DK175338B1 - Somatostatinoktapeptid, fremgangsmåde til fremstilling deraf, farmaceutisk præparat og pakning med indhold deraf - Google Patents

Description

DK 175338 B1

Den foreliggende opfindelse angår et somatostatinoktapeptid, en fremgangsmåde til fremstilling deraf, farmaceutiske præparater indeholdende somatostatinoktapeptidet, samt dets anvendelse som lægemiddel, f.eks. til behandling af somatostatinreceptorpositive tumorer eller som 5 in vivo diagnostiske billeddannelsesmidler, samt pakning indeholdende enhedsdoser af somatostatinoktapeptidet.

I de senere år er der blevet påvist en høj forekomst af somatostatin-receptorer i en lang række humane tumorer, fx hypofysetumorer, cen-10 tralnervesystemtumorer, brysttumorer, gastro-enteropankreatiske tumorer og metastaser deraf. Nogle af disse er små eller langsomt voksende tumorer, som er vanskeligfe at lokalisere præcist ved konventionelle diagnosemetoder.

^ In vitro visualisering af somatostatinreceptorer er blevet foretaget ved autoradiografi af tumorvæv under anvendelse af radioioderet somatostatin eller somatostatinanaloger, fx [123I-Tyr^]somatostatin-14 (J.E. Taylor et al., Life Science 43, s. 421, 1988, eller [*-25I-2Q Tyr3] SMS 201-995 også kaldet l125I] 204-090 (J.C. Reubi et al.,

Brain Res 406, s. 891, 1987; J.C. Reubi et al., J. Clin. Endocr.

Metab. 65, s. 1127, 1987; J.C. Reubi et al., Cancer Res. 47, s. 551, 1987; J.C. Reubi et al., Cancer Res. 47, s. 5758, 1987.

25 Der er nu blevet fundet hidtil ukendte somatostatinoktapeptider, som er nyttige inden for terapien og som kan mærkes til in vivo diagnostiske og terapeutiske anvendelser.

Somatostatinoktapeptidet ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at 30 det bærer mindst én chelatiserende gruppe, der kan kompleksbinde et detekterbart element, som er valgt blandt paramagnetiske ioner, fluorescerende metalioner og radionuklider, hvilken chelatiserende gruppe enten direkte eller indirekte er kovalent bundet til den endestillede aminogruppe i peptidet, hvorved det således modificerede somato-35 statinpeptid har bindingsaffinitet for somatostatinreceptorer.

Somatostatinoktapeptidet i stand til at binde til somatostatinreceptorer, fx udtrykt eller overudtrykt af tumorer eller metastaser. 1 Én klasse af somatostatinoktapeptider er den, i hvilken den chelatiserende gruppe er bundet direkte til somatostatinpeptidterminogruppen.

I DK 175338 B1

En anden gruppe somatostatinoktapeptider er den, i hvilken den chelati- serende gruppe er bundet indirekte via en bro- etler spacergruppe til somatostatinpeptidets aminogruppe.

5 Den chelatiserende gruppe er bundet til peptidet via en amidbinding.

Cycliske, brocycliske og ligekædede somatostatinanaloger er kendte H forbindelser. Sådanne forbindelser og deres fremstilling er beskrevet I

i fx de europæiske patentskrifter ΕΡ-ΑΊ295; 29.579; 215.171; 10 203.031; 214.872; 298.732 og 277.419.

Foretrukne somatostatinoktapeptider ifølge opfindelsen er dem, der er afledt af en forbindelse med formlen 1 I 15 A' CHa-S-Yi Yj-S-CHj

\ I I

N-CH-CO-B-C-D-E-KH-CH-G

H hvor Η A er C1.12-alkyl, Cy.^Q-phenylalkyl eller en gruppe med formlen RCO-, hvor H i) R er hydrogen, C^.^j^-alkyl, phenyl eller Cy.iQ-phenylalkyl I 25 eller I ii) RCO· er a) en L- eller D-phenylalaninrest, der eventuelt er 30 ringsubstitueret med F, Cl, Br, N02, NH2, OH, Cj^-al- kyl og/eller Cj^.j-alkoxy; eller H b) resten af enanden naturlig eller syntetisk o-aminosyre, der er forskellig fra den under a) ovenfor definerede, H 35 I eller af en tilsvarende D-aminosyre^ A' er hydrogen, I og Y2 tilsammen er en direkte binding, eller hver af og Y2 I 40 uafhængigt af hinanden er hydrogen, 3 DK 175338 B1 B er -Phe-, der eventuelt er ringsubstitueret med halogen, NO2.

NH2· OH, Cj^.3*alkyl og/eller C^.3*alkoxy (herunder pentafluor-alanin), eller /?-naphthyl-Ala, 5 C er (L)-Trp- eller (D)-Trp-, der eventuelt er ά-N-methyleret og eventuelt er benzenringsubstitueret ned halogen, NOy, NHy, OH, q.3-alkyl og/eller Ci.3-alkoxy, D er Lys, Lys, i hvilken sideksden indeholder 0 eller S i £-stil- 10 lingen, y-Lys eller fiF-Lys, der eventuelt er α-N-nethyleret, eller en 4-aminocyclohexyl-Ala- eller 4-aminocyclohexyl-Gly-rest, E er Thr, Ser, Val, Phe, Ile eller en aminoisosmorsyre- eller 15 aminosmersyrerest, G er en gruppe med formlen 20 Ri s ^*11 1 -COOR7, -CfliORio, -CON^ eller

RlJ Γ i -C0-N-UXj 25 hvor

Ry er hydrogen eller Cj__3-alkyl,

RjLQ er hydrogen eller resten af en fysiologisk acceptabel, fysiologisk hydrolyserbar ester, RU er hydrogen, q^-alkyl, phenyl eller Cy.iø-phenylalkyl, 30 R12 er hydrogen, Ci.3-alkyl eller en gruppe med formlen -CH(Ri3)-Xi, RU er CHyOH, -(CH2)2'OH, -(CH2)3-OH eller -CH(CH3)OH eller er sub-stituenten, som er bundet til α-carbonatatomet i en naturlig eller syntetisk o-aminosyre (herunder hydrogen), og 35 Xi er en gruppe med formlen -COORy, -CHyORiø eller -CONR14R15 hvor

Ry og Rio har de ovenfor anferte betydninger,

Rl4 er hydrogen eller Ci.3-alkyl,

Rl5 er hydrogen, q^-alkyl, phenyl eller Cy.i0-phenylalkyl, og Rig er hydrogen eller hydroxy, _______ I DK 175338 B1 H med det forbehold , at Ru er hydrogen eller methyl, når Ru er -CH(Ru)* H hvor resterne B, D og E har L-konfiguration og resterne i 2- og 7- 5 stillingen hver uafhængigt af hinanden har (L)- eller (D)-konfiguration.

Følgende individuelle forbindelser illustrerer forbindelserne med formlen I:

I 10 I

I----' -1 H H-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol H også kendt som octreotid I 15 I (D)Phe-Cys-Thr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNB2 i-1 (D)Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-TrpNH2 I 20 (D)Trp-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 i-1 (D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2

I

25 3-(2-Naphthyl)-(D)Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNB2

I I

3-(2-Naphthyl)-(D)Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-&-Nal-NB2 i-1 3-(2-Naphthyl)-(D)Ala-Cys-&-Nal-(D)Trp-lys-Val-Cys-ThrNH2 I 30 I (D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-P-Nal-NB2

Η B. Analoger med formlen II

I 35 ,_ t

3-Cys-Phe-Phe-(D)-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-ol II

I [jfr. Vale et al., Metabolism, 27, Supp. 1, 139, (1978)] I 40 I---

H-Cys-His-Bis-Phe-Phe-(D)Trp-lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH III

I (se EP-A-200,188).

