EA030147B1

EA030147B1 - Биспецифические антигенсвязывающие молекулы, активирующие т-клетки

Info

Publication number: EA030147B1
Application number: EA201400254A
Authority: EA
Inventors: Оливер Аст; Петер Брюнкер; Таня Фаути; Анне Фраймозер-Грундшобер; Кристиане Йегер; Кристиан Клайн; Эккехард Мёсснер; Пабло Умано
Original assignee: Роше Гликарт Аг
Priority date: 2011-08-23
Filing date: 2012-08-21
Publication date: 2018-06-29
Also published as: CA2837975A1; MX2014002099A; IL229765B; PL2748201T3; AU2012298537B2; JP7175291B2; HRP20180243T1; EP3892640A1; MA35448B1; CL2014000126A1; EP2748201B1; BR112014003769A2; CN103748114A; ECSP14013220A; MY169358A; WO2013026833A1; MX352101B; SI2748201T1; EP2748201A1; UA116192C2

Abstract

В изобретении описываются в целом новые биспецифические антигенсвязывающие молекулы для активации T-клеток и их переориентации к конкретным клеткам-мишеням. Кроме того, описываются полинуклеотиды, кодирующие указанные биспецифические антигенсвязывающие молекулы, векторы и клетки-хозяева, содержащие указанные полинуклеотиды, а также способы получения биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в изобретении, и способы применения указанных биспецифических антигенсвязывающих молекул для лечения заболевания.

Description

изобретение относится в целом к биспецифическим антигенсвязывающим молекулам, предназначенным для активации Т-клеток. Кроме того, настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, кодирующим указанные биспецифические антигенсвязывающие молекулы, к векторам и клеткамхозяевам, содержащим указанные полинуклеотиды. Изобретение относится также к способам получения биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемым в изобретении, и к способам применения таких биспецифических антигенсвязывающих молекул для лечения заболевания.

Предпосылки создания изобретения

В различных клинических ситуациях часто требуется избирательная деструкция индивидуальной клетки или конкретного типа клеток. Например, основной задачей при терапии рака является разрушение именно опухолевых клеток с сохранением при этом в интактном и неповрежденном состоянии здоровых клеток и тканей.

Перспективным подходом для достижения этой цели является индукция иммунного ответа против опухоли, при котором иммунные эффекторные клетки, такие как естественные клетки-киллеры (ΝΚ) или цитотоксические Т-лимфоциты (СТЬ), атакуют и разрушают опухолевые клетки. СТЬ представляют собой наиболее эффективные эффекторные клетки иммунной системы, однако они не могут активироваться эффекторным механизмом, опосредуемым Ре-доменом канонических терапевтических антител.

В этом плане в последние годы возрос интерес к биспецифическим антителам, предназначенным для связывания с помощью одного "плеча" с поверхностным антигеном на клетке-мишени, а с помощью второго "плеча" для активации инвариантного компонента комплекса Т-клеточного рецептора (ТСК). Одновременное связывание такого антитела с обеими его мишенями должно приводить к временному взаимодействию между клеткой-мишенью и Т-клеткой, вызывая активацию любой цитотоксической Т-клетки и последующий лизис клетки-мишени. Таким образом, иммунный ответ переориентируется к клеткам-мишеням и не зависит от презентации пептидного антигена клеткой-мишенью или специфичности Т-клетки, что имеет место при нормальной ограниченной ГКГС активации СТЬ. В этом контексте решающее значение имеет то, что СТЬ активируются только тогда, когда клетка-мишень презентует им биспецифическое антитело, т.е. имеет место имитация иммунологического синапса. Наиболее предпочтительными являются биспецифические антитела, для которых не требуется предварительное кондиционирование или костимуляция лимфоцитов для того, чтобы вызывать эффективный лизис клетокмишеней.

Разработано несколько форматов биспецифических антител и изучена возможность их применения для опосредуемой Т-клетками иммунотерапии. Среди них очень хорошо охарактеризованы так называемые молекулы В1ТЕ (ЫзресГйс Т се11 епдадег) (биспецифические привлекающие Т-клетки молекулы) и уже установлена их определенная перспективность в клинических исследованиях (см. обзор №щогзеп и Ваиег1е, Ехр. Се11 Рез. 317, 12011, р. 255-1260). ВГТЕ представляют собой тандемные молекулы зсРу, в которых две молекулы зсРу слиты с помощью гибкого линкера. Кроме того, исследовали биспецифические форматы для привлечения Т-клеток, включая димерные антитела (диабоди) (НоШдег е! а1., РгоГ. Епд. 9, 1996, р. 299-305) и их производные, такие как тандемные димерные антитела (Клрпуаиоу е! а1., 1. Мо1. Вю1. 293, 1999, р. 41-66). В последние годы разработаны так называемые молекулы ПАКТ (обладающие двойной аффинностью перенаправленные молекулы), основанные на формате димерных антител, но отличающиеся С-концевым дисульфидным мостиком, который предназначен для дополнительной стабилизации (Мооге е! а1., В1оой, 117, 2011, р. 4542-4551). Так называемые триомабы (трехфункциональные антитела), которые представляют собой полные гибридные мышиные/крысиные 1дО-молекулы и которые также в настоящее время проходят клинические испытания, представляют собой молекулы более крупного формата (см. обзор 5>ейпе1/ еГ а1., Сапсег ТгеаР Кеу. 36, 2010, р. 458-467).

Продемонстрировано, что различные разрабатываемые форматы обладают большим потенциалом, связанным с Т-клеточной переориентацией и активацией, для иммунотерапии. Однако задача создания пригодных для этого биспецифических антител никоим образом не является тривиальной, а нуждается в решении ряда проблем, связанных с требованиями эффективности, токсичности, применимости и технологичности антител.

Небольшие конструкции, такие, например, как молекулы ВГТЕ, хотя они обладают способностью эффективно перекрестно связывать эффекторные клетки и клетки мишени, обладают очень коротким временем полужизни в сыворотке, что требует их введения пациентам путем непрерывной инфузии. С другой стороны, ГдО-подобные форматы, хотя они обладают значительным преимуществом с позиций продолжительного времени полужизни, обладают таким недостатком, как токсичность, ассоциированная с нативными эффекторными функциями, которые присущи молекулам 1§О. Их иммуногенный потенциал представляет собой другую характеристику ГдО-подобных биспецифических антител, прежде всего нечеловеческого формата, неблагоприятную с позиций их успешного терапевтического применения. И, наконец, основной проблемой при обычном подходе к созданию биспецифических антител является получение биспецифических конструкций антител в достаточном для клинических испытании количестве и имеющих достаточную чистоту, эта проблема связана с ошибочным спариванием тяжелых и легких цепей антител с различными специфичностями при совместной экспрессии, что снижает выход правильно

- 1 030147

собранной конструкции и приводит к получению ряда нефункциональных побочных продуктов, от которых может оказаться трудно отделять требуемое биспецифическое антитело.

С учетом трудностей и недостатков, присущих доступным в настоящее время биспецифическим антителам, предназначенным для опосредуемой Т-клетками иммунотерапии, сохраняется потребность в создании новых улучшенных форматов указанных молекул. В настоящем изобретении предложены биспецифические антигенсвязывающие молекулы, созданные для активации и переориентации Т-клеток, в которых объединены высокая эффективность и технологичность с низкой токсичностью и предпочтительными фармакокинетическими свойствами.

Краткое изложение сущности изобретения

Первым объектом настоящего изобретения является активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, которая содержит первый и второй антигенсвязывающие фрагменты, из которых один представляет собой молекулу РаЬ, обладающую способностью к специфическому связыванию с активирующим Т-клетки антигеном, а другой представляет собой молекулу РаЬ, обладающую способностью к специфическому связыванию с антигеном клетки-мишени, и Рс-домен, состоящий из первой и второй субъединиц, которые обладают способностью к стабильной ассоциации; в которой первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой (а) одноцепочечную молекулу РаЬ, в которой легкая цепь РаЬ и тяжелая цепь РаЬ соединены пептидным линкером, или (б) полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ, в которой обменены либо вариабельные, либо константные области легкой цепи РаЬ и тяжелой цепи РаЬ.

В конкретном варианте осуществления изобретения в активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекуле присутствует не более одного антигенсвязывающего фрагмента, обладающего способностью к специфическому связыванию с активирующим Т-клетки антигеном (т.е. активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула отличается одновалентным связыванием с активирующим Т-клетки антигеном). В конкретных вариантах осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ. В еще более конкретных вариантах осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ, в которой обменены константные области легкой цепи РаЬ и тяжелой цепи РаЬ.

В некоторых вариантах осуществления изобретения первый и второй антигенсвязывающие фрагменты активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы слиты друг с другом необязательно через пептидный линкер. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента. В другом указанном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν концом тяжелой цепи РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента. В следующем указанном варианте осуществления изобретения второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце легкой цепи РаЬ с Ν-концом легкой цепи РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента. В вариантах осуществления изобретения, в которых первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ и в которых либо (I) второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента, либо (II) первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента, дополнительно легкая цепь РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента и легкая цепь РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента могут быть слиты друг с другом необязательно через пептидный линкер.

В одном из вариантов осуществления изобретения второй антигенсвязывающий фрагмент активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена. В другом варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена.

В одном из вариантов осуществления изобретения первый и второй антигенсвязывающие фрагменты активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы каждый слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом одной из субъединиц Рс-домена.

В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит третий антигенсвязывающий фрагмент, который представляет собой молекулу РаЬ, обладающую способностью к специфическому связыванию с антигеном клеткимишени. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения третий антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена. В конкретном варианте осуществления изобретения второй и третий антигенсвязывающие фрагменты активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы каждый слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом одной из субъединиц Рс-домена и первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента. В другом конкретном варианте осуществления изобретения первый и третий антигенсвязывающие фраг- 2 030147

менты активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы каждый слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом одной из субъединиц Рс-домена и второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента. Компоненты активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы можно сливать непосредственно или через приемлемые пептидные линкеры. В одном из вариантов осуществления изобретения второй и третий антигенсвязывающие фрагменты и Рс-домен представляют собой часть молекулы иммуноглобулина. В конкретном варианте осуществления изобретения молекула иммуноглобулина представляет собой иммуноглобулин класса 1§С. В еще более предпочтительном варианте осуществления изобретения иммуноглобулин представляет собой иммуноглобулин подкласса 1дС]. В другом варианте осуществления изобретения иммуноглобулин представляет собой иммуноглобулин подкласса 1дО₄.

В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен представляет собой Рс-домен 1§С. В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен представляет собой Рс-домен 1§С₁. В другом конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен представляет собой Рс-домен 1дС₄. Еще в одном конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен представляет собой Рс-домен 1дС₄, содержащий аминокислотную замену 8228Р (нумерация по Кэботу). В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен является человеческим Рс-доменом.

В конкретных вариантах осуществления изобретения Рс-домен содержит модификацию, которая способствует ассоциации первой и второй субъединиц Рс-домена. В указанном конкретном варианте осуществления изобретения аминокислотный остаток в СН3-домене первой субъединицы Рс-домена заменяют аминокислотным остатком, имеющим больший объем боковой цепи, создавая тем самым выпуклость в СНЗ-домене первой субъединицы, которая может помещаться в полость в СНЗ-домене второй субъединицы, а аминокислотный остаток в СНЗ-домене второй субъединицы Рс-домена заменяют на аминокислотный остаток, имеющий меньший объем боковой цепи, создавая тем самым полость в СНЗ-домене второй субъединицы, в которую может помещаться выпуклость в СНЗ-домене первой субъединицы.

В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен обладает пониженной аффинностью связывания с Рс-рецептором и/или пониженной эффекторной функцией по сравнению с нативным Рс-доменом 1дО_в В некоторых вариантах осуществления изобретения Рс-домен создают так, чтобы он имел пониженную аффинность связывания с Рс-рецептором и/или пониженную эффекторную функцию по сравнению с не созданным с помощью инженерии Рс-доменом. В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-домен содержит одну или несколько аминокислотную(ых) замену(н), которая(ые) снижает(ют) связывание с Рс-рецептором и/или эффекторную функцию. В одном из вариантов осуществления изобретения одна или несколько аминокислотная(ых) замена(н) в Рс-домене, которая(ые) снижает связывание с Рс-рецептором и/или эффекторную функцию, находится(ятся) в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, включающей Ь234, Ь235 и Р329 (нумерация по Кэботу). В конкретных вариантах осуществления изобретения каждая субъединица Рс-домена содержит три аминокислотные замены, которые снижают связывание с Рс-рецептором и/или эффекторную функцию, где указанные аминокислотные замены представляют собой Ь234А, Ь235А и Р329С. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения Рс-домен представляет собой Рс-домен 1дО_ь в частности Рс-домен человеческого 1дС]. В других вариантах осуществления изобретения каждая субъединица Рс-домена содержит две аминокислотные замены, которые снижают связывание с Рс-рецептором и/или эффекторную функцию, где указанные аминокислотные замены представляют собой Ь235Е и Р329С. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения Рс-домен представляет собой Рс-домен 1дС₄, в частности, Рс-домен человеческого Ι§0₄.

В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой Рсу-рецептор. В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой человеческий Рс-рецептор. В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой активирующий Рс-рецептор. В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой человеческий РсуРПа, РсуР1 и/или РсуРШа. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторная функция представляет собой антитело-обусловленную клеточнозависимую цитотоксичность (АЭСС).

В конкретном варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антиген, с которым обладает способностью связываться биспецифическая антигенсвязывающая молекула, представляет собой СЭ3. В других вариантах осуществления изобретения антиген клетки-мишени, с которым обладает способностью связываться биспецифическая антигенсвязывающая молекула, представляет собой антиген опухолевой клетки. В одном из вариантов осуществления изобретения антиген клетки-мишени выбирают из группы, включающей: ассоциированный с меланомой хондроитинсульфат-протеогликан (МС8Р), рецептор эпидермального фактора роста (ЕСРР), белок активации фибробластов (фибробластактивирующий белок) (РАР), карциноэмбриональный антиген (СЕА), СЭ19, СЭ20 и СЭ33.

- 3 030147

Другим объектом изобретения является выделенный полинуклеотид, кодирующий активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, или ее фрагмент. Изобретение относится также к полипептидам, кодируемым полинуклеотидами, предлагаемыми в изобретении. Изобретение относится также к экспрессионному вектору, содержащему выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, и клетке-хозяину, содержащей выделенный полинуклеотид или экспрессионный вектор, предлагаемый в изобретении. В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку, в частности клетку млекопитающего.

Другим объектом изобретения является способ получения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, заключающийся в том, что осуществляют стадии, на которых а) культивируют клетку-хозяина, предлагаемую в изобретении, в условиях, пригодных для экспрессии активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, и б) выделяют активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу. Изобретение относится также к активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекуле, полученной способом, предлагаемым в изобретении.

Изобретение относится также к фармацевтической композиции, содержащей активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель.

Под объем изобретения подпадают также способы применения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы и фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении. Одним из объектов изобретения является активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула или фармацевтическая композиция, предлагаемая в изобретении, предназначенная для применения в качестве лекарственного средства. Одним из объектов изобретения является активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула или фармацевтическая композиция, предлагаемая в изобретении, предназначенная для применения при лечении заболевания у индивидуума, который нуждается в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения заболевание представляет собой рак.

Предложено также применение активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, для приготовления лекарственного средства для лечения заболевания у индивидуума, который нуждается в этом; а также способ лечения заболевания у индивидуума, заключающийся в том, что вводят указанному индивидууму в терапевтически эффективном количестве композицию, которая содержит активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, в фармацевтически приемлемой форме. В конкретном варианте осуществления изобретения заболевание представляет собой рак. В любом из вышеперечисленных вариантов осуществления изобретения индивидуум предпочтительно представляет собой млекопитающее, в частности человека.

В изобретении предложен также способ индукции лизиса клетки-мишени, в частности опухолевой клетки, заключающийся в том, что приводят в контакт клетку-мишень с активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулой, предлагаемой в изобретении, в присутствии Т-клетки, в частности цитотоксической Т-клетки.

Краткое описание чертежей

На чертежах показано следующее.

На фиг. 1 - примеры конфигураций активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в изобретении. (А) Иллюстрация молекулы "1+1 1§О ксРаЬ с одним плечом", (Б) молекулы "1+1 1§О ксРаЬ, с одним плечом инвертированная". В молекуле "1+1 1§О ксРаЬ с одним плечом" легкая цепь РаЬ, мишенью которого является Т-клетка, слита с тяжелой цепью с помощью линкера, а молекула "1+1 1§О ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" имеет линкер в РаЬ, мишенью которого является опухоль. (В) Иллюстрация молекулы "2+1 1§О ксРаЬ". (Г) Иллюстрация молекулы "1+1 1дО ксРаЬ". (Д) Иллюстрация молекулы "1+1 1дО СгоккГаЬ". (Е) Иллюстрация молекулы "2+1 1дО СгоккГаЬ". (Ж) Иллюстрация молекулы "2+1 1дО СгоккГаЬ" с альтернативным порядком расположения компонентов, представляющих собой СгоккГаЬ и РаЬ ("инвертированная"). (З) Иллюстрация молекулы "1+1 1§О СгоккГаЬ, слияние легкой цепи (ПС)". (И) Иллюстрация молекулы "1+1 СгоккМаЬ". (К) Иллюстрация молекулы "2+1 1§О СгоккГаЬ, связанная легкая цепь". (Л) Иллюстрация молекулы "1+1 1дО СгоккГаЬ, связанная легкая цепь". (М) Иллюстрация молекулы "2+1 1дО СгоккГаЬ, инвертированная, связанная легкая цепь". (Н) Иллюстрация молекулы "1+1 1§О СгоккГаЬ, инвертированная, связная легкая цепь". Черная точка: необязательная модификация в Рс-домене, способствующая гетеродимеризации.

На фиг. 2 - результаты анализа, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, ИцРаде, фирма 1пу|1годсп. окрашивание кумасси), молекулы "1+1 1§О ксРаЬ, с одним плечом" (анти-МС8Р/анти1шСГО3) (см. 8ЕО ГО N0: 1, 3, 5) в невосстанавливающих (А) и восстанавливающих (Б) условиях, и молекулы "1+1 1§0 ксРаЬ, с одним плечом инвертированной" (анти-МСЗР/анти-ЬиСБЗ) (см. 8ЕЦ ГО N0: 7, 9, 11), в невосстанавливающих (В) и восстанавливающих (Г) условиях.

На фиг. 3 - результаты анализа, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации (Супердекс 200 10/300 ОЬ, фирма ОЕ НеаНЬсаге; 2 мМ М0Р8, рН 7,3, 150 мМ №С1, 0,02% (мас./об.) №С1; мас- 4 030147

са инъецируемого образца 50 мкг), молекулы "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом" (анти-МС8Р/анти-ЬиСП3) (см. 8ЕО ГО N0: 1, 3, 5) (А) и молекулы "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (антиМС8Р/анти-1шС.О3) (см. 81+) ГО N0: 7, 9, 11) (Б).

На фиг. 4 - результаты анализа, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, ШРадс. фирма 1пуПгоде% окрашивание кумасси), молекулы "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом" (анти-ЕОРК/анти1шСО3) (см. 8Е0 ГО N0: 43, 45, 57) в невосстанавливающих (А) и восстанавливающих (Б) условиях и молекулы "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (анти-ЕОРК/анти-1иСО3) (см. 8Е0 ГО N0: 11, 49, 51) в невосстанавливающих (В) и восстанавливающих (Г) условиях.

На фиг. 5 -результаты анализа, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации (Супердекс 200 10/300 ОБ, фирма ОЕ НеаЫсаге; 2 мМ М0Р8, рН 7,3, 150 мМ ЫаС1, 0,02% (мас./об.) ЫаС1; масса инъецируемого образца 50 мкг), молекулы "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом" (анти-ЕОРК/анти-1иСО3) (см. 8Е0 ГО N0: 43, 45, 47) (А) и молекулы "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (антиЕОРК/анти-1иСО3) (см. 81+) ГО N0: 11, 49, 51) (Б).

На фиг. 6 (А, Б) - результаты анализа, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, NиРаде, фирма 1пуйгодеп, окрашивание кумасси), молекулы "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (анти-РАР/анти-1шС.О3) (см. 8ЕЦ ГО N0: 11, 51, 55) в невосстанавливающих (А) и восстанавливающих (Б) условиях. (В) Результаты анализа, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации (Супердекс 200 10/300 ОБ, фирма ОЕ НеаНЪсаге; 2 мМ М0Р8, рН 7,3, 150 мМ №С1, 0,02% (мас./об.) №С1; масса инъецируемого образца 50 мкг), молекулы "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (анти-РЛР/анти-1шСГО3).

На фиг. 7 - результаты анализа, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, NиРаде, фирма 1пуйгодеп, окрашивание кумасси), молекулы (А) "2+1 1дО ксРаЬ, Р329О БАБА" (анти-МС8Р/анти1шСО3) (см. 8Е0 ГО N0: 5, 21, 23) в невосстанавливающих (полоса 2) и восстанавливающих (полоса 3) условиях; (Б) "2+1 1дО ксРаЬ, БАБА" (анти-МС8Р/анти-1иСО3) (см. 8ЕЦ ГО N0: 5, 17, 19) в невосстанавливающих (полоса 2) и восстанавливающих (полоса 3) условиях; (В) "2+1 1дО ксРаЬ, \\1" (антиМС8Р/анти-1шС.О3) (см. 8ЕЦ ГО N0: 5, 13, 15) в невосстанавливающих (полоса 2) и восстанавливающих (полоса 3) условиях; и (Г) "2+1 1дО ксРаЬ, Р329О БАБА N2970" (анти-МС8Р/анти-ЬиСО3) (см. 8Е0 ГО N0: 5, 25, 27) в невосстанавливающих (полоса 2) и восстанавливающих (полоса 3) условиях.

На фиг. 8 - результаты анализа, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации (Супердекс 200 10/300 ОБ, фирма ОЕ НеаЫсаге; 2 мМ М0Р8, рН 7,3, 150 мМ №С1, 0,02% (мас./об.) ЫаС1; масса инъецируемого образца 50 мкг), молекулы (А) "2+1 1дО ксРаЬ, Р329О БАБА" (анти-МС8Р/анти1шС1)+ (см. 81+) ГО N0: 5, 21, 23); (Б) "2+1 1дО ксРаЬ, БАБА" (анти-МС8Р/анти-ЬиСО3) (см. 81+) ГО N0: 5, 17, 19); (В) "2+1 1дО ксРаЬ, М" (анти-МС8Р/анти-1иСО3) (см. 81+) ГО N0: 5, 13, 15) и (Г) "2+1 1дО ксРаЬ, Р329О БАБА N2970" (анти-МС8Р/анти-ЬиСО3) (см. 81+) ГО N0: 5, 25, 27).

На фиг. 9 (А, Б) - результаты анализа, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, NиРаде, фирма 1пуйгодеп, окрашивание кумасси), молекулы "2+1 1дО ксРаЬ, Р329О БАБА" (антиЕСРР/анти-1шС03) (см. 8ЕЦ ГО N0: 45, 47, 53) в невосстанавливающих (А) и восстанавливающих (Б) условиях. (В) Результаты анализа, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации (Супердекс 200 10/300 ОБ, фирма ОЕ НеаЫсаге; 2 мМ М0Р8, рН 7,3, 150 мМ ЫаС1, 0,02% (мас./об.) ЫаС1; масса инъецируемого образца 50 мкг), молекулы "2+1 1дО ксРаЬ, Р329О БАБА" (анти-ЕОРК/анти-ЬиСО3).

На фиг. 10 (А, Б) - результаты анализа, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, NиРаде, фирма 1пуйгодеп, окрашивание кумасси), молекулы "2+1 1дО ксРаЬ, Р329О БАБА" (антиРАР/анти-1шС03) (см. 8ЕЦ ГО N0: 57, 59, 61) в невосстанавливающих (А) и восстанавливающих (Б) условиях. (В) Результаты анализа, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации (Супердекс 200 10/300 ОБ, фирма ОЕ НеаНЬсаге; 2 мМ М0Р8, рН 7,3, 150 мМ №С1, 0,02% (мас./об.) №С1; масса инъецируемого образца 50 мкг), молекулы "2+1 1дО ксРаЬ, Р329О БАБА" (анти-РАР/анти-1шС03).

На фиг. 11 (А, Б) - результаты анализа, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% трис-ацетат (А) или 4-12% бис/трис (Б), NиРаде, фирма 1пуйгодеп, окрашивание кумасси) молекулы "1+1 1дО СгоккГаЬ, Рс ("впадина") Р329О БАБА/Рс("выступ") \\1" (анти-МС8Р/анти-1шСО3) (см. 8ЕЦ ГО N0: 5, 29, 31, 33) в невосстанавливающих (А) и восстанавливающих (Б) условиях. (В) Результаты анализа, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации (Супердекс 200 10/300 ОБ, фирма ОЕ НеаЫсаге; 2 мМ М0Р8, рН 7,3, 150 мМ №С1, 0,02% (мас./об.) №С1; масса инъецируемого образца 50 мкг), молекулы "1+1 1дО СгоккГаЬ, Рс ("впадина") Р329О БАБА/Рс ("выступ") \\1" (анти-МС8Р/анти-1шСО3).

На фиг. 12 (А, Б) - результаты анализа, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, N11Раде, фирма 1пуйгодеп, окрашивание кумасси), молекулы "2+1 1дО СгоккГаЬ" (анти-МС8Р/анти-1иСО3) (см. 8Е0 ГО N0: 3, 5, 29, 33) в невосстанавливающих (А) и восстанавливающих (Б) условиях. (В) Результаты анализа, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации (Супердекс 200 10/300 ОБ, фирма ОЕ НеаЫсаге; 2 мМ М0Р8, рН 7,3, 150 мМ №С1, 0,02% (мас./об.) №С1; масса инъецируемого образца 50 мкг), молекулы "2+1 1дО СгоккГаЬ" (анти-МС8Р/анти-1иСО3).

На фиг. 13 (А, Б) - результаты анализа, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, NиРаде, фирма 1пуйгодеп, окрашивание кумасси), молекулы "2+1 1дО СгоккГаЬ" (анти-МС8Р/анти-суСО3) (см. 8Е0 ГО N0: 3, 5, 35, 37) в невосстанавливающих (А) и восстанавливающих (Б) условиях. (В) Резуль- 5 030147

таты анализа, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации (Супердекс 200 10/300 ОБ, фирма ОБ НеаНЪсаге; 2 мМ М0Р8, рН 7,3, 150 мМ ЫаС1, 0,02% (мас./об.) ЫаС1; масса инъецируемого образца 50 мкг), молекулы "2+1 1дО СгоккГаЬ" (анти-МС8Р/анти-суСО3).

На фиг. 14 (А, Б) - результаты анализа, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, ЫиРаде, фирма 1пуйгодеп, окрашивание кумасси), молекулы "2+1 1дО СгоккГаЬ, инвертированная" (антиСЕА/анти-1шСП3) (см. 8ЕЦ ГО N0: 33, 63, 65, 67) в невосстанавливающих (А) и восстанавливающих (Б) условиях. (В) Результаты анализа, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации (Супердекс 200 10/300 ОБ, фирма ОЕ НеаИЬсаге; 2 мМ М0Р8, рН 7,3, 150 мМ ЫаС1, 0,02% (мас./об.) ЫаС1; масса инъецируемого образца 50 мкг), молекулы "2+1 1дО СгоккГаЬ, инвертированная" (анти-СЕА/анти-йиСП3).

На фиг. 15 (А) - данные о термостабильности молекул "(8сРу)₂-Рс" и "(бкксРу)₂-Рс" (анти-МС8Р (ЪС.'007)/анти-1шСГО3 (У9)). Анализ на основе динамического рассеяния света, измерение при изменении температуры от 25 до 75°С со скоростью 0,05°С/мин. Кривая черного цвета: "(ксРу)₂-Рс"; кривая серого цвета: "(бкксРу)₂-Рс". (Б) Данные о термостабильности молекул "2+1 1дО ксРаЬ" (см. 8ЕЦ ГО N0: 5, 21, 23) и "2+1 1дО СгоккГаЬ" (анти-МС8Р/анти-ЬиСП3) (см. 8ЕЦ ГО N0: 3, 5, 29, 33). Анализ на основе динамического рассеяния света, измерение при изменении температуры от 25 до 75°С со скоростью 0,05°С/мин. Черная кривая: "2+1 1дО ксРаЬ"; серая кривая: "2+1 1дО СгоккГаЬ".

На фиг. 16 - результаты, полученные с помощью Пасоге-анализа, проведенного для (А) определения взаимодействия различных Рс-мутантов с человеческим РсуРШа и для (Б) определения одновременного связывания Т-клеточных биспецифических конструкций с опухолью-мишенью и конструкцией человеческий СО3у(О₄8)₅СГО3!:-АсТеу-Рс("выступ")-Ау1/Рс("впадина").

На фиг. 17 - данные об одновременном связывании Т-клеточных биспецифических конструкций с П3-доменом человеческого МС8Р и конструкцией человеческий СГО3у(О₄8)₅СО3!:-АсТеу-Рс("выступ")Ау1/Рс("впадина"). (А) "2+1 1дО СгоккГаЬ" (см. 8ЕЦ ГО N0: 3, 5, 29, 33), (Б) "2+1 1дО ксРаЬ" (см. 8ЕР) ГО N0: 5, 21, 23).

На фиг. 18 - данные об одновременном связывании Т-клеточных биспецифических конструкций с человеческим ЕОРР и конструкцией человеческий СП3у(О₄8)₅СП3е-АсТеу-Рс("выступ")Ау1/Рс("впадина"). (А) "2+1 1дО ксРаЬ" (см. 8ЕЦ ГО N0: 45, 47, 53), (Б) "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом" (см. 8Е0 ГО N0: 43, 45, 47), (В) "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (см. 8ЕЦ ГО N0: 11, 49, 51) и (Г) "1+1 1§О ксРаЬ" (см. 8ЕР) ГО N0: 47, 53, 213).

На фиг. 19 - данные о связывании молекулы "(ксРу)₂" (50 нМ) с СГО3. экспрессируемым на клетках линии 1игка1 (А), или с МС8Р на клетках линии Со1о-38 (Б), полученные с помощью РАС8. Представлены сравнительные данные о средней интенсивности флуоресценции, полученные для необработанных клеток и клеток, окрашенных только вторичным антителом.

На фиг. 20 - данные о связывании конструкции "2+1 1дО ксРаЬ, БАБА" (см. 8ЕЦ ГО N0: 5, 17, 19) (50 нМ) с СО3, экспрессируемым на клетках линии 1игка1 (А), или с МС8Р на клетках линии Со1о-38 (Б), полученные с помощью РАС8. Представлены сравнительные данные о средней интенсивности флуоресценции, полученные для применяемого в качестве эталона сравнения анти-СГО3 1дО (как указано), необработанных клеток и клеток, окрашенных только вторичным антителом.

На фиг. 21 - данные о связывании конструкций "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом" (см. 8ЕЦ ГО N0: 1, 3, 5) и "1+1 1дО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (см. 8ЕЦ ГО N0: 7, 9, 11) (50 нМ) с СО3, экспрессируемым на клетках линии 1игка1 (А), или с МС8Р на клетках линии Со1о-38 (Б), полученные с помощью РАС8. Представлены сравнительные данные о средней интенсивности флуоресценции, полученные для применяемого в качестве эталона сравнения анти-СГО3 1дО или анти-МС8Р 1дО (как указано), необработанных клеток и клеток, окрашенных только вторичным антителом.

На фиг. 22 - данные о связывании в зависимости от дозы биспецифической конструкции "2+1 1дО ксРаЬ, БАБА" (см. 8ЕЦ ГО N0: 5, 17, 19) и соответствующего анти-МС8Р 1дО с МС8Р на клетках линии Со1о-38, полученные с помощью РАС8.

На фиг. 23 - данные об уровне экспрессии на поверхности человеческих Т-клеток различных маркеров активации после инкубации с взятыми в концентрации 1 нМ биспецифическими конструкциями "2+1 1дО ксРаЬ, БАБА" (см. 8ЕЦ ГО N0: 5, 17, 19) или "(ксРу)₂", мишенью которых являются СП3-МС8Р, в присутствии опухолевых клеток-мишеней линии Со1о-38 или в их отсутствии, как указано (соотношении Е:Т РВМС и опухолевых клеток = 10:1). Представлены данные об уровне экспрессии раннего маркера активации СГО69 (А) или позднего маркера активации СГО25 (Б) на СЭ8'-Т-клетках после 15 или 24 ч инкубации соответственно.

На фиг. 24 - данные об уровне экспрессии на поверхности человеческих Т-клеток позднего маркера активации СГО25 после инкубации с взятыми в концентрации 1 нМ биспецифическими конструкциями "2+1 1дО ксРаЬ, БАБА" (см. 8ЕЦ ГО N0: 5, 17, 19) или "(ксРу)₂", мишенью которых являются СП3-МС8Р, в присутствии опухолевых клеток-мишеней линии Со1о-38 или в их отсутствии, как указано (соотношении Е:Т РВМС и опухолевых клеток = 5:1). Представлены данные об уровне экспрессии позднего маркера активации СГО25 на СЭ8'-Т-клетках (А) или СП4'-Т-клетках (Б) после инкубации в течение 5 дней.

- 6 030147

На фиг. 25 - данные об уровне экспрессии позднего маркера активации СГО25 на поверхности СЭ8'Т-клеток обезьян циномолгус, взятых у двух различных животных (супо Νβδΐοτ, супо Νοόιι). после 43 ч инкубации с взятой в указанных концентрациях биспецифической конструкцией "2+1 1§О СгоккГаЬ" (мишенью которой является СГО3 обезьян циномолгус и человеческий МС8Р; см. 8Еф ГО N0: 3, 5, 35, 37) в присутствии опухолевых клеток-мишеней линии МУ-3, экспрессирующих МС8Р (соотношение Е:Т = 3:1). В качестве контроля применяли референс- 1дО (1§О к СГО3 обезьян циномолгус, 1дО к человеческому МС8Р) или не представляющий собой физиологический стимул (Т-клеточной активации) РНА-М (фитогемагглютинин).

На фиг. 26 -данные об уровнях ΙΡΝ-γ, секретируемых человеческими рап-Т-клетками, которые активировали в течение 18,5 ч с помощью биспецифической конструкции "2+1 Ι§0 ксРаЬ, ЬЛЕА", мишенью которой является СГО3-МС8Р (см. 8Еф ГО N0: 5, 17, 19) в присутствии опухолевых клеток линии И87МО (соотношение Е:Т = 5:1). В качестве контролей применяли соответствующие 1дО к СГО3 и к МС8Р.

На фиг. 27 - данные об уничтожении (на основе высвобождения лактатдегидрогеназы (ЕОН)) опухолевых клеток МОА-МВ-435 при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1) и активации в течение 20 ч с помощью взятых в различных концентрациях биспецифических молекул "2+1 Ι§0 ксРаЬ" (см. 8Еф ГО N0: 5, 21, 23), "2+1 Ι§0 СгоккГаЬ" (см. 8Еф ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "(ксРу)₂" и соответствующих Ι§0.

На фиг. 28 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬОН) опухолевых клеток МЭЛМВ-435 при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1) и активации в течение 20 ч с помощью взятых в различных концентрациях биспецифических конструкций и соответствующих Ι§0. Сравнивали конструкции "2+1 Ι§0 ксРаЬ", отличающиеся их Рс-доменами (имеет либо Рс-домен дикого типа (см. 8Еф ГО N0: 5, 13, 15), либо Рс-домен, подвергнутый мутации для элиминации функции эффекторных (NΚ) клеток: Р329С ЬЛЕА (см. 8Еф ГО N0: 5, 21, 23), Р329С ЬЛЕА N2970 (см. 8Еф ГО N0: 5, 25, 27)) и "2+1 Ι§0 СгоккГаЬ" (см. 8Еф ГО N0: 3, 5, 29, 33).

На фиг. 29 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬОН) опухолевых клеток Со1о-38 при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1), обработанными имеющей в качестве мишени СО3-МС8Р биспецифической конструкцией "2+1 Ι§0 ксРаЬ, ЬЛЕА" (см. 8Еф ГО N0: 5, 17, 19), молекулой "(ксРу)₂" или соответствующими Ι§0 в течение 18,5 ч.

На фиг. 30 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬОН) опухолевых клеток Со1о-38 при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1), обработанными имеющей в качестве мишени СО3-МС8Р биспецифической конструкцией "2+1 Ι§0 ксРаЬ, ЬЛЕА" (см. 8Еф ГО N0: 5, 17, 19), молекулой "(ксРу)₂" или соответствующими Ι§0 в течение 18 ч.

На фиг. 31 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬОН) опухолевых клеток МОАМВ-435 при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1) и активации в течение 23,5 ч взятыми в различных концентрациях имеющей в качестве мишени СО3-МС8Р биспецифической конструкцией "2+1 Ι§0 ксРаЬ, ЕАЕА" (см. 8Еф ГО N0: 5, 17, 19), молекулой "(ксРу)₂" или соответствующими Ι§0.

На фиг. 32 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬОН) опухолевых клеток Со1о-38 при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1) и активации в течение 19 ч взятыми в различных концентрациях имеющими в качестве мишени СО3-МС8Р биспецифическими конструкциями "1+1 Ι§0 ксРаЬ, с одним плечом" (см. 8Еф ГО N0: 1, 3, 5), "1+1 Ι§0 ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (см. 8Еф ГО N0: 7, 9, 11) или "(ксРу)₂" или соответствующими Ι§0.

На фиг. 33 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬОН) опухолевых клеток Со1о-38 при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1), обработанными имеющей в качестве мишени СО3-МС8Р биспецифической конструкцией "1+1 Ι§0 ксРаЬ" (см. 8Еф ГО N0: 5, 21, 213) или молекулой "(ксРу)₂" в течение 20 ч.

На фиг. 34 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬОН) опухолевых клеток МОА-МВ-435 при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1) и активации в течение 21 ч взятыми в различных концентрациях биспецифическими конструкциями и соответствующими Ι§0. Сравнивали имеющие в качестве мишени СО3-МС8Р биспецифические конструкции "2+1 Ι§0 СгоккГаЬ" (см. 8Еф ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "1+1 Ι§0 СгоккГаЬ" (см. 8Еф ГО N0: 5, 29, 31, 33), молекулу "(ксРу)₂" и соответствующие ΙβΟ.

На фиг. 35 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬОН) различных клеток-мишеней (МС8Р-позитивные опухолевые клетки-мишени Со1о-38, мезенхимальные стволовые клетки, выведенные из костного мозга или жировой ткани, или перициты из плаценты, как указано), индуцированном активацией человеческих Т-клеток взятой в концентрации 135 нг/мл или 1,35 нг/мл биспецифической конструкцией "2+1 Ι§0 СгоккГаЬ", мишенью которой является СО3-МС8Р (см. 8Еф ГО N0: 3, 5, 29, 33) (соотношение Е:Т = 25:1).

На фиг. 36 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬОН) опухолевых клеток-мишеней Со1о-38, полученные после 21 ч инкубации в течение ночи при совместном культивировании с человеческими РВМС и различными имеющими в качестве мишени СО3-МС8Р биспецифическими конструк- 7 030147

циями ("2+1 1§О 8сРаЬ, ЬЛЬЛ" (см. 8ЕО ГО N0: 5, 17, 19) и "(δοΡν)₂") или созданным с помощью гликоинженерии анти-МС8Р 1дО (О1усоМаЬ). Соотношение эффекторных клеток и клеток мишеней фиксировали на уровне 25:1 (А) или варьировали, как показано на фиг. 36(Б). РВМС выделяли из свежей крови (А) или из лейкоцитарной пленки (Б).

На фиг. 37 - данные о зависящем от времени цитотоксическом действии конструкции "2+1 1§С СгоАаЬ". мишенью которой является СЭ3 обезьян циномолгус и человеческий МС8Р (см. 8Е0 ГО N0: 3, 5, 35, 37). Представлены данные о высвобождении ЬЭН из экспрессирующих человеческий МС8Р клеток МУ-3 при совместном культивировании с первичными РВМС обезьян циномолгус (соотношение Е:Т = 3:1) в течение 24 ч или 43 ч. В качестве контролей применяли референс-1дО (антитело в виде 1§О к супо СЭ3 и антитело в виде 1§О к человеческому МС8Р) с такой же молярностью. РНА-М служил в качестве контроля (нефизиологической) Т-клеточной активации.

На фиг. 38 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬЭН) ЬиМС8Р-позитивных клеток меланомы МУ-3 при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1), обработанными различными имеющими в качестве мишени СЭ3-МС8Р биспецифическими конструкциями ("2+1 1§С СгоккЕаЬ" (см. 8Е0 ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "(8сРЦ₂"), в течение ~26 ч.

На фиг. 39 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬЭН) ЕОРР-позитивных опухолевых клеток Ь8-174Т при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1), обработанными различными имеющими в качестве мишени СЭ3-ЕОРР биспецифическими конструкциями ("2+1 1§С 8сРаЬ" (см. 8Е0 ГО N0: 45, 47, 53), "1+1 1§С 8сРаЬ" (см. 8Е0 ГО N0: 47, 53, 213) и "(8сРν)₂") или референс-1дО, в течение 18 ч.

На фиг. 40 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬЭН) ЕОРР-позитивных опухолевых клеток Ь8-174Т при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1), обработанными различными имеющими в качестве мишени СЭ3-ЕОРР биспецифическими конструкциями ("1+1 1§О 8сРаЬ, с одним плечом" (см. 8Е0 ГО N0: 43, 45, 47), "1+1 1§О 8сРаЬ, с одним плечом инвертированная" (см. 8Е0 ГО N0: 11, 49, 51), "1+1 1§О 8сРаЬ" (см. 8Е0 ГО N0: 47, 53, 213) и "(8сРν)₂") или референс-1дО, в течение 21 ч.

На фиг. 41 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬЭН) ЕОРР-позитивных опухолевых клеток Ь8-174Т при совместном культивировании либо с человеческими рап-Т-клетками (А), либо с человеческими наивными Т-клетками (Б), обработанными различными имеющими в качестве мишени СЭ3-ЕОРР биспецифическими конструкциями ("1+1 1§О 8сРаЬ, с одним плечом" (см. 8Е0 ГО N0: 43, 45, 47), "1+1 1§О 8сРаЬ, с одним плечом инвертированная" (см. 8Е0 ГО N0: 11, 49, 51) и "(8сРν)₂") или референс-1дО, в течение 16 ч. Соотношение эффекторных клеток и клеток-мишеней составляло 5:1.

На фиг. 42 - данные об уничтожении (на основе высвобождения ЬЭН) РАР-позитивных фибробластов линии ОМ05389 при совместном культивировании с человеческими рап-Т-клетками (соотношение Е:Т = 5:1), обработанными различными имеющими в качестве мишени СЭ3-РАР биспецифическими конструкциями ("1+1 1§О 8сРаЬ, с одним плечом инвертированная" (см. 8Е0 ГО N0: 11, 51, 55), "1+1 1§О 8сРаЬ" (см. 8ЕС ГО N0: 57, 61, 213), "2+1 1§О 8сРаЬ" (см. 8ЕС ГО N0: 57, 59, 61) и "(8еР^₂"), в течение ~18 ч.

На фиг. 43 - полученные с помощью анализа проточной цитометрии уровни экспрессии СЭ107а/Ь, а также уровни перфорина в СЭ8+-Т-клетках, обработанных различными имеющими в качестве мишени СЭ3-МС8Р биспецифическими конструкциями ("2+1 1§О 8сРаЬ, БАРА" (см. 8Е0 ГО N0: 5, 17, 19) и "(8сРν)₂") или соответствующими контрольными 1§О в присутствии (А) или в отсутствие (Б) клетокмишеней в течение 6 ч. Человеческие рап-Т-клетки инкубировали с взятыми в концентрации 9,43 нМ различными молекулами в присутствии опухолевых клеток-мишеней Со1о-38 или в их отсутствии при соотношении эффекторных клеток и клеток-мишеней 5:1. Добавляли монензин после первого часа инкубации для повышения уровней внутриклеточных белков путем препятствования транспорту белков. Дискриминационные окна устанавливали на СЭ107а/Ь-позитивные, перфорин-позитивные или дважды позитивные клетки, как указано.

На фиг. 44 - данные об относительной пролиферации либо СЭ8+- (А), либо СЭ4+- (Б) человеческих Т-клеток при инкубации с взятыми в концентрации 1 нМ различными имеющими в качестве мишени СЭ3-МС8Р биспецифическими конструкциями ("2+1 1§О 8сРаЬ, ЬАРА" (см. 8Е0 ГО N0: 5, 17, 19) или "(8сРν)₂") или соответствующими контрольными 1§О в присутствии опухолевых клеток-мишеней Со1о-38 или в их отсутствии при соотношении эффекторных клеток и клеток-мишеней 5:1. Меченные с помощью СР8Е (карбоксифлуоресцеинсукцинимидиловый эфир) человеческие рап-Т-клетки характеризовали с помощью РАС8. Относительный уровень пролиферации определяли путем установки дискриминационного окна на непролиферирующие клетки и, используя в качестве контроля количество клеток в этом дискриминационном окне относительно всего измеренного количества клеток.

На фиг. 45 - данные об уровнях различных цитокинов, определенные в супернатанте человеческих РВМС после обработки взятыми в концентрации 1 нМ различными имеющими в качестве мишени СЭ3-МС8Р биспецифическими конструкциями ("2+1 1§О 8сРаЬ, ЬАРА" (см. 8Е0 ГО N0: 5, 17, 19) или "(8сРν)₂") или соответствующими контрольными 1§О в присутствии (А) или в отсутствие (Б) опухолевых клеток Со1о-38 в течение 24 ч. Соотношение эффекторных клеток и клеток-мишеней составляло 10:1.

- 8 030147

На фиг. 46 - данные об уровнях различных цитокинов, определенные в супернатанте цельной крови после обработки взятыми в концентрации 1 нМ различными имеющими в качестве мишени СЭ3-МСЗР биспецифическими конструкциями ("2+1 1§С ксРаЪ", "2+1 1§С СгоззГаЪ" (см. ЗЕр ГО N0: 3, 5, 29, 33) или "(5сРу)₂") или соответствующими контрольными 1§С в присутствии (А, Б) или в отсутствие (В, Г) опухолевых клеток Со1о-38 в течение 24 ч. В качестве биспецифических конструкций использовали различные конструкции "2+1 1§С ксРаЪ", имеющие либо Рс-домен дикого типа (см. ЗЕР ГО N0: 5, 13, 15), либо Рс-домен, подвергнутый мутации для элиминации функции эффекторных клеток (ΝΚ) (БАБА (см. ЗЕр ГО N0: 5, 17, 19), Р329С БАБА (см. ЗЕр ГО N0: 5, 2, 23) и Р329С БАБА Ν297Ό (см. ЗЕр ГО N0: 5, 25, 27)).

На фиг. 47 - результаты анализа, полученные с помощью капиллярного электрофореза в присутствии ДСН (КЭ-ДСН). Представлены результаты, полученные с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "2+1 1§С СгоккГаЪ. связанная легкая цепь" (см. ЗЕР ГО N0: 3, 5, 29, 179), (полоса 1: восстанавливающие условия, полоса 2: невосстанавливающие условия).

На фиг. 48 - хроматограммы, полученные с помощью аналитической гель-фильтрации конструкции "2+1 1§С СгоккГаЪ, связанная легкая цепь" (см. ЗЕР ГО N0: 3, 5, 29, 179) (конечный продукт). Инъецировали 20 мкг образца.

На фиг. 49 - данные об уничтожении (на основе высвобождения БОН) МСЗР-позитивных опухолевых клеток МУ-3 при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1), обработанными различными имеющими в качестве мишени СГО3-МСЗР биспецифическими конструкциями ("2+1 1§С СгоккГаЪ" (см. ЗЕр ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "2+1 1§С СгоккГаЪ, связанная БС" (см. ЗЕР ГО N0: 3, 5, 29, 179)) в течение ~44 ч. Человеческие РВМС выделяли из свежей крови здоровых добровольцев.

На фиг. 50 - данные об уничтожении (на основе высвобождения БОН) МСЗР-позитивных опухолевых клеток Со1о-38 при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1), обработанными различными имеющими в качестве мишени СГО3-МСЗР биспецифическими конструкциями ("2+1 1§С СгоккГаЪ" (см. ЗЕр ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "2+1 1§С СгоккГаЪ, связанная БС" (см. ЗЕР ГО N0: 3, 5, 29, 179)), в течение ~22 ч. Человеческие РВМС выделяли из свежей крови здоровых добровольцев.

На фиг. 51 - данные об уничтожении (на основе высвобождения БОН) МСЗР-позитивных опухолевых клеток Со1о-38 при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1), обработанными различными имеющими в качестве мишени СГО3-МСЗР биспецифическими конструкциями ("2+1 1§С СгоккГаЪ" (см. ЗЕр ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "2+1 1§С СгоккГаЪ, связанная БС" (см. ЗЕР ГО N0: 3, 5, 29, 179)), в течение ~22 ч. Человеческие РВМС выделяли из свежей крови здоровых добровольцев.

На фиг. 52 - данные об уничтожении (на основе высвобождения БОН) МСЗР-позитивных клеток ХУМ266-4 при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1), обработанными различными имеющими в качестве мишени СГО3-МСЗР биспецифическими конструкциями ("2+1 1§С СгоккГаЪ" (см. ЗЕр ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "2+1 1§С СгоккГаЪ, связанная БС" (см. ЗЕр ГО N0: 3, 5, 29, 179)), в течение ~22 ч. Человеческие РВМС выделяли из свежей крови здоровых добровольцев.

На фиг. 53 - данные об уровне экспрессии на поверхности человеческих СГО8'-Т-клеток раннего маркера активации СГО69 (А) и позднего маркера активации СГО8 (Б) после инкубации в течение 22 ч с взятыми в концентрации 1 нМ, 80 пМ или 3 пМ различными имеющими в качестве мишени СГО3-МСЗР биспецифическими конструкциями ("2+1 1§С СгоккГаЪ" (см. ЗЕр ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "2+1 1§С СгоккГаЪ, связанная БС" (см. ЗЕР ГО N0: 3, 5, 29, 179)) в присутствии или в отсутствие экспрессирующих человеческий МСЗР-опухолевых клеток-мишеней Со1о-38 (соотношение Е:Т = 10:1).

На фиг. 54 - результаты КЭ-ДСН-анализа. (А) Представлена электрофореграмма, полученная с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "1+1 1§С СгоккГаЪ; обмен УБ/УН" (БС007/У9) (см. ЗЕР ГО N0: 5, 29, 33, 181): а) невосстанавливающие условия, б) восстанавливающие условия. (Б) Представлена электрофореграмма, полученная с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "1+1 СгоккМаЪ; обмен СБ/СН1" (БС007/У9) (см. ЗЕР ГО N0: 5, 23, 183, 185): а) восстанавливающие условия, б) невосстанавливающие условия. (В) Представлена электрофореграмма, полученная с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "2+1 1§С СгоккГаЪ, инвертированная; обмен СБ/СН1 (БС007/У9) (см. ЗЕр ГО N0: 5, 23, 183, 187): а) восстанавливающие условия, б) невосстанавливающие условия. (Г) Представлена электрофореграмма, полученная с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "2+1 1§С СгоззГаЪ; обмен УБ/УН" (М4-3 МБ2/У9) (см. ЗЕР ГО N0: 33, 189, 191, 193): а) восстанавливающие условия, б) невосстанавливающие условия. (Д) Представлена электрофореграмма, полученная с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "2+1 1§С СгоззГаЪ; обмен СБ/СН1" (М4-3 МБ2/У9) (см. ЗЕР ГО N0: 183, 189, 193, 195): а) восстанавливающие условия, б) невосстанавливающие условия. (Е) Представлена электрофореграмма, полученная с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "2+1 1§С СгоккГаЪ, инвертированная; обмен СБ/СН1" (СН1А1А/У9) (см. ЗЕр ГО N0: 65, 67, 183, 197): а) восстанавливающие условия, б) невосстанавливающие условия. (Ж) Представлена электрофореграмма, полученная с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "2+1 1§С СгоккГаЪ; обмен СБ/СН1" (М4-3 МБ2/Н2С) (см. ЗЕр ГО N0: 189, 193, 199, 201): а) восстанавливающие

- 9 030147

условия, б) невосстанавливающие условия. (З) Представлена электрофореграмма, полученная с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "2+1 1дС Сго^^ГаЬ. инвертированная; обмен СБ/СН1" (431/26/У9) (см. 8ЕО ГО N0: 183, 203, 205, 207): а) восстанавливающие условия, б) невосстанавливающие условия. (И) Представлена электрофореграмма, полученная с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "2+1 1дС Сго88ГаЬ слияние легкой цепи" (СН1А1А/У9) (см. 8ЕО ГО N0: 183, 209, 211, 213): а) восстанавливающие условия, б) невосстанавливающие условия. (К) Представлены результаты, полученные с помощью ДСНПААГ (4-12% бис/трис, ШРадс, фирма 1пуйтодеп, окрашивание кумасси) для конструкции "2+1 1дС Сто88ГаЬ" (анти-МС8Р/анти-йиСН3) (см. 8Е0 ГО N0: 5, 23, 215, 217), невосстанавливающие условия (слева) и восстанавливающие условия (справа). (Л) Представлена электрофореграмма, полученная с помощью ДСН-ПААГ, для конструкции "2+1 1дС Сго88ГаЬ, инвертированная" (анти-МС8Р/анти-ЬиСН3) (см. 8Е0 ГО N0: 5, 23, 215, 219): а) восстанавливающие условия, б) невосстанавливающие условия. (М) Представлены результаты, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, NиРаде, фирма 1пуйтодеп, окрашивание кумасси) для конструкции "1+1 1дС Сго88ГаЬ" (анти-СП33/анти-йиСП3) (см. 8Е0 ГО N0: 33, 213, 221, 223), восстанавливающие условия (слева) и невосстанавливающие условия (справа). (Н) Представлены результаты, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, NиРаде, фирма 1пуйтодеи, окрашивание кумасси) для конструкции "2+1 1дС Сго88ГаЬ" (анти-СП33/анти-ЬиСП3) (см. 8Е0 ГО N0: 33, 221, 223, 225), восстанавливающие условия (слева) и невосстанавливающие условия (справа). (О) Представлены результаты, полученные с помощью ДСН-ПААГ (4-12% бис/трис, NиРаде, фирма 1пуйтодеи, окрашивание кумасси) для конструкции "2+1 1дС Сго88ГаЬ" (анти-СП20/анти-ЬиСП3) (см. 8Е0 ГО N0: 33, 227, 229, 231), невосстанавливающие условия.

На фиг. 55 - данные о связывании биспецифических конструкций (имеющих в качестве мишени СЕА/СП3 "2+1 1дС Сго88ГаЬ, инвертированная (УЪ/УН)" (см. 8Е0 ГО N0: 33, 63, 65, 67) и "2+1 1дС Сго88ГаЬ, инвертированная (СЬ/СН1)2" (см. 8Е0 ГО N0: 65, 67, 183, 197)) с человеческим СЭ3, экспрессируемым клетками Лика! (А), или с человеческим СЕА, экспрессируемым клетками Б8-174Т (Б), полученные с помощью РАС8. В качестве контроля оценивали также взятые в эквивалентной максимальной концентрации референс-1дО и фоновое окрашивание меченым вторичным антителом (козий античеловеческий конъюгированный с ФИТЦ Р(аЬ')₂-фрагмент, Рсу-специфический фрагмент, фирма 1аек8ои 1ттипо Ке8еагей ЬаЬ, № 109-096-098).

На фиг. 56 - данные о связывании биспецифических конструкций (имеющих в качестве мишени МС8Р/СГО3 "2+1 1дС Сго88ГаЬ" (см. 8Е0 ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "2+1 1дС Сго88ГаЬ, инвертированная" (см. 8Е0 ГО N0: 5, 23, 183, 187)) с человеческим СЭ3, экспрессируемым клетками 1итка1 (А), или с человеческим МС8Р, экспрессируемым опухолевыми клетками ХУМ266-4 (Б), полученные с помощью РАС8.

На фиг. 57 - данные о связывании "1+1 1дС Сго88ГаЬ, слияние легкой цепи" (см. 8Е0 ГО N0: 183, 209, 211, 213) с человеческим СО3, экспрессируемым клетками 1итка1 (А), или с человеческим СЕА, экспрессируемым клетками Б8-174Т (Б), полученные с помощью РАС8.

На фиг. 58 - данные о связывании конструкций "2+1 1дС Сго88ГаЬ" (см. 8Е0 ГО N0: 5, 23, 215, 217) и "2+1 1дС Сго88ГаЬ, инвертированная" (см. 8Е0 ГО N0: 5, 23, 215, 219) с человеческим СО3, экспрессируемым клетками 1итка1 (А), или с человеческим МС8Р, экспрессируемым опухолевыми клетками \УМ266-4 (Б), полученные с помощью РАС8.

На фиг. 59 - данные об уровне экспрессии на поверхности человеческих СГО4' - или СГО8'-Т-клеток раннего маркера активации СГО69 (А) или позднего маркера активации СГО25 (Б) после инкубации в течение 24 ч со взятыми в указанных концентрациях имеющими в качестве мишени СГО3/МС8Р конструкциями "1+1 Сго88МаЬ" (см. 81 У) ГО N0: 5, 23, 183, 185), "1+1 1дС Сго88ГаЬ" (см. 81 У) ГО N0: 5, 29, 33, 181) и "2+1 1дС Сго88ГаЬ" (см. 8Е0 ГО N0: 3, 5, 29, 33). Анализ осуществляли в присутствии клетокмишеней МУ-3 или в их отсутствии, как указано.

На фиг. 60 - данные об уровне экспрессии на поверхности человеческих СГО4' - или СБ8'-Т-клеток из двух различных обезьян циномолгус (А и Б) раннего маркера активации СГО25 в присутствии йиМС8Р-позитивных опухолевых клеток МУ-3 или в их отсутствии при совместном культивировании с РВМС обезьян циномолгус (соотношении Е:Т = 3:1, стандартизованное относительно количества СГО3 ), обработанных "2+1 1дС Сго88ГаЬ" (см. 8Е0 ГО N0: 5, 23, 215, 217) и "2+1 1дС Сго88ГаЬ, инвертированная" (см. 81 У) ГО N0: 5, 23, 215, 219), в течение ~41 ч.

На фиг. 61 - данные об уничтожении (на основе высвобождения БОН) опухолевых клеток МКЛ-45 (А) или Б8-174Т (Б) при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1) и активации в течение 28 ч конструкцией "2+1 1дС Сго88ГаЬ, инвертированная (УЪ/УН)" (см. 8Е0 ГО N0: 33, 63, 65, 67) в сравнении с конструкцией "2+1 1дС Сго88ГаЬ, инвертированная (СБ/СН1)" (см. 8Е0 ГО N0: 65, 67, 183, 197) при их применении в различных концентрациях.

На фиг. 62 - данные об уничтожении (на основе высвобождения БОН) опухолевых клеток ХУМ266-4 при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1) и активации в течение 26 ч конструкцией "2+1 1дС Сго88ГаЬ (УБ/УН)" (см. 8Е0 ГО N0: 33, 189, 191, 193) в сравнении с конструкцией "2+1 1дС Сго88ГаЬ (СБ/СН1)" (см. 8Е0 ГО N0: 183, 189, 193, 195) при их применении в различных концентрациях.

- 10 030147

На фиг. 63 - данные о уничтожении (на основе высвобождения БЭН) опухолевых клеток МУ-3 при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1) и активации в течение 27 ч конструкцией "2+1 1§С СгоззЕаЬ (УН/УЬ)" (см. ЗЕО ГО N0: 33, 189, 191, 193) в сравнении с конструкцией "2+1 1§С СгоззЕаЬ (СЬ/СН1)" (см. ЗЕО ГО N0: 183, 189, 193, 195) при их применении в различных концентрациях.

На фиг. 64 - данные об уничтожении (на основе высвобождения БЭН) опухолевых клеток, позитивных по человеческому МСЗР линии АМ266-4 (А) или линии МУ-3 (Б) при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1) и активации в течение 21 ч взятыми в различных концентрациях указанными конструкциями "2+1 1§С СгоззЕаЬ" (см. ЗЕО ГО N0: 3, 5, 29, 33), "1+1 СгоззМаЬ" (см. 8Е0 ГО N0: 5, 23, 183, 185) и "1+1 1§С СгоззЕаЬ" (см. ЗЕО ГО N0: 5, 29, 33, 181).

На фиг. 65 - данные об уничтожении (на основе высвобождения БОН) опухолевых клеток МКН-45 (А) или БЗ-174Т (Б) при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1) и активации в течение 28 ч взятой в различных концентрациях указанной конструкцией "1+1 1§С СгоззЕаЬ слияние ЬС" (см. ЗЕО ГО N0: 183, 209, 211, 213).

На фиг. 66 - данные об уничтожении (на основе высвобождения БОН) опухолевых клеток МС381шС.'ЕЛ при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1) и активации в течение 24 ч конструкцией "1+1 1§С СгоззЕаЬ слияние ЬС" (см. ЗЕО ГО N0: 183, 209, 211, 213) в сравнении с применяемой с качестве стандарта не имеющей специфической мишени ("ненаправленной") конструкцией "2+1 1§С СгоззЕаЬ" при их применении в различных концентрациях.

На фиг. 67 - данные об уничтожении (на основе высвобождения БОН) опухолевых клеток, позитивных по человеческому МСЗР линии МУ-3 (А) или линии АМ266-4 (Б) при совместном культивировании с человеческими РВМС (соотношение Е:Т = 10:1), обработанными конструкциями "2+1 1§С СгоззЕаЬ (У9)" (см. ЗЕО ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "2+1 1§С СгоззЕаЬ, инвертированная (У9)" (см. ЗЕО ГО N0: 5, 23, 183, 187), "2+1 1§С СгоззЕаЬ (анти-СО3)" (см. ЗЕО ГО N0: 5, 23, 215, 217) и "2+1 1§С СгоззЕаЬ, инвертированная (анти-СО3)" (см. ЗЕО ГО N0: 5,23,215,219).

Подробное описание изобретения

Определения.

Понятия, применяемые в настоящем описании, имеют значения, общепринятые в данной области, если ниже специально не указано иное.

В контексте настоящего описания понятие "антигенсвязывающий фрагмент" в наиболее широком смысле относится к молекуле, которая специфически связывается с антигенной детерминантой. Примерами антигенсвязывающих фрагментов являются иммуноглобулины и их производные, например фрагменты.

Понятие "биспецифическая" означает, что антигенсвязывающая молекула обладает способностью специфически связываться по меньшей мере с двумя различными антигенными детерминантами. Как правило, биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит два антигенсвязывающих сайта, каждый из которых является специфическим в отношении различных антигенных детерминант. В некоторых вариантах осуществления изобретения биспецифическая антигенсвязывающая молекула обладает способностью одновременно связываться с двумя антигенными детерминантами, прежде всего с двумя антигенными детерминантами, экспрессируемыми на двух различных клетках.

В контексте настоящего описания понятие "валентность" означает наличие определенного количества антигенсвязывающих сайтов в антигенсвязывающей молекуле. Так, понятие "одновалентное связывание с антигеном" означает наличие одного (и не более одного) специфического в отношении антигена антигенсвязывающего сайта в антигенсвязывающей молекуле.

Понятие "антигенсвязывающий сайт" относится к сайту, т.е. одному или нескольким аминокислотным остаткам антигенсвязывающей молекулы, обеспечивающему взаимодействие с антигеном. Например, антигенсвязывающий сайт антитела содержит аминокислотные остатки из гипервариабельных участков (определяющих комплементарность участков) (СОР). Нативная молекула иммуноглобулина имеет два антигенсвязывающих сайта, молекула РаЬ, как правило, имеет один антигенсвязывающий сайт.

В контексте настоящего описания понятие "антигенсвязывающий фрагмент" относится к полипептидной молекуле, которая специфически связывается с антигенной детерминантой. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент обладает способностью направлять субстанцию, к которой он присоединен (например, второй антигенсвязывающий фрагмент), к сайту-мишени, например, к специфическому типу опухолевой клетки или стромы опухоли, несущей антигенную детерминанту. В другом варианте осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент обладает способностью активировать передачу сигналов через его антиген-мишень, например антиген комплекса Т-клеточного рецептора. Антигенсвязывающие фрагменты включают антитела и их фрагменты, что дополнительно описано ниже. Предпочтительные антигенсвязывающие фрагменты включают антигенсвязывающий домен антитела, который содержит вариабельную область тяжелой цепи антитела и вариабельную область легкой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления изобретения антигенсвязывающие фрагменты могут включать константные области антитела, что дополнительно описано ниже и известно в данной области. Пригодные константные области тяжелых цепей включают любые из пяти

- 11 030147

изотипов: α, δ, ε, γ или μ. Пригодные константные области легких цепей включают любые из двух изотипов: к и λ.

В контексте настоящего описания понятие "антигенная детерминанта" является синонимом понятий "антиген" и "эпитоп" и относится к сайту (например, участку, состоящему из смежных аминокислот, или конформационной конфигурации, состоящей из различных областей несмежных аминокислот) на полипептидной макромолекуле, с которой связывается антигенсвязывающий фрагмент с образованием комплекса антигенсвязывающий фрагмент-антиген. Пригодные антигенные детерминанты могут присутствовать, например, на поверхности опухолевых клеток, на поверхности инфицированных вирусом клеток, на поверхности других больных клеток, на поверхности иммунных клеток, клеток, находящихся в свободном состоянии в сыворотке крови и/или во внеклеточном матриксе (ЕСМ). В контексте настоящего описания белки, относящиеся к антигенам (например, МС8Р, РЛР, СЕА, ЕСРК, СЭ33, СЭ3). если не указано иное, могут представлять собой любые нативные формы белков из любого применяемого в качестве источника позвоночного животного, включая млекопитающих, таких как приматы (например, люди) и грызуны (например, мыши и крысы). В конкретном варианте осуществления изобретения антиген представляет собой человеческий белок. В контексте настоящего описания при ссылке на конкретный белок подразумевается "полноразмерный", непроцессированный белок, а также любая форма белка, полученная в результате процессинга в клетке. Под понятие подпадают также встречающиеся в естественных условиях варианты белка, например, сплайсинговые варианты или аллельные варианты. Примерами человеческих белков, пригодных в качестве антигенов, являются (но не ограничиваясь только ими) ассоциированный с меланомой хондроитинсульфат-протеогликан (МС8Р), известный также как хонроитинсульфат-протеогликан 4 (υηίΡτοΐ № О6иУК1 (версия 70), ΝΟΒΙ КеГ8ес| № ΝΡ 001888.2); фибробластактивирующий белок (РАР), известный также как сепраза (υηί Рго! № 012884, Ο86Ζ29, 099998, регистрационный номер NСВI №_004451); карциноэмбриональный антиген (СЕА), известный также как родственный молекуле клеточной адгезии 5 карциноэмбриональный антиген (ишРго! № Р06731 (версия 119), NСВI КеГ8ес| № № 004354.2); СЭ33, известный также как др67 или §1§1ес-3 (ишРто! № Р20138, NСВI, регистрационные № № №001076087, №001171079); рецептор эпидермального фактора роста (ЕСРК), известный также как ЕтЬВ-1 или Нег1 (ишРто! № Р0053, ΝΟΒΙ, регистрационные № №958439, № 958440), и СЭ3, прежде всего эпсилон-субъединица СЭ3 (см. ишРто! № Р07766 (версия 130), NСВI РеГ5>ес.| № №000724.1, в §ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 265 представлена человеческая последовательность; или ишРто! № Ц95Ы5 (версия 49), NСВI СепВапк № ВАВ71849.1, в §ЕЦ ГО ΝΟ: 266 представлена последовательность обезьян циномолгус (яванский макак-крабоед) [Масаса Га8с1си1ат18]). В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, предлагаемая в изобретении, связывается с эпитопом активирующего Т-клетки антигена или антигеном клетки-мишени, который является консервативным для активирующего Т-клетки антигена или антигенамишени из различных видов.

Понятие "специфически связывается" означает, что связывание является избирательным в отношении антигена и его можно отличать от нежелательных или неспецифических взаимодействий. Способность антигенсвязывающего фрагмента связываться со специфической антигенной детерминантой можно определять с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ЕЬРЗА) или других методик, известных специалисту в данной области, например, с помощью методики на основе резонанса поверхностного плазмона (осуществляя анализ с помощью устройства В1асоте) (Ы1)еЬ1аб е! а1., С1усо 1. 17, 2000, р. 323-329), и традиционных анализов связывания (Нее1еу, Епбост Кез 28, 2002, р. 217-229). В одном из вариантов осуществления изобретения уровень связывания антигенсвязывающего фрагмента с неродственным белком составляет менее чем примерно 10% от уровня связывания антигенсвязывающего фрагмента с антигеном, при измерении, например, с помощью 8РК. В некоторых вариантах осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который связывается с антигеном, или антигенсвязывающая молекула, содержащая антигенсвязывающий фрагмент, характеризуется величиной константы диссоциации (», составляющей <1 мкМ, <100 нМ, <10 нМ, <1 нМ, <0,1 нМ, <0,01 нМ или <0,001 нМ (например, 10 М или менее, например от 10 до 10 М, например от 10 до 10 М).

Понятие "аффинность" относится к суммарной силе всех нековалентных взаимодействий между индивидуальным сайтом связывания молекулы (например, рецептора) и ее партнера по связыванию (например, лиганда). Если не указано иное, то в контексте настоящего описания понятие "аффинность связывания" относится к присущей компонентам связывающейся пары (например, антигенсвязывающему фрагменту и антигену или рецептору и лиганду) аффинности связывания, отражающей взаимодействие по типу 1:1. Аффинность молекулы X к ее партнеру Υ можно, как правило, характеризовать с помощью константы диссоциации (К_с), которая представляет собой отношение констант скорости реакции диссоциации и ассоциации (к_оГГ и к_оп соответственно). Так, эквивалентные аффинности могут соответствовать различным константам скорости, если соотношение констант скорости остается таким же. Аффинность можно оценивать общепринятыми методами, известными в данной области, включая представленные в настоящем описании методы. Конкретным методом измерения аффинности является метод резонанса поверхностного плазмона (8РК).

- 12 030147

Понятие "пониженное связывание (пониженная способность к связыванию)", например пониженная способность к связыванию с Ре-рецептором, относится к снижению аффинности касательно соответствующего взаимодействия, измеренной, например, с помощью 8РК. Для ясности следует отметить, что понятие включает также снижение аффинности до нуля (или ниже предела обнаружения аналитического метода), т.е. полную элиминацию взаимодействия. И, наоборот, "повышенное связывание (повышенная способность к связыванию)" относится к повышению аффинности связывания касательно соответствующего взаимодействия.

Понятие "активирующий Т-клетки антиген" в контексте настоящего описания относится к антигенной детерминанте, экспрессируемой на поверхности Т-лимфоцита, в частности цитотоксического Т-лимфоцита, которая обладает способностью индуцировать Т-клеточную активацию при взаимодействии с антигенсвязывающей молекулой. В частности, взаимодействие антигенсвязывающей молекулы с активирующим Т-клетки антигеном может индуцировать Т-клеточную активацию путем запуска каскада сигналов комплекса Т-клеточного рецептора. В конкретном варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антиген представляет собой СЭ3.

Понятие "Т-клеточная активация (активация Т-клеток)" в контексте настоящего описания относится к одному или нескольким клеточным ответам Т-лимфоцита, в частности цитотоксического Т-лимфоцита, выбранным из: пролиферации, дифференцировки, секреции цитокинов, высвобождения цитотоксических эффекторных молекул, цитотоксической активности и экспрессии маркеров активации. Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, обладают способностью индуцировать Т-клеточную активацию. Приемлемые анализы оценки Т-клеточной активации, известные в данной области, представлены в настоящем описании.

Понятие "антиген клетки-мишени" в контексте настоящего описания относится к антигенной детерминанте, которая присутствует на поверхности клетки-мишени, например клетки в опухоли, такой как раковая клетка или клетка стромы опухоли.

В контексте настоящего описания понятия "первый" и "второй" касательно антигенсвязывающих фрагментов и т.д. применяют с целью удобства различения, когда присутствует более одного типа каждого из фрагментов. Применение этих понятий не подразумевает их конкретный порядок или ориентацию в активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекуле, если специально не указано иное.

Понятие "молекула РаЬ" относится к белку, состоящему из УН и СН1-домена тяжелой цепи ("тяжелая цепь РаЬ") и УЪ и СЬ-домена легкой цепи ("легкая цепь РаЬ") иммуноглобулина.

Под понятием "слиты" подразумевается, что компоненты (например, молекула РаЬ и субъединица Рс-домена) соединены пептидными связями либо непосредственно, либо с помощью одного или нескольких пептидных линкеров.

В контексте настоящего описания понятие "одноцепочечная" относится к молекуле, содержащей аминокислотные мономеры, связанные линейно посредством пептидных связей. В некоторых вариантах осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент представляет собой одноцепочечную молекулу РаЬ, т.е. молекулу РаЬ, в которой легкая цепь РаЬ и тяжелая цепь РаЬ соединены с помощью пептидного линкера с образованием одной пептидной цепи. В конкретном указанном варианте осуществления изобретения С-конец легкой цепи РаЬ соединен с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ в одноцепочечной молекуле РаЬ.

Под полученной в результате кроссинговера молекулой РаЬ (которую обозначают также как "СгоззГаЬ") подразумевается молекула РаЬ, в которой либо вариабельные области, либо константные области тяжелой и легкой цепей РаЬ обменены друг на друга, т.е. полученная в результате кроссинговера молекула РаЬ содержит пептидную цепь, состоящую из вариабельной области легкой цепи и константной области тяжелой цепи, и пептидную цепь, состоящую из вариабельной области тяжелой цепи и константной области легкой цепи. Для простоты понимания следует отметить, что в полученной в результате кроссинговера молекуле РаЬ, в которой обменены вариабельные области легкой цепи РаЬ и тяжелой цепи РаЬ, пептидную цепь, содержащую константную область тяжелой цепи, обозначают в контексте настоящего описания как "тяжелая цепь" полученной в результате кроссинговера молекулы РаЬ. И, наоборот, в полученной в результате кроссинговера молекуле РаЬ, в которой обменены константные области легкой цепи РаЬ и тяжелой цепи РаЬ, пептидную цепь, содержащую вариабельную область тяжелой цепи, обозначают в контексте настоящего описания как "тяжелая цепь" полученной в результате кроссинговера молекулы РаЬ.

Понятие "молекула иммуноглобулина" относится к белку, имеющему структуру встречающегося в естественных условиях антитела. Например, иммуноглобулины класса 1§О представляют собой гетеротетрамерные гликопротеины с молекулярной массой примерно 150000 Да, состоящие из двух легких цепей и двух тяжелых цепей, связанных дисульфидными мостиками. В направлении от Ν-конца к С-концу каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область (УН), которую называют также вариабельным тяжелым доменом или вариабельным доменом тяжелой цепи, за которой расположены три константных домена (СН1, СН2 и СН3), которые называют также константной областью тяжелой цепи. Аналогично этому, в направлении от Ν-конца к С-концу каждая легкая цепь содержит вариабельную область (УЬ),

- 13 030147

которую называют также вариабельным легким доменом или вариабельным доменом легкой цепи, за которой расположен константный домен легкой цепи (СЬ), который называют также константной областью легкой цепи. Тяжелая цепь иммуноглобулина может относиться к одному из пяти типов, обозначенных как α (1дА), δ (1дБ), ε (1дЕ), γ (1дО) или μ (1дМ), некоторые из которых дополнительно подразделяют на подтипы, например, γι (1§θι), γ₂ (1дО₂), γ₃ (1дО₃), γ₄ (1дО₄), α (1дАД и α₂ (1дА₂). Легкая цепь иммуноглобулина может относиться к одному из двух типов, обозначенных как каппа (к) и лямбда (λ), на основе аминокислотной последовательности ее константного домена. Иммуноглобулин, как правило, состоит из двух молекул РаЬ и Рс-домена, которые соединены через шарнирную область иммуноглобулина.

В контексте настоящего описания понятие "антитело" используется в его наиболее широком смысле, и оно относится к различным структурам антител, включая (но не ограничиваясь только ими) моноклональные антитела, поликлональные антитела и фрагменты антител, при условии, что они обладают требуемой антигенсвязывающей активностью.

Понятие "фрагмент антитела" относится к молекуле, отличной от интактного антитела, которая содержит часть интактного антитела, обладающую способностью связываться с антигеном, с которым связывается интактное антитело. Примерами фрагментов антител являются (но не ограничиваясь только ими) Ρν, РаЬ, РаЬ', РаЬ'-8Н, Р(аЬ')₂, димерные антитела, линейные антитела, одноцепочечные молекулы антител (например, 8сΡν) и однодоменные антитела. Обзор некоторых фрагментов антител см., например, у Нийкои е! а1., ΝηΙ Мей 9, 2003, р. 129-134. Обзор 8сΡν-фрагментов см., например, у Р1иск!Ьии в: ТЬе РЬагтасо1оду οί Мопос1опа1 АиЬЬоФек, т. 113, под ред. РокеиЬигд и Мооге, изд-во 8ртшдет-Уег1ад, Νον Уогк, 1994, р. 269-315; см. также ΥΟ 93/16185 и И8 № 5571894 и 5587458. Обсуждение РаЬ- и Р(аЬ')₂фрагментов, содержащих остатки эпитопа, связывающегося с рецептором спасения, и обладающих удлиненным временем полужизни ίη ν^νο, см. в И8 № 5869046. Димерные антитела (диабоди) представляют собой фрагменты антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые могут быть двухвалентными или биспецифическими (см., например, ЕР 404097; ΥΟ 1993/01161; Нийкои е! а1., ΝηΙ Мей 9, 2003, р. 129134 и НоШидет е! а1., Ргос Νηΐΐ Асай §щ И8А 90, 1993, р. 6444-6448. Тримерные (триабоди) и тетрамерные (тетрабоди) антитела описаны также у Нийкои е! а1., ΝηΙ Мей 9, 2003, р. 129-134. Однодоменные антитела представляют собой фрагменты антител, содержащие весь или часть вариабельного домена тяжелой цепи или весь или часть вариабельного домена легкой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления изобретения однодоменное антитело представляет собой человеческое однодоменное антитело (фирма Ботаийк, 1ис., ХУаНЬат М.А.; см., например, И8 № 6248516 В1). Фрагменты антител можно создавать с помощью различных методик, включая (но не ограничиваясь только ими) протеолитическое расщепление интактного антитела, а также получать с использованием рекомбинантных клеток-хозяев (например, Е.соЬ или фага), как указано в настоящем описании.

Понятие "антигенсвязывающий домен" относится к части антитела, которая содержит область, специфически связывающуюся и являющуюся комплементарной части антигена или полному антигену. Антигенсвязывающий домен может представлять собой, например, один или несколько вариабельных доменов антитела (которые называют также вариабельными областями антитела). Предпочтительно антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи (УЬ) антитела и вариабельную область тяжелой цепи (УН) антитела.

Понятие "вариабельная область" или "вариабельный домен" относится к домену тяжелой или легкой цепи антитела, который участвует в связывании антитела с антигеном. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи (УН и УЬ соответственно) нативного антитела, как правило, имеют сходные структуры, при этом каждый домен содержит четыре консервативных каркасных участка (РР) и три гипервариабельных участка (НУР) (см., например, Кшй! е! а1., КиЬу 1ттиио1оду, 6-е изд., изд-во \У.Н Ргеетаи аий Со., 2007, с. 91). Одного УН- или УЪ-домена может быть достаточно для обеспечения специфичности связывания антигена.

Понятие "гипервариабельный участок" или "НУР" в контексте настоящего описания относится к каждому из участков вариабельного домена антитела, последовательности которых являются гипервариабельными, и/или которые образуют структуры в виде петель ("гипервариабельные петли"). Как правило, нативные четырехцепочечные антитела содержат шесть НУР; три в УН (Н1, Н2, Н3) и три в УЬ (Ъ1, Ь2, Ь3). НУР, как правило, содержат аминокислотные остатки из гипервариабельных петель и/или из "определяющих комплементарность участков" (СЭР), последние отличаются наиболее выраженной вариабельностью последовательности и/или участвуют в распознавании антигенов. Кроме СЭР1, присутствующего в УН, СЭР, как правило, содержат аминокислотные остатки, которые образуют гипервариабельные петли. Понятие "гипервариабельные участки" (НУР) относится также к "определяющим комплементарность участкам" (СЭР), и в контексте настоящего описания эти понятия используются взаимозаменяемо касательно положений вариабельной области, которые формируют антигенсвязывающие области. Эта конкретная область описана у КаЬа! е! а1., И.8. Эер1. оГ Неа1!Ь аий Нитаи §еМсек, "8ециеисек оГ

РгоЮтк оГ 1ттиио1одюа1 1и1еге81", 1983 и у СЬо!Ыа е! а1., 1. Мо1. Вю1. 196, 1987, р. 901-917, причем эти

- 14 030147

определения относятся к перекрывающимся аминокислотным остаткам или поднаборам аминокислотных остатков при их сравнении друг с другом. Однако в контексте настоящего описания подразумевается возможность применения любого определения СОК антитела или его вариантов. Соответствующие аминокислотные остатки, из которых состоят СОК, как они определены в каждой из процитированных выше ссылок, представлены в сравнении в табл. 1. Точные номера остатков, которые образуют конкретный СОК, должны варьироваться в зависимости от последовательности и размера СОК. Специалисты в данной области на основе данных об аминокислотной последовательности вариабельной области антитела легко могут определять, какие остатки входят в конкретный СОК.

Таблица 1 Определения СОК

	Кэбот	Хотиа	АЪМ²
ν_Η СОК1	31-35	26-32	26-35
ν_Η СОК2	50-65	52-58	50-58
ν_Η сокз	95-102	95-102	95-102
У_ь СОК.1	24-34	26-32	24-32
У_Е СОК2	50-56	50-52	50-56
Уц СШО	89-97	91-96	89-97

Нумерация всех входящих в СОК остатков в табл. 1 дана в соответствии с номенклатурой, предложенной Кэботом с соавторами (см. ниже).

Обозначение "АЪМ" с прописной буквой "Ъ", использованное в табл. 1, относится к СОК, как они определены программой для моделирования антител "АЪМ" компании Ох£огб Мо1еси1аг Огоир.

Кэбот с соавторами предложили также систему нумерации (номенклатуру) последовательностей вариабельных областей, которую можно применять для любого антитела. Обычный специалист в данной области может однозначно применять эту систему "нумерации по Кэботу" к любой последовательности вариабельной области, не имея никаких экспериментальных данных, кроме сведений о самой последовательности. В контексте настоящего описания понятие "нумерация по Кэботу" относится к системе нумерации, описанной у КаЪа! е! а1., "Зециепсе о£ Рго1етз о£ 1шшипо1о§1са1 1п1егез1", изд-во И.8. Оер1. О£ НеаЙЬ апб Нитап 8егу1сез, 1983. Если не указано иное, то ссылки на нумерацию положений конкретных аминокислотных остатков в вариабельной области антитела даны в соответствии с системой нумерации по Кэботу.

Нумерация полипептидных последовательностей в "Перечне последовательностей" (т.е. 8ЕЦ Ю N0: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 и т.д.) не представляет собой нумерацию в соответствии с системой Кэбота. Однако в компетенции обычного специалиста в данной области является превращение нумерации последовательностей в "Перечне последовательностей" в нумерацию по Кэботу.

"Каркасные участки" или "ЕК"-участки представляют собой участки вариабельных доменов, отличные от остатков гипервариабельных участков (НУК). ЕК вариабельного домена, как правило, представлены четырьмя РК-доменами: РК1, РК2, РК3 и РК4. Таким образом, последовательности НУК и РК, как правило, расположены в УН (или УЬ) в следующем порядке: РК1-Н1(Е1)-РК2-Н2(Е2)-РК3-Н3(Е3)-РК4.

Понятие "класс" антитела или иммуноглобулина относится к типу константного домена или константной области, входящего/входящей в тяжелую цепь. Существует пять основных классов антител: 1дА, 1дО, 1дЕ, 1дО и 1дМ, а некоторые из них можно дополнительно подразделять на подклассы (изотипы), например Ι§Οχ, 1дО₂, 1дО₃, 1дО₄, Ι§Αχ и 1дА₂. Константные домены тяжелых цепей, соответствующие различным классам иммуноглобулинов, обозначают как α, δ, ε, γ и μ соответственно.

В контексте настоящего описания понятие "Рс-домен" или "Рс-область" относится к С-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит по меньшей мере часть константной области. Понятие относится к нативной последовательности Рс-областей и вариантам Рс-областей. Хотя пограничные последовательности Рс-области в тяжелой цепи 1дО могут слегка варьироваться, как правило, Рсобласть тяжелой цепи человеческого 1дО простирается от Суз226 или от Рго230 до карбоксильного конца тяжелой цепи. Однако С-концевой лизин (Ьуз447) Рс-области может либо присутствовать, либо отсутствовать. Если специально не указано иное, то нумерация аминокислотных остатков в Рс-области или константном участке соответствует системе ЕИ-нумерации, которую называют также ЕИ-индекс, описанной у КаЪа! е! а1., Зециепсез о£ Рго1етз о£ 1ттипо1о§юа1 1п1егез1, 5-е изд., изд-во РиЪйс Неа№ Зегуще, Хнюпа1 1пзЙ1и1ез о£ НеаЙЬ, БеШезба, МО, 1991. Понятие "субъединица" Рс-домена в контексте настоящего описания относится к одному из двух полипептидов, образующих димерный Рс-домен, т.е. к полипептиду, который содержит С-концевые константные области тяжелой цепи иммуноглобулина, обладающие способностью к стабильной самоассоциации. Например, субъединица Рс-домена 1дО содержит константный домен СН2 1дО и СН3 1дО.

"Модификация, усиливающая ассоциацию первой и второй субъединиц Рс-домена" представляет собой манипуляцию с пептидным каркасом или посттрансляционные модификации субъединицы Рс-домена, которая уменьшает или препятствует ассоциации полипептида, содержащего субъединицу

- 15 030147

Рс-домена, с идентичным полипептидом с образованием гомодимера. В контексте настоящего описания модификация, усиливающая ассоциацию, включает, прежде всего, различные модификации, осуществляемые с каждой из двух субъединиц Рс-домена, предназначенных для ассоциации (например, первой и второй субъединиц Рс-домена), при этом модификации дополняют друг друга таким образом, чтобы усиливать ассоциацию двух субъединиц Рс-домена. Например, модификация, усиливающая ассоциацию, может изменять структуру или заряд одной или обеих субъединиц Рс-домена таким образом, чтобы улучшать их ассоциацию стерически или электростатически соответственно. Так, (гетеро)димеризация имеет место между полипептидом, который содержит первую субъединицу Рс-домена, и полипептидом, который содержит вторую субъединицу Рс-домена, которые могут быть неидентичными, поскольку дополнительные компоненты, слитые с каждой из субъединиц (например, антигенсвязывающие фрагменты), не являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления изобретения модификация, усиливающая ассоциацию, представляет собой аминокислотную мутацию в Рс-домене, в частности, аминокислотную замену. В конкретном варианте осуществления изобретения модификация, усиливающая ассоциацию, представляет собой индивидуальную аминокислотную мутацию, в частности аминокислотную замену, в каждой из двух субъединиц Рс-домена.

Понятие "эффекторные функции", используемое в настоящем описании, относится к видам биологической активности, присущим Рс-области антитела, которые варьируются в зависимости от изотипа антитела. Примерами эффекторных функций антитела являются: способность связываться с С1с| и комплементзависимая цитотоксичность (СОС), способность связываться с Рс-рецептором, антителообусловленная клеточнозависимая цитотоксичность (ЛИСС), антитело-обусловленный клеточнозависимый фагоцитоз (АИСР), секреция цитокинов, опосредованное иммунным комплексом поглощение антигена антигенпрезентирующими клетками, понижающая регуляция рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора); и активация В-клеток.

В контексте настоящего описания подразумевается, что понятия "конструирование, сконструированный, инженерия" включают любую манипуляцию с пептидным каркасом или посттрансляционные модификации встречающегося в естественных условиях или рекомбинантного полипептида или его фрагмента. Инженерия включает модификации аминокислотной последовательности, схемы гликозилирования или группы боковых цепей индивидуальных аминокислот, а также комбинации указанных подходов.

В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "аминокислотная мутация" относится к аминокислотным заменам, делециям, инсерциям и модификациям. Можно применять любую комбинацию замены, делеции, инсерции и модификации для создания конечной конструкции при условии, что конечная конструкция обладает требуемыми характеристиками, например, пониженной способностью связываться с Рс-рецептором или повышенной ассоциацией с другим пептидом. Аминокислотная последовательность с делециями и инсерциями включает амино- и/или карбоксиконцевые делеции и инсерции аминокислот. Конкретными аминокислотными мутациями являются аминокислотные замены. Для изменения, например, характеристик связывания Рс-области наиболее предпочтительными являются неконсервативные аминокислотные замены, т.е. замена одной аминокислоты на другую аминокислоту, имеющую другие структурные и/или химические свойства. Аминокислотные замены включают замену на не встречающиеся в естественных условиях аминокислоты или на производные встречающихся в естественных условиях двадцати стандартных аминокислот (например, на 4-гидроксипролин, 3-метилгистидин, орнитин, гомосерин, 5-гидроксилизин). Аминокислотные мутации можно создавать с помощью генетических или химических методов, хорошо известных в данной области. Генетические методы могут включать сайт-направленный мутагенез, ПЦР, синтез генов и т.п. Подразумевается, что можно применять также методы изменения боковой группы аминокислоты, отличные от методов генетической инженерии, такие как химическая модификация. Для обозначения одной и той же аминокислотной мутации можно использовать различные обозначения. Например, замену пролина в положении 329 Рс-домена на глицин можно обозначать как 3290, 0329, 0329, Р329О или Рго329О1у.

