tienilo, furilo, pirrolilo, piridilo, imidazolilo, pirrolidinilo, piperidinilo, azepinilo, indolilo, isoindolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzimidazolilo, benzoxadiazolilo, benzofurazanilo y especialmente, tetrahidropiranilo (por ejemplo 4-tetrahidropiranilo). Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen uno o más grupos alquilo como se describieron anteriormente, o uno o más grupos descritos anteriormente como sustituyentes alquilo.

Los términos "halógeno" o "halo", como se usan en la presente invención solos o como parte de otro grupo, denotan cloro, bromo, flúor y yodo.

El término "radical taxano", como se usa en la presente invención, denota radicales que contienen la estructura del núcleo:

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cuya estructura del núcleo puede estar sustituida y que puede contener insaturación etilénica en el sistema de anillos de la misma.

El término "taxano", como se usa en la presente invención, denota compuestos que contienen un radical taxano como se describió anteriormente. El término "taxano que lleva cadena lateral", como se usa en la presente invención, denota compuestos que contienen un radical taxano como se describió anteriormente, que contiene además una cadena lateral unida a dicho radical en la posición C-13.

El término "grupo protector de hidroxi (o de hidroxilo)", como se usa en la presente invención, denota cualquier grupo capaz de proteger un grupo hidroxilo libre que, posteriormente a la reacción para la cual se emplea, se puede eliminar sin destruir el resto de la molécula. Dichos grupos, y la síntesis de los mismos, se pueden encontrar en "Protective Groups in Organic Synthesis" de T. W. Greene, John Wiley e hijos, 1981, o Fieser & Fieser. Grupos protectores de hidroxilo a modo de ejemplo incluyen metoximetilo, 1-etoxietilo, 1-metoxi-1-metiletilo, bencilooximetilo, (\beta-trimetilsilil-etoxi)metilo, tetrahidropiranilo, 2,2,2-tri-cloroetoxicarbonilo, t-butil(difenil)sililo, trialquilsililo, triclorometoxicarbonilo y 2,2,2-tricloroetoximetilo.

El término "sal", como se usa en la presente invención, incluye sales con ácidos orgánicos y/o inorgánicos y/o bases.

El término "base silil amida de metal alcalino", como se usa en la presente invención, denota una base que contiene el radical:

--- Si ---

\delm{N}{\delm{\para}{M}}

--- Si ---

en la que M es un metal alcalino como litio, sodio o potasio.

\beta-lactamas preferidas de la presente invención son aquellos compuestos con la fórmula I que son compuestos cristalinos, en lugar de líquidos (aceites) en condiciones ambientales. Dichos compuestos cristalinos son ventajosos en relación con los compuestos líquidos en la medida de que se pueden preparar más fácilmente y obtenerse en forma pura, especialmente a mayores escalas, facilitando así su uso posterior como compuestos intermedios en la formación de taxanos que llevan cadena lateral como taxol y como derivados de taxol.

Compuestos especialmente preferidos con la fórmula I son aquellos en los que R^{1} y R^{2} son ambos el mismo grupo alquilo inferior no sustituido, especialmente en los que R^{1} y R^{2} son ambos metilo; R^{3} es alquilo inferior no sustituido, especialmente metilo; R^{4} es fenilo y R^{5} es hidrógeno, benzoilo o t-butoxicarbonilo.

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Se pueden preparar \beta-lactamas con la fórmula I mediante procedimientos como los que se muestran en el siguiente esquema de reacción para la preparación de \beta-lactamas cis con la fórmula I.

Esquema de reacción

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Los compuestos de partida con la fórmula II se pueden preparar mediante procedimientos como aquellos descritos en la Solicitud de Patente Europea Nº EP-A-552.041, incorporada en la presente invención a modo de referencia. Se prefiere emplear especialmente \beta-lactamas que son estereoisoméricamente (es decir, enantioméricamente) puras.

El compuesto con la fórmula II se puede convertir en un compuesto con la fórmula I mediante la reacción del primero, en presencia de un catalizador ácido, con un compuesto con la fórmula III o IV:

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en las que R^{1}, R^{2} y R^{3} son como se ha definido anteriormente y R^{1a} (i) es un grupo tal que R^{1a}-CH_{2}- es igual que R^{2} cuando R^{2} es alquilo o (ii) forma, junto con R^{2} y con los átomos a los que están unidos R^{1a} y R^{2}, un grupo cicloalquenilo o un grupo heterociclo que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono. Compuestos a modo de ejemplo con la fórmula III incluyen a los compuestos: dimetoxipropano,

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Compuestos a modo de ejemplo con la fórmula IV incluyen a los compuestos:

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Un procedimiento especialmente preferido para obtener un compuesto con la fórmula I en la que R^{1} y R^{2} son ambos el mismo grupo alquilo, es mediante el contacto de un compuesto con la fórmula II con un compuesto con la fórmula IV en el que R^{3} es como se ha definido anteriormente y R^{1a} es un grupo tal que R^{1a}-CH_{2}- es igual que R^{2}, en presencia de un catalizador ácido como un ácido sulfónico orgánico, por ejemplo, sulfonato de piridinio p-tolueno (PPTS, pyridinium p-toluene sulfonate), ácido tolueno sulfónico o ácido canfor sulfónico. Como el compuesto con la fórmula IV se prefiere 2-metoxipropeno.

La citada reacción se conduce preferiblemente a una temperatura de entre aproximadamente -30ºC y aproximadamente 30ºC, especialmente a aproximadamente 0ºC y a presión ambiente. La reacción se puede completar, por ejemplo, durante el curso de aproximadamente 0,5 horas a aproximadamente 10 horas, y se conduce preferiblemente bajo una atmósfera de gas inerte como argon.

Las proporciones molares preferidas del compuesto con la fórmula III o IV: compuesto con la fórmula II están entre aproximadamente 6:1 y aproximadamente 1:1. Se emplea una cantidad de ácido que es eficaz para catalizar la reacción.

Preferiblemente se emplean disolventes orgánicos que son inertes para la reacción. Disolventes especialmente preferidos son acetona, dimetilformamida, tetrahidrofurano, diclorometano, acetonitrilo y tolueno. Las cantidades de disolventes son preferiblemente aquellas en las que la proporción de compuesto con la fórmula II:disolvente está entre aproximadamente 1:5 y aproximadamente 1:40, peso: volumen.

La \beta-lactama con la fórmula I así obtenida, en la que R^{5} es hidrógeno, se puede convertir opcionalmente en una \beta-lactama con la fórmula I en la que R^{5} es arilcarbonilo o alquiloxicarbonilo, con o sin aislamiento previo de la
\beta-lactama en la que R^{5} es hidrógeno, mediante el contacto de la primera \beta-lactama en la que R^{5} es hidrógeno con un compuesto con la fórmula V o VI:

(V)R^{6}-C(O)-X

o

(VI)R^{6}-C(O)-O-C(O)-R^{6}

en las que

R^{6} es arilo o alcoxi y

X es halo, especialmente cloro.

La reacción anterior se conduce preferiblemente en presencia de una amina ternaria tal como diisopropil(etil)amina, trietilamina y 4-dimetilaminopiridina. Como el compuesto con la fórmula V se prefiere cloruro de benzoilo, especialmente para la preparación de taxol. Se prefiere el anhídrido BOC ((BOC anhydride) compuesto VI en el que R^{6} es t-butoxi) como el compuesto con la fórmula VI, especialmente para la preparación de taxotere.

En la reacción anterior, se prefiere emplear temperaturas de entre aproximadamente -30ºC y aproximadamente 30ºC, especialmente aproximadamente 0ºC y presión ambiente. La reacción se puede completar, por ejemplo, durante el curso de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 10 horas y se conduce preferiblemente bajo una atmósfera de gas inerte como argon.

Las proporciones molares preferidas del compuesto con la fórmula V o VI:\beta-lactama con la fórmula I en la que R^{5} es hidrógeno están entre aproximadamente 1:1 y aproximadamente 5:1. Las proporciones molares preferidas de amina ternaria:\beta-lactama con la fórmula I en la que R^{5} es hidrógeno están entre aproximadamente 1:1 y aproximada-
mente 5:1.

Preferiblemente se emplean disolventes orgánicos que son inertes para la reacción. Disolventes especialmente preferidos son cloruro de metileno, tetrahidrofurano, acetonitrilo, acetona, dimetilformamida y tolueno. Las cantidades de disolventes son preferiblemente aquellas en las que la \beta-lactama de partida está entre aproximadamente 15% y aproximadamente 80% en peso, basado en el peso combinado de disolvente y de \beta-lactama.

Para uso en los procedimientos de acoplamiento descritos a continuación se prefieren \beta-lactamas en las que R^{5} no sea hidrógeno.

Los taxanos son compuestos diterpeno que contienen el radical taxano:

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descrito anteriormente. De especial interés son los taxanos que contienen un radical taxano en el que las posiciones 11,12 están unidas a través de un enlace etilénico y en el que la posición 13 contiene una cadena lateral, taxanos que se ejemplifican mediante el taxol. Se pueden usar como agentes antitumorales taxanos farmacológicamente activos como el taxol para tratar pacientes que padecen cánceres tales como cáncer de mama, ovarios, colon o cánceres de pulmón, melanoma y leucemia.

