EA013877B1 - Терапевтические композиции, содержащие гиалуроновую кислоту и терапевтические антитела, а также способы лечения - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение в основном относится к протоколам лечения и профилактическим протоколам для клеточных заболеваний или нарушений, таких как заболевания и нарушения, ассоциированные с аномальной клеточной пролиферацией. Более конкретно, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим терапевтические антитела и гиалуроновую кислоту, и их применению при лечении или профилактике клеточных заболеваний и нарушений.

Description

Настоящее изобретение в основном относится к протоколам лечения и профилактическим протоколам для клеточных заболеваний или нарушений, таких как заболевания и нарушения, ассоциированные с аномальной клеточной пролиферацией. Более конкретно, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим терапевтические антитела и гиалуроновую кислоту (гиалуронан), и их применению при лечении или профилактике клеточных заболеваний и нарушений.

Предшествующий уровень техники

Все научные цитаты, патенты, патентные заявки и технические описания производителей, на которые делаются ссылки ниже в настоящем документе, включены в изобретение в качестве ссылки в полном объеме.

Злокачественная опухоль представляет собой гиперпролиферативное клеточное заболевание, которое происходит, когда клеточная популяция делится в отсутствие нормального генетического или биохимического контроля клеточного цикла. Только в Соединенных Штатах от злокачественных опухолей между 1990-1994 гг. скончались 2604650 человек, с большим количеством мужчин (53%), чем женщин (47%). Наиболее многочисленные случаи смерти в результате злокачественной опухоли были результатом рака легкого («30%), толстой и прямой кишок («11%). молочной железы («8%) и простаты («6.5%). Среди женщин наиболее часто встречающимися злокачественными опухолями были рак молочной железы (31%), легких (12%), толстой и прямой кишок (12%), матки (6%) и яичников (4%).

Исторически лечение злокачественных опухолей, как правило, требует терапевтического протокола, включающего одно или несколько из хирургической операции, радиационного излучения и химиотерапии. Недавно разработаны терапевтические антитела, направленные на злокачественные мишени. Эти антитела используют в качестве парентеральных цитотоксинов, и они проявляют зависимую от дозы эффективность и токсичность. Системная химиотерапия представляет собой основное лечение, доступное для локализованного или диссеминированного злокачественного заболевания. Химиотерапия (лечебная или паллиативная) требует нескольких циклов лечения, где химиотерапевтические средства проявляют дозозависимый эффект, а гибель клеток коррелирует с контактом с лекарственным средством.

Большинство терапевтических подходов к разработке избирательных для опухолей способов лечения сфокусированы на морфологических и функциональных различиях между злокачественными и здоровыми тканями. Лекарственные средства, разработанные для действия на уровне морфологических различий, основаны на быстрой пролиферации злокачественных клеток, которая соответствует необходимости эффективной доставки кислорода и питательных веществ, часто удовлетворяющейся процессом неоваскуляризации. Образующаяся в результате сосудистая сеть опухоли является дефектной, что позволяет проникновение во внесосудистое пространство больших молекул, а вследствие плохого внутриопухолевого лимфатического дренирования в пределах участка озлокачествления может осуществляться предпочтительное накопление больших соединений.

Функциональное требование для опухолевых клеток быть метаболически эффективными и подвижными приводит к сверхэкспрессии множества опухолеспецифических рецепторов, которые можно использовать в качестве селективной мишени для активной доставки противораковых средств посредством специфических лигандов для этих эпитопов. Один из механизмов преодоления плохой специфичности современных средств лечения злокачественных опухолей представлял собой использование антител, направленных на опухолеспецифичные рецепторы или молекулы, а кроме того, терапевтические антитела обладают потенциалом для того, чтобы быть эффективными средствами в лечении и профилактике многих заболеваний.

Большим потенциалом обладают гуманизированные и деиммунизированные антитела, хотя они, как правило, требуют доставки в высокой дозе и дороги в производстве. Необходимым условием для эффективной направленной доставки антител является то, что антитела должны быть способны проникать в ткани. Кроме того, предпочтительно владеть способом локального контролируемого высвобождения, с помощью которого антитела доставляются к участку заболевания. Однако требования к составу часто возникают при связывании антител с доставляющими носителями. Проникновение антитела является особой проблемой в отношении ассоциированных с опухолями терапевтических антител, а исследования также показали, что высокоаффинные фрагменты могут оставаться на периферии опухолей, тогда как средне- и низкоаффинные фрагменты, по-видимому, достигают лучшего проникновения. В таких случаях результат может иметь неспецифическую направленную доставку антител.

Поскольку разработка моноклональных антител перешла от мышиных антител на химерные, гуманизированные и деиммунизированные антитела, наблюдалось снижение ответа на антитела, однако в клинических условиях существуют потенциальные опасения относительно повторного или длительного лечения. Другим возможным побочным эффектом лечения антителами является высвобождение цитокинов, которое опосредованно посредством вовлечения иммунных эффекторных клеток. Таким образом, существует необходимость в разработке составов с антителами, которые могут улучшить эффективность или снизить побочные эффекты антител или фрагментов антител.

- 1 013877

Сущность изобретения

На всем протяжении описания, если контекст не требует иного, слово содержать или варианты, такие как содержащий или содержит, будет пониматься, как обозначения включения указанного элемента или числа или группы элементов или чисел, но не как исключение любого другого элемента или числа или группы элементов или чисел.

Настоящее изобретение частично основано на применении гиалуроновой кислоты (НА) и ее производных и синтезированных и химически модифицированных форм и солей в сочетании с терапевтическими антителами или их фрагментами, аналогами, производными, частями, химерными или деиммунизированными формами для содействия эффективной доставке антител к пораженному участку, приводящей к минимально токсичной, но эффективной системе лечения пролиферативного клеточного заболевания.

Таким образом, настоящее изобретение относится к композициям антител и терапевтическим и профилактическим протоколам для клеточных заболеваний и нарушений.

Таким образом, один из аспектов настоящего изобретения относится к композиции, содержащей НА, или ее производное, или синтезированную или химически модифицированную форму, или соль, и терапевтическое антитело или его фрагмент, аналог, производное, часть, химерную или деиммунизированную форму, и, необязательно, один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей и/или наполнителей.

Так как НА вводят в высоких концентрациях, происходит постоянная интернализация НА, которая означает, что любое антитело, которое находится в равновесии внутри пространственной области НА, совместно интернализуется, приводя к концентрированному внутриклеточному высвобождению лекарственного средства или фармацевтической композиции. Кроме того, связывание НА с неинтернализующимися рецепторами может способствовать образованию гликокаликса НА/терапевтическое антитело, который может обеспечить длительную задержку антитела на клеточной поверхности, приводящую к повышенной доступности к эпитопу антитела.

В соответствии с настоящим изобретением сочетание НА и антитела способствует улучшенной эффективности антитела по сравнению с применением антитела в отсутствие НА. Улучшенная эффективность включает увеличенную эффективность при ингибировании пролиферации злокачественных клеток или оказании цитотоксического эффекта на злокачественные клетки, приводящих к меньшей массе опухоли. Полагают, что композиции антител по настоящему изобретению пригодны при лечении или профилактике клеточных заболеваний.

Настоящее изобретение частично основано на определении того, что НА и ее производные, или синтезированные или химически модифицированные формы, или соли не только ингибируют непосредственно клетки, но также позволяют безопасное введение выбранных антител в стандартных, меньших и больших дозах для лечения субъектов, включая человека и животных. Ιη νίνο введение гиалуроновой кислоты в сочетании с антителами также усиливает терапевтический эффект этих средств против клеток, которые являются невосприимчивыми, таким образом предотвращая последующее возникновение множественной лекарственной устойчивости. Вследствие способности НА обеспечивать альтернативный маршрут клеточной интернализации, т.е. через лизосомальную систему обработки, сочетание НА и терапевтических антител повышает чувствительность клеток, которые в ином случае были бы устойчивы к лечению посредством присущих или приобретенных механизмов устойчивости.

Антитела, предлагаемые по настоящему изобретению, включают любые антитела, которые специфичны для типов клеток-мишеней, ассоциированных с клеточным заболеванием, или потенциально могут быть ассоциированными с клеточным заболеванием. Примеры таких антител включают АВХ-ЕСЕ; алемтузумаб; аполизумаб; бевацизумаб; кантузумаб; цетуксимаб; еС250; стс-544; даклизумаб; эпратузумаб; эрлотиниб; гемтузумаб озогамицин; 11А20; НСВЕ-11; Нип901; ибритумомаб тиуксетан; ЮЕС 159; инфликсимаб; люмиликсимаб; МАТ 3Е8; МАТ Ь43,13; МАТ ВС8; МАТ СС49-дельтаСН2; МАТ 0114,18; МАТ СР-675206; МАТ НеИ-1; МАТ Нц38193; МАТ НиС1-М195; МАТ ЬиНМЕО1; МАТ 1591; МАТ МПХ-СТЬА4; МАТ М1К-бета-1; МЭХ-010; МЕЭ1-507; МЕЫ2704; пертузумаб; КАУ12; ритуксимаб; 8ΟΝ-30; 8ΟΝ-40; тозитумомаб; Трастузумаб (герцептин); ТКМ-1 (МАТ ТКА1Ь КТ) и иттрийибритумомаб.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции антитела, содержащей НА и цетуксимаб.

Другой конкретный вариант осуществления относится к композиции антитела, содержащей НА и бевацизумаб.

Еще один конкретный вариант осуществления относится к композиции антитела, содержащей НА и герцептин.

Еще один аспект относится к композиции, содержащей НА или ее производное либо синтезированную или химически модифицированную форму и антитело, выбранное из списка в табл. 1.

Эти композиции необязательно дополнительно содержат один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей и/или разбавителей.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где гиалу

- 2 013877 роновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс приблизительно от 360 Дальтон (Да) до 20000 кДа.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс приблизительно от 360 Да до 2000 кДа.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс приблизительно от 20 до 1500 кДа.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне модальных молекулярных масс приблизительно 860 кДа.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма и антитело не связаны ковалентно.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где диапазон рН композиции составляет от рН 2,5 до 10,5.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где диапазон рН композиции составляет от рН 5,0 до 8,5.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где антитело, его фрагмент, производное, часть, химерная или полностью деиммунизированная форма предназначены для применения в лечении или профилактике клеточного пролиферативного заболевания.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где антитело, его фрагмент, производное или часть выбраны из группы антител, состоящей из АВХ-ЕСЕ; алемтузумаба; аполизумаба; бевацизумаба; кантузумаба; цетуксимаба; сС250; стс-544; даклизумаба; эпратузумаба; эрлотиниба; гемтузумаба озогамицина; 11А20; НСВЕ-11; Нип901; ибритумомаба тиуксетана; ШЕС 159; инфликсимаба; люмиликсимаба; МАТ 3Е8; МАТ Ъ43,13; МАТ ВС8; МАТ СС49-дельтаСН2; МАТ СЫ4,18; МАТ СР-675206; МАТ НеЕ1-1; МАТ Нц38193; МАТ Ни61-М195; МАТ ЬиНМЕО1; МАТ 1591; МАТ МОХ-С1ТА4; МАТ М1К-бета-1; МОХ-010; МЕП1-507; М1.Х2704; пертузумаба; КАУ12; ритуксимаба; 8ΟΝ-30; 8ΟΝ-40; тозитумомаба; трастузумаба (герцептина); ТКМ-1 (МАТ ТКА1Ь КГ) и иттрийибритумомаба.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где клеточное пролиферативное заболевание представляет собой любое из злокачественной опухоли, новообразования или любого заболевания, вовлекающего воспаление ткани или высвобождение факторов воспаления.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где клеточное пролиферативное заболевание приводит к одному или нескольким из опухоли, новообразования, бесконтрольной гиперпролиферации или метастазированию.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где клеточное пролиферативное заболевание присутствует в одном или нескольких органах или тканях, включая молочную железу, легкое, предстательную железу, почку, кожу, нервную ткань, яичники, матку, печень, поджелудочную железу, эпителиальные клетки, ткань желудка, кишечник, экзокринную, эндокринную, лимфатическую систему, гематопоэтическую систему, ткани головы и ткани шеи.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где клеточное пролиферативное заболевание возникает у млекопитающего.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где антитело представляет собой цетуксимаб.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где антитело представляет собой бевацизумаб.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где антитело представляет собой герцептин.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где антитело является гуманизированным.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции для применения в лечении или профилактике колоректального рака.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где млекопитающее выбрано из группы, состоящей из примата, коровы, собаки, лошади, кошки и свиньи.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где примат представляет собой человека.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где композиция находится в пероральной, топической или парентеральной форме.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где пероральная форма представлена в виде таблетки, пилюли, капсулы, пастилки, лепешки, порошка, гранулы,

- 3 013877 эмульсии, жидкой, водной или масляной суспензии, лекарственного средства, сиропа, эликсира или спрея.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где топическую форму вводят в форме крема, лосьона, эмульсии, геля, пленки, спрея, пасты или мази.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где парентеральную форму вводят посредством способов подкожной инъекции, аэрозоля, внутривенной, внутримышечной, интратекальной, внутричерепной, интрастернальной инъекции или инфузии в форме жидкости, мази, суппозитория или пессария.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции совместно со вторым средством или композицией, применяемых в лечении клеточного пролиферативного заболевания, где второе средство представляет собой химиотерапевтическое средство или терапевтическое антитело.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где второе средство или вторая композиция представляет собой иринотекан, или доксорубицин, или фторурацил, или лейковорин, или оксалиплатин, или метотрексат, или гемцитабин.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где биодоступность антитела, его фрагмента, производного или части увеличена.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где НА вводят до или после введения средства.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где НА вводят до введения средства.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где НА вводят после введения средства.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где НА вводят перорально.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где НА вводят в количестве приблизительно от 0,01 до приблизительно 40 мг/кг массы тела.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, где НА вводят в количестве приблизительно от 0,1 до приблизительно 27 мг/кг массы тела.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции совместно со второй композицией, применяемой в лечении клеточного пролиферативного заболевания, где вторая композиция содержит химиотерапевтическое средство или терапевтическое антитело.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции совместно со второй композицией, применяемой в лечении клеточного пролиферативного заболевания, где вторая композиция содержит НА, или ее производное, или синтезированную или химически модифицированную форму, или соль и химиотерапевтическое средство или терапевтическое антитело.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, содержащей цетуксимаб и НА, или ее производное, или синтезированную или химически модифицированную форму, или соль, совместно со вторым компонентом, иринотеканом.

В связанном аспекте настоящее изобретение также относится к способам лечения или профилактики клеточных заболеваний у субъекта, где способ включает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтического антитела или его фрагмента, производного, химерной или деиммунизированной формы и НА или ее аналога, производного, или синтезированной или химически модифицированной формы, или соли в течение периода времени и в условиях, достаточных для облегчения симптомов клеточного заболевания.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики у субъекта клеточного заболевания, где указанный способ включает введение указанному субъекту композиции антитела, содержащей НА и цетуксимаб.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики клеточного заболевания у субъекта, где указанный способ включает введение указанному субъекту композиции антитела, содержащей НА и бевацизумаб.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики клеточного заболевания у субъекта, где указанный способ включает введение указанному субъекту композиции антитела, содержащей НА и герцептин.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу лечения или профилактики клеточных заболеваний у субъекта, где способ включает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтического антитела или его фрагмента, аналога, производного, части, химерной или полностью деиммунизированной формы и НА или ее аналога, производного, или синтезированной или химически модифицированной формы, или соли в течение периода времени и в условиях, достаточных для облегчения симптомов клеточного заболевания.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма нахо- 4 013877 дится в диапазоне молекулярных масс от 360 Да до 20000 кДа.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс приблизительно от 360 Да до 2000 кДа.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс приблизительно от 20 до 1500 кДа.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне модальных молекулярных масс приблизительно 860 кДа.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма и антитело не связаны ковалентно.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где диапазон рН композиции составляет от рН 2,5 и 10,5.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где антитело, его фрагмент, производное или часть выбраны из группы антител, состоящей из АВХ-ЕСЕ; алемтузумаба; аполизумаба; бевацизумаба; кантузумаба; цетуксимаба; еС250; стс-544; даклизумаба; эпратузумаба; эрлотиниба; гемтузумаба озогамицина; 11А20; НСВЕ-11; Нип901; ибритумомаба тиуксетана; ЮЕС 159; инфликсимаба; люмиликсимаба; тЛЬ 3Е8; тЛЬ Ь43,13; тЛЬ ВС8; тЛЬ СС49-дельтаСН2; тЛЬ СМ4,18; тАЬ СР-675206; тАЬ НеИ-1; тАЬ Нц38193; тАЬ НиС1-М195; тАЬ ЬиНМЕО1; тАЬ 1591; тАЬ ΜΌΧСТЬА4; тАЬ М1К-бета-1; ΜΌΧ-010; ΜΕΌΙ-507; ΜΕΝ2704; пертузумаба; К.АУ12; ритуксимаба; 8ΟΝ-30; 8ΟΝ-40; тозитумомаба; трастузумаба (герцептина); ТКМ-1 (тАЬ ТВА1Ь В1) и иттрий-ибритумомаба.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где клеточное пролиферативное заболевание представляет собой любое из злокачественной опухоли, новообразования или любого заболевания, вовлекающее воспаление ткани или высвобождение факторов воспаления.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где клеточное пролиферативное заболевание приводит к одному или нескольким из опухоли, новообразования, бесконтрольной гиперпролиферации или метастазирования.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где клеточное пролиферативное заболевание присутствует в одном или нескольких органах или тканях, включая молочную железу, легкое, предстательную железу, почку, кожу, нервную ткань, яичники, матку, печень, поджелудочную железу, эпителиальные клетки, ткань желудка, кишечник, экзокринную, эндокринную, лимфатическую систему, гематопоэтическую систему, ткани головы и ткани шеи.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где клеточное пролиферативное заболевание возникает у млекопитающего.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где антитело представляет собой цетуксимаб.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где антитело представляет собой бевацизумаб.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где антитело представляет собой герцептин.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу лечения или профилактики колоректального рака.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где млекопитающее выбрано из группы, состоящей из примата, коровы, собаки, лошади, кошки и свиньи.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где примат представляет собой человека.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где композицию вводят перорально, топически или парентерально.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где пероральная форма представлена в виде таблетки, пилюли, капсулы, пастилки, лепешки, порошка, гранулы, эмульсии, жидкой, водной или масляной суспензии, лекарственного средства, сиропа, эликсира или спрея.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где топическую форму вводят в форме крема, лосьона, эмульсии, геля, пленки, спрея, пасты или мази.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где парентеральное введение проводят посредством способов подкожной инъекции, аэрозоля, внутривенной, внутримышечной, интратекальной, внутричерепной, интрастернальной инъекции или инфузии в форме жидкости, мази, суппозитория или пессария.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где гиалуроновую кислоту, или ее аналог, или производное, или синтезированную или модифицированную форму вводят одновременно, последовательно, до, в сочетании, в течение или после введения антитела, его фраг

- 5 013877 мента, производного или части.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где вторая композиция содержит химиотерапевтическое средство или терапевтическое антитело.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где вторая композиция содержит НА, или ее производное, или синтезированную или химически модифицированную форму, или соль и химиотерапевтическое средство или терапевтическое антитело.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где второе средство или композиция содержит НА, составленную с иринотеканом, или доксорубицином, или фторурацилом, или лейковорином, или оксалиплатином, или метотрексатом, или гемцитабином.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где второе средство или композиция содержит НА, составленную с любым из антител, перечисленных в табл. 1.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где второе средство или композиция содержит иринотекан, или доксорубицин, или фторурацил, или лейковорин, или оксалиплатин, или метотрексат, или гемцитабин.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где второе средство или композиция содержит любое из антител в группе, состоящей из АВХ-ЕСЕ; алемтузумаба; аполизумаба; бевацизумаба; кантузумаба; цетуксимаба; сС250; стс-544; даклизумаба; эпратузумаба; эрлотиниба; гемтузумаба озогамицина; 11Л20; НСВЕ-11; Нип901; ибритумомаба тиуксетана; ГОЕС 159; инфликсимаба; люмиликсимаба; тАЬ 3Р8; тАЬ Ь43,13; тАЬ ВС8; тАЬ СС49-дельтаСН2; тАЬ 0114,18; тАЬ СР-675206; тАЬ НеЕ1-1; тАЬ Нц38193; тАЬ Ни61-М195; тАЬ ЬиНМЕО1; тАЬ 1591; тАЬ ΜΌΧСТЬА4; тАЬ М1К-бета-1; ΜΌΧ-010; ΜΕΌΙ-507; ΜΕΝ2704; пертузумаба; КАУ12; ритуксимаба; 86Ν-30; 86Ν-40; тозитумомаба; трастузумаба (герцептина); ТКМ-1 (тАЬ ТКА1Ь К1) и иттрий-ибритумомаба.

