EA011552B1 - Производные хиназолиндиона в качестве ингибиторов parp - Google Patents

Abstract

В настоящем изобретении предлагаются соединения формулы (I), их применение в качестве ингибиторов PARP, а также фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения формулы (I), где R, L, L, X, Y и Z имеют указанные значения.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к ингибиторам РАКР и предлагает соединения и композиции, содержащие эти соединения. Кроме того, в настоящем изобретении предлагаются способы применения описанных ингибиторов РЛКР, например, в качестве лекарственных средств.

Уровень техники

Нуклеарный фермент поли(АЭР-рибоза)полимераза-1 (РАКР-1) является членом семейства ферментов РАКР. Указанное возрастающее семейство состоит из ферментов РАКР, таких как, например, РАКР-1, РАКР-2, РАКР-3 и УаиИ-РАКР; и ферментов танкираз (ΤΑΝΚ), таких как, например, ΤΑΝΚ-1, ΤΑΝΚ-2 и ΤΑNΚ-3. РАКР называют также поли(аденозин-5'-дифосфорорибоза)полимеразой или РАК8 (поли(АЭР-рибоза)синтетазой).

Танкиразы (ΤΛΝΚ) были идентифицированы как компоненты теломерного комплекса человека. Было также высказано предположение, что они играют определенную роль в выборе направления миграции везикул, а также могут служить в качестве клеточного каркаса для белков, которые принимают участие в различных других клеточных процессах. Теломеры, которые играют существенную роль в обеспечении жизнедеятельности и устойчивости хромосом, поддерживаются теломеразой, специализированной обратной транскриптазой. ΤΑNΚ представляют собой (АОР-рибоза)трансферазы, которые обладают общими свойствами как сигнальных, так и цитоскелетных белков. Они содержат домен РАКР, который катализирует поли-АЭР-рибозилирование белков-субстратов и представляет собой агенезический альфафрагмент, сходный с доменами некоторых сигнальных молекул, и домен АИК, который включает 24 анкириновых повторов, гомологичных цитоскелетному белку анкирину. Домен АМ< взаимодействует с теломерным белком, фактором-1 связывания теломерного повтора (ГКР-1). Поэтому указанные белки называют взаимодействующими с ΤΡΡ1 анкирин-связывающими АЭР-рибозаполимеразами ^АМК).

Одной из наиболее специфичных функций ΤΑNΚ является АЭР-рибозилирование 1КР-1. Функционирование теломеров человека требует наличия двух теломер-специфичных ДНК-связывающих белков ΤΡΡ-1 и ТОР-2. 1КР-2 защищает концы хромосом, а ТОР-1 регулирует длину теломера. АЭРрибозилирование подавляет способность ТОР-1 связываться с теломерной ДНК. Указанное поли-АЭРрибозилирование ТОР-1 высвобождает ТОР-1 из теломеров, раскрывая теломерный комплекс, и открывает доступ к теломеразе. Таким образом, ΤΑNΚ функционирует в качестве положительного регулятора длины теломеров, позволяя осуществлять удлинение теломеров под действием теломеразы.

РАКР-1 является основным нуклеарным белком, имеющим размер 116 кДа, и включает три домена: Ν-концевой ДНК-связывающий домен, который содержит две цинкосодержащие пальцеообразные области, домен аутомодифицирования и С-концевой каталитический домен. Он имеется практически у всех эукариот. Указанный фермент синтезирует поли(АОР-рибозу) - разветвленный полимер, который содержит более 200 фрагментов АЭР-рибозы. Белки-акцепторы поли(АОР-рибозы) прямо или опосредованно участвуют в поддержании целостности ДНК. Они включают гистоны, топоизомеразы, ДНК- и РНКполимеразы, ДНК-лигазы и Са²⁺- и Мд²⁺-зависимые эндонуклеазы. Белок РАКР экспрессируется с высоким уровнем во многих тканях и в основном в иммунной системе, сердце, мозге и линии половых клеток. В нормальных физиологических условиях РАКР обладает минимальной активностью. Однако повреждение ДНК вызывает немедленное вплоть до 500-кратного увеличение активности РАКР.

Одной из многочисленных функций, которые относят к РАКР, и в частности РАКР-1, является важная роль, которую он играет в способствовании репарации ДНК путем АЭР-рибозилирования и, таким образом, в координировании функций ряда белков, осуществляющих репарацию ДНК. В результате активирования РАКР значительно понижаются уровни МАЭ⁺. Интенсивная активация РАКР приводит к значительному элиминированию МАЭ⁺ из клеток, страдающих от массового повреждения ДНК. Короткий полупериод существования поли(АЭР-рибозы) приводит к быстротечности функционального цикла. Как только поли(АЭР-рибоза) образовалась, она быстро разлагается под действием конститутивно активной поли(АЭР-рибоза)гликогидролазы (РАКО) вместе с фосфодиэстеразой и (АЭРрибоза)протеинлиазой. РАКР и РАКО составляют цикл, в котором большое количество МАЭ⁺ превращается в АЭР-рибозу. Менее чем за час избыточное стимулирование РАКР может вызвать падение уровня МАЭ⁺ и АТФ до значения, составляющего меньше, чем 20% от нормального уровня. Подобный сценарий особенно пагубен при ишемии, когда кислородная недостаточность уже подвергла значительному риску выработку энергии клетками. Полагают, что последующее производство свободных радикалов в процессе реперфузии является основной причиной поражения тканей. Частично падения концентрации АТФ, что типично для многих органов при ишемии и реперфузии, можно связать с элиминированием МАЭ⁺, вызванным метаболизмом поли(АЭР-рибозы). Таким образом, ожидают, что ингибирование РАКР или РАКО сохраняет уровень клеточной энергии и тем самым обеспечивает возможность ишемическим тканям выжить после инсульта.

Поли(АОР-рибоза)синтаза принимает также участие в индуцированной экспрессии ряда генов, которые важны для формирования воспалительного ответа. Ингибиторы РАКР подавляют продукцию индуцируемой синтазы оксида азота (1ΝΟ8) в макрофагах, селектина Р-типа и молекулы-1 межклеточной адгезии (1САМ-1) в клетках эндотелия. Подобная активность подчеркивает сильное противовоспалительное действие, которое оказывают ингибиторы РАКР. Ингибиторы РАКР способны также снижать

- 1 011552 некроз, препятствуя транслокации и инфильтрации нейтрофилов в пораженные ткани.

РАКР активируется фрагментами поврежденной ДНК и сразу же после активации катализирует присоединение вплоть до 100 фрагментов АЭР-рибозы к разнообразным нуклеарным белкам, включая гистоны и сам РЛКР. При серьезных клеточных стрессах экстенсивная активация РЛКР может быстро привести к повреждению или смерти клеток за счет истощения запасов энергии. Поскольку на каждую регенерированную молекулу ΝΆΌ⁺ потребляются четыре молекулы АТФ, то массовая активация РАКР приводит к элиминированию ΝΑΌ⁺, а попытки вновь синтезировать ΝΑΌ⁺ могут привести к истощению запасов АТФ.

Сообщалось, что активация РАКР играет ключевую роль как в ΝΜΌΑ-, так и ΝΟ-индуцированной нейротоксичности. Это было показано в кортикальных культурах и в срезах гиппокампа, в которых предотвращение токсичности прямо коррелирует с действенностью ингибирования РАКР. Потенциальная роль ингибиторов РАКР при лечении нейродегенеративных заболеваний и травм головы признана, несмотря на то, что точный механизм их действия пока еще не выявлен.

Аналогично, было показано, что однократные инъекции ингибиторов РАКР снижали размер инфаркта, вызываемого ишемией и реперфузией в сердце или скелетных мышцах кроликов. При проведении указанных исследований однократные инъекции 3-аминобензамида (10 мг/кг) как за одну минуту до окклюзии, так и за одну минуту до реперфузии вызывали аналогичные снижения размера инфаркта в сердце (32-42%), в то время как 1,5-дигидроксиизохинолин (1 мг/кг), другой ингибитор РАКР, в сопоставимой степени (38-48%) снижал размер инфаркта. Указанные результаты заставляют предположить, что ингибиторы РАКР способны защитить от ранее наблюдаемой ишемии сердца или вызываемого реперфузией повреждения тканей скелетных мышц.

Активацию РАКР можно также использовать как меру поражения в результате нейротоксических инсультов, являющихся результатом воздействия любого из следующих индуцирующих факторов, таких как глутамат (за счет стимулирования рецептора НМЭА). реакционноспособные промежуточные соединения кислорода, амилоидный β-белок, №метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин (МРТР) или его активный метаболит №метил-4-фенилпиридин (МРР⁺), которые участвуют в таких патологических состояниях, как удар, болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона. Продолжаются исследования, направленные на изучение ίη νίίτο роли активации РАКР в мозжечковых тучных клетках и при МРТР нейротоксичности. Избыточное действие на нервные ткани глутамата, который является превалирующим нейротрансмиттером центральной нервной системы и воздействует на рецепторы Ν-метил-Э-аспартата (ХМЭА) и другие типы рецепторов, наиболее часто возникает в результате удара или протекания другого нейродегенеративного процесса. В результате кислородной недостаточности нейроны в больших количествах высвобождают глутамат при ишемическом инсульте мозга, возникающем при ударе или при сердечном приступе.