5 DK 175338 B1

Der henvises hermed til indholdet af alle ovenstående publikationer, herunder de specifikke forbindelser.

Særligt foretrukne somatostatinoktapeptider er dem, der er afledt af 5 i-1 H-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-lys-Thr-Cys-Thr-ol.

Egnede chelatiseringsgrupper er fysiologisk acceptable chelatise- 10 ringsgrupper, som er i stand til at kdmpleksbinde et detekterbart element. Den chelatiserende gruppe har fortrinsvis i det væsentlige hydrophil karakter. Eksempler på chelatiserende grupper omfatter fx iminodicarboxylsyregrupper, polyaminocarboxylsyregrupper, fx dem, der er afledt af ikke-cycllske ligander, fx ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA), diethylentriaminpentaeddikesyre (DTPA), ethylenglycol-0,0'- bis(2-aminoethyl)-Ν,Ν,Ν',N*-tetraeddikesyre (EGTA), N,N'-bis(hydroxy- benzyl)ethylendiamin-N,N'-dieddikesyre (HBED) og triethylentetramin- hexaeddikesyre (TTHA), dem, der er afledt af substitueret EDTA eller 20 -DTPA, fx p-isothiocyanatobenzyl-EDTA eller -DTPA, dem, der er afledt af macrocyeliske ligander, fx 1,4,7,10*tetra-azacyclododecan- N,N',N‘’,N'''-tetraeddikesyre (DOTA) og 1,4,8,11-tetraazaeyclotetra- decan-Ν,Ν',Ν" ,Ν'"-tetraeddikesyre (TETA), dem, der er afledt af N- substituerede eller C-substituerede macrocyeliske aminer, herunder 25

også eyelamer, fx som beskrevet i EP 104,780 Al og i WO 89/01476-A, grupper med formlerne IV eller V

0 0 0 w « 30 Ri-C-S-(CH2)8.-C-(TT)i-C-

IV

0 0 n *1

Rj-C-S-(CHj)B.-C-NH-CBj 0

35 \ * V

^CH-C-

Rj-C-S-(CHj)n,-C-NH

" n 0 o 40 I DK 175338 B1

I I

hvor hver af R^, R£ og Rj uafhængigt af hinanden er C^. g -alkyl, Cg. g- I

aryl eller Cj.g-arylalkyl, der hver eventuelt er substitueret ned OH, I

I C^.^-alkoxy, COOH eller SO3H, I

I n’ er 1 eller 2, I

5 i er et helt tal fra 2 til 6, eg I

I TT uafhængigt af hinanden er o- eller β·aminosyrer, der er bundet til I

hinanden ved amidbindingerne, I

I 10 I

I grupper afledt af bis-aminothiolderivater, fx forbindelser med form- I

I len VI I

I „

m nh I

I r ΐ "U2 I /’/Sh Η5^«23

I K20 I

I 20 I

I hvor I

I hver af R20. R21» ^22 °S R23 uafhængigt af hinanden er hydrogen eller I

I Cj^-alkyl, I

I X2 er en gruppe, der er i stand til at reagere med peptidets N-amino- I

25 gruppe, og I

I m' er 2 eller 3, I

I grupper afledt af dithiasemicarbazonderivater, fx forbindelser med I

I gø formlen VII I

I A

I hn"N % vn I

I hk^sh hs nh I

I hvor I

I X2 er som defineret ovenfor, I

I 40 I

7 DK 175338 B1

grupper afledt af propylenaminoximderivater, fx forbindelser med formlen VIII

HN NH

5 #26>/ "<»27 ΪΙΠ

Rj5A.

R24 j* f R29

OH OH

^ hvor hver af R24, &25> R26' R28 °6 R29 uafhængigt af hinanden er hydrogen eller Cj^-alkyl, og X2 og m' er som defineret ovenfor, 15

grupper afledt af diamiddimercaptider, fx forbindelser med formlen IX

n HN NH .

20 V/- Ύ>°

f I I

HjCgCO COCgH.

25 hvor X3 er et divalent radikal, der eventuelt er substitueret og bærer en gruppe, der er i stand til at reagere med peptidets N-aminogruppe, fx C^.^-alkylen eller phenylen, der bærer en gruppe X2, og 30 Y5 er hydrogen eller CO2R30. hvor R30 er C^.4-alkyl, eller grupper afledt af porphyriner, fx N-benzyl-5,10,15,20-tetrakis-(4-carboxyphenyl)porphin eller TPP, der bærer en gruppe X2 som defineret ovenfor, 35

Aryl er fortrinsvis phenyl. Arylalkyl er fortrinsvis benzyl.

Eksempler på X2 omfatter radikaler med formlen ·(X4)n*»-X5. hvor X4 4q er C^.g-alkylen; eller Cj^.g-alkylen, der eventuelt er bundet til carbonatomet via et oxygenatom eller -NH-, n'' er 0 eller 1, og X5 er

I DK 175338 B1 I

I 8 I

-NCS, en carboxygruppe eller et funktionelt derivat deraf, fx syre- I

H halogenid, -anhydrid eller -hydrazid. Det er klart, at X2 er bundet I

I til ét af carbonatomeme i - [CH2)m* - eller -CH-CH- i stedet for et I

I hydrogenatom. I

I I

H Den chelatiserende gruppe kan vare bundet enten direkte eller in- I

H direkte til somatostatinpeptidet N-amino gruppen. Hvis den er bundet I

I indirekte, er den fortrinsvis bundet via en bro- eller spacergruppe, I

I fx en gruppe med formlen (al) 1

I 10 I

I Z-R35*CO- (al) I

hvor R35 er C^.j^-alkylen, C2.n-alkenylen eller -CH(R')-, hvor R' er I

den rest, der er bundet i α til en naturlig eller syntetisk α- I

H 15 I

aminosyre, fx hydrogen, Cj^.^-alkyl, benzyl, eventuelt substitu- I

H eret benzyl, naphthylmethyl, pyridylmethyl, og I

Z er en funktionel enhed, der er i stand til at reagere covalent I

med chelatiseringsmidlet. I

I 20 I

Z kan fx være en gruppe, som kan danne en ether-, ester- eller amid- I

binding med chelatiseringsgruppen. Z er fortrinsvis amino. I

Chelatiseringsgrupperne, når de omfatter carboxy-, -SO3H- og/eller I

25 aminogrupper, kan eksistere i fri form eller i saltform. I

Foretrukne chelatiseringsgrupper er dem, der er afledt af polyamino- I

I polycarboxylsyregrupper, fx dem, der er afledt af EDTA, DTPA, DOTA, I

I TETA eller substitueret EDTA eller DTPA. Chelatiseringsgrupper afledt I

30 I

af DTPA foretrækkes især. I

I I somatostatinoktapeptiderne ifølge opfindelsen kan cehlatiserings- I

I gruppen, når den er polyfunktionel, være bundet enten til et enkelt so- I

I 35 matostatinpeptidmolekyle eller til flere end et somatostatinpeptidmole- I

I kyle, fx til to somatostatinpeptidmolekyler. I

I Somatostatinoktapeptiderne ifølge opfindelsen kan eksistere fx i fri I

I form eller i saltform. Salte omfatter syreadditionssalte med fx orga- I

I 40 niske syrer, polymere syrer eller uorganiske syrer, fx hydrochlorider og I

I acetater, og saltformer, der kan opnås med de carboxyl- eller sulfon- I

I syregrupper, der er til stede i cehlatiseringsgruppen, fx alkalimetalsalte I

DK 175338 B1 9 I såsom natrium eller kalium, eller substituerede eller usubstituerede I ammoniumsalte.