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где второе средство или композиция включает схему лечения ЕОЬЕОХ (фторурацил, лейковорин и оксалиплатин), ЕОЬЕГК! (включающую иринотекан, лейковорин и фторурацил) и 1ЕЬ (включающую иринотекан, фторурацил и лейковорин).

Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу, где биодоступность антитела, его фрагмента, производного или части увеличена.

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению терапевтического антитела или его фрагмента, производного, части, химерной или полностью деиммунизированной формы, в сочетании с НА, или ее производными, или синтезированными или химически модифицированными формами, или солями в производстве лекарственного средства для лечения или профилактики клеточного заболевания.

В частности, композиции антител по настоящему изобретению можно использовать в лечении или профилактике рака толстого кишечника.

Кроме того, композиции по настоящему изобретению могут дополнительно содержать одно или несколько дополнительных терапевтических средств, таких как противораковое средство, противовирусное средство, противобактериальное средство, противогрибковое средство или любое другое средство, которое дополнительно способствует лечению или профилактике клеточного заболевания или нарушения.

В дополнительном варианте осуществления композицию антитела по настоящему изобретению вводят как часть комбинированного лечения.

Еще один конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, содержащей гиалуроновую кислоту и цетуксимаб, вводимой в сочетании со второй композицией, включающей гиалуроновую кислоту и второе антитело или химиотерапевтическое средство, или схему лечения.

Еще один конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, содержащей гиалуроновую кислоту и бевацизумаб, вводимой в сочетании со второй композицией, включающей гиалуроновую кислоту и второе антитело или химиотерапевтическое средство, или схему лечения.

Еще один конкретный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, содержащей гиалуроновую кислоту и герцептин, вводимой в сочетании со второй композицией, включающей гиалуроновую кислоту и второе антитело или химиотерапевтическое средство, или схему лечения.

Кроме того, композиции могут дополнительно содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей и/или разбавителей.

Настоящее изобретение дополнительно относится к системам доставки композиций по изобретению. В одном из вариантов осуществления НА и антитело содержат раздельно и смешивают непосредственно перед введением. В данном варианте осуществления НА и антитело можно вводить посредством однотельного проникающего в ткани вводящего устройства или посредством многотельного проникающего в ткани вводящего устройства, в качестве неограничивающих примеров, такого как шприцы и иглы. Таким образом, частью настоящего изобретения является одновременное или последовательное введение НА и антитела, в любом порядке.

Настоящее изобретение дополнительно относится к применению терапевтического антитела или

- 6 013877 его фрагмента, производного, химерной или деиммунизированной формы, в сочетании с НА, или ее производными, или синтезированными или химически модифицированными формами, или солями в производстве лекарственного средства для лечения или профилактики клеточного заболевания.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1А и 1В представляют собой графическое представление, иллюстрирующее процентное изменение объема опухоли в течение лечения мышей, несущих ксенотрансплантаты рака толстого кишечника человека, где мышей лечат гиалуроновой кислотой, составленной с цетуксимабом (НуЕКВ) или цетуксимабом (ЕКВ) в качестве единственного средства. На фиг. 1А показана противоопухолевая активность монотерапии НуЕКВ (150/0,25) и ЕКВ (0,25) у голых мышей, несущих ксенотрансплантаты толстой кишки человека Ь1М1215. На фиг. 1В показан опухолевый ответ на ЕКВ (0,5) и НуЕКВ (150/0,5) в течение лечения (сутки 32). Точки на графике, обозначенные а, означают, что различие между подвергаемыми обработке группами статистически значимо (р=<0,05, 1-тест).

Фиг. 2 представляет собой графическое представление % изменения общей масса тела мышей, несущих ксенотрансплантаты рака толстого кишечника человека, где мышам в течение лечения вводят гиалуроновую кислоту, составленную с цетуксимабом (НуЕКВ) (150/0,5) или ЕКВ (0,5), сутки 32. Точки на графике, обозначенные а, означают, что различие между подвергаемыми обработке группами статистически значимо (р=<0,05, 1-тест).

Фиг. 3 представляет собой графическое представление % выживания мышей, несущих ксенотрансплантаты рака толстого кишечника человека, где мышам вводят гиалуроновую кислоту, составленную с цетуксимабом (НуЕКВ) (150/0,5) или ЕКВ (0,5). Конечной точки эксперимента достигали на сутки 120 после начала лечения, где % выживания выражали как сутки гибели мыши, деленные на 120, х100. Данные выживания можно рассматривать в качестве замещающего индикатора увеличенного терапевтического индекса.

Фиг. 4А и 4В представляют собой графическое представление мышей, получающих комбинированное лечение, НА, составленной с цетуксимабом (НуЕКВ), с НА, составленной с иринотеканом (НуСАМР). На фиг. 4А показано лечение до суток 32 (сутки последней инъекции) после начала лечения. На фиг. 4В показан тот же эксперимент до конечной точки эксперимента, сутки 300 после начала лечения. Примечание: области, где различие между группами является значимым (р=<0,05, 1-тест), обозначены а.

Фиг. 5 представляет собой графическое представление % изменения общей массы тела при комбинированном лечении, НА, составленной с цетуксимабом (НуЕКВ), с НА, составленной с иринотеканом (НуСАМР), до конечной точки эксперимента, сутки 300 после начала лечения.

Фиг. 6 представляет собой графическое представление % выживания мышей при комбинированном лечении НА, составленной с цетуксимабом (НуЕКВ), с НА, составленной с иринотеканом (НуСАМР), до конечной точки эксперимента, сутки 300 после начала лечения.

Фиг. 7 представляет собой графическое представление, иллюстрирующее процент изменения объема опухоли в течение лечения мышей до окончания лечения (сутки 32) после начала лечения иринотеканом/5-фторурацилом/лейковорином (1ЕЬ+физиологическнй раствор), 1ЕЬ+бевацизумаб (ВЕУ) и 1ЕЬ+НуВЕУ (НА, составленная с бевацизумабом). а означает, что различие между ответом на 1ЕЬ+ВЕУ и 1ЕЬ+НуВЕУ является значимым (р=<0,05, 1-тест).

Фиг. 8 представляет собой графическое представление % изменения общей массы тела для I после начала лечения иринотеканом/5-фторурацилом/лейковорином (IΕ^+физиологнческнй раствор), ГЕЬ+бевацизумаб (ВЕУ) и 1ЕЬ+НуВЕУ (НА, составленная с бевацизумабом). Различие между группой 1ЕЬ+физиологический раствор при сравнении с 1ЕЬ+ВЕУ и 1ЕЬ+НуВЕУ значимо от 25 до 134 суток. Хотя за тот же период наблюдалась тенденция, что увеличение массы у мышей, получающих 1ЕЬ+НуВЕУ, по сравнению с мышами, получающими ГЕЬ+ВЕУ, лучше, эти различия были не значимыми.

Подробное описание изобретения

На всем протяжении данного описания и следующей ниже формулы изобретения, если контекст не требует иного, слово содержать или варианты, такие как содержащий или содержит, будет пониматься, как обозначения включения указанного числа или стадии или группы чисел или стадий, но не как исключение любого числа или стадии или группы чисел или стадий.

Любые научные цитаты, патенты, патентные заявки и технические описания производителей, на которые производится ссылка в данном документе, включены в настоящее изобретение в качестве ссылки в полном объеме.

Ссылка в этом описании на любую предшествующую технологию не является и не должна рассматриваться как подтверждение или любая форма указания на то, что предшествующая технология формирует часть общего известного уровня техники в любой стране.

Если не указано иначе, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено конкретными компонентами композиции, способами производства, биологическими материалами или реагентами, схемами приема и т. п., которые могут варьировать. Также следует понимать, что используемая в данном документе терминология предназначена только для цели описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения.

- 7 013877

Как применяют в настоящем описании, единственные формы включают множественные формы, если контекст явно не диктует обратного. Таким образом, например, указание на композицию включает одну композицию, а также две или более композиций; указание на средство или реагент включает одно средство или один реагент, а также два или более средства или реагента; указание на злокачественную клетку включает одну злокачественную клетку или группу или ткань злокачественных клеток и так далее.

Термины соединение, средство, реагент, фармакологически активное средство, медикамент, терапевтическое средство, активное средство и лекарственное средство используют в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения антитела или другой взаимодействующей молекулы, которая находится или составлена с НА или ее химически синтезированными производными и которая пригодна при лечении или профилактике клеточных заболеваний и нарушений. Термины также включают фармацевтически приемлемые и фармакологически активные ингредиенты этих активных средств, конкретно указанных в настоящем документе. Когда используют термины средство, реагент, соединение, фармакологически активное средство, медикамент, терапевтическое средство, активное средство и лекарственное средство, тогда следует понимать, что они включают само активное средство, а также фармацевтически приемлемые, фармакологически активные соли, химерные и рекомбинантные формы антител или НА.

Указание на средство, химическое средство, соединение, фармакологически активное средство, медикамент, терапевтическое средство, активное средство и лекарственное средство включает комбинацию двух или более активных средств. Комбинация также включает многокомпонентные средства, такие как двухкомпонентная композиция, где средства предоставлены отдельно и их дают или дозируют отдельно или смешивают вместе до дозирования. Например, многокомпонентная фармацевтическая упаковка может содержать два или более отдельно хранимых средств. Таким образом, данный аспект настоящего изобретения относится к комбинированному лечению. Комбинированное лечение включает совместное введение антитела и НА или антитела, НА и другого средства.

Как применяют в настоящем документе, термины эффективное количество и терапевтически эффективное количество средства означает достаточное количество средства для обеспечения желательного терапевтического или физиологического или эффекта, или исхода. Такой эффект или исход включает уменьшение или снижение интенсивности симптомов клеточного заболевания. Иногда, наряду с желательным терапевтическим эффектом, проявляются нежелательные эффекты, например побочные эффекты, таким образом, практикующий специалист при определении того, каким является соответствующее эффективное количество, сравнивает потенциальные выгоды с потенциальными рисками. Точное необходимое количество будет изменяться от субъекта к субъекту в зависимости от вида, возраста и общего состояния субъекта, способа введения и т.п. Таким образом, указать точное эффективное количество может оказаться невозможным. Однако специалист в данной области, используя только обычное экспериментирование, может определить соответствующее эффективное количество в каждом конкретном случае. Как правило, средство или средства назначают в количестве и в условиях, подходящих для снижения воспаления и/или пролиферации клеток.

Композиции и способы по настоящему изобретению пригодны для увеличения чувствительности клеток к антителам, таким как антитела, применяемые в лечении клеточного пролиферативного заболевания, примеры которых приведены в табл. 1. В частности, композиции и способы настоящего изобретения пригодны для улучшения чувствительности клеток, ассоциированных с клеточными пролиферативными нарушениями, такими как злокачественная опухоль. Увеличивая эффективность без сопутствующей токсичности по отношению к незлокачественным клеткам, настоящее изобретение относится к композициям и способам, в частности, пригодным для лечения клеточных заболеваний, таких как злокачественная опухоль, и предотвращения или снижения шансов рецидива и смерти в результате цитотоксичности.

Как применяют в настоящем документе, термин субъект относится к любому человеку или животному с заболеванием или состоянием, которое требует лечения антителом, где антитело обладает сниженной по сравнению с желательной эффективностью. Как правило, субъект страдает от клеточного пролиферативного нарушения, например злокачественной опухоли, роста неопластических клеток и т. д. Указание на злокачественную опухоль включает опухоль или саркому, а также гематологическую злокачественную опухоль, такую как лейкоз. Субъекты для целей настоящего изобретения включают в качестве неограничивающих примеров млекопитающих (например, приматы, включая людей, корову, собаку, лошадь, кошку и свинью), а предпочтительно людей.

Под клеточным пролиферативным нарушением подразумевают, что клетка или клетки демонстрируют аномальный рост, как правило аберрантный рост, который может приводить к неоплазии или злокачественной опухоли.

Клеточные пролиферативные нарушения включают, например, неопластические заболевания, злокачественные опухоли (например, злокачественные опухоли молочной железы, легкого, предстательной железы, почек, кожи, нервной системы, яичников, матки, печени, поджелудочной железы, эпителиальные, желудочные, кишечные, экзокринные, эндокринные злокачественные опухоли, злокачественные

- 8 013877 опухоли лимфатической, гематопоэтической системы или ткани головы и шеи), фиброзные нарушения и т.п.

Как правило, неопластические заболевания представляют собой состояния с аномальной пролиферацией клеток, приводящей к разрастанию ткани, называемому неоплазией или злокачественной опухолью. Неоплазии обладают варьирующими степенями аномальности по структуре и поведению. Некоторые неоплазии являются доброкачественными, тогда как другие являются злокачественными или раковыми. Эффективное лечение неопластического заболевания представляет собой ценный вклад в поиск профилактических или лечебных способов для злокачественной опухоли.

Соединения и способы по настоящему изобретению также предлагаются для применения для лечения других заболеваний, связанных с лечением антителами или химиотерапией, таких как нейродегенеративные нарушения, гормональный дисбаланс и т.п. Таким образом, настоящее изобретение относится к способам улучшения симптомов нарушения, ассоциированного с клеточной пролиферацией, неоплазией, злокачественными опухолями и т.п., включая лечение субъекта с данным нарушением, в области нарушения, НА и антителом в количестве, достаточном для ингибирования или снижения клеточной пролиферации или нарушения.

