[go: up one dir, main page]

EA023667B1 - Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью - Google Patents

Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью Download PDF

Info

Publication number
EA023667B1
EA023667B1 EA201490963A EA201490963A EA023667B1 EA 023667 B1 EA023667 B1 EA 023667B1 EA 201490963 A EA201490963 A EA 201490963A EA 201490963 A EA201490963 A EA 201490963A EA 023667 B1 EA023667 B1 EA 023667B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
general formula
hemin
active against
compounds
Prior art date
Application number
EA201490963A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201490963A1 (ru
Inventor
Владимир Евгеньевич НЕБОЛЬСИН
Галина Александровна ЖЕЛТУХИНА
Сергей Александрович ОКОРОЧЕНКОВ
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез"
Publication of EA201490963A1 publication Critical patent/EA201490963A1/ru
Publication of EA023667B1 publication Critical patent/EA023667B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F15/00—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table
    • C07F15/02—Iron compounds
    • C07F15/025—Iron compounds without a metal-carbon linkage
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/555—Heterocyclic compounds containing heavy metals, e.g. hemin, hematin, melarsoprol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/02—Local antiseptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0606—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing heteroatoms not provided for by C07K5/06086 - C07K5/06139, e.g. Ser, Met, Cys, Thr
    • C07K5/06069—Ser-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • C07K5/06095—Arg-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/1008—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к новым производным гемина общей формулы (I), их получению и применению в качестве антибактериальных и/или противовирусных, средств, в том числе в составе фармацевтических композиций. Преимуществами новых антибактериальных и противовирусных средств на основе производных гемина является их биосовместимость, биодеградируемость, высокая эффективность против резистентных бактерий и широко распространенных и опасных для человека вирусов при отсутствии токсичности.