La presente invención proporciona un nuevo procedimiento para la preparación de taxanos que llevan cadena lateral mediante el acoplamiento de una \beta-lactama de la presente invención para formar dicha cadena lateral. En particular, la presente invención proporciona un nuevo procedimiento para la preparación de un taxano que lleva una cadena lateral con la siguiente fórmula VII o una sal del mismo:

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en la que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} y R^{5} son como se ha definido anteriormente y T es un radical taxano unido directamente a la posición C-13 de dicho radical;

que comprende la etapa del contacto de una \beta-lactama con la fórmula I o de una sal de la misma de la presente invención con un compuesto taxano con la siguiente fórmula VIII o con una sal del mismo:

(VIII)HO-T

en la que T es como se ha definido anteriormente, en presencia de un agente de acoplamiento y, opcionalmente, convirtiendo el grupo - OC(R^{1})(R^{2})(OR^{3}) de dicho compuesto con la fórmula VII en hidroxilo, formando de ese modo un taxano que lleva una cadena lateral o una sal del mismo con la siguiente fórmula IX:

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La adición de una cadena lateral como se describió anteriormente, en sí misma, puede transmitir una actividad farmacológica mayor o más deseable al producto taxano, o puede formar un producto taxano que es más fácilmente transformable en un taxano que tenga una actividad farmacológica mayor o más deseable que la del compuesto de partida. Taxanos a modo de ejemplo que se pueden preparar mediante el presente procedimiento para la preparación de un taxano que lleva una cadena lateral incluyen aquellos compuestos descritos en la Publicación de Patente Europea Nº 400.971, patente de EE.UU. Nº 4.876.399, patente de EE.UU. Nº 4.857.653, patente de EE.UU. Nº 4.814.470, patente de EE.UU. Nº 4.924.012 y patente de EE.UU. Nº 4.924.011, todas ellas incorporadas en la presente invención a modo de referencia. Se prefiere preparar taxotere que tenga la siguiente estructura:

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o, lo más preferiblemente, taxol como el compuesto con la fórmula IX.

Se describen compuestos a modo de ejemplo con la fórmula VIII, que tienen el grupo OH unido directamente allí en la posición C-13, los cuales se pueden emplear en el procedimiento de la presente invención, en los documentos citados que se incorporan a modo de referencia, especialmente en la Publicación de Patente Europea Nº 400.971. Lo más preferiblemente, el compuesto con la fórmula VIII es un compuesto con la fórmula X:

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en la que

R^{7} es hidrógeno, alquilcarbonilo, o un grupo protector de hidroxilo, especialmente acetilo y R^{8} es hidrógeno o un grupo protector de hidroxilo y especialmente es un 7-O-trialquilsilil bacatin III tal como 7-O-trietilsilil bacatin III o
7-O-trimetilsilil bacatin III. Se puede obtener 7-O-trietilsilil bacatin III, por ejemplo, a partir de 10-deacetil bacatin III como se describe por Denis y col., J. Am. Chem. Soc., 110, 5917 (1988), incorporada en la presente invención a modo de referencia. El 7-O-trietilsilil bacatin III se prepara preferiblemente mediante los procedimientos de los ejemplos de la presente invención. Por ejemplo, por último, dónde R^{7} es hidrógeno, el compuesto (X) se puede acilar in situ antes del acoplamiento de la cadena lateral.

El agente de acoplamiento empleado en el procedimiento de la presente invención puede ser cualquier agente que facilite el acoplamiento para formar el taxano que lleva una cadena lateral con la fórmula VII, agente de acoplamiento que se puede ilustrar a modo de ejemplo por aminas terciarias tales como trietilamina, diisopropil(etil)amina, piridina, N-metil imidazol y 4-dimetilaminopiridina (DMAP) y bases metálicas que permitan la formación de un alcóxido de metal sobre la posición C-13 del taxano con la fórmula VIII tales como diisopropilamida de litio (LDA, lithium diisopropylamide), compuestos de litio de alquilos inferiores no sustituidos o fenil litio.

Preferiblemente, el agente de acoplamiento del presente procedimiento es una base silil amida de metal alcalino o una base de amida de metal alcalino impedida estéricamente. A modo de ejemplo de dichas bases se encuentran aquellas con la fórmula XI:

(XI)R^{9} ---

\delm{N}{\delm{\para}{M}}

--- R^{10}

en la que

R^{9} y R^{10} son trialquilsilil, cicloalquilo o, junto con el átomo de nitrógeno al que se unen, forman un grupo heterociclo y

M es un metal alcalino, como litio, sodio o potasio.

Son bases preferidas, especialmente bases silil amida de metal alcalino con la fórmula XI, aquellas que son solubles en el medio de reacción empleado y lo más preferiblemente son una disilazida hexametil de metal alcalino (R^{9} y R^{10} son trimetilsilil y M es sodio, litio o potasio), especialmente hexametildisilazida de litio (LHMDS (lithium hexamethyldisilazide)). "Bases de amida de metal alcalino impedidas estéricamente" incluyen a aquellas bases que contienen el grupo -N(M)- en el que M es como se ha definido anteriormente y que están sustancialmente igual, o más, de impedidas estéricamente que la hexametildisilazida de litio en el acoplamiento de una \beta-lactama al compuesto taxano que contiene el grupo hidroxilo en la posición C-13. Ejemplos de dichas bases impedidas estéricamente incluyen tetrametil piperidinas de metal alcalino y diciclohexilamidas de metal alcalino.

Las citadas bases de metal alcalino, especialmente las bases silil amida del presente procedimiento, son ventajosas puesto que no son fuertemente nucleofílicas, de forma que se minimiza o se elimina la degradación del material taxano de partida con la fórmula VIII y puesto que proporcionan un elevado rendimiento (preferiblemente mayor que o igual a aproximadamente 90%) y pureza (preferiblemente mayor que o igual a aproximadamente 98%) de producto taxano. La presente invención proporciona además un procedimiento en el que se acopla un taxano con la fórmula VIII con cualquier \beta-lactama adecuada que proporcione una cadena lateral en la posición C-13 de dicho taxano, procedimiento que incluye a las \beta-lactamas de la presente invención pero sin limitarse a ellas, en el que se emplea como agente de acoplamiento una base silil amida de metal alcalino o una base de amida de metal estéricamente impedida para dicho acoplamiento.

El anterior procedimiento de acoplamiento de la presente invención se conduce preferiblemente a una temperatura de entre aproximadamente -70ºC y aproximadamente 25ºC, especialmente entre aproximadamente -30ºC y aproximadamente 0ºC y a presión ambiente. La reacción se puede completar, por ejemplo, durante el curso de aproximadamente media hora hasta aproximadamente cuatro horas, y se conduce preferiblemente bajo una atmósfera inerte tal como
argon.

Las proporciones molares preferidas del compuesto de partida taxano con la fórmula VII:\beta-lactama son aquellas mayores de aproximadamente 1:1,6, lo más preferiblemente entre aproximadamente 1:1 y aproximadamente 1:1,3, especialmente aproximadamente 1:1,2. Las proporciones molares preferidas del compuesto de partida taxano con la fórmula VIII:base de metal alcalino, tal como base silil amida, están entre aproximadamente 1:1,1 y aproximadamente 1:1,5, especialmente aproximadamente 1:1,1.

Preferiblemente se emplean disolventes orgánicos que son inertes para la reacción. Disolventes especialmente preferidos son tetrahidrofurano (THF), tolueno y éter. Las cantidades de disolventes son preferiblemente aquellas en las que la proporción de taxano de partida con la fórmula VIII a disolvente sea de entre aproximadamente 1:1 y aproximadamente 1:5, preferiblemente 1:2,5, en peso:volumen.

El procedimiento de la presente invención comprende además opcionalmente, posterior a la reacción que forma un taxano que lleva una cadena lateral con la fórmula VII, la conversión del grupo -OC(R^{1})(R^{2})(OR^{3}) en hidroxilo. Estos grupos se pueden convertir opcionalmente en un grupo hidroxilo de forma secuencial o simultánea con otros grupos protectores de hidroxilo, tales como aquellos que están sobre el radical taxano, mediante procedimientos apropiados, tales como mediante contacto con un ácido, por ejemplo, un ácido inorgánico tal como HCl o HF, o ácidos orgánicos tales como ácido acético y similares.

Preferiblemente, la desprotección se conduce a una temperatura de entre aproximadamente -30ºC y aproximadamente 60ºC, especialmente a entre aproximadamente 0 y 25ºC y a presión ambiente. La reacción se puede completar, por ejemplo, durante el curso de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 72 horas y se conduce preferiblemente bajo una atmósfera inerte tal como argon.

Las proporciones molares preferidas de ácido:taxano para la desprotección están entre aproximadamente 1:1 y aproximadamente 20:1, (volumen:peso). Preferiblemente se emplean disolventes orgánicos que son inertes para la reacción. Disolventes especialmente preferidos son una mezcla de etanol/tetrahidrofurano o acrilonitrilo, acetona y agua. Las cantidades de disolventes son preferiblemente aquellas en las que el taxano está entre aproximadamente 1:10 y aproximadamente 1:50, preferiblemente 1:30, proporción de taxano:disolvente combinado, peso:volumen (especialmente, tetrahidrofurano/etanol y HCl/agua).