I Den foreliggende opfindelse angår også en fremgangsmåde til frem- I 5 stilling af somatostatinoktapeptiderne ifølge opfindelsen. De kan I fremstilles analogt med kendte metoder.

I Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at I .jq a) mindst én beskyttelsesgruppe, soa er til stede i et somatosta- I tinpeptid, der barer en che lat i serings gruppe, fjernes eller I b) to peptidfragmenter, son hver indeholder nindst én aminosyre I eller aminoalkohol i beskyttet eller ubeskyttet fora, og én af I 15 dem indeholder chelatiseringsgruppen, bindes sammen ved hjalp af I en amidbinding, idet anidbindingen er på en sådan nåde, at der I opnås den ønskede aminosyresekvens, hvorefter trin a) i frem* I gangsmåden derefter eventuelt udføres, eller I 20 I c) et chelatiseringsmiddel og det ønskede somatostatinpeptid i I beskyttet eller ubeskyttet forn bindes sammen på en sådan måde, I at chelatiseringsgruppen fikseres på den ønskede N-aminogruppe i I peptidet, og trin a) derefter eventuelt udføres, eller I 25 I d) en funktionel gruppe i et ubeskyttet eller beskyttet peptid, der I barer en chelatiseringsgruppe, fjernes eller omdannes til en I anden funktionel gruppe således, at der opnås et andet ubeskyt- I tet eller beskyttet peptid, der barer en chelatiseringsgruppe,

OU

I og, i sidstnævnte tilfalde, trin a) ved fremgangsmåden udføres, I eller I e) et somatostatinpeptid, der er modificeret med en chelatiserings- I 35 gruppe, og i hvilket mercaptogrupperne i Cys-resterne ek- I sisterer i fri form, oxideres til dannelse af en analog, i I hvilken to Cys-rester er forbundet via en S-S-bro, I °9 den således opnåede forbindelse udvindes i fri form eller i saltform, I 40 e*ler ' med et detekterbart element kompleksbunden form.

I DK 175338 B1 I 10 H De ovenstående reaktioner kan udføres analogt med kendte metoder, fx

H som beskrevet i nedenstående eksempler, især processerne a) og c) . I

Hvis chelatiseringsgruppen bindes fast ved hjælp af am idbinding, kan

H dette udføres analogt med de til amiddannelse anvendte metoder. Hvis I

5 det ønskes, kan der ved disse reaktioner til funktionelle grupper, I

som ikke deltager i reaktionen, anvendes beskyttelsesgrupper, som er I

egnede til anvendelse i peptider eller til de ønskede chelatiserings-

grupper. Udtrykket beskyttelsesgruppe kan også omfatte en polymerhar- I

piks, som har funktionelle grupper. I

I 10

H Hvis det ønskes at binde chelatiseringsgruppen til den terminale I

N-aminogruppe i et peptid eller peptidfragment, der anvendes som I

H udgangsmateriale, og som omfatter én eller flere sidekædeaminogrup- I

per, kan disse sidekædeaminogrupper hensigtsmæssigt beskyttes med en I

I 15 I

H beskyttelsesgruppe, fx som anvendt inden for peptidkemi. I

Hvis det ønskes at binde chelatiseringsgruppen til en sidekædeamino- I

gruppe i et peptid eller peptidfragment, der anvendes som udgangsma- I

H 20 teriale, og peptidet omfatter en fri terminal N-aminogruppe, beskyt- I

tes sidstnævnte fortrinsvis med en beskyttelsesgruppe. I

Det peptidfragment, der bærer chelatiseringsgruppen og anvendes i I

trin b), kan fremstilles ved, at peptidfragmentet omfattende mindst I

I 25 I

H én aminosyre eller aminoalkohol i beskyttet eller ubeskyttet form I

omsættes med chelatiseringsmidlet. Reaktionen kan udføres analogt med I

trin c). I

I 30 Chelatiseringsgrupperne med formlen IV eller V kan bindes til et I

peptid ved, at et chelatiseringsmiddel med formlen IV' eller V' I

I ooo I

I Rj-C-S-(CBj)R·-C-(TT)i”C-X IV' I

I 35 I

I 0 0 I

I i

I Rj-C-S-(CBj)„-0 I

I 40 V' I

I Rj-C-S-(CHj)„.-C-MB I

I I

I o o I

DK 175338 B1 11 hvor X er en aktiveringsgruppe, der er i stand til at danne en amidbinding, omsættes med peptidets N-aminogruppe. Reaktionen kan udfares som beskrevet i EP 247.866 Al.

Det i procestrin c) anvendte chelatiseringsmiddel kan vare kendt 5 eller fremstillet analogt med kendte metoder. Den anvendte forbindelse er således, at den tillader indføring af den ønskede chelatise-ringsgruppe på somatostatinpeptidet, fx en polyaminopolycarboxylsyre som beskrevet, et salt eller et anhydrid deraf.

10

Hvis, i de aminosyrer, peptidfragmenter eller peptider, der anvendes som udgangsmaterialer, chelatiseringsgruppen ved den ovenstående proces bindes til peptidet via en bro- eller spacergruppe, fx et radikal med formlen (a^) som defineret ovenfor, så kan sådanne amino-syrer, peptidfragmenter eller peptider fremstilles ved, at de tilsvarende aminosyrer eller peptider, der er fri for en bro- eller spacer-gruppe, på konventionel måde omsættes med en tilsvarende bro- eller spacergruppedannende forbindelse, fx en syre eller et reaktivt syre-2Q derivat, der omfatter bro- eller spacergruppen, fx en syre med formlen Z-R35-COOH eller et reaktivt syrederivat deraf såsom en aktiv ester. Eksempler på aktive estergrupper eller carboxyaktiveringsgrup-per er fx 4-nitrophenyl, pentachlorphenyl, pentafluorphenyl, suc-cinimidyl eller l-hydroxyben20triazolyl.

25

Alternativt kan chelatiseringsmidlet først omsættes med en bro- eller spacergruppedannende forbindelse med henblik på at bære bro- eller spacergruppen og derefter omsættes på konventionel måde med peptidet, peptidfragmentet eller aminosyren.

30

Somatostatinoktapeptiderne ifølge opfindelsen kan oprenses på konventionel måde, fx ved kromatografi. Somatostatinoktapeptiderne ifølge opfindelsen indeholder fortrinsvis mindre end 5 vægtprocent peptider, der er fri for chelatiseringsgrupper.

35

Somatostatinoktapeptiderne ifølge opfindelsen i fri form eller i form af farmaceutisk acceptable salte er værdifulde forbindelser. Ifølge en yderligere udførelsesform kan somatostatinoktapeptiderne ifølge opfindelsen kompleksdannes med et detekterbart element.

Den foreliggende opfindelsen angår følgelig også somatostatinoktapeptiderne ifølge opfindelsen som defineret ovenfor, som er komleksdannet 40 I DK 175338 B1 I 12 H med et detekterbart element (i det følgende betegnet chelater ifølge opfindelsen i fri form eller i saltform, fremstilling deraf samt deres anvendelse til in vivo diagnostisk og terapeutisk behandling.

Med et detekterbart element menes et hvilken som helst element, I 5 fortrinsvis en metalion, som udviser en egenskab, der kan detekteres H ved terapeutiske eller in vivo diagnostiske teknikker, fx en metal- ion, som udsender en detekterbax stråling eller en metalion, som er i H stand til at påvirke NMR-relaxationegenskaber.

