EA020766B1 - Ингибиторы пролиферации и активации переносчика сигнала и активатора транскрипции (stats) - Google Patents

Abstract

Предлагаются пиридиновые соединения, эффективные в модуляции активации STAT3 и/или STAT5, эти соединения пригодны к применению для профилактики и лечения пролиферативных заболеваний и состояний, включая рак, воспаление и пролиферативные болезни кожи.

Description

Пиридиновые соединения и композиции и их применение в качестве лекарственных препаратов при лечении заболеваний предлагаются в этом документе. Способы ингибирования активации 8ТАТ3 и/или 8ТАТ5 в организме человека или животного также предлагаются для лечения заболеваний, таких как рак.

Уровень техники изобретения

Известно, что сигнальный путь 1ак/8ТАТ активируется в ряде онкологических и воспалительных заболеваний. В случае активации посредством фосфорилирования одного тирозинового остатка 8ТАТ3 димеризуется, перемещается в ядро и выполняет роль фактора транскрипции, управляющего повышением экспрессии ряда пролиферативных и способствующих выживаемости генов, включая гены сурвивина, ΥΕΟΡ, Ве1-2 и Вс1-хЬ. Известно, что продукты этих генов способствуют росту и метастазированию более чем 20 видов опухолей и также связаны с активацией ряда пролиферативных кожных заболеваний, включая псориаз, Т-клеточную лимфому и атопический дерматит.

Ингибирование фосфорилирования 8ТАТ3 у животных, имеющих опухоль, приводит к индукции гибели апоптозных клеток и в доклинических ортотопических моделях ряда заболеваний приводит к существенному уменьшению размера опухоли. Аналогичным образом при воспалительных кожных заболеваниях ингибирование фосфорилирования 8ТАТ3 приводит к прекращению воспаления пятен сыпи, к прекращению шелушения и других связанных с воспалительными кожными заболеваниями повреждений.

Наряду с тем, что разработка ингибиторов этого метаболического пути представляется целесообразной, исследования разнообразных подходов к ингибированию (такие как малые молекулы, антисмысловые последовательности, интерференция РНК) привели к неудовлетворительным результатам.

Сущность изобретения

Изобретение относится к новым пиридиновым соединениям структурной формулы I

или его фармацевтически приемлемым солям или сольватам, где

Χ₁ представляет собой галоген;

Х₅ и Х₆ представляют собой, каждый независимо, водород, (С1_-7)алкил или (С_3-6)циклоалкил,

Ζ представляет собой ΝΗ.

Ещё одним объектом настоящего изобретения является способ ингибирования активации 8ТАТ3, включающий контактирование раковой клетки с указанным соединением формулы I.

Ещё одним объектом настоящего изобретения является способ лечения §ТАТ3-опосредованного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества указанного соединения формулы I нуждающемуся в этом пациенту.

Ещё одним объектом настоящего изобретения является способ ингибирования активации 8ТАТ5, включающий контактирование раковой клетки с указанным соединением формулы I.

Ещё одним объектом настоящего изобретения является способ лечения §ТАТ5-опосредованного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества указанного соединения формулы I нуждающемуся в этом пациенту.

В предпочтительном варианте предложенные соединения представляют собой соединения формулы

- 1 020766 или фармацевтически приемлемые соли этих соединений.

Наиболее предпочтительно предложенное соединение представляет собой

или его фармацевтически приемлемую соль.

Наиболее предпочтительно предложенное соединение представляет собой

или его фармацевтически приемлемую соль.

Ещё одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая указанное соединение формулы I и фармацевтически приемлемый носитель.

Ещё одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы

или фармацевтически приемлемую соль этих соединений и фармацевтически приемлемый носитель.

Ещё одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая соединение

и фармацевтически приемлемый носитель.

Ещё одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая соединение

или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

Краткое описание чертежей

Предшествующее описание сущности изобретения, а также нижеприведенное подробное описание предпочтительного примера осуществления изобретения будут лучше поняты в сочетании с прилагаемыми чертежами. Однако следует понимать, что изобретение не ограничивается определенными схемами и средствами, показанными в этом документе.

Для более полного понимания настоящего изобретения и его преимуществ теперь делается ссылка на нижеследующее описание, взятое в совокупности с сопроводительными чертежами, на которых на фиг. 1 представлены результаты эксперимента, которые показывают ингибирование фосфорилирования 8ТЛТ3 соединением примера 1 в линии опухолевых клеток Со1о357РО;

на фиг. 2 - график, показывающий недостаток выживаемости клеток опухоли мозга И87 после введения соединений примеров 2 и 4;

на фиг. 3 - результаты, показывающие ингибирование роста клеток рака яичника 8СОУЕ3 после введения соединений примеров 2 и 4;

на фиг. 4 - результаты, полученные для соединения примера 9, существенно ингибирующего 1Ь-2

- 2 020766 фосфорилирование δΤΆΤ-3 в линии клеток опухоли мозга Ό54;

на фиг. 5 - схематичное изображение сигнальных метаболических путей, которые приводят к активации 8ΤΆΤ и к δΤΑΤ-опосредованной генной экспрессии.

Подробное описание изобретения

Соединения, представленные в этом документе, имеют общую формулу I

или представляют собой их фармацевтически приемлемые соли или сольваты, где

Χι представляет собой галоген;

Х₅ и Х₆ представляют собой, каждый независимо, водород, (С1_-7)алкил или (С_3-6)циклоалкил,

Ζ представляет собой ΝΗ.

Согласно настоящему описанию нижеприведенные термины имеют указанные значения.

Алкил относится к одновалентной группе, полученной из алкана путем удаления атома водорода от какого-либо атома углерода, таким образом, во многих случаях имеющей формулу -С_пН_2п+₁. Алкильные группы включают либо прямые, либо разветвленные цепи и/или группы, которые могут быть замещены дополнительным ациклическим алкилом, циклоалкилом, или циклические алкильные группы. Алкильная группа может быть гетероатомзамещенной или гетероатомнезамещенной, см. ниже. Предпочтительно, чтобы алкильная группа имела 1-12 атомов углерода и могла называться низший алкил, если имеет 1-7 атомов углерода, и/или высший алкил, если имеет 8 или более атомов углерода. Алкил, кроме того, относится и указывает на бивалентный алкил, который относится к бивалентной группе, полученной из алкана путем удаления двух атомов водорода либо от одного и того же атома углерода (например, метилен, этилиден, пропилиден), либо от различных атомов углерода (например, -С₂Н₄-).

Циклоалкил, в частности, относится к одновалентной группе, полученной из циклоалкана путем удаления атома водорода от кольцевого атома углерода.

Циклический алкил и/или алкилциклическое или алициклическое соединение относится к алифатическому соединению, имеющему карбоциклическую кольцевую структуру, которая может быть насыщенной или ненасыщенной, но не бензоидной или другой ароматической системой, и в которой одновалентная группа получена путем удаления атома водорода от любого углерода алкановой цепи.

Термин фармацевтически приемлемые соли, как он применяется в настоящем описании, относится к солям соединений этого изобретения, которые представляют собой практически не токсичные для живых организмов. Типичные фармацевтически приемлемые соли включают соли, полученные реакцией соединения этого изобретения с неорганической или органической кислотой или органическим основанием, в зависимости от заместителей, присутствующих в соединении изобретения.

Примеры неорганических кислот, которые могут использоваться для получения фармацевтически приемлемых солей, включают хлористо-водородную кислоту, фосфорную кислоту, серную кислоту, бромисто-водородную кислоту, йодисто-водородную кислоту, фосфористую кислоту и им подобные. Примеры органических кислот, которые могут использоваться для получения фармацевтически приемлемых солей, включают алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, такие как щавелевая кислота, угольная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота, фенилгетероатомзамещенные алканкарбоновые кислоты, алифатические и ароматические серные кислоты и им подобные. Фармацевтически приемлемые соли, полученные из неорганических или органических кислот, таким образом включают гидрохлорид, гидробромид, нитрат, сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, фосфат, моногидрофосфат, дигидрофосфат, метафосфат, пирофосфат, гидроиодид, гидрофторид, ацетат, пропионат, формиат, оксалат, цитрат, лактат, паратолуолсульфонат, метансульфонат, малеат и им подобные. Другие подходящие соли известны среднему специалисту в данной области техники.

Подходящие фармацевтически приемлемые соли также могут быть образованы путем взаимодействие соединений по изобретению с органическим основанием, таким как метиламин, этиламин, этаноламин, лизин, орнитин и им подобные. Другие подходящие соли известны специалисту в данной области техники.

Фармацевтически приемлемые соли включают соли, образованные между карбоксилатными или сульфонатными группами, имеющимися в некоторых соединениях этого изобретения, и неорганическими катионами, такими как катионы натрия, калия, аммония или кальция, или такими органическими катионами, как катионы изопропиламмония, триметиламмония, тетраметиламмония и имидазолия.