Указанное избыточное высвобождение глутамата, в свою очередь, вызывает избыточное стимулирование (экзитотоксичность) рецепторов Ν-метил-Э-аспартата (ИМО А), АМРА, каината и МОК, которые открывают ионные каналы и позволяют возникать неконтролируемому потоку ионов (в частности, Са²⁺ и Να' в клетки и К⁺ из клеток), что приводит к избыточному возбуждению нейронов. Избыточное возбуждение нейронов вызывает дополнительную секрецию глутамата, что создает петлевую обратную связь или вызывает эффект домино, который в конце концов приводит к поражению или смерти клеток за счет продуцирования протеаз, липаз и свободных радикалов. Избыточная активация рецепторов глутамата вовлекается в различные неврологические заболевания и состояния, включая эпилепсию, удар, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, амиотрофический латеральный склероз (АЬ8), болезнь Хантингтона, шизофрению, хроническую боль, ишемию и потерю нейронов в результате гипоксии, гипогликемию, ишемию, травму и нервный инсульт. Воздействие глутамата и стимулирование составляет также основу компульсивных расстройств, в частности, зависимости от наркотиков. Для различных видов животных, а также в культурах коры головного мозга, обработанных глутаматом или с помощью ХМЭА, получены подтверждения того, что антагонисты рецептора глутамата (т.е. соединения, которые блокируют связывание глутамата или активирование его рецептора) блокируют повреждение нервных тканей после васкулярной травмы. Попытки предотвратить экзитотоксичность путем блокирования рецепторов ХМЭА, АМРА, каината и МОК оказались трудными, поскольку каждый рецептор обладает множеством участков, с которыми может связываться глутамат, т.е. оказалось трудно найти эффективную смесь антагонистов или универсальный антагонист, способный предотвратить связывание глутамата со всеми рецепторами, и проверить указанную теорию. Кроме того, многие композиции, которые эффективно блокируют рецепторы, одновременно токсичны для животных. Таким образом, эффективное лечение глутаматных аномалий в настоящее время не известно.

Стимулирование рецепторов ХМЭА глутаматом, например, активирует фермент нейрональную синтазу оксида азота (ηΝΟδ), что приводит к образованию оксида азота (ΝΟ), который также опосредует нейротоксичность. Нейротоксичность ИМОА можно также предотвратить путем обработки ингибиторами нейрональной синтазы оксида азота (ΝΟ8) или путем нацеленного генетического разрушения ηΝΟδ ίη νίίτο.

Другое применение ингибиторы РАКР находят при лечении поражений периферических нервов и

- 2 011552 возникающего вследствие этого патологического болевого синдрома, известного как невропатическая боль, который, в частности, вызывается поражением при хроническом защемлении (СС1) обычного седалищного нерва и при котором возникает транссинаптическое изменение заднего рога спинного мозга, характеризующееся гиперхроматозом цитоплазмы и нуклеоплазмы (появление так называемых темных нейронов).

Получены данные, указывающие на то, что ингибиторы РАКР применимы для лечения воспалительных заболеваний кишечника, таких как колит. В частности, колит вызывали у крыс путем внутрипросветного введения гаптена тринитробензолсульфоновой кислоты в 50%-ном этаноле. Подвергнутые обработке крысы получали 3-аминобензамид, являющийся специфичным ингибитором активности РЛКР. Ингибирование активности РЛКР снижает воспалительный ответ и восстанавливает морфологию и энергетический статус дистальной ободочной кишки.

Имеются также указания, что ингибиторы РАКР применимы для лечения артрита. Кроме того, ингибиторы РАКР, видимо, пригодны для лечения диабета. Было показано, что ингибиторы РАКР применимы для лечения эндотоксического шока или септического шока.

Ингибиторы РАКР применяли также для продления времени жизни и увеличения пролиферативной способности клеток, в том числе при лечении таких заболеваний, как старение кожи, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, остеоартрит, остеопороз, мышечная дистрофия, дегенеративные заболевания скелетных мышц, включая репликационное физиологическое старение, возрастная дегенерация мышц, физиологическое старение иммунной системы, СПИД и другие заболевания иммунной системы, вызванные физиологическим старением; и для изменения экспрессии генов стареющих клеток.

Известно также, что ингибиторы РАКР, такие как 3-аминобензамид, оказывают воздействие на общую репарацию ДНК в ответ, например, на действие пероксида водорода или ионизирующего излучения.

Надежно установлена кардинальная роль РАКР при репарации разрывов в цепи ДНК, особенно в тех случаях, которые вызваны непосредственно действием ионизирующего излучения или опосредовано проявляются после ферментативной репарации повреждений ДНК, вызываемых метилирующими агентами, ингибиторами топоизомеразы I типа и другими химиотерапевтическими средствами, такими как цисплатин и блеомицин. Различные исследования с использованием мышей-нокаутов, моделей трансдоменного ингибирования (сверхэкспрессия ДНК-связывающего домена), антисмысловых ингибиторов и ингибиторов с небольшой молекулярной массой продемонстрировали роль РАКР при репарации и выживании клеток после индуцирования повреждения ДНК. Ингибирование ферментативной активности РАКР должно приводить к повышенной чувствительности опухолевых клеток к обработкам, вызывающим повреждение ДНК.

Сообщалось, что ингибиторы РАКР эффективны при радиосенсибилизации (гипоксической) опухолевых клеток и эффективно препятствуют восстановлению опухолевых клеток при потенциально летальном и сублетальном поражении ДНК после радиотерапии, в первую очередь за счет способности ингибиторов препятствовать воссоединению разрывов нити ДНК и за счет воздействия на несколько путей передачи сигнала о повреждении ДНК.

Ингибиторы РАКР применяли при лечении рака. Кроме того, в патенте США № 5177075 обсуждается несколько изохинолинов, которые применяли для усиления летального действия ионизирующего излучения или химиотерапевтических средств на опухолевые клетки. ^Ус111п е! а1., ЕГГсс! оГ 6(5Р11спаШ11пбтопс). ап БйнЬйог οί Ро1у(АОР-пЬоке) Ро1утегаке, оп СиЙитеб Титог Се11к, Опсо1. Кек., 6: 9, 399-403 (1994) обсуждают ингибирование активности РАКР, уменьшение пролиферации опухолевых клеток и выраженный синергический эффект в том случае, когда опухолевые клетки подвергают совместной обработке с алкилирующим лекарством.

Обзоры по современному уровню техники опубликованы Ь1 апб 2йапд, Штидк 2001, 4(7): 804-812, Ате е! а1. , Вюаккаук 2004, 26: 882-883 и Идиета е! а1., Ргодгекк ш Вюрйукю & Мо1еси1аг Вю1оду 2005, 88: 143-172.

Сохраняется потребность в эффективных и действенных ингибиторах РАКР и, в частности, ингибиторах РАКР-1, которые вызывают минимальные побочные эффекты. В настоящем изобретении предлагаются соединения, композиции для ингибирования и способы ингибирования активности РАКР при лечении рака и/или предотвращении поражения клеток, тканей и/или органов в результате повреждения или отмирания клеток, вызываемого, например, некрозом или апоптозом. Соединения и композиции по настоящему изобретению наиболее пригодны для повышения эффективности химиотерапии и радиотерапии, где основной эффект от воздействия заключается в повреждении ДНК клеток-мишеней.

Описание предшествующего уровня техники

Патент ЕР 2036073, опубликованный 17 июня 1999, раскрывает замещенные производные хиназолиндиона. Приведенные соединения обладают фундальными релаксирующими свойствами. В частности, раскрывается соединение 1-[1-[(28)-2-[(2К)-3,4-дигидро-2Н-1-бензопиран-2-ил]-2-гидроксиэтил]-4пиперидинил]-2,4(1Н,3Н)хиназолиндион (соединение № 9 в данном описании).

- 3 011552

Патент ЕР 13612, опубликованный 11 ноября 1983, раскрывает замещенные производные соединения пиперидинилкилхиназолина. Описываемые соединения являются антагонистами серотонина. В частности, раскрываются соединения 1-[2-4-[(4-фторбензоил)-1-пиперидинил]этил]-2,4-(1Н,3Н)хиназолиндион (соединение № 10 в данном описании), 1-[3-[4-(4-фторбензоил)-1-пиперидинил]пропил]2,4-(1Н,3Н)-хиназолиндион (соединение № 11 в данном описании), 3-[2-[4-(4-хлорбензоил)-1пиперидинил]этил]-2,4-(1Н,3Н)-хиназолиндион (соединение № 12 в данном описании), 3-[2-[4-(4фторфенил)гидроксиметил]-1-пиперидинил]этил]-2,4-(1Н,3Н)-хиназолиндион (соединение № 13 в данном описании).