La presente invención también proporciona los nuevos taxanos que llevan cadena lateral con la fórmula VII y las sales de los mismos descritas en la presente invención.

El taxol se prepara preferiblemente por último como el taxano que lleva cadena lateral mediante los procedimientos de la presente invención. El taxol se puede preparar, por ejemplo, mediante el contacto de un 7-O-trialquilsilil bacatin III tal como 7-O-trietilsilil bacatin III, como el compuesto con la fórmula VIII, con (3R-cis)-1-benzoil-3-(1-metoxi-1-metiletoxi)-4-fenil-2-azetidi-nona, como la \beta-lactama, preferiblemente en presencia de una base silil amida de metal alcalino. Los grupos trietilsililoxi y 1-metoxi-1-metiletoxi se pueden convertir en grupos hidroxilos posteriormente a la formación de la cadena lateral, mediante procedimientos de desprotección tales como aquellos descritos anteriormente, para formar taxol.

Se pueden emplear sales o solvatos tales como hidratos de reactivos o de productos o se pueden preparar de manera apropiada en cualquiera de los procedimientos de la presente invención.

Como se puede apreciar, las \beta-lactamas y los taxanos descritos en la presente invención pueden estar presentes en más de una forma estereoisomérica. Se contemplan todos los estereoisómeros de los compuestos descritos en la presente invención, tanto solos (es decir, sustancialmente libres de otros isómeros), como en una mezcla con otros seleccionados (por ejemplo como un racemato) o todos los demás estereoisómeros. Se prefiere que estos compuestos estén sustancialmente libres de otros isómeros, es decir, enantioméricamente puros.

Son estereoconfiguraciones preferidas de los compuestos con la fórmula I aquellas en las que los grupos
-OC(R^{1})(R^{2})(OR^{3}) y R^{4} están en posición cis, es decir,

13

especialmente en las que el compuesto con la fórmula I tiene la misma estereoconfiguración absoluta que el compuesto (3R-cis)-1-benzoil-3-(1-metoxi-1-metil-etoxi)-4-fenil-2-azetidinona.

Las estereoconfiguraciones preferidas de las cadenas laterales en la posición C-13 de los compuestos con las fórmulas VII y IX se corresponden con la estereoconfiguración de las \beta-lactamas cis mencionadas, es decir,

14

y

15

cuyas cadenas laterales tienen la misma configuración absoluta que la del taxol.

La presente invención se describe además mediante los siguientes ejemplos, los cuales son sólo ilustrativos.

Ejemplo 1 Preparación de (3R-cis)-3-(1-metoxi-1-metiletoxi)-4-fenil-2-azetidinona (a) (3R-cis)-3-hidroxi-4-fenil-2-azetidinona

16

El compuesto del título se preparó mediante hidrólisis enzimática de 3-acetiloxi-4-fenil-2-azetidinona racémica (ver solicitud de patente de EE.UU. Nº de serie 07/822.015, presentada el 15 de Enero, 1992, de Patel y col.) para formar (3R-cis)-3-acetiloxi-4-fenil-2-azetidinona, seguido de hidrólisis usando una base para formar el compuesto ópticamente activo del título.

(b) (3R-cis)-3-(1-metoxi-1-metiletoxi)-4-fenil-2-azetidinona

17

El producto de la etapa (a) anterior (8,49 g, 52,0 mmol) se añadió a un matraz seco de 3 bocas de 500 ml (secado en un horno a 120ºC durante \sim12 horas y equipado con una barra magnética de agitación y con un termómetro digital), se purgó con argon y se disolvió en acetona (300 ml, botella de acetona de grado HPLC recién abierta; % en peso de H_{2}O (K.F.) < 0,001). La disolución amarillenta se enfrió a 0º (la temperatura interna era 1ºC). Se añadió gota a gota 2-metoxipropeno (15,0 ml, 156 mmol) (% en peso de H_{2}O (K.F.) < 0,001) durante un período de 30 segundos. La temperatura interna subió a \sim2ºC durante la adición de 2-metoxipropeno. La disolución resultante se agitó a 0ºC durante 5 minutos antes de la adición de sulfonato de piridinio p-tolueno (PPTS (pyridinium p-toluene sulfonate))
(1,3 g, 5,2 mmol) (% en peso de H_{2}O (K.F.) = 0,001). Después de agitar a 0ºC durante 30 minutos, el análisis mediante CCF (cromatografía de capa fina) reveló que la reacción había terminado. (El análisis mediante CCF (gel de sílice, disolvente: acetato de etilo, colorante: ácido fosfomolíbdico/etanol) de la reacción en bruto reveló una mancha para el producto (R_{f} = 0,50) y ausencia de producto de partida (R_{f} = 0,31)).

La disolución se combinó con acetato de etilo (250 ml), disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} (200 ml) y H_{2}O (100 ml) en un embudo de decantación. Después de agitar la mezcla y de separar las capas, la fracción acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con una disolución acuosa saturada de NaCl (200 ml), se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron en un rotavapor para dar un sólido de color blanquecino. En el rotavapor, todas las concentraciones se condujeron con una temperatura de baño
de 35ºC.

El producto bruto se disolvió en acetato de etilo (200 ml) y se añadió carbón activado neutro (2 g). La mezcla se llevó a ebullición poco a poco durante 5 minutos, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró por aspiración a través de una capa de Celite. La eliminación del disolvente en un rotavapor como se indicó anteriormente, seguida de la exposición a alto vacío (\sim133 Pa, \sim1 mm de Hg durante 45 minutos) dio 11,9 de un sólido de color blanquecino. El sólido se disolvió en acetato de etilo hirviendo (75 ml) y a continuación se añadieron hexanos hirviendo
(400 ml) en porciones de 50 ml. Se permitió que la disolución turbia resultante enfriase hasta la temperatura ambiente. La cristalización comenzó en el espacio de \sim1 minuto después de que se retirase la disolución de la fuente de calor. Después de mantener a temperatura ambiente durante 45 minutos, la mezcla se enfrió en una cámara frigorífica a 4ºC durante 15 horas. Los cristales se filtraron, se lavaron con una mezcla de acetato de etilo/hexanos 1:19
(3 x 100 ml) sobre un filtro de aspiración y se secaron a alto vacío (\sim20 Pa, \sim0,15 mm de Hg durante 20 horas) para dar
9,55 g (78%) del compuesto del título como agujas de color blanquecino.

El agua madre se concentró en un rotavapor como se indicó anteriormente, se expuso a alto vacío (\sim133 Pa, \sim1 mm de Hg durante 0,5 h) y a continuación se cristalizó en una mezcla de acetato de etilo/hexanos para dar 1,48 g (12%) de pequeños cristales de color blanquecino del producto del título. (La cristalización se llevó a cabo de manera similar a la de la primera cosecha). El sólido se disolvió en 5 ml de acetato de etilo hirviendo y se añadieron hexanos hirviendo (\sim40 ml) en porciones de \sim5 ml hasta que aparecieron unos pocos cristales. La cristalización comenzó inmediatamente tras enfriar hasta temperatura ambiente. Se permitió que la mezcla permaneciese a temperatura ambiente durante
1,5 h y a continuación a 4ºC durante 16 horas. Los cristales se filtraron, se lavaron con 3 x 25 ml de una mezcla de acetato de etilo/hexanos 1:19 en un filtro de aspiración y se secaron a alto vacío (\sim27 Pa, \sim0,2 mm de Hg) durante
24 horas).

Para el compuesto del título:

Análisis elemental (%)

C_{13}H_{17}NO_{3}

	Calculado	Encontrado
C	66,36	66,30
H	7,28	7,40
N	5,95	6,04
H_{2}O (KF)	0,00	0,00

Punto de fusión 136-137ºC

[\alpha]^{22}_{D}: +6,7º (c 1,0, CHCl_{3})

[\alpha]^{22}_{365}: +93,3º (c 1,0, CHCl_{3})

CCF: R_{f} = 0,47 (gel de sílice, acetato de etilo) visualizado mediante ácido fosfomolíbdico/etanol.

Ejemplo 2 Preparación de (3R-cis)-3-(1-metoxi-1-metiletoxi)-4-fenil-2-azetidinona

El producto del título de la etapa (a) del ejemplo 1 anterior (30,1 g, 184 mmol, que tiene un color parduzco) se añadió a un matraz de 500 mL purgado con argon, secado a la llama (el matraz se secó en un horno a 120ºC durante
\sim12 h y se equipó con una barra magnética de agitación y con un termómetro digital) y se disolvió en dimetilformamida (300 mL, % en peso de H_{2}O (K.F.) = 0,05). La disolución de color pardo rojizo se enfrió hasta 0ºC. La temperatura interna fue 2ºC. Se añadió gota a gota 2-metoxipropeno (53,0 mL, 553 mmol) durante un período de 2 minutos (la temperatura interna subió hasta \sim2ºC durante la adición de 2-metoxipropeno) y la disolución resultante se agitó a 0ºC durante 5 minutos antes de la adición de sulfonato de piridinio p-tolueno (PPTS (pyridinium p-toluene sulfonate),
4,6 g, 18,4 mmol). Aproximadamente 5 minutos después de la adición de PPTS, la temperatura de reacción alcanzó un máximo de 4,8ºC. A medida que la reacción progresaba, el color de la disolución se volvía más ligero. Después de agitar a 0ºC durante 1 hora, el análisis mediante CCF reveló que la reacción había terminado. (El análisis mediante CCF (gel de sílice, disolvente: acetato de etilo, colorante: ácido fosfomolíbdico/etanol) de una alícuota repartida entre acetato de etilo y agua reveló una mancha para el producto (R_{f} = 0,51) y ausencia de producto de partida
(R_{f} = 0,33)).

