Verfahren zur getrennten Gewinnung von Hypophysenhinterlappenhormon
und Hypophysenvorderlappenhormon Extrakte aus dem Hypophysenhinterlappen finden
bereits seist vielen Jahren als Wehen erregendes Mittel in der Medizin Verwendung;
spezifische Wirkungen der Extrakte des Vorderlappens werden erst in den neueren
Forschungsarbeiten erwähnt. Die Isolierung des Hypophysenhinterlappenhormons und
des Hypophysenvorderla.ppenhormons erfolgtebisher durch gesonderte Aufarbeitung
der vorher anatomisch abgetrennten Hinter- und Vorderlappen. Dabei wurde die Loslösung
des Vorderlappenhormons durch lang dauernde Behandlung des Vorderlappens mit niedrig
konzentrierten hydrolysierenden Mitteln durchgeführt. In den einschlägigen Arbeiten
wird die Empfindlichkeit der wirksamen Substanzen sowohl des Vorder- als auch des
Hinterlappens, und zwar sowohl gegenüber Säuren wie gegenüber Alkali betont.Method for the separate collection of posterior pituitary hormone
and anterior pituitary hormone extracts from the posterior lobe of the pituitary gland
has been used in medicine as a labor-inducing agent for many years;
specific effects of the extracts of the anterior lobe appear only in the more recent
Research work mentioned. Isolation of the posterior lobe hormone and
of the anterior pituitary hormone has so far taken place through separate processing
the previously anatomically separated posterior and anterior lobes. Thereby the detachment became
of the anterior lobe hormone by long-term treatment of the anterior lobe with low
concentrated hydrolyzing agents. In the relevant work
becomes the sensitivity of the active substances of both the fore and the
The posterior lobe, emphasized both against acids and against alkali.
Es wurde nun gefunden, daß es trotz der erwähnten Empfindlichkeit
der Extrakte gegen Säuren und Alkali gelingt, in einem Arbeitsgang das Hypophysenhinterlappenhormon
und das Hypophysenvo,rderlappenhormon aus der Gesamtdrüse zu gewinnen, ohne die
Drüse vorher zerlegen zu müssen, wenn man die ganze frische oder frisch getrocknete
Hypophyse nacheinander kurzfristig mit hydrolysierenden Mitteln steigender Konzentration
bei niedriger oder mäßig erhöhter Temperatur, die 6o° C nicht überschreitest, behandelt.
Bei derartiger Behandlung kann man wesentlich stärkere Konzentrationen des Hydrolysiermittels
(z. B. NaOH, H Cl) anwenden, als es bisher z. B. für die Behandlung des Hypophysenvorderlappens
beschrieben ist. Beispielsweise läßt sich sogar eine n/i-Natronlauge und eine i
o n-Salzsäure verwenden, wenn nur dafür Sorge getragen wird, daß die Behandlung
nur kurze Zeit und bei niedriger oder mäßig erhöhter Temperatur ausgeführt wird.It has now been found that, in spite of the sensitivity mentioned
the extracts against acids and alkalis succeed in removing the pituitary posterior lobe hormone in one operation
and to gain the pituitary void hormone from the whole gland without the
Having to dismantle the gland beforehand if you want the whole fresh or freshly dried
Pituitary glands one after the other with hydrolysing agents of increasing concentration
treated at a low or moderately elevated temperature not exceeding 60 ° C.
With such treatment one can use much higher concentrations of the hydrolyzing agent
(z. B. NaOH, H Cl) apply than it was previously z. B. for the treatment of the anterior pituitary gland
is described. For example, even an n / i sodium hydroxide solution and an i
Use o n-hydrochloric acid if care is taken to ensure that the treatment
is only carried out for a short time and at a low or moderately elevated temperature.
Durch dieses Verfahren werden die Eiweißstoffe weitgehend hydrolysiert.