Description

(57) Изобретение относится к новым производным гемина общей формулы (I), их получению и применению в качестве антибактериальных и/или противовирусных, средств, в том числе в составе фармацевтических композиций. Преимуществами новых антибактериальных и противовирусных средств на основе производных гемина является их биосовместимость, биодеградируемость, высокая эффективность против резистентных бактерий и широко распространенных и опасных для человека вирусов при отсутствии токсичности.
Область техники
Изобретение относится к области биоорганической химии и направлено на получение новых производных гемина и на разработку антибактериальных и противовирусных средств и композиций на их основе.
Уровень техники
Как известно, многие опасные заболевания человека и животных вызываются бактериями и вирусами. Бактерии вызывают такие заболевания эпидемического характера, как холера, брюшной тиф, паратифы, чума, дифтерия, туляремия, бруцеллез, а также туберкулез, заражение крови (сепсис), проказа, сифилис и др. У животных бактерии вызывают сап, сибирскую язву, туберкулез и др. Борьба с бактериями основывается на применении антибактериальных средств, в том числе антибиотиков. Однако многие известные средства обладают рядом недостатков, такими как токсичность, чувствительность к действию протеолитических ферментов, гемолитический эффект, недостаточная широта антибактериального действия. Очень серьезную проблему представляет постоянное появление резистентных штаммов, т.е. штаммов, устойчивых к действию известных антибактериальных средств. Так, например, на сегодняшний день большую опасность представляет метициллин-резистентный стафилококк (МК8А), который устойчив к большой группе антибиотиков - бета-лактамов. Метициллин-резистентный стафилококк вызывает трудно вылечиваемые заболевания у людей, такие как заболевания крови, пневмонии. Он адаптировался к выживанию в присутствии метициллина, дифлоксацина и оксациллина. Наиболее часто именно с ним связаны внутрибольничные (нозокомиальные) инфекции. От метициллин-резистентной стафилококковой инфекции умирает около 18000 американцев ежегодно.
Поэтому проблема поиска новых антибактериальных средств, в том числе активных в отношении резистентных штаммов, не теряет своей актуальности.
Вирусы также являются причиной различных заболеваний, таких как грипп, ОРВИ, вирусные гепатиты и др. Вирусы простого герпеса - наиболее известные представители герпесвирусов (семейство Негреэтшбае), так как вызывают поражения практически у каждого человека. Имеются две разновидности вируса простого герпеса - ВПГ-1 (лабиальный герпес) и ВПГ-2 (генитальный герпес). Вирусы герпеса могут вызывать поражение нервной системы, глаз и внутренних органов. В США герпес - самая частая из причин острого вирусного энцефалита. Более чем в 95% случаев возбудителем герпетического энцефалита служит вирус простого герпеса типа 1. Широко известным средством борьбы с вирусами герпеса является ацикловир. Однако поскольку в настоящее время уже существуют резистентные к ацикловиру штаммы вируса герпеса, то поиск новых противогерпетических агентов является весьма актуальным.
Известно, что гемин обладает антимикробной активностью в отношении золотистого стафилококка [Υ. Νίΐ/ап. Н. Ьабаи, 8. Со/ащку. Ζ. МаПк.СкагасЮп/аОоп οί Непин аиБЪас(епа1 асйои оп §1арйу1ососси8 аигеи8//РЕМ8 МюгоЪю1. Ьей., 1987, νοί. 48 (3), р. 401-406]. Однако использование гемина в качестве антибактериального средства затруднено вследствие его нерастворимости в воде, гемолитической активности, а также кратковременности антибактериального эффекта.
Ранее предпринимались попытки модификации гемина путем его конъюгации с аминокислотами, пептидами и их производными с целью создания биологически активных производных. В результате модификации карбоксильных групп гемина путем получения соответствующих амидов были получены и исследованы соединения общей формулы I
где К! и К2, одинаковые или различные, представляют собой -ОН или остаток аминокислоты или пептида, причем Κι и К2 не могут одновременно обозначать -ОН;
Ме' представляет собой Ре2+ или Ре3+;
На1- представляет собой Р-, С1-, Вг- или I- [патент КИ № 2250906, опубл. 27.04.2005]. У этих производных были выявлены разные виды биологической активности, включая нуклеазную [патент КИ № 2404191, опубл. 20.11.2010], [патент КИ № 2250906, опубл. 27.04.2005], пероксидазную, каталитическую [патент КИ № 2404191, опубл. 20.11.2010], и вирулицидную [патент КИ № 2404191, опубл. 20.11.2010].
- 1 023667
Среди синтезированных ранее авторами изобретения производных гемина формулы (1) был выявлен ряд конкретных соединений, обладающих антимикробной (в том числе антибактериальной) активностью [патент Κϋ 2415868 С1, опубл. 10.04.2011]. Эти соединения представляют собой в основном конъюгаты гемина с эфирами аминокислот и антимикробными пептидами, где, в частности, для производных гемина с К1=1к=-ОЕ'ОМе, Κ1=Ι<2=-ΝΙ Ι0Ί РС1РО11, ЗегОМе или -О1и(Аг§ОМе)-Аг§ОМе была обнаружена антибактериальная активность. Однако лишь небольшое число производных гемина проявило активность в отношении резистентных штаммов бактерий, к тому же эти соединения были плохо растворимы в воде, а их активность была не слишком высока.
В настоящее время обнаружены новые производные гемина, обладающие антибактериальным и противовирусным действием, которые обладают улучшенными свойствами, в частности, проявляют активность в отношении штаммов МКЗА.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к новым производным гемина общей формулы I
где К и к- оба, представляют собой АгдЫЩ Аг§(ЫО2)ОМе, (τΑΝΙ к ЗегЫЩ ЗегОН, О1уОН, О1и(ОН)ОН, О1и(Аг§ЫН2)Аг§НН2, О1и(ЗегОМе)ЗегОМе, О1и(КНСН2СН2ОН)ННСН2СН2ОН,
О1и(ЗегНН2)Зе1НН2, О1и(О1уНН2)О1уЫН2, О1и(О1уОМе)О1уОМе, АгдЗегОМе, ЛгуЗег№ к АгдЗегОН, ЗегАгдОМе, Зег/\гу№ к ЗегАгдОН;
Меп+ представляет собой Ре2+ или Ре3+;
На1' представляет собой Р, С1, Вг или I, или их фармацевтически приемлемым солям.
Кроме того, изобретение относится к фармацевтической композиции на основе указанных соединений, и к применению указанных соединений для получения лекарственных средств, обладающих антибактериальной и/или противовирусной активностью.
Краткое описание фигур чертежей
На фигуре приведено сравнение СЬодР заявляемых и известных ранее соединений общей формулы I.
Подробное описание изобретения
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что новые соединения приведенной выше формулы I являются более эффективными по сравнению с ранее описанными аналогами.
Преимуществами новых производных гемина формулы I являются их большая водорастворимость, а также высокая антибактериальная эффективность, в том числе против резистентных штаммов.
Отличие новых заявляемых соединений от ранее известных - активность против опасных резистентных штаммов грамположительных бактерий Зкшгеиз 5 и МКЗА Зкшгеиз 3797 МКЗА и грамотрицательных Е.сой 4300. Неожиданно оказалось, что производные гемина общей формулы I, имеющие в составе заместителей незащищенный карбоксил или соответствующий амид, проявляют более высокую активность против бактерий. Так, соединения II, IV, X проявили при прочих равных условиях более высокую антибактериальную активность, чем соответствующие сложные эфиры, описанные в патенте Κϋ 2415868 С1, опубл. 10.04.2011.
При этом токсичность новых соединений осталась невысокой. Следует отметить, что вещества, содержащие амидированный карбоксил, лучше растворимы в воде, нежели их аналоги, содержащие карбоксильную или сложноэфирную группировку. По-видимому, это связано с большей гидрофильностью заместителей этих соединений, характеризуемой коэффициентами распределения октанол-вода.
- 2 023667
В настоящей работе были получены и исследованы следующие новые соединения формулы I: Соединение (И):
Соединение (III): К^Кз—АгйЩОДОМе;
Соединение (IV): Κι=Κ.2=-ΟΙνΝΗ2;
Соединение (V): К.1=К2=-ЗегМН2 ;
Соединение (VI): К|=К2=-ЗегОН;
Соединение (VII): Κι=Ρ2=-Ο1γΟΗ;
Соединение (VIII): К,=К2=-01и(ОН)ОН;
Соединение (IX): ΙΕΜ<2=-Ο1υ(ΑΐβΝΗ2)ΑΓ§ΝΗ2;
Соединение (X): К.!=К.2=-О1и(ЗегОМе)ЗегОМе;
Соединение (XI): К^Кг^ОЫЩНСНгСНгОЩЦНСНгСЩОН;
Соединение (XII): Κι=Κ.2=-Ο1ιι(36γΝΗ2)50γΝΗι;
Соединение (XIII): Κ]=Κ2=-01ο(01γΝΙΐ2)0!>'ΝΗ2;
Соединение (XIV): К|=К.2=-О1и(О1уОМе)О1уОМе;
Соединение (XIX): К|=К2=- АгдЗегОМе;
Соединение (XX): К|=К2=- АгиЗегЦН2;
Соединение (XXI): Κ.ι=Κ2=- ЗегЛгцОМе;
Соединение (XXII): Κι=Κ2=- Аг^ЗегОН;
Соединение (XXIII): К|=К2=- ЗегАщЕИ-Б;
Соединение (XXIV): Κ.ι=Κ.2=- ЗегАг^ОН.
Все аминокислоты, входящие в состав производных гемина, представляют собой Ь-аминокислоты, если не указано иное.
Дипептиды, включающие последовательность АгдЗег, являются известными соединениями. Так, у АгдЗегОМе САЗ 147139-57-9, у АгдЗегМНг - 121185-78-2, у АгдЗегОН - 70921-62-9. Дипептиды ЗегΑγ§ΝΗ2Η ЗегАгдОН также известны: САЗ 1008793-14-3 и 13261-11-5 соответственно. Ранее было описано также защищенное производное дипептида ВосЗег(В/1)АгдОН САЗ 88263-54-1. Другие использованные авторами в синтезе производных гемина промежуточные защищенные дипептиды 23АгдЗегОМе, 23АгдЗе^Н2. 23АгдЗегОН, ВосЗег(В/1)АгдОМе. ΒосЗе^(Βζ1)А^дNН2, а также дипептид ЗегАгдОМе являются новыми. Синтез данных пептидов осуществлен авторами с применением методов пептидной химии, конкретнее - методом активированных Ν-оксисукцинимидных эфиров. Бензилоксикарбонильную (Ζ) и бензильную (Βζΐ) защиты отщепляли гидрогенолизом над палладиевым катализатором, а третбутилоксикарбонильную защиту (Вос) удаляли метанолом, насыщенным хлористым водородом.
Соединения формулы I могут быть использованы как в виде солей с фармацевтически приемлемыми кислотами, например молочной, винной, лимонной, хлористоводородной и др., так и в виде солей по карбоксильным группам с ионами щелочных и щелочно-земельных металлов, таких как натрий, калий, кальций, или, например, с фармацевтически приемлемыми основаниями, такими как аммиак, этаноламин.
Представленные выше соединения формулы I проявляют активность против бактерий, таких как бактерии рода З!арЪу1ососсиз (например, З!арЪу1ососсиз аигеиз), ВасШиз (например, ВасШиз зиЫШз), Етегососсиз (например, Етегососснз Еаесайз), Мюгососсиз (например, Мюгососсиз 1Шеиз) и ЕзсЪепсЫа (например, ЕзсЪепсЫа сой), в том числе резистентных, т.е. обладающих устойчивостью к действию известных антибактериальных средств. Предпочтительно указанные бактерии относятся к штаммам ВасШиз зиЫШз ВКМ В-501, З1арйу1ососсиз аигеиз 209Р, Етегососснз Еаесайз ВКМ В-871 или Мюгососсиз 1н1енз ВКМ Ас-2230. Еще более предпочтительно указанные соединения проявляют антибактериальную активность против резистентных штаммов З1арйу1ососсиз аигеиз 25923 АТСС, З1арйу1ососсиз аигеиз 100 КС, З1арйу1ососсиз аигеиз 5 МКЗА, З1арйу1ососсиз аигеиз 3797 МКЗА, З1арйу1ососсиз ерШегниШз 533, Етегососснз ЕаесаПз 559, Етегососснз Еаесшт 569 или ЕзсЪепсЫа сой 4300.