La disolución se diluyó con una mezcla 3:1 de acetato de etilo/hexanos (600 mL) y se lavó con disolución acuosa semisaturada de NaHCO_{3} (500 mL). Durante el lavado con NaHCO_{3}, se extrajeron la mayoría de las impurezas coloreadas en la fase acuosa. Sin embargo, en la fase orgánica permaneció un color pardo rojizo. La fracción acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 150 mL). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con H_{2}O (500 mL) (el análisis mediante CCF del H_{2}O de lavado no mostró pérdida del producto a la capa acuosa), con disolución acuosa saturada de NaCl (200 mL), se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron en un rotavapor para dar un sólido de color blanquecino. En el rotavapor se condujeron todas las concentraciones con una temperatura de baño de 40ºC. El sólido se disolvió en acetato de etilo hirviendo (180 mL) y a continuación se añadieron hexanos (250 mL) en porciones de \sim20 mL hasta que aparecieron unos pocos cristales. La disolución resultante se retiró de la fuente de calor y se permitió que enfriase hasta la temperatura ambiente. La cristalización extensiva comenzó en el espacio de
\sim1 minuto después de que se retirase la disolución de la fuente de calor. Después de permanecer a temperatura ambiente durante 1 h, la mezcla se enfrió en una cámara frigorífica a 4ºC durante 17 h. Los cristales se filtraron, se lavaron con una mezcla de acetato de etilo/hexanos 1:19 (3 x 150 mL) sobre un filtro de aspiración y se secaron a alto vacío
(\sim66 Pa, \sim0,5 mm de Hg durante 22 horas) para dar 32,6 g (75,4%) del producto del título en forma de agujas mullidas de color blanco.

El agua madre se concentró en un rotavapor como se indicó anteriormente y a continuación se cristalizó en una mezcla de acetato de etilo/hexanos para dar 6,25 g (14,4%) del producto del título en forma de cristales mullidos de color blanco. La cristalización se llevó a cabo de manera similar a la de la primera cosecha. El sólido se disolvió en 25 mL de acetato de etilo hirviendo y se añadieron hexanos hirviendo (\sim60 mL) en porciones de \sim5 mL hasta que aparecieron unos pocos cristales. La cristalización comenzó inmediatamente tras enfriar hasta temperatura ambiente. Se permitió que la mezcla permaneciese a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación a 4ºC durante 14 horas. Los cristales se filtraron, se lavaron con 3 x 100 mL de una mezcla de acetato de etilo/hexanos sobre un filtro de aspiración y se secaron a alto vacío (\sim80 Pa, \sim0,6 mm de Hg) durante 16 h. (Rendimiento = 90%).

Análisis elemental (%)

C_{13}H_{17}NO_{3}

	Calculado	Encontrado
C	66,36	66,40
H	7,28	7,20
N	5,95	5,68
H_{2}O (KF)	0,00	0,00

Punto de fusión = 141ºC

[\alpha]^{22}_{D}: +6,5º (c 1,0, CHCl_{3})

[\alpha]^{22}_{365}: +95,0º (c 1,0, CHCl_{3})

CCF: R_{f} = 0,47 (gel de sílice, acetato de etilo) visualizado mediante ácido fosfomolíbdico/etanol. Para preparar el producto del título se emplearon los siguientes procedimientos alternativos:

(1) Se agitó bajo argon una mezcla del compuesto del título de la etapa (a) del ejemplo 1 (79,7 mg, 0,488 mmoles), dimetoxipropano (0,3 ml, 2,44 mmol), PPTS (aproximadamente 12 mg, 0,049 mmol) y dimetilformamida (2 ml) durante 3 horas a aproximadamente 0ºC y a continuación durante 24 horas a aproximadamente 4ºC. El producto obtenido se extrajo con acetato de etilo y se desarrolló (se diluyó con 10 ml de acetato de etilo, se lavó con 0,5 de una disolución acuosa saturada de NaHCO_{3}; la fracción acuosa se extrajo con 2x5 ml de acetato de etilo; las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con 1x10 ml de agua, con 10 ml de una disolución acuosa saturada de NaHCO_{3}, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron) para obtener un rendimiento cuantitativo de productos, rendimiento que fue una mezcla 1:1,7 del material de partida y del producto del título (determinado mediante análisis CCF).

(2) El producto del título se obtuvo mediante la adición del producto del título de la etapa (a) del ejemplo 1
(92,5 mg) a un matraz de 5 ml secado en un horno, se purgó con argon, se diluyó con dimetilformamida (1,5 ml) y se enfrió a 0ºC. Se añadió dimetoxipropano (0,18 g), seguido de PPTS (14 mg). La disolución se agitó a 0ºC durante 5 horas y se desarrolló como se indicó anteriormente (produciendo aproximadamente 1:1,1 del material de partida al producto del título).

(3) El producto del título se obtuvo mediante la adición del producto del título de la etapa (a) del ejemplo 1
(89,4 mg) a un matraz purgado con argon, secado en un horno, se disolvió en acetona (3,5 ml) y se enfrió a 0ºC. Se añadió dimetoxipropano (0,17 g), seguido de PPTS (14 mg). La disolución se agitó a 0ºC durante 3 horas, se transfirió a una cámara frigorífica a 4ºC durante 24 horas y se desarrolló para producir el producto del título en aproximadamente una proporción 8:2:1 de material de partida al producto del título a impureza.

Ejemplo 4 Preparación de ácido [2aR-[2a\alpha,4\beta,4a\beta,6\beta,9\alpha(\alphaR*,\betaS*),11\alpha,12\alpha,12a\alpha,12b\alpha]]-\beta-(benzoilamino)-\alpha-(1-metoxi-1-etiletoxi)hidroxibencenopropanóico,6,12b-bis(acetiloxi)-12-(benzoiloxi)-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-4-trietil-sililoxi-11-hidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-7,11-metano-1H-ciclodeca[3,4]benz[1,2-b]oxet-9-il-éster (a) 7-TES bacatin III

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Como se usa en la presente invención, Ac es acetilo, Bz es benzoilo y TES es trietilsilil.

(i) Ácido [2aR-(2a\alpha,4\beta,6\beta,9\alpha,11\beta,12\alpha,12a\alpha,12b\alpha)]-benzóico. 12b-acetiloxi-2a,3,4,4a,5,-6,9,10,11,12,12a,12b- dodecahidro-6,9,11-trihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-4-[(trietilsilil)oxi]-7,11-metano-1H-ciclodeca[3,4]benc [1,2-b]oxet-12-il éster (7-O-TES-10-desacetilbacatin III)