Как применяют в настоящем документе, злокачественная опухоль относится к группе заболеваний и нарушений, которые характеризуются бесконтрольным ростом клеток (например, формирование клеточной опухоли) без дифференцировки этих клеток в специализированные и различные клетки. Злокачественные опухоли, которые можно лечить способами по настоящему изобретению, включают в качестве неограничивающих примеров протоонкоген ЛБЬ1, связанные со СПИД злокачественные опухоли, невриному слухового нерва, острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелолейкоз, аденокистозную карциному, аденокортикальный рак, идиопатическую миелоидную метаплазию, алопецию, альвеолярную саркому мягких тканей, анальную злокачественную опухоль, ангиосаркому, апластическую анемию, астроцитому, атаксию-телеангиэктазию, базально-клеточную карциному (кожи), рак мочевого пузыря, злокачественные опухоли костей, злокачественную опухоль кишечника, глиому ствола головного мозга, опухоли головного мозга и ЦНС, рак молочной железы, опухоли ЦНС, карциноидные опухоли, злокачественную опухоль шейки матки, опухоли головного мозга детей, детскую злокачественную опухоль, детский лейкоз, детскую саркому мягких тканей, хондросаркому, хориокарциному, хронический лимфолейкоз, хронический миелолейкоз, колоректальные раки, кожную Т-клеточную лимфому, возвышающуюся дерматофибросаркому, десмопластическую мелко-круглоклеточную опухоль, протоковую карциному, эндокринные злокачественные опухоли, злокачественную опухоль эндометрия, эпендимому, злокачественную опухоль пищевода, саркому Юинга, злокачественную опухоль внепеченочного желчного протока, злокачественную опухоль глаз, меланому, ретинобластому глаз, злокачественную опухоль фаллопиевых труб, анемию Фанкони, фибросаркому, рак мочевого пузыря, рак желудка, злокачественные опухоли желудочно-кишечного тракта, гастроинтестинальную карциноидную опухоль, злокачественные опухоли мочеполовой системы, опухоли из половых клеток, гестационно-трофобластическую болезнь, глиому, гинекологические злокачественные опухоли, гематологические злокачественные опухоли, волосатоклеточный лейкоз, рак головы и шеи, гепатоцеллюлярную злокачественную опухоль, наследственный рак молочной железы, гистиоцитоз, болезнь Ходжкина, папилломавирус человека, пузырный занос, гиперкальцемию, злокачественную опухоль гортанной части глотки, внутриглазную меланому, злокачественную опухоль островковых клеток, саркому Капоши, рак почки, гистиоцитоз клеток Лангерганса, злокачественную опухоль гортани, лейомиосаркому, лейкоз, синдром 11-£гаитеш, злокачественную опухоль губ, липосаркому, злокачественную опухоль печени, рак легких, лимфостаз, лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, рак молочной железы мужчин, злокачественную палочковидную опухоль почек, медуллобластому, меланому, злокачественную опухоль клеток Меркеля, мезотелиому, метастазирующую злокачественную опухоль, злокачественную опухоль полости рта, множественную эндокринную неоплазию, грибовидный микоз, миелодиспластический синдром, миелому, миелопролиферативные нарушения, злокачественную опухоль носа, носоглоточную злокачественную опухоль, аденосаркому почки, нейробластому, нейрофиброматоз, синдром разрывов Неймегена, злокачественную опухоль кожи, не являющуюся меланомой, немелкоклеточный рак легкого (И5с1с), злокачественные опухоли глаз, злокачественную опухоль пищевода, злокачественную опухоль ротовой полости, злокачественную опухоль ротовой части глотки, остеосаркому, рак стомы яичников, злокачественную опухоль поджелудочной железы, околоносовую злокачественную опухоль, рак паращитовидной железы, злокачественную опухоль околоушной железы, злокачественную опухоль полового члена, периферийные нейроэктодермальные опухоли, злокачественную опухоль гипофиза, истинную полицитемию, рак предстательной железы, редкие злокачественные опухоли и ассоциированные нарушения, почечно-клеточную карциному, ретинобластому, рабдомиосаркому, синдром Ротмунда-Томсона, злокачественную опухоль слюнных желез, саркому, шванному, синдром Сезари, злокачественную опухоль кожи, мелкоклеточный рак легких (5с1с), злокачественную опухоль тонкой кишки, саркому мягких тканей, опухоли спинного мозга, плоскоклеточную карциному (кожи), злокачественную опухоль желудка, синовиальную саркому, злокачественную опухоль семенников, злокачественную опухоль тимуса, рак щитовидной железы, переходноклеточный рак (мочевого пузыря), переходно-клеточный рак (почечной лоханки/мочеточника), трофоб

- 9 013877 ластную злокачественную опухоль, уретральную злокачественную опухоль, злокачественную опухоль мочевыделительной системы, уроплакины, саркому матки, злокачественную опухоль матки, злокачественную опухоль влагалища, злокачественную опухоль наружных женских половых органов, макроглобулинемию Вальденстрема или опухоль Вильмса. Как указано выше, термин злокачественная опухоль включает опухоли, саркомы и лейкозы, и все эти термины могут быть использованы взаимозаменяемо.

Соединения по настоящему изобретению используют в фармацевтических композициях, добавляя эффективное количество соединения к фармацевтически приемлемому эксципиенту, разбавителю или носителю. Применение соединений и способов по настоящему изобретению также пригодно профилактически.

Как применяют в настоящем документе, термин антитело относится к молекуле иммуноглобулина или ее иммунологически активной части, т.е. антигенсвязывающей части, и включает части, доменные антитела, их фрагменты, химерные и деиммунизированные формы. Примеры иммунологически активных частей молекул иммуноглобулинов включают фрагменты 5сРУ и йсРУ, фрагменты Р(аЬ) и Р(аЬ'), которые получаются при обработке антитела ферментом, таким как папаин или пепсин соответственно. Антитело может быть поликлональным, моноклональным, рекомбинантным, например химерным, гуманизированным, деиммунизированным полностью человеческим, не являющимся человеческим, например мышиным или одноцепочечным антителом. Антитело может быть связанным с токсином или радиоактивным препаратом. В частности, антитела по настоящему изобретению представляют собой антитела против злокачественных опухолей, обладающие терапевтическим эффектом у субъектов с клеточным пролиферативным нарушением, например злокачественной опухолью. В конкретных вариантах осуществления антитела представляют собой антитела, перечисленные в табл. 1. В других вариантах осуществления антитела связывают мишени, перечисленные в табл. 1. В других вариантах осуществления антитела представляют собой терапевтические антитела, связывающие белок, вовлеченный в патогенез злокачественной опухоли, и обладающие положительным воздействием на субъекта. Для терапевтического лечения человеческих пациентов желательны химерные, гуманизированные, деиммунизированные, но наиболее предпочтительно целиком человеческие антитела.

Таблица 1 Примеры антител для применения при клеточных пролиферативных заболеваниях, особенно злокачественной опухоли

Непатентованное наименование	Торговое наименование (или альтернативное наименование)	Мишень
АВХ-ЕСЕ	Панитумумаб	ΕΘΕΚ
Алемтузумаб	Кэмпас	СЭ52
Аполизумаб	НиЮЮ	1Μ0
Бевацизумаб	Авастин	УЕСЕ
Кантузумаб		Антиген СапАд
Цетуксимаб	Эрбитукс	ЕСЕК
сС250	Ренкарекс	Антиген ΜΝ
стс-54 4		СБ22
Даклизумаб	Зенапакс	6ϋ25
Эпратузумаб		СБ22
Эрлотиниб	Тарцева	ЕЙЕЙ
Гзмтузумаб озогамицин	Милотарг	СИЗЗ
ЬА20		С020
НСВЕ-11		ЬТВЕ
Нип901	ВВ-10901	СЭ56

- 10 013877

Ибритумомаб тиуксетан	Зевалин	СО20
ЮЕС159		Тад72
Инфликсимаб	Ремикейд	ΤΝΡ
Люмиликсимаб		СОЗЗ
тАЬ ЗЕ8		Ганглиозид 602
тАЬ Ь43,13		СА125
тАЬ ВС8		СО4 5
тАЬ СС4 9дельтаСН2		ТАС-72
тАЬ СЬ14,18		Ганглиозид СЭ2
тАЬ СР-675206	СР-675	СТЬА-4
тАЬ ΗθΕΊ-Ι		СБЗО
тАЬ Ни33193		Антиген Льюиса-у
тАЬ НиС1-М195		СБЗЗ
тАЬ ЬиНМГС1	К1549	Мис1
тАЬ Д591		Специфический мембранный антиген предстательной железы
тАЬ МОХ-СТЬА4		СТЛА4
тАЬ М1К-бета-1		-цепь рецептора 1Ъ2
ΜϋΧ-010		СТАА4
ΜΕΩΙ-507	Сиплизумаб	СЭ2
МЦМ2704		Специфический мембранный антиген предстательной железы
Пертузумаб	гЬиМаЬ 2С4	Домен димеризации Нег2
НАУ12		Гликопротеин КААС12
Ритуксимаб	Ритуксан	С020
ЗБК-ЗО		СЮЗО
ЗБЫ-40		СО4 0
Тозитумомаб	Бексар	С02 0
Трастузумаб	Герцептин	Нег2/пеи
ТНМ-1 (тАЬ ТКАТЬ В1)		Рецептор ТКА1Б-1
Иттрийибритумомаб	Зевалин	СО20

Антитело (или его фрагмент) также можно конъюгировать с терапевтической функциональной группой, такой как цитотоксин, терапевтическое средство или радиоактивный ион. Цитотоксин или цитотоксическое средство включает любое средство, которое вредоносно для клеток. Примеры включают таксол, цитохалазин В, грамицидин Ό, бромистый этидий, эметин, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин Ό, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол, пуромицин, майтанзаноиды, например майтанзинол (см. патент США № 5208020), СС-1065 (см. патенты США № 5475092, 5585499, 5846545) и их аналоги или гомологи. Терапевтические средства включают в качестве неограничивающих примеров антиметаболиты (например, метотрексат, 6меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин и 5-фторурацил декарбазин), алкилирующие средства (например, мехлоретамин, тиотепа хлорамбуцил, СС-1065, мелфалан, кармустин (ΒδΝυ) и ломустин (ССЛи), циклофосфамид, бусульфан, дибромманнит, стрептозотоцин, митомицин С и цис-дихлордиаминплатина (II) (ΌΌΡ) цисплатин), антрациклины (например, даунорубицин (ранее дауномицин) и доксорубицин), антибиотики (например, дактиномицин (ранее актиномицин), блеомицин, митрамицин и антрамицин (АМС)), ΌΜ-1 и антимитотические средства (например, винкристин, винбластин, таксол и майтанзанои

- 11 013877 ды). Радиоактивные ионы включают в качестве неограничивающих примеров йод, иттрий и празеодимий.

Способы по настоящему изобретению включают в одном из вариантов осуществления (1) введение НА, до, вместе или после введения антитела; или (2) введение сочетания НА и антитела.

Как применяют в настоящем документе, термин терапевтически эффективное количество означает количество соединения по настоящему изобретению, эффективное для получения желательного ответа на терапевтическое средство, например для предотвращения злокачественной опухоли или лечения симптомов злокачественной опухоли у хозяина, или количество, эффективное для лечения злокачественной опухоли.

Конкретное терапевтически эффективное количество будет варьировать в зависимости от таких факторов, как конкретное состояние для лечения, физическое состояние пациента, тип подлежащего лечению млекопитающего, длительность лечения, природа сопутствующей терапии (если есть) и конкретные применяемые композиции и антитело.

Как применяют в настоящем документе, фармацевтический носитель представляет собой фармацевтически приемлемый растворитель, суспендирующее средство или носитель для доставки НА и/или химиотерапевтического средства животному или человеку. Носитель может представлять собой жидкость или твердое вещество и его выбирают в зависимости от планируемого способа введения.

Как применяют в настоящем документе, термин клетка включает в качестве неограничивающих примеров клетки животных и, в частности, клетки млекопитающих (например, клетки человека, клетки мыши или клетки крысы).

Настоящее изобретение также относится к композициям, включающим одно или несколько антител против злокачественных опухолей и производные, фрагменты и/или соли НА. В литературе описан ряд производных и фрагментов НА и подразумевается, что они включены в композиции и способы по настоящему изобретению. НА также может быть модифицирована или синтезирована химически. НА можно обозначать как полимер, гиалуроновая кислота, гиалуронат или гиалуронан.

Являясь полимерной молекулой, молекулы НА могут обладать диапазоном различных молекулярных масс. Таким образом, композиции с НА могут содержать молекулы с различными молекулярными массами. Композиция НА почти с любой средней модальной молекулярной массой может быть эффективна в способах по настоящему изобретению и настоящее изобретение не ограничено каким-либо конкретным размером или диапазоном размеров НА. НА с модальной молекулярной массой в диапазоне от 1 до 2 млн Да рассматривают как особенно пригодную, хотя настоящее изобретение таким образом не ограничено. Примеры подходящих молекулярных масс НА приблизительно включают

360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1010, 1020, 1030, 1040, 1050, 1060, 1070, 1080, 1090, 1100, 1110, 1120, ИЗО, 1140, 1150, 1160, 1170, 1180, 1190,

1200, 1210, 1220, 1230, 1240, 1250, 1260, 1270, 1280, 1290, 1300, 1310, 1320,1330,

1340, 1350, 1360, 1370, 1380, 1390, 1400, 1410, 1420, 1430, 1440, 1450, 1460,1470,

1480, 1490, 1500, 1510, 1520, 1530, 1540, 1550, 1560, 1570, 1580, 1590, 1600,1610,

1620, 1630, 1640, 1650, 1660, 1670, 1680, 1690, 1700, 1710, 1720, 1730, 1740,1750,

1760, 1770, 1780, 1790, 1800, 1810, 1820, 1830, 1840, 1850, 1860, 1870, 1880,1890,

1900, 1910, 1920, 1930, 1940, 1950, 1960, 1970, 1980, 1990, 2000, 2010, 2020,2030,

2040, 2050, 2060, 2070, 2080, 2090, 2100, 2110, 2120, 2130, 2140, 2150, 2160,2170,

2180, 2190, 2200, 2210, 2220, 2230, 2240, 2250, 2260, 2270, 2280, 2290, 2300,2310,

2320, 2330, 2340, 2350, 2360, 2370, 2380, 2390, 2400, 2410, 2420, 2430, 2440,2450,

- 12 013877

2460, 2470, 2480, 2490, 2500, 2510, 2520, 2530, 2540, 2550, 2560, 2570, 2580, 2590, 2600, 2610, 2620, 2630, 2640, 2650, 2660, 2670, 2680, 2690, 2700, 2710, 2720, 2730, 2740, 2750, 2760, 2770, 2780, 2790, 2800, 2810, 2820, 2830, 2840, 2850, 2860, 2870, 2880, 2890, 2900, 2910, 2920, 2930, 2940, 2950, 2960, 2970, 2980, 2990, 3000, 4000, 4010, 4020, 4030, 4040, 4050, 4060, 4070, 4080, 4090, 4100, 4110, 4120, 4130, 4140, 4150, 4160, 4170, 4180, 4190, 4200, 4210, 4220, 4230, 4240, 4250, 4260, 4270, 4280, 4290, 4300, 4310, 4320, 4330, 4340, 4350, 4360, 4370, 4380, 4390, 4400, 4410, 4420, 4430, 4440, 4450, 4460, 4470, 4480, 4490, 4500, 4510, 4520, 4530, 4540, 4550, 4560, 4570, 4580, 4590, 4600, 4610, 4620, 4630, 4640, 4650, 4660, 4670, 4680, 4690, 4700, 4710, 4720, 4730, 4740, 4750, 4760, 4770, 4780, 4790, 4800, 4810, 4820, 4830, 4840, 4850, 4860, 4870, 4880, 4890, 4900, 4910, 4920, 4930, 4940, 4950, 4960, 4970, 4980, 4990, 5000,.5010, 5020, 5030, 5050, 5050, 5060, 5070, 5080, 5090, 5100, 5110, 5120, 5130, 5150, 5150, 5160, 5170, 5180, 5190, 5200, 5210, 5220, 5230, 5240, 5250, 5260, 5270, 5280, 5290, 5300, 5310, 5320, 5330, 5350, 5350, 5360, 5370, 5380, 5390, 5500, 5410, 5420, 5430, 5450, 5450, 5460, 5470, 5480, 5490, 5500, 5510, 5520, 5530, 5540, 5550, 5560, 5570, 5580, 5590, 5600, 5610, 5620, 5630, 5640, 5650, 5660, 5670, 5680, 5690, 5700, 5710, 5720, 5730, 5740, 5750, 5760, 5770, 5780, 5790, 5800, 5810, 5820, 5830, 5840, 5850, 5860, 5870, 5880, 5890, 5900, 5910, 5920, 5930, 5940, 5950, 5960, 5970, 5980, 5990, 6000, 6010, 6020, 6030, 6040, 6050, 6060, 6070, 6080, 6090, 6100, 6110, 6120, 6130, 6140, 6150, 6160, 6170, 6180, 6190, 6200, 6210, 6220, 6230, 6240, 6250, 6260, 6270, 6280, 6290, 6300, 6310, 6320, 6330, 6340, 6350, 6360, 6370, 6380, 6390, 6400, 6410, 6420, 6430, 6440, 6450, 6460, 6470, 6480, 6490, 6500, 4510, 6520, 4530, 6540, 6550, 6560, 6570, 6580, 6590, 6600, 6610, 6620, 6630, 6640, 6650, 6660, 6670, 6680, 6690, 6700, 6710, 6720, 6730, 6740, 6750, 6760, 6770, 6780, 6790, 6800, 6810, 6820, 6830, 6840, 6850, 6860, 6870, 6880, 6890, 6900, 6910, 6920, 6930, 6940, 6950, 6960, 6970, 6980, 6990, 7000, 7010, 7020, 7030, 7040, 7050, 7060, 7070, 7080, 7090, 7100, 7110, 7120, 7130, 7140, 7150, 7160, 7170, 7180, 7190, 7200, 7210, 7220, 7230, 7240, 7250, 7260, 7270, 7280, 7290, 7300, 7310, 7320, 7330, 7340, 7350, 7360, 7370, 7380, 7390, 7400, 7410, 7420, 7430, 7440, 7450, 7460, 7470, 7480, 7490, 7500, 7510, 7520, 7530, 7540, 7550, 7560, 7570, 7580, 7590, 7600, 7610, 7620, 7630, 7640, 7650, 7660, 7670, 7680, 7690, 7700, 7710, 7720, 7730, 7740, 7750, 7760, 7770, 7780,

- 13 013877

7790, 7800, 7810, 7820, 7830, 7840, 7850, 7860, 7870, 7880, 7890, 7900, 7910,7920,

7930, 7940, 7950, 7960, 7970, 7980, 7990, 8000, 8010, 8020, 8030, 8040, 8050,8060,

8070, 8080, 8090, 8100, 8110, 8120, 8130, 8140, 8150, 8160, 8170, 8180, 8190,8200,

8210, 8220, 8230, 8240, 8250, 8260, 8270, 8280, 8290, 8300, 8310, 8320, 8330,8340,

8350, 8360, 8370, 8380, 8390, 8400, 8410, 8420, 8430, 8440, 8450, 8460, 8470,8480,

8490, 8500, 8510, 8520, 8530, 8540, 8550, 8560, 8570, 8580, 8590, 8600, 8610,8620,

8630, 8640, 8650, 8660, 8670, 8680, 8690, 8700, 8710, 8720, 8730, 8740, 8750,8760,

8770, 8780, 8790, 8800, 8810, 8820, 8830, 8840, 8850, 8860, 8870, 8880, 8890,8900,

8910, 8920, 8930, 8940, 8950, 8960, 8970, 8980, 8990, 9000, 9010, 9020, 9030,9040,

9050, 9060, 9070, 9080, 9090, 9100, 9110, 9120, 9130, 9140, 9150, 9160, 9170,9180,

9190, 9200, 9210, 9220, 9230, 9240, 9250, 9260, 9270, 9280, 9290, 9300, 9310,9320,

9330, 9340, 9350, 9360, 9370, 9380, 9390, 9400, 9410, 9420, 9430, 9440, 9450,9460,

9470, 9480, 9490, 9500, 9510, 9520, 9530, 9540, 9550, 9560, 9570, 9580, 9590,9600,

9610, 9620, 9630, 9640, 9650, 9660, 9670, 9680, 9690, 9700, 9710, 9720, 9730,9740,