Die entstandenen Alkali.- oder Acidalbuminat@e bzw. Globulinate werden durch Abstumpfen
der Hydrolysiermittel zur Abscheidung gebracht und entfernt, während die wirksamen
Substanzen in der Lösung zurückbleiben. Die so erhaltenen Hypophysenvorderlappen-
bzw. Hypophysenhinterlappenextrakte können jeder für sich zwecks weiterer Reinigung
und zwecks Zerlegung in die einzelnen wirksamen Komponenten nach bekannten Methoden
weiterbehandelt werden.This process largely hydrolyzes the proteins.
The resulting Alkali.- or Acidalbuminat @ e or globulinate are blunted
the hydrolyzing agent is deposited and removed while the effective
Substances remain in the solution. The anterior pituitary lobe obtained in this way
or posterior pituitary lobe extracts can each be used for further purification
and for the purpose of breaking it down into the individual effective components according to known methods
be treated further.
Dar Vorteil des Verfahrens besteht darin,
da.ß man
zur Gewinnung und Isolierung der wirksamen Substanzen des Hypophys:envorder- und
-hinterlapp:ens, die: beiden Drüsenteile nicht mehr - getrennt` zu verarbeiten braucht,
was zeitraubend und kostspielig ist, sondern daß man die Gesamtdrüsen in einem Arbeitsgang
auf die wirksamen Substanzen verarbeiten kann. Bei diesem Verfahren ist eine Trennung
der Inkrete beider Drüsenteile dadurch ermöglicht, daß man die Gesamtdrüse zunächst
mit hydrolysierenden Mitteln von schwächerer Konzentration behandelt, wodurch nur
die Hypophys,enhinterlapp:ensubstanz gelöst wird, während aus dein nach Abtrennen
des Hinterlappenextraktes verbleibenden Rückstand die Vorderlappensubstanz offenbar
erst durch tiefere Eingriffe freigelegt und der Extraktion zugängig gemacht wird.
Das Verfahren schafft aber auch noch den Vorteil, daß es durch kurzfristige Anwendung
der höheren Konzentration der hydrolysierenden Agenzien gegenüber dem bekannten
Verfahren (langfristige Behandlung mit niedrig konzentrierten hydrolysierenden Mitteln)
die Gefahr einer Zersetzung der freigelegten wirksamen Substanz verringert. Beispiele
I. 30 g frische Hypophysen werden gemahlen und etwa I5 Minuten mit Soccm
n/ I oo-Salzsäure extrahiert. Diese Extraktion wird gegebenenfalls nochmals wiederholt.
Nach Abtrennen des das Hypophys.enhinterl.appenhormon enthaltenden Extraktes, welcher
nach bekannten Methoden weitergereinigt werden kann, wird der Drüsenrückstand in
Wasser suspendiert und bei etwa I5° C 3o Minuten lang Salzsäuregas eingeleitet.
Hierauf wird zentrifugiert, das klar braune Zentrifugat abgegossen und der Rückstand
nochmals in der gleichen Weise behandelt. Die vereinigten Zentrifugate werden dann
mit starker Natronlauge neutralisiert, die ausfallenden Albuminate und Globulinate
zentrifugiert, und der klare, schwach gelb gefärbte Extrakt wird entweder direkt
auf Vorderla.ppenwirkung am geeigneten Tier ausgewertet oder zuerst mit einem organischen
Lösungsmittel, z. B. Aceton, behandelt und hierauf ausgewertet. I g Hypophysentrockenpulver
wird in 2o ccm n/2-Natronlauge bei 35 bis 40'C 2o Minuten lang gerührt und abzentrifugiert.
Das Zentrifugat enthält den größten Teil der wirksamen Hinterlappensubstanz. Der
Zentrifugenrückstand wird wiederholt mit 2o ccm n/I-Natronlauge bei 25°C 2o Minuten
lang behandelt. Das jetzt erhaltene Zentrifugat enthält die Hauptmenge der wirksamen
Vorderlappensubstanz. Die Zentrifugate mit der wirksamen Vorderlappensubstanz können
getrennt oder zusammen mit z n-Salzsäure zur Flockung gebracht werden. Die flockigen
Niederschläge werden zentrifugiert; sie enthalten nur Spuren der wirksamen Substanzen.