Кроме того, соединения по изобретению обладают противовирусной активностью, в частности в отношении вирусов герпеса, таких как вирусы герпеса простого 1 и/или 2 типа. Предпочтительно соединения по изобретению обладают активностью в отношении вирусов герпеса простого 1 типа, штамм ЕС, и/или 2 типа, штамм С (АТСС # УК-734).
Указанные выше соединения формулы I и/или их соли могут быть использованы в качестве активных ингредиентов в фармацевтических композициях (например, в твердой, полутвердой или жидкой формах) в смеси с органическим или неорганическим носителем или наполнителем.
- 3 023667
Активный ингредиент может быть включен в композицию вместе с обычно используемыми нетоксичными, фармацевтически приемлемыми носителями, пригодными для изготовления растворов, таблеток, пилюль, капсул, суппозиториев, эмульсий, суспензий, спреев, ингаляторов, капель, мазей и любых других лекарственных форм. В качестве носителей могут быть использованы вода, глюкоза, лактоза, аравийская камедь, желатин, крахмал, триксилит магния, тальк, кукурузный крахмал, мочевина, полиэтиленгликоль и другие носители, пригодные для изготовления твердых, мягких или жидких препаратов. При этом в качестве добавок могут быть использованы стабилизаторы, загустители, красители и отдушки.
Соединение формулы I вводят в композицию в эффективном количестве, достаточном для получения антибактериального и/или противовирусного эффекта.
При изготовлении разовой лекарственной формы количество активного ингредиента, используемого в комбинации с носителем, может варьировать в зависимости от реципиента, подвергающегося лечению, от конкретного способа введения лекарственного средства.
Так, например, при использовании соединений настоящего изобретения в виде растворов для инъекций содержание действующего начала в них составляет 0,001-1 мас.%. В качестве разбавителя вещества могут быть использованы 0,9% раствор натрия хлорида, дистиллированная вода, раствор новокаина для инъекций, раствор Рингера, раствор глюкозы. При использовании соединения общей формулы I в виде таблеток и суппозиториев количество вещества составляет 1-100 мг на единичную дозированную форму. Для таблеток и суппозиториев в качестве фармацевтического наполнителя используют любую фармацевтически пригодную основу.
Поскольку соединения общей формулы I являются как водорастворимыми, так и липофильными, то они могут применяться в виде водных растворов, спиртовых растворов, мазей, кремов и т.д.
Далее, изобретение относится к антибактериальному и противовирусному лекарственному средству на основе указанных выше соединений формулы I, а также к способу лечения заболеваний, вызываемых указанными выше бактериями и/или вирусами, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту указанного выше соединения формулы I или фармацевтической композиции на его основе.
Способ лечения предназначен для пациентов-млекопитающих, в том числе людей. Рекомендуемые дозы соединения формулы I составляют 0,01-10 мг/кг.
Поскольку соединения формулы I обладают антибактериальной и противовирусной активностью, они могут также использоваться в качестве или в составе антисептических и/или дезинфицирующих средств. Такие средства могут быть изготовлены, например, в виде растворов с использованием различных растворителей, таких как вода и низшие спирты (например, 1-пропанол или 2-пропанол).
Еще один аспект изобретения относится к способу получения описанных выше новых соединений формулы I.
Соединения формулы I получают путем взаимодействия активированного по карбоксильным группам производного гемина с аминокомпонентом с применением стандартных методов пептидного синтеза.
В качестве аминокомпонентов используют пептиды, аминокислоты (в основном α-аминокислоты) или их аналоги, в частности Άτ§ΝΗ2, Лг§(ЫО2)ОМе, Ο1υΝΗ2. ΧγΝΗ2. 8етОН, С1уОН, С1и(ОН)ОН, ΝΗ2ΟΗ2ΟΗ2ΘΗ, С1уОМе и 8етОМе, а также производные дипептидов Лт§§етОМе, Αγ§ΧγΝΗ2. Лт§§етОН, §етЛт§ОМе, ΧγΑγ§ΝΗ2 и ЗегАгдОН. Реакцию проводят в растворителе, предпочтительно в ПМР.
Предпочтительно аминогруппы аминокомпонентов (например, α-аминогруппы карбоксилзащищенных аминокислот) ацилируют бис-Хоксисукцинимидным эфиром гемина. Реакции проводят в ОМЕ в течение 0,5-2 ч при температуре от -15 до 30°С с применением триэтиламина. Подобные реакции с незащищенными аминокислотами проводят в ОМЕ в присутствии триэтиламина и до 10% воды. Кроме того, конъюгаты гемина с разветвленными пептидами получают с помощью прямого присоединения защищенных по СООН группе производных аминокислот и пептидов к конъюгату гемина с глутаминовой кислотой в присутствии конденсирующего агента ТВТИ.
Таким образом, предлагаются новые эффективные антибактериальные и противовирусные средства на основе производных гемина. Их преимуществами являются биосовместимость, биодеградируемость, повышенная активность в отношении резистентных штаммов бактерий, низкая токсичность и отсутствие побочных эффектов, что делает их перспективными для применения в качестве лекарственных средств.
Изобретение далее иллюстрируется с помощью примеров, которые не предназначены для ограничения его объема.
Список сокращений
ВПГ-1 -вирус простого герпеса 1 типа.
ВПГ -2 - вирус простого герпеса 2 типа.
ИК - инфракрасная спектроскопия.
ИР - ингибирование роста.
МБК - минимальная бактерицидная концентрация.
- 4 023667
МИК - минимальная ингибирующая концентрация.
ПАВ - поверхностно-активные вещества.
ТСХ - тонкослойная хроматография.
ХЛФ - хлороформ.
ЦПД - цитопатогенное действие.
А - оптическая плотность.
Вос - трет-бутилоксикарбонил.
Βζΐ - бензил.
ΌΜΡ - диметилформамид.
ΌΜδΘ - диметилсульфоксид.
Εΐ3Ν - триэтиламин.
МеОН - метиловый спирт.
МН - среда Мие11ег-Н|11оп.
МР8А - метициллин-резистентный §1арЬу1ососси8 аитеик.
ОМе - метиловый эфир.
ΡΕΟ - полиэтиленгликоль.
ТВТИ - 2-/1Н-бензотриазол-1 -ил/-1,1,3,3-тетраметилуронийтетрафторборат.
ТСГО50 - тканевая цитопатогенная доза, вызывающая гибель 50% клеток монослоя.
Ζ - бензилоксикарбонил.
Следующие примеры иллюстрируют предлагаемое изобретение.
В работе использовались аминокислоты и их производные Ь-ряда, за исключением глицина, фирмы ВасЬет (Германия), Реапа1 (Венгрия), Εΐ3Ν (Р1ика, Германия). Промежуточные соединения - защищенные дипептиды Ζ3А^§§е^ОΜе, Ζ3А^§§е^NН2 и Ζ3А^§§е^ОН, Вос8еД^1)АтдОМе, Βосδе^(Βζ1)А^§NН2 и Вос8ег(Ш1)АтдОН- получали методами пептидной химии; их физико-химические характеристики приведены в табл. 1. Все растворители безводные, за исключением тех, которые использовались для экстракции из водных растворов. Индивидуальность полученных соединений проверяли методом ТСХ на пластинах К1е§е1де1 60 Р254 (Мегск, Германия) в системах: хлороформ:метанол:уксусная кислота:вода 5:4:0,5:0,5 (1), хлороформ:метанол:уксусная кислота:вода 5:4:0,2:0,2 (2), хлороформ:метанол 9:1 (3). Хроматограммы проявляли хлор-толидиновым реактивом, по свечению в УФ-свете.
Масс-спектры высокого разрешения получали на времяпролетном масс-спектрометре ЦЦтаДех (Вгикег, Германия) методом матриксной лазерно-десорбционной ионизации (ТОР ΜΑΕΌΙ), в качестве матрицы использовалась 2,5-дигидроксибензойная кислота.
ИК-спектры регистрировали на Фурье-спектрометре: Мадпа 750 (№со1е1, США).
Электронные спектры снимали на спектрофотометре ’Эаксо модель ИУ/У8 7800 (Япония).
Общая методика получения соединений ΙΙ-У, ΧΙΧ-ΧΧίν.
К суспензии 0,26 ммоль аминокомпонента в 1,5 мл ОМР прибавляли 0,033 мл (0,266 ммоль) Εΐ3Ν и перемешивали при комнатной температуре 3 мин. К полученному раствору прибавляли раствор 0,100 г (0,118 ммоль) 6,7-^оксисукцинимидного эфира протогемина IX в 5 мл ОМР и перемешивали 30 мин при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в системе (3). Реакционную массу концентрировали в вакууме до объема 1 мл. Для нерастворимых в воде соединений ΙΙΙ, Ιν и ν к сконцентрированной реакционной массе добавляли 10 мл водного 0,01 М раствора соляной кислоты, осадок отделяли и промывали водой до нейтральной реакции. Осадок сушили в эксикаторе при пониженном давлении над хлоридом кальция в течение суток. Для водорастворимого соединения ΙΙ, ΧΙΧ-ΧΧΙν к сконцентрированной реакционной массе добавляли 2,55 М раствор соляной кислоты в метаноле до достижения нейтральной реакции, затем добавляли 0,01 М раствор соляной кислоты в насыщенном водном растворе №С1. Осадок отделяли и сушили в эксикаторе при пониженном давлении над хлоридом кальция в течение суток, затем растворяли в 1 мл безводного метанола и отфильтровывали нерастворившийся №С1, после чего очищали с помощью гель-фильтрации на колонке 20x2 см, заполненной 8ерЬаДех ЬН20, элюируя метанолом. Содержащие целевой продукт фракции объединяли, растворитель удаляли в вакууме. Целевой продукт сушили в эксикаторе при пониженном давлении над хлоридом кальция в течение суток.
Пример 1.
6.7- бис-(Амид И'-аргинил)протогемин (IX) (II).
Выход 0,1020 г (70%).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1656 (амид I), 1534 (амид II).
Масс-спектр (МАЬОЦ, т/ζ: 926 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ОМ8О, Хтах нм, (ε·10-3): 403,8 (92,60), 499,2 (6,3643), 623,6 (1,553).
Пример 2.
6.7- бис-(Метиловый эфир-^-(№-нитро)аргинил)протогемин (IX) (III).
Выход 0,083 г (65%), Ρί 0,26 (1), 0,71 (2).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1737 (СО сл.эф.), 1648 (амид I), 1539 (амид II).
- 5 023667
Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 1001 |М-\О;-С1 | 956 [М-2КО2-СГ].
Электронный спектр, ΌΜδΟ, /-та,·. нм, (ε·10-3): 404 (1,163), 500,2 (0,986), 623,4 (0,540).
Пример 3.
6,7-бис-(Амид Ы“-глицил)протогемин (IX) (IV).
Выход 0,092 г (68%).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1654 (амид I), 1536 (амид II).
Масс-спектр (МАЬОЦ т/ζ: 728 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ΌΜδΟ, Хтах, нм, (ε·10-3): 402,0 (101,2), 504,2 (7,417), 628,6 (4,201).
Пример 4.
6.7- бис-(Амид Ы“-серил)протогемин (IX) (V).
Выход 0,105 г (72%).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1651 (амид I), 1530 (амид II).
Масс-спектр (МАЬОЦ т/ζ: 788 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ΌΜδΟ, Хтах, нм, (ε·10-3): 404,8 (207,12), 499,2 (6,547), 623,4 (3,603).
Пример 5.
6.7- бис-[(метиловый эфир №-Ь-серил)-Ь-аргинил]протогемин IX (XIX).
Выход 30 мг (65%), Ρί 0,43 (5).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 3338 (ΝΗ), 1740 (С=О сл. эф.), 1653 (амид I), 1545 (амид II). Масс-спектр (МАЬБ]): [М-С1-]+ 1131,5.
Электронный спектр, ^ΜδΟ, Хтах, нм, (ε·10-3): 401,8 (63), 585 (3,18).
Пример 6.
6.7- бис-[(Амид №-Ь-серил)-Ь-аргинил]протогемин IX (XX).
Выход 27 мг (58%), Ρί 0,25 (6).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 3388(ΝΗ), 1652 (амид I), 1544 (амид II).
Масс-спектр (МАЬВ]): [М-С1-]+ 1100.
Электронный спектр, ^ΜδΟ, Хтах, нм, (ε·10-3): 400,8 (47), 581,6 (3,34).
Пример 7.