В контексте настоящего описания понятие "полипептид" относится к молекуле, состоящей из мономеров (аминокислот), линейно связанных амидными связями (которые обозначают также как пептидные связи). Понятие "полипептид" относится к любой цепи, состоящей из двух или большего количества аминокислот, и не подразумевает, что продукт имеет конкретную длину. Так, пептиды, дипептиды, трипептиды, олигопептиды, "белок", "аминокислотная цепь" или любое иное принятое понятие, относящееся к цепи, состоящей из двух или большего количества аминокислот, все подпадают под определение "полипептид", и понятие "полипептид" можно применять вместо или взаимозаменяемо с любым из указанных понятий. Подразумевается также, что понятие "полипептид" относится в продуктам, которые несут пост-экспрессионные модификации полипептида, включая (но не ограничиваясь только ими) гликозилирование, ацетилирование, фосфорилирование, амидирование, дериватизацию с использованием известных защитных/блокирующих групп, протеолитическое расщепление или модификацию с помощью не встречающихся в естественных условиях аминокислот. Полипептид можно получать из встречающегося в естественных условиях биологического источника или можно получать с помощью технологии рекомбинантной ДНК, и его не обязательно транслировать с созданной нуклеотидной последова- 16 030147

тельности. Его можно создавать любым путем, включая химический синтез. Полипептид, предлагаемый в изобретении, может состоять примерно из 3 или более, 5 или более, 10 или более, 20 или более, 25 или более, 50 или более, 75 или более, 100 или более, 200 или более, 500 или более, 1000 или более или 2000 или более аминокислот. Полипептиды могут иметь различную трехмерную структуру, хотя они необязательно должны иметь указанную структуру. Полипептиды с определенной трехмерной структурой обозначают как полипептиды, имеющие укладку, а полипептиды, которые не обладают определенной трехмерной структурой, но которые могут легче адаптироваться к большому количеству различных конформаций, обозначают как полипептиды, не имеющие укладку.

Под "выделенным" полипептидом или его вариантом, или производным подразумевают полипептид, который не находится в его естественном окружении. При этом не требуется наличия какого-либо конкретного уровня очистки. Например, выделенный полипептид можно удалять из его нативного или естественного окружения. Полученные путем рекомбинации полипептиды и белки, экспрессируемые в клетках-хозяевах, рассматриваются как выделенные для целей настоящего изобретения, если они представляют собой нативные или рекомбинантные полипептиды, которые отделены, фракционированы или частично или полностью очищены с помощью любого приемлемого метода.

"Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности" относительно полипептидной референс-последовательности определяют как процент аминокислотных остатков в последовательностикандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в полипептидной референспоследовательности, после выравнивания последовательностей и интродукции при необходимости брешей для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и при этом какиелибо консервативные замены не учитываются при оценке идентичности последовательностей. Сравнительный анализ для определения процента идентичности аминокислотных последовательностей можно осуществлять различными путями, которые находятся в компетенции специалиста в данной области, например, с использованием публично доступных компьютерных программ, таких как программа ВЕА8Т, ВЬА8Т-2, .Ά1.ΙΟΝ или Медайдп (ΏΝΑ8ΤΑΚ). Специалисты в данной области могут определять соответствующие параметры для выравнивания последовательностей, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Однако для целей настоящего изобретения величину % идентичности аминокислотных последовательностей получают с использованием предназначенной для сравнения последовательностей компьютерной программы ΑΕΙΟΝ-2. Предназначенная для сравнения последовательностей компьютерная программа ΑΕΙΟΝ-2 разработана фирмой ОепеШесН, 1пс., и исходный код помещен на хранение вместе с документацией для пользователя в и.8. Сорупдй! О£бсе, А'азНтШоп Б.С., 20559, где он зарегистрирован под регистрационным номером и.8. Сорупдй! Кед1з1гайоп № ΤΧϋ510087. Программа ΑΕΙΟΝ-2 представляет собой публично доступную программу фирмы ОепеШесН, 1пс., Южный Сан-Франциско, шт. Калифорния, или ее можно компилировать из исходного кода. Программу ΑΕΙΟΝ-2 можно компилировать для применения в операционной системе ϋΝΙΧ, включая цифровую версию ϋΝΙΧ ν4.0Ώ. В программе ΑΕΙΟΝ-2 все параметры для сравнения последовательностей являются заданными и не должны изменяться. В ситуациях, когда ΑΕΙΟΝ-2 применяют для сравнения аминокислотных последовательностей, % идентичности аминокислотных последовательностей данной аминокислотной последовательности А относительно или по сравнению с данной аминокислотной последовательностью Б (которую другими словами можно обозначать как данная аминокислотная последовательность А, которая имеет или отличается определенным % идентичности аминокислотной последовательности относительно или по сравнению с данной аминокислотной последовательностью Б), рассчитывают следующим образом:

100 х частное Χ/Υ,

где Χ обозначает количество аминокислотных остатков, оцененных программой сравнительного анализа последовательностей ΑΕΙΟΝ-2 как идентичные совпадения при сравнительном анализе последовательностей А и Б с помощью указанной программы;

Υ обозначает общее количество аминокислотных остатков в Б.

Должно быть очевидно, что когда длина аминокислотной последовательности А не равна длине аминокислотной последовательности Б, то % идентичности аминокислотной последовательности А относительно аминокислотной последовательности Б не должен быть равен % идентичности аминокислотной последовательности Б относительно аминокислотной последовательности А. Если специально не указано иное, то в контексте настоящего описания все величины % идентичности аминокислотных последовательностей получают согласно процедуре, описанной в последнем из предшествующих параграфов, с помощью компьютерной программы ΑΕΙΟΝ-2.

Понятие "полинуклеотид" относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты или конструкции, например, матричной РНК (мРНК), РНК вирусного происхождения или плазмидной ДНК (пДНК). Полинуклеотид может содержать обычную фосфодиэфирную связь или нетрадиционную связь (например, амидную связь, такую, которая присутствует в пептидных нуклеиновых кислотах (ПНК)). Понятие "молекула нуклеиновой кислоты" относится к любому одному или нескольким сегментам нуклеиновой кислоты, например фрагментам ДНК или РНК, присутствующим в полинуклеотиде.

Под "выделенной" молекулой нуклеиновой кислоты или полинуклеотидом подразумевается моле- 17 030147

кула нуклеиновой кислоты, т.е. ДНК или РНК, которая отделена от ее нативного окружения. Например, рекомбинантный полинуклеотид, кодирующий входящий в вектор полипептид, рассматривается как выделенный для целей настоящего изобретения. Другими примерами выделенного полинуклеотида являются рекомбинантные полинуклеотиды, присутствующие в гетерологичных клетках-хозяевах, или очищенные (частично или полностью) полинуклеотиды, находящиеся в растворе. Выделенный полинуклеотид включает молекулу полинуклеотида, входящую в клетки, которые в норме содержат молекулу полинуклеотида, но молекула полинуклеотида присутствует вне хромосомы или имеет локализацию в хромосоме, отличную от ее локализации в хромосоме в естественных условиях.

Выделенные молекулы РНК включают полученные ίη νΐνο или ίη νίίτο РНК-транскрипты, предлагаемые в настоящем изобретении, а также формы с позитивной и негативной цепью и двухцепочечные формы. Выделенные полинуклеотиды или нуклеиновые кислоты, предлагаемые в настоящем изобретении, включают также указанные молекулы, полученные с помощью синтеза. Кроме того, полинуклеотид или нуклеиновая кислота могут представлять собой или могут включать регуляторный элемент, такой как промотор, сайт связывания рибосом или терминатор транскрипции.

Под нуклеиновой кислотой или полинуклеотидом, имеющей/имеющим нуклеотидную последовательность, которая, например, на 95% "идентична" нуклеотидной референс-последовательности, предлагаемой в настоящем изобретении, подразумевается, что нуклеотидная последовательность полинуклеотида идентична референс-последовательности за исключением того, что полинуклеотидная последовательность может включать вплоть до 5 точковых мутаций на каждые 100 нуклеотидов нуклеотидной референс-последовательности. Другими словами, для получения полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, которая идентична по меньшей мере на 95% нуклеотидной референспоследовательности, вплоть до 5% нуклеотидов в референс-последовательности можно изымать путем делеции или заменять на другой нуклеотид, или вплоть до 5% нуклеотидов от общего количества нуклеотидов в референс-последовательности можно встраивать в референс-последовательность. Эти изменения референс-последовательности могут иметь место в положениях на 5'- или З'-конце нуклеотидной референс-последовательности или в ином положении между этими концевыми положениями, и либо их встраивают индивидуально между остатками в референс-последовательности, либо их встраивают в референс-последовательность в виде одной или нескольких смежных групп. На практике решение вопроса о том, идентична ли конкретная полинуклеотидная последовательность по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% нуклеотидной последовательности, предлагаемой в настоящем изобретении, можно решать, как правило, с использованием известных компьютерных программ, например, указанных выше для полипептидов (например, ΑΒΙΟΝ-2).

Понятие "кассета экспрессии" относится к полинуклеотиду, полученному с помощью рекомбинации или синтеза, который содержит серии специфических нуклеотидных элементов, которые обеспечивают транскрипцию конкретной нуклеиновой кислоты в клетке-мишени. Рекомбинантную кассету экспрессии можно встраивать в плазмиду, хромосому, митохондриальную ДНК, пластидную ДНК, вирус или фрагмент нуклеиновой кислоты. Как правило, рекомбинантная кассета экспрессии, представляющая собой часть экспрессионного вектора, включает среди прочих последовательностей подлежащую транскрипции нуклеотидную последовательность и промотор. В некоторых вариантах осуществления изобретения кассета экспрессии, предлагаемая в изобретении, содержит полинуклеотидные последовательности, которые кодируют биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, или их фрагменты.

Понятие "вектор" или "экспрессионный вектор" является синонимом понятия "экспрессионная конструкция" и относится к молекуле ДНК, которую применяют для интродукции и обеспечения экспрессии конкретного гена, с которой он функционально связан в клетке-мишени. Понятие включает вектор, представляющий собой самореплицирующуюся структуру нуклеиновой кислоты, а также вектор, встроенный в геном клетки-хозяина, в которую он интродуцирован. Экспрессионный вектор, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит кассету экспрессии. Экспрессионные векторы позволяют осуществлять транскрипцию стабильной мРНК в больших количествах. Когда экспрессионный вектор находится внутри клетки-мишени, то молекула рибонуклеиновой кислоты или белок, который кодируется геном, продуцируется в результате клеточного механизма транскрипции и/или трансляции. В одном из вариантов осуществления изобретения экспрессионный вектор, предлагаемый в изобретении, содержит кассету экспрессии, которая включает полинуклеотидные последовательности, которые кодируют биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, или их фрагменты.

В контексте настоящего описания понятия "клетка-хозяин", "клеточная линия-хозяин" и "клеточная культура-хозяин" используются взаимозаменяемо, и они относятся к клеткам, в которые интродуцирована экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство указанных клеток. К клеткам-хозяевам относятся "трансформанты" и "трансформированные клетки", которые включают первичные трансформированные клетки, а также потомство, выведенное из них, независимо от количества пересевов. Потомство может не быть строго идентичным родительской клетке по составу нуклеиновых кислот, а может нести мутации. Под данное понятие подпадает мутантное потомство, которое обладает такой же функцией или биологической активностью, что и отобранная путем скрининга или селекции исходная трансформированная

- 18 030147

клетка. Клетка-хозяин представляет собой любой тип клеточной системы, которую можно применять для создания биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в настоящем изобретении. Клетки-хозяева включают культивируемые клетки, например, культивируемые клетки млекопитающих, такие как (но не ограничиваясь только ими) СНО-клетки, ВНК-клетки, Νδΰ-клетки, 8Р2/0-клетки, клетки миеломы линии ΥΟ, клетки мышиной миеломы линии Р3Х63, РЕР-клетки, РЕР.Сб-клетки или клетки гибридомы, клетки дрожжей, клетки насекомых и клетки растений, но также клетки, находящиеся в трансгенном животном, трансгенном растении или в культивируемой растительной или животной ткани.

"Активирующий Рс-рецептор" представляет собой Рс-рецептор, который после взаимодействия с Рс-доменом антитела осуществляет процесс передачи сигналов, которые стимулируют несущую рецептор клетку осуществлять эффекторные функции. Человеческие активирующие Рс-рецепторы включают РсуРШа (СБ1ба), РсуР1 (СО64), РсуРПа (СП32) и РсаР1 (СО89).

Антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность (АЭСС) представляет собой иммунный механизм, приводящий к лизису сенсибилизированных антителом клеток-мишеней иммунными эффекторными клетками. Клетки-мишени представляют собой клетки, с которыми антитела или их производные, содержащие Рс-область, специфически связываются, как правило, через область белка, которая является Ν-концевой относительно Рс-области. В контексте настоящего описания понятие "пониженная АЭСС" относится или к снижению количества лизированных в данный момент времени клеток-мишеней при данной концентрации антитела в среде, окружающей клетки-мишени, путем указанного выше механизма АЭСС, и/или к повышению концентрации антитела в среде, окружающей клетки-мишени, необходимой для достижения лизиса данного количества клеток-мишеней в данное время с помощью механизма АЭСС. Понижение АЭСС-активности определяют относительно АЭСС, опосредуемой таким же антителом, которое получено с помощью такого же типа клеток-хозяев с использованием одинаковых стандартных методов получения, очистки, приготовления композиций и хранения (которые известны специалистам в данной области), но которое не подвергали инженерии. Например, понижение АЭСС, опосредуемой антителом, которое содержит в его Рс-домене аминокислотную замену, которая снижает АЭСС, определяют относительно АЭСС, опосредуемой таким же антителом без указанной аминокислотной замены в Рс-домене. Приемлемые анализы оценки АЭСС хорошо известны в данной области (см., например, публикацию РСТ АО 2006/082515 или заявку на патент РСТ/ЕР2012/055393).

Понятие "эффективное количество" агента относится к количеству, необходимому для обеспечения физиологического изменения в клетке или ткани, в которую его вводят.

Понятие "терапевтически эффективное количество" агента, например фармацевтической композиции, относится к количеству, эффективному при применении в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения требуемого терапевтического или профилактического результата. Терапевтически эффективное количество агента, например, элиминирует, снижает, замедляет, минимизирует или предупреждает нежелательные явления заболевания.

"Индивидуум" или "субъект" представляет собой млекопитающее. Млекопитающие представляют собой (но не ограничиваясь только ими) одомашненных животных (например, коровы, овцы, кошки, собаки и лошади), приматов (например, люди и приматы, кроме человека, такие как мартышки), кроликов и грызунов (например, мыши и крысы). Предпочтительно индивидуум или субъект представляет собой человека.

Понятие "фармацевтическая композиция" относится к препарату, который находится в такой форме, что он обеспечивает биологическую активность входящего в его состав действующего вещества, которое должно обладать эффективностью, и который не содержит дополнительных компонентов, обладающих неприемлемой токсичностью для индивидуума, которому следует вводить композицию.

"Фармацевтически приемлемый носитель" относится к ингредиенту в фармацевтической композиции, отличному от действующего вещества, который является нетоксичным для индивидуума. Фармацевтически приемлемые носители включают (но не ограничиваясь только ими) буфер, эксципиент, стабилизатор или консервант.

В контексте настоящего описания понятие "лечение" (и его грамматические вариации, такие как "лечить" или "процесс лечения") относится к клиническому вмешательству с целью изменения естественного течения болезни у индивидуума, подлежащего лечению, и его можно осуществлять для профилактики или в процессе развития клинической патологии. Требуемыми действиями лечения являются (но не ограничиваясь только ими) предупреждение возникновения или рецидива болезни, облегчение симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий болезни, предупреждение метастазов, снижение скорости развития болезни, облегчение или временное ослабление болезненного состояния и ремиссия или улучшение прогноза. В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, применяют для задержки развития болезни или замедления прогрессирования болезни.

Понятие "листовка-вкладыш в упаковку" в контексте настоящего описания относится к инструкциям, которые обычно помещают в поступающие в продажу упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозе, пути введения, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или мерах предосторожности при применении указанных терапевтических продуктов.

- 19 030147

Подробное описание вариантов осуществления изобретения

Первым объектом изобретения является активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, содержащая первый и второй антигенсвязывающие фрагменты, один из которых представляет собой молекулу РаЬ, обладающую способностью специфически связываться с активирующим Т-клетки антигеном, а другой представляет собой молекулу РаЬ, обладающую способностью специфически связываться с антигеном клетки-мишени, и Рс-домен, состоящий из первой и второй субъединиц, которые обладают способностью к стабильной ассоциации; в которой первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой:

(а) одноцепочечную молекулу РаЬ, в которой легкая цепь РаЬ и тяжелая цепь РаЬ соединены с помощью пептидного линкера; или

(б) полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ, в которой обменены либо вариабельные, либо константные области легкой цепи РаЬ и тяжелой цепи РаЬ.

Форматы активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул

Компоненты активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы можно сливать друг с другом в различных конфигурациях. Примеры конфигураций представлены на фиг. 1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент сливают на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена.

В конкретном указанном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент сливают на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента. В конкретном указанном объекте изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула практически состоит из первого и второго антигенсвязывающих фрагментов, Рс-домена, состоящего из первой и второй субъединиц, и необязательно одного или нескольких пептидных линкеров, в которой первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента, а второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой одноцепочечную молекулу РаЬ. Альтернативно этому, в конкретном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ. Необязательно, если первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ, то легкая цепь РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента и легкая цепь РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента могут быть дополнительно слиты друг с другом.

В альтернативном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент сливают на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена. В конкретном указанном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула практически состоит из первого и второго антигенсвязывающих фрагментов, Рс-домена, состоящего из первой и второй субъединиц, и необязательно одного или нескольких пептидных линкеров, где первый и второй антигенсвязывающие фрагменты, каждый, слиты на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом одной из субъединиц Рс-домена. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой одноцепочечную молекулу РаЬ. В альтернативном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ.

В другом указанном варианте осуществления изобретения второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце легкой цепи РаЬ с Ν-концом легкой цепи РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента. В конкретном указанном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула практически состоит из первого и второго антигенсвязывающих фрагментов, Рс-домена, состоящего из первой и второй субъединиц, и необязательно одного или нескольких пептидных линкеров, в которой первый антигенсвязывающий фрагмент слит на Ν-конце легкой цепи РаЬ с С-концом легкой цепи РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента, а второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ.

В других вариантах осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена.

В указанном конкретном варианте осуществления изобретения второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента. В конкретном указанном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула практически состоит из первого и второго антигенсвязывающих фрагментов, Рс-домена, состоящего из первой и второй субъединиц, и необязательно одного или нескольких пептидных линкеров, в которой второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента, и первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъеди- 20 030147

ницы Рс-домена. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ. Необязательно, легкая цепь РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента и легкая цепь РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента могут быть дополнительно слиты друг с другом.

В конкретных указанных вариантах осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент обладает способностью специфически связываться с активирующим Т-клетки антигеном. В других вариантах осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент обладает способностью специфически связываться с антигеном клетки-мишени.

Антигенсвязывающие фрагменты могут быть слиты с Рс-доменом или друг с другом непосредственно или через пептидный линкер, содержащий одну или несколько аминокислот, как правило, примерно 2-20 аминокислот. Пептидные линкеры известны в данной области и представлены в настоящем описании. Приемлемые неиммуногенные пептидные линкеры включают, например, пептидные линкеры (О₄8)_п, (ЗО₄)_п, (О₄3)_п или О₄(ЗО₄)_п, "п" обозначает обычно число между 1 и 10, как правило, между 2 и 4. Наиболее приемлемым пептидным линкером для слияния легких цепей РаЬ первого и второго антигенсвязывающих фрагментов друг с другом является (О₄3)₂. Примером пептидного линкера, пригодного для соединения тяжелых цепей РаЬ первого и второго антигенсвязывающих фрагментов, является ЕРК8С(О)-(О₄8)₂ (5>ЕО ГО N0: 150 и 151). Кроме того, линкеры могут содержать шарнирную область иммуноглобулина (или ее часть). В частности, когда антигенсвязывающий фрагмент слит с Ν-концом субъединицы Рс-домена, то он может быть слит через шарнирную область иммуноглобулина или ее часть с использованием дополнительного пептидного линкера или без него.

Активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, один антигенсвязывающий фрагмент которой обладает способностью специфически связываться с антигеном клеткимишени (например, как продемонстрировано на фиг. 1А, 1Б, 1Г, 1Д, 1З, 1И, 1Л или 1Н), можно применять, в частности, в случаях, при которых интернализация антигена клетки-мишени является ожидаемой после связывания обладающего высокой аффинностью антигенсвязывающего фрагмента. В таких случаях присутствие более одного антигенсвязывающего фрагмента, специфического в отношении антигена клетки-мишени, может повышать интернализацию антигена клетки-мишени, снижая, тем самым, его доступность.

Однако во многих других случаях целесообразным является получать активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, которая содержит два или большее количество антигенсвязывающих фрагментов, специфических в отношении антигена клетки-мишени (например, как продемонстрировано на фиг. 1В, 1Е, 1Ж, 1К или 1М), например, для оптимизации направленного переноса к сайту-мишени или для обеспечения перекрестного сшивания антигенов клетки-мишени.

Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, предлагаемая в изобретении, дополнительно содержит третий антигенсвязывающий фрагмент, который представляет собой молекулу РаЬ, обладающую способность специфически связываться с антигеном клетки-мишени. В одном из вариантов осуществления изобретения третий антигенсвязывающий фрагмент обладает способностью специфически связываться с тем же самым антигеном клетки-мишени, что и первый, и второй антигенсвязывающий фрагмент. В конкретном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент обладает способностью специфически связываться с активирующим Т-клетки антигеном, а второй и третий антигенсвязывающие фрагменты обладают способностью специфически связываться с антигеном клетки-мишени.

В одном из вариантов осуществления изобретения третий антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена. В конкретном варианте осуществления изобретения второй и третий антигенсвязывающие фрагменты, каждый, слиты на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом одной из субъединиц Рс-домена, а первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой одноцепочечную молекулу РаЬ. В конкретном указанном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ. Необязательно, если первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ, то легкая цепь РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента и легкая цепь РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента могут быть дополнительно слиты друг с другом.

Второй и третий антигенсвязывающие фрагменты могут быть слиты с Рс-доменом непосредственно или через пептидный линкер. В конкретном варианте осуществления изобретения второй и третий антигенсвязывающие фрагменты, каждый, слиты с Рс-доменом через шарнирную область иммуноглобулина. В конкретном варианте осуществления изобретения шарнирная область иммуноглобулина представляет собой шарнирную область человеческого 1дС]. В одном из вариантов осуществления изобретения второй и третий антигенсвязывающие фрагменты и Рс-домен представляют собой часть молекулы иммуноглобулина. В конкретном варианте осуществления изобретения молекула иммуноглобулина представляет собой иммуноглобулин класса Ι§0. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения имму- 21 030147

ноглобулин представляет собой иммуноглобулин подкласса Ι§Οι. В другом варианте осуществления изобретения иммуноглобулин представляет собой иммуноглобулин подкласса ΙβΟ₄. В другом конкретном варианте осуществления изобретения иммуноглобулин представляет собой человеческий иммуноглобулин. В других вариантах осуществления изобретения иммуноглобулин представляет собой химерный иммуноглобулин или гуманизированный иммуноглобулин. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула практически состоит из молекулы иммуноглобулина, обладающей способностью специфически связываться с антигеном клеткимишени, и антигенсвязывающего фрагмента, обладающего способностью специфически связываться с активирующим Т-клетки антигеном, в которой антигенсвязывающий фрагмент представляет собой одноцепочечную молекулу РаЪ или полученную в результате кроссинговера молекулу РаЪ, в частности полученную в результате кроссинговера молекулу РаЪ, слитую с Ν-концом одной из тяжелых цепей иммуноглобулина, необязательно через пептидный линкер.

В альтернативном варианте осуществления изобретения первый и второй антигенсвязывающие фрагменты, каждый, слиты на С-конце тяжелой цепи РаЪ с Ν-концом одной из субъединиц Рс-домена, а второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЪ с Ν-концом тяжелой цепи РаЪ первого антигенсвязывающего фрагмента. В конкретном указанном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула практически состоит из первого, второго и третьего антигенсвязывающего фрагмента, Рс-домена, состоящего из первой и второй субъединиц, и необязательно одного или нескольких пептидных линкеров, в которой второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЪ с Ν-концом тяжелой цепи РаЪ первого антигенсвязывающего фрагмента, и первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЪ с Ν-концом первой субъединицы Рс-домена, и в которой третий антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЪ с Ν-концом второй субъединицы Рс-домена. В конкретном указанном варианте осуществления изобретения первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЪ. Необязательно, легкая цепь РаЪ первого антигенсвязывающего фрагмента и легкая цепь РаЪ второго антигенсвязывающего фрагмента могут быть дополнительно слиты друг с другом.

В некоторых активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекулах, предлагаемых в изобретении, легкая цепь РаЪ первого антигенсвязывающего фрагмента и легкая цепь РаЪ второго антигенсвязывающего фрагмента слиты друг с другом необязательно через пептидный линкер. В зависимости от конфигурации первого и второго антигенсвязывающих фрагментов легкая цепь РаЪ первого антигенсвязывающего фрагмента может быть слита на ее С-конце с Ν-концом легкой цепи РаЪ второго антигенсвязывающего фрагмента или легкая цепь РаЪ второго антигенсвязывающего фрагмента может быть слита на ее С-конце с Ν-концом легкой цепи РаЪ первого антигенсвязывающего фрагмента. Слияние легких цепей РаЪ первого и второго антигенсвязывающих фрагментов дополнительно уменьшает ошибочное спаривание несоответствующих тяжелых и легких цепей РаЪ, а также снижает количество плазмид, необходимых для экспрессии некоторых активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в изобретении.

В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептид, в котором легкая цепь первого РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с пептидным линкером, который, в свою очередь, объединен карбоксиконцевой пептидной связью с тяжелой цепью первого РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УЪ-СЬ-линкер-УН-СН1-СН2-СН2(-СН4)), и полипептид, в котором тяжелая цепь второго РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)). В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула дополнительно содержит полипептид легкой цепи второго РаЪ (УЬ-СЬ). В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептиды ковалентно связаны, например, с помощью дисульфидного мостика.

В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептид, в котором легкая цепь РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с пептидным линкером, который, в свою очередь, объединен карбоксиконцевой пептидной связью с тяжелой цепью первого РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с тяжелой цепью второго РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УЬ-СЬ-линкер-УН-СН1-УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)). В одном из указанных вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит также полипептид легкой цепи второго РаЪ (УЬ-СЬ). Согласно указанным вариантам осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула может содержать также (Ι) полипептид субъединицы Рс-домена (СН2-СН3(СН4)) или (ΙΙ) полипептид, в котором тяжелая цепь третьего РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)), и полипептид легкой цепи третьего РаЪ

(УЬ-СЬ). В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептиды ковалентно связаны, напри- 22 030147

мер, с помощью дисульфидного мостика.

В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептид, в котором вариабельная область легкой цепи первого РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи первого РаЬ (т.е. в результате кроссинговера получена тяжелая цепь РаЬ, в которой вариабельная область тяжелой цепи заменена вариабельной областью легкой цепи), которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УЬ-СН1-СН2-СН2(-СН4)), и полипептид, в котором тяжелая цепь второго РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью субъединицей Рс-домена (УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)). В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит также полипептид, в котором вариабельная область тяжелой цепи РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи РаЬ (УН-СЬ), и полипептид легкой цепи РаЬ (УЬ-СЬ). В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептиды ковалентно связаны, например, с помощью дисульфидного мостика.

В альтернативных вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептид, в котором вариабельная область тяжелой цепи первого РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи первого РаЬ (т.е. в результате кроссинговера получена тяжелая цепь РаЬ, в которой константная область тяжелой цепи заменена константной областью легкой цепи), которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УН-СЬ-СН2-СН2(-СН4)), и полипептид, в котором тяжелая цепь второго РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рсдомена (УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)). В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит также полипептид, в котором вариабельная область легкой цепи РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи РаЬ (УЬ-СН1), полипептид легкой цепи РаЬ (УЬ-СЬ). В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептиды ковалентно связаны, например, с помощью дисульфидного мостика.

В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептид, в котором вариабельная область легкой цепи первого РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи первого РаЬ (т.е. в результате кроссинговера получена тяжелая цепь РаЬ, в которой вариабельная область тяжелой цепи заменена вариабельной областью легкой цепи), которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с тяжелой цепью второго РаЬ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УЬ-СН1-УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)). В других вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептид, в котором вариабельная область тяжелой цепи первого РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи первого РаЬ (т.е. в результате кроссинговера получена тяжелая цепь РаЬ, в которой константная область тяжелой цепи заменена константной областью легкой цепи), которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с тяжелой цепью второго РаЬ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УН-СЬ-УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)). В следующих вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептид, в котором тяжелая цепь второго РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с вариабельной областью легкой цепи первого РаЬ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи первого РаЬ (т.е. в результате кроссинговера получена тяжелая цепь РаЬ, в которой вариабельная область тяжелой цепи заменена вариабельной областью легкой цепи), которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УН-СН1-УЬ-СН1-СН2-СН3(-СН4)). В других вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептид, в котором тяжелая цепь второго РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с вариабельной областью тяжелой цепи первого РаЬ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи первого РаЬ (т.е. в результате кроссинговера получена тяжелая цепь РаЬ, в которой константная область тяжелой цепи заменена константной областью легкой цепи), которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УН-СН1 -УН-СЬ-СН2 -СН3 (-СН4)).

В некоторых из указанных вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит также полипептид полученной в результате кроссинговера легкой цепи РаЬ, в котором вариабельная область тяжелой цепи РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи РаЬ (УН-СЬ), и полипептид легкой цепи РаЬ (УЬ-СЬ). В других указанных вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит также полипептид полученной в результате кроссинговера легкой цепи РаЬ, в котором вариабельная область легкой цепи РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи РаЬ (УЬ-СН1), и полипептид легкой цепи

- 23 030147

РаЬ (УЬ-СЬ). В следующих указанных вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит также полипептид, в котором вариабельная область легкой цепи РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи РаЬ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с полипептидом легкой цепи РаЬ (УЬ-СН1-УЬ-СЬ), полипептид, в котором вариабельная область тяжелой цепи РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи РаЬ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с полипептидом легкой цепи РаЬ (УН-СЬ-УЬСЬ), полипептид, в котором полипептид легкой цепи РаЬ объединен карбоксиконцевой пептидной связью с вариабельной областью легкой цепи РаЬ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи РаЬ (УЬ-СЬ-УЬ-СН1), или полипептид, в котором полипептид легкой цепи РаЬ объединен карбоксиконцевой пептидной связью с вариабельной областью тяжелой цепи РаЬ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи РаЬ (УЬ-СЬ-УН-СЬ).

Согласно указанным вариантам осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула может содержать также (I) полипептид субъединицы Рс-домена (СН2-СН3(-СН4)) или (II) полипептид, в котором тяжелая цепь третьего РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)), и полипептид легкой цепи третьего РаЬ (УЬ-СЬ). В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептиды ковалентно связаны, например, с помощью дисульфидного мостика.

В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептид, в котором легкая цепь второго РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с вариабельной областью легкой цепи первого РаЬ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи первого РаЬ (т.е. в результате кроссинговера получена легкая цепь РаЬ, в которой константная область легкой цепи заменена константной областью тяжелой цепи) (УЬ-СЬ-УЬ-СН1), полипептид, в котором тяжелая цепь второго РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)), и полипептид, в котором вариабельная область тяжелой цепи первого РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи первого РаЬ (УН-СЬ). В другом варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептид, в котором легкая цепь второго РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с вариабельной областью тяжелой цепи первого РаЬ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи первого РаЬ (т.е. в результате кроссинговера получена легкая цепь РаЬ, в которой вариабельная область легкой цепи заменена вариабельной областью тяжелой цепи) (УЬ-СЬ-УН-СЬ), полипептид, в котором тяжелая цепь второго РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)), и полипептид, в котором вариабельная область легкой цепи первого РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи первого РаЬ (УЬ-СН1). Согласно указанным вариантам осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула может содержать также (I) полипептид субъединицы Рс-домена (СН2-СН3(-СН4)) или (II) полипептид, в котором тяжелая цепь третьего РаЬ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена (УН-СН1-СН2-СН3(-СН4)), и полипептид легкой цепи третьего РаЬ (УЬ-СЬ). В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептиды ковалентно связаны, например, с помощью дисульфидного мостика.

Согласно любым указанным выше вариантам осуществления изобретения компоненты активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы (например, антигенсвязывающий фрагмент, Рс-домен) могут быть слиты непосредственно или через различные линкеры, в частности, пептидные линкеры, содержащие одну или несколько аминокислот, как правило, примерно 2-20 аминокислот, которые представлены в настоящем описании или известны в данной области. Приемлемые неиммуногенные пептидные линкеры включают, например, пептидные линкеры (О₄З)_П, (ЗО₄)_П, (О₄З)_П или О₄(ЗО₄)_П, в которых η обычно обозначает число от 1 до 10, как правило, от 2 до 4.

Рс-домен.

Рс-домен активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы состоит из пары полипептидных цепей, содержащих домены тяжелой цепи молекулы иммуноглобулина. Например, Рс-домен молекулы иммуноглобулина О (!дС) представляет собой димер, каждая из субъединиц которого содержит константные домены СН2 и СН3 тяжелой цепи ЕО. Две субъединицы Рс-домена обладают способностью к стабильной ассоциации друг с другом. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, предлагаемая в изобретении, содержит не более одного Рс-домена.

В одном из вариантов осуществления Рс-домен активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы представляет собой Рс-домен ЕО. В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен представляет собой Рс-домен ЕО]. В другом варианте осуществления изобретения Рс-домен представляет собой Рс-домен ^Οψ В более конкретном варианте осуществления изобретения

- 24 030147

Рс-домен представляет собой Рс-домен 1дО₄, который содержит аминокислотную замену в положении 8228 (нумерация по Кэботу), в частности аминокислотную замену 8228Р. Эта аминокислотная замена снижает обмен ш νί\Ό в РаЬ-плече антител в виде 1дО₄ (см. 8ГиЬепгаисЬ с1 а1., Эгид МеГаЬоЩт апй Э18ро81Йоп, 38, 2010, р. 84-91). В другом конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен является человеческим. Приведенная в качестве примера последовательность Рс-области человеческого 1дО, представлена в 8ЕО ГО N0: 149.

Модификации Рс-домена, усиливающие гетеродимеризацию.

Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, содержат различные антигенсвязывающие фрагменты, слитые с одной или с другой из двух субъединиц Рс-домена, при этом две субъединицы Рс-домена, как правило, содержатся в двух неидентичных полипептидных цепях. Рекомбинантная совместная экспрессия этих полипептидов и последующая димеризация приводит к нескольким возможным комбинациям двух полипептидов. Для повышения выхода и чистоты активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул при их получении методами рекомбинации целесообразно интродуцировать в Рс-домен активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы модификацию, которая усиливает ассоциацию требуемых полипептидов.

Таким образом, в конкретных вариантах осуществления изобретения Рс-домен активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, содержит модификацию, которая усиливает ассоциацию первой и второй субъединиц Рс-домена. Сайт наиболее сильного белок-белкового взаимодействия двух полипептидных цепей Рс-домена человеческого 1дО находится в СН3-домене Рс-домена. Таким образом, в одном из вариантов осуществления изобретения указанная модификация находится в СН3-домене Рс-домена.

В конкретном варианте осуществления изобретения указанная модификация представляет собой так называемую модификацию типа "кпоЬ-ш-ко1е" (типа "выступ-впадина"), которая включает модификацию, приводящую к образованию "выступа" в одной из двух субъединиц Рс-домена и к образованию "впадины" в другой одной из двух субъединиц Рс-домена.

Технология "кпоЬ-т1о-1ю1е" описана, например, в И8 № 5731168; И8 № 7695936; у К|йддау е1 а1., РгоГ Епд. 9, 1996, р. 617-621 и Сайег, ί. 1ттипо1. МеГк. 248, 2001, р. 7-15. В целом, метод включает интродукцию выпуклости ("выступ") на поверхности раздела первого полипептида и соответствующей полости ("впадина") на поверхности раздела второго полипептида, в результате выпуклость может помещаться в полость, усиливая, тем самым, образование гетеродимера и препятствуя образованию гомодимера. Выпуклости конструируют путем замены аминокислот с небольшими боковыми цепями на поверхности раздела первого полипептида на аминокислоты с более крупными боковыми цепями (например, на тирозин или триптофан). Компенсирующие полости идентичного или сходного с выпуклостями размера конструируют на поверхности раздела второго полипептида путем замены аминокислот с крупными боковыми цепями на аминокислоты с менее крупными боковыми цепями (например, аланин или треонин).

Таким образом, в конкретном варианте осуществления изобретения в СН3-домене первой субъединицы Рс-домена активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы аминокислотный остаток заменен аминокислотным остатком, который имеет больший объем боковой цепи, что приводит к образованию выпуклости в СН3-домене первой субъединицы, которая может помещаться в полость в СН3-домене второй субъединицы, и в СН3-домене второй субъединицы Рс-домена аминокислотный остаток заменен аминокислотным остатком, который имеет меньший объем боковой цепи, что приводит к образованию полости в СН3-домене второй субъединицы, в которую может помещаться выпуклость в СН3-домене первой субъединицы.

Выпуклость и полость можно создавать путем изменения нуклеиновых кислот, кодирующих полипептиды, например, с помощью сайт-направленного мутагенеза или путем пептидного синтеза.

В конкретном варианте осуществления изобретения в СН3-домене первой субъединицы Рс-домена остаток треонина в положении 366 заменен остатком триптофана (Т366\У), и в СН3-домене второй субъединицы Рс-домена остаток тирозина в положении 407 заменен остатком валина (У407У). В одном из вариантов осуществления изобретения во второй субъединице Рс-домена дополнительно остаток треонина в положении 366 заменен остатком серина (Т3668) и остаток лейцина в положении 368 заменен остатком аланина (Ь368А).

В следующем варианте осуществления изобретения в первой субъединице Рс-домена дополнительно остаток серина в положении 354 заменен остатком цистеина (8354С) и во второй субъединице Рс-домена дополнительно остаток тирозина в положении 349 заменен остатком цистеина (У349С). Интродукция этих двух остатков цистеина приводит к образованию дисульфидного мостика между двумя субъединицами Рс-домена, дополнительно стабилизирующего димер (Сайег, ί. 1ттипо1. Ме1коЙ8, 248, 2001, р. 7-15).

В конкретном варианте осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который обладает способностью связываться с активирующим Т-клетки антигеном, сливают (необязательно через антигенсвязывающий фрагмент, который обладает способностью связываться с антигеном клетки-мишени)

- 25 030147

с первой субъединицей Рс-домена (которая содержит модификацию, приводящую к образованию "выступа"). Не вдаваясь в какую-либо теорию, слияние антигенсвязывающего фрагмента, который обладает способностью связываться с активирующим Т-клетки антигеном, с содержащей "выступ" субъединицей Рс-домена должно (дополнительно) минимизировать образование антигенсвязывающих молекул, содержащих два антигенсвязывающих фрагмента, которые обладают способностью связываться с активирующим Т-клетки антигеном (стерическое "столкновение" двух содержащих "выступ" полипептидов).

В альтернативном варианте осуществления изобретения модификация, усиливающая ассоциацию первой и второй субъединицы Рс домена, представляет собой модификацию, опосредующую определяемые электростатическим действием воздействия, например, описанные в публикации РСТ \У0 2009/089004. В целом, указанный метод включает замену одного или нескольких аминокислотных остатков на поверхности раздела двух субъединиц Рс-домена на заряженные аминокислотные остатки, в результате чего образование гомодимера становится электростатически невыгодным, а гетеродимеризация становится электростатически выгодной.

Модификации Рс-домена, приводящие к снижению связывания с Рс-рецептором и/или эффекторной функции.

Рс-домен придает активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекуле предпочтительные фармакокинетические свойства, включая продолжительное время полужизни в сыворотке, что обеспечивает хорошее накопление в ткани-мишени и предпочтительное соотношение распределений в ткани-крови. Однако в то же время он может приводить к нежелательной направленности активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекуле к клеткам, которые экспрессируют Рс-рецепторы, а не к предпочтительным несущим антиген клеткам. Кроме того, совместная активация путей передачи сигналов Рс-рецептора может приводить к высвобождению цитокинов, что в сочетании с активирующими Т-клетки свойствами и продолжительным временем полужизни антигенсвязывающей молекулы приводит к избыточной активации цитокиновых рецепторов и серьезным побочным действиям при системном введении. Активация (несущих Рс-рецептор) иммунных клеток, отличных от Т-клеток, может даже снижать эффективность активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы из-за возможной деструкции Т-клеток, например, NΚ-клетками.

Таким образом, согласно конкретным вариантам осуществления изобретения Рс-домен активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, обладает пониженной аффинностью связывания с Рс-рецептором и/или пониженной эффекторной функцией по сравнению с нативным Рс-доменом 1дС|. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения Рс-домен (или активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, содержащая указанный Рс-домен) характеризуется аффинностью связывания, составляющей менее чем 50%, предпочтительно менее чем 20%, более предпочтительно менее чем 10% и наиболее предпочтительно менее чем 5% от аффинности связывания с Рс-рецептором нативного Рс-домена ΙβΟι (или активирующей Тклетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, содержащей указанный нативный Рс-домен ΙβΟι), и/или эффекторной функцией, составляющей менее чем 50%, предпочтительно менее чем 20%, более предпочтительно менее чем 10% и наиболее предпочтительно менее чем 5% от эффекторной функции нативного Рс-домена 1§С₄ (или активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, содержащей указанный нативный Рс-домен ΙβΟι). В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-домен (или активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, содержащая указанный Рс-домен) практически не связывается с Рс-рецептором и/или не индуцирует эффекторную функцию. В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой

Рсу-рецептор. В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой человеческий Рс-рецептор. В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой активирующий Рс-рецептор. В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой активирующий человеческий Рсу-рецептор, более конкретно, человеческий РсуКШа, РсуК1 или РсуКЛа, наиболее предпочтительно человеческий РсуКШа. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторная функция представляет собой одну или несколько функций, выбранных из группы, включающей СЭС, АЭСС, АЭСР и секрецию цитокинов. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторная функция представляет собой АЭСС. В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-домен характеризуется практической такой же аффинностью связывания с неонатальным Рс-рецептором (РсКп), что и нативный Рс-домен 1§С₄. Практически такое же связывание с РсКп достигается, когда Рс-домен (или активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, содержащая указанный Рс-домен) характеризуется аффинностью связывания, составляющей более чем примерно 70%, предпочтительно более чем примерно 80%, более предпочтительно более чем примерно 90% от аффинности связывания нативного Рс-домена 1§С₄ (или активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, содержащий нативный Рс домен ΙβΟι) с РсКп.

Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения Рс-домен конструируют так, чтобы он обладал пониженной аффинностью связывания с Рс-рецептором и/или эффекторной функцией по срав- 26 030147

нению с не подвергнутым инженерии Рс-доменом. В конкретных вариантах осуществления изобретения Рс-домен активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы содержит одну или несколько аминокислотных мутаций, которые снижают аффинность связывания Рс-домена с Рс-рецептором и/или эффекторную функцию. Как правило, одна или несколько одинаковых аминокислотных мутаций присутствует(ют) в каждой из двух субъединиц Рс-домена. В одном из вариантов осуществления изобретения указанные аминокислотные мутации снижают аффинность связывания Рс-домена с Рс-рецептором по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 5 раз или по меньшей мере в 10 раз. Согласно вариантам осуществления изобретения, в которых имеет место более одной аминокислотной мутации, которые снижают аффинность связывания Рс-домена с Рс-рецептором, комбинация указанных аминокислотных мутаций может снижать аффинность связывания Рс-домена с Рс-рецептором по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 20 раз или по меньшей мере в 50 раз. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, содержащая сконструированный Рс-домен, характеризуется аффинностью, составляющей менее чем 20%, в частности менее чем 10%, более предпочтительно менее чем 5% от аффинности связывания с Рсрецептором, характерной для активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, содержащей не подвергнутый инженерии Рс-домен. В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой Рсγ-рецептор. В некоторых вариантах осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой человеческий Рс-рецептор. В некоторых вариантах осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой активирующий Рс-рецептор. В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-рецептор представляет собой активирующий человеческий Рс-рецептор, более конкретно человеческий РсγКШа, РсγКI или РсγКIIа, наиболее предпочтительно человеческий РсγКIIIа.

Предпочтительно уменьшается связывание с каждым из этих рецепторов. Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения снижается также аффинность связывания с компонентом системы комплемента, в частности, аффинность связывания с С'1с|. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения не снижается аффинность связывания с неонатальным Рс-рецептором (РсКп). Практически такое же связывание с РсКп, т.е. сохранение аффинности связывания Рс-домена с указанным рецептором, достигается, когда Рс-домен (или активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, содержащая указанный Рс-домен) характеризуется аффинностью связывания с РсКп, составляющей более чем примерно 70% от аффинности связывания с РсКп не подвергнутой инженерии формы Рс-домена (или активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, содержащей не подвергнутую инженерии форму Рс-домена). Рс-домен или активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, содержащие указанный Рс-домен, могут характеризоваться аффинностью, составляющей более чем примерно 80% и даже более чем примерно 90% от указанной выше аффинности. В некоторых вариантах осуществления изобретения Рс-домен активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы создают так, чтобы он обладал пониженной эффекторной функцией по сравнению с не подвергнутым инженерии Рс-доменом Пониженная эффекторная функция может представлять собой (но не ограничиваясь только ими) пониженную(ые) одну или несколько из следующих функций: пониженная комплементзависимая цитотоксичность (СЭС), пониженная антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность (АЭСС), пониженный антитело-обусловленный клеточнозависимый фагоцитоз (АЭСР), пониженная секреция цитокинов, пониженное опосредованное иммунным комплексом поглощение антигена антигенпрезентирующими клетками, пониженное связывание с ΝΚ-клетками, пониженное связывание с макрофагами, пониженное связывание с моноцитами, пониженное связывание с полиморфоядерными клетками, пониженная непосредственная передача сигнала, индуцирующего апоптоз, пониженное перекрестное сшивание связанных с мишенью антител, пониженное созревание дендритных клеток или пониженное Т-клеточное примирование. В одном из вариантов осуществления изобретения пониженная эффекторная функция представляет собой одну или несколько функций, выбранных из группы, включающей пониженную СЭС, пониженную АЭСС, пониженный ЛЭСР и пониженную секрецию цитокинов. В конкретном варианте осуществления изобретения пониженная эффекторная функция представляет собой пониженную АЭСС. В одном из вариантов осуществления изобретения пониженная АЭСС составляет меньше 20% от АЭСС, индуцируемой не подвергнутым инженерии Рс-доменом (или активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулой, содержащей не подвергнутый инженерии Рс-домен).

В одном из вариантов осуществления изобретения аминокислотная мутация, которая снижает аффинность связывания Рс-домена с Рс-рецептором и/или эффекторную функцию, представляет собой аминокислотную замену. В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-домен содержит аминокислотную замену в положении, выбранном из Е233, Ь234, Ь235, N297, Р331 и Р329. В более конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен содержит аминокислотную замену в положении, выбранном из Ь234, Ь235 и Р329. В некоторых вариантах осуществления изобретения Рс-домен содержит аминокислотные замены Ь234А и Ь235А. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения Рсдомен представляет собой Рс-домен », в частности Рс-домен человеческого 1дС|. В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-домен содержит аминокислотную замену в положении Р329. В более

- 27 030147

конкретном варианте осуществления изобретения аминокислотная замена представляет собой Р329А или Р3290, прежде всего Р3290. В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-домен содержит аминокислотную замену в положении Р329 и дополнительную аминокислотную замену в положении, выбранном из Е233, Ь234, Ь235, N297 и Р331. В более конкретном варианте осуществления изобретения дополнительная аминокислотная замена представляет собой Е233Р, Ь234Л, Ь235Л, Ь235Е, Ν297Α, Ν297Ό или Р3318. В конкретных вариантах осуществления изобретения Рс-домен содержит аминокислотные замены в положениях Р329, Ь234 и Ь235. В более конкретных вариантах осуществления изобретения Рс-домен содержит аминокислотные мутации Ь234А, Ь235А и Р329О ("Р329О ЬАЬА"). В одном из указанных вариантов осуществления изобретения Рс-домен представляет собой Рс-домен 1дО₁, в частности Рс-домен человеческого 1дО₁. Комбинация аминокислотных замен "Р329О ЕАЬА" практически полностью элиминирует связывание с Рсу-рецептором Рс-домена человеческого 1дО₁, что описано в заявке на патент РСТ/ЕР2012/055393, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. В РСТ/ЕР2012/055393 описаны также методы получения указанных мутантных Рс-доменов, методы изучения их свойств, таких как связывание с Рс-рецептором или эффекторные функции.

Антитела подкласса 1дО₄ обладают пониженной аффинностью к связыванию с Рс-рецепторами и пониженными эффекторными функциями по сравнению с антителами подкласса 1дО₄ Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения Рс-домен активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в изобретении, представляет собой Рс-домен 1дО₄, в частности Рс-домен человеческого 1дО₄. В одном из вариантов осуществления изобретения Рс-домен 1дО₄содержит аминокислотные замены в положении 8228. конкретно аминокислотную замену 8228Р. Для дополнительного снижения аффинности связывания с Рс-рецептором и/или его эффекторной функции в одном из вариантов осуществления изобретения Рс-домен 1дО₄ содержит аминокислотную замену в положении Ь235, в частности аминокислотную замену Ь235Е. В другом варианте осуществления изобретения Рс-домен 1дО₄ содержит аминокислотную замену в положении Р329, в частности аминокислотную замену Р329О. В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен 1дО₄ содержит аминокислотные замены в положениях 8228, Ь235 и Р329, в частности аминокислотные замены 8228Р, Ь235Е и Р329О. Указанные мутанты Рс-домена 1дО₄ и их особенности связывания с Рсу-рецептором описаны в заявке на патент РСТ/ЕР2012/055393, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки.

В конкретном варианте осуществления изобретения Рс-домен, характеризующийся пониженной аффинностью связывания с Рс-рецептором и/или пониженной эффекторной функцией по сравнению с нативным Рс-доменом 1дО₄ представляет собой Рс-домен человеческого 1дО₄ содержащий аминокислотные замены Ь234А, Ь235А и необязательно Р329О, или Рс-домен человеческого 1дО₄, содержащий аминокислотные замены 8228Р, Ь235Е и необязательно Р329О.

В некоторых вариантах осуществления изобретения элиминировали Ν-гликозилирование Рс-домена. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения Рс-домен содержит аминокислотную замену в положении N297, в частности, аминокислотную замену аспарагина на аланин Щ297А) или аспарагиновую кислоту (Ν297Ό).

Помимо Рс-доменов, описанных выше и заявке на патент РСТ РСТ/ЕР2012/055393, Рс-домены с пониженной способностью связываться с Рс-рецептором и/или эффекторной функцией включают также Рс-домены с заменой одного или нескольких остатков 238, 265, 269, 270, 297, 327 и 329 в Рс-домене (И8 № 637056). К указанным мутантам Рс относятся мутанты Рс с заменами в двух или большем количестве из аминокислотных положений 265, 269, 270, 297 и 327, включая так называемый мутант Рс-домена "^ΑNΑ" с заменой остатков 265 и 297 на аланин (И8 № 7332581).

Мутантные Рс-домены можно получать путем аминокислотной делеции, замены, инсерции или модификации с использованием генетических или химических методов, хорошо известных в данной области. Генетические методы могут включать сайт-направленный мутагенез кодирующей ДНК последовательности, ПЦР, синтез генов и т.п. Правильность нуклеотидных замен можно подтверждать, например, секвенированием.

Связывание с Рс-рецепторами можно легко определять, например, с помощью ЕЬ18А или резонанса поверхностного плазмона (8РК) с использованием стандартного оборудования, такого как устройство В1асоге (фирма ОЕ НеакЬсаге), и с применением таких Рс-рецепторов, которые можно получать методом рекомбинантной экспрессии. Приемлемый указанный анализ связывания представлен в настоящем описании. Альтернативно этому, аффинность связывания Рс-доменов или активирующих клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, содержащих Рс-домен, с Рс-рецепторами можно оценивать с использованием клеточных линий, для которых известно, что они экспрессируют конкретные Рс-рецепторы, такие как человеческие ΝΚ-клетки, экспрессирующие РсуШа-рецептор.

Эффекторную функцию Рс-домена или активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, содержащей Рс домен, можно оценивать методами, известными в данной области. Приемлемый анализ для оценки АЭСС представлен в настоящем описании. Другие примеры анализов ίη νίίτο, предназначенных для оценки АЭСС-активности представляющей интерес молекулы, описаны в

- 28 030147

и8 № 5500362; у НеПйгот е! а1., Ргос. Νηΐΐ. Αсаά. 8ск υ8Α, 83, 1986, р. 7059-7063 и Не1к!гот е! а1., Ргос. №11. Αсаά. δοΐ. υ8Α, 82, 1985, р. 1499-1502; υ8 № 5821337; у Вгиддетапп е! а1., 1. Ехр. Мей. 166, 1987, р. 1351-1361. Альтернативно этому, можно применять методы, основанные на нерадиоактивном анализе (см., например, ΑΟΓΙ™ - нерадиоактивный анализ цитотоксичности с помощью проточной цитометрии (фирма Се11ТесЬио1оду, Ιικ. Маунтин-Вью, шт. Калифорния) и Су!оТох 96® - нерадиоактивный анализ цитотоксичности (фирма Рготеда, Мэдисон, шт. Висконсин)). Приемлемыми эффекторными клетками для таких анализов являются мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и естественные клетки-киллеры (ΝΚ). В альтернативном или дополнительном варианте Α^СС-активность представляющей интерес молекулы можно оценивать ш У1уо, например, с использованием созданных на животных моделей, описанных у С1упе8 е! а1., Ргос. №11. Αсаά. 8ст υ8Α, 95, 1998, р. 652-656.

В некоторых вариантах осуществления изобретения изменяют связывание Рс-домена с компонентом системы комплемента, в частности с С1с|. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения, в которых Рс-домен конструируют так, чтобы он обладал измененной эффекторной функцией, указанная измененная эффекторная функция включает измененную СЭС. Можно осуществлять анализы связывания С1с| для решения вопроса о том, может ли активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула связываться с С1с| и, как следствие, обладает ли она СЭС-активностью (см., например, анализы связывания с С1с| и С3с с помощью ΕΕΙ8Α, описанные в \УО 2006/029879 и \УО 2005/100402). Для оценки активации комплемента можно осуществлять анализ СЭС (см., например, Οаζζаио-8аи1о^о е! а1., 1. Iттиио1. Ме1ЬоЙ8, 202, 1996, с. 163; Сгадд е! а1., В1оой. 101, 2003, р. 1045-1052 и Сгадд и О1епте, В1оой 103, 2004, р. 2738-2743).

Антигенсвязывающие фрагменты.

Антигенсвязывающая молекула, предлагаемая в изобретении, является биспецифической, т.е. она содержит по меньшей мере два антигенсвязывающих фрагмента, обладающих способностью специфически связываться с двумя различными антигенными детерминантами. Согласно изобретению антигенсвязывающие фрагменты представляют собой молекулы РаЬ (т.е. антигенсвязывающие домены, состоящие из тяжелой и легкой цепей, каждая из которых содержит вариабельную и константную область). В одном из вариантов осуществления изобретения указанные молекулы РаЬ являются человеческими. В другом варианте осуществления изобретения указанные молекулы РаЬ являются гуманизированными. В следующем варианте осуществления изобретения указанные молекулы РаЬ содержат константные области тяжелой и легкой цепей.

По меньшей мере один из антигенсвязывающих фрагментов представляет собой одноцепочечную молекулу РаЬ или полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ. Указанные модификации препятствуют ошибочному спариванию тяжелых и легких цепей из различных молекул РаЬ, повышая тем самым выход и чистоту активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, при рекомбинантном получении. В конкретной одноцепочечной молекуле РаЬ, которую можно применять для создания активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, С-конец легкой цепи РаЬ соединен с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ с помощью пептидного линкера. Пептидный линкер обеспечивает возможность тяжелой и легкой цепей РаЬ образовывать функциональный антигенсвязывающий фрагмент. Пептидные линкеры, пригодные для соединения тяжелых и легких цепей РаЬ, включают, например, (Ο₄8)₆-ΟΟ (8ЕЦ ГО ΝΟ: 152) или (8Ο₃)₂-(8ΕΟ₃)₄-(8Ο₃)-8Ο (8ЕЦ ГО ΝΟ: 153). В конкретной, полученной в результате кроссинговера молекуле РаЬ, которую можно применять для создания активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, обменены константные области легкой цепи РаЬ и тяжелой цепи РаЬ. В другой, полученной в результате кроссинговера молекуле РаЬ, которую можно применять для создания активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, обменены вариабельные области легкой цепи РаЬ и тяжелой цепи РаЬ.

В конкретном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула обладает способностью одновременно связываться с антигеном клеткимишени, в частности антигеном опухолевой клетки, и активирующим Т-клетки антигеном. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула обладает способностью к перекрестному сшиванию Т-клетки и клетки-мишени в результате одновременного связывания с антигеном клетки-мишени и активирующим Т-клетки антигеном. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения указанное одновременное связывание приводит к лизису клетки-мишени, в частности, опухолевой клетки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанное одновременное связывание приводит к активации Т-клетки. В других вариантах осуществления изобретения указанное одновременное связывание приводит к клеточному ответу Т-лимфоцита, прежде всего цитотоксического Т-лимфоцита, выбранному из группы, включающей: пролиферацию, дифференцировку, секрецию цитокинов, высвобождение цитотоксических эффекторных молекул, цитотоксическую активность и экспрессию маркеров активации. В одном из вариантов осуществления изобретения связывание активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы с активирующим Т-клетки антигеном без одновременного связывания с антигеном клетки- 29 030147

мишени не приводит к Т-клеточной активации.

В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула обладает способностью переориентировать цитотоксическую активность Т-клетки к клетке-мишени. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная переориентация не зависит от опосредуемой ГКГС презентации пептидного антигена клеткой-мишенью и/или специфичности Т-клетки.

В частности, согласно любому из вариантов осуществления изобретения Т-клетка, предлагаемая в изобретении, представляет собой цитотоксическую Т-клетку. В некоторых вариантах осуществления изобретения Т-клетка представляет собой с СГО4'- или СО8⁺-Т-клетку, в частности СО8⁺-Т-клетку.

Активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент.

Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, предлагаемая в изобретении, содержит по меньшей мере один антигенсвязывающий фрагмент, который обладает способностью связываться с активирующим Т-клетки антигеном (который в контексте настоящего описания обозначают также как "активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент"). В конкретном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит не более одного антигенсвязывающего фрагмента, который обладает способностью специфически связываться с активирующим Т-клетки антигеном. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула характеризуется одновалентным связыванием с активирующим Т-клетки антигеном. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула может представлять собой либо молекулу канонического РаЬ, либо молекулу модифицированного РаЬ, т.е. одноцепочечную или полученную в результате кроссинговера молекулу РаЬ. В вариантах осуществления изобретения, в которых не более одного антигенсвязывающего фрагмента, обладающего способностью специфически связываться с антигеном клетки-мишени, входит в активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, антигенсвязывающий фрагмент, который обладает способностью специфически связываться с активирующим Т-клетки антигеном, предпочтительно представляет собой модифицированную молекулу РаЬ.

В конкретном варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антиген представляет собой СОЗ, в частности человеческий СОЗ (ЗЕО ГО N0: 265) или СОЗ обезьян циномолгус (ЗЕО ГО N0: 266), наиболее предпочтительно человеческий СОЗ. В конкретном варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент обладает перекрестной реактивностью с (т.е. специфически связывается с) СОЗ человека и обезьян циномолгус. В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующий Т-клетки антиген представляет собой эпсилон-субъединицу СОЗ.

В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент может конкурировать с моноклональным антителом Н2С (описанным в публикации РСТ АО 2008/119567) за связывание с эпитопом СОЗ. В другом варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент может конкурировать с моноклональным антителом У9 (описанным у Койпдиек βί а1., Ιηί. I. Сапсег Зирр1. 7, 1992, р. 45-50 и в ИЗ № 6054297) за связывание с эпитопом СОЗ. В следующем варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент может конкурировать с моноклональным антителом ΡΝ18 (описанным у Νοοί) е( а1., Еиг. I. Ιιηιηιιηοΐ. 19, 1986, р. 981-984) за связывание с эпитопом СОЗ. В конкретном варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент может конкурировать с моноклональным антителом ЗРЗ4 (описанным у Ре^агю е( а1., ЕМВО I. 4, 1985, р. ЗЗ7-З40) за связывание с эпитопом СОЗ. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же эпитопом СОЗ, что и моноклональное антитело ЗРЗ4. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент содержит СОРТ тяжелой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 16З, СГОР2 тяжелой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 165, СГОРЗ тяжелой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 167, СГОР1 легкой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 171, СГОР2 легкой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 17З, и СГОРЗ легкой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 175. В другом варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична ЗЕО ГО N0: 169, и последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична ЗЕО ГО N0: 177, или их варианты, сохраняющие функциональность.

В конкретном варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент содержит СГОР1 тяжелой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 249, СГОР2 тяжелой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 251, СГОРЗ тяжелой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 25З, СГОР1 легкой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 257, СГОР2 легкой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 259, и СГОРЗ легкой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 261. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент может конкурировать за связывание с эпитопом СОЗ с антигенсвязывающим фрагментом, который содержит СГОР1 тяжелой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 249, СГОР2 тяжелой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 251, СГОРЗ тяжелой цепи, имеющий ЗЕО ГО N0: 25З, СГОР1 легкой цепи, имеющий

- З0 030147

8ЕС ΙΌ ΝΟ: 257, СЭР2 легкой цепи, имеющий 8ЕС ΙΌ ΝΟ: 259, и СЭР3 легкой цепи, имеющий 8ЕС ΙΌ ΝΟ: 261. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же эпитопом СГО3, что и антигенсвязывающий фрагмент, который содержит СГОР1 тяжелой цепи, имеющий 8ЕС ГО ΝΟ: 249, СЭР2 тяжелой цепи, имеющий 8ЕС ГО ΝΟ: 251, СГОР3 тяжелой цепи, имеющий 8ЕС ГО ΝΟ: 253, СГОР1 легкой цепи, имеющий 8ЕС ГО ΝΟ: 257, СГОР2 легкой цепи, имеющий 8ЕС ГО ΝΟ: 259, и СГОР3 легкой цепи, имеющий 8ЕС ГО ΝΟ: 261. В другом варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична 8ЕС ГО ΝΟ: 255, и последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична 8ЕС ГО ΝΟ: 263, или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент может конкурировать за связывание с эпитопом СГО3 с антигенсвязывающим фрагментом, который содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи 8ЕС ГО ΝΟ: 255 и последовательность вариабельной области легкой цепи 8ЕС ГО ΝΟ: 263. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же эпитопом СГО3, что и антигенсвязывающий фрагмент, который содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 255 и последовательность вариабельной области легкой цепи 8ЕС ГО ΝΟ: 263. В другом варианте осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент содержит гуманизированную версию последовательности вариабельной области тяжелой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 255 и гуманизированную версию последовательности вариабельной области легкой цепи 8ЕО ГО ΝΟ: 263. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Т-клетки антигенсвязывающий фрагмент содержит СГОР1 тяжелой цепи, имеющий 8ЕС ГО ΝΟ: 249, СЭР2 тяжелой цепи, имеющий 8ЕО ГО ΝΟ: 251, СГОР3 тяжелой цепи, имеющий 8ЕС ГО ΝΟ: 253, СГОР1 легкой цепи, имеющий 8ЕО ГО ΝΟ: 257, СЭР2 легкой цепи, имеющий 8ЕС ГО ΝΟ: 259, СЭР3 легкой цепи, имеющий 8ЕО ГО ΝΟ: 261, и последовательности каркасных участков вариабельных областей человеческой тяжелой и легкой цепей.

Фрагмент, связывающий антиген клетки-мишени.

Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, предлагаемая в изобретении, содержит по меньшей мере один антигенсвязывающий фрагмент, обладающий способностью связываться с антигеном клетки-мишени (обозначенный также к контексте настоящего описания как "фрагмент, связывающий антиген клетки-мишени"). В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит два антигенсвязывающих фрагмента, которые обладают способностью связываться с антигеном клетки-мишени. В конкретном указанном варианте осуществления изобретения каждый из этих антигенсвязывающих фрагментов специфически связывается с одной и той же антигенной детерминантой. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит молекулу иммуноглобулина, которая обладает способностью специфически связываться с антигеном клетки-мишени. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит не более двух антигенсвязывающих фрагментов, которые обладают способностью связываться с антигеном клетки-мишени.

Связывающий антиген клетки-мишени фрагмент, как правило, представляет собой молекулу РаЬ, которая связывается с конкретной антигенной детерминантой и обладает способностью направлять активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу к сайту-мишени, например к конкретному типу опухолевой клетки, которая несет антигенную детерминанту.

В некоторых вариантах осуществления изобретения мишенью связывающего антиген клеткимишени фрагмента является антиген, ассоциированный с патологическим состоянием, такой как антиген, презентируемый опухолевой клеткой или инфицированной вирусом клеткой. Приемлемыми антигенами являются антигены клеточной поверхности, например (но не ограничиваясь только ими), рецепторы клеточной поверхности. В конкретных вариантах осуществления изобретения антиген представляет собой человеческий антиген. В конкретном варианте осуществления изобретения антиген клетки-мишени выбирают из группы, включающей фибробласт-активирующий белок (РАР), ассоциированный с меланомой хондроитинсульфат-протеогликан (МС8Р), рецептор эпидермального фактора роста (ЕСРР), карциноэмбриональный антиген (СЕА), СЭ19, СГО20 и СГО33.

В конкретных вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньший мере один антигенсвязывающий фрагмент, специфический в отношении ассоциированного с меланомой хондроитинсульфат-протеогликана (МС8Р). В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере один, как правило, два или большее количество антигенсвязывающих фрагментов, которые могут конкурировать с моноклональным антителом ЬС007 (см. 8ЕС ГО ΝΟ: 75 и 83 и заявку на европейский патент ЕР 11178393.2, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки) за связывание с эпитопом МС8Р. В одном из вариантов осуществ- 31 030147

ления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении МСЗР, содержит СЭК1 тяжелой цепи, имеющий ЗЕф ГО N0: 69, СГОК2 тяжелой цепи, имеющий

ЗЕф ГО N0: 71, СГОК3 тяжелой цепи, имеющий ЗЕф ГО N0: 73, СГОК1 легкой цепи, имеющий

ЗЕф ГО N0: 77, СГОК2 легкой цепи, имеющий ЗЕф ГО N0: 79, и СГОК3 легкой цепи, имеющий

ЗЕф ГО N0: 81. В другом варианте осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который

является специфическим в отношении МСЗР, содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична ЗЕф ГО N0: 75, последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична ЗЕф ГО N0: 83, или их варианты, сохраняющие функциональность. В конкретных вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере один, как правило, два или большее количество антигенсвязывающих фрагментов, которые могут конкурировать с моноклональным антителом М4-3 МЬ2 (см. ЗЕф ГО N0: 239 и 247 и заявку на европейский патент ЕР 11178393.2, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки) за связывание с эпитопом МСЗР. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, специфический в отношении МСЗР, связывается с тем же эпитопом МСЗР, что и моноклональное антитело М4-3 МЬ2. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, специфический в отношении МСЗР, содержит СГОК1 тяжелой цепи, имеющий ЗЕф ГО N0: 233, СГОК2 тяжелой цепи, имеющий ЗЕф ГО N0: 235, СГОК3 тяжелой цепи, имеющий ЗЕф ГО N0: 237, СГОК1 легкой цепи, имеющий ЗЕф ГО N0: 241, СГОК2 легкой цепи, имеющий ЗЕф ГО N0: 243, и СГОК3 легкой цепи, имеющий ЗЕф ГО N0: 245. В другом варианте осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении МСЗР, содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, прежде всего примерно на 98, 99 или 100%, идентична ЗЕф ГО N0 : 239, последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, прежде всего примерно на 98, 99 или 100%, идентична ЗЕф ГО N0: 247, или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении МСЗР, содержит последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепей версии с созревшей аффинностью моноклонального антитела М4-3 МЬ2. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении МСЗР, содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи ЗЕф ГО N0: 239 с одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью или семью, в частности, двумя, тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами; и последовательность вариабельной области тяжелой цепи ЗЕф ГО N0: 247 с одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью или семью, в частности, двумя, тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами.

Любой аминокислотный остаток в последовательностях вариабельных областей можно заменять другой аминокислотой, включая аминокислотные остатки в СОК-участках, при условии, что сохраняется способность к связыванию с МСЗР, в частности, с человеческим МСЗР. Предпочтительными являются варианты, которые имеют аффинность связывания с МСЗР, по меньшей мере, такую же (или более сильную), что и аффинность связывания антигенсвязывающего фрагмента, содержащего незамещенные последовательности вариабельных областей.

В одном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 1, полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 3 и полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 5 или их варианты, сохраняющие функциональность. В другом варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 7, полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 9 и полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 11 или их варианты, сохраняющие функциональность. В следующем варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 13, полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 15 и полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 5 или их варианты, сохраняющие функциональность. В следующем варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 17, полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 19 и полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 5 или их варианты, сохраняющие функциональность. В другом варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 21, полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 23 и полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 5 или их варианты, сохраняющие функциональность. В следующем вариант осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 25, полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 27 и полипептидную последовательность ЗЕф ГО N0: 5 или их варианты, сохраняющие функциональность. В другом варианте осуществления изобретения активирующая

- 32 030147

Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 29, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 31, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 33 и полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 5 или их варианты, сохраняющие функциональность. В другом варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 29, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 3, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 33 и полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 5 или их варианты, сохраняющие функциональность. В другом варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 35, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 3, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 37 и полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 5 или их варианты, сохраняющие функциональность. В другом варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 39, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 3, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 41 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 5 или их варианты, сохраняющие функциональность. В следующем варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 29, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 3, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 5 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 179 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 5, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 29, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 33 и полипептидную последовательность

8Е0 ГО N0: 181 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 5, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 23, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 183 и полипептидную последовательность

8Е0 ГО N0: 185 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 5, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 23, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 183 и полипептидную последовательность

8Е0 ГО N0: 187 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 33, полипептидную последовательность

8Е0 ГО N0: 189, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 191 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 193 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 183, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 189, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 193 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 195 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 189, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 193, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 199 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 201 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 5, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 23, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 215 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 217 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 5, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 23, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 215 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 219 или их варианты, сохраняющие функциональность.

В конкретном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность, кодируемую полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей 8ЕЦ ГО N0: 70, 8ЕО ГО N0: 72, 8ЕО ГО N0: 74, 8ЕО ГО N0: 76, 8ЕО ГО N0: 78, 8ЕО ГО N0: 80, 8ЕО ГО N0: 82, 8ЕО ГО N0: 84, 8ЕО ГО N0: 234, 8ЕО ГО N0: 236, 8ЕО ГО N0: 238, 8ЕО ГО N0: 240, 8ЕО ГО N0: 242, 8ЕО ГО N0: 244, 8ЕО ГО N0: 246, 8ЕО ГО N0: 248, 8ЕО ГО N0: 2, 8ЕО ГО N0: 4, 8ЕО ГО N0: 6, 8ЕО ГО N0: 8, 8ЕО ГО N0: 10, 8ЕО ГО N0: 12, 8ЕО ГО N0: 14, 8ЕО ГО N0: 16, 8ЕО ГО N0: 18,

8ЕО ГО N0: 20, 8ЕО ГО N0: 22, 8ЕО ГО N0: 24, 8ЕО ГО N0: 26, 8ЕО ГО N0: 28, 8ЕО ГО N0: 30,

8ЕО ГО N0: 32, 8ЕО ГО N0: 34, 8ЕО ГО N0: 36, 8ЕО ГО N0: 38, 8ЕО ГО N0: 40, 8ЕО ГО N0: 42,

8ЕО ГО N0: 180, 8ЕО ГО N0: 182, 8ЕО ГО N0: 184, 8ЕО ГО N0: 186, 8ЕО ГО N0: 188, 8ЕО ГО N0: 190,

- 33 030147

8ЕЦ ΙΌ Ν0: 192, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 194, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 196, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 200, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 202, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 216, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 218 и 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 220.

В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере один антигенсвязывающий фрагмент, специфический в отношении рецептора эпидермального фактора роста (ЕОРК). В другом варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере один, как правило, два или большее количество антигенсвязывающих фрагментов, которые могут конкурировать с моноклональным антителом ОА201 за связывание с эпитопом ЕОРК (см. публикацию РСТ \У0 2006/082515, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки). В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении ЕОРК, содержит СБК1 тяжелой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 85, СБК2 тяжелой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 87, СБКЗ тяжелой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 89, СБК1 легкой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 93, СБК2 легкой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 95, и СБКЗ легкой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 97. В другом варианте осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении ЕОРК, содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 91, последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 99, или их варианты, сохраняющие функциональность.

В следующем варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 43, полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 45 и полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 47 или их варианты, сохраняющие функциональность. В другом варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 49, полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 51 и полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 11 или их варианты, сохраняющие функциональность. В следующем варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 53, полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 45 и полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 47 или их варианты, сохраняющие функциональность.

В конкретном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность, кодируемую полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 86, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 88, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 90, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 92, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 94, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 96, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 98, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 100, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 44, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 46, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 48, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 50, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 52, 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 54 и 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 12.

В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере один антигенсвязывающий фрагмент, специфический в отношении фибробласт-активирующего белка (РАР). В другом варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере один, как правило, два или большее количество антигенсвязывающих фрагментов, которые могут конкурировать с моноклональным антителом 3Р2 за связывание с эпитопом РАР (см. публикацию РСТ \У0 2012/020006, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки). В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении РАР, содержит СБК1 тяжелой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 101, СБК2 тяжелой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 103, СБК3 тяжелой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 105, СБК1 легкой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 109, СБК2 легкой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 111, и СБК3 легкой цепи, имеющий 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 113. В другом варианте осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении РАР, содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 107, последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 115, или их варианты, сохраняющие функциональность.

В следующем варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 55, полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 51 и полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 11 или их варианты, сохраняющие функциональность. В следующем варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 57, полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 59 и полипептидную последовательность 8ЕЦ ΙΌ Ν0: 61 или их варианты, сохраняющие функциональность.

В конкретном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая ан- 34 030147

тигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность, кодируемую полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей 8ЕО ГО N0: 102, 81 У) ГО N0: 104, 81 У) ГО N0: 106, 81 У) ГО N0: 108, 81 У) ГО N0: 110, 81 У) ГО N0: 112, 81 У) ГО N0: 114, 81 У) ГО N0: 116, 81 У) ГО N0: 56, 81 У) ГО N0: 58, 81 У) ГО N0: 60, 81 У) ГО N0: 62, 81 У) ГО N0: 52 и 81 У) ГО N0: 12.

В конкретных вариантах осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере один антигенсвязывающий фрагмент, специфический в отношении карциноэмбрионального антигена (СЕА). В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере один, как правило, два или большее количество антигенсвязывающих фрагментов, которые могут конкурировать с моноклональным антителом ВХУ431/26 (описанным в европейском патенте ЕР 160897 и у Во881е1 е1 а1., 1п1. I. Сапсег, 36, 1985 р. 75-84) за связывание с эпитопом СЕА. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере один, как правило, два или большее количество антигенсвязывающих фрагментов, которые могут конкурировать с моноклональным антителом СН1А1А (см. 8Е0 ГО N0: 123 и 131) за связывание с эпитопом СЕА (см. публикацию патента РСТ \У0 2011/023787, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки). В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении СЕА, связывается с тем же эпитопом СЕА, что и моноклональное антитело СН1А1А. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении СЕА, содержит СГОВ1 тяжелой цепи, имеющий 8Е0 ГО N0: 117, СГОВ2 тяжелой цепи, имеющий 8Е0 ГО N0: 119, СГОВ3 тяжелой цепи, имеющий 8Е0 ГО N0: 121, СГОВ1 легкой цепи, имеющий 8Е0 ГО N0: 125, СГОВ2 легкой цепи, имеющий 8Е0 ГО N0: 127, и СГОВ3 легкой цепи, имеющий 8Е0 ГО N0: 129. В другом варианте осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении СЕА, содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, прежде всего примерно на 98, 99 или 100%, идентична 8Е0 ГО N0: 123, последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%, прежде всего примерно на 98, 99 или 100%, идентична 8Е0 ГО N0: 131, или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, обладающий специфичностью в отношении СЕА, содержит последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепей версии с созревшей аффинностью моноклонального антитела СН1А1А. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении СЕА, содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 123 с одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью или семью, в частности двумя, тремя, четырьмя или пятью, аминокислотными заменами; и последовательность вариабельной области тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 131 с одной, двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью или семью, в частности двумя, тремя, четырьмя или пятью, аминокислотными заменами. Любой аминокислотный остаток в последовательностях вариабельных областей можно заменять другой аминокислотой, включая аминокислотные остатки в СГОВучастках, при условии, что сохраняется связывание с СЕА, в частности с человеческим СЕА. Предпочтительными являются варианты, которые имеют аффинность связывания с СЕА, по меньшей мере, такую же (или более сильную), что и аффинность связывания антигенсвязывающего фрагмента, содержащего незамещенные последовательности вариабельных областей.

В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 63, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 65, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 67 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 33 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 65, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 67, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 183 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 197 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 183, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 203, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 205 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 207 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 183, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 209, полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 211 и полипептидную последовательность 8Е0 ГО N0: 213 или их варианты, сохраняющие функциональность.

В конкретном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность, кодируемую полинуклео- 35 030147

тидной последовательностью, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей ЗЕЦ ΙΌ ΝΟ: 118, ЗЕО ГО ΝΟ: 120, ЗЕО ГО ΝΟ: 122, ЗЕО ГО ΝΟ: 124, ЗЕО ГО ΝΟ: 126, ЗЕО ГО ΝΟ: 128, ЗЕО ГО ΝΟ: 130, ЗЕО ГО ΝΟ: 132, ЗЕО ГО ΝΟ: 64, ЗЕО ГО ΝΟ: 66, ЗЕО ГО ΝΟ: 68, ЗЕО ГО ΝΟ: 34, ЗЕО ГО ΝΟ: 184, ЗЕО ГО ΝΟ: 198, ЗЕО ГО ΝΟ: 204, ЗЕО ГО ΝΟ: 206, ЗЕО ГО ΝΟ: 208, ЗЕО ГО ΝΟ: 210, ЗЕО ГО ΝΟ: 212 и ЗЕО ГО ΝΟ: 214.

В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере один антигенсвязывающий фрагмент, специфический в отношении СГО33. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении СГО33, содержит СБР1 тяжелой цепи, имеющий ЗЕО ГО ΝΟ: 133, СГОР2 тяжелой цепи, имеющий 8ЕЦ ГО ΝΟ: 135, СБР3 тяжелой цепи, имеющий 8ЕО ГО ΝΟ: 137, СБР1 легкой цепи, имеющий 8ЕЦ ГО ΝΟ: 141, СГОР2 легкой цепи, имеющий 8ЕО ГО ΝΟ: 143, и СГОР3 легкой цепи, имеющий 8ЕЦ ГО ΝΟ: 145. В другом варианте осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент, который является специфическим в отношении СГО33, содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична 8ЕО ГО ΝΟ: 139, последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична 8ЕО ГО ΝΟ: 147, или их варианты, сохраняющие функциональность.

В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО ΝΟ: 33, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО ΝΟ: 213, полипептидную последовательность 8ЕЦ ГО ΝΟ: 221 и полипептидную последовательность ЗЕЦ ГО ΝΟ: 223 или их варианты, сохраняющие функциональность. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность ЗЕЦ ГО ΝΟ: 33, полипептидную последовательность 8ЕО ГО ΝΟ: 221, полипептидную последовательность ЗЕЦ ГО ΝΟ: 223 и полипептидную последовательность 8ЕО ГО ΝΟ: 225 или их варианты, сохраняющие функциональность.

В конкретном варианте осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит полипептидную последовательность, кодируемую полинуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей 8ЕО ГО ΝΟ: 134, ЗЕО ГО ΝΟ: 136, ЗЕО ГО ΝΟ: 138, ЗЕО ГО ΝΟ: 140, ЗЕО ГО ΝΟ: 142, ЗЕО ГО ΝΟ: 144, ЗЕО ГО ΝΟ: 146, ЗЕО ГО ΝΟ: 148, ЗЕО ГО ΝΟ: 34, ЗЕО ГО ΝΟ: 214, ЗЕО ГО ΝΟ: 222, ЗЕО ГО ΝΟ: 224 и ЗЕО ГО ΝΟ: 226.

Полинуклеотиды.

Изобретение относится также к выделенным полинуклеотидам, которые кодируют активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, представленную в настоящем описании, или ее фрагмент.

Полинуклеотиды, предлагаемые в изобретении, включают полинуклеотиды, которые по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичны последовательностям, представленным в ЗЕО ГО ΝΟ: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108,

110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 164, 166,

168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210,

212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 226, 228, 230, 232, 234, 236, 238, 240, 242, 244, 246, 248, 250, 252, 254,

256, 258, 260, 262 и 264, включая их функциональные фрагменты или варианты.

Полинуклеотиды, кодирующие активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно экспрессировать в виде индивидуального полинуклеотида, который кодирует полную активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, или в виде нескольких (например, двух или большего количества) совместно экспрессируемых полинуклеотидов. Полипептиды, кодируемые совместно экспрессируемыми полинуклеотидами, можно соединять, например, через дисульфидные мостики или другими путями с образованием функциональной активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы. Например, представляющая собой легкую цепь часть антигенсвязывающего фрагмента может кодироваться полинуклеотидом, отличным от полинуклеотида, кодирующего часть активирующей Т-клетки биспецифической антиген связывающей молекулы, представляющей собой тяжелую цепи антигенсвязывающего фрагмента, субъединицу Рс-домена и необязательность (часть) другого антигенсвязывающего фрагмента. При совместной экспрессии полипептиды тяжелой цепи должны связываться с полипептидами легкой цепи с образованием антигенсвязывающего фрагмента. В другом примере часть активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, содержащая одну из двух субъединиц Рс-домена и необязательно (часть) одного или нескольких антигенсвязывающих фрагментов, может кодироваться полинуклеотидом, отличным от полинуклеотида, который кодирует часть активирующей Т-клетки антигенсвязывающей молекулы, содержащую вторую из двух субъединиц Рс-домена и необязательно (часть) антигенсвязывающего фрагмента. При совместной экспрессии субъединицы Рс-домена должны связываться с

- 36 030147

образованием Рс-домена.

В некоторых вариантах осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует фрагмент активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, который содержит первый и второй антигенсвязывающие фрагменты и Рс-домен, состоящий из двух субъединиц, в котором первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой одноцепочечную молекулу РаЪ. В одном из вариантов осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует первый антигенсвязывающий фрагмент и субъединицу Рс-домена. В более конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором одноцепочечная молекула РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена. В другом варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует тяжелую цепь второго антигенсвязывающего фрагмента и субъединицу Рс-домена. В более конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором тяжелая цепь РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена. В следующем варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует первый антигенсвязывающий фрагмент, тяжелую цепь второго антигенсвязывающего фрагмента и субъединицу Рс-домена. В более конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором одноцепочечная молекула РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с тяжелой цепью РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена.

В некоторых вариантах осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует фрагмент активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, содержащий первый и второй антигенсвязывающие фрагменты и Рс-домен, состоящий из двух субъединиц, в котором первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу РаЪ. В одном из вариантов осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует тяжелую цепь первого антигенсвязывающего фрагмента и субъединицу Рс-домена. В более конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором вариабельная область легкой цепи РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена. В другом конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором вариабельная область тяжелой цепи РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена. В другом варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует тяжелую цепь второго антигенсвязывающего фрагмента и субъединицу Рс-домена. В более конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором тяжелая цепь РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена. В следующем варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует тяжелую цепь первого антигенсвязывающего фрагмента, тяжелую цепь второго антигенсвязывающего фрагмента и субъединицу Рс-домена. В более конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором вариабельная область легкой цепи РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с тяжелой цепью РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена. В другом конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором вариабельная область тяжелой цепи РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с тяжелой цепью РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена. В следующем конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором тяжелая цепь РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с вариабельной областью легкой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рсдомена. В следующем варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором тяжелая цепь РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с вариабельной областью тяжелой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена.

В других вариантах осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует тяжелую цепь третьего антигенсвязывающего фрагмента и субъединицу Рс-домена. В более конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором тяжелая цепь РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с субъединицей Рс-домена.

- 37 030147

В других вариантах осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует легкую цепь антигенсвязывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором вариабельная область легкой цепи РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи РаЪ. В других вариантах осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором вариабельная область тяжелой цепи РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи РаЪ. В следующих вариантах осуществления изобретения выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, кодирует легкую цепь первого антигенсвязывающего фрагмента и легкую цепь второго антигенсвязывающего фрагмента. В более конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором вариабельная область тяжелой цепи РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с легкой цепью РаЪ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором легкая цепь РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с вариабельной областью тяжелой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью легкой цепи РаЪ. В следующем конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором вариабельная область легкой цепи РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с легкой цепью РаЪ. В следующем конкретном варианте осуществления изобретения выделенный полинуклеотид кодирует полипептид, в котором легкая цепь РаЪ объединена карбоксиконцевой пептидной связью с вариабельной областью легкой цепи РаЪ, которая, в свою очередь, объединена карбоксиконцевой пептидной связью с константной областью тяжелой цепи РаЪ.

Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является выделенный полинуклеотид, кодирующий активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, или ее фрагмент, где полинуклеотид содержит последовательность, которая кодирует последовательность вариабельной области, представленную в 8Еф ΙΌ ΝΟ: 75, 83, 91, 99, 107, 115, 123, 131, 139, 147, 169, 177, 239, 247, 255 и 263. Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является выделенный полинуклеотид, кодирующий активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, или ее фрагмент, где полинуклеотид содержит последовательность, которая кодирует полипептидную последовательность, представленную в 8Еф ГО ΝΟ: 1,3,5,7,9, 11, 13, 15, 17, 19,21,23,25,27,29,31,33,35,37,39,41,43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229 и 231.

Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является выделенный полинуклеотид, кодирующий активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, или ее фрагмент, где полинуклеотид содержит последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности, представленной в 8Еф ГО ΝΟ: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106,

108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 164,

166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208,

210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 226, 228, 230, 232, 234, 236, 238, 240, 242, 244, 246, 248, 250, 252,

254, 256, 258, 260, 262 или 264.

Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является выделенный полинуклеотид, кодирующий активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, или ее фрагмент, где полинуклеотид содержит нуклеотидную последовательность, представленную в 8Еф ГО ΝΟ: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106,

254, 256, 258, 260, 262 или 264.

Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является выделенный полинуклеотид, кодирующий активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, или ее фрагмент, где полинуклеотид содержит последовательность, которая кодирует последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 75, 83, 91, 99, 107, 115, 123, 131, 139, 147, 169, 177, 239, 247, 255 или 263.

Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является выделенный полинуклеотид, кодирующий активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, или ее фрагмент, где полинуклеотид содержит последовательность, которая кодирует

- 38 030147

полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности 5>Е0 ΙΌ Ν0: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229 или 231.

Изобретение относится к выделенному полинуклеотиду, кодирующего активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, или ее фрагмент, где полинуклеотид содержит последовательность, которая кодирует последовательность вариабельной области 5ЕЕ) ГО Ν0: 75, 83, 91, 99, 107, 115, 123, 131, 139, 147, 169, 177, 239, 247, 255 или 263 с консервативными аминокислотными заменами.

Изобретение относится также к выделенному полинуклеотиду, кодирующего активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, или ее фрагмент, где полинуклеотид содержит последовательность, которая кодирует полипептидную последовательность 5ЕЕ) ГО Ν0: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229 или 231 с консервативными аминокислотными заменами.

В некоторых вариантах осуществления изобретения полинуклеотид или нуклеиновая кислота представляет собой ДНК. В других вариантах осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в настоящем изобретении, представляет собой РНК, например, в форме матричной РНК (мРНК). РНК, предлагаемая в настоящем изобретении, может быть одноцепочечной или двухцепочечной.

Методы рекомбинации.

Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно получать, например, путем твердофазного пептидного синтеза (например, твердофазный синтез Меррифилда) или методом рекомбинации. Для рекомбинантного получения один или несколько полинуклеотидов, кодирующих активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу (фрагмент), например, описанную выше, выделяют и встраивают в один или несколько векторов для дополнительного клонирования и/или экспрессии в клетке-хозяине. Указанный полинуклеотид можно легко выделять и секвенировать с помощью общепринятых процедур. Одним из вариантов осуществления изобретения является вектор, предпочтительно экспрессионный вектор, содержащий один или несколько полинуклеотидов, предлагаемых в изобретении. Методы, хорошо известные специалистам в данной области, можно применять для конструирования экспрессионных векторов, содержащих кодирующую последовательность активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы (фрагмента) наряду с приемлемыми контролирующими транскрипцию/трансляцию сигналами. Эти методы включают технологии рекомбинантной ДНК ш уйго, методы синтеза и рекомбинации/генетической рекомбинации ш у1уо (см., например, методы, описанные у Матайз е! а1., Матайз е! а1., Мо1еси1аг

С1отпд А йаЬогаЮгу Мапиа1, изд-во Со1й 8рйпд НагЬог ЬаЬогаЮгу, Ν.Υ., 1989 и АизиЬе1 е! а1., Сиггеп! РгоЮсо1з т Мо1еси1аг Вю1оду, изд-во Огеепе РиЬйзЫпд АззоОаЮз апй \УПеу йИегзаепсе, Ν.Υ., 1989). Экспрессионный вектор может представлять собой часть плазмиды, вируса или может представлять собой фрагмент нуклеиновой кислоты. Экспрессионный вектор включает кассету экспрессии, в которой полинуклеотид, кодирующий активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу (фрагмент) (т.е. кодирующую область), клонируют с обеспечением функциональной связи с промотором и/или другими элементами, контролирующими транскрипцию или трансляцию. В контексте настоящего описания "кодирующая область" представляет собой часть нуклеиновой кислоты, которая состоит из кодонов, транслируемых в аминокислоты. Хотя "стоп-кодон" (ТАО, ТОА или ТАА) не транслируется в аминокислоту, он, в случае его присутствия, может рассматриваться как часть кодирующей области, однако любые фланкирующие последовательности, например, промоторы, сайты связывания рибосом, терминаторы транскрипции, интроны, 5'- и 3'-нетранслируемые области и т.п., не являются частью кодирующей области. Две или большее количество кодирующих областей может присутствовать в индивидуальной полинуклеотидной конструкции, например, индивидуальном векторе, или в отдельных полинуклеотидных конструкциях, например, отдельных (различных) векторах. Кроме того, любой вектор может содержать одну кодирующую область или может содержать две или большее количество кодирующих областей, например вектор, предлагаемый в настоящем изобретении, может кодировать один или несколько полипептидов, которые пост- или котрансляционно разделяются на конечные белки посредством протеолитического расщепления. Кроме того, вектор, полинуклеотид или нуклеиновая кислота, предлагаемые в изобретении, могут кодировать гетерологичные кодирующие области, либо слитые, либо не слитые с полинуклеотидом, который кодирует активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу (фрагмент), предлагаемую в изобретении, или ее вариант или производное. Гетерологичные кодирующие области включают (но не ограничиваясь только ими) специализированные элементы или мотивы, такие как секреторный сигнальный пептид или гетерологичный функциональный домен. Функциональная связь имеет место, когда кодирующая область генного продукта, например полипептида, ассоциирована с одной или несколькими регуляторными последовательностями таким образом, чтобы экспрессия генного продукта находилась под воздействием или контролем регуляторной(ых)

- 39 030147

последовательности(ей). Два ДНК-фрагмента (таких как кодирующая область полипептида и ассоциированный с ней промотор) являются "функционально связанными", если индукция промоторной функции приводит к транскрипции мРНК, кодирующей требуемый генный продукт, и если природа связи между двумя ДНК-фрагментами не оказывает воздействия на способность регулирующих экспрессию последовательностей направлять экспрессию генного продукта, или не оказывает воздействия на способность ДНК-матрицы к транскрипции. Таким образом, промоторная область должна быть функционально связана с нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид, если промотор обладает способностью осуществлять транскрипцию нуклеиновой кислоты. Промотор может представлять собой специфический для клетки промотор, который обеспечивает значительную транскрипцию ДНК только в предварительно отобранных клетках. Другие контролирующие транскрипцию элементы, помимо промотора, например энхансеры, операторы, репрессоры и сигналы терминации транскрипции, можно функционально связывать с полинуклеотидом для обеспечения специфической для клетки транскрипции.

Приемлемые промоторы и другие контролирующие транскрипцию области представлены в настоящем описании. Специалистам в данной области известно широкое разнообразие контролирующих транскрипцию областей. Они включают (но не ограничиваясь только ими) контролирующие транскрипцию области, которые функционируют в клетках позвоночных животных, такие как (но не ограничиваясь только ими) сегменты промоторов и энхансеров из цитомегаловирусов (например, немедленно-ранний промотор в сочетании с интроном-А), обезьяньего вируса 40 (например, ранний промотор) и ретровирусов (таких как вирус саркомы Рауса). Другие контролирующие транскрипцию области включают области, выведенные из генов позвоночных животных, таких как ген актина, белка теплового шока, бычьего гормона роста и кроличьего β-глобина, а также другие последовательности, которые могут контролировать экспрессию генов в эукариотических клетках. Дополнительные приемлемые контролирующие транскрипцию области включают тканеспецифические промоторы и энхансеры, а также индуцибельные промоторы (например, промоторы, индуцируемые тетрациклином). Аналогично этому, обычным специалистам в данной области известно широкое разнообразие контролирующих трансляцию элементов. Они включают (но не ограничиваясь только ими) сайты связывания рибосом, кодоны инициации трансляции и терминирующие кодоны и элементы, выведенные из вирусных систем (в частности внутренний сайт связывания (посадки) рибосом или ΙΡΕ8, который обозначают также как С1ТЕ-последовательность). Кассета экспрессии может включать также другие характерные структуры, такие как сайт инициации репликации и/или интегрированные в хромосому элементы, такие как длинные концевые повторы (ЬТР) ретровирусов, или инвертированные концевые повторы (ГГР) аденоассоциированного вируса (ААУ).

Кодирующие области полинуклеотида и нуклеиновой кислоты, предлагаемые в настоящем изобретении, могут быть ассоциированы с дополнительными кодирующими областями, которые кодируют секреторные или сигнальные пептиды, которые направляют секрецию полипептида, кодируемого полинуклеотидом, предлагаемым в настоящем изобретении. Например, если требуется секреция активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, то ДНК, кодирующую сигнальную последовательность, можно помещать против хода транскрипции относительно нуклеиновой кислоты, кодирующей активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, или ее фрагмент. Согласно гипотезе, касающейся сигналов, белки, секретируемые клетками млекопитающих, имеют сигнальный пептид или секреторную лидерную последовательность, которые отщепляются от зрелого белка после инициации экспорта растущей белковой цепи через шероховатый эндоплазматический ретикулум. Обычным специалистам в данной области должно быть очевидно, что полипептиды, секретируемые клетками позвоночных животных, как правило, имеют сигнальный пептид, слитый с Ν-концом полипептида, который отщепляется от транслируемого полипептида с образованием секретируемой или "зрелой" формы полипептида. В некоторых вариантах осуществления изобретения используют нативный сигнальный пептид, например, сигнальный пептид тяжелой цепи или легкой цепи иммуноглобулина или функциональное производное указанной последовательности, которое сохраняет способность обеспечивать секрецию полипептида, функционально связанного с ним. Альтернативно этому, можно применять гетерологичный сигнальный пептид млекопитающих или его функциональное производное. Например, лидерную последовательность дикого типа можно заменять на лидерную последовательность человеческого тканевого активатора плазминогена (ТРА) или мышиной β-глюкуронидазы. Примеры аминокислотных и полинуклеотидных последовательностей секреторных сигнальных пептидов представлены в 8Е0 ГО N0: 154-162.

ДНК, кодирующую короткую белковую последовательность, которую можно применять для облегчения дальнейшей очистки (например, гистидиновую метку), или предназначенную для мечения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, можно включать внутрь или на концы полинуклеотида, кодирующего активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу (фрагмент).

Дополнительным вариантом осуществления изобретения является клетка-хозяин, содержащая один или несколько полинуклеотидов, предлагаемых в изобретении. Некоторыми вариантами осуществления изобретения является клетка-хозяин, содержащая один или несколько векторов, предлагаемых в изобре- 40 030147

тении. Полинуклеотиды и векторы могут обладать любыми особенностями, индивидуально или в сочетании, указанными в настоящем описании касательно полинуклеотидов и векторов соответственно. В одном из таких вариантов осуществления изобретения клетка-хозяин содержит (например, трансформирована или трансфектирована) вектор, имеющий полинуклеотид, который кодирует активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении (или ее часть часть). В контексте настоящего описания понятие "клетка-хозяин" относится к любому типу клеточной системы, которую можно конструировать для получения активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в изобретении, или их фрагментов. Клетки-хозяева, пригодные для репликации и для поддержания экспрессии активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, хорошо известны в данной области. Такие клетки можно трансфектировать или трансдуцировать соответствующим образом конкретным экспрессионным вектором и можно выращивать большее количество содержащих вектор клеток с целью внесения в ферментеры для крупномасштабных процессов получения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы в достаточных для клинических применений количествах. Приемлемыми клетками-хозяевами являются прокариотические микроорганизмы, такие как Е.соП, или различные эукариотические клетки, такие как клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки насекомых или т.п. Например, полипептиды можно получать в бактериях, в частности, когда отсутствует потребность в гликозилировании. После экспрессии полипептид можно выделять из пасты бактериальных клеток в растворимую фракцию и можно дополнительно очищать. Помимо прокариот, в качестве хозяев для клонирования или экспрессии векторов, которые кодируют полипептид, можно использовать эукариотические микроорганизмы, такие как нитчатые грибы или дрожжи, включая штаммы грибов и дрожжей, пути гликозилирования которых были "гуманизированы", что позволяет получать полипептид с частично или полностью человеческой схемой гликозилирования (см. Сегпдго88, Νη!. В1о!есй. 22, 2004, р. 1409-1414 и Ы е! а1., ΝηΙ. В1о!есй. 24, 2006, р. 210-215). Клетки-хозяева, которые можно использовать для экспрессии (гликозилированных) полипептидов, получают также из многоклеточных организмов (беспозвоночных и позвоночных животных).

Примерами клеток беспозвоночных являются клетки насекомых, а также можно применять клетки растений. Были выявлены многочисленные бакуловирусные штаммы и соответствующие пригодные для них в качестве хозяев клетки насекомых, прежде всего для трансфекции клеток §робор1ега ГгиДрегба. В качестве хозяев можно применять также культуры растительных клеток (см., например, υδ № 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 и 6417429 (описание технологии Ρ^АNТIВΟ^IЕδ™ для получения антител в трансгенных растениях). В качестве хозяев можно применять также клетки позвоночных животных. Например, можно использовать клеточные линии млекопитающих, которые адаптированы к росту в суспензии. Другими примерами приемлемых линий клеток-хозяев млекопитающих являются линия клеток почки обезьяны СУ1, трансформированная с помощью δν40 (Ο.Όδ-7); линия клеток почки эмбриона человека (293 или клетки линии 293, субклонированные с целью выращивания в суспензионной культуре, Сгайат е! а1., 1. Сеп. νίΐΌ1., 36, 1977, р. 59); клетки почки детеныша хомяка (ВНК); клетки Сертоли мыши (ТМ4-клетки, описанные, например, у МаШег, Вю1. Кергоб., 23, 1980, р. 243-251); клетки почки обезьяны (Ον1); клетки почки африканской зеленой мартышки >ЕКО-76,); клетки карциномы шейки матки человека (НЕБА); клетки почки собаки (МЭСК); клетки печени бычьей крысы (ВКЬ 3А); клетки легкого человека (А138); клетки печени человека (Нер С2); клетки опухоли молочной железы мыши (ММТ 060562); клетки ТК1, описанные, например, у МаШег е! а1., Аппак Ν.Υ. Асаб. δοΐ., 383, 1982, р. 44-68); клетки МКС5 и клетки Рδ4. Другими ценными линиями клеток-хозяев млекопитающих являются клетки яичника китайского хомячка (СНО), включая бЬГг - СНО-клетки (иг1аиЬ е! а1., Ргос. Νη!1. Асаб. δα. 1ЕА, 77, 1980, с. 4216); и клеточные линии миеломы, такие как Υ0, Νδ0 и δр2/0. Обзор конкретных линий клеток-хозяев млекопитающих, которые можно применять для производства белка, см., например, у Уа/а1б и Аи, в МеШобз ш Мо1еси1аг Вю1оду под ред. В.К.С. Ьо, изд-во Нитапа Ргезз, То!о\\а, М, т. 248, 2003, р. 255-268. Клетки-хозяева включают культивируемые клетки, например, культивируемые клетки млекопитающих, клетки дрожжей, клетки насекомых, клетки бактерий и клетки растений (но не ограничиваясь только ими), а также клетки, находящиеся в организме трансгенного животного, трансгенного растения или культивируемой растительной или животной ткани. В одном из вариантов осуществления изобретения клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку, предпочтительно клетку млекопитающего, такую как клетка яичника китайского хомячка (СНО), клетка почки человеческого эмбриона (НЕК) или лимфоидная клетка (например, клетка Υ0, Νδ0, δр20).

В данной области известны стандартные технологии для экспрессии чужеродных генов в этих системах. Клетки, экспрессирующие полипептид, содержащий либо тяжелую, либо легкую цепь антигенсвязывающего домена, такого как антитело, можно конструировать таким образом, чтобы в них происходила экспрессия других цепей антитела, например, таким образом, чтобы экспрессируемый продукт представлял собой антитело, которое имеет как тяжелую, так и легкую цепи.

Одним из вариантов осуществления изобретения является способ получения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, заключающийся в том, что культивируют клетку-хозяина, содержащую полинуклеотид, который кодирует активи- 41 030147

рующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, представленную в настоящем описании, в условиях, пригодных для экспрессии активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, и необязательно выделяют активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу из клетки-хозяина (или культуральной среды клетки-хозяина).

Компоненты активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы генетически сливают друг с другом. Активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу можно создавать так, чтобы ее компоненты сливать друг с другом непосредственно или косвенно через линкерную последовательность. Состав и длину линкера можно определять с помощью методов, хорошо известных в данной области, и можно оценивать эффективность. Примеры линкерных последовательностей, расположенных между различными компонентами активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, представлены в приведенных в настоящем описании последовательностях. Можно включать также дополнительные последовательности для встраивания сайта расщепления, если требуется разделение индивидуальных компонентов слияния, например, последовательность, распознаваемую эндопептидазой.

В некоторых вариантах осуществления изобретения один или несколько антигенсвязывающих фрагментов активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул содержит(ат), по меньшей мере, вариабельную область антитела, обладающую способностью связываться с антигенной детерминантой. Вариабельные области могут образовывать часть встречающихся в естественных условиях или не встречающихся в естественных условиях антител или их фрагментов или могут быть выведены из них. Методы получения поликлональных антител и моноклональных антител хорошо известны в данной области (см., например, Наг1ом и Байе, "АпЛЬоФек: а БаЬога!огу Мапиа1", изд-во Со1Л 8рппд НагЬог БаЬога!огу, 1988). Не встречающиеся в естественных условиях антитела можно создавать с помощью твердофазного пептидного синтеза, можно получать с помощью методов рекомбинации (например, описанных в И8 № 4186567) или можно получать, например, путем скрининга комбинаторных библиотек, содержащих вариабельные области тяжелых цепей и вариабельные области легких цепей (см., например, и8 № 5969108 на имя МсСаГГейу).

Любые виды антител, фрагментов антител, антигенсвязывающих доменов или вариабельных областей животного происхождения можно применять в активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекулах, предлагаемых в изобретении. Примерами антител, фрагментов антител, антигенсвязывающих доменов или вариабельных областей, которые можно применять согласно настоящему изобретению, являются (но не ограничиваясь только ими) конструкции, полученные из организма мышей, приматов или человека. Если активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула предназначена для применения на человеке, то можно использовать химерную форму антитела, в которой константные области антитела получают из человеческого антитела. Гуманизированную или полностью человеческую форму антитела можно получать также с помощью методов, хорошо известных в данной области (см., например, И8 № 5565332 на имя ХУиНег). Для осуществления гуманизации можно применять различные методы, такие как (но не ограничиваясь только ими) (а) трансплантация нечеловеческих (например, из антитела-донора) СОК в человеческий (например, антитело-реципиент) каркасный участок и константные области, сохраняющие или не сохраняющие имеющие решающее значение остатки каркасного участка (например, остатки, важные для сохранения хорошей антигенсвязывающей аффинности или функций антитела); (б) трансплантация только нечеловеческих определяющих специфичность участков (8ОК или а-СОК; остатки имеют решающее значение для взаимодействия антителоантиген) в человеческие каркасные и константные области; или (в) трансплантация полных нечеловеческих вариабельных доменов, но их "маскировка" напоминающим человеческий сегментом путем замены поверхностных остатков. Обзор гуманизированных антител и методов их получения см., например, у А1тадго и Ргапккоп, Ргоп! Вюкск 13, 12008, р. 1619-1633, и они описаны также, например, у Р1есНтапп е! а1., ЫаШге 332, 1988, р. 323-329; Оиееп е! а1., Ргос ЫаИ АсаЛ 8οΐ И8А 86, 1989, р. 10029-10033; и8 № 5821337, 7527791, 6982321 и 7087409; ,1опек е! а1., ЫаШге, 321, 1986, р. 522-525; Моткоп е! а1., Ргос. №ιΐ1. АсаЛ. 8с1. 81, 1984, р. 6851-6855; Моткоп и 0ί, АЛу 1ттипо1 44, 1988, р. 65-92; УегНоеуеп е! а1., 8с1епсе 239, 1988, р. 1534-1536; РаЛ1ап, Мо1ес 1ттип, 31(3), 1994, р. 169-217; КакНтт е! а1., МеЛюЛк, 36, 2005, р. 25-34) (описание трансплантации 8ОК (а-СОК)); РаЛ1ап, Мо1. 1ттипо1 28, 1991, р. 489-498 (описание "повторного покрытия"); ОаП'Ассща е! а1., Ме!1оЛк, 36, 2005, р. 43-60 (описание "перестановки РК") и 0кЬоигп е! а1., Ме!1оЛк, 36, 2005, р. 61-68 и КПтка е! а1., Вг. 1. Сапсег, 83, 2000, р. 252-260 (описание подхода на основе "целенаправленной селекции" для перестановки РК). Человеческие антитела и человеческие вариабельные области можно получать с помощью различных методик, известных в данной области. Человеческие антитела описаны в целом, у уап Оук и уап Ле \Утке1, Сигг. 0рш. РНагтасок 5, 2001, р. 368-374 и БопЬегд, Сигг 0рт 1ттипо1 20, 2008, р. 450-459. Человеческие вариабельные области могут образовывать часть человеческих моноклональных антител или могут быть получены из них с помощью метода гибридом (см., например, Мопос1опа1 АпЛЬоЛу РгоЛисЛоп ТесНпищек апЛ АррЛсаЛопк, изд-во Магсе1 Оеккег, 1пс., №\ν Уогк, 1987, р. 51-63). Человеческие антитела и человеческие вариабельные области можно получать также путем введения иммуногена трансгенному животному, которое модифицировано таким образом, что может продуцировать интактные человеческие антитела или интактные анти- 42 030147

тела с человеческими вариабельными областями в ответ на контрольное заражение антигеном (см., например, ЬопЬегд, №к В1о1есН. 23, 2005, р. 1117-1125). Человеческие антитела и человеческие вариабельные области можно создавать также путем выделения последовательностей вариабельных областей Руклона, отобранных из человеческих фаговых дисплейных библиотек (см., например, НоодепЬоот и др. в МеЛобз ίη Мо1еси1аг Вю1оду, под ред. 0'Впеп е1 а1., изд-во Нитап Ргезз, То1о\\а. N1. 178, 2001, р. 1-37) и МсС’аГГеПу е1 а1., №1ше, 348, 552-554; С1аскзоп е1 а1., №1ше, 352, 1991, р. 624-628). Фаг, как правило, экспонирует фрагменты антител либо в виде одноцепочечных Ру-(зсРу)-фрагментов, либо в виде РаЬ-фрагментов.

В некоторых вариантах осуществления изобретения антигенсвязывающие фрагменты, пригодные для применения согласно настоящему изобретению, создают так, чтобы они обладали повышенной аффинностью связывания, например, с помощью методов, описанных в публикации заявки на патент США № 2004/0132066, полное содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки. Способность активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, связываться со специфической антигенной детерминантой можно оценивать количественно либо с помощью твердофазного ферментного анализа (ЕЫЗЛ), либо другими методиками, известными специалисту в данной области, например, с помощью метода резонанса поверхностного плазмона (осуществляя анализ с использованием системы В1асоге Т100) (НЩеЫаб е1 а1., О1усо ί. 17, 2000, р. 323-329), и традиционных анализов связывания (Нее1еу, Епбосг. Рез. 28, 2002, р. 217-229). Анализы в условиях конкуренции можно применять для идентификации антитела, фрагмента антитела, антигенсвязывающего домена или вариабельного домена, конкурирующего с референс-антителом за связывание с конкретным антигеном, например, антитела, которое конкурирует с антителом У9 за связывание с СЭ3. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное конкурирующее антитело связывается с тем же эпитопом (например, линейным или конформационным эпитопом), с которым связывается референс-антитело. Подробные приведенные в качестве примеров методы картирования эпитопа, с которым связывается антитело, представлены у Мотз, "Ерборе Марртд Рго1осо1з", в Мебюбз ίη Мо1еси1аг Вю1оду, изд-во Нитапа Ргезз, ТоЮ\уа, N1, т. 66, 1996. При осуществлении приведенного в качестве примера анализа в условиях конкуренции иммобилизованный антиген (например, СО3) инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, которое связывается с антигеном (например, антитело У9), и вторым немеченным антителом, которое подлежит тестированию в отношении его способности конкурировать с первым антителом за связывание с антигеном. Второе антитело может присутствовать в супернатанте гибридомы. В качестве контроля иммобилизованный антиген инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, но не содержащем второе немеченое антитело. После инкубации в условиях, обеспечивающих связывание первого антитела с антигеном, избыток несвязанного антитела удаляют и оценивают количество метки, ассоциированной с иммобилизованным антигеном. Если количество метки, ассоциированной с иммобилизованным антигеном, существенно снижено в тестируемом образце по сравнению с контрольным образцом, то это свидетельствует о том, что второе антитело конкурирует с первым антителом за связывание с антигеном (см. Наг1оте и Ьапе. АпбЬоб1ез: А ЬаЬогаФгу Мапиа1, изд-во Со1б Зрппд НагЬог ЬаЬогаФгу, Со1б Зрппд НагЬог, гл. 14, 1988).

Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, полученные с помощью представленных в настоящем описании методов, можно очищать с использованием известных в данной области методик, таких как жидкостная хроматография высокого разрешения, ионообменная хроматография, гель-электрофорез, аффинная хроматография, гель-фильтрация и т.п. Фактические условия, применяемые для очистки конкретного белка, зависят, в частности, от таких факторов, как чистый заряд, гидрофобность, гидрофильность и т.д., и они должны быть очевидны специалисту в данной области. Для очистки антитела с помощью аффинной хроматографии можно использовать лиганд, рецептор или антиген, с которым связывается активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула. Например, для очистки с помощью аффинной хроматографии активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в изобретении, можно использовать матрикс с белком А или белком О. Например, последовательное применение аффинной хроматографии на белке А или О и гель-фильтрации можно применять для выделения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы практически согласно методу, описанному в разделе "Примеры". Чистоту активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы можно определять с помощью любого из широкого разнообразия хорошо известных аналитических методов, включая гельэлектрофорез, жидкостную хроматографию высокого давления и т.п. Например, установлено, что содержащие тяжелые цепи слитые белки, которые экспрессировали согласно описанным в разделе "Примеры" методам, являются интактными и правильно собранными, что продемонстрировано с помощью ДСН-ПААГ в восстанавливающих условиях (см., например, фиг. 2). Разделяли три полосы, соответствующие примерно Мг 25000, Мг 50000 и Мг 75000, которые соответствовали предсказанным молекулярным массам легкой цепи, тяжелой цепи и слитому белку тяжелая цепь/легкая цепь активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы.

- 43 030147

Анализы.

Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, представленные в настоящем описании, можно идентифицировать, подвергать скринингу или характеризовать их физические/химические свойства и/или виды биологической активности с помощью различным анализов, известных в данной области.

Анализы аффинности.

Аффинность активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы к Рс-рецептору или антигену-мишени можно определять с помощью методов, изложенных в разделе "Примеры", с помощью резонанса поверхностного плазмона (8РР), используя стандартную инструментальную базу, например устройство Ыасоге (фирма ОЕ Неакксаге), и рецепторы или белки-мишени, которые можно получать с помощью рекомбинантной экспрессии. Альтернативно этому, связывание активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул с различными рецепторами или антигенами-мишенями можно оценивать с использованием клеточных линий, экспрессирующих конкретный рецептор или антиген-мишень, например, с помощью проточной цитометрии (РАС8). Конкретный иллюстративный и приведенный в качестве примера вариант измерения аффинности связывания описан ниже в разделе "Примеры".

Согласно одному из вариантов осуществления изобретения величину К_с измеряли методом резонанса поверхностного плазмона с помощью устройства Ыасоге® Т100 (фирма ОЕ Неакксаге) при 25°С.

Для анализа взаимодействия между Рс-областью и Рс-рецепторами меченный с помощью Н18 рекомбинантный Рс-рецептор "захватывали" с помощью антитела к Реп1а-Н18 (фирма О1адеп), иммобилизованного на СМ5-чипах, и биспецифические конструкции применяли в качестве анализируемых субстанций. В целом, метод состоял в следующем: биосенсорные чипы из карбоксиметилированного декстрана (СМ5, фирма ОЕ Неакксаге) активировали с помощью гидрохлорида ^этил-№-(3диметиламинопропил)карбодиимида (ЕЭС) и ^гидроксисукцинимида (N48) согласно инструкциям поставщика. Антитело к Реп1а-Н|8 разводили 10 мМ ацетатом натрия, рН 5,0 до концентрации 40 мкг/мл перед инъекцией со скоростью потока 5 мкл/мин для достижения примерно 6500 единиц ответа (РИ) связанного белка. После инъекции лиганда инъецировали 1 М этаноламин для блокады непрореагировавших групп. Затем осуществляли "захват" Рс-рецептора в течение 60 с в концентрации 4 или 10 нМ. Для кинетических измерений инъецировали четырехкратные серийные разведения биспецифической конструкции (диапазон от 500 до 4000 нМ) в буфере НВ8-ЕР+ (фирма ОЕ Неакксаге, 10 мМ НЕРЕ8, 150 мМ №С1, 3 мМ ЭДТК, 0,05% сурфактанта Р20, рН 7,4) при 25°С со скоростью потока 30 мкл/мин в течение 120 с.

Для определения аффинности к антигену-мишени биспецифические конструкции "захватывали" с помощью специфического в отношении человеческого РаЬ антитела (фирма ОЕ Неакксаге), которое иммобилизовали на поверхности активированного сенсорного СМ5-чипа согласно методу, описанному для антитела к Реп1а-Н18. Конечное количество сшитого белка составляло примерно 12000 РИ. Осуществляли "захват" биспецифических конструкций в течение 90 с в концентрации 300 нМ. Антигены-мишени пропускали через проточные ячейки в течение 180 с в диапазоне концентраций от 250 до 1000 нМ со скоростью потока 30 мкл/мин. Мониторинг диссоциации осуществляли в течение 180 с.

Различия всех показателей преломления корректировали путем вычитания ответа, полученного в проточной референс-ячейке. Ответ на стационарной стадии использовали для определения константы диссоциации (К_с) с помощью аппроксимации нелинейной кривой изотермы связывания Ленгмюра. Скорость реакции ассоциации (к_оп) и реакции диссоциации (к_оГ£·) рассчитывали с использованием простой модели связывания Ленгмюра 1:1 (программа В1асоге® Т100 Еуакшкоп 8оП\уаге, версия 1.1.1) путем одновременной аппроксимации сенсограмм ассоциации и диссоциации. Константу равновесия реакции диссоциации (К_с) рассчитывали как соотношение к_о££/к_оп (см., например, Скеп е1 а1., к Мо1. Вю1. 293, 1999, р. 865-881).

Анализы активности.

Биологическую активность активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в изобретении, можно определять с помощью различных анализов, описанных в разделе "Примеры". Виды биологической активности могут включать, например, индукцию пролиферации Т-клеток, индукцию передачи сигнала в Т-клетках, индукцию экспрессии маркеров активации в Т-клетках, индукцию секреции цитокинов Т-клетками, индукцию лизиса клеток-мишеней, таких как опухолевые клетки, и индукцию регресса опухоли и/или повышение выживаемости.

Композиции, препаративные формы и пути введения.

Следующим объектом изобретения являются фармацевтические композиции, содержащие любую из активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, представленных в настоящем описании, например, предназначенные для применения в любом из указанных ниже терапевтических методов. В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит любую из активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, представленных в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый носитель. В другом варианте осуществле- 44 030147

ния изобретения фармацевтическая композиция содержит любую из активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, представленных в настоящем описании, и по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, например, указанное ниже.

Кроме того, представлен способ получения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, в форме, пригодной для введения ίη νί\Ό, заключающийся в том, что (а) получают активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, и (б) объединяют в препаративной форме активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, где приготовленный препарат активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы пригоден для применения ίη νί\Ό.

Фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, содержат в терапевтически эффективном количестве одну или несколько активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, которые растворены или диспергированы в фармацевтически приемлемом носителе. Понятия "фармацевтически или фармакологически приемлемый" относится к молекулярным субстанциям и композициям, которые, в целом, нетоксичны для реципиентов в применяемых дозах и концентрациях, т.е. не вызывают вредные, аллергические или другие нежелательные реакции при введении при необходимости животному, такому, например, как человек. Приготовление фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере одну активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу и необязательно дополнительное действующее вещество, должно быть очевидно специалистам в данной области в свете настоящего описания, например, из справочника Кеш1п§1оп'8 РЬагтасеибса1 Зтепсек, 18-е изд., изд-во Маск Рг1п11пд Сотрапу, 1990, включенного в настоящее описание в качестве ссылки. Кроме того, очевидно, что препараты, предназначенные для введения животному (например, человеку), должны удовлетворять требованиям стандартов стерильности, пирогенности и общей безопасности и чистоты, разработанных отделением биологических стандартов (Управление контроля пищевых продуктов и лекарственных средств) ΡΌΆ или соответствующим уполномоченным органом других стран. Предпочтительными композициями являются лиофилизированные препаративные формы или водные растворы. В контексте настоящего описания "фармацевтически приемлемый носитель" включает любые и все растворители, буферы, дисперсионные среды, покрытия, поверхностноактивные вещества, антиоксиданты, консерванты (например, антибактериальные агенты, противогрибные агенты), агенты для придания изотоничности, замедляющие абсорбцию агенты, соли, белки, лекарственные средства, стабилизаторы лекарственных средств, полимеры, гели, связующие вещества, эксципиенты, разрыхлители, замасливатели, подслащивающие вещества, корригенты, красители и подобные материалы и их комбинации, которые должны быть известны обычному специалисту в данной области (см., например, КепипдЮп'к РЬагтасеибса1 Заепсек, 18-е изд., изд-во Маск Рг1п11пд Сотрапу, 1990, р. 1289-1329, включенный в настоящее описание в качестве ссылки). В терапевтических или фармацевтических композициях можно применять любой общепринятый носитель, если только он совместим с действующим веществом.

Композиция может содержать различные типы носителей в зависимости от того, вводят ли ее в твердой, жидкой или аэрозольной форме, и от того, должна ли она быть стерильной, как в случае использования таких путей введений, как инъекция. Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в настоящем изобретении (и любое дополнительное терапевтическое средство), можно вводить внутривенно, внутрикожно, внутриартериально, внутрибрюшинно, внутрь повреждения, внутрь черепа, внутрь сустава, внутрь предстательной железы, внутрь селезенки, внутриренально, внутриплеврально, внутритрахеально, внутриназально, внутрь стекловидного тела, внутривагинально, внутриректально, внутрь опухоли, внутримышечно, внутрибрюшинно, подкожно, подконъюнктивально, интравезикулярно, в слизистую оболочку, интраперикардиально, внутрь пуповины, интраокулярно, орально, топикально, место, путем ингаляции (например, аэрозольной ингаляции), инъекции, инфузии, непрерывной инфузии, локализованной перфузии, омывающей непосредственно клетки-мишени, через катетер, посредством лаважа, в виде кремов, в липидных композициях (например, липосомах), или с помощью любого другого метода или любой комбинации вышеуказанных путей, известных обычному специалисту в данной области (см., например, КепипдЮп'к РЬагтасеибса1 Зтепсек, 18-е изд., изд-во Маск РппРпд Сотрапу, 1990, включенный в настоящее описание в качестве ссылки). Для введения молекул полипептидов, таких как активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, наиболее часто применяют парентеральное введение, в частности, внутривенную инъекцию.

Парентеральные композиции включают композиции, созданные для введения путем инъекции, например подкожной, внутрикожной, внутрь повреждения, внутривенной, внутриартериальной, внутримышечной, подоболочечной или внутрибрюшинной инъекции. Для инъекции активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно включать в препаративные формы в виде водных растворов, предпочтительно в физиологически совместимых буферах, таких как раствор Хэнкса, раствор Рингера или физиологический соляной буфер. Раствор может содержать предназначенные для получения препаративной формы агенты, такие как суспендирующие, стаби- 45 030147

лизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно этому, активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы могут находиться в порошкообразной форме, предназначенной для восстановления перед применением приемлемым наполнителем, например, стерильной не содержащей пирогенов водой. Стерильные инъецируемые растворы приготавливают путем включения активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в изобретении, в требуемом количестве в соответствующий растворитель при необходимости в сочетании с различными другими ингредиентами, перечисленными ниже. Стерильность можно легко обеспечивать, например, путем фильтрации через стерильные фильтрующие мембраны. Как правило, дисперсии получают путем включения различных стерилизованных действующих веществ в стерильный наполнитель, который содержит основную дисперсионную среду и/или другие ингредиенты. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъецируемых растворов, суспензий или эмульсий предпочтительными методами получения являются вакуумная сушка или сушка вымораживанием, которые позволяют получать порошок действующего вещества в сочетании с любым дополнительным требуемым ингредиентом из предварительно стерилизованной фильтрацией жидкой среды. При необходимости жидкая среда перед осуществлением инъекции должна быть соответствующим образом забуферена и жидкому разбавителю сначала придана изотоничность с помощью достаточного количества соляного раствора или глюкозы. Композиция должны быть стабильной в условиях приготовления и хранения и защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Принято поддерживать загрязнение эндотоксинами на минимальном безопасном уровне, например, менее 0,5 нг/мг белка. Пригодные фармацевтически приемлемые носители включают (но не ограничиваясь только ими) буферы, такие как фосфатный, цитратный и буферы на основе других органических кислот; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмонийхлорид; гексаметонийхлорид; бензалконийхлорид; бензетонийхлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол, резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол и метакрезол); низкомолекулярные (содержащие менее примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТК; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы с металлами (например, комплексы Ζη-белок); и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (ПЭГ). Водные суспензии для инъекций могут содержать соединения, которые повышают вязкость суспензии, такие как натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, сорбит, декстран или т.п. Необязательно, суспензия может содержать также стабилизаторы или агенты, которые повышают растворимость соединений, что позволяет получать высококонцентрированные растворы. Кроме того, суспензии действующих веществ можно получать в виде соответствующих масляных предназначенных для инъекции суспензий. Приемлемые липофильные растворители или наполнители включают жирные нелетучие масла, такие как кунжутное масло, или синтетические эфиры жирных кислот, такие как этилолеаты или триглицериды, или липосомы.

Действующие вещества можно заключать в микрокапсулы, например, полученные с помощью методов коацервации или межфазной полимеризации, например в гидроксипропилметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли(метилметакрилатные) микрокапсулы соответственно, в коллоидные системы введения лекарственного средства (например, в липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методы описаны в Реш1п§1оп'8 РЬагтасеийса1 8аепсе5, под ред. А. Οδοί, 1980. Можно приготавливать препараты с замедленным высвобождением. Приемлемыми примерами препаратов с замедленным высвобождением являются полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, включающие полипептид, такие матрицы представляют собой изделия определенной формы, например, пленки или микрокапсулы. В конкретном варианте осуществления изобретения для достижения пролонгированной абсорбции инъецируемой композиции можно применять в композиции агенты, замедляющие абсорбцию, такие, например, как моностеарат алюминия, желатин или их комбинации.

Помимо описанных выше композиций, активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы можно приготавливать также в виде препарата в форме депо. Указанные препаративные формы длительного действия можно применять путем имплантации (например, подкожной или внутримышечной) или внутримышечной инъекции. Так, например, активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы можно включать в препаративные формы в сочетании с приемлемыми полимерными или гидрофобными материалами (например, в виде эмульсии в приемлемом масле), или ионообменными смолами, или в виде умеренно растворимых производных, например умеренно растворимой соли.

Фармацевтические композиции, содержащие активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно приготавливать с помощью общепринятых процессов смешения, растворения, эмульгирования, капсулирования, захвата или лиофилизации. Фармацевтические композиции можно включать в препаративные формы с помощью общепринятого метода с

- 46 030147

использованием одного или нескольких физиологически приемлемых носителей, разбавителей, эксципиентов или вспомогательных веществ, которые облегчают обработку белков, с получением препаратов, которые можно применять в фармацевтических целях. Соответствующая форма зависит от выбранного пути введения.

Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы можно включать в композиции в виде свободной кислоты или свободного основания, в нейтральной форме или в форме соли. Фармацевтически приемлемые соли представляют собой соли, которые практически сохраняют биологическую активность свободной кислоты или свободного основания. Они включают кислотно-аддитивные соли, например соли, образованные со свободными аминогруппами белковой композиции или образованные с неорганическими кислотами, такими, например, как соляная или фосфорная кислота, или такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, винная или миндальная кислоты. Соли, образованные со свободной карбоксильной группой, можно получать также из неорганических оснований, таких, например, как гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа; или таких органических оснований как изопропиламин, триметиламин, гистидин или прокаин. Фармацевтические соли имеют тенденцию к более высокой растворимости в водных и других протонных растворителях по сравнению с соответствующими формами в виде свободных оснований.

Способы и композиции для терапевтического применения.

Любую из активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, представленных в настоящем описании, можно применять в терапевтических методах. Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно использовать в качестве иммунотерапевтических агентов, например, при лечении различных видов рака.

Для применения в терапевтических методах активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно включать в состав препаративных форм, дозировать и вводить в соответствии с надлежащей клинической практикой. Рассматриваемые в этом контексте факторы включают конкретное нарушение, подлежащее лечению, конкретное млекопитающее, подлежащее лечению, клиническое состояние индивидуального пациента, причину заболевания, область введения агента, метод введения, схему введения и другие факторы, известные практикующим медикам.

Одним из объектов изобретения являются активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, предназначенные для применения в качестве лекарственного средства. Следующими объектами изобретения являются активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, предназначенные для применения при лечении заболевания. Некоторыми вариантами осуществления изобретения являются активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, предназначенные для применения в способе лечения. Одним из вариантов осуществления изобретения является активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, представленная в настоящем описании, предназначенная для применения при лечении заболевания у индивидуума, который нуждается в этом. Некоторыми вариантами осуществления изобретения является активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, предназначенная для применения в способе лечения индивидуума, который имеет заболевание, заключающемся в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу. В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевание, подлежащее лечению, представляет собой пролиферативное нарушение. В конкретном варианте осуществления изобретения заболевание представляет собой рак. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ заключается также в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, например противораковое средство, если заболевание, подлежащее лечению, представляет собой рак. Дополнительными вариантами осуществления изобретения является активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, представленная в настоящем описании, предназначенная для применения с целью индукции лизиса клетки-мишени, в частности опухолевой клетки. Некоторыми вариантами осуществления изобретения является активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, предназначенная для применения в способе индукции лизиса клетки-мишени, в частности опухолевой клетки, у индивидуума, заключающемся в том, что вводят индивидууму в эффективном количестве активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу для индукции лизиса клетки-мишени. "Индивидуум" в контексте любого из указанных выше вариантов осуществления изобретения представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека.

Следующим объектом изобретения является применение активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, для производства или приготовления лекарственного средства, которое предназначено для лечения заболевания у индивидуума, нуждающегося в этом. В одном из вариантов осуществления изобретения лекарственное средство предназначено для применения в способе лечения заболевания, заключающемся в том, что вводят индивидууму, который имеет заболевание, в терапевтически эффективном количестве лекарственное средство. В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевание, подлежащее лечению, представляет собой пролиферативное

- 47 030147

нарушение. В конкретном варианте осуществления изобретения заболевание представляет собой рак. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения способ заключается также в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, например противораковое средство, если заболевание, подлежащее лечению, представляет собой рак. В другом варианте осуществления изобретения лекарственное средство предназначено для индукции лизиса клетки-мишени, в частности опухолевой клетки. В следующем варианте осуществления изобретения лекарственное средство предназначено для применения в способе индукции лизиса клетки-мишени, в частности опухолевой клетки, у индивидуума, заключающемся в том, что вводят индивидууму в эффективном количестве лекарственное средство для индукции лизиса клеткимишени. "Индивидуум" в контексте любого из указанных выше вариантов осуществления изобретения представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека.

Следующим объектом изобретения является способ лечения заболевания у индивидуума. В одном из вариантов осуществления изобретения способ заключается в том, что вводят индивидууму, имеющему указанное заболевание, в терапевтически эффективном количестве активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении. В одном из вариантов осуществления изобретения указанному индивидууму вводят композицию, которая содержит активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, в фармацевтически приемлемой форме. В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевание, подлежащее лечению, представляет собой пролиферативное нарушение. В предпочтительном варианте осуществления изобретения заболевание представляет собой рак. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ заключается также в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, например, противораковое средство, если заболевание, подлежащее лечению, представляет собой рак. "Индивидуум" в контексте любого из указанных выше вариантов осуществления изобретения может представлять собой млекопитающее, предпочтительно человека.

Следующим объектом изобретения является способ индукции лизиса клетки-мишени, в частности, опухолевой клетки. В одном из вариантов осуществления изобретения способ заключается в том, что приводят в контакт клетку-мишень с активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулой, предлагаемой в изобретении, в присутствии Т-клетки, в частности цитотоксической Т-клетки. Другим объектом изобретения является способ индукции лизиса клетки-мишени, в частности опухолевой клетки. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения способ заключается в том, что вводят индивидууму в эффективном количестве активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу для индукции лизиса клетки-мишени. В одном из вариантов осуществления изобретения "индивидуум" представляет собой человека.

В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевание, подлежащее лечению, представляет собой пролиферативное нарушение, предпочтительно рак. Примерами рака являются (но не ограничиваясь только ими) рак мочевого пузыря, рак головного мозга, рак головы и шеи, рак поджелудочной железы, рак легкого, рак молочной железы, рак яичника, рак матки, рак шейки матки, рак эндометрия, рак пищевода, рак ободочной кишки, колоректальный рак, ректальный рак, рак желудка, рак предстательной железы, рак крови, рак кожи, плоскоклеточная карцинома, рак кости и рак почки. Другие нарушения клеточной пролиферации, которые можно лечить с использованием активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в настоящем изобретении, включают (но не ограничиваясь только ими) неоплазмы, локализованные в: животе, кости, молочной железе, пищеварительной системе, печени, поджелудочной железе, брюшине, эндокринных железах (надпочечник, паращитовидная, гипофиз, яички, яичник, тимус, щитовидная), глазу, голове и шеи, нервной системе (центральной и периферической), лимфатической системе, тазовой области, коже, мягкой ткани, селезенке, грудном отделе и мочеполовой системе. Также под объем изобретения подпадают предраковые состояния или повреждения и метастазы рака. В некоторых вариантах осуществления изобретения рак выбирают из группы, включающей почечноклеточный рак, рак кожи, рак легкого, колоректальный рак, рак молочной железы, рак головного мозга, рак головы и шеи. Специалисту в данной области должно быть очевидно, что во многих случаях активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула не может обеспечивать исцеление, а может только оказывать частичное благоприятное воздействие. В некоторых вариантах осуществления изобретения физиологические изменения, характеризующиеся некоторым благоприятным действием, рассматриваются также как терапевтически ценные. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения количество активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, которое обеспечивает физиологическое изменение, рассматривается как "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество". Субъект, пациент или индивидуум, нуждающийся в лечении, представляет собой, как правило, млекопитающее, более конкретно человека.

В некоторых вариантах осуществления изобретения активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, вводят в эффективном количестве в клетку. В других вариантах осуществления изобретения активирующую Т-клетки биспецифическую антиген- 48 030147

связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, вводят в терапевтически эффективном количестве индивидууму для лечения болезни.

Для предупреждения или лечения заболевания соответствующая доза активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении (при ее применении индивидуально или в сочетании с одним или несколькими другими дополнительными терапевтическими средствами), должна зависеть от типа заболевания, подлежащего лечению, пути введения, веса тела пациента, типа активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, серьезности и течения заболевания, от того, вводят ли активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу в превентивных или терапевтических целях, предшествующих или осуществляемых одновременно терапевтических вмешательств, истории болезни пациента и ответа на активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу и предписания лечащего врача. Практикующий специалист, ответственный за введение, в любом случае должен определять концентрацию действующего(их) вещества(в) в композиции и соответствующую(ие) дозу(ы) для индивидуального пациента. Различные схемы введения доз включают (но не ограничиваясь только ими) однократное введение или несколько введений в различные моменты времени, болюсное введение и пульсирующую инфузию.

Активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу можно вводить пациенту в виде одной обработки или серий обработок. В зависимости от типа и серьезности заболевания возможная начальная доза активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы для введения пациенту, например, с использованием одного или нескольких индивидуальных введений или с помощью непрерывной инфузии, может составлять примерно от 1 мкг/кг до 15 мг/кг (например, 0,1-10 мг/кг). Типичная суточная доза может составлять от примерно 1 мкг/кг до 100 мг/кг или более в зависимости от отмеченных выше факторов. Для повторных введений в течение нескольких дней или более продолжительного периода в зависимости от состояния лечение, как правило, должно продолжаться до достижения требуемого подавления имеющихся симптомов заболевания. В качестве примера, доза активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы может составлять от примерно 0,005 до примерно 10 мг/кг. В другом примере (но не ограничиваясь только указанным) доза на одно введение может составлять от примерно 1, примерно 5, примерно 10, примерно 50, примерно 100, примерно 200, примерно 350, примерно 500 мкг/кг веса тела, примерно 1, примерно 5, примерно 10, примерно 50, примерно 100, примерно 200, примерно 350, примерно 500 до примерно 1000 мг/кг веса тела или более и находиться в любом указанном диапазоне. В качестве примеров (но не ограничиваясь только ими) указанного диапазона значений можно вводить от примерно 5 до примерно 100 мг/кг веса тела, от примерно 5 мкг/кг веса тела до примерно 500 мг/кг веса тела и т.д. с учетом указанных выше уровней доз. Так, пациенту можно вводить одну или несколько доз, составляющих примерно 0,5, 2,0, 5,0 или 10 мг/кг (или любую их комбинацию). Указанные дозы можно вводить прерывисто, например, каждую неделю или каждые три недели (например, таким образом, чтобы пациент получал от примерно двух до примерно двадцати или, например, примерно шесть доз активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы). Можно вводить начальную более высокую ударную дозу, после которой применять одну или несколько более низких доз. Однако можно использовать другие схемы введения доз. Успех такой терапии легко оценивать с помощью общепринятых методик и анализов.

Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, как правило, следует применять в количестве, эффективном для достижения поставленной цели. При применении для лечения или предупреждения болезненного состояния активирующие Тклетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, или их фармацевтические композиции, вводят или применяют в терапевтически эффективном количестве. Определение терапевтически эффективного количества находится в компетенции специалистов в данной области, прежде всего в свете представленного подробного описания изобретения.

Для системного введения терапевтически эффективную дозу можно сначала определять с помощью анализов ш νίΙΐΌ, например анализов с использованием клеточных культур. Затем дозу можно включать в форму для изучения на животных моделях для достижения концентрации в кровотоке, находящейся в диапазоне, включающем значение ΙΟ₅₀, определенное на клеточной культуре.

Указанную информацию можно использовать для более точного определения доз, которые можно применять на людях.

Начальные дозы можно оценивать также, исходя из данных, полученных ш νί\Ό, например, на животных моделях, используя методики, хорошо известные в данной области. Обычный специалист в данной области легко может оптимизировать применение на людях на основе данных, полученных на животных.

Уровень доз и интервал можно регулировать индивидуально для получения уровней в плазме активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, которые являются достаточными для поддержания терапевтического действия. Обычные дозы, предназначенные для введения пациенту путем инъекции, составляют от примерно 0,1 до 50 мг/кг/день, как правило, от примерно 0,5 до 1 мг/кг/день. Для достижения терапевтически эффективных уровней в плазме можно вводить несколько доз каждый день. Уровни в плазме можно оценивать, например, с помощью ЖХВР.

- 49 030147

В случаях местного применения или избирательного поглощения эффективная местная концентрация активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул может не соответствовать концентрации в плазме. Специалист в данной области может оптимизировать терапевтически эффективные местные дозы без чрезмерных экспериментов.

Применение в терапевтически эффективной дозе активирующих Т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул, представленных в настоящем описании, должно, как правило, обеспечивать терапевтическую пользу, не вызывая существенной токсичности. Токсичность и терапевтическую эффективность активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы можно определять с помощью стандартных фармацевтических процедур на культурах клеток или экспериментальных животных. Анализы на клеточных культурах или опыты на животных можно применять для определения значений ЬО₅₀ (доза, смертельная для 50% популяции) и ЕЭ₅₀ (доза, терапевтически эффективная для 50% популяции). Соотношение доз, характеризующих токсические и терапевтические действия, обозначают как терапевтический индекс, который можно выражать в виде соотношения НЭ₅₁/ЕЭ₅₀. Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, имеющие высокие терапевтические индексы, являются предпочтительными. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, предлагаемая в настоящем изобретении, характеризуется высоким терапевтическим индексом. Данные, полученные в анализах с использованием клеточных культур и в опытах на животных, можно применять для определения диапазона доз, которые можно применять на людях. Доза лежит предпочтительно в диапазоне концентраций в кровотоке, которые включают ЕО₅₀, обладающих невысокой токсичностью или не обладающих токсичностью. Доза может варьироваться в зависимости от различных факторов, например, от применяемой лекарственной формы, применяемого пути введения, состояния индивидуума и т.п. Точную препаративную форму, путь введения и дозу может выбирать индивидуально врач в зависимости от состояния пациента (см., например, Ршд1 с1 а1., в ТНс РНагтасо1одюа1 Вак15 оГ ТНегареиНск, гл. 1, 1975, р. 1, публикация полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки).

Лечащему врачу пациентов, которым вводят активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, должно быть очевидно, как и когда заканчивать, прерывать или регулировать введение из-за токсичности, дисфункции органов и т.п. И, наоборот, лечащему врачу должно быть очевидно, как регулировать лечение в сторону применения более высоких доз, если клинический ответ является неадекватным (предотвращая токсичность). Величина вводимой дозы при лечении представляющего интерес нарушения должна варьироваться в зависимости от серьезности состояния, подлежащего лечению, пути введения и т.п. Серьезность состояния можно, например, оценивать среди прочего с помощью стандартных прогностических методов оценки. Кроме того, доза и предполагаемая частота введения дозы должны также варьироваться в зависимости от возраста, веса тела и ответа индивидуального пациента.

Другие средства и варианты лечения.

Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, при лечении можно вводить в сочетании с одним или несколькими другими средствами. Например, активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, можно вводить совместно по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством. Понятие "терапевтическое средство" включает любое средство, которое вводят для лечения симптома или заболевания у индивидуума, который нуждается в таком лечении. Указанное дополнительное терапевтическое средство может представлять собой любое действующее вещество, которое можно применять при конкретном показании, подлежащем лечению, предпочтительно с дополнительными видами активности, которые не оказывают отрицательное действие друг на друга. В некоторых вариантах осуществления изобретения дополнительное терапевтическое средство представляет собой иммуномодулятор, цитостатическое средство, ингибитор клеточной адгезии, цитотоксическое средство, активатор клеточного апоптоза или средство, повышающее чувствительность клеток к индукторам апоптоза. В конкретном варианте осуществления изобретения дополнительное терапевтическое средство представляет собой противораковое средство, например, агент, разрушающий микротрубочки, антиметаболит, ингибитор топоизомеразы, интеркалятор ДНК, алкилирующий агент, средство гормональной терапии, ингибитор киназ, антагонист рецептора, активатор апоптоза опухолевых клеток или антиангиогенное средство.

Указанные другие средства могут присутствовать в комбинации в количествах, эффективных для указанных целей. Эффективное количество указанных других средств зависит от количества применяемой активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, типа нарушения или лечения, и других указанных выше факторов. Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, как правило, применяют в таких же дозах и с использованием указанных в настоящем описании путей введения, или в дозах, составляющих примерно от 1 до 99% от указанных в настоящем описании доз, или в любой дозе и с использованием любого пути введения, которые согласно эмпирическим/клиническим данным рассматриваются как приемлемые.

- 50 030147

Отмеченные выше комбинированные терапии предусматривают совместное введение (когда два или большее количество терапевтических средств включают в одну и ту же или в отдельные композиции) и раздельное введение, в этом случае введение активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, можно осуществлять до, одновременно и/или после введения дополнительного терапевтического средства и/или адъюванта. Активирующие Т-клетки биспецифические антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно применять также в сочетании с лучевой терапией.

Изделия.

Другим объектом изобретения является изделие, которое содержит продукты, применяемые для лечения, предупреждения и/или диагностирования указанных выше нарушений. Изделие представляет собой контейнер и этикетку или листовку-вкладыш в упаковку, которые размещены на контейнере или прилагаются к нему. Приемлемыми контейнерами являются, например банки, пузырьки, шприцы, пакеты для внутривенного (IV) раствора и т.д. Контейнеры можно изготавливать из различных материалов, таких как стекло или пластмасса. Контейнер содержит композицию, которая сама по себе или в сочетании с другой композицией является эффективной для лечения, предупреждения и/или диагностирования состояния и может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенного раствора или пузырек, снабженный пробкой, которую можно прокалывать с помощью иглы для подкожных инъекций). По меньшей мере одно действующее вещество в композиции представляет собой активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении. На этикетке или листовке-вкладыше в упаковку указано, что композицию применяют для лечения выбранного состояния. Кроме того, изделие может включать (а) первый контейнер с находящейся в нем композицией, где композиция содержит активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу, предлагаемую в изобретении; и (б) второй контейнер с находящейся в нем композицией, где композиция содержит дополнительное цитотоксическое или иное терапевтическое средство. Согласно этому варианту осуществления изобретения изделие может содержать листовкувкладыш в упаковку, которая содержит информацию о том, что композиции можно использовать для лечения конкретного состояния. В альтернативном или дополнительном варианте изделие может дополнительно включать второй (или третий) контейнер с фармацевтически приемлемым буфером, таким как бактериостатическая вода для инъекций (БСВИ), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Кроме того, оно может включать другие материалы, необходимые с коммерческой точки зрения и с точки зрения потребителя, в частности, другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

Примеры

Ниже представлены примеры способов и композиций, предлагаемых в изобретении. Как должно быть очевидно, можно осуществлять на практике различные другие варианты осуществления изобретения в целом с учетом представленного выше описания изобретения.

Общие методы.

Методы рекомбинантной ДНК.

Для манипуляций с ДНК использовали стандартные методы, описанные у 8атЬгоок I. еί а1., Мо1еси1аг с1отпд: А 1аЬогаЮгу тапиа1; изд-во СоМ 8рппд НагЬог БаЬогаЮгу Рге§8, СоИ 8рппд НагЬог, Νον Уогк, 1989. Реагенты для молекулярной биологии применяли согласно инструкциям производителей. Общую информацию, касающуюся нуклеотидных последовательностей легких и тяжелых цепей человеческих иммуноглобулинов, см. у: ΚаЬаί Е.А. еί а1., 8ециепсе8 оГ РгоЮйъ оГ 1ттипо1одюа1 [Шегеь!, 5-е изд., изд-во ΝΙΗ, публикация Ν91-3242, 1991.

Секвенирование ДНК.

Последовательности ДНК определяли путем секвенирования двух цепей.

Синтез генов.

Требуемые сегменты генов либо создавали с помощью ПЦР с использованием соответствующих матриц, либо синтезировали на фирме Оепеай АО (Регенсбург, Германия) из синтетических олигонуклеотидов и ПЦР-продуктов посредством автоматического синтеза генов. В тех случаях, когда точная генная последовательность не была доступна, создавали олигонуклеотидные праймеры на основе последовательностей ближайших гомологов и гены выделяли с помощью ОТ-ПЦР из РНК, полученной из соответствующей ткани. Сегменты генов, фланкированные единичными сайтами, распознаваемыми рестриктазами, клонировали в стандартных клонирующих/секвенирующих векторах. Плазмидную ДНК очищали из трансформированных бактерий и определяли концентрацию с помощью УФ-спектроскопии. Последовательность ДНК субклонированных фрагментов генов подтверждали ДНК-секвенированием. Создавали сегменты генов с требуемыми сайтами рестрикции, позволяющими субклонировать их в соответствующих экспрессионных векторах. Все конструкции создавали с 5'-концевой последовательностью ДНК, кодирующей лидерный пептид, который направляет секрецию белков в эукариотических клетках. В 8Е/ ΙΌ ΝΟ: 154-162 представлены примеры лидерных пептидов и кодирующих их полинуклеотидных последовательностей.

- 51 030147

Выделение первичных человеческих рап-Т-клеток из РВМС.

Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) получали путем центрифугирования в градиенте плотности Н|з1орацие из обогащенных лимфоцитами препаратов (лейкоцитарные пленки), полученных из местных банков крови или из свежей крови здоровых доноров. В целом, метод состоял в следующем: кровь разводили стерильным ЗФР и осторожно наслаивали на градиент ШзФрадие (фирма Зщта. Н8889). После центрифугирования в течение 30 мин при 450хд при комнатной температуре (отключенное тормозное устройство) часть плазмы, находящуюся над содержащей РВМС интерфазой, отбрасывали. РВМС переносили в новые 50-миллилитровые пробирки Ра1соп и пробирки заполняли ЗФР до полного объема 50 мл. Смесь центрифугировали при комнатной температуре в течение 10 мин при 400хд (включенное тормозное устройство). Супернатант отбрасывали и дебрис РВМС отмывали дважды стерильным ЗФР (стадии центрифугирования при 4°С в течение 10 мин при 350хд). Осуществляли автоматический подсчет полученной популяции РВМС (устройство У1Се11) и хранили в среде КРМ11640, содержащей 10% РСЗ и 1% Ь-аланил-Ь-глутамина (фирма ВюсНгопт К0302) при 37°С, 5% СО₂ в инкубаторе вплоть до начала анализа.

Для получения фракции, обогащенной Т-клетками из РВМС, использовали набор для выделения рап-Т-клеток (Рап Т Се11 1зо1а1юп Κίΐ II) (фирма М111епу1 Вю1ес, № 130-091-156) согласно инструкциям производителя. В целом, метод состоял в следующем: клеточный дебрис разводили, используя 40 мкл холодного буфера на 10 млн клеток (ЗФР с 0,5% БСА, 2 мМ ЭДТК, простерилизованный фильтрацией), и инкубировали, используя 10 мкл коктейля биотин-антитело на 10 млн клеток, в течение 10 мин при 4°С. Добавляли 30 мкл холодного буфера и 20 мкл магнитных гранул с антителом к биотину на 10 млн клеток и смесь инкубировали в течение еще 15 мин при 4°С. Клетки промывали, добавляя 10-20-кратный существующий объем, и затем осуществляли стадии центрифугирования при 300хд в течение 10 мин. Вплоть до 100 млн клеток ресуспендировали в 500 мкл буфера. Магнитную сепарацию немеченных человеческих рап-Т-клеток осуществляли с помощью ЬЗ-колонок (фирма МШепуа Вю1ес, № 130-042-401) согласно инструкциям производителя. Осуществляли автоматический подсчет полученной популяции Т-клеток (устройство У1Се11) и хранили их в среде А1М-У при 37°С, 5% СО₂ в инкубаторе вплоть до начала анализа (не более 24 ч).

Выделение первичных человеческих наивных (нестимулированных) Т-клеток из РВМС.

Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) получали путем центрифугирования в градиенте плотности Н1з1орацпе из обогащенных лимфоцитами препаратов (лейкоцитарные пленки), полученных из местных банков крови или из свежей крови здоровых доноров. Для получения фракции, обогащенной Т-клетками из РВМС, использовали набор для выделения наивных СЭ8+-Т-клеток (№Ае СЭ8' Т се11 1зо1а1юп Κίΐ) фирмы М111епу1 Вю1ес (№ 130093-244) согласно инструкциям производителя, но пропуская последнюю стадию выделения СЭ8'-Т-клеток (см. также описание выделения первичных человеческих рап-Т-клеток).

Выделение мышиных рап-Т-клеток из спленоцитов.

Выделяли селезенки из мышей С57ВБ/6, переносили их в С-пробирку СепИеМАСЗ (фирма М111епу1 Вю1есН, №. 130-093-237), содержащую МАСЗ-буфер (ЗФР + 0,5% БСА + 2 мМ ЭДТК), и расщепляли с помощью устройства для диссоциации тканей Оеп!1еМАСЗ с получением суспензии одиночных клеток согласно инструкциям производителя. Клеточную суспензию пропускали через фильтр для предварительного разделения для удаления недиссоциированных частиц ткани. После центрифугирования при 400хд в течение 4 мин при 4°С добавляли буфер для лизиса АСК для лизирования эритроцитов (инкубация в течение 5 мин при комнатной температуре). Оставшиеся клетки дважды промывали буфером МАСЗ, подсчитывали и применяли для выделения мышиных рап-Т-клеток. Негативную (магнитную) селекцию осуществляли, используя набор для выделения рап-Т-клеток фирмы М111епу1 Вю1ес (№ 130-090-861), согласно инструкциям производителя. Осуществляли автоматический подсчет полученной популяции Т-клеток (устройство У1Се11) и немедленно применяли для дополнительных анализов.

Выделение первичных РВМС обезьян циномолгус из гепаризированной крови.

Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) получали путем центрифугирования в градиенте плотности из свежей крови здоровых обезьян циномолгус следующим образом: гепаринизированную кровь разводили в соотношении 1:3 стерильным ЗФР и среду ЬутрНоргер (фирма Ахоп ЬаЪ, № 1114545) разводили до 90% стерильным ЗФР. Два объема разведенной крови наслаивали на один объем разведенного градиента плотности и фракцию РВМС разделяли путем центрифугирования в течение 30 мин при 520хд без торможения при комнатной температуре. Полосу, соответствующую РВМС, переносили в свежую 50-миллилитровую пробирку Ра1соп и промывали стерильным ЗФР путем центрифугирования в течение 10 мин при 400хд при 4°С. Осуществляли одну стадию низкоскоростного центрифугирования для удаления тромбоцитов (15 мин при 150хд, 4°С) и осуществляли автоматический подсчет полученной популяции РВМС (устройство У1Се11) и сразу применяли для дополнительных анализов.

- 52 030147

Клетки-мишени.

Для оценки биспецифических антигенсвязывающих молекул, мишенью которых является МС8Р, использовали следующие линии опухолевых клеток: человеческая клеточная линия меланомы \УМ266-4 (АТСС № СКЬ-1676), выведенная из метастатического сайта злокачественной меланомы и экспрессирующая высокие уровни человеческого МС8Р; и человеческая клеточная линия меланомы МУ-3 (любезно предоставленная Медицинским центром Неймегенского университета Радбода (КаЪЪоий ип1уег811у №)тедеи МеЛса1 Сейте)), экспрессирующая средние уровни человеческого МС8Р.

Для оценки биспецифических антигенсвязывающих молекул, мишенью которых является СЕА, использовали следующие линии опухолевых клеток: человеческая клеточная линия рака желудка МКШ5 (Б8М2 № АСС 409), экспрессирующая высокие уровни человеческого СЕА; клеточная линия аденокарциномы ободочной кишки женщины кавказской расы Ь8-174Т (ЕСАСС № 87060401), экспрессирующая низкие уровни человеческого СЕА; человеческая клеточная линия эпителиоидной карциномы поджелудочной железы Рапс-1 (АТСС № СКЬ-1469), экспрессирующая (очень) низкие уровни человеческого СЕА; и мышиная клеточная линия карциномы ободочной кишки МС38-1шСЕА. которая была создана в лаборатории заявителей, стабильно экспрессирующая человеческий СЕА.

Кроме того, человеческую линию клеток Т-клеточного лейкоза (Т-лимфобластный лейкоз) Дика! (АТСС № Т1В-152) применяли для оценки связывания различных биспецифических конструкций с человеческим СБ3 на клетках.

Пример 1.

Получение, очистка и характеризация биспецифических антигенсвязывающих молекул.

Последовательности вариабельных областей тяжелых и легких цепей субклонировали в рамке считывания либо с константной областью тяжелой цепи, либо с константной областью легкой цепи, которые предварительно встраивали в соответствующий экспрессионный вектор-реципиент млекопитающего. Антитело экспрессировали под контролем промотора МР8У и синтетическую сигнальную последовательность поли-А помещали на 3'-конец СБ8. Кроме того, вектор содержал последовательность Οι^ ЕВУ.

Молекулы получали путем котрансфекции клеток НЕК293 ΕВNА экспрессионными векторами млекопитающих. Клетки НЕК293 ΕВNА на экспоненциальной фазе роста трансфектировали с помощью фосфата кальция. В альтернативном варианте клетки НЕК293 ΕВNА, растущие в суспензии, трансфектировали, используя полиэтиленимин (ПЭИ). Для получения конструкций "1+1 Ι§Ο ксРаЪ, с одним плечом/с одним плечом инвертированная" клетки трансфектировали соответствующим экспрессионными векторами в соотношении 1:1:1 ("вектор тяжелой цепи":"вектор легкой цепи":"вектор тяжелой цепи ксРаЪ"). Для получения конструкций "2+1 Ι§Ο ксРаЪ" клетки трансфектировали соответствующим экспрессионными векторами в соотношении 1:2:1 ("вектор тяжелой цепи":"вектор легкой цепи":"вектор тяжелой цепи - 8сРаЪ"). Для получения конструкций "1+1 Ι§Ο СгоххГаЬ" клетки трансфектировали соответствующим экспрессионными векторами в соотношении 1:1:1:1 ("вектор второй тяжелой цепи":"вектор первой легкой цепи":"вектор легкой цепи Сго88ГаЪ":"вектор первой тяжелой цепи-тяжелой цепи Сго88ГаЪ"). Для получения конструкций "2+1 Ι§Ο СгоккГаЪ" клетки трансфектировали соответствующим экспрессионными векторами в соотношении 1:2:1:1 ("вектор второй тяжелой цепи":"вектор легкой цепи":"вектор первой тяжелой цепи-тяжелой цепи Сго88ГаЪ)":"вектор легкой цепи СгоккГаЪ". Для получения конструкции "2+1 Ι§Ο СгоккГаЪ, связанная легкая цепь" клетки трансфектировали соответствующим экспрессионными векторами в соотношении 1:1:1:1 ("вектор тяжелой цепи":"вектор легкой цепи":"вектор тяжелой цепи" (Сго88РаЪ-РаЪ-Рс)":"вектор связанной легкой цепи"). Для получения конструкции "1+1 СгоккМаЪ" клетки трансфектировали соответствующим экспрессионными векторами в соотношении 1:1:1:1 ("вектор первой тяжелой цепи":"вектор второй тяжелой цепи":"вектор первой легкой цепи":"вектор второй легкой цепи"). Для получения конструкции "1+1 Ι§Ο СгоккГаЪ слияние легкой цепи" клетки трансфектировали соответствующим экспрессионными векторами в соотношении 1:1:1:1 ("вектор первой тяжелой цепи":"вектор второй тяжелой цепи":"вектор легкой цепи Сго88ГаЪ":"вектор второй легкой цепи").

Для трансфекции с использованием фосфата кальция клетки выращивали в виде прикрепленных монослойных культур в Т-колбах с использованием среды БМЕМ, дополненной 10 об.% РС8, и трансфектировали при достижении степени конфлюэнтности 50- 80%. Для трансфекции Т150-колб 15 млн клеток высевали за 24 ч до трансфекции в 25 мл культуральной среды БМЕМ, дополненной РС8 (до достижения концентрации 10 об.%), и клетки выдерживали при 37°С в инкубаторе в атмосфере 5% СΟ₂ в течение ночи. Для осуществления трансфекции в каждой Т150-колбе приготавливали раствор, содержащей ДНК, СаС1₂ и воду, путем смешения 94 мкг общего плазмидного ДНК-вектора, разведенного до соответствующего соотношения водой до конечного объема 469 мкл, и 469 мкл 1 М раствора СаС1₂. К этому раствору добавляли 938 мкл раствора, содержащего 50 мМ НЕРЕ8, 280 мМ №С1, 1,5мМ Nа₂НРΟ₄, рН 7,05, немедленно перемешивали в течение 10 с и выдерживали при комнатной температуре в течение 20 с. Суспензию разводили с помощью 10 мл БМЕМ, дополненной 2 об.% РС8, и добавляли в Т150колбу вместо присутствующей среды. Затем добавляли еще 13 мл среды для трансфекции. Клетки инкубировали при 37°С, 5% ί.’Ο₂ в течение примерно 17-20 ч, затем среду заменяли на 25 мл БМЕМ, 10%

- 53 030147

РСЗ. Кондиционированную культуральную среду собирали примерно через 7 дней после замены среды путем центрифугирования в течение 15 мин при 210хд, стерилизовали фильтрацией (фильтр 0,22 мкм), дополняли азидом натрия до конечной концентрации 0,01% (мас./об.) и выдерживали при 4°С.

Для трансфекции с использованием полиэтиленимина (ПЭИ) клетки НЕК293 ЕВNΑ культивировали в суспензии в бессывороточной культуральной среде СБ СΗΟ. Для получения в 500-миллилитровых стряхиваемых колбах 400 миллионов клеток НЕК293 ЕВNΑ высевали за 24 ч до трансфекции. Для трансфекции клетки центрифугировали в течение 5 мин при 210хд, и супернатант заменяли 20 мл предварительной нагретой среды СБ СΗΟ. Экспрессионные векторы смешивали в 20 мл среды СБ СΗΟ до достижения конечного количества ДНК 200 мкг. После добавления 540 мкл ПЭИ смесь интенсивно перемешивали в течение 15 с и затем инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем клетки смешивали с раствором ДНК/ПЭИ, переносили в 500-миллилитровые встряхиваемые колбы и инкубировали в течение 3 ч при 37°С в инкубаторе в атмосфере 5% СΟ₂. После завершения инкубации добавляли 160 мл Р17-среды и клетки культивировали в течение 24 ч. Через 1 день после трансфекции добавляли 1 мМ вальпроевую кислоту и 7% Реей 1 (фирма Ьон/а). После культивирования в течение 7 дней супернатант собирали для очистки путем центрифугирования в течение 15 мин при 210хд, раствор стерилизовали фильтрацией (фильтр 0,22 мкм), дополняли азидом натрия до конечной концентрации 0,01% (мас./об.), выдерживали при 4°С.

Секретируемые белки очищали из супернатантов клеточных культур с помощью аффинной хроматографии на белке А с последующей стадией гель-фильтрации.

Для осуществления аффинной хроматографии супернатант вносили на колонку НГТтар Рто!е1иА НР (СУ = 5 мл, фирма СЕ Неа1!Ьсаге), уравновешенную 25 мл смеси, содержащей 20 мМ фосфат натрия, 20 мМ цитрат натрия, рН 7,5, или 40 мл смеси, содержащей 20 мМ фосфат натрия, 20 мМ цитрат натрия, 0,5 М хлорид натрия, рН 7,5. Несвязанный белок удаляли отмывкой, используя, по меньшей мере, объем, равный 10 объемам колонки, смеси, содержащей 20 мМ фосфат натрия, 20 мМ цитрат натрия, 0,5 М хлорид натрия, рН 7,5, с последующей дополнительной стадией отмывки с использованием по меньшей мере 6 объемов колонки, смеси, содержащей 10 мМ фосфат натрия, 20 мМ цитрат натрия, 0,5 М хлорид натрия, рН 5,45. Затем колонку отмывали 20 мл смеси, содержащей 10 мМ МЕЗ, 100 мМ хлорид натрия, рН 5,0, и требуемый белок элюировали, используя 6 объемов колонки смеси, содержащей 20 мМ цитрат натрия, 100 мМ хлорида натрия, 100 мМ глицин, рН 3,0. В альтернативном варианте целевой белок элюировали, используя превышающий 20 объемов колонки объем градиента от 20 мМ цитрата натрия, 0,5 М хлорида натрия, рН 7,5 до 20 мМ цитрата натрия, 0,5 М хлорида натрия, рН 2,5. Раствор белка нейтрализовали, добавляя 1/10 0,5М фосфата натрия, рН 8. Целевой белок концентрировали и фильтровали перед внесением на колонку ШЬоай Супердекс 200 (фирма СЕ Неа1!Ьсаге), уравновешенную раствором, содержащим 25 мМ фосфат калия, 125 мМ хлорид натрия, 100 мМ глицин, рН 6,7. Для очистки конструкции "1+1 1дС СгоккГаЬ" колонку уравновешивали раствором, содержащим 20 мМ гистидин, 140 мМ хлорид натрия, рН 6,0.

Концентрацию белка в очищенных белковых образцах определяли путем измерения оптической плотности (ОП) при 280 нм, использую коэффициент молярной экстинции, рассчитанный на основе аминокислотной последовательности. Чистоту и молекулярную массу биспецифических конструкций анализировали с помощью ДСН-ПААГ в присутствии восстановителя (5 мМ 1,4-дитиотреитол) или без него и окрашивали кумассии (З1тр1еВ1ие™ ЗаГеЗ!аш, фирма 1^Ьтодеи), используя гелевую систему NиРΑСЕ® Рге-Сак! (фирма 1^Ьтодеи, США) согласно инструкциям производителя (4-12% трис-ацетатные гели или 4-12% бис-трис). В альтернативном варианте чистоту и молекулярную массу анализировали с помощью КЭ-ДСН в присутствии восстановителя или без него, используя систему СаПрег ЬаЬСЫр СХ11 (фирма СаПрег ЫГекшеисе), согласно инструкциям производителя.

Содержание агрегатов в белковых образцах анализировали, используя колонку для аналитической гель-фильтрации Супердекс 200 10/300СБ (фирма СЕ НеаПЬсате) в подвижном буфере, содержащем 2 мМ МΟРЗ, 150 мМ №С1, 0,02% (мас./об.) ΝπΝ₃, рН 7,3, при 25°С. В альтернативном варианте содержание агрегатов в образцах антител анализировали, используя колонку для аналитической гельфильтрации ТЗКде1 С3000 З\У ХЬ (фирма ТокоЬ) в подвижном буфере, содержащем 25 мМ 125 мМ №С1, 200 мМ моногидрохлорид Ь-аргинина, 0,02% (мас./об.) ΝπΝ₃, рН 6,7, при 25°С.

На фиг. 2-14 представлены результаты ДСН-ПААГ и аналитической гель-фильтрации, а в табл. 2А представлены данные о выходе, содержании агрегатов после очистки на белке А и о конечном содержании мономеров в препаратах различных биспецифических конструкций.

На фиг. 47 представлены результаты КЭ-ДСН-анализов анти-СБ3/анти-МСЗР биспецифической конструкции "2+1 1дС СгоккГаЬ, связанная легкая цепь" (см. ЗЕЦ ΙΌ ΝΟ: 3, 5, 29 и 179). Для анализов использовали по 2 мкг образца. На фиг. 48 представлены результаты аналитической гель-фильтрации конечного продукта (инъецировали 20 мкг образца).

На фиг. 54 представлены результаты анализов методом КЭ-ДСН и ДСН-ПААГ различных конструкций, а в табл. 2А представлены данные о выходе, содержании мономеров после очистки на белке А и о конечном содержании мономеров в препаратах различных биспецифических конструкций.

- 54 030147

Таблица 2А

Выход, содержание агрегатов после очистки на белке А и конечное

содержание мономеров

Конструкция	Выход [мг/л]	Содержание агрегатов после очистки на белке А [%]	НМА [%]	ЬМА [%]	Мономеры [%]
МС8Р
2+1 1§О СгоззГаЬ; обмен УН/УЬ (ЬС007/У9) (δΕΟ ГО ΝΟ: 3, 5, 29, 33)	12,8	2,2	0	0	100
2+1 1§О СгоззГаЪ; обмен УН/УЬ (ЬС007/РМ8)	3,2	5,7	0,4	0	99,6
(δΕΟ ГО ΝΟ: 3, 5, 35, 37) 2+1 1§О зсРаЬ, Р329О ЬАЬА	11,9	23	0,3	0	99,7
(δΕΟ Ю ΝΟ: 5, 21, 23) 2+1 1§О 8сРаЬ, ЬАЬА	9	23	0	0	100
(δΕΟ Ю ΝΟ: 5, 17, 19) 2+1 1§О зсРаЬ, Р329О ЬАЬА Ν297ϋ (8Е0 ГО N0: 5, 25, 27)	12,9	32,7	0	0	100
2+1 1§0 зсРаЬ, ννί (δΕΟ ГО ΝΟ: 5, 13, 15)	15,5	31,8	0	0	100
1+1 1§0 зсРаЬ (δΕΟ ГО ΝΟ: 5, 21, 213)	7	24,5	0	0	100
1 + 1 1§0 8сРаЬ «с одним плечом» (δΕΟ Ю ΝΟ: 1, 3, 5)	7,6	43,7	2,3	0	97,7
1 + 1 1дО зсРаЬ «с одним плечом инвертированная» (δΕΟ ГО N0: 7, 9, 11)	1	27	7,1	9,1	83,8
1 + 1 1дС СгохзГаЬ; обмен УН/УЬ (ЬС007/У9) (δΕΟ ГО ΝΟ: 5, 29,31,33)	9,8	0	0	0	100
2+1 1§О СгоззГаЬ, связанная легкая цепь; обмен УЬ/УН (ЬС007/У9) (8Е0 ГО ΝΟ: 3, 5, 29, 179)	0,54	40	1,4	0	98,6
1+1 1§О СгоззГаЬ; обмен УЬ/УН (ЬС007/У9) (δΕΟ ГО ΝΟ: 5, 29, 33, 181)	6,61	8,5	0	0	100
1 + 1 СгоззМаЬ; обмен СЬ/СН1 (ЬС00/У9) (δΕΟ ГО N0: 5, 23, 183, 185)	6.91	10,5	1,3	1,7	97
2+1 1§0 СгоззГаЬ, инвертированная; обмен СЬ/СН1 (ЬС007/У9) (δΕΟ ГО ΝΟ: 5, 23, 183, 187)	9,45	6,1	0,8	0	99,2
2+1 1§С СгоззГаЬ; обмен УЬ/УН (М4-3 МЬ2/У9) (8Е0 ГО ΝΟ: 33, 189, 191, 193)	36.6	0	9,5	35,3	55,2
2+1 1§С СгоззГаЬ; обмен СЬ/СН1 (М4-3 МЬ2/У9) (8Е0 ГО ΝΟ: 183, 189, 193, 195)	2,62	12	2,8	0	97,2
2+1 1§0 СгоззГаЬ; обмен СЬ/СН1 (М4-3 МЬ2/Н2С) (δΕΟ ГО ΝΟ: 189, 193, 199, 201)	29,75	0	0	0	100
2+1 1§О СгоззГаЬ; обмен СЬ/СН1 (ЬС007/анти-СОЗ) (δΕΟ ГО ΝΟ: 5, 23, 215, 217)	1,2	0	1,25	1,65	97,1
2+1 1§О СгоззГаЪ, инвертированная; обмен СЬ/СН1 (ЬС007/анти-СОЗ) (δΕΟ ГО ΝΟ: 5, 23, 215, 219)	7,82	0,5	0	0	100
ЕСРК
2+1 1§О зсРаЬ (8Е0 ГО ΝΟ: 45,47, 53)	5,2	53	0	30	70
1 + 1 1§О 8сРаЬ (δΕΟ ГО N0:47,53,213)	3,4	66,6	0	1,6	98,4
1 + 1 1§О зсРаЬ « с одним плечом» (δΕΟ ГО ΝΟ: 43, 45, 47)	9,05	60,8	0	0	100
1 + 1 1§О зсРаЬ «с одним плечом инвертированная» (8Е0 ГО ΝΟ: 11, 49, 51)	3,87	58,8	0	0	100
РАР

- 55 030147

2+1 1§О зеРаЬ (8Е(3 ГО ΝΟ: 57, 59, 61)	12,57	53	0	0	100
1 + 1 1§О зеРаЬ (5Е(3 ГО ΝΟ: 57,61,213)	17,95	41	0,4	0	99,6
1 + 1 1§С зеРаЬ «с одним плечом инвертированная» (5Е() ГО ΝΟ: 11, 51, 55)	2,44	69	0,6	0	99,4
СЕЛ
2+1 1§О СгоззРаЬ, инвертированная; обмен УЬ/УН (СН1А1А/У9) (5Е0 ГО ΝΟ: 33, 63, 65, 67)	0,34	13	4,4	0	95,6
2+1 1§С СгоззГаЬ, инвертированная; обмен СЬ/СН1 (СН1А1А/У9) (5Е(3 ГО ΝΟ: 65, 67, 183, 197)	12,7	43	0	0	100
2+1 1§О СгоззГаЬ, инвертированная; СЬ/СН 1 (431/26/У9) (5Е(3 ГО ΝΟ: 183, 203, 205, 207)	7,1	20	0	0	100
1 + 1 1§С-СгоззГаЬ слияние легкой цепи (СН1А1А/У9) (ЗЕ<3 ГО ΝΟ: 183, 209, 211,213)	7,85	27	4,3	3,2	92,5

В качестве контроля создавали биспецифические антигенсвязывающие молекулы в известном из существующего уровня техники формате тандема зсРу ("(8сРу)₂") и путем слияния тандема зсРу с Ре-доменом ("(зсРу)₂-Рс"). Молекулы получали в клетках ΗΕΚ293-ΕΒΝΑ и очищали аффинной хроматографией на белке А с последующей стадией гель-фильтрации аналогично методу, описанному выше для биспецифических антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в изобретении. Из-за значительного образования агрегатов некоторые образцы требовалось подвергать дополнительной очистке, перенося элюированные и концентрированные образцы из колонки IΙιΐ.οίκΐ Супердекс 200 (фирма ΟΕ НеаЙЕсаге) на колонку Супердекс 10/300 ОБ (фирма ΟΕ НеаЕЕсаге), уравновешенную 20 мМ гистидином, 140 мМ хлоридом натрия, рН 6,7, для получения белка с более высоким содержанием мономеров. Затем согласно описанному выше методу определяли концентрацию белка, чистоту, молекулярную массу и содержание агрегатов.

Данные о выходе, содержании агрегатов после первой стадии очистки и конечное содержание мономеров для контрольных молекул представлены в табл. 2Б. Сравнение содержания агрегатов после первой стадии очистки (белок А) свидетельствует о более высокой стабильности конструкцией 1дО СгоззРаЬ и 1дО зеРаЬ по сравнению с молекулой "(зсРу)₂-Рс" и связанной дисульфидными мостиками молекулой "(488сРу)2-Рс".

Таблица 2Б

Выход, содержание агрегатов после очистки на белке А и конечное содержание мономеров

Конструкция	Выход [мг/л]	Содержание агрегатов после очистки на белке А [%1	Конечное содержание
			НМ\У [%]	ЬМАУ [%]	Мономеры 1%]
(5СрУ)₂-Рс (анти-МС8Р/антиЬиСОЗ)	76,5	40	0,5	0	99,5
(088Сру)2-Рс (анти-МСЗР/антиЬиСОЗ)	2,65	48	7,3	8,0	84,7

Термостабильность белков определяли на основе динамического рассеяния света (ΌΕ8). По 30 мкг профильтрованных белковых образцов с концентрацией белка 1 мг/мл вносили с дублированием в планшет-ридер типа Иупарго (фирма АуаИ ТесЬпо1оду Согрогайоп; США). Температуру повышали с 25 до 75°С со скоростью 0,05°С/мин, определяя радиус и общую интенсивность рассеяния. Результаты представлены на фиг. 15 и в табл. 2В. Для молекулы "(зсРу)₂-Рс" (анти-МСЗР/анти-ЬиСВЗ) обнаружены две точки агрегации при 49 и 68°С. Для конструкции "(Й88сРу)₂-Рс" характерна повышенная температура агрегации (57°С) в результате введения дисульфидного мостика (фиг. 15А, табл. 2В). Для обеих конструкций "2+1 1дО зеРаЬ" и "2+1 1дО СгоззРаЬ" обнаружена агрегация при температуре, превышающей 60°С, что свидетельствует об их повышенной термостабильности по сравнению с форматами "(зсРу)₂-Рс" и "(Й88сРу)2-Рс" (фиг. 15Б, табл. 2В).

- 56 030147

Таблица 2В

Термостабильность, определенная с помощью динамического рассеяния света

Конструкция	т_аее [°с]
2+1 1§О 5 с РаЬ (ЬС007/У9)	68
2+1 1§С СгоззГаЬ (ЬС007/У9)	65
Рс-(зсРу)2 (ЬС007/У9)	49/68
Рс-(Й88сРу)2 (ЬС007/У9)	57

Пример 2.

Анализ методом резонанса поверхностного плазмона связывания Рс-рецептора и антигена-мишени.

Метод.

Все эксперименты на основе резонанса поверхностного плазмона (8РР) осуществляли с использованием устройства В1аеоте Т100 при 25°С, применяя в качестве подвижного буфера НВ8-ЕР (0,01 М НЕРЕ8 рН 7,4, 0,15 М №С1, 3 мМ ЭДТК, 0,005% Сурфактанта Р20, фирма Вхасоте, Фрейбург/Германия).

Анализ связывания РсР с различными Рс-вариантами.

Схема анализа представлена на фиг. 16А. Для анализа взаимодействия различных Рс-вариантов с человеческим РсуМНа-У^З и мышиным РсуРРУ осуществляли непосредственное сочетание, используя примерно 6500 резонансных единиц (Ри) антитела к Реп1а-Н18 (фирма Р1адеп), на СМ5-чипе при рН 5,0 с помощью стандартного набора для аминного сочетания (фирма Вхасоте, Фрейбург/Германия). НиРеγРΠРа-У158-К6Н6 и тиРеγРРУ-аν^Н^8-биотии "захватывали" в течение 60 с в концентрации 4 и 10 нМ соответственно.

Конструкции с различными мутациями Рс пропускали через проточные ячейки в течение 120 с в концентрации 1000 нМ со скоростью потока 30 мкл/мин. Мониторинг диссоциации осуществляли в течение 220 с. Различия всех показателей преломления корректировали путем вычитания ответа, полученного в проточной референс-ячейке. Для этого Рс-варианты пропускали по поверхности с иммобилизованным антителом к Реп1а-Н18, но на которую инъецировали НВ8-ЕР, а не НиРеγРШа-У158-К6Н6 или тиРеγРРУ-аν^Н^8-биотии. Аффинность в отношении рецепторов человеческий РсуРШа-У158 и мышиный РсуРРУ определяли, используя Рс дикого типа в концентрациях от 500 до 4000 нМ.

Ответ на стационарной стадии использовали для определения константы диссоциации (К_о) с помощью аппроксимации нелинейной кривой изотермы связывания Ленгмюра. Кинетические константы рассчитывали с использованием модели связывания Ленгмюра 1:1 посредством численного интегрирования (νΆΆ, фирма Вхасоте АВ, Уппсала/Швеция).

Результаты.

Взаимодействие Рс-вариантов с мышиным РсуРНРа и мышиным РсуРРУ определяли с помощью резонанса поверхностного плазмона. Связывание с "захваченными" конструкциями киРеуРШа-У158-К6Н6 и тиРеуРРУ-аν^Н^8-биотии существенно снижалось для всех проанализированных мутантов Рс по сравнению с конструкцией, содержащей Рс-домен дикого типа (ννΐ).

Мутанты Рс, отличающиеся наиболее низкой способностью связываться с человеческим Рсу-рецептором, несли мутации Р329О Б234А Б235А (БАБА) и Р329О БАБА N2970. Только мутации БАБА не достаточно для элиминации связывания с киРеуРШа-У158-К6Н6. Рс-вариант, несущий только мутацию БАБА, обладал остаточной аффинностью к связыванию с человеческим РсуРНРа, составляющей 2100 нМ, а аффинность связывания Рс \\1 с человеческим рецептором РсуРРРРа составляла 600 нМ (табл. 3). Оба значения Ко получали с использованием модели связывания 1:1, используя одну концентрацию.

Аффинность к рецепторам человеческий РеуРШа-У158 и мышиный РсуРРУ удалось проанализировать только для Рс \νΙ. Значения Ко представлены в табл. 3. Связывание с мышиным РсуРРУ было практически полностью элиминировано для всех проанализированных мутантов Рс.