Die Filtrate werden dann auf ihre biologische Wirksamkeit eingestellt.The advantage of the method is that to obtain and isolate the active substances of the hypophyseal front and rear lobes, the two parts of the gland no longer need to be processed separately, which is time-consuming and costly, but that you can process the entire glands in one operation on the active substances. In this procedure, a separation of the increments of both parts of the gland is made possible by first treating the entire gland with hydrolysing agents of weaker concentration, whereby only the hypophyseal lobe substance is dissolved, while the anterior lobe substance apparently only from the residue remaining after separation of the posterior lobe extract is exposed through deeper interventions and made accessible for extraction. However, the method also creates the advantage that, through short-term use of the higher concentration of the hydrolyzing agents compared to the known method (long-term treatment with low-concentration hydrolyzing agents), it reduces the risk of decomposition of the exposed active substance. Examples I. 30 g of fresh pituitary glands are ground and extracted for about 15 minutes with SOCN / 10 hydrochloric acid. This extraction is repeated again if necessary. After separating the extract containing the hypophyseal posterior lobe hormone, which can be further purified by known methods, the glandular residue is suspended in water and hydrochloric acid gas is introduced at about 15 ° C. for 30 minutes. It is then centrifuged, the clear brown centrifugate is poured off and the residue is treated again in the same way. The combined centrifugates are then neutralized with strong sodium hydroxide solution, the precipitated albuminates and globulinates are centrifuged, and the clear, pale yellow extract is either evaluated directly for the effect of the frontal skin on the appropriate animal or first with an organic solvent, e.g. B. acetone, treated and then evaluated. I g of dry pituitary powder is stirred in 2o ccm n / 2 sodium hydroxide solution at 35 to 40 ° C. for 20 minutes and centrifuged off. The centrifugate contains most of the effective posterior lobe substance. The centrifuge residue is repeatedly treated with 20 ccm n / l sodium hydroxide solution at 25 ° C. for 20 minutes. The centrifugate now obtained contains the majority of the effective anterior lobe substance. The centrifugates with the active anterior lobe substance can be flocculated separately or together with z n-hydrochloric acid. The flaky precipitates are centrifuged; they only contain traces of the active substances. The filtrates are then adjusted for their biological effectiveness.
3. 34g Hypophysen werden 2o Minuten mit 5o ccm n/5-h,latronlauge extrahiert
und zentrifugiert. Das Zentrifugatenthält die Hinterlapplensubstanz. Der Zentrifugenrückstand
wird nun mit 5o ccm einer 3 %igen Natriumsulfidlösung 2o Minuten lang bei I5° C
extrahiert und dann zentrifugiert; nach dem Zentrifugieren wird die alkalische Lösung
sofort abgestumpft. Diese Extraktion wird noch zweimal wiederholt und die vereinigten
Zentrifugate bei etwa PH= 5 zur Flo.ckung gebracht und filtriert. Der frei werdende
Schwefelwasserstoff wird nach einer der üblichen Methoden, jedoch ohne Anwendung
höherer Temperatur, entfernt und der erhaltene Extrakt am geeigneten Tier auf Vorderlappenwirkung
ausgewertet.3. 34 g of pituitary glands are extracted for 20 minutes with 50 ccm n / 5 h of sodium hydroxide solution
and centrifuged. The centrifugate contains the posterior lobe substance. The centrifuge residue
is now with 50 ccm of a 3% sodium sulfide solution for 20 minutes at 15 ° C
extracted and then centrifuged; after centrifugation becomes the alkaline solution
instantly dulled. This extraction is repeated twice and the combined
Centrifugate flocculated at about pH 5 and filtered. The one becoming free
Hydrogen sulphide is obtained by one of the usual methods, but without application
higher temperature, removed and the extract obtained on the appropriate animal for anterior lobe action
evaluated.