Соединение 10

Соединение 11

О О

Соединение 12

Соединение 13

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)

его Ν-оксидные формы, фармацевтически приемлемые аддитивные соли и его стереохимически сн- ^ч _сн_ ' и когда X означает ^ζ < то Υ изомерные формы, где каждый X независимо обозначает ^/

или ' > за исключением случая, когда X обох

Λ · означает ' каждый Υ независимо обозначает или ч —

СН— / значает ' , и тогда Υ обозначает ' '

Ь¹ означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из -С_3-6алкандиила-,

Ь² означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из карбонила, -С_3-6алкандиила-, -(гидрокси)С1_-6алкандиила-, -С(О)-С1_-6алкандиила- или -С1_-6алкандиил-С(О)-;

К¹ означает атом водорода или гидроксильную группу;

Ζ означает атом водорода или радикал, выбранный из

- 4 011552

(а-1) (а-2) (а-3) (а-4) (а-5) где каждый К² независимо выбран из атома водорода, атома галогена или С1_-6алкила, при условии, что хиназолиндионовый фрагмент присоединен к остальной части молекулы по -ΝΗфрагменту в положении 1, и в этом случае атом водорода замещен, и при условии что соединения 1-[1[(28)-2-[(2К)-3,4-дигидро-2Н-1-бензопиран-2-ил]-2-гидроксиэтил]-4-пиперидинил]-2,4(1Н,3Н)хиназолиндион, 1-[2-4-[(4-фторбензоил)-1-пиперидинил]этил]-2,4-(1Н,3Н)хиназолиндион, и 1-[3-[4-(4фторбензоил)-1-пиперидинил]пропил]-2,4-(1Н,3Н)хиназолиндион исключаются.

В том случае, когда Ζ обозначает гетероциклическую кольцевую систему, включающую фрагмент СН₂-, -СН= или -Ν^-, то заместитель К² и/или остальная часть молекулы может быть присоединена к атому углерода/или атому азота, и в этом случае замещены один или оба атома водорода.

Соединения формулы (I) могут существовать в таутомерных формах. Несмотря на то, что подобные формы не полностью освещены в приведенной выше формуле, предполагается, что они также входят в объем настоящего изобретения.

Ниже разъясняется ряд терминов, которые используются в приведенных далее определениях. Указанные термины иногда используются самостоятельно или же используются в составных терминах.

В приведенных ниже определениях и далее по тексту галоген является общим термином для атома фтора, хлора, брома и иода; С1_-6алкил означает насыщенные углеводородные радикалы с прямой или разветвленной цепью, содержащие от 1 до 6 атомов углерода, такие как метильная, этильная, пропильная, бутильная, пентильная, гексильная, 1-метилэтильная, 2-метилпропильная, 2-метилбутильная, 2метилпенильная группа и т.п.; С1_-6алкандиил означает двухвалентные углеводородные радикалы с прямой или разветвленной цепью, содержащие от 1 до 6 атомов углерода, такие как, например, метиленовая, 1,2-этандиильная, 1,3-пропандиильная, 1,4-бутандиильная, 1,5-пентандиильная, 1,6-гександиильная группа и их разветвленные изомеры, такие как 2-метилпентандиильная, 3-метилпентандиильная, 2,2диметилбутандиильная, 2,3-диметилбутандиильная группа и т.д.

Термин фармацевтически приемлемые соли означает фармацевтически приемлемые кислотноаддитивные или основно-аддитивные соли. Подразумевается, что указанные выше фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные или основно-аддитивные соли включают терапевтически активные нетоксичные кислотно-аддитивные и нетоксичные основно-аддитивные солевые формы, которые способны образовывать соединения формулы (I). Соединения формулы (I), обладающие свойствами основания, могут быть превращены в их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли обработкой указанного основания подходящей кислотой. Подходящие кислоты включают, например, неорганические кислоты, такие как галогеноводородные кислоты, в частности, хлористо-водородная или бромистоводородная кислота; серная кислота; фосфорная кислота и подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, пропановая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная, щавелевая, малоновая, янтарная (т.е. бутандионовая кислота), малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая и подобные кислоты.

Соединения формулы (I), обладающие кислотными свойствами, могут быть превращены в их фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли обработкой указанной кислотной формы соответствующим органическим или неорганическим основанием. Подходящие солевые формы включают, например, аммониевые соли, соли щелочных и щелочно-земельных металлов, в частности, соли лития, натрия, калия, магния, кальция и т.п., соли с органическими основаниями, в частности, соли бензатина, Νметил-О-глюкамина, гидрабамина, и соли с аминокислотами, такими как, например, аргинин, лизин и т. п.

Термины кислотно-аддитивные или основно-аддитивные соли включает также гидраты и формы, образованные присоединением растворителя, которые способны образовать соединения формулы (I). Примерами подобных форм являются, например, гидраты, алкоголяты и т. п.

Термин стереохимически изомерные формы соединений формулы (I) в данном описании означает все возможные соединения, образованные теми же самыми атомами, соединенными той же самой последовательностью связей, однако имеющими различные трехмерные структуры, не являющиеся взаимно совмещаемыми, которые могут иметь соединения формулы (I). Если не отмечено или не указано иное, химическое обозначение соединения охватывает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которые может иметь указанное соединения. Указанная смесь может содержать все диастереомеры и/или энантиомеры основной молекулярной структуры указанного соединения. Предполагается, что в объем настоящего изобретения входят все стереохимически изомерные формы соединений формулы (I),

- 5 011552 как в чистой форме, так и в смеси друг с другом.

Предполагается, что Ν-оксидные формы соединений формулы (I) включают такие соединения формулы (I), в которых один или несколько атомов азота окислены с образованием так называемых Νоксидов, в частности, таких Ν-оксидов, в которых Ν-окислен один или несколько атомов азота пипери дина или пиперазина.

Предполагается, что в контексте всего описания термин соединения формулы (I) включает также Ν-оксидные формы, фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные или основно-аддитивные соли и стереоизомерные формы.

Соединения, приведенные в ЕР 1036073, обладают фундальными релаксирующими свойствами. 1[1-[(28)-2-[(2Я)-3,4-дигидро-2Н-1 -бензопиран-2-ил]-2-гидроксиэтил]-4-пиперидинил] -2,4(1Н,3Н)хиназолиндион (соединение № 9 в данном описании) раскрывается в ЕР 1036073. Соединения, приведенные в ЕР 13612, являются антагонистами серотонина. Раскрываются соединения 1-[2-[4-(4фторбензоил)-1-пиперидинил]этил]-2,4-(1Н,3Н)хиназолиндион (соединение № 10 в данном описании), 1[3-[4-(4-фторбензоил)-1-пиперидинил]пропил]-2,4-(1Н,3Н)хиназолиндион (соединение № 11 в данном описании), 3-[2-[4-(4-хлорбензоил)-1-пиперидинил]этил]-2,4-(1Н,3Н)хиназолиндион (соединение № 12 в данном описании), 3-[2-[4-(4-фторфенил)гидроксиметил]-1-пиперидинил]этил]-2,4-(1Н,3Н)хиназолиндион (соединение № 13 в данном описании).

Неожиданно было обнаружено, что соединения по настоящему изобретению показывают ингибирующую активность по отношению к РАЯР.

Первую группу представляющих интерес соединений составляют такие соединения формулы (I), к которым может быть применено одно или несколько из следующих ограничений:

\ Ν-

a) каждый X независимо обозначает ' или \

b) каждый Υ независимо обозначает Л- или

c) Ь¹ означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из -С1_-6алкандиила- ;

б) Ь² означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из карбонила, -С1_-6алкандиила-, -(гидрокси)С1_-6алкандиила- или -С(О)-С1_-6алкандиила- ;

е) Я¹ означает атом водорода или гидроксильную группу;

ί) Ζ означает атом водорода или радикал, выбранный из (а-1), (а-2), (а-3), (а-4) или (а-5);

д) каждый Я² независимо выбран из атома водорода, атома галогена или С1_-6алкила.

Вторую группу представляющих интерес соединений составляют такие соединения формулы (I), к которым может быть применено одно или несколько из следующих ограничений:

a) Ь² означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из -С1_-6алкандиила- или -С(О)С1-6алкандиила- ;

b) Ζ означает атом водорода или радикал, выбранный из (а-1), (а-4) или (а-5).

Третью группу представляющих интерес соединений составляют такие соединения формулы (I), к которым может быть применено одно или несколько из следующих ограничений:

а) каждый X обозначает

b) каждый Υ обозначает

c) Ь¹ означает прямую связь;

б) Ь² означает прямую связь;

е) Я¹ означает атом водорода;

ί) Ζ означает атом водорода.

Группа предпочтительных соединений составлена из таких соединений формулы (I), где каждый X независимо обозначает Л или

каждый Υ независимо обозначает или

Ь¹ означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из -С1-6алкандиила-; Ь² означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из -С1-6алкандиила; Я¹ означает атом водорода или гидроксильную группу;

Ζ означает атом водорода или радикал, выбранный из (а-1), (а-2), (а-3), (а-4) или (а-5); и каждый Я² независимо выбран из атома водорода, атома галогена или С1_-6алкила.