Необходимо отметить, что выбор определенного аниона или катиона, образующего составную часть какой-либо соли этого изобретения, не имеет существенного значения, если образованная при этом соль является фармацевтически приемлемой и если анион или катион не оказывают нежелательного воздействия. Кроме того, дополнительные фармацевтически приемлемые соли хорошо известны специалисту в данной области техники и могут применяться в рамках объема изобретения. Дополнительные при- 3 020766 меры фармацевтически приемлемых солей и способов их получения и применения представлены в издании РЬаттасеийса1 8а11к: Рторетйек, 8е1еейои апй Ике-Л НапйЬоок (2002), которое включено в данный документ в качестве ссылки.

Согласно настоящему описанию предполагается, что термин пациент включает живые организмы, у которых могут иметь место определенные патологические состояния, описанные в этом документе. Примеры включают людей, обезьян, крупный рогатый скот, овец, коз, собак, кошек, мышей, крыс и их трансгенные виды. В предпочтительном примере осуществления изобретения пациент представляет собой примата. В еще более предпочтительном примере осуществления изобретения примат представляет собой человека. Другие примеры субъектов включают экспериментальных животных, таких как мыши, крысы, собаки, кошки, козы, овцы, свиньи и крупный рогатый скот. Экспериментальное животное может быть животной моделью заболевания, например, трансгенная мышь с невропатологией по типу болезни Альцгеймера. Пациент может быть человеком, страдающим нейродегенеративным заболеванием, таким как болезнь Альцгеймера или болезнь Паркинсона.

Согласно настоящему описанию термин 1С₅₀ относится к ингибиторной дозе, которая составляет 50% от полученной максимальной характеристики.

Согласно настоящему описанию термин водорастворимое означает, что соединение растворяется в воде, по меньшей мере, в количестве 0,010 моль/л или классифицируется как растворимое в соответствии с предшествующими литературными данными.

Согласно настоящему описанию преимущественно один энантиомер означает, что соединение содержит по меньшей мере 85% одного энантиомера или более предпочтительно по меньшей мере 90% одного энантиомера и даже более предпочтительно по меньшей мере 95% одного энантиомера или наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% одного энантиомера. Аналогично, фраза практически свободный от других оптических изомеров означает, что композиция содержит не более чем 5% другого энантиомера или диастереомера, более предпочтительно 2% другого энантиомера или диастереомера и наиболее предпочтительно 1% другого энантиомера или диастереомера.

Другие сокращения, используемые в этом документе, представляют собой нижеследующие: ΌΜδΘ, диметилсульфоксид; ίΝΟδ, индуцибельная синтаза оксида азота; СОХ-2, циклооксигеназа-2; ΝΟΡ, ростовой фактор нервов; ΙΒΜΧ, изобутилметилксантин; ΡΒδ, фетальная телячья сыворотка; ΟΡΌΗ, глицерол-3-фосфат дегидрогеназа; ΚΧΚ, ретиноидный X рецептор; ΤΟΡ-β, трансформирующий ростовой фактор-β; ΙΡΝ-γ, интерферон-γ; ЬР§, бактериальные эндотоксические липополисахариды; ΤΝΡ-α, фактор некроза опухолей-α; 1Ь-1 β; интерлейкин-ΐβ; ΟΆΡΌΗ, глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназа; МТТ, 3[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бромид; ТСА, трихлоруксусная кислота; НО-1, индуцибельная гемоксигеназа.

Термин комбинированная терапия обозначает введение двух или более терапевтических средств для лечения терапевтического состояния или нарушения, описанного в настоящем документе. Такое введение включает совместное введение этих терапевтических средств, по существу, одновременно, например в одной капсуле, содержащей фиксированное соотношение активных ингредиентов, или в несколько приемов, отдельными капсулами, содержащими каждый активный ингредиент. Кроме того, такое введение также включает применение каждого типа терапевтического средства последовательным способом. В любом случае схема лечения обеспечит благоприятные эффекты лекарственной комбинации при лечении состояний или нарушений, описанных в этом документе.

Фраза терапевтически эффективное предназначена для определения количества активных ингредиентов, применяемых при лечении заболевания или нарушения. Это количество ослабляет или излечивает указанное заболевание или нарушение.

Термин терапевтически приемлемые относится к таким соединениям (или солям, пролекарствам, таутомерам, цвитерионным формам и др.), которые представляют собой соединения, подходящие для применения в контакте с тканями пациентов, избегая чрезмерную токсичность, раздражение и аллергическую реакцию с учетом допустимого соотношения польза/риск, эффективные при их предполагаемом применении.

Согласно настоящему описанию ссылка на лечение применительно к пациенту предназначена включать и профилактику. Термин пациент обозначает всех млекопитающих, включая людей. Примеры пациентов включают людей, крупный рогатый скот, собак, кошек, коз, овец, свиней и кроликов. Предпочтительно пациент представляет собой человека.

Термин пролекарство относится к соединению, которое становится более активным ίη У1уо. Некоторые соединения, предоставленные в данном документе, также могут существовать в виде пролекарств, как описано в Нуйго1у818 ίη Эгид апй Ртойтид Ме1аЬоПкт: Скет1к1гу. ВюскеппкРу. апй Еп/уто1оду (Тек1а, Ветпатй апй Мауег, 1оас1ит Μ. ХУПеу-УНСЛ, 2шгсЬ, 5>\уП/ег1апй, 2003). Пролекарства соединений, как описано в этом документе, представляют собой структурно модифицированные формы соединения, которые легко подвергаются химическим изменениям при физиологических условиях, высвобождая соединение. Кроме того, пролекарства могут быть превращены в соединение химическими или биохимическими способами в условиях ех У1уо. Например, пролекарства можно медленно превратить в соединение,

- 4 020766 если поместить их в слое трансдермального пластыря с подходящим ферментом или химическим реагентом. Пролекарства часто удобны для применения, потому что в некоторых случаях они могут быть более легкими для введения, чем соединение или исходное лекарственное средство. Они, например, могут быть биодоступными при пероральном введении, при этом исходное лекарственное средство не является биодоступным. Пролекарство также может обладать улучшенной растворимостью в фармацевтических композициях по сравнению с исходным лекарственным средством.

Кроме того, большое разнообразие пролекарственных производных известно из уровня техники, таких как основанные на гидролитическом расщеплении или окислительной активации пролекарства. В качестве неограничивающего примера пролекарства следует рассматривать соединение, которое вводят в виде сложного эфира (пролекарство), но затем оно метаболически гидролизуется до карбоновой кислоты, т.е. активного компонента. Дополнительные примеры включают пептидилпроизводные соединения.

В то время как существует возможность введения соединений заявленного изобретения в виде необработанного химического соединения, также возможно предоставлять их в виде фармацевтических препаратов. Таким образом, заявленное изобретение предоставляет фармацевтический препарат, включающий соединение или фармацевтически приемлемую соль, пролекарство или сольват его, вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями для них. Носитель(и) должен быть приемлемым в смысле совместимости с другими ингредиентами лекарственного средства и безвредным для пациента. Надлежащий лекарственный препарат находится в зависимости от выбранного пути введения. Любые хорошо известные методики, носители и эксципиенты могут применяться как подходящие и как изученные в данной области техники, например, как в КештдХои'к РЬагтасеийса1 8с1еисе8. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть промышленно произведены способом, который сам по себе известен, например, посредством обычного смешивания, растворения, гранулирования, изготовления драже, отмучивания, эмульгирования, инкапсулирования, процессов включения или прессования.

Лекарственные формы включают такие, которые удобны для перорального, парентерального (включая подкожное, внутрикожное, внутримышечное, внутривенное, внутрисуставное и внутрикостное), интраперитониального, трансмукозального, трансдермального, ректального и топического (включая кожное, внутриротовое, подъязычное и внутриглазное) введений, хотя наиболее удобный способ применения может зависеть, например, от патологического состояния и болезни пациента. Лекарственные формы обычно могут быть представлены в виде стандартной лекарственной формы и могут быть получены какими-либо способами, хорошо известными из уровня техники в области фармакологии. Все способы включают стадию осуществления объединения соединения заявленного изобретения или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира, пролекарства или сольвата (активный ингредиент) с носителем, который состоит из одного или нескольких вспомогательных ингредиентов. Как правило, лекарственные формы получают путем осуществления равномерного и тщательного объединения активного ингредиента с жидкими носителями или мелкоизмельченными твердыми носителями или с обоими одновременно, и затем, если это необходимо, получения желаемой лекарственной формы.