I 10

Egnede detekterbare metalioner omfatter fx tunge grundstoffer eller ioner af sjældne jordarter, fx som anvendt inden for CAT-scanning (Computer axial tomography), paramagnetiske ioner, fx Gd^+, Fe^+,

Mn2+ og Cr2+, fluorescerende metalioner, fx Eu^+ og radionuklider, fx ^ 7-emitterende radionuklider, Ø-emitterende radionuklider, a-emit- terende radionuklider, positron-emitterende radionuklider, fx ^®Ga.

Egnede 7-emitterende radionuklider omfatter dem, som er anvendelige inden for diagnostiske teknikker. De 7-emitterende radionuklider har H hensigtsmæssigt en halveringstid på fra 1 time til 40 dage, fortrins - vis fra 5 timer til 4 dage, især fra 12 timer til 3 dage. Eksempler H herpå er radionuklider afledt af gallium, indium, technetium, ytter- bium, rhenium og thallium, fx ®^Ga, *^In, ^“Te, *^Yb og ^®%e.

H 25 7-Radionuklidet udvælges fortrinsvis afhængigt af metabolismen for den ligand ifølge opfindelsen eller det somatostatinpeptid, der anvendes. Liganden ifølge opfindelsen chelatiseres fortrinsvis med et 7-radionuklid, som har en længere halveringstid end halveringstiden for somatostatinpeptidet på tumoren.

30 I Yderligere radionuklider, der er egnet til anvendelse ved billeddan- nelse, er positron-emitterende radionuklider, fx som nævnt ovenfor.

I 35 Egnede ^-emitterende radionuklider omfatter dem, som er nyttige inden I for terapeutiske anvendelser, fx ^®Y, ^-Cu, *®%e, *®®Re, *®®Er, I *^Sn, 127Τβι 143pr> 198Au> 109pdi l65Dy, 32P og lft2Pr. /5-Radionukli- I det har hensigtsmæssigt en halveringstid på fra 2,3 timer til I 14,3 dage, fortrinsvis fra 2,3 til 100 timer. Det ^-emitterende I 40 radionuklid udvælges fortrinsvis med henblik på at have en længere

DK 175338 B1 I

13 I

halveringstid end halveringstiden for somatostatinpeptidet på turoo- I

ren. I

Egnede α-emitterende radionuklider er dem, som anvendes inden for I

^ terapeutiske behandlinger, fx ^*At og ^12g^ I

Chelaterne ifølge opfindelsen kan fremstilles ved at omsætte somatosta- I

tinoktapeptidet med en tilsvarende forbindelse, som giver det detekter- I

bare element, fx et metalsalt, fortrinsvis et vandopløseligt salt. Reak- I

tionen kan udføres analogt med kendte metoder, fx som beskrevet i I

10 Perrin, Organic Ligand, Chemical Data Series 22. NY Pergamon Press I

(1982); i Krejcarit og Tucker, Biophys. Biochem. Res. Com. 77: 581 I

(1977) og i Wagner og Welch, J. Nucl. Med. 20: 428 (1979). I

I Kompleksdannelsen af somatostatinoktapeptidet udføres fortrinsvis ved I

I 15 en pH-værdi, ved hvilken liganden ifølge opfindelsen er fysiologisk I

I stabil. I

I Alternativt kan det detekterbare element også tilføres til opløsnin- I

I gen som et kompleks med et intermediært chelatiseringsmiddel, fx et I

I 20 chelatiseringsmiddel, som danner et chelatkompleks, som gør elementet I

I opløseligt ved ligandens fysiologiske pH, men som er termodynamisk I

I mindre stabilt end chelatet. Eksempler på et sådan intermedisrt I

I chelatiseringsmiddel er 4,5-dihydroxy-l,3-benzendisulphonsyre I

I (Tiron). Ved en sådan proces udskifter det detekterbare element I

I 25 liganden. I

I Chelaterne ifølge opfindelsen kan også fremstilles ved, at et chela- I tiseringsmiddel, som er kompleksdannet med det detekterbare element, I bindes sammen med et somatostatinpeptid i beskyttet eller ubeskyttet I 30 form og, om ønsket, mindst én beskyttelsesgruppe, som er til stede, I fjernes. Den samme reaktion kan udføres med et chelatiseringsmiddel, I som er kompleksdannet med en ikke - de tekt erbar metalion, hvorefter I metalionen i det resulterende kompleksdannede peptid kan erstattes I 35 med det ønskede detekterbare element.

I Chelaterne ifølge opfindelsen kan også fremstilles ved, at et chela- I tiseringsmiddel, som er kompleksdannet med det detekterbare element, I bindes sammen med et somatostatinpeptidfragment, der omfatter mindst I 40 I DK 175338 B1

I u I

én aminosyre i beskyttet eller ubeskyttet form, og peptidsyntesen I

derefter fortsattes trin for trin, indtil den endelige peptidselcvens I

I er opnået, og, om ønsket, mindst én beskyttelsesgruppe, som er til I

stede, fjernes. 1 stedet for det detekterbare element kan chelatise- I

H 5 ringsmidlet vare kompleksdannet med et ikke-detekterbart metal, og I

dette metal kan derefter erstattes med det detekterbare element i det I

resulterende kompleksdannede somatostatinpeptid. I

I Hvis chelatiseringsgruppen er bundet til somatostatinpeptidet via en I

I bro· eller spacergruppe, fx via et radikal med formlen (a^) som I

I defineret ovenfor, kan enten somatostatinpeptidet eller peptidfrag- I

mentet eller chelatiseringsmidlet bære bro- eller spacergruppen. I

I 15 De ovenfor nævnte reaktioner kan udføres analogt med kendte metoder. I

I Afhængigt af den tilstedeværende chelatiserende gruppe, kan mærk* I

I ningseffektiviteten nærme sig 1002 således, at oprensning ikke er I

I nødvendig. Radionuklider såsom fx Technetium-99m kan anvendes i I

oxideret form, fx Tc-99m-pertechnetat, som kan kompleksdannes under I

I po I

& reducerende betingelser.