Группа более предпочтительных соединений составлена из таких соединений формулы (I), где каж\ дый X обозначает

- 6 011552 \

СН— / .

каждый Υ обозначает '

Ь¹ означает прямую связь;

Ь² означает прямую связь;

К¹ означает атом водорода и

Ζ означает атом водорода.

Наиболее предпочтительным соединением является соединение № 1.

Соединение № 1

Соединения формулы (I) могут быть получены в соответствии с общими способами, приведенными в ЕР 1036073 и ЕР 13612. Исходные соединения и некоторые из промежуточных соединений известны и коммерчески доступны или же могут быть получены по обычным реакциям, известным из области техники. Некоторые способы получения будут более детально описаны позднее. Другие способы получения конечных соединений формулы (I) приведены в примерах.

\ Ν—

Соединения формулы (I), где X обозначает < которые в данном описании относят к соединениям формулы (Ι-а), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с промежуточным соединением формулы (III), где Ш обозначает подходящую уходящую группу, такую как, например, атом галогена, в частности, атом фтора, хлора, брома или иода, или сульфонилоксирадикал, такой как метилсульфонилокси, 4-метилфенилсульфонилокси и т.п. Реакцию можно проводить в инертном для данной реакции растворителе, таком как, например, спирт, в частности, метанол, этанол, 2-метоксиэтанол, пропанол, бутанол и т.п.; простой эфир, в частности, 4,4-диоксан, 1,1'-оксибиспропан и т.п.; или кетон, в частности, 4-метил-2-пентанон, Ν,Ν-диметилформамид, нитробензол и т.п. Для связывания кислоты, которая выделяется в результате протекания реакции, можно использовать добавление подходящего основания, такого как, например, карбонат или гидрокарбонат щелочного или щелочноземельного металла, в частности, добавление триэтиламина или карбоната натрия. Для ускорения реакции может быть добавлено небольшое количество соответствующего иодида металла, в частности, иодид натрия или калия. Скорость реакции можно ускорить перемешиванием. Реакцию обычно можно проводить в интервале от комнатной температуры и до температуры кипения реакционной смеси и, если необ-

к соединениям формулы (ЕЬ), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (IV) с промежуточным соединением формулы (V) , где значение Ш указано ранее.

Соединения формулы (I) могут быть также превращены друг в друга посредством реакций, известных из области техники, или путем преобразования функциональных групп. Некоторые из подобных преобразований уже приведены выше в данном описании. Другими примерами являются гидролиз сложных эфиров с образованием соответствующей карбоновой кислоты или соответствующего спирта; гидролиз амидов с образованием соответствующей карбоновой кислоты или соответствующих аминов; гидролиз нитрилов с образованием соответствующих амидов; аминогруппы в имидазоле или фенильной группе могут быть замещены атомом водорода по известной из области техники реакции диазотирования с последующим замещением диазогруппы атомом водорода; спирты могут быть превращены в сложные эфиры или в простые эфиры; первичные амины могут быть превращены во вторичные или третичные амины; двойные связи могут быть гидрированы до соответствующей простой связи; радикал иода в фе

- 7 011552 нильной группе может быть превращен в сложноэфирную группу путем введения монооксида углерода в присутствии подходящего палладиевого катализатора.

Настоящее изобретение относится также к соединениям формулы (I), определение которых дано выше, для использования в качестве лекарственного средства.

Соединения по настоящему изобретению проявляют ингибирующие свойства по отношению к ΡΑΚΡ, что подтверждается в приведенной далее экспериментальной части.

Термин ΡΛΚΡ в данном описании означает белок, который обладает активностью осуществлять поли-АОР-рибозилирование. В рамках указанного термина ΡΑΚΡ охватывает все белки, кодируемые геном рагр, их мутанты и альтернативные части указанных белков. Кроме того, в данном описании термин ΡΑΚΡ включает аналоги ΡΑΚΡ, гомологи и аналоги других животных.

Термин ΡΑΚΡ включает, однако этим не ограничиваясь, ΡΑΚΡ-1. В понятие указанного термина могут входить ΡΑΚΡ-2, ΡΑΚΡ-3, \'αιι1ΐ-ΡΑΙ\Ρ (ΡΑΚΡ-4), ΡΑΚΡ-7 (ΤιΡΑΚΡ), ΡΑΚΡ-8, ΡΑΚΡ-9 (Ва1), ΡΑΚΡ10, ΡΑΚΡ-11, ΡΑΚΡ-12, ΡΑΚΡ-13, ΡΑΚΡ-14, ΡΑΚΡ-15, ΡΑΚΡ-16, ΤΑΝΚ-1, ΤΑΝΚ-2 и ΤΑΝΚ-3.

Соединения, которые ингибируют как ΡΑΚΡ-1, так и танкиразу-2, обладают тем преимуществом, что они проявляют повышенную активность по отношению к раковым клеткам.

Настоящее изобретение предполагает также применение соединений для приготовления лекарственных препаратов для лечения любых приведенных в данном описании заболеваний и расстройств у животных, при этом указанными соединениями являются соединения формулы (I), их Ν-оксидные формы, их фармацевтически приемлемые аддитивные соли и их стереохимические изомерные формы, где каждый X

независимо

X

N— обозначает ' или

\ снV / и когда X означает ' то Υ означает

или 'сн—

X /^Ν_ каждый Υ независимо обозначает за исключением случая, когда X обозначает <

\ г~.

и тогда Υ обозначает '

Б¹ означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из -С1_-6алкандиила-,

Б² означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из карбонила, -С1_-6алкандиила-, (гидрокси)С1_-6алкандиила- , -С(О)-С1_-6алкандиила- или -С1_-6алкандиил-С(О)- ;

Κ¹ означает атом водорода или гидроксильную группу;

Ζ означает атом водорода или радикал, выбранный из

(а-1) (а-2) (а-3) (а-4) (а-5) где каждый Κ² независимо выбран из атома водорода, атома галогена или С_1-6алкила.

Поскольку они обладают способностью связывать ΡΑΚΡ, то соединения по настоящему изобретению могут применяться в качестве соединений сравнения или соединений-меток, и в этом случае один из атомов в молекуле может быть замещен, например, радиоактивным изотопом.

Для приготовления фармацевтических композиций по настоящему изобретению эффективное количество конкретного соединения в форме основания или кислотно-аддитивной соли, которое используют в качестве активного ингредиента, объединяют в виде однородной смеси с фармацевтически приемлемым носителем, при этом указанный носитель может принимать разнообразные формы в зависимости от формы предназначенного для введения препарата. Желательно, чтобы указанные фармацевтические композиции были приготовлены в виде стандартной дозировочной формы, предпочтительно пригодной для введения перорально, ректально, чрескожно и с помощью парентеральной инъекции. Например, при приготовлении композиции в виде пероральной дозировочной формы могут применяться любые обыч

- 8 011552 ные фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п. в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры или растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, лубриканты, связующие, разрыхлители и т.п. в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Благодаря легкости их введения, таблетки и капсулы являются наиболее удобными пероральными дозировочными формами, и в этом случае, очевидно, применяют твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций носитель обычно представляет собой, по крайней мере, в большинстве случаев, стерильную воду, хотя могут включаться и другие ингредиенты, например вещества, способствующие повышению растворимости. Могут быть приготовлены, например, растворы для инъекций, в которых носителем является физиологический солевой раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Могут быть также приготовлены суспензии для инъекций, и в этом случае можно использовать подходящие жидкие носители, суспендирующие агенты и т.п. В композициях, пригодных для чрескожного введения, носитель необязательно содержит средство, усиливающее проникновение через кожу, и/или подходящее смачивающее средство, необязательно в сочетании с небольшими пропорциями подходящих добавок любого типа, при этом указанные добавки не оказывают значительного вредного воздействия на кожу. Указанные добавки могут облегчить нанесение на кожу и/или могут быть полезны для приготовления требуемых композиций. Указанные композиции могут вводиться различными путями, в частности, в виде чрескожного пластыря, наклейки, мази. Наиболее удобно составлять вышеуказанные фармацевтические композиции в виде стандартной дозировочной формы, с целью облегчения введения и обеспечения большей однородности дозы. Стандартная дозировочная форма по тексту настоящего описания и в формуле изобретения означает физически дискретные единицы, пригодные для однократного дозирования, при этом каждая единица содержит определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения требуемого терапевтического эффекта, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами подобных стандартных дозировочных форм являются таблетки (в том числе таблетки с насечками или таблетки с нанесенным покрытием), капсулы, пилюли, пакетики с порошком, облатки, растворы или суспензии для инъекций, количества лекарственного препарата, равные чайной ложке, количества лекарственного препарата, равные столовой ложке, и т. п. и их разделенные части.