Лекарственные формы, удобные для перорального введения, могут быть представлены дискретными дозированными формами, такими как капсулы, крахмальные капсулы или таблетки, каждая из которых содержит заранее установленное количество активного ингредиента; такими как порошок или гранулы; такими как раствор или суспензия в водной жидкой среде или в неводной жидкой среде; или такими как жидкая эмульсия масло-в-воде. Активный ингредиент также может быть представлен в виде болюса, электуария или пасты.

Фармацевтические препараты, которые можно применять перорально, включают таблетки, изготовленные из желатина капсулы с плотным заполнением, а также и мягкие герметичные капсулы, изготовленные из желатина и смягчителя, такого как глицерин или сорбит. Таблетки могут быть изготовлены путем прессования или литьевого формования, необязательно, с одним или несколькими вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть изготовлены путем прессования в подходящей промышленной установке активного ингредиента в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно, смешанного со связующими веществами, инертными разбавителями или скользящими веществами, поверхностно-активными или диспергирующими веществами. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем литьевого формования в подходящей промышленной установке смеси порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть необязательно покрытыми оболочкой или рифлеными и могут быть составленными по рецептуре так, что обеспечивают медленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента. Все лекарственные формы для перорального введения должны представлять собой формы, удобные для такого введения. Капсулы с плотным заполнением могут содержать активные ингредиенты в смеси с наполнителем, таким как лактоза, со связующими веществами, такими как крахмалы, и/или со скользящими веществами, такими как тальк или стеарат магния, и, необязательно, со стабилизаторами. В мягких капсулах активные соединения могут быть растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, таких как жирные растительные масла, вазелиновое масло или жидкие полиэтиленгликоли. Кроме того, могут быть добавлены стабилизаторы. Ядро драже покрыто подходящей оболочкой. Для этой цели можно использо- 5 020766 вать концентрированные сахарные растворы, которые, необязательно, могут содержать аравийскую камедь, тальк, поливинилпирролидон, карболол гель, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, растворы глазури и подходящие органические растворители или смеси растворителей.

Окрашивающие вещества или пигменты могут добавляться к покрытиям таблеток или драже для идентификации или для характеристики различных комбинаций доз активного соединения.

Соединения могут быть произведены в виде лекарственных форм для парентерального введения путем инъекции, например путем болюсной инъекции или длительной инфузии. Лекарственные формы для инъекции могут быть представлены в виде стандартной лекарственной формы, например в ампулах или в мультидозовых контейнерах, с добавленным консервантом. Для композиций могут быть выбраны такие формы, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных средах, и композиции могут содержать вещества для создания лекарственной формы, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие вещества. Лекарственные формы могут быть представлены в контейнерах, содежащих стандартную дозу или мультидозу, например запаянные ампулы и пузырьки, и могут храниться в порошкообразной форме или в высушенном сублимацией (лиофилизованном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например солевого физиологического раствора или стерильной апирогенной воды непосредственно перед использованием. Приготовленные непосредственно перед введением инъекционные растворы и суспензии могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток ранее описанного типа.

Лекарственные формы для парентерального введения включают водные и неводные (масляные) стерильные инъекционные растворы активных соединений, которые могут содержать антиоксиданты, буферные растворы, антимикробные добавки и растворители, которые приводят лекарственную форму к изотоническому состоянию в сравнении с кровью определенного пациента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспенлирующие вещества и загущающие компоненты. Подходящие липофильные растворители или среды включают жирные растительные масла, такие как кунжутное масло, или синтетические сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Водные инъекционные суспензии могут содержать вещества, которые повышают вязкость суспензии, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран.

Необязательно, суспензия может также содержать подходящие стабилизаторы или агенты, которые повышают растворимость соединений, обеспечивая возможность существования лекарственных препаратов в виде высококонцентрированных растворов.

Предпочтительные стандартные лекарственные формы представляют собой такие, которые содержат эффективную дозу, как описано в этом документе ниже, или оптимальную ее часть активного ингредиента.

Следует понимать, что кроме подробно указанных выше ингредиентов лекарственные формы могут включать другие вещества, которые традиционно в данной области техники имеют отношение к вопросу о типе лекарственной формы, например, такие, которые удобны для перорального введения, могут включать ароматизирующие вещества.

Соединения, предоставленные в настоящем описании, могут быть введены различными способами, например перорально, топически или инъекцией. Точное количество соединения, введенного пациенту, будет определено лечащим врачом. Специальный уровень дозировки для конкретного пациента будет зависеть от множества факторов, включая активность определенного применяемого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, питание, время введения, способ введения, скорость выведения из организма, лекарственную комбинацию, точность определения болезни, подлежащей лечению, и тяжесть симптома заболевания или патологического состояния, подлежащих лечению. Кроме того, способ введения может меняться в зависимости от состояния и его тяжести.

Одним словом, соединения изобретения могут быть введены перорально, местно или путем инъекции в дозе от 0,1 до 500 мг/кг в день. Таблетки или другие формы лекарственного средства, предоставленные в дискретных единицах, для удобства применения могут содержать количество соединения согласно настоящему изобретению, которое эффективно в такой дозировке, или, например, в многократных дозах того же соединения, содержащих от 5 до 500 мг.

Количество активного ингредиента, которое может быть скомбинировано с веществами носителя для получения стандартной лекарственной формы, будет меняться в зависимости от организмареципиента, подвергаемого лечению, и от конкретного способа введения.

В определенных случаях может быть целесообразно вводить по меньшей мере одно из описанных в этом документе соединений (или фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или его пролекарства) в комбинации с другим терапевтическим агентом. В качестве только одного примера, если один из побочных эффектов, которые испытывает пациент, получающий одно из соединений согласно настоящему описанию, представляет собой гипертензию, то возможно вводить антигипертензивное средство в комбинации с первоначальным терапевтическим средством. Или только в качестве примера терапевтическая эффективность одного из соединений, описанных в этом документе, может быть повышена путем введения адъюванта (т.е. сам по себе адъювант может иметь только минимальный терапевтический благоприятный эффект, но в комбинации с другим терапевтическим средством суммарный терапевтический

- 6 020766 благоприятный эффект для пациента усиливается). Или только в качестве примера благоприятное воздействие, которое испытывает пациент, может быть увеличено путем введения одного из соединений, описанных в этом документе, вместе с другим терапевтическим средством (которое также включает терапевтическую схему приема лекарственного средства), которое также имеет благоприятное терапевтическое воздействие. Только в качестве примера при лечении рака, включающем введение одного из соединений, описанных в этом документе, повышенный терапевтический благоприятный эффект может быть результатом предоставления пациенту также и другого терапевтического средства для лечения рака. В любом случае, независимо от заболевания, нарушения или состояния, которые подвергают лечению, суммарное благоприятное воздействие, испытываемое пациентом, просто может быть суммарным результатом от двух терапевтических средств, или пациент может испытывать синергистическое благоприятное воздействие.

Во всяком случае, сложные терапевтические средства (по меньшей мере одно из которых представляет собой соединение, предоставленное в настоящем описании) могут быть введены в любом порядке или даже одновременно. При одновременном введении сложные терапевтические средства могут быть предоставлены в стандартной форме или в мультиформах (только в качестве примера либо одной пилюлей, либо в виде двух отдельных пилюль). Один из терапевтических агентов может быть дан в многократных дозах, или оба могут быть даны в многократных дозах. При не одновременном введении распределение интервалов времени между многократными дозами может быть любым, от нескольких минут до четырех недель.

Таким образом, способы лечения 8ТАТ3-опосредованных заболеваний или нарушений (а также и 8ТАТ5-опосредованных заболеваний или нарушений) для человека или животного, нуждающегося в таком лечении, включают введение пациенту некоторого количества представленного в настоящем описании соединения, эффективного для ослабления или предотвращения указанного заболевания у пациента, в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным средством для лечения указанного заболевания, известным из уровня техники. Дополнительно терапевтические композиции включают по меньшей мере одно из таких соединений в комбинации с одним или несколькими дополнительными средствами для лечения 8ТАТ3- и 8ТАТ5-опосредованных заболеваний.

Соединения, описанные в этом документе, могут быть полезны при лечении широкого спектра заболеваний или нарушений, в которых необходимы ингибирование или модуляция 8ТАТ3 метаболического пути. Соединения ослабляют и способны терапевтически воздействовать на патологические состояния, связанные с пролиферативным заболеванием. Применяемые для этого соединения включают такие соединения, которые представляют собой средства для понижения активности 8ТАТ3; фосфорилирования 8ТАТ3 и экспрессии белков, контролируемой посредством активации транскрипции с помощью активированного 8ТАТ3. По этому принципу соединения могут применяться в качестве агентов для подавления УЕСТ, ММР9, ММР2, сурвивина, с-Мус, ММР-1, МЕК-5, с-Р08,1 СОХ-2, Вс1-х1, ММР-10, Н8Р-27 и 1пдШа.