Таблица 3

Аффинность Рс-вариантов к человеческому РсуРШа-У158 и мышиному РсуРРУ

Ко в нМ Т = 25°С	Человеческий РсуКШа-У158	Мышиный РсуКЛУ
	Кинетика	Стационарная стадия	Кинетика	Стационарная стадия
Рс-ννί (5Е(2 ГО ΝΟ: 5, 13, 15)	600*(1200)	3470	576	1500
Рс-ЬАЬА (8Е() ГО ΝΟ: 5, 17, 19)	2130*	п.й.	η.ά.
РС-Р329О ЬАЬА (3Εζ) ГО ΝΟ: 5, 21, 23)	п.й.	η.ά.
Рс-Р329О ЬАЬА Ν297ϋ (8Ες ГО ΝΟ: 5, 25, 27)	п.й.	η.ό.

*Определение с использованием одной концентрации (1000 нМ).

- 57 030147

Анализ одновременного связывания с опухолевым антигеном и ί'.Ό3.

Анализ одновременного связывания активирующих Т-клетки биспецифических конструкций с опухолевым антигеном и человеческим ί'.Ό3ι: осуществляли путем непосредственно сочетания примерно 1650 резонансных единиц (КИ) биотинилированного 03-домена МСЗР на сенсорном ЗА-чипе с помощью стандартной процедуры сочетания. Человеческий ЕОРК иммобилизовывали с использованием стандартной процедуры аминного сочетания. 8000 КИ иммобилизовывали на сенсорном СМ5-чипе при рН 5,5. Схема анализа представлена на фиг. 16Б.

Различные активирующие Т-клетки биспецифические конструкции "захватывали" в течение 60 с в концентрации 200 нМ. Затем конструкцию "человеческий СО3у(О.₁З)₅СО3а-ЛсТеу-Рс("выступ")Ау1/Рс("впадина") пропускали в концентрации 2000 нМ и со скоростью потока 40 мкл/мин в течение 60 с. Разницы всех показателей преломления корректировали путем вычитания ответа, полученного в проточной референс-ячейке, в которой рекомбинантный ί'.Ό3ι: пропускали по поверхности с иммобилизованным 03-доменом МСЗР или ЕОРК без "захваченных" активирующих Т-клетки биспецифических конструкций.

Результаты.

Одновременное связывание как с опухолевым антигеном, так и с человеческим ί'.Ο3ι: анализировали с помощью резонанса поверхностного плазмона (фиг. 17, 18). Все конструкции обладали способностью одновременно связываться с опухолевым антигеном СО3. Для большинства конструкций уровень связывания (КИ) после инъекции человеческого ί'.Ο3ι: оказался выше, чем уровень связывания, обнаруженный после инъекции только конструкции, что свидетельствует о том, что и опухолевый антиген и человеческий ί'.Ό3ι: связывались с конструкцией.

Пример 3.

Связывание биспецифических конструкций с соответствующим антигеном-мишенью на клетках.

Связывание различных биспецифических конструкций с СО3 на клетках Лика! (АТСС, № Т1В-152) и с соответствующим опухолевым антигеном на клетках-мишенях определяли с помощью РАСЗ. В целом, метод состоял в следующем: клетки собирали, подсчитывали и определяли их жизнеспособность. Высевали по 0,15-0,2 млн клеток/лунку (в ЗФР, содержащем 0,1% БСА; 90 мкл) в круглодонный 96луночный планшет и инкубировали с взятыми в указанной концентрации биспецифическими конструкциями и соответствующими 1§О-контролями (10 мкл) в течение 30 мин при 4°С. Для улучшения сравнения все конструкции и 1§О-контроли стандартизовали относительно одной и той же молярности. После инкубации клетки центрифугировали (5 мин, 350/д), промывали 150 мкл ЗФР, содержащим 0,1% БСА, ресуспендировали и инкубировали в течение еще 30 мин при 4°С, используя 12 мкл/лунку конъюгированного с ФИТЦ или РЕ вторичного антитела. Связанные конструкции выявляли, используя РАСЗСайоП (программа РАСЗ фирмы О1уа). Для выявления молекулы "(зсРу)₂" применяли конъюгированное с ФИТЦ антитело к Шз (фирма Ьисегпа, № КН1З-45Р-2). Для всех других молекул использовали конъюгированный с ФИТЦ или РЕ Р(аЬ')₂-фрагмент козьего античеловеческого 1дО АйлтРиге, специфический в отношении Рсу-фрагмента (фирма 1аскзоп 1ттипо КезеагсЬ ЬаЬ, № 109-096-098/рабочий раствор 1:20 или № 109-116-170/рабочий раствор 1:80 соответственно). Клетки промывали, добавляя 120 мкл/лунку ЗФР, содержащего 0,1% БСА, и центрифугирования при 350/д в течение 5 мин. Вторую стадию отмывки осуществляли, используя 150 мкл/лунку ЗФР, содержащего 0,1% БСА. Если не указано иное, то клетки фиксировали, используя по 100 мкл/лунку буфера для фиксации (фирма ВО, № 554655) в течение 15 мин при 4°С в темноте, центрифугировали в течение 6 мин при 400/д и выдерживали в 200 мкл/лунку ЗФР, содержащего 0,1% БСА, вплоть до оценки образцов с помощью устройства РАСЗ Сайой. Значения ЕС₅₀ рассчитывали с помощью программы ОгарЬРай Рпзт.

В первом эксперименте различные биспецифические конструкции, мишенями которых являются человеческий МСЗР и человеческий СО3, анализировали с помощью проточной цитометрии в отношении связывания с человеческим СО3, экспрессируемым на клетках Лика!, на клетках человеческого Т-клеточного лейкоза или с человеческим МСЗР на клетках человеческой меланомы линии Со1о-38.

Результаты представлены на фиг. 19-21 в виде средней интенсивности флуоресценции клеток, которые инкубировали с биспецифической молекулой, контрольным 1§О, только с вторичным антителом или оставляли необработанными.

Как продемонстрировано на фиг. 19, для обоих антигенсвязывающих фрагментов молекулы "(зсРу)₂", т.е. связывающихся с СО3 (фиг. 19А) и МСЗР (фиг. 19Б), обнаружен четкий сигнал связывания по сравнению с контрольными образцами.

Для молекулы "2+1 1§О зсРаЬ" (ЗЕО Ιϋ Ν0: 5, 17, 19) продемонстрировано выраженное связывание с ЛиМСЗР на клетках Со1о-38 (фиг. 20А). Фрагмент, мишенью которого являлся СО3, связывался с СО3 несколько лучше, чем с референс-антителом, которое представляло собой 1§О к человеческому СО3 (фиг. 20Б).

Как продемонстрировано на фиг. 21А, две конструкции "1+1" характеризовались сопоставимыми сигналами связывания с человеческим СО3 на клетках. Референс-антитело, которое представляло собой 1дО к человеческому СО3, характеризовалось несколько более слабым сигналом. Кроме того, обе протес- 58 030147

тированные конструкции ("1+1 Ι§0 ксРаЪ, с одним плечом" (ЗЕр ГО N0: 1, 3, 5) и "1+1 Ι§0 ксРаЪ, с одним плечом инвертированная" (ЗЕр ГО N0: 7, 9, 11)) характеризовались сопоставимым связыванием с человеческим МСЗР на клетках (фиг. 21Б). Сигнал связывания, обнаруженный для референс-антитела, которое представляет собой Ι§0 к человеческому МСЗР, оказался более слабым.

В другом эксперименте очищенную биспецифическую конструкцию "2+1 Ι§0 ксРаЪ"

(ЗЕр ГО N0: 5, 17, 19) и соответствующий Ι§0 к человеческому МСЗР анализировали с помощью проточной цитометрии в отношении зависящего от дозы связывания с человеческим МСЗР на клетках человеческой меланомы линии Со1о-38 с целью решения вопроса о том, связывается ли биспецифическая конструкция с МСЗР через одно или оба своих "плеча". Как продемонстрировано на фиг. 22, для конструкции "2+1 Ι§0 ксРаЪ" обнаружена такая же схема связывания, что и для анти-МСЗР ΙβΟ.

Еще в одном эксперименте оценивали связывание биспецифических конструкций анти-СГО3/СЕА "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ, инвертированная" с обменом либо УЪ/УН (см. ЗЕр ГО N0: 33, 63, 65, 67), либо СБ/СН1 (см. ЗЕр ГО N0: 66, 67, 183, 197) в СгоккГаЪ-фрагменте с человеческим СГО3, экспрессируемым на клетках Лика!, или с человеческим СЕА, экспрессируемым на клетках БЗ-174Т. В качестве контроля оценивали также в эквивалентной максимальной концентрации соответствующие ΙβΟ и фоновое окрашивание меченым вторичным антителом (конъюгированный с ФИТЦ Р(аЪ')₂-фрагмент козьего античеловеческого ΙβΟ АНтРиге, специфический в отношении Рсу-фрагмента (фирма Люккоп Iттипо Кекеагск ЬаЪ, № 109-096-098)). Как проиллюстрировано на фиг. 55, обе конструкции характеризовались выраженным связыванием с человеческим СЕА, а также с человеческим СГО3 на клетках. Рассчитанные значения ЕС₅₀ составляли 4,6 и 3,9 нМ (СО3) и 9,3 и 6,7 нМ (СЕА) для конструкций "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ, инвертированная (УЪ/УН)" и "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ, инвертированная (СБ/СН1)" соответственно.

В другом эксперименте оценивали связывание анти-СГО3/МСЗР конструкций "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ" (см. ЗЕр ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ, инвертированная" (см. ЗЕр ГО N0: 5, 23, 183, 187) с человеческим СГО3, экспрессируемым клетками Лика!, или с человеческим МСЗР, экспрессируемым клетками ХУМ266-4. Как продемонстрировано на фиг. 56, хотя связывание обеих конструкций с МСЗР оказалось сопоставимо высоким, связывание "инвертированной" конструкции с СГО3 снижалось по сравнению с другой конструкцией. Рассчитанные значения ЕС₅₀ составляли 6,1 и 1,66 нМ (СГО3) и 0,57 и 0,95 нМ (МСЗР) для конструкций "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ, инвертированная" и "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ" соответственно.

В следующем эксперименте определяли связывание конструкции "1+1 Ι§0 СгоккГаЪ, слитая легкая цепь (ЬС)" (ЗЕр ГО N0: 183, 209, 211, 213) с человеческим СГО3, экспрессируемым клетками Лика!, и с человеческим СЕА, экспрессируемым клетками БЗ-174Т. В качестве контроля оценивали также в эквивалентной максимальной концентрации соответствующие ΙβΟ к СГО3 и к СЕА и фоновое окрашивание меченым вторичным антителом (конъюгированный с ФИТЦ Р(аЪ')₂-фрагмент козьего античеловеческого ΙβΟ АГПтРиге, специфический в отношении Рсу-фрагмента (фирма Люккоп Iттипо Кекеагск ЬаЪ, № 109096-098)). Как продемонстрировано на фиг. 57, связывание конструкции "1+1 Ι§0 СгоккГаЪ, слияние ЬС" с СЕА, по-видимому, значительно понижалось, в то время как связывание с СГО3 оказалось практически сопоставимым со связыванием референсНдО.

В последнем эксперименте определяли связывание конструкций "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ" (ЗЕр ГО N0: 5, 23, 215, 217) и "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ, инвертированная" (ЗЕр ГО N0: 5, 23, 215, 219) с человеческим СО3, экспрессируемым клетками Лика!, и с человеческим МСЗР, экспрессируемым опухолевыми клетками ХУМ266-4. Как продемонстрировано на фиг. 58, связывание с человеческим СГО3 оказалось пониженным для конструкции "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ, инвертированная" по сравнению с другими конструкциями, однако связывание с человеческим МСЗР оказалось сравнительно высоким. Рассчитанные значения ЕС₅₀ составляли 10,3 и 32,0 нМ (СО3) и 3,1 и 3,4 нМ (МСЗР) для конструкций "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ" и "2+1 Ι§0 СгоккГаЪ, инвертированная" соответственно.

Пример 4.

РАСЗ-анализ поверхностных маркеров активации на первичных человеческих Т-клетках при участии биспецифических конструкций.

Очищенные, имеющие в качестве мишени 1шМСЗР-1шСГО3 биспецифические молекулы "2+1 Ι§0 ксРаЪ" (ЗЕр ГО N0: 5, 17, 19) и "(ксРу)₂" тестировали с помощью проточной цитометрии в отношении их способности осуществлять повышающую регуляцию раннего поверхностного маркера активации СГО69 или позднего маркера активации СГО25 на СГО8'-Т-клетках в присутствии экспрессирующих человеческий МСЗР опухолевых клеток.

В целом, метод состоял в следующем: МСЗР-позитивные клетки Со1о-38 собирали с использованием буфера для расщепления клеток, подсчитывали их количество и оценивали жизнеспособность. Доводили количество (жизнеспособных) клеток до 0,3 х10⁶ на 1 мл в среде АМ-У, 100 мкл суспензии указанных клеток на лунку вносили с помощью пипетки в круглодонный 96-луночный планшет (как указано). По 50 мкл (разведенной) биспецифической конструкции добавляли в содержащие клетки лунки до получения конечной концентрации 1 нМ. Человеческие эффекторные клетки РВМС выделяли из свежей крови здорового донора и доводили количество (жизнеспособных) клеток до 6х10⁶ на 1 мл в среде АМ-У.

- 59 030147

По 50 мкл суспензии указанных клеток на лунку вносили в планшет для анализа (см. выше) до получения конечного соотношения Е:Т 10:1. Для решения вопроса о том, обладают ли биспецифические конструкции способностью активировать Т-клетки исключительно в присутствии клеток-мишеней, которые экспрессируют опухолевый антиген 1шМС8Р, включали анализ лунок, содержащих в концентрации 1 нМ соответствующие биспецифические молекулы, а также РВМС, но не содержащих клетки-мишени.

После инкубации в течение 15 ч (СГО69) или 24 ч (СГО25) при 37°С, 5% СО₂, клетки центрифугировали (5 мин, 350хд) и промывали дважды, используя 150 мкл/лунку ЗФР, содержащего 0,1% БСА. Осуществляли окрашивание поверхности для выявления СГО8 (мышиный 1дОь к; клон Н1Т8а; фирма ΒΌ № 555635), СГО69 (мышиный 1дОь клон Ь78; фирма ΒΌ № 340560) и СЭ25 (мышиный 1дОь к; клон М-А251; фирма ΒΌ № 555434) при 4°С в течение 30 мин согласно рекомендациям поставщика. Клетки промывали дважды, используя 150 мкл/лунку ЗФР, содержащего 0,1% БСА, и фиксировали в течение 15 мин при 4°С, используя 100 мкл/лунку буфера для фиксации (фирма ΒΌ № 554655). После центрифугирования образцы ресуспендировали, используя 200 мкл/лунку ЗФР с 0,1% БСА, и анализировали с помощью устройства РАС8 СайоП (программа РАС8 Эка).

На фиг. 23 представлены данные об уровне экспрессии раннего маркера активации СГО69 (А) или позднего маркера активации СГО25 (Б) на СЭ8'-Т-клетках после 15- или 24-часовой инкубации соответственно. Обе конструкции индуцировали повышающую регуляцию обоих маркеров активации исключительно в присутствии клеток-мишеней. Молекула "(8сРу)₂" продемонстрировала несколько более высокую активность в этом анализе, чем конструкция "2+1 1дО 8сРаЬ".

Кроме того, очищенные имеющие в качестве мишени 1шМС8Р-1шСГО3 биспецифические молекулы "2+1 1дО 8сРаЬ" и "(8сРу)₂" тестировали с помощью проточной цитометрии в отношении их способности осуществлять повышающую регуляцию позднего маркера активации СГО25 на СЭ8'-Т-клетках или СЭ4'Т -клетках в присутствии экспрессирующих человеческий МС8Р опухолевых клеток-мишеней. Экспериментальные процедуры соответствовали описанным выше, для осуществления анализа использовали человеческие эффекторные рап-Т-клетки при соотношении Е:Т 5:1, и продолжительность инкубации составляла 5 дней.

На фиг. 24 продемонстрировано, что обе конструкции индуцировали повышающую регуляцию СГО25 исключительно в присутствии клеток-мишеней как на поверхности СЭ8'-Т-клеток (А), так и СЭ4'Т-клеток (Б). В этом анализе установлено, что конструкция "2+1 1дО 8сРаЬ" индуцировала меньшую повышающую регуляцию СГО25 по сравнению с молекулой "(8сРу)₂". В целом, повышающая регуляция СЭ25 являлась более выраженной на СЭ8'-, чем на СЭ4'-Т-клетках.

В другом эксперименте анализировали способность очищенных молекул "2+1 1дО Сго88ГаЬ", мишенью которых является СГО3 обезьян циномолгус и человеческий МС8Р (8ЕО ГО N0: 3, 5, 35, 37), индуцировать повышающую регуляцию поверхностного маркера активации СГО25 на СГО8'-Т-клетках в присутствии опухолевых клеток-мишеней. В целом, метод состоял в следующем, экспрессирующие человеческий МС8Р опухолевые клетки-мишени линии МУ-3 собирали, используя буфер для расщепления клеток, промывали и ресуспендировали в среде ЭМЕМ, содержащей 2% РС8 и 1% С1н1аМах. Высевали 30000 клеток/лунку в круглодонный 96-луночный планшет и добавляли разведение соответствующего антитела в указанных концентрациях (фиг. 25). До такой же молярности доводили молярность биспецифической конструкции и различных применяемых в качестве контролей 1дО. Добавляли в качестве эффекторных клеток РВМС обезьян циномолгус, которые выделяли из двух здоровых животных, до получения соотношения Е:Т, составляющего 3:1. После инкубации в течение 43 ч при 37°С, 5% С0₂ клетки центрифугировали при 350хд в течение 5 мин и промывали дважды ЗФР, содержащим 0,1% БСА. Окрашивание для выявления на поверхности СГО8 (фирма МШепул ЕюЮсН № 130-080-601) и СГО25 (фирма ΒΌ № 557138) осуществляли согласно рекомендациям поставщика. Клетки промывали дважды, используя 150 мкл/лунку ЗФР, содержащего 0,1% БСА, и фиксировали в течение 15 мин при 4°С, используя 100 мкл/лунку буфера для фиксации (фирма ΒΌ № 554655). После центрифугирования образцы ресуспендировали, используя 200 мкл/лунку ЗФР с 0,1% БСА, и анализировали с помощью устройства РАС8 СайоП (программа РАС8 Э|уа).

Как показано на фиг. 25, биспецифическая конструкция индуцировала зависящую от концентрации повышающую регуляцию СГО25 на СЭ8'-Т-клетках только в присутствии клеток-мишеней. Анти-супо СГО3 1дО (клон ΒΉ-18) также обладала способностью индуцировать повышающую регуляцию СГО25 на СГО8'-Т-клетках, не являясь поперечно сшитым (см. данные, полученные с использованием крови обезьяны циномолгус по кличке №81ог). Не обнаружено гиперактивации Т-клеток обезьян циномолгус при применении биспецифической конструкции в максимальной концентрации (в отсутствие клетокмишеней).

В другом эксперименте имеющую в качестве мишени СЭ3-МС8Р конструкцию "2+1 1дО Сго88ГаЬ, связанная легкая цепь" (см. 8ЕО ГО N0: 3, 5, 29, 179) сравнивали с имеющей в качестве мишени СГО3-МС8Р конструкцией "2+1 1дО Сго88ГаЬ" (см. 8Е0 ГО N0: 3, 5, 29, 33) в отношении их способности осуществлять повышающую регуляцию раннего маркера активации СГО69 или позднего маркера активации СГО25 на СЭ8'-Т-клетках в присутствии опухолевых клеток-мишеней. Первичные человеческие

- 60 030147

РВМС (выделенные согласно описанному выше методу) инкубировали с взятыми в указанных концентрациях биспецифическими конструкциями в течение по меньшей мере 22 ч в присутствии МСЗР-позитивных клеток-мишеней Οο1οΑ8 или без них. В целом, метод состоял в следующем: 0,З млн первичных человеческих РВМС высевали в лунку плоскодонного 96-луночного планшета, содержащую МСЗР-позитивные клетки-мишени (или среду). Конечное соотношение эффекторных клеток и клетокмишеней (Е:Т) составляло 10:1. Клетки инкубировали с взятыми в указанных концентрациях биспецифическими конструкциями и контролями в течение указанной продолжительности инкубации при З7°С, 5% С0₂. Эффекторные клетки окрашивали в отношении СЭ8 и СЭ69 или СЭ25 и анализировали с использованием устройства РАСЗ СапФП.

На фиг. 5З представлены результаты этого эксперимента. Не обнаружено существенных различий в отношении повышающей регуляции СЭ69 (А) или СЭ25 (Б) между двумя "2+1 1§О Сго88ГаЬ" молекулами (со связанной легкой цепью или без нее).

В следующем эксперименте сравнивали имеющие в качестве мишени СИЗ/МСЗР конструкции "2+1 Ι§0 СгозГаЬ" (см. ЗЕО ГО N0: З, 5, 29, ЗЗ) и "1+1 Ι§0 СгозГаЬ" (см. ЗЕО ГО N0: 5, 29, ЗЗ, 181) с конструкцией "1+1 Сго88МаЬ" (см. ЗЕО ГО N0: 5, 2З, 18З, 185) в отношении их способности индуцировать повышающую регуляцию СГО69 или СГО25 на СИ4+- или СИ8+-Т-клетках в присутствии опухолевых клеток-мишеней. Анализ осуществляли согласно описанному выше методу в присутствии экспрессирующих человеческий МСЗР опухолевых клеток МУ-З или без них при продолжительности инкубации 24 ч.

Как продемонстрировано на фиг. 59, конструкции "1+1 1дО СгоззГаЬ" и "2+1 1дО СгоззГаЬ" индуцировали более выраженную повышающую регуляцию маркеров активации, чем молекула "1+1 СгоккМаЬ".

В последнем эксперименте оценивали конструкции, мишенью которых является СИЗ/МСЗР, "2+1 Ι§0 Сго88ГаЬ" (см. ЗЕО ГО N0: 5, 2З, 215, 217) и "2+1 Ι§0 СгоккГаЬ, инвертированная" (см. ЗЕО ГО N0: 5, 2З, 215, 219), в отношении их способности индуцировать повышающую регуляцию СГО25 на СИ4+- или СИ8+-Т-клетках из двух различных обезьян циномолгус в присутствии опухолевых клеток-мишеней. Анализ осуществляли согласно описанному выше методу в присутствии экспрессирующих человеческий МСЗР опухолевых клеток МУ-З или без них при соотношении Е:Т, составляющем З:1, и продолжительности инкубации примерно 41 ч.

Как продемонстрировано на фиг. 60, обе конструкции обладали способностью индуцировать повышающую регуляцию СГО25 на СИ4+ - и СИ8+-Т-клетках в зависимости от концентрации, при этом не обнаружено существенного различия между двумя форматами. Контрольные образцы без антитела и без клеток-мишеней давали сигнал, сопоставимый с сигналом образцов с антителом, но без клеток-мишеней (данные не представлены).

Пример 5.

Секреция интерферона-γ при активации человеческих рап-Т-клеток биспецифическими конструкциями, мишенью которых является СИЗ.

Очищенную молекулу "2+1 Ι§0 8сРаЬ", мишенями которой являются человеческий МСЗР и человеческий СИЗ (ЗЕО ГО N0: 5, 17, 19), анализировали в отношении способности индуцировать Т-клеточную активацию в присутствии позитивных по человеческому МСЗР клеток И-87МО, измеряя высвобождение человеческого интерферона (ГОЩ-у в супернатант. В качестве контролей применяли Ι§0 к человеческому МСЗР и человеческому СИЗ, используя их в такой же молярности. В целом, метод состоял в следующем: применяемые в качестве мишени экспрессирующие БиМСЗР клетки глиобластомы-астроцитомы И-87МО (ЕСАСС 89081402) собирали, используя буфер для расщепления клеток, промывали и ресуспендировали в среде АЕМ-У (Ιηνίίτο^η № 12055-091). По 20000 клеток/лунку высевали в круглодонный 96-луночный планшет и добавляли соответствующее разведение антитела до получения конечной концентрации 1 нМ. Человеческие эффекторные ран-Т-клетки. выделенные из лейкоцитарной пленки, добавляли до получения конечного соотношения Е:Т, составляющего 5:1. После 18,5-часовой инкубации в течение ночи при З7°С, 5% С0₂ планшет для анализа центрифугировали в течение 5 мин при З50х§ и супернатант переносили в новый 96-луночный планшет. Уровни человеческого в супернатанте

измеряли с помощью ЕЫЗА согласно инструкциям производителя (набор ΙΙ для ЕЫЗА для анализа человеческого ΙΡ^γ ΒΌ ОрίЕIΑ фирмы ВесЮи □Π<ίη8οη, № 550612).

Как продемонстрировано на фиг. 26, для референсЧдО обнаружено отсутствие или слабая способность индуцировать секрецию в то время как конструкция "2+1 Ι§0 8сРаЬ" обладала способностью

активировать секрецию человеческими Т-клетками.

Пример 6.

Переориентированная Т-клеточная цитотоксичность, опосредуемая перекрестно связанными биспецифическими конструкциями, мишенью которых является СИЗ на Т-клетках и МСЗР или ЕОРК на опухолевых клетках (анализ на основе высвобождения ЬИН.

В первых сериях экспериментов анализировали способность биспецифических конструкций, мишенями которых являются СИЗ и МСЗР, индуцировать опосредуемый Т-клетками апоптоз опухолевых клеток-мишеней при перекрестном сшивании конструкции посредством связывания антигенсвязывающих фрагментов с соответствующими антигенами-мишенями на клетках (фиг. 27-З8).

- 61 030147

В одном эксперименте сравнивали очищенные конструкции "2+1 ^С 8сРаЬ" (8ЕО ΙΌ ΝΟ: 5, 21, 23) и "2+1 ^С Сго88ЕаЬ" (8ЕО ГО ΝΟ: 3, 5, 29, 33), мишенью которых является человеческий СГО3 и человеческий МС8Р, и соответствующей молекулы "(8сРу)₂". В целом, метод состоял в следующем: экспрессирующие 1шМС8Р применяемые в качестве мишени клетки человеческой меланомы МОА-МВ-435 собирали, используя буфер для расщепления, промывали и ресуспендировали в среде АГМ-У (фирма Шуйтодеп № 12055-091). По 30000 клеток/лунку высевали в круглодонный 96-луночный планшет и добавляли соответствующее разведение конструкции в указанной концентрации. Молярность всех конструкций и соответствующих контрольных !дС доводили до одинакового значения. Добавляли человеческие эффекторные рап-Т-клетки до получения конечного соотношения Е:Т, составляющего 5:1. В качестве положительного контроля активации человеческих рап-Т-клеток использовали 1 мкг/мл РНА-М (фирма 81дта № Ь8902; смесь изолектинов, выделенных из Р1а8е о1и8 уи1дап8). Для стандартизации определяли максимальный лизис клеток-мишеней (= 100%) путем инкубации клеток с взятым в конечной концентрации 1% Тритон Х-100. Уровень минимального лизиса (= 0%) определяли при совместной инкубации клеток-мишеней с эффекторными клетками, но без какой-либо конструкции или антитела. После 20часовой инкубации в течение ночи при 37°С, 5% СΟ₂ высвобождение ЬОН находящимися на стадии апоптоза/некроза клетками-мишенями в супернатант оценивали с помощью набора для детекции ЬОН (фирма Рос1е Аррйеб 8аепсе, № 11 644 793 001) согласно инструкциям производителя.

Как продемонстрировано на фиг. 27, обе "2+1" конструкции индуцировали апоптоз клетокмишеней, сопоставимый апоптозом, обусловленным молекулой "(8сРу)₂".

Кроме того, сравнивали очищенные конструкции "2+1 ^С Сго88ЕаЬ" (8ЕО ГО ΝΟ: 3, 5, 29, 33) и "2+1 !дС 8сРаЬ", отличающиеся их Рс-доменом, а также молекулу "(8сРу)₂". Различные мутации в Рс-домене (Ь234А+Ь235А (ЬАЬА), Р329С и/или Ν297Ό, как указано) снижали или элиминировали функцию эффекторных клеток (ΝΚ), индуцированную конструкциями, которые содержали Рс-домен дикого типа (М). Экспериментальные процедуры соответствовали описанным выше.

На фиг. 28 продемонстрировано, что способность всех конструкций индуцировать апоптоз клетокмишеней сопоставима со способностью молекулы "(8сРу)₂".

На фиг. 29 продемонстрированы результаты сравнительного анализа способности очищенных молекул "2+1 !дС 8сРаЬ" (8ЕО ГО ΝΟ: 5, 17, 19) и "(8сРу)₂" индуцировать опосредуемый Т-клетками апоптоз опухолевых клеток-мишеней. Экспериментальные процедуры соответствовали описанным выше, при их осуществлении использовали в качестве клеток-мишеней экспрессирующие 1шМС8Р клетки человеческой меланомы линии Со1о-38 при соотношении Е:Т, составляющем 5:1, и 18,5-часовую инкубацию в течение ночи. Как продемонстрировано на чертеже, цитотоксическая активность конструкции "2+1 !дС 8сРаЬ" сопоставима с активностью молекулы "(8сРу)₂".

Аналогично этому, на фиг. 30 продемонстрированы результаты сравнительного анализа, полученные для очищенной конструкции "2+1 !дС 8сРаЬ" (8ЕО ГО ΝΟ: 5, 17, 19) и молекулы "(8сРу)₂" с использованием в качестве клеток-мишеней экспрессирующих 1шМС8Р клеток человеческой меланомы линии Со1о-38 при соотношении Е:Т, составляющем 5:1, и при продолжительности инкубации 18 ч. Как продемонстрировано на чертеже, цитотоксическая активность конструкции "2+1 !дС 8сРаЬ" сопоставима с активностью молекулы "(8сРу)₂".

На фиг. 31 продемонстрированы результаты сравнительного анализа, полученные для очищенной конструкции "2+1 !дС 8сРаЬ" (8ЕО ГО ΝΟ: 5, 17, 19) и молекулы "(8сРу)₂" с использованием в качестве клеток-мишеней экспрессирующих 1шМС8Р клеток человеческой меланомы линии МОА-МВ-435 при соотношении Е:Т, составляющем 5:1, и при 23,5-часовой инкубации в течение ночи. Как продемонстрировано на чертеже, способность конструкции индуцировать апоптоз клеток-мишеней, оказалась сопоставимой со способностью молекулы "(8сРу)₂". У конструкции "2+1 !дС 8сРаЬ" обнаружена пониженная эффективность при применении в наиболее высоких концентрациях.

Кроме того, анализировали способность различных биспецифических конструкций, одновалентных в отношении обоих мишеней, т.е. человеческого СГО3 и человеческого МС8Р, а также соответствующей молекулы "(8сРу)₂" индуцировать опосредуемый Т-клетками апоптоз.

На фиг. 32 продемонстрированы результаты для конструкций "1+1 !дС 8сРаЬ, с одним плечом" (8ЕО ГО ΝΟ: 1, 3, 5) и "1+1 !дС 8сРаЬ, с одним плечом инвертированная" (8ЕО ГО ΝΟ: 7, 9, 11), полученные с использованием в качестве клеток-мишеней экспрессирующих 1шМС8Р клеток человеческой меланомы линии Со1о-38 при соотношении Е:Т, составляющем 5:1, и при продолжительности инкубации 19 ч. Как продемонстрировано на чертеже, обе "1+1"-конструкции обладали более низкой активностью по сравнению с молекулой "(8сРу)₂", причем в этом анализе активность молекулы "1+1 !дС 8сРаЬ, с одним плечом" превышала активность молекулы "1+1 !дС 8сРаЬ, с одним плечом инвертированная".

На фиг. 33 продемонстрированы результаты, полученные для конструкции "1+1 !дС 8сРаЬ" (8ЕО ГО ΝΟ: 5, 21, 213) с использованием в качестве клеток-мишеней экспрессирующих 1шМС8Р клеток человеческой меланомы линии Со1о-38 при соотношении Е:Т, составляющем 5:1, и при продолжительности инкубации 20 ч. Как продемонстрировано на чертеже, конструкция "1+1 !дС 8сРаЬ" обладала меньшей цитотоксичностью по сравнению с молекулой "(8сРу)₂".

- 62 030147

В дополнительном эксперименте анализировали способность очищенных молекул "2+1 1§О Сго55ГаЬ" (8ЕС) ГО N0: 3, 5, 29, 33), "1+1 Ι§0 СгоккГаЬ" (8ЕС) ГО N0: 5, 29, 31, 33) и "рсРуЬ" индуцировать опосредуемый Т-клетками апоптоз опухолевых клеток-мишеней при перекрестном сшивании конструкции посредством связывания с обоими антигенами-мишенями на клетках. В качестве клетокмишеней применяли экспрессирующие 1шМС8Р клетки человеческой меланомы линии МОА-МВ-435 при соотношении Е:Т, составляющем 5:1, и продолжительности инкубации 20 ч. Результаты представлены на фиг. 34. Установлено, что способность конструкции "2+1 Ι§0 СгоккГаЬ" индуцировать апоптоз клеток-мишеней, сопоставима со способностью молекулы "(§сРу)₂". Сравнение одно- и двухвалентных форматов "ЕС Сго88ГаЬ" четко продемонстрировало, что двухвалентный формат является более эффективным.

Еще в одном эксперименте анализировали способность очищенной конструкции "2+1 Ι§0 СгоккГаЬ" (8Е0 ГО N0: 3, 5, 29, 33) индуцировать опосредуемый Т-клетками апоптоз различных (опухолевых) клеток-мишеней. В целом, метод состоял в следующем: МС8Р-позитивные опухолевые клетки-мишени линии Со1о-38, мезенхимальные стволовые клетки (выведенные из костного мозга, фирма Боп/а, № РТ-2501 или жировой ткани, фирма Гпуйгодеп № Р7788-115) или перициты (из плаценты; фирма РготоСе11 № С-12980), как указано, собирали, используя буфер для расщепления, промывали и ресуспендировали в среде АГМ-У (фирма ГпуЦгодеп № 12055-091). По 30000 клеток/лунку высевали в круглодонный 96-луночный планшет и добавляли соответствующее разведение антитела в указанной концентрации. Добавляли человеческие эффекторные РВМС-клетки, выделенные из свежей крови здорового донора, с получением конечного соотношения Е:Т, составляющего 25:1. После инкубации в течение 4 ч при 37°С, 5% С0₂, высвобождение БЕН из находящихся на стадии апоптоза/некроза клеток-мишеней в супернатант измеряли с помощью набора для детекции БЕН (фирма РосНе АррНей 8с1епсе, № 11644793001) согласно инструкциям производителя.

Как продемонстрировано на фиг. 35, обнаружена выраженная опосредуемая Т-клетками цитотоксичность только в отношении клеток Со1о-38. Этот результат согласуется с данными о том, что клетки Со1о-38 экспрессируют высокие уровни МС8Р, в то время как экспрессия МС8Р на мезенхимальных стволовых клетках и перицитах являлась лишь очень слабой.

Сравнивали также очищенную конструкцию "2+1 Ι§0 ксРаЬ" (8ЕС ГО N0: 5, 17, 19) и молекулу "(§сРу)₂" с созданным с помощью гликоинженерии антителом к человеческому МС8Р в виде ΙβΟ, которое обладает пониженным относительным содержанием фукозилированных ^гликанов в Рс-домене (МС8Р 01усоМаЬ). В этом эксперименте применяли в качестве клеток-мишеней экспрессирующие НиМС8Р клетки человеческой меланомы линии Со1о-38 и в качестве эффекторных клеток человеческие РВМС либо в фиксированном соотношении Е:Т, составляющем 25:1 (фиг. 36А), либо в различных соотношениях Е:Т от 20:1 до 1:10 (фиг. 36Б). Различные молекулы применяли в концентрациях, указанных на фиг. 36А, или в фиксированной концентрации 1667 пМ (фиг. 36Б). Сбор данных осуществляли после 21-часовой инкубации. Как продемонстрировано на фиг. 36А и Б, обе биспецифические конструкции обладали более высокой эффективностью по сравнению с М8СР 01усоМаЬ.

В другом эксперименте анализировали очищенную конструкцию "2+1 Ι§0 Сго^ГаЬ", мишенями которой являются СЕ3 обезьян циномолгус и человеческий МС8Р (8ЕС ГО N0: 3, 5, 35, 37). В целом, метод состоял в следующем: применяемые в качестве клеток-мишеней экспрессирующие человеческий МС8Р опухолевые клетки линии МУ-3 собирали, используя буфер для расщепления, промывали и ресуспендировали в среде ЭМЕМ, содержащей 2% РС8 и 1% О1и1аМа\. По 30000 клеток/лунку высевали в круглодонный 96-луночный планшет и добавляли соответствующее разведение конструкции или референсЧдО в указанной концентрации. Молярности биспецифической конструкции и различных контрольных Ι§0 доводили до одинакового значения. Добавляли в качестве эффекторных клеток РВМС, выделенные из крови здоровой обезьяны циномолгус, до получения конечного соотношения Е:Т, составляющего 3:1. После инкубации в течение 24 ч или 43 ч при 37°С, 5% С0₂, измеряли высвобождение ЬЭН из находящихся на стадии апоптоза/некроза клеток-мишеней в супернатант с помощью набора для детекции БЭН (фирма РосНе АррНей 8с1епсе, № 11644793001) согласно инструкциям производителя.

Как продемонстрировано на фиг. 37, биспецифическая конструкция индуцирует зависящее от концентрации высвобождение БЭН из клеток-мишеней. Эффективность была более выраженной через 43 ч, чем через 24 ч. Анти-супоСЭ3 Ι§0 (клон ^N-18) также обладал способностью индуцировать высвобождение БЭН клетками-мишени, не являясь перекрестно сшитым.

На фиг. 38 продемонстрированы результаты сравнительного анализа очищенных конструкций "2+1 ЩС Сго88ГаЬ" (8Е0 ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "(§сРу)₂" с использованием в качестве клеток-мишеней экспрессирующих МС8Р клеток человеческой меланомы линии МУ-3 и человеческих РВМС в качестве эффекторных клеток при соотношении Е:Т, составляющем 10:1, и продолжительности инкубации 26 ч. Как продемонстрировано на чертеже, с точки зрения величин ЕС₅₀ конструкция "2+1 Ι§0 СгоккГаЬ" являлась более эффективной, чем молекула "(§сРу)₂".

Во второй серии экспериментов анализировали способность биспецифических конструкций, мишенями которых являлись СЕ3 и ЕОРР, индуцировать опосредуемый Т-клетками апоптоз опухолевых клеток-мишеней при перекрестном сшивании конструкции посредством связывания антигенсвязывающих

- 63 030147

фрагментов с соответствующими антигенами-мишенями на клетках (фиг. 39-41).

В одном из экспериментов осуществляли сравнение очищенных конструкций "2+1 Ι§0 ксРаЬ" (ЗЕО ΙΌ Ν0: 45, 47, 53) и "1+1 Ι§0 ксРаЬ" (ЗЕО ГО Ν0: 47, 53, 213), мишенями которых являются СГО3 и ЕОРК, и соответствующей молекулы "(ксРу)₂". В целом, метод состоял в следующем: экспрессирующие человеческий ЕОРК опухолевые клетки-мишени линии ЬЗ-174Т собирали с использованием трипсина, промывали и ресуспендировали в среде АГМ-У (фирма ШуДгодеп № 12055-091). По 30000 клеток/лунку высевали в круглодонный 96-луночный планшет и добавляли соответствующее разведение антитела в указанных концентрациях. Молярность всех конструкций и соответствующих контролей доводили до одинакового значения. Добавляли человеческие эффекторные рап-Т-клетки до получения конечного соотношения Е:Т, составляющего 5:1. В качестве положительного контроля активации человеческих рап-Т-клеток использовали 1 мкг/мл ФГА-М (фирма З1дта № Ь8902). Для стандартизации определяли максимальный лизис клеток-мишеней (= 100%) путем инкубации клеток с взятым в конечной концентрации 1% Тритон Х-100. Уровень минимального лизиса (= 0%) определяли при совместной инкубации клеток-мишеней с эффекторными клетками, но без какой-либо конструкции или антитела. После 18-часовой инкубации в течение ночи при 37°С, 5% С0₂ высвобождение БОН находящимися на стадии апоптоза/некроза клетками-мишенями в супернатант оценивали с помощью набора для детекции БОН (фирма КосЬе АррЬеД Заепсе, № 11644793001) согласно инструкциям производителя.

Как продемонстрировано на фиг. 39, цитотоксичность конструкции "2+1 ЦО ксРаЬ" была сопоставима с цитотоксичностью молекулы "(ксРу)₂", в то время как конструкция "1+1 ЦО ксРаЬ" обладала меньшей активностью.

В другом эксперименте осуществляли сравнение конструкций "1+1 ЦО ксРаЬ, с одним плечом" (ЗЕО ГО Ν0: 43, 45, 47), "1+1 ЦО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (ЗЕО ГО Ν0: 11, 49, 51), "1+1 ЦО ксРаЬ" (ЗЕО ГО Ν0: 47, 53, 213) и молекулы "(ксРу)₂". Экспериментальные условия соответствовали описанным выше, за исключением того, что продолжительность инкубации составляла 21 ч.

Как продемонстрировано на фиг. 40, цитотоксичность конструкции "1+1 ЦО ксРаЬ" в этом анализе оказалась несколько более низкой по сравнению с цитотоксической активностью молекулы "(ксРу)₂". Обе конструкции "1+1 ЦО ксРаЬ, с одним плечом (инвертированная)" обладали выражено более низкой активностью, чем молекула "(ксРу)₂".

В следующем дополнительном эксперименте осуществляли сравнение очищенных конструкций "1+1 ЦО ксРаЬ, с одним плечом" (ЗЕО ГО Ν0: 43, 45, 47) и "1+1 ЦО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (ЗЕО ГО Ν0: 11, 49, 51) и молекулы "(ксРу)₂". Продолжительность инкубация в этом эксперименте составляла 16 ч, и результаты продемонстрированы на фиг. 41. При инкубации с человеческими рап-Т-клетками обе конструкции "1+1 ЦО ксРаЬ, с одним плечом (инвертированная)" оказались менее активными, чем молекула "(ксРу)₂", но при их применении обнаружено зависящее от концентрации высвобождение ЬЭН из клеток-мишеней (фиг. 41А). При совместном культивировании опухолевых клеток ЬЗ-174Т с наивными Т-клетками, выделенными из РВМС, конструкции обладали лишь фоновым уровнем активности, наиболее активной из них оказалась молекула "(ксРу)₂" (фиг. 41Б).

В дополнительном эксперименте анализировали способность очищенных конструкций "1+1 ЦО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" (ЗЕО ГО Ν0: 11, 51, 55), "1+1 ЦО ксРаЬ" (57, 61, 213) и "2+1 ЦО ксРаЬ" (57, 59, 61), мишенью которых являются СГО3 и фибробласт-активирующий белок (РАР), и соответствующей молекулы "(ксРу)₂" индуцировать опосредуемый Т-клетками апоптоз человеческих экспрессирующих РАР фибробластов линии ОМ05389 при перекрестном сшивании конструкции посредством связывания обоих связывающих мишень фрагментов с соответствующими антигенами-мишенями на клетках. В целом, метод состоял в следующем: применяемые в качестве клеток-мишеней человеческие клетки линии ОМ05389 собирали с использованием трипсина за 1 день до осуществления анализа, промывали и ресуспендировали в среде АГМ-У (фирма ШуДгодеп № 12055-091). По 30000 клеток/лунку высевали в круглодонный 96-луночный планшет и инкубировали в течение ночи при 37°С, 5% СО2, давая клеткам высвободиться и закрепиться. На следующий день клетки центрифугировали, супернатант отбрасывали и добавляли свежую среду, а также соответствующее разведение конструкций или референс-ЦО в указанных концентрациях. Молярность всех конструкций и соответствующих контролей доводили до одинакового значения. Добавляли человеческие эффекторные рап-Т-клетки до получения конечного соотношения Е:Т, составляющего 5:1. В качестве положительного контроля активации человеческих рап-Т-клеток использовали 5 мкг/мл РНА-М (фирма ЗЦта № Ь8902). Для стандартизации определяли максимальный лизис клеток-мишеней (= 100%) путем инкубации клеток со взятым в конечной концентрации 1% ТгПоп Х-100. Уровень минимального лизиса (= 0%) определяли при совместной инкубации клеток-мишеней с эффекторными клетками, но без какой-либо конструкции или антитела. После 18-часовой инкубации в течение ночи при 37°С, 5% С0₂ высвобождение ЬЭН находящимися на стадии апоптоза/некроза клетками-мишенями в супернатант оценивали с помощью набора для детекции ЬЭН (фирма КосЬе АррЬеЬ Заепсе, № 11 644 793 001) согласно инструкциям производителя.

Как продемонстрировано на фиг. 42, цитотоксическая активность конструкции "2+1 ЦО ксРаЬ" была сопоставимой с активностью молекулы "(ксРу)₂" при оценке на основе значений ЕС₅₀. Конструкция "1+1 !дО ксРаЬ, с одним плечом инвертированная" характеризовалась более низкой активностью, чем

- 64 030147

другие конструкции, протестированные в этом анализе.

В другой серии экспериментов осуществляли сравнение конструкции, мишенью которой являлись СЭ3/Мс8р, "2+1 ЦС СгоккГаЬ, связанная легкая цепь" (см. 8ЕЦ ΙΌ νΟ: 3, 5, 29, 179) и конструкции, мишенью которой является СЭ3/МС8Р, "2+1 ЦС СгоккГаЬ" (см. 8ЕЦ ГО ΝΟ: 3, 5, 29, 33). В целом, метод состоял в следующем: клетки-мишени (человеческие Со1о-38, человеческие МV-3 или клетки меланомы \УМ 266-4) собирали с использованием буфера для расщепления клеток в день проведения анализа (или с использованием трипсина за 1 день до начала анализа), промывали и ресуспендировали в соответствующей культуральной среде (КРМП640, дополненная 2% РС8 и 1% О1и!атах). Высевали по 2000030000 клеток/лунку в круглодонный 96-луночный планшет и добавляли соответствующее разведение указанного антитела (в трех повторностях). В качестве эффекторных клеток добавляли РВМС до получения конечного соотношения эффекторных клеток и клеток-мишеней (Е:Т), составляющего 10:1. Молярность всех конструкций и соответствующих контролей доводили до одинакового значения, продолжительность инкубации составляла 22 ч. Детекцию ЬЭН и стандартизацию осуществляли согласно описанному выше методу.

На фиг. 49-52 представлены результаты четырех анализов, которые осуществляли с использованием клеток меланомы МV-3 (фиг. 49), клеток Со1о-38 (фиг. 50 и 51) или клеток \УМ266-4 (фиг. 52). Как продемонстрировано на фиг. 49, конструкция со связанной легкой цепью характеризовалась меньшей эффективностью по сравнению с конструкцией без связанной легкой цепи при анализе с использованием в качестве клеток-мишеней МУ-3. Как продемонстрировано на фиг. 50 и 51, конструкция со связанной легкой цепью оказалась более эффективной по сравнению с конструкцией без связанной легкой цепи в анализах, для осуществления которых применяли отличающиеся высоким уровнем экспрессии МС8Р клетки линии Со1о-38 в качестве клеток-мишеней. И, наконец, как продемонстрировано на фиг. 52, не обнаружено существенного различия между двумя конструкциями при применении в качестве клетокмишеней отличающихся высоким уровнем экспрессии МС8Р клеток \УМ266-4.

В другом эксперименте осуществляли сравнение двух конструкций, мишенью которых является СЕА, "2+1 ЦС СгоккГаЬ, инвертированная", в которых в СгоккГаЬ-фрагменте присутствовал обмен либо в У-областях (УЪ/УН, см. 8ЕО ГО ΝΟ: 33, 63, 65, 67), либо в С-областях (СЬ/СН1, см. 8ЕО ГО ΝΟ: 65, 67, 183, 197). Анализ осуществляли согласно описанному выше методу, используя человеческие РВМС в качестве эффекторных клеток и экспрессирующие человеческий СΕΑ клетки в качестве клеток-мишеней. Клетки-мишени (опухолевые клетки МК№45 или Ь8-174Т) собирали с использованием трипсина-ЭДТК (фирма ЬиВюкаепсек № 25300-096), промывали и ресуспендировали в среде КРМП640 (фирма ШуЦгодеп № 42404042), дополненной 1% С1и!атах (фирма ЬиВюкаепсек № 35050087) и 2% РС8. Высевали по 30000 клеток/лунку в круглодонный 96-луночный планшет и добавляли биспецифические конструкции в указанных концентрациях. Молярность всех конструкций и соответствующих контролей доводили до одинакового значения. Человеческие эффекторные РВМС-клетки добавляли до достижения конечного соотношения Е:Т, составляющего 10:1, продолжительность инкубации составляла 28 ч. Значения ЕС50 рассчитывали с помощью программы СгарЬРай Рпкт 5.

Как продемонстрировано на фиг. 61, конструкция, включающая СЬ/СН1-обмен, характеризовалась несколько более высокой активностью в отношении обеих линий клеток-мишеней, чем конструкция, включающая УЪ/УН-обмен. Рассчитанные значения ЕС₅₀ составляли 115 и 243 пМ при использовании клеток МК№45 и 673 и 955пМ при использовании клеток Ь8-174Т для конструкции с СЬ/СН1-обменом и конструкции с УЪ/УН-обменом соответственно.

Аналогично этому, осуществляли сравнение двух конструкций, мишенью которых является МС8Р, "2+1 ЦС СгоккГаЬ", в которых в СгоккГаЬ-фрагменте присутствовал обмен либо в У-областях (УЪ/УН, см. 8ЕО ГО ΝΟ: 33, 189, 191, 193), либо в С-областях (СЬ/СН1, см. 8ЕО ГО ΝΟ: 183, 189, 193, 195). Анализ осуществляли согласно описанному выше методу, используя человеческие РВМС в качестве эффекторных клеток, и экспрессирующие человеческий МС8Р клетки в качестве клеток-мишеней. Клетки-мишени (^М266-4) собирали, используя буфер для расщепления (ЪиВюкаепсек № 13151014), промывали и ресуспендировали в среде КРМП640 (Iиν^!^одеи № 42404042), включающей 1% О1и!атах (ЬиВюкаепсек № 35050087) и 2% РС8. По 30000 клеток/лунку высевали в круглодонный 96-луночный планшет и добавляли соответствующее разведение указанного антитела (в трех повторностях). Молярность всех конструкций и соответствующих контролей доводили до одинакового значения. В качестве эффекторных клеток добавляли РВМС до получения конечного соотношения эффекторных клеток и клеток-мишеней (Е:Т), составляющего 10:1, продолжительность инкубации составляла 26 ч. Значения ЕС₅₀ рассчитывали с помощью программы ОгарЬРай Рпкт 5.

Как продемонстрировано на фиг. 62, две конструкции обладали сопоставимой активностью, конструкция с СЬ/СН1-обменом характеризовалась несколько более низким значением ЕС₅₀ (12,9 пМ для конструкции с СЬ/СН1-обменом в сравнении с 16,8 пМ для конструкции с УЪ/УН-обменом).

На фиг. 63 продемонстрированы результаты аналогичного анализа, для осуществления которого в качестве клеток-мишеней использовали экспрессирующие человеческий МС8Р клетки МУ-3. И в этом случае обе конструкции обладали сопоставимой активностью, конструкция с СЬ/СН1-обменом характеризовалась несколько более низким значением ЕС₅₀ (примерно 11,7 пМ для конструкции с СЬ/СН1- 65 030147

обменом в сравнении с примерно 82,2 пМ для конструкции с УЬ/УН-обменом). Точные значения ЕС₅₀ не удалось рассчитать, поскольку кривые смертности не достигали плато при применении соединений в высоких концентрациях.

В дополнительном эксперименте осуществляли сравнение конструкций, мишенями которых являлись СЭ3/МСЗР, "2+1 !§Ο СгоззЕаЬ" (см. ЗЕр ГО N0: 3, 5, 29, 33) и "1+1 !§Ο СгоззЕаЬ" (см. ЗЕр ГО N0: 5, 29, 33, 181), с конструкцией "1+1 СгоззМаЬ" (см. ЗЕр ГО N0: 5, 23, 183, 185), мишенями которой являлись СЭ3/МСЗР. Анализ осуществляли согласно описанному выше методу, используя человеческие РВМС в качестве эффекторных клеток и клетки АМ266-4 или МУ-3 в качестве клеток-мишеней (соотношение Е:Т = 10:1), продолжительность инкубации составляла 21 ч.

Как продемонстрировано на фиг. 64, по результатам этого анализа наиболее эффективной оказалась конструкция "2+1 ^О СгоззЕаЬ", за ней в порядке снижения эффективности следовали конструкции "1+1 ^О СгоззЕаЬ" и "1+1 СгоззМаЬ". Этот порядок является еще более выраженным при использовании клеток МУ-3, которые экспрессируют средние уровни МСЗР, по сравнению с экспрессирующими высокие уровни МСЗР клетками АМ266-4. Рассчитанные значения ЕС₅₀ для клеток МУ-3 составляли 9,2, 40,9 и 88,4 пМ, для клеток АМ266-4 - 33,1, 28,4 и 53,9 пМ при использовании "2+1 ^О СгоззЕаЬ", "1+1 ^О СгоззЕаЬ" и "1+1 СгоззМаЬ" соответственно.

В дополнительном эксперименте тестировали взятые в различных концентрациях конструкции "1+1 ^О СгоззЕаЬ слияние ЬС" (ЗЕр ГО N0: 183, 209, 211, 213), используя в качестве клеток-мишеней опухолевые клетки МКЫ-45 или ЬЗ-174Т и человеческие эффекторные РВМС-клетки в соотношении Е:Т, составляющем 10:1, и продолжительность инкубации 28 ч. Как продемонстрировано на фиг. 65, конструкция "1+1 ^О СгоззЕаЬ слияние ЬС" индуцировала апоптоз клеток-мишеней линии МКЫ-45, что характеризовалось рассчитанным значением ЕС₅₀, составляющим 213 пМ, в то время как рассчитанное значение ЕС₅₀ для клеток ЬЗ-174Т составляло 1,56 нМ, что свидетельствует о влиянии различных уровней экспрессии опухолевых антигенов на эффективность биспецифических конструкций в определенный промежуток времени.

В следующем эксперименте осуществляли сравнение конструкции "1+1 ^О СгоззЕаЬ слияние ЬС" (ЗЕр ГО N0: 183, 209, 211, 213) с "ненаправленной" молекулой "2+1 ^О СгоззЕаЬ". Применяли опухолевые клетки МС38-1иСЕА и человеческие РВМС (соотношение Е:Т = 10:1) и продолжительность инкубации 24 ч. Как продемонстрировано на фиг. 66, конструкция "1+1 ^О СгоззЕаЬ слияние ЬС" индуцировала апоптоз клеток-мишеней в зависимости от концентрации, при этом рассчитанное значение ЕС₅₀ составляло примерно 3,2 нМ. В противоположность этому, для "ненаправленной" конструкции "2+1 ^О СгоззЕаЬ" характерно независимое от антигена опосредуемое Т-клетками уничтожение опухолевых клеток только при применении в наиболее высокой концентрации.

В последнем эксперименте осуществляли сравнение конструкций "2+1 ^О СгоззЕаЬ (У9)" (ЗЕр ГО N0: 3, 5, 29, 33), "1+1 ТдО СгоззЕаЬ, инвертированная (У9)" (ЗЕр ГО N0: 5, 23, 183, 187), "2+1 ГОО СгоззЕаЬ (анти-СЭ3)" (ЗЕр ГО N0: 5, 23, 215, 217), "2+1 !+ί'ι СгоззЕаЬ, инвертированная (анти-СЭ3)" (ЗЕР ГО N0: 5, 23, 215, 219), используя позитивные по человеческому МСЗР клетки МУ-3 или опухолевые клетки АМ266-4 и человеческие РВМС (соотношение Е:Т = 10:1), продолжительность инкубации составляла примерно 24 ч. Как продемонстрировано на фиг. 67, опосредуемое Т -клетками уничтожение при применении конструкций "2+1 ^О СгоззЕаЬ, инвертированная" является несколько более сильным или, по меньшей мере, таким же, что и уничтожение, индуцированное конструкциями "2+1 ^О СгоззЕаЬ", для обеих связывающих СГО3 молекул. Рассчитанные значения ЕС₅₀ представлены ниже.

ЕС50 [пМ]	2+1 1дО СгоззЕаЬ (У9)	2+1 1§О СгоззЕаЬ инвертированная (У9)	2+1 1§О СгоззЕаЬ (антиСОЗ)	2+1 1дО СгоззЕаЬ, инвертированная (антиСОЗ)
МУ-З	10,0	4,1	11,0	3,0
АМ2664	12,4	3,7	п,з	7,1

Пример 7.

Анализ СЭ107а/Ь.

С помощью проточной цитометрии оценивали способность очищенной конструкции "2+1 ^О зсРаЬ" (ЗЕр ГО N0: 5, 17, 19) и молекулы "(зсРу)₂", мишенью которых являются человеческий МСЗР и человеческий СГО3, вызывать повышающую регуляцию СГО107а и повышать внутриклеточные уровни перфорина в присутствии экспрессирующих человеческий МСЗР опухолевых клеток или без них.

В целом, метод состоял в следующем: в день 1 высевали по 30000 опухолевых клеток-мишеней линии Со1о-38 на лунку в круглодонный 96-луночный планшет и инкубировали в течение ночи при 37°С, 5% С0₂, давая им прикрепиться. Первичные человеческие рап-Т-клетки выделяли в день 1 или день 2 из лейкоцитарной пленки согласно описанному методу.

В день 2 добавляли по 0,15 млн эффекторных клеток на лунку с получением конечного соотношения Е:Т, составляющего 5:1. Добавляли конъюгированные с ФИТЦ антитела к СГО107а/Ь, а также различные биспецифические конструкции и контроли. Молярность различных биспецифических молекул и антител доводили до одинакового уровня с получением конечной концентрации 9,43 нМ. После стадии

- 66 030147

инкубации в течение 1 ч при 37°С, 5% С0₂ добавляли монензин для ингибирования секреции, а также для нейтрализации значения рН в эндосомах и лизосомах. После дополнительной инкубации в течение 5 ч клетки окрашивали при 4°С в течение 30 мин для выявления экспрессии на поверхности СЭ8. Клетки промывали буфером для окрашивания (ЗФР/0,1% БСА), фиксировали и повышали проницаемость в течение 20 мин с помощью набора ΒΌ СуЮПх/СуЮрегт Р1ик с ΒΌ Оо1щ 81ор (фирма ΒΌ Вюкиепсек № 554715). Клетки промывали дважды однократным буфером ΒΌ РегтЛУакй и осуществляли внутриклеточное окрашивание для выявления перфорина при 4°С в течение 30 мин. После конечной стадии промывки однократным буфером ΒΌ РегтЛУакй клетки ресуспендировали в ЗФР/0,1% БСА и анализировали с помощью устройства РАС8 Сап1оП (все антитела покупали у фирмы ΒΌ Β^окс^еηсек или Β^о^едепά).

Дискриминационные окна устанавливали на все СО107а/Ь-позитивные, перфорин-позитивные или дважды позитивные клетки, как указано (фиг. 43). Установлено, что конструкция "2+1 1дО ксРаЬ" обладала способностью активировать Т-клетки и вызывать повышающую регуляцию СГО107а/Ь и внутриклеточные уровни перфорина только в присутствии клеток-мишеней (фиг. 43А), в то время как молекула "(ксРу)₂" обладала способностью (слабо) индуцировать активацию Т-клеток также и в отсутствие клетокмишеней (фиг. 43Б). Двухвалентный анти-СГО3 референс-1дО обеспечивал более слабые уровни активации про сравнению с молекулой "(ксРу)₂" или другой биспецифической конструкцией.

Пример 8.

Анализ пролиферации.

С помощью проточной цитометрии оценивали способность очищенных молекул "2+1 1дО ксРаЬ" (8ЕЦ ГО N0: 5, 17, 19) и "(ксРу)₂", мишенью которых являются человеческий СГО3 и человеческий МС8Р, индуцировать пролиферацию СГО8'- или СЭ4'-Т-клеток в присутствии экспрессирующих человеческий МС8Р опухолевых клеток или без них.

В целом, метод состоял в следующем: количество свежевыделенных человеческих рап-Т-клеток доводили до 1 млн клеток на 1 мл в теплом ЗФР и окрашивали с помощью 1 мкМ СР8Е при комнатной температуре в течение 10 мин. Предназначенный для окрашивания объем увеличивали в два раза, добавляя среду РРМ11640, содержащую 10% РС8 и 1% О1и1аМах. После инкубации при комнатной температуре в течение еще 20 мин клетки промывали трижды предварительно нагретой средой для удаления оставшегося СР8Е. МС8Р-позитивные клетки Со1о-38 собирали с использованием буфера для расщепления, подсчитывали их количество и проверяли жизнеспособность. Количество клеток доводили до 0,2х 10⁶ (жизнеспособных) клеток на 1 мл в среде А1М-У, по 100 мкл суспензии указанных клеток вносили с помощью пипетки в круглодонный 96-луночный планшет (согласно указанному). По 50 мкл (разведенных) биспецифических конструкций добавляли в содержащие клетки лунки до получения конечной концентрации 1 нМ. Количество (жизнеспособных) окрашенных СР8Е человеческих рап-Т-клеток доводили до 0,2х10⁶ на 1 мл в среде А1М-У. По 50 мкл суспензии указанных клеток на лунку вносили в планшет для анализа (см. выше) до получения конечного соотношения Е:Т 5:1. Для решения вопроса о том, обладают ли биспецифические конструкции способностью активировать Т-клетки исключительно в присутствии клеток-мишеней, которые экспрессируют опухолевый антиген 1шМС8Р, включали анализ лунок, содержащих в концентрации 1 нМ соответствующие биспецифические молекулы, а также РВМС, но не содержащих клетки-мишени. После инкубации в течение 5 дней при 37°С, 5% С0₂, клетки центрифугировали (5 мин, 350хд) и промывали дважды, используя 150 мкл/лунку ЗФР, содержащего 0,1% БСА. Осуществляли окрашивание поверхности для выявления СГО8 (мышиный 1дО₁, к; клон Н1Т8а; фирма ΒΌ № 555635), СГО4 (мышиный 1§О₁, к; клон РРА-Т4; фирма ΒΌ № 560649) или СГО25 (мышиный 1§О₁, к; клон М-А251; фирма ΒΌ № 555434) при 4°С в течение 30 мин согласно рекомендациям поставщика. Клетки промывали дважды, используя 150 мкл/лунку ЗФР, содержащего 0,1% БСА, ресуспендировали, используя 200 мкл/лунку ЗФР с 0,1% БСА, и анализировали с использованием устройства РАС8 СаШоП (программа РАС8 О1уа). Относительный уровень пролиферации определяли путем установки дискриминационного окна вокруг непролиферирующих клеток и используя количество клеток в этом окне, отнесенное к общему измеренному количеству клеток.

На фиг. 44 продемонстрировано, что все конструкции, так же как и молекула "(ксРу)₂", индуцировали пролиферацию СГО8'-Т-клеток (А) или СЭ4'-Т-клеток (Б) только в присутствии клеток-мишеней. В целом, в этом анализе установлено, что пролиферация активированных СГО8'-Т-клеток является более выраженной по сравнению с пролиферацией активированных СГО4'-Т-клеток.

Пример 9.

Анализ высвобождения цитокинов.

Анализировали способность очищенной конструкции "2+1 1дО ксРаЬ" (8ЕЦ ГО N0: 5, 17, 19) и молекулы "(ксРу)₂", мишенями которых являлись человеческий МС8Р и человеческий СЭ3, индуцировать опосредуемую Т-клетками секрецию цитокинов бе поуо в присутствии опухолевых клеток-мишеней или без них.

В целом, метод состоял в следующем: человеческие РВМС выделяли из лейкоцитарных пленок и высевали по 0,3 млн клеток/лунку в круглодонный 96-луночный планшет. Добавляли в качестве клеток- 67 030147

мишеней опухолевые клетки Со1о-38, экспрессирующие человеческий МС8Р, до получения конечного соотношения Е:Т, составляющего 10:1. Биспецифические конструкции и 1§О-контроли добавляли до конечной концентрации 1 нМ и клетки инкубировали в течение 24 ч при 37°С, 5% СО₂. На следующей день клетки центрифугировали в течение 5 мин при 350/д и супернатант переносили в новый 96-луночный планшет с глубокими лунками для последующего анализа. Осуществляли СВА-анализ (цитометрический анализ с использованием набора гранул) согласно инструкциям производителя для устройства РАС8 СайоП, используя набор II Нитап ТН1/ТН2 Су1окте (фирма ΒΌ № 551809).

На фиг. 45 представлены данные об уровнях различных цитокинов, оцененные в супернатанте. В присутствии клеток-мишеней основным цитокином, секретирующимся при активации Т-клеток, являлся ΙΓΝ-у. Молекула "(8сРν)₂" индуцировала несколько более высокий уровень ΙΓΝ-у, чем конструкция "2+1 1дО 8сРаЬ". Аналогичную тенденцию удалось обнаружить для человеческого ТОТ¹, но общие уровни этого цитокина оказались существенно более низкими по сравнению с ΙΓΝ-у. Не обнаружено никакой значительной секреции ТЬ2-цитокинов (1Ь-10 и 1Ь-4) при активации Т-клеток в присутствии (или в отсутствие) клеток-мишеней. В отсутствие клеток-мишеней Со1о-38 обнаружена только очень слабая индукция секреции ТОТ¹, которая оказалась наиболее высокой в образцах, обработанных молекулой "(8сРν)₂".

Во втором эксперименте анализировали следующие очищенные биспецифические конструкции, мишенью которых являются человеческий МС8Р и человеческий СЭ3: конструкция "2+1 1дО СгоззГаЬ" (8Е/ ΙΌ ΝΟ: 3, 5, 29, 33), молекула "(8сРν)₂", а также различные молекулы "2+1 1дО 8сРаЬ", которые содержат либо дикого типа, либо мутантный (ЬАЬА, Р329О и/или Ν297Ό, как указано) Рс-домен. В целом, метод состоял в следующем: 280 мкл цельной крови здорового донора высевали в лунку 96-луночного планшета с глубокими лунками. Добавляли по 30000 применяемых в качестве клеток-мишеней опухолевых клеток Со1о-38, экспрессирующих человеческий МС8Р, а также различные биспецифические конструкции и 1§О-контроли в конечной концентрации 1 нМ. Клетки инкубировали в течение 24 ч при 37°С, 5% СО₂ и затем центрифугировали в течение 5 мин при 350/д. Супернатант переносили в новый 96-луночный планшет с глубокими лунками для последующего анализа. Осуществляли СВА-анализ согласно инструкциям производителя для устройства РАС8 СапЮП, используя комбинацию следующих компонентов, входящих в систему СВА Р1ех 8еί8: человеческий гранзим В (фирма ΒΌ № 560304), человеческий ГО^у Р1ех 8еί (фирма ΒΌ № 558269), человеческий ТОТ¹ Р1ех 8еί (фирма ΒΌ № 558273), человеческий ГО-10 Р1ех 8еί (фирма ΒΌ № 558274), человеческий ГО-6 Р1ех 8еί (фирма ΒΌ № 558276), человеческий ГО-4 Р1ех 8еί (фирма ΒΌ № 558272), человеческий ГО-2 Р1ех 8еί (фирма ΒΌ № 558270).

На фиг. 46 представлены данные об уровнях различных цитокинов, определенные в супернатанте. Основным цитокином, секретируемым в присутствии опухолевых клеток Со1о-38, являлся ГО-6, далее следовал ΙΕΝ-у. Кроме того, уровни гранзима В значительно возрастали при активации Т-клеток в присутствии клеток-мишеней. В целом, молекула "(8сРν)₂" индуцировала более высокие уровни цитокинов в присутствии клеток-мишеней (фиг. 46А и Б). Не обнаружено никакой значительной секреции ТЬ2-цитокинов (ГО-10 и ГО-4) при активации Т-клеток в присутствии (или в отсутствие) клеток-мишеней.

В этом анализе обнаружена слабая секреция ΙΕΝ-у, индуцированная различными конструкциями "2+1 1дО 8сРаЬ", даже в отсутствие клеток-мишеней (фиг. 46В и Г). В этих условиях не обнаружено существенных различий между конструкциями "2+1 1дО 8сРаЬ" с Рс-доменом дикого типа или мутантным.

Хотя выше изобретение описано достаточно подробно с помощью иллюстраций и примеров, приведенных для целей лучшего его понимания, описание и примеры не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения. Все процитированные в настоящем описании патентные и научные публикации полностью включены в него в качестве ссылки.

- 68 030147

Перечень последовательностей

<110> Роше Гликарт АГ

<120> Биспецифические антигенсвязывающие молекулы, активирующие Т-клетки

<130> 30598

<150> ЕР 11178370.0

<151> 2011-08-23

<150> ЕР 12168192.8

<151> 2012-05-16

<160> 266

<170> РаЬепЫп, версия 3.5

<210> 1

<211> 700

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (зсЕаЬ)-Ес(«впадина»)

<400> 1

Азр Не С1п МеЪ ТЬг С1п Зег Рго 1 5

Р329С ЬАЬА

Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 О1у 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд 20

А1а Зег С1п Азр 11е Агд Азп Туг 25 30

Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго 35 40

С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е 45

Туг Туг ТЬг Зег Агд Ьеи С1и Зег 50 55

С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 60

Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр Туг ТЬг 65 70

Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Рго 75 80

С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз 85

С1п 61п 61у Азп ТЬг Ьеи Рго Тгр 90 95

69 030147

70 030147

71 030147

ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Ηίβ С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе 515 520 525

Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго 530 535 540

Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 \7а1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг 545 550 555 560

Уа1 Ьеи НЬз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 565 570 575

Зег Азп Ьуз А1а Ьеи С1у А1а Рго Не С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а 580 585 590

Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Суз ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд 595 600 605

Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи Зег Суз А1а Уа1 Ьуз С1у 610 615 620

РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго 625 630 635 640

С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег 645 650 655

РЬе РЬе Ьеи Уа1 Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п 660 665 670

С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Шз С1и А1а Ьеи Н1з Азп Шз 675 680 685

Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз 690 695 700

<210> 2 <211> 2103

<212> ДНК

72 030147

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (зсЕаЬ)-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 2

дасаДссада	Ддасссадад	ссссДсДадс	сДдадсдсса	дсдДдддсда	сададДдасс	60
аДсассДдДс	дддссадсса	ддасаДсада	аасДассДда	асДддДаДса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсДдсД	даДсДасДас	ассДсДадас	Дддааадсдд	сдДдсссадс	180
сддДДДадсд	дсадсддсДс	сддсассдас	ДасасссДда	ссаДсадсад	ссДдсадссс	240
даддасДДсд	ссассДасДа	сДдссадсад	ддсаасасас	ДссссДддас	сДДсддссад	300
ддсассаадд	ДддадаДсаа	дсдДасддДд	дссдсДссса	дсдДдДДсаД	сДДссссссс	360
адсдасдадс	адсДдаадДс	сддсассдсс	адсдДсдДдД	дссДдсДдаа	саасДДсДас	420
ссссдддадд	ссааддДдса	дДддааддДд	дасаасдссс	Ддсададсдд	саасадссад	480
дааадсдДса	ссдадсадда	садсааддас	ДссассДаса	дссДдадсад	сасссДдасс	540
сДдадсаадд	ссдасДасда	даадсасаад	дДдДасдссД	дсдаадДдас	ссассадддс	600
сДдДссадсс	ссдДдассаа	дадсДДсаас	сддддсдадД	дсадсддсдд	аддсДсДдда	660
ддсддсДсДд	ааддсддадд	аадДдадддс	ддаддсДсад	ааддсддсдд	аадсдааддД	720
ддсддсДсДд	дсддсддаДс	сддсдаддДд	садсДддДсд	адДссддсдд	аддссДддДд	780
садссДддсд	дсадссДдад	асДдадсДдс	дссдссадсд	дсДасадсДД	сассддсДас	840
ассаДдаасД	дддДссддса	ддсДссДддс	аадддссДсд	ааДдддДддс	ссДдаДсаас	900
сссДасаадд	дсдДдадсас	сДасаассад	аадДДсаадд	ассддДДсас	саДсадсдДд	960
дасаададса	адаасассдс	сДаДсДдсад	аДдаасадсс	Ддсдддссда	ддасассдсс	1020
дДдДасДасД	дсдссадаад	сддсДасДас	ддсдасадсд	асДддДасДД	сдасдДдДдд	1080
ддссадддса	сасДддДсас	сдДдДссадс	дсДадсасса	адддсссаДс	ддДсДДсссс	1140
сДддсасссД	ссДссаадад	сассДсДддд	ддсасадсдд	сссДдддсДд	ссДддДсаад	1200
дасДасДДсс	ссдаассддД	дасддДдДсд	ДддаасДсад	дсдсссДдас	садсддсдДд	1260
сасассДДсс	сддсДдДссД	асадДссДса	ддасДсДасД	сссДсадсад	сдДддДдасс	1320
дДдсссДсса	дсадсДДддд	сасссадасс	ДасаДсДдса	асдДдааДса	саадсссадс	1380

- 73 030147

аасассаадд	Ьддасаадаа	адЬЬдадссс	аааЬсНдЬд	асаааасЬса	сасаЬдссса	1440
ссдЬдсссад	сассЬдаадс	Ъдсаддддда	ссдЬсадЬсЬ	гссгсггссс	сссаааассс	1500
ааддасассс	ЬсаЬдаЬсЬс	ссддассссЬ	даддЬсасаЬ	дсдЬддЬддЬ	ддасдЬдадс	1560
сасдаадасс	сЬдаддЬсаа	дНсаасЬдд	РасдЬддасд	дсдЬддаддЬ	дсаЬааЬдсс	1620
аадасааадс	сдсдддадда	дсадЬасаас	адсасдЬасс	дЬдЬддЬсад	сдЬссЬсасс	1680
дЬссЬдсасс	аддасЬддсЬ	дааЬддсаад	дадЬасаадЬ	дсааддЪсЪс	саасааадсс	1740
сЬсддсдссс	ссаЬсдадаа	аассаЬсЬсс	ааадссааад	ддсадссссд	адаассасад	1800
дрдрдсассс	РдсссссаЬс	ссдддаЬдад	сЬдассаада	ассаддЬсад	ссЬсРсдЬдс	1860
дсадЬсааад	дсНсЬаЬсс	садсдасаЬс	дссдЬддадЬ	дддададсаа	Ьдддсадссд	1920
дадаасаасЬ	асаадассас	дссЬсссдЬд	сЬддасЬссд	асддсТссН	сНссЬсдЬд	1980
адсаадсЬса	ссдЬддасаа	дадсаддЬдд	садсадддда	асдЬсНсЬс	аЬдсЬссдЬд	2040
аЬдсаЬдадд	сЬсЬдсасаа	ссасЬасасд	садаададсс	ЬсЬсссЬдЬс	ЬссдддЬааа	2100
Ьда						2103

<210> 3

<211> 442

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (νΗ-ΟΗΙ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 3

С1и Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п

10

15

Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег Уа1 ТЬг 61у Туг Зег Не ТЬг Зег С1у 20 25 30

Туг Туг Тгр Азп Тгр 11е Агд С1п РЬе Рго С1у Азп Ьуз Ьеи С1и Тгр 35 40 45

МеЬ С1у Туг 11е ТЬг Туг Азр С1у Зег Азп Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

74 030147

Ьуз Азп Агд Не Зег 11е ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе РЬе 65 70 75 80

Ьеи Ьуз Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг ТЬг С1и Азр ТЬг А1а ТЬг Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Азр РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п Е1у ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 Зег Зег 100 105 110

А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз 115 120 125

Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг 130 135 140

РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег 61у А1а Ьеи ТЬг Зег 145 150 155 160

С1у Уа1 Низ ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег 165 170 175

Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг \7а1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг 180 185 190

Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Шз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз 195 200 205

Ьуз Уа1 Е1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз 210 215 220

Рго А1а Рго С1и А1а А1а С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго 225 230 235 240

Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз 245 250 255

Уа1 \7а1 \7а1 Азр Уа1 Зег НЬз С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр 260 265 270

75 030147

Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и 275 280 285

С1и Е1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи 290 295 300

Нхз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп 305 310 315 320

Ьуз А1а Ьеи С1у А1а Рго 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у 325 330 335

С1п Рго Агд С1и Рго 61п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Суз Агд Азр С1и 340 345 350

Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг 355 360 365

Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп 370 375 380

Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе 385 390 395 400

Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр Е1п С1п С1у Азп 405 410 415

Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ НЬз С1и А1а Ьеи Шз Азп Шз Туг ТЬг 420 425 430

61п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 61у Ьуз 435 440

<210> 4

<211> 1329

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (УН-СН1)-Ес(«выступ») Р329С ЬАЬА

- 76 030147

<400> 4 дадд+ссадс ЬдсаддадЬс	аддасс+ддс	с+сдЬдааас	сНсЬсад+с	Ьс+д+с-Ьс+с	60
ассЪдсЪсЬд ЬсасЬддсЬа	сЪссаЪсасс	адОддНаН	асЪддаасСд	даЬссддсад	120
ТПссаддаа асаадсЬдда	аЪддаЬдддс	ЬасаЪаассЪ	асдасддЪад	сааЬаасЬас	180
аасссаЬсЪс ЬсаааааЪсд	ааЬсЪссаЬс	асЬсдЪдаса	саЬсЪаадаа	ссадЬЫИс	240
сЪдаадНда аНсЪдТдас	ТасТдаддас	асадсТаса-Ь	аМасЬдЪдс	ддасНЪдас	300
ЬасЪддддсс ааддсассас	ЬсЬсасадЬс	ЬссЪсадсЬа	дсассааддд	ссса+сддЬс	360
НсссссТдд сасссЬссЬс	саададсасс	ЪсЪдддддса	садсддсссЪ	дддс+дссЬд	420
дЬсааддас! асЬЪссссда	ассддЪдасд	дЪдЪсдЬдда	асЬсаддсдс	ссЬдассадс	480
ддсдЪдсаса ссЫсссддс	1д1сс1асад	ЬссЬсаддас	ЪсЪасЬсссЪ	садсадсдЬд	540
дЬдассдЬдс ссЪссадсад	сНдддсасс	садассЪаса	ЬсЪдсаасдЪ	дааЬсасаад	600
сссадсааса ссааддЪдда	саадааадН	дадсссааа!	сНдЬдасаа	дасссасасс	660
ЬдЪссссс+Ь дссс+дсссс	Ьдаадс-Ьдс!	дд+ддсссЬЬ	ссд+дЪ+ссЬ	дЪЬсссссса	720
аадсссаадд асасссЪда!	даЪсадссдд	асссссдаад	1дасс1дсд1	ддЪдд+сдаЪ	780
дЪдЬсссасд аддасссЬда	адТдаадНс	ааЪЪддЬасд	ЪддасддсдЪ	ддаадЪдсас	840
ааЬдссаада ссаадссдсд	ддаддадсад	Ьасаасадса	сдЬассдЪдЪ	ддЬсадсдЬс	900
сЬсассдЬсс Ьдсассадда	сЬддсЬдаа·!;	ддсааддадЪ	асаадЬдсаа	ддЬсЪссаас	960
ааадссс+сд дсдсссссаЪ	сдадаааасс	а+сЪссааад	ссааадддса	дссссдадаа	1020
ссасаддЬд! асасссЪдсс	сссаЪдссдд	даЬдадсЬда	ссаадаасса	ддЬсадссЬд	1080
ЪддЪдссЪдд ЬсаааддсЪЪ	сЬаЬсссадс	дасаЬсдссд	1ддад1ддда	дадсааЬддд	1140
садссддада асаас+асаа	дассасдсс!	сссд+дсЪдд	асЬссдасдд	сЬссИсНс	1200
сЬсЪасадса адс+сассдЪ	ддасаададс	аддЪддсадс	аддддаасд!	сНсЪсаЪдс	1260
ЪссдЪдаЬдс а-ЬдаддсТс!	дсасаассас	Ъасасдсада	ададссЬс+с	ссЪдЪсЬссд	1320
ддЬааа+аа					1329

<210> 5

<211> 214

<212> ΡΚ.Τ

- 77 030147

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 1.С007 (УЬ-СЬ)

<400> 5

Азр Не Уа1 Ьеи ТЬг Е1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Ьеи Е1у 15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг Не Зег Суз Зег А1а Зег Е1п Е1у 11е Агд Азп Туг 20 25 30

Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п Агд Рго Азр С1у ТЬг Уа1 Ьуз Ьеи Ьеи Не 35 40 45

Туг Туг ТЬг Зег Зег Ьеи Ηίδ Зег 01у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег Е1у 50 55 60

Зег Е1у Зег С1у ТЬг Азр Туг Зег Ьеи ТЬг 11е Зег Азп Ьеи Е1и Рго 65 70 75 80

С1и Азр Не А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п Е1п Туг Зег Ьуз Ьеи Рго Тгр 85 90 95

ТЬг РЬе С1у Е1у Е1у ТЬг Ьуз Ьеи Е1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а 100 105 110

Рго Зег Уа1 РЬе Не РЬе Рго Рго Зег Азр Е1и Е1п Ьеи Ьуз Зег С1у 115 120 125

ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд Е1и А1а 130 135 140

Ьуз \7а1 Е1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи Е1п Зег Е1у Азп Зег Е1п 145 150 155 160

Е1и Зег Уа1 ТЬг 31и Е1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175

Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг Е1и Ьуз Нхз Ьуз Уа1 Туг

78 030147

180 185 190

А1а Суз Е1и Уа1 ТЬг Ηίδ 61п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег 195 200 205

РЬе Азп Агд С1у С1и Суз 210

<210> 6 <211> 645 <212> ДНК <213> Искусственная	последовательность
<220> <223> ЬС007 (УЬ-СЬ)
<400> 6 даЬаЫдЬдс	ЬсасасадЬс	ЬссаЬссЬсс	сЬдЬсЬдссЬ	сЬсЬдддада	сададЬсасс	60
аЬсадЫдса	дЬдсаадЬса	дддсаЫада	ааЫаЬЫаа	асЬддЬаЪса	дсададасса	120
даЬддаасЬд	ЬЬааасЬссЬ	даЬсЬаЫас	асаЬсаадЫ	ЬасасЬсадд	адЬсссаЬса	180
аддЬЬсадЬд	дсадЬдддЬс	ЬдддасадаЬ	ЬаЫсЬсЬса	ссаЬсадсаа	ссЬддаассЬ	240
даадаЬаЫд	ссасЫасЬа	ЫдЬсадсад	ЬаЬадЬаадс	ЫссЫддас	дЫсддЬдда	300
ддсассаадс	ЬддаааЬсаа	асдЬасддЬд	дсЬдсассаЬ	сЬдЬсЫсаЬ	сЫсссдсса	360
ЬсЬдаЬдадс	адЫдаааЬс	ЬддаасЬдсс	ЬсЬдЫдЬдЬ	дссЬдсЬдаа	ЬаасЫсЬаЬ	420
сссадададд	ссааадЬаса	дЬддааддЬд	даЬаасдссс	ЬссааЬсддд	ЬаасЬсссад	480
дададЬдЬса	сададсадда	садсааддас	адсассЬаса	дссЬсадсад	сасссЬдасд	540
сЬдадсааад	садасЬасда	дааасасааа	дЬсЬасдссЬ	дсдаадЬсас	ссаЬсадддс	600
сЬдадсЬсдс	ссдЬсасааа	дадсЬЬсаас	аддддададЬ	дЫад		645

<210> 7

<211> 704

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (зсЕаЬ)-Ес(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 7

- 79 030147

80 030147

РЬе Азп Агд 61у 61и Суз Зег С1у 210 215

С1у С1у Зег С1у 61у С1у Зег С1и 220

61у С1у С1у Зег С1и С1у С1у С1у 225 230

Зег С1и С1у С1у С1у Зег 51и С1у 235 240

С1у С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1у 245

С1и Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у 250 255

Рго 61у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п 260

Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег \7а1 265 270

ТЬг С1у Туг Зег Не ТЬг Зег С1у 275 280

Туг Туг Тгр Азп Тгр 11е Агд С1п 285

РЬе Рго С1у Азп Ьуз Ьеи С1и Тгр 290 295

Мер С1у Туг 11е ТЬг Туг Азр С1у 300

Зег Азп Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи 305 310

Ьуз Азп Агд 11е Зег 11е ТЬг Агд 315 320

Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе РЬе 325

Ьеи Ьуз Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг ТЬг 330 335

61и Азр ТЬг А1а ТЬг Туг Туг Суз 340

А1а Азр РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п 345 350

С1у ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 Зег Зег 355 360

А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 365

РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз 370 375

Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а 380

Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг 385 390

РЬе Рго Е1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег 395 400

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег 405

С1у \7а1 Нгз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 410 415

81 030147

Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго 420 425 430

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг Не Суз Азп Уа1 Азп Шз Ьуз 435 440 445

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр 450 455 460

С1у С1у С1у СЬу Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у А1а С1п Азр Ьуз ТЬг 465 470 475 480

Нхз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а А1а СЬу СЬу Рго Зег 485 490 495

Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд 500 505 510

ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Нхз С1и Азр Рго 515 520 525

С1и \7а1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр СЬу 77а1 С1и Уа1 НЬз Азп А1а 530 535 540

Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд \7а1 Уа1 545 550 555 560

Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нхз С1п Азр Тгр Ьеи Азп Е1у Ьуз С1и Туг 565 570 575

Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е С1и Ьуз ТЬг 580 585 590

11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Суз ТЬг Ьеи 595 600 605

Рго Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи Зег Суз 610 615 620

82 030147

А1а Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег 625 630 635 640

Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр 645 650 655

Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Уа1 Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег 660 665 670

Агд Тгр Е1п Е1п О1у Азп \7а1 РЬе Зег Суз Зег А7а1 МеЬ Шз С1и А1а 675 680 685

Ьеи Шз Азп Шз Туг ТЬг 61п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз 690 695 700

<210> 8

<211> 2115

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (зсЕаЬ)-Ес(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 8

дасаЬсдЬдс	Ьдасссадад	сссЬадсадс	сЬдадсдсса	дссЬдддсда	сададЬдасс	60
аЬсадсЪдЬа	дсдссЬссса	дддса+сада	аасЪассЬда	асЪддЪаЬса	дсададассс	120
дасддсасад	ЬдаадсЬдсЬ	даЬсЬасЬас	ассадсадсс	Ьдсасадсдд	сдЬдссаадс	180
адаЫсадсд	дсадсддсЬс	сддсасадас	ЬасадссЬда	ссаЬсЬссаа	ссЬддаассс	240
даддаЬаЬсд	ссассЬасЬа	сЬдссадсад	Ьасадсаадс	ЬдсссЬддас	сЬЬсддсдда	300
ддсассаадс	ЬддаааЬсаа	дсддассдЬд	дссдсЬссса	дсдЬдЬЬсаЬ	сЫсссассс	360
адсдасдадс	адсЬдаадЬс	сддсасадсс	адсдЬсдЬдЬ	дссЬдсЬдаа	саасШсЬас	420
ссссдддадд	ссааддЬдса	дЪддааддЪд	дасаасдссс	Ьдсададсдд	саасадссад	480
дааадсдЬса	ссдадсадда	садсааддас	ЬссассЬаса	дссЬдЬссад	сасссЬдасс	540
сЬдадсаадд	ссдасЬасда	даадсасаад	дЬдЬасдссЬ	дсдаадЬдас	ссассадддс	600
сЬдадсадсс	ссдЬдассаа	дадсЫсаас	сддддсдадЬ	дЬадЬддсдд	аддсЬс+ддс	660

- 8З 030147

ддаддаадсд	адддсддадд	абс-Ьдааддс	ддсдда+с+д	аддддддадд	садЪдааддд	720
ддаддсЪсад	ддддаддаЕс	сддсдаддЪд	садс+дсадд	аабсЬддссс	ЪддссЬддЪс	780
аадссаадсс	ададСсОдад	ссбдассбдс	адсдбдассд	дсЕасадса!	бассадсддс	840
ТасЪасЪдда	ас^ддаббсд	дсадЪЕсссс	ддсааЕаадс	бддааЪддаЪ	дддсЪасабс	900
асс+асдасд	дсадсаасаа	сЕасаасссс	адсс+даада	ассддаЕсад	саЕсасссдд	960
дасассадса	адаассадб'Ь	сЕ+ссбдаад	сЪдаасадсд	Одассассда	ддасассдсс	1020
асабас+а-Ы;	дсдссдас+Ъ	сдасбасбдд	ддссадддса	ссасссбдас	сдбдЪссадс	1080
дссадсасаа	адддсссбад	сдбдббссс!:	сбддссссса	дсадсаадад	сасаадсддс	1140
ддаасадссд	сссЬдддсЬд	сс+сдЕдаад	дасбасбЪсс	ссдадсссдЪ	дасад^д+сб	1200
Ъддаасадсд	дадсссбдас	аадсддсдбд	сасассббсс	сбдссдбдсЪ	дсададсадс	1260
ддссТд+асЬ	сссбдадсад	сдЪддбсасс	д+дссбадса	дсадссЬддд	сасссадасс	1320
ЪасаЪсбдса	асдЪдаасса	саадсссадс	аасассааад	бддасаадаа	ддбддадссс	1380
аададсбдЪд	аТддсддадд	адддбссдда	ддсдд+ддаЪ	ссддадсЪса	ддасаааас1:	1440
сасасаЪдсс	сассдбдссс	адсасс+даа	дсбдсадддд	дассдбсадб	сЪТссТсЕЕс	1500
сссссаааас	ссааддасас	ссбсабда-Сс	бсссддассс	сЬдаддТсас	аЬдсд-ЬддЬд	1560
дбддасдбда	дссасдаада	сссЬдаддбс	аадЪЪсаасЪ	ддЬасдбдда	сддсд+ддад	1620
дбдсаЕааЪд	ссаадасааа	дссдсдддад	дадсадбаса	асадсасдба	ссдбдбддбс	1680
адсд+сс+са	ссдТссТдса	ссаддас+дд	с+даа+ддса	аддад+асаа	д+дсаадд+с	1740
Тссаасааад	сссбсссадс	ссссабсдад	аааассабсЪ	ссааадссаа	адддсадссс	1800
сдадаассас	аддбд+дсас	ссЬдссссса	Ъсссддда-Ьд	адсЕдассаа	даассадд+с	1860
адссЪс+сдб	дсдсадбсаа	аддсЪбсЬа!	сссадсдаса	ЪсдссдЪдда	дбдддададс	1920
ааЕдддсадс	сддадаасаа	с+асаадасс	асдсс+сссд	ЬдсЪддас+с	сдасддсбсс	1980
ЪЪсТТссЕсд	ЪдадсаадсО	сассдЪддас	аададсаддЪ	ддсадсаддд	даасдЕсЪЪс	2040
Ъса+дсЕссд	Тда+дсаОда	ддсЕсбдсас	аассасЪаса	сдсадаадад	ссЪс+сссбд	2100
ЪсЕссддд1;а	аа+да					2115