De ovenfor nævnte reaktioner udføres hensigtsmæssigt under betingel- I

ser, som undgår spormetalkontaminering. Der anvendes fortrinsvis I

I destilleret deioniseret vand, ultrarene reagenser, radioaktivitet af I

I chelatiseringskvalitet etc. med henblik på at reducere virkningerne I

fra spormetal. I

Chelaterne ifølge opfindelsen kan eksistere fx i fri fonn eller I

30 saltform. Salte omfatter syreadditionssal te med fx organiske syrer, I

polymere syrer eller uorganiske syrer, fx hydrochlorider og acetater, I

og saltformer, der kan opnås med den i molekylet tilstedeværende I

carboxylsyregruppe, som ikke deltager i chelatdannelsen, fx alkalime- I

talsalte såsom natrium- eller kaliumsalte, eller substituerede eller I

35 I

usubstituerede ammoniumsalte. I

Chelaterne ifølge opfindelsen og deres farmaceutisk acceptable salte I

udviser farmaceutisk aktivitet og er derfor nyttige enten som et I

40 billeddannelsesmiddel, fx vitualisering af somatostatinreceptorposi- I

ti ve tumorer og metastaser, når de kompleks dannes med et paramag- I

DK 175338 B1 I

15 I

netikum, en 7-emitterende metalion eller et positron-emitterende I

radionuklid, eller som et radiofarmaceutikum til behandling in vivo I

af somatostatinreceptorpositive tumorer og metastaser, nir de kom- I

pleksdannes med et a- eller ^-radionuklid som indikeret ved stan- I

5 dardtests. I

Chelaterne ifelge opfindelsen har iser affinitet til somatostatin- I

receptorer, som udtrykkes eller overudtrykkes af tumorer og meta- I

I staser, således som det indikeres ved standard in vitro bindingsas· I

I says. I

I 10 En somatostatinreceptorpositiv tumor stammende fra den menneskelige I

I mavetarmkanal fjernes fra en patient og lægges øjeblikkeligt på is og I

I nedfryses inden for maksimum 30 minutter til -80*C. Til yderligere I

I autoradiografi skæres dette frosne materiale ud i snit på 10 μα på en I

I cryostat (Leitz 1720), monteres på forrensede mikroskopobjektglas og I

I 15 opbevares ved -20“C i mindst tre dage med henblik på at forbedre I

I vævets vedhæftning til objektglasset. Snittene præinkuberes i Tris- I

I HCl-buffer (50 mM, pH 7,4), der indeholder CaCl2 (2 mM) og KC1 I

I (5 mM), i 10 minutter ved omgivelsestemperatur og vaskes derefter to I

I gange i 2 minutter i samme buffer uden yderligere tilsatte salte. I

I 20 Snittene inkuberes derefter med et chelat ifølge opfindelsen i 2 ti- I

I mer ved omgivelsestemperatur i Tris-HCl-buffer (170 mM, pH 7,4), der I

I indeholder bovint serumalbumin (10 g/1), bacitracin (40 mg/1) og I

I MgCl2 (5 mM), til inhibering af endogene proteaser. Ikke-specifik I

I binding bestemmes ved at tilsætte det tilsvarende ikke-mærkede, ikke- I

I 25 modificerede somatostatinpeptid i en koncentration på 1 μΜ. Inkubere- I

I de snit vaskes to gange i 5 minutter i kold inkubationsbuffer Inde- I

I holdende 0,25 g/1 BSA. Efter en kort neddypning i destilleret vand I

I til fjernelse af overskud af salte, tørres snittene hurtigt og an- I

I bringes på (½]-LKB-film. Efter en eksponeringstid på ca. 1 uge i I

I 30 røntgenkasetter observeres det, at chelaterne ifølge opfindelsen, fx I

I et radionuklidchelat, giver særdeles gode resultater med hensyn til I mærkning af tumorvævet uden at mærke det omgivende sunde væv, når de I tilsættes i en koncentration på ca. 10"*® til 10"·* M.

I Affiniteten hos chelaterne ifølge opfindelsen overfor somatostatin- I 35 receptorer kan også vises ved afprøvning in vivo.

I DK 175338 B1 I 16

Rotter ned transplanterbare exocrine pancreatiske sonatostatinrecep- I

H torpositive tumorer behandles med en intravenøs injektion af et I

H chelat ifølge opfindelsen. Injektionsstedet er penisvenen. Umiddel· I

bart efter administration anbringes dyrene på et gamma-kameras colli- I

H S mator, og fordelingen af radioaktivitet overvåges med forskellige I

tidsintervaller. I

H Biodistributionen af radioaktivitet kan også bestemmes ved seriel I

aflivning af et antal sådanne behandlede rotter og bestemmelse af I

organradioaktiviteten. I

10 Efter administration af et chelat ifølge opfindelsen, fx et radio- I

nuklidchelat, fx et -γ-emitterende chelat, i en dosis på fra 1-5 Mg/kg I

ligand mærket med 0,1-2 mCi radionuklid bliver tumorstedet detekter- I

bart sammen med de organer, hvor ekskretion i det væsentlige finder I

H sted. I

H 15 I en serie af specifikke og alternative udførelsesformer angår den I

foreliggende opfindelse følgeligt også: I

H 1. En fremgangsmåde til in vivo detektion af somatostatinreceptor- I

positive tumorer eller metastaser i en patient, hvilken frem- I

gangsmåde omfatter a) administration af et chelat ifølge opfin- I

H 20 delsen til patienten og b) bestemmelse af lokaliseringen for de I

H receptorer, som chelatet er rettet imod. I

H Chelater ifølge opfindelsen til anvendelse ved in vivo detek- I

I tionsmetoden ifølge opfindelsen er de chelater, som er kompleks- I

I dannet med et 7-emitterende radionuklid, et positron-emitterende I

I 25 radionuklid eller en paramagnetisk metalion, fx som antydet I

I ovenfor. . I

I Chelaterne ifølge opfindelsen til anvendelse som et billeddan- I

I nelsesmiddel ved metode (1) kan administreres parenteralt, I

I fortrinsvis intravenøst, fx i form af injicerbare opløsninger I

I 30 eller suspensioner, fortrinsvis ved en enkelt injektion. Den I

I relevante dosis vil naturligvis afhænge af fx liganden og arten I

17 DK 175338 B1 af det anvendte detekterbare element, fx radionuklidet. En egnet dosis til injektion er i det område, som muliggør billeddannelse ved fotoscanningsprocedurer, som er kendte inden for teknikken.

Hvis der anvendes et radiomærket chelat ifølge opfindelsen, kan 5 det med fordel administreres i en dosis med en radioaktivitet på fra 0,1-50 mCi, fortrinsvis 0,1-30 mCi, især 0,1-20 mCi. Et indikeret dosisområde kan være på fra 1-200 pg ligand mærket med 0,1-50 mCi, fortrinsvis 0,1-30 mCi, fx 3-15 mCi, γ-emitterende radionuklid afhængig af det anvendte 7-emitterende radionuklid.

10 Hed fx In foretrækkes det at anvende en radioaktivitet i det lave område, medens det med Tc foretrækkes at anvende en radioaktivitet i det højere område.

Berigelsen i de tumorigene steder med chelateme kan følges med tilsvarende billeddannelsesteknikker, fx under anvendelse af 15 nuclearmedicinsk billedinstrumentering, fx en scanner, et γ- kamera, et roterende 7-kamera, hver af disse fortrinsvis computerassisterede; FET-scanner (Positron emission tomography); MRI-udstyr eller CAT-scanningsudstyr.

Chelateme ifølge opfindelsen, fx en stor del af de y-emitteren-20 de chelater, udskilles i det væsentlige via nyrerne og akkumule res ikke signifikant i leveren.

2. En fremgangsmåde til in vivo behandling af somatostatinreceptor-positive tumorer og metastaser i en patient, som har behov for en sådan behandling, hvilken fremgangsmåde omfatter, at der til 25 patienten administreres en terapeutisk virksom mængde af et chelat ifølge opfindelsen.

Chelater ifølge opfindelsen til anvendelse ved in vivo behandlingsmetoden er de chelater, der er kompleksdannet med et o-eller ^-radionuklid som defineret ovenfor. 1

De doser, der anvendes ved udøvelse af den terapeutiske metode, vil naturligvis variere afhængigt af fx den specifikke tilstand, som skal behandles, fx tumorens volumen, det specifikt anvendte chelat, fx chelatets halveringstid i tumoren, og den ønskede I DK 175338 B1