Заболевания или состояния, которые могут быть предотвращены или вылечены соединениями и способы, описанные в этом документе, включают предотвращение или лечение рака, такого как кожная Т-клеточная лейкемия, опухоли головы и шеи, рак поджелудочной железы, рак мочевого пузыря, глиома высокой степени злокачественности, метастазы в головной мозг, меланома, рак кожи, рак легких, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак толстой кишки, лейкоз, миелодиспластический синдром (предлейкемическое состояние) и множественная миелома. Как правило, любые раковые метастазы можно предотвратить или лечить с помощью соединений и способов, описанных в этом документе. Соединения также могут применяться для предотвращения или лечения пролиферативных ангиогенных патологических состояний, включая телеангиэктазию, венозную ангиому, гемангиобластому.

Эти соединения и способы могут также применяться для предотвращения или лечения пролиферативных заболеваний или повреждений кожи, включая топический дерматит, псориаз и розовые угри.

Кроме того, соединения и способы, которые описаны в этом документе, могут применяться для предотвращения или лечения заболеваний и состояний центральной нервной системы (ЦНС), таких как воспалительные процессы и состояния ЦНС, например множественный склероз и прогрессирующая мультифокальная лейкоэнцефалопатия.

Кроме того, соединения и способы, которые описаны в этом документе, могут применяться для предотвращения или лечения воспалительных заболеваний и состояний, таких как остеоартрит, ревматоидный артрит, болезнь Крона, язвенный колит, и аутоиммунных заболеваний, таких как обыкновенная волчанка и смешанное аутоиммунное заболевание.

Заболевания и состояния, такие как телеангиэктазия, венозная ангиома, гемангиобластома и истинная полицитемия, также могут быть успешно предотвращены или вылечены соединениями и способами, описанными в этом документе.

Эти соединения и способы могут влиять на жизнеспособность стволовых клеток и дифференциацию путем строгого поддержания стволовых клеток, например, предотвращение дифференциации стволовых клеток.

Соединения, указанные в этом документе, также могут применяться для усиления иммунного отве- 7 020766 та, в особенности, если усиление иммунного ответа приводит к экспрессии костимулирующих молекул периферических макрофагов и проникающей в опухоль микроглии. Эти соединения также пригодны к применению, когда иммунный ответ приводит к пролиферации эффектора Т-клеток и/или к положительной регуляции некоторых ключевых внутриклеточных сигнальных молекул, которые играют критическую роль в регуляции активации Т-клеток и моноцитов. Соединения представляют собой пригодные к применению в случае, когда иммунный ответ приводит к положительной регуляции некоторых ключевых внутриклеточных сигнальных молекул, которые играют критическую роль в регуляции активации Тклеток и моноцитов, в особенности, при фосфорилировании §ук (Туг(352)) в моноцитах и ΖΑΡ-70 (Туг (319)) в Т-клетках.

Нижеприведенная таблица, как было непосредственно установлено, описывает конкретные заболевания и патологические состояния, которые можно лечить, используя соединения, описанные в этом документе

Активация §ТАТ при злокачественных новообразованиях у человека

Вид опухоли	Активируемые 5ТАТ
Новообразования крови
Множественная миелома	ЗТАТ1, ЗТАТЗ

Лейкемии;

ΗΤΙΛ'-1-зави симая

Эритролейкемия

Острая миелогенная лейкемия (АМЛ)

ЗТАТЗ, ΞΤΑΤ5 ЗТАТ1, 5ТАТ5 ЗТАТ1, ЗТАТЗ, 5ТАТ5

Хроническая миелогенная лейкемия (СМЛ) Лейкемия больших гранулярных лимфоцитов (ЬСЬ)	5ТАТ5 ЗТАТЗ
Лимфомы: Лимфома Беркитта, связанная с вирусом Эпштейн-Барр (ЕВУ) Фунгоидный микоз Кожная Т-клеточная лимфома Неходжкинская лимфома Анапластическая крупноклеточная лимфома	ЗТАТЗ ЗТАТЗ ЗТАТЗ ЗТАТЗ ЗТАТЗ
Солидные опухоли
Рак молочной железы	ЗТАТ1, ЗТАТЗ, ЗТАТ5
Рак головы и шеи	ЗТАТ1, ЗТАТЗ, ЗТАТ5
Меланома	ЗТАТЗ
Рак яичников	ЗТАТЗ
Рак легких	ЗТАТЗ
Рак поджелудочной железы	ЗТАТЗ
Рак предстательной железы	ЗТАТЗ
Глиома	ЗТАТЗ, ЗТАТ5

На основании ссылок КЕР. 12, 17, ЕВУ, Эпштейн-Барр вирус; НТЬУ-1, человеческий Тлимфотрофический вирус-1.

Семейство белков §ТАТ (переносчик сигнала и активатор транскрипции) включает факторы транскрипции, которые специфически активируются для регуляции транскрипции гена в том случае, когда клетки вступают в контакт с цитокинами и ростовыми факторами. Для млекопитающих существуют семь известных членов семейства белков §ТАТ: 8ТАТ1, 8ТАТ2, 8ТАТ3, 8ТАТ4, §ТАТ5а, 8ТАТ5Б и 8ТАТ6. Уи, Н., Ιονβ, К., ТНе 8ТАТ8 οί Сапсег - №ν Мо1еси1аг Тагдс1з Соте οί Аде, №1игс Кс\лс\уз. 4:97105 (2004). Эти семь белков различаются по размеру в диапазоне от 750 до 850 аминокислот. Белки §ТАТ5а и 8ТАТ5Б, на которые в этом документе совместно ссылаются как на 8ТАТ5, представляют собой близкородственные тесно связанные, но кодируемые различными генами. Уи, Н., ίο\Ό, К., ТНе

- 8 020766

8ТАТ8 о£ Сапсег - №у Мо1еси1аг Тагде!к Соте о£ Аде, №йиге Кеу1еук, 4:97-105 (2004).

Белки 8ТАТ функционируют как переносчики сигнала в цитоплазме и как активаторы транскрипции в ядре. К1кке1еуа Т., ВНабасНагуа 8., Вгаипк!еФ 1.. 8сФпб1ег САУ.. 81диа1шд ТНгоидН (Не 1АК/8ТАТ РаФуау, Кесеп! Абуапсек апб Ри1иге СНа11епдек, Оепе 285: 1-24 (2002). Например, 8ТАТ белки передают сигналы от цитокиновых рецепторов, от рецепторов ростового фактора и от нерецепторных цитоплазматических тирозин-киназ, таких как 8гс и АЫ, в ядро клетки, где они связываются с ДНК и регулируют транскрипцию ряда генов 1б. В результате 8ТАТ белки регулируют физиологические функции, такие как иммунный ответ, воспаление, пролиферация, дифференциация, жизнеспособность, метастаз, апоптоз и иммунотолерантность (например, ускользание опухоли от иммунного надзора). Х1е, Т. е! а1., 8!а!3 Асбуа!юп Кеди1а!ек 1Не Ехргеккюп о£ Мабгх Ме1а11орго!ешаке-2 апб Титог Фуакюп апб Ме1ак1ак1к, Опсодепе 23: 3550-3560 (2004); Ьеуу, Б.Е., ФдЫгатц О., 8ТАТ3: А МибНасе!еб Опсодепе, РЫА8 103: 10151-52 (2006).

8ТАТ подразделяют на структурно и функционально консервативные домены, включая Ν-концевой домен, который усиливает взаимодействия между 8ТАТ димерами, примыкающими к ДНКсвязывающим сайтам; двухспиральный 8ТАТ домен, который вовлечен в белок-белковые взаимодействия; ДНК-связывающий домен с иммуноглобулиноподобной кольцевой впадиной, аналогичный р53 белку-супрессору опухоли; ЕР-Напб-Нке линкерный домен, соединяющий ^NА-связывающий и 8Н2 домены; 8Н2 домен, который функционирует как зависящий от фосфорилирования выключатель контроля рецепторного распознавания и ДНК-связывания; и С-концевой трансактивационный домен. СНеп X., У1пкете1ег и., 2Нао Υ., 1еги/а1пи Ό., Бате11 ЕЕ., Кипуап 1.. Сгук1а1 81гис1иге о£ а Тугокше РНокрНогу1а!еб 8ТАТ-1 Б1тег Воипб !о ^NА, Се11 93: 827-839 (1998). Для связывания с ДНК белки 8ТАТ должны димеризоваться. Υιι. Н., Фус. К., ТНе 8ТАТ8 о£ Сапсег - Νν Мо1еси1аг Тагде(к Соте о£ Аде, №биге Кеу1еук, 4: 97-105 (2004), Бате11, 1. 1г., УаНбабпд 8!а!3 ш Сапсег ТНегару, №биге Мебюше, 11: 595-96 (2005). Образование димера включает обратимое взаимодействие между 8КС-гомологичным 2 (8Н2) доменом одной молекулы 8ТАТ с фосфорилированным тирозиновым остатком второй молекулы 8ТАТ.