9750, 9760, 9770, 9780, 9790, 9800, 9810, 9820, 9830, 9840, 9850, 9860, 9870,9880, асал аола οαίλ осла οηιη оолл оосп оока оо-7Л йо<?п ооол 1 Лала ιααια ιααπα у/си, 7?ιν₎ 72ώυ, тгул;, ζ/τν. .ζ,ζχ/ν, ι ν, у/υυ, ιννυυ, ινυιυ, ιννχ,ν,

10030, 10040, 10050, 10060, 10070, 10080, 10090, 10100, 10110, 10120, 10130, 10140,

10150, 10160, 10170, 10180, 10190, 10200, 10210, 10220, 10230, 10240, 10250, 10260,

10270, 10280, 10290, 10300, 10310, 10320, 10330, 10340, 10350, 10360, 10370, 10380,

10390, 10400, 10410,10420,10430,104100, 10450,10460,10470, 10480, 10490, 10500, 10510, 10520, 10530, 10540, 10550, 10560, 10570, 10580, 10590, 10600, 10610, 10620,

10630, 10640, 10650, 10660, 10670, 10680, 10690, 10700, 10710, 10720, 10730, 10740,

10750, 10760, 10770, 10780, 10790, 10800, 10810, 10820, 10830, 10840, 10850, 10860,

10870, 10880, 10890, 10900, 10910, 10920, 10930, 10940, 10950, 10960, 10970, 10980,

10990, 11000, 11010, 11020, 11030, 11040, 11050, 11060, 11070, 11080, 11090, 11100,

11110, 11120, 11130, 11140, 11150, 11160, 11170, 11180, 11190, 11200, 11210, 11220,

11230, 11240, 11250, 11260, 11270, 11280, 11290, 11300, 11310, 11320, 11330, 11340,

11350, 11360,11370, 11380, 11390, 11400, 11410, 11420,11430, 114110, 11450, 11460,

11470, 11480, 11490, 11500, 11510, 11520, 11530, 11540, 11550, 11560, 11570, 11580,

11590, 11600, 11610, 11620, 11630, 11640, 11650, 11660, 11670, 11680, 11690, 11700,

11710, 11720, 11730, 11740, 11750, 11760, 11770, 11780, 11790, 11800, 11810, 11820,

- 14 013877

11830, 11840, 11850, 11860, 11870, 11880, 11890, 11900, 11910, 11920, 11930, 11940,

11950, 11960, 11970, 11980, 11990, 12000, 12010, 12020, 12030, 12040, 12050, 12060,

12070, 12080, 12090, 12100, 12110, 12120, 12130, 12140, 12150, 12160, 12170, 12180,

12190, 12200, 12210, 12220, 12230, 12240, 12250, 12260, 12270, 12280, 12290, Ι23ΟΟ,

12310, 12320, 12330, 12340, 12350, 12360, 12370, 12380, 12390, 12400, 12410, 12420,

12430, 124120, 12450, 12460, 12470, 12480, 12490, 12500, 12510, 12520, 12530, 12540, 12550, 12560, 12570, 12580, 12590, 12600, 12610, 12620, 12630, 12640, 12650, 12660,

12670, 12680, 12690, 12700, 12710, 12720, 12730, 12740, 12750, 12760, 12770, 12780,

12790, 12800, 12810, 12820, 12830, 12840, 12850, 12860, 12870, 12880, 12890, 12900,

12910, 12920, 12930, 12940, 12950, 12960, 12970, 12980, 12990, 13000, 13010, 13020,

13030, 13040, 13050, 13060, 13070, 13080, 13090, 13100, 13110, 13120, 13130, 13140,

13150, 13160, 13170, 13180, 13190, 13200, 13210, 13220, 13230, 13240, 13250, 13260,

13270, 13280, 13290, 13300, 13310, 13320, 13330, 13340, 13350, 13360, 13370, 13380,

13390, 13400, 13410, 13420, 13430, 134130, 13450, 13460, 13470, 13480, 13490, 13500,

13510, 13520, 13530, 13540, 13550, 13560, 13570, 13580, 13590, 13600, 13610, 13620,

13630, 13640, 13650, 13660, 13670, 13680, 13690, 13700, 13710, 13720, 13730, 13740,

13750, 13760, 13770, 13780, 13790, 13800, 13810, 13820, 13830, 13840, 13850, 13860,

13870, 13880, 13890, 13900, 13910, 13920, 13930, 13940, 13950, 13960, 13970, 13980,

13990, 14000, 14010, 14020, 14030, 14040, 14050, 14060, 14070, 14080, 14090, 14140,

14110, 14120, 14130, 14140, 14150, 14160, 14170, 14180, 14190, 14200, 14210, 14220,

14230, 14240, 14250, 14260, 14270, 14280, 14290, 14300, 14310, 14320, 14330, 14340,

14350, 14360, 14370, 14380, 14390, 14400, 14410, 14420, 14430, 144140, 14450, 14460, 14470, 14480, 14490, 14500, 14510, 14520, 14530, 14540, 14550, 14560, 14570, 14580,

14590, 14600, 14610, 14620, 14630, 14640, 14650, 14660, 14670, 14680, 14690, 14700,

14710, 14720, 14730, 14740, 14750, 14760, 14770, 14780, 14790, 14800, 14810, 14820,

14830, 14840, 14850, 14860, 14870, 14880, 14890, 14900, 14910, 14920, 14930, 14940,

14950, 14960, 14970, 14980, 14990, 15000, 15010, 15020, 15030, 15040, 15050, 15060,

15070, 15080, 15090, 15100, 15110, 15120, 15130, 15140, 15150, 15160, 15170, 15180,

15190, 15200, 15210, 15220, 15230, 15240, 15250, 15260, 15270, 15280, 15290, 15300,

15310, 15320, 15330, 15340, 15350, 15360, 15370, 15380, 15390, 15400, 15410, 15420,

15430, 154150, 15450, 15460, 15470, 15480, 15490, 15500, 15510, 15520, 15530, 15540,

- 15 013877

15550, 15560, 15570, 15580, 15590, 15600, 15610, 15620, 15630, 15640, 15650, 15660,

15670, 15680, 15690, 15700, 10715, 15720, 15730, 15740, 15750, 15760, 15770, 15780,

15790, 15800, 15810, 15820, 15830, 15840, 15850, 15860, 15870, 15880, 15890, 15900,

15910, 15920, 15930, 15940, 15950, 15960, 15970, 15980, 15990, 16000, 16010, 16020,

16030, 16040, 16050, 16060, 16070, 16080, 16090, 16100, 16110, 16120, 16130, 16140,

16150, 16160, 16170, 16180, 16190, 16200, 16210, 16220, 16230, 16240, 16250, 16260,

16270, 16280, 16290, 16300, 16310, 16320, 16330, 16340, 16350, 16360, 16370, 16380,

16390, 16400, 16410, 16420, 16430, 164160,16450, 16460, 16470, 16480, 16490, 16500, 16510, 16520, 16530, 16540, 16550, 16560, 16570, 16580, 16590, 16600, 16610, 16620,

16630, 16640, 16650, 16660, 16670, 16680, 16690, 16700, 16710, 16720, 16730, 16740,

16750, 16760, 16770, 16780, 16790, 16800, 16810, 16820, 16830, 16840, 16850, 16860,

16870, 16880, 16890, 16900, 16910, 16920, 16930, 16940, 16950, 16960, 16970, 16980,

16990, 17000, 17010, 17020, 17030, 17040, 17050, 17060, 17070, 17080, 17090, 17100,

17110, 17120, 17130, 17140, 17150, 17160, 17170, 17180, 17190, 17200, 17210, 17220,

17230, 17240, 17250, 17260, 17270, 17280, 17290, 17300, 17310, 17320, 17330, 17340,

17350 17360 17370, 17380, 17390 17400 17410, 17420, 17430 174170 17450 17460 17470, 17480, 17490, 17500, 17510, 17520, 17530, 17540, 17550, 17560, 17570, 17580,

17590, 17600, 17610, 17620, 17630, 17640, 17650, 17660, 17670, 17680, 17690, 17700,

17710, 17720, 17730, 17740, 17750, 17760, 17770, 17780, 17790, 17800, 17810, 17820,

17830, 17840, 17850, 17860, 17870, 17880, 17890, 17900, 17910, 17920, 17930, 17940,

17950, 17960, 17970, 17980, 17990, 18000, 18000, 18010, 18020, 18030, 18040, 18050,

18060, 18070, 18080, 18090, 18100, 18110, 18120, 18130, 18140, 18150, 18160, 18170,

18180, 18190, 18200, 18210, 18220, 18230, 18240, 18250, 18260, 18270, 18280, 18290,

18300, 18310, 18320, 18330, 18340, 18350, 18360, 18370, 18380, 18390, 18400, 18410,

18420, 18430, 184190, 18450, 18460, 18470, 18480, 18490, 18500, 18510, 18520, 18530, 18540, 18550, 18560, 18570, 18580, 18590, 18600, 18610, 18620, 18630, 18640, 18650,

18660, 18670, 18680, 18690, 18700, 18710, 18720, 18730, 18740, 18750, 18760, 18770,

18780, 18790, 18800, 18810, 18820, 18830, 18840, 18850, 18860, 18870, 18880, 18890,

18900, 18910, 18920, 18930, 18940, 18950, 18960, 18970, 18980, 18990, 19000, 19010,

19020, 19030, 19040, 19050, 19060, 19070, 19080, 19090, 19100, 19110, 19120, 19130,

19140, 19150, 19160, 19170, 19180, 19190, 19200, 19210, 19220, 19230, 19240, 19250,

- 16 013877

19260, 19270, 19280, 19290, 19300, 19310, 19320, 19330, 19340, 19350, 19360, 19370, 19380, 19390, 19400, 19410, 19420, 19430,194190, 19450,19460,19470, 19480, 19490, 19500, 19510, 19520, 19530, 19540, 19550, 19560, 19570, 19580, 19590, 19600, 19610,

19620, 19630, 19640, 19650, 19660, 19670, 19680, 19690, 19700, 19710, 19720, 19730,

19740, 19750, 19760, 19770, 19780, 19790, 19800, 19810, 19820, 19830, 19840, 19850,

19860, 19870, 19880, 19890, 19900, 19910, 19920, 19930, 19940, 19950, 19960, 19970,

19980, 19990, 20000, 20000, 20010, 20020, 20030, 20040, 20050, 20060, 20070, 20080,

20090, 20100, 20110, 20120, 20130, 20140, 20150, 20160, 20170, 20180, 20190, 20200,

20210, 20220, 20230, 20240, 20250, 20260, 20270, 20280, 20290, 20300, 20310, 20320,

20330, 20340, 20350, 20360, 20370,20380, 20390, 20400, 20410, 20420, 20430, 204190, 20450, 20460, 20470, 20480, 20490, 20500, 20510, 20520, 20530, 20540, 20550, 20560,

20570, 20580, 20590, 20600, 20610, 20620, 20630, 20640, 20650, 20660, 20670, 20680,

20690, 20700, 20710, 20720, 20730, 20740, 20750, 20760, 20770, 20780, 20790, 20800,

20810, 20820, 20830, 20840, 20850, 20860, 20870, 20880, 20890, 20900, 20910, 20920,

20930, 20940, 20950, 20960, 20970, 20980, 20990, 21000, 21000, 21010, 21020, 21030,

НАЛЛ Ί1Α<Α *>1Г»ДЛ ΊΙΛ'ΤΛ -)1ΛθΛ ΟίΓΛβ 01 1 АП -)111Л 01 ЮЛ О111П О11ЛЛ О11СП

х. х ичС; л. 1 л. χυνν _> ί. х м г ν_} ώΐυυυ_? ζ. χ ζ, χ χ Δ,χ ; хи, ί.1 д χ υ υ, ώΐ χ-τν> ι χ ν>

21160, 21170, 21180, 21190, 21200, 21210, 21220, 21230, 21240, 21250, 21260, 21270, 21280, 21290, 21300, 21310, 21320, 21330, 21340, 21350, 21360, 21370, 21380, 21390, 21400, 21410, 21420, 21430, 214190, 21450, 21460, 21470, 21480, 21490, 21500, 21510, 21520, 21530, 21540, 21550, 21560, 21570, 21580, 21590, 21600, 21610, 21620, 21630, 21640, 21650, 21660, 21670, 21680, 21690, 21700, 21710, 21720, 21730, 21740, 21750, 21760, 21770, 21780, 21790, 21800, 21810, 21820, 21830, 21840, 21850, 21860, 21870, 21880, 21890, 21900, 21910, 21920, 21930, 21940, 21950, 21960, 21970, 21980, 21990, 22000, 22000, 22010, 22020, 22030, 22040, 22050, 22060, 22070, 22080, 22090, 22100, 22110, 22120, 22130, 22140, 22150, 22160, 22170, 22180, 22190, 22200, 22210, 22220, 22230, 22240, 22250, 22260, 22270, 22280, 22290, 22300, 22310, 22320, 22330, 22340, 22350, 22360, 22370, 22380, 22390, 22400, 22410, 22420, 22430, 224190, 22450, 22460, 22470, 22480, 22490, 22500, 22510, 22520, 22530, 22540, 22550, 22560, 22570, 22580, 22590, 22600, 22610, 22620, 22630, 22640, 22650, 22660, 22670, 22680, 22690, 22700, 22710, 22720, 22730, 22740, 22750, 22760, 22770, 22780, 22790, 22800, 22810, 22820, 22830, 22840, 22850, 22860, 22870, 22880, 22890, 22900, 22910, 22920, 22930, 22940,

- 17 013877

22950, 22960, 22970, 22980, 22990, 23000, 23000, 23010, 23020, 23030, 23040, 23050,

23060, 23070, 23080, 23090, 23100, 23110, 23120, 23130, 23140, 23150, 23160, 23170,

23180, 23190, 23200, 23210, 23220, 23230, 23240, 23250, 23260, 23270, 23280, 23290,

23300, 23310, 23320, 23330, 23340, 23350, 23360, 23370, 23380, 23390, 23400, 23410, 23420, 23430, 234190, 23450, 23460, 23470, 23480, 23490, 23500, 23510, 23520, 23530, 23540, 23550, 23560, 23570, 23580, 23590, 23600, 23610, 23620, 23630, 23640, 23650, 23660, 23670, 23680, 23690, 23700, 23710, 23720, 23730, 23740, 23750, 23760, 23770, 23780, 23790, 23800, 23810, 23820, 23830, 23840, 23850, 23860, 23870, 23880, 23890, 23900, 23910, 23920, 23930, 23940, 23950, 23960, 23970, 23980, 23990, 24000, 24000, 24010, 24020, 24030, 24040, 24050, 24060, 24070, 24080, 24090, 24100, 24110, 24120, 24130, 24140, 24150, 24160, 24170, 24180, 24190, 24200, 24210, 24220, 24230, 24240, 24250, 24260, 24270, 24280, 24290, 24300, 24310, 24320, 24330, 24340, 24350, 24360, 24370, 24380, 24390, 24400, 24410, 24420, 24430, 244240, 24450, 24460, 24470, 24480, 24490, 24500, 24510, 24520, 24530, 24540, 24550, 24560, 24570, 24580, 24590, 24600, 24610, 24620, 24630, 24640, 24650, 24660, 24670, 24680, 24690, 24700, 24710, 24720, 24730, 24740, 24750, 24760, 24770, 24780, 24790, 24800, 24810, 24820, 24830, 24840, 24850, 24860, 24870, 24880, 24890, 24900, 24910, 24920, 24930, 24940, 24950, 24960, 24970, 24980, 24990, 25000, 30000, 35000, 40000, 45000, 50000, 55000, 60000, 65000, 70000, 75000, 80000, 85000, 90000, 95000, 100000, 200000, 300000, 400000, 500000, 600000, 700000, 800000, 900000, 1000000, 11000000, 12000000, 13000000, 14000000, 15000000, 16000000, 17000000, 18000000, 19000000,20000000 Дальтон.

Иллюстративные производные НА представляют собой производные, описанные в патенте США № 6620927 (производные модифицированной тиолами гиалуроновой кислоты); патенте США № 6552184 (сшитые соединения гиалуроновой кислоты и их производные); патенте США № 6579978 (сульфатированные соединения гиалуроновой кислоты и их производные); патенте США № 6831172 (сшитые гиалуроновые кислоты и их гемисукцинированные производные); патенте США № 6027741 (сульфатированная гиалуроновая кислота и ее сложные эфиры); европейском патенте № 0138572 (фрагменты гиалуроновой кислоты НУЛЬЕСТГИ и ΗΥΑΤΑ8ΤΙΝΕ); патенте США № 4851521 (сложные эфиры гиалуроновой кислоты с различными ароматическими, алифатическими и/или аралифатическими спиртами); патенте США № 5202431 (частичные сложные эфиры гиалуроновой кислоты); патенте США № 5676964 (сшитые полимеры гиалуроновой кислоты) и европейском патенте № 0265116 (сшитые сложные эфиры гиалуроновой кислоты).

В дополнение к фрагментам и производным гиалуроновой кислоты в композициях и способах по настоящему изобретению можно использовать синтетические производные, т.е. полусинтетические производные. Иллюстративные полусинтетические производные НА представляют собой сложные эфиры НА со спиртами алифатического, аралифатического, гетероциклического и циклоалифатического рядов, обозначаемые ΗΥΑΕΈ, которые описаны в патентах США № 4851521, 4965353 и 5202431, европейских патентах № 0341745 и 0216453. Содержание каждого из указанных выше патентов в явной форме включено в настоящий документ в качестве ссылки.

НА и композиции антител и способы по настоящему изобретению можно вводить перорально, топически или парентерально в композициях с единицей дозирования, содержащих традиционные нетоксические фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты, адъюванты и носители.

Композиции и способы, предоставляемые по настоящему изобретению, включают пероральные формы, представленные в виде таблетки, пилюли, капсулы, пастилки, лепешки, порошка, гранулы, эмульсии, жидкой, водной или масляной суспензии, лекарственного средства, сиропа, эликсира или спрея.