I 18 I

terapi. I almindelighed beregnes dosen på basis af radioaktivi- I

I tetsfordeling til hvert organ og på observeret optagelse i I

H målet. Fx kan chelatet administreres i et dagligt dosisområde I

med radioaktivitet på fra 0,1*3 mCi/kg legemsvagt, fx 1-3 mCi, I

H S fortrinsvis 1-1,5 mCi/kg legemsvagt. Et Indikeret dagligt dosis- I

område er fra 1-200 pg ligand market med 0,1-3 mCl/kg legems- I

H vagt, fx 0,1-1,5 mCi/kg legemsvagt o- eller ^-emitterende radio- I

H nuklid, hensigtsmæssigt administreret i delte doser op til h I

I gange dagligt. I

I 10 De cr- eller ^-emitterende chelater ifølge opfindelsen kan ad- I

ministreres af en hvilken som helst konventionel, vej, især I

parenteralt, fx i form af injicerbare opløsninger eller suspen- I

I sioner. De kan også med fordel administreres ved infusion, fx en I

infusion over 30-60 minutter. Afhængigt af tumorstedet kan de I

15 administreres så tæt som muligt på tumorstedet, fx ved hjælp af I

et kateter. Den valgte administrationsmåde kan afhænge af dis- I

sociationshastigheden for det anvendte chelat og udskillelses- I

H * hastigheden. I

Chelaterne ifølge opfindelsen kan administreres i fri form eller i I

20 farmaceutisk acceptabel saltform. Sådanne salte kan fremstilles på I

H konventionel måde og udviser den samme grad af aktivitet som de frie I

forbindelser. I

Chelaterne ifølge opfindelsen til anvendelse ved fremgangsmåden kan I

I fortrinsvis fremstilles kort før administration til en patient, dvs. I

I 25 at radiomærkningen med den ønskede detekterbare metalion, især det I

I ønskede o-, β eller 7-radionuklid, kan udføres kort tid før admini- I

I strationen, I

Chelaterne ifølge opfindelsen kan være egnede til billeddannelse I

I eller behandling af tumorer såsom hypofysetumorer, gastroenteropan- I

I 30 creatiske tumorer, centralnervesystemtumorer, brysttumorer, pros- I

I tatiske tumorer, ovarie- eller colontumorer, småcellet lungecancer, I

paragangliomer, neuroblastomer, pheochromocytomer, medulære thyroid- I

carcinomer, myelomer etc. og metastaser deraf. I

19 DK 175338 B1

Ifølge en yderligere udførelsesform af opfindelsen kan de 7-emit-terende chelater ifølge opfindelsen også anvendes som et billeddan-nelsesmiddel til bedømmelse af nyrefunktionen.

g Der anvendes grupper på fen mus. Til hver nus injiceres der intravenøst via en halevene 0,1 ml indeholdende 1 mCi af et chelat ifølge opfindelsen. Musene anbringes derefter i metaboliske bure til opsam-I ling af udskilt urin. 10 eller 120 minutter efter injektionen ligeres I urinrørerne, og nusene bedøves ned chloroform. Billeddannelse af det

I 10 uropoietiske system udføres under anvendelse af den sædvanlige bil- I

I ledteknik. Ved denne test forbedrer de yemitterende chelater ifølge I opfindelsen billeddannelse af renal udskillelse, når de administreres I i en dosis på fra 0,1-30 mCi.

I 15 In vivo evaluering af nyrefunktionen hos en patient kan gennemføres I ved, at der til patienten administreres en effektiv mængde af et y- I emitterende chelat, og nyrefunktionen måles.

I Det farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen indeholder som aktiv I 20 komponent et somatostatinoktapeptid ifølge opfindelsen i fri form eller i I farmaceutisk acceptabel saltform sammen med én eller flere farmaceu- I tiske bærere eller diluenter.

I Sådanne præparater kan fremstilles på konventionel måde.

I 25 I Et præparat ifølge opfindelsen kan også foreligge i separate paknin- I ger med instruktioner til blanding af liganden med metalionen og til I fremstilling af det resulterende chelat. Det kan også foreligge i I dobbelt pakkeform, dvs. som en enkelt pakke indeholdende adskilte I 30 enhedsdoser af liganden og den detekterbare metalion med instruk- I tioner til blanding af dem og til administration af chelatet. En I 4 diluent eller bærer kan være til stede i enhedsdosisformerne.

I I de følgende eksempler er [a]jj°-værdier ukorrigerede. Der anvendes I 35 følgende forkortelser: I Boc tert.-butoxycarbonyl I TFA trifluoreddikesyre I 40 DTPA diethylentriaminpentaeddikesyre I DK 175338 B1

I 20 I

I EKSEMPEL 1 I

I I-1 I

DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol I

I 5 i

I I 1 I

1,1 g DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(e-Boc)-Thr-Cys-Thr-ol i fri baseform I

(1 mM) opløses i S 1 dioxan/l^O 1/1 (vol/vol) og omsættes med 5 g I

NaHCOj. Derefter tilsættes 520 mg DTPA-dianhydrid langsomt linder I

omrøring. Reaktionsblandingen omrøres i yderligere 30 minutter og I

frysetørres. Remanensen opløses i 250 ml vand, og pH-vxrdien justeres I

I til 2,5 med koncentreret.HC1. Det udfældede produkt filtreres fra, I

vaskes og tørres over phosphorpentoxid. Efter kromatografi på en I

I 15 silicagelsøjle isoleres følgende produkter: 230 mg DTPA-DPhe- I

I 1-1 I

Cys-Phe-DTrp-Lys(«-Boc)-Thr-Cys-Thr-ol og 500 mg af den tilsvarende I

dimer DTPA-(DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(e-Boc)-Thr-Cys-Thr-ol)2. I

I 20 I

,- I

I 3 ml TFA blandes med 200 mg DTPA-DPhe - Cys - Phe - DTrp - Lys ( e-Boc)-Thr- I

I n I

Cys-Thr-ol. Efter 5 minutter ved stuetemperatur fældes blandingen I

I 25 diisopropylether, filtreres og tørres. Remanensen afsaltes over I

I Duolit og lyofiliseres, hvilket giver 150 mg af titelforbindelsen: I

I [a)l° - -26,6* (c - 1 95X AcOH). I

Udgangsmaterialet kan fremstilles på følgende måde: I

30 I

I-i I

a) H-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(Boc)-Thr-Cys-Thr-ol I

2,25 g di-tert.butyl-pyrocarbonat opløst i 30 ml DKF sættes langsomt I

35 og dråbevis ved stuetemperatur til en opløsning af 10 g H-DPhe- I

I-1 I

Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol-acetat i 100 ml DMF. Efter 2 timer I

ved stuetemperatur fjernes opløsningsmidlet under vakuum, og der I

sættes 200 ml diisopropylether til remanensen. Det dannede bundfald I

filtreres fra, vaskes med diisopropylether og tørres. Det rå produkt I

DK 175338 B1 I 21 I oprenses ved kromatografi over silicagel (eluent: Ci^C^/MeOH 9/1) og I isoleres derefter som et hvidt amorft pulver.

I [a]£° - 29,8' (c - 1,28 i DMF).

I 5 I EKSEMPEL 2 I I j I DTPA-(DPhe-CyS'Phe-DTrp-Lys*Thr-Cys-Thr-ol)2 I 10 I i- I Fraktionen indeholdende mellemproduktet DTPA-(DPhe*Cys-Phe-DTrp* I ^ Lys(«-Boc)-Thr-Cys-Thr-ol)2 som opnået i eksempel 1 behandles som I beskrevet ovenfor for den tilsvarende monomere form, idet Boc-beskyt- I telsesgrupperne fjernes, hvilket giver titelforbindelsen: I [q]J° - *24,5* (c - 0,55 95X AcOH).

I 20 I EKSEMPEL 3

I I I

I H2N*(CH2)5*CO>DPhe-Cys-Phe*DTrp*Lys-Thr-Cys-Thr-ol I 25

I l I

I a. 0,55 g H-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(BOC)-Thr-Cys-Thr-ol, 0,5 mmol I Fmoc-£-aminocapronsyre og 115 mg hydroxybenzotriazol opløses i I 30 10 ml DMF og afkøles til *30DC. Til denne opløsning sattes der I en opløsning af 115 mg dicyclohexylcarbodiimid i 5 ml DMF (afkø- I let til -10eC).