Было обнаружено, что белки 8ТАТ сверхактивны и/или целенаправленно активны в раковых клетках, включая солидные опухоли и злокачественные новообразования крови, пролиферативные заболевания кожи и воспалительные заболевания. Υυ. Н., Фус. К., ТНе 8ТАТ8 о£ Сапсег - Νν Мо1еси1аг Тагде(к Соте о£ Аде, №биге Кеу1еук, 4: 97-105 (2004). Например, 8ТАТ сигнальная функция непосредственно связана с различными видами рака. 8опд, Л. апб Огапбю, ЕК., 8ТАТ ФдпаНпд ш Неаб апб №ск Сапсег, Опсодепе, 19: 2489-2495, 2000; №кбак1к, Ν.Ο. е! а1., ТагдеНпд 1Не 8ТАТ Ра1Нуау ш Неаб апб №ск Сапсег: Кесеп! Абуапсек апб Ри!иге Ргокрес!к, Сиггеп! Сапсег Бгид Тагде(к. 4: 639-651. Присутствие повышенного количества активированных 8ТАТ3 и/или 8ТАТ5 в ядрах тесно связано с дисрегуляцией генной транскрипции. Υи, Н., Фус. К., ТНе 8ТАТ8 о£ Сапсег - №у Мо1еси1аг Тагде!к Соте о£ Аде, №биге Кеу1еук, 4: 97-105. Кроме того, наличие повышенного количества 8ТАТ3 и/или 8ТАТ5 ассоциируется с возрастанием транскрипции генов, которые вносят свой вклад в клеточную пролиферацию, жизнеспособность, ангиогенез и вызванную опухолью иммунотолерантность. Υи, Н., Фус. К., ТНе 8ТАТ8 о£ Сапсег - №у Мо1еси1аг Тагде!к Соте о£ Аде, №биге Кеу1еук, 4: 97-105. Например, 8ТАТ5 активируется в случае определенных лейкемий, рака молочной железы и рака головы и шеи. Υи, Н., Фус. К., ТНе 8ТАТ8 о£ Сапсег №у Мо1еси1аг Тагде!к Соте о£ Аде, №биге Кеу1еук, 4: 97-105. Аналогично, известна активация 8ТАТ3, упраздняющая зависимость от ростового фактора, который вносит свой вклад в рост определенной раковой опухоли. Кгрта, Т., №уа, Н., 8!е1птап, К.А., Бгептпд, 8.Б., Оообтд, У.Е., Уеп1/е1. А.Ь., Χί, 8., апб Огапб1к, ЕК., 8ТАТ3 Асбуабоп АЬгода!ек Огоуф Рас!ог Берепбепсе Апб Соп!г1Ьи!ек То Неаб Апб №ск 5с.|иатоик Се11 Сагстота Титог Огоуф 1п У1уо, Се11 Огоуф БгЙег, 13: 355-362, 2002. Активация 8ТАТ3 также описана как фактор, регулирующий жизнеспособность клеток человеческой немелкоклеточной карциномы. 8опд, Ь., Тигккоп, 1.. Каггак, 1.О., 1оуе, К., апб Наига, Е.В., Асбуабоп О£ 8!а!3 Ву Кесер!ог Тугокше Кшакек Апб Су!окшек Кеди1а!ек 8игу1уа1 1п Нитап №п-8та11 Се11 Сагстота Се11к, Опсодепе, 22: 4150-4165, 2003. Таким образом, 8ТАТ3 и 8ТАТ5 представляют собой подходящие мишени при лечении 8ТАТ3- и 8ТАТ5-опосредованных заболеваний.

Как 8ТАТ3-, так и 8ТАТ5-сигнальные метаболические пути включают связывание цитокинов или ростовых факторов с рецепторами на поверхности клетки, которое приводит к активации цитоплазматических тиризин-киназ, таких как киназы 1АК семейства, что в дальнейшем приводит к фосфорилированию мономеров 8ТАТ. ОаФпа, М., НФоп, Б., ФНпкЮп. ЕА., МобпоЬи, А., ЫдНуаш, А., 2Нои, Υ.Ι., У1ксопф К., О'8Неа, 1.1. 81дпа1шд Ьу Туре I апб Туре II Су!окше Кесер!огк: Теп Υеа^к Айег, Сигг. Орт. 1ттипо1. 2001, 13: 363. Белки 8ТАТ активируются посредством фосфорилирования, что служит причиной их димеризации и транслокации в ядро, где они связываются со специфическими промоторными последовательностиями в генах-мишенях. НогуаФ, С.М., ТНе 1ак-8ТАТ РаФуау 8бти1а!еб Ьу 1п!ег£егоп Оатта, 8с1епсе, 8ТКЕ, 2004, 260: !г8.

Как схематически изображено на фиг. 5, рецепторы ростового фактора, цитокиновые рецепторы и нерецепторные тирозин-киназы имеют сигнальные метаболические пути, которые сходятся на 8ТАТ3 и 8ТАТ5. В случае 8ТАТ3 эти рецепторы и киназы включают 1Ь-2, 1Ь-6, 1Ь-7, 1Ь-9, 1Б-10, 1Б-11, 1Б-15, 1Ь21, ЕОР, О8М, О-С8Р, ТРО, Ь1Р и ОН. В случае 8ТАТ5 рецепторы и киназы включают 1Ь-2, 1Ь-3, 1Ь-5, Ф-7, Ф-9, Ф-15, О-С8Р, ОМ-С8Р, ЕРО, ТРО, ОН и РКЬ.

- 9 020766

Конкретнее, активация 8ТАТ3, как известно, опосредована БОРК, ЕРО-Р и 1Б-6 Р, при посредстве с-8гс или 1АК2. См., например, Бац 8.Υ., СЫ1Дз, Е.Е., Χί, 8., СорреШ, Р.М., ОооДшд, №£, ^е1к, А., РегДз, Р.Б., апД ОгапД® 1.Р., Егу!йторо1еДп-МеД1а!еД АсДуаДоп оГ 1АК-8ТАТ 81дпаДпд СопДтЬи!ез !о Се11и1аг Дказюп ш НеаД апД Ыеск 8циатоиз Се11 Сагсшота, Опсодепе, 24: 4442-4449, 2005; 81ауазД, Н., Х|к|1ак15, Ν.Ο., апД 8аик, кк, АЬгодаДоп оГ 1Б-6-МеД1а!еД ΙΑΚ 81дпа11шд Ьу 1ке Сус1ореп!епопе Ргоз!ад1апДш 15ДРСД(2) ш Ога1 8циатоиз Сагсшота Се11к, Вг. I. Сапсег, 91: 1074-1080, 2004; & СиаДгоз, М.Р., Реги//к Р., Кап, С, апД РоДеск, и., Сотр1ех Реди1аДоп оГ 81дпа1 ТгапзДисегз апД АсДуа!огз оГ ТгапзсДрДоп 3 АсДуаДоп ш №гта1 апД МаДдпап! КегаДпосу!ез, Сапсег Рез, 64: 3934-3939, 2004. Активация МАРК может приводить к снижению фосфорилирования 8ТАТ3. В случае солидных опухолей РЭСЕР и с-Ме! также могут активировать 8ТАТ3 посредством с-8гс. 1ОРР1 и ЕОРР могут активировать 8ТАТ3 .ТАК-зависимым образом. Активация 8ТАТ3 может приводить к активации некоторых последующих генов-мишеней, включая Вс1-ХБ, циклин Ό1 и УЕОР.

Связывание лиганда с цитокиновым рецептором на поверхности клеток инициирует активацию киназ 1АК. С возрастанием киназной активности .ТАК фосфорилирует тирозиновые остатки рецептора и создает сайты взаимодействия с белками, которые содержат фосфорилированный тирозин-связанный 8Н2 домен. 8ТАТ, сохраняя 8Н2 домены способными к связыванию этих фосфорилированных тирозиновых остатков, пополняют ряды рецепторов и фосфорилируются по тирозину с помощью киназ .ТАК. Фосфорилированный тирозин затем функционирует как стыковочный сайт для 8Н2 доменов других 8ТАТ, способствуя их димеризации. Различные 8ТАТ формируют гетеро-, а также и гомодимеры, активированные 8ТАТ димеры накапливаются в клеточных ядрах и активируют транскрипцию их геновмишеней. НеЬепзДей Ό. е! а1. (2005) Эгид №\тз Регзрес!. Уо1. 18 (4), радез 243-249. 8тАт могут фосфорилироваться по тирозину с помощью других нерецепторных тирозин-киназ, таких как с-згс, а также и с помощью рецепторных тирозин-киназ, таких как рецептор эпидермального ростового фактора.