6.7- бис-[(Метиловый эфир №-Ь-аргинил)-Ь-серил]протогемин IX (XXI).
Выход 22 мг (55%), Ρί 0,6 (9).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 3326 (ΝΗ), 1738 (С=О сл. эф.), 1627 (амид I), 1577 (амид II). Масс-спектр (МАЬВ]): [М-С1-]+ 1132.
Электронный спектр, ^ΜδΟ, /-та,·. нм, (ε·10-3): 404,8 (61), 495,6 (3,44), 619,6 (1,9).
Пример 8.
6.7- бис-[(№-Ь-Серил)-Ь-аргинил]протогемин IX (XXII).
Выход 30 мг (65%), Ρί 0,18 (5).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 3396 (ΝΗ), 1645 (амид I), 1550 (амид II).
Масс-спектр (МАЬВ]): [М-С1-]+ 1102,5.
Электронный спектр, ^ΜδΟ, /-|а,а,:. нм, (ε·10-3): 404 (76), 495 (5,11), 610 (3,1).
Пример 9.
6.7- бис-[(Амид №-Ь-аргинил)-Ь-серил]протогемин IX (XXIII).
Выход 27 мг (58%), Ρί 0,3 (9).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 3365 (ΝΗ), 1655 (амид I), 1542 (амид II).
Масс-спектр (МАЬВ]): [М-С1-]+ 1100.
Электронный спектр, ^ΜδΟ, /-|а,а,:. нм, (ε·10-3): 402,2 (65,3), 496,4 (4,0), 618,2 (2,1).
Пример 10.
6.7- бис-[(Ка-Ь-аргинил)-Ь-серил]протогемин IX (XXIV).
Выход 22 мг (55%), Ρί 0,2 (9).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 3340 (ΝΗ), 1659 (амид I), 1550 (амид II).
Масс-спектр (МАЬВ]): [М-С1-]+ 1102.
Электронный спектр, ^ΜδΟ, /-ааа,:. нм, (ε·10-3): 403,8 (146), 498,4 (8.1), 620,4 (4,9).
- 6 023667
Таблица 1
Физико-химические характеристики защищенных промежуточных дипептидов
Формула Κγ (Ха хроматографической системы) Масс-спектр [МД
Вос5ег(Вг1)Аг£ 0.5(7) 466
Вос5сг(Вг1)Аг| 0,2(10) 452
Вос5сг(Вг1)Ац 0,2(11) 453
ΖίΑΓβδεΓΝΗϊ 0,29(4) 662,7
гзАгдЗегОН 0,29(4) 663,1
г3Агд8егОМе 0,64(4) 677,7
Общая методика получения защищенных пептидов (табл. 1).
К раствору (0,64 ммоль) Вос8сг(В/1)ОЖи или ΖχΛΓβΟΝδιι в 3 мл ДМФ добавляли раствор (0,7 ммоль) соответствующего аминокомпонента и (0,83 ммоль) триэтиламина в смеси 2 мл ДМФ и 0,3 мл воды. Реакционную смесь перемешивали 1 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, остаток растворяли в 10 мл н-бутанола и экстрагировали 3x10 мл насыщенного водного раствора №С1. Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и отфильтровывали. Растворитель удаляли в вакууме, остаток сушили в эксикаторе при пониженном давлении над хлоридом кальция, затем растворяли в 1 мл безводного метанола и отфильтровывали соли. Растворитель удаляли в вакууме. При необходимости целевое вещество очищали перекристаллизацией или колоночной хроматографией на силикагеле.
Общая методика получения соединений νΐ-νΐΙΙ.
К раствору или суспензии аминокислоты (0,945 ммоль) в 0,5 мл воды добавляли 0,130 мл (для серина и глицина) или 0,260 мл (для глутаминовой кислоты и дигидрохлоридов аргинина и гистидина) триэтиламина. Полученный раствор добавляли к 6,7-бис-^оксисукцинимидного эфира гемина (100 мг, 0,118 ммоль) в 6 мл диметилформамида и перемешивали 30 мин. Реакционную массу концентрировали в вакууме до объема 1 мл. Для нерастворимых в воде соединений νΐ-νΐΙΙ к сконцентрированной реакционной массе добавляли 10 мл водного 0,01 М раствора соляной кислоты, осадок отделяли и промывали водой до нейтральной реакции. Осадок сушили в эксикаторе при пониженном давлении над хлоридом кальция в течение суток.
Пример 11.
6.7- бис-(И'-Серил)протогемин (IX) (VI).
Выход 84,7 мг (87%). ИК-спектр (КВг, утах/см-1): 1727 (СООН), 1656 (С=О амид I), 1530 (С=О амид ΐΐ).
Масс-спектр (ΜΆΣΌΙ), т/ζ: 790 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ЭМ8О, Хтах, нм, (ε·10-3): 403(188), 497 (8,51), 622 (4,49).
Пример 12.
6.7- бис-^“-Глицил)протогемин (ΙΧ) (νΙΙ).
Выход 77,7 мг (86%).
ИК-спектр (КВг, утах/см-1): 3294 (ΝΗ), 1724 (СООН), 1656 (С=О амид Ι), 1543 (С=О амид ΙΙ).
Масс-спектр (ΜΆΣΌΙ), т/ζ: 730,1 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ЭМ8О, Хтах, нм, (ε·10-3): 404 (126), 498 (8,02), 622 (4,48).
Пример 13.
6.7- бис-^“-Глутамил)протогемин (ΙΧ) (νΙΙΙ).
Выход 88 мг (82%).
ИК-спектр (КВг, утах/см-1): 3286 (ΝΗ), 172 (СООН), 1644 (С=О амид Ι), 1544 (С=О амид ΙΙ).
Масс-спектр (ΜΆΤΌΙ), т/ζ: 874 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ЭМ§О, Хтах, нм, (ε·10-3): 404 (76,7), 496 (8,79), 615 (6,02).
Общая методика получения соединений ΙΧ-ΧΙν.
К 0,070 г (0,077 ммоль) 6,7-бис-Цх-глутамил-протогемина (ΙΧ) в 5 мл ДМФА добавляли 0,148 г (0,462 ммоль) ТВТИ и 0,086 мл (0,462 ммоль) Εΐ3Ν. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. К суспензии 0,462 ммоль гидрохлорида аминокомпонента в 1,5 мл ΌΜΡ прибавляли 0,086 мл (0,462 ммоль) Εΐ3Ν и перемешивали при комнатной температуре 3 мин, после чего полученный раствор добавляли к раствору преактивированного 6,7-бис-^-глутамил-протогемина (ΙΧ). Реакционную массу перемешивали в течение суток, после чего концентрировали в вакууме до объема 1 мл. Для нерастворимых в воде соединений (ΧΙ и ΧΙν) к сконцентрированной реакционной массе добавляли 10 мл водного 0,1 М раствора соляной кислоты, осадок отделяли и промывали водой до нейтральной реакции. Осадок сушили в эксикаторе при пониженном давлении над хлоридом кальция в течение суток. Для водораство- 7 023667 римых соединений (IX, X и XIII) к сконцентрированной реакционной массе добавляли 0,01 М раствора соляной кислоты в насыщенном водном растворе ЫаС1. Осадок отделяли и сушили в эксикаторе при пониженном давлении над хлоридом кальция в течение суток, затем растворяли в 1 мл безводного метанола и отфильтровывали нерастворившийся ЫаС1, после чего очищали с помощью гель-фильтрации на колонке 20x2 см, заполненной §ерЬабех ЬН20, элюируя метанолом. Содержащие целевой продукт фракции объединяли, растворитель удаляли в вакууме. Целевой продукт сушили в эксикаторе при пониженном давлении над хлоридом кальция в течение суток.
Пример 14.
6.7- бис-[(Диамид Х“-Ь-аргинил)-Ь-глутамил]протогемин IX (IX).
Выход 0,082 г (71%).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1658 (амид I), 1541 (амид II).
Масс-спектр (МАЬОЦ т/ζ: 1495 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ΌΜδΟ, Хтах нм, (ε·10-3): 396,8 (137,83), 505,6 (13,404), 623,2 (6,419).
Пример 15.
6.7- бис-[(Диметиловый эфир Х“-Ь-серил)-Ь-глутамил]протогемин IX (X).
Выход 0,068 г (67%).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1747 (СО сл.эф.), 1646 (амид I), 1542 (амид II).
Масс-спектр (МАЬОЦ т/ζ: 1313 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ΌΜδΟ, Хтах, нм, (ε·10-3): 404,6 (124,25), 500 (7,434), 622,2 (4,032).
Пример 16.
6.7- бис-[(Ди-2-гидроксиэтиламид)-Ь-глутамил]протогемин IX (XI).
Выход 0,054 г (64%).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1654 (амид I), 1547 (амид II).
Масс-спектр (МАЬОЦ т/ζ: 1046 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ΌΜδΟ, Хтах, нм, (ε·10-3): 403,2 (107,83), 502,3 (9,041), 635,2 (6,591).
Пример 17.
6.7- бис-[(Диамид Х“-Ь-серил)-Ь-глутамил]протогемин IX (XII).
Выход 0,074 г (76%).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1651 (амид I), 1537 (амид II).
Масс-спектр (МАЬОЦ т/ζ: 1218 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ^ΜδΟ, Хтах, нм, (ε·10-3): 398,6 (89,41), 497,4 (4,162), 619,4 (2,124).
Пример 18.
6.7- бис-[(Диамид Х“-Ь-глицил)-Ь-глутамил]протогемин IX (XIII).
Выход 0,077 г (87%).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1652 (амид I), 1539 (амид II).
Масс-спектр (МАЬОЦ т/ζ: 1098 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ^ΜδΟ, Хтах нм, (ε·10-3): 404,4 (88,0), 497,8 (5,184), 621,8 (2,728).
Пример 19.
6.7- бис-[(Диметиловый эфир Х“-Ь-глицил)-Ь-глутамил]протогемин IX (XIV).
Выход 0,072 г (78%).
ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1738 (СО сл.эф.), 1652 (амид I), 1535 (амид II).
Масс-спектр (МЛЬОЦ т/ζ: 1158 [М-С1-]+.
Электронный спектр, ^ΜδΟ, Хтах, нм, (ε·10-3): 404,4 (88,0), 497,8 (5,184), 621,8 (2,728).
Пример 20.
Гидрофильность соединений общей формулы I.
С помощью программы АСОЬаЬз 8.0 были вычислены коэффициенты распределения октанол/вода (СЬодР) заявляемых соединений общей формулы I: II, IV, V, IX, X, XII, XIII, XIV, а также ранее известных соединений общей формулы I, где Κι и К2 представляют собой АгдОМе (XV), О1и(Аг§ОМе)Аг§ОМе (XVI), О1уОМе (XVII), δе^ΟΜе (XVIII) [патент КИ 2415868 С1, опубл. 10.04.2011].
Из фигуры видно, что замещение группы -ОМе на МН2-группу приводит к увеличению гидрофильности производных гемина. Таким образом, новые заявляемые соединения общей формулы I обладают большей гидрофильностью, чем ранее известные.
Пример 21.
Антибактериальная активность соединений общей формулы I, в том числе в отношении резистентных штаммов бактерий.
Пример 21.1.
Для определения антибактериальной активности веществ были использованы штаммы грамположительных бактерий δΙ;·ιρ1ι\·1οοοοοιΐ5 аигеиз 209Р, Еп!егососсиз Гаесайз ВКМ В-871, Мюгососсиз 1и!еиз ВКМ Ас-2230, ВасШиз зиЫШз ВКМ В-501 и грамотрицательных бактерий Рзеибошопаз аегидшоза РАО1 и ЕзсйейсЫа сой КМ МГУ С-600. Штаммы с маркировкой ВКМ были получены из Всероссийской кол- 8 023667 лекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН. Штамм 81арйу1ососси5 аитеив 209Р был получен из коллекции кафедры микробиологии биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, а Рвеийотопав аетидшова РАО1 - из коллекции микроорганизмов Института биоорганической химии РАН.
Основные параметры, которые характеризуют антибактериальную активность - это минимальная ингибирующая концентрация (МИК) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК). МИК - это наименьшая концентрация исследуемого соединения, полностью ингибирующая размножение бактерий в жидкой среде. МБК - это наименьшая концентрация, вызывающая гибель всех клеток.
МИК оценивали методом ингибирования роста культуры в жидкой среде с серийными разведениями веществ по модифицированной методике [АпгДегйат, Ό. 1996. §ивсерйЫ1йу 1евйи§ о£ аийтютоЫак ίη Псций теФа, р. 52-111. Ιη Ьотап, V., ей. АпйЬюйсв ίη 1аЬога1огу тейюте, 4* ей. ХУППапъ апй ХАНкт^ ВаШтоге].
Бактерии культивировали и тестирование проводили в жидкой среде МН (среда Мие11ег-Нш1оп: сухой экстракт говяжьего бульона 4 г/л, крахмал 1,5 г/л, гидролизат казеина 17,5 г/л; §1дта-Р1ика каталожный номер 70192) при 37°С, 100% влажности и перемешивании. Для тестирования использовали культуру (с 4 по 7 пересев от разморозки) в экспоненциальной фазе роста.
Все исследуемые соединения поглощают свет на длине волны 595 нм, используемой для оценки роста бактериальной культуры. Поэтому при оценке оптической плотности суспензии бактерий учитывали поправку на поглощение каждого соединения с учетом его концентрации в лунке. Ингибирование роста (ИР) бактерий рассчитывали в процентах через 20 ч инкубации клеток с веществами по оптической плотности (А) измеряемой в каждой лунке на длине волны 595 нм, используя формулу
ΗΡ^ΚΑκ,-ΑώΚΑ,ΓΑίοΜχΙΟΟ/ίΑκτΑ,ο) (1), где индекс ί - номер лунки;
к - контрольная лунка с бактериями, в которую исследуемое соединение не вносится;