I Efter en reaktionstid på 24 timer, under hvilken blandingen I 35 I varmer op til stuetemperatur, filtreres det resulterende di- I cyclohexylurea fra, og filtratet fortyndes med vand til det I tidobbelte volumen. Det udfældede reaktionsprodukt filtreres I fra, vaskes og tørres over phosphorpentoxid. Det rå produkt I 40 anvendes til det næste trin uden yderligere oprensning.

I DK 175338 B1 I 22 H b. Fmoe-spaltning I 0,5 g råprodukt fra koblingsreaktionen (a) behandles i 10 minut- ter med 5 ml DMF/piperidin 4/1 vol/vol (klar oplåsning) og blandes derefter med 100 ml diisopropylether. Reaktionsproduk-

B 5 I

tet, som således falder ud, filtreres fra, vaskes og tørres.

Dette rå produkt anvendes i naste trin uden yderligere oprens· ning.

10 c. BOC-spaltning

H 300 mg råprodukt vundet i (l.b) behandles i 5 minutter ved I

stuetemperatur med 5 ml 100X TFA (fuldstændigt opløst) og bian· I

des derefter med 50 ml diisopropylether. Efter tilsætning af I

2 ml HCl/diethylether filtreres det resulterende bundfald fra, I

H 15 I

vaskes og tørres i højvakuum. Slutproduktet oprenses ved kroma- I

I tografi på silicagel (CHClj/MeOH/T^O/AcOH 7/3/0,5/0,5), med

efterfølgende afsaltning over Duolit (gradient: H2O/ACOH 95/5 I

I •••H20/dioxan/Ac0H 45/50/5).

I 20

Titelforbindelsen fås som et acetat (hvidt lyophilisat). I

[cr]g° - -32* (c - 0,5 95X AcOH).

I ^ Den resulterende forbindelse kan anvendes til omsætning med DTPA I

i overensstemmelse med proceduren i eksemplerne 1 og 2. I

I EKSEMPEL 4 I

30 I

Ved at følge den i eksemplerne 1 og 3 beskrevne procedure kan følgen- I

de ligand fremstilles: I 1

1 1 I

* DTPA-£Ala-DPhe-Cys·Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr·ol I

[a]g° - -14,8' (c - 0,5 95Z AcOH). I

40 I

DK 175338 B1 I

23 I

EKSEMPEL 5 I

I I I

^-^In-mærket DTPA-DPhe-Cys-Phe*DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol I

5 I

I I-1 I

I 1 mg DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol opløses i 5 ml O.OLM

I eddikesyre. Den resulterende opløsning ledes gennem et 0,22 μ Mil- I

I lex-GV filter og dispenseres ud i portioner på 0,1 ml og opbevares I

I 10 ved *20eC. ^InClj (Amersham, 1 mCi/100 μΐ) for-fortyndes i et lige I

I så stort volumen Q,5M natriumacetat, og mærkning udføres ved blanding I

I af liganden med InClj-opløsningen og forsigtig homogenisering ved I

I stuetemperatur.

I ^ Der tilsættes derefter HEPES-buffer, pH 7,4, til dannelse af en I

I opløsning på 10"^ Μ. I

I 2Q EKSEMPEL 6 I 00 1-1 *uY-mærket DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol I 25 90Y fås fra en 90Sr-90Y-radionuklidgenerator. Generatorens konstruk- I tion, elueringen af den, samt omdannelsen af [9®Y]EDTA til acetat- I komplekset udføres i overensstemmelse med metoden beskrevet af I M. Chinol og D.J. Hnatovich i J. Nucl. Med. 28, 1465-1470 (1987).

I . 30 I-1

I 1 mg DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol opløst i 5 ml 0,01M

I eddikesyre får lov til at varme op til stuetemperatur, og der tilsæt- I tes 1,0 mCi 9^Y i 50 μΐ steril 0,5M acetat. Blandingen henstilles derefter uforstyrret i fra 30 minutter til 1 time med henblik på at I 35 maksimere chelatisering.

I Én gruppe ligander ifølge opfindelsen er somatostatinpeptider, dvs.

somatostatinanaloger, som på mindst én af amlnosyreenhederne indehol- I der en chelatiseringsgruppe, som er bundet til aminogruppen via en 40 amidbinding, i fri form eller i saltform.

I DK 175338 B1 I

I 24 Én gruppe af chelater ifølge opfindelsen er de netop ovenfor navnte ligander kompleksdannet med et detekterbart element, fx en metalion, i fri form eller i saltform.

I 10 I 15 I 20 ] 25 I 30 I 35 I 40

Claims (15)

1. Somatostatinoktapeptid, kendetegnet ved, at I at det bærer mindst én chelatiserende gruppe, der kan kompleksbinde I 5 et detekterbart element, som er valgt blandt blandt paramagnetiske I ioner, fluorescerende metalioner og radionuklider, hvilken chelatise- I rende gruppe enten direkte eller indirekte er kovalent bundet til den I endestillede aminogruppe i peptidet, og hvorved det således modifi- I cerede somatostatinpeptid har bindingsaffinitet for somatostatinrecep- I 10 torer. I

2, Somastosatinoktapeptid ifølge krav 1, kendetegnet ved, at I somastostatinpeptidet er afledt af en forbindelse med formlen I I <e A' CHj-S-Υχ Y2-S-CH2 I \ ‘ 1 ^N-CH-CO-B-C-D-B-NH -CH-G 1 I k' I hvor I I A er C^.j^-alkyl, C7.^Q-phenylalkyl eller en gruppe med formlen I I 20 I I υ RCO-, hvor I I i) R er hydrogen, C^.j^-alkyl, phenyl eller C^.^o-phenylalkyl I I eller I I 25 I I il) RCO· er I I a) en L- eller D-phenylalaninrest, der eventuelt er I I ringsubstitueret med F, Cl, Br, NOj, NH2, OH, 0^.3-al- I I kyl og/eller C^.j-alkoxy; eller b) resten af en anden naturlig eller syntetisk o-aminosy re, der I er forskellig fra den under a) ovenfor definerede, I eller af en tilsvarende D-aminosyre^ A' er hydrogen, I Y^ og Y2 tilsammen er en direkte binding, eller hver af og Y2 I uafhængigt af hinanden er hydrogen, I DK 175338 B1 ^R B er -Phe-, der eventuelt er ringsubstitueret med halogen, NO2, ^R NH2, OH, Ci.3*alkyl og/eller C^.j-alkoxy (herunder pentafluor- ^R alanin), eller Ø-naphthyl-Ala, ^R C er (L)-Trp- eller (D)-Trp-, der eventuelt er ά-N-methyleret og IH 5 eventuelt er benzenringsubstitueret med halogen, NO2. NH2 . OH, ^R Ci_3*alkyl og/eller Cj^-alkoxy, ^R D er Lys, Lys, i hvilken sidekaden indeholder 0 eller S i Ø-stil- lingen, y-Lys eller $F-Lys, der eventuelt er a-N-methyleret, ^R eller en 4-aminocyclohexyl-Ala- eller 4-aminocyclohexyl-Gly-rest, ^R E er Thr, Ser, Val, Phe, Ile eller en aminoisosmørsyre- eller aminosmersyrerest, G er en gruppe med formlen I Ril

20 -COOR7, -CHjORjo, -CON^ eller yk I Rli I f -CO-N-L_x1 H hvor 25 r7 er hydrogen eller <^.3-alkyl, er hydrogen eller resten af en fysiologisk acceptabel, fysiolo- gisk hydrolyserbar ester, I Ru er hydrogen, Cj^-alkyl, phenyl eller Cy.^Q-phenylalkyl, R^2 er hydrogen, Cj^-alkyl eller en gruppe med formlen -CH(Ru)-Xj., I 30 pl3 er CH20H, -(C^h'OH, -(O^-OH eller -CH(CH3)OH eller er sub- stituenten, som er bundet til o-carbonatatomet i en naturlig eller syntetisk α-aminosyre (herunder hydrogen), og er en gruppe med formlen -COOR7, -CH2OR1o *C0MR14Ri5 35 hvor I R7 og R^o har de ovenfor anførte betydninger, Rj4 er hydrogen eller ¢^.3-alkyl, I r15 er hydrogen, Cj_.3-alkyl, phenyl eller C7_io-phenylalkyl, og I r16 er hydr°6en eller hydroxy, 40 DK 175338 B1 med det forbehold , at R,j er hydrogen eller methyl, når R12 er -CH(Ri3)- X>, hvor resterne B, D og E har l-konfiguration og resterne i 2- og 7-5 stillingen hver uafhængigt af hinanden har (L)- eller (D)-konfiguration.