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19

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Se añadieron 10-desacetilbacatin III (27,4 g, 50,3 mmol) (cantidad sincorregir de impurezas medidas (dos veces) como: H_{2}O: 1,0% (1,57%), CH_{3}OH: 1,49% (1,6%), acetato de etilo: 0,1% (0,09%), hexano (0,03%)) y 4-dimetilaminopiridina (2,62 g, 21,4 mmol) (% en peso de H_{2}O (K.F.) = 0,09) a un matraz de 3 bocas de 1 L purgado con argon, secado a la llama (equipado con un agitador mecánico y con un termómetro digital) y se disolvieron en dimetilformamida seca (122 ml) (% en peso de H_{2}O (K.F.) =< 0,01). Se añadió CH_{2}Cl_{2} (256 ml) (% en peso de H_{2}O
(K.F.) =< 0,01) y la disolución homogénea resultante se enfrió a -50ºC. (La temperatura de la disolución de reacción subió entre 23ºC y 25ºC durante la adición de CH_{2}Cl_{2}). Se añadió gota a gota trietilamina (Et3N, 16 ml, 120 mmol) (% en peso de H_{2}O (K.F.) = 0,08 durante 3 minutos y se agitó la disolución resultante a -50ºC durante 5 minutos antes de la adición gota a gota de cloruro de trietilsililo (Et_{3}SiCl, 18,6 ml, 111 mmol). La adición de Et_{3}SiCl se condujo durante un período de 10 minutos y la temperatura de reacción no subió por encima de -50ºC. Durante la adición de Et_{3}SiCl la reacción se volvió muy turbia. La mezcla resultante se agitó a \sim-50ºC durante 1 hora y a continuación se permitió que permaneciese (sin agitación) en un congelador a -48ºC durante 22 horas. (Un experimento por separado mostró que agitar la reacción a -48ºC durante 8 horas daba como resultado \sim60% de conversión). A continuación la mezcla se retiró del congelador y se calentó a \sim-10ºC. (El análisis de la mezcla mediante CCF (disolvente: acetato de etilo, colorante: ácido fosfomolíbdico/etanol) reveló la ausencia de material de partida y mostró una única mancha para el producto (R_{f} = 0,60)). La mezcla fría se combinó con AcOEt (1 L) y se lavó con H_{2}O (890 ml). La capa acuosa resultante se separó y se extrajo con AcOEt (250 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una disolución acuosa de NaH_{2}PO_{4} al 5,7% (2 x 250 ml) (pH medido de la disolución acuosa de NaH_{2}PO_{4} al 5,7% = 4,30 \pm 0,05; pH medido de los lavados combinados de NaH_{2}PO_{4} = 5,75 \pm 0,05), con una disolución semisaturada de NaCl (250 ml), se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron en un rotavapor. (Todas las concentraciones en el rotavapor se condujeron con una temperatura del baño de agua de 35ºC). El semisólido resultante se secó además mediante exposición a alto vacío (\sim133 Pa, \sim1 mm de Hg durante 20 minutos) para dar 41,5 g de un sólido de color blanco. El producto bruto se disolvió a continuación en CH_{2}Cl_{2} (400 ml) (para disolver el sólido se requirió el calentamiento en un baño de agua a 35ºC) y se redujo el volumen de la disolución resultante hasta \sim150 ml en un rotavapor. La cristalización comenzó inmediatamente y se permitió que la mezcla permaneciese a temperatura ambiente durante
1 hora. Se añadieron hexanos (100 ml) y la mezcla se removió suavemente. Se permitió que la mezcla permaneciese en una cámara frigorífica a 4ºC durante 16,5 h. El sólido se filtró, se lavó con una mezcla 1:9 de CH_{2}Cl_{2}/hexanos
(3 x 250 ml) sobre un filtro de aspiración y se secó a alto vacío (\sim27 Pa, \sim0,2 mm de Hg durante 42 horas) para dar 26,1 g (79%) del producto del título como un polvo de color blanco. El agua madre se concentró en un rotavapor y el residuo se cristalizó en CH_{2}Cl_{2} para dar 4,5 g (14%) del producto del título en forma de cristales de color blanco. La recristalización se condujo de igual forma que con la primera cosecha de producto: el sólido se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) sin calentar y se redujo el volumen de la disolución resultante a \sim7 ml en un rotavapor. La cristalización comenzó en el espacio de 5 minutos. Se permitió que la mezcla permaneciese a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación en una cámara frigorífica a 4ºC durante 42 horas. Los cristales se filtraron, se lavaron con una mezcla 1:9 de CH_{2}Cl_{2}/hexanos (3 x 50 ml) sobre un filtro de aspiración y se secaron a alto vacío (\sim27 Pa, \sim0,2 mm de Hg durante 18 horas). El espectro de RMN ^{1}H de esta cosecha fue idéntico al espectro de RMN ^{1}H de la primera cosecha del producto.

El rendimiento combinado de las dos cosechas fue 93% (sin corregir).

Análisis elemental (%)

C_{35}H_{50}O_{10}Si

	Calculado	Encontrado
C	63,80	63,43
H	7,65	7,66
KF (H_{2}O)	0,00	0,00

Punto de fusión: 239-242ºC (descomposición)

[\alpha]^{22}_{D}: -53,6º (c 1,0, CHCl_{3})

CCF: R_{f} = 0,60 (gel de sílice, AcOEt); visualizado mediante ácido fosfomolíbdico/etanol.

Se empleó un procedimiento alternativo del modo siguiente:

En un matraz de tres bocas de 250 ml secado a la llama equipado con una entrada de argon se puso 10-des-acetil-bacatin III (5,44 g, 10 mmol, que tiene un contenido de agua de 1,56% en peso y un contenido de metanol de 1,6% en peso), 4-dimetilaminopiridina (0,49 g, 4 mmol) y N,N- dimetilformamida (24 ml, secada sobre un tamiz molecular de 4\ring{A}). La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que se volvió homogénea. Se añadió diclorometano (50 ml, de grado HPLC, usado sin purificación) y se disminuyó la temperatura hasta -50ºC. Se añadió gota a gota trietilamina
(2,9 ml, 21 mmol) durante un período de 5 minutos, seguida de cloruro de trietilsililo (3,4 ml, 20 mmol) durante un período de 10 minutos. Se permitió que la mezcla permaneciese a -48ºC durante un período de 21 horas, se diluyó con 200 ml de acetato de etilo y con 175 ml de agua. (La reacción se controló mediante CCF usando AcOEt como eluyente: R_{f} para el material de partida = 0,56, R_{f} para el producto = 0,83; visualización mediante UV y PMA (Phosphomolybdic Acid (ácido fosfomolíbdico))). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 1). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con una disolución acuosa de fosfato de potasio monobásico al 5%
(50 ml x 2) (el pH de la disolución de KH_{2}PO_{4} al 5% en H_{2}O era 4,3), con disolución semisaturada de cloruro de sodio (50 ml x 1), salmuera (50 ml x 1), se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a vacío para dar el producto bruto del título en forma de un sólido (7,45 g). El material bruto se disolvió en 75 ml de diclorometano caliente y el volumen total se redujo hasta 30 ml mediante calentamiento para comenzar la cristalización. Se apartó a temperatura ambiente durante 2 horas y a 4ºC durante 16 horas. Los cristales se filtraron en un embudo buchner, se lavaron con diclorometano frío al 10% en hexano (25 ml) y se secaron a vacío para proporcionar 5,38 g del producto del título. Las aguas madres y los lavados se concentraron a vacío y el residuo sólido se cristalizó disolviéndolo en 8 ml de diclorometano. Después del anterior procedimiento de cristalización, se obtuvieron 0,72 g del producto como una segunda cosecha. El rendimiento combinado del producto del título 7-TES-10-desacetil bacatin III, en forma de un sólido de color blanco, punto de fusión 238-240ºC, fue 6,10 g (93%).

Análisis elemental (%)

C_{35}H_{50}O_{10}Si

	Calculado	Encontrado
C	63,80	63,76
H	7,65	7,66

Punto de fusión: 239-242ºC

[\alpha]_{D}: -53,7 (c 1,0, CHCl_{3})

CCF: Rf = 0,53 (gel de sílice, AcOEt al 50% en hexano); visualización mediante UV y PMA. IH= 98,9%

(ii) [2aR-(2a\alpha,4\beta,4a\beta,6\beta,9\alpha,11\beta,12\alpha,12a\alpha,12b\alpha)]-6,12b-bis(acetiloxi)-12-(benzoiloxi)-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12, 12a,12b-dodecahidro-9,11-dihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-4-[(trietilsilil)oxi]-7,11-metano-1H-ciclodeca[3,4]benz [1,2-b]oxet-5-ona (7-O-TES-bacatin III)

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Se añadió 7-O-TES-10-desacetilbacatin III preparado en la etapa (i) anterior (21,4 g, 32,4 mmol) a un matraz de 3 bocas de 1 L, purgado con argon, secado a la llama (equipado con un agitador mecánico y con un termómetro digital) y se disolvió en THF (350 ml, recién destilado sobre sodio/benzofenona). La disolución resultante se enfrió a -70ºC. Se añadió gota a gota una disolución de n-butil-litio (n-BuLi, 14,6 ml de una disolución 2,56 M en hexanos, 37,3 mmol, valorada por triplicado con ácido difenilacético en THF a 0ºC) durante un período de 23 minutos. Durante la adición la temperatura de la reacción no subió por encima de -68ºC. Tras la adición de n-BuLi se formaron sólidos y no parecían disolverse a -70ºC. La mezcla resultante se agitó a -70ºC durante 20 minutos y a continuación se calentó a -48ºC. (Tras calentar a -48ºC se obtuvo una disolución homogénea transparente). Después de agitar a -48ºC durante 1/2 hora, se añadió gota a gota anhídrido acético (4,6 ml, 49 mmol, destilado (137-138ºC, 1 atm) bajo una atmósfera de argon antes de su uso) durante 7 minutos. Durante la adición la temperatura de la reacción no subió por encima de -45ºC. La disolución resultante se agitó a -48ºC durante 20 minutos y a continuación a 0ºC durante 1 hora. La disolución se diluyó con acetato de etilo (350 ml), se lavó con una disolución acuosa saturada de NH_{4}Cl (250 ml) y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una disolución acuosa saturada de NaCl, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron en un rotavapor. (En el rotavapor todas las concentraciones se condujeron con una temperatura del baño de agua de 35ºC). La exposición del semisólido a alto vacío (\sim200 Pa, \sim1,5 mm de Hg durante 1/2 hora) dió 24,7 g de un sólido de color blanco. El producto bruto se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (300 ml) y se redujo el volumen de la disolución resultante a
\sim70 ml en un rotavapor. La cristalización comenzó en el espacio de un minuto. Se permitió que la mezcla permaneciese a temperatura ambiente durante 45 minutos y a continuación en una cámara frigorífica a 4ºC durante 18 horas. Los cristales se filtraron, se lavaron con una mezcla 1:9 de CH_{2}Cl_{2}/hexanos (3 x 100 ml) sobre un filtro de aspiración y se secaron a alto vacío (\sim27 Pa, \sim0,2 mm de Hg durante 19 horas) para dar 20,9 g (92,0%) del producto del título en forma de finas agujas de color blanco. El agua madre se concentró en un rotavapor y el residuo se cristalizó en una mezcla de CH_{2}Cl_{2}/hexanos para dar 0,82 g (3,6%) del producto del título en forma de pequeños cristales de color blanco. La cristalización se condujo del modo siguiente: se disolvió el residuo en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se redujo el volumen de la disolución resultante hasta \sim5 ml en el rotavapor. Después de permanecer a temperatura ambiente durante 1/2 hora, no se habían formado cristales. Se añadieron hexanos (5 ml) en porciones de 1 ml y se removió la disolución. En este momento estaban presentes unos pocos cristales. Se permitió que la mezcla permaneciese a temperatura ambiente durante 1/2 hora (se formaron más cristales) y a continuación en una cámara frigorífica a 4ºC durante 18 horas. Los cristales se filtraron, se lavaron con una mezcla 1:9 de CH_{2}Cl_{2}/hexanos sobre un filtro de aspiración y se secaron a alto vacío (\sim20 Pa, \sim0,15 mm de Hg durante 21 horas).