Композиция для перорального применения может содержать одно или несколько средств, выбранных из группы подсластителей, ароматизаторов, красителей и консервантов, для получения фармацевтически подходящих и привлекательных препаратов. Таблетки содержат активный ингредиент в смеси с нетоксическими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, которые подходят для производства таблеток.

Эти эксципиенты могут представлять собой, например, (1) инертные разбавители, такие как карбонат кальция, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; (2) гранулирующие и дезинтегрирующие средства, такие кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связывающие вещества, такие как крахмал, желатин или гуммиарабик; и смазки, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Эти таблетки могут быть непокрытыми или покрытыми известными способами для задержки разрушения и всасы

- 18 013877 вания в желудочно-кишечном тракте и, таким образом, обеспечивая пролонгированное действие в течение более длительного периода. Например, можно применять вещество-замедлитель, такое как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Покрытие можно проводить с применением способов, описанных в патентах США № 4256108, 4160452 и 4265874, с формированием терапевтических таблеток с контролируемым высвобождением.

Кроме того, способы и композиции, предоставляемые по настоящему изобретению, включают топические формы, вводимые в виде крема, лосьона, эмульсии, геля, пленки, спрея, пасты или мази.

Кроме того, композиции и способы, предоставляемые по настоящему изобретению, включают парентеральное введение и, как применяют в настоящем документе, включают подкожные инъекции, аэрозольную, внутривенную, внутримышечную, интратекальную, интракраниальную и интрастернальную инъекцию, введение и способы инфузии. Парентеральные составы или композиции могут находиться в форме жидкости, мази, суппозитория или пессария.

НА, а также антитела, пригодные в способе по изобретению, можно вводить, для применения ίη νίνο, парентерально посредством инъекции или посредством постепенного вливания в течение периода времени независимо или совместно. Введение может быть внутривенным, интраперитонеальным, внутримышечным, подкожным, внутриполостным или трансдермальным. Для исследований ίη νίΐτο средства можно добавлять в подходящий биологически приемлемый буфер или растворять в нем и добавлять к клеткам или ткани.

Препараты для парентерального введения включают стерильные водные или неводные растворы, суспензии и эмульсии. Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло и инъецируемые органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают воду, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая солевые и забуференные среды. Парентеральные носители включают раствор хлорида натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия, лактат Рингера; внутривенные носители включают жидкие и питательные наполнители, электролитные наполнители (такие как наполнители, основанные на декстрозе Рингера) и т.п. Также могут присутствовать консерванты и другие добавки, например, такие как, противомикробные средства, антиоксиданты, хелаторы, факторы роста и инертные газы и т. п.

Композиции по настоящему изобретению могут дополнительно содержать одно или несколько химиотерапевтических средств или средств для снижения боли.

Предусмотрено, что изобретение используют для лечения патологий, ассоциированных с клеточными пролиферативными нарушениями, например, включая неоплазии, злокачественные опухоли (например, злокачественные опухоли молочной железы, легкого, предстательной железы, почек, кожи, нервной системы, яичников, матки, печени, поджелудочной железы, эпителиальный рак, рак желудка, рак кишечника, злокачественные опухоли экзокринной, эндокринной, лимфатической, гематопоэтической систем или ткани головы и шеи), фиброзные нарушения и т. п.

Соединения и способы по настоящему изобретению также можно применять для лечения других заболеваний, связанных с лечением злокачественных опухолей, таких как нейродегенеративные нарушения, гормональный дисбаланс и т.п. Таким образом, настоящее изобретение относится к способам для облегчения нарушения, ассоциированного с клеточной пролиферацией, неоплазиями, злокачественными опухолями и т. п., включая лечение субъекта с данным нарушением в области нарушения НА и антителом в количестве, достаточном для ингибирования или снижения клеточной пролиферации или нарушения.

Как правило, термины лечение, терапия и т.п. используют в настоящем документе для обозначения воздействия на субъекта, ткань или клетку с получением желательного фармакологического и/или физиологического эффекта. Эффект может быть профилактическим в зависимости от полного или частичного предотвращения клеточного пролиферативного нарушения или его признаков или симптомов, и/или может быть терапевтическим в зависимости от частичного или полного лечения нарушения и/или неблагоприятного воздействия, связанного, например, с аберрантной клеточной пролиферацией. Как применяют в настоящем документе, лечение относится к любому лечению или предотвращению клеточного пролиферативного нарушения у позвоночного, млекопитающего, в частности человека, и включает: (а) предотвращение возникновения нарушения у субъекта, который может быть предрасположенным к нарушению, но у которого его еще не диагностировали; (Ь) ингибирование нарушения, т.е. остановку его развития; или (с) ослабление или улучшение нарушения, т. е. вызывать регрессию нарушения.

Настоящее изобретение относится к различным фармацевтическим композициям, пригодным для улучшения клеточного пролиферативного нарушения, включая неоплазии, злокачественные опухоли и т.п. Фармацевтические композиции по одному из вариантов осуществления настоящего изобретения получают, помещая НА, ее аналоги, производные или синтезированные или химически модифицированные формы либо ее соли и одно или несколько антител, например антител против злокачественных опухолей, таких как антитела, приведенные в табл. 1, или сочетания НА и одного или нескольких антител в форму, подходящую для введения субъекту с применением носителей, эксципиентов и добавок или вспомогательных средств. Также настоящим изобретением предусмотрено сочетание НА с одним или несколькими антителами совместно с одним или несколькими химиотерапевтическими средствами, не являющимися антителами, например, такими как паклитаксел, анальгетики, опиаты, гормоны или антибиотики и

- 19 013877

т.п. Дополнительно или альтернативно, композиция может содержать обезболивающее средство.

Часто используемые носители или вспомогательные средства включают карбонат магния, диоксид титана, лактозу, маннит и другие сахара, тальк, молочный белок, желатин, крахмал, витамины, целлюлозу и ее производные, животные и растительные масла, полиэтиленгликоли и растворители, такие как стерилизованная вода, спирты, глицерин и многоатомные спирты. Внутривенные носители включают жидкие и питательные наполнители. Консерванты включают противомикробные средства, антиоксиданты, хелаторы и инертные газы. Другие фармацевтически приемлемые носители включают водные растворы, нетоксические эксципиенты, включая соли, консерванты, буферы и т.п., как описано, например, в Веш1пд1оп'8 РЬагтасеи11са1 Баеисез, 1511 ей. Еаз!ои: Маск РиЫзНид Со.:1405-1412, 1461-1487, 1975 и Т1е Ыа1юиа1 Еогти1агу XIV., 1411 ей. ^азЫидФи: Лтепсап Р1агтасеи1юа1 ЛззоааНои, 1975, содержание которых таким образом включено в качестве ссылки. рН и точную концентрацию различных компонентов фармацевтической композиции регулируют общепринятыми в данной области способами. См. Соойтаи аий Ойтаи'з Т1е Р1агтасо1одюа1 Ваз18 £ог ТЬегареийсз (711 ей.).

Фармацевтические композиции предпочтительно получают и вводят в единицах дозы. Твердые дозируемые единицы представляют собой таблетки, капсулы и суппозитории. Для лечения субъекта, в зависимости от активности соединения, способа введения, природы и тяжести нарушения, возраста и массы тела субъекта, можно использовать различные суточные дозы. Однако в определенных обстоятельствах могут подходить более высокие или низкие суточные дозы. Введение суточной дозы можно проводить посредством одного введения в форме отдельной единицы дозирования или в виде нескольких меньших единиц дозирования, а также посредством введения нескольких разделенных доз в определенные интервалы.

Фармацевтические композиции по изобретению можно вводить локально или системно в терапевтически эффективной дозе. Количества, эффективные для этого применения, зависят от тяжести заболевания и массы и общего состояния субъекта. Как правило, дозы, применяемые ш νίίΐΌ, могут предоставить пригодное руководство для количеств, подходящих для введения фармацевтической композиции ш 811и, а для определения эффективных доз для лечения конкретных нарушений можно использовать модели на животных. Различные рассмотрения описаны, например, в Ьаидег, Баеисе 249:1527, 1990. Композиции для перорального применения могут находиться в форме твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешивают с твердым инертным разбавителем, например карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином. Также они могут находиться в форме мягких желатиновых капсул, где активный ингредиент смешивают с водной или масляной средой, такой как арахисовое масло, жидкий парафин или оливковое масло.

Водные суспензии, как правило, содержат активные вещества в смеси с эксципиентами, подходящими для производства водной суспензии. Такие эксципиенты могут представлять собой (1) суспендирующее средство, такое как карбоксиметилцеллюлоза натрия, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и гуммиарабик; (2) диспергаторы или увлажнители, которые могут представлять собой (а) встречающийся в природе фосфатид, такой как лецитин; (Ь) продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой, например полиоксиэтиленстеарат; (с) продукт конденсации этиленоксида с длинноцепочечным алифатическим спиртом, например гептадекаэтиленоксицетанол; (й) продукт конденсации этиленоксида с неполным сложным эфиром, полученным из жирной кислоты и гексита, такой как полиоксиэтиленсорбитмоноолеат, или (е) продукт конденсации этиленоксида с неполным сложным эфиром, полученным из жирных кислот и ангидридов гекситов, например полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат.

Фармацевтические композиции могут находиться в форме стерильной инъецируемой водной или масляной суспензии. Эту суспензию можно составлять известными способами с применением тех подходящих диспергаторов или увлажнителей, которые указаны ранее. Стерильный инъецируемый препарат также может представлять собой стерильный инъецируемый раствор или суспензию в нетоксическом парентерально-приемлемом разбавителе или растворителе, например, как раствор в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые можно применять, находятся вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно применяют стерильные жирные растительные масла. Для этой цели можно применять любое мягкое жирное растительное масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, в препаратах инъекций находят применение жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.

НА вместе с антителом по настоящему изобретению также можно вводить в форме липосомной системы доставки, такой как малые моноламеллярные везикулы, большие моноламеллярные везикулы и мультиламеллярные везикулы. Липосомы можно формировать из различных фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Уровни дозирования соединений по настоящему изобретению в качестве неограничивающего примера составляют порядка приблизительно от 0,5 до приблизительно 10 мг на килограмм массы тела, с предпочтительным диапазоном дозирования приблизительно от 5 до приблизительно 20 мг на килограмм массы тела в сутки (приблизительно от 0,3 до приблизительно 1,2 г на пациента в сутки). Количество активного ингредиента, которое можно комбинировать с веществами носителей для получения одной

- 20 013877 дозы, варьирует в зависимости от подвергаемого лечению хозяина и конкретного способа введения. Например, композиция, предназначенная для перорального введения людям, может содержать приблизительно от 5 мг до 1 г активного соединения с соответствующим и подходящим количеством вещества носителя, которое может варьировать приблизительно от 5 до 95% общей композиции. Стандартные лекарственные формы, как правило, содержат приблизительно от 5 до 500 мг комбинированного активного ингредиента или отдельного активного ингредиента.

Однако должно быть понятным, что конкретный уровень дозирования для каждого конкретного пациента будет зависеть от множества факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, возраст, массу тела, общее самочувствие, пол, диету, время введения, маршрут введения, скорость экскреции, комбинацию лекарственных средств и тяжесть подвергаемого лечению конкретного заболевания.

Кроме того, некоторые соединения по настоящему изобретению могут формировать сольваты с водой или стандартными органическими растворителями. Такие сольваты включены в объем изобретения.

Композиции по настоящему изобретению можно вводить в виде монотерапии (см. примеры в табл. 2) или в виде комбинированного лечения для обеспечения хирургического вмешательства. Оно предназначено для включения любого химически совместного сочетания химиотерапевтических средств, включая антитела и не являющиеся антителами терапевтические средства. В табл. 3 ниже предоставлен неограничивающий список примеров типов способов комбинированного лечения, предусматриваемого настоящим изобретением.

Таблица 2

Композиция для монотерапии

Композиция	Композиция	Композиция	Композиция
НА и АВХ- ЕСГ	НА и Гемтузумаб озогамицин	НА и тАЬ СС49- дельтаСН2	НА и ΜΕϋΙ-507
НА и Алемтузумаб	НА и ЬА2 0	НА и тАЬ СИ14,18	НА и МБИ2704
НА и Аполизумаб	НА и НСВЕ-11	НА и тАЬ СР- 675206	НА и пертузумаб
НА и Бевацизумаб	НА и Нип901	НА и тАЬ НеГг- 1	НА и ΚΑΥ12
НА и Кантузумаб	НА и Ибритумомаб тиуксетан	НА и тАЬ Ни38193	НА и ритуксимаб
НА и Цетуксимаб	НАи ЮЕС159	НА и тАЬ Ни51- М195	НА и ЗСЫ-ЗО
НА и С6250	НА и Инфликсимаб	НА и тАЬ ЪиНМЕС!	НА и ЗСЫ-40
НА и стс- 544	НА и Люмиликсимаб	НА и тАЬ Л591	НА и тозитумомаб
НА и Даклизумаб	НА и тАЬ 378	НА и тАЬ МЬХ- СТБА4	НА и трастузумаб
НА и Эпратузумаб	НА и тАЬ Ь43,13	НА и тАЬ Мак- бета-1	НА и ТЕМ-1 (тАЬ ТКА1Б Н1)
НА и эрлотиниб	НА и тАЬ ВС8	НА и МЬХ-010	НА и иттрийибритумомаб

- 21 013877

Таблица 3 Примеры способов комбинированного лечения

Первый компонент*	Второй или дополнительный компоненты/схемы лечения
НА и антитело	НА и антитело*
НА и антитело	НА и химиотерапевтическое средство (например, в качестве неограничивающих примеров, иринотекан, или доксорубицин, или фторурацил, или лейковорин, или оксалиплатин, или метотрексат, или гемцитабин)
НА и антитело	Только химиотерапевтическое средство (например, в качестве неограничивающих примеров, иринотекан, или доксорубицин, или фторурацил, или лейковорин, или оксалиплатин, или метотрексат, или гемцитабин)
НА и антитело	Химиотерапевтические схемы лечения [например, в качестве неограничивающих примеров, ΕΌΙ,ίΌΧ, ΓΟΣΓΙΚΙ, 1ГЬ)
НА и антитело	Антитело
НА и антитело	Лучевая терапия
НА и антитело	Хирургическое вмешательство
Антитело	НА и антитело (для примеров смотри таблицу 1)
Антитело	НА и химиотерапевтическое средство (например, в качестве неограничивающих примеров, иринотекан, или доксорубицин, или фторурацил, или лейковорин, или оксалиплатин, или метотрексат, или гемцитабин)
Антитело	НА и химиотерапевтические схемы лечения (например, в качестве неограничивающих примеров, ГОЬГОХ, ΓΟΙ,ΪΊΚΙ, 1РЬ)

*см. табл. 2 для примеров, которые включают НА и цетуксимаб (НуЕКВ), НА и бевацизумаб (НуВЕУ) и т.д.

Композицию антитела по настоящему изобретению можно использовать в сочетании с различными стандартными химиотерапевтическими способами лечения. Такие стандартные способы лечения включают, например, ЕОЬЕОХ (фторурацил, лейковорин и оксалиплатин), ЕОЬЕГК! (включающее иринотекан, лейковорин и фторурацил) и 1ЕЬ (включающее иринотекан, фторурацил и лейковорин). Эти стандартные способы лечения хорошо известны специалистам в данной области.

Настоящее изобретение в настоящий момент дополнительно описано посредством ссылки только на следующие неограничивающие примеры. Однако должно быть понятным, что следующие примеры являются только иллюстративными и ни в коем случае их не следует рассматривать как ограничение применимости изобретения, описанной выше. В частности, хотя настоящее изобретение подробно описано в связи со злокачественной опухолью, очевидно, что открытия по настоящему документу не ограничены лечением злокачественной опухоли. Например, НА/композиции антител можно использовать для лечения других состояний, таких как инфекция патогенными возбудителями.

Следующие примеры можно проводить для тестирования эффективности антител, вводимых последовательно или в сочетании с НА, для лечения клеточных пролиферативных нарушений. Клеточные линии, используемые в этих экспериментах, получают, например, из Атепсап Туре Сн11нге Со11ес11оп (АТСС), расположенной Мапаккак, УЛ, И8А.

Описанные ниже примеры представляют собой только один набор экспериментов, которые можно проводить.

Специалист в данной области поймет, что любое данное антитело можно тестировать на ряде различных типов злокачественных опухолей и что конкретный тип злокачественных клеток, используемых в примерах, представляет собой только один из нескольких типов клеток, которые можно использовать.

Следующие неограничивающие примеры иллюстрируют изобретение. Все документы, указанные в

- 22 013877 настоящем документе, включены в изобретение в качестве ссылки в полном объеме.

Пример 1. Эффект НА и противораковых антител на злокачественные клетки ίη νίίΓΟ.

В следующем примере изложено, как специалист в данной области может сравнить эффекты любого одного антитела, приведенного в табл. 1, когда оно составлено с НА для лечения гиперпролиферативного заболевания, такого как злокачественная опухоль.

Клеточную линию злокачественной опухоли растили и субкультивировали в виде монослоя в культуральных флаконах 175 см в среде Лейбовица Ь-15, дополненной 10% об./об. эмбриональной телячьей сывороткой (ЭТС) и реагентами антибиотиком/противогрибковым средством, при 37°С в инкубаторе с контролируемой влажностью со 100% об./об. воздуха.

Для тестов клеточные линии растили в 90% среде Лейбовица Ь-15, дополненной 10% об./об. ЭТС. При достижении конфлуэнтности культуры промывали 1х в НВ88 и трипсинизировали в 0,25% мас./об. трипсина/0,05% мас./об. ЭДТА. Клеточную суспензию подсчитывали с применением автоматического клеточного счетчика (ΖΜ-2 Сои11ег Соип1ег), добавляя 15 мл физиологический раствор+0,2 мл клеточной суспензии. Клетки ресуспендировали до количества от 5000 до 50000 клеток/мл среды.

Клетки высевали в 48-луночные планшеты (площадь поверхности 1 см²), добавляя 1 мл клеточной суспензии на лунку.

Клеткам позволяли прикрепляться в течение 24 ч, перед удалением сред монослои промывали. Тестовые среды содержали среды для выращивания, содержащие противораковые антитела, составленные с гиалуроновой кислотой в качестве единственной терапии или в сочетании со стандартными химиотерапевтическими средствами.