Соединения по настоящему изобретению способны лечить или предупреждать поражение тканей, вызванное повреждением или отмиранием клеток вследствие некроза или апоптоза; они способны уменьшать последствия поражения нервных тканей или сердечно-сосудистых тканей, включая поражение, возникающее после локальной ишемии, инфаркта миокарда, и поражение в результате реперфузии; они способны вылечивать различные заболевания и состояния, вызываемые обострением активности РАКР; способны расширять или увеличивать время жизни или пролиферативную способность клеток; они могут изменять генную экспрессию стареющих клеток; способны повышать чувствительность клеток к действию радиотерапевтических и/или химиотерапевтических средств. В общем случае, ингибирование активности РЛКР спасает клетки от потери энергии, предотвращая в случае нервных клеток необратимую деполяризацию нейронов, и, таким образом, осуществляет нейрозащиту.

По указанным причинам настоящее изобретение относится также к способу введения терапевтически эффективного количества вышеуказанных соединений, которое достаточно для ингибирования активности РАКР, для лечения или предупреждения поражения тканей, вызванного повреждением или отмиранием клеток вследствие некроза или апоптоза, к воздействию на активность нейронов, не опосредованную токсичностью ΝΜΌΑ, к воздействию на активность нейронов, опосредованную токсичностью ΝΜΌΑ, к лечению повреждения нервных тканей вследствие ишемии и поражения в результате реперфузии, неврологических заболеваний и нейродегенеративных заболеваний; к предупреждению или лечению васкулярной травмы; к лечению или предупреждению сердечно-сосудистых заболеваний; к лечению других состояний и/или заболеваний, таких как возрастная мышечная дегенерация, СПИД и другие заболевания иммунной системы, вызванные физиологическим старением, воспаление, подагра, артрит, атеросклероз, общее истощение, рак, дегенеративные заболевания скелетных мышц, включая репликативное физиологическое старение, диабет, травма головы, воспалительные заболевания кишечника (такие как колит и болезнь Крона), мышечная дистрофия, остеоартрит, остеопороз, хроническая и/или острая боль (такая как невропатическая боль), почечная недостаточность, ретинальная ишемия, септический шок (такой как эндотоксический шок) и старение кожи, увеличение времени жизни и усиление пролиферативной способности клеток; к изменению генной экспрессии стареющих клеток; к повышению химиосенсибилизации и/или радиосенсибилизации (гипоксической) опухолевых клеток. Настоящее изобретение относится также к лечению заболеваний или состояний у животных, которое заключается во введении указанному животному терапевтически эффективного количества идентифицированных выше соединений.

В частности, настоящее изобретение относится к способу лечения, предупреждения или подавления неврологического заболевания у животного, который включает введение указанному животному терапевтически эффективного количества вышеуказанных соединений. Неврологическое заболевание выбирают из группы, включающей периферическую нейропатию, вызванную физической травмой или болезненным состоянием, травматическое повреждение мозга, физическое повреждение спинного мозга, удар,

- 9 011552 вызванный повреждением мозга, локальную ишемию, общую ишемию, поражение, вызванное реперфузией, демиелинизирующее заболевание и неврологическое заболевание, связанное с нейродегенерацией.

Настоящее изобретение включает также применение соединений формулы (I) для ингибирования активности РАРР с целью лечения, предупреждения или подавления поражения тканей, вызываемого повреждением или отмиранием клеток вследствие некроза или апоптоза, с целью лечения, предупреждения или подавления неврологического заболевания у животного.

Термин предупреждение нейродегенерации включает способность предупреждать нейродегенерацию у пациента, которому недавно поставлен диагноз наличия нейродегенеративного заболевания или который подвергается риску развития нового дегенеративного заболевания, а также способность предотвращать дальнейшую нейродегенерацию у пациентов, которые уже страдают от нейродегенеративного заболевания или у которых наблюдаются симптомы нейродегенеративного заболевания.

Термин лечение по тексту настоящего описания охватывает любое лечение заболевания и/или состояния у животного, в частности человека, и включает (ί) предупреждение возникновения заболевания и/или состояния у субъекта, который может быть предрасположен к заболеванию и/или состоянию, но у которого указанное заболевание и/или состояние еще не обнаружено; (п) подавление заболевания и/или состояния, т.е. прекращение его развития; (ш) ослабление заболевания и/или состояния, т.е. регрессия заболевания и/или состояния.

Термин радиосенсибилизирующее средство по тексту настоящего описания определяется как молекула, предпочтительно молекула с небольшой молекулярной массой, которую вводят животному в терапевтически эффективных количествах с целью повысить чувствительность клеток к ионизирующему излучению и/или ускорить лечение заболеваний, которые можно лечить с помощью ионизирующего излучения. Заболевания, которые можно лечить с помощью ионизирующего излучения, включают опухолевые заболевания, доброкачественные и злокачественные опухоли и раковые клетки. Настоящие изобретение также охватывает лечение с помощью ионизирующего излучения других заболеваний, которые не указаны выше.

Термин химиосенсибилизирующее средство по тексту настоящего описания определяется как молекула, предпочтительно молекула с небольшой молекулярной массой, которую вводят животному в терапевтически эффективных количествах с целью повысить чувствительность клеток к химиотерапии и/или ускорить лечение заболеваний, которые можно лечить химиотерапевтическими методами. Заболевания, которые можно лечить химиотерапевтическими методами, включают опухолевые заболевания, доброкачественные и злокачественные опухоли и раковые клетки. Настоящие изобретение также охватывает лечение с помощью химиотерапевтических средств других заболеваний, которые не указаны выше.

Соединения, композиции и способы по настоящему изобретению наиболее пригодны для лечения или предупреждения поражения тканей, вызываемого повреждением или отмиранием клеток вследствие некроза или апоптоза.

Соединения по настоящему изобретению могут быть противораковыми средствами, и этот термин охватывает также средства, препятствующие росту опухолевых клеток и противоопухолевые средства. Например, способы по настоящему изобретению пригодны для лечения рака и для химиосенсибилизации и/или радиосенсибилизации опухолевых клеток при таких видах рака, как АСТН-продуцирующие опухоли, острый лимфолейкоз, лейкоз, отличный от лимфолейкоза, рак коркового вещества надпочечников, рак мочевого пузыря, рак мозга, рак груди, рак шейки, хронический лимфолейкоз, хронический миелолейкоз, колоректальный рак, лимфома Т-клеток кожи, рак эндометрия, рак пищевода, саркома Эвинга, рак желчного пузыря, лейкоз ворсинчатых клеток, рак головы и шеи, лимфома Ходжкина, саркома Капоши, рак почки, рак печени, рак легкого (мелкоклеточных и немелкоклеточный рак), злокачественный выпот в брюшную полость; злокачественный выпот в плевральную полость, меланома, мезотелиома, множественная миелома, нейробластома, лимфома, отличная от лимфомы Ходжкина, остеосаркома, яичниковый рак, рак яичников (половых клеток), рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак полового члена, ретинобластома, рак кожи, саркома мягких тканей, карцинома сквамозных клеток, рак желудка, рак яичек, рак щитовидной железы, трофобластические опухоли, рак матки, вагинальный рак, рак вульвы и опухоль Вилма.

Таким образом, соединения по настоящему изобретению могут применяться в качестве радиосенсибилизирующего средства и/или химиосенсибилизирующего средства.

Известно, что радиосенсибилизирующие средства повышают чувствительность раковых клеток к токсическому воздействию ионизирующего излучения. В литературе было предложено несколько механизмов воздействия радиосенсибилизирующих средств, включая: гипоксические клеточные радиосенсибилизирующие средства (в частности, 2-нитроимидазольные соединения и бензотриазиновые диоксиды) имитируют кислород или иначе ведут себя как биоредуцирующие средства при гипоксии; негипоксические клеточные радиосенсибилизирующие средства (в частности, галогензамещенные пиримидины) могут быть аналогами оснований ДНК и предпочтительно встраиваются в ДНК раковых клеток и тем самых ускоряют вызываемое радиацией разрушение молекул ДНК и/или препятствуют протеканию нормального механизма репарации ДНК; а также для радиосенсибилизирующих средств были предложены

- 10 011552 другие различные потенциальные механизмы действия при лечении заболеваний.

Во многих современных методиках лечения рака радиосенсибилизирующие средства применяют вместе с облучением рентгеновскими лучами. Примеры радиосенсибилизирующих средств, активируемых рентгеновскими лучами, включают, однако этим не ограничиваясь, следующие соединения: метронидазол, мизонидазол, десметилмизонидазол, пимонидазол, этанидазол, ниморазол, митомицин С, К.8И 1069, 8К 4233, ЕО9, ЯВ 6145, никотинамид, 5-бромдеоксиуридин (ВИбК.), 5-иододеоксиуридин (ГОбК.), бромдеоксицитидин, фтордеоксиуридин (ЕибК), гидроксимочевина, цисплатин и их терапевтически эффективные аналоги и их производные соединения.

Фотодинамическая терапия (ΡΌΤ) рака использует видимый свет в качестве радиационного активатора сенсибилизаторов. Примеры фотодинамических радиосенсибилизирующих средств включают, однако этим не ограничиваясь, следующие соединения: производные соединения гематопорфирина, фотофрин, производные соединения бензопорфирина, этиопорфирин олова, феоборбид-а, бактериохлорофилл-а, нафталоцианины, фталоцианины, фталоцианин цинка и их терапевтически эффективные аналоги и их производные соединения.

