Verfahren zur Gewinnung eines Kallikrein-Inaktivators Die Lymph- und
Ohrspeicheldrüsen von Wiederkäuern enthalten einen Inaktivator des Pankreashormons
Kallikrein, der als Hemmstoff des Kallikreins, als Mittel zur Zufuhr großer Mengen
von inaktivem Kallikrein und als Hemmstoff von Fermenten eine therapeutische Bedeutung
besitzt.Method for obtaining a kallikrein inactivator The lymphatic and
Parotid glands of ruminants contain an inactivator of the pancreatic hormone
Kallikrein, used as an inhibitor of kallikrein, as a means of supplying large quantities
of inactive kallikrein and as an inhibitor of ferments is of therapeutic importance
owns.
Es ist bekannt, Präparate dieses Inaktivators herzustellen, indem
man nach H. Kraut, E. K. Frey und E. Wer 1 e (Hoppe-Seyler's, Zeitschrift für physiologische
Chemie, I92, i ff ., 193o) die getrockneten Organe mit Wasser oder verdünnter Essigsäure
extrahiert und den Inaktivator durch Zusatz von Alkohol zu diesen Extrakten fällt.
Es wurde nun gefunden, daß. man wesentlich reinere Präparate bei sehr guter Ausbeute
erhalten kann, wenn man die Extrakte zuerst mit Trichloressi.gsäure .zwecks Fällung
des Eiweißes versetzt und dann bei schwach alkalischer Reaktion unwirksame Begleitstoffe
durch Zusatz desselbenVolumens an Alkohol ausfällt. Um an diese Behandlung die Ausfällung
des Inaktivators mit größeren Alkoholmengen anschließen zu können, muß man die Trichloressigsäure
entfernen. Dies geschieht, indem man die mit Essigsäure versetzten alkoholischen
Lösungen im Vakuum auf etwa '/20 ihres Volumens eindampft und dann in bekannter
Weise die Trichloressigsäure
mit Äther extrahiert. Nach Entfernung.
der Tric'hloressigsäure gelingt die Fällung des Inaktivators durch Alkohol. Anschließend
kann man die den, Inaktivator begleitenden Salze durch lonenaustauscher entfernen
und nochmals Mit Alkohol fällen. Die so erhaltenen Trockenpräparate enthalten nur
noch i ,bis 2 y organischer Substanz je lnaktivatoreinheit. Die Ausbeute, berechnet
auf den Inaktivatorgehalt der getrockneten Organe, beträgt rund 8o %.It is known to produce preparations of this inactivator by
one after H. Kraut, E. K. Frey and E. Wer 1 e (Hoppe-Seyler's, magazine for physiological
Chemie, I92, ff., 193o) the dried organs with water or dilute acetic acid
extracted and the inactivator falls by adding alcohol to these extracts.
It has now been found that. you get much purer preparations with a very good yield
can be obtained if the extracts are first treated with trichloroacid for the purpose of precipitation
of the protein and then ineffective accompanying substances in the case of a weakly alkaline reaction
precipitates by adding the same volume of alcohol. To get to this treatment the precipitation
To be able to connect the inactivator with larger amounts of alcohol, you have to use the trichloroacetic acid
remove. It does this by adding acetic acid to the alcoholic
Solutions evaporated in vacuo to about 1/20 of their volume and then in known
Way the trichloroacetic acid
extracted with ether. After removal.
Trichloroacetic acid succeeds in precipitating the inactivator with alcohol. Afterward
the salts accompanying the inactivator can be removed by ion exchangers
and fell again with alcohol. The dry preparations obtained in this way only contain
1 to 2 y of organic matter per inactivator unit. The yield, calculated
on the inactivator content of the dried organs is around 80%.
Beispiel io g getrocknete Ohrspeicheldrüsen von Rindern werden mit
Zoo ccm n/5oJEssigsäure extrahiert. In 18o ccm der filtrierten Extraktionslösung
sind etwa 9ooo Einheiten des Kallikrein-Inaktivators enthalten. Diese Lösung wird
mit 20 ccm 2C/oiger Trichloressigsäurelösung versetzt und 30 Minuten bei
Zimmertemperatur stehengelassen. Dann wird filtriert und der Niederschlag verworfen.
Das Filtrat versetzt man mit der gleichen Menge Alkohol und bringt es mit Ammoniak
auf p118. Nach 16stündigem Stehen wird der Niederschlag abfiltriert und verworfen,
das Filtrat mit Essigsäure auf pg6 eingestellt und im Vakuum bei 45' bis zu einem
Volumen von 20 ccm eingeengt. Die Lösung wird im Flüssigkeitsextraktor 8 Stunden
mit Äther extrahiert, dann mit der zehnfachen Menge Alkohol versetzt, 16 Stunden
stehengelassen und der Niederschlag abzentrifugiert. Das Filtrat wird verworfen.
Der Niederschlag wird in 30 ccm Wasser gelöst, die Lösung durch Ionenaustauscher
entsalzt und anschließend filtriert. Mit der zehnfachen Menge Alkohol wird der Inaktivator
gefällt, der ;Niederschlag nach 16stündigem Stehen abzentrifugiert, mit Alkohol
gewaschen und mit Äther getrocknet. Ausbeute: o,oi5 g, enthaltend etwa 7000 Inaktivatoreinheiten.Example 10 g of dried parotid glands from cattle are extracted with zoo cc n / 50 acetic acid. 180 ccm of the filtered extraction solution contains about 900 units of the kallikrein inactivator. This solution is mixed with 20 ccm of 2C / o trichloroacetic acid solution and left to stand for 30 minutes at room temperature. It is then filtered and the precipitate is discarded. The filtrate is mixed with the same amount of alcohol and brought to p118 with ammonia. After standing for 16 hours, the precipitate is filtered off and discarded, the filtrate is adjusted to pg6 with acetic acid and concentrated in vacuo at 45 'to a volume of 20 ccm. The solution is extracted with ether in the liquid extractor for 8 hours, then ten times the amount of alcohol is added, the mixture is left to stand for 16 hours and the precipitate is centrifuged off. The filtrate is discarded. The precipitate is dissolved in 30 ccm of water, the solution is desalinated by ion exchangers and then filtered. The inactivator is precipitated with ten times the amount of alcohol, the precipitate is centrifuged off after standing for 16 hours, washed with alcohol and dried with ether. Yield: 0.05 g, containing about 7000 inactivator units.