<210> 9

- 84 030147

<211> 466

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ν9 (УН-СН1) -Гс(«выступ») ЬАЬА

<400> 9

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Туг Зег РНе ТЬг СЬу Туг 20 25 30

ТЬг МеЬ Азп Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ 35 40 45

АЬа Ьеи Не Азп Рго Туг Ьуз СЬу УаЬ Зег ТЬг Туг Азп СЬп Ьуз РЬе 50 55 60

Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег УаЬ Азр Ьуз Зег Ьуз Азп ТЬг АЬа Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа Агд Зег СЬу Туг Туг СЬу Азр Зег Азр Тгр Туг РЬе Азр УаЬ Тгр 100 105 110

СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго 115 120 125

Зег УаЬ РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег СЬу СЬу ТЬг 130 135 140

АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг 145 150 155 160

УаЬ Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго 165 170 175

85 030147

86 030147

Тгр Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Не АЬа УаЬ СЬи Тгр 385 390 395 400

СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ 405 410 415

Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Азр 420 425 430

Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ Мер НЬз 435 440 445

СЬи АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 450 455 460

СЬу Ьуз 465

<210> 10

<211> 1401

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (УН-СН1) -Гс(«выступ») ЬАЬА

<400> 10

даддРдсадс	РддРсдадад	сддаддсддс	срддрдсадс	сРддсддсад	ссРдадасРд	60
адсРдсдссд	ссадсддсРа	садсРРсасс	ддсРасасса	РдаасРдддР	ссддсаддса	120
ссРддсаадд	дасРддааРд	ддрддсссрд	аРсаассссР	асаадддсдр	дадсассРас	180
аассадаадР	Рсааддассд	дРРсассаРс	адсдрддаса	ададсаадаа	сассдссРаР	240
сРдсадаРда	асадссрдсд	ддссдаддас	ассдссдрдр	асРасРдсдс	садаадсддс	300
РасРасддсд	асадсдасРд	дРасРРсдас	дрдрддддсс	адддсасссР	сдрдассдрд	360
РсРадсдсРа	дсассааддд	ссссРссдРд	РРсссссРдд	сссссадсад	саададсасс	420
адсддсддса	садссдсРсР	дддсРдссРд	дРсааддасР	асРРссссда	дсссдрдасс	480
дРдРссРдда	асадсддадс	ссРдассРсс	ддсдрдсаса	ссРРссссдс	сдрдсрдсад	540

- 87 030147

адЬЬсЬддсс ЬдЬаЬадссЬ дадсадсдЬд дТсассдСдс сЫсЬадсад ссТдддсасс 600

садассЪаса ЬсЬдсаасдЬ даассасаад сссадсааса ссааддЪдда саадааддбд 660

дадсссаада дсЬдсдасдд сддЬддЬддс Ьссддаддсд дЬддаЬссдд адсЬсаддас 720

аааасЪсаса саЬдсссасс дЬдсссадса ссЬдаадсЬд садддддасс дЬсадЬсЫс 780

сЬсЫссссс саааасссаа ддасасссЬс аЬдаЬсЬссс ддассссЬда ддЪсасаЪдс 840

дЬддЬддЬдд асдЬдадсса сдаадасссЬ даддЬсаадЬ ЬсаасЪддЬа сдЬддасддс 900

д+ддаддЬдс аЬааЬдссаа дасааадссд сдддаддадс адЪасаасад сасдЬассдЬ 960

дЬддЬсадсд ЬссЬсассдЬ ссЬдсассад дасЬддсЬда аЬддсаадда дЬасаадЬдс 1020

ааддЪсЬсса асааадсссЬ сссадссссс аЬсдадаааа ссаЪсЬссаа адссаааддд 1080

садссссдад аассасаддЬ дЪасасссЪд сссссаЬдсс дддаЬдадсЬ дассаадаас 1140

саддЬсадсс ЬдЬддЬдссЬ ддЬсаааддс МсТаЪссса дсдасаЬсдс сдЬддадЬдд 1200

дададсаа+д ддсадссдда даасаасЬас аадассасдс сЬсссдЬдсЬ ддасЬссдас 1260

ддсСссЬЪсЬ ЪссЪсЪасад саадсЬсасс дЬддасаада дсаддЬддса дсаддддаас 1320

дЬсЫсЬсаЬ дсЪссдЪда-Ь дса+даддсЪ сСдсасаасс асЬасасдса даададссЬс 1380

ЬсссРдРсРс сдддЬаааЬд а 1401

<210> 11

<211> 214

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (УЬ-СЬ)

<400> 11

Азр 11е С1п МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у

15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Азр 11е Агд Азп Туг 20 25 30

Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е 35 40 45

88 030147

Туг Туг ТЬг Зег Агд Ьеи СЬи Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу 50 55 60

Зег СЬу Зег С1у ТЬг Азр Туг ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи 61п Рго 65 70 75 80

СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп С1п С1у Азп ТЬг Ьеи Рго Тгр 85 90 95

ТЬг РЬе С1у СЬп СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 1Ье Ьуз Агд ТЬг УаЬ АЬа АЬа ЬОО 105 ЬЬО

Рго Зег УаЬ РЬе 1Ье РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег СЬу 115 120 125

ТЬг АЬа Зег УаЬ УаЬ Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи АЬа 130 135 140

Ьуз УаЬ СЬп Тгр Ьуз УаЬ Азр Азп АЬа Ьеи СЬп Зег СЬу Азп Зег СЬп 145 150 155 160

СЬи Зег УаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175

Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа Азр Туг СЬи Ьуз НЬз Ьуз УаЬ Туг 180 185 190

АЬа Суз СЬи УаЬ ТЬг НЬз СЬп СЬу Ьеи Зег Зег Рго УаЬ ТЬг Ьуз Зег 195 200 205

РЬе Азп Агд СЬу СЬи Суз 210

<210> 12

<211> 645

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (УЬ-СЬ)

- 89 030147

<400> 12
дасаЬссада	Ьдасссадад	ссссадсадс	сЬдадсдсса	дсдЬдддсда	сададЬдасс	60
аЬсассЬдЬс	дддссадсса	ддасаЬсада	аасЬассЬда	асЬддЬаЬса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсЬдсЬ	даЬсЬасЬас	ассЬсЬадас	Ьддааадсдд	сдЬдсссадс	180
сддЬЬЬадсд	дсадсддсЬс	сддсассдас	ЬасасссЬда	ссаЬсадсад	ссЬдсадссс	240
даддасЬЬсд	ссассЬасЬа	сЬдссадсад	ддсаасасас	ЬдсссЬддас	сЬЬсддссад	300
ддсасааадд	ЬддадаЬсаа	дсдЬасддЬд	дсЬдсассаЬ	сЬдЬсЬЬсаЬ	сЬЬсссдсса	360
ЬсЬдаЬдадс	адЬЬдаааЬс	ЬддаасЬдсс	ЬсЬдЬЬдЬдЬ	дссЬдсЬдаа	ЬаасЬЬсЬаЬ	420
сссадададд	ссааадЬаса	дЬддааддЬд	даЬаасдссс	ЬссааЬсддд	ЬаасЬсссад	480
дададЬдЬса	сададсадда	садсааддас	адсассЬаса	дссЬсадсад	сасссЬдасд	540
сЬдадсааад	садасЬасда	дааасасааа	дЬсЬасдссЬ	дсдаадЬсас	ссаЬсадддс	600
сЬдадсЬсдс	ссдЬсасааа	дадсЬЬсаас	аддддададЬ	дЬЬад		645

<210> 13

<211> 926

<212> ΡΕΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ν9 (зсГаЬ)-ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«выступ») иЬ

<400> 13

Азр 11е Е1п Ме! ТЬг Е1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 Е1у 15 10 15

Ьеи Азп Тгр Туг С1п Е1п Ьуз Рго Е1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е 35 40 45

Туг Туг ТЬг Зег Агд Ьеи Е1и Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60

Зег Е1у Зег Е1у ТЬг Азр Туг ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи Е1п Рго

90 030147

91 030147

92 030147

485 490 495

Ьуз Рго Зег С1п Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег Уа1 ТЬг С1у Туг Зег 500 505 510

Не ТЬг Зег С1у Туг Туг Тгр Азп Тгр 11е Агд С1п РЬе Рго С1у Азп 515 520 525

Ьуз Ьеи С1и Тгр МеЬ С1у Туг 11е ТЬг Туг Азр С1у Зег Азп Азп Туг 530 535 540

Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Азп Агд 11е Зег 11е ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз 545 550 555 560

Азп С1п РЬе РЬе Ьеи Ьуз Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг ТЬг С1и Азр ТЬг А1а 565 570 575

ТЬг Туг Туг Суз А1а Азр РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Ьеи 580 585 590

ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а 595 600 605

Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи 610 615 620

Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у 625 630 635 640

А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 ΗΪ3 ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег 645 650 655

С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи 660 665 670

С1у ТЬг 61п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп ΗΪ3 Ьуз Рго Зег Азп ТЬг 675 680 685

Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг

93 030147

690 695

700

Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и 705 710

Ьеи Ьеи С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе 715 720

Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр 725

ТЬг Ьеи Мер Не Зег Агд ТЬг Рго 730 735

С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр 740

Уа1 Зег Шз С1и Азр Рго С1и Уа1 745 750

Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у 755 760

Уа1 С1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг 765

Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп 770 775

Зег ТЬг Туг Агд \7а1 Уа1 Зег Уа1 780

Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр 785 790

Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз 795 800

Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго 805

А1а Рго 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег 810 815

Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и 820

Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго 825 830

Суз Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп 835 840

С1п Уа1 Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи Уа1 845

Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр Не 850 855

А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у 860

С1п Рго 61и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг 865 870

ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр 875 880

С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз 885

Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр 890 895

С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз

Зег Уа1 МеЬ Шз С1и А1а Ьеи Шз

94 030147

900 905 910

Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз 915 920 925

<210> 14

<211> 2781

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ν9 (зсЕаЬ)-ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«выступ») мб

<400> 14

дасабссада	бдасссадад	ссссбсбадс	сбдадсдсса	дсдбдддсда	сададбдасс	60
абсассбдбс	дддссадсса	ддасабсада	аасбассбда	асбддбабса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсбдсб	дабсбасбас	ассбсбадас	бддааадсдд	сдбдсссадс	180
сддбббадсд	дсадсддсбс	сддсассдас	басасссбда	ссабсадсад	ссбдсадссс	240
даддасббсд	ссассбасба	сбдссадсад	ддсаасасас	бссссбддас	сббсддссад	300
ддсассаадд	бддадабсаа	дсдбасддбд	дссдсбссса	дсдбдббсаб	сббссссссс	360
адсдасдадс	адсбдаадбс	сддсассдсс	адсдбсдбдб	дссбдсбдаа	саасббсбас	420
ссссдддадд	ссааддбдса	дбддааддбд	дасаасдссс	бдсададсдд	саасадссад	480
дааадсдбса	ссдадсадда	садсааддас	бссассбаса	дссбдадсад	сасссбдасс	540
сбдадсаадд	ссдасбасда	даадсасаад	дбдбасдссб	дсдаадбдас	ссассадддс	600
сбдбссадсс	ссдбдассаа	дадсббсаас	сддддсдадб	дсадсддсдд	аддсбсбдда	660
ддсддсбсбд	ааддсддадд	аадбдадддс	ддаддсбсад	ааддсддсдд	аадсдааддб	720
ддсддсбсбд	дсддсддабс	сддсдаддбд	садсбддбсд	адбссддсдд	аддссбддбд	780
садссбддсд	дсадссбдад	асбдадсбдс	дссдссадсд	дсбасадсбб	сассддсбас	840
ассабдаасб	дддбссддса	ддсбссбддс	аадддссбсд	аабдддбддс	ссбдабсаас	900
сссбасаадд	дсдбдадсас	сбасаассад	аадббсаадд	ассддббсас	сабсадсдбд	960
дасаададса	адаасассдс	сбабсбдсад	абдаасадсс	бдсдддссда	ддасассдсс	1020
дбдбасбасб	дсдссадаад	сддсбасбас	ддсдасадсд	асбддбасбб	сдасдбдбдд	1080

- 95 030147

ддссадддса	сасГдд+сас	сд+дЪссадс	дсЪадсасса	адддссссЪс	сдЪдЪЪсссс	1140
сЪддссссса	дсадсаадад	сассадсддс	ддсасадссд	сссЪсддсЪд	ссГддЪсаад	1200
дас1асПсс	ссдадсссдЪ	дассд+дГсс	Гддаасадсд	дадсссЪдас	сЪссддсдЕд	1260
сасасс+Гсс	ссдссдЪдс!	дсададсадс	ддсс+дГаса	дсс+дГссад	сдЪдд+сасс	1320
дЪдссс+сса	дсадссГддд	сасссадасс	ЪасаГсГдса	асдЪдаасса	саадсссадс	1380
ааГассаадд	Ъддасаадаа	ддГддадссс	аададсЕдед	аеддеддЪдд	ГддсЪссдда	1440
ддсддЪддаЬ	с+даадГдса	дсЕдсаддаа	адсддсссСд	дсс1дд1:саа	дсссадссад	1500
адсс+дадсс	ГдассГдЬад	сдбдассддс	ГасЪссаГса	ссГссддсЪа	сЪасГддааГ	1560
ГддаПсддс	адПссссдд	саасаадсЪд	дааГддаЪдд	дсЕасаГсас	сЪасдасддс	1620
адсаасаасб	асаассссад	сс+даадаас	сддаЪсадса	Ьсасссддда	сассадсаад	1680
аассадПс!	ЪссГдаадСЪ	дааПсГдОд	асЪасЪдадд	асасадсГас	аГаЪГасЪдГ	1740
дсддасШд	асГасГдддд	ссааддсасс	асГсГсасад	ЬсГссГсадс	Ъадсассаад	1800
ддсссаЪсдд	ГсГ-ЬсссссГ	ддсасссСсс	Ъссаададса	ссГсЪддддд	сасадсддсс	1860
сЪдддсГдсс	ГддЪсаадда	сбасЫасссс	даассддГда	сдд1;дГсдГд	даасЪсаддс	1920
дсссГдасса	дсддсдГдса	сассГЪсссд	дсЕдЕссЕас	адГссбсадд	асЪсГас+сс	1980
сЪсадсадсд	ЪддЪдассдГ	дссс+ссадс	адсЫадддса	сссадассГа	саЪсЪдсаас	2040
дСдаа+саса	адсссадсаа	сассааддбд	дасаадааад	ЪГдадсссаа	а1с11д1дас	2100
аааасГсаса	саГдсссасс	дГдсссадса	ссЕдаасЕсс	Ъддддддасс	дОсадЪсПс	2160
сГс+Ъссссс	саааасссаа	ддасасссГс	аГдаГсбссс	ддассссГда	ддГсаса+дс	2220
дЕддЪддЕдд	асд+дадсса	сдаадасссЪ	дадд+саадЪ	ЪсаасГддГа	сдГддасддс	2280
дЪддаддЪдс	аЪааГдссаа	дасааадссд	сдддаддадс	адГасаасад	сасдСассдЬ	2340
дГддЪсадсд	ЪссГсассдб	ссЬдсассад	дасГддсЬда	аСддсаадда	дЪасаадГдс	2400
ааддГсЕсса	асааадсссС	сссадссссс	аЪедадаааа	ссаГсЪссаа	адссаааддд	2460
садссссдад	аассасаддС	д+асасссЕд	сссссаЪдсс	ддда+дадсЪ	дассаадаас	2520
саддЪсадсс	ЕдГддЕдссГ	дд+саааддс	11с1а1ссса	дсдасаЕсдс	едЪддадЬдд	2580
дададсаа+д	ддсадссдда	даасаас+ас	аадассасдс	сЕсссдЕдсГ	ддасЪссдас	2640

- 96 030147

ддсРссРРсР	РссРсРасад	саадсРсасс	дрддасаада	дсаддрддса	дсаддддаас	2700
дРсРРсРсаР	дсРссдРдаР	дсаРдаддсР	сРдсасаасс	асРасасдса	даададссСс	2760
РсссРдРсРс	сдддРаааРд	а				2781

<210> 15

<211> 442

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (УН-СН1) -Гс («впадина») мр

<400> 15

С1и Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п 15 10 15

Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег Уа1 ТЬг 61у Туг Зег 11е ТЬг Зег 61у 20 25 30

Мер С1у Туг 11е ТЬг Туг Азр С1у Зег Азп Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Ьуз Азп Агд 11е Зег 11е ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп 61п РЬе РЬе 65 70 75 80

А1а Азр РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 Зег Зег 100 105 110

Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи А7а1 Ьуз Азр Туг 130 135 140

97 030147

98 030147

Ьеи ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи Зег Суз АЬа УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг 355 360 365

Рго Зег Азр Не АЬа УаЬ С1и Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп 370 375 380

Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе 385 390 395 400

Ьеи УаЬ Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп 405 410 415

УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеЬ НЬз СЬи АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг 420 425 430

СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз 435 440

<210> 16

<211> 1329

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«впадина») и!

<400> 16

даддЬссадс	ЬдсаддадЬс	аддассЬддс	сЬсдЬдааас	сЬЬсЬсадЬс	ЬсЬдЬсЬсЬс	60
ассЬдсЬсЬд	ЪсасЪддсЪа	сЬссаЬсасс	адЬддЬЬаЬЬ	асЬддаасЬд	даЬссддсад	120
ЬНссаддаа	асаадсЬдда	аЬддаЬдддс	ЬасаЬаассЬ	асдасддЬад	сааЬаасЬас	180
аасссаЬсЬс	ЬсаааааЬсд	ааЬсЬссаЬс	асЬсдЬдаса	саЬсЬаадаа	ссадЬЬЬЬЬс	240
сЬдаадНда	аЬЬсЬдЬдас	ЬасЬдаддас	асадсЬасаЬ	аЬЬасЬдЬдс	ддасЬНдас	300
ЬасЬддддсс	ааддсассас	ЬсЬсасадЬс	ЬссЬсадсЬа	дсассааддд	сссаадсдЪд	360
ЬЬсссЬсЬдд	сссссадсад	саададсаса	адсддсддаа	садссдсссЬ	дддсЬдссЬд	420
дЬсааддасЬ	асНссссда	дсссдЬдаса	дЬдЬссЬдда	асадсддадс	ссЬдассадс	480
ддсдЬдсаса	ссЬЬЬссадс	сдЬдсЬдсад	адсадсддсс	ЬдЬасадссЬ	дадсадсдЬд	540

- 99 030147

дЬсасадЬдс	сЬадсадсад	сс1дддсасс	садассЬаса	ЬсЬдсаасдЬ	даассасаад	600
сссадсааса	ссааддЪдда	саадааддЬд	дадсссаада	дсЪдсдасаа	дасссасасс	660
ЬдЬсссссЫ	дЬссЬдсссс	ЬдадсЬдсЬд	ддсддассса	дсдЬдНссЬ	дНсссссса	720
аадсссаадд	асасссЪдаЬ	дарсадссдд	асссссдаад	ЬдассЬдсдЬ	дд+дд+ддас	780
дЬдЬсссасд	аддасссЬда	адЬдаадНс	ааНддЬасд	ЬддасддсдЬ	ддаддЪдсас	840
ааЬдссаада	ссаадссссд	ддаддаасад	Ьасаасадса	ссЬассдддЬ	ддЪдЪссдЪд	900
сЬдассдЬдс	Ьдсассадда	сЬддс+даас	ддсааададЬ	асаадЬдсаа	ддЪсЬссаас	960
ааддсссГдс	сЪдссссса1:	сдадаааасс	аЬсадсаадд	ссаадддсса	дсссададаа	1020
ссссаддЪдЬ	дсасссЪдсс	ссссадсада	даЪдадсЬда	ссаадаасса	ддЬдЬсссЬд	1080
адсЬдЬдссд	ЬсаадддсМ	сЬассссадс	даЪаЪсдссд	ЬддадЪддда	дадсаасддс	1140
садссЪдада	асаасЬасаа	дассассссс	ссЪдЪдсЪдд	асадсдасдд	садсЫсМс	1200
сЬддЬдЬсса	аасЪдассдЪ	ддасаададс	сддСддсадс	адддсаасдЪ	дПсадсЬдс	1260
адсдЬдаЬдс	асдаддссс!	дсасаассас	Ьасасссада	адЬсссЬдад	ссЬдадсссс	1320

ддсаад+да 1329

<210> 17

<211> 926

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223>	ν9 (	зсГаЬ)-ЬС007	(УН·	-снь;	1 - Гс	(«выступ»	·) ЬАЬА
<400>	17
Азр 11е	СЬп	МеЬ ТЬг СЬп	Зег	Рго	Зег	Зег Ьеи	Зег А1а Зег УаЬ СЬу
1		5				10	15
Азр Агд	УаЬ	ТЬг 11е ТЬг	Суз	Агд	А1а	Зег С1п	Азр Не Агд Азп Туг
		20			25		30
Ьеи Азп	Тгр	Туг СЬп СЬп	Ьуз	Рго	СЬу	Ьуз А1а	Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
	35			40			45
Туг Туг	ТЬг	Зег Агд Ьеи	СЬи	Зег	СЬу	УаЬ Рго	Зег Агд РЬе Зег СЬу

100 030147

50 55

60

Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр Туг ТЬг 65 70

Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи СЬп Рго 75 80

СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз 85

СЬп СЬп СЬу Азп ТЬг Ьеи Рго Тгр 90 95

ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз УаЬ 100

СЬи 11е Ьуз Агд ТЬг УаЬ АЬа АЬа 105 110

Рго Зег УаЬ РЬе 11е РЬе Рго Рго 115 120

Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег СЬу 125

ТЬг АЬа Зег УаЬ УаЬ Суз Ьеи Ьеи 130 135

Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи АЬа 140

Ьуз УаЬ СЬп Тгр Ьуз УаЬ Азр Азп 145 150

АЬа Ьеи СЬп Зег СЬу Азп Зег СЬп 155 160

СЬи Зег УаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр Зег 165

Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 170 175

Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа 180

Азр Туг СЬи Ьуз НЬз Ьуз УаЬ Туг 185 190

АЬа Суз СЬи УаЬ ТЬг НЬз СЬп СЬу 195 200

Ьеи Зег Зег Рго УаЬ ТЬг Ьуз Зег 205

РЬе Азп Агд СЬу СЬи Суз Зег СЬу 210 215

СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи 220

СЬу СЬу СЬу Зег СЬи СЬу СЬу СЬу 225 230

Зег СЬи СЬу СЬу СЬу Зег СЬи СЬу 235 240

СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬу 245

СЬи \?а1 СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу 250 255

СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа

- 101 030147

260

265

270

Зег

Е1у

Туг

Зег

РЬе

ТЬг

Е1у

Туг

ТЬг

МеЬ

Азп

Тгр

Уа1

Агд

Е1п

А1а

275

280

285

Рго

Е1у

Ьуз

Е1у

Ьеи

Е1и

Тгр

Уа1

А1а

Ьеи

11е

Азп

Рго

Туг

Ьуз

Е1у

290

295

300

57а1

Зег

ТЬг

Туг

Азп

Е1п

Ьуз

РЬе

Ьуз

Азр

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Уа1

305

310

315

320

Азр

Ьуз

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

А1а

Туг

Ьеи

Е1п

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

325

330

335

Е1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

Агд

Зег

Е1у

Туг

Е1у

Азр

340

345

350

Зег

Азр

Тгр

Туг

РЬе

Азр

Уа1

Тгр

Е1у

Е1п

Е1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

355

360

365

Зег

А1а

Зег

ТЬг

Ьуз

Е1у

Рго

Зег

Уа1

РЬе

Рго

Ьеи

А1а

Рго

Зег

370

375

380

Зег

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

Е1у

ТЬг

А1а

Ьеи

Е1у

Суз

Ьеи

Уа1

Ьуз

385

390

395

400

Азр

Туг

РЬе

Рго

61и

Рго

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Тгр

Азп

Зег

Е1у

А1а

Ьеи

405

410

415

ТЬг

Зег

Е1у

Уа1

Нхз

ТЬг

РЬе

Рго

А1а

Уа1

Ьеи

Е1п

Зег

Е1у

Ьеи

420

425

430

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Уа1

ТЬг

Уа1

Рго

Зег

Ьеи

Е1у

ТЬг

435

440

445

61п

ТЬг

Туг

11е

Суз

Азп

Уа1

Азп

Нхз

Ьуз

Рго

Зег

Азп

ТЬг

Ьуз

Уа1

450

455

460

Азр

Ьуз

Уа1

С1и

Рго

Ьуз

Зег

Суз

Азр

С1у

Зег

С1у

202-

- 102 030147

465 470

475 480

С1у С1у С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи 485

Б1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 490 495

Ьуз Рго Зег С1п Зег Ьеи Зег Ьеи 500

ТЬг Суз Зег Уа1 ТЬг Е1у Туг Зег 505 510

Не ТЬг Зег С1у Туг Туг Тгр Азп 515 520

Тгр 11е Агд С1п РЬе Рго С1у Азп 525

Ьуз Ьеи С1и Тгр МеД С1у Туг 11е 530 535

ТЬг Туг Азр С1у Зег Азп Азп Туг 540

Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Азп Агд 11е 545 550

Зег 11е ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз 555 560

Азп С1п РЬе РЬе Ьеи Ьуз Ьеи Азп 565

Зег Уа1 ТЬг ТЬг С1и Азр ТЬг А1а 570 575

ТЬг Туг Туг Суз А1а Азр РЬе Азр 580

Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Ьеи 585 590

ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз 595 600

С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а 605

Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у 610 615

С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи 620

Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго 625 630

Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у 635 640

А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Низ ТЬг 645

РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег 650 655

С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 660

Уа1 ТЬг \7а1 Рго Зег Зег Зег Ьеи 665 670

С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп

А/а1 Азп Низ Ьуз Рго Зег Азп ТЬг

-203- 103 030147

675 680 685

Ьуз Ή1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг 690 695 700

Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а А1а С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе 705 710 715 720

Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер 11е Зег Агд ТЬг Рго 725 730 735

С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Шз 61и Азр Рго С1и Уа1 740 745 750

Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг 755 760 765

Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Ча1 Ча1 Зег Уа1 770 775 780

Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз 785 790 795 800

Ьуз Ча1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег 805 810 815

Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Ча1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго 820 825 830

Суз Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи Уа1 835 840 845

Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у 850 855 860

С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр 865 870 875 880

С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр

104 030147

885 890 895

С1п С1п 61у Азп \7а1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Нхз С1и А1а Ьеи Нхз 900 905 910

Азп НЬз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз 915 920 925

<210> 18

<211> 2781

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (зсКаЬ)-ЬС007 (УН-СН1)-Кс(«выступ») ЬАЬА

<400> 18

дасаЕссада	Ьдасссадад	ссссЬсЬадс	сЬдадсдсса	дсдЬдддсда	сададЬдасс	60
аЕсассЕдЕс	дддссадсса	ддасаЬсада	аасЬассЬда	асЪддЬаЬса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсЬдсЪ	даЪсЪасЬас	ассЬсЬадас	Ьддааадсдд	сдЬдсссадс	180
сддЕЕЕадсд	дсадсддсЬс	сддсассдас	ЬасасссЬда	ссаЬсадсад	ссЬдсадссс	240
даддасЕЕсд	ссассЬасЬа	сЬдссадсад	ддсаасасас	ЬссссЬддас	сЬЬсддссад	300
ддсассаадд	ЬддадаЬсаа	дсдЬасддЬд	дссдсЬссса	дсдЬдЬЬсаЬ	сЬЬссссссс	360
адсдасдадс	адсЬдаадЬс	сддсассдсс	адсдЬсдЬдЬ	дссЬдсЬдаа	саасЬЬсЬас	420
ссссдддадд	ссааддЬдса	дЬддааддЬд	дасаасдссс	Ьдсададсдд	саасадссад	480
дааадсдЬса	ссдадсадда	садсааддас	ЬссассЬаса	дссЬдадсад	сасссЬдасс	540
сЬдадсаадд	ссдасЬасда	даадсасаад	дЬдЬасдссЬ	дсдаадЬдас	ссассадддс	600
сЬдЬссадсс	ссдЬдассаа	дадсЬЬсаас	сддддсдадЬ	дсадсддсдд	аддсЬсЬдда	660
ддсддсЬсЬд	ааддсддадд	аадЬдадддс	ддаддсЬсад	ааддсддсдд	аадсдааддЬ	720
ддсддсЬсЬд	дсддсддаЬс	сддсдаддЬд	садсЬддЬсд	адЬссддсдд	аддссЬддЬд	780
садссЬддсд	дсадссЬдад	асЬдадсЬдс	дссдссадсд	дсЬасадсЬЬ	сассддсЬас	840
ассаЬдаасЬ	дддЬссддса	ддсЬссЬддс	аадддссЬсд	ааЬдддЬддс	ссЬдаЬсаас	900
сссЬасаадд	дсдЬдадсас	сЬасаассад	аадЬЬсаадд	ассддЬЬсас	саЬсадсдЬд	960

- 105 030147

дасаададса	адаасассдс	сРаРсРдсад	аРдаасадсс	Рдсдддссда	ддасассдсс	1020
дРдРасРасР	дсдссадаад	сддсРасРас	ддсдасадсд	асРддРасРР	сдасдрдрдд	1080
ддссадддса	сасрддрсас	сдрдрссадс	дсРадсасса	адддссссРс	сдрдррсссс	1140
сРддссссса	дсадсаадад	сассадсддс	ддсасадссд	сссРсддсРд	ссРддРсаад	1200
дасРасРРсс	ссдадсссдр	дассдрдрсс	Рддаасадсд	дадсссРдас	сРссддсдРд	1260
сасассРРсс	ссдссдрдср	дсададсадс	ддссрдраса	дссРдРссад	сдрддрсасс	1320
дрдсссрсса	дсадссРддд	сасссадасс	РасаРсРдса	асдРдаасса	саадсссадс	1380
ааРассаадд	Рддасаадаа	ддрддадссс	аададсРдсд	асддсддрдд	РддсРссдда	1440
ддсддрддар	срдаадрдса	дсРдсаддаа	адсддсссрд	дссРддРсаа	дсссадссад	1500
адссРдадсс	РдассРдРад	сдрдассддс	РасРссаРса	ссРссддсРа	сРасРддааР	1560
РддаРРсддс	адррссссдд	саасаадсрд	дааРддаРдд	дсРасаРсас	сРасдасддс	1620
адсаасааср	асаассссад	ссрдаадаас	сддаРсадса	Рсасссддда	сассадсаад	1680
аассадРРсР	РссРдаадРР	дааРРсРдРд	асРасРдадд	асасадсРас	аРаРРасРдР	1740
дсддасРРРд	асрасрдддд	ссааддсасс	асРсРсасад	РсРссРсадс	Радсассаад	1800
ддсссаРсдд	РсРРсссссР	ддсасссРсс	Рссаададса	ссРсРддддд	сасадсддсс	1860
сРдддсРдсс	РддРсаадда	сРасРРсссс	даассддрда	сддрдрсдрд	даасРсаддс	1920
дсссРдасса	дсддсдрдса	сассРРсссд	дсРдРссРас	адРссРсадд	асРсРасРсс	1980
сРсадсадсд	РддРдассдР	дсссРссадс	адсРРдддса	сссадассРа	саРсРдсаас	2040
дРдааРсаса	адсссадсаа	сассааддрд	дасаадааад	РРдадсссаа	аРсРРдРдас	2100
аааасРсаса	саРдсссасс	дрдсссадса	ссрдаадсрд	садддддасс	дРсадРсРРс	2160
сРсРРссссс	саааасссаа	ддасасссРс	аРдаРсРссс	ддассссРда	ддРсасаРдс	2220
дрддрддрдд	асдрдадсса	сдаадасссР	даддРсаадР	РсаасРддРа	сдрддасддс	2280
дрддаддрдс	аРааРдссаа	дасааадссд	сдддаддадс	адРасаасад	сасдРассдР	2340
дрддрсадсд	РссРсассдР	ссРдсассад	дасРддсРда	аРддсаадда	дРасаадРдс	2400
ааддРсРсса	асааадсссР	сссадссссс	аРсдадаааа	ссаРсРссаа	адссаааддд	2460
садссссдад	аассасаддр	дРасасссРд	сссссардсс	дддаРдадсР	дассаадаас	2520

- 106 030147

саддЬсадсс	ЬдЬддЬдссЬ	ддЬсаааддс	ЫсЬаЬссса	дсдасаЬсдс	сдЬддадЬдд	2580
дададсааЬд	ддсадссдда	даасаасЬас	аадассасдс	сЬсссдЬдсЬ	ддасЬссдас	2640
ддсЬссЫсЬ	ЬссЬсЬасад	саадсЬсасс	дЬддасаада	дсаддЬддса	дсаддддаас	2700
дЬсЫсЬсаЬ	дсЬссдЬдаЬ	дсаЬдаддсЬ	сЬдсасаасс	асЬасасдса	даададссЬс	2760
ЬсссЬдЬсЬс	сдддЬаааЬд	а				2781

<210> 19

<211> 442

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (УН-СН1)-Рс(«впадина») ЬАЬА

<400> 19

С1и Уа1 С1п Ьеи Е1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи \7а1 Ьуз Рго Зег С1п 15 10 15

Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег Уа1 ТЬг С1у Туг Зег Не ТЬг Зег С1у 20 25 30

Ьуз Азп Агд 11е Зег 11е ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп Е1п РЬе РЬе 65 70 75 80

107 030147

Зег ТЬг Зег СЬу СЬу ТЬг АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг 130 135 140

РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг Зег 145 150 155 160

СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег 165 ПО 175

Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг 180 185 190

Туг Не Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз 195 200 205

Ьуз УаЬ СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз 210 215 220

Рго АЬа Рго СЬи АЬа АЬа СЬу СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго 225 230 235 240

Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер Не Зег Агд ТЬг Рго СЬи УаЬ ТЬг Суз 245 250 255

УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег НЬз СЬи Азр Рго СЬи УаЬ Ьуз РЬе Азп Тгр 260 265 270

Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ НЬз Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи 275 280 285

СЬи СЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд УаЬ УаЬ Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи 290 295 300

НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп 305 310 315 320

Ьуз АЬа Ьеи Рго АЬа Рго 11е СЬи Ьуз ТЬг Не Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу 325 330 335

108 030147

С1п Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Суз ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр СЬи 340 345 350

Рго Зег Азр 11е АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп 370 375 380

СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз 435 440

<210> 20

<211> 1329

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (УН-СНЬ)-Рс(«впадина») ЬАЬА

<400> 20

даддЬссадс	ЬдсаддадЬс	аддассЬддс	сЬсдЬдааас	сЬЬсЬсадЬс	ЬсЬдЬсЬсЬс	60
ассЬдсЬсЬд	ЬсасЬддсЬа	сЬссаЬсасс	адЬддНаЬЬ	асЬддаасЬд	даЬссддсад	120
ЬЬЬссаддаа	асаадсЬдда	аЬддаЬдддс	ЬасаЬаассЬ	асдасддЬад	сааЬаасЬас	180
аасссаЪсЬс	ЬсаааааЬсд	ааЬсЬссаЬс	асЬсдЬдаса	саЬсЬаадаа	ссадЬЬЬЬЬс	240
сЬдаадЬЬда	аЬЬсЬдЬдас	ЬасЬдаддас	асадсЬасаЬ	аЬЬасЬдЬдс	ддасЬЪЪдас	300
ЬасЪддддсс	ааддсассас	ЬсЬсасадЬс	ЬссЬсадсЬа	дсассааддд	сссаЬсддЬс	360
ЬЬсссссЬдд	сасссЬссЬс	саададсасс	ЬсЬдддддса	садсддсссЬ	дддсЬдссЬд	420

- 109 030147

дЬсааддасЬ	асЬЬссссда	ассддЬдасд	дЬдЬсдЬдда	асЬсаддсдс	ссЬдассадс	480
ддсдЬдсаса	ссЬЬсссддс	ЬдЬссЬасад	ЬссЬсаддас	ЬсЬасЬсссЬ	садсадсдЬд	540
дЬдассдЬдс	ссЬссадсад	сЬЬдддсасс	садассЬаса	ЬсЬдсаасдЬ	дааЬсасаад	600
сссадсааса	ссааддЬдда	саадааадЬЬ	дадсссаааЬ	сЬЬдЬдасаа	аасЬсасаса	660
ЬдсссассдЬ	дсссадсасс	ЬдаадсЬдса	дддддассдЬ	садЬсЬЬссЬ	сЬЬсссссса	720
ааасссаадд	асасссЬсаЬ	даЬсЬсссдд	ассссЬдадд	ЬсасаЬдсдЬ	ддЬддЬддас	780
дЬдадссасд	аадасссЬда	ддЬсаадЬЬс	аасЬддЬасд	ЬддасддсдЬ	ддаддЬдсаЬ	840
ааЬдссаада	сааадссдсд	ддаддадсад	Ьасаасадса	сдЬассдЬдЬ	ддЬсадсдЬс	900
сЬсассдЬсс	Ьдсассадда	сЬддсЬдааЬ	ддсааддадЬ	асаадЬдсаа	ддЬсЬссаас	960
ааадсссЬсс	садсссссаЬ	сдадаааасс	аЬсЬссааад	ссааадддса	дссссдадаа	1020
ссасаддЬдЬ	дсасссЬдсс	сссаЬсссдд	даЬдадсЬда	ссаадаасса	ддЬсадссЬс	1080
ЬсдЬдсдсад	ЬсаааддсЬЬ	сЬаЬсссадс	дасаЬсдссд	ЬддадЬддда	дадсааЬддд	1140
садссддада	асаасЬасаа	дассасдссЬ	сссдЬдсЬдд	асЬссдасдд	сЬссЬЬсЬЬс	1200
сЬсдЬдадса	адсЬсассдЬ	ддасаададс	аддЬддсадс	аддддаасдЬ	сЬЬсЬсаЬдс	1260
ЬссдЬдаЬдс	аЬдаддсЬсЬ	дсасаассас	Ьасасдсада	ададссЬсЬс	ссЬдЬсЬссд	1320

ддЬаааЬда 1329

<210> 21

<211> 926

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ν9 (зсРаЬ)-ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 21

Азр Не С1п МеЬ ТЬг 61п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 61у

15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Аэр 11е Агд Азп Туг 20 25 30

Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго 61у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не

110 030147

- 111 030147

245

250 255

Е1у С1у Ьеи А7а1 С1п Рго С1у Е1у 260

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 265 270

Зег С1у Туг Зег РЬе ТЬг С1у Туг 275 280

ТЬг МеЬ Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а 285

Рго С1у Ьуз С1у Ьеи 51и Тгр Уа1 290 295

А1а Ьеи 11е Азп Рго Туг Ьуз С1у 300

Уа1 Зег ТЬг Туг Азп С1п Ьуз РЬе 305 310

Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег Уа1 315 320

Азр Ьуз Зег Ьуз Азп ТЬг А1а Туг 325

Ьеи б1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а 330 335

С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 340

А1а Агд Зег С1у Туг Туг С1у Азр 345 350

Зег Азр Тгр Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 355 360

С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 365

Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго 370 375

Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег 380

Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг 385 390

А1а А1а Ьеи Е1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз 395 400

Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг 405

Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи 410 415

ТЬг Зег С1у Уа1 Низ ТЬг РЬе Рго 420

А1а Уа1 Ьеи 61п Зег Зег С1у Ьеи 425 430

Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг 435 440

Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг 445

С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп

Н1з Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1

112 030147

450 455 460

Азр Ьуз Ьуз УаЬ СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу 465 470 475 480

СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ 485 490 495

Ьуз Рго Зег СЬп Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег УаЬ ТЬг СЬу Туг Зег 500 505 510

Ые ТЬг Зег СЬу Туг Туг Тгр Азп Тгр Не Агд СЬп РЬе Рго СЬу Азп 515 520 525

Ьуз Ьеи СЬи Тгр Мер СЬу Туг Ые ТЬг Туг Азр СЬу Зег Азп Азп Туг 530 535 540

Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Азп Агд 11е Зег Ые ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз 545 550 555 560

Азп СЬп РЬе РЬе Ьеи Ьуз Ьеи Азп Зег УаЬ ТЬг ТЬг СЬи Азр ТЬг АЬа 565 570 575

ТЬг Туг Туг Суз АЬа Азр РЬе Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг ТЬг Ьеи 580 585 590

ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Рго Ьеи АЬа 595 600 605

Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег СЬу СЬу ТЬг АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи 610 615 620

УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ Зег Тгр Азп Зег СЬу 625 630 635 640

АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ Ьеи СЬп Зег Зег 645 650 655

СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи

113

030147

660 665 670

С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Шз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг 675 680 685

Ьуз УаЬ Азр Ьуз Ьуз Уа1 Е1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Шз ТЬг 690 695 700

Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Е1и А1а А1а Е1у Е1у Рго Зег Уа1 РЬе 705 710 715 720

Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер Не Зег Агд ТЬг Рго 725 730 735

Е1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр \7а1 Зег Нхз Е1и Азр Рго Е1и Уа1 740 745 750

Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр Е1у Уа1 Е1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг 755 760 765

Ьуз Рго Агд Е1и Е1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 770 775 780

Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз Е1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз Е1и Туг Ьуз Суз 785 790 795 800

Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Е1у А1а Рго Не Е1и Ьуз ТЬг Не Зег 805 810 815

Ьуз А1а Ьуз Е1у Е1п Рго Агд Е1и Рго Е1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго 820 825 830

Суз Агд Азр Е1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп Е1п \7а1 Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи Уа1 835 840 845

Ьуз Е1у РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а Йа1 Е1и Тгр Е1и Зег Азп Е1у 850 855 860

Е1п Рго Е1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр

- 114 030147

865

870

875

880

885

890

895

С1п 61п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мер Шз С1и А1а Ьеи НЬз

900

905

910

Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз

915

920

925

<210> 22 <211> 2781

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (зсЕаЬ)-ЬС007 (УН-СН1)-Ес(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 22

дасаРссада Рдасссадад ссссРсРадс сРдадсдсса дсдрдддсда сададрдасс 60

аРсассРдРс дддссадсса ддасаРсада аасРассРда асРддРаРса дсадаадссс 120

ддсааддссс ссаадсРдсР даРсРасРас ассРсРадас Рддааадсдд сдрдсссадс 180

сддРРРадсд дсадсддсРс сддсассдас РасасссРда ссаРсадсад ссРдсадссс 240

даддасРРсд ссассРасРа срдссадсад ддсаасасас РссссРддас сРРсддссад 300

ддсассаадд РддадаРсаа дсдРасддРд дссдсРссса дсдРдРРсаР сРРссссссс 360

адсдасдадс адсРдаадРс сддсассдсс адсдрсдрдр дссРдсРдаа саасРРсРас 420

ссссдддадд ссааддрдса дрддааддрд дасаасдссс Рдсададсдд саасадссад 480

дааадсдРса ссдадсадда садсааддас РссассРаса дссрдадсад сасссРдасс 540

сРдадсаадд ссдасРасда даадсасаад дрдрасдсср дсдаадрдас ссассадддс 600

сРдРссадсс ссдрдассаа дадсРРсаас сддддсдадр дсадсддсдд аддсрсрдда 660

ддсддсРсРд ааддсддадд аадРдадддс ддаддсрсад ааддсддсдд аадсдааддр 720

ддсддсРсРд дсддсддаРс сддсдаддрд садсРддРсд адРссддсдд аддссРддРд 780

садссРддсд дсадссРдад асрдадсрдс дссдссадсд дсРасадсРР сассддсРас 840

- 115 030147

ассаЬдаасЬ	дддЬссддса	ддсЬссЬддс	аадддссЬсд	ааЬдддЬддс	ссЬдаЬсаас	900
сссЬасаадд	дсдЬдадсас	сЬасаассад	аадЬЬсаадд	ассддЬЬсас	саЬсадсдЬд	960
дасаададса	адаасассдс	сЬаЬсЬдсад	аЬдаасадсс	Ьдсдддссда	ддасассдсс	1020
дЬдЬасЬасЬ	дсдссадаад	сддсЬасЬас	ддсдасадсд	асЬддЬасЬЬ	сдасдЬдЬдд	1080
ддссадддса	сасЬддЬсас	сдЬдЬссадс	дсЬадсасса	адддссссЬс	сдЬдЬЬсссс	1140
сЬддссссса	дсадсаадад	сассадсддс	ддсасадссд	сссЬсддсЬд	ссЬддЬсаад	1200
дасЬасЬЬсс	ссдадсссдЬ	дассдЬдЬсс	Ьддаасадсд	дадсссЬдас	сЬссддсдЬд	1260
сасассЬЬсс	ссдссдЬдсЬ	дсададсадс	ддссЬдЬаса	дссЬдЬссад	сдЬддЬсасс	1320
дЬдсссЬсса	дсадссЬддд	сасссадасс	ЬасаЬсЬдса	асдЬдаасса	саадсссадс	1380
ааЬассаадд	Ьддасаадаа	ддЬддадссс	аададсЬдсд	асддсддЬдд	ЬддсЬссдда	1440
ддсддЬддаЬ	сЬдаадЬдса	дсЬдсаддаа	адсддсссЬд	дссЬддЬсаа	дсссадссад	1500
адссЬдадсс	ЬдассЬдЬад	сдЬдассддс	ЬасЬссаЬса	ссЬссддсЬа	сЬасЬддааЬ	1560
ЬддаЬЬсддс	адЬЬссссдд	саасаадсЬд	дааЬддаЬдд	дсЬасаЬсас	сЬасдасддс	1620
адсаасаасЬ	асаассссад	ссЬдаадаас	сддаЬсадса	Ьсасссддда	сассадсаад	1680
аассадЬЬсЬ	ЬссЬдаадЬЬ	дааЬЬсЬдЬд	асЬасЬдадд	асасадсЬас	аЬаЬЬасЬдЬ	Π40
дсддасЬЬЬд	асЬасЬдддд	ссааддсасс	асЬсЬсасад	ЬсЬссЬсадс	Ьадсассаад	1800
ддсссаЬсдд	ЬсЬЬсссссЬ	ддсасссЬсс	Ьссаададса	ссЬсЬддддд	сасадсддсс	1860
сЬдддсЬдсс	ЬддЬсаадда	сЬасЬЬсссс	даассддЬда	сддЬдЬсдЬд	даасЬсаддс	1920
дсссЬдасса	дсддсдЬдса	сассЬЬсссд	дсЬдЬссЬас	адЬссЬсадд	асЬсЬасЬсс	1980
сЬсадсадсд	ЬддЬдассдЬ	дсссЬссадс	адсЬЬдддса	сссадассЬа	саЬсЬдсаас	2040
дЬдааЬсаса	адсссадсаа	сассааддЬд	дасаадааад	ЬЬдадсссаа	аЬсЬЬдЬдас	2100
аааасЬсаса	саЬдсссасс	дЬдсссадса	ссЬдаадсЬд	садддддасс	дЬсадЬсЬЬс	2160
сЬсЬЬссссс	саааасссаа	ддасасссЬс	аЬдаЬсЬссс	ддассссЬда	ддЬсасаЬдс	2220
дЬддЬддЬдд	асдЬдадсса	сдаадасссЬ	даддЬсаадЬ	ЬсаасЬддЬа	сдЬддасддс	2280
дЬддаддЬдс	аЬааЬдссаа	дасааадссд	сдддаддадс	адЬасаасад	сасдЬассдЬ	2340
дЬддЬсадсд	ЬссЬсассдЬ	ссЬдсассад	дасЬддсЬда	аЬддсаадда	дЬасаадЬдс	2400

- 116 030147

ааддЬсЬсса	асааадсссЬ	сддсдссссс	аЬсдадаааа	ссаЬсЬссаа	адссаааддд	2460
садссссдад	аассасаддЬ	дЬасасссЬд	сссссаЬдсс	дддаЬдадсЬ	дассаадаас	2520
саддЬсадсс	ЬдЬддЬдссЬ	ддЬсаааддс	ЬЬсЬаЬссса	дсдасаЬсдс	сдЪддадЪдд	2580
дададсааЬд	ддсадссдда	даасаасЬас	аадассасдс	сЬсссдЬдсЬ	ддасЪссдас	2640
ддсЬссЫсЬ	РссЬсЬасад	саадсЬсасс	дЬддасаада	дсаддЬддса	дсаддддаас	2700
дЬсЬЬсЬсаЬ	дсЬссдЬдаЬ	дсаЬдаддсЬ	сЬдсасаасс	асЬасасдса	даададссЪс	2760
ЬсссЬдЬсЬс	сдддЬаааЬд	а				2781

<210> 23

<211> 442

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329Е ЬАЬА

<400> 23

С1и Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи \7а1 Ьуз Рго Зег Е1п 15 10 15

Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег Уа1 ТЬг С1у Туг Зег 11е ТЬг Зег Е1у 20 25 30

Туг Туг Тгр Азп Тгр 11е Агд С1п РЬе Рго 61у Азп Ьуз Ьеи С1и Тгр 35 40 45

Ьуз Азп Агд 11е Зег 11е ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе РЬе 65 70 75 80

А1а Азр РЬе Азр Туг Тгр С1у Е1п С1у ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 Зег Зег 100 105 110

117 030147

- 118 030147

С1п Рго Агд С1и Рго Б1п Уа1 Суз ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и 340 345 350

Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи Зег Суз А1а Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг 355 360 365

Ьеи Уа1 Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п 01у Азп 405 410 415

Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Шз С1и А1а Ьеи Шз Азп НЬз Туг ТЬг 420 425 430

С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз 435 440

<210> 24

<211> 1329

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 24

даддЬссадс	ЬдсаддадЬс	аддассЬддс	сЬсдЬдааас	сНсЬсадЬс	ЬсЬдЬсЬсЬс	60
ассЬдсЬсЬд	ЬсасЬддсЬа	сЬссаЬсасс	адЬддЫаЫ	асЬддаасЬд	даЬссддсад	120
111ссаддаа	асаадсрдда	аЬддаЬдддс	ЬасаЬаассЬ	асдасддЬад	сааЬаасЬас	180
аасссаЬсЬс	ЬсаааааЬсд	а а Ь с Ь с с а Ь с	асЬсдЬдаса	саЬсЬаадаа	ссадНЫ'Ьс	240
сЬдаадЫда	аЫсЬдЬдас	ЬасЬдаддас	асадсЬасаЬ	аНасЬдЬдс	ддасЫЬдас	300

- 119 030147

басбддддсс	ааддсассас	бсбсасадбс	бссбсадсба	дсассааддд	сссабсддбс	360
ббсссссбдд	сасссбссбс	саададсасс	бсбдддддса	садсддсссб	дддсбдссбд	420
дбсааддасб	асббссссда	ассддбдасд	дбдбсдбдда	асбсаддсдс	ссбдассадс	480
ддсдбдсаса	ссббсссддс	бдбссбасад	бссбсаддас	бсбасбсссб	садсадсдбд	540
дбдассдбдс	ссбссадсад	сббдддсасс	садассбаса	бсбдсаасдб	даабсасаад	600
сссадсааса	ссааддбдда	саадааадбб	дадсссаааб	сббдбдасаа	аасбсасаса	660
бдсссассдб	дсссадсасс	бдаадсбдса	дддддассдб	садбсббссб	сббсссссса	720
ааасссаадд	асасссбсаб	дабсбсссдд	ассссбдадд	бсасабдсдб	ддбддбддас	780
дбдадссасд	аадасссбда	ддбсаадббс	аасбддбасд	бддасддсдб	ддаддбдсаб	840
аабдссаада	сааадссдсд	ддаддадсад	басаасадса	сдбассдбдб	ддбсадсдбс	900
сбсассдбсс	бдсассадда	сбддсбдааб	ддсааддадб	асаадбдсаа	ддбсбссаас	960
ааадсссбсд	дсдсссссаб	сдадаааасс	абсбссааад	ссааадддса	дссссдадаа	1020
ссасаддбдб	дсасссбдсс	сссабсссдд	дабдадсбда	ссаадаасса	ддбсадссбс	1080
бсдбдсдсад	бсаааддсбб	сбабсссадс	дасабсдссд	бддадбддда	дадсаабддд	1140
садссддада	асаасбасаа	дассасдссб	сссдбдсбдд	асбссдасдд	сбссббсббс	1200
сбсдбдадса	адсбсассдб	ддасаададс	аддбддсадс	аддддаасдб	сббсбсабдс	1260
бссдбдабдс	абдаддсбсб	дсасаассас	басасдсада	ададссбсбс	ссбдбсбссд	1320

ддбааабда 1329

<210> <211> <212> <213>	25 926 РКТ Искусственная последовательность
<220>
<223>	ν9 (зсЕаЬ)-ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬАЫ297О
<400>	25
Азр 11е	С1п Меб ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у

15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Азр 11е Агд Азп Туг

- 120 030147

20 25 30

Ьеи Азп Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е 35 40 45

Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр Туг ТЬг Ьеи ТЬг 1Ье Зег Зег Ьеи СЬп Рго 65 70 75 80

СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп СЬу Азп ТЬг Ьеи Рго Тгр 85 90 95

ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи ЬЬе Ьуз Агд ТЬг УаЬ АЬа АЬа 100 105 110

Рго Зег УаЬ РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег СЬу 115 120 125

ТЬг АЬа Зег УаЬ Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи АЬа 130 135 140

РЬе Азп Агд СЬу СЬи Суз Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи 210 215 220

СЬу СЬу СЬу Зег СЬи СЬу СЬу СЬу Зег СЬи СЬу СЬу СЬу Зег СЬи СЬу

121

030147

225 230 235 240

С1у С1у Зег С1у 61у С1у Зег С1у С1и Уа1 51п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 245 250 255

С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 260 265 270

Зег С1у Туг Зег РЬе ТЬг С1у Туг ТЬг МеД Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а 275 280 285

Рго Е1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр \7а1 А1а Ьеи 11е Азп Рго Туг Ьуз С1у 290 295 300

Уа1 Зег ТЬг Туг Азп С1п Ьуз РЬе Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег Уа1 305 310 315 320

Азр Ьуз Зег Ьуз Азп ТЬг А1а Туг Ьеи 61п МеД Азп Зег Ьеи Агд А1а 325 330 335

С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд Зег С1у Туг Туг С1у Азр 340 345 350

Зег Азр Тгр Туг РЬе Азр \7а1 Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 355 360 365

Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег 370 375 380

Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у 61у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз 385 390 395 400

Азр Туг РЬе Рго С1и Рго \7а1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи 405 410 415

ТЬг Зег С1у Уа1 ΗΪ3 ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи 61п Зег Зег 61у Ьеи 420 425 430

Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг

- 122 030147

435 440 445

СЬп ТЬг Туг 11е Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 450 455 460

Ьуз Ьеи СЬи Тгр МеЬ СЬу Туг ЬЬе ТЬг Туг Азр СЬу Зег Азп Азп Туг 530 535 540

Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Азп Агд ЬЬе Зег ЬЬе ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз 545 550 555 560

ТЬг \7а1 Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Рго Ьеи АЬа 595 600 605

АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа \7а1 Ьеи СЬп Зег Зег

123

030147

- 124 030147

850 855 860

Е1п 865

Рго

Е1и

Азп

Туг 870

Ьуз

ТЬг

Рго

Рго 875

Уа1

Ьеи

Азр

Зег

Азр 880

С1у

Зег

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Уа1

Азр

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

885

890

895

С1п

С1у

Азп

Уа1

РЬе

Зег

Суз

Зег

Уа1

Мер

Нтз

61и

А1а

Ьеи

Нтз

900

905

910

Азп

Нтз

Туг

ТЬг

С1п

Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Рго

С1у

Ьуз

915 920 925

<210> 26

<211> 2781

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (зсЕаЬ)-ЬС007 (УН-СН1)-Ес(«выступ») Р329С ЬАЬА Ν297ϋ

<400> 26

дасаРссада	Рдасссадад	ссссРсРадс	сРдадсдсса	дсдрдддсда	сададрдасс	60
аРсассРдРс	дддссадсса	ддасаРсада	аасРассРда	асРддРаРса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсРдсР	даРсРасРас	ассРсРадас	Рддааадсдд	сдрдсссадс	180
сддРРРадсд	дсадсддсРс	сддсассдас	РасасссРда	ссаРсадсад	ссРдсадссс	240
даддасРРсд	ссассРасРа	срдссадсад	ддсаасасас	РссссРддас	сРРсддссад	300
ддсассаадд	РддадаРсаа	дсдРасддРд	дссдсРссса	дсдРдРРсаР	сРРссссссс	360
адсдасдадс	адсРдаадРс	сддсассдсс	адсдрсдрдр	дссРдсРдаа	саасРРсРас	420
ссссдддадд	ссааддрдса	дрддааддрд	дасаасдссс	Рдсададсдд	саасадссад	480
дааадсдРса	ссдадсадда	садсааддас	РссассРаса	дссрдадсад	сасссРдасс	540
сРдадсаадд	ссдасРасда	даадсасаад	дрдрасдсср	дсдаадрдас	ссассадддс	600
сРдРссадсс	ссдрдассаа	дадсРРсаас	сддддсдадр	дсадсддсдд	аддсрсрдда	660
ддсддсРсРд	ааддсддадд	аадРдадддс	ддаддсрсад	ааддсддсдд	аадсдааддр	720

- 125 030147

ддсддсЬсЬд	дсддсддаЬс	сддсдаддБд	садсБддБсд	адЬссддсдд	аддссЬдд+д	780
садссЬддсд	дсадсс+дад	асбдадсЬдс	дссдссадсд	дсЬасадсН	сассддсЬас	840
ассаЪдаасБ	дддБссддса	ддсБссЬддс	аадддссЬсд	ааЬдддЬддс	сс+даЬсаас	900
ссс+асаадд	дсдБдадсас	с+асаассад	аадЬЪсаадд	ассддНсас	саЪсадсдЬд	960
дасаададса	адаасассдс	сЪа+с+дсад	а+даасадсс	Бдсдддссда	ддасассдсс	1020
дБд+асЬасБ	дсдссадаад	сддс+ас+ас	ддсдасадсд	ас+ддБас+Р	сдасд+д+дд	1080
ддссадддса	сасБддЬсас	сдЬдЬссадс	дсЬадсасса	адддсссс+с	сдЬдНсссс	1140
сЬддссссса	дсадсаадад	сассадсддс	ддсасадссд	сссЬсддсБд	ссБддБсаад	1200
дасЬасНсс	ссдадсссдБ	дассдЬдБсс	Бддаасадсд	дадсссБдас	сЪссддсдЬд	1260
сасассЪЪсс	ссдссдбдсБ	дсададсадс	ддссбдЬаса	дссЬдбссад	сдЪддЪсасс	1320
д+дсссЬсса	дсадссЬддд	сасссадасс	ЪасаЪсЬдса	асдрдаасса	саадсссадс	1380
ааЬассаадд	Бддасаадаа	ддЬддадссс	аададсБдсд	асддсддБдд	ЬддсЬссдда	1440
ддсддБддаЬ	сБдаадбдса	дсБдсаддаа	адсддсссЬд	дссБддБсаа	дсссадссад	1500
адсс+дадсс	Бдасс-Ьд+ад	сдЬдассддс	ЬасБссаЬса	сс+ссддсБа	сБасБддааБ	1560
ЬддаЬЬсддс	адНссссдд	саасаадсбд	дааЬддаБдд	дсЬасаЬсас	сЪасдасддс	1620
адсаасаасб	асаассссад	ссЪдаадаас	сддабсадса	Бсасссддда	сассадсаад	1680
аассадПс!	БссЬдаадН	дааЫсЬдЬд	асБасБдадд	асасадсбас	аБаНасБдБ	1740
дсддас+Нд	асБасбдддд	ссааддсасс	асЬсЬсасад	ЬсЬссбсадс	Бадсассаад	1800
ддсссаЬсдд	ГсНсссссЬ	ддсасссбсс	Ъссаададса	ссбсЬддддд	сасадсддсс	1860
сБдддсБдсс	ЪддЪсаадда	сГаеНссес	даассддЬда	сддБдБсдБд	даасЪсаддс	1920
дсссЬдасса	дсддсдЬдса	сассШсссд	дсЬдБссЬас	адБссЬсадд	ас+сбасЬсс	1980
сбсадсадсд	БддБдассдЬ	дсссЬссадс	адсЫдддса	сссадассБа	саЬсЬдсаас	2040
дбдааЬсаса	адсссадсаа	сассаадд+д	дасаадааад	Ндадсссаа	аЬсНдОдас	2100
аааасЬсаса	са+дсссасс	дбдсссадса	ссБдаадсЬд	садддддасс	дБсадЪсБЪс	2160
сЬсБЬссссс	саааасссаа	ддасасссЬс	аБдабс+ссс	ддассссЬда	ддБсасаЪдс	2220
дЪддЪддИдд	асдЬдадсса	сдаадасссБ	даддБсаадЪ	БсаасБддБа	сдБддасддс	2280

- 126 030147

дЬддаддЬдс	аЬааЬдссаа	дасааадссд	сдддаддадс	адЬасдасад	сасдЬассдЬ	2340
дЬддЬсадсд	ЬссЬсассдЬ	ссЬдсассад	дасЬддсЬда	аЬддсаадда	дЬасаадЬдс	2400
ааддЬсЬсса	асааадсссЬ	сддсдссссс	аЬсдадаааа	ссаЬсЬссаа	адссаааддд	2460
садссссдад	аассасаддЬ	дЬасасссЬд	сссссаЬдсс	дддаЬдадсЬ	дассаадаас	2520
саддЬсадсс	ЬдЬддЬдссЬ	ддЬсаааддс	ЬЬсЬаЬссса	дсдасаЬсдс	сдЬддадЬдд	2580
дададсааЬд	ддсадссдда	даасаасЬас	аадассасдс	сЬсссдЬдсЬ	ддасЬссдас	2640
ддсЬссЬЬсЬ	ЬссЬсЬасад	саадсЬсасс	дЬддасаада	дсаддЬддса	дсаддддаас	2700
дЬсЬЬсЬсаЬ	дсЬссдЬдаЬ	дсаЬдаддсЬ	сЬдсасаасс	асЬасасдса	даададссЬс	2760
ЬсссЬдЬсЬс	сдддЬаааЬд	а				2781

<210> 27

<211> 442

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА Ν297Ρ

<400> 27

С1и 1

Уа1

С1п

Ьеи

С1п 5

С1и

Зег

С1у

Рго

С1у 10

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

Зег 15

Θίη

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

ТЬг

Суз

Зег

Уа1

ТЬг

С1у

Туг

Зег

Не

ТЬг

Зег

С1у

20

25

30

Туг

Тгр

Азп

Тгр

Не

Агд

С1п

РЬе

Рго

С1у

Азп

Ьуз

Ьеи

61и

Тгр

35

40

45

МеЬ

С1у

Туг

Не

ТЬг

Туг

Азр

С1у

Зег

Азп

Туг

Азп

Рго

Зег

Ьеи

50

55

60

Ьуз

Азп

Агд

Не

Зег

Не

ТЬг

Агд

Азр

ТЬг

Зег

Ьуз

Азп

С1п

РЬе

65

70

75

80

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Азп

Зег

Уа1

ТЬг

С1и

Азр

ТЬг

А1а

ТЬг

Туг

Суз

85

90

95

127 030147

АЬа Азр РЬе Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг УаЬ Зег Зег ЬОО 105 ЬЬО

АЬа Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег Ьуз 115 120 125

СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег 165 170 175

Туг Ые Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз 195 200 205

Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ Ые Зег Агд ТЬг Рго СЬи УаЬ ТЬг Суз 245 250 255

СЬи СЬп Туг Азр Зег ТЬг Туг Агд УаЬ УаЬ Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи 290 295 300

- 128 030147

Ηίδ С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз Е1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп 305 310 315 320

С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Суз ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и 340 345 350

Ьеи ТЬг Ьуз Азп Е1п А/а1 Зег Ьеи Зег Суз А1а νβΐ Ьуз Е1у РЬе Туг 355 360 365

Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп 61у С1п Рго С1и Азп 370 375 380

Ьеи Уа1 Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр Е1п С1п С1у Азп 405 410 415

Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Ηίβ С1и А1а Ьеи Ηίδ Азп Н1з Туг ТЬг 420 425 430

С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз 435 440

<210> 28

<211> 1329

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА Ν297Ω

<400> 21

даддЬссадс	ЬдсаддадЬс	аддассЬддс	сЬсдЬдааас	сИсЬсадЬс	ЬсЬдЬсЬсЬс	60
ассЬдсЬсЬд	ЬсасЬддсЬа	сЬссаЬсасс	адЬддНаЫ	асЬддаасЬд	даЬссддсад	120
ЬЬЬссаддаа	асаадсЬдда	аЬддаЬдддс	ЬасаЬаассЬ	асдасддЬад	сааЬаасЬас	180

- 129 030147

аасссаЬсЬс	ЬсаааааЬсд	ааЬсЬссаЬс	асЬсдЬдаса	саЬсЬаадаа	ссадЬЬЬЬЬс	240
сЬдаадЬЬда	аЬЬсЬдЬдас	ЬасЬдаддас	асадсЬасаЬ	аЬЬасЬдЬдс	ддасЬЬЬдас	300
ЬасЬддддсс	ааддсассас	ЬсЬсасадЬс	ЬссЬсадсЬа	дсассааддд	сссаЬсддЬс	360
ЬЬсссссЬдд	сасссЬссЬс	саададсасс	ЬсЬдддддса	садсддсссЬ	дддсЬдссЬд	420
дЬсааддасЬ	асЬЬссссда	ассддрдасд	дЬдЬсдЬдда	асЬсаддсдс	ссЬдассадс	480
ддсдЬдсаса	ссЬЬсссддс	ЬдЬссЬасад	ЬссЬсаддас	ЬсЬасЬсссЬ	садсадсдЬд	540
дЬдассдЬдс	ссЬссадсад	сЬЬдддсасс	садассЬаса	ЬсЬдсаасдЬ	дааЬсасаад	600
сссадсааса	ссааддЬдда	саадааадЬЬ	дадсссаааЬ	сЬЬдЬдасаа	аасЬсасаса	660
ЬдсссассдЬ	дсссадсасс	ЬдаадсЬдса	дддддассдЬ	садЬсЬЬссЬ	сЬЬсссссса	720
ааасссаадд	асасссЬсаЬ	даЬсЬсссдд	ассссЬдадд	ЬсасаЬдсдЬ	ддЬддЬддас	780
дЬдадссасд	аадасссЬда	ддЬсаадЬЬс	аасЬддЬасд	ЬддасддсдЬ	ддаддЬдсаЬ	840
ааЬдссаада	сааадссдсд	ддаддадсад	Ьасдасадса	сдЬассдЬдЬ	ддЬсадсдРс	900
сЬсассдЬсс	Ьдсассадда	сЬддсЬдааЬ	ддсааддадЬ	асаадЬдсаа	ддЬсЬссаас	960
ааадсссЬсд	дсдсссссаЬ	сдадаааасс	аЬсЬссааад	ссааадддса	дссссдадаа	1020
ссасаддЬдЬ	дсасссЬдсс	сссаЬсссдд	даЬдадсЬда	ссаадаасса	ддЬсадссЬс	1080
ЬсдЬдсдсад	ЬсаааддсЬЬ	сЬаЬсссадс	дасаЬсдссд	ЬддадЬддда	дадсааЬддд	1140
садссддада	асаасЬасаа	дассасдссЬ	сссдЬдсЬдд	асЬссдасдд	сЬссЬЬсЬЬс	1200
сЬсдЬдадса	адсЬсассдЬ	ддасаададс	аддЬддсадс	аддддаасдЬ	сЬЬсЬсаЬдс	1260
ЬссдЬдаЬдс	аЬдаддсЬсР	дсасаассас	Ьасасдсада	ададссЬсЬс	ссЬдЬсЬссд	1320

ддЬаааЬда 1329

<210> 29

<211> 664

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ν9 (УЬ-СН1)-ЬС007 (УН-СН1)-Ес(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 29

Азр 11е С1п МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 Е1у

- 130 030147

- 1З1 210

215

030147

220

С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п Зег Ьеи 225 230 235 240

Зег Ьеи ТЬг Суз Зег Уа1 ТЬг С1у Туг Зег 11е ТЬг Зег С1у Туг Туг 245 250 255

Тгр Азп Тгр 11е Агд С1п РЬе Рго С1у Азп Ьуз Ьеи Е1и Тгр МеЬ С1у 260 265 270

Туг 11е ТЬг Туг Азр С1у Зег Азп Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Азп 275 280 285

Агд 11е Зег 11е ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе РЬе Ьеи Ьуз 290 295 300

Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг ТЬг С1и Азр ТЬг А1а ТЬг Туг Туг Суз А1а Азр 305 310 315 320

РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег 325 330 335

ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг 340 345 350

Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 355 360 365

Е1и Рго \7а1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег Е1у Уа1 370 375 380

НЬз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи Е1п Зег Зег Е1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег 385 390 395 400

Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е 405 410 415

Суз Азп Уа1 Азп Шз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1

1З2 030147

133 030147

625 630 635 640

Зег Суз Зег УаЬ МеД НЬз СЬи АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ьуз 645 650 655

Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз 660

<210> 30

<211> 1995

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ν9 (УЬ-СНЬ)-ЬС007 (УН-СН1)-Ес(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 30

даДаДссада	Ддасссадад	ссссадсДсД	сДдадсдсса	дсдДдддсда	сададДдасс	60
аДсассДдДс	дддссадсса	ддасаДсада	аасДассДда	асДддДаДса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсДдсД	даДсДасДас	ассадсадас	Дддааадсдд	сдДдсссДсс	180
адаДДДДссд	дсадсддсДс	сддсассдас	ДасасссДда	ссаДсадсад	ссДдсадссс	240
даддаДДДсд	ссасаДаДДа	сДдссадсад	ддсааДассс	ДдсссДддас	сДДсддасад	300
ддсасаааад	ДддаааДсаа	дадсадсдсД	Дссассааад	дсссДДссдД	дДДДссДсДд	360
дсДссДадсД	ссаадДссас	сДсДддаддс	ассдсДдсДс	ДсддаДдссД	сдДдааддаД	420
ДаДДДДссДд	адссДдДдас	адДдДссДдд	ааДадсддад	сасДдассДс	ДддадДдсаД	480
асДДДссссд	сДдДдсДдса	дДссДсДдда	сДдДасадсс	ДдадсадсдД	ддДдасадДд	540
сссадсадса	дссДдддсас	ссадассДас	аДсДдсаасд	Ддаассасаа	дсссадсаас	600
ассааддДдд	асаадааддД	ддаасссаад	ДсДДдДддсд	даддсддаДс	сддсддаддд	660
ддаДсДдадд	ДдсадсДдса	ддааадсддс	ссДддссДдд	Ддааасссад	ссададссДд	720
адссДдассД	дсадсдДдас	сддсДасадс	аДсассадсд	дсДасДасДд	даасДддаДс	780
адасадДДсс	ссддсаасаа	дсДддааДдд	аДдддсДаса	ДсассДасда	сддсадсаас	840
аасДасаасс	ссадссДдаа	даасадааДс	адсаДсассс	дддасассад	саадаассад	900
ДДсДДссДда	адсДдаасад	сдДдассасс	даддасассд	ссассДасДа	сДдсдссдас	960

- 134 030147

НсдасЪасЪ	ддддссаддд	сассасссЬд	ассдЬдЬссЬ	ссдссЬсЬас	саадддсссс	1020
адсдЬдНсс	сссЬддсасс	садсадсаад	адсасаЬсЬд	дсддаасадс	сдсЬсЬдддс	1080
ЬдЬсЬддЬда	аадасЬасН	ссссдадссс	дЬдассдЬдЬ	сЬЬддаасЬс	ЬддсдсссЬд	1140
ассадсддсд	ЬдсасассЬЬ	ЬссадссдЬд	сЬдсададса	дсддссЬдЬа	сЬсссЬдЬсс	1200
ЬссдЬддЬса	ссдЬдсссЬс	ЬадсЬсссЬд	ддаасасада	саЬаЬаЬсЬд	ЬааЬдЬсааЬ	1260
сасаадссЬЬ	ссаасассаа	адЬсдаЬаад	ааадЬсдадс	ссаададсЬд	сдасаааасЬ	1320
сасасаЬдсс	сассдЬдссс	адсассЬдаа	дсЬдсадддд	дассдЬсадЬ	сЬЬссЬсЫьс	1380
сссссаааас	ссааддасас	ссЬсаЬдаЬс	Ьсссддассс	сЬдаддЬсас	аЬдсдЬддЬд	1440
дЬддасдЬда	дссасдаада	сссЬдаддЬс	аадЬЬсаасЬ	ддЬасдЬдда	сддсдЬддад	1500
дЬдсаЬааЬд	ссаадасааа	дссдсдддад	дадсадЬаса	асадсасдЬа	ссдЬдЬддЬс	1560
адсдЬссЬса	ссдЬссЬдса	ссаддасЬдд	сЬдааЬддса	аддадЬасаа	дЬдсааддЬс	1620
Ьссаасааад	сссЬсддсдс	ссссаЬсдад	аааассаЬсЬ	ссааадссаа	адддсадссс	1680
сдадаассас	аддЬдЬдсас	ссЬдссссса	ЬсссдддаЬд	адсЬдассаа	даассаддЬс	1740
адссЬсЬсдЬ	дсдсадЬсаа	аддсЬЬсЬаЬ	сссадсдаса	ЬсдссдЬдда	дЬдддададс	1800
ааЬдддсадс	сддадаасаа	сЬасаадасс	асдссЬсссд	ЬдсЬддасЬс	сдасддсЬсс	1860
ЬЬсЬЬссЬсд	ЬдадсаадсЬ	сассдЪддас	аададсаддЬ	ддсадсаддд	даасдЬсЬЬс	1920
ЬсаЬдсЬссд	ЬдаЬдсаЬда	ддсЬсЬдсас	аассасЬаса	сдсадаадад	ссЬсЬсссЬд	1980

ЪсЪссдддЪа ааЬда 1995

<210>	31
<211>	229
<212>	РРТ
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Рс(«выступ»)	иЬ
<400>	31
Азр Ьуз	ТЬг НЬз ТЬг	Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи Ьеи Ьеи СЬу

15 10 15

СЬу Рго Зег \7а1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ

- 135 030147

136 030147

225

<210> 32 <211> 690 <212> ДНК <213> Искусственная :	последовательность
<220> <223> Гс(«выступ») мЬ
<400> 32 дасаааасЬс	асасаЬдссс	ассдЬдссса	дсассЬдаас	ЬссЬдддддд	ассдЬсадЬс	60
ЬЬссЬсЫсс	ссссаааасс	сааддасасс	сЬсаЬдаЬсЬ	сссддасссс	ЬдаддЬсаса	120
ЬдсдЬддЬдд	ЬддасдЬдад	ссасдаадас	ссЬдаддЬса	адЬЬсаасЬд	дЬасдЬддас	180
ддсдЬддадд	ЬдсаЬааЬдс	саадасааад	ссдсдддадд	адсадЬасаа	садсасдЬас	240
сдЬдЬддЬса	дсдЬссЬсас	сдЬссЬдсас	саддасЬддс	ЬдааЬддсаа	ддадЬасаад	300
ЬдсааддЬсЬ	ссаасааадс	ссЬсссадсс	сссаЬсдада	ааассаЬсЬс	сааадссааа	360
дддсадсссс	дадаассаса	ддЬдЬасасс	сЬдсссссаЬ	дссдддаЬда	дсЬдассаад	420
аассаддЬса	дссЬдЬддЬд	ссЬддЬсааа	ддсЬЬсЬаЬс	ссадсдасаЬ	сдссдЬддад	480
Ьдддададса	аЬдддсадсс	ддадаасаас	Ьасаадасса	сдссЬсссдЬ	дсЬддасЬсс	540
дасддсЬссЬ	ЬсЬЬссЬсЬа	садсаадсЬс	ассдЬддаса	ададсаддЬд	дсадсадддд	600
аасдЬсЬЬсЬ	саЬдсЬссдЬ	даЬдсаЬдад	дсЬсЬдсаса	ассасЬасас	дсадаададс	660
сЬсЬсссЬдЬ	сЬссдддЬаа	аЬссддаЬда				690

<210> 33

<2Ы> 229

<212> РВ.Т

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (УН-СЬ)

<400> 33

СЬи Уа1 СЬп Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу

Ь 5 ЬО 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Туг Зег РЬе ТЬг СЬу Туг

- 137 030147

20

25

30

ТЬг МеЬ Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45

А1а Ьеи Не Азп Рго Туг Ьуз С1у Уа1 Зег ТЬг Туг Азп С1п Ьуз РЬе 50 55 60

Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег Уа1 Азр Ьуз Зег Ьуз Азп ТЬг А1а Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Ча1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд Зег С1у Туг Туг С1у Азр Зег Азр Тгр Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 100 105 110

С1у С1п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег Уа1 А1а А1а Рго 115 120 125

Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЬг 130 135 140

А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а Ьуз 145 150 155 160

Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег С1п С1и 165 170 175

Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег 180 185 190

ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз НЬз Ьуз Уа1 Туг А1а 195 200 205

Суз Е1и Уа1 ТЬг Нхз С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе 210 215 220

Азп Агд С1у С1и Суз

138 030147

225

<210> 34

<211> 690

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (УН-СЬ)

<400> 34

даддЬдсадс	ЬддЬсдадад	сддаддсддс	срддрдсадс	сЬддсддсад	ссЬдадасЬд	60
адсЬдсдссд	ссадсддсЬа	садсЫсасс	ддсЬасасса	РдаасРдддР	ссддсаддса	120
ссРддсаадд	дасРддааРд	ддрддсссрд	аРсаассссР	асаадддсдр	дадсассРас	180
аассадаадР	Ьсааддассд	дНсассаЬс	адсдЬддаса	ададсаадаа	сассдссРаР	240
сРдсадаРда	асадссЬдсд	ддссдаддас	ассдссдрдр	асРасРдсдс	садаадсддс	300
РасРасддсд	асадсдасЬд	дРасРРсдас	дрдрддддсс	адддсасссЬ	сдрдассдрд	360
РсРадсдсРа	дсдРддсРдс	ассаРсРдРс	РРсаРсРРсс	сдссаЬсЬда	РдадсадРРд	420
аааЬсЬддаа	сРдссРсРдР	РдРдРдссРд	сЬдааЬаасЬ	РсРаРсссад	ададдссааа	480
драсадрдда	аддЬддаЬаа	сдсссЬссаа	РсдддРаасР	сссаддадад	РдРсасадад	540
саддасадса	аддасадсас	сЬасадссЬс	адсадсассс	ЬдасдсЬдад	сааадсадас	600
Ьасдадааас	асааадРсРа	сдссЬдсдаа	дРсасссаРс	адддссРдад	сРсдсссдРс	660

асааададсЬ Есаасадддд ададЬдЬЬда 690

<210>	35
<211>	670
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	ΓΝ18 (УЬ-СН1)-ЬС007 (УН-СН1)-Ес(	«впадина») Р329С ЬАЬА
<400>	35
Азр 11е	Уа1 МеР Зег С1п Зег Рго Зег Зег	Ьеи А1а Уа1 Зег Уа1 С1у

15 10 15

Е1и Ьуз Уа1 ТЬг Мер Зег Суз Ьуз Зег Зег С1п Зег Ьеи Ьеи Туг Зег

- 139 030147

140 225 230 235 240

030147

Ьуз Рго Зег Е1п Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег Уа1 ТЬг С1у Туг Зег 245 250 255

11е ТЬг Зег С1у Туг Туг Тгр Азп Тгр 11е Агд Е1п РЬе Рго С1у Азп 260 265 270

Ьуз Ьеи Е1и Тгр МеД Е1у Туг 11е ТЬг Туг Азр Е1у Зег Азп Азп Туг 275 280 285

Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Азп Агд 11е Зег Не ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз 290 295 300

Азп С1п РЬе РЬе Ьеи Ьуз Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг ТЬг Е1и Азр ТЬг А1а 305 310 315 320

ТЬг Туг Туг Суз А1а Азр РЬе Азр Туг Тгр Е1у Е1п Е1у ТЬг ТЬг Ьеи 325 330 335

ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а 340 345 350

Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег Е1у Е1у ТЬг А1а А1а Ьеи Е1у Суз Ьеи 355 360 365

Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег Е1у 370 375 380

А1а Ьеи ТЬг Зег Е1у Уа1 Низ ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи Е1п Зег Зег 385 390 395 400

Е1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи 405 410 415

Е1у ТЬг Е1п ТЬг Туг Не Суз Азп Уа1 Азп Низ Ьуз Рго Зег Азп ТЬг 420 425 430

Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 Е1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Низ ТЬг

141

030147

- 142 030147

645 650 655

Азп ΗΪ5 Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго Е1у Ьуз 660 665 670

<210> 36

<211> 2013

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ΓΝ18 (УЬ-СН1)-ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 36

дасаЬсдЬда	Ьдадссадад	ссссадсадс	сЬддссдЬдЬ	ссдЬдддсда	дааадЬдасс	60
аЬдадсЬдса	ададсадсса	дадссЬдсЬд	ЬасЬссЬсЬа	ассадаадаа	сЬассЬддсс	120
ЬддЬаЬсадс	адаадсссдд	ссадЬссссс	аадсЬдсЬда	ЬсаасЬдддс	садсасссдс	180
дададсддсд	ЬдсссдаЬад	аЫсасаддс	адсддсадсс	ддассдасН	сасссЬдасс	240
аЬсадсадсд	Ьдааддссда	ддаЬсЬддсс	дЬдЬасНсЬ	дссадсадЬЬ	сЬасадсЬас	300
ссссссассЬ	Ьсддсддадд	сасдаадсЬд	даааЬсаада	дсадсдсНс	сассаааддс	360
ссНссдЬдЬ	НссЬсЬддс	ЬссЬадсЬсс	аадЬссассЬ	сЬддаддсас	сдсЬдсЬсЬс	420
ддаЬдссЬсд	ЬдааддаНа	ННссЬдад	ссЬдЬдасад	ЬдЬссЬддаа	Ьадсддадса	480
сЬдассЬсЬд	дадЬдсаЬас	НЬссссдсЬ	дЬдсЬдсадЬ	ссЬсЬддасЬ	дЬасадссЬд	540
адсадсдЬдд	ЬдасадЬдсс	садсадсадс	сЬдддсассс	адассЬасаЬ	сЬдсаасдЬд	600
аассасаадс	ссадсаасас	сааддЬддас	аадааддЬдд	аасссаадЬс	ЫдЬддсдда	660
ддсддаЬссд	дсддаддддд	аЬсЬдаддЬд	садсЬдсадд	ааадсддссс	ЬддссЬддЬд	720
ааасссадсс	ададссЬдад	ссЬдассЬдс	адсдЬдассд	дсЬасадсаЬ	сассадсддс	780
ЬасЬасЬдда	асЬддаЬсад	асадНсссс	ддсаасаадс	ЬддааЬддаЬ	дддсЬасаЬс	840
ассЬасдасд	дсадсаасаа	сЬасаасссс	адссЬдаада	асадааЬсад	саЬсасссдд	900
дасассадса	адаассадН	сНссЬдаад	сЬдаасадсд	Ьдассассда	ддасассдсс	960
ассЬасЬасЬ	дсдссдасЫ:	сдасЬасЬдд	ддссадддса	ссасссЬдас	сдЬдЬссЬсс	1020
дссЬсЬасса	адддссссад	сдЬдЬЬсссс	сЬддсассса	дсадсаадад	сасаЬсЬддс	1080

- 143 030147

ддаасадссд сРсРдддсРд РсРддРдааа дасРасРРсс ссдадсссдр дассдрдрср 1140

РддаасРсРд дсдсссРдас садсддсдрд сасассРРРс садссдРдсР дсададсадс 1200

ддссрдраср сссРдРссРс сдрддрсасс дРдсссРсРа дсРсссРддд аасасадаса 1260

РаРаРсРдРа ардрсаарса саадссРРсс аасассааад РсдаРаадаа адрсдадссс 1320

аададсРдсд асаааасРса сасаРдссса ссдрдсссад сассРдаадс Рдсаддддда 1380

ссдРсадРсР РссРсРРссс сссаааассс ааддасассс РсаРдаРсРс ссддассссР 1440

даддРсасаР дсдрддрддр ддасдРдадс сасдаадасс сРдаддРсаа дРРсаасРдд 1500

РасдРддасд дсдрддаддр дсаРааРдсс аадасааадс сдсдддадда дсадРасаас 1560

адсасдРасс дРдРддРсад сдРссРсасс дРссРдсасс аддасРддсР дааРддсаад 1620

дадрасаадр дсааддРсРс саасааадсс срсддсдссс ссаРсдадаа аассаРсРсс 1680

ааадссааад ддсадссссд адаассасад дрдрдсассс РдсссссаРс ссдддаРдад 1740

сРдассаада ассаддРсад ссРсРсдРдс дсадРсааад дсРРсРаРсс садсдасаРс 1800

дссдрддадр дддададсаа Рдддсадссд дадаасаасР асаадассас дссРсссдРд 1860

сРддасРссд асддсРссРР сРРссРсдРд адсаадсРса ссдРддасаа дадсаддрдд 1920

садсадддда асдРсРРсРс ардсрссдрд аРдсаРдадд сРсРдсасаа ссасРасасд 1980

садаададсс РсРсссРдРс РссдддРааа Рда 2013

<210>	37
<211>	231
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	ΓΝ18 (УН-СЬ)
<400>	37
С1п Уа1	С1п Ьеи С1п 61п Зег С1и А1а С1и Ьеи А1а Агд Рго С1у А1а
1	5 10 15
Зег Уа1	Ьуз Мер Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
	20 25 30
ТЬг 11е	Нтз Тгр Ьеи Ьуз С1п Агд Рго С1у С1п С1у Ьеи Азр Тгр 11е

144 030147

- 145 030147

<211> 696

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ΡΝ18 (ЧН-СЬ)

<400> 38

саддЕдсадс	Едсадсадад	сдаддссдад	сЕддсЕадас	сЕддадссад	сдЕдаадаЕд	60
адсЕдсаадд	ссадсддсЕа	сассЕЕсасс	дасЕасасса	ЕссасЕддсЕ	даадсадсдд	120
ссЕддасадд	дссЕддасЕд	даЕсддсЕас	ЕЕсаасссса	дсадсдадад	сассдадЕас	180
аассддаадЕ	Есааддассд	дассаЕссЕд	ассдссдаса	даадсадсас	сассдссЕас	240
аЕдсадсЕда	дсадссЕдас	садсдаддас	адсдссдЕдЕ	асЕасЕдсад	ссддаадддс	300
дадаадсЕдс	Едддсаасад	аЕасЕддЕас	ЕЕсдасдЕдЕ	ддддадссдд	сассадсдЕд	360
ассдЕдЕсЕа	дсдсЕадсдЕ	ддсЕдсасса	ЕсЕдЕсЕЕса	ЕсЕЕсссдсс	аЕсЕдаЕдад	420
садЕЕдаааЕ	сЕддаасЕдс	сЕсЕдЕЕдЕд	ЕдссЕдсЕда	аЕаасЕЕсЕа	Есссададад	480
дссааадЕас	адЕддааддЕ	ддаЕаасдсс	сЕссааЕсдд	дЕаасЕссса	ддададЕдЕс	540
асададсадд	асадсаадда	садсассЕас	адссЕсадса	дсасссЕдас	дсЕдадсааа	600
дсадасЕасд	адааасасаа	адЕсЕасдсс	ЕдсдаадЕса	сссаЕсаддд	ссЕдадсЕсд	660
сссдЕсасаа	ададсЕЕсаа	саддддадад	ЕдЕЕда			696

<210> 39

<211> 664

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223>	2С11	(УЬ-СН1)	-ДС007	(УН-	СН1)	-Гс(«впадина») Р329С	ЬАЬА
<400>	39
Азр 11е	С1п	МеЕ ТЬг	С1п Зег	Рго	Зег	Зег Ьеи Рго А1а Зег	Ьеи С1у
1		5				10	15
Азр Агд	Уа1	ТЬг 11е	Азп Суз	С1п	А1а	Зег С1п Азр Не Зег	Азп Туг
		20			25	30
Деи Азп	Тгр	Туг С1п	61п Ьуз	Рго	С1у	Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи	Ьеи 11е

- 146 030147

147 030147

- 148 450 455

Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд 465 470

Уа1 Азр Уа1 Зег Шз С1и Азр Рго 485

Азр С1у Уа1 Е1и Уа1 Шз Азп А1а 500

Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 515 520

Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз Е1и Туг 530 535

Ьеи С1у А1а Рго 11е Е1и Ьуз ТЬг 545 550

Агд С1и Рго С1п Уа1 Суз ТЬг Ьеи 565

Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи Зег Суз 580

Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег 595 600

Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр 610 615

Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег 625 630

Зег Суз Зег νβΐ МеЬ Шз Е1и А1а 645

030147

460

ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 475 480

С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 490 495

Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п 505 510

Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз С1п 525

Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а 540

11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго 555 560

Рго Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг 570 575

А1а Уа1 Ьуз Е1у РЬе Туг Рго Зег 585 590

Азп б1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг 605

Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Уа1 620

Агд Тгр С1п Е1п Е1у Азп Уа1 РЬе 635 640

Ьеи Шз Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз 650 655

Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз

149 030147

660

<210> 40

<211> 1995

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 2С11 (УЬ-СНП-ЬС007 (УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 40