El rendimiento combinado para las dos cosechas fue 95,6%.

Punto de fusión: 218-219ºC (descomposición)

[\alpha]^{22}_{D}: -78,4º (c 1,0, CHCl_{3})

CCF: R_{f} = 0,37 (gel de sílice, acetona/CH_{2}Cl_{2} 1:9); visualizado mediante ácido fosfomolíbdico/etanol.

(b) Ácido [2aR-[2a\alpha,4\beta,4a\beta,6\beta,9\alpha(aR*,\betaS*),11\alpha,12\alpha,12a\alpha,12b\alpha]]-\beta-(benzoilamino)-\alpha-1-metoxi-1-metiletoxi)hidroxibencenopropanóico,6,12b-bis(acetiloxi)-12-(benzoiloxi)-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-4-trie- tilsililoxi-11-hidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-7,11-metano-1H-ciclodeca[3,4]benz[1,2-b]-oxet-9-il-éster

\vskip1.000000\baselineskip

21

\vskip1.000000\baselineskip

Como se usa en la presente invención, Ph es fenilo, MOP es 1-metoxi-1-metiletilo y THF es tetrahidrofurano.

A una disolución del compuesto preparado en la etapa (a) anterior (50,00 g, 71,33 mmol) en THF (recién destilado sobre sodio y benzofenona, 125 ml) a -50ºC (el enfriamiento se aplicó sólo después de que el compuesto se disolvió completamente en THF) se añadió gota a gota con agitación vigorosa hexametildisilazida de litio (LHMDS (lithium hexamethyldisilazide), 55,1 ml, 1,36 M en THF, 74,90 mmol; el reactivo se valoró con 1,3-difenilacetona p-tosilhidrazona) durante un período de 20 minutos, de forma que la temperatura interna no subió por encima de -48ºC. Después de la adición se calentó la mezcla de reacción hasta -35ºC y se agitó a esa temperatura durante 5 minutos.

Se añadió gota a gota una disolución recién preparada del compuesto preparado como el compuesto del título del ejemplo 3 ("Compuesto 3") (27,85 g, 82,03 mmol) en THF (35 ml) a la mezcla de reacción durante un período de
7 minutos. No se observó reacción exotérmica significativa. El matraz que contiene el Compuesto 3 se lavó con 5 ml de THF y el lavado se transfirió a la mezcla de reacción. La disolución resultante se llevó a 0ºC mediante la sustitución del baño de hielo seco por un baño de agua-hielo y se agitó durante 90 minutos adicionales. La reacción se controló mediante CCF en fase inversa sobre gel de sílice (EM Science RP-18 WF_{254S}) usando como eluyente una mezcla de acetonitrilo/agua (70/30). El valor de R_{f} para el producto del título fue 0,31, 0,41 para 7-TES-taxol (es decir, la estructura de taxol en la que el grupo hidroxilo de la posición 7 se sustituye por TES-O-), 0,47 para 7-TES-bacatin III y 0,63 para el Compuesto 3.

La reacción se detuvo con un tampón de fosfato de pH 7 (50 ml), seguido inmediatamente por una disolución saturada de NaHCO_{3} (150 ml). Se diluyó con acetato de etilo (AcOEt, 600 ml) y se separaron las capas. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se concentró a vacío para dar el producto del título bruto
(82,3 g) en forma de un sólido de color amarillo claro. El sólido se disolvió en AcOEt caliente (200 ml) y se añadieron hexanos gota a gota (110 ml) a la temperatura de reflujo. La mezcla de cristalización se apartó a temperatura ambiente durante 2 horas (tras el enfriamiento, la precipitación tuvo lugar rápidamente) y a continuación se apartó en una cámara frigorífica durante 7 horas. El sólido se filtró y se lavó con una mezcla fría de hexanos/AcOEt, 5/1 (2 x 80 ml). Los cristales resultantes de color blanco se secaron sobre el filtro de aspiración durante 1 hora y a continuación se secaron a vacío (\sim80 Pa, \sim0,6 mm de Hg) durante la noche para dar 67,37 g del producto del título (91% basado en 7-TES-bacatin III; la RMN ^{1}H mostró 0,4 moles de AcOEt lo que dió un rendimiento corregido de 87%) con un índice de homogeneidad efectivo (IH) de 99,25% (95,73% producto del título y 3,52% 7-TES-taxol).

El agua madre y los lavados se combinaron y se evaporaron hasta sequedad. El residuo se disolvió en AcOEt caliente (25 ml) y se añadieron hexanos (40 ml) gota a gota a la temperatura de reflujo. Después de enfriar hasta temperatura ambiente se apartó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora, seguido de 7 horas en la cámara frigorífica. El sólido se recogió mediante filtración, se secó sobre un filtro de aspiración y a continuación se secó a vacío durante la noche (\sim93 Pa, \sim0,7 mm de Hg) para producir 6,06 g (8%) del producto del título con un IH efectivo de 96,6% (92,6% producto del título y 4,0% 7-TES-taxol).

Análisis elemental (%)

C_{57}H_{73}NO_{15}Si \cdot 0,4 AcOEt

	Calculado	Encontrado
C	65,44	65,49
H	7,14	7,44
N	1,30	1,47

Punto de fusión: 153-155ºC

[\alpha]_{D}: -59,6 (c 1, CHCl_{3})

CCF: R_{f} = 0,31 HPTLC en fase inversa (reverse phase High Performance Thin Layer Chromatography), acetonitrilo/agua, 70:30, visualización UV.

Se empleó un procedimiento alternativo para la preparación de 2'-MOP-7-trietilsilil taxol mediante el acoplamiento del 7-O-TES bacatin III formado in situ del modo siguiente:

Se disolvió 7-O-TES-10-desacetilbacatin III (1,5177 mmol) en 3,5 ml de tetrahidrofurano seco y se enfrió entre -65 y -70ºC. Se añadió gota a gota hexametildisilazida de litio (LHMDS (lithium hexamethyldisilazide)) (0,5 equivalentes) y se agitó la mezcla durante 20 minutos. A continuación se añadió anhídrido acético (0,5 equivalentes) y se continuó agitando durante igual período de tiempo. El procedimiento de desprotección/acilación se repitió tres veces (total 1,5 equivalentes de LHMDS y 2,0 equivalentes de anhídrido acético). La precipitación tuvo lugar durante la formación del anión (mezcla de reacción concentrada) y la mezcla se calentó hasta 0ºC durante 5 minutos.

Después del enfriamiento hasta -50ºC y del tratamiento adicional gota a gota con LHMDS, se condujo el acoplamiento con el Compuesto 3 directamente (mediante el procedimiento descrito anteriormente en la etapa (b)). Rendimiento: 851 mg (55%) a partir de 7-O-TES-10-desacetilbacatin III.

Ejemplo 5 Preparación de ácido [2aR-[2a\alpha,4\beta, 4a\beta,6\beta,9\alpha(\alphaR*,\betaS*),-11\alpha,12\alpha,12a\alpha,12b\alpha]]-\beta-(benzoilamino)-\alpha-(1-metoxi-1-metiletoxi)hidroxibencenopropanóico. 6,12b-bis(acetiloxi)-12-(benzoiloxi)-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-4-trietilsililoxi-11-hidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-7,11-metano-1H-ciclodeca[3,4]benz[1,2-b]oxet-9-il éster (2'-MOP-7-trietilsilil-taxol

\vskip1.000000\baselineskip

22

A una disolución de 7-TES-bacatin III (5,00 g, 7,13 mmol) en THF (recién destilado sobre sodio y benzofenona, 12,5 ml) a -50ºC (el enfriamiento se aplicó sólo después de que el compuesto se disolvió completamente en THF) se añadió gota a gota con agitación vigorosa LHMDS (7,85 ml, 1,0 M en THF, 7,85 mmol) durante un período de 17 minutos, de forma que la temperatura interna no subió por encima de -48ºC. Cerca del final de la adición se formó un precipitado, lo que hizo difícil la agitación. Para permitir una agitación eficaz se añadieron 1,5 ml de THF adicionales. A continuación se calentó la mezcla de reacción hasta -35ºC y se agitó a esa temperatura durante 10 minutos. La disolución turbia resultante a -35ºC se enfrió de nuevo hasta -42ºC y a continuación se transfirió gota a gota a una disolución de la azetidinona, Compuesto 3 (3,03 g, 8,92 mmol) en THF (2,5 ml) mediante una cánula. La temperatura se mantuvo entre -19ºC y -10ºC durante la adición, lo que tardó 7 minutos. El matraz y la cánula se lavaron con THF (0,5 ml) y el lavado se transfirió a la mezcla de reacción. Al final de la adición, la disolución resultante se llevó a 0ºC mediante la sustitución del baño de hielo seco por un baño de agua-hielo y se agitó durante 75 minutos adicionales. La reacción se controló mediante CCF en fase inversa sobre gel de sílice (EM Science RP-18 WF_{254s}) usando como eluyente una mezcla de acetonitrilo/agua (70/30). El R_{f} para el producto del título fue 0,31, 0,41 para el 7-TES-taxol y 0,47 para el 7-TES-bacatin III.