Радиосенсибилизирующие средства могут вводиться в сочетании с терапевтически эффективным количеством одного или нескольких других соединений, включая, однако этим не ограничиваясь, соединения, которые ускоряют включение радиосенсибилизирующих средств в клетки-мишени; соединения, которые контролируют приток терапевтических средств, нутриентов и/или кислорода к клеткаммишеням; химиотерапевтические средства, которые действуют на опухоли без дополнительной радиации или вместе с дополнительной радиацией; или другие терапевтически эффективные соединения для лечения рака или другого заболевания. Примеры дополнительных терапевтических средств, которые могут применяться в сочетании с радиосенсибилизирующими средствами, включают, но этим не ограничиваясь, 5-фторурацил, лейковорин, 5'-амино-5'-деокситимидин, кислород, карбоген, вливания красных кровяных телец, перфторуглеводороды (в частности, Е1ио8о1 10 ΌΑ), 2,3-ΌΡΟ, В\У12С. блокаторы кальциевых каналов, пентоксифиллин, соединения, препятствующие ангиогенезу, гидралазин и ЬВ8О. Примеры химиотерапевтических средств включают, однако этим не ограничиваясь, адриамицин, камптотецин, карбоплатин, цисплатин, даунорубицин, доцетаксель, доксорубицин, интерферон (альфа, бета, гамма), интерлейкин 2, иринотекан, паклитаксель, топотекан и их терапевтически эффективные аналоги и их производные соединения.

Химиосенсибилизирующие средства могут вводиться в сочетании с терапевтически эффективным количеством одного или нескольких других соединений, включая, однако этим не ограничиваясь, соединения, которые ускоряют включение химиосенсибилизирующих средств в клетки-мишени; соединения, которые контролируют приток терапевтических средств, нутриентов и/или кислорода к клеткаммишеням; химиотерапевтические средства, которые действуют на опухоли, или другие терапевтически эффективные соединения для лечения рака или другого заболевания. Примеры дополнительных терапевтических средств, которые могут применяться в сочетании с химиосенсибилизирующими средствами, включают, но этим не ограничиваясь, метилирующие средства, ингибиторы топоизомеразы I и другие химиотерапевтические средства, такие как цисплатин и блеомицин.

Соединения формулы (I) могут применяться также для обнаружения и идентификации ΡΑΚΡ и, в частности, рецептора ΡΑΚΡ-1. С этой целью в соединения формулы (I) может также вводиться метка. Указанная метка может быть выбрана из группы, включающей радиоизотоп, спиновую метку, антигенную метку, ферментативную метку с флуоресцентной группой или хемилюминесцентной группой.

Специалисты смогут легко определить эффективное количество лекарства по результатам испытаний, которые представлены ниже.

В общем случае предполагается, что эффективное количество лекарства составит от 0,001 до 100 мг/кг массы тела и, в частности, от 0,005 до 10 мг/кг массы тела. Удобно вводить требуемую дозу в виде двух, трех, четырех или большего количества субдоз через определенные интервалы в течение всего дня. Указанные субдозы могут быть составлены в виде стандартных дозировочных форм, например, содержащих от 0,05 до 500 мг и, в частности, от 0,1 до 200 мг активного ингредиента на одну стандартную дозировочную форму.

Следующие примеры поясняют настоящее изобретение.

Экспериментальная часть

Далее по тексту ЭСМ означает дихлорметан, ΌΙΡΕ означает диизопропиловый эфир, ДМФА означает Ν,Ν-диметилформамид, ЕЮН означает этанол, МеОН означает метанол, МЕК означает метилэтилкетон, ΤΕΑ означает триэтиламин, ТГФ означает тетрагидрофуран.

А. Получение промежуточных соединений

Пример 1. Получение промежуточного соединения 1

Смесь 2-[[1-(фенилметил)-4-пиперидинил]амино]бензамида (0,03 моль) и 1,1'-карбонилбис-1Н

- 11 011552 имидазола (0,033 моль) в диметилацетамиде (25 мл) кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 5 ч, затем добавляют дополнительное количество 1,1'-карбонилбис-1Н-имидазола (0,003 моль) и реакционную смесь оставляют на ночь при перемешивании и при кипячении с обратным холодильником. Смесь выливают в воду (300 мл), образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают водой и ΌΙΡΕ и высушивают (выход 9,1 г, 91%). Часть продукта затем кристаллизуют из ДМФА и воды, выделяют конечный продукт, получая 0,8 г промежуточного соединения 1 с т.пл. 233,5°С. В. Получение конечных продуктов Пример В1. Получение соединения 1

Смесь промежуточного соединения 1 (0,15 моль) в ТГФ (250 мл) и МеОН (250 мл) гидрируют в аппарате Пара над 10%-ным Ρά/С (5 г) в качестве катализатора. После поглощения Н₂ (1 эквив.) катализатор отфильтровывают и получают фильтрат (Ι) и оставшийся осадок на фильтре. Полученный осадок перемешивают в кипящем гидроксиацетоне и смесь фильтруют в горячем виде. Полученный фильтрат объединяют с фильтратом (I) и смесь упаривают. Остаток перемешивают в воде, затем добавляют ΝΗ₄ΟΗ и смесь перемешивают в течение 1 ч вместе с трихлорметаном. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 31 г (84%) соединения 1, т.п. 253,7°С.

Пример В2. Получение соединения 2

Соединение 1 (0,038 моль) в 2-метоксиэтаноле (150 мл) перемешивают при нагревании до полного растворения, затем по каплям при нагревании добавляют раствор 1-(4-фторфенил)-4-иод-1-бутанона (0,019 моль) в 2-метоксиэтаноле (10 мл), при этом образуется осадок. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 1,5 ч. Осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают. Остаток очищают на силикагеле через воронку со стеклянным фильтрующим дном (элюент: СНС1₃/МеОН 90/10). Собирают фракции с продуктом и растворитель отгоняют. Остаток кристаллизуют из 2-пропанола, полученный осадок собирают и сушат, получая 2,3 г (29%) соединения 2, т.пл. 195°С.

Пример В3. Получение соединения 3

Смесь 1-(3-хлорпропил)-2,4(1Н,3Н)хиназолиндиона (0,015 моль), 3-(4-пиперидинил)-1Н-индола (0,015 моль) и карбоната натрия (0,030 моль) в 4-метил-2-пентаноне (150 мл) кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 24 ч, затем реакционную смесь охлаждают и добавляют воду. Органический слой отделяют, сушат и растворитель отгоняют. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: СНС1₃/МеОН 95/5). Собирают фракции с продуктом и растворитель отгоняют. Остаток кристаллизуют из Е1ОН и полученный осадок собирают, получая 2 г (33%) соединения 3, т.пл. 216,8°С.

В табл. 1 приведены соединения, которые получают в соответствии с одним из приведенных выше примеров.

- 12 011552

Фармакологические примеры

Ιη νότο сцинтилляционный проксимальный анализ (8РА) ингибиторной активности для РАКР-1

Соединения по настоящему изобретению испытывают ίη νίίτο по методу, основанному на технологии 8РА (запатентован компанией Атегзйат РКагтасш Вю1есй).

Принципиально анализ основывается на хорошо разработанной технологии 8РА для обнаружения поли(АЭР-рибозилирования) биотинилированных белков-мишеней, т.е. гистонов. Указанное рибозилирование индуцируют, используя фермент РАКР-1, активированный с помощью ДНК, которая содержит разрывы в цепи, и динуклеотид [³Н] -никотинамидаденин ([³Н]-ЫАП⁺) в качестве донора АИР-рибозила.

В качестве инициатора активности фермента РАКР-1 готовят ДНК, содержащую однонитевой разрыв. Для этого 25 мг ДНК (поставщик: 8щта) растворяют в 25 мл буферного раствора для ДНКазы (10 мМ ТП8-НС1, рН 7,4; 0,5 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (В8А); 5 мМ М§С1₂-6Н₂О и 1 мМ КС1), в который добавляют 50 мкл раствора ДНКазы (1 мг/мл в 0,15М ЫаС1). После инкубирования при температуре 37°С в течение 90 мин реакцию прерывают, добавив 1,45 г ЫаС1, а затем инкубируют при 58°С еще в течение 15 мин. Реакционную смесь охлаждают льдом и подвергают диализу при температуре 4°С в течение, соответственно, 1,5 и 2 ч по отношению к 1,5 л 0,2М раствора КС1 и дважды по отношению к 1,5 л 0,01 М раствора КС1 в течение 1,5 и 2 ч, соответственно. Берут аликвоту смеси и хранят ее при температуре -20°С. Гистоны (1 мг/мл, тип ΙΙ-А, поставщик: 8щта) биотинилируют, используя набор для биотинилирования компании Атегзйат, и аликвоту хранят при температуре -20°С. Исходный раствор, содержащий 100 мг/мл шариков поли(винилтолуола) (РУТ) для проведения 8РА (поставщик: Атегзйат), готовят в забуференном фосфатом солевом растворе. Исходный раствор [³Н]-ЫАП⁺ готовят, добавляя 120 мкл [³Н]-ЫАП⁺ (0,1 мКи/мл, поставщик: ΝΕΝ) к 6 мл буферного раствора для инкубирования (50 мМ Тгш/НС1, рН 8; 0,2 мМ ИТТ; 4 мМ МдС1₂). Раствор 4 мМ NА^⁺ (поставщик: Косйе) готовят в буферном растворе для инкубирования (из 100 мМ исходного раствора в воде, который хранят при -20°С). Фермент РАКР-1 получают по известным из области техники методикам, т.е. клонированием и экспрессией белка, используя исходную кДНК печени человека. Информацию относительно используемой белковой последовательности фермента РАКР-1, включая литературные ссылки, можно найти в базе данных 8\\ш$-Рго1