дасаЬссада	Ьдасссадад	ссссадсадс	сЬдссЬдсса	дссЬдддсда	сададЬдасс	60
аЬсаасЬдсс	аддссадсса	ддасаЬсадс	аасЬассЬда	асЬддЬаЬса	дсадаадссЬ	120
ддсааддссс	ссаадсЬдсЬ	даЬсЬасЬас	ассаасаадс	Ьддссдасдд	сдЬдсссадс	180
адаЬЬсадсд	дсадсддсЬс	сддсададас	адсадсЬЬса	ссаЬсЬссад	ссЬддааадс	240
даддасаЬсд	дсадсЬасЬа	сЬдссадсад	ЬасЬасаасЬ	ассссЬддас	сЬЬсддсссЬ	300
ддсассаадс	ЬддаааЬсаа	дадсадсдсЬ	Ьссассааад	дсссЬЬссдЬ	дЬЬЬссЬсЬд	360
дсЬссЬадсЬ	ссаадЬссас	сЬсЬддаддс	ассдсЬдсЬс	ЬсддаЬдссЬ	сдЬдааддаЬ	420
ЬаЬЬЬЬссЬд	адссЬдЬдас	адЬдЬссЬдд	ааЬадсддад	сасЬдассЬс	ЬддадЬдсаЬ	480
асЬЬЬссссд	сЬдЬдсЬдса	дЬссЬсЬдда	сЬдЬасадсс	ЬдадсадсдЬ	ддЬдасадЬд	540
сссадсадса	дссЬдддсас	ссадассЬас	аЬсЬдсаасд	Ьдаассасаа	дсссадсаас	600
ассааддЬдд	асаадааддЬ	ддаасссаад	ЬсЬЬдЬддсд	даддсддаЬс	сддсддаддд	660
ддаЬсЬдадд	ЬдсадсЬдса	ддааадсддс	ссЬддссЬдд	Ьдааасссад	ссададссЬд	720
адссЬдассЬ	дсадсдЬдас	сддсЬасадс	аЬсассадсд	дсЬасЬасЬд	даасЬддаЬс	780
адасадЬЬсс	ссддсаасаа	дсЬддааЬдд	аЬдддсЬаса	ЬсассЬасда	сддсадсаас	840
аасЬасаасс	ссадссЬдаа	даасадааЬс	адсаЬсассс	дддасассад	саадаассад	900
ЬЬсЬЬссЬда	адсЬдаасад	сдЬдассасс	даддасассд	ссассЬасЬа	сЬдсдссдас	960
ЬЬсдасЬасЬ	ддддссаддд	сассасссЬд	ассдЬдЬссЬ	ссдссЬсЬас	саадддсссс	1020
адсдЬдЬЬсс	сссЬддсасс	садсадсаад	адсасаЬсЬд	дсддаасадс	сдсЬсЬдддс	1080
ЬдЬсЬддЬда	аадасЬасЬЬ	ссссдадссс	дЬдассдЬдЬ	сЬЬддаасЬс	ЬддсдсссЬд	1140
ассадсддсд	ЬдсасассЬЬ	ЬссадссдЬд	сЬдсададса	дсддссЬдЬа	сЬсссЬдЬсс	1200

- 150 030147

ЬссдЬддЬса ссдЬдсссЬс ЬадсЬсссЬд ддаасасада саЬаЬаЬсЬд ЬааЬдЬсааЬ 1260

сасаадссЬЬ ссаасассаа адЬсдаЬаад ааадЬсдадс ссаададсЬд сдасаааасЬ 1320

сасасаЬдсс сассдЬдссс адсассЬдаа дсЬдсадддд дассдЬсадЬ сЬЬссЬсЬЬс 1380

сссссаааас ссааддасас ссЬсаЬдаЬс Ьсссддассс сЬдаддЬсас аЬдсдЬддЬд 1440

дЬддасдЬда дссасдаада сссЬдаддЬс аадЬЬсаасЬ ддЬасдЬдда сддсдЬддад 1500

дЬдсаЬааЬд ссаадасааа дссдсдддад дадсадЬаса асадсасдЬа ссдЬдЬддЬс 1560

адсдЬссЬса ссдЬссЬдса ссаддасЬдд сЬдааЬддса аддадЬасаа дЬдсааддЬс 1620

Ьссаасааад сссЬсддсдс ссссаЬсдад аааассаЬсЬ ссааадссаа адддсадссс 1680

сдадаассас аддЬдЬдсас ссЬдссссса ЬсссдддаЬд адсЬдассаа даассаддЬс 1740

адссЬсЬсдЬ дсдсадЬсаа аддсЬЬсЬаЬ сссадсдаса ЬсдссдЬдда дЬдддададс 1800

ааЬдддсадс сддадаасаа сЬасаадасс асдссЬсссд ЬдсЬддасЬс сдасддсЬсс 1860

ЬЬсЬЬссЬсд ЬдадсаадсЬ сассдЬддас аададсаддЬ ддсадсаддд даасдЬсЬЬс 1920

ЬсаЬдсЬссд ЬдаЬдсаЬда ддсЬсЬдсас аассасЬаса сдсадаадад ссЬсЬсссЬд 1980

ЬсЬссдддЬа ааЬда 1995

<210> 41

<211> 223

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 2С11 (УН-СЬ)

<400> 41

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Ьуз

15 10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз С1и А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег С1у Туг 20 25 30

С1у МеЬ Н1з Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго С1у Агд С1у Ьеи С1и Зег Уа1 35 40 45

А1а Туг 11е ТЬг Зег Зег Зег 11е Азп 11е Ьуз Туг А1а Азр А1а Уа1

151

030147

50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Ьеи Ьеи РЬе 65 70 75 80

Ьеи С1п МеЬ Азп Не Ьеи Ьуз Зег С1и Азр ТЬг А1а МеЬ Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд РЬе Азр Тгр Азр Ьуз Азп Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг МеЬ Уа1 100 105 110

ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег Уа1 А1а А1а Рго Зег \7а1 РЬе 11е РЬе Рго 115 120 125

Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЬг А1а Зег Уа1 А7а1 Суз Ьеи 130 135 140

Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр 145 150 155 160

Азп А1а Ьеи С1п Зег 61у Азп Зег С1п С1и Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр 165 170 175

Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз 180 185 190

А1а Азр Туг С1и Ьуз Н1з Ьуз Уа1 Туг А1а Суз С1и \7а1 ТЬг Нтз С1п 195 200 205

С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд 51у 61и Суз 210 215 220

<210> 42

<211> 672

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 2С11 (УН-СЬ)

<400> 42

- 152 030147

даддЬдсадс	ЬддЬддааад	сддсддаддс	сЬддЬдсадс	ссддсаадад	ссЬдаадсЬд	60
адсЬдсдадд	ссадсддсЬЬ	сассЬЬсадс	ддсЬасддса	ЬдсасЬдддЬ	дадасаддсс	120
ссЬддсадад	дасЬддааад	сдЬддссЬас	аЬсассадса	дсадсаЬсаа	саЬЬаадЬас	180
дссдасдссд	Ьдаадддссд	дНсассдЬд	ЬссадддаЬа	асдссаадаа	ссЬдсЬдЫс	240
сЬдсадаЬда	асаЬссЬдаа	дЬссдаддас	ассдсЪаЬдЪ	аНасЬдсдс	садаЫсдас	300
Ьдддасаада	асЬасЬдддд	ссадддсасс	аЬддЬсасад	ЬдЬсЬадсдс	ЬадсдЬддсЬ	360
дсассаЬсЬд	Гсггсагсгг	сссдссаЪсЬ	даЬдадсадЬ	ЬдаааЬсЪдд	аасЪдссЬсЪ	420
дНдЬдЬдсс	ЬдсЬдааЬаа	сНсЬаЬссс	адададдсса	аадЬасадЬд	дааддЬддаЬ	480
аасдсссЬсс	ааЬсдддЬаа	сЬсссаддад	адЬдЬсасад	адсаддасад	сааддасадс	540
ассЬасадсс	Ьсадсадсас	ссЬдасдсЬд	адсааадсад	асЬасдадаа	асасааадЬс	600
ЬасдссЬдсд	аадЬсассса	ЬсадддссЬд	адсЬсдсссд	Ьсасааадад	сНсаасадд	660

ддададЬдЬЬ да 672

<210> 43

<211> 700

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> А/9 (зсГаЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 43

Азр Не С1п МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у

15 10 15

Азр Агд А/а1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Азр Не Агд Азп Туг 20 25 30

Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не 35 40 45

Туг Туг ТЬг Зег Агд Ьеи С1и Зег С1у Уа1 50 55

Зег 61у Зег С1у ТЬг Азр Туг ТЬг Ьеи ТЬг

Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 60

Не Зег Зег Ьеи С1п Рго

153

030147

154 030147

275 280 285

Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 А1а Ьеи 11е Азп Рго Туг Ьуз Е1у 290 295 300

Уа1 Зег ТЬг Туг Азп Е1п Ьуз РЬе Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег Уа1 305 310 315 320

Азр Ьуз Зег Ьуз Азп ТЬг А1а Туг Ьеи Е1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а 325 330 335

С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд Зег С1у Туг Туг Е1у Азр 340 345 350

Зег Азр Тгр Туг РЬе Азр Уа1 Тгр Е1у Е1п Е1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг А/а1 355 360 365

Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз Е1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег 370 375 380

Зег Ьуз Зег ТЬг Зег Е1у Е1у ТЬг А1а А1а Ьеи Е1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз 385 390 395 400

Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег Е1у А1а Ьеи 405 410 415

ТЬг Зег Е1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег Е1у Ьеи 420 425 430

Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи Е1у ТЬг 435 440 445

Е1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Шз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 450 455 460

Азр Ьуз Ьуз Ча1 Е1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго 465 470 475 480

Рго Суз Рго А1а Рго Е1и А1а А1а Е1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе

155

030147

485 490 495

Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеД 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 500 505 510

ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Низ С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе 515 520 525

Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у \7а1 С1и Уа1 Низ Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго 530 535 540

Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг 545 550 555 560

Уа1 Ьеи Низ С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 61и Туг Ьуз Суз Ьуз \7а1 565 570 575

Зег Азп Ьуз А1а Ьеи С1у А1а Рго 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а 580 585 590

Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Суз Агд 595 600 605

Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п \7а1 Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи \7а1 Ьуз 61у 610 615 620

РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а \7а1 С1и Тгр 51и Зег Азп С1у С1п Рго 625 630 635 640

РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п 660 665 670

С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеД Низ С1и А1а Ьеи Низ Азп Низ 675 680 685

Туг ТЬг Е1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз

- 156 030147

690		695		700
<210> 44 <211> 2103 <212> ДНК <213> Искусственная	последовательность
<220> <223> ν9	(зсЕаЪ)-Ес(«выступ») Р329С ЬАЬА
<400> 44 дасаРссада	Рдасссадад	ссссРсРадс	сРдадсдсса	дсдрдддсда	сададрдасс	60
аРсассРдРс	дддссадсса	ддасаРсада	аасРассРда	асРддРаРса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсРдсР	даРсРасРас	ассРсРадас	Рддааадсдд	сдрдсссадс	180
сддРРРадсд	дсадсддсРс	сддсассдас	РасасссРда	ссаРсадсад	ссРдсадссс	240
даддасРРсд	ссассРасРа	сРдссадсад	ддсаасасас	РссссРддас	сРРсддссад	300
ддсассаадд	РддадаРсаа	дсдРасддРд	дссдсРссса	дсдРдРРсаР	сРРссссссс	360
адсдасдадс	адсРдаадРс	сддсассдсс	адсдРсдРдР	дссРдсРдаа	саасРРсРас	420
ссссдддадд	ссааддрдса	дрддааддрд	дасаасдссс	Рдсададсдд	саасадссад	480
дааадсдРса	ссдадсадда	садсааддас	РссассРаса	дссРдадсад	сасссрдасс	540
сРдадсаадд	ссдасРасда	даадсасаад	дрдрасдсср	дсдаадрдас	ссассадддс	600
сРдРссадсс	ссдрдассаа	дадсРРсаас	сддддсдадр	дсадсддсдд	аддсРсРдда	660
ддсддсРсРд	ааддсддадд	аадрдадддс	ддаддсрсад	ааддсддсдд	аадсдааддр	720
ддсддсРсРд	дсддсддарс	сддсдаддрд	садсРддРсд	адРссддсдд	аддссрддрд	780
садссРддсд	дсадссРдад	асРдадсРдс	дссдссадсд	дсРасадсРР	сассддсРас	840
ассаРдаасР	дддрссддса	ддсРссРддс	аадддссРсд	аардддрддс	ссРдаРсаас	900
сссРасаадд	дсдрдадсас	сРасаассад	аадРРсаадд	ассддРРсас	сарсадсдрд	960
дасаададса	адаасассдс	сРаРсРдсад	аРдаасадсс	Рдсдддссда	ддасассдсс	1020
дРдРасРасР	дсдссадаад	сддсРасРас	ддсдасадсд	асРддРасРР	сдасдрдрдд	1080
ддссадддса	сасрддрсас	сдрдрссадс	дсРадсасса	адддсссРад	сдРдРРсссР	1140
сРддссссРа	дсадсаадад	сасаадрдда	ддаасадссд	сссрдддсрд	ссРддРсаад	1200

- 157 030147

дасРасРРсс	ссдадсссдр	дассдрдрсс	РддааРРсРд	дсдсссРдас	аадсддсдрд	1260
сасасаРРРс	садссдрдср	дсададсадс	ддссРдРасР	сРсРдадсад	сдрсдрдасс	1320
дРдсссРсРа	дсРсРсРддд	сасссадасс	РасаРсРдса	асдРдаасса	саадсссадс	1380
аасассааад	Рддасаадаа	ддрддаассс	аададсРдсд	асаадассса	сассРдРссс	1440
ссРРдсссРд	ссссРдаадс	РдсРддРддс	ссРРссдРдР	РссРдРРссс	сссааадссс	1500
ааддасассс	РдаРдаРсад	ссддассссс	даадРдассР	дсдрддрддр	сдаРдРдРсс	1560
сасдаддасс	срдаадрдаа	дррсааррдд	РасдРддасд	дсдрддаадр	дсасаардсс	1620
аадассаадс	сдсдддадда	дсадРасаас	адсасдрасс	дрдрддрсад	сдРссРсасс	1680
дРссРдсасс	аддасрддср	дааРддсаад	дадРасаадР	дсааддрсрс	саасааадсс	1740
сРсддсдссс	ссарсдадаа	аассаРсРсс	ааадссааад	ддсадссссд	адаассасад	1800
дрдрасассс	РдсссссаРд	ссдддаРдад	сРдассаада	ассаддРсад	ссрдрддрдс	1860
сРддРсааад	дсРРсРаРсс	садсдасаРс	дссдрддадр	дддададсаа	Рдддсадссд	1920
дадаасаасР	асаадассас	дссРсссдРд	срддасрссд	асддсРссРР	сРРссРсРас	1980
адсаадсРса	ссдрддасаа	дадсаддрдд	садсадддда	асдРсРРсРс	аРдсРссдРд	2040
аРдсаРдадд	сРсРдсасаа	ссасРасасд	садаададсс	РсРсссРдРс	РссдддРааа	2100

Раа 2103

<210> 45

<211> 450

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЕА201 (УН-СН1)-Ес(«впадина») Р329Е ЬАЬА

<400> 45

Е1п УаЬ С1п Ьеи Уа1 Е1п Зег Е1у А1а Е1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго Е1у Зег

15 10 15

Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег Е1у РЬе ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг 20 25 30

Ьуз 11е Н1з Тгр Уа1 Агд Е1п А1а Рго Е1у Е1п С1у Ьеи Е1и Тгр Мер

158

030147

- 159 030147

- 160 030147

450

<210> 46

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СА201 (УН-СНП-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 46

саддбдсадс	бддбдсадбс	бддддсбдад	дбдаадаадс	сбдддбссбс	ддбдааддбс	60
бссбдсаадд	ссбсбддббб	сасаббсасб	дасбасаада	басасбдддб	дсдасаддсс	120
ссбддасаад	ддсбсдадбд	дабдддабаб	ббсаасссба	асадсддбба	бадбассбас	180
дсасадаадб	бссадддсад	ддбсассабб	ассдсддаса	аабссасдад	сасадссбас	240
абддадсбда	дсадссбдад	абсбдаддас	асддссдбдб	аббасбдбдс	дадасбабсс	300
ссаддсддбб	асбабдббаб	ддабдссбдд	ддссааддда	ссассдбдас	сдбсбссбса	360
дсбадсасса	адддсссабс	ддбсббсссс	сбддсасссб	ссбссаадад	сассбсбддд	420
ддсасадсдд	сссбдддсбд	ссбддбсаад	дасбасббсс	ссдаассддб	дасддбдбсд	480
бддаасбсад	дсдсссбдас	садсддсдбд	сасассббсс	сддсбдбссб	асадбссбса	540
ддасбсбасб	сссбсадсад	сдбддбдасс	дбдсссбсса	дсадсббддд	сасссадасс	600
басабсбдса	асдбдаабса	саадсссадс	аасассаадд	бддасаадаа	адббдадссс	660
ааабсббдбд	асаааасбса	сасабдссса	ссдбдсссад	сассбдаадс	бдсаддддда	720
ссдбсадбсб	бссбсббссс	сссаааассс	ааддасассс	бсабдабсбс	ссддассссб	780
даддбсасаб	дсдбддбддб	ддасдбдадс	сасдаадасс	сбдаддбсаа	дббсаасбдд	840
басдбддасд	дсдбддаддб	дсабаабдсс	аадасааадс	сдсдддадда	дсадбасаас	900
адсасдбасс	дбдбддбсад	сдбссбсасс	дбссбдсасс	аддасбддсб	даабддсаад	960
дадбасаадб	дсааддбсбс	саасааадсс	сбсддсдссс	ссабсдадаа	аассабсбсс	1020
ааадссааад	ддсадссссд	адаассасад	дбдбдсассс	бдсссссабс	ссдддабдад	1080
сбдассаада	ассаддбсад	ссбсбсдбдс	дсадбсааад	дсббсбабсс	садсдасабс	1140
дссдбддадб	дддададсаа	бдддсадссд	дадаасаасб	асаадассас	дссбсссдбд	1200

- 161 030147

сЬддасЬссд асддсЬссЫ; сЬЬссЪсдЬд адсаадсЬса ссдЬддасаа дадсаддЬдд 1260

садсадддда асдЬсЬЬс+с аЪдсЬссдЪд аЬдсаЬдадд сЬсЬдсасаа ссасЪасасд 1320

садаададсс ЬсЬсссЬдЬс ЬссдддЪааа Ъда 1353

<210> 47

<211> 213

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СА201 (УЬ-СЬ)

<400> 47

10

15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п С1у 11е Азп Азп Туг 20 25 30

Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Агд Ьеи 11е 35 40 45

Туг Азп ТЬг Азп Азп Ьеи С1п ТЬг С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60

Зег 61у Зег С1у ТЬг С1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Рго 65 70 75 80

С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи С1п Нтз Азп Зег РЬе Рго ТЬг 85 90 95

РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а Рго 100 105 110

Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр Е1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЬг 115 120 125

А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а Ьуз 130 135 140

- 162 030147

УаЬ СЬп Тгр Ьуз УаЬ Азр Азп АЬа Ьеи СЬп Зег СЬу Азп Зег СЬп СЬи 145 150 155 160

Зег УаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег 165 170 175

ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа Азр Туг СЬи Ьуз НЬз Ьуз УаЬ Туг АЬа 180 185 190

Суз СЬи УаЬ ТЬг НЬз СЬп СЬу Ьеи Зег Зег Рго УаЬ ТЬг Ьуз Зег РЬе 195 200 205

Азп Агд СЬу СЬи Суз 210

<210> 48

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СА201 (УЬ-СЬ)

<400> 48

даЬаЪссада	ЬдасссадЬс	ЬссаЬссЬсс	сЬдЬсЬдсаЬ	сЬдЬсддада	ссдддЬсасс	60
аЬсассЬдсс	дддсаадрса	дддсаЬЬаас	ааЫасЫаа	аЬЬддЬасса	дсадаадсса	120
дддааадссс	сРаадсдссЬ	даЬсЬаЬааЬ	ассаасаасЬ	Ьдсадасадд	сдЬсссаЬса	180
аддЬЬсадсд	дсадЬддаЬс	сдддасадаа	ЫсасЬсЬса	ссаЬсадсад	ссЬдсадссЬ	240
даадаЬЬЬЬд	ссассЬаЫа	сЬдсЫдсад	саЬааЬадЬи	ЫсссасдЫ	Ьддссадддс	300
ассаадсЬсд	адаЬсаадсд	ЬасддЬддсЬ	дсассаЬсЬд	ЬсЬЬсаЬсЫ:	сссдссаЬсЬ	360
даЬдадсадЬ	ЬдаааЬсЬдд	аасЬдссЬсЬ	дЬЬдЬдЬдсс	ЬдсЬдааЬаа	сЬЬсЬаЬссс	420
адададдсса	аадрасадрд	дааддрддар	аасдсссЬсс	ааЬсдддЬаа	сЬсссаддад	480
адЬдЬсасад	адсаддасад	сааддасадс	ассЬасадсс	Ьсадсадсас	ссЬдасдсЬд	540
адсааадсад	асЬасдадаа	асасааадЬс	ЬасдссЬдсд	аадЬсассса	ЬсадддссЬд	600
адсЬсдсссд	Ьсасааадад	сЬЬсаасадд	ддададЬдЬЬ	ад		642

- 163 030147

<210> <211> <212> <213>	49 697 РЕТ Искусственная	последовательность
<220>
<223>	ЕА201 (зсГаЬ)·	-Ес{«выступ») Р329С ЬАЬА
<400>	49

Азр 11е С1п МеЪ ТЬг Е1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 Е1у 15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Е1у 11е Азп Азп Туг 20 25 30

Ьеи Азп Тгр Туг Е1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Агд Ьеи 11е 35 40 45

Туг Азп ТЬг Азп Азп Ьеи Е1п ТЬг Е1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег Е1у 50 55 60

Зег Е1у Зег Е1у ТЬг Е1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи Е1п Рго 65 70 75 80

Е1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи Е1п Шз Азп Зег РЬе Рго ТЬг 85 90 95

РЬе Е1у С1п Е1у ТЬг Ьуз Ьеи Е1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а Рго 100 105 110

Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЬг 115 120 125

Уа1 Е1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи Е1п Зег Е1у Азп Зег С1п Е1и 145 150 155 160

Зег Уа1 ТЬг Е1и Е1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег

- 164 030147

- 165 030147

370 375 380

ТЬг Зег Е1у Е1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе 385 390 395 400

Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у 405 410 415

Уа1 НЬз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи 420 425 430

Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи Е1у ТЬг С1п ТЬг Туг 435 440 445

11е Суз Азп Уа1 Азп Шз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз 450 455 460

Уа1 Е1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Шз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго 465 470 475 480

А1а Рго С1и А1а А1а Б1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз 485 490 495

Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер 11е Зег Агд ТЬг Рго Б1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 500 505 510

Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Шз С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг 515 520 525

Уа1 Азр С1у Уа1 О1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и Е1и 530 535 540

С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз 545 550 555 560

Е1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз Е1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз 565 570 575

А1а Ьеи Е1у А1а Рго 11е Е1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз Е1у Е1п

166

030147

580 585 590

Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Суз Агд Азр СЬи Ьеи 595 600 605

ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго 610 615 620

Зег Азр Не АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп 625 630 635 640

Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго λ/аЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи 645 650 655

Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп УаЬ 660 665 670

РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеД НЬз СЬи АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг СЬп 675 680 685

Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз 690 695

<210> 50

<211> 2094

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СА201 (зсГаЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 50

даДаДссада	ДдасссадДс	ДссаДссДсс	сДдДсДдсаД	сДдДсддада	ссдддДсасс	60
аДсассДдсс	дддсаадДса	дддсаДДаас	ааДДасДДаа	аДДддДасса	дсадаадсса	120
дддааадссс	сДаадсдссД	даДсДаДааД	ассаасаасД	Ддсадасадд	сдДсссаДса	180
аддДДсадсд	дсадДддаДс	сдддасадаа	ДДсасДсДса	ссаДсадсад	ссДдсадссД	240
даадаДДДДд	ссассДаДДа	сДдсДДдсад	саДааДадДД	ДДсссасдДД	Дддссадддс	300
ассаадсДсд	адаДсаадсд	ДасддДддсс	дсДсссадсд	ДдДДсаДсДД	сссссссадс	360

- 167 030147

дасдадсадс	ЬдаааЬскдд	сассдссадс	дЬсдЬдЬдсс	ЬдсЬдаасаа	сЬЬсЬасссс	420
сдддаддсса	аддЬдсадЪд	дааддЬддас	аасдсссЬдс	ададсддсаа	садссаддаа	480
адсд+сассд	адсаддасад	сааддасЬсс	ассЬаЬадсс	ЬдЬссадсас	ссЬдасссЬд	540
адсааддссд	асЬасдадаа	дсасаадд+д	ЬасдссЬдсд	аадЬдассса	ссадддссЬд	600
адсадссссд	Ъдассаадад	сЬЕсаассдд	ддсдадЬдса	дсддсддадд	Ьадсддаддс	660
ддсЪсЬдадд	дсддаддаад	сдадддсдда	ддсЬссдаад	дсддсддаад	сдааддЬддс	720
ддсЬскддсд	дсддакссдд	ссаддЬдсад	сЬддЬдсадЬ	сЬддддсЬда	ддЬдаадаад	780
ссЪдддЬссЬ	сддЬдааддб	сЕссЪдсаад	дссЬсЬддЬЬ	ЬсасаЬЬсас	ЬдасЬасаад	8 40
аЪасасЪддд	Ъдсдасаддс	сссЬддасаа	дддсЬсдадЬ	ддаЬдддаЬа	ЬЬЬсаасссЬ	900
аасадсддН	аЪадЬассСа	сдсасадаад	ЬЬссадддса	дддЬсассаЬ	Ьассдсддас	960
аааЬссасда	дсасадссба	саЬддадсЬд	адсадссЬда	даЬсЬдадда	сасддссдЬд	1020
ЬаЪЪасЬдЪд	сдадасЬаЬс	сссаддсддЬ	ЬасЬаЬдЬЬа	ЬддаЬдссЬд	дддссааддд	1080
ассассдЬда	ссдЬсЕссЪс	адсЬадсасс	аадддсссЬа	дсдЬдЬЬссс	ЬсЬддссссЬ	1140
адсадсаада	дсасаадЬдд	аддаасадсс	дсссЬдддсЬ	дссЬддЬсаа	ддасЬасЬЬс	1200
сссдадсссд	ЬдассдЪдЪс	сЬддааЬЬсЬ	ддсдсссЬда	саадсддсдЬ	дсасасаЬЬЬ	1260
ссадссдйдс	Ьдсададсад	сддссЬдЬас	ЬсЬсЬдадса	дсдЬсдЬдас	сдЬдсссЬсЬ	1320
адсЬсЬсбдд	дсасссадас	сЬасаЬсЬдс	аасдЬдаасс	асаадсссад	саасассааа	1380
дЬддасаада	аддЪддаасс	саададсЬдс	дасаадассс	асассЬдЬсс	сссЬЬдсссЬ	1440
дссссЬдаад	сЬдсЬддЬдд	сссЬЬссдЬд	ЬЬссЬдЬЬсс	ссссааадсс	сааддасасс	1500
сСдабдаГса	дссддасссс	сдаадЬдасс	ЬдсдЬддЬдд	ЬсдаЬдЬдЬс	ссасдаддас	1560
ссЪдаадкда	адЬЬсааИд	дЬасдЬддас	ддсдЬддаад	ЬдсасааЬдс	саадассаад	1620
ссдсдддадд	адсадЪасаа	садсасдЬас	сдЬдЬддЬса	дсдЬссЬсас	сдЬссЬдсас	1680
саддаскддс	ЬдааЬддсаа	ддадЬасаад	ЬдсааддЬсЬ	ссаасааадс	ссЬсддсдсс	1740
сссаЪсдада	ааассаЕсЪс	сааадссааа	дддсадсссс	дадаассаса	ддЬдЬасасс	1800
сЬдсссссаЬ	дссдддайда	дсЬдассаад	аассаддЬса	дссЬдЬддЬд	ссЬддЬсааа	1860
ддс±±с±а±с	ссадсдасаЬ	сдссдЬддад	Ьдддададса	аЬдддсадсс	ддадаасаас	1920

- 168 030147

Дасаадасса	сдссДсссдД дсДддасДсс дасддсДссД	ДсДДссДсДа	садсаадсДс	1980
ассдДддаса	ададсаддДд дсадсадддд аасдДсДДсД	саДдсДссдД	даДдсаДдад	2040
дсДсДдсаса ассасДасас дсадаададс сДсДсссДдД <210> 51 <211> 452 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220> <223> 579 (УН-СН1)-Гс («впадина») Р329Е ЬАЬА <400> 51	сДссдддДаа	аДаа	2094
С1и Уа1 С1п 1	Ьеи Уа1 О1и Зег Е1у Е1у Е1у Ьеи 5 10	А7а1 Е1п Рго	Е1у Е1у 15
Зег Ьеи Агд	Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег Е1у Туг 20 25	Зег РЬе ТЬг 30	С1у Туг
ТЬг МеД Азп 35	Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго Е1у Ьуз 40	Е1у Ьеи Е1и 45	Тгр Уа1
А1а Ьеи 11е 50	Азп Рго Туг Ьуз Е1у Уа1 Зег ТЬг 55	Туг Азп Е1п 60	Ьуз РЬе
Ьуз Азр Агд 65	РЬе ТЬг 11е Зег Уа1 Азр Ьуз Зег 70 75	Ьуз Азп ТЬг	А1а Туг 80
Ьеи Е1п МеД	Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг 85 90	А1а Уа1 Туг	Туг Суз 95
А1а Агд Зег	С1у Туг Туг Е1у Азр Зег Азр Тгр 100 105	Туг РЬе Азр 110	Уа1 Тгр
Е1у С1п Б1у 115	ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а 120	Зег ТЬг Ьуз 125	Е1у Рго
Зег Уа1 РЬе	Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег	ТЬг Зег Е1у	Е1у ТЬг

130 135 140

169 030147

А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз 145 150

Азр Туг РЬе Рго С1и Рго \7а1 ТЬг 155 160

Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи 165

ТЬг Зег С1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго 170 175

А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи 180

Туг Зег Ьеи Зег Зег \7а1 Уа1 ТЬг 185 190

А7а1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТНг 195 200

С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп \7а1 Азп 205

Низ Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 210 215

Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег 220

Суз Азр Ьуз ТЬг ΗΪ3 ТЬг Суз Рго 225 230

Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а А1а 235 240

61у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе 245

Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи 250 255

МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 260

ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег 265 270

ΗΪ3 С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе 275 280

Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 61и 285

Уа1 НЬз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго 290 295

Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг 300

Туг Агд \7а1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг 305 310

\7а1 Ьеи НЬз С1п Азр Тгр Ьеи Азп 315 320

С1у Ьуз Е1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 325

Зег Азп Ьуз А1а Ьеи С1у А1а Рго 330 335

11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а 340

Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п 345 350

- 170 030147

Уа1

Суз

ТЬг 355

Ьеи

Рго

Зег

Агд 360

Азр

СЬи

Ьеи

ТЬг

Ьуз 365

Азп

С1п

Уа1

Зег

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Уа1

Ьуз

С1у

РЬе

Туг

Рго

Зег

Азр

Не

А1а

Уа1

370

375

380

С1и

Тгр

С1и

Зег

Азп

С1у

С1п

Рго

СЬи

Азп

Туг

Ьуз

ТЬг

Рго

385

390

395

400

Рго

νβΐ

Ьеи

Азр

Зег

Азр

С1у

Зег

РЬе

Ьеи

Уа1

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

405

410

415

Уа1

Азр

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

С1п

С1у

Азп

Уа1

РЬе

Зег

Суз

Зег

Уа1

420

425

430

МеЬ

НЬз

СЬи

А1а

Ьеи

НЬз

Азп

НЬз

Туг

ТЬг

С1п

Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

435

440

445

Зег

Рго

С1у

Ьуз

450

<210> 52

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ν9 (УН-СН1)-Кс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 52

даддЬдсадс	ЪддЪсдадад	сддаддсддс	сЬддЬдсадс	сЬддсддсад	ссЬдадасЬд	60
адсЬдсдссд	ссадсддсЬа	садсНсасс	ддсЪасасса	ЪдаасЪдддЬ	ссддсаддса	120
ссЬддсаадд	дасЬддааЬд	ддЬддсссЬд	аЬсаассссЬ	асаадддсдЬ	дадсассЬас	180
аассадаадЬ	Ьсааддассд	дПсассаЪс	адсдЬддаса	ададсаадаа	сассдссЬаЬ	240
сЬдсадаЬда	асадссЬдсд	ддссдаддас	ассдссдЬдЬ	асЬасЬдсдс	садаадсддс	300
ЬасЬасддсд	асадсдасЬд	дЬасНсдас	дЬдЬддддсс	адддсасссЬ	сдЬдассдЬд	360
ЬсЬадсдсЪа	дсассааддд	ссссЬссдЪд	НсссссЬдд	сссссадсад	саададсасс	420

- 171 030147

адсддсддса	садссдсЬсЬ	дддсЬдссЬд	дЬсааддасЬ	асЬЬссссда	дсссдЬдасс	480
дЬдЬссЬдда	асадсддадс	ссЬдассЬсс	ддсдЬдсаса	ссНссссдс	сдЬдсЬдсад	540
адЬЬсЬддсс	ЬдЬаЬадссЬ	дадсадсдЬд	дЬсассдЬдс	сЫсЬадсад	ссЬдддсасс	600
садассЬаса	ЬсЬдсаасдЬ	даассасаад	сссадсааса	ссааддЬдда	саадааддЬд	660
дадсссаада	дсЬдсдасаа	аасЬсасаса	ЬдсссассдЬ	дсссадсасс	ЬдаадсЬдса	720
дддддассдЪ	садЬсЬЬссЬ	сЬЬсссссса	ааасссаадд	асасссЬсаЪ	даЬсЬсссдд	780
ассссЬдадд	ЬсасаЬдсдЬ	ддЬддЬддас	дЬдадссасд	аадасссЬда	ддЬсаадЬЬс	840
аасЬддЬасд	ЬддасддсдЬ	ддаддЬдсаЬ	ааЬдссаада	сааадссдсд	ддаддадсад	900
Ьасаасадса	сдЬассдЬдЬ	ддЬсадсдЬс	сЬсассдЬсс	Ьдсассадда	сЬддсЬдааЬ	960
ддсааддадЬ	асаадЬдсаа	ддЬсЬссаас	ааадсссЪсд	дсдсссссаЬ	сдадаааасс	1020
аЬсЬссааад	ссааадддса	дссссдадаа	ссасаддЬдЬ	дсасссЬдсс	сссаЬсссдд	1080
даЬдадсЬда	ссаадаасса	ддЬсадссЬс	ЬсдЬдсдсад	ЬсаааддсЬЬ	сЬаЬсссадс	1140
дасаЬсдссд	ЬддадЬддда	дадсааЬддд	садссддада	асаасЬасаа	дассасдссЬ	1200
сссдЬдсЬдд	асЬссдасдд	сЬссЬЬсЬЬс	сЬсдЬдадса	адсЬсассдЬ	ддасаададс	1260
аддЪддсадс	аддддаасдЬ	сЬЬсЬсаЬдс	ЬссдЬдаЬдс	аЬдаддсЬсЬ	дсасаассас	1320
Ьасасдсада	ададссЬсЬс	ссЬдЬсЬссд	ддЬаааЬда			1359

<210> 53

<211> 934

<212> РИТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223>	ν9 (	зсГаЬ)-СА201	(УН-СН1)	-Рс	(«выступ»	·) Р329С	ЬАЬА
<400>	53
Азр 11е	Е1п	МеЬ ТЬг С1п	Зег Рго	Зег	Зег Ьеи	Зег А1а	Зег \7а1 Е1у
1		5			10		15
Азр Агд	Уа1	ТЬг 11е ТЬг	Суз Агд	А1а	Зег С1п	Азр 11е	Агд Азп Туг
		20		25			30
Ьеи Азп	Тгр	Туг С1п С1п	Ьуз Рго	С1у	Ьуз А1а	Рго Ьуз	Ьеи Ьеи 11е

172 030147

- 173 030147

- 174 030147

450 455

460

Азр Ьуз Ьуз Уа1 Е1и Рго Ьуз Зег 465 470

Суз Азр Е1у Е1у Е1у Е1у Зег Е1у 475 480

Е1у С1у Е1у Зег Е1п Уа1 Е1п Ьеи 485

Уа1 Е1п Зег Е1у А1а Е1и Уа1 Ьуз 490 495

Ьуз Рго Е1у Зег Зег Уа1 Ьуз Уа1 500

Зег Суз Ьуз А1а Зег Е1у РЬе ТЬг 505 510

РЬе ТЬг Азр Туг Ьуз 11е Нтз Тгр 515 520

Уа1 Агд Е1п А1а Рго Е1у Е1п Е1у 525

Ьеи Е1и Тгр МеЬ Е1у Туг РЬе Азп 530 535

Рго Азп Зег Е1у Туг Зег ТЬг Туг 540

А1а Е1п Ьуз РЬе 61п Е1у Агд Уа1 545 550

ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг 555 560

Зег ТЬг А1а Туг МеЬ Е1и Ьеи Зег 565

Зег Ьеи Агд Зег Е1и Азр ТЬг А1а 570 575

Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд Ьеи Зег 580

Рго Е1у Е1у Туг Туг Уа1 МеЬ Азр 585 590

А1а Тгр Е1у Е1п Е1у ТЬг ТЬг Уа1 595 600

ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз 605

Е1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а 610 615

Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег Е1у 620

Е1у ТЬг А1а А1а Ьеи Е1у Суз Ьеи 625 630

Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго Е1и Рго 635 640

Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег Е1у 645

А1а Ьеи ТЬг Зег Е1у,Уа1 Н1з ТЬг 650 655

РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи Е1п Зег Зег

Е1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1

- 175 030147

660 665 670

А7а1 ТЬг А/аЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг Туг 11е Суз Азп 675 680 685

А/аЬ Азп НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз А7а1 Азр Ьуз Ьуз А7а1 СЬи Рго 690 695 700

Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи 705 710 715 720

АЬа АЬа СЬу СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр 725 730 735

ТЬг Ьеи МеЬ Ые Зег Агд ТЬг Рго СЬи УаЬ ТЬг Суз А7а1 УаЬ УаЬ Азр 740 745 750

А7а1 Зег НЬз СЬи Азр Рго СЬи А7а1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг А7а1 Азр СЬу 755 760 765

А7а1 СЬи А7а1 НЬз Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп Туг Азп 770 775 780

Зег ТЬг Туг Агд А7а1 А/аЬ Зег А7а1 Ьеи ТЬг А/аЬ Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр 785 790 795 800

Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз А7а1 Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи СЬу 805 810 815

АЬа Рго Ые СЬи Ьуз ТЬг Ые Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи 820 825 830

Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Суз Агд Азр СЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп 835 840 845

СЬп А/аЬ Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи А7а1 Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Ые 850 855 860

АЬа А7а1 СЬи Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг

- 176 030147

865

870

875

880

ТЬг Рго Рго Уа! Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз

885

890

895

Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз

900

905

910

Зег Уа1 Меб Шз С1и А1а Ьеи Н1з Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи

915

920

925

Зег Ьеи Зег Рго Е1у Ьуз 930

<210> 54

<211> 2805

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 679 (зсГаЬ)-СА201 (УН-СН1)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 54

дасабссада бдасссадад ссссбсбадс сбдадсдсса дсдбдддсда сададбдасс 60

абсассбдбс дддссадсса ддасабсада аасбассбда асбддбабса дсадаадссс 120

ддсааддссс ссаадсбдсб дабсбасбас ассбсбадас бддааадсдд сдбдсссадс 180

сддбббадсд дсадсддсбс сддсассдас басасссбда ссабсадсад ссбдсадссс 240

даддасббсд ссассбасба сбдссадсад ддсаасасас бссссбддас сббсддссад 300

ддсассаадд бддадабсаа дсдбасддбд дссдсбссса дсдбдббсаб сббссссссс 360

адсдасдадс адсбдаадбс сддсассдсс адсдбсдбдб дссбдсбдаа саасббсбас 420

ссссдддадд ссааддбдса дбддааддбд дасаасдссс бдсададсдд саасадссад 480

дааадсдбса ссдадсадда садсааддас бссассбаса дссбдадсад сасссбдасс 540

сбдадсаадд ссдасбасда даадсасаад дбдбасдссб дсдаадбдас ссассадддс 600

сбдбссадсс ссдбдассаа дадсббсаас сддддсдадб дсадсддсдд аддсбсбдда 660

ддсддсбсбд ааддсддадд аадбдадддс ддаддсбсад ааддсддсдд аадсдааддб 720

- 177 030147

ддсддсЬсЬд	дсддсддаЬс	сддсдаддЪд	садсЬддЬсд	адЬссддсдд	аддссЬдд+д	780
садсс+ддсд	дсадссЪдад	асЬдадсЬдс	дссдссадсд	дсЬасадсН	сассддсЬас	840
асса+даасЪ	дддЪссддса	ддсЬссЪддс	аадддссЪсд	аабдддЬддс	ссЪдаЬсаас	900
ссс+асаадд	дсдбдадсас	с+асаассад	аадНсаадд	ассддНсас	саЪсадсдЬд	960
дасаададса	адаасассдс	сба+с+дсад	аЬдаасадсс	Ъдсдддссда	ддасассдсс	1020
д+дЪасЪасЪ	дсдссадаад	сддсЬасЬас	ддсдасадсд	асЬддбасЫ;	сдасдЬдЬдд	1080
ддссадддса	сас+дд+сас	сдСд+ссадс	дс+адсасса	адддссссЪс	сд+д+Ъсссс	1140
с+ддссссса	дсадсаадад	сассадсддс	ддсасадссд	сссЪсддс+д	сс+дд+саад	1200
дасЬасЪЪсс	ссдадсссдЬ	дассдЪдЬсс	Ьддаасадсд	дадсссрдас	сЪссддсдЬд	1260
сасассНсс	ссдссдЪдсЬ	дсададсадс	ддссЬдЬаса	дссЬдЬссад	сдЬддЬсасс	1320
д+дсссЬсса	дсадссСддд	сасссадасс	СасаЬсЬдса	асдЪдаасса	саадсссадс	1380
аа+ассаадд	Ьддасаадаа	дд+ддадссс	аададс+дсд	асддсддбдд	ЬддсЬссдда	1440
ддсддЬддаЪ	сЬсаддЬдса	дсЬддЬдсад	ЪсЬддддсЬд	аддЪдаадаа	дссЬддд'Ьсс	1500
ЪсддЬдаадд	ЬсЬссЬдсаа	ддссЪсЪддЬ	НсасаНсз	сЪдасЬасаа	даЬасасЬдд	1560
дЬдсдасадд	ссссЬддаса	адддс+сдад	ЬддаЪдддаЬ	зШсаассс	ЪаасадсддЬ	1620
ЪаЪадЪассЬ	асдсасадаа	дЬЪссадддс	адддЪсасса	Нассдсдда	сааа+ссасд	1680
адсасадссЪ	асаЬддадсЪ	дадсадссЬд	ада+сСдадд	асасддссдЬ	дЪаЪЬасЪд-Ь	1740
дсдадасЬаЬ	ссссаддсдд	НасОаОдН	аЬддаЬдссЬ	ддддссаадд	дассассдЬд	1800
ассдЬс+ссЪ	садс+адсас	саадддсссс	ЬссдЪдЬЬсс	сссЬддсссс	садсадсаад	1860
адсассадсд	дсддсасадс	сдсРсЪдддс	ЪдссЪддЪса	аддасЪасЫз	ссссдадссс	1920
дЬдассдЬдЪ	ссЬддаасад	сддадсссЪд	ассЬссддсд	ЬдсасассН	ссссдссдЪд	1980
сЬдсададН	сЬддссЬд+а	ЬадссЪдадс	адсд+дд+са	ссд+дсс+Ьс	бадсадсс+д	2040
ддсасссада	сс+аса+с+д	саасдЬдаас	сасаадссса	дсаасассаа	ддЪддасаад	2100
ааддЪддадс	ссаададсЬд	сдасаааасЪ	сасасаЪдсс	сассдЬдссс	адсассЪдаа	2160
дсЬдсадддд	дассдЬсадЪ	с + + 00601:1:0	сссссаааас	ссааддасас	сс+саЪдаЪс	2220
Ьсссддассс	сСдадд+сас	а+дсдЬддЬд	дЪддасдЬда	дссасдаада	сссЬдаддбс	2280

- 178 030147

аадДДсаасД	ддДасдДдда	сддсдДддад	дДдсаДааДд	ссаадасааа	дссдсдддад	2340
дадсадДаса	асадсасдДа	ссдДдДддДс	адсдДссДса	ссдДссДдса	ссаддасДдд	2400
сДдааДддса	аддадДасаа	дДдсааддДс	Дссаасааад	сссДсддсдс	ссссаДсдад	24 60
аааассаДсД	ссааадссаа	адддсадссс	сдадаассас	аддДдДасас	ссДдссссса	2520
ДдссдддаДд	адсДдассаа	даассаддДс	адссДдДддД	дссДддДсаа	аддсДДсДаД	2580
сссадсдаса	ДсдссдДдда	дДдддададс	ааДдддсадс	сддадаасаа	сДасаадасс	2640
асдссДсссд	ДдсДддасДс	сдасддсДсс	ДДсДДссДсД	асадсаадсД	сассдДддас	2700
аададсаддД	ддсадсаддд	даасдДсДДс	ДсаДдсДссд	ДдаДдсаДда	ддсДсДдсас	2760
аассасДаса	сдсадаадад	ссДсДсссДд	ДсДссдддДа	ааДда		2805

<210> 55

<2Ы> 694

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗГ2 (зсГаЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 55

СЬи Не У7а1 Ьеи ТЬг СЬп Зег Рго СЬу ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу 15 10 15

СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег УаЬ ТЬг Зег Зег 20 25 30

Туг Ьеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи 35 40 45

Ые Азп УаЬ СЬу Зег Агд Агд АЬа ТЬг СЬу Не Рго Азр Агд РЬе Зег 50 55 60

СЬу Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Агд Ьеи СЬи 65 70 75 80

Рго СЬи Азр РЬе АЬа \/а1 Туг Туг Суз СЬп СЬп СЬу Ые МеД Ьеи Рго 85 90 95

179 030147

Рго ТЬг РЬе 61у Е1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а 100 105 110

А1а Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр Е1и Е1п Ьеи Ьуз Зег 115 120 125

С1у ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд Е1и 130 135 140

А1а Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег 145 150 155 160

С1п С1и Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи 165 170 175

Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Шз Ьуз Уа1 180 185 190

Туг А1а Суз С1и Уа1 ТЬг Шз С1п Е1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз 195 200 205

Зег РЬе Азп Агд С1у С1и Суз С1у С1у С1у Е1у Зег С1у С1у С1у Е1у 210 215 220

Зег 61у С1у С1у 61у Зег С1у С1у 61у О1у Зег С1у 61у С1у С1у Зег 225 230 235 240

С1у Е1у Е1у С1у Зег Е1у С1у С1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у Е1у 245 250 255

С1у Ьеи Уа1 Е1п Рго Е1у С1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 260 265 270

Е1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг А1а МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго 275 280 285

С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 Зег А1а 11е Зег С1у Зег Б1у С1у Зег 290 295 300

180

030147

ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр 305 310 315 320

Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг Ьеи С1п Мер Азп Зег Ьеи Агд А1а СЬи 325 330 335

Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз А1а Ьуз СЬу Тгр РЬе С1у СЬу РЬе Азп 340 345 350

Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз 355 360 365

С1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у 370 375 380

С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго 385 390 395 400

Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Низ ТЬг 405 410 415

РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 420 425 430

Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп 435 440 445

Уа1 Азп Низ Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго 450 455 460

Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и 465 470 475 480

А1а А1а С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр 485 490 495

ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр 500 505 510

- 181 030147

<210> 56

<211> 2085

<212> ДНК

182 030147

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗГ2 (зсГаЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 56

дадаЕсдЕдс Едасасадад ссссддаасс сЕдЕсЕсЕда дсссЕддсда аададссасс 60

сЕдадсЕдЕа дадссадсса дадсдЕдасс адсадсЕасс ЕддссЕддЕа Есадсадаад 120

ссЕддасадд сссссадасЕ дсЕдаЕсааЕ дЕдддсадса дасдддссас сддсаЕсссЕ 180

даЕадаЕЕЕЕ сЕддсадсдд садсддсасс дасЕЕсассс ЕдассаЕсад садасЕддаа 240

сссдаддасЕ ЕсдссдЕдЕа сЕасЕдссад садддсаЕса ЕдсЕдссссс ЕасаЕЕЕддс 300

садддсасса аддЕддаааЕ саадсдЕасд дЕддссдсЕс ссадсдЕдЕЕ саЕсЕЕссса 360

ссЕадсдасд адсадсЕдаа дЕсЕддсаса дссадсдЕсд ЕдЕдссЕдсЕ даасаасЕЕс 420

Еасссссдсд аддссааддЕ дсадЕддаад дЕддасаасд сссЕдсадад сддсаасадс 480

саддааадсд Есассдадса ддасадсаад дасЕссассЕ асадссЕдад садсасссЕд 540

асссЕдадса аддссдасЕа сдадаадсас ааддЕдЕасд ссЕдсдаадЕ дасссассад 600

ддссЕдЕсЕа дссссдЕдас саададсЕЕс аассддддад ааЕдЕддсдд сддаддаЕсЕ 660

ддЕддсддад дЕадЕддЕдд ЕддЕддаЕсЕ ддсддаддсд даЕссддсдд аддЕддаадс 720

ддаддЕддЕд даадЕддддд адаадЕдсад сЕдсЕддааа дЕддсддадд ссЕддЕдсад 780

ссЕддсддаЕ сЕсЕдадасЕ дадсЕдЕдсс дссадсддсЕ ЕсассЕЕЕад садсЕасдсс 840

аЕдадсЕддд Ессдасаддс сссЕддааад ддасЕддааЕ дддЕдЕссдс саЕсЕсЕддс 900

ЕсЕддсддса дсассЕасЕа сдссдаЕадс дЕдаадддсс ддЕЕсассаЕ садссдддас 960

аасадсаада асасссЕдЕа ссЕдсадаЕд аасадссЕдс дддссдадда ЕассдссдЕд 1020

ЕаЕЕаЕЕдсд ссаадддаЕд дЕЕсддсддс ЕЕсаасЕаЕЕ ддддссаддд аасссЕддЕс 1080

ассдЕдЕсЕа дЕдсЕадсас саадддсссЕ адсдЕдЕЕсс сЕсЕддсссс Еадсадсаад 1140

адсасаадЕд даддаасадс сдсссЕдддс ЕдссЕддЕса аддасЕасЕЕ ссссдадссс 1200

дЕдассдЕдЕ ссЕддааЕЕс ЕддсдсссЕд асаадсддсд ЕдсасасаЕЕ ЕссадссдЕд 1260

сЕдсададса дсддссЕдЕа сЕсЕсЕдадс адсдЕсдЕда ссдЕдсссЕс ЕадсЕсЕсЕд 1320

ддсасссада ссЕасаЕсЕд саасдЕдаас сасаадссса дсаасассаа адЕддасаад 1380

- 183 030147

ааддЬддаас	ссаададсЬд	сдасаадасс	сасассЬдЬс	ссссНдссс	ЬдссссЬдаа	1440
дсЬдсЬддЬд	дсссЫссдЬ	дЫссЬдЫс	сссссааадс	ссааддасас	ссЬдаЬдаЬс	1500
адссддассс	ссдаадЬдас	сЬдсдЬддЬд	дЬсдаЬдЬдЬ	сссасдадда	сссЬдаадЬд	1560
аадЬЬсааН	ддЬасдЬдда	сддсдЬддаа	дЬдсасааЬд	ссаадассаа	дссдсдддад	1620
дадсадЬаса	асадсасдЬа	ссдЬдЬддЬс	адсдЬссЬса	ссдЬссЬдса	ссаддасЬдд	1680
сЬдааЬддса	аддадЬасаа	дЬдсааддЬс	Ьссаасааад	сссЬсддсдс	ссссаЬсдад	1740
аааассаЬсЬ	ссааадссаа	адддсадссс	сдадаассас	аддЬдЬасас	ссЬдссссса	1800
ЬдссдддаЬд	адсЬдассаа	даассаддЬс	адссЬдЬддЬ	дссЬддЬсаа	аддсЫсЬаЬ	1860
сссадсдаса	ЬсдссдЬдда	дЬдддададс	ааЬдддсадс	сддадаасаа	сЬасаадасс	1920
асдссЬсссд	ЬдсЬддасЪс	сдасддсЬсс	НсЫссЬсЬ	асадсаадсЬ	сассдЬддас	1980
аададсаддЬ	ддсадсаддд	даасдЬсПс	ЬсаЬдсЬссд	ЬдаЬдсаЬда	ддсЬсЬдсас	2040
аассасЬаса	сдсадаадад	ссЬсЬсссЬд	ЬсЬссдддЬа	ааЬаа		2085

<210> 57

<211> 931

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> А/9 (зсГаЬ)-ЗГ2 (УН-СН1)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 57

Азр 1

11е

С1п

МеЬ

ТЬг 5

Е1п

Зег

Рго

Зег

Зег 10

Ьеи

Зег

А1а

Зег

А/а1 15

Е1у

Азр

Агд

Уа1

ТЬг 20

11е

ТЬг

Суз

Агд

А1а 25

Зег

Е1п

Азр

11е

Агд 30

Азп

Туг

Ьеи

Азп

Тгр 35

Туг

С1п

Е1п

Ьуз

Рго 40

Е1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз 45

Ьеи

11е

Туг

Туг 50

ТЬг

Зег

Агд

Ьеи

С1и 55

Зег

С1у

А/а1

Рго

Зег 60

Агд

РЬе

Зег

Е1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

Туг

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Зег

Ьеи

С1п

Рго

184

030147

- 185 030147

- 186 495

030147

485

490

С1п Рго С1у С1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг 500 505 510

РЬе Зег Зег Туг А1а Мер Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у 515 520 525

Ьеи С1и Тгр Уа1 Зег А1а 11е Зег С1у Зег С1у С1у Зег ТЬг Туг Туг 530 535 540

А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз 545 550 555 560

Азп ТЬг Ьеи Туг Ьеи С1п Мер Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а 565 570 575

Уа1 Туг Туг Суз А1а Ьуз С1у Тгр РЬе С1у С1у РЬе Азп Туг Тгр С1у 580 585 590

С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег 595 600 605

Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а 610 615 620

А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 625 630 635 640

Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а 645 650 655

Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 660 665 670

Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг Не Суз Азп Уа1 Азп Шз 675 680 685

Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз

- 187 030147

- 188 030147

900 905 910

Нгз Е1и А1а Ьеи Шз Азп Нгз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег 915 920 925

Рго С1у Ьуз 930

<210> 58 <211> 2796 <212> ДНК <213> Искусственная :	последовательность
<220> <223> ν9	(зсГаЬ)-ЗР2	(УН-СН1)-Гс(«выступ»)	Р329С ЬАЬА
<400> 58 дасаРссада	Рдасссадад	ссссРсРадс	сРдадсдсса	дсдрдддсда	сададРдасс	60
аРсассРдРс	дддссадсса	ддасаРсада	аасРассРда	асРддРаРса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсРдсР	даРсРасРас	ассРсРадас	Рддааадсдд	сдрдсссадс	180
сддРРРадсд	дсадсддсРс	сддсассдас	РасасссРда	ссаРсадсад	ссРдсадссс	240
даддасРРсд	ссассРасРа	сРдссадсад	ддсаасасас	РссссРддас	сРРсддссад	300
ддсассаадд	РддадаРсаа	дсдрасддрд	дссдсРссса	дсдРдРРсаР	сРРссссссс	360
адсдасдадс	адсРдаадРс	сддсассдсс	адсдрсдрдр	дссРдсРдаа	саасРРсРас	420
ссссдддадд	ссааддрдса	дрддааддрд	дасаасдссс	Рдсададсдд	саасадссад	480
дааадсдРса	ссдадсадда	садсааддас	РссассРаса	дссРдадсад	сасссРдасс	540
срдадсаадд	ссдасРасда	даадсасаад	дрдрасдсср	дсдаадрдас	ссассадддс	600
сРдРссадсс	ссдрдассаа	дадсРРсаас	сддддсдадр	дсадсддсдд	аддсРсРдда	660
ддсддсРсРд	ааддсддадд	аадрдадддс	ддаддсРсад	ааддсддсдд	аадсдааддр	720
ддсддсрсрд	дсддсддаРс	сддсдаддРд	садсРддРсд	адРссддсдд	аддссРддРд	780
садссРддсд	дсадссРдад	асРдадсРдс	дссдссадсд	дсРасадсРР	сассддсРас	840
ассаРдаасР	дддрссддса	ддсРссРддс	аадддссРсд	аардддрддс	ссРдаРсаас	900
сссРасаадд	дсдРдадсас	сРасаассад	аадРРсаадд	ассддРРсас	саРсадсдРд	960

- 189 030147

дасаададса	адаасассдс	сЪаЕсЪдсад	аЪдаасадсс	Ъдсдддссда	ддасассдсс	1020
д+дГасГасЬ	дсдссадаад	сддс+асЬас	ддсдасадсд	асЪддСасН	сдасдЬдЬдд	1080
ддссадддса	сасЪддЬсас	сдЬдЕссадс	дсЬадсасса	адддссссЬс	сдЬдИсссс	1140
сЪддссссса	дсадсаадад	сассадсддс	ддсасадссд	ссс+сддсЬд	ссЬддЕсаад	1200
дасЬасНсс	ссдадсссд!	дассдЪдЪсс	Ъддаасадсд	дадсссЪдас	сЪссддсдЪд	1260
сасассЧсс	ссдссдЕдс!	дсададсадс	ддссГдЬаса	дссЬдЬссад	сдЬддЪсасс	1320
д+дсссСсса	дсадссбддд	сасссадасс	ЬасаЪИдса	асд+даасса	саадсссадс	1380
аа+ассаадд	Ьддасаадаа	дд+ддадссс	аададс+дсд	асддсддЬдд	Ьддс+ссдда	14 4 0
ддаддаддса	дсдадд+дса	дсЬдсЬддаа	ЕсЬддаддсд	дссЬддЕдса	дссЕддсддс	1500
адссЬдадас	ЪдОсЮдсдс	сдссадсддс	НсассНса	дсадсЬасдс	саЪдадсЬдд	1560
дЬссдасадд	сЪссЪддсаа	дддасЪддаа	ЬдддЪдЬссд	ссаЬсЬссдд	садсддаддс	1620
адсасс+асЪ	асдссдасад	сдЬдаадддс	сддНсасса	Ъсадсадада	саасадсаад	1680
аасасссЪдЕ	ассЪдсадаЕ	даасадссЕд	сдддссдадд	аГассдссдЬ	дЬаНаНдс	1740
дссаадддаЕ	ддНсддсдд	сНсаасЪас	Ьддддссадд	даасссЕддЬ	дасадЕдЬсс	1800
адсдссадса	ссаадддссс	сЪссд-Ьд+Н	ссЬсЬддссс	ссадсадсаа	дадсасНН	1860
ддсддаасад	ссдсссЕддд	с+дсс+дд+д	ааадаИаИ	Ъссссдадсс	сдЬдассдЬд	1920
ЬссЪддаасЕ	сЪддсдсссЪ	дассадсддс	дЬдсасассЬ	иссадссд!	дсЬдсададс	1980
адсддссГд!	ас+сссЬдад	садсдЬддЬд	асадСдсссЕ	ссадсадссЬ	дддсасссад	2040
ассЬасаЕсЪ	дсаасдЬдаа	ссасаадссс	адсаасасса	аадЬддасаа	дааддЬддаа	2100
сссаададсЕ	дсдасаааас	ЬсасасаЪдс	ссассдЬдсс	садсассЬда	адс+дсаддд	2160
ддассд+сад	Ь сП с с! сП	ссссссаааа	сссааддаса	сссЬсаЕдаЪ	с+сссддасс	2220
ссЬдаддЪса	саЪдсдЬдд1:	ддЪддасдЬд	адссасдаад	асссЬдаддЪ	саадНсаас	2280
Ъдд+асдЪдд	асддсдЬдда	ддЬдсаЬааЬ	дссаадасаа	адссдсддда	ддадсадЪас	2340
аасадсасдЬ	ассд+дЬддЬ	садсдНИс	ассдЬсс+дс	ассаддаИд	дс+дааЬддс	2400
ааддадЬаса	адЬдсааддЬ	сЬссаасааа	дсссЬсддсд	ссссса+сда	даааасса+с	2460
Ьссааадсса	аадддсадсс	ссдадаасса	саддЬдЬаса	сссЬдссссс	аЪдссддда!	2520

- 190 030147

дадсЬдасса	адаассаддЬ	садссЬдЬдд	ЬдссЬддЬса	ааддсЬЬсЬа	Ьсссадсдас	2580
аЬсдссдЬдд	адЬдддадад	сааЬдддсад	ссддадааса	асЬасаадас	сасдссЬссс	2640
дЬдсЬддасЬ	ссдасддсЬс	сЬЬсЫссЬс	Ьасадсаадс	ЬсассдЬдда	саададсадд	2700
Ьддсадсадд	ддаасдЬсЬЬ	сЬсаЬдсЬсс	дЬдаЬдсаЬд	аддсЬсЬдса	саассасЬас	2760
асдсадаада	дссЬсЬсссЬ	дЬсЬссдддЬ	аааЬда			2796

<210>	59
<211>	447
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	ЗЕ2 (УН-СНЬ)-Рс(«впадина») Р329С	ЬАЬА
<400>	59
СЬи УаЬ	СЬп Ьеи Ьеи СЬи Зег СЬу СЬу СЬу	Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу

15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

АЬа МеЬ Зег Тгр А7а1 Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ 35 40 45

Зег АЬа Ые Зег СЬу Зег СЬу СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа А7а1 Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа Ьуз СЬу Тгр РЬе СЬу СЬу РЬе Азп Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи 100 105 110

УаЬ ТЬг А7а1 Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз СЬу Рго Зег А7а1 РЬе Рго Ьеи 115 120 125

191

030147

А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег Е1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи Е1у Суз 130 135 140

Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 61и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег 145 150 155 160

Е1у А1а Ьеи ТЬг Зег Е1у Уа1 ΗΪ5 ТЬг РЬе Рго А1а 27а1 Ьеи Е1п Зег 165 170 175

Зег Е1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег 180 185 190

Ьеи Е1у ТЬг Е1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Шз Ьуз Рго Зег Азп 195 200 205

ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 Е1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Шз 210 215 220

ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Е1и А1а А1а Е1у Е1у Рго Зег Уа1 225 230 235 240

РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер 11е Зег Агд ТЬг 245 250 255

Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Шз Е1и Азр Рго С1и 260 265 270

\7а1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр Е1у Уа1 С1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз 275 280 285

ТЬг Ьуз Рго Агд С1и Е1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег 290 295 300

Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз Е1и Туг Ьуз 305 310 315 320

Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Е1у А1а Рго 11е Е1и Ьуз ТЬг 11е 325 330 335

192 030147

Зег Ьуз А1а Ьуз Е1у Е1п Рго Агд Е1и Рго С1п Уа1 Суз ТЬг Ьеи Рго 340 345 350

Рго Зег Агд Азр Е1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп Е1п Уа1 Зег Ьеи Зег Суз А1а 355 360 365

Уа1 Ьуз Е1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 Е1и Тгр Е1и Зег Азп 370 375 380

С1у С1п Рго Е1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег 385 390 395 400

Азр Е1у Зег РЬе РЬе Ьеи Уа1 Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд 405 410 415

Тгр С1п Е1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Ηίδ Е1и А1а Ьеи 420 425 430

Ηίδ Азп Низ Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго Е1у Ьуз 435 440 445

<210> 60

<211> 1344

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗГ2 (УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329Е ЬАЬА

<400> 60

даддЬдсадс	ЬдсЬддааЬс	Ьддаддсддс	сЬддЬдсадс	сЬддсддсад	ссЬдадасЬд	60
ЬсЬЬдсдссд	ссадсддсЬЬ	сассЬЬсадс	адсЬасдсса	ЬдадсЬдддЬ	ссдасаддсЬ	120
ссЬддсаадд	дасЬддааЬд	ддЬдЬссдсс	аЬсЬссддса	дсддаддсад	сассЬасЬас	180
дссдасадсд	Ьдаадддссд	дЬЬсассаЬс	адсададаса	асадсаадаа	сасссЬдЬас	240
сЬдсадаЬда	асадссЬдсд	ддссдаддаЬ	ассдссдЬдЬ	аЬЬаЬЬдсдс	саадддаЬдд	300
ЬЬсддсддсЬ	ЬсаасЬасЬд	дддссаддда	асссЬддЬда	садЬдЬссад	сдссадсасс	360
аадддссссЬ	ссдЬдЬЬЬсс	ЬсЬддссссс	адсадсаада	дсассЬсЬдд	сддаасадсс	420

- 193 030147

дсссЕдддсЕ дссЕддЕдаа адасЕасЕЕс сссдадсссд ЕдассдЕдЕс сЕддаасЕсЕ 480

ддсдсссЕда ссадсддсдЕ дсасассЕЕЕ ссадссдЕдс Едсададсад сддссЕдЕас 540

ЕсссЕдадса дсдЕддЕдас адЕдсссЕсс адсадссЕдд дсасссадас сЕасаЕсЕдс 600

аасдЕдаасс асаадсссад саасассааа дЕддасаада аддЕддаасс саададсЕдс 660

дасаааасЕс асасаЕдссс ассдЕдссса дсассЕдаад сЕдсаддддд ассдЕсадЕс 720

ЕЕссЕсЕЕсс ссссаааасс сааддасасс сЕсаЕдаЕсЕ сссддасссс ЕдаддЕсаса 780

ЕдсдЕддЕдд ЕддасдЕдад ссасдаадас ссЕдаддЕса адЕЕсаасЕд дЕасдЕддас 840

ддсдЕддадд ЕдсаЕааЕдс саадасааад ссдсдддадд адсадЕасаа садсасдЕас 900

сдЕдЕддЕса дсдЕссЕсас сдЕссЕдсас саддасЕддс ЕдааЕддсаа ддадЕасаад 960

ЕдсааддЕсЕ ссаасааадс ссЕсддсдсс сссаЕсдада ааассаЕсЕс сааадссааа 1020

дддсадсссс дадаассаса ддЕдЕдсасс сЕдсссссаЕ сссдддаЕда дсЕдассаад 1080

аассаддЕса дссЕсЕсдЕд сдсадЕсааа ддсЕЕсЕаЕс ссадсдасаЕ сдссдЕддад 1140

Едддададса аЕдддсадсс ддадаасаас Еасаадасса сдссЕсссдЕ дсЕддасЕсс 1200

дасддсЕссЕ ЕсЕЕссЕсдЕ дадсаадсЕс ассдЕддаса ададсаддЕд дсадсадддд 1260

аасдЕсЕЕсЕ саЕдсЕссдЕ даЕдсаЕдад дсЕсЕдсаса ассасЕасас дсадаададс 1320

сЕсЕсссЕдЕ сЕссдддЕаа аЕда 1344

<210> 61

<211> 215

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗГ2 (УЬ-СЬ)

<400> 61

С1и 11е Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго СЬу ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у

15 10 15

СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Зег Уа1 ТЬг Зег Зег 20 25 30

Туг Ьеи АЬа Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго 61у С1п АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи

194 030147

<210> 62

<211> 648

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

- 195

030147

<220>
<223> ЗГ2	(νι,-си
<400> 62 дадаДсдДдс	ДдасссадДс	Дсссддсасс	сДдадссДда	дсссДддсда	дададссасс	60
сДдадсДдса	дадссадсса	дадсдДдасс	адсадсДасс	ДддссДддДа	Дсадсадаад	120
сссддссадд	сссссадасД	дсДдаДсаас	дДдддсадса	дасдддссас	сддсаДсссс	180
даДадаДДса	дсддсадсдд	сДссддсасс	дасДДсассс	ДдассаДсад	ссддсДддаа	240
сссдаддасД	ДсдссдДдДа	сДасДдссад	садддсаДса	ДдсДдссссс	сассДДсддс	300
садддсасса	аддДддаааД	саадсддасс	дДддссдсДс	ссадсдДдДД	саДсДДссса	360
сссадсдасд	адсадсДдаа	дДссддсаса	дссадсдДдд	ДдДдссДдсД	даасаасДДс	420
Дасссссдсд	аддссааддД	дсадДддаад	дДддасаасд	сссДдсадад	сддсаасадс	480
саддааДссд	Ддассдадса	ддасадсаад	дасДссассД	асадссДдад	садсасссДд	540
асссДдадса	аддссдасДа	сдадаадсас	ааддДдДасд	ссДдсдаадД	дасссассад	600
ддссДдДсса	дссссдДдас	саададсЕЕс	аассддддсд	адДдсДда		648

<210> 63

<211> 673

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> <400>	СН1А1А (УН-СН1)63	ν9	(УЬ-СН1)-Гс(«выступ»)	ι Р329С	ЬАЬА
Е1п Уа1 1	61п Ьеи Уа1 С1п 5	Зег	С1у А1а С1и Уа1 Ьуз 10	Ьуз Рго	С1у А1а 15
Зег Уа1	Ьуз Уа1 Зег Суз 20	Ьуз	А1а Зег С1у Туг ТЬг 25	РЬе ТЬг 30	С1и РЬе
С1у МеД	Азп Тгр Уа1 Агд 35	С1п	А1а Рго 61у С1п С1у 40	Ьеи С1и 45	Тгр МеД
С1у Тгр 50	11е Азп ТЬг Ьуз	ТЬг 55	С1у С1и А1а ТЬг Туг 60	Уа1 С1и	С1и РЬе

196 030147

Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг РЬе ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 75 80

МеЕ С1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд Тгр Азр РЬе А1а Туг Туг Уа1 С1и А1а МеЕ Азр Туг Тгр С1у 100 105 110

С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег 115 120 125

Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а 130 135 140

А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 145 150 155 160

Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег 61у Уа1 НЬз ТЬг РЬе Рго А1а 165 170 175

Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 180 185 190

Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Ηίδ 195 200 205

Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз 210 215 220

С1у С1у 51у С1у Зег С1у 51у С1у С1у Зег Азр 11е С1п МеЕ ТЬг С1п 225 230 235 240

Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг 245 250 255

Суз Агд А1а Зег С1п Азр 11е Агд Азп Туг Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п 260 265 270

- 197 030147

Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не Туг Туг ТЬг Зег Агд Ьеи 275 280 285

СЬи Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр 290 295 300

Туг ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг 305 310 315 320

Туг Суз С1п С1п С1у Азп ТЬг Ьеи Рго Тгр ТЬг РЬе С1у С1п СЬу ТЬг 325 330 335

Ьуз Уа1 С1и Не Ьуз Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе 340 345 350

Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи 355 360 365

СЬу Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго УаЬ ТЬг Уа1 Зег Тгр 370 375 380

Азп Зег СЬу А1а Ьеи ТЬг Зег СЬу Уа1 НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ Ьеи 385 390 395 400

СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго Зег 405 410 415

Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг Туг Не Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз Рго 420 425 430

Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Ьуз УаЬ С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз 435 440 445

ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго СЬи А1а АЬа СЬу СЬу Рго 450 455 460

Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ Не Зег 465 470 475 480

- 198 030147

- 199 030147

<210> 64

<211> 2022

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А (УН-СН1)- У9 (УЬ-СН1)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 64

саддбдсадс	бддбдсадбс	бддсдссдаа	дбдаадааас	сбддсдссад	сдбдааддбд	60
бссбдсаадд	ссадсддсба	сассббсасс	дадббсддса	бдаасбдддб	ссдасаддсс	120
ссбддасадд	дссбддаабд	дабдддсбдд	абсаасасса	адассддсда	ддссассбас	180
дбддаададб	бсаадддсад	адбдассббс	ассассдаса	ссадсассад	сассдссбас	240
абддаасбдс	ддадссбдад	аадсдасдас	ассдссдбдб	асбасбдсдс	садабдддас	300
ббсдссбасб	абдбддаадс	сабддасбас	ьддддссадд	дсассассдб	дассдбдбсб	360
адбдсбадса	сааадддссс	садсдбдббс	ссбсбддссс	сбадсадсаа	дадсасабсб	420
ддсддаасад	ссдсссбддд	сбдссбддбс	ааддасбасб	ббсссдадсс	сдбдасадбд	480
бссбддаасб	сбддсдсссб	дасаадсддс	дбдсасассб	ббссадссдб	дсбдсададс	540
адсддссбдб	асбсбсбдад	садсдбддбс	ассдбдссба	дсбсбадссб	дддсасссад	600
ассбасабсб	дсаасдбдаа	ссасаадссс	адсаасасса	аддбддасаа	дааддбддаа	660
сссаададсб	дсддсддадд	сддабссдда	ддсддаддаб	сбдабабсса	дабдасссад	720
адссссадса	дссбдбсбдс	садсдбдддс	дасададбда	ссаббассбд	сададссадс	780
саддасабса	дааасбассб	даасбддбаб	садсадаадс	ссддсааддс	ссссаадсбд	840
сбдабсбасб	асассадсад	асбддаабсс	ддсдбдссса	дсадаббббс	сддсадсддс	900
бсбддсассд	асбасасссб	дасаабсадс	адссбдсадс	ссдаддасбб	сдссассбас	960
басбдссадс	адддсаасас	ссбдсссбдд	асабббддас	адддсасааа	ддбддааабс	1020
аададсадсд	ссбссассаа	дддсссббсс	дбдбббссас	бддсссссад	сбсбаададс	1080
ассадсддад	даасадсбдс	бсбдддабдб	сбсдбдаадд	аббасббссс	сдаассбдбд	1140
ассдбсадсб	ддаасадсдд	сдсбсбдаса	бсбддддбдс	асасаббссс	сдсбдбссбд	1200
садбссбссд	дссбдбасад	бсбдбссадс	дбсдбдасад	бдссбадсад	сбсссбддда	1260

- 200 030147

асасадасаЬ	аЬаЬсЬдЬаа	ЬдЬсааЬсас	аадсссЬсЬа	аЬассааддЬ	сдасаааааа	1320
дЬсдадссса	адЬссЬдсда	саадасссас	ассЬдЬсссс	сНдЬссЬдс	сссЬдаадсЬ	1380
дсЬддсддсс	сНсЬдЬдН	ссЬдЬЬсссс	ссааадссса	аддасассс!	даЬдаЬсадс	1440
сддасссссд	аадЬдассЬд	сдЬддЬддЬд	даЬдЬдЬссс	асдаддассс	ЬдаадЬдаад	1500
ЬЬсааЬЬддЬ	асдЬддасдд	сдЬддаадЬд	сасаасдсса	адасааадсс	дсдддаддад	1560
садЬасааса	дсасдЬассд	ЬдЬддЬсадс	дЬссЬсассд	ЬссЬдсасса	ддасЬддсЬд	1620
ааЬддсаадд	адЬасаадЬд	сааддЬсЬсс	аасааадссс	Ьсддсдсссс	саЬсдадааа	1680
ассаЬсЬсса	аадссааадд	дсадссссда	даассасадд	ЬдЬасасссЬ	дсссссаЬдс	1740
сдддаЬдадс	Ьдассаадаа	ссаддЬсадс	сЬдЬддЬдсс	ЬддЬсааадд	сЬЬсЬаЬссс	1800
адсдасаЬсд	ссдЬддадЬд	ддададсааЬ	дддсадссдд	адаасаасЬа	саадассасд	1860
ссЬсссдЬдс	ЬддасЬссда	сддсЬссЬЬс	ЬЬссЬсЬаса	дсаадсЬсас	сдЬддасаад	1920
адсаддЬддс	адсаддддаа	сдЪсЫзсЪса	ЬдсЬссдЬда	ЬдсаЬдаддс	ЪсЬдсасаас	1980
сасЬасасдс	адаададссЬ	сЬсссЬдЬсЬ	ссдддЬаааЬ	да		2022

<210> 65

<211> 451

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А (УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 65

С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у А1а 15 10 15

Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг С1и РЬе 20 25 30

С1у МеЬ Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ 35 40 45

С1у Тгр 11е Азп ТЬг Ьуз ТЬг С1у С1и А1а ТЬг Туг Уа1 С1и С1и РЬе 50 55 60

201

030147

- 202 030147

СЬи Азр Рго СЬи УаЬ Ьуз РЬе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ 275 280 285

НЬз Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг 290 295 300

Агд УаЬ УаЬ Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу 305 310 315 320

Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи СЬу АЬа Рго Ые 325 330 335

СЬи Ьуз ТЬг Ые Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ 340 345 350

Суз ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр СЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег 355 360 365

Ьеи Зег Суз АЬа УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Ые АЬа УаЬ СЬи 370 375 380

Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго 385 390 395 400

УаЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи УаЬ Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ 405 410 415

Азр Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеД 420 425 430

НЬз СЬи АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег 435 440 445

Рго СЬу Ьуз 450

<210> 66 <211> 1356

<212> ДНК

- 203 030147

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А (УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 66

саддбдсадс	бддбдсадбс	бддсдссдаа	дбдаадааас	сбддадсбад	бдбдааддбд	60
бссбдсаадд	ссадсддсба	сассббсасс	дадббсддса	бдаасбдддб	ссдасаддсб	120
ссаддссадд	дссбсдаабд	дабдддсбдд	абсаасасса	адассддсда	ддссассбас	180
дбддаададб	бсаадддсад	адбдассббс	ассасддаса	ссадсассад	сассдссбас	240
абддаасбдс	ддадссбдад	аадсдасдас	ассдссдбдб	асбасбдсдс	садабдддас	300
ббсдссбабб	асдбддаадс	сабддасбас	бддддссадд	дсассассдб	дассдбдбсб	360
адсдсбадса	ссаадддссс	сбссдбдббс	ссссбддссс	ссадсадсаа	дадсассадс	420
ддсддсасад	ссдсбсбддд	сбдссбддбс	ааддасбасб	бссссдадсс	сдбдассдбд	480
бссбддааса	дсддадсссб	дассбссддс	дбдсасассб	бссссдссдб	дсбдсададб	540
бсбддссбдб	абадссбдад	садсдбддбс	ассдбдссбб	сбадсадссб	дддсасссад	600
ассбасабсб	дсаасдбдаа	ссасаадссс	адсаасасса	аддбддасаа	дааддбддад	660
сссаададсб	дсдасаааас	бсасасабдс	ссассдбдсс	садсассбда	адсбдсаддд	720
ддассдбсад	бсббссбсбб	ссссссаааа	сссааддаса	сссбсабдаб	сбсссддасс	780
ссбдаддбса	сабдсдбддб	ддбддасдбд	адссасдаад	асссбдаддб	саадббсаас	840
бддбасдбдд	асддсдбдда	ддбдсабааб	дссаадасаа	адссдсддда	ддадсадбас	900
аасадсасдб	ассдбдбддб	садсдбссбс	ассдбссбдс	ассаддасбд	дсбдаабддс	960
ааддадбаса	адбдсааддб	сбссаасааа	дсссбсддсд	сссссабсда	даааассабс	1020
бссааадсса	аадддсадсс	ссдадаасса	саддбдбдса	сссбдссссс	абсссдддаб	1080
дадсбдасса	адаассаддб	садссбсбсд	бдсдсадбса	ааддсббсба	бсссадсдас	1140
абсдссдбдд	адбдддадад	саабдддсад	ссддадааса	асбасаадас	сасдссбссс	1200
дбдсбддасб	ссдасддсбс	сббсббссбс	дбдадсаадс	бсассдбдда	саададсадд	1260
бддсадсадд	ддаасдбсбб	сбсабдсбсс	дбдабдсабд	аддсбсбдса	саассасбас	1320
асдсадаада	дссбсбсссб	дбсбссдддб	ааабда			1356

- 204 030147

<210>	67
<211>	215
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	СН1А1А (УЬ-СЬ)
<400>	67

Азр 11е С1п Мер ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 СЬу 15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Зег А1а А1а Уа1 С1у ТЬг Туг 20 25 30

Уа1 А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго СЬу Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не 35 40 45

Туг Зег А1а Зег Туг Агд Ьуз Агд СЬу Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60

Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго 65 70 75 80

С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз НЬз СЬп Туг Туг ТЬг Туг Рго Ьеи 85 90 95

РЬе ТЬг РЬе С1у СЬп СЬу ТЬг Ьуз Ьеи СЬи Не Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а 100 105 110

А1а Рго Зег Уа1 РЬе Не РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег 115 120 125

СЬу ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и 130 135 140

СЬп С1и Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи

205

030147

175

165

170

Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Шз Ьуз Уа1

180

185

190

Туг А1а Суз С1и Уа1 ТЬг Шз С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз

195

200

205

Зег РЬе Азп Агд С1у 61и Суз

210

215

<210> 68

<211> 648

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А (УЬ-СЬ)

<400> 68

даРаРссада РдасссадРс РссаРссРсс сРдРсРдсаР сРдРдддада сададРсасс 60

аРсасРРдса аддссадРдс ддсРдРдддР асдРаРдРРд сдРддРаРса дсадааасса 120

дддааадсас сРаадсРссР даРсРаРРсд дсаРссРасс дсаааадддд адРсссаРса 180

аддРРсадРд дсадРддаРс РдддасадаР РРсасРсРса ссаРсадсад РсРдсаассР 240

даадаРРРсд саасРРасРа срдрсассаа РаРРасассР аРссРсРаРР сасдРРРддс 300

садддсасса адсРсдадаР саадсдРасд дРддсРдсас саРсРдРсРР саРсРРсссд 360

ссаРсРдаРд адсадррдаа аРсРддаасР дссРсРдРРд РдРдссРдсР дааРаасРРс 420

РаРсссадад аддссааадр асадрддаад дРддаРаасд сссРссааРс дддРаасРсс 480

саддададрд Рсасададса ддасадсаад дасадсассР асадссРсад садсасссРд 540

асдсРдадса аадсадасРа сдадааасас ааадРсРасд ссрдсдаадр сасссаРсад 600

ддссРдадсР сдсссдРсас ааададсРРс аасаддддад адРдРРад 648

<210> 69

<211> 11

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

- 206 030147

<220>

<223>	ЪС007 НСОК1
<400>	69

С1у Туг Зег 11е ТЬг Зег С1у Туг Туг Тгр Азп 15 10

<210>	70
<211>	33
<212>	днк
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЬС007 НСОК1
<400>	70

ддсРасРсса РсассадРдд РРаРРасРдд аас 33

<210>	71
<211>	16
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЪС007 НСОК2
<400>	71

Туг 11е ТЬг Туг Азр С1у Зег Азп Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи Ъуз Азп

1	5 10 15
<210>	72
<211>	48
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ИС007 НСОК2
<400>	72

РасаРаассР асдасддРад саараасрас аасссаРсРс РсаааааР 48

<210>	73
<211>	3
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

- 207 030147

<220>

<223> ЬС007 НСЬКЗ

<400> 73

РЬе Азр Туг 1

<210>	74
<211>	9
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	ЬС007 НСйКЗ
<400>	74
РРРдасРас	9

<210> 75

<211> 112

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 УН

<400> 75

Е1и Уа1 Θΐη Ьеи С1п Е1и Зег Е1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег Е1п 15 10 15

Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз Зег Уа1 ТЬг С1у Туг Зег 11е ТЬг Зег С1у 20 25 30

Туг Туг Тгр Азп Тгр 11е Агд С1п РЬе Рго Е1у Азп Ьуз Ьеи Е1и Тгр 35 40 45

Мер Е1у Туг 11е ТЬг Туг Азр Е1у Зег Азп Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Ьеи Ьуз Ьеи Азп Зег Уа1 ТЬг ТЬг Е1и Азр ТЬг А1а ТЬг Туг Туг Суз

208 030147

85 90 95

А1а Азр РЬе Азр Туг Тгр С1у Θΐη С1у ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 Зег Зег 100 105 110

<210> 76

<211> 336

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 УН

<400> 76

даддЕссадс	ЕдсаддадЕс	аддассЕддс	сЕсдЕдааас	сЕЕсЕсадЕс	ЕсЕдЕсЕсЕс	60
ассЕдсЕсЕд	ЕсасЕддсЕа	сЕссаЕсасс	адЕддЕЕаЕЕ	асЕддаасЕд	даЕссддсад	120
ЕЕЕссаддаа	асаадсЕдда	аЕддаЕдддс	ЕасаЕаассЕ	асдасддЕад	сааЕаасЕас	180
аасссаЕсЕс	ЕсаааааЕсд	ааЕсЕссаЕс	асЕсдЕдаса	саЕсЕаадаа	ссадЕЕЕЕЕс	240
сЕдаадЕЕда	аЕЕсЕдЕдас	ЕасЕдаддас	асадсЕасаЕ	аЕЕасЕдЕдс	ддасЕЕЕдас	300
ЕасЕддддсс	ааддсассас	ЕсЕсасадЕс	ЕссЕса			336

<210> 77

<211> 11

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 ЬСОК1

<400> 77

Зег А1а Зег С1п С1у 11е Агд Азп Туг Ьеи Азп 15 10

<210> 78

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 ЬСОК1

<400> 78

- 209 030147

адЕдсаадЕс адддсаЕЕад аааЕЕаЕЕЕа аас 33

<210>	79
<211>	7
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЬС007 ЬСЬК2
<400>	79

Туг ТЬг Зег Зег Ьеи Шз Зег

1	5
<210>	80
<211>	21
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЬС007 ЬСОК2
<400>	80

ЕасасаЕсаа дЕЕЕасасЕс а 21

<210>	81
<211>	9
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЬС007 ЬСОКЗ
<400>	81

С1п С1п Туг Зег Ьуз Ьеи Рго Тгр ТЬг

1	5
<210>	82
<211>	27
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЬС007 ЬСОКЗ
<400>	82

- 210 030147

садсадЬаЬа дЬаадсЬЬсс ЬЬддасд 27

<210> 83

<211> 107

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 УЬ

<400> 83

Азр 11е Уа1 Ьеи ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Ьеи СЬу 15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Суз Зег А1а Зег СЬп СЬу Ые Агд Азп Туг 20 25 30

Ьеи Азп Тгр Туг СЬп СЬп Агд Рго Азр СЬу ТЬг УаЬ Ьуз Ьеи Ьеи Ые 35 40 45

Туг Туг ТЬг Зег Зег Ьеи НЬз Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу 50 55 60

Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр Туг Зег Ьеи ТЬг Ые Зег Азп Ьеи СЬи Рго 65 70 75 80

СЬи Азр Ые АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп Туг Зег Ьуз Ьеи Рго Тгр 85 90 95

ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи СЬи Ые Ьуз 100 105

<210> 84

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007 УЬ

<400> 84

даЬаЬЬдЬдс ЬсасасадЬс ЬссаЬссЬсс сЬдЬсЬдссЬ сЬсЬдддада сададЬсасс 60

- 211 030147

аЬсадЬЬдса	дЪдсаадЬса	дддсаЬЬада	ааЬЬаЬЬЬаа	асЬддЬаЬса	дсададасса	120
даЬддаасЬд	НааасЬссЬ	даЬсЬаЬЬас	асаЬсаадЬЬ	ЬасасЬсадд	адЬсссаЬса	180
аддНсадЬд	дсадЬдддЬс	ЬдддасадаЬ	ЬаЫесЬсЬса	ссаЬсадсаа	ссЬддаассЬ	240
даадаЬаЬЬд	ссасНасЪа	ЬЬдЬсадсад	ЬаЬадЬаадс	ЬЪссЫеддас	дЫесддЬдда	300
ддсассаадс	ЬддаааЬсаа	а				321

<210> 85

<211> 5

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СА201 НСРК1

<400> 85

Азр Туг Ьуз 11е НЬз

<210> 86

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 6А201 НСРК1

<400> 86

дасЪасаада Ъасас

15

<210>	87
<211>	17
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	СА201 НСОК2
<400>	87

Туг РЬе Азп Рго Азп Зег С1у Туг Зег ТЬг Туг А1а С1п Ьуз РЬе С1п 15 10 15

С1у

- 212 030147

<210>	88
<211>	51
<212>	днк
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СА201 НСЬК2
<400>	88

ЬаШсаасс сЬаасадсдд ЬЬаЪадЪасс Ьасдсасада адЪЬссаддд с 51

<210>	89
<211>	11
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СА201 НСОКЗ
<400>	89

Ьеи Зег Рго С1у С1у Туг Туг Уа1 МеЬ Азр А1а

1	5 10
<210>	90
<211>	33
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СА201 НСОКЗ
<400>	90

сЬаЬссссад дсддНасЬа ЬдНаЬддаЬ дсс 33

<210>	91
<211>	120
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СА201 νΗ
<400>	91

С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а Е1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег

- 213 030147

15 10 15

Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг 20 25 30

Ьуз Не Нхз Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи О1и Тгр МеЬ 35 40 45

С1у Туг РЬе Азп Рго Азп Зег С1у Туг Зег ТЬг Туг А1а С1п Ьуз РЬе 50 55 60

С1п С1у Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 75 80

МеЬ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд Ьеи Зег Рго С1у С1у Туг Туг Уа1 МеЬ Азр А1а Тгр С1у С1п 100 105 110