- измерение проводится сразу же после внесения исследуемого вещества в лунку; ΐ - измерение через 20 ч после внесения вещества.
Для определения антибактериальной активности исследуемых соединений использовали следующий экспериментальный протокол. Криопробирку с культурой тестируемого штамма в среде с 7% ΌΜδΟ, хранившуюся в жидком азоте, быстро размораживали, 100 мкл суспензии клеток добавляли к 1,5 мл свежей среды МН. Клетки растили в течение суток при температуре 37°С и перемешивании на орбитальном шейкере со скоростью 150 об/мин. Морфологические признаки штамма и отсутствие контаминации посторонними бактериями проверяли (а) путем посева на агаризованную (15 г/л агара) среду МН по форме и цвету образующихся колоний, (б) под микроскопом (Микмед-2, ЛОМО, Россия) с 40х объективом по характерным морфологическим признакам клеток. Далее бактерии культивировали в 1 мл жидкой среды МН при температуре 37°С и перемешивании. Клетки пересевали каждые сутки. Начиная с 3-го и заканчивая 6-м пересевом, культуру клеток использовали для постановки тестов.
Для постановки теста 5 мкл бактериальной суспензии в стационарной фазе роста переносили в 1 мл стерильной среды МН и инкубировали до достижения экспоненциальной фазы роста (3-5 ч, 37°С при перемешивании со скоростью 150 об/мин). Чтобы оценить концентрацию микроорганизмов, измеряли оптическую плотность (А) полученной бактериальной культуры на длине волны 595 нм. Считали, что А=0,2, измеренная от 200 мкл суспензии клеток в 96-луночном планшете с учетом поглощения среды, соответствует 4х108 клеток/мл для обоих используемых штаммов. С учетом измерения концентрации клеток суспензию разбавляли средой МН до 5х104-1х105 клеток/мл и переносили стерильный 96-луночный планшет по 100 мкл на лунку. Затем к клеткам вносили исследуемые соединения и делали серийные двукратные разведения этих соединений в лунках планшета. Максимальная концентрация веществ в серии составляла 10-4 М, минимальная - 1,6х10-6 М. Исследование антибактериальной активности выполняли в 2 повторах для каждого соединения, а результат усредняли.
В качестве контролей использовали 100 мкл бактериальной культуры без добавления каких-либо веществ (4 лунки); бактериальную культуру, в которую добавлен 1% ДМСО или вода в объеме как в лунках с максимальной концентрацией тестируемых соединений (4 лунки); 100 мкл стерильной среды МН без бактерий и без исследуемых веществ для контроля случайной контаминации в планшете (4 лунки).
Сразу после внесения соединений с помощью планшетного фотометра Униплан (Пикон, Россия) в каждой лунке измеряли А10, а в контрольных лунках - Ак0 необходимые для расчета по формуле (1). Планшет инкубировали в течение 20 ч при температуре 37°С и перемешивании со скоростью 150 об/мин. Затем в каждой лунке измеряли Α1ΐ, а в контрольных лунках - Ак ΐ и рассчитывали ингибирование роста бактерий по формуле (1). МИК определяли, как минимальную концентрацию исследуемого соединения, при которой ингибирование роста составляет 100%.
Для определения МБК среду из лунок, где концентрация исследуемого соединения равнялась МИК, МИКх2 и МИКх4, переносили на чашки Петри с агаризованной средой МН (15 г/л агара) и равномерно растирали по площади чашек стерильными шпателями. Чашки инкубировали 2 суток. МБК определяли,
- 9 023667 как наименьшую концентрацию исследуемого соединения, при которой колонии на чашке Петри не вырастают.
Таблица 2
Характеристики антибактериальной активности соединений общей формулы I в отношении грамположительных бактерий ВасШик киЫШк ВКМ В-501, 81арЛу1ососсик аигеик 209Р, Ейегососсик ГаесаЛк ВКМ В-871, Мюгососсик 1и1еик ВКМ Ас-2230
ВасШиз ниЫ&хВКМ В-501 51арИу1ососси5 оигеиз 209Р Еп1егососси!;/аесаИх ВКМ В-871 К&сгососсш 1и/еи$ ВКМ Ас-2230
Шифр МИК.мкМ МБК, мкМ ΜΗΚ,μκΜ МБК, мкМ МИК, мкМ МБК, мкМ МИК, мкМ МБК.ыкМ
П 0,8 0,8 1,6 6.3 6,3 12,5 0,8 0,8
га 12,5 н/и 25 н/и н/и 1,6 6,3
IV 1,6 1,6 6,3 н/и н/и н/и 0,8 0,8
V 1,6 1,6 3,2 12,5 3,2 н/и 0,8 0,8
VI 12,5 25 50 н/и н/и 6,3 25
VII 25 25 50 н/и н/и 12,5 25
IX 1.6 1,6 3,2 25 25 50 0,8 0,8
X 50 н/и 12,5 н/и 50 н/и 12,5 25
XIV 6,3 25 12,5 н/и н/и 1,6 6,3
XV 3,1 3,1 50 200 50 400 1,6 3,2
XVI 1,6 >200** 6,3 >200** 12,5 >200** 3,1 12,5
XVII 12,5 25 50 50 100 >200** 1,6 6,5
XVIII 6,3 9 25 200 12,5 25 6,3 12,5
**МИК не достигнута. Приведена максимальная использованная концентрация вещества. н/и - не исследовано.
В табл. 2 в качестве соединений сравнения приведены ранее известные соединения общей формулы I, в которых К1=К2=АгдОМе (XV), С1и(АгдОМе)АгдОМе (XVI), С1уОМе (XVII), 8егОМе (XVIII) [патент КИ 2415868 С1, опубл. 10.04.2011]. Таким образом, соединения II, III, IV, V, IX, X, XIV по изобретению подавляют рост грамположительных бактерий З.аигеик в микромолярном интервале концентраций (табл. 2). Эти соединения также проявляют бактерицидную активность в концентрациях до 25 мкМ.
Бактерии М.1и1еик высокочувствительны даже в субмикромолярных концентрациях к действию всех соединений (в отдельных случаях МИК<0,8 мкМ).
Энтерококки Е.ГаесаПк в среднем более устойчивы к действию данных соединений, чем микрококки М.1и1еик и стафилококки З.аигеик. Наиболее эффективными соединениями в отношении Е.ГаесаПк оказались II и V: МИК<7 мкМ.
Практически все исследованные соединения проявляют активность в отношении грамположительных бактерий В.8иЬЛЛк,.
Пример 21.2.
Для определения специфической активности веществ были также использованы штаммы 81арПу1ососсик аигеик 25923 АТСС (Атепсап Туре СиПиге Со11есПои); 81арПу1ососсик аигеик 100 КС; 81арПу1ососсик ерИетиШк 533; ЕиГегососсик ГаесаЛк 559; ЕиГегососсик Гаесшт 569, 81арПу1ососсик аигеик 5 (МК8А), 81арПу1ососсик аигеик 3797 (МК8А). Для культивирования 81арПу1ососсик аигеик использовали готовую сухую среду - Триптиказо-соевый агар (ТгурПсаке 8оу Адаг, ВВЬ). Для культивирования ЕиГегососсик ГаесаЛк использовали готовую сухую среду - Колумбийский агар (Со1итЫа Адаг Ваке, ВВЬ). Среды стерилизовали автоклавированием при 121°С в течение 15 мин. Бактериальный инокулюм был постоянный и составлял 5х105 КОЕ/мл (105 КОЕ/0,2 мл). Для водорастворимых соединений с 2 по 8 лунки вносили растворитель (вода) по 15 мкл, затем в 1 лунку вносили 30 мкл стокового раствора исследуемого соединения в воде с концентрацией 1х103 М и последовательным двукратным разведением доводили его концентрацию до 0,007х103 М. Из каждой лунки отбирали по 10 мкл и добавляли по 190 мкл бактериальной культуры (105 КОЕ). Для растворимых в ЭМ8О соединений с 2 по 8 лунки вносили растворитель (ЭМ8О) по 10 мкл, затем в 1 лунку вносили 20 мкл стокового раствора исследуемого соединения в воде с концентрацией 5х103 М и последовательным двукратным разведением доводили его концентрацию до 0,039х 103 М. Из каждой лунки отбирали по 2 мкл и добавляли по 198 мкл бактериальной культуры (105 КОЕ).
В качестве контроля включали лунки, не содержащие тестируемых препаратов (контроль роста культуры). Кроме того, ставился контроль чистоты питательных сред и растворителей. Планшеты инкубировали в термостате при 36°С в течение 24 ч.
Оценку роста культур проводили визуально, сравнивая рост микроорганизмов в присутствии изучаемых тест - соединений с ростом культуры без них. За МИК принимали последнее разведение испы- 10 023667 туемых препаратов с подавлением роста бактериальной культуры.
Таблица 3
Характеристики антибактериальной активности соединений общей формулы I в отношении грамположительных бактерий 81арйу1ососсик аигеик 25923, 81арйу1ососсик аигеик 100 КС, 81арйу1ососсик ер1бегш1к 533, Еп1егососсик Гаесайк 559, ванкомицин-резистентного Ейегососсик Гаесшш 569 и грамотрицательных ванкомицин-резистентных бактерий ЕсЬеггсЫа сой 4300 (МИК, мкМ)
XXI 0,39 0,65 0,78 1,56 6,25 >50,0
XXII 1,3 0,39 1,3 >50,0 5,2 >50,0
XXIII >50,0 >50,0 >50,0 >50,0 >50,0 >50,0
XXIV >50,0 5,20 2,60 >50,0 6,25 >50,0
XV 25 50 25 25 >50 >50
XVII 25 >50 25 25 >50 >50
В табл. 3 в качестве соединений сравнения приведены ранее известные соединения общей формулы I, в которых К1=К2=ЛгдОМе (XV) или С1уОМе (XVII) [патент КИ 2415868 С1, опубл. 10.04.2011].
Новые соединения проявили активность в отношении грамположительных бактерий 81арйу1ососсик аигеик 25923, 81арйу1ососсик аигеик 100 КС и 81арйу1ососсик ерИеток 533, причем МИК не превышали 13 мкМ. Водорастворимость и антибактериальная активность дипептидных производных гемина в ряде случаев оказалась выше, чем у остальных ПГ. Так, соединение XIX показало на порядок более высокую антибактериальную активность в отношении 81арйу1ососсик ерИеток 533 (МИК 1,3 мкМ).
В отношении Еп1егососсик Гаесайк 559 заявляемые соединения проявили несколько меньшее антибактериальное действие.
Выраженную антибактериальную активность против резистентных к ванкомицину бактерий Еп1егососсик Гаесшш 569 проявили соединения II (МИК=3,12 мкМ), IV (МИК=50 мкМ), V (МИК=25 мкМ), IX (МИК=6,25 мкМ), XIX-XXI (МИК=6,25 мкМ).
По отношению к грамотрицательной бактерии Е.сой 4300 оказались активными соединения II (МИК=41,6 мкМ) и IX (МИК=16,6 мкМ).
В отношении грамотрицательных бактерий Е.сой оказались активными II (МИК=41,6 мкМ) и IX (МИК=16,6 мкМ).
- 11 023667
Таблица 4
Характеристики антибактериальной активности соединений общей формулы I в отношении метициллин-резистентных грамположительных бактерий §1арйу1ососси8 аигеик 5, 81арЬу1ососси8 аигеик 3797 (МИК, мкМ)
Как видно из табл. 4, новые соединения проявили высокую антибактериальную активность в отношении ΜΚδΑ-штаммов, при этом МПК лежали в интервале 0,78-13 мкМ.
Пример 22.
Противовирусная активность производных гемина в отношении вирусов семейства Негрекушбае.
Для исследований использовали вирус простого герпеса 1 типа (коллекция НИИ вирусологии, штамм ЕС), вирус простого герпеса 2 типа штамм С (АТСС # УК-734) и цитомегаловирус человека штамм ΆΌ169 (АТСС # УК-538). Вирусы простого герпеса 1 и 2 типов культивировали в клетках Уего. Клетки культивировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в газопроточном инкубаторе δаηуо МСО-15АС (Токио, Япония) в ростовой среде ΜΕΜ Игла (среда ΜΕΜ, БиолоТ, Санкт-Петербург, кат. № 1.3.3) с добавлением 10% фетальной сыворотки (БиолоТ, Санкт-Петербург, кат. № 1.1.12). Посевная доза клеток составляла порядка 2х105 клеток/мл в исходном материале или 2х104 клеток в лунке. Вирусы простого герпеса культивировали в тех же условиях в среде ΜΕΜ без сыворотки (поддерживающая среда). Исходные титры вирусов составили 107 ТСГО50/мл.