La reacción se detuvo con un tampón de fosfato de pH 7 (12 ml), seguido de inmediato por una disolución saturada de NaHCO_{3} (30 ml). Se diluyó con AcOEt (100 ml), se separaron las capas y se extrajo la capa acuosa con AcOEt
(10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtraron y se concentraron a vacío para dar el producto del título bruto (9,13 g) en forma de un sólido de color tostado. Se disolvió en AcOEt caliente (20 ml) y se añadieron hexanos (13 ml) gota a gota a la temperatura de reflujo. La disolución se puso aparte a temperatura ambiente durante 36 horas y a continuación se puso en la cámara frigorífica durante 2 horas. El sólido se filtró y se lavó con una mezcla fría de hexanos/AcOEt, 5/1 (2 x 10 ml). (El agua madre (1,52 g, IH 52,4) y los lavados (0,32 g, IH efectivo 53,4) se recogieron por separado y se apartaron). Los cristales resultantes de color blanco se secaron sobre el filtro de aspiración durante 20 minutos y a continuación se secaron a vacío (\sim67 Pa, \sim0,5 mm de Hg) durante la noche para dar 6,59 g del producto del título (89% basado en 7-TES-bacatin III) con un IH efectivo (IH) de 99,3% (96,0% producto del título y 3,3% 7-TES-taxol).

Análisis elemental (%)

C_{57}H_{73}NO_{15}Si

	Calculado	Encontrado
C	65,81	65,47
H	7,07	7,12
N	1,35	1,64

Punto de fusión: 153-155ºC

[\alpha]_{D}: -59,6 (c 1, CHCl_{3})

Ejemplo 6 Preparación de Taxol Ácido [2aR-[2a\alpha,4\beta,4a\beta,6\beta,9\alpha(\alphaR*,\betaS*),11\alpha,12\alpha,12a\alpha,12b\alpha]]-\beta-(benzoilamino)-\alpha-hidroxi-bencenopropanóico, 6,12b-bis(acetiloxi)-12-(benzoil-oxi)-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahidro-4-11-dihidroxi-4a,8,13,13-tetrametil-5-oxo-7,11-metano-1H-ciclodeca[3,4]benz[1,2-b]oxet-9-il-éster

23

A una disolución del producto del título del ejemplo 5 anterior ("Compuesto 5", 5,0 g, 4,81 mmol; IH 99,3% incluyendo el Compuesto 5, IH 96,0 y 7-TES-taxol, IH 3,3) en etanol (EtOH, 100 mL) y THF (80 mL) a 0ºC (el Compuesto 5 se disolvió en EtOH/THF antes de enfriar a 0ºC usando un baño de hielo) se añadió gota a gota HCl 1,5 N (acuoso, aq) previamente refrigerado (-5ºC) con agitación vigorosa durante un período de 12 minutos. La turbidez que apareció durante la adición de HCl 1,5 N desapareció instantáneamente. La disolución transparente resultante se agitó a 0ºC durante 15 minutos y se almacenó a 4ºC durante 19,5 horas. El análisis mediante HPLC de una alícuota (columna de fenilo BD de 3 \mu; gradiente lineal de 35% CH_{3}CN/65% H_{2}O durante 26 minutos; gradiente lineal de 100% CH_{3}CN durante 7 minutos; modo isocrático 35% CH_{3}CN/65% H_{2}O durante 7 minutos) en este punto indicó la presencia de taxol (98,6%), 7-TES-taxol (0,6%) y una impureza polar (0,3%) junto con otras impurezas de poca importancia. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (AcOEt, 200 mL) y se lavó con una disolución fría (aproximadamente 5ºC) de NaHCO_{3} (500 mL y 2 x 200 mL). Se continuó con el lavado hasta que el pH de los lavados acuosos fue \sim8,5.

La capa acuosa combinada se extrajo con AcOEt (2 x 100 mL). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera (300 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}, 100 g), se filtraron y se concentraron para dar taxol bruto en forma de un sólido de color blanco (4,44 g; IH mediante HPLC 97,7%). Se disolvió en 25 mL de metanol (MeOH)/isopropanol (IPA (isopropylic alcohol)) (1:5,8) y se diluyó con H_{2}O (1,4 mL) mediante calentamiento suave (se calentó hasta \sim40 a 45ºC en un baño de agua). La disolución resultante se almacenó en atmósfera de hexano a temperatura ambiente durante 16 horas (el recipiente que contenía la disolución de taxol bruto en MeOH/IPA/H_{2}O se puso en otro recipiente mayor que contenía hexano (20 ml) en un sistema cerrado a temperatura ambiente). El sólido cristalino de color blanco (examen visual bajo un microscopio) se filtró, se lavó con hexano frío (5ºC) (25 mL) y se secó a alto vacío para dar 3,8 g (93,0%) de taxol con un IH mediante HPLC de 99,0%. El agua madre y los lavados se concentraron a presión reducida para dar 0,28 g (7,0%) de un sólido de color amarillo pálido (IH mediante HPLC 80,6%) que se apartó para posterior procesamiento más adelante.

Análisis elemental (%)

C_{47}H_{51}NO_{14} \cdot 1,0 H_{2}O

	Calculado	Encontrado
C	64,74	64,71
H	6,13	6,48
N	1,61	1,57
KF (H_{2}O)	2,07	1,90

Punto de fusión: 211-213ºC

[\alpha]_{D}: -51,5 (c 1, CHCl_{3})

CCF: R_{f} = 0,22; MeOH:AcOEt:hexano; 0,6:4,0:5,4; visualización mediante UV y PMA.

Ejemplo 7 Preparación de Taxol

A una botella de 2 L de polietileno que contenía una disolución del Compuesto 5 (2'-MOP-7-trietilsilil-taxol,
20 g, 19,1 mmol) en acetonitrilo (800 ml) y piridina (48 ml) a 0ºC se añadió gota a gota una disolución acuosa de ácido fluorhídrico (HF) al 48% (104 ml) durante un período de 60 minutos. La temperatura interna no superó los 5ºC durante la adición. La disolución transparente se mantuvo a 4ºC sin agitación durante un período de 24 horas. La reacción se controló mediante HPLC (Waters, Nova-Pak Fenilo, columna de 3,9 x 150 mm; absorción: 227 nm; caudal:
2 ml/min).

Condiciones cromatográficas:

0-26 min, 35% CH_{3}CN/65% H_{2}O a 100% CH_{3}CN, gradiente lineal, 26-28 min, 100% CH_{3}CN a 35% CH_{3}CN/65% H_{2}O, gradiente lineal, 28-35 min, 35% CH_{3}CN/65% H_{2}O, modo isocrático

Rt: 13,73 para 7-TES-taxol

Rt: 6,65 para Taxol

Rt: 4,96 para 10-desacetil-taxol

Después de 19 horas de reacción, en esta mezcla permanecía 0,36% de 7-TES-taxol. Después de 24 horas, en la mezcla de reacción no estaban presentes 7-TES-taxol ni 10-desacetil-taxol (índice de impureza II<0,04%). A continuación se diluyó la disolución con acetato de etilo (1 L) y se lavó con HCl 1N (800 ml x 2). La capa acuosa combinada se extrajo con acetato de etilo (400 ml x 1). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (800 ml x 5), con salmuera (300 ml x 1), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para dar 17,46 g (\sim100%) de taxol bruto en forma de un sólido de color blanco. El IH mediante HPLC para el taxol bruto obtenido anteriormente fue 98,7%. El rendimiento es sin corregir.

Análisis elemental (%)

C_{47}H_{51}NO_{14} \cdot 1,3 H_{2}O

	Calculado	Encontrado
C	64,34	64,32
H	6,16	5,99
N	1,60	2,00
KF (H_{2}O)	2,67	2,00

Punto de fusión: 207,5-212ºC (peso/descomposición)

[\alpha]_{D}: -52,5 (c 1, CHCl_{3})

CCF: R_{f} = 0,22; gel de sílice; MeOH:AcOEt:hexano; 0,6:4,0:5,4; visualización mediante UV y PMA.