Клетки подвергали воздействию нескольких композиций НА/антитела в качестве единственной терапии или в сочетании со стандартными химиотерапевтическими средствами в течение различных периодов времени и при различных концентрациях.

После инкубации и периодов роста клеточные монослои промывали НВ 8 8 и трипсинизировали. Клеточную суспензию подсчитывали на автоматическом клеточном счетчике, добавляя физиологический раствор и клеточную суспензию. Результаты выражают в виде % от контроля без лекарственного средства, который рассчитывают как

Количество клеток х 100

Клетки в контроле без лекарственного средства

Или, в зависимости от эксперимента, как % от контроля с лекарственным средством, рассчитанный как

Количество клеток х 100

Клетки в контроле с лекарственным средством

Увеличение эффективности лечения определяли, сравнивая концентрацию комбинации НА антитело и/или химиотерапевтическое средство для оказания цитотоксического эффекта на 50% клеточной популяции (1С₅₀).

Пример 2. Эффективность противораковых антител, составленных с гиалуроновой кислотой, ίη νίνο.

Основываясь на результатах экспериментов чувствительности к лекарственному средству ίη νίίΓΟ в примере 1, проводили оценку эффективности лечения гиалуроновой кислотой, составленной с противораковыми антителами для лечения злокачественной опухоли ίη νίνο.

Клеточные линии растили и субкультивировали, как ранее описано в примере 1. Для инъекции мышам клетки растили до 80% конфлуэнтности, трипсинизировали, дважны отмывали посредством центрифугирования, подсчитывали и ресуспендировали в среде Лейбовица Ь-15 без сыворотки.

Голых бестимусных мышей СВА/\УЕН1 в возрасте от шести до восьми недель содержали в специальных условиях с отсутствием патогенов со стерилизованной едой и водой, доступных в неограниченных количествах. Каждой мыши проводили одну инъекцию, содержащую приблизительно 5х 10⁶ клеток в 50 мкл. Измерения опухолей проводили еженедельно, измеряя три перпендикулярных диаметра (б|б₂б₃,). Объем опухоли рассчитывали с применением формулы (1/6)π(άιά₂ά₃)

Лечение противораковыми антителами и НА начинали, когда объем опухоли достигал 50-100 мм³. Получали индивидуальные инъекции противораковых антител, составленных с НА, в зависимости от индивидуальной массы мышей, с целью доставки терапевтически эффективных доз каждой мыши.

Животных взвешивали и измеряли объемы опухолей на сутки применения лечения. Инъекцию животным проводили через хвостовую вену.

Конечной точки эксперимента достигали, когда:

1) масса опухоли становилась такой большой, что животное делалось неподвижным;

2) животное не принимало пищу или воду и испытывало значительную потерю массы или

3) размер опухоли составлял больше 10% массы тела.

В конечной точке эксперимента животных анестезировали посредством интраперитонеальной инъекции нембутала, после умерщвления животного посредством цервикальной дислокации собирали кровь.

- 23 013877

Непосредственно после умерщвления мыши удаляли опухоль, печень, сердце, селезенку, мочевой пузырь, левую и правую почки, матку, легкие, желудок, кишечник, головной мозг и лимфатические узлы и помещали в формалин и хлорид цетилпиридиния. Перед гистологической обработкой ткань фиксировали в течение 16-24 ч. Фиксированную ткань постепенно обезвоживали до 100% этанола и помещали в парафиновые блоки, срезы из которых помещали на стеклянные микроскопные стекла. Окрашивание тканевых срезов гематоксилиновым ядерным красителем и эозиновым цитоплазматическим красителем выявляет любые патологические свойства, которые могут указывать на токсичность лечения.

У каждого животного собирали лимфатические узлы, дренирующие область опухоли.

Гематоксилин и эозин, окрашивающие лимфатические узлы, проверяли, когда каждый узел проверяли с помощью микроскопа на присутствие опухолевых клеток. Иммуноокрашенные СЕА лимфатические узлы микроскопически тестировали, когда любые положительно окрашенные узлы подсчитывали и считали положительными на метастазы в лимфатические узлы.

Объем опухоли контролировали ежесуточно или еженедельно посредством измерений циркулем, а объем опухоли рассчитывали, как описано ранее.

Для демонстрации любых изменений массы массу тела животных нормализовали на массу тела во время начала лечения как

Масса тела (без опухоли) — масса тела в начале лечения (без опухоли)

Масса тела (без опухоли) х 100

Эффект лечения на массу органов.

Для гарантии того, что лечение не индуцирует атрофию или увеличение органов, органы после умерщвления удаляли и взвешивали. Массу каждого органа рассчитывали как % от общей массы тела и сравнивали с массой органов контрольной группы.

Общее время выживания животного рассчитывали как время (сутки или недели), которое животное прожило после начала исследования.

Пример 3. Оценка действия гиалуроновой кислоты на противоопухолевые свойства цетуксимаба (эрбитукса) при лечении рака толстого кишечника человека.

Для оценки действия гиалуроновой кислоты на эффективность терапевтических доз цетуксимаба при лечении рака толстого кишечника у голых мышей в случае монотерапии или в сочетании с иринотеканом или его композиции с гиалуроновой кислотой (НуСАМР). Конкретный анализ следующих параметров эффективности:

объем первичной опухоли;

метастазы злокачественной опухоли;

токсичность лечения по отношению к массе тела, массе органов, выживанию.

Тестовые и контрольные препараты.

Тестовые препараты и дозировки, которые применялись в исследовании, представляют собой следующее:

гиалуроновая кислота (модальная молекулярная масса 800-900 кДа); дозировка 150 мг/кг или 26,6 мг/кг;

цетуксимаб (Эрбитукс или ЕКВ); дозировка 0,5 мг/кг;

иринотекан гидрохлороид (камптосар или СРТ-11); дозировка 50 мг/кг; НуЕКВ (150/0,25), содержащий 150 мг/кг НА и 0,25 мг/кг цетуксимаба; НуЕКВ (150/0,5), содержащий 150 мг/кг НА и 0,5 мг/кг цетуксимаба; НуСАМР (26,6/50), содержащий 26,6 мг/кг НА и 50 мг/кг иринотекана. Клеточная линия карциномы толстого кишечника человека.

Клеточную линию карциномы толстого кишечника человека ЫМ1215 стандартным образом культивировали в виде монослоя в 75 см² колбах для культур в средах КРМ11640, дополненных исходным раствором 5% об./об. эмбриональной телячьей сыворотки, 10 мкг/мл бычьего инсулина, 1 мМ гидрокортизона и противобактериальным/противогрибковым средством. Для получения первичной опухоли и инъекции мышам клетки растили до 80% конфлуентности, трипсинизировали в растворе 0,05% трипсине/0,01% мас./об. ЭДТА, дважды отмывали посредством центрифугирования в настольной центрифуге Весктап Т1-6 при 400 дау в течение 10 мин и подсчитывали с применением счетчика СоиЙег, затем ресуспендировали в средах КРМ11640 при 2х10⁸ клеток/мл. Эту клеточную линию выбрали из-за ее рецептора СЭ44, ее чувствительности только к иринотекану или при составлении с НА (НуСАМР) по сравнению с химиотерапией иринотеканом в модели ксенотрансплантата и того, что клеточная пролиферация контролируется аутокринной петлей ТСГ-а/ЕСГ-К.

Модель опухоли на мышах.

Самок бестимусных голых мышей СВЛЛУЕН1 содержали в специфических условиях без патогенов со стерилизованной пищей и водой, доступных в неограниченном количестве. Каждая мышь получала одну инъекцию, содержащую 1х10⁷ клеток в 50-100 мкл. Клетки инъецировали иглой калибра 26 в жировое тело молочной железы сразу после первого соска.

Обработку (ί) физиологическим раствором, (и) НА, (ш) цетуксимабом (ЕКВ), (ίν) композицией, со

- 24 013877 держащей НА и цетуксимаб (НуЕКВ), (ν) цетуксимабом/иринотеканом и (νί) НА и цетуксимабом/НА и иринотеканом (НуЕКВ/НуСАМР) начинали приблизительно через 4-8 недель после того, как объем опухоли достигал диапазона 50-100 мм². Лекарственные средства доставляли посредством болюсной IV на сутки 1 и 4 всего в течение 5 недель. Введение иринотекана или НуСАМР проводили на сутки 1 7-суточного цикла всего в течение 5 недель. Мышей наблюдали в течение 120 суток на повторный рост опухоли. В табл. 4 ниже указаны компоненты дозировки и средний объем опухоли в каждой обрабатываемой группе на начало лечения.

Таблица 4

Объем опухоли на начало лечения

Группа лечения*	Доза компонентов в первой композиции на животное (мг/кг)	Доза компонентов во второй композиции на животное (мг/кг)	Объем опухоли на начало лечения Среднее ± 50
НА	цетуксимаб	НА	иринотекан	Объем опухоли (мм3)	как % массы тела
Контроль: Физиологический раствор	-	-	-	-	79,54+8,2	0,46+0,07
Контроль: только НА	150	-	-	-	81,13+11,7	0,46+0,07
Монотерапия: НА и цетуксимаб = НуЕКВ (150/0,5)	150	0, 5	-	-	53,51+3,8	0,27+0,03
Монотерапия: НА и цетуксимаб = НуЕКВ (150/0,25)	150	0,25	-	-	53,51 + 3,8	0,27+0,03
Монотерапия: Только цетуксимаб ЕКВ (0,5)	-	0, 5	-	-	56,27±6,9	0,28+0,06
Монотерапия: Только цетуксимаб ЕКВ (0,25)	-	0,25	-	-	56,27+6,9	0,28+0,06
Комбинированное лечение: НА и цетуксимабом (НуЕКВ) с НА и иринотеканом. (НуСАМР) НуЕВВ/НуСАМР	150	0, 5	26, 6	50	76,1 + 6, 9	0,52±0,08
Комбинированное лечение: цетуксимаб и иринотекан = ЕВВ/САМР или ЕКВ/СРТ-11	-	0,5	-	50	71,63+5,96	0,51+0,06

*8 животных на группу лечения

Содержание и размещение животных.

Самок бестимусных голых мышей СВАЛУЕНЕ в возрасте от 6 до 8 недель, содержали в специфических условиях без патогенов со стерилизованной пищей и водой, доступных в неограниченном количестве. Опытным путем доказано, что стресс может являться важным фактором в ответе пациента на химиотерапию, таким образом, обеспечивали, чтобы в каждой клетке содержались равные количества мышей.

Введение лекарственных средств и контрольных носителей.

Мышей равномерно распределяли в каждую из шести групп обработки (п=8 на группу). Каждую мышь помещали в бокс для инъекций и введение лечебной композиции проводили через хвостовую вену с применением иглы 26 калибра. Для обеспечения точности каждой вводимой дозы шприцы до и после инъекции взвешивали с применением аналитических весов с четырьмя десятичными знаками.

Протокол введения для каждой группы приведен в табл. 5 ниже.

- 25 013877

Таблица 5

Протокол введения лечебной композиции

ПРОТОКОЛ

Сутки 1

Контроль:

Физиологическим

Сутки 1

Контроль:

Только НА

Сутки 1

Ионотерапия:

НуЕВВ (150/0,5}

Ионотерапия:

НуЕРВ

Ионотерапия:

Сутки 1

Ионотерапия:

недель

Комбинированное

Сутки 1 цетуксимабом (НуЕКВ с НА и

Сутки 1 иринотеканом (НуСАМР}

НуЕРВ/НуСАМР

Комбинированное цетуксимаб иринотекан

ЕНВ/САМР

Стерильный исходный раствор цетуксимаба (эрбитукса) приобретали в виде одного флакона, содержащего 100 мг в конечном объеме 50 мл (2 мг/мл). Преклинические данные в модели ксенотрансплантата СЕО демонстрируют, что оптимальным для задержки роста опухоли считается режим дозирования от 0,25 до 1 мг/инъекцию, вводимую каждые 3 суток всего в количестве 5 доз. Альтернативные режимы 0,25 мг/инъекцию, вводимую дважды в неделю (сутки 1 и 4) в течение 5 недель, в той же модели ксенотрансплантата, а также 0,25-, 0,5- и 1 мг/инъекцию дважды в неделю (сутки 1 и 4) в течение 3 недель показали сравнимую противоопухолевую активность. Таким образом, эти дозировки выбраны в качестве контрольной точки для лечения в данном исследовании, где мыши получали дозу 0,35 мг/инъекцию.

Стерильный исходный раствор 20 мг/мл иринотекана разбавляли до 4 мг/мл в 0,9% (мас./об.) апирогенным раствором ЫаС1 с качеством для инъекций и использовали для получения инъекций иринотекана, составленных с НА.

Индивидуальные инъекции получали в зависимости от массы каждой мыши с целью доставки 50 мг/кг иринотекана (эквивалентно терапевтической дозе для человека 208 мг/м²; ΜΙΜ81999). Получали отдельные порции 10 мг/мл раствора и помещали в одноразовые 100 мл стерильные стеклянные пробирки, и они проходили стандартное химическое и микробиологическое тестирование. Гиалуроновую ки

- 26 013877 слоту, составленную с иринотеканом [НуСАМР (150/50)], получали, смешивая часть 4 мг/мл исходного раствора иринотекана с раствором гиалуроновой кислоты до конечной концентрации НА, эквивалентной 150 мг/кг массы мыши и 50 мг/кг иринотекана. Гиалуроновую кислоту, составленную с цетуксимабом [НуЕВВ (150/0,5)], получали, смешивая часть 2 мг/мл исходного раствора цетуксимаба с раствором НА до конечной концентрации НА, эквивалентной 150 мг/кг массы мыши и 50 мг/кг цетуксимаба.

Препараты количественно вводили через хвостовую вену. Перед и после инъекции инъекционный шприц взвешивали, а массы записывали.

Вводимые дозы рассчитывали с применением следующих формул:

Инъецируемый объем (мл) = масса шприца до инъекции (г) - масса шприца после инъекции (г)

Концентрация в инъецируемом растворе (мг/мл) = концентрация в исходном растворе х фактор разведения

Инъецируемая масса (мг) = концентрация в инъецируемом растворе (мг/мл)х инъецируемый объем (мл) _{ч ζ} . , инъецируемая масса (.мг)х1000

Вводимая доза (мг/кг) =--------------------------масса мыши (г)

Мониторинг массы тела, объема опухоли и самочувствия животного.

После начала лечения наблюдения за животными проводили ежедневно, включая сутки конечной точки эксперимента, и записывали. Животных взвешивали, измеряли объем опухоли и контролировали самочувствие животного, записывая уровни энергии и признаки токсичности ЖК-тракта, такие как диарея. Потерю массы контролировали, подсчитывая общую массу тела, получаемую посредством вычитания массы опухоли, которую рассчитывали как 1 г х объем опухоли (см³). Для демонстрации любых изменений массы массу тела животного нормализовали на время начала лечения в виде

Масса тела (без опухоли) - Масса тела на начало лечения (без опухоли) х 100

Масса тела на начало лечения (без опухоли)

Умерщвление животных в конечной точке эксперимента.

В конечной точке эксперимента животных анестезировали посредством 0,1 мл интраперитонеальной инъекции нембутала (60 мг/мл), после умерщвления животного посредством цервикальной дислокации собирали кровь.

Сбор и обработка опухоли и органов тела.

Непосредственно после умерщвления мыши удаляли опухоль, печень, сердце, селезенку, мочевой пузырь, левую и правую почки, матку, легкие, желудок, кишечник, головной мозг и лимфатические узлы и взвешивали и помещали в 10% формалиновый буфер. Перед гистологической обработкой ткань фиксировали в течение 16-24 ч. Фиксированную ткань постепенно обезвоживали до 100% этанола и помещали в парафиновые блоки, 2-4 мкм срезы из которых помещали на стеклянные микроскопные стекла. Тканевые срезы окрашивали гематоксилиновым ядерным красителем и эозиновым цитоплазматическим красителем. Срезы органов исследовали на признаки, которые могли бы указывать на токсичность лечения и на наличие опухолевых клеток.

Анализ данных.

Сравнение групп обработки и контроля осуществляли посредством статистического анализа с применением анализа параметрического 1-теста. При несоответствии нормальному распределению осуществляли реализацию непараметрического анализа с применением суммы рангов по Манну-Витни и одностороннего Апоуа.

Анализ данных разделяли на шесть частей:

1) объем опухоли (исходными данными являются измерения, записанные на листах наблюдения. Данные о массе опухоли, необходимые для значения гидратации, получали из записей аутопсии животных);

2) исходный объем опухоли (определяют как объем опухоли (мм³) на сутки начала обработки (т. е. сутки 1));

3) исходный объем опухоли как процент от общей массы тела рассчитывали с применением следующей формулы:

Исходный объем опухоли (см³) х 100

Масса тела (г) на сутки 1

4) объем опухоли в конечной точке эксперимента определяли как объем опухоли (мм³) на сутки гибели. Для животных, которые были найдены мертвыми, использовали объем опухоли, измеренный при последнем наблюдении;

5) процентное изменение объема опухоли в конечной точке эксперимента - рассчитывали с применением следующей формулы:

- 27 013877

Объем опухоли в конечной точке (мм³) - исходный объем опухоли (л£м³)х100 Исходный объем опухоли (л<л<’)

6) % Т/С - рассчитывали с применением следующей формулы:

% изменения объема опухоли в конечной точке эксперимента у группы обработки х 100 % изменения объема опухоли в конечной точке эксперимента у контрольной группы Классификация прогрессирования опухолей.

После завершения исследования мышей из каждой группы обработки классифицировали по одной из четырех категорий на основе степени прогрессирования их опухоли.

Категории и критерии для каждой были следующими (Маисйег & νοη Апдегег, 1. Сапсег. Кек. Сйи. Оисо1. 120(8):502-4, 1994):

Полная ремиссия;	Опухоль не пальпируется
Частичная ремиссия	Объем опухоли меньше 50% от исходного (равно значениям меньше -50% изменения объема опухоли в конечной точке эксперимента)
Статические опухоли:	Объем опухоли 50-150% от исходного (равно значениям от -50 до 150% изменения объема опухоли в конечной точке эксперимента)
Прогрессирующие опухоли:	Объем опухоли меньше 150% от исходного (равно значениям меньше 150% изменения объема опухоли в конечной точке эксперимента)

Средний объем опухоли.