Из ΌΜδΘ-растворимых препаратов готовили маточные растворы концентрации 10 мМ в ΌΜδΘ. Из водорастворимых препаратов готовили маточный раствор той же концентрации на среде ΜΕΜ (Μίηίιηηΐ Ек5еп1га1 Уебют) для культур клеток. Для контроля цитотоксичности (см. ниже) маточный раствор разводили в среде до концентрации 100 мкМ, после чего готовили серию десятикратных разведений препаратов на среде ΜΕΜ (в случае ΌΜδΘ-растворимых веществ - на среде ΜΕΜ с 3% ΌΜδΘ). В опыт по противовирусному действию брали следующие концентрации препаратов: в случае отсутствия токсичности 100 мкМ препаратов использовали концентрации испытуемых веществ 100, 10 и 1 мкМ, при наличии токсичности 100 мкМ препаратов - 10, 1 и 0,1 мкМ. В качестве препаратов сравнения для контроля адекватности вирусной модели использовали ацикловир (10 мкг/мл) для вирусов простого герпеса обоих типов.
Для изучения противовирусной активности препараты вносили в лунки планшета с монослоем клеток в объеме 0,1 мл на лунку. Чтобы компенсировать снижение концентрации препарата при последующем добавлении вирусов, использовали двукратные концентрации соединений, т.е. 200, 20 и 2 или 20, 2 и 0,2 мкМ для токсичных и нетоксичных в концентрации 100 мкМ препаратов, соответственно, инкубировали в течение 1 ч, после чего заражали изучаемыми вирусами в объеме 0,1 мл на лунку в дозах 1, 10 и 100 ТСГО50 (50% тканевая инфекционная доза).
Инфицированные клетки инкубировали в течение 48 ч при 37°С в атмосфере 5% СО2, после чего визуально под инвертированным микроскопом Ьеюа ΌΜΙΕ НС оценивали состояние монослоя, учитывая характер цитопатогенного действия, существенно различающийся для вируса и действия препарата при токсических его концентрациях. Вирусоспецифическое цитопатогенное действие проявлялось в увеличении размеров клеток, их округлении и отрыве от субстрата. Эти морфологические особенности резко отличали их от клеток, подвергшихся токсическому воздействию высоких концентраций исследуемых
- 12 023667 препаратов. Последние приобретали веретеновидную форму, утрачивали связь с соседними клетками монослоя, границы их становились резче.
Степень выраженности вирусоспецифических изменений в клетках оценивали полуколичественно по 4-балльной системе: 0 - ЦПД в клетках нет, 1 - вирусом поражены до 25% монослоя, 2 - от 25 до 50%, 3 - от 50 до 75%, 4 - от 75 до 100%. Противовирусную активность соединений оценивали по их способности снижать проявления цитопатогенного действия в лунках планшета по сравнению с контрольными значениями. Значимыми считали различия с контрольными значениями 1 балл и более.
Таблица 5
Противовирусная активность заявляемых соединений общей формулы I в отношении вируса герпеса простого 1 и 2 типов: проявления вирусного ЦПД (баллы) при различных концентрациях производных гемина, мкМ
Доза вируса, Ι^ΕΙΠ 50 1 10 100
Концентрация 100 10 1 0,1 100 10 I 0,1 100 10 I 0,1
Вирус герпеса простого 1 типа
IV н/т 0' 1 1 н/т 0' 2 2 н/т 2* 3 3
VI н/т 0' 0' о1 н/т 2 2 2 н/т 3 3,3 3
Ацикловир, 10 мкг/мл с 1 о1 о1
Контроль вируса без препаратов 2 3,3
Вирус герпеса простого 2 типа
II н/т 0' 0,5 1 н/т 1' 2 1,5 н/т 3 3 3
IV н/т 0' 0,5 1 н/т о1 2 2 н/т 0' 3 3
V н/т 0' 0,5 I н/т 0' 2 2 н/т 2‘ 3 3
VI н/т 0' 1 1 н/т 0' 2 2 н/т 2* 3 3
IX н/т 0' 0,5 1 н/т 1' 2 2 н/т 3 3 3
X н/т о1 1 1 н/т 1,5 2 2 н/т 3 3 3
XII н/т 0' 0,5 0,5 н/т 1' 1,5 2 н/т 3 3 3
XIII к/т 0,5 1 1 н/т I1 2 2 н/т 3 3 3
Ацикловир, 10 мкг/мл 0 0' 0
Контроль вируса без препаратов 1 2 3
'Отличия от контрольных лунок без препарата: снижение степени ЦПД на 1 балл и более.
Как видно из табл.5, в отношении вирусов герпеса простого 1 типа оказались активными большинство исследованных заявляемых соединений в суб- и микромолярных концентрациях.
Пример 23.
Токсичность новых соединений.
Новые соединения практически не токсичны; гибель лейкоцитов 1-5% обнаруживается при концентрациях 12-50 мкМ.
Исследованные новые соединения также не вызывают значительного выхода гемоглобина из эритроцитов крови человека, который составляет не более 2-3% вплоть до концентраций 50 мкМ.
Полученные результаты свидетельствуют о перспективности заявляемых веществ для создания на их основе нетоксичных, биосовместимых антибактериальных и противовирусных агентов, в том числе для профилактики и лечения заболеваний, вызванных различными микроорганизмами.
Таким образом, по сравнению с ранее известными соединениями [патент КИ 2415868 С1, опубл. 10.04.2011, патент КИ 2404191 С2, опубл. 20.11.2010] заявляемые соединения обладают большей водорастворимостью, проявляют антибактериальную активность в более низких концентрациях, в том числе против грамположительных и грамотрицательных резистентных штаммов бактерий, оказывают противовирусное действие в отношении вирусов герпеса 1 и 2 типов, что повышает их потенциальную практическую ценность как противоинфекционных агентов.
Пример 24.
Композиции настоящего изобретения могут быть использованы в виде дезинфицирующих, антисептических и фармацевтических препаратов (например, в твердой, полутвердой или жидкой формах), содержащих предлагаемые в настоящем изобретении соединения в качестве активных ингредиентов в смеси с органическим или неорганическим носителем или наполнителем, приемлемым для внутримышечного, внутривенного, интраназального, перорального, сублингвального, ингаляционного и интраректального введения. Активный ингредиент может быть включен в композицию вместе с обычно используемыми нетоксичными, фармацевтически приемлемыми носителями, пригодными для изготовления растворов, таблеток, пилюль, капсул, суппозиториев, эмульсий, суспензий, спреев, ингаляторов, капель, мазей и любых других лекарственных форм. В качестве носителей могут быть использованы вода, глюкоза, лактоза, аравийская камедь, желатин, крахмал, триксилит магния, тальк, кукурузный крахмал, мо- 13 023667 чевина, полиэтиленгликоль и другие носители, пригодные для изготовления твердых, мягких или жидких препаратов. При этом в качестве добавок могут быть использованы стабилизаторы, загустители, красители и отдушки.
Соединение общей формулы I вводят в композицию в количестве, достаточном для получения нужного антибактериального и/или противовирусного эффекта.
При изготовлении разовой лекарственной формы количество активного ингредиента, используемого в комбинации с носителем, может варьировать в зависимости от реципиента, подвергающегося лечению, от конкретного способа введения лекарственного средства.
Так, например, при использовании соединений настоящего изобретения в виде растворов для инъекций содержание активного ингредиента в них составляет 0,001-1%. В качестве разбавителя вещества могут быть использованы 0,9% раствор натрия хлорида, дистиллированная вода, раствор новокаина для инъекций, раствор Рингера, раствор глюкозы. При использовании соединения общей формулы I в виде таблеток и суппозиториев количество вещества составляет 1,0-100,0 мг на единичную дозированную форму. Для таблеток и суппозиториев в качестве фармацевтического наполнителя используют любую фармацевтически пригодную основу.
Примеры лекарственных форм
А. Желатиновые капсулы.
Состав вводимого в капсулу порошка:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) 1-50 мг,
Оксид магния 50 мг,
Крахмал 100-200 мг
Указанные выше ингредиенты смешивают, и смесь вводят в твердые желатиновые капсулы в количестве 151-285 мг.
Б. Таблетированная форма.
Таблетированную форму получают, используя приведенные ниже ингредиенты:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) 1-50 мг
Крахмал картофельный 100 мг
Поливинилпирролидон 10 мг
Магния стеарат 2 мг
Лактоза 48-82 мг
Аэросил 5 мг
Компоненты смешивают и прессуют для образования таблеток весом 200 мг каждая. В. Аэрозольная форма.
Состав аэрозольной смеси, рассчитанной на 10 приемов:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) 10-100 мг
Магния сульфата 150 мг
Лактоза 110-140 мг
Соединение смешивают с наполнителями и помещают в специальное устройство для распыления.
Г. Суппозитории.
В качестве суппозиторной основы могут быть использованы: основы, не растворимые в воде - масло какао;
основы, растворимые в воде или смешиваемые с водой - желатино-глицериновые или полиэтиленоксидные;
комбинированные основы - мыльно-глицериновые.
Пример состава суппозитория:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) - 1-50 мг.
Масло какао - количество, необходимое для получения суппозитория.
При необходимости возможно изготовление ректальных, вагинальных и уретральных суппозиториев с соответствующими наполнителями.
Д. Мази.
В качестве мазевой основы могут быть использованы углеводородные мазевые основы - вазелин белый и желтый (Уакейиит а1Ьит, Уакейиит йауит), вазелиновое масло (О1еит Уакейш), мазь белая и жидкая (Иидиейит а1Ьит, ипдпеШпт йауит), а в качестве добавок для придания более плотной консистенции твердый парафин и воск;
абсорбтивные мазевые основы - гидрофильный вазелин (Уакейиит йуДгорйуйсит), ланолин (Ьапойпит), кольдкрем (Иидиетит 1ешеик);
- 14 023667 мазевые основы, смываемые водой - гидрофильная мазь (Ип^иеШит йубгорйу1ит); водорастворимые мазевые основы - полиэтиленгликолевая мазь (ипдиеШит С1усоПк Ро1уае1Ну1еп1). бентонитовые основы и другие.
Пример состава мази:
Соединение соответствующее общей формуле (I) 0,01-0,1 г
Вазелин Юг
Мази изготавливают по соответствующей технологии.
Е. Раствор для инъекций.
В качестве растворителя при приготовлении раствора для инъекций могут быть использованы: 0,9% раствор натрия хлорида, дистиллированную воду, раствор новокаина. Форма выпуска - ампулы, флаконы, шприц-тюбики,
Состав раствора для инъекций:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) 1 -50 мг
Вода дистиллированная 1-2 мл
Возможно изготовление различных лекарственных форм для инъекций - стерильных растворов, стерильных порошков и таблеток. Примеры композиций для дезинфицирующих и антисептических средств:
Ж, Соединение, соответствующее общей формуле I
1- пропанол
2- пропанол вода дистиллированная
3. Соединения, соответствующие общей формуле I Четвертичное аммониевое основание (или их смесь)
Вода дистиллированная
И, Соединения, соответствующие общей формуле I Диметилсульфоксид (ОМЗО) или полиэтиленгликоль (РЕО) М.М. 200-12000
0,001-1% 30-40% 10-70% 10-60% 0,001-1% 2-10% до 100% 0,001-1% 1-20% 1-20% до 100% 0,001-1% вода дистиллированная
К. Соединения, соответствующие общей формуле I Смесь спиртов, ΩΜ3Ο, РЕО, ПАВ в различных сочетаниях и соотношениях 1-80% вода дистиллированная до 100%
Л, Соединения, соответствующие общей формуле 0,001 -1 % вода дистиллированная до 100%
Таким образом, предлагаемые в настоящем изобретении новые производные гемина общей формулы I, обладают повышенными водорастворимостью, антибактериальной активностью, в том числе в отношении резистентных штаммов бактерий, противовирусной активностью, в том числе против вируса герпеса. Кроме того, среди новых соединений выявлены производные гемина, активные в отношении резистентных штаммов грамотрицательных бактерий. Эффективность отдельных представителей новых соединений, соответствующих общей формуле I, подтверждает их пригодность для применения в составе дезинфицирующих, антисептических и терапевтических средств с антибактериальным и/или противовирусным действием.