- 13 011552 под первичным регистрационным номером Р09874. Биотинилированные гистоны и шарики РУТ-БРА смешивают и предварительно инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре. Фермент РАКР-1 (концентрация зависит от поставляемой партии вещества) смешивают с ДНК, содержащей разрывы в цепи, и смесь предварительно инкубируют в течение 30 мин при температуре 4°С. Смешивают равные части раствора гистоны/шарики РУТ-БРА и раствора фермент РАКР-1/ДНК и 75 мкл полученной смеси вместе с 1 мкл соединения в ДМСО и 25 мкл [³Η]-ΝΑΌ⁺ на лунку помещают на 96-луночный планшет для микротитрования. Конечная концентрация смеси для инкубирования составляет 2 мкг/мл для биотинилированных гистонов, 2 мг/мл для шариков РУТ-БРА, 2 мкг/мл/мл для для ДНК, содержащей разрывы в цепи, и в диапазоне 5-10 мкг фермента РАКР-1. После инкубирования смеси в течение 15 мин при комнатной температуре реакцию прерывают, добавляя 100 мкл 4 мМ раствора NΑ^⁺ в буфере для инкубирования (конечная концентрация 2 мМ), и планшеты смешивают.

Дают шарикам осесть в течение по крайней мере 15 мин и планшеты переносят в Τορί,'οιιηΐΝΧΤ™ (Раскагб) для проведения сцинтилляции и количество отсчетов выражают в виде единиц в минуту (срт). При каждом эксперименте параллельно проводят испытания контрольного образца (содержащего фермент РАКР-1 и ДМСО без соединения), пустого раствора для инкубирования (содержащего ДМСО, но не содержащего фермент РАКР-1 или соединение по настоящему изобретению) и испытуемых образцов (содержащих фермент РАКР-1 и соединение по настоящему изобретению, растворенные в ДМСО). Все тестируемые соединения растворяют в ДМСО, а затем дополнительно разбавляют в ДМСО. Вначале соединения испытывают при концентрации 10^-5М. В том случае, если соединения показывают активность при 10^-5М, то строят кривую зависимости реакции от дозы, при этом соединения исследуют в диапазоне концентраций от 10^-5 до 10^-8М. При проведении каждого теста значения для пустого раствора вычитают из результатов как контрольного, так и испытуемого образцов. Контрольный образец характеризует максимальную активность фермента РАКР-1. Для каждого образца величину отсчетов в минуту выражают в виде процента от среднего значения отсчетов в минуту для контрольных образцов. Там, где возможно, рассчитывают величины 1С₅₀ (концентрация лекарства, необходимая для 50%-ного снижения ферментативной активности РАКР-1 по сравнению с контрольным образцом) методом линейной интерполяции между экспериментальными точками, расположенными непосредственно над и непосредственно под уровнем, составляющим 50%. В данном описании величину воздействия соединений выражают в виде р1С₅₀ (отрицательный логарифм от значения 1С₅₀). Для оценки БРА анализа в качестве соединения для сравнения используют 4-амино-1, 8-нафталимид. Тестируемые соединения проявляют ингибиторную активность при начальной исследуемой концентрации, составляющей 10^-5М (см. табл. 2).

Ιη νΐΐΐΌ фильтрационный анализ ингибиторной активности поотношению к РАКР-1

Соединения по настоящему изобретению тестируют по методу ίη νίΐτο фильтрационного анализа активности РАКР-1 (инициируется в присутствии ДНК, содержащей однонитевой разрыв) по его активности при поли(АОР-рибозилировании) гистона, используя [³²Р]^АО в качестве донора АОР-рибозила.

Радиоактивные рибозилированные гистоны осаждают трихлоруксусной кислотой (ТСА) на 96луночных фильтровальных пластинах и захваченное количество [³²Р] определяют с помощью сцинтиллятора. Готовят смесь гистонов (исходный раствор: 5 мг/мл в Η2Ο), NΑ^⁺ (исходный раствор: 100 мМ в Η2Ο) и [³²Р]^АЭ⁺ в буферном растворе для инкубирования (50 мМ ТШ/НСТ рН 8; 0,2 мМ ΌΤΤ; 4 мМ МдС12) . Готовят также смесь фермента РАКР-1 (5-10 мкг/мл) и ДНК, содержащей одноцепочечный разрыв. ДНК, содержащую одноцепочечный разрыв, готовят, как описано в ίη νίΐτο БРА анализе ингибиторной активности для РАКР-1. Добавляют по 75 мкл смеси фермент РАКР-1/ДНК вместе с 1 мкл соединения по изобретению в ДМСО и 25 мкл смеси гистоны^АЭ'/ [³²Р]^АЭ⁺ на каждую лунку 96-луночной фильтровальной пластинки (0,45 мкм, поставщик: Мййроге). Конечная концентрация в смеси для инкубирования составляет 2 мкг/мл для гистонов, 0,1 мМ для NΑ^⁺, 200 мкМ (0,5 мкКи) для [³²Р]^АЭ⁺ и 2 мкг/мл для ДНК с одноцепочечным разрывом. Пластинки инкубируют в течение 15 мин при комнатной температуре и реакцию прерывают добавлением 10 мкл охлажденного льдом 100% ТСА с последующим добавлением 10 мкл охлажденного льдом раствора ВБА (1% в Η2Ο). Дают в течение 10 мин фракции белка осесть при комнатной температуре и пластинки отфильтровывают в вакууме. Каждую лунку пластинок последовательно промывают с помощью 1 мл охлажденного льдом 10%-ного раствора ТСА, 1 мл охлажденного льдом 5%-ного раствора ТСА и 1 мл 5%-ного раствора ТСА при комнатной температуре. Наконец, в каждую лунку добавляют 100 мкл сцинтилляционного раствора (М1сто8сш1 40, Раскагб) и пластинки помещают в ТοрСοиηΐNXТ™ (поставщик: Раскагб) для проведения сцинтилляционного подсчета и полученные значения выражают в виде количества отсчетов в минуту (срт). В каждом эксперименте параллельно проводят испытания контрольного образца (содержащего фермент РАКР-1 и ДМСО без соединения), пустого раствора для инкубирования (содержащего ДМСО, но не содержащего фермент РАКР-1 или соединение по настоящему изобретению) и испытуемых образцов (содержащих фермент РАКР-1 и соединение по настоящему изобретению, растворенные в ДМСО). Все тестируемые соединения растворяют в ДМСО, а затем дополнительно разбавляют в ДМСО. Вначале тестируемые соединения испытывают при концентрации 10^-5М. В том случае, если соединения показывают активность при 10^-5М, то строят кривую зависимости реакции от дозы, при этом соединения исследуют в диапазоне концентра

- 14 011552 ций от 10^-5 до 10^-8М. При проведении каждого теста значения для пустого раствора вычитают из результатов как контрольного, так и испытуемого образцов. Контрольный образец характеризует максимальную активность фермента РАКР-1. Для каждого образца величину отсчетов в минуту выражают в виде процента от среднего значения отсчетов в минуту для контрольных образцов. Там, где возможно, рассчитывают величины 1С₅₀ (концентрация лекарства, необходимая для 50%-ного снижения ферментативной активности РАКР-1 по сравнению с контрольным образцом) методом линейной интерполяции между экспериментальными точками, расположенными непосредственно над и непосредственно под уровнем, составляющим 50%. В данном описании величину воздействия тестируемых соединений выражают в виде р1С₅₀ (отрицательный логарифм от значения 1С₅₀). Для оценки фильтрационного анализа в качестве соединения для сравнения проводят испытания с 4-амино-1,8-нафталимидом. Тестируемые соединения проявляют ингибиторную активность при начальной исследуемой концентрации, составляющей 10^-5М (см. табл. 2).

Ιη νϊίΐΌ сцинтилляционный проксимальный анализ (8РА) ингибиторной активности для ΤΑΝΚ-2

Соединения по настоящему изобретению испытывают ίη νίίτο по методу, основанному на технологии 8РА, используя планшеты N1 Иакй (96 или 384 лунки).

Принципиально анализ основывается на технологии 8РА для обнаружения авто-поли(АЭРрибозилирования) белка ΤΑΝΚ-2, используя динуклеотид [³Н]-никотинамидаденина (|³Ή|-ΝΛΟ') в качестве донора АЭР-рибозила.