Аналогичным образом, связывание цитокинов семейства 1Б-6 (включая ГБ-6, онкостатин М и фактор, ингибирующий лейкемию) с др130 рецептором инициирует фосфорилирование 8ТАТ3 киназой ,тАк2. Вои1!оп, Т.О., 2Допд, Ζ., \Уеп, Ζ., ОагпеН, 1г, РЕ., 8!аЫ, Ν., апД Υапсорои1оз, Ο.Ό., 8ТАТ3 АсДуаДоп Ьу Су!октез иДДапд др130 апД Ре1а!еД ТгапзДисегз 1пуо1уез а 8есопДагу МоДШсаДоп Ресцпппд ап Н78епзЙ1уе Камазе Ргос Ν·ιΐ1 АсаД 8с1 И8А. 92(15): 6915-6919. ЕОР-Р и некоторые другие рецепторные тирозин-киназы, такие как с-МЕТ, фосфорилируют 8ТАТ3 в ответ на их лиганды. Υиап Ζ.Ρ е! а1., (2004) Мо1. Се11. Вю1. Уо1. 24 (21), радез 9390-9400. 8ТАТ3 также представляет собой мишень для с-згс нерецепторной тирозин-киназы. 8Дуа С.М. (2004) Опсодепе Уо1. 23 (48), радез 8017-8023. В дополнение к активации 8ТАТ3 посредством 1Б-6 связывания, 8ТАТ3 далее активируется путем связывания 1Б-2, 1Б-7, 1Б-9, 1Б-10, 1Б-11, 1Б-15, 1Б-21, ЕОР, О8М, О-С8Р, ТРО, Б1Р или ОН с соответствующим рецептором. Аналогично, 8ТАТ5 активируется путем связывания 1Б-2, 1Б-3, 1Б-5, 1Б-7, 1Б-9, 1Б-15, О-С8Р, ОМ-С8Р, ЕРО, ТРО, ОН или РРБ с соответствующим рецептором.

Безусловно, Янус-киназы (1АК) играют важную роль на начальных этапах подачи сигнала цитокиновому рецептору. Несмотря на то, что специфичность четырех членов семейства .ТАК (Дак1, 1ак2, 1ак3 и Тук2) к различным цитокиновым рецепторам полностью не понята, исследования говорят о том, что некоторые специфические цитокиновые рецепторы могут активировать одну или несколько 1ак. О’8йеа, кк, Рези, М., Вопе, Э.С., СДапдеДап, Р.8., А Νον МоДа1йу Гог Гшшипозирргеззюп: ТагдеДпд 1ке 1АК/8ТАТ РаШтау, №-Ииге Реу. Эгид Э|зс. 2004 (3): 555-564. Например, рецептор гормона роста (ОНР) может взаимодействовать главным образом с 1ак2, и, как было показано, это индуцирует фосфорилирование Дак1 и 1ак3. Не11дгеп, О., .Тапззоп, Ю., Саг1ззоп, Б.М., Саг1ззоп, В., ТДе Οιό\\11ι Ногтопе РесерЮг Аззос1а!ез \νίΐ1ι Дакк 1ак2 апД Тук2 ш Нитап Ыует, Сго\\Д1 Ногт. ГОР Рез. 1999 9(3): 212-8.

Метаболические пути 1АК-8ТАТ могут подвергаться негативной регуляции на многочисленных уровнях. Протеин-тирозин-фосфатазы перемещают фосфаты от цитокиновых рецепторов, а также активируют 8тАт. НеЬепзДей Ό. е! а1. (2005) Эгид №«'з Регзреск Уо1. 18 (4), радез 243-249. В последнее время идентифицированы супрессоры цитокинового пути передачи сигнала (8ОС8), ингибирующие фосфорилирование 8ТАТ путем связывания и ингибирования киназ ДАК или путем конкурирования со 8ТАТ за сайты связывания фосфорилированного тирозина на цитокиновых рецепторах. КгеЬз, Б. е! а1. (2001) 8!ет Се11з Уо1. 19, радез 378-387. 8ТАТ также негативно регулируются белковыми ингибиторами активированных 8ТАТ (Р1А8), которые действуют в ядрах по нескольким механизмам. 8йиа1, К. (2006) Уо1. 16 (2), радез 196-202. Например, Р1А81 и Р1А83 ингибируют транскрипционную активацию с помощью 8ТАТ1 и 8ТАТ3, соответственно, путем связывания и блокирования доступа к ДНК последовательностям, которые они распознают.

Метаболический сигнальный путь 1АК-8ТАТ участвует в регуляции клеточных ответных реакций на цитокины и ростовые факторы. Задействуя Янус-киназы (ДАК) и переносчиков сигнала и активаторов транскрипции (8ТАТ), метаболический путь преобразует сигнал, привнесенный этими экстраклеточными полипептидами в клеточные ядра, где активированные белки 8ТАТ изменяют экспрессию гена. Несмотря на то, что 8ТАТ первоначально были открыты как мишени Янус-киназ, некоторые стимулирующие факторы могут активировать их независимо от киназ ДАК. Ό.\ν Беатап, 8. Р1зйагоДу, Τ.ν. РДскшдет, М.А. Соттапе, 1. 8сЬ1еззшдег, Г.М. Кегг, Э.Е. Беуу апД О.Р. 8!агк Ро1ез оГ ДАКз ш АсДуаДоп оГ

- 10 020766 δΤΑΤδ апб §Ити1аОоп о£ с-£о5 Оепе Ехргеккюп Ьу Ер0сгта1 Сго\\1Н ЕасЮг. Мо1. Се11 ΒίοΙ. 1996 16(1): 369375. Этот метаболический путь играет основную роль в выборе принципиального поведения клетки, в регуляции процессов клеточной пролиферации, дифференциации и апоптоза. δΤΑΤ активатор фосфорилирования предопределяет фосфорилирование киназы 1ЛК до фосфорилированного состояния. Другими словами, 1ЛК сначала должна быть профосфорилирована и должна связаться со δΤΑΤ. Затем δΤΑΤ способен фосфорилироваться и димеризоваться с другим δΤΑΤ.

Соединения, описанные в этом документе, могут контролировать клеточный рост и жизнеспособность посредством изменения δΤΑΤ. Клеточная активность регулируется сигналами. Сигналы проникают через клеточные стенки при посредстве рецепторов, сигналы передаются с помощью δΤΑΤ. δΤΑΤ завершают метаболический путь у ДНК. Сигналы активируют транскрипцию ДНК (в иных случаях на это ссылаются как на активацию гена). ВСБ-Х1, МСЬ1, сурвивин и р53 участвуют в клеточной жизнеспособности. МУС, циклин Ό1/Ώ2 и р53 участвуют в клеточной пролиферации. Последующее фосфорилирование 8ΤΆΤ3 сигнальных путей вызывает ангиогенез как результат регуляции при помощи УЕСР, Н1Р1 и р53, и ускользание от иммунного надзора, как процесс, регулируемый иммуносупрессорными факторами, провоспалительными цитокинами и провоспалительными хемокинами.

Соединения и способы, описанные в этом документе, могут непосредственно или опосредованно регулировать активацию 8ΤΆΤ3 и/или 8ΤΆΤ5. Например, соединения и способы могут ингибировать активацию 8ΤΆΤ3 посредством (1) воздействия на сигнальные метаболические пути, которые приводят к активации 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5, так что последующая активация 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5 предотвращается или снижается; (2) непосредственного предотвращения снижения активности 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5, например, путем предотвращения фосфорилирования 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5; и (3) разрушением комплексообразования 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5 с рядом каких-либо кофакторов и/или макромолекул, при котором комплексы являются содействующими регуляции передачи сигнала с участием 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5, и, аналогично, активации 8ΤΆΤ5.

Ингибирование активации 8ΤΆΤ3 и/или 8ΤΆΤ5 может осуществляться, непосредственно или опосредовано, с помощью каких-либо приемов выбора мишеней δΤΑΤ, в настоящее время хорошо известных из уровня техники. В качестве примера 8ΤΆΤ3 активность может быть уменьшена посредством (1) уменьшения доступности молекул 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5 для комплектования; (2) блокирования комплектования 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5 рецепторами, (3) блокирования фосфорилирования молекул 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5; (4) вмешательства в образование димеров 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5; (5) вмешательства в перемещение димеров 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5 в ядра; (6) вмешательства в процесс связывания 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5 с ДНК; (7) вмешательства во взаимодействие 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5 с активаторами транскрипции; и/или (8) посредством других способов предотвращения δΤΑΤ-опосредованной транскрипционной активации. См., например, N.0. ΝίΚίΙαΚίδ, е! а1., Τ;·ΐΓ^Ιίπ§ (Не δΤΑΤ Ра1Н\\ау ш Неаб апб №ск Сапег: Кесеп! Лбуапсек апб Ри1иге Ргокрес15, Сиггеп! Сапсег Эгид Τа^деΐ5, 4: 637-651 (2004).