Средний объем опухоли рассчитывали с применением следующей формулы:

Сумма объемов опухолей (мм³) каждой мыши

Количество мышей в течение каждой недели периода лечения и наносили на график±8ЕМ как функцию времени. Масса органов.

Для исследования возможной атрофии или увеличения органов, индуцированных лечением, после умерщвления органы удаляли и взвешивали.

Исходные данные, включающие массы мыши и опухоли, записанные, когда любые животные были найдены мертвыми, не включены в анализ данных.

Массу каждого органа рассчитывали как % от общей массы тела при аутопсии и сравнивали с массами органов контрольной группы, получавшей только физиологический раствор.

Масса тела.

Исходные данные представляли собой записанные измерения. Любых животных, найденных мертвыми, не включали в анализ данных.

% изменения общей массы тела в конечной точке эксперимента рассчитывали с применением следующей формулы:

[масса тела в конечной точке (без опухоли)—масса тела на начало лечения (без о»>ааа«)]х100 масса тела на начало лечения (без опухоли)

Средний % изменения общей массы тела в конечной точке эксперимента рассчитывали с применением следующей формулы:

Сумма % изменения общей массы тела в конечной точке эксперимента каждой мыши Количество мышей наносили на график±8ЕМ как функцию времени.

Выживание.

Общее время выживания мышей рассчитывали как время в сутках, которое животное прожило после начала лечения, которое обозначали как сутки 1.

Монотерапия: цетуксимаб в качестве единственной терапии или составленный с гиалуроновой кислотой.

Монотерапия: сравнение эффективности цетуксимаба и НуЕКВ: объем опухоли.

Конечная точка эксперимента цетуксимаба, 0,25 и 0,5 мг/кг, составленного со 150 мг/кг НА или без нее, режима монотерапии наступила на 120 сутки после начала лечения. На фиг. 1А и 1В показан процент изменения объема опухоли в зависимости от времени при различных дозах цетуксимаба, 0,25 и 0,5 мг/кг соответственно.

При сравнении данных цетуксимаба (0,25) и цетуксимаба (0,5) ответ опухоли оказывается дозоза

- 28 013877 висимым. Композиция цетуксимаба (0,25) с НА [НуЕКВ (150/0,25)] не показала значимого отличия ответа опухоли, но при исследовании кривых роста опухолей стало очевидно, что НуЕКВ (150/0,25) приводил к меньшему росту опухоли. Опухоли, обработанные ЕКВ (0,25), достигали 400% увеличения объема опухоли на сутки 58, тогда как животные, обработанные НуЕКВ (150/0,25), достигали равного размера опухоли на сутки 90, что, таким образом, приводит к задержке роста опухоли на 32 сутки (35%). Опухоли мышей, получавших цетуксимаб (0,5) с НА [НуЕКВ (150/0,5)], показали даже больший ответ, где опухоли были значимо меньшими, чем в группе с обработкой цетуксимабом (0,5). Таким образом, НуЕКВ (150/0,5) вызывает цитотоксический ответ (т.е. уменьшение объема опухоли) по сравнению с обработкой ЕКВ (0,5) (фиг. 1В), ответ, который ранее не наблюдали при исследовании терапевтических антител. Различия в ответе опухоли между группами с обработкой НуЕКВ (150/0,5) и ЕКВ (0,5) были статистически значимыми до суток 15.

Таким образом, эти данные демонстрируют, что составление НА с цетуксимабом может увеличить эффективность терапевтического антитела.

Монотерапия.

В преклинических исследованиях потеря массы часто может являться индикатором самочувствия животного и прогрессирования заболевания. На фиг. 2 показаны группы, обрабатываемые ЕКВ (0,5) и НуЕКВ (150/0,5). Эти данные указывают на то, что обработка НуЕКВ (150/0,5) на сутки 15 и 22 являлась статистически более интенсивной, чем ЕКВ (0,5), указывая на тенденцию к сниженному прогрессу заболевания, когда антитело составляли с НА.

Монотерапия: эффект цетуксимаба на выживание.

Данные выживания мышей показаны на фиг. 3. Для группы НуЕКВ (150/0,5) одну мышь гуманно умертвили на сутки 99, так как объем опухоли превысил 1000 мм³. Для группы с обработкой ЕКВ (0,5) одну мышь гуманно умертвили до конечной точки эксперимента на сутки 53 и одну на сутки 85, так как объем опухоли составлял 1000 мм³. Остальных мышей умертвили по завершении схемы лечения. Для группы НуЕКВ наблюдали увеличенное выживание, вследствие снижения прогрессирования заболевания.

Комбинированное лечение: НуЕКВ (150/0,5)/НуСАМР (26,6/50) и ЕКВ (0,5)/САМР (50).

Комбинированное лечение: сравнение эффективностей комбинированного лечения в отношении объема опухоли.

На фиг. 4 А и В показан процент изменения объема опухоли у мышей, получающих комбинированное лечение, НА, составленной с цетуксимабом, с НА, составленной с иринотеканом (НуЕКВ/НуСАМР), и цетуксимаба, составленного с иринотеканом (ЕКВ/СРТ-11). На фиг. 4А показан процент изменения объема опухоли для лечения до суток 32 (сутки последней инъекции). На фиг. 4В показаны данные в конечной точке эксперимента, сутки 300.

Мыши, получавшие комбинированное лечение НуЕКВ/НуСАМР, демонстрировали значимо более ранний ответ опухоли по сравнению с данными ЕКВ/САМР (фиг. 4А). Намного большую эффективность сочетания НуЕКВ/НуСАМР в течение периода времени до конечной точки эксперимента, сутки 300, можно видеть на фиг. 4В, где это отчетливо указано на кривых роста опухолей. Животные, обрабатываемые цетуксимабом/иринотеканом (ЕКВ/САМР), продемонстрировали среднее увеличение объема опухоли 600% на сутки 135, тогда как животные, обработанные НуЕКВ/НуСАМР, не достигали этой степени опухолевого роста даже в конечной точке эксперимента 300 суток.

Классификация прогрессирования опухолей.

После завершения исследования мышей из каждой группы обработки классифицировали по одной из четырех категорий на основе степени прогрессирования их опухоли, как рассчитывали из данных объема опухоли (табл. 6).

На сутки 92, все опухоли из групп с физиологическим раствором и НА были классифицированы как статические (12,5%) или прогрессирующие (87,5%).

Сравнение между группами с монотерапией, обработки НуЕКВ с ЕКВ, показало, что добавление НА к антителу цетуксимабу приводило к значимому сдвигу в прогрессировании опухоли в направлении частичной или полной ремиссии от суток 92.

Сравнение между группами с комбинированным лечением, НуЕКВ/НуСАМР с ЕКВ/САМР, показало, что, когда присутствует НА, статических или прогрессирующих опухолей не было; все они находились в полной или частичной ремиссии. Напротив, для лечения ЕКВ/САМР на сутки 120 37,5% опухолей были прогрессирующими.

Эти данные указывают, что, когда в композиции присутствует НА, прогресс опухоли изменен в направлении ремиссии. В заключение, добавление НА к композиции комбинированного лечения значимо увеличивает эффективность лечения.

Комбинированное лечение: мониторинг массы тела и прогресса заболевания.

Сниженная потеря массы трансформируется в увеличенную пользу для животного. Процент изменения общей массы тела на фиг. 5 указывает на сниженную опухолевую нагрузку для комбинации НуЕКВ/НуСАМР по сравнению с ЕКВ/САМР. Эти данные указывают, что добавление НА к композиции комбинированного лечения снижает прогресс заболевания.

- 29 013877

Комбинированное лечение: влияние на выживание.

Наиболее ярким при введении композиции НуЕКВ/НуСАМР по сравнению с группой ЕКВ/САМР является процент выживания животных (фиг. 6). Для группы НуЕКВ/НуСАМР, до суток 300 дожили 6 мышей, при этом по одной мыши гуманно умерщвляли на сутки 211 и 218, так как объем опухоли составил более 1000 мм³. В группе ЕКВ/САМР только одна мышь дожила до суток 300. Двух мышей умертвили на сутки 134, одну - на сутки 141, 169 и 281, так как объем опухоли составил более 1000 мм³. На сутки 211 и 294 мышей умерщвляли вследствие метаболического стресса (т.е. потеря массы).

Таблица 6

Классификация прогрессирования опухолей в группах при лечении в виде монотерапии и комбинированного лечения

Тестируемое соединение	Сутки	Полная ремиссия3 (%)	Частичная ремиссия13 ( %)	С т атиче скал опухоль0 %	Прогрессирующая опухоль1·1 (%)
Контроль:	15	0	0	87,5	12,5
Физиологический раствор	46	0	0	37,5	62,5
	71	0	0	25	75
	92	0	0	12,5	87,5
	106	0	0	0	100
Контроль:	15	0	0	50	50
Только НА	46	0	0	37,5	62,5
	71	0	0	37,5	62,5
	92	0	0	12,5	87,5
	120	0	0	0	100
Ионотерапия:	15	0	25	75	0
НуЕКВ (150/0,5)	46	0	37	63	0
	71	0	50	37	13
	92	12	37	37	13
	113	12	50	25	12
	120	25	37,5	0	37,5
Ионотерапия:	15	0	0	100	0
ЕНВ (0,5)	46	0	0	100	0
	71	0	0	86	14
	92	0	0	86	14
	113	0	0	86	14
	120	0	0	71,4	28,6
Комбинированное лечение:	15	0	100	0	0
НуЕкв/нусАме	46	0	100	0	0
	71	12, 5	87,5	0	0
	92	12, 5	87,5	0	0
	113	12,5	87,5	0	0
	120	0	100	0	0
Комбинированное лечение:	15	0	63	37	0
ЕНВ/САМР	46	12,5	75	12, 5	0
	71	25	63	12, 5	0
	92	25	37	37	0
	113	25	37	0	37
	120	25	37,5	0	37,5

Пример 5. Оценка действия гиалуроновой кислоты на противоопухолевые свойства бевацизумаба (авастина) при лечении рака толстого кишечника человека.

Для оценки действия гиалуроновой кислоты на эффективность терапевтических доз бевацизумаба при лечении рака толстого кишечника у голых мышей в случае монотерапии или в сочетании с иринотеканом и/или лейковорином и/или 5-РИ. Конкретный анализ следующих параметров эффективности: объем первичной опухоли;

метастазы злокачественной опухоли;

токсичность лечения по отношению к массе тела, массе органов и выживанию.

Материалы и методы.

Тестовые и контрольные препараты.

- 30 013877

Тестовые препараты и дозировки, которые применялись в исследовании, представляют собой следующее:

гиалуроновая кислота (модальная молекулярная масса 800-900 кДа); дозировка 150 мг/кг;

бевацизумаб (авастин; ВЕУ); дозировка 5,0 мг/кг;

иринотекан гидрохлороид (камптосар или САМР); дозировка 50 мг/кг;

лейковорин; дозировка 5 мг/кг;

5-фторурацил (5-ЕИ); дозировка 100 мг/кг;

НуВЕУ (150/0,5); данная композиция содержит компоненты в виде 150 мг/кг НА и 0,5 мг/кг бевацизумаба.

Обработку (ί) физиологическим раствором, (ίί) НА, (ш) композицией, содержащей НА с бевацизумабом (НуВЕУ), (ίν) бевацизумабом (ВЕУ), (ν) НуВЕУ и иринотеканом/лейковорином/5-ЕИ (1ЕЬ) или (νί) ВЕУ и иринотеканом/лейковорином/5-ЕЙ (1ЕЬ) начинали приблизительно через 4-8 недель после того, как объем опухоли достигал диапазона 50-100 мм³. Лекарственные средства доставляли посредством болюсной 1У на сутки 1 и 4 всего в течение 5 недель. Введение иринотекана/лейковорина/5-ЕИ (1ЕЬ) проводили на сутки 1 7-суточного цикла всего в течение 5 недель. Мышей наблюдали в течение 120 суток на повторный рост опухоли. В табл. 7 ниже указаны компоненты дозировки и средний объем опухоли в каждой обрабатываемой группе на начало лечения.

Таблица 7

Объем опухоли на начало лечения

Группа лечения*	Доза компонентов в первой композиции на животное (мт/кт)	Доза компонентов во второй композиции (ΙΠ.) на животное (мг/кг)	Объем опухоли (мм3) Среднее ± 80
НА	бев ацизумаб	иринотекан	лейковорин	5ЕП	на начало лечения	как процент массы тела на начало лечения
Контроль: + Физиологический раствор	-	-	-	-	-	79,54+8,2	0,46+0,07
Комбинированное лечение: 1ЕЬ + НуВЕУ	150	5,0	50	5	100	81,82+9,53	0,51+0,05
Комбинированное лечение: 1ЕЬ + НуВЕУ	-	5,0	50	5	100	76,99+7,27	0,48+0,09

* 8 животных на группу обработки.

# Примечание: после одного цикла химиотерапии 1ЕЬ предпринято снижение дозы 5-ЕИ от 100 до 50 мг/кг вследствие избыточной потери массы у обоих групп обработки. Оставшиеся четыре цикла составляли 50 мг/кг 5-ЕИ.

Введение лекарственных средств и контрольных носителей.

Мышей случайным образом распределяли на каждые из семи групп обработки (п=8 на группу). Каждую мышь помещали в бокс для инъекций и введение лечебного препарата проводили через хвостовую вену с применением иглы 26 калибра. Для обеспечения точности каждой вводимой дозы шприцы до и после инъекции взвешивали с применением аналитических весов с четырьмя десятичными знаками.

Протокол введения для каждой группы приведен в табл. 8.

Таблица 8

Протокол введения лечебной композиции

Группа лечения*	ДоЗа компонентов в первой кромпозиции на животное (мг/кг)	Доза компонентов во второй композиции на животное (мг/кг)	Протокол введения
НА	бевацизумаб	иринотекан	лейковорин	5ги
Контроль: ♦ ΙΕΈ + физиологический раствор	-	-	-	-	-	Сутки 1, 4x5 недель
Комбинированное лечение: • НуВЕУ с * ΙΓΕ	150	5, 0	50	5	100	Сутки 1, 4x5 недель Сутки 1x5 недель
Комбинированное лечение: • ВЕУ с • 1ГЪ	-	5, 0	50	5	100	Сутки 1, 4x5 недель Сутки 1 х 5 недель

п=8 на группу

- 31 013877

Индивидуальные инъекции получали в зависимости от массы каждой мыши с целью доставки 50 мг/кг иринотекана (эквивалентно терапевтической дозе для человека 208 мг/м²; ΜΙΜ81999). Из партий обезвоженной гиалуроновой кислоты (НА) получали раствор 10 мг/мл и помещали в одноразовые 100 мл стерильные стеклянные пробирки. Гиалуроновую кислоту, составленную с бевацизумабом (НуВЕУ), получали, смешивая часть 25 мг/мл исходного раствора бевацизумаба с раствором гиалуроновой кислоты до конечной концентрации НА, эквивалентной 150 мг/кг массы мыши и 0,5 мг/кг бевацизумаба.

Растворы, композиции и проведение схемы лечения 1ЕЬ (т.е. иринотекана, и лейковорина, и 5-ЕИ) вводили стандартным образом, известным в данной области.

Препараты количественно вводили через хвостовую вену.

Для всех других материалов, способов и расчетов, используемых для этого исследования, см. как для примера 4. Они включают следующее:

клеточную линию карциномы толстого кишечника человека;

модель опухоли на мышах;

содержание и размещение животных;

мониторинг массы тела, объема опухоли и самочувствия животного;

умерщвление животных в конечной точке эксперимента;

сбор и обработку опухоли и органов тела;

анализ данных;

классификацию прогрессирования опухолей;

средний объем опухоли;

массу органов;

массу тела;

% изменения общей массы тела в конечной точке эксперимента;

средний % изменения общей массы тела в конечной точке эксперимента;

выживание.

Результаты и выводы.

1ЕЬ с бевацизумабом в модели ксенотрансплантата ΠΜ1215: объем опухоли.

На фиг. 7 показан процент изменения объема опухоли для мышей, получающих комбинированное лечение 1ЕЬ+ВЕУ и 1ЕЬ+НуВЕУ. Включение НуВЕУ с режимом 1ЕЬ приводит к значимо более раннему ответу опухоли (а: р<0,05) по сравнению с группой обработки 1ЕЬ+ВЕУ. Эти данные демонстрируют, что добавление НА к антителу увеличивает эффективность.

В конечной точке эксперимента (134 суток) опухоли были классифицированы на четыре категории на основе степени прогрессирования их опухоли, как рассчитано из данных об объеме опухолей по Μаисйе^ & νοη Апдегег, 1994, выше. Эти данные представлены в табл. 9.

Таблица 9 Классификация опухолей на 4, 15, 32, 46, 71, 92 и 134 сутки в ксенотрансплантатах рака толстого кишечника ΠΜ1215, получающих 1ЕЬ+физиологический раствор, 1ЕЬ+ВЕУ и 1ЕЬ+НуВЕУ

	Полная ремиссия (% мышей)	Частичная ремиссия (% мышей)	Статическая опухоль (% мышеи)	Прогрессирующая опухоль (% мышей)
Лечение*	1ГЬ + физиологический раствор	1ГЬ + ВВУ	1ЕЬ + НуВЕУ	1ЕЬ + физиологический раствор	1ГЬ + ВЕУ	ΙΗΊ> + НуВЕУ	1РЪ + физиологический раствор	ΙΕΤ- + ВЕУ	1ГЬ + НуВЕУ	1ЕЬ + физиологический раствор	ΙΕΕ + ВЕУ	ΙΓΕ + НуВЕУ
Сутки
4	-	-	-	-	-	-	100	100	100	-	-	-
15	-	-	-	-	12, 5	62,5	100	87,5	37,5	-	-	-
32*	-	-	-	-	62,5	87,5	100	37,5	12,5	-	-	-
46	-	-	-	-	75	87,5	100	25	12,5	-		-
71	-		-	-	50	87, 5	50	37,5	12, 5	50		12,5
92	-		12, 5	-	37,5	75	16, 7	37,5	-	83, 3	12,5	25
134	-		12,5	-	12,5	37,5	-	50	12,5	100	25	37, 5

*1ЕЬ+физиологический раствор (п=6); 1ЕЬ+ВЕУ (п=8); 1ЕЬ+НуВЕУ (п=8). #Последние сутки лечения.