С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120

<210> 92

<211> 360

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СА201 УН

<400> 92

саддЬдсадс	ЬддЬдсадЬс	ЕддддсЬдад	дЬдаадаадс	сЬдддЬссЬс	ддЬдааддЬс	60
ЬссЬдсаадд	ссЬсЬддНЪ	сасаНсасЬ	дасЬасаада	ЬасасЬдддЪ	дсдасаддсс	120
ссЬддасаад	ддсЬсдадЬд	даЬдддаЬаЬ	ЬЬсаасссЬа	асадсддЬЬа	ЬадЬассЬас	180
дсасадаадЬ	Ьссадддсад	ддЬсассаЬЬ	ассдсддаса	ааЬссасдад	сасадссЬас	240
аЬддадсЬда	дсадссЬдад	аЬсЬдаддас	асддссдЬдЬ	аЬЬасЬдЬдс	дадасЬаЬсс	300
ссаддсддЬЬ	асЬаЬдЬЬаЬ	ддаЬдссЬдд	ддссааддда	ссассдЬдас	сдЬсЬссЬса	360

- 214 030147

<210>	93
<211>	Ы
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СА201 ЬСОКЬ
<400>	93

Агд АЬа Зег СЬп СЬу 11е Азп Азп Туг Ьеи Азп

1	5 10
<210>	94
<211>	33
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СА201 ЬСОКЬ
<400>	94

сдддсаадДс адддсаДДаа сааДДасДДа ааД 33

<210>	95
<211>	7
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СА201 ЬСОК2
<400>	95

Азп ТЬг Азп Азп Ьеи СЬп ТЬг 1 5

<210>	96
<211>	21
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СА201 ЬСОК2
<400>	96

ааДассааса асДДдсадас а 21

- 215 030147

- 216 030147

Зег 65

С1у

Зег

С1у

ТЬг

С1и 70

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е 75

Зег

Ьеи

С1п

Рго 80

С1и

Азр

РЬе

А1а

ТЬг

Туг

Суз

Ьеи

С1п

Ηίδ

Азп

Зег

РЬе

Рго

ТЬг

85

90

95

РЬе

С1у

С1п

Е1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

С1и

Х1е

Ьуз

100 105

<210> 100

<211> 318

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СА201 УЬ

<400> 100

даРаРссада	РдасссадРс	РссаРссРсс	сРдРсРдсаР	сРдРсддада	ссдддРсасс	60
аРсассРдсс	дддсаадрса	дддсаРРаас	ааРРасРРаа	аРРддРасса	дсадаадсса	120
дддааадссс	сРаадсдссР	даРсРаРааР	ассаасаасР	Рдсадасадд	сдРсссаРса	180
аддррсадсд	дсадРддаРс	сдддасадаа	РРсасРсРса	ссаРсадсад	ссРдсадссР	240
даадаРРРРд	ссассРаРРа	сРдсРРдсад	саРааРадРР	РРсссасдРР	Рддссадддс	300
ассаадсРсд	адаРсаад					318

<210> 101

<211> 5

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗЕ2 НСОК1

<400> 101

Зег Туг А1а Мер Зег

1 5

<210> 102 <211> 15

<212> ДНК

- 217 030147

<213>

Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЗЕ2 НСОК1
<400>	102

адсЬасдсса Ьдадс 15

<210>	103
<211>	16
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЗГ2 НСОК2
<400>	103

А1а 11е Зег С1у Зег С1у С1у Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз

1	5 10 15
<210>	104
<211>	48
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЗГ2 НСРК2
<400>	104

дссаЬсЬссд дсадсддадд садсассЬас Ьасдссдаса дсдЬдаад 48

<210>	105
<211>	8
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЗР2 НСОКЗ
<400>	105

Туг Суз А1а Ьуз С1у Тгр РЬе С1у 1 5

<210> 106

<211> 24

<212> ДНК

- 218 030147

24

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗР2 НСЬКЗ

<400> 106

ЪаЬЬдсдсса адддаЬддЫ сддс

<210> 107

<211> 117

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗГ2 УН

<400> 107

СЬи Уа1 СЬп Ьеи Ьеи СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

АЬа Мер Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ 35 40 45

Зег АЬа ЬЬе Зег СЬу Зег СЬу СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг ЬЬе Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 65 70 75 80

УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115

<210> 108

- 219 030147

<211> 351

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗЕ2 УН

<400> 108

даддрдсадс	РдсРддааРс	Рддаддсддс	срддрдсадс	сРддсддсад	ссРдадасРд	60
РсРРдсдссд	ссадсддсРР	сассРРсадс	адсРасдсса	РдадсРдддР	ссдасаддсР	120
ссРддсаадд	дасРддааРд	ддрдрссдсс	аРсРссддса	дсддаддсад	сассРасРас	180
дссдасадсд	Рдаадддссд	дРРсассаРс	адсададаса	асадсаадаа	сасссРдРас	240
сРдсадаРда	асадссрдсд	ддссдаддаР	ассдссдрдр	аРРаРРдсдс	саадддаРдд	300
РРсддсддсР	РсаасРасРд	дддссаддда	асссрддрда	садрдрссад	с	351

<210> 109

<211> 11

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗЕ2 ЬСЬК1

<400> 109

Агд А1а Зег С1п Зег Уа1 ТЬг Зег Зег Туг Ьеи 15 10

<210> 110

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗЕ2 ЬСЬК1

<400> 110

ададссадсс ададсдРдас садсадсрас сРд

33

<210> 111

<211> 7

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

- 220 030147

<220>

<223>	ЗГ2 ЬС0К2
<400>	111

Азп Уа1 С1у Зег Агд Агд А1а

1	5
<210>	112
<211>	21
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	зг2 ъсикг
<400>	112

аасдрдддса дсадасдддс с 21

<210>	113
<211>	9
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЗГ2 ЪСРКЗ
<400>	113

Суз С1п С1п 61у 11е Мер Ъеи Рго Рго

1	5
<210>	114
<211>	27
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ЗР2 ЬСИКЗ
<400>	114

Рдссадсадд дсаРсаРдсР дсссссс 27

<210>	115
<211>	108
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

- 221 030147

<220>

<223> ЗЕ2 УЬ

<400> 115

С1и Ые Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго 1 5

СЬу ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу 10 15

С1и Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд 20

АЬа Зег СЬп Зег УаЬ ТЬг Зег Зег 25 30

Туг Ьеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз 35 40

Рго С1у С1п АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи 45

Ые Азп Уа1 СЬу Зег Агд Агд АЬа 50 55

ТЬг СЬу Ые Рго Азр Агд РЬе Зег 60

СЬу Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе 65 70

ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Агд Ьеи СЬи 75 80

Рго С1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг 85

Суз С1п СЬп СЬу Ые МеЕ Ьеи Рго 90 95

Рго ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз 100

Уа1 СЬи Ые Ьуз 105

<210> 116

<211> 324

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЗГ2 УЬ

<400> 116

дадаЕсдЕдс	ЕдасссадЕс	Есссддсасс	сЕдадссЕда	дсссЕддсда	дададссасс	60
сЕдадсЕдса	дадссадсса	дадсдЕдасс	адсадсЕасс	ЕддссЕддЕа	Есадсадаад	120
сссддссадд	сссссадасЕ	дсЕдаЕсаас	дЕдддсадса	дасдддссас	сддсаЕсссс	180
даЕадаЕЕса	дсддсадсдд	сЕссддсасс	дасЕЕсассс	ЕдассаЕсад	ссддсЕддаа	240
сссдаддасЕ	ЕсдссдЕдЕа	сЕасЕдссад	садддсаЕса	ЕдсЕдссссс	сассЕЕсддс	300

- 222 030147

садддсасса аддДддаааД саад 324

<210> 117

<211> 5

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А НСРК1

<400> 117

С1и РЬе С1у МеД Азп

1 5

<210> 118

<211> 15

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А НСЬК1

<400> 118

дадДДсддса Ддаас 15

<210> 119

<211> 17

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А НСЬК2

<400> 119

Тгр 11е Азп ТЬг Ьуз ТЬг С1у 61и А1а ТЬг Туг Уа1 С1и С1и РЬе Ьуз

15 10 15

С1у

<210> 120

<211> 51

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

- 223 030147

224 030147

35

40

45

С1у Тгр 11е Азп ТЬг Ьуз ТЬг С1у С1и А1а ТЬг Туг Уа1 Е1и С1и РЬе 50 55 60

МеЬ С1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд Тгр Азр РЬе А1а Туг Туг Уа1 С1и А1а МеЬ Азр Туг Тгр С1у 100 105 110

С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120

<210> 124

<211> 363

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А УН

<400> 124

саддЬдсадс	ЬддЬдсадЬс	Ьддсдссдаа	дЬдаадааас	сЬддадсЬад	ЬдЬдааддЬд	60
ЬссЬдсаадд	ссадсддсЬа	сассЬЬсасс	дадНсддса	ЬдаасЬдддЬ	ссдасаддсЬ	120
ссаддссадд	дссЬсдааЬд	даЬдддсЬдд	аЬсаасасса	адассддсда	ддссассЬас	180
дЬддаададЬ	Ьсаадддсад	адЬдассЬЬс	ассасддаса	ссадсассад	сассдссЬас	240
аЬддаасЬдс	ддадссЬдад	аадсдасдас	ассдссдЬдЬ	асЬасЬдсдс	садаЬдддас	300
ЫсдссОаЫ	асдЬддаадс	саЬддасЬас	Ьддддссадд	дсассассдЬ	дассдЬдЬсЬ	360
аде						363

<210> 125

<211> 11

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

- 225 030147

<220>

<223>	СН1А1А ЬС0К1
<400>	125

Ьуз А1а Зег А1а А1а \7а1 С1у ТЬг Туг Уа1 А1а

1	5 10
<210>	126
<211>	33
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СН1А1А ЬСОК1
<400>	126

ааддссадЕд сддсЕдЕддд ЕасдЕаЕдЕЕ дед 33

<210>	127
<211>	7
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СН1А1А ЬСЭК2
<400>	127

Зег А1а Зег Туг Агд Ьуз Агд

1	5
<210>	128
<211>	21
<212>	днк
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	СН1А1А ЬСОК2
<400>	128

ЕсддсаЕссЕ ассдсаааад д 21

<210>	129
<211>	10
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность -326-

- 226 030147

<220>

<223> СН1А1А ЬСЬКЗ

<400> 129

Ηίδ Е1п Туг 1

Туг

ТЬг 5

Туг

Рго

Ьеи

РЬе

ТЬг 10

<210>

130

<211>

30

<212>

ДНК

<213>

Искусственная последовательность

<220>

<223>

СН1А1А ЬСЬКЗ

<400>

130

сассааЬаЬЬ

асассЬаЬсс ЬсЬаЬЬсасд

<210>

131

<211>

108

<212>

РКТ

<213>

Искусственная последовательность

<220>

<223>

СН1А1А УЬ

<400>

131

Азр 11е

Е1п

МеЬ

ТЬг

С1п

Зег

Рго

Зег

Ьеи

Зег

А1а

Зег

Уа1

Е1у

1

5

10

15

Азр Агд

Уа1

ТЫ

11е

ТЬг

Суз

Ьуз

А1а

Зег

А1а

Уа1

Е1у

ТЬг

Туг

20

25

30

Уа1 А1а

Тгр

Туг

Е1п

С1п

Ьуз

Рго

Е1у

Ьуз

А1а

Рго

Ьуз

Ьеи

11е

35

40

45

Туг Зег

А1а

Зег

Туг

Агд

Ьуз

Агд

Е1у

Уа1

Рго

Зег

Агд

РЬе

Зег

Е1у

50

55

60

Зег 61у

Зег

Е1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Зег

Ьеи

61п

Рго

65

70

75

80

Е1и Азр

РЬе

А1а

ТЬг

Туг

Суз

ΗΪ5

Е1п

Туг

ТЬг

Туг

Рго

Ьеи

227 030147

85

90

95

РЬе ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и 11е Ьуз 100 105

<210> 132

<211> 324

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А УЬ

<400> 132

даЬаЬссада	ЬдасссадЬс	ЬссаЬссЬсс	сЬдЬсЬдсаЬ	сЬдЬдддада	сададЬсасс	60
аЬсасЬЬдса	аддссадЬдс	ддсЬдЬдддЬ	асдЬаЬдЬЬд	сдЬддЬаЬса	дсадааасса	120
дддааадсас	сЬаадсЬссЬ	даЬсЬаЬЬсд	дсаЬссЬасс	дсаааадддд	адЬсссаЬса	180
аддЬЬсадЬд	дсадЬддаЬс	ЬдддасадаЬ	ЬЬсасЬсЬса	ссаЬсадсад	ЬсЬдсаассЬ	240
даадаЬЬЬсд	саасЬЬасЬа	сЬдЬсассаа	ЬаЬЬасассЬ	аЬссЬсЬаЬЬ	сасдЬЬЬддс	300
садддсасса	адсЬсдадаЬ	саад				324

<210> 133

<211> 10

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Анти-СОЗЗ НСОК1

<400> 133

С1у Туг ТЬг 11е ТЬг Азр Зег Азп 11е НЬз 15 10

<210> 134

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Анти-СОЗЗ НСОК1

<400> 134

- 228 030147

ддсЬасасса Ьсассдасад саасаЬссас 30

<210>	135
<211>	13
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	Анти-СОЗЗ НСОК2
<400>	135

Туг 11е Туг Рго Туг Азп С1у С1у ТЬг Азр Туг Азп С1п

1	5 10
<210>	136
<211>	39
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	Анти-СОЗЗ НСОК2
<400>	136

ЬасаЬсЬасс ссЬасаасдд сддсассдас Ьасаассад 39

<210>	137
<211>	7
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	Анти-СОЗЗ НСОКЗ
<400>	137

С1у Азп Рго Тгр Ьеи А1а Туг

1	5
<210>	138
<211>	21
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	Анти-СОЗЗ НСОКЗ
<400>	138

- 229 030147

ддсаассссб ддсбддссба б

21

<210> 139

<211> 116

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Анти-СОЗЗ УН

<400> 139

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у Зег 15 10 15

Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег 61у Туг ТЬг 11е ТЬг Азр Зег 20 25 30

Азп 11е ΗΪ5 Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п Зег Ьеи С1и Тгр 11е 35 40 45

С1у Туг 11е Туг Рго Туг Азп 61у 61у ТЬг Азр Туг Азп С1п Ьуз РЬе 50 55 60

Ьуз Азп Агд А1а ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 Азр Азп Рго ТЬг Азп ТЬг А1а Туг 65 70 75 80

Меб 61и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а РЬе Туг Туг Суз 85 90 95

Уа1 Азп С1у Азп Рго Тгр Ьеи А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 100 105 110

ТЬг Уа1 Зег Зег 115

<210> 140

<211> 348

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Анти-СОЗЗ УН

- 230 030147

<400> 140 даадДдсадс	ДддДдсадДс	Дддсдссдаа	дДдаадааас	ссддсадсад	сдДдааддДд	60
ДссДдсаадд	ссадсддсДа	сассаДсасс	дасадсааса	ЪссасЪдддЕ	ссдасаддсс	120
ссДдддсада	дссДддааДд	даДсддсДас	аДсДассссД	асаасддсдд	сассдасДас	180
аассадаадД	Дсаадаассд	ддссасссДд	ассдДддаса	ассссассаа	сассдссДас	240
аДддаасДда	дсадссДдсд	дадсдаддас	ассдссДДсД	асЪасЕдсдЕ	даасддсаас	300
сссДддсДдд	ссДаДДдддд	ссадддаасс	сДддДсассд	ЪдЕсЕадс		348

<210> 141

<2Ы> 15

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Анти-СОЗЗ ЬСОКЬ

<400> 141

Агд А1а Зег СЬи Зег Ьеи Азр Азп Туг СЬу Ые Агд РЬе Ьеи ТЬг 15 10 15

<210> 142

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Анти-СОЗЗ ЬСОКЬ

<400> 142

сдддссадсд ададссДдда саасДасддс аДссддДДДс Ддасс 45

<210> 143

<211> 7

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Анти-СОЗЗ ЬСОК2

<400> 143

А1а АЬа Зег Азп СЬп СЬу Зег

- 231 030147

1	5
<210>	144
<211>	21
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	Анти-СОЗЗ ЬСЬК2
<400>	144

дссдссадса ассадддсад с 21

<210>	145
<211>	9
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	Анти-СОЗЗ ЬСОКЗ
<400>	145

С1п С1п ТЪг Ьуз С1и Уа1 Рго Тгр Зег

1	5
<210>	146
<211>	27
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	Анти-СОЗЗ ЬСОКЗ
<400>	146

садсадасса аададдЬдсс сЬддЬсс 27

<210>	147
<211>	111
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	Анти-СОЗЗ УЬ
<400>	147

Азр 11е Θίη Ьеи ТЪг С1п Зег Рго Зег ТЪг Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у

- 232 030147

15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1и Зег Ьеи Азр Азп Туг 20 25 30

С1у 11е Агд РЬе Ьеи ТЬг Тгр РЬе С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго 35 40 45

Ьуз Ьеи Ьеи Мер Туг А1а А1а Зег Азп С1п С1у Зег СЬу Уа1 Рго Зег 50 55 60

Агд РЬе Зег С1у Зег СЬу Зег СЬу ТЬг С1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег 65 70 75 80

Зег Ьеи С1п Рго Азр Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п СЬп ТЫ Ьуз 85 90 95

С1и Уа1 Рго Тгр Зег РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Уа1 Ьуз 100 105 110

<210> 148

<211> 333

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Анти-СРЗЗ УЬ

<400> 148

дасаРссадс	Ьдасссадад	ссссадсасс	сРдРсРдсса	дсдрдддсда	сададрдасс	60
аРсассРдРс	дддссадсда	дадссРддас	аасРасддса	РссддРРРсР	дассРддРРс	120
садсадаадс	ссддсааддс	ссссаадсрд	сРдаРдРасд	ссдссадсаа	ссадддсадс	180
ддсдрдссаа	дсадаЪЪсад	сддсадсддс	Рссддсассд	адРРсасссР	дассаРсадс	240
адссРдсадс	ссдасдасЪ!:	сдссассРас	РасРдссадс	адассааада	ддрдсссрдд	300
РссРРсддсс	адддсассаа	ддрддаадрд	аад			333

<210>	149
<211>	227
<212>	РКТ

- 233 030147

<213> Ното зарЬепз

<400> 149

Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи Ьеи Ьеи СЬу 15 10 15

СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 20 25 30

Ые Зег Агд ТЬг Рго СЬи УаЬ ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег НЬз 35 40 45

СЬи Азр Рго СЬи УаЬ Ьуз РЬе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ 50 55 60

НЬз Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг 65 70 75 80

Агд УаЬ УаЬ Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу 85 90 95

Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи Рго АЬа Рго Ые 100 105 110

СЬи Ьуз ТЬг Ые Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ 115 120 125

Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр СЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег 130 135 140

Ьеи ТЬг Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Ые АЬа УаЬ СЬи 145 150 155 160

Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго 165 170 175

УаЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз 180 185

Ьеи ТЬг УаЬ 190

234

030147

Азр Ьуз Зег Агд Тгр Е1п Е1п Е1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ 195 200 205

Н1з О1и А1а Ьеи Ыз Азп Шз Туг ТЬг Е1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег 210 215 220

Рго С1у Ьуз 225

<210> 150

<211> 15

<212> РИТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 150

Е1и Рго Ьуз Зег Суз Е1у С1у Е1у Е1у Зег О1у Е1у С1у Е1у Зег 15 10 15

<210> 151

<211> 16

<212> РИТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 151

Е1и Рго Ьуз Зег Суз Азр С1у С1у С1у Е1у Зег Е1у Е1у С1у С1у Зег 15 10 15

<210> 152

<211> 32

<212> РИТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер

<400> 152

С1у Е1у Е1у Е1у Зег С1у 61у Е1у Е1у Зег С1у О1у С1у Е1у Зег Е1у 15 10 15

- 235 030147

<210> 155

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

- 236

030147

<223> Лидер 1

<400> 155

аДддасДдда ссДддадааД ссДсДДсДДд дДддсадсад ссасаддадс ссасДсс 57

<210> 156

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Лидер 1

<400> 156

аДддасДдда ссДддаддаД ссДсДДсДДд дДддсадсад ссасаддадс ссасДсс 57

<210>	157
<211>	22
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	Лидер 2
<400>	157
МеД Азр	' МеД Агд Уа1 Рго А1а С1п Ьеи Ьеи Е1у Ьеи	Ьеи Ьеи Ьеи Тгр
1	5 10	15

РЬе Рго	’ Е1у	А1а Агд Суз 20
<210>	158
<211>	66
<212>	ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Лидер 2

<400> 158

аДддасаДда дддДссссдс ДсадсДссДд ддссДссДдс ДдсДсДддДД сссаддДдсс 60

аддДдД 66

<210> 159

<211> 19

- 237 030147

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Лидер 3

<400> 159

МеЬ С1у Тгр Зег Суз 11е 11е Ьеи РЬе Ьеи Уа1 А1а ТЬг А1а ТЬг С1у 15 10 15

Уа1 Шз Зег

<210> 160

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Лидер 3

<400> 160

аЬдддаЬдда дсЬдЬаЬсаЬ ссЬсЬЬсЬЬд дЬадсаасад сЬассддЬдЬ дсаЬЬсс 57

<210> 161

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Лидер 3

<400> 161

аЬдддсЬддЬ ссЬдсаЬсаЬ ссЬдЬЬЬсЬд дЬддсЬассд ссасЬддадЬ дсаЬЬсс 57

<210> 162

<211> 57

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Лидер 3

<400> 162

аЬдддсЬддЬ ссЬдсаЬсаЬ ссЬдЫЬсЬд дЬсдссасад ссассддсдЬ дсасЬсЬ 57

- 2З8 030147

<210>	163
<211>	5
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	'79 НСЦК1
<400>	163

С1у Туг ТЬг МеР Азп 1 5

<210>	164
<211>	15
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ν9 НСБК1
<400>	164

ддсРасасса Рдаас 15

<210>	165
<211>	17
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	У9 НСЦК2
<400>	165

Ьеи 11е Азп Рго Туг Ьуз С1у Уа1 Зег ТЬг Туг Азп С1п Ьуз РЬе Ьуз

1	5 10 15
Азр

<210>	166
<211>	51
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	'79 НСОК2

- 239 030147

- 240 030147

А1а Ьеи 50

Не

Азп

Рго

Туг

Ьуз 55

С1у

Уа1

Зег

ТЬг

Туг 60

Азп

С1п

Ьуз

РЬе

Ьуз Азр

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Уа1

Азр

Ьуз

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Ьеи С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а Агд

Зег

С1у

Туг

С1у

Азр

Зег

Азр

Тгр

Туг

РЬе

Азр

Уа1

Тгр

100

105

НО

С1у С1п

С1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

<210> 170

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная

последовательность

<220>

<223> ν9 УН

<400> 170

даддЬдсадс	ЬддЬсдадЬс	сддсддаддс	сЬддЬдсадс	с+ддсддсад	ссЬдадасЬд	60
адсЬдсдссд	ссадсддсЬа	садсНсасс	ддсЬасасса	ЬдаасЪдддЪ	ссддсаддсЬ	120
ссЬддсаадд	дссЬсдааЬд	ддЬддсссЬд	аЬсаассссЬ	асаадддсдЬ	дадсассЬас	180
аассадаадЬ	Ьсааддассд	дНсассаЬс	адсдЬддаса	ададсаадаа	сассдссЬаЬ	240
сЬдсадаЬда	асадссЬдсд	ддссдаддас	ассдссдЬдЬ	асЬасЬдсдс	садаадсддс	300
ЬасЬасддсд	асадсдасЬд	дЬасНсдас	дЬдЬддддсс	адддсасасЬ	ддЬсассдЬд	360

Ьссадс 366

<210>

<211>

<212>

<213>

171

11

РКТ

Искусственная последовательность

<220>

<223> ν9 ЬСРК1

- 241 030147

<400> 171

Агд АЬа Зег СЬп Азр 11е Агд Азп Туг Ьеи Азп

1	5 10
<210>	172
<211>	33
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	ν9 ьсокь
<400>	172

сдддссадсс аддасаЕсад ааасЕассЕд аас 33

<210>	173
<211>	7
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	У9 ЬСОК2
<400>	173

Туг ТЬг Зег Агд Ьеи СЬи Зег

1	5
<210>	174
<211>	21
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	У9 ЬСОК2
<400>	174

ЕасассЕсЕа дасЕддааад с 21

<210>	175
<211>	9
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	У9 ЬСОКЗ

- 242 030147

<400> 175

Е1п С1п С1у Азп ТЬг Ьеи Рго Тгр ТЬг 1 5

<210> 176

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 ЬСЬКЗ

<400> 176

садсадддса асасасРссс сРддасс 27

<210> 177

<211> 107

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 УЬ

<400> 177

Азр Не С1п Мер ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у 15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Азр Не Агд Азп Туг 20 25 30

Туг Туг ТЬг Зег Агд Ьеи С1и Зег 51у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег 61у 50 55 60

Зег Е1у Зег С1у ТЬг Азр Туг ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго 65 70 75 80

С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п С1у Азп ТЬг Ьеи Рго Тгр 85 90 95

- 243

030147

ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 Е1и 11е Ьуз 100 105

<210> 178

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 УЬ

<400> 178

дасабссада	бдасссадад	ссссбсбадс	сбдадсдсса	дсдбдддсда	сададбдасс	60
абсассбдбс	дддссадсса	ддасабсада	аасбассбда	асбддбабса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсбдсб	дабсбасбас	ассбсбадас	бддааадсдд	сдбдсссадс	180
сддбббадсд	дсадсддсбс	сддсассдас	басасссбда	ссабсадсад	ссбдсадссс	240
даддасббсд	ссассбасба	сбдссадсад	ддсаасасас	бссссбддас	сббсддссад	300
ддсассаадд	бддадабсаа	д				321

<210> 179

<211> 454

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9(УН-СЬ)-ЬС007(УЬ-СЬ)

<400> 179

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 Е1п Рго Е1у Е1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Туг Зег РЬе ТЬг С1у Туг 20 25 30

ТЬг Меб Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45

А1а Ьеи 11е Азп Рго Туг Ьуз С1у Уа1 Зег ТЬг Туг Азп 51п Ьуз РЬе 50 55 60

- 244 030147

Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег УаЬ АЬа АЬа Рго 115 120 125

Зег УаЬ РЬе Ые РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег СЬу ТЬг 130 135 140

АЬа Зег УаЬ УаЬ Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи АЬа Ьуз 145 150 155 160

УаЬ СЬп Тгр Ьуз УаЬ Азр Азп АЬа Ьеи СЬп Зег СЬу Азп Зег СЬп СЬи 165 170 175

Зег УаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег 180 185 190

ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа Азр Туг СЬи Ьуз НЬз Ьуз УаЬ Туг АЬа 195 200 205

Суз СЬи УаЬ ТЬг НЬз СЬп СЬу Ьеи Зег Зег Рго УаЬ ТЬг Ьуз Зег РЬе 210 215 220

Азп Агд СЬу СЬи Суз Азр СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 225 230 235 240

Азр Ые УаЬ Ьеи ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег АЬа Зег Ьеи СЬу 245 250 255

Азр Агд УаЬ ТЬг Ые Зег Суз Зег АЬа Зег СЬп СЬу Ые Агд Азп Туг 260 265 270

- 245 030147

Ьеи Азп Тгр Туг Е1п Е1п Агд Рго Азр Е1у ТЬг Уа1 Ьуз Ьеи Ьеи 11е 275 280 285

Туг Туг ТЬг Зег Зег Ьеи НЬз Зег Е1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег Е1у 290 295 300

Зег Е1у Зег Е1у ТЬг Азр Туг Зег Ьеи ТЬг 11е Зег Азп Ьеи Е1и Рго 305 310 315 320

Е1и Азр 11е А1а ТЬг Туг Туг Суз Е1п Е1п Туг Зег Ьуз Ьеи Рго Тгр 325 330 335

ТЬг РЬе Е1у Е1у Е1у ТЬг Ьуз Ьеи Е1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а 340 345 350

Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр Е1и Е1п Ьеи Ьуз Зег Б1у 355 360 365

ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд 61и А1а 370 375 380

Ьуз Уа1 Е1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи Е1п Зег Е1у Азп Зег Е1п 385 390 395 400

Е1и Зег Уа1 ТЬг Е1и Е1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 405 410 415

Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг Е1и Ьуз Шз Ьуз Уа1 Туг 420 425 430

А1а Суз Е1и Уа1 ТЬг Ηίβ Е1п Е1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег 435 440 445

РЬе Азп Агд Е1у Е1и Суз 450

<210> 180

<211> 1362

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

- 246

030147

<220>

<223> У9(УН-СЬ)-ЬС007(УЬ-СЬ)

<400> 180 даддЬдсадс	ЬддЬддааЬс	Ьддсддсдда	сЬддЬдсадс	сЬддсддаЬс	ЬсЬдадасЬд	60
адсЬдЬдссд	ссадсддсЬа	садсЬЬсасс	ддсЬасасса	ЬдаасЬдддЬ	дсдссаддсс	120
ссЬддсаадд	дасЬддааЬд	ддЬддсссЬд	аЬсаассссЬ	асаадддсдЬ	дЬссассЬас	180
аассадаадЬ	Ьсааддассд	дЬЬсассаЬс	адсдЬддаса	ададсаадаа	сассдссЬас	240
сЬдсадаЬда	асадссЬдсд	ддссдаддас	ассдссдЬдЬ	асЬаЬЬдЬдс	садаадсддс	300
ЬасЬасддсд	асадсдасЬд	дЬасЬЬсдас	дЬдЬддддсс	адддсасасЬ	сдЬдассдЬд	360
ЬсаадсдсЬа	дсдЬддссдс	ЬсссадсдЬд	ЬЬсаЬсЬЬсс	сассЬадсда	сдадсадсЬд	420
аадЬссддса	садссЬсЬдЬ	сдЬдЬдссЬд	сЬдаасаасЬ	ЬсЬасссссд	сдаддссаад	480
дЬдсадЬдда	аддЬддасаа	ЬдсссЬдсад	адсддсааса	дссаддааад	сдЬдассдад	540
саддасадса	аддаЬадсас	сЬасадссЬд	адсадсассс	ЬдасссЬдад	сааддссдас	600
Ьасдадаадс	асааддЬдЬа	сдссЬдсдаа	дЬдасссасс	адддссЬдЬс	ЬадссссдЬд	660
ассаададсЬ	Ьсаассдддд	сдадЬдЬдаЬ	ддсддаддсд	даЬссддддд	аддсддсЬсЬ	720
даЬаЬЬдЬдс	Ьдасссадад	ссссадсадс	сЬдЬсЬдссЬ	сЬсЬдддсда	сададЬдасс	780
аЬсадсЬдЬа	дсдссЬсЬса	дддсаЬссдд	аасЬассЬда	асЬддЬаЬса	дсадсддссс	840
дасддсассд	ЬдаадсЬдсЬ	даЬсЬасЬас	ассадсЬссс	ЬдсасЬссдд	сдЬдсссадс	900
адаЬЬЬЬсЬд	дсадсддсЬс	сддсассдас	ЬасЬсссЬда	ссаЬсЬссаа	ссЬддаассс	960
даддаЬаЬсд	ссассЬасЬа	сЬдссадсад	ЬасЬссаадс	ЬдсссЬддас	сЬЬЬддаддс	1020
ддсассаадс	ЬддаааЬсаа	дсдЬасддЬд	дсЬдсссссЬ	ссдЬдЬЬЬаЬ	сЬЬЬссссса	1080
ЬссдаЬдаас	адсЬдаааад	сддсассдсс	адсдЬсдЬдЬ	дЬсЬдсЬдаа	сааЬЬЬЬЬас	1140
ссЬадддаад	сЬааадЬдса	дЬддааадЬд	даЬаасдсас	ЬдсадЬссдд	саасЬсссад	1200
дааЬсЬдЬда	садаасадда	сЬсЬааддас	адсасаЬасЬ	сссЬдЬссЬс	сасссЬдаса	1260
сЬдЬсЬаадд	сЬдаЬЬаЬда	дааасасааа	дЬдЬаЬдсЬЬ	дЬдаадЬдас	асаЬсаддда	1320
сЬдадсадсс	сЬдЬдасааа	дЬссЬЬсаас	ададдсдадЬ	дс		1362

- 247 030147

<210>	181
<211>	227
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	Гс(«выступ») Р3296 ЬАЬА
<400>	181

Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а А1а С1у 15 10 15

С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Меб 20 25 30

11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Низ 35 40 45

61и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 50 55 60

НЬз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг 65 70 75 80

Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у 85 90 95

Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи С1у А1а Рго 11е 100 105 110

С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд Е1и Рго С1п Уа1 115 120 125

Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Суз Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег 130 135 140

Ьеи Тгр Суз Ьеи Уа1 Ьуз Е1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и 145 150 155 160

Тгр 61и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго 165 170 175

248 030147

<210> 182

<211> 681

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гс(«выступ») Ρ329Ε ЬАЬА

<400> 182 дасаааасЬс	асасаЬдссс	ассдЬдссса	дсассЬдаад	сПдсаддддд	ассдЬсадЬс	60
ЬЪссЬсЫзсс	ссссаааасс	сааддасасс	сЬсаЬдаЬсЬ	сссддасссс	ПдаддЬсаса	120
ЬдсдЬддПдд	ЬддасдЬдад	ссасдаадас	ссЬдаддЪса	адЬЬсаасЬд	дЬасдЬддас	180
ддсдЬддадд	ЬдсаЬааЬдс	саадасааад	ссдсдддадд	адсадЬасаа	садсасдЬас	240
сдЬдЬддСса	дсдЬссЬсас	сдЬссЬдсас	саддасЬддс	ЬдааЬддсаа	ддадЬасаад	300
ЬдсааддЪсЬ	ссаасааадс	ссЬсддсдсс	сссаЬсдада	ааассаЬсЬс	сааадссааа	360
дддсадсссс	дадаассаса	ддЬдЬасасс	сЬдсссссаЬ	дссддда+да	дсЬдассаад	420
аассаддЬса	дссЬдЬддЬд	ссЬддЬсааа	ддсЬЬсЬаЬс	ссадсдасаЬ	сдссдЬддад	480
Ьдддададса	а+дддсадсс	ддадаасаас	Ьасаадасса	сдссЬсссдЬ	дс+ддасЬсс	540
дасддсЬссЬ	ЬсЬЬссЬсЬа	садсаадсЬс	ассдЬддаса	ададсадд+д	дсадсадддд	600
аасдЬсЬЬсЬ	саПдсЬссдЬ	даЬдсаЬдад	дсЬсЬдсаса	ассасЬасас	дсадаададс	660
сЬсЬсссЬдЬ	с+ссдддЬаа	а				681

- 249 030147

<210> 183

<211> 212

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9(УЬ-СН1)

<400> 183

Азр Х1е С1п МеЕ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у

10

15

Туг Туг ТЬг Зег Агд Ьеи С1и Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60

Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр Туг ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Рго 65 70 75 80

61и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п С1у Азп ТЬг Ьеи Рго Тгр 85 90 95

ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз Зег Зег А1а Зег ТЬг 100 105 110

Ьуз Е1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег 115 120 125

С1у С1у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и 130 135 140

Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег 61у Уа1 Ηίδ 145 150 155 160

ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи Е1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег 165 170 175

250 030147

Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг Не Суз 180 185 190

Азп Уа1 Азп Низ Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и 195 200 205

Рго Ьуз Зег Суз 210

<210> 184 <211> 636 <212> ДНК <213> Искусственная	последовательность
<220> <223> У9(УЬ-СН1)
<400> 184 даРаРРсада	Рдасссадад	ссссадсРсР	срдадсдсса	дсдрдддсда	сададрдасс	60
аРсассРдРс	дддссадсса	ддасаРсада	аасРассРда	асРддРаРса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсРдсР	даРсРасРас	ассадсадас	Рддааадсдд	сдРдсссРсс	180
адаРРРРссд	дсадсддсРс	сддсассдас	РасасссРда	ссаРсадсад	ссРдсадссс	240
даддаРРРсд	ссасаРаРРа	сРдссадсад	ддсааРассс	РдсссРддас	сРРсддасад	300
ддсасаааад	РддаааРсаа	дадсадсдсР	Рссассааад	дсссРРссдР	дРРРссРсРд	360
дсРссРадсР	ссаадрссас	сРсРддаддс	ассдсРдсРс	РсддаРдссР	сдрдааддар	420
РаРРРРссРд	адссрдрдас	адРдРссРдд	ааРадсддад	сасРдассРс	РддадРдсаР	480
асРРРссссд	сРдРдсРдса	дРссРсРдда	сРдРасадсс	РдадсадсдР	ддрдасадрд	540
сссадсадса	дссРдддсас	ссадассРас	аРсРдсаасд	Рдаассасаа	дсссадсаас	600
ассааддрдд	асаадааддр	ддаасссаад	РсРРдР			636
<210> 185 <211> 456 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
<220>

- 251 030147

<223> У9(УН-СЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 185

10

15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Туг Зег РЬе ТЬг СЬу Туг 20 25 30

АЬа Ьеи Ые Азп Рго Туг Ьуз СЬу УаЬ Зег ТЬг Туг Азп СЬп Ьуз РЬе 50 55 60

Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг Ые Зег УаЬ Азр Ьуз Зег Ьуз Азп ТЬг АЬа Туг 65 70 75 80

- 252 030147

ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Нхз Ьуз Уа1 Туг А1а 195 200 205

Суз С1и Уа1 ТЬг Нхз С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе 210 215 220

Азп Агд С1у С1и Суз Азр Ьуз ТЬг Нхз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а 225 230 235 240

Рго С1и А1а А1а С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго 245 250 255

Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЪ 11е Зег Агд ТЬг Рго 61и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 260 265 270

Уа1 Азр Уа1 Зег Нхз С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 275 280 285

Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Нхз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п 290 295 300

Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нхз С1п 305 310 315 320

Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а 325 330 335

Ьеи С1у А1а Рго 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у 61п Рго 340 345 350

Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Суз Агд Азр С1и Ьеи ТЬг 355 360 365

Ьуз Азп 61п Уа1 Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег 370 375 380

Азр 11е А1а Уа1 61и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг 385 390 395 400

253

030147

Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг 405 410 415

Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр Е1п Е1п С1у Азп Уа1 РЬе 420 425 430

Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Шз С1и А1а Ьеи Шз Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз 435 440 445

Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 61у Ьуз 450 455

<210> 186

<211> 1368

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9(УН-СЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 186

даддЬдсадс	ЬддЬсдадад	сддаддсддс	сЬддЬдсадс	сЬддсддсад	ссЬдадасЬд	60
адсЬдсдссд	ссадсддсЬа	садсЫсасс	ддсЬасасса	ЬдаасЬдддЬ	ссддсаддса	120
ссЬддсаадд	дасЬддааЬд	ддЬддсссЬд	аЬсаассссЬ	асаадддсдЬ	дадсассЬас	180
аассадаадЬ	Ьсааддассд	дЫсассаЪс	адсдЬддаса	ададсаадаа	сассдссЬаЬ	240
сЬдсадаЬда	асадссЬдсд	ддссдаддас	ассдссдЬдЬ	асЬасЬдсдс	садаадсддс	300
ЬасЬасддсд	асадсдасЬд	дЬасЫсдас	дЬдЬддддсс	адддсасссЬ	сдЬдассдЬд	360
ЬсЬадсдсЬа	дсдЬддссдс	ЬсссЬссдЬд	НЬаЬсЬНс	ссссаЬссда	ЬдаасадсЬд	420
аааадсддса	ссдссЬссдЬ	сдЬдЬдЬсЬд	сЬдаасааН	ЫЬасссЬад	ддаадс!ааа	480
дЬдсадЬдда	аадЬддаЬаа	сдсасЬдсад	ЬссддсаасЬ	сссаддааЬс	ЬдЬдасадаа	540
саддасЬсса	аддасадсас	сЬасЬсссЬд	ЬссЬссассс	ЬдасасЬдЬс	ЬааддсЬдаЬ	600
ЬаЬдадааас	асааадЬсЬа	сдссЬдсдаа	дЬсасссаЬс	адддссЬдад	сЬсдсссдЬс	660
асааададсЬ	Ьсаасадддд	ададЬдЬдас	аадасссаса	ссЬдЬссссс	НдЬссЬдсс	720
ссЬдаадсЬд	сЬддсддссс	ЬЬсЬдЬдНс	сЬдЫссссс	сааадсссаа	ддасасссЬд	780
аЬдаЬсадсс	ддасссссда	адЬдассЬдс	дЬддЬддЬдд	аЬдЬдЬссса	сдаддасссЬ	840

- 254 030147

даадЕдаадЕ	ЕсааЕЕддЕа	сдЕддасддс	дЕддаадЕдс	асаасдссаа	дасааадссд	900
сдддаддадс	адЕасаасад	сасдЕассдЕ	дЕддЕсадсд	ЕссЕсассдЕ	ссЕдсассад	960
дасЕддсЕда	аЕддсаадда	дЕасаадЕдс	ааддЕсЕсса	асааадсссЕ	сддсдссссс	1020
аЕсдадаааа	ссаЕсЕссаа	адссаааддд	садссссдад	аассасаддЕ	дЕасасссЕд	1080
сссссаЕдсс	дддаЕдадсЕ	дассаадаас	саддЕсадсс	ЕдЕддЕдссЕ	ддЕсаааддс	1140
ЕЕсЕаЕссса	дсдасаЕсдс	сдЕддадЕдд	дададсааЕд	ддсадссдда	даасаасЕас	1200
аадассасдс	сЕсссдЕдсЕ	ддасЕссдас	ддсЕссЕЕсЕ	ЕссЕсЕасад	саадсЕсасс	1260
дЕддасаада	дсаддЕддса	дсаддддаас	дЕсЕЕсЕсаЕ	дсЕссдЕдаЕ	дсаЕдаддсЕ	1320
сЕдсасаасс	асЕасасдса	даададссЕс	ЕсссЕдЕсЕс	сдддЕааа		1368

<210> 187

<2Ы> 682

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007(УН-СН1)-У9(УН-СЬ)-Рс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 187

С1и 1

УаЬ

СЬп

Ьеи

СЬп 5

СЬи

Зег

СЬу

Рго

СЬу 10

Ьеи

УаЬ

Ьуз

Рго

Зег 15

СЬп

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

ТЬг

Суз

Зег

УаЬ

ТЬг

СЬу

Туг

Зег

Ые

ТЬг

Зег

СЬу

20

25

30

Туг

Тгр

Азп

Тгр

Ые

Агд

СЬп

РЬе

Рго

СЬу

Азп

Ьуз

Ьеи

СЬи

Тгр

35

40

45

МеЕ

СЬу

Туг

Ые

ТЬг

Туг

Азр

СЬу

Зег

Азп

Туг

Азп

Рго

Зег

Ьеи

50

55

60

Ьуз

Азп

Агд

11е

Зег

Ые

ТЬг

Агд

Азр

ТЬг

Зег

Ьуз

Азп

СЬп

РЬе

65

70

75

80

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Азп

Зег

УаЬ

ТЬг

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

ТЬг

Туг

Суз

85

90

95

255

030147

А1а Азр

РЪе

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЪг

Ьеи

ТЪг

Уа1

Зег

100

105

но

А1а Зег

ТЪг

Ьуз

С1у

Рго

Зег

Уа1

РЪе

Рго

Ьеи

А1а

Рго

Зег

Ьуз

115

120

125

Зег ТЪг

Зег

С1у

ТЪг

А1а

Ьеи

61у

Суз

Ьеи

\7а1

Ьуз

Азр

Туг

130

135

140

РЪе Рго

С1и

Рго

Уа1

ТЪг

Уа1

Зег

Тгр

Азп

Зег

С1у

А1а

Ьеи

ТЪг

Зег

145

150

155

160

С1у Уа1

Шз

ТЪг

РЪе

Рго

А1а

Уа1

Ьеи

Θίη

Зег

С1у

Ьеи

Туг

Зег

165

170

175

Ьеи Зег

Зег

Уа1

ТЪг

Уа1

Рго

Зег

Ьеи

С1у

ТЪг

61п

ТЪг

180

185

190

Туг 11е

Суз

Азп

Уа1

Азп

Ηίδ

Ьуз

Рго

Зег

Азп

ТЪг

Ьуз

Уа1

Азр

Ьуз

195

200

205

Ьуз Уа1

С1и

Рго

Ьуз

Зег

Суз

Азр

С1у

61у

С1у

Зег

С1у

210

215

220

61у Зег

С1и

Уа1

Θίη

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

225

230

235

240

С1у С1у

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

Туг

Зег

РЪе

ТЪг

245

250

255

С1у Туг

ТЪг

МеЬ

Азп

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

Е1у

Ьеи

С1и

260

265

270

Тгр Уа1

А1а

Ьеи

11е

Азп

Рго

Туг

Ьуз

С1у

Уа1

Зег

ТЪг

Туг

Азп

Θίη

275

280

285

Ьуз РЪе

Ьуз

Азр

Агд

РЪе

ТЪг

11е

Зег

Уа1

Азр

Ьуз

Зег

Ьуз

Азп

ТЪг

290

295

300

256

030147

АЬа Туг Ьеи СЬп МеД Азп Зег Ьеи 305 310

Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг 315 320

Туг Суз АЬа Агд Зег СЬу Туг Туг 325

СЬу Азр Зег Азр Тгр Туг РЬе Азр 330 335

УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ 340

ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег УаЬ АЬа 345 350

АЬа Рго Зег УаЬ РЬе Ые РЬе Рго 355 360

Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег 365

СЬу ТЬг АЬа Зег УаЬ УаЬ Суз Ьеи 370 375

Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи 380

АЬа Ьуз УаЬ СЬп Тгр Ьуз УаЬ Азр 385 390

Азп АЬа Ьеи СЬп Зег СЬу Азп Зег 395 400

СЬп СЬи Зег УаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр 405

Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи 410 415

Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз 420

АЬа Азр Туг СЬи Ьуз НЬз Ьуз УаЬ 425 430

Туг АЬа Суз СЬи УаЬ ТЬг НЬз СЬп 435 440

СЬу Ьеи Зег Зег Рго УаЬ ТЬг Ьуз 445

Зег РЬе Азп Агд СЬу СЬи Суз Азр 450 455

Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз 460

Рго АЬа Рго СЬи АЬа АЬа СЬу СЬу 465 470

Рго Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго 475 480

Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеД Ые 485

Зег Агд ТЬг Рго СЬи УаЬ ТЬг Суз 490 495

УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег НЬз СЬи 500

Азр Рго СЬи УаЬ Ьуз РЬе Азп Тгр 505 510

257 030147

Туг Уа1 Азр Е1у Уа1 Е1и Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд Е1и 515 520 525

С1и Е1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи 530 535 540

Шз Е1п Азр Тгр Ьеи Азп Е1у Ьуз Е1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп 545 550 555 560

Ьуз А1а Ьеи Е1у А1а Рго 11е Е1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз Е1у 565 570 575

Е1п Рго Агд Е1и Рго Е1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Суз Агд Азр Е1и 580 585 590

Ьеи ТЬг Ьуз Азп Е1п Уа1 Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи Уа1 Ьуз Е1у РЬе Туг 595 600 605

Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 Е1и Тгр Е1и Зег Азп Е1у Е1п Рго Е1и Азп 610 615 620

Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр Е1у Зег РЬе РЬе 625 630 635 640

Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр Е1п Е1п Е1у Азп 645 650 655

Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мер Шз Е1и А1а Ьеи Шз Азп Шз Туг ТЬг 660 665 670

Е1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго Е1у Ьуз 675 680

<210> 188

<211> 2046

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

- 258

030147

<223> ЬС007(УН-СН1)- ν9(νΗ-СЬ)-Гс(«выступ») Р3296 ЬАЬА

<400> 188

даддЬдсадс	ЬдсаддааЬс	ЬддсссЬддс	сЬддЬсаадс	саадссадад	ЬсЬдадссЬд	60
ассЬдсадсд	ЪдассддсЬа	садсаЬЬасс	адсддсЬасЬ	асЬддаасЬд	даЬЬсддсад	120
Нссссддса	аЬаадсЬдда	аЬддаЬдддс	ЬасаЬсассЬ	асдасддсад	саасаасЬас	180
аассссадсс	Ьдаадаассд	даЬсадсаЬс	асссдддаса	ссадсаадаа	ссадПсНс	240
сЬдаадсЬда	асадсдЬдас	сассдаддас	ассдссасаЬ	асЬаЬЬдсдс	сдасПсдас	300
ЬасЬддддсс	адддсассас	ссЬдассдЬд	Ьссадсдсса	дсасаааддд	сссЬадсдЬд	360
ЬЬсссЬсЬдд	сссссадсад	саададсаса	адсддсддаа	садссдсссЬ	дддсЬдссЬс	420
дЬдааддасЬ	асггссссдг	дсссдЬдаса	дЬдЬсЬЬдда	асадсддадс	ссЬдасаадс	480
ддсдЬдсаса	ссЬЬсссЬдс	сдЬдсЬдсад	адсадсддсс	ЬдЬасЬсссЬ	дадсадсдЬд	540
дЬсассдЬдс	сЬадсадсад	ссЬдддсасс	садассЬаса	ЬсЬдсаасдЬ	даассасаад	600
сссадсааса	ссааадЬдда	саадааддЬд	дадсссаада	дсЬдЬдаЬдд	сддаддаддд	660
Ьссддаддсд	даддаЬссда	адЬдсадсЬд	дЬддааЬсЬд	дсддаддссЬ	ддЬдсадссЬ	720
ддсддаЬсЬс	ЬдадасЬдад	сЬдЬдссдсс	адсддсЬаса	дсЬЬсассдд	сЬасассаЬд	780
аасЬдддЬдс	дссаддсссс	Ьддсааддда	сЬддааЬддд	ЬддсссЬдаЬ	саассссЬас	840
аадддсдЬдЬ	ссасаЬасаа	ссадаадЬЬс	ааддассддЬ	ЬсассаЬсад	сдЬддасаад	900
адсаадааса	ссдссЬассЬ	дсадаЬдаас	адссЬдсддд	ссдаддасас	сдссдЬдЬас	960
ЬаЬЬдЬдсса	даадсддсЬа	сЬасддсдас	адсдасЬддЬ	асЬЬсдасдЬ	дЬддддссад	1020
ддсасасЬсд	ЬдассдЬдЬс	аадсдсЬадс	дЬддссдсЬс	ссЬссдЬдЬЬ	ЬаЬсЬЬЬссс	1080
ссаЬссдаЬд	аасадсЬдаа	аадсддсасс	дссЬссдЬсд	ЬдЬдЬсЬдсЬ	даасааЬЬЬЬ	1140
ЬасссЬаддд	аадсЬааадЬ	дсадЬддааа	дЬддаЬаасд	сасЬдсадЬс	сддсаасЬсс	1200
саддааЬс+д	Ьдасадааса	ддасЬссаад	дасадсассЬ	асЬсссЬдЬс	сЬссасссЬд	1260
асасЬдЬсЬа	аддсЬдаЬЬа	Ьдадааасас	ааадЬсЬасд	ссЬдсдаадЬ	сасссаЬсад	1320
ддссЬдадсЬ	сдсссдЬсас	ааададсЬЬс	аасаддддад	адЬдЬдасаа	дасссасасс	1380
ЬдЬсссссЬЬ	дЬссЬдсссс	ЬдаадсЬдсЬ	ддсддсссЬЬ	сЬдЬдЬЬссЬ	дЬЬсссссса	1440
аадсссаадд	асасссЬдаЬ	даЬсадссдд	асссссдаад	ЬдассЬдсдЬ	ддЬддЬддаЬ	1500

- 259 030147

дДдДсссасд	аддасссДда	адДдаадДДс	ааДДддДасд	ДддасддсдД	ддаадДдсас	1560
аасдссаада	сааадссдсд	ддаддадсад	Дасаасадса	сдДассдДдД	ддДсадсдДс	1620
сДсассдДсс	Ддсассадда	сДддсДдааД	ддсааддадД	асаадДдсаа	ддДсДссаас	1680
ааадсссДед	дсдсссссаД	сдадаааасс	аДсДссааад	ссааадддса	дссссдадаа	1740
ссасаддДдД	асасссДдсс	сссаДдссдд	даДдадсДда	ссаадаасса	ддДсадссДд	1800
ДддДдссДдд	ДсаааддсДД	сДаДсссадс	дасаДсдссд	ДддадДддда	дадсааДддд	1860
садссддада	асаасДасаа	дассасдссД	сссдДдсДдд	асДссдасдд	сДссДДсДДс	1920
сДсДасадса	адсДсассдД	ддасаададс	аддДддсадс	аддддаасдД	сДДсДсаДдс	1980
ДссдДдаДдс	аДдаддсДсД	дсасаассас	Дасасдсада	ададссДсДс	ссДдДсДссд	2040
ддДааа						2046

<210>	189
<211>	214
<212>	РКТ
<213>	Иску
<220>
<223>	М4-3
<400>	189
Азр 11е	Е1п

10

15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег Е1п 61у 11е Агд Азп Туг 20 25 30

Туг Туг ТЬг Зег Зег Ьеи Низ Зег Е1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег Е1у 50 55 60

Зег Е1у Зег Е1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи Е1п Рго 65 70 75 80

- 260 030147

Е1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п Е1п Туг Зег Ьуз Ьеи Рго Тгр 85 90 95

ТЬг РЬе С1у Е1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Не Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а 100 105 110

Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег Е1у 115 120 125

ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а 130 135 140

Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег С1п 145 150 155 160

С1и Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175

Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Шз Ьуз Уа1 Туг 180 185 190

А1а Суз С1и Уа1 ТЬг Шз С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег 195 200 205

РЬе Азп Агд С1у Е1и Суз 210

<210> 190

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> М4-3 МЬ2(УЬ-СЬ)

<400> 190

дасаРссада	Рдасссадад	ссссадсадс	сРдадсдсса	дсдрдддсда	сададрдасс	60
аРсассРдсс	дддссадсса	дддса^ссдд	аасРассРда	асРддРаРса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсРдсР	даЪсЪасЬас	ассадсадсс	Рдсасадсдд	сдРдссРадс	180
сддРРРадсд	дсадсддсРс	сддсассдас	РРсасссРда	ссаРРадсРс	ссРдсадссс	240

- 261 030147

даддасРРсд	ссассРасРа	сРдссадсад	Расадсаадс	РдсссРддас	сРРсддссад	300
ддаасааадд	РддадаРсаа	дсдРасддРд	дсРдсассаР	сРдРсРРсаР	сРРсссдсса	360
РсРдаРдадс	адррдааарс	РддаасРдсс	РсРдРРдРдР	дссРдсРдаа	РаасРРсРаР	420
сссадададд	ссааадРаса	дрддааддрд	даРаасдссс	РссааРсддд	РаасРсссад	480
дададрдрса	сададсадда	садсааддас	адсассРаса	дссРсадсад	сасссРдасд	540
сРдадсааад	садасРасда	дааасасааа	дРсРасдссР	дсдаадРсас	ссаРсадддс	600
сРдадсРсдс	ссдРсасааа	дадсРРсаас	аддддададр			642

<210> 191

<211> 664

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ν9 (νΐι-ΟΗΙ)-М4-3 МЬ2 (УН-СН1)-Гс («выступ») Р329Е ЬАЬА

<400> 191

Азр 11е Е1п Мер ТЬг О1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 Е1у 15 10 15

Азр Агд \7а1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Азр 11е Агд Азп Туг 20 25 30

Туг Туг ТЬг Зег Агд Ьеи С1и Зег Е1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 50 55 60

Зег Е1у Зег С1у ТЬг Азр Туг ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи Е1п Рго 65 70 75 80

Е1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Б1п Е1п Е1у Азп ТЬг Ьеи Рго Тгр 85 90 95

- 262 030147

Ьуз СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег 115 120 125

СЬу СЬу ТЬг АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи 130 135 140

Рго УаЬ ТЬг УаЬ Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу УаЬ НЬз 145 150 155 160

ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег 165 170 175

УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг Туг Ые Суз 180 185 190

Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Ьуз УаЬ СЬи 195 200 205

Рго Ьуз Зег Суз СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬп УаЬ 210 215 220

СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег СЬп ТЬг Ьеи 225 230 235 240

Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег СЬу СЬу Зег Ые ТЬг Зег СЬу Туг Туг 245 250 255

Тгр Азп Тгр Ые Агд СЬп НЬз Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Ые СЬу 260 265 270

Туг Ые ТЬг Туг Азр СЬу Зег Азп Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Зег 275 280 285

Агд УаЬ ТЬг Ые Зег Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп СЬп РЬе Зег Ьеи Ьуз 290 295 300

Ьеи Зег Зег УаЬ ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа Азр 305 310 315 320

263 030147

- 264 030147

Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз АЬа 530 535 540

Ьеи СЬу АЬа Рго ЬЬе СЬи Ьуз ТЬг 1Ье Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго 545 550 555 560

Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Суз Агд Азр СЬи Ьеи ТЬг 565 570 575

Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег 580 585 590

Азр ЬЬе АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг 595 600 605

Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг 610 615 620

Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп УаЬ РЬе 625 630 635 640

Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз 660

<210> 192

<211> 1992

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9(УЬ-СНЬ)-М4-3 МЬ2(УН-СН1)-Ес(«выступ») Р329С ЬАЬА (ДНК)

<400> 192

даДаДссада	Ддасссадад	ссссадсДсД	сДдадсдсса	дсдДдддсда	сададДдасс	60
аДсассДдДс	дддссадсса	ддасаДсада	аасДассДда	асДддДаДса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсДдсД	даДсДасДас	ассадсадас	Дддааадсдд	сдДдсссДсс	180

- 265 030147

адаббббссд	дсадсддсбс	сддсассдас	басасссбда	ссабсадсад	ссбдсадссс	240
даддабббсд	ссасабабба	сбдссадсад	ддсаабассс	бдсссбддас	сббсддасад	300
ддсасаааад	бддааабсаа	дадсадсдсб	бссассааад	дсссббссдб	дбббссбсбд	360
дсбссбадсб	ссаадбссас	сбсбддаддс	ассдсбдсбс	бсддабдссб	сдбдааддаб	420
баббббссбд	адссбдбдас	адбдбссбдд	аабадсддад	сасбдассбс	бддадбдсаб	480
асбббссссд	сбдбдсбдса	дбссбсбдда	сбдбасадсс	бдадсадсдб	ддбдасадбд	540
сссадсадса	дссбдддсас	ссадассбас	абсбдсаасд	бдаассасаа	дсссадсаас	600
ассааддбдд	асаадааддб	ддаасссаад	бсббдбддсд	даддсддабс	сддсддаддд	660
ддабсбсадд	бдсадсбдса	ддааадсддс	ссбддссбдд	бсаадсссад	ссадасссбд	720
адссбдассб	дсассдбдбс	сддсддсадс	абсассадсд	дсбасбасбд	даасбддабб	780
сддсадсасс	ссддсааддд	ссбддаабдд	абсддсбаса	бсассбасда	сддсадсаас	840
аасбасаасс	ссадссбдаа	дбссададбд	ассабсадсс	дддасассад	саадаассад	900
ббсадссбда	адсбдбссад	сдбдасадсс	дссдасассд	ссдбдбасба	сбдсдссдас	960
ббсдасбасб	ддддссаддд	сасссбддбс	ассдбдбсса	дсдсбадсас	саадддсссс	1020
адсдбдббсс	сссбддсасс	садсадсаад	адсасабсбд	дсддаасадс	сдсбсбдддс	1080
бдбсбддбда	аадасбасбб	ссссдадссс	дбдассдбдб	сббддаасбс	бддсдсссбд	1140
ассадсддсд	бдсасассбб	бссадссдбд	сбдсададса	дсддссбдба	сбсссбдбсс	1200
бссдбддбса	ссдбдсссбс	бадсбсссбд	ддаасасада	сабабабсбд	баабдбсааб	1260
сасаадссбб	ссаасассаа	адбсдабаад	ааадбсдадс	ссаададсбд	сдасаааасб	1320
сасасабдсс	сассдбдссс	адсассбдаа	дсбдсадддд	дассдбсадб	сббссбсббс	1380
сссссаааас	ссааддасас	ссбсабдабс	бсссддассс	сбдаддбсас	абдсдбддбд	1440
дбддасдбда	дссасдаада	сссбдаддбс	аадббсаасб	ддбасдбдда	сддсдбддад	1500
дбдсабаабд	ссаадасааа	дссдсдддад	дадсадбаса	асадсасдба	ссдбдбддбс	1560
адсдбссбса	ссдбссбдса	ссаддасбдд	сбдаабддса	аддадбасаа	дбдсааддбс	1620
бссаасааад	сссбсддсдс	ссссабсдад	аааассабсб	ссааадссаа	адддсадссс	1680
сдадаассас	аддбдбасас	ссбдссссса	бдссдддабд	адсбдассаа	даассаддбс	1740

- 266 030147

адссЬдЬддЬ	дссЬддЬсаа	аддсПсЬаЬ	сссадсдаса	ЬсдссдЬдда	дЬдддададс	1800
ааЬдддсадс	сддадаасаа	сЬасаадасс	асдссЬсссд	ЪдсЪддасЕс	сдасддсЬсс	1860
ПсПссЬсЬ	асадсаадсЬ	сассдЬддас	аададсаддЬ	ддсадсаддд	даасдЪсНс	1920
ЬсаЬдсЬссд	ЬдаЬдсаЬда	ддсЬсЬдсас	аассасЬаса	сдсадаадад	ссЬсЬсссЬд	1980
ЬсЬссдддЬа	аа					1992

<210>	193
<211>	442
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	М4-3 МЬ2(УН-СН1)-Ес(«впадина») Р329С	ЬАЬА
<400>	193
Е1п Уа1	Е1п Ьеи Е1п Е1и Зег Е1у Рго Е1у Ьеи	Уа1 Ьуз Рго Зег Е1п

10

15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег С1у Е1у Зег 11е ТЬг Зег С1у 20 25 30

Туг Туг Тгр Азп Тгр 11е Агд С1п Шз Рго Е1у Ьуз Е1у Ьеи Б1и Тгр 35 40 45

11е Е1у Туг 11е ТЬг Туг Азр Е1у Зег Азп Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег 65 70 75 80

Ьеи Ьуз Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Азр РЬе Азр Туг Тгр Е1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 100 105 110

А1а Зег ТЬг Ьуз Е1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз 115 120 125

267 030147

Зег ТЬг Зег Е1у Е1у ТЬг А1а А1а Ьеи Е1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг 130 135 140

РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег 145 150 155 160

С1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег 165 170 175

Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи 61у ТЬг 61п ТЬг 180 185 190

Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз 195 200 205

Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз 210 215 220

Рго А1а Рго С1и А1а А1а С1у Е1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго 225 230 235 240

Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег НЬз Е1и Азр Рго Е1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр 260 265 270

Туг Уа1 Азр С1у Уа1 Е1и УаЬ НЬз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и 275 280 285

Е1и Е1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи 290 295 300

НЬз Е1п Азр Тгр Ьеи Азп Е1у Ьуз Е1и Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп 305 310 315 320

Ьуз А1а Ьеи Е1у А1а Рго 11е Е1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз Е1у 325 330 335

268

030147

61η Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Суз ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и 340 345 350

Рго Зег Азр Не А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп 370 375 380

Ьеи Уа1 Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп 405 410 415

Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мер Шз С1и А1а Ьеи Шз Азп Шз Туг ТЬг 420 425 430

С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз 435 440

<210> 194

<211> 1326

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> М4-3 МЬ2(УН-СН1)-Гс(«впадина») Р3296 ЬАЬА

<400> 194

саддРдсадс	Рдсаддааад	сддсссРддс	срддрсаадс	ссадссадас	ссРдадссРд	60
ассРдсассд	РдРссддсдд	садсаРсасс	адсддсРасР	асГддаасГд	даРссддсад	120
сассссддса	адддссРдда	аРддаРсддс	РасаРсассР	асдасддсад	саасаасРас	180
аассссадсс	РдаадРссад	адРдассаРс	адссдддаса	ссадсаадаа	ссадРРсадс	240
сРдаадсРдР	ссадсдрдас	адссдссдас	ассдссдрдр	асГасГдсдс	сдасРРсдас	300
РасРддддсс	адддсассср	ддрсассдрд	РссадсдсРа	дсассааддд	ссссРссдРд	360
РРсссссРдд	сссссадсад	саададсасс	адсддсддса	садссдсГсГ	дддсРдссРд	420

- 269 030147

дЬсааддасЬ	асЬЬссссда	дсссдЬдасс	дЬдЬссЬдда	асадсддадс	ссЬдассЬсс	480
ддсдЬдсаса	ссЬЬссссдс	сдЬдсЬдсад	адЫсЬддсс	ЬдЬаЬадссЬ	дадсадсдЬд	540
дЬсассдЬдс	сЬЬсЬадсад	ссЬдддсасс	садассЪаса	ЬсЬдсаасдЬ	даассасаад	600
сссадсааса	ссааддЬдда	саадааддЬд	дадсссаада	дсЬдсдасаа	аасЬсасаса	660
ЬдсссассдЬ	дсссадсасс	ЬдаадсЬдса	дддддассдЬ	садЬсЫссЬ	сЫсссссса	720
ааасссаадд	асасссЬсаЬ	даЬсЬсссдд	ассссЬдадд	ЬсасаЬдсдЬ	ддЬддЬддас	780
дЬдадссасд	аадасссЬда	ддЬсаадЬЬс	аасЬддЬасд	ЬддасддсдЬ	ддаддЬдсаЬ	840
ааЬдссаада	сааадссдсд	ддаддадсад	Ьасаасадса	сдЬассдЬдЬ	ддЬсадсдЬс	900
сЬсассдЬсс	Ьдсассадда	сЬддсЪдааЬ	ддсааддадЬ	асаадЬдсаа	ддЬсЬссаас	960
ааадсссЬсд	дсдсссссаЬ	сдадаааасс	аЬсЪссааад	ссааадддса	дссссдадаа	1020
ссасаддЬдЬ	дсасссЬдсс	сссаЬсссдд	даЬдадсЬда	ссаадаасса	ддЬсадссЬс	1080
ЬсдЬдсдсад	ЬсаааддсМ	сЬаЬсссадс	дасаЬсдссд	ЬддадЬддда	дадсааЬддд	1140
садссддада	асаасЬасаа	дассасдссЬ	сссдЬдсЬдд	асЬссдасдд	сЬссЫсЫс	1200
сЬсдЬдадса	адсЬсассдЬ	ддасаададс	аддЬддсадс		сЫсЪсаЪдс	1260
ЬссдЬдаЬдс	аЬдаддсЬсЬ	дсасаассас	Ьасасдсада	ададссЬсЬс	ссЬдЬсЬссд	1320

ддЬааа 1326

<210> 195

<211> 681

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9(УН-СЬ)-М4-3 МЬ2(УН-СНЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 195

С1и УаЬ С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

- 270 030147

ТЬг МеЕ Азп Тгр Уа1 Агд Е1п А1а Рго Е1у Ьуз С1у Ьеи Е1и Тгр Уа1 35 40 45

А1а Ьеи 11е Азп Рго Туг Ьуз Е1у Уа1 Зег ТЬг Туг Азп Е1п Ьуз РЬе 50 55 60

Ьеи Е1п МеЕ Азп Зег Ьеи Агд А1а Е1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд Зег С1у Туг Туг Е1у Азр Зег Азр Тгр Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 100 105 110

С1у Е1п Е1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег Уа1 А1а А1а Рго 115 120 125

Зег \7а1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр Е1и Е1п Ьеи Ьуз Зег Е1у ТЬг 130 135 140

А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд Е1и А1а Ьуз 145 150 155 160

Уа1 Е1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег Е1у Азп Зег С1п Е1и 165 170 175

Зег Уа1 ТЬг Е1и Е1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег 180 185 190

ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг Е1и Ьуз Ηίδ Ьуз Уа1 Туг А1а 195 200 205

Суз Е1и Уа1 ТЬг Низ Е1п Е1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе 210 215 220

Азп Агд Е1у Е1и Суз Е1у Е1у Е1у Е1у Зег Е1у Е1у Е1у Е1у Зег Е1п 225 230 235 240

- 271 030147

- 272 030147

273 030147

РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мер Низ С1и А1а Ьеи Шз Азп Низ Туг ТЬг СЬп 660 665 670

Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз 675 680

<210> 196

<211> 2043

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9 (УН-СЬ)-М4-3 МЬ2(УН-СН1)-Ес(«выступ») Р329С ЬАЬА (ДНК)

<400> 196

даддРдсадс	РддРсдадад	сддаддсддс	сРддРдсадс	сРддсддсад	ссрдадасрд	60
адсРдсдссд	ссадсддсРа	садсРРсасс	ддсРасасса	РдаасРдддР	ссддсаддса	120
ссРддсаадд	дасРддааРд	ддрддсссрд	аРсаассссР	асаадддсдр	дадсассРас	180
аассадаадр	Рсааддассд	дРРсассаРс	адсдрддаса	ададсаадаа	сассдссРаР	240
срдсадарда	асадссРдсд	ддссдаддас	ассдссдрдр	асРасРдсдс	садаадсддс	300
РасРасддсд	асадсдасРд	дРасРРсдас	дрдрддддсс	адддсасссР	сдрдассдрд	360
РсРадсдсРа	дсдрддсрдс	ассаРсРдРс	РРсаРсРРсс	сдссаРсРда	РдадсадРРд	420
аааРсРддаа	срдссрсрдр	РдРдРдссРд	сРдааРаасР	РсРаРсссад	ададдссааа	480
драсадрдда	аддРддаРаа	сдсссРссаа	РсдддРаасР	сссаддадад	РдРсасадад	540
саддасадса	аддасадсас	сРасадссРс	адсадсассс	РдасдсРдад	сааадсадас	600
Расдадааас	асааадРсРа	сдссРдсдаа	дРсасссаРс	адддссРдад	сРсдсссдРс	660
асааададсР	Рсаасадддд	ададрдрддс	ддаддсддаР	ссддсддадд	дддаРсРсад	720
дрдсадсрдс	аддааадсдд	сссРддссРд	дрсаадссса	дссадасссР	дадссРдасс	780
РдсассдРдР	ссддсддсад	саРсассадс	ддсРасРасР	ддаасрддар	Рсддсадсас	840
сссддсаадд	дссРддааРд	даРсддсРас	аРсассРасд	асддсадсаа	саасРасаас	900
сссадссРда	адрссададр	дассаРсадс	сдддасасса	дсаадаасса	дРРсадссРд	960
аадсРдРсса	дсдРдасадс	сдссдасасс	дссдрдраср	асРдсдссда	сРРсдасРас	1020
Рддддссадд	дсасссРддР	сассдРдРсс	адсдсРадса	ссаадддссс	садсдРдРРс	1080

- 274 030147

ссссбддсас	ссадсадсаа	дадсасабсб	ддсддаасад	ссдсбсбддд	сбдбсбддбд	1140
ааадасбасб	бссссдадсс	сдбдассдбд	бсббддаасб	сбддсдсссб	дассадсддс	1200
дбдсасассб	ббссадссдб	дсбдсададс	адсддссбдб	асбсссбдбс	сбссдбддбс	1260
ассдбдсссб	сбадсбсссб	дддаасасад	асабабабсб	дбаабдбсаа	бсасаадссб	1320
бссаасасса	аадбсдабаа	дааадбсдад	сссаададсб	дсдасаааас	бсасасабдс	1380
ссассдбдсс	садсассбда	адсбдсаддд	ддассдбсад	бсббссбсбб	ссссссаааа	1440
сссааддаса	сссбсабдаб	сбсссддасс	ссбдаддбса	сабдсдбддб	ддбддасдбд	1500
адссасдаад	асссбдаддб	саадббсаас	бддбасдбдд	асддсдбдда	ддбдсабааб	1560
дссаадасаа	адссдсддда	ддадсадбас	аасадсасдб	ассдбдбддб	садсдбссбс	1620
ассдбссбдс	ассаддасбд	дсбдаабддс	ааддадбаса	адбдсааддб	сбссаасааа	1680
дсссбсддсд	сссссабсда	даааассабс	бссааадсса	аадддсадсс	ссдадаасса	1740
саддбдбаса	сссбдссссс	абдссдддаб	дадсбдасса	адаассаддб	садссбдбдд	1800
бдссбддбса	ааддсббсба	бсссадсдас	абсдссдбдд	адбдддадад	саабдддсад	1860
ссддадааса	асбасаадас	сасдссбссс	дбдсбддасб	ссдасддсбс	сббсббссбс	1920
басадсаадс	бсассдбдда	саададсадд	бддсадсадд	ддаасдбсбб	сбсабдсбсс	1980
дбдабдсабд	аддсбсбдса	саассасбас	асдсадаада	дссбсбсссб	дбсбссдддб	2040

ааа 2043

<210> 197

<211> 690

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А(УН-СН1)- У9(УН-СЬ)-Гс(«выступ») Р329Е ЬАЬА

<400> 197

С1п Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1п Зег С1у А1а 01и Уа1 Ьуз Ьуз Рго Е1у А1а

15 10 15

Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег Е1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Е1и РЬе 20 25 30

275 030147

Е1у МеЬ Азп Тгр Уа1 Агд Е1п А1а Рго Е1у Е1п Е1у Ьеи Е1и Тгр МеЬ 35 40 45

Е1у Тгр 11е Азп ТЬг Ьуз ТЬг Е1у Е1и А1а ТЬг Туг Уа1 Е1и Е1и РЬе 50 55 60

Ьуз Е1у Агд Уа1 ТЬг РЬе ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 75 80

А1а Агд Тгр Азр РЬе А1а Туг Туг Уа1 Е1и А1а МеЬ Азр Туг Тгр Е1у 100 105 110

Е1п Е1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег 115 120 125

Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у 61у ТЬг А1а 130 135 140

А1а Ьеи Е1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго Е1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 145 150 155 160

Зег Тгр Азп Зег Е1у А1а Ьеи ТЬг Зег Е1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а 165 170 175

Уа1 Ьеи Е1п Зег Зег Е1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 180 185 190

Рго Зег Зег Зег Ьеи Е1у ТЬг Е1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Шз 195 200 205

Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 Е1и Рго Ьуз Зег Суз 210 215 220

С1у Е1у Е1у Е1у Зег Е1у Е1у Е1у Е1у Зег С1и Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1и 225 230 235 240

276

030147

Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго 245

СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз 250 255

АЬа АЬа Зег СЬу Туг Зег РЬе ТЬг 260

СЬу Туг ТЬг МеД Азп Тгр УаЬ Агд 265 270

СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи 275 280

Тгр УаЬ АЬа Ьеи Ые Азп Рго Туг 285

Ьуз СЬу УаЬ Зег ТЬг Туг Азп СЬп 290 295

Ьуз РЬе Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг Ые 300

Зег УаЬ Азр Ьуз Зег Ьуз Азп ТЬг 305 310

АЬа Туг Ьеи СЬп МеД Азп Зег Ьеи 315 320

Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг 325

Туг Суз АЬа Агд Зег СЬу Туг Туг 330 335

СЬу Азр Зег Азр Тгр Туг РЬе Азр 340

УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ 345 350

ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег УаЬ АЬа 355 360

АЬа Рго Зег УаЬ РЬе Ые РЬе Рго 365

Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег 370 375

СЬу ТЬг АЬа Зег УаЬ УаЬ Суз Ьеи 380

Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи 385 390

АЬа Ьуз УаЬ СЬп Тгр Ьуз УаЬ Азр 395 400

Азп АЬа Ьеи СЬп Зег СЬу Азп Зег 405

СЬп СЬи Зег УаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр 410 415

Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи 420

Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз 425 430

АЬа Азр Туг СЬи Ьуз НЬз Ьуз УаЬ 435 440

Туг АЬа Суз СЬи УаЬ ТЬг НЬз СЬп 445

- 277 030147

Е1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз 450 455

Зег РЬе Азп Агд С1у С1и Суз Азр 460

Ьуз ТЬг Нгз ТЬг Суз Рго Рго Суз 465 470

Рго А1а Рго С1и А1а А1а Е1у Е1у 475 480

Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго 485

Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер 11е 490 495

Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз 500

Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Нгз Е1и 505 510

Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр 515 520

Туг Уа1 Азр Е1у Уа1 Е1и Уа1 Нгз 525

Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и 530 535

Е1и Е1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 540

Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг \7а1 Ьеи 545 550

Нгз Е1п Азр Тгр Ьеи Азп Е1у Ьуз 555 560

61и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп 565

Ьуз А1а Ьеи С1у А1а Рго 11е Е1и 570 575

Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у 580

Е1п Рго Агд С1и Рго Е1п \7а1 Туг 585 590

ТЬг Ьеи Рго Рго Суз Агд Азр С1и 595 600

Ьеи ТЬг Ьуз Азп Е1п Уа1 Зег Ьеи 605

Тгр Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг 610 615

Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 Е1и Тгр 620

С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп 625 630

Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 635 640

Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе 645

Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр 650 655

- 278 030147

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп \7а1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеД Низ 660 665 670

С1и А1а Ьеи Низ Азп Низ Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 675 680 685

С1у Ьуз 690

<210> 198

<211> 2070

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А(УН-СН1)-У9(УН-СЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 198

саддДдсадс	ДддДдсадДс	Дддсдссдаа	дДдаадааас	сДддсдссад	сдДдааддДд	60
ДссДдсаадд	ссадсддсДа	сассДДсасс	дадДДсддса	ДдаасДдддД	ссдасаддсс	120
ссДддасадд	дссДддааДд	даДдддсДдд	аДсаасасса	адассддсда	ддссассДас	180
дДддаададД	Дсаадддсад	адДдассДДс	ассассдаса	ссадсассад	сассдссДас	240
аДддаасДдс	ддадссДдад	аадсдасдас	ассдссдДдД	асДасДдсдс	садаДдддас	300
ДДсдссДасД	аДдДддаадс	саДддасДас	Дддддссадд	дсассассдД	дассдДдДсД	360
адДдсДадса	сааадддссс	садсдДдДДс	ссДсДддссс	сДадсадсаа	дадсасаДсД	420
ддсддаасад	ссдсссДддд	сДдссДддДс	ааддасДасД	ДДсссдадсс	сдДдасадДд	480
ДссДддаасД	сДддсдсссД	дасаадсддс	дДдсасассД	ДДссадссдД	дсДдсададс	540
адсддссДдД	асДсДсДдад	садсдДддДс	ассдДдссДа	дсДсДадссД	дддсасссад	600
ассДасаДсД	дсаасдДдаа	ссасаадссс	адсаасасса	аддДддасаа	дааддДддаа	660
сссаададсД	дсддсддадд	сддаДссдда	ддсддаддаД	ссдаадДдса	дсДддДддаа	720
ДсДддсддад	дссДддДдса	дссДддсдда	ДсДсДдадас	ДдадсДдДдс	сдссадсддс	780
ДасадсДДса	ссддсДасас	саДдаасДдд	дДдсдссадд	ссссДддсаа	дддасДддаа	840
ДдддДддссс	ДдаДсаассс	сДасаадддс	дДдДссасаД	асаассадаа	дДДсааддас	900

- 279 030147

сддЬЬсасса	ЬсадсдЬдда	саададсаад	аасассдссЬ	ассЬдсадаЬ	даасадссЬд	960
сдддссдадд	асассдссдЬ	дЬасЬаНдЬ	дссадаадсд	дсЬасЬасдд	сдасадсдас	1020
ЬддЬасЬЬсд	асдЬдЬдддд	ссадддсаса	сЬсдЬдассд	ЬдЬсаадсдс	ЬадсдЬддсс	1080
дсЬсссЬссд	ЬдЬНаЬсЬЬ	ЬсссссаЬсс	даЬдаасадс	Ьдаааадсдд	сассдссЬсс	1140
дЬсдЬдЬдЬс	ЬдсЬдаасаа	ЬЬЬЬЬасссЬ	адддаадсЬа	аадЬдсадЬд	дааадЬддаЬ	1200
аасдсасЬдс	адЬссддсаа	сЬсссаддаа	ЬсЬдЬдасад	аасаддасЬс	сааддасадс	1260
ассЬасЬссс	ЬдЬссЬссас	ссЬдасасЬд	ЬсЬааддсЬд	аЬЬаЬдадаа	асасааадЬс	1320
ЬасдссЬдсд	аадЪсассса	ЬсадддссЬд	адсЬсдсссд	Ьсасааадад	сЬЬсаасадд	1380
ддададЬдЬд	асаадассса	сассЬдЬссс	ссЬЬдЬссЬд	ссссЬдаадс	ЬдсЬддсддс	1440
ссЬЬсЬдЬдЬ	ЬссЬдЬЬссс	сссааадссс	ааддасассс	ЬдаЬдаЬсад	ссддассссс	1500
даадЬдассЬ	дсдЬддЬддЬ	ддаЬдЬдЬсс	сасдаддасс	сЬдаадЬдаа	дЬЬсааЬЬдд	1560
ЬасдЬддасд	дсдЬддаадЬ	дсасаасдсс	аадасааадс	сдсдддадда	дсадЬасаас	1620
адсасдЬасс	дЬдЬддЬсад	сдЬссЬсасс	дЬссЬдсасс	аддасЬддсЬ	дааЬддсаад	1680
дадЬасаадЬ	дсааддЬсЬс	саасааадсс	сЬсддсдссс	ссаЬсдадаа	аассаЬсЬсс	1740
ааадссааад	ддсадссссд	адаассасад	дЬдЬасассс	ЬдсссссаЬд	ссдддаЬдад	1800
сЬдассаада	ассаддЬсад	ссЬдЬддЬдс	сЬддЬсааад	дсЬЬсЬаЬсс	садсдасаЬс	1860
дссдЬддадЬ	дддададсаа	Ьдддсадссд	дадаасаасЬ	асаадассас	дссЬсссдЬд	1920
сЬддасЬссд	асддсЬссЬЬ	сЬЬссЬсЬас	адсаадсЬса	ссдЬддасаа	дадсаддЬдд	1980
садсадддда	асдЬсЬЬсЬс	аЬдсЬссдЬд	аЬдсаЬдадд	сЬсЬдсасаа	ссасЬасасд	2040
садаададсс	ЬсЬсссЬдЬс	ЬссдддЬааа				2070

<210> 199

<211> 214

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Н2С(УЬ-СН1)

<400> 199

- 280 030147

- 281 030147

УаЬ СЬи Рго Ьуз Зег Суз 210

<210> 200 <211> 642 <212> ДНК <213> Искусственная	последовательность
<220> <223> Н2С(УЬ-СН1)
<400> 200 садассдЕдд	Едасасадда	асссадссЕд	ассдЕсЕссс	сЕддсддсас	сдЕдасссЕд	60
ассЕдЕддаа	дсадсасадд	сдссдЕдасс	адсддсЕасЕ	ассссаасЕд	ддЕдсадсад	120
аадсссддсс	аддссссЕад	аддасЕдаЕс	ддсддсасса	адЕЕЕсЕддс	сссЕддсасс	180
сссдссадаЕ	ЕсЕсЕддсЕс	ЕсЕдсЕдддс	ддсааддссд	сссЕдасасЕ	дЕсЕддсдЕд	240
садссЕдадд	асдаддссда	дЕасЕасЕдс	дсссЕдЕддЕ	асадсаасад	аЕдддЕдЕЕс	300
ддсддаддса	ссаадсЕдас	сдЕдсЕдадс	адсдсЕЕсса	ссаааддссс	ЕЕссдЕдЕЕЕ	360
ссЕсЕддсЕс	сЕадсЕссаа	дЕссассЕсЕ	ддаддсассд	сЕдсЕсЕсдд	аЕдссЕсдЕд	420
ааддаЕЕаЕЕ	ЕЕссЕдадсс	ЕдЕдасадЕд	ЕссЕддааЕа	дсддадсасЕ	дассЕсЕдда	480
дЕдсаЕасЕЕ	ЕссссдсЕдЕ	дсЕдсадЕсс	ЕсЕддасЕдЕ	асадссЕдад	садсдЕддЕд	540
асадЕдссса	дсадсадссЕ	дддсасссад	ассЕасаЕсЕ	дсаасдЕдаа	ссасаадссс	600
адсаасасса	аддЕддасаа	дааддЕддаа	сссаадЕсЕЕ			642

<210> 201

<211> 684

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Н2С(УН-СЬ)-М4-3 МЬ2(УН-СН1)-Рс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 201

СЬи Уа1 СЬп Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Азп Ьуз Туг 20 25 30

- 282 030147

283 030147

- 284 030147

- 285 030147

Е1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Шз С1и А1а Ьеи Шз Азп Нгз 660 665 670

Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго Е1у Ьуз 675 680

<210> 202

<211> 2052

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Н2С(УН-СЬ)-М4-3 МЬ2(УН-СН1)-Гс(«выступ») Р329Е ЬАЬА

<400> 202

даддЬдсадс	ЪддЪддааад	сддсддадда	сЬддЬдсадс	сЬддсддаад	ссЬдаадсЬд	60
ЬсНдсдссд	ссадсддсП	сассНсаас	аааЬасдсса	ЬдаасЬдддЬ	дсдссаддсс	120
ссЪддсаадд	дасЬддааЬд	ддЬддсссдд	аЬсадаадса	адЬасаасаа	сЬасдссасс	180
ЬасЬасдссд	асадсдЬдаа	ддассддПс	ассаЬсадсс	дддасдасад	саадаасасс	240
дссЬассЬдс	адаЬдаасаа	ссЬдаааасс	даддасассд	ссд-ЬдТас-Ьа	сЬдсдЬдсдд	300
сасддсаасЬ	Ьсддсаасад	сЬасаЬсадс	ЬасЬдддссЬ	асЬддддаса	дддсасссЬд	360
дЬдасадЬдЬ	ссадсдсЬад	сдЬддсЬдса	ссаЬсЬдЬсЬ	ЪсаЬсНссс	дссаЬсСдаЬ	420
дадсадНда	ааЬсЬддаас	ЬдссЬсЬдП	дЬдЬдссЬдс	ЬдааЬаасН	сЬаЬсссада	480
даддссааад	ЬасадЬддаа	ддЬддаЬаас	дсссЬссааЬ	сдддЬаасЬс	ссаддададЬ	540
дЬсасададс	аддасадсаа	ддасадсасс	ЬасадссЬса	дсадсасссЬ	дасдсЬдадс	600
ааадсадасЬ	асдадаааса	сааадЬсЬас	дссЬдсдаад	ЬсасссаЬса	дддссЬдадс	660
ЬсдсссдЬса	сааададсП	саасадддда	дадЬдЬддсд	даддсддаЬс	сддсддаддд	720
ддаЬсЬсадд	ЬдсадсЬдса	ддааадсддс	ссЬддссЬдд	Ьсаадсссад	ссадасссЬд	780
адссЬдассЬ	дсассдЬдЬс	сддсддсадс	аЪсассадсд	дсЬасЬасЬд	даасЪддаН	840
сддсадсасс	ссддсааддд	ссЬддааЬдд	аЬсддсЬаса	ЬсассЬасда	сддсадсаас	900
аасЬасаасс	ссадссЬдаа	дЬссададЬд	ассаЬсадсс	дддасассад	саадаассад	960
НсадссЬда	адсЬдЬссад	сдЬдасадсс	дссдасассд	ссдЬдЬасЬа	сЬдсдссдас	1020

- 286 030147

ЬЬсдасЬасЬ	ддддссаддд	сасссЬддЬс	ассдЬдЬсса	дсдсЬадсас	саадддсссс	1080
адсдЬдЬЬсс	сссЬддсасс	садсадсаад	адсасаЬсЬд	дсддаасадс	сдсЬсЬдддс	1140
ЬдЬсЬддЬда	аадасЬасЬЬ	ссссдадссс	дЬдассдЬдЬ	сЬЬддаасЬс	ЬддсдсссЬд	1200
ассадсддсд	ЬдсасассЬЬ	ЬссадссдЬд	сЬдсададса	дсддссЬдЬа	сЬсссЬдЬсс	1260
ЬссдЬддЬса	ссдЬдсссЬс	ЬадсЬсссЬд	ддаасасада	саЬаЬаЬсЬд	ЬааЬдЬсааЬ	1320
сасаадссЬЬ	ссаасассаа	адЬсдаЬаад	ааадЬсдадс	ссаададсЬд	сдасаааасЬ	1380
сасасаЬдсс	сассдЬдссс	адсассЬдаа	дсЬдсадддд	дассдЬсадЬ	сЬЬссЬсЬЬс	1440
сссссаааас	ссааддасас	ссЬсаЬдаЬс	Ьсссддассс	сЬдаддЬсас	аЬдсдЬддЬд	1500
дЬддасдЬда	дссасдаада	сссЬдаддЬс	аадЬЬсаасЬ	ддЬасдЬдда	сддсдЬддад	1560
дЬдсаЬааЬд	ссаадасааа	дссдсдддад	дадсадЬаса	асадсасдЬа	ссдЬдЬддЬс	1620
адсдЬссЬса	ссдЬссЬдса	ссаддасЬдд	сЬдааЬддса	аддадЬасаа	дЬдсааддЬс	1680
Ьссаасааад	сссЬсддсдс	ссссаЬсдад	аааассаЬсЬ	ссааадссаа	адддсадссс	1740
сдадаассас	аддЬдЬасас	ссЬдссссса	ЬдссдддаЬд	адсЬдассаа	даассаддЬс	1800
адссЬдЬддЬ	дссЬддЬсаа	аддсЬЬсЬаЬ	сссадсдаса	ЬсдссдЬдда	дЬдддададс	1860
ааЬдддсадс	сддадаасаа	сЬасаадасс	асдссЬсссд	ЬдсЬддасЬс	сдасддсЬсс	1920
ЬЬсЬЬссЬсЬ	асадсаадсЬ	сассдЬддас	аададсаддЬ	ддсадсаддд	даасдЬсЬЬс	1980
ЬсаЬдсЬссд	ЬдаЬдсаЬда	ддсЬсЬдсас	аассасЬаса	сдсадаадад	ссЬсЬсссЬд	2040
ЬсЬссдддЬа	аа					2052

<210> 203

<211> 212

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 431/26 (УЬ-СЬ)