Claims (29)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ где К! и К2, оба, представляют собой Άγ§ΝΗ2, Атд(ЫО2)ОМе, Ο1νΝΗ2, 8етМН2, 8егОН, С1уОН, С1и(ОН)ОН, 0,1ιι(Άιν\ΙΙ2)Άι-μ\ΙΙ, С1и(8егОМе)8егОМе, С1и(\11С1ЕС1ЕО11)ΝΙ 1С1ЕС1ЕО11.
    С1и(8егМН2)8егМН2, С1и(С1уМН2)С1уМН2 или С1и(С1уОМе)С1уОМе, Лгд8егОМе, Лгд§егМН2, Лгд8егОН, 8егЛг§ОН, §егЛг§МН2 и 8егЛг§ОМе;
    Ме' представляет собой Ре2' или Ре3';
    На1- представляет собой Е-, С1-, Вг- или I-, или его фармацевтически приемлемая соль.
  2. 2. Соединение или его соль по п.1, в котором К! и К2, оба, представляют собой Άγ§ΝΗ2, С1уЯН2, 8ег\Н, О1и(Лгу\Н2)Лгу\Н2. О1и(8ег\Н2)8ег\Н2 или С1и(С1уМН2)С1уМН2, Лгд8ег\Н, 8егЛгу\Н2.
  3. 3. Соединение или его соль по п.1, в котором К! и К2, оба, представляют собой 8егОН, С1уОН или С1и(ОН)ОН, Лгд8егОН, 8егЛгдОН.
  4. 4. Соединение или его соль по п.1, в котором К! и К2, оба, представляют собой С1и(ГОНСН2СН2ОН^НСН2СН2ОН. С1и(С1уОМе)С1уОМе, Лг§8егОМе, 8егЛг§ОМе.
  5. 5. Фармацевтическая композиция, обладающая антибактериальной и/или противовирусной активностью, включающая в качестве активного ингредиента соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп.1-4.
  6. 6. Фармацевтическая композиция по п.5, включающая в качестве активного ингредиента соединение общей формулы I или его соль по п.2.
  7. 7. Фармацевтическая композиция по п.5, включающая в качестве активного ингредиента соединение общей формулы I или его соль по п.3.
  8. 8. Фармацевтическая композиция по п.5, включающая в качестве активного ингредиента соединение общей формулы I или его соль по п.4.
  9. 9. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-8, которая проявляет активность в отношении грамположительных бактерий рода 81арйу1ососсик, ЕШегососсик. Мютососсик и/или ЕксйейсЫа.
  10. 10. Фармацевтическая композиция по п.9, которая проявляет активность в отношении грамположительных бактерий рода 81арйу1ососсик аигеик, Ейетососсик ГаесаПк. Мютососсик 1и1еик, 81арйу1ососсик ерИегпиФк. ЕШегососсик Гаесшш или грамотрицательной бактерии ЕксйейсЫа сой.
  11. 11. Фармацевтическая композиция по п.10, которая проявляет активность в отношении грамположительных бактерий, где бактерии относятся к штамму 81арйу1ососсик аигеик 209Р, ЕШегососсик Гаесайк ВКМ В-871, Мютососсик 1и1еик ВКМ Ас-2230, 81арйу1ососсик аигеик 25923 АТСС, 81арйу1ососсик аигеик 100 КС, 81арйу1ососсик аигеик 5 МК8А, 81арйу1ососсик аигеик 3797 МК8А, 81арйу1ососсик ерЛегппФк 533, ЕШегососсик Гаесайк 559, ЕШегососсик Гаесшш 569 или грамотрицательной бактерии ЕксйейсЫа сой 4300.
  12. 12. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-8, которая проявляет активность в отношении вирусов герпеса.
  13. 13. Фармацевтическая композиция по п.12, которая проявляет активность в отношении вирусов герпеса простого 1 и/или 2 типа.
  14. 14. Фармацевтическая композиция по п.12, которая проявляет активность в отношении вирусов герпеса простого 1 типа, штамм ЕС, и 2 типа, штамм С (АТСС # УК-734).
  15. 15. Лекарственное средство, обладающее антибактериальной и/или противовирусной активностью, представляющее собой производное гемина общей формулы I или его фармацевтическую соль по любому из пп.1-4.
  16. 16. Лекарственное средство по п.15, представляющее собой соединение общей формулы I или его соль по п.2.
  17. 17. Лекарственное средство по п.15, представляющее собой соединение общей формулы I или его соль по п.3.
  18. 18. Лекарственное средство по п.15, представляющее собой соединение общей формулы I или его
    - 16 023667 соль по п.4.
  19. 19. Лекарственное средство по любому из пп.15-18, которое проявляет активность в отношении грамположительных бактерий рода З1арйу1ососсиз, Еп1егососсиз, Мюгососсиз и/или ЕзсйепсЫа.
  20. 20. Лекарственное средство по п.19, которое проявляет активность в отношении грамположительных бактерий рода З1арйу1ососсиз аигеиз, Еп1егососсиз Гаесайз, Мюгососсиз 1и1еиз, З1арйу1ососсиз ерЫегШ1013, Еп1егососсиз Гаесшш или грамотрицательной бактерии ЕзсЬепсЫа сой.
  21. 21. Лекарственное средство по п.20, которое проявляет активность в отношении грамположительных бактерий, где бактерии относятся к штамму З1арйу1ососсиз аигеиз 209Р, Еп1егососсиз Гаесайз ВКМ В-871, Мюгососсиз 1и1еиз ВКМ Ас-2230, З1арйу1ососсиз аигеиз 25923 АТСС, З1арйу1ососсиз аигеиз 100 КС, З1арйу1ососсиз аигеиз 5 МКЗА, З1арйу1ососсиз аигеиз 3797 МКЗА, З1арйу1ососсиз ерИегшЛз 533, Еп1егососсиз Гаесайз 559, Еп1егососсиз Гаесшш 569 или грамотрицательной бактерии ЕзейепсЫа сой 4300.
  22. 22. Лекарственное средство по любому из пп.15-18, которое проявляет активность в отношении вирусов герпеса.
  23. 23. Лекарственное средство по п.22, которое проявляет активность в отношении вирусов герпеса простого 1 и/или 2 типа.
  24. 24. Лекарственное средство по п.22, которое проявляет активность в отношении вирусов герпеса простого 1 типа, штамм ЕС, и 2 типа, штамм О (АТСС # νΚ-734).
  25. 25. Способ получения соединения общей формулы I по любому из пп.1-4, включающий взаимодействие активированного по карбоксильной группе производного гемина с аминокомпонентом.
  26. 26. Способ по п.25, где в качестве активированного производного гемина используют 6,7-бис-Ы-оксисукцинимидный эфир гемина, а в качестве растворителя используют Ν,Ν-диметилформамид.
  27. 27. Способ по п.25, где в качестве активированного производного гемина используют 6,7-бис-Ы-оксисукцинимидный эфир гемина, в качестве аминокомпонента - незащищенную аминокислоту или пептид, а в качестве растворителя - Ν,Ν-диметилформамид, содержащий до 10% воды и триэтиламин.
  28. 28. Способ получения соединения общей формулы I по любому из пп.1-4, включающий прямое присоединение защищенных по СООН группе производных аминокислот и пептидов к конъюгату гемина с глутаминовой кислотой в присутствии конденсирующего агента ТВТИ.
  29. 29. Дипептид, выбранный из группы НЗегАгдОМе, ВосЗег(В21)АтдОМе, ВосЗег(В21)АтдЫН2, 23АтдЗегОМе, 23АтдЗегЫН2, 23АтдЗегОН.
EA201490963A 2011-11-17 2012-11-15 Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью EA023667B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011146831/04A RU2475498C1 (ru) 2011-11-17 2011-11-17 Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью
PCT/RU2012/000939 WO2013073998A2 (ru) 2011-11-17 2012-11-15 Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201490963A1 EA201490963A1 (ru) 2014-12-30
EA023667B1 true EA023667B1 (ru) 2016-06-30