3. Somatostatinoktapeptid ifølge ethvert af de foregående krav, kendetegnet ved, at somatostatinpeptidet er afledt af 10 2- (D) ?he-Cys-?he- (0)Tr?-tys-Thr-Cys-Thr-ol som også er kendt som oktreotid.

4. Somatostatinoktapeptid ifølge et hvilket som helst af de foregående 15 krav, kendetegnet ved, at den chelatiserende gruppe er valgt blandt iminodicarboxylsyregrupper, polyaminopolycarboxylsyregrupper, grupper afledt af makrocykliske aminer, grupper med formlen IV eller V 20 0 0 0 n «1 iv Ri-C-S-(CH,)B.-C-(TT)i-C- IV o o n n

25 R2-C-S-(CH2)b.-C-NH-QHj 0 ^CB-C- Rj ~C-S-(CB2)a.-C-NH V η n 0 o 30 hvor hver af R^, R2 og R3 uafhængigt af hinanden er C5 * alkyl, Cg. g* aryl eller Cy.g-arylalkyl, der hver eventuelt er substitueret med OH, Cj^-alkoxy. COOH eller SO3H, 35 n' er 1 eller 2, i er et helt tal fra 2 til 6, og TT uafhængigt af hinanden er o- eller ^-aminosyrer, der er bundet til hinanden via amidbindinger, 40 I DK 175338 B1 I I 28 I I grupper afledt af bis-aminothiolderlvater, af dithiasemicarbazonderi- I I vater, af propylenaminoximderivater, af diamiddimercaptider eller af I I porphyriner, i fri form eller i saltform. I

5. Somatostatinoktapeptid ifølge krav 4, kendetegnet ved, at den I I chelatiserende gruppe er afledt af ethylendiamlntetraeddikesyre (EDTA), I I diethylentriaminpentaeddikesyre (DTPA), ethylenglycol-0,0'-bis(2-amino- I I ethyl)-N,N,N,N', N'.tetraeddikesyre (EGTA), N,N'-bis(hydroxybenzyl)- I I ethylendiamin-N,N'-dieddikesyre (HBED), triethylentetraminhexaeddike- I I 10 syre (TTHA), substitueret EDTA eller DTPA, 1,4,7,10-tetraazacyclodode- I I decan-Ν,Ν', N'^W'-tetraeddikesyre (DOTA) og 1,4,8,11-tetraazacyclo- I I tetradecan-N,N',N",N",-tetraeddikesyre (TETA) i fri form eller i saltform. I

6. Somatostatinoktapeptid ifølge krav 5, kendetegnet ved, at den che- I I 15 latiserende gruppe er afledt af diethylentriaminpentaeddikesyre (DTPA), i I I fri form eller i saltform. I

7. Somatostatinoktapeptid ifølge ethvert af de foregående krav, kende* I I tegnet ved, at den chelatiserende gruppe er bundet til peptidet via en I I 20 spacergruppe med formlen αχ I I Z-Rjj-CO- (ctj) I I hvori I I 25 I I R35 er Ci-nalkylen, Cj.nalkenylen eller -CH(R')-, hvor R’ er den rest I I som er bunden i α til en naturlig eller syntetisk o-aminosyre og I I Z er en funktionel gruppe, der kan reagere kovalent med I I 30 chelatiseringsmidlet. I

8. Somatostatinoktapeptid ifølge ethvert af de foregående krav, kende- I I tegnet ved, at det detekterbare element er et positron-, o-, β- eller γ- I I emitterende radionuklid. I I 35 I

9. DTPA-( D)Phe-dys-Phe-( D)Trp-Lys-Thr-(jys-Thr-ol i fri form, i saltform I I eller bundet til Ulm eller 90Y. I

10. Fremgangsmåde til fremstilling af et somatostatinoktapeptid ifølge H I 40 krav 1 i fri form, i saltform eller i komplexbunden form, kendetegnet I I ved, at I DK 175338 B1 a) mindst én beskyttelsesgruppe, som er til stede i et somatosta-tinpeptid, der barer en chelatiseringsgruppe, fjernes eller b) to peptidfragmenter, som hver indeholder mindst én aminosyre _ eller aminoalkohol i beskyttet eller ubeskyttet form, og én af 5 dem indeholder chelatiseringsgruppen, bindes sammen ved hjalp af en amidbinding, idet amidbindingen er på en sådan måde, at der opnås den ønskede aminosyresekvens, hvorefter trin a) i fremgangsmåden derefter eventuelt udføres, eller 10 c) et chelatiseringsmiddel og det ønskede somatostatinpeptid i beskyttet eller ubeskyttet form bindes sammen på en sådan måde, at chelatiseringsgruppen fikseres på den ønskede N-arainogruppe i ^ peptidet, og trin a) derefter eventuelt udføres, eller d) en funktionel gruppe i et ubeskyttet eller beskyttet peptid, der barer en chelatiseringsgruppe, fjernes eller omdannes til en anden funktionel gruppe således, at der opnås et andet ubeskyt- 20 tet eller beskyttet peptid, der barer en chelatiseringsgruppe, og, i sidstnævnte tilfælde, trin a) ved fremgangsmåden udføres, eller e) et somatostatinpeptid, der er modificeret med en chelatiserings-25 gruppe, og i hvilket mercaptogrupperne i Cys-resterne eksisterer i fri form, oxideres til dannelse af en analog, i hvilken to Cys-rester er forbundet via en S-S-bro, og den siledes opnåede forbindelse udvindes i fri form eller i saltform, 30 eller i med et detekterbart element kompleksbunden form.

11. Somatostatinpeptid ifølge et hvilket som helst af kravene 1-9 i fri form eller i farmaceutisk acceptabel saltform til anvendelse som lægemiddel. 35

12. Somatostatinoktapeptid ifølge krav 11 til anvendelse som billedgengivelsesmiddel, når det er kompleksbundet med et positron- eller γ-emit-terende radionuklid, eller som et terapeutisk middel, når det er kompleksbundet med et o- eller β-emitterende radionuklid. — ... ^t 40 I DK 175338 B1 I 30 I

13. Farmaceutisk præparat, der som aktivt komponent indeholder et I H somatostatinoktapeptid ifølge et hvilket som helst af kravene 1-9 i fri I I form eller I farmaceutisk acceptabel saltform i kombination med en I I farmaceutisk bærer eller diluent. I I 5 I

14. Pakning indeholdende enhedsdoser af et somastostatinoktapeptid ’ I ifølge ethvert af kravene 1-9 i ikke-kompleksbunden form og af et detek- I I terbart element, med instruktioner til blanding deraf og til anvendelse I I som billedgengivelsesmiddel eller terapeutisk middel. I I to I I

15 I I 20 I I I