<400> 203

Азр 11е С1п МеЬ ТЬг Е1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у 15 10 15

- 287 030147

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Зег ТЬг Зег Зег Зег Уа1 Зег Туг Мер 20 25 30

Ηΐ3 Тгр Туг С1п Е1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е Туг 35 40 45

Зег ТЬг Зег Азп Ьеи А1а Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег Е1у Зег 50 55 60

С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг РЬе ТЬг 11е Зег Зег Ьеи Е1п Рго С1и 65 70 75 80

Азр 11е А1а ТЬг Туг Туг Суз НЬз Е1п Тгр Зег Зег Туг Рго ТЬг РЬе 85 90 95

С1у Е1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а Рго Зег 100 105 110

Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр Е1и Е1п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЬг А1а 115 120 125

Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а Ьуз \7а1 130 135 140

Е1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи Е1п Зег Е1у Азп Зег Е1п Е1и Зег 145 150 155 160

Уа1 ТЬг С1и Е1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег ТЬг 165 170 175

Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг Е1и Ьуз Нлз Ьуз Уа1 Туг А1а Суз 180 185 190

Е1и Уа1 ТЬг Низ Е1п Е1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп 195 200 205

Агд Е1у Е1и Суз 210

- 288 030147

<210> 204

<2Ы> 636

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 431/26(УЬ-СЬ)

<400> 204

дасаДссада	Ддасссадад	ссссадсадс	сДдДсДдсса	дсдДдддсда	сададДдасс	60
аДсассДдДа	дсассадсад	садсдДдДсс	ДасаДдсасД	ддДаДсадса	даадсссддс	120
ааддссссса	адсДдсДдаД	сДасадсасс	ДссааДсДдд	ссадсддсдД	дсссадсада	180
ДДДДсДддса	дсддсДссдд	сассдасДДс	ассДДсасса	ДсадсДсссД	дсадсссдад	240
даДаДсдсса	ссДасДасДд	ссассадДдд	ДссадсДасс	ссассДДДдд	ссадддсасс	300
ааддДддааа	ДсаадсдДас	ддДддсДдса	ссаДсДдДсД	ДсаДсДДссс	дссаДсДдаД	360
дадсадДДда	ааДсДддаас	ДдссДсДдДД	дДдДдссДдс	ДдааДаасДД	сДаДсссада	420
даддссааад	ДасадДддаа	ддДддаДаас	дсссДссааД	сдддДаасДс	ссаддададД	480
дДсасададс	аддасадсаа	ддасадсасс	ДасадссДса	дсадсасссД	дасдсДдадс	540
ааадсадасД	асдадаааса	сааадДсДас	дссДдсдаад	ДсасссаДса	дддссДдадс	600
ДсдсссдДса	сааададсДД	саасадддда	дадДдД			636

<210> 205

<211> 689

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 431/26(УН-СН1)-У9(УН-СЬ)-Ес(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 205

СЬп Уа1 С1п Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ Агд Рго Зег СЬп 15 10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег СЬу РЬе ТЬг Ые Зег Зег СЬу 20 25 30

Туг Зег Тгр НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп Рго Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи Тгр 35 40 45

289 030147

11е Е1у Туг 11е Е1п Туг Зег С1у 50 55

11е ТЬг Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи 60

Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг Мер Ьеи Уа1 65 70

Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег 75 80

Ьеи Агд Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а 85

А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 90 95

А1а Агд С1и Азр Туг Азр Туг НЬз 100

Тгр Туг РЬе Азр Уа1 Тгр Е1у С1п 105 110

С1у Зег Ьеи Уа1 ТЬг \7а1 Зег Зег 115 120

А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег \7а1 125

РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз 130 135

Зег ТЬг Зег С1у Е1у ТЬг А1а А1а 140

Ьеи Е1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг 145 150

РЬе Рго Е1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег 155 160

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег 165

С1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 170 175

Ьеи Б1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег 180

Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго 185 190

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг 195 200

Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Шз Ьуз 205

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз 210 215

Ьуз Уа1 Е1и Рго Ьуз Зег Суз Е1у 220

С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у 225 230

Зег Е1и Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1и Зег 235 240

С1у С1у С1у Ьеи \7а1 С1п Рго С1у 245

Е1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а 250 255

290 030147

- 291 030147

ТЬг ΗΪ5 ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Е1и А1а А1а Е1у С1у Рго 465 470 475 480

Зег \7а1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е Зег 485 490 495

Агд ТЬг Рго Е1и 7а1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Низ Е1и Азр 500 505 510

Рго Е1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 Е1и Уа1 Шз Азп 515 520 525

А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд Е1и Е1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 530 535 540

Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Низ Е1п Азр Тгр Ьеи Азп Е1у Ьуз Е1и 545 550 555 560

Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Е1у А1а Рго 11е С1и Ьуз 565 570 575

ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз Е1у Е1п Рго Агд Е1и Рго Е1п Уа1 Туг ТЬг 580 585 590

Ьеи Рго Рго Суз Агд Азр Е1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп Е1п Уа1 Зег Ьеи Тгр 595 600 605

Суз Ьеи Уа1 Ьуз Е1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 Е1и Тгр Е1и 610 615 620

Зег Азп Е1у Е1п Рго Е1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи 625 630 635 640

Азр Зег Азр Е1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз 645 650 655

Зег Агд Тгр Е1п Е1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЕ Низ Е1и 660 665 670

- 292 030147

А1а Ьеи НЬз Азп Шз Туг ТЬг Е1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 675 680 685

Ьуз

<210> 206

<211> 2067

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 431/26 (\7Н-СН1)-ν9 (νΗ-СЬ)-Гс («выступ») Р329СЬАЬА

<400> 206

саддбдсадс	бдсаддаабс	бддсссбдда	сбсдбдсддс	сбадссадас	асбдадссбд	60
ассбдбассд	бдбссддсбб	сассабсадс	адсддсбаса	дсбддсаббд	ддбдсдссад	120
ссассбддса	даддссбдда	абддабсддс	басабссадб	асадсддсаб	сассаасбас	180
аассссадсс	бдаадбссад	адбдассабд	сбддбддаса	ссбссаадаа	ссадббсадс	240
сбдсддсбда	дсадсдбдас	адссдссдаб	асадссдбдб	асбасбдсдс	садададдас	300
басдасбасс	асбддбасбб	сдасдбдбдд	ддссадддсб	сбсбсдбдас	сдбдбсаадс	360
дсбадсасаа	адддссссад	сдбдббсссб	сбддссссба	дсадсаадад	сасабсбддс	420
ддаасадссд	сссбдддсбд	ссбддбсаад	дасбасбббс	ссдадсссдб	дасадбдбсс	480
бддаасбсбд	дсдсссбдас	аадсддсдбд	сасассбббс	садссдбдсб	дсададсадс	540
ддссбдбасб	сбсбдадсад	сдбддбсасс	дбдссбадсб	сбадссбддд	сасссадасс	600
басабсбдса	асдбдаасса	саадсссадс	аасассаадд	бддасаадаа	ддбддаассс	660
аададсбдсд	дсддаддсдд	абссддаддс	ддаддабссд	аадбдсадсб	ддбддаабсб	720
ддсддаддсс	бддбдсадсс	бддсддабсб	сбдадасбда	дсбдбдссдс	садсддсбас	780
адсббсассд	дсбасассаб	даасбдддбд	сдссаддссс	сбддсааддд	асбддаабдд	840
дбддсссбда	бсаассссба	саадддсдбд	бссасабаса	ассадаадбб	сааддассдд	900
ббсассабса	дсдбддасаа	дадсаадаас	ассдссбасс	бдсадабдаа	садссбдсдд	960
дссдаддаса	ссдссдбдба	сбаббдбдсс	адаадсддсб	асбасддсда	садсдасбдд	1020

- 293 030147

ЬасЬЬсдасд	ЬдЬддддсса	дддсасасЪс	дЕдассд+дЬ	саадсдсЬад	сдЬддссдсЬ	1080
сссЬссдЬдЬ	НаЬсЬНсс	сссаЬссдаЬ	даасадсЬда	ааадсддсас	сдссЬссдЬс	1140
дЬдЬдЬсЬдс	ЬдаасааНЬ	ЫасссЬадд	даадсЬааад	ЬдсадЬддаа	адЬддаЬаас	1200
дсасЬдсадЬ	ссддсаасЬс	ссаддааЬсЬ	дЬдасадаас	аддасЬссаа	ддасадсасс	1260
ЬасЬсссЬдЬ	ссЕссасссЬ	дасас+дЬсЕ	ааддсЬдаН	аЬдадаааса	сааадЬсЕас	1320
дссЬдсдаад	ЬсасссаЬса	дддссЬдадс	ЬсдсссдЬса	сааададсЬЬ	саасадддда	1380
дадЬдЬдаса	адасссасас	сЬдЬсссссЬ	ЬдЬссЬдссс	сЬдаадсЬдс	ЬддсддсссЬ	1440
ЬсЬдЬдЬЬсс	ЬдЬЬсссссс	ааадсссаад	дасасссЬда	ЬдаЬсадссд	дасссссдаа	1500
дЬдассЬдсд	ЬддЬддЬдда	ЬдЬдЬсссас	даддасссЬд	аадЬдаадЫ	сааЫддЬас	1560
дЬддасддсд	ЬддаадЬдса	саасдссаад	асааадссдс	дддаддадса	дЬасаасадс	1620
асдЬассдЕд	ЬддЬсадсдЬ	ссЬсассдЬс	сЬдсассадд	асЬддсЬдаа	Ьддсааддад	1680
ЬасаадЬдса	аддЬсЬссаа	сааадсссЬс	ддсдссссса	Ьсдадаааас	саЬсЬссааа	1740
дссааадддс	адссссдада	ассасаддЬд	ЬасасссЬдс	ссссаЬдссд	ддаЬдадсЬд	1800
ассаадаасс	аддЬсадссЬ	дЬддЬдссЬд	дЬсаааддсЬ	ЬсЬаЬсссад	сдасаЕсдсс	1860
дЬддадЬддд	ададсааЬдд	дсадссддад	аасаасЬаса	адассасдсс	ЬсссдЬдсЬд	1920
дасЬссдасд	дсЬссЬЬсЬО	ссЬсЬасадс	аадсЬсассд	Ьддасаадад	саддЬддсад	1980
саддддаасд	ЬсНсЬсаЬд	сЬссдЬдаЬд	саЬдаддсЬс	Ьдсасаасса	сЬасасдсад	2040
аададссЬсЕ	сссЕд+сЬсс	дддЬааа				2067

<210> 207

<211> 450

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 431/26(УН-СН1)-Рс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 207

С1п Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег 61у Рго С1у Ьеи Уа1 Агд Рго Зег С1п 15 10 15

- 294 030147

Ьуз ТЬг Шз ТЬг Суз Рго Рго Суз 225 230

Рго А1а Рго Е1и А1а А1а С1у С1у 235 240

Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго 245

Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е 250 255

Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз 260

Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Шз С1и 265 270

Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр 275 280

Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Шз 285

Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и 290 295

С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 300

А/а1 А/а1 Зег А7а1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи 305 310

Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп 61у Ьуз 315 320

Е1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп 325

Ьуз А1а Ьеи С1у А1а Рго 11е С1и 330 335

Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз Е1у 340

С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Суз 345 350

ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и 355 360

Ьеи ТЬг Ьуз Азп Е1п А/а1 Зег Ьеи 365

Зег Суз А1а Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг 370 375

Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр 380

С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп 385 390

Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго А/а1 395 400

Ьеи Азр Зег Азр 61у Зег РЬе РЬе 405

Ьеи Уа1 Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр 410 415

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп 420

Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Шз 425 430

- 295 030147

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег Е1у РЬе ТЬг 11е Зег Зег СЬу 20 25 30

Не СЬу Туг 11е СЬп Туг Зег СЬу Не ТЬг Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Ьуз Зег Агд УаЬ ТЬг МеР Ьеи УаЬ Азр ТЬг Зег Ьуз Азп СЬп РЬе Зег 65 70 75 80

Ьеи Агд Ьеи Зег Зег УаЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа Агд СЬи Азр Туг Азр Туг НЬз Тгр Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп 100 105 110

С1у Зег Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 115 120 125

РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег СЬу С1у ТЬг А1а А1а 130 135 140

Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег СЬу А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 НЬз ТЬг РЬе Рго А1а УаЬ Ь65 ЬЬО Ь75

Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго Ь80 Ь85 Ь90

Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг Туг Не Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз Ь95 200 205

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Ьуз УаЬ СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр 2Ь0 2Ь5 220

296

030147

Е1и А1а Ьеи НЬз Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

С1у Ьуз 450

<210> 208

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 431/26(УН-СН!)-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 208

саддЬдсадс	ЬдсаддааЬс	ЬддсссЬдда	сЬсдЬдсддс	сЬадссадас	асЬдадссЬд	60
ассЪдЬассд	ЬдЬссддсЬЬ	сассаЬсадс	адсддсЬаса	дсЬддсаЬЬд	ддЬдсдссад	120
ссассЬддса	даддссЬдда	аЬддаЬсддс	ЬасаЬссадЬ	асадсддсаЬ	сассаасЬас	180
аассссадсс	ЬдаадЬссад	адЬдассаЬд	сЬддЬддаса	ссЬссаадаа	ссадЬЬсадс	240
сЬдсддсЬда	дсадсд+дас	адссдссдаЬ	асадссд+дЬ	асЬасЬдсдс	садададдас	300
ЬасдасЬасс	асЪддЪасЫ	сдасдЬдЬдд	ддссадддсЬ	сЬсЬсдЬдас	сдЬдЬсаадс	360
дсЬадсасса	адддссссЬс	сдЬдЫсссс	сЬддссссса	дсадсаадад	сассадсддс	420
ддсасадссд	сЬсЬдддсЬд	ссЬддЬсаад	дасЬасЬЬсс	ссдадсссдЬ	дассдЬдЬсс	480
Ьддаасадсд	дадсссЬдас	сЬссддсдЬд	сасассЫсс	ссдссдЬдсЬ	дсададЬЬсЬ	540
ддссЬдЬаЬа	дссЬдадсад	сдЬддЬсасс	дЬдссЫсЬа	дсадссЬддд	сасссадасс	600
ЬасаЬсЬдса	асдЬдаасса	саадсссадс	аасассаадд	Ьддасаадаа	ддЬддадссс	660
аададсЬдсд	асаааасЬса	сасаЬдссса	ссдЬдсссад	сассЬдаадс	Ьдсаддддда	720
ссдЬсадЬсЬ	ЬссЬсЫссс	сссаааассс	ааддасассс	ЬсаЬдаЬсЬс	ссддассссЬ	780
даддЬсасаЬ	дсдЬддЬддЬ	ддасдЬдадс	сасдаадасс	сЬдаддЬсаа	дЫсаасЬдд	840
ЬасдЬддасд	дсдЬддаддЬ	дсаЬааЬдсс	аадасааадс	сдсдддадда	дсадЬасаас	900
адсасдЬасс	дЬдЬддЬсад	сдЬссЬсасс	дЬссЬдсасс	аддас+ддсЬ	дааЬддсаад	960
дадЬасаадЬ	дсааддЬсЬс	саасааадсс	сЬсддсдссс	ссаЬсдадаа	аассаЬсЬсс	1020
ааадссааад	ддсадссссд	адаассасад	дЬдЬдсассс	ЬдсссссаЬс	ссдддаЬдад	1080

- 297 030147

сбдассаада	ассаддбсад	ссбсбсдбдс	дсадбсааад	дсббсбабсс	садсдасабс	1140
дссдбддадб	дддададсаа	бдддсадссд	дадаасаасб	асаадассас	дссбсссдбд	1200
сбддасбссд	асддсбссбб	сббссбсдбд	адсаадсбса	ссдбддасаа	дадсаддбдд	1260
садсадддда	асдбсббсбс	абдсбссдбд	абдсабдадд	сбсбдсасаа	ссасбасасд	1320
садаададсс	бсбсссбдбс	бссдддбааа				1350

<210> 209

<211> 464

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А(УЬ-СЬ)-У9 (УН-СЬ)

<400> 209

Азр 11е Е1п Меб ТЬг Е1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у 15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Зег А1а А1а Уа1 Е1у ТЬг Туг 20 25 30

Уа1 А1а Тгр Туг Е1п Б1п Ьуз Рго Е1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е 35 40 45

Туг Зег А1а Зег Туг Агд Ьуз Агд С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег Е1у 50 55 60

Зег Е1у Зег Е1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Рго 65 70 75 80

Е1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Нтз С1п Туг Туг ТЬг Туг Рго Ьеи 85 90 95

РЬе ТЬг РЬе Е1у Е1п Е1у ТЬг Ьуз Ьеи Е1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а 100 105 110

298 030147

- 299 030147

Туг С1у Азр Зег Азр Тгр Туг РЪе Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТЪг Ьеи 340 345 350

Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег А1а Зег Уа1 А1а А1а Рго Зег Уа1 РЪе Не РЪе 355 360 365

Рго Рго Зег Азр С1и 51п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЪг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз 370 375 380

Ьеи Ьеи Азп Азп РЪе Туг Рго Агд С1и А1а Ьуз Уа1 Е1п Тгр Ьуз Уа1 385 390 395 400

Азр Азп А1а Ьеи Θίη Зег С1у Азп Зег Θίη С1и Зег Уа1 ТЪг С1и С1п 405 410 415

Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЪг Туг Зег Ьеи Зег Зег ТЪг Ьеи ТЪг Ьеи Зег 420 425 430

Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Шз Ьуз Уа1 Туг А1а Суз 61и Уа1 ТЪг Шз 435 440 445

С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЪг Ьуз Зег РЪе Азп Агд С1у С1и Суз 450 455 460

<210> 210

<211> 1392

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А(УЬ-СЬ)-У9 (УН-СЬ)

<400> 210 даЬаЬссада	Ьдасссадад	ссссадсадс	сЬдЪсЪдсса	дсдЬдддсда	сададЬдасс	60
аЬсасаЬдса	аддссЬсЬдс	сдссдЬдддс	асаЬасдЬдд	ссЪддЬаЪса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсЬдсЬ	даЬсЬасадс	дссадсЪасс	ддаадададд	сдЪдсссадс	180
адаЬЬЪЪссд	дсадсддсЬс	Ьддсассдас	ЬЬсасссЬда	ссаЬсадсЬс	ссЪдсадссс	240
даддасЬЬсд	ссассЪасЪа	сЪдссассад	ЬасЪасассЪ	асссссЪдЬЬ	сассЫсддс	300

- 300 030147

садддсасса	адсбсдадаб	саадсдбасд	дбддссдсбс	ссадсдбдбб	сабсббссса	360
ссбадсдасд	адсадсбдаа	дбссддсаса	дссбсбдбсд	бдбдссбдсб	даасаасббс	420
басссссдсд	аддссааддб	дсадбддаад	дбддасаабд	сссбдсадад	сддсаасадс	480
саддааадсд	бдассдадса	ддасадсаад	дасбссассб	асадссбдад	садсасссбд	540
асасбдадса	аддссдасба	сдадаадсас	ааддбдбасд	ссбдсдаадб	дасссассад	600
ддссбдбсба	дссссдбдас	саададсббс	аассддддсд	аабдбддсдд	сддаддабсс	660
ддсддаддсд	дсбссддадд	сддаддаадб	ддсддадддд	дабсбдаадб	дсадсбддбд	720
даабсбддсд	даддссбддб	дсадссбддс	ддабсбсбда	дасбдадсбд	бдссдссадс	780
ддсбасадсб	бсассддсба	сассабдаас	бдддбдсдсс	аддссссбдд	саадддасбд	840
даабдддбдд	сссбдабсаа	ссссбасаад	ддсдбдбсса	сабасаасса	даадббсаад	900
дассддббса	ссабсадсдб	ддасаададс	аадаасассд	ссбассбдса	дабдаасадс	960
сбдсдддссд	аддасассдс	сдбдбасбас	бдбдссадаа	дсддсбасба	сддсдасадс	1020
дасбддбасб	бсдасдбдбд	дддссаддда	асссбсдбда	ссдбдбсаад	сдсбадсдбд	1080
дссдсасссб	сбдбдбббаб	сбббссассс	бсбдасдаас	адсбдаааад	сддсассдсс	1140
адсдбсдбдб	дбсбдсбдаа	саабббббас	ссбадддаад	сбааадбдса	дбддааадбд	1200
дабаасдсас	бдсадбссдд	саасбсссад	даабсбдбда	садаасадда	сбссааддас	1260
адсасабасб	сссбдбссад	сасасбдасс	сбдбсбаадд	ссдаббабда	дааасасааа	1320
дбдбабдсбб	дбдаадбдас	асабсаддда	сбдадсадсс	сбдбдасааа	дбссббсаас	1380
ададдсдадб	д£					1392

<210> 211

<211> 451

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А(УН-СН1)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 211

Θΐη Уа1 Е1п Ьеи Уа1 С1п Зег 61у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у А1а 15 10 15

- 301 030147

- 302 030147

- 303 030147

НЬз С1и АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег 435 440 445

Рго СЬу Ьуз 450

<2Ь0> 212

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН1А1А(УН-СН1)-Рс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 212

саддЕдсадс	ЕддЕдсадЕс	Еддсдссдаа	дЕдаадааас	сЕддадсЕад	ЕдЕдааддЕд	60
ЕссЕдсаадд	ссадсддсЕа	сассЕЕсасс	дадЕЕсддса	ЕдаасЕдддЕ	ссдасаддсЕ	120
ссаддссадд	дссЕсдааЕд	даЕдддсЕдд	аЕсаасасса	адассддсда	ддссассЕас	180
дЕддаададЕ	Есаадддсад	адЕдассЕЕс	ассасддаса	ссадсассад	сассдссЕас	240
аЕддаасЕдс	ддадссЕдад	аадсдасдас	ассдссдЕдЕ	асЕасЕдсдс	садаЕдддас	300
ЕЕсдссЕаЕЕ	асдЕддаадс	саЕддасЕас	Еддддссадд	дсассассдЕ	дассдЕдЕсЕ	360
адсдсЕадса	ссаадддссс	аЕсддЕсЕЕс	ссссЕддсас	ссЕссЕссаа	дадсассЕсЕ	420
ддддосасад	сддсссЕддд	сЕдссЕддЕс	ааддасЕасЕ	Ессссдаасс	ддЕдасддЕд	480
ЕсдЕддаасЕ	саддсдсссЕ	дассадсддс	дЕдсасассЕ	ЕсссддсЕдЕ	ссЕасадЕсс	540
ЕсаддасЕсЕ	асЕсссЕсад	садсдЕддЕд	ассдЕдсссЕ	ссадсадсЕЕ	дддсасссад	600
ассЕасаЕсЕ	дсаасдЕдаа	Есасаадссс	адсаасасса	аддЕддасаа	дааадЕЕдад	660
сссаааЕсЕЕ	дЕдасаааас	ЕсасасаЕдс	ссассдЕдсс	садсассЕда	адсЕдсаддд	720
ддассдЕсад	ЕсЕЕссЕсЕЕ	ссссссаааа	сссааддаса	сссЕсаЕдаЕ	сЕсссддасс	780
ссЕдаддЕса	саЕдсдЕддЕ	ддЕддасдЕд	адссасдаад	асссЕдаддЕ	саадЕЕсаас	840
ЕддЕасдЕдд	асддсдЕдда	ддЕдсаЕааЕ	дссаадасаа	адссдсддда	ддадсадЕас	900
аасадсасдЕ	ассдЕдЕддЕ	садсдЕссЕс	ассдЕссЕдс	ассаддасЕд	дсЕдааЕддс	960
ааддадЕаса	адЕдсааддЕ	сЕссаасааа	дсссЕсддсд	сссссаЕсда	даааассаЕс	1020

- 304 030147

Рссааадсса	аадддсадсс	ссдадаасса	саддРдРаса	сссРдссссс	аРдссдддаР	1080
дадсРдасса	адаассаддр	садссрдрдд	РдссРддРса	ааддсРРсРа	Рсссадсдас	1140
аРсдссдРдд	адрдддадад	сааРдддсад	ссддадааса	асРасаадас	сасдссРссс	1200
дРдсРддасР	ссдасддсРс	сРРсРРссРс	Расадсаадс	РсассдРдда	саададсадд	1260
Рддсадсадд	ддаасдРсРР	сРсаРдсРсс	дрдардсард	аддсРсРдса	саассасРас	1320
асдсадаада	дссРсРсссР	дрсрссдддр	ааа			1353

<210> 213

<211> 227

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 213

Азр Ьуз ТЬг Шз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а А1а С1у 15 10 15

С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер 20 25 30

11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз 57а1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Шз 35 40 45

С1и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг \7а1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 50 55 60

Шз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и Е1п Туг Азп Зег ТЬг Туг 65 70 75 80

- 305 030147

Е1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз Е1у С1п Рго Агд С1и Рго Е1п Уа1 115 120 125

Суз ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр Е1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег 130 135 140

Ьеи Зег Суз А1а Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и 145 150 155 160

Тгр С1и Зег Азп 61у С1п Рго Е1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго 165 170 175

Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Уа1 Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 180 185 190

Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п Е1п Е1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ 195 200 205

ΗΪ5 Е1и А1а Ьеи Нхз Азп НЬз Туг ТЬг Е1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег 210 215 220

Рго Е1у Ьуз 225

<210> 214

<211> 681

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гс(«впадина») Р329Е ЬАЬА

<400> 214

дасаааасЬс	асасаЬдссс	ассдГдссса	дсассЬдаад	сЬдсаддддд	ассдЬсадЬс	60
ЫссЬсЫсс	ссссаааасс	сааддасасс	сЬсаЬдаЬсЬ	сссддасссс	ЬдаддЬсаса	120
ЬдсдЬддЬдд	ЬддасдЬдад	ссасдаадас	ссЪдаддЬса	адЫсаасЬд	дЬасдЬддас	180
ддсдЬддадд	ЬдсаЬааЬдс	саадасааад	ссдсдддадд	адсадЬасаа	садсасдЬас	240
сдЬдЬддЬса	дсдЬссЬсас	сдГссЪдсас	саддасЬддс	ЬдааЬддсаа	ддадЬасаад	300
ЬдсааддЬсЬ	ссаасааадс	ссЪсддсдсс	сссаЬсдада	ааассаЬсЬс	сааадссааа	360

- 306 030147

дддсадсссс	дадаассаса	ддрдрдсасс	сРдсссссаР	сссдддаРда	дсРдассаад	420
аассаддрса	дссРсРсдРд	сдсадРсааа	ддсРРсРаРс	ссадсдасаР	сдссдрддад	480
Рдддададса	аРдддсадсс	ддадаасаас	Расаадасса	сдссРсссдР	дсРддасРсс	540
дасддсРссР	РсРРссРсдР	дадсаадсРс	ассдрддаса	ададсаддрд	дсадсадддд	600
аасдРсРРсР	саРдсРссдР	даРдсаРдад	дсРсРдсаса	ассасРасас	дсадаададс	660
сРсРсссРдР	сРссдддРаа	а				681

<210>	215
<211>	214
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	СН2527(УЬ-СНЬ
<400>	215
СЬп АЬа	. УаЬ УаЬ ТЬг ι

10

15

ТЬг УаЬ ТЬг Ьеи ТЬг Суз Агд Зег Зег ТЬг С1у А1а УаЬ ТЬг ТЬг Зег 20 25 30

Азп Туг А1а Азп Тгр УаЬ С1п СЬи Ьуз Рго Азр НЬз Ьеи РЬе ТЬг СЬу 35 40 45

Ьеи Не СЬу СЬу ТЬг Азп Ьуз Агд АЬа Рго СЬу УаЬ Рго АЬа Агд РЬе 50 55 60

Зег СЬу Зег Ьеи Не СЬу Азр Ьуз А1а АЬа Ьеи ТЬг Ые ТЬг СЬу АЬа 65 70 75 80

СЬп ТЬг СЬи Азр СЬи АЬа Ые Туг РЬе Суз АЬа Ьеи Тгр Туг Зег Азп 85 90 95

Ьеи Тгр УаЬ РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи Зег Зег АЬа 100 105 110

- 307 030147

Зег

ТЬг

Ьуз 115

С1у

Рго

Зег

Уа1

РЬе 120

Рго

Ьеи

А1а

Рго

Зег 125

Зег

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

С1у

ТЬг

А1а

Ьеи

С1у

Суз

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азр

Туг

РЬе

130

135

140

Рго

С1и

Рго

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Тгр

Азп

Зег

С1у

А1а

Ьеи

ТЬг

Зег

С1у

145

150

155

160

Уа1

Низ

ТЬг

РЬе

Рго

А1а

Уа1

Ьеи

С1п

Зег

С1у

Ьеи

Туг

Зег

Ьеи

165

170

175

Зег

Уа1

ТЬг

Уа1

Рго

Зег

Ьеи

С1у

ТЬг

С1п

ТЬг

Туг

180

185

190

11е

Суз

Азп

Уа1

Азп

Низ

Ьуз

Рго

Зег

Азп

ТЬг

Ьуз

Уа1

Азр

Ьуз

195 200 205

Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз 210

<210> 216

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН2527(УЬ-СН1)

<400> 216

саддссдЕсд	Едасссадда	аадсдсссЕд	асаасаадсс	сЕддсдадас	адЕдасссЕд	60
ассЕдсадаЕ	сЕадсасадд	сдссдЕдасс	ассадсаасЕ	асдссаасЕд	ддЕдсаддаа	120
аадсссдасс	ассЕдЕЕсас	сддссЕдаЕс	ддсддсасса	асаааадддс	ЕссаддсдЕд	180
ссадссадаЕ	Есадсддсад	ссЕдаЕЕддс	даЕааддссд	сссЕдассаЕ	сасЕддсдсс	240
садасададд	асдаддссаЕ	сЕасЕЕЕЕдс	дсссЕдЕддЕ	асадсаассЕ	дЕдддЕдЕЕс	300
ддсддаддса	ссаадсЕдас	адЕдсЕдадс	адсдсЕЕсса	ссаааддссс	ЕЕссдЕдЕЕЕ	360
ссЕсЕддсЕс	сЕадсЕссаа	дЕссассЕсЕ	ддаддсассд	сЕдсЕсЕсдд	аЕдссЕсдЕд	420
ааддаЕЕаЕЕ	ЕЕссЕдадсс	ЕдЕдасадЕд	ЕссЕддааЕа	дсддадсасЕ	дассЕсЕдда	480

- 308 030147

дДдсаДасДД ДссссдсДдД дсДдсадДсс ДсДддасДдД асадссДдад садсдДддДд 540

асадДдссса дсадсадссД дддсасссад ассДасаДсД дсаасдДдаа ссасаадссс 600

адсаасасса аддДддасаа дааддДддаа сссаадДсДД дД 642

<210>	217
<211>	684
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	СН2527(УН-СЬ)-ЬС007(УН-СН1)-Ес(«выступ»)	Р329С ЬАЬА
<400>	217
СЬи УаЬ	СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ	СЬп Рго Ьуз СЬу

10

15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Азп ТЬг Туг 20 25 30

АЬа МеД Азп Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ 35 40 45

АЬа Агд Ые Агд Зег Ьуз Туг Азп Азп Туг АЬа ТЬг Туг Туг АЬа Азр 50 55 60

Зег УаЬ Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азр Зег СЬп Зег Ые 65 70 75 80

Ьеи Туг Ьеи СЬп МеД Азп Азп Ьеи Ьуз ТЬг СЬи Азр ТЬг АЬа МеД Туг 85 90 95

Туг Суз УаЬ Агд НЬз СЬу Азп РЬе СЬу Азп Зег Туг УаЬ Зег Тгр РЬе 100 105 110

АЬа Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег АЬа АЬа Зег УаЬ 115 120 125

АЬа АЬа Рго Зег УаЬ РЬе Ые РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз 130 135 140

309 030147

- 310 030147

- 311 030147

Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи СЬу АЬа Рго ЬЬе СЬи Ьуз ТЬг Ые Зег Ьуз АЬа 565 570 575

Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Суз Агд 580 585 590

Азр СЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу 595 600 605

РЬе Туг Рго Зег Азр Ые АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго 610 615 620

СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег 625 630 635 640

РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп 645 650 655

СЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеЬ НЬз СЬи АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз 660 665 670

Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз 675 680

<210> 218

<211> 2052

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН2527 (УН-СЬ)-ЬС007(УН-СНЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 218

даадЬдсадс	ЬддЬддааад	сддсддаддс	сЬддЬдсадс	сЬаадддсЬс	ЬсЬдаадсЬд	60
адсЬдЬдссд	ссадсддсЬЬ	сассЬЬсаас	ассЬасдсса	ЬдаасЬдддЬ	дсдссаддсс	120
ссЬддсааад	дссЬддааЬд	ддЬддсссдд	аЬсадаадса	адЬасаасаа	Ыасдссасс	180
ЬасЬасдссд	асадсдЬдаа	ддассддЫс	ассаЬсадсс	дддасдасад	ссададсаЬс	240
сЬдЬассЬдс	адаЬдаасаа	ссЬдаааасс	даддасассд	ссаЬдЬасЬа	сЬдсдЬдсдд	300

- 312 030147

сасддсаасД	Дсддсаасад	сДаДдДдДсД	ДддДДДдссД	асДддддсса	дддсасссДс	360
дДдасадДдД	сДдсДдсДад	сдДддсДдса	ссаДсДдДсД	ДсаДсДДссс	дссаДсДдаД	420
дадсадДДда	ааДсДддаас	ДдссДсДдДД	дДдДдссДдс	ДдааДаасДД	сДаДсссада	480
даддссааад	ДасадДддаа	ддДддаДаас	дсссДссааД	сдддДаасДс	ссаддададД	540
дДсасададс	аддасадсаа	ддасадсасс	ДасадссДса	дсадсасссД	дасдсДдадс	600
ааадсадасД	асдадаааса	сааадДсДас	дссДдсдаад	ДсасссаДса	дддссДдадс	660
ДсдсссдДса	сааададсДД	саасадддда	дадДдДддсд	даддсддаДс	еддеддаддд	720
ддаДсДдадд	ДссадсДдса	ддадДсадда	ссДддссДсд	ДдааассДДс	ДсадДсДсДд	780
ДсДсДсассД	дсДсДдДсас	ДддсДасДсс	аДсассадДд	дДДаДДасДд	дааеДддаДД	840
сддсадДДДс	саддааасаа	дсДддааДдд	аДдддсДаса	ДаассДасда	сддДадсааД	900
аасДасаасс	саДсДсДсаа	аааДсдааДс	ДссаДДасДс	дДдасасаДс	Даадаассад	960
ДДДДДссДда	адДДдааДДс	ДдДдасДасД	даддасасад	сДасаДаДДа	сДдДдсддас	1020
ДДДдасДасД	ддддссаадд	сассасДсДс	асадДсДсса	дедеДадсас	саадддсссс	1080
адсдДдДДсс	сссДддсасс	садсадсаад	адсасаДсДд	дсддаасадс	сдсДсДдддс	1140
ДдДсДддДда	аадасДасДД	ссссдадссс	дДдассдДдД	сДДддаасДс	ДддсдсссДд	1200
ассадсддсд	ДдсасассДД	ДссадссдДд	сДдсададса	дсддссДдДа	сДсссДдДсс	1260
ДссдДддДса	ссдДдсссДс	ДадсДсссДд	ддаасасада	саДаДаДсДд	ДааДдДсааД	1320
сасаадссДД	ссаасассаа	адДсдаДаад	ааадДсдадс	ссаададсДд	сдасаааасД	1380
сасасаДдсс	сассдДдссс	адсассДдаа	дсДдсадддд	дассдДсадД	сДДссДсДДс	1440
сссссаааас	ссааддасас	ссДсаДдаДс	Дсссддассс	сДдаддДсас	аДдедДддДд	1500
дДддасдДда	дссасдаада	сссДдаддДс	аадДДсаасД	ддДаедДдда	еддедДддад	1560
дДдсаДааДд	ссаадасааа	дссдсдддад	дадсадДаса	асадсасдДа	ссдДдДддДс	1620
адсдДссДса	ссдДссДдса	ссаддасДдд	сДдааДддса	аддадДасаа	дДдсааддДс	1680
Дссаасааад	сссДсддсдс	ссссаДсдад	аааассаДсД	ссааадссаа	адддсадссс	1740
сдадаассас	аддДдДасас	ссДдссссса	ДдссдддаДд	адсДдассаа	даассаддДс	1800
адссДдДддД	дссДддДсаа	аддсДДсДаД	сссадсдаса	ДсдссдДдда	дДдддададс	1860

- 313 030147

ааЬдддсадс	сддадаасаа	сЬасаадасс	асдссЬсссд	ЪдсЪддасЪс	сдасддсЬсс	1920
ЬЬсНссЬсЬ	асадсаадс-Ь	сассдЬддас	аададсаддЬ	ддсадсаддд	даасдЬсЬЬс	1980
ЬсаЬдсЬссд	£да{;дса1;да	ддсЬсЬдсас	аассасЬаса	сдсадаадад	ссЬсЬсссЬд	2040
ЬсЬссдддЬа	аа					2052

<210> 219

<211> 685

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007(УН-СН1)-СН2527(УН-СЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 219

Е1и Уа1 Е1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п 15 10 15

З14 030147

- 315 030147

316 030147

ТЬг Уа1 Ьеи ΗΪ3 С1п Азр Тгр Ьеи Азп Е1у Ьуз €1и Туг Ьуз Суз Ьуз 545 550 555 560

Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи С1у А1а Рго 11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз 565 570 575

А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго 61п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Суз 580 585 590

Агд Азр 61и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи Уа1 Ьуз 595 600 605

С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п 610 615 620

Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр С1у 625 630 635 640

Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр С1п 645 650 655

С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Шз С1и А1а Ьеи Шз Азп 660 665 670

Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 61у Ьуз 675 680 685

<210> 220

<211> 2055

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ЬС007(УН-СН1)-СН2527(УН-СЬ)-Гс(«выступ») Р329СЬАЬА

<400> 220

даддЬдсадс	ЬдсаддааЬс	ЬддсссЬддс	сЬддЬсаадс	саадссадад	ЬсЬдадссЬд	60
ассЬдсадсд	ЬдассддсЬа	садсаПасс	адсддсЬасЪ	асЕддаасЪд	даПсддсад	120
Нссссддса	аЬаадсЬдда	аЬддаЬдддс	ЬасаЬсассЬ	асдасддсад	саасаасЬас	180
аассссадсс	Ьдаадаассд	даЬсадсаЬс	асссдддаса	ссадсаадаа	ссадПсПс	240

- 317 030147

сбдаадсбда	асадсдбдас	сассдаддас	ассдссасаб	асбаббдсдс	сдасббсдас	300
басбддддсс	адддсассас	ссбдассдбд	бссадсдсса	дсасаааддд	сссбадсдбд	360
ббсссбсбдд	сссссадсад	саададсаса	адсддсддаа	садссдсссб	дддсбдссбс	420
дбдааддасб	асббссссда	дсссдбдаса	дбдбсббдда	асадсддадс	ссбдасаадс	480
ддсдбдсаса	ссббсссбдс	сдбдсбдсад	адсадсддсс	бдбасбсссб	дадсадсдбд	540
дбсассдбдс	сбадсадсад	ссбдддсасс	садассбаса	бсбдсаасдб	даассасаад	600
сссадсааса	ссааадбдда	саадааддбд	дадсссаада	дсбдбдабдд	сддаддаддд	660
бссддаддсд	даддабссда	адбдсадсбд	дбддааадсд	дсддаддссб	ддбдсадссб	720
аадддсбсбс	бдаадсбдад	сбдбдссдсс	адсддсббса	ссббсаасас	сбасдссабд	780
аасбдддбдс	дссаддсссс	бддсаааддс	сбддаабддд	бддсссддаб	садаадсаад	840
басаасаабб	асдссассба	сбасдссдас	адсдбдаадд	ассддббсас	сабсадссдд	900
дасдасадсс	ададсабссб	дбассбдсад	абдаасаасс	бдаааассда	ддасассдсс	960
абдбасбасб	дсдбдсддса	сддсаасббс	ддсаасадсб	абдбдбсббд	дбббдссбас	1020
бддддссадд	дсасссбсдб	дасадбдбсб	дсбдсбадсд	бддссдсбсс	сбссдбдббб	1080
абсбббсссс	сабссдабда	асадсбдааа	адсддсассд	ссбссдбсдб	дбдбсбдсбд	1140
аасааббббб	асссбаддда	адсбааадбд	садбддааад	бддабаасдс	асбдсадбсс	1200
ддсаасбссс	аддаабсбдб	дасадаасад	дасбссаадд	асадсассба	сбсссбдбсс	1260
бссасссбда	сасбдбсбаа	ддсбдаббаб	дадааасаса	аадбсбасдс	сбдсдаадбс	1320
асссабсадд	дссбдадсбс	дсссдбсаса	аададсббса	асаддддада	дбдбдасаад	1380
асссасассб	дбсссссббд	бссбдссссб	даадсбдсбд	дсддсссббс	бдбдббссбд	1440
ббссссссаа	адсссаадда	сасссбдабд	абсадссдда	сссссдаадб	дассбдсдбд	1500
дбддбддабд	бдбсссасда	ддасссбдаа	дбдаадббса	аббддбасдб	ддасддсдбд	1560
даадбдсаса	асдссаадас	ааадссдсдд	даддадсадб	асаасадсас	дбассдбдбд	1620
дбсадсдбсс	бсассдбссб	дсассаддас	бддсбдаабд	дсааддадба	саадбдсаад	1680
дбсбссааса	аадсссбсдд	сдсссссабс	дадаааасса	бсбссааадс	сааадддсад	1740
ссссдадаас	сасаддбдба	сасссбдссс	ссабдссддд	абдадсбдас	саадаассад	1800

- 318 030147

дЬсадссЬдЬ	ддЬдссЬддЬ	саааддсЬЬс	ЬаЬсссадсд	асаЬсдссдЬ	ддадЬдддад	1860
адсааЬдддс	адссддадаа	саасЬасаад	ассасдссЬс	ссдЬдсЬдда	сЬссдасддс	1920
ЬссЪЪсЪЪсс	ЬсЬасадсаа	дсЬсассдЬд	дасаададса	ддЬддсадса	ддддаасдЬс	1980
НсЬсаЬдсЬ	ссдЬдаЬдса	ЬдаддсЬсЬд	сасаассасЬ	асасдсадаа	дадссЬсЬсс	2040
сЬдЬсЬссдд	дЬааа					2055

<210> 221

<211> 218

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> анти-СРЗЗ(УЬ-СЬ)

<400> 221

Азр Не С1п МеЪ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у

10

15

Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1и Зег Уа1 Азр Азп Туг 20 25 30

С1у Не Зег РЬе МеЬ Азп Тгр РЬе С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго 35 40 45

Ьуз Ьеи Ьеи Не Туг А1а А1а Зег Азп С1п Е1у Зег С1у Уа1 Рго Зег 50 55 60

Агд РЬе Зег С1у Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег 65 70 75 80

Зег Ьеи С1п Рго Азр Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз 61п С1п Зег Ьуз 85 90 95

С1и Уа1 Рго Тгр ТЬг РЬе Е1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Не Ьуз Агд 100 105 110

ТЬг Уа1 А1а А1а Рго Зег Уа1 РЬе Не РЬе Рго Рго Зег Азр Е1и С1п 115 120 125

- 319 030147

Ьеи Ьуз Зег СЬу ТЬг АЬа Зег УаЬ УаЬ Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг 130 135 140

Рго Агд СЬи АЬа Ьуз УаЬ СЬп Тгр Ьуз УаЬ Азр Азп АЬа Ьеи СЬп Зег 145 150 155 160

СЬу Азп Зег СЬп СЬи Зег УаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг 165 170 175

Туг Зег Ьеи Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа Азр Туг СЬи Ьуз 180 185 190

НЬз Ьуз УаЬ Туг АЬа Суз СЬи УаЬ ТЬг НЬз СЬп СЬу Ьеи Зег Зег Рго 195 200 205

УаЬ ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд СЬу СЬи Суз 210 215

<210> 222

<211> 654

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> анти-СОЗЗ(УЬ-СЬ)

<400> 222

дасаДссада Ддасссадад ссссадсадс сДдадсдсса дсдДдддсда сададДдасс 60

аДсассДдДс дддссадсда дадсдДддас аасДасддса ДсадсДДсаД даасДддДДс 120

садсадаадс ссддсааддс ссссаадсДд сДдаДсДасд ссдссадсаа Дсадддсадс 180

ддсдДдссса дсадаДДсад сддсДсДддс адсддсассд асДДсасссД дассаДсадс 240

адссДдсадс ссдасдасДД сдссассДас ДасДдссадс ададсааада ддДдсссДдд 300

ассДДсддсс адддсассаа ддДддаааДс аадсдДасдд ДддсДдсасс аДсДдДсДДс 360

аДсДДсссдс саДсДдаДда дсадДДдааа ДсДддаасДд ссДсДдДДдД дДдссДдсДд 420

ааДаасДДсД аДсссадада ддссааадДа садДддаадд ДддаДаасдс ссДссааДсд 480

ддДаасДссс аддададДдД сасададсад дасадсаадд асадсассДа садссДсадс 540

- 320 030147

адсасссЬда сдсЬдадсаа адсадасЬас дадааасаса аадЬсЬасдс сЬдсдаадЬс

асссаЬсадд дссЬдадсЬс дсссдЬсаса аададсЬЬса асаддддада дЬдЬ

600

654

<210>	223
<211>	668
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	ν9(УЬ-СН1)-анти-СРЗЗ(УН-СН1)-Кс(«выступ»)	Р329Е ЬАЬА
<400>	223
Азр 11е	61п МеЬ ТЬг Е1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег	А1а Зег Уа1 Е1у

10

15

Ьеи Азп Тгр Туг Е1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е 35 40 45

Туг Туг ТЬг Зег Агд Ьеи Е1и Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег Е1у 50 55 60

61и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Е1п Е1п Е1у Азп ТЬг Ьеи Рго Тгр 85 90 95

ТЬг РЬе Е1у Е1п Е1у ТЬг Ьуз Уа1 Е1и 11е Ьуз Зег Зег А1а Зег ТЬг 100 105 110

С1у Е1у ТЬг А1а А1а Ьеи Е1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго Е1и 130 135 140

- 321 030147

- 322 030147

Зег Ьуз Зег ТЬг Зег СЬу СЬу ТЬг АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз 355 360 365

Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ Зег Тгр Азп Зег СЬу А1а Ьеи 370 375 380

ТЬг Зег СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи 385 390 395 400

Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг 405 410 415

СЬп ТЬг Туг Ые Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ 420 425 430

Азр Ьуз Ьуз УаЬ СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго 435 440 445

Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи АЬа АЬа СЬу СЬу Рго Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе 450 455 460

Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер Ые Зег Агд ТЬг Рго СЬи УаЬ 465 470 475 480

ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег НЬз СЬи Азр Рго СЬи УаЬ Ьуз РЬе 485 490 495

Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ НЬз Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго 500 505 510

Агд СЬи СЬи СЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд УаЬ УаЬ Зег УаЬ Ьеи ТЬг 515 520 525

УаЬ Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ 530 535 540

Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи СЬу АЬа Рго Ые СЬи Ьуз ТЬг Ые Зег Ьуз АЬа 545 550 555 560

- 323 030147

Ьуз

С1у

С1п

Рго

Агд 565

СЬи

Рго

С1п

Уа1

Туг 570

ТЬг

Ьеи

Рго

Суз 575

Агд

Азр

С1и

Ьеи

ТЬг

Ьуз

Азп

С1п

Уа1

Зег

Ьеи

Тгр

Суз

Ьеи

УаЬ

Ьуз

СЬу

580

585

590

РЬе

Туг

Рго

Зег

Азр

11е

А1а

Уа1

СЬи

Тгр

СЬи

Зег

Азп

С1у

С1п

Рго

595

600

605

С1и

Азп

Туг

Ьуз

ТЬг

Рго

УаЬ

Ьеи

Азр

Зег

Азр

СЬу

Зег

610

615

620

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

УаЬ

Азр

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

СЬп

625

630

635

640

С1у

Азп

Уа1

РЬе

Зег

Суз

Зег

Уа1

МеЬ

НЬз

СЬи

А1а

Ьеи

НЬз

Азп

НЬз

645

650

655

Туг

ТЬг

С1п

Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Рго

СЬу

Ьуз

660 665

<210> 224

<211> 2004

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9(УЬ-СН1)-анти-СЬЗЗ(УН-СН1)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 224

даЬаЬссада	Ьдасссадад	ссссадсЬсЬ	сЬдадсдсса	дсдЬдддсда	сададЬдасс	60
аЬсассЬдЬс	дддссадсса	ддасаЬсада	аасЬассЬда	асЬддЬаЬса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсЬдсЬ	даЬсЬасЬас	ассадсадас	Ьддааадсдд	сдЬдсссЬсс	180
адаЬЬЬЬссд	дсадсддсЬс	сддсассдас	ЬасасссЬда	ссаЬсадсад	ссЬдсадссс	240
даддаЬЬЬсд	ссасаЬаЬЬа	сЬдссадсад	ддсааЬассс	ЬдсссЬддас	сЬЬсддасад	300
ддсасаааад	ЬддаааЬсаа	дадсадсдсЬ	Ьссассааад	дсссЬЬссдЬ	дЬЬЬссЬсЬд	360
дсЬссЬадсЬ	ссаадЬссас	сЬсЬддаддс	ассдсЬдсЬс	ЬсддаЬдссЬ	сдЬдааддаЬ	420
ЬаЬЬЬЬссЬд	адссЬдЬдас	адЬдЬссЬдд	ааЬадсддад	сасЬдассЬс	ЬддадЬдсаЬ	480

- 324 030147

асЬЬЬссссд	сЬдЬдсЬдса	дЬссЬсЬдда	сЬдЬасадсс	ЬдадсадсдЬ	ддЬдасадЬд	540
сссадсадса	дссЬдддсас	ссадассЬас	аЬсЬдсаасд	Ьдаассасаа	дсссадсаас	600
ассааддЬдд	асаадааддЬ	ддаасссаад	ЬсЬЬдЬддсд	даддсддаЬс	сддсддаддс	660
ддаЬсЬсадд	ЬдсадсЬддЬ	дсадЬсЬддс	дссдаадЬда	адааасссдд	садсадсдЬд	720
ааддЬдЬссЬ	дсааддссад	сддсЬасасс	ЬЬсассдасЬ	асаасаЬдса	сЬдддЬссдс	780
саддссссад	дссадддасЬ	ддааЬддаЬс	ддсЬасаЬсЬ	ассссЬасаа	сддсддсасс	840
ддсЬасаасс	адаадЬЬсаа	дадсааддсс	ассаЬсассд	ссдасдадад	сассаасасс	900
дссЬасаЬдд	аасЬдадсад	ссЬдсддадс	даддасассд	ссдЬдЬасЬа	сЬдсдссада	960
ддсадасссд	ссаЬддасЬа	сЬддддссад	ддсасссЬдд	ЬдасадЬдЬс	садсдссадс	1020
асааадддсс	ссадсдЬдЬЬ	сссссЬддса	сссадсадса	ададсасаЬс	Ьддсддааса	1080
дссдсЬсЬдд	дсЬдЬсЬддЬ	дааадасЬас	ЬЬссссдадс	ссдЬдассдЬ	дЬсЬЬддаас	1140
ЬсЬддсдссс	Ьдассадсдд	сдЬдсасасс	ЬЬЬссадссд	ЬдсЬдсадад	садсддссЬд	1200
ЬасЬсссЬдЬ	ссЬссдЬддЬ	сассдЬдссс	ЬсЬадсЬссс	Ьдддаасаса	дасаЬаЬаЬс	1260
ЬдЬааЬдЬса	аЬсасаадсс	ЬЬссаасасс	ааадЬсдаЬа	адааадЬсда	дсссаададс	1320
Ьдсдасаааа	сЬсасасаЬд	сссассдЬдс	ссадсассЬд	аадсЬдсадд	дддассдЬса	1380
дЬсЬЬссЬсЬ	Ьссссссааа	асссааддас	асссЬсаЬда	ЬсЬсссддас	сссЬдаддЬс	1440
асаЬдсдЬдд	ЬддЬддасдЬ	дадссасдаа	дасссЬдадд	ЬсаадЬЬсаа	сЬддЬасдЬд	1500
дасддсдЬдд	аддЬдсаЬаа	Ьдссаадаса	аадссдсддд	аддадсадЬа	саасадсасд	1560
ЬассдЬдЬдд	ЬсадсдЬссЬ	сассдЬссЬд	сассаддасЬ	ддсЬдааЬдд	сааддадЬас	1620
аадЬдсаадд	ЬсЬссаасаа	адсссЬсддс	дсссссаЬсд	адаааассаЬ	сЬссааадсс	1680
ааадддсадс	сссдадаасс	асаддЬдЬас	асссЬдсссс	саЬдссддда	ЬдадсЬдасс	1740
аадаассадд	ЬсадссЬдЬд	дЬдссЬддЬс	аааддсЬЬсЬ	аЬсссадсда	саЬсдссдЬд	1800
дадЬдддада	дсааЬдддса	дссддадаас	аасЬасаада	ссасдссЬсс	сдЬдсЬддас	1860
ЬссдасддсЬ	ссЬЬсЬЬссЬ	сЬасадсаад	сЬсассдЬдд	асаададсад	дЬддсадсад	1920
дддаасдЬсЬ	ЬсЬсаЬдсЬс	сдЬдаЬдсаЬ	даддсЬсЬдс	асаассасЬа	сасдсадаад	1980
адссЬсЬссс	ЬдЬсЬссддд	Ьааа				2004

- 325 030147

<210>

<211>

<212>

<213>

225

446

РКТ

Искусственная последовательность

<220>

<223> анти-СИЗЗ(УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329Е ЬАЬА

<400> 225

Е1п Уа1 Е1п Ьеи УаЬ Е1п Зег Е1у А1а Е1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго Е1у Зег 15 10 15

Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег Е1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг 20 25 30

Азп Мер Шз Тгр Уа1 Агд Е1п А1а Рго Е1у Е1п Е1у Ьеи Е1и Тгр 11е 35 40 45

61у Туг 11е Туг Рго Туг Азп Е1у Е1у ТЬг Е1у Туг Азп Е1п Ьуз РЬе 50 55 60

Ьуз Зег Ьуз А1а ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Е1и Зег ТЬг Азп ТЬг А1а Туг 65 70 75 80

Мер Е1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег Е1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд Б1у Агд Рго А1а Мер Азр Туг Тгр Е1у Е1п Е1у ТЬг Ьеи Уа1 100 105 110

ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз Е1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а 115 120 125

Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег Е1у Е1у ТЬг А1а А1а Ьеи Е1у Суз Ьеи 130 135 140

Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго Е1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег Е1у 145 150 155 160

- 326 030147

- 327 030147

Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Ые АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег Азп СЬу 370 375 380

СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег Азр 385 390 395 400

СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи УаЬ Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег Агд Тгр 405 410 415

СЬп СЬп СЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеЕ НЬз СЬи АЬа Ьеи НЬз 420 425 430

Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз 435 440 445

<210> 226

<211> 1338

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> анти-СОЗЗ(УН-СНЬ)-Гс(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 226

саддЕдсадс	ЕддЕдсадЕс	Еддсдссдаа	дЕдаадааас	ссддсадсад	сдЕдааддЕд	60
ЕссЕдсаадд	ссадсддсЕа	сассЕЕсасс	дасЕасааса	ЕдсасЕдддЕ	ссдссаддсс	120
ссаддссадд	дасЕддааЕд	даЕсддсЕас	аЕсЕассссЕ	асаасддсдд	сассддсЕас	180
аассадаадЕ	Есаададсаа	ддссассаЕс	ассдссдасд	ададсассаа	сассдссЕас	240
аЕддаасЕда	дсадссЕдсд	дадсдаддас	ассдссдЕдЕ	асЕасЕдсдс	сададдсада	300
сссдссаЕдд	асЕасЕдддд	ссадддсасс	сЕддЕдасад	ЕдЕссадсдс	Еадсассаад	360
ддссссЕссд	ЕдЕЕсссссЕ	ддсссссадс	адсаададса	ссадсддсдд	сасадссдсЕ	420
сЕдддсЕдсс	ЕддЕсаадда	сЕасЕЕсссс	дадсссдЕда	ссдЕдЕссЕд	даасадсдда	480
дсссЕдассЕ	ссддсдЕдса	сассЕЕсссс	дссдЕдсЕдс	ададЕЕсЕдд	ссЕдЕаЕадс	540
сЕдадсадсд	ЕддЕсассдЕ	дссЕЕсЕадс	адссЕдддса	сссадассЕа	саЕсЕдсаас	600
дЕдаассаса	адсссадсаа	сассааддЕд	дасаадаадд	Еддадсссаа	дадсЕдсдас	660
аааасЕсаса	саЕдсссасс	дЕдсссадса	ссЕдаадсЕд	садддддасс	дЕсадЕсЕЕс	720

- 328 030147

сДсДДссссс	саааасссаа	ддасасссДс	аДдаДсДссс	ддассссДда	ддДсасаДдс	780
дДддДддДдд	асдДдадсса	сдаадасссД	даддДсаадД	ДсаасДддДа	сдДддасддс	840
дДддаддДдс	аДааДдссаа	дасааадссд	сдддаддадс	адДасаасад	сасдДассдД	900
дДддДсадсд	ДссДсассдД	ссДдсассад	дасДддсДда	аДддсаадда	дДасаадДдс	960
ааддДсДсса	асааадсссД	сддсдссссс	аДсдадаааа	ссаДсДссаа	адссаааддд	1020
садссссдад	аассасаддД	дДдсасссДд	сссссаДссс	дддаДдадсД	дассаадаас	1080
саддДсадсс	ДсДсдДдсдс	адДсаааддс	ДДсДаДссса	дсдасаДсдс	сдДддадДдд	1140
дададсааДд	ддсадссдда	даасаасДас	аадассасдс	сДсссдДдсД	ддасДссдас	1200
ддсДссДДсД	ДссДсдДдад	саадсДсасс	дДддасаада	дсаддДддса	дсаддддаас	1260
дДсДДсДсаД	дсДссдДдаД	дсаДдаддсД	сДдсасаасс	асДасасдса	даададссЕс	1320
ДсссДдДсДс	сдддДааа					1338

<210> 227

<211> 219

<212> ΡΚΤ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> анти-СО20(УЬ-СЬ)

<400> 227

Азр 1

Ые

УаЬ

МеД

ТЬг 5

СЬп

ТЬг

Рго

Ьеи

Зег 10

Ьеи

Рго

УаЬ

ТЬг

Рго 15

СЬу

61и

Рго

АЬа

Зег

Ые

Зег

Суз

Агд

Зег

Ьуз

Зег

Ьеи

НЬз

Зег

20

25

30

Азп

СЬу

Ые

ТЬг

Туг

Ьеи

Туг

Тгр

Туг

Ьеи

СЬп

Ьуз

Рго

СЬу

СЬп

Зег

35

40

45

Рго

СЬп

Ьеи

Ые

Туг

СЬп

МеД

Зег

Азп

Ьеи

УаЬ

Зег

СЬу

УаЬ

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

СЬу

Зег

СЬу

Зег

СЬу

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Ые

65

70

75

80

329 030147

Зег Агд Уа1 С1и А1а Е1и Азр Уа1 С1у Уа1 Туг Туг Суз А1а С1п Азп 85 90 95

Ьеи С1и Ьеи Рго Туг ТЬг РЬе СЬу С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз 100 105 110

Агд ТЬг Уа1 А1а А1а Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и 115 120 125

С1п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе 130 135 140

Туг Рго Агд С1и А1а Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п 145 150 155 160

Зег С1у Азп Зег С1п С1и Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег 165 170 175

ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг 61и 180 185 190

Ьуз Шз Ьуз Уа1 Туг А1а Суз С1и Уа1 ТЬг Шз С1п СЬу Ьеи Зег Зег 195 200 205

Рго А7а1 ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд 61у С1и Суз 210 215

<210> 228

<211> 657

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> анти-С020(УЬ-СЬ)

<400> 228

даЬаЬсдЬда	Ьдасссадас	ЬссасЬсЬсс	сЬдсссдЬса	ссссЬддада	дсссдссадс	60
аЬЪадсЬдса	ддЬсЬадсаа	дадссЬсЬЬд	сасадсааЬд	дсаЬсасЬЬа	ЬЬЬдЬаЬЬдд	120
ЬассЬдсааа	адссадддса	дЬсЬссасад	сЬссЬдаЬЬЬ	аЬсаааЬдЬс	саассЫдЪс	180

- 330 030147

ЬсЬддсдЬсс	сЬдассддЫ	сЬссддаЬсс	дддЬсаддса	сЬдаЫЬсас	асЬдааааЬс	240
адсадддЬдд	аддсЬдадда	ЬдЫддадЫ	ЬаЫасЬдсд	сЬсадааЬсЬ	адаасЫссЬ	300
ЬасассЬЬсд	дсддадддас	сааддЬддад	аЬсааасдЬа	сддЬддсЬдс	ассаЬсЬдЬс	360
ЫсаЬсЫсс	сдссаЬсЬда	ЬдадсадСЬд	аааЬсЬддаа	сЬдссЬсЬдЬ	ЬдЬдЬдссЬд	420
сЪдааЪаасЬ	ЪсЪаЪсссад	ададдссааа	дЬасадЬдда	аддЬддаЬаа	сдсссЬссаа	480
ЬсдддЬаасЬ	сссаддадад	ЬдЬсасадад	саддасадса	аддасадсас	сЬасадссЬс	540
адсадсассс	ЬдасдсЬдад	сааадсадас	Ьасдадааас	асааадЬсЬа	сдссЬдсдаа	600
дЬсасссаЬс	адддссЬдад	сЬсдсссдЬс	асааададсЬ	Ьсаасадддд	ададЬдЬ	657
<210> 229 <211> 671 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220> <223> У9(УЬ-СН1)-анти-СО20(УН-СНЬ)-Гс(«выступ») Р329С	ЬАЬА
<400> 229 Азр Ые СЬп	МеЬ ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи	Зег АЬа Зег	УаЬ СЬу

15 10 15

Азр Агд УаЬ ТЬг 11е ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Азр Ые Агд Азп Туг 20 25 30

Ьеи Азп Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые 35 40 45

Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр Туг ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Зег Ьеи СЬп Рго 65 70 75 80

331

030147

- 332 030147

Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег Е1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд 305 310 315 320

Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи 325 330 335

Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз Е1у Рго Зег \7а1 РЬе Рго Ьеи 340 345 350

А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег Е1у Е1у ТЬг А1а А1а Ьеи Е1у Суз 355 360 365

Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго Е1и Рго \7а1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег 370 375 380

Е1у А1а Ьеи ТЬг Зег Е1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а А7а1 Ьеи Е1п Зег 385 390 395 400

Зег Е1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег 405 410 415

Ьеи Е1у ТЬг Е1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Ηίβ Ьуз Рго Зег Азп 420 425 430

ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 Е1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Нлз 435 440 445

ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Е1и А1а А1а Е1у Е1у Рго Зег Уа1 450 455 460

РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер 11е Зег Агд ТЬг 465 470 475 480

Рго Е1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 \7а1 Уа1 Азр Уа1 Зег НЬз Е1и Азр Рго Е1и 485 490 495

Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр Е1у Уа1 Е1и Уа1 НЬз Азп А1а Ьуз 500 505 510

- 333 030147

ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд УаЬ УаЬ Зег 515 520 525

УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи Туг Ьуз 530 535 540

Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи СЬу А1а Рго ЬЬе СЬи Ьуз ТЬг ЬЬе 545 550 555 560

Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг ТЬг Ьеи Рго 565 570 575

Рго Суз Агд Азр СЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи Тгр Суз Ьеи 580 585 590

УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Ые АЬа УаЬ СЬи Тгр СЬи Зег Азп 595 600 605

СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег 610 615 620

Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Азр Ьуз Зег Агд 625 630 635 640

Тгр СЬп СЬп СЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ Мер НЬз СЬи АЬа Ьеи 645 650 655

НЬз Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз 660 665 670

<210> 230

<211> 2013

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> У9(УЬ-СНЬ)-анти-СО20(УН-СНЬ)-Гс(«выступ») Р329С ЬАЬА

<400> 230

даРаРссада Рдасссадад ссссадсРсР срдадсдсса дсдрдддсда сададрдасс 60

- 334 030147

ддсааддссс	ссаадсбдсб	дабсбасбас	ассадсадас	бддааадсдд	сдбдсссбсс	180
адаббббссд	дсадсддсбс	сддсассдас	басасссбда	ссабсадсад	ссбдсадссс	240
даддабббсд	ссасабабба	сбдссадсад	ддсаабассс	бдсссбддас	сббсддасад	300
ддсасаааад	бддааабсаа	дадсадсдсб	бссассааад	дсссббссдб	дбббссбсбд	360
дсбссбадсб	ссаадбссас	сбсбддаддс	ассдсбдсбс	бсддабдссб	сдбдааддаб	420
баббббссбд	адссбдбдас	адбдбссбдд	аабадсддад	сасбдассбс	бддадбдсаб	480
асбббссссд	сбдбдсбдса	дбссбсбдда	сбдбасадсс	бдадсадсдб	ддбдасадбд	540
сссадсадса	дссбдддсас	ссадассбас	абсбдсаасд	бдаассасаа	дсссадсаас	600
ассааддбдд	асаадааддб	ддаасссаад	бсббдбддсд	даддсддабс	сддсддаддд	660
ддабсбсадд	бдсааббддб	дсадбсбддс	дсбдаадбба	адаадссбдд	дадббсадбд	720
ааддбсбссб	дсааддсббс	сддабасдсс	ббсадсбабб	сббддабсаа	ббдддбдсдд	780
саддсдссбд	дасаадддсб	сдадбддабд	ддасддабсб	ббсссддсда	бддддабасб	840
дасбасаабд	ддаааббсаа	дддсададбс	асааббассд	ссдасааабс	сасбадсаса	900
дссбабабдд	адсбдадсад	ссбдадабсб	даддасасдд	ссдбдбабба	сбдбдсаада	960
аабдбсбббд	абддббасбд	дсббдбббас	бддддссадд	даасссбддб	сассдбсбсс	1020
бсадсбадса	ссаадддссс	садсдбдббс	ссссбддсас	ссадсадсаа	дадсасабсб	1080
ддсддаасад	ссдсбсбддд	сбдбсбддбд	ааадасбасб	бссссдадсс	сдбдассдбд	1140
бсббддаасб	сбддсдсссб	дассадсддс	дбдсасассб	ббссадссдб	дсбдсададс	1200
адсддссбдб	асбсссбдбс	сбссдбддбс	ассдбдсссб	сбадсбсссб	дддаасасад	1260
асабабабсб	дбаабдбсаа	бсасаадссб	бссаасасса	аадбсдабаа	дааадбсдад	1320
сссаададсб	дсдасаааас	бсасасабдс	ссассдбдсс	садсассбда	адсбдсаддд	1380
ддассдбсад	бсббссбсбб	ссссссаааа	сссааддаса	сссбсабдаб	сбсссддасс	1440
ссбдаддбса	сабдсдбддб	ддбддасдбд	адссасдаад	асссбдаддб	саадббсаас	1500
бддбасдбдд	асддсдбдда	ддбдсабааб	дссаадасаа	адссдсддда	ддадсадбас	1560
аасадсасдб	ассдбдбддб	садсдбссбс	ассдбссбдс	ассаддасбд	дсбдаабддс	1620
ааддадбаса	адбдсааддб	сбссаасааа	дсссбсддсд	сссссабсда	даааассабс	1680

- 335 030147

Ьссааадсса	аадддсадсс	ссдадаасса	саддЬдЬаса	сссЬдссссс	аЬдссдддаЬ	1740
дадсЬдасса	адаассаддЬ	садссЬдЬдд	ЬдссЬддЬса	ааддсНсЬа	Ьсссадсдас	1800
аЬсдссдЬдд	адЬдддадад	сааЬдддсад	ссддадааса	асЬасаадас	сасдссЬссс	1860
дЬдсЬддасЬ	ссдасддсЬс	сЬЬсЬЬссЬс	Ьасадсаадс	ЬсассдЬдда	саададсадд	1920
Ьддсадсадд	ддаасдЬсН	сЬсаЬдсЬсс	дЬдаЬдсаЬд	аддсЬсЬдса	саассасЬас	1980
асдсадаада	дссЬсЬсссЬ	дЬсЬссдддЬ	ааа			2013

<210> 231

<211> 449

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> анти-СЬ20(УН-СН1)-Гс(«впадина») Р329Е ЬАЬА

<400> 231

С1п Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1п Зег Е1у А1а Е1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго Е1у Зег 15 10 15

Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег Е1у Туг А1а РЬе Зег Туг Зег 20 25 30

Тгр 11е Азп Тгр Уа1 Агд Е1п А1а Рго Е1у Е1п Е1у Ьеи Е1и Тгр МеЬ 35 40 45

Е1у Агд 11е РЬе Рго Е1у Азр Е1у Азр ТЬг Азр Туг Азп Е1у Ьуз РЬе 50 55 60

Ьуз Е1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 75 80

МеЬ Е1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр Е1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр Е1у Е1п Е1у 100 105 110

ЗЗ6

030147

- 337 030147

Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи С1у А1а Рго 11е 61и Ьуз 325 330 335

ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у 61п Рго Агд С1и Рго 61п Уа1 Суз ТЬг 340 345 350

Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи Зег 355 360 365

Суз А1а Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а \/а1 61и Тгр С1и 370 375 380

Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи 385 390 395 400

Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Уа1 Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз 405 410 415

Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Шз С1и 420 425 430

А1а Ьеи Шз Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 435 440 445

Ьуз

<210> 232

<211> 1347

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> анти-СЦ20(УН-СН1)-Ес(«впадина») Р329С ЬАЬА

<400> 232

саддЬдсааЬ	ЬддЬдсадЬс	ЬддсдсЬдаа	дНаадаадс	сЬдддадНс	адЬдааддЬс	60
ЬссЬдсаадд	сНссддаЬа	сдссНсадс	ЬаПсНдда	ЬсааПдддЬ	дсддсаддсд	120
ссЬддасаад	ддсЬсдадЬд	даЬдддасдд	аЪсЬИсссд	дсдаЬдддда	ЬасЬдасЬас	180
ааЬдддаааЬ	Ьсаадддсад	адЬсасааН	ассдссдаса	ааЬссасЬад	сасадссЬаЬ	240

- 338 030147

аРддадсРда	дсадссРдад	аРсРдаддас	асддссдрдр	аРРасРдРдс	аадаааРдРс	300
РРРдаРддРР	асРддсРРдР	РРасРддддс	садддаассс	РддРсассдР	сРссРсадсР	360
адсассаадд	дсссаРсддР	сРРсссссРд	дсасссРссР	ссаададсас	срсрдддддс	420
асадсддссс	РдддсРдссР	ддРсааддас	РасРРссссд	аассддрдас	ддрдрсдрдд	480
аасРсаддсд	сссрдассад	сддсдрдсас	ассРРсссдд	сРдРссРаса	дРссРсадда	540
сРсРасРссс	РсадсадсдР	ддрдассдрд	сссРссадса	дсРРдддсас	ссадассРас	600
аРсРдсаасд	РдааРсасаа	дсссадсаас	ассааддрдд	асаадааадр	Рдадсссааа	660
РсРРдРдаса	ааасрсасас	аРдсссассд	Рдсссадсас	срдаадсрдс	адддддассд	720
РсадРсРРсс	РсРРсссссс	аааасссаад	дасасссРса	РдаРсРсссд	дассссРдад	780
дРсасаРдсд	рддрддрдда	сдрдадссас	даадасссРд	аддРсаадРР	саасРддРас	840
дрддасддсд	РддаддРдса	РааРдссаад	асааадссдс	дддаддадса	драсаасадс	900
асдрассдрд	РддРсадсдР	ссРсассдРс	сРдсассадд	асРддсРдаа	Рддсааддад	960
РасаадРдса	аддРсРссаа	сааадсссрс	ддсдссссса	Рсдадаааас	саРсРссааа	1020
дссааадддс	адссссдада	ассасаддрд	РдсасссРдс	ссссаРсссд	ддаРдадсРд	1080
ассаадаасс	аддРсадссР	срсдрдсдса	дРсаааддсР	РсРаРсссад	сдасаРсдсс	1140
дрддадрддд	ададсаардд	дсадссддад	аасаасРаса	адассасдсс	РсссдРдсРд	1200
дасРссдасд	дсРссРРсРР	ссРсдРдадс	аадсРсассд	Рддасаадад	саддрддсад	1260
саддддаасд	РсРРсРсаРд	срссдрдард	саРдаддсРс	Рдсасаасса	сРасасдсад	1320
аададссРсР	сссРдРсРсс	дддрааа				1347

<210> 233

<211> 11

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> М4-3 МЬ2 НСРК1

<400> 233

С1у Е1у Зег 11е ТЬг Зег С1у Туг Туг Тгр Азп 15 10

- 339 030147

<210>	234
<211>	33
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	М4-3 МЬ2 НСОК1
<400>	234

ддсддсадса Ьсассадсдд сЬасЬасЬдд аас 33

<210>	235
<211>	16
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	М4-3 МЬ2 НСЬК2
<400>	235

Туг 11е ТЬг Туг Азр Е1у Зег Азп Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи. Ьуз Зег

1	5 10 15
<210>	236
<211>	48
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	М4-3 МЬ2 НСЬК2
<400>	236

ЬасаЬсассЬ асдасддсад саасаасЬас аассссадсс ЬдаадЬсс 48

<210>	237
<211>	3
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	М4-3 МЬ2 НСРКЗ
<400>	237

РЬе Азр Туг 1

- 340 030147

<210>	238
<211>	9
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	М4-3 МЬ2 НСИКЗ
<400>	238
ббсдасбас	9

<210>	239
<211>	112
<212>	РКТ
<213>	Иску
<220>
<223>	М4-3
<400>	239
С1п Уа1	С1п

С1п Уа1 С1п Ьеи Е1п С1и Зег Е1у Рго Е1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п

10

15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег 61у С1у Зег Не ТЬг Зег 61у 20 25 30

Туг Туг Тгр Азп Тгр Не Агд С1п Шз Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр 35 40 45

Не С1у Туг Не ТЬг Туг Азр С1у Зег Азп Азп Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг Не Зег Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег 65 70 75 80

А1а Азр РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 100 105 110

341 030147

<210> 240

<211> 336

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> М4-	3 МЬ2 УН
<400> 240 саддЪдсадс	Ьдсаддааад	сддсссЬддс	сЬддЬсаадс	ссадссадас	ссЬдадссЬд	60
ассЬдсассд	ЬдЬссддсдд	садсаЬсасс	адсддсЬасЬ	асЪддаасЬд	даЬссддсад	120
сассссддса	адддссЬдда	аЬддаЬсддс	ЪасаЬсассЪ	асдасддсад	саасаас+ас	180
аассссадсс	ЬдаадЬссад	адЬдассаЬс	адссдддаса	ссадсаадаа	ссад+Ъсадс	240
сЬдаадсЬдЬ	ссадсд+дас	адссдссдас	ассдссдЬдЬ	асЬасЪдсдс	сдасЬЬсдас	300
ЬасЬддддсс	адддсасссЬ	ддЬсассдЬд	Ьссадс			336

<210>	241
<211>	11
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	М4-3 МЬ2 ЬСОК1
<400>	241

Агд А1а Зег С1п Е1у 11е Агд Азп Туг Ьеи Азп 15 10

<210> 242

<211> 33

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> М4-3 МЬ2 ЬСЦК1

<400> 242

сдддссадсс адддсаЬссд даасЬассЬд аас 33

<210> 243

<211> 7

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

- 342 030147

<220>

<223>	М4-3 МЬ2 ЬСРК2
<400>	243

Туг ТЬг Зег Зег Ьеи НЬз Зег

Ь	5
<210>	244
<21Ь>	21
<2Ь2>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	М4-3 МЬ2 ЬСРК2
<400>	244

Расассадса дссРдсасад с 2Ь

<210>	245
<211>	9
<2Ь2>	РКТ
<2ЬЗ>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	М4-3 МЬ2 ЬСРКЗ
<4 00>	245

СЬп СЬп Туг Зег Ьуз Ьеи Рго Тгр ТЬг

Ь	5
<210>	246
<2Ь1>	27
<2Ь2>	ДНК
<2ЬЗ>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	М4-3 МЬ2 ЬСРКЗ
<400>	246

садсадРаса дсаадсрдсс сРддасс 27

<2Ь0>	247
<211>	107
<2Ь2>	РКТ
<2ЬЗ>	Искусственная последовательность

- 343 030147

<220>

<223> М4-3 МЬ2 УЬ

<400> 247

Азр 11е С1п МеЕ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег АЬа Зег Уа1 СЬу 15 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг Ые ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп СЬу ЬЬе Агд Азп Туг 20 25 30

Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Зег Ьеи СЬп Рго 65 70 75 80

СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп Туг Зег Ьуз Ьеи Рго Тгр 85 90 95

ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз 100 105

<210> 248

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> М4-3 МЬ2 УЬ
<400> 248 дасаЕссада	Едасссадад	ссссадсадс	сЕдадсдсса	дсдЕдддсда	сададЕдасс	60
аЕсассЕдсс	дддссадсса	дддсаЕссдд	аасЕассЕда	асЕддЕаЕса	дсадаадссс	120
ддсааддссс	ссаадсЕдсЕ	даЕсЕасЕас	ассадсадсс	Едсасадсдд	сдЕдссЕадс	180
сддЕЕЕадсд	дсадсддсЕс	сддсассдас	ЕЕсасссЕда	ссаЕЕадсЕс	ссЕдсадссс	240
даддасЕЕсд	ссассЕасЕа	сЕдссадсад	Еасадсаадс	ЕдсссЕддас	сЕЕсддссад	300

- 344 030147

<210>

<211>

<212>

<213>

252

57

ДНК

Искусственная последовательность

- 345 030147

346 030147

А1а Мер Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 61у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45

А1а Агд 11е Агд Зег Ьуз Туг Азп Азп Туг А1а ТЬг Туг Туг А1а Азр 50 55 60

Зег Уа1 Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азр Зег С1п Зег 11е 65 70 75 80

Ьеи Туг Ьеи С1п Мер Азп Азп Ьеи Ьуз ТЬг С1и Азр ТЬг А1а Мер Туг 85 90 95

Туг Суз Уа1 Агд Нгз С1у Азп РЬе С1у Азп Зег Туг Уа1 Зег Тгр РЬе 100 105 110

А1а Туг Тгр С1у С1п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег А1а 115 120 125

<210> 256

<211> 375

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> анти-СЬЗ УН

<400> 256

даадРдсадс	РддРддааад	сддсддаддс	сРддРдсадс	сРаадддсРс	РсРдаадсРд	60
адсРдРдссд	ссадсддсРР	сассРРсаас	ассРасдсса	РдаасРдддР	дсдссаддсс	120
ссрддсааад	дссрддаард	ддрддсссдд	аРсадаадса	адРасаасаа	РРасдссасс	180
РасРасдссд	асадсдРдаа	ддассддРРс	ассаРсадсс	дддасдасад	ссададсаРс	240
сРдРассРдс	адаРдаасаа	ссРдаааасс	даддасассд	ссаРдРасРа	срдсдрдсдд	300
сасддсааср	Рсддсаасад	сРаРдРдРсР	РддРРРдссР	асРддддсса	дддсасссРс	360
дрдасадрдр	сРдсР					375

<210> 257

<211> 14

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

- 347 030147

<220>

<223>	анти-СОЗ ЬСЬК1
<400>	257

Агд Зег Зег ТЬг С1у А1а Уа1 ТЬг ТЬг Зег Азп Туг А1а Азп

1	5 10
<210>	258
<211>	42
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	анти-СОЗ ЬСОК1
<400>	258

адаЬсЬадса саддсдссдЬ дассассадс аасЬасдсса ас 42

<210>	259
<211>	7
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	анти-СОЗ ЬСОК2
<400>	259

С1у ТЬг Азп Ьуз Агд А1а Рго

1	5
<210>	260
<211>	21
<212>	ДНК
<213>	Искусственная последовательность

<220>
<223>	анти-СОЗ ЬСОК2
<400>	260

ддсассааса ааадддсЬсс а 21

<210>	261
<211>	9
<212>	РКТ
<213>	Искусственная последовательность

- 348 030147

<220>

<223> анти-СОЗ ЬСОКЗ

<400> 261

А1а Ьеи Тгр Туг 1	Зег Азп 5	Ьеи	Тгр	Уа1
<210> 262 <211> 27 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
<220> <223> анти-СОЗ	ЬСОКЗ
<400> 262 дсссЕдЕддЕ асадсаассЕ дЕдддЕд
<210> 263 <211> 109 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
<220> <223> анти-СОЗ	УЬ
<400> 263
С1п А1а Уа1 Уа1 1	ТЬг С1п 5	С1и	Зег	А1а	Ьеи 10	ТЬг	ТЬг	Зег	Рго	СЬу 15	С1и
ТЬг Уа1 ТЬг Ьеи 20	ТЬг Суз	Агд	Зег	Зег 25	ТЬг	61у	А1а	Уа1	ТЬг 30	ТЬг	Зег
Азп Туг А1а Азп 35	Тгр Уа1	С1п	С1и 40	Ьуз	Рго	Азр	Низ	Ьеи 45	РЬе	ТЬг	С1у
Ьеи 11е С1у С1у 50	ТЬг Азп	Ьуз 55	Агд	А1а	Рго	С1у	Уа1 60	Рго	А1а	Агд	РЬе
Зег С1у Зег Ьеи	11е С1у	Азр	Ьуз	А1а	А1а	Ьеи	ТЬг	11е	ТЬг	С1у	А1а

65 70 75 80

- 349 030147

Εΐη ТЬг Е1и Азр С1и А1а 11е Туг РЬе Суз А1а Ьеи Тгр Туг Зег Азп 85 90 95

Ьеи Тгр Уа1 РЬе С1у Е1у Е1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи 100 105

<210> 264

<211> 327

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> анти-СЬЗ УЬ

<400> 264

саддссд!:сд	бдасссадда	аадсдсссбд	асаасаадсс	сбддсдадас	адбдасссбд	60
асс-ЬдсадаЪ	сбадсасадд	сдссдбдасс	ассадсаасб	асдссаасбд	ддбдсаддаа	120
аадсссдасс	ассбдббсас	сддссбдабс	ддсддсасса	асаааадддс	бссаддсдбд	180
ссадссада!:	бсадсддсад	ссбдаббддс	дабааддссд	сссбдассаб	сасбддсдсс	240
садасададд	асдаддссаб	сбасббббдс	дсссбдбддб	асадсаассб	дбдддбдббс	300
ддсддаддса	ссаадсбдас	адбдсбд				327

<210>	265
<211>	207
<212>	РКТ
<213>	Ното
<400>	265
Меб Е1п	. Зег

10

15

Уа1 Е1у Уа1 Тгр Е1у Е1п Азр Е1у Азп Е1и Е1и Меб Е1у С1у 11е ТЬг 20 25 30

Е1п ТЬг Рго Туг Ьуз Уа1 Зег 11е Зег Е1у ТЬг ТЬг Уа1 11е Ьеи ТЬг 35 40 45

Суз Рго Е1п Туг Рго Е1у Зег Е1и 11е Ьеи Тгр 61п Нтз Азп Азр Ьуз 50 55 60

- 350 030147

- 351 030147

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула, содержащая первый и второй антигенсвязывающие фрагменты, один из которых представляет собой молекулу ЕаЬ, обладающую способностью к специфическому связыванию с активирующим Т-клетки антигеном, а другой представляет собой молекулу ЕаЬ, обладающую способностью к специфическому связыванию с антигеном клетки-мишени, и Ес-домен, состоящий из первой и второй субъединиц, которые обладают способностью к стабильной ассоциации, в которой первый антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полученную в результате кроссинговера молекулу ЕаЬ, в которой обменены либо вариабельная, либо константная области легкой цепи ЕаЬ и тяжелой цепи ЕаЬ, где первый и второй антигенсвязывающие фрагментыы слиты друг с другом, необязательно, через пептидный линкер и где активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула содержит не более одного антигенсвязывающего фрагмента, способного специфически связываться с активирующим Т-клетки антигеном.
2. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.1, в которой второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи ЕаЬ с Ν-концом тяжелой цепи ЕаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента.
3. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.1, в которой первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи ЕаЬ с Ν-концом тяжелой цепи ЕаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента.
4. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.2 или 3, в которой легкая цепь ЕаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента и легкая цепь ЕаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента слиты друг с другом, необязательно, через пептидный линкер.

- 352 030147
5. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.1, в которой второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце легкой цепи РаЬ с Ν-концом легкой цепи РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента.
6. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.3 или 5, в которой второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена.
7. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.2, в которой первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена.
8. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из пп.1-7, содержащая третий антигенсвязывающий фрагмент, который представляет собой молекулу РаЬ, обладающую способностью к специфическому связыванию с антигеном клетки-мишени.
9. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.8, в которой третий антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом первой или второй субъединицы Рс-домена.
10. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.8 или 9, в которой второй и третий антигенсвязывающие фрагменты, каждый, слиты на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом одной из субъединиц Рс-домена и первый антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ второго антигенсвязывающего фрагмента.
11. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.8 или 9, в которой первый и третий антигенсвязывающие фрагменты, каждый, слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом одной из субъединиц Рс-домена и второй антигенсвязывающий фрагмент слит на С-конце тяжелой цепи РаЬ с Ν-концом тяжелой цепи РаЬ первого антигенсвязывающего фрагмента.
12. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.10, в которой второй и третий антигенсвязывающие фрагменты и Рс-домен представляют собой часть молекулы иммуноглобулина, прежде всего иммуноглобулина класса 1§С.
13. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из предыдущих пунктов, в которой Рс-домен представляет собой Рс-домен 1дС. в частности Ι§Οι или 1дС₄.
14. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из предыдущих пунктов, в которой Рс-домен представляет собой человеческий Рс-домен.
15. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из предыдущих пунктов, в которой Рс-домен содержит модификацию, усиливающую ассоциацию первой и второй субъединиц Рс-домена.
16. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.15, в которой в СН3-домене первой субъединицы Рс-домена аминокислотный остаток заменен аминокислотным остатком, который имеет боковую цепь большего объема, что приводит к образованию выпуклости в СН3-домене первой субъединицы, которая может помещаться в полость в СН3-домене второй субъединицы, и в СН3-домене второй субъединицы Рс-домена аминокислотный остаток заменен аминокислотным остатком, который имеет меньший объем боковой цепи, что приводит к образованию полости в СН3-домене второй субъединицы, в которую может помещаться выпуклость в СН3-домене первой субъединицы.
17. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из предыдущих пунктов, в которой Рс-домен характеризуется пониженной аффинностью связывания с Рсрецептором и/или пониженной эффекторной функцией по сравнению с нативным Рс-доменом Ι§Οι.
18. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из предыдущих пунктов, в которой Рс-домен содержит одну или несколько аминокислотных замен, которые снижают связывание с Рс-рецептором и/или эффекторную функцию.
19. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по п.18, в которой указанная одна или несколько аминокислотные замены находятся в положении, выбранном из группы, включающей Ь234, Ь235 и Р329 (ЕИ-нумерация).
20. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по любому из предыдущих пунктов, в которой каждая субъединица Рс-домена содержит три аминокислотные замены, которые снижают связывание с активирующим Рс-рецептором и/или эффекторную функцию, где указанные аминокислотные замены представляют собой Ь234А, Ь235А и Р329С (ЕИ-нумерация).
21. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из пп.1720, в которой Рс-рецептор представляет собой Рсу-рецептор.
22. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из пп.1720, в которой эффекторная функция представляет собой антитело-обусловленную клеточнозависимую цитотоксичность (АЭСС).
23. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из предыдущих пунктов, в которой активирующий Т-клетки антиген представляет собой СИ3.
24. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из преды- 353 030147

дущих пунктов, где антиген клетки-мишени выбран из группы, включающей: ассоциированный с меланомой хондроитинсульфат-протеогликан (МС8Р), рецептор эпидермального фактора роста (БОРК), СБ19, СБ20, СБ33, карциноэмбриональный антиген (СЕА) и фибробласт-активирующий белок (РАР).
25. Выделенный полинуклеотид, кодирующий активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу по одному из пп.1-24.
26. Вектор, прежде всего экспрессионный вектор, содержащий выделенный полинуклеотид по п.25.
27. Клетка-хозяин, содержащая выделенный полинуклеотид по п.25 или вектор по п.26.
28. Способ получения активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы по одному из пп.1-24, включающий стадии, на которых а) культивируют клетку-хозяина по п.27 в условиях, пригодных для экспрессии активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы; и б) выделяют активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу.
29. Фармацевтическая композиция, содержащая активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу по одному из пп.1-24 и фармацевтически приемлемый носитель.
30. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из пп.1-24 или фармацевтическая композиция по п.29, предназначенная для применения в качестве лекарственного средства.
31. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула по одному из пп.1-24 или фармацевтическая композиция по п.29, предназначенная для применения при лечении заболевания у индивидуума, который нуждается в этом.
32. Активирующая Т-клетки биспецифическая антигенсвязывающая молекула или фармацевтическая композиция по п.31, где заболевание представляет собой рак.
33. Применение активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулы по одному из пп.1-24 для приготовления лекарственного средства для лечения заболевания у индивидуума, который нуждается в этом.
34. Способ лечения заболевания у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму в терапевтически эффективном количестве композиции, которая содержит активирующую Т-клетки биспецифическую антигенсвязывающую молекулу по одному из пп.1-24, в фармацевтически приемлемой форме.
35. Применение по п.33 или способ по п.34, где указанное заболевание представляет собой рак.
36. Способ индукции лизиса клетки-мишени, включающий приведение в контакт клетки-мишени с активирующей Т-клетки биспецифической антигенсвязывающей молекулой по одному из пп.1-24 в присутствии Т-клетки.