Ejemplo 8 Preparación de Taxol

A una disolución de 2'-MOP-7-TES-taxol (Compuesto 5, 5,0 g, 4,81 mmol, IH 99,2% (incluyendo 2'-MOP-7-TES-taxol, IH 95,7) en etanol (EtOH, 50 ml) y THF (40 ml) a 0ºC (baño de hielo, el 2'-MOP-7-TES-taxol se disolvió en EtOH/THF antes de enfriar a 0ºC) se añadió gota a gota HCl 1,5 N (aq., 50 ml) previamente refrigerado (-5ºC) con agitación vigorosa durante un período de 40 minutos. La turbidez que apareció durante la adición de HCl 1,5 N desapareció instantáneamente. La disolución transparente resultante se agitó a -2ºC durante 1 hora y se almacenó a 4ºC durante 22 horas. En esta etapa precipitaron aproximadamente 100-200 mg de un sólido de color blanco (taxol). (El análisis de una alícuota mediante HPLC durante el procedimiento después de 20 horas (columna de fenilo BD de 3 \mu; gradiente lineal de 35% CH_{3}CN/65% H_{2}O durante 26 minutos; gradiente lineal de 100% CH_{3}CN durante 7 minutos; modo isocrático 35% CH_{3}CN/65% H_{2}O durante 7 minutos) en este punto indicó la presencia de taxol (97,2%), 7-TES taxol (0,2%), 10-desacetil taxol (0,7%) con otras impurezas de poca importancia). La mezcla de reacción se diluyó con AcOEt (200 ml) y se lavó con una disolución fría (\sim5ºC) de NaHCO_{3} (400 ml y 2 x 200 ml). (El pH de los lavados acuosos debería ser preferiblemente \sim8,5 (cuando no sea así, preferiblemente se continua el lavado hasta que el pH alcance 8,5)). La capa acuosa combinada se extrajo con AcOEt (2 x 80 ml). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera (200 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}, 100 g), se filtraron y se concentraron para dar taxol bruto en forma de un sólido de color blanco (4,2 g; IH 97,9%). Se disolvió en 31 ml de EtOH)/heptano (6:4) y se diluyó con H_{2}O (0,15 ml) mediante calentamiento suave (se calentó hasta \sim30-35ºC en un baño de agua). La disolución transparente homogénea resultante se almacenó a 4ºC durante aproximadamente 20 horas. El sólido cristalino de color blanco (examen visual bajo un microscopio) se filtró, se lavó con heptano frío (5ºC) (20 ml) y se secó a alto vacío para dar 3,72 g (90,6%) de taxol con IH 98,6%. Bajo concentración a presión reducida, el agua madre y los lavados dieron taxol bruto (0,45 g) que cristalizando (se disolvió en EtOH/heptano (0,5:0,3, 4,6 ml) y H_{2}O (20 \mul) y se almacenó a 4º durante 20 horas) produjo la segunda cosecha de sólido cristalino de color blanco (examen visual bajo un microscopio) (0,18 g; 4,0%; IH 92,0%).

Análisis elemental (%)

C_{47}N_{51}NO_{14} \cdot 2,55 H_{2}O

	Calculado	Encontrado
C	62,73	62,35
H	6,28	6,43
N	1,56	1,94
H_{2}O	5,11	4,91

Punto de fusión = 207-208ºC

Rotación óptica: [\alpha]_{D} = -52,3º (c 1, CHCl_{3})

CCF: R_{f} = 0,22; gel de sílice; MeOH:AcOEt:hexano; 0,6:4,0:5,4; visualización mediante UV y PMA. IH = 98,6%.

Claims

1. Una \beta-lactama con la siguiente fórmula I:

24

en la que

R^{1} y R^{2}:

: (i) son ambos el mismo grupo alquilo; o

: (ii) forman un grupo cicloalquilo junto con el átomo de carbono al que están unidos; o

: (iii) forman un grupo cicloalquenilo junto con el átomo de carbono al que están unidos; o

: (iv) forman un grupo heterociclo junto con el átomo de carbono al que están unidos;

en la que el átomo de carbono marcado con un asterisco al que están unidos R^{1} y R^{2} es no asimétrico;

R^{3} es alquilo;

R^{4} es arilo;

R^{5} es hidrógeno, arilcarbonilo o alquiloxicarbonilo,

o dicha \beta-lactama en forma de sal, distinta de base libre (+)-cis-1-benzoil-3-(2-metoxi-2-propiloxi)-4-fenil-azetidin-2-ona;

en la que

2. Una \beta-lactama de la reivindicación 1 que es cristalina en condiciones ambientales.

3. Una \beta-lactama de la reivindicación 1 ó 2 que está sustancialmente libre de otros isómeros y en la que los grupos -OC(R^{1})(R^{2})(OR^{3}) y R^{4} están en la posición cis en relación mutua.

4. Una \beta-lactama de la reivindicación 1, 2 ó 3, en la que R^{1} y R^{2} son ambos el mismo grupo alquilo inferior no sustituido, R^{3} es alquilo inferior no sustituido, R^{4} es fenilo y R^{5} es hidrógeno, benzoilo o t-butoxicarbonilo, significando "alquilo inferior" "alquilo" como se ha definido en la reivindicación 1 pero que tiene 1 a 4 átomos de carbono en la cadena normal.

5. Una \beta-lactama de la reivindicación 3, que es (3R-cis)-3-(1-metoxi-1-metiletoxi)-4-fenil-2-azetidinona.

6. Una \beta-lactama de la reivindicación 3, que es (3R-cis)-1-benzoil-3-(1-metoxi-1-metiletoxi)-4-fenil-2-azeti-
dinona.

7. Una \beta-lactama de la reivindicación 3, que es (3R-cis)-1-t- butoxicarbonil-3-(1-metoxi-1-metiletoxi)-4-fenil-2-azetidinona.

8. Un procedimiento para la preparación de un taxano que lleva cadena lateral con la siguiente fórmula VII o una sal del mismo:

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en la que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} y R^{5} son como se ha definido en la reivindicación 1, en la que el átomo de carbono marcado con un asterisco al que están unidos R^{1} y R^{2} no es asimétrico y en la que T es un radical taxano unido directamente a la posición C-13 de dicho radical, siendo el radical taxano de fórmula:

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en la que

Bz es benzoilo;

Ac es acetilo;

R^{7} es hidrógeno, alquilcarbonilo (siendo alquilo como se ha definido en la reivindicación 1), o un grupo protector de hidroxilo y

R^{8} es hidrógeno o un grupo protector de hidroxilo;

que comprende la etapa de contactar una \beta-lactama con la siguiente fórmula I o una sal de la misma:

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en la que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} y R^{5} son como se ha definido anteriormente y en la que la \beta-lactama es distinta de base libre (+)-cis-1-benzoil-3-(2-metoxi-2- propiloxi)-4-fenil-azetidin-2-ona, con un compuesto taxano con la siguiente fórmula VIII o con una sal del mismo:

(VIII)HO-T

en la que T es como se ha definido anteriormente, en presencia de un agente de acoplamiento y opcionalmente convirtiendo el grupo -OC(R^{1})(R^{2})(OR^{3}) de dicho compuesto con la fórmula VII en hidroxilo, formando de ese modo un taxano que lleva cadena lateral o una sal del mismo con la siguiente fórmula IX:

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en la que R^{4}, R^{5} y T son como se ha definido anteriormente.

9. El procedimiento de la reivindicación 8, en el que dicho taxano con la fórmula VIII es un 7-O-trialquilsililbacatin III (siendo alquilo como se ha definido en la reivindicación 1).

10. El procedimiento de la reivindicación 8 ó 9, en el que dicho agente de acoplamiento es una base silil amida de metal alcalino o una base de amida de metal alcalino impedida estéricamente.

11. El procedimiento de la reivindicación 10, en el que dicho agente de acoplamiento tiene la siguiente

\hbox{fórmula XI:}

(XI)R^{9} ---

\delm{N}{\delm{\para}{M}}

--- R^{10}

en la que

R^{9} y R^{10} son trialquilsililo, cicloalquilo (siendo alquilo y cicloalquilo como se ha definido en la reivindicación 1), o forman un grupo heterociclo junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos y M es un metal alcalino; en la que "heterociclo" significa un grupo tal que tiene al menos un heteroátomo en al menos un anillo y sustituido opcionalmente como en la definición de "cicloalquilo" presentada en la reivindicación 1.

12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que dicho agente de acoplamiento es una hexametil disilazida de metal alcalino.

13. El procedimiento de la reivindicación 12, en el que dicha hexametil disilazida de metal alcalino es hexametil disilazida de litio.

14. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 8-13, que comprende además la desprotección de uno o más grupos hidroxilo en el radical taxano del taxano formado que lleva cadena lateral.

15. El procedimiento de la reivindicación 14, en el que se emplea un ácido para dicha desprotección.

16. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 8-15, en el que R^{1} y R^{2} son ambos el mismo grupo alquilo inferior no sustituido, R^{3} es alquilo inferior no sustituido, R^{4} es fenilo y R^{5} es benzoilo o t-butoxicarbonilo, significando "alquilo inferior" "alquilo" como se ha definido en la reivindicación 1, pero que tiene 1 a 4 átomos de carbono en la cadena normal.

17. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que se prepara taxol.

18. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que se prepara taxotere.

19. Un procedimiento para la preparación de un taxano que lleva una cadena lateral en la posición C-13, siendo el radical taxano de fórmula:

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en la que

Bz es benzoilo;

Ac es acetilo;

R^{7} es hidrógeno, alquilcarbonilo o un grupo protector de hidroxilo y

R^{8} es hidrógeno o un grupo protector de hidroxilo;

que comprende la etapa de poner en contacto un taxano que lleva un grupo hidroxilo unido a la posición C-13 con una \beta-lactama como se ha definido en la reivindicación 1 que es capaz de formar dicha cadena lateral, en presencia de una base silil amida de metal alcalino o de una base de amida de metal alcalino impedida estéricamente.