Сравнение групп 1ЕЬ+ВЕУ с 1ЕЬ+НуВЕУ на сутки 92 показывает, что добавление НА к схеме лечения приводит к сдвигу в прогрессировании опухоли в направлении частичной и полной ремиссии, указывая на то, что НА увеличивает эффективность.

Желудочно-кишечная токсичность: мониторинг массы тела.

Процент изменения общей массы тела на фиг. 8 показывает, что различия между группой 1ЕЬ+физиологический раствор и группами ГЕЬ+ВЕУ и 1ЕЬ+НуВЕУ являются значимыми, начиная с суток 25 до 134. Хотя для того же периода времени наблюдается тенденция, где увеличение массы лучше

- 32 013877 происходит у мышей, получающих ГРЬ+НуВЕУ, по сравнению с мышами, получающими ГРЬ+ВЕУ, эти различия не являются значимыми. Тенденция демонстрирует, что НуВЕУ улучшает самочувствие животного. Эти данные позволяют предположить, что НА обладает воздействием на желудочно-кишечный тракт, снижая токсичность, известную токсичность бевацизумаба.

Специалисты в данной области поймут, что изобретение, описываемое в настоящем документе, поддается вариациям и модификациям, отличным от конкретно описанных вариаций и модификаций. Следует понимать, что изобретение включает все такие вариации и модификации. Изобретение также включает все стадии, особенности, композиции и соединения, на которые делалась ссылка или которые указаны в данном описании, отдельно или обобщенно, и любую и все комбинации любых двух или более указанных стадий или особенностей.

Библиография

Европейский патент № 0265116.

Европейский патент № 0138572.

Сообщал аиб Сбтап'з Т1е Р11агтасо1ощса1 Ваз1з £ог Тйегареибсз (7(Ь еб.).

Ьапдег, Заепсе 249:1527, 1990.

Маисйег & уоп Лидегег, 1 Саисег Кез С1ш Опсо1. 120(8):502-4, 1994.

ΜΙΜ8 аппиа1, 1999.

Кетшд£оп'з Рйагтасеибса1 Баепсез, 15РЪ еб. ЕазЮп: Μаск РиЬйзЫпд Со.: 1405-1412, 1461-1487, 1975.

Т1е №1Ропа1 Рогти1агу XIV, 14(Ь еб. \Уаз1ипд1оп: Лтепсап Рйагтасеибса1 Лззоаабоп, 1975.

патент США № 4160452.

патент США № 4256108.

патент США № 4265874.

патент США № 4851521.

патент США № 4965353.

патент США № 4965353.

патент США № 5208020.

патент США № 5202431.

патент США № 5475092.

патент США № 5585499.

патент США № 5676964.

патент США № 5846545.

патент США № 6620927.

патент США № 6579978.

патент США № 6831172.

Claims (68)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Композиция, содержащая гиалуроновую кислоту (НА), или ее аналог, или производное, или синтезированную или химически модифицированную форму, или соль, где гиалуроновая кислота находится в диапазоне молекулярных масс от 400 до 20000 кДа, и терапевтическое антитело или его фрагмент, производное, часть, химерную или деиммунизированную форму и, необязательно, один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей и/или эксципиентов.
2. 2. Композиция по п.1, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс приблизительно от 400 Да до 10000 кДа.
3. 3. Композиция по п.1, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс приблизительно от 400 Да до 2000 кДа.
4. 4. Композиция по п.1, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс приблизительно от 400 до 1500 кДа.
5. 5. Композиция по п.1, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне модальных молекулярных масс приблизительно 860 кДа.
6. 6. Композиция по любому из пп.1-5, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма и антитело не связаны ковалентно.
7. 7. Композиция по п.1, где диапазон рН композиции составляет от рН 2,5 до 10,5.
8. 8. Композиция по п.1, где диапазон рН композиции составляет от рН 5,0 до 8,5.
9. 9. Композиция по любому из пп.1-6, где антитело, его фрагмент, производное, часть, химерная или полностью деиммунизированная форма предназначены для применения в лечении или профилактике клеточного пролиферативного заболевания.

   - 33 013877
10. 10. Композиция по любому из пп.1-6, где антитело, его фрагмент, производное или часть выбраны из группы антител, состоящей из АВХ-ЕСР; алемтузумаба; аполизумаба; бевацизумаба; кантузумаба; цетуксимаба; СС250; стс-544; даклизумаба; эпратузумаба; эрлотиниба; гемтузумаба озогамицина; 11Л20; НСВЕ-11; Нип901; ибритумомаба тиуксетана; ГОЕС 159; инфликсимаба; люмиликсимаба; тЛЬ 3Р8; тЛЬ Ь43,13; тАЬ ВС8; тАЬ СС49-дельтаСН2; тАЬ СЫ4,18; тАЬ СР-675206; тАЬ НеРМ; тАЬ Ни38193; тАЬ НиС1-М195; тАЬ РиНМР61; тАЬ 4591; тАЬ \11).Х-СТРА4; тАЬ М1К-бета-1; ΜΌΧ-010; ΜΕΌΙ507; ΜΕΝ2704; пертузумаба; К.АУ12; ритуксимаба; 8ΟΝ-30; 8ΟΝ-40; тозитумомаба; трастузумаба (герцептина); ТВМ-1 (ТКА1Ь В1 тАЬ) и иттрий-ибритумомаба.
11. 11. Композиция по п.9, где клеточное пролиферативное заболевание представляет собой любое из злокачественной опухоли, неопластического заболевания или любого заболевания, включающего воспаление ткани или высвобождение факторов воспаления.
12. 12. Композиция по п.9, где клеточное пролиферативное заболевание приводит к одному или нескольким из опухоли, неоплазии, бесконтрольной гиперпролиферации или метастазированию.
13. 13. Композиция по п.9, где клеточное пролиферативное заболевание присутствует в одном или нескольких органах или тканях, включая молочную железу, легкое, предстательную железу, почку, кожу, нервную ткань, яичники, матку, печень, поджелудочную железу, эпителиальные клетки, ткань желудка, кишечник, экзокринную, эндокринную, лимфатическую систему, гематопоэтическую систему, ткани головы и ткани шеи.
14. 14. Композиция по п.9, где клеточное пролиферативное заболевание возникает у млекопитающего.
15. 15. Композиция по любому из пп.1-6, где антитело представляет собой цетуксимаб.
16. 16. Композиция по любому из пп.1-6, где антитело представляет собой бевацизумаб.
17. 17. Композиция по любому из пп.1-6, где антитело является гуманизированным.
18. 18. Композиция по пп.15, 16 или 17 для применения в лечении или профилактике колоректального рака.
19. 19. Композиция по п.14, где млекопитающее выбрано из группы, состоящей из примата, коровы, собаки, лошади, кошки и свиньи.
20. 20. Композиция по п.19, где примат представляет собой человека.
21. 21. Композиция по любому из пп.1-6, где композиция является пероральной, топической или парентеральной формой.
22. 22. Композиция по п.21, где оральная форма представлена в виде таблетки, пилюли, капсулы, пастилки, лепешки, порошка, гранулы, эмульсии, жидкой, водной или масляной суспензии, лекарственного средства, сиропа, эликсира или спрея.
23. 23. Композиция по п.21, где топическую форму вводят в форме крема, лосьона, эмульсии, геля, пленки, спрея, пасты или мази.
24. 24. Композиция по п.21, где парентеральную форму вводят посредством способов подкожной инъекции, аэрозоля, внутривенной, внутримышечной, интратекальной, внутричерепной, интрастернальной инъекции или инфузии в форме жидкости, мази, суппозитория или пессария.
25. 25. Композиция по любому из пп.1-24 совместно со вторым средством или второй композицией, применяемой в лечении клеточного пролиферативного заболевания, где второе средство представляет собой химиотерапевтическое средство или терапевтическое антитело.
26. 26. Композиция по любому из пп.1-25, где биодоступность антитела, его фрагмента, производного или части увеличены.
27. 27. Композиция по п.25, где НА вводят до или после введения второго средства.
28. 28. Композиция по п.25, где НА вводят до введения второго средства.
29. 29. Композиция по п.25, где НА вводят после введения второго средства.
30. 30. Композиция по п.21, где НА вводят перорально.
31. 31. Композиция по любому из пп.1-30, где НА вводят в количестве приблизительно от 0,01 до приблизительно 40 мг/кг массы тела.
32. 32. Композиция по любому из пп.1-30, где НА вводят в количестве приблизительно от 0,1 до приблизительно 27 мг/кг массы тела.
33. 33. Способ лечения или профилактики клеточных заболеваний у субъекта, где способ включает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтического антитела или его фрагмента, производного, части, химерной или полностью деиммунизированной формы и НА или ее аналога, производного или синтезированной или химически модифицированной формы либо соли, где гиалуроновая кислота находится в диапазоне молекулярных масс от 360 Да до 20000 кДа, в течение периода времени и в условиях, достаточных для облегчения симптомов клеточного заболевания.
34. 34. Способ по п.33, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс от 360 Да до 10000 кДа.
35. 35. Способ по п.33, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс приблизительно от 360 Да до 2000 кДа.
36. 36. Способ по п.33, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная

    - 34 013877 или модифицированная форма находится в диапазоне молекулярных масс приблизительно от 20 до 1500 кДа.
37. 37. Способ по п.33, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма находится в диапазоне модальных молекулярных масс приблизительно 860 кДа.
38. 38. Способ по любому из пп.33-37, где гиалуроновая кислота, или ее аналог, или производное, или синтезированная или модифицированная форма и антитело не связаны ковалентно.
39. 39. Способ по п.33, где диапазон рН композиции составляет от рН 2,5 до 10,5.
40. 40. Способ по любому из пп.33-39, где антитело, его фрагмент, производное или часть выбраны из группы антител, состоящей из АВХ-ЕСЕ; алемтузумаба; аполизумаба; бевацизумаба; кантузумаба; цетуксимаба; СС250; стс-544; даклизумаба; эпратузумаба; эрлотиниба; гемтузумаба озогамицина; 11Л20; НСВЕ-11; Нип901; ибритумомаба тиуксетана; ГОЕС 159; инфликсимаба; люмиликсимаба; тАЬ 3Е8; тАЬ Ь43,13; тАЬ ВС8; тАЬ СС49-дельтаСН2; тАЬ СЫ4,18; тАЬ СР-675206; тАЬ НеИ-1; тАЬ Нц38193; тАЬ НИС1-М195; тАЬ ЬиНМЕС1; тАЬ 1591; тАЬ МПХ-СТЬА4; тАЬ М1К-бета-1; ΜΌΧ-010; МЕЭ1507; МЬЫ2704; пертузумаба; КАУ12; ритуксимаба; 8ΟΝ-30; 8ΟΝ-40; тозитумомаба; трастузумаба (герцептина); ТКМ-1 (ТКА1Ь К1 тАЬ) и иттрий-ибритумомаба.
41. 41. Способ по любому из пп.33-40, где клеточное пролиферативное заболевание представляет собой любое из злокачественной опухоли, неопластического заболевания или любого заболевания, включающего воспаление ткани или высвобождение факторов воспаления.
42. 42. Способ по любому из пп.33-41, где клеточное пролиферативное заболевание приводит к одному или нескольким из опухоли, неоплазии, бесконтрольной гиперпролиферации или метастазирования.
43. 43. Способ по любому из пп.33-42, где клеточное пролиферативное заболевание присутствует в одном или нескольких органах или тканях, включая молочную железу, легкое, предстательную железу, почку, кожу, нервную ткань, яичники, матку, печень, поджелудочную железу, эпителиальные клетки, ткань желудка, кишечник, экзокринную, эндокринную, лимфатическую систему, гематопоэтическую систему, ткани головы и ткани шеи.
44. 44. Способ по любому из пп.33-43, где клеточное пролиферативное заболевание возникает у млекопитающего.
45. 45. Способ по любому из пп.33-37, где антитело представляет собой цетуксимаб.
46. 46. Способ по любому из пп.33-37, где антитело представляет собой бевацизумаб.
47. 47. Способ по любому из пп.33-46 для лечения или профилактики колоректального рака.
48. 48. Способ по п.44, где млекопитающее выбрано из группы, состоящей из примата, коровы, собаки, лошади, кошки и свиньи.
49. 49. Способ по п.48, где примат представляет собой человека.
50. 50. Способ по любому из пп.32-49, где введение является пероральным, топическим или парентеральным.
51. 51. Способ по п.50, где пероральная форма является таблеткой, пилюлей, капсулой, пастилкой, лепешкой, порошком, гранулой, эмульсией, жидкой, водной или масляной суспензией, лекарственным средством, сиропом, эликсиром или спреем.
52. 52. Способ по п.50, где топически вводимая форма является кремом, лосьоном, эмульсией, гелем, пленкой, спреем, пастой или мазью.
53. 53. Способ по п.50, где парентеральное введение осуществляют посредством способов подкожной инъекции, аэрозоля, внутривенной, внутримышечной, интратекальной, внутричерепной, интрастернальной инъекции или инфузии в форме жидкости, мази, суппозитория или пессария.
54. 54. Способ по любому из пп.33-53, где гиалуроновую кислоту, или ее аналог, или производное, или синтезированную или модифицированную форму вводят одновременно, последовательно, до, в комбинации, во время или после введения антитела, его фрагмента, производного или части.
55. 55. Способ по любому из пп.33-54, где второе средство или вторую композицию вводят, когда применяют в лечении клеточного пролиферативного заболевания, где второе средство представляет собой химиотерапевтическое средство или терапевтическое антитело.
56. 56. Способ по п.55, где второе средство или композиция содержит НА, составленную с иринотеканом, или доксорубицином, или фторурацилом, или лейковорином, или оксалиплатином, или метотрексатом, или гемцитабином.
57. 57. Способ по п.56, где второе средство или композиция содержит НА, составленную с любым антителом, выбранным из группы, состоящей из ЛВХ-ЕСЕ; алемтузумаба; аполизумаба; бевацизумаба; кантузумаба; цетуксимаба; СС250; стс-544; даклизумаба; эпратузумаба; эрлотиниба; гемтузумаба озогамицина; 11А20; НСВЕ-11; Нип901; ибритумомаба тиуксетана; ГОЕС 159; инфликсимаба; люмиликсимаба; тАЬ 3Е8; тАЬ Ь43,13; тАЬ ВС8; тАЬ СС49-дельтаСН2; тАЬ Сй14,18; тАЬ СР-675206; тАЬ НеЕ1-1; тАЬ Ни38193; тАЬ НиС1-М195; тАЬ ЬиНМЕС1; тАЬ 1591; тАЬ МПХ-СТЬА4; тАЬ М1К-бета-1; М1ЕХ010; МЕЭ1-507; МЬ№704; пертузумаба; КАУ12; ритуксимаба; 8С№30; 8С№40; тозитумомаба; трастузумаба (герцептина); ТКМ-1 (ТКА1Ь К1 тАЬ) и иттрий-ибритумомаба.
58. 58. Способ по п.55, где второе средство или композиция содержит иринотекан, или доксорубицин,

    - 35 013877 или фторурацил, или лейковорин, или оксалиплатин, или метотрексат, или гемцитабин.
59. 59. Способ по п.55, где второе средство или композиция содержит любое антитело, выбранное из группы, состоящей из АВХ-Е6Е; алемтузумаба; аполизумаба; бевацизумаба; кантузумаба; цетуксимаба; С6250; стс-544; даклизумаба; эпратузумаба; эрлотиниба; гемтузумаба озогамицина; 11А20; НСВЕ-11; Нип901; ибритумомаба тиуксетана; ЮЕС 159; инфликсимаба; люмиликсимаба; тАЬ 3Е8; тАЬ Ь43,13; тАЬ ВС8; тАЬ СС49-дельтаСН2; тАЬ СЫ4,18; тАЬ СР-675206; тАЬ НеИ-1; тАЬ Ни38193; тАЬ Ни61-М195; тАЬ ЬиНМЕО1; тАЬ 1591; тАЬ ХШ.Х-СТЕА4; тАЬ М1К-бета-1; ΜΌΧ-010; МЕП1-507; МЬЫ2704; пертузумаба; КАУ12; ритуксимаба; 86Ν-30; 86Ν-40; тозитумомаба; трастузумаба (герцептина); ТКМ-1 (ТКА1Ь К1 тАЬ) и иттрий-ибритумомаба.
60. 60. Способ по любому из пп.55-59, где второе средство или композиция содержит схему лечения ЕОЬЕОХ (фторурацил, лейковорин и оксалиплатин), ЕОЬЕ1К1 (включающую иринотекан, лейковорин и фторурацил) и 1ЕЬ (включающую иринотекан, фторурацил и лейковорин).
61. 61. Способ по любому из пп.33-60, где биодоступность антитела, его фрагмента, производного или части увеличена.
62. 62. Применение терапевтического антитела или его фрагмента, производного, части, химерной или полностью деиммунизированной формы, в сочетании с НА, или ее производными, или синтезированными или химически модифицированными формами, или солями, где гиалуроновая кислота находится в диапазоне молекулярных масс от 360 Да до 20000 кДа, в производстве лекарственного средства для лечения или профилактики клеточного заболевания.
63. 63. Композиция по любому из пп.1-6, где антитело представляет собой герцептин.
64. 64. Композиция по п.25, где второе средство или вторая композиция представляет собой иринотекан, или доксорубицин, или фторурацил, или лейковорин, или оксалиплатин, или метотрексат, или гемцитабин.
65. 65. Композиция по любому из пп.1-24 совместно со второй композицией, применяемой в лечении клеточного пролиферативного заболевания, где вторая композиция содержит НА, или ее производное, или синтезированную или химически модифицированную форму, или соль и химиотерапевтическое средство или терапевтическое антитело.
66. 66. Композиция по п.65, где композиция содержит цетуксимаб, а вторая композиция содержит иринотекан.
67. 67. Композиция по любому из пп.1-25, где НА вводят до антитела.
68. 68. Способ лечения клеточного пролиферативного заболевания, включающий введение композиции, содержащей НА и антитело, где НА вводят до антитела.