Family

ID=48430327

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201490963A EA023667B1 (ru) 2011-11-17 2012-11-15 Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью

Country Status (14)

Country Link
US (1) US9605013B2 (ru)
EP (1) EP2781525B1 (ru)
CN (1) CN104039824B (ru)
CY (1) CY1122496T1 (ru)
DK (1) DK2781525T3 (ru)
EA (1) EA023667B1 (ru)
ES (1) ES2755937T3 (ru)
HU (1) HUE046503T2 (ru)
PL (1) PL2781525T3 (ru)
PT (1) PT2781525T (ru)
RU (1) RU2475498C1 (ru)
SI (1) SI2781525T1 (ru)
UA (1) UA116877C2 (ru)
WO (1) WO2013073998A2 (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160286801A1 (en) 2013-03-15 2016-10-06 Suncor Energy Inc. Herbicidal Compositions
RU2656595C1 (ru) * 2018-03-16 2018-06-06 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" Циклическое производное гемина с антимикробными свойствами и способ его синтеза
CA3128733A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Suncor Energy Inc. The use of protoporphyrin ix derivatives to improve the health of plants
CN111848656B (zh) * 2020-06-24 2023-03-14 天津大学 离子修饰的原卟啉镓化合物及其制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2238950C2 (ru) * 2002-04-25 2004-10-27 Небольсин Владимир Евгеньевич Производные гемина и их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, применение и фармацевтическая композиция
RU2250906C2 (ru) * 2003-07-10 2005-04-27 Небольсин Владимир Евгеньевич Способы получения геминпептидов и их применение в качестве нуклеолитических агентов
RU2296131C2 (ru) * 2004-11-26 2007-03-27 ООО "Фарминтерпрайсез" Геминпептид, его фармацевтически приемлемые соли и применение в качестве противовирусного и вирулецидного агента
RU2404191C2 (ru) * 2007-07-09 2010-11-20 ООО "Фарминтерпрайсез" Производные гемина или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, композиция и применение
WO2011031187A1 (ru) * 2009-09-10 2011-03-17 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" Антимикробные средства на основе производных гемина

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05504774A (ja) * 1990-07-31 1993-07-22 ザ ロックフェラー ユニバーシティ エイズ治療を増進するためのメタロポルフィリン類の使用
RU2280649C1 (ru) * 2004-11-26 2006-07-27 ООО "Фарминтерпрайсез" Геминпептиды, их фармацевтически приемлемые соли, фармкомпозиция и применение в качестве противоопухолевых агентов

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2238950C2 (ru) * 2002-04-25 2004-10-27 Небольсин Владимир Евгеньевич Производные гемина и их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, применение и фармацевтическая композиция
RU2250906C2 (ru) * 2003-07-10 2005-04-27 Небольсин Владимир Евгеньевич Способы получения геминпептидов и их применение в качестве нуклеолитических агентов
RU2296131C2 (ru) * 2004-11-26 2007-03-27 ООО "Фарминтерпрайсез" Геминпептид, его фармацевтически приемлемые соли и применение в качестве противовирусного и вирулецидного агента
RU2404191C2 (ru) * 2007-07-09 2010-11-20 ООО "Фарминтерпрайсез" Производные гемина или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, композиция и применение
WO2011031187A1 (ru) * 2009-09-10 2011-03-17 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" Антимикробные средства на основе производных гемина

Also Published As

Publication number Publication date
EP2781525B1 (en) 2019-10-16
CY1122496T1 (el) 2021-01-27
EA201490963A1 (ru) 2014-12-30
DK2781525T3 (da) 2019-11-18
PL2781525T3 (pl) 2020-05-18
CN104039824B (zh) 2017-06-06
UA116877C2 (uk) 2018-05-25
RU2475498C1 (ru) 2013-02-20
EP2781525A4 (en) 2015-05-27
WO2013073998A2 (ru) 2013-05-23
WO2013073998A3 (ru) 2013-08-08
US9605013B2 (en) 2017-03-28
ES2755937T3 (es) 2020-04-24
US20150031854A1 (en) 2015-01-29
EP2781525A2 (en) 2014-09-24
HUE046503T2 (hu) 2020-03-30
PT2781525T (pt) 2019-12-05
SI2781525T1 (sl) 2020-02-28
CN104039824A (zh) 2014-09-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114159430B (zh) 作为免疫调节剂的1,2,4-噁二唑和噻二唑化合物
AU2013276480B2 (en) N-substituted second generation derivatives of antifungal antibiotic Amphotericin B and methds of their preparation and application
CA2761489C (en) High penetration prodrug compositions of peptides and peptide-related compounds
JP5524858B2 (ja) 抗菌性化合物
CN107405336A (zh) 作为免疫调节剂的1,3,4‑噁二唑和噻二唑化合物
TW200848018A (en) A therapeutic medicine of influenza
JP2021098695A (ja) （４ｓ，４ａｓ，５ａｒ，１２ａｓ）−４−ジメチルアミノ−３，１０，１２，１２ａ−テトラヒドロキシ−７−［（メトキシ（メチル）アミノ）−メチル］−１，１１−ジオキソ−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−ナフタセン−２−カルボン酸アミドの結晶塩及びそれを使用する方法
EA021683B1 (ru) Производные деоксиактагардина в
EA023667B1 (ru) Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью
EA020802B1 (ru) Антимикробные средства на основе производных гемина
US11014891B2 (en) Reduction-triggered antibacterial sideromycins
AU2002312656B2 (en) Peptoid compounds
CN101153053B (zh) 骨生肽、其制备方法和其药物组合物与用途
Andruszkiewicz et al. Antimicrobial properties of N3-(iodoacetyl)-L-2, 3-diaminopropanoic acid-peptide conjugates
RU2656595C1 (ru) Циклическое производное гемина с антимикробными свойствами и способ его синтеза
US20250011366A1 (en) Prodrugs of Antibiotic Teixobactin
WO2018067663A2 (en) Ketolides having antibacterial activity
CZ308943B6 (cs) Lipofosfonoxiny třetí generace, jejich příprava a použití
WO2020065595A1 (es) Lipopeptidos cortos con actividad antimicrobiana contra bacterias gram negativas y gram positivas
WO1996006069A1 (en) D-b-lysylmethanediamine derivatives with bacteria, aids virus and tumor cell growth inhibiting activity and preparation thereof
MXPA02000320A (es) Compuestos de pseudomicina modificados en los grupos amina.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AZ KG TJ TM