Готовят исходный раствор [³Н]^АЭ⁺^АП, добавляя 64,6 мкл [³Н]^АЭ⁺ (0,1 мКи/мл, поставщик: Регкш Е1тег) и 46,7 мкл исходного раствора NΑ^ (10,7 мМ, хранят -20°С, поставщик: Косйе) к 1888,7 мкл буферного раствора для анализа (60 мМ Тп5/НС1. рН 7,4; 0,9 мМ ΌΤΤ; 6 мМ МдС12). Фермент ΤΑNΚ-2 получают, как указано в ЕР 1238063. В каждую ячейку 96-луночного планшета с Νί-покрытием (Регкш Е1тег) добавляют 60 мкл буферного раствора для анализа вместе с 1 мкл соединения по изобретению в ДМСО, 20 мкл раствора [³Н] ^АО'^АЭ и 20 мкл фермента ΤΑNΚ-2 (конечная концентрация 6 мкг/мл). После инкубирования смеси в течение 120 мин при комнатной температуре реакцию прерывают добавлением 60 мкл раствора для остановки процесса (42,6 мг NΑ^ в 6 мл Н2О). Планшеты покрывают герметиком для планшетов и помещают в ΤορΓ'οιιηΐΝΧΤ™ (Раскагб) для проведения сцинтилляционных подсчетов. Полученные значения выражают в виде количества отсчетов в минуту (срт). В каждом эксперименте параллельно проводят испытания контрольного образца (содержащего фермент ΤΑNΚ-2 и ДМСО без соединения по изобретению), пустого раствора для инкубирования (содержащего ДМСО, но не содержащего фермент ΤΑNΚ-2 или соединение по настоящему изобретению) и испытуемых образцов (содержащих фермент ΤΑNΚ-2 и соединение по настоящему изобретению, растворенные в ДМСО). Все тестируемые соединения растворяют в ДМСО, а затем дополнительно разбавляют в ДМСО. Вначале тестируемые соединения испытывают при концентрации 10^-5М. В том случае, если соединения показывают активность при 10^-5М, то строят кривую зависимости реакции от дозы, при этом соединения исследуют в диапазоне концентраций от 10^-5 до 10^-8М. При проведении каждого теста значения для пустого раствора вычитают из результатов как контрольного, так и испытуемого образцов. Контрольный образец характеризует максимальную активность фермента ΤΑNΚ-2. Для каждого образца величину отсчетов в минуту выражают в виде процента от среднего значения отсчетов в минуту для контрольных образцов. Там, где возможно, рассчитывают величины 1С₅₀ (концентрация лекарства, необходимая для 50%-ного снижения ферментативной активности ΤΑNΚ-2, по сравнению с контрольным образцом) методом линейной интерполяции между экспериментальными точками, расположенными непосредственно над и непосредственно под уровнем, составляющим 50%. В данном описании величину воздействия тестируемых соединений выражают в виде р1С₅₀ (отрицательный логарифм от значения 1С₅₀). Для оценки 8РА анализа в качестве соединения для сравнения проводят испытания с 3-аминобензамидом и 4-амино-1,8-нафталимидом. Приведена методика проведения анализа для 96-луночных планшетов. В анализах, где используют 384луночные планшеты, применяют те же самые конечные концентрации, а используемые объемы адаптируют. Если получают данные для 96-луночных планшетов, то эти результаты приведены в табл. 2, в противном случае представлены результаты для 384-луночных планшетов.

- 15 011552

Таблица 2

Соединение №	Ιη νίύΓΟ фильтрационный анализ РАКР-1, р1С50	Ιη νίϋΓΟ ЗРА анализ РАКР-1, р1С50	Ιη νίΕτο ЗРА анализ ΤΑΝΚ-2, р1С50
1	6,333	6,691	<5
2	5,804	6,59	<5
3	5,988	6,867	<5
4	5,642	6,257	5,158
5	5,759	6,458	5,121
6	5,877	6,778	5,86
7	5,49	6,535	<5
8	5,792	6,848	5,247
9	5,661	6,445	<5
10	5,745	6,658	5,143
11	5,566	6,655	<5

Оценку соединений можно также провести с помощью анализов химио- и/или радиосенсибилизации клеток, анализа по определению ингибирования активности эндогенного РАКР-1 в линиях раковых клеток и, наконец, в тесте по ίη νίνο радиосенсибилизации.

Claims (14)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы (I) его Ν-оксидные формы, его фармацевтически приемлемые аддитивные соли и его стереохимически изомерные формы, где каждый X независимо обозначает или и когда X означает то

   Υ означает или каждый Υ независимо обозначает за исключением случая, когда X обозначает \ Ν— и тогда Υ обозначает !

   Б¹ означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из -С1_-6алкандиила-,

   Б² означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из карбонила, -С_1-6алкандиила-, -(гидрокси)С_1-6алкандиила-, -С(О)-С_1-6алкандиила- или -С_1-6алкандиил-С(О)-;

   К¹ означает атом водорода или гидроксильную группу;

   Ζ означает атом водорода или радикал, выбранный из

   - 16 011552 где каждый К² независимо выбран из атома водорода, атома галогена или С1_-6алкила, при условии, что хиназолиндионовый фрагмент присоединен к остальной части молекулы по -№Нфрагменту в положении 1, и в этом случае атом водорода замещен, и при условии, что соединения 1-[1[(28)-2-[(2К)-3,4-дигидро-2Н-1-бензопиран-2-ил]-2-гидроксиэтил]-4-пиперидинил]-2,4(1Н,3Н)-хиназолиндион, 1-[2-4-[(4-фторбензоил)-1-пиперидинил]этил]-2,4-(1Н,3Н)хиназолиндион и 1-[3-[4-(4-фторбензоил)-1-пиперидинил]пропил]-2,4-(1Н,3Н)хиназолиндион исключаются.
2. 2. Соединение по п.1, где

   X каждый X независимо обозначает или \

   каждый Υ независимо обозначает ⁷ или

   Г¹ означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из -С1_-6алкандиила-;

   Ь² означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из карбонила или -С1_-6алкандиила-; К¹ означает атом водорода или гидроксильную группу;

   Ζ означает атом водорода или радикал, выбранный из (а-1), (а-2), (а-3), (а-4) или (а-5); и каждый К² независимо выбран из атома водорода, атома галогена или С1_-6алкила.
3. 3. Соединение по п.1 и 2, где каждый X обозначает каждый Υ обозначает Г¹ означает прямую связь; Ь² означает прямую связь;

   К¹ означает атом водорода и Ζ означает атом водорода.
4. 4. Соединение по пп.1, 2 и 3, где соединением является соединение № 1

   Соединение № 1
5. 5. Применение соединения по любому из пп.1-4 в качестве лекарственного средства.
6. 6. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемые носители и терапевтически эффективное количество соединения по пп.1-4 в качестве активного ингредиента.
7. 7. Способ получения фармацевтической композиции по п.6, где тщательно смешивают фармацевтически приемлемые носители и соединение по пп.1-4.
8. 8. Применение соединения формулы (I) его Ν-оксидных форм, его фармацевтически приемлемых аддитивных солей и его стереохимических изомерных форм, где каждый X независимо обозначает или и когда X означает то

   Υ означает

   - 17 011552 каждый Υ независимо обозначает ' или за исключением случая, когда X обозначает \

   тогда Υ обозначает ·

   Ь¹ означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из -С_1-6алкандиила-,

   I.² означает прямую связь или двухвалентный радикал, выбранный из карбонила, -Сцбалкандиила-, -(гндроксн)С_1-6алкандннла-, -С(Ο)-С_1-6алкандннла- или -С_1-6алкандннл-С(О)-;

   К¹ означает атом водорода или гидроксильную группу;

   Ζ означает атом водорода или радикал, выбранный из где каждый К² независимо выбран из атома водорода, атома галогена или С_1-6алкила; для приготовления лекарственного средства для лечения опосредованного РАКР заболевания.
9. 9. Применение по п.8, где опосредованное РАКР заболевание представляет собой опосредованное РАКР-1 заболевание.
10. 10. Применение по пп.8 и 9, где лечение включает хнмносенснбнлнзацню.
11. 11. Применение по пп.8 и 9, где лечение включает радносенснбнлнзацню.
12. 12. Комбинация соединения формулы (I) по пп.1-4 с химиотерапевтическим средством.
13. 13. Способ получения соединения по п.1, характеризующийся взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с промежуточным соединением формулы (III), где обозначает подходящую уходящую группу, с образованием соединения формулы (Та), где \

    —

    X обозначает ' в инертном для данной реакции растворителе и при добавлении подходящего основания, (Ш) (П) <1-а)
14. 14. Способ получения соединения по п.1, характеризующийся взаимодействием промежуточного соединения формулы (IV) с промежуточным соединением формулы (V), где обозначает подходящую уходящую группу, с образованием соединения формулы (ТЬ), где \

    Υ обозначает ' в инертном для данной реакции растворителе и при добавлении подходящего основания