Непосредственная или опосредованная модуляция активности 8ΤΆΤ3 или 8ΤΆΤ5 соединениями, представленным в этом документе, может предотвратить, уменьшить или устранить 8ΤΆΤ3- и/или δΤΑΤ5-зависимую активацию генов, ответственных за пролиферацию, жизнеспособность, метастаз, ангиогенез, иммунный ответ и ускользание опухоли от иммунологического надзора. Как схематично показано на фиг. 5 и 6, активация δΤΑΤ3 и/или δΤΑΤ5 оказывает воздействие на транскрипцию многих генов, включая, но без ограничения, УЕСР, ММР9, ММР2, сурвивин, с-Мус, ММР-1, МЕК-5, с-ΡΘδ, СОХ2, Вс1-хЬ, ММР-10, Н8Р27, 1ш|а1а, РСЕ-2.

Эти воздействия активированного δΤΑΤ на транскрипцию некоторых генов таким же образом связаны с физиологическими эффектами. Например, как сообщают Уи и 1оуе на стр. 99-101, что включено в настоящее описание в качестве ссылки, активированные δΤΑΤ повышают уровень клеточной жизнеспособности посредством положительной регуляции Вс1-хЬ, МСЬ1 и сурвивина, и отрицательной регуляции р53. Уи, Н., е! а1., Τ0 δΤΑΤδ о£ Сапсег - №ν Мо1еси1аг Τа^деΐ5 Соте о£ Αде, №Циге Кеу1е№5, 4:97-105 (2004). Активированные δΤΑΤ также способствуют пролиферации посредством положительной регуляции МУС и циклина Ό1/Ό2 и отрицательной регуляции р53. Кроме того, активированные δΤΑΤ способствуют ангиогенезу посредством положительной регуляции УЕСР и Н1Р1, и отрицательной регуляции р53. Кроме того, активированные δΤΑΤ также помогают ускользанию опухоли от иммунологического надзора посредством положительной регуляции иммуносупрессорных факторов и отрицательной регуляции провоспалительных цитокинов и хемокинов.

Помимо возможности применения для лечения человека, соединения и лекарственные формы настоящего изобретения также пригодны для применения в ветеринарии для лечения домашних животных, экзотических животных и сельскохозяйственных животных, включая млекопитающих, грызунов и им подобных. Более предпочтительными животными являются лошади, собаки и кошки.

Общие синтетические способы получения соединений

Нижеприведенные подходы могут применяться при практической реализации настоящего изобретения.

Синтез и характеристика.

Синтез (Е)-3 -(6-бромпиридин-2-ил)акрилальдегида.

- 11 020766

Раствор 6-бром-2-карбоксипиридина (3 г, 16,1 ммоль) растворяли в дихлорметане (100 мл). (Трифенилфосфоранилиден)ацетальдегид (4,9 г, 16,1 ммоль) добавляли и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Дихлорметан частично упаривали (до объема приблизительно 50 мл) и реакционную смесь наносили на хроматографическую колонку (§ШсаСе1 60). Продукты элюировали дихлорметаном. Фракции, содержащие продукт, объединяли и упаривали, получая 2,3 г белого порошка (выход 67%).

Ή ЯМР (ΟΌΟ1₃, δ) м.д.: 9,81 (д, 1Н, 1=7,6 Гц, СНО), 7,63 (дд, 1Н, 1=1=7,7 Гц, Н4), 7,51 (дд, 2Н, 1=1=7,7 Гц, Н-3,5), 7,45 (д, 1Н, 1=15,8 Гц, Аг-СН=СН-СНО), 7,12 (дд, 1Н, 1Н, 1=15,8 Гц, 1=7,6 Гц, АгСН=СН-СНО).

Общая методика.

Синтез (2Е,4Е)-5-(6-бромпиридин-2-ил)-2-циано-Ы-замещенных-2,4-диенамидов.

Готовили раствор (1) (2,1 г, 9,9 ммоль) и пиперидина (0,2 мл) в безводном этаноле. Добавляли альдегид (10,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Спустя 3 ч полученное твердое вещество фильтровали, промывали этанолом и сушили. Получили соединения, как проиллюстрировано в нижеприведенных примерах.

Пример 1. (2Е,4Е)-5-(6-бромпиридин-2-ил)-2-циано-М-[(1§)-1-фенилэтил]пента-2,4-диенамид

Выход 67% (2Е,4Е)-5-(6-бромпиридин-2-ил)-2-циано-М-((§)-1-фенилэтил)пента-2,4-диенамид.

Ή ЯМР (СПС1₃, δ) м.д.: 8,07 (д, 1Н, 1=12,1 Гц, Н-3), 7,71 (дд, 1Н, 1=12,1 Гц, 1=15,0 Гц, Н-4), 7,59 (дд, 1Н, 1=1=7,7 Гц, Н-4'), 7,47 (д, 1Н, 1=7,5 Гц, Н-3'), 7,41 (д, 1Н, 1=7,63 Гц, Н-5'), 7,39-7,29 (м, 5Н, Н ароматич.), 7,15 (д, 1Н, 1=15,0 Гц, Н-5), 6,45 (д, 1Н, 1=7,5 Гц, ΝΗ), 5,23 (дт, 1Н, 1=7,0 Гц, 1=7,5 Гц, Н-1), 1,61 (д, 1Н, 1=7,0 Гц, Ме).

Пример 2. (2Е,4Е)-5-(6-хлорпиридин-2-ил)-2-циано-М-[(1§)-1-фенилэтил]пента-2,4-диенамид

Ή ЯМР (СПС1₃, δ) м.д.: 8,07 (д, 1Н, 1=12,1 Гц, Н-3), 7,73 (дд, 1Н, 1=12,0 Гц, 1=15,0 Гц, Н-4), 7,70 (дд, 1Н, 1=1=7,81 Гц, Н-4'), 7,43-7,29 (м, 7Н, Н-3', Н-5', Н ароматич.), 7,18 (д, 1Н, 1=15,0 Гц, Н-5), 6,45 (д, 1Н, 1=7,3 Гц, ΝΗ), 5,25 (дт, 1Н, 1=7,0 Гц, 1=7,5 Гц, Н-1), 1,61 (д, 1Н, 1=7,0 Гц, Ме).

Пример 3. (2Е,4Е)-5-(6-бромпиридин-2-ил)-2-циано-М-[(1Р)-1-фенилэтил]пента-2,4-диенамид

Ή ЯМР (СПС1₃, δ) м.д.: 8,07 (д, 1Н, 1=12,1 Гц, Н-3), 7,71 (дд, 1Н, 1=12,1 Гц, 1=15,0 Гц, Н-4), 7,59 (дд, 1Н, 1=1=7,7 Гц, Н-4'), 7,47 (д, 1Н, 1=7,5 Гц, Н-3'), 7,41 (д, 1Н, 1=7,63 Гц, Н-5'), 7,39-7,29 (м, 5Н, Н ароматич.), 7,15 (д, 1Н, 1=15,0 Гц, Н-5), 6,45 (д, 1Н, 1=7,5 Гц, ΝΗ), 5,23 (дт, 1Н, 1=7,0 Гц, 1=7,5 Гц, Н-1), 1,61 (д, 1Н, 1=7,0 Гц, Ме).

Пример 4. (2Е,4Е)-Ы-бензил-5-(6-бромпиридин-2-ил)-2-цианопента-2,4-диенамид

Ή ЯМР (СПС1₃, δ) м.д.: 8,10 (д, 1Н, 1=12,1 Гц, Н-3), 7,70 (дд, 1Н, 1=12,1 Гц, 1=15,0 Гц, Н-4), 7,57 (д, 1Н, 1=7,7 Гц, Н-4'), 7,46-7,29 (м, 7Н, Н-3', Н-5', Н ароматич.), 7,16 (д, 1Н, 1=15,0 Гц, Н-5), 6,52 (ушир.с, 1Н, ΝΗ), 4,58 (д, 1Н, 1=5,8 Гц, 1).

Пример 5. (2Е,4Е)-5-(6-хлорпиридин-2-ил)-2-циано-М-[(1Р)-1-фенилэтил]пента-2,4-диенамид

Ή ЯМР (СПС1₃, δ) м.д.: 8,07 (д, 1Н, 1=12,1 Гц, Н-3), 7,73 (дд, 1Н, 1=12,0 Гц, 1=15,0 Гц, Н-4), 7,70 (дд, 1Н, 1-1=7,81 Гц, Н-4'), 7,43-7,29 (м, 7Н, Н-3', Н-5', Н ароматич.), 7,18 (д, 1Н, 1=15,0 Гц, Н-5), 6,45 (д, 1Н, 1=7,3 Гц, ΝΗ), 5,25 (дт, 1Н, 1=7,0 Гц, 1=7,5 Гц, Н-1), 1,61 (д, 1Н, 1=7,0 Гц, Ме).

Пример 6. (2Е, 4Е)-М-бензил-5-(6-хлорпиридин-2-ил)-2-цианопента-2, 4-диенамид

- 12 020766 о

¹Н ЯМР (СЭС1₃, δ) м.д.: 8,09 (д, 1Н, 1=12,1 Гц, Н-3), 7,72 (дд, 1Н, 1=12,1 Гц, 1=15,0 Гц, Н-4), 7,68 (дд, 1Н, 1=1=7,8 Гц, Н-4'), 7,40-7,28 (м, 7Н, Н-3', Н-5', Н ароматич.), 7,17 (д, 1Н, 1=15,0 Гц, Н-5), 6,45 (ушир.с, 1Н, ΝΗ), 4,58 (д, 1Н, 1=5,75 Гц, Н-1).

Пример 7. (2Е,4Е)-5-(6-бромпиридин-2-ил)-2-циано-^[(§)-циклопропил(фенил)метил]пента-2,4диенамид

¹Н ЯМР (СЭС1₃, δ) м.д.: 8,06 (д, 1Η, 1=12,1 Гц, Н-3), 7,72 (дд, 1Н, 1=12,1 Гц, 1=15,0 Гц, Н-4), 7,59 (дд, 1Н, 1=1=7,9 Гц, Н-4'), 7,47-7,29 (м, 7Н, Н-3', Н-5', Н ароматич.), 7,15 (д, 1Н, 1=15,0 Гц, Н-5), 6,68 (д, 1Н, 1=7,8 Гц, ΝΗ), 4,49 (дд, 1Н, 1=8,0 Гц, 1=8,8 Гц, Н-1), 1,33-1,24 (м, 1Н, Н-2), 0,69-0,41 (м, 4Н, 3-СН₂, 4-СН2).

Пример 8. (2Е,4Е)-5-(6-бромпиридин-2-ил)-2-циано-М-[(1§)-1-фенилпропил]пента-2,4-диенамид

Ή ЯМР (СЭС1₃, δ) м.д.: 8,03 (дд, 1Н, 1=12,1 Гц, 1=0,7 Гц, Н-3'), 7,69 (дд, 1Н, 1=12,1 Гц, 1=15,0 Гц, Н4), 7,57 (дд, 1Н, 1=7,5 Гц, 1=7,9 Гц, Н-4'), 7,45 (дд, 1Н, 1=7,9 Гц, 1=0,8 Гц, Н-3), 7,39 (дд, 1Н, 1=7,5 Гц, 1=0,8 Гц, Н-5), 7,39-7,27 (м, 5Н, Н ароматич.), 7,1 (д, 1Н, 1=15,0 Гц, Н-5), 6,43 (д, 1Н, 1=7,8 Гц, ΝΗ), 4,96 (дд, 1Н, 1=15,2 Гц, 1=7,5 Гц, Н-1'), 1,99-1,85 (м, 2Н, Н-2), 0,93 (т, 3Н, 1=7,4 Гц, Н-3).

Пример 9. (2Е,4Е)-5-(6-бромпиридин-2-ил)-2-циано-М-[(1§)-1-фенилбутил]пента-2,4-диенамид

Ή ЯМР (СЭС1₃, δ) м.д.: 8,03 (дд, 1Н, 1=12,1 Гц, 1=0,7 Гц, Н-3), 7,68 (дд, 1Н, 1=15,0 Гц, 1=12,1 Гц, Н4), 7,55 (дд, 1Н, 1=1=7,7 Гц, Н-4'), 7,45 (дд, 1Н, 1=7,9 Гц, 1=0,8 Гц, Н-3'), 7,39 (дд, 1Н, 1=7,5 Гц, 1=0,8 Гц, Н-5'), 6,66-7,28 (м, 6Н, Н-4, Н-ароматич.), 7,13 (д, 1Н, 1=14,9 Гц, Н-5), 6,42 (д, 1Н, 1=8,0 Гц, ΝΗ), 5,05 (дд, 1Н, 1=15,3, 1=7,6 Гц, Н-1), 1,91-1,82 (м, 2Н, Н-2), 1,41-1,24 (м, 2Н, Н-3), 0,95 (т, 3Н, 1=7,3 Гц, Н-4).

Антипролиферативная активность соединения примеров 1 и 7 была показана на клеточной линии рака поджелудочной железы Со1о357РО, как представлено ниже:

	Со1о357ГС
Соединение	1С50, мкМ
Пример 1	3,2
Пример 7	5,4

Активность соединений примеров 1, 2, 4 и 9 как ингибиторов 8ТАТ была продемонстрирована, по меньшей мере, посредством одного из нижеприведенных биологических испытаний. Полученные данные по соответствующей активности представлены на фиг. 1-4. Для других соединений, описанных выше, для которых еще не были получены результаты, также прогнозируется наличие активности в этих биологических испытаниях.

Испытания биологической активности с помощью метода с МТТ для определения клеточной жизнеспособности и чувствительности к дозе лекарственного средства.

Многообразные типы клеток высевали с плотностью 50000 клеток/100 мкл в 96-луночные планшеты и культивировали в течение 24-48 ч в среде ΌΜΕΜ до достижения конфлюентности. При конфлюентности 25 мкл свежей среды, содержащей \УР 1220 в различных концентрациях (0-100 мкМ), добавляли в лунки и инкубировали в течение 72 ч при 37°С. Комплекс убирали, 100 мкл свежей среды добавляли и клетки инкубировали в течение ночи. Среду убирали и свежую среду (100 мкл) добавляли в каждую лунку совместно с (20 мкл) МТТ раствора (5 мг/мл в РВ§) перед инкубированием клеток в течение последующих 4 ч при 37°С. Продукт реакции растворяли с использованием додецилсульфата натрия (100 мкл, 10% мас./об.) в 0,01н. Η0 в течение ночи перед определением количества продукта с помощью мультипланшетного анализатора при 590 нм в сравнении с контрольными клетками. Эксперимент проводили трижды (п=3).

- 13 020766

Испытания биологической активности с помощью метода Вестерн-блотинга для определения содержания белков и фосфорилированных белков.

Используя антитела к фосфорилированному по тирозину δΤΑΤ3 (Υ705), фосфорилированной по тирозину 1ак2 (Υ1 007/1008), целого 8ΤΆΤ3, целой 1ак2, Вс1-хЬ, актину (Се11 δίβηαΐίηβ ТесЬпо1о§у, Иапуег8, МА) и сурвивину (К&И δу8ΐет8, МтпеароШ. ΜΝ), Вестерн-блотинг осуществляли, применяя нижеприведенные методы. В общем, (1) образцы готовили из клеток, которые были гомогенизированы в буферном растворе, защищающем белок от разложения; (2) образцы затем разделяли с использованием δΌδ-ΡΑΟΕ (10-15 мкг белка/лунка) и затем переносили на мембрану для детектирования и (3) мембрану инкубировали с общим белком (молочные белки) для связывания с любыми оставшимися участками на мембране. Первичные антитела затем добавляли к раствору, в котором существует возможность связывания с их специфическим белком; (4) вторичные конъюгаты антитело-фермент, которые распознают первичное антитело, затем добавляли для обнаружения расположения мест связывания первичного антитела.

Из вышеприведенного описания средний специалист в данной области техники может легко установить важнейшие характерные особенности этого изобретения и, не выходя за рамки сущности и объема его, может осуществить различные изменения и модификации изобретения для адаптации его к различным областям использования и к различным условиям.

Claims (12)

1. Соединение структурной формулы I или его фармацевтически приемлемая соль или сольват, в котором Х₁ представляют собой галоген; Х₅ и Х₆ представляют собой, каждый независимо, водород, (С1_-7)алкил или (С_3-6)циклоалкил, Ζ представляет собой ΝΗ.

2. Способ ингибирования активации δΤΑΤ3, включающий контактирование раковой клетки с соединением по п.1.

3. Способ лечения δΤΑΤ3-опосредованного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по п.1 нуждающемуся в этом пациенту.

4. Способ ингибирования активации δΤΑΤ5, включающий контактирование раковой клетки с соединением по п.1.

5. Способ лечения δΤΑΤ5-опосредованного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по п.1 нуждающемуся в этом пациенту.

6. Соединение по п.1, представляющее собой соединение формулы или фармацевтически приемлемую соль этих соединений.

7. Соединение по п.1, представляющее собой или его фармацевтически приемлемую соль.

14 020766

8. Соединение по п.1, представляющее собой или его фармацевтически приемлемую соль.

9. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

10. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.6 и фармацевтически приемлемый носитель.

11. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.7 и фармацевтически приемлемый носитель.

12. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.8 и фармацевтически приемлемый носитель.